JP7167041B2 - 免疫ｐｅｔイメージングのための放射標識抗ｌａｇ３抗体 - Google Patents

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Description

本開示は、放射標識抗ＬＡＧ３抗体、および免疫ＰＥＴイメージングにおけるその使用に関する。
配列表
配列表の正式な複製は、２０１８年２月０９日の作成日、および約２５４ＫＢのサイズである、「１０３２９ＷＯ０１＿ＳＥＱ＿ＬＩＳＴ＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」というファイル名を有する、ＡＳＣＩＩ形式の配列表として、ＥＦＳ－Ｗｅｂから電子的に、本明細書と同時に提出する。このＡＳＣＩＩ形式の文書に含まれている配列表は、本明細書の一部であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
背景
Ｔ細胞共刺激性分子および共阻害性分子（まとめて、共シグナル伝達分子と称される）は、Ｔ細胞活性化、サブセット分化、エフェクター機能および生存の調節に重要な役割を果たしている（Ｃｈｅｎら、２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３巻：２２７～２４２頁）。共シグナル伝達受容体は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）による抗原提示細胞上の同族ペプチド－ＭＨＣ複合体の認識後、Ｔ細胞受容体と共に、免疫シナプスに共局在化し、そこで、これらの受容体は、ＴＣＲシグナル伝達と相乗的に作用して、Ｔ細胞活性化および機能を促進または阻害する（Ｆｌｉｅｓら ２０１１年、Ｙａｌｅ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ． ８４巻：４０９～４２１頁）。最終的な免疫応答は、共刺激性シグナルと共阻害性シグナルとの間のバランス（「免疫チェックポイント」）によって調節される（Ｐａｒｄｏｌｌ ２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２巻：２５２～２６４頁）。リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）は、末梢Ｔ細胞寛容を媒介する際に、このような１つの「免疫チェックポイント」として機能する。
ＬＡＧ３（ＣＤ２２３とも呼ばれる）は、活性化ＣＤ４ Ｔ細胞およびＣＤ８ Ｔ細胞、γδ Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ細胞、Ｂ細胞、ナチュラルキラー細胞、形質細胞様樹状細胞および制御性Ｔ細胞上に発現する５０３のアミノ酸の膜貫通タンパク質受容体である。ＬＡＧ３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ＬＡＧ３の主要な機能は、免疫応答を弱めることである。ＭＨＣクラスＩＩ分子にＬＡＧ３が結合すると、負のシグナルがＬＡＧ３発現細胞に送達されて、抗原依存性ＣＤ４およびＣＤ８ Ｔ細胞応答を下方調節する。ＬＡＧ３は、Ｔ細胞の「疲弊」と呼ばれる、Ｔ細胞の増殖能力、サイトカインを産生する能力および標的細胞を溶解する能力を負に調節する。ＬＡＧ３はまた、Ｔ調節性（Ｔｒｅｇ）細胞機能を増強する際に、ある役割を果たすことが報告されている（Ｐａｒｄｏｌｌ ２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２巻：２５２～２６４頁）。
免疫－ポジトロン断層法（ＰＥＴ）は、抗体の標的特性とポジトロン断層法用カメラの感度とを組み合わせた、ポジトロン放出体により標識されたモノクローナル抗体を利用する診断的イメージング機器である。例えば、Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、１２巻：１３７９頁（２００７年）；Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５２巻（８号）：１１７１頁（２０１１年）を参照されたい。免疫ＰＥＴにより、ｉｎ ｖｉｖｏで、抗原および抗体の蓄積の可視化ならびに定量が可能になり、こうして、これは、診断剤および療法を補完するための重要な手段として働くことができる。例えば、免疫ＰＥＴは、特定の療法法のための潜在的な患者候補の選択および処置のモニタリングの助けとなり得る。
Ｃｈｅｎら、２０１３年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １３巻：２２７～２４２頁 Ｆｌｉｅｓら、２０１１年、Ｙａｌｅ Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｍｅｄ． ８４巻：４０９～４２１頁 Ｐａｒｄｏｌｌ、２０１２年、Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ １２巻：２５２～２６４頁 Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ、１２巻：１３７９頁（２００７年） Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｕｃｌｅａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、５２巻（８号）：１１７１頁（２０１１年）
ＬＡＧ３は、腫瘍免疫療法および感染性免疫療法に対する標的として台頭してきており、とりわけ、前記療法法に対する好適な患者候補を見つけ出すことを可能にする診断的手段を含めた、抗ＬＡＧ３療法法のための診断用手段が必要とされている。
簡単な要旨
免疫ＰＥＴイメージングにおいて使用するための放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートが、本開示に含まれている。
一態様では、本コンジュゲートは、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片、キレート形成性部分およびポジトロン放出体を含む。
前記コンジュゲートを合成するための方法、および合成に有用な合成中間体も本明細書において提供されている。
ＬＡＧ３を発現する組織をイメージングする方法であって、本明細書に記載されている放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを組織に投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む方法も本明細書において提供されている。
ＬＡＧ３発現細胞を含む組織、例えばＬＡＧ３発現腫瘍内リンパ球をイメージングする方法であって、本明細書に記載されている放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを組織に投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む方法も本明細書において提供されている。
組織中のＬＡＧ３を検出する方法であって、本明細書に記載されている放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを組織に投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む方法も本明細書において提供されている。一実施形態では、組織はヒト対象に存在する。ある種の実施形態では、対象は非ヒト哺乳動物である。ある種の実施形態では、対象は、がん、炎症性疾患もしくは感染などの疾患または障害を有する。
固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、本明細書に記載されている放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによって腫瘍における投与された放射標識抗体コンジュゲートを可視化するステップを含む、ＬＡＧ３の阻害剤を含む、抗腫瘍療法に好適な患者を特定する方法であって、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、患者をＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に好適であると特定する方法も本明細書において提供されている。
腫瘍を処置する方法であって、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、固形腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであると判定するステップ、およびそれを必要としている対象に抗腫瘍療法を行うステップを含む方法も本明細書において提供されている。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）の阻害剤を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤、および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む。ある種の実施形態では、対象に、本明細書に記載されている放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを投与し、放射標識抗体コンジュゲートの局在化をポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりイメージングして、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであるかどうかを判定する。ある種の実施形態では、対象に、放射標識抗ＰＤ－１抗体コンジュゲートがさらに投与され、放射標識抗体コンジュゲートの局在化をポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりイメージングして、腫瘍がＰＤ－１ポジティブであるかどうかを判定する。
抗腫瘍療法により処置される、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、本明細書に記載されている放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを対象に投与するステップ、ＰＥＴイメージングにより腫瘍における投与された放射標識コンジュゲートの局在化をイメージングするステップ、および腫瘍成長を判定するステップを含む、対象において、抗腫瘍療法の効力をモニタリングするための方法であって、コンジュゲートの取り込み時のベースラインからの低下、または放射標識されたシグナルが、抗腫瘍療法の効力を示す、方法も本明細書において提供されている。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤、およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブおよびペムブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許公開ＵＳ２０１５－０２０３５８０に開示されているもの）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプト、またはＵＳ７，０８７，４１１に記載されている他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）などの「ＶＥＧＦ－トラップ」］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原への抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌、がんワクチン）、抗原提示を向上するアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体またはＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５などのサイトカインおよび抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）を含む。
さらに、固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、および腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであるかどうかを判定するステップを含む、患者の抗腫瘍療法に対する応答を予測するための方法であって、腫瘍が、ＬＡＧ３ポジティブである場合、患者の抗腫瘍療法への応答がポジティブであると予測する方法も本明細書において提供されている。ある種の実施形態では、腫瘍は、本開示の放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを局在化させることにより、ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。一部の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブおよびペムブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５およびＲＥＧＮ３５０４）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプト、またはＵＳ７，０８７，４１１に記載されている他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）などの「ＶＥＧＦ－トラップ」］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原への抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌、がんワクチン）、抗原提示を向上するアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体またはＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５などのサイトカインおよび抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）から選択される。
固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、および腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであるかどうかを判定するステップを含む、患者のＬＡＧ３阻害剤を含む抗腫瘍療法に対する応答を予測するための方法であって、腫瘍が、ＬＡＧ３ポジティブである場合、患者のＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法への応答がポジティブであることを示す方法も本明細書において提供されている。ある種の実施形態では、腫瘍は、本開示の放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを局在化させることにより、ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。
図１は、ＤＦＯ修飾抗ＬＡＧ３抗体（ｍＡｂ１－ＤＦＯ）のＵＶ／ＶＩＳスペクトルを示す図である。
図２は、ＤＦＯ修飾抗ＬＡＧ３抗体のＨＰＬＣ－ＳＥＣを示す図である。
図３は、検討１に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の、アイソタイプ－ＤＦＯ－コンジュゲートの放射ＳＥＣ－ＨＰＬＣを示す図である。
図４は、検討１に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の、抗ＬＡＧ３－ＤＦＯ－コンジュゲートの放射ＳＥＣ－ＨＰＬＣを示す図である。
図５は、検討２に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の、抗ＬＡＧ３－ＤＦＯ－コンジュゲートの放射ＳＥＣ－ＨＰＬＣを示す図である。
図６は、検討１に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の、アイソタイプ－ＤＦＯ－コンジュゲートのＵＶ２８０－ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムおよび放射ｉＴＬＣトレースを示す図である。
図７は、検討１に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の抗ＬＡＧ３－ＤＦＯ－コンジュゲートのＵＶ２８０－ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムおよび放射ｉＴＬＣトレースを示す図である。
図８は、検討２に関する、８９Ｚｒ放射標識した後の、抗ＬＡＧ３－ＤＦＯ－コンジュゲートのＵＶ２８０－ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムおよび放射ｉＴＬＣトレースを示す図である。
図９は、タンパク質用量が５ｍｇ／ｋｇ（Ｍｓ０１）または０．０３ｍｇ／ｋｇ（Ｍｓ１４）で注入された８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の代表的な画像を示し、これらにより、０．０３ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を使用すると、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１はＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍を特異的標的とすること、および５ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１で遮断することが実証される。０．０３ｍｇ／ｋｇという低い用量の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１で、脾臓およびリンパ節における特異的な取り込みが観察される。
図１０は、ＰＢＭＣ／Ｒａｊｉ異種移植片に由来する組織試料（腫瘍埋め込み後の２７日目および１５日目に得られた）において、および黒色腫の臨床試料においてＬＡＧ３が発現していることを示す図である。
図１１は、腫瘍微小環境において、ＲＥＧＮ２８１０抗ヒトＰＤ－１ ＡｂおよびｍＡｂ１抗ヒトＬＡＧ－３により、それぞれ、ＬＡＧ－３＋Ｔ細胞およびＰＤ－１＋Ｔ細胞が増加していることを実証しているデータを示す図である。
図１２は、実施例７において検討した黒色腫試料の特徴を提示する図である。
詳細な説明
Ｉ．定義
本明細書において特に定義されない限り、本明細書において使用される技術的用語および科学的用語はすべて、開示されている主題が属する当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。
用語「ＬＡＧ３」とは、ＣＤ２２３としても公知である、リンパ球活性化遺伝子－３タンパク質、免疫チェックポイント受容体またはＴ細胞共阻害剤を指す。完全長ＬＡＧ３のアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ＿００２２７７．４としてＧｅｎＢａｎｋに提供されており、本明細書において、配列番号５８２とも呼ばれる。用語「ＬＡＧ３」はまた、配列番号５７４、５７５または５７６のアミノ酸配列を有する、ＬＡＧ３のタンパク質バリアントを含む。用語「ＬＡＧ３」は、組換えＬＡＧ３またはその断片を含む。この用語はまた、例えば、ヒスチジンタグ、マウスもしくはヒトＦｃに結合しているＬＡＧ３もしくはその断片、またはＲＯＲ１のシグナル配列などのシグナル配列を包含する。例えば、この用語は、完全長エクトドメインＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０に結合している、Ｃ末端における、マウスＦｃ（ｍＩｇＧ２ａ）を含む配列番号５７５によって例証されている配列を含む。配列番号５７４によって例証されるタンパク質バリアントは、完全長エクトドメインＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０に結合している、Ｃ末端における、ヒスチジンタグを含む。非ヒト種に由来すると特定されていない場合、用語「ＬＡＧ３」は、ヒトＬＡＧ３を意味する。
ＬＡＧ３は、免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーのメンバーである。ＬＡＧ３は、４つの細胞外Ｉｇ様ドメインＤ１～Ｄ４を有する１型膜貫通タンパク質であり、活性化Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、Ｂ細胞、形質細胞様樹状細胞および制御性Ｔ細胞を含めた、腫瘍内リンパ球に発現する。ＬＡＧ３受容体は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）に存在するＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する。
用語「Ｂ７－１」は、共刺激性因子ＣＤ８０としても公知である、Ｔ－リンパ球活性化抗原を指す。Ｂ７－１は、ＩｇＶ様（ａａ３７～１３８）およびＩｇＣ様（ａａ１５４～２３２）領域、膜貫通ドメイン（ａａ２４３～２６３）およびＣ末端細胞内領域（ａａ２６３～２８８）を含む細胞外Ｎ末端ドメインを有する、２８８アミノ酸膜受容体である。完全長Ｂ７－１のアミノ酸配列は、受託番号ＮＰ＿００５１８２．１としてＧｅｎＢａｎｋにおいて提供されている。
本明細書で使用する場合、用語「Ｔ細胞共阻害剤」は、Ｔ細胞活性化または抑制により免疫応答をモジュレートする、リガンドおよび／または受容体を指す。Ｔ細胞共シグナル伝達分子としても公知である、用語「Ｔ細胞共阻害剤」には、以下に限定されないが、リンパ球活性化遺伝子３タンパク質（ＬＡＧ－３であり、ＣＤ２２３としても公知である）、プログラム死－１（ＰＤ－１）、細胞傷害性Ｔ－リンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）、ＢおよびＴリンパ球アテニュエータ（ＢＴＬＡ）、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、Ｔ細胞免疫グロブリンおよびムチン－３（ＴＩＭ３）、免疫グロブリンおよびＩＴＩＭドメインを有するＴ細胞免疫受容体（ＴＩＧＩＴ；ＶＳＩＧ９としても公知である）、白血球関連免疫グロブリン様受容体１（ＬＡＩＲ１；ＣＤ３０５としても公知である）、誘導性Ｔ細胞共刺激分子（ＩＣＯＳ；ＣＤ２７８としても公知である）、Ｂ７－１（ＣＤ８０）およびＣＤ１６０が含まれる。
用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、ジスルフィド結合により相互結合している４つのポリペプチド鎖、すなわち２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖からなる免疫グロブリン分子（すなわち、「完全抗体分子」）、およびその多量体（例えば、ＩｇＭ）またはその抗原結合性断片を指すことが意図されている。重鎖はそれぞれ、重鎖可変領域（「ＨＣＶＲ」または「ＶＨ」）および重鎖定常領域（ドメインＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる）からなる。軽鎖はそれぞれ、軽鎖可変領域（「ＬＣＶＲ」または「ＶＬ」）および軽鎖定常領域（ＣＬ）からなる。ＶＨおよびＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域、フレームワーク領域（ＦＲ）と称される、より多くが保存されている領域が分散した領域にさらに小さく分類され得る。ＶＨおよびＶＬはそれぞれ、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で、アミノ末端からカルボキシ末端まで並んだ、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる。ある種の実施形態では、抗体（またはその抗原結合性断片）のＦＲは、ヒト生殖系列配列と同一であってもよく、または天然にもしくは人為的に改変されていてもよい。アミノ酸コンセンサス配列は、２つまたはそれより多いＣＤＲの段階的な解析に基づいて定義され得る。
１つもしくは複数のＣＤＲ残基の置換、または１つもしくは複数のＣＤＲのないこともありうる。抗体は、科学文献に記載されており、これらの中で、１つまたは２つのＣＤＲが、結合のために分配され得る。Ｐａｄｌａｎら（１９９５年、ＦＡＳＥＢ Ｊ． ９巻：１３３～１３９頁）は、公開されている結晶構造に基づいて、抗体とその抗原との間の接触領域を解析し、ＣＤＲの約５分の１から３分の１しか、実際には、抗原に接触していないと結論付けた。Ｐａｄｌａｎはまた、１つまたは２つのＣＤＲが、抗原に接触しているアミノ酸を有さない、多数の抗体も見いだした（同様に、Ｖａｊｄｏｓら、２００２年、Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３２０巻：４１５～４２８頁を参照されたい）。
抗原に接触していないＣＤＲ残基は、これまでの検討（例えば、ＣＤＲＨ２における残基Ｈ６０～Ｈ６５は必要とされないことが多い）に基づいて、分子モデリングによって、および／または経験的に、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲの外側にあるＫａｂａｔのＣＤＲの領域から特定され得る。ＣＤＲまたはその残基がない場合、別のヒト抗体配列またはこのような配列のコンセンサスにおいて、対応する位置を占めているアミノ酸によって、通常、置換されている。ＣＤＲ内の置換位置、および置換するアミノ酸はまた、経験的に選択され得る。経験的な置換は、保存的置換または非保存的置換とすることができる。
本明細書において開示されている抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体は、対応する生殖系列配列と比べて、重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインのフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域に、１つまたは複数のアミノ酸置換、挿入および／または欠失を含むことがある。このような変異は、本明細書において開示されているアミノ酸配列と、例えば、公的な抗体配列データベースから入手可能な生殖系列配列とを比較することにより容易に確認することができる。本開示は、抗体およびその抗原結合性断片を含み、これらは、本明細書において開示されているアミノ酸配列のいずれかに由来しており、１つまたは複数のフレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の１つまたは複数のアミノ酸は、抗体が導かれる生殖系列配列の対応する残基に、または別のヒト生殖系列配列の対応する残基に、または対応する生殖系列残基の保存的アミノ酸置換に変異する（このような配列の変化は、本明細書において、まとめて「生殖系列変異」と称される）。当業者は、本明細書において開示されている重鎖および軽鎖可変領域配列から始めて、１つまたは複数の個々の生殖系列変異またはその組合せを含む、多数の抗体および抗原結合性断片を容易に生成することができる。ある種の実施形態では、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン内のフレームワークおよび／またはＣＤＲ残基はすべて、抗体が導かれる元の生殖系列配列に見いだされる残基に変異して戻る。他の実施形態では、ある種の残基だけが、元の生殖系列配列に変異して戻り、例えば、変異残基は、ＦＲ１の最初の８つのアミノ酸内に、またはＦＲ４の最後の８つのアミノ酸内にしか観察されない、または変異残基は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２またはＣＤＲ３内にしか観察されない。他の実施形態では、フレームワークおよび／またはＣＤＲ残基の１つまたは複数は、異なる生殖系列配列（すなわち、抗体が元々、導かれた生殖系列配列とは異なる、生殖系列配列）の対応する残基に変異する。さらに、本開示の抗体は、フレームワークおよび／またはＣＤＲ領域内の２つまたはそれより多い生殖系列変異の任意の組合せを含むことがあり、例えば、ある種の個々の残基は、特定の生殖系列配列の対応する残基に変異する一方、元の生殖系列配列とは異なるある種の他の残基は維持されるか、または異なる生殖系列配列の対応する残基に変異される。１つまたは複数の生殖系列変異を含有する抗体および抗原結合性断片は、一旦得られると、結合特異性の改善、結合親和性の向上、拮抗性の改善もしくは増強、または生物学的アゴニスト特性（場合による）、免疫原性の低下などの１つまたは複数の所望の特性について容易に試験され得る。この一般的な方法で得られた抗体および抗原結合性断片は、本開示内に包含される。
本開示はまた、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、および／または１つもしくは複数の保存的置換を有する、本明細書において開示されているＣＤＲアミノ酸配列のいずれかのバリアントを含む抗ＬＡＧ３モノクローナル抗体を含む。例えば、本開示は、ＨＣＶＲ、ＬＣＶＲ、ならびに／または本明細書に開示されているＨＣＶＲ、ＬＣＶＲおよび／もしくはＣＤＲアミノ酸配列のいずれかと比べて、例えば、１０またはそれより少ない、８またはそれより少ない、６またはそれより少ない、４またはそれより少ないなどの保存的アミノ酸置換を有するＣＤＲアミノ酸配列を有する抗ＬＡＧ３抗体を含む。
用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列に由来する可変領域および定常領域を有する抗体を含むことが意図されている。本開示のヒトｍＡｂは、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３において、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によりコードされないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのランダムもしくは部分特異的突然変異誘発により、またはｉｎ ｖｉｖｏでの体細胞変異により誘発される変異）を含むことがある。しかし、用語「ヒト抗体」は、本明細書で使用する場合、ｍＡｂを含むことは意図されておらず、この場合、別の哺乳種（例えば、マウス）の生殖系列に由来するＣＤＲ配列が、ヒトＦＲ配列にグラフトされている。
用語「多重特異性抗原結合性分子」とは、本明細書で使用する場合、二重特異性、三重特異的または多重特異性抗原結合性分子、およびそれらの抗原結合性断片を指す。多重特異性抗原結合性分子は、１つの標的ポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、または１つより多い標的ポリペプチドのエピトープに特異的な抗原結合性ドメインを含み得る。多重特異性抗原結合性分子は、単一の多機能性ポリペプチドとすることができるか、または共有結合によりもしくは非共有結合により互いに結合している２つまたはそれより多いポリペプチドからなる多量複合体とすることができる。用語「多重特異性抗原結合性分子」は、別の機能性分子、例えば、別のペプチドまたはタンパク質に連結していてもよい、またはこれと共発現し得る、本開示の抗体を含む。例えば、抗体またはその断片は、タンパク質またはその断片などの１つまたは複数の別の分子実体に官能基により連結（例えば、化学的カップリング、遺伝子的融合、非共有結合、またはその他による）して、第２の結合特異性を有する、二重特異性または多重特異性抗原結合性分子を生成することができる。本開示によれば、用語「多重特異性抗原結合性分子」はまた、二重特異性、三重特異的もしくは多重特異性抗体、またはそれらの抗原結合性断片を含む。ある種の実施形態では、本開示の抗体は、別の抗体またはその抗原結合性断片に官能基により連結して、第２の結合特異性を有する二重特異性抗体を生成する。本開示の二重特異性抗体および多重特異性抗体は、本明細書のどこかに記載されている。
用語「特異的に結合する」または「に特異的に結合する」などは、抗体またはその抗原結合性断片が、生理的条件下、比較的安定な抗原と複合体を形成することを意味する。特異的結合は、少なくとも約１×１０－８Ｍまたはそれより小さな平衡解離定数（例えば、ＫＤが小さいほど、結合が強いことを意味する）を特徴とすることができる。２つの分子が特異的に結合するかどうかを決定する方法は、当技術分野で周知であり、例えば、平衡透析、表面プラズモン共鳴などを含む。本明細書に記載されている通り、抗体は、ＬＡＧ３に特異的に結合する、表面プラズモン共鳴、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）によって特定される。ＬＡＧ３および１つまたは複数のさらなる抗原における１つのドメインに結合する多重特異性抗体、またはＬＡＧ３の２つの異なる領域に結合する二重特異性抗体は、それでもやはり、本明細書で使用する場合、「特異的に結合する」抗体と考えられる。
抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、本明細書で使用する場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に発生する、酵素により得ることができる、合成により、または遺伝的に操作されたポリペプチドまたはグリコタンパク質のいずれかを含む。抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書で使用する場合、ＬＡＧ３に結合する能力を保持している抗体の１つまたは複数の断片を指す。
「単離された抗体」は、本明細書で使用する場合、異なる抗原特異性を有する他の抗体（Ａｂ）を実質的に含まない抗体を指す（例えば、ＬＡＧ３に特異的に結合する単離された抗体またはその断片が、ＬＡＧ３以外の抗原に特異的に結合するＡｂを実質的に含まない）。
用語「表面プラズモン共鳴」とは、本明細書で使用する場合、例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）系（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ ＡＢ、Ｕｐｐｓａｌａ、ＳｗｅｄｅｎおよびＰｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．）を使用して、バイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化を検出することによる、生物分子のリアルタイム相互作用の分析を可能にする、光学的現象を指す。
用語「ＫＤ」は、本明細書で使用する場合、特定の抗体－抗原相互作用の平衡解離定数を指すことが意図されている。
用語「エピトープ」とは、パラトープとして公知の抗体分子の可変領域における、特異的抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一抗原は、１つより多いエピトープを有することがある。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なるエリアに結合することがあり、異なる生物学的影響を及ぼすことがある。用語「エピトープ」はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。エピトープはまた、抗体によって結合されている抗原の領域を指す。エピトープは、構造的または機能的なものとして定義され得る。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接的に寄与する残基を有する。エピトープはまた、すなわち、非直鎖状アミノ酸からなる、立体構造的なものであってもよい。ある種の実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基またはスルホニル基などの、分子の化学的に活性な表面基である決定因子を含むことができ、ある種の実施形態では、特定の三次元構造の特徴、および／または特定の電荷特徴を有することがある。
用語「実質的な同一性」または「実質的に同一である」は、核酸またはその断片を言う場合、別の核酸（またはその相補鎖）を含む適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って最適に整列していると、ＦＡＳＴＡ、ＢＬＡＳＴまたはＧＡＰなどの周知の配列同一性アルゴリズムのいずれかによって測定すると、少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、９６％、９７％、９８％または９９％のヌクレオチド塩基において、ヌクレオチド配列同一性があることを示す。
ポリペプチドに該当する通り、用語「実質的な類似性」または「実質的に類似している」は、最適に整列している場合、デフォルトギャップ重み付け（ｄｅｆａｕｌｔ ｇａｐ ｗｅｉｇｈｔ）を使用して、ＧＡＰまたはＢＥＳＴＦＩＴというプログラムなどによる、２つのペプチド配列が、少なくとも９０％の配列同一性、さらにより好ましくは、少なくとも９５％、９８％または９９％の配列同一性を共有することを意味する。好ましくは、同一ではない残基の位置は、保存的アミノ酸置換によって異なる。「保存的アミノ酸置換」は、アミノ酸残基が、類似した化学的性質（例えば、電荷または疎水性）を有する側鎖（Ｒ基）を有する別のアミノ酸残基により置換されているものである。一般に、保存的アミノ酸置換は、タンパク質の機能的特性を実質的に変化させない。２つまたはそれより多いアミノ酸配列が、保存的置換によって互いに異なる場合、類似性の割合または程度は、置換の保存的性質を補正するよう上方に調節され得る。この調節を行う手段は、当業者に周知である。例えば、参照により本明細書に組み込まれている、Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９４年）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２４巻：３０７～３３１頁を参照されたい。類似した化学的性質を有する側鎖を有するアミノ酸の群の例には、１）脂肪族側鎖：グリシン、アラニン、バリン、ロイシンおよびイソロイシン；２）脂肪族ヒドロキシル側鎖：セリンおよびトレオニン；３）アミド含有側鎖：アスパラギンおよびグルタミン；４）芳香族側鎖：フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン；５）塩基性側鎖：リシン、アルギニンおよびヒスチジン；６）酸性側鎖：アスパラギン酸およびグルタミン酸、ならびに７）硫黄含有側鎖：システインおよびメチオニンを含む。好ましい保存的アミノ酸の置換基は、バリン－ロイシン－イソロイシン、フェニルアラニン－チロシン、リシン－アルギニン、アラニン－バリン、グルタミン酸－アスパラギン酸およびアスパラギン－グルタミンである。代替的に、保存的置き換えは、参照により本明細書に組み込まれている、Ｇｏｎｎｅｔら（１９９２年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５６巻：１４４３～４５頁に開示されている、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおいて、正の値を有する任意の変化である。「適度に保守的な」置き換えは、ＰＡＭ２５０対数尤度マトリックスにおける負ではない値を有する任意の変化である。ポリペプチドの配列類似性は、通常、配列解析ソフトウェアを使用して測定される。タンパク質解析ソフトウェアは、保存的アミノ酸置換を含めた、様々な置換、欠失および他の改変に割り当てられる、類似性の尺度を使用する類似配列に一致する。例えば、ＧＣＧソフトウェアは、生物の異なる種に由来する、または野生型タンパク質とその突然変異タンパク質との間の相同性ポリペプチドなどの、密接に関連するポリペプチド間の配列相同性または配列同一性を決定するためのデフォルトパラメータと共に使用され得る、ＧＡＰおよびＢＥＳＴＦＩＴなどプログラムを含む。例えば、ＧＣＧバージョン６．１を参照されたい。ポリペプチド配列はまた、デフォルトパラメータまたは推奨パラメータを含むＦＡＳＴＡ；ＧＣＧバージョン６．１におけるプログラムを使用して比較することができる。ＦＡＳＴＡ（例えば、ＦＡＳＴＡ２およびＦＡＳＴＡ３）は、クエリー配列と探索配列との間の最良の重なり領域の整列および配列同一性割合を提供する（Ｐｅａｒｓｏｎ（２０００年）、上記）。別の好ましいアルゴリズムは、本開示の配列と様々な生物に由来する大多数の配列を含むデータベースとを比較する場合、デフォルトパラメータを使用する、ＢＬＡＳＴ、とりわけＢＬＡＳＴＰまたはＴＢＬＡＳＴＮというコンピュータプログラムである。例えば、その各々が参照により本明細書に組み込まれている、Ａｌｔｓｃｈｕｌら（１９９０年）Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５巻：４０３～４１０頁および（１９９７年）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ． ２５巻：３３８９～３４０２頁を参照されたい。
言い回し「治療有効量」とは、所望の効果であって、そのために投与される所望の効果を生じる量を意味する。正確な量は、処置の目的に依存し、公知技術を使用して、当業者により確認される（例えば、Ｌｌｏｙｄ（１９９９年）Ｔｈｅ Ａｒｔ， Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｉｎｇを参照されたい）。
本明細書で使用する場合、用語「対象」とは、慢性ウイルス感染、がんまたは自己免疫疾患などの疾患または障害の改善、予防および／または処置を必要とする、動物、好ましくは哺乳動物を指す。
ＩＩ．免疫ＰＥＴイメージングのためのＬＡＧ３抗体の放射標識イムノコンジュゲート
ＬＡＧ３に結合する放射標識抗原結合性タンパク質が、本明細書において提供されている。一部の実施形態では、放射標識抗原結合性タンパク質は、ポジトロン放出体に共有結合により連結されている抗原結合性タンパク質を含む。一部の実施形態では、放射標識抗原結合性タンパク質は、ポジトロン放出体とキレート形成することが可能な化学部分である、１つまたは複数のキレート形成性部分に共有結合により連結されている抗原結合性タンパク質を含む。
一部の実施形態では、ＬＡＧ３に結合する抗原結合性タンパク質、例えば抗体が提供され、ＬＡＧ３に結合する前記抗原結合性タンパク質は、以下の構造：
－Ｌ－ＭＺ
を有する１つまたは複数の部分に共有結合により結合しており、式中、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは、独立して、出現ごとに、０または１であり、ｚの少なくとも１つは１である。
一部の実施形態では、放射標識抗原結合性タンパク質は、式（Ｉ）の化合物：
Ｍ－Ｌ－Ａ－［Ｌ－ＭＺ］ｋ
（Ｉ）
であり、Ａは、ＬＡＧ３に結合するタンパク質であり、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは０または１であり、ｋは０～３０の整数である。一部の実施形態では、ｋは１である。
ある種の実施形態では、放射標識抗原結合性タンパク質は、式（ＩＩ）の化合物：
Ａ－［Ｌ－Ｍ］ｋ
（ＩＩ）
であり、式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合するタンパク質であり、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｋは１～３０の整数である。
一部の実施形態では、以下の構造：
Ａ－Ｌｋ
を有する、コンジュゲートを含む組成物が本明細書において提供され、式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合するタンパク質であり、Ｌはキレート形成性部分であり、ｋは１～３０の整数であり、コンジュゲートは、臨床的ＰＥＴイメージングに好適な比放射能を実現するのに十分な量で、ポジトロン放出体とキレートを形成する。
好適な結合性タンパク質、キレート形成性部分およびポジトロン放出体が、以下に提供される。
Ａ．ＬＡＧ３結合性タンパク質
好適なＬＡＧ３結合性タンパク質は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６に記載されているものを含めた、ＬＡＧ３に特異的に結合するタンパク質である。本開示の例示的な抗ＬＡＧ３抗体は、やはり以下に提示されている、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の表１に列挙されている。
Figure 0007167041000001
Figure 0007167041000002
 表１は、例示的な抗ＬＡＧ３抗体の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）、軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）および軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）のアミノ酸配列識別子を記載している。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含むＨＣＶＲを含む抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、またはそれに対して少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含むＬＣＶＲを含む抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、ＨＣＶＲ、および表１に列挙されているＬＣＶＲアミノ酸配列のいずれかと対を形成する表１に列挙されているＨＣＶＲアミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列対（ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ）を含む、抗体または抗原結合性断片である。ある種の実施形態によれば、本開示は、表１に列挙されている例示的な抗ＬＡＧ３抗体のいずれかに含まれる、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある種の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択される。ある種の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号３８６／３９４（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４１８／４２６（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）または５３８／５４６（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）のうちの１つから選択される。ある種の他の実施形態では、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対は、配列番号４５８／４６４（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２）、１６２／１７０（例えば、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ）および５７９／５７８（例えば、Ｈ４Ｈ１５４８２Ｐ）のうちの１つから選択される。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＨＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ１（ＨＣＤＲ１）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＨＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ２（ＨＣＤＲ２）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む重鎖ＣＤＲ３（ＨＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＬＣＤＲ１アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ１（ＬＣＤＲ１）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＬＣＤＲ２アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ２（ＬＣＤＲ２）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかから選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を含む軽鎖ＣＤＲ３（ＬＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、ＨＣＤＲ３、および表１に列挙されているＬＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかと対を形成する、表１に列挙されているＨＣＤＲ３アミノ酸配列のいずれかを含むＨＣＤＲ３およびＬＣＤＲ３アミノ酸配列対（ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合性断片である。ある種の実施形態によれば、本開示は、表１に列挙されている例示的な抗ＬＡＧ３抗体のいずれかに含まれる、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対を含む、抗体またはその抗原結合性断片を提供する。ある種の実施形態では、ＨＣＤＲ３／ＬＣＤＲ３アミノ酸配列対は、配列番号３９２／４００（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４２４／４３２（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）および５４４／５５２（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されている、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかに含まれる、一組の６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合性断片である。ある種の実施形態では、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の組は、配列番号３８８－３９０－３９２－３９６－３９８－４００（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４２０－４２２－４２４－４２８－４３０－４３２（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）および５４０－５４２－５４４－５４８－５５０－５５２（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群から選択される。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、表１に列挙されている、例示的な抗ＬＡＧ３抗体のうちのいずれかによって規定される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれる、一組の６つのＣＤＲ（すなわち、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３）を含む、抗体または抗原結合性断片である。例えば、一部の実施形態では、結合性タンパク質は、配列番号３８６／３９４（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ）、４１８／４２６（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）および５３８／５４６（例えば、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ）からなる群から選択される、ＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対内に含まれる、ＨＣＤＲ１－ＨＣＤＲ２－ＨＣＤＲ３－ＬＣＤＲ１－ＬＣＤＲ２－ＬＣＤＲ３アミノ酸配列の組を含む、抗体または抗原結合性断片である。ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定するための方法および技法は、当技術分野で周知であり、これを使用して、本明細書において開示されている特定のＨＣＶＲおよび／またはＬＣＶＲアミノ酸配列内のＣＤＲを特定することができる。ＣＤＲの境界を特定するために使用することができる例示的な慣習は、例えば、Ｋａｂａｔの定義、Ｃｈｏｔｈｉａの定義およびＡｂＭの定義を含む。一般用語では、Ｋａｂａｔの定義は、配列可変性に基づくものであり、Ｃｈｏｔｈｉａの定義は、構造上のループ領域の位置に基づくものであり、ＡｂＭの定義は、Ｋａｂａｔ手法とＣｈｏｔｈｉａ手法との間の折衷である。例えば、Ｋａｂａｔ、「Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ」、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１年）；Ａｌ－Ｌａｚｉｋａｎｉら．、Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２７３巻：９２７～９４８頁（１９９７年）；およびＭａｒｔｉｎら、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８６巻：９２６８～９２７２頁（１９８９年）を参照されたい。抗体内のＣＤＲ配列を特定するための公的データベースも入手可能である。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、ＬＡＧ３への特異的結合に対して、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む抗体またはその抗原結合性断片と競合する抗体およびその抗原結合性断片であり、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ、表１に列挙されているＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
本明細書において有用なさらなる例示的な抗ＬＡＧ３抗体には、ＬＡＧ５２５（およびＵ．Ｓ．２０１００２３３１８３に開示されている他のＬＡＧ３抗体）、レラトリマブ（およびＵ．Ｓ．２０１１０１５０８９２に開示されている他のＬＡＧ３抗体）、ＧＳＫ２８３１７８１（およびＵ．Ｓ．２０１４０２８６９３５に開示されている他のＬＡＧ３抗体）、ＭＧＤ０１３（およびＷＯ２０１５２００１１９に開示されている他のＬＡＧ３抗体）およびＵ．Ｓ．２０１６０２２２１１６、Ｕ．Ｓ．２０１７００２２２７３、Ｕ．Ｓ．２０１７００９７３３３、Ｕ．Ｓ．２０１７０１３７５１７、Ｕ．Ｓ．２０１７０２６７７５９、Ｕ．Ｓ．２０１７０２９０９１４、Ｕ．Ｓ．２０１７０３３４９９５、ＷＯ２０１６１２６８５８、ＷＯ２０１６２００７８２、ＷＯ２０１７０８７５８９、ＷＯ２０１７０８７９０１、ＷＯ２０１７１０６１２９、ＷＯ２０１７１４９１４３、ＷＯ２０１７１９８７４１、ＷＯ２０１７２１９９９５およびＷＯ２０１７２２０５６９に開示されているＬＡＧ３抗体が含まれる。
ＭＨＣクラスＩＩに結合するＬＡＧ３を遮断する、単離された抗体およびその抗原結合性断片も本明細書において提供されている。一部の実施形態では、ＬＡＧ３結合を遮断する抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３上のＭＨＣクラスＩＩと同じエピトープに結合することがあるか、またはＬＡＧ３上のＭＨＣクラスＩＩと異なるエピトープに結合することがある。ある種の実施形態では、ＭＨＣクラスＩＩに結合するＬＡＧ３を遮断する本開示の抗体は、表１に列挙されているＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲのＣＤＲ、および表１に列挙されているＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲのＣＤＲを含む。
代替的な実施形態では、本開示は、ＭＨＣクラスＩＩに結合するＬＡＧ３を遮断しない、抗体およびその抗原結合性断片を提供する。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、ヒトまたは他の種に由来するＬＡＧ３に特異的に結合する、抗体およびその抗原結合性断片である。ある種の実施形態では、この抗体は、ヒトＬＡＧ３および／またはカニクイザルのＬＡＧ３に結合することができる。
一部の実施形態では、結合性タンパク質は、ＬＡＧ３への結合に対して、ＨＣＶＲのＣＤＲおよびＬＣＶＲのＣＤＲを含む参照抗体またはその抗原結合性断片と交差競合する抗体およびその抗原結合性断片であり、ＨＣＶＲおよびＬＣＶＲはそれぞれ、表１に列挙されているＨＣＶＲおよびＬＣＶＲ配列から選択されるアミノ酸配列を有する。
一実施形態では、結合性タンパク質は、以下の特徴：（ａ）ＬＡＧ３の結合、またはＭＨＣクラスＩＩの結合を遮断すること；（ｂ）ヒトＬＡＧ３および／またはカニクイザルのＬＡＧ３に特異的に結合すること；（ｃ）Ｔ細胞活性化のＬＡＧ３誘導性損傷を遮断して、Ｔ細胞シグナル伝達をレスキューすること；および（ｄ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制して、生存率を向上することのうちの１つまたは複数を有する、単離された抗体または抗原結合性断片である。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、作動的にＬＡＧ３に特異的に結合することができる。すなわち、これは、ＬＡＧ３結合および／もしくは活性を増強または刺激することができる。他の実施形態では、抗体は、拮抗的に、ＬＡＧ３に特異的に結合することができる。すなわち、これは、ＬＡＧ３がそのリガンドに結合するのを遮断することができる。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、中立的に、ＬＡＧ３に特異的に結合することができる。すなわち、これは、ＬＡＧ３に結合するが、ＬＡＧ３の結合および／または活性を遮断も増強も刺激することもない。
ある種の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、ＬＡＧ３への第１の結合特異性、および第２の標的エピトープに対する第２の結合特異性を含む、二重特異性である。第２の標的エピトープは、ＬＡＧ３または異なるタンパク質上の別のエピトープであってもよい。ある種の実施形態では、第２の標的エピトープは、様々なＴ細胞、Ｂ細胞、腫瘍細胞またはウイルス感染細胞を含めた、様々な細胞上とすることができる。
ある種の実施形態では、ヒトリンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ３）タンパク質に特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合性断片が提供され、抗体またはその抗原結合性断片は、以下からなる群から選択される特性を有する：（ａ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合する（ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例３に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用して）；（ｂ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合する；（ｃ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合する；（ｄ）；３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合する；（ｅ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合する；（ｆ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合する；（ｇ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断する；（ｈ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がマウスＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断する；（ｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、９０％よりも高く、ｈＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断する；（ｊ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて決定すると、約９ｎＭ未満のＥＣ５０で、Ｔ細胞活性のＬＡＧ３媒介性阻害をレスキューする；および（ｋ）蛍光アッセイで決定すると、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する。
一部の実施形態では、抗体およびその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例３に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用して、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定すると、約１．６分より長い解離半減期（ｔ１／２）で、ＬＡＧ３に結合する。ある種の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例３に規定されているアッセイフォーマット（例えば、ｍＡｂ－捕捉フォーマットまたは抗原捕捉フォーマット）または実質的に類似するアッセイを使用して、２５℃または３７℃で表面プラズモン共鳴によって測定すると、約５分より長い、約１０分より長い、約３０分より長い、約５０分より長い、約６０分より長い、約７０分より長い、約８０分より長い、約９０分より長い、約１００分より長い、約２００分より長い、約３００分より長い、約４００分より長い、約５００分より長い、約６００分より長い、約７００分より長い、約８００分より長い、約９００分より長い、約１０００分より長い、または約１１００分より長いｔ１／２で、ＬＡＧ３に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例５に規定されているフローサイトメトリーアッセイまたは実質的に類似するアッセイによって測定すると、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ヒトＬＡＧ３発現細胞に結合する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例５におけるアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、フローサイトメトリーアッセイによって測定すると、約５ｎＭ未満、約２ｎＭ未満、約１ｎＭ未満または約０．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例５に規定されているフローサイトメトリーアッセイまたは実質的に類似するアッセイによって測定すると、約２．５ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルＬＡＧ３発現細胞に結合する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例５に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、フローサイトメトリーアッセイによって測定すると、約２ｎＭ未満または約１ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例７または実質的に類似するアッセイに示される、細胞接着アッセイを使用して決定すると、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＭＨＣクラスＩＩ（例えば、ヒトＨＬＡ－ＤＲ２）にＬＡＧ３が結合するのを遮断する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例７に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、細胞接着アッセイによって測定すると、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満または約５ｎＭ未満のＩＣ５０で、ヒトＭＨＣクラスＩＩにＬＡＧ３が結合するのを遮断する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例７または実質的に類似するアッセイに示される、細胞接着アッセイを使用して決定すると、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ＭＨＣクラスＩＩにＬＡＧ３が結合するのを遮断する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例７に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、細胞接着アッセイによって測定すると、約２５ｎＭ未満、約２０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満または約５ｎＭ未満のＩＣ５０で、ヒトＭＨＣクラスＩＩにマウスＬＡＧ３が結合するのを遮断する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例７に規定されている細胞接着アッセイまたは実質的に類似するアッセイによって測定すると、９０％よりも高く、ヒトまたはマウスＭＨＣクラスＩＩにＬＡＧ３が結合するのを遮断する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例８に規定されているＴ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイまたは実質的に類似するアッセイによって測定すると、９ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ誘導性Ｔ細胞の下方調節を遮断する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例８に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、Ｔ細胞／ＡＰＣルシフェラーゼレポーターアッセイによって測定すると、約５ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満または約０．１ｎＭ未満のＥＣ５０で、ＬＡＧ３誘導性Ｔ細胞の下方調節を遮断する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例９に規定されている蛍光アッセイまたは実質的に類似するアッセイによって測定すると、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルの活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する。ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、例えば、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６の実施例９に規定されているアッセイフォーマットまたは実質的に類似するアッセイを使用する、蛍光アッセイによって測定すると、約１．１ｎＭ未満、約１ｎＭ未満、約０．５ｎＭ未満、約０．２ｎＭ未満または約０．１ｎＭ未満のＥＣ５０で、カニクイザルの活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する。
一実施形態では、抗体またはその断片は、ＬＡＧ３に結合するモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、抗体またはその断片は、以下の特徴：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４６４、４７２、４８０、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５４４および５６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；および配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、５２８、５３６、５５２および５６８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと； （ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６０、４６８、４７６、４８４、４９２、５００、５０８、５１６、５４０および５５６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４６２、４７０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、５１８、５４２および５５８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、５２４、５３２、５４８および５６４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；および配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、５２６、５３４、５５０および５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと；（ｖ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること；（ｖｉ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること；（ｖｉｉ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること；（ｖｉｉｉ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること；（ｉｘ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がマウスＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｉｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、９０％よりも高く、ｈＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｖ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて決定すると、約９ｎＭ未満のＥＣ５０で、Ｔ細胞活性のＬＡＧ３媒介性阻害をレスキューすること；（ｘｖ）蛍光アッセイで決定すると、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合すること；および（ｘｖｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制して、生存率を向上することのうちの１つまたは複数を示す。
一実施形態では、抗体またはその断片は、ＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断するモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、抗体またはその断片は、以下の特徴：（ｉ）配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有する、ＨＣＶＲを含むこと、（ｉｉ）配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有する、ＬＣＶＲを含むこと、（ｉｉｉ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４６４、４７２、４８０、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５４４および５６０からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン；および配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、５２８、５３６、５５２および５６８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ３ドメインを含むこと；（ｉｖ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６０、４６８、４７６、４８４、４９２、５００、５０８、５１６、５４０および５５６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン；配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４６２、４７０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、５１８、５４２および５５８からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン；配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、５２４、５３２、５４８および５６４からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン；および配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、５２６、５３４、５５０および５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列、または少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有するそれらの実質的に類似する配列を有するＬＣＤＲ２ドメインを含むこと；（ｖ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１０ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること；（ｖｉ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること；（ｖｉｉ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること；（ｖｉｉｉ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること；（ｉｘ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約８ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｈＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘ）フローサイトメトリーアッセイで測定すると、約２．３ｎＭ未満のＥＣ５０で、ｍｆＬＡＧ３発現細胞に結合すること；（ｘｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３２ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がヒトＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、約３０ｎＭ未満のＩＣ５０で、ｈＬＡＧ３がマウスＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｉｉ）細胞接着アッセイによって決定すると、９０％よりも高く、ｈＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断すること；（ｘｉｖ）ルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて決定すると、約９ｎＭ未満のＥＣ５０で、Ｔ細胞活性のＬＡＧ３媒介性阻害をレスキューすること；（ｘｖ）蛍光アッセイで決定すると、約１．２ｎＭ未満のＥＣ５０で、活性化ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合すること；および（ｘｖｉ）がんを有する対象において、腫瘍成長を抑制して、生存率を向上することのうちの１つまたは複数を示す。
ある種の実施形態では、抗体は、完全長タンパク質の他の領域または断片のいずれかに結合することによる、ＬＡＧ３に関連するＭＨＣクラスＩＩ結合活性を遮断または阻害することにより機能することができ、完全長タンパク質のアミノ酸配列は、配列番号５８２に示されている。
ある種の実施形態では、抗体は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、１つのドメイン中の１つのエピトープに結合することができ、ＬＡＧ３の異なるドメイン中の第２のエピトープにも結合することができる。ある種の実施形態では、二重特異性抗体は、同じドメイン中の２つの異なるエピトープに結合する。一実施形態では、多重特異性抗原結合性分子は、第１の抗原結合特異性（第１の結合特異性は、ＬＡＧ３の細胞外ドメインまたはその断片を含む）、およびＬＡＧ３の別のエピトープへの第２の抗原結合特異性を含む。
ある種の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片は、配列番号５８２に例示されている天然形態、または配列番号５７４～５７６に例示されている組換えにより生成した形態のどちらかで、ＬＡＧ３に例示されている領域のいずれか１つまたは複数内のエピトープにまたはそれらの断片に結合する。一部の実施形態では、抗体は、ＬＡＧ３のアミノ酸残基２９～４５０からなる群から選択される、１つまたは複数のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。一部の実施形態では、抗体は、配列番号５７６により例示されるカニクイザルのＬＡＧ３のアミノ酸残基１～５３３からなる群から選択される、１つまたは複数のアミノ酸を含む細胞外領域に結合する。
ある種の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体およびその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３（配列番号５８８）の細胞外領域内に見いだされる１つまたは複数のエピトープと相互作用する。エピトープは、ＬＡＧ３の細胞外領域内に位置する、３つまたはそれより多い（例えば、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０またはそれより多い）アミノ酸のうちの１つまたは複数の連続する配列からなることができる。代替的に、エピトープは、ＬＡＧ３の細胞外領域内に位置する複数の非連続アミノ酸（またはアミノ酸配列）からなることができる。例示的な抗体Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐが相互作用するＬＡＧ３のエピトープは、配列番号５８８のアミノ酸２８～７１に相当する、アミノ酸配列ＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹ（配列番号５８９）によって規定される。したがって、配列番号５８８のアミノ酸２８～７１からなる領域（すなわち、配列ＬＲＲＡＧＶＴＷＱＨＱＰＤＳＧＰＰＡＡＡＰＧＨＰＬＡＰＧＰＨＰＡＡＰＳＳＷＧＰＲＰＲＲＹ［配列番号５８９］）内に含まれる１つまたは複数のアミノ酸と相互作用する、抗ＬＡＧ３抗体も含まれる。
本開示は、表１中に本明細書に記載されている例示的な特異的抗体のいずれか、または表１に記載されている例示的な抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体として、同じエピトープまたはエピトープの一部分に結合する抗ＬＡＧ３抗体を含む。同様に、表１中の本明細書に記載されている例示的な特異的抗体のいずれか、または表１に記載されている例示的な抗体のいずれかのＣＤＲ配列を有する抗体と、ＬＡＧ３またはＬＡＧ３断片への結合について競合する抗ＬＡＧ３抗体も含まれる。例えば、本開示は、本明細書において提供されている１つまたは複数の抗体と、ＬＡＧ３への結合について交差競合する抗ＬＡＧ３抗体を含む（例えば、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ、Ｈ４ｓＨ１４８１３Ｎ、Ｈ４Ｈ１４８１３Ｎ、Ｈ４Ｈ１５４７９Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８２Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４９８Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７８１９ＰおよびＨ４Ｈ１７８２３Ｐ）。
本明細書に記載されている抗体および抗原結合性断片は、ＬＡＧ３と特異的に結合し、ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用をモジュレートする。抗ＬＡＧ３抗体は、高い親和性で、または低い親和性で、ＬＡＧ３に結合することができる。ある種の実施形態では、抗体は遮断抗体であり、この場合、抗体は、ＬＡＧ３に結合して、ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用を遮断する。一部の実施形態では、本開示の遮断抗体は、ＬＡＧ３のＭＨＣクラスＩＩへの結合を遮断する、および／またはＴ細胞活性化を刺激もしくは増強する。一部の実施形態では、遮断抗体は、免疫応答を刺激もしくは増強する、および／またはがんもしくは慢性ウイルス感染に罹患している対象を処置するのに有用である。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象における、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）などのウイルスによる慢性感染を低減することができる。それらは、対象における、腫瘍細胞の成長を阻害するために使用され得る。それらは、単独で使用されてもよく、または他の治療用部分との補助療法として、またはがんもしくはウイルス感染を処置する当技術分野で公知のモダリティとして使用されてもよい。ある種の実施形態では、低い親和性でＬＡＧ３に結合する抗ＬＡＧ３抗体は、多重特異性抗原結合性分子として使用され、この場合、第１の結合特異性は、低い親和性でＬＡＧ３に結合し、第２の結合特異性は、ＬＡＧ３の異なるエピトープおよび別のＴ細胞共阻害剤からなる群から選択される抗原に結合する。
一部の実施形態では、抗体は、ＬＡＧ３に結合し、疲弊Ｔ細胞のアネルギー状態を反転する。ある種の実施形態では、抗体は、ＬＡＧ３に結合し、制御性Ｔ細胞活性を阻害する。一部の実施形態では、抗体は、免疫応答を刺激もしくは増強する、および／またはがん、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染もしくは寄生虫感染に罹患している対象を処置するのに有用となり得る。抗体は、それを必要とする対象に投与されると、対象において、ＨＩＶ、ＬＣＭＶまたはＨＢＶなどのウイルスによる慢性感染を低減することがある。それらは、対象における、腫瘍細胞の成長を阻害するために使用され得る。それらは、単独で使用されてもよく、または他の治療用部分との補助療法として、またはがんもしくはウイルス感染を処置する当技術分野で公知のモダリティとして使用されてもよい。
ある種の実施形態では、本開示の抗体は、アゴニスト抗体であり、この場合、抗体は、ＬＡＧ３に結合して、ＬＡＧ３とＭＨＣクラスＩＩとの相互作用を増強する。一部の実施形態では、活性抗体は、ＬＡＧ３のＭＨＣクラスＩＩへの結合を増強する、および／またはＴ細胞活性化を阻害もしくは抑制する。本開示の活性抗体は、対象における免疫応答を阻害する、および／または自己免疫疾患を処置するのに有用となり得る。
ある種の抗ＬＡＧ３抗体は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏアッセイによって決定される通り、ＬＡＧ３に結合して、その活性を中和することができる。抗体がＬＡＧ３に結合して、この活性を中和する能力は、本明細書に記載されている結合アッセイまたは活性アッセイを含めた、当業者に公知の任意の標準的方法を使用して測定することができる。
結合活性を測定するための非限定的な例示的ｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイは、ＰＣＴ／ＵＳ１６／５６１５６に提示されている実施例に例示されている：実施例３では、ヒトＬＡＧ３に対するヒト抗ＬＡＧ３抗体の結合親和性および速度定数は、表面プラズモン共鳴によって決定され、この測定は、Ｂｉａｃｏｒｅ４０００またはＴ２００機器で行われた。実施例４では、遮断アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体間の交差競合が決定された。実施例５および６は、ＬＡＧ３を過剰発現する細胞への抗体の結合を記載している。実施例７では、結合アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体がｉｎ ｖｉｔｒｏで、ＬＡＧ３のＭＨＣクラスＩＩへの結合能力を遮断する能力が決定された。実施例８では、ルシフェラーゼアッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体が、Ｔ細胞におけるＬＡＧ３シグナル伝達を拮抗する能力が決定された。実施例９では、蛍光アッセイを使用して、抗ＬＡＧ３抗体が、活性化サルＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に結合する能力が決定された。
特に具体的に示さない限り、用語「抗体」は、本明細書で使用する場合、２つの免疫グロブリン重鎖および２つの免疫グロブリン軽鎖（すなわち、「完全抗体分子」）、ならびにそれらの抗原結合性断片を含む抗体分子を包含することが理解されるものとする。抗体の「抗原結合性部分」、抗体の「抗原結合性断片」などの用語は、本明細書で使用する場合、抗原に特異的に結合して複合体を形成する、天然に発生する、酵素により得ることができる、合成により、または遺伝的に操作されたポリペプチドまたはグリコタンパク質のいずれかを含む。抗体の「抗原結合性断片」または「抗体断片」という用語は、本明細書で使用する場合、ＬＡＧ３に特異的に結合する能力を保持している抗体の１つまたは複数の断片を指す。抗体断片は、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、ｄＡｂ断片、ＣＤＲまたは単離ＣＤＲを含有する断片を含むことができる。ある種の実施形態では、用語「抗原結合性断片」とは、多重特異性抗原結合性分子のポリペプチドまたはその断片を指す。このような実施形態では、用語「抗原結合性断片」は、例えば、ＬＡＧ３に特異的に結合するＭＨＣクラスＩＩ分子を含む。抗体の抗原結合性断片は、抗体可変ドメインおよび（必要に応じて）定常ドメインをコードするＤＮＡの操作および発現を含めた、タンパク質分解性消化または組換え遺伝子工学技法などの任意の好適な標準技法を使用して、例えば完全抗体分子から誘導され得る。このようなＤＮＡは公知である、かつ／または例えば、市販源、ＤＮＡライブラリ（例えば、ファージ抗体ライブラリを含む）から容易に入手可能であるか、または合成することができる。ＤＮＡは、化学的に、または例えば、１つもしくは複数の可変ドメインおよび／または定常ドメインを好適な構成に配置させる、またはコドンを導入する、システイン残基を作製する、アミノ酸を改変する、付加させるまたは欠失させるなどの分子生物学的技法を使用することにより、配列決定または操作され得る。
抗原結合性断片の非限定例は、（ｉ）Ｆａｂ断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片；（ｉｉｉ）Ｆｄ断片；（ｉｖ）Ｆｖ断片；（ｖ）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）分子；（ｖｉ）ｄＡｂ断片；および（ｖｉｉ）抗体の超可変領域を模倣するアミノ酸残基からなる最小限の認識単位（例えば、ＣＤＲ３ペプチドなどの単離された相補性決定領域（ＣＤＲ））、または拘束ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４ペプチドを含む。ドメイン特異的抗体、単一ドメイン抗体、ドメイン欠失抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ダイアボディ、トライアボディ、テトラボディ、ミニボディ、ナノボディ（例えば一価ナノボディ、二価ナノボディなど）、小モジュラー免疫医薬品（ＳＭＩＰ）およびサメ可変ＩｇＮＡＲドメインなどの他の操作された分子もまた、本明細書において使用する「抗原結合性断片」という表現に包含される。
抗体の抗原結合性断片は、通常、少なくとも１つの可変ドメインを含む。可変ドメインは、任意のサイズまたはアミノ酸組成であってもよく、１つまたは複数のフレームワーク配列を有するフレームに隣接している、またはこのフレーム内に存在する少なくとも１つのＣＤＲを一般に含む。ＶＬドメインに結合したＶＨドメインを有する抗原結合性断片では、ＶＨおよびＶＬドメインは、任意の好適な配列で、互いに対して位置することができる。例えば、可変領域は二量体であってもよく、ＶＨ－ＶＨ、ＶＨ－ＶＬまたはＶＬ－ＶＬ二量体を含有してもよい。代替的に、抗体の抗原結合性断片は、ＶＨまたはＶＬドメインモノマーを含有してもよい。
ある種の実施形態では、抗体の抗原結合性断片は、少なくとも１つの定常ドメインに共有結合により連結されている少なくとも１つの可変ドメインを含有することができる。本開示の抗体の抗原結合性断片内に見いだすことができる可変ドメインおよび定常ドメインの非限定的な例示的構成は、：（ｉ）ＶＨ－ＣＨ１；（ｉｉ）ＶＨ－ＣＨ２；（ｉｉｉ）ＶＨ－ＣＨ３；（ｉｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｖ）ＶＨ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉ）ＶＨ－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｖｉｉ）ＶＨ－ＣＬ；（ｖｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１；（ｉｘ）ＶＬ－ＣＨ２；（ｘ）ＶＬ－ＣＨ３；（ｘｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２；（ｘｉｉ）ＶＬ－ＣＨ１－ＣＨ２－ＣＨ３；（ｘｉｉｉ）ＶＬ－ＣＨ２－ＣＨ３；および（ｘｉｖ）ＶＬ－ＣＬを含む。上に列挙されている例示的な構成のいずれかを含めた、可変ドメインおよび定常ドメインのいずれかの構成において、可変ドメインおよび定常ドメインは、互いに直接、連結され得るか、またはヒンジ領域もしくはリンカー領域の全体または一部により連結され得るかのどちらかである。ヒンジ領域は、少なくとも２つ（例えば、５、１０、１５、２０、４０、６０またはそれより多い）アミノ酸からなることができ、単一ポリペプチド分子中に、隣接する可変ドメインおよび／または定常ドメイン間の可撓性または半可撓性の連結をもたらす。さらに、本開示の抗体の抗原結合性断片は、互いに、および／または１つもしくは複数のＶＨまたはＶＬドメインモノマーと（例えば、ジスルフィド結合による）非共有結合で、上で列挙されている可変ドメイン構成および定常ドメイン構成のいずれかのホモ二量体またはヘテロ二量体（または、他のマルチマー）を含むことができる。
完全抗体分子と同様に、抗原結合性断片は、単一特異的または多重特異性（例えば、二重特異性）であってもよい。抗体の多重特異性抗原結合性断片は、少なくとも２つの異なる可変ドメインを通常、含み、この場合、各可変ドメインは、個別の抗原または同じ抗原上の異なるエピトープに特異的に結合することができる。本明細書において開示されている例示的な二重特異性抗体フォーマットを含めた、いずれの多重特異性抗体フォーマットも、当技術分野において利用可能な慣用技術を使用して、本開示の抗体の抗原結合性断片の文脈において使用するよう適合され得る。
本開示の抗ＬＡＧ３抗体および抗体断片は、記載されている抗体のものと異なるが、ＬＡＧ３に結合する能力を保持するアミノ酸配列を有するタンパク質を包含する。このようなバリアント抗体および抗体断片は、親配列と比べると、アミノ酸の１つまたは複数の付加、欠失または置換を含むが、記載されている抗体の生物活性と本質的に等価な生物活性を示す。同様に、本開示の抗体をコードするＤＮＡ配列は、開示されている配列と比べた場合、ヌクレオチドの１つもしくは複数の付加、欠失または置換を含むが、本開示の抗体または抗体断片に本質的に生物学的に等価な抗体または抗体断片をコードする配列を包含する。
２つの抗原結合性タンパク質または抗体は、例えば、単回投与であれ、複数回投与であれ、同様の実験条件下、同じモル濃度用量で投与された場合に、その吸収速度および程度が有意な差異を示さない、医薬同等物または医薬代替物であれば、生物学的に等価であると考えられる。一部の抗体は、その吸収速度の程度が等価であるが、吸収速度が等価ではない場合、等価物または医薬品代替物と考えられるであろうが、吸収速度のこのような差異は、意図的なものであり、標識時に反映されて、例えば継続的使用に及ぼす有効な身体薬物濃度の実現に必須でなく、検討されている特定の薬物製品にとって医療的に重要ではないと考えられるので、上記の抗体は生物学的に等価であるとやはり考えることができる。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、その安全性、純度または効能に臨床的に有意な差異が存在しない場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、参照製品と生物学的製品とを切り替えない継続的治療と比べ、免疫原性の臨床的に有意な変化または有効性の低下を含めた悪影響のリスクの増大が予期されることなしに、このような切り替えが患者に１回または複数回、行われ得る場合、生物学的に等価である。
一実施形態では、２つの抗原結合性タンパク質は、使用の条件（単数または複数）に対する一般的な機序または作用機序が公知である程度に、このような機序によってどちらも作用する場合、生物学的に等価である。
生物学的等価性は、ｉｎ ｖｉｖｏおよび／またはｉｎ ｖｉｔｒｏ方法によって実証され得る。生物学的等価性の尺度は、例えば、（ａ）抗体またはその代謝産物の濃度が、血液、血漿、血清または他の生物学的流体において、時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳動物でのｉｎ ｖｉｖｏ試験；（ｂ）ヒトのｉｎ ｖｉｖｏでの生体利用率データと相関し、その合理的な予測が可能なｉｎ ｖｉｔｒｏ試験；（ｃ）抗体（またはその標的）の適切な急性薬理学的影響が、時間の関数として測定される、ヒトまたは他の哺乳動物におけるｉｎ ｖｉｖｏ試験；および（ｄ）抗体の安全性、効力、または生体利用率もしくは生物学的等価性を確立する十分に制御された臨床試験を含む。
本開示の抗体の生物学的等価なバリアントは、例えば、生物活性に必要としない、残基または配列の様々な置換を行うことにより、あるいは末端残基もしくは内部残基または配列を欠失させることにより構築することができる。例えば、生物活性にとって不可欠でないシステイン残基は、復元時に不必要なまたは不適切な分子内ジスルフィド架橋の形成を防止するため、欠失され得るか、または他のアミノ酸と置き換えられ得る。他の文脈では、生物学的に等価な抗体は、抗体のグリコシル化特徴を改変するアミノ酸の変化、例えば、グリコシル化を排除または除去する変異を含む抗体バリアントを含んでもよい。
本開示のある種の実施形態によれば、抗ＬＡＧ３抗体は、例えば、中性ｐＨに比べて、酸性ｐＨにおいて、ＦｃＲｎ受容体に抗体が結合するのを増強するまたは低下させる、１つまたは複数の変異を含むＦｃドメインを含む。例えば、本開示は、ＦｃドメインのＣＨ２またはＣＨ３領域における変異であって、酸性環境（例えば、ｐＨが、約５．５～約６．０の範囲であるエンドソーム中）で、ＦｃＲｎに対するＦｃドメインの親和性を向上させる、変異を含む抗ＬＡＧ３抗体を含む。このような変異は、動物に投与された場合、抗体の血清半減期の向上をもたらすことがある。このようなＦｃ改変の非限定例には、例えば、位置２５０（例えば、ＥまたはＱ）；２５０および４２８（例えば、ＬまたはＦ）、２５２（例えば、Ｌ／Ｙ／Ｆ／ＷまたはＴ）、２５４（例えば、ＳまたはＴ）および２５６（例えば、Ｓ／Ｒ／Ｑ／Ｅ／ＤまたはＴ）における改変；または位置４２８および／もしくは４３３（例えば、Ｈ／Ｌ／Ｒ／Ｓ／Ｐ／ＱまたはＫ）および／もしくは４３４（例えば、Ａ、Ｗ、Ｈ、ＦまたはＹ［Ｎ４３４Ａ、Ｎ４３４Ｗ、Ｎ４３４Ｈ、Ｎ４３４ＦまたはＮ４３４Ｙ］）における改変；または位置２５０および／または４２８における改変；または位置３０７もしくは３０８（例えば、３０８Ｆ、Ｖ３０８Ｆ）および４３４における改変が含まれる。一実施形態では、改変は、４２８Ｌ（例えば、Ｍ４２８Ｌ）および４３４Ｓ（例えば、Ｎ４３４Ｓ）改変；４２８Ｌ、２５９Ｉ（例えば、Ｖ２５９Ｉ）および３０８Ｆ（例えば、Ｖ３０８Ｆ）改変；４３３Ｋ（例えば、Ｈ４３３Ｋ）および４３４（例えば、４３４Ｙ）改変；２５２、２５４および２５６（例えば、２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ）改変；２５０Ｑおよび４２８Ｌ改変（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ４２８Ｌ）；および３０７および／または３０８改変（例えば、３０８Ｆまたは３０８Ｐ）を含む。さらに別の実施形態では、改変は、２６５Ａ（例えば、Ｄ２６５Ａ）および／または２９７Ａ（例えば、Ｎ２９７Ａ）改変を含む。
例えば、本開示は、２５０Ｑおよび２４８Ｌ（例えば、Ｔ２５０ＱおよびＭ２４８Ｌ）；２５２Ｙ、２５４Ｔおよび２５６Ｅ（例えば、Ｍ２５２Ｙ、Ｓ２５４ＴおよびＴ２５６Ｅ）；４２８Ｌおよび４３４Ｓ（例えば、Ｍ４２８ＬおよびＮ４３４Ｓ）；２５７Ｉおよび３１１Ｉ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＱ３１１Ｉ）；２５７Ｉおよび４３４Ｈ（例えば、Ｐ２５７ＩおよびＮ４３４Ｈ）；３７６Ｖおよび４３４Ｈ（例えば、Ｄ３７６ＶおよびＮ４３４Ｈ）；３０７Ａ、３８０Ａおよび４３４Ａ（例えば、Ｔ３０７Ａ、Ｅ３８０ＡおよびＮ４３４Ａ）；ならびに４３３Ｋおよび４３４Ｆ（例えば、Ｈ４３３ＫおよびＮ４３４Ｆ）からなる群から選択される変異の１つもしくは複数の対または群を含むＦｃドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体を含む。一実施形態では、本開示は、二量体の安定化を促進する、ＩｇＧ４のヒンジ領域において、Ｓ１０８Ｐ変異を含むＦｃドメインを含む抗ＬＡＧ３抗体を含む。上述のＦｃドメイン変異、および本明細書において開示されている抗体可変ドメイン内の他の変異のありうるすべての組合せが、本開示の範囲内に企図される。
本開示はまた、キメラ重鎖定常（ＣＨ）領域を含む抗ＬＡＧ３抗体を含み、ここでは、キメラＣＨ領域は、１つより多い免疫グロブリンアイソタイプのＣＨ領域に由来するセグメントを含む。例えば、本開示の抗体は、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ２ドメインの一部またはすべてを、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４分子に由来するＣＨ３ドメインの一部またはすべてと組み合わせて含むキメラＣＨ領域を含むことができる。ある種の実施形態によれば、本開示の抗体は、キメラヒンジ領域を有するキメラＣＨ領域を含む。例えば、キメラヒンジは、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「上部ヒンジ」アミノ酸配列（ＥＵ番号付けに準拠すると、位置２１６～２２７までのアミノ酸残基）を、ヒトＩｇＧ１、ヒトＩｇＧ２またはヒトＩｇＧ４ヒンジ領域に由来する「下部ヒンジ」配列（ＥＵ番号付けに準拠すると、位置２２８～２３６までのアミノ酸残基）と組み合わせて含むことができる。ある種の実施形態によれば、キメラヒンジ領域は、ヒトＩｇＧ１またはヒトＩｇＧ４上部ヒンジに由来するアミノ酸残基、およびヒトＩｇＧ２下部ヒンジに由来するアミノ酸残基を含む。本明細書に記載されているキメラＣＨ領域を含む抗体は、ある種の実施形態では、抗体の治療的特性または薬物動態特性に悪影響を及ぼすことなく、改変したＦｃエフェクター機能を示すことがある。（例えば、その開示の全体が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許公開第２０１４０２４３５０４号を参照されたい）。ある種の実施形態では、Ｆｃ領域は、配列番号５６９、５７０、５７１、５７２および５７３からなる群から選択される配列を含む。
Ｂ．ポジトロン放出体およびキレート形成性部分
好適なポジトロン放出体には、以下に限定されないが、キレート形成性部分と安定な錯体を形成し、免疫ＰＥＴイメージング目的に好適な物理的半減期を有するものが含まれる。例示的なポジトロン放出体には、以下に限定されないが、８９Ｚｒ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃおよび８６Ｙが含まれる。適切なポジトロン放出体にはまた、以下に限定されないが、７６Ｂｒおよび１２４Ｉ、ならびに補欠分子族を介して導入されるもの、例えば１８Ｆを含めた、ＬＡＧ３結合性タンパク質と直接、結合するものも含まれる。
本明細書に記載されているキレート形成性部分は、ＬＡＧ３結合性タンパク質、例えば抗ＬＡＧ３抗体に共有結合により連結されている化学部分であり、ポジトロン放出体とキレート形成することが可能な部分、すなわち、ポジトロン放出体と反応して配位キレート錯体を形成することが可能な部分を含む。好適な部分は、特定の金属を十分に搭載することが可能なもの、および診断的使用、例えば免疫ＰＥＴイメージングにとってｉｎ ｖｉｖｏで十分に安定な金属－キレート剤の錯体を形成するものを含む。例示的なキレート形成性部分は、ポジトロン放出体の解離、ならびに診断的使用に好適な程度に堆積する、無機骨、血漿タンパク質および／または骨髄における蓄積を最小限にするものを含む。
キレート形成性部分の例には、以下に限定されないが、ポジトロン放出体８９Ｚｒ、６８Ｇａ、６４Ｃｕ、４４Ｓｃおよび／または８６Ｙと安定な錯体を形成するものが含まれる。例示的なキレート形成性部分には、以下に限定されないが、その全体が参照により組み込まれている、Ｎａｔｕｒｅ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、５巻（４号）：７３９頁、２０１０年；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２６巻（１２号）：２５７９頁（２０１５年）；Ｃｈｅｍ Ｃｏｍｍｕｎ（Ｃａｍｂ）、５１巻（１２号）：２３０１頁（２０１５年）；Ｍｏｌ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ、１２巻：２１４２頁（２０１５年）；Ｍｏｌ． Ｉｍａｇｉｎｇ Ｂｉｏｌ．、１８巻：３４４頁（２０１５年）；Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． Ｍｏｌ． Ｉｍａｇｉｎｇ、３７巻：２５０頁（２０１０年）；Ｅｕｒ． Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． Ｍｏｌ． Ｉｍａｇｉｎｇ（２０１６年）． ｄｏｉ：１０．１００７／ｓ００２５９－０１６－３４９９－ｘ；Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．、２６巻（１２号）：２５７９頁（２０１５年）；ＷＯ２０１５／１４０２１２Ａ１；およびＵＳ５，６３９，８７９に記載されているものが含まれる。
例示的なキレート形成性部分にはまた、以下に限定されないが、デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）、１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、（１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－テトラ（メチレンホスホン）酸（ＤＯＴＰ）、１Ｒ，４Ｒ，７Ｒ，１０Ｒ）－α’α”α’’’－テトラメチル－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン－１，４，７，１０－四酢酸（ＤＯＴＭＡ）、１，４，８，１１－テトラアザアザシクロテトラデカン－１，４，８，１１－四酢酸（ＴＥＴＡ）、Ｈ４オクタパ、Ｈ６ホスパ、Ｈ２デドパ、Ｈ５デカパ、Ｈ２アザパ、ＨＯＰＯ、ＤＯ２Ａ、１，４，７，１０－テトラキス（カルバモイルメチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡＭ）、１，４，７－トリアザシクロノナン－Ｎ，Ｎ’，Ｎ”－三酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，７，１０－テトラキス（カルバモイルメチル）－１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（ＤＯＴＡＭ）、１，４，８，１１－テトラアザビシクロ［６．６．２］ヘキサデカン－４，１１－二酢酸（ｄｉｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）（ＣＢ－ＴＥ２Ａ）、１，４，７，１０－テトラアザシクロドデカン（サイクレン）、１，４，８，１１－テトラアザシクロテトラデカン（サイクラム）、八座キレート剤、例えば、ＤＦＯ＊（これは、ＤＦＯ＊－ｐＰｈｅ－ＮＣＳにより抗体にコンジュゲートされ得る）（Ｖｕｇｔら、Ｅｕｒ Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ Ｍｏｌ Ｉｍａｇｉｎｇ（２０１７年）４４巻：２８６～２９５頁を参照されたい）、六座キレート剤、ホスホネートをベースとするキレート剤、マクロ環式キレート剤、マクロ環式テレフタルアミド配位子を含むキレート剤、二官能性キレート剤、フサリニンＣおよびフサリニンＣ誘導体キレート剤、トリアセチルフサリニンＣ（ＴＡＦＣ）、フェリオキサミンＥ（ＦＯＸＥ）、フェリオキサミンＢ（ＦＯＸＢ）、フェリクロメＡ（ＦＣＨＡ）などを含むものを含む。
一部の実施形態では、キレート形成性部分は、キレート形成性部分のキレート形成部分が結合性タンパク質に共有結合により結合している、リンカー部分を介して、ＬＡＧ３結合性タンパク質、例えば抗体またはその抗原結合性断片に共有結合している。一部の実施形態では、これらのリンカー部分は、ＬＡＧ３結合性タンパク質の反応性部分、例えば抗体のシステインまたはリシンと、例えば、ｐ－イソチオシアナトベンジル（ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｏｂｅｎｙｌ）基、および以下のコンジュゲート方法に提示されている反応性部分を含めたキレート剤に結合する反応性部分との間の反応から形成される。さらに、このようなリンカー部分は、極性、溶解度、立体的相互作用、剛直性および／またはキレート形成性部分とＬＡＧ３結合性タンパク質との間の長さを調節する目的のために使用される化学基を必要に応じて含む。
Ｃ．放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートの調製
放射標識抗ＬＡＧ３タンパク質コンジュゲートは、（１）ＬＡＧ３結合性タンパク質、例えば抗体と、ポジトロン放出体キレート剤およびＬＡＧ３結合性タンパク質の望ましいコンジュゲート部位に反応性の部分を含む分子を反応させて、（２）所望のポジトロン放出体を搭載させることにより調製することができる。
適切なコンジュゲート部位には、以下に限定されないが、リシンおよびシステインが含まれ、これらはどちらも、例えば、天然または操作されたものとすることができ、例えば、抗体の重鎖または軽鎖上に存在し得る。システインコンジュゲート部位は、以下に限定されないが、抗体ジスルフィド結合の変異、挿入または還元から得られたものを含む。システインを操作した抗体を作製する方法は、以下に限定されないが、ＷＯ２０１１／０５６９８３に開示されているものを含む。抗体の特異的部位にコンジュゲート反応を向かわせて、所望の化学量論を実現する、および／または所望のキレート剤対抗体の比を実現する、部位特異的コンジュゲート方法を使用することもできる。このようなコンジュゲート方法は、当業者に公知であり、以下に限定されないが、システイン操作法、ならびに以下に限定されないが、グルタミンコンジュゲート、Ｑ２９５コンジュゲートおよびトランスグルタミナーゼ媒介性コンジュゲートを含めた酵素法および化学酵素法、ならびにその全体が参照により本明細書に組み込まれている、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３６巻：１００頁（２０１６年）に記載されているものを含む。所望のコンジュゲート部位に反応性を示す好適な部分により、ＬＡＧ３結合性タンパク質、例えば抗体とポジトロン放出体キレート剤との効率的かつ容易なカップリングが、一般に可能になる。リシンおよびシステイン部位に反応性を示す部分は、当業者に公知の求電子性基を含む。ある種の態様では、所望のコンジュゲート部位がリシンである場合、反応性部分は、イソチオシアネート、例えばｐ－イソチオシアナトベンジル基または反応性エステルである。ある種の態様では、所望のコンジュゲート部位がシステインである場合、反応性部分はマレイミドである。
キレート剤が、デスフェリオキサミン（ＤＦＯ）である場合、好適な反応性部分には、以下に限定されないが、イソチオシアナトベンジル基、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、２，３，５，６テトラフルオロフェノールエステル、Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート、およびその全体が参照により本明細書に組み込まれている、ＢｉｏＭｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、２０１４巻、書籍ＩＤ ２０３６０１に記載されているものが含まれる。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３結合性タンパク質は抗体であり、ポジトロン放出体キレート剤およびコンジュゲート部位に反応性を示す部分を含む分子は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミン（ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯ）：
Figure 0007167041000003
 である。
ポジトロン放出体の搭載は、例えば、本明細書に提示されている実施例に記載されている方法、または実質的に同様の方法を行うことにより、前記ポジトロン放出体をキレート剤に配位させるのに十分な時間、ポジトロン放出体とともにＬＡＧ３結合性タンパク質キレート剤コンジュゲートをインキュベートすることにより行われる。
Ｄ．コンジュゲートの例示的実施形態
ヒトＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片、およびポジトロン放出体を含む放射標識抗体コンジュゲートが本開示に含まれる。同様に、ヒトＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片、キレート形成性部分およびポジトロン放出体を含む放射標識抗体コンジュゲートが、本開示に含まれる。
一部の実施形態では、キレート形成性部分は、８９Ｚｒと錯体を形成することが可能なキレート剤を含む。ある種の実施形態では、キレート形成性部分は、デスフェリオキサミンを含む。ある種の実施形態では、キレート形成性部分は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミンである。
一部の実施形態では、ポジトロン放出体は、８９Ｚｒである。一部の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体の１．０％未満しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．９％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．８％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．７％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．６％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．５％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．４％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．３％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、０．２％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない、または０．１％未満の抗ＬＡＧ３抗体しかポジトロン放出体とコンジュゲートされていない。
一部の実施形態では、コンジュゲートの抗体に対するキレート形成性部分の比は、１～２である。
特定の実施形態では、キレート形成性部分は、ｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミンであり、ポジトロン放出体は、８９Ｚｒである。別の特定の実施形態では、キレート形成性部分はｐ－イソチオシアナトベンジル－デスフェリオキサミンであり、ポジトロン放出体は８９Ｚｒであり、コンジュゲートの抗体に対するキレート形成性部分の比は１～２である。
一部の実施形態では、ＬＡＧ３に結合する抗原結合性タンパク質が提供され、ＬＡＧ３に結合する前記抗原結合性タンパク質は、以下の構造：
－Ｌ－ＭＺ
を有する１つまたは複数の部分に共有結合により結合しており、式中、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは、独立して、出現ごとに、０または１であり、ｚの少なくとも１つは、１である。ある種の実施形態では、放射標識抗原結合性タンパク質は、式（Ｉ）の化合物：
Ｍ－Ｌ－Ａ－［Ｌ－ＭＺ］ｋ
（Ｉ）
であり、Ａは、ＬＡＧ３に結合するタンパク質であり、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは、０または１であり、ｋは０～３０の整数である。一部の実施形態では、ｋは１である。
一部の実施形態では、Ｌは、以下：
Figure 0007167041000004
 である。
一部の実施形態では、Ｍは８９Ｚｒである。
一部の実施形態では、ｋは、１～２の整数である。一部の実施形態では、ｋは１である。
一部の実施形態では、－Ｌ－Ｍは、以下：
Figure 0007167041000005
 である。
式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 0007167041000006
 を、８９Ｚｒに接触させるステップを含む、放射標識抗体コンジュゲートを合成する方法も、本開示に含まれ、式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片である。ある種の実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物は、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片をｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯに接触させることにより合成される。
式（ＩＩＩ）の化合物と８９Ｚｒとの間の反応生成物も、本明細書において提供されている。
式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 0007167041000007
 が本明細書において提供され、式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片であり、ｋは１～３０の整数である。一部の実施形態では、ｋは、１または２である。
一部の実施形態では、以下の構造：
Ａ－Ｌｋ
を有する、コンジュゲートを含む組成物が本明細書において提供され、式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合するタンパク質であり、Ｌはキレート形成性部分であり、ｋは１～３０の整数であり、コンジュゲートは、臨床的ＰＥＴイメージングに好適な比放射能を実現するのに十分な量で、ポジトロン放出体とキレートを形成する。一部の実施形態では、キレート形成したポジトロン放出体の量は、ＬＡＧ３に結合するタンパク質１～５０ｍｇあたり、約１～約２０ｍＣｉの比放射能をもたらすのに十分な量である。一部の実施形態では、キレート形成したポジトロン放出体の量は、ＬＡＧ３に結合するタンパク質１～５０ｍｇあたり、最大で２０ｍＣｉ、最大で１５ｍＣｉまたは最大で１０ｍＣｉ、例えば約３～約２０ｍＣｉ、約５～約２０ｍＣｉ、約１～約１５ｍＣｉ、約３～約１５ｍＣｉ、約５～約１５ｍＣｉ、約１～約１０ｍＣｉまたは約３～約１０ｍＣｉの範囲の比放射能をもたらすのに十分な量である。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約２ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１．５ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約９０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約２０ｐＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合する。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ヒトＬＡＧ３への結合について、ＨＣＶＲ（ＨＣＶＲは、表１に列挙されているＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）の相補性決定領域（ＣＤＲ）およびＬＣＶＲ（ＬＣＶＲは、表１に列挙されているＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）のＣＤＲを含む参照抗体と競合する。一部の実施形態では、参照抗体またはその抗原結合性断片は、表１に記載されているＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。一部の実施形態では、参照抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを増大する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３がＭＨＣクラスＩＩに結合するのを遮断する。一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３がそのリガンドに結合するのを増大も低下もさせない。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＨＣＶＲの相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）；およびＬＣＶＲのＣＤＲ（ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）を含む。ある種の実施形態では、単離された抗体は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。ある種の実施形態では、単離された抗体は、配列番号３８６／３９４、４１８／４２６、５３８／５４６、５７７／５７８、５７９／５７８および５８０／５８１からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
一部の実施形態では、抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙されている重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙されている軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗体は、ヒトＬＡＧ３に特異的に結合するヒトモノクローナル抗体またはその抗原結合性断片であり、抗体またはその抗原結合性断片は、（ａ）表１に列挙されているＨＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＶＲ、および（ｂ）表１に列挙されているＬＣＶＲ配列からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＶＲを含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、表１に列挙されている重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）配列のいずれか１つ内に含まれている、３つの重鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２およびＨＣＤＲ３）；および表１に列挙されている軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列のいずれか１つ内に含まれている３つの軽鎖ＣＤＲ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２およびＬＣＤＲ３）を含む。
一部の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、以下：
（ａ）配列番号４、２０、３６、５２、６８、８４、１００、１１６、１３２、１４８、１６４、１８０、１９６、２１２、２２８、２４４、２６０、２７６、２９２、３０８、３２４、３４０、３５６、３７２、３８８、４０４、４２０、４３６、４５２、４６０、４６８、４７６、４８４、４９２、５００、５０８、５１６、５４０および５５６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ１ドメイン、
（ｂ）配列番号６、２２、３８、５４、７０、８６、１０２、１１８、１３４、１５０、１６６、１８２、１９８、２１４、２３０、２４６、２６２、２７８、２９４、３１０、３２６、３４２、３５８、３７４、３９０、４０６、４２２、４３８、４５４、４６２、４７０、４７８、４８６、４９４、５０２、５１０、５１８、５４２および５５８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ２ドメイン、
（ｃ）配列番号８、２４、４０、５６、７２、８８、１０４、１２０、１３６、１５２、１６８、１８４、２００、２１６、２３２、２４８、２６４、２８０、２９６、３１２、３２８、３４４、３６０、３７６、３９２、４０８、４２４、４４０、４５６、４６４、４７２、４８０、４８８、４９６、５０４、５１２、５２０、５４４および５６０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＨＣＤＲ３ドメイン、
（ｄ）配列番号１２、２８、４４、６０、７６、９２、１０８、１２４、１４０、１５６、１７２、１８８、２０４、２２０、２３６、２５２、２６８、２８４、３００、３１６、３３２、３４８、３６４、３８０、３９６、４１２、４２８、４４４、５２４、５３２、５４８および５６４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ１ドメイン、
（ｅ）配列番号１４、３０、４６、６２、７８、９４、１１０、１２６、１４２、１５８、１７４、１９０、２０６、２２２、２３８、２５４、２７０、２８６、３０２、３１８、３３４、３５０、３６６、３８２、３９８、４１４、４３０、４４６、５２６、５３４、５５０および５６６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ２ドメイン、および
（ｆ）配列番号１６、３２、４８、６４、８０、９６、１１２、１２８、１４４、１６０、１７６、１９２、２０８、２２４、２４０、２５６、２７２、２８８、３０４、３２０、３３６、３５２、３６８、３８４、４００、４１６、４３２、４４８、５２８、５３６、５５２および５６８からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＬＣＤＲ３ドメイン
を含む。
一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。一部の実施形態では、抗体または抗原結合性断片は、配列番号３８６／３９４、４１８／４２６および５３８／５４６からなる群から選択されるＨＣＶＲ／ＬＣＶＲアミノ酸配列対を含む。
Ｅ．抗ＬＡＧ３抗体－キレート剤コンジュゲートを生成するためのスケールを向上した製造
キレート剤にコンジュゲートされた抗ＬＡＧ３抗体を生成するためのスケールアップ製造法が、本開示に含まれる。抗ＬＡＧ３抗体－キレート剤コンジュゲートは、放射標識に好適な形態にある。
良好な製造法は、滅菌環境の維持、滅菌手順の実践、すべての過程の記録の保管、ならびに製品品質、純度、力価および同一性の文書化、ならびにこれらからのいかなる逸脱を含めた、製品のすべての態様において順守される。
スケールアップ製造法は、一部の実施形態では、研究および開発のための製造法よりもかなり速い。一部の実施形態では、スケールアップ製造法は、１２時間未満、または１０時間未満、または８時間未満、または６時間未満、または４時間未満、または約２時間またはそれ未満しかかかり得ない。
一部の実施形態では、第１のステップは、コンジュゲート過程を阻害する、賦形剤、コンジュゲート妨害性化学種および塩を除去するための、３０～５０ｋＤａの膜を使用する、抗ＬＡＧ３抗体の限外ろ過およびダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）を含む。例示的な膜ポリマーには、ポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）、酢酸セルロース（ＣＡ）および再生セルロース（ＲＣ）が含まれる。このステップでは、抗体は、低イオン強度および非妨害性緩衝溶液中でバッファー交換される。緩衝液のｐＨは、約４．５～約６、または約５～約６、または約５．３～約５．７の間、または約５．５とすることができる。本明細書において企図される緩衝系には、一級アミンのない任意の緩衝系が含まれる。例示的な緩衝液には、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝液が含まれる。緩衝液は、事前コンジュゲート処理中、タンパク質に安定性をもたらす。この過程の体積をさらに低下させて抗体を濃縮し、次に、滅菌ろ過することができる。
事前コンジュゲートＵＦＤＦの後、濃縮してろ過した抗体を、アミン不含炭酸緩衝系に移送することができる。炭酸緩衝系は、約８．５～約９．６、または約９．０～約９．６、または約９．２～約９．４、または約９．４～約９．６の範囲のｐＨ、または約９．４のｐＨを有することができる。
溶媒中のキレート剤、例えばＤＦＯを、抗体を含有する緩衝系に目標濃度まで加え、追加の溶媒をこの溶液に加えて、所望の百分率にすることができる。キレート剤は、過剰モルの抗体で、例えば、３．５～５：１となる抗体に対するキレート剤で添加することができる。全反応体積は、最大５Ｌとすることができる。
反応温度および反応時間は、反比例の関係にある。例えば、反応温度が高いほど、反応時間は短い。反応温度が低いほど、反応時間は長い。例示的には、約１８℃より高い温度では、反応は、２時間未満しかかからないことがあり、１８℃未満の温度では、反応は、２時間を超えることがある。
コンジュゲート反応は、クエンチすることにより、例えば、酢酸の添加によって終了させることができる。
一部の実施形態では、抗体とデフェロキサミンとのコンジュゲートを行い、ＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲートを生成する。一部の実施形態では、抗体とｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－デフェロキサミンとのコンジュゲートを行うと、ＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲートが生成する。
キレート剤用の例示的な溶媒には、ＤＭＳＯおよびＤＭＡが含まれる。後続のＵＦＤＦステップは膜を利用し、この膜は、コンジュゲートステップで使用される溶媒系に基づいて選択される。例えば、ＤＭＡは、ＰＥＳ膜を溶かすので、これら２つを同じ系で使用することはできない。
炭酸緩衝液は、長期保管中のコンジュゲートの安定性に関すると好ましくない。したがって、一旦、抗体－キレート剤コンジュゲートが形成されると、それらは、特に長期保管および安定性のために選択された緩衝液へとバッファー交換され得る。例示的な緩衝液には、クエン酸、酢酸、リン酸、アルギニンおよびヒスチジンの緩衝液が含まれる。さらなるＵＦＤＦステップを行って、残留塩を除去すること、および好適な濃度、賦形剤レベル、およびコンジュゲートされたモノクローナル抗体のｐＨを実現することができる。得られた抗体－キレート剤コンジュゲートは、その後の製剤化のため、滅菌ろ過して保管され得る。
ＩＩＩ．放射標識イムノコンジュゲートを使用する方法
ある種の態様では、本開示は、本開示の放射標識抗体コンジュゲートの使用の診断的および治療的方法を提供する。
一態様によれば、本開示は、組織中のＬＡＧ３を検出する方法であって、本明細書において提供されている放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを組織に投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む方法を提供する。ある種の実施形態では、組織は、細胞または細胞系を含む。ある種の実施形態では、組織は、対象に存在し、対象は哺乳動物である。ある種の実施形態では、対象は、ヒト対象である。ある種の実施形態では、対象は、がん、感染症および炎症性疾患からなる群から選択される疾患または障害を有する。一実施形態では、対象はがんを有する。ある種の実施形態では、感染症は、例えば、ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ細菌、ｂａｃｉｌｌｉ、ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉおよびｇｏｎｏｃｏｃｃｉ、ｐｒｏｔｅｕｓ、ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅおよびＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓによって引き起こされる細菌感染である。ある種の実施形態では、感染症は、例えば、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、ヘルペスウイルス（例えば、ＶＺＶ、ＨＳＶ－Ｉ、ＨＡＶ－６、ＨＳＶ－ＩＩ、ＣＭＶおよびエプスタインバールウイルス）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）、およびサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）によって引き起こされるウイルス感染である。ある種の実施形態では、感染症は、例えば、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｓｐｐ．、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．、Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉおよびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉによって引き起こされる寄生虫感染である。ある種の実施形態では、感染症は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒなど）、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓなど）、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｕｓなど）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓおよびＳｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉによって引き起こされる真菌感染である。
一態様によれば、本開示は、ＬＡＧ３を発現する組織をイメージングする方法であって、本開示の放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを組織に投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む方法を提供する。一実施形態では、組織は、腫瘍に含まれる。一実施形態では、組織は、腫瘍細胞培養物または腫瘍細胞系に含まれる。一実施形態では、組織は、対象における腫瘍病変に含まれる。一実施形態では、組織は、組織中の腫瘍内リンパ球である。一実施形態では、組織は、ＬＡＧ３発現細胞を含む。
一態様によれば、本開示は、療法への応答を測定するための方法であって、療法への応答が、炎症の測定により測定される、方法を提供する。本方法は、この態様によれば、それを必要とする対象に本明細書において提供される放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによってＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む。ある種の実施形態では、炎症は、対象における腫瘍中に存在する。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３発現の向上は、腫瘍における炎症の増大に相関する。ある種の実施形態では、炎症は、対象における感染組織に存在する。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３発現の低下は、感染組織における炎症の低下に相関する。
一態様によれば、本開示は、療法への応答を測定するための方法であって、療法への応答が、炎症の測定により測定される、方法を提供する。本方法は、この態様によれば、（ｉ）それを必要とする対象に本明細書において提供される放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによってＬＡＧ３発現を可視化するステップ、および（ｉｉ）療法の開始後に、１回または複数回、ステップ（ｉ）を繰り返すステップを含む。ある種の実施形態では、炎症は、対象における組織中に存在する。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３発現の向上は、組織における炎症の増大に相関する。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３発現の低下は、組織における炎症の低下に相関する。ある種の実施形態では、ステップ（ｉ）において可視化したＬＡＧ３発現は、ステップ（ｉｉ）において可視化したＬＡＧ３発現と比較される。
一態様によれば、本開示は、固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、本開示の放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによって腫瘍における投与された放射標識抗体コンジュゲートを局在化させるステップを含む、患者が、ＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に好適かどうかを判定するための方法であって、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、患者をＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に好適であると特定する方法を提供する。
一態様によれば、本開示は、固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、本開示の放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによって腫瘍における投与された放射標識抗体コンジュゲートを局在化させるステップを含む、ＬＡＧ３の阻害剤およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む抗腫瘍療法のための候補を特定する方法であって、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、患者をＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に好適であると特定する方法を提供する。一部の実施形態では、患者は、放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートをさらに投与されて、投与した放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートは、ＰＥＴイメージングによって腫瘍に局在化させ、この場合、腫瘍中の放射標識抗体コンジュゲートの存在により、患者をＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含む抗腫瘍療法に好適であると特定する。
固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、および腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであるかどうかを判定するステップを含む、患者の抗腫瘍療法に対する応答を予測するための方法であって、腫瘍が、ＬＡＧ３ポジティブである場合、患者の抗腫瘍療法への応答がポジティブであると予測する方法も本明細書において提供される。ある種の実施形態では、腫瘍は、本開示の放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを局在化させることにより、ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。
一部の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブおよびペムブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許公開ＵＳ２０１５－０２０３５８０に開示されているもの）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプト、またはＵＳ７，０８７，４１１に記載されている他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）などの「ＶＥＧＦ－トラップ」］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原への抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌、がんワクチン）、抗原提示を向上するアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体またはＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５などのサイトカインおよび抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）から選択される。
一部の実施形態では、抗腫瘍療法は、以下：ニボルマブ、イピリムマブ、ペムブロリズマブおよびそれらの組合せから選択される。
一態様によれば、本開示は、固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであるかどうかを判定するステップを含む、ＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に対する患者の応答を予測するための方法であって、腫瘍が、ＬＡＧ３ポジティブである場合、患者のポジティブ応答が予測される、方法を提供する。ある種の実施形態では、腫瘍は、本開示の放射標識抗体コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを局在化させることにより、ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。
一態様によれば、本開示は、固形腫瘍を有する患者を選択するステップ、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブおよびＰＤ－１ポジティブであるかどうかを判定するステップを含む、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤と組み合わせた、ＬＡＧ３の阻害剤を含む抗腫瘍療法に対する患者の応答を予測するための方法であって、腫瘍が、ＬＡＧ３ポジティブおよびＰＤ－１ポジティブである場合、患者のポジティブ応答が予測される、方法を提供する。ある種の実施形態では、腫瘍は、放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを局在化させることにより、ＬＡＧ３ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。ある種の実施形態では、腫瘍は、放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートをさらに投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートを局在化させることにより、ＰＤ－１ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＰＤ－１ポジティブであることが示される。
一態様によれば、本開示は、対象における、ＬＡＧ３ポジティブ腫瘍を検出するための方法を提供する。本方法は、本態様によれば、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、対象に本開示の放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびＰＥＴイメージングによって放射標識抗体コンジュゲートの局在化を判定するステップを含み、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。
一部の態様では、それを必要とする対象には、放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートが、約２０ｍｇまたはそれ未満の用量、約１５ｍｇまたはそれ未満の用量、約１０ｍｇまたはそれ未満の用量、例えば、２ｍｇまたは５ｍｇまたは１０ｍｇの用量で投与される。
本明細書で使用する場合、表現「それを必要とする対象」は、がんの１つもしくは複数の症状または兆候を示しており、かつ／または固形腫瘍を含めたがんと診断を受け、これらの処置を必要とするヒトまたは非ヒト哺乳動物を意味する。多くの実施形態では、用語「対象」は、用語「患者」と互換的に使用され得る。例えば、ヒト対象は、原発性または転移性腫瘍、および／または以下に限定されないが、解明できない体重減少、全身の脱力感、持続性倦怠感、食欲不振、発熱、寝汗、骨痛、息切れ、腹部の腫れ、胸部痛／圧、脾臓の膨張、およびがん関連バイオマーカー（例えば、ＣＡ１２５）のレベルの向上を含めた、１つまたは複数の症状または兆候の診断を受け得る。この表現は、原発性または定着した腫瘍を有する対象を含む。具体的な実施形態では、この表現は、固形腫瘍、例えば、結腸がん、乳がん、肺がん、前立腺がん、皮膚がん、肝臓がん、骨がん、卵巣がん、子宮頚がん、膵臓がん、頭頸部がんおよび脳がんを有する、および／またはこれらの処置を必要とするヒト対象を含む。この用語は、原発性または転移性腫瘍（進行性悪性腫瘍）を有する対象を含む。ある種の実施形態では、表現「それを必要とする対象」は、以前の療法（例えば、抗がん剤による処置）に抵抗性もしくは不応性を示す、またはこれにより適切に制御されない固形腫瘍を有する患者を含む。例えば、この表現は、化学療法（例えば、カルボプラチンまたはドセタキセル）による処置などの、以前の療法の１つまたは複数の方針により処置された対象を含む。ある種の実施形態では、表現「それを必要とする対象」は、以前の療法の１つまたは複数の方針により処置されたが、後で再発または転移した、固形腫瘍を有する患者を含む。ある種の実施形態では、この用語は、以下に限定されないが、がん、関節リウマチ、アテローム性動脈硬化、歯周炎、花粉症、心臓疾患、冠動脈疾患、感染症、気管支炎、皮膚炎、髄膜炎、喘息、結核、潰瘍性大腸炎、クローン病、炎症性腸疾患、肝炎、静脈洞炎、乾癬、アレルギー、線維症、ループス、脈管炎（ｖａｓｉｃｕｌｉｔｉｓ）、強直性脊椎炎、グレーブス病、セリアック病、線維筋痛症および移植拒絶を含めた炎症性疾患または障害を有する対象を含む。
ある種の実施形態では、本開示の方法は、固形腫瘍を有する対象において使用される。用語「腫瘍」、「がん」および「悪性」は、本明細書において互換的に使用される。本明細書で使用する場合、用語「固形腫瘍」とは、嚢腫または液状エリアを通常、含まない、組織の異常塊を指す。固形腫瘍は、良性の（がんではない）または悪性腫瘍（がん）とすることができる。一部の実施形態では、腫瘍は転移性である。本開示の目的のため、用語「固形腫瘍」は、悪性固形腫瘍を意味する。この用語は、固形腫瘍、すなわち肉腫、癌腫およびリンパ腫を形成する、細胞タイプに命名される、様々なタイプの固形腫瘍を含む。ある種の実施形態では、用語「固形腫瘍」は、以下に限定されないが、結腸直腸がん、卵巣がん、前立腺がん、乳がん、脳がん、子宮頚がん、膀胱がん、肛門がん、子宮がん、結腸がん、肝臓がん、黒色腫、転移性黒色腫、膵臓がん、肺がん、子宮内膜がん、骨がん、精巣がん、皮膚がん、腎臓がん、胃がん、食道がん、頭頸部がん、唾液腺がんおよび骨髄腫を含めたがんを含む。
一部の実施形態では、本明細書において開示されている方法は、がんを有する対象、例えば血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頸部の扁平上皮癌、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫および黒色腫を有する対象に使用され得る。一部の態様では、がんは、転移性、例えば転移性黒色腫である。
一態様によれば、本開示は、対象における、腫瘍を処置する方法を提供する。本方法は、この態様によれば、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることを判定するステップ、ＬＡＧ３の阻害剤の１つまたは複数の用量を投与するステップを含む。ある種の実施形態では、腫瘍は、対象に本開示の放射標識抗体コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを可視化することによりＬＡＧ３ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。
さらなる態様では、処置の方法は、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプト、またはＵＳ７，０８７，４１１に記載されている他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）などの「ＶＥＧＦ－トラップ」］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原への抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌、がんワクチン）、抗原提示を向上するアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体またはＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５などのサイトカイン、抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）、抗炎症性薬物（例えば、コルチコステロイドおよび非ステロイド系抗炎症薬）、抗酸化剤などの栄養補助食品、またはがんを処置するための任意の他の療法ケアと組み合わせて、１つまたは複数の用量のＬＡＧ３の阻害剤を投与するステップを含む。ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、樹状細胞ワクチン、腫瘍溶解性ウイルス、腫瘍細胞ワクチンなどを含めたがんワクチンと組み合わせて使用し、抗腫瘍応答を増大させることができる。ＬＡＧ３の阻害剤と組み合わせて使用することができるがんワクチンの例は、黒色腫および膀胱がんのＭＡＧＥ３ワクチン、乳がんのＭＵＣ１ワクチン、脳がん（多形神経膠芽細胞腫を含む）のＥＧＦＲｖ３（例えば、リンドペピムト）、またはＡＬＶＡＣ－ＣＥＡ（ＣＥＡ＋がんの場合）を含む。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、長期間の持続性抗腫瘍応答を発生する、かつ／またはがんを有する患者の生存率を高める方法において、放射線療法と組み合わせて使用することができる。一部の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤、例えば抗ＬＡＧ３抗体は、がん患者への放射線療法を行う前、これと同時にまたはこの後に、投与され得る。例えば、放射線療法は、腫瘍病変に１つまたは複数の用量で行われ、次いで、１つまたは複数の用量の抗ＬＡＧ３抗体が投与され得る。一部の実施形態では、放射線療法は、腫瘍病変に局所的に行われ、患者の腫瘍の局所免疫原性（アジュバント作用性放射線照射（ａｄｊｕｖｉｎａｔｉｎｇ ｒａｄｉａｔｉｏｎ））を増強する、かつ／または腫瘍細胞を死滅させ（破壊的照射）、次いで抗ＬＡＧ３抗体を全身投与することができる。例えば、頭蓋内放射線照射を、脳がん（例えば、多形神経膠芽細胞腫）を有する患者に、抗ＬＡＧ３抗体の全身投与と組み合わせて投与することができる。ある種の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、放射線療法、および化学療法薬（例えばテモゾロミド）、またはＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、アフリベルセプト）と組み合わせて投与することができる。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、１つまたは複数の抗ウイルス薬と組み合わせて投与され、例えば、ＬＣＭＶ、ＨＩＶ、ＨＰＶ、ＨＢＶまたはＨＣＶによって引き起こされるウイルス感染を処置することができる。抗ウイルス薬の例には、以下に限定されないが、ジドブジン、ラミブジン、アバカビル、リバビリン、ロピナビル、エファビレンズ、コビシスタット、テノホビル、リルピビリンおよびコルチコステロイドが含まれる。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａｌ細菌、ｂａｃｉｌｌｉ、ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ、ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｉおよびｇｏｎｏｃｏｃｃｉ、ｐｒｏｔｅｕｓ、ｐｎｅｕｍｏｎｏｃｏｃｃｉ、ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ、ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ、ｓｅｒｒａｔｉａ、Ｂｏｒｒｉｅｌｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ ａｎｔｈｒｉｃｉｓ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌｅｐｒｏｍａｔｏｓｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏ ｃｈｏｌｅｒａｅおよびＹｅｒｓｉｎｉａ ｐｅｓｔｉｓによって引き起こされる細菌感染を処置するための１種または複数の抗細菌薬と組み合わせて投与され得る。抗細菌薬物の例には、以下に限定されないが、ペニシリン、テトラサイクリン、セファロスポリン、キノロン、リンコマイシン、マクロライド、ケトライド、スルホンアミド、グリコペプチド、アミノグリコシドおよびカルバペネムが含まれる。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ（ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、ｎｉｇｅｒなど）、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ（ａｌｂｉｃａｎｓ、ｋｒｕｓｅｉ、ｇｌａｂｒａｔａ、ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓなど）、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ、Ｇｅｎｕｓ Ｍｕｃｏｒａｌｅｓ（ｍｕｃｏｒ、ａｂｓｉｄｉａ、ｒｈｉｚｏｐｕｓなど）、Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓおよびＳｐｏｒｏｔｈｒｉｘ ｓｃｈｅｎｋｉｉによって引き起こされる真菌感染を処置するための１種または複数の抗真菌薬と組み合わせて投与され得る。抗真菌薬の例には、以下に限定されないが、アムホテリシンＢ、フルコナゾール、ボリコナゾール（ｖｏｒｉｘｏｎａｚｏｌｅ）、ポサコナゾール、イトラコナゾール、ボリコナゾール、アニデュラフンギン、カスポフンギン、ミカファンギンおよびフルシトシンが含まれる。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３の阻害剤は、例えば、Ｅｎｔａｍｏｅｂａ ｓｐｐ．、Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｓｐｐ．、Ｔｏｘｏｃａｒａ ｓｐｐ．、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｓｐｐ．、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｓｐｐ．、Ｔａｅｎｉａ ｓｏｌｉｕｍ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｉおよびＴｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉにより引きこされる寄生虫感染を処置するための、１種または複数の抗寄生虫薬と組み合わせて投与され得る。抗寄生虫薬の例には、以下に限定されないが、プラジカンテル、オキサムニクイン、メトロニダゾール、チニダゾール、ニタゾキサニド、デヒドロエメチンまたはクロロキン、ジロキサニドフルオエート、ヨードキノリン、クロロキン、パロモマイシン、パモ酸ピランテル、アルベンダゾール、ニフルチモクスおよびベンズニダゾールが含まれる。
追加の治療活性剤／構成成分は、ＬＡＧ３の阻害剤の投与前、これと同時に、またはこの後に投与され得る。本開示の目的のため、このような投与レジメンは、第２の治療的に活性な構成成分と「組み合わせた」、ＬＡＧ３阻害剤の投与と考えられる。
一部の態様では、処置する方法は、細菌感染、ウイルス感染、真菌感染または寄生虫感染を有する対象を選択するステップ、対象における罹患組織がＬＡＧ３ポジティブであると判定するステップ、および感染に適切な１つまたは複数の用量の治療剤を投与するステップを含む。ある種の実施形態では、罹患組織は、対象に本開示の放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって対象における放射標識抗体コンジュゲートを可視化することによりＬＡＧ３ポジティブと判定され、組織における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、組織がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。ある種の実施形態では、投与するステップおよび可視化するステップは、感染を処置する際に、治療剤の有効性をモニタリングするため、１回または複数回、行われる。
一部の態様では、処置方法は、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブおよびＰＤ－１ポジティブであると判定するステップ、ならびに１つもしくは複数の用量のＬＡＧ３の阻害剤、および／または１つもしくは複数の用量のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を投与するステップを含む。ある種の実施形態では、腫瘍は、対象に本開示の放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートを可視化することによりＬＡＧ３ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの存在により、腫瘍がＬＡＧ３ポジティブであることが示される。ある種の実施形態では、腫瘍は、対象に本開示の放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートを投与して、ＰＥＴイメージングによって腫瘍における放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートを可視化することによりＰＤ－１ポジティブと判定され、腫瘍における放射標識抗ＰＤ－１コンジュゲートの存在により、腫瘍がＰＤ－１ポジティブであることが示される。
例示的な抗ＰＤ－１抗体には、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブおよびペムブロリズマブが含まれる。
例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体には、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５およびＲＥＧＮ３５０４、ならびに特許公開ＵＳ２０１５－０２０３５８０に開示されているものが含まれる。
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤は、ＬＡＧ３の阻害剤の投与前、これと同時に、またはこの後に投与され得る。本開示の目的のため、このような投与レジメンは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤と「組み合わせた」、ＬＡＧ３阻害剤の投与と考えられる。
本明細書で使用する場合、用語「処置する」、「処置すること」などは、一時的または恒久的のどちらかで症状を軽減する、症状の原因を取り除く、腫瘍成長を遅延させるもしくは阻害する、腫瘍細胞荷重もしくは腫瘍負荷を軽減する、腫瘍退縮を促進する、腫瘍収縮、壊死および／もしくは消失を引き起こす、腫瘍再発を予防する、転移を予防または阻害する、転移性腫瘍成長を阻害する、および／または対象の生存期間を延ばすことを意味する。
一態様によれば、本開示は、抗腫瘍療法により処置される、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、本開示の放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを対象に投与するステップ、ＰＥＴイメージングにより腫瘍における投与された放射標識コンジュゲートの局在化をイメージングするステップ、および腫瘍成長を判定するステップを含む、対象において抗腫瘍療法の効力をモニタリングするための方法であって、放射標識されたシグナルのベースラインからの低下が、抗腫瘍療法の効力を示す、方法を提供する。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）をさらに含む。
ある種の実施形態では、本開示は、抗腫瘍療法により処置される、固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、本明細書に提供されている放射標識抗ＬＡＧ３コンジュゲートを対象に投与するステップ、およびＰＥＴイメージングにより腫瘍における投与された放射標識コンジュゲートの局在化をイメージングするステップを含む、腫瘍の炎症状態の変化をアセスメントする方法であって、放射標識されたシグナルにおけるベースラインからの向上が、炎症および抗腫瘍療法の効力の向上を示す方法を提供する。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤、および／またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体または抗ＰＤ－Ｌ１抗体）を含む。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＰＤ－１阻害剤（例えば、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブおよびペムブロリズマブ）、ＰＤ－Ｌ１阻害剤（例えば、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５およびＲＥＧＮ３５０４）、ＣＴＬＡ－４阻害剤（例えば、イピリムマブ）、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト（例えば、ＣＤ－２８、２Ｂ４、ＬＹ１０８、ＬＡＩＲ１、ＩＣＯＳ、ＣＤ１６０またはＶＩＳＴＡに対する抗体）、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト［例えば、アフリベルセプト、またはＵＳ７，０８７，４１１に記載されている他のＶＥＧＦ阻害性融合タンパク質、または抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合性断片（例えば、ベバシズマブまたはラニビズマブ）、またはＶＥＧＦ受容体の低分子キナーゼ阻害剤（例えば、スニチニブ、ソラフェニブまたはパゾパニブ）などの「ＶＥＧＦ－トラップ」］、Ａｎｇ２阻害剤（例えば、ネスバクマブ）、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤（例えば、エルロチニブ、セツキシマブ）、ＣＤ２０阻害剤（例えば、リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体）、腫瘍特異的抗原への抗体［例えば、ＣＡ９、ＣＡ１２５、黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ビメンチン、腫瘍－Ｍ２－ＰＫ、前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）、ムチン－１、ＭＡＲＴ－１およびＣＡ１９－９］、ワクチン（例えば、カルメット－ゲラン桿菌、がんワクチン）、抗原提示を向上するアジュバント（例えば、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子）、二重特異性抗体（例えば、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体またはＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体）、細胞毒、化学療法剤（例えば、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセルおよびビンクリスチン）、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤（例えば、サリルマブ）、ＩＬ－４Ｒ阻害剤（例えば、デュピルマブ）、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１およびＩＬ－１５などのサイトカインおよび抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）（例えば、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣおよび抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣ）を含む。
本明細書で使用する場合、腫瘍におけるＬＡＧ３の発現に関する用語「ベースライン」は、ある用量の抗腫瘍療法の投与前または投与時の、対象に対する放射標識コンジュゲートの取り込み量の数値を意味する。放射標識コンジュゲートの取り込み量は、当技術分野において公知の方法を使用して決定される（例えば、Ｏｏｓｔｉｎｇら ２０１５年、Ｊ． Ｎｕｃｌ． Ｍｅｄ． ５６巻：６３～６９頁を参照されたい）。ある種の実施形態では、抗腫瘍療法は、ＬＡＧ３の阻害剤を含む。
一部の実施形態では、連続的なｉＰＥＴ走査および腫瘍生検は、標準のケア免疫療法による処置前および処置後に行われる。このような免疫療法は、以下：ニボルマブ、イピリムマブ、ペムブロリズマブおよびそれらの組合せから選択され得る。
抗腫瘍療法に効力があるかどうか判断するために、ベースライン時、およびＬＡＧ３阻害剤の投与後の１つまたは複数の時点に、放射標識コンジュゲートの取り込み量を定量する。例えば、投与される放射標識抗体コンジュゲート（例えば、放射標識抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲート）の取り込み量は、ＬＡＧ３阻害剤（例えば、抗ＬＡＧ３抗体）による最初の処置後の、２日目、３日目、４日目、５日目、６日目、７日目、８日目、９日目、１０日目、１１日目、１２日目、１４日目、１５日目、２２日目、２５日目、２９日目、３６日目、４３日目、５０日目、５７日目、６４日目、７１日目、８５日目、または１週目、２週目、３週目、４週目、５週目、６週目、７週目、８週目、９週目、１０週目、１１週目、１２週目、１３週目、１４週目、１５週目、１６週目、１７週目、１８週目、１９週目、２０週目、２１週目、２２週目、２３週目、２４週目またはこれより長い後の終わりに測定され得る。処置の開始後の特定の時点における取り込み量の値と、ベースライン時の取り込み量の値との間の差異を使用して、抗腫瘍療法が有効であるかどうかを確立する（腫瘍退縮または進行）。
ある種の実施形態では、放射標識抗体コンジュゲートは、対象に静脈内または皮下に投与される。ある種の実施形態では、放射標識抗体コンジュゲートは、腫瘍内に投与される。投与時に、放射標識抗体コンジュゲートは、腫瘍に局在化する。局在化した放射標識抗体コンジュゲートは、ＰＥＴイメージングによってイメージングされ、腫瘍による放射標識抗体コンジュゲートの取り込み量は、当技術分野において公知の方法により測定される。ある種の実施形態では、イメージングは、放射標識コンジュゲートを投与して、１、２、３、４、５、６または７日後に行われる。ある種の実施形態では、イメージングは、放射標識抗体コンジュゲートの投与時と同じ日に行われる。
ある種の実施形態では、抗体またはその抗原結合性断片は、ＬＡＧ３に特異的に結合する。ある種の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、ＨＣＶＲのＣＤＲ（ＨＣＶＲは、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）、およびＬＣＶＲのＣＤＲ（ＬＣＶＲは、配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する）を含む。
ある種の実施形態では、ＬＡＧ３阻害剤は、ＬＡＧ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む。ある種の実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体はＢＭＳ９８６０１６である。ある種の他の実施形態では、ＬＡＧ３阻害剤は、ＬＡＧ３に特異的に結合する抗体またはその抗原結合性断片を含む。一実施形態では、抗ＬＡＧ３抗体は、配列番号４１８のＨＣＶＲおよび配列番号４２６のＬＣＶＲを含む。
ＩＶ．
本開示のある種の実施形態は、以下の非限定実施例により例示される。
（実施例１）
ＬＡＧ３に対するヒト抗体の生成
ＬＡＧ３に対するヒト抗体は、マウスＦｃ領域に遺伝的に融合されたＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００２２７７．４のほぼアミノ酸２９～４５０（配列番号５８２）までの範囲となるＬＡＧ３の断片を使用して生成した。ＵＳ８，５０２，０１８Ｂ２に記載されている通り、免疫原を、免疫応答を刺激するアジュバントと共に、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウス（すなわち、ヒト免疫グロブリン重鎖およびカッパ軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡを含む、操作されたマウス）に直接投与するか、またはＷＯ２０１３０２２７８２に記載されている通り、ヒト化ユニバーサル軽鎖（ＵＬＣ）ＶｅｌｏｃＩｍｍｕｎｅ（登録商標）マウスに直接投与した。抗体の免疫応答を、ＬＡＧ３特異的免疫アッセイによってモニタリングした。所望の免疫応答に到達すると、脾臓細胞を収穫し、マウス骨髄腫細胞と融合して、その生存率を保って、ハイブリドーマ細胞系を形成した。このハイブリドーマ細胞系をスクリーニングして選別し、ＬＡＧ３特異的抗体を産生する細胞系を特定した。この技法、および上記の免役原を使用して、いくつかの抗ＬＡＧ３キメラ抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびマウス定常ドメインを有する抗体）を得た。抗体の完全ヒト型は、マウス定常領域をヒト定常領域に置き換えることにより作製され得る。この方法で、ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスから生成した例示的な抗体を、Ｈ１Ｍ１４９８５Ｎ、Ｈ１Ｍ１４９８７Ｎ、Ｈ２Ｍ１４８１１Ｎ、Ｈ２Ｍ１４８８５Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９２６Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９２７Ｎ、Ｈ２Ｍ１４９３１Ｎ、Ｈ２Ｍ１８３３６Ｎ、Ｈ２Ｍ１８３３７ＮおよびＨ４Ｈ１４８１３Ｎと表した。
その全体が参照により本明細書に具体的に組み込まれている米国特許第７，５８２，２９８号に記載されている通り、抗ＬＡＧ３抗体は、骨髄腫細胞への融合なしに、抗原ポジティブＢ細胞（免疫付与マウスのいずれかに由来）からも直接、単離した。この方法を使用して、いくつかの抗ＬＡＧ３抗体（すなわち、ヒト可変ドメインおよびヒト定常ドメインを有する抗体）を得た。この方法で生成する例示的な抗体を、以下の通り表した：Ｈ４Ｈ１５４７７Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８３Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４８４Ｐ、Ｈ４Ｈ１５４９１Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２３Ｐ、Ｈ４Ｈ１７８２６Ｐ２、Ｈ４Ｈ１７８２８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４６０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６３Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６４Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６６Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４６７Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７５Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４７９Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８０Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４８８Ｐ、Ｈ４ｓＨ１５４９６Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５０５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５１８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５２３Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５３０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５６７Ｐ２、およびＨ４Ｈ１７８１９Ｐ。
例示的な抗体Ｈ４ｓＨ１５４９６Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５４９８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５０５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５１８Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５２３Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５３０Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５５Ｐ２、Ｈ４ｓＨ１５５５８Ｐ２およびＨ４ｓＨ１５５６７Ｐ２は、ＵＬＣ ＶＥＬＯＣＩＭＭＵＮＥ（登録商標）マウスに由来するＢ細胞から生成した。
この実施例の方法に準拠して生成した例示的な抗体の生物学的特性は、以下に記載されている実施例に詳細に記載されている。
（実施例２）
抗ＬＡＧ３抗体Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐのｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－ＤＦＯとのコンジュゲート
親となる抗ＬＡＧ３抗体、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ（配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲ配列対を有する；本明細書のこれ以降、ｍＡｂ１と称する）および放射標識による免疫ＰＥＴ検討に好適なアイソタイプ対照抗体を改変するため、この抗体にキレート剤であるｐ－ＳＣＮ－ｂｎ－デフェロキサミン（ＤＦＯ；Ｍａｃｒｏｃｙｌｉｃｓ、カタログ番号：Ｂ－７０５）を結合した。
改変に関すると、ｍＡｂ１をまず、４℃で一晩の透析によって、ヒスチジン緩衝液からＰＢＳ（ｐＨ７．２）にバッファー交換し（Ｓｌｉｄｅ－Ａ－Ｌｙｚｅｒ透析カセットＧ２ １０ｋ ＭＷＣＯ；ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）、次に、ＰＤ－１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号：１７－０８５１－０１）を使用して、５０ｍＭ炭酸緩衝液、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ９．０（コンジュゲート用緩衝液）からなる緩衝液に、再度、バッファー交換した。緩衝液の交換後の濃度を決定するため、この試料をＭａｃＶｅｃｔｏｒ配列に基づく２２３４００Ｍ－１ｃｍ－１の吸光係数および分子量１４５７０９ｇ／ｍｏｌを使用して、Ｎａｎｏｄｒｏｐ２０００ＵＶ／ＶＩＳ分光計（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で測定した（表２を参照されたい）。１５ｍＬのポリプロピレン製管中で、５３７４．８ｕＬのコンジュゲート用緩衝液に、１４８５．２４ｕＬのｍＡｂ１（７０ｍｇ）を加えた。ｍＡｂ１溶液に、ＤＦＯのＤＭＳＯ溶液１３９μＬを４分の１刻みで加え、各回に、ピペットを上下に操作することにより優しく混合した。最終溶液は、コンジュゲート用緩衝液中の１０ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ１（２％ＤＭＳＯ）となり、モル対モルで３倍過剰のＤＦＯを含んだ。さらに攪拌しないで、この溶液を３７℃の水浴中でインキュベートした。
３７℃で３０分後、この溶液を、ｐＨ５．４の２５０ｍＭのＮａＡｃＯを含有する緩衝液（製剤緩衝液）により予め平衡化したＰＤ－１０脱塩カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号：１７－０８５１－０１）に速やかに通した。この溶液の体積を、１０Ｋ ＭＷＣＯ濃縮器（Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ－１５Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｌ Ｆｉｌｔｅｒ Ｕｎｉｔ、ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号：ＵＦＣ９０１０２４）を用いて、約５０％低下させた。最終溶液をシリンジフィルター（Ａｃｒｏｄｉｓｃ１３ｍｍのシリンジフィルター、Ｐａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、カタログ番号：４６０２）によって滅菌ろ過した。続いて、濃度、およびＤＦＯと抗体との比（ＤＡＲ）をＵＶ／ＶＩＳ分光法によって測定した。図１を参照されたい。吸光度測定に関しては、２５２ｎｍ（Ａ２５２）、２８０ｎｍ（Ａ２８０）および６００ｎｍ（Ａ６００）で、ＤＦＯ－コンジュゲート抗体を製剤緩衝液に対して測定した。算出に関しては、以下の式：
Figure 0007167041000008
 を使用して、各吸光度値におけるバックグラウンドを補正した。
２５ｕｇの試料をＳｕｐｅｒｄｅｘ２００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－５１７５－０１）に注入して、ＳＥＣクロマトグラフィーを使用して凝集に関してこの抗体コンジュゲートを試験し、ＰＢＳ移動相（０．７５ｍＬ／分）を用いて、２８０ｎｍでモニタリングした。図２を参照されたい。抗体完全性は、２ｕｇの試料をロードして、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ４～２０％Ｔｒｉｓ／Ｇｌｙプレキャストゲル（Ｎｏｖｅｘ）によって評価した。抗体濃度、コンジュゲート濃度およびＤＡＲは、以下の式を使用して算出した：
抗体濃度の算出
Figure 0007167041000009
 コンジュゲート濃度の算出
Figure 0007167041000010
 ＤＡＲ算出
Figure 0007167041000011
Figure 0007167041000012
Figure 0007167041000013
 （実施例３）
ＤＦＯコンジュゲートモノクローナル抗体の８９Ｚｒキレート形成
免疫ＰＥＴ ｉｎ ｖｉｖｏ検討に使用するため、ＤＦＯ－コンジュゲート抗ＬＡＧ３抗体、ｍＡｂ１およびＤＦＯ－コンジュゲートアイソタイプ対照抗体に、８９Ｚｒを放射標識した。
ＤＦＯ－コンジュゲート抗体をまず、１Ｍ ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．２）中の１．２５ｍｇ／ｍＬにした。各検討用のＤＦＯ－Ａｂコンジュゲート溶液の組成を表４に列挙する。個別に、表５に示されているそれぞれ対応する検討用の組成を使用して、８９Ｚｒ溶液を調製した。８９Ｚｒ－シュウ酸保存溶液を３Ｄイメージングから得た。この溶液の最終放射活性は、まず、Ｃａｐｉｎｔｅｃ ＣＲＣ－２５Ｒ用量校正器（Ｃａｐｉｎｔｅｃ＃５２０）を使用して確認し、次に、ＤＦＯ－Ａｂコンジュゲート溶液と直ちに混合して穏やかに混合し（ピペットを上下に操作）、続いて、室温で４５分間、インキュベートした。
インキュベート後、この混合物を、重量供給方式の脱塩のために、ｐＨ５．４の２５０ｍＭ酢酸ナトリウムで予め平衡化した、検討１のためのＰＤ－１０（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号：１７－０８５１－０１）、または検討２のためのＮＡＰ－５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、カタログ番号１７－０８５３－０２）のどちらか一方の脱塩カラムに移送した。検討１の場合、この反応混合物をＰＤ－１０カラムに加えた。反応の内容物がカラム床に入った後、流れ出たものを廃棄した。生成物をｐＨ５．４の２５０ｍＭ酢酸ナトリウム（製剤緩衝液）で溶出し、溶離液を製造業者の指示書に従い採集した。検討２の場合、この混合物をＮＡＰ－５カラムに移し、流れ出たものを廃棄した。生成物をｐＨ５．４の２５０ｍＭ酢酸ナトリウム（製剤緩衝液）で溶出し、溶離液を製造業者の指示書に従い採集した。続いて、Ａｂ濃度をＵＶ／ＶＩＳ分光計により測定し、２８０ｎｍにおける適切な吸光係数および吸光度（ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ）を使用して、以下の式：
濃度（ｍｇ／ｍＬ）＝２８０ｎｍにおける吸光度÷２８０ｎｍの吸光係数（表６に見られる）を使用して算出した。
グラムで測定した最終質量を表７に記録した。次に、用量校正器を使用して放射活性を測定し、表７に報告した。０．７５ｍＬ／分の流速のＰＢＳ移動相を用いて、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００Ｉｎｃｒｅａｓｅカラムを使用し、直列に接続したＵＶ２８０および放射性同位体検出器を備えるＳＥＣ－ＨＰＬＣ（Ｌａｂｌｏｇｉｃ Ｒａｄｉｏ－ＴＬＣ／ＨＰＬＣ検出器ＳＣＡＮ－ＲＡＭを備えるＡｇｉｌｅｎｔ１２６０）を使用して、最終物質（５ｕｇ）を解析した。総タンパク質ピーク（約１０～１６分間）の合計と非標識８９Ｚｒピーク（約２５分間）の積分値とを比較することによって、放射化学的純度（１００％－非標識８９Ｚｒの割合）を決定するために放射トレースを使用した。高分子量（ＨＭＷ）化学種ピーク（１０分～約１５分）とモノマー（約１６分）の積分値とを比較することにより、ＵＶ２８０トレースによってモノマー純度（％）を決定した。
各放射標識コンジュゲートの比放射能およびタンパク質回収率（％）を、以下の式を使用して決定した：
ａ．コンジュゲートの質量（ｍｇ）＝濃度（ｍｇ／ｍＬ）×溶液の質量（グラム）
ｂ．比放射能（ｍＣｉ／ｍｇ）＝バイアルの活性（ｍＣｉ）÷コンジュゲートの質量（ｍｇ）
ｃ．タンパク質の回収率＝始めのコンジュゲート質量（ｍｇ）÷コンジュゲートの質量（ｍｇ）
最後に、外観を書き留め、表７に記録した。これらの結果が表７にまとめられている。図３～５に示されている放射ＳＥＣ－ＨＰＬＣクロマトグラムにより、少なくとも９８％の放射化学的純度であることが確認される。図６～８に示されているＵＶ２８０－ＨＰＬＣ ＳＥＣのクロマトグラムにより、モノマーが多い生成物（＞９０％）であることが確認される。
Figure 0007167041000014
Figure 0007167041000015
Figure 0007167041000016
Figure 0007167041000017
 （実施例４）
免疫反応性
放射標識抗ＬＡＧ３抗体およびアイソタイプ対照抗体の免疫反応性（ＩＲ）を以下の通り測定した。これらのアッセイでは、２０ｎｇのそれぞれの８９Ｚｒ標識抗体を、最終体積１ｍＬで、１５ｘ１０６個のＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰ－ｍＬＡＧ３－／－ｈＬＡＧ３Ｔｇ細胞に加えた。連続混合しながら、試料を４５分間（３７℃、５％ＣＯ２）、インキュベートした後、培地で２回、洗浄して、いかなる未結合抗体も除去した。次に、試験細胞のペレットの放射活性を、同じ２０ｎｇの８９Ｚｒ標識抗体を含有する２つの参照標準品に対して、自動ガンマ計数器（２４７０Ｗｉｚａｒｄ２、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で計数した。これらの試料に関する免疫反応性の百分率は、全活性の尺度として、標準品の平均値を使用して決定した。
表８で見られる通り、８９Ｚｒ標識抗ＬＡＧ３抗体は、コンジュゲートおよび放射標識後に免疫反応性を保持し、８６％ＩＲであった。
Figure 0007167041000018
 （実施例５）
マウスにおけるＬＡＧ３ポジティブ腫瘍への放射標識抗ＬＡＧ３抗体の選択的局在化
腫瘍の埋め込みおよび投与群の割り当て：
ｉｎ ｖｉｖｏでのイメージング検討のため、ＬＡＧ３ポジティブ腫瘍系を使用した。最初に、マウス結腸癌細胞系であるＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰ－ｍＬＡＧ３－／－ｈＬＡＧ３Ｔｇを使用した。ここで、細胞は、レンチウイルス形質導入によって導入（それぞれ、ｐＬＶＸ ＥＦ１ａおよびｐＬＫＯ ＳＳＦＶ）したｅＧＦＰを融合したヒトＬＡＧ３および完全長ニワトリオボアルブミンを過剰発現する。ＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰ－ｍＬＡＧ３－／－ｈＬＡＧ３Ｔｇ腫瘍同種移植片の場合、１ｘ１０６個の細胞を雄ＮＣｒヌード（Ｔａｃｏｎｉｃ、Ｈｕｄｓｏｎ ＮＹ）の左脇腹の皮下に埋め込んだ。一旦、腫瘍が１００～１５０ｍｍ３の平均体積に到達すると（埋め込み後、約７日）、マウスを無作為に５つの群に分け、試験８９Ｚｒ放射標識抗体または対照８９Ｚｒ放射標識抗体を投与した。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与および生体内分布：
ＭＣ３８／ｏｖａ／ＬＡＧ３腫瘍を有するヌードマウスでの初期検討に関して、マウスに、約０．６ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量を含む、５０±１μＣｉの８９Ｚｒ標識抗体を投与した。生体内分布検討に関すると、マウスを投与の６日後に安楽死させて、心穿刺により血液を採集した。次に、腫瘍および正常組織を摘出し、計数管に入れた。次に、自動ガンマ計数器（Ｗｉｚａｒｄ２４７０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で試料を測定することにより、ＣＰＭ中の８９Ｚｒの計数データを採集した。組織もすべて秤量し、注入物質から調製した標準品を使用して、各試料について１グラムあたりの注入用量（％）（％ＩＤ／ｇ）を算出した。
結果、要約および結論：
この実施例では、ＭＣ３８／ｏｖａ／ｈＬＡＧ３腫瘍を有するＮＣｒマウスに、５０μＣｉ／マウスの最終用量で、８９Ｚｒコンジュゲート抗ＬＡＧ３ ｍＡｂ１または非結合抗体を投与した。続いて、血液、腫瘍および組織を採取するまでマウスを６日間、放置し、全試料について、試料の％ＩＤ／ｇを算出した。各抗体の平均％ＩＤ／ｇを表９に示す。ここから、ＭＣ３８／ｏｖａ／ｈＬＡＧ３腫瘍中において、明確な取り込み率の高さが他の正常組織よりも明白であり、４３．１％の腫瘍内取り込み率は、胸腺において観察された、２番目に高い６．６％ＩＤ／ｇという取り込み率よりも有意に高かった。腫瘍への抗ＬＡＧ３ ｍＡｂ１取り込みの特異性は、非結合抗体について観察された、著しく低い７．８％という腫瘍取り込み率の点で明白である。
Figure 0007167041000019
 （実施例６）
マウスにおけるＲａｊｉ／ＰＢＭＣ腫瘍への放射標識抗ＬＡＧ３抗体の選択的局在化
この実施例は、Ｒａｊｉ細胞およびヒトＰＢＭＣを共埋め込みしたＮＳＧマウスにおける、ジルコニウム－８９標識ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートのｉｎ ｖｉｖｏでのイメージングおよびｅｘ ｖｉｖｏでの生体内分布を記載する。
この実施例に使用した例示的な抗体は、配列番号４１８／４２６のＨＣＶＲ／ＬＣＶＲを含む、ＭＡｂ１であった。
腫瘍の埋め込みおよび投与群の割り当て：
ＬＡＧ３標的化に対する放射標識抗体の特異性を実証するため、２×１０６個のＲａｊｉ細胞および５×１０５個のヒトＰＢＭＣ（ロット０１５１０２９、ＲｅａｃｈＢｉｏ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｓ）を、雌ＮＳＧマウス（８～１０週齢、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ）の右脇腹に共埋め込みした。腫瘍埋め込み後の１４日目に、マウスを４つの群に無作為化し、様々なタンパク質用量の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を静脈内に注入した。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与およびＰＥＴ／ＣＴイメージング
Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍を有するマウスに、腫瘍埋め込み後の１４日目に、５、０．３、０．１または０．０３ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を注入した。０．１および０．０３ｍｇ／ｋｇ用量の投与を受けたマウスに、それぞれ、約３０または約９μＣｉの放射標識８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を投与した。５または０．３ｍｇ／ｋｇのタンパク質用量の投与を受けたマウスに、約３０μＣｉの放射標識８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１、および最終的に注入した総タンパク質の用量とするための補給物として、追加の非ＤＦＯコンジュゲートｍＡｂ１（Ｌ５）を投与した。
抗体局在化のＰＥＴイメージングは、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１を投与して６日目にアセスメントした。Ｓｏｆｉｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｇ８ ＰＥＴ／ＣＴを使用して、ＰＥＴ／ＣＴ画像（Ｓｏｆｉｅ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓおよびＰｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を得た。この機器は、画像を取得する前に、８９Ｚｒを検出するよう予め校正した。エネルギーウィンドウは、視野の中央において１．４ｍｍの再構築分解能で、１５０～６５０ｋｅＶの範囲とした。イソフルランを使用してマウスに誘導麻酔を施し、イメージング中、イソフルランの連続流下に維持した。Ｇ８アクイジションソフトウェアを使用して、１０分間の静止画像を取得し、続いて、予め構成した設定を使用して再構築した。画像データは、減衰および他のパラメータに関して補正した。ＰＥＴ取得後にＣＴ画像を得て、続いてＰＥＴ画像と一緒に登録した。画像は、ＶｉｖｏＱｕａｎｔ後処理ソフトウェア（ｉｎｖｉＣＲＯ Ｉｍａｇｉｎｇ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ）を使用して調製した。
８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の生体内分布：
生体内分布検討に関しては、最後の時点にマウスを安楽死させて（８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の投与後６日目）、心穿刺により血液を採集した。次に、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍および正常組織を摘出し、計数管に入れて秤量した。次に、自動ガンマ計数器（Ｗｉｚａｒｄ ２４７０、Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）で試料を測定することにより、ＣＰＭ中の８９Ｚｒの計数データを採集した。注入物質から調製した標準品を使用して、各試料について１グラムあたりの注入用量（％ ＩＤ／ｇ）を算出した。
結果、要約および結論：
この検討は、ＮＳＧマウスにおいて成長した皮下のＲａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍中のヒトリンパ球上で発現したＬＡＧ３への８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の抗原特異的標的化を実証する。Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍において、５ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１の遮断用量は、０．３、０．１および０．０３ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１という一層少ない用量と比較して、血液への取り込み率（％ＩＤ／ｇ）が向上し、腫瘍への取り込み率（％ＩＤ／ｇ）は低下することが示された（表１０）。さらに、タンパク質用量が低下するにつれて、平均の腫瘍対血液の比が向上し、ｉｎ ｖｉｖｏでは、Ｌａｇ－３に特異的となることが実証された（表１０）。０．３、０．１および０．０３ｍｇ／ｋｇの８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１という一層少ない用量でも、Ｒａｊｉ／ｈＰＢＭＣ腫瘍中で発現したＬａｇ－３を標的とすることに加えて、腫瘍を有するマウスの脾臓および腋窩リンパ節を標的とすることが実証された。８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１投与後の６日目の代表的なＰＥＴ画像（図９）により、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－ｍＡｂ１は、５ｍｇ／ｋｇの場合と比べて、０．０３ｍｇ／ｋｇで、腫瘍、脾臓および腋窩リンパ節を一層高度に標的とすることが実証される。
Figure 0007167041000020
 （実施例７）
Ｒａｊｉ／ＰＢＭＣ異種移植片および臨床試料におけるＬＡＧ３のＬＣ－ＰＲＭ－ＭＳ定量
凍結組織試料（Ｒａｊｉ／ＰＢＭＣ腫瘍、マウス脾臓および黒色腫組織；黒色腫組織源および特徴に関しては図１２を参照されたい）を溶解緩衝液（１％ＲａｐｉＧｅｓｔを含む５０ｍＭ ＮＨ４ＨＣＯ３中の８Ｍウレア）で溶解した。組織を小片に切り、強固に装着したダウンス型ホモジナイザー中で１ｍＬの溶解緩衝液を用いてホモジナイズした。溶解物を、１０分ごとに３０秒間、音波照射しながら、氷上で３０分間、インキュベートし、タンパク質抽出を完全にした。この溶解物を１０分間、１４，０００ｇで遠心分離した。タンパク質濃度をＢＣＡアッセイによって測定した。各試料を１ｍｇ／ｍＬに希釈し、次に、１０分間、１４，０００ｇで遠心分離し、一定分量中で、－８０℃で保管した。
埋め込みしていないＮＳＧマウスの脾臓溶解物をサロゲートマトリックスとして使用し、ＬＡＧ３定量用の標準曲線を生成した。ＬＡＧ３のＦｃを、０．３９～５０ｎｇ／ｍｇタンパク質（１：２の段階希釈）の範囲の最終濃度で、マウス脾臓溶解物１００μｇのそれぞれにスパイクした。標準品、異種移植片および臨床黒色腫溶解物を冷アセトン９００μＬ中で一晩、沈殿させて、次に、３７℃で１時間、８Ｍウレア／ＴＣＥＰ緩衝液９０μＬ中で変性させた。重標識ヒトＬＡＧ３ペプチド（ＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲ１３Ｃ６１５Ｎ４）を内部標準としてすべての試料に加えた。標準品および試験試料を室温で３０分間、ＩＡＡによりアルキル化し、３７℃で、ｌｙｓ－Ｃ（１：１００ｗ／ｗ）により４時間、次にトリプシン（１：２０ｗ／ｗ）により一晩、消化させた。試料を１０％ＦＡによりクエンチし、最終体積１００μＬに到達させた。
処理した試料（２μＬ）をそれぞれ、予め平衡化したナノＣ１８トラップカラムに注入し、簡易型（ｅａｓｙ）ナノＣ１８分離カラムにより分離した。流速は、２５０ｎＬ／分間（移動相Ａ：水：ギ酸／１００：０．１［Ｖ：Ｖ］および移動相Ｂ：アセトニトリル：ギ酸／１００：０．１［Ｖ：Ｖ］）とした。保持時間およびピーク面積は、Ｓｋｙｌｉｎｅソフトウェアを使用して決定した。ＬＡＧ３．Ｆｃ参照標準（ｈＬＡＧ３のトリプシン消化により生成した、非標識ＬＡＧ３ペプチドＦＶＷＳＳＬＤＴＰＳＱＲ１２Ｃ６ １４Ｎ４）のピーク面積比を内部標準（安定な同位体標識ＬＡＧ３ペプチド）に対してプロットすることにより較正曲線を生成した。各試料中のＬＡＧ３の濃度は、線形回帰を使用して算出した。ＬＡＧ３参照標準の最低濃度（０．３９ｎｇ／ｍｇタンパク質）は、アッセイのダイナミックレンジ内にあり、このアッセイの定量下限値として規定した。
結果、要約および結論：
２７日目からＰＢＭＣ／Ｒａｊｉ異種移植片のうちの４つからの組織試料、腫瘍埋め込み後１５日目から５つの異種移植片、および１０の黒色腫臨床試料に対して、ＬＡＧ３の定量を行った。組織重量、タンパク質量、抽出収率およびＬＡＧ３発現を表１１に列挙した。Ｂｍａｘは、１ｇ／ｍＬという腫瘍密度の推定値を使用して、以下の式に基づいて算出した。
Figure 0007167041000021
１０の黒色腫組織試料のうちの５つは、２．５２±１．８７ｎＭの平均発現レベルでＬＡＧ３ポジティブとして検出された。この発現レベルは、２７日目（３．７９±１．９３ｎＭ）および１５日目（６．０６±４．０４ｎＭ）におけるＲａｊｉ／ＰＢＭＣモデルに類似している。表１１および同様に図１０も参照されたい。
Figure 0007167041000022
 （実施例８）
ＲＥＧＮ２８１０（抗ヒトＰＤ－１Ａｂ）およびｍＡｂ１（抗ヒトＬＡＧ－３Ａｂ）での療法による腫瘍微小環境におけるＴ細胞上のヒトＬＡＧ－３およびＰＤ－１発現の上方調節
この実験は、Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎの独占所有権のあるＰＤ－１ｈｕ／ｈｕ／ＬＡＧ－３ｈｕ／ｈｕ二重ヒト化免疫コンピテントマウスを使用する、ＲＥＧＮ２８１０およびｍＡｂ１による処置時の、腫瘍微小環境におけるＴ細胞に対するヒトＬＡＧ－３およびＰＤ－１の発現レベルのモジュレートを評価するために行った。この実験に使用した腫瘍細胞系は、マウス結腸癌細胞系ＭＣ３８（Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、ＭＤ、Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｕｍｏｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＢｉｏｌｏｇｙのＮＣＩから取得）であり、これは、ｅＧＦＰを融合した完全長のニワトリオボアルブミンを発現するよう自家で操作した（したがって、ここでは、ＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰと呼ぶ）。ヒトＬＡＧ－３の発現レベルは、腫瘍を有する二重ヒト化マウスから抽出し、酵素により解離させた腫瘍に由来するＣＤ４とＣＤ８ Ｔ細胞の両方に対して、ｅｘ ｖｉｖｏで評価した。標準プロトコルに準拠し、抗体（抗ヒトＬＡＧ－３抗体：ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、クローン３ＤＳ２２３Ｈ；抗ヒトＰＤ－１抗体：ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、クローンＥＨ１２．２Ｈ７）に直接コンジュゲートした市販の蛍光色素を用いて、表面全体を染色した。手短に言えば、腫瘍細胞を一度、ＰＢＳにより洗浄し、氷冷染色用緩衝液で１回、洗浄し、市販の蛍光色素が直接コンジュゲートされている抗ヒトＰＤ－１または抗ヒトＬＡＧ－３抗体を用いて、暗所中、氷上で、染色用緩衝液中、３０分間、染色し、ここでもやはり２ｍｌのＰＢＳにより洗浄した。固定可能な色素ｅＦｌｕｏｒ５０６も、製造業者のプロトコル（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）に従い、含ませた。試料は、ＤＩＶＡ ｖ８を装備したＢＤ ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（商標）ＩＶＤ１０で取得した。データをＦｌｏｗＪｏ ｖ１０．０．６または後続バージョンによりさらに解析した。
結果、要約および結論：
表１２は、前臨床腫瘍設定における、治療投与レジメンの概略図を提示している。１×１０６個のＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰ細胞を、ＰＤ－１ｈｕ／ｈｕ／ＬＡＧ－３ｈｕ／ｈｕ二重ヒト化免疫コンピテントマウスの皮下に埋め込んだ。約１１日目に、マウスを約１００ｍｍ３の平均腫瘍体積で４つの群に無作為化し、表示した通りに処置を開始した。腫瘍試料を第２の用量後の３日目に採集した。
Figure 0007167041000023
表１３に示される通り、抗ヒトＰＤ－１（ＲＥＧＮ２８１０）と抗ヒトＬＡＧ－３（ｍＡｂ１）とを組み合わせると、二重ヒト化マウスでのＭＣ３８－ｃＯＶＡ／ｅＧＦＰ同系腫瘍モデルにおいて、腫瘍成長が有意に阻害された。腫瘍を有するマウス（約１００ｍｍ３の腫瘍サイズ）を、ｈＩｇＧ４アイソタイプ対照抗体、ＲＥＧＮ２８１０（抗ヒトＰＤ－１、ｈＩｇＧ４）、ｍＡｂ１（抗ヒトＬＡＧ－３、ｈＩｇＧ４ｓ）、およびＲＥＧＮ２８１０とｍＡｂ１との組合せにより、１週間に２回、２回の用量で処置し、腫瘍サイズをキャリパーにより測定した。腫瘍体積はＶ＝Ｌ×Ｗ２／２として算出した。対照群では、腫瘍サイズは、３００～８６９ｍｍ３の範囲であり、５４８ｍｍ３のメジアン値となった。ＲＥＧＮ２８１０処置群は、腫瘍サイズの縮小（１２１～７２１ｍｍ３で、４６６ｍｍ３のメジアン）を示したが、差異は、統計的有意性には到達しなかった。ｍＡｂ１処置群は、アイソタイプ対照群のいずれからとも差異を示さなかった（２０３～７２１ｍｍ３で、５９２ｍｍ３のメジアン）一方、組合せ処置は、腫瘍成長（１１３～６２１ｍｍ３、２８９ｍｍ３のメジアン、ｐ＜０．０１）を有意に遅延させた。
Figure 0007167041000024
図１１で分かる通り、ＲＥＧＮ２８１０抗ヒトＰＤ－１ＡｂおよびｍＡｂ１抗ヒトＬＡＧ－３はそれぞれ、腫瘍微小環境では、ＬＡＧ－３＋Ｔ細胞およびＰＤ－１＋Ｔ細胞を増大させた。個々のマウスからの腫瘍は、製造業者のプロトコルに準拠して、ＧｅｎｔａｌＭＡＣ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃｈ）によって分離した。試料をＡｂのパネルにより染色し、フローサイトメータによって解析した。提示されているデータは、ＦＳＣ／ＳＳＣ、生存率、シングレット、ＣＤ４５＋ＣＤ３＋細胞に関して予めゲート（ｇａｔｅ）し、次に、ＣＤ４またはＣＤ８ Ｔ細胞に対してさらにゲートした。異なる群間でヒトＬＡＧ－３およびヒトＰＤ－１の発現を評価した。ありうるＡｂの交差競合を排除するため、ＲＥＧＮ２８１０処置群および組合せ処置群をヒトＰＤ－１解析から除外した。同様に、ｍＡｂ１処置群および組合せ処置群もまた、ヒトＬＡＧ－３分析から除外した。２回の治療用量後、ＲＥＧＮ２８１０は、腫瘍微小環境において、ヒトＬＡＧ－３＋ＣＤ４ Ｔ細胞の出現度が約２４％（ｐ＝０．０００６）と有意に向上したが、試験した投与レジメンによるＣＤ８ Ｔ細胞上でのＬＡＧ－３発現の場合、直接的な調節役割を有するように思われた。興味深いことに、ｍＡｂ１は、腫瘍微小環境において、それぞれ、ヒトＰＤ－１＋ＣＤ４（ｐ＝０．００２６）およびＣＤ８ Ｔ細胞（ｐ＝０．０２４９）の出現度を約２８％とやはり向上させた。図１１を参照されたい。
ここで実施したこの検討からの結果は、８９Ｚｒにより標識した抗ＬＡＧ３抗体は、有意かつ特異的に腫瘍に局在化することができることを明確に実証している。ＬＡＧ３阻害剤で単独で、またはＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤を含めた、他の抗がん治療剤と組み合わせて、続けて処置した場合に、抗ＬＡＧ３抗体は、ＬＡＧ３ポジティブ腫瘍を有する患者の選択に使用されるというシナリオを想定することができる。
（実施例９）
ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを生成するためのスケールアップ製造法
この実施例は、ｐ－ＳＣＮ－ｂｎ－デフェロキサミン（ＤＦＯ）を本明細書に記載されている抗ＬＡＧ３抗体（ｍＡｂ、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐ）に結合させることにより、放射標識に好適な抗ＬＡＧ３抗体を調製するスケールアップ製造方法を詳述する：（１）ｍＡｂのコンジュゲート前に、限外ろ過およびダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）過程は、コンジュゲート過程を阻害する賦形剤を除去する、（２）ＵＦＤＦを事前コンジュゲートした後、ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－デフェロキサミンによるｍＡｂのコンジュゲートを行い、ＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲートを生成する、および（３）残留塩を除去するためのコンジュゲート後のＵＦＤＦにより、コンジュゲートモノクローナル抗体の好適な濃度、賦形剤レベルおよびｐＨを実現する。次に、得られたＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲートが、その後の製剤化のために、安定性の向上した緩衝化状態で提供される。
（１）事前コンジュゲート限外ろ過およびダイアフィルトレーション（ＵＦＤＦ）
Ｓｉｕｓ Ｐｒｏｓｔｒｅａｍ（ＴａｎｇｅｎＸ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）膜（≦５００ｇ／ｍ２の膜容量）を使用して、ｐＨ５．５０を有する５ｍＭの酢酸塩緩衝溶液に、１００ｇのｍＡｂをバッファー交換し、コンジュゲート前に残留塩を除去した。この過程の体積を減少させて、さらに抗体を濃縮し、次に、０．４５／０．２μｍ（不均一ＰＥＳ二重層）または等価な細孔サイズを有するＳａｒｔｏｐｏｒｅ２（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ）膜を使用して、この抗体を滅菌ろ過した。酢酸緩衝液の温度を２０±５℃の目標温度に維持した。この溶液を十分に混合した。
（２）コンジュゲート
濃縮してろ過した抗体（２０ｇ）をアミン不含炭酸緩衝液系（５６ｍＭ炭酸塩、１６７ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ９．４０）を含有するコンジュゲート用容器に移し、残留酢酸塩が無視できるレベルとなるようにした。ＤＦＯ（２５ｍＭ ｐ－ＳＣＮ－Ｂｎ－デフェロキサミン）をＤＭＳＯに溶解し、追加のＤＭＳＯと共にコンジュゲート用容器に加え、こうしてＤＭＳＯを５％の最終量で存在するようにした。ＤＦＯを、ＤＦＯとｍＡｂの比が４．５：１となる過剰モル数で加えた。全反応体積は、２．０Ｌにした。反応成分を添加している間、および反応時間全体にわたり、この緩衝系を混合した。
反応温度は、温度を反応時間に関連付ける式を使用することにより、特定の時間、制御した。この例では、反応温度は、２０±２℃で１８０分間、保持した。２Ｍ酢酸（２３ｍＬ／Ｌ）を添加することによってこの反応をクエンチし、ｐＨ６を有する溶液にした。
（３）コンジュゲート後のＵＦＤＦ
コンジュゲートステップの後、クエンチしたＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲート溶液を、ヒスチジン緩衝液（せん断保護剤として０．０００５％（ｗ／ｖ）超高純度ポリソルベート８０を含む、１０ｍＭヒスチジン、ｐＨ５．５０）にバッファー交換し、残留処理塩、ＤＭＳＯおよび未反応ＤＦＯを除去した。一度、透析ろ過し、次に、この溶液を濃縮して、次いで製剤化した。－８０℃でタンパク質を長期保管するために、ヒスチジン緩衝液を選択した。最終ＵＦＤＦステップに、ステップ（１）で述べた同じＳｉｕｓ Ｐｒｏｓｔｒｅａｍ膜を使用した。上記のＳａｒｔｏｐｏｒｅ２フィルターを使用して、得られた濃縮ＤＦＯ－ｍＡｂコンジュゲート溶液を滅菌ろ過した。
ＵＶ－ＤＡＲ（１．５を目標）およびタンパク質濃度決定は、実施例２に記載されている通り実施した。
Figure 0007167041000025
 （実施例１０）
転移性黒色腫を有する患者における８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートを使用する、腫瘍におけるＬＡＧ３の免疫ＰＥＴイメージング
この検討の主要な目的は、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３抗体コンジュゲートの安全性および耐容性を決定することであり、この場合、放射標識コンジュゲートに使用した抗ＬＡＧ３抗体は、Ｈ４ｓＨ１５４８２Ｐである。転帰尺度は、安全性に関する有害事象および慣用法の実験室試験をモニタリングする。
本検討の二次目的は以下である：
・検討部分Ａ：腫瘍におけるＬＡＧ３発現を評価するためのバイオマーカーとしての８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３ ＰＥＴを適格化すること。これは、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３ ＰＥＴトレーサーの安全性を評価して、最適トレーサー投与質量用量および注入後の最適イメージング時間を決定し、腫瘍ＰＥＴシグナルとＬＡＧ３組織をベースとする発現との関係を確立し、患者における線量測定を評価することにより行われる。部分Ａは、腫瘍生検と共に、連続トレーサー用量漸増設計を含む。イメージング、およびトレーサー注入後の１、４および７日目に抜き取った血液により、その後のイメージング時の腫瘍：血液の比の算出を含めた血液プール（ｐｏｏ）ＳＵＶ；組織放射線吸収線量に基づいた臨床的線量測定、ならびにＰＥＴ画像アクイジションデータおよび血中のトレーサー活性濃度から算出した有効用量；目的の腫瘍領域にわたる、標準化後の取り込み値（ＳＵＶ－標的組織中の減衰による補正済み活性濃度を注入時における身体中の平均活性濃度で除算）；目的の腫瘍領域（ＲＯＩ）内の最大ＳＵＶ（ＳＵＶｍａｘ）；および曲線下面積（ＡＵＣ０－７ｄａｙｓ）の算出を含む、血漿トレーサー活性濃度が可能となる。
・ 検討部分Ｂ：ＩＯ療法後の組織をベースとするＬＡＧ３発現によるＰＥＴシグナルと臨床的転帰（奏効率および無増悪生存率）とを関連付けることによる、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３ ＰＥＴの構築物および基準関連妥当性を探索すること。表示により許容される以下：ニボルマブ、イピリムマブ、ペムブロリズマブおよび組合せから選択される、標準のケア免疫療法による処置前および処置後に、一連のｉＰＥＴ走査および腫瘍生検を行う。
ＬＡＧ３腫瘍の存在および確立された免疫療法によって誘発されたＬＡＧ３シグナルの変化を検出する能力を試験することにより、ならびにｉＰＥＴシグナルと臨床的転帰（基準関連妥当性：生物学的および臨床的に有意な転帰に対する）との相関関係を探索することによって、最初に免疫ＰＥＴ（ｉＰＥＴ）トレーサーの有用性をアセスメントすることができる。
ＰＥＴ、トレーサーＰＫおよび線量測定によって適切な腫瘍取り込み量を示す、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３の安全な最適質量用量を特定することができる。３つのトレーサー質量用量レベルの選択は、前臨床のマウス異種移植片イメージングおよび生体内分布検討、ならびに非標識抗ＬＡＧ３治療用抗体を使用する、臨床データおよび前臨床データに基づく。計画した質量用量の漸増は、２ｍｇ、５ｍｇおよび１０ｍｇである。この手法は、前向き抗腫瘍療法を妨害しないよう、治療量未満または薬理学的に活性のない用量を使用する。
最適な質量用量は、目的の腫瘍病変領域（ＲＯＩ）内の腫瘍ＳＵＶ、最大ＳＵＶ（ＳＵＶｍａｘ）、および少なくとも１つの病変における腫瘍：血液の比がすべて＞１（さらに、理想的には、腫瘍－血液比は３～４である）（理想的には、いくつかの腫瘍転移を有する患者では、＞１の病変における）であることを実証する。
血漿（または血清）におけるトレーサー活性および／または血液プールＳＵＶ（活性ＰＫをこの検討のために測定する）は、投与後の７日間のイメージング期間にわたり検出可能であり、トレーサーを腫瘍病変にコンパートメント化するのに利用可能であることを示唆している。腫瘍と血液のシグナル比は、ＳＵＶに基づくが、他の活性濃度単位を使用することもできる。同じことが、絶対単位または正規化後の単位に関して報告され得る、血液活性濃度の測定に該当する。
生検した病変におけるＬＡＧ３ ＰＥＴシグナルの強度は、半定量的手段を使用して、組織生検におけるＬＡＧ３発現の程度と共変する。
オートラジオグラフィーによるＬＡＧ３ ＰＥＴシグナルは、組織生検試料におけるＬＡＧ３発現と空間的に相関する。
ＬＡＧ３ ＰＥＴシグナルの強度は、免疫療法による処置後に増大する。
ＬＡＧ３ ＰＥＴのシグナル強度の増大は、免疫療法による処置後の応答と相関する。
さらに、探索目的および転帰尺度は、免疫組織化学、ＲＮＡｓｃｏｐｅ、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）およびオートラジオグラフィーを使用して、腫瘍による８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３の取り込み量との相関関係における、組織生検中のＬＡＧ３の発現の判定を含む。部分Ｂだけに関すると、探索目的は、処置後の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３シグナルの変化、および処置後の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３シグナルと臨床的転帰との相関関係を測定することである。転帰尺度は、免疫療法処置後のＳＵＶ、ＳＵＶｍａｘ、腫瘍：血液比、および臨床的転帰（ＲＥＣＩＳＴ１．１を使用する、応答者状況を算出するための連続ＣＴおよび腫瘍体積）、奏効率、および無増悪生存率を含む。
患者標的集団
標的集団は、進行性転移性黒色腫を有する１８歳またはそれより年長の患者であって、生検への修正が可能な（ａｍｅｎｄａｂｌｅ）少なくとも１つの病変があるという診断が組織学的または細胞学的に確認された上記の患者からなる。患者は、２未満またはこれに等しいＥＣＯＧパフォーマンスステータス、少なくとも３か月の寿命予測、ならびに適切な臓器および骨髄機能を有していなければならない。
高い有病率の標的を有する指標を有する患者を含ませると、本検討の重要な転帰となる、ＬＡＧ３ ｉＰＥＴ腫瘍局在化のアセスメントが支援される。免疫療法後のＬＡＧ３発現の検出、およびこれと臨床的転帰との相関関係には、免疫療法に対する十分に特徴づけられている臨床応答率を有する患者集団が必要とされる。転移性黒色腫の患者は、チェックポイント阻害剤に対する確立された応答率、ならびに高いレベルの有病率およびＬＡＧ３の発現を有する患者集団となる。
検討設計
この検討は部分Ａ（構築物バリデーション）および部分Ｂ（基準バリデーション）を含む。検討期間は、部分Ａの場合、９週間（４週間のスクリーニング、１週間のトレーサー投与、走査および生検、４週間の安全性経過観察）、および部分Ｂの場合、１８週間（４週間のスクリーニング、１週間のトレーサー投与、走査および生検、最大８週間の免疫療法、１週間の第２のトレーサー投与および走査、４週間の安全性経過観察）である。
部分Ａ
部分Ａは、用量調査検討であり、この場合、患者は単一トレーサー用量の投与を受けて、次いで７日間の期間にわたる、連続走査および生検が続く。一旦、一連の走査および生検が完了すると、対象は、標準のケア免疫療法のレジメン（抗ＰＤ－１単独で、または表示されている適応症に従い、抗ＣＴＬＡ４と組み合わせる）により直ちに処置され得る。
部分Ａにおける用量コホート
部分Ａは、合計で６名の患者（３＋３の設計）までコホートを拡張する可能性を伴う、３名の患者からなる、３連続用量コホートを含む。用量漸増決定は、ａ）安全性、およびｂ）ｉＰＥＴがポジティブであるという評価によって情報提供を受ける。用量規定毒性（ＤＬＴ）は、トレーサー投与の１週間後に、８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３に関連する、または関連する可能性のある、グレード３またはそれより高い（ＮＴＣＡＥ）有害事象（ＡＥ）として定義する。血液学的な検査室でのＡＥに関すると、ＤＬＴをグレード４またはそれより高く定義する。腫瘍取り込みがポジティブであること／腫瘍の局在化は、腫瘍：血液比が、１より高いことによって定義する。適切なＰＫは、最適なイメージング時間（注入後４日目または７日目）において、血液中のＳＵＶが１～５の範囲であることにより定義する。
６名の患者に対するコホートの拡張は、以下の条件のいずれかを満足する場合に行う：（ａ）ちょうど１名の患者がＤＬＴを経験する、または（ｂ）３名の患者のうちの少なくとも１名が、腫瘍局在化および適切なＰＫを示し、かつ１名以下の患者がＤＬＴを経験する。
３名または６名の対象のいずれかのコホートの完了時に、拡張コホートにおける３名未満の患者がＤＬＴを経験する場合、用量漸増は一層高い利用可能な用量まで行う。
検討の部分Ａは、以下の条件のいずれかを満足した場合、停止する（部分Ａの停止規則）：コホートにおける１名より多い患者がＤＬＴを経験する；３名より多い患者が、２つの連続する拡張コホートの各々において、目視可能な腫瘍局在化および適切なＰＫを示す；または漸増に一層高い用量を利用することができない。
部分Ａの停止規則に達すると、部分Ｂ用量は以下のように選択される：ａ）２つまたは３つの拡張コホートが、腫瘍局在化および適切なＰＫを有する３名より多い患者を示す場合、より多数の患者における腫瘍局在化または最高の腫瘍：血液比を伴う用量コホートが選択される。これらが、コホート間で類似している場合、より少ない用量が選択される。ｂ）１つのコホートが、腫瘍局在化および適切なＰＫを有する患者が３名より多いことを示した場合、この用量を選択する。ｃ）コホートが、腫瘍局在化および適切なＰＫを有する患者が３名より多いことを示さない場合、この検討は部分Ｂに進むことなく終了する。
部分Ｂ
部分Ｂは、免疫療法前と免疫療法後の両方で、規定されたトレーサー用量および注入後の時点（部分Ａで決定した）におけるＬＡＧ３ ｉＰＥＴシグナルを測定して、腫瘍炎症応答の指標としてのＬＡＧ３の役割を取り巻く仮説をアセスメントする（探索目的）。部分Ｂでの患者はすべて、部分Ａにおいて特定された最適トレーサー質量用量および注入後のイメージングタイミングを受ける。
部分Ｂの患者は、ベースライン時でのＬＡＧ３ ｉＰＥＴ走査、および療法前の生検を受ける。次に、患者は、標識に従って標準のケア免疫療法（現在、これらは、モノクローナル抗体をベースとするＰＤ－１およびＣＴＬＡ－４経路遮断剤である）を受ける。４～８週間後に、追加のｉＰＥＴ走査を行い、次いで、実現可能な場合、第２の生検を行う。
最適トレーサー質量用量の投与を受け、適切な走査の質を達成した部分Ａにおける患者は、部分Ｂにも適格となり得、合計で２回のｉＰＥＴトレーサー注入を受ける。部分Ｂにおける対象の総数（部分Ａから参加したものを含む）は、２０名を超えない。
生検の考慮
病変は、接近のし易さおよびサイズ（通常、少なくとも２０ｍｍの直径）に基づいて生検を選択する。患者はすべて、ｉＰＥＴ検討がポジティブであるか否かに関わりなく、最初の一式のｉＰＥＴ走査の最後の日に、ベースライン生検を受ける。このように、ネガティブ患者を含めて、ＬＡＧ３シグナルとの相関関係のために、幅広い範囲のＬＡＧ３組織の発現を有する患者からの組織を採集する。生検は、患者への療法遅延を最小化するため、注入日から７日以内に計画する。
生検から始め、次いで、トレーサーの投与および走査、次に療法を開始する一連のアセスメントが、実用上の理由のために好ましいものとなり得る。
部分Ｂに関すると、第２の走査後の第２の生検は、実現可能であり必要に応じて、行ってもよい。実施可能な場合、一連の生検は、同一部位から行われる。
オートラジオグラフィー検討は、ＬＡＧ３に対して染色された隣接切片と共に、ｉＰＥＴ走査に対してポジティブな生検済み腫瘍の一部に行う。
検討介入
部分Ａ
スクリーニングに続いて、対象はそれぞれ、ある用量の８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３の投与、次いで、６～７日間にわたり、３回の連続したｉＰＥＴ走査を受ける。開始用量は、動物検討およびモデリングから決定した、２ｍｇとなろう。最後のｉＰＥＴ走査の後の１日以内に、対象は、放射線でガイドする生検を受ける。利用可能な場合、ＬＡＧ３発現について、保管された生検腫瘍組織をＩＨＣによっても分析する。
部分Ａの場合、対象の全員が、最終的に特定された最適トレーサー用量を受けるわけではないので、生検は必要に応じる。
部分Ｂへ進むかどうかの決定は、部分Ａのデータおよび動員率に基づいて行われる。
部分Ｂ
スクリーニングに続いて、黒色腫患者はそれぞれ、最適化した質量用量（部分Ａから）で８９Ｚｒ－ＤＦＯ－抗ＬＡＧ３の投与、次いで、最適な注入後時点（部分Ａから）においてＰＥＴ走査を受ける。次に、ｉＰＥＴイメージング後の１日以内に、対象は、放射線でガイドする病変の生検を受ける。続いて、患者は、利用可能な承認を受けている免疫療法レジメン（表示通りに投与）で、非盲検で処置を受ける。対象は、免疫療法を開始して４～８週間後に、第２の走査を受ける。第２の走査後の第２の生検は、実現可能で必要に応じて、行ってもよい。
患者はすべて、１８Ｆ－ＦＤＧ ＰＥＴ／ＣＴ走査によってスクリーニングを受ける。ＰＥＴ／ＣＴ走査のＣＴ部分は、診断品質でなければならないか、またはスクリーニング期間中に取得した診断用ＣＴスキャンは、病変の位置および寸法をアセスメントするのに利用可能でなければならない。これらの走査を使用して、代謝活性／生存率および適切な寸法に関して病変を評価する。
上記の実施形態および実施例は、単に例示に過ぎず、非限定例であることが意図されている。当業者は、慣用法の実験だけを使用して、具体的な化合物、物質および手順の多数の等価物を認識するか、または突き止めることができる。このような等価物はすべて、本範囲内と考えられ、添付の特許請求の範囲によって包含される。
本発明は、例えば、以下の項目を提供する。
(項目１)
リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）に結合する抗体またはその抗原結合性断片、およびポジトロン放出体を含む、放射標識抗体コンジュゲート。
(項目２)
キレート形成性部分をさらに含む、項目１に記載のコンジュゲート。
(項目３)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、式（Ａ）の１つまたは複数の部分：
－Ｌ－Ｍ Ｚ
（Ａ）
（式中、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは、独立して、出現ごとに、０または１であり、ｚの少なくとも１つは、１である）
に共有結合している、項目１または２に記載のコンジュゲート。
(項目４)
前記キレート形成性部分が、デスフェリオキサミンを含む、項目２に記載のコンジュゲート。
(項目５)
前記ポジトロン放出体が ８９ Ｚｒである、項目１から４のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目６)
－Ｌ－Ｍが、
Figure 0007167041000026
である、項目３に記載のコンジュゲート。
(項目７)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、式（Ａ）の１つ、２つまたは３つの部分に共有結合している、項目１から６のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目８)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
（ａ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ Ｄ ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
（ｂ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１０ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
（ｃ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること、
（ｄ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１．１ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること
からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、項目１から７のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目９)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）において３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）；および配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）において、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、項目１から８のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目１０)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２０を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）－１；配列番号４２２を含むＨＣＤＲ２；および配列番号４２４を含むＨＣＤＲ３；配列番号４２８を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）－１；配列番号４３０を含むＬＣＤＲ２；および配列番号４３２を含むＬＣＤＲ３を含む、項目１から９のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目１１)
前記抗体が、配列番号４１８のＨＣＶＲに３つのＣＤＲ；および配列番号４２６のＬＣＶＲに３つのＣＤＲを含む、項目１から９のいずれかに記載のコンジュゲート。
(項目１２)
ＬＡＧ３を発現する組織をイメージングする方法であって、前記組織に項目１から１１のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む、方法。
(項目１３)
（ａ）固形腫瘍を有する対象を選択するステップ、
（ｂ）（ｉ）それを必要とする前記対象に項目１から１１のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを投与すること、および（ｉｉ）ポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングにより、前記腫瘍における前記放射標識抗体コンジュゲートの局在化をイメージングすることを含む、前記固形腫瘍がＬＡＧ３ポジティブな細胞を含むことを判定するステップであって、前記腫瘍における前記放射標識抗体コンジュゲートの存在により、前記腫瘍がＬＡＧ３ポジティブな細胞を含むことを示す、判定するステップ、および
（ｃ）それを必要とする前記対象に抗腫瘍療法の１つまたは複数の用量を投与するステップ
を含む、腫瘍を処置する方法。
(項目１４)
前記抗腫瘍療法が、ＬＡＧ３の阻害剤、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、がんワクチン、二重特異性抗体、細胞毒、化学療法剤、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、項目１３に記載の方法。
(項目１５)
前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍－Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット－ゲラン桿菌、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、項目１３または１４に記載の方法。
(項目１６)
前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される、項目１３から１５のいずれか一項に記載の方法。
(項目１７)
前記抗腫瘍療法が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）／軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列対内に、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片である、項目１６に記載の方法。
(項目１８)
前記抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４／６／８／１２／１４／１６、２０／２２／２４／２８／３０／３２、３６／３８／４０／４４／４６／４８、５２／５４／５６／６０／６２／６４、６８／７０／７２／７６／７８／８０、８４／８６／８８／９２／９４／９６、１００／１０２／１０４／１０８／１１０／１１２、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８、１３２／１３４／１３６／１４０／１４２／１４４、１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０、１６４／１６６／１６８／１７２／１７４／１７６、１８０／１８２／１８４／１８８／１９０／１９２、１９６／１９８／２００／２０４／２０６／２０８、２１２／２１４／２１６／２２０／２２２／２２４、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０、２４４／２４６／２４８／２５２／２５４／２５６、２６０／２６２／２６４／２６８／２７０／２７２、２７６／２７８／２８０／２８４／２８６／２８８、２９２／２９４／２９６／３００／３０２／３０４、３０８／３１０／３１２／３１６／３１８／３２０、３２４／３２６／３２８／３３２／３３４／３３６、３４０／３４２／３４４／３４８／３５０／３５２、３５６／３５８／３６０／３６４／３６６／３６８、３７２／３７４／３７６／３８０／３８２／３８４、３８８／３９０／３９２／３９６／３９８／４００、４０４／４０６／４０８／４１２／４１４／４１６、４２０／４２２／４２４／４２８／４３０／４３２、４３６／４３８／４４０／４４４／４４６／４４８、４５２／４５４／４５６／５２４／５２６／５２８、４６０／４６２／４６４／５２４／５２６／５２８、４６８／４７０／４７２／５２４／５２６／５２８、４７６／４７８／４８０／５２４／５２６／５２８、４８４／４８６／４８８／５２４／５２６／５２８、４９２／４９４／４９６／５２４／５２６／５２８、５００／５０２／５０４／５３２／５３４／５３６、５０８／５１０／５１２／５３２／５３４／５３６、５１６／５１８／５２０／５３２／５３４／５３６、５４０／５４２／５４４／５４８／５５０／５５２、および５５６／５５８／５６０／５６４／５６６／５６８からなる群から選択される３つのＨＣＤＲおよび３つのＬＣＤＲを含む、項目１７に記載の方法。
(項目１９)
前記抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のＨＣＶＲに３つのＨＣＤＲ；および配列番号４２６のＬＣＶＲに３つのＬＣＤＲを含む、項目１７に記載の方法。
(項目２０)
前記抗腫瘍療法が、ＲＥＧＮ２８１０、ニボルマブおよびペムブロリズマブからなる群から選択される、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片である、項目１６に記載の方法。
(項目２１)
前記抗腫瘍療法が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片である、項目１６に記載の方法。
(項目２２)
前記抗ＬＡＧ３抗体が、第２の抗腫瘍療法と組み合わせて投与される、項目１９に記載の方法。
(項目２３)
前記第２の抗腫瘍療法が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、がんワクチン、二重特異性抗体、細胞毒、化学療法剤、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
(項目２４)
前記第２の抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍－Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット－ゲラン桿菌、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、項目２２に記載の方法。
(項目２５)
前記腫瘍が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頸部の扁平上皮癌、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫および黒色腫からなる群から選択される、項目１３から２４のいずれか一項に記載の方法。
(項目２６)
式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 0007167041000027
（式中、Ａは、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片であり、ｋは１～３０である）。
(項目２７)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
（ａ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満の結合解離平衡定数（Ｋ Ｄ ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
（ｂ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１０ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
（ｃ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること、
（ｄ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１．１ｎＭ未満のＫ Ｄ で、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること
からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、項目２６に記載の化合物。
(項目２８)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２、１８、３４、５０、６６、８２、９８、１１４、１３０、１４６、１６２、１７８、１９４、２１０、２２６、２４２、２５８、２７４、２９０、３０６、３２２、３３８、３５４、３７０、３８６、４０２、４１８、４３４、４５０、４５８、４６６、４７４、４８２、４９０、４９８、５０６、５１４、５３８および５５４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）において３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）；および配列番号１０、２６、４２、５８、７４、９０、１０６、１２２、１３８、１５４、１７０、１８６、２０２、２１８、２３４、２５０、２６６、２８２、２９８、３１４、３３０、３４６、３６２、３７８、３９４、４１０、４２６、４４２、５２２、５３０、５４６および５６２からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）において、３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、項目２６または２７のいずれかに記載の化合物。
(項目２９)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）／軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列対内に、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、項目２６から２８のいずれか一項に記載の化合物。
(項目３０)
前記抗抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４／６／８／１２／１４／１６、２０／２２／２４／２８／３０／３２、３６／３８／４０／４４／４６／４８、５２／５４／５６／６０／６２／６４、６８／７０／７２／７６／７８／８０、８４／８６／８８／９２／９４／９６、１００／１０２／１０４／１０８／１１０／１１２、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８、１３２／１３４／１３６／１４０／１４２／１４４、１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０、１６４／１６６／１６８／１７２／１７４／１７６、１８０／１８２／１８４／１８８／１９０／１９２、１９６／１９８／２００／２０４／２０６／２０８、２１２／２１４／２１６／２２０／２２２／２２４、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０、２４４／２４６／２４８／２５２／２５４／２５６、２６０／２６２／２６４／２６８／２７０／２７２、２７６／２７８／２８０／２８４／２８６／２８８、２９２／２９４／２９６／３００／３０２／３０４、３０８／３１０／３１２／３１６／３１８／３２０、３２４／３２６／３２８／３３２／３３４／３３６、３４０／３４２／３４４／３４８／３５０／３５２、３５６／３５８／３６０／３６４／３６６／３６８、３７２／３７４／３７６／３８０／３８２／３８４、３８８／３９０／３９２／３９６／３９８／４００、４０４／４０６／４０８／４１２／４１４／４１６、４２０／４２２／４２４／４２８／４３０／４３２、４３６／４３８／４４０／４４４／４４６／４４８、４５２／４５４／４５６／５２４／５２６／５２８、４６０／４６２／４６４／５２４／５２６／５２８、４６８／４７０／４７２／５２４／５２６／５２８、４７６／４７８／４８０／５２４／５２６／５２８、４８４／４８６／４８８／５２４／５２６／５２８、４９２／４９４／４９６／５２４／５２６／５２８、５００／５０２／５０４／５３２／５３４／５３６、５０８／５１０／５１２／５３２／５３４／５３６、５１６／５１８／５２０／５３２／５３４／５３６、５４０／５４２／５４４／５４８／５５０／５５２、および５５６／５５８／５６０／５６４／５６６／５６８からなる群から選択される３つのＨＣＤＲおよび３つのＬＣＤＲを含む、項目２６から２８のいずれか一項に記載の方法。
(項目３１)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のＨＣＶＲに３つのＨＣＤＲ；および配列番号４２６のＬＣＶＲに３つのＬＣＤＲを含む、項目２６から２８のいずれか一項に記載の化合物。
(項目３２)
前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２０を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）－１；配列番号４２２を含むＨＣＤＲ２；および配列番号４２４を含むＨＣＤＲ３；配列番号４２８を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）－１；配列番号４３０を含むＬＣＤＲ２；および配列番号４３２を含むＬＣＤＲ３を含む、項目２６から３１のいずれか一項に記載の化合物。
(項目３３)
ｋが２未満または２に等しい、項目２６から３２のいずれか一項に記載の化合物。
(項目３４)
ｋが１または２である、項目２６から３２のいずれか一項に記載の化合物。

Claims (33)

  1. リンパ球活性化遺伝子－３（ＬＡＧ３）に結合する抗体またはその抗原結合性断片、およびポジトロン放出体を含む、放射標識抗体コンジュゲートであって、前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８の重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）アミノ酸配列内の３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および配列番号４２６の軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）アミノ酸配内の３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む、放射標識抗体コンジュゲート。
  2. キレート形成性部分をさらに含む、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、式（Ａ）の１つまたは複数の部分：
    －Ｌ－ＭＺ
    （Ａ）
    （式中、Ｌはキレート形成性部分であり、Ｍはポジトロン放出体であり、ｚは、独立して、出現ごとに、０または１であり、ｚの少なくとも１つは、１である）
    に共有結合している、請求項１または２に記載のコンジュゲート。
  4. 前記キレート形成性部分が、デスフェリオキサミンを含む、請求項２に記載のコンジュゲート。
  5. 前記ポジトロン放出体が８９Ｚｒである、請求項１から４のいずれかに記載のコンジュゲート。
  6. －Ｌ－Ｍが、
    Figure 0007167041000028
     であり、Ｚｒが前記ポジトロン放出体８９Ｚｒである、請求項３に記載のコンジュゲート。
  7. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、式（Ａ）の１つ、２つまたは３つの部分に共有結合している、請求項１から６のいずれかに記載のコンジュゲート。
  8. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
    （ａ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
    （ｂ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１０ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
    （ｃ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること、
    （ｄ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること
    からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、請求項１から７のいずれかに記載のコンジュゲート。
  9. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２０を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）－１；配列番号４２２を含むＨＣＤＲ２；および配列番号４２４を含むＨＣＤＲ３；配列番号４２８を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）－１；配列番号４３０を含むＬＣＤＲ２；および配列番号４３２を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項１から８のいずれかに記載のコンジュゲート。
  10. 前記抗体が、配列番号４１８のＨＣＶＲ；および配列番号４２６のＬＣＶＲを含む、請求項１から９のいずれかに記載のコンジュゲート。
  11. ＬＡＧ３を発現する組織をイメージングする方法において使用するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを含む組成物であって、前記方法は、前記組織に前記組成物を投与するステップ、およびポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングによりＬＡＧ３発現を可視化するステップを含む、組成物。
  12. ポジトロン断層法（ＰＥＴ）イメージングにより、腫瘍における放射標識抗体コンジュゲートの局在化をイメージングすることにより、固形腫瘍がＬＡＧ３ポジティブな細胞を含むことを判定する方法において使用するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを含む医薬組成物であって、前記腫瘍における前記放射標識抗体コンジュゲートの存在により、前記腫瘍がＬＡＧ３ポジティブな細胞を含むことを示す、医薬組成物。
  13. 前記固形腫瘍がＬＡＧ３ポジティブな細胞を含むことが決定された場合、抗腫瘍療法が、ＬＡＧ３の阻害剤、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、がんワクチン、二重特異性抗体、細胞毒、化学療法剤、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、請求項１２に記載の医薬組成物。
  14. 前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍－Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット－ゲラン桿菌、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片および抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片からなる群から選択される、請求項１３または１４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  16. 前記抗腫瘍療法が、配列番号２／１０、１８／２６、３４／４２、５０／５８、６６／７４、８２／９０、９８／１０６、１１４／１２２、１３０／１３８、１４６／１５４、１６２／１７０、１７８／１８６、１９４／２０２、２１０／２１８、２２６／２３４、２４２／２５０、２５８／２６６、２７４／２８２、２９０／２９８、３０６／３１４、３２２／３３０、３３８／３４６、３５４／３６２、３７０／３７８、３８６／３９４、４０２／４１０、４１８／４２６、４３４／４４２、４５０／５２２、４５８／５２２、４６６／５２２、４７４／５２２、４８２／５２２、４９０／５２２、４９８／５３０、５０６／５３０、５１４／５３０、５３８／５４６、および５５４／５６２からなる群から選択される重鎖可変領域（ＨＣＶＲ）／軽鎖可変領域（ＬＣＶＲ）配列対内に、３つの重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）および３つの軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）を含む抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片であり、前記抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４／６／８／１２／１４／１６、２０／２２／２４／２８／３０／３２、３６／３８／４０／４４／４６／４８、５２／５４／５６／６０／６２／６４、６８／７０／７２／７６／７８／８０、８４／８６／８８／９２／９４／９６、１００／１０２／１０４／１０８／１１０／１１２、１１６／１１８／１２０／１２４／１２６／１２８、１３２／１３４／１３６／１４０／１４２／１４４、１４８／１５０／１５２／１５６／１５８／１６０、１６４／１６６／１６８／１７２／１７４／１７６、１８０／１８２／１８４／１８８／１９０／１９２、１９６／１９８／２００／２０４／２０６／２０８、２１２／２１４／２１６／２２０／２２２／２２４、２２８／２３０／２３２／２３６／２３８／２４０、２４４／２４６／２４８／２５２／２５４／２５６、２６０／２６２／２６４／２６８／２７０／２７２、２７６／２７８／２８０／２８４／２８６／２８８、２９２／２９４／２９６／３００／３０２／３０４、３０８／３１０／３１２／３１６／３１８／３２０、３２４／３２６／３２８／３３２／３３４／３３６、３４０／３４２／３４４／３４８／３５０／３５２、３５６／３５８／３６０／３６４／３６６／３６８、３７２／３７４／３７６／３８０／３８２／３８４、３８８／３９０／３９２／３９６／３９８／４００、４０４／４０６／４０８／４１２／４１４／４１６、４２０／４２２／４２４／４２８／４３０／４３２、４３６／４３８／４４０／４４４／４４６／４４８、４５２／４５４／４５６／５２４／５２６／５２８、４６０／４６２／４６４／５２４／５２６／５２８、４６８／４７０／４７２／５２４／５２６／５２８、４７６／４７８／４８０／５２４／５２６／５２８、４８４／４８６／４８８／５２４／５２６／５２８、４９２／４９４／４９６／５２４／５２６／５２８、５００／５０２／５０４／５３２／５３４／５３６、５０８／５１０／５１２／５３２／５３４／５３６、５１６／５１８／５２０／５３２／５３４／５３６、５４０／５４２／５４４／５４８／５５０／５５２、および５５６／５５８／５６０／５６４／５６６／５６８からなる群から選択される３つのＨＣＤＲおよび３つのＬＣＤＲの組合せを含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
  18. 前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片であり、前記抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のＨＣＶＲ内の３つのＨＣＤＲ；および配列番号４２６のＬＣＶＲ内の３つのＬＣＤＲを含む、請求項１５に記載の医薬組成物。
  19. 前記抗腫瘍療法が、ＲＥＧＮ２８１０、ニボルマブおよびペムブロリズマブからなる群から選択される、抗ＰＤ－１抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１５に記載の医薬組成物。
  20. 前記抗腫瘍療法が、アテゾリズマブ、アベルマブおよびデュルバルマブからなる群から選択される抗ＰＤ－Ｌ１抗体またはその抗原結合性断片である、請求項１５に記載の方法。
  21. 前記抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片であり、前記抗ＬＡＧ３抗体またはその抗原結合性断片が、第２の抗腫瘍療法と組み合わせて投与される、請求項１８に記載の医薬組成物。
  22. 前記第２の抗腫瘍療法が、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達軸の阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＭ３阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＣＤ４７阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、別のＴ細胞共阻害剤またはリガンドのアンタゴニスト、インドールアミン－２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）阻害剤、血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）アンタゴニスト、Ａｎｇ２阻害剤、トランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）阻害剤、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）阻害剤、ＣＤ２０阻害剤、腫瘍特異的抗原に対する抗体、がんワクチン、二重特異性抗体、細胞毒、化学療法剤、シクロホスファミド、放射線療法、ＩＬ－６Ｒ阻害剤、ＩＬ－４Ｒ阻害剤、ＩＬ－１０阻害剤、ＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－２１、ＩＬ－１５、および抗体－薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）からなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 前記第２の抗腫瘍療法が、抗ＬＡＧ３抗体、ＲＥＧＮ２８１０、ＢＧＢ－Ａ３１７、ニボルマブ、ピジリズマブ、ペムブロリズマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＲＥＧＮ３５０４、イピリムマブ、抗ＣＤ－２８抗体、抗２Ｂ４抗体、抗ＬＹ１０８抗体、抗ＬＡＩＲ１抗体、抗ＩＣＯＳ抗体、抗ＣＤ１６０抗体、抗ＶＩＳＴＡ抗体、アフリベルセプト、ベバシズマブ、ラニビズマブ、スニチニブ、ソラフェニブ、パゾパニブ、ネスバクマブ、エルロチニブ、セツキシマブ、リツキシマブ、抗ＣＡ９抗体、抗ＣＡ１２５抗体、抗黒色腫関連抗原３（ＭＡＧＥ３）抗体、抗癌胎児性抗原（ＣＥＡ）抗体、抗ビメンチン抗体、抗腫瘍－Ｍ２－ＰＫ抗体、抗前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）抗体、抗ムチン－１抗体、抗ＭＡＲＴ－１抗体、抗ＣＡ１９－９抗体、カルメット－ゲラン桿菌、ＣＤ３ｘＣＤ２０二重特異性抗体、ＰＳＭＡｘＣＤ３二重特異性抗体、ダカルバジン、テモゾロミド、シクロホスファミド、ドセタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シスプラチン、カルボプラチン、ゲムシタビン、メトトレキセート、ミトキサントロン、オキサリプラチン、パクリタキセル、ビンクリスチン、シクロホスファミド、放射線療法、サリルマブ、デュピルマブ、抗ＣＤ１９－ＤＭ４ ＡＤＣ、および抗ＤＳ６－ＤＭ４ ＡＤＣからなる群から選択される、請求項２１に記載の医薬組成物。
  24. 前記腫瘍が、血液がん、脳がん、腎細胞がん、卵巣がん、膀胱がん、前立腺がん、乳がん、肝細胞癌、骨がん、結腸がん、非小細胞肺がん、頭頸部の扁平上皮癌、結腸直腸がん、中皮腫、Ｂ細胞リンパ腫および黒色腫からなる群から選択される、請求項１２から２３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  25. 式（ＩＩＩ）の化合物：
    Figure 0007167041000029
     （式中、Ａは、配列番号４１８のＨＣＶＲアミノ酸配列内の３つのＨＣＤＲおよび配列番号４２６のＬＣＶＲアミノ酸配内の３つのＬＣＤＲを含む、ＬＡＧ３に結合する抗体またはその抗原結合性断片であり、ｋは１～３０である）。
  26. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、以下：
    （ａ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約８ｎＭ未満の結合解離平衡定数（ＫＤ）で、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
    （ｂ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１０ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３単量体に結合すること、
    （ｃ）３７℃において表面プラズモン共鳴アッセイで測定すると、約１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること、
    （ｄ）２５℃において表面プラズモン共鳴アッセイにおいて、約１．１ｎＭ未満のＫＤで、ヒトＬＡＧ３二量体に結合すること
    からなる群から選択される、１つまたは複数の特性を有する、請求項２５に記載の化合物。
  27. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４１８のＨＣＶＲおよび配列番号４２６のＬＣＶＲを含む、請求項２５または請求項２６に記載の化合物。
  28. 前記抗体またはその抗原結合性断片が、配列番号４２０を含む重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）－１；配列番号４２２を含むＨＣＤＲ２；および配列番号４２４を含むＨＣＤＲ３；配列番号４２８を含む軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）－１；配列番号４３０を含むＬＣＤＲ２；および配列番号４３２を含むＬＣＤＲ３を含む、請求項２５から２７のいずれか一項に記載の化合物。
  29. ｋが２未満または２に等しい、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の化合物。
  30. ｋが１または２である、請求項２５から２８のいずれか一項に記載の化合物。
  31. Ｔ細胞疲弊を識別するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを含む医薬組成物。
  32. 前記Ｔ細胞疲弊はがん、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染または寄生虫感染によるものである、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. ＰＥＴイメージングを使用する、細胞におけるＬＡＧ３発現を識別または可視化するための、請求項１から１０のいずれか一項に記載の放射標識抗体コンジュゲートを含む医薬組成物。
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