JP6436965B2 - 抗ｂ７−ｈ４抗体及びイムノコンジュゲート - Google Patents

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Description

関連出願とのクロスリファレンス
本出願は、それぞれがすべての目的のためにその全内容が本明細書に参照により援用される、２０１３年３月１４日に出願された米国特許仮出願第６１／７８４８７７号、２０１３年３月１４日に出願された米国特許仮出願第６１／７８５８１１号及び２０１３年９月５日に出願された米国特許仮出願第６１／８７４１７５号の優先権の利益を主張する。
本発明は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びイムノコンジュゲート並びにそれらの使用方法に関する。
Ｂ７−Ｈ４は、Ｉ型膜貫通タンパク質であり、Ｔ細胞受容体抗原性シグナルと連動して共シグナルを提供するタンパク質のＢ７スーパーファミリーの一員である。Ｂ７−Ｈ４は、Ｔ細胞機能の負の制御因子であり、Ｔ細胞の連結は、それらの増殖、サイトカイン分泌及び細胞傷害性を阻害する。マウスにおけるＢ７−Ｈ４の排除は、免疫細胞恒常性に影響せず、自己免疫の兆候がない。Ｚｈｕら、Ｂｌｏｏｄ、１１３（８）：１７５９−１７６７（２００９）；Ｓｕｈら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２６（１７）：６４０３−６４１１（２００６）。Ｂ７−Ｈ４についての受容体は知られておらず、同定されていない。
ヒトＢ７−Ｈ４は、２８２アミノ酸タンパク質（アミノ末端シグナル配列を含む）であり、そのうち〜２２７アミノ酸は、アミノ末端シグナル配列の切断の後に細胞外空間にあると予測される。Ｂ７−Ｈ４は、Ｉｇ様Ｖドメイン、Ｉｇ様Ｃドメイン、膜貫通ドメイン及び短い細胞質尾部を含む。
がんのようなＢ７−Ｈ４付随状態を診断及び治療するために、Ｂ７−Ｈ４を標的にする薬剤に対する要求が当該技術分野で存在する。本発明は、その要求を満たし、他の利点も提供する。
本発明は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びイムノコンジュゲート並びにそれらの使用方法に関する。
幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離抗体が提供される。幾つかの実施態様では、抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合し、少なくとも１つの以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を有する。幾つかの実施態様では、抗体は、≦５０ｎＭの親和性でＢ７−Ｈ４に結合する。幾つかの実施態様では、抗体は、モノクローナル抗体である。幾つかの実施態様では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体又はキメラ抗体である。幾つかの実施態様では、抗体は、ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体又はＩｇＧ２ｂ抗体である。幾つかの実施態様では、抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体断片である。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、配列番号７３の配列を有するヒトＢ７−Ｈ４である。
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、又は（ｂ）（ｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、又は（ｃ）（ｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、又は（ｄ）（ｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、又は（ｅ）（ｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、又は（ｆ）（ｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び（ｉｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、又は（ｂ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、又は（ｃ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、又は（ｄ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、又は（ｅ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、又は（ｆ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、配列番号５１、５２又は５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｃ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｄ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｅ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｆ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３をさらに含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｃ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｄ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｅ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｆ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３をさらに含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、配列番号６５若しくは６６の軽鎖フレームワークＦＲ２配列又は配列番号４７の軽鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。
幾つかの実施態様では、単離抗体（ａ）配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｂ）配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｃ）（ａ）と同様のＶＨ配列及び（ｂ）と同様のＶＬ配列、又は（ｄ）配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｅ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｆ）（ｄ）と同様のＶＨ配列及び（ｅ）と同様のＶＬ配列、又は（ｇ）配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｈ）配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｉ）（ｇ）と同様のＶＨ配列及び（ｈ）と同様のＶＬ配列、又は（ｊ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｋ）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｌ）（ｊ）と同様のＶＨ配列及び（ｋ）と同様のＶＬ配列、又は（ｍ）配列番号３６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｎ）配列番号３５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｏ）（ｍ）と同様のＶＨ配列及び（ｎ）と同様のＶＬ配列、又は（ｐ）配列番号３７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｑ）（ｐ）と同様のＶＨ配列及び（ｎ）と同様のＶＬ配列、又は（ｒ）配列番号３８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｓ）（ｒ）と同様のＶＨ配列及び（ｎ）と同様のＶＬ配列、又は（ｔ）配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は（ｕ）配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｖ）（ｔ）と同様のＶＨ配列及び（ｖ）と同様のＶＬ配列、又は（ｗ）配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は（ｘ）（ｔ）と同様のＶＨ配列及び（ｗ）と同様のＶＬ配列。
幾つかの実施態様では、抗体は、配列番号４のＶＨ配列、配列番号１２のＶＨ配列、配列番号２０のＶＨ配列、配列番号４、２８のＶＨ配列、配列番号３６のＶＨ配列、配列番号３７のＶＨ配列、配列番号３８のＶＨ配列又は配列番号５６のＶＨ配列を含む。
幾つかの実施態様では、抗体は、配列番号３のＶＬ配列、配列番号１１のＶＬ配列、配列番号１９のＶＬ配列、配列番号２７のＶＬ配列、配列番号３５のＶＬ配列、配列番号５５のＶＬ配列又は配列番号５７のＶＬ配列を含む。
幾つかの実施態様では、単離抗体は、（ａ）配列番号４のＶＨ配列及び配列番号３のＶＬ配列、又は（ｂ）配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列、又は（ｄ）配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｅ）配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｆ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｇ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、又は（ｈ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む。
幾つかの実施態様では、本明細書に記載の抗体をコードする単離核酸が提供される。幾つかの実施態様では、核酸を含む宿主細胞が提供される。幾つかの実施態様では、本明細書に記載の抗体を産生する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含む。
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートが提供される。幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体と細胞傷害剤とを含む。幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂは、本明細書に記載の抗体であり、（ｂ）Ｌは、リンカーであり、（ｃ）Ｄは、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン及びネモルビシン誘導体から選択される薬物であり、（ｄ）ｐは１−８の範囲である。幾つかの実施態様では、Ｄは、オーリスタチンである。幾つかのそうした実施態様では、Ｄは、式ＤＥ：
DE
（式中、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ及びＨから独立して選択され、Ｒ９はＨであり、Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである）
を有する。幾つかの実施態様では、Ｄは、構造：

を有するＭＭＡＥである。
幾つかの実施態様では、Ｄは、
式Ａ：
A;
のピロロベンゾジアゼピンである。
式中、点線は、Ｃ１とＣ２の間又はＣ２とＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し、Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、任意選択的にハロ又はジハロからさらに選択され、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立して選択され、Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、Ｒ１１は、Ｈ又はＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、Ｍは金属カチオンであり、Ｒ及びＲ’は、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基からそれぞれ独立して選択され、及び任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員の複素環式環を形成し、Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義した通りであり、Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香族環によって離断されてもよく、Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される。幾つかのそうした実施態様では、Ｄは、
;
（式中、ｎは０又は１である）
である。
幾つかの実施態様では、Ｄは、
A(I);
A(III);
A(IV); 及び
A(V);
（式中、ＲＥ及びＲＥ”は、それぞれ、Ｈ又はＲＤから独立して選択され、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立して選択され、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、ｎは、０又は１である）
から選択される構造を有するピロロベンゾジアゼピンである。
幾つかの実施態様では、Ｄは、式Ｂ：
（式中、水平の波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、メチル、エチル、フェニル、フルオロ置換フェニル及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立して選択され、ｎは０又は１である）
のピロロベンゾジアゼピンである。
幾つかの実施態様では、Ｄは、ネモルビシン誘導体である。幾つかの実施態様では、Ｄは、
; 及び
から選択される構造を有する。
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、プロテアーゼによって切断可能なリンカーを含む。幾つかの実施態様では、リンカーは、ｖａｌ−ｃｉｔジペプチド、Ｐｈｅ−Ｌｙｓジペプチド又はＰｈｅ−ホモＬｙｓジペプチドを含む。幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、酸不安定性のリンカーを含む。幾つかのそうした実施態様では、リンカーは、ヒドラゾンを含む。
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、以下から選択される式を有する。
（式中、Ｓは硫黄原子である）
;
;
;
;
; 及び
幾つかの実施態様では、ｐは２−５の範囲である。
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、（ａ）配列番号４のＶＨ配列及び配列番号３のＶＬ配列、又は（ｂ）配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列、又は（ｄ）配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｅ）配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｆ）配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列、又は（ｇ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、又は（ｈ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む抗体を含む。
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｂ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｃ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｅ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｆ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｇ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｈ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｉ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｊ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、又は（ｋ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｌ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を含む。
幾つかの実施態様では、薬学的製剤が提供される。幾つかのそうした実施態様では、薬学的製剤は、例えば本明細書に記載のように、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体を含むイムノコンジュゲートを含む。幾つかの実施態様では、薬学的製剤は、追加的な治療剤をさらに含む。幾つかの実施態様では、追加的な治療剤は、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である。
幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する個体を治療する方法が提供される。幾つかのそうした実施態様では、方法は、例えば本明細書に記載のように、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体を含むイムノコンジュゲートを含む薬学的製剤を投与することを含む。幾つかのそうした実施態様では、方法は、Ｂ７−Ｈ４の細胞外ドメインに結合する抗体を含むイムノコンジュゲートを含む薬学的製剤を投与することを含む。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、乳がん、卵巣がん及び子宮内膜がんから選択される。幾つかの実施態様では、方法は、追加的な治療剤を個体に投与することを含む。幾つかのそうした実施態様では、追加的な治療剤は、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である。
幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、細胞表面上のＢ７−Ｈ４へのイムノコンジュゲートの結合が可能な条件下で、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体を含むイムノコンジュゲートに、細胞を曝露することを含む。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体は、本明細書に記載の抗体である。幾つかの実施態様では、それによって、細胞の増殖が阻害される。幾つかの実施態様では、細胞は、乳がん細胞、卵巣がん細胞又は子宮内膜がん細胞である。
幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体は、標識にコンジュゲートされている。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体は、本明細書に記載の抗体である。幾つかの実施態様では、標識は陽電子放出体である。幾つかの実施態様では、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
幾つかの実施態様では、生体試料においてヒトＢ７−Ｈ４を検出する方法が提供される。幾つかの実施態様では、方法は、天然に存在するヒトＢ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合が可能な条件下で、生体試料を抗Ｂ７−Ｈ４抗体に接触させること、及び生体試料において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体と天然に存在するヒトＢ７−Ｈ４との間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、本明細書に記載の抗体である。幾つかの実施態様では、生体試料は、乳がん試料、卵巣がん試料又は子宮内膜がん試料である。
幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを検出するための方法が提供される。幾つかのそうした実施態様では、方法は、（ｉ）Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する又は有することが疑われる被検体に標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を投与すること、及び（ｉｉ）被検体において標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することを含み、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出が、被検体のＢ７−Ｈ４陽性のがんを示す。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、本明細書に記載の抗体である。幾つかのそうした実施態様では、標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、陽電子放出体にコンジュゲートされている抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む。幾つかの実施態様では、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。
実施例Ａに記載されている、様々な組織におけるヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現のレベルのグラフ図である。 実施例Ｂに記載されている、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションによる乳癌試料におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す図である。 実施例Ｂに記載されている、（Ａ）すべての乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４発現の広まり、（Ｂ）乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４染色の０、１＋、２＋及び３＋レベルの広まりを示す図である。 実施例Ｂに記載されている、（Ｃ）乳腺腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現（ウェスタン分析による）を示す図である。 実施例Ｂに記載されている、（Ｄ）原発性乳腺腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現（ウェスタン分析による）を示す図である。 実施例Ｂに記載されている、（Ｅ）卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の発現を示す図である。 （Ａ）は、実施例に記載されている、開発したある種の抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体の特性を示す図である。（Ｂ）は、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４モノクローナル抗体のエピトープグループ化を示す図である。 マウス抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９及び２２Ｃ１０の軽鎖及び重鎖可変領域配列のアライメントを示す図である。 マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異体の軽鎖可変領域配列のアライメントを示す図である。 マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異体の軽鎖可変領域配列のアライメントを示す図である。 マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異体の重鎖可変領域配列のアライメントを示す図である。 マウス抗体ｍｕ１Ｄ１１及びそのヒト化変異体の重鎖可変領域配列のアライメントを示す図である。 マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異体の軽鎖可変領域配列を示す図である。 マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異体の軽鎖可変領域配列を示す図である。 マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異体の重鎖可変領域配列を示す図である。 マウス抗体ｍｕ２２Ｃ１０及びそのヒト化変異体の重鎖可変領域配列を示す図である。 ヒト、チンパンジー、カニクイザル、ラット、及びマウスからのＢ７−Ｈ４のアライメントを示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４抗体の種交差反応性を示す図である。 キメラ抗体ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０並びに様々なヒト化変異体の親和性測定値を示す図である。 ＳＫ−ＢＲ３細胞における抗Ｂ７−Ｈ４ ９Ｂ９抗体についての染色とＥＧＦ染色とのオーバーラップにより示される、抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内部移行を示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４抗体がＭＸ−１のリソソームに達することができることを示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４イムノコンジュゲートがＭＸ−１乳がん異種移植における有効性を示すことを示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４イムノコンジュゲートがＨＢＣＸ−２４乳がん異種移植における有効性を示すことを示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４イムノコンジュゲートがＭＸ−１乳がん異種移植における有効性を示すことを示す図である。 抗Ｂ７−Ｈ４イムノコンジュゲートがＭＸ−１乳がん異種移植における有効性を示すことを示す図である。 （Ａ）ＦＡＣＳ及び免疫組織化学によるＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植でのＢ７−Ｈ４の発現、並びに（Ｂ）抗Ｂ７−Ｈ４イムノコンジュゲートがＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん異種移植における有効性を示すことを示す図である。
Ｉ．定義
本明細書において、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下で定義するように、ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、それらの同じアミノ酸配列を含んでいてもよいし、アミノ酸配列変化を含んでいてもよい。幾つかの実施態様では、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。幾つかの実施態様では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、ＶＬヒト免疫グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と配列が同一である。
「親和性」は、分子（例えば抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）の間の非共有相互作用を合計した力を指す。別途指示がない限り、本明細書で使用する場合、「結合親和性」は、結合ペアのメンバー（例えば抗体と抗原）の間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載のものを含めた、当該技術分野で知られている慣用法によって測定することができる。結合親和性の測定に関する具体的な例示的及び代表的な実施態様を以下に記載する。
「親和性成熟」抗体は、変更を有さない親抗体と比較して、１つ又は複数の超可変領域（ＨＶＲ）中に１つ又は複数の変更を有し、そうした変更が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を指す。
用語「抗Ｂ７−Ｈ４抗体」及び「Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体」は、抗体が、Ｂ７−Ｈ４のターゲティングにおいて、診断剤及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性を有してＢ７−Ｈ４を結合することができる抗体を指す。一実施態様では、例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）によって測定される無関係の非Ｂ７−Ｈ４タンパク質への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合の程度は、Ｂ７−Ｈ４に対する抗体の結合の約１０％未満である。ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦４ｎＭ、≦３ｎＭ、≦２ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）の解離定数（Ｋｄ）を有する。ある種の実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、様々な種のＢ７−Ｈ４の間で保存されている、Ｂ７−Ｈ４のエピトープに結合する。
用語「抗体」は、本明細書で広義で使用され、これらに限定されないが、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）及び抗体断片を含めた様々な抗体構造を、それらが所望の抗原結合活性を示す限り、包含する。
「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部を含み、インタクトな抗体が結合する抗原に結合する、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体断片の例としては、これらに限定されないが、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；直鎖状抗体；単鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。
基準抗体として「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、その抗原への基準抗体の結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、競合アッセイにおいて、基準抗体は、その抗原への抗体の結合を５０％以上ブロックする。例示的な競合アッセイを本明細書で提供する。
用語「がん」及び「癌性」は、典型的には無秩序な細胞成長／増殖で特徴づけられる、哺乳動物の生理的条件を指すか又は説明する。がんの例としては、これらに限定されないが、カルシノーマ、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫及び白血病が挙げられる。そうしたがんのより特定の例としては、扁平上皮がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺腺癌、肺扁平上皮癌、腹膜がん、肝細胞がん、胃腸がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝がん、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、子宮内膜又は子宮癌、唾液腺癌、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰がん、甲状腺がん、肝臓癌、白血病及び他のリンパ増殖性障害、並びに様々なタイプの頭頚部がんが含まれる。
用語「キメラ」抗体は、重鎖及び／又は軽鎖の一部は特定の供給源又は種に由来するが、重鎖及び／又は軽鎖の残部は異なる供給源又は種に由来する抗体を指す。
抗体の「クラス」は、抗体の重鎖が有する定常ドメイン又は定常領域のタイプを指す。抗体の５つの主要なクラス、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭがあり、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２にさらに分けることができる。免疫グロブリンの異なるクラスに相当する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。
本明細書で使用する場合、用語「細胞傷害剤」は、細胞機能を阻害若しくは妨害する及び／又は細胞死若しくは細胞破壊を引き起こす物質を指す。細胞傷害剤としては、これらに限定されないが、放射性同位元素（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位元素）；化学療法剤又は化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン又は他の挿入剤）；成長阻害剤；酵素及びその断片、例えば核酸分解酵素；抗生物質；毒素、例えば、細菌、真菌、植物又は動物起源の小分子毒素又は酵素的に活性な毒素（それらの断片及び／又は変異体を含む）；並びに以下に開示する様々な抗腫瘍性又は抗がん性の薬剤が挙げられる。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプによって異なる、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を指す。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体結合、抗体依存性細胞介在性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体）の下方制御、並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
薬剤、例えば薬学的製剤の「有効量」は、所望の治療的又は予防的な結果を達成するのに必要な投薬量及び期間での有効な量を指す。
用語「エピトープ」は、抗体が結合する、抗原分子上の特定の部位を指す。
本明細書では、用語「Ｆｃ領域」は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するのに使用される。この用語には、天然配列Ｆｃ領域及び変異Ｆｃ領域が含まれる。一実施態様では、ヒトＩｇＧ重鎖のＦｃ領域は、Ｃｙｓ２２６又はＰｒｏ２３０から重鎖のカルボキシル末端まで延びる。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在しても、存在しなくてもよい。本明細書で別途断りのない限り、Ｆｃ領域又は定常領域のアミノ酸残基の番号付けは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ、１９９１に記載されているような、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵ番号付けシステムに従う。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を指す。可変ドメインのＦＲは、一般に、４つのＦＲドメイン、すなわちＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４から成る。したがって、ＨＶＲ配列及びＦＲ配列は、一般に、ＶＨ（又はＶＬ）中の次の配列、ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４に出現する。
用語「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」は、本明細書では、互換的に使用されて、天然の抗体構造と実質的に類似している構造を有する、又は本明細書で定義したＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を指す。
用語「グリコシル化された形態のＢ７−Ｈ４」は、炭水化物残基の付加により翻訳後修飾された天然に存在する形態のＢ７−Ｈ４を指す。
用語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及び「宿主細胞培養物」は、互換的に使用されて、外来性の核酸が導入された細胞（そうした細胞の後代を含む）を指す。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これには、初代形質転換細胞、及び継代数とは関係なく、それに由来する後代が含まれる。後代は、核酸の含有量が親細胞と完全に同一でなくてもよく、変異を含んでいてもよい。元の形質転換細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する変異後代は、本明細書に含まれる。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞によって産生される、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体をコードする配列を利用する非ヒトの供給源に由来する抗体のものに対応するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体の本定義は、非ヒトの抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨのフレームワーク配列の選択において、最も一般的に存在するアミノ酸残基に相当するフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２、Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、１−３巻と同様のサブグループである。一実施態様では、ＶＬについては、サブグループは、上述のＫａｂａｔらと同様のサブグループカッパＩである。一実施態様では、ＶＨについては、サブグループは、上述のＫａｂａｔらと同様のサブグループＩＩＩである。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を指す。ある種の実施態様では、ヒト化抗体は、少なくとも１つの、及び典型的には２つの可変ドメインのすべてを実質的に含み、すべて又は実質的にすべてのＨＶＲ（例えばＣＤＲ）は、非ヒト抗体のものに対応し、すべて又は実質的にすべのＦＲは、ヒト抗体のものに対応する。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。抗体、例えば非ヒト抗体の「ヒト化形態」は、ヒト化された抗体を指す。
本明細書で使用する場合、用語「超可変領域」又は「ＨＶＲ」は、配列が超可変性である、及び／又は構造的に定められたループ（「超可変ループ」）を形成する、各抗体可変ドメイン領域を指す。一般に、天然の４鎖抗体は、６つのＨＶＲ、すなわちＶＨ中の３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ中の３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）を含む。ＨＶＲは、一般に、超可変ループ由来及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）由来のアミノ酸残基を含み、後者は、配列変動性が最も高く、及び／又は抗原の認識に関与する。例示的な超可変ループは、アミノ酸残基２６−３２（Ｌ１）、５０−５２（Ｌ２）、９１−９６（Ｌ３）、２６−３２（Ｈ１）、５３−５５（Ｈ２）及び９６−１０１（Ｈ３）で生じる（Chothia及びLesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)）。例示的なＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２及びＣＤＲ−Ｈ３）は、Ｌ１の２４−３４、Ｌ２の５０−５６、Ｌ３の８９−９７、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−６５及びＨ３の９５−１０２のアミノ酸残基で生じる（Kabatら, Sequences of Proteins of Immunological Interest,第５版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)）。ＶＨ中のＣＤＲ１を除いては、ＣＤＲは、一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲは、抗原と接触する残基である、「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮ＣＤＲ又はａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲ領域内に含まれる。例示的なａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１−３４、Ｌ２の５０−５５、Ｌ３の８９−９６、Ｈ１の３１−３５Ｂ、Ｈ２の５０−５８及びＨ３の９５−１０２で生じる（Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）。別途指示がない限り、可変ドメインのＨＶＲ残基及び他の残基（例えばＦＲ残基）は、本明細書では、上述のＫａｂａｔらに従って番号付けする。
「イムノコンジュゲート」は、これに限定されないが、細胞傷害剤を含めた、１つ又は複数の異種分子（複数可）にコンジュゲートされた抗体である。
「個体」又は「被検体」は哺乳動物である。哺乳動物としては、これらに限定されないが、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及びサルなどの非ヒト霊長類）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられる。ある種の実施態様では、個体又は被検体はヒトである。
「単離抗体」は、その天然環境の構成成分から分離された抗体である。幾つかの実施態様では、抗体は、例えば電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）によって測定した時に９５％を越える又は９９％の純度に精製される。抗体純度の評価方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら、Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照されたい。
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を指す。単離核酸としては、核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子が挙げられるが、核酸分子は、染色体外に、又はその天然の染色体上の位置とは異なる染色体上の位置にも存在する。
「抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードする単離核酸」は、抗体の軽鎖及び重鎖（又はその断片）をコードする１種又は複数の核酸分子を指す。これには、単一のベクター又は別々のベクター中のそうした核酸分子（複数可）が含まれ、そうした核酸分子（複数可）は、宿主細胞の１か所又は複数の位置に存在する。
本明細書で使用する場合、用語「Ｂ７−Ｈ４」は、細胞におけるＢ７−Ｈ４の前躯体タンパク質のプロセシングによって生じる、任意の天然の成熟Ｂ７−Ｈ４を指す。この用語には、別途指示がない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）などの哺乳動物並びにげっ歯類（例えば、マウス及びラット）を含めた任意の脊椎動物供給源由来のＢ７−Ｈ４が含まれる。この用語には、天然に存在するＢ７−Ｈ４の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子変異体も含まれる。シグナル配列を有する（シグナル配列のアミノ酸１−２８を有する）例示的ヒトＢ７−Ｈ４前駆体タンパク質のアミノ酸配列を、配列番号７３に示す。例示的成熟ヒトＢ７−Ｈ４のアミノ酸配列を、配列番号７４に示す。例示的カニクイザルＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列のアミノ酸１−２８を有する）の推定配列及び成熟配列を、それぞれ配列番号７５及び７６に示す。例示的ラットＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列のアミノ酸１−２８を有する）及び成熟配列のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号７７及び７８に示す。例示的マウスＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列のアミノ酸１−２８を有する）及び成熟配列のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号７９及び８０に示す。例示的チンパンジーＢ７−Ｈ４前駆体（シグナル配列のアミノ酸１−２４を有する）及び成熟配列のアミノ酸配列を、それぞれ配列番号８１及び８２に示す。
用語「Ｂ７−Ｈ４陽性のがん」は、その表面でＢ７−Ｈ４を発現する細胞を含むがんを指す。幾つかの実施態様では、細胞表面でのＢ７−Ｈ４の発現は、例えば、免疫組織化学、ＦＡＣＳなどのような方法においてＢ７−Ｈ４に対する抗体を使用して決定する。あるいは、Ｂ７−Ｈ４ ｍＲＮＡ発現は、細胞表面でのＢ７−Ｈ４発現と相関すると考えられ、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法によって測定できる。
用語「Ｂ７−Ｈ４陽性細胞」は、その表面にＢ７−Ｈ４を発現する細胞を指す。
本明細書で使用する場合、用語「モノクローナル抗体」は、例えば天然に存在する変異を含む又はモノクローナル抗体調製物の産生の間に生じる、あり得る変異体抗体（そうした変異体は、一般に少量存在している）を除いては、実質的に均一な抗体の集団（すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一である及び／又は同じエピトープに結合する）から得られる抗体を指す。様々な決定基（エピトープ）に対する様々な抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物と対照的に、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は、抗原の単一決定基に対するものである。したがって、修飾語「モノクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られたという抗体の性質を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とすると解釈されるべきでない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、これらに限定されないが、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン座の全体又は一部を含むトランスジェニック動物を利用する方法を含めた種々の手法によって作製することができ、モノクローナル抗体を作製するためのそうした方法及び他の例示的方法は、本明細書に記載されている。
「裸抗体」は、異種部分（例えば細胞傷害性部分）又は放射標識にコンジュゲートされていない抗体を指す。裸抗体は、薬学的製剤に存在してもよい。
「天然の抗体」は、多様な構造を有する、天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然のＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合した２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端に、各重鎖は、可変重鎖ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）を有する。同様にＮ末端からＣ末端に、各軽鎖は、可変軽鎖ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽鎖（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプのうちの１つに帰属させることができる。
用語「添付文書」は、治療用製品の商業的なパッケージに慣例上含まれ、そうした治療用製品の使用に関する、適応症、用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は注意についての情報を含む、説明書を指すのに使用される。
基準ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じて最大の配列同一性パーセントを得るためにギャップを導入した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部としてみなさない、基準ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセンテージと定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定するためのアライメントは、当該技術分野の範囲内の様々な方法で、例えば、公的に利用可能なコンピュータソフトウェア、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者なら、比較する配列の完全長にわたる最大のアライメントを得るために必要とされる任意のアルゴリズムを含めて、配列を整列させるための適切なパラメーターを決定することができる。しかし、本明細書においては、アミノ酸配列同一性％値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ−２を使用して得られる。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作製され、ソースコードは、米国著作権庁、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．、２０５５９に使用者用書類と共に提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７の下で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａから公的に利用可能であり、又はソースコードからコンパイルすることができる。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、使用するために、デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含めたＵＮＩＸオペレーティングシステムでコンパイルする必要がある。すべての配列比較パラメーターはＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され、変更しない。
ＡＬＩＧＮ−２をアミノ酸配列の比較に用いる場合は、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂに対する所与のアミノ酸配列Ａのアミノ酸配列同一性％（あるいはこれは、所与のアミノ酸配列Ｂへの、所与のアミノ酸配列Ｂとの、又は所与のアミノ酸配列Ｂに対する特定のアミノ酸配列同一性％を有する又は含む所与のアミノ酸配列Ａと表現することができる）は、以下のように計算される：
分数Ｘ／Ｙの１００倍
式中、Ｘは、ＡとＢのプログラムのアライメントにおいて、配列アライメントプログラムＡＬＩＧＮ−２によって、同一一致としてスコア化されたアミノ酸残基の数であり、Ｙは、Ｂのアミノ酸残基の総数である。アミノ酸配列Ａの長さが、アミノ酸配列Ｂの長さに等しくない場合は、ＢへのＡのアミノ酸配列同一性％は、ＡへのＢのアミノ酸配列同一性％に等しくないであろうことが理解されよう。特に具体的に明記しない限り、本明細書で使用するすべてのアミノ酸配列同一性％値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを使用して、直前の段落に記載されているように得られる。
用語「薬学的製剤」は、その中に含まれる活性成分の生物活性を有効にするような形態であって、製剤を投与することになる被検体にとって許容されない毒性を有する追加的な構成成分を含まない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」は、被検体に非中毒性である、薬学的製剤中の活性成分以外の成分を指す。薬学的に許容される担体としては、これらに限定はされないが、バッファー、賦形剤、安定化剤又は防腐剤が挙げられる。
本明細書で使用する場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療すること」などのその文法的バリエーション）は、治療される個体の自然経過を変化させようとする臨床的介入を指し、予防のため又は臨床病理の過程において行うことができる。治療の望ましい作用としては、これらに限定されないが、疾患の出現又は再発の予防、症状の軽減、疾患の任意の直接又は間接的な病理学的帰結の低減、転移の予防、疾患進行速度の低下、病態の改善又は緩和、及び寛解又は予後の改善が挙げられる。幾つかの実施態様では、本発明の抗体は、疾患の発生を遅延させる又は疾患の進行を遅らせるために使用される。
用語「可変領域」又は「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する、抗体の重鎖又は軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖（それぞれＶＨ及びＶＬ）の可変ドメインは、一般に、各ドメインが、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む、類似した構造を有する（例えば、Kindtら、Kuby Immunology第６版、W.H.Freeman and Co.、ｐ９１(2007)を参照されたい）。単一のＶＨ又はＶＬドメインは、抗原結合特異性を付与するのに十分であり得る。さらに、抗原に結合する抗体由来のＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ相補的なＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングし、特定の抗原を結合する抗体を単離することができる。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）；Ｃｌａｒｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照されたい。
本明細書で使用する場合、用語「ベクター」は、それに結合した別の核酸を伝搬することができる核酸分子を指す。この用語には、自己複製核酸構造物としてのベクター及びそれが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある種のベクターは、動作可能に連結された核酸の発現を指令することができる。そうしたベクターを、本明細書では、「発現ベクター」と称する。
「アルキル」は、ノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含むＣ１−Ｃ１８炭化水素である。例は、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３である。
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ８アルキル」は、１から８個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル及び−ｎ−デシルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」は、１から１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。Ｃ１−Ｃ１２アルキル基は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ６アルキル」は、１から６個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ６アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル及び−ｎ−ヘキシルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル及び２−メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及び−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上で述べるように、未置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
本明細書で使用する場合、用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」は、１から４個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝の、飽和又は不飽和の炭化水素を指す。代表的な「Ｃ１−Ｃ４アルキル」基としては、これらに限定されないが、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが挙げられ、一方で、分枝Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、これらに限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられ、不飽和Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、これらに限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル及び−イソブチレニルが挙げられる。Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、Ｃ１−Ｃ８アルキル基について上で述べるように、未置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
「アルコキシ」は、酸素に単結合したアルキル基である。例示的アルコキシ基としては、これらに限定されないが、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が挙げられる。「Ｃ１−Ｃ５アルコキシ」は、１から５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、アルキル基について上で述べたように、未置換でもよいし、１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する、ノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、これらに限定されないが、エチレン又はビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）及び５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられる。「Ｃ２−Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する、２から８個のノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、炭化水素である。
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する、ノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、これらに限定されないが、アセチレン（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。「Ｃ２−Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する、２から８個のノルマル、第２級、第３級又は環状の炭素原子を含む、炭化水素である。
「アルキレン」は、飽和した、分枝又は直鎖又は環状の、１−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルカンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルキレン基としては、これらに限定されないが、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）などが挙げられる。
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０−の直鎖の飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オシチレン（ｏｃｙｔｙｌｅｎｅ）、ノニレン及びデカレンが挙げられる。
「アルケニレン」は、不飽和の、分枝又は直鎖又は環状の、２−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルケンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルケニレン基としては、これに限定されないが、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられる。
「アルキニレン」は、不飽和の、分枝又は直鎖又は環状の、２−１８個の炭素原子の炭化水素基であって、親アルキンの同じ又は２つの異なる炭素原子から２つの水素原子を除去することによって得られる一価のラジカル中心を２つ有する炭化水素基を指す。典型的なアルキニレン基としては、これらに限定されないが、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が挙げられる。
「アリール」は、炭素環式芳香族基を指す。アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。炭素環式芳香族基又は複素環式芳香族基は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
「Ｃ５−Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環中に５から２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ２０アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。Ｃ５−Ｃ２０アリール基は、アリール基について上で述べたように、置換されていても、未置換でもよい。「Ｃ５−Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環中に５から１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ１４アリール基の例としては、これらに限定されないが、フェニル、ナフチル及びアントラセニルが挙げられる。Ｃ５−Ｃ１４アリール基は、アリール基について上で述べたように、置換されていても、未置換でもよい。
「アリーレン」は、共有結合を２つ有するアリール基であり、以下の構造：

で示すように、オルソ、メタ又はパラ配置で存在することができ、
フェニル基は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた４つまでの基で置換されていてもよい。
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがアリール基で置き換えられている、非環式のアルキル基を指す。典型的なアリールアルキル基としては、これらに限定されないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられる。アリールアルキル基は６から２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基（アルカニル、アルケニル又はアルキニル基を含む）のアルキル部分、は、１から６個の炭素原子であり、アリール部分は５から１４個の炭素原子である。
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子の１つがヘテロアリール基で置き換えられている、非環式のアルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基は、これらに限定されないが、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチルなどが挙げられる。ヘテロアリールアルキル基は、６から２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基（アルカニル、アルケニル又はアルキニル基を含む）のアルキル部分は１から６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５から１４個の炭素原子、並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３から７環員（２から６個の炭素原子）を有する単環でもよいし、７から１０環員（４から９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系でもよい。
「置換されたアルキル」、「置換されたアリール」、及び「置換されたアリールアルキル」は、１つ又は複数の水素原子が、それぞれ独立して置換基で置き換えられた、アルキル、アリール及びアリールアルキルをそれぞれ意味する。典型的な置換基としては、これらに限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ− ３、−ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２ −、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられ、式中、各Ｘは独立して、ハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩであり、各Ｒは独立して、−Ｈ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４複素環、保護基又はプロドラッグ部分である。上記のアルキレン、アルケニレン及びアルキニレン基も、同様に置換されていてもよい。
「ヘテロアリール」及び「複素環」は、１つ又は複数の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素及び硫黄である環系を指す。複素環基は、３から２０個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３から７環員（２から６個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する単環でもよいし、７から１０環員（４から９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ及びＳから選択される１から３個のヘテロ原子）を有する二環でもよく、例えば、ビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］又は［６，６］系でもよい。
例示的な複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．、「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９６８）、特に１、３、４、６、７及び９章；「Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９５０年から現在まで）、特に１３、１４、１６、１９及び２８巻；並びにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
複素環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ｂｉｓ−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ｂｉｓ−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル（ｐｈｅｎｏｘａｔｈｉｎｙｌ）、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナンスロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾオキサゾリニル、及びイサチノイルが挙げられる。
限定ではなく例として、炭素結合複素環は、ピリジンの２、３、４、５若しくは６位、ピリダジンの３、４、５若しくは６位、ピリミジンの２、４、５若しくは６位、ピラジンの２、３、５若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール若しくはテトラヒドロピロールの２、３、４若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール若しくはチアゾールの２、４、若しくは５位、イソオキサゾール、ピラゾール若しくはイソチアゾールの３、４、若しくは５位、アジリジンの２若しくは３位、アゼチジンの２、３若しくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７若しくは８位、又はイソキノリンの１、３、４、５、６、７若しくは８位で結合する。さらにより典型的には、炭素結合複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル又は５−チアゾリルが挙げられる。
限定ではなく例として、窒素結合複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ−カルボリンの９位で結合する。さらにより典型的には、窒素結合複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル及び１−ピペリジニルが挙げられる。
「Ｃ３−Ｃ８複素環」は、１から４個の環炭素原子が、Ｏ、Ｓ及びＮから成る群からのヘテロ原子に独立して置き換えられている芳香族又は非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ８複素環の代表的な例としては、これらに限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル及びテトラゾリルが挙げられる。Ｃ３−Ｃ８複素環は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた７個までの基で置換されていてもよい。
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロは、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた６個までの基で置換されていてもよい。
「Ｃ３−Ｃ２０複素環」は、１から４個の環炭素原子がＯ、Ｓ及びＮから成る群からのヘテロ原子で独立して置き換えられている、芳香族又は非芳香族のＣ３−Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３−Ｃ２０複素環は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた７個までの基で置換されていてもよい。
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ２０複素環基を指す。
「炭素環」は、単環として３から７個の炭素原子、又は二環として７から１２個の炭素原子を有する、飽和環又は不飽和環を意味する。単環式炭素環は、３から６個の環原子、さらにより典型的には５又は６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えばビシクロ［４，５］、［５，５］、［５，６］若しくは［６，６］系として配置された７から１２個の環原子、又はビシクロ［５，６］若しくは［６，６］系として配置された９若しくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は、３、４、５、６、７又は８員の飽和又は不飽和の非芳香族炭素環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環は、これらに限定されないが、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル及び−シクロオクタジエニルが挙げられる。Ｃ３−Ｃ８炭素環基は、未置換でもよいし、これらに限定されないが、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立して選択される）を含めた１つ又は複数の基で置換されていてもよい。
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子の１つが結合で置き換えられている、上記で定義したＣ３−Ｃ８炭素環基を指す。
「リンカー」は、薬物部分に抗体を共有結合させる共有結合又は原子鎖を含む化学物質部分を指す。様々な実施態様では、リンカーは、２価の基、例えばアルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル、部分、例えば−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−、アルキルオキシ（例えばポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えばポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位；並びにコハク酸エステル、スクシンアミド、ジグリコールエステル、マロン酸エステル及びカプロアミドを含めた、二酸エステル及びアミドを含む。様々な実施態様では、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン及びホモリジンなどの１つ又は複数のアミノ酸残基を含むことができる。
用語「キラル」は、鏡像パートナーの重ね合わせができない特性を有する分子を指し、一方で用語「アキラル」は、その鏡像パートナーに重ね合わせることができる分子を指す。
用語「立体異性体」は、同一の化学構造を有するが、原子又は基の空間配置に関して異なる化合物を指す。
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラリティー中心を有し、その分子が互いの鏡像でない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、様々な物理的特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性及び反応性を有する。ジアステレオマー混合物は、電気泳動及びクロマトグラフィーなどの高分解能の分析法の下で分離することができる。
「光学異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を指す。
本明細書で使用する立体化学の定義及び慣例は、一般に、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ編、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；並びにＥｌｉｅｌ，Ｅ．及びＷｉｌｅｎ，Ｓ．、Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学的活性型で存在し、すなわちこれらは、平面偏光面を回転させる能力を有する。光学的活性化合物の記載では、接頭辞Ｄ及びＬ又はＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）に関する分子の絶対配置を表示するのに使用される。接頭辞ｄ及びｌ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を示すのに用いられ、（−）又は１は、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄが前に付けられた化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、これらが互いの鏡像であることを除いては、同一である。特定の立体異性体は、光学異性体と称される場合もあり、そうした異性体の混合物は、光学異性混合物と呼ばれることが多い。光学異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と称され、これは、化学反応又は化学過程において立体選択又は立体特異性がなかった場合に生じ得る。用語「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」は、光学活性のない２つの光学異性体種の等モル混合物を指す。
「脱離基」は、別の官能基によって置換され得る官能基を指す。ある種の脱離基は当該技術分野でよく知られており、例としては、これらに限定されないが、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフレート）及びトリフルオロメチルスルホネートが挙げられる。
用語「保護基」は、化合物の他の官能基を反応させている間、特定の官能基性をブロック又は保護するのに一般に用いられる置換基を指す。例えば、「アミノ保護基」は、化合物のアミノ官能基性をブロック又は保護する、アミノ基に結合した置換基である。適切なアミノ保護基としては、これらに限定されないが、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられる。保護基及びその使用の概説については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９９１又はそれ以降の版を参照されたい。
ＩＩ．組成物及び方法
一態様では、本発明は、Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体及びそうした抗体を含むイムノコンジュゲートに部分的に基づく。本発明の抗体及びイムノコンジュゲートは、例えばＢ７−Ｈ４陽性がんの診断又は治療に有用である。
Ａ．例示的な抗Ｂ７−Ｈ４抗体
幾つかの実施態様では、本発明は、Ｂ７−Ｈ４に結合する単離抗体を提供する。Ｂ７−Ｈ４は、例えば抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面で見出されるＩ型膜貫通タンパク質である。本明細書に証明するように、Ｂ７−Ｈ４は、乳癌標本の約８０％及び調べた卵巣腫瘍試料の約６０％で発現される。
シグナル配列（アミノ酸１−２８）を有する例示的な天然に存在するヒトＢ７−Ｈ４前駆体タンパク質配列を、配列番号７３に示し、対応する成熟Ｂ７−Ｈ４タンパク質配列を、配列番号７４（配列番号７３のアミノ酸２９−２８２に相当）に示す。
ある種の実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、少なくとも１つ又は複数の以下の特性：
（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性、並びに
（ｂ）≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦９ｎＭ、又は≦８ｎＭ、又は≦７ｎＭ、又は≦６ｎＭ、又は≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭ、及び任意選択的に≧０．０００１ｎＭ、又は≧０．００１ｎＭ、又は≧０．０１ｎＭの親和性でＢ７−Ｈ４に結合する特性
を任意の組み合わせで有する。
非限定的なそのような例示的抗体は、本明細書に記載の１Ｄ１１、２２Ｃ１０、９Ｂ９、及び３２Ｄ６、並びにそれらのヒト化変異体である。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４である。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、ヒト、カニクイザル、マウス及びラットのＢ７−Ｈ４から選択される。
幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体又は一部内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体又は一部内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体又は一部内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体又は一部内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体又は一部内のエピトープに結合する。幾つかのそうした実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦９ｎＭ、又は≦８ｎＭ、又は≦７ｎＭ、又は≦６ｎＭ、又は≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭ、及び任意選択的に≧０．０００１ｎＭ、又は≧０．００１ｎＭ、又は≧０．０１ｎＭの親和性でＢ７−Ｈ４に結合する。非限定的なそのような例示的抗体は、本明細書に記載の１Ｄ１１、２２Ｃ１０、９Ｂ９及び３２Ｄ６、並びにそれらのヒト化変異体を含む。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４である。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、ヒトＢ７−Ｈ４又はカニクイザルＢ７−Ｈ４である。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４は、マウスＢ７−Ｈ４又はラットＢ７−Ｈ４である。
アッセイ
抗Ｂ７−Ｈ４抗体が「Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体又は一部内のエピトープに結合する」か、又は「Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体又は一部内のエピトープに結合する」か、又は「Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体又は一部内のエピトープに結合する」か、又は「配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体又は一部内のエピトープに結合するか、又は「配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体又は一部内のエピトープに結合する」かどうかは、実施例Ｆにおいて本明細書に記載のように、ＦＡＣＳによりアッセイされる競合的結合により決定される。
抗Ｂ７−Ｈ４抗体が「≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、又は≦９ｎＭ、又は≦８ｎＭ、又は≦７ｎＭ、又は≦６ｎＭ、又は≦５ｎＭ、又は≦４ｎＭ、又は≦３ｎＭ、又は≦２ｎＭ、又は≦１ｎＭの親和性で結合する」かどうかは、実施例Ｅにおいて本明細書に記載のように決定する。選択したヒト化変異体の解離定数は、放射性リガンド細胞結合アッセイを使用して決定した。簡単に述べると、〜２５０ｐＭ（標識されていない抗体競合物質と同じ）にて１２５Ｉ−抗体トレーサーを、１００，０００のＭＸ−１細胞又は２９３ Ｂ７−Ｈ４安定細胞株と、１０００ｎＭから開始する標識されていない抗体の２倍希釈物の存在下でインキュベートした。抗体／細胞混合物を、ＤＭＥＭ（１％ ＢＳＡ、３００ｎＭヒトＩｇＧ、０．１％アジド）中で２５℃にて２時間インキュベートし、次いで、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅマルチスクリーン濾過プレートを使用して回収及び濾過した。１０分間、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ Ｗｉｚａｒｄ １４７０自動ガンマカウンターを使用してＤｕｒａｐｏｒｅ膜フィルターをカウントした。抗体親和性定数（Ｋｄ）は、ＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェアを使用してスキャッチャード解析により決定した。
抗体１Ｄ１１及び他の実施態様
幾つかの実施態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。別の実施態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、及び配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３、及び配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号７から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号４１から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
上記の実施態様の何れかでは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト化されている。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施態様の何れかと同様のＨＶＲを含み、ヒトアクセプターフレームワーク、例えばヒト免疫グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークをさらに含む。ある種の実施態様では、ヒトアクセプターフレームワークは、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／又はＶＨフレームワークＶＨ１である。ある種の実施態様では、ヒトアクセプターフレームワークは、以下の変異：軽鎖フレームワーク領域ＦＲ３中のＹ４９Ｈ、Ｖ５８Ｉ、Ｔ６９Ｒ及び／又はＦ７１Ｙ変異；重鎖フレームワーク領域ＦＲ３中のＶ６７Ａ、Ｉ６９Ｌ、Ｒ７１Ａ、Ｔ７３Ｋ及び／又はＴ７５Ｓ変異の何れか１つを含む、ヒトＶＬカッパＩコンセンサス（ＶＬＫＩ）フレームワーク及び／又はＶＨフレームワークＶＨ１である。
幾つかの実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、上記の実施態様の何れかと同様のＨＶＲを含み、配列番号５１、５２又は５３の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む。幾つかのそうした実施態様では、重鎖可変ドメインフレームワークは、配列番号５１、５２又は５３のＦＲ３配列を有する改変されたヒトＶＨ１フレームワークである。
別の態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施態様では、配列番号４のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号４において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号４において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号４のＶＨ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２又は１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施態様では、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２又は１０３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２又は１０３において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２又は１０３において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号３６、３７、３８、９９、１００、１０１、１０２又は１０３のＶＨ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号３において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号３において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号３のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７又は９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７又は９８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７又は９８において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７又は９８において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号３５、９３、９４、９５、９６、９７又は９８のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＨ、及び上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＬを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。
一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号４及び配列番号３のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９３のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９７のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０２及び配列番号９８のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０３及び配列番号９８のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９６のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０１及び配列番号９４のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１００及び配列番号９３のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号９９及び配列番号９３のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号３６及び配列番号９３のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号３６及び配列番号３５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号３７及び配列番号３５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号３８及び配列番号３５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある種の実施態様では、配列番号４のＶＨ配列及び配列番号３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９７のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０２のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０３のＶＨ配列及び配列番号９８のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０１のＶＨ配列及び配列番号９４のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１００のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号９９のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号９３のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３６のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３７のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号３８のＶＨ配列及び配列番号３５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合し、少なくとも１つの以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗体は、少なくとも１つ又は複数の以下の特性を任意の組み合わせで有する。（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を有する、上記の実施態様の何れかに記載の抗体が提供される。
本発明のさらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体又はヒト抗体を含めた、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様では、抗体は、実質的に完全長抗体、例えば、ＩｇＧ１抗体、又は本明細書で定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載されるような特色のうちの何れかを、単独で又は組み合わせて含むことができる。
抗体２２Ｃ１０及び他の実施態様
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３及び配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号３４から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号６３から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
上記の実施態様の何れかでは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
別の態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施態様では、配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号２８において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号２８において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号２８のＶＨ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号２７において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号２７において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号２７のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号５５、５７、１０４、１０５又は１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号５５、５７、１０４、１０５又は１０６のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号５５、５７、１０４、１０５又は１０６において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号５５、５７、１０４、１０５又は１０６において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号５５、５７、１０４、１０５又は１０６のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＨ、及び上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＬを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０４のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１１及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１２及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１３及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１４及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１１及び配列番号１０６のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１１０及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０９及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０８及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１０７及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号５６及び配列番号５５のＶＨ及びＶＬ配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号５６及び配列番号５７のＶＨ及びＶＬ配列を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある種の実施態様では、配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０４のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１２のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１３のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１４のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１０６のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１０のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０９のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０８のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１０７のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合し、少なくとも１つの以下の特性を有する、上記の実施態様の何れかに記載の抗体が提供される。（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する。幾つかの実施態様では、抗体は、少なくとも１つ又は複数の以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を任意の組み合わせで有する。
本発明のさらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含めた、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様では、抗体は、実質的に完全長抗体、例えば、ＩｇＧ２ａ抗体、又は本明細書で定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載されるような特色のうちの何れかを、単独で又は組み合わせて含むことができる。
抗体３２Ｄ６及び他の実施態様
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１８から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
上記の実施態様の何れかでは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
別の態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施態様では、配列番号１２のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号１２において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号１２において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号１２のＶＨ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号１１において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号１１において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号１１のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＨ、及び上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＬを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１２及び配列番号１１のＶＨ及びＶＬ配列を含む。別の実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号１２及び配列番号１１のＶＨ及びＶＬ配列を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある種の実施態様では、配列番号１２のＶＨ配列及び配列番号１１のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合し、少なくとも１つの以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を有する、上記の実施態様の何れかに記載の抗体が提供される。幾つかの実施態様では、抗体は、少なくとも１つ又は複数の以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を任意の組み合わせで有する。
本発明のさらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含めた、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様では、抗体は、実質的に完全長抗体、例えば、ＩｇＧ２ａ抗体、又は本明細書で定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載されるような特色のうちの何れかを、単独で又は組み合わせて含むことができる。
抗体９Ｂ９及び他の実施態様
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又は６つのＨＶＲを含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体を提供する。
一態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。別の実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。さらなる実施態様では、抗体は、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３及び配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２を含む。さらなる実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含む抗体を提供する。一実施態様では、抗体は、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む。
別の態様では、本発明の抗体は、（ａ）（ｉ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｉｉｉ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＨ ＨＶＲ配列を含むＶＨドメイン、並びに（ｂ）（ｉ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｉｉ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、少なくとも１つ、少なくとも２つ又は３つすべてのＶＬ ＨＶＲ配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｄ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｅ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｆ）配列番号２６から選択されるアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む抗体を提供する。
上記の実施態様の何れかでは、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体である。
別の態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する重鎖可変ドメイン（ＶＨ）配列を含む。ある種の実施態様では、配列番号２０のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号２０において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号２０において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号２０のＶＨ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＨは、（ａ）配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｂ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び（ｃ）配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３から選択される１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有する軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。ある種の実施態様では、配列番号１９のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、基準配列に対して、置換（例えば保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、Ｂ７−Ｈ４に結合する能力を保持する。ある種の実施態様では、配列番号１９において、合計で１から５個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、配列番号１９において、合計で１から１０個のアミノ酸が、置換され、挿入され、及び／又は欠失する。ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、ＨＶＲの外側の領域（すなわちＦＲ内）で生じる。任意選択的に、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、配列の翻訳後修飾を含めた、配列番号１１のＶＬ配列を含む。特定の実施態様では、ＶＬは、（ａ）配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｃ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３から選択される、１つ、２つ又は３つのＨＶＲを含む。
別の態様では、上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＨ、及び上記の実施態様のうちの何れかと同様のＶＬを含む、抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。一実施態様では、抗体は、配列の翻訳後修飾を含めて、それぞれ配列番号２０及び配列番号１９のＶＨ及びＶＬ配列を含む。
さらなる態様では、本発明は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。例えば、ある種の実施態様では、配列番号２０のＶＨ配列及び配列番号１９のＶＬ配列を含む抗Ｂ７−Ｈ４抗体と同じエピトープに結合する抗体が提供される。
ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４に結合し、少なくとも１つの以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を有する、上記の実施態様の何れかに記載の抗体が提供される。幾つかの実施態様では、抗体は、少なくとも１つ又は複数の以下の特性：（ａ）Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−１５７）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃ含有ドメイン（配列番号７３のアミノ酸１５８−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又はＢ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖ及びＩｇ−Ｃドメイン（配列番号７３のアミノ酸２９−２５０）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７４（成熟ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合するか、又は配列番号７３（前駆体ヒトＢ７−Ｈ４）の全体若しくは一部分内のエピトープに結合する特性を任意の組み合わせで有する。
本発明のさらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ヒト抗体を含めた、モノクローナル抗体である。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗体断片、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ又はＦ（ａｂ’）２断片である。別の実施態様では、抗体は、実質的に完全長抗体、例えば、ＩｇＧ２ａ抗体、又は本明細書で定義する他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
さらなる態様では、上記の実施態様の何れかに記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、以下に記載されるような特色のうちの何れかを、単独で又は組み合わせて含むことができる。
１．抗体親和性
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、≦１μＭ、≦１００ｎＭ、≦５０ｎＭ、≦１０ｎＭ、≦５ｎＭ、≦１ｎＭ、≦０．１ｎＭ、≦０．０１ｎＭ、又は≦０．００１ｎＭの解離定数（Ｋｄ）を有し、任意選択的に、≧１０−１３Ｍ（例えば１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍから１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍから１０−１３Ｍ）である。
一実施態様では、Ｋｄは、以下のアッセイに記載されるように、目的のＦａｂ型抗体及びその抗原を用いて実施する放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって測定する。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、滴定系列の非標識抗原の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原を用いてＦａｂを平衡化し、次いで、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートを用いて結合した抗原を捕獲することによって測定する（例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい）。アッセイ条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）に入れた５μｇ／ｍｌの捕獲抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ Ｌａｂｓ）で一晩コーティングし、続いて、ＰＢＳに入れた２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンを用いて、２から５時間、室温（約２３℃）でブロッキングする。非吸着プレート（Ｎｕｎｃ＃２６９６２０）において、１００ｐＭ又は２６ｐＭの［１２５Ｉ］−抗原を目的のＦａｂの段階希釈物と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における抗ＶＥＧＦ抗体、Ｆａｂ−１２の評価と一致している）。次いで、目的のＦａｂを一晩インキュベートする。しかしインキュベーションは、確実に平衡状態に達するように、より長期間（例えば約６５時間）続けてもよい。その後、この混合物を捕獲プレートに移して、室温で（例えば、１時間）インキュベートする。次いで溶液を除去し、０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））のＰＢＳ溶液でプレートを８回洗浄する。プレートが乾燥したら、１５０μｌ／ウェルの閃光物質（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）、Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、ＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）ガンマカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）でプレートを１０分間カウントする。最大結合の２０％以下を与える各Ｆａｂの濃度を選んで、競合的結合アッセイで使用する。
別の実施態様によれば、Ｋｄは、〜１０反応単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）を２５℃で使用して、表面プラズモン共鳴アッセイによって測定する。簡単に述べると、供給業者の指示書に従って、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５、ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を、１０ｍＭの酢酸ナトリウム、ｐＨ４．８を用いて、５μｇ／ｍｌ（〜０．２μＭ）に希釈してから、５μｌ／分の流速で注入して、約１０反応単位（ＲＵ）の結合タンパク質を得る。抗原の注入に続いて、１Ｍエタノールアミンを注入して、未反応基をブロックする。反応速度論的な測定のため、Ｆａｂの２倍段階希釈物（０．７８ｎＭから５００ｎＭ）を、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤を含むＰＢＳ（ＰＢＳＴ）に、約２５μｌ／分の流速で２５℃で注入する。結合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）評価ソフトウェア３．２版）を使用して、結合センサーグラムと解離センサーグラムを同時に適合することによって計算する。平衡解離定数（Ｋｄ）を、比ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。例えば、Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照されたい。上記の表面プラズモン共鳴アッセイによって、会合速度が１０６Ｍ−１ Ｓ −１を超える場合は、流動停止を備えた分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌キュベットを備えた８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）などの分光計で測定される、漸増濃度の抗原の存在下において、ＰＢＳ、ｐＨ７．２に入れた２０ｎＭの抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の２５℃での蛍光放出強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増大又は低下を測定する蛍光消光技術を使用することによって、会合速度を決定することができる。
２．抗体断片
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は抗体断片である。抗体断片としては、これらに限定されないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ及びｓｃＦｖ断片並びに以下に記載する他の断片が挙げられる。特定の抗体断片の総説については、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の総説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、２６９−３１５頁（１９９４）を参照されたい。国際公開第９３／１６１８５号；並びに米国特許第５５７１８９４号及び第５５８７４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボでの半減期が増大したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５８６９０４６号を参照されたい。
ダイアボディは、二価又は二重特異性であり得る、２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第１９９３／０１１６１号；Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディ及びテトラボディも、Ｈｕｄｓｏｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
シングルドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全体若しくは一部分、又は軽鎖可変ドメインの全体若しくは一部分を含む抗体断片である。ある種の実施態様では、シングルドメイン抗体は、ヒトシングルドメイン抗体（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６２４８５１６Ｂ１号を参照されたい）である。
抗体断片は、これらに限定されないが、本明細書に記載のように、インタクトな抗体のタンパク質消化並びに組換え宿主細胞（例えば大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生を含めた様々な手法によって作製することができる。
３．キメラ抗体及びヒト化抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体はキメラ抗体である。特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号；及びＭｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４））に記載されている。一例を挙げれば、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ又は非ヒト霊長類、例えばサルに由来する可変領域）及びヒト定常領域を含む。さらなる例を挙げれば、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のものから変化した「クラススイッチ」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合性断片を含む。
ある種の実施態様では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトに対する免疫原性を低減するためにヒト化されるが、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を保持する。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ（又はその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（又はその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部も含む。幾つかの実施態様では、例えば、抗体特異性又は親和性を回復する又は改善するために、ヒト化抗体の幾つかのＦＲ残基が、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びその作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）に概説されており、さらに、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５８２１３３７号、第７５２７７９１号、第６９８２３２１号及び第７０８７４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）グラフティングを記載）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェシング」を記載）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載）；並びにＯｓｂｏｕｒｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」手法を記載）に記載されている。
ヒト化に使用することができるヒトフレームワーク領域としては、これらに限定されないが、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖又は重鎖可変領域の特定サブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異）フレームワーク領域又はヒト生殖細胞系フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照されたい）、並びにＦＲライブラリーのスクリーニングから得られるフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）；及びＲｏｓｏｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６）を参照されたい）が挙げられる。
４．ヒト抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野で知られている様々な手法を使用して産生することができる。ヒト抗体は、一般的に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）、並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原負荷に反応してインタクトなヒト抗体又はヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製することができる。そうした動物は、典型的にはヒト免疫グロブリン座の全体又は一部分を含み、ヒト免疫グロブリン座は、内因性の免疫グロブリン座に置き換わるか、又は染色体外に存在するか、若しくは動物の染色体にランダムに組み込まれる。そうしたトランスジェニックマウスでは、内因性の免疫グロブリン座は、一般に不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の総説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照されたい。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載する米国特許第６０７５１８１号及び第６１５０５８４号；ＨＵＭＡＢ（登録商標）技術を記載する米国特許第５７７０４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許第７０４１８７０号、並びにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい。そうした動物によって生成されたインタクトな抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに改変することができる。
ヒト抗体は、ハイブリドーマに基づく方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株が記載されている（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、５１−６３頁（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体も、Ｌｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。さらなる方法としては、例えば、米国特許第７１８９８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載する）及びＮｉ、Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ、２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載する）に記載されるものが挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ技術）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ、２０（３）：９２７−９３７（２００５）、並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されたＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによって生成することもできる。次いで、そうした可変ドメイン配列を、所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。ヒト抗体を抗体ライブラリーから選択する技法を以下に記載する。
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、所望の活性（１又は複数）を有する抗体について、コンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることによって単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成するための、及び所望の結合特性を有する抗体についてそうしたライブラリーをスクリーニングするための種々の方法が、当該技術分野で知られている。そうした方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）に概説されており、さらに、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ１０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；及びＬｅｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に記載されている。
ある種のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーをポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングし、ファージライブラリーにおいてランダムに組換え、次いでこれを、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片又はＦａｂ断片の何れかとして、抗体断片を提示する。免疫化された供給源由来のライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要無しで、免疫原に対する高親和性抗体を提供する。あるいは、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）によって記載されているように、ナイーブレパートリーを（例えばヒトから）クローニングし、いかなる免疫化もせずに、幅広い非自己及び自己抗原に対して抗体の単一供給源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）によって記載されているように、再配列していないＶ−遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングし、高度可変ＣＤＲ３領域をコードし且つインビトロで再配列を達成するためのランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用して、ナイーブライブラリーも合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、米国特許第５７５０３７３号、並びに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、第２００５／０１１９４５５号、第２００５／０２６６０００号、第２００７／０１１７１２６号、第２００７／０１６０５９８号、第２００７／０２３７７６４号、第２００７／０２９２９３６号及び第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書で、ヒト抗体又はヒト抗体断片とみなす。
６．多重特異性抗体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、多重特異性抗体、例えば二重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある種の実施態様では、結合特異性の１つはＢ７−Ｈ４に対してであり、他は、任意の他の抗原に対してである。ある種の実施態様では、結合特異性の１つはＢ７−Ｈ４に対してであり、他はＣＤ３に対してである。例えば、米国特許第５８２１３３７号を参照されたい。ある種の実施態様では、二重特異性抗体は、Ｂ７−Ｈ４の２つの異なるエピトープに結合することができる。二重特異性抗体は、Ｂ７−Ｈ４を発現する細胞に細胞傷害剤を局在させるのに使用することもできる。二重特異性抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
多重特異性抗体を作製するための技法としては、これらに限定されないが、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖ペアの組換え共発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ及びＣｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、国際公開第９３／０８８２９号、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）を参照されたい）、並びに「ｋｎｏｂ−ｉｎ−ｈｏｌｅ」エンジニアリング（例えば、米国特許第５７３１１６８号を参照されたい）が挙げられる。多重特異性抗体は、抗体のＦｃ−ヘテロ二量体分子を作製するための静電ステアリング作用を操作すること（国際公開第２００９／０８９００４Ａ１号）、２つ以上の抗体又は断片を架橋結合すること（例えば、米国特許第４６７６９８０号、及びＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）を参照されたい）、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体を産生すること（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい）、「ダイアボディ」技術を使用して二重特異性抗体断片を作製すること（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照されたい）、及び単鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用すること（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）を参照されたい）、及び例えば、ＴｕｔｔらＪ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されているような三重特異性抗体を調製することによって、作製することもできる。
「オクトパス抗体」を含めて、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば、米国特許出願公開第２００６／００２５５７６Ａ１号を参照されたい）。
本明細書の抗体又は断片には、Ｂ７−Ｈ４及び別の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば米国特許出願公開第２００８／００６９８２０を参照されたい）。
７．抗体変異体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的な特性を改善することが望ましい場合もある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適切な修飾を導入すること、又はペプチド合成によって調製することができる。そうした修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又はその残基への挿入、及び／又はその残基の置換が挙げられる。最終的なコンストラクトが所望の特性、例えば、抗原結合を有することを条件として、最終的なコンストラクトを得るために、欠失、挿入及び置換を任意に組み合わせることができる。
ａ）置換、挿入及び欠失変異体
ある種の実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体変異体が提供される。置換突然変異誘発の目的の部位は、ＨＶＲ及びＦＲを含む。保存的置換を、表１において「好ましい置換」の項目の下に示す。より実質的な変化を、表１おいて「例示的置換」の項目の下に提供し、アミノ酸側鎖クラスに関連して以下にさらに記載するように提供する。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入することができ、その産物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下又はＡＤＣＣ又はＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。
アミノ酸は、共通の側鎖特性によってグループ化することができる。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ、
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ、
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ、
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ、
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを必要とするであろう。
置換変異体の１タイプは、親抗体（例えば、ヒト化の又はヒト抗体）の１つ又は複数の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる研究のために選択された得られた変異体（複数可）は、親抗体と比較して、特定の生物学的な特性（例えば親和性の増大、免疫原性の低減）における改変（例えば改善）を有する、及び／又は実質的に保持された、親抗体の特定の生物学的な特性を有する。例示的置換変異体は親和性成熟抗体であり、これは、例えば、ファージディスプレイに基づく親和性成熟技法、例えば本明細書に記載のものを使用して、簡便に生成することができる。簡単に述べると、１つ又は複数のＨＶＲ残基を変異させ、変異体抗体をファージ上に提示し、特定の生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
変更（例えば置換）は、例えば抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて行うことができる。そうした変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟過程の間に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行うことができ、得られた変異体ＶＨ又はＶＬは、結合親和性について試験される。２次ライブラリーを構築し、それから再選択することによる親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、（２００１））に記載されている。親和性成熟の幾つかの実施態様では、種々の方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング又はオリゴヌクレオチド指定突然変異）のうちの何れかによって、成熟のために選ばれた可変遺伝子中に多様性を導入する。次いで２次ライブラリーを作出する。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する任意の抗体変異体を同定する。多様性を導入するための別の方法は、幾つかのＨＶＲ残基（例えば、一度に４−６残基）をランダム化する、ＨＶＲ指向性手法を含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基は、例えばアラニンスキャニング変異誘発又はモデル化を使用して、具体的に特定することができる。特にＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３が標的にされることが多い。
ある種の実施態様では、置換、挿入又は欠失は、そうした変更が、抗体が抗原に結合する能力を実質的に低減しない限り、１つ又は複数のＨＶＲ内に生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に低減しない保存的変更（例えば、本明細書で提供する保存的置換）は、ＨＶＲ内で行うことができる。そうした変更は、ＨＶＲの「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記の変異体ＶＨ及びＶＬ配列のある種の実施態様では、各ＨＶＲは、不変であるか、又は１つ、２つ若しくは３つ以下のアミノ酸置換を含むかの何れかである。
突然変異誘発の標的にされ得る抗体の残基又は領域を同定するのに有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４：１０８１−１０８５によって記載されているように、「アラニンスキャニング変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基の残基又は集団（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ及びｇｌｕなどの荷電残基）を同定し、中性の又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置き換えて、抗原との抗体の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換を、最初の置換に機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入することができる。あるいは、又はさらに、抗原抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原の間の接触点を同定する。そうした接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的にされてもよいし、排除されてもよい。変異体をスクリーニングして、それらが所望の特性を含むかどうかを決定することができる。
アミノ酸配列挿入は、１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまでの長さに及ぶアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに単一又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、抗体の血清半減期を増大させる（例えばＡＤＥＰＴについての）酵素又はポリペプチドに対する抗体のＮ末端又はＣ末端への融合が挙げられる。
ｂ）グリコシル化変異体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増大又は低下させるように変化させる。抗体に対するグリコシル化部位の付加又は欠失は、１つ又は複数のグリコシル化部位が作出される又は除去されるようにアミノ酸配列を変化させることによって、簡便に達成することができる。
抗体がＦｃ領域を含む場合は、それに結合する炭水化物を変化させることができる。哺乳動物細胞によって産生される天然抗体は、一般に、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７へのＮ結合によって結合した、分枝した二分岐オリゴ糖を典型的には含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら、ＴＩＢＴＥＣＨ１５：２６−３２（１９９７）を参照されたい。オリゴ糖は、様々な炭水化物、例えば、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース及びシアル酸、並びに二分岐のオリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合したフコースを含み得る。幾つかの実施態様では、特定の改善した特性を有する抗体変異体を作出するために、本発明の抗体のオリゴ糖を修飾することができる。
一実施態様では、Ｆｃ領域に（直接的又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、そうした抗体のフコースの量は、１％から８０％、１％から６５％、５％から６５％又は２０％から４０％であり得る。フコースの量は、例えば国際公開第２００８／０７７５４６号に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定されるような、Ａｓｎ２９７に結合したすべての糖構造体（例えば複合、ハイブリッド及び高マンノース構造体）の合計に対して、Ａｓｎ２９７における糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって決定する。Ａｓｎ２９７は、Ｆｃ領域の約２９７位（Ｆｃ領域残基のＥｕ番号付け）に位置するアスパラギン残基を指すが、抗体の軽微な配列バリエーションが原因で、Ａｓｎ２９７は、２９７位の約±３アミノ酸上流又は下流、すなわち２９４位と３００位の間に位置する可能性もある。そうしたフコシル化変異体は、改善したＡＤＣＣ機能を有し得る。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（協和発酵工業株式会社）を参照されたい。「脱フコシル化」又は「フコース欠損」抗体変異体に関する刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；国際公開第２０００／６１７３９号；国際公開第２００１／２９２４６号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；国際公開第２００３／０８５１１９号；国際公開第２００３／０８４５７０号；国際公開第２００５／０３５５８６号；国際公開第２００５／０３５７７８号；国際公開第２００５／０５３７４２号；国際公開第２００２／０３１１４０号；Ｏｋａｚａｋｉら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生することができる細胞株の例としては、タンパク質のフコシル化を欠いたＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ripkaら Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545(1986)；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号、Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及び国際公開第２００４／０５６３１２Ａ１号、Ａｄａｍｓら、特に実施例１１）、並びにノックアウト細胞株、例えば、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８のノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら、Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙ．ら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．、９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及び国際公開第２００３／０８５１０７号を参照されたい）が挙げられる。
抗体変異体は、二分されたオリゴ糖をさらに備えており、例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分岐のオリゴ糖がＧｌｃＮＡｃによって二分されている。そうした抗体変異体は、フコシル化が低減されている、及び／又はＡＤＣＣ機能が改善されている可能性がある。そうした抗体変異体の例は、例えば、国際公開第２００３／０１１８７８号（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６６０２６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖中に少なくとも１つのガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。そうした抗体変異体は、ＣＤＣ機能が改善されている可能性がある。そうした抗体変異体は、例えば、国際公開第１９９７／３００８７号（Ｐａｔｅｌら）；国際公開第１９９８／５８９６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及び国際公開第１９９９／２２７６４号（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある種の実施態様では、１つ又は複数のアミノ酸修飾を、本明細書で提供する抗体のＦｃ領域に導入することができ、それによって、Ｆｃ領域変異体を生成することができる。Ｆｃ領域変異体は、１つ又は複数のアミノ酸の位置に、アミノ酸修飾（例えば置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４のＦｃ領域）を含むことができる。
ある種の実施態様では、本発明は、インビボでの抗体半減期が重要であるけれども、特定のエフェクター機能（補体及びＡＤＣＣなど）は不要又は有害である適用にとって望ましい候補とする、すべてではないが、いくらかのエフェクター機能を有する抗体変異体を企図する。インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを行って、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／喪失を確認することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを行って、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（したがって、ＡＤＣＣ活性を欠く可能性がある）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持するということを確実にすることができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、Ｆｃ（ＲＩＩＩのみを発現するが、一方、単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲの発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に概説されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定例は、米国特許第５５００３６２号（例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照されたい）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；第５８２１３３７号（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照されたい）に記載されている。あるいは、非放射性アッセイ法を用いることもできる（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用の非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）；及びＣｙｔｏＴｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そうしたアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又はさらに、目的の分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えば、ＣｌｙｎｅｓらＰｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されているものなどの動物モデルで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを行って、抗体がＣ１ｑに結合することができず、それ故にＣＤＣ活性を欠くことを確認することもできる。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び国際公開第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら、Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）；並びにＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ、Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照されたい）。当該技術分野で知られている方法を使用して、ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期の測定も行うことができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら、Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９（２００６）を参照されたい）。
エフェクター機能が低減した抗体としては、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ又は複数の置換を有する抗体（米国特許第６７３７０５６）が挙げられる。そうしたＦｃ突然変異体としては、残基２６５及び２９７からアラニンへの置換を有する、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ突然変異体（米国特許第７３３２５８１号）を含めて、アミノ酸の位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７の２つ以上の置換を有するＦｃ突然変異体が挙げられる。
ＦｃＲへの結合が改善又は減弱された特定の抗体変異体が記載されている（例えば、米国特許第６７３７０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号、及びShieldsら, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)を参照されたい）。
ある種の実施態様では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１つ又は複数のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３及び／又は３３４（残基のＥＵ番号付け）での置換を有するＦｃ領域を含む。
幾つかの実施態様では、例えば、米国特許第６１９４５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、変化した（すなわち、改善又は減弱した）Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）をもたらす変更が、Ｆｃ領域中で行われる。
半減期が延び、母性ＩｇＧを胎児へ移行させるのに関与する（Guyerら, J. Immunol. 117:587 (1976)、及びKimら, J. Immunol. 24:249 (1994)）新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が改善された抗体が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１号（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する１つ又は複数の置換を有する、Ｆｃ領域含む。そうしたＦｃ変異体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４の１つ又は複数での置換、例えば、Ｆｃ領域の残基４３４での置換（米国特許第７３７１８２６号）を有する変異体が挙げられる。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関する、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５６４８２６０号；米国特許第５６２４８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある種の実施態様では、抗体の１つ又は複数の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば「チオＭＡｂ」を作出することが望ましい場合もある。特定の実施態様では、置換残基は、抗体のアクセス可能な部位に存在する。そのような残基をシステインで置換することにより、反応性のチオール基は、それによって、抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書でさらに記載するように、薬物部分又はリンカー−薬物部分などの他の部分に抗体をコンジュゲートして、イムノコンジュゲートを作出するのに使用することができる。ある種の実施態様では、以下の残基の任意の１つ又は複数をシステインで置換することができる：軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）、重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）、及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７５２１５４１号に記載されているように生成することができる。
ｅ）抗体誘導体
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗体は、当該技術分野で知られており且つ容易に利用可能な付加的な非タンパク質性部分を含むように、さらに改変することができる。抗体の誘導体化に適した部分としては、これに限定されないが、水溶性ポリマーが挙げられる。水溶性ポリマーの非限定例としては、これらに限定されないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールの共重合体、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸共重合体、ポリアミノ酸（ホモポリマー又はランダム共重合体の何れか）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロプロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシド共重合体、ポリオキシエチル化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、並びにそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造における利点を有し得る。ポリマーは、いかなる分子量のものでもよく、分枝でも非分枝でもよい。抗体に結合したポリマーの数は変動する可能性があり、１ポリマーより多くが結合する場合は、それらは、同じ分子でも異なる分子でもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、これらに限定されないが、改善される抗体の特定の特性又は機能、抗体誘導体が定められた条件下などで療法に使用されるかどうかなどを含めた考慮に基づいて決定することができる。
別の実施態様では、照射曝露によって選択的に加熱することができる抗体及び非タンパク質性部分のコンジュゲートが提供される。一実施態様では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブ（Kamら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 11600-11605(2005)）である。照射はいかなる波長でもよく、これに限定はされないが、通常の細胞を害さないが、抗体−非タンパク質性部分の近位細胞が死滅する温度に非タンパク質性部分を加熱する波長が挙げられる。
Ｂ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４８１６５６７号に記載されているような組換え法及び組成物を使用して産生することができる。一実施態様では、本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体をコードする単離核酸が提供される。そうした核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又は抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。さらなる実施態様では、そうした核酸を含む１つ又は複数のベクター（例えば発現ベクター）が提供される。さらなる実施態様では、そうした核酸を含む宿主細胞が提供される。そうした実施態様の１つでは、宿主細胞は、以下のものを含む（例えば、以下のもので形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施態様では、宿主細胞は、真核性であり、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上記の抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に適した条件下で培養すること、及び任意選択的に、宿主細胞（又は宿主細胞の培養培地）から抗体を回収することを含む。
抗Ｂ７−Ｈ４抗体を組換え産生するために、例えば上記のように、抗体をコードする核酸を単離し、さらなるクローニング及び／又は宿主細胞での発現のために、１つ又は複数のベクターに挿入する。そうした核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用して）、容易に単離し、配列決定することができる。
抗体をコードするベクターのクローニング又は発現に適切な宿主細胞としては、本明細書に記載の原核生物細胞又は真核生物細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特に、グリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要でない場合は、細菌で産生することができる。抗体断片及びポリペプチドの細菌での発現については、例えば、米国特許第５６４８２３７号、第５７８９１９９号及び第５８４０５２３号を参照されたい（大腸菌での抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）２４５−２５４頁も参照されたい）。発現させた後に、抗体を、可溶性画分の細菌細胞のペーストから単離することができ、さらに精製することができる。
原核生物に加えて、糸状菌又は酵母などの真核微生物が、抗体をコードするベクターにとってクローニング又は発現の適切な宿主であり、これには、グリコシル化経路が「ヒト化され」、その結果、部分的に又は完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体を産生する真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉら、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照されたい。
グリコシル化抗体の発現に適切な宿主細胞は、多細胞生物体（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて使用することができる、特にヨトウガ（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞のトランスフェクションのために使用することができる、多数のバキュロウイルス株が同定されている。
植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５９５９１７７号、第６０４０４９８号、第６４２０５４８号、第７１２５９７８号及び第６４１７４２９号（トランスジェニック植物で抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載する）を参照されたい。
脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で増殖するように適合されている哺乳動物細胞株は、有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ−７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胎児性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍら、Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３又は２９３細胞）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されているようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）、ヒト子宮頚癌細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝細胞（ＢＲＬ ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス乳房腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、例えば、Ｍａｔｈｅｒら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されているようなＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞、及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Urlaubら, Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980)）を含めたチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、及びＹ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞株の総説として、例えば、Ｙａｚａｋｉ及びＷｕ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２４８巻（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）、２５５−２６８頁（２００３）を参照されたい。
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、当該技術分野で知られている様々なアッセイによって、その物理的／化学的特性及び／若しくは生物活性を同定することができ、それらについてスクリーニングすることができ、又はそれらについて特徴を明らかにすることができる。
一態様では、例えばＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ又はウェスタンブロットなどの既知の方法によって、本発明の抗体をその抗原結合活性について試験する。
別の態様では、競合アッセイを使用して、Ｂ７−Ｈ４への結合について本明細書に記載の抗体のうちの何れかと競合する抗体を同定することができる。ある種の実施態様では、そうした競合抗体は、本明細書に記載の抗体が結合するのと同じエピトープ（例えば、直鎖状又は立体構造エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例示的方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）「Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ」、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ６６巻（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ）に提供されている。
例示的競合アッセイでは、固定化されたＢ７−Ｈ４を、Ｂ７−Ｈ４に結合する第１の標識抗体（例えば、本明細書に記載の抗体のうちの何れか）と、Ｂ７−Ｈ４への結合について第１の抗体と競合するその能力について試験される第２の非標識抗体とを含む溶液中でインキュベートする。第２の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在してもよい。コントロールとして、固定化されたＢ７−Ｈ４を、第１の標識抗体を含むが、第２の非標識抗体を含まない溶液中でインキュベートする。第１の抗体がＢ７−Ｈ４に結合可能な条件下でインキュベーションした後、過剰な未結合抗体を除去し、固定化されたＢ７−Ｈ４に結合した標識の量を測定する。固定化されたＢ７−Ｈ４に結合した標識の量が、コントロール試料と比較して試験試料中で実質的に低減する場合は、Ｂ７−Ｈ４への結合について、第２の抗体が第１の抗体と競合していることを示す。Ｈａｒｌｏｗ及びＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ第１４章（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）を参照されたい。
Ｄ．イムノコンジュゲート
本発明は、１種又は複数の細胞傷害剤、例えば、化学療法剤又は化学療法薬、成長阻害剤、毒素（例えば、細菌、真菌、植物若しくは動物起源のタンパク質毒素、酵素的に活性な毒素、又はそれらの断片）又は放射性同位体（すなわち放射性コンジュゲート）にコンジュゲートされた、本明細書における抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含むイムノコンジュゲートも提供する。
イムノコンジュゲートは、非コンジュゲート薬物の全身投与が、正常細胞に対して許容できないレベルの毒性をもたらし得る場合に、薬物部分を腫瘍へ標的送達することを可能にし、幾つかの実施態様では、その中での細胞内蓄積を可能にする（Polakis P. (2005) Current Opinion in Pharmacology 5:382-387）。
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、抗原を発現する腫瘍細胞に強力な細胞毒性薬物をターゲティングすることによって、抗体及び細胞毒性薬物の両方の特性を兼ね備え（Teicher, B.A. (2009) Current Cancer Drug Targets 9:982-1004）、それによって、有効性を最大にし、オフターゲットな毒性を最小にすることにより治療指数を高める（Carter, P.J.及びSenter P.D. (2008) The Cancer Jour. 14(3):154-169;Chari, R.V. (2008) Acc. Chem. Res. 41:98-107）、標的とされる化学療法分子である。
本発明のＡＤＣ化合物としては、抗がん活性を有するものが挙げられる。幾つかの実施態様では、ＡＤＣ化合物は、薬物部分にコンジュゲートされた、すなわち共有結合的に結合した抗体を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、リンカーを介して共有結合的に薬物部分に結合している。本発明の抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、腫瘍組織に有効用量の薬物を選択的に送達し、これによって、治療指数（「治療濃度域」）を増大させながら、より大きな選択性、すなわちより低い有効用量を達成することができる。
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性又は細胞増殖抑制性作用を有する任意の化合物、部分又は基を含むことができる。薬物部分は、これらに限定されないが、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はインターカレーション、並びにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成及び／又はトポイソメラーゼの阻害を含めた機序によって、その細胞傷害性及び細胞増殖抑制性作用を与えることができる。例示的薬物部分は、これらに限定されないが、メイタンシノイド、ドラスタチン、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、並びに細胞傷害性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、アナログ及び誘導体が挙げられる。そうしたイムノコンジュゲートの非限定例を、以下でさらに詳細に論じる。
１．例示的抗体−薬物コンジュゲート
抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）化合物の例示的実施態様は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合させるリンカー部分（Ｌ）を含む。幾つかの実施態様では、抗体は、リジン及び／又はシステインなどの１つ又は複数のアミノ酸残基を介してリンカー部分（Ｌ）に結合する。
例示的ＡＤＣは、式Ｉ：
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ Ｉ
を有し、式中、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、抗体にコンジュゲートすることができる薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって制限される。幾つかの実施態様では、遊離システイン残基を、本明細書に記載の方法によって抗体のアミノ酸配列に導入する。例示的な式ＩのＡＤＣとしては、これらに限定されないが、１、２、３又は４つの操作したシステインアミノ酸を有する抗体（Lyon，R.ら(2012) Methods in Enzym. 502:123-138）が挙げられる。幾つかの実施態様では、１つ又は複数の遊離システイン残基は、操作しなくても抗体中に既に存在し、そのような場合は、現存する遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物にコンジュゲートすることができる。幾つかの実施態様では、１つ又は複数の遊離システイン残基を生成するために、抗体のコンジュゲーションに先立って抗体を還元条件に曝露する。
ａ）例示的リンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１つ又は複数の薬物部分（ｄ）を抗体（Ａｂ）に結合して、式Ｉの抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を形成するのに使用することができる、二官能性又は多官能性部分である。幾つかの実施態様では、抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、薬物及び抗体に共有結合的に結合する反応官能基を有するリンカーを使用して調製することができる。例えば、幾つかの実施態様では、抗体（Ａｂ）のシステインチオールは、リンカーの反応性官能基との結合、又はＡＤＣを作製するための薬物−リンカー中間体を形成することができる。
一態様では、リンカーは、抗体に存在する遊離システインと反応して共有結合を形成することができる官能性を有する。非限定的な例示的なそうした反応官能基としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステルなどの活性化エステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎら（２００４）、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １５（４）：７６５−７７３の７６６頁のコンジュゲーション方法、及び本明細書の実施例を参照されたい。
幾つかの実施態様では、リンカーは、抗体に存在する求電子基と反応することができる官能性を有する。例示的なそうした求電子基としては、これらに限定されないが、アルデヒド基及びケトンカルボニル基が挙げられる。幾つかの実施態様では、リンカーの反応官能基のヘテロ原子は、抗体の求電子基と反応することができ、抗体ユニットに対して共有結合を形成することができる。非限定的な例示的なそうした反応官能基としては、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられる。
リンカーは、１つ又は複数のリンカー構成成分を含むことができる。例示的リンカー構成成分としては、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。様々なリンカー構成成分が当該技術分野で知られており、それらの幾つかを以下に記載する。
リンカーは、薬物の放出を促進する「切断可能なリンカー」でもよい。非限定的な例示的な切断可能なリンカーとしては、（例えばヒドラゾンを含む）酸不安定性リンカー、プロテアーゼ感受性（例えばペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー又はジスルフィド含有リンカー（Chariら, Cancer Research 52:127-131(1992)；米国特許第５２０８０２０号）が挙げられる。
ある種の実施態様では、リンカーは、以下の式ＩＩ：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ− ＩＩ
を有し、式中、Ａは「ストレッチャーユニット」であり、ａは０から１の整数である。Ｗは「アミノ酸ユニット」であり、ｗは０から１２の整数である。Ｙは「スペーサーユニット」であり、ｙは０、１又は２である。Ａｂ、Ｄ及びｐは、式Ｉについて上記で定義されている。そうしたリンカーの例示的実施態様は、本明細書に参照により明確に援用される、米国特許第７４９８２９８号に記載されている。
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は、抗体を別のリンカー構成成分又は薬物部分に結合する「ストレッチャーユニット」を含む。非限定的な例示的ストレッチャーユニットを以下に示す（式中、波線は抗体、薬物又は追加的なリンカー構成成分への共有結合部位を示す）。
MC
MP
mPEG
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は「アミノ酸ユニット」を含む。幾つかのそうした実施態様では、アミノ酸ユニットによって、プロテアーゼによるリンカーの切断が可能になり、それによって、リソソーム酵素などの細胞内プロテアーゼ曝露の際に、イムノコンジュゲートからの薬物放出が促進される（Doroninaら(2003) Nat. Biotechnol. 21:778-784）。例示的アミノ酸ユニットとしては、これらに限定されないが、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド及びペンタペプチドが挙げられる。例示的ジペプチドとしては、これらに限定されないが、バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋ又はｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が挙げられる。例示的トリペプチドとしては、これらに限定されないが、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられる。アミノ酸ユニットは、天然に生じるアミノ酸残基及び／又はマイナーなアミノ酸及び／又は天然に存在しないアミノ酸アナログ、例えばシトルリンを含み得る。アミノ酸ユニットは、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ及びＤ又はプラスミンプロテアーゼによる酵素切断について、設計及び最適化することができる。
幾つかの実施態様では、リンカー構成成分は、直接的に又はストレッチャーユニット及び／若しくはアミノ酸ユニットを介して抗体を薬物部分に結合する「スペーサー」ユニットを含む。スペーサーユニットは、「自壊性」でもよいし、「非自壊性」でもよい。「非自壊性」スペーサーユニットは、ＡＤＣの切断の際に、一部又はすべてのスペーサーユニットが薬物部分に結合したままのスペーサーユニットである。非自壊性スペーサーユニットの例としては、これらに限定されないが、グリシンスペーサーユニット及びグリシン−グリシンスペーサーユニットが挙げられる。幾つかの実施態様では、グリシン−グリシンスペーサーユニットを含むＡＤＣの腫瘍細胞関連プロテアーゼによる酵素切断によって、ＡＤＣの残部からグリシン−グリシン−薬物部分が放出される。幾つかのそうした実施態様では、グリシン−グリシン−薬物部分が、腫瘍細胞において加水分解ステップにかけられ、それにより、薬物部分からグリシン−グリシンスペーサーユニットが切断される。
「自壊性」スペーサーユニットによって、薬物部分の放出が可能になる。ある種の実施態様では、リンカーのスペーサーユニットは、ｐ−アミノベンジルユニットを含む。幾つかのそうした実施態様では、ｐ−アミノベンジルアルコールが、アミド結合を介してアミノ酸ユニットに結合し、カルバミン酸、メチルカルバミン酸又は炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物の間に作られる（Hamannら(2005) Expert Opin. Ther. Patents (2005) 15:1087-1103）。幾つかの実施態様では、スペーサーユニットは、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）である。幾つかの実施態様では、自壊性リンカーを含むＡＤＣは、構造：

を有し、式中、Ｑは−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ又は−シアノであり、ｍは０から４に及ぶ整数であり、ｐは１から約２０の範囲である。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、１から７、１から５、又は１から４の範囲である。
自壊性スペーサーの他の例としては、これらに限定されないが、ＰＡＢ基、例えば、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体（米国特許第７３７５０７８号；Hayら(1999) Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237）及びオルソ−又はパラ−アミノベンジルアセタールと電子的に類似している芳香族化合物が挙げられる。幾つかの実施態様では、置換及び未置換の４−アミノ酪酸アミド（Rodriguesら(1995) Chemistry Biology 2:223）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Stormら(1972) J. Amer. Chem. Soc. 94:5815）、並びに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Amsberryら(1990) J. Org. Chem. 55:5867）などの、アミド結合加水分解の際に環化を受けるスペーサーを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自壊性スペーサーの別の例である（Kingsburyら(1984) J. Med. Chem. 27:1447）。
幾つかの実施態様では、リンカーＬは、分枝状の、多官能性リンカー部分を介して１つより多い薬物部分を抗体へ共有結合するための樹状型リンカー（Sunら(2002) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 12:2213-2215；Sunら(2003) Bioorganic & Medicinal Chemistry 11:1761-1768）でもよい。樹状リンカーは、ＡＤＣの力価に関係している、抗体に対する薬物のモル比、すなわち負荷を増加させることができる。したがって、抗体がたった１つの反応性システインチオール基のみを有する場合は、多数の薬物部分は、樹状リンカーを介して結合することができる。
式ＩのＡＤＣと関連して、非限定的な例示的リンカーを以下に示す。
val-cit

MC-val-cit
MC-val-cit-PAB
さらなる非限定的な例示的ＡＤＣは、以下の構造：
,
,
,
,
,
を含み、式中、Ｘは、

であり、
Ｙは、
;
であり、
各Ｒは独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｎは１から１２である。
典型的には、ペプチド型リンカーは、２つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。そうしたペプチド結合は、例えば、液相合成法（例えば、E. Schroder及びK. Lubke(1965) “The Peptides”, 1巻, pp 76-136, Academic Press）に従って調製することができる。
幾つかの実施態様では、リンカーは、溶解度及び／又は反応性を調節する基で置換される。非限定例として、スルホネート（−ＳＯ３ −）又はアンモニウムなどの荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を高めることができ、ＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、抗体及び／若しくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を容易にするか、又はＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）のカップリング反応若しくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のカップリング反応を容易にすることができる。幾つかの実施態様では、リンカーの一部が抗体に結合し、リンカーの一部が薬物に結合し、次いで、Ａｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂに結合して、式ＩのＡＤＣを形成する。幾つかのそうした実施態様では、抗体は、１つより多い（リンカー部分）ａ置換基を含み、その結果、１つより多い薬物が式ＩのＡＤＣの抗体に結合する。
本発明の化合物は、これらに限定されないが、以下のリンカー試薬を用いて調製されるＡＤＣを特に意図する。ビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）スクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］スクシンイミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、スクシンイミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）、スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、スクシンイミジル（４−ヨードアセチル）アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、スクシンイミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）ブチレート（ＳＭＰＢ）、スクシンイミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサノエート］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ及びスルホ−ＳＭＰＢ、並びにスクシンイミジル−（４−ビニルスルホン）ベンゾエート（ＳＶＳＢ）（ビス−マレイミド試薬：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（以下に示す）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（以下に示す）；イミドエステルの二官能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌなど）、活性エステル（スベリン酸ジサクシンイミジルなど）、アルデヒド（グルタルアルデヒドなど）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンなど）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンなど）、ジイソシアネート（トルエン２，６−ジイソシアネートなど）、及びビス−活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンなど）を含む）。幾つかの実施態様では、ビス−マレイミド試薬によって、抗体のシステインのチオール基の、チオール含有薬物部分、リンカー又はリンカー−薬物中間体への結合が可能になる。チオール基と反応性の他の官能基としては、これらに限定されないが、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアネート及びイソチオシアネートが挙げられる。
特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ、ＣＯ）などの様々な商業的供給元から得ることができ、又は当該技術分野で記載されている手順、例えば、Ｔｏｋｉら（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２；Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ、３８：５２５７−６０；Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５；Ｆｒｉｓｃｈら（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６；米国特許第６２１４３４５号；国際公開第０２／０８８１７２号；米国特許出願公開第２００３１３０１８９号；米国特許出願公開第２００３０９６７４３号；国際公開第０３／０２６５７７号；国際公開第０３／０４３５８３号；及び国際公開第０４／０３２８２８号に記載されている手順に従って合成することができる。
炭素１４標識した１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミン五酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、放射性ヌクレオチドの、抗体へのコンジュゲーションについての例示的キレート剤である。例えば、国際公開第９４／１１０２６号を参照されたい。
ｂ）例示的薬物部分
（１）メイタンシン及びメイタンシノイド
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、１つ又は複数のメイタンシノイド分子にコンジュゲートされた抗体を含む。メイタンシノイドはメイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカの灌木であるメイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。続いて、ある種の微生物も、メイタンシノール及びＣ−３メイタンシノールエステル（米国特許第４１５１０４２号）などのメイタンシノイドを産生することが発見された。合成メイタンシノイドは、例えば、米国特許第４１３７２３０号；第４２４８８７０号；第４２５６７４６号；第４２６０６０８号；第４２６５８１４号；第４２９４７５７号；第４３０７０１６号；第４３０８２６８号；第４３０８２６９号；第４３０９４２８号；第４３１３９４６号；第４３１５９２９号；第４３１７８２１号；第４３２２３４８号；第４３３１５９８号；第４３６１６５０号；第４３６４８６６号；第４４２４２１９号；第４４５０２５４号；第４３６２６６３号；及び第４３７１５３３号に開示されている。
メイタンシノイド薬物部分は、抗体−薬物コンジュゲートにおける魅力的な薬物部分である。これは、メイタンシノイド薬物部分が、（ｉ）発酵又は発酵産物の化学修飾又は誘導体化によって調製するのに比較的利用しやすく、（ｉｉ）非ジスルフィドリンカーを介する抗体へのコンジュゲーションに適した官能基を用いる誘導体化を受けることができ、（ｉｉｉ）血漿中で安定であり、（ｉｖ）種々の腫瘍細胞株に対して有効であることが理由である。
メイタンシノイド薬物部分としての使用に適した特定のメイタンシノイドは、当該技術分野で知られており、天然源から既知の方法に従って単離することができ、又は遺伝子工学的技法を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕら（２００２）ＰＮＡＳ９９：７９６８−７９７３を参照されたい）。メイタンシノイドは、既知の方法に従って合成的に調製することもできる。
例示的メイタンシノイド薬物部分としては、これらに限定されないが、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサマイトシンＰ２の水素化アルミニウムリチウム還元によって調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）若しくは放射菌（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ）を使用する脱メチル化又はＬＡＨを使用する脱塩素によって調製される）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４２９４７５７号）（例えば、塩化アシルを使用するアシル化によって調製される）などの修飾された芳香族環を有するもの、並びに芳香族環の他の位置での修飾を有するものが挙げられる。
例示的メイタンシノイド薬物部分としては、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、メイタンシノールとＨ２Ｓ又はＰ２Ｓ５との反応によって調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルジア（Ｎｏｃａｒｄｉａ）から調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトマイセスによるメイタンシノールの変換によって調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び第４３１５９２９号）（例えば、トレウィア・ヌドロフローラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトマイセスによるメイタンシノールの脱メチル化によって調製される）；及び４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される）などの修飾を有するものも挙げられる。
メイタンシノイド化合物の多くの位置が結合位置として有用である。例えば、エステル結合は、従来のカップリング技法を使用して、ヒドロキシル基との反応によって形成することができる。幾つかの実施態様では、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位で起こり得る。幾つかの実施態様では、結合は、メイタンシノール又はメイタンシノールアナログのＣ−３位で形成される。
メイタンシノイド薬物部分には、構造：

を有するものが含まれ、式中、波線はメイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の、ＡＤＣのリンカーへの共有結合を示す。各Ｒは独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルでもよい。アミド基を硫黄原子に結合させるアルキレン鎖は、メタニル、エタニル又はプロピルでもよく、すなわち、ｍは、１、２又は３でもよい（米国特許第６３３４１０号；米国特許第５２０８０２０号；Chariら(1992) Cancer Res. 52:127-131;Liuら(1996) Proc. Natl. Acad. Sci USA 93:8618-8623）。
メイタンシノイド薬物部分のすべての立体異性体、すなわち、キラル炭素でのＲ及びＳ配置の任意の組み合わせ（その全内容が参照により援用される、米国特許第７２７６４９７号；米国特許第６９１３７４８号；米国特許第６４４１１６３号；米国特許第６３３４１０（ＲＥ３９１５１）号；米国特許第５２０８０２０号；Widdisonら(2006) J. Med. Chem. 49:4392-4408）が本発明のＡＤＣについて企図される。幾つかの実施態様では、メイタンシノイド薬物部分は、以下の立体化学：

を有する。
メイタンシノイド薬物部分の例示的実施態様としては、これらに限定されないが、構造：


を有する、ＤＭ１、ＤＭ３及びＤＭ４が挙げられ、式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への薬物の硫黄原子の共有結合を示す。
他の例示的メイタンシノイド抗体−薬物コンジュゲートは、以下の構造及び略称を有する（式中、Ａｂは抗体であり、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、ｐは１から７、ｐは１から５、又はｐは１から４である）。
Ab -SPP-DM1
Ab-SMCC-DM1
ＤＭ１が、ＢＭＰＥＯリンカーを介して抗体のチオール基へ結合する場合の例示的抗体−薬物コンジュゲートは、構造及び略称：

を有し、式中、Ａｂは抗体であり、ｎは０、１又は２であり、ｐは１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｐは１から１０、ｐは１から７、ｐは１から５、又はｐは１から４である。
メイタンシノイドを含むイムノコンジュゲート、その作製方法及びその治療的使用は、例えば、米国特許第５２０８０２０号及び第５４１６０６４号、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号、並びに欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号に開示されており、その開示は、本明細書に参照により明確に援用される。Ｌｉｕら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３（１９９６）；及びＣｈａｒｉら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照されたい。
幾つかの実施態様では、抗体−メイタンシノイドコンジュゲートは、メイタンシノイド分子に抗体を化学的に結合することによって、抗体又はメイタンシノイド分子の何れかの生物活性を顕著に減弱させることなく調製することができる。例えば、米国特許第５２０８０２０号を参照されたい（その開示は、本明細書に参照により明確に援用される）。幾つかの実施態様では、抗体分子あたり平均３−４個のメイタンシノイド分子がコンジュゲートされたＡＤＣは、抗体の機能又は溶解度に負の影響を及ぼすことなく、標的細胞の細胞傷害性の増強において有効性を示した。場合によっては、１分子の毒素／抗体でさえ、裸抗体の使用において細胞傷害性を増強することが期待される。
抗体−メイタンシノイドコンジュゲートを作製するための例示的連結基としては、例えば、本明細書に記載のもの、及びその開示が本明細書に参照により明確に援用される、米国特許第５２０８０２０号；欧州特許第０４２５２３５Ｂ１号；ＣｈａｒｉらＣａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）；米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２Ａ１号；及び米国特許出願公開第２００５／０１６９９３Ａ１号に開示されているものが挙げられる。
（２）オーリスタチン及びドラスタチン
薬物部分としては、ドラスタチン、オーリスタチン、並びにそれらのアナログ及び誘導体（米国特許第５６３５４８３号；米国特許第５７８０５８８号；米国特許第５７６７２３７号；米国特許第６１２４４３１号）が挙げられる。オーリスタチンは、海生軟体動物の化合物のドラスタチン−１０の誘導体である。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、ドラスタチン及びオーリスタチンは、微小管動態、ＧＴＰ加水分解並びに核及び細胞の分裂に干渉すること（Woykeら(2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584）、並びに抗がん性（米国特許第５６６３１４９号）及び抗真菌活性（Pettitら(1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42:2961-2965）を有することが示されている。ドラスタチン／オーリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を介して、抗体に結合することができる（国際公開第０２／０８８１７２号；Doroninaら(2003) Nature Biotechnology 21(7):778-784；Franciscoら(2003) Blood 102(4):1458-1465）。
例示的なオーリスタチンの実施態様としては、Ｎ末端に連結したモノメチルオーリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが挙げられ、これらは、その開示が、参照によりその全内容が明確に援用される、米国特許第７４９８２９８号及び米国特許第７６５９２４１号に開示されている：
DE
DF
式中、ＤＥ及びＤＦの波線は抗体又は抗体−リンカー構成成分への共有結合部位を示し、独立して各位置で、
Ｒ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
Ｒ５は、Ｈ及びメチルから選択され、
又はＲ４及びＲ５は、共同で炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し（式中、Ｒａ及びＲｂは、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル及びＣ３−Ｃ８炭素環から独立して選択され、ｎは２、３、４、５及び６から選択される）、
Ｒ６は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
各Ｒ８は、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環及びＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から独立して選択され、
Ｒ９は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０は、アリール又はＣ３−Ｃ８複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ又はＮＲ１２であり（式中、Ｒ１２はＣ１−Ｃ８アルキルである）、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、又は−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍは、１−１０００に及ぶ整数であり、
Ｒ１３は、Ｃ２−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４は、Ｈ又はＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１５の各出現は、独立に、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ又は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３−Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１６の各出現は、独立に、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、及び−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎは、０から６に及ぶ整数である。
一実施態様では、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は、独立して、イソプロピル又はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は、−Ｈ又はメチルである。例示的実施態様では、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
さらに別の実施態様では、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
なお別の実施態様では、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３である。
例示的実施態様では、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９−Ｈである。
一実施態様では、Ｚは、−Ｏ−又は−ＮＨ−である。
一実施態様では、Ｒ１０はアリールである。
例示的実施態様では、Ｒ１０は−フェニルである。
例示的実施態様では、Ｚが−Ｏ−である場合は、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル又はｔ−ブチルである。
一実施態様では、Ｚが−ＮＨである場合は、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
別の実施態様では、Ｚが−ＮＨである場合は、Ｒ１１は−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
式ＤＥの例示的なオーリスタチンの実施態様はＭＭＡＥであり、式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
MMAE
式ＤＦの例示的なオーリスタチンの実施態様はＭＭＡＦであり、式中、波線は抗体−薬物コンジュゲートのリンカー（Ｌ）への共有結合を示す。
MMAF
他の例示的実施態様としては、ペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号）、及びペンタペプチドオーリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号）が挙げられる。
ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及び様々なリンカー構成成分を含む式ＩのＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、以下の構造及び略称を有する（式中、「Ａｂ」は抗体であり、ｐは１から約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」はバリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は硫黄原子である）。
Ab-MC-vc-PAB-MMAF
Ab-MC-vc-PAB-MMAE
Ab-MC-MMAE
Ab-MC-MMAF
ＭＭＡＦ及び様々なリンカー構成成分を含む式ＩのＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦをさらに含む。タンパク分解で切断不可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートは、タンパク分解で切断可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートと匹敵する活性を有することが示されている（Doroninaら(2006) Bioconjugate Chem. 17:114-124）。幾つかのそうした実施態様では、薬物放出は、細胞における抗体の分解によってもたらさせると考えられている。
典型的には、ペプチド−ベースの薬物部分は、２つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。そうしたペプチド結合は、例えば、液相合成法に従って調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ及びＫ．Ｌｕｂｋｅ、「Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」、１巻、７６−１３６頁、１９６５、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照されたい）。幾つかの実施態様では、オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、米国特許第７４９８２９８号；米国特許第５６３５４８３号；米国特許第５７８０５８８号；Ｐｅｔｔｉｔら（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔら（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３：２４３−２７７；Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、１９９６、７１９−７２５；Ｐｅｔｔｉｔら（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ ５：８５９−８６３；並びにＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（７）：７７８−７８４の方法に従って調製することができる。
幾つかの実施態様では、ＭＭＡＥなどの式ＤＥ及びＭＭＡＦなどのＤＦのオーリスタチン／ドラスタチン薬物部分、及び薬物−リンカー中間体、並びにそれらの誘導体、例えばＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、米国特許第７４９８２９８号；Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４；及びＤｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：７７８−７８４に記載されている方法を使用して調製することができ、次いで、目的の抗体にコンジュゲートすることができる。
（３）カリケアマイシン
幾つかの実施態様では、イムノコンジュゲートは、１つ又は複数のカリケアマイシン分子にコンジュゲートされた抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリー及びそのアナログは、ピコモル濃度以下で二本鎖ＤＮＡの破断を引き起こすことができる（Hinmanら, (1993) Cancer Research 53:3336-3342;Lodeら, (1998) Cancer Research 58:2925-2928）。カリケアマイシンは、細胞内作用部位を有するが、場合によっては、形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介性内部移行を介するこうした薬剤の細胞内取込は、幾つかの実施態様では、その細胞傷害性作用を大きく増強し得る。カリケアマイシン薬物部分を有する抗体−薬物コンジュゲートの調製に関する非限定的な例示的方法は、例えば、米国特許第５７１２３７４号；米国特許第５７１４５８６号；米国特許第５７３９１１６号；及び米国特許第５７６７２８５号に記載されている。
（４）ピロロベンゾジアゼピン
幾つかの実施態様では、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。幾つかの実施態様では、ＰＤＢダイマーは、特異的なＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然物のアントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（LeimGruberら, (1965) J. Am. Chem. Soc., 87:5793-5795;LeimGruberら, (1965) J. Am. Chem. Soc., 87:5791-5793）。それ以来、ダイマーの三環式ＰＢＤスキャフォールド（米国特許第６８８４７９９号；米国特許第７０４９３１１号；米国特許第７０６７５１１号；米国特許第７２６５１０５号；米国特許第７５１１０３２号；米国特許第７５２８１２６号；米国特許第７５５７０９９号）を含めて、天然に存在するもの及びアナログの両方の幾つかのＰＢＤが報告されている（Thurstonら, (1994) Chem. Rev. 1994, 433-465）。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、ダイマー構造は、Ｂ型ＤＮＡの副溝を伴う等螺旋性に適切な３次元形状を与え、結合部位でのぴったりとした嵌合をもたらすと考えられている（Kohn, In Antibiotics III. Springer-Verlag, New York, pp. 3-11 (1975); Hurley及びNeedham-VanDevanter, (1986) Acc. Chem. Res., 19:230-237）。Ｃ２アリール置換基を有するダイマーのＰＢＤ化合物は、細胞傷害剤として有用であることが示されている（Hartleyら(2010) Cancer Res. 70(17):6849-6858;Antonow (2010) J. Med. Chem. 53(7):2927-2941;Howardら(2009) Bioorganic and Med. Chem. Letters 19(22):6463-6466）。
幾つかの実施態様では、ＰＢＤ化合物は、インビボで除去可能な窒素保護基を用いてＮ１０位において保護することによって、プロドラッグとして用いることができる（国際公開第００／１２５０７号；国際公開第２００５／０２３８１４号）。
ＰＢＤダイマーが抗体にコンジュゲートされており、得られたＡＤＣは、抗がん特性を有することが示された（米国特許出願公開第２０１０／０２０３００７号）。非限定的な例示的なＰＢＤダイマーの結合部位としては、５員のピロロ環、ＰＢＤユニット間のテザー、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基が挙げられる（国際公開第２００９／０１６５１６号；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号；国際公開第２０１１／１３０５９８号）。
非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ａのもの：
A
並びにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１及びＣ２の間又はＣ２及びＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し、
Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、任意選択的にハロ又はジハロからさらに選択され、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立して選択され、
Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
Ｒ１１は、Ｈ若しくはＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、Ｍは金属カチオンであり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義した通りであり、
Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子、例えばＯ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ及び／又は環が置換されていてもよい芳香族環、例えばベンゼン又はピリジンによって離断されてもよく、
Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される。
幾つかの実施態様では、Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ１−１２アルキル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員複素環式環を形成する。
幾つかの実施態様では、Ｒ９及びＲ１９はＨである。
幾つかの実施態様では、Ｒ６及びＲ１６はＨである。
幾つかの実施態様では、Ｒ７及びＲ１７は両方ともＯＲ７Ａであり、Ｒ７Ａは、置換されていてもよいＣ１−４アルキルである。幾つかの実施態様では、Ｒ７ＡはＭｅである。幾つかの実施態様では、Ｒ７Ａは、Ｃｈ２Ｐｈ（式中、Ｐｈはフェニル基である）である。
幾つかの実施態様では、ＸはＯである。
幾つかの実施態様では、Ｒ１１はＨである。
幾つかの実施態様では、各単量体ユニットのＣ２とＣ３の間に二重結合が存在する。
幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、Ｈ及びＲから独立して選択される。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、独立してＲである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリール又はＣ５−７アリール又はＣ８−１０アリールである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は独立して、置換されていてもよいフェニル、チエニル、ナフチル、ピリジル、キノリニル又はイソキノリニルである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ及び＝Ｃ（ＲＤ）２から独立して選択される。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝ＣＨ２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれＨである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝Ｏである。幾つかの実施態様では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝ＣＦ２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立して＝Ｃ（ＲＤ）２である。幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立して＝ＣＨ−ＲＤである。
幾つかの実施態様では、Ｒ２及び／又はＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤの場合は、それぞれの基は、独立して、以下に示す配置の何れかを有し得る。
幾つかの実施態様では、ａ＝ＣＨ−ＲＤは配置（Ｉ）中に存在する。
幾つかの実施態様では、Ｒ”はＣ３アルキレン基又はＣ５アルキレン基である。
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は式Ａ（Ｉ）：
A(I);
（式中、ｎは０又は１である）
の構造を有する。
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ａ（ＩＩ）：
A(II);
（式中、ｎは０又は１である）
の構造を有する。
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ａ（ＩＩＩ）：
A(III);
（式中、ＲＥ及びＲＥ”は、それぞれ独立してＨ又はＲＤから選択され、ＲＤは上記で定義されており、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
幾つかの実施態様では、ｎは０である。幾つかの実施態様では、ｎは１である。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＨである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及びＲＥ”はＨである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＲＤであり、ＲＤは、置換されていてもよいＣ１−１２アルキルである。幾つかの実施態様では、ＲＥ及び／又はＲＥ”はＲＤであり、ＲＤはメチルである。
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ａ（ＩＶ）：
A(IV);
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じでも異なっていてもよく、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
幾つかの実施態様では、ＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ａ（Ｖ）：
A(V);
（式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同じでも異なっていてもよく、
ｎは０又は１である）
の構造を有する。
幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいフェニル、フラニル、チオフェニル及びピリジルから選択される。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいフェニルである。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいチエン−２−イル又はチエン−３−イルである。幾つかの実施態様では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいキノリニル又はイソキノリニルである。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環位置を介してＰＢＤコアに結合することができる。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル及びキノリン−８−イルでもよい。幾つかの実施態様では、キノリニルは、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル及びイソキノリン−８−イルでもよい。幾つかの実施態様では、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
さらなる非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ｂのもの：
B
並びにその塩及び溶媒和物であり、式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに繋がれた波線は、Ｓ又はＲ配置を示し、
ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、メチル、エチル及びフェニル（フェニルは、特に４位のフルオロで任意選択的に置換されていてもよい）及びＣ５−６ヘテロシクリルから独立して選択され、（式中、ＲＶ１及びＲＶ２は、同じでも異なっていてもよく、）
ｎは０又は１である。
幾つかの実施態様では、ＲＶ１及びＲＶ２は、Ｈ、フェニル及び４−フルオロフェニルから独立して選択される。
幾つかの実施態様では、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位又はＡ環に結合するテザーユニットを含めたＰＢＤダイマー薬物部分の様々な部位のうちの１つで結合することができる（以下の構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照されたい）。
非限定的なＡＤＣの例示的なＰＢＤダイマー構成成分は、式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）：
C(I)
C(II)
を含む。
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）をそれらのＮ１０−Ｃ１１イミン形態において示す。例示的ＰＢＤ薬物部分は、以下の表：
で示すように、カルビノールアミン及び保護されたカルビノールアミン形態もさらに含む。
式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１から５）、Ｎ又はＯであり、
Ｚ及びＺ’は、ＯＲ及びＮＲ２から独立して選択され、Ｒは、１から５個の炭素原子を含む一級、二級又は三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２及びＲ’２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換されたアリールを含む）、Ｃ５−２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ及び−ＳＨから選択され、幾つかの実施態様では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は、５炭素原子まで含み、
Ｒ３及びＲ’３は、Ｈ、ＯＲ、ＮＨＲ及びＮＲ２から独立して選択され、Ｒは、１から５個の炭素原子を含む一級、二級又は三級アルキル鎖であり、
Ｒ４及びＲ’４は、Ｈ、Ｍｅ及びＯＭｅから独立して選択され、
Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、及びＣ５−２０ヘテロアリール基から選択され、幾つかの実施態様では、アルキル、アルケニル及びアルキニル鎖は、５炭素原子まで含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は保護基（例えば、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、又は、バリン−シトルリン−ＰＡＢなどの自壊ユニットを含む部分）であり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル又は保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、Ｒ５又はＲ１２のうちの１つの水素、又はＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサーの水素は、ＡＤＣのリンカーに繋がれた結合で置き換えられている。
ＡＤＣの例示的ＰＤＢダイマー部としては、これらに限定されないが、
PBDダイマー;
が挙げられる（波線は、リンカーへの共有結合部位を示す）。
ＰＢＤダイマーを含むＡＤＣの非限定的な例示的実施態様は、以下の構造を有する。
ＰＢＤダイマー−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ；
ＰＢＤダイマー−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂ、式中、
ｎは０から１２である。幾つかの実施態様では、ｎは２から１０である。幾つかの実施態様では、ｎは４から８である。幾つかの実施態様では、ｎは４、５、６、７及び８から選択される。
ＰＢＤダイマー−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ及びＰＢＤダイマー−Ｐｈｅ−Ｌｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーはプロテアーゼ切断可能であるが、ＰＢＤダイマー−マレイミド−アセタールのリンカーは酸不安定性である。
ＰＢＤダイマー及びＰＢＤダイマーを含むＡＤＣは、当該技術分野で知られている方法に従って、調製することができる。例えば、国際公開第２００９／０１６５１６号；米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号；米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号；米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号；米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号；国際公開第２０１１／１３０５９８号を参照されたい。
（５）アントラサイクリン
幾つかの実施態様では、ＡＤＣはアントラサイクリンを含む。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論にも束縛されることを意図するものではないが、研究によって、アントラサイクリンは、幾つかの異なる機序によって細胞を死滅させる働きをすることが示され、この機序には、１）細胞のＤＮＡへ薬物分子がインターカレーションし、それによってＤＮＡ依存性核酸合成が阻害されること、２）薬物によりフリーラジカルが産生され、次いで、それが細胞の高分子と反応して、細胞に損傷を引き起こすこと、及び／又は３）細胞膜との薬物分子の相互作用が含まれる（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎら、「Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｎｄ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｏｆ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ」ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ「Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｄａｍａｇｅ」ｉｄ．９７−１０２頁を参照されたい）。その細胞傷害性潜在能力のために、アントラサイクリンは、多数のがん、例えば、白血病、乳癌、肺癌、卵巣腺癌及び肉腫の治療に使用されてきた（例えば、Ｐ．Ｈ−Ｗｉｅｒｎｉｋ、ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ Ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ、１１頁を参照されたい）。
非限定的な例示的アントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びそれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシン及びドキソルビシンのイムノコンジュゲート及びプロドラッグが調製され、研究された（Kratzら(2006) Current Med. Chem. 13:477-523;Jeffreyら(2006) Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362；Torgovら(2005) Bioconj. Chem. 16:717-721；Nagyら(2000) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834；Dubowchikら(2002) Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532；Kingら(2002) J. Med. Chem. 45:4336-4343；欧州特許第０３２８１４７号；米国特許第６６３０５７９号）。抗体−薬物コンジュゲートのＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原のＬｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相及び第ＩＩ相試験で評価された（Salehら(2000) J. Clin. Oncology 18:2282-2292；Ajaniら(2000) Cancer Jour. 6:78-81；Tolcherら(1999) J. Clin. Oncology 17:478-484）。
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝物（又は誘導体）である（Quintieriら(2005) Clinical Cancer Research 11(4)：1608-1617）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノに２−メトキシモルホリノ基を有する、ドキソルビシンの半合成的アナログであり、臨床評価下にあり（Grandiら(1990) Cancer Treat. Rev. 17:133；Ripamontiら(1992) Brit. J. Cancer 65:703;）、臨床評価には、肝細胞癌の第ＩＩ／ＩＩＩ相治験（Sunら(2003) Proceedings of the American Society for Clinical Oncology 22, Abs1448；Quintieri (2003) Proceedings of the American Association of Cancer Research, 44:第１版, Abs 4649；Pacciariniら(2006) Jour. Clin. Oncology 24:14116）が含まれる。
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含む非限定的な例示的ＡＤＣを、式Ｉａに示す。
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基又は薬学的に許容されるそれらの塩であり、
Ｌ１及びＺは共に、本明細書に記載のリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは本明細書に記載の抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｍは、１から１０、１から７、１から５、又は１から４である。
幾つかの実施態様では、Ｒ１及びＲ２は両方ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含むさらなる非限定的な例示的ＡＤＣを、式Ｉｂに示す。
式中、Ｒ１は水素原子、ヒドロキシ又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基又は薬学的に許容されるそれらの塩であり、
Ｌ２及びＺは共に、本明細書に記載のリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは本明細書に記載の抗体（Ａｂ）であり、
ｍは、１から約２０である。幾つかの実施態様では、ｍは、１から１０、１から７、１から５、又は１から４である。
幾つかの実施態様では、Ｒ１及びＲ２は両方ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
幾つかの実施態様では、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成成分はＰＮＵ−１５９６８２である。幾つかのそうした実施態様では、ＡＤＣの薬物部は、以下の構造のうちの１つを有してもよい。
; 又は

;
式中、波線は、リンカー（Ｌ）への結合を示す。
アントラサイクリンは、ＰＮＵ−１５９６８２を含めて、幾つかの結合部位及び本明細書に記載のリンカーを含めた種々のリンカー（米国特許出願公開第２０１１／００７６２８７号；国際公開第２００９／０９９７４１号；米国特許出願公開第２０１０／００３４８３７号；国際公開第２０１０／００９１２４号）を介して、抗体にコンジュゲートすることができる。
ネモルビシン及びリンカーを含む例示的ＡＤＣとしては、これらに限定されないが、

ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂ；

ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ；
ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー−Ａｂ；

ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂ（式中、
Ｒ１及びＲ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから独立して選択される）、及び、

ＰＮＵ−１５９６８２−マレイミド−Ａｂ
が挙げられる。
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは酸不安定性であるが、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー−Ａｂ、及びＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ切断可能である。
（６）他の薬物部分
薬物部分としては、ゲルダナマイシン（Mandlerら(2000) J. Nat. Cancer Inst. 92(19):1573-1581；Mandlerら(2000) Bioorganic & Med. Chem. Letters 10:1025-1028；Mandlerら(2002) Bioconjugate Chem. 13:786-791）、並びに酵素的に活性な毒素及びその断片も挙げられ、これらに限定されないが、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンチンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ（ｍｏｍｏｒｄｉｃａ ｃｈａｒａｎｔｉａ）阻害剤、クルシン、クロチン、サボンソウ（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン、フェノマイシン、エノマイシン及びトリコテセンが含まれる。例えば、国際公開第９３／２１２３２号を参照されたい。
薬物部分としては、核酸分解活性を有する化合物（例えば、ＲＮＡ分解酵素又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ）も挙げられる。
ある種の実施態様では、イムノコンジュゲートは高放射性原子を含むことができる。種々の放射性同位体が、放射性コンジュゲート抗体を産生するのに利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。幾つかの実施態様では、検出にイムノコンジュゲートが使用される場合、イムノコンジュゲートは、シンチグラフィー研究用に放射性原子、例えばＴｃ９９若しくはＩ１２３を含むことができ、又は核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像化（磁気共鳴画像化、ＭＲＩとしても知られる）用にスピン標識、例えばジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン若しくは鉄を含むことができる。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴ画像化用に、様々な金属キレート剤と錯体形成していてもよく、抗体にコンジュゲートされていてもよい（国際公開第２０１１／０５６９８３号）。
放射性標識又は他の標識を、既知の方法でイムノコンジュゲートに組み込むことができる。例えばペプチドは、例えば、１つ又は複数の水素の代わりに１つ又は複数のフッ素−１９原子を含む適切なアミノ酸前駆体を使用して、生合成又は化学合成することができる。幾つかの実施態様では、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８及びＩｎ１１１などの標識は、抗体のシステイン残基を介して結合することができる。幾つかの実施態様では、イットリウム−９０は、抗体のリジン残基を介して結合することができる。幾つかの実施態様では、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Frakerら(1978) Biochem. Biophys. Res. Commun. 80: 49-57）を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ」（Ｃｈａｔａｌ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、特定の他の方法を記載している。
ある種の実施態様では、イムノコンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素にコンジュゲートされた抗体を含むことができる。幾つかのそうした実施態様では、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えばペプチジル化学療法剤、国際公開第８１／０１１４５号を参照されたい）を、活性薬物、例えば抗がん剤に変換する。幾つかの実施態様では、そうしたイムノコンジュゲートは、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体にコンジュゲートすることができる酵素としては、これらに限定されないが、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるアルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるアリールスルファターゼ；無毒性の５−フルオロシトシンを、抗がん薬、５−フルオロウラシルに変換するのに有用であるシトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用であるプロテアーゼ、例えばセラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬなど）；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用であるＤ−アラニルカルボキシペプチダーゼ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物に変換するのに有用である、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼなどの炭水化物切断酵素；β−ラクタムで誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用であるβ−ラクタマーゼ；並びにそのアミン窒素においてフェノキシアセチル又はフェニルアセチル基でそれぞれ誘導体化された薬物を遊離薬物に変換するのに有用であるペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼなどのペニシリンアミダーゼが挙げられる。幾つかの実施態様では、酵素は、当該技術分野でよく知られている組換えＤＮＡ技法によって、共有結合的に抗体に結合することができる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照されたい。
ｃ）薬物負荷
薬物負荷は、ｐ、すなわち式Ｉの分子における抗体あたりの薬物部分の平均数によって表される。薬物負荷は、抗体あたり１から２０の薬物部分（Ｄ）に及び得る。式ＩのＡＤＣは、１から２０の範囲の薬物部分とコンジュゲートされた抗体の集合を含む。コンジュゲーション反応由来のＡＤＣ調製物における抗体あたりの薬物部分の平均数は、質量分光、ＥＬＩＳＡアッセイ及びＨＰＬＣなどの従来の手段で特徴を明らかにすることができる。ｐに関してのＡＤＣの定量的分布を、決定することもできる。場合によっては、ｐが他の薬物負荷を有するＡＤＣ由来の特定の値である場合の均一なＡＤＣの分離、精製及び特徴づけは、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動などの手段によって達成することができる。
幾つかの抗体−薬物コンジュゲートについては、ｐは、抗体の結合部位の数によって制限され得る。例えば、結合がシステインチオールである場合は、上記の特定の例示的実施態様にあるように、抗体は、１つのみ又は幾つかのシステインチオール基を有してもよいし、リンカーが結合することができる、１つのみ又は幾つかの十分に反応性のチオール基を有してもよい。ある種の実施態様では、高薬物負荷、例えばｐ＞５は、特定の抗体−薬物コンジュゲートの凝集、不溶性、毒性又は細胞透過性の喪失を引き起こす可能性がある。ある種の実施態様では、ＡＤＣに対する平均薬物負荷は、１から約８、約２から約６、又は約３から約５の範囲である。実際、特定のＡＤＣについて、抗体あたりの薬物部分の最適な比は、８未満、及び約２から約５であり得ることが示された（米国特許第７４９８２９８号）。
ある種の実施態様では、理論上の最大数より少ない薬物部分が、コンジュゲーション反応の間に抗体にコンジュゲートする。以下で論じるように、抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬に反応しないリジン残基を含むことができる。一般に、抗体は、薬物部分に結合し得る、遊離及び反応性システインチオール基を多く含まず、実際、抗体のほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある種の実施態様では、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で、部分的又は全還元条件下で抗体を還元して、反応性システインチオール基を生成することができる。ある種の実施態様では、抗体を変性条件にかけて、リジン又はシステインなどの反応性求核基を明らかにする。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比率）は、様々な方法で、例えば、（ｉ）抗体と比較して薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬の過剰モルの制限、（ｉｉ）コンジュゲーションの反応時間又は温度の制限、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分的又は制限的還元条件によって調節することができる。
１つより多い求核基が薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応する場合は、得られた産物は、抗体に結合した１つ又は複数の薬物部分が分布したＡＤＣ化合物の混合物であることを理解されたい。抗体あたりの薬物の平均数は、抗体に対して特異的且つ薬物に対して特異的な二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって、混合物から計算することができる。個々のＡＤＣ分子を、質量分光によって混合物中で同定することができ、ＨＰＬＣ、例えば疎水性相互作用クロマトグラフィーによって分離することができる（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈら（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ＆Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ１９（７）：２９９−３０７；Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０；Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．ら「Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」、要旨番号６２４、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｍａｒｃｈ２７−３１、２００４、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ、４５巻、Ｍａｒｃｈ２００４；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ」、要旨番号６２７、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ、Ｍａｒｃｈ２７−３１、２００４、Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ、４５巻、Ｍａｒｃｈ ２００４を参照されたい）。ある種の実施態様では、単一の負荷値を有する均一なＡＤＣを、電気泳動又はクロマトグラフィーによって、コンジュゲーション混合物から単離することができる。
ｄ）イムノコンジュゲート調製の特定の方法
式ＩのＡＤＣは、当業者に知られている有機化学の反応、条件及び試薬を用いる幾つかの経路によって調製することができ、これは、（１）抗体の求核基を二価のリンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて、薬物部分Ｄと反応させること、及び（２）薬物部分の求核基を二価のリンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて、抗体の求核基と反応させることを含む。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例示的方法は、米国特許第７４９８２９８号に記載されており、これは、本明細書に参照により明確に援用される。
抗体の求核基としては、これらに限定されないが、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えばリジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えばシステイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化される場所である糖ヒドロキシル又はアミノ基が挙げられる。アミン、チオール及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸エステル及び酸ハロゲン化物、（ｉｉ）アルキル及びベンジルハロゲン化物、例えばハロアセトアミド、並びに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル及びマレイミド基を含めた、リンカー部分及びリンカー試薬の求電子基と共有結合を形成するように反応することができる。特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有する。抗体を完全に又は部分的に還元するように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）などの還元剤で処理することによって、リンカー試薬とのコンジュゲーションのために抗体を反応性にすることができる。したがって、理論的に、各システイン架橋は、２つの反応性チオール求核剤を形成する。リジン残基の修飾を介して、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（トラウト試薬）と反応させることによって、追加的な求核基を抗体に導入することができ、これによって、アミンをチオールに変換することができる。１つ、２つ、３つ、４つ又はそれ以上のシステイン残基を導入することによって（例えば、１つ又は複数の非天然のシステインアミノ酸残基を含む変異体抗体を調製することによって）、反応性チオール基を抗体に導入することもできる。
本発明の抗体−薬物コンジュゲートは、例えばアルデヒド又はケトンカルボニル基などの抗体の求電子基とリンカー試薬又は薬物の求核基との間の反応によって産生することもできる。リンカー試薬における有用な求核基としては、これらに限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート及びアリールヒドラジドが挙げられる。一実施態様では、抗体を、リンカー試薬又は薬物の求核性置換基と反応することができる求電子性部分を導入するように修飾する。別の実施態様では、グリコシル化抗体の糖を、例えば過ヨウ素酸塩酸化試薬を用いて酸化して、リンカー試薬又は薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド又はケトン基を形成することができる。得られたイミンシッフ塩基基は、安定な結合を形成することができ、又は例えばホウ化水素試薬によって還元されて、安定なアミン結合を形成することができる。一実施態様では、ガラクトースオキシダーゼ又はメタ過ヨウ素酸ナトリウムの何れかとのグリコシル化抗体の炭水化物部の反応は、薬物の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒド及びケトン）基を抗体中にもたらし得る（Hermanson, Bioconjugate Techniques）。別の実施態様では、Ｎ末端セリン又はスレオニン残基を含む抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応することができ、最初のアミノ酸の代わりにアルデヒドを産生することができる（Geoghegan & Stroh, (1992) Bioconjugate Chem. 3:138-146；米国特許第５３６２８５２号）。そうしたアルデヒドは、薬物部分又はリンカー求核剤と反応することができる。
薬物部分の例示的求核基としては、これらに限定されないが、（ｉ）活性エステル、例えばＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロギ酸エステル及び酸ハロゲン化物、（ｉｉ）アルキル及びベンジルハロゲン化物、例えばハロアセトアミド、（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル及びマレイミド基を含めたリンカー部分及びリンカー試薬の求電子基と共有結合を形成するように反応することができる、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジド基が挙げられる。
ＡＤＣを調製するのに使用することができる非限定的な例示的架橋試薬は、「例示的リンカー」と表題をつけたセクションにおいて本明細書に記載する。タンパク質性部分及び化学物質部分を含めた２つの部分を結合するためのそうした架橋試薬を使用する方法は、当該技術分野で知られている。幾つかの実施態様では、抗体及び細胞傷害剤を含む融合タンパク質を、例えば、組換え技法又はペプチド合成によって作製することができる。組換えＤＮＡ分子は、互いに隣接した又コンジュゲートの所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって分離した、コンジュゲートの抗体及び細胞傷害性部をコードする領域を含むことができる。
さらに別の実施態様では、抗体を、腫瘍のプレターゲティングに利用するための「受容体」（ストレプトアビジンなど）にコンジュゲートすることができ、ここでは、抗体−受容体コンジュゲートを患者に投与し、続いて、除去剤を使用して循環から未結合のコンジュゲートを除去し、次いで、細胞傷害剤（例えば、薬物又は放射性ヌクレオチド）にコンジュゲートされた「リガンド」（例えば、アビジン）を投与する。
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある種の実施態様では、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体のうちの何れかは、生体試料におけるＢ７−Ｈ４の存在を検出するのに有用である。本明細書で使用する場合、用語「検出」は、定量的又は定性的検出を包含する。「生体試料」は、例えば、細胞又は組織（例えば、癌性又は癌性の可能性がある、乳房、子宮内膜、又は卵巣の組織を含めた生検材料）を含む。
一実施態様では、診断又は検出の方法で使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。さらなる態様では、生体試料におけるＢ７−Ｈ４の存在を検出する方法が提供される。ある種の実施態様では、方法は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体がＢ７−Ｈ４に結合可能な条件下で、本明細書に記載のように、抗Ｂ７−Ｈ４抗体に生体試料を接触させること、及び生体試料において抗Ｂ７−Ｈ４抗体及びＢ７−Ｈ４の間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む。そうした方法は、インビトロの方法でもよいし、インビボの方法でもよい。一実施態様では、例えば、Ｂ７−Ｈ４が患者を選択するためのバイオマーカーである場合、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、抗Ｂ７−Ｈ４抗体を用いる療法に好適な被検体を選択するのに使用される。さらなる実施態様では、生体試料は、細胞又は組織（例えば、癌性又は癌性の可能性がある、乳房、子宮内膜、又は卵巣の組織を含めた生検材料）である。
さらなる実施態様では、抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、例えば、がんの診断、予測若しくは病期分類、適切な療法経過の決定、又は療法に対するがんの応答のモニタリングの目的で、例えばインビボ画像化によって、被検体のＢ７−Ｈ４陽性のがんを検出するために、インビボで使用される。インビボ検出のための当該技術分野で知られている一方法は、例えば、ｖａｎ Ｄｏｎｇｅｎら、Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １２：１３７９−１３８９（２００７）、及びＶｅｒｅｌら、Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載されているような、免疫陽電子放出断層撮影法（免疫ＰＥＴ）である。そうした実施態様では、被検体のＢ７−Ｈ４陽性のがんを検出するための方法が提供され、この方法は、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する又は有することが疑われる被検体に標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体を投与すること、及び被検体において標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することを含み、標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出が、被検体のＢ７−Ｈ４陽性のがんを示す。ある種のそうした実施態様では、標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、陽電子放出体、例えば６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ及び１２４Ｉにコンジュゲートされた抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む。特定の実施態様では、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
さらなる実施態様では、診断又は検出の方法は、基質に固定化された第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、Ｂ７−Ｈ４の存在について試験される生体試料と接触させること、第２の抗Ｂ７−Ｈ４抗体に基質を曝露すること、及び生体試料において第１の抗Ｂ７−Ｈ４抗体とＢ７−Ｈ４の間の複合体に第２の抗Ｂ７−Ｈ４が結合しているかどうかを検出することを含む。基質は、任意の支持媒体、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ及び他の基質でもよい。ある種の実施態様では、生体試料は、細胞又は組織（例えば、癌性又は癌性の可能性がある、乳房、子宮内膜又は卵巣の組織を含めた生検材料）を含む。ある種の実施態様では、第１又は第２の抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、本明細書に記載の抗体のうちの何れかである。
上記実施態様の何れかに従って診断又は検出することができる例示的障害としては、Ｂ７−Ｈ４陽性のがん、例えばＢ７−Ｈ４陽性の乳がん、Ｂ７−Ｈ４陽性の卵巣がん、及びＢ７−Ｈ４陽性の子宮内膜がんが挙げられる。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、抗Ｂ７−Ｈ４免疫組織化学（ＩＨＣ）又はｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）の「０」より大きいスコアが与えられるがんであり、このスコアは、実施例Ｂにおいて本明細書に記載する条件下で、非常に弱い又は＞９０％の腫瘍細胞で染色無しに相当する。別の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、実施例Ｂにおいて本明細書で記載する条件下で定められるように、Ｂ７−Ｈ４を１＋、２＋又は３＋のレベルで発現する。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、Ｂ７−Ｈ４のｍＲＮＡを検出する逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイによりＢ７−Ｈ４を発現するがんである。幾つかの実施態様では、ＲＴ−ＰＣＲは、定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
ある種の実施態様では、標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体が提供される。標識には、これらに限定されないが、（蛍光、発色団、高電子密度、化学発光、及び放射性標識などの）直接的に検出される標識又は部分、並びに例えば、酵素反応又は分子の相互作用を介して間接的に検出される、酵素又はリガンドなどの部分が挙げられる。例示的標識としては、これらに限定されないが、放射性同位体の３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセインなどのフルオロフォア及びその誘導体、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えばホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４７３７４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン類、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖類オキシダーゼ、例えばグルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ及びグルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼ、複素環式オキシダーゼ、例えばウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ、色素前駆体を酸化するために過酸化水素を用いる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ又はミクロペルオキシダーゼとの結合、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定なフリーラジカルなどが挙げられる。別の実施態様では、標識は陽電子放出体である。陽電子放出体としては、これらに限定されないが６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ及び１２４Ｉが挙げられる。特定の実施態様では、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
Ｆ．薬学的製剤
本明細書に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートの薬学的製剤は、所望の純度を有するそうした抗体又はイムノコンジュゲートを１つ又は複数の任意選択的な薬学的に許容される担体（Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版, Osol, A.編(1980)）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水性液剤の形で調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いる投薬量及び濃度においてレシピエントに対して非中毒性であり、これらに限定されないが、リン酸、クエン酸及び他の有機酸などのバッファー；アスコルビン酸及びメチオニンを含めた抗酸化剤；防腐剤（例えば、塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース若しくはデキストリンを含めた、単糖類、二糖類及び他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース又はソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば亜鉛−タンパク質錯体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性の界面活性剤が挙げられる。本明細書において例示的な薬学的に許容される担体としては、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）などの間質薬物分散剤、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）などのヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質をさらに含む。特定の例示的ｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、ｒＨｕＰＨ２０を含めて、米国特許公開第２００５／０２６０１８６号及び第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰは、コンドロイチナーゼなどの１つ又は複数の追加的なグルコサミノグリカナーゼと組み合わせる。
例示的な凍結乾燥抗体製剤又は凍結乾燥イムノコンジュゲート製剤は、米国特許第６２６７９５８号に記載されている。水性抗体製剤又は水性イムノコンジュゲート製剤には、米国特許第６１７１５８６号及び国際公開第２００６／０４４９０８号に記載されているものが含まれ、後者の製剤は、ヒスチジン−酢酸バッファーを含む。
本明細書の製剤は、治療される特定の適応症に必要である場合、１種より多い活性成分、好ましくは、互いに悪影響を及ぼさない相補的な活性を有するものを含むこともできる。例えば場合によっては、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性のがん、例えばＢ７−Ｈ４陽性の乳がん、Ｂ７−Ｈ４陽性の卵巣がん又はＢ７−Ｈ４陽性の子宮内膜がんなどの治療のために、アバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）をさらに提供することが望ましい場合もある。
活性成分は、コロイド薬物配送システム（例えば、リポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションにおいて、例えばコアセルベーション技法又は界面重合によって調製されるマイクロカプセル、例えば、それぞれヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メタクリル酸メチル）マイクロカプセルに封入することができる。そうした技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ編（１９８０）に開示されている。
持続性放出調製物を調製することができる。持続性放出調製物の適切な例としては、マトリックスが成形品の形、例えばフィルム又はマイクロカプセルである、抗体又はイムノコンジュゲートを含む固形疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられる。
インビボ投与に使用される製剤は、一般に無菌である。無菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通す濾過によって容易に達成することができる。
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートのうちの何れかを、方法、例えば治療方法において使用することができる。
一態様では、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートは、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害する方法であって、細胞表面上のＢ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートの結合が可能な条件下で、細胞を抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートに曝露し、それによって、細胞の増殖を阻害することを含む方法において、使用される。ある種の実施態様では、方法は、インビトロ又はインビボの方法である。さらなる実施態様では、細胞は、乳房細胞、卵巣細胞又は子宮内膜細胞である。
インビトロでの細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）から市販品として入手できる、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）発光細胞生存率アッセイを使用してアッセイすることができる。このアッセイは、代謝的に活性な細胞の指標である存在するＡＴＰの定量化に基づいて、培養物中の生細胞の数を測定する。Ｃｒｏｕｃｈら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照されたい。アッセイは、自動ハイスループットスクリーニング（ＨＴＳ）に適合しやすくする９６又は３８４ウェル型式で行うことができる。Ｃｒｅｅら（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接的に加えることを含む。これによって、細胞が溶解し、ルシフェラーゼ反応によって産生される発光シグナルが発生する。発光シグナルは、存在するＡＴＰの量に比例し、これは、培養物中に存在する生細胞の数に正比例する。データは、ルミノメーター又はＣＣＤカメラ画像化装置によって記録することができる。発光産生量は、相対的光単位（ＲＬＵ）として表される。
別の態様では、医薬として使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートが提供される。さらなる態様では、治療法で使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートが提供される。ある種の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんの治療において使用するための抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートが提供される。ある種の実施態様では、本発明は、有効量の抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートを個体に投与することを含む、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する個体を治療する方法において使用するための、抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートを提供する。そうした実施態様の１つでは、方法は、例えば以下に記載するような、有効量の少なくとも１つの追加的な治療剤を個体に投与することをさらに含む。
さらなる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製における抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートの使用を提供する。一実施態様では、医薬は、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを治療するためのものである。さらなる実施態様では、医薬は、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを治療する方法において使用するためのものである。そうした実施態様の１つでは、方法は、例えば以下に記載するような、有効量の少なくとも１つの追加的な治療剤を個体に投与することをさらに含む。
さらなる態様では、本発明は、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんの治療方法を提供する。一実施態様では、方法は、そうしたＢ７−Ｈ４陽性のがんを有する個体に、有効量の抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートを投与することを含む。そうした実施態様の１つでは、方法は、以下に記載するような、有効量の少なくとも１つの追加的な治療剤を個体に投与することをさらに含む。
上記実施態様の何れかに記載のＢ７−Ｈ４陽性のがんは、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性の乳がん、Ｂ７−Ｈ４陽性の卵巣がん、又はＢ７−Ｈ４陽性の子宮内膜がんでもよい。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、抗Ｂ７−Ｈ４免疫組織化学（ＩＨＣ）又はｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）の「０」より大きいスコアが与えられるがんであり、このスコアは、本明細書の実施例Ｂに記載する条件下で、非常に弱い又は＞９０％の腫瘍細胞で染色無しに相当する。別の実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、本明細書の実施例Ｂに記載する条件下で定められるように、１＋、２＋又は３＋のレベルでＢ７−Ｈ４を発現する。幾つかの実施態様では、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんは、Ｂ７−Ｈ４のｍＲＮＡを検出する逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイによりＢ７−Ｈ４を発現するがんである。幾つかの実施態様では、ＲＴ−ＰＣＲは、定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
上記実施態様の何れかに記載の「個体」はヒトでもよい。
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記の何れかの治療方法において使用するための、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートのうちの何れかを含む薬学的製剤を提供する。一実施態様では、薬学的製剤は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートのうちの何れか、及び薬学的に許容される担体を含む。別の実施態様では、薬学的製剤は、本明細書で提供する抗Ｂ７−Ｈ４抗体又はイムノコンジュゲートのうちの何れか、及び例えば以下に記載するような少なくとも１つの追加的な治療剤を含む。
本発明の抗体又はイムノコンジュゲートは、療法において単独又は他の薬剤と組み合わせて使用することができる。例えば本発明の抗体又はイムノコンジュゲートは、少なくとも１つの追加的な治療剤と共投与することができる。ある種の実施態様では、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性のがん、例えば、Ｂ７−Ｈ４陽性の乳がん用の追加的な治療剤はアバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である。ある種の実施態様では、追加的な治療剤は、カドサイラ（登録商標）（トラスツズマブエムタンシン）である。
上記のそうした併用療法は、併用投与（２つ以上の治療剤が同じ又は別々の製剤に含まれる）、及び分離投与（本発明の抗体又はイムノコンジュゲートの投与が、追加的な治療剤及び／又はアジュバントの投与より前に、その投与と同時に、及び／又はその投与に続いて生じ得る）を包含する。本発明の抗体又はイムノコンジュゲートは、照射療法と組み合わせて使用することもできる。
本発明の抗体又はイムノコンジュゲート（及び任意の追加的な治療剤）は、任意の適切な手段によって投与することができ、その手段には、非経口、肺内及び鼻腔内が含まれ、並びに局所治療が望まれる場合、病変内の投与が含まれる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内又は皮下投与が挙げられる。投与が短期であるか長期であるかどうかにある程度応じて、任意の適切な経路、例えば静脈内又は皮下注射などの注射によって投薬することができる。これらに限定されないが、様々な時間点にわたる単回又は複数回投与、ボーラス投与及びパルス注入を含めた様々な投薬計画が、本明細書で企図される。
本発明の抗体又はイムノコンジュゲートは、医学行動規範と一致した様式で、製剤化され、用量決定され、投与されることになる。これに関連して考慮する要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤送達部位、投与方法、投与計画、及び医師に知られている他の要因が挙げられる。抗体又はイムノコンジュゲートは、必要ではないが、任意選択的に、問題になっている障害を予防又は治療するのに現在使用されている１つ又は複数の薬剤と製剤化される。そうした他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体又はイムノコンジュゲートの量、障害又は治療のタイプ、及び上で論じた他の要因によって決まる。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量及び投与経路で、又は本明細書に記載の投薬量の約１から９９％で、又は経験的／臨床的に適切であると決定された任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防又は治療のために、（単独又は１つ又は複数の他の追加的な治療剤と組み合わせて使用する場合の）本発明の抗体又はイムノコンジュゲートの適切な投薬量は、治療される疾患のタイプ、抗体又はイムノコンジュゲートのタイプ、疾患の重症度及び経過、抗体又はイムノコンジュゲートが予防又は治療目的で投与されるか、以前の療法、患者の病歴及び抗体又はイムノコンジュゲートに対する応答、並びに主治医の裁量によって決まる。抗体又はイムノコンジュゲートは、単回、又は一連の治療に適切に患者に投与される。疾患のタイプ及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１ｍｇ／ｋｇ−１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体又はイムノコンジュゲートが、例えば、１回又は複数回の分離投与によるか、連続的注入によるかに関わらず、患者に投与するための最初の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲に及び得る。数日以上にわたる反復投与については、状態に応じて、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が起こるまで持続されることになる。抗体又はイムノコンジュゲートの１つの例示的投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組み合わせ）の１つ又は複数の用量が、患者に投与される得る。そうした用量は、断続的に、例えば毎週又は３週毎に投与することができる（例えばその結果、患者は、約２から約２０、又は例えば約６用量の抗体が与えられる）。最初の高負荷用量に続いて、１つ又は複数の低用量を投与することができる。しかし、他の薬物投与法も有用であり得る。この療法の進捗は、従来の技法及びアッセイによって容易にモニタリングされる。
上記の製剤又は治療方法の何れかが、本発明のイムノコンジュゲートと抗Ｂ７−Ｈ４抗体の両方を使用して実施され得ることが理解されよう。
Ｈ．製造品
本発明の別の態様では、上記の障害の治療、予防及び／又は診断に有用な材料を含む製造品が提供される。製造品は、容器、及び容器上の若しくは容器に付随するラベル又は添付文書を含む。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、注射器、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの種々の材料から形成され得る。容器は、単独で、又は別の組成物と組み合わせて、障害を治療、予防及び／若しくは診断するのに有効な組成物を収容し、滅菌アクセスポートを有し得る（例えば、容器は皮下注射針によって穿刺可能なストッパーを有する静脈内溶液バッグ又はバイアルでもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体又はイムノコンジュゲートである。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択された状態を治療するのに使用されることを示す。さらに、製造品は、（ａ）本発明の抗体又はイムノコンジュゲートを含む組成物が中に含まれる第１の容器、及び（ｂ）さらなる細胞傷害性剤又は治療剤を含む組成物が中に含まれる第２の容器を含むことができる。本発明の本実施態様における製造品は、組成物が特定の状態を治療するのに使用ができることを示す添付文書をさらに含むことができる。あるいは、又はさらに、製造品は、薬学的に許容されるバッファー、例えば静菌性の注射用水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液又はデキストローズ溶液を含む第２（又は第３）の容器をさらに含むことができる。他のバッファー、希釈剤、濾過器、針及び注射器を含めた、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上記の概説を考えると、様々な他の実施態様が実施され得ることが理解されよう。
Ａ．ヒトＢ７−Ｈ４遺伝子の発現
ヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現を、遺伝子発現情報を含む所有権のあるデータベース（ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）、Ｇｅｎｅ Ｌｏｇｉｃ Ｉｎｃ．、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）を使用して解析した。ＧｅｎｅＥｘｐｒｅｓｓ（登録商標）データベースの図による解析を、マイクロアレイプロファイルビューアを使用して行った。図１は、様々な組織におけるヒトＢ７−Ｈ４遺伝子発現の図示である。ｙ軸上の尺度は、ハイブリダイゼーションシグナル強度に基づく遺伝子発現量を示す。点は、それぞれの列挙する組織の名称から延びる直線の左及び右の両方に出現する。直線の左に出現する点は、正常組織における遺伝子発現を表し、直線の右に出現する点は、腫瘍及び疾患組織における遺伝子発現を表す。図１は、ある種の腫瘍又は疾患組織において、それらの正常の対応物に対してＢ７−Ｈ４遺伝子発現が増加していることを示す。特に、Ｂ７−Ｈ４は、乳腺腫瘍、子宮内膜腫瘍及び卵巣腫瘍において実質的に過剰発現している。Ｂ７−Ｈ４の最高の正常ｍＲＮＡレベルは、乳房、腎臓、膵臓及び卵巣において観察される。ヒトＢ７−Ｈ４タンパク質発現は、正常組織においてかなりより低く、〜３０の試験した組織（ＰＢＭＣ、骨髄、扁桃腺及び脾臓を含む）で発現がないか、又は正常乳房、卵巣、腎臓、膵臓及び胎盤組織において発現のレベルが低く、これは、ｇｅｎｅｌｏｇｉｃデータ（データは示さず）と一貫する。
Ｂ．乳腺及び卵巣癌腫におけるヒトＢ７−Ｈ４の広まり
乳癌におけるＢ７−Ｈ４の発現を評価するために、１８５の原発性乳腺癌腫を複数の供給元から得た。組織マイクロアレイ（ＴＭＡ）は、Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ Ｌら、Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．２００１年９月；１９５（１）：７２−９に記載されるようにして２重コアを使用して組み立て、一致する症例からの正常乳房試料を含めた。
Ｂ７−Ｈ４発現は、ヒトＢ７−Ｈ４に対するＡ５７．１抗体（ｄｉａＤｅｘｕｓ、Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）を用いる免疫組織化学により決定した。ＣＡＢ７−Ｈ４ハイブリダイゼーション強度は、強度（銀粒子）及び染色の広さを考慮して、以下のスキームに従って、訓練された病理学者によりスコア化した。
０（陰性）：腫瘍細胞の＞９０％においてハイブリダイゼーションが非常に弱いか又は全くない
１＋（軽度）：優勢なハイブリダイゼーションパターンが弱い
２＋（中度）：優勢なハイブリダイゼーションパターンが新生物細胞の大多数（＞５０％）において中度に強い
３＋（強度）：優勢なハイブリダイゼーションパターンが新生物細胞の大多数（＞５０％）において強い
同じＡ５７．１抗体を使用して、正常乳房組織におけるハイブリダイゼーションの特異性のコントロールとした。
図２は、０、１＋、２＋及び３＋のレベルの染色を有する例示的乳癌切片を示す。画像における銀粒子の沈着は、抗体のハイブリダイゼーション及びＢ７−Ｈ４タンパク質の発現を示す。〜６８％（１２６／１８５）の分析した乳癌切片はＢ７−Ｈ４陽性であり、１＋、２＋又は３＋のレベルでの染色を示し、３２％（５９／１８５）は１＋の染色、２２％（４１／１８５）は２＋の染色及び１５％（２６／１８５）は３＋の染色をそれぞれ示した。さらに、およそ〜７０％のＢ７−Ｈ４陽性の乳腺癌腫は、ＴＭＡコアに基づいて８０％を超える腫瘍細胞染色を示した。
Ｂ７−Ｈ４発現の意義及び異なる乳がんサブタイプにおける広まりを評価するために、乳がん試料を集め、ヒト上皮増殖因子受容体２（Ｈｅｒ２）、ホルモン受容体（ＨＲ）及び原発腫瘍のトリプルネガティブ（ＴＮ）状態に基づいて３つのサブタイプに類別した。Ｂ７−Ｈ４を発現する腫瘍のパーセンテージを、上記のようにして行い、スコア化した。
図３Ａに示すように、Ｂ７−Ｈ４発現は、すべての乳がんサブタイプに広まっており、すべてのサブタイプの〜６５％が陽性であった（スコア１−３）。特に、〜６０％のＨｅｒ２＋及びＨＲ＋乳がんサブタイプはＢ７−Ｈ４も発現し、〜８０％のＴＮ乳がんはＢ７−Ｈ４陽性であった。図３Ｂは、免疫組織化学により測定される、乳がんサブタイプにおけるＢ７−Ｈ４染色の０、１＋、２＋及び３＋のレベルの広まりを示す。〜２０％のＨｅｒ２＋及びＨＲ＋乳がんサブタイプ並びに〜２５％のＴＮ乳がんサブタイプは、Ｂ７−Ｈ４について１＋のレベルの染色を示した。〜２８％のＨｅｒ２＋及びＴＮ乳がんサブタイプ並びに〜１８％のＨＲ＋乳がんサブタイプは、Ｂ７−Ｈ４について２＋のレベルの染色を示した。〜１５％、〜２０％及び〜２５％のＨｅｒ２＋、ＨＲ＋及びＴＮ乳がんサブタイプはそれぞれ、Ｂ７−Ｈ４について３＋のレベルの染色を示した。
ウェスタンブロット解析も、図３Ｃに示すように、乳腺腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現が〜７０％であり、これらの乳腺腫瘍の〜４０％において実質的に発現が高いことを示唆した。ＭＸ−１腫瘍モデルを内因性のポジティブコントロールとして、Ｂ７−Ｈ４について陰性の腫瘍細胞株であるＢＴ５４９を内因性のネガティブコントロールとして用い、１０個の異なる乳腺腫瘍試料を、４つの正常乳房組織（腫瘍に隣接する正常組織として定義される正常）と比較して、Ｂ７−Ｈ４タンパク質発現について評価した。２９３野生型細胞及びヒトＢ７−Ｈ４でトランスフェクトされた２９３細胞もコントロールとして含めた。Ｂ−アクチンレベルを使用して、ローディングの不整合を標準化した。
Ｂ７−Ｈ４は、Ａ５７．１抗体を使用してウェスタンブロット解析により検出される、８２％の原発性乳腺腫瘍（Ｘｅｎｔｅｃｈパネル）で発現される。図３Ｄに示すように、Ｂ７−Ｈ４は、２３／２８の試験した原発性乳腺腫瘍において〜６２Ｋｄのバンドとして出現する。
ウェスタンブロット解析は、図３Ｅに示すように、卵巣腫瘍におけるＢ７−Ｈ４の全体的な発現が〜８０％であり、これらの卵巣腫瘍の〜６０％において発現が実質的に高いことも示唆していた。
Ｃ．マウスモノクローナル抗体生成
ヒトＢ７−Ｈ４に対するモノクローナル抗体は、以下の手順を使用して生成した。組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞又はヒトＢ７−Ｈ４のＤＮＡ発現コンストラクトの何れかで、２つの別々の群のＢａｌｂ／Ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ）を過免疫化し、マウスの骨髄腫発現系で発現させたＣ末端Ｆｃを有するマウスＢ７−Ｈ４細胞外ドメイン（ＥＣＤ、アミノ酸２９−２５８）で、第３の群のマウスＢ７−Ｈ４ ＫＯ ＢＬ／６Ｎマウスを免疫化した。
Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ、ＣＡ、ＵＳＡ）に、ＰＢＳ中のヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞（腹腔内で５百万／投与）又は乳酸リンゲル液中のｈｕＢ７−Ｈ４プラスミドＤＮＡ（尾静脈から）の何れかを注射した後に、組み換えヒトＢ７−Ｈ４ＥＣＤ（腹腔内で４μｇ／投与）を使用してタンパク質追加免疫を行った。マウスＢ７−Ｈ４ ＫＯ ＢＬ／６Ｎマウスに、上記のようにして（後足蹠から）、代謝性スクワレン（４％ｖ／ｖ）、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２％ｖ／ｖ）、トレハロース６，６−ジミコレート（０．０５％ｗ／ｖ）及びモノホスホリルリピドＡ（０．０５％ｗ／ｖ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ、ＵＳＡ）を含むアジュバント中の組み換えマウスＢ７−Ｈ４ ＥＣＤを注射した。血清力価は、標準的な酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）及びＦＡＣＳにより、６−９回の注射の後に評価した。Ｂ７−Ｈ４陽性マウスの血清から収集した脾臓Ｂ細胞を、マウス骨髄腫細胞（Ｘ６３．Ａｇ８．６５３、アメリカンタイプカルチャーコレクション、Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ、ＵＳＡ）と、電気融合（Ｈｙｂｒｉｍｕｎｅ、Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｉｎｃ．、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ、ＭＡ、ＵＳＡ）により融合した。１０−１４日後に、ハイブリドーマ上清を、ＥＬＩＳＡにより抗体分泌についてスクリーニングした。すべての陽性クローンを、次いで、増殖させ、ｈｕＢ７−Ｈ４及びｍｕＢ７−Ｈ４との結合について ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳにより再スクリーニングした。組み換えヒトＢ７−Ｈ４、組み換えカニクイザルＢ７−Ｈ４及び組み換えマウスＢ７−Ｈ４を発現する安定細胞株を用いる蛍光性活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）により強く反応する、４つのハイブリドーマクローンが同定された：１Ｄ１１（マウスＢ７−Ｈ４免疫化ｍＢ７−Ｈ４ ＫＯマウスから同定）、２．３２Ｄ６（ヒトＢ７−Ｈ４を使用してＤＮＡ免疫化されたマウスから同定）並びに９Ｂ９及び３．２２．Ｃ１０（組み換えヒトＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞を使用する細胞性免疫化から同定）。
図４Ａは、生成したある種のモノクローナル抗体を、ある種の特性（このうちのいくつかは以下にさらに詳細に記載する）と共に示す。
Ｄ．マウスモノクローナル抗体のクローニング及びキメラ化
モノクローナル抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９及び２２Ｃ１０を、以下のようにクローニングして、キメラ化した。
トータルＲＮＡを、マウスの１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９及び２２Ｃ１０を産生するハイブリドーマ細胞から、標準的な方法を使用して抽出した。可変軽鎖（ＶＬ）及び可変重鎖（ＶＨ）ドメインを、重鎖及び軽鎖に対する縮重プライマーを用いるＲＴ−ＰＣＲを使用して増幅した。フォワードプライマーは、ＶＬ及びＶＨ領域のＮ末端アミノ酸配列に特異的であった。それぞれＬＣ及びＨＣリバースプライマーは、種間で高度に保存された定常軽鎖（ＣＬ）及び定常重鎖ドメイン１（ＣＨ１）中の領域にアニールするように設計した。挿入断片のポリヌクレオチド配列は、常套的配列決定法を使用して決定した。１Ｄ１１ ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号３及び４に示す。１Ｄ１１重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２及びＨ３を、それぞれ配列番号５、６及び７に示す。１Ｄ１１軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２及びＬ３を、それぞれ配列番号８、９及び１０に示す。３２Ｄ６ ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号１１及び１２に示す。３２Ｄ６重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２及びＨ３を、それぞれ配列番号１３、１４及び１５に示す。３２Ｄ６軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２及びＬ３を、それぞれ配列番号１６、１７及び１８に示す。９Ｂ９ ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号１９及び２０に示す。９Ｂ９重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２及びＨ３を、それぞれ配列番号２１、２２及び２３に示す。９Ｂ９軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２及びＬ３を、それぞれ配列番号２４、２５及び２６に示す。２２Ｃ１０ ＶＬ及びＶＨアミノ酸配列を、配列番号２７及び２８に示す。２２Ｃ１０重鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｈ１、Ｈ２及びＨ３を、それぞれ配列番号２９、３０及び３１に示す。２２Ｃ１０軽鎖超可変領域（ＨＶＲ）Ｌ１、Ｌ２及びＬ３を、それぞれ配列番号３２、３３及び３４に示す。抗体１Ｄ１１、３２Ｄ６、９Ｂ９及び２２Ｃ１０の軽鎖及び重鎖可変領域のアライメントを、図５に示す。
各抗体は、マウス重鎖可変領域をヒトＩｇＧ１重鎖定常領域にクローニングし、ヒトラムダ軽鎖定常領域にクローニングした９Ｂ９以外は軽鎖可変領域をヒトカッパ軽鎖定常領域にクローニングすることによりキメラ化した。
Ｅ．１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化
モノクローナル抗体１Ｄ１１及び２２Ｃ１０を、以下に記載するようにしてヒト化した。残基番号は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）に従う。
アクセプターヒトコンセンサスフレームワークへの超可変領域の直接グラフト
１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化の間に構築した変異体を、ＩｇＧの形態で評価した。マウスの１Ｄ１１及び２２Ｃ１０からのＶＬ及びＶＨドメインを、ヒトＶＬカッパＩ（ＶＬＫＩ）及びヒトＶＨサブグループＩ（ＶＨＩ）コンセンサス配列に整列させた。
マウスの１Ｄ１１（ｍｕ１Ｄ１１）抗体からの超可変領域を、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワークに操作して、ヒト化１Ｄ１１．ｖ１（ｈ１Ｄ１１．ｖ１）、１Ｄ１１．ｖ２（ｈ１Ｄ１１．ｖ２）、１Ｄ１１．ｖ３（ｈ１Ｄ１１．ｖ３）、１Ｄ１１．ｖ４（ｈ１Ｄ１１．ｖ４）、１Ｄ１１．ｖ１．１（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．１）、１Ｄ１１．ｖ１．２（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．２）、１Ｄ１１．ｖ１．３（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．３）、１Ｄ１１．ｖ１．４（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．４）、１Ｄ１１．ｖ１．５（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．５）、１Ｄ１１．ｖ１．６（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．６）、１Ｄ１１．ｖ１．７（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．７）、１Ｄ１１．ｖ１．８（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．８）及び１Ｄ１１．ｖ１．９（ｈ１Ｄ１１．ｖ１．９）を生成した。具体的に、ｍｕ１Ｄ１１ ＶＬドメインから、位置２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）をＶＬＫＩにグラフトした。ｍｕ１Ｄ１１ ＶＨドメインから、位置２６−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）をＶＨＩにグラフトした。
さらに、ある種の残基は、ＣＤＲ構造を調整して抗原の適合を微調整し得る「バーニア」領域として作用するフレームワーク残基の一部であることが見出された。例えばＦｏｏｔｅ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９（１９９２）（図５及び６）を参照されたい。これらのＣＤＲの定義は、それらの配列超可変性（Wu, T. T.及びKabat, E. A. (1970)）、それらの構造上の位置（Chothia, C.及びLesk, A. M. (1987)）及び抗原−抗体接触におけるそれらの関わり（MacCallumらJ. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996)）により定義される位置を含む。例えば、ＶＨ及びＶＬ中の以下の位置は、マウス配列から以下のヒト化１Ｄ１１変異体において保持した。
ｈ１Ｄ１１．ｖ１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１及び７３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置５８、６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１、７３及び７５、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置５８、６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．６−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７及び６９、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４９、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．７−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７及び６９、ＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．８−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、ＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
ｈ１Ｄ１１．ｖ１．９−ＶＨにおいて変更なし、ＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置６９及び７１
１Ｄ１１の様々なヒト化変異体についての軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を、それぞれ図６及び７に示す。
４つすべてのｈ１Ｄ１１変異体（ｈ１Ｄ１１．ｖ１−４）のうち、ｈ１Ｄ１１．ｖ１は、ヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞でのＦＡＣＳによるマウス１Ｄ１１との比較により、最も近い親和性を保持することが示された。その結果、追加的なｈ１Ｄ１１．ｖ１変異体を、上記のようにして、重鎖及び軽鎖の両方の可変領域の異なるバーニア位置を改変することにより生成した。
マウスの２２Ｃ１０（ｍｕ２２Ｃ１０）抗体からの超可変領域を、ＶＬＫＩ及びＶＨＩアクセプターフレームワークに操作して、様々なヒト化２２Ｃ１０を生成した。具体的に、ｍｕ２２Ｃ１０ ＶＬドメインから、位置２４−３４（Ｌ１）、５０−５６（Ｌ２）及び８９−９７（Ｌ３）をＶＬＫＩにグラフトした。ｍｕ２２Ｃ１０ ＶＨドメインから、位置２６−３５（Ｈ１）、５０−６５（Ｈ２）及び９５−１０２（Ｈ３）をＶＨＩにグラフトした。
例えば、ＶＨ及びＶＬ中の以下の位置は、マウス配列から以下のヒト化２２Ｃ１０変異体において保持した。
ｈ２２Ｃ１０．ｖ１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７、並びにＶＬのフレームワークＩＩＩにおける位置７１
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１、７３及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１、７６及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１、７５、７６及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．１−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．２−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．３−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６９、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．４−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、７１及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．５−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び９３、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．６−−ＶＨのフレームワークＩＩＩにおける位置６７、６９及び７１、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．７−ＶＨにおける変更なし、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６及び４７
ｈ２２Ｃ１０．ｖ２．８−ＶＨにおける変更なし、ＶＬのフレームワークＩＩにおける位置４６
２２Ｃ１０の様々なヒト化変異体についての軽鎖可変領域配列及び重鎖可変領域配列を、それぞれ図８及び９に示す。
１Ｄ１１及び２２Ｃ１０のヒト化変異体は、Ｋｕｎｋｅｌ突然変異誘発により、各超可変領域について別々のオリゴヌクレオチドを使用して生成した。正しいクローンは、ＤＮＡ配列決定により同定した。
変異体の評価
スクリーニングする目的のために、ＩｇＧ変異体を、まず２９３細胞において産生した。ＶＬ及びＶＨをコードするベクターを２９３細胞にトランスフェクトした。プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって、細胞培養培地からＩｇＧを精製した。
小規模調製物を、まず、ＦＡＣＳ及びスキャッチャード解析によりスクリーニングして、組み換え及び内因性のＢ７−Ｈ４に対する種特異性及び親和性（Ｋｄ）を決定した。異なる濃度（０−１０μｇ／ｍｌ）のヒト化変異体を、組み換えヒト、カニクイザル又はマウスＢ７−Ｈ４を過剰発現する２９３細胞及び内因性のヒトＢ７−Ｈ４を発現する腫瘍細胞株であるＭＸ−１と４０分間４℃でインキュベートした後に洗浄し、Ｄｙｌｉｇｈｔ−６５０とコンジュゲートされた２次ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体で２０分間４℃で染色することにより、初期ＥＣ５０及び種特異性を決定した。蛍光性シグナルは、ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒを使用して取得し、ＥＣ５０の値は、Ｇｒａｐｈ ＰａｄプログラムＰｒｉｓｍ４を使用して決定した。
１．種交差反応性
モノクローナル抗体がヒト以外の種からのＢ７−Ｈ４と交差反応するかを決定するために、モノクローナル抗体を試験した。図１０は、ヒト（配列番号７３）、チンパンジー（配列番号８１）、カニクイザル（配列番号７５）、ラット（配列番号７７）及びマウス（配列番号７９）Ｂ７−Ｈ４間のアライメントを示す。５つすべての種の間で同一の残基を、赤色の箱の中にグループ化することにより示す。異なる残基は、赤色の点で示す。Ｂ７−Ｈ４オルソログは、非常に高い配列同一性を有する（ヒトＢ７−Ｈ４ １００％、チンパンジーＢ７−Ｈ４ ９６．０９％、カニクイザルＢ７−Ｈ４ ９８．６％、ラットＢ７−Ｈ４ ８６．８７％、及びマウスＢ７−Ｈ４ ８７．６３％）。特に、ラットＢ７−Ｈ４は、マウスＢ７−Ｈ４と９７．１７％同一である。Ｂ７−Ｈ４オルソログも非常に高い配列類似性を有する（ヒトＢ７−Ｈ４ １００％、チンパンジーＢ７−Ｈ４ ９７．４２％、カニクイザルＢ７−Ｈ４ ９８．８％、ラットＢ７−Ｈ４ ８９．３％、及びマウスＢ７−Ｈ４ ９０．１２％）。
それぞれの種のＢ７−Ｈ４との結合は、Ｂ７−Ｈ４（ヒト、チンパンジー、カニクイザル、ラット又はマウスＢ７−Ｈ４）で安定してトランスフェクトされ、Ｄｙｌｉｇｈｔ−６５０コンジュゲートヤギ抗ヒト抗体で染色する２９３細胞のＦＡＣＳ解析により決定した。トランスフェクトされていない２９３細胞は、Ｂ７−Ｈ４を通常発現しない。
図１１に示すように、代表的なＦＡＣＳスクリーニングデータは、ｈｕ１Ｄ１１ｖ１．７−９及びｈｕ ２２Ｃ１０ｖ２．７−８が組み換えヒト、カニクイザル及びマウスＢ７−Ｈ４と、親のキメラ抗体の範囲内のＥＣ５０で結合することを示す。
１．抗体親和性
標準的な手順（Holmesら、Science 256:1205-1210 (1992)）に従ってスキャッチャード解析を実施して、ｃｈ１Ｄ１１、ｃｈ９Ｂ９、ｃｈ２２Ｃ１０及びｃｈ３２Ｄ６抗体の相対的結合親和性を決定した。
間接的Ｉｏｄｏｇｅｎ法を使用して抗Ｂ７−Ｈ４抗体を［Ｉ１２５］標識した。［Ｉ１２５］標識された抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、ＮＡＰ−５カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するゲル濾過によって遊離１２５Ｉ−Ｎａから精製し、精製ヨウ素化抗Ｂ７−Ｈ４抗体は、８−１０μＣｉ／μｇの比活性範囲を有していた。固定濃度の［Ｉ１２５］標識された抗体及び漸減濃度の系列希釈した標識されていない抗体を含む５０μＬの競合アッセイ混合物を９６ウェルプレートに配置した。ヒト、カニクイザル、ラット若しくはマウスＢ７−Ｈ４を安定して発現する２９３細胞又はＭＸ−１腫瘍細胞を、成長培地中で３７℃にて５％ＣＯ２中で培養した。細胞を、Ｓｉｇｍａ細胞解離溶液を使用してフラスコから離し、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、３００ｍＭヒトＩｇＧ及び０．１％アジ化ナトリウムを含むダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）から成る結合バッファーで洗浄した。洗浄した細胞を、０．２ｍＬの結合バッファー中の密度が１００，０００細胞で、９６ウェルプレートに加えた。各ウェル中の［Ｉ１２５］標識された抗体の最終濃度は、〜２５０ｐＭであった。競合アッセイ中の標識されていない抗体の最終濃度は、１０００ｎＭから、１０個の２倍段階希釈により、０ｎＭバッファーのみのアッセイまでの範囲に及んだ。競合アッセイは、３重で行った。競合アッセイを２時間室温でインキュベートした。２時間のインキュベーションの後に、競合アッセイをＭｉｌｌｉｐｏｒｅマルチスクリーンフィルタープレート（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）に移し、結合バッファーで４回洗浄して、結合した［Ｉ１２５］標識された抗体から遊離抗体を分離した。Ｗａｌｌａｃ Ｗｉｚａｒｄ １４７０ガンマカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ Ｌｉｆｅ ａｎｄ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ、ＭＡ）でフィルターをカウントした。結合データは、抗体の結合親和性を決定するのにＭｕｎｓｏｎ及びＲｏｂａｒｄ（Munson及びRobard 1980）の適合アルゴリズムを使用するＮｅｗＬｉｇａｎｄソフトウェア（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）を使用して評価した。
図４Ａに示すように、ヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４及びラットＢ７−Ｈ４に結合するｃｈ１Ｄ１１は、それぞれ６．１ｎＭ、４．１ｎＭ、９．４ｎＭ及び４．１ｎＭの親和性で、安定してトランスフェクトされた２９３細胞で発現された。ヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４及びラットＢ７−Ｈ４に結合するｃｈ２２Ｃ１０は、それぞれ６．６ｎＭ、４．６ｎＭ、１８．３ｎＭ及び５．７ｎＭの親和性で、安定してトランスフェクトされた２９３細胞で発現された。ヒトＢ７−Ｈ４、カニクイザルＢ７−Ｈ４、マウスＢ７−Ｈ４及びラットＢ７−Ｈ４に結合するｃｈ９Ｂ９は、それぞれ６．６ｎＭ、５．２ｎＭ、１３．７ｎＭ及び４．７ｎＭの親和性で、安定してトランスフェクトされた２９３細胞で発現された。ヒトＢ７−Ｈ４及びカニクイザルＢ７−Ｈ４に結合するｃｈ３２Ｄ６は、それぞれ４．８ｎＭ及び３．１ｎＭの親和性で、安定してトランスフェクトされた２９３細胞で発現された。
様々なヒト化抗Ｂ７−Ｈ４抗体の親和性も、上記のスキャッチャード解析を使用して評価した。ヒトＢ７−Ｈ４を安定して発現するＭＸ−１腫瘍細胞を、成長培地中で３７℃にて５％ＣＯ２中で培養した。図１２に示すように、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．７、ｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．８及びｈｕ１Ｄ１１．ｖ１．９は、（親の１Ｄ１１抗体の７．８ｎＭと比較して）それぞれ８．３ｎＭ、８．７ｎＭ及び７．８ｎＭの親和性でヒトＢ７−Ｈ４に結合した。Ｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．７及びｈｕ２２Ｃ１０．ｖ２．８は、（親の２２Ｃ１０抗体の４．９ｎＭと比較して）それぞれ６．３ｎＭ及び１０ｎＭの親和性でヒトＢ７−Ｈ４に結合した。
Ｆ．モノクローナル抗体エピトープグループ化
モノクローナル抗体のエピトープグループ化を決定するために、ＦＡＣＳ解析を実施して、他の抗体が基準抗体を置き換えるかどうかを評価した。
エピトープグループ化は、細胞ベースの競合結合ＦＡＣＳアッセイを使用して決定した。組み換えヒトＢ７−Ｈ４を発現する２９３細胞を、標識されていない抗体（０、０．０５、０．５、５、５０μｇ／ｍｌ）の存在下でＤｙｌｉｇｈｔ−４８８標識されたトレーサー抗体（０．３−１μｇ／ｍｌ）とインキュベートした。トレーサーが標識されていない抗体で置き換えられる場合、競合が生じ、抗体がＢ７−Ｈ４の同じ又は同様の領域に結合することを示す。このことは、同じ抗体をトレーサー及び競合抗体として用いる場合に生じる。異なる標識されていない抗体によりトレーサーが置き換えられない場合、標識されていない抗体は、Ｂ７−Ｈ４中の異なる領域に結合している。
Ｂ７−Ｈ４抗体がＢ７−Ｈ４のＩｇ−Ｖ又はＩｇ−Ｃドメインの何れかに結合するかどうかを決定するために、標準的な分子クローニング方法を使用して、Ｂ７−Ｈ４（ＩｇＶ；スペーサーＳ１５１−Ｖ１５７を含むＧ２８−Ｆ１５０）と無関係の（Ｉｇ−Ｃ）（コンストラクト−８８）又は無関係の（Ｉｇ−Ｖ）−Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｃ；ＴＭ／ＣＤ Ｄ２３７−Ｋ２８２を含むＤ１５８−Ｇ２３６）（コンストラクト−８８Ｂ）膜タンパク質の何れかを含むキメラＩｇドメイン分子を操作した。Ｎ末端又は細胞質タグを付加して、これらのコンストラクトでトランスフェクトされた２９３細胞がタンパク質を細胞膜上で発現することを確認した（データは示さず）。簡単に述べると、２９３細胞は、ｐｏｌｙｆｅｃｔを使用してコンストラクト８８及び８８Ｂで一過性にトランスフェクトされた。４８時間後に、Ｄｙｌｉｇｈｔ−４８８又は−６５０で標識された１０μｇ／ｍｌのｃｈ９Ｂ９、ｃｈ１Ｄ１１、ｃｈ２２Ｃ１０又はｃｈ３２Ｄ６で３０−４０分間４℃で細胞を染色し、洗浄し、ＢＤ ＦＡＣＳ ｃａｌｉｂｕｒで解析した。
さらに、操作した可溶型Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ、Ｇ２８−Ｖ１５７）−Ｆｃ融合タンパク質を使用して独立して結果を確認した。３−３００倍の濃度にて色素で標識されたトレーサー抗体とインキュベートした場合、トレーサーの結合は、ＦＡＣＳにより決定されるように、２９３−ｈｕＢ７−Ｈ４細胞に対して阻害された。
Ｂ７−Ｈ４（Ｉｇ−Ｖ）ドメインは、単一Ｎ−結合グリコシル化部位（Ｎ１１２−Ｓ１１４）を含み、グリコシル化がＢ７−Ｈ４への抗体の結合に影響するかどうかを決定するために、標準的な部位特異突然変異誘発を使用してＳ１１４をアラニンで置換して、完全長ヒトＢ７−Ｈ４膜コンストラクトにおけるグリコシル化を妨げた。変異Ｓ１１４ＡヒトＢ７−Ｈ４コンストラクトを、ｐｏｌｙｆｅｃｔを使用して２９３細胞にトランスフェクトし、４８時間後に、抗体結合についてＦＡＣＳにより２９３−ｈｕＢ７−Ｈ４安定細胞株と共に解析した。
図４Ａは、これらの結果を、「エピトープグループ」との表題の欄にまとめる。図４に示すように、抗体１Ｄ１１及び９Ｂ９は共に、「Ａ」の下にグループ化されるエピトープに結合するが、抗体２２．Ｃ１０は、「Ｂ」の下にグループ化されるエピトープに結合し、抗体３２Ｄ６は、「Ｃ」の下にグループ化されるエピトープに結合する。
３つのモノクローナル抗体が、Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｖドメインと確実に結合し、ｃｈ２２Ｃ１０が、Ｉｇ−Ｖ／Ｉｇ−Ｃを共に含むエピトープに結合する可能性があり、そのような結合がグリコシル化非依存性であった（４つすべての抗体はアイソタイプコントロールより１００倍多く結合した）ことがさらに確認された。ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０についての代表的なデータを図４Ｂに示す。用いたｃｈ１Ｄ１１のバージョンは、１Ｄ１１ ｍＡｂ軽鎖がＣ４３Ｇにて置換を含む、ｃｈ１Ｄ１１のわずかに改変したバージョンであった。Ｂ７−Ｈ４ Ｉｇ−Ｃドメインに対する結合は、何れのモノクローナル抗体によっても検出されなかった。
Ｇ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体の内部移行
ＡＤＣ標的のある所望の属性は、抗体を細胞の分解性区画内に内部移行する能力である。抗Ｂ７−Ｈ４抗体が結合により内部移行されるかどうかを決定するために、ＳＫＢＲ３腺癌細胞を細胞培養処理４ウェルチャンバースライド（Ｎａｌｇｅ Ｎｕｎｃ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）に播種し、Ｄｙｌｉｇｈｔ５９４コンジュゲート抗Ｂ７−Ｈ４ ９Ｂ９ ｍＡｂ（１０μｇ／ｍＬ）又は膜染色コントロールとしての抗ＥＧＦ−Ａｌｅｘａ ４８８（３μｇ／ｍＬ）の何れかと共に２時間４℃でインキュベートした。内部移行のために、両方を加え、２時間４℃でインキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、リソソームプロテアーゼ阻害剤ペプスタチン（５μｇ／ｍＬ）／ロイペプチン（１０μｇ／ｍＬ）の存在下で１６時間の追跡に供した。すべての処置グループは、３％パラホルムアルデヒド（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．）中で２０分間室温で固定し、５０ｍＭ塩化アンモニウム及びＰＢＳで洗浄し、その後ＤＡＰＩで核染色することにより追跡した。Ｌｅｉｃａ ＳＰ５共焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ）を画像解析のために用いた。
図１３に示すように、９Ｂ９及びＥＧＦ（リソソームマーカーとして用いた）染色のかなりのオーバーラップが細胞内で見られた。これらの結果から、抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣが、効果的に内部移行され、分解を受け、がん細胞を死滅させる薬物を放出することが予測される。
抗Ｂ７−Ｈ４抗体がリソソームに到達することを証明するために、色素コンジュゲートで標識されたｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０抗Ｂ７−Ｈ４抗体を、ＭＸ−１カルシノーマ細胞とインキュベートし、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）を使用して、抗体の細胞内の位置を追跡した。ＦＲＥＴは、２つの発色団、この場合はドナー及びアクセプター色素の間のエネルギー移動の機構である。簡単に述べると、ｃｈ１Ｄ１１又はｃｈ２２Ｃ１０の何れかを、カテプシン切断部位を含むペプチドスペーサーにより一緒にされた２つの色素ＦＡＭ及びＴＡＭＲＡにコンジュゲートされた。未切断状態では、緑色色素（ドナー）が赤色色素（アクセプター）と近接しているのでクエンチされ、このため、膜及び細胞質の染色は赤色に見える。抗体コンジュゲートがリソソームに入ると、リソソーム酵素であるカテプシンがペプチドスペーサーを切断し、アクセプターからのドナーの距離が増え、よって、赤色色素へのエネルギー移動を妨げ、緑色色素が見えるようになる。このことを達成するために、２μｇ／ｍｌの抗体−コンジュゲートと細胞を氷上で３０分間インキュベートした。細胞を直ちに画像化して、タイムラプス撮影技術で１０時間にわたって３７℃でＬｅｉｃａ ＳＰ５共焦点顕微鏡を使用して膜染色（Ｔ０）を示した。図１４に示すように、ｃｈ１Ｄ１１及びｃｈ２２Ｃ１０は共にリソソームに局在され、インタクト（赤色）及び切断された（緑色）コンジュゲートの合成画像は、リソソーム中で両方のコンジュゲートが共局在する黄色の領域を示す。
Ｈ．抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの生成
大規模な抗体産生のために、抗体をＣＨＯ細胞で産生する。ＶＬ及びＶＨをコードするベクターをＣＨＯ細胞にトランスフェクトし、プロテインＡアフィニティークロマトグラフィーによって、細胞培養培地からＩｇＧを精製した。
抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、１Ｄ１１、２２Ｃ１０及び９Ｂ９を、本明細書に示す薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥにコンジュゲートすることによって産生した。便宜上、薬物−リンカー部分ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、これらの実施例及び図で「ｖｃＭＭＡＥ」又は「ＶＣＥ」と呼ぶこともある。コンジュゲーションに先立って、国際公開第２００４／０１０９５７Ａ２号に記載されている方法に従った標準的な方法を使用して、ＴＣＥＰで抗体を部分的に還元した。部分的に還元した抗体を、例えば、Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４及び米国特許出願公開第２００５／０２３８６４９Ａ１号に記載された方法に従った標準的な方法を使用して、薬物−リンカー部分にコンジュゲートした。簡単に述べると、抗体の還元システイン残基へ薬物−リンカー部分がコンジュゲートできるように、部分的に還元した抗体を薬物−リンカー部分と組み合わせた。コンジュゲーション反応をクエンチし、ＡＤＣを精製した。各ＡＤＣに関する薬物負荷（抗体あたりの薬物部分の平均数）を決定し、抗Ｂ７−Ｈ４抗体について３．５−３．９（オーリスタチン）及び１．６−１．９（ネモルビシン）の間であった。
あるいは、本明細書に示す、アセタールリンカーを有する薬物−リンカー部分ＰＮＵ−１５９６８２マレイミド（ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタールリンカー）に１Ｄ１１をコンジュゲートすることにより、抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）を生成した。
Ｉ．ＭＸ−１ヒト乳がん細胞株異種移植における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの有効性
ＭＸ−１ヒト乳がん異種移植モデルを使用して、抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣの有効性を調べた。ＭＸ−１細胞株は、トリプルネガティブ（ＴＮ、ＥＲ（−）／ＰＲ（−）／Ｈｅｒ２（−））乳管癌細胞株である。Ｂ７−Ｈ４は、ＭＸ−１細胞で高発現され、ＩＨＣ、ＦＡＣＳ、ＩＦ及び共焦点顕微鏡観察及びウェスタンブロットで確認された。ＭＸ−１腫瘍断片（１ｍｍ３）（９Ｂ９を使用してＦＡＣＳによりＢ７−Ｈ４陽性）を、グループあたり１０匹のマウスの側背に皮下移植し、移植片が接種後１００−１５０ｍｍ３に到達したときに、マウスに３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥコントロール抗体−薬物コンジュゲート、３ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物コンジュゲート、ｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物コンジュゲート、ｃｈ１Ｄ１１−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物コンジュゲート、又は１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９裸抗体、又はビヒクル（ＰＢＳ）単独を単回静脈内注射した。抗体の存在は、注射後１、７及び１４日にＰＫ出血により確認した。
図１５に示すように、実質的な腫瘍増殖阻害が、試験した両方の濃度で３つすべての抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物コンジュゲートを使用して達成された。
Ｊ．ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞株異種移植における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの有効性
ＨＢＣＸ−２４乳がん異種移植モデルを使用して、抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣの有効性を調べた。ＨＢＣＸ−２４細胞株は、トリプルネガティブ（ＴＮ、ＥＲ（−）／ＰＲ（−）／Ｈｅｒ２（−））乳癌細胞株である。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞で高発現され、ＩＨＣ、ＦＡＣＳ、ＩＦ及び共焦点顕微鏡観察及びウェスタンブロットで確認された。免疫組織化学により測定される、ＨＢＣＸ−２４乳がん細胞において１＋及び２＋のレベルのＢ７−Ｈ４染色の広まりがあった。ＨＢＣＸ−２４腫瘍断片（２０ｍｍ３）を、グループあたり５−１０匹のマウスの側背に皮下移植し、移植片が接種後７５−２００ｍｍ３に到達したときに、マウスに６ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥコントロール抗体−薬物コンジュゲート、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ若しくは１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９−ｖｃＭＭＡＥ抗体−薬物コンジュゲート、又は１０ｍｇ／ｋｇのｃｈ９Ｂ９裸抗体、又はビヒクル（ＰＢＳ）単独を単回静脈内注射した。抗体の存在は、注射後１、７及び１４日にＰＫ出血により確認した。
図１６に示すように、実質的な腫瘍増殖阻害が、試験したすべての濃度でｃｈ９Ｂ９抗Ｂ７−Ｈ４抗体−薬物コンジュゲートを使用して達成された。
Ｋ．ＭＸ−１乳がん細胞異種移植における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの有効性
ＭＸ−１乳がん異種移植モデルを使用して、アセタールリンカーを有する薬物−リンカー部分ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドに１Ｄ１１をコンジュゲートすることにより生成した抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣの有効性を調べた。ＭＸ−１腫瘍断片（１ｍｍ３）を、グループあたり１０匹のマウスの側背に皮下移植し、移植片が接種後１００−１５０ｍｍ３に到達したときに、マウスに０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ若しくは２．５ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ ５Ｂ６−ｖｃＭＭＡＥコントロール抗体−薬物コンジュゲート、又はアセタールリンカーを有する０．１ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ若しくは２．５ｍｇ／ｋｇのｃｈ１Ｄ１１−ＰＮＵ−１５９６８２マレイミド、又はビヒクル（ＰＢＳ）単独を単回静脈内注射した。抗体の存在は、注射後１、７及び１４日にＰＫ出血により確認した。
図１７に示すように、２．５ｍｇ／ｋｇ用量のｃｈ１Ｄ１１ ＡＤＣは、腫瘍増殖を遅らせるが、より低い用量の０．１ｍｇ／ｋｇ及び０．５ｍｇ／ｋｇは、腫瘍増殖に対して認識できる作用を示さなかったことがわかった。
Ｌ．ＭＸ−１乳がん細胞異種移植における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの有効性
実施例Ｋに記載するようなＭＸ−１異種移植モデルを使用して、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣの有効性を調べた。マウスを１０匹のグループに分け、１２ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７裸抗体、０．５ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、６ｍｇ／ｋｇ、９ｍｇ／ｋｇ、１２ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、６若しくは１２ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、又はビヒクル（ＰＢＳ）単独の単回静脈内用量を投与した。抗体の存在は、ＰＫ出血により確認した。腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）は、ビヒクルに対して各処置群についての１日あたりの適合した腫瘍体積−時間曲線下面積（ＡＵＣ）のパーセントとして、以下の式を使用して計算した：
％ＴＧＩ＝１００’（１−ＡＵＣ処置／日、ＡＵＣビヒクル／日）
１００％のＴＧＩ値は、腫瘍停滞を示し、＞１％であるが＜１００％のＴＧＩは、腫瘍増殖遅延を示し、＞１００％のＴＧＩは、腫瘍後退を示す。
図１８に示すように、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、６、９及び１２ｍｇ／ｋｇ用量についてそれぞれ９１％、１０６％及び１０８％の顕著な腫瘍増殖阻害を示し、９ｍｇ／ｋｇ用量では３８％部分寛解（ＰＲ）及び６２％完全寛解（ＣＲ）を示した。ビヒクル又はコントロールＡＤＣでは応答は観察されなかった。
Ｍ．ＨＣＣ−１５６９ｘ２乳がん細胞異種移植における抗Ｂ７−Ｈ４抗体薬物コンジュゲートの有効性
ＨＣＣ−１５６９ｘ２（Ｈｅｒ２＋／ＥＲ−）乳がん細胞異種移植モデルを使用して、ｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７の抗Ｂ７−Ｈ４ ＡＤＣの有効性を調べた。Ｂ７−Ｈ４は、ＨＣＣ−１５６９ｘ２異種移植で高発現され、ＩＨＣ及びＦＡＣＳで確認された（図１９Ａ）。ＨＣＣ−１５６９ｘ２細胞（マトリゲル中５×１０６）をＳＣＩＤベージュマウスの乳腺脂肪体に接種し、腫瘍体積が２５０−３７５ｍｍ３に達するまでモニタリングした。マウスを１０匹のグループに分け、５ｍｇ／ｋｇのｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、又は３ｍｇ／ｋｇ若しくは５ｍｇ／ｋｇのｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、又は５ｍｇ／ｋｇのヒト抗ｇＤ−５Ｂ６−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ、又はビヒクル（ＰＢＳ）単独の単回静脈内用量を投与した。抗体の存在は、ＰＫ出血により確認した。
図１９Ｂに示すように、ｃｈ２２Ｃ１０−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ及びｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、５ｍｇ／ｋｇの用量でそれぞれ１０７％及び１０５％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を示した。キメラ又はヒト化２２Ｃ１０抗体薬物コンジュゲートの間で有効性の顕著な差はなかった。より低い３ｍｇ／ｋｇの用量のｈｕ２２Ｃ１０ｖ２．７−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥは、ビヒクル又はコントロールＡＤＣの何れかと比較して９４％の腫瘍増殖阻害（ＴＧＩ）を示した。
理解を明瞭にする目的で、前述の発明を、例示及び例としてある程度詳細に記載したが、説明及び例は、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきでない。本明細書で引用されるすべての特許及び科学文献の開示は、その全内容が本明細書に参照により明確に援用される。

Claims (53)

  1. Ｂ７−Ｈ４に結合する単離抗体であって、
    （ａ）（ｉ）配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、（ｉｉ）配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、（ｉｉｉ）配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３、（ｉｖ）配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、（ｖ）配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び（ｖｉ）配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３
    を含む抗体。
  2. モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗体。
  3. ヒト化抗体又はキメラ抗体である、請求項１又は２に記載の抗体。
  4. Ｂ７−Ｈ４に結合する抗体断片である、請求項１から３の何れか一項に記載の抗体。
  5. Ｂ７−Ｈ４が、配列番号７３のヒトＢ７−Ｈ４である、請求項１から４の何れか一項に記載の抗体。
  6. 配列番号７１の重鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む、請求項１から５の何れか一項に記載の抗体。
  7. 配列番号６５若しくは６６の軽鎖フレームワークＦＲ２配列、及び／又は配列番号６７の軽鎖フレームワークＦＲ３配列をさらに含む、請求項１から６の何れか一項に記載の抗体。
  8. （ａ）配列番号５６のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は
    （ｂ）配列番号５５のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は
    （ｃ）（ａ）と同様のＶＨ配列及び（ｂ）と同様のＶＬ配列、又は
    （ｄ）配列番号５７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は
    （ｅ）（ａ）と同様のＶＨ配列及び（ｄ）と同様のＶＬ配列、又は
    （ｆ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、又は
    （ｇ）配列番号２７のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、又は
    （ｈ）（ｆ）と同様のＶＨ配列及び（ｇ）と同様のＶＬ配列、
    を含む、請求項１から７の何れか一項に記載の抗体。
  9. 配列番号５６のＶＨ配列、又は配列番号２８のＶＨ配列を含む、請求項８に記載の抗体。
  10. 配列番号５５のＶＬ配列、配列番号２７のＶＬ配列、又は配列番号５７のＶＬ配列を含む、請求項８又は９に記載の抗体。
  11. （ａ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５５のＶＬ配列、又は（ｂ）配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２７のＶＬ配列、又は（ｃ）配列番号５６のＶＨ配列及び配列番号５７のＶＬ配列を含む、単離抗体。
  12. ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体又はＩｇＧ２ｂ抗体である、請求項１から１１の何れか一項に記載の抗体。
  13. 請求項１から１２の何れか一項に記載の抗体をコードする単離核酸。
  14. 請求項１３に記載の核酸を含む宿主細胞。
  15. 抗体が産生されるように請求項１４に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗体を産生する方法。
  16. 請求項１から１２の何れか一項に記載の抗体及び細胞傷害剤を含むイムノコンジュゲート。
  17. 式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、
    （ａ）Ａｂは抗体であり、
    （ｂ）Ｌはリンカーであり、
    （ｃ）Ｄはメイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される薬物であり、
    （ｄ）ｐは１−８の範囲である、
    請求項１６に記載のイムノコンジュゲート。
  18. 細胞傷害剤がオーリスタチンである、請求項１６に記載のイムノコンジュゲート。
  19. Ｄが式ＤＥ
    DE
    （式中、Ｒ２及びＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ３及びＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、ＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ及びＨから独立して選択され、Ｒ９はＨであり、Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである）
    を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  20. 薬物がＭＭＡＥである、請求項１８に記載のイムノコンジュゲート。
  21. Ｄが、式Ａ：
    Ａ；
    （式中、点線は、Ｃ１及びＣ２の間又はＣ２及びＣ３の間の二重結合の任意選択的な存在を示し、
    Ｒ２は、Ｈ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから独立して選択され、任意選択的にハロ又はジハロからさらに選択され、ＲＤは、Ｒ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ及びハロから独立して選択され、
    Ｒ６及びＲ９は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
    Ｒ７は、Ｈ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから独立して選択され、
    Ｑは、Ｏ、Ｓ及びＮＨから独立して選択され、
    Ｒ１１は、Ｈ又はＲの何れかであり、又は、ＱがＯの場合は、ＳＯ３Ｍであり、Ｍは金属カチオンであり、
    Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意選択的に、ＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と共に、置換されていてもよい４、５、６又は７員複素環式環を形成し、
    Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれ、Ｒ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義した通りであり、
    Ｒ”は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、鎖は、１つ又は複数のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香族環によって離断されてもよく、
    Ｘ及びＸ’は、Ｏ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から独立して選択される）
    のピロロベンゾジアゼピンである、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  22. Ｄが構造：
    ；
    （式中、ｎは０又は１である）
    を有する、請求項２１に記載のイムノコンジュゲート。
  23. 細胞傷害剤がネモルビシン誘導体である、請求項１６に記載のイムノコンジュゲート。
  24. Ｄが
    ；及び
    から選択される構造を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  25. リンカーがプロテアーゼによって切断可能である、請求項１７、１９、２１、２２、及び２４の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  26. リンカーがｖａｌ−ｃｉｔジペプチド又はＰｈｅ−ｈｏｍｏＬｙｓジペプチドを含む、請求項２５に記載のイムノコンジュゲート。
  27. リンカーが酸不安定性である、請求項１７、１９、２１、２２、及び２４の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  28. リンカーがヒドラゾンを含む、請求項２７に記載のイムノコンジュゲート。
  29. 式：
    （式中、Ｓは硫黄原子である）
    を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  30. 式：
    を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  31. ；

    ；
    ；
    （式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ及びＣ１〜Ｃ６アルキルから選択される）；及び
    から選択される式を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  32. ｐが２−５の範囲である、請求項１７、１９、２１、２２、及び２４から３１の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  33. 請求項１１に記載の抗体を含む、請求項１６から３２の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート。
  34. 請求項１６から３３の何れか一項に記載のイムノコンジュゲート及び薬学的に許容される担体を含む薬学的製剤。
  35. 追加的な治療剤をさらに含む、請求項３４に記載の薬学的製剤。
  36. 追加的な治療剤がアバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である、請求項３５に記載の薬学的製剤。
  37. 請求項１６から３３の何れか一項に記載の有効量のイムノコンジュゲートを含む、Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを有する個体を治療するための医薬。
  38. Ｂ７−Ｈ４陽性のがんが、乳がん、卵巣がん、及び子宮内膜がんから選択される、請求項３７に記載の医薬。
  39. 追加的な治療剤をさらに含む、請求項３８に記載の医薬。
  40. 追加的な治療剤がアバスチン（登録商標）（ベバシズマブ）である、請求項３９に記載の医薬。
  41. 細胞表面上のＢ７−Ｈ４へのイムノコンジュゲートの結合が可能な条件下で、請求項１６から３３の何れか一項に記載のイムノコンジュゲートに細胞を曝露し、それによって細胞の増殖を阻害することを含む、Ｂ７−Ｈ４陽性細胞の増殖を阻害するインビトロの方法。
  42. 細胞が、乳がん細胞、卵巣がん細胞又は子宮内膜がん細胞である、請求項４１に記載の方法。
  43. 標識にコンジュゲートされた、請求項１から１２の何れか一項に記載の抗体。
  44. 標識が陽電子放出体である、請求項４３に記載の抗体。
  45. 陽電子放出体が８９Ｚｒである、請求項４４に記載の抗体。
  46. 生体試料においてヒトＢ７−Ｈ４を検出する方法であって、天然に存在するヒトＢ７−Ｈ４への抗Ｂ７−Ｈ４抗体の結合が可能な条件下で、請求項１から１２の何れか一項に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体に生体試料を接触させること、及び生体試料において、抗Ｂ７−Ｈ４抗体と天然に存在するヒトＢ７−Ｈ４の間で複合体が形成されているかどうかを検出することを含む方法。
  47. 抗Ｂ７−Ｈ４抗体が請求項１１と同様の抗体である、請求項４６に記載の方法。
  48. 生体試料が、乳がん試料、卵巣がん試料、又は子宮内膜がん試料である、請求項４６又は４７に記載の方法。
  49. Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを検出するための方法であって、請求項１から１２の何れか一項に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体が投与された被検体において、標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体を検出することを含み、標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体の検出が被検体のＢ７−Ｈ４陽性のがんを示す方法。
  50. 標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体が、標識された請求項１１と同様の抗体である、請求項４９に記載の方法。
  51. 標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体が陽電子放出体にコンジュゲートされた抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む、請求項４９又は５０に記載の方法。
  52. 陽電子放出体が８９Ｚｒである、請求項５１に記載の方法。
  53. Ｂ７−Ｈ４陽性のがんを検出するためのキットであって、請求項１から１２の何れか一項に記載の抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含む標識抗Ｂ７−Ｈ４抗体を含むキット。
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Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103842030B (zh) 2011-08-01 2018-07-31 霍夫曼-拉罗奇有限公司 使用pd-1轴结合拮抗剂和mek抑制剂治疗癌症的方法
BR112015022019A2 (pt) 2013-03-14 2017-08-29 Genentech Inc Anticorpos isolados, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de anticorpos, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de indivíduos, de inibição da proliferação de células, de detecção de b7-h4 humano e de detecção de câncer
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
MX2017000546A (es) 2014-07-15 2017-03-08 Genentech Inc Composiciones para el tratamiento del cancer mediante el uso de antagonistas de union al eje de pd-1 e inhibidores de mek.
CN113698488A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物
EP3223865A4 (en) 2014-10-31 2018-10-03 Jounce Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind b7-h4
EP3274369A4 (en) * 2015-03-27 2018-10-17 University of Southern California Car t-cells for the treatment of b7-h4 expressing solid tumors
PL3370768T3 (pl) 2015-11-03 2022-06-13 Janssen Biotech, Inc. Przeciwciała specyficznie wiążące pd-1 i ich zastosowania
CA3021086C (en) 2016-04-15 2023-10-17 Bioatla, Llc Anti-axl antibodies, antibody fragments and their immunoconjugates and uses thereof
TW202208441A (zh) 2016-05-13 2022-03-01 美商拜奧亞特拉公司 抗-ror2抗體、抗體片段、其免疫結合物及其用途
CN109563503B (zh) * 2016-07-26 2023-09-29 静冈县 抗b7-h4抗体
CA3045466A1 (en) 2016-12-01 2018-06-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-pd-l1 antibodies for immuno-pet imaging
AU2018219909A1 (en) 2017-02-10 2019-09-12 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled anti-LAG3 antibodies for immuno-PET imaging
BR112020001360A2 (pt) 2017-07-24 2020-08-11 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. anticorpo monoclonal isolado ou fragmento de ligação a antígeno deste que se liga a cd8, composição farmacêutica, molécula de ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, conjugado de anticorpo, métodos para gerar imagens de um tecido que expressa cd8, para tratar um sujeito tendo um tumor sólido, para prever uma resposta positiva a uma terapia antitumoral, para monitorar uma resposta de um tumor em um sujeito a uma terapia antitumoral, para prever ou monitorar a eficácia da terapia antitumoral e para monitorar a presença de células t em um tumor ao longo do tempo, e, composto.
BR112020003533A2 (pt) 2017-08-25 2020-11-17 Five Prime Therapeutics, Inc. anticorpos b7-h4 e métodos de uso dos mesmos
EP3743447B1 (en) * 2018-01-23 2024-03-27 Nextcure, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
AU2019218319A1 (en) 2018-02-11 2020-08-13 Jiangsu Hansoh Pharmaceutical Group Co., Ltd. Anti-B7-H4 antibody, antigen-binding fragment thereof and pharmaceutical use thereof
CA3091801A1 (en) 2018-03-02 2019-09-06 Five Prime Therapeutics, Inc. B7-h4 antibodies and methods of use thereof
AU2019255781A1 (en) 2018-04-20 2020-10-29 Lyvgen Biopharma Holdings Limited Anti-CD40 antibodies and uses thereof
CN108948204B (zh) * 2018-06-15 2023-01-13 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 抗人b7-h4单克隆抗体、鉴定方法、应用和试剂盒
WO2019241730A2 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
KR20210070317A (ko) 2018-09-28 2021-06-14 리브젠 바이오파마 코., 엘티디. 조작된 Fc 도메인을 갖는 항-CD40 결합 분자 및 그의 치료적 용도
WO2020081493A1 (en) 2018-10-16 2020-04-23 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins
JP2022515424A (ja) 2018-12-24 2022-02-18 サノフイ 突然変異ｆａｂドメインを有する多重特異性結合タンパク質
CN112638949B (zh) * 2019-03-21 2023-04-28 苏州鑫康合生物医药科技有限公司 抗b7s1多肽及其用途
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
CN112351797B (zh) * 2019-06-06 2023-12-22 上海翰森生物医药科技有限公司 抗b7-h4抗体-药物偶联物及其医药用途
WO2021055816A1 (en) 2019-09-18 2021-03-25 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding molecules comprising shiga toxin a subunit scaffolds
CN110981961B (zh) * 2019-11-28 2022-07-29 青岛大学 一种特异结合癌细胞蛋白b7-h4的纳米抗体h6的序列和应用
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
US20210292418A1 (en) 2020-03-18 2021-09-23 Genmab A/S Antibodies
CA3184366A1 (en) 2020-06-29 2022-01-06 Darby Rye Schmidt Viruses engineered to promote thanotransmission and their use in treating cancer
CN114641504B (zh) * 2020-06-30 2022-10-18 和铂医药(上海)有限责任公司 抗b7h4抗体及其双抗和应用
TW202216779A (zh) 2020-07-17 2022-05-01 美商輝瑞股份有限公司 治療性抗體類和彼等之用途
BR112023013263A2 (pt) 2021-01-04 2023-12-12 Mersana Therapeutics Inc Conjugados anticorpo-fármaco alvejados a b7h4 e métodos de uso dos mesmos
WO2022197945A1 (en) 2021-03-17 2022-09-22 Molecular Templates, Inc. Pd-l1 binding proteins comprising shiga toxin a subunit scaffolds and cd8+ t cell antigens
MX2023011310A (es) 2021-03-26 2023-10-05 Innate Pharma Anclajes de citocina para proteinas de celulas nk de union a nkp46.
EP4313109A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer
JP2024519212A (ja) 2021-05-07 2024-05-09 ジェンマブ エー／エス Ｂ７ｈ４およびｃｄ３に結合する二重特異性抗体を含む薬学的組成物
BR112023025331A2 (pt) 2021-06-09 2024-02-27 Innate Pharma Proteína multiespecífica, composição farmacêutica, célula recombinante, ácido nucleico ou conjunto de ácidos nucleicos, uso de uma proteína ou composição, métodos ou uso
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
EP4363059A1 (en) 2021-06-29 2024-05-08 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer

Family Cites Families (173)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US633410A (en) 1898-09-22 1899-09-19 George A Ames Ice-cutter.
US821337A (en) 1905-04-22 1906-05-22 Benjamin F Cline Window-sash fastener.
US3896111A (en) 1973-02-20 1975-07-22 Research Corp Ansa macrolides
US4151042A (en) 1977-03-31 1979-04-24 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for producing maytansinol and its derivatives
US4137230A (en) 1977-11-14 1979-01-30 Takeda Chemical Industries, Ltd. Method for the production of maytansinoids
US4265814A (en) 1978-03-24 1981-05-05 Takeda Chemical Industries Matansinol 3-n-hexadecanoate
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5562090A (en) 1978-10-27 1980-05-10 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164687A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS55164685A (en) 1979-06-08 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
JPS55164686A (en) 1979-06-11 1980-12-22 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US4309428A (en) 1979-07-30 1982-01-05 Takeda Chemical Industries, Ltd. Maytansinoids
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1981001145A1 (en) 1979-10-18 1981-04-30 Univ Illinois Hydrolytic enzyme-activatible pro-drugs
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
DE3883899T3 (de) 1987-03-18 1999-04-22 Sb2 Inc Geänderte antikörper.
IL89220A (en) 1988-02-11 1994-02-27 Bristol Myers Squibb Co Immunoconjugates of anthracycline, their production and pharmaceutical preparations containing them
WO1990005144A1 (en) 1988-11-11 1990-05-17 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE164395T1 (de) 1990-12-03 1998-04-15 Genentech Inc Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
JP4124480B2 (ja) 1991-06-14 2008-07-23 ジェネンテック・インコーポレーテッド 免疫グロブリン変異体
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0861893A3 (en) 1991-09-19 1999-11-10 Genentech, Inc. High level expression of immunoglobulin polypeptides
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
DE69334255D1 (de) 1992-02-06 2009-02-12 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für Krebs und biosynthetisches Bindeprotein dafür
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
DE69329503T2 (de) 1992-11-13 2001-05-03 Idec Pharma Corp Therapeutische Verwendung von chimerischen und markierten Antikörpern, die gegen ein Differenzierung-Antigen gerichtet sind, dessen Expression auf menschliche B Lymphozyt beschränkt ist, für die Behandlung von B-Zell-Lymphoma
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
CA2163345A1 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Susan Adrienne Morgan Antibodies
CA2173150C (en) 1993-10-01 2004-11-30 Kyoichi Sakakibara Novel peptide derivatives
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US5712374A (en) 1995-06-07 1998-01-27 American Cyanamid Company Method for the preparation of substantiallly monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
EP0994903B1 (en) 1997-06-24 2005-05-25 Genentech, Inc. Methods and compositions for galactosylated glycoproteins
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
US6602677B1 (en) 1997-09-19 2003-08-05 Promega Corporation Thermostable luciferases and methods of production
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
BR9813365A (pt) 1997-12-05 2004-06-15 Scripps Research Inst Método para produção e humanização de um anticorpo monoclonal de rato
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
PT1193270E (pt) 1998-08-27 2003-10-31 Spirogen Ltd Pirrolobenzodiazepinas
GB9818731D0 (en) 1998-08-27 1998-10-21 Univ Portsmouth Compounds
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
PT1176195E (pt) 1999-04-09 2013-07-18 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Processo para controlar a actividade de uma molécula funcional sob o ponto de vista imunológico
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
KR100797667B1 (ko) 1999-10-04 2008-01-23 메디카고 인코포레이티드 외래 유전자의 전사를 조절하는 방법
AU7950400A (en) 1999-10-19 2001-04-30 Kyowa Hakko Kogyo Co. Ltd. Process for producing polypeptide
CA2393869A1 (en) 1999-12-15 2001-06-21 Genetech,Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
JP2003531821A (ja) 1999-12-29 2003-10-28 イムノージェン インコーポレーテッド 改変型ドキソルビシンおよびダウノルビシンを含む細胞傷害性薬剤ならびにその治療上の使用
DK2857516T3 (en) 2000-04-11 2017-08-07 Genentech Inc Multivalent antibodies and uses thereof
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
EP3263702A1 (en) 2000-10-06 2018-01-03 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cells producing antibody compositions
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
KR100857943B1 (ko) 2000-11-30 2008-09-09 메다렉스, 인코포레이티드 인간 항체의 제조를 위한 형질전환 트랜스염색체 설치류
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
MXPA04001072A (es) 2001-08-03 2005-02-17 Glycart Biotechnology Ag Variantes de glicosilacion de anticuerpos que tienen citotoxicidad celulares dependiente de anticuerpos incrementada.
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US7091186B2 (en) 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
KR100988949B1 (ko) 2001-10-25 2010-10-20 제넨테크, 인크. 당단백질 조성물
US20050123536A1 (en) 2001-11-20 2005-06-09 Che-Leung Law Treatment of immunological disorders using anti-dc30 antibodies
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
EP1498490A4 (en) 2002-04-09 2006-11-29 Kyowa Hakko Kogyo Kk PROCESS FOR PREPARING ANTIBODY COMPOSITION
DE60336548D1 (de) 2002-04-09 2011-05-12 Kyowa Hakko Kirin Co Ltd Zelle mit erniedrigter oder deletierter aktivität eines am gdp-fucosetransport beteiligten proteins
US20050031613A1 (en) 2002-04-09 2005-02-10 Kazuyasu Nakamura Therapeutic agent for patients having human FcgammaRIIIa
PL373256A1 (en) 2002-04-09 2005-08-22 Kyowa Hakko Kogyo Co, Ltd. Cells with modified genome
EP1498491A4 (en) 2002-04-09 2006-12-13 Kyowa Hakko Kogyo Kk METHOD FOR INCREASING THE ACTIVITY OF AN ANTIBODY COMPOSITION FOR BINDING TO THE FC GAMMA RECEPTOR IIIA
EP1500400A4 (en) 2002-04-09 2006-10-11 Kyowa Hakko Kogyo Kk MEDICAMENT WITH ANTIBODY COMPOSITION
JP4753578B2 (ja) 2002-06-03 2011-08-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド 合成抗体ファージライブラリー
AU2003294210A1 (en) 2002-07-31 2004-05-04 Seattle Genetics, Inc Anti-cd20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
ES2556641T3 (es) 2002-07-31 2016-01-19 Seattle Genetics, Inc. Conjugados de fármacos y su uso para tratar cáncer, una enfermedad autoinmune o una enfermedad infecciosa
DE60336149D1 (de) 2002-08-16 2011-04-07 Immunogen Inc Vernetzer mit hoher reaktivität und löslichkeit und ihre verwendung bei der herstellung von konjugaten für die gezielte abgabe von kleinmolekularen arzneimitteln
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
SI2289936T1 (sl) 2002-12-16 2017-10-30 Genentech, Inc. Imunoglobulinske variante in njihove uporabe
AU2004205631A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
WO2004087717A1 (en) 2003-03-31 2004-10-14 Council Of Scientific And Industrial Research Non-cross-linking pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines as potential antitumour agents and process thereof
US7755007B2 (en) 2003-04-17 2010-07-13 K&H Manufacturing, Inc Heated pet mat
JP4884224B2 (ja) * 2003-05-09 2012-02-29 ディアデクサス インコーポレーテッド Ｏｖｒ１１０抗体組成物および使用方法
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
US20050163772A1 (en) 2003-06-16 2005-07-28 University Of Washington B7S1: an immune modulator
GB0321295D0 (en) 2003-09-11 2003-10-15 Spirogen Ltd Synthesis of protected pyrrolobenzodiazepines
WO2005035586A1 (ja) 2003-10-08 2005-04-21 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 融合蛋白質組成物
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
WO2005040170A2 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto
LT2380911T (lt) 2003-11-05 2018-07-10 Roche Glycart Ag Antigeną surišančios molekulės, pasižyminčios padidintu fc receptoriaus surišimo afiniškumu ir efektoriaus funkcija
KR101438983B1 (ko) 2003-11-06 2014-09-05 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
WO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2005-06-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. 抗体組成物を含有する医薬
US7375078B2 (en) 2004-02-23 2008-05-20 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
GB0404577D0 (en) 2004-03-01 2004-04-07 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
JP5166861B2 (ja) 2004-03-09 2013-03-21 スピロゲン リミティッド ピロロベンゾジアゼピン
CN1961003B (zh) 2004-03-31 2013-03-27 健泰科生物技术公司 人源化抗TGF-β抗体
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
AU2005249490B2 (en) 2004-06-01 2010-07-29 Genentech, Inc. Antibody drug conjugates and methods
US7058138B2 (en) 2004-09-01 2006-06-06 Xg Technology, Llc Coordinated numerical control of sideband energy and modulation compression method for the radio frequency transmission of high speed data
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
US20100111856A1 (en) 2004-09-23 2010-05-06 Herman Gill Zirconium-radiolabeled, cysteine engineered antibody conjugates
PL1791565T3 (pl) 2004-09-23 2016-10-31 Modyfikowane cysteiną przeciwciała i koniugaty
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP1817055B1 (en) * 2004-11-10 2012-12-26 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
WO2006104677A2 (en) 2005-03-24 2006-10-05 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Antibodies that bind ov064 and methods of use therefor
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
EP3498289A1 (en) 2005-07-07 2019-06-19 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
EP1973951A2 (en) 2005-12-02 2008-10-01 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
EP1963371A2 (en) 2005-12-08 2008-09-03 Medarex Inc. Human monoclonal antibodies to o8e
ES2374964T3 (es) 2006-01-25 2012-02-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina.
JP2009536527A (ja) 2006-05-09 2009-10-15 ジェネンテック・インコーポレーテッド 最適化されたスキャフォールドを備えた結合ポリペプチド
AU2007274738B2 (en) 2006-07-18 2013-11-28 Sanofi-Aventis Antagonist antibody against EphA2 for the treatment of cancer
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
EP1914242A1 (en) 2006-10-19 2008-04-23 Sanofi-Aventis Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer
CA2670696A1 (en) 2006-11-27 2008-06-05 Diadexus, Inc. Ovr110 antibody compositions and methods of use
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
SI2019104T1 (sl) 2007-07-19 2013-12-31 Sanofi Citotoksična sredstva, ki obsegajo nove tomaimicinske derivate, in njihova terapevtska uporaba
CL2008003526A1 (es) * 2007-11-30 2010-01-11 Medarex Inc Conjugado de anticuerpo-molécula asociada que comprende un anticuerpo monoclonal humano anti b7-h4/08e/b7x/b7s1/bl-cam/b3/leu-14/lyb-8 humana; composición que lo comprende; método in vitro de inhibición de célula tumoral que expresa b7-h4/08e/b7x/b7s1/bl-cam/b3/leu-14/lyb-8; y uso para tratar cancer.
EP2235064B1 (en) 2008-01-07 2015-11-25 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
WO2009099741A1 (en) 2008-02-01 2009-08-13 Genentech, Inc. Nemorubicin metabolite and analog reagents, antibody-drug conjugates and methods
EP2303332B1 (en) 2008-07-15 2014-12-31 Genentech, Inc. Anthracycline conjugates, process for their preparation and their use as antitumor compounds
CN101544697A (zh) 2008-12-11 2009-09-30 中国人民解放军第四军医大学 融合蛋白TT-B7-H4IgV及其制备方法和用途
KR101984053B1 (ko) 2009-02-05 2019-05-30 이뮤노젠 아이엔씨 신규한 벤조디아제핀 유도체
SI2530091T1 (en) 2010-01-29 2018-06-29 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha PROTITELO ANTI-DLL3
WO2011130598A1 (en) 2010-04-15 2011-10-20 Spirogen Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
JP6120848B2 (ja) * 2011-08-15 2017-04-26 メディミューン，エルエルシー 抗ｂ７−ｈ４抗体およびその使用
AR090549A1 (es) 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
CA2894879A1 (en) 2012-12-19 2014-06-26 Amplimmune, Inc. B7-h4 specific antibodies, and compositions and methods of use thereof
BR112015022019A2 (pt) 2013-03-14 2017-08-29 Genentech Inc Anticorpos isolados, ácido nucleico, célula hospedeira, método de produção de anticorpos, imunoconjugado, formulação farmacêutica, métodos de tratamento de indivíduos, de inibição da proliferação de células, de detecção de b7-h4 humano e de detecção de câncer
US9562099B2 (en) 2013-03-14 2017-02-07 Genentech, Inc. Anti-B7-H4 antibodies and immunoconjugates
US20160146806A1 (en) 2013-05-17 2016-05-26 Amplimmune, Inc. Receptors for b7-h4
CN103981150B (zh) 2014-03-28 2016-06-01 苏州大学 抗人b7-h4单克隆抗体及其制备和应用
CN113698488A (zh) 2014-09-12 2021-11-26 基因泰克公司 抗-b7-h4抗体及免疫缀合物

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