CN108373505B - 抗il-4r抗体及其用途 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了结合人IL‑4R的抗体或其抗原结合部分，编码所述抗体或其抗原结合部分的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合部分的应用。

Description

抗IL-4R抗体及其用途
技术领域
本申请大体涉及基因工程和抗体药物领域；具体而言，涉及抗人白介素-4受体(IL-4R)抗体领域及其用途。本申请开发了新的抗人IL-4R抗体，并提供了该抗体在治疗IL-4R介导的疾病中的用途。
发明背景
白介素4(Interleukin-4，IL-4)由153个氨基酸组成，分子量约为17kDa。最初，因为IL-4能够刺激B细胞增殖而被发现，并被命名为B细胞刺激因子-1(BSF-1)[1]。IL-4与IL-13一样属于I型细胞因子家族，具有4α螺旋的疏水束核心所构成的四级结构[2]。IL-4由TH2细胞分泌，参与TH2介导的免疫应答，具有广泛的生物学活性，包括刺激T细胞、肥大细胞、粒细胞、巨核细胞和红细胞增殖[3]。此外，IL-4还可以刺激B细胞表达主要组织相容性复合物2类分子。IL-13与IL-4具有大约30％的氨基酸序列同源性和多种相似的功能[4]。IL-4和IL-13都能促进B细胞增殖，并联合CD40/CD40L共刺激诱导IgM类型转变成IgE[5]。IL-4促进肥大细胞聚集，上调肥大细胞高亲和力IgE受体和B细胞上IgE低亲和力受体CD23(FcεRII)的表达，上调血管内皮细胞黏附分子(VCAM-1)表达，促进嗜酸性粒细胞、T淋巴细胞、单核细胞和嗜碱性粒细胞的转移。与IL-13不同的是，IL-4可以促进幼稚T细胞分化成TH2[6]。
IL-4需要与膜受体结合而发挥生物学功能。人白介素受体(IL-4R)是由两条多肽链形成的异二聚体，其中一条α链对IL-4有很高的亲和力，由于在IL-4R复合物中IL-4Rα链对IL-4的结合起主导作用，因此很多科学研究和报道中常用IL-4Rα替代IL-4R。IL-4R在人B细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、巨噬细胞/单核细胞、DC细胞、纤维细胞、气道上皮和平滑肌等多种细胞上都有表达[7]。IL-4Rα可以与其他亚基形成两类受体复合物，在造血干细胞中主要表达由IL-4Rα和γc组成的I型受体[3]。在非造血干细胞中IL-4主要通过IL-4Rα和IL-13Rα1组成的II型受体发挥作用[8,9]。II型受体是IL-4和IL-13的共同受体，IL-13与IL-13Rα1结合发挥功能。I型受体和II型受体都通过Jak/STAT通路转导信号，IL-4Rα、γc和IL-13Rα1分别与Jak1、Jak3和Tyk2结合激活下游通路，IL-4和IL-13还可以通过胰岛素受体底物家族(IRS)转导信号，最终激活核内的PI3-K、NF-κB[10]。阻断IL-4R既可以抑制IL-4也可以抑制IL-13的生物学功能。
多项研究表明IL-4和IL-13与TH2免疫应答相关的疾病有关。特应性皮炎(AD)，又称异位性皮炎或遗传过敏性皮炎，是皮肤科常见疾病，多见于儿童和青少年，常与某些遗传过敏性疾病如过敏性鼻炎、哮喘等并发[11]。研究发现AD患者的TH2因子IL-4、IL-5、IL-10和IL-13水平上升[12]，IgE水平升高[13]，此外还发现，TH2因子与AD疾病进程相关，过表达IL-4、IL-13等TH2因子的小鼠表现出皮肤保护缺陷和类似AD病症[14][15]。AD患者IL-4和IL-13水平升高阻碍了表皮分化和抗菌肽的产生[16]。IL-4缺陷小鼠降低皮肤过敏性炎症的发生[17]。这些研究表明阻断IL-4R可能对治疗AD有效。国外已经有抗IL-4R的单抗上市，对AD表现出良好的治疗效果[11]。
此外IL-13和IL-4在哮喘中也发挥重要作用。哮喘是一种常见的肺部炎症疾病，以气道高反应性(AHR)、粘液分泌过多、纤维化和IgE水平升高为特征。非特异性刺激如冷空气等常常导致气道高反应性加剧，AHR和粘液分泌过多导致气道阻碍这是哮喘致死的主要原因。TH2因子在哮喘疾病进程中发挥重要作用[18]，哮喘患者支气管和肺泡灌洗液过表达IL-4和IL-13[19]。尽管IL-13和IL-4具有某些功能相似性，但是一些研究表明IL-13在哮喘的疾病进展中发挥了比其他Th2细胞因子更为重要的作用[20]。IL-13可以促进杯状细胞的分化和纤维化。给未经过过敏原刺激的小鼠气道注射重组IL-13会导致气道炎症，粘液分泌过多和气道高反应性[21,22]，注射可溶性的IL13Rα2可以阻止小鼠AHR、粘液分泌过多和肺部炎症的发生。在哮喘模型中注射IL-4Rα抗体可以降低AHR和肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞。研究表明阻断IL-4Rα可能对治疗哮喘有效。
新的抗IL-4R抗体的开发和应用是本领域所需要的。
发明概述
第一方面，本申请提供了结合人IL-4R的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSIGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQSFKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSRNVIYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGTNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSHNLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAY，所述LCDR3序列为MQALQSPYT；
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQALETPYA；
其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
在一些实施方案中，抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26、27、28、29、30或者31所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示。
第二方面，本申请提供了结合人IL-4R的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:18具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:26、27、28、29、30或者31中任何一项具有至少90％的一致性。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体针对IL-4Rα。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够结合重组人IL4R(SEQID NO:1)和重组猴IL4R(SEQ ID NO:3)，且结合重组人IL4R时的KD低于1nM。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于100pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于50pM的IC50值抑制重组IL13(SEQ ID NO:32)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于200pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)诱导的TF-1细胞的增殖。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为中和抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能结合并中和人IL4R，进而阻断IL4-IL4R和IL13-IL4R信号通路。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面至第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面至第二方面所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗IL-4R介导的疾病。
第五方面，本申请提供了第一方面至第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗IL-4R介导的疾病的药物中的用途。
第六方面，本申请提供了预防或治疗IL-4R介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面至第二方面所述的抗体或第四方面的药物组合物。
在第四方面、第五方面和第六方面的一些实施方案中，IL-4R介导的疾病为自身免疫性疾病。在一些具体实施方案中，自身免疫性疾病选自哮喘或过敏性皮炎。
附图说明
图1显示了本申请的示例性抗IL4R噬菌体-scFv结合IL4R表位分析。
图2显示了本申请的示例性抗IL4R单克隆抗体对IL-4诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图3显示了本申请的示例性抗IL4R单克隆抗体对IL-13诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图4显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体抑制IL4结合IL4R。
图5显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体抑制IL4结合IL4R。
图6显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体对IL-4诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图7显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体对IL-13诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图8显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体对IL-4诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图9显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体对IL-13诱导的HEK-Blue IL-4/IL-13细胞表达SEAP的抑制曲线。
图10显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体抑制IL-4诱导的TF-1细胞的增殖。
图11显示了本申请的示例性S1E6轻链突变体抑制IL-4诱导的人PBMC CD23表达。
序列说明
SEQ ID NO:1显示人(homo sapiens)IL-4R胞外区(hIL-4R)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:2显示小鼠(mus musculus)IL-4R胞外区(mIL-4R)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:3显示猕猴(Macaca mulatta)IL-4R胞外区(mmIL-4R)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4显示人IL-4胞外区(hIL-4)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:5显示His标签(His)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:6显示人抗体IgG1的Fc段(Fc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7显示鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc)的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8显示人IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9显示人IgG2亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:10显示人IgG4亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:11显示鼠IgG1亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12显示鼠IgG2a亚型重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:13显示人κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:14显示人λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:15显示鼠κ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:16显示鼠λ亚型轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19分别显示克隆S1E6的全长氨基酸序列、VH氨基酸序列和VL氨基酸序列。
SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22分别显示克隆S1H9的全长氨基酸序列、VH氨基酸序列和VL氨基酸序列。
SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25分别显示克隆S2C2的全长氨基酸序列、VH氨基酸序列和VL氨基酸序列。
SEQ ID NO:26为轻链突变体L18D7的氨基酸序列。
SEQ ID NO:27为轻链突变体L28G5的氨基酸序列。
SEQ ID NO:28为轻链突变体L28F8的氨基酸序列。
SEQ ID NO:29为轻链突变体L28C9的氨基酸序列。
SEQ ID NO:30为轻链突变体L10B2的氨基酸序列。
SEQ ID NO:31为轻链突变体L10C2的氨基酸序列。
SEQ ID NO:32显示人重组IL-13的氨基酸序列。
发明详细描述
本申请的发明人通过抗体工程技术得到了新的抗人IL-4R抗体。在本申请的多个方面，提供了新的抗人IL-4R抗体或其抗原结合片段，编码该抗体或其抗原结合片段的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体、包含所述多核苷酸或载体的宿主细胞、制备和纯化该抗体的方法及所述抗体或其抗原结合片段的医学和生物学应用。根据本申请提供的抗体的可变区的序列，可构建全长的抗体分子作为药物用于治疗临床上由IL-4R介导的疾病。
除非另外指明，本发明的实施采用本领域常规的分子生物学、微生物学、细胞生物学、生物化学以及免疫学技术。
除非另外指明，本申请中所用的术语具有本领域技术人员通常所理解的含义。
定义
如本文所用术语“抗体”，是指能够经由至少一个位于免疫球蛋白分子的可变区中的抗原识别位点特异性结合到标靶的免疫球蛋白分子。标靶包括但不限于碳水化合物、多聚核苷酸、脂质、多肽等。本文所使用的“抗体”不仅包括完整的(即全长的)抗体，而且还包括其抗原结合片段(例如Fab、Fab'、F(ab')2、Fv)、其变异体、包含抗体部分的融合蛋白、人源化抗体、嵌合抗体、双抗体、线性抗体、单链抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体)及任何其他包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的修改配置，包括抗体的糖基化变体、抗体的氨基酸序列变体及共价修饰的抗体。
通常，完整或全长的抗体包含两个重链和两个轻链。每个重链含有重链变异区(VH)和第一、第二及第三恒定区(CH1、CH2及CH3)。每个轻链含有轻链变异区(VL)和恒定区(CL)。全长的抗体可以是任何种类的抗体，例如IgD、IgE、IgG、IgA或IgM(或上述的子类)，但抗体不需要属于任何特定的类别。根据重链的恒定域的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白指定为不同的类别。通常，免疫球蛋白有五种主要的类别：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，而且这些类别中有几个可以再被进一步区分成子类(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。对应于不同免疫球蛋白类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ、以及μ。不同类别的免疫球蛋白的子单元结构和三维结构是公知的。
如本文所用术语“抗原结合片段或抗原结合部分”，是指负责结合抗原的完整抗体分子的一部分或区域。抗原结合域可以包含重链变异区(VH)、轻链变异区(VL)或上述两者。VH和VL中的每个通常含有三个互补决定区CDR1、CDR2及CDR3。
本领域技术人员公知，互补决定区(CDR，通常有CDR1、CDR2及CDR3)是可变区中对抗体的亲和力和特异性影响最大的区域。VH或VL的CDR序列有两种常见的定义方式，即kabat定义和Chothia定义。(参阅例如Kabat,“Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest”，National Institutes of Health,Bethesda，Md.(1991)；A1-Lazikani etal.，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)；以及Martin et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:9268-9272(1989))。对于给定抗体的可变区序列，可以根据Kabat定义或者Chothia定义来确定VH和VL序列中CDR区序列。在本申请的实施方案中，利用Kabat定义CDR序列。
对于给定抗体的可变区序列，可以通过多种方式分析可变区序列中CDR区序列，例如可以利用在线软件Abysis确定(http://www.abysis.org/)。
抗原结合片段的实例包括但不限于：(1)Fab片段，其可以是具有VL-CL链和VH-CH1链的单价片段；(2)F(ab')2片段，其可以是具有两个Fab'片段的二价片段，该两个Fab'片段由铰链区的二硫桥(即Fab'的二聚物)连接；(3)具有抗体的单臂的VL和VH域的Fv片段；(4)单链Fv(scFv)，其可以是由VH域和VL域经由胜肽连接符组成的单一多胜肽链；以及(5)(scFv)2，其可以包含两个由胜肽连接符连接的VH域和两个VL域，该两个VL域是经由二硫桥与该两个VH域组合。
如本文所用术语“特异性结合”，是指两个分子之间的非随机结合反应，例如抗体至抗原表位的结合。
本文所用术语“单克隆抗体”指由基本同质的抗体群体获得的抗体，即，除了可能在少量个体中存在自然发生的突变以外，组成群体的各个抗体是相同的。本文所述单克隆抗体特别包括“嵌合”抗体，其中重链和/或轻链的一部分与来源于具体物种或属于具体抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，而重链和/或轻链的余下部分与来源于另一物种或属于另一抗体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源，并且还包括这样的抗体的片段，只要它们能表现出所期望的生物学活性(美国专利号4,816,567；和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。
在本文给出的核酸序列中涉及兼并碱基(除了A、T、C、G常规碱基之外)的使用，其含义与本领域技术人员通常理解的相同。例如，R代表A或G；Y代表C或T，M代表A或C；K代表G或T；S代表C或G；W代表A或T；H代表A或C或T；B代表C或G或T；V代表A或C或G；D代表A或G或T；N代表A或C或G或T。
第一方面，本申请提供了结合人IL-4R的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSIGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQSFKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSRNVIYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGTNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSHNLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAY，所述LCDR3序列为MQALQSPYT；
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQALETPYA；
其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。
在一些实施方案中，抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。
在一些实施方案中，抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26、27、28、29、30或者31所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示。
在一些实施方案中，所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示。
第二方面，本申请提供了结合人IL-4R的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:18具有至少90％的一致性，并且所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:26、27、28、29、30或者31中任何一项具有至少90％的一致性。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体针对IL-4Rα。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够结合重组人IL4R(SEQID NO:1)和重组猴IL4R(SEQ ID NO:3)，且结合重组人IL4R时的KD低于1nM。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于100pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于50pM的IC50值抑制重组IL13(SEQ ID NO:32)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能够以低于200pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)诱导的TF-1细胞的增殖。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为全人源抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体为中和抗体。
在第一方面至第二方面的一些实施方案中，所述抗体能结合并中和人IL4R，进而阻断IL4-IL4R和IL13-IL4R信号通路。
第三方面，本申请提供了核酸分子，其编码第一方面至第二方面所述的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，所述核酸分子可操作地连接到调控序列，调控序列可以被用所述载体转化过的宿主细胞识别。
第四方面，本申请提供了药物组合物，其包含第一方面至第二方面所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
在一些实施方案中，药物组合物还可包含下述中的一种或多种：润滑剂，如滑石粉、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂；悬浮剂；防腐剂，如苯甲酸、山梨酸和丙酸钙；增甜剂和/或调味剂等。
在一些实施方案中，可将本申请中的药物组合物配制为片剂、丸剂、粉剂、锭剂、酏剂、悬液、乳剂、溶液、糖浆、栓剂或胶囊等形式。
在一些实施方案中，可以利用任何生理上可接受的给药方式递送本申请的药物组合物，这些给药方式包括但不限于：口服给药、肠胃外给药、经鼻给药、直肠给药、腹膜内给药、血管内注射、皮下给药、经皮给药、吸入给药等。
在一些实施方案中，可以通过混合具有所需纯度的试剂与视情况的药学上可接受的载体、赋形剂等，以冻干制剂或水溶液的形式配制用于治疗用途的药物组合物用于存储。
在一些实施方案中，所述药物组合物用于治疗IL-4R介导的疾病。
第五方面，本申请提供了第一方面至第二方面所述的抗体在制备用于预防或治疗IL-4R介导的疾病的药物中的用途。
第六方面，本申请提供了预防或治疗IL-4R介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予第一方面至第二方面所述的抗体或第四方面的药物组合物。
在第四方面、第五方面和第六方面的一些实施方案中，IL-4R介导的疾病为自身免疫性疾病。在一些具体实施方案中，自身免疫性疾病选自哮喘或过敏性皮炎。
在其他方面，本申请还提供包含编码本申请抗体或其抗原结合部分的分离的核酸分子的载体以及包含所述核酸分子或载体的宿主细胞。
在其他方面，本申请还提供产生本申请抗体的方法。在一些实施方案中，产生抗体的方法包括培养宿主细胞以便于表达核酸。在一些实施方案中，产生抗体的方法还包括从宿主细胞培养基中回收抗体。
应当理解，以上详细描述仅为了使本领域技术人员更清楚地了解本申请的内容，而并非意图在任何方面加以限制。本领域技术人员能够对所述实施方案进行各种改动和变化。
以下实施例仅用于说明而非限制本申请范围的目的。
实施例
实施例1.噬菌体展示抗体库的构建
本实施例的内容参照发明人之前的中国专利申请201610609651.X号(题目为：抗人PDL1抗体及其用途)以及201510097117.0号(题目为：抗人IL-17单克隆抗体)。通过引用的方式，将上述两篇专利申请的内容并入本文。
实施例2：重组蛋白的制备
制备和测试抗IL-4R单抗的过程中用到多种不同的重组蛋白，包括人IL-4R胞外区(hIL-4R，SEQ ID NO:1)、小鼠IL-4R胞外区(mIL-4R，SEQ ID NO:2)、猕猴IL-4R胞外区(mmIL-4R，SEQ ID NO:3)、人IL-4胞外区(hIL-4，SEQ ID NO:4)和人重组IL-13(SEQ ID NO:32)。这些蛋白都具有翻译后修饰(如：糖基化或者二硫键等)，因而利用哺乳动物细胞表达系统将更有利于保持重组蛋白的结构和功能。此外，在这些重组蛋白的C端添加了His标签(His，SEQ ID NO:5)或者人抗体IgG1的Fc段(Fc，SEQ ID NO:6)或者鼠抗体IgG2a的Fc段(mFc，SEQ ID NO:7)，更有利于重组蛋白的纯化和单克隆抗体功能的鉴定。抗体重链恒定区可以是人IgG1亚型(SEQ ID NO:8)，人IgG2亚型(SEQ ID NO:9)、人IgG4亚型(SEQ ID NO:10)或者鼠IgG1亚型(SEQ ID NO:11)，鼠IgG2a亚型(SEQ ID NO:12)，轻链恒定区可以是人κ亚型(SEQ ID NO:13)、人λ亚型(SEQ ID NO:14)或者鼠κ亚型(SEQ ID NO:15)、鼠λ亚型(SEQID NO:16)。
根据Uniprot数据库的各种目的重组蛋白的氨基酸序列，设计并合成上述各种重组蛋白的基因(包含His标签或者Fc、mFc编码基因)。利用常规的分子生物学技术将合成的各种重组蛋白基因克隆至合适的真核表达载体(如invitrogen公司的pcDNA3.1等)，然后利用脂质体(如invitrogen公司的293fectin等)或者其他阳离子转染试剂(如PEI等)将制备的重组蛋白表达质粒转染入HEK293细胞(如invitrogen公司的HEK293F)，在无血清悬浮培养条件下培养3-4天。然后通过离心等方式收获培养上清。
His标签融合表达的重组蛋白利用金属螯合亲和层析柱(如GE公司的HisTrap FF等)对培养上清中的重组蛋白进行一步纯化。Fc和mFc融合表达的重组蛋白用ProteinA/G亲和层析柱(如GE公司的Mabselect SURE等)进行一步纯化。然后利用脱盐柱(如GE公司的Hitrap desaulting等)将重组蛋白保存缓冲液置换为PBS(pH7.0)或者其他合适的缓冲液。必要时，可以对抗体样品进行过滤除菌，然后分装保存于-20℃。
实施例3：利用噬菌体展示抗体库技术筛选抗人IL4R单抗
3.1抗人IL4R单抗的筛选
以实施例2制备的重组hIL4R-his为抗原，利用固相筛选策略(实验方案参考噬菌体展示：通用实验指南/(美)克拉克森(Clackson,T.),(美)洛曼(Lowman,H.B.)编；马岚等译。化学工业出版社，2008.5)筛选实施例1制备的展示人单链抗体库的噬菌体库，获得3株序列不同，但均能特异性结合人IL4R的人抗体，包括克隆S1E6(氨基酸序列为SEQ ID NO:17，VH序列为SEQ ID NO:18，VL序列为SEQ ID NO:19)、S1H9(氨基酸序列为SEQ ID NO:20，VH序列为SEQ ID NO:21，VL序列为SEQ ID NO:22)、S2C2(氨基酸序列为SEQ ID NO:23，VH序列为SEQ ID NO:24，VL序列为SEQ ID NO:25)。
3.2抗人IL4R单抗的初步功能分析(蛋白水平)
包被IL4R重组抗原，将S1E6、S1H9、S2C2这3株单克隆抗体制备纯化噬菌体(噬菌体-scFv)，用固定滴度的不同单克隆抗体噬菌体-scFv分别对重组蛋白IL4做一系列的浓度梯度，HRP-抗M13二抗检测IL4重组蛋白阻断3株单克隆抗体噬菌体-scFv结合IL4R的能力。结果(图1)显示，重组蛋白IL4可以和S1E6噬菌体-scFv竞争结合IL4R，说明S1E6单链抗体和IL4有相似的IL4R结合位点。
3.3重组抗人IL4R单抗的初步功能分析(细胞水平)
HEK-BlueTM IL-4/IL-13细胞(InvivoGen,hkb-il413)为InvivoGen公司基于HEK293细胞开发的一个报告基因细胞株。该细胞株中稳转进人STAT6基因和SEAP(碱基磷酸酶)报告基因，当白介素-4(IL-4)或者白介素-13(IL-13)刺激细胞时，细胞内的STAT6信号通路被激活，并诱导SEAP报告基因表达、合成并分泌SEAP到细胞上清中，用酶标仪630nm定量分析SEAP浓度。本实施例用HEK-BlueTM IL-4/IL-13细胞评价不同重组抗IL4R单抗(人IgG4亚型重链恒定区)抑制IL-4和IL-13的能力。将96孔板的每孔接种5×104细胞，用一定浓度的IL-4(40pM)或IL-13(80pM)刺激HEK-BlueTM IL-4/IL-13细胞，加入一系列浓度梯度抗IL4R单克隆抗体阻断IL-4或IL-13。图2和图3的结果显示单抗S1E6阻断IL-4和IL-13的能力最强，S2C2弱于S1E6，S1H9不能阻断IL-4和IL-13对HEK-BlueTM IL-4/IL-13细胞的刺激。
实施例4：抗人IL4R单抗的亲和力成熟
4.1基于轻链CDR突变和轻链置换的策略对抗体S1E6进行体外亲和力成熟
基于双载体噬菌体展示系统，利用轻链CDR(LCDR)突变的策略(具体操作可参照申请人之前提交的中国专利第201510097117.0号中的实施例5)对抗体S1E6单抗进行体外亲和力成熟。利用经典重叠延伸PCR方法构建了库容量超过1.4×10E8的S1E6VK-CDR123突变库。其中在S1E6轻链(S1E6VK)的三个CDR中引入突变所需引物见表5。然后利用重组hIL4R-His为抗原，对此轻链突变库进行了三轮筛选。最后鉴定出4个高亲和力的轻链突变体L18D7(氨基酸序列为SEQ ID NO:26)、L28G5(氨基酸序列为SEQ ID NO:27)、L28F8(氨基酸序列为SEQ ID NO:28)、L28C9(氨基酸序列为SEQ ID NO:29)。
表5构建S1E6轻链LCDR突变库所需引物
同时，基于双载体噬菌体展示系统，以S1E6重链为基础，利用轻链置换策略(具体操作可参照本申请人之前提交的中国专利第201510097117.0号中的实施例4.3)对抗体S1E6进行了体外亲和力成熟研究，获得两个高亲和力轻链突变体L10B2(氨基酸序列为SEQID NO:30)、L10C2(氨基酸序列为SEQ ID NO:31)。
4.2抗IL4R单抗重组蛋白水平功能分析
利用常规分子生物学方法，将4.1得到的高亲和力结合IL4R的轻链突变体制备重组人IgG4-κ形式全人源抗体。
用抗原IL4R-mFc包被96孔板(3μg/ml，100μl/孔)，4℃包被过夜。用固定浓度的IL4-his对各抗IL4R重组抗体进行梯度稀释，100μl/孔加入96孔板中，37℃孵育1h。HRP-小鼠-抗his IgG(康为世纪，CW0285M)检测IL4-his和IL4R-mFc的结合。ELISA分析结果(图4和图5)显示S1E6的6种轻链突变体能够有效阻断IL4R和IL4的结合，且能力优于S1E6，IC50见表6和表7。
表6：S1E6轻链突变体抑制IL4结合IL4R的IC50
L18D7 L28G5 L28F8 L28C9 S1E6
IC<sub>50</sub> 9.682 8.304 10.78 3.755 16.6
表7：S1E6轻链突变体抑制IL4结合IL4R的IC50
L10C2 L10B2 S1E6
IC<sub>50</sub> 7.879 7.166 19.77
4.3抗IL4R单抗的亲和力分析
利用Biacore X100测定各抗IL4R IgG4嵌合抗体的亲和力。氨基偶联试剂盒，人抗体捕获试剂盒，CM5芯片和pH7.4的10×HBS-EP等相关试剂和耗材均购自GE healthcare。根据试剂盒中的说明书，使用氨基偶联的方法将抗人Fc段的抗体偶联至CM5芯片表面，然后稀释抗体蛋白至合适浓度，保证100RU左右的抗体被抗人Fc的抗体捕获。将IL4R-his设置一系列的浓度梯度(100nm，33.3nm，11.1nm，3.7nm，1.23nm)流经固定相表面，用3M MgCl2对芯片表面进行再生，25℃测定各单克隆抗体的亲和力。使用Biacore X100Evaluation软件(版本2.0.1)对biacore数据进行分析，拟合结果如表8和表9所示。
表8.抗IL4R单抗(轻链置换突变体)结合huIL4R亲和力常数
K<sub>on</sub>(1/Ms) K<sub>off</sub>(1/s) KD(M)
L10B2-IgG4 3.432E+5 1.520E-4 4.429E-10
L10C2-IgG4 3.531E+5 3.085E-4 8.736E-10
S1E6-IgG4 3.125E+5 9.227E-4 2.953E-9
表9.抗IL4R单抗(LCDR突变体)结合huIL4R亲和力常数
K<sub>on</sub>(1/Ms) K<sub>off</sub>(1/s) KD(M)
L18D7-IgG4 2.97E5 1.426E-4 4.8E-10
L28F8-IgG4 3.422E5 1.436E-4 4.196E-10
L28G5-IgG4 2.891E5 1.343E-4 4.645E-10
L28C9-IgG4 3.307E5 1.937E-4 5.857E-10
S1E6-IgG4 2.494E5 7.086E-4 2.841E-9
同样的，捕获抗IL4R单抗，将mmIL4R-mFc设置一系列的浓度梯度(50nm，16.7nm，5.56nm，31.85nm，0.62nm)，测得各抗IL4R单抗结合mmIL4R的亲和力数据如表10所示。
K<sub>on</sub>(1/Ms) K<sub>off</sub>(1/s) KD(M)
L18D7-IgG4 5.904E5 9.839E-4 1.667E-9
L28C9-IgG4 7.065E5 5.935E-3 8.401E-9
L28F8-IgG4 7.485E5 5.189E-3 6.932E-9
L28G5-IgG4 6.842E5 7.086E-3 1.036E-8
S1E6-IgG4 5.271E5 4.904E-3 9.305E-9
4.4抗IL4R单抗的细胞学功能分析
4.4.1基于HEK-Blue IL-4/IL-13细胞分析抗IL4R单抗的生物学活性
具体实施方法参见实施例3.3。结果(图6和图7)显示四种S1E6轻链突变体相对于S1E6生物活性显著提高，并且四种S1E6轻链突变体抑制IL-4或IL-13的IC50值比较接近(表11和表12)。图8和图9的结果显示另外两种S1E6轻链突变体抑制IL-4和IL-13的活性增强，L10B2要优于L10C2，表13的IC50值显示L10C2抑制IL-4的IC50是L10B2的1.6倍，表14的IC50值显示L10C2抑制IL-13的IC50值是L10B2的2.4倍。
表11：S1E6轻链突变体抑制IL-4的IC50值
IL-4 S1E6-IgG4 L18D7-IgG4 L28C9-IgG4 L28G5-IgG4 L28F8-IgG4
IC<sub>50</sub>(pM) ～ 48.39 49.40 48.41 55.02
表12：S1E6轻链突变体抑制IL-13的IC50值
IL-13 S1E6-IgG4 L18D7-IgG4 L28C9-IgG4 L28G5-IgG4 L28F8-IgG4
IC<sub>50</sub>(pM) ～ 10.20 12.12 11.51 12.07
表13：S1E6轻链突变体抑制IL-4的IC50值
IL-4 S1E6-IgG4 L10B2-IgG4 L10C2-IgG4
IC<sub>50</sub>(pM) ～ 206.7 332.8
表14：S1E6轻链突变体抑制IL-13的IC50值
IL-13 S1E6-IgG4 L10B2-IgG4 L10C2-IgG4
IC<sub>50</sub>(pM) ～ 13.05 31.42
4.4.2基于TF-1细胞增殖分析抗IL4R单抗的生物学活性
人红细胞白血病细胞系(TF-1)由Kitamura等人在1989年建立，实验中所用TF-1来自ATCC细胞库(CRL-2003)。TF-1细胞生长完全依赖于GM-CSF或IL-3，红细胞生成素(EPO)也可以维持TF-1细胞的短期生长，但不能诱导TF-1细胞分化。此外多种细胞因子对TF-1都有作用，IL-4、IL-13等细胞因子可以刺激TF-1细胞增殖。将96孔板的每孔接种2×104细胞，用一定浓度的IL-4(80pM)刺激TF-1细胞，加入一系列浓度梯度抗IL-4R单克隆抗体(浓度范围65.536nM～0.25pM，四倍稀释)，用发光法细胞活力检测试剂盒(Promega,G7571)测定活细胞数量。图10结果显示四种S1E6轻链突变体抑制TF-1增殖的曲线几乎重合，表15的IC50值无显著差异。
表15：S1E6轻链突变体抑制IL-4的IC50值
L18D7-IgG4 L28C9-IgG4 L28G5-IgG4 L28F8-IgG4
IC<sub>50</sub>(nM) 0.1159 0.1289 0.1181 0.1236
4.4.3基于PBMC分析抗IL4R单抗的生物学活性
CD23(FcεRII)是一种对IgE亲和力较低的细胞表面受体，在多种炎症细胞表面都有表达，CD23表达上调会提高支气管粘膜对抗原的摄取和提呈导致过敏性反应。IL-4可以刺激单核细胞、巨噬细胞和B淋巴细胞表面CD23表达上调。利用Ficoll密度梯度离心法从健康人全血中分离PBMC，用一定浓度的IL-4(100pM)刺激PBMC细胞，加入一系列浓度梯度抗IL-4R单抗(最大浓度16384pM～0.25pM，四倍稀释)。将细胞在37℃5％CO2环境下培养48h，收集细胞，用抗CD23-PE(BD Pharmingen,555711)染色，用流式细胞术(BD AccuriTMC6)测定PBMC上CD23的表达。图11的结果显示L18D7抑制PBMC CD23表达的能力强于L28C9，L28C9抑制IL-4的IC50值是L18D7的2.3倍。
表16：S1E6轻链突变体抑制人PBMC CD23表达IC50值
L18D7-IgG4 L28C9-IgG4
IC<sub>50</sub>(pM) 26.82 63.48
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序列表
<110> 北京智仁美博生物科技有限公司
<120> 抗IL-4R抗体及其用途
<130> 18C10364CN
<160> 32
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 207
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Thr Cys Val Ser Asp Tyr Met Ser Ile
1 5 10 15
Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Asn Gly Pro Thr Asn Cys Ser Thr Glu
20 25 30
Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Leu Leu Ser Glu Ala His Thr
35 40 45
Cys Ile Pro Glu Asn Asn Gly Gly Ala Gly Cys Val Cys His Leu Leu
50 55 60
Met Asp Asp Val Val Ser Ala Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu Trp Ala
65 70 75 80
Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu His Val
85 90 95
Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val Ser Asp
100 105 110
Thr Leu Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn Tyr Leu
115 120 125
Tyr Asn His Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn Asp Pro
130 135 140
Ala Asp Phe Arg Ile Tyr Asn Val Thr Tyr Leu Glu Pro Ser Leu Arg
145 150 155 160
Ile Ala Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala Arg Val
165 170 175
Arg Ala Trp Ala Gln Cys Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp Ser Pro
180 185 190
Ser Thr Lys Trp His Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln His
195 200 205
<210> 2
<211> 208
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 2
Ile Lys Val Leu Gly Glu Pro Thr Cys Phe Ser Asp Tyr Ile Arg Thr
1 5 10 15
Ser Thr Cys Glu Trp Phe Leu Asp Ser Ala Val Asp Cys Ser Ser Gln
20 25 30
Leu Cys Leu His Tyr Arg Leu Met Phe Phe Glu Phe Ser Glu Asn Leu
35 40 45
Thr Cys Ile Pro Arg Asn Ser Ala Ser Thr Val Cys Val Cys His Met
50 55 60
Glu Met Asn Arg Pro Val Gln Ser Asp Arg Tyr Gln Met Glu Leu Trp
65 70 75 80
Ala Glu His Arg Gln Leu Trp Gln Gly Ser Phe Ser Pro Ser Gly Asn
85 90 95
Val Lys Pro Leu Ala Pro Asp Asn Leu Thr Leu His Thr Asn Val Ser
100 105 110
Asp Glu Trp Leu Leu Thr Trp Asn Asn Leu Tyr Pro Ser Asn Asn Leu
115 120 125
Leu Tyr Lys Asp Leu Ile Ser Met Val Asn Ile Ser Arg Glu Asp Asn
130 135 140
Pro Ala Glu Phe Ile Val Tyr Asn Val Thr Tyr Lys Glu Pro Arg Leu
145 150 155 160
Ser Phe Pro Ile Asn Ile Leu Met Ser Gly Val Tyr Tyr Thr Ala Arg
165 170 175
Val Arg Val Arg Ser Gln Ile Leu Thr Gly Thr Trp Ser Glu Trp Ser
180 185 190
Pro Ser Ile Thr Trp Tyr Asn His Phe Gln Leu Pro Leu Ile Gln Arg
195 200 205
<210> 3
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<212> PRT
<213> 猕猴(Macaca mulatta)
<400> 3
Gly Asn Met Lys Val Leu Gln Glu Pro Ala Cys Val Ser Asp Tyr Met
1 5 10 15
Ser Ile Ser Thr Cys Glu Trp Lys Met Gly Gly Pro Thr Asn Cys Ser
20 25 30
Ala Glu Leu Arg Leu Leu Tyr Gln Leu Val Phe Gln Ser Ser Glu Thr
35 40 45
His Thr Cys Val Pro Glu Asn Asn Gly Gly Val Gly Cys Val Cys His
50 55 60
Leu Leu Met Asp Asp Val Val Ser Met Asp Asn Tyr Thr Leu Asp Leu
65 70 75 80
Trp Ala Gly Gln Gln Leu Leu Trp Lys Gly Ser Phe Lys Pro Ser Glu
85 90 95
His Val Lys Pro Arg Ala Pro Gly Asn Leu Thr Val His Thr Asn Val
100 105 110
Ser Asp Thr Val Leu Leu Thr Trp Ser Asn Pro Tyr Pro Pro Asp Asn
115 120 125
Tyr Leu Tyr Asn Asp Leu Thr Tyr Ala Val Asn Ile Trp Ser Glu Asn
130 135 140
Asp Pro Ala Tyr Ser Arg Ile His Asn Val Thr Tyr Leu Lys Pro Thr
145 150 155 160
Leu Arg Ile Pro Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Ile Ser Tyr Arg Ala
165 170 175
Arg Val Arg Ala Trp Ala Gln His Tyr Asn Thr Thr Trp Ser Glu Trp
180 185 190
Ser Pro Ser Thr Lys Trp Tyr Asn Ser Tyr Arg Glu Pro Phe Glu Gln
195 200 205
Arg
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<211> 129
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile
20 25 30
Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala
35 40 45
Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg
50 55 60
Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile
65 70 75 80
Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu
85 90 95
Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe
100 105 110
Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser
115 120 125
Ser
<210> 5
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
His His His His His His
1 5
<210> 6
<211> 232
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<210> 7
<211> 232
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 7
Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile
20 25 30
Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val
50 55 60
Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln
85 90 95
Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val
115 120 125
Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu
145 150 155 160
Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr
165 170 175
Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr
195 200 205
Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys
210 215 220
Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
225 230
<210> 8
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 9
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 9
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 10
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
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Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 11
<211> 324
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 11
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Glu Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
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65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
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Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
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Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asn Thr Asn Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 12
<211> 330
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 12
Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Val Cys Gly
1 5 10 15
Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser Gln Ser Ile
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
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Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp
145 150 155 160
Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg
165 170 175
Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln
180 185 190
His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn
195 200 205
Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly
210 215 220
Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met
245 250 255
Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu
260 265 270
Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe
275 280 285
Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn
290 295 300
Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr
305 310 315 320
Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys
325 330
<210> 13
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 14
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 15
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 16
<211> 106
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<400> 16
Gly Gln Pro Lys Ser Ser Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Glu Thr Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Thr Ile Thr Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Val Val Thr Val Asp Trp Lys Val Asp Gly Thr Pro
35 40 45
Val Thr Gln Gly Met Glu Thr Thr Gln Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Met Ala Ser Ser Tyr Leu Thr Leu Thr Ala Arg Ala Trp Glu
65 70 75 80
Arg His Ser Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly His Thr Val
85 90 95
Glu Lys Ser Leu Ser Arg Ala Asp Cys Ser
100 105
<210> 17
<211> 252
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Ile Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Phe Gly Leu
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met
130 135 140
Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser
145 150 155 160
Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Val Leu Tyr Gly Asn Gly Tyr Asn
165 170 175
Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu
180 185 190
Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Val Ala Ala Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu
210 215 220
Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser Leu Arg Thr Pro
225 230 235 240
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245 250
<210> 18
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Thr Gly Gly Gly Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Arg Ile Ser Ile Thr Ile Arg Pro Arg Tyr Phe Gly Leu
100 105 110
Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 19
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Ser Val Leu Tyr Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Val Ala Ala Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Arg Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 20
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Arg Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Pro Thr Ala Pro Arg Ser Ser Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
130 135 140
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
145 150 155 160
Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser
180 185 190
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
210 215 220
Gln Gln Arg Leu Ser Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ser Met Arg Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Ala Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Pro Thr Ala Pro Arg Ser Ser Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Val Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Leu Ser Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 246
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 23
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Asp Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Leu Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu His Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Lys Arg Asp Ser Ser Val Gly Val Gly Ala Met Asp
100 105 110
Val Trp Ser Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile Trp Met Thr
130 135 140
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
145 150 155 160
Thr Cys Arg Ser Ser Gln Tyr Ile Gly Lys Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln
165 170 175
Tyr Lys Lys Gly Gln Val Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser
180 185 190
Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Ala Thr
195 200 205
Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Arg Glu Asp Phe Ala Thr
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ala Val Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 24
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Asn Asp Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala
50 55 60
Val Ser Leu Lys Gly Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu His Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Lys Arg Asp Ser Ser Val Gly Val Gly Ala Met Asp
100 105 110
Val Trp Ser Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
Val Ile Trp Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Tyr Ile Gly Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Tyr Lys Lys Gly Gln Val Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Arg Gly Ser Ala Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Arg
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ala Val Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 26
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 26
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ile Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Phe Lys Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 27
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 27
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Arg Asn Val Ile Tyr Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Asn Asn Val Ala Ala Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Gln Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 28
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 28
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Val Val Tyr Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Thr Asn Val Ala Ala Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Gln Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 29
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 29
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Asn Val Val Tyr Gly
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Ser Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Asn Asn Val Ala Ala Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Phe Tyr Tyr Cys Met Gln Ser
85 90 95
Leu Lys Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 30
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser His Asn Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Tyr Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr His Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105 110
<210> 31
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Ala Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Met Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Glu Thr Pro Tyr Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 32
<211> 122
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Leu Thr Cys Leu Gly Gly Phe Ala Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser
1 5 10 15
Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn
20 25 30
Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu
35 40 45
Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser
50 55 60
Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys
65 70 75 80
Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp
85 90 95
Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu
100 105 110
Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn
115 120

Claims (11)

1.一种结合人IL-4R的抗体，其包含含HCDR1、HCDR2和HCDR3序列的重链可变区和含LCDR1、LCDR2和LCDR3序列的轻链可变区，其中
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSIGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQSFKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSRNVIYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGTNVAA，所述LCDR3序列为MQSLQAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQNVVYGNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGNNVAA，所述LCDR3序列为MQSLKAPYT；或者
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSHNLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAY，所述LCDR3序列为MQALQSPYT；
所述HCDR1序列为GFTFSSYAMS，所述HCDR2序列为SITGGGGGIYYADSVKG，所述HCDR3序列为DRISITIRPRYFGLDF，所述LCDR1序列为RSSQSLLYSNGYNYLD，所述LCDR2序列为LGSNRAS，所述LCDR3序列为MQALETPYA；
其中HCDR和LCDR序列根据Kabat定义。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:18所示。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ IDNO:26、27、28、29、30或者31所示。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:27所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:30所示；或者
所述抗体的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示，所述抗体的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO:31所示。
5.如权利要求1-4中任一项所述的抗体，其中
所述抗体能够结合重组人IL4R(SEQ ID NO:1)和重组猴IL4R(SEQ ID NO:3)，且结合重组人IL4R时的KD低于1nM；和/或
所述抗体能够以低于100pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活；和/或
所述抗体能够以低于50pM的IC50值抑制重组IL13(SEQ ID NO:32)对HEK-Blue IL-4/IL-13细胞的激活；和/或
所述抗体能够以低于200pM的IC50值抑制重组IL4(SEQ ID NO:4)诱导的TF-1细胞的增殖；和/或
所述抗体为全抗体、Fab片段、F(ab’)2片段或单链Fv片段(scFv)；和/或
所述抗体还包含选自IgG1亚型、IgG2亚型或IgG4亚型的重链恒定区和/或包含选自κ亚型或者λ亚型的轻链恒定区；和/或
所述抗体为单克隆抗体；和/或
所述抗体能结合并中和人IL4R，进而阻断IL4-IL4R和IL13-IL4R信号通路。
6.如权利要求5所述的抗体，其中所述抗体为全人源抗体。
7.核酸分子，其编码权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合部分。
8.药物组合物，其包含权利要求1-6中任一项所述的抗体和药学可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
9.权利要求1-6中任一项所述的抗体在制备用于预防或治疗IL-4R介导的疾病的药物中的用途。
10.如权利要求9所述的用途，其中所述IL-4R介导的疾病为自身免疫性疾病。
11.如权利要求9所述的用途，其中所述IL-4R介导的疾病为哮喘或过敏性皮炎。
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