CN113101364B - 一种自免疫抑制剂的开发和应用 - Google Patents

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Abstract

本公开涉及靶向人白细胞介素‑4和白介素‑13的双重阻断抗体其制造方法和应用。

Description

一种自免疫抑制剂的开发和应用
技术领域
本公开涉及靶向白细胞介素-4和白介素-13的双重阻断抗体其制造方法和应用。
背景技术
白细胞介素-4(IL-4)是Th2辅助细胞介导的免疫反应的关键驱动因子。嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、肥大细胞或先天样淋巴细胞遇到免疫原活化后，分泌IL-4，可诱导抗原活化的T细胞分化成Th2细胞，Th2细胞表达IL-4、IL-5、IL-13等细胞因子，其中IL-4作用于Th2细胞自身，可形成环路放大活化效应。
IL-4和IL-13通过与细胞表面的特异性受体结合，将信号传递到细胞内部，进而发挥其生物学活性。IL-4和IL-13作用于B细胞，可上调MHCII类抗原的表达，增强B细胞提呈抗原能力，使免疫系统对小量抗原刺激发生免疫应答；诱导B细胞发生抗体类别转换，产生IgG1、IgE；IL-4和IgE结合到肥大细胞，会导致后者活化释放组织胺、血清素等；Th2细胞分泌的IL-4、IL-5、IL-13可募集和活化嗜酸性粒细胞。IL-13作用于上皮细胞和平滑肌细胞，可导致气道上皮杯状细胞增生和平滑肌收缩。
IL-4Rα(Uniprot P24394)，分子量约为140KDa的I型跨膜蛋白，是IL-4和IL-13的共同受体。IL-4以高亲和力结合到IL-4Rα，并与细胞表面的γc形成复合物，经由γc传递信号，称为I型受体复合物IL-4Rα/IL-4Rγc；不同于IL-4，IL-13先以低亲和力结合于IL-13Rα1，再与IL-4Rα的结合形成高亲和力受体，通过IL-13Rα1传递信号，称为II型受体复合物IL-4Rα/IL-13Rα1。IL-4可通过I型受体和II型受体发挥作用，而IL-13仅能通过II型受体发挥作用。I、II型受体在效应细胞上的表达差异，导致IL-4和IL-13产生部分重叠的生物学效应，以及各自特异的功能。
白介素(IL)-13被视为是辅助T细胞2型(Th2)炎症的关键中介物，并且升高的IL-13水平已与多种疾病相关，包括但不限于哮喘、炎症性肠病、特发性肺纤维化(IPF)，慢性阻塞性肺病(COPD)和特应性皮炎和其他(Oh CK等人，Eur Respir Rev 19：46-54(2010)；FahyJV等人，Nat Rev Immunol15：57-65[2015])。IL-13由许多细胞类型产生，包括Th2细胞、嗜碱性粒细胞、嗜酸性粒细胞和肥大细胞以及气道上皮细胞和2型天然淋巴样细胞。IL-13与异二聚体受体IL-4Rα/IL-13Rα1结合，所述异二聚体受体也是IL-4的受体，并且激活STAT-6信号传导途径(Hershey GK，J Allergy Clin Immunol111(4)：677-90[2003])。在某些情况下，IL-13已经与哮喘的临床表现相关联，包括产生黏液、表皮下纤维化、产生IgE、平滑肌增生以及召集和活化炎性细胞(Hershey GK，J Allergy Clin Immunol111(4)：677-90[2003]；Fahy JV等人，Nat Rev Immunol 15：57-65[2015])。因为Th2炎症涉及除Th2细胞之外的几种细胞类型(包括2型天然淋巴样细胞(ILC2))的活性，“Th2炎症”最近在科学文献中更称作“2型炎症”。除Th2细胞之外，还已经将ILC2鉴定为重要的细胞因子(如IL-5和IL-13)源。因此，先前已经被鉴定为Th2细胞因子的细胞因子如IL-13和IL-5现在科学文献中也称作2型细胞因子。同样地，与这类细胞因子相关的疾病状态现在也称作2型驱动的疾病或2型相关疾病。参见，例如，Noonan等人，J.Allergy Clin Immunol.，132(3)：567-574(2013)；Hanania等人，Thorax70(8)：748-56(2015)；和Cai等人，Bioanalysis 8(4)：323-332(2016)。例如，科学文献中术语“2型哮喘”的使用反映了对哮喘理解的演化过程，并且以肺组织中高水平的白介素(包括IL-5和IL-13)为特征。因此，“Th2”和“2型”在本文中互换地使用。
哮喘是一种慢性呼吸道炎症疾病，患者具有气道高反应性和不同程度的可逆性气道阻塞症状，若长期反复发作可使气道(包括胶原纤维、平滑肌)重建，导致气道增厚与狭窄，成为阻塞性肺气肿。约50％的重症哮喘患者呈现Th2细胞介导的II型炎症反应，和正常人相比，在哮喘患者的血清或支气管活检中，IL-4、IL-13水平均增高。用过敏原刺激，患者哮喘支气管肺泡灌洗液中发现IL-4、IL-13水平均增高。过敏性哮喘患者吸入IL-4，可诱导气道高反应等哮喘特征症状，痰液中嗜酸性粒细胞增多。研究表明，过敏性哮喘的发病与Th1/Th2型细胞的比例失衡密切相关，进而产生过多的细胞因子IL-4。IL-4是唯一决定Th1向Th2细胞分化的细胞因子，促进B细胞合成IgE，而IL-13是触发呼吸道高反应性、气道重塑以及粘液分泌过多的支配性偶体(Annu Rev Immunol，Wynn et al.2003)。
特应性皮炎患者的外周血中存在嗜酸性粒细胞，与健康对照的正常皮肤相比，特应性皮炎患者的非损伤皮肤中检测到Th2途径激活的相关分子。此外，特应性皮炎患者血清中，胸腺和活化调节趋化因子CCL17水平升高，而CCL17是一种IL-4和IL-13诱导的趋化因子，选择性诱导T细胞活化。广谱疗法，例如局部皮质类固醇和口服环孢素A，可诱导TARC水平迅速下降，这与特应性皮炎的严重程度密切相关，证明该疾病中潜在的II型炎症驱动反应特应性皮炎。特应性皮炎经常与其它一些过敏性疾病，如过敏性鼻炎、哮喘等并发。
特应性鼻炎的发病机制，被认为是Th2介导的对常见过敏原，如花粉、霉菌和屋尘螨的过敏。IL-4在年轻组季节性特应性鼻炎患者的鼻腔灌洗中，与对照组相比升高。与慢性感染性鼻炎患者的鼻腔肥大细胞相比，常年性特应性鼻炎患者的鼻腔肥大细胞中IL-4和IL-13上调。IL-4诱导鼻腔肥大细胞上调Fc RI mRNA和细胞表面蛋白表达。特应性鼻炎可发展为伴有鼻息肉的慢性鼻窦炎，鼻息肉同时也具有Th2型反应，嗜酸性粒细胞和IL-5、IgE和组织嗜酸性细胞趋化因子升高。慢性鼻窦炎鼻息肉患者的粘膜中，含有比无鼻息肉的慢性鼻窦炎或正常粘膜更多的先天淋巴样ILC2细胞，这些细胞在IL-33刺激下分泌高水平的IL-13。
慢性阻塞性肺疾病是一种阻塞性肺疾病，其特征是显著的肺和全身炎症。患者大部分气道发炎导致慢性支气管炎，小的气道产生炎症，导致管腔减少和气流阻力增加。与哮喘不同，慢性阻塞性肺疾病的气流限制是不可逆的。有研究显示，慢阻塞性肺患者支气管肺泡灌洗得到的淋巴细胞具有混合表型，与非慢性阻塞性肺患者或对照相比，IL-4+CD4、IL-4+CD8和IL-13+CD8 T细胞的比例更高。30％急性加重期的慢性阻塞性肺疾病患者有呼吸道病毒，其中77％为鼻病毒rhinovirus，病毒是导致慢性阻塞性肺疾病恶化的重要原因。恶化患者的肺和外周血中同时具有Th1和Th2反应，患者IFN表达不普遍，与稳定期和对照组无显著性差异；相反，IL-4表达普遍，与稳定型和对照组相比上调。研究表明，控制嗜酸性粒细胞水平，可能为慢性阻塞性肺疾病患者带来非常明显的临床益处，将恶化降低62％；在嗜酸性粒细胞每微升＞200的患者中，使用benralizumab单抗，有效清除患者的嗜酸性粒细胞，降低了急性加重期的慢性阻塞性肺疾病症状，并改善了FEV1和症状评分(Brightling CE etal，Lancet Respir Med.2014)。哮喘/慢阻肺重叠综合征现已被公认为一种具有哮喘和慢性阻塞性肺疾病两个关键方面的疾病。
鉴于IL-4Rα和IL-13在各类相关疾病中作用和功能，本领域仍然需要开发适于治疗患者的改善的抗IL-4Rα特异性抗体
发明内容
本发明人通过广泛而深入的研究，经过大量筛选，意外地获得具有极其优异的亲和力和特异性的抗IL-4Rα抗体，基于该抗体而获得的人源化抗体。本发明抗体能够高特异性地结合IL-4Rα抗原，其具有很高的亲和力，并且显著抑制IL-4Rα与IL-4以及IL-4Rα与IL-13的结合，而对于哺乳动物本身没有可见的毒副作用。在此基础上完成了本发明。
在一方面，本公开涉及特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段。
根据前一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO：2-4、12-14、22-24、32-34、42-44、52-54、62-64、72-74、82-84、92-94、102-104、112-114、122-124、132-134、142-144、152-154、162-164、172-174、177-179、182-184、187-189、192-194、197-199、202-204、207-209或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：7-9、17-19、27-29、37-39、47-49、57-59、67-69、77-79、87-89、97-99、107-109、117-119、12-129、137-139、147-149、157-159、167-169、212-214、217-219、222-224、227-229或任何变体的轻链CDR。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO：2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、177、182、187、192、197、202、207，或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、133、143、153、163、173、178、183、188、193、198、203、208，或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、179、184、189、194、199、204、209，或其任何变体的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、212、217、222、227或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：8、18、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、213、218、223、228或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID N0：9、19、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、214、219、224、229或其任何变体的轻链CDR3。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、176、181、186、191、196、201、206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：6、16、26、36、46、56、66、77、86、96、106、116、126、136、146、156、166、211、216、221、226或其任何变体的轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID N0：171或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID NO：176或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID N0：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：211或其任何变体的轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ ID N0：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其中所述抗体是抗体片段。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段阻断hIL-4与hIL-4Rα相互作用，优选地，所述抗体或其功能片段还阻断hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合。
根据前述任一方面的抗体或其功能片段，其中所述抗体或其功能片段是人源化的。
抗体或其功能片段，其与前述任一方面的抗体或其功能片段具有至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性。
编码如前述任一方面的抗体或其功能片段的核酸分子，或与其具有至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的核酸分子。
含有如前述任一方面的核酸的载体。
含有如前述任一方面的载体的细胞。
包含如前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸和药学上可接受的载体的药物组合物。
治疗哺乳动物中变应性疾病的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
治疗癌症的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
治疗哺乳动物中哮喘的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
治疗哺乳动物中慢性阻塞性肺疾病的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
治疗哺乳动物中与IL-4和/或IL-13异常产生有关的疾病的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
抑制哺乳动物中TH-2介导的反应的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中变应性疾病的药物中的用途。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中哮喘的药物中的用途。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中慢性阻塞性肺疾病的药物中的用途。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中与IL-4和/或IL-13异常产生有关的疾病的药物中的用途。
前述任一方面的抗体或其功能片段或核酸分子或载体或细胞或药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中TH-2介导的反应的药物中的用途。
附图说明
图1A显示人的IL-4Rα胞外区蛋白大小在40K道尔顿左右，图1B显示食蟹猴的IL-4Rα胞外区蛋白大小在40K道尔顿左右；图1C显示人IL-4蛋白大小在20K道尔顿左右；图1D显示人的IL-13Rα1胞外区蛋白大小在55K道尔顿左右。
图2显示获得稳定表达hIL-4Rα的单克隆HEK293细胞。
图3A，显示5只免疫小鼠血清中抗体的滴度均可以达到1∶819200；图3B，显示编号#3、#4的免疫小鼠，其血清中的抗体可以抑制人IL-4与IL-4受体的结合；图3C，显示前期ELISA筛选到的抗体均与表达IL-4Rα的HEK293稳转细胞特异性结合；图3D，显示前期ELISA筛选到的阳性单克隆中，有15个抗体能够阻断表达hIL-4Rα的稳转细胞与人IL-4的结合。
图4A，显示hIL-4Rα可以与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合；图4B，显示候选抗体可以阻断hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合。
图5A，显示人源化候选抗体能够与表达IL-4Rα的HEK293稳转细胞特异性结合；图5B，显示候选抗体能够阻断人IL-4与表达hIL-4Rα的细胞结合。
图6A，显示hIL-4能够刺激TF-1细胞增殖；图6B显示hIL-13能够刺激TF-1细胞增殖。图6C显示人源化抗体能够抑制hIL-4刺激TF-1细胞增殖；图6D显示人源化抗体能够抑制hIL-13刺激TF-1细胞增殖；图6E显示人源化抗体能够同时抑制hIL-4与hIL-13刺激TF-1细胞增殖。
图7A，人源化候选抗体与人IL-4Rα蛋白的结合；图7B，人源化候选抗体与食蟹猴IL-4Rα的蛋白结合；图7C，人源化候选抗体不结合小鼠IL-4Rα蛋白；图7D，人源化候选抗体与大鼠IL-4Rα蛋白的结合。
具体实施方式
在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。
“白介素-4”(IL-4)涉及天然出现或内源的哺乳动物IL-4蛋白或与天然出现或内源的相应哺乳动物IL-4蛋白具有同样氨基酸序列的蛋白(如重组蛋白，合成蛋白(即用合成有机化学方法制备的蛋白质))。相应地，如此处所定义的，该术语包括成熟的IL-4蛋白、多态或等位变体、IL-4的其它同种型，以及上述的修饰的或未修饰的形式(如脂化(lipidate)或糖基化)。天然出现或内源的IL-4包括野生型蛋白质如成熟的IL-4、多态或等位变体以及其它在哺乳动物(如人，非人灵长类动物)中天然出现的同种型和突变体形式。这些蛋白可从如天然产生IL-4的来源回收或分离出来。这些蛋白质以及与天然出现或内源的相应IL-4有相同氨基酸序列的蛋白质是按相应的哺乳动物之名称命名的。例如，当相应的哺乳动物是人时，该蛋白质则称为人IL-4。本领域已知几种突变IL-4蛋白质，如WO 03/038041中所披露的。
“白介素-13”(IL-13)指的是天然出现或内源的哺乳动物IL-13蛋白或与天然出现或内源的相应哺乳动物IL-13蛋白具有同样氨基酸序列的蛋白(如重组蛋白，合成蛋白(即用合成有机化学方法制备的蛋白质))。IL-13是由许多细胞类型(包括T辅助细胞2型(Th2)细胞)分泌的细胞因子。相应地，如此处所定义的，该术语包括成熟的IL-13蛋白、多态或等位变体、IL-13的其它同种型(如通过可选剪接或其它细胞过程所产生的)，以及上述的修饰的或未修饰的形式(如脂化或糖基化)。天然出现或内源的IL-13包括野生型蛋白质如成熟的IL-13、多态或等位变体以及其它在哺乳动物中天然出现的同种型和突变形式(如人，非人灵长类动物)。例如，此处所用的IL-13包括人IL-13变体，其中位于成熟的人IL-13之110位置的Arg被Gin所置换(成熟的IL-13的110位置相当于前体蛋白质的130位置)，Gin与哮喘(特异反应性和非特异反应性哮喘)以及其它IL-13的变体有关。(Heinzmann等人，Hum MoIGenet 9：549-559(2000))。这些蛋白可从如天然产生IL-13的来源回收或分离出来。这些蛋白质以及与天然出现或内源的相应IL-13有相同氨基酸序列的蛋白质是按相应的哺乳动物之名称命名的。例如，当相应的哺乳动物是人时，该蛋白质则称为人IL-13。本领域已知有几种突变IL-13蛋白质，如WO 03/035847中所披露的。示例性人IL-13的氨基酸序列可以在例如UniProtKB登录号P35225下找到。IL-13与IL-13受体结合，IL-13受体可包括与IL-13受体亚基α1(IL13RA1)或IL-13受体亚基α2(IL13RA2)复合的IL-4受体α(IL4Rα)。例如，IL-13可以结合IL-4受体α和IL-13受体亚基α1的复合体。
就抗体链多肽序列而言，短语“基本相同”可理解为表现出与参照多肽序列至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多的序列同一性的抗体链。就核酸序列而言，该术语可理解为表现出与参照核酸序列至少大于60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的序列同一性的核苷酸序列。
术语“同一性”或“同源性”可指候选序列中与相应序列残基相同的核苷酸碱基或氨基酸残基的百分数，所述候选序列为与相应序列进行比较，经比对序列和引入空位(若有必要)以实现整段序列的最大同一性百分数且不把任何保守性取代视为序列同一性部分后。无论N端或C端延伸或插入均不应理解为降低同一性或同源性。用于比对的方法和计算机程序均易获得，并为本领域所熟知。可使用序列分析软件测量序列同一性。
抗体或抗原的“功能片段、变异体、衍生物或类似物”等以及它们的多种形式等短语和术语是指具有与全长目的抗体或抗原在性质上相同的生物活性的化合物或分子。例如，抗IL-4抗体的功能片段或类似物是可结合IL-4分子的片段或类似物，或是可防止或基本上降低配体或激动或拮抗性抗体结合IL-4的能力的片段或类似物。
“取代型”变异体是天然序列中至少一个氨基酸残基被除去并被不同的氨基酸插入其相同位置的变异体。所述取代可为单个的，其中该分子中仅有一个氨基酸被取代；或可为多个的，其中该相同分子有两个或更多的氨基酸被取代。多个取代可位于连续的位点。同样，一个氨基酸可被多个残基取代，其中这样的变异体包括取代和插入二者。“插入型”变异体是一个或多个氨基酸被插入到紧邻一段天然序列某个特定位置处的氨基酸的变异体。紧邻氨基酸意指与该氨基酸的α-羧基或α-氨基官能团连接。“缺失型”变异体是天然氨基酸序列中一个或多个氨基酸被除去的变异体。通常情况下，缺失型变异体在其分子的特定区域内有一个或两个氨基酸被缺失。
如本文所用，术语“抗体”被用于最宽泛的含义，具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、携带一个或多个CDR或源自CDR序列的抗体片段或合成多肽，只要这些多肽表现出所需的生物活性。抗体(Abs)和免疫球蛋白(Igs)是具有相同结构特征的糖蛋白。“抗体”也可指免疫球蛋白和免疫球蛋白片段，无论天然的或者部分或全部合成(例如重组)产生的，包括其至少包含免疫球蛋白分子的部分可变区的保留全长免疫球蛋白的结合特异性能力的任何片段。因此，抗体包括具有与免疫球蛋白抗原结合结构域(抗体结合位点)同源或基本上同源的结合结构域的任何蛋白。抗体包括抗体片段，例如抗肿瘤干细胞抗体片段。如本文所用，因此术语抗体包括合成抗体、重组产生的抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人抗体、非人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、胞内抗体以及抗体片段，例如但不限于Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段、Fv片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、Fd片段、Fd’片段、单链Fv(scFv)、单链Fab(scFab)、双抗体、抗独特型(抗Id)抗体、或者上述任何抗体的抗原结合片段。本文所提供的抗体包括任何免疫球蛋白类型(例如，IgG、IgM、IgD、IgE、IgA和IgY)、任何类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类(例如，IgG2a和IgG2b)的成员。
本发明所述抗体可为任何种类(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA等)、或亚类(例如IgG1、IgG2、IgG2a、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2等)的抗体(“类型”和“种类”、以及“亚型”和“亚类”在本文中可互换使用)。天然或野生型(即得自未人工操纵的群体成员)抗体和免疫球蛋白通常为约150,000道尔顿的异四聚体糖蛋白，其由两个相同的轻链(L)和两个相同的重链(H)组成。每条重链的一端具有可变结构域(VH)，随后是多个恒定结构域。每条轻链的一端具有可变结构域(VL)，另一端具有恒定结构域。所谓“未人工操纵”意指未经旨在使其含有或表达外来抗原结合分子的处理。野生型可指一个群体中发现的最普遍的等位基因或种类或指得自未操纵动物的抗体，相比较于等位基因或多态型，或得自以某种形式的操纵例如诱变、使用重组方法等改变该抗原结合分子的氨基酸的变异体或衍生物。
正如本文所使用，“抗IL-4抗体”意指可特异结合本文所定义的IL-4的抗体或源自这些抗体的多肽(衍生物)，其包括但不限于抑制或实质降低IL-4与其受体的结合或抑制IL-4活性的分子。
就抗体的可变结构域而言，术语“可变”系指抗体之间有广泛序列差异的相关分子的某些部分，且被用于针对其特异靶的特定抗体的特异识别和结合。但是，可变性在抗体的整个可变结构域内不是均匀分布的。可变性集中在被称为互补决定区域(CDRs；即CDR1、CDR2和CDR3)或超变区的三个区段，它们均位于轻链和重链的可变结构域内。可变结构域内保守程度更高的部分被称为构架(FR)区或构架序列。天然重链和轻链的每个可变结构域均包括四个FR区，其主要采用β-折叠构型，它们籍三个CDRs连接起来，CDRs形成环，所述环连接β-折叠结构并在某些情形下形成部分的β-折叠结构。每条链的CDRs通常被FR区在邻近连接起来，并且借助于来自其它链的CDR，有助于抗体靶结合位点(表位或决定簇)的形成(参看Kabat等人Sequences of Proteins of Immunological Interest，NationalInstituteof Health，Bethesda，MD(1987))。正如本文所使用，免疫球蛋白氨基酸残基的编号是依据Kabat等人的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统而进行的，除非另有说明。一个CDR可具有特异结合关联表位的能力。
本发明所用的术语“绞链”或“绞链区”系指包含抗体的第一和第二恒定结构域之间的氨基酸的柔性多肽。
如本文所用，抗体的“抗体片段”或“抗原结合片段”指全长抗体的任何部分，其少于全长，但是至少包含结合抗原的所述抗体的部分可变区(例如一个或多个CDR和/或一个或多个抗体结合位点)，并且因此保留结合特异性以及所述全长抗体的至少部分特异性结合能力。因此，抗原结合片段指包含与衍生抗体片段的抗体结合相同抗原的抗原结合部分的抗体片段。抗体片段包括通过酶促处理全长抗体所产生的抗体衍生物，以及合成产生的衍生物，例如重组产生的衍生物。抗体包括抗体片段。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab’、F(ab’)2、单链Fv(scFv)、Fv、dsFv、双抗体、Fd和Fd’片段以及其他片段，包括修饰的片段(参见，例如，Methods in Molecular Biology，Vol207：Recombinant Antibodies forCancer Therapy Methods and Protocols(2003)；Chapter 1；p 3-25，Kipriyanov)。所述片段可以包括连接在一起的多条链，例如通过二硫键和/或通过肽接头。抗体片段一般包含至少或约50个氨基酸，并且典型至少或约200个氨基酸。抗原结合片段包括任何抗体片段，其在被插入抗体框架(例如通过置换相应区域)时获得免疫特异性地结合(即表现出至少或至少约107-108M-1的Ka)抗原的抗体。“功能片段”或“抗IL-4和/或IL-13抗体的类似物”是可防止或实质降低所述受体结合配体或启动信号转导的能力的片段或类似物。正如本文所使用，功能片段一般与“抗体片段″含义相同，且就抗体而论，可指能防止或实质降低所述受体结合配体或启动信号转导的能力的片段，例如Fb、Fab、F(ab′)2等等。“Fv”片段由一条重链的可变结构域和一条轻链的可变结构域籍非共价结合方式而形成的二聚体(VH-VL二聚体)组成。在该构型中，每个可变结构域的三个CDRs相互作用，以确定VH-VL二聚体表面上的靶结合位点，与完整抗体的情况一样。所述六个CDRs共同赋予完整抗体的靶结合特异性。但是，即使是单个可变结构域(或仅包括3个靶特异的CDRs的Fb的一半)，仍可具有识别和结合靶的能力。
“单链Fv”、“sFv”或“scab”抗体片段包括抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域位于单条多肽链上。一般而言，所述Fv多肽还包括一段位于VH和VL区域之间的多肽连接体，其通常为柔性分子，可使sFv形成适合于靶结合的所需结构。
术语“双抗体(diabody)”系指具有两个抗原结合位点的抗体片段，这些片段可包括与同一多肽链的轻链可变结构域(VL)相连的重链可变结构域(VH)。通过使用过短的连接体使得同一条链上的两个可变结构域无法配对，所述双抗体结构域被迫与另一条链的结合结构域配对，生成两个抗原结合位点。
Fab片段含有轻链的可变结构域和恒定结构域以及重链的可变和第一个恒定结构域(CH1)。Fab′片段与Fab片段的不同之处在于前者在CH1结构域的羧基端加入数个残基，以包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸。通过裂解位于F(ab′)2胃蛋白酶消化产物的铰链半胱氨酸处的二硫键，可生成Fab′片段。对抗体另外进行酶处理和化学处理可生成其它目的功能片段。
术语“线性Fab”系指Miller等所述之四价抗体(Miller等人(2003)，JImmunol.170：4854-4861)。“线性Fab”是由一连串相同的CH1-VH结构域组成的，在每一个CH1-VH位置与相同的轻链配对。研发了这些分子是为了增加抗体的效价并透过亲合力效应来增强其功能性亲和力，但是，它们是单特异性的。
如本文所用，“单克隆抗体”指相同抗体的群体，表示单克隆抗体群体中的每个单独的抗体分子与其他抗体分子相同。这种特性与抗体的多克隆群体的特性相反，所述抗体的多克隆群体包含具有多种不同序列的抗体。单克隆抗体可以通过许多公知的方法来制备(Smith et al.(2004)J.Clin.Pathol.57，912-917；和Nelson et al.，J Clin Pathol(2000)，53，111-117)。例如，单克隆抗体可以通过永生化B细胞来制备，例如通过与骨髓瘤细胞融合以产生杂交瘤细胞系或者通过用诸如EBV的病毒感染B细胞。重组技术还可以用来在体外通过用携带编码抗体的核苷酸的人工序列的质粒转化宿主细胞来从宿主细胞的克隆群体制备抗体。
如本文中所用，术语“杂交瘤”或“杂交瘤细胞”指由融合产抗体的淋巴细胞和不产抗体的癌细胞而产生的细胞或细胞系(通常为骨髓瘤或淋巴瘤细胞)。如本领域普通技术人员所知的，杂交瘤可增殖并持续供应产生特定单克隆抗体。用于产生杂交瘤的方法为本领域已知的(见例如，Harlow&Lane，1988)。当提及术语“杂交瘤”或“杂交瘤细胞”时，其还包括杂交瘤的亚克隆和后代细胞。
如本文所用，“常规抗体”指包含两条重链(其可以标示为H和H’)和两条轻链(其可以标示为L和L’)和两个抗原结合位点的抗体，其中每条重链可以是全长免疫球蛋白重链或保留抗原结合能力的其任何功能区(例如重链包括但不限于VH链、VH-CHl链和VH-CH1-CH2-CH3链)，并且每条轻链可以是全长轻链或任何功能区(例如轻链包括但不限于VL链和VL-CL链)。每条重链(H和H’)与一条轻链(分别为L和L’)配对。
如本文所用，全长抗体是具有两条全长重链(例如VH-CH1-CH2-CH3或VH-CH1-CH2-CH3-CH4)和两条全长轻链(VL-CL)和铰链区的抗体，例如通过抗体分泌B细胞天然产生的抗体以及合成产生的具有相同结构域的抗体。
如本文所用，dsFv指具有稳定VH-VL对的工程化分子间二硫键的Fv。
如本文所用，Fab片段是用木瓜蛋白酶消化全长免疫球蛋白所获得的抗体片段，或者例如通过重组方法合成产生的具有相同结构的片段。Fab片段包含轻链(包含VL和CL)和另一条链，所述另一条链包含重链的可变结构域(VH)和重链的一个恒定区结构域(CH1)。
如本文所用，F(ab’)2片段是在pH4.0-4.5下用胃蛋白酶消化免疫球蛋白所导致的抗体片段，或者例如通过重组方法合成产生的具有相同结构的片段。F(ab’)2片段基本上包含两个Fab片段，其中每个重链部分包含额外的几个氨基酸，包括形成连接两个片段的二硫键的半胱氨酸。
如本文所用，Fab’片段是包含F(ab’)2片段的一半(一条重链和一条轻链)的片段。
如本文所用，scFv片段指包含通过多肽接头以任何顺序共价连接的可变轻链(VL)和可变重链(VH)的抗体片段。接头长度使得两个可变结构域基本不干扰地桥接。示例性接头是分散有一些Gh或Lys残基以增加溶解性的(Gly-Ser)n残基。
术语“嵌合抗体”是指这样的抗体，其中可变区序列源自一个物种，恒定区序列源自另一物种，如其中可变区序列源自小鼠抗体及恒定区序列源自人抗体的抗体。
“人源化”抗体是指非人(例如小鼠)抗体形式，其是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或者其片段(如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或者抗体的其它抗原结合亚序列)，含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。优选地，人源化抗体是人免疫球蛋白(接受者抗体)，其中接受者抗体的互补决定区(CDR)的残基由来自具有希望的特异性、亲和性和能力的非人物种(供体抗体)如小鼠、大鼠或者兔的CDR残基置换。
此外，在人源化中，还可能对VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3区内的氨基酸残基进行突变，由此改善抗体的一或多种结合特性(例如亲和性)。可进行例如PCR介导的突变引入突变，其对抗体结合或其它功能特性的影响可利用本文所述的体外或体内测试评估。通常，引入保守性突变。此类突变可为氨基酸取代、添加或缺失。另外，CDR内的突变通常不超过一个或两个。因此，本发明所述人源化抗体还涵盖CDR内包含1或2两个氨基酸突变的抗体。
如本文所用，术语“表位”指抗体的互补位结合的抗原上的任何抗原决定簇。表位决定簇通常包含分子的化学活性表面分型，例如氨基酸或糖侧链，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。
如本文所用，可变结构域或可变区是抗体重链或轻链的特定Ig结构域，其包含在不同抗体之间变化的氨基酸序列。每条轻链和每条重链分别具有一个可变区结构域VL和VH。可变结构域提供抗原特异性，并且因此负责抗原识别。每个可变区包含CDR和框架区(FR)，CDR是抗原结合位点结构域的部分。
如本文所用，“抗原结合结构域”和“抗原结合位点(antigen-binding site)”同义地用来指识别并与同种(cognate)抗原物理相互作用的抗体内的结构域。天然的常规全长抗体分子具有两个常规抗原结合位点，每个包含重链可变区部分和轻链可变区部分。常规抗原结合位点包含连接可变区结构域内反向平行的β链的环。抗原结合位点可以包含可变区结构域的其他部分。每个常规抗原结合位点包含3个来自重链的高变区和3个来自轻链的高变区。高变区也称为互补决定区(CDR)。
如本文所用，“高变区”、“HV”、“互补决定区”和“CDR”和“抗体CDR”可交换地用来指一起形成抗体的抗原结合位点的每个可变区内的多个部分中的一个。每个可变区结构域包含3个CDR，命名为CDR1、CDR2和CDR3。例如，轻链可变区结构域包含3个CDR，命名为VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3；重链可变区结构域包含3个CDR，命名为VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3。可变区中的3个CDR沿线性氨基酸序列是不连续的，但是在折叠的多肽中接近。CDR位于连接可变结构域的β折叠的平行链的环内。如本文所述，本领域技术人员知道并且可以基于Kabat或Chothia编号鉴定CDR(参见例如，Kabat，E.A.et a1.(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest，Fifth Edition，U.S.Department of Health and HumanServices，NIH Publication No.91-3242，和Chothia，C.etal.(1987)J.M0l.Biol.196：901-917)。
如本文所用，框架区(FR)是位于β折叠内的抗体可变区结构域内的结构域；在氨基酸序列方面，FR区比高变区相对更保守。
如本文所用，“恒定区”结构域是抗体重链或轻链中的结构域，其包含比可变区结构域的氨基酸序列相对更保守的氨基酸序列。在常规全长抗体分子中，每条轻链具有单个轻链恒定区(CL)结构域，而每条重链包含一个或多个重链恒定区(CH)结构域，包括CHl、CH2、CH3和CH4。全长IgA、IgD和IgG同种型包含CHl、CH2、CH3和铰链区，而IgE和IgM包含CHl、CH2、CH3和CH4。CH1和CL结构域延伸抗体分子的Fab臂，因此有助于与抗原相互作用以及转动抗体臂。抗体恒定区可以服务于效应子功能，例如但不限于清除该抗体特异性结合的抗原、病原体和毒素，例如通过与各种细胞、生物分子和组织相互作用。
如本文所用，抗体的功能区是包含该抗体的至少VH、VL、CH(例如CH1、CH2或CH3)、CL或铰链区结构域或者至少其功能区的抗体部分。
如本文所用，VH结构域的功能区是保留完整VH结构域的至少部分结合特异性(例如通过保留完整VH结构域的一个或多个CDR)的完整VH结构域的至少一部分，从而所述VH结构域的功能区单独地或者与另一抗体结构域(例如VL结构域)或其区域组合地结合抗原。示例性VH结构域的功能区是包含VH结构域的CDR1、CDR2和/或CDR3的区域。
如本文所用，VL结构域的功能区是保留完整VL结构域的至少部分结合特异性(例如通过保留完整VL结构域的一个或多个CDR)的完整VL结构域的至少一部分，从而所述VL结构域的功能区单独地或者与另一抗体结构域(例如VH结构域)或其区域组合地结合抗原。示例性VL结构域的功能区是包含VL结构域的CDR1、CDR2和/或CDR3的区域。
如本文所用，关于抗体或其抗原结合片段的“特异性结合”或“免疫特异性地结合”在本文中可交换使用，并且指抗体或抗原结合片段通过抗体和抗原的抗体结合位点之间的非共价相互作用与同种抗原形成一个或多个非共价键的能力。所述抗原可以是分离的抗原或存在于肿瘤细胞。通常，免疫特异性地结合(或特异性结合)抗原的抗体是以约或1×107M-1或1x108M1或更大的亲和常数Ka(或者1x10-7M或1×10-8M或更低的解离常数(Kd))结合所述抗原。亲和常数可以通过抗体反应的标准动力学方法来测定，例如，免疫测定、表面等离子共振(SPR)(Richand Myszka(2000)Curr.Opin.Biotechnol11：54；Englebienne(1998)Analyst.123：1599)、等温滴定量热法(ITC)或本领域已知的其他动力学相互作用测定(参见，例如，Paul，ed.，Fundamental Immunology，2nd ed.，Raven Press，New York，pages 332336(1989)；还参见描述用于计算抗体的结合亲和力的示例性SPR和ITC方法的美国专利第7,229,619号)。用于实时检测和监测结合速率的仪器和方法是已知的，并且可商购(参见，BiaCore2000，Biacore AB，Upsala，Sweden and GE Healthcare Life Sciences；Malmqvist(2000)Biochem.Soc.Trans.27：335)。
如本文所用，关于抗体的术语“竞争”是指第一抗体或其抗原结合片段以与第二抗体或其抗原结合片段足够相似的方式结合一个表位，由此第一抗体与其关联表位的结合结果在存在第二抗体的条件下与不存在第二抗体的条件下相比可检测地降低。或者，在第二抗体与其表位的结合在存在第一抗体条件下也可检测地降低的情况中，可以但不必需是这种情况。也就是说，第一抗体可以抑制第二抗体与其表位的结合，而不用第二抗体抑制第一抗体与其各自表位的结合。然而，在每个抗体均可检测地抑制另一抗体与其关联表位或配体的结合的情况中，无论是相同、更高或更低程度，所述抗体被称为彼此“交叉竞争”结合其各自的表位。竞争及交叉竞争抗体均涵盖在本发明中。无论这种竞争或交叉竞争发生的机制如何(例如位阻、构象改变或者结合共同表位或其片段)，本领域技术人员基于本发明提供的教导将意识到这种竞争和/或交叉竞争抗体涵盖在本发明中且可用于本发明揭示的方法中。
如本文所用，“多肽”指共价连接的两个或更多个氨基酸。术语“多肽”和“蛋白质”在本文中可交换使用。
“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”指所述蛋白质、多肽或抗体(1)不与在其天然状态下伴随其天然相关成分关联，(2)不含来自相同物种的其它蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)不在天然中发生。因此，经化学合成的多肽或在不同于多肽的天然来源细胞的细胞系统中合成的多肽将会与其天然相关成分″分离″。还可通过分离以使蛋白质实质上不含天然相关成分，即使用本领域众所周知的蛋白质纯化技术。
在肽或蛋白中，合适的保守氨基酸取代是本领域技术人员已知的，并且一般可以进行而不改变所得分子的生物活性。通常，本领域技术人员认识到多肽的非必需区中的单个氨基酸取代基本上不改变生物活性(参见，例如，Watson et al.，Molecular Biology ofthe Gene，4th Edition，1987，The Benjamin/Cummings Pub.co.，p.224)。
如本文所用，术语“多核苷酸”和“核酸分子”指包含至少两个连接的核苷酸或核苷酸衍生物的寡聚体或聚合物，包括通常通过磷酸二酯键连接在一起的脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。
如本文所用，分离的核酸分子是从存在于核酸分子的天然来源中的其他核酸分子分离的核酸分子。诸如cDNA分子的“分离的”核酸分子可以在通过重组技术制备时基本上不含其他细胞物质或培养基，或者在化学合成时基本上不含化学前体或其他化学成分。本文所提供的示例性分离的核酸分子包括编码所提供的抗体或抗原结合片段的分离的核酸分子。
序列“相同性”或“同一性”具有本领域公认的含义，并且可以利用公开的技术计算两个核酸或多肽分子或区域之间序列相同性的百分比。可以沿着多核苷酸或多肽的全长或者沿着该分子的区域测量序列相同性。(参见，例如：Computational MolecularBiology，Lesk，A.M.，ed.，Oxford University Press，New York，1988；Biocomputing：Informaticsand Genome Projects，Smith，D.W.，ed.，Academic Press，New York，1993；ComputerAnalysis of Sequence Data，Part I，Griffin，A.M.，and Griffin，HI.G.，eds.，HumanaPress，New Jersey，1994；Sequence Analysis in Molecular Biology，yon Heinje，G.，Academic Press，1987；and Sequence AnalysisPrimer，Gribskov，M.and Devereux，J.，eds.，M Stockton Press，New York，1991)。虽然存在许多测量两个多核苷酸或多肽之间的相同性的方法，但是术语“相同性”是技术人员公知的(Carrillo，H.&Lipman，D.，SIAM JApplied Math 48：1073(1988))。
如本文所用，关于核酸序列、区域、元件或结构域的“可操作地连接”表示核酸区域互相功能相关。例如，启动子可以可操作地连接至编码多肽的核酸，从而所述启动子调控或介导所述核酸的转录。
如本文所用，“表达”指通过多核苷酸的转录和翻译产生多肽的过程。多肽的表达水平可以利用本领域已知的任何方法来评价，包括例如测定从宿主细胞产生的多肽的量的方法。这类方法可以包括但不限于通过ELISA定量细胞裂解物中的多肽，凝胶电泳之后考马斯蓝染色，Lowry蛋白测定以及Bradford蛋白测定。
如本文所用，“宿主细胞”是用于接受、保持、复制和扩增载体的细胞。宿主细胞还可以用来表达载体所编码的多肽。当宿主细胞分裂时，载体中所含的核酸复制，从而扩增核酸。宿主细胞可以是真核细胞或原核细胞。合适的宿主细胞包括但不限于CHO细胞、各种COS细胞、HeLa细胞、HEK细胞例如HEK 293细胞。
“密码子优化”是指通过用在宿主细胞的基因中更频繁地或者最频繁地使用的密码子代替天然序列的至少一个密码子(例如约或多于约1、2、3、4、5、10、15、20、25、50个或更多个密码子同时维持该天然氨基酸序列而修饰核酸序列以便增强在感兴趣宿主细胞中的表达的方法。不同的物种对于特定氨基酸的某些密码子展示出特定的偏好。密码子偏好性(在生物之间的密码子使用的差异)经常与信使RNA(mRNA)的翻译效率相关，而该翻译效率则被认为依赖于被翻译的密码子的性质和特定的转运RNA(tRNA)分子的可用性。细胞内选定的tRNA的优势一般反映了最频繁用于肽合成的密码子。因此，可以将基因定制为基于密码子优化在给定生物中的最佳基因表达。密码子利用率表可以容易地获得，例如在www.kazusa.orjp/codon/上可获得的密码子使用数据库(“Codon Usage Database”)中，并且这些表可以通过不同的方式调整适用。参见，Nakamura Y.等，“Codon usage tabulatedfrom the international DNA sequence databases：status for theyear2000.Nucl.Acids Res.，28：292(2000)。
如本文所用，“载体”是可复制的核酸，当载体转化入适当的宿主细胞时，可以从该载体表达一种或多种异源蛋白。关于载体包括那些通常通过限制酶切消化和连接可以将编码多肽或其片段的核酸引入其中的载体。关于载体还包括那些包含编码多肽的核酸的载体。载体用来将编码多肽的核酸引入宿主细胞，用于扩增核酸或者用于表达/展示核酸所编码的多肽。载体通常保持游离，但是可以设计为使基因或其部分整合入基因组的染色体。还考虑人工染色体的载体，例如酵母人工载体和哺乳动物人工染色体。这类媒介物的选择和用途是本领域技术人员公知的。
如本文所用，载体还包括“病毒载体”或“病毒的载体”。病毒的载体是工程化的病毒，其可操作地连接至外源基因以将外源基因转移(作为媒介物或穿梭(shuttle))入细胞。
如本文所用，“表达载体”包括能够表达DNA的载体，所述DNA与诸如启动子区的能够影响这类DNA片段表达的调控序列可操作地连接。这类额外的片段可以包括启动子和终止子序列，并且任选地可以包括一个或多个复制起点、一个或多个选择标记、增强子、多腺苷酸化信号等。表达载体一般来源于质粒或病毒DNA，或者可以包含这两者的元件。因此，表达载体指重组DNA或RNA构建体，例如质粒、噬菌体、重组病毒或其他载体，当引入适当的宿主细胞时，导致克隆DNA的表达。适当的表达载体是本领域技术人员公知的，并且包括在真核细胞和/或原核细胞中可复制的表达载体以及保持游离的表达载体或者整合入宿主细胞基因组的表达载体。
如本文所用，“治疗”患有疾病或疾病状况的个体表示所述个体的症状部分或全部缓解，或者在治疗后保持不变。因此，治疗包括预防、治疗和/或治愈。预防指防止潜在疾病和/或防止症状恶化或疾病发展。治疗还包括所提供的任何抗体或其抗原结合片段以及本文所提供的组合物的任何药学用途。
如本文所用，“疗效”表示由个体的治疗所导致的效果，其改变、通常改良或改善疾病或疾病状况的症状，或者治愈疾病或疾病状况。
如本文所用，“治疗有效量”或“治疗有效剂量”指施用于对象之后至少足以产生疗效的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量。因此，其为防止、治愈、改善、阻滞或部分阻滞疾病或病症的症状所必需的量。
如本文所用，“预防有效量”或“预防有效剂量”指在施用于对象时会具有预期的预防效果的物质、化合物、材料或包含化合物的组合物的量，例如，防止或延迟疾病或症状的发生或复发，减少疾病或症状发生或复发的可能性。完全预防有效剂量不必通过施用一个剂量发生，并且可以仅在施用一系列剂量之后发生。因此，预防有效量可以在一次或多次施用中施用。
如本文中所使用的，术语“患者”是指哺乳动物，例如人。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：2-4、12-14、22-24、32-34、42-44、52-54、62-64、72-74、82-84、92-94、102-104、112-114、122-124、132-134、142-144、152-154、162-164、172-174、177-179、182-184、187-189、192-194、197-199、202-204、207-209或其任何变体的重链CDR，和/或选自氨基酸序列SEQ IDNO：7-9、17-19、27-29、37-39、47-49、57-59、67-69、77-79、87-89、97-99、107-109、117-119、127-129、137-139、147-149、157-159、167-169、212-214、217-219、222-224、227-229或任何变体的轻链CDR。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：2、12、22、32、42、52、62、72、82、92、102、112、122、132、142、152、162、172、177、182、187、192、197、202、207，或其任何变体的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：3、13、23、33、43、53、63、73、83、93、103、113、123、133、143、153、163、173、178、183、188、193、198、203、208，或其任何变体的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：4、14、24、34、44、54、64、74、84、94、104、114、124、134、144、154、164、174、179、184、189、194、199、204、209，或其任何变体的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：7、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、212、217、222、227或其任何变体的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：8、18、28、38、48、58、68、78、88、98、108、118、128、138、148、158、168、213、218、223、228或其任何变体的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：9、19、29、39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、214、219、224、229或其任何变体的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、176、181、186、191、196、201、206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、211、216、221、226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：2的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：3的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：4的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：7的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：8的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：9的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：12的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：13的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：14的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：17的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：18的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：19的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：22的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：23的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：24的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：27的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：28的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：29的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：32的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：33的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：34的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：37的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDN0：38的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：39的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：42的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：43的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：44的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：47的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：48的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：49的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：52的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：53的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：54的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：57的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：58的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：59的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：62的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：63的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：64的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：67的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：68的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：69的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：72的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：73的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：74的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：77的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：78的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：79的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：82的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：83的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：84的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：87的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDN0：88的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：89的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：92的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：93的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：94的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：97的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQ IDNO：98的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：99的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：102的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：103的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：104的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：107的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID N0：108的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：109的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：112的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：113的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：114的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：117的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：118的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：119的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：122的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：123的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：124的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：127的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID N0：128的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：129的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：132的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：133的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：134的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：137的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID N0：138的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：139的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：142的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：143的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：144的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：147的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID N0：148的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：149的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：152的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：153的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：154的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：157的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：158的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：159的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：162的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：163的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：164的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：167的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID N0：168的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：169的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：172的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：173的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：174的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：182的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：183的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：184的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：187的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：188的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：189的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：192的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：193的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：194的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：197的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：198的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：199的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：202的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：203的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：204的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：207的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：208的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：209的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：212的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：213的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：214的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：172的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：173的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：174的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：177的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：178的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：179的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：182的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：183的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：184的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：187的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：188的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：189的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：192的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：193的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：194的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：197的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：198的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：199的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：202的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：203的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：204的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：207的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：208的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：209的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：217的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：218的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：219的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：172的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：173的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：174的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：177的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：178的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：179的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：182的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：183的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：184的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：187的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：188的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：189的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：192的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：193的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：194的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：197的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：198的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：199的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：202的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：203的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：204的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：207的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：208的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：209的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：223的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：172的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：173的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：174的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：177的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：178的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：179的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：182的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：183的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：184的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：187的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：188的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：189的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：192的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：193的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：194的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：197的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：198的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：199的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：202的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：203的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：204的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：207的重链CDR1，选自氨基酸序列SEQ ID NO：208的重链CDR2，选自氨基酸序列SEQ IDNO：209的重链CDR3；和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：227的轻链CDR1，选自氨基酸序列SEQID NO：228的轻链CDR2，选自氨基酸序列SEQ ID NO：229的轻链CDR3。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：1或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：6或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：11或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：16或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：21或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：26或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：31或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：36或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：41或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：46或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：51或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：56或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：61或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：66或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：71或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：76或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：81或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：86或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：91或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：96或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：101或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：106或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：111或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：116或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：111或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：116或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：121或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：126或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：131或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：136或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：141或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：146或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：151或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：156或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：161或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：166或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：171或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：176或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：181或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：186或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：191或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：201或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：211或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：171或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：176或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：181或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：186或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：191或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：201或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：216或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：171或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：176或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：181或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：186或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：191或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：201或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：221或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：171或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：176或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID N0：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：181或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：186或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：191或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：196或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：201或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及一种抗体或其功能片段，其包含选自氨基酸序列SEQ IDNO：1、11、21、31、41、51、61、71、81、91、101、111、121、131、141、151、161、171、176、181、186、191、196、201、206或其任何变体的重链可变区，和/或选自氨基酸序列SEQ ID NO：6、16、26、36、46、56、66、76、86、96、106、116、126、136、146、156、166、211、216、221、226或其任何变体的轻链可变区。
在一方面，本公开涉及编码本文所披露抗体或其功能片段或变体变体的分离的核酸序列，含有编码本发明的抗体或其功能片段的IL-4和/或IL-13结合部分的核苷酸序列的载体构建体，含有这种载体的宿主细胞，以及生产多肽的重组技术。
在一方面，本公开还包括试剂盒，例如所述试剂盒包括本公开的抗体、其片段、同源物、其衍生物等，例如带标记或具有细胞毒性的辍合物，以及抗体使用说明书、杀死特定类型细胞的辍合物等等。该说明书可包括在体外、体内或离体使用抗体、辍合物等的指导。抗体可以是液体形式或固体，通常是冻干的。该试剂盒可包含其它适宜的试剂，如缓冲液、重构溶液以及为了预定用途的其它必要成分。考虑了以预定量包装好的试剂组合与用于其用途的说明书，所述用途例如用于治疗用途或用于进行诊断测定。当抗体是带标记的时，例如用酶标记的，那么该试剂盒可包括底物和酶所需的辅因子(例如提供可检测生色团或荧光团的底物前体)。此外，其它添加剂，如稳定剂、缓冲液(例如封闭缓冲液或裂解缓冲液)等也可包括在内。多种试剂的相对量可以改变而提供试剂溶液的浓缩物，这就提供了用户灵活性、节省空间、节省试剂等。这些试剂也可以干粉形式提供，通常是冻干形式，包括赋形剂，它在溶解时可提供具有适当浓度的试剂溶液。
本发明之抗体可用于治疗哺乳动物。在一个实施方案中，例如，出于获得临床前数据的目的，将目的抗体或等效物施用给非人哺乳动物。示例性的待治疗非人哺乳动物，包括非人灵长类动物、狗、猫、啮齿类动物以及其它哺乳动物，其中进行了临床前研究。这种哺乳动物可为需用抗体治疗的疾病的建立的动物模型，或可用于研究目的抗体的毒性。在每个这样的实施方案中，可在哺乳动物中进行剂量递增研究。
抗体，无论有无第二个组分(如与之缀合的治疗剂部分)，无论是单独或与细胞毒性因子组合施用，均可作为治疗剂使用。本发明涉及以抗体为基础的疗法，其中保留给动物、哺乳动物或人施用本发明之抗体，以治疗IL-4和/或IL-13介导的疾病、障碍或状况。
本发明所使用的术语″治疗″是指治疗性治疗和预防性或预防措施。它指的是预防、治愈、逆转、减弱、改善、最小化、抑制或停止疾病状态、疾病进程、疾病致病因素(如细菌或病毒)或其它异常状况的有害效应。
因此，本发明还包含多价抗体，包括双特异抗IL-4/IL-13抗体，其具有与之相连的诊断或治疗功能的效应分子、原子或其它物质。例如，抗体可具有放射性诊断标签或放射性细胞毒性原子或金属或细胞毒性物质如蓖麻毒蛋白链，与之相连用于癌症的体内诊断或治疗。
此外，本发明的抗体还可用于免疫测定、纯化方法以及其它用到免疫球蛋白或其片段的方法。此类用途在本领域为人所熟知。
相应地，本发明还提供包含本发明的抗IL-13和/或抗IL-4的抗体或其片段的组合物，所述抗体方便地和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合，这是本领域的常规做法。
本发明所使用的术语″药物组合物″系指多种制备物的制剂。含有治疗有效量的多价抗体的制剂为无菌液体溶液、液体悬浮剂或冻干形式，任选地包含稳定剂或赋形剂。
本发明所使用的术语″障碍″系指任何能够得益于本发明抗体治疗的状况。这包括慢性和急性障碍或疾病，包括那些倾向于使哺乳动物，尤其是人染上所述障碍的病理状况。本文中非限制性的有待治疗的障碍之实例包括癌症、炎症、自身免疫疾病、感染、心血管疾病、呼吸疾病、神经疾病以及代谢性疾病。
本发明的抗体可用来治疗、抑制或预防疾病，如变应性疾病、Th2介导的疾病、IL-13介导的疾病、IL-4介导的疾病和/或IL-4/IL-13介导的疾病。此类疾病的实例包括霍奇金病、哮喘、变应性哮喘、特应性皮炎、特应性变态反应、溃疡性结肠炎、硬皮病、变应性鼻炎、COPD3特发性肺纤维化、慢性移植排斥、博来霉素诱导的肺纤维化、辐射诱导的肺纤维化、肺部肉芽肿、进行性系统性硬化、血吸虫病、肝纤维化、肾癌、伯基特淋巴瘤、霍奇金病、非-霍奇金病、塞扎里综合征、哮喘、浓毒性关节炎、疱疹样皮炎、慢性特发性荨麻疹、溃疡性结肠炎、硬皮病、肥厚性疤痕、Whipple病、良性前列腺增生、IL-4受体起作用的肺部障碍、IL-4受体介导的上皮屏障破坏起作用的状况、IL-4受体起作用的消化系统障碍、对药物的变应性反应、川崎病、镰状细胞病、Churg-Strauss综合征、Grave’s病、先兆子痫、Sjogren’s综合征、自身免疫性淋巴组织增生综合征、自身免疫性溶血性贫血、Barrett’s食管、自身免疫性葡萄膜炎、肺结核、囊性纤维化、变应性支气管肺真菌病、慢性阻塞性肺病、博来霉素诱导的肺病和纤维化、肺泡蛋白沉积症(pulmonary alveolar proteinosis)、成人呼吸窘迫综合征、结节病、高IgE综合征、特发性嗜伊红细胞增多综合征(idiopathic hypereosinophilsyndrome)、自身免疫性发疱病(autoimmune blisteringdisease)、寻常型天疱疮、大疱性类天疱疮、重症肌无力、慢性疲劳综合征、肾病。
术语“变应性疾病‘系指病理状况，其中患者对一种正常情况下非免疫原性的物质超敏并作出免疫反应。变应性疾病的一般特征是IgE激活肥大细胞而造成炎症反应(如局部反应、全身反应)，这类反应可导致如流鼻涕那样的良性症状，也可能是危及生命的过敏性休克和死亡。变应性疾病的实例包括但不限于变应性鼻炎(如花粉症)、哮喘(如变应性哮喘)、变应性皮炎(如湿疹)、接触性皮炎、食物过敏和荨麻疹(荨麻疹(hive))。
此处所使用的“Th2介导的疾病”系指一种疾病，其病理是(全部或部份)由CD4+Th2T淋巴样细胞调控的免疫反应(Th2型免疫反应)造成的，其特征地形成IL-4、IL-5、IL-9和IL-13。Th2型免疫反应与某些细胞因子(如IL-4，IL-13)和某些类别的抗体(如IgE)的产生以及体液免疫有关。Th2介导的疾病的特征是Th2细胞因子(如IL-4，IL-13)和/或某些类别的抗体(如IgE)的升高水平的存在，包括例如变应性疾病(如变应性鼻炎、特发性皮炎、哮喘(如特发性哮喘)、变应性气道疾病(AAD)、过敏性休克、结膜炎)，与IL-4和/或IL-13水平增高有关的自身免疫障碍(如类风湿性关节炎、宿主vs移植物疾病、肾病(如肾病综合征、狼疮性肾炎))，以及与IL-4和/或IL-13水平升高有关的感染(如病毒、寄生虫、真菌(如白色念珠菌(C.albicans))感染)。有些癌症与IL-4和/或IL-13的升高水平有关，或与IL-4诱导的和/或IL-13诱导的癌细胞增殖有关(如B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、头颈癌、乳腺癌和卵巢癌)。这些癌症可用本发明的Ii gaud治疗、抑制或预防。
本发明所使用的术语“癌症”系指或描述了哺乳动物尤其是人的生理状况，其典型特点是细胞无调控地生长。癌症的实例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。
本发明所使用的术语“自身免疫疾病”系指由于个体自身组织并针对自身组织的非恶性疾病或障碍。自身免疫疾病或障碍的实例包括但不限于炎症性反应如炎症性皮肤病，包括银屑病和皮炎；变应性状况如湿疹和哮喘；其它涉及T细胞浸润和慢性炎症反应的症状；动脉粥样硬化、糖尿病(如I型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病)；多发性硬化和中枢神经系统炎症性障碍。
本发明的抗体可以作为单独施用的组合物使用，或可与其它活性剂联合使用。抗体可以与现有的IL-13疗法(例如现有的IL-13活性剂如抗IL-13Rαl、IL-4/13Trap、抗IL-13)加抗IL-4抗体，以及现有的IL-4活性剂(如抗IL-4R、IL-4突变蛋白质、IL-4/13Trap)加抗IL-13抗体和IL-4抗体(如WO05/0076990(CAT)，WO03/092610(Regeneron)，W000/64944(Genetic Inst.)以及W02005/062967(Tanox))一起用于组合疗法中。
编码如前述任一方面的抗体或其功能片段的核酸。
含有如前述任一方面的核酸的载体。
含有如前述任一方面的载体的细胞。
包含如前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸和药学上可接受的载体的药物组合物。
治疗哺乳动物中变应性疾病的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的根据前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
治疗哺乳动物中变应性疾病的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
治疗癌症的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
治疗哺乳动物中哮喘的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
治疗哺乳动物中与IL-4和/或IL-13异常产生有关的疾病之方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
抑制哺乳动物中TH-2介导的反应的方法，其包括下述步骤：向所述哺乳动物施用治疗有效量的前述任一方面的抗体或其功能片段或其编码核酸。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”旨在包括与药物给药相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延缓剂等。合适载体描述于最新版的Remington’s Pharmaceutical Sciences中，这是本领域的标准参考书目，其以引用方式并入本文。此类载体或稀释剂的优选示例包括但不限于水、盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％的人血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体，例如固定化油。将此类介质和试剂用于药物活性物质是本领域熟知的。除去任何常规的介质或试剂与抗体不相容之外，设想其在组合物中的用途。
待用于体内施用的制剂必须为无菌的。这可容易地通过无菌滤膜过滤实现。
将所述实施方案的药物组合物配制成与其预期施用途径相容。给药途径的示例包括肠胃外，例如静脉内、皮内、皮下、经口(例如吸入)、经皮(即局部的)、经粘膜和直肠给药。用于肠胃外、皮内或皮下施用的溶液或悬浮液可包括以下组分：注射用无菌稀释剂例如水、盐溶液、固定油、聚乙二醇类、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐、以及调节渗透压的试剂，例如氯化钠或右旋糖。pH可用酸或碱进行调节，例如盐酸或氢氧化钠。可将肠胃外制剂包装在安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料制多剂量小瓶内。
适于注射用途的药物组合物包括无菌水性溶液(在此是水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany，N.J.)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况下，组合物必须是无菌的并且应当为流动性达到易于注射的程度。其在制造和储存条件下必须是稳定的并且必须能防止微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇等)的溶剂或分散介质，及其适宜的混合物。例如通过利用涂层例如卯磷脂，在分散体情况下维持所需颗粒尺寸，以及利用表面活性剂，可以保持适宜的流动性。对微生物作用的防止可以通过各种抗细菌剂和抗真菌剂例如对羟基苯甲酸酯、氯代丁醇、苯酚、抗坏血酸、硫柳汞等来实现。在许多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨醇)、氯化钠。注射用组合物的延长吸收可通过在所述组合物中包含延缓吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。
根据需要，可以通过将抗体以所需量掺入具有上文所列成分中的一种或组合(按需要)的合适溶剂中来制备无菌注射溶液，然后过滤消毒。一般来讲，通过将抗体掺入含有碱性分散介质和上文所列那些中的所需其它成分的无菌载体中来制备分散体。就用于制备无菌注射溶液的无菌粉末而言，制备方法是获得粉末的真空干燥和冷冻干燥，该粉末包含活性成分和任何另外的期望成分，它们来自前述的这些成分的无菌过滤溶液。
对于吸入给药，从包含合适推进剂如二氧化碳等气体的加压容器或分配器或者喷雾器以气溶胶喷雾形式递送化合物。
还可以通过经粘膜或透皮方式全身给药。对于经粘膜或透皮给药，在制剂中使用适于渗透屏障的渗透剂。此类渗透剂通常在本领域是通常所知的，并且包括如用于经粘膜给药的去污剂、胆盐和夫西地酸衍生物。经粘膜给药可以通过使用喷鼻剂或栓剂来实现。对于透皮给药，可将一种或多种所述抗体配制成如本领域通常所知的膏剂、软膏、凝胶、或霜膏。
还可将化合物以栓剂(例如，具有常规栓剂基质，如可可脂或其它甘油酯)或滞留性灌肠剂形式进行制备以用于经直肠递送。
在一个实施方案中，所述抗体可用防止其不被身体迅速消除的载体制备，例如缓释/控释制剂，包括植入体和微胶囊化递送体系。可使用可生物降解、可生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对于本领域技术人员而言是显而易见的。
例如，这些活性成分可胶囊包封于例如通过凝聚技术或通过界面聚合法制备的微胶囊中，例如分别在胶体给药系统(例如，脂质体、白蛋白微球、微乳液、纳米颗粒和纳米胶囊剂)或大乳液中的羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。
可制备缓释制剂。适宜的缓释制剂的示例包括含有抗体的固体疏水聚合物的半透性基质，该基质是成型制品形式例如膜或微胶囊。缓释基质的示例包括聚脂、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙酸酯)、或聚(乙烯醇))、聚交酯(美国专利No.3,773,919)、L-谷氨酸和γ乙基-L-谷氨酸盐的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯酯、可降解乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林构成的注射用微球)、和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。虽然聚合物例如乙烯-乙酸乙烯酯和乳酸-乙醇酸能够释放分子100天以上，但是一些水凝胶释放蛋白质的时间却较短。
脂质体混悬剂(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染细胞的脂质体)也可以用作药学上可接受的载体。这些可根据本领域技术人员已知的方法制备，例如在美国专利No.4,522,811中有所描述。
尤其有利的是以剂量单位形式配制肠胃外组合物以易于施用和剂量的一致性。如本文所用，剂量单位形式是指用于待治疗的受试者，适合作为单位剂量的物理上可分离的单位；每个单位含有经计算与所需药物载体结合产生期望治疗效果的预定量的一种或多种所述抗体。所述实施方案的剂量单位形式的规格由以下指示并直接取决于：抗体的独特特征和待实现的具体治疗效果，和用于治疗个体的此类抗体的调配领域中固有的局限性。
所述药物组合物可与给药说明书一起放于容器、包装、或分配器中。
本文所述制剂还可根据要治疗的具体情况而包含多于一种所述抗体，优选具有互补活性但对彼此无负面影响的那些。另选地或除此之外，组合物可例如包含增强其功能的试剂，诸如细胞毒素试剂、细胞因子、化学治疗剂、或生长抑制剂。此类分子以对预期目的有效的量适当地联合存在。
在一个实施方案中，一种或多种所述抗体可在联合治疗中施用，即与其它试剂例如治疗剂(其可用于治疗病理学病症或障碍，例如各种形式的癌症、自身免疫性障碍和炎性疾病)联合。术语“联合”在本文中是指将试剂基本上同步地，同时地或顺次地给予。如果顺次给予，则在开始施用第二种化合物时，两种化合物中的第一种仍优选在治疗位点处以有效浓度被检测到。
例如，联合治疗可包含本文所述一种或多种抗体与一种或多种附加治疗剂(例如一种或多种细胞因子和生长因子抑制剂、免疫抑制剂、抗炎剂、代谢抑制剂、酶抑制剂、和/或细胞毒素或细胞生长抑制剂，如下更详述的)共同配制和/或共同施用。此类联合治疗可有利地利用较低剂量的施用的治疗剂，因而避免了与各种单一疗法相关的可能毒性或并发症。
与本文所述抗体联合使用的优选治疗剂是干扰炎症应答中不同阶段的那些试剂。在一个实施方案中，可将本文所述一种或多种抗体与一种或多种附加试剂例如其它细胞因子或生长因子拮抗剂(例如，可溶受体、肽抑制剂、小分子、配体融合物)；或结合其它靶标的抗体或抗原结合片段(例如，结合其它细胞因子或生长因子、其受体、或其它细胞表面分子的抗体)；以及抗炎性细胞因子或其激动剂共同配制和/或共同施用。
在其它实施方案中，本文所述抗体被用作针对自身免疫性障碍、炎性疾病等的疫苗佐剂。用于治疗这些类型障碍的佐剂的组合适于与各种各样的抗原联合使用，所述抗原来自于所靶向的自体抗原，即参与自身免疫的自身抗原，例如髓磷脂碱性蛋白；炎性自体抗原，例如淀粉状肽蛋白、或移植抗原，例如同种抗原。抗原可包括衍生自蛋白质的肽或多肽以及以下任一项的片段：糖、蛋白质、多核苷酸或寡核苷酸、自身抗原、淀粉样肽蛋白、移植抗原、过敏原或其它大分子组分。在一些例子中，多于一种抗原被包含在抗原性组合物中。
为了达到清楚和简洁描述的目的，本文中作为相同的或分开的一些实施方案的一部分来描述特征，然而，将要理解的是，本发明的范围可包括具有所描述的所有或一些特征的组合的一些实施方案。
实施例
1、IL-4Rα胞外区蛋白在真核细胞的重组表达
合成含人IL-4Rα胞外区(Uniprot P24394，26-232)的质粒基因AgH01-pUC57-Amp(苏州泓迅生物，SynbioTech)。以该质粒为模板，上游引物5’-ctgagaggtgccagatgtatgaaggtgctgcag-3’，下游引物为5’-tccgcctccgccgctagcgtgctgctcgaaggg-3’，PCR扩增人IL-4Rα胞外片段。扩增产物经NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix(NEB，Cat：M0530L)酶连后，克隆到自主构建的真核表达质粒系统(c端6×his tag融合蛋白)。以此类似，我们以合成的质粒AgCO1-pUC57-Amp为模板，将编码食蟹猴IL-4Rα胞外区(Uniprot Q6JHZ9，24-231)DNA序列克隆到真核表达质粒。以合成的Ag1104-PUC57-Amp质粒为模板，将编码人IL-4基因(Uniprot P05112，25-153)克隆到真核表达质粒系统。以购买的IL13R α 1cDNA克隆质粒(Sino Biological，Cat：HG10943-M)为模板，将编码人IL13Rα1基因(Uniprot P78552，27-343)克隆到真核表达质粒系统。以此质粒转染HEK293-6E细胞7天后，收集培养基上清液，经镍螯合柱纯化得到人IL-4Rα胞外区(hIL-4Rα)、猴IL-4Rα胞外区(cynoIL-4Rα)、人IL- 13Rα1胞外区(hIL-13Rα1)和人IL-4重组蛋白(hIL-4)。
结果见图1A、1B、1C与1D，显示人和食蟹猴的IL-4Rα胞外区蛋白大小在40K道尔顿左右；人的IL-13Rα1胞外区蛋白大小在55K道尔顿左右，同时人IL-4蛋白大小在20K道尔顿左右。
2、获得HEK293-hIL-4Rα稳转细胞株
将含hIL-4Rα全长序列的表达质粒与PEI按照1：3的比例在Opti-MEM培养基中混合，室温静置20分钟。取出前一天接种于6孔板中的细胞，显微镜下观察细胞汇合度约为80％。吸出DMEM培养基(Gibco)，加入4.5ml预热的Opti-MEM培养基(Gibco)。将质粒-PEI混合液滴加入细胞中，轻轻摇匀，置于37℃二氧化碳培养箱中培养；24小时后加入1ug/ml浓度的真核筛选物嘌呤霉素(Gibco)，进行筛选培养。显微镜下观察到在筛选培养基中生长起来的细胞，采用逐步稀释的方法，进行亚克隆筛选。等待单个克隆细胞铺满孔板，进行FACS检测。
吸出培养基，用PBS缓冲液润洗细胞，加入200ul胰酶短暂消化后，加入700ul完全培养基终止消化。取300ul细胞悬液进行染色检测，剩余细胞置于37℃培养箱中继续培养。每管用于染色的细胞中加入500ul 0.5％BSA/PBS，200*g离心3分钟，重复洗涤两次。取2ul对照抗体(Sino Biological，Cat：10402-R209)作为一抗加入至800ul 1％BSA/PBS溶液中，终浓度为10ug/ml；每管加入100ul，冰上孵育1小时。同样每管加入500ul 0.5％BSA/PBS，200*g离心3分钟，重复洗涤两次。加入二抗FITC-缀合的山羊抗兔IgG(BD Biosciences， Cat：554020)1：200稀释，每管加入100ul，冰上避光孵育1小时。同样每管加入500ul 0.5％BSA/PBS，200*g离心3分钟，重复洗涤三次。加入300ul PBS溶液重悬细胞，流式细胞仪上进行检测。结果见图2，显示获得稳定表达hIL-4Rα的单克隆HEK293细胞。
3、抗hIL-4Rα抗体的制备
3.1免疫动物
将hIL-4Rα重组蛋白作为抗原与等量免疫佐剂(福氏佐剂)混合，取5只6周大雌性Balb/c小鼠进行腹部皮下注射免疫。在初次免疫以后，每隔两周进行一次加强免疫。四次免疫后，尾部取血，分别用ELISA检测5只小鼠血清的滴度以及与配体hIL-4结合的抑制作用。
取1块96孔酶标板(Thermo Maxisorp)，每孔加入100ul PBS(中杉金桥，货号：ZLI-9063)，室温静置孵育10min。取5ul 1mg/ml IL-4Rα重组蛋白，加入到5ml 0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液中，上下颠倒混匀，即为1ug/ml抗原包被液。弃去孔板中的PBS溶液，每孔加入100ul抗原包被液，4℃过夜孵育。将包被好的孔板弃去包被液，用PBS-T清洗3次，每孔再加入200ul 2％milk/PBS，室温封闭2小时；弃去封闭液，PBS清洗3次，备用。对于血清滴度实验，分别将5只老鼠的血清样品按照1：200、1：800、1：3200、1：12800、1：51200、1：204800、1：81200梯度稀释，分别取100ul加入孔板中，37℃孵育1.5小时。分别用PBS-T、PBS各洗3次，甩干。用0.5％BSA按1：4000稀释二抗anti-mIgG Fc-HRP(Jackson，Cat：115035071)，每孔加入100ul，室温孵育30分钟。对于血清封闭实验，分别将5只老鼠的血清样品按照1：20、1：200、1：2000稀释，每孔加入50ul，室温孵育30分钟。取已封闭的5ml EP管，弃去封闭液，加入3ml0.5％BSA，再加入1.1ul生物素标记的人IL-4至终浓度为625ng/ml，每孔加入50ul，37℃孵育1小时。分别用PBS-T、PBS各洗3次，甩干。用0.5％BSA按1：8000稀释二抗SA-HRP(BDbioscience，Cat：6222697)，每孔加入100ul，室温孵育30分钟。分别用PBS-T、PBS各清洗3次，甩干。每孔加入100ul TMB(Sigma，Cat：T2885)底物溶液，37℃避光反应；待底物显色适中，每孔加入50ul H2SO4终止反应，15分钟内用酶标仪(BioTek，Synergy HT)测定OD450nm；收集数据使用Graph Pad Prism 5软件计算结果。结果见图3A，显示5只免疫小鼠血清中抗体的滴度均可以达到1∶819200。结果见图3B，显示编号#3、#4的免疫小鼠，其血清中的抗体可以抑制人IL-4与IL-4受体的结合。
3.2制备抗体噬菌体展示文库
在进行尾静脉冲击免疫后3天，将上述编号#3、#4的免疫小鼠用断颈法处死后，收集小鼠脾脏与外周淋巴结；在PBS缓冲液中碾磨后取富含B细胞的悬浮液，离心收集B细胞。用Trizol RNA提取试剂盒从B细胞中提取总RNA，用逆转录试剂盒(SuperScriptTMFirst-Strand Synthesis System，Cat：18080051)，利用重链特异性引物逆转录得到抗体重链cDNA文库。以该cDNA为模板，利用重链可变区引物PCR扩增抗体重链可变区片段；经NcoI和NheI双酶切后，克隆到自主构建的噬菌体质粒pDS-mHC。以此类似，我们利用轻链特异性引物逆转录得到轻链cDNA库。以该cDNA为模板，利用轻链可变区引物PCR扩增抗体轻链可变区片段；经NcoI和BsiwI双酶切后，克隆到自主构建的噬菌体质粒pDS-LC。然后构建基于丝状噬菌体M13的小鼠Fab噬菌体展示文库，库容为6x109。
3.3.ELISA筛选结合hIL-4Rα的抗体
利用一系列重组人IL-4Rα蛋白的选择循环，由噬菌体展示文库里分离出抗IL-4Rα的特异性Fab抗体。简而言之，取25ul 1mg/ml IL-4Rα重组蛋白，加入到5ml PBS(中杉金桥，货号：ZLI-9063)包被液中，上下颠倒混匀，即为5ug/ml抗原包被液。将0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液配制的IL-4Rα包被至免疫管(Immunotube Maxisorp，Nunc)上，4℃过夜。用PBS洗涤免疫管，然后用5％BSA封闭2小时。将终浓度为1％BSA配制的纯化Fan噬菌体加入免疫管中，使之与包被的抗原结合1小时。用PBS-吐温(0.5％v/v)和PBS进行多轮洗涤以除去未结合的噬菌体，用100mM三乙胺洗脱结合的噬菌体颗粒，1MTris-HCl(pH7.4)中和后感染入大肠杆菌TG1细菌中，拯救以进行下一轮富集筛选。二轮筛选以后，挑取单克隆至96孔U型孔板中进行IPTG诱导表达，取上清进行ELISA检测筛选。
取10ul 1mg/ml hIL-4Rα溶液，加入到10ml0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液中，上下颠倒混匀，即为lug/ml抗原包被液。将配好的抗原包被液加入96孔酶标板(ThermoMaxisorp)中，每孔100ul。将96孔酶标板用封板膜包裹后，置于4℃中孵育过夜。第二天取出酶标板，置于洗板机(BioTek，Synergy HT)上，PBS洗涤3次；加入含2％BSA的PBS溶液，每孔200ul，室温封闭2小时。然后弃去其中的封闭液，PBS重复洗涤3次。将诱导后的上清液依次加入相应的孔中，每孔50ul，室温孵育1小时，弃去上清，PBS-T、PBS分别重复洗涤3次。向96孔酶标板中逐排加入TMB溶液(Sigma，Cat No：T2885)，每孔100ul。37℃放置5分钟，立即向96孔酶标板中加入50ul 2M浓硫酸溶液终止反应。将96孔酶标板置于酶标仪(BioTek，，Synergy HT)中，读取OD450的值，收集数据使用GraphPad Prism 5软件计算结果。共挑取3100个单克隆进行IPTG诱导，ELISA检测到其中576个单克隆可以与hIL-4Ra抗原结合。
3.3.ELISA筛选可阻断人IL-4与hIL-4Rα相互作用的抗体
将与hIL-4Rα抗原结合的576个阳性单克隆重新进行IPTG诱导，取上清进行ELISA检测筛选。取7块96孔酶标板(Thermo Maxisorp)，每孔加入100ul PBS(中杉金桥，货号：ZLI-9063)，室温静置孵育10分钟。取35ul 1mg/ml IL-4Rα重组蛋白，加入到35ml0.05MpH9.5碳酸盐包被缓冲液中，上下颠倒混匀，即为1ug/ml抗原包被液。弃去孔板中的PBS溶液，每孔加入100ul抗原包被液，4℃过夜孵育。将包被好的孔板弃去包被液，用PBS-T清洗3次；每孔再加入200ul 2％milk/PBS，室温封闭2小时；弃去封闭液，PBS清洗3次。分别吸取50ul抗体诱导上清，加入酶标板中，每孔加入50ul，室温孵育30分钟。取已封闭的5mlEP管，弃去封闭液，加入3ml 0.5％BSA，再加入1.1ul biotin标记的IL-4至终浓度为625ng/ml；每孔加入50ul，37℃孵育1小时。分别用PBS-T、PBS各洗3次，甩干。用0.5％BSA按1∶8000比例稀释二抗SA-HRP(BD bioscience，Cat：6222697)，每孔加入100ul，室温孵育30分钟。分别用PBS-T、PBS各清洗3次，甩干。每孔加入100ul TMB底物溶液，37℃避光反应，待底物显色适中，每孔加入50ul H2S04终止反应，15分钟内用酶联检测仪(BioTek，Synergy HT)测定OD450nm，收集数据，使用Graph Pad Prism 5软件计算结果。在3.2ELISA检测得到阳性克隆中，有120个单克隆可以阻断人IL-4与hIL-4Rα的相互结合。3.4.FACS检测结合细胞膜表面表达hIL-4Rα的抗体
将上述检测到的可阻断人IL-4与人hIL-4Rα结合的120个阳性单克隆，取上清进行FACS检测。按每孔5*104cells准备HEK293细胞与HEK293-hIL-4Rα稳转细胞，用CellTracker Green CMFDA(Invitrogen，Cat：C2925)染色细胞的量为每1*106细胞对应100μlcell tracker green溶液，37℃培养箱孵育30分钟；加入5ml 0.5％BSA/PBS，1000rpm，离心3分钟，洗3次。每1＊106细胞对应100μl 3％BSA/PBS溶液，4℃封闭20分钟；将准备好的细胞按100μl/孔的体积加入到96孔U型板中，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；加入一抗溶液，冰上孵育1小时。将纯化的Fab抗体做5个浓度梯度，起始浓度为500nM(12.5μg/ml)，按照1∶5的梯度进行稀释。一抗溶液孵育完后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；准备加入二抗anti-human IgG，Fab’2-AF647(Jackson)，二抗用1％BSA/PBS进行1∶300稀释；每孔加入40μl稀释后的二抗溶液，冰上孵育45分钟。二抗溶液孵育完毕后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；每孔加入20～100μlPBS重悬细胞至每毫升1*106细胞，准备流式细胞仪(I-Quescreener)上机检测。按正确流程打开仪器和操作系统，设置正确的参数后，将细胞加入检测板上，检测荧光信号；使用Graph Pad Pri sm 5软件进行分析，结果见图3C，显示前期ELISA筛选到的抗体均与表达IL-4Rα的HEK293稳转细胞特异性结合。
3.5.FACS检测阻断人IL-4与hIL-4Rα相互作用的抗体
将FACS检测到与hIL-4Rα结合能力较强的前100个阳性单克隆，取上清进行细胞表面表达受体的阻断实验。按每孔3*104cells准备HEK293细胞与HEK293-hIL-4Ra稳转细胞，用Cell TrackerTM Green CMFDA(Invitrogen，Cat：C2925)染色细胞的量为每1*106细胞对应100μl cell tracker green溶液，37℃培养箱孵育30分钟；然后再加入5ml0.5％BSA/PBS，1000rpm，离心3分钟，洗3次。每1*106细胞对应100μl3％BSA/PBS溶液，4℃封闭20分钟。将准备好的细胞按100μl/孔的体积加入到96孔U型板中，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；加入一抗溶液，冰上孵育1小时。将纯化的Fab抗体做5个浓度梯度，起始浓度为100nM，按照1∶5的梯度进行稀释。一抗溶液孵育完后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；加入终浓度为0.15ug/ml biotin标记的人IL-4-mIgG2a Fc，冰上孵育45分钟。二抗SA-PE用1％BSA/PBS进行1∶300稀释，每孔加入40μl二抗溶液，冰上孵育45分钟。二抗溶液孵育完毕后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；每孔加入20～100μl PBS重悬细胞至每毫升1*106细胞，准备流式细胞仪(I-Que screener)上机检测。按正确流程打开仪器和操作系统，设置正确的参数后，将细胞加入检测板上，检测荧光信号；使用Graph Pad Prism 5软件进行分析。结果见图3D，显示前期ELISA筛选到的阳性单克隆中，有15个抗体能够阻断表达hIL-4Rα的稳转细胞与人IL-4的结合。
4、Fortebio检测筛选抑制hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合的Fab抗体
4.1测定hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合
分别各取1ml hIL-13Rα(浓度为400ng/ml)及1ml hIL-13(Sino Biological，货号10369-HNAC，浓度为400ng/ml)，按照1：1比例混合至工作浓度为200ng/ml，室温静置孵育结合2小时。hIL-13R α/hIL-13复合物起始浓度为200ng/ml，按照1：1梯度进行稀释，设置3个浓度梯度：200ng/ml、100ng/ml、50ng/ml，分别按照每孔l00ul加入96孔板，并设置空白对照组。SA探针先固化结合biotin标记的hIL-4Rα(工作浓度为10ng/ml)，每孔加入100ul，再上机检测同hIL-13Rα/hIL-13的结合；编辑实验方法进行运行，实验结果在Fortebiosoftware软件中进行分析。结果见图4A，显示hIL-4Rα可以与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合。
4.2检测抑制hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合的抗体
上述实验验证了hIL-4Rα可以结合复合物hIL-13R α/hIL-13，在此基础上进一步筛选能够阻断hIL-4Rα结合复合物hIL-13R α/hIL-13的Fab抗体，比较了前期筛选到的候选Fab抗体的抑制效应，设置负对照组为工作缓冲液。探针固化biotin标记的hIL-4Rα浓度为10ng/ml，候选Fab抗体均调节工作浓度至100ug/ml，复合物hIL-13Rα/hIL-13浓度为200ng/ml；SA探针先固化biotin标记的hIL-4Rα(工作浓度为10ng/ml)，每孔加入100ul，再上机检测候选Fab抗体对hIL-4Rα与复合物hIL-13R α/hIL-13的阻断效应；编辑实验方法进行运行，实验结果在Fortebio software软件中进行分析。结果见图4B，显示候选抗体可以阻断hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合。
5、候选阳性单克隆抗体可变区序列
提取阳性单克隆质粒，经测序后，得到候选阳性克隆重链和轻链可变区序列为：
克隆1A6：
重链
核酸序列
轻链
/>
核酸序列
克隆1D8：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆1H9：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆2H1：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆2F8：
重链
核酸序列
/>
轻链
核酸序列
克隆9B4：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆9E7：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆24G10：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆25D6：
重链
/>
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆25G9：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆35A7：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆31B9：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆34A2：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆34H11：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
/>
克隆35D5：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆35A7：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
克隆36F4：
重链
核酸序列
轻链
核酸序列
6、构建嵌合抗体表达载体
上述重链和轻链可变区序列片段PCR扩增，将重链可变区克隆入含有人重链恒定区和调节元件的载体，以在哺乳动物细胞中表达完整的IgG重链。类似地，将轻链可变区克隆入含有人轻链恒定区和调节元件的载体，以在哺乳动物细胞中表达完整的IgG轻链。经测序正确后转染入HEK293-6E哺乳动物细胞中，IgG经表达分泌入培养基中，合并收集上清，过滤后纯化。采用Protein A层析纯化IgG，将培养上清液加载于大小合适的Protein A柱子上，用50mM Tris-HCl pH8.0，250mM NaCl洗涤，用0.1M Glycine-HCl(pH3.0)将结合的IgG洗脱下来。利用浓缩管(Millipore)将蛋白超滤浓缩，检测OD280，通过分光光度法测定IgG的浓度。采用SDS-PAGE分析纯化IgG的凝聚或降解。
7、Fortebio抗体亲和力测定
在96孔板选任意一列中加入PBS，100ul/孔，将96孔板放入探针支架盒中。取探针时尽量小心谨慎完全悬空放入支架上，避免探针触碰到支架。用PBS将biotin标记的固化物hIL-4Ra稀释至5ug/ml；取新的96孔板，按列加入稀释好的固化物，每孔加入100ul。用PBS将抗体稀释至50ug/ml，然后1：1梯度稀释，分别做50ug/ml、2Sug/ml、12.5ug/ml、6.25ug/ml、3.125ug/ml、0ug/ml 6个浓度梯度，每孔加入100ul，根据具体分析物的结合能力可做适当的调整。取新的96孔板，第1列和第2列加入PBS，100ul/孔(基线和解离均为同一种缓冲液)，第3列加入稀释好的固化物，第4列加入梯度稀释的分析物，11列为10mM HCl pH1.9，12列均为PBS。SA探针与biotin固化物结合非常牢固，再生时，固化物仍然结合在探针上，因此只需固化一次即可重复使用。然后在Fortebio software软件中建立实验方法，之后运行实验程序检测。抗体亲和力检测结果见下表1
编号 KD(nm) kon(1/Ms) kdis(1/s)
3iH7 9.6 2.66E+04 2.56E-04
31B9 1.9 3.30E+04 6.28E-05
34A2 0.001 2.90E+04 1.00E-07
34H11 6.6 2.69E+04 1.76E-04
35D5 1.3 3.87E+04 5.05E-05
35A7 0.001 2.47E+04 1.00E-07
36F4 1.8 5.09E+04 9.37E-05
24610 0.94 2.53E+04 2.37E-05
25D6 5.9 2.65E+04 1.57E-04
2569 0.001 3.79E+04 1.00E-07
1D8 8.06 7.01E+04 5.66E-04
2H1 5.27 7.16E+04 3.77E-04
1B6 20.78 2.46E+04 5.10E-04
1A6 11.3 5.30E+04 6.02E-04
1H9 8.9 2.93E+04 2.62E-04
2F8 0.9 2.93E+04 8.68E-06
表1
8、抗体的人源化改造
把选择的单克隆抗体可变区序列与人胚系抗体序列进行比对，找出同源性高的序列进行CDR移植；随后同时利用计算机进行同源建模，分析CDR区及其周边的框架氨基酸序列，考察其空间立体结合方式。通过计算静电力，范德华力，亲疏水性和熵值，分析各阳性单克隆抗体基因序列中可能与IL-4Rα作用以及维护空间构架的关键氨基酸个体，在此基础上设计回复突变位点。分析考察HLA-DR亲和性，选出免疫原性较低的人胚胎系框架序列。
设计共得到8条重链衍生物(VHi021至VH1028)和4条轻链衍生物(VLi011至VLi014)，将轻、重链衍生物分别合成(苏州泓迅生物科技公司、苏州金唯智生物科技公司)后，克隆到含有抗体kappa链恒定区Ckappa或人IgG1恒定区CH1-CH3的载体pHCT2、HCT1，质粒进行配对后转染HEN293.6E细胞，表达5-6天，收取上清proteinA柱纯化。
人源化抗体重链可变区序列：
VH1021：
/>
核酸序列
VH1022：
核酸序列
VH1023：
核酸序列
VH1024：
核酸序列
VH1025：
核酸序列
VH1026：
核酸序列
VH1027：
核酸序列
VH1028：
核酸序列
/>
人源化抗体轻链可变区序列：
VL1011：
核酸序列
VL1012：
核酸序列
VL1013：
核酸序列
VL1014：
核酸序列
9、FACS检测人源化候选抗体与IL-4Rα的结合
9.1FACS检测人源化候选抗体与HEK293-IL-4Rα稳转细胞株的结合
为了进一步通过FACS验证人源化候选抗体与IL-4Ra的结合，按每孔5*104cells准备HEK293细胞与293-hIL-4Ra稳转细胞，加入5ml 0.5％BSA/PBS，1000rpm，离心3分钟，洗3次。每1*106细胞对应100μl3％BSA/PBS溶液，4℃封闭20分钟。将准备好的细胞按100μl/孔的体积加入到96孔U型板中，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；加入一抗溶液，冰上孵育1小时。将纯化的Fab抗体做5个浓度梯度，起始浓度为500nM(12.5μg/ml)，按照1：5的梯度进行稀释。一抗溶液孵育完后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清。再加入150μtl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；准备加入二抗anti-humanIgG，Fab’2-AF647，二抗用1％BSA/PBS进行1∶300稀释。每孔加入40ul二抗溶液，冰上孵育45分钟。二抗溶液孵育完毕后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；每孔加入20～100μl PBS重悬细胞至每毫升1*106细胞，准备流式细胞仪(I-Que screener)上机检测。按正确流程打开仪器和操作系统，设置正确的参数后，将细胞加入检测板上，检测荧光信号，使用GraphPad Prism 5软件进行分析。结果见图5A，显示人源化候选抗体能够与表达IL-4Rα的HEK293稳转细胞特异性结合。
9.2FACS检测人源化候选抗体阻断人IL-4与HEK293-IL-4Rα稳转细胞的结合
按每孔3*104cells准备HEK293细胞与HEK293-hIL-4Rα稳转细胞，加入5ml 0.5％
BSA/PBS，1000rpm，离心3分钟，洗3次。每1*106细胞对应100μl3％BSA/PBS溶液，4℃封闭20分钟。将准备好的细胞按100μl/孔的体积加入到96孔U型板中，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；加入一抗溶液，冰上孵育1小时。将纯化的候选抗体做5个浓度梯度，起始浓度为100nM，按照1：5的梯度进行稀释。一抗溶液孵育完后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清。再加入150μl 0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清，加入终浓度为0.15ug/mlbiotin标记的IL-4，冰上孵育45分钟。二抗SA-PE用1％BSA/PBS进行1：300稀释，每孔加入40μl二抗溶液，冰上孵育45分钟。二抗溶液孵育完毕后，补加0.5％BSA/PBS至150μl的体积，1100rpm，离心3分钟，弃去上清；再加入150μl0.5％BSA/PBS，1100rpm，离心3分钟，弃去上清。每孔加入20～100μl PBS重悬细胞至每毫升1*106细胞，准备流式细胞仪(I-Que screener)上机检测。按正确流程打开仪器和操作系统，设置正确的参数后，将细胞放入检测板上，检测荧光信号，使用Graph Pad Prism 5软件进行分析。结果见图5B，显示候选抗体能够阻断人IL-4与表达hIL-4Rα的细胞结合。
10、人源化候选抗体抑制hIL-4或hIL-13对TF-1细胞的增殖作用
10.1hIL-4或hIL-13刺激TF-1细胞增殖实验
从液氮罐中取出TF-1冻存细胞(ATCC：CRL-2003TM)，放入37℃水浴锅中轻柔震荡，使其迅速溶解。将溶解后的细胞悬液转移至含有10ml预热的1640培养基(Gibco，Cat：C11875500BT)50ml离心管中，1000rpm离心3min；弃去上清，加入含GM-CSF的1640完全培养基，转移至T75细胞培养瓶中，放入37℃，5％二氧化碳细胞培养箱中静置培养。每隔2-3天，取细胞悬液，800rpm离心3min；加入15ml 1640完全培养基重悬细胞，取1*106个细胞于含有10ml 1640完全培养基的T75培养方瓶中，连续传代2-3次。待细胞晶莹剔透，呈单一悬浮，形态略不规则时，并且细胞活率大于90％，进行细胞活性检测实验。
根据实验设计，准备含1.5x106细胞的细胞液，1000rpm离心5min后去上清；细胞沉淀用不含有GM-CSF的完全培养基重悬，再1000rpm离心5min后去上清，用4.2ml不含GM-CSF的完全培养基重悬。取样用显微镜计数，根据计数结果将细胞液密度调整至3x105 cells/ml。然后将细胞液和培养基加到96孔板中，每孔100ul，空白处加入200ul PBS，放入培养箱下培养24小时，培养条件37℃，5％CO2。先将hIL-4(Sino Biological，Cat：11846-HNAC)，hIL-13(Sino Biological，Cat：10369-HNAC)分别稀释到100ng/ml、800ng/ml，按2倍梯度稀释9次，用排枪将稀释好的IL-4和IL-13按实验设计加入到孔板中，每孔10ul，混匀。将孔板放回培养箱中继续培养72小时，取出孔板，用排枪将细胞混匀，均匀吸去80ul细胞液加入到96孔黑色酶标板对应的孔中。然后每孔加入80ul提前溶解混匀的Cell titer-Glo(Promega，Cat：G7570)，然后将96孔黑色酶标板(JET，Cat：LTP-021-896)放在振荡上器(Thermo，Cat：8880024)上温和振荡2分钟，室温孵育10min，使其产生稳定的发光信号。用酶标仪检测luminescence，检测时间设置为1秒。结果见图6A，显示hIL-4能够刺激TF-1细胞增殖；图6B显示hIL-13能够刺激TF-1细胞增殖。
10.2ELISA检测人源化抗体抑制hIL-4或hIL-13对TF-1细胞的增殖作用
按照5.1中所述进行TF-1细胞的培养，根据实验设计在96孔板中加入100ul细胞液(3x105 cells/ml)，不加任何细胞因子的条件下培养24小时，边缘孔用PBS封板。将抗体稀释至1mM的浓度，hIL-4稀释至3ng/ml，hIL-13稀释至30ng/ml。将抗体按照2倍梯度稀释，加入到细胞中，每孔10ul，空白组加入10ul 1640培养基，混匀，37℃、5％CO2条件下孵育1小时。将hIL-4、hIL-13按照实验设计，加入到细胞中，每孔10ul，空白组加入10ul 1640培养基，混匀，37℃、5％CO2条件下培养72小时。将混匀后的细胞液接种到96孔黑色酶标板中，每孔80ul；在每孔中加入80ul Cell Titer-Glo，然后将微孔板放在振荡器上温和振荡混匀2分钟，室温孵育10分钟，使其产生稳定的发光信号。用酶标仪检测luminescence，检测时间设置为1秒。结果见图6C显示人源化抗体能够抑制hIL-4刺激TF-1细胞增殖；图6D显示人源化抗体能够抑制hIL-13刺激TF-1细胞增殖；图6E显示人源化抗体能够同时抑制hIL-4与hIL-13刺激TF-1细胞增殖。
11、人源化候选抗体与食蟹猴、小鼠、大鼠IL-4Rα蛋白的结合
将1ug/ml的人hIL-4Rα，10ug/ml的食蟹猴cynoIL-4Rα，1ug/ml的小鼠mIL-4Ra(Sino Biological，Cat：80198-R08H)和1ug/ml的大鼠源ratIL-4Rα(Sino Biological，Cat：51180-M08H)稀释在0.05M pH9.5碳酸盐包被缓冲液中，4℃过夜。第二天弃去孔内溶液，用PBS洗涤缓冲液洗3次。然后加入含有2％BSA的PBS溶液封闭2小时。用PBS洗涤缓冲液洗3次后，加入100ul稀释后不同浓度人源化候选抗体，室温孵育1h后用PBS洗涤缓冲液冲洗3次，用PBS洗涤缓冲液以1∶10000倍稀释HRP交联抗体(Jackson Immuno Research)室温孵育1小时。经PBS洗涤缓冲液冲洗3次后，加入100ul TMB底物溶液显色，室温反应10分钟后；加入50ul 0.5M浓硫酸溶液终止反应并在450nm处读出吸光度。其结果为：图7A，人源化候选抗体与人IL-4Rα蛋白的结合；图7B，人源化候选抗体与食蟹猴IL-4Rα的蛋白结合；图7C，人源化候选抗体不结合小鼠IL-4Rα蛋白；图7D，人源化候选抗体与大鼠IL-4Ra蛋白的结合；由此可见，人源化抗体可以类似亲和力结合人或食蟹猴或大鼠的IL-4Ra蛋白，但不与小鼠IL-4Rα蛋白相互作用。
序列表
<110> 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司
<120> 一种自免疫抑制剂的开发和应用
<130> MTI19163E-D1
<160> 230
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Val Asn Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Ile Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Leu His Pro Gly Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Leu Thr Thr Ala Gly Arg Ala Trp Phe Pro Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 2
<211> 5
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 2
Gly Tyr Asn Met His
1 5
<210> 3
<211> 17
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 3
Gly Leu His Pro Gly Asn Gly Asp Ser Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 4
Thr Thr Ala Gly Arg Ala Trp Phe
1 5
<210> 5
<211> 357
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 5
caggttcagc tgcagcagtc tgggactgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctgtcaa cacatttacc ggttacaata tgcactggat aaaacagaca 120
cctggacagg gcctggaatg gattggaggt cttcatccag gaaatggtga ttcttcctac 180
aatcagaagt tcaaaggcag ggccacattg actgcagaca aatcctccaa cactgcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct attactgtgc ccttactacg 300
gctggccggg cctggtttcc ttactggggc caagggactc tggtcactgt ctctgca 357
<210> 6
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<213> 小鼠(Mus musculus)
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ggcaccaagc tggaaataaa a 321
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<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 141
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<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 151
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1 5 10 15
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<400> 152
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<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 153
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<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 154
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<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 155
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<211> 107
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<213> 小鼠(Mus musculus)
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<400> 158
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<400> 159
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1 5
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<211> 321
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<400> 160
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<210> 161
<211> 119
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 161
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 163
Gly Leu His Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
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<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 164
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1 5
<210> 165
<211> 358
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 165
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<210> 166
<211> 108
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 166
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 167
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 167
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 168
<211> 7
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 168
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
1 5
<210> 169
<211> 10
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 169
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 170
<211> 324
<212> DNA
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 170
gacatcaaga tgacccagtc tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc 60
atcagttgca gggcaagtca ggacattagc aattatttaa actggtatca gcagaaacca 120
gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcaagat tacactcagg agtcccatca 180
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gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttcctccgtg gacgttcggt 300
ggaggcacca agctggaaat caaa 324
<210> 171
<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 171
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Thr Ala Arg Ala Thr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 172
Arg Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 173
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 173
Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
<210> 174
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 174
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1 5
<210> 175
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 175
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<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 176
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Gly Gly Ser Tyr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Val Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ala Thr Ala Arg Ala Thr Glu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 177
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 177
Arg Tyr Ala Met Ser
1 5
<210> 178
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 178
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1 5 10 15
Gly
<210> 179
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 179
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1 5
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<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 180
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<211> 119
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 181
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Thr Phe Thr Gly Tyr
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35 40 45
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115
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly Tyr Asn Met His
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 184
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1 5
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<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 187
Gly Tyr Asn Met His
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 189
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<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 191
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 192
Gly Tyr Asn Met His
1 5
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<213> 智人(Homo sapiens)
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Gly
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 196
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
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Asp
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 199
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<211> 119
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 201
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115
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 202
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 203
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Gly
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<211> 8
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 204
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1 5
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<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 205
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<211> 119
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 206
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115
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<211> 5
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 207
Ser Tyr Asn Met His
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 208
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1 5 10 15
Gly
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 209
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<210> 210
<211> 357
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 211
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<213> 智人(Homo sapiens)
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1 5
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 214
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<211> 107
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 216
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 217
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 218
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1 5
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<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 219
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<210> 220
<211> 321
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 220
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<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 221
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
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Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 222
Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 223
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 223
Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 224
Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Leu Thr
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<211> 321
<212> DNA
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 225
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<210> 226
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 226
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
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<211> 11
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 227
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 228
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<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 229
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<213> 智人(Homo sapiens)
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gacatccaga tgacacagag ccctagcagc ctgtctgcca gcgtgggaga cagagtgacc 60
atcacctgtc aggccagcca ggacatcagc aactacctga actggtatca gcagaagccc 120
ggcaaggccc ctaagctgct gatctactac accagcagac tgcacagcgg cgtgccctct 180
agattttctg gcagcggctc tggcaccgac tacaccctga caatctctag cctgcagcct 240
gaggacttcg ctacctactt ctgccagcaa ggcaacaccc tgcctccatg gacatttggc 300
ggaggcacca aggtggaaat caag 324

Claims (9)

1.特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段在制备用于治疗哺乳动物中哮喘或慢性阻塞性肺疾病的药物中的用途，其中，所述特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段包含氨基酸序列SEQ IDNO：172的重链CDR1，氨基酸序列SEQ ID NO：173的重链CDR2，氨基酸序列SEQID NO：174的重链CDR3；和氨基酸序列SEQ ID NO：222的轻链CDR1，氨基酸序列SEQ IDNO：223的轻链CDR2，氨基酸序列SEQ ID NO：224的轻链CDR3。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段阻断hIL-4与hIL-4Rα相互作用。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述抗体或其功能片段是人源化的。
4.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段阻断hIL-4Rα与复合物hIL-13Rα/hIL-13结合。
5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述抗体或其功能片段是人源化的。
6.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段包含氨基酸序列SEQ ID NO：171的重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO：221的轻链可变区。
7.根据权利要求1或2所述的用途，其中，所述特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段包含氨基酸序列SEQ ID NO：176的重链可变区，和氨基酸序列SEQ ID NO：221的轻链可变区。
8.编码权利要求1-7中任一项所述的用途中使用的特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段的核酸分子、或含有所述核酸分子的载体、或含有所述载体的细胞在制备用于治疗哺乳动物中哮喘或慢性阻塞性肺疾病的药物中的用途。
9.药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中哮喘或慢性阻塞性肺疾病的药物中的用途，其中所述药物组合物包含权利要求1-7中任一项所述的用途中使用的特异性结合IL-4Rα的抗体或其功能片段或其编码核酸和药学上可接受的载体。
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