CN110624107A - 通过施用il-4r拮抗剂治疗或预防哮喘的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了用于治疗或预防哮喘和相关疾病的患者的方法。本发明的方法包括给予有需要的受试者包含白介素4受体(IL‑4R)拮抗剂，如抗IL‑4R抗体的治疗组合物。

Description

通过施用IL-4R拮抗剂治疗或预防哮喘的方法
本申请是2013年8月20日提交的申请号为201380054710.6(PCT申请号为PCT/US2013/055747)、发明名称为“通过施用IL-4R拮抗剂治疗或预防哮喘的方法”的发明专利申请的分案申请。
相关申请
本申请要求下列申请的优先权的利益：2012年8月21日提交的美国临时申请号61/691,625；2013年1月29日提交的美国临时申请号61/758,097；2013年2月6日提交的美国临时申请号61/761279；2013年3月14日提交的美国临时申请号61/783,796；2013年3月27日提交的美国临时申请号 61/805,797；和2013年7月16日提交的法国申请号1356994，上述各申请的内容通过引用的方式以其整体并入本文。
发明领域
本发明涉及哮喘和相关病症的治疗和/或预防。更具体地，本发明涉及在有需要的患者中通过施用白介素4受体(IL-4R)拮抗剂以治疗或预防哮喘。
背景
哮喘是以气道高反应性，急性和慢性支气管收缩，气道水肿和粘液堵塞气道特征的慢性炎性疾病。哮喘的炎症成分被认为涉及许多细胞类型，包括肥大细胞，嗜酸性粒细胞，T淋巴细胞，中性粒细胞和上皮细胞，以及它们的生物产物。哮喘患者最常见表现为喘息、气短、咳嗽、胸闷等症状。对于大多数哮喘患者，控制剂疗法和支气管扩张剂治疗的方案可提供足够的长期控制。吸入皮质类固醇(ICS)被认为是控制哮喘症状的“金标准”，且吸入β2- 受体激动剂是目前已经上市的支气管扩张剂中最有效的。研究已经显示ICS 与吸入长效β2-激动剂(LABA)的联合疗法提供了比单独的高剂量ICS更好的哮喘控制。因此，联合治疗一直是单独低剂量ICS控制不力的受试者的推荐疗法。
然而，据估计，5％至10％患哮喘人群尽管接受了抗炎和支气管扩张药的组合的最大推荐治疗，仍然具有表现症状的疾病。此外，这种重度哮喘人群由于住院、使用急救服务，和不定期的就诊，占用高达50％的卫生总费用。许多严重哮喘患者由于若干细胞和分子机制而对ICS响应较差，因此需要在此严重哮喘人群中的新疗法，该需求尚未得到满足。此外，全身和吸入给药的皮质类固醇对骨代谢、肾上腺皮质功能、以及儿童成长的长期不利影响促使人们尝试减少皮质类固醇的使用量。尽管大部分哮喘患者用现有前的治疗管理得相当好，对严重皮质类固醇难治性哮喘的患者而言，可充分控制病情的治疗选项很少。对治疗不响应或对治疗缺少顺应性的后果是哮喘失控，最终导致哮喘加重。
一些重症哮喘患者对药物的反应不佳的原因之一可能是疾病的异质性。人们对于理解这些不同的表型的兴趣正在增加，因为靶向治疗在具有相似的潜在病理生物学特征的患者中更有可能成功。最近的哮喘治疗途径都聚焦于试图控制T辅助细胞2的响应。已经表明，白介素-4(IL-4)和白介素-13(IL-13) 的上调是哮喘疾病进展中涉及的一个重要炎性成分。
因此，本领域中存在对用于治疗和/或预防哮喘的新型靶向疗法的需要。
发明简述
根据本发明的一个方面，提供了用于在有此需要的受试者中减少哮喘恶化的发生率的方法。在一个相关的方面，提供了用于在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关的参数的方法。在本发明的另一个方面，提供了用于在有此需要的受试者中治疗哮喘(例如，中度至重度的嗜酸细胞性哮喘)的方法。
作为本发明特征的方法包括给受试者施用治疗有效量的包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物。根据某些实施方案，IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段。可以在本发明的方法的上下文中使用的示例性抗IL-4R抗体在本文别处，包括工作实施例1中有描述。例如，在一个实施方案中，所述IL-4R拮抗剂是这样的抗体或抗原结合片段，其特异性结合IL-4R，并且包含分别来自SEQ ID NO:162和164的重链可变区(HCVR) 和轻链可变区(LCVR)的重链和轻链(互补决定区)CDR序列。
在一个实施方案中，提供通过施用特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段而在有需要的受试者中减少一种或多种哮喘加重的发生率的方法。哮喘加重可以是下述的一种或多种：(a)连续两天早间峰值呼气流速(PEF)从基线减少30％或更多；(b)连续两天在24小时期间内六次或更多次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾(与基线相比)；和(c)哮喘恶化，需要：(i)全身(口服和/或肠胃外)类固醇治疗，或者(ii)增加吸入皮质类固醇至中断或住院治疗前最后一个剂量的至少4倍。
在各种实施方案中，用于改善一种或多种哮喘相关参数的方法包括给予有此需要的受试者治疗有效量的IL-4R拮抗剂，其中，哮喘相关参数的改善定义为下述之一：FEV1自基线增加；AM PEF自基线增加；PM PEF自基线增加；沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用自基线下降；夜间苏醒自基线下降；和/ 或SNOT-22评分自基线降低。哮喘相关参数的例子包括：(a)1秒用力呼气容积(FEV1)；(b)峰值呼气流速(PEF)，包括早间PEF(AM PEF)和晚间PEF(PMPEF)；(c)使用吸入支气管扩张剂，如沙丁胺醇或左沙丁胺醇；(c)5项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分；(d)夜间苏醒；(e)22项目鼻腔鼻窦结果测试(SNOT-22) 评分。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是FEV1自基线增加至少0.10 L。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是AM PEF自基线增加至少10.0 L/min。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是PM PEF自基线增加至少 1.0L/min。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用自基线减少至少1次喷雾每天。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是ACQ5评分自基线下降至少0.5分。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是夜间苏醒自基线减少至少0.2次每夜。在一个实施方案中，哮喘相关参数的改善是SNOT-22评分自基线减少至少5分。
本发明也提供在有此需要的受试者中降低哮喘加重的发生率，或改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其中所述方法包括依次向有此需要的受试者施用：单个初始剂量的包含IL-4R拮抗剂(例如，抗IL-4R抗体或其抗原结合片段)的药物组合物，然后是一个或多个次级剂量的包含所述IL-4R拮抗剂的所述药物组合物。该包含IL-4R拮抗剂的药物组合物可以皮下、鼻内或静脉内施用给有此需要的受试者。
根据某些实施方案，本发明提供用于在有此需要的受试者中减少哮喘加重的发生率，或改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其中所述方法包括向受试者施用约75至约300mg的包含特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段的药物组合物。根据该方面，该药物组合物可以以例如每周一次的给药频率施用给受试者。
本发明进一步包括用于治疗哮喘(例如，嗜酸性粒细胞性哮喘，中度至重度的嗜酸细胞性哮喘等)的方法，该方法是通过如下实施的：选择呈现哮喘的一种或多种症状或标记的受试者，并且向该患者施用包含IL-4R拮抗剂(例如，抗IL-4R抗体或其抗原结合片段)的药物组合物，其中所述受试者表现出一种或多种下述的哮喘症状或征象：(1)受试者在筛选前已经用稳定剂量的氟替卡松/沙美特罗联合治疗(250/50μg BID或500/50μg BID)或布地奈德/福莫特罗联合治疗(160/9μg BID或320/9μg BID)至少3个月；(2)受试者的血液嗜酸性粒细胞大于或等于300个细胞/μL；(3)受试者的痰嗜酸性粒细胞大于或等于 3％；(4)受试者的IgE、胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、嗜酸细胞活化趋化因子-3、癌胚抗原(CEA)、YKL-40或骨膜素的水平升高；(5)受试者的呼出气一氧化氮分数(FeNO)的水平升高；和/或(6)所述受试者的哮喘控制问卷 (ACQ5)评分大于或等于1.0。
作为本发明特征的实施方案涉及如上所述的治疗方法进一步包括施用与 IL-4R拮抗剂组合的第二治疗剂。第二治疗剂可以在IL-4R拮抗剂之前、之后或同时施用给有需要的受试者。示例性的第二治疗剂包括，但不限于，下述一种或多种的组合：IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂，皮质类固醇，长效β2-激动剂，和白三烯抑制剂。
在另一个方面，本发明提供减少或消除哮喘患者对背景哮喘疗法的依靠的方法，包括：选择具有未用背景哮喘疗法控制或用背景哮喘疗法部分控制的中度至重度哮喘的患者；向患者施用限定剂量的IL-4R拮抗剂，同时保持患者的背景疗法；并在随后的治疗期内逐渐减少背景疗法的一种或多种组分的用量，同时继续施用所述IL-4R拮抗剂。在某些实施方案中，背景疗法包括吸入皮质类固醇(ICS)，长效β-受体激动剂(LABA)，或ICS和LABA的组合。在一些实施方案中，背景疗法历时2-8周逐渐减少或撤出。在一些实施方案中，在初始治疗期之后背景疗法的一个组分被去除。在一个实施方案中，在后续治疗期间背景疗法逐渐减少。
在另一个方面，本发明提供了一种用于鉴别患者并治疗中度至重度哮喘的方法，该方法是通过如下进行的：选择具有升高的水平的生物标志物、或具有增加水平的呼出气一氧化氮分数(FeNO)的患者，并对该患者施用治疗有效量的IL-4R拮抗剂，所述生物标志物例如胸腺和活化调节的趋化因子 (TARC)，IgE，嗜酸细胞活化趋化因子-3，骨膜素(periostin)，癌胚抗原(CEA)，或者YKL-40。
在另一个方面，本发明的特征是一种用于监测受试者中度至重度哮喘治疗的有效性的方法，例如通过(a)确定在用IL-4R拮抗剂治疗前从受试者获得的生物样品中生物标志物(如TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3之一或二者) 的表达水平，或IgE的总血清水平；(b)确定在用IL-4R拮抗剂治疗后从该受试者获得的生物样品中所述生物标志物的表达水平；(c)比较在步骤(a)中确定的表达水平与步骤(b)中的水平，和(d)当在步骤(b)中确定的水平低于在步骤(a) 中确定的水平时，作出治疗有效的结论，或者当在步骤(b)中确定的水平等于或高于在步骤(a)中确定的水平时，作出治疗无效的结论。
在一个实施方案中，所述生物标志物是FeNO，并且如果在施用拮抗剂后 FeNO水平降低，则确定IL-4R拮抗剂治疗是有效的。
可以在所述IL-4R拮抗剂施用后例如1周，2周，3周，4周，5周或更长时间确定生物标志物的表达水平，并且与该拮抗剂施用之前的表达水平比较。可以在确定之后调整IL-4R拮抗剂(例如，抗IL4R抗体)的剂量或给药方案。例如，如果生物标志物的表达未能在拮抗剂给药之后1周，2周，3周， 4周，5周，或更长的时间内降低，则可以停止该拮抗剂治疗，或者可以增加该拮抗剂的剂量。如果生物标志物的表达在拮抗剂施用之后减少，可以保持或降低拮抗剂的剂量，以确定一个最小的有效剂量。在一些实施方案中，将治疗维持在最低有效剂量。
在另一个方面，本发明的特征是用于监测受试者对IL-4R拮抗剂治疗的反应的方法，其中所述受试者患有中度至重度哮喘，所述方法例如是通过如下实施的：在对受试者施用IL-4R拮抗剂之后获取关于来自该受试者的生物样品中的生物标志物(例如TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3之一或二者)的表达水平或IgE的总血清水平的信息，并如果该生物标志物的表达水平相比于用IL-4R拮抗剂治疗前的水平已经降低，则提供治疗应该继续的提示。在一个实施方案中，生物标志物是FeNO，并且如果FeNO水平被确定为在施用抗体后降低，则提供继续用IL-4R拮抗剂治疗的指示。
本发明还包括如本文所公开的IL-4R拮抗剂在制备用于治疗和/或预防哮喘(例如，嗜酸性粒细胞性哮喘，中度至重度的嗜酸细胞性哮喘等)，或用于治疗本文公开的任何其它适应症或病症的药物中的用途。
本发明还包括适用于治疗和/或预防哮喘(例如，嗜酸性粒细胞性哮喘，中度至重度的嗜酸细胞性哮喘等)，或适用于治疗和/或预防本文公开的任何其它适应症或病症的本文公开的IL-4R拮抗剂。
本发明包括这样的药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，其适用于治疗和/或预防哮喘和相关病症。
本发明还包括这样的药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在有此需要的受试者中降低一种或多种哮喘加重的发生率。
另外，本发明包括这样的药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数。
本发明包括这样的药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，用于在具有升高水平的选自下组的生物标志物的患者中治疗哮喘和相关病症：胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、IgE、嗜酸细胞活化趋化因子-3，骨膜素，癌胚抗原(CEA)，YKL-40，和呼出气一氧化氮分数(FeNO)。
本发明还包括这样的药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，用于在有此需要的受试者中治疗哮喘或中度至重度的嗜酸细胞性哮喘，其中所述治疗包括检测所述患者中至少300个细胞每微升的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平的存在，和如果发现这样的血液嗜酸性粒细胞水平和/或痰嗜酸性粒细胞水平，则开始/继续施用所述药物组合物。
参照随后的详述，本发明的其他实施方案将不言自明。
更具体地，本申请提供下述各项：
1.一种在有此需要的受试者中减少一种或多种哮喘加重的发生率的方法，其包括对受试者施用治疗有效量的包含白介素-4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物。
2.项1的方法，其中所述的哮喘加重选自下组：
(a)连续两天早间峰值呼气流速(PEF)自基线减少30％更多；
(b)连续两天在24小时期间内6次或更多次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾(与基线相比)；和
(c)哮喘恶化，需要：
(i)全身(口服和/或胃肠外)类固醇治疗，或
(ii)增加吸入皮质类固醇至中止前接受的最后一次剂量的至少4倍，或者
(ii)住院治疗。
3.项1或2的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段。
4.项3的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
5.项4的方法，其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合 IL-4R的抗体或抗原结合片段。
6.项3的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区(CDR)序列，所述重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对选自下组： SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58,66/68,70/72,74/82, 90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140,142/144,146/154, 162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202,210/212,214/216, 218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264。
7.项6的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR 序列。
8.项7的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、150、 152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
9.项8的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164的氨基酸序列的LCVR。
10.项1-9中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
11.项1-10中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受试者施用第二治疗剂。
12.项11的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
13.项12的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2- 激动剂的组合。
14.项13的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
15.项13的方法，其中所述长效β2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
16.项13的方法，其中所述吸入皮质类固醇是氟替卡松，且所述长效β 2-激动剂是沙美特罗。
17.项13的方法，其中所述吸入皮质类固醇是布地奈德，且所述长效β 2-激动剂是福莫特罗。
18.一种用于在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其包括给受试者施用治疗有效量的包含白介素-4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物，其中哮喘相关参数的改善选自下组：
(a)以升计的1秒用力呼气容积(FEV1)自基线增加；
(b)以升/分钟计的早间峰值呼气流速(AM PEF)自基线增加；
(c)以升/分钟计的晚间峰值呼气流速(PM PEF)自基线增加；
(d)以吸入数/日计的每日沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用自基线减少；
(e)五项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分自基线减少；
(f)每日测量的夜间苏醒(每夜次数)自基线减少；和
(g)22项目鼻窦-鼻腔结果测试(SNOT-22)评分自基线减少。
19.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是FEV1自基线增加至少0.10 L。
20.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是AM PEF自基线增加至少 10.0L/min。
21.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是PM PEF自基线增加至少 1.0L/min。
22.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用自基线减少至少1次喷雾每日。
23.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是ACQ5评分自基线减少至少0.5分。
24.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是夜间苏醒自基线减少至少 0.2次每夜。
25.项18的方法，其中哮喘相关参数的改善是SNOT-22评分自基线减少至少5分。
26.项18-25中任一项的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R 的抗体或其抗原结合片段。
27.项18-26中任一项的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg 的所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
28.项27的方法，其中其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
29.项26的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区(CDR)序列，所述重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对选自 SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58,66/68,70/72,74/82, 90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140,142/144,146/154, 162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202,210/212,214/216, 218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264。
30.项29的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR 序列。
31.项30的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、150、 152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
32.项31的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的LCVR。
33.项18-32中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
34.项18-33中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受试者施用第二治疗剂。
35.项34的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
36.项35的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2- 激动剂的组合。
37.项36的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
38.项36的方法，其中所述长效β2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
39.项36的方法，其中所述吸入皮质类固醇是氟替卡松，且所述长效β 2-激动剂是沙美特罗。
40.项36的方法，其中所述皮质类固醇是布地奈德，且所述长效β2-激动剂是福莫特罗。
41.一种用于在有此需要的受试者中治疗中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘的方法，其包括对受试者施用有治疗有效量的包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物，其中所述受试者被鉴定为具有每微升至少300个细胞的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少为3％的痰嗜酸性粒细胞水平。
42.项41的方法，其中IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段。
43.项41或42的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
44.项43的方法，其中所述药物组合物包含300mg的所述特异性结合 IL-4R的抗体或抗原结合片段。
45.项42的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自选自SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58,66/68, 70/72,74/82,90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140,142/144, 146/154,162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202,210/212, 214/216,218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264的重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的互补决定区(CDR)序列。
46.项44的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR 序列。
47.项46所述的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、 150、152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
48.项47所述的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的LCVR。
49.项41-48中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
50.项41-49中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受试者施用第二治疗剂。
51.项50的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
52.项51的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2- 激动剂的组合。
53.项52的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
54.项52的方法，其中所述长效β2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
55.项52的方法，其中所述吸入皮质类固醇为氟替卡松，且所述长效β 2-激动剂是沙美特罗。
56.项52的方法，其中所述吸入皮质类固醇为布地奈德，且所述长效β 2-激动剂是福莫特罗。
57.一种用于在有需要的受试者中减少哮喘加重的发生率或改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其包括对有此需要的受试者顺序施用：单一初始剂量的包含白介素-4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物，然后一个或多个次级剂量的该包含IL-4R拮抗剂的药物组合物。
58.项57的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段。
59.项57或58的方法，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
60.项59的方法，其中药物组合物包含300mg的所述特异性结合IL-4R 的抗体或抗原结合片段。
61.根据项58所述的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区(CDR)序列，所述重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对选自SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58,66/68,70/72, 74/82,90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140,142/144, 146/154,162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202,210/212, 214/216,218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264。
62.项61的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR 序列。
63.项62的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、150、152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
64.项63的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的LCVR。
65.项57-64中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
66.项57-65中任一项的方法，其中在所述药物组合物的初始剂量和/或次级剂量之前、之后或同时对受试者施用第二治疗剂。
67.项66的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
68.项67的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2- 激动剂的组合。
69.项68的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
70.项68的方法，其中长效β2-激动剂是沙美特罗和福莫特罗。
71.项68的方法，其中所述吸入皮质类固醇为氟替卡松，且所述长效β 2-激动剂是沙美特罗。
72.项68的方法，其中所述吸入皮质类固醇为布地奈德，且所述长效β 2-激动剂是福莫特罗。
73.项57-72中任一项的方法，其中，每个次级剂量在紧前剂量的1至8 周后施用。
74.项57-72中任一项的方法，其中，对受试者施用至少8个次级剂量的所述IL-4R拮抗剂，并且其中每个次级剂量在紧前剂量的1周后施用。
75.项57-74中任一项的方法，其中所述初始剂量和一个或多个次级剂量各自包括75mg至600mg的所述IL-4R拮抗剂。
76.项75的方法，其中所述初始剂量和一个或多个次级剂量各自包括300 mg的所述IL-4R拮抗剂。
77.一种用于在有此需要的受试者中降低哮喘加重的发生率或改善一种或多种哮喘相关参数的方法，包括向受试者施用300mg的包含特异性结合 IL-4R的抗体或抗原结合片段的药物组合物，其中所述药物组合物以每周一次的给药频率施用给受试者。
78.项77的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区(CDR)序列，所述重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对选自 SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58,66/68,70/72,74/82, 90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140,142/144,146/154, 162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202,210/212,214/216, 218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264。
79.项78的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR 序列。
80.项79的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、150、 152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
81.项80的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的LCVR。
82.项77-81中任一项的方法，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
83.项77-82中任一项的方法，其中在所述药物组合物之前、之后、或同时对受试者施用第二治疗剂。
84.项83的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
85.项84的方法，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2- 激动剂的组合。
86.项85的方法，其中吸入皮质类固醇是氟替卡松或布地奈德。
87.项85的方法，其中长效β2-激动剂是沙美特罗和福莫特罗。
88.项85的方法，其中所述吸入皮质类固醇为氟替卡松，且所述长效β 2-激动剂方法是沙美特罗。
89.项85的方法，其中所述吸入皮质类固醇为布地奈德，且所述长效β 2-激动剂是福莫特罗。
90.一种用于治疗哮喘的方法，包括：(a)选择表现至少300个细胞每微升的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平的患者，和(b) 对该患者施用包含IL-4R拮抗剂的药物组合物。
91.项90的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段。
92.项91的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:148、150、 152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156， 158和160。
93.项92的方法，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO:164 的氨基酸序列的LCVR。
94.一种降低或消除哮喘患者为治疗一种或多种哮喘加重而对吸入皮质类固醇(ICS)的和/或长效β-激动剂(LABA)的依靠的方法，包括：
(a)选择部分受或不受背景哮喘疗法控制的具有中度至重度哮喘的患者，所述背景哮喘疗法包括ICS、LABA，或其组合；
(b)在初始治疗期内以限定频率对患者施用限定剂量的IL-4R拮抗剂，同时在初始治疗期内保持患者的背景哮喘疗法；和
(c)在随后的一段治疗期间内逐渐降低或消除施用给患者的ICS和/或 LABA的剂量，同时以初始治疗期内使用的限定频率和剂量继续对患者施用所述IL-4R拮抗剂。
95.项94所述的方法，其中，所述IL-4R拮抗剂是抗IL-4R抗体或抗原结合片段。
96.项94或95所述的方法，其中，所述ICS是氟替卡松、布地奈德、或莫米松。
97.项94-96中任一项的方法，其中，所述LABA是沙美特罗或福莫特罗。
98.项94-97中任一项的方法，其中，所述ICS/LABA组合是氟替卡松/ 沙美特罗，布地奈德/福莫特罗，或者莫米松/福莫特罗。
99.项94-98中任一项的方法，其中LABA的剂量在初始治疗期结束时去除。
100.项94-99中任一项的方法，其中在2至8周中的过程中逐渐降低或消除LABA和/或ICS的剂量。
101.一种用于治疗中度至重度哮喘的方法，包括：(a)选择具有升高水平的选自下组的生物标志物的患者：胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、IgE、嗜酸细胞活化趋化因子-3、骨膜素、癌胚抗原(CEA)、YKL-40、和呼出气一氧化氮分数(FeNO)；和(b)向该患者施用治疗有效量的IL-4R拮抗剂。
102.项101的方法，其中所述IL-4R拮抗剂是抗IL-4R抗体或抗原结合片段。
103.一种监测受试者中度至重度哮喘治疗的有效性的方法，包括：
(a)确定在用IL-4R拮抗剂治疗前从受试者获得的生物样品中
TARC与嗜酸细胞活化趋化因子-3之一或二者的表达水平，或
IgE的总血清水平
中的一种或多种；
(b)确定在用IL-4R拮抗剂治疗后从该受试者获得的生物样品中
TARC与嗜酸细胞活化趋化因子-3之一或二者的表达水平，或
IgE的总血清水平
中的一种或多种；
(c)比较在步骤(a)中确定的水平与步骤(b)中的水平，和
(d)当在步骤(b)中确定的水平低于在步骤(a)中确定的水平时，作出治疗有效的结论，或者当在步骤(b)中确定的水平等于或高于在步骤(a)中确定的水平时，作出治疗无效的结论。
104.项103的方法，其中，在测定步骤(a)中的水平之后1周，2周，3 周，4周，或5周测定步骤(b)中的水平。
105.项103的方法，其中，如果在步骤(b)中的水平不低于步骤(a)中的水平，则停止IL-4R拮抗剂的施用，或增加IL-4R拮抗剂的剂量。
106.项105所述的方法，其中，在测定步骤(a)中的水平之后1周，2周， 3周，4周，或5周测定步骤(b)中的水平。
107.一种监测受试者对使用IL-4R拮抗剂的治疗的反应的方法，其中所述受试者患有中度至重度哮喘，包括：
(a)在对受试者施用IL-4R拮抗剂之后获取关于来自该受试者的生物样品中TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3之一或二者的表达水平或IgE的总血清水平的信息，和
(b)如果TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3表达水平、或IgE的总血清水平相比于用IL-4R拮抗剂治疗前的水平已经降低，则提供治疗应该继续的提示。
108.适用于治疗和/或预防哮喘和相关病症的IL-4R拮抗剂。
109.一种药物组合物，包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于治疗和/或预防哮喘和相关病症。
110.项109的药物组合物，其中所述药物组合物包含75mg至600mg 的特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
111.项110的药物组合物，其中所述药物组合物包含300mg的特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段。
112.项108-110中任一项的药物组合物，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)序列对的重链和轻链互补决定区(CDR)序列，所述重链可变区(HCVR)/轻链可变区 (LCVR)序列对选自SEQ ID NO:2/10,18/20,22/24,26/34,42/44,46/48,50/58, 66/68,70/72,74/82,90/92,94/96,98/106,114/116,118/120,122/130,138/140, 142/144,146/154,162/164,166/168,170/178,186/188,190/192,194/202, 210/212,214/216,218/226,234/236,238/240,242/250,258/260,和262/264。
113.项112的药物组合物，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含来自包含SEQ ID NO:162/164的HCVR/LCVR序列对的重链和轻链CDR序列。
114.项109-113中任一项的药物组合物，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或其抗原结合片段包含三个重链互补决定区(HCDR)序列，它们分别包含 SEQ ID NO:148、150、152，和三个轻链互补决定区(LCDR)序列，它们分别包含SEQ ID NO:156，158和160。
115.项113的药物组合物，其中所述特异性结合IL-4R的抗体或抗原结合片段包含：包含SEQ ID NO:162的氨基酸序列的HCVR，和包含SEQ ID NO: 164的氨基酸序列的LCVR。
116.项109-115中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
117.项109-116中任一项的药物组合物，其中在所述药物组合物之前、之后或同时对受试者施用第二治疗剂。
118.项117的药物组合物，其中所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂， IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
119.项118的药物组合物，其中所述第二治疗剂包括吸入皮质类固醇和长效β2-激动剂的组合。
120.项119的药物组合物，其中所述吸入皮质类固醇为氟替卡松或布地奈德。
121.项119的药物组合物，其中所述长效β2-激动剂是沙美特罗或福莫特罗。
122.项119的药物组合物，其中所述吸入皮质类固醇为氟替卡松，且所述长效β2-激动剂是沙美特罗。
123.项119的药物组合物，其中所述吸入皮质类固醇为布地奈德，且所述长效β2-激动剂是福莫特罗。
124.项109-123中任一项的方法，其中所述相关病症选自慢性鼻窦炎，变应性鼻炎，变应性真菌性鼻窦炎，变应性支气管肺曲菌病，联合气道疾病，丘-施综合征，血管炎，慢性阻塞性肺病(COPD)，及运动诱发的支气管痉挛。
125.一种药物组合物，包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在有此需要受试者中降低一种或多种哮喘加重的发生率。
126.项125的药物组合物，其中所述哮喘加重选自下组：
(a)连续两天早间峰值呼气流速(PEF)自基线降低30％或更多；
(b)连续两天在24小时期间内六次或更多次额外的(与基线相比)沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾；和
(c)哮喘恶化，需要：
(i)全身(口服和/或胃肠外)类固醇治疗，或
(ii)增加吸入皮质类固醇至中止之前接受的最后一个剂量的至少4倍，或者
(iii)住院治疗。
127.一种药物组合物，包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数。
128.项127的的药物组合物，其中哮喘相关参数的改善选自下组：
((a)以升计的1秒用力呼气容积(FEV1)自基线增加；
(b)以升/分钟计的早间峰值呼气流速(AM PEF)自基线增加；
(c)以升/分钟计的晚间峰值呼气流速(PM PEF)自基线增加；
(d)以吸入数/日计的每日沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用自基线减少；
(e)五项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分自基线减少；
(f)每日测量的夜间苏醒(每夜次数)自基线减少；和
(g)22项目鼻窦-鼻腔结果测试(SNOT-22)评分自基线减少。
129.一种药物组合物，包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在具有升高的选自下组的生物标志物的水平的患者中治疗哮喘和相关病症：胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、IgE、嗜酸细胞活化趋化因子-3、骨膜素、癌胚抗原(CEA)、YKL-40、和呼出气一氧化氮分数(FeNO)。
130.项129的药物组合物，其中所述相关病症选自慢性鼻窦炎，变应性鼻炎，变应性真菌性鼻窦炎，变应性支气管肺曲菌病，联合气道疾病，丘-施综合征，血管炎，慢性阻塞性肺病(COPD)，及运动诱发的支气管痉挛。
131.一种药物组合物，其包含抗IL4R抗体拮抗剂或其抗原结合片段，适用于在有此需要的受试者中治疗哮喘或中度至重度嗜酸细胞性哮喘，其中所述治疗包括测试患者是否存在至少300个细胞每微升的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平，并且如果发现这样的血液嗜酸性粒细胞水平和/或痰嗜酸性粒细胞水平，则开始/继续施用所述药物组合物。
附图简要说明
图1是显示用安慰剂(空心圆)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1(星号) 治疗的患者相比较的哮喘加重前时间(time to exacerbation)的Kaplan-Meier作图的曲线图。用抗IL-4R抗体mAm1治疗的作用随时间推移持续，包括8周之后，彼时由于类固醇停药患者发生病情加重的风险较高。不连续的垂直线表示LABA停药。
图2是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1(实心圆)治疗的患者相比较的1秒用力呼气容积(FEV1)(以升计)自基线的平均变化的曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图3是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1 (实心圆)治疗的患者相比较的早间峰值呼气流速(AM PEF)(以升每分钟计)自基线的平均变化的曲线图。
图4是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1 (实心圆)治疗的患者相比较的晚间峰值呼气流速(PM PEF)(以升每分钟计)自基线的平均变化的曲线图。
图5是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1 (实心圆)治疗的患者相比较的吸入的沙丁胺醇使用自基线的平均变化曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图6是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者与用抗IL-4R抗体mAb1 (实心圆)治疗的患者相比较的五项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分自基线的平均变化的曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图7是显示用安慰剂(空心三角形)治疗的患者夜间苏醒(以次每夜计)自基线的平均变化的曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图8是显示用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、1、4、8、12周各次访视时TARC自基线的平均百分比变化的曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图9是显示用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、1、4、8、12周各次访视时嗜酸细胞活化趋化因子-3自基线的平均百分比变化的曲线图。不连续的垂直线表示 LABA停药。
图10是显示用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、1、4、8、12周各次访视时总IgE自基线的平均百分比变化的曲线图。不连续的垂直线表示LABA停药。
图11是显示用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、1、4、8、12周各次访视时骨膜素自基线的平均百分比变化的曲线图。
图12是显示用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、1、4、8、12周各次访视时癌胚抗原(CEA) 自基线的平均百分比变化的曲线图。
图13是用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1治疗的患者(实心方块)相比较的显示在0、1、4、8、12周各次访视时YKL-40 自基线的平均百分比变化的曲线图。
图14是用安慰剂治疗的mITT群体(实心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1(实心方块)治疗的患者相比较的显示在0、1、2、4、6、8、12周各次访视时血液嗜酸性粒细胞自基线的平均百分比变化的曲线图。
图15是显示用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆)与用抗IL-4R抗体mAb1 治疗的患者(实心方块)相比较的在0、4、8、和12周各次访视时呼出气一氧化氮分数(NO)水平自基线的平均百分比变化的曲线图。不连续的垂直线表示 LABA停药。
图16是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时FEV 1(L)自基线的变化与基线呼出气一氧化氮分数(FeNO)(PPB)的关系的散点图。
图17是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时AM-PEF(L/min)自基线的变化与基线FeNO(PPB)的关系的散点图。
图18是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时PM-PEF(L/min)自基线的变化与基线FeNO(PPB)的关系的散点图。
图19是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时FEV1自基线的变化(L) 与血液嗜酸性粒细胞计数(GIGA/L)的关系的散点图。
图20是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时ACQ自基线的变化与血液嗜酸性粒细胞计数(GIGA/L)的关系的散点图。
图21是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时沙丁胺醇/左沙丁胺醇日使用自基线的变化与血液嗜酸性粒细胞计数(GIGA/L)的关系的散点图。
图22是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时ACQ自基线的变化与基线骨膜素的关系的散点图。
图23是用安慰剂治疗的mITT群体(空心圆和全线)与用抗IL-4R抗体 mAb1治疗的患者(加号和虚线)相比较的在第12周时ACQ自基线的变化与 YKL-40的关系的散点图。
图24是用于治疗哮喘患者的时机和给药方案的示意图。
图25是描述一个随机化、安慰剂对照、双盲平行组研究的患者处置的图，该研究通过对吸入皮质类固醇(ICS)和长效β2-受体激动剂(LABA)疗法部分控制/无控制的持续性中度至重度嗜酸性哮喘患者每周一次皮下施用300mg mAb或安慰剂12周来进行。
图26A和26B是在12周时间内安慰剂(空心三角形)或mAb1(实心圆)施用后测得的早间(A)和晚间(B)哮喘症状的散点图。
图27是显示人源化IL-4/IL-4R小鼠(IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu)中在用屋尘螨 (HDM)攻毒、并用抗IL-4R抗体或IL-13Ra2-Fc的诱饵受体分子处理或模拟处理后血清IgE水平的曲线图。测量是对第40日(第一剂处理24小时之前)及第 85天实验结束时采取的样品进行的。
图28是显示野生型(Balb/c)小鼠中在用屋尘螨(HDM)攻毒、并用同种型对照、抗IL-4R抗体或IL-13Ra2-Fc的诱饵受体分子处理、或模拟处理后血清 IgE水平的曲线图。
图29是显示人源化的IL-4/IL-4R的小鼠在HDM攻毒和标示的处理之后肺中胶原含量(以μg/叶计)的曲线图。
图30是显示野生型小鼠在HDM攻毒和标示的处理之后肺中胶原含量(以μg/叶计)的曲线图。
图31A是显示人源化的IL-4/IL-4R的小鼠中在HDM攻毒和标明的处理之后嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的水平的曲线图，图31B是显示人源化的 IL-4/IL-4R的小鼠中在HDM攻毒和标示的处理之后驻留树突状细胞和炎性树突状细胞的水平的曲线图。
详述
在本发明进行了说明，但是应当理解，本发明不限于特定方法和实验条件的描述，因为这些方法和条件可以变化。也应当理解，本文所用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，而不旨在进行限制，因为本发明的范围将由所附的权利要求书来限定。
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属的技术领域中的普通技术人员的普遍理解相同。
如本文所用的，在提到某个特定列举的数值时，使用术语“约”，表示该值可以从所引用的数值偏差不超过1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101以及二者之间的所有值(例如，99.1，99.2，99.3，99.4等)。
如本文所用的，术语“治疗”、“处理”、或类似表述，是指暂时或永久地减轻所指明的疾病或病症的症状，消除症状的原因，或者防止或减缓症状的出现。
下面描述优选的方法和材料，但任何类似或等同于本文描述的方法和材料者均可以用于本发明的实践中。本文提及的所有出版物通过引用整体并入本文。
减少哮喘加重的发生率的方法
本发明包括用于在有此需要的受试者中降低哮喘加重的发生率的方法，包括向受试者施用包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物。如本文所使用的，表述“哮喘加重”是指哮喘的一种或多种症状或征象的严重程度和/或频率和/或持续时间的增加。“哮喘加重”还包括受试者呼吸健康的任何如下所述的恶化：该恶化需要对哮喘的治疗干预(例如类固醇治疗、吸入皮质类固醇治疗、住院治疗等)或可通过对哮喘的治疗干预来治疗。根据本发明的某些实施方案，哮喘加重定义为以下一种或多种：(a)连续两天早间峰值呼气流速(“AM PEF”，如本文中他处定义)从基线减少30％或更多；(b)连续两天在24 小时期间内六次或更多次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾(与基线相比)；和(c)哮喘恶化(例如，由医师或其他医疗从业者确定的)，需要下述中的至少一项：(i)全身(口服和/或肠胃外)类固醇治疗，或者(ii)增加吸入皮质类固醇到基线水平的至少4倍，或(iii)住院治疗。
在某些情况下，哮喘加重可以归类为“重度哮喘加重”。重度哮喘加重是指这样的事件，其需要以事件发生前采用剂量的四倍以上的全身皮质类固醇或吸入皮质类固醇处理的形式立即干预。因此，一般性的表述“哮喘加重”包括和涵盖的更具体的子类别“重度哮喘加重”。相应地，本发明包括在有需要的患者中降低重度哮喘加重的发生率的方法。
哮喘加重的“发生率降低”是指，接受了本发明的药物组合物的受试者在治疗后经历的哮喘加重较治疗前更少(即，加重减少至少一次)，或在开始用本发明的药物组合物治疗后，至少4周(例如，4周，6周，8周，12周，14周，或更多周)不经历哮喘加重。或者，哮喘加重的“发生率降低”意味着在本发明的药物组合物施用之后，受试者经历哮喘加重的可能性相比没有接受本发明的药物组合物的受试者降低了至少10％(例如，10％，15％，20％，25％，30％， 35％，40％，45％，50％，或更多)。
改善哮喘相关参数的方法
本发明还包括在有此需要的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数的方法，其中所述方法包括对受试者给予包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物。为本发明的目的，哮喘加重的发生率的降低(如上所述)可与一种或多种哮喘相关参数的改善相关联；然而，这样的相关性不一定在所有情况下观察到。
“哮喘相关参数”的实例包括：(a)1秒用力呼气容积(FEV1)；(二)峰值呼气流速(PEF)，包括早间PEF(AM PEF)和晚间PEF(PM PEF)；(c)吸入支气管扩张剂，如沙丁胺醇或左沙丁胺醇，的使用；(四)5项目哮喘控制问卷(ACQ5) 评分；(四)夜间苏醒；(五)22项目鼻窦-鼻腔结果测试(SNOT-22)评分。“哮喘相关参数的改善”意指FEV1、AM PEF或PM PEF中的一个或多个自基线的增加，和/或每日沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用、ACQ5评分、平均夜间苏醒或SNOT-22的分数中的一个或多个自基线的降低。如本文所使用的，术语“基线”，就哮喘相关参数而言，意指患者在施用本发明的药物组合物之前或之时的哮喘相关参数的数值。
为了确定哮喘相关参数是否有“改善”，在基线和施用本发明的药物组合物后的某个时间点对该参数定量。例如，哮喘相关参数可在用本发明的药物组合物初始治疗后的第1天，第2天，第3天，第4天，第5天，第6天，第7天，第8天，第9天，第10天，第11天，第12天，第14天进行测量，或第3周，第4周，第5周，第6周，第7周，第8周，第9周，第10周，第11周，第12周，第13周，第14周，第15周，第16周，第17周，第 18周，第19周，第20周，第21周，第22周，第23周，第24周，或更长的时间加以测量。该参数在治疗开始后的特定的时间点的值与该参数在基线的值之间的差被用来确定该哮喘相关参数是否已有“改善”(例如，视情况增加或减少，取决于被测量的特定参数)。
如本文所用的术语“获取”，是指通过“直接获取”或“间接获取”物理实体或值(如数值)，诸如哮喘相关参数，而获得对物理实体或值的占有。“直接获取”是指实施某个过程(例如，实施合成或分析方法)以获得物理实体或值。“间接取得”是指从另一方或另一来源(例如，直接获取物理实体或值的第三方实验室)接收物理实体或值。直接获取物理实体包括实施这样的过程，该过程包括某种物理物质(例如起始材料)的物理变化。示例性的变化包括从两种或更多种起始材料制造物理实体，剪切或断裂某种物质，分离或纯化某种物质，将两个或更多个分离的实体组合成混合物，进行包括破坏或形成共价或非共价键的化学反应。直接获取某个值包括实施这样的过程，该过程包括样品或其它物质的物理变化；例如实施包括在某种物质(例如样品，分析物，或试剂)中的物理变化的分析过程(有时在本文中称为“物理分析”)。
间接获得的信息可以以报告的形式来提供，例如，以纸质或电子形式提供，例如从在线数据库或应用程序(“App”)提供。所述报告或信息可以由，例如，医疗机构如医院或诊所；或医疗服务提供者如医生或护士来提供。
1秒用力呼气容积(FEV1)。根据本发明的某些实施方案，对患者施用IL-4R拮抗剂导致1秒用力呼气容积(FEV1)自基线增加。测量FEV 1的方法是现有技术公知的。例如，符合2005美国胸科学会(ATS)/欧洲呼吸协会(ERS) 建议的肺活量计可以用来在患者中以测量FEV 1。ATS/ERS肺活量计标准化 (ATS/ERS Standardization of Spirometer)可以作为指南。一般在暂停使用沙丁胺醇至少6小时后在早间6时和10时之间进行肺活量测定。肺功能测试通常以坐姿测定，记录最高的测量结果作为FEV1(以升计)。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时FEV1自基线增加至少0.05L。例如，根据本发明，对有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致第12周时FEV1自基线增加约 0.05L，0.10L，0.12L，0.14L，0.16L，0.18L，0.20L，0.22L，0.24L，0.26L， 0.28L，0.30L，0.32L，0.34L，0.36L，0.38L，0.40L，0.42L，0.44L，0.46L， 0.48L，0.50L，或更多。
早间和晚间峰值呼气流速(PEF AM和PM PEF)。根据本发明的某些实施方案，对患者施用IL-4R拮抗剂导致早间(AM)和/或晚间(PM)峰值呼气流速 (PEFAM和/或PM PEF)自基线增加。测量PEF的方法是本领域已知的。例如，根据一种测量PEF的方法，发给患者电子PEF计，用于记录早间(AM)和晚间(PM)PEF(以及每日沙丁胺醇使用，早晚间哮喘症状评分，以及由于需要急救药物的哮喘症状而夜间苏醒的次数)。指导患者该装置的用法，并给患者提供关于使用电子PEF计的书面说明。此外，医疗专业人员可以指示患者如何在电子PEF计中记录有关的变量。AM PEF一般在起床(早上6点到10点)后 15分钟内，摄入任何沙丁胺醇之前完成。PM PEF通常是在晚间(6时至10时之间)，摄入任何沙丁胺醇之前进行。受试者应尽量在其PEF测量之前暂时停用沙丁胺醇至少6小时。由患者进行三次PEF尝试，所有3个值均由电子PEF 计记录。一般用最高的值进行评价。基线AM PEF可以作为施用第一剂包含 IL-4R拮抗剂的药物组合物之前的7天时间内记录的AM测量值的平均值来计算，基线PM PEF可以作为施用第一剂包含IL-4R拮抗剂的药物组合物之前的7天时间内记录的PM测量值的平均值来计算。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时AM PEF及/或PM PEF自基线增加至少1.0L/min。例如，根据本发明，对有需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致在第12周时 PEF从基线增加约0.5L/min，1.0L/min，1.5L/min，2.0L/min，2.5L/min，3.0L/min，3.5L/min，4.0L/min，4.5L/min，5.0L/min，5.5L/min，6.0L/min，6.5L/min， 7.0L/min，7.5L/min，8.0L/min，8.5L/min，9.0L/min，9.5L/min，10.0L/min， 10.5L/min，11.0L/min，12.0L/min，15L/min，20L/min，或更多。
沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用。根据本发明某些实施方案，对患者施用IL-4R 拮抗剂导致每日沙丁胺醇或左沙丁胺醇使用自基线降低。沙丁胺醇/左沙丁胺醇吸入的次数可以每天由患者在日记、PEF计，或其它记录装置中记录。在用本发明的药物组合物治疗的过程中，沙丁胺醇/左沙丁胺醇可以针对症状按需要使用，而不是定期或预防性使用。沙丁胺醇/左沙丁胺醇的基线每日吸入次数可以基于施用第一剂包含IL-4R拮抗剂的药物组合物之前的7天时间内的均值来计算。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时的沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用自基线减少至少0.25次喷雾/日。例如，根据本发明，对有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致在第12周时的沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用自基线减少每日约0.25次喷雾，每日 0.50次喷雾，每日0.75次喷雾，1.00次喷雾，每日1.25次喷雾，每日1.5次喷雾，每日1.75次喷雾，每日2.00次喷雾，每日2.25次喷雾，每日2.5次喷雾，每日2.75次喷雾，每日3.00次喷雾，或更多。
5项目哮喘控制问卷(ACQ)评分。根据本发明的某些实施方案，对患者施用IL-4R拮抗剂导致5项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分自基线下降。该ACQ5 是一种经验证有效的评估哮喘控制的调查问卷。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时的ACQ5自基线减少至少0.10分。例如，根据本发明，对有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致在第12周时的ACQ评分从基线下降约0.10分，0.15分，0.20分，0.25分，0.30分，0.35分，0.40分， 0.45分，0.50分，0.55分，0.60分，0.65分，0.70分，0.75分，0.80分，0.85 分，或更多。
夜间苏醒。根据本发明的某些实施方案，对患者施用IL-4R拮抗剂导致夜间苏醒的平均次数自基线下降。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时的夜间苏醒的平均次数自基线减少至少约0.10次每夜。例如，根据本发明，对有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致第12周时的夜间苏醒的平均次数自基数减少每夜约0.10次，每夜0.15次，每夜0.20 次，每夜0.25次，每夜0.30次，每夜0.35次，每夜0.40次，每夜0.45次，每夜0.50次，每夜0.55次，每夜0.60次，每夜0.65次，每夜0.70次，0.75 每夜次，每夜0.80次，每夜0.85次，每夜0.90次，每夜0.95次，每夜1.0 次，每夜2.0次，或更多。
22项目鼻腔鼻窦结果测试(SNOT-22)评分。根据本发明的某些实施方案，对患者施用IL-4R拮抗剂导致22项目鼻腔鼻窦结果测试基线(SNOT-22)自基线下降。SNOT-22是一种经验证有效的问卷，用于评估慢性鼻窦炎对生活质量的影响(Hopkins et al 2009,Clin.Otolaryngol.34：447-454)。
本发明包括这样的治疗方法，其导致用包含抗IL-4R拮抗剂的药物组合物开始治疗后第12周时的SNOT-22评分自基线减少至少1分。例如，根据本发明，对有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂导致第12周时SNOT-22评分自基线减少约1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13分，或更多。
治疗哮喘的方法
根据某些实施方式，本发明提供了用于在有此需要的受试者中治疗哮喘，包括例如嗜酸性粒细胞性哮喘的方法，其中该方法包括对受试者施用包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的药物组合物。在某些实施方案中，本发明的方法可用于治疗受试者中的中度至重度嗜酸细胞性哮喘(例如，持续的中度至重度嗜酸细胞性哮喘)。
根据本发明，如果受试者显示每微升至少300个细胞的血液嗜酸性粒细胞的水平，和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平，则将受试者鉴定为具有中度至重度的嗜酸细胞性哮喘。本领域中已知并可获得的任何血液和/或痰中嗜酸性粒细胞水平的测量方法均可用于在本发明的上下文中，以确定受试者具有中度至重度的嗜酸细胞性哮喘并且因此是本发明治疗方法的合适受试者。
根据本发明的一个相关方面，提供了治疗哮喘的方法，包括：(a)选择表现出每微升至少300个细胞的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平的患者；和(b)对该患者施用包含IL-4R拮抗剂的药物组合物。
在另一个方面，提供了用于减少或消除哮喘患者在中度至重度哮喘的治疗过程中对吸入皮质类固醇(ICS)的和/或长效β-激动剂(LABA)的依靠的方法。在某些实施方案中，该方法包括：选择不受或部分受背景疗法控制的具有中度至重度哮喘的患者；在初始治疗期内给患者施用限定剂量的IL-4R拮抗剂，优选抗IL-4R抗体，同时在初始治疗期内保持患者的背景疗法；并经过随后的一段治疗期间逐渐减少背景疗法的一种或多种组分的剂量，同时继续施用 IL-4R拮抗剂。术语“背景疗法”是指在本领域中已知的用于治疗哮喘的标准或常规的治疗剂。在某些实施方案中，背景疗法包括ICS、LABA、或两者的组合。在一些实施方案中，在初始治疗期(upon the initial treatment period)ICS和 /或LABA的剂量被去除或完全撤出。例如，LABA如沙美特罗或福莫特罗的在初始治疗期中施用，而随后的治疗期内完全停止或撤出。
用于中度至重度哮喘患者的治疗方案一个例子示于图24，其中，将IL-4R 拮抗剂给予中度至重度哮喘患者。在初始治疗期(也被称为“稳定期”)，对患者施用LABA和ICS作为背景疗法。在随后的治疗期间(也称为“撤出期”)中， LABA的施用停止，即LABA撤出或消除。ICS在随后的治疗期间逐渐降低，直到消除。
在一个相关方面，提供了用于治疗哮喘的方法，其包括对背景疗法的附加疗法，并系统性撤出背景疗法。在某些实施方案中，对接受一段时间(例如， 1周，2周，3周，1个月，2个月，5个月，12个月，18个月，24个月或更长的时间)(也称为“稳定期”)的背景治疗的哮喘患者施用IL-4R拮抗剂作为附加疗法。在一些实施方案中，背景疗法包括ICS和/或LABA。稳定期之后是背景治疗撤出期，其中构成背景治疗的一个或多个组分被撤出，或减少或消除，而附加疗法仍继续。在一些实施方案中，在撤出期内背景疗法可能减少约5％，约10％，约20％，约30％，约40％，约50％或更多。撤出期可能持续1周，2周，3周，4周，5周，6周，第7周，8周，9周，10周，11周， 12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约5％，且撤出期可持续1周，2周，3周，4周，5周，6周，7周，8周，9 周，10周，11周，12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约10％，且撤出期可持续1周，2周，3周，4周，5周， 6周，第7周，8周，9周，10周，11周，12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约20％，且撤出期可持续1周，2 周，3周，4周，5周，6周，第7周，8周，9周，10周，11周，12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约30％，且撤出期可持续1周，2周，3周，4周，5周，6周，第7周，8周，9周，10周，11周，12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约40％，且撤出期可持续1周，2周，3周，4周，5周，6 周，第7周，8周，9周，10周，11周，12周，或更长时间。在一个优选的实施方案中，在撤出期内背景疗法可减少约50％，且撤出期可持续1周，2 周，3周，4周，5周，6周，第7周，8周，9周，10周，11周，12周，或更长时间。
在一些其它实施方案中，本发明包括用于治疗或减轻与哮喘有关的病症或并发症的方法，如慢性鼻窦炎，变应性鼻炎，变应性真菌性鼻窦炎，变应性支气管肺曲菌病，联合气道疾病(unified airway disease)，丘-施综合征，血管炎，慢性阻塞性肺病(COPD)，及运动诱发的支气管痉挛。
本发明还包括用于治疗持续性哮喘的方法。如本文所使用的，术语“持续性哮喘”是指受试者至少每周一次在昼间和/或在夜间有症状，症状持续数小时至数天。在某些替代的实施方案中，持续性哮喘是“轻度持续性的”(例如，超过一周两次，但少于每日一次，症状严重到足以干扰日常活动或睡眠，和/ 或其中，肺功能正常或者可通过吸入支气管扩张剂逆转)，“中度持续性的”(例如，症状每日发生，至少每周一次打断睡眠，和/或有肺功能中度异常)，或“重度持续性的”(例如，尽管正确使用批准的药物治疗但症状持续，和/或其中肺的功能严重受影响)。
白介素-4受体拮抗剂
本发明的方法包括给予有此需要的受试者包含白介素4受体(IL-4R)拮抗剂的治疗组合物。如本文所使用的，“IL-4R拮抗剂”是任何在体外或体内结合 IL-4R或与IL-4R相互作用，且当IL-4R表达在细胞上时抑制IL-4R的正常生物信号传导功能的作用剂。IL-4R拮抗剂的类别的非限制性的例子包括小分子 IL-4R拮抗剂，抗IL-4R适体，肽基IL-4R拮抗剂(例如，“肽抗体”(peptibody) 分子)，和特异性结合人IL-4R的抗体或抗体的抗原结合片段。
术语“人IL4R”(hIL-4R)指特异性结合白介素-4(IL-4)的人细胞因子受体，诸如IL-4Rα(SEQ ID NO:274)。
术语“抗体”是指包含通过二硫键连接的4条多肽链，两条重(H)链和两条轻链(L)的免疫球蛋白分子，以及其多聚体(例如，IgM抗体)。每条重链包含重链可变区(在本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1，CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文中缩写为LCVR 或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。VH和VL区可以进一步细分成具有高可变性的区域，称为互补决定区(CDR)，这些区域之间散布有更保守的称为框架区(FR)的区域。每个VH和VL由三个CDR和四个FR 构成，按以下顺序从氨基末端布置到羧基末端：FR1，CDR1，FR2，CDR2， FR3，CDR3，FR4。在不同的实施方案中，抗IL-4R抗体的FR(或其抗原结合部分)可与人种系序列相同，或可以是天然或人工修饰的。氨基酸共有序列可以基于两个或多个CDR的肩并肩分析来界定。
术语“抗体”还包括完整的抗体分子的抗原结合片段。抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”，和类似的术语，如本文中所使用的，包括任何特异性结合抗原形成复合物的天然存在的、可酶促获得的、合成的、或遗传工程的多肽或糖蛋白。抗原结合的抗体的片段可以，例如，使用任何合适的标准技术，如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变域和任选的恒定域的DNA之操作和表达的重组遗传工程技术，从完全抗体分子衍生。这样的DNA是已知的和/或很容易获得的，例如从商业来源、DNA文库(包括，例如，噬菌体抗体文库)，或可以合成。可将DNA测序，并用化学手段或通过使用分子生物学技术操作，以便，例如，将一个或多个可变和/或恒定域安排为合适的配置，或者引入密码子，创建半胱氨酸残基，修饰、增加或删除氨基酸等等。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd 片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；和(vii)由模仿抗体的高变区的氨基酸残基构成的最小识别单位(例如，分离的互补决定区(CDR)， CDR3肽)，或受约束的FR3-CDR3-FR4肽。其它工程分子，如域特异性抗体，单域抗体，域缺失抗体，嵌合抗体，CDR嫁接的抗体，双抗体，三抗体，四抗体，微型抗体，纳米抗体(如单价纳米抗体，二价纳米抗体等)，小模块化免疫药(small modular immunopharmaceuticals,SMIP)，和鲨鱼可变IgNAR域，也包括在术语“抗原结合片段”内。
抗体的抗原结合片段将通常包含至少一个可变域。可变域可以具有任何大小或氨基酸组成，且一般会包括与一个或多个框架序列邻近或合框的至少一个CDR。在具有与VL结构域相关联的VH结构域的抗原结合片段中，VH和VL结构域可以以任何合适的安排相对于彼此放置。例如，可变区可以是二聚的，包含VH-VH，VH-VL或VL-VL二聚体。或者，抗体的抗原结合片段可包含单体的VH或VL结构域。
在某些实施方案中，抗体的抗原结合片段可包含共价连接到至少一个恒定域的至少一个可变域。可能在本发明抗体的抗原结合片段中发现的可变区和恒定域配置的非限制性实例包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH 2；(iii)VH-CH3； (iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH-CH3；(vii)VH-CL；(viii) VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3； (xiii)VL-CH2-CH3；及(xiv)VL-CL。在可变和恒定域的任何配置，包括任何以上列出的示例性配置中，可变和恒定域可以直接彼此连接，或可以由全部或部分铰链或接头区相连接。铰链区可以由至少2个(例如，5，10，15，20， 40，60或更多个)氨基酸组成，这些氨基酸导致单个多肽分子中相邻的可变和 /或恒定域之间的柔性或半柔性的联接，优选地，铰链区可以由2至60个氨基酸之间，优选5至50个，或优选10至40个氨基酸组成。此外，本发明抗体的抗原结合片段可以包含任何上面列出的可变和恒定域配置彼此非共价缔合和/或与一种或多种单体的VH或VL域(例如通过二硫键(S))非共价缔合而成的同二聚体或异二聚体(或其他多聚体)。
如同完整抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性或多特异性(例如，双特异性)的。抗体的多特异性抗原结合片段一般将包含至少两个不同的可变域，其中每个可变域能够特异性结合单独的抗原，或相同的抗原上的不同表位。任何多特异性抗体形式均可使用本领域中可用的常规技术适用于本发明抗体的抗原结合片段的语境中。
抗体的恒定区对于抗体固定补体并介导细胞依赖性细胞毒性的能力是重要的。因而，抗体的同种型可能基于其是否有利于抗体介导细胞毒性来选择。
术语“人抗体”包括具有来自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。作为本发明特征的人抗体可能仍包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过随机或定点诱变在体外、或通过体细胞突变在体内引入的突变)，例如在CDR中，特别是在CDR3中。然而，术语“人抗体”不包括其中来自另一哺乳动物物种(例如小鼠)的种系CDR序列已被移植到人框架序列上的抗体。
如本文所用，术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、产生或分离的所有人抗体，诸如使用转染入宿主细胞内的重组表达载体表达的抗体 (下文进一步描述)，从重组、组合的人抗体文库分离的抗体(下文进一步描述)，从用人免疫球蛋白基因转基因的动物(例如，小鼠)分离的抗体(例如参见Taylor et al.(1992)Nucl.Acids Res.20:6287-6295)或通过涉及将人免疫球蛋白基因序列剪切为其他DNA序列的任何其他方法制备、表达、产生或分离的抗体。此类重组人抗体具有源于人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，将此类重组人抗体进行体外诱变(或者，当使用以人 Ig序列进行转基因的动物时，为体内体细胞诱变)，因此该重组抗体的VH和 VL区域的氨基酸序列是这样的序列，尽管来源于人种系VH和VL序列或与人种系VH和VL序列相关，但所述氨基酸序列并不天然存在于体内人抗体种系所有组成成分中。
人抗体可以以与铰链异质性(hinge heterogeneity)相关的两种形式存在。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含大约150-160kDa的稳定的四链构建体，其中二聚体通过链间重链二硫键结合在一起。在第二种形式中，二聚体并不经链间的二硫键连接，而是形成由共价偶联的轻链和重链构成的约75-80kDa的分子(半抗体)。这些形式即使在亲和纯化后仍极难分离。
在多种完整IgG同种型中出现第二种形式的概率是由于但不限于与抗体的铰链区同种型相关的结构差异。在人IgG4铰链的铰链区内的单个氨基酸取代能够将第二种形式的出现(Angal et al.(1993)Molecular Immunology 30:105) 显著减少至使用人IgGl铰链通常观察到的水平。本发明包括在铰链区、CH2 或CH3区内具有一个或多个突变的抗体，所述突变可以是所希望的，例如在生产中用于提高想要的抗体形式的产量。
“分离的抗体”表示已经从它的天然环境的至少一种组分中鉴定并分离和/ 或回收的抗体。例如，已经与生物的至少一种组分分离或将生物的至少一种组分除去的抗体、或者从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或除去的抗体是用于本发明的目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括在重组细胞内的原位抗体。分离的抗体是已经进行至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方案，分离的抗体可以基本上不含其他细胞物质和/或化学品。
术语“特异地结合”等表示抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合体。用于确定抗体是否特异地结合抗原的方法是本领域众所周知的，并且包括例如平衡透析、表面等离振子共振等等。例如，如在本发明的上下文中所用，“特异地结合”IL-4R的抗体包括以下述Kd(如在表面等离振子共振测定中测量的)结合IL-4R或其部分的抗体：少于约1000nM、少于约500nM、少于约300nM、少于约200nM、少于约100nM、少于约90nM、少于约80nM、少于约70nM、少于约60nM、少于约50nM、少于约40nM、少于约30nM、少于约20nM、少于约10nM、少于约5nM、少于约4nM、少于约3nM、少于约2nM、少于约1nM，或少于约0.5nM。然而，特异地结合 IL-4R的分离的抗体可以与其他抗原诸如来自其他(非人)物种的IL-4R分子具有交叉反应性。
与抗体来源的所对应的种系序列相比，对本发明的方法有用的抗IL-4R 抗体可以包含在重链和轻链可变域的框架区和/或CDR区中的一个或多个氨基酸取代、插入和/或缺失(例如1,2,3,4,5,6,7,8,9,或10个取代或1,2,3,4, 5,6,7,8,9,或10个插入和/或1,2,3,4,5,6,7,8,9或10个缺失)。通过比较本文公开的氨基酸序列与例如从自公共抗体序列数据库中获得的种系序列可以容易地确定此类突变。本发明包括涉及使用抗体及其抗原结合片段的方法，所述抗体来源于本文公开的任一氨基酸序列，其中将一个或多个框架区和/或一个或多个(例如对四抗体而言为1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11或12个，对于抗体的HCVR和LCVR而言为1,2,3,4,5或6个)CDR区中的一个或多个氨基酸(例如1,2,3,4,5,6,7,8,9,或10个氨基酸)突变至抗体来源的种系序列的对应残基、或者突变至另一人种系序列的对应残基、或者突变至对应种系残基的保守氨基酸取代物(此类序列改变在本文中共同称为“种系突变”)。本领域的普通技术人员从本文公开的重链和轻链可变区序列开始，能够容易地产生包含一个或多个单个种系突变或其组合的大量抗体和抗原结合片段。在某些实施方案中，将在VH和/或VL结构域内的所有框架和/或CDR残基突变回在抗体来源的原始种系序列中发现的残基。在其他实施方案中，仅将某些残基突变回原始种系序列，例如，仅突变在FRl的前8个氨基酸内或在FR4的最后8个氨基酸内发现的突变残基，或者仅突变在CDR1、CDR2或CDR3内发现的突变残基。在其他实施方案中，将一个或多个框架和/或CDR残基突变为不同种系序列(即，与抗体原始来源的种系序列不同的种系序列)所对应的残基。此外，本发明的抗体可以含有在框架区和/或CDR区内的两个或多个种系突变的任意组合，例如，其中将某些单独的残基突变为特定种系序列的对应残基，而将与原始种系序列不同的某些其他残基保持或突变为不同种系序列的对应残基。一旦获得含有一个或多个种系突变的抗体和抗原结合片段后，可以容易地对其测试一种或多种想要的特性，诸如提高的结合特异性、增加的结合亲和力、提高的或增强的拮抗性或激动性生物学特性(视情况而定)、降低的免疫原性等。以这种一般方式获得的抗体和抗原结合片段的用途包含于本发明中。
本发明还包括涉及这样的抗IL-4R抗体的使用的方法，所述抗体包含本文公开的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的具有一个或多个保守性取代的变体。例如，本发明包括这样的抗IL-4R抗体的用途，相对于本文公开的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列，所述抗IL-4R抗体具有例如10个或更少、8个或更少、6个或更少、4个或更少的保守氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。
术语“表面等离振子共振”指通过例如使用BIAcoreTM系统(GEHealthcare 的Biacore Life Sciences部门，Piscataway,NJ)来检测生物传感器基质内的蛋白质浓度改变从而允许分析实时相互作用的光学现象。
术语“KD”指特定抗体-抗原相互作用的平衡解离常数。
术语“表位”指与抗体分子可变区内的特定抗原结合位点(称为互补位)相互作用的抗原决定簇。单一抗原可以具有多于一个表位。因此，不同抗体可以结合抗原上的不同区域并且可以具有不同的生物效应。表位可以是构象性的或线性的。构象表位由来自线性多肽链不同区段的且在空间上并列的氨基酸产生。线性表位是由多肽链中相邻的氨基酸残基产生的表位。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基部分。
人抗体的制备
在转基因小鼠中产生人抗体的方法是本领域中已知的。可将任何这样的已知方法用于本发明的情况中来制备与人IL-4R特异性结合的人抗体。
使用VELOCIMMUNETM技术(参见，例如US6,596，541，Regeneron Pharmaceuticals,)或用于产生单克隆抗体的任何其他已知方法，最先分离具有人可变区和小鼠恒定区的对IL-4R的高亲和力嵌合抗体。技术包括产生转基因小鼠，其具有包含与内源小鼠恒定区基因座可操作地连接的人重链和轻链可变区的基因组，从而使得小鼠响应抗原刺激产生包含人可变区和小鼠恒定区的抗体。分离编码抗体的重链和轻链之可变区的DNA，并且与编码人重链和轻链恒定区的DNA可操作地连接。然后使DNA在能够表达完全人抗体的细胞中表达。
一般地，用目标抗原刺激小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(例如B细胞)。可将淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生的杂交瘤细胞系，筛选并选择这样的杂交瘤细胞系以鉴别产生对目标抗原特异之抗体的杂交瘤细胞系。可分离编码重链和轻链之可变区的DNA，并且与重链和轻链的期望的同型恒定区连接。可在细胞如CHO细胞中产生这样的抗体蛋白。或者，可从抗原特异性淋巴细胞中直接分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链的可变结构域的DNA。
最初，分离具有人可变区和小鼠恒定区的高亲和力嵌合抗体。使用本领域技术人员已知的标准程序对抗体进行表征并且根据期望特性(包括亲和力、选择性、表位等)进行选择。将小鼠恒定区替换成期望的人恒定区以产生作为本发明特征的完全人抗体，例如野生型或经修饰的IgGl或IgG4。尽管所选择的恒定区可根据特定用途而改变，但是高亲和的抗原结合和靶标特异性特征存在于可变区。
一般来说，如上所述，当通过与固定在固相上或溶液相中的抗原结合来测量时，可用于本发明的方法中的抗体具有高的亲和力。将小鼠恒定区替换成期望的人恒定区以产生作为本发明特征的完全人抗体。虽然所选择的恒定区可根据特定用途而改变，但是高亲和的抗原结合和靶标特异性特征存在于可变区。
与可用于本发明之方法的与IL-4R特异性结合的人源抗体或抗体的抗原结合片段的具体实例包括任何这样的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区(HCVR)内所含的三个重链CDR(HCDR1、HCDR2、HCDR3)，所述重链可变区具有选自SEQ ID NO:2、18、22、26、42、46、50、66、70、74、90、 94、98、114、118、122、138、142、146、162、166、170、186、190、194、 210、214、218、234、238、242、258、和262的氨基酸序列。该抗体或抗原结合片段可包含如下所述的轻链可变区(LCVR)内所含的三个轻链CDR (LCVR1、LCVR2、LCVR3)，该轻链可变区包含选自SEQ ID NO:10、20、 24、34、44、48、58、68、72、82、92、96、106、116、120、130、140、144、154、164、168、178、188、192、202、212、216、226、236、240、250、260，和264的氨基酸序列。用于鉴定HCVR和LCVR内的CDR的方法和技术是本领域公知的，并且可以用于鉴定本文所公开的具体HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。可以用于鉴定CDR边界的示例规则包括，例如，Kabat 定义、Chothia定义、和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列可变性， Chothia定义基于结构环区的位置，AbM定义则是Kabat和Chothia方法的折中。参见，例如，Kabat,"Sequences of Proteins of Immunological Interest," National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani et al.,J.Mol. Biol.273:927-948(1997)；和Martin et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。还有公共数据库可供用于鉴定抗体中的CDR序列。
在本发明的某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包括源自重链和轻链可变区氨基酸序列对(HCVR/LCVR)的6个CDR(HCDRl、HCDR2、 HCDR3、LCDRl、LCDR2和LCDR3)，所述氨基酸序列对选自SEQ ID NO:2/10、 18/20、22/24、26/34、42/44、46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、 94/96、98/106、114/116、118/120、122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、 166/168、170/178、186/188、190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、258/260、和262/264。
在本发明的特定实施方案中，抗体或其抗原结合部分包含6个CDR (HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3)，所述CDR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NOs:4/6/8/12/14/16；28/30/32/36/38/40； 52/54/56/60/62/64；76/78/80/84/86/88；100/102/104/108/110/112； 124/126/128/132/134/136；148/150/152/156/158/160；172/174/176/180/182/184； 196/198/200/204/206/208；220/222/224/228/230/232；和 244/246/248/252/254/256。
在本发明的某些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下列一组序列对的HCVR/LCVR氨基酸序列对:2/10、18/20、22/24、26/34、42/44、 46/48、50/58、66/68、70/72、74/82、90/92、94/96、98/106、114/116、118/120、 122/130、138/140、142/144、146/154、162/164、166/168、170/178、186/188、 190/192、194/202、210/212、214/216、218/226、234/236、238/240、242/250、 258/260、和262/264。
药物组合物
本发明包括给患者施用IL-4R拮抗剂的方法，其中该IL-4R拮抗剂包含在药物组合物中。本发明特征的药物组合物是与适宜的载体、辅料以及赋予药物各种适宜特性(如转移、递送、耐受性)的其他试剂一起配制的。在这本所有药剂化学师均知晓的处方集里可以找到许多适宜的配方：Remington’s Pharmaceutical Sciences,Mack PublishingCompany，Easton，PA)。这些配方包括，例如粉剂、糊剂、油膏、凝胶、蜡剂、油剂、脂类、含有脂质(阳离子或阴离子)的泡囊(如LIPOFECTINTM)、DNA偶联物、无水吸收性糊剂、水包油或油包水乳剂、乳胶状碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体状凝胶以及含有碳蜡的半固体状混合物。还可参阅Powell et al.“Compendium of excipients for parenteralformulations”，PDA(1998)J Pharm Sci Technol 52:238-311。
依照本发明的方法施用于患者的抗体的剂量可取决于患者的年龄和体格、症状、状况、施用途径等等而变化。优选的剂量通常根据体重或体表面积计算。取决于状况的严重程度，可以调整治疗的频度和持续时间。包含抗IL-4R 抗体的药物组合物的有效剂量和时间安排可以经验地确定；例如，可以通过周期性评估来监测患者的进展，并相应地调整剂量。此外，可以使用本领域公知的方法进行物种间剂量缩放(例如Mordenti et al.,1991,Pharmaceut.Res. 8:1351)。
已知有各种药物递送系统可用于本发明特征的药物组合物的施用，例如脂质体封装、微颗粒、微胶囊、能表达突变病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参阅如Wu et al.，1987，J.Biol.Chem.262:4429-4432)。施用方法包括但不限于皮内、肌内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、气管内、硬膜外以及口服。该组合物可经由任何方便的途径施用，例如，输注或快速注射，经上皮或粘膜(例如口腔粘膜、直肠和肠粘膜等)吸收，并可与其他生物活性剂一起施用。
本发明的药物组合物可用标准的针头和注射器经皮下或静脉注射。此外，对于皮下施用，笔型施用装置可方便地用于本发明的药物组合物的施用。该笔型施用装置可以是重复使用型或一次性使用型。可重复使用的笔型施用装置一般采用一种可更换的含药物组合物的药筒。一旦药筒内所有药物组合物均已输出、药筒变空，则可方便地弃置空药筒，并用一个含有药物组合物的新药筒取代。然后，该笔型施用装置即可重复使用。在一次性使用的笔型施用装置中，没有可更换的药筒。而是，该一次性使用的笔型施用装置具有一个预先灌满药物组合物的贮液器。一旦该贮液器内药物组合物用完，则弃置整个装置。
许多可重复使用的笔型和自动注射施用装置已用于本发明的药物组合物的皮下施用。其实例包括但不限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc., Woodstock,UK)、DISETRONICTM笔(Disetronic Medical Systems,Bergdorf, Switzerland)、HUMALOGMIX75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly and Co.,Indianapolis,IN)、NOVOPENTMI、II和III型(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark),NOVOPEN JUNIORTM(Novo Nordisk,Copenhagen,Denmark),BDTM笔(Becton Dickinson,Franklin Lakes,NJ)、 OΡΤΙΡΕΝTM、OΡΤΙΡΕΝPROTM、OPTIPEN STARLETTM,以及OPTICLIKTM (sanof1-aventis，Frankfurt,Germany)，此处仅举几例。用于皮下注射本发明之药物组合物的一次性使用的笔型施用装置的实例包括但不限于SOLOSTAR TM笔(sanofi-aventis)、FLEXPENTM(NovoNordisk),KWIKPENTM(Eli Lilly)、 SURECLICKTM自动注射器(Amgen,Thousand Oaks,CA)、PENLETTM (Haselmeier,Stuttgart,Germany)，EPIPEN(Dey,L.P.)，以及HUMIRATM笔(Abbott Labs,Abbott Park IL)，此处仅举几例。
对于向鼻窦中的直接施用，本发明的药物组合物可以使用例如微导管(例如内窥镜和微导管)、烟雾器、打粉器、喷雾器、或吸入器来施用。所述方法包括以烟雾化(aerosolized)配制剂形式向有此需要的受试者施用IL-4R拮抗剂。例如，可以施用烟雾化的抗IL-4R抗体来治疗患者中的哮喘。烟雾化的抗体可以如例如US8178098(通过引用全文并入本申请)中所述来制备。
在某些情况下，该药物组合物可在控释系统中施用。在一个实施方案中，可使用泵(参阅Langer,出处同上；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一个实施方案中，可采用聚合材料；参阅 Medical Applications of Controlled Release,Langerand Wise(eds.),1974,CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在另一个实施方案中，可将控释系统置于该组合物的靶标附近，从而只需要使用全身性剂量的一小部分(参阅例如，Goodson, 1984，收录于Medical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,pp.115-138)。在Langer,1990,Science249:1527-1533的综述中也讨论了其他控释系统。
注射型制剂可包括静脉、皮下、皮内和肌内注射、滴注输液等剂型。这些注射型制剂可以已知的方法制备。例如，可以将上述抗体或其盐溶解、悬浮或乳化在无菌水性介质中，或通常用于注射的油性介质中，以此方式制备该注射型制剂。作为注射用的水性介质有例如生理盐水、含葡萄糖和其他助剂的等渗溶液等，可结合使用适当的增溶剂，如醇(如乙醇)、多元醇(如丙二醇、聚乙二醇)，非离子型表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HC0-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50摩尔)加合物)]等。作为油性介质，可采用例如芝麻油、豆油等，可结合使用增溶剂，如苯甲酸苯甲酯、苯甲醇等。如此制备的注射液最好是装入适当的安瓿瓶中。
有利的是，上述口服或胃肠外使用的药物组合物是制备成单位剂量的剂型，以容纳一次剂量的活性成分。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射液(安瓿)、栓剂等。
能够在本发明的上下文中使用的示例性包含抗IL-4R抗体的药物组合物在例如美国专利申请2012/0097565中公开。
剂量
根据本发明的方法向受试者施用的IL-4R拮抗剂(例如，抗IL-4R抗体) 的量一般是治疗有效量。如本文所使用的，短语“治疗有效量”是指IL-4R拮抗剂的这样的量，其导致下述的一种或多种：(a)哮喘加重的发生率的降低； (b)一个或多个哮喘相关参数的改善(如本文他处所定义的)；和/或(c)上气道炎性病症的一种或多种症状或征象的可检测的改善。“治疗有效量”还包括抑制、阻止、减轻或延迟受试者中的哮喘的进展的IL-4R拮抗剂的量。
在抗IL-4R抗体的情况中，治疗有效量可以是从约0.05mg至约600mg，例如约0.05mg，约0.1mg，约1.0mg，约1.5mg，约2.0mg，大约3.0mg，大约5.0mg，大约7.0mg，大约10mg，大约20mg，大约30mg，大约40mg，大约50mg，大约60mg，大约70mg，大约80mg，大约90mg，约100mg，约 110mg，约120mg，约130mg，约140mg，约150mg，约160mg，约170mg，约180mg，约190mg，约200mg，约210mg，约220mg，约230mg，约240mg，约250mg，约260mg，约270mg，约280mg，约290mg，约300mg，约310mg，约320mg，约330mg，约340mg，约350mg，约360mg，约370mg，约380mg，约390mg，约400mg，约410mg，约420mg，约430mg，约440mg，约450mg，约460mg，约470mg，约480mg，约490mg，约500mg，约510mg，约520mg，约530mg，约540mg，约550mg，约560mg，约570mg，约580mg，约590mg，或约600mg的所述抗IL-4R抗体。在某些实施方案中，施用300mg抗IL-4R 抗体。
单个剂量中包含的IL-4R拮抗剂的量可以用每千克患者体重的抗体毫克数(即，mg/kg)为单位表示。例如，IL-4R拮抗剂可以以约0.0001至约10mg/kg 患者体重的剂量施用给患者。
联合疗法
根据某些实施方式，本发明的方法包括向受试者施用与IL-4R拮抗剂组合的一种或多种另外的治疗剂。如本文所使用的，表述“与…组合”意味着另外的治疗剂在包含IL-4R拮抗剂的药物组合物之前，之后或同时施用。在一些实施方案中，“与…组合”一词包括将IL-4R拮抗剂与第二治疗剂顺序或同时施用。本发明包括治疗哮喘或相关病症或并发症、或减少至少一种加重的方法，其包含为了实现加合或协同活性而将IL-4R拮抗剂与第二治疗剂组合施用。
例如，当在所述包含IL-4R拮抗剂的药物组合物“之前”施用时，所述另外的治疗剂可以在施用所述包含IL-4R拮抗剂的药物组合物前约72小时，约 60小时，约48小时，约36小时，约24小时，约12小时，约10小时，约8 小时，约6小时，约4小时，约2小时，约1小时，约30分钟，约15分钟，或约10分钟施用。当在所述包含IL-4R拮抗剂的药物组合物“之后”施用时，所述另外的治疗剂可以在施用所述包含IL-4R拮抗剂的药物组合物后约10分钟，约15分钟，约30分钟，约1小时，约2小时，约4小时，约6小时，约8小时，约10小时，约12小时，约24小时，约36小时，约48小时，约 60小时，或约72小时施用。与包含IL-4R拮抗剂的药物组合物“同时”施用意味着另外的治疗剂在施用包含IL-4R拮抗剂的药物组合物不到5分钟之内 (之前，之后或同时)在另外的剂型中被施用给受试者，或者作为包含该另外的治疗剂与该IL-4R拮抗剂二者的单一联合剂量配制剂被施用给受试者。
另外的治疗剂可以是，例如，另一种IL-4R拮抗剂，IL-1拮抗剂(包括，例如，如美国专利号6927044中所述的IL-1拮抗剂)，IL-6拮抗剂，IL-6R拮抗剂(包括，例如，如美国专利号7582298中所述的抗IL-6R抗体)，TNF拮抗剂，IL-8拮抗剂，IL-9拮抗剂，IL-17拮抗剂，IL-5拮抗剂，IgE拮抗剂， CD48拮抗剂，白三烯抑制剂，抗真菌剂，NSAID，长效β2激动剂(例如沙美特罗或福莫特罗)，吸入皮质类固醇(例如，氟替卡松或布地奈德)，全身性皮质类固醇(例如，口服或静脉内)，甲基黄嘌呤，奈多罗米钠，色甘酸钠，或它们的组合。例如，在某些实施方案中，所述包含IL-4R拮抗剂的药物组合物与下述组合组合施用：所述组合包含长效β2-激动剂和吸入皮质类固醇(例如，氟替卡松+沙美特罗[例如，(GlaxoSmithKline)]；或布地奈德+福莫特罗[例如，(Astra Zeneca)])。
施用方案
根据本发明的特定实施方案，可以在一段限定的时程内对受试者施用多个剂量的IL-4R拮抗剂。这样的方法包括对受试者顺序地施用多个剂量的 IL-4R拮抗剂。如本文中使用的，“顺序(地)施用”表示每个剂量的IL-4R拮抗剂在不同的时间点施用给受试者，例如在不同日，两两相隔预定的间隔(例如小时、周或月)。本发明包括这样的方法，所述方法包括顺序地对受试者施用：单一初始剂量的IL-4R拮抗剂，然后是一个或多个次级(secondary)剂量的 IL-4R拮抗剂，任选然后是一个或多个三级(tertiary)剂量的IL-4R拮抗剂。
本发明包括这样的方法，其包括以下述的给药频率对受试者施用包含 IL-4R拮抗剂的药物组合物：约每周四次，每周两次，每周一次，每两周一次，每三周一次，每四周一次，每五周一次，每六周一次，每八周一次，每十二周一次，或更低的频率，只要能实现治疗应答。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的特定实施方案中，可以使用每周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每两周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每三周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R 抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每四周一次大约75mg、150 mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每五周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每六周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗 IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每八周一次大约75mg、 150mg、或300mg量的给药。在涉及施用包含抗IL-4R抗体的药物组合物的其他实施方案中，可以使用每十二周一次大约75mg、150mg、或300mg量的给药。优选的施用途径是皮下。
术语“周”是指(n x 7日)±2日，优选(n x 7日)±1日，更优选(n x 7日) 的一段时间，其中“n”表示周数，例如1,2,3,4,5,6,8,12或更多。
术语“初始剂量”、“次级剂量”和“三级剂量”，是指IL-4R拮抗剂施用的时间顺序。因此，“初始剂量”是指治疗方案开始时施用的剂量(又称“基线剂量”)；“次级剂量”是初始剂量之后施用的剂量；“三级剂量”是次级剂量之后施用的剂量。初始、次级和三级剂量可全部含有相同量的IL-4R拮抗剂，但通常可能在施用频率上彼此相异。但是，在特定实施方案中，初始、次级和/或三级剂量中包含的IL-4R拮抗剂的量在治疗过程中相对彼此改变 (例如视情况上调或下调)。在特定实施方案中，在治疗方案开始时施用两个或更多个(例如2、3、4或5个)剂量作为“负荷剂量”(loading doses)，然后以更低的频率施用后续的剂量(例如“维持剂量”)。在一个实施方案中，维持剂量可低于负荷剂量。例如，可以施用一个或多个600mg IL-4R拮抗剂的负荷剂量，然后是大约75mg至约300mg的维持剂量。
在本发明的一个示例性的实施方案中，每个次级和/或三级剂量于紧前剂量之后1-14(例如1,11/2,2,21/2,3,31/2,4,41/2,5,51/2,6,61/2,7,71/2,8,81/2,9,91/2, 10,101/2,11,111/2,12,121/2,13,131/2,14,141/2或更多)周后施用。短语“紧前剂量”是指在多次施用的序列中，在序列中的下一个剂量施用之前施用给患者的 IL-4R拮抗剂剂量，二者之间没有剂量。
所述方法可包括对患者施用任何数目的次级和/或三级剂量的IL-4R拮抗剂。例如，在特定的实施方案中，仅对患者施用单个次级剂量。在其他实施方案中，对患者施用两个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8个，或更多)次级剂量。类似地，在特定的实施方案中，仅对患者施用单个三级剂量。在其他实施方案中，对患者施用两个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8个，或更多)三级剂量。
在包含多个次级剂量的实施方案中，每个次级剂量施用的频率可以与其他次级剂量相同。例如，每个次级剂量可以于紧前剂量之后1-2周施用给患者。类似地，在包含多个三级剂量的实施方案中，每个三级剂量施用的频率可以与其他三级剂量相同。例如，每个三级剂量可以于紧前剂量之后2-4周施用给患者。或者，在治疗方案的过程中次级和/或三级剂量施用给患者的频率可以变化。也可以在治疗过程中由医师在临床检查之后根据个别患者的需要对施用频率加以调整。
本发明包括这样的方法，所述方法包括对患者顺序施用IL-4R拮抗剂和第二治疗剂以治疗哮喘或相关状况。在一些实施方案中，所述方法包括施用一个或多个剂量的IL-4R拮抗剂，然后施用一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8 个或更多个)剂量的第二治疗剂。例如，可以施用一个或多个约75mg至约300 mg剂量的IL-4R拮抗剂，然后施用一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8个或更多个)剂量的第二治疗剂(例如吸入皮质类固醇或β2激动剂或本文中他处描述的任何其他治疗剂)，以治疗、缓解、减少或改善哮喘的一种或多种症状。在一些实施方案中，施用一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8个或更多)的IL-4R拮抗剂导致一种或多种哮喘相关参数的改善，然后施用第二治疗剂以防止至少一种哮喘症状的复发。备选的实施方案涉及IL-4R拮抗剂与第二治疗剂同时施用。例如，施用一个或多个(例如2,3,4,5,6,7,8个或更多)剂量的IL-4R拮抗剂，并以单独的剂量、以相对于该IL-4R拮抗剂相似或不同的频率施用第二治疗剂。在一些实施方案中，第二治疗剂在IL-4R拮抗剂之前、之后或同时施用。
治疗群体
本发明的方法包括对有此需要的受试者施用包含IL-4R拮抗剂的治疗组合物。术语“有此需要的受试者”是指这样的人或非人动物，其展现哮喘的一种或多种症状或征象(例如嗜酸性粒细胞性哮喘，包括中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘)，或已经被诊断为具有哮喘。例如，“有此需要的受试者”可以包括，例如，在治疗前展现(或已经展现)一种或多种哮喘相关参数，例如受损的FEV1(例如小于2.0L)、受损的AM PEF(例如小于400L/min)、受损的PM PEF(例如小于400L/min)，ACQ5评分至少2.5，每夜至少1次夜间苏醒，和 /或SNOT-22评分至少20。在各种实施方案中，所述方法可以用来治疗有此需要的患者中的轻度、中度至重度、以及重度哮喘。
在一个相关的实施方案中，“有此需要的受试者”可以是这样的受试者，其在接受IL-4R拮抗剂之前，已经被给予吸入皮质类固醇(ICS)/长效β2肾上腺能拮抗剂(LABA)组合处方或当前正在接受吸入皮质类固醇(ICS)/长效β2肾上腺能拮抗剂(LABA)组合。ICS/LABA疗法的实例包括对ICS/LABA治疗的例子包括氟替卡松/沙美特罗组合疗法和布地奈德/福莫特罗组合疗法。例如，本发明包括这样的方法，其包括对如下所述的患者给予IL-4R拮抗剂，所述患者在施用IL-4R拮抗剂之紧前(immediately preceding the administrationof the IL-4R antagonist)已经在接受定期的ICS/LABA疗程2周或更多周(这样的在先治疗本文中称为“背景治疗”)。本发明包括这样的治疗方法，其中背景治疗在首次使用IL-4R拮抗剂时，或者在即将首次使用IL-4R拮抗剂之前(例如 1天至2周前)中断。或者，背景治疗可以与IL-4R拮抗剂的施用一道继续进行。在其他实施方案中，ICS组分和/或LABA组分的量在IL-4R拮抗剂施用之前或开始施用之后逐渐下降。在一些实施方案中，本发明包括治疗持续性哮喘患者至少≥12个月的方法。在一个实施方案中，持续性哮喘的患者可能对治疗剂，如皮质类固醇的治疗抵抗，并且可以根据本发明方法对其施用 IL-4R拮抗剂。
在某些实施方案中，“有此需要的受试者”可为具有升高水平的哮喘相关生物标志物的受试者。哮喘相关生物标志物的实例包括，但不限于IgE、胸腺和活化调节趋化因子(TARC)、嗜酸细胞活化趋化因子-3、CEA、YKL-40、和骨膜素。在某些实施方案中，“有此需要的受试者”可为血液嗜酸性粒细胞≥ 300/μl、或痰嗜酸性粒细胞水平≥3％的受试者。在某些实施方案中，“有此需要的受试者”可为具有升高的支气管或气道炎症(以呼出气一氧化氮分数 (FeNO)度量)的受试者。
为本发明的目的，健康受试者中的正常IgE水平为小于约100kU/L(例如，用测定法[Phadia,Inc.Portage,MI]测定的)。因此，本发明涵盖这样的方法，其包括选择显示升高的IgE水平的受试者，所述升高的IgE水平是高于约100kU/L,高于约150kU/L,高于约500kU/L,高于约1000kU/L, 高于约1500kU/L,高于约2000kU/L,高于约2500kU/L,高于约3000kU/L, 高于约3500kU/L,高于约4000kU/L,高于约4500kU/L,或高于约5000kU/L 的血清IgE水平，并对该受试者施用包含治疗有效量的IL-4R拮抗剂的药物组合物。
健康受试者中的TARC水平的范围为106ng/L至431ng/L，均值为约239 ng/L。(测量TARC水平的一个示例性测定系统是R&D Systems,Minneapolis, MN以批号DDN00提供的TARC定量ELISA试剂盒)。因此，本发明涵盖这样的方法，其包括选择显示升高的TARC水平的受试者，所述升高的TARC 水平为高于约431ng/L,高于约500ng/L,高于约1000ng/L,高于约1500 ng/L,高于约2000ng/L,高于约2500ng/L,高于约3000ng/L,高于约3500 ng/L,高于约4000ng/L,高于约4500ng/L,或高于约5000ng/L的血清TARC 水平，并对该受试者施用包含治疗有效量的IL-4R拮抗剂的药物组合物。
嗜酸细胞活化趋化因子-3属于由气道上皮细胞释放的趋化因子类群，其被Th2趋化因子IL-4和IL-13上调(Lilly et al 1999,J.Allergy Clin.Immunol. 104:786-790)。本发明包括这样的方法，其包括施用IL-4R拮抗剂来治疗具有升高的嗜酸细胞活化趋化因子-3水平(例如高于约100pg/ml,高于约150 pg/ml,高于约200pg/ml,高于约300pg/ml,或高于约350pg/ml)的受试者。血清嗜酸细胞活化趋化因子-3水平可以例如通过ELISA测量。
骨膜素是Th2介导的炎症过程中涉及的一种胞外基质蛋白。骨膜素水平在哮喘患者中被发现上调(Jia et al 2012 J Allergy Clin Immunol. 130:647-654.e10.doi:10.1016/j.jaci.2012.06.025.Epub 2012 Aug 1)。本发明包括这样的方法，所述方法包括施用IL-4R拮抗剂来治疗具有升高的骨膜素水平的受试者。
呼出气一氧化氮分数(fractional exhaled NO,FeNO)是支气管或气道炎症的生物标志物。FeNO是气道上皮细胞相应于包括IL-4和IL-13在内的炎症趋化因子而产生的(Alwing et al 1993,Eur.Respir.J.6:1368-1370)。健康成人中的FeNO水平在2-30个十亿分率(ppb)的范围。一种示例性的用于测量FeNO 的测定法是使用Aerocrine AB,Solna,Sweden的NIOX仪。评估可以在肺活量测定之前，并在禁食至少一小时后进行。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的呼出NO(FeNO)(例如高于约30ppb,高于约31ppb, 高于约32ppb,高于约33ppb,高于约34ppb,或高于约35ppb)的患者施用 IL-4R拮抗剂。
癌胚抗原(CEA)是一种肿瘤标志物，其被发现与肺的非新生性疾病相关(Marechal et al 1988,Anticancer Res.8:677-680)。血清中的CEA水平可以通过 ELISA来测定。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的CEA (例如高于约1.0ng/ml,高于约1.5ng/ml,高于约2.0ng/ml,高于约2.5ng/ml, 高于约3.0ng/ml,高于约4.0ng/ml,或高于约5.0ng/ml)的患者施用IL-4R拮抗剂。
YKL-40[因其N-末端氨基酸酪氨酸(Y)、赖氨酸(K)和亮氨酸(L)，及其分子质量40kD而得名]是一种壳多糖酶样蛋白质，其被发现上调并与哮喘加重、 IgE和嗜酸性粒细胞相关(Tang et al 2010 Eur.Respir.J.35:757-760)。血清 YKL-40水平通过例如ELISA来测定。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的YKL-40(例如高于约40ng/ml,高于约50ng/ml,高于约 100ng/ml,高于约150ng/ml,高于约200ng/ml,或高于约250ng/ml)的患者施用IL-4R拮抗剂。
诱导的痰嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞是良好确立的气道炎症直接标志物(Djukanovic et al 2002,Eur.Respire.J.37:1S-2S)。吸入高渗盐水溶液诱发产痰，根据本领域已知的方法，例如欧洲呼吸学会(European Respiratory Society) 的指南处理进行细胞计数。本发明包括这样的方法，所述方法包括对具有升高水平的痰嗜酸性粒细胞(例如高于约2.5％或高于约3％)的患者施用IL-4R拮抗剂。
评估药效学哮喘相关参数的方法
本发明还包括用于在有此需要的受试者中评估施用包含白介素-4受体 (IL-4R)拮抗剂的药物组合物导致的一种或多种药效学哮喘相关参数的方法。在哮喘加重的发生率的减少(如上所述)或一种或多种哮喘相关参数的改善(如上所述)可以与一种或多种药效学哮喘相关参数的改善相关联；然而，这样的相关性不一定在所有情况下观察到。
“药效学哮喘相关参数”的实例包括，例如，下述：(a)生物标志物表达水平；(b)血清蛋白和RNA分析；(c)诱导的痰嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞的水平；(d)呼出气一氧化氮分数(FeNO)；和(e)血液嗜酸性粒细胞计数。“药效学哮喘相关参数的改善”是指，例如，一种或多种生物标志物，如TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3或IgE，自基线的降低；痰嗜酸性粒细胞或嗜中性粒细胞、FeNO、或血液嗜酸性粒细胞计数减少。如本文所使用的，术语“基线”，就药效学哮喘相关参数而言，意指患者在施用本发明特征的药物组合物之前或之时的药动学哮喘相关参数的数值。
为了评估药效学哮喘相关参数，在基线和本发明的药物组合物施用后的时间点定量该参数。例如，药效学哮喘相关参数可以在用本发明的药物组合物初始治疗后第1天，第2天，第3天，第4天，第5天，第6天，第7天，第8天，第9天，第10天，第11天，第12天，第14天，或第3周，第4 周，第5周，第6周，第7周，第8周，第9周，第10周，第11周，第12 周，第13周，第14周，第15周，第16周，第17周，第18周，第19周，第20周，第21周，第22周，第23周，第24周，或更长的时间时测量。用参数在开始治疗后的特定时间点的值与该参数在基线的值的差异来证明药动学哮喘相关参数是否已经有变化，如“改善”(例如，视情况为增加或减少，取决于测量的具体参数)。
在某些实施方案中，向患者施用IL-4R拮抗剂引起特定的生物标志物的表达变化，如增加或减少。哮喘相关的生物标志物包括下述：血清中的(a)总 IgE；(b)胸腺和活化调节趋化因子(TARC)；(c)YKL-40；及(d)癌胚抗原(CEA，也称为癌胚抗原细胞粘附分子5[CEACAM5])，和血浆中的(e)嗜酸细胞活化趋化因子-3。例如，对哮喘患者施用IL-4R拮抗剂可以导致下述中的一者或多者：TARC或嗜酸细胞活化趋化因子-3的水平的降低，或血清总IgE水平的降低。该降低可以在IL-4R拮抗剂施用之后第1周，第2周，第3周，第4 周，第5周或更长的时间时检测到。生物标志物表达可通过本领域中已知的方法来测定。例如，蛋白质水平可通过ELISA(酶联免疫吸附测定法)进行测定，或RNA水平可以通过逆转录耦合聚合酶链式反应(RT-PCR)来测定。
生物标志物的表达，如上面所讨论的，可通过检测血清中的蛋白质或 RNA来测定。血清样品也可用于监测与对IL-4R拮抗剂治疗的反应、 IL-4/IL-13的信号传导、哮喘、特应性或嗜酸性粒细胞疾病相关的其他蛋白质或RNA生物标志物(例如，通过测量可溶性IL-4Rα、IL-4、IL-13、骨膜素)。在一些实施方案中，RNA样品用于确定RNA水平(非遗传分析)，例如，生物标志物的RNA水平；并且在其他实施方案中，RNA样品用于转录组测序(例如，遗传分析)。
实施例
给出以下实施例以便为本领域的技术人员提供如何制造和使用本发明描述的方法和组合物的完整公开和描述，并且不意在限制发明人视为其发明的范围。已尽量确保所使用的数字的准确性(例如量、温度等)，但一些实验误差和偏差应予以容许。除非另外指出，否则，份数是重量份数，分子量是平均分子量，温度是摄氏度，压力为大气压或接近大气压。
实施例1针对人IL-4R的人抗体的产生
如美国专利号7608693所述生成抗人IL-4R人抗体。表1列出了选定的抗IL-4R抗体的重链和轻链可变区氨基酸序列对及CDR的氨基酸序列的序列标识符，及其相应的抗体名称
表1
在下列实施例中使用的示范性IL-4R拮抗剂是在表1中指定为H1H098-b 的人抗IL-4R抗体(在此也称为“mAb1”)。
实施例2：在具有持续中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘的患者，包括具有慢性增生性嗜酸性粒细胞性鼻窦炎的哮喘患者中进行的皮下施用抗IL-4R 抗体(mAb1)的临床试验
A.研究目的和概览
进行一项随机、安慰剂对照、双盲、平行组的研究，对患有持续中度至重度嗜酸性粒细胞性哮喘、通过吸入皮质类固醇(ICS)和长效β2-受体激动剂 (LABA)疗法受到部分控制/不受控制的患者，每周一次皮下施用300mg mAb1 或安慰剂，历时12周。该项研究的主要目标是调查每周一次皮下施用历时 12周的mAb1，与安慰剂相比，对降低患有持续中度至重度的嗜酸细胞性哮喘的患者中哮喘加重的发生率的影响。该项研究的次要目标是在具有持续中度至重度嗜酸细胞性哮喘的患者中评估每周一次皮下施用12周的mAb1的安全性和耐受性，以及在具有持续中度至重度嗜酸细胞性哮喘的患者中评估每周一次皮下给药12周之后的mAb1血清浓度。
在筛选之前，要求患者接受稳定剂量的任何下述剂量和配方的ICS/LABA 组合疗法(又称“背景疗法”)至少1个月：
氟替卡松/沙美特罗组合疗法
的Diskus-干粉吸入器(DPI)：250/50ug BID或500/50ug BID；或
HFA-定量吸入器(MDI)：230/42ug BID或460/42ug BID；或
布地奈德/福莫特罗组合疗法(160/9ug BID或320/9ug BID)；或
莫米松/福莫特罗组合疗法(200/10ug BID或400/10ug BID)
在随机化时(第1天)，接受着布地奈德/福莫特罗或莫米松/福莫特罗的患者切换到相当剂量的氟替卡松/沙美特罗，而接受着氟替卡松/沙美特罗的患者保持与背景疗法相同。
满足纳入和排除标准(见下文)的患者被随机分配到以下处理之一：300毫克mAb1皮下施用，每周一次共12周；或安慰剂皮下施用，每周一次共12 周。
该研究包括：2周的筛选期；随机化之后的12周的治疗期，包括4周的背景疗法稳定阶段和8周的背景疗法撤出阶段；然后是8周的治疗后访视期。
用于背景疗法(ICS/LABA)撤出的算法：
患者在开始附加疗法或300mg mAb1(或安慰剂)治疗后维持BID(每日两次)氟替卡松/沙美特罗背景疗法4周。在随机化后4周时，患者从BIC氟替卡松/沙美特罗组合疗法切换为相当ICS剂量的氟替卡松单一疗法(包括：Diskus-DPI制剂250ug或500ugBID；或HFA-MDI制剂 220ug或440ug BID)。LABA组分(即沙美特罗)中断。在随后的访视时，从第 6周开始，将氟替卡松剂量降低约50％，只要患者未达到任何哮喘加重的标准(定义见下文)。如果没有哮喘加重发生，则ICS撤出根据下列给药方案继续进行：
当用研究产品治疗12周完成时(或在提前终止后)，令患者接受原来的氟替卡松/沙美特罗、布地奈德/福莫特罗、或者莫米松/福莫特罗剂量(加入研究时的剂量)以及视需要的沙丁胺醇或左沙丁胺醇以控制他们的症状，在脱离研究药物的条件下再历时四周，然后进行最终的安全性评估。
成年患者基于以下条件被纳入研究：(1)医师根据全球哮喘防治创议 (GINA)2009年指南诊断为持续哮喘已至少≥12个月，其气道炎症很可能是嗜酸性粒细胞性的；和(2)根据以下标准，其哮喘部分受吸入皮质类固醇/长效β- 激动剂组合疗法的部分控制或不受其控制：(i)在筛选的至少1个月前，稳定剂量的氟替卡松/沙美特罗组合疗法(DPI配方：205/50μg BID或500/50μg BID 或MDI配方：230/52μg BID或460/42μg BID)，或布地奈德/福莫特罗组合疗法(160/9μg BID或320/9μg BID)，或莫米松/福莫特罗组合疗法(200/10μg BID或400/10μg BID)；(ii)在筛选阶段内血嗜酸性粒细胞≥300个细胞/μl或痰嗜酸性粒细胞≥3％；(iii)在筛选时Juniper哮喘控制问卷调查(5个问题的版本， ACQ)评分≥1.5且≤3.0；(iv)在筛选阶段内(最多3次尝试)以及第一次剂量前的随机化日(最多3次尝试)FEV1≥50％预测正常；(v)在筛选前2年之内曾有过：用一次或多次全身性(口服和/或胃肠外)类固醇突增(burst)治疗以应对哮喘恶化，或住院患者入院，或为由于哮喘恶化接受急救，和(vi)距离筛选12个月内有满足条件—至少12％可逆转性的有据可查的历史，且在200μg到400μg (2至4次吸入)沙丁胺醇之后在筛选阶段过程中(最多三次尝试)FEV1为200 mL，或者在筛选前12个月内有阳性乙酰甲胆碱攻毒(PD20乙酰甲胆碱≤8mg) 的有据可查的历史。研究中纳入了这样的患者：具有用中到高剂量的吸入皮质类固醇和长效β受体激动剂(或)组合疗法部分控制或无法控制的中度至重度哮喘；并且在筛选阶段过程中血嗜酸性粒细胞大于或等于300个细胞每μl，或痰嗜酸性粒细胞大于或等于3％。
对符合所有入选标准的患者筛选以下排除标准：(1)患者小于18岁或大于 65岁的；(2)临床相关的异常检验值提示未知的疾病，需要进一步评估的；(3) 慢性阻塞性肺病(COPD)和/或其他肺部疾病妨碍肺功能测试的；(4)患者因任何原因需要β-肾上腺素能受体阻滞剂的；(5)目前吸烟或筛选之前6个月内戒烟的；(6)以前吸烟，有>10包-年吸烟史的；(7)在筛选之前2个月内因哮喘加重而住院治疗或紧急护理访视的；(8)计划在研究期间内开始变应原免疫治疗的；(9)在筛选前小于另一研究抗体的5个半衰期但不少于30日的时间内，或如果该抗体的半衰期未知，在筛选前至少6个月的时间内，暴露于另一研究抗体的；(10)先前参加过本项研究的；(11)患者是研究人员、他/她的家庭成员、或研究站点的雇员的；(12)已知或疑似有违规，酗酒或药物滥用的；(13) 不能遵守该研究的规程的(例如，由于语言问题或心理障碍)；(14)睡眠模式反转的(例如，夜班工作人员)；(15)用已知会延长QTc间期的药物治疗的；(16) 伴随有禁用ICS的严重疾病(例如，活动或不活动性肺结核)或禁用LABA的严重疾病(例如糖尿病，心血管疾病，高血压，甲状腺功能亢进症，甲状腺毒症等)的；(17)在筛选之前2个月内使用过注射皮质类固醇或口服全身性皮质类固醇，或者在筛选之前6个月内使用过多于3个疗程的；(18)用可变剂量的 ICS预处理，无论是单独使用或与非甾体控制药联用(除氟替卡松/沙美特罗组合疗法，布地奈德/福莫特罗组合疗法，或莫米松/福莫特罗组合疗法之外)； (19)患者接受被禁止的同时用药的(见下表)；(20)已知对多西环素或相关化合物有变态反应的；(21)在研究过程中怀孕或准备要怀孕，母乳喂养，或不愿使用有效的避孕方法；和(22)最近的寄生物感染史，或筛选前6个月内去到过寄生物流行区。
在研究的前四周时间内患者保持恒定剂量的背景哮喘疗法，之后逐渐减少背景疗法的剂量。首先，在第4周撤出背景疗法的长效β激动剂组分，然后每2周将吸入的皮质类固醇的剂量减少一半，直到第12周。患者继续研究治疗直到研究结束，或者直到他们由于哮喘加重或任何其他原因退出。
B.研究处理
研究产品：用于皮下注射的无菌mAb1 150mg/mL的溶液，在5毫升的玻璃小瓶中提供。每个小瓶含有2mL的可抽出体积。在研究站点早间皮下施用 300mg剂量，每周一次，共12周。
安慰剂：在完全相同的5mL小玻璃瓶中提供用于皮下注射的无菌安慰剂。每个小瓶含有2mL的可抽出体积。在研究站点早间皮下施用安慰剂，每周一次，共12周。
该研究的持续期间，不允许同时使用下列药物：除氟替卡松/沙美特罗组合疗法或按规程施用的氟替卡松(或在筛选期间的布地奈德/福莫特罗或莫米松/福莫特罗)之外的任何其它吸入性类固醇；全身或眼部类固醇；除氟替卡松 /沙美特罗组合疗法中按规程施用的沙美特罗成分之外的任何LABA；除上文所列之外任何其他ICS/LABA联合产品；任何吸入的抗胆碱能药物(如异丙托溴铵或噻托溴铵)；甲基黄嘌呤(茶碱，氨茶碱)；cromones；抗IgE疗法；脂加氧酶抑制剂；和白三烯受体拮抗剂或白三烯合成抑制剂。
C.处理的功效
本研究的主要终点是按照以下任何定义的哮喘急性加重的发生：(1)连续两天早间峰值呼气流速(PEF)自基线减少30％或更多；或(2)连续两天在24小时内额外的6次或更多次(与基线相比)沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾；或(3) 哮喘恶化，如由研究者确定的，需要：全身性(口服和/或胃肠外)类固醇治疗，或(b)ICS增加≥在从研究中断之前接受的最后一个剂量的4倍，或(c)住院治疗。
研究的次要终点包括下列参数自基线的均值变化：(1)每次访视时测量的 1秒用力呼气容积(FEV1)，以升计；(2)每日测量的早间和晚间峰值呼气流速 (AM PEF和PM PEF)，以升/分钟计；(3)每日沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用，以吸入数/日计；(4)每次访视时的五项哮喘控制问卷(ACQ5)评分；和(5)每日测量的夜间苏醒(每夜的次数)，以及(6)22项目鼻窦-鼻腔结果测试(SNOT-22)，在基线和治疗结束时(在第12周)评估，以评价上气道症状。次要终点也包括具有如下定义的复合哮喘事件的患者的比例：连续两天早间PEF自基线减少30％或更多，同时连续两天与基线相比在24小时期间内≥6次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾。PEF、ACQ5、哮喘症状评分、夜间苏醒，以及缓解用药记录在电子日记中。平均每日夜间苏醒，范围从0-10次，以前7天的平均计。早间和晚间的哮喘症状评分由未经验证的患者报告的评估结果构成，该结果基于一个5分制利克特式量表评定，评分越高表明结果越不好(表2)。患者每天记录总体症状评分两次，在PEF测量之前进行。数据作为指定的时间点之前7天的平均值(见，例如，图26A和26B)描述。
表2哮喘症状评分评估
D.不良事件监测
在整个研究过程中通过监测不良事件和严重不良事件评估安全性。
不良事件(AE)是在被施用药物产品的受试者或临床研究对象中发生的任何不利的医学事变。因此AE可以是在时间上与使用医药产品相关的任何不利的和非预期的征候(包括异常的实验检查所见)、症状、或疾病，不管是否被认为与该药物(研究)产品有联系。AE还包括：预先存在的状况的任何在时间上与使用研究药物相关的恶化(即，任何临床显著的频率和/或强度变化)；研究者认为有临床显著性的实验检查所见异常；以及任何不利的医疗事件。
严重不良事件(SAE)是这样的不利医学事变，其在任何剂量下导致死亡、危及生命、需要住院治疗或延长住院时间；导致持续或显著的失能/机能不全；是先天性异常/出生缺陷；或者是重要的医学事件。
E.统计方法
对于经历哮喘加重的患者的比例的主要分析，用逻辑斯蒂回归模型比较 SAR组与安慰剂。该模型包括治疗条件(terms of treatment)和分层因子(在先的 ICS/LABA组合疗法剂量)。主要分析基于修正的意向治疗(mITT)群体进行，该群体包括接受了至少一个剂量的研究药品(IMP)的所有随机化患者。还采用分层卡方检验来佐证主要分析。
对于次要功效终点，除了SNOT-22之外，自基线的变化均使用重复测量的混合效应模型(MMRM)的方法进行分析。该模型包括直至第12周的自基线的变化值作为响应变量，和治疗因素(固定效应)，分层因素，访视，治疗/访视互作(treatment-by-visitinteraction)，基线值，以及基线/访视互作 (baseline-by-visit interaction)。从该混合效应模型得出对第12周时自基线的改变(change from baseline at week 12)的治疗比较(treatment comparisons)的统计推论。SNOT-22自基线的改变使用协方差分析(ANCOVA)进行分析，利用治疗结束时的测量所得(end of treatment measurements)来插补缺失的数据。使用 MMRM模型以事后方式对药效学效应进行了评估。没有就多重性进行调整，因为只有一个主要终点和分析。安全性变量，包括不良事件、实验室参数、生命体征、ECG、临床实验室观察和体检，使用描述性统计进行总结。
人口统计学和临床特征用描述性特征加以概括。次要变量和药效学变量的作图以自基线的随时间平均改变加标准误差的形式呈现。源自MMRM分析的治疗效果比较是基于在第12周时自基线的最小二乘均值变化(95％置信区间[CI])。
F.结果
所有完成或中止了本研究治疗阶段的104例随机化患者(来自筛选的491 例)的观察结果总结如下。所有随机化患者均被暴露于研究治疗，并包括在 mITT群体中。各组之间的基线特征相似。人口统计学和临床特征在两组(表 3)之间也相似。如上所述，患者或者用每周一次300mg mAb1皮下处理，或用安慰剂处理。分别有86.5％的mAb1患者和67.3％的安慰剂患者完成了研究治疗期(图25)。中止的最常见的原因是缺乏功效，这在安慰剂中的频率(21.2％) 比mAb1中(1.9％)高。
表3.各治疗组的基线人口统计学和临床特征*
*正负值是平均值±标准差，除非另有说明。ACQ5表示哮喘控制问卷(5 问题版)，FeNO呼出气一氧化氮分数，FEV1 1秒用力呼气容积，IgE免疫球蛋白E，PEF峰值呼气容积，SNOT-22 22项目鼻腔鼻窦结果测试，TARC 胸腺和活化调节趋化因子。
(i)主要功效终点
安慰剂和mAb1治疗组中哮喘加重的发生率示于表4中。
表4：mITT群体中哮喘加重的发生率
安慰剂(N＝52) mAb1(N＝52)
无哮喘加重的患者 29(55.8％) 49(94.2％)
有哮喘加重的患者 23(44.2％) 3(5.8％)
对安慰剂的优势比(95％CI) -- 0.077(0.021,0.279)
在整个治疗期间共有26例哮喘加重，没有患者由于哮喘加重住院。在安慰剂组中有23例患者(44.2％)经历了哮喘加重，而mAb1治疗组中只有3例 (5.8％)经历了哮喘加重。优势比是0.077(p<0.0001)，相对风险降低大约是87％。
在这项研究中经历的26例哮喘加重中，9例被认为是严重的，表现为需要以至少4倍于事件前所摄取的剂量的全身皮质类固醇或吸入皮质类固醇的形式进行立即干预。重度哮喘加重的发生率的总结示于表5中。
表5：mITT群体中重度哮喘加重的发生率
安慰剂(N＝52) mAb1(N＝52)
无哮喘加重的患者 29(55.8％) 49(94.2％)
有严重哮喘加重的患者 8(15.4％) 1(1.9％)
有不严重的哮喘加重的患者 15(28.8％) 2(3.8％)
如表5所示，在安慰剂组中观察到8例重度哮喘加重，而在mAb1治疗中组只观察到1例重度哮喘加重。安慰剂组的其余15例哮喘加重和mAb1组的其余2例哮喘加重满足加重的基于早间PEF降低和/或沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用增加的规程定义。如表6所示，在积极治疗组中，在研究的全过程中均观察到了所有参数的相对于基线的持续改善，即使撤出了类固醇。
表6：加重事件
*4例安慰剂患者符合PEF和全身性类固醇治疗标准二者，1例安慰剂患者符合PEF和额外的沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用二者。
使用mAb1时，加重前时间(time to exacerbation)较长(图1)，且加重的风险相对于安慰剂降低(风险比0,10；95％CI：0.03，0.34；P<0.001)。采用 Kaplan-Meier曲线对哮喘加重前时间的分析表明，mAb1治疗的作用随时间推移持续存在，包括在8周之后，此时患者由于类固醇停药而处于较高的发生加重的风险中(图1)。
只有1名来自安慰剂组的患者发生了复合哮喘事件。复合哮喘事件定义为连续2天早间PEF自基线减少30％或更多，并且连续2天在24小时期间内≥6次额外的(相比于基线)沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾。
(ii)其他疗效终点
在每次访视时对每名患者评估肺功能参数(FEV1，PEF AM和PM PEF)、基于哮喘症状的终点(ACQ评分，夜间苏醒)、和沙丁胺醇的使用。这些参数的观察结果(每周自基线的改变)分别描绘在图2-7。此外，SNOT-22评分在基线和治疗结束时进行评估。对于所有参数，将基线和第12周(LOCF)的均值以及治疗组之间的平均差异(对SNOT-22为ANOVA模型)总结在表7中。在表7中，标为“与安慰剂相比的差异”的列反映自基线的经安慰剂校正的值，其考虑了观察到的参数的值的改变，与该参数在安慰剂治疗组中观察到的改变相比较。
表7：肺功能的次级参数和症状评分
51例患者至少有1次基线后评估。
50例患者至少有1次基线后评估。
mAb1治疗导致FEV1在第1周自基线显著改变，该改变保持到第12周(图 2)，即使LABA和ICS撤药，其中FEV1在第5周在与LABA撤药同时有较小下降。对于早间PEF观察到类似的改善，但晚间PEF改善较少(图3和4)。FEV1自基线到12周的最小二乘(LS)均值改变为：安慰剂-0.22L，mAb1组 0.05L。(P＝0.0009)。
两个治疗组的ACQ5评分在第1周均有提高(图6)。然而，虽然mAb1在第1周到第4周之间改善ACQ5更多，但安慰剂效应稳定化，保持该差异直到第12周。
安慰剂的早间症状评分从基线至第12周上升。在mAb1的情况下，最初有下降，该下降保持在基线以下直到第12周(图26A)。夜间哮喘症状评分观察到类似的模式(可变性更大)(图26B)。
安慰剂组的夜间苏醒稳定到第6周，然后从第6周至第12周增加。与此相反，mAb1组中到第1周为止夜间苏醒减少，并保持相对于基线改善直到第12周(图7)。
沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用(图5)的改变与其他次要终点相似：对于安慰剂，最初下降，随后向基线回复。而对于mAb1，最初的下降随时间推移而保持。
各SNOT-22值之间在基线有不显著的差异，安慰剂组平均评分26.24， mAb1平均评分39.02。在第12周时，LS平均改变在安慰剂组为0.23分的轻微增加，而在mAb1组为8.26分的平均减少(改善)。这代表mAb1组提高幅度为8.49分(p＝0.0027)。
表8.次要终点
表9.从基线的变化，在第12周的SNOT-22项目相关的上气道疾病。
分别有*51和50例患者至少有1次基线后评估
对于所有的次要终点，第12周测量所得均有利于mAb1治疗，而且是显著的，除了晚间PEF和夜间苏醒(表7、8)。也观察到了mAb1的与上气道疾病相关的3个SNOT-22项目显著改善(表9)。
(iii)安全性
mAb1普遍安全且耐受良好。40名(76.9％)名安慰剂治疗的患者和42名 (80.8％)mAb1治疗的患者类似地报道了治疗后出现的不良事件(TEAE)(表10)。 TEAE是非特异性的，强度一般为轻到中度，大多数到研究结束时已复原。观察到mAb1与安慰剂相比下列TEAE的报告有所增加：15名(28.8％)mAb1 患者和5名(9.6％)安慰剂患者报告了注射部位反应；7名(13.5％)mAb1患者和2名(3.8％)安慰剂患者报告了鼻咽炎；6名(11.5％)mAb1患者和3名(5.85) 安慰剂患者报告了头痛，且有4名(7.7％)mAb1患者和1名(1.9％)安慰剂患者报告了恶心。
表10.不良事件。
*任何治疗组中根据优选术语≥3名病人
注射部位反应包括报告为如下的事件：注射部位疼痛，注射部位反应，注射部位红斑，注射部位皮疹，注射部位血肿，注射部位荨麻疹，注射部位皮炎，注射部位炎症，注射部位结节，注射部位瘙痒和注射部位肿胀。
没有研究期间死亡的报告。在4例报告为治疗后出现的严重不良事件 (SAE)中：1例mAb1患者经历双相情感障碍，3例安慰剂患者经历哮喘的SAE，伴有肺炎、枪伤左气胸(gunshot wound with left pneumothorax)，和右脚踝骨折。这些SAE均被认为与IMP有关系，并且除了最近的踝骨折之外，它们全部到研究结束时恢复。没有死亡病例。
共6例患者由于TEAE中止研究：mAb1组中3例(双相情感障碍，哮喘加喘鸣，和血管性水肿)，安慰剂组中3例(上呼吸道感染，银屑病和哮喘)。血管性水肿的TEAE在一名42岁的非洲裔女性中在第九次研究治疗后发生，表现为在注射部位观察到的和远离注射部位的瘙痒、遍发(popular)皮疹。其持续了一个星期，并在中止研究治疗、泼尼松和苯海拉明治疗后解决。它被认为是与治疗相关的。在此AE之前，在第一和第六研究治疗剂量后有轻度皮疹。
在任何治疗组内发生于≥3名患者的最常见AE中(表10)，注射部位反应、鼻咽炎、恶心和头痛在mAb1组发生比在安慰剂组更频繁。任一组中均没有报告临床生命体征、体检、临床实验室所见或心电图所见的显著变化。
G.结论
观察到肺功能和其他哮喘控制参数显著改善。功效很早就观察到，而且即使背景疗法撤出而仍然持续。观察到持续性中度至重度哮喘伴有嗜酸性粒细胞增多的患者在用每周一次300mg mAb1治疗12周之后的主要终点哮喘加重发生率(5.8％)相比于安慰剂(44.2％)相对降低大约87％(p<0.0001)。如表7 所示，观察到治疗与安慰剂相比在肺功能参数(FEV1，PEF AM)、哮喘症状评分(ACQ)和沙丁胺醇使用方面获得了临床上有意义的且统计学显著(无多重性调整)的改善。PEF PM(p＝0.0567)和夜间苏醒(P＝0.0518)观察到积极的趋势。 SNOT-22评分也观察到统计学显著(无多重性调整)的改善。在积极治疗组中，所有参数在研究全过程中均观察到相对于基线的持续的改善，即使LABA和 ICS撤出。mAb1普遍安全且得到了良好的耐受。
实施例3：生物标志物研究
对从参加mAb1临床试验的受试者(见上文实施例2)采集的样品进行生物标志物分析。具体地，在基线以及研究治疗开始之后的不同时间点，测量来自患者的样品中与TH2炎症有关的血清/血浆生物标志物，如胸腺和活化趋化因子(TARC；CCL17)，免疫球蛋白E(IgE)，嗜酸细胞活化趋化因子-3，骨膜素，癌胚抗原(CEA)，YKL-40和血液嗜酸性粒细胞。评估这些生物标志物的基线水平对治疗响应的潜在预测价值。此外，测定作为支气管炎症生物标志物的呼出气NO量(FeNO)，以及诱导的痰嗜酸性粒细胞和嗜中性粒细胞。呼出气一氧化氮分数评估在肺活量测定之前、在禁食至少1小时之后进行，使用NIOX仪(Aerocrine AB，Solna Sweden)。使用混合模型分析生物标志物，从模型得出的最小二乘均值报告如下。
在研究第1、8、15、22、29、36、43、50、57、64、71、和78天(即， 12次每周一次的剂量)对哮喘受试者(N＝104)皮下施用mAb1(300mg)或安慰剂(见本文实施例2)。用于生物标志物分析的样品是在第0、1、4、8和12周从用抗体和安慰剂治疗的受试者收集的。抗原特异性IgE的检测使用测试。
TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3和IgE响应于安慰剂保持不变(图8、9 和10)。与此相反，在用mAb1治疗的患者中在一周内观察到TARC(平均改变％：-22.7％对+0.3％；p＝0.0003)(图8)和嗜酸细胞活化趋化因子-3(平均改变％：-39.62％对+12.69％；p<0.0001)(图9)的迅速减少，并一直持续到第12 周：TARC：-26.0％对+7.6％安慰剂(P＝0.0005)；嗜酸细胞活化趋化因子-3： -45.67％对+5.13％安慰剂(p<0.0001)。
TARC水平在暴露于皮下施用的300mg mAb1一周内应答。TARC水平在 mAb1治疗的受试者中在基线水平的大约50％处达到平台，与ICS撤出无关。数据提示TARC表达比FEV1改变(后者与ICS停药[4周后]平行下降)更直接地与IL-4R信号传导相关，并且，阻断IL-4R可诱导朝向TH1签名的移动，与例如施用IFNγ时观察到的一样。有可能使用TARC滴定mAb1剂量(并且例如CXCL10)，特别是对需要长期治疗、且处于TH1型免疫疾病风险中的患者而言。
总血清IgE也在mAb1治疗后降低。与TARC应答相比，总血清IgE应答更不均一且更延迟。平均值(SD)的基线IgE水平分别为安慰剂组694.68IU/ L(1837.82)(n＝52)、mAb1组657.66(1482.25)(n＝52)，而中位数为安慰剂组 169.95、mAb1组206.15。尽管有这种非均一性，但在mAb1暴露患者中观察到与安慰剂组相比IgE的下降的趋势——然而仅从第4周开始。血清IgE在 mAb1组与安慰剂相比显著降低(平均改变％：-10.1％对+13.5％；p＝0.0325)，从第4周开始，并持续减少，直到第12周(平均改变％：REGN668/SAR231893 为-36.8％，而安慰剂为-5.5％，p<0.0001)(图10)。
FeNO、TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3、和IgE在第12周自基线和相对安慰剂的改变都有利于mAb1(所有P<0.001)(表11)。YKL-40和CEA均未观察到相比基线或不同处理之间的差异。
表11.药效学终点在12周从基线自基线的百分比改变。
骨膜素的水平有一短暂的下降，而后随着LABA/ICS撤出有增加(图11)。mAb1的施用延迟了该增加，但没有阻止该增加超过基线。对CEA(图12)和 YKL-40(图13)没有观察到一致的治疗效应。血液嗜酸性粒细胞的数目到第6 周为止保持不变，但随后在第8和第12周增加(图14)。安慰剂组整个治疗过程中外周血嗜酸性粒细胞数没有改变。处理之间的差异不显著，只有在少数 mAb1处理的患者中由更大的血液嗜酸性粒细胞升高驱动了边界增加。多数患者中几乎未观察到或未观察到上升(表12)。
表12.达到血液嗜酸性粒细胞水平的变化阈值的患者的比例。
由于在研究全过程中只有3名mAb1患者出现了哮喘加重，无法针对基线生物标志物水平和哮喘加重之间的关联作出结论。
mAb1处理也伴随着第4周时FeNO自基线的显著下降，且FeNO保持低于基线直到第12周，无论ICS撤出(第12周时的平均％变化：mAb1-28.7对安慰剂35.0；p<0.0001)(图15)。与此相反，安慰剂FeNO值保持稳定直到第 8周，随后在第12周在ICS撤出的同时发生增加。
第12周时的1秒用力呼气容积(FEV1)的改善与FeNO水平降低显著相关 (r＝-0.408，p值＝0.009)(图16)。同样，AM-PEF和PM-PEF的改善与FeNO 降低相关(图17和18)。其他与FeNO的相关性不显著。见表13。
表13.FEV1和PD终点之间的相关性。
基线嗜酸性粒细胞对FEV1第12周自基线的变化的散点图分析似乎未提示基线嗜酸性粒细胞与治疗效果的关联，治疗效果以研究人群中FEV1在第12周时从基线的变化来度量(基线嗜酸性粒细胞≥0.3千兆/L)(图19)。基线嗜酸性粒细胞与ACQ降低(图20)和沙丁胺醇/左沙丁胺醇使用减少(图21)相关。在基线的YKL-40和骨膜素与ACQ降低相关(图22和23)。
第12周时FEV1自基线的变化被ICS撤出(从第4周起)所加剧。类似的分析并没有提示研究群体(基线嗜酸性粒细胞≥0.3千兆/L)中基线TARC或IgE 与第12周时FEV1自基线的变化之间的关联。
总结
这些结果表明，mAb1在成人哮喘患者中显著降低与Th2炎症相关的血清生物标志物(TARC、嗜酸细胞活化趋化因子-3和IgE)和与支气管炎相关的血清生物标志物(FeNO)。FeNO降低与FEV1改善之间的相关性提示在中度至重度的不受控哮喘中IL-4/IL-13介导的抗炎活性和肺功能的改善之间有关系。
本发明的范围不受本文所述具体实施方案的限制。事实上，除了本文所述的修改，本领域技术人员根据前面的描述和附图中容易想到其他各种各样的修改。这样的修改旨在落入所附权利要求的范围之内。
实施例4：在屋尘螨诱导的嗜酸细胞性哮喘的小鼠模型中对IL-4/IL-13信号通路的阻断抑制IgE的产生和气道重构
简介
屋尘螨变应原(HDM)已被证明可诱导Th2免疫应答，包括Th2细胞流入肺，和IL-4诱导的嗜酸性粒细胞跨内皮迁移(trans-endothelial migration)入肺。嗜酸性粒细胞是变应性反应中主要的效应细胞，嗜酸性粒细胞的颗粒内容物 (包括IL-4)的释放有助于炎症。在哮喘患者中，Th2细胞驱动的IL-4产生促进嗜酸性粒细胞在嗜酸细胞活化趋化因子的介导下从血液迁移到肺，嗜酸细胞活化趋化因子是一种强有力的嗜酸性粒细胞化学引诱物(Mochizuki et al.,J. Immunol.,1998,160(1):60-68)。此外，嗜酸性粒细胞当在炎症部位局在化时，产生和分泌IL-4，从而对正在持续的Th2驱动炎症起贡献(Bjerke et al.,Respir. Med.,1996,90(5):271-277)。在变应性哮喘患者中，用HDM攻毒可在变应原攻击后增加血清中IgE和Th2细胞因子水平长达5周(van de Pol et al.,Allergy, 2012,67(1):67-73)。
在本实施例中，利用一个HDM诱导的慢性哮喘模型来评估抗IL-4R抗体对小鼠中气道炎症的标志物的药效学作用。此外，在这个模型中评价了抗 IL-4R抗体对气道中胶原沉积的影响，因为胶原沉积与气道重构的程度相关。
材料和方法
两种不同的抗IL-4Rα抗体用于本实施例的实验：“mAb1”，一种特异于人IL-4Rα的全人单克隆抗体(即，在本文的其他工作实施例中使用的抗IL-4R 抗体)；和“抗mIL-4Rα”，一种特异于小鼠IL-4Rα蛋白的小鼠单克隆抗体。 mAb1不与小鼠IL-4Rα交叉反应；因此，在人源化小鼠中评估mAb1，该小鼠中通过工程化用人IL-4和IL-4Rα的胞外域替代小鼠中其对应的鼠序列 (IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu)。另一方面，将小鼠的抗小鼠IL-4Rα抗体“抗mIL-4R”在野生型(Balb/c)小鼠中进行测试。这些实验中还测试了小鼠IL-13Rα2-mFc融合蛋白，其充当诱饵受体，通过隔离IL-13细胞因子而阻断IL-13信号传导。
对于HDM诱导的哮喘模型，小鼠每日鼻内施用HDM(每只小鼠50μg，在20μl PBS中)历时10天以致敏，随后休息(2周消退期(resolution period))。通过鼻内施用HDM(每只小鼠50μg，在20μl PBS中)，每周三次，持续8 周来实施变应原攻毒。每次HDM施用时，无论在致敏或攻毒期间，将小鼠用异氟烷轻度麻醉。
对小鼠开始实验程序之前，将小鼠在实验设施驯化至少5天。在实验的整个持续时间，动物保持在实验设施中的12小时昼/夜循环的标准条件下，随意获取食物和水。每笼的小鼠的数目限制为最多5只小鼠。
总共48只人源化小鼠，其中通过工程化用人IL-4的配体和IL-4Rα的胞外域替代其对应的鼠序列(IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu)，用于两个实验。IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠具有C57BL/6NTac(75％)/129S6SvEvTac(25％)的混合背景。此外，在三个实验之一中使用20只具有同一混合背景的野生型同窝小鼠。在每个实验中，将小鼠用HDM(或在对照组中用PBS)每日致敏历时十天，随后是从第11天至第29天的消退期。从第30天起，每周三次用HDM对动物攻毒，历时8周，直至第81天，然后在第85天施以安乐死以供分析。小鼠分成如下6个实验组：
(1)无致敏，无处理：致敏和攻毒期间鼻内施用PBS。小鼠未用抗体处理 (IL-4hu/huIL-4Rαhu/hu小鼠N＝9；野生型同窝N＝5)；
(2)HDM致敏，无处理：致敏和攻毒期间鼻内施用HDM。小鼠未用抗体处理(IL-4hu/huIL-4Rαhu/hu小鼠N＝7；野生型同窝N＝5)；
(3)HDM致敏，用抗mIL-4Rα处理：致敏和攻毒期间鼻内施用HDM。小鼠用抗mIL-4Rα以50mg/kg剂量腹膜内注射，每周两次，从第7周～12周，在6周期间总共12个剂量(野生型同窝N＝5)；
(4)HDM致敏，用抗人mAb1处理：致敏和攻毒期间鼻内施用HDM。小鼠用mAb1以50mg/kg剂量腹膜内注射，每周两次，从第7周～12周，在6 周期间总共12个剂量(IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠N＝12)；
(5)HDM致敏，用小鼠IL-13Rα2-mFc融合蛋白处理：致敏和攻毒期间鼻内施用HDM。小鼠用抗IL-13Rα2-mFc以25mg/kg剂量腹膜内注射，每周两次，从第7周～12周，在6周期间总共12个剂量(IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠N＝7，野生型同窝N＝5)；
(6)HDM致敏，用同种型对照抗体处理：致敏和攻毒期间鼻内施用HDM。小鼠用同种型对照Ab以50mg/kg剂量腹膜内注射，每周两次，从第7周～ 12周，在6周期间总共12个剂量(IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠N＝7)。
第85天对小鼠进行安乐死，收集血液用于血清免疫球蛋白水平测定法，并用肺(1叶)生成i)支气管肺泡灌洗(BAL)液，ii)用于流式细胞术分析的消化单细胞悬液样品，iii)用于染色和组织学分析的固定福尔马林标本，或iv)用于使用SircolTM胶原测定法来定量每个肺叶的胶原含量的分析的样品。
如下从安乐死的动物获得BAL液：首先暴露气管，通过气管壁上的一个小切口引入一根23G灌洗管。然后向肺中注射无菌PBS(1mL)，再用注射器通过灌洗管回收BAL液。将BAL100μl上样到Cytospin，在500rpm下旋转 5分钟，以提取细胞到显微镜载玻片上。干燥载玻片，进行H&E染色以可视化嗜酸性粒细胞。
IgE的血清水平使用市售ELISA试剂盒进行定量。简言之，在96孔板上将经连续稀释的血清样品与抗IgE捕获抗体一起温育，并通过生物素化的抗小鼠IgE的第二抗体检测IgE。HRP标记的纯化小鼠IgE用作标准物。
HDM特异性的IgG1血清水平通过ELISA定量。简言之，将HDM包被后的板与经连续稀释的血清样品一起温育，然后与抗小鼠IgG1-HRP缀合抗体一起温育。IgG1血清水平的相对水平表示为效价单位(OD450乘以达到 OD450≤0.5所需的稀释因子)。收集的肺叶在液氮中快速冷冻，并储存在-80 ℃直到提取步骤。以提取胶原，将肺在冰冷的NaCl/NaHCO3溶液中匀浆，并在9000xg离心10分钟。此步骤重复三次，将所得的离心沉淀用溶于乙酸的胃蛋白酶4℃消化18小时。离心样品，收集上清液并与Sircol染料试剂混合以染色测定胶原蛋白含量。用酸盐洗净试剂(Acid-Salt Wash Reagent)洗涤样品以除去未结合的Sircol染料，然后与碱试剂(Alkali Reagent)混合。将200μL 的每种样品转移到96孔板，并测定555nm处的OD。使用胶原标准品对每个样品中的胶原含量最终定量。
从安乐死的小鼠收集肺，并保持在冰上的完全DMEM培养基中，直到用含胶原酶和DNA酶的混合物的HBSS缓冲液在37℃消化20分钟。通过加入 0.5M的EDTA淬灭胶原酶活性，将样品离心，并用ACK缓冲液裂解红细胞。将对于每个样品获得的细胞悬浮液分成三个分别的池，并用抗体预混物1(抗 CD11c-APC抗体，抗SiglecF-PE抗体，抗F4/80-FITC抗体，抗CD45-PerCp-Cy5.5抗体)、或预混物2(抗CD11c-APC抗体，抗 CD11b-PerCp-Cy5.5抗体，抗CD103-FITC抗体，抗MHCII-PE抗体)，或预混物3(抗CD19-PE抗体，抗Ly6G-APC抗体，抗CD3-FITC，抗CD11b-PerCp- Cy5.5抗体)在4℃染色25分钟。将经染色的细胞在Cytofix/Cytoperm溶液中 4℃固定30分钟，并储存在PBS中直至通过FACSCanto(BD Biosciences公司) 进行流式细胞分析。
从HDM诱导的嗜酸性粒细胞性哮喘(EA)的慢性模型中，每组从4只小鼠收集左肺叶，使用技术对基因表达进行微阵列分析。将经致敏并用HDM攻毒，然后用同种型对照抗体处理的小鼠的基因表达水平，与经模拟(PBS)致敏和攻毒，且未接受抗体治疗的小鼠中的基因表达水平比较。基因表达的变化阈值设置为>1.5倍。对于鉴定为在经致敏和HDM攻毒的小鼠中差异表达的基因群体，在抗IL-4Rα处理组和与之相对的同种型对照处理组中进行进一步分析。IL-4Rα抗体处理组相对于同种型对照处理组中的基因表达改变的阈值设定为>2倍。
结果
HDM致敏和攻毒导致IgE和HDM特异性IgG1水平的提高。IgE的增加被两种抗IL-4Rα抗体完全阻断，但不被IL-13Rα2-Fc处理阻断(图27)； HDM特异性的IgG1水平不受任何处理的影响(数据未显示)。
HDM致敏和攻毒也引起了小鼠肺中胶原含量的增加。用两种IL-4Rα抗体和IL-13Rα2-Fc蛋白处理的小鼠的肺中的胶原含量降低到在模拟致敏和攻毒的小鼠中观察到的水平(图28)。
此外，mAb1处理阻止了嗜酸性粒细胞、中性粒细胞和炎性树突状细胞的流入肺(图29，图面A和B)。
对从HDM诱导的、经同种型对照抗体处理的IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠的肺组织分离的mRNA进行微阵列分析表明，1468个基因相比模拟致敏和模拟攻毒小鼠有差异表达(826个基因上调，642个基因下调)。用mAb1处理HDM 诱导的IL-4hu/hu IL-4Rαhu/hu小鼠，导致仅有521个基因的表达有变化(相对于模拟致敏/攻毒的小鼠)，有效地封闭了约65％的受HDM致敏/攻毒影响的基因(> 1.5倍的变化，p<0.05)。特别令人感兴趣的是，发现mAb1介导IL-1细胞因子家族的几个成员的基因表达下调，尤其是是IL-1α(2.9倍)、IL-33(2.6倍) 和IL-18结合蛋白(1.5倍)。IL-1β基因表达在HDM诱导、同种型对照处理组中没有增加(相比于模拟致敏小鼠)，但在mAb1处理组中降低(1.5倍)。Th1 炎性细胞因子IL-12β和IFN-γ的基因表达相比于同种型对照处理组也被 mAb1下调。值得注意的是，在mAb1处理组中，与同种型对照处理组相比， 8种编码涉及细胞归巢及转运的趋化因子配体的基因被下调：Ccl11(～9倍的降低)，Ccl8和Cxcl2(两者～5倍的降低)，Cxcl1，Ccl7，Ccl6(全部～3倍的降低)，Ccl2和Ccl9(约2倍的降低)。
结论
该实施例显示，抗IL-4Rα抗体阻断经由I型和II型受体的IL-4信号传导可抑制HDM-攻毒的小鼠的肺中由HDM驱动的炎性和纤维性变化，以及 HDM驱动的基因签名改变。
其它实施方案都在权利要求书中。
序列表
<110> Marius Ardeleanu
Namita Gandhi
Neil Graham
Stephane C. Kirkesseli
Sudeep Kundu
Allen Radin
Ross E. Rocklin
Steven Weinstein
Jennifer Davidson Hamilton
Jeffrey Ming
<120>通过施用IL-4R拮抗剂治疗或预防哮喘的方法
<130> US2012/080-WO-PCT
<140> 待指配
<141> 同时提交
<150> US 61/691,625
US 61/758,097
US 61/761,279
US 61/783,796
US 61/805,797
FR 1356994
<151> 2012-08-21
2013-01-29
2013-02-06
2013-03-14
2013-03-27
2013-07-16
<160> 275
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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<210> 42
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Ile Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Glu Gly Arg Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 43
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggtcattaat aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagtcc ctaagtccct gatccatgct gcatccagtt tgcaaagagg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacaa tataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
His Ala Ala Ser Ser Leu Gln Arg Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 45
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaga agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgt gaaagagggg 300
aggggggggt ttgactactg gggccaggga accctggtca ccgtctcctc a 351
<210> 46
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Glu Gly Arg Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 47
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 47
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggtcattaat aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacaa tataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa ac 322
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 48
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Val Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 49
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 49
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cttgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcg attagtggtt ccggtggtaa cacatacttc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggtccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 50
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 51
ggattcacgt ttagagacta tgcc 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 52
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1 5
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<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 53
attagtggtt ccggtggtaa caca 24
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 54
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
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<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 55
gcgaaagatc gactctctat aacaattcgc ccacgctatt atggtttgga cgtc 54
<210> 56
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 56
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 57
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 57
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggccattaac aatcatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctttgct gtatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 58
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Asn Asn His
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 59
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 59
caggccatta acaatcat 18
<210> 60
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 60
Gln Ala Ile Asn Asn His
1 5
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 61
gctgtatcc 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 62
Ala Val Ser
1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 63
caacagtata atagttaccc gtggacg 27
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 64
Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 65
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 65
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cttgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcg attagtggtt ccggtggtaa cacatacttc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cc 372
<210> 66
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 66
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 67
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 67
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggccattaac aatcatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctttgct gtatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 68
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 68
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Asn Asn His
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 69
<211> 373
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 69
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtt ccggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cct 373
<210> 70
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 70
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 71
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 71
gacatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggccattaac aatcatttag cctggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gtatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataatagtt acccgtggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa ac 322
<210> 72
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ala Ile Asn Asn His
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 73
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 73
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cttgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
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gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggtccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 74
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 74
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 75
ggattcacgt ttagagacta tgcc 24
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 76
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1 5
<210> 77
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 77
attagtggtt ccggtggtaa caca 24
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 78
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 79
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 79
gcgaaagatc gactctctat aacaattcgc ccacgctatt atggtttgga cgtc 54
<210> 80
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 81
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 81
gaaatagtgt tgacgcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agtcagggca gtctccacag ctccttatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggttt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gcccggggac caagctggag atcaaacga 339
<210> 82
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 82
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 83
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 83
cagagcctcc tgtatagtat tggatacaac tat 33
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 84
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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ttgggttct 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 86
Leu Gly Ser
1
<210> 87
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 87
atgcaagctc tacaaactcc gtacact 27
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 88
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 89
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 89
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cttgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcatcg attagtggtt ccggtggtaa cacatacttc 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cc 372
<210> 90
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 90
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Phe Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 91
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 91
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agtcagggca gtctccacag ctccttatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggttt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gcccggggac caagctggag atcaaa 336
<210> 92
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 92
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 93
<211> 373
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 93
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgtttaga gactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtt ccggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cct 373
<210> 94
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 94
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 95
<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 95
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaac 337
<210> 96
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 96
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 97
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 97
caggtgcagc tggtggagtc tgagggactc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caactttaga gactttgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatct attagtggta gtggtagtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaacca cacgctgtat 240
ctgcgaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtgt attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattac ggtctggacg tctggggcca agggtccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 98
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 98
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Glu Gly Leu Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Arg Asp Phe
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 99
ggattcaact ttagagactt tgcc 24
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 100
Gly Phe Asn Phe Arg Asp Phe Ala
1 5
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 101
attagtggta gtggtagtaa taca 24
<210> 102
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 102
Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 103
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 103
gcgaaagatc gactctctat aacaattcgc ccacgctatt acggtctgga cgtc 54
<210> 104
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 104
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 105
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 105
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattattttg cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaagttc ctaagctcct gatctttgct gcatccactt tgcatccagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattcgcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaaa tatgacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 106
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu His Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 107
caggacatta gcaattat 18
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 108
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 109
gctgcatcc 9
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 110
Ala Ala Ser
1
<210> 111
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 111
caaaaatatg acagtgcccc gtacact 27
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 112
Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 113
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 113
gaggtgcagc tggtggagtc tgagggactc ttggaacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caactttaga gactttgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatct attagtggta gtggtagtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaacca cacgctgtat 240
ctgcgaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtgt attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattac ggtctggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cc 372
<210> 114
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Glu Gly Leu Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Arg Asp Phe
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Arg Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 115
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 115
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattattttg cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaagttc ctaagctcct gatctttgct gcatccactt tgcatccagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattcgcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaaa tatgacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 116
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 116
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu His Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 117
<211> 373
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 117
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caactttaga gactttgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtagtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattac ggtctggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cct 373
<210> 118
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 118
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Phe Arg Asp Phe
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 119
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 119
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaaa tatgacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa ac 322
<210> 120
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 120
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 121
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 121
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cttctggatt cacccttaac aactttgtca tgaactgggt ccgccaggtt 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctctttt attagtgcta gtggtggtag tatatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca cttccaagaa cacattatat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgacgac acggccgtct attactgtgc gaaatccccg 300
tataactgga acccctttga ctattggggc cagggaacca cggtcaccgt ctcctca 357
<210> 122
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 122
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Val Met Asn Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ala Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Pro Tyr Asn Trp Asn Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 123
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 123
ggattcaccc ttaacaactt tgtc 24
<210> 124
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 124
Gly Phe Thr Leu Asn Asn Phe Val
1 5
<210> 125
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 125
attagtgcta gtggtggtag tata 24
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 126
Ile Ser Ala Ser Gly Gly Ser Ile
1 5
<210> 127
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 127
gcgaaatccc cgtataactg gaaccccttt gactat 36
<210> 128
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 128
Ala Lys Ser Pro Tyr Asn Trp Asn Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 129
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 129
gacatccagt tgacccagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga acgagccacc 60
ctctcctgca gggccagtct gagtgttagc agcaaattag cctggtacca gcagacacct 120
ggccaggctc ccagactcct catctatagt gcctccaccc gggccactgg tatcccagtc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cggtttatta ctgtcagcag tataatcatt ggcctccgta cacttttggc 300
caggggacca aggtggagat caaacga 327
<210> 130
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 130
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Leu Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Val Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 131
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 131
ctgagtgtta gcagcaaa 18
<210> 132
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 132
Leu Ser Val Ser Ser Lys
1 5
<210> 133
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 133
agtgcctcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 134
Ser Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 135
cagcagtata atcattggcc tccgtacact 30
<210> 136
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 136
Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Pro Tyr Thr
1 5 10
<210> 137
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 137
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgtag cttctggatt cacccttaac aactttgtca tgaactgggt ccgccaggtt 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctctttt attagtgcta gtggtggtag tatatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca cttccaagaa cacattatat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgacgac acggccgtct attactgtgc gaaatccccg 300
tataactgga acccctttga ctattggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 138
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 138
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Val Met Asn Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ala Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Pro Tyr Asn Trp Asn Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 139
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 139
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga acgagccacc 60
ctctcctgca gggccagtct gagtgttagc agcaaattag cctggtacca gcagacacct 120
ggccaggctc ccagactcct catctatagt gcctccaccc gggccactgg tatcccagtc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cggtttatta ctgtcagcag tataatcatt ggcctccgta cacttttggc 300
caggggacca agctggagat caaa 324
<210> 140
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 140
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Leu Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Val Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 141
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 141
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacccttaac aactttgtca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtgcta gtggtggtag tatatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaatccccg 300
tataactgga acccctttga ctattggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 142
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 142
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Val Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ala Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Ser Pro Tyr Asn Trp Asn Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 325
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 143
gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtct gagtgttagc agcaaattag cctggtacca gcagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatagt gcctccacca gggccactgg tatcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataatcatt ggcctccgta cacttttggc 300
caggggacca agctggagat caaac 325
<210> 144
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 144
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Leu Ser Val Ser Ser Lys
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn His Trp Pro Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 145
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 145
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacctttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcatct attagtggtt ccggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggtccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 146
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 147
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 147
ggattcacct ttagagacta tgcc 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 148
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1 5
<210> 149
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 149
attagtggtt ccggtggtaa caca 24
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 150
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 151
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 151
gcgaaagatc gactctctat aacaattcgc ccacgctatt atggtttgga cgtc 54
<210> 152
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 152
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 153
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 153
gacatcgtgt tgacccagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agtcagggca gtctccacag ctccttatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggttt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaacga 339
<210> 154
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 154
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 155
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 155
cagagcctcc tgtatagtat tggatacaac tat 33
<210> 156
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 156
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ile Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
<210> 157
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 157
ttgggttct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 158
Leu Gly Ser
1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 159
atgcaagctc tacaaactcc gtacact 27
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 160
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 161
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 161
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggaacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag gctctggatt cacctttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcatct attagtggtt ccggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cc 372
<210> 162
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 162
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 163
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 163
gacatcgtga tgacccagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agtcagggca gtctccacag ctccttatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttgggttt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaa 336
<210> 164
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 164
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 165
<211> 373
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 165
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga gactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtt ccggtggtaa cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctctataa caattcgccc acgctattat ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cct 373
<210> 166
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 166
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 167
<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 167
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatagtattg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactccg 300
tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaac 337
<210> 168
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 168
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 169
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 169
caggtgcagc tggtggagtc tgggggagtc ttggagcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cctctggatt cacctttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatct attagtggta gtggtggtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca actccaacca cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctccataa caattcgccc acgctattac ggtttggacg tctggggcca agggtccacg 360
gtcaccgtct cctca 375
<210> 170
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 170
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Ser Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 171
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 171
ggattcacct ttagagacta tgcc 24
<210> 172
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 172
Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr Ala
1 5
<210> 173
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 173
attagtggta gtggtggtaa taca 24
<210> 174
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 174
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 175
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 175
gcgaaagatc gactctccat aacaattcgc ccacgctatt acggtttgga cgtc 54
<210> 176
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 176
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
1 5 10 15
Asp Val
<210> 177
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 177
gatattgtga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
attacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattattttg cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaagttc ctaaactcct gatctttgct gcatccactt tgcatccagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagtag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagg tggaaatcaa acga 324
<210> 178
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 178
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu His Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 179
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 179
caggacatta gcaattat 18
<210> 180
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 180
Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 181
gctgcatcc 9
<210> 182
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 182
Ala Ala Ser
1
<210> 183
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 183
caaaagtata acagtgcccc gtacact 27
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 184
Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr
1 5
<210> 185
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 185
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagtc ttggagcagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cctctggatt cacctttaga gactatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatct attagtggta gtggtggtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaggggccg gttcaccatc tccagagaca actccaacca cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctccataa caattcgccc acgctattac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cc 372
<210> 186
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 186
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Val Leu Glu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Asn His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 187
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 187
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
attacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattattttg cctggtatca gcagaagcca 120
gggaaagttc ctaaactcct gatctttgct gcatccactt tgcatccagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccattagtag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa a 321
<210> 188
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 188
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu His Pro Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 189
<211> 373
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 189
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttaga gactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtaa tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcga 300
ctctccataa caattcgccc acgctattac ggtttggacg tctggggcca agggaccacg 360
gtcaccgtct cct 373
<210> 190
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 190
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Leu Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Tyr Gly Leu
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120
<210> 191
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 191
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca ggacattagc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacttatta ctgtcaaaag tataacagtg ccccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa ac 322
<210> 192
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 192
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 193
<211> 355
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 193
gaagtgcacc tggtggaatc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgagg cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccggggaagg gcctggaatg ggtctcaggt cttagtcgga caagtgtcag tataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctttat 240
ttggaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttat attactgtgc aaaatggggg 300
acccgggggt attttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355
<210> 194
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 194
Glu Val His Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 195
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 195
ggattcacct ttgatgatta tgcc 24
<210> 196
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 196
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala
1 5
<210> 197
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 197
cttagtcgga caagtgtcag tata 24
<210> 198
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 198
Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser Ile
1 5
<210> 199
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 199
gcaaaatggg ggacccgggg gtattttgac tac 33
<210> 200
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 200
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 201
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 201
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggatattagt atttggttag cctggtatca gcagagtcca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatcaatgtt gcatcccgtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag tctgcagcct 240
gaagattttg taacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggcgaccaa ac 322
<210> 202
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 202
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Val Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Ala Thr Lys
100 105
<210> 203
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 203
caggatatta gtatttgg 18
<210> 204
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 204
Gln Asp Ile Ser Ile Trp
1 5
<210> 205
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 205
gttgcatcc 9
<210> 206
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 206
Val Ala Ser
1
<210> 207
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 207
caacaggcta acagtttccc gatcacc 27
<210> 208
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 208
Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile Thr
1 5
<210> 209
<211> 355
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 209
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgagg cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccggggaagg gcctggaatg ggtctcaggt cttagtcgga caagtgtcag tataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctttat 240
ttggaaatga acagtctgag acctgaggac acggccttat attactgtgc aaaatggggg 300
acccgggggt attttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355
<210> 210
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 210
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 211
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 211
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggatattagt atttggttag cctggtatca gcagagtcca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatcaatgtt gcatcccgtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacag tctgcagcct 240
gaagattttg taacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa ac 322
<210> 212
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 212
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Asn Val Ala Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 213
<211> 355
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 213
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt cttagtcgga caagtgtcag tataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaatggggg 300
acccgggggt attttgacta ctggggccaa ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355
<210> 214
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 214
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Leu Ser Arg Thr Ser Val Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Trp Gly Thr Arg Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 215
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 215
gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgtc gggcgagtca ggatattagt atttggttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgtt gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gctaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa ac 322
<210> 216
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 216
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ile Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 217
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 217
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttgctacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaggg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgatag cacatcctac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccagc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagtcata 300
gcagctcgtc ctcactggaa cttcgatctc tggggccgtg gcaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 218
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 218
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ser Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ile Ala Ala Arg Pro His Trp Asn Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 219
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 219
ggaatcacct ttagcaccta tgcc 24
<210> 220
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 220
Gly Ile Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
1 5
<210> 221
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 221
attagtggta gtggtgatag caca 24
<210> 222
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 222
Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr
1 5
<210> 223
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 223
gcgaaagtca tagcagctcg tcctcactgg aacttcgatc tc 42
<210> 224
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 224
Ala Lys Val Ile Ala Ala Arg Pro His Trp Asn Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 225
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 225
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agatatttag cctggtatca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg gagtttatta ctgtcagcag cgtagtgact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 226
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 226
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 227
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 227
cagagtgtta gtagatat 18
<210> 228
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 228
Gln Ser Val Ser Arg Tyr
1 5
<210> 229
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 229
gatgcatcc 9
<210> 230
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 230
Asp Ala Ser
1
<210> 231
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 231
cagcagcgta gtgactggcc gctcact 27
<210> 232
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 232
Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 233
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 233
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttgctacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaggg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgatag cacatcctac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccagc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagtcata 300
gcagctcgtc ctcactggaa cttcgatctc tggggccgtg gcaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 234
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 234
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ser Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ile Ala Ala Arg Pro His Trp Asn Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 235
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 235
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agatatttag cctggtatca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg gagtttatta ctgtcagcag cgtagtgact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 236
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 236
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 237
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 237
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggaat cacctttagc acctatgcca tgagctgggt ccgtcaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtgatag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagtcata 300
gcagctcgtc ctcactggaa cttcgatctc tggggccgtg gcaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 238
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 238
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ile Ala Ala Arg Pro His Trp Asn Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 239
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 239
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agatatttag cctggtatca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cgtagtgact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 240
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 240
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 241
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 241
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
acctgtgcag cctctggatt caccttcagt agtaatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atatcatatg atggaaataa tcaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagca cacgctgtat 240
ctggaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtac aaaagccatc 300
tctataagtg gaacttacaa ctggttcgat tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 242
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 242
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ile Ser Ile Ser Gly Thr Tyr Asn Trp Phe Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 243
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 243
ggattcacct tcagtagtaa tggc 24
<210> 244
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 244
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn Gly
1 5
<210> 245
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 245
atatcatatg atggaaataa tcaa 24
<210> 246
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 246
Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Gln
1 5
<210> 247
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 247
acaaaagcca tctctataag tggaacttac aactggttcg attcc 45
<210> 248
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 248
Thr Lys Ala Ile Ser Ile Ser Gly Thr Tyr Asn Trp Phe Asp Ser
1 5 10 15
<210> 249
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 249
gaaattgtat tgacacagtc tccagccatc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcaacag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 250
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 250
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 251
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 251
cagagtgtta gcaggtac 18
<210> 252
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 252
Gln Ser Val Ser Arg Tyr
1 5
<210> 253
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 253
gatgcatcc 9
<210> 254
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 254
Asp Ala Ser
1
<210> 255
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 255
caacagcgta gcaactggcc gctcact 27
<210> 256
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 256
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 257
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 257
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
acctgtgcag cctctggatt caccttcagt agtaatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcaatt atatcatatg atggaaataa tcaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagca cacgctgtat 240
ctggaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtac aaaagccatc 300
tctataagtg gaacttacaa ctggttcgat tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 258
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 258
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Thr Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys His Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ile Ser Ile Ser Gly Thr Tyr Asn Trp Phe Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 259
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 259
gaaattgtat tgacacagtc tccagccatc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcaacag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 260
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 260
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 261
<211> 366
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 261
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agtaatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaaataa tcaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtac aaaagccatc 300
tctataagtg gaacttacaa ctggttcgat tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctca 366
<210> 262
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 262
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Gln Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Lys Ala Ile Ser Ile Ser Gly Thr Tyr Asn Trp Phe Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 263
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 263
gaaattgtat tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60
ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc aggtacttag cctggtacca acagaaacct 120
ggccaggctc ccaggctcct catctatgat gcatccaaca gggccactgg catcccagcc 180
aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctagagcct 240
gaagattttg cagtttatta ctgtcaacag cgtagcaact ggccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa acgg 324
<210> 264
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 264
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 265
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(8)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 265
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 266
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(8)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 266
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 267
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(18)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 267
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa
<210> 268
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(11)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 268
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 269
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(3)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 269
Xaa Xaa Xaa
1
<210> 270
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<220>
<221> VARIANT
<222> (1)...(9)
<223> Xaa = 任何氨基酸
<400> 270
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 271
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 271
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 272
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 272
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 273
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 273
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 274
<211> 207
<212> PRT
<213> 人
<400> 274
Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile
1 5 10 15
Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu
20 25 30
Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr
35 40 45
Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu
50 55 60
Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val
85 90 95
Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp
100 105 110
Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu
115 120 125
Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro
130 135 140
Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg
145 150 155 160
Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val
165 170 175
Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro
180 185 190
Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His
195 200 205
<210> 275
<211> 231
<212> PRT
<213> 食蟹猴
<400> 275
Met Gly Trp Leu Cys Ser Gly Leu Leu Phe Pro Val Ser Cys Leu Val
1 5 10 15
Leu Leu Gln Val Ala Ser Ser Gly Ser Met Lys Val Leu Gln Glu Pro
20 25 30
Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met
35 40 45
Gly Gly Pro Thr Asn Cys Ser Ala Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu
50 55 60
Val Phe Gln Ser Ser Glu Thr His Thr Cys Val Pro Glu Asn Asn Gly
65 70 75 80
Gly Val Gly Cys Val Cys His Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Met
85 90 95
Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys
100 105 110
Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn
115 120 125
Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp Thr Val Leu Leu Thr Trp Ser
130 135 140
Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu Tyr Asn Asp Leu Thr Tyr Ala
145 150 155 160
Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro Ala Tyr Ser Arg Ile His Asn
165 170 175
Val Thr Tyr Leu Lys Pro Thr Leu Arg Ile Pro Ala Ser Thr Leu Lys
180 185 190
Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln His Tyr
195 200 205
Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro Ser Thr Lys Trp Tyr Asn Ser
210 215 220
Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln
225 230
2

Claims (25)

1.包含特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段的药物组合物供制备在患有中度至重度哮喘的受试者、或者用中到高剂量的吸入皮质类固醇(ICS)和第二种控制药控制不足的患者中减少一种或多种哮喘加重的发生率的药物的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160。
2.权利要求1的用途，其中所述的哮喘加重选自下组：
(a)连续两天早间峰值呼气流速(PEF)自基线减少30％更多；
(b)连续两天在24小时期间内6次或更多次额外的沙丁胺醇或左沙丁胺醇缓解喷雾(与基线相比)；和
(c)哮喘恶化，需要：
(i)全身(口服和/或胃肠外)类固醇治疗，或
(ii)增加吸入皮质类固醇至中止前接受的最后一次剂量的至少4倍，
或者
(ii)住院治疗。
3.权利要求1或2的用途，其中所述药物组合物具有下述一项或多项特征：
-其包含75mg至600mg的所述抗体或抗原结合片段；
-其以每周一次的给药频率施用给受试者；
-其通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
4.包含特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段的药物组合物供制备用于在患有重度哮喘的受试者中改善一种或多种哮喘相关参数的药物的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含来自重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160，其中哮喘相关参数的改善选自下组：
(a)1秒用力呼气容积(FEV1)自基线增加至少0.10L；
(b)早间峰值呼气流速(AM PEF)自基线增加至少10.0L/min；
(c)晚间峰值呼气流速(PM PEF)自基线增加至少1.0L/min；
(d)每日沙丁胺醇/左旋沙丁胺醇使用自基线减少1次吸入/日；
(e)五项目哮喘控制问卷(ACQ5)评分自基线减少至少0.5分；
(f)每日测量的夜间苏醒(每夜次数)自基线减少0.2次每夜；和
(g)22项目鼻窦-鼻腔结果测试(SNOT-22)评分自基线减少5分。
5.权利要求4的用途，其中所述药物组合物包含75mg至600mg的所述抗体或抗原结合片段，并且/或者所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
6.权利要求1-5中任一项的用途，其中还包括使用第二治疗剂，所述第二治疗剂在所述抗体之前、之后、或同时对受试者施用，其中，优选地，所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
7.包含特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段的药物组合物供制备药物的用途，所述药物用于在患有中度至重度哮喘的受试者中减少哮喘加重的发生率或改善一种或多种哮喘相关参数的应用，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160，所述应用包括对所述受试者顺序施用单一初始剂量的所述药物组合物，其中在施用该单一初始剂量之后施用一个或多个次级剂量的所述药物组合物。
8.权利要求7的用途，其中所述药物组合物的每个初始剂量和次级剂量各包含75mg至600mg的所述抗体或抗原结合片段，并且/或者所述药物组合物通过全身、皮下、静脉内、或鼻内施用给受试者。
9.权利要求7或8的用途，其中还包括使用第二治疗剂，所述第二治疗剂在所述药物组合物的初始剂量和/或次级剂量之前、之后或同时对受试者施用，其中，优选地，所述第二治疗剂选自下组：TNF抑制剂，IL-1抑制剂，IL-5抑制剂，IL-8抑制剂，IgE抑制剂，白三烯抑制剂，皮质类固醇，甲基黄嘌呤，NSAID，奈多罗米钠，色甘酸钠，长效β2-激动剂，抗真菌剂，以及它们的组合。
10.权利要求7-9中任一项的用途，其中，每个次级剂量在紧前剂量的1至8周后施用，或其中对受试者施用至少8个次级剂量的所述特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段，并且其中每个次级剂量在紧前剂量的1周后施用。
11.包含特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段的药物组合物供制备用于治疗中度至重度哮喘的药物的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ IDNO:156、158和160，所述用途包括：(a)选择表现至少300个细胞每微升的血液嗜酸性粒细胞水平和/或至少3％的痰嗜酸性粒细胞水平的患者，和(b)对该患者施用所述药物组合物。
12.特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段供制备药物的用途，所述药物用于降低或消除中度至重度哮喘患者为治疗一种或多种哮喘加重而对吸入皮质类固醇(ICS)的和/或长效β-激动剂(LABA)的依靠，所述用途包括：
(a)选择部分受或不受背景哮喘疗法控制的具有中度至重度哮喘的患者，所述背景哮喘疗法包括ICS、LABA，或其组合；
(b)在初始治疗期内以限定频率对患者施用限定剂量的所述抗体或其抗原结合片段，同时在初始治疗期内保持患者的背景哮喘疗法；和
(c)在随后的一段治疗期间内逐渐降低或消除施用给患者的ICS和/或LABA的剂量，同时以初始治疗期内使用的限定频率和剂量继续对患者施用所述抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160。
13.权利要求12所述的用途，其中所述ICS是氟替卡松、布地奈德、或莫米松；和/或其中所述LABA是沙美特罗或福莫特罗；和/或其中所述ICS/LABA组合是氟替卡松/沙美特罗，布地奈德/福莫特罗，或者莫米松/福莫特罗。
14.权利要求12或13的用途，其中LABA的剂量在初始治疗期结束时去除；和/或在2至8周中的过程中逐渐降低或消除LABA和/或ICS的剂量。
15.特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段供制备用于治疗中度至重度持续性哮喘的药物的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160，所述治疗包括：(a)选择具有升高水平的选自下组的生物标志物的患者：胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、IgE、嗜酸细胞活化趋化因子-3、骨膜素、癌胚抗原(CEA)、YKL-40、和呼出气一氧化氮分数(FeNO)；和(b)向该患者施用治疗有效量的所述抗体或其抗原结合片段。
16.权利要求1-15中任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(HCVR)/轻链可变区(LCVR)对SEQ ID NO:162和SEQ ID NO:164。
17.权利要求1-15中任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段的施用通过皮下进行。
18.权利要求1-15中任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段的施用使用针头和注射器来进行。
19.权利要求1-15中任一项的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段的施用使用笔型施用装置或利用自动注射器来进行。
20.权利要求1-15中任一项的用途，其中所述药物组合物为附加维持治疗，且其中受试者或患者具有嗜酸性粒细胞性表型。
21.特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段用于制备降低或消除重度哮喘患者为治疗一种或多种哮喘加重而对吸入皮质类固醇(ICS)的和/或长效β-激动剂(LABA)的依靠的药物的用途，包括：
(a)选择部分受或不受背景哮喘疗法控制的重度哮喘的患者，所述背景哮喘疗法包括中到高剂量的ICS、LABA，或其组合；
(b)在初始治疗期内以限定频率对患者施用限定剂量的IL-4R拮抗剂，同时在初始治疗期内保持患者的背景哮喘疗法；和
(c)在随后的一段治疗期间内逐渐降低或消除施用给患者的ICS和/或LABA的剂量，同时以初始治疗期内使用的限定频率和剂量继续对患者施用所述抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160。
22.权利要求21的用途，其中所述ICS为高剂量氟替卡松、布地奈德、或莫米松；和/或其中所述LABA是沙美特罗或福莫特罗；和/或其中所述ICS/LABA组合是氟替卡松/沙美特罗，布地奈德/福莫特罗，或者莫米松/福莫特罗。
23.权利要求21或22的用途，其中LABA的剂量在初始治疗期结束时去除；和/或在2至8周中的过程中逐渐降低或消除LABA和/或ICS的剂量。
24.特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段供制备用于治疗重度哮喘的药物的用途，所述治疗包括：(a)选择具有升高水平的选自下组的生物标志物的患者：胸腺和活化调节的趋化因子(TARC)、IgE、嗜酸细胞活化趋化因子-3、骨膜素、癌胚抗原(CEA)、YKL-40、和呼出气一氧化氮分数(FeNO)；和(b)向该患者施用治疗有效量的所述抗体或其抗原结合片段，
其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160。
25.特异性结合白介素-4受体(IL-4R)的抗体或其抗原结合片段供制备用作在患有重度哮喘的受试者中减少一种或多种哮喘加重的发生率的附加维持治疗的药物的用途，其中所述抗体或其抗原结合片段包含重链互补决定区(HCDR)序列SEQ ID NO:148、150和52，以及轻链互补决定区(LCDR)序列SEQ ID NO:156、158和160。
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