BR112021012647A2 - Anticorpo, polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para preparar o anticorpo e para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença, conjugado de anticorpo, anticorpo multiespecífico, proteína de fusão, composição farmacêutica, kit, usos do anticorpo, método in vivo ou in vitro, célula de hibridoma e anticorpo monoclonal - Google Patents

Anticorpo, polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para preparar o anticorpo e para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença, conjugado de anticorpo, anticorpo multiespecífico, proteína de fusão, composição farmacêutica, kit, usos do anticorpo, método in vivo ou in vitro, célula de hibridoma e anticorpo monoclonal Download PDF

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Abstract

anticorpo, polipeptídeo isolado, polinucleotídeo isolado, vetor, célula hospedeira, métodos para preparar o anticorpo e para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença, conjugado de anticorpo, anticorpo multiespecífico, proteína de fusão, composição farmacêutica, kit, usos do anticorpo, método in vivo ou in vitro, célula de hibridoma e anticorpo monoclonal. a presente invenção refere-se a um anticorpo anti-receptor a da interleucina-4 humana, uma composição farmacêutica ou um kit compreendendo o anticorpo e seu uso.

Description

“ANTICORPO, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, MÉTODOS PARA PREPARAR O ANTICORPO E PARA A PREVENÇÃO E/OU TRATAMENTO E/OU TRATAMENTO ADJUVANTE E/OU DIAGNÓSTICO DE UMA DOENÇA, CONJUGADO DE ANTICORPO, ANTICORPO MULTIESPECÍFICO, PROTEÍNA DE FUSÃO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, KIT, USOS DO ANTICORPO, MÉTODO IN VIVO OU IN VITRO, CÉLULA DE HIBRIDOMA E ANTICORPO MONOCLONAL” CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção se refere ao campo do tratamento de doenças alérgicas e imunologia molecular e, particularmente, a um anticorpo anti- receptor A da interleucina-4 humana, uma composição farmacêutica ou um kit compreendendo o mesmo, e uso do mesmo.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] O receptor de interleucina-4 (IL-4R) é um receptor transmembrana que existe em duas formas distintas: IL-4R tipo I, que consiste em uma subunidade IL-4R α (referida aqui como IL-4RA) com alta afinidade e uma subunidade γc com afinidade moderada, e liga-se a outras funções biológicas da interleucina-4 (IL-4) e medeia proliferação celular induzida por IL-4, a ativação e outras funções biológicas; e IL-4R tipo II, que consiste em uma subunidade IL-4R α (IL-4RA) com alta afinidade e uma subunidade α do receptor de interleucina-13 (IL-13Rα), e é um receptor funcional homólogo para interleucina-13 (IL-13) capaz de se ligar a IL-13 (Wang e Secombes, Cytokine, 2015, 75 (1): 8-13). O IL-4R é expresso em células T, células B, células tronco hematopoiéticas e células endoteliais, células epiteliais, músculos, fibroblastos, hepatócitos e tecido cerebral. IL-4RA, juntamente com a subunidade γc ou subunidade IL-13R α, ativa várias proteínas tirosina quinases não receptoras no citoplasma após IL-4 se ligar ao seu receptor, iniciando ainda mais as vias de transdução de sinal a jusante
(Nelms et al., Annu. Rev.. Immunol., 1999, 17: 701-738; LaPorte et al., Cell, 2008, 132 (2): 259-272).
[003] IL-4RA pode se ligar a IL-4 e IL-13 com alta afinidade e é uma subunidade funcional principal do IL-4R tipo I e tipo II anterior. A inibição de IL- 4RA pode bloquear efetivamente funções biológicas relevantes mediadas por IL- 4 e IL-13 (Gessner et al., Immunobiology, 2000, 201: 285).
[004] IL-4 é uma citocina pleiotrópica secretada por células imunes, tais como subconjuntos de células T CD4+, células B, mastócitos e semelhantes; A IL-13 é produzida principalmente por células T ativadas (Th2 em camundongos) em humanos e tem vários efeitos biológicos em monócitos (macrófagos), linfócitos B, células NK, células endoteliais vasculares e semelhantes. Estudos in vitro demonstraram que IL-4 e IL-13 podem exercer funções efetoras correspondentes em uma variedade de células, como células T, células B, eosinófilos, mastócitos, basófilos, células do músculo liso das vias aéreas, células epiteliais do trato respiratório, fibroblastos e células endoteliais, que são as principais células efetoras responsáveis pelo desenvolvimento de doenças alérgicas, como rinite alérgica e alergia alimentar, e asma (May et al., Cytokine, 2015, 75 (1): 89-116); além disso, as células do músculo liso das vias aéreas, células epiteliais do trato respiratório, fibroblastos e células endoteliais, etc. também estão envolvidas no desenvolvimento, progressão e manutenção da doença pulmonar obstrutiva crônica (para revisões, ver Steinke et al., RespRes, 2001, 2 (66): 66-70 e Willis- Karp et al., Immunol Rev, 2004, 202: 175-190); As disfunções das células T e B são os principais mecanismos de doenças autoimunes, e IL-4 está envolvida no desenvolvimento de doenças autoimunes, ativando vias de sinalização a jusante por meio da ligação a IL-4R na superfície das células imunológicas (May et al., Cytokine, 2015, 75 (1): 89-116).
[005] As vias IL-4/IL-13 desempenham um papel importante na patologia da asma (Chatila et al., Trends in Molecular Med., 2004, 10 (10): 493-
499), bem como em outras doenças aqui descritas. A hiper-reatividade das vias aéreas, a hipersecreção de muco e a remodelação das vias aéreas, etc. são as principais características patológicas da asma. Estudos demonstraram que IL-4 e IL-13 estão envolvidas no desenvolvimento e manutenção dos processos patológicos acima (May et al., Cytokine, 2015, 75 (1): 89-116). IL-13 é considerada uma citocina chave para desencadear a hiper-reatividade das vias aéreas (AHR), e IL-4 é uma das principais causas da polarização de células imunes Th2 e produção de IgE (Wynn et al., Annu. Rev. Immunol., 2003, 21: 425-456).
[006] A dermatite atópica, especialmente a dermatite atópica moderada e grave, é uma doença inflamatória crônica da pele, caracterizada principalmente por coceira intensa, alterações eczematosas pronunciadas e pele seca. A dermatite atópica geralmente começa em bebês e continua por toda a vida em alguns pacientes. Pode afetar seriamente a qualidade de vida dos pacientes devido a erupção cutânea eczematosa recorrente crônica, coceira intensa, déficit de sono, restrições alimentares e razões psicossociais. IL-4/IL-13 são considerados um dos principais impulsionadores da inflamação intrínseca persistente da dermatite atópica (Malajian et al., Cytokine, 2015, 73 (2): 311-318).
Estudos clínicos demonstraram que dupilumabe, um anticorpo monoclonal anti- IL-4RA humano, é eficaz no tratamento de dermatite atópica moderada e grave (Beck et al., N. Engl. J. Med., 2014, 371 (2): 130- 139) e foi aprovado pela Food and Drug Administration (FDA) dos EUA para o tratamento de dermatite atópica moderada e grave.
[007] Além disso, pesquisas médicas básicas e clínicas também provaram que as vias de IL-4, IL-13 e IL-4R estão envolvidas no desenvolvimento e progressão de doença pulmonar obstrutiva crônica, rinossinusite e tumores, e a inibição de IL-4RA tem o potencial para o tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica (Jin Lin et al., Journal of Practical Medicine, 2014, 30 (22): 3543- 3544), rinossinusite, fibrose pulmonar e tumores (May et al., Cytokine, 2015, 75
(1): 89-116; Guo Changkuo et al., Chemistry of Life, 2017, 37 (3): 413-418). Em pacientes adultos com rinossinusite crônica sintomática e polipose nasal refratária a glicocorticoide intranasal, o anticorpo monoclonal anti-IL-4RA humano dupilumabe em combinação com glicocorticóides pode melhorar significativamente os sintomas e reduzir os pólipos nasais (Bachert et al., JAMA, 2016, 315 (5): 469-79).
[008] O medicamento com anticorpo anti-IL-4RA humana tem ampla perspectiva de aplicação e pode ser usado para tratar doenças alérgicas, como rinite alérgica, asma, alergia e dermatite atópica, enquanto trata rinossinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose de tecido, tumor, doenças autoimunes e semelhantes. Portanto, o desenvolvimento de medicamentos de anticorpos com alta afinidade para IL-4RA humano para o tratamento de doenças alérgicas com melhor eficácia e efeitos tóxicos e colaterais menos graves apresenta grande significado. No entanto, os medicamentos de anticorpo anti-IL-4RA humana disponíveis mostraram afinidades insuficientes, e ainda há necessidade de um anticorpo anti-IL-4RA humana com alta afinidade.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO
[009] Após estudos intensivos e esforços criativos, os inventores usaram sistemas de expressão de células de mamífero para expressar IL-4RA recombinante como um antígeno para imunizar camundongos e obtiveram células de hibridoma por fusão de células de baço de camundongo e células de mieloma.
Os inventores obtiveram as seguintes linhagens celulares de hibridoma por rastreio de um grande número de amostras.
[0010] O inventor descobriu que: A linhagem celular de hibridoma 13E5 é capaz de secretar e produzir um anticorpo específico (denominado 13E5) que se liga especificamente ao IL- 4RA humano, e o anticorpo pode bloquear a ligação do IL-4RA humano ao IL-4 de forma eficaz.
[0011] Além disso, os inventores prepararam criativamente anticorpos anti-IL-4RA humanos humanizados (denominados como 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L4 e 13E5 H4L2, respectivamente).
[0012] A linhagem celular de hibridoma 18H7 é capaz de secretar e produzir um anticorpo específico (denominado 18H7) que se liga especificamente ao IL-4RA humano, e o anticorpo pode bloquear a ligação de IL-4RA humano a IL-4 de forma eficaz.
[0013] Além disso, os inventores prepararam criativamente anticorpos anti-IL-4RA humanos humanizados (denominados como 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3 e 18H7 H3L2, respectivamente).
[0014] A linhagem celular de hibridoma 20G10 é capaz de secretar e produzir um anticorpo específico (denominado 20G10) que se liga especificamente ao IL-4RA humano, e o anticorpo pode bloquear a ligação de IL- 4RA humano e IL-4 de forma eficaz.
[0015] Além disso, os inventores prepararam criativamente um anticorpo anti-IL-4RA humana humanizado (denominado como 20G10 H3L3).
[0016] Os anticorpos anteriores podem se ligar eficazmente ao IL- 4RA humano, bloquear a ligação de IL-4RA humano ao ligante IL-4 ou IL-13 do mesmo e inibir a ativação da via de sinalização a jusante do IL-4 RA humano. Os anticorpos têm potencial na preparação de um medicamento para prevenir e tratar rinite alérgica, asma, alergia, dermatite atópica, rinossinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose de tecidos e doenças autoimunes.
[0017] A presente invenção é detalhada abaixo.
Um aspecto da presente invenção se refere a um anticorpo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, o anticorpo compreendendo: uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 9, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 10, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 11, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e o anticorpo compreendendo ainda:
uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 12, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 13, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 14, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (preferencialmente 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
ou,
o anticorpo compreendendo:
uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 15, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 16, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 17, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
e o anticorpo compreendendo ainda:
uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 18, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 19, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 20, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (preferencialmente 1, 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
ou,
o anticorpo compreendendo:
uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 130, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 131, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 132, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
e o anticorpo compreendendo ainda:
uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 133, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 134, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 135, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência.
[0018] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende: (1) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em: na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 2, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 2, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 2, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 4,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 4, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 4;
(2) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 6,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 6, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 6, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 8,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 8, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 8;
(3) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 22,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 22, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 24,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 24, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 24;
(4) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 26, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 26, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 26, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 28,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 28, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 28;
(5) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 30,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 30, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 30, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 32,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 32, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 32;
(6) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 34,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 34, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 34, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 36,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 36, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 36;
(7) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 38,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 38, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 38, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 40,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 40, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 40;
(8) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 42,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 42, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 42, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 44,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 44, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 44;
(9) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 46,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 46, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 46, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 48,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 48, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 48;
(10) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 42,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 42, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 42, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 48,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 48, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 48;
(11) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 46, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 46, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 44, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 44;
(12) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 34,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 34, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1,
2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 34, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em: na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 28,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 28, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 28; ou (13) uma região variável de cadeia pesada que compreende ou consiste em: na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 127, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 127, e uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em: na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 129, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência apresentada na SEQ ID NO: 129.
[0019] As sequências de aminoácidos das regiões CDR dos anticorpos em (1) a (13) acima são analisadas por meios técnicos bem conhecidos pelos técnicos no assunto, por exemplo, por uma base de dados VBASE2.
[0020] Os anticorpos 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L4 e 13E5 H4L2 divulgados neste documento compartilham o mesmo HCDR1-3 e LCDR1-3.
[0021] De acordo com o sistema de numeração IMGT, as sequências de aminoácidos das 3 regiões HCDR da região variável da cadeia pesada são as seguintes: HCDR1: GYTFTEYT SEQ ID NO: 9; HCDR2: INPNNGGT SEQ ID NO: 10; e HCDR3: ARVRRGMDY SEQ ID NO: 11.
[0022] As sequências de aminoácidos das 3 regiões CDR da região variável da cadeia leve são as seguintes: LCDR1: QDVTTA SEQ ID NO: 12; LCDR2: SAS SEQ ID NO: 13; e LCDR3: QQHYSAPWT SEQ ID NO: 14.
[0023] Os anticorpos 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3 e 18H7 H3L2 aqui divulgados compartilham o mesmo HCDR1-3 e LCDR1-3.
[0024] De acordo com o sistema de numeração IMGT, as sequências de aminoácidos das 3 regiões HCDR da região variável da cadeia pesada são as seguintes: HCDR1: GFTFSSSY SEQ ID NO: 15; HCDR2: INSNGGKT SEQ ID NO: 16; e HCDR3: TRQRGNYVGAMDY SEQ ID NO: 17.
[0025] As sequências de aminoácidos das 3 regiões CDR da região variável da cadeia leve são as seguintes: LCDR1: QDVSTA SEQ ID NO: 18; LCDR2: SAS SEQ ID NO: 19; e LCDR3: HQYYGSPPT SEQ ID NO: 20.
[0026] O anticorpo 20G10 H3L3 aqui divulgado tem o seguinte HCDR1-3 e LCDR1-3.
[0027] De acordo com o sistema de numeração IMGT, as sequências de aminoácidos das 3 regiões HCDR da região variável da cadeia pesada são as seguintes: HCDR1: GFSLSTSGMG SEQ ID NO: 130; HCDR2: IWWADDK SEQ ID NO: 131; e HCDR3: ARITRGNSAMDF SEQ ID NO: 132.
[0028] As sequências de aminoácidos das 3 regiões CDR da região variável da cadeia leve são as seguintes: LCDR1: ENVYSY SEQ ID NO: 133; LCDR2: NAK SEQ ID NO: 134; e LCDR3: QHHYGIPWT SEQ ID NO: 135.
[0029] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda regiões estruturais (FRs) na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 49, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 49, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 49; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 50, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 50, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 50; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 51, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 51, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 51; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 52, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 52, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 52.
[0030] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 53, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 53, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO:
53; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 54, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 54, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 54; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 55, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 55, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 55; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 56, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 56, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 56.
[0031] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 57, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 57, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 57; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 58, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou
99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO:
58, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3,
4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 58; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 59, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%,
94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 59, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 59; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 60, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 60, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 60.
[0032] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID
NO: 61, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 61, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 61; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 62, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%,
95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 62, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 62;
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 63, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 63, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 63; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 64, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%,
94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 64, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 64.
[0033] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 65, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 65, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 65; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 66, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 66, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 66; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 67, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 67, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 67; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 68, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 68, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 68.
[0034] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 69, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 69, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 69; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 70, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 70, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 70; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 71, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 71, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 71; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 72, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 72, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 72.
[0035] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 73, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 73, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 73; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 74, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 74, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 74; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 75, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 75, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 75; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 76, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 76, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 76.
[0036] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 77, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 77, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 77; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 78, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 78, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 78; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 79, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 79, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 79; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 80, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 80, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 80.
[0037] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID
NO: 81, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 81, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 81; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 82, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%,
95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 82, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 82;
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 83, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 83, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 83; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 84, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 84, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 84.
[0038] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 85, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 85, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 85; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 86, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 86, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 86; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 87, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 87, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 87; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 88, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 88, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 88.
[0039] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 89, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 89, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 89; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 90, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 90, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 90;
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 91, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 91, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 91; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 92, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 92, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 92.
[0040] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 93, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 93, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 93; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 94, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 94, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 94; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 95, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 95, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 95; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 96, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 96, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 96.
[0041] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 97, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 97, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 97; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 98, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 98, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 98; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 99, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 99, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 99; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 100, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 100, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 100.
[0042] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID
NO: 101, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 101, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 101; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 102, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%,
94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 102, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 102;
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 103, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 103, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 103; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 104, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 104, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 104.
[0043] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 105, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 105, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 105; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 106, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 106, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 106; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 107, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 107, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 107; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 108, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 108, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 108.
[0044] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 109, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 109, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 109; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 110, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 110, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 110; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 111, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 111, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 111; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 112, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 112, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 112.
[0045] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 113, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 113, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 113; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 114, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 114, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 114; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 115, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 115, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 115; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 116, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 116, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 116.
[0046] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 117, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 117, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 117; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 118, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%,
94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 118, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 118;
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na
SEQ ID NO: 119, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 119, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 119; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 120, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 120, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 120.
[0047] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia pesada, de preferência as FRs incluindo FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4, em que a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 136, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 136, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 136; a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 137, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 137, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 137; a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 138, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 138, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 138; e a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 139, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 139, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 139.
[0048] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende ainda FRs na região variável da cadeia leve, de preferência as FRs incluindo FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4, em que a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 140, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 140, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 140; a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 141, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 141, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 141; a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 142, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 142, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 142; e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 143, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 143, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 143.
[0049] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 12, 13 e 14.
[0050] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 18, 19 e
20.
[0051] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 9, 10 e 11.
[0052] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 15, 16 e
17.
[0053] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 130, 131 e 132, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 133, 134 e 135.
[0054] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 133, 134 e 135, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas em SEQ ID NOs: 130, 131 e 132.
[0055] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2, 6, 22, 26, 30, 34 e 38, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos com um ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas
SEQ ID NOs: 4, 8, 24, 28, 32, 36 e 40, uma sequência tendo pelo menos 80%,
85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%,
98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos com um ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com as sequências;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 44, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência; ou um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência.
[0056] Um aspecto da presente invenção se refere a um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 8, 24, 28, 32, 36 e 40, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos com um ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência, respectivamente, selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2, 6, 22, 26, 30, 34 e 38, uma sequência tendo pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%,
95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências,
ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4,
5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 34, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) comparadas com a sequência;
um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência tendo pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos
91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência; ou um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência.
[0057] Em uma forma de realização da presente invenção, o fragmento de ligação ao antígeno é selecionado a partir de Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, fragmento da região determinante de complementaridade (CDR), anticorpo de cadeia simples (por exemplo, scFv), anticorpo bivalente e anticorpo de domínio.
[0058] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo é um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico ou um anticorpo multiespecífico (por exemplo, anticorpo biespecífico).
[0059] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo se liga à proteína IL-4RA humana com um KD menor que cerca de 10- 5 M, por exemplo, menor que cerca de 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou menos. De preferência, o KD é medido por um instrumento de interação molecular Fortebio.
[0060] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo se liga à proteína IL-4RA humano com uma EC50 inferior a cerca de 100 nM, por exemplo, inferior a que cerca de 10 nM, 1 nM, 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM, 0,1 nM ou menos. Especificamente, o EC50 é medido por ELISA indireto.
[0061] Em uma forma de realização da presente invenção, o anticorpo compreende uma região constante, e a região constante é derivada de uma espécie diferente de murina, por exemplo, de um anticorpo humano, preferencialmente de um IgG humano, mais preferencialmente de IgG4.
[0062] Em uma forma de realização da presente invenção, a região constante do anticorpo é humanizada, por exemplo, as regiões constantes da cadeia pesada são regiões C da cadeia Ig gama-4, de preferência a região C da cadeia Ig gama-4 do Nº de acesso do GenBank: P01861.1; as regiões constantes da cadeia leve são regiões C da cadeia Ig kapa, de preferência a região C da cadeia Ig kapa do Nº de acesso do GenBank: P01834.
[0063] Outro aspecto da presente invenção refere-se a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um IL-4RA anti-humano anticorpo, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14.
[0064] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um IL-4RA anti-humano anticorpo, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas
SEQ ID NOs: 18, 19 e 20.
[0065] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL- 4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11.
[0066] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL- 4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17.
[0067] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 130, 131 e 132, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 133, 134 e 135.
[0068] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 133, 134 e 135, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 130, 131 e 132.
[0069] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs:
2, 6, 22, 26, 30, 34 e 38, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência, respectivamente,
selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 8, 24,
28, 32, 36 e 40, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência; ou um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência.
[0070] Um aspecto da presente invenção se refere a um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 8, 24, 28, 32, 36 e 40, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência, respectivamente,
selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2, 6, 22,
26, 30, 34 e 38, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com as sequências;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência;
um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência; ou um polinucleotídeo isolado que codifica um polipeptídeo compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou exclusões) em comparação com a sequência.
[0071] Em particular, a molécula de polinucleotídeo compreende ou consiste nas sequências estabelecidas em SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO:
37, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 45 ou SEQ ID NO: 126, ou uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências.
[0072] Em particular, a molécula de polinucleotídeo compreende ou consiste nas sequências estabelecidas em SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 47 ou SEQ ID NO: 128, ou uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências.
[0073] Ainda outro aspecto da presente invenção se refere a um vetor que compreende qualquer uma das moléculas de polinucleotídeo aqui divulgadas.
[0074] Ainda outro aspecto da presente invenção se refere a uma célula hospedeira compreendendo qualquer uma das moléculas de polinucleotídeo divulgadas neste documento, ou o vetor divulgado neste documento.
[0075] Ainda outro aspecto da presente invenção refere-se a um método para a preparação de qualquer um dos anticorpos ou os fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento, compreendendo a cultura da célula hospedeira divulgada neste documento em uma condição adequada e o isolamento do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno das culturas de células.
[0076] Um aspecto da presente invenção fornece ainda um conjugado de anticorpo compreendendo o anticorpo anti-IL-4RA humana ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e uma porção conjugada acoplada ao mesmo, em que a porção conjugada é uma etiqueta de purificação (por exemplo, uma etiqueta de His), um agente citotóxico ou um marcador detectável.
De preferência, a porção conjugada é um radioisótopo, uma substância luminescente, uma substância colorida, uma enzima ou polietileno glicol.
[0077] Um aspecto da presente invenção fornece ainda um anticorpo multiespecífico, de preferência um anticorpo biespecífico, compreendendo o anticorpo anti-IL-4RA humana ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno contra outro antígeno e/ou outro epítopo antigênico.
[0078] Um aspecto da presente invenção fornece ainda uma proteína de fusão compreendendo qualquer um dos anticorpos anti-IL-4RA humana ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos aqui divulgados.
[0079] Um aspecto da presente invenção fornece ainda um kit compreendendo qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento, ou o conjugado de anticorpo ou o anticorpo multiespecífico divulgado neste documento.
[0080] De preferência, o kit compreende ainda um segundo anticorpo que reconhece especificamente o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo; opcionalmente, o segundo anticorpo compreende ainda um marcador detectável, como um radioisótopo, uma substância luminescente, uma substância colorida, uma enzima ou polietileno glicol.
[0081] Ainda outro aspecto da presente invenção refere-se ao uso de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento, ou o conjugado do anticorpo ou o anticorpo multiespecífico divulgado neste documento na preparação de um kit para detectar a presença ou o nível de IL-4RA humana em uma amostra ou para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença alérgica, um tumor, uma doença autoimune, uma infecção de pele, fibrose de tecido, rinossinusite, pólipos nasais e doença pulmonar obstrutiva crônica, em que preferencialmente a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia e, mais preferencialmente,
dermatite atópica inclui dermatite atópica moderada e grave.
[0082] Ainda outro aspecto da presente invenção se refere a uma composição farmacêutica compreendendo qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento ou o conjugado do anticorpo, o anticorpo multiespecífico ou a proteína de fusão divulgada neste documento e, opcionalmente, um veículo farmaceuticamente aceitável e/ou excipiente. De preferência, a composição farmacêutica é usada sozinha ou em combinação com um ou mais medicamentos. Quando a composição farmacêutica não pode ser diretamente misturada com o medicamento combinado, a composição farmacêutica e o medicamento combinado estão separadamente presentes no kit.
[0083] Ainda outro aspecto da presente invenção refere-se ao uso de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento ou o conjugado do anticorpo, o anticorpo multiespecífico ou a proteína de fusão divulgada neste documento na preparação de: um medicamento para bloquear a ligação de IL-4RA humana a IL- 4 ou IL-13, um medicamento para bloquear a atividade de IL-4RA humana ou regular negativamente o nível de IL-4RA humana, e um medicamento para bloquear uma resposta biológica celular mediada pela ligação de IL-4 humana ou de IL-13 humana a IL-4RA; em que preferencialmente, o ligante de IL-4RA humana é IL-4 humana ou IL-13 humana, mais preferencialmente IL-4 humana.
[0084] Um aspecto da presente invenção se refere ao uso de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos divulgados neste documento ou o conjugado do anticorpo, o anticorpo multiespecífico ou a proteína de fusão divulgada neste documento na preparação de um medicamento para o tratamento de uma doença selecionada a partir de: dermatite atópica incluindo dermatite atópica moderada e grave; pólipos nasais; asma; uma infecção de pele; uma doença autoimune e semelhantes.
[0085] Ainda outro aspecto da presente invenção refere-se a um método in vivo ou in vitro compreendendo a administração de uma célula que compreende o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo aqui divulgado, o conjugado de anticorpo, o anticorpo multiespecífico ou a proteína de fusão divulgada neste documento, ou administração a um sujeito em necessidade de uma quantidade eficaz de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos ou o conjugado de anticorpo, o anticorpo multiespecífico ou a proteína de fusão aqui divulgada. O método é selecionado a partir de: um método para bloquear a ligação de IL-4RA a IL-4 ou IL-13, um método para regular negativamente a atividade ou nível de IL- 4RA, ou um método para bloquear uma resposta biológica celular mediada pela ligação de IL-4 humana ou IL-13 humana a IL-4RA; em que preferencialmente, o ligante de IL-4RA é IL-4 ou IL-13, mais preferencialmente IL-4.
[0086] Em uma forma de realização da presente invenção, o método in vitro não é terapêutico e/ou não é diagnóstico.
[0087] Ainda outro aspecto da presente invenção refere-se ao uso de qualquer um dos anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos ou o conjugado do anticorpo ou o anticorpo multiespecífico divulgado neste documento na preparação de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença alérgica, um tumor, uma infecção de pele, uma doença autoimune, fibrose de tecido,
rinossinusite, pólipos nasais e doença pulmonar obstrutiva crônica. Em particular, a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia.
[0088] Em uma forma de realização da presente invenção, o medicamento está em uma forma de dosagem adequada para administração oral ao trato gastrointestinal (GI). De preferência, a forma de dosagem é selecionada a partir de comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires.
[0089] Em uma forma de realização da presente invenção, o medicamento está em uma forma adequada para administração por injeção subcutânea, injeção intradérmica, injeção intravenosa, injeção intramuscular ou injeção intralesional.
[0090] Ainda outro aspecto da presente invenção se refere a um método para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença alérgica, um tumor, uma doença autoimune, fibrose de tecido, uma infecção de pele, rinossinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, compreendendo a administração de qualquer um do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, o conjugado do anticorpo ou o anticorpo multiespecífico divulgado neste documento a um sujeito em necessidade. Em particular, a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia.
[0091] Na presente invenção, a menos que definido de outra forma, os termos científicos e técnicos usados neste documento têm os significados geralmente compreendidos por aqueles técnicos no assunto. Além disso, as operações laboratoriais de cultura de células, genética molecular, química de ácido nucleico e imunologia utilizadas na presente invenção são as operações de rotina amplamente utilizadas nos campos correspondentes. Entretanto, a fim de compreender melhor a presente invenção, as definições e explicações dos termos relevantes são fornecidas abaixo.
[0092] Tal como aqui utilizado, o termo “fragmento de ligação ao antígeno” significa uma proteína ou porção de uma proteína que se liga especificamente a um determinado antígeno. Por exemplo, uma porção de um anticorpo compreendendo resíduos de aminoácidos que interagem com um antígeno e conferem ao anticorpo a especificidade e afinidade para o antígeno é referida como um “fragmento de ligação ao antígeno”. O fragmento de ligação ao antígeno geralmente compreende uma ou mais regiões determinantes de complementaridade (CDRs). Certos fragmentos de ligação ao antígeno compreendem ainda uma ou mais regiões estruturais (FRs). As CDRs são sequências de aminoácidos que contribuem para a especificidade e afinidade de ligação ao antígeno.
[0093] Tal como aqui utilizado, o termo “anticorpo” refere-se a uma imunoglobulina intacta de qualquer isotipo ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que pode competir com um anticorpo intacto para se ligar especificamente a um antígeno alvo e inclui, por exemplo, anticorpos quiméricos, humanizados, totalmente humanos e biespecíficos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos. Esses “anticorpos” são proteínas de ligação ao antígeno.
Um anticorpo intacto geralmente compreende pelo menos duas cadeias pesadas de comprimento total e duas cadeias leves de comprimento total, mas, em alguns casos, pode compreender menos cadeias, como um anticorpo que ocorre naturalmente em espécies de Camelidae que pode compreender apenas uma cadeia pesada. Um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo pode ser derivado de uma única fonte apenas ou pode ser “quimérico”, isto é, porções diferentes de um anticorpo podem ser derivadas de duas fontes diferentes, conforme descrito abaixo. Os anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos podem ser produzidos em hibridomas por técnicas de DNA recombinante ou por clivagem enzimática ou química de anticorpos intactos. Salvo indicado de outra forma, o termo “anticorpo”, além de anticorpos compreendendo duas cadeias pesadas de comprimento total e duas cadeias leves de comprimento total, também inclui derivados, variantes e fragmentos dos mesmos.
[0094] Tal como aqui utilizado, o termo “fragmento de ligação ao antígeno” (ou simplesmente “fragmento”) de um “anticorpo” ou “cadeia de imunoglobulina” (cadeia pesada ou leve) inclui uma porção de um anticorpo (obtido ou sintetizado) que carece de pelo menos alguns dos resíduos de aminoácidos presentes no comprimento total do anticorpo, mas é capaz de se ligar especificamente ao antígeno. Tais fragmentos são biologicamente ativos, uma vez que se ligam especificamente a um antígeno alvo e podem competir com outros anticorpos ou fragmentos de ligação ao antígeno dos mesmos para a ligação específica a um determinado epítopo. Em um aspecto, tais fragmentos reterão pelo menos uma CDR presente na cadeia leve ou pesada de comprimento total do anticorpo e, em algumas formas de realização, compreenderão uma única cadeia pesada e/ou leve ou uma porção da mesma.
Esses fragmentos biologicamente ativos podem ser produzidos por técnicas de DNA recombinante ou, por exemplo, por clivagem enzimática ou química de anticorpos intactos. Fragmentos de imunoglobulina imunologicamente funcionais incluem, mas não estão limitados a, Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, anticorpos de domínio e anticorpos de cadeia única e podem ser derivados de qualquer fonte de mamífero, incluindo, mas não se limitando a, humanos, camundongos, ratos, espécies de Camelidae e coelhos. É ainda contemplado que uma porção funcional de um anticorpo divulgado neste documento, tal como uma ou mais CDRs, pode ser covalentemente ligado a uma segunda proteína ou uma pequena molécula para gerar um agente terapêutico que tem como alvo um alvo específico no corpo, tendo assim propriedades terapêuticas bifuncionais ou tendo uma meia-vida sérica estendida, como uma proteína de fusão.
[0095] Tal como aqui utilizado, os termos “cadeia de comprimento total do anticorpo”, “anticorpo de comprimento total”, “anticorpo intacto” e “anticorpo inteiro” são usados indistintamente aqui para se referir a um tal anticorpo tendo uma estrutura substancialmente semelhante a uma estrutura de anticorpo natural ou tendo uma cadeia pesada que compreende uma região Fc conforme definida neste documento.
[0096] O termo “cadeia leve” inclui cadeias leves de comprimento total e seus fragmentos tendo uma sequência de região variável suficiente para conferir a especificidade de ligação. A cadeia leve de comprimento total compreende um domínio de região variável VL e um domínio de região constante CL. O domínio da região variável da cadeia leve está no terminal amino do polipeptídeo. As cadeias leves incluem cadeias kappa (κ) e lambda (λ).
[0097] O termo “cadeia pesada” inclui cadeias pesadas de comprimento total e seus fragmentos com uma sequência de região variável suficiente para conferir a especificidade de ligação. A cadeia pesada de comprimento total compreende um domínio de região variável VH e 3 domínios de região constante CH1, CH2 e CH3. O domínio VH está no terminal amino do polipeptídeo e os domínios CH estão no terminal carboxila, em que CH3 está mais próximo do terminal carboxila do polipeptídeo. A cadeia pesada pode ser de qualquer isotipo, incluindo IgG (incluindo os subtipos IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4), IgA (incluindo os subtipos IgA1 e IgA2), IgM e IgE.
[0098] Conforme usado aqui, o termo fragmento “Fab” consiste em uma cadeia leve, CH1 e a região variável de uma cadeia pesada. A cadeia pesada de uma molécula Fab não pode formar ligações bissulfeto com outra molécula de cadeia pesada.
[0099] Tal como aqui utilizado, o termo região “Fc” compreende dois fragmentos de cadeia pesada compreendendo os domínios CH1 e CH2 de um anticorpo. Os dois fragmentos de cadeia pesada são mantidos juntos por duas ou mais ligações bissulfeto e a interação hidrofóbica dos domínios CH3.
[00100] Tal como aqui utilizado, o termo fragmento “Fab’” compreende porções de uma cadeia leve e uma cadeia pesada, incluindo o domínio VH e o domínio CH1 e a região entre os domínios CH1 e CH2), de modo que as ligações bissulfeto intercadeia podem ser formadas entre as duas cadeias pesadas de dois fragmentos Fab’ para dar uma molécula F(ab’)2.
[00101] Tal como aqui utilizado, o termo fragmento “F(ab’)2” compreende duas cadeias leves e duas cadeias pesadas contendo porções da região constante entre os domínios CH1 e CH2, de modo que as ligações dissulfureto intercadeia são formadas entre as duas cadeias pesadas. Assim, o fragmento F(ab’)2 consiste em dois fragmentos Fab’ mantidos juntos por ligações bissulfeto entre as duas cadeias pesadas.
[00102] Tal como aqui utilizado, o termo região “Fv” compreende as regiões variáveis das cadeias pesada e leve, mas carece das regiões constantes.
[00103] Tal como aqui utilizado, o termo fragmento “Fd” refere-se a um fragmento de anticorpo que consiste nos domínios VH e CH1 (Ward et al., Nature, 341: 544-546 (1989)).
[00104] Conforme usado aqui, o termo fragmento “dAb” consiste em um domínio VH (Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989)).
[00105] Conforme usado aqui, o termo “Fab’-SH” é a designação aqui para Fab’, em que um ou mais resíduos de cisteína do domínio constante carregam um grupo tiol livre.
[00106] Tal como aqui utilizado, o termo fragmento “Fab/c” é um intermediário formado pela digestão com pepsina de uma imunoglobulina, que combina as vantagens das regiões Fab e Fc, ou seja, forte difusibilidade e baixa depuração metabólica in vivo, mantendo alta afinidade (Liu Jianjun, Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology, 1989 (4): 29-29).
[00107] Tal como aqui utilizado, o termo “anticorpo de cadeia única” é uma molécula Fv em que as regiões variáveis da cadeia pesada e leve são conectadas por um ligante flexível para formar uma única cadeia polipeptídica (que forma uma região de ligação ao antígeno) (ver, por exemplo, Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988), e Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 90: 5879-5883 (1988)). Os anticorpos de cadeia única são descritos em detalhes na Publicação de Patente Internacional No. WO 88/01649 e Patentes US Nos. 4,946,778 e 5,260,203, cujas divulgações são aqui incorporadas por referência.
[00108] Tal como aqui utilizado, o termo “anticorpo de domínio” é um fragmento de imunoglobulina imunofuncional que compreende apenas a região variável da cadeia pesada ou da cadeia leve. Em alguns casos, duas ou mais regiões VH são covalentemente ligadas por um ligante de peptídeo para gerar um anticorpo de domínio multivalente (particularmente um anticorpo de domínio bivalente). As duas regiões VH do anticorpo de domínio bivalente podem ter como alvo os mesmos antígenos ou antígenos diferentes.
[00109] Tal como aqui utilizado, o termo “proteína de ligação ao antígeno bivalente” ou “anticorpo bivalente” compreende dois locais de ligação ao antígeno. Em alguns casos, os dois locais de ligação têm especificidade contra o mesmo antígeno. O anticorpo bivalente pode ser biespecífico.
[00110] Tal como aqui utilizado, o termo “proteína de ligação ao antígeno multiespecífico” ou “anticorpo multiespecífico” é uma proteína de ligação ao antígeno ou anticorpo que tem como alvo mais de um antígeno ou epítopo.
[00111] Tal como aqui utilizado, o termo proteína ou anticorpo de ligação ao antígeno “biespecífico”, “especificidade dupla” ou “bifuncional” é uma proteína ou anticorpo híbrido de ligação ao antígeno possuindo dois locais de ligação ao antígeno diferentes, respectivamente. Um anticorpo biespecífico é uma proteína de ligação ao antígeno multiespecífico ou anticorpo multiespecífico e pode ser produzido por uma variedade de métodos, incluindo, mas não se limitando a, fusão de hibridomas ou ligação de fragmentos Fab’. Ver, por exemplo, Songsivilai e Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol., 79: 315-321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol., 148: 1547-1553. Os dois locais de ligação de uma proteína ou anticorpo biespecífico de ligação ao antígeno se ligarão a dois epítopos diferentes que estão presentes no mesmo ou em diferentes alvos de proteína.
[00112] Conforme usado na presente invenção, os termos “mAb” e “anticorpo monoclonal” referem-se a um anticorpo ou fragmento de um anticorpo que é derivado de um grupo de anticorpos altamente homólogos, isto é, de um grupo de moléculas de anticorpo idênticas, exceto para mutações naturais que podem ocorrer espontaneamente. O anticorpo monoclonal tem uma alta especificidade para um único epítopo em um antígeno. O anticorpo policlonal, em relação ao anticorpo monoclonal, geralmente compreende pelo menos dois ou mais anticorpos diferentes que geralmente reconhecem epítopos diferentes em um antígeno. Os anticorpos monoclonais podem geralmente ser obtidos usando a técnica de hibridoma relatada pela primeira vez por Kohler et al. (Nature, 256: 495, 1975), mas também podem ser obtidos usando técnica de DNA recombinante (ver, por exemplo, Patente US No. 4,816,567).
[00113] Conforme usado na presente invenção, o termo “anticorpo humanizado” refere-se a um anticorpo ou fragmento de anticorpo obtido quando todas ou uma parte das regiões CDR de uma imunoglobulina humana (anticorpo receptor) são substituídas pelas regiões CDR de um anticorpo não humano (anticorpo doador), em que o anticorpo doador pode ser um anticorpo não humano (por exemplo, camundongo, rato ou coelho) com especificidade, afinidade ou reatividade esperadas. Além disso, alguns resíduos de aminoácidos nas regiões estruturais (FRs) do anticorpo receptor também podem ser substituídos pelos resíduos de aminoácidos de anticorpos não humanos correspondentes ou pelos resíduos de aminoácidos de outros anticorpos para melhorar ou otimizar ainda mais o desempenho do anticorpo.
Para mais detalhes sobre anticorpos humanizados, ver, por exemplo, Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986); Reichmann et al., Nature, 332: 323-329 (1988); Presta, Curr. Op. Struct. Biol., 2: 593-596 (1992); e Clark, Immunol. Today, 21: 397-402 (2000).
[00114] Conforme usado aqui, o termo “epítopo” refere-se a um local em um antígeno ao qual uma imunoglobulina ou anticorpo se liga especificamente. “Epítopo” também é chamado no campo como um “determinante antigênico”. O epítopo ou determinante antigênico geralmente consiste em grupos de moléculas de superfície quimicamente ativos, como aminoácidos, carboidratos ou cadeias laterais de açúcar, e geralmente tem características estruturais tridimensionais específicas e características de carga específicas. Por exemplo, o epítopo geralmente inclui pelo menos 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 aminoácidos consecutivos ou não consecutivos em uma conformação espacial única, que pode ser “linear” ou “conformacional”. Ver, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol.
66, G. E. Morris, Ed. (1996). Em um epítopo linear, todos os locais de interação entre uma proteína e uma molécula de interação (por exemplo, um anticorpo) estão localizados adjacentemente ao longo da sequência de aminoácidos primária da proteína. Em um epítopo conformacional, os locais de interação estão localizados nas seções do resíduo de aminoácido.
[00115] Os termos “polipeptídeo” ou “proteína” são usados indistintamente aqui para se referir a um polímero de resíduos de aminoácidos. O termo também é usado para se referir a um polímero de aminoácidos em que um ou mais resíduos de aminoácidos são análogos ou miméticos de aminoácidos existentes naturalmente e para polímeros de aminoácidos existentes naturalmente. O termo também pode incluir, por exemplo, polímeros de aminoácidos que foram modificados por adição de resíduos de sacarídeo para formar glicoproteínas, ou foram fosforilados. Os polipeptídeos e proteínas podem ser produzidos por células existentes naturalmente e células não recombinantes; ou podem ser produzidos por células geneticamente modificadas ou recombinantes e compreendem uma molécula com a sequência de aminoácidos de uma proteína nativa ou uma molécula com deleções, inserções e/ou substituições em um ou mais aminoácidos da sequência nativa.
[00116] Em particular, os termos “polipeptídeo” e “proteína” incluem anticorpos, tais como anticorpos anti-IL-4RA humana (também referidos como anticorpos IL-4RA), proteínas de ligação a IL-4RA, anticorpos ou sequências com deleções, inserções, e/ou substituições em um ou mais aminoácidos de uma proteína de ligação ao antígeno.
[00117] O termo “fragmento de polipeptídeo” refere-se a um polipeptídeo possuindo deleções do terminal amino, deleções do terminal carboxila e/ou deleções internas em comparação com uma proteína de comprimento total. Esses fragmentos também podem conter aminoácidos modificados em comparação com a proteína de comprimento total. Em certas formas de realização, tais fragmentos têm cerca de 5 a 500 aminoácidos de comprimento. Por exemplo, um fragmento pode ter pelo menos 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 ou 450 aminoácidos de comprimento. Os fragmentos polipeptídicos úteis incluem fragmentos imunologicamente funcionais de anticorpos, incluindo domínios de ligação. No caso de anticorpos IL-4RA humanos, fragmentos úteis incluem, mas não estão limitados a, regiões CDR, domínios variáveis de cadeias pesadas ou leves, porções de cadeias de anticorpos, domínios variáveis compreendendo apenas 2 CDRs ou semelhantes.
[00118] Os termos “IL-4RA humana”, “hIL-4RA”, “receptor A de IL-4 humana”, “subunidade alfa do receptor de IL-4 humana” são usados indistintamente para se referir à subunidade alfa do receptor de interleucina-4 humana. A IL-4RA humana refere-se ao seu peptídeo maduro (Genbank ID: NP_001244336.1). IL-4 e IL-13 são os principais agonistas endógenos de IL- 4RA. A menos que indicado de outra forma ou claro a partir do contexto em que o termo é usado, “IL-4RA” refere-se a IL-4RA humana.
[00119] Um “derivado” de um polipeptídeo é um polipeptídeo (por exemplo, uma proteína ou anticorpo de ligação ao antígeno) que é quimicamente modificado de outras maneiras que não a inserção, deleção ou substituição, por exemplo, por conjugação com outra fração química, por exemplo, um polipeptídeo conjugado a PEG.
[00120] Tal como aqui utilizado, o termo “isolado” refere-se a “obtido por meios artificiais a partir de um estado natural”. Se uma determinada substância ou componente “isolado” aparece na natureza, pode ser que a mudança ocorra em seu ambiente natural, ou que esteja isolado do ambiente natural, ou ambos. Por exemplo, um certo polinucleotídeo ou polipeptídeo não isolado existe naturalmente em um determinado animal vivo, e o mesmo polinucleotídeo ou polipeptídeo com uma pureza elevada isolado de tal estado natural é denominado polinucleotídeo ou polipeptídeo isolado. O termo “isolado” não exclui a existência de substâncias artificiais ou sintéticas ou outras impurezas que não afetam a atividade da substância.
[00121] Conforme usado aqui, o termo “vetor” refere-se a um veículo de ácido nucleico no qual um polinucleotídeo pode ser inserido. Quando um vetor permite a expressão da proteína codificada pelo polinucleotídeo inserido, o vetor é denominado vetor de expressão. Um vetor pode ser introduzido em uma célula hospedeira por transformação, transdução ou transfecção de modo que os elementos da substância genética transportados pelo vetor possam ser expressos na célula hospedeira. Os vetores são bem conhecidos dos técnicos no assunto, incluindo, mas não se limitando a: plasmídeos; fagemídeos; cosmídeos; cromossomos artificiais, como cromossomo artificial de levedura (YAC), cromossomo artificial bacteriano (BAC) ou cromossomo artificial derivado de P1 (PAC); fagos, tais como fagos lambda ou fagos M13; e vírus animais. Os vírus animais que podem ser usados como vetores incluem, mas não estão limitados a retrovírus (incluindo lentivírus), adenovírus, vírus adeno-associados, vírus herpes (como vírus herpes simplex), poxvírus, baculovírus, papilomavírus e papovavírus (como SV40) Um vetor pode conter uma variedade de elementos que controlam a expressão, incluindo, mas não se limitando a sequências promotoras, sequências de iniciação de transcrição, sequências intensificadoras, elementos de seleção e genes repórter.
Além disso, o vetor pode conter ainda um local de início de replicação.
[00122] Tal como aqui utilizado, o termo “célula hospedeira” refere-se a células que podem ser introduzidas com vetores, incluindo, mas não se limitando a, células procarióticas, como E. coli ou Bacillus subtilis, células fúngicas, como células de levedura ou Aspergillus, células de inseto, tais como como células de drosófila S2 ou Sf9, ou células animais, como fibroblastos, células CHO, células COS, células NSO, células HeLa, células BHK, células HEK 293 ou células humanas.
[00123] Tal como aqui utilizado, o termo “ligar-se especificamente” refere-se a uma reação de ligação não aleatória entre duas moléculas, tal como uma reação entre um anticorpo e um antígeno que ele tem como alvo. Em algumas formas de realização, um anticorpo que se liga especificamente a um antígeno (ou um anticorpo que é específico para um antígeno) refere-se a que o anticorpo se liga ao antígeno com uma afinidade (KD) inferior a cerca de 10-5 M, tal como menos do que cerca de 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou menos.
[00124] Tal como aqui utilizado, o termo “KD” refere-se a uma constante de equilíbrio de dissociação para uma interação anticorpo-antígeno específica, que é usada para descrever a afinidade de ligação entre o anticorpo e o antígeno. Entre os vários parâmetros medidos pela cinética de ligação molecular, o valor KD é a constante de equilíbrio de dissociação. Em uma pesquisa de drogas de anticorpos, é o parâmetro que caracteriza a intensidade do efeito de afinidade de um anticorpo de interesse e a molécula de antígeno alvo, e é calculado pela fórmula: KD = kdis/kon. Uma constante de dissociação de equilíbrio menor indica uma ligação anticorpo-antígeno mais intensa e uma afinidade mais alta entre o anticorpo e o antígeno. kon (constante da taxa de associação) é a taxa de formação do complexo antígeno-anticorpo, e um kon menor sugere uma ligação mais rápida de um anticorpo a um antígeno. kdis (constante de taxa de dissociação) é a taxa na qual um anticorpo se dissocia de um complexo antígeno-anticorpo, e uma kdis menor sugere uma taxa mais lenta para a dissociação do anticorpo do antígeno e uma ligação mais firme entre o anticorpo e o antígeno. Geralmente, um anticorpo se liga a um antígeno (por exemplo, proteína L1) com uma constante de equilíbrio de dissociação (KD) inferior a cerca de 10-5 M, tal como inferior a cerca de 10-6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou 10-10 M ou menos, por exemplo, conforme determinado em um instrumento de ressonância de plásmon de superfície (SPR) BIACORE ou um instrumento de interação molecular ForteBio.
[00125] Conforme usado aqui, os termos “anticorpo monoclonal” e “McAb” têm o mesmo significado e podem ser usados indistintamente; os termos “anticorpo policlonal” e “PcAb” têm o mesmo significado e podem ser usados indistintamente; os termos “polipeptídeo” e “proteína” têm o mesmo significado e podem ser usados indistintamente. Além disso, aqui, os aminoácidos são geralmente representados por abreviaturas de uma única letra e de três letras conhecidas na técnica. Por exemplo, a alanina pode ser representada por A ou Ala.
[00126] Tal como aqui utilizado, os termos “hibridoma” e “células de hibridoma” podem ser usados indistintamente, e quando se referem aos termos “hibridoma” e “células de hibridoma”, subclones e células descendentes do hibridoma também estão incluídos.
[00127] Tal como aqui utilizado, os termos “percentagem de identidade de sequência” e “percentagem de homologia de sequência” são usados indistintamente.
[00128] Tal como aqui utilizado, os termos “semelhança”, “semelhança de sequência” e “identidade” referem-se à correlação das sequências de duas ou mais proteínas ou moléculas de polipeptídeo, conforme determinado pelo alinhamento e comparação das sequências. “Porcentagem de identidade” refere-se à porcentagem de resíduos de aminoácidos idênticos nas moléculas comparadas e pode ser calculada com base no tamanho da menor molécula para comparação. Para tais cálculos, as lacunas no alinhamento (se houver) devem ser tratadas por um modelo matemático específico ou programa de computador (ou seja, um “algoritmo”). O termo “identidade substancial”, quando usado para polipeptídeos, refere-se às duas sequências de peptídeos, quando idealmente alinhadas, por exemplo, usando os programas GAP ou BESTFIT, usando pesos de lacuna padrão fornecidos pelos programas, têm pelo menos 70%, 75% ou 80% de identidade de sequência, pelo menos 90% ou 95% de identidade de sequência, ou pelo menos 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência. Em alguns casos, as posições dos resíduos que não são idênticas diferem por substituições de aminoácidos conservativas. “Substituição de aminoácidos conservativas” é aquela em que o resíduo de aminoácido é substituído por outro resíduo de aminoácido possuindo um grupo R de cadeia lateral que possui propriedades químicas semelhantes (por exemplo, carga ou hidrofilicidade). Geralmente, as substituições de aminoácidos conservativas reterão substancialmente as funções e propriedades da proteína. Nos casos em que duas ou mais sequências de aminoácidos diferem umas das outras por substituições conservativas, a identidade de sequência percentual pode ser elevada para corrigir a natureza conservativa da substituição. Os métodos para fazer este ajuste são bem conhecidos dos técnicos no assunto. Ver, por exemplo, Pearson, Methods Mol. Biol., 243: 307-31 (1994). Exemplos de grupos de aminoácidos com cadeias laterais com propriedades químicas semelhantes incluem: 1) cadeia lateral hidroxi alifática: glicina, alanina, valina, leucina e isoleucina, 2) cadeia lateral hidroxi alifática: serina e treonina, 3) cadeia lateral contendo amida: asparagina e glutamina, 4) cadeia lateral aromática: fenilalanina, tirosina e triptofano, 5) cadeia lateral básica: lisina, arginina e histidina, 6) cadeia lateral ácida: ácido aspártico e ácido glutâmico e 7) cadeia lateral contendo enxofre: cisteína e metionina. Os grupos de substituição de aminoácidos conservativas são valina-leucina-isoleucina, fenilalanina-tirosina, lisina-arginina, alanina-valina, ácido glutâmico-ácido aspártico e asparagina- glutamina.
[00129] Opcionalmente, uma substituição conservativa é qualquer mudança com um valor positivo na matriz de probabilidade logarítmica PAM250 divulgada em Gonnet et al., Science, 256: 1443-45 (1992), que é aqui incorporado por referência. Uma substituição “moderadamente conservativa” é qualquer mudança com um valor não negativo na matriz de verossimilhança logarítmica PAM250.
[00130] A identidade de sequência de polipeptídeos é geralmente medida por software de análise de sequência. O software de análise de proteínas combina sequências usando uma medida de similaridade atribuída a diferentes substituições, deleções e outras modificações (incluindo substituições de aminoácidos conservativas). Por exemplo, GCG, incluindo programas como “Gap” e “Bestfit” que (usando parâmetros padrão especificados pelo programa) podem ser usados para determinar a homologia de sequência ou identidade de sequência entre polipeptídeos intimamente relacionados (por exemplo, polipeptídeos homólogos de diferentes espécies biológicas) ou entre uma proteína de tipo selvagem e sua proteína mutante. Ver, por exemplo, GCG Versão 6.1 (University of Wisconsin, WI). As sequências polipeptídicas também podem ser comparadas usando FASTA com parâmetros padrão ou recomendados. Ver GCG Versão 6.10 FASTA (por exemplo, FASTA2 e FASTA3) que fornece alinhamentos para regiões de sobreposição ótima entre as sequências de desafio e consulta e a porcentagem de identidades de sequência (Pearson, Methods Enzymol. 183: 63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol., 132: 185-219 (2000)). Outro algoritmo preferido ao comparar sequências com um banco de dados contendo sequências massivas de diferentes organismos é o programa de computador BLAST, em particular, blastp ou tblastn (usando parâmetros padrão fornecidos pelo programa). Ver, por exemplo, Altschul et al., Mol. Biol., 215: 403-410 (1990); Al tschul et al., Nucleic Acids Res., 25: 3389-402 (1997).
[00131] Em comparação com o estado da técnica, a presente invenção tem as seguintes vantagens: O anticorpo anti-IL-4RA humana divulgado neste documento pode se ligar a IL-4RA humana com alta afinidade e inibir efeitos biológicos celulares relevantes mediados por IL-4 humana e IL-13 humana, tais como proliferação celular, IL-4 e IL-13 induziu a regulação positiva do nível de expressão de CD23 e semelhantes, bloqueando a ligação de IL-4 humana e IL-13 humana a IL-4RA humana. O anticorpo tem vantagens de alta atividade, exclusão de diferença de espécies e semelhantes, e pode ser usado na preparação de medicamentos para bloquear a ligação de IL-4 e IL-13 humanas a IL-4RA humana e na preparação de medicamentos para tratamento ou prevenção de doenças alérgicas como rinite alérgica, asma, alergia e dermatite atópica (incluindo dermatite atópica moderada e grave), sinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose de tecido e doenças autoimunes, tendo assim perspectiva de aplicação e comercialização.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[00132] Figura 1: Atividade de ligação de 13E5 e dupilumabe ao antígeno IL4RA-mFc.
[00133] Figura 2: Atividade de ligação de 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3 e dupilumabe ao antígeno IL4RA-mFc.
[00134] Figura 3: Atividade de ligação de 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 e dupilumabe ao antígeno IL4RA-mFc.
[00135] Figura 4: Atividade de 13E5 e dupilumabe na competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00136] Figura 5: Atividade de 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3 e dupilumabe em competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00137] Figura 6: Atividade de 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 e dupilumabe na competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00138] Figura 7: Atividade de ligação de 18H7 e dupilumabe ao antígeno IL4RA-mFc.
[00139] Figura 8: Atividade de ligação de 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2, 18H7 H3L3 e dupilumabe ao antígeno IL4RA- mFc.
[00140] Figura 9: Ensaio de atividade de 18H7 e dupilumabe na competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00141] Figura 10: Ensaio de atividade de 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 e dupilumabe na competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00142] Figura 11: Ensaio de atividade de 20G10 H3L3, 13E5 H4L4 e dupilumabe na competição com IL4-N-His humana pela ligação ao IL4RA-mFc humano.
[00143] Figura 12: Ensaio da constante de afinidade de 13E5 H4L4 a IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00144] Figura 13: Ensaio da constante de afinidade de 18H7 H1L1 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00145] Figura 14: Ensaio da constante de afinidade de dupilumabe para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00146] Figura 15: Ensaio da constante de afinidade de 13E5 H1L1 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00147] Figura 16: Ensaio da constante de afinidade de 13E5 H2L2 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00148] Figura 17: Ensaio da constante de afinidade de 13E5 H3L3 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00149] Figura 18: Ensaio da constante de afinidade de 13E5
H4L2 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00150] Figura 19: Ensaio da constante de afinidade de 18H7 H2L2 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00151] Figura 20: Ensaio da constante de afinidade de 18H7 H3L2 para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 25 nM, 12,5 nM, 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00152] Figura 21: Ensaio da constante de afinidade de dupilumabe para IL4RA humana. As concentrações de anticorpos para os pares de curvas de cima para baixo foram de 6,25 nM, 3,13 nM, 1,56 nM, 0,78 nM e 0,39 nM, respectivamente.
[00153] Figura 22: 13E5 H1L1, 13E5 H2L2 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-4.
[00154] Figura 23: 13E5 H1L1, 13E5 H2L2 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-13.
[00155] Figura 24: 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-4.
[00156] Figura 25: 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-13.
[00157] Figura 26: 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-4.
[00158] Figura 27: 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 e dupilumabe inibindo a proliferação de células TF-1 induzida por IL-13.
[00159] Figura 28: 18H7 H1L1, 13E5 H4L4 e dupilumabe inibindo a regulação positiva da expressão de CD23 induzida por IL-4 em monócitos.
[00160] Figura 29: 18H7 H1L1, 13E5 H4L4 e dupilumabe inibindo a regulação positiva da expressão de CD23 induzida por IL-13 em monócitos.
[00161] Figura 30: 13E5 H4L4 que inibe o aumento da espessura epidérmica no modelo de inflamação da pele de camundongo B- hIL4Ra.
[00162] Figura 31: Cortes patológicos mostrando espessura epidérmica em camundongos de todos os grupos experimentais (coloração HE, 400×). a. controle (solução salina normal); b. dupilumabe (80 mg/kg); c.
dupilumabe (20 mg/kg); d. hIgG4 (80 mg/kg); e. 13E5 H4L4 (80 mg/kg); f. 13E5 H4L4 (20 mg/kg).
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00163] As formas de realização da presente invenção serão descritas em detalhes abaixo com referência aos exemplos. Os técnicos no assunto entenderão que os exemplos a seguir são usados apenas para ilustrar a presente invenção e não devem ser considerados como limitantes do escopo da presente invenção. Nos casos em que as técnicas ou condições não são especificadas, os exemplos foram realizados de acordo com as técnicas ou condições descritas na literatura da arte (por exemplo, ver Molecular Cloning: A Laboratory Manual, de autoria de J. Sambrook et al., e traduzido por Huang Peitang et al., Terceira edição, Science Press) ou de acordo com o manual do produto. Os reagentes ou instrumentos usados são produtos convencionais disponíveis no mercado, se os seus fabricantes não forem especificados.
[00164] Nos exemplos seguintes da presente invenção, os camundongos BALB/C foram adquiridos do Guangdong Medical Laboratory Animal Center.
[00165] Nos seguintes exemplos da presente invenção, o anticorpo de referência dupilumabe VAB 16F3-1 (doravante referido como dupilumabe) foi produzido por Akeso, Inc., cuja sequência pode ser encontrada no Pedido de Patente No. PCT/US2007/021210 concedido para Regeneron Pharmaceuticals, Inc. A região variável da cadeia pesada do anticorpo VAB 16F3-1 é apresentada na SEQ ID NO: 124, com a região constante sendo uma região C da cadeia Ig gama-1, Nº de Acesso P01857, enquanto a sequência de codificação da região variável da cadeia leve do anticorpo VAB 16F3-1 é apresentada na SEQ ID NO: 125, com a região constante sendo uma região C da cadeia Ig kapa, Nº DE ACESSO P01834).
EXEMPLO 1. PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-IL-4RA HUMANA 20G10, 13E5 E 18H7
1. PREPARAÇÃO DE LINHAGENS CELULARES DE HIBRIDOMA 20G10, 13E5 E 18H7
[00166] O antígeno IL-4RA-mFc para a produção de anticorpo anti-IL-4RA foi uma proteína de fusão de peptídeo maduro IL-4RA humana (Genbank ID: NP_001244336.1) e marcador mFc (SEQ ID NO: 121) sintetizado por Akeso, Inc., e foi usado para imunizar camundongos BALB/C (adquiridos da Guangdong Medical Laboratory Animal Center). As células do baço de camundongos BALB/C imunizados (adquiridos no centro de Guangdong para animais de laboratório de medicina) e células de mieloma de camundongo foram fundidas para formar células de hibridoma com referência a técnicas de fusão de células existentes (por exemplo, Stewart, SJ, “Monoclonal Antibody Production”, em Basic Methods in Antibody Production and Characterization, Eds. G. C. Howard e D. R. Bethell, Boca Raton: CRC Press, 2000). A placa foi revestida com proteína IL 4RA-hFc (IL-4RA é descrita acima, e hFc é um marcador de purificação Fc de IgG humana, especificamente região C da cadeia Ig gama-1, Genbank ID: P01857, posições 114-330) para ELISA indireto. Por triagem, foram obtidas linhagens celulares de hibridoma que secretam anticorpos que se ligam especificamente a IL 4RA-hFc. As linhagens celulares de hibridoma obtidas por triagem de ELISA indireto foram submetidas a ELISA competitivo para selecionar linhagens celulares de hibridoma que secretam anticorpos monoclonais que competem com o ligante IL4-N-his (IL4 NCBI Gene ID: AAH70123.1) pela ligação a IL 4RA-hFc. Duas linhagens celulares de hibridoma que secretam anticorpos anti-IL-4RA humana de forma estável foram obtidas por diluição limitante. As linhagens celulares de hibridoma foram nomeadas como LT018, LT008 e LT009, e os anticorpos monoclonais secretados foram nomeados como 20G10, 13E5 e 18H7.
[00167] A linhagem celular de hibridoma LT018 (IL4RA- 20G10) foi depositada no China Center for Type Culture Collection (CCTCC) em 25 de dezembro de 2019 com um número de acesso CCTCC NO: C202010 e um endereço de preservação da Universidade de Wuhan, Wuhan, China, código postal: 430072.
[00168] A linhagem celular de hibridoma LT008 (IL4RA-13E5) foi depositada no China Center for Type Culture Collection (CCTCC) em 21 de junho de 2018 com um número de acesso CCTCC NO: C2018131 e um endereço de preservação da Universidade de Wuhan, Wuhan, China, código postal: 430072.
[00169] A linhagem celular de hibridoma LT009 (IL4RA- 18H7) foi depositada no China Center for Type Culture Collection (CCTCC) em 21 de junho de 2018 com um número de acesso CCTCC NO: C2018132 e um endereço de preservação da Universidade de Wuhan, Wuhan, China, código postal: 430072.
2. PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS ANTI-IL-4RA HUMANA 20G10, 13E5 E 18H7
[00170] As linhagens celulares LT018, LT008 e LT009, preparadas como descrito acima foram cultivadas em separado com um meio químico definido (meio CD; contendo 1% de estreptomicina) em 5% de CO2, incubadora a 37 °C. Após 7 dias, os sobrenadantes foram coletados e purificados por centrifugação de alta velocidade, filtração a vácuo através de uma membrana de microfiltração e uma coluna HP de proteína A HiTrap para dar os anticorpos 20G10, 13E5 e 18H7.
EXEMPLO 2. ANÁLISE DE SEQUÊNCIA DE ANTICORPO ANTI-IL-4RA HUMANA 13E5
[00171] O mRNA foi extraído da linhagem celular LT008 cultivada no Exemplo 1 de acordo com o método descrito no manual do RNAprep puro Cell/Bacteria Kit (Tiangen, Cat. No. DP430).
[00172] O cDNA foi sintetizado de acordo com o manual do Invitrogen SuperScript® III First-Strand Synthesis System para RT-PCR e amplificado por PCR.
[00173] Os produtos amplificados por PCR foram submetidos diretamente à clonagem de TA de acordo com o manual do kit pEASY-T1 Cloning (Transgen CT101).
[00174] Os produtos clonados com TA foram sequenciados diretamente e os resultados de sequenciamento são os seguintes.
[00175] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 1 com um comprimento de 348 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 2 com um comprimento de 116 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, respectivamente.
[00176] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 3 com um comprimento de 321 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 4 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14,
respectivamente.
EXEMPLO 3. PROJETO E PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANIZADOS ANTI-IL-4RA HUMANA 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4
1. PROJETO DE SEQUÊNCIAS DE CADEIA LEVE E PESADA DE ANTICORPOS ANTI- IL4RA HUMANIZADOS 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4
[00177] Com base na estrutura cristalina tridimensional da proteína IL-4RA humana (Hage T, Reinemer P, Sebald W., Crystals of a 1:1 Complex Between Human Interleukin-4 and the Extracelular Domain of Its Receptor Alpha Chain, Eur. J. Biochem., 1998; 258 (2): 831-6.) e a sequência do anticorpo 13E5 obtida no Exemplo 2, as sequências da região variável dos anticorpos 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 foram dadas por modelagem por computador e projeto de mutação (sequências da região constante do anticorpo do banco de dados NCBI: a região constante da cadeia pesada é a região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; a região constante da cadeia leve é a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso P01834).
[00178] As sequências de região variável projetadas são as seguintes.
(1) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 13E5 H1L1
[00179] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 21 com um comprimento de 348 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 22 com um comprimento de 116 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, respectivamente.
[00180] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 23 com um comprimento de 321 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 24 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, respectivamente.
(2) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 13E5 H2L2
[00181] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 25 com um comprimento de 348 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 26 com um comprimento de 116 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, respectivamente.
[00182] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 27 com um comprimento de 321 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 28 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, respectivamente.
(3) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 13E5 H3L3
[00183] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 29 com um comprimento de 348 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 30 com um comprimento de 116 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, respectivamente.
[00184] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 31 com um comprimento de 321 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 32 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, respectivamente.
(4) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 13E5 H4L4
[00185] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 33 com um comprimento de 348 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 34 com um comprimento de 116 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, respectivamente.
[00186] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 35 com um comprimento de 321 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 36 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, respectivamente.
(5) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 13E5 H4L2
[00187] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 33, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 34.
[00188] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 27, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID
NO: 28.
2. PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANIZADOS 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4
[00189] As regiões constantes da cadeia pesada são a região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; as regiões constantes da cadeia leve são a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso P01834.
[00190] O cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 13E5 H1L1, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 13E5 H2L2, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 13E5 H3L3, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 13E5 H4L2 e o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 13E5 H4L4 foram separadamente clonados em vetor simples pUC57 (fornecido por Genscript Biotech Corporation) para dar pUC57simples-13E5H1, pUC57simples-13E5L1, pUC57simples-13E5H2, pUC57simples-13E5L2, pUC57simples-13E5H3, pUC57simples-13E5L3, pUC57simples-13E5H4 e pUC57simples-13E5L4. Os fragmentos da região variável foram adquiridos por digestão de acordo com as técnicas padrão descritas em Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Segunda Edição), e subclonados nos vetores pcDNA3.1 contendo o fragmento da região constante da cadeia pesada ou leve correspondente (para os vetores pcDNA3.1 contendo as regiões constantes da cadeia pesada e leve, as enzimas de restrição foram HindIII e EcoRI) para dar pcDNA3.1-13E5H1, pcDNA3.1-13E5L1, pcDNA3.1- 13E5H2, pcDNA3.1-13E5L2, pcDNA3.1-13E5H3, pcDNA3.1-13E5L3, pcDNA3.1-13E5H4 e pcDNA3.1-13E5L4. O par de plasmídeo recombinante contendo as cadeias leves e pesadas correspondentes (pcDNA3.1-13E5H1 e pcDNA3.1-13E5L1, pcDNA3.1-13E5H2 e pcDNA3.1-13E5L2, pcDNA3.1- 13E5H3 e pcDNA3.1-13E5L3, pcDNA3. 1-13E5H4 e pcDNA3.1-13E5L4 e pcDNA3.1-13E5H4 e pcDNA3.1-13E5L2) foram co-transfectados em células 293F. As culturas foram coletadas e purificadas. Após as sequências terem sido verificadas, os plasmídeos de expressão livres de endotoxina foram preparados e transitoriamente transfectados em células HEK293 para expressão de anticorpos. As culturas foram coletadas após 7 dias e purificadas em uma coluna de Proteína A para dar os anticorpos humanizados 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4.
EXEMPLO 4. ANÁLISE DE SEQUÊNCIA DE ANTICORPO ANTI-IL-4RA HUMANA 18H7
[00191] O mRNA foi extraído da linhagem celular LT009 cultivada no Exemplo 1 de acordo com o método descrito no manual do RNAprep pure Cell/Bacteria Kit (Tiangen, Cat. No. DP430).
[00192] O cDNA foi sintetizado de acordo com o manual do Invitrogen SuperScript ® III First-Strand Synthesis System para RT-PCR e amplificado por PCR.
[00193] Os produtos amplificados por PCR foram submetidos diretamente à clonagem de TA de acordo com o manual do kit pEASY-T1 Cloning (Transgen CT101).
[00194] Os produtos clonados com TA foram sequenciados diretamente e os resultados de sequenciamento são os seguintes.
[00195] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 5 com um comprimento de 360 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 6 com um comprimento de 120 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, respectivamente.
[00196] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 7 com um comprimento de 333 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 8 com um comprimento de 111 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e
20, respectivamente.
EXEMPLO 5. PROJETO E PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANIZADOS ANTI-IL- 4RA HUMANA 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 E 18H7 H3L3
1. PROJETO DE SEQUÊNCIAS DE CADEIA LEVE E PESADA DE ANTICORPOS ANTI- IL-4RA HUMANIZADOS 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 E 18H7 H3L3
[00197] Com base na estrutura cristalina tridimensional da proteína IL-4RA humana (Nat Hage T, Reinemer P, Sebald W., Crystals of a 1:1 Complex Between Human Interleukin-4 and the Extracelular Domain of Its Receptor Alpha Chain, Eur. J. Biochem., 1998; 258 (2): 831-6.) e a sequência do anticorpo 18H7 obtido no Exemplo 4, as sequências da região variável dos anticorpos 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 e 18H7 H3L3 foram dadas por modelagem por computador e projeto de mutação (sequências da região constante do anticorpo do banco de dados NCBI: a região constante da cadeia pesada é a região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; a região constante da cadeia leve é a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso. P01834).
[00198] As sequências de região variável projetadas são as seguintes.
(1) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 18H7 H1L1
[00199] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 37 com um comprimento de 360 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 38 com um comprimento de 120 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, respectivamente.
[00200] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 39 com um comprimento de 333 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 40 com um comprimento de 111 aminoácidos, enquanto as sequências de aminoácidos da cadeia leve CDR1, CDR2 e CDR3 são apresentadas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, respectivamente.
(2) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 18H7 H2L2
[00201] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 41 com um comprimento de 360 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 42 com um comprimento de 120 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, respectivamente.
[00202] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 43 com um comprimento de 333 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 44 com um comprimento de 111 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, respectivamente.
(3) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 18H7 H3L3
[00203] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 45 com um comprimento de 360 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 46 com um comprimento de 120 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia pesada são apresentadas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, respectivamente.
[00204] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 47 com um comprimento de 333 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 48 com um comprimento de 111 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, respectivamente.
(4) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 18H7 H2L3
[00205] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 41, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO:
42.
[00206] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 47, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO:
48.
(5) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 18H7 H3L2
[00207] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 45, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO:
46.
[00208] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 43, e a sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO:
44.
2. PREPARAÇÃO DE ANTICORPOS HUMANIZADOS 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L3 E 18H7 H3L2
[00209] As regiões constantes da cadeia pesada são a região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; as regiões constantes da cadeia leve são a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso P01834.
[00210] O cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 18H7 H1L1, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 18H7 H2L2, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 18H7 H2L3, o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 18H7 H3L3 o cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 18H7 H3L2 foi clonado separadamente no vetor simples pUC57 (fornecido por Genscript Biotech Corporation) para dar pUC57simples-18H7H1, pUC57simples-18H7L1, pUC57simples-18H7H2, pUC57simples-18H7H7L2, pUC57simples-18H7L3 e pUC57simples-18H7L3. Os fragmentos da região variável foram adquiridos por digestão de acordo com as técnicas padrão descritas em Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Segunda Edição), e subclonados nos vetores pcDNA3.1 contendo o fragmento da região constante da cadeia pesada ou leve correspondente para dar pcDNA3.1- 18H7H1, pcDNA3.1-18H7L1, pcDNA3.1- 18H7H2, pcDNA3.1-18H7L2, pcDNA3.1-18H7H3 e pcDNA3.1-18H7L3. O par de plasmídeo recombinante contendo as cadeias leves e pesadas correspondentes (pcDNA3.1-18H7H1 e pcDNA3.1-18H7L1, pcDNA3.1-18H7H2 e pcDNA3.1-18H7L2, pcDNA3.1-18H7H3 e pcDNA3.1-18H7L3, pcDNA3, pcDNA3. 1-18H7H2 e pcDNA3.1-18H7L3, e pcDNA3.1-18H7H3 e pcDNA3.1-18H7L2) foram co- transfectados em células 293F. As culturas foram coletadas e purificadas. Após as sequências terem sido verificadas, os plasmídeos de expressão livres de endotoxina foram preparados e transitoriamente transfectados em células HEK293 para expressão de anticorpos. As culturas foram coletadas após 7 dias e purificadas em uma coluna de Proteína A (GE) para dar os anticorpos humanizados 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 e 18H7 H3L3.
EXEMPLO 6. PROJETO E PREPARAÇÃO DE ANTICORPO ANTI-IL-4RA HUMANA HUMANIZADO 20G10 H3L3
1. PROJETO DE SEQUÊNCIAS DE CADEIA LEVE E PESADA DE ANTICORPO ANTI-IL-4RA HUMANIZADO 20G10 H3L3
[00211] Com base na estrutura cristalina tridimensional da proteína IL-4RA humana (Nat Hage T, Reinemer P, Sebald W., Crystals of a 1: 1 Complex Between Human Interleukin-4 and the Extracelular Domain of Its Receptor Alpha Chain, Eur. J. Biochem., 1998; 258 (2): 831-6.), as sequências da região variável do anticorpo 20G10 H3L3 foram dadas por modelagem por computador e projeto de mutação (sequências da região constante do anticorpo do banco de dados NCBI: a região constante da cadeia pesada é região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; a região constante da cadeia leve é a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso P01834).
[00212] As sequências de região variável projetadas são as seguintes.
(1) SEQUÊNCIAS DE CADEIA PESADA E LEVE DE ANTICORPO MONOCLONAL HUMANIZADO 20G10 H3L3
[00213] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia pesada é apresentada na SEQ ID NO: 126 com um comprimento de 360 pb.
A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 127 com um comprimento de 120 aminoácidos, enquanto as sequências de CDR1, CDR2 e CDR3 da cadeia pesada são apresentadas na SEQ ID NO: 130, 131 e 132, respectivamente.
[00214] A sequência de ácido nucleico da região variável da cadeia leve é apresentada na SEQ ID NO: 128 com um comprimento de 321 pb. A sequência de aminoácidos codificada é apresentada na SEQ ID NO: 129 com um comprimento de 107 aminoácidos, enquanto as sequências de aminoácidos de CDR1, CDR2 e CDR3 de cadeia leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 133, 134 e 135, respectivamente.
2. PREPARAÇÃO DE ANTICORPO HUMANIZADO 20G10 H3L3
[00215] As regiões constantes da cadeia pesada são a região C da cadeia Ig gama-4, Nº de Acesso P01861.1; as regiões constantes da cadeia leve são a região C da cadeia Ig kapa, Nº de Acesso P01834.
[00216] O cDNA da região variável da cadeia pesada e leve de 20G10 H3L3 foi clonado no vetor simples pUC57 (fornecido por Genscript Biotech Corporation) para dar pUC57simples-20G10H3 e pUC57simples-20G10L3. Os fragmentos da região variável foram adquiridos por digestão de acordo com as técnicas padrão descritas em Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Segunda Edição), e subclonados nos vetores pcDNA3.1 contendo o fragmento da região constante da cadeia pesada ou leve correspondente para dar pcDNA3.1-20G10H3 e pcDNA3.1-20G10L3. O par de plasmídeo recombinante contendo as cadeias leves e pesadas correspondentes (pcDNA3.1-20G10H3 e pcDNA3.1-20G10L3) foi co- transfectado em células 293F. As culturas foram coletadas e purificadas. Após as sequências terem sido verificadas, os plasmídeos de expressão livres de endotoxina foram preparados e transitoriamente transfectados em células HEK293 para expressão de anticorpos. As culturas foram coletadas após 7 dias e purificadas em uma coluna de Proteína A (GE) para dar o anticorpo humanizado 20G10 H3L3.
EXEMPLO 7. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE ANTICORPOS A ANTÍGENOS POR ELISA ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DO ANTICORPO MURINO 13E5 E ANTICORPOS HUMANIZADOS 1.
13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4 PARA ANTÍGENOS IL4RA-HFC HUMANO OU IL-4RA-MFC HUMANO
1.1 A ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DOS ANTICORPOS 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4 AOS ANTÍGENOS IL4RA-HFC HUMANO OU IL4RA-
MFC HUMANO FOI MEDIDA POR ELISA INDIRETO
[00217] Procedimentos: As placas de ELISA foram revestidas com IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humano e foram incubadas, e os anticorpos alvo foram adicionados após o bloqueio. IgG anti-camundongo de cabra (H + L) e HRP (adquirido de Jackson ImmunoResearch Inc., Cat No. 109-035-062), ou IgG anti-humano de cabra e HRP (adquirido de Jackson ImmunoResearch Inc., Cat No.
109-035-088) foram adicionados. As placas foram incubadas e lavadas antes da adição de TMB (Neogen, 308177) para a reação cromogênica. No final da reação, a absorbância a 450 nm foi medida por um leitor de placas. Os dados foram analisados pelo SoftMax Pro 6.2.1.
[00218] As leituras a 450 nm mostram que os anticorpos 13E5,
13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 são todos capazes de se ligar efetivamente aos antígenos IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humana de uma maneira dependente da dose. Por regressão logística de 4 parâmetros de absorbância vs. concentração de anticorpo, como mostrado nas Tabelas 1, 2 e 3, 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 são todos capazes de se ligar a antígenos IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humano efetivamente, e demonstrar atividades de ligação comparáveis àquelas do anticorpo de referência dupilumabe contra o mesmo alvo (Figuras 1, 2 e 3).
TABELA 1. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE 13E5 E DUPILUMABE A ANTÍGENOS IL4RA- H F C HUMANO OU IL4RA-M FC HUMANO Antígeno (1 μg/ml) Diluição de anticorpo IL4RA-hFc IL4RA-mFc (μg/ml) 13E5 Dupilumabe 0,333 2,300 2,313 2,758 2,858 1:3 2,318 2,215 2,748 2,801 1:9 1,923 1,878 2,388 2,500 1:27 1,251 1,207 1,469 1,679 1:81 0,558 0,563 0,599 0,673 1:243 0,244 0,237 0,250 0,281 1:729 0,112 0,113 0,126 0,137 0 0,047 0,053 0,076 0,069 Segundo IgG anti-camundongo de cabra (H IgG anti-humano de cabra (H + L), anticorpo + L), HRP (1:5000) HRP (1:5000) EC50 (nM) 0,084 0,077 TABELA 2. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3 E DUPILUMABE AO ANTÍGENO IL4RA-MFC Diluição de Antígeno:IL4RA-mFc anticorpo (μg/ml) 13E5 H1L1 13E5 H2L2 13E5 H3L3 Dupilumabe 1 2,716 2,797 2,768 2,754 2,642 2,656 2,901 2,921 1:3 2,834 2,825 2,686 2,770 2,679 2,688 2,928 2,923 1:9 2,802 2,798 2,692 2,735 2,658 2,717 2,909 2,921 1:27 2,684 2,613 2,551 2,578 2,492 2,498 2,799 2,801 1:81 2,116 2,122 1,972 2,043 1,918 1,891 2,358 2,358
1:243 1,214 1,297 1,104 1,153 1,069 1,080 1,551 1,544 1:729 0,571 0,566 0,499 0,528 0,469 0,464 0,717 0,705 0 0,056 0,059 0,055 0,056 0,056 0,056 0,056 0,093 Segundo IgG anti-humano de cabra (H + L), HRP (1:5000) anticorpo EC50 (nM) 0,035 0,040 0,042 0,028 TABELA 3. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 E DUPILUMABE AO ANTÍGENO IL4RA-MFC Diluição de Antígeno:IL4RA-mFc anticorpo (μg/ml) 13E5 H4L2 13E5 H4L4 Dupilumabe 0,333 2,733 2,772 2,798 2,879 2,850 2,893 1:3 2,730 2,775 2,766 2,730 2,676 2,673 1:9 2,359 2,406 2,370 2,392 2,482 2,408 1:27 1,492 1,523 1,474 1,608 1,637 1,722 1:81 0,673 0,707 0,709 0,778 0,861 0,816 1:243 0,305 0,293 0,317 0,313 0,335 0,336 1:729 0,145 0,134 0,146 0,147 0,147 0,147 0 0,063 0,063 0,064 0,064 0,067 0,064 Segundo IgG anti-humano de cabra (H + L), HRP (1:5000) anticorpo EC50 (nM) 0,079 0,079 0,066
1.2 A ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DOS ANTICORPOS 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 E 13E5 H4L4 PARA BLOQUEAR A LIGAÇÃO ENTRE IL4-N- HIS E O ANTÍGENO IL4RA-HFC FOI MEDIDA POR ELISA COMPETITIVO
[00219] O EC50 (concentração de efeito médio) de 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 para competir com o ligante IL4-N-His humano pela ligação ao antígeno IL4RA-hFc humano foi testado por ELISA, então para investigar a atividade de 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 para bloquear a ligação do ligante ao antígeno alvo IL4RA-hFc humano.
[00220] As placas de ELISA foram revestidas com IL4RA-hFc humano e bloqueadas antes dos anticorpos serem adicionados. Um volume igual de IL4-N-His humano (sintetizado por Akeso, Inc.) foi adicionado e a mistura foi bem misturada e incubada. Após as placas serem lavadas, foi adicionado anti- His de camundongo, HRP (adquirido na CoWin Biosciences, Cat No. CW0285A) para incubação. As placas foram submetidas a outra lavagem. A reação cromogênica foi iniciada pela adição de TMB (Neogen, 308177) e foi então encerrada. No final da reação, o valor de DO no comprimento de onda de 450 nm foi medido por um leitor de placas e foi analisado e processado pelo SoftMax Pro 6.2.1. Os resultados são mostrados nas Tabelas 4, 5 e 6.
[00221] Por regressão logística de 4 parâmetros de absorbância vs concentração de anticorpo, a EC50 de bloqueio dos anticorpos foi calculada. Conforme mostrado nas Figuras 4, 5 e 6, 13E5, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 são todos capazes de bloquear efetivamente a ligação do ligante IL4-N-His humano ao antígeno IL4RA-hFc humano de uma maneira dependente da dose. Os anticorpos 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H4L2 e 13E5 H4L4 demonstram atividades superiores para competir com IL4-N-His humano pela ligação a IL4RA-hFc humano em comparação com o anticorpo de referência dupilumabe para o mesmo antígeno.
TABELA 4. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 13E5 E DUPILUMABE PARA COMPETIR COM IL4- N-HIS HUMANO PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC HUMANO Antígeno: IL4RA-hFc Diluição de anticorpo (μg/ml) 13E5 Dupilumabe 3 0,053 0,053 0,054 0,052 1:3 0,093 0,100 0,074 0,076 1:9 0,790 0,832 0,837 0,877 1:27 1,080 1.095 1.056 1,123 1:81 1,108 1,164 1.100 1,149 1:243 1,120 1.199 1,126 1,126 1:729 1,125 1,129 1.076 1,158 0 1,136 1,156 1,123 1.093
IL4-N-his Segundo Anti-His de camundongo, HRP (1: 4000) anticorpo EC50 (nM) 3,000 3.033 TABELA 5. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3 E DUPILUMABE PARA COMPETIR COM IL4-N-HIS HUMANA PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC
HUMANA Diluição de Antígeno:IL4RA-hFc anticorpo (μg/ml) 13E5 H1L1 13E5 H2L2 13E5 H3L3 Dupilumabe 3 0,070 0,078 0,230 0,216 0,645 0,620 0,050 0,049 1:3 0,095 0,103 0,282 0,306 0,727 0,708 0,059 0,057 1:9 0,179 0,225 0,443 0,455 1,047 0,955 0,186 0,159 1:27 0,921 1,415 1,048 1,096 1,450 0,845 1,230 1,053 1:81 1,468 2,037 1,562 1,543 1,705 1,686 1,680 1,546 1:243 1,705 2,157 1,776 1,888 1,932 1,846 1,774 1,743 1:729 1,746 2,182 1,792 1,845 2,060 1,933 1,889 1,841 0 1,793 2,243 1,741 1,776 2,056 1,912 1,828 1,806 IL4-N-his Segundo anticorpo Anti-His de camundongo, HRP (1:4000) EC50 (nM) 0,875 0,819 0,636 0,943 TABELA 6. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 13E5 H4L2, 13E5 H4L4 E DUPILUMABE PARA COMPETIR COM IL4-N-HIS HUMANA PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC HUMANO Antígeno:IL4RA-hFc Diluição de anticorpo (μg/ml) 13E5 H4L2 13E5 H4L4 Dupilumabe 3 0,056 0,059 0,054 0,051 0,054 0,057 1:3 0,068 0,065 0,053 0,052 0,052 0,053 1:9 0,202 0,197 0,228 0,274 0,292 0,308 1:27 0,697 0,780 0,752 0,786 0,771 0,871 1:81 0,996 0,991 0,903 1,030 0,971 0,966 1:243 1,082 1,047 1,030 1,135 1,050 1,073 1:729 0,964 0,988 0,950 0,978 0,918 0,964
Antígeno:IL4RA-hFc Diluição de anticorpo (μg/ml) 13E5 H4L2 13E5 H4L4 Dupilumabe 0 0,935 0,960 0,932 0,898 0,896 0,956 IL4-N-his Segundo Anti-His de camundongo, HRP (1:4000) anticorpo EC50 (nM) 1,150 1,328 1,546
2. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DO ANTICORPO MURINO 18H7 E ANTICORPOS HUMANIZADOS 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 E 18H7 H3L3 AOS ANTÍGENOS IL -4RA-HFC
2.1 A ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DOS ANTICORPOS 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 E 18H7 H3L3 AOS ANTÍGENOS IL4RA-HFC HUMANO OU IL4RA-MFC HUMANO FOI MEDIDA POR ELISA INDIRETO
[00222] Procedimentos: As placas de ELISA foram revestidas com IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humano e foram incubadas, e os anticorpos alvo foram adicionados após o bloqueio. IgG anti-camundongo de cabra (H + L) e HRP (adquirido de Jackson ImmunoResearch Inc., Cat No. 109-035-062), ou IgG anti-humano de cabra e HRP (adquirido de Jackson ImmunoResearch Inc., Cat No.
109-035-088) foram adicionados. As placas foram incubadas e lavadas antes da adição de TMB (Neogen, 308177) para a reação cromogênica. No final da reação, a absorbância a 450 nm foi medida por um leitor de placas. Os dados foram analisados pelo SoftMax Pro 6.2.1.
[00223] As leituras a 450 nm mostram que os anticorpos 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 e 18H7 H3L3 são todos capazes de se ligar efetivamente aos antígenos IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humano de uma maneira dependente da dose. Por regressão logística de 4 parâmetros de absorbância vs. concentração de anticorpo, como mostrado nas Tabelas 7 e 8, 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 e 18H7 H3L3 são todos capazes de se ligar a antígenos IL4RA-hFc humano ou IL4RA-mFc humano de forma eficaz e os anticorpos 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 e 18H7 H2L3 demonstram atividades de ligação comparáveis àquelas do anticorpo de referência dupilumabe contra o mesmo alvo (Figuras 7 e 8).
TABELA 7. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE 18H7 E DUPILUMABE A ANTÍGENOS IL4RA- H F C HUMANO OU IL-4 RA-MFC HUMANO Antígeno (1 μg/ml) Diluição de anticorpo IL-4RA-hFc IL-4RA-mFc (μg/ml) 18H7 Dupilumabe 0,333 2,239 2,219 2,758 2,858 1:3 2,065 2,128 2,748 2,801 1:9 1,913 1,867 2,388 2,500 1:27 1,278 1,333 1,469 1,679 1:81 0,640 0,650 0,599 0,673 1:243 0,276 0,302 0,250 0,281 1:729 0,132 0,137 0,126 0,137 0 0,051 0,053 0,076 0,069 Segundo IgG anti-camundongo de cabra (H + IgG anti-humano de cabra (H + L), anticorpo L), HRP (1:5000) HRP (1:5000) EC50 (nM) 0,068 0,077 TABELA 8: ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DE 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2, 18H7 H3L3 E DUPILUMABE AO ANTÍGENO IL4RA-MFC Diluição Antígeno:IL-4RA-mFc de anticorpo 18H7 H1L1 18H7 H2L2 18H7 H2L3 18H7 H3L2 18H7 H3L3 Dupilumabe (μg/ml) 0,333 2,683 2,666 2,580 2,720 2,750 2,848 2,862 2,943 1,729 1,704 2,972 3,042 1:3 2,630 2,616 2,611 2,595 2,726 2,675 2,696 2,673 1,314 1,279 2,989 3,057 1:9 2,226 2,101 2,153 2,174 2,150 2,185 2,197 2,235 0,719 0,744 2,654 2,740 1:27 1,441 1,373 1,401 1,382 1,439 1,437 1,429 1,410 0,291 0,308 1,743 1,815 1:81 0,682 0,575 0,626 0,613 0,677 0,679 0,685 0,708 0,139 0,134 0,847 0,896 1:243 0,282 0,223 0,257 0,253 0,288 0,292 0,295 0,300 0,085 0,086 0,329 0,358 1:729 0,133 0,115 0,127 0,124 0,138 0,143 0,146 0,150 0,078 0,068 0,147 0,165 0 0,059 0,062 0,060 0,062 0,059 0,063 0,062 0,059 0,065 0,063 0,068 0,063
Diluição Antígeno:IL-4RA-mFc de anticorpo 18H7 H1L1 18H7 H2L2 18H7 H2L3 18H7 H3L2 18H7 H3L3 Dupilumabe (μg/ml) Segundo IgG anti-humano de cabra (H + L), HRP (1:5000) anticorpo EC50 0,087 0,087 0,094 0,100 0,446 0,067 (nM)
2.2 ATIVIDADE DOS ANTICORPOS 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3 E 18H7 H3L2 PARA BLOQUEAR A LIGAÇÃO ENTRE IL4-N-HIS E O ANTÍGENO IL4RA-HFC
POR ELISA COMPETITIVO
[00224] O EC50 (concentração de efeito médio) de 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3 e 18H7 H3L2 para competir com o ligante IL4-N-His humano pela ligação ao antígeno IL4RA-hFc humano foi testado por ELISA, a fim de investigar a atividade de 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3 e 18H7 H3L2 para bloquear a ligação do ligante ao antígeno alvo IL4RA- hFc humano.
[00225] As placas de ELISA foram revestidas com IL4RA-hFc humano e bloqueadas antes dos anticorpos serem adicionados. Um volume igual de IL4-N-His humano (sintetizado por Akeso, Inc., um IL4 conectado com 6 marcadores His no N terminal) foi adicionado, e a mistura foi bem misturada e incubada. Após as placas serem lavadas, anti-His de camundongo, HRP (adquirido na CoWin Biosciences, Cat No. CW0285M) foi adicionado para incubação. As placas foram submetidas a outra lavagem. A reação cromogênica foi iniciada pela adição de TMB (Neogen, 308177) e foi então encerrada. No final da reação, o valor de DO no comprimento de onda de 450 nm foi medido por um leitor de placas e foi analisado e processado pelo SoftMax Pro 6.2.1. Os resultados são mostrados nas Tabelas 9 e 10.
[00226] Por regressão logística de 4 parâmetros de absorbância vs concentração de anticorpo, a EC50 de bloqueio dos anticorpos foi calculada. Conforme mostrado nas Figuras 9 e 10, 18H7, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 e 18H7 H3L2 são todos capazes de bloquear efetivamente a ligação do ligante IL4-N-His humano ao antígeno IL4RA-hFc humano de uma maneira dependente da dose. Os anticorpos 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 e 18H7 H3L2 demonstram atividades superiores para competir com IL4-N-His humano para a ligação a IL4RA-hFc humano em comparação com aquela do anticorpo de referência dupilumabe para o mesmo antígeno.
TABELA 9. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 18H7 E DUPILUMABE NA COMPETIÇÃO COM IL4- N-HIS HUMANA PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC HUMANA Diluição de Antígeno:IL4RA-hFc (2 μg/ml) anticorpo (μg/ml) 18H7 Dupilumabe 3 0,046 0,045 0,054 0,052 1:3 0,051 0,053 0,074 0,076 1:9 0,704 0,722 0,837 0,877 1:27 1,047 1,055 1,056 1,123 1:81 1,117 1,144 1,100 1,149 1:243 1,113 1,162 1,126 1,126 1:729 1,097 1,115 1,076 1,158 0 1,157 1,127 1,123 1,093 IL-4-N-his:0,15μg/ml Segundo Anti-His de camundongo, HRP (1:4000) anticorpo EC50 (nM) 2,714 3,033 TABELA 10. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H2L3, 18H7 H3L2 E DUPILUMABE NA COMPETIÇÃO COM IL4-N-HIS HUMANO PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC HUMANO Diluição Antígeno:IL4RA-hFc (2 μg/ml) de anticorpo 18H7 H1L1 18H7 H2L2 18H7 H2L3 18H7 H3L2 Dupilumabe (μg/ml) 3 0,053 0,051 0,057 0,061 0,781 0,806 0,183 0,184 0,086 0,079 1:3 0,051 0,054 0,074 0,083 0,956 1,011 0,280 0,279 0,127 0,126 1:9 0,564 0,735 0,985 1,072 1,439 1,388 1,036 1,100 1,326 1,341 1:27 1,599 1,671 1,835 1,785 1,840 1,775 1,761 1,673 1,887 1,947 1:81 1,839 1,884 1,939 2,009 1,971 1,926 1,947 1,964 2,029 2,059 1:243 1,938 1,993 2,037 2,055 2,086 2,057 1,960 1,946 2,079 2,049 1:729 1,979 1,995 2,101 2,043 2,048 2,002 1,975 1,948 2,039 2,029
Diluição Antígeno:IL4RA-hFc (2 μg/ml) de anticorpo 18H7 H1L1 18H7 H2L2 18H7 H2L3 18H7 H3L2 Dupilumabe (μg/ml) 0 1,919 1,991 2,063 2,024 2,096 1,973 1,928 1,938 2,034 1,975 IL-4-N-his:0,15μg/ml Segundo Anti-His de camundongo, HRP (1:4000) anticorpo EC50 (nM) 1,655 2,297 2,513 2,329 2,800
3. ATIVIDADE DE LIGAÇÃO DOS ANTICORPOS HUMANIZADOS 20G10 H3L3 E 13E5 H4L4 AO ANTÍGENO IL-4RA-HFC
3.1 A ATIVIDADE DOS ANTICORPOS 20G10 H3L3 E 13E5 H4L4 PARA BLOQUEAR A LIGAÇÃO DE IL4-N-HIS AO ANTÍGENO IL4RA-HFC FOI MEDIDA POR ELISA
COMPETITIVO
[00227] O EC50 (concentração de efeito médio) de 20G10 H3L3 e 13E5 H4L4 para competir com o ligante IL4-N-His humano pela ligação ao antígeno IL4RA-hFc humano foi testado por ELISA, de modo a investigar a atividade de 20G10 H3L3 e 13E5 H4L4 para bloquear a ligação do ligante ao antígeno alvo IL4RA-hFc humano.
[00228] As placas de ELISA foram revestidas com IL4RA-hFc humano e bloqueadas antes dos anticorpos serem adicionados. Um volume igual de IL4-N-His humano (sintetizado por Akeso, Inc.) foi adicionado e a mistura foi bem misturada e incubada. Após as placas serem lavadas, anti-His de camundongo, HRP (adquirido na CoWin Biosciences, Cat No. CW0285A) foi adicionado para incubação. As placas foram submetidas a outra lavagem. A reação cromogênica foi iniciada pela adição de TMB (Neogen, 308177) e foi então encerrada. No final da reação, o valor de DO no comprimento de onda de 450 nm foi medido por um leitor de placas e foi analisado e processado pelo SoftMax Pro 6.2.1. Os resultados são mostrados na Tabela 11.
[00229] Por regressão logística de 4 parâmetros de absorbância vs concentração de anticorpo, a EC50 de bloqueio dos anticorpos foi calculada. Como mostrado na Figura 11, 20G10 H3L3 e 13E5 H4L4 são todos capazes de bloquear efetivamente a ligação do ligante IL4-N-His humano ao antígeno IL4RA-hFc humano de uma maneira dependente da dose. Os anticorpos 20G10 H3L3 e 13E5 H4L4 demonstram atividades superiores para competir com IL4-N-His humano pela ligação a IL4RA-hFc humana em comparação com o anticorpo de referência dupilumabe para o mesmo antígeno.
TABELA 11. ENSAIO DE ATIVIDADE DE 20G10 H3L3, 13E5 H4L4 E DUPILUMABE NA COMPETIÇÃO COM IL4-N-HIS HUMANO PELA LIGAÇÃO A IL4RA-HFC HUMANO Diluição de Antígeno:IL4RA-hFc (2 μg/ml) anticorpo (μg/ml) 20G10 H3L3 13E5 H4L4 Dupilumabe 3 0,093 0,082 0,065 0,074 0,059 0,059 1:3 0,099 0,094 0,097 0,071 0,059 0,060 1:9 0,199 0,212 0,123 0,119 0,201 0,197 1:27 0,701 0,693 0,554 0,594 0,853 0,948 1:81 0,948 1,001 0,944 0,976 1,241 1,287 1:243 1,118 1,131 1,137 1,200 1,443 1,400 1:729 1,210 1,180 1,252 1,269 1,534 1,441 0 1,295 1,274 1,328 1,349 1,559 1,482 IL4-N-his:0,15μg/ml Segundo anticorpo Anti-His de camundongo, HRP (1:4000) EC50 (nM) 0,742 0,532 0,865 EXEMPLO 8. ENSAIO DA CONSTANTE DE AFINIDADE DE ANTICORPOS HUMANIZADOS 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2, 13E5 H4L4, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2 E 18H7 H3L2 PARA IL-4RA HUMANA
[00230] Pelo instrumento de interação molecular Fortebio, foi medida a constante de afinidade dos anticorpos humanizados 13E5H 1L1, 13E5H 2L2, 13E5 H3L3, 13E5H 4L2, 13E5H 4L4, 18H7 H1L1, 18H7 H2L2, 18H7 H3L2 e dupilumabe para ligação a IL-4RA humana.
[00231] 5 μg/ml de antígeno foi imobilizado no sensor AMC por 60 s de incubação. O sensor foi então equilibrado em PBST por 300 s e incubado por 120 s nos anticorpos a 0,39 a 25 nM (diluição em série de duas vezes) para ligar os anticorpos ao antígeno imobilizado no sensor. Os anticorpos restantes foram dissociados com o antígeno por uma incubação de 600 segundos em PBST. O sensor foi atualizado em glicina 10 mM, pH 1,7. Os dados foram analisados por ajuste de modelo 1:1 para obter constantes de afinidade.
[00232] As constantes de afinidade dos anticorpos humanizados 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 e dupilumabe (referência) para IL4RA humana são mostradas na Tabela 12 e Figuras 12-14.
TABELA 12. ENSAIO DA CONSTANTE DE AFINIDADE DE 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 E DUPILUMABE PARA IL4RA HUMANA Nome KD (M) kon (1/Ms) Erro kon kdis (1/s) Erro kdis Rmax (nm) 1,60E + 13E5 H4L4 2,63E-11 5,56E + 06 1,46E-04 9,74E-06 0,1370-0,1667 05 1,94E + 18H7 H1L1 3,09E-11 4,97E + 06 1,54E-04 1,33E-05 0,1026-0,1445 05 2,15E + Dupilumabe 1,14E-11 7,08E + 06 8,10E-05 1,13E-05 0,1325-0,2184 05 KD é a constante de afinidade; KD = kdis/kon.
[00233] Os resultados mostram que os anticorpos humanizados 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 e IL4RA humana têm altas capacidades de ligação ao antígeno alvo, que são comparáveis àquelas do anticorpo de referência dupilumabe.
[00234] As constantes de afinidade dos anticorpos humanizados 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2, 18H7 H2L2, 18H7 H3L2 e dupilumabe (referência) para IL-4RA humana são mostradas na Tabela 13 e nas Figuras 15-21.
TABELA 13. ENSAIO DA CONSTANTE DE AFINIDADE DE 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H3L3, 13E5 H4L2, 18H7 H2L2, 18H7 H3L2 E DUPILUMABE PARA IL4RA
HUMANA Anticorpo KD (M) kon (1/Ms) Erro kon kdis (1/s) Erro kdis Rmax (nm) 13E5 H1L1 1,00E-11 5,78E + 06 1,94E + 05 5,79E-05 1,12E-05 0,1347-0,2008 13E5 H2L2 2,83E-11 2,44E + 06 9,77E + 04 6,90E-05 1,44E-05 0,1377-0,1944
13E5 H3L3 1,82E-11 2,79E + 06 1,46E + 05 5,09E-05 1,90E-05 0,0824-0,1332 13E5 H4L2 1,79E-11 1,78E + 07 1,16E + 06 3,18E-04 2,15E-05 0,0521-0,1012 18H7 H2L2 2,39E-11 6,47E + 06 2,63E + 05 1,54E-04 1,60E-05 0,0913-0,117 18H7 H3L2 1,71E-11 1,27E + 06 5,38E + 04 2,16E-05 1,44E-05 0,1731-0,3601 Dupilumabe 1,17E-11 2,35E + 06 1,68E + 05 2,75E-05 1,73E-05 0,2131-0,3131 KD é a constante de afinidade; KD = kdis/kon.
[00235] O resultado mostra que a afinidade do anticorpo humanizado 13E5 H1L1 para o antígeno é superior à do anticorpo de referência dupilumabe; as constantes de taxa de dissociação kdis de 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 18H7 H2L2 e 18H7 H3L2 com IL-4RA humana foram menores do que a do anticorpo de referência dupilumabe, sugerindo ligação mais estável de 13E5 H2L2, 18H7 H2L2 e 18H7 H3L2 para IL-4RA humana. As constantes de taxa de associação de 13E5 H1L1 e 13E5 H4L2 com o antígeno IL-4RA humana são maiores do que as do anticorpo de referência dupilumabe, sugerindo uma ligação mais rápida de 13E5 H1L1 e 13E5 H4L2 ao antígeno IL-4RA humana do que dupilumabe.
EXEMPLO 9. ENSAIO DE BIOATIVIDADE CELULAR
[00236] A bioatividade celular de 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H4L2, 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 e 18H7 H2L2 para inibir a proliferação de células TF- 1 induzida por IL-4/IL-13 humana foi analisada. Os procedimentos são os seguintes.
[00237] Células TF-1 (adquiridas da American Type Culture Collection, Cat. No. CRL-2003) foram cultivadas (meio completo: RPMI 1640 + 10% FBS + 2,5 g/l de glicose + 2 ng/ml de GM-CSF). No dia do ensaio, as células TF-1 foram separadas por centrifugação, ressuspensas num meio sem GM-CSF e contadas. As células foram inoculadas em placas de 96 poços a 20.000 células/poço. O tratamento foi administrado conforme planejado: as concentrações finais dos anticorpos foram 0,05, 0,5 e 5 nM; três concentrações de 0,041, 0,41 e 4,1 nM foram estabelecidas para IL-4, e o grupo de anticorpos empregou 0,41 nM de IL-4; três concentrações de 1,58, 15,8 e 79 nM foram estabelecidas para IL-13,
e o painel de anticorpos empregou 15,8 nM de IL-13. Após a administração, as placas de 96 poços foram incubadas em uma incubadora de dióxido de carbono a 5% a 37 °C por 72 h. Após 72 horas, o reagente CCK8 foi adicionado de acordo com as instruções do kit CCK8 (adquirido em Dojindo Laboratories, Japão, Cat No.
CK04). A mistura foi bem misturada, incubada a 37 °C durante 3-4 horas em uma incubadora de dióxido de carbono a 5% e o valor de DO a 450 nm foi lido. Uma curva de DO vs. número de células foi traçada semeando células TF-1 diluídas em série em placas de 96 poços, adicionando reagente CCK8, incubando as placas em uma incubadora de dióxido de carbono a 5% a 37 °C por 3-4 h e lendo o valor de OD a 450 nm. Os números de células dos grupos foram calculados de acordo com o valor de DO, e GraphPad Prism 5 foi usado para plotagem.
[00238] O isotipo de anticorpo de referência era IgG humano anti-lisozima de ovo de galinha (anti-HEL) derivado da região variável da sequência Fab F10.6.6 em Maturação de Afinidade aumenta a estabilidade e plasticidade do domínio Fv de anticorpos antiproteína (Acierno et al., J Mol Biol., 2007, 374 (1): 130- 46). O isotipo foi sintetizado por Akeso, Inc.
[00239] A Nanjing Genscript Biology foi encarregada da otimização de códons e síntese de genes para os genes de cadeia pesada e leve (sequência completa ou região variável) dos anticorpos IgG humanos. Com referência ao Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Segunda Edição), os genes da cadeia pesada e leve foram subclonados nos vetores de expressão da cadeia pesada e leve do anticorpo (ambos eram vetor pcDNA3.1) para o sistema de expressão de mamífero por técnicas de clonagem molecular padrão, tais como PCR, digestão enzimática, eletroforese em gel de DNA, ligação e transformação, PCR de colônia ou digestão e identificação. Os genes da cadeia pesada e leve do vetor de expressão recombinante foram posteriormente sequenciados e analisados (as sequências das cadeias pesada e leve são apresentadas nas SEQ ID NOs: 122 e 123). Após a sequência ter sido verificada como correta, os plasmídeos de expressão livres de endotoxina foram preparados em grande escala, e os plasmídeos das cadeias pesada e leve foram transitoriamente co-transfectados em células HEK293 para a expressão do anticorpo recombinante. Após 7 dias de cultura, o meio de cultura de células foi coletado e purificado por afinidade usando uma coluna de Proteína A (GE), e a qualidade da amostra de anticorpo resultante foi determinada usando SDS-PAGE e técnicas de análise padrão SEC-HPLC.
[00240] Os resultados são mostrados nas Figuras 22-27. Como pode ser visto nas Figuras 22-27, tanto a IL-4 humana quanto a IL-13 humana são capazes de promover efetivamente a proliferação de células TF-1 de uma maneira dependente da dose; em comparação com os anticorpos de referência de isotipo (IgG humana), dupilumabe, 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H4L2, 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 e 18H7 H2L2 podem inibir especificamente a proliferação de células TF-1 induzida por IL-4 e IL-13 em uma forma dependente de dose.
[00241] Os resultados mostram que 13E5 H1L1, 13E5 H2L2, 13E5 H4L2, 13E5 H4L4, 18H7 H1L1 e 18H7 H2L2 podem inibir especificamente a proliferação de células TF-1 induzidas por IL-4 humana e IL-13 humana; os anticorpos 13E5 H1L1, 13E5 H4L4 e 18H7 H1L1 demonstram atividades comparáveis ao anticorpo de referência dupilumabe.
EXEMPLO 10. 13E5H4L4 E 18H7H1L1 INIBINDO A REGULAÇÃO POSITIVA DA EXPRESSÃO DE CD23 EM PBMCS
[00242] Este exemplo pretendia examinar a bioatividade de 13E5 H4L4 e 18H7 H1L1 para neutralizar a regulação positiva da expressão de CD23 na superfície de PBMC humana induzida por IL-4 humana e IL-13 humana por meio de citometria de fluxo. Os procedimentos são os seguintes.
[00243] O sangue periférico humano normal (com heparina) foi separado por centrifugação em gradiente de densidade Ficoll para dar PBMCs humanos frescos. Após 3 centrifugações e lavagens, as células foram contadas e a densidade ajustada para 2,5 × 106 células/ml. As células foram semeadas em placas de 96 poços de fixação baixa a 200 μl de PBMCs por poço (ou seja, 500.000 células/poço); 25 μl dos anticorpos dupilumabe, 13E5 H4L4 ou 18H7 H1L1 (nas concentrações finais de 30, 3 e 0,3 nM, respectivamente) foram adicionados a cada poço, e a referência controle branco e a referência de isotipo IgG humana (a uma concentração final de 30 nM) foram definidas. As células foram incubadas à temperatura ambiente durante 30 min. Após 30 min, 25 μl de IL-4 humana (concentração final de 100 pM) ou 25 μl de IL-13 humana (concentração final de 300 ng/ml) foram adicionados e o sistema foi incubado por 2,5 dias. Após 2,5 dias, os PBMCs foram separados e transferidos para tubos EP de 1,5 ml, adicionados com 500 μl de PBSA a 1% e centrifugados a 1000 × g por 5 min. O sobrenadante foi descartado e os resíduos foram adicionados com 50 μl de anticorpo CD23-PE (diluído 50 vezes com PBSA a 1%) e incubados em gelo por 40 min. Após a incubação por 40 min, o sistema foi adicionado com 1 ml de PBSA a 1% e centrifugado a 1000 × g por 5 min antes do sobrenadante ser descartado. As células foram ressuspensas em 200 μl de PBSA a 1% e transferidas para um tubo de citometria de fluxo para ensaio.
[00244] Os resultados são mostrados nas Figuras 28 e 29.
[00245] Os resultados mostram que a IL-4 humana e a IL-13 humana podem regular positivamente o nível de expressão de CD23 na superfície de PBMCs humanas, e 13E5 H4L4 e 18H7 H1L1 podem se ligar especificamente a IL-4RA humana, bloqueando eficazmente a regulação positiva do nível de expressão de CD23 por IL-4 e IL-13.
EXEMPLO 11. EFEITO DE 13E5 H4L4 NO MODELO DE CAMUNDONGO B-HIL4RA COM
INFLAMAÇÃO DA PELE INDUZIDA POR HDM
[00246] Os procedimentos são os seguintes: Um modelo de inflamação da pele de camundongo B-hIL4Ra (fundo C57BL/6) foi estabelecido por indução com HDM (alergênico de ácaros humanos, Greer Laborct, lote No. 348717). Os camundongos foram divididos em 6 grupos com 7 camundongos em cada, incluindo grupo de referência de isotipo (anti-HEL), grupo de alta dose de dupilumabe (80 mg/kg; dupilumabe comercialmente disponível da Sanofi and Regeneron Pharmaceuticals) e grupo de dose baixa (20 mg/kg; comercialmente disponível como Dupilumabe da Sanofi and Regeneron Pharmaceuticals), grupo de dose alta 13E5 H4L4 (80 mg/kg) e grupo de dose baixa (20 mg/kg). O tratamento foi administrado por injeção subcutânea em D-1, D2, D5 e D8. No grupo normal, o modelo animal foi estabelecido por injeção intradérmica diária de solução salina normal. No grupo de isotipo de referência, o modelo animal foi estabelecido com injeção intradérmica diária de HDM (37,5 μg × 2/25 μl/dia) por 7 dias e injeção intradérmica diária de HDM (25 μg × 2/25 μl/dia) por 3 dias. Nos grupos de tratamento com anticorpos, o modelo animal foi estabelecido com injeção intradérmica diária de HDM (37,5 μg × 2/25 μl/dia) por 7 dias e injeção intradérmica diária de HDM (25 μg × 2/25 μl/dia) por 3 dias.
[00247] A espessura epidérmica dos camundongos foi medida para investigar o efeito de 13E5 H4L4 na inibição da espessura epidérmica no modelo de inflamação da pele de camundongo B-hIL4Ra.
TABELA 14. DOSAGEM E REGIME Grupo n Modelo animal Tratamento Solução salina normal, 25 Solução salina normal, Grupo normal 7 μl/dia em D0-D9, injeção injeção subcutânea, D-1, intradérmica, diariamente D2, D5 e D8 Anti-HEL, 80 mg/kg, hIgG4 (ou seja, anti-HEL) 7 injeção subcutânea, D-1, D2, D5 e D8 Dupilumabe, 80 mg/kg, Dupilumabe 7 injeção subcutânea, D-1, 80 mg/kg D2, D5 e D8 HDM, 37,5 μg × 2/25 μl/dia, Dupilumabe, 80 mg/kg, D0-D6; Dupilumabe, 20 mg/kg 7 injeção subcutânea, D-1, 25 μg × 2/25 μl/dia, D7-D9, D2, D5 e D8 injeção intradérmica diária 13E5 H4L4, 80 mg/kg, 13E5 H4L4, 80 mg/kg 7 injeção subcutânea, D-1, D2, D5 e D8 13E5 H4L4, 20 mg/kg, 13E5 H4L4, 20 mg/kg 7 injeção subcutânea, D-1, D2, D5 e D8
[00248] Nota: D0 é o primeiro dia de estabelecimento do modelo. A solução salina normal e HDM foram administrados na parte superior direita das costas e parte inferior das costas direita, respectivamente. Os resultados são mostrados na Figura 30. Em comparação com o anticorpo de referência de isotipo hIgG4, 13E5 H4L4 de diferentes doses pode inibir efetivamente o espessamento da epiderme, e a concentração sanguínea de 13E5 H4L4 é maior do que a de dupilumabe a 80 mg/kg, o que corresponde à eficácia.
[00249] As seções patológicas são mostradas na Figura 31: no modelo de inflamação da pele de camundongo B-hIL4Ra estabelecido por 37,5 μg + 25 μg HDM injeção intradérmica, a espessura da epiderme no grupo de modelo é significativamente espessada em comparação com a do grupo normal, o espessamento da epiderme em camundongos pode ser significativamente inibido por dupilumabe 80 mg/kg e 13E5 H4L4 com injeções subcutâneas de 80 mg/kg com boa relação dose-resposta. 13E5 H4L4 80 mg/kg é ligeiramente superior ao dupilumabe 80 mg/kg.
[00250] As formas de realização preferidas da presente invenção foram descritas acima em detalhes, mas a presente invenção não está limitada às formas de realização. Os técnicos no assunto podem fazer várias modificações ou substituições equivalentes sem violar o espírito da presente invenção. Estas modificações ou substituições equivalentes estão incluídas no escopo definido pelas reivindicações do presente pedido.
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS
[00251] Região variável de cadeia pesada 13E5:
GAGGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGACCAGAGCTGGTGAAGC CTGGCGCCTCTGTGAAGATCAGCTGTAAGACCTCCGGCTACACCTTCACA GAGTATACAATCCACTGGGTGAAGCAGAACCACGGCAAGAGCCTGGAGTG GATCGGCGGCATCAATCCTAACAATGGCGGCACCGTGTACAACCAGAACT TCAAGGGCAAGGCCACCCTGACAGTGGACAAGAGCTCCTCTACCGCCTAT ATGGAGCTGAGGTCTCTGACAAGCGAGGACTCCGCCGTGTACTATTGCGC
CAGAGTGCGGAGAGGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCTCCGTGACA GTGAGCTCC (SEQ ID NO: 1); e
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTIHWVKQNHGKS
LEWIGGINPNNGGTVYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYCA RVRRGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID: 2).
[00252] Região variável de cadeia leve 13E5:
GACATCGTGATGACCCAGTCCCACAAGTTTATGTCCACATCT GTGGGCGACAGGGTGTCCATCACCTGTAAGGCCTCTCAGGATGTGACCAC AGCCGTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCCAGTCTCCCAAGCTGCTG ATCTATAGCGCCTCCTACCGGTATACAGGCGTGCCCGACAGATTCACCGG CTCTGGCAGCGGCACAGATTTCACCTTTACAATCAGCTCCGTGCAGGCAG
AGGACCTGGCCGTGTACTATTGCCAGCAGCACTACTCTGCCCCTTGGACC TTCGGCGGAGGAACAAACCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 3); e
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVTTAVAWYQQKPGQS
PKLLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCQQHYSAPW TFGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 4).
[00253] Região variável da cadeia pesada 18H7:
GATGTGAAGCTGGTGGAGTCCGGCGGCGACCTGGTGAACCT GGGCGGAAGCCTGAAGCTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACATTTTCCT CCAGCTACATGAGCTGGGTGAGGCAGACACCCGAGAGGAGACTGGAGCT GGTGGCCGCCATCAACAGCAATGGCGGCAAGACATACTACCCTGATACCG TGAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGGGACAACGCCAAGAACACCCTGTAC CTGCAGATGTCCGGCCTGAAGACAGAGGACACAGCCCTGTACTACTGCAC
CAGGCAGAGGGGCAACTACGTGGGCGCCATGGACTACTGGGGCCAGGG CACAAGCGTGACCGTGAGCTCC (SEQ ID NO: 5); e
DVKLVESGGDLVNLGGSLKLSCAASGFTFSSSYMSWVRQTPER
RLELVAAINSNGGKTYYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSGLKTEDTALYYC TRQRGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 6).
[00254] Região variável de cadeia leve 18H7:
GACATCGTGATGACACAGTCCCACAAGTTTATGTCCACATCC GTGGGCGATAGGGTGTCCATCACATGCAAGGCCAGCCAGGACGTGAGCA CAGCCGTGGTGTGGTACCAGCAGAAGCCTGGCCAGAGCCCCACCCTGCT GATCTACTCCGCCAGCTACAGGTACACAGGCGTGCCTGACAGATTCACAG GCTCCGGCAGCGGCACCGATTTCACCTTTACCATCTCCTCCGTGCAGGCC
GAGGATCTGGCCGTGTACTACTGCCACCAGTACTACGGCAGCCCCCCCAC ATTCGGCGGCGGAACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 7); e
DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKASQDVSTAVVWYQQKPGQS
PTLLIYSASYRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYCHQYYGSPP TFGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 8).
[00255] 13E5 CDR: HCDR1: GYTFTEYT (SEQ ID NO: 9); HCDR2: INPNNGGT (SEQ ID NO: 10); HCDR3: ARVRRGMDY (SEQ ID NO: 11); LCDR1: QDVTTA (SEQ ID NO: 12); LCDR2: SAS (SEQ ID NO: 13); e LCDR3: QQHYSAPWT (SEQ ID NO: 14).
[00256] 18H7 CDR: HCDR1: GFTFSSSY (SEQ ID NO: 15); HCDR2: INSNGGKT (SEQ ID NO: 16); HCDR3: TRQRGNYVGAMDY (SEQ ID NO: 17); LCDR1: QDVSTA (SEQ ID NO: 18); LCDR2: SAS (SEQ ID NO: 19); e LCDR3: HQYYGSPPT (SEQ ID NO: 20).
[00257] Região variável de cadeia pesada 13E5 H1:
CAGGTGCAGCTGCAGCAGTCCGGAGCAGAGGTGGTGAAGC CAGGAGCCAGCGTGAAGATCTCCTGTAAGACCTCTGGCTACACCTTCACA GAGTATACAATCCACTGGGTGAAGCAGGCACACGGACAGAGCCTGGAGT GGATCGGCGGCATCAACCCTAACAATGGCGGCACCGTGTACAATCAGAAG TTTCAGGGCAAGGCCACCCTGACAGTGGACAAGTCTACCAGCACAGCCTA TATGGAGCTGAGGTCCCTGACCTCTGAGGACACAGCCGTGTACTATTGCG
CCCGGGTGCGGAGAGGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCTCCGTGAC AGTGAGCTCC (SEQ ID NO: 21); e
QVQLQQSGAEVVKPGASVKISCKTSGYTFTEYTIHWVKQAHGQ
SLEWIGGINPNNGGTVYNQKFQGKATLTVDKSTSTAYMELRSLTSEDTAVYYC ARVRRGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 22).
[00258] Região variável de cadeia leve 13E5 L1:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTAAGTCTCTGAGCACATCC GTGGGCGACCGGGTGACCATCACATGTAGAGCCAGCCAGGATGTGACCA CAGCAGTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCTGGCAAGTCCCCTAAGCTGCTG ATCTATTCTGCCAGCTACAGGTATACCGGAGTGCCATCTCGGTTCTCCGG CTCTGGCAGCGGCACAGACTTCACCTTTACAATCAGCTCCGTGCAGCCAG
AGGATCTGGCCACCTACTATTGCCAGCAGCACTACAGCGCCCCATGGACC TTTGGCGGAGGAACAAACCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 23); e
DIQMTQSPKSLSTSVGDRVTITCRASQDVTTAVAWYQQKPGKS
PKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDLATYYCQQHYSAPW TFGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 24).
[00259] Região variável de cadeia pesada 13E5 H2:
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGGTGAAGC CAGGAGCCAGCGTGAAGGTGTCCTGTAAGACCTCTGGCTACACCTTCACA GAGTATACAATCCACTGGGTGCGGCAGGCACCAGGACAGTCTCTGGAGTG GATCGGCGGCATCAACCCTAACAATGGCGGCACCAACTACAATCAGAAGT TTCAGGGCAAGGTGACCCTGACAGTGGACAAGTCCACCTCTACAGCCTAT ATGGAGCTGAGCTCCCTGAGGTCTGAGGACACAGCCGTGTACTATTGCGC
CCGCGTGCGGAGAGGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACA GTGTCTAGC (SEQ ID NO: 25); e
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTEYTIHWVRQAPGQ
SLEWIGGINPNNGGTNYNQKFQGKVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYY CARVRRGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 26).
[00260] Região variável de cadeia leve 13E5 L2:
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCCTC CGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTAGAGCCTCCCAGGATGTGACC ACAGCAGTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAGCTGC TGATCTACTCCGCCTCTAGCAGGTATACCGGAGTGCCATCTCGGTTCTCTG GCAGCGGCTCCGGCACAGACTTTACCCTGACAATCTCCTCTGTGCAGCCA
GAGGATCTGGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTATTCTGCCCCCTGGAC CTTTGGCGGCGGCACAAACCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 27); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVTTAVAWYQQKPGKA
PKLLIYSASSRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDLATYYCQQHYSAPW TFGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 28).
[00261] Região variável de cadeia pesada 13E5 H3:
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGGTGAAGC CAGGAGCCAGCGTGAAGGTGTCCTGTAAGGCCTCTGGCTACACCTTCACA GAGTATACCATCCACTGGGTGCGGCAGGCACCAGGACAGGGACTGGAGT GGATCGGCGGCATCAACCCTAACAATGGCGGCACAAATTACGCCCAGAAG TTTCAGGGCAGGGTGACCATCACAGTGGACAAGTCCACCTCTACAGCCTA TATGGAGCTGAGCTCCCTGAGGTCTGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCG
CCCGCGTGCGGAGAGGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGAC AGTGTCTAGC (SEQ ID NO: 29); e
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKASGYTFTEYTIHWVRQAPGQ GLEWIGGINPNNGGTNYAQKFQGRVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC
ARVRRGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 30).
[00262] Região variável de cadeia leve 13E5 L3:
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCCTC CGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTAGAGCCTCCCAGGATGTGACC ACAGCCCTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAGCTGC TGATCTACTCCGCCTCTAGCCTGTATACCGGAGTGCCATCTCGGTTCTCTG GCAGCGGCTCCGGCACAGACTTTACCCTGACAATCTCCTCTCTGCAGCCA
GAGGATTTCGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTATTCTGCCCCCTGGAC CTTTGGCGGCGGCACAAACCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 31); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVTTALAWYQQKPGKA
PKLLIYSASSLYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYSAPW TFGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 32).
[00263] Região variável de cadeia pesada 13E5 H4:
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCCGGAGCAGAGGTGGTGAAGC CAGGAGCCAGCGTGAAGGTGTCCTGTAAGACCTCTGGCTACACCTTCACA
GAGTATACAATCCACTGGGTGCGGCAGGCACCAGGACAGTCTCTGGAGTG GATCGGCGGCATCAACCCTAACAATGGCGGCACCgtcTACAATCAGAAGTT
TCAGGGCAAGGTGACCCTGACAGTGGACAAGTCCACCTCTACAGCCTATA TGGAGCTGAGCTCCCTGAGGTCTGAGGACACAGCCGTGTACTATTGCGCC
CGCGTGCGGAGAGGCATGGATTACTGGGGCCAGGGCACCAGCGTGACAG TGTCTAGC (SEQ ID NO: 33); e
QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTSGYTFTEYTIHWVRQAPGQ
SLEWIGGINPNNGGTVYNQKFQGKVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC ARVRRGMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 34 SEQ).
[00264] Região variável de cadeia leve 13E5 L4:
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCTAGCTCCCTGAGCGCCTC CGTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTAGAGCCTCCCAGGATGTGACC ACAGCAGTGGCATGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCTAAGCTGC
TGATCTACTCCGCCTCTTAcAGGTATACCGGAGTGCCATCTCGGTTCTCTG
GCAGCGGCTCCGGCACAGACTTTACCCTGACAATCTCCTCTGTGCAGCCA
GAGGATCTGGCCACATACTATTGCCAGCAGCACTATTCTGCCCCCTGGAC CTTTGGCGGCGGCACAAACCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 35); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVTTAVAWYQQKPGKA
PKLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDLATYYCQQHYSAPW TFGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 36).
[00265] Região variável de cadeia pesada 18H7 H1:
GACGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGC TGGGCGGCTCCCTGAGGCTGTCTTGTGCAGCCAGCGGCTTCACCTTTAGC TCCTCTTACATGTCTTGGGTGCGGCAGACACCCGAGAAGAGACTGGAGCT GGTGGCCGCCATCAACTCTAATGGCGGCAAGACCTACTATGCCGACAGCG TGAAGGGCAGGTTTACCATCTCCCGCGATAACTCTAAGAATACACTGTATC TGCAGATGAGCTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACA
CGGCAGAGAGGCAACTACGTGGGCGCCATGGATTATTGGGGCCAGGGCA CCAGCGTGACAGTGTCTAGC (SEQ ID NO: 37); e
DVQLVESGGGLVQLGGSLRLSCAASGFTFSSSYMSWVRQTPE
KRLELVAAINSNGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYY CTRQRGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 38).
[00266] Região variável de cadeia leve 18H7 L1:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCCAGCTCCCTGTCCACATCT GTGGGCGACCGGGTGACCATCACCTGTAAGGCCTCTCAGGATGTGAGCA CCGCCGTGGTGTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGAGCCCCAAGCTGCT GATCTATAGCGCCTCCTACCGGTATACCGGCGTGCCTTCCAGATTCTCTG GCAGCGGCTCCGGCACAGACTTCACCTTTACAATCTCTAGCGTGCAGCCA
GAGGATATCGCCACATACTATTGCCACCAGTACTATGGCAGCCCTCCCAC CTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 39); e
IQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCKASQDVSTAVVWYQQKPGKSP
KLLIYSASYRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDIATYYCHQYYGSPPTF GGGTKLEIK (SEQ ID NO: 40).
[00267] Região variável da cadeia pesada 18H7 H2:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGC CCGGCGGCTCCCTGAGGCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGC TCCTCTTACATGTCTTGGGTGCGGCAGGCACCTGGCAAGAGACTGGAGCT GGTGGCCGCCATCAACTCTAATGGCGGCAAGACATACTATGCCGACAGCG TGAAGGGCAGGTTTACCATCTCCCGCGATAACTCTAAGAATACACTGTATC TGCAGATGAGCTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCACA
CGGCAGAGAGGCAACTACGTGGGCGCCATGGATTATTGGGGCCAGGGCA CCAGCGTGACAGTGTCTAGC (SEQ ID NO: 41); e
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSSYMSWVRQAPG
KRLELVAAINSNGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYY CTRQRGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 42).
[00268] Região variável de cadeia leve 18H7 L2:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCTCCCTGTCCGCCTCT GTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTCAGGCCTCTCAGGATGTGAGCA CAGCCGTGGTGTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGAGCCCCAAGCTGCT GATCTATAGCGCCTCCTACCTGTATACCGGCGTGCCTTCCAGATTCTCTGG CAGCGGCTCCGGCACAGACTTCACCTTTACAATCTCTAGCCTGCAGCCAG
AGGATATCGCCACCTACTATTGCCACCAGTACTATGGCAGCCCTCCCACCT TCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 43); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVSTAVVWYQQKPGKS
PKLLIYSASYLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQYYGSPPT FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 44).
[00269] Região variável da cadeia pesada 18H7 H3:
GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGC CCGGCGGCTCCCTGCGGCTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAG CTCCTCTTACATGTCCTGGGTGAGGCAGGCACCTGGCAAGGGACTGGAGT ACGTGAGCGCCATCAACTCTAATGGCGGCAAGACATACTATGCCGACTCT GTGAAGGGCAGGTTTACCATCAGCCGCGATAACTCCAAGAATACACTGTA CCTGCAGATGAGCTCCCTGAGGGCAGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCA
CACGGCAGAGAGGCAACTACGTGGGCGCCATGGATTATTGGGGCCAGGG CACCTCCGTGACAGTGTCTAGC (SEQ ID NO: 45); e
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSSYMSWVRQAPG
KGLEYVSAINSNGGKTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYY CTRQRGNYVGAMDYWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 46).
[00270] Região variável de cadeia leve 18H7 L3:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCAAGCTCCCTGTCCGCCTCT GTGGGCGACAGGGTGACCATCACATGTCAGGCCTCTCAGGATGTGAGCA CAGCCCTGGCCTGGTACCAGCAGAAGCCAGGCAAGGCCCCCAAGCTGCT GATCTATAGCGCCTCCAACCTGGAGACCGGCGTGCCTAGCAGATTCTCTG GCAGCGGCTCCGGCACAGACTTCACCTTTACAATCTCTAGCCTGCAGCCA
GAGGATATCGCCACCTACTATTGCCACCAGTACTATGGCAGCCCTCCCAC CTTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 47); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDVSTALAWYQQKPGKA
PKLLIYSASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCHQYYGSPPT FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 48).
[00271] Região de estrutura de cadeia pesada 13E5: FR-H1: EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTS (SEQ ID NO: 49); FR-H2: IHWVKQNHGKSLEWIGG (SEQ ID NO: 50); FR-H3: VYNQNFKGKATLTVDKSSSTAYMELRSLTSEDSAVYYC (SEQ ID NO: 51); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 52).
[00272] Região de estrutura de cadeia leve 13E5: FR-L1: DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKAS (SEQ ID NO: 53);
FR-L2: VAWYQQKPGQSPKLLIY (SEQ ID NO: 54); FR-L3: YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYC (SEQ ID NO: 55); e FR-L4: FGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 56).
[00273] Região de estrutura de cadeia pesada 18H7: FR-H1: DVKLVESGGDLVNLGGSLKLSCAAS (SEQ ID NO: 57); FR-H2: MSWVRQTPERRLELVAA (SEQ ID NO: 58); FR-H3: YYPDTVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSGLKTEDTALYYC (SEQ ID NO: 59); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 60).
[00274] Região de estrutura de cadeia leve 18H7: FR-L1: DIVMTQSHKFMSTSVGDRVSITCKAS (SEQ ID NO: 61); FR-L2: VVWYQQKPGQSPTLLIY (SEQ ID NO:62); FR-L3: YRYTGVPDRFTGSGSGTDFTFTISSVQAEDLAVYYC (SEQ ID NO: 63); e FR-L4: FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 64).
[00275] Região de estrutura 13E5 H1: FR-H1: QVQLQQSGAEVVKPGASVKISCKTS (SEQ ID NO: 65); FR-H2: IHWVKQAHGQSLEWIGG (SEQ ID NO: 66); FR-H3: VYNQKFQGKATLTVDKSTSTAYMELRSLTSEDTAVYYC (SEQ ID NO: 67); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 68).
[00276] Região de estrutura 13E5 L1: FR-L1: DIQMTQSPKSLSTSVGDRVTITCRAS (SEQ ID NO: 69); FR-L2: VAWYQQKPGKSPKLLIY (SEQ ID NO: 70); FR-L3: YRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDLATYYC (SEQ ID NO: 71); e FR-L4: FGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 72).
[00277] Região da estrutura 13E5 H2: FR-H1: QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTS (SEQ ID NO: 73); FR-H2: IHWVRQAPGQSLEWIGG (SEQ ID NO: 74); FR-H3: NYNQKFQGKVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC (SEQ ID NO: 75); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 76).
[00278] Região de estrutura 13E5 L2: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS (SEQ ID NO: 77); FR-L2: VAWYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 78); FR-L3: SRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDLATYYC (SEQ ID NO: 79); e FR-L4: FGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 80).
[00279] Região de estrutura 13E5 H3: FR-H1: QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKAS (SEQ ID NO: 81); FR-H2: IHWVRQAPGQGLEWIGG (SEQ ID NO: 82); FR-H3: NYAQKFQGRVTITVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC (SEQ ID NO: 83); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 84).
[00280] Região de estrutura 13E5 L3: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS (SEQ ID NO: 85); FR-L2: LAWYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 86); FR-L3: SLYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC (SEQ ID NO: 87); e FR-L4: FGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 88).
[00281] Região de estrutura 13E5 H4: FR-H1: QVQLVQSGAEVVKPGASVKVSCKTS (SEQ ID NO: 89); FR-H2: IHWVRQAPGQSLEWIGG (SEQ ID NO: 90); FR-H3: VYNQKFQGKVTLTVDKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYC
(SEQ ID NO: 91); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 92).
[00282] Região de estrutura 13E5 L4: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS (SEQ ID NO: 93); FR-L2: VAWYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 94); FR-L3: YRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSVQPEDLATYYC (SEQ ID NO: 95); e FR-L4: FGGGTNLEIK (SEQ ID NO: 96).
[00283] Região de framework 18H7 H1: FR-H1: DVQLVESGGGLVQLGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 97); FR-H2: MSWVRQTPEKRLELVAA (SEQ ID NO: 98); FR-H3: YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO: 99); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 100).
[00284] Região de estrutura 18H7 L1: FR-L1: DIQMTQSPSSLSTSVGDRVTITCKAS (SEQ ID NO: 101); FR-L2: VVWYQQKPGKSPKLLIY (SEQ ID NO: 102); FR-L3: YRYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSVQPEDIATYYC (SEQ ID NO: 103); e FR-L4: FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 104).
[00285] Região de estrutura 18H7 H2: FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 105); FR-H2: MSWVRQAPGKRLELVAA (SEQ ID NO: 106); FR-H3: YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO: 107); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 108).
[00286] Região de estrutura 18H7 L2: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAS (SEQ ID NO: 109);
FR-L2: VVWYQQKPGKSPKLLIY (SEQ ID NO: 110); FR-L3: YLYTGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC (SEQ ID NO: 111); e FR-L4: FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 112).
[00287] Região de estrutura 18H7 H3: FR-H1: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS (SEQ ID NO: 113); FR-H2: MSWVRQAPGKGLEYVSA (SEQ ID NO: 114); FR-H3: YYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMSSLRAEDTAVYYC (SEQ ID NO: 115); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 116).
[00288] Região de estrutura 18H7 L3: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQAS (SEQ ID NO: 117); FR-L2: LAWYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 118); FR-L3: NLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC (SEQ ID NO: 119); e FR-L4: FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 120).
[00289] Sequência de tag mFc:
PRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTC VVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDW MSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLT
CMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNW VERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK (SEQ ID NO: 121).
[00290] Sequência de cadeia pesada hIgG:
EVQLEQSGAELMKPGASVKISCKATGYTFTTYWIEWIKQRPGHS LEWIGEILPGSDSTYYNEKVKGKVTFTADASSNTAYMQLSSLTSEDSAVYYCA RGDGFYVYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYF PEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNV DHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPE VTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVL HQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (SEQ ID NO: 122).
[00291] Sequência de cadeia leve hIgG:
DIELTQSPATLSVTPGDSVSLSCRASQSISNNLHWYQQKSHESP RLLIKYTSQSMSGIPSRFSGSGSGTDFTLSINSVETEDFGVYFCQQSGSWPRT FGGGTKLDIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKV
DNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLS SPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 123).
[00292] VAB 16F3-1 VH-2:
EVQLVESGGGLVQPGRSLRLSCEASGFTFDDYAMHWVRQAPG
KGLEWVSGLSRTSVSIGYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLEMNSLRPEDTALYY CAKWGTRGYFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 124).
[00293] 16F3-1 VL:
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQDISIWLAWYQQSPGKAP
KLLINVASRLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTINSLQPEDFVTYYCQQANSFPITF GQGTRLATK (SEQ ID NO: 125).
[00294] Região variável de cadeia pesada 20G 10H3:
CAGGTGACACTGAAGGAGTCCGGCCCAACCCTGGTGAAGCC CACCCAGACACTGACCCTGACATGTACCTTCAGCGGCTTTTCTCTGAGCAC ATCCGGCATGGGAGTGGGATGGATCAGACAGCCCCCTGGCAAGGCCCTG GAGTGGCTGGCCCTGATCTGGTGGGCCGACGATAAGAGGTACTCTACCA GCCTGAAGTCCCGCCTGACAATCTCCAAGGACACCTCTAAGAACCAGGTG GTGCTGACAATCACCAATGTGGACCCCGTGGATACAGCCACCTACTATTG
CGCCCGGATCACAAGAGGCAACTCTGCCATGGATTTTTGGGGCCAGGGCA CATCTGTGACCGTGAGCTCC (SEQ ID NO: 126); e
QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFSGFSLSTSGMGVGWIRQPPG
KALEWLALIWWADDKRYSTSLKSRLTISKDTSKNQVVLTITNVDPVDTATYYCA RITRGNSAMDFWGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 127).
[00295] Região variável de cadeia leve 20G 10L3:
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCTAGCTCCCTGTCCGCCTCT GTGGGCGATAGGGTGACCATCACATGTAGAGCCTCTGAGAACGTGTACAG CTATCTGAATTGGTACCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGCTGA TCTATAACGCCAAGAGCCTGCAGTCCGGAGTGCCAAGCCGGTTCAGCGG CTCCGGCTCTGGCACCGACTTTACCCTGACAATCTCTAGCCTGCAGCCAG
AGGATTTCGCCACATACTATTGCCAGCACCACTACGGCATCCCCTGGACC TTCGGCGGCGGCACAAAGCTGGAGATCAAG (SEQ ID NO: 128); e
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASENVYSYLNWYQQKPGKA
PKLLIYNAKSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHHYGIPWT FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 129).
[00296] 20G10 CDR: HCDR1: GFSLSTSGMG (SEQ ID NO: 130); HCDR2: IWWADDK (SEQ ID NO: 131); HCDR3: ARITRGNSAMDF (SEQ ID NO: 132); LCDR1: ENVYSY (SEQ ID NO: 133); LCDR2: NAK (SEQ ID NO: 134); e LCDR3: QHHYGIPWT (SEQ ID NO: 135).
[00297] Região de estrutura 20G 10H3: FR-H1: QVTLKESGPTLVKPTQTLTLTCTFS (SEQ ID NO: 136); FR-H2: VGWIRQPPGKALEWLAL (SEQ ID NO: 137); FR-H3: RYSTSLKSRLTISKDTSKNQVVLTITNVDPVDTATYYC (SEQ ID NO: 138); e FR-H4: WGQGTSVTVSS (SEQ ID NO: 139).
[00298] Região da estrutura 20G 10L3: FR-L1: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRAS (SEQ ID NO: 140);
FR-L2: LNWYQQKPGKAPKLLIY (SEQ ID NO: 141);
FR-L3: SLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC
(SEQ ID NO: 142); e
FR-L4: FGGGTKLEIK (SEQ ID NO: 143).

Claims (28)

REIVINDICAÇÕES
1. ANTICORPO ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo que se liga a IL4RA, de preferência IL4RA humana, caracterizado por: (1) o anticorpo compreender: uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 9, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 10, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 11, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e o anticorpo compreende ainda: uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 12, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 13, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 14, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (preferencialmente 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(2) o anticorpo compreende:
uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 15, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 16, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 17, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
e o anticorpo compreende ainda:
uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 18, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 19, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 20, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (preferencialmente 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
ou, (3) o anticorpo compreende:
uma HCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 130, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência,
uma HCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 131, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma HCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 132, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e o anticorpo compreende ainda: uma LCDR1, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 133, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, uma LCDR2, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 134, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, e uma LCDR3, compreendendo ou consistindo na sequência estabelecida na SEQ ID NO: 135, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos possuindo uma ou mais (de preferência 2 ou 3) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência.
2. ANTICORPO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por compreender: (1) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em: a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 2,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 2, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 2, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 4,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 4, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 4;
(2) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 6,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 6, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 6, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 8,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 8, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 8;
(3) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 22,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 22, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 22, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 24,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 24, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 24;
(4) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 26,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 26, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 26, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 28,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28;
(5) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 30,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 30, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 30, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 32,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 32, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 32;
(6) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 34,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 36, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 36, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 36;
(7) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 38,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 38, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 38, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 40,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 40, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 40;
(8) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 42,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 44,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44;
(9) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 46,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 48,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48;
(10) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 42,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 48,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48;
(11) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 46,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 44,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44;
(12) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 34,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 28,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28; ou
(13) (i) uma região variável de cadeia pesada compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 127,
uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, e
(ii) uma região variável de cadeia leve compreendendo ou consistindo em:
a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129.
3. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizado pelo anticorpo compreender ainda as regiões estruturais FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4 na região variável da cadeia pesada, e as regiões estruturais FR-L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4 na região variável da cadeia leve, em que: (1) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 49, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 49, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 49, a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 50, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 50, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 50, a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 51, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 51, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 51,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 52, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 52, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 52,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 53, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 53, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 53, a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID
NO: 54, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 54, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (preferencialmente substituições,
inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 54, a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 55, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%,
95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 55, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 55,
e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 56, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 56, ou uma sequência de aminoácidos com uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5,
6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 56;
(2) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 57, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 57, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 57,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 58, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 58, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 58,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 59, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 59, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 59,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 60, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 60, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 60,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 61, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 61, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 61,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 62, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 62, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 62,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 63, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 63, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 63, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 64, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 64, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 64;
(3) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 65, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 65, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 65,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 66, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 66, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 66,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 67, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 67, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 67,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 68, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 68, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 68,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 69, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 69, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 69,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 70, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 70, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 70,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 71, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 71, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 71, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 72, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 72, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 72;
(4) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 73, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 73, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 73,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 74, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 74, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 74,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 75, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 75, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 75,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 76, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 76, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 76,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 77, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 77, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 77,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 78, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 78, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 78,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 79, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 79, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 79, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 80, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 80, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 80;
(5) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 81, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 81, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 81,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 82, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 82, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 82,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 83, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 83, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 83,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 84, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 84, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 84,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 85, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 85, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 85,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 86, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 86, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 86,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 87, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 87, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 87, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 88, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 88, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 88;
(6) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 89, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 89, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 89,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 90, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 90, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 90,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 91, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 91, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 91,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 92, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 92, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 92,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 93, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 93, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 93,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 94, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 94, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 94,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 95, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 95, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 95, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 96, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 96, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 96;
(7) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 97, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 97, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 97,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 98, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 98, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 98,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 99, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 99, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 99,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 100, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 100, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 100,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 101, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 101, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 101,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 102, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 102, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 102,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 103, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 103, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 103, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 104, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 104, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 104;
(8) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 105, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 105, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 105,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 106, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 106, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 106,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 107, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 107, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 107,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 108, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 108, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 108,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 109, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 109, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 109,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 110, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 110, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 110,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 111, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 111, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 111, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 112, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 112, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 112;
(9) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 113, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 113, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 113,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 114, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 114, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 114,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 115, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 115, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 115,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 116, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 116, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 116,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 117, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 117, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 117,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 118, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 118, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 118,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 119, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 119, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 119, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 120, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 120, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 120; ou
(10) a FR-H1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 136, uma sequência com pelo menos
80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,
97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na
SEQ ID NO: 136, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 136,
a FR-H2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 137, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 137, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 137,
a FR-H3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 138, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 138, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 138,
a FR-H4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 139, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 139, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 139,
a FR-L1 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 140, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 140, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 140,
a FR-L2 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 141, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 141, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 141,
a FR-L3 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 142, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 142, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 142, e a FR-L4 compreende ou consiste na sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 143, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou
90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%
ou 99% de identidade de sequência com a sequência estabelecida na SEQ ID NO: 143, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência de aminoácidos estabelecida na SEQ ID NO: 143.
4. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo anticorpo se ligar à proteína IL-4RA humana com um KD menor que cerca de 10-5 M, por exemplo, menor que cerca de 10- 6 M, 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M ou 10- 10 M ou menos.
5. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo anticorpo se ligar à proteína IL-4RA humana com um EC50 inferior a cerca de 100 nM, por exemplo, inferior a cerca de 10 nM, 1 nM, 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM, 0,1 nM ou menos.
6. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo anticorpo ser um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico ou um anticorpo multiespecífico (por exemplo, anticorpo biespecífico).
7. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pela região constante do anticorpo ser humanizada, preferencialmente derivada de IgG humana, mais preferencialmente IgG4.
8. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pela região constante da cadeia pesada do anticorpo ser uma região C da cadeia Ig gama-4, mais preferencialmente a região C da cadeia Ig gama-4 do Nº de acesso do GenBank: P01861.1; a região constante da cadeia leve ser uma região C da cadeia Ig kapa,
mais preferencialmente a região C da cadeia Ig kapa do Nº de acesso do GenBank: P01834.
9. ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizado pelo fragmento de ligação ao antígeno ser selecionado a partir de Fab, Fab’, F(ab’)2, Fd, Fv, dAb, Fab/c, fragmento da região determinante de complementaridade (CDR), anticorpo de cadeia única (por exemplo, scFv), anticorpo bivalente e anticorpo de domínio.
10. POLIPEPTÍDEO ISOLADO, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste em: (1) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14; (2) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 15, 16 e 17, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20; (3) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 12, 13 e 14, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 9, 10 e 11; (4) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 18, 19 e 20, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas
SEQ ID NOs: 15, 16 e 17;
(5) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 130, 131 e 132, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas
SEQ ID NOs: 133, 134 e 135;
(6) um polipeptídeo isolado compreendendo as sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 133, 134 e 135, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda as sequências estabelecidas nas
SEQ ID NOs: 130, 131 e 132;
(7) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2, 6, 22,
26, 30, 34 e 38, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência em pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%
de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humano, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência, respectivamente, selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 8, 24, 28, 32, 36 e 40, uma sequência com pelo menos 80%,
85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%,
98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com as sequências;
(8) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 44, uma sequência com pelo menos 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(9) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 48, uma sequência tendo pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(10) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(11) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 34, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(12) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 4, 8, 24,
28, 32, 36 e 40, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência em pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%
de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com as sequências, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humano, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência, respectivamente, selecionada a partir das sequências estabelecidas nas SEQ ID NOs: 2, 6, 22, 26, 30, 34 e 38, uma sequência com pelo menos 80%,
85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%,
98% ou 99% de identidade de sequência com as sequências, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10)
mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições,
inserções ou deleções) em comparação com as sequências; (13) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 44, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(14) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 42, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(15) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 48, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 46, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(16) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 28, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 34, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência;
(17) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID
NO: 129, uma sequência tendo pelo menos 90%, de preferência pelo menos
91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência; ou
(18) um polipeptídeo isolado compreendendo uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 129, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%,
92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas
(de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência, em que o polipeptídeo se liga especificamente a IL-4RA humana como parte de um anticorpo anti-IL-4RA humana, o anticorpo compreendendo ainda uma sequência selecionada a partir da sequência estabelecida na SEQ ID NO: 127, uma sequência com pelo menos 80%, 85% ou 90%, de preferência pelo menos 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência, ou uma sequência de aminoácidos tendo uma ou mais (de preferência 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10) mutações de aminoácidos conservativas (de preferência substituições, inserções ou deleções) em comparação com a sequência.
11. POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, caracterizado por codificar o polipeptídeo isolado, conforme definido na reivindicação 10.
12. VETOR, caracterizado por compreender o polinucleotídeo isolado, conforme definido na reivindicação 11.
13. CÉLULA HOSPEDEIRA, caracterizada por compreender o polinucleotídeo isolado, conforme definido na reivindicação 11, ou o vetor, conforme definido na reivindicação 12.
14. MÉTODO PARA PREPARAR O ANTICORPO ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, caracterizado por compreender o cultivo da célula hospedeira, conforme definida na reivindicação 13.
15. CONJUGADO DE ANTICORPO, caracterizado por compreender o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, e uma porção conjugada acoplada ao mesmo, em que, de preferência, a porção conjugada é selecionada a partir de uma etiqueta de purificação (por exemplo, etiqueta His), um agente citotóxico, um marcador detectável, um radioisótopo, uma substância luminescente, uma substância colorida, uma enzima ou polietileno glicol.
16. ANTICORPO MULTIESPECÍFICO, de preferência um anticorpo biespecífico, caracterizado por compreender o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, e um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno contra outro antígeno e/ou outro epítopo antigênico.
17. PROTEÍNA DE FUSÃO, caracterizada por compreender o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9.
18. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por compreender o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16 ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, e opcionalmente, um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável.
19. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pela composição farmacêutica ser usada sozinha ou em combinação com um ou mais medicamentos.
20. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 18, caracterizada pela composição farmacêutica estar em uma forma de dosagem adequada para administração oral ao trato gastrointestinal (GI), de preferência a forma de dosagem sendo selecionada a partir de comprimidos, cápsulas, pílulas, pós, grânulos, emulsões, microemulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires; ou a composição farmacêutica está em uma forma de dosagem adequada para injeção subcutânea, injeção intradérmica, injeção intravenosa, injeção intramuscular ou injeção intralesional.
21. KIT, caracterizado por compreender o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, em que preferencialmente o kit compreende ainda um segundo anticorpo que reconhece especificamente o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16 ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17; opcionalmente, o segundo anticorpo compreende ainda um marcador detectável, como um radioisótopo, uma substância luminescente, uma substância colorida ou uma enzima.
22. USO DO ANTICORPO ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, caracterizado por ser na preparação de um kit para detectar a presença ou o nível de IL-4RA humana em uma amostra ou para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença alérgica, um tumor, uma doença autoimune, uma infecção de pele, fibrose de tecido, rinossinusite, pólipos nasais e doença pulmonar obstrutiva crônica, em que, de preferência, a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia e, mais preferencialmente, dermatite atópica inclui dermatite atópica moderada e grave.
23. USO do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16 ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, caracterizado por ser na preparação de um medicamento selecionado a partir de: um medicamento para bloquear a ligação de IL-4RA humana a IL- 4 ou IL-13, um medicamento para bloquear a atividade de IL-4RA humana ou regular negativamente o nível de IL-4RA humana, e um medicamento para bloquear uma resposta biológica celular mediada pela ligação de IL-4 humana ou IL-13 humana a IL-4RA; em que preferencialmente, o ligante de IL-4RA humana é IL-4 humana ou IL-13 humana, mais preferencialmente IL-4 humana.
24. USO do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou a proteína de fusão, conforme definido na reivindicação 17, caracterizado por ser na preparação de um medicamento para a prevenção e/ou tratamento e/ou tratamento adjuvante e/ou diagnóstico de uma doença alérgica, um tumor, uma doença autoimune, uma infecção de pele, fibrose de tecido, rinossinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, em que preferencialmente, a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia e, mais preferencialmente, dermatite atópica inclui dermatite atópica moderada e grave.
25. MÉTODO IN VIVO OU IN VITRO, caracterizado por compreender a administração de uma célula compreendendo o anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou o proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, ou administração a um sujeito em necessidade de uma quantidade eficaz do anticorpo ou do fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, o método sendo selecionado a partir de: um método para bloquear a ligação de IL-4RA a IL-4 ou IL-13, um método para regular negativamente a atividade ou nível de IL- 4RA, ou um método para bloquear uma resposta biológica celular mediada pela ligação de IL-4 humana ou IL-13 humana a IL-4R; em que preferencialmente, o ligante de IL-4RA é IL-4 ou IL-13, mais preferencialmente IL-4; mais preferencialmente, o método in vitro é não terapêutico e/ou não diagnóstico.
26. MÉTODO PARA A PREVENÇÃO E/OU TRATAMENTO E/OU TRATAMENTO ADJUVANTE E/OU DIAGNÓSTICO DE UMA DOENÇA alérgica, um tumor, uma doença autoimune, fibrose de tecido, rinossinusite, pólipos nasais, doença pulmonar obstrutiva crônica, caracterizado por compreender a administração do anticorpo ou o fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, conforme definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 9, o conjugado de anticorpo, conforme definido na reivindicação 15, o anticorpo multiespecífico, conforme definido na reivindicação 16, ou a proteína de fusão, conforme definida na reivindicação 17, para um sujeito em necessidade, em que, de preferência, a doença alérgica é selecionada a partir de dermatite atópica, rinite alérgica, asma e alergia e, mais preferencialmente, dermatite atópica inclui dermatite atópica moderada e grave.
27. CÉLULA DE HIBRIDOMA, caracterizada por ter o número de acesso de CCTCC No: C202010, CCTCC No: C2018131 ou CCTCC No: C2018132.
28. ANTICORPO MONOCLONAL, caracterizado por ser secretado pela célula de hibridoma, conforme definida na reivindicação 27.
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Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113101364B (zh) * 2018-05-29 2023-12-01 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种自免疫抑制剂的开发和应用
CN113527485A (zh) 2020-04-17 2021-10-22 上海麦济生物技术有限公司 抗人白细胞介素-4受体α抗体及其制备方法和应用
WO2022052974A1 (en) * 2020-09-10 2022-03-17 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Antibodies specifically recognizing interleukin-4 receptor alpha and uses thereof
CN114457024A (zh) * 2020-10-30 2022-05-10 未来智人再生医学研究院(广州)有限公司 一种表达IL-4Rα阻断物的多能干细胞或其衍生物及应用
CN114634574B (zh) * 2022-04-18 2022-12-20 先进生物(苏州)有限公司 抗B7H6的scFv抗体、其编码基因及其应用
WO2023208104A1 (zh) * 2022-04-29 2023-11-02 中山康方生物医药有限公司 抗人il-4ra的抗体及其用途
US20240024472A1 (en) 2022-05-02 2024-01-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-Interleukin-4 Receptor (IL-4R) Antibody Formulations
WO2023215750A2 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods for reducing lipase activity

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988001649A1 (en) 1986-09-02 1988-03-10 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
MX2010006735A (es) * 2007-12-21 2010-09-30 Medimmune Ltd Miembros de union para receptor alfa de interleucina-4 (il-4ra) - 173.
PL2817338T3 (pl) * 2012-02-24 2017-12-29 Abbvie Stemcentrx Llc Modulatory DLL3 i sposoby zastosowania
AU2013305945B2 (en) * 2012-08-21 2018-07-26 Regeneron Pharmaceuticals Inc. Methods for treating or preventing asthma by administering an IL-4R antagonist
TWI755763B (zh) * 2013-06-04 2022-02-21 美商再生元醫藥公司 藉由投與il-4r抑制劑以治療過敏及增強過敏原-特異之免疫療法的方法
TWI634900B (zh) * 2013-07-11 2018-09-11 再生元醫藥公司 藉由投與ｉｌ－４ｒ抑制劑治療嗜酸性食道炎的方法
US8986691B1 (en) * 2014-07-15 2015-03-24 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
US8980273B1 (en) * 2014-07-15 2015-03-17 Kymab Limited Method of treating atopic dermatitis or asthma using antibody to IL4RA
WO2015127229A1 (en) * 2014-02-21 2015-08-27 Sanofi Methods for treating or preventing asthma by administering an il-4r antagonist
US20170281769A1 (en) * 2014-09-03 2017-10-05 Medimmune Limited STABLE ANTI-IL-4Ra FORMULATION
ES2893148T3 (es) * 2015-04-02 2022-02-08 Intervet Int Bv Anticuerpos contra el receptor alfa de la interleucina 4 canina
GB2552473A (en) * 2016-07-21 2018-01-31 Evox Therapeutics Ltd Surface decoration of extracellular vesicles
CN108409860B (zh) * 2017-02-10 2021-10-15 三生国健药业（上海）股份有限公司 抗人白细胞介素-4受体α单克隆抗体、其制备方法和应用
CN108373505B (zh) * 2018-04-20 2019-08-20 北京智仁美博生物科技有限公司 抗il-4r抗体及其用途

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