JP2022514290A - 改変抗体ｆｃおよび使用方法 - Google Patents

Abstract

生体高分子は、中枢神経系（ＣＮＳ）の疾患の処置に非常に大きな可能性を有するが、血液脳関門（ＢＢＢ）の存在が、治療上関連する抗体濃度を達成することを極めて困難にする。新生児型Ｆｃ受容体に対する増強された中性ｐＨ親和性を有する抗体は、脳における改善された蓄積を実証する。本明細書に開示されるバリアントはまた、操作されたマウスモデルにおける曝露を増強した。抗ＢＡＣＥ１抗体を使用すると、これらのＦｃバリアントは脳Ａベータのレベルを有意に低下させた。【選択図】図８Ａ

Description

本出願は、２０１８年１２月２０日に出願された米国仮特許出願第６２／７８２，９０４号の優先権の利益を主張するものであり、その全体があらゆる目的のために参照により本明細書に組み込まれる。

本発明は、改変Ｆｃおよび改変Ｆｃを使用して血液脳関門を通過する方法に関する。

アミロイドベータ（Ａベータ）、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、タウ、およびアルファ－シヌクレインを含む、有意な医学的価値を有するいくつかの中枢神経系（ＣＮＳ）治療標的がある（Ｓｐｉｌｌａｎｔｉｎｉ、Ｓｃｈｍｉｄｔら １９９７、ＨａｒｄｙおよびＳｅｌｋｏｅ ２００２、Ｇｈｏｓｈ、Ｇｅｍｍａら ２００８、ＴｈｉｎａｋａｒａｎおよびＫｏｏ ２００８、ＭａｎｄｅｌｋｏｗおよびＭａｎｄｅｌｋｏｗ ２０１２）。しかしながら、血液脳関門（ＢＢＢ）は、正常な状況下では脳内への抗体透過を制限する（Ａｂｂｏｔｔ、Ｒｏｎｎｂａｃｋら ２００６、Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ、２０１６）。

トランスフェリン受容体（ＴｆＲ）を利用する受容体介在性トランスサイトーシス（ＲＭＴ）などのＲＭＴの増強（Ｆｉｓｈｍａｎ、Ｒｕｂｉｎら １９８７）によって脳への抗体透過を改善する努力がなされている（Ｙｕ，Ｚｈａｎｇら ２０１１、Ｙｕ，Ａｔｗａｌら ２０１４、Ｐａｒｄｒｉｄｇｅ ２０１６）。ＴｆＲは脳内皮細胞上で濃縮され、脳および他の組織におけるトランスフェリンの輸送を促進するために迅速にトランスサイトーシスされる（ＰｏｎｋａおよびＬｏｋ １９９９）。

しかしながら、ＴｆＲ標的化には欠点がある。例えば、ＴｆＲを利用してＢＢＢを通過する治療用抗体を作製するためには、第２の結合ドメインを、例えば、ノブインホール（ｋｎｏｂ－ｉｎ－ｈｏｌｅ）、二重可変ドメイン、またはクロスｍＡｂ技術を含む多数の多重特異性技術のうちの１つを介して伝統的なＩｇＧに導入しなければならない。これらの技術は、治療用抗体の開発に費用と複雑さの両方を加える。さらに、ＴｆＲはいくつかの組織で発現され、この受容体の標的化は、いくつかの潜在的な安全性の責務を導入し得る。例えば、ＴｆＲの標的化は、網状赤血球の減少を引き起こし得る（Ｃｏｕｃｈ、Ｙｕら ２０１３）。このリスクは、様々なエフェクター減弱技術を使用することによって軽減され得る（Ｃｏｕｃｈ、Ｙｕら ２０１３、Ｌｏ、Ｋｉｍら ２０１７）。しかしながら、抗体エフェクター機能がいくつかのＡベータ標的化抗体の作用機序において役割を果たすことが提案されているので、エフェクター減弱は、アミロイド標的化抗体、ならびに他の抗原を標的化する抗体の有効性を制限する可能性がある。

多数の生物学的抗体受容体が、Ｆｃ－ガンマ受容体および胎児性Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）などのＩｇＧ分子と相互作用することができる（ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ ２００２、Ｃｈａｌｌａ、Ｖｅｌｍｕｒｕｇａｎら ２０１４）。ＦｃＲｎは、ＦｃＲｎアルファ鎖としても知られるＦＣＧＲＴと、ベータ－２ミクログロブリン（β２Ｍ）の２つのサブユニットで構成されるヘテロ二量体タンパク質複合体である。ヒトでは、ＦｃＲｎは、いくつかの造血細胞、腎臓細胞、腸および上気道上皮細胞、ならびにＢＢＢに位置するものを含む正常な内皮細胞上で発現される（ＲｏｏｐｅｎｉａｎおよびＡｋｉｌｅｓｈ ２００７、Ｃｈａｌｌａ、Ｖｅｌｍｕｒｕｇａｎら ２０１４）。発達中、ＦｃＲｎは胎盤関門を通過するＩｇＧ分子の輸送を促進し、乳児期には、ＦｃＲｎは腸上皮細胞を通過する母乳からのＩｇＧの輸送を促進する。成人では、ＦｃＲｎの主な機能は、ＩｇＧのエンドソーム再循環およびその結果としてのＩｇＧ血清半減期の持続を媒介することにある。ＦｃＲｎは、胎盤、肝臓（肝細胞およびクッパー細胞を含む）、小腸（頂端腸細胞、杯細胞および陰窩の腸細胞を含む）、大腸（頂端腸細胞、杯細胞、陰窩の腸細胞、結腸および直腸を含む）、口腔上皮、鼻咽頭、上気道（肺上皮細胞を含む）、腎臓上皮細胞、内皮細胞、脳内皮細胞、脊髄、大脳皮質、脈絡叢、くも膜絨毛、骨、リンパ節、扁桃腺、脾臓、甲状腺、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞、副腎、乳房、膵臓、ランゲルハンス島、胆嚢、前立腺、膀胱、皮膚、子宮、卵巣、精巣、精嚢および脂肪組織を含む様々な組織および細胞型で発現される。

ＩｇＧのＦｃＲｎへの結合はｐＨによって調節される。血清中などの生理学的ｐＨではＩｇＧのＦｃＲｎへの結合は事実上存在しないが、エンドソーム中などの酸性ｐＨでは、ＩｇＧのＦｃＲｎに対する親和性が増強される（ＫｕｏおよびＡｖｅｓｏｎ、２０１１）。エンドソーム中の酸性ｐＨでのＦｃＲｎへのこの増強された結合は、ピノサイトーシスを受けた抗体の捕捉をもたらし、リソソーム分解を防止し、血清中の抗体レベルを維持する（ＧｈｅｔｉｅおよびＷａｒｄ、２００２）。研究努力により、酸性ｐＨでのＦｃＲｎへの結合の増強の結果として、改善された薬物動態特性を有する抗体Ｆｃバリアントが同定された（Ｈｉｎｔｏｎ、Ｊｏｈｌｆｓら２００４、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ、Ｋｉｅｎｅｒら２００６、Ｈｉｎｔｏｎ、Ｘｉｏｎｇら２００６、Ｐｅｔｋｏｖａ、Ａｋｉｌｅｓｈら２００６、Ｄａｔｔａ－Ｍａｎｎａｎ、Ｗｉｔｃｈｅｒら２００７、Ｙｅｕｎｇ、Ｌｅａｂｍａｎら２００９、Ｚａｌｅｖｓｋｙ、Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎら ２０１０）。生理学的ｐＨと酸性ｐＨの両方でＦｃＲｎへの結合を改善するいくつかのＦｃバリアントが同定されている（Ｈｉｎｔｏｎ、Ｊｏｈｌｆｓら２００４、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ、Ｋｉｅｎｅｒら２００６、Ｈｉｎｔｏｎ、Ｘｉｏｎｇら ２００６、Ｙｅｕｎｇ、Ｌｅａｂｍａｎら ２００９、Ｉｇａｗａ、Ｍａｅｄａら ２０１３）。しかしながら、これらのＦｃバリアントのいくつかは、抗体クリアランスの増強ももたらし得る（Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ、Ｗｏｏｄｓら、２００２、Ｖａｃｃａｒｏ、Ｚｈｏｕら、２００５、Ｉｇａｗａ、Ｍａｅｄａら、２０１３、Ｂｏｒｒｏｋ、Ｗｕら、２０１５）。

以前の研究は、ＦｃＲｎが脳への抗体の輸送において限られた機能を有することを示唆しており（ＡｂｕｑａｙｙａｓおよびＢａｌｔｈａｓａｒ、２０１３）、実際、直接頭蓋内抗体注入を用いた実験は、ＦｃＲｎが脳からの抗体の輸送を促進するように機能することを示した（Ｃｏｏｐｅｒ、Ｃｉａｍｂｒｏｎｅら、２０１３）。

改変Ｆｃを含み、改善された脳取り込みを有する抗体およびＦｃコンジュゲートが本明細書で提供される。

いくつかの実施形態では、対象の神経障害を処置する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経障害は、ニューロパチー障害、神経変性疾患、脳障害、がん、眼疾患障害、発作障害、リソソーム蓄積症、アミロイドーシス、ウイルス性または微生物性疾患、虚血、行動障害、およびＣＮＳ炎症から選択される。いくつかの実施形態では、神経障害は、神経変性疾患である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、アミロイドーシス、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、アミロイドーシス、タウオパチー、アルツハイマー病、核上性麻痺、プリオン病、ウシ海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ症候群、クールー、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症から選択される。

いくつかの実施形態では、抗体を対象の脳に送達する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、抗体への脳曝露を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する抗体の輸送を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含み、インビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である単離抗体が提供される。

いくつかの実施形態では、抗体は、野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じ抗体に標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、抗体は、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、インビトロトランスサイトーシスアッセイは、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎは、ヒトＦｃＲｎである。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体は、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体は、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体は、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下のｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体は、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ未満のｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体の親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体の親和性に対する比は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体は、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、配列番号１～４から選択される配列の１つまたは複数の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃは、ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃは、ＩｇＧ４ Ｆｃである。

いくつかの実施形態では、抗体は、脳抗原に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、アミロイドベータ（Ａベータ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、タウ、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）、アルファ－シヌクレイン、ＣＤ２０、ハンチンチン、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ロイシンリッチリピートキナーゼ２（ＬＲＲＫ２）、パーキン、プレセニリン１、プレセニリン２、ガンマセクレターゼ、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ｐ７５ニューロトロフィン受容体（ｐ７５ＮＴＲ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、カスパーゼ６、骨髄細胞に発現する誘発性受容体２（ＴＲＥＭ２）、Ｃ１ｑ、対になった免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）、ＣＤ３３、インターロイキン６（ＩＬ６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ＴＮＦＲ１）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーＩＢ（ＴＮＦＲ２）およびアポリポタンパク質Ｊ（ＡｐｏＪ）から選択される脳抗原に結合に結合する。

いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、抗体断片である。

いくつかの実施形態では、抗体は、イメージング剤にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、抗体は、神経障害薬にコンジュゲートされている。いくつかの実施形態では、神経障害薬は、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される。

いくつかの実施形態では、神経障害を処置する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与するステップを含み、Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。いくつかの実施形態では、神経障害は、ニューロパチー障害、神経変性疾患、がん、眼疾患障害、発作障害、リソソーム蓄積症、アミロイドーシス、ウイルス性または微生物性疾患、虚血、行動障害、およびＣＮＳ炎症から選択される。いくつかの実施形態では、神経障害は、神経変性疾患である。いくつかの実施形態では、神経変性疾患は、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、タウオパチー、アルツハイマー病、核上性麻痺、プリオン病、ウシ海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ症候群、クールー、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症から選択される。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートを対象の脳に送達する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートへの脳曝露を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するＦｃコンジュゲートの輸送を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法が提供される。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含み、インビトロトランスサイトーシスアッセイで活性であるＦｃコンジュゲートが提供される。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じＦｃコンジュゲートに標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、インビトロトランスサイトーシスアッセイは、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎは、ヒトＦｃＲｎである。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートは、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートは、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートは、１ｍＭ未満、または７５０ｎＭ未満、または５００ｎＭ未満、または４００ｎＭ未満、または３００ｎＭ未満、または２００ｎＭ未満、または１００ｎＭ未満、または５０ｎＭ～１ｍＭ、または１００ｎＭ～１ｍＭ、または１００ｎＭ～５００ｎＭのｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートは、１００ｎＭ未満、または９０ｎＭ未満、または８０ｎＭ未満、または７０ｎＭ未満、または６０ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満、または４０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満、または１ｎＭ～２００ｎＭ、または１０ｎＭ～２００ｎＭ、または１０ｎＭ～１００ｎＭのｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートの親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートの親和性に対する比は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である。

いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む。いくつかの実施形態では、改変ＩｇＧ Ｆｃは、配列番号１～４から選択される配列の１つまたは複数の改変を含む。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃは、ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃは、ＩｇＧ４ Ｆｃである。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、治療用タンパク質に融合した改変ＩｇＧ Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、治療用タンパク質は、受容体細胞外ドメインおよび酵素から選択される。いくつかの実施形態では、受容体細胞外ドメインは、ＴＮＦ－Ｒ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ＣＴＬＡ－４ ＥＣＤ、およびＩＬ－１Ｒ１ ＥＣＤから選択される。いくつかの実施形態では、酵素は、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン－６－スルファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、ベータ－グルクロニダーゼ、酸性アルファ－グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ベータ－ガラクトセレブロシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ１およびトリペプチジルアミノペプチダーゼ１から選択される。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、神経障害薬にコンジュゲートした改変ＩｇＧ Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、神経障害薬は、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される。いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、イメージング剤にコンジュゲートした改変ＩｇＧ Ｆｃを含む。

野生型マウスにおける抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１）、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ＹＴＥ）、または対照抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体（抗ｇＤ）の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）血漿抗体薬物動態；Ｂ）脳Ａベータレベルによって測定される脳薬力学；Ｃ）脳抗体薬物動態。Ｄ）最大濃度（Ｃｍａｘ）および曲線下面積（ＡＵＣ）を含む、野生型ＩｇＧ１と比較したヒトＩｇＧ１ ＹＴＥ改変抗体の脳における相対的抗体取り込み。

ヒト ＦＣＧＲＴ（ｈＦｃＲｎアルファ鎖）を含み、マウスＦｃｇｒｔを欠き（すなわち、ＦＣＧＲＦ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－マウス）、ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック（Ｔｇ３２）マウスにおける抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１）、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ＹＴＥ）、または抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）血漿抗体薬物動態；Ｂ）脳Ａベータレベルによって測定される脳薬力学；Ｃ）脳抗体薬物動態；Ｄ）ヒトＩｇＧ１ ＹＴＥ改変抗体またはヒトＩｇＧ１野生型抗体の イン ビトロヒトおよびマウスＦｃＲｎ結合特性。

実施例３に記載されるような、２つの異なるｐＨでのｈＦｃＲｎに対するＦｃの突然変異を含むある特定のｈＩｇＧ１抗体の結合親和性のプロットを示す図である。Ｘ軸は抗体のｐＨ６親和性を示し、Ｙ軸は抗体のｐＨ７．４親和性を示す。

実施例３に記載されるような、ある特定のＦｃ改変抗体の標準化されたトランスサイトーシス値のグラフである。破線より上のＦｃ改変抗体は、有意に改善されたトランスサイトーシスを示した。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック（Ｔｇ３２）マウスにおける改変Ｆｃを含む抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の改善された脳曝露特性を示す図である。Ａ）血清薬物動態（ＰＫ）；Ｂ）脳ＰＫ；Ｃ）単回用量ＰＫデータおよび親和性データの要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック（Ｔｇ３２）マウスにおける改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ＹＱＡＹ）の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）血清抗体濃度；Ｂ）脳薬物動態（ＰＫ）；Ｃ）脳Ａベータレベルによって測定される脳薬力学（ＰＤ）；Ｄ）ｈＦｃＲｎ親和性および脳ＰＫデータの要約；Ｅ）脳ＰＤデータの要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニックＴｇ３２（３＞ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウス；ｈＦＣＧＲＴとｍＦＣＧＲＴの両方を発現するヘミ接合性（ＦＣＧＲＴ^＋／－Ｆｃｇｒｔ^＋／－）マウス；またはｍＦＣＧＲＴのみを発現する野生型（Ｆｃｇｒｔ^＋／＋）マウスに投与したＤ１（ＹＹ）およびＱ９５（ＹＱＡＹ）ｈＩｇＧ１改変Ｆｃ抗体の血漿薬物動態および結合親和性を示す図である。Ａ）ホモ接合性Ｔｇ３２マウスにおける血漿ＰＫ；Ｂ）ヘミ接合性Ｔｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／－Ｆｃｇｒｔ^＋／－）マウスにおける血漿ＰＫ；Ｃ）野生型（Ｆｃｇｒｔ^＋／＋）マウスにおける血漿ＰＫ；Ｄ）ＦｃＲｎ結合親和性データおよび野生型抗体と比較した各ＦＣ改変抗体の血漿ＡＵＣの比の要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニックＴｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の脳薬物動態および脳抗体濃度を示す図である。Ａ）脳ＰＫデータ；Ｂ）投与７日後の脳抗体濃度；Ｃ）親和性データおよび野生型抗体と比較した各Ｆｃ改変抗体の脳ＡＵＣの比の要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック Ｔｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の肝臓曝露を示す図である。Ａ）肝臓ＰＫデータ；Ｂ）投与７日後の肝臓抗体濃度；Ｃ）親和性データおよび野生型抗体と比較した各Ｆｃ改変抗体の肝臓ＡＵＣの比の要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック Ｔｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の大腸曝露を示す図である。Ａ）大腸ＰＫデータ；Ｂ）投与７日後の大腸抗体濃度；Ｃ）親和性データおよび野生型抗体と比較した各Ｆｃ改変抗体の大腸ＡＵＣの比の要約。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック Ｔｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体の肺曝露を示す図である。Ａ）肺ＰＫデータ；Ｂ）投与７日後の肺抗体濃度；Ｃ）親和性データおよび野生型抗体と比較した各Ｆｃ改変抗体の肺ＡＵＣの比の要約。

ヒトＩｇＧサブクラスＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４の整列された配列（それぞれ配列番号１～４）を示す図である。ＩｇＧ１との配列の違いを灰色で強調し、スラッシュで区切られた２つの残基の存在は、一般的な多型バリアントを示す。位置は、Ｒａｂａｔ（ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ、第５版、ＮＩＨ ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ、第９１－３２４２号、Ｅ．Ａ．Ｒａｂａｔら）に記載されるＥＵインデックスに従ってナンバリングされている。ＥＵインデックスまたはＥＵナンバリングスキームは、Ｅｄｅｌｍａｎら、１９６９、Ｐｒｏｃ Ｎａｉｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ６３：７８～８５に記載されるＥＵ抗体のナンバリングを指す。

ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニック（Ｔｇ３２）マウスにおける改変Ｆｃ（抗ＢＡＣＥ１－ＹＱＡＹおよび抗ＢＡＣＥ１－ＹＹ）を有する抗ＢＡＣＥ１抗体の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）血清抗体濃度；Ｂ）脳薬物動態（ＰＫ）；Ｃ）脳Ａベータレベルによって測定される脳薬力学（ＰＤ）；Ｄ）ｈＦｃＲｎ親和性、脳ＰＫデータおよび脳ＰＤデータの要約。

カニクイザルにおける抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１ ＷＴ）および改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ＹＥＹ、ＹＱＡＹ、ＹＰＹ）の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）抗体投与後の様々な時点でのＣＳＦ中のｓＡＰＰβ／α比によって測定されるＣＮＳ薬力学。Ｂ）抗体投与後の様々な時点での血清抗体濃度。Ｃ）（Ｂ）のデータに基づく、０日目から７日目までの抗体血清曝露。

カニクイザルにおける抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１ ＷＴまたは「ＷＴ」）および改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ＹＱＡＹ、ＹＹ、ＹＬＹＩ、ＹＩＹ）の薬物動態および薬力学を示す図である。Ａ）抗体投与後の様々な時点でのＣＳＦ中のｓＡＰＰβ／α比によって測定されるＣＮＳ薬力学。Ｂ）２日目および７日目の脳組織からのｓＡＰＰβ／α比によって測定される脳薬力学。Ｃ）２日目および７日目のｓＡＰＰβ／αの比によって測定されるＣＳＦ対脳の薬力学。Ｄ）抗体投与後２日目および７日目の脳抗体濃度（皮質および海馬）。Ｅ）（Ｂ）のデータに基づく、２日目および７日目のｈＩｇＧ１野生型と比較した脳抗体濃度の変化倍率。Ｆ）脳薬物動態と脳薬力学の相関。Ｇ）抗体投与後の様々な時点でのＣＳＦ抗体濃度。Ｈ）抗体投与後の様々な時点でのＣＳＦおよび血清中の抗体濃度の比。Ｉ）抗体投与後の様々な時点での血清抗体濃度。Ｊ）（Ｉ）のデータに基づく抗体血清曝露。

示される用量でｍＦＣＧＲＴを発現するＰＳ２ＡＰＰマウスに投与した後の血漿（Ａ）および小脳（Ｂ）中の抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体および改変Ｆｃを有する抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体（抗ＡベータｈＩｇＧ４－ＹＴＥ）の濃度。Ｃ）示される用量でマウスに投与した後のＰＳ２ＡＰＰマウスの苔状線維海馬管におけるオリゴマーＡベータに結合する抗ＡベータｈＩｇＧ４（「Ａベータ」）、抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥ（「ＡベータＹＴＥ」）および抗ｇＤ ｈＩｇＧ４。Ｄ）（Ｃ）で観察された染色レベルの棒グラフ。ＰＳ２ＡＰＰマウスの海馬台（Ｅ）および前頭前皮質（Ｆ）におけるＡベータプラークを標的化するための抗ＡベータｈＩｇＧ４および抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥの結合。

Ａ）カニクイザルへの単回投与後２日目および７日目の抗ＡベータｈＩｇＧ４野生型（「ＷＴ」）ならびに抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＹ、ＹＱＡＹおよびＹＥＹ抗体の平均脳濃度。Ｂ）（Ａ）のデータに基づく、２日目および７日目のｈＩｇＧ４野生型と比較した脳抗体濃度の変化倍率。Ｃ）カニクイザルへの単回投与後の抗ＡベータｈＩｇＧ４野生型（「ＷＴ」）ならびに抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＹ、ＹＱＡＹおよびＹＥＹ抗体のＣＳＦ濃度。Ｄ）カニクイザルへの抗ＡベータｈＩｇＧ４野生型（「ＷＴ」）ならびに抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＹ、ＹＱＡＹおよびＹＥＹの単回投与後のＣＳＦおよび血清中の抗体濃度の比。Ｅ）カニクイザルへの投与後の抗ＡベータｈＩｇＧ４野生型（「ＷＴ」）抗体および改変Ｆｃを有する抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体（ＹＹ、ＹＱＡＹおよびＹＥＹ）の血清薬物動態。Ｆ）（Ｅ）のデータに基づく抗体血清曝露。

Ａ）抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体と改変Ｆｃを有する抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体の両方についてのｐＨ７．４での抗体血清曝露と抗体親和性との間の相関。Ｂ）抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体と改変Ｆｃを有する抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体の両方についてのｐＨ７．４での血清に対する脳への抗体分配と抗体親和性との間の相関。

これより本発明のある特定の実施形態を詳細に参照するが、それらの例は、添付の構造および式に例示されている。本発明は、列挙される実施形態と併せて説明されるが、それらは、本発明をこれらの実施形態に限定することを意図するものではないことを理解されたい。逆に、本発明は、全ての代替形、修正形および同等物を網羅することが意図されており、それらは、特許請求の範囲によって定義される本発明の範囲内に含まれ得る。

当業者であれば、本発明の実施に使用することができる、本明細書に記載されるものに類似または同等である多数の方法および材料を理解するであろう。本発明は、決して記載される方法および材料に限定されるものではない。

そうでないと定義しない限り、本明細書で用いる技術的および科学的な用語は、本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されるのと同じ意味を有し、Ｓｉｎｇｌｅｔｏｎら（１９９４）Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹ、およびＪａｎｅｗａｙ，Ｃ．、Ｔｒａｖｅｒｓ，Ｐ．、Ｗａｌｐｏｒｔ，Ｍ．、Ｓｈｌｏｍｃｈｉｋ（２００１）Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋと一致する。

商品名が本明細書で使用される場合、出願人らは、商品名の製品配合物、ジェネリック医薬品、および商品名の製品の活性薬学的成分（複数可）を独立して含むことを意図している。
定義

特に明記しない限り、本明細書で使用される以下の用語および句は、以下の意味を有することを意図している：

「親和性」は、分子の単一の結合部位とその結合パートナーとの間の、合計の非共有性相互作用の強度を指す。特に示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対（例えば、抗体と抗原、またはＩｇＧ定常領域またはＦｃとＦｃＲｎ）のメンバー間の１：１相互作用を反映する固有結合親和性を指す。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は、一般に、平衡解離定数（Ｋ_Ｄ、ＹからのＸの解離速度（ｋｄまたはｋｏｆｆ）の、ＸのＹに対する会合速度（ｋａまたはｋｏｎ）に対する比である）によって表すことができる。１つまたは複数の抗体のその標的に対する親和性についての代用測定値は、抗体標的に対する既知のリガンドの結合を５０％阻害するために抗体がどの程度必要であるかの尺度である、その半数阻害濃度（ＩＣ５０）である。親和性は、本明細書に記載されるものを含め、当技術分野で知られている一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための特定の例証的かつ例示的な実施形態が、本明細書に記載される。

「血液脳関門」または「ＢＢＢ」は、脳毛細血管内皮細胞膜内のタイトジャンクションによって形成される末梢循環と脳および脊髄（すなわち、ＣＮＳ）との間の生理学的障壁を指し、尿素（６０ダルトン）などの非常に小さな分子であっても、脳への分子の輸送を制限するタイトな障壁を形成する。脳内の血液脳関門、脊髄内の血液脊髄関門、および網膜内の血液網膜関門は、ＣＮＳ内の連続した毛細血管関門であり、本明細書ではまとめて血液脳関門またはＢＢＢと呼ばれる。ＢＢＢはまた、血液－ＣＳＦ関門（脈絡叢）を包含し、この関門は、毛細血管内皮細胞ではなく上衣細胞で構成される。

本明細書で互換的に使用される「アミロイドベータ」、「ベータ－アミロイド」、「Ａベータ」、「アミロイドβ」、および「Ａβ」という用語は、ＡＰＰのβ－セクレターゼ１（「ＢＡＣＥ１」）およびγ－セクレターゼ切断時に産生されるアミロイド前駆体タンパク質（「ＡＰＰ」）の断片、ならびにＡβ１－４０およびＡβ１－４２を含むがこれらに限定されないその修正形、断片および任意の機能的同等物を指す。Ａβは、単量体形態で存在すること、ならびに会合してオリゴマーおよびフィブリル構造を形成することが知られており、これらはアミロイドプラークの構成メンバーとして見出され得る。そのようなＡβペプチドの構造および配列は当業者に周知であり、前記ペプチドを作製する方法、または脳および他の組織からそれらを抽出する方法は、例えば、ＧｌｅｎｎｅｒおよびＷｏｎｇ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１２９：８８５～８９０（１９８４）に記載されている。さらに、Ａβペプチドは、様々な形態で市販もされている。

「抗Ａベータ免疫グロブリン」、「抗Ａベータ抗体」および「Ａベータに結合する抗体」は、本明細書で互換的に使用され、ヒトＡベータに特異的に結合する抗体を指す。抗Ａベータ抗体の非限定的な例は、クレネズマブである。抗Ａベータ抗体の他の非限定的な例は、以下の刊行物に開示されているソラネズマブ、バピネズマブ、ガンテネルマブ、アデュカヌマブ、ポネズマブおよび任意の抗Ａベータ抗体である：国際公開第２０００１６２８０１号パンフレット、国際公開第２００２０４６２３７号パンフレット、国際公開第２００２００３９１１号パンフレット、国際公開第２００３０１６４６６号パンフレット、国際公開第２００３０１６４６７号パンフレット、国際公開第２００３０７７８５８号パンフレット、国際公開第２００４０２９６２９号パンフレット、国際公開第２００４０３２８６８号パンフレット、国際公開第２００４０３２８６８号パンフレット、国際公開第２００４１０８８９５号パンフレット、国際公開第２００５０２８５１１号パンフレット、国際公開第２００６０３９４７０号パンフレット、国際公開第２００６０３６２９１号パンフレット、国際公開第２００６０６６０８９号パンフレット、国際公開第２００６０６６１７１号パンフレット、国際公開第２００６０６６０４９号パンフレット、国際公開第２００６０９５０４１号パンフレット、国際公開第２００９０２７１０５号パンフレット。

「クレネズマブ」および「ＭＡＢＴ５１０２Ａ」という用語は、本明細書で互換的に使用され、単量体形態、オリゴマー形態およびフィブリル形態のＡベータに結合し、ＣＡＳ登録番号１０９５２０７に関連する特異的抗Ａベータ抗体を指す。

本明細書で使用される「アミロイドーシス」という用語は、アミロイドもしくはアミロイド様タンパク質によって引き起こされるまたはこれらに関連する疾患および障害の群を指し、アミロイドプラークによるものを含む、単量体、フィブリルもしくは多量体状態、または３つの任意の組み合わせのアミロイド様タンパク質の存在または活性によって引き起こされる疾患および障害を含むが、これらに限定されない。そのような疾患には、続発性アミロイドーシスおよび加齢性アミロイドーシス、例えばアルツハイマー病（「ＡＤ」）などの神経障害、例えば軽度認知障害（ＭＣＩ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）、グアム・パーキンソン－認知症複合などの認知記憶能力の喪失を特徴とする疾患または症状、ならびに進行性核上性麻痺、多発性硬化症、クロイツフェルト・ヤコブ病、パーキンソン病、ＨＩＶ関連認知症、ＡＬＳ（筋萎縮性側索硬化症）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、成人発症糖尿病、内分泌腫瘍および老人性心アミロイドーシスなどのアミロイド様タンパク質に基づくまたはそれに関連する他の疾患、ならびにベータアミロイド沈着による黄斑変性、ドルーゼン関連視神経症、緑内障および白内障を含む様々な眼疾患を含むがこれらに限定されない疾患が含まれる。

緑内障は、視神経症の特徴的なパターンの網膜神経節細胞（ＲＧＣ）の喪失を伴う視神経の疾患群である。ＲＧＣは、眼から脳へ視覚信号を伝達する神経細胞である。アポトーシスプロセスにおける２つの主要な酵素である、カスパーゼ－３およびカスパーゼ－８は、ＲＧＣのアポトーシスをもたらすプロセスにおいて活性化される。カスパーゼ－３は、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）を切断して、Ａベータを含む神経毒性断片を産生する。ＡＰＰの保護効果がなければ、網膜神経節細胞層におけるＡベータ蓄積は、ＲＧＣの死および不可逆的な視力喪失をもたらす。

緑内障は、常にではないが、多くの場合、眼圧上昇を伴い、これは、房水の循環の閉塞またはその排液の結果であり得る。眼圧上昇は緑内障を発症する重大な危険因子であるが、緑内障を引き起こす決定要因となる眼圧の閾値を定義することはできない。損傷はまた、重要な視神経線維への血液供給不足、神経の構造の脆弱性、および／または神経線維自体の健康の問題によって引き起こされ得る。未処置の緑内障は、視神経の永続的な損傷および結果としての視野喪失をもたらし、失明に進行し得る。

「中枢神経系」または「ＣＮＳ」は、身体機能を制御する神経組織の複合体を指し、脳および脊髄を含む。

本明細書で使用される「神経障害」は、ＣＮＳを冒すおよび／またはＣＮＳに病因を有する疾患または障害を指す。例示的なＣＮＳ疾患または障害には、ニューロパチー、アミロイドーシス、がん、眼疾患または障害、ウイルスまたは微生物感染症、炎症、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、およびリソソーム蓄積症が含まれるが、これらに限定されない。本出願の目的のために、ＣＮＳは、通常は血液網膜関門によって身体の残りの部分から隔離されている眼を含むと理解される。神経障害の具体例には、神経変性疾患（レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、タウオパチー（アルツハイマー病および核上性麻痺を含むがこれらに限定されない）、プリオン病（ウシ海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ症候群、クールー、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症を含むがこれらに限定されない）、球麻痺、運動ニューロン疾患、および神経系ヘテロ変性障害（カナバン病、ハンチントン病、神経セロイドリポフスチン症、アレキサンダー病、トゥレット症候群、メンケス候群、コケイン症候群、ハラーホルデン・スパッツ症候群、ラフォラ病、レット症候群、肝レンズ核変性症、レッシュ・ナイハン症候群およびウンフェルリヒト・ルントボルク病を含むがこれらに限定されない）、認知症（ピック病および脊髄小脳失調症を含むがこれらに限定されない）、がん（例えば、体の他の場所のがんから生じた脳転移を含む、ＣＮＳのもの）が含まれるがこれらに限定されない。

「神経障害薬」は、１つまたは複数の神経障害を処置する薬物または治療薬である。本発明の神経障害薬には、抗体、ペプチド、タンパク質、１つまたは複数のＣＮＳ標的の天然リガンド、１つまたは複数のＣＮＳ標的の天然リガンドの改変バージョン、アプタマー、抑制性核酸（すなわち、低分子抑制性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）および短ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））、リボザイム、および小分子、または前記のいずれかの活性断片が含まれるが、これらに限定されない。本発明の例示的な神経障害薬は本明細書に記載されており、それ自体であるか、あるいは限定されないが、アミロイド前駆体タンパク質またはその一部、アミロイドベータ、ベータ－セクレターゼ、ガンマ－セクレターゼ、タウ、アルファ－シヌクレイン、パーキン、ハンチンチン、ＤＲ６、プレセニリン、ＡｐｏＥ、神経膠腫または他のＣＮＳがんマーカー、およびニューロトロフィンなどのＣＮＳ抗原または標的分子を特異的に認識するおよび／またはそれらに作用する（すなわち、阻害する、作動させるもしくは検出する）抗体、アプタマー、タンパク質、ペプチド、抑制性核酸および小分子ならびに前記のいずれかの活性断片を含むがこれらに限定されない。神経障害薬およびそれらを使用して処置することができる障害の非限定的な例を以下の表１に提供する：

「イメージング剤」は、その存在および／または位置を直接的または間接的に検出することを可能にする１つまたは複数の特性を有する化合物である。そのようなイメージング剤の例には、検出を可能にする標識部分を組み込んだタンパク質および小分子化合物が含まれる。

「ＣＮＳ抗原」または「脳抗原」は、抗体または小分子で標的化することができる、脳を含むＣＮＳで発現される抗原である。そのような抗原の例には、限定されないが、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、アミロイドベータ（Ａベータ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、タウ、アポリポタンパク質Ｅ４（ＡｐｏＥ４）、アルファ－シヌクレイン、ＣＤ２０、ハンチンチン、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ロイシンリッチリピートキナーゼ２（ＬＲＲＫ２）、パーキン、プレセニリン１、プレセニリン２、ガンマセクレターゼ、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ｐ７５ニューロトロフィン受容体（ｐ７５ＮＴＲ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、カスパーゼ６、骨髄細胞に発現する誘発性受容体２（ＴＲＥＭ２）、Ｃ１ｑ、対になった免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）、ＣＤ３３、インターロイキン６（ＩＬ６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ＴＮＦＲ１）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーＩＢ（ＴＮＦＲ２）およびアポリポタンパク質Ｊ（ＡｐｏＪ）が含まれる。一実施形態では、抗原は、ＢＡＣＥ１である。

本明細書で使用される「ＢＡＣＥ１」という用語は、別段の指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト）およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源からの任意の天然のベータ－セクレターゼ１（［３部位アミロイド前駆体タンパク質切断酵素１、膜結合型アスパラギン酸プロテアーゼ２、メマプシン２、アスパルチルプロテアーゼ２またはＡｓｐ２とも呼ばれる）を指す。この用語は、「完全長」のプロセシングされていないＢＡＣＥ１、および細胞におけるプロセシングから生じるＢＡＣＥ１の任意の形態を包含する。この用語は、ＢＡＣＥ１の天然に存在するバリアント、例えば、スプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なＢＡＣＥ１ポリペプチドのアミノ酸配列は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＶａｓｓａｒら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：７３５～７４１（１９９９）に報告されているヒトＢＡＣＥ１、アイソフォームＡの配列である。アイソフォームＢ、ＣおよびＤを含むヒトＢＡＣＥ１のいくつかの他のアイソフォームが存在する。参照によりその全体が本明細書に組み込まれるＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ Ｅｎｔｒｙ Ｐ５６８１７を参照されたい。

「抗ベータセクレターゼ抗体」、「抗ＢＡＣＥ１抗体」、「ベータ－セクレターゼに結合する抗体」および「ＢＡＣＥ１に結合する抗体」という用語は、抗体がＢＡＣＥ１の標的化において診断剤および／または治療剤として有用になるように十分な親和性でＢＡＣＥ１に結合することができる抗体を指す。一実施形態では、抗ＢＡＣＥ１抗体が非関連非ＢＡＣＥ１タンパク質に結合する程度は、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される、抗体のＢＡＣＥ１への結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＢＡＣＥ１に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０－８Ｍ以下、例えば、１０－８Ｍ～１０－１３Ｍ、例えば、１０－９Ｍ～１０－１３Ｍ）の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。ある特定の実施形態では、抗ＢＡＣＥ１抗体は、異なる種のＢＡＣＥ１およびアイソフォーム間で保存されているＢＡＣＥ１のエピトープに結合する。他の実施形態では、ＢＡＣＥ１の触媒ドメインの外側に位置するＢＡＣＥ１内のエキソサイトに結合する抗体が提供される。一実施形態では、ＢＡＣＥ１との結合について、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、Ｋｏｒｎａｃｋｅｒら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．４４：１１５６７～１１５７３（２００５）で同定されたペプチド（すなわち、ペプチド１、２、３、１－１１、１－１０、１－９、１－８、１－７、１－６、２－１２、３－１２、４－１２、５－１２、６－１２、７－１２、８－１２、９－１２、１０－１２、４、５、６、５－１０、５－９、スクランブル、Ｙ５Ａ、Ｐ６Ａ、Ｙ７Ａ、Ｆ８Ａ、１９Ａ、Ｐ１０ＡおよびＬ１ １Ａ）と競合する抗体が提供される。非限定的な例示的抗ＢＡＣＥ１抗体は、例えば、国際公開第２０１２／０６４８３６号パンフレットおよび国際公開第２０１６／０８１６３９号パンフレットに記載されている。

本明細書における「天然配列」タンパク質は、天然に存在するタンパク質のバリアントを含む、天然に見られるタンパク質のアミノ酸配列を含むタンパク質を指す。本明細書で使用される用語は、その天然源から単離されるタンパク質、または組換え作製されるタンパク質を含む。

本明細書の「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、種々の抗体構造を包含し、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを含むが、これらに限定されない。

本明細書における「参照抗体」は、試験抗体の特徴を欠く抗体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ改変抗体に対する参照抗体は、同じ可変領域を有し、同じアイソタイプであるが、Ｆｃ改変を欠く抗体である。いくつかの実施形態では、Ｆｃ改変抗体に対する参照抗体は、同じ可変領域およびアイソタイプを有するが、野生型Ｆｃを有する抗体である。

「抗体断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含むインタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例は当技術分野で周知であり（例えば、Ｎｅｌｓｏｎ、ＭＡｂｓ（２０１０）２（１）：７７～８３参照）、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖ；ダイアボディ；線状抗体；単鎖抗体分子（単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、リンカーを含むもしくは含まない軽鎖および／または重鎖抗原結合ドメインの融合物（および任意にタンデム）を含むがこれらに限定されない）；および抗体断片から形成された単一特異性または多重特異性抗原結合分子（Ｆｃを欠く複数の可変ドメインから構築された多重特異性抗体を含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない。

本明細書で使用される「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均一な抗体の集合から得られる抗体を指す。すなわち、集団を構成する個々の抗体が、同一である、および／または同じエピトープに結合するが、ただし、例えば、天然に存在する変異またはモノクローナル抗体の作製中に生じ得る変異を含む、可能なバリアントは除く。そのようなバリアントは、一般的に、少量存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物と比べて、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原の単一の決定基に対するものである。「モノクローナル」という修飾語は、実質的に同種の抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の作製を必要とするものと解釈されるべきではない。例えば、本発明によって使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５（１９７５）参照）、組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書参照）、ファージディスプレイ法（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４～６２８（１９９１）およびＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１～５９７（１９９１））、およびヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない様々な技術によって作製され得、そのような方法およびモノクローナル抗体を作製するための他の例示的な方法は本明細書に記載されている。本明細書におけるモノクローナル抗体の具体例には、キメラ抗体、ヒト化抗体、およびヒト抗体（それらの抗原結合断片を含む）が含まれる。

本明細書におけるモノクローナル抗体には、具体的には、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種に由来するか、または特定の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体内の対応する配列と同一または相同である一方で、鎖（複数可）の残りが、別の種に由来するか、または別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体における対応する配列と同一または相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）、ならびにそれらが所望される生物学的活性を呈する限りはそのような抗体の断片が含まれる（米国特許第４，８１６，５６７号明細書、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８１：６８５１～６８５５（１９８４））。

本明細書の目的のための「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に定義される、ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワークまたは重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワークまたはヒトコンセンサスフレームワーク「由来の」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、またはアミノ酸配列の変更を含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、アミノ酸変更の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、または２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列またはヒトコンセンサスフレームワーク配列に対して、配列が同一である。

「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬまたはＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１～３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、第１～３巻にあるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらにあるようなサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについて、サブグループは、上記のＫａｂａｔらにあるようなサブグループＩＩＩである。

非ヒト（例えば、マウス）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト抗体由来の最小限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの場合、ヒト化抗体は、ヒト抗体（レシピエント抗体）であり、レシピエントの超可変領域からの残基が、所望の特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギ、もしくは非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基によって置き換えられる。例えば、ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体のものに相当し、フレームワーク領域（ＦＲ）の全てまたは実質的に全てがヒト抗体のものに相当する。いくつかの例では、ヒト免疫グロブリンのＦＲ残基は、対応する非ヒト残基によって置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にもドナー抗体にも見られない残基を含んでもよい。これらの改変を行って、抗体性能をさらに改良する。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、上述のＦＲ置換（複数可）を除いて、超可変領域の全てまたは実質的に全てが非ヒト抗体の超可変領域に対応し、かつＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト抗体のＦＲである少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体はまた、任意に、抗体の定常領域、典型的には、ヒト抗体の定常領域の少なくとも一部分を含む。ある抗体、例えば、非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化を受けた抗体を指す。さらなる詳細については、例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ ３２１：５２２～５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３～５９６（１９９２）を参照されたい。

本明細書における「ヒト抗体」は、ヒトもしくはヒト細胞によって産生される抗体、またはヒト抗体レパートリもしくは他のヒト抗体コード配列を利用した非ヒト源由来の抗体のアミノ酸配列構造と対応するアミノ酸配列構造を含む抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特定的に除外する。そのような抗体は、免疫化で、内因性免疫グロブリン産生の非存在下でヒト抗体を産生することができるトランスジェニック動物（例えば、マウス）による産生（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５～２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏ．、７：３３（１９９３）；ならびに米国特許第５，５９１，６６９号明細書、同第５，５８９，３６９号明細書および同第５，５４５，８０７号明細書参照）；ヒト抗体またはヒト抗体断片を発現するファージディスプレイライブラリーからの選択（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２～５５３（１９９０）；Ｊｏｈｎｓｏｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ３：５６４～５７１（１９９３）；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４～６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１～５９７（１９９１）；Ｇｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ Ｊ．１２：７２５～７３４（１９９３）；米国特許第５，５６５，３３２号明細書および同第５，５７３，９０５号明細書参照）；インビトロ活性化Ｂ細胞を介した作製（米国特許第５，５６７，６１０号明細書および同第５，２２９，２７５号明細書参照）；およびヒト抗体産生ハイブリドーマからの単離を含むがこれらに限定されない様々な技術によって同定または作製することができる。

本明細書における「多重特異性抗体」は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。多重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体）として調製され得る。２つ、３つ、またはそれ以上（例えば、４つ）の機能的な抗原結合部位を有する操作された抗体も企図される（例えば、米国特許出願公開第２００２／０００４５８７ Ａ１号明細書、Ｍｉｌｌｅｒら参照）。多重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。

本明細書における抗体は、変化した抗原結合または生物学的活性を有する「アミノ酸配列バリアント」を含む。そのようなアミノ酸変化の例には、抗原に対する増強された親和性を有する抗体（例えば「親和性成熟」抗体）、および存在する場合には変化したＦｃを含む、例えば変化した（増加または減少した）抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を有する抗体（例えば、国際公開第００／４２０７２号パンフレット、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．および国際公開第９９／５１６４２号パンフレット、Ｉｄｕｏｓｏｇｉｅら参照）；および／または血清半減期の増加もしくは減少（例えば、国際公開第００／４２０７２号パンフレット、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．参照）が含まれる。

「親和性改変バリアント」は、親和性を変化させる（増加または減少させる）親抗体（例えば、親キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の置換超可変領域またはフレームワーク残基を有する。そのような置換バリアントを作製するための簡便な方法は、ファージディスプレイを使用する。簡潔には、いくつかの超可変領域部位（例えば、６～７つの部位）が、各部位に全ての可能なアミノ置換を生成するように突然変異される。このように作製された抗体バリアントは、各粒子内にパッケージングされたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物への融合物として糸状ファージ粒子からの一価様式で提示される。その後、ファージ提示バリアントは、それらの生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。改変の候補超可変領域部位を特定するために、アラニンスキャニング変異誘発を実施して、抗原結合に著しく寄与する超可変領域残基を同定することができる。あるいは、または加えて、抗原－抗体複合体の結晶構造を分析して、抗体と標的との間の接触点を特定することが有益であり得る。そのような接触残基および隣接残基は、本明細書に詳述される技術に従う置換の候補である。そのようなバリアントが作製されたら、バリアントのパネルがスクリーニングに供され、変化した親和性を有する抗体がさらなる開発のために選択され得る。

本明細書における改変ＩｇＧ Ｆｃまたは改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体もしくは融合タンパク質を「異種分子」とコンジュゲートして、例えば半減期もしくは安定性を増加させる、または抗体を改善することができる。例えば、本明細書における改変ＩｇＧ Ｆｃまたは改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体もしくは融合タンパク質は、多様な非タンパク質性ポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、またはポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマーのうちの１つに連結され得る。いくつかの実施形態では、異種分子は、治療用化合物または可視化剤（すなわち、検出可能な標識）であり、ＩｇＧ Ｆｃは、ＢＢＢを通過してそのような異種分子を輸送するために使用されている。異種分子の例には、化学化合物、ペプチド、ポリマー、脂質、核酸、およびタンパク質が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書における改変Ｆｃは、Ｆｃに結合した任意の炭水化物が、変化されている、存在／非存在下で改変されている、または型が改変されているように、「グリコシル化バリアント」であり得る。例えば、本抗体のＦｃに結合しているフコースを欠く成熟炭水化物構造を有する抗体が、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号明細書（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）も参照されたい。抗体のＦｃに結合した炭水化物中の二分枝Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）を有する抗体は、国際公開第２００３／０１１８７８号パンフレット、Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら、および米国特許第６，６０２，６８４号明細書、Ｕｍａｎａらに言及されている。抗体のＦｃに結合したオリゴ糖中の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体は、国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット、Ｐａｔｅｌらに報告されている。そのＦｃに結合した変化した炭水化物を有する抗体に関する国際公開第１９９８／５８９６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）および国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も参照されたい。改変グリコシル化を有する抗体を記載している米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号明細書（Ｕｍａｎａら）も参照されたい。例えば、この配列のＡｓｎを任意の他のアミノ酸に変異させることによる、Ｐｒｏを２９８位に配置することによる、または２９９位をＳｅｒもしくはＴｈｒ以外の任意のアミノ酸に改変することによる、Ｆｃ中のコンセンサスグリコシル化配列（２９７～２９９位のＡｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ／Ｔｈｒ（式中、Ｘはプロリンであることができない））の突然変異は、その位置でのグリコシル化を無効にするはずである（例えば、Ｆａｒｅｓ Ａ１－Ｅｊｅｈら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（２００７）１３：５５１９ｓ～５５２７ｓ；ＩｍｐｅｒｉａｌｉおよびＳｈａｎｎｏｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（１９９１）３０（１８）：４３７４～４３８０；Ｋａｔｓｕｒｉ、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．（１９９７）３２３（Ｐｔ ２）：４１５～４１９；Ｓｈａｋｉｎ－Ｅｓｈｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（１９９６）２７１：６３６３～６３６６参照）。

「超可変領域」または「ＨＶＲ」という用語は、本明細書で使用される場合、配列において超可変性であり（「相補性決定領域」もしくは「ＣＤＲ」）、および／または構造的に所定のループ（「超可変ループ」）を形成し、および／または抗原に接触する残基（「抗原接触」）を含有する抗体可変ドメインのそれぞれの領域を指す。一般的に、抗体は、６個のＨＶＲを含み、ＶＨに３個（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）、ＶＬに３個（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）含む。
本発明の例示的なＨＶＲとしては、以下のものが挙げられる：
（ａ）アミノ酸残基２６～３２（Ｌ１）、５０～５２（Ｌ２）、９１～９６（Ｌ３）、２６～３２（Ｈ１）、５３～５５（Ｈ２）および９６～１０１（Ｈ３）で生じる超可変ループ（ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１～９１７（１９８７））；
（ｂ）アミノ酸残基２４～３４（Ｌ１）、５０～５６（Ｌ２）、８９～９７（Ｌ３）、３１～３５ｂ（Ｈ１）、５０～６５（Ｈ２）および９５～１０２（Ｈ３）で生じるＣＤＲ（Ｒａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版 Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１））；
（ｃ）アミノ酸残基２７ｃ～３６（Ｌ１）、４６～５５（Ｌ２）、８９～９６（Ｌ３）、３０～３５ｂ（Ｈ１）、４７～５８（Ｈ２）および９３～１０１（Ｈ３）で生じる抗原接触（ＭａｃＣａｌｌｕｍら Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２６２：７３２～７４５（１９９６））；ならびに
（ｄ）ＨＶＲアミノ酸残基４６～５６（Ｌ２）、４７～５６（Ｌ２）、４８～５６（Ｌ２）、４９～５６（Ｌ２）、２６～３５（Ｈ１）、２６～３５ｂ（Ｈ１）、４９～６５（Ｈ２）、９３～１０２（Ｈ３）および９４～１０２（Ｈ３）を含む、（ａ）、（ｂ）および／または（ｃ）の組み合わせ。

別段の指示がない限り、ＨＶＲ残基および可変ドメイン内の他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において、上記のＲａｂａｔらに従ってナンバリングされている。

「フレームワーク」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義される超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。可変ドメインのＦＲは、一般的に、４つのＦＲドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ配列およびＦＲ配列は、一般的に、ＶＨ（またはＶＬ）の以下の配列に現れる：ＦＲ１－Ｈ１（Ｌ１）－ＦＲ２－Ｈ２（Ｌ２）－ＦＲ３－Ｈ３（Ｌ３）－ＦＲ４。ある特定の実施形態では、１つまたは複数のＦＲ残基を改変して、抗体の安定性を調節するか、または抗体の１つもしくは複数のＨＶＲの三次元的位置を調節して、例えば結合を増強することができる。

「完全長抗体」は、抗原結合可変領域ならびに軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）および重鎖定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３を含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列バリアントであり得る。

「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、および「全抗体」という用語は、本明細書において、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、または本明細書に定義されるＦｃを含有する重鎖を有する抗体を指すために互換的に使用される。

「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば、細胞傷害性部分または放射性標識）にコンジュゲートしていない抗体を指す。ネイキッド抗体は、医薬製剤中に存在し得る。

「天然抗体」は、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合されている２つの同一の軽鎖および２つの同一の重鎖で構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメインまたは重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）を有し、これに３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３）が続く。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメインまたは軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）を有し、これに定常軽（ＣＬ）ドメインが続く。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき）、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２種類のうちの１つに割り当てられ得る。

「エフェクター機能」は、補体経路の活性化以外の免疫系の活性化をもたらす抗体の生物学的活性を指す。そのような活性は、抗体のＦｃ（本明細書では改変Ｆｃなど）に主に見られる。エフェクター機能の例には、例えば、Ｆｃ受容体結合および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）が含まれる。一実施形態では、本明細書における改変Ｆｃは、エフェクター機能を本質的に欠く。別の実施形態では、本明細書における改変Ｆｃは、最小のエフェクター機能を保持する。エフェクター機能を改変または排除する方法は当技術分野で周知であり、エフェクター機能を排除するために１つまたは複数のアミノ酸位置でＦｃを改変すること（Ｆｃ結合嵌入：２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５６、２６５、２６８、２６９、２７０、２７２、２７８、２８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、３０１、３０３、３１１、３２２、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３８２、３８８、３８９、４１４、４１６、４１９、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８および４３９位）；Ｆｃのグリコシル化を改変すること（野生型哺乳動物グリコシル化を許容しない環境で抗体を産生すること、既にグリコシル化された抗体から１つまたは複数の炭水化物基を除去すること、および１つまたは複数のアミノ酸位置でＦｃを改変して、抗体がそれらの位置でグリコシル化される能力を排除すること（Ｎ２９７ＧおよびＮ２９７ＡおよびＤ２６５Ａを含むが、これらに限定されない）を含むが、これらに限定されない）を含むが、これらに限定されない。

「補体活性化」機能、または「補体経路の活性化」を可能にするかもしくは誘発する抗体の特性は互換的に使用され、対象の免疫系の補体経路に関与するかまたはこれを刺激する抗体の生物学的活性を指す。そのような活性には、例えば、Ｃ１ｑ結合および補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）が含まれ、抗体のＦｃ部分と非Ｆｃ部分の両方によって媒介され得る。補体活性化機能を改変または排除する方法は当技術分野で周知であり、補体成分との相互作用または補体成分を活性化する能力を排除または低減するために、一つまたは複数のアミノ酸位置でＦｃを改変すること（Ｃ１ｑ結合に関与することが知られている２７０、３２２、３２９および３２１位など）、および補体活性化を担う非Ｆｃの一部を改変または排除すること（すなわち、１３２位のＣＨ１領域を排除または改変すること（例えば、Ｖｉｄａｒｔｅら、（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（４１）：３８２１７～３８２２３参照））を含むが、これらに限定されない。

アミノ酸配列に応じて、Ｆｃドメインおよびそれらが一部である抗体は、異なる「クラス」に割り当てられ得る。Ｆｃドメインには５つの主なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡおよびＩｇＡ２へとさらに分けることができる。抗体の異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインはそれぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造および三次元配置は、当技術分野で周知である。重鎖定常領域は、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ドメインを含む。

本明細書で使用される「組換え抗体」という用語は、抗体をコードする核酸を含む組換え宿主細胞によって発現される抗体（例えば、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体またはその抗原結合断片）を指す。

本明細書で使用される「組換えタンパク質」という用語は、タンパク質をコードする核酸を含む組換え宿主細胞によって発現されるタンパク質（本明細書の改変Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートなど）を指す。

「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」という用語は、互換的に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の後代を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞および継代数にかかわらずこれに由来する後代を含む、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれる。後代は、核酸含有量が親細胞と完全に同一でなくてもよいが、突然変異を含有していてもよい。元々の形質転換された細胞についてスクリーニングされるかまたは選択されるのと同じ機能または生物学的活性を有する突然変異体後代は、本発明に含まれる。組換え抗体およびタンパク質を産生するための「宿主細胞」の例には、以下が含まれる：（１）哺乳動物細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）、ＣＯＳ、骨髄腫細胞（Ｙ０およびＮＳ０細胞を含む）、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）、ＨｅｌａおよびＶｅｒｏ細胞；（２）昆虫細胞、例えばｓｆ９、ｓｆ２１およびＴｎ５；（３）植物細胞、例えばタバコ属（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）に属する植物（例えば、タバコ（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ）；（４）酵母細胞、例えばサッカロミセス属（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）に属するもの（例えば、サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ））またはアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）に属するもの（例えばアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ））；（５）細菌細胞、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）細胞または枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）細胞など。

本明細書で使用される場合、「特異的に結合する（ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ ｂｉｎｄｉｎｇ）」または「特異的に結合する（ｂｉｎｄｓ ｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙ）」は、抗原に選択的または優先的に結合する抗体を指す。結合親和性は、一般に、スキャチャード解析または表面プラズモン共鳴技術（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）を使用）などの標準的なアッセイを使用して決定される。

参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上遮断する抗体を指し、逆に、参照抗体は、競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上遮断する。

本明細書で使用される「細胞傷害剤」という用語は、細胞機能を阻害もしくは防止し、および／または細胞死もしくは破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤には、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２およびＬｕの放射性同位体）；化学療法剤または薬物（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシンまたは他の挿入剤）；成長阻害剤；酵素およびその断片、例えば核分解酵素；抗生物質；細菌、真菌、植物または動物由来の低分子毒素または酵素的活性毒素などの毒素（その断片および／またはバリアントを含む）；ならびに本明細書に開示される様々な抗腫瘍剤または抗がん剤が含まれるが、これらに限定されない。

薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な投与量で、かつ期間にわたって、所望の治療的または予防的結果を達成するのに有効な量を指す。

「Ｆｃ領域」または「Ｆｃ」という用語は、本明細書では、ｐＨ６、ｐＨ７．４、またはｐＨ６とｐＨ７．４の両方でＦｃＲｎに結合するのに十分な重鎖定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３、または重鎖定常ドメインＣＨ２およびＣＨ３の一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。この用語は、天然配列Ｆｃおよび改変Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃは、Ｃｙｓ２２６またはＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端に及ぶ。一方、ＦｃのＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在してもよく、または存在しなくてもよい。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃまたは定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載される、ＥＵナンバリングシステム（ＥＵインデックスとも呼ばれる）に従う。例示的なヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３およびＩｇＧ４ Ｆｃアミノ酸配列を図１２および配列番号１～４に示す。いくつかの実施形態では、Ｆｃを含む抗体は、重鎖定常ドメインＣＨ１およびヒンジも含む。

本明細書で使用される「ＦｃＲｎ受容体」または「ＦｃＲｎ」という用語は、ヒトもしくは霊長類の胎盤または卵黄嚢（ウサギ）を介した胎児への、および初乳から小腸を介した新生児への母体ＩｇＧの移行に関与することが知られているＦｃ受容体（「ｎ」は新生児を示す）を指す。ＦｃＲｎは、ＩｇＧ分子に結合し、それらを血清中に再利用することによって、一定の血清ＩｇＧレベルの維持に関与することも知られている。

「コンジュゲート」は、１つまたは複数の異種分子にコンジュゲートした抗体またはＦｃである。「イムノコンジュゲート」は、１つまたは複数の異種分子にコンジュゲートした抗体である。「Ｆｃコンジュゲート」は、１つまたは複数の異種分子にコンジュゲートしたＦｃである。そのような異種分子の非限定的な例には、タンパク質、酵素、標識および細胞傷害剤が含まれる。任意に、そのようなコンジュゲーションは、リンカーを介する。いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、Ｆｃが連続アミノ酸配列として異種タンパク質に融合されている「Ｆｃ融合物」である。

本明細書で使用される「リンカー」は、第１の分子を第２の分子に共有結合的または非共有結合的に接続する構造である。ある特定の実施形態では、リンカーは、ペプチドである。他の実施形態では、リンカーは、化学リンカーである。

「標識」は、本明細書の抗体と結合し、検出またはイメージングに使用されるマーカーである。そのような標識の例には、放射性標識、フルオロフォア、発色団またはアフィニティータグが含まれる。一実施形態態では、標識は、医用画像に使用される放射性標識、例えば、ｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ｍｒｉとしても知られる）のためのスピン標識、例えば、この場合もやはりヨウ素－１２３、ヨウ素－１３１、インジウム－１１１、フッ素－１９、炭素－１３、窒素－１５、酸素－１７、ガドリニウム、マンガン、鉄などである。

「個体」または「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物には、飼い馴らされた動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、およびウマ）、霊長類（例えば、ヒト、およびサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ、およびげっ歯類（例えば、マウスおよびラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体または対象は、ヒトである。

「単離」抗体は、その自然環境の構成成分から分離された抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換もしくは逆相ＨＰＬＣ）法によって決定される場合、純度が９５％より大きく、または９９％より大きくなるまで精製される。抗体純度を評価する方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９～８７（２００７）を参照されたい。

「単離核酸」は、その天然環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸は、元々その核酸分子を含む細胞に含まれているが、その核酸分子が、染色体外に存在するか、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する核酸分子を含む。

「抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖および軽鎖（またはその断片）をコードする１つまたは複数の核酸分子を指し、単一のベクターまたは別個のベクター内の核酸分子（複数可）を含み、そのような核酸分子（複数可）は、宿主細胞内の１つまたは複数の場所に存在する。

「パッケージ添付文書」という用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、そのような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌および／または警告に関する情報を含む。

参照ポリペプチド配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列をアライメントし、配列同一性最大パーセントを得るのに必要な場合はギャップを導入した後に、いかなる保存的置換も配列同一性の部分として考慮せずに、参照ポリペプチド配列におけるアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアラインメントは、当業者が備えている技能の範囲内の様々な方法で、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成され得る。当業者は、比較される配列の完全長にわたって最大アラインメントを達成するのに必要とされる任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするのに適切なパラメータを決定することができる。しかしながら、本明細書では目的のために、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を用いて生成される。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７に登録されている。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．（Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）から公的に入手可能であり、またはそのソースコードからコンパイルされてもよい。ＡＬＩＧＮ－２プログラムは、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含め、ＵＮＩＸオペレーティングシステムで使用するためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ－２プログラムによって設定されており、かつ変わらない。

ＡＬＩＧＮ－２がアミノ酸配列比較に採用されている状況においては、（あるいは所与のアミノ酸配列Ｂに対する、配列Ｂとの、または配列Ｂに対向するある特定のアミノ酸配列同一性％を有するかまたは含む所与のアミノ酸配列Ａとして購入することができる）所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂに対する、配列Ｂとの、または配列Ｂに対向するアミノ酸配列同一性％は、次のように計算される：
分数Ｘ／Ｙの１００倍
（式中、Ｘは、ＡおよびＢのこのプログラムのアラインメントにおいて、配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ－２によって同一性マッチとしてスコアリングされたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂにおけるアミノ酸残基の合計数である）。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと等しくない場合、ＡのＢに対するアミノ酸配列同一性％は、ＢのＡに対するアミノ酸配列同一性％と等しくないことが理解されよう。特に具体的に明記しない限り、本明細書で使用されるアミノ酸配列同一性％値は全て、ＡＬＩＧＮ－２コンピュータプログラムを使用して直前の段落に記載されるように得られる。

「医薬製剤」という用語は、その中に含まれる有効成分の生物学的活性を有効にし、製剤が投与される対象にとって受け入れられないほど毒性である更なる構成成分を含まないような形態である調製物を指す。

「薬学的に許容され得る担体」は、対象に非毒性の、有効成分以外の医薬製剤中の成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、または保存剤が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書で使用される場合、「処置」（およびその文法的な変形語、例えば、「処置する」または「処置すること」）は、処置される個体の本来の経過を変える試みにおける臨床的介入を指し、予防のために、または臨床病理の経過の間に行うことができる。処置の所望の効果には、疾患の発症または再発を予防すること、症状の軽減、疾患の任意の直接的または間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行速度を低下させること、病状の寛解または緩和、および回復または改善された予後が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるために、または疾患の進行を遅らせるために使用される。

「可変領域」または「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖および軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨおよびＶＬ）は、一般的に、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）と、３つの超可変領域（ＨＶＲ）とを含む。（例えば、Ｋｉｎｄｔら、Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第６版、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．、９１頁（２００７）参照）。抗原結合特異性を与えるために、単一のＶＨまたはＶＬドメインで十分であり得る。さらに、特定の抗原に結合する抗体は、抗原に結合する抗体のＶＨまたはＶＬドメインを使用し、それぞれ、相補的ＶＬまたはＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングして、単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０～８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８（１９９１）を参照されたい。

本明細書で使用される「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することができる核酸分子を指す。本用語は、自己複製する核酸構造としてのベクター、およびベクターが導入された宿主細胞のゲノム内へと組み込まれたベクターを含む。ある特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターは、本明細書で「発現ベクター」と呼ばれる。
１．組成物および方法
Ａ．抗体およびＦｃコンジュゲート

一態様では、本発明は、部分的に、ＢＢＢを通過して所望の分子を輸送するために使用することができる改変Ｆｃに基づく。ある特定の実施形態では、改変Ｆｃを含む抗体が提供される。ある特定の実施形態では、改変Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、治療用タンパク質および／または検出可能なタンパク質などのタンパク質に融合した本明細書で提供される改変Ｆｃを含む。そのような実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは「Ｆｃ融合物」と呼ばれ得る。本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートは、例えば、脳および／またはＣＮＳに影響を及ぼす疾患の診断または処置に有用である。
Ａ．例示的な改変Ｆｃ

改変Ｆｃを含む抗体およびＦｃコンジュゲートが本明細書で提供され、抗体およびＦｃコンジュゲートは、インビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃを含む抗体およびＦｃコンジュゲートは、改善された脳取り込みを有する。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、対象の脳または中枢神経系への抗体またはＦｃコンジュゲートの送達を改善するために使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書の改変Ｆｃは、血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する輸送を改善する。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じ抗体またはＦｃコンジュゲートに標準化された場合、少なくとも３０または少なくとも４０または少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。非限定的な例示的なトランスサイトーシスアッセイが、本明細書のアッセイの節に記載される。いくつかの実施形態では、インビトロトランスサイトーシスアッセイは、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲｎは、ヒトＦｃＲｎである。いくつかの実施形態では、細胞は、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体またはＦｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体またはＦｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下のｐＨ７．４でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃを含むある特定の抗体およびＦｃコンジュゲートは、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のｐＨ６でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する結合親和性を有する。いくつかの実施形態では、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体またはＦｃコンジュゲートの親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎ（例えば、ヒトＦｃＲｎ）に対する改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体またはＦｃコンジュゲートの親和性に対する比は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である。

様々な実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃは、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、配列番号１～４から選択されるＩｇＧ配列の１つまたは複数の改変を含む。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、改変Ｆｃは、ＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、ＩｇＧ Ｆｃは、ＩｇＧ２またはＩｇＧ３ Ｆｃである。

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートの文脈で、少なくとも３０の標準化されたトランスサイトーシススコアを有する改変Ｆｃが提供される。そのような改変Ｆｃの非限定的な例には、以下の突然変異のセットを含む改変Ｆｃが含まれる：２５２Ｗ／４３４Ｗ；２５２Ｙ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／２８６Ｅ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０８Ｐ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／Ｎ４３４Ｙ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２８６Ｅ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２８６Ｅ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；２８６Ｅ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；２８６Ｅ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；３０７Ｑ／２８６Ｅ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／３１１Ａ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；３１１Ａ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；３１１Ａ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；３１１Ｉ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；４３３Ｋ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；および２５２Ｙ／３１１Ｉ／４２８Ｌ／４３４Ｙ。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ２またはＩｇＧ３ Ｆｃである。

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートの文脈で、少なくとも７０の標準化されたトランスサイトーシススコアを有する改変Ｆｃが提供される。そのような改変Ｆｃの非限定的な例には、以下の突然変異のセットを含む改変Ｆｃが含まれる：２５２Ｗ／４３４Ｗ；２５２Ｙ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／２８６Ｅ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０８Ｐ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／Ｎ４３４Ｙ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２８６Ｅ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２８６Ｅ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；２８６Ｅ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；３０７Ｑ／２８６Ｅ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／３１１Ａ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；３１１Ａ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；３１１Ｉ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；４３３Ｋ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；および２５２Ｙ／３１１Ｉ／４２８Ｌ／４３４Ｙ。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ２またはＩｇＧ３ Ｆｃである。

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートの文脈で、少なくとも１００の標準化されたトランスサイトーシススコアを有する改変Ｆｃが提供される。そのような改変Ｆｃの非限定的な例には、以下の突然変異のセットを含む改変Ｆｃが含まれる：２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／Ｎ４３４Ｙ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２８６Ｅ／３１１Ａ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；３１１Ａ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；３１１Ｉ／４３３Ｋ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ａ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／３１１Ｉ／４３４Ｙ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ｉ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３１１Ａ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／４２８Ｌ／４３４Ｙ／４３６Ｉ；２５２Ｙ／３０７Ｑ／４２８Ｌ／４３４Ｙ；および２５２Ｙ／３１１Ｉ／４２８Ｌ／４３４Ｙ。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ１ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ４ Ｆｃである。いくつかの実施形態では、上に列挙される改変Ｆｃは、改変ＩｇＧ２またはＩｇＧ３ Ｆｃである。

非限定的なさらなる改変Ｆｃが提供され、例えば、本明細書中に記載されるインビトロトランスサイトーシスアッセイを使用して選択され得る。様々な例示的な改変Ｆｃが当技術分野で公知であり、本明細書で抗体およびＦｃコンジュゲートに使用するためのインビトロトランスサイトーシスアッセイを使用して選択され得る。トランスサイトーシス活性についてアッセイされ得るそのような改変Ｆｃの非限定的な例には、例えば、米国特許出願公開第２０１５／００５０２６９号明細書および同第２０１３／０１３１３１９号明細書に記載されるものが含まれ、これらは、任意の目的のためにその全体が参照により本明細書に組み込まれる。
１．改変Ｆｃ親和性

いくつかの実施形態では、ｐＨ７．４でＦｃＲｎについて１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する改変Ｆｃが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ｐＨ７．４でＦｃＲｎについて１００ｎＭ～１０μＭの間、または１００ｎＭ～５μＭの間、または１００ｎＭ～２μＭの間、または１００ｎＭ～１μＭの間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する改変Ｆｃが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ｐＨ６でＦｃＲｎについて１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する改変Ｆｃが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ｐＨ６でＦｃＲｎについて１０ｎＭ～１μＭの間、または１０ｎＭ～７５０ｎＭの間、または１０ｎＭ～５００ｎＭの間、または１０ｎＭ～２００ｎＭの間、または１０ｎＭ～１００ｎＭの間の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する改変Ｆｃが本明細書で提供される。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃは、ｐＨ７．４でＦｃＲｎに結合し、ｐＨ６でＦｃＲｎに結合し、ｐＨ７．４での Ｋ_Ｄの、ｐＨ６でのＫ_Ｄに対する比は、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、または少なくとも１００である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃは、ｐＨ７．４でＦｃＲｎに結合し、ｐＨ６でＦｃＲｎに結合し、ｐＨ７．４でのＫ_ＤのｐＨ６でのＫ_Ｄに対する比は、５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、または２０～２００である。

様々な実施形態では、ＦｃＲｎは、ヒトＦｃＲｎである。

いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、表面プラズモン共鳴を使用して測定される。いくつかのそのような実施形態では、Ｋ_Ｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００装置（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を使用して２５℃で測定される。改変Ｆｃは、例えば、４００～１０００ ＲＵの表面密度でのプロテインＬ結合を通して、または１０～１００ ＲＵの表面密度で抗ヒトＦａｂ捕捉チップを使用することによって固定化される。中性ｐＨ結合は、例えば、ＨＢＳ－Ｐ（０．０１ Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％ ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）で決定され得る。酸性ｐＨ結合は、例えば、ＭＢＳ－Ｐ（０．０１ Ｍ ＭＥＳＳ ｐＨ７．５、０．１５ Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％ ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）で決定され得る。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）は、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン４．１）を使用して計算される。平衡解離定数（Ｋｄ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５～８８１（１９９９）を参照されたい。あるいは、Ｋ_Ｄ値は、分析物濃度に対する定常状態の結合レベルの依存性から決定され得る。いくつかの実施形態では、いわゆる定常状態分析は、弱い相互作用から中程度の相互作用の測定に特に適している。
２．改変Ｆｃバリアント

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃのアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、改変Ｆｃバリアントの結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。Ｆｃのアミノ酸配列バリアントは、Ｆｃをコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような改変には、例えば、Ｆｃのアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／またはＦｃのアミノ酸配列内の残基への挿入、および／またはＦｃのアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入および置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。
ａ）置換、挿入および欠失バリアント

ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有するＦｃバリアントが提供される。置換による変異誘発に関して目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表２Ａに「好ましい置換」の見出しの下で示される。より実質的な変化は、表２Ａに「例示的な置換」の見出しの下に示され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される通りである。目的のＦｃ中にアミノ酸置換を導入し、その産物を、所望の活性、例えば、減少した免疫原性、または減少したもしくは改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
表２Ａ

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ分けされてもよい。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うだろう。

突然変異誘発の標的となり得るＦｃの残基または領域を特定するための有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４巻：１０８１～１０８５に記載されるように「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、ＦｃとＦｃＲｎの相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、残基または標的残基群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ）が同定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。あるいは、または加えて、ＦｃとＦｃＲｎとの間の接触点を特定するためのＦｃ－ＦｃＲｎ複合体の結晶構造。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、または除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに１個または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有するＦｃが含まれる。Ｆｃ分子の他の挿入バリアントには、ＦｃのＮ末端またはＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）またはＦｃの血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が含まれる。
ｂ）グリコシル化バリアント

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃは、Ｆｃがグリコシル化されている程度を増加または減少させるように変化する。Ｆｃへのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。

哺乳動物細胞によって産生される天然Ｆｃは、典型的には、Ｎ結合によってＦｃのＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、ＷｒｉｇｈｔらＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６～３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」にあるＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本発明のＦｃ中のオリゴ糖の改変は、ある特定の改善された特性を有するＦｃバリアントを作成するために行われてもよい。

一実施形態では、Ｆｃに（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有するＦｃバリアントが提供される。例えば、そのようなＦｃ中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号パンフレットに記載されるＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃの約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ残基のＥＵナンバリング）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、Ｆｃのマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流または下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号明細書（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠乏」Ｆｃバリアントに関する刊行物の例には：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書；国際公開第２０００／６１７３９号パンフレット；国際公開第第２００１／２９２４６号パンフレット；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号明細書；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号明細書；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号明細書；国際公開第２００３／０８５１１９号パンフレット；国際公開第２００３／０８４５７０号パンフレット；国際公開第２００５／０３５５８６号パンフレット；国際公開第２００５／０３５７７８号パンフレット；国際公開第２００５／０５３７４２号パンフレット；国際公開第２００２／０３１１４０号パンフレット；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３６巻：１２３９～１２４９頁（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．、８７巻：６１４頁（２００４）が含まれる。脱フコシル化Ｆｃを産生することができる細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠乏したＬｅｅ １３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３～５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；および国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号パンフレット、Ａｄａｍｓ ら、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０～６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号パンフレット参照）が含まれる。

例えば、Ｆｃに結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている二分オリゴ糖を有するＦｃバリアントがさらに提供される。そのようなＦｃバリアントは、減少したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのようなＦｃバリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号パンフレット（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号明細書（Ｕｍａｎａら）；および米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号明細書（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃに結合したオリゴ糖中の少なくとも１つのガラクトース残基を有するＦｃバリアントも提供される。そのようなＦｃバリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのようなＦｃバリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；および国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）システイン操作Ｆｃバリアント

ある特定の実施形態では、改変Ｆｃの１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されている、システイン操作Ｆｃバリアントを作製することが望ましい場合がある。特定的な実施形態では、置換された残基は、改変Ｆｃの接近可能な部位で生じる。それらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基が改変Ｆｃの接近可能な部位に位置付けられ、それを使用して、改変Ｆｃを他の部分（薬物部分またはリンカー－薬物部分など）にコンジュゲートして、本明細書にさらに記載されるＦｃコンジュゲートを作製することができる。システイン操作Ｆｃは、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号明細書および同第９，０００，１３０号明細書に記載されるように作製され得る。
ｄ）改変Ｆｃ誘導体

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される改変Ｆｃは、当技術分野で公知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変され得る。改変Ｆｃの誘導体化に適した部位には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。このポリマーは、任意の分子量を有していてもよく、分岐していてもよく、または分岐していなくてもよい。改変Ｆｃに結合したポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが結合している場合には、同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数および／またはタイプは、改善される改変Ｆｃの特定の特性または機能、改変Ｆｃ誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかを含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。

別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る改変Ｆｃおよび非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０２：１１６００～１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を与えないが、改変Ｆｃ－非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部位を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
Ｂ．例示的な抗体

様々な実施形態では、本明細書の改変Ｆｃを含む抗体が提供される。ある特定の態様では、改変Ｆｃは、ＢＢＢを通過する抗体の輸送を改善し得る。いくつかの実施形態では、本明細書の改変Ｆｃを含む抗体は、脳抗原に結合する。そのような脳抗原の非限定的な例には、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、アミロイドベータ（Ａベータ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、タウ、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）、アルファ－シヌクレイン、ＣＤ２０、ハンチンチン、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ロイシンリッチリピートキナーゼ２（ＬＲＲＫ２）、パーキン、プレセニリン１、プレセニリン２、ガンマセクレターゼ、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ｐ７５ニューロトロフィン受容体（ｐ７５ＮＴＲ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、カスパーゼ６、骨髄細胞に発現する誘発性受容体２（ＴＲＥＭ２）、Ｃ１ｑ、対になった免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）、ＣＤ３３、インターロイキン６（ＩＬ６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ＴＮＦＲ１）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバーＩＢ（ＴＮＦＲ２）およびアポリポタンパク質Ｊ（ＡｐｏＪ）が含まれる。

さらなる態様では、本明細書の改変Ｆｃを含む抗体は、以下の１～７節に記載される特徴のいずれかを、単独で、または組み合わせて組み込むことができる：
１．抗体親和性

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体が、その抗原について１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下または０．００１ｎＭ以下（例えば、１０^－８Ｍ以下、例えば１０^－８Ｍ～１０^－１３Ｍ、例えば、１０^－９ Ｍ～１０^－１３ Ｍ）の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を有する。

一実施形態では、Ｋ_Ｄは、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定される。一実施形態では、ＲＩＡは、目的の抗体のＦａｂバージョンおよびその抗原を用いて実施される。例えば、抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、非標識抗原の滴定系の存在下で、最小濃度の（^１２５Ｉ）標識抗原によりＦａｂを平衡化し、次いで、結合した抗原を抗Ｆａｂ抗体でコーティングしたプレートで捕捉することにより測定する（例えばＣｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５～８８１（１９９９）参照）。アッセイの条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ^{（登録商標）}マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中の５μｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、その後、ＰＢＳ中の２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２～５時間にわたって室温（およそ２３℃）でブロッキングする。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中、１００ｐＭまたは２６ｐＭの［^１２５Ｉ］－抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３～４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ－１２の評価と一貫する）。その後、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションをより長い期間（例えば、約６５時間）続けて、平衡に達することを確実にすることができる。その後、室温でのインキュベーション（例えば、１時間）のために混合物を捕捉プレートに移す。次に、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％のポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ－２０^{（登録商標）}）で８回洗浄する。プレートが乾燥してから、１５０μｌ／ウェルのシンチラート（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ－２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を添加し、プレートを、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイでの使用に選択する。

一態様では、ＲＩＡは、スキャチャード解析である。例えば、目的の抗体は、ラクトペルオキシダーゼ法（ＢｅｎｎｅｔｔおよびＨｏｒｕｋ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ２８８ １３４～１４８頁（１９９７））を使用してヨウ素化することができる。放射標識抗体を、ＮＡＰ－５カラムを使用するゲル濾過によって遊離^１２５Ｉ－Ｎａから精製し、その比活性を測定する。一定濃度のヨウ素化抗体および減少する濃度の段階希釈した非標識抗体を含有する５０μＬの競合反応混合物を９６ウェルプレートに入れる。抗原を一過的に発現する細胞を、１０％ ＦＢＳ、２ ｍＭ Ｌ－グルタミンおよび１×ペニシリン－ストレプトマイシンを補充したダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）からなる増殖培地中、３７℃、５％ ＣＯ_２で培養する。Ｓｉｇｍａ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを使用して細胞を皿から剥離し、結合緩衝液（１％ウシ血清アルブミン、５０ ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２および０．２％アジ化ナトリウムを含むＤＭＥＭ）で洗浄する。洗浄した細胞を、０．２ ｍＬの結合緩衝液中、およそ２００，０００個の細胞の密度で、５０μＬの競合反応混合物を含有する９６ウェルプレートに添加する。細胞との競合反応における非標識抗体の最終濃度を、１０００ｎＭで開始し、次いで、１０濃度について１：２倍希釈で減少させ、ゼロ添加緩衝液のみの試料を含めて、変化させる。各濃度の非標識抗体についての細胞との競合反応物を３連でアッセイする。細胞との競合反応物を室温で２時間インキュベートする。２時間のインキュベーション後、競合反応物をフィルタプレートに移し、結合緩衝液で４回洗浄して、結合したヨウ素化抗体から分離する。フィルタをガンマカウンターによって計数し、ＭｕｎｓｏｎおよびＲｏｄｂａｒｄ（１９８０）のフィッティングアルゴリズムを使用して結合データを評価して、抗体の結合親和性を決定する。

いくつかの実施形態では、Ｋ_Ｄは、抗ヒトＦｃキット（ＢｉＡｃｏｒｅ Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ））を使用して、２５℃で、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００装置（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。簡潔には、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、供給業者の指示に従って、Ｎ－エチル－Ｎ’－（３－ジメチルアミノプロピル）－カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗ヒトＦｃ抗体を、５μｌ／分の流量で注入する前に、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ４．０で、５０μｇ／ｍｌに希釈して、およそ１００００応答単位（ＲＵ）の結合タンパク質を達成する。抗体の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応基を遮断する。動態測定のために、抗体をＨＢＳ－Ｐに注入して約２２０ ＲＵに到達させ、次いで、２倍段階希釈の抗原をＨＢＳ－Ｐに２５℃で約３０μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して計算する。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５～８８１（１９９９）を参照されたい。

所与の化合物についてのＩＣ５０を決定するいくつかの方法は当技術分野で公知であり；一般的なアプローチは、本明細書に記載されるような競合結合アッセイを実施することである。一般に、高いＩＣ５０は、既知のリガンドの結合を阻害するために必要な抗体が多く、したがって、そのリガンドに対する抗体の親和性が比較的低いことを示す。逆に、低いＩＣ５０は、既知のリガンドの結合を阻害するために必要な抗体が少なく、したがって、そのリガンドに対する抗体の親和性が比較的高いことを示す。
２．キメラ抗体およびヒト化抗体

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１～６８５５（１９８４））に記載されている。一例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、または非ヒト霊長類、例えば、サル由来の可変領域）およびヒト定常領域を含む。本明細書における目的のキメラ抗体には、非ヒト霊長類（例えば、ヒヒ、アカゲザル、またはカニクイザルなどの旧世界ザル）に由来する可変ドメイン抗原結合配列と、ヒト定常領域配列とを含む、「霊長類化」抗体が含まれる（米国特許第５，６９３，７８０号明細書）。さらなる例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のものから変化している「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

ある特定の実施形態では、キメラ抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減する一方で、親非ヒト抗体の特異性および親和性は保持するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（またはその一部）が非ヒト抗体由来であり、かつＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列由来である１つまたは複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体のいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復するか、または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換されている。

ヒト化抗体およびその作製方法については、例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９～１６３３（２００８）に概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３～３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９～１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号明細書、同第７，５２７，７９１号明細書、同第６，９８２，３２１号明細書および同第７，０８７，４０９号明細書；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５～３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフトを記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９～４９８（１９９１）（「表面再生」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３～６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載している）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１～６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２～２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「ガイド付き選択」を記載している）にさらに記載されている。

ヒト化に使用され得るヒトフレームワーク領域には、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）参照）；軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導されるフレームワーク領域（例えば、ＣａｒｔｅｒらＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；およびＰｒｅｓｔａらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）参照）；ヒト成熟（体細胞変異された）フレームワーク領域またはヒト生殖系フレームワーク領域（例えば、ＡｌｍａｇｒｏおよびＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９～１６３３（２００８）参照）；およびＦＲライブラリーのスクリーニングから誘導されるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８～１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１～２２６１８（１９９６）参照）が含まれるがこれらに限定されない。
３．ヒト抗体

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して作製され得る。ヒト抗体は一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋおよびｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、５：３６８～７４（２００１）ならびにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２０：４５０～４５９（２００８）に記載されている。

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製され得る。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わるか、または染色体外に存在するか、または動物の染色体にランダムに組み込まれるヒト免疫グロブリン遺伝子座の全部または一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般的に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得る方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．、２３：１１１７～１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術について記載した米国特許第６，０７５，１８１号明細書および同第６，１５０，５８４号明細書；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術について記載した米国特許第５，７７０，４２９号明細書；Ｋ－Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載した米国特許第７，０４１，８７０号明細書；ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術について記載した米国特許出願公開第２００７／００６１９００号明細書も参照されたい。そのような動物によって産生されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによってさらに改変され得る。

ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１～６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：８６（１９９１）参照）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して作製されたヒト抗体もまた、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７～３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法は、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号明細書（ハイブリドーマ細胞株由来のモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の作製を記載する）、およびＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５～２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載している）を含む。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）はまた、ＶｏｌｌｍｅｒｓおよびＢｒａｎｄｉｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７～９３７（２００５）ならびにＶｏｌｌｍｅｒｓおよびＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５～９１（２００５）にも記載されている。

ヒト抗体は、ヒト由来のファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても作製され得る。その後、そのような可変ドメイン配列は、所望のヒト定常ドメインと組み合わせられ得る。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術は以下に記載される。
４．ライブラリー由来抗体

本発明の抗体は、所望の活性（複数可）を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し、所望の結合特性を保有する抗体に関してそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当技術分野で公知である。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１～３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２～５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４～６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１～５９７（１９９２）；ＭａｒｋｓおよびＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１～１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９～３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３～１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７～１２４７２（２００４）；ならびにＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１～２）：１１９～１３２（２００４）にさらに記載されている。

ある特定のファージディスプレイ方法では、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー中でランダムに再結合され、次いで、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３～４５５（１９９４）に記載されているように抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として、またはＦａｂ断片としてのいずれかで、抗体断片を提示する。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。あるいは、ナイーブなレパートリを（例えばヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５～７３４（１９９３）に記載されるように、いずれの免疫化も行わずに、広範囲の非自己抗原および自己抗原に対する単一源の抗体を得ることができる。最後に、ナイーブライブラリーを、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１～３８８（１９９２）に記載されているように、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して高度可変ＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを説明する特許刊行物には、例えば、以下が含まれる：米国特許第５，７５０，３７３号明細書、ならびに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号明細書、同第２００５／０１１９４５５号明細書、同第２００５／０２６６０００号明細書、同第２００７／０１１７１２６号明細書、同第２００７／０１６０５９８号明細書、同第２００７／０２３７７６４号明細書、同第２００７／０２９２９３６号明細書、および同第２００９／０００２３６０号明細書。

ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書においてヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。
５．多重特異性抗体

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、多重特異性抗体、例えば、二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、同じ抗原の２つの異なるエピトープに結合し得る。ある特定の実施形態では、二重特異性抗体は、２つの異なる抗原に結合し得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体断片として調製され得る。

多重特異性抗体を作製する技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、国際公開第９３／０８８２９号パンフレット、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）参照）、および「ノブ・イントゥ・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号明細書参照）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号パンフレット）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書、およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）参照）；二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７～１５５３（１９９２）参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８（１９９３）参照）；および単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）参照）；および例えば、Ｔｕｔｔら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。

多重特異性抗体を作製する技術には、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の組換え共発現（ＭｉｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、国際公開第９３／０８８２９号パンフレット、およびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）参照）、および「ノブ・イントゥ・ホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号明細書参照）が含まれるが、これらに限定されない。多重特異性抗体はまた、抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング効果の操作（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号パンフレット）；２つ以上の抗体または断片の架橋（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号明細書、およびＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）参照）；二重特異性抗体を作製するためのロイシンジッパーの使用（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７～１５５３（１９９２）参照）；二重特異性抗体断片を作製するための「ダイアボディ」技術の使用（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４～６４４８（１９９３）参照）；および単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）参照）；および例えば、Ｔｕｔｔら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載される三重特異性抗体の調製によっても作製され得る。

「オクトパス抗体」または「二重可変ドメイン免疫グロブリン」（ＤＶＤ）を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体もまた、本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号明細書およびＷｕら Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００７）参照）。
６．抗体バリアント

特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な改変を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような改変には、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が含まれる。欠失、挿入および置換の任意の組み合わせは、最終構築物が、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終構築物に到達するように行うことができる。
ａ）置換、挿入および欠失バリアント

ある特定の実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換による変異誘発に関して目的の部位には、ＨＶＲおよびＦＲが含まれる。保存的置換は、表２Ｂに「好ましい置換」の見出しの下で示される。より実質的な変化は、表２Ｂに「例示的な置換」の見出しの下に示され、アミノ酸側鎖クラスを参照して以下にさらに記載される通りである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入し、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された後編結合、減少した免疫原性、または減少したもしくは改善されたＡＤＣＣもしくはＣＤＣについてスクリーニングすることができる。
表２Ｂ

アミノ酸は、共通の側鎖特性に従ってグループ分けされてもよい。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。

非保存的置換は、これらのクラスの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴うだろう。

ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つまたは複数の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなるの試験ために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較したある特定の生物学的特性の修正（例えば、改善）（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）を有し、かつ／または実質的に保持された親抗体のある特定の生物学的特性を有する。例示的な置換バリアントは、親和性成熟抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を使用して、簡便に作製され得る。簡潔には、１つまたは複数のＨＶＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージ上に提示され、特定の生物学的活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。

改変（例えば、置換）をＨＶＲに行って、例えば、抗体親和性を改善することができる。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９～１９６（２００８）参照）、および／または抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨまたはＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーの構築およびそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１～３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、多様性が、様々な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、またはオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のうちのいずれかによって、成熟させるために選択された可変遺伝子に導入される。その後、二次ライブラリーが作製される。その後、このライブラリーがスクリーニングされて、所望の親和性を有する任意の抗体バリアントを特定する。多様性を導入するための別の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４～６個の残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えば、アラニンスキャニング変異誘発またはモデリングを使用して、特異的に特定され得る。特にＣＤＲ－Ｈ３およびＣＤＲ－Ｌ３が標的とされることが多い。

ある特定の実施形態では、置換、挿入または欠失は、そのような改変が、抗体が抗原に結合する能力を実質的に低下させない限り、１つまたは複数のＨＶＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的変化（例えば、本明細書で提供される保存的置換）が、ＨＶＲ中で行われ得る。そのような変化は、例えば、ＨＶＲ内の抗原接触残基の外側であり得る。上に提供されるバリアントＶＨおよびＶＬ配列のある特定の実施形態では、各ＨＶＲは、変化していないか、または１つ、２つもしくは３つ以下のアミノ酸置換を含有するかのいずれかである。

変異誘発に標的化され得る抗体の残基または領域を同定するための有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１～１０８５によって記載されるように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、抗体と抗原の相互作用が影響を受けるかどうかを決定するために、残基または標的残基群（例えば、荷電残基、例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕ）が同定され、中性または負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニンまたはポリアラニン）によって置き換えられる。さらなる置換が、初期置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸位置に導入されてもよい。あるいは、または加えて、抗体と抗原との間の接点を特定するための抗原－抗体複合体の結晶構造。そのような接触残基および隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、または除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。

アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端および／またはカルボキシル末端融合、ならびに１個または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例には、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が含まれる。抗体分子の他の挿入バリアントには、抗体のＮ末端またはＣ末端と酵素（例えば、ＡＤＥＰＴの場合）または抗体の血清半減期を増加させるポリペプチドとの融合が含まれる。
ｂ）グリコシル化バリアント

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化されている程度を増加または減少させるように変化する。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つまたは複数のグリコシル化部位が作り出されるか、または除去されるようにアミノ酸配列を改変させることにより好都合に達成され得る。

抗体がＦｃ領域を含む場合、それに結合した炭水化物が変化させられ得る。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、典型的には、Ｎ結合によってＦｃのＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に一般に結合される分岐状の二分岐オリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６～３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ－アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトースおよびシアル酸、ならびに二分岐オリゴ糖構造の「幹」にあるＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含んでいてもよい。いくつかの実施形態では、本発明の抗体中のオリゴ糖の改変は、特定の改善された特性を有する抗体バリアントを作成するために行われ得る。

一実施形態では、Ｆｃに（直接的または間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体バリアントが提供される。例えば、そのような抗体中のフコースの量は、１％～８０％、１％～６５％、５％～６５％、または２０％～４０％であってもよい。フコースの量は、例えば、国際公開第２００８／０７７５４６号パンフレットに記載されるＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ質量分析法によって測定される、Ａｓｎ２９７に結合した全ての糖構造（例えば、複合体、ハイブリッド、および高マンノース構造）の合計に対する、Ａｓｎ２９７での糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定される。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃの約２９７位に位置するアスパラギン残基を指す（Ｆｃ残基のＥＵナンバリング）；ただし、Ａｓｎ２９７はまた、抗体のマイナーな配列変化のために、位置２９７の上流または下流、すなわち位置２９４と３００の間の約±３個のアミノ酸に位置していてもよい。そのようなフコシル化バリアントは、改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；同第２００４／００９３６２１号明細書（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」または「フコース欠乏」抗体バリアントに関する刊行物の例には：米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号明細書；国際公開第２０００／６１７３９号パンフレット；国際公開第第２００１／２９２４６号パンフレット；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号明細書；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号明細書；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号明細書；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号明細書；国際公開第２００３／０８５１１９号パンフレット；国際公開第２００３／０８４５７０号パンフレット；国際公開第２００５／０３５５８６号パンフレット；国際公開第２００５／０３５７７８号パンフレット；国際公開第２００５／０５３７４２号パンフレット；国際公開第２００２／０３１１４０号パンフレット；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３３６巻：１２３９～１２４９頁（２００４）；Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．、８７巻：６１４頁（２００４）が含まれる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例には、タンパク質フコシル化が欠乏したＬｅｃ１３ ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３～５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８ Ａ１号明細書、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；および国際公開第２００４／０５６３１２ Ａ１号パンフレット、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、およびノックアウト細胞株、例えばアルファ－１，６－フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ－Ｏｈｎｕｋｉら Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０～６８８（２００６）；および国際公開第２００３／０８５１０７号パンフレット参照）が含まれる。

例えば、抗体のＦｃに結合した二分岐オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分される二分オリゴ糖を有する抗体バリアントがさらに提供される。そのような抗体バリアントは、減少したフコシル化および／または改善されたＡＤＣＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントの例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号パンフレット（Ｊｅａｎ－Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号明細書（Ｕｍａｎａら）；および米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号明細書（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃに結合したオリゴ糖中の少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体も提供される。そのような抗体バリアントは、改善されたＣＤＣ機能を有し得る。そのような抗体バリアントは、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号パンフレット（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；および国際公開第１９９９／２２７６４号パンフレット（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃバリアント

様々な実施形態では、抗体は、本明細書で提供される改変Ｆｃを含む。いくつかの実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸改変を抗体のＦｃに導入して、それによって、改変Ｆｃを作製することができる。改変Ｆｃは、１つまたは複数のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４ Ｆｃ）を含み得る。

ある特定の実施形態では、本発明は、全てではないが一部のエフェクター機能を有し、それによりインビボでの抗体の半減期が重要であるが、特定のエフェクター機能（例えば、補体およびＡＤＣＣなど）が不要または有害である用途にとって望ましい候補となる、抗体バリアントを企図する。インビトロおよび／またはインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣおよび／またはＡＤＣＣ活性の低減／欠乏を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確実にすることができる。ＡＤＣＣの媒介のための主要な細胞であるＮＫ細胞がＦｃγＲＩＩＩのみを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７～４９２（１９９１）の４６４頁、表３にまとめられている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号明細書（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８３：７０５９～７０６３（１９８６）、およびＨｅｌｌｓｔｒｏｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９～１５０２（１９８５）参照）；米国特許第５，８２１，３３７号明細書（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１～１３６１（１９８７）参照）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ方法を使用してもよい（例えば、フローサイトメトリー（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）のためのＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ、およびＣｙｔｏＴｏｘ ９６^{（登録商標）}非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が含まれる。あるいは、または加えて、目的のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２～６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、インビボで評価され得る。Ｃ１ｑ結合アッセイを実行して、抗体がＣ１ｑに結合することができないためにＣＤＣ活性を欠くことを確認してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号パンフレットトおよび国際公開第２００５／１００４０２号パンフレットにおけるＣ１ｑおよびＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施してもよい（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５～１０５２（２００３）；ならびにＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．およびＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８～２７４３（２００４）参照）。ＦｃＲｎ結合およびインビボ クリアランス／半減期の決定もまた、当技術分野で公知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９～１７６９（２００６）参照）。

エフェクター機能が低下した抗体の非限定的な例には、Ｆｃ残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７および３２９のうちの１つまたは複数の置換を有するものが含まれる（米国特許第６，７３７，０５６号明細書）。そのようなＦｃバリアントには、アミノ酸２６５、２６９、２７０、２９７および３２７位のうちの２つ以上での置換を有するＦｃバリアントが含まれ、残基２６５および２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃバリアントを含む（米国特許第７，３３２，５８１号明細書）。

ＦｃＲに対する結合が改善または減少したある特定の抗体バリアントが記載される（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号明細書および同第８，９６９，５２６号明細書；国際公開第２００４／０５６３１２号パンフレット；ならびにＳｈｉｅｌｄｓら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１～６６０４（２００１）参照）。

ある特定の実施形態では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つまたは複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの２９８、３３３および／または３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃを含む。

いくつかの実施形態では、例えば、米国特許第６，１９４，５５１号明細書、国際公開第９９／５１６４２号パンフレット、およびＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８～４１８４（２０００）に記載されるように、変化した（すなわち、改善されたまたは減少した）Ｃ１ｑ結合および／または補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）をもたらす変化が、Ｆｃ領域において行われる。

Ｆｃバリアントの他の例に関する、ＤｕｎｃａｎおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８～４０頁（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号明細書；米国特許第５，６２４，８２１号明細書；および国際公開第９４／２９３５１号パンフレットも参照されたい。
ｄ）システイン操作抗体バリアント

ある特定の実施形態では、抗体の１つまたは複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、「チオマブ（ｔｈｉｏＭＡｂ）」を作成することが望ましい場合がある。特定の実施形態では、置換残基は、抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することによって、反応性チオール基がそれにより抗体の接近可能な部位に配置され、それを使用して、薬物部分またはリンカー－薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートして、本明細書にさらに記載されるイムノコンジュゲートを作製することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基のうちの任意の１つまたは複数がシステインで置換され得る：軽鎖のＶ２０５（Ｋａｂａｔナンバリング）；軽鎖のＫ１４９（Ｋａｂａｔナンバリング）；重鎖のＡ１１８（ＥＵナンバリング）；および重鎖ＦｃのＳ４００（ＥＵナンバリング）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号明細書および同第９，０００，１３０号明細書に記載されるように作製され得る。
ｅ）抗体誘導体

ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当技術分野で公知であり、容易に入手可能なさらなる非タンパク質性部分を含有するようにさらに改変され得る。抗体の誘導体化に適した部分には、水溶性ポリマーが含まれるが、これらに限定されない。水溶性ポリマーの非限定的な例には、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびこれらの混合物が含まれるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造時に有利であり得る。このポリマーは、任意の分子量を有していてもよく、分岐していてもよく、または分岐していなくてもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であり、複数のポリマーが結合している場合には、同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化のために使用されるポリマーの数および／またはタイプは、改善される抗体の特定の特性または機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかを含むがこれらに限定されない考慮事項に基づいて決定することができる。

別の実施形態では、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体および非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０２：１１６００～１１６０５（２００５））。放射線は、任意の波長であってもよく、通常の細胞に害を与えないが、抗体－非タンパク質性部分に近位の細胞が死滅する温度まで非タンパク質性部位を加熱する波長を含むが、これらに限定されない。
Ｃ．組換え方法および組成物

抗体、改変ＦｃおよびＦｃ融合物は、当技術分野で公知の組換え方法および組成物を使用して作製され得る。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号明細書を参照されたい。一実施形態では、本明細書に記載される抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物をコードする単離核酸が提供される。抗体の場合、そのような核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードし得る。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。抗体を発現するためのいくつかの実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、以下で形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。様々な実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。いくつかの実施形態では、抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物を作製する方法であって、上で提供される抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物の発現に好適な条件下で培養するステップと、任意に、抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収するステップとを含む方法が提供される。

抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物の組換え作製のために、例えば、上記の、抗体、改変ＦｃまたはＦｃ融合物をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニングおよび／または発現のために１つまたは複数のベクターに挿入される。抗体については、そのような核酸は、従来の手順（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）を使用して容易に単離され、配列決定され得る。

タンパク質をコードするベクターのクローニングまたは発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、Ｆｃ含有タンパク質は、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生され得る。細菌でのポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号明細書、同第５，７８９，１９９号明細書、および同第５，８４０，５２３号明細書を参照されたい（Ｃｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編 Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）、２４５～２５４頁、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ．）での抗体断片の発現を記載も参照）。発現後、タンパク質を細菌細胞ペーストから可溶性画分で単離し、さらに精製することができる。

原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核微生物は、タンパク質をコードするベクターのクローニングまたは発現宿主として適しており、その中には、グリコシル化経路が「ヒト化」された菌株および酵母株が含まれ、その結果、部分的または完全にヒトのグリコシル化パターンを有するタンパク質が産生される。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９～１４１４（２００４）およびＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０～２１５（２００６）を参照されたい。

グリコシル化タンパク質の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例には、植物細胞および昆虫細胞が含まれる。昆虫細胞と併せて（特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションに）使用することができる、多数のバキュロウイルス株が特定されている。

植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号明細書、同第６，０４０，４９８号明細書、同第６，４２０，５４８号明細書、同第７，１２５，９７８号明細書および同第６，４１７，４２９号明細書（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照されたい。

脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で増殖するように適合された哺乳動物細胞株が有用となり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）により形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載される２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３～２５１（１９８０）に記載されるＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカ緑猿腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；水牛ラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４～６８（１９８２）に記載されるＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株には、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞を含むチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））；ならびにＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が含まれる。タンパク質産生に適したある特定の哺乳動物宿主細胞株の総説については、例えば、ＹａｚａｋｉおよびＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ）、２５５～２６８頁（２００３）を参照されたい。
Ｄ．アッセイ

本明細書で提供される改変Ｆｃは、それらの物理的／化学的特性および／または生物学的活性について、当技術分野で公知の様々なアッセイによって、特定され、スクリーニングされ、または特徴付けら得る。
１．結合アッセイおよび他のアッセイ

本明細書で提供される改変Ｆｃを含む薬剤（抗体またはＦｃコンジュゲート（Ｆｃ融合物を含む）など）のＦｃＲｎへの結合を決定するための様々な技術が利用可能である。１つのそのようなアッセイは、ｐＨ７．４およびｐＨ６などの様々なｐＨでヒトＦｃＲｎに結合する能力を確認するための酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）である。抗体のその抗原への結合を決定するために、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）も含む様々な技術も利用可能である。このアッセイによると、ＦｃＲｎまたは抗原でコーティングされたプレートを、抗体または他の改変Ｆｃ含有薬剤を含む試料とインキュベートし、抗体または改変Ｆｃ含有薬剤の目的の抗原またはＦｃＲｎへの結合を決定する。

一態様では、本発明の抗体を、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって、その抗原結合活性について試験する。別の態様では、改変Ｆｃ含有薬剤を、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロットなどの公知の方法によって、ＦｃＲｎへの結合活性について試験する。

別の態様では、競合アッセイは、抗原への結合について本発明の抗体のいずれかと競合する抗体を特定するために使用され得る。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、本発明の抗体のいずれかによって結合されるのと同じエピトープ（例えば、線状エピトープまたは構造的エピトープ）、より具体的には、本明細書中に記載されるクラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩまたはクラスＩＶの抗体によって特異的に結合されるエピトープのいずれかに結合する（例えば、実施例１および表４参照）。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法が、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）、「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、ニュージャージー州トトワ）に提供されている。

例示的な競合アッセイでは、固定化された抗原は、抗原に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に開示される１つまたは複数の抗体）、および抗原への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験されている第２の非標識抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化された抗原を、第１の標識抗体を含むが第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体の抗原への結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰な非結合抗体を除去し、固定化された抗原に関連する標識の量を測定する。固定化された抗原に関連する標識の量が、対照試料と比較して試験試料中で実質的に減少している場合、それは、第２の抗体が抗原への結合について第１の抗体と競合していることを示す。ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ １４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照されたい。
２．活性アッセイ

一態様では、生物学的活性を有する抗体およびＦｃコンジュゲートを特定するためのアッセイが提供される。生物活性には、例えば、血液脳関門を通過して脳および／またはＣＮＳに入る能力、ならびにＢＢＢを通過して改変Ｆｃに関連する化合物を脳および／またはＣＮＳに輸送する能力が含まれ得る。インビボおよび／またはインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体およびＦｃコンジュゲートが提供される。

ある特定の実施形態では、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートは、そのような生物学的活性について試験される。いくつかのそのような実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、インビトロトランスサイトーシスアッセイでそのような生物学的活性について試験される。例示的なトランスサイトーシスアッセイは以下の通りである。ヒトＦｃＲｎ（例えば、Ｐ２Ａ配列によって分離されたＦＣＧＲＴ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５５８９９、ＦＣＧＲＴＮ＿ＨＵＭＡＮ）およびβ_２ｍ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６１７６９、Ｂ２ＭＧ＿ＨＵＭＡＮ）（ＫｉｍらＰＬｏＳ ｏｎｅ ２０１１；６（４）：ｅ１８５５６））を発現するようにトランスフェクトされたＭＤＣＫ ＩＩ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）を、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）透過性支持プレート、０．４μｍ細孔径（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．、Ｃｏｒｎｉｎｇ、ＮＹ）に３日間播種する。３日目に、試験抗体および蛍光マーカー色素、例えばルシファーイエロー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を含む新鮮な培地を頂端側区画に添加する。試験抗体およびルシファーイエローを含まない新鮮な培地を基底側区画に添加する。両チャンバーのｐＨは７．４とした。プレートを３７℃、５％ ＣＯ_２加湿インキュベータ内で一晩インキュベートする。４日目に、培地を頂端側区画および基底側区画から回収し、２つの区画中の抗体濃度を、例えばＥＬＩＳＡによってアッセイする。細胞単層中の接合形成の完全性を、基底側区画中のルシファーイエローの相対蛍光単位を測定することによって監視する。データは、各抗体またはＦｃコンジュゲートのトランスサイトーシス濃度を、典型的には野生型Ｆｃを含む参照抗体のトランスサイトーシス濃度で割ることによって標準化され得る。

いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＦｃコンジュゲートは、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体またはＦｃコンジュゲートは、野生型Ｆｃを含む同じ抗体またはＦｃコンジュゲートに標準化された場合、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す。
Ｅ．イムノコンジュゲートおよびＦｃコンジュゲート

本発明はまた、化学療法剤もしくは化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌真菌、植物、もしくは動物起源の酵素活性毒素、もしくはそれらの断片）、または放射性同位体などの１種または複数の細胞傷害剤にコンジュゲートされた本明細書の抗体または改変Ｆｃを含むコンジュゲートを提供する。そのようなコンジュゲートが抗体を含む場合、いくつかの実施形態では、それらはイムノコンジュゲートと呼ばれ得る。

一実施形態では、本明細書の抗体または改変Ｆｃは、ＢＢＢを横切って薬物、化学療法剤および／またはイメージング剤をより効率的に輸送するために、神経障害薬物、化学療法剤および／またはイメージング剤とカップリングされる。

共有結合的コンジュゲーションは、直接的であってもリンカーを介してもよい。ある特定の実施形態では、直接的コンジュゲーションは、タンパク質融合物の構築による（すなわち、改変Ｆｃをコードする遺伝子と例えば神経障害薬をコードする遺伝子の２つの遺伝子の遺伝子融合、および単一タンパク質としての発現による）。ある特定の実施形態では、直接的コンジュゲーションは、改変Ｆｃまたは抗体上の反応性基と、例えば神経薬上の対応する基またはアクセプターとの間の共有結合の形成による。ある特定の実施形態では、直接的コンジュゲーションは、コンジュゲートされる２つの分子のうちの一方を、適切な条件下でコンジュゲートされる他方の分子と共有結合を形成する反応性基（非限定的な例として、スルフヒドリル基またはカルボキシル基）を含むように改変（すなわち、遺伝子改変）することによるものである。１つの非限定的な例として、所望の反応性基（すなわち、システイン残基）を有する分子（すなわち、アミノ酸）を抗体または改変Ｆｃに導入し、例えば神経薬とジスルフィド結合を形成することができる。核酸とタンパク質の共有結合的コンジュゲーションの方法も当技術分野で公知である（すなわち、光架橋、例えばＺａｔｓｅｐｉｎ ら Ｒｕｓｓ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．７４：７７～９５（２００５）参照）。

非共有結合的コンジュゲーションは、当業者によって容易に理解されるように、疎水性結合、イオン結合、静電相互作用などを含む任意の非共有結合的手段によるものであり得る。

コンジュゲーションはまた、様々なリンカーを使用して実施され得る。例えば、抗体と神経薬または改変Ｆｃと神経薬は、Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、イミノチオラン（ＩＴ）、イミドエステルの二官能性誘導体（ジメチルアジピミデートＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビスアジド化合物（ビス（ｐ－アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス－ジアゾニウム誘導体（ビス－（ｐ－ジアゾニウムベンゾイル）－エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６－ジイソシアネートなど）、および二活性フッ素化合物（１，５－ジフルオロ－２，４－ジニトロベンゼンなど）などの種々の二官能性タンパク質カップリング剤を使用してコンジュゲートされ得る。例えば、リシン免疫毒素は、Ｖｉｔｅｔｔａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３８：１０９８（１９８７）に記載されるように調製することができる。炭素－１４で標識された１－イソチオシアナトベンジル－３－メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ－ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの抗体、改変ＦｃまたはＦｃコンジュゲートへのコンジュゲーションのための例示的なキレート剤である。国際公開第９４／１１０２６号パンフレットを参照されたい。ペプチド結合によって結合された１～２０個のアミノ酸で構成されるペプチドリンカーも使用され得る。ある特定のそのような実施形態では、アミノ酸は、２０個の天然に存在するアミノ酸から選択される。ある特定の他のそのような実施形態では、１つまたは複数のアミノ酸は、グリシン、アラニン、プロリン、アスパラギン、グルタミンおよびリジンから選択される。リンカーは、脳への送達時に神経薬の放出を促進する「切断可能なリンカー」であり得る。例えば、酸不安定性リンカー、ペプチダーゼ感受性リンカー、感光性リンカー、ジメチルリンカーまたはジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７～１３１（１９９２）；米国特許第５，２０８，０２０号明細書）が使用され得る。

本明細書の本発明は、市販されている（例えば、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ．、Ｕ．Ｓ．Ａから）、ＢＭＰＳ、ＥＭＣＳ、ＧＭＢＳ、ＨＢＶＳ、ＬＣ－ＳＭＣＣ、ＭＢＳ、ＭＰＢＨ、ＳＢＡＰ、ＳＩＡ、ＳＩＡＢ、ＳＭＣＣ、ＳＭＰＢ、ＳＭＰＨ、スルホ－ＥＭＣＳ、スルホ－ＧＭＢＳ、スルホ－ＫＭＵＳ、スルホ－ＭＢＳ、スルホ－ＳＩＡＢ、スルホ－ＳＭＣＣ、およびスルホ－ＳＭＰＢ、ならびにＳＶＳＢ（スクシンイミジル－（４－ビニルスルホン）安息香酸塩）を含むが、これらに限定されない架橋剤試薬で調製されるコンジュゲートを明示的に企図するが、これらに限定されない。

一実施形態では、イムノコンジュゲートは、抗体が、メイタンシノイド（米国特許第５，２０８，０２０号明細書、同第第５，４１６，０６４号明細書および欧州特許第０ ４２５ ２３５号明細書参照）；モノメチルオーリスタチン薬物部位ＤＥおよびＤＦ（ＭＭＡＥおよびＭＭＡＦ）などのオーリスタチン（米国特許第５，６３５，４８３号明細書および同第５，７８０，５８８号明細書、および同第７，４９８，２９８号明細書参照）；ドラスタチン；カリケアマイシンまたはその誘導体（米国特許第５，７１２，３７４号明細書、同第第５，７１４，５８６号明細書、同第５，７３９，１１６号明細書、同第５，７６７，２８５号明細書、同第５，７７０，７０１号明細書、同第５，７７０，７１０号明細書、同第５，７７３，００１号明細書および同第５，８７７，２９６号明細書；Ｈｉｎｍａｎら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５３：３３３６～３３４２（１９９３）；およびＬｏｄｅら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５８：２９２５～２９２８（１９９８）参照）；ダウノマイシンまたはドキソルビシンなどのアントラサイクリン（Ｋｒａｔｚら、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７～５２３（２００６）；Ｊｅｆｆｒｅｙら、Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８～３６２（２００６）；Ｔｏｒｇｏｖら、Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７～７２１（２００５）；Ｎａｇｙら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９～８３４（２０００）；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：１５２９～１５３２（２００２）；Ｋｉｎｇら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６～４３４３（２００２）；および米国特許第６，６３０，５７９号明細書参照）；メトトレキサート；ビンデシン；ドセタキセル、パクリタキセル、ラロタキセル、テセタキセルおよびオルタタキセルなどのタキサン；トリコテセン；およびＣＣ１０６５を含むが、これらに限定されない１種または複数の薬剤にコンジュゲートされた抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。いくつかの実施形態では、１種または複数の前記薬物にコンジュゲートした本明細書の改変Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートが提供される。

別の実施形態では、コンジュゲートは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、アルファ－サルシン、Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉタンパク質、ジアンシンタンパク質、Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩおよびＰＡＰ－Ｓ）、ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ阻害剤、クルシン、クロチン、ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン、およびトリコテセンを含むが、これらに限定されない酵素活性毒素またはその断片にコンジュゲートされた本明細書に記載される抗体またはＦｃを含む。

別の実施形態では、コンジュゲートは、放射性原子にコンジュゲートされて放射性コンジュゲートを形成する、本明細書に記載される抗体またはＦｃを含む。放射性コンジュゲートの作製には、様々な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ^２１１、Ｉ^１３１、Ｉ^１２５、Ｙ^９０、Ｒｅ^１８６、Ｒｅ^１８８、Ｓｍ^１５３、Ｂｉ^２１２、Ｐ^３２、Ｐｂ^２１２、およびＬｕの放射性同位体が挙げられる。放射性物質が検出のために使用される場合、それは、シンチグラフィ研究のための放射性原子、例えばｔｃ９９ｍもしくはＩ１２３、または核磁気共鳴（ＮＭＲ）イメージング（別名、磁気共鳴イメージング、ｍｒｉ）のためのスピンラベル、例えば再びヨウ素１２３、ヨウ素１３１、インジウム１１１、フッ素１９、炭素１３、窒素１５、酸素１７、ガドリニウム、マンガンもしくは鉄を含んでいてもよい。

いくつかの実施形態では、Ｆｃコンジュゲートは、治療用タンパク質および／または検出可能なタンパク質などのタンパク質に融合した本明細書で提供される改変Ｆｃを含む。そのような実施形態では、そのようなＦｃコンジュゲートは、Ｆｃ融合物と呼ばれ得る。本明細書で提供される改変Ｆｃにコンジュゲートされ得る非限定的な例示的な治療用タンパク質には、ＴＮＦ－Ｒ１、ＣＴＬＡ－４、ＩＬ－１Ｒ１、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン－６－スルファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、ベータ－グルクロニダーゼ、酸性アルファ－グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ベータ－ガラクトセレブロシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ１およびトリペプチジルアミノペプチダーゼ１が含まれる。いくつかの実施形態では、ＴＮＦ－Ｒ１、ＣＴＬＡ－４、またはＩＬ－１Ｒ１の細胞外ドメインなどの治療用タンパク質の細胞外ドメインは、本明細書で提供される改変Ｆｃにコンジュゲートされている。
Ｆ．診断および検出のための方法および組成物

いくつかの実施形態では、診断または検出方法に使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートが提供される。

本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートを使用して診断され得る例示的な障害には、脳を含む中枢神経系（ＣＮＳ）の障害が含まれる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートは、例えば、抗原の存在またはレベル上昇に関連する疾患または障害を診断するために、ＣＮＳ中（例えば、脳中）の抗原を検出するために使用され得る。

ある特定の実施形態では、標識抗体およびＦｃコンジュゲートが提供される。標識には、直接的に検出される標識または部分（蛍光、発色団、高電子密度、化学発光および放射性標識）、および酵素反応または分子相互作用を通して間接的に検出される部分（例えば、酵素またはリガンド）が含まれるが、これらに限定されない。例示的な標識には、放射性同位体 ^３２Ｐ、^１４Ｃ、^１２５Ｉ、^３Ｈおよび^１３１Ｉ、希土類キレートまたはフルオレセインおよびその誘導体などのフルオロフォア、ローダミンおよびその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼおよび細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号明細書）、ルシフェリン、２，３－ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、およびグルコース－６－リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、またはマイクロペルオキシダーゼとカップリングされたウリカーゼおよびキサンチンオキシダーゼなどの複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、ならびに安定なフリーラジカルなどが含まれるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、エフェクター機能を欠く。いくつかの実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、低下したエフェクター機能を有する。別の実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、低下したエフェクター機能を有するように操作されている。いくつかの態様では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、エフェクター機能を低減または排除する１つまたは複数のＦｃ突然変異を有する。別の態様では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、例えば、正常なヒトグリコシル化酵素を欠く系において抗体、Ｆｃコンジュゲートまたは改変Ｆｃを産生するために、改変グリコシル化を有する。別の態様では、Ｉｇ骨格は、限定されたエフェクター機能を天然に有するかまたはエフェクター機能を有さないものに改変される。

抗体またはＦｃコンジュゲートの標的タンパク質への結合を決定するための様々な技術が利用可能である。１つのそのようなアッセイは、標的タンパク質に結合する能力を確認するための酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）である。このアッセイによると、抗原でコーティングされたプレートを、抗体またはＦｃコンジュゲートを含む試料とインキュベートし、抗体またはＦｃコンジュゲートの目的の標的タンパク質への結合を決定する。

全身投与された抗体またはＦｃコンジュゲートの取り込みおよび抗体またはＦｃコンジュゲートの他の生物学的活性を評価するためのアッセイは、実施例に開示されているように、または目的のＣＮＳ標的タンパク質について当技術分野で公知のように実施することができる。

一態様では、生物学的活性を有する抗ＢＡＣＥ１抗体を特定するためのアッセイが提供される。生物学的活性には、例えばＢＡＣＥ１アスパルチルプロテアーゼ活性の阻害が含まれ得る。例えば、合成基質ペプチドを使用して、またはＡＰＰなどのＢＡＣＥ１基質を発現する細胞株においてインビボで、均一時間分解蛍光ＨＴＲＦアッセイまたはマイクロ流体キャピラリー電気泳動（ＭＣＥ）アッセイによって評価されるように、インビボおよび／またはインビトロでそのような生物学的活性を有する抗体も提供される。
Ｆ．医薬製剤

本明細書に記載される抗体またはＦｃコンジュゲートの医薬製剤は、所望の程度の純度を有するそのような抗体またはＦｃコンジュゲートを、１種または複数の任意の薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０））と混合することによって、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製される。薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤は一般的に、使用される投薬量および濃度でレシピエントに対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、および他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化剤；保存剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチル、もしくはベンジルアルコール、メチルもしくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３－ペンタノール、およびｍ－クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、およびグルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）；ならびに／またはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体には、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ^{（登録商標）}、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質などの介在性薬物分散剤がさらに含まれる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰおよび使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号明細書および同第第２００６／０１０４９６８号明細書に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１種または複数のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせる。

例示的な凍結乾燥抗体またはＦｃコンジュゲート製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号明細書に記載される。水性抗体またはＦｃコンジュゲート製剤には、米国特許第６，１７１，５８６号明細書および国際公開第２００６／０４４９０８号パンフレットに記載されるものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。

本明細書の製剤は、処置される特定の徴候に必要な２種以上の有効成分も含んでいてもよく、好ましくは、互いに有害な影響を与えない相補的な活性を有するものを含んでいてもよい。例えば、ニューロパチー障害、神経変性疾患、がん、眼疾患障害、発作障害、リソソーム蓄積症、アミロイドーシス、ウイルス性または微生物性疾患、虚血、行動障害またはＣＮＳ炎症を処置するための１種または複数の有効成分をさらに提供することが望ましい場合がある。そのような医薬の例は、本明細書で論じられる。そのような有効成分は、適切には、意図する目的にとって有効な量で組み合わせて存在する。

有効成分はまた、例えば、コアセルベーション技術によって、もしくは界面重合によって調製されたマイクロカプセル、例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロースもしくはゼラチンマイクロカプセルおよびポリ－（メチルメタクリレート）マイクロカプセル、コロイド薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロ乳濁液、ナノ粒子、およびナノカプセル）、またはマクロ乳濁液に取り込まれ得る。そのような技術は、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。１種または複数の有効成分は、本明細書に記載される抗体またはＦｃコンジュゲートにカップリングされているリポソームにカプセル化され得る（例えば、米国特許出願公開第２００２００２５３１３号明細書参照）。

徐放性調製物を調製してもよい。徐放性調製物の好適な例には、抗体またはＦｃコンジュゲートを含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、そのマトリックスは、造形品、例えば、フィルム、またはマイクロカプセルの形態である。徐放性マトリックスの非限定的な例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２－ヒドロキシエチル－メタクリレート）、またはポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号明細書）、Ｌ－グルタミン酸とγ－Ｌ－グルタミン酸エチルとのコポリマー、非分解性エチレン酢酸ビニル、ＬＵＰＲＯＮ ＤＥＰＯＴ（商標）などの分解性乳酸－グリコール酸コポリマー（乳酸－グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）、ならびにポリ－Ｄ－（－）－３－ヒドロキシ酪酸が含まれる。

インビボ投与に使用される製剤は一般に、滅菌である。滅菌性は、例えば、滅菌濾過膜による濾過によって、容易に達成され得る。
Ｇ．治療方法および組成物

本明細書で提供される抗体またはＦｃコンジュゲートのいずれも治療方法に使用され得る。一態様では、医薬として使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートが提供される。例えば、本発明は、血液脳関門を通過して治療用化合物を輸送する方法であって、改変ＦｃがＢＢＢを通過する抗体またはＦｃコンジュゲートの輸送を可能にするように、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートをＢＢＢに曝露するステップを含み、抗体またはＦｃコンジュゲートは治療用化合物を含む、方法を提供する。別の例では、本発明は、血液脳関門を通過して神経障害薬を輸送する方法であって、改変ＦｃがＢＢＢを通過する抗体またはＦｃコンジュゲートの輸送を可能にするように、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートをＢＢＢに曝露するステップを含み、抗体またはＦｃコンジュゲートは神経障害薬を含む、方法を提供する。一実施形態では、ＢＢＢは、哺乳動物（例えば、ヒト）、例えば、限定されないが、アルツハイマー病（ＡＤ）、脳卒中、認知症、筋ジストロフィー（ＭＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、嚢胞性線維症、アンジェルマン症候群、リドル症候群、パーキンソン病、ピック病、パジェット病、がん、外傷性脳損傷などを含む、神経障害を有するものにある。

一実施形態では、神経障害は、ニューロパチー、アミロイドーシス、がん（例えば、ＣＮＳまたは脳を含む）、眼疾患または障害、ウイルスまたは微生物感染症、炎症（例えば、ＣＮＳまたは脳の）、虚血、神経変性疾患、発作、行動障害、リソソーム蓄積症などから選択される。本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートは、ＢＢＢを通過してＣＮＳ／脳に１種または複数の関連する有効成分／カップリングされた治療化合物を輸送する能力のために、そのような神経障害の処置に特に適しており、そのような障害はそれらの分子、細胞またはウイルス／微生物の基礎を見出す。

ニューロパチー障害は、不適切なもしくは制御されない神経シグナル伝達またはその欠如を特徴とする神経系の疾患または異常であり、慢性疼痛（侵害受容性疼痛を含む）、がん関連疼痛、神経因性疼痛（神経、脊髄、または脳の異常によって引き起こされる疼痛）および心因性疼痛（完全にまたはほとんどが心理学的障害に関連する）を含む身体組織の損傷によって引き起こされる疼痛、頭痛、片頭痛、ニューロパチー、ならびにしばしばそのようなニューロパチー障害に付随する症状および症候群、例えば眩暈または悪心が含まれるが、これらに限定されない。

ニューロパチー障害の場合、麻薬性／オピオイド鎮痛薬（すなわち、モルヒネ、フェンタニル、ヒドロコドン、メペリジン、メタドン、オキシモルホン、ペンタゾシン、プロポキシフェン、トラマドール、コデインおよびオキシコドン）、非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（すなわち、イブプロフェン、ナプロキセン、ジクロフェナク、ジフルニサル、エトドラク、フェノプロフェン、フルルビプロフェン、インドメタシン、ケトロラック、メフェナム酸、メロキシカム、ナブメトン、オキサプロジン、ピロキシカム、スリンダクおよびトルメチン）、コルチコステロイド（すなわち、コルチゾン、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン、メチルプレドニゾロンおよびトリアムシノロン）、抗片頭痛薬（すなわち、スマトリプチン、アルモトリプタン、フロバトリプタン、スマトリプタン、リザトリプタン、エレトリプタン、ゾルミトリプタン、ジヒドロエルゴタミン、エレトリプタンおよびエルゴタミン）、アセトアミノフェン、サリチル酸塩（すなわち、アスピリン、サリチル酸コリン、サリチル酸マグネシウム、ジフルニサルおよびサルサラート）、抗痙攣薬（すなわち、カルバマゼピン、クロナゼパム、ガバペンチン、ラモトリギン、プレガバリン、チアガビンおよびトピラマート）、麻酔薬（すなわち、イソフルラン、トリクロロエチレン、ハロタン、セボフルラン、ベンゾカイン、クロロプロカイン、コカイン、シクロメチカイン、ジメトカイン、プロポキシカイン、プロカイン、ノボカイン、プロパラカイン、テトラカイン、アルチカイン、ブピバカイン、カルチカイン、シンコカイン、エチドカイン、レボブピバカイン、リドカイン、メピバカイン、ピペロカイン、プリロカイン、ロピバカイン、トリメカイン、サキシトキシンおよびテトロドトキシン）、およびｃｏｘ－２阻害剤（すなわち、セレコキシブ、ロフェコキシブおよびバルデコキシブ）を含むが、これらに限定されない鎮痛薬である神経薬が選択され得る。眩暈併発を伴うニューロパチー障害の場合、メクリジン、ジフェンヒドラミン、プロメタジンおよびジアゼパムを含むが、これらに限定されない抗眩暈薬である神経薬が選択され得る。悪心併発を伴うニューロパチー障害の場合、プロメタジン、クロルプロマジン、プロクロルペラジン、トリメトベンズアミドおよびメトクロプラミドを含むが、これらに限定されない抗悪心薬である神経薬が選択され得る。

アミロイドーシスは、ＣＮＳにおける細胞外タンパク質性沈着物に関連する疾患および障害の群であり、続発性アミロイドーシス、加齢性アミロイドーシス、アルツハイマー病（ＡＤ）、軽度認知障害（ＭＣＩ）、レビー小体型認知症、ダウン症候群、アミロイドーシスを伴う遺伝性脳出血（オランダ型）、グアム・パーキンソン－認知症複合、脳アミロイド血管症、ハンチントン病、進行性核上性麻痺、多発性硬化症；クロイツフェルト・ヤコブ病、パーキンソン病、伝達性海綿状脳症、ＨＩＶ関連認知症、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、封入体筋炎（ＩＢＭ）、およびベータアミロイド沈着に関連する眼疾患（すなわち、黄斑変性、ドルーゼン関連視神経症、および白内障）を含むが、これらに限定されない。

アミロイドーシスの場合、ベータセクレターゼ、タウ、プレセニリン、アミロイド前駆体タンパク質またはその部分、アミロイドベータペプチドまたはそのオリゴマーもしくは原線維、細胞死受容体６（ＤＲ６）、終末糖化産物受容体（ＲＡＧＥ）、パーキン、およびハンチンチンから選択される標的に特異的に結合する抗体または他の結合分子（小分子、ペプチド、アプタマー、もしくは他のタンパク質結合剤を含むが、これらに限定されない）；コリンエステラーゼ阻害剤（すなわち、ガランタミン、ドネペジル、リバスチグミンおよびタクリン）；ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（すなわち、メマンチン）、モノアミン枯渇剤（すなわち、テトラベナジン）；メシル酸エルゴロイド；抗コリン抗パーキンソン症候群剤（すなわち、プロシクリジン、ジフェンヒドラミン、トリヘキシルフェニジル、ベンズトロピン、ビペリデンおよびトリヘキシフェニジル）；ドーパミン作動性抗パーキンソン症候群剤（すなわち、エンタカポン、セレギリン、プラミペキソール、ブロモクリプチン、ロチゴチン、セレギリン、ロピニロール、ラサギリン、アポモルヒネ、カルビドパ、レボドパ、ペルゴリド、トルカポンおよびアマンタジン）；テトラベナジン；抗炎症剤（非ステロイド性抗炎症薬（すなわち、インドメチシン（ｉｎｄｏｍｅｔｈｉｃｉｎ）および上記に列挙される他の化合物）を含むが、これらに限定されない）；ホルモン（すなわち、エストロゲン、プロゲステロンおよびリュープロリド）；ビタミン（すなわち、葉酸およびニコチンアミド）；ジメボリン；ホモタウリン（すなわち、３－アミノプロパンスルホン酸；３ＡＰＳ）；セロトニン受容体活性調節剤（すなわち、キサリプロデン）；インターフェロン、ならびにグルココルチコイドを含むが、これらに限定されない神経薬が選択され得る。

ＣＮＳのがんは、１つまたは複数のＣＮＳ細胞（すなわち、神経細胞）の異常な増殖を特徴とし、神経膠腫、多形性膠芽腫、髄膜腫、星状細胞腫、聴神経腫、軟骨腫、乏突起神経膠腫、髄芽腫、神経節膠腫、シュワン腫、神経線維腫、神経芽細胞腫、および硬膜外、髄内または硬膜内腫瘍を含むが、これらに限定されない。

がんの場合、化学療法剤である神経薬が選択され得る。化学療法剤の例には、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロスホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、およびピポスルファンなどのアルキルスルホネート；ベンゾドパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、およびウレドパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン；アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホルアミド、トリエチレンチオホスホルアミド、およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミンおよびメチルアメラミン；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；デルタ－９－テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＩＮＯＬ（登録商標）；β－ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトテシン（合成アナログトポテカン（ＨＹＣＡＭＴＩＮ（登録商標）、ＣＰＴ－１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳＡＲ（登録商標）、アセチルカンプトテシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、および９－アミノカンプトテシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ－１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、およびビゼレシン合成アナログを含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸；テニポシド；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ－２１８９およびＣＢ１－ＴＭ１を含む）；エリュテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；クロラムブシル、クロルナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビシン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタードなどの窒素マスタード；カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムヌスチン（ｒａｎｉｍｎｕｓｔｉｎｅ）などのニトロスレア；エンジイン抗生物質（例えば、カリケアミシン、特にカリケアミシンγ１ＩおよびカリケアミシンωＩ１（例えば、Ａｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ Ｉｎｔｉ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．、３３：１８３～１８６（１９９４）参照）；ダイネミシンＡを含む、ダイネミシン；エスペラミシン；ならびにネオカルジノスタチンクロモフォアおよび関連色素タンパク質エンジイン抗生物質クロモフォア）、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ－ドキソルビシン、シアノモルホリノ－ドキソルビシン、２－ピロリノ－ドキソルビシン、およびデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、ミトマイシンＣなどのミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメックス、ジノスタチン、ゾルビシンなどの抗生物質；メトトレキサートおよび５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）などの抗代謝物；デノプテリン、メトトレキサート、プテロプテリン、トリメトレキサートなどの葉酸類似体；フルダラビン、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニンなどのプリン類似体；アンシタビン、アザシチジン、６－アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロキシウリジンなどのピリミジン類似体；カルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトンなどのアンドロゲン；アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタンなどの抗副腎剤；フロリン酸などの葉酸補液；アセグラトン；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキサート；デフォファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォミチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；レンチナン；ロニダイニン；マイタンシンおよびアンサミトシンなどのマイタンシノイド；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダンモル；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロソキサントロン；２－エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖錯体（ＪＨＳ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２’’－トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ－２毒素、ベラキュリンＡ、ロリジンＡ、およびアングイジン）；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ－Ｃ」）；チオテパ；タキソイド、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ、Ｎ．Ｊ．）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）クレモホールフリー、アルブミン操作されたパクリタキセルのナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐａｒｔｎｅｒｓ、Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドセタキセル（Ｒｈｏｎｅ－Ｐｏｕｌｅｎｃ Ｒｏｒｅｒ、Ａｎｔｏｎｙ、フランス）；クロラムブシル；ゲムシタビン（ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））；６－チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキサート；シスプラチンおよびカルボプラチンなどの白金類似体；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；白金；エトポシド（ＶＰ－１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；オキサリプラチン；ロイコボビン（ｌｅｕｃｏｖｏｖｉｎ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキサート；ダウノマイシン；アミノプテリン；イバンドロネート；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイン酸などのレチノイド；カペシタビン（ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））；上記のうちのいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体；ならびにＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、およびプレドニゾロンの併用療法の略語）；およびＦＯＬＦＯＸ（５－ＦＵおよびロイコボリンと組み合わせたオキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））を用いた処置レジメンの略語）などの上記のうち２つ以上の組み合わせが含まれる。

がんの増殖を促進し得るホルモンの効果を調節、低下、遮断、または阻害するように作用し、多くの場合、全身性または身体全体の処置の形態にある抗ホルモン剤も化学療法剤のこの定義に含まれる。化学療法剤はホルモン自体であってもよい。例としては、例えば、タモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ＥＶＩＳＴＡ（登録商標）ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４－ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン、およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェン；抗プロゲステロン；エストロゲン受容体下方制御因子（ＥＲＤ）；卵巣を抑制するかまたは活動停止するように機能する薬剤、例えば、ＬＵＰＲＯＮ（登録商標）およびＥＬＩＧＡＲＤ（登録商標）ロイプロリド酢酸塩、ゴセレリン酢酸塩、ブセレリン酢酸塩、およびトリプテレリンなどの黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）アゴニスト；フルタミド、ニルタミド、およびビカルタミドなどの他の抗アンドロゲン薬；ならびに副腎におけるエストロゲン生産を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）－イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）メゲストロールアセテート、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタニー（ｆｏｒｍｅｓｔａｎｉｅ）、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾール、およびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾールを含む、抗エストロゲンおよび選択的なエストロゲン受容体調節因子（ＳＥＲＭ）が挙げられる。さらに、化学療法剤のそのような定義には、クロドロネート（例えば、ＢＯＮＥＦＯＳ（登録商標）またはＯＳＴＡＣ（登録商標）、ＤＩＤＲＯＣＡＬ（登録商標）エチドロネート、ＮＥ－５８０９５、ＺＯＭＥＴＡ（登録商標）ゾレドロン酸／ゾレドロネート、ＦＯＳＡＭＡＸ（登録商標）アレンドロネート、ＡＲＥＤＩＡ（登録商標）パミドロネート、ＳＫＥＬＩＤ（登録商標）チルドロネート、またはＡＣＴＯＮＥＬ（登録商標）リセドロネートなどのビスホスホネート；ならびにトロキサシタビン（１，３－ジオキソランヌクレオシドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に、例えばＰＫＣ－α、Ｒａｆ、Ｈ－Ｒａｓ、および表皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）などの異所（ａｂｅｒｒａｎｔ）細胞増殖に関係があるとされるシグナル伝達系路における遺伝子の発現を阻害するもの；ＴＨＥＲＡＴＯＰＥ（登録商標）ワクチンおよび遺伝子治療ワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチンなどのワクチン；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；ジトシル酸ラパチニブ（別名ＧＷ５７２０１６、ＥｒｂＢ－２およびＥＧＦＲ二重チロシンキナーゼ小分子阻害剤）；ならびに上記のうちのいずれかの薬学的に許容され得る塩、酸、または誘導体が含まれる。

がんを処置または予防するための神経薬として選択され得る化合物の別の群は、抗がん免疫グロブリン（トラスツズマブ、ペルツズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、セツキシマブ、ゲムツズマブオゾガマイシン、イブリツモマブチウキセタン、パニツムマブおよびリツキシマブを含むが、これらに限定されない）である。いくつかの例では、^１３１Ｉ放射標識を有するトシツモマブまたはトラスツズマブエムタンシンを含むが、これらに限定されない毒性標識またはコンジュゲートと合わせた抗体を使用して、所望の細胞（すなわち、がん細胞）を標的化し、死滅させることができる。

眼疾患または障害は、本明細書の目的のために、ＢＢＢによって分離されたＣＮＳ器官と考えられる眼の疾患または障害である。眼疾患または障害には、強膜、角膜、虹彩および毛様体の障害（すなわち、強膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、角膜擦過傷、雪目、アークアイ、タイゲソン点状表層角膜炎、角膜血管新生、フックスジストロフィー、円錐角膜、乾性角結膜炎、虹彩炎およびブドウ膜炎）、水晶体の障害（すなわち、白内障）、脈絡膜および網膜の障害（すなわち、網膜剥離、網膜分離症、高血圧性網膜症、糖尿病性網膜症、網膜症、未熟児網膜症、加齢黄斑変性、黄斑変性（滲出型または萎縮型）、網膜上膜、網膜色素変性および黄斑浮腫）、緑内障、飛蚊症、視神経および視覚経路の障害（すなわち、レーバー遺伝性視神経症および視神経乳頭ドルーゼン）、眼筋／両眼運動調節／屈折の障害（すなわち、斜視、眼麻痺、進行性外眼筋麻痺、内斜視、外斜視、遠視、近視、乱視、不同視、老視および眼筋麻痺）、視覚障害および失明（すなわち、弱視、レーバー先天性黒内障、暗点、色盲、全色盲、夜盲症、失明、河川盲目症および小眼球症／コロボーマ）、充血、アーガイル・ロバートソン瞳孔、角膜真菌症、眼球乾燥症ならびに無虹彩症が含まれるが、これらに限定されない。

眼疾患または障害の場合、抗血管新生眼科薬（すなわち、ベバシズマブ、ラニビズマブおよびペガプタニブ）、眼科用緑内障薬（すなわち、カルバコール、エピネフリン、臭化デメカリウム、アプラクロニジン、ブリモニジン、ブリンゾラミド、レボブノロール、チモロール、ベタキソロール、ドルゾラミド、ビマトプロスト、カルテオロール、メチプラノロール、ジピベフリン、トラボプロストおよびラタノプロスト）、炭酸脱水酵素阻害剤（すなわち、メタゾラミドおよびアセタゾラミド）、眼科用抗ヒスタミン薬（すなわち、ナファゾリン、フェニレフリンおよびテトラヒドロゾリン）、眼潤滑薬、眼科用ステロイド（すなわち、フルオロメトロン、プレドニゾロン、ロテプレドノール、デキサメタゾン、ジフルプレドナート、リメキソロン、フルオシノロン、メドリゾンおよびトリアムシノロン）、眼科用麻酔薬（すなわち、リドカイン、プロパラカインおよびテトラカイン）、眼科用抗感染症薬（すなわち、レボフロキサシン、ガチフロキサシン、シプロフロキサシン、モキシフロキサシン、クロラムフェニコール、バシトラシン／ポリミキシンｂ、スルファセタミド、トブラマイシン、アジスロマイシン、ベシフロキサシン、ノルフロキサシン、スルフイソキサゾール、ゲンタマイシン、イドクスウリジン、エリスロマイシン、ナタマイシン、グラミシジン、ネオマイシン、オフロキサシン、トリフルリジン、ガンシクロビル、ビダラビン）、眼科用抗炎症薬（すなわち、ネパフェナク、ケトロラック、フルルビプロフェン、スプロフェン、シクロスポリン、トリアムシノロン、ジクロフェナクおよびブロムフェナク）、および眼科用抗ヒスタミン薬またはうっ血除去薬（すなわち、ケトチフェン、オロパタジン、エピナスチン、ナファゾリン、クロモリン、テトラヒドロゾリン、ペミロラスト、ベポタスチン、ナファゾリン、フェニレフリン、ネドクロミル、ロドキサミド、フェニレフリン、エメダスチンおよびアゼラスチン）である神経薬が選択され得る。

ＣＮＳのウイルスまたは微生物感染症には、急性または慢性であり得る髄膜炎、脳炎、脊髄炎、血管炎および膿瘍を含むが、これらに限定されないＣＮＳ病態生理学をもたらす、ウイルス（すなわち、インフルエンザ、ＨＩＶ、ポリオウイルス、風疹）、細菌（すなわち、ナイセリア属（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ）種、ストレプトコッカス属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）種、シュードモナス属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）種、プロテウス属（Ｐｒｏｔｅｕｓ）種、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）、黄色ブドウ球菌（Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）、肺炎球菌属（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）種、髄膜炎菌属（Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ）種、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）種および結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ））および真菌（すなわち、酵母、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ））、寄生生物（すなわち、トキソプラズマ・ゴンディ（ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉ））またはアメーバなどの他の微生物による感染症が含まれるが、これらに限定されない。

ウイルス性または微生物性疾患の場合、抗ウイルス化合物（アダマンタン系抗ウイルス薬（すなわち、リマンタジンおよびアマンタジン）、抗ウイルスインターフェロン（すなわち、ペグインターフェロンアルファ－２ｂ）、ケモカイン受容体アンタゴニスト（すなわち、マラビロク）、インテグラーゼ鎖転移阻害剤（すなわち、ラルテグラビル）、ノイラミニダーゼ阻害剤（すなわち、オセルタミビルおよびザナミビル）、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（すなわち、エファビレンツ、エトラビリン、デラビルジンおよびネビラピン）、ヌクレオシド系逆転写酵素阻害剤（テノホビル、アバカビル、ラミブジン、ジドブジン、スタブジン、エンテカビル、エムトリシタビン、アデホビル、ザルシタビン、テルビブジンおよびジダノシン）、プロテアーゼ阻害剤（すなわち、ダルナビル、アタザナビル、ホスアンプレナビル、チプラナビル、リトナビル、ネルフィナビル、アンプレナビル、インジナビルおよびサキナビル）、プリンヌクレオシド（すなわち、バラシクロビル、ファムシクロビル、アシクロビル、リバビリン、ガンシクロビル、バルガンシクロビルおよびシドホビル）、および種々の抗ウイルス薬（すなわち、エンフビルチド、ホスカルネット、パリビズマブおよびホミビルセン）を含むが、これらに限定されない）、抗生物質（アミノペニシリン（すなわち、アモキシシリン、アンピシリン、オキサシリン、ナフシリン、クロキサシリン、ジクロキサシリン、フルクロキサシリン、テモシリン、アズロシリン、カルベニシリン、チカルシリン、メズロシリン、ピペラシリンおよびバカンピシリン）、セファロスポリン（すなわち、セファゾリン、セファレキシン、セファロチン、セファマンドール、セフトリアキソン、セフォタキシム、セフポドキシム、セフタジジム、セファドロキシル、セフラジン、ロラカルベフ、セフォテタン、セフロキシム、セフプロジル、セファクロルおよびセフォキシチン）、カルバペネム／ペネム（すなわち、イミペネム、メロペネム、エルタペネム、ファロペネムおよびドリペネム）、モノバクタム（すなわち、アズトレオナム、チゲモナム、ノカルジシンＡおよびタブトキシニン－ベータ－ラクタム、別のベータ－ラクタム抗生物質と合わせたベータ－ラクタマーゼ阻害剤（すなわち、クラブラン酸、タゾバクタムおよびスルバクタム）、アミノグリコシド（すなわち、アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンおよびパロモマイシン）、アンサマイシン（すなわち、ゲルダナマイシンおよびハービマイシン）、カルバセフェム（すなわち、ロラカルベフ）、糖ペプチド（すなわち、テイコプラニンおよびバンコマイシン）、マクロライド（すなわち、アジスロマイシン、クラリスロマイシン、ジリスロマイシン、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、トロレアンドマイシン、テリスロマイシンおよびスペクチノマイシン）、モノバクタム（すなわち、アズトレオナム）、キノロン（すなわち、シプロフロキサシン、エノキサシン、ガチフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、モキシフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、トロバフロキサシン、グレパフロキサシン、スパルフロキサシンおよびテマフロキサシン）、スルホンアミド（すなわち、マフェニド、スルホンアミドクリソイジン、スルファセタミド、スルファジアジン、スルファメチゾール、スルファニルアミド、スルファサラジン、スルフイソキサゾール、トリメトプリム、トリメトプリムおよびスルファメトキサゾール）、テトラサイクリン（すなわち、テトラサイクリン、デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリンおよびオキシテトラサイクリン）、抗腫瘍または細胞傷害性抗生物質（すなわち、ドキソルビシン、ミトキサントロン、ブレオマイシン、ダウノルビシ、ダクチノマイシン、エピルビシン、イダルビシン、プリカマイシン、マイトマイシン、ペントスタチンおよびバルルビシン）、および種々の抗菌化合物（すなわち、バシトラシン、コリスチンおよびポリミキシンＢ）を含むが、これらに限定されない）、抗真菌剤（すなわち、メトロニダゾール、ニタゾキサニド、チニダゾール、クロロキン、ヨードキノールおよびパロモマイシン）、および抗寄生生物薬（キニーネ、クロロキン、アモジアキン、ピリメタミン、スルファドキシン、プログアニル、メフロキン、アトバコン、プリマキン、アルテミシニン、ハロファントリン、ドキシサイクリン、クリンダマイシン、メベンダゾール、ピランテルパモ酸塩、チアベンダゾール、ジエチルカルバマジン、イベルメクチン、リファンピン、アムホテリシンＢ、メラルソプロール、エフロルニチンおよびアルベンダゾールを含むが、これらに限定されない）を含むが、これらに限定されない神経薬が選択され得る。

ＣＮＳの炎症には、物理的損傷（すなわち、事故、外科手術、脳外傷、脊髄損傷、脳震盪による）およびＣＮＳの１つまたは複数の他の疾患または障害（すなわち、膿瘍、がん、ウイルスまたは微生物感染症）によるまたはこれらに関連する損傷であり得る、ＣＮＳの損傷によって引き起こされる炎症が含まれるが、これに限定されない。

ＣＮＳ炎症の場合、炎症自体に対処する神経薬（すなわち、イブプロフェンもしくはナプロキセンなどの非ステロイド性抗炎症薬）、または炎症の根本的原因を処置する神経薬（すなわち、抗ウイルス薬もしくは抗がん剤）が選択され得る。

本明細書で使用されるＣＮＳの虚血は、脳内の異常な血流もしくは血管挙動またはその原因に関連する障害の群を指し、局所脳虚血、全脳虚血、脳卒中（すなわち、くも膜下出血および脳内出血）、および動脈瘤を含むが、これらに限定されない。

虚血の場合、血栓溶解薬（すなわち、ウロキナーゼ、アルテプラーゼ、レテプラーゼおよびテネクテプラーゼ）、血小板凝集阻害剤（すなわち、アスピリン、シロスタゾール、クロピドグレル、プラスグレルおよびジピリダモール）、スタチン（すなわち、ロバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチン、ロスバスタチン、アトルバスタチン、シンバスタチン、セリバスタチンおよびピタバスタチン）、および血流または血管の柔軟性を改善するための化合物（例えば、血圧薬を含む）を含むが、これらに限定されない神経薬が選択され得る。

神経変性疾患は、ＣＮＳにおける神経細胞の機能喪失または死に関連する疾患および障害の群であり、副腎白質ジストロフィー、アレキサンダー病、アルパース病、筋萎縮性側索硬化症、毛細血管拡張性運動失調、バッテン病、コケイン症候群、皮質基底核変性症、アミロイドーシスによって引き起こされるまたはこれに関連する変性、フリードライヒ運動失調症、前頭側頭葉変性症、ケネディ病、多系統萎縮症、多発性硬化症、原発性側索硬化症、進行性核上性麻痺、脊髄性筋萎縮症、横断性脊髄炎、レフサム病、および脊髄小脳失調症を含むが、これらに限定されない。

神経変性疾患の場合、成長ホルモンまたは神経栄養因子である神経薬が選択され得る；例には、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、ニューロトロフィン－４／５、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）－２および他のＦＧＦ、ニューロトロフィン（ＮＴ）－３、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）、上皮成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）－アルファ、ＴＧＦ－ベータ、血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、インターロイキン－１受容体アンタゴニスト（ＩＬ－１ｒａ）、毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ）、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）、ニュールツリン、血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）、ヘレグリン、ニューレグリン、アルテミン、ペルセフィン、インターロイキン、グリア細胞株由来神経栄養因子（ＧＦＲ）、顆粒球コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、顆粒球－マクロファージ－ＣＳＦ、ネトリン、カルディオトロフィン－１、ヘッジホッグ、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、ミッドカイン、プレイオトロフィン、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、ネトリン、サポシン、セマフォリン、および幹細胞因子（ＳＣＦ）が含まれるが、これらに限定されない。

ＣＮＳの発作疾患および障害は、ＣＮＳにおける不適切なおよび／または異常な電気伝導を伴い、てんかん（すなわち、欠神発作、脱力発作、良性ローランドてんかん、小児欠神、間代発作、複雑部分発作、前頭葉てんかん、熱性発作、点頭攣縮、若年性ミオクローヌスてんかん、若年性欠神てんかん、レノックス・ガストー症候群、ランドウ・クレフナー症候群、ドラベ症候群、大田原症候群、ウエスト症候群、ミオクローヌス発作、ミトコンドリア障害、進行性ミオクローヌスてんかん、心因性発作、反射性てんかん、ラスムッセン症候群、単純部分発作、続発性全身発作、側頭葉てんかん、強直間代発作、強直発作、精神運動発作、辺縁系てんかん、部分発症発作、全身発症発作、てんかん重積状態、腹部てんかん、無動発作、自律神経発作、両側汎発性ミオクローヌス、月経随伴性てんかん、転倒発作、情動発作、焦点発作、笑い発作、ジャクソン・マーチ、ラフォラ病、運動発作、多焦点発作、夜間発作、光感受性発作、疑似発作、感覚発作、微細発作、シルヴァン発作、離脱発作および視覚性反射発作）を含むが、これらに限定されない。

発作障害の場合、バルビツール酸系抗痙攣薬（すなわち、プリミドン、メタルビタール、メホバルビタール、アロバルビタール、アモバルビタール、アプロバルビタール、アルフェナール、バルビタール、ブラロバルビタールおよびフェノバルビタール）、ベンゾジアゼピン系抗痙攣薬（すなわち、ジアゼパム、クロナゼパムおよびロラゼパム）、カルバメート系抗痙攣薬（すなわち、フェルバメート）、炭酸脱水酵素阻害剤抗痙攣薬（すなわち、アセタゾラミド、トピラマートおよびゾニサミド）、ジベンザゼピン系抗痙攣薬（すなわち、ルフィナミド、カルバマゼピンおよびオクスカルバゼピン）、脂肪酸誘導体系抗痙攣薬（すなわち、ジバルプロエクスおよびバルプロ酸）、ガンマ－アミノ酪酸類似体（すなわち、プレガバリン、ガバペンチンおよびビガバトリン）、ガンマ－アミノ酪酸再取り込み阻害剤（すなわち、チアガビン）、ガンマ－アミノ酪酸トランスアミナーゼ阻害剤（すなわち、ビガバトリン）、ヒダントイン系抗痙攣薬（すなわち、フェニトイン、エトトイン、ホスフェニトインおよびメフェニトイン）、種々の抗痙攣薬（すなわち、ラコサミドおよび硫酸マグネシウム）、プロゲスチン（すなわち、プロゲステロン）、オキサゾリジンジオン系抗痙攣薬（すなわち、パラメタジオンおよびトリメタジオン）、ピロリジン系抗痙攣薬（すなわち、レベチラセタム）、スクシンイミド系抗痙攣薬（すなわち、エトスクシミドおよびメトスクシミド）、トリアジン系抗痙攣薬（すなわち、ラモトリギン）、および尿素系抗痙攣薬（すなわち、フェナセミドおよびフェネトライド）を含むが、これらに限定されない抗痙攣薬または抗てんかん薬である神経薬が選択され得る。

行動障害は、罹患した対象の一部における異常な行動を特徴とするＣＮＳの障害であり、睡眠障害（すなわち、不眠症、睡眠時随伴症、夜驚症、概日リズム睡眠障害およびナルコレプシー）、気分障害（すなわち、うつ病、自殺うつ病、不安症、慢性情動障害、恐怖症、パニック発作、強迫性障害、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、注意欠陥障害（ＡＤＤ）、慢性疲労症候群、広場恐怖症、心的外傷後ストレス障害、双極性障害）、摂食障害（すなわち、食欲不振または過食症）、精神病、発達行動障害（すなわち、自閉症、レット症候群、アスペベルガー症候群）、人格障害および精神病性障害（すなわち、統合失調症、妄想性障害など）を含むが、これらに限定されない。

行動障害の場合、神経薬は、非定型抗精神病薬（すなわち、リスペリドン、オランザピン、アプリピプラゾール、クエチアピン、パリペリドン、アセナピン、クロザピン、イロペリドンおよびジプラシドン）、フェノチアジン系抗精神病薬（すなわち、プロクロルペラジン、クロルプロマジン、フルフェナジン、ペルフェナジン、トリフルオペラジン、チオリダジンおよびメソリダジン）、チオキサンテン（すなわち、チオチキセン）、種々の抗精神病薬（すなわち、ピモジド、リチウム、モリドン、ハロペリドールおよびロキサピン）、選択的セロトニン再取り込み阻害剤（すなわち、シタロプラム、エスシタロプラム、パロキセチン、フルオキセチンおよびセルトラリン）、セロトニン－ノルエピネフリン再取り込み阻害剤（すなわち、デュロキセチン、ベンラファキシン、デスベンラファキシン）、三環系抗うつ薬（すなわち、ドキセピン、クロミプラミン、アモキサピン、ノルトリプチリン、アミトリプチリン、トリミプラミン、イミプラミン、プロトリプチリンおよびデシプラミン）、四環系抗うつ薬（すなわち、ミルタザピンおよびマプロチリン）、フェニルピペラジン系抗うつ薬（すなわち、トラゾドンおよびネファゾドン）、モノアミンオキシダーゼ阻害剤（すなわち、イソカルボキサジド、フェネルジン、セレギリンおよびトラニルシプロミン）、ベンゾジアゼピン（すなわち、アルプラゾラム、エスタゾラム、フルラゼパム、クロナゼパム、ロラゼパムおよびジアゼパム）、ルエピネフリン－ドーパミン再取り込み阻害剤（すなわち、ブプロピオン）、ＣＮＳ刺激薬（すなわち、フェンテルミン、ジエチルプロピオン、メタンフェタミン、デキストロアンフェタミン、アンフェタミン、メチルフェニデート、デクスメチルフェニデート、リスデキサンフェタミン、モダフィニル、ペモリン、フェンジメトラジン
、ベンズフェタミン、フェンジメトラジン、アルモダフィニル、ジエチルプロピオン、カフェイン、アトモキセチン、ドキサプラムおよびマジンドール）、抗不安薬／鎮静薬／催眠薬（バルビツール酸系（すなわち、セコバルビタール、フェノバルビタールおよびメホバルビタール）、ベンゾジアゼピン系（上記）、および種々の抗不安薬／鎮静薬／催眠薬（すなわち、ジフェンヒドラミン、ナトリウムオキシベート、ザレプロン、ヒドロキシジン、抱水クロラール、アルピデム、ブスピロン、ドキセピン、エスゾピクロン、ラメルテオン、メプロバメートおよびエトクロルビノール）を含むが、これらに限定されない）、セクレチン（例えば、Ｒａｔｌｉｆｆ－Ｓｃｈａｕｂら Ａｕｔｉｓｍ ９：２５６～２６５（２００５）参照）、オピオイドペプチド（例えば、Ｃｏｗｅｎら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．８９：２７３～２８５（２００４）参照）、および神経ペプチド（例えば、Ｈｅｔｈｗａら Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８９：Ｅ３０１～３０５（２００５）参照）を含むが、これらに限定されない行動修正化合物から選択され得る。

リソソーム蓄積障害は、場合によってはＣＮＳに関連するかまたはＣＮＳ特異的症状を有する代謝障害である；そのような障害には、テイ・サックス病、ゴーシェ病、ファブリー病、ムコ多糖症（Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩおよびＶＩＩ型）、糖原病、ＧＭ１ガングリオシドーシス、異染性白質ジストロフィー、ファーバー病、カナバン白質ジストロフィー、および神経セロイドリポフスチン症１型および２型、ニーマン・ピック病、ポンペ病、ならびにクラッベ病が含まれるが、これらに限定されない。

リソソーム蓄積症の場合、それ自体であるか、そうでなければ疾患において損なわれている酵素の活性を模倣する神経薬が選択され得る。リソソーム蓄積障害を処置するための例示的な組換え酵素には、例えば、米国特許出願公開第２００５／０１４２１４１号明細書に示されるもの（すなわち、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン－６－スルファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、ベータ－グルクロニダーゼ、酸性アルファ－グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ベータ－ガラクトセレブロシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ１およびトリペプチジルアミノペプチダーゼ１）が含まれるが、これらに限定されない。

一態様では、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートは、症状の発症前に神経障害を検出するため、および／または疾患もしくは障害の重症度もしくは持続期間を評価するために使用される。一態様では、抗体またはＦｃコンジュゲートは、Ｘ線撮影、断層撮影、または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）による画像化を含む、神経障害の検出および／または画像化を可能にする。

一態様では、医薬として使用するための本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートが提供される。さらなる態様では、神経疾患または障害（例えば、アルツハイマー病）の処置に使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される処置方法に使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、有効量の抗体またはＦｃコンジュゲートを個体に投与することを含む、神経疾患または障害を有する個体を処置する方法に使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートを提供する。そのような一実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を個体に投与することをさらに含む。さらなる実施形態では、本発明は、神経疾患または障害（例えば、アルツハイマー病）のリスクがあるか、またはこれを患っている患者でアミロイドプラーク形成を減少させるまたは阻害するのに使用するための抗体またはＦｃコンジュゲートを提供する。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、任意に、ヒトである。ある特定の態様では、本発明の方法に使用するための本発明の改変Ｆｃを含む抗体またはＦｃコンジュゲートは、野生型Ｆｃを含む抗体またはＦｃコンジュゲートと比較して神経障害薬の取り込みを改善する。

さらなる態様では、本発明は、医薬の製造または調製における本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートの使用を提供する。一実施形態では、医薬は、神経疾患または障害を処置するためのものである。さらなる実施形態では、医薬は、有効量の医薬を神経疾患または障害を有する個体に投与することを含む、神経疾患または障害を処置する方法に使用するためのものである。そのような一実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を個体に投与することをさらに含む。

さらなる態様では、本発明は、アルツハイマー病を処置する方法を提供する。一実施形態では、本方法は、有効量の、ＢＡＣＥ１またはＡベータに結合する本発明の抗体を、アルツハイマー病を有する個体に投与することを含む。そのような一実施形態では、本方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤を個体に投与することをさらに含む。上記の実施形態のいずれかによる「個体」は、ヒトであり得る。

本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートは、治療において、単独で、または他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートは、少なくとも１つのさらなる治療剤と同時投与されてもよい。ある特定の実施形態では、さらなる治療剤は、抗体またはＦｃコンジュゲートが処置のために使用されているのと同じまたは異なる神経障害を処置するのに有効な治療剤である。例示的なさらなる治療剤には、上記の様々な神経薬、コリンエステラーゼ阻害剤（ドネペジル、ガランタミン、ロバスチグミンおよびタクリンなど）、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト（メマンチンなど）、アミロイドベータペプチド凝集阻害剤、抗酸化剤、γ－セクレターゼモジュレーター、神経成長因子（ＮＧＦ）模倣物またはＮＧＦ遺伝子治療、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＨＭＳ－ＣｏＡレダクターゼ阻害剤（スタチン）、アンパキン、カルシウムチャネル遮断薬、ＧＡＢＡ受容体アンタゴニスト、グリコーゲンシンターゼキナーゼ阻害剤、静脈内免疫グロブリン、ムスカリン受容体アゴニスト、ニコチン受容体モジュレーター、活性または受動的アミロイドベータペプチド免疫化、ホスホジエステラーゼ阻害剤、セロトニン受容体アンタゴニストおよび抗アミロイドベータペプチド抗体が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、少なくとも１つのさらなる治療剤は、神経学的薬物の１つまたは複数の副作用を軽減する能力について選択される。

上述および本明細書の様々な併用療法は、併用投与（２種以上の治療剤が同じまたは別個の製剤中に含まれる場合）、ならびに本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートの投与が、さらなる治療剤および／またはアジュバントの投与の前、それと同時、および／またはその後に行われ得る、別個の投与を包含する。一実施形態では、抗体またはＦｃコンジュゲートの投与およびさらなる治療剤の投与は、互いの約一カ月以内、または約１、２、もしくは３週間以内、または約１、２、３、４、５、もしくは６日以内に行われる。本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートはまた、限定されないが、放射線療法、行動療法、または当技術分野で公知であり、処置または予防される神経障害に適した他の治療法などの他の介入療法と組み合わせて使用することもできる。

本発明の抗体またはＦｃコンジュゲート（および任意のさらなる治療剤）は、非経口投与、肺内投与、および鼻腔内投与、ならびに局所処置で所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内または皮下投与を含む。投薬は、任意の適切な経路によるもの、例えば、一部には、投与が一時的であるか慢性的であるかに依存して、注射によって、例えば、静脈または皮下への注射によるものであってもよい。種々の時点にわたる単回または複数回の投与、ボーラス投与、およびパルス注入を含むが、これらに限定されない種々の投薬計画が本明細書で企図される。

本発明の抗体およびＦｃコンジュゲートは、良好な医療行為と一貫する様式で、製剤化され、投薬され、かつ投与される。本文脈で考慮する因子としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床症状、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与計画、および医学専門家に既知の他の因子が挙げられる。抗体またはＦｃコンジュゲートは、当の障害を予防もしくは処置するため、または抗体もしくはＦｃコンジュゲート投与の１つもしくは複数の副作用を予防、緩和もしくは改善するために現在使用されている１種または複数の薬剤と製剤化される必要はないが、任意に、これらと製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体またはＦｃコンジュゲートの量、障害または処置の種類、および上で考察される他の因子に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量および投与経路によって、または本明細書に記載される投薬量の約１～９９％、または適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量および任意の経路で使用される。

疾患の予防または処置のために、本発明の抗体またはＦｃコンジュゲートの適切な投薬量（単独で、または１つもしくは複数の他のさらなる治療剤と組み合わせて使用される場合）は、処置される疾患の種類、抗体またはＦｃコンジュゲートの種類、疾患の重症度および経過、抗体またはＦｃコンジュゲートが予防目的または治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴、ならびに抗体またはＦｃコンジュゲートへの応答、ならびに主治医の裁量に依存するだろう。抗体またはＦｃコンジュゲートは、一度に、または一連の処置にわたって患者に好適に投与される。疾患の種類および重症度に応じて、例えば、１回または複数回の別個の投与によるものであれ、連続注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体またはＦｃコンジュゲートが、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。数日間またはそれ以上にわたる反復投与については、症状に応じ、処置は一般的に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで維持される。抗体またはＦｃコンジュゲートの１つの例示的な投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ～約４０ｍｇ／ｋｇの範囲内であるだろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、７．５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇまたは４０ｍｇ／ｋｇ（またはそれらの任意の組み合わせ）の１つまたは複数の用量を患者に投与してもよい。そのような用量は、間欠的に、例えば、毎週または３週間に１回（例えば、患者が約２～約２０回、もしくは例えば約６回用量の抗体またはＦｃコンジュゲートを受けるように）投与され得る。初回の多めの負荷量、それに続く１回または複数回の少ない用量を投与してよい。しかしながら、他の投薬レジメンが有用であり得る。この治療の進行は、本明細書に記載され、当技術分野で公知の従来の技術およびアッセイによって容易に監視される。
Ｈ．製造物品

本発明の別の態様では、上記の障害の処置、予防および／または診断に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器に挿入されるか、または容器に付随するラベルもしくはパッケージ添付文書とを含む。適切な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成され得る。容器は、単独である、あるいは症状を処置、予防および／または診断するのに有効な別の組成物と組み合わせられた組成物を保持し、滅菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有する静脈用溶液袋またはバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤は、本発明の改変Ｆｃを含む抗体または本発明のＦｃコンジュゲートである。ラベルまたはパッケージ添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造物品は、（ａ）本発明の改変Ｆｃを含む抗体または本発明のＦｃコンジュゲートを含む組成物がその中に含有された第１の容器と、（ｂ）さらなる細胞傷害剤またはさもなければ治療剤を含む組成物がその中に含有された２の容器とを含み得る。本発明のこの実施形態では、製造物品は、組成物を特定の症状を処置するために使用することができることを示すパッケージ添付文書をさらに含み得る。あるいは、または加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝剤、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液およびデキストロース溶液を含む第２の（または第３の）容器をさらに含み得る。製造品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針およびシリンジを含む、商業的観点および使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含み得る。

以下の実施例は、ある特定の開示される実施形態を説明するために提供され、決して本発明の範囲を限定するものと解釈されるべきではない。
実施例１－方法

プラスミド構築ならびに抗体およびＦｃＲｎ産生－抗体の重鎖および軽鎖またはＦｃ、またはＦｃＲｎの場合はＦＣＧＲＴもしくはＦｃｇｒｔ（ヒトＦｃＲｎアルファ鎖およびマウスＦｃＲｎアルファ鎖をそれぞれコードする）およびベータ２ミクログロブリン（β２ Ｍ）をコードするクローニング配列を含む、抗体、抗体Ｆｃ、ならびにヒトおよびマウスＦｃＲｎ複合体を、標準的な技術を使用して、以前に記載された（Ｅａｔｏｎ、Ｗｏｏｄら １９８６）標準的な分子生物学技術によって哺乳動物発現ベクターで発現させた。ＦｃＲｎを、Ｈｉｓタグを用いて発現させ、固定化金属イオンクロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）または固定化ＩｇＧカラム（例えば、Ｓｉｇｍａ Ａ０９１９、マウスＩｇＧアガロースまたはウサギＩｇＧアガロースの場合はＡ２９０９）で精製することによって精製する。抗体を、一過性トランスフェクション培養物としてＣＨＯ細胞で発現させ（Ｗｏｎｇ，Ｂａｇｉｎｓｋｉら、２０１０、Ｂｉｏｔｅｃｈｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、１０６（５）：７５１～６３）、ＧＥ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）、引き続いてＳｕｐｅｒｄｅｘ－２００サイズ排除クロマトグラフィー（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ、ＰＡ）でアフィニティー精製した。

抗体－ＦｃＲｎ親和性測定－ヒトまたはマウスＦｃＲｎに対する改変Ｆｃを含む抗体の親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）装置を使用して表面プラズモン共鳴によって決定した。全ての実験は２５℃で行った。改変Ｆｃ抗体を、１０００ ＲＵの表面密度でプロテインＬ結合によって固定化した。中性ｐＨ結合を、ＨＢＳ－Ｐ（０．０１ Ｍ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．４、０．１５ Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％ ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）で決定した。酸性ｐＨ結合を、ＭＢＳ－Ｐ（０．０１ Ｍ ＭＥＳ ｐＨ６．０、０．１５ Ｍ ＮａＣｌ、０．００５％ ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０）で決定した。会合速度（ｋａ）および解離速度（ｋｄ）を、会合センサグラムおよび解離センサグラムを同時に適合することによって、１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを使用して計算した（ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎｓバージョン４．１）。全ての適合は、１０％未満のカイ二乗／Ｒｍａｘ値を有し、許容される適合度基準を満たす。平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）を、比ｋｄ／ｋａとして計算した。あるいは、平衡結合Ｋ_Ｄ値を、分析物濃度に対する定常状態の結合レベルの依存性から決定した。いわゆる定常状態分析は、弱い相互作用から中程度の相互作用の測定に適している。検出不能な結合または正確な親和性分析を可能にするには弱すぎた結合は、本明細書の表で１０μＭ超に設定されている。

トランスサイトーシスアッセイ－インビトロアッセイを使用して、改変Ｆｃ抗体のトランスサイトーシス活性を測定した。この２チャンバートランスウェルアッセイでは、ｈＦｃＲｎまたはｍＦｃＲｎを発現する上皮細胞の層が、２つのチャンバーを分離する膜上に確立される。細胞間に形成されたタイトジャンクションが抗体拡散を排除するので、一方のチャンバーから他方のチャンバーへの抗体通過は細胞内輸送によってのみ可能である。したがって、一方のチャンバーから他方のチャンバーへのこの細胞層を通過する抗体の輸送は、トランスサイトーシスのモデルとして使用される。同様のアッセイは、例えば、Ｃｌａｙｐｏｏｌら Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２００２年８月２日；２７７（３１）：２８０３８－５０に記載されている。ＭＤＣＫ ＩＩ細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）を、１０％のウシ胎児血清（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、１００単位／ｍＬのペニシリン、１００μｇ／ｍＬのストレプトマイシンおよび０．２９２ｍｇ／ｍＬのＬ－グルタミン（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を含有するダルベッコ改変最小必須培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）中、３７℃、５％のＣＯ_２の加湿インキュベータ中で増殖させた。ＭＤＣＫ ＩＩ細胞を最初にｈＦｃＲｎをコードする遺伝子（Ｐ２Ａ配列によって分離されたＦＣＧＲＴ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ５５８９９、ＦＣＧＲＴＮ ＨＵＭＡＮ）および β_２ｍ（ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ－Ｐ６１７６９、Ｂ２ＭＧ＿ＨＵＭＡＮ）（ＫｉｍらＰＬｏＳ ｏｎｅ ２０１１；６（４）：ｅ １８５５６））でトランスフェクトし、次いで、トランスフェクトした細胞株を、抗ＦＣＧＲＴ抗体（ＡＤＭ３１、Ａｌｄｅｖｒｏｎ、Ｆａｒｇｏ、ＮＤ）および二次抗マウスＰＥコンジュゲート抗体（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用してＦＡＣＳによって選択された単離された単一コロニーから増殖させた。全てのクローンを、一定の抗生物質選択（５μｇ／ｍＬのピューロマイシン）で維持した。ＦＩＴＣ抗ヒトβ_２Ｍ（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ）を使用してフローサイトメトリーによって評価したそのＦＣＧＲＴおよびβ_２ Ｍ細胞表面発現に基づいて、最終クローンを選択した。

トランスサイトーシスアッセイを以下の通り実施した：ＦｃＲｎ発現細胞をＴｒａｎｓｗｅｌｌ（登録商標）透過性支持プレート、０．４μｍ細孔径（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｉｎｃ．，Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）に３日間播種した。３日目に、試験抗体および蛍光マーカー色素ルシファーイエロー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、Ｅｕｇｅｎｅ、ＯＲ）を含む新鮮な培地を頂端側区画に添加した。試験抗体およびルシファーイエローを含まない新鮮な培地を基底側区画に添加した。両チャンバーのｐＨは７．４とした。プレートを３７℃、５％ ＣＯ_２加湿インキュベータ内で一晩インキュベートした。４日目に、培地を頂端側区画および基底側区画から回収し、２つの区画中の抗体濃度を、以下に記載されるようにＥＬＩＳＡによってアッセイした。側底側区画中の試験抗体の濃度を、同じ区画中の参照抗体、典型的には野生型抗体の濃度で割ることによってデータを標準化された。細胞単層中の接合形成の完全性を、基底側区画中のルシファーイエローの相対蛍光単位を測定することによって監視した。対照レベルより上の上昇したレベルのルシファーイエローを有するウェルからのデータは、上皮性関門がインタクトではなかったことを示すので破棄した。

野生型およびトランスジェニックマウスのＰＫおよびＰＤ試験－６週齢～８週齢の野生型Ｃ５７Ｂ／６マウスをｍＦｃＲｎ試験に使用した。ｈＦｃＲｎをモデル化するマウス試験のために、ヒトプロモータの制御下でヒトＦｃＲｎアルファ鎖（ＦＣＧＲＴ）導入遺伝子を発現し、マウスＦｃＲｎアルファ鎖のノックアウト対立遺伝子を有するトランスジェニックＴｇ３２マウス（Ｆｃｇｒｔ^{ｔｍＩＤｃｒ}）－Ｂ６．Ｃｇ－Ｆｃｇｒｔ^{ｔｍＩＤｃｒ} Ｔｇ（ＦＣＧＲＴ）３２Ｄｃｒ／ＤｃｒＪ，（ＪＡＸストック番号０１４５６５）を使用した（Ｐｅｔｋｏｖａ Ｓ．Ｂ．２００６ Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １８（２）：１７５９－６９、Ｒｏｏｐｅｎｉａｎ，Ｄ．Ｃ．、２０１０、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．６０２：９３～１０４）。

マウス試験のための投与、試料収集－マウスに、以下に概説されるように、示される用量の抗体を静脈内注射した。投与後の様々な時間の後、血液を採取し、抗体濃度の測定のために血漿または血清のいずれかを単離した。血漿収集のために、全血を灌流の前にＥＤＴＡマイクロコンテナチューブ（ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に収集し、５，０００×ｇで１５分間遠心分離し、血漿抗体濃度を測定するために上清を単離した。血清採取のために、全血を血清セパレータマイクロコンテナチューブ（ＢＤ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）に収集し、少なくとも３０分間凝固させ、５，０００×ｇで９０秒間スピンダウンした。血清抗体測定のために上清を単離した。示された時間に、マウスをＤ－ＰＢＳで灌流し、脳を抗体濃度および／またはＡベータの測定のために収集した。脳抗体濃度測定のために、各マウス由来の半脳を、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有するＰＢＳ中１％ ＮＰ－４０（Ｃａｌ－Ｂｉｏｃｈｅｍ）中でホモジナイズした。ホモジナイズした脳試料を４℃で１時間回転させた後、１４，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離した。脳抗体測定のために上清を単離した。Ａベータ_１－４０ 測定のために、半脳を５Ｍ塩酸グアニジン緩衝液中でホモジナイズし、試料を室温で３時間回転させた後、新たに添加したアプロチニン（２０ｍｇ／ｍＬ）およびロイペプチン（１０ｍｇ／ｍｌ）を含有するＰＢＳ中０．２５％カゼイン、５ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ８．０）に希釈した（１：１０）。希釈したホモジネートを１４，０００ ｒｐｍで２０分間遠心分離し、Ａベータ_１－４０測定のために上清を単離した。

マウス血漿または血清中の抗体濃度の測定（薬物動態）－マウス血漿または血清中の総抗体濃度を、一般的なヒトＦｃ ＥＬＩＳＡで測定した。Ｎｕｎｃ ３８４ウェルＭａｘｉＳｏｒｐイムノプレートを、ロバ抗ヒトＩｇＧのＦ（ａｂ’）_２断片およびＦｃ断片特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）により４℃で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳおよび０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）により２５℃で１時間ブロッキングした。各抗体（対照ＩｇＧまたは改変Ｆｃ）を標準として使用して、それぞれの抗体濃度を定量した。プレートを、マイクロプレートウォッシャ（Ｂｉｏ－Ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を使用して、ＰＢＳおよび０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０で洗浄し、０．５％ ＢＳＡ、０．３５ Ｍ ＮａＣｌ、０．２５％ ＣＨＡＰＳ、５ ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０および１５ ｐｐｍ（百万分率）Ｐｒｏｃｌｉｎを含有するＰＢＳに希釈した標準および試料を、２５℃で２時間添加した。結合した抗体をＨＲＰコンジュゲートＦ（ａｂ’）_２ヤギ抗ヒトＩｇＧおよびＦｃ特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で検出し、ＴＭＢ（ＫＰＬ Ｉｎｃ．）で展開し、吸光度（Ａ）をＭｕｌｔｉｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で４５０ｎｍで測定した。濃度を、４パラメータ非線形回帰プログラムを用いて標準曲線から決定した。

抗ＢＡＣＥ１抗体薬物動態アッセイ－マウス血清および脳試料中の抗体濃度を、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。ＮＵＮＣ ３８４ウェルＭａｘｉｓｏｒｐイムノプレート（Ｎｅｐｔｕｎｅ，ＮＪ）を、コートとしての組換えヒトＢＡＣＥ１ ＥＣＤで４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを、０．５％ ＢＳＡを含有するＰＢＳで、室温で１時間ブロッキングした。各抗体を標準として使用して、血清および脳試料中のそれぞれの抗体濃度を定量した。マイクロプレートウォッシャ（Ｂｉｏ－Ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用して０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳでプレートを洗浄した後、標準および０．５％ ＢＳＡ、０．３５ Ｍ ＮａＣｌ、０．２５％ ＣＨＡＰＳ、５ ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０および１５ ｐｐｍプロクリンを含有するＰＢＳに希釈した試料をプレート上で穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。結合した抗体を、ＨＲＰコンジュゲートＦ（ａｂ’）_２ヤギ抗ヒトＩｇＧ Ｆｃ特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で検出した。最後に、基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用してプレートを展開した。吸光度を、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＨ）で、６３０ｎｍを参照として４５０ｎｍの波長で測定した。濃度を、４パラメータ非線形回帰プログラムを使用して標準曲線から決定した。遊離抗ＢＡＣＥ１マウスＥＬＩＳＡの検出下限（ＬＬＯＤ）は０．０６ｎｇ／ｍｌであった。

ＰＤアッセイ－マウス脳試料中のＡベータ_１－４０濃度を、ＰＫ分析についての上記の方法と同様のＥＬＩＳＡを使用して測定した。簡潔には、Ａベータ_１－４０のＣ末端に特異的なウサギポリクローナル抗体（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｅｄｆｏｒｄ、ＭＡ）をプレート上にコーティングし、ビオチン化抗マウスＡベータモノクローナル抗体Ｍ３．２（Ｃｏｖａｎｃｅ、Ｄｅｄｈａｍ、ＭＡ）を検出に使用した。このアッセイは、血漿中１．９６ｐｇ／ｍｌおよび脳中３９．１ｐｇ／ｇの定量値下限を有していた。

放射標識試験－修正したＣｈｉｚｚｏｎｉｔｅ放射ヨウ素標識プロトコルを使用して、抗体を^１２５Ｉで標識した（Ｃｈｉｚｚｏｎｉｔｅ、Ｔｒｕｉｔｔら、１９９１）。野生型またはヒトＦＣＧＲＴ ホモ接合性トランスジェニックマウス（Ｔｇ３２）に ［^１２５Ｉ］標識抗体（５ ｍＣｉ ｉｖ）を投与した。注射後、血液、脳および他の組織を指定された時点で収集した。次いで、試料を、組織１グラム当たりの総放射能について分析した。組織放射能を血管血中濃度からの寄与について補正した（ｎ＝２／群）。
実施例２－野生型およびヒトＦＣＧＲＴトランスジェニックマウスにおけるｈＩｇＧ１野生型およびＦｃ改変抗体の薬物動態および薬力学

ｐＨ６でｈＦｃＲｎへの改善された結合を有するとして以前に同定された改変Ｆｃ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ（ＬＡ）およびＭ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＹＴＥ）を含む２つの抗体、ならびに野生型ｈＩｇＧ１およびｈＩｇＧ４を含む２つの抗体を発現および精製し、ｐＨ７．４およびｐＨ６でのｈＦｃＲｎに対する親和性を測定した。さらに、野生型ＩｇＧまたは改変Ｆｃを含む各抗体のトランスサイトーシスを、実施例１に記載されるインビトロトランスサイトーシスアッセイで決定した。表２は、これらの抗体についての親和性およびトランスサイトーシスの結果を示す。
表２

表２に示されるように、ＬＡまたはＹＴＥ Ｆｃ改変を含む抗体は、ｐＨ６での改善されたＦｃＲｎ結合を有し、ｐＨ７．４での結合に検出可能な差はなく、野生型対照と比較して、トランスサイトーシスの改善はほとんど示さなかった。（１０μＭ超は、ｐＨ７．４での親和性が検出不能であったか、または弱すぎて測定できなかったことを示す）。ＬＡおよびＹＴＥバリアントは、トランスサイトーシスをそれぞれ５．１倍および１．９倍増加させた。

ｐＨ６でＦｃＲｎ親和性が増強された抗体で脳取り込みを改善できるかどうかを評価するために、対照抗ｇＤ ｈＩｇＧ１抗体（抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１）、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１）、またはＹＴＥ Ｆｃ改変を含む抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥ）を投与した後の野生型（Ｆｃｇｒｔ^＋／＋）マウスにおいて、抗体薬物動態およびＡベータ薬力学を決定した。図１に示されるように、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥは、野生型Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１と比較して、速い血漿からのクリアランス（図１Ａ）および改善された脳抗体濃度（図１Ｃ）を示した。抗体の改善された脳濃度と一致して、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥ投与は脳Ａベータ_１－４０レベルを低下させた（図１Ｂ）。対照的に、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１抗体（対照）および抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１抗体は、脳で検出された低レベルのこれらの抗体と一致して、脳Ａベータ_１－４０レベルにほとんど影響を及ぼさなかった（図１Ｂ、図１Ｃ）。抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１と比較して、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥは、野生型（Ｆｃｇｒｔ^＋／＋）マウスにおいて最大濃度（Ｃｍａｘ）と曲線下面積（ＡＵＣ）（図１Ｄ）の両方に関して脳曝露を増加させた。

驚くべきことに、ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニックＴｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウスにおいて抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥを試験した場合、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１と比較して、脳取り込みの改善も脳Ａベータ_１－４０レベルの低下もなかった（図２Ａ、図２Ｂ、図２Ｃ）。この理由を調べるために、ｐＨ７．４およびｐＨ６での野生型ｈＩｇＧ１抗体およびＹＴＥ改変を含むｈＩｇＧ１抗体のｍＦｃＲｎおよびｈＦｃＲｎへの結合を試験した。データは、ＹＴＥ改変がｐＨ７．４とｐＨ６．０の両方でｍＦｃＲｎへの結合を約１０倍改善したが、ｈＦｃＲｎへの結合はｐＨ６．０でのみ改善されたことを示した（図２Ｄ；図２ＤのＫ_Ｄデータは、異なる実験で測定されたため、表２のデータとわずかに異なる）。これらの結果は、ｐＨ６ではなく中性ｐＨでのＦｃＲｎに対するより強い親和性が、脳への輸送の増加を可能にすることを示唆した。
実施例３－ｈＩｇＧ１およびｈＩｇＧ４ Ｆｃ改変の評価

脳取り込みが改善された抗体を同定するために、一連の単一Ｆｃ改変を有する抗ＢＡＣＥ１抗体を作製した。改変の位置は、ＥＵナンバリングに従う。図１２を参照されたい。

Ｆｃ改変を含む抗体を発現させ、精製し、ｐＨ７．４およびｐＨ６でのｈＦｃＲｎに対する親和性を、Ｂｉａｃｏｒｅを使用して測定し、トランスサイトーシス活性を実施例１に記載されるように決定した。

表３は、ｐＨ６．０でヒトＦｃＲｎに対する改善された結合を有するＦｃ改変抗体を示し、これはインビトロトランスサイトーシスを実質的に改善しなかった。

表３に示されるように、ｐＨ６ではｈＦｃＲｎに対する増強された親和性を有するが、ｐＨ７．４では測定不能な親和性を有する改変Ｆｃ抗体については、トランスサイトーシスの改善は観察されない、またはわずかであり（１．７～７．８）、実施例２に記載されるＹＴＥ結果と一致した。対照的に、Ｎ４３４Ｗ Ｆｃ改変を含む抗体の、測定可能ではあるが弱いｐＨ７．４親和性（５．５μＭ）は、野生型抗体と比較して、トランスサイトーシスの増加（２６倍）を示した。

単一Ｆｃ改変を二重、三重および四重Ｆｃ改変に組み合わせ、改変Ｆｃを含む抗ＢＡＣＥ１抗体を実施例１に記載されるように構築、発現および精製し、ｐＨ７．４およびｐＨ６でのヒトＦｃＲｎへの結合および実施例１に記載されるトランスサイトーシスアッセイにおける有効性について試験した。表４、５および６は、ｐＨ７．４でのヒトＦｃＲｎへの改善された結合および改善されたトランスサイトーシス活性を有する、それぞれ二重、三重および四重Ｆｃ改変を含む抗体を示す。図３は、改変Ｆｃ抗体のｐＨ７．４ ＦｃＲｎ親和性とｐＨ６ ＦｃＲｎ親和性との間の相関を示す。各点は単一抗体を表す。白い三角形は、インビボでさらに試験した、四重Ｆｃ改変Ｍ２５２Ｙ／Ｔ３０７Ｑ／Ｑ３１１Ａ／Ｎ４３４Ｙを含み、Ｑ９５（ＹＱＡＹ）として示される、本開示の例示的抗体を示す。図４は、表３、４、５および６に示されるＦｃ改変抗体の標準化されたトランスサイトーシス活性を示す。

上記の表に示されるように、トランスサイトーシス活性が実質的に改善された一連のＦｃ改変抗体を作製し、いくつかのＦｃ改変は、野生型ＩｇＧ１抗体と比較して１００倍超トランスサイトーシスを促進した。

表７および表８は、抗ヒトＦａｂ捕捉チップを使用してＢＩＡＣＯＲＥによって決定された、改変Ｆｃを含むある特定の抗ＢＡＣＥ１抗体およびある特定の抗Ａベータ抗体の定常状態親和性を示す。

実施例４－Ｔｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗体の薬物動態

単回２５ｍｇ／ｋｇ静脈内（ＩＶ）用量の野生型ヒトＩｇＧ１を含む抗ｇＤ抗体（抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１）、ＹＹ（Ｄ１、Ｍ２５２Ｙ／Ｎ４３４Ｙ）Ｆｃ改変を有するｈＩｇＧ１を含む抗ｇＤ抗体（抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹ）、ＹＱＡＹ（Ｑ９５、Ｍ２５２Ｙ／Ｔ３０７Ｑ／Ｑ３１１Ａ／Ｎ４３４Ｙ）Ｆｃ改変を有するｈＩｇＧ１を含む抗ｇＤ抗体（抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹ）、またはＬＡ（Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ａ）Ｆｃ改変を有するｈＩｇＧ１を含む抗ｇＤ抗体（抗ｇＤ－ＩｇＧ１－ＬＡ）を、ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニックＴｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウスに投与した。図５Ａおよび図５Ｂに示されるように、異なるｈＩｇＧ１ Ｆｃを含む抗ｇＤ抗体の血清レベルは類似していたが、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹ、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹおよび抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＬＡの脳レベルは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１よりも高かった。

ｈＦｃＲｎに対する抗ｇＤ抗体の結合親和性を、上記のようにｐＨ６およびｐＨ７．４で測定した。ＹＹおよびＹＱＡＹ Ｆｃ改変抗体は、抗ＢＡＣＥ１状況で観察されたのと同様の抗ｇＤ抗体におけるｈＦｃＲｎ親和性増強をもたらした（図５Ｃ）（表４および表６）。ＰＫ結果およびｈＦｃＲｎ親和性を図５Ｃにまとめて要約しており、これは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹおよび抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹがより大きい脳／血清比（脳／血清についての％ＡＵＣ／ＡＵＣとして測定）を有したことを示している。両方のＦｃ改変は、ｐＨ７．４およびｐＨ６でｈＦｃＲｎへの結合を有意に改善し、高いトランスサイトーシススコアをもたらした（抗ＢＡＣＥ１との関連でＹＹについては７９、ＹＱＡＹについては１００－表４および表６）。
実施例５－Ｔｇ３２マウスにおける改変Ｆｃを含む抗体の薬力学

薬力学（ＰＤ）アッセイを行って、野生型ｈＩｇＧ１を含む抗ＢＡＣＥ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１）およびＹＱＡＹ Ｆｃ改変を有するｈＩｇＧ１を含む抗ＢＡＣＥ１抗体（抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹ）を、ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くトランスジェニックＴｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウスに、単回５０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ投与した後のＡベータレベルを評価した。脳抗体レベルおよびＡベータ_１－４０レベルを実施例１に記載されるようにアッセイした。以前の結果と一致して、Ｆｃ改変抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１野生型よりも大きな脳取り込みを示した（図６Ｂ）。さらに、Ｆｃ改変抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹの投与後に脳Ａベータ_１－４０レベルは低下したが、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１はほとんどまたは全く低下を示さなかった（図６Ｃ）。図６Ｄおよび図６Ｅに示されるように、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１よりも大きなＣｍａｘおよびＡＵＣ_ｌａｓｔ、ならびにＡベータのより大きな減少を有していた。

同様の実験を、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＹおよび抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹとしてフォーマット化された異なる抗ＢＡＣＥ１抗体を用いて行った。トランスジェニックＴｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウスに、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＹまたは抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹの単回５０ｍｇ／ｋｇ ＩＶ投与を行った。脳抗体レベルおよびＡベータ_１－４０レベルを実施例１に記載されるようにアッセイした。３つ全ての抗体が同様の血清濃度を有していたが（図１３Ａ）、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、最大の脳取り込みを示し、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＹは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１と比較して脳取り込みの増強に向かっていた（図１３Ｂ）。より大きな脳取り込みと一致して、脳Ａベータ_１－４０レベルは、Ｆｃ改変抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹの投与後に最も大きく低下し、Ｆｃ改変抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＹの投与後に低下する傾向が観察された（図１３Ｃ）。図１３Ｄに示されるように、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１よりも大きな脳ＣｍａｘおよびＡＵＣを有し、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＹは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１よりも大きな脳ＣｍａｘおよびＡＵＣ、ならびにＡベータのより大きな減少に向かっていた。
実施例６－ＦＣＧＲＴ^＋／＋、ＦＣＧＲＴ^＋／－およびＦｃｇｒｔ^＋／＋マウスにおける高トランスサイトーシスＩｇＧ１バリアントの薬物動態

５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内（ＩＶ）用量の抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１抗体、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹ、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹ、またはＹＴＥ（Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ）Ｆｃ改変（抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥ）を有するｈＩｇＧ１を含む抗ｇＤ抗体を、ｈＦＣＧＲＴを発現し、ｍＦＣＧＲＴを欠くホモ接合型トランスジェニックＴｇ３２（ＦＣＧＲＴ^＋／＋Ｆｃｇｒｔ^－／－）マウス；ｈＦＣＧＲＴとｍＦＣＧＲＴの両方を発現するヘミ接合性（ＦＣＧＲＴ^＋／－Ｆｃｇｒｔ^＋／－）マウス；およびｍＦＣＧＲＴのみを発現する野生型（Ｆｃｇｒｔ^＋／＋）マウスに投与した。各抗体を５μＣｉ ^１２５Ｉで標識した。全ての抗体が、ホモ接合性Ｔｇ３２マウスおよびヘミ接合性（ＦＣＧＲＴ^＋／－Ｆｃｇｒｔ^＋／－）マウスにおいて同様の血漿ＰＫを示した。野生型マウスでは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹおよび抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１または抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥよりも速い血漿からのクリアランスを示した（図７Ａ、図７Ｂ、図７Ｃ）。図７Ｄは、ｐＨ７．４およびｐＨ６でのｈＦｃＲｎおよびｍＦｃＲｎに対する抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１および各Ｆｃ改変抗体の親和性を、各系統のマウスで、各抗体について、野生型に対する血漿ＡＵＣと共に示す。

ホモ接合性ｈＦＣＧＲＴマウスにおける抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１および３つのＦｃ修改変抗体の脳ＰＫを図８に示す。抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹおよび抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１または抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥよりも大きな脳取り込みを示した（図８Ａ）。抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹおよび抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹの脳取り込み増加は、ホモ接合性ｈＦＣＧＲＴ Ｔｇ３２マウスに特異的であった（図８Ｂ）。ｈＦＣＧＲＴについてホモ接合性であるマウスでＡＵＣによって測定されるように、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＹは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１と比較して２．２倍増加した脳曝露をもたらし、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１－ＹＱＡＹは、抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１と比較して３．４倍の増加という、脳曝露のさらに大きな増加をもたらした（図８Ｃ）。

抗ｇＤ－ｈＩｇＧ１および３つのＦｃ改変抗体の薬物動態を、肝臓、大腸および肺を含む他の組織においても決定した（図９～図１１）。これらの組織も、Ｆｃ改変抗体による組織透過の中程度の改善を示したが、改善は脳で見られる改善よりも少ない。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、これらの組織は、より低いレベルのＦｃＲｎを有するか、または有窓毛細管を有する脈管構造を含み得、これが拡散によるある程度のレベルの抗体透過を可能にし得る。
実施例７－カニクイザルにおける高トランスサイトーシスＩｇＧ１バリアントの薬物動態および薬力学

カニクイザルＰＫ／ＰＤ試験．両方の試験について、１実験群当たり４匹の３～５歳の雄カニクイザルを使用した。

第１の試験では、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体、および改変Ｆｃ（抗ＢＡＣＥ１－ＹＱＡＹ、ＹＥＹ、ＹＰＹ）を有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体を、０日目に伏在静脈への静脈内ボーラス注射によって５０ｍｇ／ｋｇで投与した。ＣＳＦおよび血液試料を、投与７日前から投与２９日後までの様々な時点で収集した。試料は、同じ時間に収集した。

第２の試験では、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体、および改変Ｆｃ（抗ＢＡＣＥ１－ＹＱＡＹ、ＹＹ、ＹＬＹＩ、ＹＩＹ）を有する抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１抗体を、伏在静脈への静脈内ボーラス注射によって５０ｍｇ／ｋｇで投与した。ＣＳＦおよび血液試料を、投与７日前から投与７日後までの様々な時点で収集した。投与２日後および７日後に、２匹の動物の脳を全身灌流後に採取した。脳領域を部分解剖し、直ちに凍結した。異なる脳領域を、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有するＰＢＳ中１％ ＮＰ－４０（Ｃａｌ－Ｂｉｏｃｈｅｍ）中でホモジナイズした。ホモジナイズした脳試料を４℃で１時間回転させてから、１４，０００ｒｐｍで２０分間スピンした。上清を脳薬物動態および薬力学（ｓＡＰＰβ／α）分析のために単離した。

薬物動態アッセイ．サル血清中の総抗体濃度を、Ｐｕｒｅ Ｐｒｏｔｅｏｍｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｂｅａｄｓ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）による親和性捕捉、引き続いて変性、還元、アルキル化およびトリプシン消化を使用するＬＣＭＳ法を使用して測定した。Ｆｃ領域からのシグネチャペプチドを、総抗体濃度の定量のための代用として選択した。アッセイのＭＱＣは６０ｎｇ／ｍＬであった。ＣＳＦおよび脳試料の総抗体濃度を、コートとしてサル吸着ヒツジ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ）を使用し、検出としてＨＲＰにコンジュゲートしたサル吸着ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｂｅｔｈｙｌ）を用いるＥＬＩＳＡ法を使用して測定した。アッセイは、ＣＳＦおよび脳で１．６ｎｇ／ｍｌのＭＱＣ値を有していた。

薬力学アッセイ．ｓＡＰＰβ／α比．ｓＡＰＰαおよびｓＡＰＰβのＣＳＦ濃度および脳濃度を、ｓＡＰＰα／ｓＡＰＰβマルチプレックスＥＣＬアッセイを用いて決定した。抗Ａベータモノクローナル抗体６Ｅ１０を使用してｓＡＰＰαを捕捉し、ＡＰＰのアミノ酸５９１～５９６に対する抗体を使用してＡＰＰβを捕捉した。両分析物を、ＡＰＰのＮ末端に対する抗体を用いて検出した。ＣＳＦを氷上で解凍し、次いで、ＴＢＳ－Ｔｗｅｅｎ ２０中１％ ＢＳＡに１：１０希釈した。アッセイは、ｓＡＰＰαおよびｓＡＰＰβについてそれぞれ０．０５ｎｇ／ｍｌおよび０．０３ｎｇ／ｍｌのＬＬＯＱ値を有していた。

結果．図１４Ａに示されるように、第１の試験では、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体と比較して、脳脊髄液（ＣＳＦ）ｓＡＰＰβ／α比の有意な減少を示した。図１４Ｂおよび図１４Ｃに示されるように、中性ｐＨでのＦｃＲｎ親和性は、血清からの抗体のクリアランスの増加と相関するように見え、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体は、改変Ｆｃを有する抗体のいずれよりもゆっくりと除去された。

図１５Ａに示されるように、第２の試験では、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体と比較して、ＣＳＦ ｓＡＰＰβ／α比の有意な減少を示した。図１５Ｂに示されるように、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体と比較して脳ｓＡＰＰβ／α比の実質的な減少を示した。図１５Ｃは、各抗体についてのＣＳＦ ｓＡＰＰβ／α比および脳ｓＡＰＰβ／α比の比較を示す。ＣＳＦおよび脳は、様々な抗体で同様のＰＤ効果を示した。

図１５Ｄに示されるように、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体の全てが、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体よりも２日目に脳（皮質および海馬の平均値）により高濃度で存在し、ＹＱＡＹ、ＹＹおよびＹＩＹ Ｆｃ改変を有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体よりも７日目に高い脳濃度を有していた。２日目の抗体濃度の改善倍率は７．４であり、７日目では、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１ ＹＹについて４．７であった。２日目の抗体濃度の改善倍率は７．４であり、７日目では、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１ ＹＱＡＹについて８．１であった（図１５Ｅ）。

図１５Ｆは、脳ｓＡＰＰβ／α比と脳抗体濃度との間の相関を示しており、これは、より高レベルの抗ＢＡＣＥ１抗体が、より低いｓＡＰＰβ／α比およびより強いＰＤ応答を脳でもたらすことを実証している。

図１５Ｇは、野生型または改変ｈＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体の平均ＣＳＦ濃度を示す。ＹＹおよびＹＱＡＹ改変を含むｈＩｇＧ１ Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、様々な時点でｈＩｇＧ１野生型Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体と比較して高いＣＳＦ濃度を示した。図１５Ｈは、ＣＳＦ中の抗ＢＡＣＥ１抗体の濃度の血清中の抗ＢＡＣＥ１抗体の濃度に対する比を示す。改変Ｆｃ、ＹＹ、ＹＱＡＹ、ＹＬＹＩおよびＹＩＹの全てが、ＣＳＦ中の抗ＢＡＣＥ１抗体の割合の増加をもたらした。図１５１および図１５Ｊに示されるように、改変Ｆｃを有する抗ＢＡＣＥ１抗体は、抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１野生型抗体よりも迅速に血清から除去された。
実施例８－ＰＳ２ＡＰＰトランスジェニックマウスにおける抗Ａベータ抗体標的結合の評価

実施例２で論じられるように、Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅ（ＹＴＥ）を含む改変Ｆｃは、ｐＨ７．４とｐＨ６．０の両方でｍＦｃＲｎへの結合を改善したが、ｐＨ６．０でのみｈＦｃＲｎを改善した。野生型マウスでは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１－ＹＴＥは、抗ＢＡＣＥ１－ｈＩｇＧ１と比較して改善された脳取り込みを実証している。他の脳抗原に結合する抗体で改善された脳取り込みが観察されるかどうかを決定するために、それぞれＴｈｙ１およびＰｒＰプロモーターによって駆動される、スウェーデン変異Ｋ６７０Ｎ／Ｍ６７１Ｌを有するヒトＡＰＰ（ｈＡＰＰ）およびＮ１４１Ｉ変異を有するヒトプレセニリン２を共発現するＰＳ２ＡＰＰマウスに抗Ａベータ－ｈＩｇＧ４－ＹＴＥ抗体を投与した。例えば、Ｒｉｃｈａｒｄｓら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．２３、８９８９～９００３（２００３）を参照されたい。これらのマウスは、アミロイドプラークを含むオリゴマーおよび原線維性アミロイド沈着物を脳に蓄積し、したがって、抗Ａベータ抗体の標的結合を評価することができる。一般に、抗Ａベータ抗体の投与後、抗体の結合がアミロイドプラークの周辺部に沿って、また苔状線維海馬管内で観察される。この特異的染色パターンは、アイソタイプ適合対照抗体では観察されない（データは示さない；例えば、Ｍｅｉｌａｎｄｔ，Ｗ．Ｊ．ら Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｒｅｎｅｚｕｍａｂ ｔｏ ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｃ Ａβ．Ａｌｚ Ｒｅｓ Ｔｈｅｒａｐｙ １１、９７（２０１９）ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１３１９５－０１９－０５５３－５参照）。

インビボ投与．トランスジェニックＰＳ２ＡＰＰ同腹子または非トランスジェニック（Ｎｔｇ）同腹子を処置群に無作為化し、単回静脈内（ｉ．ｖ．）用量の抗ＡベータｈＩｇＧ４または抗ＡベータｈＩｇＧ４－ＹＴＥ（２０、４０、８０または１２０ｍｇ／ｋｇ）を投与した。抗体をプラットフォーム緩衝液（２０ ｍＭヒスチジン、２４０ ｍＭスクロース；ｐＨ５．５、０．０２％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で希釈し、５ ｍｌ／ｋｇの体積で注入した。投与５日後、動物を屠殺し、心臓穿刺によって終末血漿を回収した後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で灌流した；右半脳を取り出し、４％パラホルムアルデヒド中で滴下固定した。左半脳から海馬、皮質および小脳を切除し、秤量し、－８０℃で保存した。

免疫組織化学．右半脳を４％パラホルムアルデヒド中で４８時間滴下固定し、次いで、ＰＢＳ中３０％スクロースに移した。マウス脳の浮動性矢状凍結切片（３５μｍ）をＰＢＳ、次いで、ＰＢＳ－Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ１００（ＰＢＳＴ、０．１％）で洗浄し、次いで、５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含むＰＢＳＴ（０．３％）でブロッキングし、ＰＢＳＴ（０．３％）中１％ ＢＳＡに希釈した一次抗体と共に４℃で一晩インキュベートした。ヤギ抗ヒトＩｇＧ－Ａｌｅｘａ５９４（またはＡｌｅｘａ５５５、１：１００～１：５００；Ｔｈｅｒｍｏ－Ｆｉｓｈｅｒ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）を使用して、投与したヒト抗体の局在化を行った。Ａｐ蛍光マーカーメトキシ－Ｘ０４を使用してプラークを検出した。

蛍光顕微鏡法．４’６－ジアミジノ－２－フェニルインドール、二塩酸塩（ＤＡＰＩ）、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）およびシアニン５（Ｃｙ５）フルオロフォアに最適化されたＰＣＯ．エッジカメラ（Ｋｅｌｈｅｉｍ、ドイツ）、Ｌｕｍｅｎｃｏｒ Ｓｐｅｃｔｒａ Ｘ（Ｂｅａｖｅｒｔｏｎ、ＯＲ）およびＳｅｍｒｏｃｋフィルタ（Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＮＹ）を備えたＰａｎｎｏｒａｍｉｃ ２５０（３Ｄ Ｈｉｓｔｅｃｈ、ハンガリー）を使用して、全スライド画像を２０倍で取り込む。各チャネルの理想的な露光は、最も明るい強度の試料に基づいて決定し、スライドのセット全体をバッチとして実行するように設定する。画像はまた、Ｌｅｉｃａ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｓｕｉｔｅ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｆｌｏｒｅｓｃｅｎｃｅソフトウェア（ＬＡＳ ＡＦ４．０）を使用して、Ｌｅｉｃａ ＤＭ５５００Ｂ光学顕微鏡を使用して２０倍で捕捉した。Ｚｅｎ２．３ソフトウェアを使用してＺｅｉｓｓ ＬＳＭ８００共焦点レーザー走査型顕微鏡で２０倍または４０倍の油浸対物レンズを使用して共焦点画像を撮影した。ＩｍａｇｅＪ（ＮＩＨ）を使用して動物１匹当たり２～４切片からの積分密度を測定することによって、苔状線維染色の定量を実施した。

インビボ抗体薬物動態（ＰＫ）測定．小脳試料を秤量し、Ｑｉａｇｅｎ ＴｉｓｓｕｅＬｙｓｅｒ ＩＩ（３０ Ｈｚで２×３分）を使用して３００μｌの１％ ＮＰ－４０（Ｒｏｃｈｅ完全ＥＴＤＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテルを含む）中でホモジナイズした。次いで、試料を氷上に２０分間置き、次いで、２０，０００×ｇで２０分間遠心分離した。上清を回収し、ＰＫアッセイに使用するまで－８０℃で保存した。マウス血漿および脳試料中の抗体濃度を、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。ＮＵＮＣ ３８４ウェルＭａｘｉｓｏｒｐイムノプレート（Ｎｅｐｔｕｎｅ、ＮＪ、米国）を、ヒツジ抗ヒトＩｇＧのＦ（ａｂ’）_２断片、Ｆｃ断片特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ、米国）により４℃で一晩コーティングした。次いで、プレートを、０．５％ ＢＳＡを含有するＰＢＳで、室温で１時間ブロッキングした。各抗体（抗ＡベータｈＩｇＧ４または抗ＡベータｈＩｇＧ４－ＹＴＥ）を標準として使用して、それぞれの抗体濃度を定量した。マイクロプレートウォッシャ（Ｂｉｏ－Ｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．、Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＴ）を使用して０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０を含有するＰＢＳでプレートを洗浄した後、標準および０．５％ ＢＳＡ、０．３５ Ｍ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、０．２５％ ３－［（３－コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］－１－プロパンスルホネート水和物（ＣＨＡＰＳ）、５ ｍＭ ＥＤＴＡ、０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０および１５ ｐｐｍプロクリンを含有するＰＢＳに希釈した試料をプレート上で穏やかに撹拌しながら室温で２時間インキュベートした。結合した抗体を、西洋ワサビぺルオキシダーゼコンジュゲートＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ断片特異的ポリクローナル抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）で検出した。最後に、基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＫＰＬ，Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ、米国）を使用してプレートを展開した。吸光度を、Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔリーダー（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ、ＮＨ、米国）で、６３０ｎｍを参照として４５０ｎｍの波長で測定した。濃度を、４パラメータ非線形回帰プログラムを使用して標準曲線から決定した。このアッセイは、血漿中１３．７ｎｇ／ｍｌおよび脳中１．３７ｎｇ／ｍｌの定量値下限を有していた。

結果．図１６Ａ～図１６Ｂに示されるように、血漿ＰＫおよび脳ＰＫの用量依存的増加が抗ＡベータｈＩｇＧ４について観察されたが、抗ＡベータｈＩｇＧ４－ＹＴＥは、全ての用量でより低い血清曝露および増強された脳取り込みを示した。抗ＡベータｈＩｇＧ４についての脳：血漿比は約０．１５％であり、抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥについては約０．７５％であった。

図１６Ｃは、苔状線維海馬管への抗体結合によって測定されるインビボ標的結合を示す。抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥは、２０ｍｇ／ｋｇの投与後に有意な結合を示し、用量が増加するにつれて結合増加を示す。対照的に、抗ＡベータｈＩｇＧ４は、２０ｍｇ／ｋｇおよび４０ｍｇ／ｋｇでの投与後、抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥと比較してはるかに低い染色を示す。図１６Ｄは、図１６Ｃからの染色レベルを示す棒グラフである。

図１６Ｅおよび図１６Ｆは、２０ｍｇ／ｋｇでの投与後の海馬台（１６Ｅ）および前頭前野（１６Ｆ）におけるアミロイドプラークの周辺部への抗ＡベータｈＩｇＧ４および抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥの結合を示す。これらの脳領域におけるアミロイドプラークへの抗ＡベータｈＩｇＧ４ ＹＴＥの結合レベルは、抗ＡベータｈＩｇＧ４について観察された結合よりもはるかに大きい。
実施例９－カニクイザルにおける高トランスサイトーシスＩｇＧ４バリアントの薬物動態

カニクイザルＰＫ試験．１実験群当たり４匹の３～５歳の雄カニクイザルを使用した。抗Ａベータ ｈＩｇＧ４野生型抗体、および改変Ｆｃ（抗Ａベータ－ＹＱＡＹ、ＹＥＹ、ＹＹ）を有する抗ＡベータｈＩｇＧ４抗体を、０日目に伏在静脈への静脈内ボーラス注射によって５０ｍｇ／ｋｇで投与した。ｐＨ７．４およびｐＨ６．０でのカニクイザルＦｃＲｎに対する各抗体の結合親和性を表９に示す。示される親和性は２５℃で測定した；３７℃での親和性は類似であった（データは示さず）。

ＣＳＦおよび血液試料を、投与７日前から投与７日後までの様々な時点で収集した。試料は、同じ時間に収集した。投与２日後および７日後に、２匹の動物の脳を全身灌流後に採取した。脳領域を部分解剖し、直ちに凍結した。異なる脳領域を、Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｍｉｎｉ ＥＤＴＡフリープロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を含有するＰＢＳ中１％ ＮＰ－４０（Ｃａｌ－Ｂｉｏｃｈｅｍ）中でホモジナイズした。ホモジナイズした脳試料を４℃で１時間回転させてから、１４，０００ｒｐｍで２０分間スピンした。上清を脳薬物動態分析のために単離した。

薬物動態アッセイ．サル血清、ＣＳＦおよび脳試料の総抗体濃度を、コートとしてサル吸着ヒツジ抗ヒトＩｇＧポリクローナル抗体（Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ）を使用し、検出としてＨＲＰにコンジュゲートしたサル吸着ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｂｅｔｈｙｌ）を用いるＥＬＩＳＡ法を使用して測定した。アッセイは、ＣＳＦおよび脳で１．６ｎｇ／ｍｌのＭＱＣ値を有していた。

結果．図１７Ａは、２日目および７日目の抗Ａベータ抗体の平均脳濃度を示す。図１７Ｂは、各改変ｈＩｇＧ４ Ｆｃで観察された脳濃度の改善倍率を要約している。改変Ｆｃを有する抗Ａベータ抗体は、２日目に野生型Ｆｃと比較して脳取り込みの２．７～４．７倍の改善、および７日目に３．７～４．２倍の改善を示した。

図１７Ｃは、野生型または改変ｈＩｇＧ４ Ｆｃを有する抗Ａベータ抗体の平均ＣＳＦ濃度を示す。ＹＥＹおよびＹＱＡＹ改変を含むｈＩｇＧ４ Ｆｃを有する抗Ａベータ抗体は、ｈＩｇＧ４野生型Ｆｃを有する抗Ａベータ抗体と比較して高いＣＳＦ濃度を示した。ＹＹ改変を含むＦｃでもわずかな改善が観察された。図１７Ｄは、ＣＳＦ中の抗Ａベータ抗体の濃度の血清中の抗Ａベータ抗体の濃度に対する比を示す。改変Ｆｃ、ＹＹ、ＹＥＹおよびＹＱＡＹの全てが、ＣＳＦ中の抗Ａベータ抗体の割合の増加をもたらした。図１７Ｅおよび図１７Ｆに示されるように、改変Ｆｃを有する抗Ａベータ抗体は、抗Ａベータ ｈＩｇＧ４野生型抗体よりも迅速に血清から除去された。

図１８Ａは、カニクイザルにおける血清曝露とｐＨ７．４でのｈＦｃＲｎに対するＦｃの親和性（Ｋ_Ｄ（７．４））の相関を示す。抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１（丸）と抗ＡベータＩｇＧ４（四角）の両方のＦｃ改変バリアントをプロットに示す。ＷＴ Ｆｃを丸で囲み、標識する。

図１８Ｂは、カニクイザルの脳への抗体分配（％ ［ｍＡｂ_脳］／［ｍＡｂ_血清］）とｐＨ７．４でのｈＦｃＲｎに対するＦｃの親和性（Ｋ_Ｄ（７．４））の相関を示す。抗ＢＡＣＥ１ ｈＩｇＧ１（丸）と抗ＡベータＩｇＧ４（四角）の両方のＦｃ改変バリアントをプロットに示す。ＷＴ Ｆｃを丸で囲み、標識する。

要約すると、結果は、ｐＨ７．４でＦｃＲｎに対する増加した親和性を有する改変Ｆｃが、ｈＩｇＧ１とｈＩｇＧ４の両方の状況においてカニクイザルの脳曝露を改善することを実証している。特に血清曝露と比較して、ＣＳＦ曝露の改善も観察された。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する増加した親和性は、再利用も分解もされるのではなく、トランスサイトーシスされるＩｇＧの割合を増加させ、脳およびＣＳＦ曝露の改善をもたらし得る。あるいは、または加えて、ｐＨ７．４での細胞表面上のＦｃＲｎに対する増加した親和性は、細胞中に内在化され、トランスサイトーシスされるＩｇＧ抗体の量を増加させ、脳およびＣＳＦ曝露の改善をもたらし得る。

上述の発明を、理解を明確にする目的で、説明および実施例によってある程度詳細に記載してきたが、その記載および実施例は、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。本明細書に引用される全ての特許および科学文献の開示は、その全体が参照により明示的に組み込まれる。
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Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．、Ｍ．Ｋ．Ｌｅａｂｍａｎ、Ｊ．Ｓ．Ｍａｒｖｉｎ、Ｊ．Ｑｉｕ、Ｃ．Ｗ．Ａｄａｍｓ、Ｓ．Ｌｉｅｎ、Ｍ．Ａ．ＳｔａｒｏｖａｓｎｉｋおよびＨ．Ｂ．Ｌｏｗｍａｎ（２００９）．「Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｈｕｍａｎ ＩｇＧ１ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｎｅｏｎａｔａｌ Ｆｃ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ ｏｎ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｉｎ ｐｒｉｍａｔｅｓ．」Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １８２（１２）：７６６３～７６７１．
Ｙｕ，Ｙ．Ｊ．、Ｊ．Ｋ．Ａｔｗａｌ、Ｙ．Ｚｈａｎｇ、Ｒ．Ｋ．Ｔｏｎｇ、Ｋ．Ｒ．Ｗｉｌｄｓｍｉｔｈ、Ｃ．Ｔａｎ、Ｎ．Ｂｉｅｎ－Ｌｙ、Ｍ．Ｈｅｒｓｏｍ、Ｊ．Ａ．Ｍａｌｏｎｅｙ、Ｗ．Ｊ．Ｍｅｉｌａｎｄｔ、Ｄ．Ｂｕｍｂａｃａ、Ｋ．Ｇａｄｋａｒ、Ｋ．Ｈｏｙｔｅ、Ｗ．Ｌｕｋ、Ｙ．Ｌｕ、Ｊ．Ａ．Ｅｒｎｓｔ、Ｋ．Ｓｃｅａｒｃｅ－Ｌｅｖｉｅ、Ｊ．Ａ．Ｃｏｕｃｈ、Ｍ．Ｓ．ＤｅｎｎｉｓおよびＲ．Ｊ．Ｗａｔｔｓ（２０１４）．「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｃｒｏｓｓ ｔｈｅ ｂｌｏｏｄ－ｂｒａｉｎ ｂａｒｒｉｅｒ ｉｎ ｎｏｎｈｕｍａｎ ｐｒｉｍａｔｅｓ．」Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ６（２６１）：２６１ｒａ１５４．
Ｙｕ，Ｙ．Ｊ．、Ｙ．Ｚｈａｎｇ、Ｍ．Ｋｅｎｒｉｃｋ、Ｋ．Ｈｏｙｔｅ、Ｗ．Ｌｕｋ、Ｙ．Ｌｕ、Ｊ．Ａｔｗａｌ、Ｊ．Ｍ．Ｅｌｌｉｏｔｔ、Ｓ．Ｐｒａｂｈｕ、Ｒ．Ｊ．ＷａｔｔｓおよびＭ．Ｓ．Ｄｅｎｎｉｓ（２０１１）．「Ｂｏｏｓｔｉｎｇ ｂｒａｉｎ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ａ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｉｔｓ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ａ ｔｒａｎｓｃｙｔｏｓｉｓ ｔａｒｇｅｔ．」Ｓｃｉ Ｔｒａｎｓｌ Ｍｅｄ ３（８４）：８４ｒａ４４．
Ｚａｌｅｖｓｋｙ，Ｊ．、Ａ．Ｋ．Ｃｈａｍｂｅｒｌａｉｎ、Ｈ．Ｍ．Ｈｏｒｔｏｎ、Ｓ．Ｋａｒｋｉ、Ｉ．Ｗ．Ｌｅｕｎｇ、Ｔ．Ｊ．Ｓｐｒｏｕｌｅ、Ｇ．Ａ．Ｌａｚａｒ、Ｄ．Ｃ．ＲｏｏｐｅｎｉａｎおよびＪ．Ｒ．Ｄｅｓｊａｒｌａｉｓ（２０１０）．「Ｅｎｈａｎｃｅｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ．」Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ ２８（２）：１５７～１５９．
［配列表］

Claims (114)

1. 神経障害を処置する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
2. 前記神経障害が、ニューロパチー障害、神経変性疾患、脳障害、がん、眼疾患障害、発作障害、リソソーム蓄積症、アミロイドーシス、ウイルス性または微生物性疾患、虚血、行動障害、およびＣＮＳ炎症から選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記神経障害が、神経変性疾患である、請求項１に記載の方法。
4. 前記神経変性疾患が、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、アミロイドーシス、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、アミロイドーシス、タウオパチー、アルツハイマー病、核上性麻痺、プリオン病、ウシ海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ症候群、クールー、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症から選択される、請求項３に記載の方法。
5. 抗体を対象の脳に送達する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
6. 抗体への脳曝露を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
7. 血液脳関門（ＢＢＢ）を通過する抗体の輸送を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記抗体はインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
8. 前記抗体が、野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じ抗体に標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記抗体が、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項８に記載の方法。
10. 前記インビトロトランスサイトーシスアッセイが、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記細胞が、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である、請求項１０に記載の方法。
12. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項１から１１のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下のｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
16. ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体の親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体の親和性に対する比が、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む、請求項１７に記載の方法。
19. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む、請求項１８に記載の方法。
20. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む、請求項１８に記載の方法。
21. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む、請求項１から２０のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ１ Ｆｃである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ４ Ｆｃである、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記抗体が脳抗原に結合する、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記抗体が、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、アミロイドベータ（Ａベータ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、タウ、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）、アルファ－シヌクレイン、ＣＤ２０、ハンチンチン、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ロイシンリッチリピートキナーゼ２（ＬＲＲＫ２）、パーキン、プレセニリン１、プレセニリン２、ガンマセクレターゼ、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ｐ７５ニューロトロフィン受容体（ｐ７５ＮＴＲ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、カスパーゼ６、骨髄細胞に発現する誘発性受容体２（ＴＲＥＭ２）、Ｃ１ｑ、対になった免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）、ＣＤ３３、インターロイキン６（ＩＬ６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ＴＮＦＲ１）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ＴＮＦＲ２）およびアポリポタンパク質Ｊ（ＡｐｏＪ）から選択される脳抗原に結合に結合する、請求項２４に記載の方法。
26. 前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１から２５のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記抗体が、ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項１から２６のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記抗体が、二重特異性抗体である、請求項１から２７のいずれか一項に記載の方法。
29. 前記抗体が、抗体断片である、請求項１から２８のいずれか一項に記載の方法。
30. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、配列番号１～４から選択される配列の１つまたは複数の改変を含む、請求項１から２９のいずれか一項に記載の方法。
31. 前記抗体が、イメージング剤にコンジュゲートされている、請求項１から３０のいずれか一項に記載の方法。
32. 前記抗体が、神経障害薬にコンジュゲートされている、請求項１から３１のいずれか一項に記載の方法。
33. 前記神経障害薬が、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される、請求項３２に記載の方法。
34. 神経障害を処置する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートを、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
35. 前記神経障害が、ニューロパチー障害、神経変性疾患、がん、眼疾患障害、発作障害、リソソーム蓄積症、アミロイドーシス、ウイルス性または微生物性疾患、虚血、行動障害、およびＣＮＳ炎症から選択される、請求項３４に記載の方法。
36. 前記神経障害が、神経変性疾患である、請求項３５に記載の方法。
37. 前記神経変性疾患が、レビー小体病、ポリオ後症候群、シャイ・ドレーガー症候群、オリーブ橋小脳萎縮症、パーキンソン病、多系統萎縮症、線条体黒質変性症、タウオパチー、アルツハイマー病、核上性麻痺、プリオン病、ウシ海綿状脳症、スクレイピー、クロイツフェルト・ヤコブ症候群、クールー、ゲルストマン・シュトロイスラー・シャインカー病、慢性消耗病および致死性家族性不眠症から選択される、請求項３６に記載の方法。
38. Ｆｃコンジュゲートを対象の脳に送達する方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
39. Ｆｃコンジュゲートへの脳曝露を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
40. 血液脳関門（ＢＢＢ）を通過するＦｃコンジュゲートの輸送を増加させる方法であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含む抗体を、それを必要とする対象に投与するステップを含み、前記Ｆｃコンジュゲートはインビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、方法。
41. 前記Ｆｃコンジュゲートが、野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じＦｃコンジュゲートに標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項３４から４０のいずれか一項に記載の方法。
42. 前記Ｆｃコンジュゲートが、少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項４１に記載の方法。
43. 前記インビトロトランスサイトーシスアッセイが、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む、請求項３４から４２のいずれか一項に記載の方法。
44. 前記細胞が、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である、請求項４３に記載の方法。
45. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項３４から４４のいずれか一項に記載の方法。
46. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項３４から４５のいずれか一項に記載の方法。
47. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、１ｍＭ未満、または７５０ｎＭ未満、または５００ｎＭ未満、または４００ｎＭ未満、または３００ｎＭ未満、または２００ｎＭ未満、または１００ｎＭ未満、または５０ｎＭ～１ｍＭ、または１００ｎＭ～１ｍＭ、または１００ｎＭ～５００ｎＭのｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項３４から４６のいずれか一項に記載の方法。
48. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、１００ｎＭ未満、または９０ｎＭ未満、または８０ｎＭ未満、または７０ｎＭ未満、または６０ｎＭ未満、または５０ｎＭ未満、または４０ｎＭ未満、または３０ｎＭ未満、または２０ｎＭ未満、または１０ｎＭ未満、または１ｎＭ～２００ｎＭ、または１０ｎＭ～２００ｎＭ、または１０ｎＭ～１００ｎＭのｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項３４から４７のいずれか一項に記載の方法。
49. ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートの親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートの親和性に対する比が、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である、請求項３４から４８のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む、請求項４５から４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む、請求項４９に記載の方法。
52. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む、請求項５１に記載の方法。
53. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む、請求項５１に記載の方法。
54. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む、請求項３４から５３のいずれか一項に記載の方法。
55. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ１ Ｆｃである、請求項３４から５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ４ Ｆｃである、請求項３４から５４のいずれか一項に記載の方法。
57. 前記Ｆｃコンジュゲートが、治療用タンパク質に融合した前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項３４から５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 前記治療用タンパク質が、受容体細胞外ドメインおよび酵素から選択される、請求項５７に記載の方法。
59. 前記受容体細胞外ドメインが、ＴＮＦ－Ｒ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ＣＴＬＡ－４ ＥＣＤ、およびＩＬ－１Ｒ１ ＥＣＤから選択される、請求項５７に記載の方法。
60. 前記酵素が、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン－６－スルファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、ベータ－グルクロニダーゼ、酸性アルファ－グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ベータ－ガラクトセレブロシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ１およびトリペプチジルアミノペプチダーゼ１から選択される、請求項５７に記載の方法。
61. 前記Ｆｃコンジュゲートが、神経障害薬にコンジュゲートした前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項３４から５６のいずれか一項に記載の方法。
62. 前記神経障害薬が、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される、請求項５９に記載の方法。
63. 前記Ｆｃコンジュゲートが、イメージング剤にコンジュゲートした前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項３４から５６のいずれか一項に記載の方法。
64. 脳抗原に結合する単離抗体であって、改変ＩｇＧ Ｆｃを含み、インビトロトランスサイトーシスアッセイで活性である、単離抗体。
65. 野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じ抗体に標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項６４に記載の単離抗体。
66. 少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項６５に記載の単離抗体。
67. 前記インビトロトランスサイトーシスアッセイが、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む、請求項６４から６６のいずれか一項に記載の単離抗体。
68. 前記細胞が、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である、請求項６７に記載の単離抗体。
69. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項６４から６８のいずれか一項に記載の単離抗体。
70. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照抗体の結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項６４から６９のいずれか一項に記載の単離抗体。
71. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下のｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項６４から７０のいずれか一項に記載の単離抗体。
72. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項６４から７１のいずれか一項に記載の単離抗体。
73. ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体の親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体の親和性に対する比が、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である、請求項６４から７２のいずれか一項に記載の単離抗体。
74. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記抗体が、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む、請求項６４から７３のいずれか一項に記載の単離抗体。
75. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む、請求項７４に記載の単離抗体。
76. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む、請求項７５に記載の単離抗体。
77. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む、請求項７５に記載の単離抗体。
78. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む、請求項６４から７７のいずれか一項に記載の単離抗体。
79. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ１ Ｆｃである、請求項６４から７８のいずれか一項に記載の単離抗体。
80. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ４ Ｆｃである、請求項６４から７８のいずれか一項に記載の単離抗体。
81. 前記脳抗原が、ベータ－セクレターゼ１（ＢＡＣＥ１）、アミロイドベータ（Ａベータ）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、タウ、アポリポタンパク質Ｅ（ＡｐｏＥ）、アルファ－シヌクレイン、ＣＤ２０、ハンチンチン、プリオンタンパク質（ＰｒＰ）、ロイシンリッチリピートキナーゼ２（ＬＲＲＫ２）、パーキン、プレセニリン１、プレセニリン２、ガンマセクレターゼ、細胞死受容体６（ＤＲ６）、アミロイド前駆体タンパク質（ＡＰＰ）、ｐ７５ニューロトロフィン受容体（ｐ７５ＮＴＲ）、インターロイキン６受容体（ＩＬ６Ｒ）、インターロイキン１ベータ（ＩＬ１β）、カスパーゼ６、骨髄細胞に発現する誘発性受容体２（ＴＲＥＭ２）、Ｃ１ｑ、対になった免疫グロブリン様２型受容体アルファ（ＰＩＬＲＡ）、ＣＤ３３、インターロイキン６（ＩＬ６）、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦα）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ａ（ＴＮＦＲ１）、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー１Ｂ（ＴＮＦＲ２）およびアポリポタンパク質Ｊ（ＡｐｏＪ）から選択される、請求項６４から８０のいずれか一項に記載の単離抗体。
82. モノクローナル抗体である、請求項６４から８１のいずれか一項に記載の単離抗体。
83. ヒト抗体、ヒト化抗体、またはキメラ抗体である、請求項６５から８２のいずれか一項に記載の単離抗体。
84. 二重特異性抗体である、請求項６４から８３のいずれか一項に記載の単離抗体。
85. 抗体断片である、請求項６４から８４のいずれか一項に記載の単離抗体。
86. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、配列番号１～４から選択される配列の１つまたは複数の改変を含む、請求項６４から８５のいずれか一項に記載の単離抗体。
87. イメージング剤にコンジュゲートされている、請求項６４から８６のいずれか一項に記載の単離抗体。
88. 神経障害薬にコンジュゲートされている、請求項６４から８７のいずれか一項に記載の単離抗体。
89. 前記神経障害薬が、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される、請求項８８に記載の単離抗体。
90. 改変ＩｇＧ Ｆｃを含むＦｃコンジュゲートであって、インビトロトランスサイトーシスアッセイで活性であるＦｃコンジュゲート。
91. 野生型ＩｇＧ Ｆｃを含む同じＦｃコンジュゲートに標準化された場合、少なくとも５０の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項９０に記載のＦｃコンジュゲート。
92. 少なくとも６０、少なくとも７０、少なくとも８０、少なくとも９０、または少なくとも１００の、インビトロトランスサイトーシスアッセイでのトランスサイトーシス活性を示す、請求項９１に記載のＦｃコンジュゲート。
93. 前記インビトロトランスサイトーシスアッセイが、ＦｃＲｎを発現する細胞を含む、請求項９０から９２のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
94. 前記細胞が、ＭＤＣＫ ＩＩ細胞である、請求項９３に記載のＦｃコンジュゲート。
95. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項９０から９４のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
96. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、同じ種およびアイソタイプの未改変ＩｇＧ Ｆｃを有する参照Ｆｃコンジュゲートの結合親和性よりも大きい、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項９０から９５のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
97. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、１０μＭ以下、５μＭ以下、４μＭ以下、３μＭ以下、２μＭ以下、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下または１００ｎＭ以下のｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項９０から９６のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
98. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、１μＭ以下、９００ｎＭ以下、８００ｎＭ以下、７００ｎＭ以下、６００ｎＭ以下、５００ｎＭ以下、４００ｎＭ以下、３００ｎＭ以下、２００ｎＭ以下、１００ｎＭ以下、９０ｎＭ以下、８０ｎＭ以下、７０ｎＭ以下、６０ｎＭ以下、５０ｎＭ以下、４０ｎＭ以下、３０ｎＭ以下、２０ｎＭ以下または１０ｎＭ以下のｐＨ６でのＦｃＲｎに対する結合親和性を有する、請求項９０から９７のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
99. ｐＨ７．４でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートの親和性の、ｐＨ６でのＦｃＲｎに対する前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートの親和性に対する比が、少なくとも５、少なくとも１０、少なくとも２０、少なくとも５０、もしくは少なくとも１００；または５～２００、５～１００、１０～２００、１０～１００、２０～１００、もしくは２０～２００である、請求項９０から９８のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
100. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む前記Ｆｃコンジュゲートが、ＥＵナンバリングで２５２Ｗ、２５２Ｙ、２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１０Ａ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋ、４３４Ｆ、４３４Ｗ、４３４Ｙおよび４３６Ｉから選択される１つまたは複数の突然変異を含む、請求項９０から９９のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
101. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙを含む、請求項１００に記載のＦｃコンジュゲート。
102. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、２５２Ｙおよび４３４Ｙ、ならびに２８６Ｅ、２８６Ｑ、３０７Ｑ、３０８Ｐ、３１１Ａ、３１１Ｉ、４２８Ｌ、４３３Ｋおよび４３６Ｉから選択される１つまたは２つのさらなる突然変異を含む、請求項１０１に記載のＦｃコンジュゲート。
103. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、３０７Ｑおよび３１１Ａをさらに含むか、または２８６Ｅをさらに含む、請求項１０１に記載のＦｃコンジュゲート。
104. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、表４、５および６の突然変異のセットから選択される突然変異のセットを含む、請求項９０から１０３のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
105. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ１ Ｆｃである、請求項９０から１０４のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
106. 前記ＩｇＧ ＦｃがＩｇＧ４ Ｆｃである、請求項９０から１０４のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
107. 治療用タンパク質に融合した前記改変ＩｇＧ Ｆｃを含む、請求項９０から１０６のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
108. 前記治療用タンパク質が、受容体細胞外ドメインおよび酵素から選択される、請求項１０７に記載のＦｃコンジュゲート。
109. 前記受容体細胞外ドメインが、ＴＮＦ－Ｒ１細胞外ドメイン（ＥＣＤ）、ＣＴＬＡ－４ ＥＣＤ、およびＩＬ－１Ｒ１ ＥＣＤから選択される、請求項１０７に記載のＦｃコンジュゲート。
110. 前記酵素が、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、Ｎ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、Ｎ－アセチル－ガラクトサミン－６－スルファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＢ、ベータ－グルクロニダーゼ、酸性アルファ－グルコシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、ヘキソサミニダーゼＡ、酸性スフィンゴミエリナーゼ、ベータ－ガラクトセレブロシダーゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、酸性セラミダーゼ、アスパルトアシラーゼ、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ１およびトリペプチジルアミノペプチダーゼ１から選択される、請求項１０７に記載のＦｃコンジュゲート。
111. 前記改変ＩｇＧ Ｆｃが、配列番号１～４から選択される配列の１つまたは複数の改変を含む、請求項９０から１１０のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
112. イメージング剤にコンジュゲートされている、請求項９０から１１１のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
113. 神経障害薬にコンジュゲートされている、請求項９０から１１１のいずれか一項に記載のＦｃコンジュゲート。
114. 前記神経障害薬が、アプタマー、抑制性核酸、リボザイム、および小分子から選択される、請求項１１３に記載のＦｃコンジュゲート。

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