JP6684208B2 - 抗ＦｃＲＨ５抗体 - Google Patents

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Description

関連出願
本出願は、米国特許法第１１９条の下、２０１３年６月２４日出願の米国仮特許出願第６１／８３８，５３４号の優先権を主張し、この出願の開示内容全体が参照により本明細書に組み入れられる。
配列表
本出願はＡＳＣＩＩ形式の配列表を含み、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。このＡＳＣＩＩテキストファイルは２０１４年７月９日に作成され、ＧＮＥ−０４１３ＷＯ＿ＳＬ．ｔｘｔと名付けられ、６７，９０９バイトの大きさである。
発明の分野
抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば二重特異性抗体）及びイムノコンジュゲート、及びそれらの使用法が本明細書に提供される。
Ｆｃ受容体様５（ＦｃＲＬ５、ＦｃＲＨ５及びＩＲＴＡ２としても知られる）は、免疫グロブリンスーパーファミリー（ＩｇＳＦ）の最近同定された６種の遺伝子のファミリーに属する。この遺伝子のファミリーは、保存されたゲノム構造、細胞外ＩＧドメイン組成、並びにＩＴＩＭ−及びＩＴＡＭ様シグナル伝達モチーフを有してＦｃ受容体と密接に関連している（Ｄａｖｉｓ ＲＳら，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００５）３５：６７４−８０）。このファミリーのメンバーはＩＦＧＰ（Ｉｇスーパーファミリー、ＦｃＲ，ｇｐ４２）及びＳＰＡＰとも呼ばれている（ＳＨ２ドメイン含有ホスフェターゼ アンカータンパク質）。ＦｃＲＨ／ＩＲＴＡ受容体ファミリ−の６種のメンバー、すなわちＦｃＲＨｌ／ＩＲＴＡ５、ＦｃＲＨ２／ＩＲＴＡ４、ＦｃＲＨ３／ＩＲＴＡ３、ＦｃＲＨ４／ｌＲＴＡ１、ＦｃＲＨ５／ＩＲＴＡ２及びＦｃＲＨ６が記載されている（Ｐｏｌｓｏｎ ＡＧ ら，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（２００６）１８（９）：１３６３−１３７３）。全てのＦｃＲＨ／ＩＲＴＡは、標準的な免疫受容体、チロシンをベースとする抑制性モチーフと、免疫受容体、チロシンをベースとする活性化モチーフ様シグナル伝達モチーフのいくつかの組み合わせを含む。ＦｃＲＨ ｃＤＮＡは、複数のＩｇ様細胞外ドメインと、コンセンサス免疫受容体、チロシンをベースとする活性化及び／又は阻害性シグナル伝達モチーフを含む細胞質ドメインとを有する、Ｉ型膜貫通糖タンパク質をコードする。ＦｃＲＨ遺伝子は構造的に関連しており、それらのタンパク質産物は、お互いに２８〜６０％の細胞外同一性を共有している。それらは、また最も近いＦｃＲ類縁体と１５〜３１％の同一性を共有している。異なるＦｃＲＨ間には、高度の相同性がある。
ＦｃＲＨ５のリガンドは未知であるが、ＦｃＲＨ５は、抗原感作Ｂ細胞の発生の際に増殖の増大、及び下流のアイソタイプの発現に関連づけられている（Ｄｅｒｎｅｎｔ−Ｂｒｏｗｎ Ｊ．ら，Ｊ Ｌｅｔｉｋｏｅ Ｂｉｏｌ（２０１２）９１：５９−６７）。ＦｃＲＨ５遺伝子座は、３個の主要なｍＲＮＡアイソフォーム（ＦｃＲＨ５ａ、ＦｃＲＨ５ｂ、及びＦｃＲＨ５ｃ）を有している。これらの転写物によりコードされる主要なＦｃＲＨ５タンパク質アイソフォームは５６０残基まで共通のアミン酸配列を共有しており、共通のシグナルペプチド及び６個の細胞外Ｉｇ様ドメインを特徴とする。ＦｃＲＨ５ａは、８個のＩｇ様ドメイン、それに続く、Ｃ末端における、１３個の独特な優性の極性アミノ酸を有する、７５９個のアミノ酸の分泌性糖タンパク質を表す。ＦｃＲＨ５ｂは、アミノ酸残基５６０からＦｃＲＨ５ａとは異なり、その疎水性がＧＰＩアンカーを介した原形質膜に対するドッキングと適合する、３２個の追加残基の短いストレッチに延びている。ＦｃＲＨ５ｃは最も長いアイソフォームであり、その配列は、アミノ酸７４６からＦｃＲＨ５ａとは異なる。ＦｃＲＨ５ｃは、９個の細胞外Ｉｇ型ドメインを有し、８個の潜在的なＮ−結合グリコシル化部位を有し、ＩＴＩＭコンセンサスとともに３つのコンセンサスＳＨ２結合モチーフを有する２３個のアミノ酸膜貫通、及び１０４個のアミノ酸の細胞質内ドメインを有する、９７７個のアミノ酸の１型膜貫通糖タンパク質をコードしている。
ＦｃＲＨ遺伝子は、古典的なＦｃＲ遺伝子の中で、染色体１のｌｑ２１−２３領域において、ＦｃγＲI、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ及びＦｃeＲＩ一緒にクラスター化されている。この領域は、造血細胞腫瘍、特に多発性骨髄腫において悪性表現型と関連のある、最も高頻度の二次染色体異常の１つを含んでいる（Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ Ｑ．ら．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００１）１４：２７７−８９）。ＦｃＲＨ５は、プレＢ細胞と同じくらいに早く開始し、Ｂ細胞系列でのみ発現するが、成熟Ｂ細胞段階までは完全な発現には達しない。知られている他のほとんどのＢ細胞特異的表面タンパク質（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ１９、及びＣＤ２２）とは異なり、ＦｃＲＨ５は形質細胞中で発現し続けるが、他のＢ細胞特異的マーカーは減少する（Ｐｏｌｓｏｎ ＡＧら，Ｉｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ （２００６） １８：１３６３−７３）。更に、オリゴヌクレオチドアレイにより検出されるように、ＦｃＲＨ５のｍＲＮＡは、１ｑ２１異常を有する多発性骨髄腫株化細胞で過剰発現する（Ｉｎｏｕｅ Ｊ．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ（２００４）１６５：７１−８１）。発現パターンは、ＦｃＲＨ５が、多発性骨髄腫の治療のための抗体をベースとする治療の標的であり得ることが示される。多発性骨髄腫は、骨格損傷、腎不全、貧血及び高カルシウム血症を特徴とする形質細胞の悪性腫瘍である。これは、現在の治療法によっては本質的に不治である。多発性骨髄腫の現在の薬物療法としては、プロテオソーム阻害剤であるボルテゾミブ（ベルケイド）、免疫調節剤であるレナリドマイド（レブラミド）、及びステロイドであるデキサメタゾンの併用が挙げられる。
ＦｃＲＨ５ｃ特異的抗体をベースとする治療法及び検出法は、それが標的細胞である膜関連ＦｃＲＨ５を、ＦｃＲＨ５の可溶性アイソフォーム及び膜アイソフォームの両方を認識する抗体よりも特異的に認識するので、特に有効である。しかし、ＦｃＲＨ５のドメインの最後のＩｇ様ドメイン（Ｉｇ様ドメイン９）のみが３つの主要なアイソフォームを区別する独特な細胞外領域であり、ＦｃＲＨ５内においてＩｇ様ドメイン間にかなりの相同性が存在する。更に、最後のＩｇ様ドメインは、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及びＦｃＲＨ５間で高度に保存されている。ＦｃＲＨ５を特異的に標的とするいかなる抗体をベースとする治療法も、不利な非特異的な効果を回避するために、他のＦｃＲＨとの交差反応性は最小でなければならない（例えば、ＦｃＲＨ３は正常ＮＫ細胞で発現する）。ＦｃＲＨ５関連がんのようながんの診断及び治療に役立つ薬剤が、当該技術分野で必要とされている。
本明細書においては、二重特異性抗体を含む抗ＦｃＲＨ５抗体、イムノコンジュゲート、及びそれらの使用法が提供される。本明細書においては、ＦｃＲＨ５の細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する、単離された抗ＦｃＲＨ５抗体が提供される。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、Ｉｇ様ドメイン９を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７４３〜８５０を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、 該重鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、 該重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
いくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、該重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号１１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｂ）配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｃ）配列番号１１５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｄ）配列番号１１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｅ）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｇ）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｈ）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｊ）配列番号１２９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｋ）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；ｌ）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列；又は配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、ａ）配列番号１１１のＶＨ配列、及び／又は配列番号１１０のＶＬ配列；ｂ）配列番号１１３のＶＨ配列、及び／又は配列番号１１２のＶＬ配列；ｃ）配列番号１１５のＶＨ配列、及び／又は配列番号１１４のＶＬ配列；ｄ）配列番号１１７のＶＨ配列、及び／又は配列番号１１６のＶＬ配列；ｅ）配列番号１１９のＶＨ配列、及び／又は配列番号１１８のＶＬ配列；ｆ）配列番号１２１のＶＨ配列、及び／又は配列番号１２０のＶＬ配列；ｇ）配列番号１２３のＶＨ配列、及び／又は配列番号１２２のＶＬ配列；ｈ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び／又は配列番号１２４のＶＬ配列；ｉ）配列番号１２７のＶＨ配列、及び／又は配列番号１２６のＶＬ配列；ｊ）配列番号１２９のＶＨ配列、及び／又は配列番号１２８のＶＬ配列；ｋ）配列番号１３１のＶＨ配列、及び／又は配列番号１３０のＶＬ配列；ｌ）配列番号１３３のＶＨ配列、及び／又は配列番号１３２のＶＬ配列；又はｍ）配列番号１３５のＶＨ配列、及び／又は配列番号１３４のＶＬ配列；を含む。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である。抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５に結合する抗体断片である。抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂ抗体である。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は、以下の特徴の１以上を有する。ａ）全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する、ｂ）ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と交差反応しない、ｃ）内在性ＦｃＲＨ５に結合する、ｄ）ＦｃＲＨ５ａと交差反応しない、及びｅ）ＦｃＲＨ５の他のＩｇ様ドメインと交差反応しない。
抗体のいずれかのいくつかの実施形態では、該抗体は二重特異性抗体である。いくつかの実施形態では、二重特異性抗体はＦｃＲＨ５及びＣＤ３に結合する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載された抗体をコードする、単離された核酸が提供される。いくつかの実施形態では、該核酸を含む宿主細胞が提供される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載された抗体を製造する方法が提供される。いくつかの実施形態では、該方法は、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することを含む。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが提供される。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、抗ＦｃＲＨ５抗体及び細胞と、細胞障害薬物とを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５のＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有し、式中、（ａ）Ａｂは本明細書に記載の抗体であり；（ｂ）Ｌはリンカーであり；（ｃ）Ｄは、メイタンシノイド、アウリスタチン、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される薬剤であり；（ｄ）ｐは１〜８の範囲である。いくつかの実施形態では、Ｄはアウリスタチンである。いくつかの実施形態では、Ｄは式ＤＥ
を有し、式中、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、独立してＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、及びＨから選択され、Ｒ９はＨであり、Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである。いくつかの実施形態では、Ｄは、
構造：
を有するＭＭＡＥである。
いくつかの実施形態では、Ｄは式Ａ：
のピロロベンゾジアゼピンであり、式中、点線は、Ｃ１及びＣ２、又はＣ２及びＣ３間の二重結合の任意の存在を示し、Ｒ２は、独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＯＲから選択され、任意で更にジハロから選択され、ここで、ＲＤは、独立してＲ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、Ｒ６及びＲ９は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから選択され、Ｒ７は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから選択され、Ｑは、独立してＯ、Ｓ及びＮＨから選択され、Ｒ１１は、Ｈ若しくはＲであるか、又はＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであり、ここで、Ｍは金属カチオンであり、Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基から選択され、人でＮＲＲ’基に関して、Ｒ及びＲ’が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換されていてもよい４、５、６又は７員環複素環を形成し、Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義され通りであり、Ｒ’’はＣ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香環により中断されていてもよく、Ｘ及びＸ’は、独立してＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から選択される。いくつかのこのような実施形態では、Ｄは
であり、式中ｎは０又は１である。
いくつかの実施形態では、Ｄはネモルビシン誘導体である。いくつかの実施形態では、Ｄは、
から選から選択される構造を有する。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、プロテアーゼにより切断可能なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーは、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）ジペプチド又はフェニルアラニン−ホモリシン（Ｐｈｅ−ｈｏｍｏＬｙｓ）ジペプチドを含む。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、酸に不安定なリンカーを含む。いくつかの実施形態では、リンカーはヒドラゾンを含む。
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、下記から選択される式を有する。
（式中、Ｓはイオウ原子である）
いくつかの実施形態では、ｐは２〜５の範囲である。
いくつかの実施形態では、医薬製剤が提供される。いくつかのそのような実施形態では、医薬製剤はＦｃＲＨ５に結合する抗体、例えば本明細書に記載されるような抗体を含むイムノコンジュゲートを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、医薬製剤は、追加の治療薬を更に含む。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５（例えばＦｃＲＨ５ｃ）陽性のがんを患っている個体を治療する方法が提供される。いくつかのそのような実施形態では、方法は、ＦｃＲＨ５に結合する抗体、及び／又はＦｃＲＨ５二重特異性抗体、例えば、本明細書に記載されるようなものを含むイムノコンジュゲートを含む医薬製剤を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体は、ＦｃＲＨ５結合アーム及びＣＤ３結合アームを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異性領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性のがんは、Ｂ細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性のがんは形質細胞腫瘍である。いくつかの実施形態では、形質細胞腫瘍は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、方法は、追加の治療薬を個体に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５（例えばＦｃＲＨ５ｃ）陽性細胞の増殖を阻害する方法が提供される。いくつかの実施形態では、前記方法は、細胞表面上で抗体がＦｃＲＨ５に結合するのを許容する条件下で、ＦｃＲＨ５に結合する抗体、及び／又はＦｃＲＨ５二重特異性抗体を含むイムノコンジュゲートを、細胞にさらすことを含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体は、ＦｃＲＨ５結合アーム及びＣＤ３結合アームを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異性領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は、本明細書に記載される抗体である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性のがんは、Ｂ細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性のがんは形質細胞腫瘍である。いくつかの実施形態では、形質細胞腫瘍は多発性骨髄腫である。いくつかの実施形態では、方法は、追加の治療薬を個体に投与することを含む。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は標識に結合している。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異性領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は、本明細書に記載される抗体である。いくつかの実施形態では、標識はポジトロン放射体である。いくつかの実施形態では、ポジトロン放射体は８９Ｚｒである。
いくつかの実施形態では、生物試料中のヒトＦｃＲＨ５を検出する方法が提供される。いくつかの実施形態では、方法は、生物学的試料を抗ＦｃＲＨ５抗体と、抗ＦｃＲＨ５抗体が天然のヒトＦｃＲＨ５に結合する条件下で接触させ、前記生物試料中で、抗ＦｃＲＨ５抗体と天然のヒトＦｃＲＨ５との間に複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異性領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は、本明細書に記載される抗体である。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性のがんを検出する方法が提供される。いくつかのそのような実施形態では、方法は、（ｉ）標識された抗ＦｃＲＨ５抗体を、ＦｃＲＨ５陽性を患っているか、疑わしい被験者に投与すること、及び（ｉｉ）被験者中の標識された抗ＦｃＲＨ５抗体を検出することを含み、標識された抗ＦｃＲＨ５抗体の検出が、被験者中のＦｃＲＨ５−陽性がんを示す。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異性領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は、本明細書に記載される抗体である。
ＦｃＲＨ５の３種の主要なアイソフォームであるＦｃＲＨ５ａ（ＩＲＴＡ２ａ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−３）、ＦｃＲＨ５ｂ（ＩＲＴＡ２ｂ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−４）、及びＦｃＲＨ５ｃ（ＩＲＴＡ２ｃ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−１）を示す。Ｉｇ様ドメインを番号付けし、ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ６９ＲＤ９−１（配列番号１）のアミノ酸配列、Ｉｇ様ドメイン１（ａａ（アミノ酸） ２３〜１００）、Ｉｇ様ドメイン２（ａａ１０５〜１８５）、ＩＧ様ドメイン３（ａａ１８８〜２７１）、ＩＧ様ドメイン４（２８７〜３７３）、ＩＧ様ドメイン５（ａａ３８０〜４６６）、ＩＧ様ドメイン６（ａａ４９０〜５５５）、ＩＧ様ドメイン７（ａａ５６８〜６５２）、ＩＧ様ドメイン８（ａａ６５８〜７３１）、及びＩＧ様ドメイン９（ａａ７５４〜８３５）に対応させた。 ＦｃＲＨ５（配列番号１３６）の一部、及び ＦｃＲＨ５のアミノ酸７３５〜９７７（配列番号２）の構造及び相同性を示す。 （Ａ）ヒトＦｃＲＨ５及び（Ｂ）カニクイザルＦｃＲＨ５でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合を示す。 （Ａ）ヒトＦｃＲＨ５及び（Ｂ）カニクイザルＦｃＲＨ５でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした、（Ａ）ＥＪＭ細胞又は（Ｂ）ＯＰＭ２細胞に対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び内生的にＦｃＲＨ５を発現するＭＯＬＰ２細胞に対する、サブクローンの上清（Ｃ）５Ａ１０．１、（Ｄ）５Ｆ１．１、（Ｅ）３Ｇ７．１、及び（Ｆ）６Ｄ２．２の結合を示す。 （Ａ）野生型、又は（Ｂ）４つの膜近位細胞外ドメインを欠失する変異体ＦｃＲＨ５でトランスフェクトした２９３細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローンの上清の結合を示す。 （Ａ）野生型、又は（Ｂ）４つの膜近位細胞外ドメインを欠失する変異体ＦｃＲＨ５でトランスフェクトした２９３細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローンの上清の結合を示す。 （Ａ）ＥＬＩＳＡによるＦｃＲＨ５ａに対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び（Ｂ）ヒトＢ細胞に対するサブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＥＬＩＳＡによるＦｃＲＨ５ａに対するＦｃＲＨ５抗体の結合、及び（Ｂ）ヒトＢ細胞に対するサブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ１、（Ｂ）ＦｃＲＨ２、（Ｃ）ＦｃＲＨ３、又は（Ｄ）ＦｃＲＨ４でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ１、（Ｂ）ＦｃＲＨ２、（Ｃ）ＦｃＲＨ３、又は（Ｄ）ＦｃＲＨ４でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ１、（Ｂ）ＦｃＲＨ２、（Ｃ）ＦｃＲＨ３、又は（Ｄ）ＦｃＲＨ４でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ１、（Ｂ）ＦｃＲＨ２、（Ｃ）ＦｃＲＨ３、又は（Ｄ）ＦｃＲＨ４でトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対するＦｃＲＨ５サブクローン上清の結合を示す。 ＮＫ細胞に対するＦｃＲＨ５抗体サブクローン上清の結合を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、ＦｃＲＨ５−ＴＤＢ（クローン１０Ａ８）、及び（Ｂ）ＨＥＲ２−ＴＤＢの殺活性、並びに（Ｃ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、及び（Ｄ）ＦｃＲＨ５においてトランスフェクトされた２９３個の細胞ＦｃＲＨ５−ＴＤＢの殺活性を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、ＦｃＲＨ５−ＴＤＢ（クローン１０Ａ８）、及び（Ｂ）ＨＥＲ２−ＴＤＢの殺活性、並びに（Ｃ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、及び（Ｄ）ＦｃＲＨ５においてトランスフェクトされた２９３個の細胞ＦｃＲＨ５−ＴＤＢの殺活性を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、ＦｃＲＨ５−ＴＤＢ（クローン１０Ａ８）、及び（Ｂ）ＨＥＲ２−ＴＤＢの殺活性、並びに（Ｃ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、及び（Ｄ）ＦｃＲＨ５においてトランスフェクトされた２９３個の細胞ＦｃＲＨ５−ＴＤＢの殺活性を示す。 （Ａ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、ＦｃＲＨ５−ＴＤＢ（クローン１０Ａ８）、及び（Ｂ）ＨＥＲ２−ＴＤＢの殺活性、並びに（Ｃ）ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ、及び（Ｄ）ＦｃＲＨ５においてトランスフェクトされた２９３個の細胞ＦｃＲＨ５−ＴＤＢの殺活性を示す。 ＭＯＬＰ−２細胞における、ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ及びＦｃＲＨ５−ＴＤＢの（Ａ）殺活性及び（Ｂ）Ｔ細胞活性を示す。 ＭＯＬＰ−２細胞における、ＦｃＲＨ５二重特異性Ｆａｂ及びＦｃＲＨ５−ＴＤＢの（Ａ）殺活性及び（Ｂ）Ｔ細胞活性を示す。
Ｉ．定義
本明細書で用いられる場合、「ＦｃＲＨ５」という用語は、細胞内のＦｃＲＨ５前駆体タンパク質のプロセシングに由来する、あらゆる天然の成熟ＦｃＲＨ５を意味する。この用語には、別様に明記しない限り、霊長類（例えば、ヒト及びカニクイザル）及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）のようなほ乳動物を含む、あらゆる脊椎動物源からのＦｃＲＨ５が含まれる。この用語には、ＦｃＲＨ５の天然の変異体、例えば、スプライス変異体又は対立遺伝子多型も含まれる。いくつかの実施形態では、ヒトＦｃＲＨ５のアミノ酸配列は、ＦｃＲＨ５ａ（ＩＲＴＡ２ａ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−３；７５９ａａ）、ＦｃＲＨ５ｂ（ＩＲＴＡ２ｂ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−４；５９２ａａ）、ＦｃＲＨ５ｃ（ＩＲＴＡ２ｃ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−１；９７７ａａ（配列番号１）、ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−２（１２４ ａａ）、及び／又はＦｃＲＨ５ｄ（ＩＲＴＡ２ｄ；ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−５；１５２ａａ）である。
「ＦｃＲＨ５のグリコシル化形態」という用語は、炭水化物残基の付加により翻訳後に修飾されている、ＦｃＲＨ５の天然形態を意味する。
参照ポリペプチド配列に関して「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」とは、配列を整列させ、最大のパーセント配列同一性を得るために必要ならば間隙を導入し、如何なる同類置換も配列同一性の一部と考えないとした後の、参照ポリペプチド配列のアミノ酸残基と同一である候補配列中のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定する目的のためのアラインメントは、当業者の技量の範囲にある種々の方法、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、又はＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウエアのような公に入手可能なコンピュータソフトウエアを使用することにより達成可能である。当業者であれば、比較される配列の完全長に対して最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを行うための適切なパラメータを決定することができる。しかし、本明細書での目的のためには、％アミノ酸配列同一性値は、配列比較コンピュータプログラムであるＡＬＩＧＮ−２を使用して生成される。ＡＬＩＧＮ−２配列比較コンピュータプログラムはジェネンテック社によって作成され、下記の表１に示したソースコードは米国著作権庁，ワシントンＤ．Ｃ．，２０５５９に使用者用書類とともに提出され、米国著作権登録番号ＴＸＵ５１００８７で登録されている。ＡＬＩＧＮ−２プログラムはカリフォルニア州サウスサンフランシスコのジェネンテック社から公的に入手可能であり、ソースコードからコンパイルしてもよい。ＡＬＩＧＮ−２プログラムは、ＵＮＩＸオペレーティングシステム（デジタルＵＮＩＸ Ｖ４．０Ｄを含む）での使用のためにコンパイルされるべきである。全ての配列比較パラメータは、ＡＬＩＧＮ−２プログラムによって設定され変動しない。
アミノ酸配列比較にＡＬＩＧＮ−２が用いられる状況では、所与のアミノ酸配列Ａの、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する％アミノ酸配列同一性（又は、所与のアミノ酸配列Ｂへの、それとの、又はそれに対する或る程度の％アミノ酸配列同一性を有する、又は含む所与のアミノ酸配列Ａと言うこともできる）は次のように計算される：
分率Ｘ／Ｙの１００倍
ここで、Ｘは配列アラインメントプログラムＡＬＩＧＮ−２のＡ及びＢのプログラムアラインメントによって同一であると一致したスコアのアミノ酸残基の数であり、ＹはＢの全アミノ酸残基数である。アミノ酸配列Ａの長さがアミノ酸配列Ｂの長さと異なる場合、ＡのＢに対する％アミノ酸配列同一性は、ＢのＡに対する％アミノ酸配列同一性とは異なると認識されるであろう。特に断らない限りは、ここで使用される全ての％アミノ酸配列同一性値は、ＡＬＩＧＮ−２コンピュータプログラムを用いて直ぐ上の段落に記載されるようにして得られる。
「抗ＦｃＲＨ５抗体」及び「ＦｃＲＨ５に結合する抗体」という用語は、抗体が、ＦｃＲＨ５を標的とすることにおいて、診断及び／又は治療薬として有用であるように、十分な親和力でＦｃＲＨ５に結合することができる抗体を意味する。一実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体の、非ＦｃＲＨ５タンパク質への結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）により測定してＦｃＲＨ５に対する抗体の結合の約１０％未満である。ある特定の実施形態では、ＦｃＲＨ５に結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、２ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、又は０．００１ｎＭ以下（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）の解離定数を有する。ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、異なる種からＦｃＲＨ５間で保存されているＦｃＲＨ５のエピトープに結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
本明細書で用いられる場合、「抗体」という用語は最も広い意味で用いられ、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、及び所望の抗原結合活性を有する限り、抗体断片を含むが、これらに限定されない、種々の抗体構造を包含する。
「抗体断片」は、無傷の抗体の一部を含み、無傷抗体が結合する抗原に結合する、無傷抗体以外の分子を意味する。抗体断片の例としては、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられるが、これらに限定されない。
「エピトープ」という用語は、抗体が結合する、抗原分子の特定の部位を意味する。
参照抗体と「同じエピトープに結合する抗体」は、競合アッセイにおいて、参照抗体の抗原への結合を５０％以上阻止する抗体を指し、逆に言えば、その抗原への抗体の結合を参照抗体が５０％以上阻止する。典型的な拮抗アッセイが本明細書において提供される。
本明細書で用いられる場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に同種の抗体の集団から得られる抗体を意味する、すなわち、自然に発生する変異を含み、又はモノクローナル抗体の調製の製造中に起こる可能な変異体抗体を除き、集団を含む個々の抗体が同一であり、及び／又は同じエピトープに結合し、このような変異体は通常は微量存在する。通常は異なる決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは異なり、モノクローナル抗体調製物の各モノクローナル抗体は抗原の１つの決定基に対するものである。従って「モノクローナル」という修飾語は、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするものと解釈すべきではない。例えば、例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ法、組換えＤＮＡ法、ファージディスプレイ法、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有するトランスジェニック動物を利用する方法を含むがこれらに限定されない種々の技術により製造することができる。
「完全長抗体」、「無傷の抗体」、及び「全抗体」という本後は、本明細書では互換的に使用されて、天然の抗体構造に実質的に類似する構造を有し、又は本明細書で定義されるＦｃ領域を含む重鎖を有する抗体を意味する。
「ネイキッド抗体」は、異種部分（例えば細胞障害性部分）又は放射ラベルに結合していない抗体である。裸の抗体は、医薬製剤中に存在させてもよい。
「天然抗体」は、様々な構造を有する、天然の免役グロブリン分子を意味する。例えば、天然ＩｇＧ抗体は、ジスルフィド結合している２つの同一の軽鎖及び２つの同一の重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端まで、各重鎖は、可変重ドメイン又は重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）、続いて３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端まで、各軽鎖は、可変軽ドメイン又は軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）、続いて定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。抗体の軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つの型うちの１つが割り当てられ得る。
「キメラ」抗体という用語は、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の源又は種に由来する一方で、重鎖及び／又は軽鎖の残りの部分が異なる源又は種に由来する、抗体を意味する。
「ヒト抗体」は、ヒト若しくはヒト細胞により産生される、又はヒト抗体レパートリー若しくは他のヒト抗体コード配列を利用する非ヒト供給源由来の抗体のアミノ酸配列に一致するアミノ酸配列を有する抗体である。ヒト抗体のこの定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を特に除外する。
「ヒト化」抗体は、非ヒトＨＶＲ由来のアミノ酸残基及びヒトＦＲ由来のアミノ酸残基を含むキメラ抗体を意味する。ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は、ＨＶＲ（例えば、ＣＤＲ）の全て又は実質的に全てが非ヒト抗体のＨＶＲに一致しており、ＦＲの全て又は実質的に全てがヒト抗体のＦＲに一致している少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含む。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト抗体由来の抗体定常領域の少なくとも一部を含んでいてもよい。「ヒト化型の」抗体、例えば、非ヒト抗体とはヒト化を受けた抗体のことである。
抗体の「クラス」は、定常領域又はその重鎖により所有される定常領域の種類のことである。抗体には５つの主要クラスＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭがあり、これらの抗体のいくつかは更にサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２に分けられる。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、及びμと呼ばれる。
本明細書における「Ｆｃ領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部分を含む、免役グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するように使用される。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及び変異形Ｆｃ領域を含む。一実施形態において、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。しかし、Ｆｃ領域のＣ末端リジン（Ｌｙｓ４４７）は、存在することもあり、存在しないこともある。本明細書で別途明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基の付番は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵ付番系に従う。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗体を抗原に結合することに関与する、抗体重鎖又は軽鎖のドメインを意味する。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ、ＶＨ及びＶＬ）は一般に、同様の構造を有し、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）及び３つの超可変領域（ＨＶＲ）を含む（Ｋｉｎｄｔら，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ９１（２００７）を参照のこと）。抗原結合特異性を付与するためには、単一のＶＨ又はＶＬドメインで十分であり得る。更に、抗原に結合する抗体からのＶＨ又はＶＬドメインを使用して、それぞれ、相補的ＶＬ又はＶＨドメインのライブラリーをスクリーニングして、特定の抗原に結合する抗体を単離してもよい。例えば、Ｐｏｒｔｏｌａｎｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：８８０−８８７（１９９３）、Ｃｌａｒｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）を参照のこと。
「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、超可変領域（ＨＶＲ）残基以外の可変ドメイン残基を意味する。可変ドメインのＦＲは、一般に４つのＦＲドメイン、ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＨＶＲ及びＦＲ配列は、一般にＶＨ（又はＶＬ）において次の配列で現れる：ＦＲ１−Ｈ１（Ｌ１）−ＦＲ２−Ｈ２（Ｌ２）−ＦＲ３−Ｈ３（Ｌ３）−ＦＲ４。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免役グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において最も一般的に生じるアミノ酸残基を代表する、フレームワークである。一般に、ヒト免役グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列の下位集団から行われる。一般に、配列の下位集団は、Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１−３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１），ｖｏｌｓ．１−３にあるような下位集団である。一実施形態において、ＶＬについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団カッパＩである。一実施形態において、ＶＨについて、下位集団は、上記のＫａｂａｔらにあるような下位集団ＩＩＩである。
本明細書で用いられる場合、「超可変領域」又は「ＨＶＲ」という用語は、配列が高度に変化し、及び／又は構造的に規定されたループ（「超可変ループ」）を形成する、抗体可変ドメインの領域の各々を意味する。一般に、天然４本鎖抗体は、６つのＨＶＲを含み、このうち３つがＶＨ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）にあり、３つがＶＬ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）にある。ＨＶＲは一般に、超可変ループからの、及び／又は「相補性決定領域」（ＣＤＲ）からのアミノ酸残基を含み、このうち後者が、配列可変性が最も高く、及び／又は抗原認識に関与する。例となる超可変ループは、アミノ酸残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）、９１〜９６（Ｌ３）、２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）、及び９６〜１０１（Ｈ３）において生じる。（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７））。例となるＣＤＲ（ＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、ＣＤＲ−Ｌ３、ＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の２４〜３４、Ｌ２の５０〜５６、Ｌ３の８９〜９７、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜６５、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））。ＶＨにおけるＣＤＲ１を除いて、ＣＤＲは一般に、超可変ループを形成するアミノ酸残基を含む。ＣＤＲはまた、抗原に接触する残基である、「特異性決定残基」又は「ＳＤＲ」も含む。ＳＤＲは、短縮型（ａｂｂｒｅｖｉａｔｅｄ）ＣＤＲ、又はａ−ＣＤＲと呼ばれるＣＤＲの領域内に含有される。例となるａ−ＣＤＲ（ａ−ＣＤＲ−Ｌ１、ａ−ＣＤＲ−Ｌ２、ａ−ＣＤＲ−Ｌ３、ａ−ＣＤＲ−Ｈ１、ａ−ＣＤＲ−Ｈ２、及びａ−ＣＤＲ−Ｈ３）は、アミノ酸残基Ｌ１の３１〜３４、Ｌ２の５０〜５５、Ｌ３の８９〜９６、Ｈ１の３１〜３５Ｂ、Ｈ２の５０〜５８、及びＨ３の９５〜１０２において生じる。（Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）を参照のこと）。別途指定されない限り、可変ドメインにおけるＨＶＲ残基及び他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、本明細書において上記のＫａｂａｔらに従って番号付けされる。
本明細書における目的のために、「アクセプターヒトフレームワーク」は、以下に記載される、ヒト免役グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワークに由来する、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）フレームワーク又は重鎖可変ドメイン（ＶＨ）フレームワークのアミノ酸配列を含むフレームワークである。ヒト免役グロブリンフレームワーク又はヒトコンセンサスフレームワーク「に由来する」アクセプターヒトフレームワークは、その同じアミノ酸配列を含んでいてもよく、又はそれは、アミノ酸配列変化を含有し得る。いくつかの実施形態において、アミノ酸変化の数は、１０以下、９以下、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下である。いくつかの実施形態では、ＶＬアクセプターヒトフレームワークは、配列において、ＶＬヒト免役グロブリンフレームワーク配列又はヒトコンセンサスフレームワーク配列と同一である
「親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、総計の非共有性相互作用の強度を意味する。別様に指定されない限り、本明細書で用いられる場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、本来の結合親和性を意味する。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（Ｋｄ）によって表すことができる。親和性は、本明細書に記載される方法を含む、当該技術分野で公知の一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な例示説明及び例となる実施形態が、以下に記載される。
「親和性成熟」抗体は、変化を有しない親抗体と比較して、１以上の超可変領域（ＨＶＲ）において１以上の変化を有し、この変化が抗原に対する抗体の親和性の改善をもたらす、抗体を意味する。
「イムノコンジュゲート」は、細胞傷害性薬剤を含むが、これらに限定されない１以上の異種性分子（複数可）に結合する抗体である。
本明細書で用いられる場合、「細胞傷害性薬剤」という用語は、細胞機能を阻害若しくは阻止し、及び／又は細胞死若しくは破壊を引き起こす物質を意味する。細胞傷害性薬剤としては、放射性同位体（例えば、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体）；化学療法剤若しくは化学療法薬（例えば、メトトレキサート、アドリアマイシン、ビンカアルカロイド（ビンクリスチン、ビンブラスチン、エトポシド）、ドキソルビシン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、ダウノルビシン、又は他のインターカレート剤）；増殖阻害剤；核酸分解酵素等の酵素及びそれらの断片；抗生物質；細菌、真菌、植物、又は動物起源の小分子毒素又は酵素活性毒素（それらの断片及び／又は変異体を含む）等の毒素；並びに以下に記載される種々の抗腫瘍又は抗がん薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」は、抗体アイソタイプにより異なる、抗体のＦｃ領域に起因し得る生物活性を意味する。抗体エフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；並びにＢ細胞活性化が挙げられる。
「単離抗体」は、その自然環境の構成成分から分離されている抗体である。いくつかの実施形態では、抗体が、例えば、電気泳動（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、等電点電気泳動（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）で決定して、９５％又は９９％超の純度に精製される。抗体純度の評価法の考察については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎら，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ８４８：７９−８７（２００７）を参照のこと。
「単離核酸」は、その天然環境の構成成分から分離された核酸分子を意味する。単離核酸としては、核酸分子を普通は含有する細胞内に含有される核酸分子が挙げられるが、その核酸分子は、染色体外に、又はその天然の染色体上の場所とは異なる染色体上の場所に存在する。
「抗ＦｃＲＨ５抗体をコードする単離核酸」は、抗体重鎖及び軽鎖（又はそれらの断片）をコードする１以上の核酸分子を指し、それには単一のベクター又は別個のベクターにおけるかかる核酸分子（複数可）、及び、宿主細胞内の１以上の場所に存在するかかる核酸分子（複数可）が含まれる。
本明細書で用いられる場合、「ベクター」という用語は、連結している別の核酸を増殖することが可能な核酸分子を意味する。この用語には、自己複製核酸構造としてのベクター、及び導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターが含まれる。ある特定のベクターは、作動的に連結された核酸の発現を導くことが可能である。かかるベクターは、本明細書で「発現ベクター」と称される。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養物」という用語は交換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、かかる細胞の子孫を含む。宿主細胞には、初代形質転換細胞及び継代の数に関わらずそれに由来する子孫を含む、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれる。子孫は、核酸含量において親細胞と完全に同一でない場合があり、突然変異を含有し得る。元々形質転換された細胞においてスクリーニング又は選択されたものと同じ機能又は生物活性を有する突然変異体子孫が、本明細書に含まれる。
本明細書で用いられる場合、「治療」（及び「治療する」又は「治療すること」等のその文法上の変形形態）は、治療される個体の自然過程を変えることを目的とした臨床介入を指し、予防のために、又は臨床病理過程の間に行うことができる。治療の望ましい効果としては、疾患の発生又は再発の予防、症状の緩和、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低減、疾患状態の寛解又は一時緩和、及び緩解又は予後の改善が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態においては、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延するために、又は疾患の進行を緩徐にするために使用される。
「がん」及び「がん性」という用語は、無秩序な細胞成長／増殖によって典型的に特徴付けられる、哺乳動物における生理的状態を意味するか、又は表す。がんの例としては、がん腫、リンパ腫（例えば、ホジキン及び非ホジキンリンパ腫）、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるが、これらに限定されない。このようながんのより特定の例としては、扁平上皮細胞がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がん、肺の腺がん、肺の扁平上皮がん、腹膜のがん、肝細胞がん、消化器がん、膵臓がん、神経膠腫、子宮頚がん、卵巣がん、肝臓がん、膀胱がん、肝細胞腫、乳がん、結腸がん、結腸直腸がん、小腸がん、子宮内膜又は子宮がん腫、唾液腺がん、腎臓がん、肝臓がん、前立腺がん、外陰部がん、甲状腺がん、肝臓がん、白血病及び他のリンパ増殖性障害、並びに種々の種類の頭頸部がんが挙げられる。
本明細書における「Ｂ細胞悪性腫瘍」には、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）（低悪性度／濾胞性ＮＨＬ、小リンパ球性（ＳＬ）ＮＨＬ、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、中悪性度びまん性ＮＨＬ、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫、及びワルデンシュトレーム型マクログロブリン血症、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、リンパ球優位型ホジキン病（ＬＰＨＤ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、再発性緩慢性ＮＨＬ及びリツキシマブ不応性緩慢性ＮＨＬを含む緩慢性ＮＨＬを含む）、白血病（急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、有毛細胞白血病、慢性骨髄芽球性白血病を含む）、マントル細胞リンパ腫、並びに他の血液系悪性腫瘍が含まれる。かかる悪性腫瘍は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）等のＢ細胞表面マーカーに対して向けられる抗体で治療され得る。かかる疾患は、本明細書において、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）等のＢ細胞表面マーカーに対して向けられる抗体の投与によって治療されることが企図され、複合されていない（ネイキッド）抗体又は本明細書に開示される細胞傷害性薬剤に複合される抗体の投与を含む。かかる疾患はまた、本明細書において、本発明の抗ＦｃＲＨ５抗体（ＦｃＲＨ５二重特異性抗体を含む）又は抗ＦｃＲＨ５抗体薬物複合体を、同時に又は順次に投与される別の抗体又は抗体薬物複合体、他の細胞傷害性薬剤、放射線又は他の治療と組み合わせて含む、併用療法によって治療されることが企図される。
本明細書で用いられる場合「非ホジキンリンパ腫」又は「ＮＨＬ」という用語は、ホジキンリンパ腫以外のリンパ系のがんを意味する。ホジキンリンパ腫は一般に、ホジキンリンパ腫におけるリード−シュテルンベルク細胞の存在、及び非ホジキンリンパ腫における該細胞の不在によって、非ホジキンリンパ腫から識別され得る。本明細書で用いられるこの用語に包含される非ホジキンリンパ腫の例としては、当業者（例えば、腫瘍学者又は）によって、Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ（第３版），Ａ．Ｖｉｃｔｏｒ Ｈｏｆｆｂｒａｎｄ及びＪｏｈｎ Ｅ．Ｐｅｔｔｉｔ（編）（Ｈａｒｃｏｕｒｔ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ Ｌｔｄ．，２０００）に記載されるＲｅｖｉｓｅｄ Ｅｕｒｏｐｅａｎ−Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｌｙｍｐｈｏｍａ（ＲＥＡＬ）スキーム等の、当該技術分野で既知の分類スキームに従って、そのように特定されるであろうもののいずれもが挙げられる。特に、図１１．５７、１１．５８、及び１１．５９における一覧を参照のこと。より具体的な例としては、再発性又は難治性ＮＨＬ、フロントライン低悪性度ＮＨＬ、第ＩＩＩ／ＩＶ病期ＮＨＬ、化学療法耐性ＮＨＬ、前駆Ｂリンパ芽球性白血病及び／又はリンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病及び／又は前リンパ球性白血病及び／又は小リンパ球性リンパ腫、Ｂ細胞前リンパ球性リンパ腫、免疫細胞腫及び／又はリンパ形質細胞性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、辺縁帯Ｂ細胞リンパ腫、脾臓辺縁帯リンパ腫、結節外辺縁帯−ＭＡＬＴリンパ腫、結節性辺縁帯リンパ腫、有毛細胞白血病、形質細胞腫及び／又は形質細胞骨髄腫、低悪性度／濾胞性リンパ腫、中悪性度／濾胞性ＮＨＬ、マントル細胞リンパ腫、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）、中悪性度びまん性ＮＨＬ、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、侵攻性ＮＨＬ（侵攻性フロントラインＮＨＬ及び侵攻性再発性ＮＨＬを含む）、自家幹細胞移植後に再発する又はそれに対して不応性のＮＨＬ、原発性縦隔大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、原発性滲出性リンパ腫、高悪性度免疫芽球性ＮＨＬ、高悪性度リンパ芽球性ＮＨＬ、高悪性度小型非切れ込み核細胞性ＮＨＬ、巨大腫瘤病変ＮＨＬ、バーキットリンパ腫、前駆体（末梢）大顆粒リンパ球性白血病、菌状息肉腫及び／又はセザリー症候群、皮膚（ｓｋｉｎ）（皮膚（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ））リンパ腫、未分化大細胞型リンパ腫、血管中心性リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
形質細胞障害は、形質細胞クローンの非制御分裂又は増殖に起因する。形質細胞は、活性化Ｂリンパ球（すなわち、Ｂ細胞）から生じる。各Ｂ細胞は、Ｂ細胞受容体として公知であり、外来物質、すなわち抗原に特異的なその細胞表面に並べられる独自の受容体を産生する。Ｂ細胞受容体がその同種抗原に結合すると、受容体を発現している細胞は活性化されて細胞周期に再び入り、それ自体の多数のクローンコピーを産生する。クローンは、主に骨髄中に存在し、抗体として血流中に放出されるＢ細胞受容体のコピーを産生するよう特殊化される形質細胞に成熟する。形質細胞障害では、形質細胞又は親Ｂ細胞は遺伝子損害を蒙って、細胞の分裂及び／又は活性の抑制、あるいはそれに関する正常な制御に対する非感受性を生じる。このような細胞に由来する娘形質細胞は、それらが抑制なく分裂し、及び／又は過剰量の同一免疫グロブリン（抗体）を生成し得るという点で悪性である。しばしば、産生される免疫グロブリンは不完全であり、あるいは血清、組織又は器官（特に腎臓）中でのタンパク質（具体的障害によって、モノクローナルタンパク質、Ｍタンパク質、異常タンパク質又はアミロイドタンパク質としても知られている）の蓄積を引き起こして、器官の機能障害及び／又は不全をもたらし得る。形質細胞障害としては、意義不明のモノクローナルガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）、多発性骨髄腫（ＭＭ）、マクログロブリン血症、重鎖病及び全身性軽鎖アミロイドーシス（ＡＬ）が挙げられ、これらはクローンの増殖性、骨髄関与の程度、並びに発現されたＭタンパク質の型に基づいて識別される。さらなる形質細胞障害は、孤立性形質細胞腫、骨髄外形質細胞腫、多発性孤立性形質細胞腫、形質細胞白血病、ワルデンシュトレーム・マクログロブリン血症、Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、Ｂ細胞慢性リンパ球性白血病である。
「ＦｃＲＨ５陽性がん」という用語は、表面にＦｃＲＨ５を発現する細胞を含むがんを意味する。細胞がその表面でＦｃＲＨ５を発現しているかどうかを判定するために、ＦｃＲＨ５ ｍＲＮＡの発現が細胞表面におけるＦｃＲＨ５の発現と関連することを考慮する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５ ｍＲＮＡの発現は、インサイチューハイブリダイゼーション及びＲＴ−ＰＣＲ（定量的ＲＴ−ＰＣＲを含む）から選択される方法により判定される。また、細胞表面におけるＦｃＲＨ５の発現は、例えば、免疫組織学化学的方法、ＦＡＣＳ等の方法においてＦｃＲＨ５に対する抗体を用いて判定することができる。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５は、ＦｃＲＨ５ａ、ＦｃＲＨ５ｂ、ＦｃＲＨ５ｃ、ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−２、及び／又はＦｃＲ５ｄのうちの１以上である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はＦｃＲＨ５ｃである。
「ＦｃＲＨ５陽性細胞」という用語は、表面にＦｃＲＨ５を発現する細胞を意味する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５は、ＦｃＲＨ５ａ、ＦｃＲＨ５ｂ、ＦｃＲＨ５ｃ、ＵｎｉＰｒｏｔ識別名Ｑ９６ＲＤ９−２、及び／又はＦｃＲ５ｄのうちの１以上である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はＦｃＲＨ５ｃである。
薬剤、例えば、医薬製剤の「有効量」は、必要な複数回投薬量で一定期間にわたる、所望の治療的又は予防的結果を達成するために有効な量を意味する。
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ、及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト、及びサル等の非ヒト霊長類）、ウサギ、及び齧歯類（例えば、マウス及びラット）が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態においては、個体又は対象はヒトである。
「添付文書」という用語は、治療薬の商用のパッケージに通常含まれる指示書であって、そのような治療薬の適応症、使用法、投薬量、投与、併用療法、禁忌症についての情報、及び／又はその使用に関する警告を含むものを意味するように使用される。
「医薬製剤」という用語は、中に含有される活性成分の生物活性が有効になるような形態であり、製剤が投与されるであろう対象にとって許容できないほど有毒である追加の構成成分を何ら含有していない、調製物を意味する。
「薬学的に許容される担体」は、対象にとって無毒である、活性成分以外の医薬製剤中の成分を意味する。薬学的に許容される担体としては、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキル」は、直鎖（ｎｏｒｍａｌ）、第二級、第三級、又は環状炭素原子を含む、Ｃ１−Ｃ１８炭化水素である。例は、メチル（Ｍｅ、−ＣＨ３）、エチル（Ｅｔ、−ＣＨ２ＣＨ３）、１−プロピル（ｎ−Ｐｒ、ｎ−プロピル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−プロピル（ｉ−Ｐｒ、ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−Ｂｕ、ｎ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−Ｂｕ、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−Ｂｕ、ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−Ｂｕ、ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３である。本明細書で用いられる場合、「Ｃ１−Ｃ８アルキル」という用語は、１〜８個の炭素原子を有する、直鎖又は分岐鎖の飽和又は不飽和炭化水素を意味する。代表的な「Ｃ１−Ｃ８アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、−ｎ−ヘキシル、−ｎ−ヘプチル、−ｎ−オクチル、−ｎ−ノニル及びｎ−デシルが挙げられるが、これらに限定されず、一方、分岐鎖Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、２−メチルブチルが含まれるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１−Ｃ８アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニル、−３−メチル−１ブチニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ８アルキル基は、置換されていないか、又はＣ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及びＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
本明細書で用いられる場合、「Ｃ１−Ｃ１２アルキル」という用語は、１〜１２個の炭素原子を有する、直鎖又は分枝鎖の飽和又は不飽和の炭化水素を意味する。Ｃ１−Ｃ１２アルキル基は、置換されていないか、又は−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２及び−ＣＮ（式中、各Ｒ’は、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル及びアリールから独立に選択される）を含むが、これらに限定されない、１個以上の基で置換されていてもよい。
本明細書で用いられる場合、「Ｃ１−Ｃ６アルキル」という用語は、１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の飽和又は不飽和炭化水素を意味する。代表的な「Ｃ１−Ｃ６アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチル、−ｎ−ペンチル、及びｎ−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されず、一方、分岐鎖Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチル、及び２−メチルブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１−Ｃ６アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及びイソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、及び３−ヘキシルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ６アルキル基は、置換されていないか、又はＣ１−Ｃ８アルキル基について上述の、１個以上の基で置換されていてもよい。
本明細書で用いられる場合、「Ｃ１−Ｃ４アルキル」という用語は、１〜４個の炭素原子を有する直鎖又は分岐鎖の飽和又は不飽和炭化水素を意味する。代表的な「Ｃ１−Ｃ４アルキル」基としては、−メチル、−エチル、−ｎ−プロピル、−ｎ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されず、一方、分岐鎖Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチルが挙げられるが、これらに限定されず、不飽和Ｃ１−Ｃ４アルキルとしては、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、及びイソブチレニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ１−Ｃ４アルキル基は、置換されていないか、又はＣ１−Ｃ８アルキル基について上述の、１個以上の基で置換されていてもよい。
「アルコキシ」は、酸素に単結合されたアルキル基である。例示的なアルコキシ基としては、メトキシ（−ＯＣＨ３）及びエトキシ（−ＯＣＨ２ＣＨ３）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ１−Ｃ５アルコキシ」は、１〜５個の炭素原子を有するアルコキシ基である。アルコキシ基は、置換されていないか、又はアルキル基について上述の、１個以上の基で置換されていてもよい。
「アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する直鎖、第二級、第三級、又は環状炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、エチレン又はビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）、及び５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルケニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ２二重結合を有する２〜８個の直鎖、第二級、第三級、又は環状炭素原子を含む炭化水素である。
「アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する直鎖、第二級、第三級、又は環状炭素原子を含む、Ｃ２−Ｃ１８炭化水素である。例としては、アセチレン系（−Ｃ≡ＣＨ）及びプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｃ２−Ｃ８アルキニル」は、少なくとも１つの不飽和部位、すなわち炭素−炭素、ｓｐ三重結合を有する２〜８個の直鎖、第二級、第三級、又は環状炭素原子を含む炭化水素である。
「アルキレン」は、親アルカンの同じ又は２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価ラジカル中心を有する、１〜１８個の炭素原子の飽和の分岐鎖又は直鎖又は環状炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアルキレンラジカルとしては、メチレン（−ＣＨ２−）１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）等が挙げられるが、これらに限定されない。
「Ｃ１−Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１−１０の直鎖、飽和炭化水素基である。Ｃ１−Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレン、及びデカレンが挙げられる。
「アルケニレン」は、親アルケンの同じ又は２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる、２つの一価ラジカル中心を有する、２〜１８個の炭素原子の不飽和の分岐鎖又は直鎖又は環状炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアルケニレンラジカルとしては、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられるが、これらに限定されない。
「アルキニレン」は、親アルキンの同じ又は２個の異なる炭素原子からの２個の水素原子の除去によってもたらされる２つの一価ラジカル中心を有する、２〜１８個の炭素原子の、不飽和の分岐鎖又は直鎖又は環状炭化水素ラジカルを意味する。典型的なアルキニレンラジカルとしては、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）、及び４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）が挙げられるが、これらに限定されない。
「アリール」は、炭素環式芳香族基を意味する。アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。炭素環式芳香族基又は複素環式芳香族基は、置換されていないか、又はＣ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及びＣＮを含むが、これらに限定されない１個以上の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「Ｃ５−Ｃ２０アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜２０個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ２０アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ２０アリール基は、アリール基について上述のように、置換されていてもよく、又は置換されていなくてもよい。「Ｃ５−Ｃ１４アリール」は、炭素環式芳香族環内に５〜１４個の炭素原子を有するアリール基である。Ｃ５−Ｃ１４アリール基の例としては、フェニル、ナフチル、及びアントラセニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ５−Ｃ１４アリール基は、アリール基について上述のように、置換されていてもよく、又は置換されていなくてもよい。
「アリーレン」は、２つの共有結合を有するアリール基であり、次の構造
で示されるオルト、メタ、又はパラ配置にあり得、そこでフェニル基は、置換されていないか、又はＣ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及びＣＮを含むが、これらに限定されない最大４個の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「アリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、アリールラジカルと置換されている、非環状アルキルラジカルを意味する。典型的なアリールアルキル基としては、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエテン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イル等が挙げられるが、これらに限定されない。アリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、アリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、又はアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、アリール部分は、５〜１４個の炭素原子である。
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子、典型的には末端又はｓｐ３炭素原子に結合した水素原子のうちの１個が、ヘテロアリールラジカルと置換されている、非環状アルキルラジカルを意味する意味する。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチル等が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアリールアルキル基は、６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルカニル、アルケニル、又はアルキニル基を含む、アルキル部分は、１〜６個の炭素原子であり、ヘテロアリール部分は、５〜１４個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子、又は７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ ［４，５］、［５，５］、［５，６］、又は［６，６］系であってもよい。
「置換アルキル」、「置換アリール」、及び「置換アリールアルキル」は、１個以上の水素原子が、それぞれ独立して置換基と置換されている、それぞれ、アルキル、アリール、及びアリールアルキルを意味する。典型的な置換基としては、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、ＮＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３ −、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ３、ＰＯ３Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２、−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられるが、これらに限定されず、式中、各Ｘは独立して、ハロゲン、すなわちＦ、Ｃｌ、Ｂｒ、又はＩであり、各Ｒは独立して、−Ｈ、Ｃ２−Ｃ１８アルキル、Ｃ６−Ｃ２０アリール、Ｃ３−Ｃ１４複素環、保護基、又はプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレン、及びアルキニレン基もまた、同様に置換され得る。
「ヘテロアリール」及び「複素環」は、１個以上の環原子がヘテロ原子、例えば、窒素、酸素、及び硫黄である、環系を意味する。複素環ラジカルは、３〜２０個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を含む。複素環は、３〜７個の環員を有する単環（２〜６個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、又は７〜１０環員を有する二環（４〜９個の炭素原子並びにＮ、Ｏ、Ｐ、及びＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）、例えば、ビシクロ ［４，５］、［５，５］、［５，６］、又は［６，６］系であり得る。
例となる複素環は、例えば、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ Ａ．，“Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｍｏｄｅｒｎ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１、３、４、６、７、及び９章、“Ｔｈｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ”（ＪＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９５０〜現在）、特に第１３、１４、１６、１９、及び２８巻、並びにＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
複素環の例としては、限定ではなく例として、ピリジル、ジヒドロイピリジル（ｄｉｈｙｄｒｏｙｐｙｒｉｄｙｌ）、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化型テトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンズイソキサゾリル、オキシンドリル、ベンゾキサゾリニル、及びイサチノイルが挙げられる。
限定ではなく例として、炭素が結合する複素環は、ピリジンの２、３、４、５、若しくは６位、ピリダジンの３、４、５、若しくは６位、ピリミジンの２、４、５、若しくは６位、ピラジンの２、３、５、若しくは６位、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロール、若しくはテトラヒドロピロールの２、３、４、若しくは５位、オキサゾール、イミダゾール、若しくはチアゾールの２、４、若しくは５位、イソキサゾール、ピラゾール、若しくはイソチアゾールの３、４、若しくは５位、アジリジンの２若しくは３位、アゼチジンの２、３、若しくは４位、キノリンの２、３、４、５、６、７、若しくは８位、又はイソキノリンの１、３、４、５、６、７、若しくは８位において結合される。更により典型的には、炭素が結合した複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、又は５−チアゾリルが挙げられる。
限定ではなく例として、窒素が結合した複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位、イソインドール、又はイソインドリンの２位、モルホリンの４位、及びカルバゾール又はβ−カルボリンの９位で結合する。更に、により典型的には、窒素が結合した複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリル、及び１−ピペリジニルが挙げられる。
「Ｃ３−Ｃ８複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ及びＮからなる群からのヘテロ原子と置換されている、芳香族又は非芳香族Ｃ３−Ｃ８炭素環を意味する。Ｃ３−Ｃ８複素環の代表的な例としては、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、及びテトラゾリルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８複素環は、置換されていないか、又は−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない最大７個の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロ」は、複素環基の水素原子のうちの１個が結合と置換されている、上記に定義されているＣ３−Ｃ８複素環基を意味する。Ｃ３−Ｃ８ヘテロシクロは、置換されていないか、又は−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない最大６個の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「Ｃ３−Ｃ２０複素環」は、環炭素原子のうちの１〜４個が独立して、Ｏ、Ｓ、及びＮからなる群からのヘテロ原子と置換されている、芳香族又は非芳香族Ｃ３−Ｃ８炭素環を意味する。Ｃ３−Ｃ８複素環は、置換されていないか、又は−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない最大６個の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「Ｃ３−Ｃ２０ヘテロシクロ」は、ヘテロ複素環基の水素のうちの１個が単結合と置換されている、上記に定義されたＣ３−Ｃ２０複素環基を意味する。「炭素環」は、単環として３〜７個の炭素原子、又は二環として７〜１２個の炭素原子を有する、飽和又は不飽和の環を意味する。単環式炭素環は、３〜６個の環原子、更により典型的には５又は６個の環原子を有する。二環式炭素環は、例えば、ビシクロ ［４，５］、［５，５］、［５，６］、若しくは［６，６］系として配置される、７〜１２個の環原子、又はビシクロ ［５，６］若しくは［６，６］系として配置される、９若しくは１０個の環原子を有する。単環式炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチル、及びシクロオクチルが挙げられる。
「Ｃ３−Ｃ８炭素環」は、３、４、５、６、７、又は８員の飽和又は不飽和の非芳香族炭素環式環である。代表的なＣ３−Ｃ８炭素環には、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチル、及び−シクロオクタジエニルが挙げられるが、これらに限定されない。Ｃ３−Ｃ８炭素環基は、置換されていないか、又は−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２、及び−ＣＮが挙げられるが、これらに限定されない１個以上の基で置換されていてもよく、式中、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、及びアリールから選択される。
「Ｃ３−Ｃ８カルボシクロ」は、炭素環基の水素原子のうちの１個が単結合と置換されている、上記に定義されているＣ３−Ｃ８炭素環基を意味する。
「リンカー」は、共有結合、又は抗体を薬物部分に共有結合する原子の鎖を含む、化学部分を意味する。種々の実施形態において、リンカーとしては、アルキルジイル、アリールジイル、ヘテロアリールジイル等の二価ラジカル、−（ＣＲ２）ｎＯ（ＣＲ２）ｎ−等の部分、アルキルオキシ（例えば、ポリエチレンオキシ、ＰＥＧ、ポリメチレンオキシ）及びアルキルアミノ（例えば、ポリエチレンアミノ、Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ（商標））の反復単位、並びにコハク酸塩、コハク酸アミド、ジグリコール酸塩、マロン酸塩、及びカプロアミドを含む二酸エステル及びアミドが挙げられる。種々の実施形態において、リンカーは、バリン、フェニルアラニン、リジン、及びホモリジン等の１個以上のアミノ酸残基を含み得る。
「キラル」という用語は、鏡像パートナーの重ね合せできない特性を有する分子を指し、一方で、「アキラル」という用語は、それらの鏡像パートナーと重ね合せできる分子を意味する。
「立体異性体」という用語は、同一の化学構成を有するが、空間内の原子又は基の配置に関して異なる、化合物を意味する。
「ジアステレオマー」は、２個以上のキラル性の中心を有し、それらの分子が互いの鏡像ではない立体異性体を意味する。ジアステレオマーは、異なる物理特性、例えば、融点、沸点、スペクトル特性、及び反応性を有する。ジアステレオマーの混合物は、電気泳動法及びクロマトグラフィー等の高解像度分析手順の下で分離することができる。
「鏡像異性体」は、互いに重ね合せできない鏡像である、化合物の２つの立体異性体を意味する。
本明細書で用いられる立体化学的な定義及び慣例は、通常、Ｓ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ（１９８４）ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ Ｂｏｏｋ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、及びＥｌｉｅｌ，Ｅ．ａｎｄ Ｗｉｌｅｎ，Ｓ．，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（１９９４）Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋに従う。多くの有機化合物は、光学活性型で存在し、すなわち、それらは平面偏光の平面を回転させる能力を有する。光学活性化合物を説明する際、接頭辞Ｄ及びＬ、又はＲ及びＳは、そのキラル中心（複数可）の周りの分子の絶対配置を表すように使用される。接頭辞ｄ及びｌ又は（＋）及び（−）は、化合物による平面偏光の回転の徴候を表記するために用いられ、このうち（−）又はｌは、化合物が左旋性であることを意味する。（＋）又はｄの接頭辞を有する化合物は、右旋性である。所与の化学構造について、これらの立体異性体は、それらが互いの鏡像であることを除いて同一である。特定の立体異性体はまた、鏡像異性体とも称され得、かかる異性体の混合物は、しばしば鏡像異性体混合物と呼ばれる。鏡像異性体の５０：５０混合物は、ラセミ混合物又はラセミ体と称され、それらは化学反応又はプロセスにおいて立体選択又は立体特異性が存在していない場合に生じ得る。「ラセミ混合物」及び「ラセミ体」という用語は、光学活性を欠く２種の鏡像異性体種の等モル混合物を意味する。
「脱離基」は、他の官能基によって置換され得る官能基を意味する。特定の脱離基は、当該技術分野で周知であり、例としては、ハロゲン化物（例えば、塩化物、臭化物、ヨウ化物）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフル酸塩）、及びトリフルオロメチルスルホン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
「保護基」という用語は、特定の官能性を、化合物上の他の官能基を反応させながら、ブロッキングするため、又は保護するために一般的に用いられる置換基を意味する。例えば、「アミノ保護基」は、化合物中のアミノ官能性をブロッキングし、又は保護する、アミノ基に結合した置換基である。好適なアミノ保護基としては、アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、及び９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）が挙げられるが、これらに限定されない。保護基の一般的な説明及びそれらの使用については、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９１、又はより新しい版を参照のこと。
当業者によって理解されるように、「約」値又はパラメータへの言及は、その値又はパラメータ自体に対する実施形態を含む（及び説明する）。例えば、「約Ｘ」に言及する説明は、「Ｘ」の説明を含む。
本明細書に記載される態様及び実施形態は、態様及び実施形態を「含む」、及び／又は「本質的になる」を含むことが理解される。本明細書で用いられる場合、単数形の「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、特に指示がない限り、複数への言及が含まれる。
ＩＩ．組成物及び方法
本明細書では、二重特異性抗体を含む、ＦｃＲＨ５に結合する抗体、及びこのような抗体を含むイムノコンジュゲートが提供される。抗体及びイムノコンジュゲートは、例えば、ＦｃＲＨ５陽性がんの診断又は治療に有用であり得る。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲｈ５抗体はＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
理論に拘束されないが、本発明の抗体に対する的確な抗原の選択は、少なくとも３つの重要な考慮によって決定された。第一に、非標的分子との結合由来の治療、すなわち効果の低下を回避するために、ＦｃＲＨ５ｃ以外のＦｃＲＨ５イソ型、例えばアイソフォームａ及びアイソフォーム型ｂとの交差反応性がないかわずかである要求があった。図１に示すように、ＦｃＲＨ５のドメイン９は３種のイソ型の中でも独特な配列の例である。次いで、ＦｃＲＨ５以外のＦｃＲＨファミリーメンバー、例えばＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及びＦｃＲＨ４との交差反応性がないかわずかである要求があった。一般的に、多くのＦｃＲＨファミリーメンバーにおける最後のＩｇ様ドメインの高度に保存された性質のため、これは困難である。しかし、ＦｃＲＨ５アイソフォームｃ特異性に対する類似の要求のため、最後のＩｇ様ドメインに結合する抗体が探求された。最後に、抗体は、このような二重特異性抗体形式を使用してＴ細胞及び腫瘍細胞のような近接した大きな構造を持って動作する治療用分子で使用するためには、細胞膜により近い腫瘍エピトープがより効果的であることが知られている（例えば、Ｂｌｕｅｍｅｌ，ら，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｅｔｈｅｒ （２０１０）５９：１１９７−１２０９を参照のこと）。時々運動分離の理論として説明され、ＦｃＲＨ５のドメイン９の細胞膜近位の位置は、この文脈において望ましい抗原標的である。これらの考慮事項を満たすために、以下に詳細に記載されるように、本発明の抗体のある特定の実施形態が開発された。
本明細書では、ＦｃＲＨ５の細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する、単離された抗ＦｃＲＨ５ｃ抗体が提供される。いくつかの実施形態では、アイソフォーム特異的領域はＩｇ様ドメイン９を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ様ドメイン９は、Ｉｇ様Ｃ２−タイプ８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７５４〜８３５を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７５２〜８３４を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７４３〜８５０を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７４５〜８５１を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、Ｎ−末端及び／又はＣ−末端境界から、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４又は約１５のいずれかのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１の約７５０、約７５１、約７５２、約７５３又は約７５４のいずれかから配列番号１の約８３０、約８３１、約８３２、約８３３、約８３４、約８３５又は約８３６のいずれかまでのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、５ｎＭ以下、又は４ｍＭ以下、又は３ｎＭ以下、又は２ｎＭ以下、又は１ｎＭ以下、任意に０．０００１ｎＭ以上、又は０．００１ｎＭ以上、又は０．０１ｎＭ以上の親和力で、ＦｃＲＨ５ｃ、及び／又はアイソフォームｃ特異的領域に結合する。
本発明のいずれかのいくつかの実施形態では、前記抗体は、以下の特徴の１以上を有する。ａ）全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する（すなわち、全長のヒトＦｃＲＨ５に結合し、全長のカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する）、ｂ）ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない（すなわち、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に結合しない）、ｃ）内在性ＦｃＲＨ５に結合する、ｄ）ＦｃＲＨ５ａと交差反応しない（すなわち、ＦｃＲＨ５ａと有意に結合しない）、及びｅ）ＦｃＲＨ５の他のＩｇ様ドメインと交差反応しない（すなわち、ＦｃＲＨ５他のＩｇ様ドメインと有意に結合しない）。結合能力を測定する方法は当該技術分野で公知であり、以下に説明する。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１１１のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１０のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１１のＶＨ配列及び配列番号１１０のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個のｌＣ８．１のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、ｌＣ８．１のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１１３のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１２のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１３５のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３４のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１３のＶＨ配列及び配列番号１１２のＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３５のＶＨ配列及び配列番号１３４のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個のｌＧ７．２のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、ｌＧ７．２のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個のｌＧ７．２’のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、ｌＧ７．２’のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ａと有意に交差反応しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１００のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１１５のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１４のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１５のＶＨ配列及び配列番号１１４のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の２Ｈ７．３のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、２Ｈ７．３のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１１７のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１６のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１７のＶＨ配列及び配列番号１１６のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ａ４．２のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ａ４．２のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１１９のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１１８のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１１９のＶＨ配列及び配列番号１１８のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ｂ１２．１．１のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ｂ１２．１．１のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ａと有意に交差反応しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１２１のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２０のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２１のＶＨ配列及び配列番号１２０のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ｃ１０のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ｃ１０のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１２３のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２２のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２３のＶＨ配列及び配列番号１２２のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ｆ１０のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ｆ１０のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ａと有意に交差反応しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１２５のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２４のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２５のＶＨ配列及び配列番号１２４のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ｇ３のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ｇ３のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ａと有意に交差反応しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１２７のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２６のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２７のＶＨ配列及び配列番号１２６のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の３Ｇ７．１．５のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、３Ｇ７．１．５のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号５９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１２９のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１２８のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１２９のＶＨ配列及び配列番号１２８のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の５Ａ１０．１．３のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、５Ａ１０．１．３のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号６０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１３１のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３０のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３１のＶＨ配列及び配列番号１３０のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の５Ｆ１．１．５のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、５Ｆ１．１．５のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ａと有意に交差反応しない。
また、本明細書では、いくつかの実施形態では、ａ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖；及び／又はｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖を含む抗体が提供される。いくつかの実施形態では、前記重鎖は、配列番号６１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号８５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号１０９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む。いくつかの実施形態では、前記抗体は、配列番号１３３のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＨ配列、及び／又は配列番号１３２のアミノ酸配列と、少なくとも約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又は約１００％のいずれかの配列同一性を有するＶＬ配列を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号１３３のＶＨ配列及び配列番号１３２のＶＬ配列を含む。任意の抗体のいくつかの実施形態では、抗体は、６個の６Ｄ２のＨＶＲを含む。いくつかの実施形態では、６Ｄ２のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメイン（例えば、Ｉｇ様ドメイン９）のアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と有意に交差反応しない。いくつかの実施形態では、抗体は内在性ＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗体はＢ細胞に結合する。いくつかの実施形態では、抗体は、ＮＫ細胞及び／又は単球と有意に結合しない。
本明細書に提供される更なる態様において、上記実施形態のいずれによる抗ＦｃＲＨ５抗体も、キメラ、ヒト化、又はヒト抗体を含む、モノクローナル抗体である。一実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、抗体断片、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２断片である。他の実施形態では、本抗体は、実質的に完全長の抗体、例えば、本明細書に定義されるＩｇＧ１抗体又は他の抗体クラス若しくはアイソタイプである。
更なる態様では、本発明は、本明細書に提供される抗ＦｃＲＨ５抗体と同じエピトープに結合する抗体を提供する。ある特定の実施形態では、配列番号１のアミノ酸７５４〜８３５からの、その内の、又はそれと重複するＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する抗体が提供される。
任意の抗ＦｃＲＨ５抗体のいくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５抗体、特にＦｃＲＨ５二重抗体（例えば、抗ＣＤ３／抗ＦｃＲＨ５二重抗体）は、ＨＥＫ細胞株アッセイ（ＨＥＫ細胞は、その全体が参照として本明細書に組み入れられる、Ｊａｍｅｓ ａｎｄ Ｖａｌｌｅ， Ｎａｔｕｒｅ ４８７：６４−６９（２０１２）に記載されているように、ＴＣＲトリガーに必要なシグナル伝達成分で再構成されている）に基づき、単独で又は組み合わせて特徴を有し得る。いくつかの実施形態では、上記特徴は、単独で又は組み合わせて、腫瘍細胞静止期／免疫学的シナプス、Ｌｃｋ介在性ＴＣＲリン酸化、リン酸化状態及び局在化を含むＺＡＰ７０活性、局在化及び結合を含むＣＤ５８活性、局在化及び結合を含むβ２Ａｒ活性、局在化及び結合を含むＣＡＡＸ活性、局在化を含むＣＤ４５活性、局在化を含むｐＭＨＣ活性、及び／又はＴＣＲ活性並びにトリガー特性を含んでいてもよい。
更なる態様では、上記実施形態のいずれによる抗ＦｃＲＨ５抗体も、（ａ）から（ｅ）及び／又は以下のセクション１〜７に記載される、任意の特徴を単独で又は組み合わせて組み入れることができる。
（ａ）ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する
抗ＦｃＲＨ５抗体が、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合するかどうかを判定する方法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域への抗ＦｃＲＨ５抗体の結合は、２９３細胞及び／又はＳＶＴ２細胞内で、Ｎ末端及びＣ末端欠失を伴うＦｃＲＨ５ポリペプチドを発現させること、及び切断型ポリペプチドに対する抗体の結合を示す実施例におけるように、ＦＡＣＳによって試験することにより判定することができる。いくつかの実施形態では、２９３細胞内で発現する完全長ＦｃＲＨ５への結合に対する、切断型ポリペプチドへの抗体の結合の実質的な低減（７０％以上の低減）は、抗体が切断型ポリペプチドに結合しないことを示す。
いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、Ｉｇ様ドメイン９を含む。いくつかの実施形態では、Ｉｇ様ドメイン９は、Ｉｇ様Ｃ２型８とも呼ばれる。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７５４〜８３５を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７５２〜８３４を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７４３〜８５０を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１のアミノ酸７４５〜８５１を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、Ｎ−末端及び／又はＣ−末端境界から、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、約１２、約１３、約１４又は約１５のいずれかのアミノ酸を含む。いくつかの実施形態では、アイソフォームｃ特異的領域は、配列番号１の約７５０、約７５１、約７５２、約７５３又は約７５４のいずれかから配列番号Ｎｏ：１の約８３０、約８３１、約８３２、約８３３、約８３４、約８３５又は約８３６のいずれかまでのアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はヒトＦｃＲＨ５である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はヒトＦｃＲＨ５又はカニクイザルＦｃＲＨ５である。
（ｂ）５ｎＭ以下、又は４ｎＭ以下、又は３ｎＭ以下、又は２ｎＭ以下、又は１ｎＭ以下、任意に０．０００１ｎＭ以上、又は０．００１ｎＭ以上、又は０．０１ｎＭ以上の親和性で、ヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応（結合）する。
結合親和性の測定法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、例えば、実施例に記載されているＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、ＥＬＩＳＡ、Ｆａｃｓ、及びＩＨＣに従って測定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、約５ｎＭ以下、約４ｎＭ以下、約３ｎＭ以下、約２ｎＭ以下、又は約１ｎＭ以下の親和性でヒト及び／又はカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、約５ｎＭ以下の親和性でヒト及び／又はカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、約４ｎＭ以下の親和性でヒト及び／又はカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、約３ｎＭ以下の親和性でヒト及び／又はカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、約２ｎＭ以下の親和性でヒト及び／又はカニクイザルＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はカニクイザルＦｃＲＨ５である。
（ｃ）ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と交差反応（結合）しない
結合の測定法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、例えば、実施例に記載されているＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイ、Ｆａｃｓ、ＥＬＩＳＡ、及びＩＨＣに従って測定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４よりも、約２、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約５００、又は約１０００倍より高い親和性でＦｃＲＨ５に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨはヒトＦｃＲＨである。
（ｄ）ＦｃＲＨ５ａと交差反応しない（結合しない）
結合の測定法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、例えば、実施例に記載されているＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）アッセイ、Ｆａｃｓ、ＥＬＩＳＡ、及びＩＨＣに従って測定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ａよりも、約２、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約５００、又は約１０００倍より高い親和性でＦｃＲＨ５ｃに結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨはヒトＦｃＲＨである。
（ｅ）ＦｃＲＨ５の他のＩｇ様ドメインと交差反応しない（結合しない）
結合の測定法は当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、結合親和性は、例えば、実施例に記載されているＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）アッセイ、Ｆａｃｓ、ＥＬＩＳＡ、及びＩＨＣに従って測定することができる。
いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５のＩｇ様ドメイン１、２、３、４、５、６、７、及び８よりも、約２、約５、約１０、約２０、約５０、約１００、約５００、又は約１０００倍より高い親和性でＦｃＲＨ５のＩｇ様ドメイン９に結合する。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨはヒトＦｃＲＨである。いくつかの実施形態では、Ｉｇ様ドメインは、Ｉｇ様ドメイン１（配列番号１のアミノ酸２３〜１００）、Ｉｇ様ドメイン２（配列番号１のアミノ酸１０５〜１８５）、Ｉｇ様ドメイン３（配列番号１のアミノ酸１８８〜２７１）、Ｉｇ様ドメイン４（配列番号１のアミノ酸２８７〜３７３）、Ｉｇ様ドメイン５（配列番号１のアミノ酸３８０〜４６６）、Ｉｇ様ドメイン６（配列番号１のアミノ酸４９０〜５５５）、Ｉｇ様ドメイン７（配列番号１のアミノ酸５６８〜６５２）、Ｉｇ様ドメイン８（配列番号１のアミノ酸６５８〜７３１）である。
結合アッセイ及びその他のアッセイ
一態様では抗ＦｃＲＨ５抗体は、その抗原結合活性に関して試験される。例えば、ある特定の実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、細胞の表面に発現するＦｃＲＨ５と結合するその能力に関して試験される。ＦＡＣＳアッセイが、このような試験のために用いられ得る。
例示的な競合アッセイでは、固定化ＦｃＲＨ５が、ＦｃＲＨ５と結合する第一の標識化抗体、及びＦｃＲＨ５との結合に関して第一抗体と競合するその能力に関して試験されている第二の非標識化抗体を含む溶液中でインキュベートされる。第二の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在し得る。対照として、固定化ＦｃＲＨ５が、第一の標識化抗体を含むが第二非標識化抗体を含まない溶液中でインキュベートされる。第一の抗体とＦｃＲＨ５との結合を許容する条件下でのインキュベーション後、過剰量の非結合抗体が除去され、固定化ＦｃＲＨ５と会合した標識の量が測定される。固定化ＦｃＲＨ５と会合した標識の量が、対照試料に比して試験試料中で実質的に減少されている場合には、それは、第二の抗体がＦｃＲＨ５との結合に関して第一の抗体と競合していることを示す。いくつかの実施形態では、固定化ＦｃＲＨ５は、細胞の表面に存在するか、あるいはその表面にＦｃＲＨ５を発現する細胞から得られた膜調製物中に存在する。
一態様では、精製された抗ＦｃＲＨ５抗体が、更に、一連のアッセイ、例えばＮ末端配列決定、アミノ酸分析、非変性サイズ排除高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、質量分光分析、イオン交換クロマトグラフィー及びパパイン消化（これらに限定されない）により特徴づけられ得る。一実施形態では、本発明は、インビボでの抗体の半減期が重要である多数の用途のための望ましい候補にそれをする、いくつかの（しかし全てではない）エフェクター機能を保有する変更された抗体を意図するが、ある特定のエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）は必要でないか又は有害である。ある特定の実施形態では、抗体のＦｃ活性は、所望の特性のみが維持されることを保証するために測定される。インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを、ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低減／枯渇を確証するために実行することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それ故、ＡＤＣＣ活性を欠くと思われる）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを保証するために実行することができる。ＡＤＣＣを媒介するための一次細胞、ＮＫ細胞はＦｃ（ＲＩＩＩ）のみを発現するが、一方、単球はＦｃ（ＲＩ）、Ｆｃ（ＲＩＩ）及びＦｃ（ＲＩＩＩ）を発現する。造血系細胞上でのＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ． Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． ９：４５７−９２ （１９９１）の４６４ページの表３に要約されている。この分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの一例は、米国特許第５，５００，３６２号又は第５，８２１，３３７号に記載されている。このようなアッセイのために有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、又は付加的には、当該分子のＡＤＣＣ活性は、インビボで、例えばＣｌｙｎｅｓら，ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に開示されたような動物モデルで評価することができる。Ｃ１ｑ結合アッセイを、抗体がＣ１ｑを結合できず、そのためＣＤＣ活性を欠くことを確証するためにも用いることができる。補体活性化を評価するために、例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）に記載されたＣＤＣアッセイを実施することができる。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期確定も、当該技術分野で既知の方法を用いて実施することができる。
１．抗体親和性
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下、１ｎＭ以下、０．１ｎＭ以下、０．０１ｎＭ以下、又は０．００１ｎＭ以下、任意に、１０−１３Ｍ以上である、解離定数（Ｋｄ）（例えば、１０−８Ｍ以下、例えば、１０−８Ｍ〜１０−１３Ｍ、例えば、１０−９Ｍ〜１０−１３Ｍ）を有する。
一実施形態では、Ｋｄは、目的の抗体のＦａｂバージョン及びその抗原と共に行われる、放射標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）によって、次のアッセイによって記載されるように測定することができる。抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性は、Ｆａｂを、未標識抗原の一連の滴定の存在下で、最小濃度の（１２５Ｉ）標識抗原と平衡化した後、抗Ｆａｂ抗体コーティングプレートと結合した抗原を捕捉することによって、測定することができる（例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと）。アッセイのための条件を確立するために、ＭＩＣＲＯＴＩＴＥＲ（登録商標）マルチウェルプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）を、５０ｍＭの炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中５μｇ／ｍＬの捕捉抗Ｆａｂ抗体（ＣａｐｐｅｌＬａｂｓ）で一晩コーティングした後、ＰＢＳ中２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンにより、室温（約２３℃）で２〜５時間ブロッキングしてもよい。非吸着性のプレート（Ｎｕｎｃ番号２６９６２０）中で、１００ｐＭ又は２６ｐＭ［１２５Ｉ］−抗原を、目的のＦａｂの段階希釈液と混合する（例えば、Ｐｒｅｓｔａら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９（１９９７）における、抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価と一致）。次いで、目的のＦａｂを一晩インキュベートするが、インキュベーションは、平衡に到達することを確実にするために、より長い期間（例えば、約６５時間）継続してもよい。その後、混合物を、室温での（例えば、１時間にわたる）インキュベーションのために、捕捉プレートに移す。次いで、溶液を除去し、プレートを、ＰＢＳ中０．１％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））で８回洗浄する。プレートが乾燥したとき、１５０μＬ／ウェルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）（ＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ−２０（商標）；Ｐａｃｋａｒｄ）を加え、プレートをＴＯＰＣＯＵＮＴ（商標）γ計数器（Ｐａｃｋａｒｄ）により１０分間計数する。最大結合の２０％以下をもたらす各Ｆａｂの濃度を、競合結合アッセイにおいて使用するために選定することができる。
他の実施形態によれば、Ｋｄは、ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用した表面プラスモン共鳴アッセイを使用して、２５℃で、約１０応答単位（ＲＵ）で固定化された抗原ＣＭ５チップを用いて測定される。簡潔に述べると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサチップ（ＣＭ５，ＢＩＡＣＯＲＥ，Ｉｎｃ．）を、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）及びＮ−ヒドロキシコハク酸イミド（ＮＨＳ）により、供給業者の指示に従って活性化することができる。抗原を１０ｍＭの酢酸ナトリウム（ｐＨ４．８）で５μｇ／ｍＬ（約０．２μＭ）まで希釈した後、５μＬ／分の流速で注入して、カップリングされたタンパク質のおよそ１０応答単位（ＲＵ）を達成することができる。抗原の注入後、１Ｍのエタノールアミンを注入して、未反応の基をブロッキングする。動態測定のために、Ｆａｂ（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）の２倍段階希釈液を、ＰＢＳ中、０．０５％ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（商標））界面活性剤（ＰＢＳＴ）と共に、２５℃で、およそ２５μＬ／分の流速で注入することができる。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、単純な１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、算出することができる。平衡解離定数（Ｋｄ）は、比率ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして算出する。例えば、Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５−８８１（１９９９）を参照のこと。オン速度が、上の表面プラスモン共鳴アッセイによって、１０６Ｍ−１ｓ−１を超える場合、オン速度は、撹拌されたキュベットを備えるストップトフロー装着分光光度計（Ａｖｉｖ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は８０００−シリーズＳＬＭ−ＡＭＩＮＣＯ（商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計において測定される、漸増濃度の抗原の存在下で、２５℃で、ＰＢＳ（ｐＨ７．２）中２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ型）の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ、発光＝３４０ｎｍ、１６ｎｍ帯域通過）の増加又は減少を測定する、蛍光消光技法を使用することによって、測定することができる。
２．抗体断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、及びｓｃＦｖ断片、並びに以下に記載される他の断片が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）を参照のこと。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９の３１５（１９９４）を参照のこと。また、ＷＯ９３／１６１８５号、及び米国特許第５，５７１，８９４号及び同第５，５８７，４５８号も参照のこと。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、増加した体内半減期を有する、Ｆａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
ダイアボディは、二価性又は二重特異性であってもよい、２個の抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、欧州特許第４０４，０９７号、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）、及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）を参照のこと。トリアボディ及びテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎら，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９−１３４（２００３）に記載されている。
単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全て若しくは一部又は軽鎖可変ドメインの全て若しくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体はヒト単一ドメイン抗体である（Ｄｏｍａｎｔｉｓ，Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号Ｂ１を参照のこと）。
抗体断片は、本明細書に記載されているように、無傷の抗体のタンパク質消化及び組換え宿主細胞（例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）又はファージ）による産生が挙げられるがこれらに限定されない種々の技法により作製することができる。
３．キメラ及びヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体はキメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎら， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５（１９８４）に記載されている。一例では、キメラ抗体は非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、又はサルなどの非ヒト霊長類由来の可変領域）及びヒト定常領域を含む。更なる例では、キメラ抗体は、クラス又はサブクラスが親抗体のクラス又はサブクラスから変化している「クラス転換された」抗体である。キメラ抗体にはその抗原結合断片が含まれる。
ある特定の実施形態では、キメラ抗体はヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、ヒトへの免疫原性を抑えるために親非ヒト抗体の特異性及び親和性を保持したままヒト化される。一般的には、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えば、ＣＤＲ（又はその部分）が非ヒト抗体由来でＦＲ（又はその部分）がヒト抗体配列由来である１つ又は複数の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、場合によって、ヒト定常領域の少なくとも一部も含むことになる。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体中の一部のＦＲ残基は、例えば、抗体特異性又は親和性を回復又は改善するために非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）由来の対応する残基で置換される。
ヒト化抗体及びそれを作製する方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８）で概説されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３−３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９−１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、米国特許第７，５２７，７９１号、米国特許第６，９８２，３２１号、及び米国特許第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉら，Ｍｅｔｈｏｄｓ３６：２５−３４（２００５）（ＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）移植法を記載している）；Ｐａｄｌａｎ、Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９−４９８（１９９１）（「リサーフェイシング」を記載している）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３−６０（２００５）（「ＦＲシャフリング」を記載している）；並びにＯｓｂｏｕｒｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１−６８（２００５）及びＫｌｉｍｋａら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、８３：２５２−２６０（２０００）（ＦＲシャフリングへの「誘導選択」アプローチを記載している）が更に記載されている。
ヒト化のために使用することのできるヒトフレームワーク領域としては、「ベストフィット」法を使用して選択されるフレームワーク領域（Ｓｉｍｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３））；軽鎖又は重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列由来のフレームワーク領域（Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９：４２８５（１９９２）；及びＰｒｅｓｔａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５１：２６２３（１９９３））；ヒト成熟（体細胞的に変異した）フレームワーク領域又はヒト生殖系列フレームワーク領域（Ａｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ、Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９−１６３３（２００８））；及びＦＲライブラリーをスクリーニングすることに由来するフレームワーク領域（Ｂａｃａら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４（１９９７）及びＲｏｓｏｋら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１−２２６１８（１９９６））が挙げられるが、これらに限定されない。
４．ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体はヒト抗体である。ヒト抗体は当技術分野で公知の種々の技術を使用して産生することができる。ヒト抗体は一般的には、ｖａｎ Ｄｉｊｋ及びｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８−７４（２００１）並びにＬｏｎｂｅｒｇ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０−４５９（２００８）に記載されている。
ヒト抗体は、抗原投与に応答して無傷のヒト抗体又はヒト可変領域を有する無傷の抗体を産生するように改変されているトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製することができる。そのような動物は、典型的には、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全て又は一部を含有しており、その遺伝子座は内在性免疫グロブリン遺伝子座に取って代わり、又は染色体外に存在すし、若しくは動物の染色体中に無作為に取り込まれる。そのようなトランスジェニックマウスでは、内在性免疫グロブリン遺伝子座が、通常は不活化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ、Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７−１１２５（２００５）を参照のこと。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）技術を記載している米国特許第６，０７５，１８１号及び米国特許第６，１５０，５８４号；ＨｕＭａｂ（登録商標）技術を記載している米国特許第５，７７０，４２９号；Ｋ−Ｍ ＭＯＵＳＥ（登録商標）技術を記載している米国特許第７，０４１，８７０号及びＶｅｌｏｃｉＭｏｕｓｅ（登録商標）技術を記載している米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照のこと。そのような動物により産生される無傷の抗体由来のヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることにより更に改変することができる。
ヒト抗体はハイブリドーマベースの方法によっても作製することができる。ヒトモノクローナル抗体の産生のためのヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、１９８７）；及びＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照のこと）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して産生されるヒト抗体も、Ｌｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７−３５６２（２００６）に記載されている。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞系からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載している）及びＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５−２６８（２００６）（ヒト−ヒトハイブリドーマを記載している）に記載されている方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（トリオーマ（Ｔｒｉｏｍａ）技術）も、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７−９３７（２００５）、並びにＶｏｌｌｍｅｒｓ及びＢｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５−９１（２００５）に記載されている。
ヒト抗体は、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても産生することができる。次に、そのような可変ドメイン配列は所望のヒト定常ドメインと組み合わせることができる。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択する技術が以下に記載される。
５．ライブラリー由来抗体
本発明の抗体は、１種又は複数の所望の活性を有する抗体を求めてコンビナトリアルライブラリーをスクリーニングすることにより単離することができる。例えば、ファージディスプレイライブラリーを作製し所望の結合特徴を有する抗体を求めてそのようなライブラリーをスクリーニングするための種々の方法は当技術分野において公知である。そのような方法は、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００１）で概説されており、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２−５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４−６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ及びＢｒａｄｂｕｒｙ、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１−１７５（Ｌｏ，ｅｄ．， Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｔｏｔｏｗａ、ＮＪ、２００３）；Ｓｉｄｈｕら， Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９−３１０（２００４）；Ｌｅｅ ら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３−１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７−１２４７２（２００４）；並びにＬｅｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１−２）：１１９−１３２（２００４）に、更に記載されている。
ある特定のファージディスプレイ法では、Ｗｉｎｔｅｒら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１２：４３３−４５５（１９９４）に記載されているように、ＶＨ及びＶＬ遺伝子のレパートリーがポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により別々にクローニングされ、ファージライブラリーにおいて無作為に組み換えられ、これは次に抗原結合ファージを求めてスクリーニングすることができる。ファージは典型的には、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片として又はＦａｂ断片としてのいずれかで抗体断片を提示する。免疫源由来のライブラリーは、ハイブリドーマの構築を要することなく免疫原に対して高親和性の抗体を提供する。代わりに、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら，ＥＭＢＯ Ｊ、１２：７２５−７３４（１９９３）により記載されているように、未処置のレパートリーをクローニングして（例えば、ヒトから）いかなる免疫化もせずに広範な非自己抗原及び自己抗原にも単一源の抗体を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１−３８８（１９９２）により記載されているように、幹細胞から再配列されていないＶ−遺伝子セグメントをクローニングし、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を実現するランダム配列を含むＰＣＲプライマーを使用することにより、未処置のライブラリーを合成的に作製することもできる。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公報としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、米国特許出願公開第２００５／０１１９４５５号、米国特許出願公開第２００５／０２６６０００号、米国特許出願公開第２００７／０１１７１２６号、米国特許出願公開第２００７／０１６０５９８号、米国特許出願公開第２００７／０２３７７６４号、米国特許出願公開第２００７／０２９２９３６号、及び米国特許出願公開第２００９／０００２３６０号が挙げられる。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体断片は、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体断片とみなされる。
６．多特異的抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は多特異的抗体、例えば、二重特異的抗体である。多特異的抗体は、少なくとも２つの異なる部位に対する結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の実施形態では、結合特異性の１つはＦｃＲＨ５に対してであり、もう一方は他の任意の抗原に対してである。ある特定の実施形態では、結合特異性の１つはＦｃＲＨ５に対してであり、もう一方はＣＤ３に対してである。米国特許第５，８２１，３３７号を参照のこと。ある特定の実施形態では、二重特異的抗体はＦｃＲＨ５の２つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異的抗体を使用して、細胞傷害性薬剤をＦｃＲＨ５を発現する細胞に局在化させてもよい。二重特異的抗体は、完全長抗体又は抗体断片として調製することができる。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例となる二重特異性抗体は、本明細書中に記載されるようなＦｃＲＨ５タンパク質の２つの異なるエピトープと結合し得る。他のそのような抗体は、ＦｃＲＨ５結合部位を他のタンパク質に対する結合部位と組み合わせて有し得る。また、抗ＦｃＲＨ５アームは、ＦｃＲＨ５発現細胞に細胞性防御機序を集中し、限局するために、Ｔ細胞受容体分子（例えば、ＣＤ３）、又はＩｇＧに対するＦｃ受容体（ＦｃγＲ）、例えばＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）及びＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）のような白血球上のトリガー分子と結合するアームと組合され得る。二重特異性抗体は、ＦｃＲＨ５を発現する細胞に細胞傷害剤を限局するためにも用いることができる。これらの抗体は、ＦｃＲＨ５結合アーム、並びに細胞傷害剤（例えば、サポリン、抗インターフェロン−α、ビンカアルカロイド、シリンＡ鎖、メトトレキサート又は放射性同位体ハプテン）に結合するアームを有する。二重特異性抗体は、全長抗体又は抗体断片（例えばＦ（ａｂ‘）２二重特異性抗体）として調製することができる。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体は、第一のアームを有し、該第一のアームはＦｃＲＨ５と結合し、及び第二のアームを有し、第二のアームはＦｃと結合する。ＦｃＲＨ５二重特異性抗体の第二のアームは、当該技術分野で公知の任意の抗Ｆｃ抗体であってもよい。例えば、ＷＯ ９６／１６６７３には二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲＩＩＩ抗体が記載され、米国特許第５，８３７，２３４号には二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＦｃγＲ１抗体が記載されている。二重特異性抗ＥｒｂＢ２抗Ｆｃα抗体が、ＷＯ９８／０２４６３に記載されている。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲｈ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体は第一のアームを有し、該第一のアームはＦｃＲＨ５に結合し、及び第二のアームを有し、該第２のアームはＣＤ３に結合する。ＦｃＲＨ５二重特異性抗体の第二のアームは、当該技術分野で公知の任意の抗ＣＤ３抗体であってもよい。米国特許第５，８２１，３３７号及び第６，４０７，２１３号には、二重特異性抗ＥｒｂＢ２／抗ＣＤ３抗体を教示している。ＣＤ３抗原上のエピトープ及び第二のエピトープと結合するさらなる二重特異性抗体が記載されている。例えば、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第５，０７８，９９８号（抗ＣＤ３／腫瘍細胞抗原）；米国特許第５，６０１，８１９号（抗ＣＤ３／ＩＬ−２Ｒ；抗ＣＤ３／ＣＤ２８；抗ＣＤ３／ＣＤ４５）；米国特許第６，１２９，９１４号（抗ＣＤ３／悪性疾患Ｂ細胞抗原）；米国特許第７，１１２，３２４号（抗ＣＤ３／ＣＤ１９）；米国特許第６，７２３，５３８号（抗ＣＤ３／ＣＣＲ５）；米国特許第７，２３５，６４１号（抗ＣＤ３／ＥｐＣＡＭ）；米国特許第７，２６２，２７６号（抗ＣＤ３／卵巣腫瘍抗原）；及び米国特許第５，７３１，１６８号（抗ＣＤ３／ＣＤ４ＩｇＧ）を参照のこと。いくつかの実施形態では、第二のアームの抗ＣＤ３抗体は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる、ＷＯ２００５／１１８６３５、ＷＯ２００７／０４２２６１、ＷＯ２００８／１１９５６７、米国特許第５，９２９，２１２号、米国特許第６，７５０，３２５号、米国特許第６，４９１，９１６号、米国特許第７，９９４，２８９号、米国特許第７，９９３，６４１号、米国特許第６，７０６，２６５号、米国特許第５，５８５，０９７号、米国特許第５，９６８，５０９号、米国特許第５，９３２，４４８号、米国特許第６，１２９，９１４号、米国特許第７，３８１，８０３号、米国特許第５，８３４，５９７号、及び米国特許第７，８６２，８１３号のいずれかに記載の抗体である。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
多特異的抗体を作製するための技術としては、異なる特異性を有する２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の組換え同時発現（Ｍｉｌｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｃｕｅｌｌｏ、Ｎａｔｕｒｅ ３０５：５３７（１９８３）、ＷＯ９３／０８８２９及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５（１９９１）参照）、及び「ノブインホール」操作（例えば、米国特許第５，７３１，１６８号参照）が挙げられるが、これらに限定されない。抗体Ｆｃヘテロダイマー分子を作製するために静電気的ステアリング効果を操作する（ＷＯ２００９／０８９００４Ａ１）；２つ以上の抗体又は断片を架橋する（例えば、米国特許第４，６７６，９８０号及びＢｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２９：８１（１９８５）参照）；ロイシンジッパーを使用して二重特異的抗体を産生する（例えば、Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）参照）；二重特異的抗体断片を作製するために「ダイアボディ」技術を使用する（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０：６４４４−６４４８（１９９３）参照）；及び一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを使用する（例えば、Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５２：５３６８（１９９４）参照）；並びにＴｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）に記載されている三重特異的抗体を調製することにより、多特異的抗体を作製することができる。
「オクタパス抗体」を含む、３つ以上の機能的抗原結合部位を有する操作された抗体も本明細書に含まれる（例えば、ＵＳ２００６／００２５５７６Ａ１を参照のこと）。
本明細書の抗体又は断片には、ＦｃＲＨ５及び他の異なる抗原に結合する抗原結合部位を含む「二重作用ＦＡｂ」又は「ＤＡＦ」も含まれる（例えば、ＵＳ２００８／００６９８２０を参照のこと）。
異なるアプローチによれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインが、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。好ましくは、融合は、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含むＩｇ重鎖定常ドメインを伴う。融合の少なくとも１つに存在する軽鎖結合に必要な部位を含む第一重鎖定常領域（ＣＨ１）を有することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合を、また、所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡが、別個の発現ベクター中に挿入され、適切な宿主に同時にトランスフェクトされる。これは、構築に用いられる不等比の３つのポリペプチド鎖が所望の二重特異性抗体の最適産生を提供する場合の実施形態において３つのポリペプチド断片の相互割合を調整するに際して、より大きな柔軟性を提供する。しかし、等しい比率での少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高収率を生じる場合、あるいは所望の鎖の組合せの収率に比率が有意の影響を及ぼさない場合、単一発現ベクター中に３つのポリペプチド鎖のうちの２つ又は全てに関するコード配列を挿入することができる。
いくつかの実施形態では、二重特異性抗体は、一方のアームに第一結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖、並びに他方のアームのハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第二結合特異性を提供する）からなる。二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリン軽鎖が存在することが分離の容易な方法を提供するので、この不斉構造は、望ましくない免疫グロブリン鎖組合せからの所望の二重特異性化合物の分離を促す、ということが判明した。このアプローチは、ＷＯ ９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体の生成についての更なる詳細に関しては、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ １２１：２１０（１９８６）を参照のこと。
米国特許第５，７３１，１６８号に記載された他のアプローチによれば、抗体分子の対の間の界面は、組換え細胞培養から回収されるヘテロ二量体の割合を最大にするよう操作することができる。好ましい界面は、ＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第一抗体分子の界面からの１つ以上の小アミノ酸側鎖が、より大きい側鎖（例えば、チロシン又はトリプトファン）で置換される。大型アミノ酸側鎖をより小さいもの（例えば、アラニン又はトレオニン）に置換することにより、大きい側鎖（単数又は複数）と同一又は類似のサイズの代償性「空洞」が第二抗体分子の界面上に作られる。これは、ホモ二量体のような他の望ましくない最終産物に対してヘテロ二量体の産生を増大するための機序を提供する。このアプローチに従って産生される二重特異性抗体は、本明細書中では「空洞への隆起」抗体と呼ぶ。
二重特異性抗体としては、架橋又は「ヘテロ結合体」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロ結合体での抗体の一方はアビジンと、他方はビオチンと結合することができる。このような抗体は、例えば、免疫系細胞を望ましくない細胞に向けることが（米国特許第４，６７６，９８０号）、並びにＨＩＶ感染の治療のために（ＷＯ ９１／００３６０、ＷＯ ９２／２００３７３及びＥＰ ０３０８９）、提案されている。ヘテロ結合体は、任意の便利な架橋法を用いて作製することができる。適切な架橋剤は当該技術分野で周知であり、多数の架橋技術とともに米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
抗体断片から二重特異性抗体を生成するための技術も、文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体は、化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１（１９８５）には、無傷抗体がタンパク質分解的に切断されて、Ｆ（ａｂ’）２断片を生成する方法が記載されている。これらの断片は、ジチオール錯化剤、亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元されて、近接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィドの形成を防止する。次いで、生成されたＦａｂ’断片は、チオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に転化される。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体のうちの１つは、メルカプトエチルアミンを用いた還元によりＦａｂ’−チオールに再転化され、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合されて、二重特異性抗体が形成される。産生された二重特異性抗体は、酵素の選択的固定のための作用物質として用いることができる。
大腸菌からのＦａｂ’−ＳＨ断片を直接的回収し、二重特異性抗体を形成するために連結することができる。Ｓｈａｌａｂｙら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５： ２１７−２２５（１９９２）には、完全ヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の生成が記載されている。各Ｆａｂ’断片は、大腸菌から別々に分泌され、インビトロで指向性化学結合が施され、二重特異性抗体が形成された。このようにして形成された二重特異性抗体は、ＥｒｂＢ２受容体を過剰発現する細胞及び正常ヒトＴ細胞と結合し、並びにヒト乳がん標的に対してヒト細胞傷害性リンパ球の溶解活性を誘発することができた。
組換え細胞培養から二重特異性抗体断片を直接作製し、単離するための種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体が、ロイシンジッパーを用いて産生されている（Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２））。Ｆｏｓ及びＪｕｎタンパク質からのロイシンジッパーは、遺伝子融合により、２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に連結された。抗体ホモ二量体はヒンジ領域で還元されて単量体を形成した後に、再酸化されて、抗体へテロ二量体を形成した。この方法は、抗体ホモ二量体の産生のためにも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４−６４４８（１９９３）により記載された「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替的機序を提供している。断片は、同一鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによりＶＬに連結されたＶＨを含む。したがって、一断片のＶＨ及びＶＬドメインは別の断片の相補的ＶＬ及びＶＨと強いて対合され、それによって２つの抗原結合部位が形成される。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）二量体の使用により二重特異性抗体断片を作製するための別の戦略も、報告されている（Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）を参照のこと）。
２より大きい結合価を有する抗体が意図される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる（Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１））。
８．抗体変異形
ある特定の実施形態において、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異形が企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異形は、適切な修飾を、抗体をコードするヌクレオチド配列中に導入することによって、又はペプチド合成によって、調製することができる。かかる修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、及び／又はそこへ残基の挿入、及び／又はその内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入、及び置換の任意の組み合わせを作製して、最終構築物に到達することができる。但し、その最終構築物が、所望の特性、例えば、抗原結合性を保有することを条件とする。
ａ）置換、挿入及び欠失変異形
ある特定の実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異形が提供される。置換型突然変異生成に対する目的の部位には、ＨＶＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、表１において、「好ましい置換」の見出しの下に示されている。より実質的な変化は、表１において、「例となる置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して下に更に記載される。アミノ酸置換が目的の抗体中に導入され、産物が、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについて、スクリーニングすることができる。
アミノ酸は共通の側鎖特性に基づいて群に分類することができる：
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響する残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらの分類の一つのメンバーを他の分類に交換することを必要とする。
一つのタイプの置換変異体は、親抗体（例えばヒト化又はヒト抗体）の１以上の高頻度可変領域残基を置換することを含む。一般的に、更なる開発のために選択される、得られた変異体は、親抗体と比較してある特定の生物学的性質（例えば増加した親和性、減少した免疫原性）における修飾（例えば改善）を有するであろう。例示的な置換変異体は、親和性成熟抗体であり、これは、本明細書に記載されたもののようなファージディスプレイベースの親和性成熟技術を使用して簡便に産生することができる。手短に言えば、１以上のＨＶＲ残基を突然変異させ、変異体抗体をファージにディスプレイさせ、特定の生物学的活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。
改変（例えば置換）は、例えば抗体親和性を改善するために、ＨＶＲにおいて行なうことができる。このような改変はＨＶＲ「ホットスポット」、すなわち体細胞成熟プロセス中に高頻度で変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えばＣｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９−１９６（２００８）を参照）、及び／又はＳＤＲ（ａ−ＣＤＲ）において行ない得る場合があり、得られる変異体ＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーを構築し、次いで再選択することによる親和性成熟は、例えばＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１−３７ （Ｏ’Ｂｒｉｅｎら編，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの実施形態では、様々な方法（例えばエラープローンＰＣＲ、鎖シャフリング、又はオリゴヌクレオチド特異的突然変異誘発）のいずれかによって成熟のために選択された可変遺伝子中に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。その後、ライブラリーがスクリーニングされ、所望の親和性を有する任意の抗体変異体が同定される。多様性を導入する他の方法は、いくつかのＨＶＲ残基（例えば一度に４〜６残基）が無作為化されるＨＶＲ指向性アプローチを含む。抗原結合に関与するＨＶＲ残基を、例えばアラニンスキャン突然変異誘発又はモデリングを使用して、特に同定することができる。特に、ＣＤＲ−Ｈ３及びＣＤＲ−Ｌ３がしばしば標的とされる。
いくつかの実施形態では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗原に結合する抗体の能力を実質的に低下させない限り、１以上のＨＶＲ内で生じてもよい。例えば、結合親和性を実質的に減少させない保存的改変（例えば、本明細書で提供される保存的置換）をＨＶＲにおいて行なうことができる。そのような改変は、ＨＶＲ「ホットスポット」又はＳＤＲの外側であってもよい。上記に提供された変異ＶＨ及びＶＬ配列の所定の実施形態では、いずれかの各ＨＶＲが改変されず、又は１、２又は３個のアミノ酸置換を含む。
突然変異誘発に対して標的とされ得る抗体の残基又は領域の同定のための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ及びＷｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５に記載されたような「アラニンスキャニング突然変異誘発法」と呼ばれる。この方法では、残基又は標的残基群（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕのような荷電残基）が同定され、中性の又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）によって置換され、抗原との抗体の相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。最初の置換に対して機能的感受性を示すアミノ酸位置に、更なる置換を導入することができる。又は、更に加えて、抗体及び抗原間の接触点を同定するために抗原抗体複合体の結晶構造が使用される。そのような接触残基及び隣接する残基を置換のための候補として標的化し又は削除することができる。変異体は、それらが所望の性質を含むかどうかを決定するためにスクリーニングし得る。
アミノ酸配列の挿入は、長さが１残基から１００以上の残基を含むポリペプチドまで及ぶ、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端融合、並びに単一の又は複数のアミノ酸残基の配列内挿入を含む。末端挿入の例は、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体を含む。抗体分子の他の挿入変異体は、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えばＡＤＥＰＴ）又はポリペプチドへの抗体のＮ又はＣ末端の融合を含む。
ｂ）グリコシル化変異体
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される抗体は、抗体がグリコシル化される度合いを増大又は減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加又は欠失は、アミノ酸配列を、１以上のグリコシル化部位が作製され、又は除去されるように改変させることによって、簡便に達成することができる。
抗体がＦｃ領域を含む場合、そこに結合される炭水化物を改変することができる。哺乳動物細胞により産生される天然抗体は、典型的には、Ｆｃ領域のＣＨ２ドメインのＡｓｎ２９７に対してＮ結合により一般的に結合する分枝状、二分岐のオリゴ糖を含む。例えば、Ｗｒｉｇｈｔら，ＴＩＢＴＥＣＨ １５：２６−３２（１９９７）を参照のこと。オリゴ糖は様々な炭水化物、例えばマンノース、Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）、ガラクトース、及びシアル酸を含み得、並びにフコースが二分岐オリゴ糖構造の「幹」のＧｌｃＮＡｃに結合される。いくつかの実施形態では、ある特定の改善された特性を有する抗体変異体を生じせしめるために、本発明の抗体におけるオリゴ糖の修飾を行なうことができる。
一実施形態では、Ｆｃ領域に（直接又は間接的に）結合したフコースを欠く炭水化物構造を有する抗体変異体が提供される。例えば、かかる抗体におけるフコースの量は、１％〜８０％、１％〜６５％、５％〜６５％、又は２０％〜４０％であり得る。フコースの量は、例えばＷＯ２００８／０７７５４６に記載されているように、ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ質量分析法によって測定して、Ａｓｎ２９７（例えば複合のハイブリッド及び高マンノース構造）に結合した全ての糖構造の合計に対してＡｓｎ２９７の糖鎖内のフコースの平均量を計算することによって測定される。Ａｓｎ２９７はＦｃ領域内の約２９７位（Ｆｃ領域のＥｕ番号付け）に位置したアスパラギン残基を意味する；しかし、Ａｓｎ２９７は、抗体中の軽微な配列変異のために、２９７位から約±３アミノ酸上流又は下流に、すなわち、２９４位及び３００位の間に位置している場合があり得る。そのようなフコシル化変異体は改善されたＡＤＣＣ機能を有しうる。例えば、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号（Ｋｙｏｗａ Ｈａｋｋｏ Ｋｏｇｙｏ Ｃｏ．，Ｌｔｄ）を参照のこと。「脱フコシル化された」又は「フコース欠損」抗体変異体に関連した刊行物の例としては、米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８号；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ第２００１／２９２４６；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許出願公開第２００２／０１６４３２８号；米国特許出願公開第２００４／００９３６２１号；米国特許出願公開第２００４／０１３２１４０号；米国特許出願公開第２００４／０１１０７０４号；米国特許出願公開第２００４／０１１０２８２号；米国特許出願公開第２００４／０１０９８６５号；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；ＷＯ２００５／０５３７４２；ＷＯ２００２／０３１１４０；Ｏｋａｚａｋｉら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体生産可能な細胞株の例としては、タンパク質フコシル化に欠けているＬｅｃ１３ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；米国特許出願公開第２００３／０１５７１０８Ａ１号，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２Ａ１，Ａｄａｍｓら，特に実施例１１）、及びノックアウト細胞株、例えばアルファ−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子、ＦＵＴ８、ノックアウトＣＨＯ細胞（例えば、Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）；Ｋａｎｄａ，Ｙら，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｅｎｇ．，９４（４）：６８０−６８８（２００６）；及びＷＯ２００３／０８５１０７を参照のこと）が挙げられる。
例えば、抗体のＦｃ領域に結合した二分オリゴ糖がＧｌｃＮＡｃにより二分される二分オリゴ糖を有する抗体変異体が更に提供される。そのような抗体変異体は、フコシル化が減少し、及び／又はＡＤＣＣ機能が改善されている場合がある。そのような抗体変異体の例は、例えば、ＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）；米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）；及び米国特許出願公開第２００５／０１２３５４６号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。Ｆｃ領域に結合したオリゴ糖に少なくとも１個のガラクトース残基を有する抗体変異体も提供される。このような抗体変異体は、改善されたＣＤＣ機能を有している場合がある。このような抗体変異体は、例えばＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）；ＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）；及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）に記載されている。
ｃ）Ｆｃ領域変異体
ある特定の実施形態では、１以上のアミノ酸修飾を、本明細書で提供される抗体のＦｃ領域に導入し、それによりＦｃ領域変異体を産生することができる。Ｆｃ領域変異体は、１以上のアミノ酸位置にアミノ酸修飾（例えば、置換）を含んでなるヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、一部であるが全てではないエフェクター機能を有する抗体変異体を企図し、これは、抗体を、インビボでの抗体の半減期は重要であるが、あるエフェクター機能（例えば、補体及びＡＤＣＣ）が不要であるか又は有害である用途のために望ましい候補とする。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の減少／喪失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボ細胞傷害性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）結合アッセイは、抗体がＦｃγＲ結合を欠く（それ故、ＡＤＣＣ活性を欠くと思われる）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持していることを確認するために実施することができる。ＡＤＣＣを媒介する主要な細胞であるＮＫ細胞はＦｃ（ＲＩＩＩのみを発現するのに対し、単球はＦｃ（ＲＩ、Ｆｃ（ＲＩＩ及びＦｃ（ＲＩＩＩを発現する。造血細胞上のＦｃＲ発現は、Ｒａｖｅｔｃｈ及びＫｉｎｅｔ， Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ９：４５７−４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。対象とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するための非限定的なインビトロアッセイが米国特許第５，５００，３６２号（例えばＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８３：７０５９−７０６３（１９８６）を参照のこと）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：１４９９−１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１−１３６１（１９８７）を参照のこと）に記載されている。別法では、非放射性アッセイ法が用いられ得る（例えば、フローサイトメトリー用のＡＣＴＩ（商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡ；及びＣｙｔｏ Ｔｏｘ９６（登録商標）非放射性細胞傷害性アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を参照のこと）。そのようなアッセイのために有用なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む。代替として、又は追加で、対象とする分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓ等ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）９５：６５２−６５６（１９９８）に記載されているような動物モデルにおいてインビボで評価することができる。Ｃｌｑ結合アッセイは、抗体がＣｌｑに結合できず、よってＣＤＣ活性を欠くことを確認するためにまた実施することができる。例えば、ＷＯ２００６／０２９８７９及びＷＯ２００５／１００４０２におけるＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照のこと。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを実施することができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ら，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５−１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．及びＭ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８−２７４３（２００４）を参照）。ＦｃＲｎ結合及びインビボクリアランス／半減期定量も当該技術分野で公知の方法を使用して実施することができる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ら，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９−１７６９ （２００６）を参照のこと）。
低下したエフェクター機能を有する抗体は、Ｆｃ領域残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９のうちの１以上の置換を有するものを含む（米国特許第６，７３７，０５６号）。そのようなＦｃ変異体は、アミノ酸位２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうちの２以上に置換を有するＦｃ変異体を含み、アラニンへの残基２６５及び２９７の置換を有するいわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの改善した又は低減した結合を有するある特定の抗体変異体が記載されている（例えば米国特許第６，７３７，０５６号；ＷＯ２００４／０５６３１２、及びＳｈｉｅｌｄｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１−６６０４（２００１）を参照のこと）。
ある特定の実施形態では、抗体変異体は、ＡＤＣＣを改善する１以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２９８、３３３、及び／又は３３４での置換（残基のＥＵ番号付け）を有するＦｃ領域を含む。
いくつかの実施形態では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、ＷＯ９９／５１６４２、及びＩｄｕｓｏｇｉｅら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８−４１８４（２０００）に記載されているように、改変された（すなわち、改善され又は減少した）Ｃｌｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）を生じる改変がＦｃ領域に改変がなされる。
増大した半減期及び胎児への母性ＩｇＧの移動に関与する新生児Ｆｃレセプター（ＦｃＲｎ）（Ｇｕｙｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））への改善された結合性を有する抗体が、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４Ａ１（Ｈｉｎｔｏｎら）に記載されている。それらの抗体は、ＦｃＲｎへのＦｃ領域の結合を改善する一又は複数の置換を有するＦｃ領域を含む。そのようなＦｃ変異体は、Ｆｃ領域残基：２３８、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４又は４３４のうちの１以上での置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものを含む（米国特許第７，３７１，８２６号）。
Ｆｃ領域変異体の他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ， Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８−４０（１９８８）；米国特許第５，６４８，２６０号；米国特許第５，６２４，８２１号；及び国際公開第９４／２９３５１号も参照のこと。
ｄ）システイン操作抗体変異体
ある特定の実施形態では、システイン操作抗体、例えば抗体の１以上の残基がシステイン残基で置換される「ｔｈｉｏＭＡｂｓ」を作ることが望ましいことがある。特定の実施形態では、置換される残基が抗体の接近可能な部位で生じる。これらの残基をシステインと置換することによって、反応性チオール基が抗体の接近可能な部位に位置し、抗体を他の部分、例えば薬剤部分又はリンカー薬剤部分に結合させ、本明細書で更に記載されるように免疫コンジュゲートを作るために使用することができる。ある特定の実施形態では、以下の残基の任意の１以上：すなわち、軽鎖のＶ２０５（カバット番号付け）；重鎖のＡ１１８（ＥＵ番号付け）；及び重鎖Ｆｃ領域のＳ４００（ＥＵ番号付け）が置換され得る。システイン操作抗体は、例えば米国特許第７，５２１，５４１号に記載されるようにして、産生することができる。
ｅ）抗体誘導体
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される抗体は、当該技術分野において知られており、すぐに利用できる更なる非タンパク質性部分を含むように更に修飾することができる。抗体の誘導体化に適した部分は、限定しないが、水溶性ポリマーを含む。水溶性ポリマーの非限定的な例としては、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ−１，３−ジオキソラン、ポリ−１，３，６−トリオキサン、エチレン／無水マレイン酸コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーかランダムコポリマー）、及びデキストラン又はポリ（ｎ−ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール（例えばグリセロール）、ポリビニルアルコール、及びそれらの混合物が挙げられる。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中におけるその安定性のために製造の際に有利であり得る。ポリマーは任意の分子量であってもよく、分枝状でも非分枝状であってもよい。抗体に結合するポリマーの数は変化してもよく、一を超えるポリマーが結合する場合、それらは同じ分子であっても異なった分子であってもよい。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数及び／又はタイプは、限定されるものではないが、その抗体誘導体が定まった条件下での治療に使用されるかどうか等を含む、改善される抗体の特定の性質又は機能を含む考慮事項に基づいて決定することができる。
他の実施形態では、放射線への暴露によって選択的に加熱され得る非タンパク質部分及び抗体の複合体が提供される。一実施形態では、非タンパク質部分はカーボンナノチューブである（Ｋａｍら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００−１１６０５（２００５））。放射線は任意の波長のものであってよく、限定するものではないが、通常の細胞に害を与えないが、抗体−非タンパク質様部分に近位の細胞が殺傷する温度まで非タンパク質部分を加熱する波長が含まれる。
Ｂ．組換え法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載される、組み換え法及び組成物を使用して産生されてもよい。一実施形態において、本明細書に記載される抗ＦｃＲＨ５抗体をコードする単離された核酸が提供される。かかる核酸は、抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び／又はＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖及び／又は重鎖）をコードし得る。更なる実施形態では、この核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。更なる実施形態では、この核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、又は（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第一のベクター、及び抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第二のベクターを含む（例えば、それらで形質転換されている）。一実施形態では、宿主細胞は、真核性、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体を作製する方法が提供され、この方法は、上に提供される抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することを含み、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養培地）から回収することを含む。
抗ＦｃＲＨ５抗体の組み換え産生のために、例えば、上述の、抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内における更なるクローニング及び／又は発現のために、１以上のベクター中に挿入される。そのような核酸は、慣例の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合可能である、オリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）、容易に単離することができ、配列決定することができる。
抗体をコードするベクターのクローニング、又は発現に好適な宿主細胞としては、本明細書に記載される原核性又は真核性細胞が挙げられる。例えば、抗体は、特にグリコシル化及びＦｃエフェクター機能が必要とされない場合に、細菌において産生されてもよい。細菌における抗体断片及びポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、及び同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３），ｐｐ．２４５−２５４（大腸菌における抗体断片の発現を記載する）も参照のこと）。発現後、抗体は、可溶性画分として細菌細胞ペーストから単離することもでき、また更に精製することもできる。原核生物に加えて、糸状菌又は酵母等の真核微生物は、抗体をコードするベクターに好適なクローニング又は発現宿主であり、それには、グリコシル化経路が「ヒト化」されており、部分的又は完全ヒトグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす、真菌及び酵母株が含まれる。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９−１４１４（２００４）、及びＬｉら，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０−２１５（２００６）を参照のこと。
グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞は、多細胞生物（無脊椎動物及び脊椎動物）にも由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物及び昆虫細胞が挙げられる。昆虫細胞と併せて、特にヨトウガ細胞のトランスフェクションのために、使用され得る、多数のバキュロウイルス株が特定されている。また、植物細胞培養物も、宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、及び同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ（商標）技術を記載している）を参照のこと。
また、脊椎動物細胞も宿主として使用することができる。例えば、懸濁液中で成長するように適合された哺乳類細胞株が、有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株（ＣＯＳ−７）；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されている、２９３又は２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３−２５１（１９８０）に記載されている、ＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ−７６）；ヒト子宮頚がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝がん細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス乳腺腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；例えば、Ｍａｔｈｅｒら，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４−６８（１９８２）に記載されている、ＴＲＩ細胞；ＭＲＣ ５細胞；及びＦＳ４細胞がある。他の有用な哺乳類宿主細胞株には、ＤＨＦＲ−ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０）を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞；並びにＹ０、ＮＳ０、及びＳｐ２／０等の骨髄腫細胞株が含まれる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ），ｐｐ．２５５−２６８（２００３）を参照のこと
Ｃ．アッセイ
本明細書で提供される抗ＦｃＲＨ５抗体は、それらの物理／化学特性及び／又は生物活性について、当該技術分野で公知の種々のアッセイによって、特定し、スクリーニングし、又は特徴付けすることができる。
一態様では、本発明の抗体は、その抗原結合活性について、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＢＩＡＣｏｒｅ（登録商標）、ＦＡＣＳ、又はウェスタンブロット等の既知の方法によって、試験される。
他の態様では、競合アッセイを使用して、ＦｃＲＨ５への結合に対して、本明細書に記載される抗体のいずれかと競合する抗体を特定することができる。ある特定の実施形態では、そのような競合抗体は、本明細書に記載される抗体によって結合されるのと同じエピトープ（例えば、直線状又は立体配座エピトープ）に結合する。抗体が結合するエピトープをマッピングするための詳細な例となる方法は、Ｍｏｒｒｉｓ（１９９６）“Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，” ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｖｏｌ．６６（Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ）に提供される。
例となる競合アッセイでは、固定化されたＦｃＲＨ５が、ＦｃＲＨ５に結合する第一の標識抗体（例えば、本明細書に記載される抗体のいずれか）、及びＦｃＲＨ５への結合に対して第一の抗体と競合するその能力について試験されている第二の未標識抗体を含む、溶液中でインキュベートされる。第二の抗体は、ハイブリドーマ上清中に存在していてもよい。対照として、固定化されたＦｃＲＨ５が、第一の標識抗体を含むが、第二の未標識抗体を含まない、溶液中でインキュベートされる。ＦｃＲＨ５への第一の抗体の結合を許容する条件下でのインキュベーションの後、過剰の非結合抗体を除去し、固定化されたＦｃＲＨ５に関連する標識の量が測定される。固定化されたＦｃＲＨ５に関連する標識の量が、対照試料と比べて試験試料中で実質的に低減される場合、それは、第二の抗体がＦｃＲＨ５への結合に対して第一の抗体と競合することを示す。Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ ｃｈ．１４（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ）を参照のこと。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はＦｃＲＨ５ｃである。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
Ｄ．イムノコンジュゲート
また、本発明は、本明細書において、化学療法剤若しくは化学療法薬、成長阻害性薬剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらの断片）、又は放射性同位体（すなわち、放射性複合体）等の、１つ以上の細胞傷害性薬剤に複合される抗ＦｃＲＨ５抗体を含む、イムノコンジュゲートも提供する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体はＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
イムノコンジュゲートは、腫瘍への薬物部分の標的化された送達を可能にし、いくつかの実施形態では、複合されていない薬物の全身投与により、正常な細胞にとって許容できないレベルの毒性をもたされ得る場合に、腫瘍中の細胞内蓄積を可能にする（Ｐｏｌａｋｉｓ Ｐ．（２００５）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ５：３８２−３８７）。
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、強力な細胞傷害性薬物の標的を抗原発現腫瘍細胞に定め（Ｔｅｉｃｈｅｒ，Ｂ．Ａ．（２００９）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ ９：９８２−１００４）、それによって、有効性を最大限にし、オフターゲット毒性を最小限にすることにより治療指数を増強し、抗体及び細胞傷害性薬物の両者の特性を組み合わる、標的を定められた化学療法分子である（Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．Ｊ．ａｎｄ Ｓｅｎｔｅｒ Ｐ．Ｄ．（２００８）Ｔｈｅ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．１４（３）：１５４−１６９、Ｃｈａｒｉ，Ｒ．Ｖ．（２００８）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：９８−１０７。
本明細書で提供されるＡＤＣ化合物としては、抗がん活性を有するものが挙げられる。いくつかの実施形態では、ＡＤＣ化合物としては、薬物部分に結合した、すなわち、共有結合した、抗体が挙げられる。いくつかの実施形態では、本抗体は、リンカーを通じて薬物部分と共有結合する。本発明の抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、有効用量の薬物を腫瘍組織に選択的に送達し、それによって、治療指数（「治療濃度域」）を増加させながら、より高い選択性、すなわちより低い効果的用量が、達成され得る。
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）の薬物部分（Ｄ）は、細胞傷害性又は細胞静止効果を有する任意の化合物、部分、又は基を含んでいてもよい。薬物部分は、チューブリン結合、ＤＮＡ結合又はインターカレーション、並びにＲＮＡポリメラーゼ、タンパク質合成、及び／又はトポイソメラーゼの阻害を含むが、これらに限定されない機構によって、それらの細胞傷害性及び細胞静止効果を付与することができる。例となる薬物部分としては、メイタンシノイド、ドラスタチン、アウリスタチン、カリケアミシン、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）、ネモルビシン及びその誘導体、ＰＮＵ−１５９６８２、アントラサイクリン、デュオカルマイシン、ビンカアルカロイド、タキサン、トリコテセン、ＣＣ１０６５、カンプトテシン、エリナフィド、並びに細胞傷害性活性を有するそれらの立体異性体、同配体、類似体、及び誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。そのようなイムノコンジュゲートの非限定的な例を、以下に更に詳細に考察する。
１．例となる抗体−薬物複合体
抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）化合物の例となる実施形態は、腫瘍細胞を標的とする抗体（Ａｂ）、薬物部分（Ｄ）、及びＡｂをＤに結合するリンカー部分（Ｌ）を含む。いくつかの実施形態では、本抗体は、リジン及び／又はシステイン等の１個以上のアミノ酸残基を通して、リンカー部分（Ｌ）に結合される。
例となるＡＤＣは、式Ｉ
Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐ Ｉ
を有し、式中、ｐは、１〜約２０である。いくつかの実施形態では、抗体と結合し得る薬物部分の数は、遊離システイン残基の数によって限定される。いくつかの実施形態では、遊離システイン残基が、本明細書に記載される方法によって抗体アミノ酸配列中に導入される。式Ｉの例となるＡＤＣとしては、１、２、３、又は４個の操作されたシステインアミノ酸を有する抗体が挙げられるが、これらに限定されない（Ｌｙｏｎ，Ｒ．ら，（２０１２）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍ．５０２：１２３−１３８）。いくつかの実施形態では、１個以上の遊離システイン残基が、操作を使用することなく、抗体においてすでに存在しており、その場合には、既存の遊離システイン残基を使用して、抗体を薬物と結合させてもよい。いくつかの実施形態では、本抗体は、１個以上の遊離システイン残基を生成するために、抗体の複合前に還元条件に曝露される。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
ａ）例となるリンカー
「リンカー」（Ｌ）は、１個以上の薬物部分（Ｄ）を抗体（Ａｂ）に連結して、式Ｉの抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）を形成するために使用し得る、二官能性又は多官能性部分である。いくつかの実施形態では、抗体−薬物複合体（ＡＤＣ）は、薬物に及び抗体に共有結合するための反応性官能基を有するリンカーを使用して、調製することができる。例えば、いくつかの実施形態では、抗体の（Ａｂ）システインチオールは、リンカーの反応性官能基との結合、又は薬物−リンカー中間体を形成して、ＡＤＣを製造することができる。
一態様では、リンカーは、抗体上に存在する遊離システインと反応して、共有結合を形成することが可能な官能性を有する。このような非限定的な例となる反応性官能基としては、マレイミド、ハロアセトアミド、α−ハロアセチル、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル等の活性化エステル、無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネート、及びイソチオシアネートが挙げられる。例えば、Ｋｌｕｓｓｍａｎ，ら（２００４），Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １５（４）：７６５−７７３の７６６ページにおける結合方法、及びその中の実施例を参照のこと。
いくつかの実施形態では、リンカーは、抗体上に存在する求電子基と反応することが可能な官能性を有する。例となるこのような求電子基としては、アルデヒド基及びケトンカルボニル基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、リンカーの反応性官能基のヘテロ原子が、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位との共有結合を形成することができる。非限定的な例となる、そのような反応性官能基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレート、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。
リンカーは、１つ以上のリンカー構成要素を含んでいてもよい。例となるリンカー構成要素にとしては、６−マレイミドカプロイル（「ＭＣ」）、マレイミドプロパノイル（「ＭＰ」）、バリン−シトルリン（「ｖａｌ−ｃｉｔ」又は「ｖｃ」）、アラニン−フェニルアラニン（「ａｌａ−ｐｈｅ」）、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（「ＰＡＢ」）、４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸Ｎ−スクシンイミジル（「ＳＰＰ」）、及び４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレート（「ＭＣＣ」）が挙げられる。種々のリンカー構成要素、当該技術分野で公知であり、このうちのいくつかを以下に記載する。
リンカーは、薬物の放出を容易にする「切断可能なリンカー」であってもよい。非限定的な例となる切断可能なリンカーとしては、酸不安定性リンカー（例えば、ヒドラゾンを含む）、プロテアーゼ感受性（例えば、ペプチダーゼ感受性）リンカー、感光性リンカー、又はジスルフィド含有リンカー（Ｃｈａｒｉら，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許第５２０８０２０号）が挙げられる。
ある特定の実施形態では、リンカーは以下の式ＩＩ：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ− ＩＩ
を有し、式中、Ａは、「ストレッチャ（ｓｔｒｅｔｃｈｅｒ）単位」であり、ａは、０〜１の整数であり、Ｗは、「アミノ酸単位」であり、ｗは、０〜１２の整数であり、Ｙは、「スペーサー単位」であり、ｙは、０、１、又は２であある。式ＩＩのリンカーを含むＡＤＣは式Ｉ（Ａ）：Ａｂ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−Ｄ）ｐを有し、式中、Ａｂ、Ｄ及びｐは、式Ｉについて上記で定義された通りである。このようなリンカーの例となる実施形態は、参照により本明細書に組み入れられる、米国特許第７，４９８，２９８号に記載されている。
いくつかの実施形態では、リンカー構成要素は、抗体を他のリンカー構成要素、又は薬物部分に連結する、「ストレッチャ単位」（Ａ）を含む。非限定的な例となるストレッチャ単位を以下に示す（式において、波線は、抗体、薬物、又は追加のリンカー構成要素への共有結合の部位を示す）：
いくつかの実施形態では、リンカー構成要素は、「アミノ酸単位」を含む。そのような実施形態のいくつかにおいては、アミノ酸単位は、プロテアーゼによるリンカーの切断を可能にし、それによって、リソソーム酵素等の細胞内プロテアーゼへの曝露時にイムノコンジュゲートからの薬物の放出を容易にする（Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１：７７８−７８４）。例となるアミノ酸単位としては、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。例となるジペプチドとしては、バリン−シトルリン（ｖｃ又はｖａｌ−ｃｉｔ）、アラニン−フェニルアラニン（ａｆ又はａｌａ−ｐｈｅ）、フェニルアラニン−リジン（ｆｋ又はｐｈｅ−ｌｙｓ）、フェニルアラニン−ホモリジン（ｐｈｅ−ｈｏｍｏｌｙｓ）、及びＮ−メチル−バリン−シトルリン（Ｍｅ−ｖａｌ−ｃｉｔ）が挙げられるが、これらに限定されない。例となるトリペプチドとしては、グリシン−バリン−シトルリン（ｇｌｙ−ｖａｌ−ｃｉｔ）及びグリシン−グリシン−グリシン（ｇｌｙ−ｇｌｙ−ｇｌｙ）が挙げられるが、これらに限定されない。アミノ酸単位は、天然のアミノ酸残基、並びに／又は微量アミノ酸、及び／若しくはシトルリン等の非天然のアミノ酸類似体を含んでいてもよい。アミノ酸単位は、特定の酵素、例えば、腫瘍関連プロテアーゼ、カテプシンＢ、Ｃ、及びＤ、又はプラスミンプロテアーゼによる、酵素的切断のために設計し、最適化することができる。
通常は、ペプチド型リンカーは、２個以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片の間にペプチド結合を形成することによって、調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、液相合成法により調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌｕｂｋｅ（１９６５）“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６−１３６，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）。
いくつかの実施形態では、リンカー構成要素は、直接、又はストレッチャー単位及び／若しくはアミノ酸単位を通してのいずれかにより、抗体を薬物部分に連結させる「スペーサー単位」（Ｙ）を含む。スペーサー単位は、「自壊性（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）」又は「非自壊性」であり得る。「非自壊性」スペーサー単位は、ＡＤＣの開裂時にスペーサー単位の一部又は全てが薬物部分に結合したままであるものである。非自壊性スペーサー単位の例としては、グリシンスペーサー単位及びグリシン−グリシンスペーサー単位が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、腫瘍細胞関連プロテアーゼによる、グリシン−グリシンスペーサー単位を含むＡＤＣの酵素的開裂は、ＡＤＣの残りの部分からのグリシン−グリシン−薬物部分の放出をもたらす。いくつかの実施形態では、グリシン−グリシン−薬物部分は、腫瘍細胞内で加水分解ステップを受け、それによって、グリシン−グリシンスペーサー単位を薬物部分から開裂する。
「自壊性」スペーサー単位は、薬物部分の放出を可能にする。ある特定の実施形態では、リンカーのスペーサー単位は、ｐ−アミノベンジル単位を含む。このような実施形態のいくつかでは、ｐ−アミノベンジルアルコールは、アミド結合を介してアミノ酸単位に結合し、カルバミン酸塩、メチルカルバミン酸塩、又は炭酸塩が、ベンジルアルコールと薬物との間に作製される（Ｈａｍａｎｎら，（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ（２００５）１５：１０８７−１１０３）。いくつかの実施形態では、スペーサー単位は、ｐ−アミノベンジルオキシカルボニル（ＰＡＢ）を含む。いくつかの実施形態では、自己犠牲型リンカーを含むＡＤＣは、構造、
を有し、式中、Ｑは、−Ｃ１−Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロ、又はシアノであり、ｍは、０〜４の範囲の整数であり、Ｘは、１つ以上の追加のスペーサー単位であり得るか、又は非存在であり得、ｐは、１〜約２０の範囲である。いくつかの実施形態では、ｐは、１〜１０、１〜７、１〜５、又は１〜４の範囲である。非限定的な例となるＸスペーサー単位としては、
が挙げられ、式中、Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ−ＣＨ３である。
自壊性スペーサーの他の例としては、２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体等の、ＰＡＢ基と電子的に同様である芳香族化合物（米国特許第７，３７５，０７８号、Ｈａｙら，（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７）及びオルト−又はパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、置換及び非置換４−アミノ酪酸アミド（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら（１９９５）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｂｉｏｌｏｇｙ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］及びビシクロ［２．２．２］環系（Ｓｔｏｒｍら（１９７２）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）、並びに２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（Ａｍｓｂｅｒｒｙら（１９９０）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）等の、アミド結合加水分解時に環化を経るスペーサーを使用することができる。グリシン残基のα−炭素への薬物の結合は、ＡＤＣにおいて有用であり得る自壊性スペーサーの他の例である（Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら（１９８４）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）。
いくつかの実施形態では、リンカーＬは、分岐する多機能性リンカー部分を通した、抗体への１つを超える薬物部分の共有結合のための、樹状型リンカーであってもよい（Ｓｕｎら（２００２）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：２２１３−２２１５、Ｓｕｎら（２００３）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １１：１７６１−１７６８）。樹状リンカーは、ＡＤＣの効力に関連する、薬物対抗体のモル比、すなわち、負荷を増加させることができる。したがって、抗体が１個のみの反応性システインチオール基を担持する場合、樹状リンカーを通して多数の薬物部分を結合することができる。
非限定的な例となるリンカーを、式ＩのＡＤＣとの関連において以下に示す：
（式中、Ｒ１及びＲ２は、独立して、Ｈ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ−ＣＨ３である）；
（式中、ｎは０〜１２である。いくつかの実施形態では、ｎは２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｎは４〜８である。）
更なる非限定的な例となるＡＤＣとしては以下の構造が挙げられる：
式中、Ｘは、
であり、Ｙは、
であり、Ｒは独立してＨ又はＣ１−Ｃ６アルキルであり、ｎは１〜１２である）。
いくつかの実施形態では、リンカーは、溶解度及び／又は反応性を調節する基で置換される。非限定的な例として、スルホン酸塩（−ＳＯ３ −）又はアンモニウム等の荷電置換基は、リンカー試薬の水溶性を増加させ、抗体及び／若しくは薬物部分とのリンカー試薬のカップリング反応を促進することができ、又はＡＤＣを調製するために用いられる合成経路に応じて、ＤとのＡｂ−Ｌ（抗体−リンカー中間体）、若しくはＡｂとのＤ−Ｌ（薬物−リンカー中間体）のカップリング反応を促進することができる。いくつかの実施形態では、リンカーの一部が抗体にカップリングされ、リンカーの一部分が薬物にカップリングされ、次いでＡｂ−（リンカー部分）ａが薬物−（リンカー部分）ｂにカップリングされて、式ＩのＡＤＣが形成される。
本発明の化合物は、限定されないが、以下のリンカー試薬とともに調製されるＡＤＣを明示的に企図する：ビス−マレイミド−トリオキシエチレングリコール（ＢＭＰＥＯ）、Ｎ−（β−マレイミドプロピルオキシ）−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＢＭＰＳ）、Ｎ−（ε−マレイミドカプロイルオキシ）コハク酸イミドエステル（ＥＭＣＳ）、Ｎ−［γ−マレイミドブチリルオキシ］コハク酸イミドエステル（ＧＭＢＳ）、１，６−ヘキサン−ビス−ビニルスルホン（ＨＢＶＳ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロン酸塩）（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル（ＭＢＳ）、４−（４−Ｎ−マレイミドフェニル）酪酸ヒドラジド（ＭＰＢＨ）、コハク酸イミジル３−（ブロモアセトアミド）プロピオン酸塩（ＳＢＡＰ）、コハク酸イミジルヨード酢酸塩（ＳＩＡ）、コハク酸イミジル（４−ヨードアセチル）アミノ安息香酸塩（ＳＩＡＢ）、Ｎ−コハク酸イミジル−３−（２−ピリジルジチオ）プロピオン酸塩（ＳＰＤＰ）、Ｎ−コハク酸イミジル−４−（２−ピリジルチオ）ペンタン酸塩（ＳＰＰ）、コハク酸イミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボン酸塩（ＳＭＣＣ）、コハク酸イミジル４−（ｐ−マレイミドフェニル）酪酸塩（ＳＭＰＢ）、コハク酸イミジル６−［（β−マレイミドプロピオンアミド）ヘキサン酸塩］（ＳＭＰＨ）、イミノチオラン（ＩＴ）、スルホ−ＥＭＣＳ、スルホ−ＧＭＢＳ、スルホ−ＫＭＵＳ、スルホ−ＭＢＳ、スルホ−ＳＩＡＢ、スルホ−ＳＭＣＣ、及びスルホ−ＳＭＰＢ、並びにコハク酸イミジル−（４−ビニルスルホン）安息香酸塩（ＳＶＳＢ）、及び次のビス−マレイミド試薬を含む：ジチオビスマレイミドエタン（ＤＴＭＥ）、１，４−ビスマレイミドブタン（ＢＭＢ）、１，４ビスマレイミジル−２，３−ジヒドロキシブタン（ＢＭＤＢ）、ビスマレイミドヘキサン（ＢＭＨ）、ビスマレイミドエタン（ＢＭＯＥ）、ＢＭ（ＰＥＧ）２（下に示される）、及びＢＭ（ＰＥＧ）３（下に示される）；イミドエステルの二機能性誘導体（アジプイミド酸ジメチルＨＣｌ等）、活性エステル（スベリン酸ジスクシンイミジル等）、アルデヒド（グルタルアルデヒド等）、ビス−アジド化合物（ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミン等）、ビス−ジアゾニウム誘導体（ビス−（ｐ−ジアゾニウムンゾイル等）−エチレンジアミン）、ジイソシアン酸塩（トルエン２，６−ジイソシアン酸塩等）、及びビス活性フッ素化合物（１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼン等）。いくつかの実施形態では、ビス−マレイミド試薬は、チオール含有薬物部分、リンカー、又はリンカー−薬物中間体への、抗体におけるシステインのチオール基の結合を可能にする。チオール基と反応性である他の官能基としては、ヨードアセトアミド、ブロモアセトアミド、ビニルピリジン、ジスルフィド、ピリジルジスルフィド、イソシアン酸塩、及びイソチオシアン酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。
ある特定の有用なリンカー試薬は、Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．（Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）等の、種々の商業的供給源から得ることができ、又は当該技術分野において記載されている方法、例えば、Ｔｏｋｉら（２００２）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら，（１９９７）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，３８：５２５７−６０、Ｗａｌｋｅｒ，Ｍ．Ａ．（１９９５）Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０：５３５２−５３５５、Ｆｒｉｓｃｈら（１９９６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６、米国特許第６２１４３４５号、ＷＯ０２／０８８１７２、米国特許出願公開第２００３１３０１８９号、米国特許出願抗体第２００３０９６７４３号、ＷＯ０３／０２６５７７、ＷＯ０３／０４３５８３、及びＷＯ０４／０３２８２８に記載されている方法に従って合成することができる。
炭素−１４標識１−イソチオシアナトベンジル−３−メチルジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＭＸ−ＤＴＰＡ）は、抗体への放射性ヌクレオチドの結合のための、例となるキレート剤である。例えば、ＷＯ９４／１１０２６を参照のこと。
ｂ）薬物部分
（１）メイタンシン及びメイタンシノイド
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、１個以上のメイタンシノイド分子と結合する抗体を含む。メイタンシノイドは、メイタンシンの誘導体であり、チューブリン重合を阻害することによって作用する有糸分裂（ｍｉｔｏｔｏｔｉｃ）阻害剤である。メイタンシンは、東アフリカの低木であるメイテナス・セラタ（Ｍａｙｔｅｎｕｓ ｓｅｒｒａｔａ）から最初に単離された（米国特許第３８９６１１１号）。その後、ある特定の微生物も、メイタンシノール及びＣ−３メイタンシノールエステル等のメイタンシノイドを産生することが発見された（米国特許第４，１５１，０４２号）。合成メイタンシノイドは、例えば、米国特許第４，１３７，２３０号、同第４，２４８，８７０号、同第４，２５６，７４６号、同第４，２６０，６０８号、同第４，２６５，８１４号、同第４，２９４，７５７号、同第４，３０７，０１６号、同第４，３０８，２６８号、同第４，３０８，２６９号、同第４，３０９，４２８号、同第４，３１３，９４６号、同第４，３１５，９２９号、同第４，３１７，８２１号、同第４，３２２，３４８号、同第４，３３１，５９８号、同第４，３６１，６５０号、同第４，３６４，８６６号、同第４，４２４，２１９号、同第４，４５０，２５４号、同第４，３６２，６６３号、及び同第４，３７１，５３３号に記載されている。
メイタンシノイド薬物部分は、それらが、（ｉ）発酵又は醗酵産物の化学修飾若しくは誘導体化によって調製するのに比較的利用しやすく、（ｉｉ）抗体への非ジスルフィドリンカーを通した結合に好適な官能基による誘導体化を受けやすく、（ｉｉｉ）血漿中で安定しており、（ｉｖ）多様な腫瘍細胞株に対して有効であるので、抗体−薬物複合体における魅力的な薬物部分である。
メイタンシノイド薬物部分として使用するのに好適なある特定のメイタンシノイドは、当該技術分野で公知であり、公知の方法により天然源から単離することができ、又は遺伝子操作技術を使用して産生することができる（例えば、Ｙｕら（２００２）ＰＮＡＳ ９９：７９６８−７９７３を参照のこと）。また、メイタンシノイドは、公知の方法により合成的に調製することができる。
メイタンシノイド薬物部分としては、Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４２５６７４６号）（例えば、アンサミトシン（ａｎｓａｍｙｔｏｃｉｎ）Ｐ２の水素化アルミニウムリチウム還元によって調製される）；Ｃ−２０−ヒドロキシ（又はＣ−２０−デメチル）＋／−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４３６１６５０号及び同第４３０７０１６号）（例えば、ストレプトミセス若しくはアクチノミセスを使用したデメチル化、又はＬＡＨを使用した脱塩素によって調製される）；及びＣ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋／−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（例えば、塩化アシルを使用したアシル化によって調製される）等の、修飾された芳香族環を有するもの、並びに芳香族環の他の位置に修飾を有するものが挙げられるが、これらに限定されない。
また、メイタンシノイド薬物部分としては、Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４４２４２１９号）（例えば、Ｈ２Ｓ又はＰ２Ｓ５とのメイタンシノールの反応によって調製される）；Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ／ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４３３１５９８号）；Ｃ−１４−ヒドロキシメチル又はアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨ又はＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４４５０２５４号）（例えば、ノカルジアから調製される）；Ｃ−１５−ヒドロキシ／アシルオキシ（米国特許第４３６４８６６号）（例えば、ストレプトミセスによるメイタンシノールの変換によって調製される）；Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４３１３９４６号及び同第４３１５９２９号）（例えば、トレビア・ヌーディフロラ（Ｔｒｅｗｉａ ｎｕｄｌｆｌｏｒａ）から単離される）；Ｃ−１８−Ｎ−デメチル（米国特許第４３６２６６３号及び同第４３２２３４８号）（例えば、ストレプトミセスによるメイタンシノールのデメチル化によって調製される）；及び４，５−デオキシ（米国特許第４３７１５３３号）（例えば、メイタンシノールの三塩化チタン／ＬＡＨ還元によって調製される）等の、修飾を有するものも挙げられる。
メイタンシノイド化合物上の多くの位置は、結合位置として有用である。例えば、エステル結合は、従来のカップリング技法を使用したヒドロキシル基との反応によって形成することができる。いくつかの実施形態では、反応は、ヒドロキシル基を有するＣ−３位、ヒドロキシメチルで修飾されたＣ−１４位、ヒドロキシル基で修飾されたＣ−１５位、及びヒドロキシル基を有するＣ−２０位において生じ得る。いくつかの実施形態では、結合は、メイタンシノール又はメイタンシノール類似体のＣ−３位で形成される。
メイタンシノイド薬物部分は、以下の構造を有するものを含み：
式中、波線は、ＡＤＣのリンカーへの、メイタンシノイド薬物部分の硫黄原子の共有結合を示す。各Ｒは独立して、Ｈ又はＣ１−Ｃ６アルキルであってもよい。アミド基を硫黄原子に結合するアルキレン鎖は、メタニル、エタニル、又はプロピルであってもよい。すなわち、ｍは、１、２又は３である（米国特許第６３３４１０号、米国特許第５２０８０２０号、Ｃｈａｒｉら（１９９２）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５２：１２７−１３１、Ｌｉｕら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ９３：８６１８−８６２３）。
メイタンシノイド薬物部分の全ての立体異性体、すなわちキラル炭素におけるＲ及びＳ配置の任意の組み合わせが、本明細書に提供される発明のＡＤＣについて企図される（それらの全体が参照により本明細書に組み入れられる米国特許第７２７６４９７号、米国特許第６９１３７４８号、米国特許第６４４１１６３号、米国特許第６３３４１０号（ＲＥ３９１５１）、米国特許第５２０８０２０号、Ｗｉｄｄｉｓｏｎら（２００６）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４９：４３９２−４４０８）。いくつかの実施形態では、メイタンシノイド薬物部分は以下の立体構造を有する：
メイタンシノイド薬物部分の例となる実施形態としては、以下の構造を有するを有する、ＤＭ１、ＤＭ３、及びＤＭ４が挙げられるが、これらに限定されず：
式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への、薬物の硫黄原子の共有結合を示す。
他の例となるメイタンシノイド抗体−薬物複合体は、以下の構造及び略号を有する。（式中、Ａｂは抗体であり、ｐは１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｐは１〜１０であるか、ｐは１〜７であるか、ｐは１〜５であるか、又はｐは１〜４である。）：
ＤＭ１がＢＭＰＥＯリンカーを通して、抗体のチオール基に連結される場合の、例となる抗体−薬物複合体は、以下の構造及び略号：
を有し、式中、Ａｂは抗体であり、ｎは、０、１又は２であり、ｐは１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｐは１〜１０であるか、ｐは１〜７であるか、ｐは１〜５であるか、又はｐは１〜４である。
メイタンシノイドを含むイムノコンジュゲート、その製造方法、及びそれらの治療的使用は、例えば、米国特許第５，２０８，０２０号及び米国特許第５，４１６，０６４号、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２ Ａ１号、及び欧州特許第ＥＰ ０ ４２５ ２３５ Ｂ１号に記載されており、それらの開示は参照により本明細書に明示的に組み入れられる。また、Ｌｉｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：８６１８−８６２３（１９９６）、及びＣｈａｒｉら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）も参照のこと。
いくつかの実施形態では、抗体−メイタンシノイド複合体は、抗体又はメイタンシノイド分子のいずれの生物活性も有意に低減することなく、抗体をメイタンシノイド分子に化学結合することによって調製することができる。例えば、米国特許第５，２０８，０２０号を参照のこと（その開示は参照により本明細書に明示的に組み入れられる）。いくつかの実施形態では、抗体１分子当たり平均３〜４個のメイタンシノイド分子が結合したＡＤＣが、抗体の機能又は溶解度に悪影響を及ぼすことなく標的細胞の細胞傷害性を増強することにおいて、有効性を示している。ある事例において、毒素／抗体の１個の分子でさえも、裸の抗体の使用を上回って細胞傷害性を増強することが予想される。
抗体−メイタンシノイド複合体を作製するための連結基としては、例えば、本明細書に記載されるもの、並びに米国特許第５２０８０２０号；欧州特許第０ ４２５ ２３５ Ｂ１号；Ｃｈａｒｉら．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５２：１２７−１３１（１９９２）、米国特許出願公開第２００５／０２７６８１２ Ａ１号、及び米国特許出願公開第２００５／０１６９９３ Ａ１号に記載されるものが挙げられ、それらの開示は参照により本明細書に明示的に組み入れられる。
（２）オールスタチン及びドラスタチン
薬物部分としては、ドラスタチン、アウリスタチン、並びにそれらの類似体及び誘導体が挙げられる（米国特許第５６３５４８３号、米国特許第５７８０５８８号、米国特許第５７６７２３７号、米国特許第６１２４４３１号）。アウリスタチンは、海洋軟体動物化合物ドラスタチン−１０の誘導体である。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、ドラスタチン及びアウリスタチンは、微小管運動、ＧＴＰ加水分解、並びに核及び細胞分裂に干渉し（Ｗｏｙｋｅら（２００１）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗がん（米国特許第５６６３１４９号）及び抗真菌活性を有すること（Ｐｅｔｔｉｔら（１９９８）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５）が示されている。ドラスタチン／アウリスタチン薬物部分は、ペプチド性薬物部分のＮ（アミノ）末端又はＣ（カルボキシル）末端を通して抗体に結合することができる（ＷＯ０２／０８８１７２号、Ｄｏｒｏｎｉｎａら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２１（７）：７７８−７８４、Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２００３）Ｂｌｏｏｄ １０２（４）：１４５８−１４６５）。
例となるアウリスタチン実施形態としては、米国特許第７４９８２９８号及び米国特許第７６５９２４１号に開示される、以下のＮ末端連結モノメチルアウリスタチン薬物部分ＤＥ及びＤＦが含まれ、その開示は参照によりそれらの全体が明示的に本明細書に組み入れられる：
式中、ＤＥ及びＤＦの波線は、抗体又は抗体−リンカー成分への共有結合部位を示し、各場所において独立して；
Ｒ２は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され；
Ｒ５は、Ｈ及びメチルから選択されるか、
又はＲ４及びＲ５は一緒に、炭素環式環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、式中、Ｒａ及びＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、及びＣ３−Ｃ８炭素環から選択され、ｎは、２、３、４、５、及び６から選択され；
Ｒ６は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）、Ｃ３−Ｃ８複素環、及びＣ１−Ｃ８アルキル−（Ｃ３−Ｃ８複素環）から選択され、
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ３−Ｃ８炭素環、及びＯ−（Ｃ１−Ｃ８アルキル）から選択され、
Ｒ９は、Ｈ及びＣ１−Ｃ８アルキルから選択され、
Ｒ１０は、アリール又はＣ３−Ｃ８複素環から選択され、
Ｚは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、若しくはＮＲ１２であり、式中、Ｒ１２は、Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３−Ｃ８複素環、−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−Ｒ１４、又は−（Ｒ１３Ｏ）ｍ−ＣＨ（Ｒ１５）２から選択され、
ｍは、１〜１０００の範囲の整数であり、
Ｒ１３は、Ｃ２−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１４は、Ｈ若しくはＣ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１５の各出現は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈ、又は−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３〜Ｃ１−Ｃ８アルキルであり、
Ｒ１６の各出現は独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、又は−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨであり、
Ｒ１８は、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリール、−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８複素環）、及びＣ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−（Ｃ３−Ｃ８炭素環）から選択され、
ｎは、０〜６の範囲の整数である。
一実施形態では、Ｒ３、Ｒ４及びＲ７は独立して、イソプロピル又はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は−Ｈ又はメチルである。例となる実施形態では、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
更なる実施形態では、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
更に他の実施形態では、Ｒ８の各出現は、−ＯＣＨ３である。
いくつかの実施形態では、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ８の各出現は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は、−Ｈである。
一実施形態では、Ｚは−Ｏ−又はＮＨ−である。
一実施形態において、Ｒ１０はアリールである。
例となる実施形態において、Ｒ１０は−フェニルである。
例となる実施形態では、Ｚが−Ｏ−であるとき、Ｒ１１は、−Ｈ、メチル、又はｔ−ブチルである。
一実施形態では、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ３）ｎ−Ｎ（Ｒ１６）２であり、Ｒ１６は、−Ｃ１−Ｃ８アルキル又は（ＣＨ２）ｎ−ＣＯＯＨである。
他の実施形態では、Ｚが−ＮＨであるとき、Ｒ１１は、−ＣＨ（Ｒ１５）２であり、式中、Ｒ１５は、−（ＣＨ２）ｎ−ＳＯ３Ｈである。
式ＤＥの例となるアウリスタチン実施形態は、次のＭＭＡＥであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
式ＤＦの例となるアウリスタチン実施形態は、次のＭＭＡＦであり、式中、波線は、抗体−薬物複合体のリンカー（Ｌ）への共有結合を示す：
他の例となる実施形態としては、ペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニンカルボキシ修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８８４８号）、及びペンタペプチドアウリスタチン薬物部分のＣ末端にフェニルアラニン側鎖修飾を有するモノメチルバリン化合物（国際公開第２００７／００８６０３号）が挙げられる。
ＭＭＡＥ又はＭＭＡＦ及び種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、以下の構造及び略号を有し、式中、「Ａｂ」は抗体であり、ｐは１〜約８であり、「Ｖａｌ−Ｃｉｔ」は、バリン−シトルリンジペプチドであり、「Ｓ」は硫黄原子である：
ＭＭＡＦ及び種々のリンカー構成要素を含む、式ＩのＡＤＣの非限定的な例となる実施形態としては、Ａｂ−ＭＣ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ及びＡｂ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦが更に挙げられる。タンパク質分解性に開裂可能でないリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートは、タンパク分解性に開裂可能なリンカーによって抗体に結合したＭＭＡＦを含むイムノコンジュゲートに匹敵する活性を保有することが示されている（Ｄｏｒｏｎｉｎａら．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４）。このような実施形態のいくつかにおいて、薬物放出は、細胞内の抗体分解によって達成されると考えられている。
通常は、ペプチドをベースとする薬物部分は、２つ以上のアミノ酸及び／又はペプチド断片との間にペプチド結合を形成することによって調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、液相合成法により調製することができる（例えば、Ｅ．Ｓｃｈｒｏｄｅｒ ａｎｄ Ｋ．Ｌｕｂｋｅ，“Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ”，ｖｏｌｕｍｅ １，ｐｐ ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓを参照のこと）。アウリスタチン／ドラスタチン薬物部分は、いくつかの実施形態では、米国特許第７４９８２９８号、米国特許第５６３５４８３号、米国特許第５７８０５８８号、Ｐｅｔｔｉｔら（１９８９）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５、Ｐｅｔｔｉｔら（１９９８）Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ １３：２４３−２７７、Ｐｅｔｔｉｔ，Ｇ．Ｒ．ら．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９９６，７１９−７２５、Ｐｅｔｔｉｔら（１９９６）Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１ ５：８５９−８６３、及びＤｏｒｏｎｉｎａ（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２１（７）：７７８−７８４の方法より調製してもよい。
いくつかの実施形態では、ＭＭＡＥ等の式ＤＥ、及びＭＭＡＦ等の式ＤＦのアウリスタチン／ドラスタチン薬物部分、並びにＭＣ−ＭＭＡＦ、ＭＣ−ＭＭＡＥ、ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＦ、及びＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＥ等のそれらの薬物−リンカー中間体及び誘導体は、米国特許第７４９８２９８号、Ｄｏｒｏｎｉｎａら．（２００６）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１７：１１４−１２４、及びＤｏｒｏｎｉｎａら．（２００３）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２１：７７８−７８４に記載される方法を使用して調製されてもよく、次いで目的の抗体と結合してもよい。
（３）カリケアマイシン
いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートは、１個以上のカリケアマイシン分子と結合する抗体を含む。抗生物質のカリケアマイシンファミリー、及びそれらの類似体は、ピコモル未満の濃度で２本鎖ＤＮＡ切断をもたらすことが可能である（Ｈｉｎｍａｎ ら．，（１９９３）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５３：３３３６−３３４２、Ｌｏｄｅ ら．，（１９９８）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ５８：２９２５−２９２８）。カリケアマイミシンは細胞内作用部位を有するが、ある特定の場合には、形質膜を容易に通過しない。したがって、抗体媒介性内部移行を通したこれらの薬剤の細胞取り込みは、いくつかの実施形態では、それらの細胞傷害効果を大幅に増強し得る。カリケアマイシン薬物部分との抗体−薬物複合体を調製する非限定的な例となる方法は、例えば、米国特許第５７１２３７４号、米国特許第５７１４５８６号、米国特許第５７３９１１６号、及び米国特許第５７６７２８５号に記載されている。
（４）ピロロベンゾジアゼピン
いくつかの実施形態では、ＡＤＣは、ピロロベンゾジアゼピン（ＰＢＤ）を含む。いくつかの実施形態では、ＰＤＢ二量体は、具体的なＤＮＡ配列を認識し、それに結合する。天然物アントラマイシンであるＰＢＤは、１９６５年に最初に報告された（Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒら，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９３−５７９５、Ｌｅｉｍｇｒｕｂｅｒら，（１９６５）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８７：５７９１−５７９３）。それ以来、天然及び類似体の両方の、いくつかのＰＢＤが報告されてきており（Ｔｈｕｒｓｔｏｎら，（１９９４）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９４，４３３−４６５）、三環式ＰＢＤ足場の二量体が含まれる（米国特許第６８８４７９９号、米国特許第７０４９３１１号、米国特許第７０６７５１１号、米国特許第７２６５１０５号、米国特許第７５１１０３２号、米国特許第７５２８１２６号、米国特許第７５５７０９９号）。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図しないが、二量体構造が、Ｂ型ＤＮＡの副溝とのイソヘリシティに適切な三次元形状を付与し、結合部位において滑り嵌めをもたらすと考えられている（Ｋｏｈｎ，Ｉｎ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＩＩＩ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．３−１１（１９７５）、Ｈｕｒｌｅｙ ａｎｄ Ｎｅｅｄｈａｍ−ＶａｎＤｅｖａｎｔｅｒ，（１９８６）Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．，１９：２３０−２３７）。Ｃ２アリール置換基を担持する二量体ＰＢＤ化合物は、細胞傷害性薬剤として有用であることが示されている（Ｈａｒｔｌｅｙら（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７０（１７）：６８４９−６８５８、Ａｎｔｏｎｏｗ（２０１０）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５３（７）：２９２７−２９４１、Ｈｏｗａｒｄら（２００９）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ ａｎｄ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１９（２２）：６４６３−６４６６）。
ＰＢＤ二量体は、抗体と結合されており、結果として得られるＡＤＣが抗がん特性を有することが示されている。ＰＢＤ二量体上の非限定的な例となる結合部位としては、５員のピロロ環、ＰＢＤ単位の間のテザー、及びＮ１０−Ｃ１１イミン基が挙げられる（ＷＯ２００９／０１６５１６、米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号、米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号、米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号、米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号、ＷＯ２０１１／１３０５９８）。
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ：
のもの、並びにその塩及び溶媒和物であり、
式中、波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
点線は、Ｃ１とＣ２、又はＣ２とＣ３との間の二重結合の任意の存在を示し、
Ｒ２は、独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ、及びＣＯＲから選択され、任意に、ハロ又はジハロから更に選択され、ＲＤは、独立してＲ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
Ｒ６及びＲ９は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｒ７は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ、及びハロから選択され、
Ｑは、独立してＯ、Ｓ、及びＮＨから選択され、
Ｒ１１は、Ｈ若しくはＲであるか、又はＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであり、式中、Ｍは金属陽イオンであり、
Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して任意に置換されるＣ１−８アルキル、Ｃ１−１２アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意に、基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４、５、６、又は７員の複素環式環を形成し、
Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９、及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９、及びＲ７について定義される通りであり、
Ｒ’’は、Ｃ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子、例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｈ）、ＮＭｅ、及び／又は芳香族環、例えば、ベンゼン又はピリジンによって分断される場合があり、それらの環は任意に置換されており、
Ｘ及びＸ’は、独立してＯ、Ｓ、及びＮ（Ｈ）から選択される。
いくつかの実施形態では、Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して任意に置換されるＣ１−１２アルキル、Ｃ３−２０複素環、及びＣ５−２０アリール基から選択され、任意に、基ＮＲＲ’に関して、Ｒ及びＲ’は、それらが結合する窒素原子と一緒に、任意に置換される４、５、６、又は７員の複素環式環を形成する。
いくつかの実施形態では、Ｒ９及びＲ１９はＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ６及びＲ１６はＨである。
いくつかの実施形態では、Ｒ７及びＲ１７は両者とも、ＯＲ７Ａであり、ここで、Ｒ７Ａは、任意に置換されるＣ１−４アルキルである。いくつかの実施形態では、Ｒ７ＡはＭｅである。いくつかの実施形態では、Ｒ７ＡはＣｈ２Ｐｈであり、ここで、Ｐｈはフェニル基である。
いくつかの実施形態では、ＸはＯである。
いくつかの実施形態では、Ｒ１１はＨである。
いくつかの実施形態では、各単量体単位においてＣ２とＣ３との間に二重結合が存在する。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、独立してＨ及びＲから選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、独立してＲである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、独立して任意に置換されるＣ５−２０アリール、Ｃ５−７アリール又はＣ８−１０アリールである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、独立して、任意に置換されるフェニル、チエニル、ナプチル、ピリジル、キノリニル、又はイソキノリニルである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、独立して、＝Ｏ、＝ＣＨ２、＝ＣＨ−ＲＤ、及び＝Ｃ（ＲＤ）２から選択される。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝ＣＨ２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれＨである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝Ｏである。いくつかの実施形態では、Ｒ２及びＲ１２は、それぞれ＝ＣＦ２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立して＝Ｃ（ＲＤ）２である。いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／又はＲ１２は、独立して＝ＣＨ−ＲＤである。
いくつかの実施形態では、Ｒ２及び／又はＲ１２が＝ＣＨ−ＲＤであるとき、各基は独立して、以下に示す配置のいずれかを有し得る：
いくつかの実施形態では、＝ＣＨ−ＲＤは配置（Ｉ）にある。
いくつかの実施形態では、Ｒ’’は、Ｃ３アルキレン基又はＣ５アルキレン基である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｉ）：
の構造を有し、
式中、ｎは０又は１である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩ）：
の構造を有し、
式中、ｎは０又は１である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＩＩ）：
の構造を有し、
式中、ＲＥ及びＲＥ’’は、それぞれ独立してＨ又はＲＤから選択され、ＲＤは上記に定義される通りであり、ｎは０又は１である。
いくつかの実施形態では、ｎは０である。いくつかの実施形態では、ｎは１である。いくつかの実施形態では、ＲＥ及び／又はＲＥ’’はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及びＲＥ’’はＨである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及び／又はＲＥ’’はＲＤであり、ここで、ＲＤは、任意に置換されるＣ１−１２アルキルである。いくつかの実施形態では、ＲＥ及び／又はＲＥ’’はＲＤであり、ここで、ＲＤはメチルである。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（ＩＶ）：
の構造を有し、
式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同一であっても異なってもよく、
ｎは、０又は１である。
いくつかの実施形態では、ＡＤＣの例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ａ（Ｖ）：
の構造を有し、
式中、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、任意に置換されるＣ５−２０アリールであり、Ａｒ１及びＡｒ２は、同一であっても異なってもよく、
ｎは、０又は１である。
いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、任意に置換されるフェニル、フラニル、チオフェニル、及びピリジルから選択される。いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２は各々独立して、任意に置換されるフェニルである。いくつかの実施形態において、Ａｒ１及びＡｒ２は各々独立して、任意に置換されるチエン−２−イル又はチエン−３−イルである。いくつかの実施形態では、Ａｒ１及びＡｒ２は各々独立して、任意に置換されるキノリニル又はイソキノリニルである。キノリニル又はイソキノリニル基は、任意の利用可能な環の位置を通じて、ＰＢＤコアに結合されてもよい。例えば、キノリニルは、キノリン−２−イル、キノリン−３−イル、キノリン−４イル、キノリン−５−イル、キノリン−６−イル、キノリン−７−イル、及びキノリン−８−イルであってもよい。いくつかの実施形態では、キノリニルは、キノリン−３−イル及びキノリン−６−イルから選択される。イソキノリニルは、イソキノリン−１−イル、イソキノリン−３−イル、イソキノリン−４イル、イソキノリン−５−イル、イソキノリン−６−イル、イソキノリン−７−イル、及びイソキノリン−８−イルであり得る。いくつかの実施形態において、イソキノリニルは、イソキノリン−３−イル及びイソキノリン−６−イルから選択される。
ＡＤＣの更なる非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素は、式Ｂ：
のもの、並びにその塩及び溶媒和物であり、
式中、
波線は、リンカーへの共有結合部位を示し、
ＯＨに接続された波線は、Ｓ又はＲ配置を示し、
ＲＶ１及びＲＶ２は、独立してＨ、メチル、エチル、及びフェニル（このフェニルは、特に４位において、フルオロで任意に置換されてもよい）、並びにＣ５−６ヘテロシクリルから選択され、式中、ＲＶ１及びＲＶ２は、同一であっても異なっていてもよく、
ｎは、０又は１である。
いくつかの実施形態では、ＲＶ１及びＲＶ２は、独立してＨ、フェニル、及び４−フルオロフェニルから選択される。
いくつかの実施形態では、リンカーは、Ｂ環のＮ１０イミン、Ｃ環のＣ−２エンド／エキソ位、又はＡ環を連結するテザー単位を含む、ＰＢＤ二量体薬物部分の種々の部位のうちの１つにおいて結合されてもよい（下記構造Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）を参照のこと）。
ＡＤＣの非限定的な例となるＰＢＤ二量体構成要素には、式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）：
が含まれる。
式Ｃ（Ｉ）及びＣ（ＩＩ）は、それらのＮ１０−Ｃ１１イミン型で示される。例となるＰＢＤ薬物部分としては、以下の表に示される、カルビノールアミン及び保護されたカルビノールアミン型も同様に挙げられる：
式中、
Ｘは、ＣＨ２（ｎ＝１〜５）、Ｎ、又はＯであり、
Ｚ及びＺ’は、独立してＯＲ及びＮＲ２から選択され、ここで、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含む第一級、第二級、又は第三級アルキル鎖であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、及びＲ’２は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（置換アリールを含む）、Ｃ５−２０ヘテロアリール基、−ＮＨ２、−ＮＨＭｅ、−ＯＨ、及びＳＨから選択され、いくつかの実施形態では、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ３及びＲ’３は、独立してＨ、ＯＲ、ＮＨＲ、及びＮＲ２から選択され、ここで、Ｒは、１〜５個の炭素原子を含む第一級、第二級、又は第三級アルキル鎖であり、
Ｒ４及びＲ’４は、独立してＨ、Ｍｅ、及びＯＭｅから選択され、
Ｒ５は、Ｃ１−Ｃ８アルキル、Ｃ２−Ｃ８アルケニル、Ｃ２−Ｃ８アルキニル、Ｃ５−２０アリール（ハロ、ニトロ、シアノ、アルコキシ、アルキル、ヘテロシクリルによって置換されたアリールを含む）、及びＣ５−２０ヘテロアリール基から選択され、いくつかの実施形態では、アルキル、アルケニル、及びアルキニル鎖は、最大５個の炭素原子を含み、
Ｒ１１は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、又は保護基（アセチル、トリフルオロアセチル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、ベンジルオキシカルボニル（ＣＢＺ）、９−フルオレニルメチレンオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）、又はバリン−シトルリン−ＰＡＢ等の自壊性単位を含む部分等）であり、
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８アルキル、又は保護基であり、
Ｒ１、Ｒ’１、Ｒ２、Ｒ’２、若しくはＲ１２のうちの１つの水素、又はＡ環の間の−ＯＣＨ２ＣＨ２（Ｘ）ｎＣＨ２ＣＨ２Ｏ−スペーサーの水素は、ＡＤＣのリンカーに接続された結合と置換されている）。
ＡＤＣの例となるＰＤＢ二量体部分としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない（波線は、リンカーへの共有結合の部位を示す）。
ＰＢＤ二量体を含むＡＤＣの非限定的な例となる実施形態は、次の構造を有し：
式中、ｎは、０〜１２である。いくつかの実施形態では、ｎは、２〜１０である。いくつかの実施形態では、ｎは、４〜８である。いくつかの実施形態では、ｎは、４、５、６、７、及び８から選択される。
ＰＢＤ二量体−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ及びＰＢＤ二量体−Ｐｈｅ−ホモＬｙｓ−ＰＡＢ−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ開裂可能であるが、ＰＢＤ二量体−マレイミド−アセタールのリンカーは、酸に不安定である。
ＰＢＤ二量体及びＰＢＤ二量体を含むＡＤＣは、当該技術分野で公知の方法によって調製することができる。例えば、ＷＯ２００９／０１６５１６、米国特許出願公開第２００９／３０４７１０号、米国特許出願公開第２０１０／０４７２５７号、米国特許出願公開第２００９／０３６４３１号、米国特許出願公開第２０１１／０２５６１５７号、ＷＯ２０１１／１３０５９８を参照のこと。
（５）アントラサイクリン
いくつかの実施形態では、ＡＤＣはアントラサイクリンを含む。アントラサイクリンは、細胞傷害性活性を示す抗生物質化合物である。いかなる特定の理論にも拘束されることを意図するものではないが、研究は、アントラサイクリンが、１）細胞のＤＮＡ中への薬物分子のインターカレーションによって、ＤＮＡ依存性核酸合成を阻害すること、２）薬物により遊離ラジカルが産生され、その後、それが細胞高分子と反応して、細胞への損傷を引き起こすこと、及び／又は３）薬物分子の細胞膜との相互作用を含む、いくつかの異なる機構によって、細胞を死滅させるように作動し得ることを示している（例えば、Ｃ．Ｐｅｔｅｒｓｏｎら，“Ｔｒａｎｓｐｏｒｔ Ａｎｄ Ｓｔｏｒａｇｅ Ｏｆ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｌｅｕｋｅｍｉａ”ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ Ｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ｎ．Ｒ．Ｂａｃｈｕｒ，“Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｄａｍａｇｅ” 同著書、９７〜１０２ページを参照のこと）。アントラサイクリンは、それらの細胞傷害性の可能性のために、白血病、乳がん、肺がん、卵巣腺がん、及び肉腫等の多数のがんの治療において使用されている（例えば、Ｐ．Ｈ− Ｗｉｅｒｎｉｋ，ｉｎ Ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｓｔａｔｕｓ Ａｎｄ Ｎｅｗ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ ｐ １１を参照のこと）。
非限定的な例となるアントラサイクリンとしては、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、ダウノマイシン、ネモルビシン、及びそれらの誘導体が挙げられる。ダウノルビシン及びドキソルビシンのイムノコンジュゲート及びプロドラッグが調製され、研究されている（Ｋｒａｔｚら（２００６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１３：４７７−５２３、Ｊｅｆｆｒｅｙら（２００６）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １６：３５８−３６２、Ｔｏｒｇｏｖら（２００５）Ｂｉｏｃｏｎｊ．Ｃｈｅｍ．１６：７１７−７２１、Ｎａｇｙら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９７：８２９−８３４、Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら（２００２）Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ１２：１５２９−１５３２、Ｋｉｎｇら（２００２）Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：４３３６−４３４３、欧州特許第０３２８１４７号、米国特許第６６３０５７９号）。抗体−薬物複合体ＢＲ９６−ドキソルビシンは、腫瘍関連抗原Ｌｅｗｉｓ−Ｙと特異的に反応し、第Ｉ相及びＩＩ相試験において評価されている（Ｓａｌｅｈら（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １８：２２８２−２２９２、Ａｊａｎｉら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒ．６：７８−８１、Ｔｏｌｃｈｅｒら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１７：４７８−４８４）。
ＰＮＵ−１５９６８２は、ネモルビシンの強力な代謝産物（又は誘導体）である（Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉら．（２００５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ１１（４）：１６０８−１６１７）。ネモルビシンは、ドキソルビシンのグリコシドアミノ上に２−メトキシモルホリノ基を有する、ドキソルビシンの半合成類似体であって、臨床評価されており（Ｇｒａｎｄｉら（１９９０）Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔ．Ｒｅｖ．１７：１３３、Ｒｉｐａｍｏｎｔｉら（１９９２）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６５：７０３；）、肝細胞がんに対する第ＩＩ／ＩＩＩ相治験が含まれる（Ｓｕｎら（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ ２２，Ａｂｓ１４４８、Ｑｕｉｎｔｉｅｒｉ（２００３）Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，４４：１ｓｔ Ｅｄ，Ａｂｓ ４６４９、Ｐａｃｃｉａｒｉｎｉら（２００６）Ｊｏｕｒ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ２４：１４１１６）。
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含む非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉａに示され：
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、又はその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ１及びＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、又は１〜４である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、両者ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
ネモルビシン又はネモルビシン誘導体を含む更なる非限定的な例となるＡＤＣは、式Ｉｂに示され：
式中、Ｒ１は、水素原子、ヒドロキシ、又はメトキシ基であり、Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ５アルコキシ基、又はその薬学的に許容される塩であり、
Ｌ２及びＺは共に、本明細書に記載されるリンカー（Ｌ）であり、
Ｔは、本明細書に記載される抗体（Ａｂ）であり、
ｍは１〜約２０である。いくつかの実施形態では、ｍは、１〜１０、１〜７、１〜５、又は１〜４である。
いくつかの実施形態では、Ｒ１及びＲ２は、両者ともメトキシ（−ＯＭｅ）である。
いくつかの実施形態では、ネモルビシン含有ＡＤＣのネモルビシン構成要素は、ＰＮＵ−１５９６８２である。そのような実施形態の一部では、ＡＤＣの薬物部分は、次の構造のうちの１つを有し得：
式中、波腺はリンカー（Ｌ）への結合を示す。
ＰＮＵ−１５９６８２を含むアントラサイクリンは、数個の結合部位、及び本明細書に記載されるリンカーを含む多様なリンカー（米国特許出願公開第２０１１／００７６２８７号、ＷＯ２００９／０９９７４１、米国特許出願公開第２０１０／００３４８３７号、ＷＯ２０１０／００９１２４）を通して抗体と結合してもよい。
ネモルビシン及びリンカーを含む例となるＡＤＣとしては、以下のものが挙げられるが、それらに限定されない：
ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂ
（式中、Ｒ１及びＲ２は、独立してＨ及びＣ１−Ｃ６アルキルから選択される）；及び
ＰＮＵ−１５９６８２−マレイミド−Ａｂ。
ＰＮＵ−１５９６８２マレイミドアセタール−Ａｂのリンカーは酸に不安定であるが、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−Ａｂ、ＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー−Ａｂ、及びＰＮＵ−１５９６８２−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−スペーサー（Ｒ１Ｒ２）−Ａｂのリンカーは、プロテアーゼ開裂可能である。
（６）他の薬物部分
薬物部分としては、また、ゲルダナマイシン（Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｊ．Ｎａｔ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９２（１９）：１５７３−１５８１、Ｍａｎｄｌｅｒら（２０００）Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔｅｒｓ １０：１０２５−１０２８、Ｍａｎｄｌｅｒら（２００２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．１３：７８６−７９１）；並びにジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンチン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、フィトラカ・アメリカーナ（Ｐｈｙｔｏｌａｃａ ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリ阻害剤、クルシン（ｃｕｒｃｉｎ）、クロチン（ｃｒｏｔｉｎ）、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）阻害剤、ゲロニン（ｇｅｌｏｎｉｎ）、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセン（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅ）が挙げられるが、これらに限定されない、それらの酵素活性毒素及び断片も含まれる。例えば、ＷＯ９３／２１２３２を参照のこと。
また、薬物部分としては、核酸分解活性（例えば、リボヌクレアーゼ又はＤＮＡエンドヌクレアーゼ）を有する化合物も挙げられる。
ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、高放射性原子を含んでいてもよい。放射性物質複合抗体の産生のために、多様な放射性同位体が利用可能である。例としては、Ａｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２、Ｐｂ２１２、及びＬｕの放射性同位体が挙げられる。いくつかの実施形態では、イムノコンジュゲートが検出に使用されるとき、それは、シンチグラフィー検査のための放射性原子、例えば、Ｔｃ９９若しくはＩ１２３、又はジルコニウム−８９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１、インジウム−１１１、フッ素−１９、炭素−１３、窒素−１５、酸素−１７、ガドリニウム、マンガン、若しくは鉄等の、核磁気共鳴（ＮＭＲ）画像法（磁気共鳴画像法、ＭＲＩとしても知られる）のためのスピン標識を含んでいてもよい。ジルコニウム−８９は、例えば、ＰＥＴ画像法のために、種々の金属キレート剤と複合体化され、抗体と結合する（ＷＯ２０１１／０５６９８３）。
放射標識又は他の標識を、公知の方法でイムノコンジュゲートに組み込んでもよい。例えば、ペプチドは、例えば、１個以上の水素に代えて１個以上のフッ素−１９原子を含む、好適なアミノ酸前駆体を使用して、生合成又は化学合成してもよい。いくつかの実施形態では、Ｔｃ９９、Ｉ１２３、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、及びＩｎ１１１等の標識を、抗体におけるシステイン残基を介して結合させることができる。いくつかの実施形態では、イットリウム−９０を、抗体のリジン残基を介して結合させることができる。いくつかの実施形態では、ＩＯＤＯＧＥＮ法（Ｆｒａｋｅｒ ら（１９７８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．８０：４９−５７）を使用して、ヨウ素−１２３を組み込むことができる。“Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｓｃｉｎｔｉｇｒａｐｈｙ”（Ｃｈａｔａｌ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９８９）は、ある特定の他の方法を記載している。
ある特定の実施形態では、イムノコンジュゲートは、プロドラッグ活性化酵素に結合された抗体を含んでいてもよい。いくつかの実施形態において、プロドラッグ活性化酵素は、プロドラッグ（例えば、ペプチジル化学療法剤、ＷＯ８１／０１１４５を参照のこと）を、抗がん剤等の活性な薬物に変換する。そのようなイムノコンジュゲートは、いくつかの実施形態では、抗体依存性酵素媒介性プロドラッグ療法（「ＡＤＥＰＴ」）において有用である。抗体と結合され得る酵素としては、リン酸塩含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、アルカリホスファターゼ；硫酸塩含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、アリールスルファターゼ；非毒性５−フルオロシトシンを抗がん剤５−フルオロウラシルへと変換するのに有用である、シトシンデアミナーゼ；ペプチド含有プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、セラチアプロテアーゼ、サーモリシン、スブチリシン、カルボキシペプチダーゼ、及びカテプシン（カテプシンＢ及びＬ等）等のプロテアーゼ；Ｄ−アミノ酸置換基を含むプロドラッグを変換するのに有用である、Ｄ−アラニルカルボキシペプチダーゼ ；グリコシル化プロドラッグを遊離薬物へと変換するのに有用である、β−ガラクトシダーゼ及びノイラミニダーゼ等の炭水化物開裂酵素；β−ラクタムにより誘導体化された薬物を遊離薬物へと変換するのに有用である、β−ラクタマーゼ；並びにそれらのアミン窒素においてそれぞれフェノキシアセチル基又はフェニルアセチル基により誘導体された薬物を遊離薬物へと変換するのに有用である、ペニシリンＶアミダーゼ及びペニシリンＧアミダーゼ等のペニシリンアミダーゼが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、酵素は、当該技術分野で周知の組み換えＤＮＡ技術によって、抗体に共有結合させることができる。例えば、Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ ３１２：６０４−６０８（１９８４）を参照のこと。
ｃ）薬物負荷
薬物負荷は、式Ｉの分子における１抗体当たりの薬物部分の平均数であるｐによって表される。薬物負荷は、１抗体当たり１〜２０個の薬物部分（Ｄ）の範囲であってもよい。式ＩのＡＤＣは、１〜２０個の範囲の薬物部分と共に複合化された抗体の集団を含む。複合反応からのＡＤＣの調製における、１抗体当たりの薬物部分の平均数は、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイ、及びＨＰＬＣ等の従来の手段によって特徴付けることができる。ｐの単位でのＡＤＣの定量分布も決定され得る。ある事例においては、ｐがある特定の値である同種のＡＤＣの、他の薬物負荷を有するＡＤＣからの分離、精製、及び特性評価は、逆相ＨＰＬＣ又は電気泳動等の手段によって達成することができる。
一部の抗体−薬物複合体について、ｐは、抗体上の結合部位の数によって限定され得る。例えば、上記の特定の例となる実施形態にあるように、結合がシステインチオールである場合、抗体は、１個のみ、若しくは数個のシステインチオール基を有することができ、又は、１個のみ若しくは数個の十分に反応性のチオール基を有することができ、それを通してリンカーが結合され得る。ある特定の実施形態では、より高い薬物負荷、例えば、５を超えるｐは、ある特定の抗体−薬物複合体において凝集、不溶性、毒性、又は細胞透過性の喪失を引き起こす可能性がある。ある特定の実施形態では、ＡＤＣについての平均薬物負荷は、１〜約８、すなわち約２〜約６、又は約３〜約５の範囲である。実際、ある特定のＡＤＣについて、１抗体当たりの薬物部分の最適な比率は、８未満であってもよく、また約２〜約５であってもよいことが示されている（米国特許第７４９８２９８号）。
ある特定の実施形態では、理論上の最大数よりも少ない薬物部分が、複合反応中に抗体と結合する。抗体は、以下に考察されるように、例えば、薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応しないリジン残基を含有している可能性がある。一般に、抗体は、薬物部分に連結し得る多くの遊離及び反応性システインチオール基を含有せず、実際、抗体におけるほとんどのシステインチオール残基は、ジスルフィド架橋として存在する。ある特定の実施形態では、抗体は、ジチオスレイトール（ＤＴＴ）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤により、部分又は完全還元条件下で還元されて、反応性システインチオール基を生成し得る。ある特定の実施形態において、抗体は、リジン又はシステイン等の反応性求核基を現すために、変性条件に供される。
ＡＤＣの負荷（薬物／抗体比）は、種々の方式で、並びに例えば、（ｉ）抗体と比べてモル過剰の薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬を限定すること、（ｉｉ）複合反応時間又は温度を限定すること、及び（ｉｉｉ）システインチオール修飾のための部分又は限定的還元条件によって、制御してもよい。
１個を超える求核基が薬物−リンカー中間体又はリンカー試薬と反応する場合、結果として得られる生成物は、１個以上の薬物部分の分布が抗体に結合した、ＡＤＣ化合物の混合物であることを理解すべきである。１抗体当たりのの平均薬物数は、抗体に特異的であり、薬物に特異的である、二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイによって混合物から算出することができる。個々のＡＤＣ分子は、質量分析法によって混合物中で特定され、ＨＰＬＣ、例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィーによって、分離することができる（例えば、ＭｃＤｏｎａｇｈら（２００６）Ｐｒｏｔ．Ｅｎｇｒ．Ｄｅｓｉｇｎ ＆ Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ １９（７）：２９９−３０７、Ｈａｍｂｌｅｔｔら（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１０：７０６３−７０７０、Ｈａｍｂｌｅｔｔ，Ｋ．Ｊ．，ら．“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｒｕｇ ｌｏａｄｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ａｎ ａｎｔｉ−ＣＤ３０ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４、Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．，ら．“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｔｈｅ ｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ ｉｎ ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ，”Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００４ Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ ４５，Ｍａｒｃｈ ２００４を参照のこと）。ある特定の実施形態では、単一の負荷値を有する同種のＡＤＣを、電気泳動又はクロマトグラフィーによって複合混合物から単離することができる。
ｄ）イムノコンジュゲートのある特定の調製方法
式ＩのＡＤＣは、（１）抗体の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＡｂ−Ｌを形成し、続いて薬物部分Ｄと反応させること、及び（２）薬物部分の求核基を二価リンカー試薬と反応させて、共有結合を介してＤ−Ｌを形成し、続いて抗体の求核基と反応させることを含む、いくつかの経路によって、当業者に公知の有機化学反応、条件、及び試薬を用いて調製することができる。後者の経路を介して式ＩのＡＤＣを調製するための例となる方法は、参照により本明細書に明示的に組み入れられる、米国特許第７４９８２９８号に記載されている。
抗体上の求核基としては、（ｉ）Ｎ末端アミン基、（ｉｉ）側鎖アミン基、例えば、リジン、（ｉｉｉ）側鎖チオール基、例えば、システイン、及び（ｉｖ）抗体がグリコシル化される糖ヒドロキシル又はアミノ基が挙げられるが、これらに限定されない。アミン、チオール、及びヒドロキシル基は、求核性であり、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート（ｈａｌｏｆｏｒｍａｔｅ）、及び酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、並びに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能である。ある特定の抗体は、還元可能な鎖間ジスルフィド、すなわちシステイン架橋を有している。抗体は、抗体が完全又は部分還元されるように、ＤＴＴ（ジチオスレイトール）又はトリカルボニルエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）等の還元剤での処理によって、リンカー試薬との結合に対して反応性になり得る。各システイン架橋は、このようにして、理論上２つの反応性のチオール求核剤を形成する。更なる求核基を、リジン残基の修飾を通して、例えば、リジン残基を２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔの試薬）と反応させて、アミンをチオールに変換させることによって、抗体中に導入することができる。反応性のチオール基も、１個、２個、３個、４個、又はそれを超えるシステイン残基を導入することによって（例えば、１個以上の非天然システインアミノ酸残基を含む変異体抗体を調製することによって）、抗体中に導入することができる。
また、本明細書に提供される抗体−薬物複合体は、アルデヒド又はケトンカルボニル基等の抗体上の求電子基と、リンカー試薬又は薬物上の求核基との間の反応によって製造することができる。リンカー試薬上の有用な求核基としては、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジドが挙げられるが、これらに限定されない。一実施形態では、抗体が、リンカー試薬又は薬物上の求核置換基と反応可能である求電子部分を導入するように修飾される。他の実施形態では、グリコシル化抗体の糖を、例えば、過ヨウ素酸塩酸化試薬で酸化させて、リンカー試薬又は薬物部分のアミン基と反応し得るアルデヒド又はケトン基を形成してもよい。結果として得られるイミンシッフ塩基群は、安定した結合を形成し得るか、例えば、水素化ホウ素試薬によって還元されて、安定したアミン結合を形成し得る。一実施形態では、グリコシル化された抗体の炭水化物部分の、ガラクトースオキシダーゼ又はメタ過ヨウ素酸ナトリウムのいずれかとの反応は、抗体において、薬物上の適切な基と反応することができるカルボニル（アルデヒド及びケトン）基を生み出し得る（Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）。他の実施形態では、Ｎ末端セリン又はスレオニン残基を含む抗体は、メタ過ヨウ素酸ナトリウムと反応して、第一のアミノ酸の代わりにアルデヒドの産生をもたらすことができる（Ｇｅｏｇｈｅｇａｎ＆Ｓｔｒｏｈ，（１９９２）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．３：１３８−１４６、米国特許第５３６２８５２号）。このようなアルデヒドは、薬物部分又はリンカー求核剤と反応させることができる。
薬物部分上の例となる求核基としては、（ｉ）ＮＨＳエステル、ＨＯＢｔエステル、ハロホルメート、及び酸ハロゲン化物等の、活性エステル、（ｉｉ）ハロアセトアミド等のアルキル及びベンジルハロゲン化物、並びに（ｉｉｉ）アルデヒド、ケトン、カルボキシル、及びマレイミド基を含む、リンカー部分及びリンカー試薬上の求電子基と反応して、共有結合を形成することが可能な、アミン、チオール、ヒドロキシル、ヒドラジド、オキシム、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボン酸塩、及びアリールヒドラジド基が挙げられるが、これらに限定されない。
ＡＤＣを調製するために使用することのできる、非限定的な例となるクロスリンカー試薬は、本明細書における「例となるリンカー」と題される節に記載されている。かかるクロスリンカー試薬を使用して、タンパク質性部分及び化学部分を含む、２つの部分を連結する方法は、当該技術分野で公知である。いくつかの実施形態では、抗体及び細胞傷害性薬剤を含む融合タンパク質は、例えば、組み換え技術又はペプチド合成によって作製することができる。組み換えＤＮＡ分子は、互いに隣接しているか、又は複合体の所望の特性を破壊しないリンカーペプチドをコードする領域によって隔離されているかのいずれかの、複合体の抗体及び細胞傷害性部分をコードする領域を含んでいてもよい。
更に他の実施形態では、抗体は、腫瘍の事前標的化において利用するために「受容体」（ストレプトアビジン等）に結合されてもよく、その腫瘍の事前標的化では、抗体−受容体複合体が、患者に投与され、続いて除去剤を使用した血液循環からの非結合複合体の除去、次いで細胞傷害性薬剤（例えば、薬物又は放射性ヌクレオチド）に複合されている「リガンド」（例えば、アビジン）の投与が行われる。
Ｅ．診断及び検出のための方法及び組成物
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗ＦｃＲＨ５抗体は、いずれも生体試料中のＦｃＲＨ５（例えばＦｃＲＨ５）の存在を検出するのに有用である。本明細書で用いられる場合、「検出する」という用語は、定量的又は定性的検出を包含する。ある特定の実施形態では、生体試料は細胞又は組織を含む。ある特定の実施形態では、そのような組織としては、他の組織と比較して高いレベルでＦｃＲＨ５を発現している正常組織及び／又はがん組織、例えば、Ｂ細胞及び／又はＢ細胞関連組織が挙げられる。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
一態様では、本明細書は、生体試料中のＦｃＲＨ５の存在を検出する方法を提供する。ある特定の実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体がＦｃＲＨ５に結合するのを許容する条件下で、生体試料を抗ＦｃＲＨ５抗体と接触させること、及び抗ＦｃＲＨ５抗体とＦｃＲＨ５との間で複合体が形成されるかどうかを検出することを含む。一態様では、本発明は、ＦｃＲＨ５の発現の増大に関連する障害の診断方法を提供する。ある特定の実施形態では、本方法は、試験細胞を抗ＦｃＲＨ５抗体と接触させること；抗ＦｃＲＨ５抗体とＦｃＲＨ５との結合を検出することによって、試験細胞によるＦｃＲＨ５の発現のレベルを（定量的又は定性的に）決定すること；及び試験細胞によるＦｃＲＨ５の発現のレベルを対照細胞（例えば、試験細胞と同じ組織起源の正常細胞又はそのような正常細胞と同程度のレベルでＦｃＲＨ５を発現する細胞）によるＦｃＲＨ５の発現のレベルと比較することを含み、ここで、対照細胞と比較して試験細胞によるＦｃＲＨ５の発現のレベルがより高い場合は、ＦｃＲＨ５の発現の増大と関連する障害の存在を示す。ある特定の実施形態では、試験細胞は、ＦｃＲＨ５の発現の増大と関連する障害を有することが疑われる個体から得られる。ある特定の実施形態では、障害は、がん又は腫瘍のような細胞増殖性障害である。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５はＦｃＲＨ５ｃである。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
本明細書に記載される抗体を用いて診断することのできる、例となる細胞増殖性障害としては、リンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、攻撃性ＮＨＬ、再発性攻撃性ＮＨＬ、再発性無痛性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性無痛性ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）及びマントル細胞リンパ腫を含むＢ細胞障害及び／又はＢ細胞増殖性障害が挙げられるが、これらに限定されない。
一実施形態では、診断又は検出方法において使用するための抗ＦｃＲＨ５抗体が提供される。更なる態様では、生体試料中のＦｃＲＨ５の存在を検出する方法が提供される。ある特定の実施形態では、本方法は、ＦｃＲＨ５への抗ＦｃＲＨ５抗体の結合を許容する条件下で、生体試料を、本明細書に記載される抗ＦｃＲＨ５抗体と接触させること、及び複合体が、生体試料中で抗ＦｃＲＨ５抗体とＦｃＲＨ５との間で形成されるかどうかを検出することとを含む。そのような方法は、インビトロにおける方法であっても、インビボにおける方法であってもよい。一実施形態では、例えば、ＦｃＲＨ５が患者の選択のためのバイオマーカーである場合抗ＦｃＲＨ５抗体を使用して、抗ＦｃＲＨ５抗体での治療法にふさわしい対象を選択する。更なる実施形態では、生体試料は細胞又は組織（生検材料）である。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
更なる実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、例えば、がんを診断する、がんの予後を判定する、若しくはがんを病期分類する、適切な治療過程を決定する、又は治療法に対するがんの反応を監視する目的のために、体内で使用され、例えば、体内画像法によって、対象におけるＦｃＲＨ５陽性がんを検出する。インビボ検出のための当該技術分野で公知の１つの方法は、例えば、ｖａｎ Ｄｏｎｇｅｎら，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ １２：１３７９−１３８９（２００７）、及びＶｅｒｅｌら，Ｊ．Ｎｕｃｌ．Ｍｅｄ．４４：１２７１−１２８１（２００３）に記載されている、免疫−陽電子放出断層撮影（免疫−ＰＥＴ）である。そのような実施形態では、対象においてＦｃＲＨ５陽性がんを検出するための方法が提供され、本方法は、標識された抗ＦｃＲＨ５抗体を、ＦｃＲＨ５陽性がんを患っているか、又はそれを患っていることが疑われる対象に投与することと、対象における標識された抗ＦｃＲＨ５抗体を検出することとを含み、その標識された抗ＦｃＲＨ５抗体の検出は、対象におけるＦｃＲＨ５陽性がんを示す。そのような実施形態のある特定のものでは、標識された抗ＦｃＲＨ５抗体は、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉ等の陽電子放出体に結合する抗ＦｃＲＨ５抗体を含む。特定の実施形態では、陽電子放出体は、８９Ｚｒである。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
更なる実施形態では、診断又は検出方法は、基質に固定化された第一の抗ＦｃＲＨ５抗体を、ＦｃＲＨ５の存在について試験されるべき生体試料と接触させることと、その基質を第二の抗ＦｃＲＨ５抗体に曝露することと、その第二の抗ＦｃＲＨ５抗体が、生体試料中で、第一の抗ＦｃＲＨ５抗体とＦｃＲＨ５との間の複合体に結合されるかどうかを検出することとを含む。基質は、任意の支持媒体、例えば、ガラス、金属、セラミック、ポリマービーズ、スライド、チップ、及び他の基質であってもよい。ある特定の実施形態では、生体試料は、細胞、血液又は組織（例えば、生検材料）を含む。
上記実施形態のいずれかによって診断又は検出することのできる、例となる障害としては、ＦｃＲＨ５陽性がん、ＦｃＲＨ５陽性Ｂ細胞増殖性障害、ＦｃＲＨ５陽性原形質細胞腫瘍、及びＦｃＲＨ５陽性多発性骨髄腫が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性がんは、抗ＦｃＲＨ５免疫組織化学的検査（ＩＨＣ）又はインサイチューハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）により検出される。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性がんは、ＦｃＲＨ５ ｍＲＮＡを検出する逆転写ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイにより、ＦｃＲＨ５を発現するがんである。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲは定量的ＲＴ−ＰＣＲである。
ある特定の実施形態では、標識された抗ＦｃＲＨ５抗体が提供される。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。としては、直接検出される標識又は部分（蛍光標識、発色団標識、高電子密度標識、化学発光標識、及び放射性標識等）、並びに例えば、酵素反応又は分子相互作用を通して、間接的に検出される酵素又はリガンド等の部分が挙げられるが、これらに限定されない。例となる標識としては、放射性同位体３２Ｐ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３Ｈ、及び１３１Ｉ、希土類キレート又はフルオレセイン及びその誘導体等のフルオロフォア、ローダミン及びその誘導体、ダンシル、ウンベリフェロン、ルシフェラーゼ、例えば、ホタルルシフェラーゼ及び細菌ルシフェラーゼ（米国特許第４，７３７，４５６号）、ルシフェリン、２，３−ジヒドロフタラジンジオン、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコアミラーゼ、リゾチーム、糖質オキシダーゼ、例えば、グルコースオキシダーゼ、ガラクトースオキシダーゼ、及びグルコース−６−リン酸塩デヒドロゲナーゼ、過酸化水素を用いて色素前駆体を酸化させる酵素、例えばＨＲＰ、ラクトペルオキシダーゼ、又はマイクロペルオキシダーゼとカップリングされた、ウリカーゼ及びキサンチンオキシダーゼ等の複素環式オキシダーゼ、ビオチン／アビジン、スピン標識、バクテリオファージ標識、安定した遊離ラジカル等が挙げられるが、これらに限定されない。他の実施形態では、標識は陽電子放出体である。陽電子放出体としては、６８Ｇａ、１８Ｆ、６４Ｃｕ、８６Ｙ、７６Ｂｒ、８９Ｚｒ、及び１２４Ｉが挙げられるが、これらに限定されない。特定の実施形態では、陽電子放出体は８９Ｚｒである。
Ｆ．医薬製剤
本明細書に記載されるＦｃＲＨ５抗体又はイムノコンジュゲートの医薬製剤は、所望の程度の純度を有する、そのような抗体又はイムノコンジュゲートを、１種以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版，Ｏｓｏｌ，Ａ．編集（１９８０）と混合することによって、凍結乾燥製剤又は水溶液の形態で、調製される。薬学的に許容される担体は、一般に、用いられる投薬量及び濃度で、受容者に対して非毒性であり、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸等の緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム等；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル、若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベン等のアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、若しくは免役グロブリン等のタンパク質；ポリビニルピロリドン等の親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、若しくはリジン等のアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース、若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡ等のキレート薬剤；ショ糖、マンニトール、トレハロース、若しくはソルビトール等の糖類；ナトリウム等の塩形成対イオン；金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）；並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の非イオン性界面活性剤が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書における例となる薬剤的に許容される担体としては、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ−２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の、介在性（ｉｎｓｔｅｒｓｔｉｔｉａｌ）薬物分散剤が更に挙げられる。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例となるｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載されている。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰが、コンドロイチナーゼ等の１種以上の追加のグリコサミノグリカナーゼと組み合わされる。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
例となる凍結乾燥抗体又はイムノコンジュゲート製剤は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体又はイムノコンジュゲート製剤としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載されるものが挙げられ、後者の製剤はヒスチジン−酢酸緩衝剤を含む。
また、本明細書における製剤は、治療されている特定の適応症に対する必要に応じて、１種を超える活性成分、好ましくは相互に悪影響を及ぼさない相補的活性を有する成分を含有してもよい。
活性成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製される、マイクロカプセル、例えば、それぞれ、コロイド状薬物送達系（例えば、リポソーム、アルブミンミクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）中又はマクロエマルション中の、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチン−マイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート（ｍｅｔｈｙｌｍｅｔｈａｃｙｌａｔｅ））マイクロカプセル中に、封入されてもよい。このような技術は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 第１６版 ，Ｏｓｏｌ，Ａ．編（１９８０）に開示されている。
徐放性製剤を調製してもよい。徐放性製剤の好適な例としては、抗体又はイムノコンジュゲートを含む固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが挙げられ、そのマトリクスは、造形品、例えば、フィルム、又はマイクロカプセルの形態である。
インビボにおける投与に使用される製剤は、通常は滅菌されている。滅菌状態は、例えば、滅菌濾過膜を通したろ過によって、容易に実施することができる。
Ｇ．治療方法及び組成物
本明細書に提供されるいずれの抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特性抗体）、及び／又はイムノコンジュゲートも、方法、例えば治療方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
一態様では、本明細書に提供される抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特性性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートは、細胞表面で、抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特性性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートがＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）に結合するのを許容する条件下に、ＦｃＲＨ５陽性細胞の増殖を阻害する方法に使用され、該方法は、細胞を、抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特性性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートに暴露し、それによって、細胞の増殖を阻害することを含む。ある特定の実施形態では、この方法はインビトロ又はインビボにおける方法である。更なる実施形態では、細胞はＢ細胞増殖性障害である。ある特定の実施形態では、細胞増殖霜害は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）の発現及び／又は活性の増大と関連している。例えば、ある特定の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は、Ｂ細胞表面におけるＦｃＲＨ５の発現の増大に関連している。ある特定の実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は腫瘍又はがんである。いくつかの実施形態では、Ｂ細胞増殖性障害は形質細胞腫瘍である。いくつかの実施形態では、形質細胞腫瘍は、多発性骨髄腫、形質細胞腫、及び／又はＭＧＵＳである。本発明の抗体及び／又はイムノコンジュゲートにより治療されるＢ細胞増殖性障害の例としては、リンパ腫、多発性骨髄腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、攻撃性ＮＨＬ、再発性攻撃性ＮＨＬ、再発性無痛性ＮＨＬ、難治性ＮＨＬ、難治性無痛性ＮＨＬ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、小リンパ球性リンパ腫、白血病、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）及びマントル細胞リンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。
試料中の種々のバイオマーカーの存在は、多数の方法によって分析することができ、このうちの多くは、当該技術分野で公知であり、当業者によって理解されており、免疫組織化学（「ＩＨＣ」）、ウェスタンブロット分析、免疫沈降、分子結合アッセイ、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＦＡ、蛍光標識細胞分取（「ＦＡＣＳ」）、ＭａｓｓＡＲＲＡＹ、プロテオミクス、定量血液系アッセイ（例として血清ＥＬＩＳＡ）、生化学酵素活性アッセイ、インサイツハイブリダイゼーション、サザン分析、ノーザン分析、全ゲノム配列決定、定量リアルタイムＰＣＲ（「ｑＲＴ−ＰＣＲ」）及び例えば、分岐鎖ＤＮＡ、ＳＩＳＢＡ、ＴＭＡ等の他の増幅型の検出法を含む、ポリメラーゼ連鎖反応（「ＰＣＲ」）、ＲＮＡ−Ｓｅｑ、ＦＩＳＨ、マイクロアレイ分析、遺伝子発現プロファイリング、及び／又は遺伝子発現の連鎖解析（「ＳＡＧＥ」）、並びにタンパク質、遺伝子、及び／又は組織アレイ分析によって行うことができる多種多様のアッセイのうちの任意のものが挙げられるが、これらに限定されない。遺伝子及び遺伝子産物の状態の評価のための典型的なプロトコルは、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら， ｅｄｓ．，１９９５，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｕｎｉｔｓ ２（Ｎｏｒｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、４（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔｔｉｎｇ）、１５（Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ）、及び１８（ＰＣＲ Ａｎａｌｙｓｉｓ）に見出される。Ｒｕｌｅｓ Ｂａｓｅｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ又はＭｅｓｏ Ｓｃａｌｅ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ（「ＭＳＤ」）から利用可能なもの等の、多項目免疫測定法もまた使用することができる。
インビトロにおける細胞増殖の阻害は、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から市販されている、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙを使用してアッセイすることができる。このアッセイは、代謝的に活性な細胞を示す、ＡＴＰの存在量の定量に基づいて、培養物中の生存細胞の数を測定する。Ｃｒｏｕｃｈら．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６６０２６７７号を参照のこと。アッセイは、自動化高処理スクリーニング（ＨＴＳ）を受けやすくする、９６ウェル又は３８４ウェル形式で行うことができる。Ｃｒｅｅら（１９９５）ＡｎｔｉＣａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇｓ ６：３９８−４０４を参照されたい。アッセイ手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を培養細胞に直接添加することを含む。これは、細胞溶解及びルシフェラーゼ反応によって発生する発光シグナルの生成をもたらす。発光シグナルは、ＡＴＰの存在量に比例し、ＡＴＰの存在量は、培養物中に存在する生存細胞の数に直接比例する。データは、ルミノメーター又はＣＣＤカメラ画像化デバイスによって記録することができる。発光出力は、相対発光量（ＲＬＵ）として表される。
他の態様では、薬物として使用するための抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートが提供される。更なる態様では、治療方法において使用するための抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんの治療において使用するための抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートが提供される。ある特定の実施形態では、本発明は、ＦｃＲＨ５陽性がんを患っている個体を治療する方法において使用するための抗ＦｃＲＨ５抗体（ＦｃＲＨ５二重特異性抗体を含む）及び／又はイムノコンジュゲートを提供し、本方法は、個体に、有効量の抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートを投与することを含む。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。このような実施形態の１つでは、本方法は、個体に、例えば、下に記載されるような、有効量の少なくとも１種の追加の治療剤を投与することを更に含む。
更なる態様では、本明細書において、薬物の製造又は調製における抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートの使用が提供される。一実施形態では、該薬物は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんの治療用である。更なる実施形態では、薬物は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんであり、この方法は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんを患っている個体に、有効量の薬物を投与することを含む。そのような実施形態の１つでは、この方法は、個体に、例えば、下記に記載されるような、少なくとも種の追加の治療剤の有効量を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
更なる態様では、本発明は、ＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんを治療するための方法を提供する。一実施形態では、本方法は、そのようなＦｃＲＨ５（例えば、ＦｃＲＨ５ｃ）陽性がんを患っている個体に、有効量の抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、ＦｃＲＨ５二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートを投与することを含む。そのような実施形態の１つでは、本方法は、個体に、下記に記載されるような、有効量の少なくとも１つの追加の治療剤を投与することを更に含む。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
上記実施形態のいずれかのＦｃＲＨ５陽性がんは、例えば、ＦｃＲＨ５陽性Ｂ細胞増殖性障害、ＦｃＲＨ５陽性形質細胞腫瘍、及び／又はＦｃＲＨ５陽性多発性骨髄腫であり得る。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性がんは、抗ＦｃＲＨ５免疫組織化学（ＩＨＣ）又はインサイチューハイブリダイゼーション（ＩＳＨ）により検出される。いくつかの実施形態では、ＦｃＲＨ５陽性がんは、ＦｃＲＨ５ ｍＲＮＡを検出する逆転写酵素ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイに従って、ＦｃＲＨ５を発現するがんである。いくつかの実施形態では、ＲＴ−ＰＣＲは定量的 ＲＴ−ＰＣＲである。
上記実施形態のいずれかのいくつかの実施形態では、個体はヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、例えば、上記治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートのいずれかを含む、医薬製剤を提供する。一実施形態では、医薬製剤は、本明細書に提供される抗ＦｃＲＨ５抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートのいずれかと、薬学的に許容される担体とを含む。他の実施形態では、医薬製剤は、本明細書に提供されるＦｃＲＨ５抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートのいずれかと、例えば、以下に記載されるような、少なくとも１種の追加の治療剤とを含む。
本明細書に提供される抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートは、治療法において、単独で、又は他の薬剤と組み合わせてのいずれかで使用することができる。上述のこのような併用療法は、併用投与（２種以上の治療剤が、同じであるか又は別個の製剤中に含まれる）、及び別個の投与を包含し、別個の投与の場合、本発明の抗体又はイムノコンジュゲートの投与は、追加の治療剤及び／又はアジュバントの投与の前、それと同時、及び／又はその後であってもよい。本発明に提供される抗体及び／又はイムノコンジュゲートは、放射線療法と組み合わせて使用することもできる。
本明細書に提供される抗体（二重特異性抗体を含む）及び／又はイムノコンジュゲート（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、ならびに局所両方のために所望される場合、病変内投与を含む、任意の好適な手段によって投与することができる。非経口注入としては、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。投薬は、任意の好適な経路による、例えば、投与が短時間であるか長期的であるかに部分的に応じて、静脈内又は皮下注射等の、注射により行うことができる。単回又は種々の時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス注入が挙げられるが、これらに限定されない、種々の投薬スケジュールが本明細書で企図される。
本明細書に提供される抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートは、良好な医療行為と一致した様式で製剤化され、投薬され、投与されるであろう。この文脈における考慮の要因としては、治療される特定の障害、治療される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床的病態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与のスケジュール管理、及び医療従事者に既知の他の要因が挙げられる。抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又イムノコンジュゲートは、必要ではないが、任意に、問題の障害を予防又は治療するために現在使用される１種以上の薬剤と共に製剤化される。そのような他の薬剤の有効量は、製剤中に存在する抗体又はイムノコンジュゲートの量、障害又は治療の種類、及び上記で考察された他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載されるのと同じ投薬量で、本明細書に記載される投与経路により、又は本明細書に記載される投薬量の約１〜９９％、又は適切であると経験的／臨床的に決定される任意の投薬量で、任意の経路によって使用される。
疾患の予防又は治療のために、本明細書に提供される抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートの適切な投薬量（単独で、又は１種以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用されるとき）は、治療対象の疾患の種類、抗体又はイムノコンジュゲートの種類、疾患の重症度及び経過、抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートが予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の治療法、患者の病歴及び抗体又はイムノコンジュゲートへの反応、ならびに主治医の裁量に依存するであろう。抗体又はイムノコンジュゲートは、患者に、１回で、又は一連の治療にわたって、好適に投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、例えば、１回以上の別個の投与によってであれ、又は持続注入によってであれ、約１μｇ／ｋｇ〜１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートが、患者への投与のための初回の候補投薬量であり得る。１つの典型的な１日投薬量は、上述の要因に応じて、約１μｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ以上の範囲であり得る。病態に応じて数日間又はより長い日数にわたる反復投与について、治療は、一般に、疾患症状の所望の抑制が生じるまで持続されるであろう。抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はイムノコンジュゲートの１つの例となる投薬量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であろう。故に、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はそれらの任意の組み合わせ）の１回以上の用量を患者に投与してもよい。そのような用量は、断続的に、例えば、毎週又は３週間毎に（例えば、患者が抗体の約２〜約２０回、又は例えば、約６回用量を受容するように）投与してもよい。より高い初回負荷用量、続いて１回以上のより低い用量を投与してもよい。しかし、他の投薬レジメンが有用であってもよい。この治療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
上記製剤又は治療方法のうちのいずれも、本発明のイムノコンジュゲート及び抗ＦｃＲＨ５抗体の両方を使用して行うことができることが理解される。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
Ｈ．製品
本明細書に提供される他の態様では、上述の障害の治療、予防、及び／又は診断に有用な物質を含む製品が提供される。製品は、容器、及び容器上の又は容器と伴ったラベル又は添付文書を含む。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグ等が挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチック等の多様な材料から形成することができる。容器は、組成物を、それ自体で、又は障害を治療し、予防し、及び／若しくは診断するのに有効な他の組成物と組み合わせて保有し、また滅菌アクセスポートを有していてもよい（例えば容器は、皮下注射針によって貫通可能な栓を有する静脈注射用溶液バッグ又はバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１種の活性薬剤は、本明細書に提供される抗体又はイムノコンジュゲートである。標識又は添付文書は、組成物が選定した病態を治療するために使用されることが表示される。更に、製品は、（ａ）組成物が中に含有される第一の容器（その組成物は本明細書に提供されるＦｃＲＨ５抗体（例えば、二重特異性抗体）及び／又はＦｃＲＨ５イムノコンジュゲートを含む）、及び（ｂ）組成物が中に含有された第二の容器（その組成物はさらなる細胞傷害性薬剤又は治療剤を含む）を含んでいてもよい。本明細書に提供される、この実施形態の製品は、組成物が特定の病態を治療するために使用され得ることを表示する、添付文書をさらに含んでいてもよい。代替として、又は追加的に、製品は、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液又はデキストロース溶液等の、薬剤的に許容される緩衝液を含む、第二の（又は第三の）容器をさらに含んでもいてよい。それは、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、及びシリンジを含む、商業的及びユーザの立場から望ましい他の材料をさらに含んでいてもよい。いくつかの実施形態では抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ−抗原特異的領域に結合する。いくつかの実施形態では、抗ＦｃＲＨ５抗体は、ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン９に結合する。
ＩＩＩ．実施例
以下は、本発明の方法及び組成物の実施例である。上に提供される一般的記載を考慮すると、種々の他の実施形態が実施され得ることが理解される。
材料及び方法
免疫源（Ｅ１１−フラグ）
ヒトＦｃＲＨ５ｃのアミノ酸７４５〜８５０（配列番号１）を、標準的プロトコルを用いてほ乳動物発現ベクターｐＲＫ５．ＮＴ．Ｆｌａｇにクローニングし、ＣＨＯ細胞内で一時的に発現させた。Ｎ末端フラグ発現タグを有する組換え型タンパク質を、Ｓ２００Ｓｕｐｅｒｄｅｘカラムで、抗フラグ及び分子ふるいクロマトグラフィーを用いて精製した。
抗ＦｃＲＨ５ Ｅ１１抗体の開発及び特徴づけ
Ｂａｌｂ／ｃマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｈｏｌｌｉｓｔｅｒ，ＣＡ）を、足蹠注射により、ＭＰＬ＋ＴＤＭ（Ｒｉｂｉ）と混合した、２μｇのヒトＦｃＲＨ５ Ｅ１１ ＥＣＤタンパク質（配列番号１のアミノ酸残基７４３〜８５０）（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ．ＣＡ）で免疫した。マウスは９回投与され、その後、足蹠注射により、ＰＢＳのみの融合前追加免疫及び融合の３日前の静脈注射を行った。
膝窩リンパ節を集め、血清が、ＥＬＩＳＡにより免疫タンパク質に対し強い結合力価を示し、ＦｃＲＨ５ Ｅ１１ ＥＣＤでトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞に対し強いＦＡＣＳ反応性を示す、全てのこれらのマウス由来のリンパ球を、電気融合（Ｈａｒｖａｒｄ Ａｐｐａｒａｔｕｓ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）により、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ． Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）と融合した。融合細胞を、培地Ｃ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）中、３７℃、７％ ＣＯ２で一晩インキュベートし、０．０１ｍｇ／ｍＬのＦＩＴＣ標識した抗マウスＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，ＰＡ）を含む半固体培地Ｄ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に再懸濁し、Ｏｍｎｉｗｅｌｌトレイ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ， Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）に蒔いた。細胞を蒔いて９日後、蛍光を放つコロニーを選択し、Ｃｌｏｎｅｐｉｘ ＦＬ（Ｇｅｎｅｔｉｘ，Ｎｅｗ Ｍｉｌｔｏｎ，Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を使用して、培地Ｅ（ＳｔｅｍＣｅｌｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含む９６ウェルのプレートに移した。選択の７日後に、上清を、抗マウスＩｇＧ（ＭＰ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，ＣＡ）に対してＥＬＩＳＡによりスクリーニングした。
ＥＬＩＳＡによりマウスＩｇＧの発明を示したハイブリドーマを拡張し、全長のヒトＦｃＲＨ５、カニクイザルＦｃＲＨ５、及びヒトＦｃＲＨ５ Ｅ１１ ＥＣＤを過剰発現するＳＶＴ２細胞に対し、ＦＡＣＳによりスクリーニングした。ＦＡＣＳの強い陽性クローンをＦＡＣＳＡｒｉａ（ＢＤ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ， ＮＪ）を用いた単一細胞ソートによりサブクローニングし、サブクローニングの１又は２ラウンド後に、興味のある最も高いＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳ結合を示す最終クローンを、大規模生産のためにバイオリアクター中に拡張した。次いで、既に記載されているように（Ｈｏｎｇｏら，２０００）、親和性クロマトグラフィーにより上清を精製した。
ｂｉｓＦａｂの生産
ＢｉｓＦａｂを、ヒンジシステイン残基で、抗ＦｃＲＨ５ ＭａｂのＦａｂ’を抗ＣＤ３（ＵＣＨＴ１．ｖ９）のＦａｂ’に架橋させることにより生成した。ハイブリドーマＡｂからＦａｂ’２断片を生成するために、異なる消化条件を用いた：ｍＩｇＧ１アイソタイプのＡｂは、１：５０（ｗ／ｗ）のペプシンを用い、３７℃、ｐＨ３．５で１〜２時間消化し；マウスＩｇＧ２ａ Ａｂは、１１：５００（ｗ／ｗ）の比でＬｙｓｉｎ Ｃエンドペプチダーゼを用い、３７℃、ｐＨ８で〜３時間消化し、マウスＩｇＧ２ｂ Ａｂは、１：１００（ｗ／ｗ）の比でＬｙｓｉｎ Ｃを用い、３７℃で一晩消化した。全てのケースで、ＳＰカラムを用いた捕獲及び１Ｍ塩化ナトリウムの直線状勾配（０〜１００％）のカラム用量の１０倍の溶出により、反応混合物からＦ（ａｂ’）２断片を分離した。上記消化条件下で、ｍＩｇＧ１及びｍＩｇＧ２ｂは、ヒンジに３つのシステイン残基を含むＦ（ａｂ'）２断片を生成したが、ｍＩｇＧ２ａからのＦ（ａｂ'）２は、ヒンジに２つのシステイン残基を示した。１つの反応性システインを生成するために、２つの異なる方法を使用した。奇数個（３個）のヒンジシステインを含む断片（ｍＩｇＧ１及びｍＩｇＧ２ｂ）については、分離したＦ（ａｂ'）２を、２５ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、２ｍＭ ＥＤＴＡ、２ｍＭ ＴＣＥＰ中、室温で２〜６時間で還元した。還元ステップの完了後、試料を０．２ｍｇ／ｍＬに希釈し、Ｔｒｉｓ ｐＨ８を加えることによりｐＨを７．５に上昇させ、５ｍＭ デヒドロアスコルビン酸（ＤＨＡＡ）を加えてシステインを再酸化させた。室温で一晩インキュベートした後、減少したチオールの存在を、過剰のＮＥＭで調査し、質量分析により、分子量の変化を分析することにより評価した。分子あたり１つのみのシステインの存在を確認した後、Ｆａｂ’をゲルろ過により生成し、少量のホモ二量体を除去した。
ｍＩｇＧ２ａに由来し、ヒンジ中に２つのシステイン残基を含むＦ（ａｂ'）２断片については、Ｓｃｈｅｅｒら（印刷中）に記載されるように、Ｎ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）を用いた部分的ブロッキングにより、１つの反応性システインを生産させた。手短に言えば、抗体を、ｐＨ４．５で酢酸ナトリウム緩衝液中での処理によりペプシン（１％ｗ／ｗ）を用いて消化した。１時間消化した後、ＳＰ−ＨＰ陽イオン交換樹脂上に捕獲し、０〜１Ｍ ＮａＣｌの１０ＣＶ塩勾配により精製することにより、消化混合物からＦ（ａｂ'）２を分離した。次いで、Ｆ（ａｂ'）２を、２５ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ５．８、２ｍＭ ＥＤＴＡ、及び３００ｍＭ ＮａＣｌを含む緩衝液中、１ｍＭ ＴＣＥＰを用いて還元し、５ｍＭデヒドロ酢酸（ＤＨＡＡ）を加えることによりＦａｂを酸化し、重鎖及び軽鎖間のジスルフィド結合を再形成させた。
二重特異性Ｆａｂ（ＵＣＨＴ１．ｖ９）のエフェクターアームは、以前に記載されているようにして（Ｓｃｈｅｅｒら，印刷中）、ペプシン消化、部分的ＮＥＭブロッキング及びビスマレイミドへの結合により生成した。手短に言えば、次いで、ヒンジの２つのチオール（シス残基）を１当量のＮ−エチルマレイミド（ＮＥＭ）（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）と反応させた。単一の反応性システインを含む、種々の抗ＦｃＲＨ５ Ｆａｂ’ｓを、ビスマレイミド架橋剤と結合した抗ＣＤ３ Ｆａｂ’と、室温で一晩インキュベートした。ゲル濾過により、約１００ｋＤａの架橋したＦａｂｓを分離した後、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、質量スペクトル、及び分析用サイズ排除クロマトグラフィーにより特徴付けを行った。
ＴＤＢの発現及び精製
ＴＤＢは、２つの異なるアプローチ、すなわち２つの抗体アームをそれぞれ発現する最近の共培養、又は各アームを別個に発現した後、インビトロでそれらをアニーリングすることにより生産した。これらの戦略は、参照により本明細書に組み入れられる、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ Ｓｐｉｅｓｓら，２０１２に記載されており、２０１１年５月３１日出願のＰＣＴ／ＵＳ１０／５８９５８に記載されている。手短に言えば、共培養の戦略については、抗ＣＤ３を発現する大腸菌（ホール）及び抗腫瘍標的を発現する大腸菌（ノブ）を、同様の量の各ヘミマーを生産するような所定の比で、振盪フラスコ中、一緒に培養した。次いで、共培養した細菌培養液を集め、細胞をマイクロフルイダイザー中で破壊し、プロテインＡ親和力により抗体を精製した。マイクロフルイダイジング及びプロテインＡ捕獲の際に、２つのアームがアニーリングされ、ヒンジ鎖間ジスルフィド結合が形成されるのが観察された（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ Ｓｐｉｅｓｓら，２０１２）。代替として、抗体ヘミマーを、高細胞密度発酵により別個に成長させ、それぞれプロテインＡクロマトグラフィーにより分離した。次いで、精製したヘミマーを、１：１のモル比に混合し、２ｍＭ ＤＴＴの存在下、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ ｐＨ８．５中で４時間インキュベートし、ヒンジ領域のジスルフィドをアニール及び還元させた。ＤＴＴを含まない同じ緩衝液に対して２４〜４８時間透析することにより、鎖内ジスルフィド結合が形成された。両方の生産戦略について、Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈ Ｓｐｉｅｓｓら，２０１２に記載されるようにして、疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）により、混入物から二重特異性抗体を精製した。得られた物質を、Ｅｎｄｏｓａｆｅ ｐｒｏｔａｂｌｅ ｅｔｅｓｔシステムを用いてエンドトキシン濃度について分析し、必要であれば、０．１％ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１１４でタンパク質を洗浄することによりエンドトキシン含有量を低減させた。
ＴＤＢの特徴づけ
二重特異性抗体の分子量は、以前に記載されているように（Ｊａｃｋｍａｎら，２０１０）、質量スペクトル分析（ＬＣ− ＥＳＩ／ＴＣＦ）により分析した。抗体は、Ａｇｉｌｅｎｔ １：１００ＨＰＬＣシステムを用いたＺｅｎｉｘ ＳＥＣ−３００カラム（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ＵＳＡ）による分析用サイズ排除クロマトグラフィーによっても分析した。残りの抗体断片の存在は、２１００ Ｂｉｏａｎａｉｙｚｅｒ及びＰｒｏｔｅｉｎ ２３０ Ｃｈｉｐを用いて電気泳動により定量した。
血液細胞分別
リンパ球分離培地（ＭＰ ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｓｏｌｏｎ，ＯＨ）を用い、健常人ボランティアの血液からＰＢＭＣを分離し、負の選択により、Ｍｉｌｔｅｎｙｉ（＃１３０−０９４−１５６）からのヒトＣＤ８＋分離キットを用い、ＰＢＭＣからＣＤ８＋細胞を抽出した。
インビトロにおける細胞毒性アッセイ（Ｔ細胞死滅）
インビトロにおける細胞毒性アッセイについて、１×１０４個の標的細胞を９６ウェルのプレートに蒔き、一晩インキュベートした。３×１０４個のＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＴＤＢ又はＢｉｓＦａｂの存在下又は非存在下で加え、３７℃で４８時間インキュベートした。増殖培地で２回洗浄することによりＴ細胞を除去した。細胞の生存率を、ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｃｅｌｌ Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて測定した。
代替として、インビトロにおける細胞毒性をフローサイトメトリーにより監視した。製造業者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，＃Ｃ３４５５４）に従って標的細胞をカルボキシフルオレセインスクシニミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識した。ＣＦＳＥで標識した標的細胞と、ヒトＰＢＭＣ由来の精製ＣＤ８＋Ｔ細胞を３：１のＥ：Ｔ比で混合し、ＴＤＢ又はＢｉｓＦａｂとともに４８時間インキュベートした。インキュベーション終了時に、細胞をトリプシンにより取り出し、プレートから集めた。等量のＰＢＳ＋２％ＦＢＳ＋１ｍＭ ＥＤＴＡ＋ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）に再懸濁した。フローサイトメトリー分析を、自動化フォーマットにおけるＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒにより実施した。生きている標的細胞の数を、ＣＦＳＥ＋／ＰＩ 陰性細胞においてゲーティングすることにより数えた。細胞毒性の割合を、以下のようにして計算した：細胞毒性％（ＴＤＢ無しで生きている標的細胞数−ＴＤＢ有りで生きている標的細胞数）／（ＴＤＢ無しで生きている標的細胞数）×１００。
Ｔ細胞活性化の分析
標的細胞及び精製ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＴＤＢの存在下又は非存在下に混合し、Ｔ細胞活性化を、フローサイトメトリーによって分析した。インキュベーションの終了時に、細胞を、ＣＤ８−ＦＩＴＣ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５５６３４）及びＣＤ６９−ＰＥ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５５５３１）で染色した。
サブクローン上清、モノクローナル抗体、ｂｉｓＦａｂ及びＴＤＢの結合
内生的にＦｃＲＨ５を発現するがん細胞又はＦｃＲｈ５をトランスフェクトしたがん細胞への結合を試験するため、ＥＤＴＡ／ＰＢＳを用いて細胞を取り出した。１×１０５個の細胞を１００ｕＬ中に懸濁し、一次抗体（１容量の非ＩｇＧ定量化サブクローン上清、４ｕｇ／ｍＬのＩｇＧ定量化サブクローン上清、又は２ｕｇ／μＬの精製モノクローナル抗体）と、時間インキュベートした。細胞をＦＡＣＳ緩衝液（ＰＢＳ、１％ＢＳＡ、２ｍＭ ＥＤＴＡ）で２回洗浄し、１：１０００倍希釈した、ＰＥで標識したヤギ抗マウス二次抗体、又は１：１００のヤギ抗マウスＡＰＣとインキュベートした。細胞を、ＦＡＣＳ緩衝液で２回洗浄し、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒによりフローサイトメトリー分析を行った。指示された場合、抗体の直接的キセノン標識を、製造業者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に従って実施した。ＮＫ又はＢ細胞への結合を分析するため、１００万個のヒトＰＢＭＣを４ｕｇ／ｍＬのＩｇＧ定量化サブクローン上清と６０分間インキュベートし、１：１００希釈したＡＰＣで標識したヤギ抗マウス二次抗体で洗浄し、それとインキュベートした。次いで、細胞を再び２回洗浄し、フローサイトメトリー、並びにヒトＣＤ５６＋及びＧＤ１９＋細胞への結合の分析の前に、抗ＣＤ５６（ＰＥ；ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃５５５５１６）及び抗ＣＤ１９（ＰＥ； ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃３４０３６４）を用いて染色した。
結果
最初に、膜近位Ｉｇ−ドメインに対するアイソフォーム特異的抗体を産生するために、組換え型バキュロウイルスにより生成されたヒトＦｃＲＨ５ｃのＥ１１タンパク質（配列番号１のアミノ酸７４５〜８４８）及びＣ末端Ｈｉｓ発現タグでマウスを免疫した。この免疫戦略はＦｃＲＨ５に対する有意な免疫応答を起こさず、モノクローナル抗ＦｃＲＨ５抗体を産生することができなかった。第二の免疫戦略は、ヒトＦｃＲＨ５の膜近位Ｉｇ−ドメイン、膜貫通ドメイン及び細胞内ドメインをコードする、ＦｃＲＨ５ｃのアミノ酸７４５〜９７７（配列番号）をコードするプラスミドを用いたＤＮＡ免疫であった。この免疫戦略はＦｃＲＨ５に対する有意な免疫応答を起こさず、モノクローナル抗ＦｃＲＨ５抗体を産生することができなかった。第３の免疫戦略は、カニクイザルＦｃＲＨ５に相同的であり、ヒトＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、ＦｃＲＨ４に非相同的である、ＦｃＲＨ５の膜近位Ｉｇ−ドメインに対応するペプチドを利用した。この免疫戦略はＦｃＲＨ５に対する有意な免疫応答を起こさず、モノクローナル抗ＦｃＲＨ５抗体を産生することができなかった。
第４の免疫戦略については、Ｎ末端フラグ発現タグを有する、ヒトＦｃＲＨ５の膜近位Ｉｇ−ドメインからなるＥ１１タンパク質（配列番号１のアミノ酸残基７４５〜８５０）を、ＣＨＯ細胞内で産生した。上記組換え型タンパク質を、マウスを免疫するために使用した。抗ＦｃＲＨ５ Ｅ１１抗体の免疫、開発及び特徴付けを、上に詳細に記載したようにして実施した。
組換え型Ｅ１１（配列番号１のアミノ酸残基７４５〜８５０）を６回接種した後、ＦＡＣＳを用いて、ＦｃＲＨ５結合抗体を分析した。ヒト全長ＦｃＲＨ５、カニクイザル全長ＦｃＲＨ５、又はヒトＥ１１ドメイン膜貫通ドメイン及び細胞質ドメインを発現するＳＶＴ２細胞に対する有意な反応性が検出されたが、ＳＶＴ２細胞でトランスフェクトしたベクターでは反応性は検出されず、これは、５匹全てのマウスの血清中に、ＦｃＲＨ５反応性抗体が存在していたことを示す。
９回の接種後、免疫したマウス由来のリンパ球を、Ｘ６３〜Ａｇ８．６５３マウス骨髄腫細胞と電気融合した。更なるスクリーニングのために、３２３個のＩｇＧ陽性ハイブリドーマサブクローンを選択した。クローンを、ＥＬＩＳＡにより組換え型Ｅ１１（配列番号１のアミノ酸残基７４５〜８５０）に対する結合について、またＦＡＣＳによりヒト全長ＦｃＲＨ５、カニクイザル全長ＦｃＲＨ５又はヒトＥ１１ドメイン膜貫通ドメイン、及びＦｃＲＨ５の細胞質ドメインを発現するＳＶＴ２細胞に対する結合について細胞の試験を行った。ヒトＦｃＲＨ５を発現する細胞、及びカニクイザルＦｃＲＨ５を発現する細胞に対して結合する、合計２６個のクローンを同定し、これは、異種間反応性のあることを示す（表２）。サブクローン上清を、更にＡ）ヒトＦｃＲＨ５でトランスフェクトした多発性骨髄腫細胞、Ｂ）内生的にヒトＦｃＲＨ５を発現する細胞（ＭＯＬＰ−２骨髄腫細胞、健常人ドナー由来の末梢ヒトＣＤ１９＋Ｂ細胞）、Ｃ）ヒトＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３又はＦｃＲＨ４を発現させるためにトランスフェクトしたＳＶＴ２細胞、Ｄ）ヒトＦｃＲＨ５の切断型バージョン（Ｅ１１が含む４つのＩｇ−ドメインを欠失する；配列番号１のアミノ酸４６４〜８５０）を発現する２９３細胞、及びＥ）ＮＫ細胞に対する結合について更に特徴づけた。更に、上清の可溶性ＦｃＲＨ５ａに対する結合をＥＬＩＳＡにより分析した。これらの分析に基づき、精製のためのモノクローナル抗体を選択した。
表２
図２は、５種の精製したＥ１１抗体、非アイソフォーム選択的抗ＦｃＲＨ５抗体１０Ａ８（ＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン４〜５に結合する）、及びヒトＦｃＲＨ５（図２Ａ）又はカニクイザルＦｃＲＨ５（図２Ｂ）のいずれかを発現するＳＶＴ２細胞に対するＮ末端ｇＤタグに特異的な対照の抗体の結合の用量範囲を示す。このアッセイにおける抗体は、製造業者のプロトコル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＃ｚ２５０５１， ｚ２５１５１，ｚ２５２５１）に従ってＡＰＣフルオロフォアにより直接標識した。ヒトＦｃＲＨ５をトランスフェクトしたＥＪＭ（図３Ａ）及びＯＰＭ２（図３Ｂ）多発性骨髄腫株化細胞に対する、代表的なＥ１１抗体５Ａ１０の結合は、以前に記載した非アイソフォーム選択的ＦｃＲＨ５抗体１０Ａ８及び７Ｄ１１（両者ともＦｃＲＨ５ｃのＩｇ様ドメイン４〜５に結合する）（Ｅｌｋｉｎｓら，２０１２；Ｐｏｌｓｏｎら，２００６）と比較して同様であるか、又は良好であることがわかった。ＭＯＬＰ−２細胞は、低レベルのＦｃＲＨ５を内生的に発現する、非常に少ない公知の多発性骨髄腫株化細胞の１つである。５Ａ１０、５Ｆ１、３Ｇ７及び６Ｄ２サブクローンの上清は、７Ｄ１１と同様の強度でＭＯＬＰ−２細胞を染色した（図３Ｃ〜Ｆ）。
２つの別々の試験を、結合の、膜近位Ｉｇ−ドメイン９（Ｅ１１）の存在に対する依存性に対処するために設計した。第一に、Ｅ１１免疫に由来する抗体の予想される結合部位を含むＩｇ−ドメイン６〜９（配列番号１のアミノ酸４６４〜８５０）を欠失する、切断型ＦｃＲＨ５ｃ変異体を作製した。Ｎ末端ｇＤタグを有する、この構築物を２９３細胞内で発現させ、２．５uｇ／ｍlのサブクローン上清、次いでＰＥ標識したヤギ抗マウス二次抗体（１：１０００希釈）に供した。試験を行ったサブクローンは、いずれも切断型ヒトＦｃＲＨ５ｃを発現する２９３細胞に結合しなかった（図４Ａ）。これに対し、野生型のヒトＦｃＲＨ５ｃを発現する２９３細胞への結合が検出された。ｇＤ又は非アイソフォーム選択的抗体クローン（１０Ａ８）の結合は、突然変異によって変化しなかった。この結果は、Ｅ１１抗体の結合部位がＩｇ−ドメイン６〜９に含まれることを示す。
可溶性ＦｃＲＨ５ａアイソフォームへの結合を試験することにより、アイソフォーム選択性を更に証明した。このために、２９３細胞をトランスフェクトし、Ｃ末端ＨＩＳ発現タグを有する可溶性アイソフォームを発現させた。ＦｃＲＨ５ａの発現は、抗ＨＩＳ抗体を使用したウェスタンブロット分析により確認した。６５ｋＤａのバンドが馴化培地中のＦｃＲＨ５ａから検出されたが、ベクターをトランスフェクトした細胞からは検出されなかった（データは示さず）。ＥＬＩＳＡのために、プレートを抗ＨＩＳ捕獲抗体でコーティングし、ＨＩＳタグ化可用性ＦｃＲＨ５ａアイソフォームを含む、１：１０希釈した馴化培地とともに１時間インキュベートした。Ｅ１１モノクローナル抗体を、、１〜０．００１μｇ／ｍＬの濃度で使用し、１時間インキュベートした後、ヤギ抗マウスＨＲＰ抗体、最後にＴＭＢ−基質とインキュベーションした。クローン２Ｈ７及び５Ａ１０は、可溶性のＦｃＲＨ５ａに対し相当の反応性を示したが、試験を行った他のモノクローナル抗体は、検出可能な結合をなんら示さなかった（図５Ａ）。この結果により、Ｉｇ−ドメイン９（Ｅ１１）が抗体１Ｇ７、３Ａ４、３Ｂ１２、３Ｇ７及び５Ｆ１の結合に必要であり、それ故、これらの抗体が全長ＦｃＲＨ５アイソフォーム（ＦｃＲＨ５ｃ）に対して選択的であることが確認される。
ＦｃＲＨ５は、Ｂ細胞内で内生的に発現する（Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕら，２００１；Ｐｏｌｓｏｎら，２００６）。サブクローン上清のＢ細胞への結合を評価するために、ＰＢＭＣを健常人ドナーの血液から抽出した。１００万個のＰＢＭＣを４μｇ／ｍＬのサブクローン上清とともに６０分間インキュベートし、洗浄し、１：１００に希釈した、ＡＰＣで標識したヤギ抗マウス二次抗体とともにインキュベートした。次いで、細胞を再度２回洗浄し、フローサイトメトリー及びＣＤ１＋細胞に対する結合分析の前に、ＰＥ標識した抗ＣＤ１９（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃３４０３６４）で染色した。上清のほとんどは、ＣＤ１９＋細胞内で、対照（一次抗体なし、抗ｇＤ）を超えてＡＰＣシグナルの有意な変化を誘発し（図５Ｂ）、これはＢ細胞への結合を示す。
Ｆｃ受容体ホモログ（ＦｃＲＨ）ファミリー分子は、お互いに高い程度の相同性を有している（Ｍｉｌｌｅｒら，２００２）。相同性は、Ｅ１１抗体が標的とする、膜近位ドメイン間で特に高い（Ｍｉｌｌｅｒら，２００２）。ファミリーメンバーに対する交差反応性を調べるために、ＦｃＲＨｌ、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３及びＦｃＲＨ４（全て、Ｎ末端ｇＤ発現タグを含む）をＳＶＴ２細胞内で発現させ、細胞をサブクローン上清及びヤギ抗マウス−ＰＥ二次抗体で染色した。トランスフェクトされたＦｃＲＨの発現は、全ての株化細胞内の抗ｇＤ抗体からのシグナルにより確認された。ｇＤ抗体で染色したものと比べ、ＦｃＲＨ２発現細胞と有意に結合する上清はなかった（図６Ｂ）。１Ｂ８、１Ｈ１１、３Ｃ１０、４Ｇ８及び６Ｄ２により、ＦｃＲＨ１に対する低レベルの結合（図６Ａ）が示され、及び１Ｆ４がＦｃＲＨ４に結合した（図６Ｄ）。全体的に見て、ｇＤ対照抗体を含むＦｃＲＨ３発現ＳＶＴ２細胞からのシグナルは低く、これは、低レベルの発現を示す。ＦｃＲＨ３発現ＳＶＴ２細胞に対する低レベルの結合が、１Ｆ４及び４Ｈ８上清について検出された（図６Ｃ）。
ＦｃＲＨ３発現ＳＶＴ２細胞内の全体のシグナルは低いので、健常人ドナー由来のＰＢＭＣを用いて更なる試験を行った。ＰＢＭＣを上述のようにして染色したが、ＮＫ細胞に対する調査した細胞集団をゲートするために、ＣＤ１９に代え、ＣＤ５６（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃５５５５１６）を使用した。ＮＫ細胞はＦｃＲＨ３を内生的に発現し（Ｐｏｉｓｏｎら，２００６）、予想されるように、以前に記載されたモノクローナル抗ＦｃＲＨ３抗体（Ｐｏｉｓｏｎら，２００６）で染色された。ＣＤ５６＋細胞においてもＦｃＲＨ１の発現が検出されたが、Ｅ１１サブクローンの上清のいずれもＮＫ脂肪を有意に染色せず（図７）、これはＦｃＲＨ３の内生的発現に対する交差反応性がないことを示す。
ファミリーメンバーの交差反応性を、ＳＶＴ２細胞内で上述したのを同じプロトコルを用いて再試験したが、新鮮な試薬を使用し、ＳＶＴ２細胞を、ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３及びＦｃＲＨ４で再トランスフェクトした。上述のような精製抗体の再試験により、最初の一連の実験とは著しく異なる結果が得られた。これらの更新された結果を表４に要約する。他のＦｃＲＨファミリーメンバーと、交差反応性を示さないかわずかに示すのではなく、１種の抗体（１Ｇ７）を除いて全てが、ＦｃＲＨ５及び少なくとも１種以上の他のファミリーメンバーと有意な結合を示した。理論に拘束されないが、抗体交差反応性の量は、種々のＦｃＲＨファミリーメンバーの最後のＩｇ様ドメインの配列類似性を考慮すると予想されるものである。
ＣＤ８＋細胞は、最も強力な免疫エフェクター細胞の１種である。Ｔ細胞の活性を、Ｔ細胞及び腫瘍抗原の両方に同時に結合する二重特異性抗体（又は抗体断片）を使用することにより、腫瘍細胞を死滅させるために動員され得る。二重の結合は、Ｔ細胞及び腫瘍抗原発現細胞の特異的死滅のポリクローナル活性をもたらし得る（Ｌｉｕら，１９８５：Ｓｈａｌａｂｙら，１９９２）。いくつかの腫瘍の標的及びいくつかの二重特異性抗体のプラットフォームは、このアプローチのための一般的な柔軟性及び前臨床実現可能性を実証している。重要なことに、有望な臨床活性はＣＤ１９標的指向化、Ｔ細胞活性二重特異性ＳｃＦＶ抗体断片、ブリナツモマブ（ＭＴ１０３；ＭｉｃｒｏＭｅｔ）により証明された。６０ｕｇ／ｍ２／日という低用量での治療により、再発性非ホジキンリンパ腫及び急性リンパ芽球性白血病の治療のための臨床試験において長期の応答をもたらす（Ｂａｒｇｏｕら，２００８；Ｄｒｅｉｅｒら，２００２）。
ＦｃＲＨ５抗体のＴ細胞を活性化し、二重特異性抗体の形式で死滅を介在する能力を、二重特異性ｂｉｓＦａｂ分子を精製することにより調べた。要するに、これらの二重特異性分子を、抗体のタンパク質分解切断、それに続く還元、再酸化反応及びビス−マレアミドを用いたＦａｂ断片の結合により生成した（Ｓｃｈｅｅｒら，２０１２ｂ、及び上記のとおり）。抗ＣＤ３抗体クローンであるＵＣＨＴｌは、Ｔ細胞受容体に取り込まれるヒトＣＤ３に結合する。ＵＣＨＴｌ ．ｖ９は、以前に有効なＴ細胞結合アームであることが示されており（Ｊｕｎｔｔｉｌａら，２０１２及び上記；Ｚｈｕら，１９９５）、したがって、ＦｃＲＨ５ ｂｉｓＦａｂに使用された。Ｅ１１免疫由来の９種の抗ＦｃＲＨ５抗体クローン（１Ｇ７、２Ｈ７、３Ｇ７、５Ａ１０、５Ｆ１、６Ｄ２、３Ｂ１２、３Ｃ１０、３Ｆ１０）を標的アームのために選択し、ＵＣＨＴｌ，ｖ９と結合し、ＣＤ３−ＦｃＲＨ５二重特異性ｂｉｓＦａｂ分子を得た。
ｂｉｓＦａｂ分子に加え、全長の二重特異性抗体（Ｔ細胞依存性二重特異性抗体；ＴＤＢ）を、抗体のヘミマーのヘテロ二量体化を推進する、一対の相補的に設計されたＦｃ領域に依存するノブ・イントゥーホール技術（Ｍｅｒｃｈａｎｔら，１９９８）を用いて生成した。ｂｉｓＦａｂの場合におけるように、ＵＣＨＴｌ．ｖ９（Ｚｈｕら，１９９５）を抗ＣＤ３（ホール）として使用した。標的アーム（ノブ）については、ＦｃＲＨ５ Ｅ１１免疫由来の抗体クローンである、非アイソフォーム選択的抗ＦｃＲＨ５クローン（１０Ａ８）（Ｅｌｋｉｎｓら，２０１２）又は抗ＨＥＲ２クローン４Ｄ５（トラスツズマブ）（Ｃａｒｔｅｒら，１９９２）を使用した。ＴＤＢの生成及び精製は詳細に記載されている（Ｊｕｎｔｔｉｌａら，２０１２；Ｓｃｈｅｅｒら，２０１２ａ、及び上記のとおり）。
ＦｃＲＨ５をトランスフェクトした２９３標的細胞の死滅を媒介する二重特異性分子の能力を、標的をＣＤ８＋Ｔ細胞（エフェクター細胞）と４８時間インキュベートし、Ｃｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ Ｇｌｏアッセイ又はＦＡＣＳ殺傷アッセイ（上記アッセイ）を用いて殺傷活性を測定した。ＦｃＲＨ５ Ｅ１１標的アームを取り込んだ、９種全てのｂｉｓＦａｂは、標的細胞殺傷の媒介において有効であった（図８Ａ〜Ｂ）。殺傷活性は、１〜１０ｎｇ／ｍＬの低い濃度で検出され、１０〜１００ｎｇ／ｍＬ濃度で飽和した。最大殺傷活性は、ほとんどのクローンについて８０％を超えた。殺傷活性は、ＨＥＲ２−ＴＤＢと比較して同様であった（図８Ａ〜Ｂ）。ヒトＨＥＲ２は、２９３細胞内において低レベルで発現する（データは示さず）。一方、殺傷活性は、標的の約２０％しか殺傷することのできない非アイソフォーム選択的ＦｃＲＨ５−ＴＤＢ（１０Ａ８）をはるかに超えた。全長の標的アームとして２Ｈ７、３Ｇ７及び５Ａ１０ ＦｃＲＨ５−Ｅ１１クローンを組み込んだ全長のＴＤＢを用いて、同様の着実な活性が検出された（図８Ｃ〜Ｄ）。ＴＤＢと、２Ｈ７及び３Ｇ７のｂｉｓＦａｂバージョンとの有意な差は検出されず、Ｆｃが活性に必要ではなく殺傷活性のに対して阻害性を有するものでもないことを示す。ＦｃＲＨ５ ｂｉｓＦａｂと、標的アームとして２Ｈ７及び３Ｇ７を取り込んだ全長ＴＤＢとは、低レベルのＦｃＲＨ５を内生的に発現するＭＯＬＰ２細胞の殺傷を効率的に媒介することもできる（図９Ａ）。Ｔ細胞の活性化が、細胞膜上でＣＤ６９を発現するＣＤ８＋細胞の割合を測定する反応に続いた。Ｔ細胞の活性化は殺傷活性に対応し、ｂｉｓＦａｂ及びＴＤＢの両者について同様であった（図９Ｂ）。結果の要約を表３に示す。
表３
表４
参考文献
Ｂａｒｇｏｕ，Ｒ．ら，（２００８）．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２１，９７４−９７７，
Ｃａｒｔｅｒ，Ｐ．ら，（１９９２）．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８９，４２８５−４２８９．
Ｄｒｅｉｅｒ，Ｔ．ら，（２００２），Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ １００，６９０−６９７．
Ｅｌｋｉｎｓ，Ｋ．ら，（２０１２）．Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １１，２２２２−２２３２．
Ｈａｔｚｉｖａｓｓｉｌｉｏｕ，Ｇ．ら，（２００１）．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １４，２７７−２８９．
Ｌｉｕ，Ｍ．Ａ．ら，（１９８５）．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８２，８６４８−８６５２．
Ｍｅｒｃｈａｎｔ，Ａ，Ｍ．ら，（１９９８）．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １６，６７７−６８１．
Ｍｉｌｌｅｒ，Ｉ ら，（２００２）．Ｂｌｏｏｄ ９９，２６６２−２６６９．
Ｐｏｌｓｏｎ，Ａ．Ｇ．ら，（２００６）．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐａｔｔｅｒｎ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ＦｃＲＨ／ＩＲＴＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｉｎ Ｂ−ｃｈｒｏｎｉｃ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １８，１３６３−１３７３．
Ｓｈａｌａｂｙ，Ｍ．Ｒ，ら，（１９９２）．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １７５，２１７−２２５．
Ｚｈｕ，Ｚ．ら，（１９９５）．Ｉｎｔ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ６２，３１９−３２４．
上記発明を、明確な理解のための説明及び例として、ある程度詳細に記載したが、説明及び例は、本発明の範囲を限定すると見なされるべきではない。本明細書で引用される全ての特許及び科学文献の開示は、参照によりそれらの全体が明示的に組み入れられる。
可変軽鎖ドメイン
１Ｃ８．１
ＤＩＶＭＴＱＳＱＲＦＭＳＴＳＬＧＤＲＶＳＶＴＣＫＡＳＱＮＶＩＴＮＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＡＬＩＹＳＡＳＹＲＹＳＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＮＶＱＳＥＤＬＡＥＹＦＣＱＱＹＴＮＹＰＭＷＴＦＧＧＧＴＲＬＥＩＫＲＴＶＡ（配列番号１１０）
１Ｇ７．２
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＩＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＮＩＶＶＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＮＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１１２）
２Ｈ７．３
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＶＴＰＧＤＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＮＩＲＮＮＬＨＷＹＱＱＫＳＨＥＳＰＲＬＬＩＫＦＴＳＱＳＩＳＧＩＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＴＥＤＦＧＭＹＦＣＱＱＳＮＮＷＰＱＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１１４）
３Ａ４．２
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＴＰＧＤＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨＷＹＱＱＫＳＨＥＳＰＲＬＬＩＫＦＡＳＱＳＩＳＧＩＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＳＩＮＳＶＥＴＥＤＦＧＭＹＦＣＱＱＳＮＮＷＰＱＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡ（配列番号１１６）
３Ｂ１２．１．１
ＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＬＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＧＡＡＮＬＡＥＧＶＰＳＲＩＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＴＹＹＣＱＨＦＷＧＩＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１１８）
３Ｃ１０
ＤＩＱＭＴＱＴＰＬＳＬＰＶＴＬＧＤＱＡＳＩＳＣＲＳＳＱＳＬＶＨＲＮＧＮＴＹＬＨＷＹＬＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＫＶＳＮＲＦＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＫＩＳＲＶＥＡＥＤＬＧＶＹＦＣＳＱＳＴＨＶＰＰＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡ（配列番号１２０）
３Ｆ１０
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＬＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＧＡＡＮＬＡＥＧＶＰＳＲＩＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＴＹＹＣＱＨＦＷＧＩＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１２２）
３Ｇ３
ＤＩＶＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＶＧＥＴＶＴＩＴＣＲＡＳＥＮＩＹＳＮＬＡＷＹＱＬＫＱＧＫＳＰＱＬＬＶＹＧＡＡＮＬＡＥＧＶＰＳＲＩＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＮＳＬＱＳＥＤＦＧＴＹＹＣＱＨＦＷＧＩＰＷＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１２４）
３Ｇ７．１．５
ＤＩＶＬＩＱＳＰＡＴＬＳＶＴＬＧＧＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＳＩＳＮＮＬＨＷＹＱＱＫＳＨＥＳＰＲＬＬＩＫＦＡＳＱＳＩＳＧＩＰＳＲＦＲＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＳＶＥＴＥＤＦＧＩＹＦＣＱＱＳＮＮＷＰＱＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＬＫＲＴＶＡＡ（配列番号１２６）
５Ａ１０．１．３
ＤＩＶＬＴＱＳＰＡＮＬＳＶＩＰＧＤＳＶＳＬＳＣＲＡＳＱＮＩＲＮＮＬＨＷＹＱＱＫＳＱＥＳＰＲＬＬＩＫＦＡＳＱＳＭＳＧＴＰＳＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＮＴＶＥＴＥＤＦＧＭＹＦＣＱＱＳＮＮＷＰＱＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１２８）
５Ｆ１．１．５
ＱＡＶＶＴＱＥＳＡＬＴＴＳＰＧＥＴＶＴＬＴＣＲＳＳＴＧＴＶＴＴＳＮＦＡＮＷＶＱＥＫＰＤＨＬＦＴＧＬＩＧＧＴＳＮＲＡＰＧＶＰＡＲＦＳＧＳＬＩＧＤＫＡＡＬＴＩＴＧＡＱＴＥＤＥＡＩＹＦＣＶＬＷＣＳＮＬＷＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡ（配列番号１３０）
６Ｄ２
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＦＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＧＴＡＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＦＷＰＳＴＲＨＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＧＮＶＱＳＥＤＬＡＤＹＦＣＱＱＦＳＳＬＰＨＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫＲＴＶＡＡ（配列番号１３２）
ＩＧ７’
ＤＩＶＭＴＱＳＨＫＩＭＳＴＳＶＧＤＲＶＳＩＴＣＫＡＳＱＤＶＳＮＩＶＶＷＦＱＱＫＰＧＱＳＰＮＬＬＩＹＳＡＳＹＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＳＧＴＤＦＴＦＴＩＳＳＶＱＡＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＨＹＳＳＰＹＴＦＧＧＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１３４）
可変重鎖ドメイン
１Ｃ８．１
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＭＫＩＳＣＥＡＳＧＹＳＦＴＡＹＩＭＮＷＶＫＱＳＲＧＫＮＬＥＷＩＧＬＩＮＰＹＮＧＥＴＴＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＱＳＳＳＴＡＹＭＥＬＬＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＦＣＡＲＧＬＹＷＦＰＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１１１）
１Ｇ７．２
ＥＶＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＲＦＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＬＮＳＬＫＶＤＤＴＡＩＹＹＣＳＮＨＹＹＧＳＳＤＹＡＬＤＮＷＧＱＧＴＳＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１１３）
２Ｈ７．３
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＷＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＫＷＶＫＱＴＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＥＴＦＹＳＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＴＴＡＹＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＬＹＲＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１１５）
３Ａ４．２
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＳＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＫＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＹＮＧＥＴＦＹＮＱＫＬＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＶＦＭＱＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＬＹＦＦＡＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１１７）
３Ｂ１２．１．１
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＥＹＴＩＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＲＩＧＧＩＮＰＮＮＤＡＶＳＹＮＱＲＦＲＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＫＬＧＲＧＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１１９）
３Ｃ１０
ＱＶＱＬＱＱＰＧＡＥＬＶＲＰＧＡＳＶＫＬＳＣＫＴＳＧＹＴＦＩＳＹＷＩＮＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＮＩＹＰＳＤＳＹＴＮＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＴＳＳＳＴＡＹＭＱＬＴＳＰＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＴＲＳＬＹＧＹＤＡＳＹＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１２１）
３Ｆ１０
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＥＹＴＩＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＲＩＧＧＩＮＰＮＮＤＡＩＳＹＮＱＫＦＲＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＫＬＧＲＧＹＹＦＤＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１２３）
３Ｇ３
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＴＳＧＹＴＦＴＥＹＴＩＨＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＲＩＧＧＩＮＰＮＮＤＡＩＳＹＮＱＫＦＲＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＫＬＧＲＧＹＹＦＤＹＷＧＲＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１２５）
３Ｇ７．１．５
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＫＷＶＲＱＮＨＧＫＲＬＥＷＩＧＤＩＮＰＹＮＧＤＴＦＹＮＱＫＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＦＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＬＹＦＦＨＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１２７）
５Ａ１０．１．３
ＥＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＷＫＰＧＡＳＶＫＭＳＣＫＡＳＧＹＴＦＴＤＹＹＭＫＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＤＩＮＰＮＮＧＥＴＦＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＴＳＴＡＹＭＥＬＮＳＬＴＴＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＬＹＲＦＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１２９）
５Ｆ１．１．５
ＱＶＱＬＱＱＳＧＡＤＬＶＲＰＧＴＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＮＹＬＩＥＷＶＫＱＲＰＧＱＧＬＥＷＩＧＶＩＮＰＧＳＧＧＴＮＹＮＥＫＦＫＧＫＡＴＬＴＡＤＫＳＳＳＴＡＹＭＱＬＳＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＦＣＡＲＴＲＮＹＧＹＶＩＤＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１３１）
６Ｄ２
ＱＶＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＩＳＣＫＡＳＧＦＳＦＴＡＹＦＭＮＷＶＫＱＳＨＧＫＳＰＥＷＩＧＲＩＮＰＹＮＧＥＴＦＦＮＱＮＦＫＤＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＮＴＡＨＭＥＬＬＳＬＴＳＤＤＳＡＶＹＹＣＧＲＧＬＹＹＬＮＹＷＧＱＧＴＴＬＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰ（配列番号１３３）
１Ｇ７’
ＱＶＱＬＫＱＳＧＰＧＬＶＱＰＳＱＳＬＳＩＴＣＴＶＳＧＦＳＬＴＲＦＧＶＨＷＶＲＱＳＰＧＫＧＬＥＷＬＧＶＩＷＲＧＧＳＴＤＹＮＡＡＦＭＳＲＬＴＩＴＫＤＮＳＫＳＱＶＦＦＫＬＮＳＬＫＶＤＤＴＡＩＹＹＣＳＮＨＹＹＧＳＳＤＹＡＬＤＮＷＧＱＧＩＳＶＴＶＳＳ（配列番号１３５）
Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ１ （ＨＶＲ−Ｈ１）
Ｋａｂａｔ ＣＤＲ Ｈ２ （ＨＶＲ−Ｈ２）
ＣＤＲ Ｈ２ （ＨＶＲ−Ｈ２）
ＦｃＲＨ５ｃ
ＭＬＬＷＶＩＬＬＶＬＡＰＶＳＧＱＦＡＲＴＰＲＰＩＩＦＬＱＰＰＷＴＴＶＦＱＧＥＲＶＴＬＴＣＫＧＦＲＦＹＳＰＱＫＴＫＷＹＨＲＹＬＧＫＥＩＬＲＥＴＰＤＮＩＬＥＶＱＥＳＧＥＹＲＣＱＡＱＧＳＰＬＳＳＰＶＨＬＤＦＳＳＡＳＬＩＬＱＡＰＬＳＶＦＥＧＤＳＶＶＬＲＣＲＡＫＡＥＶＴＬＮＮＴＩＹＫＮＤＮＶＬＡＦＬＮＫＲＴＤＦＨＩＰＨＡＣＬＫＤＮＧＡＹＲＣＴＧＹＫＥＳＣＣＰＶＳＳＮＴＶＫＩＱＶＱＥＰＦＴＲＰＶＬＲＡＳＳＦＱＰＩＳＧＮＰＶＴＬＴＣＥＴＱＬＳＬＥＲＳＤＶＰＬＲＦＲＦＦＲＤＤＱＴＬＧＬＧＷＳＬＳＰＮＦＱＩＴＡＭＷＳＫＤＳＧＦＹＷＣＫＡＡＴＭＰＹＳＶＩＳＤＳＰＲＳＷＩＱＶＱＩＰＡＳＨＰＶＬＴＬＳＰＥＫＡＬＮＦＥＧＴＫＶＴＬＨＣＥＴＱＥＤＳＬＲＴＬＹＲＦＹＨＥＧＶＰＬＲＨＫＳＶＲＣＥＲＧＡＳＩＳＦＳＬＴＴＥＮＳＧＮＹＹＣＴＡＤＮＧＬＧＡＫＰＳＫＡＶＳＬＳＶＴＶＰＶＳＨＰＶＬＮＬＳＳＰＥＤＬＩＦＥＧＡＫＶＴＬＨＣＥＡＱＲＧＳＬＰＩＬＹＱＦＨＨＥＧＡＡＬＥＲＲＳＡＮＳＡＧＧＶＡＩＳＦＳＬＴＡＥＨＳＧＮＹＹＣＴＡＤＮＧＦＧＰＱＲＳＫＡＶＳＬＳＶＴＶＰＶＳＨＰＶＬＴＬＳＳＡＥＡＬＴＦＥＧＡＴＶＴＬＨＣＥＶＱＲＧＳＰＱＩＬＹＱＦＹＨＥＤＭＰＬＷＳＳＳＴＰＳＶＧＲＶＳＦＳＦＳＬＴＥＧＨＳＧＮＹＹＣＴＡＤＮＧＦＧＰＱＲＳＥＶＶＳＬＦＶＴＶＰＶＳＲＰＩＬＴＬＲＶＰＲＡＱＡＶＶＧＤＬＬＥＬＨＣＥＡＰＲＧＳＰＰＩＬＹＷＦＹＨＥＤＶＴＬＧＳＳＳＡＰＳＧＧＥＡＳＦＮＬＳＬＴＡＥＨＳＧＮＹＳＣＥＡＮＮＧＬＶＡＱＨＳＤＴＩＳＬＳＶＩＶＰＶＳＲＰＩＬＴＦＲＡＰＲＡＱＡＶＶＧＤＬＬＥＬＨＣＥＡＬＲＧＳＳＰＩＬＹＷＦＹＨＥＤＶＴＬＧＫＩＳＡＰＳＧＧＧＡＳＦＮＬＳＬＴＴＥＨＳＧＩＹＳＣＥＡＤＮＧＬＥＡＱＲＳＥＭＶＴＬＫＶＡＶＰＶＳＲＰＶＬＴＬＲＡＰＧＴＨＡＡＶＧＤＬＬＥＬＨＣＥＡＬＲＧＳＰＬＩＬＹＲＦＦＨＥＤＶＴＬＧＮＲＳＳＰＳＧＧＡＳＬＮＬＳＬＴＡＥＨＳＧＮＹＳＣＥＡＤＮＧＬＧＡＱＲＳＥＴＶＴＬＹＩＴＧＬＴＡＮＲＳＧＰＦＡＴＧＶＡＧＧＬＬＳＩＡＧＬＡＡＧＡＬＬＬＹＣＷＬＳＲＫＡＧＲＫＰＡＳＤＰＡＲＳＰＳＤＳＤＳＱＥＰＴＹＨＮＶＰＡＷＥＥＬＱＰＶＹＴＮＡＮＰＲＧＥＮＶＶＹＳＥＶＲＩＩＱＥＫＫＫＨＡＶＡＳＤＰＲＨＬＲＮＫＧＳＰＩＩＹＳＥＶＫＶＡＳＴＰＶＳＧＳＬＦＬＡＳＳＡＰＨＲ（配列番号１）

Claims (53)

  1. ＦｃＲＨ５ｃの細胞外ドメインのアイソフォームｃ特異的領域（配列番号１のアミノ酸７４５〜８５０）に結合する、単離された抗ＦｃＲＨ５抗体であって、
    抗ＦｃＲＨ５抗体が、ＦｃＲＨ５の他のＩｇ様ドメインと有意に結合しない、抗ＦｃＲＨ５抗体。
  2. 抗ＦｃＲＨ５抗体が、
    （ａ）配列番号３９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｂ）配列番号３８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｃ）配列番号４１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号８９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号２９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｄ）配列番号４２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｅ）配列番号４３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列列番号７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｆ）配列番号４４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｇ）配列番号４５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号６９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２１のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖
    （ｈ）配列番号４６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号１０のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；
    （ｉ）配列番号４８のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２４のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖；又は
    （ｊ）配列番号４９のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ１、配列番号７３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ２、及び配列番号９７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｈ３を含む重鎖、及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ１、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ２、及び配列番号３７のアミノ酸配列を含むＨＶＲ−Ｌ３を含む軽鎖
    を含む、請求項１に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  3. 抗ＦｃＲＨ５抗体が、
    （ａ）配列番号１１３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｂ）配列番号１３５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１３４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列
    （ｃ）配列番号１１１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｄ）配列番号１１７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｅ）配列番号１１９のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１１８のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｆ）配列番号１２１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１２０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｇ）配列番号１２３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１２２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｈ）配列番号１２５のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１２４のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｉ）配列番号１２７のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１２６のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、
    （ｊ）配列番号１３１のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１３０のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列 、又は
    （ｋ）配列番号１３３のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＨ配列、及び配列番号１３２のアミノ酸配列と少なくとも９５％の配列同一性を有するＶＬ配列、を含む、請求項２に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  4. 抗ＦｃＲＨ５抗体が、
    （ａ）配列番号１１１のＶＨ配列、及び配列番号１１０のＶＬ配列、
    （ｂ）配列番号１３５のＶＨ配列、及び配列番号１３４のＶＬ配列
    （ｃ）配列番号１１３のＶＨ配列、及び配列番号１１２のＶＬ配列 、
    （ｄ）配列番号１１７のＶＨ配列、及び配列番号１１６のＶＬ配列 、
    （ｅ）配列番号１１９のＶＨ配列、及び配列番号１１８のＶＬ配列 、
    （ｆ）配列番号１２１のＶＨ配列、及び配列番号１２０のＶＬ配列 、
    （ｇ）配列番号１２３のＶＨ配列、及び配列番号１２２のＶＬ配列 、
    （ｈ）配列番号１２５のＶＨ配列、及び配列番号１２４のＶＬ配列 、
    （ｉ）配列番号１２７のＶＨ配列、及び配列番号１２６のＶＬ配列 、
    （ｊ）配列番号１３１のＶＨ配列、及び配列番号１３０のＶＬ配列 、又は
    （ｋ）配列番号１３３のＶＨ配列、及び配列番号１３２のＶＬ配列、を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  5. 抗ＦｃＲＨ５抗体が、
    （ａ）モノクローナル抗体である、
    （ｂ）ヒト抗体、ヒト化抗体、又はキメラ抗体である、
    （ｃ）ＦｃＲＨ５に結合する抗体断片である、
    （ｄ）ＩｇＧ１抗体、ＩｇＧ２ａ抗体、ＩｇＧ２ｂ抗体である、
    （ｅ）二重特異性抗体である；及び／又は
    （ｆ）標識にコンジュゲートされている、請求項１〜４のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  6. 抗ＦｃＲＨ５抗体が、
    （ａ）全長のヒト及びカニクイザルＦｃＲＨ５と交差反応する、
    （ｂ）ＦｃＲＨ１、ＦｃＲＨ２、ＦｃＲＨ３、及び／又はＦｃＲＨ４と交差反応しない、（ｃ）内在性ＦｃＲＨ５に結合する、又は
    （ｄ）ＦｃＲＨ５ａと交差反応しない、
    請求項１〜５のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  7. 二重特異性抗体がＦｃＲＨ５及びＣＤ３に結合する、請求項５に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  8. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体をコードする、単離された核酸。
  9. 請求項８に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  10. 抗ＦｃＲＨ５抗体を生産するために、請求項９に記載の宿主細胞を培養することを含む、抗ＦｃＲＨ５抗体の生産方法。
  11. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体と、細胞障害性薬物とを含む、イムノコンジュゲート。
  12. 式Ａｂ−（Ｌ−Ｄ）ｐを有する、請求項１１に記載のイムノコンジュゲートであって、
    式中、
    （ａ）Ａｂは請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体であり、
    （ｂ）Ｌはリンカーであり、
    （ｃ）Ｄは、メイタンシノイド、アウリスタチン、カリチアマイシン、ピロロベンゾジアゼピン、及びネモルビシン誘導体から選択される薬剤であり、
    （ｄ）ｐは１〜８の範囲である、イムノコンジュゲート。
  13. Ｄがアウリスタチンである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  14. Ｄが式ＤＥ
    （式中、Ｒ２及びＲ６は、それぞれメチルであり、Ｒ３及びＲ４は、それぞれイソプロピルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、各Ｒ８は、独立してＣＨ３、Ｏ−ＣＨ３、ＯＨ、及びＨから選択され；Ｒ９はＨであり；Ｒ１８は−Ｃ（Ｒ８）２−Ｃ（Ｒ８）２−アリールである）を有する、請求項１３に記載のイムノコンジュゲート。
  15. 薬剤がＭＭＡＥである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  16. Ｄが式Ａ：
    （式中、点線は、Ｃ１及びＣ２、又はＣ２及びＣ３間の二重結合の任意の存在を示し 、
    Ｒ２は、独立してＨ、ＯＨ、＝Ｏ、＝ＣＨ２、ＣＮ、Ｒ、ＯＲ、＝ＣＨ−ＲＤ、＝Ｃ（ＲＤ）２、Ｏ−ＳＯ２−Ｒ、ＣＯ２Ｒ及びＣＯＲから選択され、又はハロ若しくはジハロから更に選択されてもよく、ここで、ＲＤは、独立してＲ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
    Ｒ６及びＲ９は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから選択され 、
    Ｒ７は、独立してＨ、Ｒ、ＯＨ、ＯＲ、ＳＨ、ＳＲ、ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＲＲ’、ＮＯ２、Ｍｅ３Ｓｎ及びハロから選択され、
    Ｑは、独立してＯ、Ｓ及びＮＨから選択され、
    Ｒ１１は、Ｈ若しくはＲであるか、又はＱがＯである場合、ＳＯ３Ｍであり、ここで、Ｍは金属カチオンであり、
    Ｒ及びＲ’は、それぞれ独立して置換されていてもよいＣ１−８アルキル、Ｃ３−８ヘテロシクリル及びＣ５−２０アリール基から選択され、ＮＲＲ’基に関しては、Ｒ及びＲ’が、それらが結合している窒素原子と一緒になって、置換されていてもよい４、５、６又は７員環複素環を形成していてもよく、
    Ｒ１２、Ｒ１６、Ｒ１９及びＲ１７は、それぞれＲ２、Ｒ６、Ｒ９及びＲ７について定義された通りであり、
    Ｒ’’はＣ３−１２アルキレン基であり、その鎖は、１個以上のヘテロ原子及び／又は置換されていてもよい芳香環により中断されていてもよく、
    Ｘ及びＸ’は、独立してＯ、Ｓ及びＮ（Ｈ）から選択される）のピロロベンゾジアゼピンである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  17. Ｄが、構造：
    （式中、ｎは０又は１である）を有する、請求項１６に記載のイムノコンジュゲート。
  18. Ｄが、
    （式中、ＲＥ及びＲＥ’’は、それぞれ独立してＨ又はＲＤから選択され、ＲＤは、独立してＲ、ＣＯ２Ｒ、ＣＯＲ、ＣＨＯ、ＣＯ２Ｈ、及びハロから選択され、
    Ａｒ１及びＡｒ２は、それぞれ独立して、置換されていてもよいＣ５−２０アリールであり、
    ｎは０又は１である）から選択される構造を有する、請求項１６に記載のイムノコンジュゲート。
  19. Ｄが、式Ｂ：
    （式中、水平の波線はリンカーとの共有結合部位を示し、
    ＲＶ１及びＲＶ２は、独立して、Ｈ、メチル、エチル、フェニル、フルオロ置換フェニル、及びＣ５−６ヘテロシクリルから選択され、
    ｎは０又は１である）のピロロベンゾジアゼピンである、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  20. Ｄがネモルビシン誘導体である、請求項１２に記載のイムノコンジュゲート。
  21. Ｄが、
    から選択される構造を有する、請求項２０に記載のイムノコンジュゲート。
  22. リンカーが、プロテアーゼにより切断可能である、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
  23. リンカーが、バリン−シトルリン（ｖａｌ−ｃｉｔ）ジペプチド又はフェニルアラニン−ホモリジン（Ｐｈｅ−ｈｏｍｏＬｙｓ）ジペプチドを含む、請求項２２に記載のイムノコンジュゲート。
  24. リンカーが酸に不安定である、請求項１２〜２１のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
  25. リンカーがヒドラゾンを含む、請求項２４に記載のイムノコンジュゲート。
  26. 下記構造を有する、請求項２４に記載のイムノコンジュゲート。
    （式中、Ｓはイオウ原子である）
  27. から選択される式を有する、請求項１７に記載のイムノコンジュゲート。
  28. から選択される式を有する、請求項２１に記載のイムノコンジュゲート。
  29. ｐが２〜５の範囲である、請求項１２〜２８のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート。
  30. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体、及び／又は請求項１１〜２９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲート、並びに薬学的に許容可能な担体を含む、医薬製剤。
  31. 追加の治療薬を更に含む、請求項３０に記載の医薬製剤。
  32. ＦｃＲＨ５陽性のがんの治療のための医薬の製造における、請求項７に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体、及び／又は請求項１２〜２９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートの使用。
  33. ＦｃＲＨ５陽性のがんがＢ細胞増殖性障害である、請求項３２に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートの使用。
  34. 医薬が追加の治療薬との投与のために製剤化されている、請求項３２又は３３に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートの使用。
  35. ＦｃＲＨ５陽性細胞の増殖を阻害するための医薬の製造における、請求項７に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体、及び／又は請求項１１〜２９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートの使用であって、ＦｃＲＨ５陽性細胞の表面上で抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートがＦｃＲＨ５に結合するのを許容する条件下で、ＦｃＲＨ５陽性細胞が抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートに曝露され、それによってＦｃＲＨ５陽性細胞の増殖を阻害する、使用。
  36. ＦｃＲＨ５陽性細胞がＢ細胞である、請求項３５に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートの使用。
  37. ＦｃＲＨ５陽性のがんを治療するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又は請求項１１〜２９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートを含む医薬。
  38. ＦｃＲＨ５陽性のがんがＢ細胞増殖性障害である、請求項３７に記載の医薬。
  39. 追加の治療剤との投与のために製剤化されている、請求項３７又は３８に記載の医薬。
  40. 請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体、及び／又は請求項１１〜２９のいずれか１項に記載のイムノコンジュゲートを含む、ＦｃＲＨ５陽性細胞の増殖を阻害するための薬剤であって、ＦｃＲＨ５陽性細胞の表面上で抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートがＦｃＲＨ５に結合するのを許容する条件下で、ＦｃＲＨ５陽性細胞が抗ＦｃＲＨ５抗体及び／又はイムノコンジュゲートに曝露され、それによってＦｃＲＨ５陽性細胞の増殖を阻害する、薬剤。
  41. ＦｃＲＨ５陽性細胞がＢ細胞である、請求項４０に記載の薬剤。
  42. 標識がポジトロン放射体である、請求項５に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  43. ポジトロン放射体が８９Ｚｒである、請求項４２に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体。
  44. 生物試料中のヒトＦｃＲＨ５を検出するための医薬の製造における、請求項１〜７、４２、及び４３のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体の使用であって、抗ＦｃＲＨ５抗体が天然のヒトＦｃＲＨ５に結合するのを許容する条件下で、生物試料が抗ＦｃＲＨ５抗体と接触せしめられ、生物試料中で、抗ＦｃＲＨ５抗体と天然のヒトＦｃＲＨ５との間に複合体が形成されるかどうかが検出される、使用。
  45. 生物試料が血液試料である、請求項４４に記載の使用。
  46. ＦｃＲＨ５陽性がんを患っている、又はＦｃＲＨ５陽性がんを患っていることが疑われる被験者において、ＦｃＲＨ５陽性がんを検出するための医薬の製造における請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体の使用であって、抗ＦｃＲＨ５抗体が標識されており、かつ被験者における標識された抗ＦｃＲＨ５抗体の検出が、被験者中のＦｃＲＨ５陽性がんを示す、使用。
  47. 標識された抗ＦｃＲＨ５抗体が、ポジトロン放射体にコンジュゲートされた抗ＦｃＲＨ５抗体を含む、請求項４６に記載の使用。
  48. ポジトロン放射体が８９Ｚｒである、請求項４７に記載の使用。
  49. 請求項１〜７、４２、及び４３のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体を含む、生物試料中のヒトＦｃＲＨ５を検出するための薬剤であって、抗ＦｃＲＨ５抗体が天然のヒトＦｃＲＨ５に結合することを許容する条件下で、生物試料が抗ＦｃＲＨ５抗体と接触せしめられ、生物試料中で、抗ＦｃＲＨ５抗体と天然のヒトＦｃＲＨ５との間に複合体が形成されるかどうかが検出される、薬剤。
  50. 生物試料が血液試料である、請求項４９に記載の薬剤。
  51. ＦｃＲＨ５陽性がんを患っている、又はＦｃＲＨ５陽性がんを患っていることが疑われる被験者において、ＦｃＲＨ５陽性がんを検出するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の抗ＦｃＲＨ５抗体を含む医薬であって、抗ＦｃＲＨ５抗体が標識されており、かつ被験者における標識された抗ＦｃＲＨ５抗体の検出が、被験者中のＦｃＲＨ５陽性がんを示す、医薬。
  52. 標識された抗ＦｃＲＨ５抗体が、ポジトロン放射体にコンジュゲートされた抗ＦｃＲＨ５抗体を含む、請求項５１に記載の医薬。
  53. ポジトロン放射体が８９Ｚｒである、請求項５２に記載の医薬。
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Families Citing this family (66)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
DK3083689T3 (da) 2013-12-17 2020-08-03 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
EP3160513B1 (en) 2014-06-30 2020-02-12 Glykos Finland Oy Saccharide derivative of a toxic payload and antibody conjugates thereof
MA40253A (fr) 2014-07-15 2017-05-24 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
US9751946B2 (en) 2014-09-12 2017-09-05 Genentech, Inc. Anti-CLL-1 antibodies and immunoconjugates
US9616114B1 (en) 2014-09-18 2017-04-11 David Gordon Bermudes Modified bacteria having improved pharmacokinetics and tumor colonization enhancing antitumor activity
MX2017007249A (es) 2014-12-05 2018-01-25 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Receptores de antigeno quimerico dirigidos al receptor fc 5 similar y sus usos.
WO2016131769A2 (en) 2015-02-16 2016-08-25 Lonza Ltd Antibodies
TWI731861B (zh) * 2015-06-16 2021-07-01 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法
CN107847568B (zh) 2015-06-16 2022-12-20 豪夫迈·罗氏有限公司 抗cll-1抗体和使用方法
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
EP3383913A4 (en) * 2015-12-04 2019-10-30 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center ANTIBODIES TARGETING FC 5 RECEPTOR TYPE PROTEIN AND METHODS OF USE
AU2017361081A1 (en) 2016-11-15 2019-05-23 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-CD20/anti-CD3 bispecific antibodies
MX2019006448A (es) 2016-12-01 2020-02-05 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-pd-l1 radiomarcados para imagenes de inmuno-pet.
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
US11180535B1 (en) 2016-12-07 2021-11-23 David Gordon Bermudes Saccharide binding, tumor penetration, and cytotoxic antitumor chimeric peptides from therapeutic bacteria
JP7167041B2 (ja) 2017-02-10 2022-11-08 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 免疫ｐｅｔイメージングのための放射標識抗ｌａｇ３抗体
CN110997013B (zh) 2017-07-24 2022-09-20 瑞泽恩制药公司 抗cd8抗体和其用途
MA50855A (fr) 2017-11-01 2020-09-09 Juno Therapeutics Inc Procédé de génération de compositions thérapeutiques de cellules modifiées
KR20200116077A (ko) 2017-11-01 2020-10-08 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
SG11202003657VA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Process for producing a t cell composition
CA3080904A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
WO2019089848A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
KR20200096253A (ko) 2017-11-30 2020-08-11 노파르티스 아게 Bcma-표적화 키메라 항원 수용체, 및 이의 용도
MX2020005908A (es) 2017-12-08 2020-10-07 Juno Therapeutics Inc Proceso para producir una composicion de celulas t modificadas.
KR20200109308A (ko) 2017-12-08 2020-09-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 세포 요법을 위한 표현형 마커 및 관련 방법
BR112020011144A2 (pt) 2017-12-08 2020-11-17 Juno Therapeutics Inc formulação de meio livre de soro para o cultivo de células e métodos de uso da mesma
AU2019218959A1 (en) 2018-02-08 2020-09-03 Genentech, Inc. Bispecific antigen-binding molecules and methods of use
AU2019277029C1 (en) 2018-06-01 2024-01-04 Novartis Ag Binding molecules against BCMA and uses thereof
EP3802825A1 (en) 2018-06-08 2021-04-14 Intellia Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunooncology
AU2019297451A1 (en) 2018-07-03 2021-01-28 Marengo Therapeutics, Inc. Anti-TCR antibody molecules and uses thereof
AR116109A1 (es) 2018-07-10 2021-03-31 Novartis Ag Derivados de 3-(5-amino-1-oxoisoindolin-2-il)piperidina-2,6-diona y usos de los mismos
US20210230671A1 (en) 2018-08-09 2021-07-29 Juno Therapeutics, Inc. Methods for assessing integrated nucleic acids
WO2020092854A2 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
WO2020092848A2 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
AU2019402189B2 (en) 2018-12-20 2023-04-13 Novartis Ag Dosing regimen and pharmaceutical combination comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
AU2020222346B2 (en) 2019-02-15 2021-12-09 Novartis Ag Substituted 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives and uses thereof
EA202192019A1 (ru) 2019-02-15 2021-11-02 Новартис Аг Производные 3-(1-оксо-5-(пиперидин-4-ил)изоиндолин-2-ил)пиперидин-2,6-диона и пути их применения
AU2020265741A1 (en) 2019-05-01 2021-11-25 Editas Medicine, Inc. Cells expressing a recombinant receptor from a modified TGFBR2 Locus, related polynucleotides and methods
MX2021013223A (es) 2019-05-01 2022-02-17 Juno Therapeutics Inc Celulas que expresan un receptor quimerico de un locus cd247 modificado, polinucleotidos relacionados y metodos.
WO2021123996A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Novartis Ag Uses of anti-tgf-beta antibodies and checkpoint inhibitors for the treatment of proliferative diseases
KR20230009386A (ko) 2020-04-10 2023-01-17 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｂ-세포 성숙 항원을 표적화하는 키메라 항원 수용체로 조작된 세포 요법 관련 방법 및 용도
JP2023528215A (ja) 2020-05-13 2023-07-04 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 臨床応答に関連する特徴量の特定方法およびその使用
WO2021260528A1 (en) 2020-06-23 2021-12-30 Novartis Ag Dosing regimen comprising 3-(1-oxoisoindolin-2-yl)piperidine-2,6-dione derivatives
WO2021260186A1 (en) 2020-06-26 2021-12-30 Juno Therapeutics Gmbh Engineered t cells conditionally expressing a recombinant receptor, related polynucleotides and methods
CN116134027A (zh) 2020-08-03 2023-05-16 诺华股份有限公司 杂芳基取代的3-(1-氧代异吲哚啉-2-基)哌啶-2,6-二酮衍生物及其用途
WO2022098787A1 (en) 2020-11-04 2022-05-12 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified invariant cd3 immunoglobulin superfamily chain locus and related polynucleotides and methods
WO2022097060A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Novartis Ag Cd19 binding molecules and uses thereof
WO2022122709A1 (en) 2020-12-07 2022-06-16 Sotio Biotech A.S. Antibody-drug conjugates based on humanized cldn18.2 antibodies
AU2021405049A1 (en) 2020-12-23 2023-06-22 Sotio Biotech A.S. Tumor-specific claudin 18.2 antibody-drug conjugates
CN117693508A (zh) 2021-03-03 2024-03-12 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞疗法和dgk抑制剂的组合
TW202304979A (zh) 2021-04-07 2023-02-01 瑞士商諾華公司 抗ＴＧＦβ抗體及其他治療劑用於治療增殖性疾病之用途
BR112023020832A2 (pt) 2021-04-08 2023-12-19 Marengo Therapeutics Inc Moléculas multifuncionais ligadas a tcr e seus usos
TW202309294A (zh) 2021-04-27 2023-03-01 瑞士商諾華公司 病毒載體生產系統
JP2024517863A (ja) 2021-05-06 2024-04-23 ジュノ・セラピューティクス・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 細胞を刺激し、形質導入する方法
WO2023147515A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
TW202342520A (zh) 2022-02-18 2023-11-01 美商樂天醫藥生技股份有限公司 抗計畫性死亡配體１（ｐｄ—ｌ１）抗體分子、編碼多核苷酸及使用方法
US20230406930A1 (en) 2022-04-13 2023-12-21 Genentech, Inc. Pharmaceutical compositions of therapeutic proteins and methods of use
WO2023214325A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Novartis Ag Pyrazolopyrimidine derivatives and uses thereof as tet2 inhibitors
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2023230548A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Method for predicting response to a t cell therapy
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
CN116789849B (zh) * 2023-04-12 2024-03-08 南京紫珑生物科技有限公司 一种嵌合抗原受体及其应用

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
DE69434136T2 (de) 1993-10-01 2005-12-01 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Dolastatin-derivate
US20030059780A1 (en) 1997-06-16 2003-03-27 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US6248564B1 (en) 1997-08-29 2001-06-19 Harvard University Mutant MHC class I molecules
EP2418212B1 (en) 1999-11-29 2016-06-15 The Trustees of Columbia University in the City of New York Isolation of five novel genes coding for new fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/melanoma
US7105149B1 (en) 1999-11-29 2006-09-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Isolation of five novel genes coding for new Fc receptors-type melanoma involved in the pathogenesis of lymphoma/myeloma
US20040005561A1 (en) 2000-03-01 2004-01-08 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040018194A1 (en) 2000-11-28 2004-01-29 Francisco Joseph A. Recombinant anti-CD30 antibodies and uses thereof
PE20020574A1 (es) 2000-12-06 2002-07-02 Wyeth Corp Anticuerpos humanizados que reconocen el peptido amiloideo beta
CU23007A1 (es) 2001-04-06 2004-12-17 Ct De Inmunologia Molecular Ct De Inmunologia Mole Combinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiencombinaciones inmunoterapéuticas para el tratamiento de tumores que sobre-expresan gangliósidos to de tumores que sobre-expresan gangliósidos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
IL159177A0 (en) 2001-06-20 2004-06-01 Prochon Biotech Ltd Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
WO2003024392A2 (en) 2001-09-18 2003-03-27 Genentech, Inc. Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
US7858330B2 (en) 2001-10-19 2010-12-28 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
WO2005063299A2 (en) 2003-12-24 2005-07-14 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US7888478B2 (en) 2002-09-11 2011-02-15 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
US20050226869A1 (en) 2001-10-19 2005-10-13 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of tumor of hematopoietic origin
WO2003043583A2 (en) 2001-11-20 2003-05-30 Seattle Genetics, Inc. Treatment of immunological disorders using anti-cd30 antibodies
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
EP1718667B1 (en) * 2004-02-23 2013-01-09 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
NZ551180A (en) 2004-06-01 2009-10-30 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
EP1791565B1 (en) 2004-09-23 2016-04-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
US7999077B2 (en) * 2004-09-30 2011-08-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services IRTA2 antibodies and methods of use
US20070134243A1 (en) 2004-12-01 2007-06-14 Gazzard Lewis J Antibody drug conjugates and methods
US7947839B2 (en) 2004-12-01 2011-05-24 Genentech, Inc. Heterocyclic-substituted bis-1,8 naphthalimide compounds, antibody drug conjugates, and methods of use
WO2006076691A2 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Medarex, Inc. Irta-2 antibodies and their uses
NZ563370A (en) 2005-06-20 2010-10-29 Genentech Inc Compositions and methods for the diagnosis and treatment of tumor
WO2008109533A2 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Medarex, Inc. Human antibodies that bind multiple irta family proteins, and uses thereof
ES2547552T3 (es) * 2008-02-01 2015-10-07 Genentech, Inc. Metabolito de nemorrubicina y reactivos análogos, conjugados anticuerpo-fármaco y métodos
AU2009270988A1 (en) 2008-07-15 2010-01-21 Genentech, Inc. Anthracycline derivative conjugates, process for their preparation and their use as antitumor compounds
AU2010236787A1 (en) 2009-04-01 2011-11-10 Genentech, Inc. Anti-FcRH5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
SG174930A1 (en) * 2009-04-01 2011-11-28 Genentech Inc Anti-fcrh5 antibodies and immunoconjugates and methods of use
EP3211094A3 (en) 2009-09-03 2017-11-01 F. Hoffmann-La Roche AG Methods for treating, diagnosing, and monitoring rheumatoid arthritis
KR101738203B1 (ko) * 2010-04-15 2017-05-19 메디뮨 리미티드 피롤로벤조디아제핀 및 그의 컨주게이트
AR096687A1 (es) 2013-06-24 2016-01-27 Genentech Inc Anticuerpos anti-fcrh5
DK3083689T3 (da) 2013-12-17 2020-08-03 Genentech Inc Anti-CD3-antistoffer og fremgangsmåder til anvendelse
TWI731861B (zh) 2015-06-16 2021-07-01 美商建南德克公司 FcRH5之人源化及親和力成熟抗體及使用方法

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