KR20200116077A - B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드 - Google Patents
B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드 Download PDFInfo
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- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
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- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
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- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
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Abstract
본 명세서는 BCMA 결합 분자, 예컨대 항-BCMA 항체 및 이의 항원 결합 단편, 예컨대 중쇄 가변(VH) 영역 및 단일 사슬 항체 단편을 포함하는 키메라 수용체 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR) 및 암호화 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 키메라 수용체는 BCMA에 특이적으로 결합한다. 항-BCMA 결합 분자 중에는 참조 항체, 예컨대 비-인간 참조 항체와 BCMA에 결합하기 위해 경쟁하는 것을 포함한 인간 항체가 있다. CAR을 발현하는 유전자 조작된 세포 및 예컨대 입양 세포 요법에서 이의 용도가 또한 제공된다.
Description
본 개시는 일부 측면에서 B 세포 성숙 항원(B-cell maturation antigen, BCMA)에 특이적인 항체 부분을 함유하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR) 및 BCMA에 특이적인 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 관한 것이다. 본 개시 내용은 또한 상기 BCMA 결합 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포 및 이의 입양 세포 요법에서의 용도에 관한 것이다.
B 세포 성숙 항원(BCMA)은 성숙한 B 림프구에서 발현되는 막 관통 유형 III 단백질이다. BCMA가 이의 리간드에 결합한 후에, TNF 패밀리의 B 세포 활성화제(B cell activator of the TNF family, BAFF) 또는 증식 유도 리간드(a proliferation inducing ligand, APRIL), 생존 보조 세포 신호가 혈장 세포 생존에 필요한 것으로 밝혀진 B 세포로 전달된다. BCMA의 발현은 암, 자가 면역 장애 및 감염성 질병을 포함한 여러 질병과 관련이 있다. 암을 포함한 다양한 질병 및 병태에서 BCMA의 역할로 인해 BCMA는 치료 표적이다. 다양한 BCMA 결합 키메라 항원 수용체(CAR) 및 상기 CAR을 발현하는 세포가 이용 가능하다. 그러나, 예를 들어 입양 세포 요법에 사용하기 위한 개선된 BCMA 결합 CAR 및 조작된 BCMA CAR 발현 표적 세포에 대한 요구가 남아있다. 상기 요구를 충족시키는 구현예가 본 명세서에 제공된다.
관련 출원들에 대한 상호 참조
본 출원은 2017년 11월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/580,439호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2017년 11월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/580,445호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2017년 11월 7일자로 출원된 미국 가출원 제62/582,932호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2017년 11월 7일자로 출원된 미국 가출원 제62/582,938호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2017년 12월 8일자로 출원된 미국 가출원 제62/596,765호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2017년 12월 8일자로 출원된 미국 가출원 제62/596,763호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2018년 1월 8일자로 출원된 미국 가출원 제62/614,960호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2018년 1월 8일자로 출원된 미국 가출원 제62/614,963호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2018년 5월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/665,442호(제목 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드), 2018년 5월 1일자로 출원된 미국 가출원 제62/665,447호(제목 재조합 항원 수용체의 활성 평가 방법)의 우선권을 주장하고, 이의 내용은 그 전체가 참고로 포함된다.
서열 목록의 참조 포함
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2018년 11월 1일에 생성된 735042009940SeqList.txt라는 제목의 파일로 제공되며 크기는 593 킬로바이트이다. 서열 목록의 전자적 형식의 정보는 그 전체가 참고로 포함된다.
요약
(a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 함유하는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공되고, 여기서 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(messenger RNA, mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95%의 RNA 동질성을 나타낸다. 일부 경우에, 스페이서는 면역글로불린으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 IgG4 또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래된다. 일부 경우에, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 유래된다. 일부 측면에서, 하나 이상의 힌지, CH2 및 CH3은 키메라이고 IgG4 및 IgG2로부터 유래된 서열을 함유한다. 일부 예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지, IgG2/4 CH2 및 IgG4 CH3 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 암호화된 스페이서는 (i) 서열 번호: 649에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 649와 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는 (iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 암호화된 스페이서는 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
임의의 구현예에서, 스페이서는 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 또는 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이 또는 전술한 것 중 어느 하나 사이의 길이이다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 스페이서를 암호화하는 핵산은 하나 이상의 변형 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 621에 제시된 서열에 함유된 참조 스플라이스 공여체 부위 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 함유한다. 일부 경우에, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 삽입, 결실, 치환 또는 이들의 조합을 함유한다. 일부 경우에, 참조 스플라이스 수용체 및/또는 참조 스플라이스 공여체 부위는 정규, 비정규 또는 숨은 스플라이스 부위이다. 일부 예에서, 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나; 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 aatctaagtacggac(서열 번호: 705), tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706), acaattagtaaggca(서열 번호: 707) 및/또는 accacaggtgtatac(서열 번호: 708)을 포함하고/거나; 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호: 743)을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나; 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다. 일부 구현예에서, 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706)을 함유하고/거나; 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742)를 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 하나 이상은 참조 스플라이스 수용체 및/또는 참조 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다. 일부 측면에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 침묵하고/거나 서열 번호: 621과 비교하여 퇴화 코돈을 생성하고/거나 암호화된 스페이서의 아미노산 서열을 변경하지 않는다. 일부 구현예에서, 변형된 스플라이스 공여체 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호: 661), tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662), accatctccaaggcc(서열 번호: 663) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호: 664)에 제시되고/거나; 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 673) 및/또는 aagtttctttctgtattccagactgaccgtggataaatctc(서열 번호: 854)에 제시된다. 일부 경우에, 변형된 스플라이스 공여체 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662)에 제시되고/거나 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672)에 제시된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 622에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다.
키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공되며, 여기서 상기 폴리뉴클레오타이드는 (a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열로 암호화되는, 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 포함한다.
키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공되며, 여기서 상기 폴리뉴클레오타이드는 (a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열을 포함하거나 대부분 포함하거나 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열로 암호화되는 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 세포에서의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 상기 폴리뉴클레오타이드와 같은 아미노산 서열을 암호화하고, 여기에서 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나 상기 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함한다. 일부 경우에, RNA 이질성은 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 감소된다. 일부 경우에, 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리(analytical ultracentrifugation), 장흐름 분획법(field flow fractionation) 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 코돈-최적화된다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 항원은 질병 또는 병태와 관련되거나 질병 또는 병태와 관련된 병변 환경의 세포에서 발현된다. 일부 경우에, 질병이나 병태는 암이다. 일부 예에서, 질병 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종이다. 일부 구현예에서, 항원은 ROR1, B 세포 성숙 항원(BCMA), 탄산 탈수 효소 9(CAIX), tEGFR, Her2/neu(수용체 티로신 키나제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA 및 B 형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당 단백질 2(EPG-2), 상피 당 단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 2량체, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(folate binding protein, FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파 2, 키나제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor, kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종 우선 발현 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아(Foetal) AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암 고환 항원, 메소텔린, 뮤린 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체 특이적 항원이다. 일부 경우에, 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 항체 단편이다. 일부 측면에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 경우에, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 함유하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 함유하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295,507, 532, 593, 596, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(heavy chain complementarity determining region 1, CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 594, 597, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595, 606, 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 (a) 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 3, 141, 143, 144, 288, 289, 507, 593, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(heavy chain complementarity determining region 1, CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4, 5, 6, 145, 147, 148, 290, 291, 372, 513, 594, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7, 8, 9, 10, 149, 153, 154, 155, 156, 157, 292, 293, 376, 517, 595, 606 또는 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)이거나 이를 함유하고/거나; VL 영역은 (a) 서열 번호: 26, 27, 28, 30, 31, 33, 34, 174, 176, 177, 178, 302, 303, 380, 381, 382, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37, 38, 39, 41, 43, 44, 179, 181, 182, 183, 304, 305, 399, 400, 401, 402, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47, 48, 49, 51, 52, 55, 56, 185, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 306, 307, 415, 417, 418, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)이거나 이를 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 11의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 140, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 150의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 142, 146 및 151의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 152의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 377의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 373 및 152의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 378의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 374 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 29, 40 및 50의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 32, 42 및 53의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 35, 45 및 57의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 36, 46 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 184의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 186의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 187의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 383, 403 및 419의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 384, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 385, 180 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 386, 404 및 420의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 387, 405 및 422의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 406 및 423의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 407 및 424의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 389, 408 및 425의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 390, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 391, 409 및 426의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 392, 40 및 427의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 394, 39 및 429의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 395, 411 및 430의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 431의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 397, 413 및 432의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 398, 414 및 433의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 일부 경우에, VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 함유하고; VL 영역은 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 593, 611, 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295, 507, 532, 596 또는 604 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 594, 612, 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 597 또는 605 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호:595, 613, 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 또는 606 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL 영역은 (a) 서열 번호: 601, 614, 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589 또는 607 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 602, 615, 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590 또는 608 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 603, 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433 또는 591 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 119에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 119에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 122에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 122에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 123에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 123에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 114 및 126에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 114 및 126에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 127에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 127에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 247 및 257에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247 및 257에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 249 및 259에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249 및 259에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 250 및 260에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250 및 260에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 251 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 523 및 539에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 523 및 539에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 540에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 540에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 541에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 541에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 525 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 525 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 526 및 542에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 526 및 542에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 527 및 543에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 527 및 543에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 544에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 544에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 529 및 545에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 529 및 545에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 546에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 546에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 547에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 547에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 548에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 548에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 530 및 549에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 530 및 549에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 531 및 550에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 531 및 550에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 552에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 552에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 553에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 553에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 533 및 554에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 533 및 554에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 555에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 555에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 556에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 556에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 557에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 557에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:772 및 775에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:772 및 775에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:773 및 776에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:773 및 776에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:774 및 777에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:774 및 777에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:815 및 833에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:815 및 833에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:816 및 834에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:816 및 834에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:817 및 835에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:817 및 835에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:818 및 836에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:818 및 836에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:819 및 837에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:819 및 837에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:820 및 838에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:820 및 838에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:821 및 839에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:821 및 839에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:822 및 840에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:822 및 840에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:823 및 841에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:823 및 841에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:824 및 842에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:824 및 842에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:825 및 843에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:825 및 843에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:826 및 844에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:826 및 844에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:827 및 845에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:827 및 845에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:828 및 846에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:828 및 846에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:829 및 847에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:829 및 847에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:830 및 847에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:830 및 847에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:831 및 848에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:831 및 848에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:832 및 849에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:832 및 849에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:772 및 775에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:772 및 775에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:773 및 776에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:773 및 776에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:774 및 777에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:774 및 777에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:815 및 833에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:815 및 833에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:816 및 834에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:816 및 834에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:817 및 835에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:817 및 835에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:818 및 836에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:818 및 836에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:819 및 837에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:819 및 837에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:820 및 838에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:820 및 838에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:821 및 839에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:821 및 839에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:822 및 840에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:822 및 840에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:823 및 841에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:823 및 841에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:824 및 842에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:824 및 842에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:825 및 843에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:825 및 843에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:826 및 844에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:826 및 844에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:827 및 845에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:827 및 845에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:828 및 846에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:828 및 846에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:829 및 847에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:829 및 847에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:830 및 847에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:830 및 847에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:831 및 848에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:831 및 848에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호:832 및 849에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호:832 및 849에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나의 서열이거나 이를 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나의 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 단편은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 함유하는 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 (a) 서열 번호: 330-352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열; (b) 서열 번호: 330-352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는 (c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 (a) 서열 번호: 352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열; (b) 서열 번호: 352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는 (c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 코돈-최적화된다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 440, 460, 715, 717 또는 719 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인(여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 617의 VH 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 사슬(VH); 및 (ii) 서열 번호: 618의 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함); (2) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서(상기 스페이서를 암호화하는 핵산은 서열 번호: 622에 기재된 서열이거나 이를 포함); (3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및 (4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체가 제공된다. 또한 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595 의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인(여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL)영역; 또는 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 593, 594 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 서열 번호: 596, 597 및 595 의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 서열 번호: 598, 599 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 611, 612 및 613의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함); (2) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서(상기 스페이서를 암호화하는 핵산은 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함); (3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 인간 4-1BB 또는 인간 CD28의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체가 제공된다. 또한 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체는 BCMA 상에 같거나 실질적으로 같은 에피토프에 결합하거나 본 명세서에 기재된 상기 임의의 구현예를 포함한, 임의의 항체 및 단편 또는 VH/VL 또는 CDR 서열의 제공된 조합을 갖는 항체와 BCMA에 결합하기 위해 경쟁하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 결합 도메인은 BCMA 폴리펩티드 내의 하나 이상의 아미노산 서열의 일부를 포함하는 에피토프를 인식한다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 아미노산 서열은 MLMAG(서열 번호: 640), YFDSL(서열 번호: 779) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642)이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 아미노산 서열은 MLMAG(서열 번호: 640), YFDSLL(서열 번호: 641) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642)이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 아미노산 서열은 MLMAG(서열 번호: 640), QNEYFDSLL(서열 번호: 780) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642)이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 아미노산 서열은 QNEYF(서열 번호: 637), CIPCQL(서열 번호: 638) 및 CQRYC(서열 번호: 639)이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 하나 이상의 아미노산 서열은 CSQNEYF(서열 번호: 410에 제시) 및 LLHACIPCQLR(서열 번호: 428에 제시)이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 (제타 사슬의) 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 활성화 세포질 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 627에 제시된 서열 또는 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이거나 이를 포함한다. 다른 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 공자극 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 681에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 623에 제시된 서열 또는 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 688에 제시된 서열을 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드의 일부 구현예에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인 순서로 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755에 제시된 서열 또는 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755에 제시된 서열을 포함하고 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 또한 절단형 수용체를 암호화한다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터이다.
일부 측면에서, 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체가 제공된다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 (a) B세포 성숙 항원(BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 스페이서는 면역글로불린으로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 IgG4 또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래된다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 키메라이고 IgG4 또는 IgG2로부터 유래된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지, IgG2/4 CH2 및 IgG4 CH3 영역을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 스페이서는 (i) 서열 번호: 649에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 649와 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는 (iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 암호화된 스페이서는 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
다른 측면에서, (a) B세포 성숙 항원(BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체가 제공된다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 항체 단편이다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 함유하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 함유하고/거나; VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295, 507, 532, 593, 596, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 594, 597, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595, 606, 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 (a) 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 3, 141, 143, 144, 288, 289, 507, 593, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4, 5, 6, 145, 147, 148, 290, 291, 372, 513, 594, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7, 8, 9, 10, 149, 153, 154, 155, 156, 157, 292, 293, 376, 517, 595, 606 또는 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)이거나 이를 포함하고/거나; VL 영역은 (a) 서열 번호: 26, 27, 28, 30, 31, 33, 34, 174, 176, 177, 178, 302, 303, 380, 381, 382, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37, 38, 39, 41, 43, 44, 179, 181, 182, 183, 304, 305, 399, 400, 401, 402, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47, 48, 49, 51, 52, 55, 56, 185, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 306, 307, 415, 417, 418, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)이거나 이를 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 11의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 140, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 150의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 142, 146 및 151의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 152의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 377의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 373 및 152의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 378의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 374 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 29, 40 및 50의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 32, 42 및 53의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 35, 45 및 57의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 36, 46 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 184의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 186의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 187의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 383, 403 및 419의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 384, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 385, 180 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 386, 404 및 420의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 387, 405 및 422의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 406 및 423의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 407 및 424의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 389, 408 및 425의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 390, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 391, 409 및 426의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 392, 40 및 427의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 394, 39 및 429의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 395, 411 및 430의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 431의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 58의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 397, 413 및 432의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 398, 414 및 433의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 119에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 119에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 122에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 122에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 123에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 123에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 114 및 126에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 114 및 126에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 127에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 127에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 247 및 257에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247 및 257에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 249 및 259에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249 및 259에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 250 및 260에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250 및 260에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 251 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대 VH 영역 및 VL 영역은 해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 각각 함유하거나 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 523 및 539에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 523 및 539에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 540에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 540에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 541에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 541에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 525 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 525 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 526 및 542에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 526 및 542에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 527 및 543에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 527 및 543에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 544에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 544에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 529 및 545에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 529 및 545에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 546에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 546에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 547에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 547에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 548에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 548에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 530 및 549에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 530 및 549에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 531 및 550에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 531 및 550에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 552에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 552에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 553에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 553에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 533 및 554에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 533 및 554에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 555에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 555에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 556에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 556에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 557에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 557에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 단편은 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 함유하는 링커를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 (제타 사슬의) 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 일부 구현예에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인 순서로 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755에 제시된 서열 또는 이에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 조작된 세포가 제공된다. 본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포의 일부 구현예에서, 조작된 세포는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체를 함유한다.
본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포의 일부 구현예에서, 세포는 면역 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이고 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포이다.
본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포의 일부 구현예에서, 세포는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타내는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 함유한다. 일부 구현예에서, 세포는 참조 키메라 항원 수용체를 암호화하는 세포에서 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 함유하고, 상기 참조 키메라 항원 수용체는 키메라 항원 수용체와 같은 아미노산 서열을 함유하나 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 뉴클레오타이드 차이를 함유하는 상이한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고/거나 상기 참조 키메라 항원 수용체는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위를 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, RNA 이질성은 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 감소된다. 일부 구현예에서, 참조 CAR을 암호화하는 세포는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타내는, 참조 CAR을 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함한다. 일부 구현예에서, RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포의 일부 구현예에서, 복수의 조작된 세포 중에서, 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만 또는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 복수의 세포가 토닉(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
본 명세서에 제공된 임의의 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 1:3 내지 3:1 또는 약 1:3 내지 3:1이다.
본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 조성물, 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 조작된 세포를 함유하는 조성물이 또한 본 명세서에 제공된다. 일부 구현예에서, 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 멸균된다.
다른 측면에서, 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 조작된 세포 또는 본 명세서에 기재된 임의의 구현예의 조성물을 질병 또는 장애를 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 방법은 조작된 세포 단위 용량 또는 조작된 세포 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포 또는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 질병 또는 장애를 치료하기 위한 본 명세서에 기재된 임의의 조작된 세포 또는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 세포 또는 조성물은 치료 요법에 사용하기 위한 것이며, 여기서 치료 요법은 조작된 세포 단위 용량 또는 조작된 세포 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현과 관련된다. 일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애이다. 일부 구현예에서, 자가 면역 질환 또는 장애는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소증 자반병(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소증 자반병(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 차가스 병(Chagas' disease) 그레이브스 병(Grave's disease), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결절성 다발 동맥염(poly-arteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 보통 천포창(pemphigus vulgaris), 경피증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신증(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노 증후군(Reynaud's syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture's disease), 가와사키 병(Kawasaki disease), 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)이다.
본 명세서에 기재된 임의의 방법의 일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 BCMA 발현 암이다. 일부 구현예에서, 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 암은 림프종, 백혈병 또는 혈장 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 암은 림프종이고 림프종은 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma, NHL), 호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 작은 비절단 세포 림프종(small non-cleaved cell lymphoma), 점막-관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma, MALT), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 비장 림프종, 결절 단핵구 B 세포 림프종(nodal monocytoid B cell lymphoma), 면역 모세포 림프종(immunoblastic lymphoma), 거대 세포 림프종(large cell lymphoma), 확산 혼합 세포 림프종(diffuse mixed cell lymphoma), 폐 B 세포 혈관 중심 림프종(pulmonary B cell angiocentric lymphoma), 작은 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma), 1 차 종격동 B 세포 림프종(primary mediastinal B cell lymphoma), 림프구 형질세포성 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL) 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)이다. 일부 구현예에서, 암은 백혈병이고, 백혈병은 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 혈장 세포 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL)이다. 일부 구현예에서, 암은 혈장 세포 악성 종양이고 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 또는 형질 세포종(plasmacytoma)이다. 일부 구현예에서, 암은 다발성 골수종(MM)이다.
임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 1 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 2 x 109개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 1 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 2.5 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포, 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 1.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 2.5 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 1.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 2.5 x 107개 또는 약 2.5 x 107개, 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개, 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개, 8.0 x 108개 또는 약 8.0 x 108개 또는 1.2 x 109개 또는 약 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개 또는 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 1:1 또는 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1인, CD4+ CAR 발현 T 세포 대 CD8+ CAR 발현 T 세포 및/또는 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 정의된 비율로 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 조합물을 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량에서 CAR 발현 T 세포의 약 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 세포자멸사 마커, 선택적으로 아넥신 V(Annexin V) 또는 활성 카스파제 3(Caspase 3)을 발현한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포 단위 용량에서 CAR 발현 T 세포의 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 아넥신 V 또는 활성 카스파제 3을 발현한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 투여 전에, 대상체는 대상체의 신체 표면적 m2 당 20-40 mg 또는 약 20-40 mg 선택적으로 30 mg 또는 약 30 mg의 플루다라빈을 2-4 일 동안 매일 및/또는 대상체의 신체 표면적 m2 당 200-400 mg 또는 약 200-400 mg 선택적으로 300 mg 또는 약 300 mg의 시클로포스파미드를 2-4 일 동안 매일 투여하는 것을 포함한, 림프구 고갈 요법을 받았다.
임의의 구현예 중 일부에서, 대상체는 대상체의 신체 표면적 m2 당 30 mg 또는 약 30 mg의 플루다라빈을 3 일 동안 매일 및 대상체의 신체 표면적 m2 당 300 mg 또는 약 300 mg의 시클로포스파미드를 3 일 동안 매일 투여하는 것을 포함한 림프구 고갈 요법을 받았다.
임의의 구현예 중 일부에서, 단위 용량의 세포 투여 시 또는 투여 전에, 대상체는 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant, ASCT); 면역 조절제; 프로테아좀 억제제; 및 항 CD38 항체 중에서 선택된 3가지 이상의 요법을 받았다.
임의의 구현예 중 일부에서, 면역 조절제는 탈리도마이드(thalidomide), 레날리도마이드(lenalidomide) 또는 포말리도마이드(pomalidomide) 중에서 선택된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 프로테아좀 억제제는 보르테조밉(bortezomib), 카르필조밉(carfilzomib) 또는 익사조밉(ixazomib) 중에서 선택된다. 임의의 구현예에서, 항 CD38 항체는 다라투무맙(daratumumab)이거나 이를 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 단위 용량의 세포 투여에서, 대상체는 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia, PCL)의 활성 또는 병력을 갖지 않았다.
임의의 구현예 중 일부에서, 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상에서 객관적인 반응(objective response, OR)을 달성할 수 있다. 임의의 구현예 중 일부에서, OR은 엄격한 완전 반응(stringent complete response, sCR), 완전 반응(complete response, CR), 매우 양호한 부분 반응(very good partial response, VGPR), 부분 반응(partial response, PR) 및 최소 반응(minimal response, MR)을 달성하는 대상체를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80% 또는 85% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR), 매우 양호한 부분 반응(VGPR) 또는 부분 반응(PR)을 달성할 수 있다. 임의의 구현예 중 일부에서, 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 20%, 30%, 40% 50%, 60% 또는 70% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR)을 달성할 수 있다.
임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개 또는 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다.
또한, 전이 유전자의 전사된 핵산의 이질성을 결정하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 a) 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용하여 전사된 핵산을 증폭시키는 단계(여기서 하나 이상의 쌍은 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' untranslated region, 5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' 비번역 영역(3' untranslated region, 3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함하여 하나 이상의 증폭된 생성물을 생성); 및 b) 상기 증폭된 생성물을 검출하는 단계(여기서 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍으로부터의 둘 이상의 증폭된 생성물의 존재는 증폭된 생성물에서의 이질성을 나타냄)를 포함한다.
상기 방법의 일부 구현예에서, b)에서의 검출 차이는 증폭된 전사체의 상이한 길이이다. 일부 구현예에서, b)의 차이는 증폭된 전사체의 크로마토그래피 프로파일의 차이이다.
일부 구현예에서, 증폭된 생성물의 차이는 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 5' 프라이머는 전사된 핵산의 프로모터 영역으로부터 전사된 서열에 특이적이다. 일부 구현예에서, 전사된 핵산은 전사된 전-mRNA(pre-mRNA)의 폴리뉴클레오타이드의 아미노산 코딩 서열 및/또는 3' 비번역 영역 내의 서열에 특이적인 3' 프라이머를 사용하여 증폭된다. 일부 구현예에서, 3' 프라이머는 전사된 전-mRNA의 3' 비번역 영역의 폴리아데닐화 서열 또는 인핸서 영역에 특이적이다.
일부 구현예에서, 단계 a)는 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 3' 비번역 영역(3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함한 5' 및 3' 프라이머 단일 쌍을 사용한 단일 증폭 반응에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 단계 a)는 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍, 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍 및 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용하여 병렬 또는 후속 증폭 반응에 의해 달성되고, 여기에서 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍은 전사된 핵산의 5' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고; 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍은 이의 서열이 핵산 전사체의 번역된 서열의 일부에 상보적인 5' 프라이머 및 이의 서열이 전사체의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고; 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍 각각은 전사체의 번역된 영역 내의 서열에 상보적인 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 병렬 또는 후속 증폭 반응은 전사체의 중첩 부분을 증폭한다.
일부 구현예에서, 증폭 산물은 약 1.5 킬로베이스, 2 킬로베이스, 2.5 킬로베이스, 3 킬로베이스, 3.5 킬로베이스, 4 킬로베이스, 4.5 킬로베이스, 5 킬로베이스, 5.5 킬로베이스, 6 킬로베이스, 7 킬로베이스 또는 8 킬로베이스 길이로 예측된다.
임의의 구현예 중 일부에서, 이질성을 갖는 것으로 검출되는 전사 핵산은 하나 이상의 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보로 확인된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 전이 유전자 후보의 전사 핵산은 세포에서 발현 후에 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상 또는 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상의 이질성을 나타낸다.
또한 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법이 제공되고, 상기 방법은, a) 본 명세서에 제공된 전사 핵산의 이질성을 결정하는 임의의 방법에 따라 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하는 단계; b) 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하는 단계; 및 c) b에서 확인된 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위 또는 근처에서 핵산 서열을 변형시켜 변형된 폴리뉴클레오타이드를 생성하는 단계;를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 방법은 또한 d) a) 단계에서와 같이 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 단계를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 방법은 또한 e) d) 단계에서의 전사체 이질성이 a) 단계에서 결정된 바와 같은 전사체의 이질성에 비해 감소될 때까지 b)-d) 단계를 반복하는 단계를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 이상 또는 1.0의 스플라이스 이벤트 점수를 나타내고/거나; 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 확인된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위는 정규, 비정규 또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 전이 유전자는 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체의 일부이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CAR 폴리펩타이드는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL), 스페이서(예를 들어, 재조합 수용체의 리간드 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치된 스페이서 영역), 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항체 단편, 선택적으로 단일 사슬 항체 단편(scFv)을 포함한 항원 결합 도메인을 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 변형된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 CAR 폴리펩티드의 항원 결합 도메인에 대한 코딩 서열 내에서 변형되지 않는다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 전이 유전자의 암호화된 아미노산 서열은 폴리뉴클레오타이드의 변형 후에 변하지 않는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 변형된 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA는 세포에서 비변형 폴리뉴클레오타이드의 발현 후에 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상 또는 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 동질성을 나타낸다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포는 인간 세포이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포는 T 세포이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 방법은 컴퓨터 구현 방법이며, 상기 하나 이상의 단계 a)-c)는 하나 이상의 프로세서 및 메모리를 포함하는 전자 장치에서 발생한다.
또한 프로세서 및 메모리를 포함하는 컴퓨터 시스템이 제공되며, 상기 메모리는 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법 중 하나 이상의 임의의 단계를 프로세서가 수행하게 하는 작동가능한 명령을 포함한다.
도 1a 및 도 1b는 아가로스 겔 전기 영동에 의해 평가된 RNA 이질성을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 1a는 긴 스페이서(long spacer, LS) 영역 또는 보다 짧은 CD28 스페이서 영역을 함유하는 몇몇 항 BCMA CAR의 RNA 이질성을 도시한다. 도 1b는 코딩 서열 최적화 및 스플라이스 부위 제거(O/SSE) 전후에 긴 스페이서(LS) 영역을 함유하는 3개의 상이한 항 BCMA CAR 암호화 서열의 RNA 이질성을 도시한다.
도 2는 코딩 서열의 최적화 및 스플라이스 부위 제거 전(Non-SSE) 및 후(O/SSE) 형질 도입된 T 세포의 표면에서 BCMA-LS CAR 발현의 수준을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 3은 예상 스플라이스 부위(O/SSE)를 제거하기 위해 코돈 최적화되고 변형된 BCMA-LS CAR 작제물을 암호화하는 렌티바이러스 벡터 및 BMCA-LS CAR 작제물을 암호화하는 렌티바이러스 벡터의 형질 도입 효율의 비교를 도시한다.
도 4a는 여러 이펙터:표적 세포(E:T) 비율에서 BCMA를 높은 수준(K562/BCMA) 또는 낮은 수준(RPMI 8226)으로 발현하는 세포주에 대하여 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석결과를 도시한다. 도 4b는 3:1의 E:T 비율로 RPMI-8226 세포에 대하여 몇몇 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 도시한다. 도 4c 및 도 4d는 다양한 BCMA 발현 세포주 상에서 비최적화된 BCMA-LS CAR 발현 T 세포 및 최적화된(O/SSE) BCMA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 도시한다.
도 5a는 몇몇 이펙터:표적 세포(E:T) 비율에서(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 5:1, 2.5:1, 1.25:1 및 0.6:1) BCMA를 높은 수준(K562/BCMA) 또는 낮은 수준(RPMI 8226)으로 발현하는 세포주와의 배양에 대한 반응으로 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 5b는 상이한 E:T 비율에서(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 3:1, 1.5:1, 0.75:1 및 0.375:1) BCMA 발현 K562/BCMA 및 RPMI 8226 세포와의 배양에 대한 반응으로 비최적화된 BCMA-LS CAR 발현 T 세포 및 최적화된(O/SSE) BCMA-LS CAR 발현 T 세포의 IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 도시한다.
도 6은 다양한 수준의 BCMA를 발현하는 BCMA 발현 세포와 함께 2명의 도너로부터의 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포를 배양한 후 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 7은 다양한 수준의 BCMA를 발현하는 BCMA 발현 세포와 함께 2명의 도너로부터의 BCMA-55-LS-O/SSE-발현 T 세포를 배양한 후 IFN분비를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 8은 OPM2 표적 세포 상에서 상이한 스페이서 영역을 함유하는 CAR을 발현하는 항 BCMA 발현 CAR T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 9a 및9b는 가용성 BCMA-Fc의 존재 하에 OPM2 표적 세포와 항 BCMA CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후, 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 10a는 H929 다발성 골수종 세포주로부터의 상청액의 존재 하에 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 10b는 재조합 B 세포 활성화 인자(B-cell activating factor, BAFF)의 존재 하에 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 11a 및 도 11b는 가용성 BCMA-Fc의 존재(도 11a) 또는 상이한 농도(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 (0 ng/mL, 111 ng/mL, 333 ng/mL 및 1000 ng/mL)에서 다발성 골수종 세포주 H929로부터의 상청액의 존재(도 11b) 하에 OPM2 표적 세포와 항 BCMA CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후, IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 12a는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, OPM2 인간 다발성 골수종 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 12b는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, OPM2 인간 다발성 골수종 이종이식 마우스 모델에서 생존을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 13a는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 13b는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스 모델에서의 생존을 도시한다.
도 14a 및 도 14b는 단일 도너(도너 2)로부터 유래된 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR T 세포로 처리된 RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스로부터의 혈액에서 CD4+(도 14a) 및 CD8+(도 14b) CAR 양성 T 세포의 수를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 15a 및 도 15b는 단일 도너(도너 1)로부터 유래된 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR T 세포로 처리된 RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스로부터의 혈액에서 CD4+(도 15a) 및 CD8+(도 15b) CAR 양성 T 세포의 수를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 16a는 BCMA-Fc(IgG의 Fc 영역에 C-말단에서 융합된 가용성 인간 BCMA) 융합 폴리펩티드(0.008 g/mL, 0.04 g/mL, 0.2 g/mL, 1 g/mL 및 5 g/mL)로 밤새 코팅된 96 웰 세포 배양 플레이트에서 6 시간 동안 인큐베이션된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포에서 유세포 분석에 의해 검출된 바와 같이, tdTomato 및 절단형 수용체(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 평가한 분석 결과를 도시한다. 재조합 Fc 폴리펩티드를 대조군(Fc 대조군)으로 사용하였다.
도 16b는 BCMA-Fc의 10개의 2배 연속 희석과 인큐베이션된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-25-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 절단형 수용체를 발현하는 세포 중 tdTomato+ 세포의 백분율을 평가한 분석 결과를 도시한다. 상이한 항원에 대해 특이적인 CAR을 발현(항 CD19 CAR)하는 세포를 대조군으로 사용하였다.
도 17은 다양한 E:T 비율에서 인간 BCMA 발현 K562 표적 세포(BCMA.K562)와 공배양 후에, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-SS CAR 발현 리포터 세포 중에서 tdTomato+ 세포의 백분율을 도시한다.
도 18은 3일 동안 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하기 위해 항원 자극 없이 인큐베이션된 항CD19 CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-52-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 유세포 분석으로 검출된 바와 같이, tdTomato 및 GFP(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 도시한다.
도 18은 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하기 위해 항원 자극 없이 인큐베이션된 항CD19 CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-52-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 유세포 분석으로 검출된 바와 같이, tdTomato 및 절단형 수용체(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 도시한다.
도 20a는 2:1 또는 5:1의 E:T 비율에서 인간 BCMA(huBCMA), 뮤린 BCMA(muBCMA) 또는 시노몰구스 원숭이 BCMA(cynoBCMA)를 발현하는 K562 인간 골수성 백혈병 세포와 공배양된 인간 BCMA에 대해 특이적인 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 Nur77-tdTomato 리포터 세포 중에서 유세포 분석으로 평가된 바와 같이, tdTomato+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 20b 및 도 20c는 96 웰 편평한 바닥 플레이트에 코팅된 huBCMA 및 cynoBCMA의 농도 증가(0, 0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 및 100 g/mL)로 배양된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 리포터 세포들 중에서, 유세포 분석으로 평가된 바와 같이 tdTomato+ 세포의 백분율(도 20b) 및 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity, MFI; 도 20c)를 도시한다.
도 21a는 전사체 및 예상 증폭 생성물을 위한 예시적인 증폭 전략을 도시한다. 도 21b는 공지 및 공지되지 않은(숨은) 전사체 스플라이스 부위의 증폭으로부터 초래된 예시적인 증폭 생성물을 도시한다. 도 21c는 중첩 프라이머 쌍을 사용한 전사체의 예시적인 슬라이딩 윈도우 증폭을 도시한다.
도 2는 코딩 서열의 최적화 및 스플라이스 부위 제거 전(Non-SSE) 및 후(O/SSE) 형질 도입된 T 세포의 표면에서 BCMA-LS CAR 발현의 수준을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 3은 예상 스플라이스 부위(O/SSE)를 제거하기 위해 코돈 최적화되고 변형된 BCMA-LS CAR 작제물을 암호화하는 렌티바이러스 벡터 및 BMCA-LS CAR 작제물을 암호화하는 렌티바이러스 벡터의 형질 도입 효율의 비교를 도시한다.
도 4a는 여러 이펙터:표적 세포(E:T) 비율에서 BCMA를 높은 수준(K562/BCMA) 또는 낮은 수준(RPMI 8226)으로 발현하는 세포주에 대하여 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석결과를 도시한다. 도 4b는 3:1의 E:T 비율로 RPMI-8226 세포에 대하여 몇몇 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 도시한다. 도 4c 및 도 4d는 다양한 BCMA 발현 세포주 상에서 비최적화된 BCMA-LS CAR 발현 T 세포 및 최적화된(O/SSE) BCMA-LS CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 도시한다.
도 5a는 몇몇 이펙터:표적 세포(E:T) 비율에서(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 5:1, 2.5:1, 1.25:1 및 0.6:1) BCMA를 높은 수준(K562/BCMA) 또는 낮은 수준(RPMI 8226)으로 발현하는 세포주와의 배양에 대한 반응으로 BMCA-LS CAR 발현 T 세포의 IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 5b는 상이한 E:T 비율에서(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 3:1, 1.5:1, 0.75:1 및 0.375:1) BCMA 발현 K562/BCMA 및 RPMI 8226 세포와의 배양에 대한 반응으로 비최적화된 BCMA-LS CAR 발현 T 세포 및 최적화된(O/SSE) BCMA-LS CAR 발현 T 세포의 IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 도시한다.
도 6은 다양한 수준의 BCMA를 발현하는 BCMA 발현 세포와 함께 2명의 도너로부터의 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포를 배양한 후 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 7은 다양한 수준의 BCMA를 발현하는 BCMA 발현 세포와 함께 2명의 도너로부터의 BCMA-55-LS-O/SSE-발현 T 세포를 배양한 후 IFN분비를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 8은 OPM2 표적 세포 상에서 상이한 스페이서 영역을 함유하는 CAR을 발현하는 항 BCMA 발현 CAR T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 9a 및9b는 가용성 BCMA-Fc의 존재 하에 OPM2 표적 세포와 항 BCMA CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후, 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 10a는 H929 다발성 골수종 세포주로부터의 상청액의 존재 하에 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 10b는 재조합 B 세포 활성화 인자(B-cell activating factor, BAFF)의 존재 하에 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포의 세포 용해 활성을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 11a 및 도 11b는 가용성 BCMA-Fc의 존재(도 11a) 또는 상이한 농도(도면에서 각각 a, b, c 및 d로 표시된 (0 ng/mL, 111 ng/mL, 333 ng/mL 및 1000 ng/mL)에서 다발성 골수종 세포주 H929로부터의 상청액의 존재(도 11b) 하에 OPM2 표적 세포와 항 BCMA CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후, IFN, IL-2 및 TNF 사이토카인 방출을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 12a는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, OPM2 인간 다발성 골수종 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 12b는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, OPM2 인간 다발성 골수종 이종이식 마우스 모델에서 생존을 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 13a는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스 모델에서 종양 성장을 평가한 분석 결과를 도시한다. 도 13b는 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR을 발현하는 CAR T 세포의 단일 정맥 주사 후에, RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스 모델에서의 생존을 도시한다.
도 14a 및 도 14b는 단일 도너(도너 2)로부터 유래된 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR T 세포로 처리된 RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스로부터의 혈액에서 CD4+(도 14a) 및 CD8+(도 14b) CAR 양성 T 세포의 수를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 15a 및 도 15b는 단일 도너(도너 1)로부터 유래된 최적화된(O/SSE) 항 BCMA CAR T 세포로 처리된 RPMI-8226(피하) 이종이식 마우스로부터의 혈액에서 CD4+(도 15a) 및 CD8+(도 15b) CAR 양성 T 세포의 수를 평가한 분석 결과를 도시한다.
도 16a는 BCMA-Fc(IgG의 Fc 영역에 C-말단에서 융합된 가용성 인간 BCMA) 융합 폴리펩티드(0.008 g/mL, 0.04 g/mL, 0.2 g/mL, 1 g/mL 및 5 g/mL)로 밤새 코팅된 96 웰 세포 배양 플레이트에서 6 시간 동안 인큐베이션된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포에서 유세포 분석에 의해 검출된 바와 같이, tdTomato 및 절단형 수용체(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 평가한 분석 결과를 도시한다. 재조합 Fc 폴리펩티드를 대조군(Fc 대조군)으로 사용하였다.
도 16b는 BCMA-Fc의 10개의 2배 연속 희석과 인큐베이션된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-25-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 절단형 수용체를 발현하는 세포 중 tdTomato+ 세포의 백분율을 평가한 분석 결과를 도시한다. 상이한 항원에 대해 특이적인 CAR을 발현(항 CD19 CAR)하는 세포를 대조군으로 사용하였다.
도 17은 다양한 E:T 비율에서 인간 BCMA 발현 K562 표적 세포(BCMA.K562)와 공배양 후에, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-SS CAR 발현 리포터 세포 중에서 tdTomato+ 세포의 백분율을 도시한다.
도 18은 3일 동안 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하기 위해 항원 자극 없이 인큐베이션된 항CD19 CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-52-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 유세포 분석으로 검출된 바와 같이, tdTomato 및 GFP(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 도시한다.
도 18은 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하기 위해 항원 자극 없이 인큐베이션된 항CD19 CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-52-LS-O/SSE CAR 발현 리포터 세포에서 유세포 분석으로 검출된 바와 같이, tdTomato 및 절단형 수용체(CAR 발현을 위한 대리 마커)의 발현 수준을 도시한다.
도 20a는 2:1 또는 5:1의 E:T 비율에서 인간 BCMA(huBCMA), 뮤린 BCMA(muBCMA) 또는 시노몰구스 원숭이 BCMA(cynoBCMA)를 발현하는 K562 인간 골수성 백혈병 세포와 공배양된 인간 BCMA에 대해 특이적인 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 Nur77-tdTomato 리포터 세포 중에서 유세포 분석으로 평가된 바와 같이, tdTomato+ 세포의 백분율을 도시한다. 도 20b 및 도 20c는 96 웰 편평한 바닥 플레이트에 코팅된 huBCMA 및 cynoBCMA의 농도 증가(0, 0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 및 100 g/mL)로 배양된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 리포터 세포들 중에서, 유세포 분석으로 평가된 바와 같이 tdTomato+ 세포의 백분율(도 20b) 및 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity, MFI; 도 20c)를 도시한다.
도 21a는 전사체 및 예상 증폭 생성물을 위한 예시적인 증폭 전략을 도시한다. 도 21b는 공지 및 공지되지 않은(숨은) 전사체 스플라이스 부위의 증폭으로부터 초래된 예시적인 증폭 생성물을 도시한다. 도 21c는 중첩 프라이머 쌍을 사용한 전사체의 예시적인 슬라이딩 윈도우 증폭을 도시한다.
제공된 구현예 중에는 BCMA 및 BCMA 발현 세포 및 질병을 표적화하거나 지시하는 것을 포함하는 조성물, 제조 물품, 화합물, 방법 및 용도가 있다. BCMA는 예를 들어 정상 조직에서 거의 발현되지 않고 예를 들어, 모든 재발 또는 새로 진단된 골수종 환자로부터와 같은 악성 혈장 세포에서 특정 질병 및 병태 예컨대 악성 또는 이의 조직 또는 세포에서 발현, 예를 들어 이종으로 발현되는 것으로 관찰된다. 제공된 구현예 중에는 상기 질병 및 병태의 치료 및/또는 키메라 항원 수용체(CAR) 및 상기 암호화된 CAR과 같은 암호화된 수용체를 포함하는 BCMA 결합 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 상기를 포함한 조성물 및 제조 물품을 포함하는 상기 세포 유형을 표적화하는데 유용한 접근법이 있다. 수용체는 일반적으로 BCMA에 특이적인 항체(항원 결합 항체 단편, 예컨대 중쇄 가변(VH) 영역, scFv를 포함한 단일 도메인 항체 단편 및 단일 사슬 단편 포함)를 함유할 수 있다. 또한 세포, 예컨대 상기 BCMA 결합 수용체, 예를 들어, 항 BCMA CAR을 발현하고/거나 상기 수용체를 암호화하는 핵산 및 상기 세포를 함유하는 조성물 및 제조 물품 및 치료 단위 용량을 함유하는 조작 또는 재조합 세포가 제공된다. 또한 핵산 서열(들), 예를 들어, 재조합 BCMA 결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열을 평가, 최적화, 제조 및 사용 방법이 제공된다. 또한 재조합 BCMA 결합 수용체 및 재조합 BCMA 결합 수용체 암호화 폴리뉴클레오타이드 또는 상기 세포를 함유하는 조성물을 발현 또는 함유하는 세포(예를 들어 조작된 세포)의 제조 및 이용(예컨대 BCMA 발현 질병 및 병태의 치료 또는 개선) 방법이 제공된다.
입양 세포 요법(다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법뿐만 아니라 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 관심 질병 또는 장애에 특이적인 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것을 포함)은 암 및 기타 질병 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다. 특정 맥락에서, 입양 세포 요법에 유용한 접근이 항상 전적으로 만족스럽지 않을 수 있다. 일부 측면에서, 투여된 세포가 표적, 예를 들어, BCMA와 같은 표적 항원을 인식 및 결합, 왕래하는 능력은 대상체, 종양 및 이의 환경 내의 적절한 부위로 국소화 및 성공적으로 진입하여 활성화, 증폭되고, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함하여 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기를 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태로의 분화, 전환 또는 재프로그래밍에 관여하고, 클리어런스(clearance) 및 표적 리간드 또는 항원에 대한 재노출 후에 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 소진, 아네르기, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시킨다.
일부 맥락에서, 치료에 대한 최적 반응은 CAR과 같은 조작된 재조합 수용체의 능력에 따라 달라질 수 있어서, 세포의 표면 상에 일관되고 확실하게 발현되고/거나 표적 항원에 결합할 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 도입된 전이 유전자(예를 들어, 재조합 수용체 암호화)로부터 전사된 RNA의 이질성은 일부 경우에 세포 요법에 사용되는 인간 T 세포와 같은 세포에서 발현될 때, 재조합 수용체의 발현 및/또는 활성에 영향을 미칠 수 있다. 일부 맥락에서, CAR과 같은 재조합 수용체에서 스페이서의 길이 및 유형은 수용체의 발현, 활성 및/또는 기능에 영향을 미칠 수 있다.
또한, 일부 맥락에서, 특정 재조합 수용체는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달("토닉 신호 전달(tonic signaling)"로도 공지)을 나타낼 수 있으며, 이는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 분화 및/또는 소진의 증가에 기인한 것과 같은 바람직하지 않은 영향으로 이어질 수 있다. 일부 측면에서, 상기 활성은 T 세포의 활성, 효과 또는 효능을 제한할 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체 발현을 위한 세포의 조작 및 생체 외 증폭 동안, 세포는 재조합 수용체를 통한 토닉 신호 전달로 인해 소진을 나타내는 표현형을 나타낼 수 있다.
일부 맥락에서, 재조합 수용체가 특이적 결합, 인식 또는 표적화하는 특정 표적 항원의 특성은 수용체의 활성에 영향을 미칠 수 있다. 일부 맥락에서, B 세포 성숙 항원(BCMA)은 전형적으로 악성 혈장 세포 상에서 발현되며 세포 요법을 위한 매력적인 치료 표적이다. 일부 경우에, BCMA는 감마 세크레타아제에 의해 절단되어, 수용성 BCMA(soluble BCMA, sBCMA) 또는 BCMA의 "탈락(shed)" 형태를 생성하고 표적 세포의 표면 상에서 발현되는 BCMA를 감소시킬 수 있다. 일부 경우에, BCMA 결합 분자의 활성, 예컨대 항 BCMA 키메라 항원 수용체의 활성은 수용성 BCMA의 존재에 의해 차단되거나 억제될 수 있다. 세포 요법에 대한 최적의 반응, 특히 BCMA를 특이적으로 결합, 인식 또는 표적화하는 재조합 수용체에 대한 개선된 전략이 필요하다.
제공된 구현예는, 일부 맥락에서, 핵산 서열의 특정 스페이서 및 최적화가 재조합 수용체의 일관되고 강력한 발현을 유도할 수 있다는 관측에 기초한다. 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체는 세포 요법, 특히 BCMA 표적화 세포 요법을 위한 이용 가능한 접근법에 비해 이점을 제공한다. 일부 구현예에서, 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체는 수용성 BCMA에 의한 억제의 결여 및 항원 비의존적, 토닉 신호 전달의 감소를 나타내는 것으로 관찰된다. 다양한 측면에서, 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체, 상기 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 조작된 세포 및 세포 조성물은 세포 요법, 예를 들어 BCMA 결합 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 이용한 세포 요법에 대한 최적의 반응을 감소시킬 수 있는 특정 한계를 극복하거나 중화시킬 수 있는 특정 바람직한 특성을 나타낸다. 일부 측면에서, 본 명세서에 제공된 예시적인 BCMA 결합 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 함유하는 조성물은 조작된 세포의 세포 건강의 일관성을 나타내는 것으로 관찰되었고, 임상 반응과 관련되었다. 일부 맥락에서, 재조합 수용체, 상기 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 조작된 세포 및 세포 조성물을 포함한 제공된 구현예는 BCMA를 표적화하는 이용 가능한 요법에 비해 다양한 이점을 제공하여, 재조합 수용체의 활성 및 BCMA 표적화 세포 요법에 대한 반응을 개선할 수 있다.
Ⅰ. BCMA 결합 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
일부 측면에서 BCMA 결합 제제(agents), 예컨대 BCMA 분자에 결합 또는 인식하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체와 같은 세포 표면 단백질 및 BCMA 결합 세포 표면 단백질, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. BCMA 결합 세포 표면 단백질은 일반적으로 특이적으로 결합, 예컨대 BCMA, 예컨대 BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어 항원 결합 항체 단편) 및/또는 기타 결합 펩티드를 함유한다. 일부 측면에서, 제제는 BCMA의 세포 외 부분에 결합한다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 RNA 이질성을 감소시키고/거나 변형, 예를 들어 세포 생성물 로트(lots) 중에서 암호화된 수용체의 표면 발현과 같은 발현을 증가시키거나 보다 일관되도록 최적화되거나, 코돈 사용과 같은 최적화를 위해 설계된 특정 특징을 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 숨은 또는 숨겨진 스플라이스 부위를 제거하는 것과 같이 참조 폴리뉴클레오타이드에 비해 변형되어 RNA 이질성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 포유동물, 예를 들어 인간 세포, 예컨대 인간 T 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 측면에서, 변형된 폴리뉴클레오타이드는 세포에서 발현될 때 개선된, 예를 들어, 증가되거나 보다 균일하거나 보다 일관된 수준의 발현, 예를 들어 표면 발현을 초래한다. 상기 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 BCMA 결합 세포 표면 단백질을 발현하는 조작된 세포의 생성을 위한 작제물에서 이용될 수 있다. 따라서, 또한 본 명세서에 제공된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포 및 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 제공된다.
제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 특이적으로 BCMA에 결합하는 것과 같이 특이적으로 인식하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 것이 있다. 일부 측면에서, BCMA 결합 폴리펩티드를 함유하는 것과 같은 암호화된 수용체 및 조성물 및 제조 물품 및 상기 용도가 또한 제공된다.
BCMA 결합 폴리펩티드 중에는 항체, 예컨대 단일 사슬 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편) 또는 이의 일부가 존재한다. 일부 예에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체, 예컨대 항 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 것이다. 임의의 구현예에서, 항원, 예를 들어 BCMA를 특이적으로 인식하는 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 단편은 항원에 특이적으로 결합한다. 제공된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 재조합 BCMA 결합 수용체의 발현을 위해 세포 내로 도입될 수 있는 것과 같이 데옥시리보 핵산(DNA) 또는 RNA 작제물과 같은 작제물에 통합될 수 있다.
일부 경우에, BCMA 결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 일부 경우에 BCMA 결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열의 상류에서 암호화되거나 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산 서열의 5' 말단에서 연결되는 신호 펩티드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 경우에, BCMA 결합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 신호 펩티드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩티드로부터 유래된 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩티드는 서열 번호: 619 또는 682-685 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되거나 서열 번호: 620에 제시된 IgG 카파 사슬의 신호 펩티드; 서열 번호: 850에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 서열 번호: 851에 제시된 GMCSFR 알파 사슬; 서열 번호: 852에 제시된 CD8 알파 신호 펩티드; 또는 서열 번호: 853에 제시된 CD33 신호 펩티드를 포함한다. 일부 경우에, BCMA 결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 대리 마커 또는 다른 마커와 같은 추가 분자를 암호화하는 핵산 서열을 함유할 수 있거나, 추가 성분, 예컨대 프로모터, 조절 요소 및/또는 다중 시스트론 요소(multicistronic elements)를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은 임의의 추가 성분에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
A. 암호화된 재조합 BCMA 결합 수용체의 성분
제공된 BCMA 결합 수용체는 일반적으로 세포 외 결합 분자 및 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 결합 분자 중에는 단일 사슬 세포 표면 단백질, 예를 들어 상기 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 포함하는 항체를 함유하는 폴리펩티드가 있다.
제공된 결합 분자(예를 들어, BCMA 결합 분자) 중에는 제공된 항체 또는 이의 단편(예를 들어, BCMA 결합 단편) 중 하나를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, 항원 수용체)와 같은 단일 사슬 세포 표면 단백질이 있다. 재조합 수용체는 제공된 항 BCMA 항체, 예를 들어 항원 결합 단편을 함유하는 항원 수용체와 같이 BCMA에 특이적으로 결합하거나 이를 특이적으로 인식하는 항원 수용체를 포함한다. 항원 수용체 중에는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR)가 있다. 또한, 재조합 수용체를 발현하는 세포 및 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 제공된다.
CAR을 포함하는 예시적 항원 수용체 및 상기 항원 수용체를 조작하고 세포 내로 도입하는 방법은 예를 들어 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013166321, WO2013071154, WO2013123061 및 미국 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353 및 8,479,118 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416]에 기재된 것들 및/또는 문헌[Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 기재된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 문헌[미국 특허 번호 제7,446,190호]에 기재된 바와 같은 CAR 및 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO2014055668]에 기재된 것을 포함한다. 예시적인 CAR은 상기 언급된 발행물, 예컨대 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, US 7,446,190 및 US 8,389,282 중 어느 하나에 개시된 바와 같은 CAR을 포함하고 항원 결합 부분, 예를 들어 scFv는 본 명세서에 제공된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로 대체된다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은 서열 번호: 757-762 중에서 선택된 아미노산 서열을 갖거나 서열 번호: 757-762 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 핵산 서열 또는 서열 번호: 751-756 중 어느 하나에 제시된 핵산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 핵산 서열 또는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 핵산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 서열 번호: 755에 제시된 핵산 서열 또는 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 서열 번호: 755에 제시된 핵산 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 (a) 서열 번호: 648, 330-352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열; (b) 서열 번호: 648, 330-352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는 (c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열을 포함한다.
1. 항원 결합 도메인
키메라 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)가 있다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 제공된 항 BCMA 항체 중 하나를 포함하거나, 제공된 항 BCMA 항체 중 하나이거나, 제공된 항 BCMA 항체 중 하나 안에 포함되거나, 제공된 항 BCMA 항체 중 하나를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인을 포함한다. 따라서, 키메라 수용체, 예를 들어 CAR은 전형적으로 세포 외 부분에 하나 이상의 BCMA 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원 결합 단편, 도메인 또는 부분 또는 하나 이상의 항체 가변 영역 및/또는 항체 분자, 예컨대 본 명세서에 기재된 것을 포함한다.
본 명세서에서 용어 "항체(antibody)"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원 결합) 항체 단편을 포함하는 다클론성 및 단클론성 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작되고/거나 달리 변형된 형태의 면역글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 전체 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적, 예를 들어 이중 특이적 또는 삼중 특이적 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항체"는 본 명세서에서 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"으로도 지칭되는 이의 기능성 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포함한다.
용어 "초가변 영역(hypervariable region)" 또는 "HVR"과 동의어인 "상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 및 "CDR"은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. "프레임워크 영역(Framework region)" 및 "FR"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[카바트 et al. (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (카바트(Kabat) 넘버링 체계); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (코티아(Chothia) 넘버링 체계); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography, J. Mol. Biol. 262, 732-745. (콘택트(Contact) 넘버링 체계); Lefranc MP et al., IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains, Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (IMGT 넘버링 체계); Honegger A and Plukthun A, Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool, J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (Aho 넘버링 체계); 및 Martin et al., Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm, PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (AbM 넘버링 체계)]에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 카바트 체계는 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면 코티아 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. 카바트 및 코티아 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 "30a"에 의해 제공된 삽입 및 일부 항체에서 나타나는 결실을 갖는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기초한다. 두 가지 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(인델(indel))을 배치하여 차별적인 넘버링을 초래한다. 콘택트 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 기초하며 여러 측면에서 코티아 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기초한 카바트와 코티아 정의 사이의 절충안이다.
하기 표 1은 카바트, 코티아, AbM 및 콘택트 체계에 의해 각각 확인된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, 카바트 및 코티아 넘버링 체계 둘 다를 사용한 잔기 넘버링이 나열된다. FR은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR 사이에 위치한다. 도시된 카바트 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 카바트 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때 코티아 CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
[표 1]
따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 "CDR" 또는 "상보적 결정 영역(complementary determining region)" 또는 개별 지정 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 상기 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에 있는 해당 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급될 경우, 상기 CDR은 상기 언급된 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내의 해당 CDR(예를 들어, CDR-H3) 서열을 갖는다고 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계를 사용하여 기재되지만, 제공된 항체는 상기 언급된 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에서, CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계는 카바트, 코티아, AbM 또는 콘택트 방법 또는 다른 공지진 체계에 의해 정의된 바와 같이 특정된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
용어 "가변 영역(variable region)" 또는 "가변 도메인(ariable domain)"은 항체를 항원에 결합시키는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역(각각 VH 및 VL)은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91 페이지(2007)]을 참조한다. 단일 VH 또는 VL 도메인이 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리되어 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 각각 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
제공된 CAR에 포함된 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편(antibody fragment)" 또는 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 중쇄 가변(VH) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이적 항체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에 있는 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 예컨대 scFv와 같은 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편이다.
단일 도메인 항체(Single-domain antibody, sdAb)는 항체의 중쇄 가변 영역의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다.
항체 단편은 온전한 항체의 단백질 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합으로 생성된 단편, 예컨대 합성 링커, 예를 들어 펩티드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것과 같은 자연적으로 발생하지 않는 배열을 포함하는 단편이고/거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않을 수 있다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv이다.
"인간화된(humanized)" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화된 형태(humanized form)"는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서, 전형적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선시키기 위해 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)로부터의 해당 잔기로 치환된다.
제공된 CAR에 포함된 항 BCMA 항체 중에는 인간 항체가 있다. "인간 항체(human antibody)"는 인간 또는 인간 세포 또는 인간 항체 라이브러리를 포함하는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체 암호화 서열을 이용하는 비인간 공급원에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 상기 용어는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간인 것과 같은 비인간 항원 결합 영역을 포함하는 비인간 항체의 인간화된 형태를 배제한다. 상기 용어는 인간 항체의 항원 결합 단편을 포함한다.
인간 항체는 항원의 도전에 대한 반응으로 인간 가변 영역을 가진 손상되지 않은 인간 항체 또는 손상되지 않은 항체를 생성하도록 변형된 전이 유전자를 가진 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 상기 동물은 전형적으로 내인성 면역글로불린 유전자 좌를 대체하거나 또는 동물의 염색체 내로 무작위 통합되거나 염색체 외에 존재하는 인간 면역글로불린 유전자 좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 전이 유전자 동물에서, 내인성 면역글로불린 좌위는 일반적으로 불활성화된다. 인간 항체는 또한 인간 레퍼토리로부터 유래된 항체 암호화 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무세포 라이브러리를 포함한, 인간 항체 라이브러리로부터 유래될 수 있다.
제공된 CAR에 포함된 항체 중에는 단클론성 항체 단편을 포함하는 단클론성 항체인 것이 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "단클론성 항체(monoclonal antibody)"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터 또는 실질적으로 균질한 항체 집단 내에서 수득된 항체를 지칭한다, 즉 상기 집단을 포함하는 개별 항체는 단클론성 항체 제제의 생산 동안 발생하거나 자연적으로 발생하는 돌연변이를 함유하는 가능한 변이체를 제외하고 동일하며, 상기 변이체는 일반적으로 미미한 양으로 존재한다. 전형적으로 상이한 에피토프에 대하여 지시되는 상이한 항체를 포함하는 다클론성 항체 제제와는 대조적으로, 단클론성 항체 제제의 각 단클론성 항체는 항원 상의 단일 에피토프에 대해 지시된다. 상기 용어는 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 단클론성 항체는 하이브리도마, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 및 기타 항체 디스플레이 방법으로부터의 생성을 포함하되 이에 제한되지 않는 다양한 기술에 의해 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 scFv 항체 단편의 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역과 같은 항체 분자의 BCMA 결합 부분 또는 부분들을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 BCMA 결합 CAR은 제공된 CAR의 BCMA 결합 특성을 부여하는 항 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 도메인은 기재된 임의의 항 BCMA 항체이거나 기재된 임의의 항 BCMA 항체로부터 유래될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, 국제 출원 WO 2016090320, WO2016090327, WO2010104949 및 WO2017173256]을 참조한다. 상기 항 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편 중 어느 하나가 제공된 CAR에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항 BCMA CAR은 문헌[국제 출원 WO 2016090320 또는 WO2016090327]에 기재된 항체로부터 유래된 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 scFv인 항원 결합 도메인을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 항 BCMA 항체 또는 항원 결합 단편은 기재된 바와 같은 중쇄 및/또는 경쇄 가변(VH 또는 VL) 영역 서열 또는 충분한 이의 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 항체 예를 들어 항원 결합 단편은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 항체 예를 들어 항원 결합 단편은 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 항체 예를 들어 항원 결합 단편은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열을 함유하고 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열을 함유한다. 또한 항체 중에는 상기 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일하거나 약 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98% 또는 약 99% 동일한 서열을 갖는 것이 존재한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617 및 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변(VH) 영역을 갖거나 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항체 단편은 문헌[국제 출원 WO 2016090327, WO 2016090320 또는 WO 2017173256]에 기재된 항체 또는 항체 결합 단편 중 어느 하나의 VH 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, 항 BCMA 항체의 VH 영역은 아미노산 서열 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14(서열 번호: 355, 여기에서 X1은 A, D, E, G, L, V 또는 W; X2는 A, D, G, L, P, Q 또는 S; X3은 A, D, G, L 또는 Y; X4는 D, G, P, R, S, V, Y 또는 부재; X5는 D, I, P, S, T, Y 또는 부재; X6은 A, G, I, S, T, V, Y 또는 부재; X7은 A, D, E, F, L, P, S, Y 또는 부재; X8은 P, Q, T, Y 또는 부재; X9는 D, G, R, Y 또는 부재; X10은 A, F, Y 또는 부재; X11은 D, F 또는 부재; X12는 F 또는 부재; X13은 D, T 또는 Y; 및 X14는 I, L, N, V 또는 Y)를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 것이다. 상기 일부 구현예에서, 상기 CDR-H3에서, X1은 V; X2는 D; X3은 G; X4는 D; X5는 Y; X6은 V; X7은 D; X8은 부재; X9는 부재; X10은 부재; X11은 부재; X12는 부재; X13은 D; 및 X14는 Y이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 및 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 606 및 613으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 517, 595, 606 또는 613 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-H3 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 H95 내지 H102 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 및 595 중 어느 하나, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 및 595 중 어느 하나 또는 서열 번호: 606 및 613 중 어느 하나로부터 선택된 CDR-H3 서열에 의해 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 아미노산 서열 X1X2X3MX4(서열 번호: 353, X1은 D 또는 S; X2는 Y 또는 S; X3은 A, G, W 또는 Y; 및 X4는 H, Q 또는 S)를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1)을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 CDR-H1에서, X1은 D; X2는 Y; X3은 Y; 및 X4는 S이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 507 및 593 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 12-15, 158-160, 294, 295, 532 및 596 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 19-22, 165-169, 298, 299, 509, 577 및 598 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 604 및 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 507, 532, 577, 593, 596, 598, 604 및 611 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-H1 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 H31 내지 H35 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 507 및 593 중 어느 하나, 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 12-15, 158-160, 294, 295, 532 및 596 중 어느 하나, AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 19-22, 165-169, 509, 298, 299, 509, 577 및 598 중 어느 하나 또는 서열 번호: 604 및 611 중 어느 하나로부터 선택된 CDR-H1 서열에 의해 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 아미노산 서열 X1IX2X3X4X5X6X7X8X9X10X11YX12 X13 X14 X15 X16 X17(서열 번호: 354, 여기에서 X1은 F, G, H, V, W 또는 Y; X2는 N, R, S 또는 V; X3은 P, Q, S, V, W 또는 Y; X4는 K 또는 부재; X5는 A 또는 부재; X6은 D, G, N, S 또는 Y; X7은 G 또는 S; X8은 G 또는 S; X9는 E, G, N, T 또는 S; X10은 I, K 또는 T; X11은 E, G, N 또는 Y; X12는 A 또는 V; X13은 A, D 또는 Q; X14는 K 또는 S; X15는 F 또는 V; X16은 K 또는 Q; 및 X17은 E 또는 G)를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2)를 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 CDR-H2에서, X1은 Y; X2는 S, X3은 S; X4는 부재; X5는 부재; X6은 S; X7은 G; X8은 S; X9는 T; X10은 I; X11은 Y; X12는 A; X13은 D; X14는 S; X15는 V; X16은 K; 및 X17은 G이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 372-374, 513 및 594 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 16-18, 161-164, 296, 297, 514-516, 551, 597 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 23-25, 170-173, 300, 301, 510-512, 587 및 599 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 605 및 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 513, 551, 587, 594, 597, 599, 605 또는 612 중 어느 하나의 아미노산 서열을 갖는 CDR-H2를 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-H2 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 H50 내지 H65 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 372-374, 513 및 594 중 어느 하나, 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 16-18, 161-164, 296, 297, 514-516, 551, 597 중 어느 하나, AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 23-25, 170-173, 300, 301, 510-512, 587 및 599 중 어느 하나 또는 서열 번호: 605 또는 612로부터 선택된 CDR-H2 서열에 의해 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H2를 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 507 및 593 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H1; 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 372-374, 513 및 594 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H2; 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 및 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 12-15, 158-160, 294, 295, 532 및 596 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H1; 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 16-18, 161-164, 296, 297, 514-516, 551, 597 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H2; 코티아 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 및 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 19-22, 165-169, 509, 298, 299, 509, 577 및 598 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H1; AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 23-25, 170-173, 300, 201, 510-512, 587 및 599 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H2; AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595, 606 및 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 604 및 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H1; 서열 번호: 605 및 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H2; 서열 번호: 606 및 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 카바트 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 코티아 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 140, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 150의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 142, 146 및 151의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 377의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 373 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 378의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 374 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 289, 291, 293의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링에 따른 서열 번호: 1, 4 및 7; 서열 번호: 2, 5 및 8; 서열 번호: 2, 5 및 9; 서열 번호: 2, 5 및 10; 서열 번호: 3, 6 및 11; 서열 번호: 140, 145 및 149; 서열 번호: 141, 145 및 149; 서열 번호: 141, 145 및 150; 서열 번호: 142, 146 및 151; 서열 번호: 2, 5 및 152; 서열 번호: 143, 147 및 153; 서열 번호: 144, 148 및 154; 서열 번호: 3, 6 및 155; 서열 번호: 2, 5 및 156; 서열 번호: 2, 5 및 157; 서열 번호: 2, 6 및 376; 서열 번호: 3, 372 및 376; 서열 번호: 3, 6 및 376; 서열 번호: 3, 6 및 377; 서열 번호: 2, 373 및 152; 서열 번호: 2, 5 및 378; 서열 번호: 2, 374 및 9, 서열 번호: 288, 290 및 292; 서열 번호: 289, 291, 293; 서열 번호: 507, 513 및 517; 및 서열 번호: 593, 594 및 595 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 609 또는 서열 번호: 617의 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열; 서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열; 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열; 또는 서열 번호: 611, 612 및 613 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VH 영역은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 어느 하나를 포함하고, 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 예를 들어, 항 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4)에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 함유하는 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4) 및 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 59-63, 195-203, 308, 309 및 434-439 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR1; 서열 번호: 64-66, 204-209, 310 및 311 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR2; 서열 번호: 67-69, 210-216, 312, 313, 441 및 443 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR3; 및/또는 서열 번호: 70-71, 217-220, 314, 315, 444 및 445 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR4로부터 선택된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 61의 아미노산 서열을 포함하는 FR1; 서열 번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 FR2; 서열 번호: 69의 아미노산 서열을 포함하는 FR3; 및/또는 서열 번호: 70의 아미노산 서열을 포함하는 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
또한 상기 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일하거나 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 서열을 갖는 항체 및 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편이 본 명세서에 제공된다.
일부 구현예에서, 항체는 상기 기재된 VH 서열(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 및/또는 CDR-H4) 중 어느 하나와 같은 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분만을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)이다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체(예를 들어 항 BCMA 항체) 또는 VH 영역을 포함하는 이의 항원 결합 단편은 또한 경쇄 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 포함한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 영역 및 VL 영역 또는 VH 영역 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 상기 구현예에서, VH 영역 서열은 상기 기재된 VH 서열 중 어느 하나일 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 항원 결합 단편, 예컨대 Fab 또는 scFv이다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 또는 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변(VL) 영역을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 임의의 문헌[국제 출원 WO 2016090327, WO 2016090320 또는 WO 2017173256]에 기재된 VL 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 항체의 VL 영역(예를 들어 항 BCMA 항체) 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12(서열 번호: 358, 여기에서 X1은 A, C, G, H, I, Q 또는 S; X2는 A, Q, S 또는 V; X3은 S, W 또는 Y; X4는 D, F, G, H 또는 Y; X5는 D, G, M, R, S 또는 T; X6은 A, G, H, L, R, S, T 또는 Y; X7은 L, P, R, S 또는 부재; X8은 D, G, N, R, S, T 또는 부재; X9는 A, G, H, L, P 또는 부재; X10은 F, S 또는 부재; X11은 L, P, W 또는 Y; 및 X12는 S, T 또는 V)를 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, 상기 CDR-L3에서 X1은 H; X2는 V; X3은 W; X4는 D; X5는 R; X6은 S; X7은 R; X8은 D; X9는 H; X10은 부재; X11은 Y; 및 X12는 V이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 및 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 591 또는 603의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L3을 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-L3 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 L89 내지 L97 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 및 603 중 어느 하나로부터 선택된 CDR-L3 서열에 의해 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 610 또는 서열 번호: 618의 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 항체의 VL 영역(예를 들어 항 BCMA 항체) 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 X1X2X3X4X5X6X7X8X9X10X11X12X13X14X15X16X17(서열 번호: 356, 여기에서 X1은 G, K, R, S 또는 T; X2는 A, G 또는 S; X3은 G, N, S 또는 T; X4는 G, K, N, Q, R 또는 S; X5는 S 또는 부재; X6은 D, N, V 또는 부재; X7 은 L, V 또는 부재; X8은 H, S, Y 또는 부재; X9는 S, T 또는 부재; X10은 S 또는 부재; X11은 D, G, I, N, S 또는 부재; X12는 D, E, G, K, I, N 또는 부재; X13은 F, G, K, N, R, S, Y 또는 부재; X14는 D, K, N, T 또는 부재; X15는 A, D, G, L, N, S, T 또는 Y; X16은 L 또는 V; X17은 A, H, N, Q 또는 S)를 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1)을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, X1은 G; X2는 A; X3은 N; X4는 N; X5는 부재; X6은 부재; X7은 부재; X8은 부재; X9는 부재; X10은 부재; X11은 I; X12는 G; X13은 S; X14는 K; X15는 S; X16은 V; X17은 H이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589 또는 601 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 607 및 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 589 또는 601의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L1을 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-L1 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 L24 내지 L34 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589 또는 601 중 어느 하나로부터 선택된 CDR-L1 서열에 의해 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나의 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체(예를 들어 항 BCMA 항체)의 VL 영역 또는 이의 항원 결합 단편은 아미노산 서열 X1X2X3X4X5X6X7(서열 번호: 357, 여기에서 X1은 A, D, E, N, S, V 또는 W; X2는 A, D, N, S 또는 V; X3은 A, D, H, I, N 또는 S; X4는 D, K, N, Q, R 또는 T; X5는 L, R 또는 V; X6은 A, E, P 또는 Q; 및 X7은 A, D, S 또는 T)를 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2)을 포함하는 것이다. 일부 구현예에서, X1은 D; X2는 D; X3은 D; X4는 D; X5는 R; X6은 P; 및 X7은 S이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590 및 602 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 608 및 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2를 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 590 또는 서열 번호: 602의 아미노산 서열을 갖는 CDR-L2를 함유한다. 상기 임의의 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 서열을 함유할 수 있고, 상기에 함유된 해당 CDR-L2 서열(예를 들어 카바트 넘버링에 의한 L50 내지 L56 아미노산 잔기에 해당)은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590 및 602 중 어느 하나로부터 선택된 CDR-L2 서열 또는 서열 번호: 608 및 615 중 어느 하나로 대체된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L2를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나의 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L2를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589 또는 601 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-L1; 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590 및 602 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-L2; 카바트 넘버링, 코티아 넘버링 또는 AbM 넘버링에 따른 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 및 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 카바트 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 코티아 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 29, 40 및 50의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 32, 42 및 53의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 35, 45 및 57의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 36, 46 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 184의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 186의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 187의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 383, 403 및 419의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 384, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 385, 180 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 386, 404 및 420의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 387, 405 및 422의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 406 및 423의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 388, 407 및 424의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 389, 408 및 425의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 390, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 391, 409 및 426의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 392, 40 및 427의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 394, 39 및 429의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 395, 411 및 430의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 431의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 396, 412 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 397, 413 및 432의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 398, 414 및 433의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중에서 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 589, 590 및 591; 서열 번호: 607, 608 및 591; 서열 번호: 601, 602 및 603; 또는 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 26, 37 및 47; 서열 번호: 27, 38 및 48; 서열 번호: 28, 39 및 49; 서열 번호: 29, 40 및 50; 서열 번호: 30, 39 및 51; 서열 번호: 31, 41 및 52; 서열 번호: 32, 42 및 53; 서열 번호: 30, 39 및 54; 서열 번호: 33, 43 및 55; 서열 번호: 34, 44 및 56; 서열 번호: 35, 45 및 57; 서열 번호: 36, 46 및 58; 서열 번호: 174, 179 및 184; 서열 번호: 174, 179 및 185; 서열 번호: 174, 179 및 186; 서열 번호: 174, 179 및 187; 서열 번호: 175, 180 및 188; 서열 번호: 174, 179 및 189; 서열 번호: 176, 181 및 190; 서열 번호: 177, 182 및 191; 서열 번호: 174, 179 및 192; 서열 번호: 178, 183 및 193; 서열 번호: 178, 183 및 194; 서열 번호: 30, 399 및 415; 서열 번호: 380, 400 및 416; 서열 번호: 33, 43 및 421; 서열 번호: 381, 401 및 417; 서열 번호: 382, 402 및 418; 서열 번호: 383, 403 및 419; 서열 번호: 384, 39 및 54; 서열 번호: 385, 180 및 58; 서열 번호: 175, 180 및 188; 서열 번호: 386, 404 및 420; 서열 번호: 387, 405 및 422; 서열 번호: 388, 406 및 423; 서열 번호: 388, 407 및 424; 서열 번호: 389, 408 및 425; 서열 번호: 390, 183 및 193; 서열 번호: 391, 409 및 426; 서열 번호: 392, 40 및 427; 서열 번호: 394, 39 및 429; 서열 번호: 395, 411 및 430; 서열 번호: 396, 412 및 431; 서열 번호: 396, 412 및 58; 서열 번호: 397, 413 및 432; 서열 번호: 398, 414 및 433; 서열 번호: 589, 590 및 591; 서열 번호: 607, 608 및 591; 서열 번호: 601, 602 및 603; 또는 서열 번호: 614, 615 및 603 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 610 또는 서열 번호: 618 중에서 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 601, 602 및 603; 또는 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VL 영역은 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 중 어느 하나를 포함하고, 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 각각 포함한다. 예를 들어, 항 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4)에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 함유하는 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4) 및 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 72-82, 221-227, 316, 317, 446-459 및 461-466 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR1; 서열 번호: 83-92, 228-232, 318, 319, 467-477 및 479-482 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR2; 서열 번호: 93-101, 233-242, 320, 321, 483-495 및 497-501 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR3; 및/또는 서열 번호: 102-109, 243-246, 322, 323, 502-506 및 508 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 FR4로부터 선택된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 FR1; 서열 번호: 89의 아미노산 서열을 포함하는 FR2; 서열 번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 FR3; 및/또는 서열 번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 610 또는 서열 번호: 618의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유한다.
또한 상기 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일하거나 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 서열을 갖는 항체가 제공된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 단편의 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고 항체 또는 단편의 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
또한 상기 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일하거나 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 서열을 갖는 항체 및 이의 항원 결합 단편이 제공된다. 예를 들어, 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/거나; 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는 항체 또는 항원 결합 단편이 본 명세서에서 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나의 VH 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나의 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 617 및 618의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 116의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 111 및 117의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 118의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 119의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 120의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 121의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 122의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 123의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 112 및 124의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 113 및 125의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 114 및 126의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 115 및 127의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 247 및 257의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 248 및 258의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 249 및 259의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 250 및 260의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 251 및 261의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 252 및 262의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 253 및 263의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 254 및 264의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 255 및 265의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 256 및 266의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 256 및 267의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 518 및 534의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 519 및 535의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 115 및 536의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 520 및 264의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 521 및 537의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 522 및 538의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 523 및 539의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 519 및 540의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 524 및 541의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 525 및 261의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 526 및 542의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 527 및 543의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 528 및 544의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 529 및 545의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 528 및 546의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 522 및 547의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 256 및 548의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 530 및 549의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 531 및 550의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 519 및 552의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 110 및 553의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 533 및 554의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 115 및 555의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 524 및 556의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 519 및 557의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 324 및 326의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 325 및 327의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 609 및 610의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 772 및 775의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 773 및 776의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 774 및 777의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:815 및 833의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:816 및 834의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:817 및 835의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:818 및 836의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:819 및 837의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:820 및 838의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:821 및 839의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:822 및 840의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:823 및 841의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:824 및 842의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:825 및 843의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:826 및 844의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:827 및 845의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:828 및 846의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호:829 및 847의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 830 및 847의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 831 및 848의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 832 및 849의 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 및 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3을 각각 포함하고; 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 및 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3을 각각 포함한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH는 서열 번호: 617의 VH 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL은 서열 번호: 618의 VL 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하거나; VH는 서열 번호: 256의 VH 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL은 서열 번호: 267의 VL 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하거나; VH는 서열 번호: 519의 VH 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL은 서열 번호: 535의 VL 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하거나; VH는 서열 번호: 115의 VH 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL은 서열 번호: 536의 VL 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하거나; 또는 VH는 서열 번호: 609의 VH 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL은 서열 번호: 610의 VL 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 256에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 267에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 519에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 535에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 115에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 536에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 609에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 610에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 (a) 서열 번호: 593, 611, 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295, 507, 532, 596 또는 604 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 594, 612, 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 597 또는 605 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호:595, 613, 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517 또는 606 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-H3이거나 이를 포함하고; VL 영역은 (a) 서열 번호: 601, 614, 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589 또는 607 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 602, 615, 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590 또는 608 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 603, 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433 또는 591 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함하는 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 8의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 27, 38 및 48의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 28, 39 및 49의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 29, 40 및 50의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 30, 39 및 51의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 31, 41 및 52의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 32, 42 및 53의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 30, 39 및 54의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 9의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 33, 43 및 55의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 34, 44 및 56의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 11의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 35, 45 및 57의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 36, 46 및 58의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 140, 145 및 149의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 184의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 141, 145 및 149의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 185의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 141, 145 및 150의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 186의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 142, 146 및 151의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 187의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 152의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 175, 180 및 188의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 143, 147 및 153의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 189의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 144, 148 및 154의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 176, 181 및 190의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 155의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 177, 182 및 191의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 156의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 174, 179 및 192의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 157의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 178, 183 및 193의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 157의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 178, 183 및 194의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 6 및 376의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 30, 399 및 415의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 380, 400 및 416의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 33, 43 및 421의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 155의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 177, 182 및 191의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 372 및 376의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 381, 401 및 417의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 376의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 382, 402 및 418의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 377의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 383, 403 및 419의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 384, 39 및 54의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 385, 180 및 58의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 373 및 152의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 175, 180 및 188의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 11의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 386, 404 및 420의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 378의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 33, 43 및 421의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 9의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 387, 405 및 422의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 9의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 388, 406 및 423의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 9의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 388, 407 및 424의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 3, 6 및 376의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 389, 408 및 425의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 157의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 390, 183 및 193의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 374 및 9의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 391, 409 및 426의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 392, 40 및 427의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 394, 39 및 429의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 395, 411 및 430의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 28, 39 및 49의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 396, 412 및 431의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 396, 412 및 58의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 397, 413 및 432의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 398, 414 및 433의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 288, 290 및 292의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 302, 304 및 306의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 288, 290 및 292의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 302, 304 및 306의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 289, 291 및 293의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 303, 305 및 307의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 289, 291 및 293의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 303, 305 및 307의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 507, 513 및 517의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 589, 590 및 591의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 617, 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나의 서열이거나 이를 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618, 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나의 서열이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 119의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 122의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 123의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 114 및 126의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 127의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 247 및 257의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 249 및 259의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 250 및 260의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 251 및 261의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 523 및 539의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 540의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 541의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 525 및 261의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 526 및 542의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 527 및 543의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 544의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 529 및 545의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 546의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 547의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 548의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 530 및 549의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 531 및 550의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 552의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 553의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 533 및 554의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 555의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 556의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 557의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 772 및 775의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 773 및 776의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 774 및 777의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:815 및 833의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:816 및 834의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:817 및 835의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:818 및 836의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:819 및 837의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:820 및 838의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:821 및 839의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:822 및 840의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:823 및 841의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:824 및 842의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:825 및 843의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:826 및 844의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:827 및 845의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:828 및 846의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:829 및 847의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:830 및 847의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:831 및 848의 아미노산 서열을 각각 포함하거나; 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호:832 및 849의 아미노산 서열을 각각 포함하거나 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
예를 들어, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116; 서열 번호: 111 및 117; 서열 번호: 110 및 118; 서열 번호: 110 및 119; 서열 번호: 110 및 120; 서열 번호: 110 및 121; 서열 번호: 110 및 122; 서열 번호: 110 및 123; 서열 번호: 112 및 124; 서열 번호: 113 및 125; 서열 번호: 114 및 126; 서열 번호: 115 및 127; 서열 번호: 247 및 257; 서열 번호: 248 및 258; 서열 번호: 249 및 259; 서열 번호: 250 및 260; 서열 번호: 251 및 261; 서열 번호: 252 및 262; 서열 번호: 253 및 263; 서열 번호: 254 및 264; 서열 번호: 255 및 265; 서열 번호: 256 및 266; 서열 번호: 256 및 267; 서열 번호: 518 및 534; 서열 번호: 519 및 535; 서열 번호: 115 및 536; 서열 번호: 520 및 264; 서열 번호: 521 및 537; 서열 번호: 522 및 538; 서열 번호: 523 및 539; 서열 번호: 519 및 540; 서열 번호: 524 및 541; 서열 번호: 525 및 261; 서열 번호: 526 및 542; 서열 번호: 527 및 543; 서열 번호: 528 및 544; 서열 번호: 529 및 545; 서열 번호: 528 및 546; 서열 번호: 522 및 547; 서열 번호: 256 및 548; 서열 번호: 530 및 549; 서열 번호: 531 및 550; 서열 번호: 519 및 552; 서열 번호: 110 및 553; 서열 번호: 110 및 118; 서열 번호: 533 및 554; 서열 번호: 115 및 555; 서열 번호: 524 및 556; 서열 번호: 519 및 557, 서열 번호: 324 및 326, 서열 번호: 325 및 327, 서열 번호: 609 및 610; 서열 번호: 617 및 618; 서열 번호: 772 및 775; 서열 번호: 773 및 776; 서열 번호: 774 및 777; 서열 번호:815 및 833; 서열 번호:816 및 834; 서열 번호:817 및 835; 서열 번호:818 및 836; 서열 번호:819 및 837; 서열 번호:820 및 838; 서열 번호:821 및 839; NO:822 및 840; 서열 번호:823 및 841; 서열 번호:824 및 842; 서열 번호:825 및 843; 서열 번호:826 및 844; 서열 번호:827 및 845; 서열 번호:828 및 846; 서열 번호:829 및 847; 서열 번호:830 및 847; 서열 번호:831 및 848; 및 서열 번호:832 및 849로부터 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하거나 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 VH 영역 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 및 상기 VH 및 VL 중 어느 하나의 VL 영역 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618; 서열 번호: 256 및 267; 서열 번호: 519 및 535; 서열 번호: 115 및 536; 또는 서열 번호: 609 및 610으로부터 선택된 아미노산 서열을 각각 포함하거나 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 VH 영역 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 및 상기 VH 및 VL 중 어느 하나의 VL 영역 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 VH 영역 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 및 상기 VH 및 VL 중 어느 하나의 VL 영역 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv) 또는 디아바디 또는 단일 도메인 항체(sdAb)와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 scFv이다. 일부 구현예에서, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어 scFv)은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함한다. 링커는 전형적으로 펩티드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩티드 링커이다. 링커 중에는 글리신과 세린이 풍부하고/거나 일부 경우에는 트레오닌이 풍부한 것이 있다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 용해도를 향상시킬 수 있는 리신 및/또는 글루타메이트와 같이 하전된 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 하나 이상의 프롤린을 포함한다.
따라서, 제공된 항 BCMA 항체는 단일 사슬 항체 단편, 예컨대 scFv 및 디아바디, 특히 인간 단일 사슬 항체 단편을 포함하고, 전형적으로 VH 및 VL 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 링커(들)을 포함한다. 링커는 전형적으로 펩티드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩티드 링커, 예컨대 글리신과 세린이 풍부한 것이다.
일부 측면에서, 글리신 및 세린(및/또는 트레오닌)이 풍부한 링커는 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 상기 아미노산(들)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들은 50%, 55%, 60%, 70% 또는 75% 이상 또는 약 50%, 55%, 60%, 70% 또는 75%의 글리신, 세린 및/또는 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 실질적으로 전체적으로 글리신, 세린 및/또는 트레오닌으로 구성된다. 링커는 일반적으로 약 5 내지 약 50개 아미노산 길이, 전형적으로 10 내지 30 또는 약 10 내지 약 30개 아미노산 길이, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개 아미노산 길이이고 일부 예에서 10 내지 25개 아미노산 길이이다. 예시적인 링커는 서열 GGGGS(4GS; 서열 번호: 359) 또는 GGGS(3GS; 서열 번호: 360)의 다양한 반복 횟수, 예컨대 상기 서열의 2, 3, 4 및 5 회 반복을 갖는 링커를 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 361(GGGGSGGGGSGGGGS)에 제시된 서열을 갖거나 이로 이루어진 것을 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 362(GSTSGSGKPGSGEGSTKG)에 제시된 서열을 갖거나 이로 이루어진 것을 또한 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 778(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 이루어진 것을 또한 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 서열 번호: 361에 제시된 링커와 같은 GGGS(서열 번호: 360) 또는 GGGGS(서열 번호: 359)의 반복을 갖는 링커를 포함한, 글리신/세린이 풍부한 링커와 같은 상기 언급된 링커 중 하나 이상을 포함한, 단일 사슬 항체 단편 예를 들어, scFv를 포함한다.
일부 구현예에서, 링커는 서열 번호: 361에 제시된 서열을 함유하는 아미노산 서열을 갖는다. 단편, 예를 들어 scFv는 VH 영역 또는 이의 일부, 이어서 링커, 이어서 VL 영역 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 단편, 예를 들어 scFv는 VL 영역 또는 이의 일부, 이어서 링커, 이어서 VH 영역 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478, 128-139, 268-278, 329, 442, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 서열 또는 서열 번호: 478, 128-139, 268-278, 329, 442, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 측면에서, 본 명세서에 제공된 scFv는 서열 번호: 128-139, 268-278, 328, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585, 586 및 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 서열 번호: 128-139, 268-278, 328, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585, 586 및 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
예를 들어, 본 명세서에 제공된 scFv는 서열 번호: 128, 129, 130, 132, 133, 136, 137, 269, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 328, 329, 442, 478, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583 585, 586, 769, 770, 771, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812 또는 813 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 또는 서열 번호: 128, 129, 130, 132, 133, 136, 137, 269, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 328, 329, 442, 478, 558, 559, 560, 561, 562, 563, 564, 565, 566, 567, 568, 569, 570, 571, 572, 573, 574, 575, 576, 577, 578, 579, 580, 581, 582, 583 585, 586, 769, 770, 771, 781, 782, 783, 784, 785, 786, 787, 788, 789, 790, 791, 792, 793, 794, 795, 796, 797, 798, 799, 800, 801, 802, 803, 804, 805, 806, 807, 808, 809, 810, 811, 812 또는 813 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
표 2는 제공된 BCMA 결합 수용체, 예컨대 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)에 포함될 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 예시적인 항원 결합 도메인의 서열 번호를 제공한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호(카바트 넘버링에 의함)에 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 영역 및 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 BCMA 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열을 포함하는 BCMA 결합 항체 또는 이의 단편 또는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열을 포함하는 BCMA 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열을 포함하는 BCMA 결합 항체 또는 이의 단편 또는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 scFv 아미노산 서열을 포함하는 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 수용체는 하기 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열을 포함하는 BCMA 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다.
[표 2]
제공된 CAR에서 항체, 예를 들어 항원 결합 단편 중에는 인간 항체가 있다. 제공된 인간 항 BCMA 항체, 예를 들어 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 D 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VH 영역을 함유하고/거나; 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3에 해당한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR2 및/또는 FR4에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 FR1, FR2, FR2 및/또는 FR4에 해당한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H1 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 아미노산 이내의 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H2 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H2을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트, D 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H3 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트, D 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H1 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H2 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H2을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-L3 영역에 해당하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L3을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 인간 생식 세포 계열 유전자 세그먼트 서열을 함유하는 프레임워크 영역을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역, 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및 FR4가 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트 예컨대 V 세그먼트 및/또는 J 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역, 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및 FR4가 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트 예컨대 V 세그먼트 및/또는 J 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL 영역을 함유한다. 예를 들어, 상기 일부 구현예에서, VH 영역 및/또는 VL 영역 내에 함유된 프레임워크 영역 서열은 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역 서열과 비교하여 10개 이내의 아미노산, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이내의 아미노산이 상이하다.
일부 구현예에서, 참조 항체는 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2010/104949에 기재된 마우스 항 BCMA scFv일 수 있다.
항체, 예를 들어 항원 결합 단편은 하나 이상의 불변 영역 도메인과 같은 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 불변 영역은 경쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 불변 영역 1(CH1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 CH2 및/또는 CH3 도메인, 예컨대 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4와 같은 인간 IgG의 Fc 영역이다.
2. 스페이서
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항체(예를 들어 항원 결합 단편)을 포함하는 CAR과 같은 재조합 수용체는 스페이서 또는 스페이서 영역을 또한 포함한다. 스페이서는 전형적으로 폴리펩티드 스페이서이고, 일반적으로 CAR의 항원 결합 도메인과 막 관통 도메인 사이의 CAR 내에 위치한다. 일부 측면에서, 스페이서는 면역글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부, 예컨대 면역글로불린의 힌지 영역, 예컨대 IgG 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 또는 IgG4 유래 힌지 영역 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역이거나 이를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 이의 하나 이상의 부분(들)은 인간 IgG4 또는 IgG1 또는 IgG2와 같은 인간 IgG의 영역이다. 일반적으로, 불변 영역의 일부와 같은 스페이서는 항원 인식 성분(예를 들어, scFv)과 막 관통 도메인 사이의 스페이서 영역으로서 기능한다. 일부 구현예에서, 스페이서의 길이 및/또는 조성은 CAR과 이의 표적 사이의 상호 작용의 특정 특징을 최적화하거나 촉진시키도록 설계되고; 일부 측면에서, 이는 표적 발현 세포 상에서 이의 표적에 대한 CAR의 결합 동안 또는 결합 시 또는 결합 후 CAR의 표적을 발현하는 세포와 CAR 발현 세포 사이의 생물리학적 시냅스 거리를 최적화하도록 설계되고; 일부 측면에서, 표적 발현 세포는 BCMA 발현 종양 세포이다. 일부 구현예에서, CAR은 T 세포에 의해 발현되고, 스페이서의 길이는 T 세포 활성화에 적합하거나 CAR T 세포 성능을 최적화하기 위한 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 리간드 결합 도메인과 막 관통 도메인 사이에 위치한 스페이서 영역이다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 리간드 결합 도메인과 막 관통 도메인 사이에 위치한 영역이다.
일부 구현예에서, 스페이서는 스페이서의 부재 및/또는 길이만 상이한 것과 같은 상이한 스페이서의 존재 하에서와 비교하여 항원 결합 후 세포의 반응성을 증가시키는 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 100개 이상의 아미노산 길이, 예컨대 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 또는 250개 이상의 아미노산 길이이다. 일부 예에서, 스페이서는 12개 또는 약 12개 아미노산 길이이거나 또는 12개 이내의 아미노산 길이이다. 예시적인 스페이서는 약 10 내지 300개 아미노산, 약 10 내지 200개 아미노산, 약 50 내지 175개 아미노산, 약 50 내지 150개 아미노산, 약 10 내지 125개 아미노산, 약 50 내지 100개 아미노산, 약 100 내지 300개 아미노산, 약 100 내지 250개 아미노산, 약 125 내지 250개 아미노산 또는 약 200 내지 250개 이상의 아미노산을 갖는 것을 포함하고, 열거된 범위 중 어느 하나의 종점 사이 임의의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 또는 스페이서 영역은 약 12개 이상의 아미노산, 적어도 약 119개 이하의 아미노산, 약 125개 이상의 아미노산, 약 200개 이상의 아미노산 또는 약 220개 이상의 아미노산 또는 약 225개 이상의 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 스페이서는 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 또는 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이 또는 전술한 것 중 어느 하나 사이의 길이이다.
예시적인 스페이서는 면역글로불린 불변 영역의 부분(들), 예컨대 IgG 힌지 도메인과 같은 Ig 힌지를 함유하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 스페이서는 IgG 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인 중 하나 이상에 연결된 IgG 힌지 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG 힌지를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG 힌지, CH2 및/또는 CH3은 IgG4 또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4, IgG2 및/또는 IgG2 및 IgG4로부터 유래된 힌지, CH2 및/또는 CH3 서열(들) 중 하나 이상을 함유하는 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이며; CH2 영역은 IgG4 CH2 영역 및/또는 IgG2 CH2 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 IgG4 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH2 영역이고 IgG2 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH2 영역이고/거나; CH3 영역은 IgG4 CH3 영역 및/또는 IgG2 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 IgG4 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH3 영역이고 IgG2 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH3 영역이다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터의 각각의 힌지 영역, CH2 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지 영역을 포함하고; CH2 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH2 영역을 포함하고/거나; CH3 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH3 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4 힌지 영역; 인간 IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 인간 IgG4 CH3 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지를 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4 및/또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있고 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 단일 아미노산 돌연변이와 같은 돌연변이를 함유할 수 있다. 일부 예에서, 아미노산 변형은 IgG4의 힌지 영역에서 세린(S)에 대한 프롤린(P)의 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 변형은 서열 번호: 750에 제시된 전장 IgG4 Fc 서열의 CH2 영역에서 177 위치의 돌연변이 N177Q 또는 서열 번호: 749에 제시된 전장 IgG2 Fc 서열의 CH2 영역에서 176 위치의 N176Q와 같은 글리코실화 이질성을 감소시키기 위한 아스파라긴(N)에 대한 글루타민(Q)의 치환이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역이거나 이를 포함하고 선택적으로 약 228개 아미노산 길이이거나; 또는 서열 번호: 649에 제시된 스페이서이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 코돈 발현 및/또는 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하기에 최적화된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 아미노산 서열 ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열 번호: 649)를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 622에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 855 또는 856에 제시된 핵산 서열을 포함한다.
추가의 예시적인 스페이서는 문헌[Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3(2):125-135 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687]에 기재된 것을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오타이드 서열은 발현 후 RNA 이질성을 감소시키도록 최적화된다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오타이드 서열은 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 스플라이스 부위에서 스플라이스 이벤트의 가능성을 감소시키도록 최적화된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 363에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 364에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 365에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 366에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 630에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 629에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 621, 622, 855 또는 856에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 621, 622, 855 또는 856에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된, 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 649에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖고 이는 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 RNA 이질성을 감소시키기 위해 최적화된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 622에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
3. 막 관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 성분
항원 인식 성분은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 자극 및/또는 활성화 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 모방하는 신호 전달 성분과 같은 신호 전달 성분을 함유하는 하나 이상의 세포 내 신호 전달 영역에 연결된다. 따라서, 일부 구현예에서, BCMA 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)는 본 명세서에 기재된 것과 같은 하나 이상의 막관통 도메인 및 본 명세서에 기재된 것과 같은 하나 이상의 세포 내 성분을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역 또는 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 세포 외 도메인에 융합된다. 일 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 연관된 막 관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형된다.
일부 구현예에서 막 관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서 도메인은 임의의 막-결합 또는 막 관통 단백질로부터 유래된다. 막 관통 도메인은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD3 입실론, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및/또는 CD154로부터 유래된 것을 포함(즉 적어도 막 관통 도메인(들)을 포함)한다. 예를 들어, 막관통 도메인은 서열 번호: 623 또는 서열 번호: 688에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 624에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CD28 막관통 도메인일 수 있다. 대안적으로 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한다.
세포 내 신호 전달 영역 또는 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합으로 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿(doublet)을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.
수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분 또는 성분들을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체는 T 세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타 사슬과 같은 TCR 복합체의 세포 내 성분 또는 신호 전달 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, BCMA 결합 항체는 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포 내 신호 전달 도메인 및/또는 다른 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 또한 Fc 수용체 , CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR은 CD3-제타(CD3-) 또는 Fc 수용체 와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR의 결찰시 또는 결찰 후, CAR의 세포질 도메인 또는 세포 내 신호 전달 도메인은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 이펙터 기능 또는 반응 중 하나 이상을 자극하고/거나 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 맥락에서, CAR은 T 세포의 기능, 예컨대 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예컨대 사이토카인 또는 다른 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인의 절단 부분은 예를 들어 그것이 이펙터 기능 신호를 형질 도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인 또는 도메인들은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열 및 일부 측면에서 천연 맥락에서 항원 수용체 결합 후에 신호 전달을 개시하기 위해 상기 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체 및/또는 상기 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열의 세포질 서열을 또한 포함한다.
천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호를 필요로 한다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2 차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR이 동일한 세포에서 발현되고 2 차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 두 가지 종류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR을 통한 항원 의존적 일차 활성화를 개시하는 것(1 차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원 비의존적 방식으로 작용하여 2 차 또는 공자극 신호를 제공하는 것(2 차 세포질 신호 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 종류의 세포질 신호 전달 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1 차 자극 및/또는 활성화를 조절하는 1 차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1 차 세포질 신호 전달 서열은 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1 차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 TCR 또는 CD3 제타, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유래된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포 내 신호 전달 영역 또는 도메인은 CD3 제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 일부 또는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, CD3 제타는 서열 번호: 627 또는 서열 번호: 652에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된 서열 번호: 628에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 신호 전달 도메인(예를 들어, 세포 내 또는 세포질 신호 전달 도메인) 및/또는 공자극 분자, 예컨대 T 세포 공자극 분자의 막관통 부분을 포함한다. 예시적인 공자극 분자는 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS를 포함한다. 예를 들어, 공자극 분자는 4-1BB로부터 유래될 수 있고, 서열 번호: 625 또는 서열 번호: 681에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 626에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 자극성 또는 활성화 성분(예를 들어, 세포질 신호 전달 서열) 및 공자극 성분 둘 다를 포함한다.
일부 구현예에서, 자극성 또는 활성화 성분은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR 및 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO2014/055668 참조). 일부 측면에서, BCMA 표적 CAR은 활성화 또는 자극성 CAR이고; 다른 측면에서, 이는 공자극 CAR이다. 일부 구현예에서, 세포는 또한 억제성 CAR(inhibitory CAR(iCAR), Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013) 참조), 예컨대 BCMA외의 항원을 인식하는 CAR을 포함하고, BCMA 표적화 CAR을 통해 전달된 자극성 또는 활성화 신호는 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되어 예를 들어 오프 타깃 효과를 감소시킨다.
특정 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 CD3(예를 들어, CD3-제타) 세포 내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 CD137(4-1BB, TNFRSF9) 공자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 하나 이상, 예를 들어 두개 이상의 공자극 도메인 및 자극성 또는 활성화 도메인, 예를 들어 세포질 부분의 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 키메라 항원 수용체는 (a) 본 명세서에 기재된 임의의 항원 결합 도메인과 같은 B세포 성숙 항원(BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617 및 618의 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618의 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 593, 594 및 595를 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 601, 602 및 603을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 596, 597 및 595를 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 601, 602 및 603을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 598, 599 및 595를 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 601, 602 및 603을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 611, 612 및 613을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 614, 615 및 603을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618의 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 자극성 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함한다. 일부 구현예에서, 자극성 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 자극성 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 자극성 세포질 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 자극성 세포질 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 627에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 또는 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이다. 다른 구현예에서, 자극성 세포질 신호 전달 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 681에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다. 다른 구현예에서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인(여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 617의 VH 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 사슬(VH); (ii) 서열 번호: 618의 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함); (2) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서(상기 스페이서를 암호화하는 핵산은 서열 번호: 622에 기재된 서열이거나 이를 포함); (3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및 (4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체가 제공된다. 또한 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다.
일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; VL 영역은 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인(여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL)영역; 또는 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 593, 594 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 서열 번호: 596, 597 및 595 의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 서열 번호: 598, 599 및 595의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 611, 612 및 613의 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함); (2) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서(상기 스페이서를 암호화하는 핵산은 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함); (3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자, 선택적으로 인간 4-1BB 또는 인간 CD28로부터의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체가 제공된다. 또한 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 일부 구현예에서, 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617의 VH 영역 서열 및 서열 번호: 618의 VL 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 수용체의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체의 다른 도메인, 영역 또는 성분은 본 명세서에 기재된 임의의 도메인, 영역 또는 성분을 포함한다.
4. 대리 마커
일부 구현예에서, CAR은 또한 대리 마커, 예컨대 세포 표면 마커(예를 들어, 절단형 세포 표면 마커)를 포함하고, 이는 수용체를 발현하는 세포의 형질 도입 또는 조작을 확인하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 외인성 마커 유전자는 조작된 세포 요법과 관련하여 이용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 또한 ADCC에 의한 세포 자살을 촉진한다. 예시적인 마커 유전자는 절단형 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFRt)를 포함하며, 이는 형질 도입된 세포에서 관심 전이 유전자(예를 들어, CAR 또는 TCR)와 함께 공발현될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux174)에 의해 인식되는 에피토프를 함유한다. 상기 이유로 Erbitux를 사용하여 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 다른 재조합 수용체와 또한 공-조작된 세포를 포함하여 EGFRt 작제물로 조작된 세포를 확인하거나 선택할 수 있다. 또한, EGFRt는 일반적으로 세포 요법과 관련하여 자살 메커니즘으로 사용된다. 일부 측면에서, EGFRt가 관심 전이 유전자(예를 들어 CAR 또는 TCR)를 갖는 세포에서 공발현될 때, ADCC를 통해 전달된 유전자-변형 세포를 감소시키거나 고갈시키기 위해 세툭시맙 단클론성 항체에 의해 표적화될 수 있다(미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430434 참조). 중요하게는, tEGFR을 사용한 자살 사멸 접근법은 항체 에피토프의 이용 가능성을 요구한다. 상기 마커 유전자의 다른 예는 전립선 특이적 막 항원(prostate-specific membrane antigen, PSMA) 또는 이의 변형된 형태이다. PSMA 또는 이의 변형 형태는 PSMA-표적화 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 결합 또는 인식되는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. PSMA-표적화 분자는 또한 본 명세서에 제공된 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 다른 재조합 수용체와 함께 공-조작된 세포를 포함하여 PSMA 또는 변형된 작제물로 조작된 세포를 확인하거나 선택하는데 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 마커는 CD34, 신경 성장 인자 수용체(nerve growth factor receptor, NGFR), 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, EGFR) 또는 PSMA의 전부 또는 일부(예를 들어, 절단 형태)를 포함한다.
예시적인 대리 마커는 세포 표면 폴리펩티드의 절단 형태, 예컨대 비기능적이며 전장 형태의 세포 표면 폴리펩티드에 의한 신호 또는 이에 의해 일반적으로 전달되는 신호를 전달할 수 없거나 전달하지 않고/거나 내재화될 수 없거나 내재화되지 않는 절단 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절단형 세포 표면 폴리펩티드는 성장 인자 또는 다른 수용체의 절단 형태, 예컨대 절단된 인간 표피 성장 인자 수용체 2(truncated human epidermal growth factor receptor 2, tHER2), 절단된 표피 성장 인자 수용체(tEGFR, 서열 번호: 11 또는 76에 제시된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선 특이적 막 항원(PSMA) 또는 이의 변형 형태를 포함한다. tEGFR은 항체 세툭시맙(Erbitux) 또는 다른 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 tEGFR 작제물 및 암호화된 외인성 단백질로 조작된 세포를 확인 또는 선택하기 위해 및/또는 암호화된 외인성 단백질을 발현하는 세포를 제거 또는 분리하기 위해 사용될 수 있다. 문헌[미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430434]을 참조한다. 일부 측면에서, 마커, 예를 들어 대리 마커는 CD34, NGFR, CD19 또는 절단된 CD19, 예를 들어 절단된 비-인간 CD19 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, tEGFR)의 전부 또는 일부(예를 들어 절단 형태)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 형광 단백질, 예컨대 그린 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 강화된 그린 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein, EGFP), 예컨대 슈퍼-폴드 GFP(super-fold GFP, sfGFP), 레드 형광 단백질(red fluorescent protein, RFP), 예컨대 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(cyan fluorescent protein, CFP), 블루 그린 형광 단백질(blue green fluorescent protein, BFP), 강화된 블루 형광 단백질(enhanced blue fluorescent protein, EBFP) 및 옐로우 형광 단백질(yellow fluorescent protein, YFP) 및 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체 및 코돈-최적화된 및/또는 강화된 변이체를 포함한 이의 변이체이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 효소, 예컨대 루시퍼라제, 대장균 유래 lacZ 유전자, 알칼리 포스파타제, 분비성 배아 알칼리 포스파타제(secreted embryonic alkaline phosphatase, SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(chloramphenicol acetyl transferase, CAT)이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase, luc), β-갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), β-글루쿠로니다제(-glucuronidase, GUS) 또는 이의 변이체를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 외인성 제제 또는 약물에 대한 저항성을 부여하는 폴리펩티드이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 저항 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 포유류 세포에 대해 항생제 저항을 부여하는 항생제 저항 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 퓨로마이신 저항 유전자, 히그로마이신 저항 유전자, 블라스티사이딘 저항 유전자, 네오마이신 저항 유전자, 게네티신 저항 유전자 또는 제오신 저항 유전자 또는 이의 변형된 형태이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커를 암호화하는 핵산은 링커 서열, 예컨대 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 작동 가능하게 연결된다. 문헌[국제 특허 출원 WO2014031687] 참조. 일부 구현예에서, T2A 리보솜 스위치에 의해 분리된 CAR 및 대리 마커를 암호화하는 작제물의 도입으로 같은 작제물로부터 2개의 단백질을 발현시킬 수 있어서, 대리 마커는 상기 작제물을 발현하는 세포를 검출하기 위한 마커로서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커 및 선택적으로 링커 서열은 국제 공개 번호 WO2014031687에 개시된 바와 같은 임의의 것일 수 있다. 예를 들어, 마커는 선택적으로 링커 서열, 예컨대 2A 절단 가능한 링커 서열(예를 들어, 본 명세서의 다른 곳에 기재된 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 절단 가능 링커)에 연결된 절단된 EGFR(tEGFR) 또는 PSMA일 수 있다. 절단된 EGFR 대리 마커에 대한 예시적인 폴리펩티드는 서열 번호: 634에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 634에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 공지된 가요성 링커와 같은 다른 가요성 링커이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 분자, 예를 들어 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 세포 표면 단백질 또는 이의 일부이다.
일부 구현예에서, 분자는 비자기 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 자기(self)로 인식되지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고/거나 유전자 조작, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것외에 다른 효과를 생성하지 않는다. 기타 구현예에서, 마커는 치료적 분자 또는 달리 일부 원하는 효과를 나타내는 분자, 예컨대 생체 내에서 세포가 조우하게 될 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우 후 세포의 반응을 강화하고/거나 약화시키는 공자극 또는 면역 체크 포인트 분자일 수 있다.
일부 경우에, CAR은 제 1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제 1 세대 CAR은 항원 결합에 대한 반응으로 또는 결합 시 CD3-사슬 유도 신호만을 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137과 같은 공자극 수용체로부터 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 상기 신호 및 공자극 신호를 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 일부 측면에서 상이한 공자극 수용체의 다수의 공자극 도메인을 포함하는 것이다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 본 명세서에 기재된 항체 또는 단편을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 본 명세서에 기재된 항체 또는 단편을 함유하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 VH 영역만을 포함하는 scFv 또는 단일 도메인 항체를 포함하고 세포 내 신호 전달 도메인은 ITAM을 함유한다. 일부 측면에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬의 제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 세포 외 도메인 및 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 외 도메인 및 막관통은 본 명세서에 기재된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 예컨대 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에서 공자극 분자(예를 들어 T 세포 공자극 분자)의 세포 내 도메인을 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
일부 구현예에서, 수용체(예를 들어 CAR)의 막관통 도메인은 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 변이체, 예를 들어 인간 CD28(수탁 번호: P10747.1)의 27-아미노산 막관통 도메인이다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 CD28 또는 이의 기능성 변이체, 예컨대 이의 41 아미노산 도메인 및/또는 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL이 GG로 치환된 도메인의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 도메인은 4-1BB 또는 이의 기능성 변이체, 예컨대 인간 4-1BB(수탁 번호 Q07011.1)의 42-아미노산 세포질 도메인의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 CD3 제타 자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체, 예컨대 인간 CD3(수탁 번호: P20963.2)의 동형 단백질 3의 112 AA 세포질 도메인 또는 문헌[미국 특허 번호: 7,446,190]에 기재된 바와 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 본 명세서에 기재된 바와 같은 sdAb 및 scFv를 포함하는 임의의 인간 BCMA 항체와 같은 BCMA 항체 또는 단편, 임의의 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28 막관통 도메인, CD28 세포 내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타 신호 전달 도메인과 같은 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 본 명세서에 기재된 sdAb 및 scFv를 포함하는 임의의 인간 BCMA 항체와 같은 BCMA 항체 또는 단편, 임의의 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28 막관통 도메인, 4-1BB 세포 내 신호 전달 도메인 및 CD3 제타 신호 전달 도메인과 같은 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 CAR 작제물은 또한 예를 들어 CAR의 하류에서 T2A 리보솜 건너뛰기 요소 및/또는 tEGFR 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어 다중 특이적 키메라 수용체, 예컨대 다중 특이적 CAR은, 예를 들어 상기 섹션 I.A.에 기재된 어느 하나와 같은 이중 특이적 항체, 다중 특이적 단일 사슬 항체, 예를 들어 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤(tandem) di-scFv 및 탠덤 tri-scFv를 포함한 임의의 다중 특이적 항체를 함유할 수 있다.
B. 예시적 특징
일부 측면에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 특정 에피토프, 예컨대 참조 항체와 같은 다른 항체에 의해 특이적으로 결합되는 것과 유사하거나 중첩되는 에피토프 또는 참조 항체와 같은 다른 항체에 의해 특이적으로 결합되는 것과 상이한 에피토프를 인식하거나 결합하는 것을 포함한 결합 특성, 참조 항체와 같은 다른 항체와 결합하기 위해 경쟁하는 능력 및/또는 특정 결합 친화도와 같은 하나 이상의 명시된 기능적 특성을 갖는다. 다른 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 단편은 참조 항체와 같은 다른 항체에 의해 특이적으로 결합되는 것과 중첩되지 않거나 상이한 에피토프를 인식, 예컨대 특이적으로 인식하거나 결합, 예를 들어 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 제공된 CAR에서 항체에 의해 특이적으로 결합된 에피토프는 참조 항체와 같은 다른 항체에 의해 특이적으로 결합된 것과 상이하다. 일부 구현예에서, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 참조 항체와 같은 다른 항체와의 결합에 대해 보다 낮은 정도로 경쟁하거나 직접 경쟁하지 않는다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 BCMA 단백질을 특이적으로 인식하거나 특이적으로 결합한다. 임의의 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 단편은 BCMA를 특이적으로 인식하고 BCMA와 특이적으로 결합한다. 본 명세서에 제공된 일부 구현예에서, BCMA 단백질은 인간 BCMA, 마우스 BCMA 단백질 또는 비인간 영장류(예를 들어 시노몰구스 원숭이) BCMA 단백질을 지칭한다. 본 명세서의 임의의 구현예 중 일부 구현예에서, BCMA 단백질은 인간 BCMA 단백질을 지칭한다. 항체 또는 다른 결합 분자가 BCMA 단백질에 결합하거나 BCMA 단백질에 특이적으로 결합한다는 관찰이 반드시 모든 종의 BCMA 단백질에 결합한다는 것을 의미하지는 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, BCMA 단백질에 결합하는 특징, 예컨대 이에 대해 특이적으로 결합하는 능력 및/또는 참조 항체와 이에 대해 결합하기 위해 경쟁하는 능력 및/또는 특정 친화도로 결합하는 능력 또는 특정 정도로 경쟁하는 능력은, 일부 구현예에서, 인간 BCMA 단백질에 관한 능력을 지칭하고 항체는 다른 종, 예컨대 마우스의 BCMA 단백질에 관하여 상기 특징을 갖지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 특정 스플라이스 변이체 또는 대립 유전자 변이체와 같은 BCMA의 자연발생적 변이체를 포함하는 포유류 BCMA 단백질에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체는 인간 BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 단백질의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 367(GenBank No. BAB60895.1) 또는 서열 번호: 368(NCBI No. NP_001183.2)의 아미노산 서열을 포함하는 인간 BCMA 단백질 또는 이의 대립 유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 특이적으로 결합한다. 일 구현예에서, 인간 BCMA 단백질은 전사체 변이체에 의해 암호화되거나 서열 번호: 369에 제시된 아미노산 서열을 갖는 동형 단백질이다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 371(GenBank No. EHH60172.1)에 제시된 시노몰거스 원숭이 BCMA 단백질과 같은 시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 BCMA에 결합하지만 서열 번호: 371(GenBank No. EHH60172.1)에 제시된 시노몰거스 원숭이 BCMA 단백질과 같은 시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질에 결합하지 않거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 370 (NCBI No. NP_035738.1)에 제시된 마우스 BCMA 단백질과 같은 마우스 BCMA 단백질에 결합하지 않거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 370 (NCBI No. NP_035738.1)에 제시된 마우스 BCMA 단백질과 같은 마우스 BCMA 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 BCMA 단백질에 대한 결합보다 더 낮은 친화도로 마우스 BCMA 단백질 및/또는 시노몰거스 원숭이 BCMA 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 BCMA 단백질에 대한 결합보다 더 낮은 친화도로 마우스 BCMA 단백질 및/또는 시노몰거스 원숭이 BCMA 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 BCMA 단백질에 대한 결합과 비교하여 유사한 결합 친화도로 마우스 BCMA 단백질 및/또는 시노몰거스 원숭이 BCMA 단백질에 결합한다.
일부 구현예에서, 제공된 항원 결합 도메인 또는 CAR는 수용성 BCMA에 비해 막 결합 BCMA에 우선적인 결합을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 항원 결합 도메인 또는 CAR은 수용성 BCMA에 비해 막 결합 BCMA에 대해 보다 큰 결합 친화도를 나타낸다.
일 구현예에서, 비인간 BCMA 단백질 또는 다른 비-BCMA 단백질과 같은 비관련, 비-BCMA 단백질에 대한 항 BCMA 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR의 결합 정도는 예를 들어 방사선 면역 분석(RIA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 BCMA 단백질 또는 인간 막 결합 BCMA에 대한 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR의 결합의 10% 미만 또는 약 10%이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중, 마우스 BCMA 단백질에 대한 결합이 인간 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%인 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중, 시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질에 대한 결합이 인간 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%인 항체가 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중, 시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질 및/또는 마우스 BCMA 단백질에 대한 결합이 인간 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합과 유사하거나 대략 동일한 항체가 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중, 가용성 BCMA 단백질에 대한 결합이 막 결합 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%인 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR이 있다.
일부 구현예에서, 항체는 BCMA 단백질, 예를 들어 인간 BCMA, 마우스 BCMA 단백질 또는 비인간 영장류(시노몰구스 원숭이) BCMA 단백질에 대해 특정 친화도로 결합하거나 특정 정도로 경쟁하고/거나 참조 항체와 이에 대한 결합을 두고 경쟁하고/거나 특이적으로 결합한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체는 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된 바와 같이 인간 BCMA 단백질과 같은 BCMA 단백질에 특정 친화도 이상으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 친화도는 평형 해리 상수(KD)로 표시되고; 일부 구현예에서, 친화도는 EC50으로 표시된다.
어떤 결합 분자(예를 들어 항체 또는 이의 단편)가 특정 리간드(예를 들어 항원, 예컨대 BCMA 단백질)에 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하고/거나 결합 친화도를 평가하기 위한 다양한 분석이 공지되어 있다. 예컨대 당업계에 잘 알려진 다수의 임의의 결합 분석을 이용하여, 항원, 예를 들어 BCMA, 예컨대 인간 BCMA 또는 시노몰구스 BCMA 또는 마우스 BCMA에 대한 결합분자, 예를 들어 항체의 결합 친화도를 결정하는 것은 당업자의 수준 이내이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, BIAcore 기계는 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance, SPR) 분석을 이용하여, 2개의 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 단편과 항원, 예컨대 BCMA 단백질) 사이 복합체의 결합 동역학 및 상수를 결정하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어 Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993; 및 미국 특허 번호 5,283,173, 5,468,614 또는 동등물 참조).
SPR은 분자가 표면에 결합하거나 해리될 때 센서 표면의 분자 농도 변화를 측정한다. SPR 신호의 변화는 표면에 가까운 질량 농도의 변화에 정비례하여 두 분자 사이의 결합 동역학을 측정할 수 있다. 복합체에 대한 해리 상수는 완충액이 칩을 통해 전달됨에 따라 시간에 대하여 굴절률의 변화를 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 하나의 단백질과 다른 단백질의 결합을 측정하기 위한 다른 적합한 분석에는 예를 들어, 효소 결합 면역 흡착 분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 및 방사선 면역 분석(radioimmunoassay, RIA)과 같은 면역 분석 또는 단백질의 분광학적 또는 광학적 특성의 변화를 형광, UV 흡수, 원편광 이색성(circular dichroism) 또는 핵 자기 공명(nuclear magnetic resonance, NMR)을 통해 모니터링함으로써 결합을 결정하는 것이 포함된다. 다른 예시적인 분석은 웨스턴 블롯, ELISA, 분석적 초원심 분리, 분광법, 유세포 분석, 발현된 폴리뉴클레오타이드 또는 단백질 결합의 검출을 위한 염기서열 분석 및 기타 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 단편 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 항원, 예를 들어 BCMA 단백질 또는 그 안의 에피토프에 105 M-1이상의 친화도 또는 KA(즉, 1/M의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 결합 상수; 2 분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 온-레이트(on-rate)[kon 또는 ka] 대 오프-레이트(off-rate)[koff 또는 kd]의 비율과 동일)로 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 단편 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 10-5 M 이하의 KD(즉, M의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 해리 상수; 2 분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 오프-레이트[koff 또는 kd] 대 온-레이트[kon 또는 ka]의 비율과 동일)로 펩티드 에피토프에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 예를 들어, 평형 해리 상수 KD는 10-5 M 내지 10-13 M, 예컨대 10-7 M 내지 10-11 M, 10-8 M 내지 10-10 M 또는 10-9 M 내지 10-10 M의 범위이다. 상기 온-레이트(결합 비율 상수; kon 또는 ka; 1/Ms의 단위) 및 상기 오프-레이트(해리 비율 상수; koff 또는 kd; 1/s의 단위)는 당업계에 공지된 임의의 분석 방법, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명(SPR)을 이용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 단백질에 대한 항체(예를 들어 항원 결합 단편) 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 해리 상수는 0.01 nM 내지 500 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 500 nM, 0.01 nM 내지 400 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 400 nM, 0.01 nM 내지 100 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 100 nM, 0.01 nM 내지 50 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 50 nM, 0.01 nM 내지 10 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 10 nM, 0.01 nM 내지 1 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 1 nM, 0.01 nM 내지 0.1 nM 또는 약 0.01 nM 내지 약 0.1 nM, 0.1 nM 내지 500 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 500 nM, 0.1 nM 내지 400 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 400 nM, 0.1 nM 내지 100 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 100 nM, 0.1 nM 내지 50 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 50 nM, 0.1 nM 내지 10 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 10 nM, 0.1 nM 내지 1 nM 또는 약 0.1 nM 내지 약 1 nM, 0.5 nM 내지 200 nM 또는 약 0.5 nM 내지 약 200 nM, 1 nM 내지 500 nM 또는 약 1 nM 내지 약 500 nM, 1 nM 내지 100 nM 또는 약 1 nM 내지 약 100 nM, 1 nM 내지 50 nM 또는 약 1 nM 내지 약 50 nM, 1 nM 내지 10 nM 또는 약 1 nM 내지 약 10 nM, 2 nM 내지 50 nM 또는 약 2 nM 내지 약 50 nM, 10 nM 내지 500 nM 또는 약 10 nM 내지 약 500 nM, 10 nM 내지 100 nM 또는 약 10 nM 내지 약 100 nM, 10 nM 내지 50 nM 또는 약 10 nM 내지 약 50 nM, 50 nM 내지 500 nM 또는 약 50 nM 내지 약 500 nM, 50 nM 내지 100 nM 또는 약 50 nM 내지 약 100 nM 또는 100 nM 내지 500 nM 또는 약 100 nM 내지 약 500 nM이다. 특정 구현예에서, BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 단백질에 대한 항체의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD는 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 약 400 nM, 300 nM, 200 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하이다. 일부 구현예에서, 항체는 BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 단백질에 나노몰 이하의 결합 친화도, 예를 들어 약 1 nM 미만의 결합 친화도, 예컨대 약 0.9 nM 미만, 약 0.8 nM, 약 0.7 nM, 약 0.6 nM, 약 0.5 nM, 약 0.4 nM, 약 0.3 nM, 약 0.2 nM 또는 약 0.1 nM 이하로 결합한다.
일부 구현예에서, 결합 친화도는 높은 친화도 또는 낮은 친화도로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 낮은 내지 중간 정도의 친화도 결합을 나타내는 결합 분자(예를 들어 항체 또는 이의 단편) 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 최대 107 M-1, 최대 106 M-1, 최대 105 M-1의 KA를 나타낸다. 일부 경우에, 특정 에피토프에 대해 높은 친화도 결합을 나타내는 결합 분자(예를 들어 항체 또는 이의 단편)은 107 M-1 이상, 108 M-1 이상, 109 M-1 이상, 1010 M-1 이상, 1011 M-1 이상, 1012 M-1 이상 또는 1013 M-1 이상의 KA로 상기 에피토프와 상호작용한다. 일부 구현예에서, BCMA 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항 BCMA 항체 또는 이의 단편 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD는 0.01 nM 내지 1 M 또는 약 0.01 nM 내지 약 1 M, 0.1 nM 내지 1 M, 1 nM 내지 1 M, 1 nM 내지 500 nM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 50 nM, 1 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 500 nM, 10 nM 내지 100 nM, 10 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 500 nM, 50 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 500 nM이다. 특정 구현예에서, BCMA 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항 BCMA 항체 또는 이의 단편 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD의 해리 상수는 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하이다. 특정 항체의 친화도의 정도는 참조 항체와 같은 공지된 항체의 친화도와 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종으로부터의 BCMA 단백질에 대한 항 BCMA 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인과 같은 결합 분자의 결합 친화도는 종 교차 반응성을 결정하기 위해 비교될 수 있다. 예를 들어, 종 교차 반응성은 높은 교차 반응성 또는 낮은 교차 반응성으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종, 예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이 또는 마우스로부터의 BCMA 단백질에 대한 평형 해리 상수, KD는 종 교차 반응성을 결정하기 위해 비교될 수 있다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 종 교차 반응성은 높을 수 있고, 예를 들어 항 BCMA 항체는 인간 BCMA 및 종 변이체 BCMA에 유사한 정도로 결합하고, 예를 들어 인간 BCMA에 대한 KD 및 종 변이체 BCMA에 대한 KD의 비율은 1 또는 약 1이다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 종 교차 반응성은 낮을 수 있고, 예를 들어 항 BCMA 항체는 인간 BCMA에 대한 높은 친화도를 가지나 종 변이체 BCMA에 대해 낮은 친화도를 갖거나 이와 반대도 같다. 예를 들어, 종 변이체 BCMA에 대한 KD와 인간 BCMA에 대한 KD의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 이상이며, 항 BCMA 항체는 낮은 종 교차 반응성을 갖는다. 종 교차 반응성의 정도는 참조 항체와 같은 공지된 항체의 종 교차 반응성과 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 막 결합 BCMA에 대한 결합 친화도와 비교하여 항원의 상이한 형태 또는 위상형, 예를 들어 가용성 BCMA 단백질에 대한 항 BCMA 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인의 결합 친화도는 특정 형태 또는 위상형에 대한 우선적 결합 또는 상대적 친화도를 결정한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 제공된 항 BCMA 항체 또는 항원 결합 도메인은 가용성 BCMA와 비교하여 막 결합 BCMA에 우선적인 결합을 나타낼 수 있고/거나 가용성 BCMA와 비교하여 막 결합 BCMA에 대해 보다 큰 결합 친화도를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 형태 또는 위상형의 BCMA 단백질에 대한 평형 해리 상수, KD를 비교하여 우선적인 결합 또는 상대적인 결합 친화도를 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 가용성 BCMA와 비교하여 막 결합 BCMA에 대한 우선적인 결합 또는 상대적 친화도가 높을 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, 가용성 BCMA에 대한 KD와 막 결합 BCMA에 대한 KD의 비율이 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 이상이고 항체 또는 항원 결합 도메인은 막 결합 BCMA에 우선적으로 결합하거나 보다 높은 결합 친화도를 갖는다. 일부 경우에, 막 결합 BCMA에 대한 KA와 가용성 BCMA에 대한 KA의 비율이 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 이상이고 항체 또는 항원 결합 도메인은 막 결합 BCMA에 우선적으로 결합하거나 보다 높은 결합 친화도를 갖는다. 일부 경우에, 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 가용성 BCMA 및 막 결합 BCMA에 유사한 정도로 결합하고, 예를 들어 가용성 BCMA에 대한 KD와 막 결합 BCMA에 대한 KD의 비율이 1이거나 약 1이다. 일부 경우에, 항체 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 가용성 BCMA 및 막 결합 BCMA에 유사한 정도로 결합하고, 예를 들어 가용성 BCMA에 대한 KA와 막 결합 BCMA에 대한 KA의 비율이 1이거나 약 1이다. 막 결합 BCMA 또는 가용성 BCMA에 대한 우선적 결합 정도 또는 상대적 친화도는 참조 항체와 같은 공지된 항체의 것과 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 BCMA 단백질 및 비인간 BCMA 단백질 또는 다른 비-BCMA 단백질과 유사한 정도로 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 인간 BCMA 단백질, 예컨대 서열 번호: 367(GenBank No. BAB60895.1) 또는 서열 번호: 368(NCBI No. NP_001183.2)의 아미노산 서열을 포함하는 인간 BCMA 단백질 또는 이의 대립 유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 평형 해리 상수(KD)로 결합하고 비인간 BCMA, 예컨대 시노몰구스 원숭이 BCMA, 예컨대 서열 번호: 371(GenBank No. EHH60172.1)에 제시된 시노몰구스 원숭이 BCMA 단백질에 유사하거나 대략 유사하거나 또는 2배 미만 상이하거나 5배 미만 상이한 KD로 결합한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 유사하거나 대략 유사하거나 또는 2배 미만 상이하거나 5배 미만 상이한 평형 해리 상수(KD)로 가용성 BCMA 단백질 및 막 결합 BCMA 단백질과 유사한 정도로 결합한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 BCMA에 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하의 KD로 결합하고 시노몰구스 원숭이 BCMA에 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 마우스 BCMA 단백질에 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 약 1 M, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하의 KD로 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 BCMA, 시노몰구스 원숭이 BCMA 및 마우스 BCMA에 높은 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 BCMA 및 시노몰구스 원숭이 BCMA에 높은 친화도로 및 마우스 BCMA에 낮은 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 BCMA 및 다른 종으로부터의 BCMA 또는 BCMA 단백질의 다른 변이체에 높은 친화도로 결합한다.
일부 구현예에서, 특정 표면 플라즈몬 공명(SPR) 조건을 사용하여 측정된 바와 같은 총 결합 용량(total binding capacity, Rmax)은 항원, 예를 들어 인간 BCMA 단백질과 같은 BCMA 단백질에 대한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 능력 또는 용량을 결정하기 위해 사용된다. SPR 분석의 경우, "리간드(ligand)"는 센서 표면상의 고정된 표적 분자, 예를 들어 BCMA 단백질이고, "분석물(analyte)"은 "리간드"에 결합하기 위한 테스트 분자, 예를 들어 항체이다. 예를 들어, "분석물"은 BCMA 단백질에 결합하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. SPR에서의 특정 리간드 및 분석물 쌍에 대해, Rmax는 특정 조건에 대해 1:1 결합 화학량론 모델을 가정하여 결정될 수 있다. 결합 용량(Rmax)은 다음 식: Rmax(RU) = (분석물 분자량)/(리간드 분자량) 고정된 리간드 수준(RU)을 사용하여 결정되었다. 예를 들어, 특정 SPR 조건에서, 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 BCMA 단백질, 예컨대 인간 BCMA 또는 시노몰구스 BCMA 간 결합의 Rmax는 50 공명 단위(resonance unit, RU) 이상 또는 약 50 RU 이상, 예컨대 약 25 RU, 20 RU, 15 RU, 10 RU, 5 RU 또는 1 RU이다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 인간 항체와 같은 항체는 일반적으로 세포 외 에피토프 또는 영역과 같은 BCMA 단백질의 특정 에피토프 또는 영역에 특이적으로 결합한다. BCMA 단백질은 세포 외 도메인, 막 관통 도메인 및 세포질 도메인을 함유하는 III 형 막 184 아미노산 단백질이다. 서열 번호: 367에 제시된 인간 BCMA 아미노산 서열을 참조하여, 세포 외 도메인은 아미노산 1-54에 해당하고, 아미노산 55-77은 막 관통 도메인에 해당하고, 아미노산 78-184는 세포질 도메인에 해당한다.
제공된 CAR 중에는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달, 즉 항원, 예를 들어 BCMA의 부재 하에 부재 또는 배경 수준에서 측정 가능한 신호 전달 활성을 나타내는 CAR이 있다. 따라서, 일부 측면에서, 제공된 CAR은 항원, 예를 들어 BCMA의 부재하에 존재하는 배경 이하 또는 허용 가능하거나 낮은 수준의 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내거나 나타내지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 항 BCMA CAR 발현 세포는 세포 독성 활성, 사이토카인 생성 및 증식 능력을 포함하는 생물학적 활성 또는 기능을 나타낸다.
일부 구현예에서, 세포 독성 활성과 같은 키메라 수용체의 생물학적 활성 또는 기능적 활성은 다수의 공지된 방법 중 어느 하나를 사용하여 측정될 수 있다. 활성은 시험관 내 또는 생체 내에서 평가되거나 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 대상체(예를 들어, 인간)에 투여될 때 활성이 평가될 수 있다. 평가 파라미터는 예를 들어 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 대한 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), and Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 평가와 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 특정 사이토카인, 예컨대 인터레쿠킨-2(interlekukin-2, IL-2), 인터페론-감마(IFNg), 인터루킨-4(IL-4), TNF-알파(TNF), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-10(IL-10), 인터루킨-12(IL-12), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)), CD107a 및/또는 TGF-베타(TGF)의 발현 및/또는 분비를 평가하여 측정될 수 있다. 사이토카인을 측정하는 분석법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, 관련 사이토카인에 대해 반응하는 세포가 테스트 샘플의 존재 하에 반응성(예를 들어 증식)이 테스트되는 ELISA, 세포 내 사이토카인 염색, 세포 계량 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 생체 분석을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 측면에서 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가하여 측정된다.
일부 측면에서, 리포터 세포주는 항 BCMA CAR 발현 세포를 통한 항원 비의존적 활성 및/또는 토닉 신호 전달을 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 주르카트 세포주와 같은 T 세포주는 내인성 Nur77 전사 조절 요소의 제어 하에 발현된 레드 형광 단백질과 같은 형광 단백질 또는 다른 검출 가능한 분자와 같은 리포터 분자를 함유한다. 일부 구현예에서, Nur77 리포터 발현은 세포 내인성이며, T 세포에서 1 차 활성화 신호를 함유한 재조합 리포터를 통한 신호 전달, T 세포 수용체(TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM), 예컨대 CD3 사슬을 포함한 신호 전달 도메인에 의존한다. Nur77 발현은 일반적으로 세포 외인성 방식으로 작용할 수 있고 재조합 수용체를 통한 신호 전달에 의존하지 않을 수 있는 사이토카인 신호 전달 또는 톨-유사 수용체(toll-like receptor, TLR) 신호 전달과 같은 다른 신호 전달 경로에 영향을 받지 않는다. 따라서, 적절한 신호 전달 영역을 함유하는 외인성 재조합 수용체, 예를 들어 항 BCMA CAR을 발현하는 세포만이 자극시(예를 들어, 특이적 항원의 결합) Nur77을 발현할 수 있다. 일부 경우에, Nur77 발현은 자극(예를 들어: 항원)량에 대한 단위 용량 의존적 반응을 나타낼 수도 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항 BCMA CAR은 동일한 아미노산 서열을 가지고 있지만 제거된 비-스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 예컨대 대안적인 CAR과 비교하여 세포의 표면 상에서 개선된 발현을 나타낸다. 일부 구현예서, 세포의 표면 상에서 재조합 수용체의 발현을 평가할 수 있다. 세포의 표면 상에서 재조합 수용체의 발현을 결정하기 위한 접근법은 키메라 항원 수용체(CAR) 특이적 항체(예를 들어, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38), Protein L (Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), CAR 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 에피토프 태그 및 단클론 항체(국제 특허 출원 공개 번호 WO2014190273 참조)의 사용을 포함할 수 있다. 일부 구현예서, 세포, 예를 들어 1차 T 세포의 표면 상에서 재조합 수용체의 발현을 예를 들어 재조합 수용체에 결합할 수 있는 결합 분자 또는 검출될수 있는 이의 일부를 이용하여 유세포 분석으로 평가할 수 있다. 일부 구현예서, 재조합 수용체의 발현을 검출하기 위해 사용되는 결합 분자는 항-이디오타입 항체, 예를 들어 결합 도메인, 예를 들어 scFv에 특이적인 항-이디오타입 작용제 항체 또는 이의 일부이다. 일부 구현예서, 결합 분자는 단리되거나 정제된 항원, 예를 들어 재조합으로 발현된 항원이거나 이를 포함한다.
C. 다중 특이적 항체
특정 구현예에서, BCMA 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 폴리펩티드, 예컨대 상기를 함유하는 키메라 수용체는 다중 특이적이다. 다중 특이적 결합 분자 중에는 예를 들어, 이중 특이적 항체를 포함하는 다중 특이적 항체가 있다. 다중 특이적 결합 파트너, 예를 들어 항체는 동일하거나 상이한 항원일 수 있는 2개 이상의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는다. 특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 BCMA에 대한 것이고 다른 하나는 다른 항원에 대한 것이다. 일부 구현예에서, 추가의 결합 분자는 제3 또는 그 이상의 항원에 결합하고/거나 인식한다. 특정 구현예에서, 이중 특이적 항체는 BCMA의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중 특이적 항체는 또한 BCMA를 발현하는 세포에 세포 독성 제제를 국소화하기 위하여 사용될 수 있다. 이중 특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다. 다중 특이적 항체 중에는 다중 특이적 단일 사슬 항체, 예를 들어, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv 및 탠덤 트리-scFv가 있다. 또한 항체(예를 들어 항원 결합 단편)를 함유하는 다중 특이적 CAR과 같은 다중 특이적 키메라 수용체가 제공된다. 또한 BCMA 상에서 상이한 항원 또는 상이한 에피토프에 결합하는 추가 키메라 수용체와 같은 항 BCMA 항체 및 추가적인 세포 표면 단백질을 포함하는 세포 표면 단백질을 함유하는 세포와 같은 상기를 포함하는 항체 또는 폴리펩티드를 함유하는 다중 특이적 세포가 제공된다.
예시적인 항원은 B 세포 특이적 항원, 백혈병(예를 들어, B 세포 백혈병), 림프종(예를 들어, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 등) 또는 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종(MM), 혈장 세포 악성 종양(예를 들어 형질 세포종)에 특이적으로 발현되거나 이와 관련된 항원과 같은 다른 종양 특이적 항원을 포함한다. 예를 들어, 항원은 B 세포 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 확산성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 버킷 림프종(예를 들어, 풍토성 버킷 림프종 또는 산발성 버킷 림프종), 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL), 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer, NSCLC), 만성 골수성 (또는 골수 형성) 백혈병(chronic myeloid leukemia, CML), 모발 세포 백혈병(hairy cell leukemia, HCL), 소림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma, SLL), 변연부 림프종, 호지킨 림프종(Hodgkin lymphoma, HL), 비-호지킨 림프종(non-Hodgkin lymphoma, NHL), 역형성 거대 세포 림프종(Anaplastic large cell lymphoma, ALCL), 불응성 여포 림프종, 월덴스트롬 마크로글로불린혈증, 여포성 림프종, 작은 비-절단 세포 림프종, 점막 관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma, MALT), 변연부 림프종, 결절성 단핵구 B 세포 림프종, 면역 모세포성 림프종, 거대 세포 림프종, 확산성 혼합 세포 림프종, 폐 B 세포 혈관 중심성 림프종, 소림프구성 림프종, 1차 종격동 B 세포 림프종, 림프구 형질세포 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL), 신경 아세포종, 신장 세포암, 결장암, 직장암, 유방암, 상피성 편평 상피 세포암, 흑색종, 골수종, 예컨대 다발성 골수종(예를 들어, 비분비 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종, 위암, 식도암, 뇌암, 폐암(예를 들어 소세포 폐암), 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암(예를 들어 간암종, 간종양 등), 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 비장암(예를 들어 비장 림프종), 부신암 및/또는 두경부암에서 특이적으로 발현되거나 이와 관련된 것 및 T 세포 상에서 발현되는 항원을 포함한다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략에 대한 제2 또는 추가 항원 중에서 항원 중 하나 이상은 보편적 종양 항원 또는 이의 패밀리 멤버인 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 종양 상에서 발현되는 항원이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 BCMA 결합 분자는 제2 또는 추가 항원과 동일한 종양 유형에 대한 항원을 표적화한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 또한 보편적 종양 항원일 수 있거나 종양 유형에 특이적인 종양 항원일 수 있다.
예시적인 제2 또는 추가 항원은 CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, 테나신(tenascin), 혈관형성 인자, VEGF, PIGF, ED-B 피브로넥틴, 종양 유전자, 종양 유전자 산물, CD66a-d, 괴사 항원, Ii, IL-2, T101, TAC, IL-6, ROR1, TRAIL-R1(DR4), TRAIL-R2(DR5), tEGFR, Her2, L1-CAM, 메소텔린(mesothelin), CEA, B형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD24, CD30, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, erbB 2량체, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(G protein-coupled receptor class C group 5 member D, GPRC5D), HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 부착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 우선 발현 흑색종 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2(IL-13Ra2), CA9, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린(integrin), 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아 AchR, NKG2D 리간드, 이중 항원, 범용 태그 관련 항원, 암 고환 항원, MUC1, MUC16, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양 1(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, hTERT, MDM2, CYP1B, WT1, 리빈(livin), AFP, p53, 사이클린 (D1), CS-1, BAFF-R, TACI, CD56, TIM-3, CD123, L1-세포 부착 분자, MAGE-A1, MAGE A3, 사이클린, 예컨대 사이클린 A1(CCNA1) 및/또는 병원체 특이적 항원, 비오티닐화 분자, HIV, HCV, HBV 및/또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자 및/또는 일부 측면에서 이의 신생 에피토프 또는 신생 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 범용 태그이거나 이와 관련된다.
일부 측면에서, 항원, 예를 들어 질병 특이적 항원 및/또는 관련 항원과 같은 제2 또는 추가 항원은 다발성 골수종, 예컨대 G 단백질 결합 수용체 클래스 C군 5 멤버 D(GPRC5D), CD38(환형 ADP 리보오스 가수 분해 효소), CD138(신데칸-1, 신데칸, SYN-1), CS-1(CS1, CD2 서브세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24), BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5에서 발현된다. 다른 예시적인 다발성 골수종 항원은 CD56, TIM-3, CD33, CD123, CD44, CD20, CD40, CD74, CD200, EGFR, 2-마이크로글로불린, HM1.24, IGF-1R, IL-6R, TRAIL-R1 및 액티빈(activin) 수용체 IIA형(ActRIIA)을 포함한다. 문헌[Benson and Byrd, J. Clin. Oncol. (2012) 30(16): 2013-15; Tao and Anderson, Bone Marrow Research (2011):924058; Chu et al., Leukemia (2013) 28(4):917-27; Garfall et al., Discov Med. (2014) 17(91):37-46]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항원은 림프성 종양, 골수종, 에이즈 관련 림프종 및/또는 CD38과 같은 이식 후 림프구의 과량 생산에 존재하는 것을 포함한다. 상기 항원에 대해 지시된 항체 또는 항원 결합 단편은 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[미국 특허 번호 8,153,765; 8,603477, 8,008,450; 미국 공개 번호 US20120189622 또는 US20100260748; 및/또는 국제 PCT 공개 번호 WO2006099875, WO2009080829 또는 WO2012092612 또는 WO2014210064]에 기재된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 scFv)는 다중 특이적 항체, 다중 특이적 키메라 수용체 예컨대 다중 특이적 CAR 및/또는 다중 특이적 세포에 함유된다.
Ⅱ. 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 BCMA CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및 최적화된 폴리뉴클레오타이드를 생산하고 최적화하는 방법
발현 및/또는 치료적 용도를 위해 폴리뉴클레오타이드를 최적화하는 방법 및 예를 들어 상기 방법에 따라 최적화된 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에서 제공된다. 일부 구현예에서, 제공된 방법 또는 최적화는 예를 들어, 폴리뉴클레오타이드가 세포, 예컨대 특정 세포 유형, 예컨대 포유류, 예를 들어 인간 세포 유형, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포 또는 T 세포주에서 발현될 때 메신저 RNA(mRNA)와 같은 전사 RNA의 이질성을 감소시키고/거나 균질성을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드를 최적화하는 방법은 공여체 스플라이스 부위 또는 수용체 스플라이스 부위 중 하나 또는 둘 다와 같은 하나 이상의 숨은 스플라이스 부위의 서열을 확인 및 제거 또는 변경하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 코돈 최적화를 추가적으로 또는 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화는 예측된 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제와 같은 전사된 RNA(예를 들어, mRNA)의 이질성을 감소시키는 방법 이전 및/또는 이후에 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화는 전사된 RNA의 이질성을 감소시키는 방법의 하나 이상의 단계 중 어느 하나에 통합된다. 일부 구현예에서, 예측된 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제와 같은 이질성을 감소시키는 방법은 코돈 최적화 후에 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 항 BCMA CAR 폴리펩티드 중 어느 하나를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 전이 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 발현 및/또는 치료적 용도를 위해 최적화될 수 있는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 코돈 사용을 최적화하기 위해 변형된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드, 예컨대 본 명세서에 제공된 임의의 항체, 수용체(예컨대 키메라 항원 수용체와 같은 항원 수용체) 및/또는 BCMA 특이적 결합 단백질을 암호화하는 것은 본 명세서에서 관찰된(예컨대 최적화 방법에 의함) 하나 이상의 핵산 서열을 함유하거나 이질성을 감소시키기 위해 변형되거나 변형되었어서, 최적화되지 않은 별개의 참조 서열을 함유하는 것과 비교하여 CAR과 같은 폴리펩티드의 개선된 특징을 초래한다. 상기 특징 중에는 하나 이상의 숨은 스플라이스 부위와 같은 하나 이상의 스플라이스 부위의 존재로 초래된 것과 같은 RNA 이질성에서의 개선 및/또는 폴리펩티드를 발현하도록 조작된 상이한 치료적 세포 조성물 또는 세포 중에서 발현의 증가된 수준, 균일성 또는 일관성과 같은 암호화된 단백질의 개선된 발현 및/또는 표면 발현이 포함된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현에 최적화된 코돈일 수 있다.
게놈 핵산 서열은 일반적으로, 사실상, 포유류 세포에서, 전사 직후 또는 전사와 동시에 프로세싱을 거치고, 여기에서 게놈의 디옥시리보핵산(DNA) 서열로부터 전사된 초기 전구체 메신저 리보핵산(pre-mRNA)은, 일부 경우에 진핵 세포에서 인트론을 제거하기 위해 스플라이싱을 통해 편집되고, 엑손의 결찰로 이어진다. 스플라이스 부위에 대한 컨센서스 서열은 공지되어 있지만, 일부 측면에서, 스플라이스 부위를 정의하는 특정 뉴클레오타이드 정보는 복잡할 수 있고 이용 가능한 방법에 기초하여 쉽게 명백하지 않을 수 있다. 숨은 스플라이스 부위는 표준 컨센서스 서열을 기반으로 예측되지 않고 다양하게 활성화되는 스플라이스 부위이다. 따라서, 숨은 스플라이스 부위에서 전-mRNA의 가변 스플라이싱은 진핵 세포에서의 발현 후 전사된 mRNA 생성물에서의 이종성으로 이어진다.
전이 유전자의 발현을 위해 생성된 폴리뉴클레오타이드는 전형적으로 인트론을 함유하지 않는 상보적 DNA(cDNA)와 같은 핵산 서열 또는 이의 일부로부터 작제된다. 따라서, 상기 서열의 스플라이싱이 일어나지 않을 것으로 예상된다. 그러나, cDNA 서열 내의 숨은 스플라이스 부위의 존재는 전사된 mRNA에서 의도하지 않거나 바람직하지 않는 스플라이싱 반응 및 이질성으로 이어질 수 있다. 상기 이질성은 변형된 발현 및/또는 활성을 나타내는 가변 아미노산 서열을 가진 절단된 단백질 산물과 같은 의도하지 않은 단백질 산물의 번역을 초래한다.
또한 전이 유전자를 암호화하거나 함유하는 것 또는 재조합 단백질을 암호화하는 것과 같은 전사된 핵산의 이질성을 결정하기 위한 방법 및 접근법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' untranslated region, 5' UTR)의 전부 또는 일부 및/또는 3' 비번역 영역(3' untranslated region, 3' UTR)의 전부 또는 일부를 포함하는 전사된 핵산 서열의 이질성을 결정하는 것을 포함한다. 또한 전사된 핵산의 이질성에 기초하여 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위의 존재를 확인하는 방법이 본 명세서에 제공된다. 또한 전이 유전자의 전사된 핵산의 이질성을 결정하는 제공된 방법을 사용하여, 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하는 방법이 제공된다. 또한 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법이 제공된다.
또한 예를 들어 전이 유전자의 전사된 핵산의 결정된 이질성에 기초하는 것과 같은 하나 이상의 스플라이스 부위, 예컨대 숨은 스플라이스 부위의 제거 또는 변형을 위한 전이 유전자 또는 재조합 단백질 또는 핵산 후보를 확인하는 방법이 제공된다.
전이 유전자(예를 들어, 발현된 전이 유전자 전사체) 또는 다른 핵산의 전사된 핵산(예를 들어, 전사체)의 이질성을 감소시키기 위한 방법 및 접근법이 또한 제공된다. 상기 방법 및 접근법은 제공된 방법에 따라 스플라이스 부위(예컨대 숨은 스플라이스 부위)의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하고 전이 유전자 내에서 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하는 것을 포함할 수 있다. 제공된 방법의 구현예에서, 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 전사된 핵산(예를 들어, 전사체)의 번역 및/또는 비번역 영역에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하면 전이 유전자 산물, 예컨대 전이 유전자로부터 번역된 폴리펩티드, 예컨대 항 BCMA CAR 폴리펩티드의 발현을 개선 또는 최적화할 수 있다. 암호화된 BMCA CAR 분자와 같은 암호화된 전이 유전자의 숨은 스플라이스 부위에서의 스플라이싱은 단백질 발현, 예를 들어 세포 표면 상에서의 발현 감소로 이어질 수 있고/거나 기능, 예를 들어 세포 내 신호 전달의 감소로 이어질 수 있다. 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 제거하도록 최적화된 항BMCA CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에서 제공된다. 또한 코돈 발현에 최적화된 항BMCA CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 스플라이스 부위에 관한 본 명세서의 방법 또는 관찰에 의해 확인된 것과 같은 하나 이상의 서열이 존재하고/거나 본 명세서에서 확인된 스플라이스 부위 중 어느 하나와 같은 확인된 스플라이스 부위가 존재하지 않는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에서 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 특정 조건 하에서 발현되고/거나 특정 세포 유형, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1 차 인간 T 세포 및 상기 특성을 함유하고/거나 상기 특성을 나타내는 세포 및 조성물 및 제조 물품으로 도입될 때 특정 정도 미만의 RNA 이질성 또는 스플라이스 형태를 나타내는 것이 있다.
일부 구현예에서, RNA 이질성을 감소시키거나 잠재적 스플라이스 부위를 제거하는 것은 폴리뉴클레오타이드를 변형시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형은 동일한 폴리펩타이드를 암호화하는 비변형 폴리뉴클레오타이드와 같은 참조 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 대체 또는 치환과 같은 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 참조 폴리뉴클레오티는 전사된 RNA(예를 들어 mRNA)는 세포에서 발현될 때, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타내는 것이다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 전사된 RNA의 RNA 이질성이 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상보다 더 많이 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상보다 더 많이 감소된 폴리뉴클레오타이드를 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 전사된 RNA의 RNA 균질성이 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상인 폴리뉴클레오타이드를 생성한다.
A. RNA 이질성 측정 및 감소 방법
예를 들어, 특정 세포 유형 또는 맥락에서 발현될 때 전사된 RNA와 같은 핵산의 RNA 이질성을 측정, 평가 및/또는 감소시키기 위한 방법, 접근법 및 전략뿐만 아니라 참조 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 상기 이질성 및/또는 이의 위험에서의 감소를 나타내는 폴리뉴클레오타이드가 본 명세서에서 제공된다. 일부 구현예에서, 참조 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 본 섹션에 기재된 바와 같은 방법에 의해 RNA 이질성에 대해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 접근법은, 예컨대 숨은 스플라이스 부위로 인한, 예컨대 특정 세포 또는 맥락에서 RNA(예를 들어, mRNA) 이질성 또는 이의 가능성을 확인하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 상기 이질성은 프로모터와 같은 전사된 RNA에 있는 전이 유전자의 상류에 위치된 요소의 일부에 해당하는 5' 비번역 영역(5' UTR)에 특이적인 제 1 프라이머 및 전이 유전자 내의 서열에 특이적이거나 전사된 RNA 서열에 있는 발현된 전이 유전자의 하류에 위치된 3' 비번역 영역(3' UTR)에 특이적인 제2 프라이머를 사용하여 RNA 전사체를 증폭함으로써 확인된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용하여 전사된 핵산을 증폭시키는 것을 포함하며, 여기서 하나 이상의 쌍은 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' 비번역 영역(3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함하여 하나 이상의 증폭 산물을 생성한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 증폭 산물을 검출하는 것을 포함하며, 여기서 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍으로부터 2개 이상의 증폭 산물의 존재는 증폭 산물에서의 이질성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 전사체에서의 검출된 차이는 증폭된 전사체의 상이한 길이이다. 일부 구현예에서, 전사체에서의 검출된 차이는 크로마토그래피 프로파일에서의 차이이다. RNA 이질성을 갖는 폴리뉴클레오타이드를 확인하기 위한 예시적인 방법이 하기에 기재된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 이질성을 감소시키기 위해 변형될 필요성에 대해 RNA 이질성을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상보다 더 큰 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상보다 더 큰 RNA 이질성을 나타내는 폴리뉴클레오타이드가 하나 이상의 스플라이스 부위, 예컨대 하나 이상의 숨은 스플라이스 부위를 제거하기 위해 뉴클레오타이드 변형을 위해 선택된다.
1. RNA 이질성 측정
RNA 이질성은 본 명세서에 제공되거나 기재되거나 공지된 다수의 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 전사된 핵산의 RNA 이질성은 예컨대 역전사 효소 폴리머라제 연쇄 반응(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)에 의해 전사된 핵산을 증폭한 후 하나 이상의 증폭된 산물에서 크기 차이와 같은 하나 이상의 차이를 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, RNA 이질성은 상이한 크기의 증폭 산물의 수 또는 다양한 상이한 크기의 증폭 산물의 비율에 기초하여 결정된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, RNA 이질성은 총 증폭 산물의 수 또는 양과 비교하여 상이한 크기의 증폭 산물의 수, 양 또는 비율을 결정함으로써 정량화된다. 일부 경우에, 모든 또는 실질적으로 모든 특정 전사체가 같은 크기로 결정되며, 이 경우 RNA 이질성은 낮다. 일부 경우에, 다양한 상이한 크기의 전사체가 존재하거나, 특정 전사체의 상당 부분이 숨은 또는 바람직하지 않은 스플라이싱 이벤트가 없는 증폭 산물의 예측된 크기와 비교하여 상이한 크기이다. 일부 구현예에서, RNA 이질성은 증폭 산물의 예측된 크기와 비교하여 상이한 크기인 모든 증폭 산물의 총 수 또는 양을 모든 증폭 산물의 총 수 또는 양으로 나눔으로써 계산될 수 있다. 일부 구현예에서, 전사체 또는 증폭 산물의 예측된 크기는 숨은 스플라이스 부위를 함유하지 않거나 함유하지 않을 것으로 예상되는 RNA로부터의 것이다. 일부 구현예에서, 전사체 또는 증폭 산물의 예측된 크기는 바람직하거나 의도적으로 배치된 하나 이상의 스플라이스 부위를 고려한다.
일부 구현예에서, RNA, 예컨대 총 RNA 또는 세포질의 폴리아데닐화된 RNA는 일부 경우에 전사된 RNA에 있는 전이 유전자의 상류에 위치된 발현 벡터에서 프로모터 서열의 일부에 해당하는 5' 비번역 영역(5' UTR)에 특이적인 프라이머 및 전사된 RNA 서열에 있는 발현된 전이 유전자의 하류에 위치된 3' 비번역 영역(3' UTR)에 특이적인 프라이머 또는 전이 유전자 내의 서열에 특이적인 프라이머를 사용하여 역전사 효소 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 증폭되고 최적화된 전이 유전자를 발현하는 세포로부터 수확된다. 특정 구현예에서, 5' 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머 및 3' 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머가 전이 유전자를 증폭하기 위해 이용된다. 5 'UTR에 특이적인 정방향 프라이머 및 3'UTR에 있는 뉴클레오타이드 서열에 특이적인 프라이머를 사용한 전사체으 증폭 및 결과 산물 및 스플라이스 이벤트가 발생하지 않은 예측된 증폭 산물의 예시적인 도시가 도 21a에서 제공된다. 5' UTR 및 3' UTR 영역에 특이적인 프라이머를 사용하여, 공지된 스플라이스 공여체 부위(P-SD) 및 공지된 스플라이스 수용체 부위(P-SD)를 함유하는 전사된 프로모터 서열, 비공지(숨은) 스플라이스 공여체 부위(T-SD) 및 비공지(숨은) 스플라이스 수용체 부위(T-SA)를 함유하는 전사된 전이 유전자를 갖는 5' UTR 및 3' UTR을 갖는 전사체의 증폭으로부터 생성된 예시적인 다중 증폭 산물(즉, 이종성)의 예시적 도시를 도 21b에 나타냈다.
5' 비번역 영역(UTR)에 특이적인 예시적인 프라이머는 전이 유전자의 프로모터 내의 서열에 대해 지시된 프라이머를 포함한다. 일부 예에서, 어떤 프라이머는 EF1a/HTLV 프로모터에 특이적이다. EF1a-HTLV 프로모터에 특이적인 예시적인 정방향 프라이머가 서열 번호: 763에 제시되어 있다.
3' 비번역 영역(UTR)에 특이적인 예시적인 프라이머는 전이 유전자의 하류에 위치한 3' 전사 후 조절 요소에 대해 지시된 프라이머를 포함한다. 예시적인 3' 전사 후 조절 요소는 서열 번호: 636에 제시된 우드척 간염 바이러스(woodchuck hepatitis virus, WHP) 전사 후 조절 요소(WPRE)를 포함한다. WPRE에 특이적인 예시적인 정방향 프라이머가 서열 번호: 764에 제시되어 있다.
일부 구현예에서, 다수의 프라이머 쌍이 긴 전이 유전자와 같은 전이 유전자를 증폭시키기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 증폭 산물의 슬라이딩 윈도우를 생성하기 위해 순차적 또는 중첩된 정방향 및 역방향 프라이머 쌍을 사용하여 서열의 완전하고 중복된 범위를 얻을 수 있다. 전형적으로, 프라이머는 대략 1.5-6kb, 2-6kb 또는 3-6kb인 전이 유전자의 길이를 증폭시키도록 설계된다. 중첩된 프라이머 쌍을 사용한 전사체의 증폭의 예시적인 도시가 도 21c에 제공된다.
이어서 증폭된 핵산 서열은 증폭된 전사체 길이의 관점에서 이종성에 대해 분석된다. 일부 예에서, 이질성은 발현된 서열에 대한 밴드의 수 및 강도에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 발현시 스플라이스 이벤트를 갖는 RNA 서열은 상이한 이동성을 갖는 다중 밴드를 생성한다. 일부 구현예에서, 임의의 돌발적인 스플라이스 이벤트를 갖지 않는 서열에 대한 예측된 이동성에서 메이저 밴드가 검출되고, 다양한 강도 및 이동성의 1개 이상의 추가 밴드는 전이 유전자 서열 내에서 하나 이상의 숨은 스플라이스 이벤트의 발생을 나타낸다.
당업자는 메신저 RNA와 같은 RNA를 분석할 수 있고, 여러 방법으로 이의 이질성을 분석할 수 있다. 비제한적이고 예시적인 방법은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 원심 분리, 장흐름 분획법 및 크기 배제 크로마토그래피 또는 액체 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피를 포함한다.
상기 기술의 하나 이상의 단계는 변성 조건, 부분 변성 조건 또는 비변성 조건 하에서 수행될 수 있다. 변성 조건은 다른 변성 메카니즘 중에서 온도, 카오트로픽 제제(염 포함), 유기 제제로 인한 핵산 전사체(예를 들어, mRNA)의 변성을 유발하는 조건을 포함할 수 있다. 열 변성 조건으로 상승된 온도가 적용될 수 있다. 상승된 온도는 분자 내 수소 결합을 변성시켜, 2 차 구조 또는 3 차 구조 등의 변화 또는 손실을 유발하기에 충분한 온도일 수 있다. 예를 들어, 온도 또는 열 변성 조건은 25 ℃ 내지 95 ℃, 35 ℃ 내지 85 ℃, 55 ℃ 내지 75 ℃ 또는 상기 범위 내의 다른 범위의 온도를 포함할 수 있다. 유사하게, 원하는 수준의 변성을 유발하기 위해 보다 높거나 보다 낮은 온도가 적절하게 사용될 수 있다. 온도 또는 열 변성 조건은 또한 상이한 온도가 상이한 핵산 전사체 또는 핵산 전사체 유형에 대해 사용되도록 핵산 전사체의 동일성에 의존할 수 있다. 변성 조건은 또한 과염소산 리튬 및 다른 과염소산 염, 구아니디늄 클로라이드 및 다른 구아니디늄 염, 우레아, 부탄올, 에탄올, 리튬 아세테이트, 염화 마그네슘, 페놀, 프로판올, 소듐 도데실 설페이트, 티오우레아 또는 기타와 같은 카오트로픽 제제의 사용을 포함할 수 있다. 변성 조건은 또한 유기 변성제, 예컨대 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO), 아세토니트릴 및 글리옥살을 포함할 수 있다. 또한, 변성 조건은 상기 유형의 변성 조건 중 둘 이상의 조합물을 포함할 수 있다. RNA 이질성 결정 기술의 임의의 하나 이상의 단계는 카오트로픽 또는 유기 제제와 함께 또는 없이 승온 또는 주위 온도에서 수행될 수 있다.
a) 겔 전기영동
일부 구현예에서, RNA 전사체 토폴로지 및 겉보기 (유체 역학적) 크기는 아가로스 겔 전기 영동과 같은 겔 전기 영동에 의해 분석될 수 있다. 일부 예에서, RNA 전사체는 1.2% 아가로스 겔과 같은 0.05% 내지 2% 아가로스 겔 상에서 분석될 수 있고, 특정 서열에 특이적인 프로브를 염색 또는 사용함으로써 가시화될 수 있다. 일부 구현예에서, RNA 전사체는 겔 전기영동에 의해 직접 평가될 수 있거나, 증폭 후, 예컨대 정량적 증폭 방법으로 평가될 수 있다. 아가로스 겔에서 핵산을 시각화하기 위한 핵산 염색이 잘 알려져 있다. 예시적인 염색으로는 BlueView 핵산 염색(Millipore Sigma), SYBR 골드 핵산 염색(ThermoFisher), SYBR 그린 핵산 염색(Millipore Sigma), SYBR Green II(ThermoFisher), PicoGreen 핵산 염색(Invitrogen) 및 증류수에서 제조되거나 겔로 혼입된 에티듐 브로마이드 0.5 g/mL이 포함된다. 일부 예에서, 핵산을 Quant-iT PicoGreen 결합을 사용하여 염색 후, 증폭된 생성물의 형광 검출 및 정량화한다. 아가로스 겔 방법은 보다 정량적이지만 크기 분포의 측정에서 덜 분석적이다. 일부 구현예에서, 아가로스 겔 전기 영동에 의해 분석된 핵산 단편은 RNA의 경우 노던 블롯 또는 증폭된 역전사 효소-중합 효소 연쇄 반응(RT-PCR) 생성물의 경우 서던 블롯에 의해 가시화될 수 있다.
b) 칩 기반 모세관 전기 영동
칩 기반 모세관 전기 영동(예를 들어, AGILENT 2100 BIOANALYZER 사용)은 RNA 전사체 무결성 및 크기 분포를 모니터링하기 위한 빠르고 일상적인 방법으로 사용될 수 있다. 분리는 유체 역학적 크기 및 전하에 기초하며, RNA 전사체의 뉴클레오타이드 길이 및 접힌 구조에 의해 영향을 받는다. 일 구현예에서, 상기 방법은 샘플을 전해질 매질을 갖는 칩의 채널로 전달하는 단계 및 RNA 전사체 및 불순물이 채널을 통해 이동하게 하는 전기장을 칩에 적용하는 단계를 포함한다. RNA 전사체는 불순물과 상이한 전기 영동 이동성을 가지므로, RNA 전사체는 불순물이 채널을 통해 이동하는 속도와는 다른 속도로 채널을 통해 이동한다. RNA 전사체의 전기 영동 이동성은 RNA 전사체의 이온 전하에 비례하고 전해질 매질에서의 마찰력에 반비례한다. 상기 방법은 또한 RNA 전사체를 포함하는 샘플 및 불순물을 포함하는 샘플의 하나 이상의 개별 부분을 칩으로부터 수집하는 단계를 포함한다. 또한, 상기 방법은 RNA 전사체를 포함하는 샘플 부분 중 하나 이상 및 불순물을 포함하는 샘플의 하나 이상의 개별 부분의 일 측면을 특성화하는 단계를 포함한다. 예를 들어 특성화는 전하 변이체를 정량화하는 것을 포함할 수 있다.
c) 분석적 초 원심 분리(Analytical Ultracentrifugation, AUC)
분석적 초 원심 분리(AUC)는 SEC, 아가로스 또는 다른 방법에서 매트릭스(수지 또는 겔) 상호 작용에 의해 도입될 수 있는 잠재적인 아티팩트 없이 분자량 분포를 측정하기 위한 용액 상 방법이다. 평형 AUC 및 침강 초 원심 분리가 모두 사용되며, 후자는 RNA 전사체의 크기 및 모양 둘 다와 관련된 침강 계수를 제공한다. RNA 전사체의 분석에는 스캐닝 UV/가시광선 광학 장치가 구비된 BECKMAN 분석적 초 원심 분리기가 사용된다.
d) 장흐름 분획법(Field Flow Fractionation, FFF)
유체 역학적 크기 분포를 평가하기 위한 다른 용액 상 방법은 장흐름 분획법(FFF)이다. FFF는 유동 방향에 수직으로 길고 좁은 채널을 통해 펌핑된 유체 현탁액 또는 용액에 장이 적용되어, 장에 의해 발휘되는 힘 하에서 유체에 존재하는 폴리뉴클레오타이드(RNA 전사체)의 분리를 유발하는 분리 기술이다. 상기 장은 반투과성 막, 중력, 원심력, 열 구배, 전기, 자기 등을 통한 비대칭 흐름일 수 있다.
e) 크로마토그래피
크로마토그래피는 또한 RNA 전사체 길이의 이질성을 검출하는데 사용될 수 있다. mRNA 이질성을 결정하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 및 액체 크로마토그래피의 방법이 문헌[국제 출원 WO2014144711]에 기재되어 있으며, 이는 본 명세서에 참조로 포함된다.
B. 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 BCMA CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 최적화 방법
일부 구현예에서, 제공된 방법은 예를 들어 RNA 이종성을 감소시키고/거나 숨은 또는 바람직하지 않은 스플라이스 부위를 제거 또는 삭제하기 위해 폴리뉴클레오타이드를 최적화 및/또는 변형시키는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 예컨대 상기 섹션 I.A.에 기재된 방법에 의해 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하는 단계; 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하는 단계; 및 확인된 하나 이상의 확인된 스플라이스 공여체 부위에서 또는 근처에서 핵산 서열을 변형시켜 변형된 폴리뉴클레오타이드를 생성하는 단계를 포함하는 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 (예컨대, 변형 전) 결정된 바와 같은 전사체의 초기 이질성과 비교하여 전사체의 이질성이 감소될 때까지 상기 하나 이상의 단계를 반복하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 예컨대 예측된 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제에 의해 이종성을 감소시키는 방법은 코돈 최적화 후 또는 비코돈-최적화된 RNA 상에서 수행될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 방법은 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위와 같은 스플라이스 부위를 확인하고, RNA 서열을 변형 또는 변경(예를 들어, 스플라이스 부위에서 또는 근처에서 하나 이상의 뉴클레오타이드를 치환 또는 교체에 의해)하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화는 예컨대 예측된 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제에 의해 전사된 RNA(예를 들어, mRNA)의 이질성을 감소시키는 방법 전 및/또는 후에 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 전사체가 RNA 이질성을 감소시키는 후보인지의 여부는 예를 들어 본 명세서 섹션 II.A에 기재된 바와 같이 RNA 이질성을 측정하는 방법에 기초하여 결정된다. 일부 측면에서, 이질성을 갖는 것으로 검출된 전사된 핵산은 하나 이상의 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보로서 확인된다. 일부 구현예에서, 전이 유전자 후보의 전사된 핵산이 세포에서 발현 후에 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상 또는 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상의 이질성을 나타낼 때, 전이 유전자 서열은 이질성을 감소시키기 위한 후보일 수 있다. 일부 구현예에서, 인간 세포, 선택적으로 인간 T 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 전사 및 프로세싱 후에, 폴리뉴클레오타이드로부터의 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 균질성을 나타낸다.
1. RNA 이질성 감소 방법
발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하고, 식별된 스플라이스 공여체 부위 중 하나 이상에서 또는 근처에서 핵산 서열을 변형시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 단계를 포함한다. 일부 측면에서, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 단계는 예를 들어, 잠재적 RNA 이질성이 출발 또는 비변형 전사체와 비교하여 감소될 때까지 반복될 수 있다.
a) 스플라이스 부위 확인
일부 측면에서, 잠재적 숨은 스플라이스 부위(전이 유전자 전사체와 같은 전사체에 존재하는 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위)의 존재는 세포에서 발현 후, 전사체의 RNA 이질성을 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 전이 유전자 전사체에 존재할 수 있고, 바람직하지 않고/거나 전사체의 코돈 최적화 후 및/또는 전사에서의 돌연변이 또는 실수 또는 오류에 의해 다양한 기본 서열로부터 전이 유전자 전사체에 생성될 수 있는 하나 이상의 잠재적 스플라이스 부위를 확인하는 단계를 포함한다. 제공된 구현예의 일부 측면에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 확인된다. 일부 구현예에서, 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)은 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)이다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 RNA 이질성을 나타내거나 바람직하지 않은 것을 함유할 수 있는 재조합 수용체와 같은 전이 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드와 같은 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 잠재적 스플라이스 부위(예를 들어, 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들) 또는 분지 부위)를 확인하는 단계를 포함한다. 상기 참조 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 감소된 수의 상기 스플라이스 부위를 갖는 폴리펩티드가 또한 제공된다.
일부 측면에서, 핵산 서열에서 하나 이상의 스플라이스 부위의 확인은 반복 과정이다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 확인 또는 예측하기 위해 출발 또는 참조 서열과 계산적으로 또는 알고리즘적으로 비교할 수 있는 데이터베이스, 유전자 합성 벤더 또는 다른 소스에 전이 유전자, 예컨대 BCMA 결합 수용체, 예를 들어 항 BCMA CAR을 암호화하는 출발 또는 참조 서열을 제출하는 것과 같이 스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화 예측 도구를 사용하여 스플라이스 부위를 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위해 서열을 변형한 후, 변경 또는 변형된 핵산 서열과 같은 서열의 하나 이상의 추가 평가를 수행하여 스플라이스 부위 제거, 예컨대 숨은 스플라이스 부위를 하나 이상의 다른 또는 추가 스플라이스 부위 예측 도구를 사용하여 또한 평가한다.
일부 측면에서, RNA 이질성은 진핵 세포에 존재하는 스플라이소좀(spliceosome) 활성의 결과일 수 있다. 일부 측면에서, 스플라이싱은 전형적으로 스플라이소좀에 의해 촉매된 일련의 반응에서 수행된다. 스플라이스 부위에 대한 컨센서스 서열은 공지되어 있지만, 일부 측면에서, 스플라이스 부위를 정의하는 특정 뉴클레오타이드 정보는 복잡할 수 있고 이용 가능한 방법에 기초하여 쉽게 명백하지 않을 수 있다. 숨은 스플라이스 부위는 표준 컨센서스 서열을 기반으로 예측되지 않고 다양하게 활성화되는 스플라이스 부위이다. 따라서, 숨은 스플라이스 부위에서 전-mRNA의 가변 스플라이싱은 진핵 세포에서의 발현 후 전사된 mRNA 생성물에서의 이종성으로 이어진다. 일부 경우에, 스플라이소좀 인트론 내에서, 공여체 부위(일반적으로 인트론의 5' 말단), 분지 부위(인트론의 3' 말단 근처) 및 수용체 부위(인트론의 3' 말단)가 스플라이싱 이벤트에 필요하다. 스플라이스 공여체 부위는 인트론의 5' 말단에서 GU 서열을 포함할 수 있으며, 대규모로 매우 덜 보존된 영역을 갖는다. 인트론의 3' 말단에 있는 스플라이스 수용체 부위는 AG 서열로 종결될 수 있다.
일부 구현예에서, 잠재적 숨은 스플라이스 부위를 포함하는 스플라이스 부위는 서열을 공지된 스플라이스 부위 서열, 예컨대 서열 데이터베이스에 있는 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위를 상기 부위에서 스플라이싱 이벤트의 확률 및 잠재적 스플라이스 부위를 확인하는 스플라이스 부위 예측 도구, 예컨대 Human Splice Finder(Desmet et al., Nucl. Acids Res. 37(9):e67 (2009)), 신경망 스플라이스 부위 예측 도구인 NNSplice(Reese et al., J. Comput. Biol., 4(4):311 (1997)), GeneSplicer (Pertea et al., Nucleic Acids Res. 2001 29(5): 1185-1190) 또는 NetUTR(Eden and Brunak, Nucleic Acids Res. 32(3):1131 (2004))에 의한 분석을 위해 뉴클레오타이드 서열을 제출함으로써 컴퓨터 사용으로 확인할 수 있다. 추가 스플라이스 예측 도구에는 RegRNA, ESEfinder 및 MIT 스플라이스 예측기가 포함된다. GeneSplicer와 같은 스플라이스 부위 예측 도구는 인간, 초파리 멜라노가스터(melanogaster), 말라리아 원충 팔시파룸(falciparum), 애기장대 탈리아나(thaliana) 및 쌀과 같은 상이한 종에 대한 데이터베이스에서 성공적으로 훈련 및/또는 테스트되었다. 일부 구현예에서, 상이한 예측 도구는 상이한 데이터베이스 및/또는 상이한 종에 대해 상이한 정도로 적용될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 예측 도구는 특정 데이터베이스 및/또는 특정 종에 대한 이의 유용성에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 문헌[Saxonov et al., (2000) Nucleic Acids Res., 28, 185-190.]을 참조한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 스플라이스 부위 예측 도구가 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위의 결정에 사용하기 위해 선택된다. 일부 구현예에서, 로컬로 실행할 수 있고/거나; 사용자 사이트에서 데이터 세트로 재학습할 수 있고/거나; 특정 종(예컨대 인간)에 대한 데이터베이스를 사용할 수 있고/거나; 여러 플랫폼에 대해 컴파일할 수 있고/거나; 서열 선택에 대한 실시간 예측을 허용하고/거나; 특정 도구나 플러그인을 수정할 수 있도록 OSI 인증 오픈 소스 소프트웨어인 스플라이스 부위 예측 도구를 사용할 수 있다. 사용할 수 있는 예시적인 도구는 NNSplice, GeneSplicer 또는 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, 스플라이스 부위 예측 도구는 전이 유전자 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 서열에서 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위의 리스트를 확인하기 위해 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 예측 도구는 또한 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 서열에 대한 하나 이상의 예상 점수를 생성할 수 있고, 이는 스플라이스 공여체 또는 수용체 부위 서열로 하나 이상의 서열의 가능성을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 제거 또는 삭제를 위한 후보인 특정 스플라이스 부위를 결정하거나 확인하기 위해 임계값 점수 또는 기준 점수와 특정 스플라이스 부위에 대한 예상 점수를 비교하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 예상 스플라이스 부위는 예상 점수가 임계 점수 또는 기준 점수보다 크거나 작지 않을 때 잠재적 스플라이스 부위로 확인된다. 일부 측면에서, 특정 스플라이스 부위를 제거하거나 삭제하기 위한 고려 사항은 기준 점수 또는 임계 점수와 비교한 예상 점수; 및 특정 스플라이스 부위가 바람직하거나 의도적인지 여부(예를 들어 스플라이싱 이벤트가 전사 및/또는 번역의 조절에 보다 유리하거나 필요한 경우)를 포함한다. 일부 측면에서, 결과적인 스플라이스 변이체가 원하는 기능을 상실하거나 손상된 기능을 가지고 있을 가능성이 제거 또는 삭제를 위해 특정 공여체 및/또는 수용체 부위를 결정할 때 또한 고려될 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 또는 1.0 또는 약 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 이상 또는 1.0(예를 들어, 최대 1.0의 스케일)의 스플라이스 이벤트 점수 또는 스플라이스 이벤트 확률을 나타내고, 상기 부위는 스플라이스 부위 제거 또는 삭제를 위한 후보일 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 부위에서, 예를 들어, GeneSplicer에 의해 사용된 점수는 트루(true) 마르코프(Markov) 모델에 의해 상기 서열에 대해 리턴된 로그 홀수 점수 사이의 차이에 기초하고 상기 점수는 폴스(false) 마르코프 모델에 의해 계산된다. 특정 구현예에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 또는 개별적으로 평가된다. 일부 구현예에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 스플라이스 공여체/수용체 쌍으로 평가된다.
b) 스플라이스 부위 제거
일부 구현예에서, 제공된 방법은 바람직하지 않은 숨은 스플라이싱 이벤트에 관여할 수 있거나 바람직하지 않은 RNA 이질성을 초래하는 하나 이상의 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위(들), 예컨대 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위를 제거하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 스플라이스 부위를 제거하는 것은 제거 후보인 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위 근처에서 또는 이를 함유하는 부위에서 하나 이상의 뉴클레오타이드를 변형(예를 들어, 치환 또는 교체에 의함)하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 스플라이스 부위에 있거나, 이를 함유하거나 근처에 있는 코돈 내의 특정 뉴클레오타이드가 변형(예를 들어, 치환 또는 교체)된다. 일부 측면에서, 변형(예컨대 치환 또는 교체)은 상기 부위에서 특정 코돈에 의해 암호화된 아미노산을 보유 또는 보존하면서 동시에 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위를 제거한다.
일부 구현예에서, 변형을 위한 스플라이스 부위 또는 근처의 코돈은 잠재적 스플라이스 부위에서 2개의 뉴클레오타이드 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 하나 이상의 코돈(일부 경우에 "스플라이스 부위 코돈(splice site codon)"으로 지칭)을 포함한다. 잠재적 스플라이싱이 코돈의 두 뉴클레오타이드 사이에서 발생할 것으로 예측되는 경우, 상기 코돈은 상기 스플라이스 부위에 대한 유일한 스플라이스 부위 코돈이다. 잠재적 스플라이싱이 2개의 인접한 코돈 사이, 예를 들어 제 1 코돈의 마지막 뉴클레오타이드와 다음 코돈의 제 1 뉴클레오타이드 사이에서 발생하는 것으로 예측되는 경우, 상기 2개의 코돈이 스플라이스 부위 코돈이다. 예를 들어, 2개의 코돈의 경계에 있을 것으로 예측되는 스플라이스 부위에 대해, 2개의 인접한 코돈은 뉴클레오타이드 변형의 후보일 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 하나의 스플라이스 부위 코돈을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 스플라이스 부위 코돈 둘 다를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 또는 둘 모두의 스플라이스 부위 코돈을 변형시킴으로써 잠재적인 스플라이스 공여체 부위를 제거하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 또는 둘 모두의 스플라이스 부위 코돈을 변형시킴으로써 잠재적인 스플라이스 수용체 부위를 제거하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 스플라이스 부위 코돈에 대한 동의 코돈이 없는 경우, 스플라이스 부위의 하나 또는 둘 모두의 코돈은 변형되지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능한 동의 코돈이 없는 경우, 근처 코돈에 있는 하나 이상의 뉴클레오타이드가 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 변형된 하나 이상의 코돈은 스플라이스 부위 코돈을 포함하고, 여기서 변형은 스플라이스 부위의 하나 또는 둘 모두의 뉴클레오타이드를 상이한 뉴클레오타이드 또는 상이한 뉴클레오타이드들로 바꾸는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 또는 둘 모두의 스플라이스 부위 코돈을 변형시킴으로써 스플라이스 공여체 부위를 제거하는 것을 포함하고, 여기서 변형은 스플라이스 부위의 하나 또는 2개의 뉴클레오타이드가 상이한 뉴클레오타이드로 바뀌지 않으나, 근처 뉴클레오타이드, 예를 들어 스플라이스 부위에 인접한 코돈의 일부가 변형된다. 일부 구현예에서, 변형될 수 있는 근처 또는 인접한 뉴클레오타이드는 스플라이스 부위 코돈의 상류 또는 하류에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 코돈 이내에 있는 코돈과 같은 근처 또는 인접한 코돈의 일부인 뉴클레오타이드의 변형을 포함한다.
일부 경우에, 예측된 스플라이스 부위의 확률을 감소시키기 위해, 암호화된 아미노산 서열을 보존하면서 폴리뉴클레오타이드의 수동 변형이 이용될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위의 확률이 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상인 하나 이상의 예측된 스플라이스 부위는 스플라이싱 이벤트의 확률을 감소시키기 위해 수동으로 변형된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 변형(들)은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개 뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 치환 또는 교체에 의한 것이다. 일부 구현예에서, 변형(들)은 스플라이스 공여체 부위의 교차점에 있거나 스플라이스 수용체 부위의 교차점에 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 하나 이상은 스플라이스 수용체 및/또는 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다. 일부 구현예에서, 변형된 핵산 서열의 라이브러리는 숨은 스플라이스 부위의 확률이 감소된 상태로 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 스플라이스 공여체/수용체 쌍으로 평가된다. 특정 구현예에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 또는 개별적으로 평가되며, 스플라이스 공여체/수용체 쌍으로서의 부분이 아니다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 예측된 스플라이스 부위는 제거되지 않는다. 일부 구현예서, 전사체의 프로모터 영역 내의 공지된 또는 예측된 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위는 제거되지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 또는 2개의 스플라이스 부위 코돈 또는 하나 이상의 근처 또는 인접한 코돈(예를 들어, 동의 코돈이 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능하지 않은 경우)을 변형시킴으로써 하나 이상의 잠재적 공여체 스플라이스 부위를 제거하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 하나 또는 2개의 스플라이스 부위 코돈 또는 하나 이상의 근처 또는 인접한 코돈(예를 들어, 동의 코돈이 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능하지 않은 경우)을 변형시킴으로써 하나 이상의 잠재적 수용체 스플라이스 부위를 제거하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 변형되는 근처 또는 인접한 코돈은 스플라이스 부위로부터 1, 2 또는 3개의 코돈 내에 있는 코돈과 같은 스플라이스 부위 코돈의 상류 또는 하류에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 코돈 이내에 있는 코돈을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 스플라이싱을 위한 잠재적 분지 부위의 제거 또는 삭제를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 분지 부위 또는 근처의 코돈 내의 뉴클레오타이드는 숨은 스플라이싱을 제거하고/거나 RNA 이질성을 감소시키기 위해 변형, 예를 들어 치환 또는 교체될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변형은 스플라이싱에 관여할 수 있는(예컨대 스플라이스 공여체 부위, 스플라이스 수용체 부위 또는 스플라이스 분지 부위) 뉴클레오타이드 중 하나의 치환 또는 교체를 수반할 수 있어서, 코돈에 의해 암호화된 아미노산은 보존되고, 뉴클레오타이드 치환 또는 교체는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 폴리펩티드 서열을 변경하지 않는다. 일부 경우에, 코돈의 세 번째 위치가 다른 두 위치보다 더 퇴화적이다. 따라서, 다양한 동의 코돈이 특정 아미노산을 암호화할 수 있다(예를 들어, 하기 섹션 II.B.2 참조). 일부 구현예에서, 변형은 폴리뉴클레오타이드가 도입되는 세포의 종(예를 들어, 인간)에 사용된 동의 코돈으로 코돈을 교체하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 종은 인간이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 해당 코돈과 유사한 사용 빈도(예를 들어, 가장 가까운 사용 빈도)를 갖는 동의 코돈 또는 종에서 가장 빈번하게 사용되는 상응하는 동의 코돈으로 교체된다(예를 들어, 하기 섹션 II.B.2 참조).
일부 구현예에서, 상기 방법은 또한 초기 제안된 변형 후에, 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 제안된 변형은 변형 및/또는 코돈 최적화 후 임의의 추가의 잠재적 스플라이스 부위를 확인하고 제안된 변형을 평가하기 위해 재평가될 수 있다. 일부 측면에서, 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위해 서열을 변형한 후, 변경 또는 변형된 핵산 서열과 같은 서열의 하나 이상의 추가 평가를 수행하여 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위 제거를 하나 이상의 다른 또는 추가 스플라이스 부위 예측 도구를 사용하여 또한 평가한다. 일부 측면에서, 제안된 변형이 후속 단계에 대해 고려되며, 반복 최적화가 이용될 수 있다. 일부 측면에서, 상기 방법은 또한 예를 들어 초기에 결정된 바와 같은 전사체의 이질성과 비교하여 전사체의 이질성이 감소될 때까지 확인 및/또는 변형 단계 중 어느 하나를 반복하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 동일한 코돈에서의 상이한 뉴클레오타이드 교체 또는 상이한 위치 또는 코돈에서의 변형과 같은 추가적 또는 상이한 변형이 반복적인 평가 및 사정 후에 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 해당 상이한 동의 코돈은 해당 코돈과 유사한 사용 빈도(예를 들어, 다음으로 가장 가까운 사용 빈도)를 갖는 코돈 또는 특정 종에서 두번째로 가장 빈번하게 사용되는 것과 같이 사용될 수 있다(예를 들어, 하기 섹션 II.B.2 참조).
일부 측면에서, 제안된 변형은 예를 들어 변형이 폴리뉴클레오타이드에서 바람직하지 않거나 추가 제한 부위를 생성하는지 여부를 평가하기 위해 추가로 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 추가 제한 부위가 바람직하지 않을 수 있고, 추가의 또는 상이한 변형(예를 들어, 동일한 코돈에서 상이한 뉴클레오타이드 치환 또는 상이한 위치 또는 코돈에서의 변형)이 고려될 수 있다. 일부 측면에서, 지정된 제한 부위와 같은 특정 제한 부위가 회피된다. 일부 측면에서, 변형이 실질적으로 스플라이스 부위 예상 점수를 감소시키지 않으면, 추가 또는 대안적인 변형이 제안될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위 예상 점수는 상기 방법의 한번 이상의 반복 후에, 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 이상 감소되거나 작아질 수 있다.
본 명세서에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 컴퓨터 시스템은 하나 이상의 단계, 도구, 기능, 프로세스 또는 스크립트를 실행하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법은 컴퓨터로 구현된 방법이고/거나 컴퓨터의 도움으로 수행된다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제를 위한 스플라이스 부위 예측, 평가 및 변형은 컴퓨터 구현 방법 및/또는 컴퓨터 구현 단계인 단계를 포함하는 방법에 의해 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 서열을 공지된 데이터베이스와 비교하고, 스플라이스 부위 예상 점수를 계산하고, 잠재적 뉴클레오타이드 변형을 결정하고, 코돈 최적화 및/또는 반복 단계 중 어느 하나를 컴퓨터에 의해 또는 컴퓨터로 구현된 단계, 도구, 기능, 프로세스 또는 스크립트를 사용하여 수행할 수 있다. 특정 구현예에서, 프로세서 및 메모리를 포함하는 컴퓨터 시스템이 제공되며, 여기에서 메모리는 프로세서로 하여금 본 명세서에 제공된 방법의 단계 중 임의의 하나 이상을 수행하게하는 작동 가능한 명령을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 컴퓨터로, 예를 들어 하나 이상의 컴퓨터 프로그램을 사용하여 및/또는 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 수행되는 단계, 기능, 프로세스 또는 스크립트를 포함한다.
가능한 스플라이스 부위를 확인 및/또는 제거하기 위해 제공된 방법의 예시적인 단계, 기능, 프로세스 또는 스크립트는 서열 선택, FASTA 포맷 서열 기록, 코돈 테이블 로딩(예를 들어, www.kazusa.or.jp/codon), GeneSplicer 실행, 예측 로딩, 코돈 분석, 예측에서의 중복 결정, 다음으로 높은 사용 동의 코돈 확인, 제한 부위 검토, 주석 작성 또는 다른 코돈 평가 중 하나 이상의 단계를 포함한다. 특정 단계는 정방향 및 역방향 스트랜드를 모두 평가할 수 있다. 일부 측면에서, 반복적인 최적화를 허용하기 위해, 이전의 주석 스플라이스 부위 변형이 또한 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 임의의 하나 이상의 단계, 기능, 프로세스 또는 스크립트가 반복될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법은 단일 프로세서 또는 다중 프로세서 컴퓨터 시스템, 미니 컴퓨터, 메인 프레임 컴퓨터뿐만 아니라 개인용 컴퓨터, 휴대용 컴퓨팅 장치, 마이크로 프로세서 기반 및/또는 프로그램 가능한 소비자 전자 제품 등을 포함하는 컴퓨터 시스템 구성으로 적어도 부분적으로 실시될 수 있으며, 이들 각각은 하나 이상의 연관된 장치와 작동 가능하게 통신할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법은 분산 컴퓨팅 환경에서 적어도 부분적으로 실시되어 특정 작업이 통신 네트워크를 통해 연결된 원격 처리 장치에 의해 수행될 수 있다. 분산 컴퓨팅 환경에서, 프로그램 모듈은 로컬 및/또는 원격 메모리 저장 장치에 위치할 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법의 일부 또는 모든 단계는 독립형 컴퓨터에서 실행될 수 있다.
특정 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법의 단계 중 일부 또는 전부는 하나 이상의 구성 요소에 의해 실행되는 프로그램 모듈, 플러그인 및/또는 스크립트와 같은 컴퓨터 실행 가능 명령어의 일반적인 맥락에서 작동할 수 있다. 일반적으로, 프로그램 모듈은 특정 작업을 수행하거나 특정 추상 데이터 유형을 구현하는 루틴, 프로그램, 객체, 데이터 구조 및/또는 스크립트를 포함한다. 전형적으로, 프로그램 모듈의 기능은 원하는대로 조합되거나 분배될 수 있다. 특정 구현예에서, 프로세서로 하여금 본 명세서에 제공된 방법 중 임의의 하나 이상의 단계를 수행하게하는 작동 가능한 명령은 컴퓨터 실행 가능 명령을 갖는 컴퓨터 판독 가능 매체 상에 구현될 수 있고 예를 들어 네트워크에서 명령을 수행한 결과뿐만 아니라 상기 명령을 전송하도록 제조된 신호로서 전송될 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법 중 하나 이상의 단계를 수행하거나 실행하기 위한 컴퓨터 시스템, 컴퓨터 판독 가능 명령어, 소프트웨어, 시스템, 네트워크 및/또는 장치가 또한 제공된다.
2. 코돈 최적화
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간에서의 발현을 위한 코돈 최적화에 의해 변형된다. 일부 측면에서, 코돈 최적화는 스플라이스 부위 확인 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위한 단계 및/또는 RNA 이질성을 감소시키기 위한 각 반복 단계 전 및/또는 후에 고려될 수 있다. 코돈 최적화는 일반적으로 예를 들어 어떠한 것도 과부하 또는 제한되지 않도록 인간 전달 RNA의 존재비, 예를 들어 공개된 존재비로 선택된 코돈의 백분율의 균형 유지를 포함한다. 일부 경우에, 대부분의 아미노산이 하나 이상의 코돈에 의해 암호화되고 코돈 사용은 일반적으로 유기체마다 다르기 때문에 상기 균형이 필요하거나 유용하다. 형질 감염 또는 형질 도입된 유전자 또는 핵산과 숙주 세포 사이의 코돈 사용의 차이는 핵산 분자로부터의 단백질 발현에 영향을 미칠 수 있다. 하기 표 3은 예시적인 인간 코돈 사용 빈도 표를 제시한다. 일부 구현예에서, 코돈-최적화된 핵산 서열을 생성하기 위해, 인간 사용 빈도와 균형을 이루는 그러한 코돈을 선택하도록 코돈이 선택된다. 아미노산에 대한 코돈의 중복성은 표 3에 도시된 바와 같이 상이한 코돈이 하나의 아미노산을 코딩하게 한다. 교체를 위한 코돈을 선택함에 있어서, 코돈 변화가 아미노산 서열에 영향을 미치지 않도록 생성된 돌연변이는 침묵 돌연변이인 것이 바람직하다. 일반적으로, 코돈의 마지막 뉴클레오타이드(예를 들어, 제 3 위치)는 아미노산 서열에 영향을 미치지 않으면서 변하지 않고 유지될 수 있다.
[표 3]
예를 들어, 코돈 TCT, TCC, TCA, TCG, AGT 및 AGC는 모두 세린을 코딩한다(DNA의 T는 RNA의 U와 동일). 상기 표 3에 제시된 바와 같은 인간 코돈 사용 빈도로부터, 상기 코돈에 대한 상응하는 사용 빈도는 각각 15.2, 17.7, 12.2, 4.4, 12.1 및 19.5이다. TCG가 4.4%에 해당하기 때문에, 상기 코돈이 유전자 합성에 일반적으로 사용된다면, 상기 코돈의 tRNA는 제한적일 것이다. 코돈 최적화에서, 목적은 전이 유전자가 발현되도록 의도된 동물 종에서의 정상적인 사용 빈도와 각 코돈 사용의 균형을 맞추는 것이다.
C. 최적화된 항 BCMA CAR
일부 구현예에서, 전이 유전자, 예컨대 BCMA 결합 수용체, 예를 들어 항 BCMA CAR을 암호화하는 출발 또는 참조 서열은 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거에 대해 평가된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 항 BCMA CAR, 예컨대 BCMA에 특이적인 scFv 항원 결합 도메인을 함유하는 CAR, 스페이서, 예컨대 서열 번호: 649에 제시된 스페이서, 공자극 신호 전달 영역, 예컨대 4-1BB 및 및 CD3 제타 신호 전달 영역으로부터의 공자극 신호 전달 도메인에서 수행된다. 예시적인 항 BCMA CAR에 대해 예시적인 확인된 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위 및 이의 상응 점수는 하기 표 3 및 표 4에 열거되어 있다.
[표 4]
일부 구현예에서, 이어서 생성된 변형 핵산 서열(들)이 합성되고 사용되어 RNA 이질성에 의해 지시된 바와 같은 스플라이싱을 테스트하기 위해 세포로 형질 도입된다. 예시적인 방법은 하기와 같고 실시예에 기재되어 있다. 간략하게, RNA는 발현 세포로부터 수확되고, 역전사 효소 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 증폭되고, 아가로스 겔 전기 영동에 의해 분석되어 출발 서열과 비교하여 RNA의 이질성을 결정한다. 일부 경우에, 개선된 서열은 추가 코돈 최적화 및 스플라이스 부위 제거를 위해 유전자 합성 공급 업체에 다시 제출될 수 있고, 이어서 아가로스 겔 상의 RNA가 최소 RNA 이질성을 나타낼 때까지 추가의 숨은 스플라이스 부위의 평가, 변형, 합성 및 테스트가 이어질 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 항 BCMA CAR 또는 본 명세서에 제공된 작제물과 같은 전이 유전자를 암호화하는 코딩 핵산 서열을 최적화하기 위해 제공된 방법은 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 제거하는 것 둘 다이고(예를 들어, 예시적인 코돈 최적화 및 스플라이스 부위 제거된 스페이서 서열에 대해서 서열 번호: 622 참조), 인간 코돈 사용을 최적화하는 것(예를 들어, 예시적인 코돈 최적화 및 스페이서 서열에 대해서 서열 번호: 855 참조)이다. 예시적인 최적화 전략이 실시예에 기재된다.
일부 구현예에서, (a) 하기 기재된 항원 결합 도메인 중 어느 하나를 포함한, BCMA를 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 포함하는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공되고, 여기서 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617 및 618에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 596, 597 및 595 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체의 예시적인 항원 결합 도메인은 본 명세서의 표 2의 각 열에 기재된 것을 포함한다. 상기 임의의 구현예에서, CAR의 막 관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막 관통 도메인이거나 이를 포함하며; 세포 내 신호 전달 영역은 CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분을 포함하고, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, (a) 하기 기재된 임의의 항원 결합 도메인을 포함하며, BCMA를 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) (b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 이로 구성되거나 또는 본질적으로 이로 구성되거나 또는 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열로 암호화되는 스페이서; (c) 막 관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 포함하는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617 및 618에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 596, 597 및 595 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체의 예시적인 항원 결합 도메인은 본 명세서의 표 2의 각 열에 기재된 것을 포함한다. 상기 임의의 구현예에서, CAR의 막 관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막 관통 도메인이거나 이를 포함하며; 세포 내 신호 전달 영역은 CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분을 포함하고, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
코돈 최적화(O) 및/또는 스플라이스 부위 제거(SSE)를 위해 변형된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 예시적인 변형된 폴리뉴클레오타이드가 또한 본 명세서에 제공된다. 상기 폴리뉴클레오타이드의 예가 표 5에 제시되고, 여기에서 스플라이스 부위 제거 및 코돈 최적화(비-선택) 전에 예시적인 CAR 작제물의 성분에 대한 예시적인 뉴클레오타이드(nt) 서열, 스플라이스 부위 제거 및 최적화(O/SSE) 후에 CAR 작제물의 성분에 대한 핵산(nt) 서열 및 상기 핵산 서열에 의해 암호화된 해당 아미노산(aa) 서열이 제공된다. 상기 성분은 IgG-카파 신호 전달 서열(signaling sequence, ss), 항 BCMA scFv, 스페이서 영역, 막 관통(transmembrane, tm) 도메인, 공신호 전달 서열(4-1BB co-sig 또는 CD28 co-sig), CD3- 신호 전달 도메인(CD3-), T2A 리보솜 건너뛰기 요소(T2A) 및 절단형 EGF 수용체(EGFRt) 서열을 포함한다. 예시적인 CAR 작제물의 폴리뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 751-756에 제시되고 암호화 아미노산 서열은 서열 번호: 757-762에 제시된다.
[표 5]
Ⅲ. 조작된 세포
또한 본 명세서에 기재된 바와 같이 항 BCMA 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 도메인을 함유하는 것과 같은 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)를 함유하는 조작된 세포와 같은 세포가 제공된다. 또한 예컨대 BCMA 결합 분자를 발현하는 세포가 특정 유형의 세포 예컨대 T 세포 또는 CD8+ 또는 CD4+ 세포 또는 조성물에서 총세포의 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 이상의 백분율을 구성하는 상기 세포 집단, 상기 세포를 함유하고/거나 상기 세포가 농축된 조성물이 제공된다. 조성물 중에는 예컨대 입양세포 요법에 대한 약학 조성물 및 투여용 제형이 있다. 또한 대상체, 예를 들어 환자에게 세포 및 조성물을 투여하기 위한 치료 방법이 제공된다.
따라서 또한 항체를 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작 세포, 예를 들어 CAR을 함유하는 세포가 제공된다. 세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 기관으로부터 유래되며, 선천적 또는 적응성 면역 세포와 같은 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 다른 예시적인 세포는 유도된 다능성 줄기 세포(induced pluripotent stem cell, iPSC)를 포함한, 다능성 및 다분화능 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상체로부터 직접 분리되고/거나 대상체로부터 분리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포 또는 다른 세포 유형 예컨대 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단의 하나 이상의 서브세트, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 증폭, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 용량, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것을 포함한다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종 이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 상기 방법 중에는 기성품 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 기성품 기술에 대해 세포는 다능성 및/또는 다분화능, 예컨대 줄기 세포, 예컨대 유도된 다능성 줄기 세포(iPSC)이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이 대상체로부터 세포를 단리하고, 세포를 제조, 프로세싱, 배양 및/또는 조작하고, 동결 보존 전 또는 후에 동일한 환자에게 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위-유형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(nave T, TN) 세포, 이펙터 T 세포(effector T cell, TEFF), 기억 T 세포 및 이의 하위-유형, 예컨대 줄기 세포 기억 T(stem cell memory T, TSCM), 중앙 기억 T(central memory T, TCM), 이펙터 기억 T(effector memory T, TEM) 또는 말단 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양-침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막-관련 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(regulatory T, Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 있다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살해(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하여 상기 폴리뉴클레오타이드의 재조합 또는 유전적으로 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 이종 기원이다, 즉 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같은 세포나 또는 상기 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않고, 이는 예를 들어 조작된 세포 및/또는 상기 세포가 유래된 유기체에서 보통 발견되지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한 자연에서 발견되지 않는 폴리뉴클레오타이드와 같이 천연 발생이 아니다. 일부 구현예에서, 세포(예를 들어, 조작된 세포)는 본 명세서에 기재된 재조합 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터와 같이 본 명세서에 기재된 바와 같은 벡터(예를 들어, 바이러스 벡터, 발현 벡터 등)를 포함한다.
A. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 포함하는 결합 분자(예를 들어, 항 BCMA 결합 분자)를 발현시키기 위한 및 상기 결합 분자를 발현하는 유전자 조작된 세포를 생산하기 위한 방법, 폴리뉴클레오타이드, 조성물 및 키트가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 포함하는 하나 이상의 결합 분자는 세포 또는 다수의 세포로 유전자 조작될 수 있다. 유전자 조작은 일반적으로, 예컨대 레트로바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해 재조합 또는 조작된 성분을 암호화하는 핵산의 세포 내로의 도입을 포함한다.
키메라 항원 수용체 및/또는 이의 부분, 예를 들어, 사슬을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 본 명세서에 기재된 항 BCMA 키메라 항원 수용체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 암호화하는 것이 있다. 또한 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어 본 명세서에 기재된 하나 이상의 항 BCMA 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 및/또는 다른 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 다른 표적 항원에 결합하는 항체 및/또는 이의 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 상기 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어 골격 변형을 갖는 것을 포함하여 천연 및/또는 비 천연 발생 뉴클레오타이드 및 염기를 포함하는 것을 포함할 수 있다. 용어 "핵산 분자(nucleic acid molecule)", "핵산(nucleic acid)" 및 "폴리뉴클레오타이드(polynucleotide)"는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오타이드 중합체를 지칭한다. 상기 뉴클레오타이드 중합체는 천연 및/또는 비 천연 뉴클레오타이드를 함유할 수 있으며, DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이에 제한되지 않는다. "핵산 서열(nucleic acid sequence)"은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드의 선형 서열을 지칭한다.
또한 코돈 사용 및/또는 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위의 제거를 위해 최적화된 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 키메라 항원 수용체, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 키메라 항원 수용체의 코딩 서열을 최적화하고 생산하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 본 명세서의 섹션 II에 기재된다.
본 명세서에 기재된 임의의 폴리뉴클레오타이드와 같은 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 벡터 및 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하기 위한 벡터를 함유하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 구현예에서, 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다. 또한 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 제조 방법이 제공된다. 핵산은 항체(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 핵산은 항체(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VL 영역을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 상기 일 구현예에서, 숙주 세포는 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다(예를 들어, 벡터로 형질 전환되었다). 다른 상기 구현예에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터 또는 (2) 항체의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 암호화하는 핵산을 포함하는 제 1 벡터 및 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제 2 벡터를 포함한다(예를 들어, 벡터로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 숙주 세포는 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 이의 항원 결합 단편을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함한다(예를 들어, 이로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 숙주 세포는 상이한 항체 또는 동일한 항체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 숙주 세포는 하나 이상의 항체를 발현할 수 있다.
항 BCMA 키메라 항원 수용체를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 키메라 수용체 항체를 암호화하는 핵산 서열이 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은 통상적인 절차(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브 사용)를 이용하여 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 일부 구현예에서, 항 BCMA 키메라 항원 수용체의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같이 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
일부 측면에서, 단리되거나 분비된 폴리펩티드의 생산을 위해, 원핵 생물 이외에, 사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 생물 미생물은 글리코실화 경로가 인간 세포에서의 경로와 유사하거나 이를 모방하도록 변형되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생성을 초래하는 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체 암호화 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 문헌[Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004) 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
단리 또는 분비된 폴리펩티드를 포함하여 폴리펩티드를 발현시키기 위해 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S, DG44. Lec13 CHO 세포 및 FUT8 CHO 세포를 포함한 CHO 세포; PER.C6 세포; 및 NSO 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)는 효모에서 발현될 수 있다. 예를 들어 문헌[미국 출원 공개 번호 US 2006/0270045 A1]을 참조한다. 일부 구현예에서, 특정 진핵 생물 숙주 세포는 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 지역)에 대해 원하는 번역 후 변형을 가할 수 있는 능력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CHO 세포는 293 세포에서 생성된 동일한 폴리펩티드보다 높은 수준의 시알릴화를 갖는 폴리펩티드를 생성한다.
특정 예에서, 인간 면역 세포와 같은 면역 세포는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 제공된 폴리펩티드를 발현시키기 위해 사용된다. 일부 예에서, 면역 세포는 1 차 세포, 예컨대 1 차 CD4+ 및 CD8+ 세포를 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ 면역 세포와 같은 T 세포이다.
일부 구현예에서, 유전자 전달은 예를 들어, 활성화된 세포의 형질 도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서의 증폭 후에 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 세포를 먼저 자극함으로써, 예컨대 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하여 달성된다.
일부 맥락에서, 자극 인자(예를 들어, 림포카인 또는 사이토카인)의 과발현은 대상체에게 유독할 수 있다. 따라서, 일부 맥락에서, 조작된 세포는 예컨대 입양 면역 요법에서의 투여 후에 생체 내에서 세포를 음성 선택에 취약하게 하는 유전자 분절을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 세포는 이들이 투여되는 환자의 생체 내 조건의 변화의 결과로서 제거될 수 있도록 조작된다. 음성 선택 가능한 표현형은 투여된 제제, 예를 들어 화합물에 대한 감수성을 부여하는 유전자의 삽입으로부터 초래될 수 있다. 음성 선택 가능한 유전자는 간시클로비르(ganciclovir) 감수성을 부여하는 헤르페스 심플렉스 바이러스 I 티미딘 인산화효소(HSV-I TK) 유전자(Wigler et al., Cell 2:223, 1977); 세포성 하이포잔틴 포스포리보실 트랜스퍼라제(hypoxanthine phosphoribosyltransferase, HPRT) 유전자, 세포성 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(adenine phosphoribosyltransferase, APRT) 유전자, 박테리아 시토신 디아미나제(Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992))를 포함한다.
일부 측면에서, 세포는 또한 사이토카인 또는 다른 인자의 발현을 촉진하도록 조작된다. 유전자 조작된 성분, 예를 들어 항원 수용체, 예를 들어 CAR의 도입을 위한 다양한 방법이 잘 알려져 있으며 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질 도입, 트랜스포존 및 전기천공을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 전달을 위한 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포 내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여 T 세포 내로 전달된다(예를 들어 Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550557 참조).
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(long terminal repeat sequence, LTR), 예를 들어 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수 증식육종 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기 세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV), 비장 초점 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV) 또는 인간 면역 결핍 바이러스 유형 1(human immunodeficiency virus type 1, HIV-1)로부터 유래된 레트로바이러스 벡터를 갖는다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것을 포함한다. 레트로바이러스는 전형적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 시스템이 문헌[예를 들어, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller, A. D. (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109]에 기재되어 있다.
렌티바이러스 형질 도입 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 문헌[예를 들어 Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:16371644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505]에 기재된다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 전기 천공을 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437. 참조). 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 전위를 통해 T 세포로 전달된다(예를 들어, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126. 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 다른 방법은 인산칼슘 형질 감염(예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포좀-매개 형질 감염; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 스트론튬 포스페이트 DNA 공침전(Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다.
재조합 생성물을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는 문헌[예를 들어, 국제 특허 출원, 공개 번호: WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 것이다.
추가적인 폴리뉴클레오타이드 중에서, 예를 들어 도입을 위한 유전자는 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진함으로써와 같은 치료의 효능을 개선하기 위한 유전자; 생체 내에서 생존 또는 국소화를 평가하기 위한 것과 같이 세포의 평가 및/또는 선택을 위한 유전자 마커를 제공하기 위한 유전자; 문헌[Lupton S. D. et al., Mol. 및 Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]에 기재된 바와 같이 예를 들어 생체 내에서 음성 선택에 세포를 예민하게 만들어 안정성을 개선하기 위한 유전자가 있고; 또한 우성 양성 선택 가능 마커를 음성 선택 가능 마커와 융합시켜 유래된 2작용성 선택 가능 융합 유전자의 용도를 기술하는 문헌[국제 출원 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton et al.] 참조. 예를 들어, 문헌[Riddell et al., 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17 열]을 참조한다.
일부 구현예에서, 항체 및/또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 포함하는 하나 이상의 결합 분자는 세포 또는 다수의 세포에서 발현되도록 유전적으로 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 제 1 재조합 수용체 및 제2 결합 분자, 예를 들어, 재조합 수용체는 동일하거나 별개의 핵산 분자에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 추가의 결합 분자는 세포 또는 다수의 세포에서 발현되도록 조작된다.
일부 경우에, BCMA 결합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 신호 펩티드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩티드로부터 유래된 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩티드는 서열 번호: 619 또는 682-685에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되거나 서열 번호: 620에 제시된 IgG 카파 사슬의 신호 펩티드; 서열 번호: 850에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 서열 번호: 851에 제시된 GMCSFR 알파 사슬; 서열 번호: 852에 제시된 CD8 알파 신호 펩티드; 또는 서열 번호: 853에 제시된 CD33 신호 펩티드를 포함한다.
일부 구현예에서 벡터 또는 작제물은 암호화된 재조합 수용체의 발현을 조절하는 프로모터 및/또는 인핸서 또는 조절 요소를 함유할 수 있다. 일부 예에서 프로모터 및/또는 인핸서 또는 조절 요소는 조건 의존적인 프로모터, 인핸서 및/또는 조절 요소일 수 있다. 일부 예에서 상기 요소는 전이 유전자의 발현을 구동한다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는 HTLV1 인핸서(서열 번호: 635)를 가진 EF1알파 프로모터와 같은 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는 전이 유전자의 하류에 위치한 우드척 간염 바이러스(Woodchuck Hepatitis Virus, WHP) 전사 후 조절 요소(WPRE; 서열 번호: 636)에 작동 가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동하는 단일 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 핵산 분자, 예를 들어, 전사체는 다중시스트론(이중시스트론 또는 삼중시스트론, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,060,273 참조)일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 유전자 산물의 공발현(예를 들어 제 1 및 제2 키메라 수용체 암호화)을 허용하는 IRES(internal ribosome entry site, 내부 리보솜 도입 부위)를 함유하는 이중시스트론 단위로 조작될 수 있다. 대안적으로, 일부 경우에, 단일 프로모터는 단일 오픈 리딩 프레임(open reading frame, ORF)에 자가-절단 펩티드(예를 들어, 2A 절단 서열) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어, 푸린)를 암호화하는 서열에 의해 서로 분리된, 2개 또는 3개의 유전자(예를 들어, 제 1 및 제2 결합 분자, 예를 들어 항체 재조합 수용체 암호화)를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서, 상기 ORF는 번역 동안(T2A의 경우) 또는 후에 개별적인 단백질로 절단되는 단일 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩티드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 건너뛰기) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음 펩티드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 deFelipe et al. Traffic 5:616-626 (2004) 참조). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 본 명세서에 개시된 방법 및 폴리뉴클레오타이드에 사용될 수 있는 2A 서열의 예는, 이에 제한되는 것은 아니나, 미국 특허 공개 번호 20070116690 에 개시된 바와 같이 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열번호: 659 또는 660), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열번호: 657 또는 658), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열번호: 631, 653 또는 654) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열번호: 655 또는 656)이 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상이한 또는 분리된 프로모터는 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동한다.
본 명세서에 제공된 임의의 결합 분자, 예를 들어, 항체 및/또는 재조합 수용체, 예를 들어 BCMA 결합 분자 및/또는 추가적인 재조합 수용체는 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 임의의 조합 또는 배열로 함유하는 폴리뉴클레오타이드로 암호화될 수 있다. 예를 들어, 1개, 2개, 3개 이상의 폴리뉴클레오타이드는 1개, 2개, 3개 이상의 상이한 수용체 또는 도메인을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 벡터 또는 작제물은 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어, 항체 및/또는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 함유하고, 별도의 벡터 또는 작제물은 추가적인 결합 분자, 예를 들어, 항체 및/또는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 분자를 함유한다. 각각의 핵산 분자는 또한 하나 이상의 마커(들), 예컨대 표면 마커, 예를 들어 절단형 EGFR(tEGFR)을 암호화할 수 있다.
또한 상기 임의의 기재와 같은 하나 이상의 핵산 분자, 벡터 또는 작제물을 함유하는 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 핵산 분자, 벡터, 작제물 또는 조성물은 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 재조합 수용체 및/또는 추가적인 결합 분자 중 어느 하나를 발현하도록 T 세포와 같은 세포를 조작하는데 사용될 수 있다.
B. 조작을 위한 세포 제조
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 도입을 위한 세포는 예를 들어 대상체로부터 수득되거나 유래된 생물학적 샘플과 같은 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는 질병 또는 병태를 갖거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서 대상체는 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법과 같은 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 일차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플에는 대상체로부터 직접 채취한 조직, 유체 및 기타 샘플뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전적 조작(예를 들어 바이러스 벡터로의 형질 도입), 세척 및/또는 배양과 같은 하나 이상의 가공 단계에서 생성된 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 수득된 샘플 또는 가공된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플에는 체액, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플(이로부터 유래된 가공 샘플 포함)이 포함되나, 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술 생성물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 내장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 기관 및/또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플은 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 맥락에서 자가 및 동종이계 공급원으로부터의 샘플을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주로부터 유래된다. 일부 구현예에서 세포는 이종성 공급원, 예를 들어 마우스, 랫트, 비인간 영장류 또는 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화성 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심 분리 및/또는 배양되어, 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 강화, 특정 시약에 민감한 세포를 용해하거나 제거한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예컨대 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 저항성에 기초하여 분리된다.
일부 예에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 핵 형성 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는 세척되어, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 가공 단계를 위한 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 배치한다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 반자동 "플로우-쓰루(flow-through)" 원심 분리기(예를 들어, Cobe 2991 셀 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 접선 흐름 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어 Ca++/Mg++이 없는 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서 상기 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예컨대 적혈구를 용해시켜 말초 혈액로부터 백혈구를 제조하고 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심 분리를 포함한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예를 들어, 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마커에 기초한 분리를 위한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역친화도 기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리는 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함한다.
상기 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 유지되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일부 예에서 두 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이질적인 집단에서 세포 유형을 특이하게 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 상기 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 마커에 기초하여 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 마커를 발현하는 특정 세포 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거를 초래할 필요가 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 초래할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 상기 모든 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다.
일부 예에서, 여러 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거친다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는 예컨대 다수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 배양함으로써 동시에 다수의 마커를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있으며, 각각 음성 선택을 위해 표적화된 마커에 대해 특이적이다. 마찬가지로, 다중 세포 유형은 다양한 세포 유형에서 발현되는 다수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 배양함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, T 세포의 특정 하위 집단, 예컨대 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+를 높은 수준으로 발현하거나 양성인 T 세포는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 CD3/CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS M-450 CD3/CD28 T Cell Expander, MACSiBeads 등)를 사용하여 양성으로 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포 집단에 대한 농축 또는 음성 선택에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 상대적으로 보다 높은 수준으로 발현(마커high)되거나 발현된(마커+) 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 배양함으로써 달성된다.
일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단핵구 또는 CD14와 같은 다른 백혈구와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 및/또는 CD8+ 선택 단계는 백혈구 성분 채집술을 통해 수득된 것과 같은 PBMC 조성물과 같은 조성물로부터 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리하는데 사용된다. 일부 측면에서, 상기 CD4+ 및 CD8+ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 이펙터 T 세포 하위 집단에서 상대적으로 보다 높은 정도로 발현되거나 발현된 마커에 대해 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, CD4+ 및 CD8+ 세포는 원하는 비율로 혼합된다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는 또한 예컨대 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 이펙터 기억 및/또는 중앙 기억 줄기 세포가 농축되거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축은 효능을 증가시키기 위해, 예컨대 투여 후의 장기간 생존, 증폭 및/또는 생착을 개선하기 위해 수행되며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다. 문헌[Terakura et al. (2012) Blood.1:7282; Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]을 참조한다. 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포를 결합하면 효능이 더욱 강화된다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항 CD8 및 항 CD62L 항체를 사용하여 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획에 대해 농축되거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 높게 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, TCM 세포에 대해 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈, CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중앙 메모리 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택, CD62L에 기초한 양성 선택이 적용된다. 일부 측면에서 상기 선택은 동시에 수행되며 다른 측면에서 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포 집단 또는 하위 집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계는 또한 CD4+ 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하는데 사용되어, CD4 기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획 모두가 유지되고 선택적으로 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계 후에 상기 방법의 후속 단계에서 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD4+ 세포의 선택에 노출된다. 이어서 음성 분획은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 메모리 T 세포의 마커 특성에 기초한 양성 선택에 노출되고, 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인해서 나이브, 중앙 기억 및 이펙터 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 메모리 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론성 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리가 가능하도록 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기술(Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher Humana Press Inc., Totowa, NJ에서 검토됨)을 사용하여 분리되거나 단리된다.
일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 작고, 자화 가능 또는 자성 반응 물질, 예컨대 자성 반응 입자 또는 미세입자, 예컨대 상자성 비드(예를 들어 Dynabeads 또는 MACS 비드)와 함께 인큐베이션된다. 자기 반응성 물질, 예를 들어 입자는 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포 또는 세포 집단에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특정 결합 부재에 결합된 자성 반응성 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 잘 알려진 많은 자성 반응성 재료가 있다. 적합한 자성 입자는 문헌[본 명세서에 참조로 통합된 Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B]에 기재된 것을 포함한다. 콜로이드 크기의 입자, 예컨대 문헌[Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti et al., 미국 특허 번호 5,200,084]에 기재된 것이 다른 예이다.
항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 다른 시약이 샘플 내의 세포에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 인큐베이션이 일반적으로 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌리고 표지되지 않은 세포로부터 분리될 것이다. 양성 선택에 대해서는 자석에 끌린 세포가 유지되고; 음성 선택에 대해서는 끌리지 않은 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 동안 수행되며, 양성 및 음성 분획은 유지되고 추가적으로 가공되거나 추가적인 분리 단계에 노출된다.
특정 구현예에서, 자성 반응 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 이차 항체- 또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자는 비오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자성 반응 입자는 후속적인 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응 입자는 세포로부터 제거된다. 세포에서 자화 가능 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체, 절단 가능 링커에 접합된 자화 가능 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(MACS, Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS) 시스템은 이에 부착된 자화된 입자를 갖는 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 외부 자기장의 적용 후에 비-표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 모드로 작동한다. 즉, 자화 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 동안 제자리에 유지된다. 이어서, 상기 제 1 용출 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리되는 것이 방지된 종은 이들이 용리 및 회수될 수 있도록 상당한 방식으로 해제된다. 특정 구현예에서, 비-표적 세포는 표지되고 이종 세포 집단으로부터 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 상기 방법의 단리, 세포 제조, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템이 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각을 수행하는데 사용된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[국제 특허 출원, 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 출원 20110003380 A1]에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합되거나 독립적인 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 상기 시스템 또는 장치는 사용자가 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가 및/또는 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 다양한 측면을 조정할 수 있게 하는 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준에서 세포의 자동 분리를 위해 CliniMACS 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소에는 통합 마이크로 컴퓨터, 자기 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서 통합 컴퓨터는 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템이 표준화된 순서로 반복된 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서 자기 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜빙 세트 전체의 유량을 제어하고 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 흐름 제어와 세포의 지속적인 서스펜션을 보장한다.
일부 측면에서 CliniMACS 시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자화성 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 제조 백은 튜빙 세트에 연결되고, 이는 차례로 완충액을 함유하는 백 및 세포 수집 백에 연결된다. 튜브 세트는 사전 컬럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 튜브로 구성되며 일회용이다. 분리 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 유지되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 칼럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 칼럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장을 제거한 후 칼럼으로부터 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서 CliniMACS Prodigy 시스템에는 원심 분리에 의해 세포의 자동 세척 및 분획화를 가능하게 하는 세포 가공 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 공급원 세포 산물의 거시적인 층을 식별하여 최적의 세포 분획화 종점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함될 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리될 수 있다. CliniMACS Prodigy 시스템에는 또한 예를 들어, 세포 분화 및 증폭, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버가 포함될 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게 할 수 있고 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651660, Terakura et al. (2012) Blood.1:7282, 및 Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]을 참조한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 유동 세포 분석법을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되고, 여기서 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 분취 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 FACS 기반 검출 시스템과 조합된 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 국제 출원 WO 2010/033140), Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355376 참조). 두 경우 모두, 세포는 고순도로 잘 정의된 T 세포 서브세트의 단리를 가능하게 하는 다수의 마커로 표지될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예를 들어 유동 세포 분석 검출 시스템과 조합하여 예컨대 분취 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 다수의 마커에 기초하여 양성 및 음성 선택을 동시에 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전이든 후이든 세포를 동결, 예를 들어, 동결 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위해 세척 단계 후에 동결 용액에 현탁된다. 일부 측면에서 공지된 다양한 동결 용액 및 파라미터 중 어느 하나가 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 이를 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 배지로 1:1로 희석시킨다. 이어서 세포를 분당 1의 속도로 -80 ℃까지 동결시키고 액체 질소 저장 탱크의 기상에서 저장한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 사육(cultivation), 인큐베이션, 배양 및/또는 유전적 조작 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 고갈된 세포 집단 및 배양 개시 조성물을 인큐베이션 및/또는 조작하는 방법이 제공된다.
따라서, 일부 구현예에서, 세포 집단은 배양 개시 조성물에서 인큐베이션된다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜빙 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 세포 배양 또는 배양을 위한 다른 컨테이너에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작과 관련하여 또는 그 전에 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 사육, 자극, 활성화 및/또는 번식을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고/거나 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다.
조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화시키기 위해 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극 또는 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 켜거나 개시한다. 상기 제제는 항체, 예컨대 TCR에 특이적인 것, 예를 들어 항-CD3을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 자극 조건은 공자극 수용체, 예를 들어 항-CD28을 자극할 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제제 및/또는 리간드는 고체 지지체 예컨대 비드 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합될 수 있다. 선택적으로, 증폭 방법은 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항 CD28 항체를 첨가(예를 들어 약 0.5 ng/ml 이상의 농도)하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 제제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 측면에서, IL-2 농도는 약 10 유닛/mL 이상이다.
일부 측면에서, 인큐베이션은 예컨대 문헌[미국 특허 번호 6,040,1 77(Riddell 외), Klebanoff 외(2012) J Immunother. 35(9): 651660, Terakura 외 (2012) Blood.1:7282 및/또는 Wang 외 (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기재된 기술에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 배양 개시 조성물 배양보조 세포, 예컨대 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가하고(예를 들어 생성된 세포 집단은 증폭될 초기 집단의 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유); 상기 배양물을 인큐베이션(예를 들어 T 세포 수를 증폭하기에 충분한 시간 동안)하여 증폭된다. 일부 측면에서, 상기 비분할 배양보조 세포는 감마-조사된 PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 PBMC는 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열이 방지된다. 일부 측면에서, 상기 배양보조 세포는 T 세포 집단에 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 약 25 ℃ 이상, 일반적으로 약 30 ℃ 이상 및 일반적으로 37 ℃ 또는 약 37 ℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분할 EBV-형질 전환 림프모구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서 상기 LCL 배양보조 세포는 임의의 적합한 양, 예컨대 약 10:1 이상의 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율로 제공된다.
구현예에서, 항원-특이적 T 세포, 예컨대 항원-특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원-특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 같은 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원에 대해 생성될 수 있다.
C. 다중 표적화를 위한 조작된 세포, 벡터 및 조성물
다수의 항원에 결합하고/거나 표적화할 수 있는 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 다수의 항원을 표적화하는 전략을 통해 개선된 선택 및 특이성이 달성된다. 상기 전략은 일반적으로 별개의 유전자 조작된 항원 수용체 상에 전형적으로 존재하고 별개의 항원에 특이적으로 결합하는 다수의 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 항원에 결합하는 능력으로 조작된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 다중 특이적 결합 분자를 발현하도록 조작된다. 일부 구현예에서, 세포는 다수의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하고, 이들 각각은 하나의 항원 또는 다수의 항원, 예를 들어 본 명세서에 기재된 어느 하나와 같은 BCMA를 표적화하는 하나의 수용체 및 다른 항원, 예를 들어 종양 항원을 표적화하는 또 다른 수용체를 표적화할 수 있다. 일부 측면에서, 복수의 유전자 조작된 항원 수용체가 세포에 도입되고, 이는 상이한 항원에 특이적으로 결합하며, 각각은 세포 또는 조직 또는 이의 세포를 표적으로하는 질병 또는 병태에서 발현된다. 일부 측면에서 상기 특징은 표적 외 효과의 가능성을 다루거나 감소시키거나 효능을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 질병 또는 병태에서 발현된 단일 항원이 또한 비-질병 또는 정상 세포에서 발현되는 경우, 상기 다중-표적화 접근법은 세포를 활성화시키거나 또는 특정 이펙터 기능을 유도하기 위해 다중 항원 수용체를 통한 결합을 요구함으로써 원하는 세포 유형에 대한 선택성을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 다수의 세포는 하나 이상의 상이한 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 조작될 수 있으며, 이들 각각은 하나의 항원 또는 다수의 항원을 표적화할 수 있다.
본 명세서에 기재된 임의의 결합 분자를 함유하는 다중 특이적 세포, 예컨대 상이한 항원 또는 BCMA 상의 상이한 에피토프에 결합하는 추가의 키메라 수용체와 같은 항 BCMA 항체 및 추가의 세포 표면 단백질을 포함하는 세포 표면 단백질을 함유하는 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 결합 분자, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체가 BCMA에 결합하고/거나 표적화하는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체는 BCMA상의 하나 이상의 상이한 에피토프를 표적화한다.
일부 구현예에서, 각각의 세포 유형이 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하는 세포의 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 이의 항원 결합 단편을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함한다(예를 들어, 이로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 세포는 상이한 항체 또는 동일한 항체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 세포는 하나 이상의 항체와 같은 하나 이상의 항체를 발현한다. 일부 구현예에서, 각각의 세포는 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어 다중 특이적 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 세포는 BCMA 및 특정 질병 또는 병태와 관련된 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 다중 표적화 전략을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 다중 특이적 결합 분자 및/또는 다중 결합 분자 및/또는 각각 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 다수의 세포, 예를 들어 하나 이상의 세포에 의해 표적화된다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 재조합 수용체는 BCMA 결합 분자와 동일한 세포 상에서 또는 상이한 세포상에서 발현된다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략에 대한 제2 또는 추가 항원 중에서 항원 중 하나 이상은 보편적 종양 항원 또는 이의 패밀리 멤버인 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 종양 상에서 발현되는 항원이다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 BCMA 결합 분자는 제2 또는 추가 항원과 동일한 종양 유형에 대한 항원을 표적화한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 또한 보편적 종양 항원일 수 있거나 종양 유형에 특이적인 종양 항원일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 치료될 질병 또는 병태에서 발현되는 제2 또는 추가항원을 인식하는 추가의 유전자 조작 항원 수용체를 더 포함하고 자극 또는 활성화 신호를 유도한다.
예시적인 항원은 CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, 테나신(tenascin), 혈관형성 인자, VEGF, PIGF, ED-B 피브로넥틴, 종양 유전자, 종양 유전자 산물, CD66a-d, 괴사 항원, Ii, IL-2, T101, TAC, IL-6, ROR1, TRAIL-R1(DR4), TRAIL-R2(DR5), B 세포 성숙 항원(BCMA), tEGFR, Her2, L1-CAM, 메소텔린(mesothelin), CEA, B형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD24, CD30, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, erbB 2량체, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(G protein-coupled receptor class C group 5 member D, GPRC5D), HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 부착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 우선 발현 흑색종 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2(IL-13Ra2), CA9, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린(integrin), 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아 AchR, NKG2D 리간드, 이중 항원, 범용 태그 관련 항원, 암 고환 항원, MUC1, MUC16, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양 1(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, hTERT, MDM2, CYP1B, WT1, 리빈(livin), AFP, p53, 사이클린 (D1), CS-1, BCMA, BAFF-R, TACI, CD56, TIM-3, CD123, L1-세포 부착 분자, MAGE-A1, MAGE A3, 사이클린, 예컨대 사이클린 A1(CCNA1) 및/또는 병원체 특이적 항원, 비오티닐화 분자, HIV, HCV, HBV 및/또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자 및/또는 일부 측면에서 이의 신생 에피토프 또는 신생 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 범용 태그이거나 이와 관련된다.
일부 구현예에서, 다수의 항원, 예를 들어, 제 1 항원, 예를 들어, BCMA 및 제2 또는 추가항원은 암세포와 같은 표적화된 세포, 조직 또는 질병 또는 병태 상에서 발현된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 다수의 항원 중 하나 이상은 일반적으로 정상 또는 비질병 세포 또는 조직 및/또는 조작된 세포 자체와 같은 세포 요법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포 상에서도 발현된다. 상기 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
일부 측면에서, 항원, 예를 들어 질병 특이적 항원 및/또는 관련 항원과 같은 제2 또는 추가 항원은 다발성 골수종, 예컨대 G 단백질 결합 수용체 클래스 C군 5 멤버 D(GPRC5D), CD38(환형 ADP 리보오스 가수 분해 효소), CD138(신데칸-1, 신데칸, SYN-1), CS-1(CS1, CD2 서브세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24), BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5에서 발현된다. 다른 예시적인 다발성 골수종 항원은 CD56, TIM-3, CD33, CD123, CD44, CD20, CD40, CD74, CD200, EGFR, 2-마이크로글로불린, HM1.24, IGF-1R, IL-6R, TRAIL-R1 및 액티빈(activin) 수용체 IIA형(ActRIIA)을 포함한다. 문헌[Benson and Byrd, J. Clin. Oncol. (2012) 30(16): 2013-15; Tao and Anderson, Bone Marrow Research (2011):924058; Chu et al., Leukemia (2013) 28(4):917-27; Garfall et al., Discov Med. (2014) 17(91):37-46]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항원은 림프성 종양, 골수종, 에이즈 관련 림프종 및/또는 CD38과 같은 이식 후 림프구의 과량 생산에 존재하는 것을 포함한다. 상기 항원에 대해 지시된 항체 또는 항원 결합 단편은 공지되어 있고, 예를 들어 문헌[미국 특허 번호 8,153,765; 8,603477, 8,008,450; 미국 공개 번호 US20120189622 또는 US20100260748; 및/또는 국제 PCT 공개 번호 WO2006099875, WO2009080829 또는 WO2012092612 또는 WO2014210064]에 기재된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 scFv)는 다중 특이적 항체, 다중 특이적 키메라 수용체 예컨대 다중 특이적 CAR 및/또는 다중 특이적 세포에 함유된다.
일부 구현예에서, 상기 세포 및 방법은 세포 상에 2개 이상의 유전자 조작 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 포함하며, 각각은 상이한 항원을 인식하고 전형적으로 각각은 상이한 세포 내 신호 전달 성분을 포함한다. 상기 다중 표적화 전략은 예를 들어, 문헌[국제 특허 출원, 공개 번호 WO 2014055668 A1(자극 또는 활성화 및 공자극 CAR의 조합, 예를 들어, 표적 외, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하나 치료될 질병 또는 병태 세포에만 함께 존재하는 2개의 상이한 항원을 표적화하는 것을 기재) 및 Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)(자극 또는 활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포, 예컨대 자극 또는 활성화 CAR이 정상 또는 비-질병 세포 및 치료될 질병 또는 병태 세포 둘 다에서 발현된 하나의 항원에 결합하고, 억제 CAR이 치료가 바람직하지 않은 세포 또는 정상 세포에서만 발현되는 다른 항원에 결합함을 기재)]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 각각이 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 조작된, 다수의 세포가 제공된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나의 세포는 BCMA에 결합 및/또는 표적화하는 결합 분자를 발현하도록 조작되고, 다른 세포는 추가 또는 제2 항원에 결합 및/또는 표적화하는 결합 분자를 발현하도록 조작된다. 일부 구현예에서, 세포는 각각 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어, 다중 특이적 재조합 수용체를 발현할 수 있고, 여기서 하나 이상의 표적 항원은 BCMA이다. 상기 구현예 중 일부에서, 다수의 세포는 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 다수의 세포는 상기 세포와 동시에 또는 함께 투여되고, 예를 들어, 같은 날에 투여되고/거나 임의의 순서로, 순차적으로 또는 간헐적으로 다른 조작된 세포와 복수로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, BCMA 결합 분자, 예를 들어 CAR을 발현하는 조작된 세포는 임의의 순서로, 상이한 표적 항원 또는 BCMA 상의 상이한 에피토프에 결합하는 결합 분자를 발현하는 다른 조작된 세포와 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 다수의 세포는 동일한 조성물에 있을 수 있다. 예시적인 세포 조성물은 하기 섹션 II에 기재된 조성물을 포함한다.
Ⅳ. 약학 조성물
약학 조성물 및 제형을 포함하는 BCMA 결합 분자, 면역 접합체, 재조합 수용체 및 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 상기 조성물 중에는 제공된 항 BCMA 재조합 수용체(예를 들어 CAR)를 발현하는 다수의 조작된 세포와 같은 조작된 세포를 포함하는 것이 있다.
BCMA 결합 재조합 키메라 항원 수용체 또는 상기 수용체를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체 및/또는 병용 치료 또는 요법을 위한 추가 제제를 발현하는 다수의 조작된 세포를 포함하는 약학 제형이 제공된다. 약학 조성물 및 제형은 일반적으로 하나 이상의 선택적인 약학적으로 허용가능한 담체(들) 또는 부형제(들)를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료제를 포함한다.
용어 "약학 제형(pharmaceutical formulation)"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태이고, 제형이 투여될 대상체에 허용가능하지 않게 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)"는 활성 성분외의 약학 제형 안에 있는 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서, 담체의 선택은 특정 세포, 결합 분자 및/또는 항체 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 방부제가 혼합되어 사용된다. 방부제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.0001% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수용체에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화 제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로 헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA 와 같은 킬레이팅제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 카운터 이온; 금속 착물(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
일부 측면에서 완충제는 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2 이상의 완충제 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.001% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.
본 명세서에 기재된 항체 제형은 동결 건조된 제형 및 수용액을 포함할 수 있다.
제형 또는 조성물은 또한 결합 분자 또는 세포, 바람직하게는 결합 분자 또는 세포에 상보적인 활성을 가진 것으로 치료될 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 상기 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적절히 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴 등과 같은 다른 약학적 활성제 또는 약물을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 염, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여된다. 적합한 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염은 염산, 브롬화 수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜 산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산과 같은 유기산으로부터 유도된 것을 포함한다.
활성 성분은 마이크로캡슐, 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 마이크로스피어, 미세에멀젼, 나노 입자 및 나노캡슐) 또는 거대에멀젼에 포획될 수 있다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 사이클로덱스트린 포함 복합체와 같은 포함 복합체 또는 리포좀으로서 제형화된다. 리포좀은 특정 조직에 대해 숙주 세포(예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)를 표적화하는 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) 및 미국 특허 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028 및 5,019,369]에 기재된 것과 같은 리포좀 제조에 유용한 많은 방법이 있다.
일부 측면에서 약학 조성물은 치료될 부위의 감작을 유발하기 전 및 충분한 시간을 가지고 조성물의 전달이 발생하도록 시간 방출, 지연 방출 및 서방성 전달 시스템을 채용할 수 있다. 많은 유형의 방출 전달 시스템이 이용 가능하고 공지되어 있다. 상기 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있어서, 대상체와 의사의 편의성을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같은 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 결합 분자 및/또는 세포를 함유한다. 일부 구현예에서 치료적 또는 예방적 효능은 치료 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 조건에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여의 경우, 질병 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여량 처방이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 원하는 투여량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 CAR을 함유하는 유전자 조작 세포의 맥락에서, 대상체는 약 백만 내지 약 1000억개의 세포, 예컨대, 예를 들어 백만 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 5 백만 세포, 약 25 백만 세포, 약 500 백만 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억개의 세포 또는 상기 수치의 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 천만 내지 약 1000억개의 세포(예를 들어 약 2천만 세포, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억개의 세포 또는 상기 수치의 임의의 2개에 의해 정의된 범위) 및 일부 경우에 약 100 백만 세포 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 120 백만 세포, 약 250 백만 세포, 약 350 백만 세포, 약 450 백만 세포, 약 650 백만 세포, 약 800 백만 세포, 약 900 백만 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억개의 세포) 또는 상기 범위 내 임의의 수치 및/또는 대상체의 체중 kg 당 상기 숫자의 세포 범위로 투여된다. 일부 측면에서, 결합 분자, 예를 들어 CAR을 발현하는 유전자 조작 세포의 맥락에서, 조성물은 예를 들어 섹션 V.A에서 투여를 위해 본 명세서에 기재된 대략 또는 그 이상의 세포 수와 같이 세포 요법의 단위 용량을 위한 투여를 위해 적어도 다수의 세포를 함유할 수 있다.
표준 투여 기술, 제형 및/또는 디바이스를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를 위한 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 디바이스가 제공된다. 세포의 투여는 자가 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체는 하나의 대상체로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이하고, 양립 가능한 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 이는 주사 가능한 단위 투여량 형태(용액, 현탁액, 에멀젼)으로 제형화될 것이다.
제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육, 비강, 볼, 설하 또는 좌약 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "비경구(parenteral)"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질, 두개내, 흉부내 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 이용하여 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서 조성물은 멸균 액체 제제로서, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 보다 용이하다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 다른 한편으로, 점성 조성물은 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공하기 위해 적절한 점도 범위 내에서 제형화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균 주사용 용액은 적합한 담체, 희석제 또는 멸균수, 생리식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 부형제와의 혼화제와 같은 용매에 결합 분자를 통합함으로써 제조될 수 있다. 조성물은 또한 동결 건조될 수 있다. 조성물은 투여 경로 및 원하는 제조 경로에 따라 습윤제, 분산제 또는 유화제(예를 들어, 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 향상 첨가제, 방부제, 향미제, 색소 등과 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 적절한 제조를 위하여 표준 텍스트를 참조할 수 있다.
항균 방부제, 항산화제, 킬레이트화제 및 완충액을 포함한 조성물의 안정성 및 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등에 의해 보장될 수 있다. 주사용 약학적 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 초래될 수 있다.
서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체 내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
또한 병용 요법을 위한 약학 조성물도 제공된다. 본 명세서에 기재된 병용 요법을 위한 임의의 추가 제제, 예컨대 섹션 III. B 에 기재된 제제는 하나 이상의 약학 조성물로서 BCMA 결합 분자(예를 들어, 항체), 면역 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 본 명세서에 기재된 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와 함께 제조 및 투여될 수 있다. 병용 요법은 예를 들어, 결합 분자, 재조합 수용체 및/또는 세포가 추가 제제로서 .동일한 약학 조성물 또는 별도의 약학 조성물에 존재하는 하나 이상의 약학 조성물로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 추가 조작된 세포, 예를 들어 상이한 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포이고 동일한 조성물 또는 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 각각의 약학 조성물은 특정 결합 분자, 재조합 수용체, 세포, 예를 들어, 조작된 세포 및/또는 추가 제제 및 특정 투여 요법 및/또는 전달 방법에 따라 적합한 제형으로 제형화된다.
Ⅴ. 방법 및 용도
또한 예컨대 BCMA가 발현되는 질병, 병태 및 장애의 치료 및/또는 검출, 진단 및 예후 방법에서 BCMA 결합 분자, 면역 접합체, 재조합 수용체, 조작된 세포 및 이의 약학 조성물 및 제형의 용도 및 사용 방법이 제공된다. 상기 방법, 예컨대 치료 방법 및 용도 중에는 제공된 항 BCMA 재조합 수용체(예를 들어 CAR)를 발현하는 조작된 세포, 예컨대 다수의 조작된 세포를 대상체에 투여하는 것을 포함하는 것이 있다. 또한 병용 요법 및/또는 병용 치료 방법이 제공된다.
A. 치료 및 예방 방법 및 용도
항 BCMA 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 수용체를 발현하는 다수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 포함하는 BCMA 결합 분자의 치료 및 예방 용도와 같은 투여 및 사용 방법이 또한 제공된다. 상기 방법 및 용도는 예를 들어 분자(예를 들어, 재조합 수용체), 세포(예를 들어, 조작된 세포) 또는 상기를 함유하는 조성물을, BCMA 발현과 관련되고/거나 세포 또는 조직이 예를 들어, BCMA를 특이적으로 발현하는 질병, 병태 또는 장애와 같은 BCMA와 관련된 질병, 병태 또는 장애를 갖는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 분자, 세포 및/또는 조성물은 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로 투여된다. 상기 방법 및 치료 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 재조합 수용체(예를 들어 CAR) 및 세포(예를 들어 조작된 세포)의 용도를 본 명세서에서 제공한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 결합 분자 또는 세포 또는 상기를 포함하는 조성물을 질병 또는 병태를 갖는 것으로 의심되거나 갖거나 가졌던 대상체에게 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 이에 의해 치료한다. 또한 BCMA와 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한, 본 명세서에 제공된 임의의 조성물, 예컨대 약학 조성물의 용도, 예컨대 치료 요법에서의 용도를 본 명세서에서 제공한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "치료(treatment)"(및 "치료(treat)" 또는 "치료(treating)"와 같은 이의 문법적 변형)는 질병 또는 병태 또는 장애 또는 이와 관련된 증상, 불리한 효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과 중 어느 하나의 감소, 전이 방지, 질병 진행의 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 진정 또는 향상된 예후를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 상기 용어는 질병의 완전한 치료 또는 모든 증상이나 결과에 있어 임의의 증상이나 결과(들)의 완전한 제거를 의미하지 않는다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "질병의 발달 지연(delaying development of a disease)"은 질병(예컨대 암)의 발달을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 치료될 대상체 및/또는 질병의 역사에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 충분하거나 유의미한 지연으로서 대상체가 질병을 발달시키지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발달과 같은 말기 암이 지연될 수 있다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "예방(preventing)"은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발에 관하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 분자 및 조성물은 질병의 발달을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추는데 사용된다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 기능 또는 활성을 "억제(suppress)"하는 것은 다른 조건과 비교하여 또는 대안적으로 관심 조건 또는 파라미터를 제외하고 달리 동일한 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 항체 또는 조성물 또는 세포는 항체 또는 조성물 또는 세포의 부재에서 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
제제, 예를 들어 약학 제형, 결합 분자, 항체, 세포 또는 조성물의 "유효량(effective amount)"은 투여의 맥락에서, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 원하는 결과를 달성하기 위해 투여량/양에서와 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
제제, 예를 들어 약학 제형, 결합 분자, 항체, 세포 또는 조성물의 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은 예컨대 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 원하는 치료적 결과를 달성하기 위한 투여량에서와 필요한 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중 및 투여된 세포 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 분자, 항체, 세포 및/또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
"예방적 유효량(prophylactically effective amount)"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 투여량에서와 필요한 시간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 전형적으로, 예방 단위 용량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 "대상체(subject)" 또는 "개체(individual)"는 포유 동물이다. 일부 구현예에서, "포유 동물(mammal)"은 인간, 비인간 영장류, 가축 및 농장 동물 및 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 저빌쥐, 마우스, 흰 담비, 래트, 고양이, 원숭이 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어 문헌[미국 특허 출원 공개 번호2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
치료될 질병 중에는 BCMA와 관련된 임의의 질병 또는 장애 또는 BCMA가 특이적으로 발현되고/거나 BCMA가 치료를 위해 표적화되는 임의의 질병 또는 장애가 있다(본 명세서에서 또한 "BCMA 관련 질병 또는 장애(BCMA-associated disease or disorder)로서 상호교환적으로 지칭). BCMA 발현과 관련된 암은 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia)뿐만 아니라 호지킨 및 비호지킨 림프종 둘 다와 같은 혈액 악성 종양을 포함한다. BCMA에 대한 검토는 문헌[Coquery et al., Crit Rev Immunol., 2012, 32(4):287-305]을 참조한다. BCMA는 종양 세포 생존을 매개하는데 연루되어 있기 때문에 암 요법의 잠재적 표적이다. 마우스 항 인간 BCMA 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체 및 상기 키메라 수용체를 발현하는 세포는 상기에 기재되었다. 문헌[Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060]을 참조한다.
일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 교모세포종, 림프종모양 육아종증(lymphomatoid granulomatosis), 이식후 림프 증식성 장애(post-transplant lymphoproliferative disorder), 면역 조절 장애, 중쇄 질병(heavy-chain disease), 일차 또는 면역 세포 관련 아밀로이드증 또는 의미불명(undetermined significance)의 단세포군감마글로불린병증(monoclonal gammopathy)으로부터의 하나 이상의 질병 또는 병태이다.
일부 구현예에서, BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애이다. 상기 자가 면역 질환 또는 장애는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장 질환, 류마티스성 관절염(예를 들어, 청소년 류마티스성 관절염), ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소증 자반병(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소증 자반병(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 차가스 병(Chagas' disease) 그레이브스 병(Grave's disease), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결절성 다발 동맥염(polyarteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 보통 천포창(pemphigus vulgaris), 경피증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신증(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노 증후군(Reynaud's syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture's disease), 가와사키 병(Kawasaki disease), 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)을 포함하나 이제 제한되지 않는다.
특정 질병 및 병태에서, BCMA는 악성 세포 및 암에서 발현된다. 일부 구현예에서, 암(예를 들어, BCMA 발현 암)은 B 세포 악성 종양이다. 일부 구현예에서, 암(예를 들어, BCMA 발현 암)은 림프종, 백혈병 또는 혈장 세포 악성 종양이다. 본 명세서에서 고려되는 림프종은 버킷 림프종(예를 들어, 고질적인 버킷 림프종 또는 돌발적인 버킷 림프종), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma, NHL), 호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 작은 비절단 세포 림프종(small non-cleaved cell lymphoma), 점막-관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma, MALT), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 비장 림프종, 결절성 단핵구 B 세포 림프종(nodal monocytoid B cell lymphoma), 면역 모세포 림프종(immunoblastic lymphoma), 거대 세포 림프종(large cell lymphoma), 확산 혼합 세포 림프종(diffuse mixed cell lymphoma), 폐 B 세포 혈관 중심 림프종(pulmonary B cell angiocentric lymphoma), 작은 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma), 1 차 종격동 B 세포 림프종(primary mediastinal B cell lymphoma), 림프구 형질세포성 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL) 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본 명세서에서 고려되는 백혈병에는 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 혈장 세포 백혈병 또는 급성 림프성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL)이 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 다발성 골수종(예를 들어, 비분비성 다발성 골수종, 무증상 다발성 골수종) 또는 형질 세포종을 포함하나 이에 제한되지 않는 혈장 세포 악성 종양이 본 명세서에서 또한 고려된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 예컨대 재발성 및/또는 불응성 다발성 골수종(relapsed and/or refractory multiple myeloma, R/R MM)이다. 치료될 수 있는 BCMA(예를 들어, BCMA 발현 암)와 관련된 질병, 장애 또는 병태 중에는 신경모세포종(neuroblastoma), 신장 세포암종(renal cell carcinoma), 대장암(colon cancer), 결장암(colorectal cancer), 유방암, 편평상피세포암(epithelial squamous cell cancer), 흑색종(melanoma), 골수종(예를 들어, 다발성 골수종), 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암(head and neck cancer)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 BCMA 관련 질병 또는 장애가 있거나, 의심되거나 또는 발병할 위험이 있는 대상체를 확인할 수 있다. 따라서, 상승된 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애를 갖는 대상체를 확인하고, 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포로 치료하기 위해 이들을 선택하는 방법이 제공된다.
예를 들어, 대상체는 BCMA 발현 암과 같은 상승된 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애의 존재에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 BCMA 관련 질병, 예컨대 종양의 존재를 검출하거나 또는 이를 스크리닝하는 것을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 상승된 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애를 갖는 것으로 의심되며, BCMA의 발현 수준에 대해 분석된 환자로부터 샘플을 얻을 수 있다. 일부 측면에서, BCMA 관련 질병 또는 장애에 대해 양성 테스트된 대상체는 본 방법에 의한 치료를 위해 선택될 수 있고, BCMA 결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 본 명세서에 기재된 바와 같은 재조합 수용체 또는 이의 약학 조성물을 함유하는 세포가 치료적 유효량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 화학 요법, 방사선 및/또는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT), 예를 들어 동종 이계 HSCT(allogenic HSCT) 또는 자가 HSCT를 포함하는 BCMA 표적화 키메라 수용체를 발현하는 세포 및/또는 다른 BCMA 특이적 항체 및/또는 다른 요법으로의 치료 후에 지속적 또는 재발성 질병을 앓는다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 대상체가 다른 BCMA 표적화된 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 대상체는 재발하지 않았지만, 재발의 위험이 높은 것과 같이 재발의 위험이 있는 것으로 결정되고, 따라서 화합물 또는 조성물은 예를 들어 재발의 가능성을 낮추거나 재발을 예방하기 위해 예방적으로 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT에 적합한 것과 같이 이식에 적합한 대상체이다. 상기 일부 구현예에서, 대상체는 적합함에도 불구하고 본 명세서에 제공된 바와 같은 항 BCMA 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 다수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 포함하는 BCMA 결합 분자의 투여 전, 이전에 이식을 받지 않았다.
일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기 세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT에 적합하지 않은 것과 같이 이식에 적합하지 않은 대상체이다. 상기 일부 구현예에서, 상기 대상체에 본 명세서에 제공된 구현예에 따라 항 BCMA 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 다수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 포함하는 BCMA 결합 분자가 투여된다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 투여 개시 전에, 대상체는 하나 이상의 선행 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20가지 이상의 선행 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10가지 이상의 선행 요법을 받았다.
일부 측면에서, 대상체는 하나 이상의 선행 요법에 대해 재발했거나 불응성이었다. 일부 측면에서, 선행 요법은 자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant, ASCT); 면역 조절제; 프로테아좀 억제제; 및 항 CD38 항체를 이용한 치료를 포함한다(대상체가 하나 이상의 요법에 대한 후보가 아니었거나 금기를 나타내지 않는 한). 일부 구현예에서, 면역 조절제는 탈리도마이드(thalidomide), 레날리도마이드(lenalidomide) 또는 포말리도마이드(pomalidomide) 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 프로테아좀 억제제는 보르테조밉(bortezomib), 카르필조밉(carfilzomib) 또는 익사조밉(ixazomib) 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 항 CD38 항체는 다라투무맙(daratumumab)이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 질병이 요법에 대한 최선의 반응이 아닌 한 각 요법에 대해 2 회 이상의 연속 치료 주기를 겪어야 한다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 특정 기준, 진단 또는 징후에 기초하여 제공된 항 BCMA 항체, 재조합 수용체 및/또는 상기 수용체를 포함하는 세포로 치료하기 위한 특정 대상체를 포함하거나 배제하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 세포 투여 또는 림프구 고갈 화학요법 전처리 시에, 대상체는 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia, PCL)의 활성 또는 병력을 갖지 않았다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL의 활성 또는 병력이 있는 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL, 예컨대 2차 PCL이 발달한 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 기준, 진단 또는 징후에 대한 평가는 제공된 방법에 따라 치료의 적격성 또는 적합성을 위해 대상체를 스크리닝하는 시점에, 치료 요법의 다양한 단계에서, 림프구 고갈 요법을 받는 시점 및/또는 조작된 세포 또는 이의 조성물의 투여 시 또는 투여 개시 직전에 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료는 요법에 대한 대상체에 의한 면역 반응을 유도하지 않고/거나 질병 또는 병태의 효과적인 치료를 방해할 정도로 상기 반응을 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 면역원성 및/또는 이식편 대 숙주 반응의 정도는 상이하지만 비교 가능한 치료로 관찰된 것보다 작다. 예를 들어, 제공된 항 BCMA 항체를 포함하는 CAR을 발현하는 세포를 이용한 입양 세포 요법의 경우, 일부 구현예에서 면역원성의 정도는 유사한, 예를 들어 중첩 에피토프에 결합하고/거나 항체, 예컨대 마우스 또는 원숭이 또는 토끼 또는 인간화된 항체와 BCMA 결합을 두고 경쟁하는 상이한 항체를 포함한 CAR에 비해 감소된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 입양 세포 요법을 포함하며, 이에 의해 BCMA 결합 분자(예를 들어 항 BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR)를 포함하는 제공된 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작 세포가 대상체에게 투여된다. 상기 투여는 BCMA 표적화된 방식으로 세포(예를 들어, T 세포 활성화)의 활성화를 촉진할 수 있어서, 질병 또는 장애의 세포가 파괴를 위해 표적화된다.
따라서, 제공된 방법 및 용도는 입양 세포 요법에 대한 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체, 조직 또는 세포, 예컨대, 질병, 병태 또는 장애를 갖거나, 가질 위험이 있거나 또는 가질 것으로 의심되는 것에 세포 또는 세포를 함유하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포, 집단 및 조성물은 치료될 특정 질병 또는 병태를 갖는 대상체에게 예를 들어 입양 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 또는 조성물은 대상체, 예컨대 질병 또는 병태를 갖거나 이에 대한 위험이 있는 대상체에게 투여된다. 일부 측면에서, 상기 방법은 예컨대 BCMA 발현 암에서 종양 부담을 감소시킴으로써 이에 의해 치료, 예를 들어 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상을 개선한다.
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되며, 상기 세포는 단리되고/거나 달리 세포 요법을 받은 대상체 또는 상기 대상체로부터 유래된 샘플로부터 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 대상체, 예를 들어 치료가 필요한 환자로부터 유래되고, 세포는 단리 및 가공 후에 동일한 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 동종 이계 전달에 의해 수행되며, 상기 세포는 단리되고/거나 달리 세포 요법을 받을 예정이거나 최종적으로 받은 대상체, 예를 들어 제 1 대상체외의 대상체로부터 제조된다. 상기 구현예에서, 이어서 세포는 상이한 대상체, 예를 들어, 같은 종의 제2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제 1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제 1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제 2 대상체는 제 1 대상체와 동일한 HLA 클래스(HLA class) 또는 수퍼타입(supertype)을 발현한다.
일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체는 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체는 비인간 영장류이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류는 원숭이(예를 들어, 시노몰구스 원숭이) 또는 유인원(ape)이다. 상기 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있으며, 유아, 소아, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류(예를 들어, 마우스, 랫트 등)와 같은 비영장류 포유 동물이다. 일부 예에서, 환자 또는 대상체는 질병, 입양 세포 요법 및/또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)과 같은 독성 결과물의 평가를 위한 검증된 동물 모델이다.
BCMA 결합 분자, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 상기를 발현하는 세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기는 비경구, 폐내 및 비강 내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변 내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 두개내, 흉부내 또는 피하 투여를 포함한다. 복용량 및 투여는 투여가 짧거나 만성인지 여부에 부분적으로 의존할 수 있다. 다양한 복용량 스케쥴은 다양한 시점에 걸쳐 단일 또는 다수 투여, 볼러스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 결합 분자, 재조합 수용체 또는 세포의 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 결합 분자 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 결합 분자 또는 재조합 수용체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 치료, 환자의 임상 이력 및 재조합 수용체 또는 세포에 대한 반응 및 주치의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서 조성물 및 분자 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다.
일부 구현예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 효능 및/또는 반응에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 효능은 질병 상태를 평가함으로써 결정된다. 질병 상태를 평가하기 위한 예시적인 방법은 전기 영동 및 면역 고정에 의해 혈액 및/또는 소변과 같은 생물학적 유체에서 M 단백질의 측정; 혈액에서 sFLC( 및 )의 정량화; 골격 검사; 및 골수외 질병을 갖는 대상체에서 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)/컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT)에 의한 이미징을 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 상태는 골수 검사에 의해 평가될 수 있다. 일부 예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 혈액 및/또는 골수에서 재조합 수용체 또는 세포의 증폭 및 지속성에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 재조합 수용체 또는 조작된 세포의 항종양 활성에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서 항종양 활성은 전체 반응 속도(overall response rate, ORR) 및/또는 국제 골수종 워킹 그룹(International Myeloma Working Group, IMWG) 균일한 반응 기준(Uniform Response Criteria)에 의해 결정된다(Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17(8):e328-346 참조). 일부 구현예에서, 반응은 최소 잔류 질병(minimal residual disease, MRD) 평가를 사용하여 평가된다. 일부 구현예에서, MRD는 유세포 분석 및 고처리량 시퀀싱, 예를 들어, 딥 시퀀싱(deep sequencing)과 같은 방법에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 반응은 재조합 수용체 또는 세포의 투여 후 반응의 지속 기간에 기초하여 평가된다. 일부 예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 독성에 기초할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 재조합 수용체 및/또는 세포가 투여되는 대상체의 건강 관련 삶의 질(health-related quality of life, HRQoL)에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도는 변경, 즉 상기 기준 중 어느 하나에 기초하여, 증가 또는 감소될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 장애는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종에 대한 측정 가능한 질병 기준은 (1) 혈청 M-단백질 1 g/dL 이상; (2) 소변 M-단백질 200 mg 이상/24시간; (3) 수반된 비정상적인 대 의 비율로 혈청 프리 경쇄(serum free light chain, sFLC) 수준 10 mg/dL 이상을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 경쇄 질병은 혈청 또는 소변에서 측정 가능한 질병이 없는 대상체에 대해서만 허용 가능하다.
일부 구현예에서, 동부 종양학 그룹 협회(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG) 성과 상태 지표는 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법으로부터 성과가 좋지 않았던 대상체를 평가하거나 선택하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, Oken et al.(1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655 참조). 성과 상태의 ECOG 척도는 스스로를 돌보는 능력, 일상 활동 및 신체 능력(예를 들어 걷기, 일하기 등)의 관점에서 환자의 기능 수준을 설명한다. 일부 구현예에서, ECOG 성과 상태 0은 대상체가 정상적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 1의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 신체 활동에 일부 제한을 보이나 대상체는 완전히 걸을 수 있다. 일부 측면에서, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 환자는 50% 이상 걸을 수 있다. 일부 경우에, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 스스로를 돌볼 수도 있다; 예를 들어, 문헌[Srensen et al., (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775]을 참조한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 방법 또는 치료 요법에 따라 투여될 대상체는 0 또는 1의 ECOG 수행 상태를 가진 대상체를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 투여는 다른 요법에 내성이 생긴 대상체일지라도 대상체를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상에서 객관적인 반응(objective response, OR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, OR은 엄격한 완전 반응(stringent complete response, sCR), 완전 반응(complete response, CR), 매우 양호한 부분 반응(very good partial response, VGPR), 부분 반응(partial response, PR) 및 최소 반응(minimal response, MR)을 달성하는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80% 또는 85% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR), 매우 양호한 부분 반응(VGPR) 또는 부분 반응(PR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 20%, 30%, 40% 50%, 60% 또는 70% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 단위 용량은 약 5.0 x 107, 1.5 x 108, 3.0 x 108 또는 4.5 x 108 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어, 본 명세서에 제공된 방법에 따라, 치료에 대한 특정 반응은 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 균일한 반응 기준에 기초하여 평가될 수 있다(Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17(8):e328-346 참조). 일부 구현예에서, OR과 같은 특정 결과를 달성하기 위한 예시적인 단위 용량은 약 5.0 x 107 CAR 발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료의 독성 및/또는 부작용은 재조합 수용체, 예를 들어, CAR, 세포 및/또는 조성물의 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도를 조절하기 위해 사용되고 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 불리한 이벤트 및 실험실 이상은 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도를 조절하기 위해 사용되고 모니터링될 수 있다. 불리한 이벤트는 주입 반응, 사이토카인 방출 증후군(CRS), 신경 독성, 대식세포 활성화 증후군 및 종양 용해 증후군(TLS)을 포함한다. 상기 이벤트 중 일부는 단위 용량 제한 독성을 확립할 수 있고 단위 용량 및/또는 치료의 종료를 담보할 수 있다. 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도를 확립하기 위한 지침으로 사용될 수 있는 다른 부작용 또는 불리한 이벤트는 피로, 발열 또는 열성 호중구 감소증, 설정된 기간(예를 들어, 2주 이하 또는 7일 이하) 동안의 트랜스아미나제 증가, 두통, 뼈 통증, 저혈압, 저산소증, 오한, 설사, 메스꺼움/구토, 신경 독성(예를 들어 혼란, 실어증, 발작, 경련, 혼수 및/또는 변경된 정신 상태), 산재성 혈관 내 응고, 기타 무증상 비혈액학적 임상 실험실 이상 예컨대 전해질 이상을 포함하나 이에 제한되지 않는 비혈액학적 불리한 이벤트를 포함한다. 투여 단위 용량 및/또는 투여 빈도를 확립하기 위한 지침으로 사용될 수 있는 다른 부작용 또는 불리한 이벤트는 호중구 감소증, 백혈구 감소증, 혈소판 감소증, 동물 및/또는 B 세포 결여증 및 저감마글로불린혈증을 포함하나 이에 국한되지 않는 혈액학적 불리한 이벤트를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따른 치료는 예를 들어, 다른 요법의 투여와 비교하여, 더 낮은 속도 및/또는 더 낮은 정도의 독성, 독성 결과 또는 증상, 독성 촉진 프로파일, 인자 또는 특성, 예컨대 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경 독성과 관련되거나 이를 나타내는 증상 또는 결과, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 신경독성를 초래할 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 분자 또는 재조합 수용체를 함유하는 유전자 조작 세포의 맥락에서, 대상체는 약 백만 내지 약 1000억개의 세포의 범위 및/또는 체중 kg 당 세포의 양, 예컨대, 예를 들어 약 백만 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 5 백만 세포, 약 25 백만 세포, 약 500 백만 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억개의 세포 또는 상기 수치의 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 천만 내지 약 1000억개의 세포(예를 들어 약 2천만 세포, 약 2천5백만, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 5천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억개의 세포 또는 상기 수치의 임의의 2개에 의해 정의된 범위) 및 일부 경우에 약 100 백만 세포 내지 약 500억개의 세포(예를 들어 약 120 백만 세포, 약 150 백만 세포, 약 250 백만 세포, 약 300 백만 세포, 약 350 백만 세포, 약 450 백만 세포, 약 500 백만 세포, 약 600 백만 세포, 약 650 백만 세포, 약 800 백만 세포, 약 900 백만 세포, 약 10억 세포, 약 12억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포 또는 약 500억 세포개의 세포) 또는 상기 범위 사이 임의의 수치 및/또는 체중 kg 당으로 투여된다. 또한, 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 특수한 속성에 따라 달라질 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 조작된 세포 단위 용량 또는 조작된 세포 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물은 치료 요법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료 요법은 조작된 세포 단위 용량 또는 조작된 세포 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 수의 상기 세포와 같은 특정 수 또는 범위의 재조합 수용체 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 세포를 함유하는 조성물이 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 세포 집단 또는 세포 조성물에서 CAR 발현 세포의 수, 양 또는 비율은 본 명세서에 제공된 결합 분자 또는 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는 대리 마커의 검출, 예를 들어 표지된 항원과 같은 표지된 분자의 결합을 검출함으로써 또는 유세포 분석 또는 다른 수단에 의해 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 단위 용량은 약 1 x 106개 이상의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 약 2 x 109 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예를 들어, 약 2.5 x 107 내지 약 1.2 x 109개의 상기 세포의 범위, 예컨대 2.5 x 107, 5 x 107, 1.5 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 8 x 108 또는 1.2 x 109개의 상기 총 세포 또는 전술한 값 중 임의의 두 값 사이의 범위를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 단위 용량은 2.5 x 107 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내지 1.2 x 109 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC 또는 약 2.5 x 107 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내지 약 1.2 x 109 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC, 5.0 x 107 CAR 발현 T 세포 내지 4.5 x 108 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 약 5.0 x 107 CAR 발현 T 세포 내지 약 4.5 x 108 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 1.5 x 108 CAR 발현 T 세포 내지 3.0 x 108 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC 또는 약 1.5 x 108 CAR 발현 T 세포 내지 약 3.0 x 108 CAR 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC를 포함한다(각각의 값 포함). 일부 구현예에서, 상기 수는 CD3+ 또는 CD8+, 일부 경우에는 또한 CAR 발현(예를 들어 CAR+) 세포의 총 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 2.5 x 107 내지 1.2 x 109 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포 또는 약 2.5 x 107 내지 약 1.2 x 109 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포, 5.0 x 107 내지 4.5 x 108 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포 또는 약 5.0 x 107 내지 약 4.5 x 108 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포 또는 1.5 x 108 내지 3.0 x 108 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포 또는 약 1.5 x 108 내지 약 3.0 x 108 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR 발현 세포 수를 포함한다(각각의 값 포함).
일부 구현예에서, 단위 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, CD8+ T 세포 단위 용량은, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량을 포함하여, 1 x 106 내지 2 x 109 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포 또는 약 1 x 106 내지 약 2 x 109 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포, 예를 들어 5 x 107 내지 4.5 x 108 상기 세포 또는 약 5 x 107 내지 약 4.5 x 108 상기 세포의 범위, 예컨대 2.5 x 107 또는 약 2.5 x 107, 5 x 107 또는 약 5 x 107, 1.5 x 108 또는 약 1.5 x 108, 3 x 108 또는 약 3 x 108, 4.5 x 108 또는 약 4.5 x 108, 8 x 108 또는 약 8 x 108 또는 1.2 x 109 또는 약 1.2 x 109개의 총 상기 세포 또는 전술한 값 중 임의의 두 개의 값 사이의 범위를 포함한다.
일부 구현예에서, 단위 용량의 세포, 예를 들어 재조합 수용체 발현 T 세포는 단일 단위 용량으로 대상체에게 투여되거나 2 주, 1개월, 3개월, 6개월, 1 년 이상의 기간 내에 1회만 투여된다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 단위 용량으로 투여되고, 각각의 단위 용량 또는 총 단위 용량은 상기 임의의 값 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 투여를 위한 조작된 세포 또는 투여를 위한 조작된 세포의 조성물은 세포 건강과 일치하거나 세포 건강을 나타내는 특성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 단위 용량의 70, 75, 80, 85 또는 90% CAR+ 세포 또는 약 70, 75, 80, 85 또는 90% CAR+ 세포 또는 70, 75, 80, 85 또는 90% 이상의 CAR+ 세포는 세포 자멸사 마커의 발현 부재와 같은 세포 건강 또는 생물학적으로 활성 CAR 세포를 나타내는 하나 이상의 특성 또는 표현형을 나타낸다.
특정 구현예에서, 표현형은 세포 자멸사의 부재 및/또는 세포가 세포 자멸사 과정을 겪고 있다는 표시이거나 이를 포함한다. 세포 자멸사는 기포 형성(blebbing), 세포 수축, 핵 단편화, 염색질 응축, 염색체 DNA 단편화 및 전체적인 mRNA 붕괴를 포함하여 특징적인 세포 변화 및 사망을 초래하는 일련의 고정된 형태 및 생화학적 사건을 포함하는 프로그래밍된 세포 사멸 과정이다. 일부 측면에서, 세포 자멸사의 초기 단계는 특정 카스파제, 예를 들어 2, 8, 9 및 10의 활성화에 의해 표시될 수 있다. 일부 측면에서, 세포 자멸사의 중간 내지 말기 단계는 막 완전성의 추가 손실, 염색질 응축 및 DNA 단편화를 특징으로하며, 카스파 제 3, 6 및 7의 활성화와 같은 생화학적 사건을 포함한다.
특정 구현예에서, 표현형은 프로그램된 세포 사멸과 관련된 하나 이상의 인자, 예를 들어 세포 자멸사를 개시하는 것으로 공지된 전-세포 자멸사 인자, 예를 들어 사멸 수용체 경로의 멤머, 미토콘드리아(내인성) 경로의 활성화된 멤머, 예를 들어 Bax, Bad 및 Bid와 같은 Bcl-2 계열 멤머 및 카스파제의 음성 발현이다. 특정 구현예에서, 표현형은 세포 조성물과 함께 배양되거나 세포 조성물과 접촉할 때 세포 자멸사를 겪는 세포에 우선적으로 결합하는 지시약, 예를 들어 아넥신 V 분자 또는 TUNEL 염색에 의한 이의 부재이다. 일부 구현예에서, 표현형은 세포에서 세포 자멸사 상태를 나타내는 하나 이상의 마커의 발현이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 표현형은 카스파제 3과 같은 카스파제의 발현 및/또는 활성화 부재이다. 일부 측면에서, 카스파제-3의 활성화는 세포 자멸사의 증가 또는 재생을 나타낸다. 특정 구현예에서, 카스파제 활성화는 공지된 방법에 의해 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 활성화된 카스파제에 특이적으로 결합하는 (즉, 절단된 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는) 항체는 카스파제 활성화를 검출하는데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 표현형은 활성 카스파제 3-이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 자멸사의 마커는 세포 자멸사와 관련된 세포의 특징을 검출하는 시약이다. 특정 구현예에서, 시약은 아넥신 V 분자이다.
일부 구현예에서, 투여를 위해 조작된 세포를 함유하는 조성물은 세포 건강을 나타내거나 또는 이와 일치하는 표현형을 나타내는 특정 수 또는 양의 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량에서 CAR 발현 T 세포의 약 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 세포자멸사 마커, 선택적으로 아넥신 V(Annexin V) 또는 활성 카스파제 3(Caspase 3)을 발현한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포 단위 용량에서 CAR 발현 T 세포의 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 아넥신 V 또는 활성 카스파제 3을 발현한다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포는 BCMA 결합 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 면역 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여된 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여된 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여된 세포는 CD4+ CAR T 세포 및 CD8+ CAR T 세포의 조합과 같은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 조합이며, 일부 측면에서 이는 동일한 용기 또는 세포 조성물 또는 현탁액 내에 있다. 일부 예에서, 현탁액 또는 조성물 또는 용기 내에서의 비율과 같은, 투여된 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포(CD4:CD8)의 비율은 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1이다. 일부 구현예에서, 비율은 1:3 내지 3:1이거나 또는 (약) 1:4 내지 (약) 4:1 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1 또는 (약) 1:2 내지 (약) 2:1 또는 허용 오차율 내에서 상기 비율 중 어느 하나이다. 일부 측면에서, 요법을 받는 대상체 및/또는 세포 조성물을 생성하기 위해 샘플을 채취하여 가공한 대상체 중, CD4+ CAR T 세포 대 CD8+ CAR T 세포의 비 또는 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비는 (약) 1:4 내지 (약) 4:1 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1 또는 (약) 1:2 내지 (약) 2:1과 같은 원하는 범위 내이거나 또는 상기 대상체의 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상 또는 80% 이상 또는 85% 이상 또는 90% 이상 또는 95% 이상과 같은 상기 대상체의 주어진 백분율에 대해 상기 원하는 비율 내에 있다.
일부 구현예에서, 세포, 결합 분자 또는 제조합 수용체는 조합 치료의 일부로서, 다른 치료적 개입, 예컨대 다른 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 예컨대 동시에 또는 순차적으로, 임의의 순서로 투여된다.
일부 구현예에서, 세포, 결합 분자 및/또는 재조합 수용체는 하나 이상의 추가 치료제 또는 다른 치료적 개입과 관련하여 동시이든 순차적이든 임의의 순서로 공투여된다. 일부 맥락에서, 세포는 세포 집단이 하나 이상의 추가 치료 제제의 효과를 강화하도록(또는 반대로) 시간에 있어 충분히 가깝게 다른 요법과 공투여된다. 일부 구현예에서, 세포, 결합 분자 및/또는 재조합 수용체는 하나 이상의 추가 치료제보다 앞서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, 결합 분자 및/또는 재조합 수용체는 하나 이상의 추가 치료제 후에 투여된다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈구 성분 채집술 후 및 림프구 고갈 화학 요법 전에 연결 치료를 받을 수 있다. 치료 의사는 제공된 조성물 또는 세포의 제조 동안, 예를 들어 질병 제어를 위해 연결 치료가 필요한지를 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 연결 치료는 생물학적 제제, 예컨대 항체(예를 들어, 다라투무맙)를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 개시 전에 연결 치료가 중단된다. 일부 구현예에서, 연결 치료는 림프구 고갈 전 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 7 일, 10 일, 14 일, 21 일, 28 일, 45 일 또는 60 일에 중단된다.
세포가 포유 동물(예를 들어, 인간)에게 투여되면, 일부 측면에서 조작된 세포 집단 및/또는 항체의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 어느 하나에 의해 측정된다. 평가 파라미터는 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 대한 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009) 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 평가와 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 특정 사이토카인, 예컨대 CD 107a, IFN, IL-2 및 TNF의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정될 수 있다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포는 이들의 치료적 또는 예방적 효능이 증가하도록 임의의 다수의 방법으로 변형된다. 예를 들어, 일부 구현예에서 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR은 표적화 모이어티에 링커를 통해 직접적으로든 간접적으로든 접합된다. 화합물, 예를 들어 TCR 또는 CAR을 표적화 모이어티에 접합시키는 실시는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Wadwa et al., J. Drug Targeting, 3(2):111 (1995) 및 미국 특허 5,087,616]을 참조한다.
B. 병용 요법
BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 다수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 및 용도, 예컨대 치료 및 예방 용도를 포함하는 병용 요법 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포는 예컨대 임의의 순서로, 하나 이상의 추가 치료 개입과 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료적 개입은 예를 들어 항체, 조작된 세포, 수용체 및/또는 제제, 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 세포 및/또는 세포 독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 하나 이상의 추가 제제, 요법 및/또는 치료, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 추가 제제, 요법 및/또는 치료제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 면역 조절제, 면역 체크 포인트 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나제 억제제와 같은 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다. 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 세포 및/또는또는 조성물 및 하나 이상의 추가 치료적 개입을 포함하는 병용 치료 또는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법을 위한 추가 제제는 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 치료 효과의 효능 및/또는 안전성을 강화, 부양 및/또는 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 결합 분자 또는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 효능, 생존 또는 지속성을 강화하거나 개선시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 포스파타제 억제제, 키나제 억제제, 사이토카인, 면역조절제 또는 조절 T(Treg) 세포의 수준 또는 활성을 감소시키는 제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 부작용을 감소시키거나 개선시킴으로써 안전성을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 동일한 질병, 병태 또는 동반 질환을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 불리한 효과 또는 부작용을 개선, 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 재조합 수용체, 세포 또는 조성물의 투여 전, 동안 또는 후에 아세트아미노펜 또는 항히스타민제, 예컨대 디펜히드라민과 같은 통증 관리 약물은 치료와 관련된 경미한 부작용을 개선 또는 감소 또는 제거하기 위해 투여될 수 있다. 일부 예에서, 적혈구 및 혈소판 주입 및/또는 콜로니 자극 인자는 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 예를 들어, CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 불리한 효과 또는 부작용을 감소시키거나 제거하기 위해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 예방 또는 경험적 항 감염제(예를 들어, 폐렴 구균 폐렴[pneumocystis pneumonia, PCP] 예방을 위한 트리메토프림/설파메톡사졸, 광범위 항생제, 항진균제 또는 열성 호중구 감소증을 위한 항 바이러스제)는 치료로 인한 부작용을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 예에서, 필요한 경우, 치료 결과로서 발생하는 림프구 감소증 및/또는 호중구 감소증을 치료하기 위해 예방이 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 요법, 치료 또는 제제는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 이식, 입양 세포 요법, 항체, 세포 독성제, 화학 요법제, 사이토카인, 성장 억제제, 항 호르몬제, 키나제 억제제, 항 혈관 형성제, 심장 보호제, 면역 자극제, 면역 억제제, 면역 체크포인트 억제제, 항생제, 혈관 신생 억제제, 대사 조절제 또는 다른 치료제 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질, 펩티드, 핵산, 소분자 제제, 세포, 독소, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합물 또는 임의의 다른 유형의 치료제, 예를 들어 방사선이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 수술, 화학 요법, 방사선 요법, 이식, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포의 투여, 키나제 억제제, 면역 체크포인트 억제제, mTOR 경로 억제제, 면역 억제제, 면역 조절제, 항체, 면역 제거제, 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편, 항체 접합체, 기타 항체 요법, 세포 독소, 스테로이드, 사이토카인, 펩티드 백신, 호르몬 요법, 항 대사제, 대사 조절제, 칼슘 의존성 포스파타제 칼시뉴린 또는 p70S6 키나제 FK506)을 억제하거나 또는 p70S6 키나제를 억제하는 약물, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드류, 프로테아좀 억제제, GITR 작용제, 단백질 티로신 포스파타제 억제제, 단백질 키나제 억제제, 종양 용해성 바이러스 및/또는 다른 유형의 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 치료제는 골수 이식, 화학 요법제, 예컨대 플루다라빈, 외부 빔 방사선 요법(external-beam radiation therapy, XRT), 시클로포스파미드 및/또는 항체 요법을 사용한 T 세포 제거 요법이다.
일부 구현예에서, 세포, BCMA 결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 키나제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 감마 분비 효소 억제제, 예컨대 감마 분비 효소 억제제의 표적, 예를 들어 세포(예컨대 종양/암 세포) 상의 BCMA의 막내 절단을 억제 또는 감소시키는 감마 분비 효소 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료제는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어 단클론성 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 화학 요법제이다. 예시적인 화학 요법제는 안트라사이클린(예를 들어, 리소좀 독소루비신과 같은 독소루비신); 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈); 알킬화제(예를 들어, 시클로포스파미드, 데카르바진, 멜팔란, 이포스파미드, 테모졸로마이드); 면역 세포 항체(예를 들어, 알렘투주맙, 겜투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙); 항 대사제(예를 들어, 엽산 길항제, 피리미딘 유사체, 플루다라빈과 같은 퓨린 유사체 및 아데노신 디아미나제 억제제 포함); TNFR 글루코코르티코이드 유도 TNFR 관련 단백질(glucocorticoid induced TNFR related protein, GITR) 작용제; 프로테아좀 억제제(예를 들어, 아클라시노마이신 A, 글리오톡신 또는 보르테조밉); 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 요법 또는 치료는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 추가 요법은 조작된 세포, 예를 들어 추가 CAR 발현 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는 본 명세서에 제공된 조작된 세포, 예를 들어 항 BCMA CAR 발현 세포와 동일하거나 상이한 재조합 수용체를 발현하는 CAR 발현 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원 및/또는 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 본 명세서에 기재된 재조합 수용체, 예를 들어 BCMA와 동일한 항원의 상이한 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원, 예를 들어 상이한 종양 항원 또는 항원의 조합을 인식한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 초기 계통 마커, 예를 들어 암 줄기 세포를 발현하는 암 세포를 표적화하는 반면, 다른 CAR 발현 세포는 보다 후기 계통 마커를 발현하는 암 세포를 표적화한다. 상기 구현예에서, 추가 조작된 세포는 본 명세서에 기재된 CAR 발현 세포의 투여 전, 동시 또는 투여 후에(예를 들어, 주입) 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는 동종 이계 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자의 구성은 1 차 세포 내 신호 전달 도메인 및 2개 이상, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5개 이상의 공자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는 동일하거나 상이한 1 차 세포 내 신호 전달 도메인, 동일하거나 상이한 공자극 신호 전달 도메인 또는 동일한 수 또는 상이한 수의 공자극 신호 전달 도메인을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는 분할된 CAR로서 구성될 수 있고, 여기서 CAR 분자 중 하나는 항원 결합 도메인 및 공자극 도메인(예를 들어, 4-1BB)을 포함하고, 다른 CAR 분자는 항원 결합 도메인 및 1 차 세포 내 신호 전달 도메인(예를 들어, CD3 제타)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 하나 이상의 항 BCMA 결합 분자를 발현하도록 조작된 세포 및/또는 상이한 항원을 표적화하는 추가의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 본 명세서에, 예를 들어 섹션 I.C.에 기재된 세포 또는 다수의 세포 중 어느 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 상이한 에피토프 및/또는 항원, 예를 들어 질병 또는 병태와 관련된 상이한 항원을 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 다발성 골수종에서 발현되는 제 2 또는 추가 항원, 예를 들어 CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5를 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항 종양 면역 반응, 예를 들어 투여된 조작된 세포로부터의 항 종양 면역 반응을 예컨대 면역 억제 신호 전달을 억제하거나 면역 자극 신호 전달을 강화함으로써 자극, 증폭 및/또는 달리 강화할 수 있는 면역 조절제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 펩티드, 단백질이거나 소분자이다. 일부 구현예에서, 단백질은 융합 단백질 또는 재조합 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 세포, 예컨대 T 세포, B 세포 또는 항원-제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 수용체와 같은 면역학적 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 융합 단백질, 소분자 또는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 단클론성 항체인 추가 제제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 체크포인트 경로의 성분을 차단, 억제 또는 방해한다. 면역계는 자기-내성을 유지하고 면역 반응을 조절하는데 관여하는 다수의 억제 경로를 갖는다. 종양은 특히 종양 항원에 특이적인 T 세포(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12 : 252-264), 예를 들어 CAR 발현 세포와 같은 조작된 세포에 대한 면역 저항의 주요 메커니즘으로 특정 면역 체크포인트 경로를 사용할 수 있다. 많은 상기 면역 체크포인트는 리간드-수용체 상호 작용에 의해 개시되기 때문에, 리간드 및/또는 이들의 수용체에 대한 항체에 의해 쉽게 차단될 수 있다.
따라서, 소분자, 핵산 억제제(예를 들어, RNAi) 또는 항체 분자와 같은 면역 체크포인트 경로를 차단하는 길항 분자에 의한 요법은 암 및 다른 질병에 대한 면역 요법의 유망한 수단이 되고있다. 대다수의 항암제와 대조적으로, 체크포인트 억제제는 반드시 종양 세포를 직접 표적화하는 것이 아니라 면역계의 내인성 항 종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 이의 리간드를 표적화한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "면역 체크 포인트 억제제(immune checkpoint inhibitor)"는 하나 이상의 체크포인트 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 체크포인트 단백질은 T 세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 상기 단백질은 T 세포 반응의 공자극 또는 억제 상호 작용을 담당한다. 면역 체크포인트 단백질은 자기 내성 및 생리적 면역 반응의 지속 시간 및 진폭을 조절하고 유지한다. 일부 구현예에서, 대상체는 본 명세서에 기재된 임의의 것과 같은 질병 또는 병태, 예를 들어 암에 대해, 면역 반응, 예를 들어 본 명세서에 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 의해 영향을 받는 면역 반응을 향상시키거나 증진시킬 수 있는 추가 작용제를 투여받을 수 있다.
면역 체크포인트 억제제는 면역계의 억제 경로를 통계적으로 유의한 방식으로 차단 또는 억제하는 임의의 제제를 포함한다. 상기 억제제는 면역 체크 포인트 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하고 차단하거나 억제하는 소분자 억제제를 포함할 수 있거나, 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극은 면역 체크포인트 경로 성분을 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극을 표적화할 수 있는 예시적인 면역 체크포인트 분자는 PD-1(CD279), PD-L1(CD274, B7-H1), PDL2(CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3(CD223), TIM-3, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GITR(TNFRSF18, AITR), CD40, OX40(CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원(tumor associated antigens, TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4(CD2 분자 패밀리에 속하며 모든 NK, 宸 및 메모리 CD8+(飡) T 세포에서 발현), CD160(또한 BY55로 지칭), CGEN-15049, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), HVEM(TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신 및 형질 전환 성장 인자 수용체(transforming growth factor receptor, TGFR; 예를 들어, TGFR 베타)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 면역 체크포인트 억제제는 임의의 상기 분자 중 하나 이상의 활성에 결합하고 차단 또는 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 다른 결합 단백질을 포함한다.
예시적인 면역 체크포인트 억제제는 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체 또한 티실리무맙, CP-675,206으로 공지), 항 OX40, PD-L1 단클론성 항체(Anti-B7-H1; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항 PD-1 항체), CT-011(항 PD-1 항체), BY55 단클론성 항체, AMP224(항 PD-L1 항체), BMS-936559(항 PD-L1 항체), MPLDL3280A(항 PD-L1 항체), MSB0010718C(항 PD-L1 항체) 및 이필리무맙(항 CTLA-4 항체, Yervoy, MDX-010 및 MDX-101로도 공지)을 포함한다. 예시적인 면역 조절 항체에는 다클리주맙(Zenapax), 베바시주맙(Avastin), 바실리시맙(Basiliximab), 이필리무맙(Ipilimumab), 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), MPDL3280A, 피딜리주맙(CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A(아테졸리주맙(Atezolizumab)), 트레멜리무맙(tremelimumab), IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙(urelumab), PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C(아벨루맙(Avelumab)), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙(Ulocuplumab), BKT140, 발리루맙(CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 릴리루맙(BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙(Emactuzumab), CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 다른 예시적인 면역조절제에는, 예를 들어, 아푸투주맙(Roche로부터 이용 가능); 페그필그라스팀(Neulasta); 레날리도마이드(CC-5013, Revlimid); 탈리도마이드(Thalomid), 액티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터루킨 1, 인터루킨 2 및 인터페론 감마, IRX Therapeutics으로부터 이용 가능한 CAS 951209-71-5를 포함하는 인간 사이토카인 혼합물)이 포함된다.
프로그램된 세포 사멸 1(Programmed cell death 1, PD-1)은 B 세포, NK 세포 및 T 세포에서 발현되는 면역 체크포인트 단백질이다(Shinohara et al., 1995, Genomics 23:704-6; Blank et al., 2007, Cancer Immunol Immunother 56:739-45; Finger et al., 1997, Gene 197:177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). PD-1의 주요 역할은 감염에 대한 반응으로 염증 동안 말초 조직에서 T 세포의 활성을 제한하는 것뿐만 아니라 자가 면역을 제한하는 것이다. PD-1 발현은 활성화된 T 세포에서 유도되고, 내인성 리간드 중 하나에 PD-1의 결합은 자극성 키나아제를 억제함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 또한 TCR "정지 신호(stop signal)"를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 Treg 세포 상에서 고도로 발현되고 리간드의 존재 하에서 이의 증식을 증가시킬 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항 PD 1 항체는 흑색종, 비-소세포 폐암, 방광암, 전립선암, 결장 직장암, 두경부암, 삼중-음성 유방암, 백혈병, 림프종 및 신장 세포암의 치료에 사용되어 왔다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Lipson et al., 2013, Clin Cancer Res 19:462-8; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:3044-51; Gildener-Leapman et al., 2013, Oral Oncol 49:1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85). 예시적인 항 PD-1 항체는 니볼루맙(Opdivo by BMS), 펨브롤리주맙(Keytruda by Merck), 피딜리주맙(CT-011 by Cure Tech), 램브롤리주맙(MK-3475 by Merck) 및 AMP-224(Merck)를 포함하고, 니볼루맙(Opdivo, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭; Bristol-Myers Squibb)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론성 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론성 항체는 문헌[미국 특허 US 8,008,449 및 국제 출원 WO2006/121168]에 기재되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 단클론성 항체이다. 피딜리주맙(Pidilizumab) 및 다른 인간화된 항 PD-1 단클론성 항체는 국제 출원 WO2009/101611에 기재되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로 공지되었고, 키트루다(Keytruda), MK03475; Merck로도 지칭)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 단클론성 항체이다. 펨브롤리주맙(Pembrolizumab) 및 다른 인간화된 항 PD-1 항체는 문헌[미국 특허 US 8,354,509 및 국제 출원 WO2009/114335]에 기재되어 있다. 다른 항 PD-1 항체는 다른 것들 예를 들어 문헌[미국 특허 US 8,609,089, US 2010028330, US 20120114649 및/또는 US 20150210769]에 기재된 항 PD-1 항체들 중에서 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/027827 및 WO2011/066342]에 기재)는 PD-1과 B7-H1 사이의 상호 작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
PD-L1(CD274 및 B7-H1로도 공지) 및 PD-L2(CD273 및 B7-DC로도 공지)는 활성화된 T 세포, B 세포, 골수성 세포, 대식세포 및 일부 유형의 종양 세포에서 발견되는 PD-1에 대한 리간드이다. 항 종양 요법은 항 PD-L1 항체에 중점을 두었다. PD-1 및 PD-L1의 복합체는 CD8+ T 세포의 증식을 억제하고 면역 반응을 감소시킨다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65). 항 PD-L1 항체는 비-소세포 폐암, 흑색종, 결장암(colorectal cancer), 신장 세포암, 췌장암, 위암, 난소암, 유방암 및 혈액암의 치료에 사용되어 왔다(Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300-9; Radvanyi et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:13044-51). 예시적인 항 PD-L1 항체에는 MDX-1105(Medarex), MEDI4736(Medimmune) MPDL3280A(Genentech), BMS-935559(Bristol-Myers Squibb) 및 MSB0010718C가 포함된다. MEDI4736(Medimmune)은 PD-L1에 결합하고 PD-1과 리간드의 상호 작용을 억제하는 인간 단클론성 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화 IgG1 단클론성 항체이다. MDPL3280A 및 PD-L1에 대한 다른 인간 단클론성 항체는 문헌[미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 공개 번호 20120039906]에 기재되어 있다. 다른 항 PD-L1 결합제는 YW243.55.S70(국제 출원 WO2010/077634 참조) 및 MDX-1105(BMS-936559 및 예를 들어 문헌[국제 출원 WO2007/005874]에 기재된 항 PD-L1 결합제로도 지칭)를 포함한다.
CD152로도 공지된 세포 독성 T-림프구 관련 항원(Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen, CTLA-4)은 T 세포 활성화를 조절하는 기능을 하는 공동 억제 분자이다. CTLA-4는 T 세포에서만 발현되는 면역글로불린 슈퍼패밀리(superfamily)의 멤버이다. CTLA-4는 T 세포 활성화를 억제하는 역할을 하며, 헬퍼 T 세포 활성을 억제하고 조절 T 세포 면역 억제 활성을 향상시키는 것으로 보고되어 있다. CTLA-4의 정확한 작용 기전은 여전히 연구 중이지만, CD80 및 CD86에 결합하는데 CD28을 능가하고 T 세포에 억제제 신호를 능동적으로 전달함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 것으로 제안되었다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항 CTLA-4 항체는 흑색종, 전립선암, 소 세포 폐암, 비-소 세포 폐암의 치료를 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다(Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14:848-61; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300; Weber, 2007, Oncologist 12:864-72; Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89). 항 CTLA-4의 중요한 특징은 항 종양 효과의 동역학으로, 생리적 반응에 필요한 초기 치료 후 최대 6개월의 지연 기간이 있다. 어떤 경우에는, 치료 시작 후 감소가 보이기 전에 종양 크기가 실제로 증가할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 예시적인 항 CTLA-4 항체는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer)을 포함한다. 이필리무맙은 최근 전이성 흑색종 치료에 대한 FDA 승인을 받았다(Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89).
CD223으로도 공지된 림프구 활성화 유전자-3(Lymphocyte activation gene-3, LAG-3)은 또 다른 면역 체크포인트 단백질이다. LAG-3은 림프구 활성의 억제 및 일부 경우에 림프구 면역성 결여(anergy)의 유도와 관련이 있다. LAG-3은 B 세포, NK 세포 및 수지상 세포(dendritic cell)를 포함한 면역계의 다양한 세포에서 발현된다. LAG-3은 MHC 클래스 II 수용체에 대한 천연 리간드이며, 이는 강력한 면역 억제 활성이 부여된 세포를 포함하여 흑색종 침윤성 T 세포에서 실질적으로 발현된다. 예시적인 항 LAG-3 항체는 LAG-3을 표적화하는 단클론성 항체인 BMS-986016(Bristol-Myers Squib)을 포함한다. IMP701(Immutep)은 길항제 LAG-3 항체이고 IMP731(Immutep 및 GlaxoSmithKline)은 고갈된 LAG-3 항체이다. 다른 LAG-3 억제제는 MHC 클래스 II 분자에 결합하고 항원 제시 세포(APC)를 활성화시키는 LAG-3 및 Ig의 가용성 부분의 재조합 융합 단백질인 IMP321(Immutep)을 포함한다. 다른 항체는 예를 들어 문헌[국제 출원 WO2010/019570 및 미국 출원 US2015/0259420]에 기재되어 있다.
활성화된 Th1 세포에서 초기에 확인된 T 세포 면역글로불린 도메인(T-cell immunoglobulin domain) 및 뮤신 도메인-3(TIM-3)은 면역 반응의 음성 조절자인 것으로 밝혀졌다. TIM-3의 봉쇄는 T 세포 매개 항 종양 면역을 촉진하고 다양한 마우스 종양 모델에서 항 종양 활성을 갖는다. TIM-3 봉쇄와 다른 면역 치료제, 예컨대 TSR-042, 항 CD137 항체 및 기타의 조합물은 항 종양 효과를 증가시키는데 부가적이거나 상승적일 수 있다. TIM-3 발현은 흑색종, NSCLC 및 신장암을 포함하는 다수의 상이한 종양 유형과 관련이 있으며, 또한 종양 내 TIM-3의 발현은 NSCLC, 자궁 경부암 및 위암을 포함하는 다양한 종양 유형에 걸친 나쁜 예후와 상관 관계가 있는 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 또한, 다수의 만성 바이러스성 질병에 대한 면역 증가를 촉진시키는데 관심이 있다. TIM-3은 또한 갈렉틴-9(galectin-9), 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 및 HMGB1을 포함하는 다수의 리간드와 상호 작용하는 것으로 나타났지만, 이들 중 어느 것이(있다 하더라도) 항 종양 반응의 조절과 관련이 있는지는 현재 명확하지 않다. 일부 구현예에서, TIM-3을 표적화하는 항체, 항체 단편, 소분자 또는 펩티드 억제제는 TIM-3의 IgV 도메인에 결합하여 이의 리간드와의 상호 작용을 억제할 수 있다. TIM-3을 억제하는 예시적인 항체 및 펩티드는 문헌[미국 출원 US 2015/0218274, 국제 출원 WO2013/006490 및 미국 출원 US 2010/0247521]에 기재되어 있다. 다른 항 TIM-3 항체는 인간화된 버전의 RMT3-23(Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) 및 클론 8B.2C12(Monney et al., 2002, Nature, 415:536-541)를 포함한다. TIM-3 및 PD-1을 억제하는 이중 특이적 항체는 문헌[미국 출원 US 2013/0156774]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CEACAM 억제제(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5 억제제)이다. 일부 구현예에서, CEACAM의 억제제는 항 CEACAM 항체 분자이다. 예시적인 항 CEACAM-1 항체, 예를 들어 단클론성 항체 34B1, 26H7 및 5F4는 문헌[국제 출원 WO 2010/125571, WO 2013/082366, WO 2014/059251 및 WO 2014/022332]에 기재되어 있으며; 또는 이의 재조합 형태는 예를 들어 문헌[미국 출원 US 2004/0047858, US 7,132,255 및 국제 출원 WO 99/052552]에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항 CEACAM 항체는, 예를 들어 문헌[Zheng et al. PLoS One. (2011) 6(6): e21146]에 기재된 바와 같이 CEACAM-5에 결합하거나, 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2013/054331 및 미국 출원 US 2014/0271618]에 기재된 바와 같이 CEACAM-1 및 CEACAM-5와 교차 반응한다.
CD137로도 공지된 4-1BB는 TNFR 슈퍼패밀리에 속하는 막관통 당단백질이다. 4-1BB 수용체는 활성화된 T 세포 및 B 세포 및 단핵구 상에 존재한다. 예시적인 항 4-1BB 항체는 잠재적 면역자극 및 항종양제 활성을 갖는 우렐루맙(BMS-663513)이다.
OX40 및 CD134로도 공지된 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리, 멤버 4(TNFRSF4)는 TNFR 슈퍼패밀리의 다른 멤버이다. OX40은 휴지기 나이브 T 세포(naive T cell)에서 구성적으로 발현되지 않으며, 2 차 공자극 면역 체크포인트 분자로서 작용한다. 예시적인 항 OX40 항체는 MEDI6469 및 MOXR0916(RG7888, Genentech)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 조절 T 세포(Treg) 집단을 감소시키는 분자를 포함한다. Treg 세포의 수를 감소(예를 들어 고갈)시키는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 CD25 고갈, 시클로포스파미드 투여 및 글루코코르티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-induced TNFR family related gene, GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역계를 강화시키는 활성화된 T 세포에서 상향 조절되는 TNFR 슈퍼패밀리의 멤버이다. 성분 채집 전 또는 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에, 대상체에서 Treg 세포의 수를 감소시키는 것은, 종양 미세 환경에서 원치 않는 면역 세포(예를 들어, Treg)의 수를 감소시키고, 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제 및/또는 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 GITR 항체와 같은, GITR을 표적화하고/거나 GITR 기능을 조절하는 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 작용제는 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능 조절 분자(예를 들어, GITR 작용제 및/또는 GITR 항체 고갈 Treg)는 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제는 세포의 성분 채집 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드(cyclophosphamide)는 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재 주입) 전 또는 세포의 성분 채집 전에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드 및 항 GITR 항체는 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전에 또는 세포의 성분 채집 전에 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 작용제는 GITR 작용제이다. 예시적인 GITR 작용제는 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항 GITR 항체(예를 들어, 2가 항 GITR 항체), 예를 들어 문헌[미국특허 번호 6,111,090, 유럽 특허번호 090505B 1, 미국특허 번호 8,586,023, PCT 공개번호 WO 2010/003118 및 2011/090754]에 기재된 GITR 융합 단백질 또는 예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 7,025,962, 유럽특허 번호 1947183B 1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국특허 번호 8,388,967, 미국특허 번호 8,591,886, 유럽특허 번호 EP1866339, PCT 공개번호 WO 2011/028683, PCT 공개번호 WO 2013/039954, PCT 공개번호 WO2005/007190, PCT 공개번호 WO 2007/133822, PCT 공개번호 WO2005/055808, PCT 공개번호 WO 99/40196, PCT 공개번호 WO 2001/03720, PCT 공개번호 WO99/20758, PCT 공개번호 WO2006/083289, PCT 공개번호 WO 2005/115451, 미국특허 번호 7,618,632 및 PCT 공개번호 WO 2011/051726]에 기재된 항-GITR 항체를 포함한다. 예시적인 항 GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 종양 침윤 또는 이동(transmigration)을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD40, 예컨대 CD40L, 예를 들어 재조합 인간 CD40L을 자극한다. 분화 클러스터 40(CD40)은 또한 TNFR 슈퍼패밀리의 멤버이다. CD40은 항원-제시 세포에서 발견되는 공자극 단백질이며 광범위한 면역 및 염증 반응을 매개한다. CD40은 또한 일부 악성 종양에서 발현되어 증식을 촉진한다. 예시적인 항 CD40 항체는 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(Novartis, 길항제), SEA-CD40(Seattle Genetics) 및 CP-870,893이다. 일부 구현예에서, 종양 침윤을 향상시키는 추가 작용제는 티로신 키나제 억제제, 수니티닙(sunitnib), 헤파라나제(heparanase) 및/또는 케모카인 수용체, 예컨대 CCR2, CCR4 및 CCR7을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 작용제는 탈리도마이드 약물 또는 이의 유사체 및/또는 이의 유도체, 예컨대 레날리도마이드, 포말리도마이드(pomalidomide) 또는 아프레밀라스트(apremilast)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Bertilaccio et al., Blood (2013) 122:4171, Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940; Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644 및 Kuramitsu et al., Cancer Gene Therapy (2015) 22:487-495]을 참조한다. 레날리도마이드((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온; 레블리미드(Revlimid)로도 공지)는 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 시행을 포함하여 다수의 면역 조절 효과를 갖는다. 예를 들어, 일부 경우에, 레날리도마이드는 T 세포 반응을 조절하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 인터루킨(IL)-2 생성의 증가를 초래하고, Th2에서 Th1으로 T 헬퍼(Th) 반응의 변경을 유도하고, T 세포(Treg)의 조절 서브세트의 증폭을 억제하고, 여포성 림프종 및 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL)에서 면역 시냅스의 기능을 향상시킨다(Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). 레날리도마이드는 또한, 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 환자에서 직접적인 종양 살상 활성을 가지며, 림프 조직의 미세 환경에서 발견되는 간호사-유사 세포(nurse-like cell)와 같은 지지 세포에 영향을 미침으로써 CLL 종양 세포의 생존을 직접 및 간접적으로 조절한다. 레날리도마이드는 또한 CD3 라이게이션 또는 수지상 세포-매개 활성화를 통한 T 세포의 활성화에 반응하여 T 세포 증식 및 인터페론- 생산을 향상시킬 수 있다. 레날리도마이드는 또한, 악성 B 세포가 CD80, CD86, HLA-DR, CD95 및 CD40과 같은 더 높은 수준의 면역 자극 분자를 발현하도록 유도할 수 있다(Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644). 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 1 mg 내지 약 20 mg, 예를 들어, 약 1 mg 내지 약 10 mg, 약 2.5 mg 내지 약 7.5 mg, 약 5 mg 내지 약 15 mg, 예컨대 약 5 mg, 10 mg, 15 mg 또는 20 mg의 투여량으로 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 10 g/kg 내지 5 mg/kg, 예를 들어, 약 100 g/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 200 g/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 400 g/kg 내지 약 600 g/kg, 예컨대 약 500 g/kg의 단위 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 리툭시맙(rituximab)은 약 350-550 mg/m2(예를 들어, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 또는 475-500 mg/m2)의 투여량으로, 예를 들어 정맥 내 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 낮은 단위 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1의 억제제 또는 이들의 조합물 중에서 선택된 하나 이상의 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, B 세포 억제제는 항체(예를 들어, 단일- 또는 이중 특이적 항체) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B 세포 표적, 예를 들어 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1을 표적으로 하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD20 억제제, 예를 들어 항 CD20 항체(예를 들어, 항 CD20 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항 CD20 항체는 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), 옥렐리주맙(ocrelizumab) (GA101 또는 RO5072759로도 공지), 벨투주맙(veltuzumab), 오비누투주맙(obinutuzumab), TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals), 옥카라투주맙(ocaratuzumab)(AME-133v 또는 옥카라투주맙으로도 공지) 및 Pro131921(Genentech)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Lim et al. Haematologica. (2010) 95(1):135-43]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항 CD20 항체는 리툭시맙을 포함한다. 리툭시맙은 CD20에 결합하고 CD20 발현 세포의 세포 용해를 유발하는 키메라 마우스/인간 단클론성 항체 IgG1 카파이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20 억제제는 소분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD22 억제제, 예를 들어 항 CD22 항체(예를 들어, 항 CD22 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항 CD22 항체는 에프라투주맙(epratuzumab) 및 RFB4를 포함한다. 일부 구현예에서, CD22 억제제는 소분자이다. 일부 구현예에서, 항체는 선택적으로 화학 요법제와 같은 제 2 제제에 접합된 단일 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 항 CD22 단클론성 항체-MMAE 접합체(예를 들어, DCDT2980S)이다. 일부 구현예에서, 항체는 항 CD22 항체의 scFv, 예를 들어 항체 RFB4의 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(Pseudomonas exotoxin-A)(예를 들어, BL22)의 전부 또는 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, 목세투모맙 파수도톡스(moxetumomab pasudotox))의 전부 또는 단편(예를 들어, 38 kDa 단편)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항 CD22 항체는 선택적으로 독소에 접합된, 항 CD19/CD22 이중 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항 CD22 항체는 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)의 전부 또는 일부, 예를 들어, 디프테리아 독소(DT)의 처음 389 아미노산, DT 390, 예를 들어 리간드-지향 독소(ligand-directed toxin), 예컨대 DT2219ARL에 선택적으로 연결된 항 CD19/CD22 이중 특이적 부분(예를 들어, 인간 CD19 및 CD22를 인식하는 2개의 scFv 리간드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 부분(예를 들어, 항 CD 19/항 CD22)은 독소, 예컨대 탈당화된 리신 A 사슬(예를 들어, 콤보톡스)에 연결된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이거나 종양 미세 환경에서 사이토카인의 발현 증가를 유도하는 제제이다. 사이토카인은 T 세포 증폭, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 갖는다. 본 명세서에 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물을 받는 대상체에게 투여될 수 있는 사이토카인은 하나 이상의 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-18 및 IL-21을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여된 사이토카인은 IL-7, IL-15 또는 IL-21 또는 이들의 조합물이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여에 대해 차선적 반응을 갖는 대상체에 사이토카인의 투여는 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 효능 및/또는 항-종양 활성을 개선시킨다.
"사이토카인(cytokine)"은 세포 간 매개체로서 다른 세포에 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질에 대한 일반적인 용어를 의미한다. 상기 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬(bovine growth hormone);부갑상선 호르몬(parathyroid hormone); 티록신(thyroxine); 인슐린; 프로인슐린(proinsulin); 렐락신(relaxin); 프로렐락신(prorelaxin); 당 단백질 호르몬(glycoprotein hormones), 예컨대 여포 자극 호르몬(follicle stimulating hormone, FSH), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone, TSH) 및 황체 형성 호르몬(luteinizing hormone, LH); 간 성장 인자(hepatic growth factor); 섬유 아세포 성장 인자(fibroblast growth factor); 프로락틴(prolactin); 태반 락토겐(placental lactogen); 종양 괴사 인자-알파 및 -베타(tumor necrosis factor-alpha and -beta); 뮬러리아 억제 물질(mullerian-inhibiting substance); 마우스 성선 자극 호르몬 관련 펩티드(mouse gonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관 내피 성장 인자; 인테그린(integrin); 트롬보포이에틴(thrombopoietin, TPO); 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-베타; 혈소판 성장 인자; TGF-알파 및 TGF-베타와 같은 형질 전환 성장 인자(transforming growth factor, TGF); 인슐린 유사 성장 인자 -I 및 -II; 에리스로포이에틴(erythropoietin, EPO); 골 유도 인자(osteoinductive factor); 인터페론-알파, 베타 및 -감마와 같은 인터페론; 대식세포-CSF(M-CSF)와 같은 콜로니 자극 인자(colony stimulating factor, CSF); 과립구-대식세포-CSF(GM-CSF); 과립구-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예컨대 IL-1, IL-1 알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양 괴사 인자인 IL-15; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand, KL)를 포함하는 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질 및 천연(native) 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 예를 들어, 면역 조절제는 사이토카인이고 사이토카인은 IL-4, TNF-, GM-CSF 또는 IL-2이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 인터루킨-15(IL-15) 폴리펩티드, 인터루킨-15 수용체 알파(IL-15R) 폴리펩티드 또는 이들의 조합물, 예를 들어 hetIL-15(Admune Therapeutics, LLC)를 포함한다. hetIL-15는 IL-15 및 IL-15R의 헤테로다이머(heterodimeric) 비공유 복합체이다. HetIL-15는 예를 들어, 문헌[미국 출원 U.S. 8,124,084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 및 U.S. 2011/0081311]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 하나 이상의 사이토카인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 인터루킨은 천연 사이토카인의 조합인 백혈구 인터루킨 주사(Multikine)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 톨-유사 수용체(Toll-like receptor, TLR) 작용제, 보조제 또는 사이토카인이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법과 관련된 하나 이상의 독성 또는 부작용을 개선 또는 중화시키는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), TNF 억제제 및 IL-6의 억제제 중에서 선택된다. TNF 억제제의 예는 항 TNF 항체 분자, 예컨대 인플릭시맙(infliximab), 아달리무맙(adalimumab), 세르톨리주맙 페골(certolizumab pegol) 및 골리무맙(golimumab)이다. TNF 억제제의 다른 예는 엔타네르셉트(entanercept)와 같은 융합 단백질이다. TNF의 소분자 억제제는 잔틴(xanthine) 유도체(예를 들어, 펜톡시필린(pentoxifylline)) 및 부프로피온(bupropion)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. IL-6 억제제의 예는 항 IL-6 항체 분자, 예컨대 토실리주맙(tocilizumab), 사릴루맙(sarilumab), 엘실리모맙(elsilimomab), CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI-2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 및 FM101이다. 일부 구현예에서, 항 IL-6 항체 분자는 토실리주맙(tocilizumab)이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아나킨라(anakinra)와 같은 IL-1R 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수준 및/또는 아데노신 경로 성분의 조절제이다. 아데노신은 신체에서 면역 조절제로서 기능할 수 있다. 예를 들어, 아데노신 수용체 하위 유형(subtypes)을 비 선택적으로 활성화시키는 아데노신 및 일부 아데노신 유사체는 염증성 산화 생성물의 호중구 생성을 감소시킨다(Cronstein et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier et al., J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). 일부 경우에, 세포 외 아데노신 또는 아데노신 유사체의 농도는 특정 환경, 예를 들어, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 증가할 수 있다. 일부 경우에, 아데노신 또는 아데노신 유사체 신호 전달은 저산소증(hypoxia) 또는 저산소증과 관련된 인자 또는 이의 조절, 예를 들어 저산소증 유도성 인자(hypoxia inducible factor, HIF)에 의존한다. 일부 구현예에서, 아데노신 신호 전달의 증가는 세포 내 cAMP 및 cAMP-의존성 단백질 키나아제를 증가시켜, 전-염증성 사이토카인 생성의 억제를 초래할 수 있고, 면역 억제 분자의 합성 및 Treg의 발달로 이어질 수 있다(Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605). 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신, 아데노신 유사체 및/또는 아데노신 신호 전달의 면역 억제 효과를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 구동 A2-아데노신성 T세포(hypoxia-driven A2-adenosinergic T cell) 면역 억제를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체의 길항제, 세포 외 아데노신-분해제, CD39/CD73 엑토엔자임에 의한 아데노신 생성 억제제 및 저산소증-HIF-1 신호 전달 억제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다.
세포 외 아데노신의 억제제(예컨대, 세포 외 아데노신의 형성을 방지, 분해, 불활성화 및/또는 감소시키는 제제) 및/또는 아데노신 수용체 억제제(예컨대 아데노신 수용체 길항제)에 의한 세포 외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제 또는 감소는 대식세포, 호중구, 과립구, 수지상 세포, T- 및/또는 B 세포-매개 반응과 같은 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 더욱이, Gs 단백질 매개 cAMP 의존성 세포 내 경로 억제제 및 아데노신 수용체-유발 Gi 단백질 매개 세포 내 경로 억제제는 또한 급성 및 만성 염증을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제, 예를 들어 하나 이상의 아데노신 수용체 A2a, A2b, A1 및 A3의 길항제 또는 작용제이다. 아데닐레이트 시클라제(adenylate cyclase) 활성을 A1 및 A3은 억제하고, A2a 및 A2b는 각각 자극한다. A2a, A2b 및 A3과 같은 특정 아데노신 수용체는 염증 동안 면역 반응을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 따라서, 길항성 면역억제 아데노신 수용체는 면역 반응, 예를 들어, 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 T 세포로부터의 면역 반응을 증강, 증진 또는 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 외 아데노신 및 아데노신 수용체를 통한 아데노신-유발 신호 전달의 생성을 억제한다. 아데노신 생성 국소 조직 저산소증을 억제 또는 감소시킴으로써; 축적된 세포 외 아데노신을 분해(또는 불활성화)함으로써; 면역 세포에서 아데노신 수용체의 발현을 방해하거나 감소시킴으로써; 및/또는 아데노신 수용체를 통한 아데노신 리간드에 의한 신호 전달을 억제/길항함으로써 면역 반응의 강화, 국소 조직 염증 및 표적화된 조직 파괴가 향상될 수 있다.
길항제는 생물학적 반응을 유발하지 않으면서 세포 수용체에 결합하는 제제로서 다른 것의 작용을 무효화하는 경향이 있는 임의의 물질이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3 수용체에 대한 길항제인 화학적 화합물이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체에 결합하지만 Gi 단백질 의존성 세포 내 경로를 유발하지 않는 펩티드 또는 펩티도미메틱(peptidomimetic)이다. 예시적인 길항제는 문헌[미국 특허 번호 5,565,566; 5,545, 627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 A2a 길항제와 같은 A2 수용체(A2R) 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제는 KW6002(이스트라데필린(istrafyline)), SCH58261, 카페인(caffeine), 파라잔틴(paraxanthine), 3,7-디메틸-1-프로파르길잔틴(DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데난트(preladenant), 비파데난트(vipadenant, BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP 및 A2R 발현을 표적화하는 억제성 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA 또는 A2R을 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 문헌[Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; 미국 출원 US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; 국제 출원 WO2008/147482; 미국 출원 US 8,883,500; US 20140377240; 국제 출원 WO02/055083; 미국 출원 US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279]에 기재된 A2R 길항제이다.
일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체를 암호화하는 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자(예를 들어, 소형 억제성 RNA(small inhibitory RNA, siRNA)) 또는 촉매 핵산 분자(예를 들어 리보자임)이다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산 분자는 A2a, A2b 또는 A3을 암호화하는 핵산에 결합한다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산은 아데노신 수용체의 생화학적 경로 하류를 표적화한다. 예를 들어, 안티센스 분자 또는 촉매 핵산은 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포 내 경로에 관여하는 효소를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3의 우세한 음성 돌연변이 형태를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 외 아데노신을 억제하는 추가 제제는 세포 외 아데노신을 비기능성으로 만드는(또는 상기 기능을 감소시키는) 제제, 예컨대, 아데노신의 구조를 변형시켜 아데노신 수용체를 통해 신호 전달하는 아데노신의 능력을 억제하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 외 아데노신 생성 또는 아데노신 분해 효소, 이의 변형된 형태 또는 이의 조절제이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신에 선택적으로 결합하고 파괴하여, 내생적으로 형성된 아데노신의 아데노신 수용체를 통한 신호 전달 및 염증을 종결시키는 능력을 폐지 또는 현저히 감소시키는 효소(예를 들어, 아데노신 디아미나제) 또는 다른 촉매 분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 디아미나제(ADA) 또는 이의 변형된 형태, 예를 들어 재조합 ADA 및/또는 폴리에틸렌 글리콜-변형 ADA(ADA-PEG)이며, 이는 세포 외 아데노신의 국소 조직 축적을 억제할 수 있다. ADA-PEG는 ADA SCID 환자의 치료에 사용되었다(Hershfield (1995) Hum Mutat. 5:107). 일부 구현예에서, 세포 외 아데노신을 억제하는 제제는 세포 외 아데노신의 형성을 방지 또는 감소시키고/거나 세포 외 아데노신의 축적을 방지 또는 감소시켜 아데노신의 면역 억제 효과를 없애거나 실질적으로 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵 전사 인자의 조절제를 포함하는 전-염증성 분자의 합성 및/또는 분비 조절에 관여하는 효소 및 단백질을 특이적으로 억제한다. 아데노신 수용체 발현 또는 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포 내 경로 또는 cAMP-의존성 세포 내 경로 발현의 억제는 면역 반응의 증가/향상을 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 외 아데노신을 생성 또는 생산하는 엑토엔자임(ectoenzymes)을 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 외 아데노신을 생성하기 위해 협력하여 기능하는 CD39 및 CD73 엑토엔자임을 표적화한다. CD39(엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라제로도 명명)는 세포 외 ATP(또는 ADP)를 5'AMP로 전환시킨다. 이어서, CD73(5' 뉴클레오티다제로도 명명)은 5'A境를 아데노신으로 전환시킨다. CD39의 활성은 NDP 키나아제 및 아데닐레이트 키나아제의 작용에 의해 가역적이지만, CD73의 활성은 비가역적이다. CD39 및 CD73은 내피 세포 및 Treg를 포함하는 종양 간질 세포(tumor stromal cell) 및 다수의 암 세포에서도 발현된다. 예를 들어, 내피 세포에서의 CD39 및 CD73의 발현은 종양 미세 환경의 저산소 조건 하에서 증가된다. 종양 저산소증은 산소 전달을 약화시키는 불충분한 혈액 공급 및 조직화되지 않은 종양 혈관 구조를 초래할 수 있다(Carroll and Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7(6):1-16). 저산소증은 또한 아데노신을 AMP로 전환시키는 아데닐레이트 키나제(adenylate kinase, AK)를 억제하여 매우 높은 세포 외 아데노신 농도를 야기한다. 따라서, 아데노신은 고형 종양에서 또는 주위에서 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 빈번하게 발생시키는 상태인 저산소증에 반응하여 고농도로 방출된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 하나 이상의 항 CD39 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항 CD73 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 MEDI9447 또는 TY/23, α-β-메틸렌-아데노신 디포스페이트(ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52이다(예를 들어, Allard et al. Clin Cancer Res (2013) 19(20):5626-5635; Hausler et al., Am J Transl Res (2014) 6(2):129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70(16):6407-6411를 참조한다).
일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도성 인자 1 알파(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1) 신호 전달의 억제제이다. HIF-1의 예시적인 억제제는 디곡신(digoxin), 아크리플라빈(acriflavine), 시르투인-7(sirtuin-7) 및 가네테스핍(ganetespib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 티로신 포스파타제 억제제, 예를 들어 본 명세서에 기재된 단백질 티로신 포스파타제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타제 억제제는 SHP-1 억제제, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 SHP-1 억제제, 예컨대 나트륨 스티보글루코네이트(sodium stibogluconate)이다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타제 억제제는 SHP-2 억제제, 예를 들어 본 명세서에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제이다. CDK4 키나아제 억제제, BTK 키나아제 억제제, MNK 키나아제 억제제 또는 DGK 키나아제 억제제와 같은 키나아제 억제제는 종양 세포에 존재하는 구성적인 활성 생존 경로를 조절하고/거나 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 브루톤 티로신 키나아제(Bruton's tyrosine kinase, BTK) 억제제, 예를 들어 이브루티닙(ibrutinib)이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나아제(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase, PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 CDK4 억제제, 예를 들어 CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 mTOR 억제제, 예컨대 라파마이신, 라파마이신 유사체, OSI-027이다. mTOR 억제제는 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 MNK 억제제 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 다른 예시적인 키나아제 억제제는 AKT 억제제 페리포신(perifosine), mTOR 억제제 템시롤리무스(temsirolimus), Src 키나아제 억제제 다사티닙(dasatinib) 및 포스타마티닙(fostamatinib), JAK2 억제제 파크리티닙(pacritinib) 및 룩솔리티닙(ruxolitinib), PKC억제제 엔자스타우린(enzastaurin) 및 브리오스타틴(bryostatin) 및 AAK 억제제 알리세르팁(alisertib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 이브루티닙(PCI-32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13으로부터 선택된 BTK억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터루킨-2-유도성 키나아제(interleukin-2-inducible kinase, ITK)의 키나아제 활성을 감소시키거나 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로프-2-엔-1-온; PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(PCI-32765)이고, 이브루티닙은 시간의 어떤 기간 동안 매일, 예를 들어 21일 주기 동안 매일 또는 28일 주기 동안 매일, 약 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 420 mg, 440 mg, 460 mg, 480 mg, 500 mg, 520 mg, 540 mg, 560 mg, 580 mg, 600 mg(예를 들어, 250 mg, 420 mg 또는 560 mg)의 단위 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 이상의 주기로 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 문헌[국제 출원 WO 2015/079417]에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십(idelalisib, PI3K 억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 라파마이신(mTOR)의 포유류 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 템시롤리무스(temsirolimus); 리다포롤리무스(ridaforolimus, AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버롤리무스(everolimus, RAD001); 라파마이신(AY22989); 시마피모드(simapimod); AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765로부터 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib) 및 트라메티닙(trametinib)과 같은 미토겐-활성화 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 전- 또는 항-세포사멸적(apoptotic) 단백질을 조절하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B 세포 림프종2(B-cell lymphoma 2, BCL-2) 억제제(예를 들어, ABT-199 또는 GDC-0199로도 명명되는 베네토클락스(venetoclax); 또는 ABT-737)을 포함한다. 베네토클락스는 항-세포사멸적 단백질인 BCL-2를 억제하는, 소분자(4-(4-{[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸-1-사이클로헥센-1-일]메틸} -1-피페라지닐)-N-({3-니트로-4-[(테트라하이드로-2H-피란-4-일메틸)아미노]페닐}설포닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일옥시)벤즈아미드)이다. 전- 또는 항-세포사멸적 단백질을 조절하는 다른 제제는 최대 효능을 위한 BCL-2 억제제 ABT-737, 나비토클락스(navitoclax, ABT-263); Mcl-1 siRNA 또는 Mcl-1 억제제 레티노이드 N-(4-히드록시페닐) 레티나미드(4-HPR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 종양 괴사 인자-관련 세포 자멸사 유도 리간드(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)와 같은 전-세포 자멸적 자극을 제공하며, 이는 종양 세포 표면의 TRAIL 사멸 수용체 DR-4 및 DR-5 또는 TRAIL-R2 작용제 항체에 결합함으로써 세포 자멸사 경로를 활성화시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 인돌아민 2,3-디옥시게나제(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO) 억제제를 포함한다. IDO는 아미노산, L-트립토판의 키누레닌(kynurenine)으로의 분해를 촉매하는 효소이다. 예를 들어, 전립선암, 결장암, 췌장암, 자궁 경부암, 위암, 난소암, 두부암 및 폐암과 같은 많은 암은 IDO를 과발현한다. 혈장 세포의 수지상 세포(Plasmacytoid dendritic cell, pDC), 대식세포 및 수지상 세포(DC)는 IDO를 발현할 수 있다. 일부 측면에서, L-트립토판의 감소(예를 들어, IDO에 의해 촉매)는 T 세포 면역성 결여 및 세포 자멸사를 유도함으로써 면역 억제 환경을 초래한다. 따라서, 일부 측면에서, IDO 억제제는 예를 들어, 투여된 CAR 발현 세포의 억제 또는 사멸을 감소시킴으로써 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능을 향상시킬 수 있다. IDO의 예시적인 억제제는 1-메틸-트립토판, 인독시모드(indoximod, New Link Genetics, 예를 들어 Clinical Trial Identifier Nos. NCT01191216; NCT01792050 참조) 및 INCB024360(Incyte Corp., 예를 들어 Clinical Trial Identifier Nos. NCT01604889; NCT01685255 참조)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포독성제, 예를 들어 CPX-351(Celator Pharmaceuticals), 시타라빈(cytarabine), 다우노루비신(daunorubicin), 보사록신(vosaroxin, Sunesis Pharmaceuticals), 사파시타빈(sapacitabine, Cyclacel Pharmaceuticals), 이다루비신(idarubicin) 또는 미톡산트론(mitoxantrone)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저메틸화제(hypomethylating agent), 예를 들어 DNA 메틸트랜스퍼라제(DNA methyltransferase) 억제제, 예를 들어 아자시티딘(azacytidine) 또는 데시타빈(decitabine)을 포함한다.
다른 구현예에서, 추가 요법은 이식, 예를 들어 동종이계(allogeneic) 줄기 세포 이식이다.
일부 구현예에서, 추가 요법은 림프구 고갈 요법(lymphodepleting therapy)이다. 림프구 고갈 화학 요법은 재조합 수용체 발현 세포, 예컨대 CAR T 세포의 활성 및 생착을 개선하는 것으로 여겨진다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 항상성 증식을 통해 생체 내에서 증식하도록 입양적으로 전달된 종양 특이적 T 세포를 강화할 수 있다(Grossman 2004, Stachel 2004). 일부 구현예에서, 화학요법은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 감소 또는 제거할 수 있으며, 이는 종양 표적화 입양으로 전달된 T 세포의 기능을 억제할 수 있다(Turk 2004). 일부 구현예에서, 입양 T 세포 요법에 앞선 림프구 고갈 화학요법은 골수에서 기질 세포 유래 인자 1(stromal cell-derived factor 1, SDF-1)의 발현을 향상시킬 수 있으며, T 세포 표면 상에 발현된 CXCR-4와 SDF-1의 결합을 통해 1차 종양 부위로 변형된 T 세포의 귀소를 강화할 수 있다(Pinthus 2004). 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학요법은 대상체의 종양 부담을 더 감소시키고 잠재적으로 CRS의 위험 및 중증도를 낮출 수 있다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈은 예를 들어, 조작된 세포 예를 들어, CAR 발현 세포를 투여하기 전에 대상체에서 수행된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 멜팔란(melphalan), 사이톡산(Cytoxan), 사이클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전, 동시 또는 투여 후에(예를 들어, 주입) 대상체에 투여된다. 일 예에서, 림프구 고갈 화학요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서 림프구 고갈 화학요법은 조작된 세포를 투여하기 1 내지 10일 전, 예컨대 조작된 세포의 투여 개시 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 전 또는 2일 이상 전, 예컨대 조작된 세포의 투여 개시 3, 4, 5, 6 또는 7일 이상 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체는 조작된 세포의 투여 개시 7일 이내 전, 예컨대 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내 전에 전처리제가 투여된다. 조작된 세포가 투여되는 림프구 고갈 화학요법 후의 날 수는 임상적 또는 수송 환경에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 예에서, 단위 용량 조정 또는 기타 림프구 고갈 화학요법으로의 변경은 치료 의사가 결정한 바와 같이 대상체의 기본 장기 기능과 같은 피험자의 건강으로 인해 구현될 수 있다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학요법은 림프구 고갈제, 예컨대 시클로포스파미드, 플루다라빈 또는 이들의 조합물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에 대상체의 체중 kg 당 (약) 20 mg 내지 (약) 100 mg, 예컨대 (약) 40 mg 내지 (약) 80 mg의 단위 용량으로 시클로포스파미드가 투여된다. 일부 측면에서, 대상체에 약 60 mg/kg의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 매일 1회 투여된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 시클로포스파미드를 포함하는 경우, 대상체에 대상체의 체표면적 m2 당 (약) 100 mg 내지 (약) 500 mg, 예컨대 (약) 200 mg 내지 (약) 400 mg 또는 (약) 250 mg 내지 (약) 350 mg(수치 포함)의 단위 용량으로 시클로포스파미드가 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 약 300 mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 다수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 예컨대 1-5일, 예를 들어 2-4일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 대상체의 체표면적 m2 당 약 300 mg의 사이클로포스파미드가 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체에 대상체의 체표면적 m2 당 (약) 1 mg 내지 (약) 100 mg, 예컨대 (약) 10 mg 내지 (약) 75 mg, (약) 15 mg 내지 (약) 50 mg, (약) 20 mg 내지 (약) 40 mg 또는 (약) 24 mg 내지 (약) 35 mg(수치 포함)의 단위 용량으로 플루다라빈이 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 약 30 mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 다수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예컨대 1-5일, 예를 들어 2-4일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 대상체의 체표면적 m2 당 약 30 mg의 플루다라빈이 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 사이클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합과 같은 제제의 조합물을 포함한다. 따라서, 제제의 조합물은 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 스케줄로 사이클로포스파미드 및 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 스케줄로 플루다라빈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체에 대상체의 체표면적 m2 당 (약) 30 mg의 플루다라빈을 3 일 동안 매일 및 대상체의 체표면적 m2 당 (약) 300 mg의 시클로포스파미드를 3 일 동안 매일 투여한다.
일부 구현예에서, 덱사메타손 또는 다른 스테로이드를 제외한, 구토 방지제 요법은 림프구 고갈 화학요법 이전에 주어질 수 있다. 일부 구현예에서, 메스나(Mesna)는 출혈성 방광염의 병력이 있는 대상체에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 종양 용해 바이러스이다. 일부 구현예에서, 종양 용해 바이러스는 암세포에서 선택적으로 복제하고 암세포의 사멸을 유발하거나 암세포의 성장을 더디게할 수 있다. 일부 경우에, 종양 용해 바이러스는 비-암세포에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 종양 용해성 바이러스는 종양 용해성 아데노바이러스, 종양 용해성 단순 헤르페스 바이러스, 종양 용해성 레트로바이러스, 종양 용해성 파보바이러스, 종양 용해성 백시니아 바이러스, 종양 용해성 신비스(Sinbis) 바이러스, 종양 용해성 인플루엔자 바이러스 또는 종양 용해성 RNA 바이러스(예를 들어 종양 용해성 레오바이러스, 종양 용해성 뉴캐슬 질병 바이러스(Newcastle Disease Virus, NDV), 종양 용해성 홍역 바이러스 또는 종양 용해성 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus, VSV)를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
기타 예시적인 병용 요법, 치료 및 제제(agent)는 항 알레르기성 제제, 항구토제, 진통제 및 부가 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가의 제제는 신경보호제, 자유라디칼 제거제, 심장보호제, 안트라사이클린 삼출 중화제 및 영양소와 같은 세포보호제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제로서 사용되는 항체는 치료제, 예를 들어, 화학 치료제(예를 들어, 사이톡산(Cytoxan), 플루다라빈, 히스톤 디아세틸라제 억제제, 탈메틸화제, 펩티드 백신, 항종양 항생제, 티로신 키나아제 억제제, 알킬화제, 항 미세소관제 또는 항 유사분열제), 항 알레르기제, 항 구역질제(또는 항 구토제), 진통제 또는 본 명세서에 기재된 세포 보호제에 접합되거나 달리 결합된다. 일부 구현예에서, 추가의 제제는 항체 약물 접합체이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 특정 인자를 조절, 억제 또는 자극하여 본 명세서에 제공된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능을 향상시키거나 증진시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA 수준에서 투여된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 내에서 인자를 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제성 핵산, 예를 들어, 억제성 핵산, 예를 들어, dsRNA, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA 또는 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 팔린드롬 반복체(clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR), 전사 활성제 유사 이펙터 뉴클레아제(transcription-activator like effector nuclease, TALEN) 또는 아연 핑거 엔도뉴클레아제(zinc finger endonuclease, ZFN)가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포에서 억제성 분자의 발현을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서 억제제는 shRNA이다. 일부 구현예에서, 억제 분자는 조작된 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포 내에서 억제된다. 일부 구현예에서, 조절 또는 조정, 예를 들어, T 세포 기능을 억제하는 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자를 암호화하는 핵산 분자는 프로모터, 예를 들어, HI- 또는 U6-유래 프로모터와 작동가능하게 연결되어, 억제성 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포 내에서 발현된다. 예를 들어, 문헌[Brummelkamp TR, et al. (2002) Science 296: 550-553; Miyagishi M, et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500]을 참조한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 본 명세서에 기재된 임의의 면역 체크포인트 억제제와 같은 억제성 분자를 암호화하는 유전자를 파괴할 수 있다. 일부 구현예에서, 파괴는 결실, 예를 들어, 전체 유전자, 엑손 또는 영역의 결실 및/또는 외인성 서열로의 대체 및/또는 돌연변이, 예를 들어 유전자 내, 전형적으로 유전자의 엑손 내에서 프레임시프트 또는 미스센스 돌연변이에 의한다. 일부 구현예에서, 파괴는 조기 정지 코돈이 유전자 내로 통합되는 것을 초래하여, 억제 분자가 발현되지 않거나 세포 표면 상에서 발현될 수 있고/거나 세포 신호 전달을 매개할 수 있는 형태로 발현되지 않는다. 파괴는 일반적으로 DNA 수준에서 수행된다. 파괴는 일반적으로 영구적이거나 돌이킬 수 없거나 일시적이지 않다.
일부 측면에서, 파괴는 DNA 결합 단백질 또는 DNA 결합 핵산을 사용하는 것과 같은 유전자 편집에 의해 수행되며, 이는 파괴를 표적화 하는 영역에서 유전자에 특이적으로 결합하거나 혼성화된다. 일부 측면에서, 단백질 또는 핵산은 키메라 또는 융합 단백질에서와 같이 뉴클레아제에 결합되거나 이와 복합체를 형성한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 파괴는 파괴되는 유전자에 특이적인, DNA 표적화 단백질 및 뉴클레아제, 예컨대 아연 핑거 뉴클레아제(ZFN) 또는 TAL 이펙터 뉴클레아제(TALEN) 또는 RNA 가이드 뉴클레아제, 예컨대 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 팔린드롬 핵산(CRISPR)-Cas 시스템, 예컨대 CRISPR-Cas9 시스템을 포함하는 융합을 이용하여 달성된다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포를 생성 또는 생산하는 방법은 유전자 조작된 항원 수용체(예를 들어 CAR)를 암호화하는 핵산 분자 및 억제성 분자에 특이적인 유전자 편집 뉴클레아제, 예컨대 DNA 표적화 단백질과 ZFN 또는 TALEN과 같은 뉴클레아제 또는 CRISPR-Cas9 시스템과 같은 RNA 가이드 뉴클레아제의 융합인 억제성 분자를 표적화하는 제제를 암호화하는 핵산 "응美* 세포 집단으로 도입하는 것을 포함한다.
본 명세서에 기재된 임의의 추가 제제는 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와의 병용 요법, 예컨대 병용 요법 중 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 것을 포함하는 약학 조성물로서 제조 및 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, BCMA 결합 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체), 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포, 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 다수의 조작된 세포는 추가 제제, 요법 또는 치료와 임의의 순서로 동시에, 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 상기 투여는 대상체의 신체에서 각각의 제제를 치료적 유효 수준으로 제공한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 동일한 약학 조성물의 일부로서 또는 동일한 전달 방법을 사용하여 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물과 공투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물과 동시에 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 추가 조작된 세포, 예를 들어 상이한 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포이고 동일한 조성물 또는 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포의 투여 전에 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포와 함께 인큐베이션된다.
일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 투여 전 또는 후속적으로 선택된 기간에 의해 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 기간은 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 1 주, 2 주, 3 주, 1개월, 2개월 또는 3개월이다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 여러 번 투여되고/거나 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은 여러 번 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 전에, 예를 들어 투여 2 주, 12 일, 10 일, 8 일, 1 주일, 6 일, 5 일, 4 일, 3 일, 2 일 또는 1 일 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본 명세서에 기재된 BCMA 결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 후에, 예를 들어 투여 2 주, 12 일, 10 일, 8 일, 1 주일, 6 일, 5 일, 4 일, 3 일, 2 일 또는 1 일 후에 투여된다.
추가 제제의 단위 용량은 임의의 치료적 유효량, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 단위 용량일 수 있고, 추가 제제의 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 투여될 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 유형, 단위 용량 및/또는 빈도, 질병의 중증도 및 경과, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 환자의 임상 이력 및 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 대한 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 및/또는 추가 제제 및/또는 요법은 한 번, 반복해서 환자에게 투여되거나 일련의 치료에 걸쳐 투여될 수 있다.
Ⅵ. 제조 물품 또는 키트
제공된 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 유전자 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 함유하는 제조 물품 또는 키트가 또한 제공된다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 시험관, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 있는 것을 포함하여 정맥내 용액 백, 바이알을 포함한다. 제조 물품 또는 키트는 조성물이 본 명세서에 기재된 병태(예를 들어, 다발성 골수종)와 같은 특정 병태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조 물품 또는 키트는 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 다른 용기 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다.
라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 개체에서 BCMA 발현 또는 BCMA 관련 질병, 장애 또는 병태의 치료에 사용됨을 나타낼 수 있다. 용기 상에 있거나 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물은 제형의 재구성 및/또는 사용에 대한 지시를 나타낼 수 있다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 제형이 개체에서 BCMA 발현 또는 BCMA 관련 질병, 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 피하, 정맥내 또는 다른 투여 방식에 유용하거나 의도된 것임을 추가로 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서 용기는 그 자체 또는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는데 효과적인 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 제조 물품 또는 키트는 (a) 조성물이 함유된 제 1 용기(즉, 제 1 약제, 여기서 상기 조성물은 항체(예를 들어, 항 BCMA 항체) 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)을 포함); 및 (b) 조성물이 함유된 제 2 용기(즉, 제 2 약제, 여기서 상기 조성물은 세포 독성제 또는 달리 치료제와 같은 추가 제제를 포함하고, 물품 또는 키트는 유효량의 제 2 약제로 대상체를 치료하기 위한 라벨 또는 패키지 삽입물 상에 설명서를 추가로 포함)를 포함할 수 있다.
Ⅶ. 정의
본 명세서에 사용된 바와 같이, 항체의 "대응 형태(corresponding form)"에 대한 참조는 두 항체의 특성 또는 활성을 비교할 때, 동일한 형태의 항체를 사용하여 특성이 비교됨을 의미한다. 예를 들어, 어떤 항체가 제 1 항체의 상응하는 형태의 활성과 비교하여 더 큰 활성을 갖는다고 언급된 경우, 이는 상기 항체의 scFv와 같은 특정 형태가 제 1 항체의 scFv 형태와 비교하여 더 큰 활성을 갖는다는 것을 의미한다.
본 명세서에서 용어 "Fc 영역(Fc region)"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실 말단까지 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본 명세서에 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[카바트 et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은 EU 색인으로도 명명되는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
용어 "전장 항체(full length antibody)", "완전 항체(intact antibody)" 및 "전체 항체(whole antibody)"는 본 명세서에 정의된 바와 같이 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 교환적으로 사용된다.
"단리된(isolated)" 항체는 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는 예를 들어 전기 영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱(isoelectric focusing, IEF), 모세관 전기 영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도 평가 방법의 검토에 대해서는 예를 들어, 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
"단리된(isolated)" 핵산은 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체 외 또는 이의 천연 염색체 위치와는 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항 BCMA 항체를 암호화하는 단리된 핵산(isolated nucleic acid encoding an anti-BCMA antibody)"은 단일 벡터 또는 별도의 벡터에서의 상기 핵산 분자(들) 및 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재하는 상기 핵산 분자(들)을 포함하여 항체 중쇄 및 경쇄(또는 이의 단편)을 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭한다.
용어 "숙주 세포(host cell)", "숙주 세포주(host cell line)" 및 "숙주 세포 배양(host cell culture)"은 상호 교환적으로 사용되며, 상기 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질 전환체(transformants)" 및 "형질 전환된 세포(transformed cells)"를 포함하고, 이는 1 차 형질 전환 세포 및 계대 수에 관계없이 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으나 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질 전환된 세포에서 선별되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본 명세서에 포함된다.
용어 "폴리펩티드(polypeptide)" 및 "단백질(protein)"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 항체 및 항체 사슬 및 다른 펩티드, 예를 들어 링커 및 BCMA 결합 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어는 또한 폴리펩티드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 천연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 상기 변형은 부위-지정 돌연변이 유발을 통한 것과 같이 고의적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통한 것과 같이 우발적일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 아미노산 서열 동일성 백분율(%)(percent (%) amino acid sequence identity) 및 동일성 백분율(percent identity)이 아미노산 서열(참조 폴리펩티드 서열)과 관련하여 사용될 경우 서열 동일성의 부분으로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 최대 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 필요하다면, 서열 및 도입 갭을 정렬한 후에, 참조 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어 대상체 항체 또는 단편)의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은 예를 들어 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 당업계 기술 범위 내에서 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 치환은 폴리펩티드에서 하나의 아미노산을 다른 아미노산으로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 아미노산 치환은 관심 결합 분자, 예를 들어 항체에 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어 보유/개선된 항원 결합 또는 감소된 면역원성에 대해 스크리닝될 수 있다.
아미노산은 일반적으로 하기와 같은 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다.
(1) 소수성: 노르루신(Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 아미노산 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤버를 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "벡터(vector)"는 이에 연결된 다른 핵산을 번식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 이것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 편입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본 명세서에서 "발현 벡터(expression vector)"로 지칭된다.
용어 패키징 삽입물(package insert)은 지시, 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 상기 치료 산물의 용도와 관련한 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유한 치료 산물의 상업적 패키지에 관례적으로 포함되는 지시 사항을 지칭하기 위해 사용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, "a" 또는 "an"은 "적어도 하나(at least one)" 또는 "하나 이상(one or more)"을 의미한다. 본 명세서에 기재된 측면, 구현예 및 변형은 측면, 구현예 및 변형을 포함하는(comprising), "구성하는(consisting)" 및/또는 "본질적으로 구성하는(consisting essentially of)"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 개시를 통해, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 모든 가능한 하위 범위 및 상기 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 수치의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이 각각의 사이에 오는 수치와 상기 언급된 범위에서 임의의 다른 언급되거나 사이에 오는 수치가 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 상기 더 작은 범위의 상한 내지 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한도를 조건으로 청구된 주제 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 상기 포함된 한계 중 하나 또는 둘 다를 제외한 범위도 청구된 주제에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "약(about)"은 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 수치에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본 명세서에서 "약"의 수치 또는 파라미터에 대한 언급은 상기 수치 또는 파라미터 자체에 관한 구현예를 포함(설명)한다. 예를 들어, "약 X"를 언급하는 설명은 "X"의 설명을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 조성물(composition)은 세포를 포함하여 둘 이상의 생성물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합물일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성(positive)"이라는 진술은 특정 마커, 전형적으로 표면 마커가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 마커를 언급할 때, 상기 용어는 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써, 유세포 분석에 의해 검출된 바와 같은 표면 발현의 존재를 지칭하며, 상기 염색은 달리 동일한 조건 하에서 아이소타이프-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 음성(negative)이라는 진술은 특정 마커, 전형적으로 표면 마커가 세포에 또는 세포 상에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 마커를 언급할 때, 상기 용어는 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써, 유세포 분석에 의해 검출된 바와 같은 표면 발현의 부재를 지칭하며, 상기 염색은 달리 동일한 조건 하에서 아이소타이프-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본 명세서에서 정의되며, 본 명세서에서의 상기 정의의 포함은 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.
본 출원에서 언급된 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본 명세서에 제시된 정의가 본 명세서에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 달리 부합하지 않는 경우, 본 명세서에 제시된 정의는 본 명세서에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.
본 명세서에 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
Ⅷ. 예시적인 구현예
제공된 구현예 중에는 하기가 있다.
1. (a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산을 포함하는, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(여기서 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타냄).
2. 구현예 1의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 스페이서는 면역글로불린으로부터 유래된다.
3. 구현예 1 또는 구현예 2의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함한다.
4. 구현예 1 내지 3 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 암호화된 스페이서는 (i) 서열 번호: 649에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 649와 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는 (iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분; 이거나 이를 포함한다.
5. 구현예 1 내지 4 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 스페이서를 암호화하는 핵산은 하나 이상의 변형 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 621에 제시된 서열에 함유된 참조 스플라이스 공여체 부위 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함한다.
6. 구현예 5의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 삽입, 결실, 치환 또는 이의 조합을 포함한다.
7. 구현예 5 또는 구현예 6의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 참조 스플라이스 수용체 및/또는 참조 스플라이스 공여체 부위는 정규, 비정규 또는 숨은 스플라이스 부위이다.
8. 구현예 5 내지 7 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나; 상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
9. 구현예 5 내지 8 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 aatctaagtacggac(서열 번호: 705), tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706), acaattagtaaggca(서열 번호: 707) 및/또는 accacaggtgtatac(서열 번호: 708)을 포함하고/거나; 상기 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호: 743)을 포함한다.
10. 구현예 5 내지 8 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나; 상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
11. 구현예 5 내지 8 및 10 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706)을 포함하고/거나; 상기 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742)를 포함한다.
12. 구현예 5 내지 11 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 하나 이상은 참조 스플라이스 수용체 및/또는 참조 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다.
13. 구현예 5 내지 12 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 침묵하고/거나 서열 번호: 621과 비교하여 퇴화 코돈을 생성하고/거나 암호화된 스페이서의 아미노산 서열을 변경하지 않는다.
14. 구현예 5 내지 9 및 12 내지 13 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 변형된 스플라이스 공여체 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호: 661), tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662), accatctccaaggcc(서열 번호: 663) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호: 664)에 제시되고/거나; 상기 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 673) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(SEQ ID NO: 766)에 제시된다.
15. 구현예 5 내지 14 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 변형된 스플라이스 공여체 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662)에 제시되고/거나 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(SEQ ID NO: 766)에 제시된다.
16. 구현예 1 내지 15 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 622에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다.
17. 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서, 여기서 상기 폴리뉴클레오타이드는 (a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열로 암호화되는 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역; 을 암호화하는 핵산을 포함한다.
18. 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서, 여기서 상기 폴리뉴클레오타이드는 (a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열로 구성되거나 반드시 이로 구성되거나 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열에 의해 암호화되는 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역; 을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
19. 구현예 17 또는 구현예 18의 폴리뉴클레오타이드에서, 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다.
20. 구현예 1 내지 19 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 세포에서의 발현 후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드와 같은 아미노산 서열을 암호화하고, 여기에서 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함한다.
21. 구현예 20의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 RNA 이질성은 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 감소된다.
22. 구현예 20 또는 구현예 21의 폴리뉴클레오타이드에서, 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타낸다.
23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리(analytical ultracentrifugation), 장흐름 분획법(field flow fractionation) 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
24. 구현예 1 내지 23 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 코돈-최적화된다.
25. 구현예 1 내지 24 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원은 질병 또는 병태와 관련되거나 질병 또는 병태와 관련된 병변 환경의 세포에서 발현된다.
26. 구현예 1 내지 25 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 질병 또는 병태는 암이다.
27. 구현예 1 내지 26 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 질병 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종이다.
28. 구현예 1 내지 27 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 항원은 ROR1, B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen. BCMA), 탄산 탈수 효소 9(CAIX), tEGFR, Her2/neu(수용체 티로신 키나제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린(mesothelin), CEA 및 B 형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당 단백질 2(epithelial glycoprotein 2, EPG-2), 상피 당 단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 2량체, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(folate binding protein, FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파 2, 키나제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor, kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종 우선 발현 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아(Foeta)l AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암 고환 항원, 메소텔린(mesothelin), 뮤린 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양 1(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린(사이클린), 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체 특이적 항원이다.
29. 구현예 28의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)이다.
30. 구현예 1 내지 29 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이다.
31. 구현예 30의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
32. 구현예 30 또는 구현예 31의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
33. 구현예 30 또는 구현예 31의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
34. 구현예 30 내지 33 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
35. 구현예 30 내지 34 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295, 507, 532, 593, 596, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(heavy chain complementarity determining region 1, CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 594, 597, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595, 606, 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3);이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3);이거나 이를 포함한다.
36. 구현예 30 내지 35 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 3, 141, 143, 144, 288, 289, 507, 593, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4, 5, 6, 145, 147, 148, 290, 291, 372, 513, 594, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7, 8, 9, 10, 149, 153, 154, 155, 156, 157, 292, 293, 376, 517, 595, 606 또는 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3);이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 26, 27, 28, 30, 31, 33, 34, 174, 176, 177, 178, 302, 303, 380, 381, 382, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); 및/또는 (b) 서열 번호: 37, 38, 39, 41, 43, 44, 179, 181, 182, 183, 304, 305, 399, 400, 401, 402, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47, 48, 49, 51, 52, 55, 56, 185, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 306, 307, 415, 417, 418, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3);이거나 이를 포함한다.
37. 구현예 30 내지 구현예 36 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 140, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 150의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 142, 146 및 151의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3서열 번호: 3, 6 및 377의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 373 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 378의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 374 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
38. 구현예 30 내지 37 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
39. 구현예 30 내지 38 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
40. 구현예 30 내지 39 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
41. 구현예 30 내지 40 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하거나; 상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
42. 구현예 30 내지 41 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
43. 구현예 30 내지 42 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 29, 40 및 50의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 32, 42 및 53의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 35, 45 및 57의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 36, 46 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 184의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 186의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 187의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 383, 403 및 419의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 384, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 385, 180 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 386, 404 및 420의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 387, 405 및 422의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 388, 406 및 423의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 388, 407 및 424의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 389, 408 및 425의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 390, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 391, 409 및 426의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 392, 40 및 427의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 394, 39 및 429의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 395, 411 및 430의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 396, 412 및 431의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 396, 412 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 397, 413 및 432의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 398, 414 및 433의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는 서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
44. 구현예 30 내지 43 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는
서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
45. 구현예 30 내지 44 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
46. 구현예 30 내지 45 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
47. 구현예 30 내지 46 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
48. 구현예 30 내지 47 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
49. 구현예 30 내지 48 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 119에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 119에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 122에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 122에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 123에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 123에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 114 및 126에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 114 및 126에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 127에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 127에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 247 및 257에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247 및 257에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 249 및 259에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249 및 259에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 250 및 260에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250 및 260에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 251 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 523 및 539에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 523 및 539에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 540에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 540에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 541에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 541에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 525 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 525 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 526 및 542에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 526 및 542에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 527 및 543에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 527 및 543에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 544에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 544에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 529 및 545에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 529 및 545에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 546에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 546에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 547에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 547에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 548에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 548에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 530 및 549에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 530 및 549에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 531 및 550에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 531 및 550에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 552에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 552에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 553에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 553에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 533 및 554에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 533 및 554에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 555에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 555에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 556에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 556에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 557에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 557에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
50. 구현예 30 내지 49 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
51. 구현예 30 내지 50 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 단편은 scFv를 포함한다.
52. 구현예 30 내지 51 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다.
53. 구현예 52의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 포함하는 링커를 포함한다.
54. 구현예 30 내지 53 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
55. 구현예 30 내지 54 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
56. 구현예 30 내지 55 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
57. 구현예 30 내지 56 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 (a) 서열 번호: 330-352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열; (b) 서열 번호: 330-352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는 (c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열; 을 포함한다.
58. 구현예 30 내지 57 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 (a) 서열 번호: 352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열; (b) 서열 번호: 352, 647, 648, 716 또는 718 중 어느 하나에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는 (c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열; 을 포함한다.
59. 구현예 30 내지 57 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 코돈-최적화된다.
60. 구현예 30 내지 57 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 440, 460, 715, 717 또는 719 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
61. 구현예 30 내지 60 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
62. 구현예 30 내지 53 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다.
63. 구현예 51 내지 53 및 62 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 scFv는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
64. 구현예 1 내지 59 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다.
65. 구현예 60의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한다.
66. 구현예 64 또는 구현예 65의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 (제타 사슬의) 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
67. 구현예 64 내지 66 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
68. 구현예 64 내지 67 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
69. 구현예 64 내지 68 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 627에 제시된 서열 또는 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이거나 이를 포함한다.
70. 구현예 64 내지 69 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
71. 구현예 64 내지 70 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함한다.
72. 구현예 71의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
73. 구현예 71 구현예 72의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
74. 구현예 71 내지 73 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
75. 구현예 71 내지 74 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
76. 구현예 71 내지 75 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
77. 구현예 71 내지 76 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 코돈 최적화된 서열 및/또는 이의 퇴화 서열이다.
78. 구현예 71 내지 77 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 681에 제시된 서열을 포함한다.
79. 구현예 71 내지 78 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재한다.
80. 구현예 71 내지 79 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
81. 구현예 80의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
82. 구현예 1 내지 81 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
83. 구현예 1 내지 82 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
84. 구현예 1 내지 83 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 623에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 또는 이의 코돈 최적화된 서열 및/또는 퇴화 서열이다.
85. 구현예 35a의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 막관통 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 688에 제시된 서열을 포함한다.
86. 구현예 1 내지 85 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인 순서로 포함한다.
87. 구현예 1 내지 86 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 또한 절단형 수용체를 암호화한다.
88. 구현예 1 내지 87 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체.
89. (a) B세포 성숙 항원(B cell maturation antigen, BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는, 키메라 항원 수용체.
90. 구현예 89의 키메라 항원 수용체에서, 상기 스페이서는 면역글로불린으로부터 유래된다.
91. 구현예 89 또는 구현예 90의 키메라 항원 수용체에서, 상기 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함한다.
92. 구현예 91의 키메라 항원 수용체에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 IgG4 또는 IgG2, 선택적으로 인간 IgG4 또는 인간 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래된다.
93. 구현예 90 또는 구현예 91의 키메라 항원 수용체에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 유래된다.
94. 구현예 90 또는 구현예 91의 키메라 항원 수용체에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 IgG4 및 IgG2로부터 유래된 서열을 포함한다.
95. 구현예 94의 키메라 항원 수용체에서, 상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4, IgG2/4 키메라 CH2 및 IgG4 CH3 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4를 포함한다.
96. 구현예 89 내지 92 및 94 내지 95 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 스페이서는 (i) 서열 번호: 649에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 649에 대해 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는 (iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분; 이거나 이를 포함한다.
97. 구현예 89 내지 92 및 94 내지 96 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 암호화된 스페이서는 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
98. (a) B세포 성숙 항원(BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인; (b) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서; (c) 막관통 도메인; 및 (d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
99. 구현예 89 내지 98 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이다.
100. 구현예 99의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609 또는 617중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
101. 구현예 99 또는 구현예 100의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
102. 구현예 99 또는 구현예 100의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
103. 구현예 99 내지 102 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3이거나 이를 포함한다.
104. 구현예 99 내지 103 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1-3, 140-144, 288, 289, 294, 295, 507, 532, 593, 596, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4-6, 145-148, 290, 291, 296, 297, 372-374, 513, 551, 594, 597, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7-11, 149-157, 279-287, 292, 293, 376-378, 517, 595, 606, 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3);이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 26-36, 174-178, 302, 303, 380-392, 394-398, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 37-46, 179-183, 304, 305, 399-409, 411-414, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47-58, 184-194, 306, 307, 415-427, 429-433, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3);이거나 이를 포함한다.
105. 구현예 99 내지 104 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 3, 141, 143, 144, 288, 289, 507, 593, 604, 611 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); 및/또는 (b) 서열 번호: 4, 5, 6, 145, 147, 148, 290, 291, 372, 513, 594, 605 또는 612 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 7, 8, 9, 10, 149, 153, 154, 155, 156, 157, 292, 293, 376, 517, 595, 606 또는 613 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3);이거나 이를 포함하고/거나; 상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 26, 27, 28, 30, 31, 33, 34, 174, 176, 177, 178, 302, 303, 380, 381, 382, 589, 601, 607 또는 614 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 37, 38, 39, 41, 43, 44, 179, 181, 182, 183, 304, 305, 399, 400, 401, 402, 590, 602, 608 또는 615 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 47, 48, 49, 51, 52, 55, 56, 185, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 306, 307, 415, 417, 418, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3);이거나 이를 포함한다.
106. 구현예 99 내지 105 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 8 의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 11의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 140, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 141, 145 및 150의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 142, 146 및 151의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3서열 번호: 3, 6 및 377의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 373 및 152의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 5 및 378의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 2, 374 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 604, 605 및 606; 서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
107. 구현예 99 내지 106 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 8의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 9의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 141, 145 및 149의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 143, 147 및 153의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 144, 148 및 154의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 156의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 2, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 155의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 372 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 3, 6 및 376의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 604, 605 및 606의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3;
서열 번호: 288, 290 및 292의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 또는 서열 번호: 289, 291 및 293의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3; 으로부터 선택된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
108. 구현예 99 내지 107 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110-115, 247-256, 324, 325, 518-531, 533, 609, 617, 772-774 또는 814-832 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
109. 구현예 99 내지 108 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 111, 112, 113, 115, 248, 252, 253, 254, 255, 256, 324, 325, 518, 519, 520, 521, 522, 609 또는 617 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
110. 구현예 99 내지 109 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하거나; 상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
111. 구현예 99 내지 110 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
112. 구현예 99 내지 111 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 29, 40 및 50의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 32, 42 및 53의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 35, 45 및 57의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 36, 46 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 184의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 186의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 187의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 383, 403 및 419의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 384, 39 및 54의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 385, 180 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 175, 180 및 188의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 386, 404 및 420의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 387, 405 및 422의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 388, 406 및 423의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 388, 407 및 424의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 389, 408 및 425의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 390, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 391, 409 및 426의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 392, 40 및 427의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 394, 39 및 429의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 395, 411 및 430의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 396, 412 및 431의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 396, 412 및 58의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 397, 413 및 432의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 398, 414 및 433의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는
서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
113. 구현예 99 내지 112 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 26, 37 및 47의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 27, 38 및 48의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 28, 39 및 49의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 39 및 51의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 31, 41 및 52의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 55의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 34, 44 및 56의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 185의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 189의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 176, 181 및 190의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 177, 182 및 191의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 174, 179 및 192의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 193의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 30, 399 및 415의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 381, 401 및 417의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 382, 402 및 418의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 607, 608 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3;
서열 번호: 302, 304 및 306의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 또는
서열 번호: 303, 305 및 307의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3; 으로부터 선택된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
114. 구현예 99 내지 113 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 116-127, 257-267, 326, 327, 534-550, 552-557, 610, 618, 775-777 또는 833-849 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
115. 구현예 99 내지 114 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 116, 117, 118, 120, 121, 124, 125, 258, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 326, 327, 534, 535, 536, 537, 538, 610 또는 618 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
116. 구현예 99 내지 115 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
117. 구현예 99 내지 116 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
118. 구현예 99 내지 117 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 119에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 119에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 122에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 122에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 123에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 123에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 114 및 126에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 114 및 126에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 127에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 127에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 247 및 257에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247 및 257에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 249 및 259에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249 및 259에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 250 및 260에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250 및 260에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 251 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 523 및 539에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 523 및 539에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 540에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 540에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 541에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 541에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 525 및 261에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 525 및 261에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 526 및 542에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 526 및 542에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 527 및 543에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 527 및 543에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 544에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 544에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 529 및 545에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 529 및 545에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 528 및 546에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 528 및 546에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 547에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 547에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 548에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 548에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 530 및 549에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 530 및 549에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 531 및 550에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 531 및 550에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 552에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 552에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 553에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 553에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 533 및 554에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 533 및 554에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 555에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 555에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 524 및 556에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 524 및 556에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 557에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 557에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
119. 구현예 99 내지 118 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 116에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 116에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 111 및 117에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 111 및 117에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 118에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 118에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 120에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 120에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 110 및 121에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 110 및 121에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 124에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 및 124에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 113 및 125에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 113 및 125에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 248 및 258에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248 및 258에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 252 및 262에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 252 및 262에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 253 및 263에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 253 및 263에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 254 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 254 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 255 및 265에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 255 및 265에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 266에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 266에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 518 및 534에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 518 및 534에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 520 및 264에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 520 및 264에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 521 및 537에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 521 및 537에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 522 및 538에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 522 및 538에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 324 및 326에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 324 및 326에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 325 및 327에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 325 및 327에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
120. 구현예 99 내지 119 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 단편은 scFv를 포함한다.
121. 구현예 99 내지 120 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다.
122. 구현예 121의 키메라 항원 수용체에서, 상기 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 포함하는 링커를 포함한다.
123. 구현예 99 내지 122 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
124. 구현예 99 내지 123 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-139, 268-278, 329, 442, 478, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
125. 구현예 99 내지 124 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-278, 329, 442, 478, 558-563 또는 585 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
126. 구현예 99 내지 122 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다.
127. 구현예 99 내지 122 및 126 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 scFv는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 328 또는 586에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
128. 구현예 89 내지 127 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함한다.
129. 구현예 128의 키메라 항원 수용체에서, 상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한다.
130. 구현예 128 또는 구현예 129의 키메라 항원 수용체에서, 상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 (제타 사슬의) 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함한다.
131. 구현예 128 내지 130 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 활성화 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
132. 구현예 128 내지 131 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 활성화 세포질 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
133. 구현예 128 내지 132 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함한다.
134. 구현예 133의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
135. 구현예 133 또는 구현예 134의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
136. 구현예 133 내지 135 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
137. 구현예 133 내지 136 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
138. 구현예 133 내지 137 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
139. 구현예 133 내지 139 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재한다.
140. 구현예 89 내지 139 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
141. 구현예 140의 키메라 항원 수용체에서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
142. 구현예 89 내지 141 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 막관통 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된다.
143. 구현예 89 내지 142 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
144. 구현예 89 내지 143 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단으로 유효한 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
145. 구현예 1 내지 87 및 173 내지 180 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 조작된 세포.
146. 구현예 88 내지 144 및 181 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체를 포함하는 조작된 세포.
147. 구현예 145 또는 구현예 146의 조작된 세포에서, 상기 세포는 면역 세포이다.
148. 구현예 147의 조작된 세포에서, 상기 면역 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 세포이다.
149. 구현예 147 또는 구현예 148의 조작된 세포에서, 상기 면역 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다.
150. 구현예 147 내지 149 중 어느 하나의 조작된 세포에서, 상기 면역 세포는 T 세포이고 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포이다.
151. 구현예 145 내지 150 중 어느 하나의 조작된 세포에서, 상기 세포는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하고, 이는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다.
152. 구현예 145 내지 151 중 어느 하나의 조작된 세포에서, 상기 세포는 참조 키메라 항원 수용체를 암호화하는 세포에서 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내며, 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하고, 상기 참조 키메라 항원 수용체는 키메라 항원 수용체와 같은 아미노산 서열을 포함하나 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 뉴클레오타이드 차이를 포함하는 상이한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고/거나 상기 참조 키메라 항원 수용체는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다.
153. 구현예 152의 조작된 세포에서, 상기 RNA 이질성은 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 감소된다.
154. 구현예 152 또는 구현예 153의 조작된 세포에서, 상기 참조 CAR을 암호화하는 세포는 참조 CAR을 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하고, 이는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타낸다.
155. 구현예 151 내지 154 중 어느 하나의 조작된 세포에서, 상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리(analytical ultracentrifugation), 장흐름 분획법(field flow fractionation) 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
156. 구현예 145 내지 155 중 어느 하나의 조작된 세포에서, 다수의 조작된 세포 중에서, 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만 또는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 다수의 세포가 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함한다.
157. 구현예 1 내지 87 및 173 내지 179 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드, 구현예 88 내지 144 및 180 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체 또는 구현예 144 내지 156 중 어느 하나의 조작된 세포를 포함하는 조성물.
158. 구현예 157의 조성물은 또한 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함한다.
159. 구현예 157 또는 구현예 158의 조성물은 멸균된다.
160. 질병 또는 장애를 갖는 대상체에게 구현예 144 내지 156 중 어느 하나의 조작된 세포 또는 구현예 157 내지 159 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 것을 포함한, 치료 방법.
161. 구현예 160의 방법에서, 상기 질병 또는 장애는 B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen, BCMA)의 발현과 관련된다.
162. 구현예 160 또는 구현예 161의 방법에서, BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다.
163. 구현예 160 내지 162 중 어느 하나의 방법에서, BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애이다.
164. 구현예 163의 방법에서, 자가 면역 질환 또는 장애는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장 질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소증 자반병(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소증 자반병(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 차가스 병(Chagas' disease), 그레이브스 병(Grave's disease), 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 결절성 다발 동맥염(poly-arteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 보통 천포창(pemphigus vulgaris), 경피증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신증(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노 증후군(Reynaud's syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture's disease), 가와사키 병(Kawasaki disease), 자가 면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)이다.
165. 구현예 160 내지 164 중 어느 하나의 방법에서, BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 암이다.
166. 구현예 165의 방법에서, 상기 암은 BCMA 발현 암이다.
167. 구현예 165 또는 구현예 166의 방법에서, 상기 암은 B 세포 악성 종양이다.
168. 구현예 165 내지 167 중 어느 하나의 방법에서, 상기 암은 림프종, 백혈병 또는 혈장 세포 악성 종양이다.
169. 구현예 168의 방법에서, 상기 암은 림프종이고 상기 림프종은 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma, NHL), 호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 작은 비절단 세포 림프종(small non-cleaved cell lymphoma), 점막-관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma, MALT), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 비장 림프종, 결절 단핵구 B 세포 림프종(nodal monocytoid B cell lymphoma), 면역 모세포 림프종(immunoblastic lymphoma), 거대 세포 림프종(large cell lymphoma), 확산 혼합 세포 림프종(diffuse mixed cell lymphoma), 폐 B 세포 혈관 중심 림프종(pulmonary B cell angiocentric lymphoma), 작은 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma), 1 차 종격동 B 세포 림프종(primary mediastinal B cell lymphoma), 림프구 형질세포성 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL) 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)이다.
170. 구현예 168의 방법에서, 상기 암은 백혈병이고, 상기 백혈병은 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 혈장 세포 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL)이다.
171. 구현예 168의 방법에서, 상기 암은 혈장 세포 악성 종양이고 상기 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)이다.
172. 구현예 165 내지 168 및 171 중 어느 하나의 방법에서, 상기 암은 다발성 골수종(MM)이다.
173. 구현예 1 내지 87 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 항원 결합 도메인 및/또는 암호화된 키메라 항원 수용체는 가용성 BCMA에 비해 막 결합 BCMA에 대해 우선적으로 결합하고/거나 보다 큰 결합 친화도를 나타낸다.
174. 구현예 1 내지 87 및 173 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 751-762 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 751-762 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유한다.
175. 구현예 1 내지 87, 173 및 174 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 IgG4 또는 IgG2, 선택적으로 인간 IgG4 또는 인간 IgG2로부터 전부 또는 일부가 유래된다.
176. 구현예 1 내지 87, 173 내지 175 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 유래된다.
177. 구현예 1 내지 87, 173 내지 176 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 IgG4 및 IgG2로부터 유래된 서열을 포함한다.
178. 구현예 177의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4, IgG2/4 키메라 CH2 및 IgG4 CH3 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4를 포함한다.
179. 구현예 1 내지 87, 173 내지 178 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에서, 상기 암호화된 스페이서는 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
180. 구현예 88 내지 144 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 항원 결합 도메인 및/또는 키메라 항원 수용체는 가용성 BCMA에 비해 막 결합 BCMA에 대해 우선적으로 결합하고/거나 보다 큰 결합 친화도를 나타낸다.
181. 구현예 88 내지 144 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체에서, 상기 항원 결합 도메인 및/또는 키메라 항원 수용체 또는 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출 후 암호화된 키메라 항원 수용체의 기능 또는 활성을 나타내는 측정값이 가용성 또는 탈락 형태(shed form)의 BCMA 존재 하에 감소하거나 차단되지 않거나 실질적으로 감소하거나 차단되지 않는다.
182. 구현예 181의 키메라 항원 수용체에서, 상기 가용성 또는 탈락 형태 BCMA의 농도 또는 양은 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장에 또는 상기 질병 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에 존재하는 농도 또는 양에 해당하거나 또는 상기 가용성 또는 탈락 형태 BCMA의 농도 또는 양에서 참조 항 BCMA 재조합 수용체, 선택적으로 참조 항 BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 결합 또는 측정치가 같은 평가에서 감소하거나 차단되거나 또는 실질적으로 감소하거나 차단된다.
183. 전이 유전자의 전사된 핵산의 이질성을 결정하는 방법으로, 상기 방법은 a) 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용하여 전사된 핵산을 증폭시키는 단계(여기서 하나 이상의 쌍은 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' untranslated region, 5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' 비번역 영역(3' untranslated region, 3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함하여 하나 이상의 증폭된 생성물을 생성); 및 b) 상기 증폭된 생성물을 검출하는 단계(여기서 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍으로부터의 2 이상의 증폭된 생성물의 존재는 증폭된 생성물에서의 이질성을 나타냄)를 포함하는, 방법.
184. 구현예 183의 방법에서, 상기 b)에서 검출된 차이는 증폭된 전사체의 상이한 길이이다.
185. 구현예 183의 방법에서, 상기 b)에서의 차이는 증폭된 전사체의 크로마토그래피 프로파일의 차이이다.
186. 구현예 183 내지 185 중 어느 하나의 방법에서, 상기 증폭된 생성물에서의 차이는 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
187. 구현예 183 내지 186 중 어느 하나의 방법에서, 상기 5' 프라이머는 전사된 핵산의 프로모터 영역으로부터 전사된 서열에 특이적이다.
188. 구현예 183 내지 187 중 어느 하나의 방법에서, 상기 전사된 핵산은 폴리뉴클레오타이드의 아미노산 코딩 서열 및/또는 전사된 전-mRNA의 3' 비번역 영역 내의 서열에 특이적인 3' 프라이머를 사용하여 증폭된다.
189. 구현예 183 내지 188 중 어느 하나의 방법에서, 상기 3' 프라이머는 전사된 전-mRNA의 3' 비번역 영역의 폴리아데닐화 서열 또는 인핸서 영역에 특이적이다.
190. 구현예 183 내지 189 중 어느 하나의 방법에서, 단계 a)는 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 3' 비번역 영역(3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함한 5' 및 3' 프라이머 단일 쌍을 사용한 단일 증폭 반응에 의해 달성된다.
191. 구현예 183 내지 190 중 어느 하나의 방법에서, 단계 a)는 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍, 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍 및 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용한 병렬 또는 후속 증폭 반응에 의해 달성되고, 여기에서 상기 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍은 전사된 핵산의 5' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고; 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍은 이의 서열이 핵산 전사체의 번역된 서열의 일부에 상보적인 5' 프라이머 및 이의 서열이 전사체의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고; 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍 각각은 전사체의 번역된 영역 내의 서열에 상보적인 서열을 함유한다.
192. 구현예 191의 방법에서, 상기 병렬 또는 후속 증폭 반응은 전사체의 중첩 부분을 증폭한다.
193. 구현예 183 내지 192 중 어느 하나의 방법에서, 상기 증폭 생성물은 약 1.5 킬로베이스, 2 킬로베이스, 2.5 킬로베이스, 3 킬로베이스, 3.5 킬로베이스, 4 킬로베이스, 4.5 킬로베이스, 5 킬로베이스, 5.5 킬로베이스, 6 킬로베이스, 7 킬로베이스 또는 8 킬로베이스 길이로 예측된다.
194. 구현예 183 내지 193 중 어느 하나의 방법에서, 이질성을 갖는 것으로 검출된 전사 핵산은 하나 이상의 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보로 확인된다.
195. 구현예 194의 방법에서, 전이 유전자 후보의 전사 핵산은 세포에서 발현 후에 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상 또는 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상의 이질성을 나타낸다.
196. 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법으로, 상기 방법은, a) 구현예 194 또는 구현예 195의 방법에 따라 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하는 단계; b) 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하는 단계; 및 c) b)에서 확인된 하나 이상의 확인된 스플라이스 공여체 부위 또는 근처에서 핵산 서열을 변형시켜 변형된 폴리뉴클레오타이드를 생성하는 단계; 를 포함한다.
197. 구현예 196의 방법은 d) a) 단계에서와 같이 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 단계를 추가로 포함한다.
198. 구현예 197의 방법은 e) d) 단계에서의 전사체 이질성이 a) 단계에서 결정된 바와 같은 전사체의 이질성에 비해 감소될 때까지 b)-d) 단계를 반복하는 단계를 추가로 포함한다.
199. 구현예 196 내지 198 중 어느 하나의 방법에서, 상기 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.9, 0.95 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 이상 또는 1.0의 스플라이스 이벤트 점수 또는 스플라이스 이벤트 확률을 나타낸다.
200. 구현예 196 내지 199 중 어느 하나의 방법에서, 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 확인된다.
201. 구현예 196 내지 200 중 어느 하나의 방법에서, 상기 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)는 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)이다.
202. 구현예 196 내지 201 중 어느 하나의 방법에서, 상기 전이 유전자는 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체의 일부이다.
203. 구현예 202의 방법에서, 상기 CAR 폴리펩타이드는 항체 단편, 선택적으로 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는 단일 사슬 항체 단편(single chain antibody fragment, scFv)을 포함한 항원 결합 도메인, 스페이서 영역, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다.
204. 구현예 202 또는 구현예 203의 방법에서, 상기 변형된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 CAR 폴리펩티드의 항원 결합 도메인에 대한 코딩 서열 내에서 변형되지 않는다.
205. 구현예 196 내지 204 중 어느 하나의 방법에서, 상기 전이 유전자의 암호화된 아미노산 서열은 폴리뉴클레오타이드의 변형 후에 변경되지 않는다.
206. 구현예 196 내지 205 중 어느 하나의 방법에서, 상기 변형된 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA는 세포에서 비변형 폴리뉴클레오타이드의 발현 후에 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상 또는 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 동질성을 나타낸다.
207. 구현예 183 내지 206 중 어느 하나의 방법에서, 상기 세포는 인간 세포이다.
208. 구현예 183 내지 207 중 어느 하나의 방법에서, 상기 세포는 T 세포이다.
Ⅸ. 실시예
하기 실시예는 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.
실시예 1: 항 BCMA 항체(V
H
사슬 단독)의 생성 및 평가
경쇄 가변(VL) 영역이 없는 경우에도 BCMA에 특이적으로 결합하는 중쇄 가변(VH) 영역을 함유하는 예시적인 항 BCMA 항체를 생성하고 평가하였다.
A. 라이브러리 선택 및 항체 생성
다수의 BCMA 결합 VH 영역은 무-세포 시스템에 나타난 dsDNA 암호화 His-태그 인간 정상 도너 항체 VH 라이브러리의 멤버에서 수행된 일련의 선택 단계를 통해 생성되었다. VH 라이브러리의 멤버를 면역글로불린 Fc 영역에 융합된 가용성 인간 BCMA(hBCMA-Fc)에 특이적으로 결합하는 VH 영역을 선택하기 위해 여러 라운드의 스크리닝을 수행하였다. BCMA를 발현하지 않는 모 HEK293 세포주와 비교하여 인간 BCMA를 발현하는 재조합 HEK293 세포주(hBCMA/HEK293 세포주)에 대한 결합뿐만 아니라 내인성 BCMA를 발현하는 인간 골수종 세포주(H929 세포)에 대한 결합을 위해, 플루오로크롬-접합된 항 HIS 항체를 사용한 유세포 분석법에 의해 선택된 hBCMA-Fc 풀(pool)로부터의 VH 영역을 스크리닝하였다. hBCMA/HEK293 세포에 대해서와 보다 낮은 정도로 H929 세포에 대한 특이적 결합을 나타내는 VH 영역 클론이 결과적으로 확인되었다.
BCMA를 발현하지만 BCMA 음성 대조군 세포가 아닌 세포주에 특이적인 결합을 나타내는 예시적인 VH 클론을 서열 분석하고 추가 특성화를 위해 정제하였다. 클론을 정제하고 적정하고, 플루오로크롬-접합된 항 HIS-항체를 사용한 유세포 분석법 기반 평가를 사용하여 hBCMA/HEK293 세포에 대한 이들의 결합 친화도(EC50)를 측정하였다. 표 E1은 본 연구에서 관찰된 인간 VH3 유래 프레임워크 영역 및 이들 각각의 결합 친화도(EC50)를 함유하는 예시적인 클론의 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3) 서열을 열거한다.
[표 E1]
실시예 2 항 BCMA 항체(scFv)의 생성 및 평가
단일사슬 항체 단편(scFv)으로 구성된 예시적인 항 BCMA 항체를 확인하고, BCMA에 대한 결합에 대해 평가하였다.
A. 라이브러리 선택 및 scFv 항체 생성
예시적인 항 BCMA scFv 항체는, 무-세포 시스템에 나타난, dsDNA 암호화된 인간 정상 도너 항체 라이브러리 상에서 수행된 다양한 선택을 통해 생성되었다. 한 접근법에서, VH-(G4S)3-VL 형식으로 scFv 라이브러리를 생성하기위해, 실시예 1에 기재된 접근법에서 첫번째 라운드의 스크리닝으로부터 농축된(enriched) VH 영역 라이브러리 멤버를 인간 정상 도너 VL 라이브러리의 멤버와 셔플링함으로써 쌍을 만들었다. 생성된 scFv 라이브러리는 모 HEK293 세포와 비교하여, BCMA 발현 HEK293 세포에 대한 특이적 결합을 위해 후속 선택 라운드에서 농축되었다.
다른 접근법에서, 마우스 항 BCMA 참조 scFv 항체를 이용한 경쟁 용리(elution)의 존재 또는 부재하에 hBCMA-Fc에 대한 BCMA 특이적 결합을 위해 정상 도너 유래 인간 scFv 라이브러리를 스크리닝함으로써 데 노보 선택(de novo selection)을 수행하였다(BCMA-C1, VL-VH scFv 항체, 서열 번호 328; 또는 BCMA-C2, VH-VL scFv 항체, 서열 번호 329). 2 라운드 이상의 선택 후에, scFv 결합제가 회수되었다.
BCMA를 발현하지 않는 대조군 세포와 비교하여, 생성된 scFv 클론의 BCMA 발현 HEK293 세포에 대한 특이적 결합을, 시험관 내 번역된(translated) 조세포 용해물(crude cell lysate) 또는 박테리아로 생성된(bacterially-produced) 상청액으로 유세포 분석법에 의해 평가하였다. BCMA에 대한 결합 선호도를 나타내는 특정 scFv 클론을 추가로 분석하였다.
선택된 scFv 클론을 정방향 및 역방향 프라이머를 사용하여 서열 분석하고, 추가 특성화를 위해 정제하였다. 표 E2는 scFv의 아미노산(aa) 및 뉴클레오타이드(nt) 서열 및 상응하는 중쇄(VH) 또는 경쇄(VL) 가변 영역, CDR 및 프레임 워크 영역(FR)의 아미노산 서열에 상응하는 서열 식별자(서열 번호)를 열거한다. 클론 BCMA-22와 관련하여, 생식선(germline) 프레임워크 영역으로부터 유전된 것으로 관찰된 경쇄 CDR3의 첫번째 잔기(시스테인)를 세린으로 대체하여 BCMA-23으로 나타낸 추가 scFv를 생성하였다. 표 E2는 또한 후속 실시예에 기재된 바와 같은 대조군 및 경쟁 연구에서 사용된 예시적인 마우스 항 BCMA 참조 항체(anti-BCMA reference antibodies)의 서열을 제시한다.
[표 E2]
예시적인 클론을 정제하고 적정하였으며 hBMCA(BCMA-1, BCMA-2, BCMA-3, BCMA-4, BCMA-5, BCMA-6, BCMA-7, BCMA-8, BCMA-9, BCMA-10, BCMA-11, BCMA-12, BCMA-13, BCMA-14, BCMA-14, BCMA-15, BCMA-16, BCMA-17, BCMA-18, BCMA-19, BCMA-20, BCMA-21, BCMA-22, BCMA-23, BCMA-24, BCMA-25, BCMA-26, BCMA-27, BCMA-28 및 BCMA-29)에 대한 이들의 결합 친화도(EC50)를 테스트하였다. 다른 항 BCMA scFv 항체, 예컨대 문헌[국제 출원 WO2016090327]에 기재된 항체의 VH 및 VL 서열을 함유하는 scFv 및 문헌[국제 출원 WO2010104949]에 기재된 BCMA 항체의 VH 및 VL 서열을 함유하는 scFv를 평가하였다(표 E3 참조).
[표 E3]
실시예 3: BCMA에 대한 키메라 항원 수용체(CAR)의 생성 및 항 BCMA CAR을 발현하는 세포
각각 인간 항 BCMA scFv 항원 결합 도메인을 함유하는 예시적인 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 생성되었다. 인간 항 BCMA scFv 중에는 실시예 2에 기재된 것이 있다. 또한 생성된 CAR 중에는 문헌[국제 출원 WO2016090327]에 기재된 항체의 VH 및 VL 서열을 함유하는 scFv를 함유하는 CAR이 있다. 문헌[국제 출원 WO2010104949]에 기재된 BCMA 항체의 VH 및 VL 서열을 갖는 scFv를 함유하는 항 BCMA CAR이 또한 생성되었다. 일부 scFv의 경우에, VH 는 VL 에 대해 아미노 말단이었고, 일부 경우에는 VL 이 VH에 대해 아미노 말단이었다. 생성된 CAR에서의 scFv 영역은 표 E4에 제시되어 있다.
구체적으로, 예시적인 폴리뉴클레오타이드 CAR 작제물은 인간 IgG 카파 신호 전달 서열(서열 번호: 620을 암호화하는 서열 번호: 619)을 암호화하는 핵산, 인간 항 BCMA scFv(서열 번호: 128-130, 132, 133, 136, 137, 269, 273-277, 442, 478 및 558-563), 스페이서(예컨대 변형된 IgG4-힌지 CH2-CH3을 함유하는 스페이서, 서열 번호: 649를 암호화하는 서열 번호: 621, 일부 경우에 상기 스페이서는 LS로 지칭될 수 있음) 또는 일부 경우에 보다 짧은 스페이서(SS로 지칭될 수 있음), 예컨대 IgG 힌지 영역으로부터 유래된 것, 예컨대 IgG4 유래 힌지 영역 또는 이의 변형된 형태 또는 CD28 세포 외 도메인 유래; 인간 CD28 막관통 도메인; 인간 4-1BB 유래 세포 내 공동 신호 전달 서열; 인간 CD3 제타 유래 세포 내 신호 전달 도메인을 암호화하는 핵산을 함유했다. 예시적인 스페이서는 IgG4 힌지 영역(예를 들어, 서열 번호: 364에 의해 암호화되고/거나 서열 번호: 363의 아미노산 서열을 함유하는 것)으로부터 유래된 것 및 예를 들어, 서열 번호: 629의 서열에 의해 암호화된 것 또는 서열 번호: 630의 아미노산 서열을 갖는 것과 같은 CD28 엑토도메인-유래 스페이서를 포함했다.
인간 IgG-카파 신호 서열(서열 번호: 620을 암호화하는 서열 번호: 619), 마우스 항 BCMA scFv(서열 번호: 328(BCMA-C1; VL-VH), 329(BCMA-C2; VH-VL), 585(BCMA-C1; VH-VL) 또는 586(BCMAC-2; VL-VH)), 스페이서(서열 번호: 649를 암호화하는 서열 번호: 621), 인간 CD28 막관통 도메인, 인간 4-1BB 유래 세포 내 공신호 전달 서열 및 CD3-제타 유래 세포 내 신호 전달 도메인을 암호화하는 핵산을 함유하는 다른 CAR 작제물을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 생성되었다.
[표 E4]
상기 CAR을 암호화하는 cDNA 클론은 절단된 수용체 암호화 서열 뒤 하류 리보솜 건너뛰기 요소(예컨대, 서열 번호: 654를 암호화하는 T2A-암호화 서열 서열 번호: 686 또는 687)에 연결되었고, 렌티바이러스 발현 벡터로 클로닝되었다.
항 BCMA CAR 발현 T 세포를 생성하기 위해, 인간 도너 대상체로부터의 백혈구 성분 채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 T 세포를 단리하였다. 단리된 T 세포를 활성화하고 항 BCMA CAR을 암호화하는 각각의 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 렌티바이러스 벡터로 형질 도입하였다. 형질 도입 및 증폭 후, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 절단된 수용체에 특이적인 항체 및 형광 표지된 재조합 인간 BCMA로 염색하고 유세포 분석법으로 분석하여 세포의 형질 도입 및 항 BCMA CAR의 발현을 확인하였다.
실시예 4: 잠재적 RNA 이질성 및 변형 평가
실시예 3에 기재된 바와 같이 예시적인 항 BCMA CAR로 형질 도입된 세포로부터의 RNA를, 예시적인 CAR 전사체의 3' UTR 및 5' UTR의 하류 WPRE 및 프로모터에 특이적인 프라이머를 사용하여 역전사 효소 폴리머라제 연쇄 반응(RT-PCR) 후 아가로스 겔 전기 영동에 의해 이질성에 대해 분석하였다. 변형된 IgG CH2-CH3 힌지 영역을 포함하는 예시적인 스페이서를 함유하는 서로 다른 항 BCMA CAR 작제물(BCMA-LS CAR)에 대해 다중 밴드가 관찰되었고(도 1a), 이는 RNA 이질성을 나타낸다. 보다 짧은 스페이서를 함유하는 예시적인 CAR, 예컨대 인간 CD28 세포 외 영역의 일부를 포함하는 것(예를 들어, BCMA-52-SS CAR 참조)에 대해서 보다 낮은 RNA 이질성이 관찰되었다.
다양한 BCMA-LS CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에서 잠재적 스플라이스 부위에 대해 평가하고 잠재적 예상 스플라이스 부위의 제거를 포함하여 보존적인 방식으로 변형시켰다. 변형 전의 서열(출발 서열) 및 변형 후의 서열(최적화된 서열)을 분석하여 잠재적인 숨은 스플라이스 부위의 존재를 평가하였다. 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위를 독립적으로 평가하였다. 작제물의 다양한 영역의 출발 서열의 예시적인 스플라이스 공여체 및 스플라이스 수용체 부위가 확인되었다(예를 들어 프로모터 영역 및 긴 스페이서 영역에서). > 0.7(> 70%)인 스플라이스 부위 점수, 예를 들어 서열 번호: 693(스플라이스 부위 점수 0.96) 및 708(스플라이스 부위 점수 0.97)에 각각 제시된 공여체 부위를 갖는 초기 코돈 최적화 후 긴 스페이서 영역 내에서 예시적인 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위가 확인되었다. 원하지 않는 스플라이스 부위의 가능성을 줄이기 위해 초기 코돈 최적화가 이루어진 후(예를 들어, 예시적인 초기 코돈 최적화된 스페이서 서열에 대해 서열 번호: 855 참조) 스플라이스 부위 점수가 > 0.7(> 70%)로 평가된 영역 내에서 추가의 변형을 함유하는 변형된 작제물이 생성되었다. 코돈 최적화/스플라이스 부위 제거 후 추가 변형된 상기 영역 중에는 보다 긴 스페이서 영역 서열 내의 영역이 있었고, 예를 들어 스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위의 최종 최적화 스플라이스 부위 제거된(O/SSE) 서열은 각각 서열 번호: 662 및 672에 제시된다.
상기 기재된 바와 같이 변형된 서열을 작제하고 RNA 이질성에 대해 테스트하였다. 전기 영동으로 RNA 이질성의 감소를 확인했다. 스플라이스 부위 제거 전과 후에 BCMA CAR 작제물의 분석은 감소된 RNA 이질성을 입증하였다(도 1b). 긴 스페이서 영역의 변형을 함유하는 예시적인 O/SSE CAR 작제물, 예를 들어 BCMA-23-LS-O/SSE CAR, BCMA-25-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-52-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-55-LS-O/SSE CAR이 생성되었다.
실시예 5: 1 차 T 세포에서 CAR 발현 및 기능의 평가
실시예 3에 기재된 바와 같이 각각 출발 서열 및 최적화된 서열을 갖는 항 BCMA CAR 암호화 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 렌티바이러스 작제물을 T 세포로 형질 도입하고 형질 도입된 세포를 형질 도입(대리 마커의 발현에 기초) 및 유세포 분석에 의해 재조합 BCMA-Fc 융합 단백질에 대한 결합에 기초하여 CAR 발현에 대해 분석하였다. 출발(비-SSE) 서열을 갖는 폴리뉴클레오타이드를 통해 동일한 상응하는 CAR을 발현하도록 형질 도입된 세포와 비교하여, 최적화된 서열 BCMA-52-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 사용하여 형질 도입된 CD4+ 및 CD8+ T 세포가 보다 높은 백분율로 표면에서 항 BCMA CAR을 발현하였다. 대표적인 데이터는 도 2 및 하기 표 E5에 제시된다.
[표 E5]
CAR 작제물, BCMA-23-LS CAR, BCMA 26-LS CAR, BCMA 55-LS CAR 및 BCMA 55-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 렌티바이러스 벡터를 함유하는 다양한 부피의 바이러스 제제를 사용하여 500,000개의 도너 유래 1 차 인간 T 세포를 형질 도입하고 형질 도입 효율을 비교하였다. 출발 서열(도 3, 삼각형)과 비교하여, 최적화된 서열(도 3, 원)에 의해 형질 도입 후 T 세포의 형질 도입 백분율이 증가하였다.
실시예 6: BCMA-52 및 BCMA-55 scFv의 특성화
A. 조직의 면역 조직 화학적 염색
다양한 수준의 BCMA를 발현하는 세포 및 조직을 예시적인 항 BCMA 항체의 결합에 대해 면역 조직 화학에 의해 평가하였다. 마우스 IgG1 Fc 영역 펩티드에 융합된 예시적인 인간 BCMA 표적화 CAR의 결합 도메인(scFv)을 면역 조직 화학에 의해 세포 및 조직의 결합에 대해 평가하였다.
B. 결합 동역학 평가
BCMA-55 유래 scFv 결합 도메인, 변형된 IgG 유래 CH2-CH3-힌지 스페이서, CD28 막관통 도메인, 41BB 및 CD3제타 엔도도메인을 갖는 CAR이 주르카트(Jurkat) T 세포주에서 발현되었다. CAR에 의한 재조합 인간 BCMA-hFc(rhBCMA hFc)에 대한 결합 동역학을 동역학 배제 분석을 이용하여 평가하였다. CAR의 scFv 부분을 함유하는 Fc 융합 단백질(scFv-Fc)의 재조합 인간 BCMA 융합 단백질에 대한 결합 친화도를 또한 Biacore-기반 분석을 이용하여 평가하였다. 본 연구에서, CAR 및 scFv-Fc 융합에 의한 결합에 대한 KD 는 각각 대략 1 nM 및 10 nM인 것으로 관찰되었다.
추가의 실험에서, 주르카트 세포는 BCMA-55 유래 scFv 결합 도메인을 갖는 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로 형질 도입되었고 ~ 2 x 106의 밀도로 배양되었다. 세포를 수확하고 4 ℃에서 15 분 동안 1500 g로 회전시켰다. 세포 펠릿을 세척하고 세포를 재현탁시키고 20 nM 또는 1 nM 비오티닐화된 rhBCMA hFc(본 분석에서 불변 결합 파트너(constant binding partner, CBP)로도 지칭)로 연속 희석하였다. 평형 후, 세포를 회전하여 침전시키고 KinExa 동역학적 배제 분석을 위해 상청액을 수확하였다. 간략하게, rhBCMA hFc를 함유하는 평형화된 BCMA-55-LS CAR O/SSE 발현 쥬르카트 세포로부터의 상청액을 스트렙타비딘 비드 유동 세포 위로 흘려서 유리 비오티닐화 rhBCMA hFc를 포획하였다. 이어서 rhBCMA를 형광 표지된 2 차 항 hBCMA 항체를 사용하여 검출하였다. 검출된 rhBCMA hFc의 흡광도를 각각의 샘플에 대해 기록하고, 각 희석에서 세포의 수에 대해 플롯 팅하였다(Darling (2004) Assay Drug. Dev., 2:647-657). 본 연구에서, 상기 분석에서 rhBCMA hFc에 결합하는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포의 상호 작용에 대한 KD 는 대략 1.46 nM인 것으로 결정되었고, 발현 수준(expression level, EL)은 CAR 발현 쥬르카트 세포 당 대략 146,500 CAR인 것으로 결정되었다.
C. BCMA-55 scFv-Fc의 선택성
scFv-Fc 융합 단백질을 사용하여 BCMA-55 유래 결합 도메인의 결합 특이성을 평가하기 위해 막 프로테옴 어레이(membrane proteome array, MPA) 분석을 사용하였다. 인간 세포 외 프로테옴의 85% 이상을 나타내는 4400개 이상의 고유한 인간 세포 외 단백질을 발현하는 HEK293 세포에 대한 BCMA-55-Fc의 상호 작용 및 형광 단백질을 Retrogenix 플랫폼을 사용하여 평가하였다. 형질 감염을 확인하기 위해 형광 단백질을 검출하였고, 매칭된 Fc를 함유하는 CTLA4-Fc(0.2 ㎍/mL에서 테스트)를 또한 사용하여 양성 대조군으로 CD86을 스크리닝하였다. 초기 스크리닝은 전체 단백질 패널에 대한 BCMA-55-scFv에 대한 scFv 결합 분석을 수반하였다. 이어서 후속 확인 스크리닝을 수행하여 BCMA-55-Fc와 초기 스크리닝에서 확인된 잠재적 히트(hit)의 하위 집합과의 상호 작용을 재시험하였다. BCMA는 본 결합 도메인이 다른 세포 외 단백질에 비해 BCMA에 대해 매우 선택적이라는 결론과 일관되게, 본 분석에서 유일하게 강력하고 특이적인 히트로 확인되었다. 일부 저수준 신호가 카텝신 G(Cathepsin G, CTSG)에 대해 관찰되었지만 기능적 활성을 부여하지 않는 것으로 관찰되었다(실시예 16 참조).
실시예 7: 다양한 항 BCMA 키메라 항원 수용체(Chimeric Antigen Receptor, CAR)를 발현하도록 조작된 T 세포의
시험관 내
기능 평가
다양한 예시적인 항 BCMA CAR을 발현하는 유전자 조작된 인간 T 세포를 BCMA 발현 표적 세포와의 공 배양 후 시험관 내에서 평가하였다. BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR, BCMA-52-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR로 T 세포를 형질 도입시켰다. 양성 대조군으로서 참조 항 BCMA CAR 발현 세포 또는 음성 대조군으로서 모의 가공된 세포와 반응을 비교하였다.
A. 표적 세포에 대한 세포 용해 활성
5:1, 2.5:1, 1.25:1 및 0.65:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율로 BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 또는 참조 항 BCMA CAR을 발현하는 T 세포와 함께 BCMA 발현 표적 세포를 인큐베이션하였다. 대조군으로서, 표적 세포를 CAR을 발현하지 않는 T 세포(모의 대조군)와 함께 인큐베이션하였다. 구체적으로, BCMA 형질 도입 K562 세포(K562/BCMA, BCMAhigh) 또는 RPMI 8226 세포(BCMAlow 인간 다발성 골수종 세포주)가 용해를 위한 표적으로 사용되었다. 표적 세포는 현미경 검사법에 의한 표적 세포의 추적을 허용하도록 NucLight Red(NLR)로 표지되었다. 적색 형광 신호(Essen Bioscience의 IncuCyte Live Cell Analysis System 사용)에 의해 결정된 바와 같이 24 시간 내지 72 시간의 기간에 걸쳐 살아있는 표적 세포의 손실을 측정하여 세포 용해 활성을 평가하였다. 용해 백분율(용해 %)는 모의 가공된 T 세포와 인큐베이션된 표적 세포에서 발생한 용해로 정규화되었다. 도 4a에 도시된 바와 같이, 항 BCMA CAR 발현 T 세포는 BCMA+ 세포에 대한 항원 특이적 세포 용해 활성을 나타냈다. 세포 용해의 크기는 특정 세포주 및 CAR에 따라 상이했다.
별도의 실험에서, 세포 용해 활성을 3:1의 E:T 비율로 RPMI 8226 표적 세포로 시험하였다. 도 4b에 도시된 바와 같이, BCMA-52-LS-CAR 및 BCMA-55-LS-CAR 발현 세포는 CAR을 발현하지 않으나 모의 가공된 세포에 의한 용해에 대해 정규화되어, 대략 70% 용해를 나타낸 반면, 참조 항 BCMA 항체 결합 도메인을 함유하는 CAR을 발현하는 세포는 대략 50% 용해를 나타냈다. 따라서, BCMA-52-CAR 또는 BCMA-55-CAR을 발현하도록 조작된 세포의 세포 용해 활성은 참조 결합 도메인 함유 CAR의 세포 용해 활성과 유사하거나 이보다 높은 결과가 나타났다.
변형되지 않은 CAR 작제물 또는 최적화된 CAR 작제물에 의해 암호화된 동일한 CAR로 조작된 T 세포의 세포 용해 활성을 비교하기 위해, 변형되지 않은 폴리뉴클레오타이드 작제물(BCMA-52-LS CAR 및 BCMA-55-LS CAR) 또는 최적화된 폴리뉴클레오타이드 작제물(BCMA-52-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-55-LS-O/SSE CAR) 중 하나를 함유하는 바이러스 벡터를 사용하여 항 BCMA CAR을 발현하도록 T 세포를 조작하였다. 조작된 세포의 세포 용해 활성을 실질적으로 상기 기재된 바와 같이 평가하였다. CAR 발현 T 세포를 3:1의 E:T 비율로, 표적 세포, K562-BCMA, RPMI 8226, MM1.S 세포(BCMAmed 인간 다발성 골수종 세포주) 또는 OPM2 세포(BCMAmed 인간 다발성 골수종 세포주) 표적 세포와 인큐베이션하였다. 도 4c 및 도 4d에 도시된 바와 같이, CO/SSE CAR 작제물로 형질 도입된 CAR 발현 세포는 상응하는 변형되지 않은 작제물로 형질 도입된 세포에 비해 보다 큰 세포 용해 활성을 나타냈다.
B. 사이토카인 방출
항원 발현 표적 세포와 다양한 항 BCMA CAR 발현 세포의 인큐베이션에 후에 사이토카인 방출을 평가하였다.
5:1, 2.5:1, 1.25:1 또는 0.65:1의 E:T 비율로 BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 또는 참조 결합 도메인 함유 항 BCMA CAR을 발현하는 T 세포와 함께 BCMA 발현 표적 세포, K562/BCMA 또는 RPMI 8226 세포를 인큐베이션하였다. 대조군으로서, 표적 세포를 CAR을 발현하지 않는 T 세포(모의 대조군)와 함께 인큐베이션하였다. 공배양 세포를 약 24 시간 동안 인큐베이션한 다음 IFN-g, TNF- 및 IL-2의 측정을 위해 상청액을 수집하였으며 다중 사이토카인 면역 분석법을 사용하였다. 도 5a에 도시된 바와 같이, 테스트된 항 BCMA CAR 발현 T 세포는 항원 자극 후에 사이토카인을 생성하였다.
변형되지 않은 CAR 작제물 또는 최적화된 CAR 작제물에 의해 암호화된 동일한 CAR로 조작된 T 세포의 항원 의존적 사이토카인 생성을 평가하기 위해, 변형되지 않은 폴리뉴클레오타이드 작제물(BCMA-52-LS CAR 및 BCMA-55-LS CAR) 또는 최적화된 폴리뉴클레오타이드 작제물(BCMA-52-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-55-LS-O/SSE CAR) 중 하나를 함유하는 바이러스 벡터를 사용하여 항 BCMA CAR을 발현하도록 T 세포를 조작하였다. CAR 발현 T 세포를 3:1, 1.5:1, 0.75:1 및 0.375:1의 E:T 비율로, 표적 세포 즉, K562-BCMA, RPMI 8226 세포, MM1S(BCMAmed 인간 다발성 골수종 세포주) 또는 OPM2 세포(BCMAmed 인간 다발성 골수종 세포주) 표적 세포 중 하나와 인큐베이션하였다. 사이토카인 IFN-g, TNF- 및 IL-2의 생성을 상기 기재된 바와 같이 평가하였다. 도 5b에 도시된 바와 같이, O/SSE 최적화된 작제물을 사용하여 형질 도입된 CAR 발현 세포는 상응하는 변형되지 않은(출발) 작제물로 형질 도입된 세포에 비해 보다 많은 사이토카인 생성을 나타내는 것으로 관찰되었다.
C. 표면 상에 상이한 수준의 항원을 발현하는 표적에 대한 반응으로 세포 용해 활성, 사이토카인 방출 및 증식
BCMA를 상이한 수준으로 발현한 BCMA 발현 세포와 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후 세포 용해 활성, 사이토카인 방출 및 증식을 평가하였다. 모든 활성을 가용성 BCMA의 존재 또는 부재 하에 평가하였다.
두 명의 인간 도너(D#1 및 D#2)로부터 수확한 1:1 비율의 CD4+ 및 CD8+ 1차 T세포를 CD3/CD28 비드로 자극하고 BMCA-55 CAR을 안정적으로 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질 도입하였다. 형질 도입된 세포를 1:3, 1:1 또는 3:1의 E:T 비율로 BCMA 발현 표적 세포의 존재 하에 배양하였다. 동일한 도너로부터 모의 가공된 T 세포도 대조군으로 사용하기 위해 표적 세포와 혼합하였다. BCMA+ 표적 세포, Daudi, RPMI-8226 및 K562-BCMA 세포는 상이한 수준의 표면 BCMA 항원 밀도를 나타내었고(항원 밀도: Daudi (<1000 BCMA 분자/세포) < RPMI-8226 <K562-BCMA) T 세포와 인큐베이션하기 전에 카르복시플루오레신 석신이미딜 에스테르(carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE)로 염색하였다. BCMA를 발현하지 않고 세포 추적 바이올렛(cell trace violet, CTV)으로 염색된 동일한 수의 표적 음성 세포가 또한 T 세포 및 BCMA+ 표적 세포와의 배양물에 포함되었다. 24시간 인큐베이션 후, 남은 BCMA+ 대 BCMA- 표적 세포를 유세포 분석으로 측정하였고 세포 독성을 나타내는 표적 세포 용해의 정도를 평가하였다.
BCMA-55-LS-O/SSE CAR T 세포는 BCMA 발현 수준과 관계없이 표적 세포와 함께 배양될 때 유사한 세포 용해 활성을 나타냈다(도 6). 또한, 세포당 100,000개 초과의 분자를 발현하는 표적 세포(NCI-H929)에 대해 유사한 결과가 관찰되었다. 모의 가공된 T 세포는 BCMA+ 표적 세포주 중 어느 것에 대하여도 활성을 나타내지 않았다. BCMA 발현에 대해 음성인 표적 세포는 테스트된 임의의 도너로부터의 BCMA-55-LS-O/SSE CAR T 세포에 의해 용해되지 않았다 (데이터는 나타내지 않음).
인큐베이션 후 상청액을 축적된 IFN-, TNF- 및 IL-2 사이토카인에 대해 분석하였다. BCMA-55-LS-O/SSE CAR T 세포가 BCMA 발현 표적 세포와의 결합 후에 다양한 사이토카인을 방출했고; 방출된 사이토카인의 수준은 일반적으로 항원의 증가 수준에 대응한다는(즉, Daudi < RPMI 8226 < K562-BCMA) 결론과 데이터가 일치했다. IFN-에 대한 결과가 도 7에 도시되고; TNF- 및 IL-2에 대해 유사한 데이터가 관찰되었다(데이터는 나타내지 않음). BCMA-55-LS CAR O/SSE T 세포는 BCMA 음성 표적에 대한 반응으로 사이토카인을 방출하지 않았으며 또는 어떠한 표적 세포도 존재하지 않는 경우 사이토카인을 발현하지도 않았고, 이는 BCMA+ 표적 세포에 대한 특이성 및 토닉 신호 전달의 결여를 입증하였다.
가용성 BCMA의 존재 대 부재 하에서 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포의 활성을 평가하였다. BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포를 RPMI-8226 종양 세포, 재조합 BCMA-Fc 또는 NCI-H929 다발성 골수종 세포로부터 유래된 세포 배양 상청액(BCMA 분비 세포주, 즉 상청액은 가용성 BCMA 함유)과 공배양 하였다. 종양 세포 용해 또는 사이토카인 생성은 NCI-H929 유래 가용성 BCMA의 어떠한 농도(최대 1000 ng/mL)에 의해서도 영향을 받지 않는 것으로 관찰되었다. 종양 세포 용해 및 사이토카인 생성 둘 모두는 유사하게 높은 생리학적 수준의 재조합 BCMA에서 단지 최소한으로 감소되었다.
BCMA에 대한 반응으로 증식을 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포 및 모의 가공된 T 세포에서 측정 하였다. 형질 도입된 T 세포를 세포 추적 바이올렛(CTV)으로 표지하고 1:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율에서 72 시간 동안 BCMA 양성 표적 세포, BCMA 음성 표적 세포 또는 무세포의 존재 하에 배양하였다. 유세포 분석법에 의해 증식을 측정하였다. BCMA 양성 표적 세포와의 인큐베이션에 대한 반응으로 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포에 대해서만 T 세포(CD4+ 및 CD8+ T 세포)의 증식이 관찰되었다.
D. 건강한 도너 및 골수종 환자로부터 수확된 형질 도입 T 세포
BCMA+ 및 BCMA-K562 표적 세포와의 24 시간 인큐베이션 후 다수의 골수종 환자로부터 수확된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 T 세포를 건강한 인간 도너로부터 유래된 것과 비교하였다. CAR을 발현하지 않는 T 세포는 또한 음성 대조군으로서 평가되었다. 다수의 골수종 환자로부터 유래된 CAR T 세포는 건강한 인간 도너로부터 유래된 CAR을 발현하는 세포와 비교하여 유사한 발현, 증폭 및 항원 특이적 활성을 입증하였다.
실시예 8: 상이한 스페이서를 갖는 항 BCMA CAR
암호화된 CAR 폴리펩티드의 scFv 및 막관통 세그먼트 사이에 상이한 스페이서 영역을 함유하는 항 BCMA CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물이 생성되었다. 구체적으로, (1) IgG 힌지 영역으로부터 유래된 스페이서(예를 들어, BCMA-5-SS, BCMA-9-SS, BCMA-18-SS, BCMA-23-SS, BCMA-25-SS, BCMA-26-SS, BCMA-52-SS, BCMA-55-SS 및 참조1(VH/VL)-SS); 또는 (2) CD28의 엑토도메인으로부터 유래된 짧은 스페이서(예를 들어 BCMA-52-SCD28 및 BCMA-55-SCD28)을 함유하는 CAR이 생성되었다. 상기 스페이서 함유 CAR을 발현하는 T 세포를 실시예 3에 기재된 바와 같은 스페이서(예를 들어, BCMA-1-LS, BCMA-5-LS, BCMA-9-LS, BCMA-18-LS, BCMA-23-LS, BCMA-25-LS, BCMA-26-LS, BCMA-27-LS, BCMA-52-LS, BCMA-55-LS 및 참조1(VH/VL)-LS)를 함유하는 예시적인 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물로 형질 도입된 T 세포와 비교하였다.
CAR 발현 세포를 1.25:1 및 0.65:1의 이펙터 대 표적(E:T) 비율에서 CAR 발현 T 세포와 함께 배양된 OPM2 인간 다발성 골수종 표적 세포의 용해를 모니터링함으로써 세포 용해 활성에 대해 평가하였다. CAR을 발현하지 않은 세포(모의)를 음성 대조군으로 사용 하였다. 세포 용해 활성을 실시예 7에 기재된 바와 같이 평가하였다. 대부분 평가된 CAR 발현 세포의 경우, 보다 짧은 스페이서를 함유하는 CAR로 조작된 세포와 비교하여 CH2-CH3-힌지 스페이서를 함유하는 CAR을 발현하도록 조작된 세포에 대해서 표적 세포 용해가 보다 많았다(도 8).
실시예 9: 항 BCMA CAR 활성의 차단 활성에 대한 제제(agent)의 평가
BCMA 발현 표적 세포 및 가용성 BCMA 또는 다른 단백질과의 인큐베이션 후 항 BCMA CAR 발현 세포의 기능을 평가하였다. 세포 용해 활성 및 사이토카인 생성은 실질적으로 실시예 7에 기재된 바와 같이 평가되었다.
A. 세포 용해 활성
1. 가용성 재조합 BCMA(rBCMA) OPM2 표적 세포
항 BCMA CAR 발현 T 세포, BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 또는 참조 결합 도메인 함유 CAR을 5:1의 E:T 비율로 0, 0.3, 3, 30 또는 300 ng/mL에서 가용성 BCMA-Fc의 존재 하에 OPM2 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. 도 9a에 도시된 바와 같이, 참조 결합 도메인 함유 CAR 또는 BCMA-52-LS CAR을 발현하는 T 세포의 세포 용해 활성은 3 ng/mL 이상의 BCMA-Fc의 존재 하에서 실질적으로 감소되었지만, BCMA-55-LS CAR을 발현하는 세포의 세포 용해 활성은 최대 300 ng/mL BCMA-Fc의 존재에 의해 차단되지 않았다.
다른 실험에서, 항 BCMA CAR 발현 T 세포(BCMA-1-LS CAR, BCMA-9-LS CAR, BCMA-23-LS CAR, BCMA-25-LS CAR, BCMA-26-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 및 참조1(VH/VL)-LS CAR)을 0, 7.8, 15.6, 31.3, 62.5, 125, 250, 500 및 1000 ng/mL의 농도에서 가용성 BCMA-Fc의 존재하에 5:1의 E:T 비율로 OPM2 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. 도 9b에 도시된 바와 같이, BCMA-55-CAR을 발현하는 세포의 세포 용해 활성은 테스트된 임의의 농도에서 BCMA-Fc의 존재에 의해 차단되지 않았으나; 다양한 농도의 BCMA-Fc의 존재는 다른 항 BCMA CAR을 발현하는 세포의 활성을 상이한 정도로 차단하였다.
2. 다발성 골수종 세포주(H929) 상청액 OPM2 표적 세포
최적화된 스플라이스 부위 제거된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포, BCMA-52-LS-O/SSE CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 참조 결합 도메인 함유 CAR을 H929 다발성 골수종 세포주로부터 0, 111, 333 및 1000 ng/mL 배양 상청액의 존재하에 5:1의 E:T 비율에서 OPM2 표적 세포와 인큐베이션하였다. 가용성 BCMA의 농도를 ELISA에 의해 H929 상청액으로부터 정량화하였다. 도 10a에 도시된 바와 같이, BCMA-52-LS-O/SSE CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 참조 CAR을 발현하는 세포의 세포 용해 활성은 H929 상청액의 존재에 의해 차단되지 않았다.
3. 가용성 재조합 BCMA(rBCMA) 및 H929 상청액 RPMI-8226 표적 세포
추가 연구에서, 최적화된 스플라이스 부위 제거된(O/SSE) BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포를 3:1의 E:T 비율에서 H929 다발성 골수종 세포주로부터의 배양 상청액으로부터 0, 111, 333 및 1000 ng/mL 가용성 BCMA(ELISA에 의해 가용성 BCMA 정량화) 또는 BCMA-Fc의 존재 하에 RPMI-8226 종양 표적 세포와 함께 배양하였다. BCMA-52-LS-O/SSE CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 참조 CAR을 발현하는 세포의 세포 용해 활성은 H929 상청액의 존재에 의해 차단되지 않았다.
4. B 세포 활성화 인자(B-Cell Activating Factor, BAFF)
최적화된 스플라이스 부위 제거된(O/SSE) 항 BCMA CAR 발현 T 세포, BCMA-52-LS-O/SSE CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 참조 CAR을 0, 1, 10, 100 및 1000 ng/mL 재조합 B 세포 활성화 인자(BAFF), 즉 BCMA에 대한 리간드의 존재하에 5:1의 E:T 비율에서 OPM2 표적 세포와 인큐베이션하였다. 도 10b에 도시된 바와 같이, BCMA-52-LS-O/SSE CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR 또는 참조 CAR을 발현하는 T 세포의 세포 용해 활성은 BAFF의 존재에 의해 차단되지 않았다.
B. 사이토카인 방출
1. BCMA-Fc
항 BCMA CAR 발현 T 세포, BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 또는 참조 LS CAR을 5:1의 E:T 비율로 0, 111, 333 및 1000 ng/mL에서 가용성 BCMA-Fc의 존재 하에 OPM2 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. CAR을 발현하지 않는 T 세포(모의)도 평가되었다. 상청액 중 IFN-g, TNF- 및 IL-2의 사이토카인 축적을 평가하였다. 도 11a에 도시된 바와 같이, 참조 CAR 또는 BCMA-52-CAR을 발현하는 T 세포를 함유하는 배양물에서 사이토카인 축적은 111 ng/mL 이상의 BCMA-Fc의 존재 하에서 실질적으로 감소되었으나, 사이토카인 축적의 감소는 테스트된 모든 농도에서 가용성 BCMA-Fc의 존재하에 BCMA-55-CAR을 발현하는 T 세포를 함유하는 배양물에서 보다 적게 관찰되었다.
2. 다발성 골수종 세포주(H929) 상청액
항 BCMA CAR 발현 T 세포, BCMA-52-LS CAR, BCMA-55-LS CAR 또는 참조 LS CAR을 5:1의 E:T 비율로 다발성 골수종 세포주 H929로부터 0, 111, 333 및 1000 ng/mL 배양 상청액의 존재하에 OPM2 표적 세포와 함께 인큐베이션하였다. BCMA-52-CAR, BCMA-55-CAR 또는 참조 CAR을 발현하는 T 세포를 함유하는 배양물에서 사이토카인 축적은 H929 상청액의 존재에 의해 차단되지 않았다(도 11b).
실시예 10: 동물 모델에서 입양 전달 후 항 BCMA CAR 발현 T 세포의
생체 내
항 종양 효과
OPM2 인간 다발성 골수종 이종 이식(xenograft) 마우스 모델(정위 골수 모델) 및 RPMI 8226 인간 다발성 골수종 이종 이식 마우스 모델(피하 이식 모델)을 포함하여 종양 관련 동물 모델에서 세포의 입양 전달 후 종양을 모니터링하여 예시적으로 설계된 항 BCMA CAR 발현 1차 인간 T 세포의 항 종양 효과를 평가하였다.
A. OPM2(정위/골수) 모델
NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgt m1Wjl /SzJ(NSG) 마우스에 개똥벌레 루시퍼라제(OPM2-ffluc)로 형질 감염된 2 x 106개의 OPM2(다발성 골수종) 세포를 정맥 내(i.v.) 주사하였다. 종양 이식 후 14일 째에 마우스는 최적화된 스플라이스 부위 제거(O/SSE) BCMA-23-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 항 BCMA CAR T 세포의 단일 정맥 내(i.v.) 주사를 받았다. 항 BCMA CAR 발현 T 세포를 마우스 당 1 x 106(저 단위 용량, n=8) 또는 3 x 106(고 단위 용량, n=8)개의 CAR 발현 T 세포 중 하나의 단위 용량으로 투여하였고, 두 명의 상이한 도너로부터 유래된 CAR 발현 T 세포에 대해 각 조건을 반복하였다. 대조군으로서, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의, n=8)를 투여하거나 처리되지 않았다(n=3). 생존과 종양 부담을 90 일에 걸쳐 평가하였다.
입양적으로 전달된 CAR 발현(CAR-T) 세포의 항종양 활성을 연구 기간 동안 CAR-T 세포 투여 후 3 내지 6일 간격으로 생체 발광 영상으로 모니터링하였다. 생체 발광 영상을 위해, 마우스에 PBS에 재현탁된 루시페린 기질(CaliperLife Sciences, Hopkinton, MA, 체중 g당 15 g)을 복강내(i.p.) 주사하였다. 본질적으로 문헌[국제 출원 WO2015/095895]에 기재된 바와 같이 마우스를 마취하고 영상화하였다. 총 플럭스(광자/s)를 각 시점에 결정하였다. 음성 대조군 처리 마우스때문에, 동물은 높은 종양 부담으로 인해 CAR-T 세포 투여 후 19일 내지 23일 사이에 희생되었다. 하나의 도너 유래 CAR 발현 T 세포의 대표적인 결과가 도 12a에 도시된다.
도 12a에 도시된 바와 같이, 모든 처리된 마우스에 대해, 모의 가공된 T 세포를 받았거나 또는 T 세포를 받지 않은 마우스에서 종양은 연구 과정을 통해 계속 성장했다. 대조군 마우스에 비해 BCMA-23-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 입양 전달을 받은 마우스는 일반적으로 보다 낮은 정도의 생체 발광 신호를 갖는 것으로 관찰되었고, 이는 처리된 동물에서 시간에 따른 종양 성장의 감소 및/또는 보다 낮은 정도의 종양 성장을 나타낸다. 종양 성장에 미치는 영향은 예시적으로 테스트된 항 BCMA CAR에 대해 항 BCMA CAR 발현 세포의 보다 높은 단위 용량에서 보다 컸다.
상기 기재된 바와 같이 처리된 마우스의 생존을 CAR 발현 T 세포의 주입 후 79일까지 평가하고 비교하였다. 하나의 도너로부터 대표적인 생존 곡선, 즉 카플란 마이어(Kaplan-Meier) 방법(GraphPad Prism 7.0, GraphPad Software, La Jolla)이 도 12b에 도시된다. 도시된 바와 같이, 저 단위 용량 및 고 단위 용량으로 테스트된 항 BCMA CAR-T 세포는 처리되지 않았거나 또는 모의 가공된 T 세포를 받은 마우스와 비교하여 마우스의 보다 높은 생존율을 초래했다. 마우스를 또한 뒷다리 마비(hind limb paralysis, HLP), 20% 초과의 체중 감소(>20% BWL) 및 이식편 대 숙주 질병(graft-versus-host disease, GvHD)을 포함한 종양 부담과 관련된 임상 징후의 제시에 대해 평가하였다. 상기 임상 징후를 가진 마우스의 수는 처리를 받지 않았거나 또는 모의 T 세포를 받은 마우스에 비해 감소되었다.
B. RPMI-8226(피하) 모델
NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ(NSG) 마우스에 RPMI 8226(말초 혈액 형질세포종) 세포를 피하 주사 하였다. 27일째에, 마우스를 대략 130 mm3의 최소 평균 종양 부피에 기초하여 무작위로 그룹화하였다. 29일째에, 마우스에 최적화된 스플라이스 부위 제거된(O/SSE) BCMA-23-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 1차 인간 T 세포(CD4+ 및 CD8+)를 1 x 106(저 단위 용량, n=8) 또는 3 x 106(고 단위 용량, n=8)개의 CAR 발현 T 세포의 단위 용량으로 단일 정맥(i.v.) 주사했다. 두 명의 상이한 도너로부터 유래된 CAR 발현 T 세포에 대해 각 조건을 반복하였다. 모의 가공된 세포를 투여받은 마우스 및 처리되지 않은 마우스를 음성 대조군으로 사용하였다. 종양 부피를 CAR T 세포 전달 후 최대 152일까지 매주 2회 캘리퍼로 측정하였고, 20% 체중 감소, 빈사 상태이거나 또는 종양 부피가 1500 mm3를 초과할 경우 안락사시켰다. 생존 곡선은 카플란 마이어 방법(GraphPad Prism 7.0, GraphPad)을 사용하여 CAR T 세포 전달 후 최대 108일까지 플롯팅되었다.
하나의 도너로부터 유래된 CAR 발현 T 세포로부터의 종양 성장 및 생존을 위한 대표적인 결과가 도 13a 및 도 13b 각각에 도시된다. 도 13a에 도시된 바와 같이, 종양은 음성 대조군 세포의 입양 전달 후 또는 처리를 받지 않은 마우스에서 연구 과정을 통해 계속 성장하였다. 대조군 마우스에 비해, BCMA-23-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 T 세포가 입양 전달된 마우스는 CAR 발현 T 세포를 저 단위 용량 또는 고 단위 용량으로 받은 후에 종양 부피가 실질적으로 감소한 것으로 나타났다(도 13a). 본 모델에서, 항 BCMA CAR T 세포의 테스트된 두 단위 용량으로 투여된 마우스 모두가 CAR T 세포 전달 후 20일까지 종양 성장의 완전한 퇴보를 나타내었으며, 이는 도 13a에 도시된 연구 평가 기간 내내 계속되었다.
항 BCMA CAR 발현 T 세포를 투여한 마우스의 생존률도 대조군 그룹보다 실질적으로 더 컸다(도 13b). CAR T 세포 주입 후 108일째에, BCMA-26-LS-O/SSE CAR 발현 T 세포가 고 단위 용량으로 처리된 그룹에서 두 마리의 동물이 종양 제거 후에 죽었으나, 이는 본 모델에서 이식편 대 숙주 질병(GVHD) 증상때문일 가능성이 있다. 다른 모든 CAR-T 세포 처리된 마우스는 CAR-T 세포 투여 후 최대 108일까지 살아 남았다.
혈액에 CAR+ T 세포의 존재를 모니터링하여 처리된 마우스에서 CAR 발현 T 세포의 약동학을 평가하였다. 각 처리군의 8 마리 마우스를 4 마리의 마우스 2 그룹으로 나누었다. 각 마우스가 CAR-T 세포 투여 후 4 주 동안 격주로(즉, CAR-T 세포 투여 후 7, 14, 21 및 28일째) 채혈되도록 2 그룹 사이에 교대로 안구뒤 채혈에 의해 매주 혈액을 뽑았다. 유세포 분석(FlowJo software, Treestar Inc., Ashland, OR)에 의해 혈액 L 당 대리 마커 또는 가용성 BCMA-Fc 및 비-CAR T 세포에 대해 항체를 이용하여 결정된 바와 같이, CAR 발현 T 세포의 수에 대해 수집된 혈액을 분석하였다.
하나의 도너에 대해 7, 14, 21 및 28일째에 혈액 L 당 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 수가 각각 도 14a 및 도 14b에 도시되고, 두번째 도너에 대해 각각 도 15a 및 도 15b에 도시된다. 도시된 바와 같이, CAR-T 증폭은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 고 단위 용량 및 저 단위 용량 그룹에서 발생했으며, 두 도너 모두에 대해 CAR T 세포 전달 후 14일째에 최대 또는 피크 증폭이 관찰되었다. CAR-T 세포 전달 후 모든 평가 시점에, 두 명의 도너 모두에 대해 CD4+ CAR+ T 세포에 비해 CD8+ CAR+ T 세포의 수가 보다 큰 것으로 관찰되었다(도 14a 및 도 14b 또는 도 15a 및 도 15b 비교). BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 T 세포는, 서로 유사한 발현을 나타낸, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-26-LS-O/SSE CAR 작제물을 발현하는 T 세포에 비해 CAR을 더 많이 발현했다. 상기 결과는 BCMA-55-LS CAR 발현 T 세포가 종양 제거 중에 혈액에서 순환하는 것으로 확인될 수 있음을 입증한다.
실시예 11: 리포터 세포주에서 Nur77-tdTomato 리포터 신호에서 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)를 통한 신호 평가
Nur77 녹-인(knock-in) 리포터를 함유하는 예시적인 안정적 주르카트 T 세포 리포터 세포주가 생성되었으며, 여기에서 상기 리포터 분자를 암호화하는 핵산 서열은 상동성 의존 수선(homology dependent repair, HDR)을 통해 내인성 Nur77 유전자좌로 녹-인되었다. 고아 핵 호르몬 수용체 Nur77(Nr4a1로도 명명)은 T 세포 수용체로부터 신호의 활성화에 의해 및/또는 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 함유하는 분자를 통해 유도된 즉각적인 초기 반응 유전자이다. Nur77이 T 림프구에서 즉각적인 초기 유전자 생성물이기 때문에 Nur77-리포터 세포주가 CAR 발현 세포에서 T 세포 활성화를 평가하는데 사용되었고; 전사는 CD3 제타 신호 전달의 하류에서 특이적으로 개시되며 사이토카인 또는 TLR 매개 신호의 영향을 받지 않는다. 주르카트 T 세포 클론 E6-1(ATCC TIB-152)에서, 적색 형광 단백질(red fluorescent protein, RFP; 예컨대 tdTomato 형광 단백질)을 암호화하는 핵산 서열이, 상동성 의존 수리(HDR)에 의한 유전자 파괴 부위 근처에서 통합을 위해 전이 유전자를 표적화하고 유전자 편집을 이용하여 유전자 파괴를 도입함으로써 Nur77 발현의 리포터로서 RFP의 공발현을 허용하도록 정지 코돈 앞 및 자가 절단(self-cleaving) T2A 요소(서열 번호: 631, 653 또는 654에 제시된 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열 번호: 686 또는 687에 제시된 서열) 뒤 마지막 엑손에서 내인성 Nr4a1(Nur77) 유전자와 인-프레임(in-frame) 통합을 위해 표적화되었다. Nur77-tdTomato 리포터 세포주는 다양한 항 BCMA 키메라 항원 수용체를 발현하도록 조작되었으며, 리포터 발현이 평가되었다.
실시예 3에 기재된 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR), 즉 BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-25-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 바이러스 벡터가 Nur77-tdTomato 리포터 주르카트 T 세포주로 도입되었다. 20시간의 공배양 후 플레이트 결합 재조합 BCMA 양의 증가에 대한 반응으로 또는 예시적인 다발성 골수종 세포주에 대한 반응으로 Nur77 신호 전달의 활성에 대해 항 BCMA CAR 발현 리포터 세포를 평가하였다.
A. 플레이트 결합 재조합 BCMA에 대한 반응에서 Nur77 신호 전달
BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입된 리포터 세포를 다양한 농도(0.008 g/mL, 0.04 g/mL, 0.2 g/mL, 1 g/mL 및 5 g/mL)의 BCMA-Fc(IgG의 Fc 영역에 대해 C-말단에서 융합된 가용성 인간 BCMA) 융합 폴리펩티드로 밤새 코팅된 96 웰 세포 배양 플레이트에서 6 시간동안 인큐베이션했다. 재조합 Fc 폴리펩타이드를 대조군(Fc 대조군)으로 사용하였다. 도 16a에 도시된 바와 같이, 항 BCMA CAR 발현 리포터 세포를 재조합 항원으로 자극한 후에 tdTomato 발현의 단위 용량 의존적 증가가 관찰되었다.
또 다른 연구에서 BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 및 BCMA-25-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 리포터 세포를 BCMA-Fc의 2배 연속 희석 10개와 함께 인큐베이션하였다. 항 CD19 CAR을 발현하는 리포터 세포를 비-표적 대조군으로 사용하였다. CAR을 발현하는 세포의 집단 내에서 tdTomato 발현 세포의 백분율(대리 마커의 발현에 기초하여 결정된 바와 같음)을 결정하였다. 도 16b에 도시된 바와 같이, 재조합 항원으로 자극한 후에 tdTomato 발현의 단위 용량 의존적 증가가 관찰되었다. 비-표적 항원에 대하여 CAR을 발현하는 대조군 리포터 세포에 의해 BCMA-Fc로의 자극에 대한 어떠한 반응도 관찰되지 않았다.
B. 다발성 골수종 세포주에 대한 반응에서 Nur77 신호 전달
BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입된 리포터 세포를 NALM6, Daudi, RPMI-8226, MM1S, OPM2 및 H929 세포와 20시간 동안 인큐베이션하였다. 항 BCMA CAR 발현 리포터 세포에 자극을 준 세포주에 따라 RFP 발현의 상이한 수준이 관찰되었다.
항 BCMA CAR 발현 리포터 세포를 자극하는데 사용된 다발성 골수종 세포주 표면의 BCMA 발현량을 평가하기 위해, 세포는 항 인간 BCMA 항체(BioLegend, San Diego, CA)로 염색되었으며, 유세포 분석 이벤트는 LSRFortessa 유세포 분석기(BD Biosciences, San Jose, CA)에서 수집되었고 데이터는 FlowJo software(Treestar Inc., Ashland, OR)로 분석되었다. 동일한 항 인간 BCMA 항체로 코팅된 Quantum Simply Cellular 항 마우스 IgG 마이크로스피어 비드를 사용하여 BCMA 항원 밀도(AD)를 결정하였다. 마이크로스피어를 표지하였고 BCMA 항체 결합 용량을 계산하였다. 상이한 항원 밀도의 범위를 나타내는, 각각의 다양한 상이한 BCMA 발현 세포와 함께 인큐베이션되었을 때 상기 결과는 CAR 발현 리포터 세포에서 특정 CAR 활성을 나타내는 파라미터(리포터의 검출 가능한 수준)의 검출을 확인했으며, 표적 음성 세포와 인큐베이션되었을 때는 아니었다. RFP 리포터 신호의 정도는 일반적으로 표면 BCMA 발현의 수준과 상관관계가 있다. 보다 낮은 수준의 표면 BCMA 발현이 관찰된 세포와 인큐베이션하였을 때, CAR 발현 리포터 세포는 활성을 나타내는 보다 낮은 수준의 리포터를 나타냈다. 유사하게, 보다 높은 수준의 표면 BCMA 발현이 관찰된 세포주와 인큐베이션된 CAR 발현 리포터 세포는 활성을 나타내는 보다 높은 수준의 리포터를 나타냈다. 따라서, 다양한 다발성 골수종 세포주 표면의 BCMA 발현의 밀도는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 리포터 세포의 항원 특이적 활성을 나타내는 파라미터의 수준과 서로 관련이 있는 것으로 관찰되었으며, 이는 CAR을 발현하는 세포가 다양한 항원 밀도에 걸쳐 활성을 나타낼 수 있고, 일부 측면에서 증가된 항원 수준으로 증가된 활성을 나타낼 수 있음을 나타낸다.
실시예 12: 상이한 길이의 스페이서를 함유하는 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 리포터 세포주에서 Nur77-tdTomato 리포터 신호의 평가
동일한 항원 결합 도메인을 함유하지만 상이한 길이의 스페이서를 함유하는 항 BCMA CAR을 발현하도록 조작된 세포에서의 리포터 발현이 표적 세포와의 공배양 후 결정되었다. 실시예 11에 기재된 바와 같이 생성된 주르카트 Nur77-tdTomato 세포는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR(서열 번호: 649에 제시되고, 변형된 IgG 힌지-CH2-CH3으로부터 유래된 보다 긴 스페이서 함유) 또는 또는 BCMA-55-SS CAR(서열 번호: 363에 제시되고, IgG4 힌지로부터 유래된 보다 짧은 스페이서 함유)을 발현하도록 조작되었다. 세포를 다양한 E:T 비율에서 인간 BCMA 발현 K562 표적 세포(BCMA-K562) 표적 세포와 공배양하였다. 상이한 항원(항 CD19 CAR)을 표적화하는 CAR을 발현하는 리포터 세포를 대조군으로 사용하였다. 도 17에 도시된 바와 같이, 상이한 스페이서 길이를 함유하는 항 BCMA CAR에서 Nur77-tdTomato 발현 수준이 상이한 것으로 관찰되었고, BCMA를 발현하는 표적 세포에 의한 자극에 대한 단위 용량-의존적 반응이 관찰되었다.
실시예 13: 상이한 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)로부터 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 평가
Nur77-tdTomato 리포터 세포는, 형질 도입에 대한 대리 마커가 수퍼-폴드 녹색 형광 단백질, sfGFP 인 점을 제외하고 상기 실시예 11에 기재된 바와 같이, 항 CD19 CAR(대조군), BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또한 BCMA-25-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입되었다. 본 모델에서, 토닉 신호 전달은 BCMA 항원 자극의 부재 하에서 tdTomato 발현으로 나타냈다.
BCMA-52-LS-O/SSE CAR로 표시된 상이한 항 BCMA scFv를 함유하는 항 BCMA CAR을 암호화하는 바이러스 벡터가 또한 생성되어 리포터 세포로 형질 도입되었다. 다양한 CAR 발현 세포를 항원 자극없이 인큐베이션하여 3 일 동안 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하고 유세포 분석에 의해 tdTomato의 발현을 평가하였다.
도 18에 도시된 바와 같이, 다양한 CAR 발현 세포주는 항원 자극의 부재 하에서 다양한 정도의 tdTomato 발현을 나타냈다. CAR 발현 세포(GFP+ 세포로 표시) 중에서 tdTomato+ 세포(토닉 리포터 활성화 표시)의 백분율은 상이한 CAR을 발현하는 세포에서 0.23% 내지 19.3%로 다양하였다.
실시예 14: 상이한 세포 내 도메인을 함유하는 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)로부터 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 평가
상이한 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 다양한 CAR을 발현하는 리포터 세포에서 항원 비의존적(토닉) 신호 전달을 평가하였다. Nur77-tdTomato 리포터 세포는, CAR이 4-1BB 또는 CD28로부터 유래된 세포 내 도메인을 함유하고 형질 도입에 대한 대리 마커가 절단형 수용체인 점을 제외하고 실시예 11 및 실시예 13에 기재된 바와 같이 일반적으로 생성되는 항 CD19 CAR, BCMA-55-LS-O/SSE CAR, BCMA-26-LS-O/SSE CAR, BCMA-23-LS-O/SSE CAR 또는 BCMA-52-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입되었다. 다양한 CAR 발현 세포를 항원 자극없이 인큐베이션하여 항원 비의존적(토닉) 신호 전달의 정도를 평가하고 유세포 분석에 의해 tdTomato의 발현을 평가하였다.
도 19a 및 도 19b에 도시된 바와 같이, 다양한 CAR에서 4-1BB- 및 CD28- 유래 세포 내 도메인은 CAR+ 세포 중에서 tdTomato+ 세포의 백분율로 나타낸 바와 같이(대리 마커의 발현에 기초하여 결정된 바와 같음) 상이한 수준의 토닉 신호 전달을 초래하였다.
실시예 15: 리포터 세포주를 이용한 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)의 항원 교차 반응성 평가
인간 BCMA에 특이적이고 실시예 11에 일반적으로 기재된 바와 같이 생성된 BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하도록 조작된 Nur77-tdTomato 세포주를 사용하여 CAR의 항원 결합 도메인의 종 교차 반응성을 평가하였다. BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 리포터 세포주를 2:1 또는 5:1의 E:T 비율에서 인간 BCMA(huBCMA), 뮤린 BCMA(muBCMA) 또는 시노몰구스 원숭이 BCMA(cynoBCMA)를 발현하는 K562 인간 골수성 백혈병 세포와 공배양하였다. tdTomato+ 세포의 백분율을 유세포 분석으로 결정하였다.
도 20a에 도시된 바와 같이, 테스트된 두 E:T 비율 모두에서 huBCMA를 발현하는 표적 세포와 함께 배양될 때 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포의 90% 이상이 tdTomato+ 인 것으로 관찰되었다. 그에 비해, muBCMA를 발현하는 표적 세포와 함께 배양될 때, 매우 극소수의 세포가 tdTomato+였으며, 이는 매우 낮은 교차 반응성을 나타낸다. cynoBCMA를 발현하는 표적 세포와 함께 배양될 때, 세포의 대략 10 내지 20%가 tdTomato+였으며, 이는 cynoBCMA에 의한 일부 교차 반응성을 나타낸다.
BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 발현하는 리포터 세포주를 96 웰 편평한 바닥 플레이트 상에 코팅된 huBCMA 및 cynoBCMA의 증가하는 농도(0, 0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 및 100 ㎍/mL)로 배양하였다. CAR+ 세포에서 tdTomato+ 세포의 백분율 및 tdTomato 신호의 평균 형광 강도(mean fluorescence intensity, MFI)를 결정하였다.
도 20b 및 도 20c에 도시된 바와 같이, cynoBCMA는 낮은 농도에서 BCMA-55-LS-O/SSE CAR과 교차 반응하지 않았으나 높은 농도에서 교차 반응하였다.
실시예 16: 리포터 세포주를 이용한 항 BCMA 키메라 항원 수용체(CAR)의 항원 특이성 평가
BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포의 활성화에 대한 항원 특이성을 BCMA 발현 MM1S 표적 세포에 대한 반응으로 주르카트 Nur77 리포터 세포의 활성화를, 실시예 5C에서 BCMA-55-scFv Fc에 의해 낮은 수준으로 인식되는 것으로 나타난 비BCMA 단백질, 카텝신 G(CTSG)를 발현하도록 조작된 K562 표적 세포와 비교함으로써 테스트하였다. 음성 대조군으로서, 모 K542 세포도 평가하였다. 간단히, BCMA-55-LS-O/SSE CAR을 암호화하는 바이러스 벡터로 형질 도입된 Nur77 리포터 세포를 상기 열거된 표적 세포와 함께 5:1, 1:1 및 1:5의 이펙터:표적 세포의 비율에서 24 시간 동안 인큐베이션하였고 유세포 분석법에 의해 RFP를 발현하는 세포(RFP+)의 백분율을 측정함으로써 활성화를 결정하였다. 결과는 BCMA-55-LS-O/SSE CAR 발현 세포가 BCMA 발현 MM1S 세포에 의해 활성화되었으나 BCMA 음성 표적 세포(비-BCMA 항원, CTSG를 발현하는 모 또는 세포)에 의해서는 활성화되지 않았다.
실시예 17: BCMA-52 및 BCMA-55 scFv에 대한 결합 에피토프 결정
예시적인 항 BCMA scFv 클론(BCMA-1, BCMA-5, BCMA-9, BCMA-23, BCMA-25, BCMA-26, BCMA-52 및 BCMA-55 항 BCMA scFv)에 의해 인식되는 예를 들어, 특이적으로 결합되는 에피토프가 펩티드의 스캐폴드 상으로의 화학적 결합에 의한 전체 불연속 에피토프 맵핑을 사용하여 평가되었다(CLIPS; Pepscan Presto BV, Lelystad, The Netherlands; 예를 들어, Timmerman et al., (2007) J. Mol. Recognit. 20: 283-329 참조). 마우스 Fc와 융합된 것(scFv-mFc)과 같은 항 BCMA scFv 클론을 사용하여 맵핑을 수행하였다.
인간 BCMA의 아미노산 잔기 1-54(서열 번호: 367의 아미노산 잔기 1-54로 제시)의 선형 및 입체 구조적 펩티드 라이브러리를 조합 매트릭스 설계에 기초하여 생성하였다. 단일 루프, α-헬릭스, β-턴, 조합 및 선형 이황화 브릿지 모방체 및 불연속 에피토프 모방체를 포함하는 선형 펩티드 및 구조적 모방체를 아미노 기능화된 고체 지지체 상에 양성 및 음성 대조 펩티드와 함께 사용하였다.
에피토프 라이브러리에서 펩티드에 대한 결합 친화도를 ELISA를 사용하여 결정하였다. 펩티드 어레이를 scFv를 함유하는 용액과 함께 4 ℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 친화도 정보를 반복 스크리닝에 사용하여 에피토프의 서열 및 입체 구조를 정의하였다. 두 개 이상의 루프에 대한 친화도 정보의 히트 맵이 생성되었다.
평가된 scFv는 BCMA 펩티드 서열의 여러 불연속 펩티드 신장을 포함하는 입체 구조 에피토프를 인식하는 것으로 관찰되었다. BCMA-1, BCMA-5, BCMA-23 및 BCMA-25 scFv는 선형 형태로 인식될 수 있는 30SNTPPLTCQR39(서열 번호: 379에 제시) 의 펩티드에 결합하는 것으로 관찰되었다. 일부 측면에서, 상기 항체는 서열 번호: 379의 상기 펩티드의 잔기를 포함하는 비선형 또는 선형 에피토프를 인식하고, 일부 측면에서 21CIPCQLR27(서열 번호: 375에 제시), 30SNTPPLTCQR39 및/또는 44SVTNSVK50(서열 번호: 393에 제시)의 잔기를 추가로 포함하는 비선형 에피토프를 인식한다. BCMA-26 scFv는 8CSQNEYF14(서열 번호: 410에 제시) 및 17LLHACIPCQLR27(서열 번호: 428에 제시)에 존재하는 잔기를 포함하는 에피토프를 인식하는 것으로 관찰되었다. BCMA-52-scFv-mFc는 10QNEYF14(서열 번호: 637), 21CIPCQL26(서열 번호: 638) 및 7CQRYC41(서열 번호: 639)와 같은 불연속 펩티드 잔기를 함유하는 에피토프에 결합하는 것으로 관찰되었다. BCMA-55-scFv-mFc는 BCMA 폴리펩티드 서열의 불연속 부분을 포함하는 펩티드에 존재하는 잔기를 함유한 에피토프에 특이적으로 결합하는 것으로 관찰되었으며, 개별적으로 1MLMAG6(서열 번호: 640), 13YFDSL17(서열 번호: 779) 및 25QLRCSSNTPPL35(서열 번호: 642) 서열을 포함했다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 수용체는, 예를 들어 각각의 불연속 펩티드가 MLMAG(서열 번호: 640), YFDSL(서열 번호: 779) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642) 서열을 갖는 것 중 하나 이상 안에 존재하는 잔기를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 측면에서 제공된 항체 또는 수용체는, 예를 들어 각각의 불연속 펩티드가 MLMAG(서열 번호: 640), YFDSLL(서열 번호: 641) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642) 서열을 갖는 것 중 하나 이상 안에 존재하는 잔기를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하며; 일부 측면에서, 제공된 항체 또는 수용체는, 예를 들어 각각의 불연속 펩티드가 MLMAG(서열 번호: 640), QNEYFDSLL(서열 번호: 780) 및 QLRCSSNTPPL(서열 번호: 642) 서열을 갖는 것 중 하나 이상 안에 존재하는 잔기를 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
실시예 18: 재발성 또는 불응성 다발성 골수종(Multiple Myeloma, MM)을 가진 대상체에게 항 BCMA CAR 발현 세포의 투여
B 세포 성숙항원(B-cell maturation antigen, BCMA)에 특이적인 CAR을 발현하는 자가 T 세포를 함유한 키메라 항원 수용체(chimeric antigen-receptor, CAR) 발현 T 세포 조성물을 재발성 및/또는 불응성 다발성 골수종(MM)을 가진 인간 대상체에게 투여하였다.
A. 대상체 및 치료
BCMA에 특이적인 예시적인 CAR을 발현하도록 조작된 자가 T 세포를 함유하는 조성물을, 3개 이상의 사전 치료(각각의 경우 대상체가 예컨대 금기를 나타내는 식으로 상기 치료를 받을 후보가 아니지 않은 한, 상기 3개 이상의 사전 치료는 적어도 프로테아솜 억제제, 면역조절제 및 항 CD38 단클론 항체를 포함)를 받은 재발성 또는 불응성(relapsed or refractory, R/R) 다발성 골수종(MM)을 가진 성인 인간 대상체에게 투여하였다.
상기 투여된 T 세포 조성물은 MM을 가진 개별 대상체로부터의 백혈구 성분 채집술 샘플로부터 CD4+ 및 CD8+ 세포 집단의 면역 친화도 기반 농축, 예컨대 1:1 또는 약 1:1 비율로 상기 집단의 세포를 결합 및 세포 형질 도입 및 증폭 및 동결 보존 및 다양한 CD4+ 대 CD8+ CAR T 세포 비율을 갖는 세포의 생성을 포함하는 공정 단계에 세포를 노출시키는 것을 포함한 공정에 의해 생성되었다. 상기 CAR은 BCMA-55 유래 scFv 결합 도메인, 변형된 IgG 유래 CH2-CH3-힌지 스페이서, CD28 막관통 도메인 및 연속하여 4-1BB 엔도도메인 및 CD3제타 엔도도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역을 함유했다. 항 BCMA CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열에는 확인된 잠재적 숨은 스플라이스 공여체 및 수용체 부위가 포함되지 않았다.
CAR+ T 세포 주입 2 내지 7일 전에(및 CAR-T 주입 적어도 48시간 전에 완료) 대상체는 플루다라빈(flu, 30 mg/m2/일) 및 시클로포스파미드(Cy, 300 mg/m2/일)로 3일 동안 림프구 제거 화학요법(lymphodepleting chemotherapy, LDC)을 받았고, 상기 LDC는 CAR-T 주입 적어도 48시간 전에 완료되었다. 동결 보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 침대 옆에서 해동하였고, 주입일을 1일로 나타냈다. 1일째, 5 x 107개의 총 CAR 발현 T 세포를 함유하는 단위 용량 수준 1(dose level 1, DL1)의 단일 단위 용량 또는 1.5 x 108개의 총 CAR 발현 T 세포를 함유하는 단위 용량 수준 2(dose level 2, DL2)의 단일 단위 용량과 같은 CAR 발현 T 세포 단위 용량을 대상체에게 투여하였다.
특정 분석 시점에서, 19명의 성인 대상체가 상기 치료를 포함하는 진행중인 임상 연구에 등록했다. 상기 특정 시점에 상기 19명의 대상체 중 13명의 대상체에 각각 DL1 또는 DL2 중 하나로 항 BCMA CAR+ 세포를 투여하였다. 진행 중인 연구에서 상기 특정 시점에 상기 13명의 대상체 중 8명의 대상체가 안전성을 나타내는 특성에 대해 평가 가능했다(= 1 mo. 후속 조치 기준 평가 가능성)(n = 5 DL1; n = 3 DL2). 한 대상체는 LDC 이후 패혈증으로 인해 CAR+ T 세포를 받을 수 없었고, 이는 CAR+ T 세포 투여 전에 사망으로 이어졌다. 국제 골수종 워킹 그룹(International Myeloma Working Group, IMWG) 동일 표준의 반응 기준(Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17(8):e328-346)에 따라 3명의 대상체(모두 DL1)가 확인된 반응(=2 mo. 후속 조치 기준 평가 가능성)에 대해 본 시점에서 평가 가능했다.
상기 시점에서 평가된 상기 8명의 대상체에 대해, 중간 후속 조치는 5주(4 내지 13주 범위)였다. 평균 연령은 53세(36 내지 66세 범위)였고, 진단으로부터 4년(2 내지 12년 범위)의 중간 시기였다. 대상체는 MM에 대해 평균 10개의 선행 요법(4 내지 15개 범위)을 받았다. 8명의 대상체 중 4명(50%)이 보르테조밉(bortezomib), 카르필조밉(carfilzomib), 레날리도마이드(lenalidomide), 포말리도마이드(pomalidomide) 및 항 CD38 단클론 항체에 대해 불응성(마지막 치료 후 60일 이내에 반응이 없거나 진전이 없음)이었다. 8명의 대상체 중 7명(88%)이 앞서 자가 줄기 세포 이식을 받았고 8명 중 4명(50%)이 IMWG 고위험 세포유전을 가졌다.
진행 중인 연구의 시점에서 평가시, DL1 또는 DL2를 받은 것으로 평가된 대상체에서 DLT가 관찰되지 않았다. 상기 시점에서 8명 중 6명(75%)의 대상체에서 모두 1 또는 2 등급의 사이토카인 방출 증후군(Cytokine release syndrome, CRS)이 관찰되었다. 8명의 대상체 중 상기 시점에서 CRS의 중간 개시는 9일(4 내지 10일 범위)이었고, 중간 지속 기간은 4.5일(2 내지 19일 범위)이었다. 상기 시점에서 2 등급 CRS를 가진 대상체 중 아무도 혈관 압축기 지원이 필요하지 않았으며 1명의 대상체만이 토실리주맙(tocilizumab)을 받았다. 대상체 중 아무도 3 등급 이상의 CRS를 나타내지 않았다. 8명 중 3명(38%)의 대상체가 신경학적 부작용(adverse event, AE)을 경험했다. 상기 시점에서 8명의 대상체 중 2명이 1 등급 이벤트를 나타냈고, 1명이 3 등급 이벤트(무기력)를 나타내었으며 스테로이드를 받은 후 24시간 이내에 해결되었다. 신경학적 AE를 경험한 3명의 대상체에 대해, 신경학적 AE의 개시는 9, 11 및 12일이었고, 지속 기간은 각각 2, 3 및 1일이었다. 상기 시점에서 분석 결과로 3 등급 신경 독성(neurotoxicity, NT)을 경험한 대상체에서 LDC를 받기 직전에 2차 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia, PCL)이 발달했다.
상기 시점에서 모든 8명의 대상체는 2차 PCL을 갖는 대상체를 포함하여 객관적인 반응의 증거를 갖는 것으로 관찰되었다. DL1으로 투여된 모든 3명의 대상체는 확인된 반응(1명 부분 반응, PR(partial response); 2명 엄격한 완전한 반응, sCR(stringent complete response))을 달성한 것으로 관찰된 반면, 나머지 대상체는 확인되지 않은 상태로 남았다(1명 완전한 반응, CR(complete response); 2명 아주 좋은 부분 반응, VGPR(very good partial response); 1명 PR, 1명 MR). 평가 시점 현재, 어떤 대상체도 진행된 것으로 관찰되지 않았다.
상기 결과에서 평가된 단위 용량 수준에서, 항 BCMA CAR 세포 요법의 투여가 진행중인 임상 연구에서 본 시점에 보고된 DLT 없이 유리한 안전성 프로필을 나타낸 것으로 나타났다. 상기 결과는 본 시점에서 3 등급 이상 NT의 발생이 낮았으며, 3 등급 이상 CRS가 임상 반응으로 관찰되지 않았다는 결론과 일치하였다.
본 발명은 본 발명의 다양한 측면을 설명하기 위해, 예를 들어 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위를 제한하려는 것이 아니다. 설명된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변경이 본 명세서의 설명과 가르침에서 명백해질 것이다. 그러한 변형은 공개의 진정한 범위와 정신에서 벗어나지 않고 실행될 수 있으며, 본 개시의 범위 내에 속하는 것이 의도된다.
서열
SEQUENCE LISTING
<110> Juno Therapeutics, Inc.
Memorial Sloan Kettering Cancer Center
SATHER, Blythe D.
SMITH, Eric L.
<120> CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR
B-CELL MATURATION ANTIGEN AND ENCODING
POLYNUCLEOTIDES
<130> 735042009940
<140> PCT/US2018/058811
<141> 2018-11-01
<150> US 62/580,439
<151> 2017-11-01
<150> US 62/580,445
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<151> 2017-11-07
<150> US 62/582,938
<151> 2017-11-07
<150> US 62/596,765
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<150> US 62/614,960
<151> 2018-01-08
<150> US 62/614,963
<151> 2018-01-08
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<151> 2018-05-01
<150> US 62/665,447
<151> 2018-05-01
<160> 856
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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-26, -32, -33, -35, -36, -37, -38, -40, -41, -47,
-48, -49 CDR-H1 (aa) Kabat numbering
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-44, -45, -46, -51 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
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-32, -35, -36, -37, -38, -40, -47, -48, -49 CDR-H2
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Gly
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Gly
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-44, -45, -46, -51 and VH-2 CDR-H3 (aa)
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<211> 9
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<223> Synthetic
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<220>
<223> Synthetic
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-42, -44, -45, -46, -51 CDR-H1 (aa) Chothia
numbering
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<211> 7
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-32, -33, -35, -36, -37, -38, -40, -41, -47, -48,
-49 CDR-H1 (aa) Chothia numbering
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<223> Synthetic
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Chothia numbering
<400> 15
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
1 5
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<211> 8
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -25, -31, -42,
-44, -45, -46, -51 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 16
Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr
1 5
<210> 17
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -9, -10, -12, -17, -21, -22, -23, -26,
-32, -35, -36, -37, -38, -40, -47, -48 CDR-H2 (aa)
Chothia numbering
<400> 17
Ser Ser Ser Gly Ser Thr
1 5
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<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11, -20, -24, -27, -29, -30, -34, -39 CDR-H2
(aa) Chothia numbering
<400> 18
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1 5
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -25, -31, -42,
-44, -45, -46, -51 CDR-H1 (aa) AbM numbering
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1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic
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-32, -33, -35, -36, -37, -38, -40, -41, -47, -48,
-49 CDR-H1 (aa) AbM numbering
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Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser
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<211> 10
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-10 CDR-H1 (aa) AbM numbering
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Gly Phe Pro Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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AbM numbering
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Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -25, -31, -42,
-44, -45, -46, -51 CDR-H2 (aa) AbM numbering
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Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -9, -10, -12, -17, -21, -22, -23, -26,
-32, -35, -36, -37, -38, -40, -47, -48, -49 CDR-H2
(aa) AbM numbering
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Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11, -20, -24, -27, -29, -30, -34, -39 CDR-H2
(aa) AbM numbering
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Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly
1 5 10
<210> 26
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Ala
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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1 5 10
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu His Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
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Ala
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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1 5 10 15
Ala
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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Arg Ala Ser Gln Asp Ile Gly Asp Tyr Leu Ala
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<211> 11
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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Gly Gly Asn Asn Ile Glu Arg Lys Asn Val His
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<220>
<223> Synthetic
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1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-2 CDR-L2 (aa)
<400> 38
Ala Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
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<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-6 CDR-L2 (aa)
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Ala Ala Ser Asn Val Glu Asp
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 42
Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9, -26, -35 CDR-L2 (aa)
<400> 43
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Asp Asp Ser Asp Arg Ala Ser
1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 CDR-L2 (aa)
<400> 45
Asn Ser His Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12 CDR-L2 (aa)
<400> 46
Asp Asn Ala Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1 CDR-L3 (aa)
<400> 47
Gln Gln Tyr Phe Ser Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 48
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2 CDR-L3 (aa)
<400> 48
Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro Thr
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-3, -46 CDR-L3 (aa)
<400> 49
Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 50
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-4 CDR-L3 (aa)
<400> 50
Gln Gln Tyr Tyr Ser Leu Pro Leu Ser
1 5
<210> 51
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-5 CDR-L3 (aa)
<400> 51
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 52
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 CDR-L3 (aa)
<400> 52
Gln Gln Ser His Met Tyr Pro Pro Thr
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 53
Gln Gln Tyr His Ser His Pro Trp Thr
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 54
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9 CDR-L3 (aa)
<400> 55
His Val Trp Asp Arg Ser Arg Asp His Tyr Val
1 5 10
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-10 CDR-L3 (aa)
<400> 56
Gln Ala Trp Asp Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Val
1 5 10
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 CDR-L3 (aa)
<400> 57
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 58
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12, -32, -48 CDR-L3 (aa)
<400> 58
Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val
1 5 10
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -45, -46 VH FR1
(aa)
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
20 25 30
<210> 60
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -12, -22, -23, -26, -40, -48 VH FR1 (aa)
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 61
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9, -24, -35, -37 VH FR1 (aa)
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 62
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-10 VH FR1 (aa)
<400> 62
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser
20 25 30
<210> 63
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11, -28, -29, -39 VH FR1 (aa)
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 64
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -25, -31, -42,
-44, -45, -46, -51 VH FR2 (aa)
<400> 64
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly
1 5 10
<210> 65
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -9, -10, -12, -21, -22, -23, -24, -26,
-32, -33, -35, -36, -37, -38, -40, -41, -47, -48,
-49 VH FR2 (aa)
<400> 65
Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 66
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 VH FR2 (aa)
<400> 66
Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -25, -31, -42,
-44, -45, -46, -51 VH FR3 (aa)
<400> 67
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210> 68
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -10, -12, -21, -22, -23, -26, -32, -40,
-41, -48, -49 VH FR3 (aa)
<400> 68
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
20 25 30
<210> 69
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9, -11, -17, -24, -28, -29, -30, -33, -34,
-35, -36, -38, -39 VH FR3 (aa)
<400> 69
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 70
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -15, -16, -18,
-20, -21, -22, -23, -25, -27, -31, -35, -36, -37,
-38, -40, -41, -42, -44, -45, -46, -51 VH FR4 (aa)
<400> 70
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 71
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -10, -11, -12, -24, -26, -29, -30, -32,
-34, -39, -48, -49, -50 VH FR4 (aa)
<400> 71
Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 72
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1 VL FR1 (aa)
<400> 72
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys
20
<210> 73
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2 VL FR1 (aa)
<400> 73
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 74
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-3, -46 VL FR1 (aa)
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Val Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 75
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-4 VL FR1 (aa)
<400> 75
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 76
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-5, -8, -24 VL FR1 (aa)
<400> 76
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 77
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 VL FR1 (aa)
<400> 77
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 78
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-7 VL FR1 (aa)
<400> 78
Val Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 79
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9 VL FR1 (aa)
<400> 79
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Val Thr Cys
20
<210> 80
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-10, -26 VL FR1 (aa)
<400> 80
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 81
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 VL FR1 (aa)
<400> 81
Gln Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 82
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12 VL FR1 (aa)
<400> 82
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 83
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1 VL FR2 (aa)
<400> 83
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Leu Tyr
1 5 10 15
<210> 84
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -34 VL FR2 (aa)
<400> 84
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 85
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-3, -5, -8, -24, -44, -46 VL FR2 (aa)
<400> 85
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 86
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-4 VL FR2 (aa)
<400> 86
Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu Ser
1 5 10 15
<210> 87
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 VL FR2 (aa)
<400> 87
Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 88
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-7 VL FR2 (aa)
<400> 88
Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 89
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9, -26, -35 VL FR2 (aa)
<400> 89
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
1 5 10 15
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-10 VL FR2 (aa)
<400> 90
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Pro Val Val Tyr
1 5 10 15
<210> 91
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 VL FR2 (aa)
<400> 91
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Glu Val Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 92
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12 VL FR2 (aa)
<400> 92
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 93
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1, -3, -5, -8, -31, -44, -46 VL FR3 (aa)
<400> 93
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 94
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2 VL FR3 (aa)
<400> 94
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 95
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-4 VL FR3 (aa)
<400> 95
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Thr Thr Ser Gly Ala Glu Tyr Ala
1 5 10 15
Leu Ser Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Ser Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 96
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 VL FR3 (aa)
<400> 96
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr
1 5 10 15
Leu Ala Ile Ser Asn Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 97
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-7 VL FR3 (aa)
<400> 97
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 98
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9, -26, -35 VL FR3 (aa)
<400> 98
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 99
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-10 VL FR3 (aa)
<400> 99
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Ala Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Thr Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 100
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 VL FR3 (aa)
<400> 100
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Ala Ile Asn Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 101
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12 VL FR3 (aa)
<400> 101
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr
1 5 10 15
Leu Asp Ile Ala Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-1 VL FR4 (aa)
<400> 102
Phe Gly His Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 103
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-2, -39 VL FR4 (aa)
<400> 103
Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-3, -4, -6, -30, -46 VL FR4 (aa)
<400> 104
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 105
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-5, -45 VL FR4 (aa)
<400> 105
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 106
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-7 VL FR4 (aa)
<400> 106
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Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
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Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
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20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Pro Pro Arg Leu Leu Leu Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ala Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Ser Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Thr Thr Ser Gly Ala Glu Tyr Ala Leu Ser Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
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Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
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20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
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20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
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Thr Ala Arg Val Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
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His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Val Trp Asp Arg Ser Arg Asp His
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Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Glu Arg Lys Asn Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Pro Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Ala Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Ala Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Ala Thr
65 70 75 80
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85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Gln Leu Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
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Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Glu Val Leu
35 40 45
Ile Tyr Asn Ser His Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Asn Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Ala Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Asp Ile Ala Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
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Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
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Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Val Leu Ser Thr Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Ser Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu
130 135 140
Ser Val Ser Pro Gly Glu Thr Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Lys Thr Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
165 170 175
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro
180 185 190
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
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Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
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Val Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln
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Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly
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Thr Lys Val Glu Ile Lys
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210 215 220
Tyr Ser Leu Pro Leu Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
<210> 132
<211> 246
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-5 scFv (aa)
<400> 132
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
130 135 140
Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr
180 185 190
Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Asp Ile Lys
245
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<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 scFv (aa)
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Val Ser Val Gly Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Ser Ile Ser Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Lys Gln Arg Pro Gly Glu Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile His Ala Ala Ser Asn Val Glu Asp Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Arg Gly Ser Gly Thr Val Phe Thr Leu Ala Ile
195 200 205
Ser Asn Val Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
His Met Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
225 230 235 240
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<223> Synthetic
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Val Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Asp Ile Gly Asp Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Ser Leu Ile Tyr Val Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Asn Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
210 215 220
His Ser His Pro Trp Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
225 230 235 240
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<220>
<223> Synthetic
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
130 135 140
Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr
180 185 190
Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
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<223> Synthetic
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Val Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Val Trp Asp
210 215 220
Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
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<211> 241
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile
145 150 155 160
Glu Arg Lys Asn Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Val Pro Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Ala Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Ala Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Ala Gln Ala Thr Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp
210 215 220
Ser Ser Ser Thr Leu Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
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<223> Synthetic
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Asp Tyr Asp Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Val Leu Thr Gln Pro
130 135 140
Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser
145 150 155 160
Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Leu Pro Gly Thr Ala Pro Glu Val Leu Ile Tyr Asn Ser His Gln Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser
195 200 205
Ala Ser Leu Ala Ile Asn Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Arg Gly Tyr Val Phe Gly Thr
225 230 235 240
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Ala Ala Pro Gly Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser
145 150 155 160
Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr
165 170 175
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Ala Lys Arg Pro Ser Gly Ile
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Asp
195 200 205
Ile Ala Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val
210 215 220
Trp Asp Ser Ser Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-13 CDR-H1 (aa) Kabat numbering
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Ser Tyr Ala Met His
1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-14, -15 CDR-H1 (aa) Kabat numbering
<400> 141
Ser Tyr Gly Met His
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<400> 142
Ser Ser Ala Met Gln
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<223> BCMA-18 CDR-H1 (aa) Kabat numbering
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Ser Tyr Trp Met Ser
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-19 CDR-H1 (aa) Kabat numbering
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Ser Tyr Tyr Met His
1 5
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
<400> 145
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
<400> 146
Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Glu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-18 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
<400> 147
His Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 17
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<223> BCMA-19 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
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Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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Leu Pro Gly Arg Asp Gly Tyr Pro Gly Ala Phe Asp Tyr
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 150
Asp Gln Tyr Ser Ser Ser Ala Gln Arg Ala Asp Phe Asp Tyr
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<211> 12
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Ala Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Leu
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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Glu Ala Asp Ser Ser Ala Asp Tyr
1 5
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<211> 6
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 CDR-H3 (aa)
<400> 153
Trp Leu Ala Val Thr Asn
1 5
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<400> 154
Asp Gly Gly Asp Val
1 5
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<400> 155
Gly Gly Leu Gly Ile Thr Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<400> 156
Val Asp Gly Gly Tyr Thr Glu Asp Tyr
1 5
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<211> 9
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
<220>
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Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15, -18 CDR-H1 (aa) Chothia
numbering
<400> 158
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 CDR-H1 (aa) Chothia numbering
<400> 159
Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser
1 5
<210> 160
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 CDR-H1 (aa) Chothia numbering
<400> 160
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 161
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 161
Ser Tyr Asp Gly Ser Asn
1 5
<210> 162
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 162
Val Val Gly Ser Gly Asn
1 5
<210> 163
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 163
Asn Gln Asp Gly Ser Glu
1 5
<210> 164
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 164
Asn Pro Asn Ser Gly Gly
1 5
<210> 165
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 CDR-H1 (aa) AbM numbering
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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met His
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14, -15 CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 166
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His
1 5 10
<210> 167
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 167
Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser Ala Met Gln
1 5 10
<210> 168
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 168
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met Ser
1 5 10
<210> 169
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 169
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His
1 5 10
<210> 170
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<400> 170
Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr
1 5 10
<210> 171
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<400> 171
Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn
1 5 10
<210> 172
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<400> 172
His Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr
1 5 10
<210> 173
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<400> 173
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn
1 5 10
<210> 174
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15, -16, -18, -21 CDR-L1 (aa)
<400> 174
Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser
1 5 10
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17, -33 CDR-L1 (aa)
<400> 175
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Phe Lys Gly Val Gln
1 5 10
<210> 176
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 CDR-L1 (aa)
<400> 176
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asp Tyr Asn Tyr Val Ala
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 177
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1 5
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<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22, -23 CDR-L1 (aa)
<400> 178
Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<211> 7
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 181
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1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 182
Ser Asn Asp Gln Arg Pro Ser
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser
1 5
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<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Gly Gly Ser Trp Val
1 5 10
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<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 185
Ala Ala Trp Asp Asp Arg Leu Asn Gly Phe Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 186
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 187
Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 188
Gln Val Trp Asp Ser Ala Ser Asp His Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 189
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Ile Ser Tyr Ser Arg Gly Ser Thr Pro Tyr Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27 CDR-L3 (aa)
<400> 191
Gly Ser Trp Asp Asp Ser Leu Asn Ala Trp Val
1 5 10
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<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-21 CDR-L3 (aa)
<400> 192
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 193
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22, -40 CDR-L3 (aa)
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Cys Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val
1 5 10
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 195
Gln Met Gln Leu Val Gln Tyr Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 196
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14 VH FR1 (aa)
<400> 196
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
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<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 197
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 198
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 VH FR1 (aa)
<400> 198
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 199
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17, -33, -36, -38, -41 VH FR1 (aa)
<400> 199
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 200
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 VH FR1 (aa)
<400> 200
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 201
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VH FR1 (aa)
<400> 201
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 202
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20 VH FR1 (aa)
<400> 202
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 203
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-21 VH FR1 (aa)
<400> 203
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 204
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15 VH FR2 (aa)
<400> 204
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 205
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 VH FR2 (aa)
<400> 205
Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 206
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17 VH FR2 (aa)
<400> 206
Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
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<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 VH FR2 (aa)
<400> 207
Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 208
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VH FR2 (aa)
<400> 208
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
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<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27, -28, -29, -30, -34, -39 VH FR2 (aa)
<400> 209
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser
1 5 10
<210> 210
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 VH FR3 (aa)
<400> 210
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr
20 25 30
<210> 211
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14 VH FR3 (aa)
<400> 211
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr
20 25 30
<210> 212
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-15 VH FR3 (aa)
<400> 212
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
20 25 30
<210> 213
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 VH FR3 (aa)
<400> 213
Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
20 25 30
<210> 214
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 VH FR3 (aa)
<400> 214
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Ser Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 215
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VH FR3 (aa)
<400> 215
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 216
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27 VH FR3 (aa)
<400> 216
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Lys
20 25 30
<210> 217
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 VH FR4 (aa)
<400> 217
Arg Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14 VH FR4 (aa)
<400> 218
Arg Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 219
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17, -33 VH FR4 (aa)
<400> 219
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Asn Val Ser Ser
1 5 10
<210> 220
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VH FR4 (aa)
<400> 220
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 221
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14 VL FR1 (aa)
<400> 221
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 222
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-15, -18, -21 VL FR1 (aa)
<400> 222
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 223
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 VL FR1 (aa)
<400> 223
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 224
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17, -33 VL FR1 (aa)
<400> 224
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Met Ile Thr Cys
20
<210> 225
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VL FR1 (aa)
<400> 225
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys
20
<210> 226
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27 VL FR1 (aa)
<400> 226
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys
20
<210> 227
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22, -23, -40 VL FR1 (aa)
<400> 227
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys
20
<210> 228
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13, -14, -15, -16, -18, -21 VL FR2 (aa)
<400> 228
Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 229
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17, -33 VL FR2 (aa)
<400> 229
Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
1 5 10 15
<210> 230
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VL FR2 (aa)
<400> 230
Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Asp Pro Lys Leu Met Ile Phe
1 5 10 15
<210> 231
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27 VL FR2 (aa)
<400> 231
Trp Phe Arg Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 232
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22, -23, -40 VL FR2 (aa)
<400> 232
Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 233
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 VL FR3 (aa)
<400> 233
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 234
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14 VL FR3 (aa)
<400> 234
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ala Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 235
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-15 VL FR3 (aa)
<400> 235
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Val Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 236
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 236
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 237
<211> 32
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
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1 5 10 15
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Leu Asp Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Tyr Tyr Tyr Cys
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20 25 30
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1 5 10 15
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20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<223> Synthetic
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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<223> Synthetic
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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115 120
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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<223> Synthetic
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<223> BCMA-18 VH Chain (aa)
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp His Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Leu Ala Val Thr Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
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<220>
<223> Synthetic
<220>
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1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20 VH Chain (aa)
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Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Lys Gly Gly Leu Gly Ile Thr Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Gly Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 256
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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Leu Val Thr Val Ser Ser
115
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<223> Synthetic
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Gly Gly Ser Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
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<211> 111
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 258
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
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20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ala Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Arg Leu
85 90 95
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100 105 110
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<211> 110
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-15 VL Chain (aa)
<400> 259
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Arg
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<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 VL Chain (aa)
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<223> BCMA-17, -33 VL Chain (aa)
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20 25 30
Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ala Ser Asp His
85 90 95
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100 105
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<211> 110
<212> PRT
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<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 VL Chain (aa)
<400> 262
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Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 VL Chain (aa)
<400> 263
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
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35 40 45
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50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Asp Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ile Ser Tyr Ser Arg Gly
85 90 95
Ser Thr Pro Tyr Val Ile Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 264
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20, -27 VL Chain (aa)
<400> 264
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Lys Thr Val Asn Trp Phe Arg
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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100
<210> 265
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-21 VL Chain (aa)
<400> 265
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ile Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
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100 105 110
<210> 266
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22 VL Chain (aa)
<400> 266
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 267
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 VL Chain (aa)
<400> 267
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 268
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 scFv (aa)
<400> 268
Gln Met Gln Leu Val Gln Tyr Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Leu Pro Gly Arg Asp Gly Tyr Pro Gly Ala Phe Asp Tyr Arg
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro
130 135 140
Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser
145 150 155 160
Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Ala Ser Lys Ser Gly Thr Ser
195 200 205
Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Gly Gly Ser Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Leu Pro Gly Arg Asp Gly Tyr Pro Gly Ala Phe Asp Tyr Arg
100 105 110
Gly Pro Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro
130 135 140
Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser
145 150 155 160
Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ala Ser
195 200 205
Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Arg Leu Asn Gly Phe Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Gln Tyr Ser Ser Ser Ala Gln Arg Ala Asp Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln
130 135 140
Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys
145 150 155 160
Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr
195 200 205
Ser Ala Ser Leu Val Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly
225 230 235 240
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Ser
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Ala Met Gln Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Val Val Gly Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Glu Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Met Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Ala Ala Pro Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Leu Trp Gly
100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
145 150 155 160
Ser Gly Ser Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile
165 170 175
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
195 200 205
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Ser Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Leu Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
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Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val
130 135 140
Ala Pro Gly Lys Thr Ala Met Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly
145 150 155 160
Phe Lys Gly Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro Val
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180 185 190
Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg
195 200 205
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210 215 220
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115 120 125
Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro
130 135 140
Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser Asn Ile Gly
145 150 155 160
Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr Ala Pro Lys
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
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195 200 205
Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp
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Ser Leu Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly
130 135 140
Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Asp
145 150 155 160
Tyr Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Asp Pro Lys
165 170 175
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180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Asp Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ile Ser Tyr Ser Arg
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Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro
130 135 140
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
145 150 155 160
Gly Lys Thr Val Asn Trp Phe Arg Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Gln
165 170 175
Leu Leu Ile Tyr Ser Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Asp Ile Ser Gly
195 200 205
Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Tyr Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Asp
210 215 220
Ser Leu Asn Ala Trp Val Phe Gly Gly Glu Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser
130 135 140
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Gly Ser
145 150 155 160
Asn Ile Gly Ser Asn Asp Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ile Pro Gly Thr
165 170 175
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Asn Asp Gln Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Ile Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala
210 215 220
Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly
180 185 190
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195 200 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys
210 215 220
Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly
180 185 190
Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Thr Val Leu
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Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg
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Gly
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<211> 17
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<223> Synthetic
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Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe Lys
1 5 10 15
Gly
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<223> Synthetic
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<400> 292
Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr
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Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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<223> Synthetic
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<211> 6
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<223> Synthetic
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<223> BCMA-C2 VH CDR-H2 (aa) Chothia numbering
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Asn Thr Tyr Thr Gly Glu
1 5
<210> 298
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C1 VH CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 298
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn
1 5 10
<210> 299
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C2 VH CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 299
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Gly Met Asn
1 5 10
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 300
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala
1 5 10
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 301
Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr
1 5 10
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 302
Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His
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<220>
<223> Synthetic
<220>
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Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
1 5
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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<220>
<223> Synthetic
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<211> 30
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<220>
<223> Synthetic
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Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly
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<211> 14
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met Ala
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln
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Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu
20 25 30
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg
20 25 30
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C2 VL FR3 (aa)
<400> 321
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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<223> BCMA-C1 VL FR4 (aa)
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<211> 10
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C1 VH Chain (aa)
<400> 324
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1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
50 55 60
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100 105 110
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<213> Artificial Sequence
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<223> Synthetic
<220>
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1 5 10 15
Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met
35 40 45
Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115 120
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C2 VL Chain (aa)
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1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
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Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val
130 135 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile
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Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp
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Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg Gly
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Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln
195 200 205
Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu
210 215 220
Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
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Val Ser Ser
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<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C2 VH-VL scFv (aa)
<400> 329
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met
35 40 45
Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr
180 185 190
Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Asp Ile Lys
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg atattgtgat gacccagtct 420
ccagactccc tgtctgtgtc tccgggcgag agggccacca tcagctgcaa gtccagccag 480
agtgttttat ccacctccaa caataagaac tatttagctt ggtatcagca gaaaccagga 540
cagcccccta ggctgctcct ttactgggca tctacccggg aggccggggt ccctgaccga 600
ttcagtggca gcgggtctgg gacagatttc actctcacca tcagcagcct gcaggctgaa 660
gatgtggcgg tttattactg tcaacaatat ttcagttctc cgtacacttt tggccacggg 720
accaagctgg aaatcaaa 738
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<220>
<223> Synthetic
<220>
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tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtggat 300
ggccctcctt cttctgatat ctggggccaa gggacaatgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg aaatagtgat gacgcagtct 420
ccagccaccc tgtctgtgtc tccaggggaa acagccaccc tctcctgcag ggccagtcag 480
agtattaaga ccaacttggc ctggtaccag cagaaacctg gccaggctcc caggctcctc 540
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gggacagact tcactctcac catcaccaga ctggagcctg aagattttgc agtgtattac 660
tgtcagcaat atggtagctc acccactttt ggccggggga ccaagctgga aatcaaa 717
<210> 332
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg atattgtgat gacccagtct 420
ccagactccc tggttgtgtc tctgggcgag agggccacca tcaactgcaa gtccagccag 480
agtgttttac acagctccaa caataagaat tacttagctt ggtaccagca gaaaccagga 540
cagcctccta agctgctcat ttactgggca tctacccggg aatccggggt ccctgaccgg 600
ttcagtggca gcgggtctgg gacagatttc actctcacca tcagcagcct gcaggctgaa 660
gatgtggcag tttattactg tcagcagtat tatactactc cgctcacttt cggcggaggg 720
accaaggtgg aaatcaaa 738
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg ccatccggat gacccagtct 420
ccatcctccc tgtccgcgtc tctgggggac agagtcacca tcacttgccg ggcgagtcag 480
gacattagga attctttggc ctggtatcag cagaggccag ggaaagcccc taaactcctg 540
ctttctgctg catccagatt ggaaagtggg gtcccttcta ggttcagtgg cactacttct 600
ggggcggagt atgctctcag catcagcagc ctgcagcctg aagatgtcgc atcttatttc 660
tgtcagcagt attatagtct ccctctctcc ttcggcggag ggaccaaggt ggaaatcaaa 720
<210> 334
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-5 scFv (nt)
<400> 334
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg acatcgtgat gacccagtct 420
ccagactccc tggctgtgtc tctgggcgag agggccacca tcaactgcaa gtccagccag 480
agtgttttat acagctccaa caataagaac tacttagctt ggtaccagca gaaaccagga 540
cagcctccta agctgctcat ttactgggca tctacccggg aatccggggt ccctgaccga 600
ttcagtggca gcgggtctgg gacagatttc actctcacca tcagcagcct gcaggctgaa 660
gatgtggcag tttattactg tcagcaatat tatagtactc cgtggacgtt cggccaaggg 720
accaaggtgg atatcaaa 738
<210> 335
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-6 scFv (nt)
<400> 335
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg atattgtgat gacccagtct 420
ccatcgtccc tgtctgtgtc tgtaggagag agagtcacca tcacttgtcg ggcgagtcag 480
tctataagta attccttagc ctggtataaa cagagaccgg gagaagcccc taaactcctg 540
atacatgctg catccaatgt ggaagatggg gtcccttcga ggttcagcgg caggggatct 600
gggacagttt tcactctcgc catcagcaat gtacagcctg aagatttcgc aacttactac 660
tgtcagcaga gtcacatgta ccctccgact ttcggcgggg ggaccaaggt ggaaatcaaa 720
<210> 336
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-7 scFv (nt)
<400> 336
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg tcatccagtt gacccagtct 420
ccctcctcac tgtctgcatc tgtaggggac agagtcacca tcacttgtcg ggcgagtcag 480
gacattggcg attatttagc ctggtttcag cagagaccag ggaaagcccc taagtccctg 540
atctatgttg cgtccacttt gcagagtggg gtcccatcaa ggttcagcgg cagtggatct 600
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tgccaacagt atcatagtca cccgtggacg ttcggcccag ggaccaaggt ggatatcaaa 720
<210> 337
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-8 scFv (nt)
<400> 337
caggtccagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtacagc cagggcggtc cctgagactc 60
tcctgtacag cttctggatt cacctttggt gattatgcta tgagctggtt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtaggtttc attagaagca aagcttatgg tgggacaaca 180
gaatacgccg cgtctgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc caaaagcatc 240
gcctatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtgcggcc 300
tggagtgccc cgactgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgg atattgtgat gacccagtct 420
ccagactccc tggctgtgtc tctgggcgag agggccacca tcaactgcaa gtccagccag 480
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<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-9 scFv (nt)
<400> 338
gaagtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
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ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagtggac 300
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cta 723
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<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-10 scFv (nt)
<400> 339
gaagtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagtggac 300
ggtgactacg tcgatgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgt cctatgagct gactcagccg 420
ccctcggtgt ctgtggcccc aggacagacg gccagggtta cctgtggggc aaataatatt 480
ggaagcaaaa gtgtccactg gtaccagcag aagccaggcc aggcccccat gctggtcgtc 540
tatgatgatg acgaccggcc ctccgggatc cctgagcgat tctctggctc caactctggg 600
aacacggcca ccctgaccat cagcggggtc gaggccgggg atgaggccga ctacttctgt 660
cacgtgtggg atagaagtcg tgatcattat gtcttcggaa ctgggaccaa gctgaccgtc 720
cta 723
<210> 340
<211> 741
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-11 scFv (nt)
<400> 340
caggtgcagc tggtacagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcgagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagatctg 300
gggcccgact acgatcccga tgcttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtt 360
tcctcaggtg gaggcggttc aggcggaggt ggctctggcg gtggcggatc gcagcttgtg 420
ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480
ggaagcagct ccaacatcgg aagtaatgct gtaaactggt accagcagct cccaggaacg 540
gcccccgaag tcctcatcta taatagtcat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600
tctggctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca atgggctcca gtctgaggac 660
gaggctgatt attactgtgc agcatgggat gacagcctga gaggttacgt cttcggaact 720
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-12 scFv (nt)
<400> 341
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
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ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtggat 300
ggccctcctt cttttgatat ctggggccaa gggacaatgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agtctgccct gacgcagccg 420
ccctcagtgt ctgcggcccc aggacagaag gtcaccatct cctgctctgg aagccgctcc 480
aacattggga ataattatgt atcctggtac caacagctcc caggaacagc ccccaaactc 540
ctcatttatg acaatgctaa gcgaccctca ggaattcctg accgattctc tggctccaag 600
tctggcacgt cagccaccct ggacatcgcc ggactccaga ctggggatga ggccgactat 660
tactgtcagg tgtgggatag tagtagtgat cattgggtat tcggcggagg gaccaagctc 720
accgtccta 729
<210> 342
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-13 scFv (nt)
<400> 342
cagatgcagc tggtgcagta tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatgcta tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgaa agctgaggac acggctgtgt attactgtgc taccctaccc 300
ggtagagatg gctaccccgg agcctttgac tacaggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360
tcctcaggtg gaggcggttc aggcggaggt ggctctggcg gtggcggatc gcaggctgtg 420
ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480
ggaagcggct ccaacatcgg aagtaatgat gtctcctggt atcagcagat cccaggaacg 540
gcccccaaac tcctcatcta ctggaatgat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600
tctgcctcca agtctggcac ctcagcctcc ctggccatca gtgggctccg gtccgaggat 660
gaggctgatt attactgtgc agcatgggat gacagcctgg gtggttcttg ggtgttcggc 720
ggagggacca aggtcaccgt ccta 744
<210> 343
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-14 scFv (nt)
<400> 343
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cgtctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactac 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc taccctaccc 300
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tcctcaggtg gaggcggttc aggcggaggt ggctctggcg gtggcggatc gcaggctgtg 420
ctgactcagc caccctcagc gtctgggacc cccgggcaga gggtcaccat ctcttgttct 480
ggaagcggct ccaacatcgg aagtaatgat gtctcctggt atcagcagat cccaggaacg 540
gcccccaaac tcctcatcta ctggaatgat cagcggccct caggggtccc tgaccgattc 600
tctggctcca agtctggcgc ctcagcctct ctggccatca gtgggctcca gtctgaggat 660
gaggctgatt attattgtgc agcatgggat gacaggttga acggtttttg ggtgttcggc 720
ggagggacca agctcaccgt ccta 744
<210> 344
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-15 scFv (nt)
<400> 344
caggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatggca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccaggcaagg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatatg atggaagtaa taaatactat 180
gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctgtgt attactgtgc gaaagatcag 300
tatagcagta gcgcacaaag ggccgacttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctcag gtggaggcgg ttcaggcgga ggtggttctg gcggtggcgg atcgcagtct 420
gtgctgacgc agccaccctc agcgtctggg acccccgggc agagggtcac catctcttgt 480
tctggaagcg gctccaacat cggaagtaat gatgtctcct ggtatcagca gatcccagga 540
acggccccca aactcctcat ctactggaat gatcagcggc cctcaggggt ccctgaccgg 600
ttctcaggct ccaagtctgg cacctcagcc tccctggtca tcagtgggct ccggtccgag 660
gatgaggctg attattactg tgcagcatgg gatgacagcc tgagtggttg ggtgttcggc 720
ggagggacca agctgaccgt ccta 744
<210> 345
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-16 scFv (nt)
<400> 345
gaggtccagc tggtacagtc tgggcctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggatt cacctttact agctctgcta tgcagtgggt gcgacaggct 120
cgtggacaac gccttgagtg gataggatgg atcgtcgttg gcagtggtaa cacaaactac 180
gcacagaagt tccaggaaag agtcaccatt accagggaca tgtccacaag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atccgaggac acggccgtgt attactgtgc ggcagctccg 300
tattacgata ttttgactgg ttattattta tggggccagg gaacgctggt caccgtctcc 360
tcaggtggag gcggttctgg cggaggtggc tctggcggtg gcggatcgca gtctgccctg 420
actcagccac cctcagcgtc tgggaccccc gggcagaggg tcaccatctc ttgttctgga 480
agcggctcca acatcggaag taatgatgtc tcctggtatc agcagatccc aggaacggcc 540
cccaaactcc tcatctactg gaatgatcag cggccctcag gggtccctga ccgattctct 600
ggctccaagt ctggcacctc agcctccctg gccatcagtg ggctccagtc tgaggatgag 660
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<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-17 scFv (nt)
<400> 346
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ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gagagaggcc 300
gatagtagcg ctgactactg gggccaggga accctggtca acgtctcctc aggtggaggc 360
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tcggtgtcag tggccccagg aaagacggcc atgattacct gtgggggaaa caacattgga 480
tttaaaggtg tgcagtggta ccagcagaag acaggccagg cccctgtgct ggtcgtctat 540
gatgatagcg accggccctc agggatccct gagcgattct ctggctccaa ctctgggaac 600
acggccaccc tgaccatcag cagggtcgaa gccggggatg aggccgatta ttactgtcag 660
gtgtgggata gtgctagtga tcattgggtg ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 720
<210> 347
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-18 scFv (nt)
<400> 347
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgtttagt agctattgga tgagctggca ccgccaggct 120
ccagggaagg ggccggagtg ggtggcccac ataaaccaag acggaagtga gaagtactat 180
gtggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccgagag ttcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gaggtggctg 300
gcggttacta actggggcca gggaaccctg gtcaccgtct cctcaggtgg aggcggttca 360
ggcggaggtg gctctggcgg tggcggatcg cagtctgtgt tgactcagcc accctcagcg 420
tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc tcttgttctg gaagcggctc caacatcgga 480
agtaatgatg tctcctggta tcagcagatc ccagggacgg cccccaaact cctcatctac 540
tggaatgatc agcggccctc aggggtccct gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc 600
tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca 660
gcatgggatg acagcctgaa tggttgggtg ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta 720
<210> 348
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-19 scFv (nt)
<400> 348
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggt 300
ggggacgtct ggggccaagg gaccacggtc accgtctcct caggtggagg cggttcaggc 360
ggaggtggct ctggcggtgg cggatcgcag gctgtgctga ctcagcctgc ctccgtgtct 420
gggtctcctg gacagtcgat caccatctcc tgcactggaa ccagcagtga cgttggtgat 480
tataactatg tcgcctggta tcaacaacac ccaggcaaag accccaaact catgattttt 540
gaggtcatta atcggccctc aggggtttct gatcgcttct ctggctccaa gtctggcaac 600
acggcctccc tggacatctc tgggctccag cctgaggacg aggctgatta ttactgcatc 660
tcatattcac gaggcagcac tccttatgtc atcggaactg ggaccaaggt gaccgtccta 720
<210> 349
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-20 scFv (nt)
<400> 349
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtctcaggt attagttgga atagtggtag cataggctat 180
gcggactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agctgaggac acggccttgt attactgtgc aaaggggggc 300
ctaggaataa ccccatacta ctttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tcaggtggag gcggttcagg cggaggtggc tctggcggtg gcggatcgca gcctgtgctg 420
actcagccac cctcagcgtc tgggaccccc gggcagaggg tcaccatctc ttgttcggga 480
ggcaagactg taaactggtt ccggcaggtc ccaggaacgg ccccccaact cctcatctat 540
agtaatgatc agcggccctc aggggtccct gaccgattct ctggctccaa gtctggctcc 600
tcagcctccc tggacatcag tgggctccag tctgaggatg aggcttatta ttactgtgga 660
tcatgggatg acagcctcaa tgcttgggtg ttcggcggag agaccaagct gaccgtccta 720
<210> 350
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-21 scFv (nt)
<400> 350
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtagac 300
ggaggctaca cagaggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agtctgtgct gactcagcca 420
ccctcagcgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct cttgttctgg aagcggctcc 480
aacatcggaa gtaatgatgt ctcctggtat cagcagatcc caggaacggc ccccaaactc 540
ctcatctact ggaatgatca gcggccctca ggggtccctg accggttctc aggctccaag 600
tctggcatct cagcctccct ggccatcagc gggctccggt ccgaggatga ggctgattat 660
tactgtgcag catgggatga cagcctgaat ggttatgtct tcggaactgg gaccaaggtc 720
accgtccta 729
<210> 351
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-22 scFv (nt)
<400> 351
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtagac 300
ggagactaca cagaggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agtctgccct gactcagcct 420
gcctccgtgt ctgggtctcc tggacagtcg atcactatct cctgcactgg aagcagcagt 480
gatgttggca aatataatct tgtctcctgg taccaacagc ccccaggcaa agcccccaag 540
ctcataattt atgacgtcaa taagcggccc tcaggggttt ctaatcgctt ctctggctcc 600
aagtctggca acacggccac cctgacaatc tctgggctcc agggtgacga cgaggctgat 660
tattattgtt gctcatatgg aggtagtagg tcttatgtct tcggaactgg gaccaaggtg 720
accgtccta 729
<210> 352
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 scFv (nt)
<400> 352
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtagac 300
ggagactaca cagaggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agtctgccct gactcagcct 420
gcctccgtgt ctgggtctcc tggacagtcg atcactatct cctgcactgg aagcagcagt 480
gatgttggca aatataatct tgtctcctgg taccaacagc ccccaggcaa agcccccaag 540
ctcataattt atgacgtcaa taagcggccc tcaggggttt ctaatcgctt ctctggctcc 600
aagtctggca acacggccac cctgacaatc tctgggctcc agggtgacga cgaggctgat 660
tattattgta gctcatatgg aggtagtagg tcttatgtct tcggaactgg gaccaaggtg 720
accgtccta 729
<210> 353
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-H1
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = D or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = Y or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = A, G, W or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = H, Q or S
<400> 353
Xaa Xaa Xaa Met Xaa
1 5
<210> 354
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-H2
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = F, G, H, V, W or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = N, R, S or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = P, Q, S, V, W or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = K or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = A or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = D, G, N, S, or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = G or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = G or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = E, G, N, T or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = I, K, or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = E, G, N or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = A or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = A, D or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = K or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = F or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 18
<223> Xaa = K or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> 19
<223> Xaa = E or G
<400> 354
Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa Xaa Xaa
<210> 355
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-H3
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = A, D, E, G, L, V or W
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = A, D, G, L, P, Q or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = A, D, G, L or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = D, G, P, R, S, V, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = D, I, P, S, T, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = A, G, I, S, T, V, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = A, D, E, F, L, P, S, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = P, Q, T, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = D, G, R, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = A, F, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = D, F or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = F or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = D, T or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = I, L, N, V or Y
<400> 355
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 356
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-L1
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = G, K, R, S or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = A, G or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = G, N, S or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = G, K, N, Q, R or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = S or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = D, N, V or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = L, V or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = H, S, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = S, T or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = S or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = D, G, I, N, S or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = D, E, G, K, I, N or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 13
<223> Xaa = F, G, K, N, R, S, Y or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 14
<223> Xaa = D, K, N, T or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 15
<223> Xaa = A, D, G, L, N, S, T or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 16
<223> Xaa = L or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 17
<223> Xaa = A, H, N, Q or S
<400> 356
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Xaa
<210> 357
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-L2
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = A, D, E, N, S, V or W
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = A, D, N, S or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = A, D, H, I, N or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = D, K, N, Q, R or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = L, R or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = A, E, P or Q
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = A, D, S or T
<400> 357
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5
<210> 358
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Consensus CDR-L3
<220>
<221> VARIANT
<222> 1
<223> Xaa = A, C, G, H, I, Q or S
<220>
<221> VARIANT
<222> 2
<223> Xaa = A, Q, S or V
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = S, W or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = D, F, G, H or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 5
<223> Xaa = D, G, M, R, S or T
<220>
<221> VARIANT
<222> 6
<223> Xaa = A, G, H, L, R, S, T or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 7
<223> Xaa = L, P, R, S or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 8
<223> Xaa = D, G, N, R, S, T or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 9
<223> Xaa = A, G, H, L, P or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = F, S or null
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = L, P, W or Y
<220>
<221> VARIANT
<222> 12
<223> Xaa = S, T or V
<400> 358
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 359
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 4GS linker (aa)
<400> 359
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 360
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 3GS linker (aa)
<400> 360
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 361
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> (4GS)3 linker (aa)
<400> 361
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 362
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Linker (aa)
<400> 362
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 363
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Spacer (IgG4hinge) (aa)
<400> 363
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 364
<211> 36
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Spacer (IgG4hinge) (nt)
<400> 364
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 365
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Hinge-CH3 spacer (aa)
<400> 365
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 366
<211> 229
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Hinge-CH2-CH3 spacer (aa)
<400> 366
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1 5 10 15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
20 25 30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
35 40 45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
50 55 60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
85 90 95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
100 105 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
115 120 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
130 135 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145 150 155 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
165 170 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
195 200 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
210 215 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 367
<211> 184
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human BCMA; GenBank No. BAB60895.1
<400> 367
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Ser Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 368
<211> 184
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human BCMA; NCBI No. NP_001183.2
<400> 368
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 369
<211> 135
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human BCMA Variant; GenBank No. ABN42510.1
<400> 369
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Arg Ser Gly Leu Leu
35 40 45
Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu Ile
50 55 60
Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
65 70 75 80
Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe Pro
85 90 95
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
100 105 110
Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu Ile
115 120 125
Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
130 135
<210> 370
<211> 185
<212> PRT
<213> Mus musculus
<220>
<223> Mouse BCMA; NCBI No. NP_035738.1
<400> 370
Met Ala Gln Gln Cys Phe His Ser Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His
1 5 10 15
Ala Cys Lys Pro Cys His Leu Arg Cys Ser Asn Pro Pro Ala Thr Cys
20 25 30
Gln Pro Tyr Cys Asp Pro Ser Val Thr Ser Ser Val Lys Gly Thr Tyr
35 40 45
Thr Val Leu Trp Ile Phe Leu Gly Leu Thr Leu Val Leu Ser Leu Ala
50 55 60
Leu Phe Thr Ile Ser Phe Leu Leu Arg Lys Met Asn Pro Glu Ala Leu
65 70 75 80
Lys Asp Glu Pro Gln Ser Pro Gly Gln Leu Asp Gly Ser Ala Gln Leu
85 90 95
Asp Lys Ala Asp Thr Glu Leu Thr Arg Ile Arg Ala Gly Asp Asp Arg
100 105 110
Ile Phe Pro Arg Ser Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
115 120 125
Asp Cys Val Lys Ser Lys Pro Lys Gly Asp Ser Asp His Phe Phe Pro
130 135 140
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
145 150 155 160
Gly Asp Tyr Gly Lys Ser Ser Val Pro Thr Ala Leu Gln Ser Val Met
165 170 175
Gly Met Glu Lys Pro Thr His Thr Arg
180 185
<210> 371
<211> 183
<212> PRT
<213> Macaca fascicular
<220>
<223> Cynomolgus BCMA; GenBank No. EHH60172.1
<400> 371
Met Leu Gln Met Ala Arg Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Asp Cys Lys Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Thr Pro
20 25 30
Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Met Thr Asn Ser Val
35 40 45
Lys Gly Met Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu Ile
50 55 60
Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Thr Phe Leu Leu Arg Lys Met Ser
65 70 75 80
Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu Leu
85 90 95
Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Gly Arg Thr Gly Asp Glu Ile
100 105 110
Val Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
115 120 125
Asp Cys Ile Lys Asn Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe Pro
130 135 140
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
145 150 155 160
Asn Asp Tyr Cys Asn Ser Leu Ser Ala Ala Leu Ser Val Thr Glu Ile
165 170 175
Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 372
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = any amino acid
<400> 372
Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 373
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-33 CDR-H2 (aa) Kabat numbering
<400> 373
Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 374
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-H2 Kabat numbering
<400> 374
Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 375
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human BCMA epitope (residues 21-27)
<400> 375
Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg
1 5
<210> 376
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24, -28, -29, -39 CDR-H3 (aa)
<400> 376
Asp Leu Gly Pro Pro Tyr Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 377
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 CDR-H3 (aa)
<400> 377
Asp Leu Asp Pro Asp Asp Ala Phe Asp Ile
1 5 10
<210> 378
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-35 CDR-H3 (aa)
<400> 378
Val Asp Gly Asp Tyr Asp Asp Tyr
1 5
<210> 379
<211> 10
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human BCMA epitope (residues 30-39)
<400> 379
Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg
1 5 10
<210> 380
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L1 (aa)
<400> 380
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 381
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-L1 (aa)
<400> 381
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 382
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 CDR-L1 (aa)
<400> 382
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
<210> 383
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 CDR-L1 (aa)
<400> 383
Arg Ala Ser Gln Pro Ile Arg Ser Asn Leu Ala
1 5 10
<210> 384
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-31 CDR-L1 (aa)
<400> 384
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asn Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Val
1 5 10 15
Ala
<210> 385
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32 CDR-L1 (aa)
<400> 385
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val His
1 5 10
<210> 386
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 CDR-L1 (aa)
<400> 386
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 387
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 CDR-L1 (aa)
<400> 387
Gly Ser Ser Thr Gly Pro Val Thr Ser Ala His Ser Pro Ser
1 5 10
<210> 388
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37, -38 CDR-L1 (aa)
<400> 388
Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Asn Gly His Ser Pro Tyr
1 5 10
<210> 389
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 CDR-L1 (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 11
<223> Xaa = any amino acid
<400> 389
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Tyr Glu Leu Xaa
1 5 10
<210> 390
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-40 CDR-L1 (aa)
<400> 390
Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Ser Lys Tyr Asn Leu Val Ser
1 5 10
<210> 391
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-L1 (aa)
<400> 391
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Ser Val Asp
1 5 10
<210> 392
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 CDR-L1 (aa)
<400> 392
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asn Gly Leu Ala
1 5 10
<210> 393
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human BCMA epitope (residues 44-50)
<400> 393
Ser Val Thr Asn Ser Val Lys
1 5
<210> 394
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-44 CDR-L1 (aa)
<400> 394
Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 395
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 CDR-L1 (aa)
<400> 395
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Arg Ser Leu Ala
1 5 10
<210> 396
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47, -48 CDR-L1 (aa)
<400> 396
Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 397
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 CDR-L1 (aa)
<400> 397
Gly Gly Asp Gln Ile Gly Arg Lys Ser Val His
1 5 10
<210> 398
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 CDR-L1 (aa)
<400> 398
Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Asp Trp Leu Ala
1 5 10
<210> 399
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 CDR-L2 (aa)
<400> 399
Trp Gly Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 400
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L2 (aa)
<400> 400
Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 401
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-L2 (aa)
<400> 401
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 402
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 CDR-L2 (aa)
<400> 402
Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 403
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 CDR-L2 (aa)
<400> 403
Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr
1 5
<210> 404
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 CDR-L2 (aa)
<400> 404
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 405
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 CDR-L2 (aa)
<400> 405
Glu Thr Thr Asn Arg His Ser
1 5
<210> 406
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 CDR-L2 (aa)
<400> 406
Asp Thr Thr Asn Arg His Ser
1 5
<210> 407
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 CDR-L2 (aa)
<400> 407
Asp Thr Asn Asn Arg His Ser
1 5
<210> 408
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 CDR-L2 (aa)
<400> 408
Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1 5
<210> 409
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-L2 (aa)
<400> 409
Ala Asn Asp Arg Arg Pro Ser
1 5
<210> 410
<211> 7
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human BCMA epitope (residues 8-15)
<400> 410
Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe
1 5
<210> 411
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 CDR-L2 (aa)
<400> 411
Asp Ala Ser Ser Leu Arg Ser
1 5
<210> 412
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47, -48 CDR-L2 (aa)
<400> 412
Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 413
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 CDR-L2 (aa)
<400> 413
Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser
1 5
<210> 414
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 CDR-L2 (aa)
<400> 414
Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser
1 5
<210> 415
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 CDR-L3 (aa)
<400> 415
Gln Gln Tyr Ile Ser Leu Pro Trp Thr
1 5
<210> 416
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L3 (aa)
<400> 416
Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln Thr
1 5
<210> 417
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-L3 (aa)
<400> 417
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 418
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 CDR-L3 (aa)
<400> 418
Cys Ser Tyr Ala Gly Ser Ser Thr Ser Arg Asp Val
1 5 10
<210> 419
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 CDR-L3 (aa)
<400> 419
Arg His Tyr Ala Pro Leu Thr
1 5
<210> 420
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 CDR-L3 (aa)
<400> 420
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Tyr Thr
1 5 10
<210> 421
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-26, -35 CDR-L3 (aa)
<400> 421
His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His Tyr Val
1 5 10
<210> 422
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 CDR-L3 (aa)
<400> 422
Leu Leu Ser Ser Gly Asp Ala Arg Met Val
1 5 10
<210> 423
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 CDR-L3 (aa)
<400> 423
Ser Leu Ser His Ala Gly Asp Arg Val Phe
1 5 10
<210> 424
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 CDR-L3 (aa)
<400> 424
Leu Leu Ser Tyr Ser Asp Ala Arg Leu Ala
1 5 10
<210> 425
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 CDR-L3 (aa)
<400> 425
Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr
1 5
<210> 426
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-L3 (aa)
<400> 426
Glu Ser Trp Asp Asp Ala Leu Asn Gly His Val
1 5 10
<210> 427
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 CDR-L3 (aa)
<400> 427
Gln Gln Tyr Val Glu Asp Ala Leu Thr
1 5
<210> 428
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human BCMA epitope (residues 17-27)
<400> 428
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg
1 5 10
<210> 429
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-44 CDR-L3 (aa)
<400> 429
Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 430
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 CDR-L3 (aa)
<400> 430
Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Trp Thr
1 5
<210> 431
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 CDR-L3 (aa)
<400> 431
Gln Leu Trp Asp Ser Asp Ser Asp Asp Phe Ala
1 5 10
<210> 432
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 CDR-L3 (aa)
<400> 432
Gln Val Trp Asp Ser Ser Thr Gly Gln Tyr Val Val
1 5 10
<210> 433
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 CDR-L3 (aa)
<400> 433
Gln Lys Tyr Asp Gly Ala Pro Pro Trp Thr
1 5 10
<210> 434
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-27 VH FR1 (aa)
<400> 434
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 435
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VH FR1 (aa)
<400> 435
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
20 25 30
<210> 436
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25, -31, -44, -51 VH FR1 (aa)
<400> 436
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
20 25 30
<210> 437
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32, -49 VH FR1 (aa)
<400> 437
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 438
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 VH FR1 (aa)
<400> 438
Thr Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp
20 25 30
<210> 439
<211> 30
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VH FR1 (aa)
<400> 439
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly
20 25 30
<210> 440
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 scFv (nt)
(O/SSE)
<400> 440
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg ggatctagag gtggcggagg atctggcggc 360
ggaggaagcg gaggcggcgg atctcttgaa atggctgaag tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga agaagcctgg cgagagcctg aagatcagct gcaaaggcag cggctacagc 480
ttcaccagct actggatcgg ctgggtccga cagatgcctg gcaaaggcct tgagtggatg 540
ggcatcatct accccggcga cagcgacacc agatacagcc ctagctttca gggccacgtg 600
accatcagcg ccgacaagtc tatcagcacc gcctacctgc agtggtccag cctgaaggcc 660
tctgacaccg ccatgtacta ctgcgccaga tactctggca gcttcgacaa ttggggccag 720
ggcacactgg tcaccgtgtc cagc 744
<210> 441
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 VH FR3 (aa)
<400> 441
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 442
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 scFv (aa)
<400> 442
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
180 185 190
Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala
210 215 220
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 443
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VH FR3 (aa)
<400> 443
Asp Ser Pro Ser Pro Gly Thr Thr Pro Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys
20 25 30
<210> 444
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VH FR4 (aa)
<400> 444
Gly Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 445
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VH FR4 (aa)
<400> 445
Trp Arg Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 446
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 VL FR1 (aa)
<400> 446
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys
20
<210> 447
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VL FR1 (aa)
<400> 447
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys
20
<210> 448
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 VL FR1 (aa)
<400> 448
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys
20
<210> 449
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VL FR1 (aa)
<400> 449
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 450
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-31 VL FR1 (aa)
<400> 450
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys
20
<210> 451
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32 VL FR1 (aa)
<400> 451
Gln Thr Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 452
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 VL FR1 (aa)
<400> 452
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 453
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-35 VL FR1 (aa)
<400> 453
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 454
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 VL FR1 (aa)
<400> 454
Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys
20
<210> 455
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 VL FR1 (aa)
<400> 455
Gln Leu Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys
20
<210> 456
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 VL FR1 (aa)
<400> 456
Gln Ala Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys
20
<210> 457
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 VL FR1 (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = any amino acid
<400> 457
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1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 458
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 VL FR1 (aa)
<400> 458
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Pro Cys
20
<210> 459
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VL FR1 (aa)
<400> 459
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 460
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 scFv (nt)
(O/SSE)
<400> 460
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 180
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 240
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 300
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 360
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 420
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 480
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 540
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 600
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 660
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 720
accgtgtcca gc 732
<210> 461
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-44 VL FR1 (aa)
<400> 461
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 462
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 VL FR1 (aa)
<400> 462
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 463
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VL FR1 (aa)
<400> 463
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Thr Cys
20
<210> 464
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-48 VL FR1 (aa)
<400> 464
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Thr Cys
20
<210> 465
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 VL FR1 (aa)
<400> 465
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys
20
<210> 466
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 VL FR1 (aa)
<400> 466
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys
20
<210> 467
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 VL FR2 (aa)
<400> 467
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 468
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VL FR2 (aa)
<400> 468
Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 469
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 VL FR2 (aa)
<400> 469
Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 470
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VL FR2 (aa)
<400> 470
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 471
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-31 VL FR2 (aa)
<400> 471
Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Val Ile Ser
1 5 10 15
<210> 472
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32 VL FR2 (aa)
<400> 472
Trp Tyr Arg Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Glu Val Val Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 473
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 VL FR2 (aa)
<400> 473
Trp Phe Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Thr Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 474
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37, -38 VL FR2 (aa)
<400> 474
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 475
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 VL FR2 (aa)
<400> 475
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 476
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 VL FR2 (aa)
<400> 476
Trp Phe Gln Glu Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 477
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VL FR2 (aa)
<400> 477
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu Phe
1 5 10 15
<210> 478
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 scFv (aa)
<400> 478
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
180 185 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
195 200 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 479
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 VL FR2 (aa)
<400> 479
Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Gly Val Pro Gln Leu Leu Ile His
1 5 10 15
<210> 480
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47, -48 VL FR2 (aa)
<400> 480
Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Gly Pro Val Val Val Ile Gln
1 5 10 15
<210> 481
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 VL FR2 (aa)
<400> 481
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Met Ser
1 5 10 15
<210> 482
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 VL FR2 (aa)
<400> 482
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Phe
1 5 10 15
<210> 483
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 VL FR3 (aa)
<400> 483
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr His Cys
20 25 30
<210> 484
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 VL FR3 (aa)
<400> 484
Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 485
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VL FR3 (aa)
<400> 485
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 486
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 VL FR3 (aa)
<400> 486
Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser
1 5 10 15
Pro Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 487
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VL FR3 (aa)
<400> 487
Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu His Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Arg
20 25 30
<210> 488
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32 VL FR3 (aa)
<400> 488
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Val Arg Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 489
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 VL FR3 (aa)
<400> 489
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 490
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 VL FR3 (aa)
<400> 490
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 491
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 VL FR3 (aa)
<400> 491
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 492
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 VL FR3 (aa)
<400> 492
Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala
1 5 10 15
Leu Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 493
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 VL FR3 (aa)
<400> 493
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala
1 5 10 15
Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 494
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 VL FR3 (aa)
<400> 494
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Thr Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser
1 5 10 15
Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln Ser Asp Asp Asp Ala His Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 495
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VL FR3 (aa)
<400> 495
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 496
<211> 350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VH chain (nt)
<400> 496
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gcgctactct 300
ggttctttcg ataactgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctcagc 350
<210> 497
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 VL FR3 (aa)
<400> 497
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ser Glu Asp Ser Ala Thr Tyr His Cys
20 25 30
<210> 498
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VL FR3 (aa)
<400> 498
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asp Thr Ala Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 499
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-48 VL FR3 (aa)
<400> 499
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 500
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 VL FR3 (aa)
<400> 500
Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Ala Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 501
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 VL FR3 (aa)
<400> 501
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 502
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 VL FR4 (aa)
<400> 502
Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 503
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 VL FR4 (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 3
<223> Xaa = any amino acid
<400> 503
Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 10
<210> 504
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-31, -34 VL FR4 (aa)
<400> 504
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 505
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-35 VL FR4 (aa)
<400> 505
Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 506
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VL FR4 (aa)
<400> 506
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
1 5 10
<210> 507
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1 (aa) - Kabat numbering
<400> 507
Ser Tyr Trp Ile Gly
1 5
<210> 508
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24, -28, -51 VL FR4 (aa)
<400> 508
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 509
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 CDR-H1 (aa) AbM numbering
<400> 509
Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 510
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<220>
<221> VARIANT
<222> 10
<223> Xaa = any amino acid
<400> 510
Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Xaa
1 5 10
<210> 511
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-33 CDR-H2 (aa) AbM numbering
<400> 511
Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ile Tyr
1 5 10
<210> 512
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-H2 AbM numbering
<400> 512
Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr
1 5 10
<210> 513
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2 (aa) - Kabat numbering
<400> 513
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 514
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 514
Ser Trp Asn Ser Gly
1 5
<210> 515
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-33 CDR-H2 (aa) Chothia numbering
<400> 515
Ser Gly Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 516
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 CDR-H2 Chothia numbering
<400> 516
Ser Ser Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 517
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H3 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 517
Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn
1 5
<210> 518
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 VH chain (aa)
<400> 518
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Pro Tyr Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 519
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25, -31, -44, -51 VH chain (aa)
<400> 519
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 520
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-27 VH chain (aa)
<400> 520
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Gly Gly Leu Gly Ile Thr Pro Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 521
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VH chain (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 59
<223> Xaa = any amino acid
<400> 521
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Xaa Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Pro Tyr Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile Gly
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 522
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29, -39 VH chain (aa)
<400> 522
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Pro Tyr Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 523
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VH chain (aa)
<400> 523
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Asp Pro Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 524
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32, -49 VH chain (aa)
<400> 524
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 525
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-33 VH chain (aa)
<400> 525
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ala Asp Ser Ser Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Asn Val Ser Ser
115
<210> 526
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 VH chain (aa)
<400> 526
Thr Gly Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Asp Tyr Asp Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 527
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-35 VH chain (aa)
<400> 527
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 528
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36, 38 VH chain (aa)
<400> 528
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 529
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 VH chain (aa)
<400> 529
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 530
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 VH chain (aa)
<400> 530
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 531
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VH chain (aa)
<400> 531
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 532
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1 (aa) - Chothia numbering
<400> 532
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
1 5
<210> 533
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VH chain (aa)
<400> 533
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Asp Ser Pro Ser Pro Gly Thr Thr Pro Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Arg Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 534
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 VL chain (aa)
<400> 534
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Gly Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr His Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Ile Ser Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 535
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 VL chain (aa)
<400> 535
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 536
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-26 VL chain (aa)
<400> 536
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 537
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-28 VL chain (aa)
<400> 537
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 538
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-29 VL chain (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 105
<223> Xaa = any amino acid
<400> 538
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Pro Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Ser Thr Ser Arg Asp Val Phe Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 539
<211> 105
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-30 VL chain (aa)
<400> 539
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Pro Ile Arg Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu His
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Arg Arg His Tyr Ala Pro Leu Thr Phe
85 90 95
Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 540
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-31 VL chain (aa)
<400> 540
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asn Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Val Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 541
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-32 VL chain (aa)
<400> 541
Gln Thr Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Gly Val
20 25 30
His Trp Tyr Arg Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Glu Val Val Ile Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Arg Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 542
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-34 VL chain (aa)
<400> 542
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Asp Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro
85 90 95
Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 543
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-35 VL chain (aa)
<400> 543
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 544
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-36 VL chain (aa)
<400> 544
Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Pro Val Thr Ser Ala
20 25 30
His Ser Pro Ser Trp Phe Gln Lys Lys Pro Gly Gln Ala Pro Thr Thr
35 40 45
Leu Ile Tyr Glu Thr Thr Asn Arg His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Leu Leu Ser Ser Gly Asp
85 90 95
Ala Arg Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 545
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-37 VL chain (aa)
<400> 545
Gln Leu Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Asn Gly
20 25 30
His Ser Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Thr Thr Asn Arg His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Leu Ser His Ala Gly
85 90 95
Asp Arg Val Phe Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 546
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 VL chain (aa)
<400> 546
Gln Ala Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly
1 5 10 15
Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Asn Gly
20 25 30
His Ser Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Thr
35 40 45
Leu Ile Tyr Asp Thr Asn Asn Arg His Ser Trp Thr Pro Ala Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu Leu Ser Tyr Ser Asp
85 90 95
Ala Arg Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 547
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-39 VL chain (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 4
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT
<222> 34
<223> Xaa = any amino acid
<400> 547
Asp Ile Gln Xaa Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Tyr Glu
20 25 30
Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 548
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-40 VL chain (aa)
<400> 548
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Ser Lys Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 549
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 VL chain (aa)
<400> 549
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Pro Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn
20 25 30
Ser Val Asp Trp Phe Gln Glu Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Thr Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Arg Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Asp Asp Asp Ala His Tyr Tyr Cys Glu Ser Trp Asp Asp Ala Leu
85 90 95
Asn Gly His Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 550
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 VL chain (aa)
<400> 550
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Asn Gly
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Val Glu Asp Ala Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 551
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2 (aa) - Chothia numbering
<400> 551
Tyr Pro Gly Asp Ser Asp
1 5
<210> 552
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-44 VL chain (aa)
<400> 552
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 553
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-45 VL chain (aa)
<400> 553
Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Gly Arg Ser
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Gly Val Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
His Asp Ala Ser Ser Leu Arg Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ser Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Leu Asn Gly Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 554
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 VL chain (aa)
<400> 554
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Gly Pro Val Val Val Ile Gln
35 40 45
Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Lys Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asp Ser Asp Ser Asp Asp
85 90 95
Phe Ala Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 555
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-48 VL chain (aa)
<400> 555
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Gly Pro Val Val Val Ile Gln
35 40 45
Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ser Asp His
85 90 95
Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 556
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 VL chain (aa)
<400> 556
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asp Gln Ile Gly Arg Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Met Ser
35 40 45
Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Thr Gly Gln
85 90 95
Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 557
<211> 108
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 VL chain (aa)
<400> 557
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Gly Asp Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asp Gly Ala Pro Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 558
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-24 scFv sequence (aa)
<400> 558
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Gly Pro Pro Tyr Gly Asp Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
145 150 155 160
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
165 170 175
Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
180 185 190
Trp Gly Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu
210 215 220
Asp Val Ala Ile Tyr His Cys Gln Gln Tyr Ile Ser Leu Pro Trp Thr
225 230 235 240
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
245 250
<210> 559
<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 scFv sequence (aa)
<400> 559
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala
165 170 175
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile
195 200 205
Asp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
210 215 220
Tyr Thr Ser Arg Gln Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
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180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp
210 215 220
Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
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1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
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35 40 45
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys
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Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
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Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
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Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro
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Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln
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Gly Xaa Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr
130 135 140
Leu Ser Val Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser
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Gln Pro Ile Arg Ser Asn Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
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Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln
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Ser Val Leu Asn Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Val Ala Trp Tyr Lys
165 170 175
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195 200 205
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Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
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Thr Lys Leu Asp Ile Lys
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Thr Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Gly Val His Trp Tyr Arg Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Glu Val Val Ile Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Val Arg
195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp
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Ser Ser Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
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Leu
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Glu Ala Asp Ser Ser Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Asn Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val
130 135 140
Ala Pro Gly Lys Thr Ala Met Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly
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Phe Lys Gly Val Gln Trp Tyr Gln Gln Lys Thr Gly Gln Ala Pro Val
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Leu Val Val Tyr Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg
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Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg
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Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser
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Ala Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Ala Arg Asp Leu Gly Pro Asp Tyr Asp Pro Asp Ala Phe Asp Ile Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Ile Val Met Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Asp Arg Ala Thr Leu Ser Cys
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Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala
180 185 190
Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Lys Leu Asp Ile Lys
245
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val
130 135 140
Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly
145 150 155 160
Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met
165 170 175
Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg
180 185 190
Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly
195 200 205
Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
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Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
130 135 140
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
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Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Leu Ser His Ala Gly Asp Arg Val Phe Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
<210> 572
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-38 scFv sequence (aa)
<400> 572
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
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65 70 75 80
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Ala Arg Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Leu Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr
130 135 140
Val Ser Pro Gly Gly Thr Val Thr Leu Thr Cys Gly Ser Ser Thr Gly
145 150 155 160
Ala Val Thr Asn Gly His Ser Pro Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly
165 170 175
Gln Ala Pro Arg Thr Leu Ile Tyr Asp Thr Asn Asn Arg His Ser Trp
180 185 190
Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Gly Ala Gln Pro Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Leu
210 215 220
Leu Ser Tyr Ser Asp Ala Arg Leu Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
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<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
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<223> BCMA-39 scFv sequence (aa)
<220>
<221> VARIANT
<222> 141
<223> Xaa = any amino acid
<220>
<221> VARIANT
<222> 171
<223> Xaa = any amino acid
<400> 573
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Trp Asn Ser Gly Ser Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Xaa Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
145 150 155 160
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Tyr Glu Leu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln
180 185 190
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Ala Leu Thr Ile Arg Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
210 215 220
Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Arg Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys
<210> 574
<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-40 scFv sequence (aa)
<400> 574
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asp Val Ser Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly
180 185 190
Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Cys
210 215 220
Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
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<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 scFv sequence (aa)
<400> 575
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Val Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Pro Cys Ser Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asn Ile Gly Gly Asn Ser Val Asp Trp Phe Gln Glu Val Pro Gly Thr
165 170 175
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Val
180 185 190
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Thr Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala
195 200 205
Ile Arg Gly Leu Gln Ser Asp Asp Asp Ala His Tyr Tyr Cys Glu Ser
210 215 220
Trp Asp Asp Ala Leu Asn Gly His Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Thr Val Leu
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<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-42 scFv sequence (aa)
<400> 576
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Leu Val
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Gly Ile Gly Asn Gly Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Leu Phe Ala Ala Ser Arg Leu Glu Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr
210 215 220
Val Glu Asp Ala Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
225 230 235 240
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<220>
<223> Synthetic
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1 5 10
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<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 578
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu
130 135 140
Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln
145 150 155 160
Asn Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln
165 170 175
Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr
180 185 190
Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr
195 200 205
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Lys Leu Glu Ile Lys
245
<210> 579
<211> 240
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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<400> 579
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Arg Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Gly Ile Gly Arg Ser Leu Ala Trp Tyr Lys Gln Lys Pro Gly Gly Val
165 170 175
Pro Gln Leu Leu Ile His Asp Ala Ser Ser Leu Arg Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Gly Val Gln Ser Glu Asp Ser Ala Thr Tyr His Cys Gln Gln Leu
210 215 220
Asn Gly Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
225 230 235 240
<210> 580
<211> 241
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-47 scFv sequence (aa)
<400> 580
Gln Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Asp Ser Pro Ser Pro Gly Thr Thr Pro Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Arg Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Lys Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Gly Pro
165 170 175
Val Val Val Ile Gln Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asp Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Leu Trp Asp
210 215 220
Ser Asp Ser Asp Asp Phe Ala Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-48 scFv sequence (aa)
<400> 581
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Lys Thr Ala Thr Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Arg Lys Pro Gly Gln Gly Pro
165 170 175
Val Val Val Ile Gln Tyr Asp Thr Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Gly Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp
210 215 220
Ser Ser Ser Asp His Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu
<210> 582
<211> 242
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-49 scFv sequence (aa)
<400> 582
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Lys Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asp Gln Ile
145 150 155 160
Gly Arg Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Val Leu Val Met Ser Tyr Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Arg Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Ala Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp
210 215 220
Ser Ser Thr Gly Gln Tyr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr
225 230 235 240
Val Leu
<210> 583
<211> 241
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-51 scFv sequence (aa)
<400> 583
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Thr Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Ala Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Asn Ile Gly Asp Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
165 170 175
Pro Lys Leu Leu Ile Phe Gly Ala Ser Ile Leu Glu Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr
210 215 220
Asp Gly Ala Pro Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
225 230 235 240
Lys
<210> 584
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-41 scFv sequence (nt)
<400> 584
caggtgcagc tggtgcaatc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtaatac catatactac 180
gcagactctg taaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaaaaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtggac 300
ggtgactacg tcgatgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agcctgtgct gactcagcca 420
ccctcagtgt ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatcc cttgttctgg aagcagctcc 480
aacatcggag gtaactctgt agactggttc caggaggtcc cagggacggc ccccaaactc 540
ctcatctacg ctaatgatcg gcggccctcg ggtgtccctg accgcttctc tggcaccaag 600
tcgggcacct cagcctccct ggccatcagg gggctccagt ctgacgatga cgctcattat 660
tactgtgaat cctgggacga tgccctgaac ggtcacgtgt tcggcggagg gaccaagctg 720
accgtccta 729
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<211> 243
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C1 VH-VL scFv (aa)
<400> 585
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala
130 135 140
Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
145 150 155 160
Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
165 170 175
Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
180 185 190
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
195 200 205
Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
210 215 220
Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225 230 235 240
Glu Ile Lys
<210> 586
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-C2 VL-VH scFv (aa)
<400> 586
Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln
115 120 125
Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Leu Ser Cys
130 135 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Gly Met Asn Trp Val Lys
145 150 155 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met Ala Trp Ile Asn Thr Tyr
165 170 175
Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe
180 185 190
Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu
195 200 205
Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Glu Ile Tyr
210 215 220
Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ala
<210> 587
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2 (aa) - AbM numbering
<400> 587
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg
1 5 10
<210> 588
<211> 348
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VH chain (nt) (O/SSE)
<400> 588
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60
agctgcaaag gcagcggcta cagcttcacc agctactgga tcggctgggt ccgacagatg 120
cctggcaaag gccttgagtg gatgggcatc atctaccccg gcgacagcga caccagatac 180
agccctagct ttcagggcca cgtgaccatc agcgccgaca agtctatcag caccgcctac 240
ctgcagtggt ccagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatactct 300
ggcagcttcg acaattgggg ccagggcaca ctggtcaccg tgtccagc 348
<210> 589
<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L1 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 589
Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His Ser Val Asn
1 5 10
<210> 590
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L2 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 590
Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1 5
<210> 591
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<400> 591
Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Gly Leu Val
1 5 10
<210> 592
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VL chain (nt)
<400> 592
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 593
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1 (aa) - Kabat numbering
<400> 593
Asp Tyr Tyr Val Tyr
1 5
<210> 594
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2 (aa) - Kabat numbering
<400> 594
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 595
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H3 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 595
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr
1 5
<210> 596
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1 (aa) - Chothia numbering
<400> 596
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
1 5
<210> 597
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2 (aa) - Chothia numbering
<400> 597
Asn Pro Asn Ser Gly Gly
1 5
<210> 598
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1 (aa) - AbM numbering
<400> 598
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val Tyr
1 5 10
<210> 599
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2 (aa) - AbM numbering
<400> 599
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn
1 5 10
<210> 600
<211> 333
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VL chain (nt) (O/SSE)
<400> 600
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg gga 333
<210> 601
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L1 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 601
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly
1 5
<210> 602
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L2 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 602
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 603
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L3 (aa) - Kabat, Chothia, and AbM
numbering
<400> 603
Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val
1 5 10
<210> 604
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1 (aa)
<400> 604
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 605
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2 (aa)
<400> 605
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
<210> 606
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H3 (aa)
<400> 606
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn
1 5
<210> 607
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L1 (aa)
<400> 607
Ser Ser Asn Ile Gly Ser His Ser
1 5
<210> 608
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L2 (aa)
<400> 608
Thr Asn Asn
1
<210> 609
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VH chain (aa)
<400> 609
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 610
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 VL chain (aa)
<400> 610
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 611
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1 (aa)
<400> 611
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 612
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2 (aa)
<400> 612
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 613
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H3 (aa)
<400> 613
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 614
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L1 (aa)
<400> 614
Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp
1 5
<210> 615
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L2 (aa)
<400> 615
Glu Asp Ser
1
<210> 616
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> predicted splice donor site
<400> 616
tcaattggta cgtgg 15
<210> 617
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VH chain (aa)
<400> 617
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 618
<211> 105
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VL chain (aa)
<400> 618
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 619
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (nt)
<400> 619
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 620
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (aa)
<400> 620
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly
20
<210> 621
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> gG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 spacer
(nt)
<400> 621
gaatctaagt acggaccgcc ctgccctccc tgccctgctc ctcctgtggc tggaccaagc 60
gtgttcctgt ttccacctaa gcctaaagat accctgatga tttcccgcac acctgaagtg 120
acttgcgtgg tcgtggacgt gagccaggag gatccagaag tgcagttcaa ctggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtccacaa tgctaagact aaaccccgag aggaacagtt tcagtcaact 240
taccgggtcg tgagcgtgct gaccgtcctg catcaggatt ggctgaacgg gaaggagtat 300
aagtgcaaag tgtctaataa gggactgcct agctccatcg agaaaacaat tagtaaggca 360
aaagggcagc ctcgagaacc acaggtgtat accctgcccc ctagccagga ggaaatgacc 420
aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtc aaaggcttct atccaagtga catcgccgtg 480
gagtgggaat caaatgggca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 540
tctgatggaa gtttctttct gtattccagg ctgaccgtgg ataaatctcg ctggcaggag 600
ggcaacgtgt tctcttgcag tgtcatgcac gaagccctgc acaatcatta tacacagaag 660
tcactgagcc tgtccctggg caaa 684
<210> 622
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> optimized SSE IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4
CH3 spacer (nt)
<400> 622
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
<210> 623
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 transmembrane domain (nt)
<400> 623
atgttttggg tgctggtcgt ggtcggaggg gtgctggcct gttacagcct gctggtgaca 60
gtcgctttca tcatcttctg ggtg 84
<210> 624
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 transmembrane domain (aa)
<400> 624
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 625
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(nt)
<400> 625
aagcggggga gaaagaaact gctgtatatt ttcaaacagc cctttatgag acctgtgcag 60
actacccagg aggaagacgg atgcagctgt aggtttcccg aggaagagga aggaggctgt 120
gagctg 126
<210> 626
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(aa)
<400> 626
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 627
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(nt)
<400> 627
agagtcaagt tttccaggtc cgccgacgct ccagcctacc agcaggggca gaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg cagaagggaa gagtacgacg tcctggataa gcggagaggc 120
cgggaccctg agatgggcgg caagcctcgg cggaagaacc cccaggaagg cctgtataac 180
gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240
aggcggggca agggccacga cggcctgtat cagggcctgt ccaccgccac caaggatacc 300
tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc ccaagg 336
<210> 628
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(aa)
<400> 628
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 629
<211> 117
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 ectodomain spacer (nt)
<400> 629
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc 117
<210> 630
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 ectodomain spacer (aa)
<400> 630
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
35
<210> 631
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 631
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 632
<211> 1074
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated EGFR (tEGFR) sequence (nt)
<400> 632
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
aatgctacga atattaaaca cttcaaaaac tgcacctcca tcagtggcga tctccacatc 180
ctgccggtgg catttagggg tgactccttc acacatactc ctcctctgga tccacaggaa 240
ctggatattc tgaaaaccgt aaaggaaatc acagggtttt tgctgattca ggcttggcct 300
gaaaacagga cggacctcca tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag 360
caacatggtc agttttctct tgcagtcgtc agcctgaaca taacatcctt gggattacgc 420
tccctcaagg agataagtga tggagatgtg ataatttcag gaaacaaaaa tttgtgctat 480
gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt gggacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct cttgccggaa tgtcagccga 660
ggcagggaat gcgtggacaa gtgcaacctt ctggagggtg agccaaggga gtttgtggag 720
aactctgagt gcatacagtg ccacccagag tgcctgcctc aggccatgaa catcacctgc 780
acaggacggg gaccagacaa ctgtatccag tgtgcccact acattgacgg cccccactgc 840
gtcaagacct gcccggcagg agtcatggga gaaaacaaca ccctggtctg gaagtacgca 900
gacgccggcc atgtgtgcca cctgtgccat ccaaactgca cctacggatg cactgggcca 960
ggtcttgaag gctgtccaac gaatgggcct aagatcccgt ccatcgccac tgggatggtg 1020
ggggccctcc tcttgctgct ggtggtggcc ctggggatcg gcctcttcat gtga 1074
<210> 633
<211> 1074
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated EGFR (tEGFR) sequence (nt) (O/SSE)
<400> 633
atgctgctcc tcgtgacaag cctgctcctg tgtgaactcc ctcatccagc ttttctgctc 60
attcctcgga aagtgtgcaa cggcatcggc atcggagagt tcaaggacag cctgagcatc 120
aatgccacca acatcaagca cttcaagaat tgcaccagca tcagcggcga cctgcacatt 180
ctgcctgtgg cctttagagg cgacagcttc acccacacac ctccactgga tccccaagag 240
ctggatatcc tgaaaaccgt gaaagagatt accggattcc tcctgatcca agcctggcca 300
gagaacagaa ccgatctgca cgccttcgag aacctcgaga tcatcagagg ccggaccaaa 360
cagcacggcc agtttagcct ggctgtggtg tctctgaaca tcaccagtct gggcctgaga 420
agcctgaaag aaatctccga cggcgacgtg atcatctccg gaaacaagaa cctgtgctac 480
gccaacacca tcaactggaa gaagctgttc ggcacctccg gccagaaaac aaagatcatc 540
tctaaccggg gcgagaacag ctgcaaggcc accggacaag tttgtcacgc cctgtgtagc 600
cctgaaggct gttggggacc cgaacctaga gactgtgtgt cctgccggaa tgtgtcccgg 660
ggcagagaat gtgtggataa gtgcaacctg ctggaaggcg agccccgcga gtttgtggaa 720
aacagcgagt gcatccagtg tcaccccgag tgtctgcccc aggccatgaa cattacatgc 780
accggcagag gccccgacaa ctgtattcag tgcgcccact acatcgacgg ccctcactgc 840
gtgaaaacat gtccagctgg cgtgatggga gagaacaaca ccctcgtgtg gaagtatgcc 900
gacgccggac atgtgtgcca cctgtgtcac cctaattgca cctacggctg taccggacct 960
ggcctggaag gatgccctac aaacggccct aagatcccca gcattgccac cggaatggtt 1020
ggagccctgc tgcttctgtt ggtggtggcc ctcggaatcg gcctgttcat gtga 1074
<210> 634
<211> 357
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated EGFR (tEGFR) sequence (aa)
<400> 634
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
20 25 30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
35 40 45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
50 55 60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65 70 75 80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
85 90 95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
100 105 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
115 120 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
130 135 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145 150 155 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
165 170 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
180 185 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
195 200 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
210 215 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225 230 235 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
245 250 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 635
<211> 544
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> EF1alpha promoter with HTLV1 enhancer
<400> 635
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctac 544
<210> 636
<211> 589
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Woodchuck Hepatitis Virus (WHP)
Posttranscriptional Regulatory Element (WPRE)
<400> 636
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589
<210> 637
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA binding epitope 1
<400> 637
Gln Asn Glu Tyr Phe
1 5
<210> 638
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA binding epitope 2
<400> 638
Cys Ile Pro Cys Gln Leu
1 5
<210> 639
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA binding epitope 3
<400> 639
Cys Gln Arg Tyr Cys
1 5
<210> 640
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA binding epitope 1
<400> 640
Met Leu Met Ala Gly
1 5
<210> 641
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA binding epitope 2
<400> 641
Tyr Phe Asp Ser Leu Leu
1 5
<210> 642
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA binding epitope 3
<400> 642
Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu
1 5 10
<210> 643
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VH chain (nt)
<400> 643
gaagtgcagc tggtgcagtc tggggctgag atgaagaagc ctggggcctc actgaagctc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcatc gactactatg tatactggat gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtc catgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac accgccatgt attactgtgc gcgctcccag 300
cgtgacggtt acatggatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 644
<211> 354
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VH chain (nt) (O/SSE)
<400> 644
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag atgaagaaac ctggcgcctc tctgaagctg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcatc gactactacg tgtactggat gcggcaggcc 120
cctggacagg gactcgaatc tatgggctgg atcaacccca atagcggcgg caccaattac 180
gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg accagagaca ccagcatcag caccgcctac 240
atggaactga gccggctgag atccgacgac accgccatgt actactgcgc cagatctcag 300
cgcgacggct acatggatta ttggggccag ggaaccctgg tcaccgtgtc cagc 354
<210> 645
<211> 312
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VL chain (nt)
<400> 645
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc ta 312
<210> 646
<211> 312
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 VL chain (nt) (O/SSE)
<400> 646
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 180
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 240
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 300
ctgacagtgc tg 312
<210> 647
<211> 744
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 scFv
<400> 647
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt gcagtctgga 420
gcagaggtga aaaagcccgg ggagtctctg aagatctcct gtaagggttc tggatacagc 480
tttaccagct actggatcgg ctgggtgcgc cagatgcccg ggaaaggcct ggagtggatg 540
gggatcatct atcctggtga ctctgatacc agatacagcc cgtccttcca aggccacgtc 600
accatctcag ctgacaagtc catcagcact gcctacctgc agtggagcag cctgaaggcc 660
tcggacaccg ccatgtatta ctgtgcgcgc tactctggtt ctttcgataa ctggggtcaa 720
ggtactctgg tgaccgtctc ctca 744
<210> 648
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 scFv
<400> 648
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt 360
ggatccctcg agatggccga agtgcagctg gtgcagtctg gggctgagat gaagaagcct 420
ggggcctcac tgaagctctc ctgcaaggct tctggataca ccttcatcga ctactatgta 480
tactggatgc gacaggcccc tggacaaggg cttgagtcca tgggatggat caaccctaac 540
agtggtggca caaactatgc acagaagttt cagggcaggg tcaccatgac cagggacacg 600
tccatcagca cagcctacat ggagctgagc aggctgagat ctgacgacac cgccatgtat 660
tactgtgcgc gctcccagcg tgacggttac atggattact ggggtcaagg tactctggtg 720
accgtctcct ca 732
<210> 649
<211> 228
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 spacer
(aa)
<400> 649
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys
225
<210> 650
<211> 554
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> modified EF1 alpha promoter
<400> 650
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctacggctag cgcc 554
<210> 651
<211> 399
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> MND promoter
<400> 651
tttatttagt ctccagaaaa aggggggaat gaaagacccc acctgtaggt ttggcaagct 60
aggatcaagg ttaggaacag agagacagca gaatatgggc caaacaggat atctgtggta 120
agcagttcct gccccggctc agggccaaga acagttggaa cagcagaata tgggccaaac 180
aggatatctg tggtaagcag ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggtccccag 240
atgcggtccc gccctcagca gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag 300
gacctgaaat gaccctgtgc cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt 360
tcgcgcgctt ctgctccccg agctcaataa aagagccca 399
<210> 652
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(nt)
<400> 652
agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct ccagcctatc agcagggcca aaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggataa gcggagaggc 120
agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat 180
gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc 240
agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300
tatgacgcac tgcacatgca ggccctgcca cctaga 336
<210> 653
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 653
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 654
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 654
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 655
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> P2A peptide (aa)
<400> 655
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 656
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> P2A peptide (aa)
<400> 656
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 657
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> E2A peptide (aa)
<400> 657
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 658
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> E2A peptide (aa)
<400> 658
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 659
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> F2A peptide (aa)
<400> 659
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 660
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> F2A peptide (aa)
<400> 660
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 661
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 661
agtctaaata cggac 15
<210> 662
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 662
tcaactggta tgtgg 15
<210> 663
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 663
accatctcca aggcc 15
<210> 664
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 664
gccccaggtt tacac 15
<210> 665
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 665
tcagcagatc cgccg 15
<210> 666
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 666
ctcctgtgtg aactc 15
<210> 667
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 667
tcggaaagtg tgcaa 15
<210> 668
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 668
cagcacggcc agttt 15
<210> 669
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 669
aaccggggcg agaac 15
<210> 670
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site
<400> 670
ctggaaggcg agccc 15
<210> 671
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice donor site (last 4 nt outside of
coding region)
<400> 671
tgttcatgtg agcgg 15
<210> 672
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 672
cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca a 41
<210> 673
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 673
gggcaacgtg ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg c 41
<210> 674
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 674
cggagtgctg gcctgttaca gcctgctggt taccgtggcc t 41
<210> 675
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 675
gctgagagtg aagttcagca gatccgccga cgctccagcc t 41
<210> 676
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 676
acacctccac tggatcccca agagctggat atcctgaaaa c 41
<210> 677
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 677
accggattcc tcctgatcca agcctggcca gagaacagaa c 41
<210> 678
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 678
acggccagtt tagcctggct gtggtgtctc tgaacatcac c 41
<210> 679
<211> 123
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 endo (nt)
<400> 679
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 680
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 endo (aa)
<400> 680
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 681
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(nt)
<400> 681
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 120
gagctg 126
<210> 682
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (nt)
<400> 682
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctacggc 60
<210> 683
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (nt)
<400> 683
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
<210> 684
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (nt)
<400> 684
atggtgctgc agacacaggt gttcatctcc ctgctgctgt ggatctctgg agcatacgga 60
<210> 685
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgG -kappa signal sequence (nt)
<400> 685
atggtgctgc agacacaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 686
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> T2A peptide (nt)
<400> 686
ctcgagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggcccta gg 72
<210> 687
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> T2A peptide (nt)
<400> 687
cttgaaggtg gtggcgaagg cagaggcagc ctgcttacat gcggagatgt ggaagagaac 60
cccggaccta ga 72
<210> 688
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28 transmembrane domain (nt)
<400> 688
atgttctggg tgctcgtggt cgttggcgga gtgctggcct gttacagcct gctggttacc 60
gtggccttca tcatcttttg ggtc 84
<210> 689
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 689
cgtctaggta agttt 15
<210> 690
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 690
gaccaaggtg accgt 15
<210> 691
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 691
tgcactggta ccagc 15
<210> 692
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 692
taaactggta ccagc 15
<210> 693
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 693
atctcctgta agggt 15
<210> 694
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 694
ggtcaaggta ctctg 15
<210> 695
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 695
gaggacagta agcgg 15
<210> 696
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 696
ggtcaaggta ctctg 15
<210> 697
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 697
tgcctccgtg tctgc 15
<210> 698
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 698
caccaaggtg accgt 15
<210> 699
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 699
tgaactggta tcagc 15
<210> 700
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 700
atctcttgaa atggt 15
<210> 701
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 701
ggccagggca cactg 15
<210> 702
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 702
gaggacagca agagg 15
<210> 703
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 703
ggccagggaa ccctg 15
<210> 704
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 704
tgccagcgtt agtgc 15
<210> 705
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 705
aatctaagta cggac 15
<210> 706
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 706
tcaactggta cgtgg 15
<210> 707
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 707
acaattagta aggca 15
<210> 708
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 708
accacaggtg tatac 15
<210> 709
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 709
tttccaggtc cgccg 15
<210> 710
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 710
ctgctctgtg agtta 15
<210> 711
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 711
acgcaaagtg tgtaa 15
<210> 712
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 712
caacatggtc agttt 15
<210> 713
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 713
aacagaggtg aaaac 15
<210> 714
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Predicted splice donor site
<400> 714
ctggagggtg agcca 15
<210> 715
<211> 729
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 scFv (nt)
<400> 715
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc cctgaggctg 60
tcttgcgcag ccagcggctt cacctttagc gactactata tgtcctggat cagacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagctcct ctggctccac aatctactat 180
gccgactctg tgaagggccg gtttaccatc agcagagata acgccaagaa ttccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcgattaca ccgaggatta ttggggccag ggcacactgg tgaccgtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg cagcggcgga ggaggctccc agtctgccct gacacagcca 420
gccagcgtgt ccggctctcc cggacagtcc atcacaatct cttgtaccgg ctctagctcc 480
gacgtgggca agtacaacct ggtgtcctgg tatcagcagc cccctggcaa ggcccctaag 540
ctgatcatct acgatgtgaa caagaggcca tctggcgtga gcaatcgctt cagcggctcc 600
aagtctggca ataccgccac actgaccatc agcggcctgc agggcgacga tgaggcagat 660
tactattgtt ctagctacgg cggcagcaga tcctacgtgt tcggcacagg caccaaggtg 720
accgtgctg 729
<210> 716
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 scFV(nt)
<400> 716
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
<210> 717
<211> 720
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 scFV(nt)
(O/SSE)
<400> 717
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caagcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
<210> 718
<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-26 scFV(nt)
<400> 718
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctg 723
<210> 719
<211> 723
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-26 scFV(nt)
(O/SSE)
<400> 719
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctg 723
<210> 720
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated marker predicted splice donor site
<400> 720
tcttcatgtg agcgg 15
<210> 721
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> promoter predicted splice acceptor site
<400> 721
tggctccgcc tttttcccga gggtggggga gaaccgtata t 41
<210> 722
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> promoter predicted splice acceptor site
<400> 722
tgaactgcgt ccgccgtcta ggtaagttta aagctcaggt c 41
<210> 723
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> promoter predicted splice acceptor site
<400> 723
ttctgttctg cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg c 41
<210> 724
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 predicted splice acceptor site
<400> 724
ctactacatg agctggatcc gccaggctcc agggaagggg c 41
<210> 725
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 predicted splice acceptor site
<400> 725
ggctgattat tattgtagct catatggagg tagtaggtct t 41
<210> 726
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
<400> 726
ctatgccatg tcctggttca ggcaggcacc aggcaagggc c 41
<210> 727
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
<400> 727
gtccgcctct gtgggcgata gggtgaccgt gacatgtcgc g 41
<210> 728
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
<400> 728
gtgggcttta tccgctctaa ggcctacggc ggcaccacag a 41
<210> 729
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
<400> 729
gtgacatgtc gcgcctccca gggcatctct aactacctgg c 41
<210> 730
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
<400> 730
tacagcgcct ccaccctgca gagcggagtg ccctcccggt t 41
<210> 731
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 predicted splice acceptor site
<400> 731
ctggccatca gtggcctcca gtctgaggat gaggctgatt a 41
<210> 732
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 predicted splice acceptor site
<400> 732
agatacagcc cgtccttcca aggccacgtc accatctcag c 41
<210> 733
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 predicted splice acceptor site
<400> 733
cgaggctgat tattactgca gctcaaatac aagaagcagc a 41
<210> 734
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 predicted splice acceptor site
<400> 734
gccctcaggg gtttctaatc gcttctctgg ctccaagtct g 41
<210> 735
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 735
ctactatatg tcctggatca gacaggcacc tggcaagggc c 41
<210> 736
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-23 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 736
ggcagattac tattgttcta gctacggcgg cagcagatcc t 41
<210> 737
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-25 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 737
ctatgccatg tcctggttca agcaggcacc aggcaagggc c 41
<210> 738
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 738
ctggctattt ctggactgca gagcgaggac gaggccgact a 41
<210> 739
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-52 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 739
agatacagcc ctagctttca gggccacgtg accatcagcg c 41
<210> 740
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 740
cgaggccgat tactactgca gcagcaacac ccggtccagc a 41
<210> 741
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> BCMA-55 predicted splice acceptor site
(O/SSE)
<400> 741
gcccagcggc gtgtccaata gattcagcgg cagcaagagc g 41
<210> 742
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> spacer predicted splice acceptor site
<400> 742
aagtttcttt ctgtattcca ggctgaccgt ggataaatct c 41
<210> 743
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> spacer predicted splice acceptor site
<400> 743
gggcaacgtg ttctcttgca gtgtcatgca cgaagccctg c 41
<210> 744
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD28TM predicted splice acceptor site
<400> 744
aggggtgctg gcctgttaca gcctgctggt gacagtcgct t 41
<210> 745
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> 4-1BB/CD3 zeta predicted splice acceptor site
<400> 745
gctgagagtc aagttttcca ggtccgccga cgctccagcc t 41
<210> 746
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated marker predicted splice acceptor site
<400> 746
actcctcctc tggatccaca ggaactggat attctgaaaa c 41
<210> 747
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated marker predicted splice acceptor site
<400> 747
acagggtttt tgctgattca ggcttggcct gaaaacagga c 41
<210> 748
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> truncated marker predicted splice acceptor site
<400> 748
atggtcagtt ttctcttgca gtcgtcagcc tgaacataac a 41
<210> 749
<211> 326
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human IgG2 Fc (Uniprot P01859)
<400> 749
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 750
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human IgG4 Fc (Uniprot P01861)
<400> 750
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 751
<211> 1959
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 751
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc cctgaggctg 60
tcttgcgcag ccagcggctt cacctttagc gactactata tgtcctggat cagacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagctcct ctggctccac aatctactat 180
gccgactctg tgaagggccg gtttaccatc agcagagata acgccaagaa ttccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcgattaca ccgaggatta ttggggccag ggcacactgg tgaccgtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg cagcggcgga ggaggctccc agtctgccct gacacagcca 420
gccagcgtgt ccggctctcc cggacagtcc atcacaatct cttgtaccgg ctctagctcc 480
gacgtgggca agtacaacct ggtgtcctgg tatcagcagc cccctggcaa ggcccctaag 540
ctgatcatct acgatgtgaa caagaggcca tctggcgtga gcaatcgctt cagcggctcc 600
aagtctggca ataccgccac actgaccatc agcggcctgc agggcgacga tgaggcagat 660
tactattgtt ctagctacgg cggcagcaga tcctacgtgt tcggcacagg caccaaggtg 720
accgtgctgg aatctaagta cggaccgcct tgtcctcctt gtcccgctcc tcctgttgcc 780
ggaccttccg tgttcctgtt tcctccaaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 840
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaagagg atcccgaggt gcagttcaac 900
tggtatgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagttc 960
cagagcacct acagagtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggattg gctgaacggc 1020
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccta gcagcatcga gaaaaccatc 1080
tccaaggcca agggccagcc aagagagccc caggtttaca cactgcctcc aagccaagag 1140
gaaatgacca agaatcaggt gtccctgaca tgcctggtca agggcttcta cccctccgat 1200
atcgccgtgg aatgggagag caatggccag cctgagaaca actacaagac cacacctcct 1260
gtgctggaca gcgacggcag tttcttcctg tatagtagac tcaccgtgga taaatcaaga 1320
tggcaagagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1380
acccagaaaa gcctgagcct gtctctgggc aagatgttct gggtgctcgt ggtcgttggc 1440
ggagtgctgg cctgttacag cctgctggtt accgtggcct tcatcatctt ttgggtcaag 1500
cggggcagaa agaagctgct ctacatcttc aagcagccct tcatgcggcc cgtgcagacc 1560
acacaagagg aagatggctg ctcctgcaga ttccccgagg aagaagaagg cggctgcgag 1620
ctgagagtga agttcagcag atccgccgac gctccagcct atcagcaggg ccaaaaccag 1680
ctgtacaacg agctgaacct ggggagaaga gaagagtacg acgtgctgga taagcggaga 1740
ggcagagatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga atcctcaaga gggcctgtat 1800
aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaat gaagggcgag 1860
cgcagaagag gcaagggaca cgatggactg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1920
acctatgacg cactgcacat gcaggccctg ccacctaga 1959
<210> 752
<211> 1950
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 752
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caagcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 780
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 840
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 900
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 960
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 1020
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 1080
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 1140
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 1200
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 1260
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 1320
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 1380
agcctgagcc tgtctctggg caagatgttc tgggtgctcg tggtcgttgg cggagtgctg 1440
gcctgttaca gcctgctggt taccgtggcc ttcatcatct tttgggtcaa gcggggcaga 1500
aagaagctgc tctacatctt caagcagccc ttcatgcggc ccgtgcagac cacacaagag 1560
gaagatggct gctcctgcag attccccgag gaagaagaag gcggctgcga gctgagagtg 1620
aagttcagca gatccgccga cgctccagcc tatcagcagg gccaaaacca gctgtacaac 1680
gagctgaacc tggggagaag agaagagtac gacgtgctgg ataagcggag aggcagagat 1740
cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag aatcctcaag agggcctgta taatgagctg 1800
cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga 1860
ggcaagggac acgatggact gtaccagggc ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgac 1920
gcactgcaca tgcaggccct gccacctaga 1950
<210> 753
<211> 1953
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 753
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctggaatcta agtacggacc gccttgtcct ccttgtcccg ctcctcctgt tgccggacct 780
tccgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag gacaccctga tgatcagcag gacccctgaa 840
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccaa gaggatcccg aggtgcagtt caactggtat 900
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gttccagagc 960
acctacagag tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020
tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg cctagcagca tcgagaaaac catctccaag 1080
gccaagggcc agccaagaga gccccaggtt tacacactgc ctccaagcca agaggaaatg 1140
accaagaatc aggtgtccct gacatgcctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1200
gtggaatggg agagcaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1260
gacagcgacg gcagtttctt cctgtatagt agactcaccg tggataaatc aagatggcaa 1320
gagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380
aaaagcctga gcctgtctct gggcaagatg ttctgggtgc tcgtggtcgt tggcggagtg 1440
ctggcctgtt acagcctgct ggttaccgtg gccttcatca tcttttgggt caagcggggc 1500
agaaagaagc tgctctacat cttcaagcag cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa 1560
gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga 1620
gtgaagttca gcagatccgc cgacgctcca gcctatcagc agggccaaaa ccagctgtac 1680
aacgagctga acctggggag aagagaagag tacgacgtgc tggataagcg gagaggcaga 1740
gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag 1800
ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga 1860
agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat 1920
gacgcactgc acatgcaggc cctgccacct aga 1953
<210> 754
<211> 1974
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 754
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg ggatctagag gtggcggagg atctggcggc 360
ggaggaagcg gaggcggcgg atctcttgaa atggctgaag tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga agaagcctgg cgagagcctg aagatcagct gcaaaggcag cggctacagc 480
ttcaccagct actggatcgg ctgggtccga cagatgcctg gcaaaggcct tgagtggatg 540
ggcatcatct accccggcga cagcgacacc agatacagcc ctagctttca gggccacgtg 600
accatcagcg ccgacaagtc tatcagcacc gcctacctgc agtggtccag cctgaaggcc 660
tctgacaccg ccatgtacta ctgcgccaga tactctggca gcttcgacaa ttggggccag 720
ggcacactgg tcaccgtgtc cagcgagtct aaatacggac cgccttgtcc tccttgtccc 780
gctcctcctg ttgccggacc ttccgtgttc ctgtttcctc caaagcctaa ggacaccctg 840
atgatcagca ggacccctga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgtccca agaggatccc 900
gaggtgcagt tcaactggta tgtggacggc gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct 960
agagaggaac agttccagag cacctacaga gtggtgtccg tgctgacagt gctgcaccag 1020
gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaggtgtcca acaagggcct gcctagcagc 1080
atcgagaaaa ccatctccaa ggccaagggc cagccaagag agccccaggt ttacacactg 1140
cctccaagcc aagaggaaat gaccaagaat caggtgtccc tgacatgcct ggtcaagggc 1200
ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg gagagcaatg gccagcctga gaacaactac 1260
aagaccacac ctcctgtgct ggacagcgac ggcagtttct tcctgtatag tagactcacc 1320
gtggataaat caagatggca agagggcaac gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc 1380
ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg agcctgtctc tgggcaagat gttctgggtg 1440
ctcgtggtcg ttggcggagt gctggcctgt tacagcctgc tggttaccgt ggccttcatc 1500
atcttttggg tcaagcgggg cagaaagaag ctgctctaca tcttcaagca gcccttcatg 1560
cggcccgtgc agaccacaca agaggaagat ggctgctcct gcagattccc cgaggaagaa 1620
gaaggcggct gcgagctgag agtgaagttc agcagatccg ccgacgctcc agcctatcag 1680
cagggccaaa accagctgta caacgagctg aacctgggga gaagagaaga gtacgacgtg 1740
ctggataagc ggagaggcag agatcctgaa atgggcggca agcccagacg gaagaatcct 1800
caagagggcc tgtataatga gctgcagaaa gacaagatgg ccgaggccta cagcgagatc 1860
ggaatgaagg gcgagcgcag aagaggcaag ggacacgatg gactgtacca gggcctgagc 1920
accgccacca aggataccta tgacgcactg cacatgcagg ccctgccacc taga 1974
<210> 755
<211> 1962
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 755
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
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Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
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Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
180 185 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
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Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
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Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
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Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
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cgccttgtcc tccttgtccc gctcctcctg ttgccggacc t 41
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<223> Synthetic
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<223> Synthetic
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
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Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
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130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly
145 150 155 160
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA scFV
<400> 771
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Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
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Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
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Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
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Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
145 150 155 160
Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn
180 185 190
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser
195 200 205
Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr Met Asp Tyr Trp
100 105 110
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
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Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BMCA VH
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
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Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
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Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<220>
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<223> Synthetic
<220>
<223> QNEYFDSLL
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<223> Synthetic
<220>
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Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
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Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
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Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly
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Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn
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<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA scFv
<400> 782
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Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Gly
85 90 95
Leu Gly Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 836
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 836
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Ala Tyr Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 837
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 837
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg His Val Trp Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 838
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 838
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Arg Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Phe Tyr Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 839
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 839
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Thr Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 840
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 840
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Ala His Thr Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 841
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 841
Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His His Val Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 842
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 842
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Val Ile
20 25 30
Gly Ala His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Ala Ala Ile Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Ile Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 843
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 843
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 844
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 844
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Ser
20 25 30
Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr His Ser Ser Pro
85 90 95
Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 845
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 845
Asp Ile Arg Leu Thr Gln Ser Pro Ser Pro Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Glu Asp Ile Asn Lys Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr His Gln Thr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Thr Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Gly Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Glu Ser Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 846
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 846
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Ser
20 25 30
Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Met Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ala Gly Ser Pro
85 90 95
Pro Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 847
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 847
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 848
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 848
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Ser Ile Tyr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 849
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> anti-BCMA VL
<400> 849
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Glu Thr
85 90 95
Ser His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 850
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal sequence
<400> 850
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 851
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal peptide
<400> 851
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 852
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD8 alpha signal peptide
<400> 852
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 853
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> CD33 signal peptide
<400> 853
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
<210> 854
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Optimized splice acceptor site
<400> 854
aagtttcttt ctgtattcca gactgaccgt ggataaatct c 41
<210> 855
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Spacer - codon optimized (nt)
<400> 855
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtccagctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caaa 684
<210> 856
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic
<220>
<223> Alternative CO/SSE spacer (nt)
<400> 856
gaatctaagt acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
Claims (275)
- (a) B세포 성숙 항원(B cell maturation antigen, BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인;
(b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서;
(c) 막관통 도메인; 및
(d) 세포 내 신호 전달 영역(intracellular signaling region)을 포함하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항에 있어서,
상기 스페이서가 면역글로불린 불변 영역의 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 스페이서가 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 3 항에 있어서,
상기 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고, 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고/거나;
상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 영역 및/또는 IgG2 CH2 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH2 영역이고 상기 IgG2 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH2 영역이고/거나;
상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 영역 및/또는 IgG2 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH3 영역이고 상기 IgG2 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH3 영역인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
상기 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 각각의 힌지 영역, CH2 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 3 항 또는 제 4 항에 있어서,
상기 힌지 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지 영역을 포함하고/거나;
상기 CH2 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH2 영역을 포함하고/거나;
상기 CH3 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서가 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4 힌지 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지;
인간 IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및
인간 IgG4 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 4 항, 제 6 항 및 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서가 (i) 서열 번호: 649에 제시된 서열;
(ii) 서열 번호: 649에 대해 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는
(iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 3 항 및 제 6 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서가 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - (a) B세포 성숙 항원(BCMA)을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인;
(b) 서열 번호: 649에 제시된 스페이서;
(c) 막관통 도메인; 및
(d) 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인이 가변 중쇄(variable heavy chain, VH) 및 가변 경쇄(variable light chain, VL) 영역을 포함하는 항체 단편인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 또는 제 12 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하거나, 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하거나, 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하거나, 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하거나, 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 제시된 아미노산 서열을 각각 포함하거나, 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(heavy chain complementarity determining region 1, CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항 및 제 15 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 507 또는 593 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 4, 5, 513 또는 594 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 7, 10, 157, 517 또는 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 33, 178, 380, 589 또는 601 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 43, 183, 400, 590 또는 602 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 194, 416, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항, 제 15 항 및 제 17 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항, 제 15 항, 제 17 항 및 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 13 항, 제 15 항, 제 17 항, 제 18 항 및 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 256에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL은 서열 번호: 267에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 519에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL은 서열 번호: 535에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 115에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL은 서열 번호: 536에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 609에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL은 서열 번호: 610에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 21 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하거나; 또는 상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 23 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단편은 scFv를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 25 항에 있어서,
상기 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 포함하는 링커를 포함하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 아미노-말단인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 27 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478, 128-139, 268-278, 329, 442, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 478, 128-139, 268-278, 329, 442, 558-576, 578-583, 585 또는 769-771 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 28 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478, 278, 559, 560 또는 442 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 478, 278, 559, 560 또는 442 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 30 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은
(a) 서열 번호: 648, 352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열;
(b) 서열 번호: 648, 352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는
(c) (a) 또는 (b)의 퇴화(degenerate) 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460, 440, 715, 717 또는 719 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 33 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 11 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 카르복시-말단인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - (1) 인간 B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen, BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인(여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은
(i) 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH); 및
(ii) 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함);
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 (선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인) IgG4 CH3 영역을 포함하는 스페이서; 또는 서열 번호: 649에 제시된 스페이서;
(3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및
(4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - (1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인, 여기서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은:
서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 서열내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 서열내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하거나;
서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하거나;
서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하거나;
서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하거나; 또는
서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 을 포함함;
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 IgG4 CH3 영역을 포함하는 스페이서; 또는 서열 번호: 649에 제시된 스페이서;
(3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및
(4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 38 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 35 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 40 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 40 항 또는 제 41 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 40 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 도메인은 인간이거나 인간 단백질로부터 유래된 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 39 항, 제 42 항 및 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열이거나 이를 포함하고, 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 40 항 내지 제 44 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 45 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 39 항, 제 45 항 및 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 39 항 및 제 45 항 내지 제 47 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 39 항 및 제 45 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 또는 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 39 항 및 제 45 항 내지 제 49 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열이거나 이를 포함하고, 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 36 항 내지 제 50 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 상기 막관통 도메인과 상기 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 51 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 52 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 53 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 인간 또는 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 54 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열이거나 이를 포함하고, 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단 순서로 상기 항원 결합 도메인, 상기 스페이서, 상기 막관통 도메인 및 상기 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
(a) 표적 세포의 표면에 발현된 BCMA에 대한 상기 항원 결합 도메인 또는 상기 키메라 항원 수용체의 결합 능력 또는
(b) 상기 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포가 표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출된 후 상기 키메라 항원 수용체의 기능 또는 활성을 나타내는 측정값이
가용성 또는 탈락 형태(shed form) BCMA의 농도 또는 양의 존재 하에 감소 또는 차단되지 않거나 또는 실질적으로 감소 또는 차단되지 않으며,
여기서 상기 농도 또는 양은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건하에서 참조(reference) 항-BCMA 재조합 수용체 또는 참조 항-BCMA 결합 도메인과 관련된 결합 또는 기능 또는 활성의 측정값을 차단하거나 감소시킬 수 있거나 실질적으로 차단하거나 감소시킬 수 있는 농도 또는 양이거나 또는 생물학적 샘플에 존재하는 농도 또는 양인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 57 항에 있어서,
상기 가용성 또는 탈락 형태 BCMA의 상기 농도 또는 양은
상기 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장에 존재하는 농도 또는 양이거나 또는 다발성 골수종 또는 이의 하위 유형을 갖는 환자 집단 또는 이의 하위 집단 내 환자의 혈청, 혈액 또는 혈장에 존재하는 평균 농도 또는 양이거나 또는
동일하거나 실질적으로 동일한 조건 하에서, 상기 결합 또는 측정값이 참조 항-BCMA 재조합 수용체, 선택적으로 참조 항-BCMA CAR에 대해 감소되거나 차단되거나 또는 실질적으로 감소되거나 차단되는 농도 또는 양인 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 751 내지 756 중 어느 하나에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되거나, 또는 서열 번호: 751 내지 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 59 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되거나, 또는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 60 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되거나, 또는 이에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 61 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 755에 제시된 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는,
키메라 항원 수용체. - 제 1 항 내지 제 62 항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 암호화하는, 폴리뉴클레오타이드.
- 제 63 항에 있어서,
인간 세포, 선택적으로 인간 T 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터의 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 또는 제 64 항에 있어서,
상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지;
IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및
선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 IgG4 CH3 영역을 포함하는 스페이서; 또는 서열 번호: 649, 서열 번호: 649에 대해 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체로 제시된 스페이서;
를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서,
(a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인;
(b) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서;
(c) 막관통 도메인; 및
(d) 세포 내 신호 전달 영역;
을 암호화하는 핵산을 포함하고,
여기서 인간 세포, 선택적으로 인간 T 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 스페이서는 면역글로불린의 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 67 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 스페이서는 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항, 제 64 항 및 제 66 항 내지 제 68 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고, 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고/거나;
상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 영역 및/또는 IgG2 CH2 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH2 영역이고 상기 IgG2 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH2 영역이고/거나;
상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 영역 및/또는 IgG2 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH3 영역이고 상기 IgG2 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH3 영역인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항, 제 64항 및 제 66 항 내지 제 69 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터의 힌지 영역, CH2 및 CH3 각각의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항, 제 64항 및 제 66 항 내지 제 69 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 힌지 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지 영역을 포함하고/거나;
상기 CH2 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH2 영역을 포함하고/거나;
상기 CH3 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항, 제 64 항 및 제 66 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4 힌지 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지;
인간 IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및
인간 IgG4 CH3 영역을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항, 제 64 항 및 제 66 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 스페이서는
(i) 서열 번호: 649에 제시된 서열;
(ii) 서열 번호: 649에 대해 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 649의 기능적 변이체; 또는
(iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분;
이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 스페이서는 서열 번호: 649에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서를 암호화하는 상기 핵산은 하나 이상의 변형 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 621에 제시된 서열에 함유된 참조 스플라이스 공여체 부위 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항에 있어서,
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 뉴클레오타이드 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 또는 제 76 항에 있어서,
상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위는 정규(canonical), 비정규(non-canonical) 또는 숨은(cryptic) 스플라이스 부위인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 77 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나;
상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상되는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 78 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 aatctaagtacggac(서열 번호: 705), tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706), acaattagtaaggca(서열 번호: 707) 및/또는 accacaggtgtatac(서열 번호: 708)을 포함하고/거나;
상기 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호: 743)을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 78 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나;
상기 참조 스플라이스 공여체 및/또는 참조 스플라이스 수용체 부위(들)은 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상되는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 78 항 및 제 80 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 참조 스플라이스 공여체 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호: 706)을 포함하고/거나;
상기 참조 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 742)를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 81 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 하나 이상은 참조 스플라이스 수용체 및/또는 참조 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점(junction)의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 이내의 잔기에 존재하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 82 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 서열 번호: 621과 비교하여 침묵하고/거나 퇴화 코돈을 생성하고/거나, 상기 암호화된 스페이서의 상기 아미노산 서열을 변경하지 않는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 83 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 변형된 스플라이스 공여체 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호: 661), tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662), accatctccaaggcc(서열 번호: 663) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호: 664)에 제시되고/거나;
상기 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 673) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(SEQ ID NO: 766)에 제시된 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 75 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 변형된 스플라이스 공여체 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 662)에 제시되고/거나
상기 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 672) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(SEQ ID NO: 766)에 제시된 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 85 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 서열 번호: 622에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서,
상기 폴리뉴클레오타이드는
(a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인;
(b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나, 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는 스페이서;
(c) 막관통 도메인; 및
(d) 세포 내 신호 전달 영역;
을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드로서,
상기 폴리뉴클레오타이드는
(a) 항원을 특이적으로 인식하는 세포 외 항원 결합 도메인;
(b) 암호화 핵산이 서열 번호: 622에 제시된 서열로 구성 또는 본질적으로 구성되거나 서열 번호: 649에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는 스페이서;
(c) 막관통 도메인; 및
(d) 세포 내 신호 전달 영역;
을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 87 항 또는 제 88 항에 있어서,
세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현 후, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 89 항 중 어느 한 항에 있어서,
인간 세포, 선택적으로 인간 T 세포에서의 발현 후, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 상기 폴리뉴클레오타이드와 같은 아미노산 서열을 암호화하고,
여기에서 상기 참조 폴리뉴클레오타이드는 상기 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나, 상기 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하고/거나, 서열 번호: 621에 제시된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 90 항에 있어서,
10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 상기 RNA 이질성이 감소된 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 90 항 또는 제 91 항에 있어서,
상기 참조 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리(analytical ultracentrifugation), 장흐름 분획법(field flow fractionation) 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정되는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 93 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 94 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원은 질병 또는 병태와 관련되거나 질병 또는 병태와 관련된 병변 환경의 세포에서 발현되는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 95 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 질병 또는 병태는 암인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 96 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 질병 또는 병태는 골수종, 백혈병 또는 림프종인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 97 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원은 B 세포 성숙 항원(B cell maturation antigen, BCMA), ROR1, 탄산 탈수 효소 9(CAIX), tEGFR, Her2/neu(수용체 티로신 키나제 erbB2), L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린(mesothelin), CEA 및 B 형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, 상피 당 단백질 2(EPG-9), 상피 당 단백질 40(EPG-40), EPHa2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 2량체, EGFR vIII, 엽산 결합 단백질(folate binding protein, FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(G protein-coupled receptor class C group 5 member D, GPRC5D), HMW-MAA, IL-92R-알파, IL-13R-알파 2, 키나제 삽입 도메인 수용체(kinase insert domain receptor, kdr), 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종 우선 발현 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 알파 2(IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아(Foetal) AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 암 고환 항원, 메소텔린(mesothelin), 뮤린 CMV, 뮤신 1(MUC1), MUC16, PSCA, NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, ephrinB2, CD123, c-Met, GD-9, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양 1(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린(cyclin), 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 병원체 특이적 항원인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 98 항에 있어서,
상기 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA)인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 99 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(variable heavy chain, VH) 및 가변 경쇄(variable light chain, VL) 영역을 포함하는 항체 단편인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 또는 제 101 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 256 및 267에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 256 및 267에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 519 및 535에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 519 및 535에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 및 536에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 및 536에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 609 및 610에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 609 및 610에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 617 및 618에 각각 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 617 및 618에 대해 각각 90% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(heavy chain complementarity determining region 1, CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(light chain complementarity determining region 1, CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항 및 제 104 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 (a) 서열 번호: 1, 2, 507 또는 593 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 4, 5, 513 또는 594 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 7, 10, 157, 517 또는 595 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 (a) 서열 번호: 33, 178, 380, 589 또는 601 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 43, 183, 400, 590 또는 602 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 194, 416, 421, 591 또는 603 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항, 제 104 항 및 제 106 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 157의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 178, 183 및 194의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 1, 4 및 7의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 380, 400 및 416의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 2, 5 및 10의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 33, 43 및 421의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 507, 513 및 517의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 589, 590 및 591의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항, 제 104 항, 제 106 항 및 제 107 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617, 115, 256, 519 또는 609 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618, 267, 535, 536 또는 610 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 102 항, 제 104 항, 제 106 항, 제 107 항 및 제 109 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 256에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 267에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 519에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 535에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 115에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 536에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 609에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 610에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하거나; 또는 상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 110 항 내지 제 111 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고;
상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 112 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단편은 scFv를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 114 항에 있어서,
상기 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 361)을 포함하는 링커를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 115 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 아미노-말단인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 116 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478, 278, 559, 560 또는 442 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 478, 278, 559, 560 또는 442 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 117 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 118 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 478에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 119 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은
(a) 서열 번호: 648, 352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열;
(b) 서열 번호: 648, 352, 647, 716 또는 718 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열; 또는
(c) (a) 또는 (b)의 퇴화 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 120 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460, 440, 715, 717 또는 719 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산은 서열 번호: 460에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 100 항 내지 제 116 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 카르복시-말단인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 키메라 항원 수용체를 암호화하는, 폴리뉴클레오타이드로서
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인, 여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH); 및
(ii) 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 IgG4 CH3 영역을 포함하는 스페이서; 또는 서열 번호: 649에 제시된 스페이서;
(3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및
(4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;
을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 키메라 항원 수용체를 암호화하는, 폴리뉴클레오타이드로서
(1) 인간 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원 결합 도메인, 여기에서, 상기 세포 외 항원 결합 도메인은:
서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 서열내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 서열내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역;
서열 번호: 593, 594 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역;
서열 번호: 596, 597 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역;
서열 번호: 598, 599 및 595의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 601, 602 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는
서열 번호: 611, 612 및 613의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 614, 615 및 603의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 을 포함함;
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 (선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인) IgG4 CH3 영역을 포함하는 스페이서; 또는 서열 번호: 649에 제시된 스페이서;
(3) 막 관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28로부터의 막 관통 도메인; 및
(4) CD3-제타(CD3) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인과 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;
을 암호화하는 핵산을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 617에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 618에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 123 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 활성화 세포질 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 128 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 128 항 또는 제 129 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3) 사슬 또는 이의 기능적 변이체의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 128 항 내지 제 130 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 활성화 세포질 도메인은 인간 또는 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항, 제 130 항 및 제 131 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포질 신호 전달 도메인은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 130 항 내지 제 132 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포질 신호 전달 도메인을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 627에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 또는 이의 코돈 최적화된 서열 및/또는 퇴화 서열인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 130 항 내지 제 133 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포질 신호 전달 도메인을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 652에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 128 항 내지 제 134 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 135 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항, 제 135 항 및 제 136 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 135 항 내지 제 137 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 135 항 내지 제 138 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 또는 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 135 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 135 항 내지 제 140 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 영역을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 625에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 또는 이의 코돈 최적화된 서열 및/또는 퇴화 서열인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항 및 제 135 항 내지 제 141 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 681에 제시된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 139 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및
서열 번호: 626에 제시된 서열 또는 서열 번호: 626에 제시된 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 139 항 및 제 143 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 서열 번호: 628 및 서열 번호: 626에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 124 항 내지 제 127 항, 제 135 항 내지 제 137 항, 제 139 항 및 제 144 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 139 항 및 제 145 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 서열 번호: 628에 제시된 서열 또는 서열 번호: 628에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및
서열 번호: 680에 제시된 서열 또는 서열 번호: 680에 제시된 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 139 항, 제 145 항 및 제 146 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포 내 신호 전달 영역은 서열 번호: 628 및 서열 번호: 680에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 135 항 내지 제 147 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 상기 막관통 도메인과 상기 세포 내 신호 전달 영역 사이에 존재하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 148 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터의 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 149 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD28로부터의 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 150 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 인간 또는 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 151 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 624에 제시된 서열 또는 서열 번호: 624에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 152 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 623에 제시된 서열이거나 이를 포함하거나 또는 이의 코돈 최적화된 서열 및/또는 퇴화 서열인 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 153 항에 있어서,
상기 막관통 도메인을 암호화하는 상기 핵산은 서열 번호: 688에 제시된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 154 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단 순서로 상기 항원 결합 도메인, 상기 스페이서, 상기 막관통 도메인 및 상기 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 155 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 절단형 수용체를 더 암호화하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 156 항 중 어느 한 항에 있어서,
표면 BCMA를 발현하는 세포에 노출 후 상기 암호화된 항원 결합 도메인 및/또는 상기 암호화된 키메라 항원 수용체의 결합 또는 상기 암호화된 키메라 항원 수용체의 기능 또는 활성을 나타내는 측정값이 가용성 또는 탈락 형태(shed form) BCMA의 존재 하에 감소하거나 차단되지 않거나 또는 실질적으로 감소하거나 차단되지 않는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 157 항에 있어서,
상기 가용성 또는 탈락 형태 BCMA의 상기 농도 또는 양은 대상체 또는 다발성 골수종 환자의 혈청 또는 혈액 또는 혈장에 또는 상기 질병 또는 장애에 대한 환자 집단의 평균에 존재하는 농도 또는 양에 해당하거나 또는
상기 가용성 또는 탈락 형태 BCMA의 농도 또는 양에서 참조 항-BCMA 재조합 수용체, 선택적으로 참조 항-BCMA CAR을 발현하는 세포에 대해 상기 결합 또는 측정치가 같은 평가에서 감소하거나 차단되거나 또는 실질적으로 감소하거나 차단되는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 158 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 751 내지 756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 751 내지 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고
상기 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 감소된 RNA 이질성을 보유하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 159 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열 또는 서열 번호: 755 및 756 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고
상기 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 상기 감소된 RNA 이질성을 보유하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 160 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755에 제시된 서열 또는 이에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함하고
상기 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 상기 감소된 RNA 이질성을 보유하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 161 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 755에 제시된 서열을 포함하고
상기 암호화된 수용체는 BCMA에 대한 결합 기능을 보유하고 상기 감소된 RNA 이질성을 보유하는 것을 특징으로 하는,
폴리뉴클레오타이드. - 제 63 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 벡터.
- 제 163 항에 있어서,
상기 벡터는 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는,
벡터. - 제 164 항에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는,
벡터. - 제 164 항 또는 제 165 항에 있어서,
상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는,
벡터. - 제 63 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체.
- 제 1 항 내지 제 62 항 및 제 167 항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 포함하는, 조작된 세포.
- 제 63 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 제 163 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는, 조작된 세포.
- 제 168 항 또는 제 169 항에 있어서,
상기 세포는 면역 세포인 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 168 항 내지 제 170 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 대상체로부터 수득된 1 차 세포인 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 170 항 또는 제 171 항에 있어서,
상기 면역 세포는 NK 세포 또는 T 세포인 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 170 항 내지 제 172 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 면역 세포는 T 세포이고 상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 168 항 내지 제 173 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하되, 이는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 168 항 내지 제 174 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하되, 이는 참조 키메라 항원 수용체를 암호화하는 세포에서 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내며,
상기 참조 키메라 항원 수용체는 상기 키메라 항원 수용체와 같은 아미노산 서열을 포함하나 상기 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 뉴클레오타이드 차이를 포함하는 상이한 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고/거나
상기 참조 키메라 항원 수용체는 상기 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위를 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 175 항에 있어서,
10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 상기 RNA 이질성이 감소된 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 175 항 또는 제 176 항에 있어서,
상기 참조 CAR을 암호화하는 상기 폴리뉴클레오타이드는 상기 참조 CAR을 암호화하는 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)를 포함하고, 이는 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 또는 약 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 174 항 내지 제 177 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리(analytical ultracentrifugation), 장흐름 분획법(field flow fractionation) 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정되는 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 168 항 내지 제 178 항 중 어느 한 항에 있어서,
다수의 조작된 세포 중에서, 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만 또는 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만의 다수의 세포가 토닉(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는,
조작된 세포. - 제 1 항 내지 제 62 항 및 제 167 항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체, 제 63 항 내지 제 162 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드 또는 제 163 항 내지 제 166 항 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는, 조성물.
- 제 168 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항의 조작된 세포를 포함하는, 조성물.
- 제 181 항에 있어서,
상기 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 1:3 내지 3:1 또는 약 1:3 내지 3:1인 것을 특징으로 하는,
조성물. - 제 180 항 내지 제 182 항 중 어느 한 항에 있어서,
약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는,
조성물. - 제 168 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항의 조작된 세포 또는 제 180 항 내지 제 183 항 중 어느 한 항의 조성물을 질병 또는 장애를 가진 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
- 제 184 항에 있어서,
상기 방법은 상기 조작된 세포의 단위 용량 또는 상기 조작된 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는,
방법. - 질병 또는 장애의 치료를 위해 약제의 제조를 위한 제 168 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항의 조작된 세포 또는 제 180 항 내지 제 183 항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 질병 또는 장애를 치료하기 위한 제 168 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항의 조작된 세포 또는 제 180 항 내지 제 183 항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 제 186 항 또는 제 187 항에 있어서,
상기 조작된 세포 또는 상기 조성물은 치료 요법에 사용하기 위한 것이며, 여기서 상기 치료 요법은 상기 조작된 세포의 단위 용량 또는 상기 조작된 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함하는,
용도. - 제 184 항 또는 제 185 항의 방법 또는 제 186 항 내지 제 188 항 중 어느 한 항의 용도에 있어서,
상기 질병 또는 장애는 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현, 선택적으로 B 세포 관련 장애와 관련된 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항 내지 제 189 항 중 어느 한 항에 있어서,
BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 자가 면역 질환 또는 장애인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 내지 제 190 항 중 어느 한 항에 있어서,
BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 암인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 191 항에 있어서,
상기 암은 BCMA 발현 암인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 191 항 또는 제 192 항에 있어서,
상기 암은 B 세포 악성 종양인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 191 항 내지 제 193 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암은 림프종, 백혈병 또는 혈장 세포 악성 종양인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 194 항에 있어서,
상기 암은 림프종이고, 상기 림프종은 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma, NHL), 호지킨 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증(Waldenstrom macroglobulinemia), 여포성 림프종(follicular lymphoma), 작은 비절단 세포 림프종(small non-cleaved cell lymphoma), 점막-관련 림프 조직 림프종(mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma, MALT), 변연부 림프종(marginal zone lymphoma), 비장 림프종, 결절성 단핵구 B 세포 림프종(nodal monocytoid B cell lymphoma), 면역 모세포 림프종(immunoblastic lymphoma), 거대 세포 림프종(large cell lymphoma), 확산 혼합 세포 림프종(diffuse mixed cell lymphoma), 폐 B 세포 혈관 중심 림프종(pulmonary B cell angiocentric lymphoma), 작은 림프구성 림프종(small lymphocytic lymphoma), 1 차 종격동 B 세포 림프종(primary mediastinal B cell lymphoma), 림프구 형질세포성 림프종(lymphoplasmacytic lymphoma, LPL) 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 195 항에 있어서,
상기 암은 백혈병이고, 상기 백혈병은 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 혈장 세포 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL)인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 194 항에 있어서,
상기 암은 혈장 세포 악성 종양이고, 상기 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 191 항 내지 제 194 항 및 제 197 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암은 다발성 골수종(MM)인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 198 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 1 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 2 x 109개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 1 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 199 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 2.5 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포, 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 1.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 2.5 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 또는 약 1.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포 내지 약 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 200 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 2.5 x 107개 또는 약 2.5 x 107개, 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개, 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개, 8.0 x 108개 또는 약 8.0 x 108개 또는 1.2 x 109개 또는 약 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 201 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개 또는 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 202 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은, 1:1 또는 약 1:1 또는 약 1:3 내지 약 3:1인 CD4+ CAR 발현 T 세포 대 CD8+ CAR 발현 T 세포 및/또는 CD4+ T 세포 대 CD8+ T 세포의 비율로, CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 203 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량에서 상기 CAR 발현 T 세포의 약 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 세포자멸사 마커, 선택적으로 아넥신 V(Annexin V) 또는 활성 카스파제 3(Caspase 3)을 발현하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 204 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량에서 상기 CAR 발현 T 세포의 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 아넥신 V 또는 활성 카스파제 3을 발현하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 205 항 중 어느 한 항에 있어서,
투여 전에, 상기 대상체는 대상체의 체표면적 m2 당 20-40 mg 또는 약 20-40 mg 선택적으로 30 mg 또는 약 30 mg의 플루다라빈(fludarabine)을 2-4 일 동안 매일 투여; 및/또는 대상체의 체표면적 m2 당 200-400 mg 또는 약 200-400 mg, 선택적으로 300 mg 또는 약 300 mg의 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 2-4 일 동안 매일 투여하는 것을 포함한 림프구 고갈 요법을 받는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 206 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 3 일 동안 대상체의 체표면적 m2 당 30 mg 또는 약 30 mg의 플루다라빈을 매일 및 대상체의 체표면적 m2 당 300 mg 또는 약 300 mg의 시클로포스파미드를 매일 투여하는 것을 포함한 림프구 고갈 요법을 받는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 207 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 단위 용량 투여 시 또는 투여 전에, 상기 대상체는 상기 질병 또는 장애에 대해 3가지 이상의 선행 요법, 선택적으로 4가지 이상의 선행 요법을 받았으며, 상기 선행 요법들은
자가 줄기 세포 이식(autologous stem cell transplant, ASCT);
면역 조절제;
프로테아좀 억제제; 및
항-CD38 항체;
중에서 임의로 선택된 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 208 항에 있어서,
상기 면역 조절제는 탈리도마이드(thalidomide), 레날리도마이드(lenalidomide) 및 포말리도마이드(pomalidomide) 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 208 항 또는 제 209 항에 있어서,
상기 프로테아좀 억제제는 보르테조밉(bortezomib), 카르필조밉(carfilzomib) 및 익사조밉(ixazomib) 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 208 항 내지 제 210 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항-CD38 항체는 다라투무맙(daratumumab)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 211 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량 투여 시 및/또는 림프구 고갈 화학요법 또는 백혈구 성분 채집술 시에, 상기 대상체는 혈장 세포 백혈병(plasma cell leukemia, PCL)의 활성 또는 병력을 갖지 않는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 212 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량 투여 시에 상기 대상체에 2차 혈장 세포 백혈병(PCL)이 발달한 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항, 제 185 항 및 제 188 항 내지 제 213 항 중 어느 한 항에 있어서,
투여시 상기 대상체는 다발성 골수종에 대한 3가지 이상 또는 4 가지 이상의 선행 요법 후에 재발되었거나 불응성이고/거나;
성인 대상체이거나 25세 또는 35세 이상이고/거나;
다발성 골수종 진단으로부터 대략 4년 또는 2년 내지 15년 또는 2년 내지 12년의 시간이 경과하였고/거나;
다발성 골수종에 대해 약 10가지 또는 3가지 내지 15가지 또는 4가지 내지 15가지의 선행 요법을 받았고/거나;
보르테조밉, 카르필조밉, 레날리도마이드, 포말리도마이드 및/또는 항-CD38 단클론성 항체에 대해 반응하지 않았거나 불응성이고/거나;
이전에 자가 줄기 세포 이식을 받았거나 이전에 자가 줄기 세포 이식을 받지 않았고/거나;
IMWG 고위험 세포 유전학을 가진 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 184 항 내지 제 214 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 상기 대상체의 상기 질병 또는 장애를 갖는 대상체의 코호트(cohort)에서, 하나 이상 또는 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%의 대상체들에서 선택적으로 투여 개시 후 지정된 시점에서, 명시된 반응 또는 결과를 달성할 수 있되, 선택적으로 여기서 상기 대상체의 코호트는, 상기 방법에 의해 치료된 대상체와, 같은 수 이상의 선행 요법, 예후 또는 예후 인자, 하위 유형, 2차 관여 또는 기타 명시된 환자 특성 또는 특성들을 갖고,
여기서:
상기 반응은 객관적인 반응(objective response, OR), 완전 반응(complete response, CR), 엄격한 완전 반응(stringent complete response, sCR), 매우 양호한 부분 반응(very good partial response, VGPR), 부분 반응(partial response, PR) 및 최소 반응(minimal response, MR)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
상기 반응 또는 결과는 OR이거나 이를 포함하며,
상기 반응 또는 결과는 CR이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 OR이고, 상기 코호트의 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상 또는 80% 이상의 대상체에서 달성되는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 CR 또는 sCR이고, 상기 코호트의 20%, 30% 또는 40% 이상의 대상체에서 달성되는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 217 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개의 세포 미만 또는 1.5 x 10^8개의 CAR+ T 세포 미만 또는 3 x 10^8개의 CAR+ T 세포 미만 또는 4.5 x 10^8개의 CAR+ T 세포 미만인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 217 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개의 세포이거나 1.5 x 10^8개의 세포 미만 또는 1.5 x 10^8개의 CAR+ T 세포 미만인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 219 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 5 x 107개의 세포 또는 CAR+ T 세포이거나 약 5 x 107개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 219 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 1.5 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포이거나 약 1.5 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 219 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 3 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포이거나 약 3 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 219 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포의 상기 단위 용량은 4.5 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포이거나 약 4.5 x 108개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 223 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 3 등급 또는 그 이상 또는 4 등급 또는 그 이상의 신경독성의 부재, 3 등급 또는 그 이상 또는 4 등급 또는 그 이상의 사이토카인 방출 증후군의 부재를 포함하거나 이를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 224 항 중 어느 한 항에 있어서,
조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개, 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개, 3.0 x 108개 또는 약 3.0 x 108개 또는 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 225 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 5.0 x 107개 또는 약 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 225 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 1.5 x 108개 또는 약 1.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 225 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 3 x 108개 또는 약 3 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 215 항 내지 제 225 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조작된 T 세포의 상기 단위 용량은 4.5 x 108개 또는 약 4.5 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법 또는 용도. - 제 168 항 내지 제 179 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 180 항 내지 제 183 항 중 어느 한 항의 조성물에서,
CAR+ 세포의 단위 용량으로 투여 후에, 상기 세포 또는 조성물은 선택적으로 투여 개시 후 지정된 시점에서, 대상체의 코호트 또는 이의 평가 가능한 대상체들 내에서 하나 이상, 또는 10% 이상, 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상, 80% 이상, 90% 이상 또는 95% 이상의 대상체들에서 명시된 반응 또는 결과를 달성할 수 있고, 여기서 대상체의 상기 코호트는 다발성 골수종을 갖는 코호트인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과의 달성은 투여 개시 후 지정된 시점에서이고, 이는 상기 개시 후 1, 2, 3, 6, 9 또는 12개월인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 231 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과의 달성은 투여 개시 후 지정된 시점에서이고, 이는 상기 개시 후 1 또는 2 또는 3개월인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항에 있어서,
상기 대상체 코호트는 다발성 골수종이 재발하였거나 불응성인 대상체이고/거나;
상기 대상체 코호트는 다발성 골수종에 대해 3가지 이상의 선행 요법 후에 투여되었고 재발하였거나 불응성인 재발성 또는 불응성 다발성 골수종을 갖는 대상체(상기 선행 요법은 선택적으로 면역 조절제; 프로테아솜 억제제; 및/또는 항-CD38 항체를 포함)이고/거나;
상기 대상체 코호트는 다발성 골수종에 대해 3가지 이상의 선행 요법 후에 투여되었고 재발하였거나 불응성인 재발성 또는 불응성 다발성 골수종을 갖는 대상체(상기 선행 요법은 선택적으로 면역 조절제; 프로테아솜 억제제; 및/또는 항-CD38 항체 및/또는 자가 줄기 세포 이식을 포함)이고/거나;
상기 대상체 코호트는 상기 투여 시에 활성 혈장 세포 백혈병(PCL)을 갖지 않거나 PCL의 병력이 없는 대상체이고/거나;
상기 대상체 코호트는 상기 세포의 투여 전에 2차 혈장 세포 백혈병(PCL)이 발달한 대상체이고/거나;
상기 대상체 코호트는 다발성 골수종에 대해 4가지 이상 또는 평균 10가지 이상의 선행 요법 후에 투여되었고 재발하였거나 불응성인 재발성 또는 불응성 다발성 골수종을 갖는 대상체이거나 이를 포함하고/거나;
상기 대상체 코호트는 성인 대상체로 이루어지거나 이를 포함하고/거나;
상기 대상체 코호트는 진단으로부터 2년 내지 12년의 다양한 시간 및/또는 진단으로부터 4년의 중간 시기를 가지고/거나;
상기 대상체 코호트는 다발성 골수종에 대해 10가지의 선행 요법(regimen) 또는 3 내지 15가지 또는 4 내지 15가지 선행 요법(therapy)의 중간 값을 갖고/거나;
상기 대상체 코호트는 보르테조밉, 카르필조밉, 레날리도마이드, 포말리도마이드 및 항-CD38 단클론성 항체에 불응성인 대상체를 포함하고/거나;
상기 대상체 코호트는 이전에 자가 줄기 세포 이식을 받았던 대상체를 포함하고/거나;
상기 대상체 코호트는 IMWG 고위험 세포 유전학을 갖는 대상체를 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 233 항에 있어서,
상기 면역 조절제는 탈리도마이드, 레날리도마이드 및 포말리도마이 중에서 선택되고/거나
상기 프로테아솜 억제제는 보르테조밉, 카르필조밉 및 익사조밉 중에서 선택되고/거나
상기 항-CD38 항체는 다라투무맙이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 234 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 선택적으로 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 균일한 반응 기준에 근거하여 객관적인 반응(objective response, OR), 완전 반응(complete response, CR), 엄격한 완전 반응(stringent complete response, sCR), 매우 양호한 부분 반응(very good partial response, VGPR), 부분 반응(partial response, PR) 및 최소 반응(minimal response, MR)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나;
상기 반응 또는 결과는 선택적으로 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 균일한 반응 기준에 근거한 OR이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 반응 또는 결과는 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 균일한 반응 기준에 근거한 CR이거나 이를 포함;
하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 235 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 OR이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 236 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량은 코호트의 40% 이상, 50% 이상, 60% 이상, 70% 이상 또는 80% 이상의 대상체에서 상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 235 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 CR 또는 sCR이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 238 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단위 용량은 코호트의 20%, 30% 또는 40% 이상의 대상체에서 상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 239 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개의 세포 미만,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개의 CAR+ T 세포 미만인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 240 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개 미만의 세포이거나,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개 미만의 CAR+ T 세포이거나,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 3 x 10^8개 미만의 CAR+ T 세포이거나 또는
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 4.5 x 10^8개 미만의 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 241 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1 x 10^8개 미만의 세포,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1 x 10^8개 미만의 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 242 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 5 x 10^7개의 세포 또는 약 5 x 10^7개의 세포이거나 5 x 10^7개의 CAR+ T 세포 또는 약 5 x 10^7개의 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 243 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 1.5 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포 또는 약 1.5 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 244 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 3 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포 또는 약 3 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 245 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과를 달성할 수 있는 상기 단위 용량은 4.5 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포 또는 약 4.5 x 10^8개의 세포 또는 CAR+ T 세포인 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 제 230 항 내지 제 246 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 반응 또는 결과는 3 등급 또는 그 이상 또는 4 등급 또는 그 이상의 신경독성의 부재, 3 등급 또는 그 이상 또는 4 등급 또는 그 이상의 사이토카인 방출 증후군의 부재를 포함하거나 이를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는,
세포 또는 조성물. - 전이 유전자의 전사된 핵산의 이질성을 결정하는 방법으로,
상기 방법은
a) 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용하여 전사된 핵산을 증폭시켜 하나 이상의 증폭된 생성물을 생성하는 단계, 여기서 상기 하나 이상의 쌍은 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' untranslated region, 5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 전사된 핵산의 3' 비번역 영역(3' untranslated region, 3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함함; 및
b) 상기 증폭된 생성물을 검출하는 단계, 여기서 상기 하나 이상의 5' 및 3' 프라이머 쌍으로부터의 2 이상의 증폭된 생성물의 존재는 증폭된 생성물에서의 이질성을 나타냄;
를 포함하는, 방법. - 제 248 항에 있어서,
b)에서 검출된 상기 차이는 증폭된 전사체의 상이한 길이인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항에 있어서,
b)에서의 상기 차이는 상기 증폭된 전사체의 크로마토그래피 프로파일에서의 차이인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 250 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 증폭된 생성물에서의 상기 차이는 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 크로마토그래피에 의해 결정되는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 251 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 5' 프라이머는 상기 전사된 핵산의 프로모터 영역으로부터 전사된 서열에 특이적인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 252 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 전사된 핵산은 상기 폴리뉴클레오타이드의 아미노산 코딩 서열 및/또는 상기 전사된 전-mRNA(pre-mRNA)의 3' 비번역 영역 내의 서열에 특이적인 3' 프라이머를 사용하여 증폭된 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 253 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 3' 프라이머는 상기 전사된 전-mRNA의 3' 비번역 영역의 폴리아데닐화 서열(polyadenylation sequence) 또는 인핸서(enhancer) 영역에 특이적인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 254 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단계 a)는 상기 전사된 핵산의 5' 비번역 영역(5' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 3' 비번역 영역(3' UTR) 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 포함한, 5' 및 3' 프라이머 단일 쌍을 사용한 단일 증폭 반응에 의해 달성되는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 255 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단계 a)는 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍, 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍 및 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍을 사용한 병렬 또는 후속 증폭 반응에 의해 달성되고,
여기에서:
상기 제 1 5' 및 3' 프라이머 쌍은 상기 전사된 핵산의 5' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 5' 프라이머 및 상기 전사된 핵산의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고;
상기 제2 5' 및 3' 프라이머 쌍은 이의 서열이 상기 핵산 전사체의 번역된 서열의 일부에 상보적인 5' 프라이머 및 이의 서열이 상기 전사체의 3' UTR 내의 핵산 서열에 상보적인 3' 프라이머를 함유하고;
상기 선택적으로 추가 5' 및 3' 프라이머 쌍 각각은 상기 전사체의 번역된 영역 내의 서열에 상보적인 서열을 함유하는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 256 항에 있어서,
상기 병렬 또는 후속 증폭 반응은 상기 전사체의 중첩 부분을 증폭하는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 257 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 증폭 생성물은 약 1.5 킬로베이스, 2 킬로베이스, 2.5 킬로베이스, 3 킬로베이스, 3.5 킬로베이스, 4 킬로베이스, 4.5 킬로베이스, 5 킬로베이스, 5.5 킬로베이스, 6 킬로베이스, 7 킬로베이스 또는 8 킬로베이스 길이로 예측되는,
방법. - 제 248 항 내지 제 258 항 중 어느 한 항에 있어서,
이질성을 갖는 것으로 검출된 상기 전사 핵산은 하나 이상의 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보로 확인된 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 259 항에 있어서,
상기 전이 유전자 후보의 상기 전사 핵산은 세포에서 발현 후에 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상 또는 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75% 이상의 이질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
방법. - 발현된 전이 유전자 전사체의 이질성을 감소시키는 방법으로,
상기 방법은,
a) 제 259 항 또는 제 260 항의 방법에 따라 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 확인하는 단계;
b) 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 확인하는 단계; 및
c) b)에서 확인된 상기 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위에서 또는 근처에서 상기 핵산 서열을 변형시켜 변형된 폴리뉴클레오타이드를 생성하는 단계;
를 포함하는, 방법. - 제 261 항에 있어서,
d) 상기 a) 단계에서와 같이 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 평가하는 단계를 추가로 포함하는,
방법. - 제 262 항에 있어서,
e) 상기 d) 단계에서의 상기 전사체 이질성이 상기 a) 단계에서 결정된 바와 같은 상기 전사체의 이질성과 비교하여 감소될 때까지 상기 b)-d) 단계를 반복하는 단계를 추가로 포함하는,
방법. - 제 261 항 내지 제 263 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 또는 1.0 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95 이상 또는 1.0의 스플라이스 이벤트 점수를 나타내고/거나;
70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상되는,
방법. - 제 261 항 내지 제 264 항 중 어느 한 항에 있어서,
스플라이스 공여체 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 확인되는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 261 항 내지 제 265 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)는 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여체 부위(들)인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 261 항 내지 제 266 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 전이 유전자는 키메라 항원 수용체 또는 키메라 항원 수용체의 일부인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 267 항에 있어서,
상기 CAR 폴리펩타이드는 항체 단편, 선택적으로 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)를 포함하는 단일 사슬 항체 단편(single chain antibody fragment, scFv)을 포함한 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 267 항 또는 제 268 항에 있어서,
상기 변형된 폴리뉴클레오타이드는 상기 암호화된 CAR 폴리펩티드의 항원 결합 도메인에 대한 코딩 서열 내에서 변형되지 않는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 261 항 내지 제 269 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 전이 유전자의 암호화된 아미노산 서열은 상기 폴리뉴클레오타이드의 변형 후에 변경되지 않는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 261 항 내지 제 270 항 중 어느 한 항에 있어서,
세포에서 비변형 폴리뉴클레오타이드의 발현 후에, 상기 변형된 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA는 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상 또는 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 이상의 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 271 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 인간 세포인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 272 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포는 T 세포인 것을 특징으로 하는,
방법. - 제 248 항 내지 제 273 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 방법은 컴퓨터 구현 방법이며, 상기 하나 이상의 단계 a)-c)는 하나 이상의 프로세서 및 메모리를 포함하는 전자 장치에서 발생하는 것을 특징으로 하는,
방법. - 프로세서 및 메모리를 포함하는 컴퓨터 시스템으로,
상기 메모리는 상기 프로세서로 하여금 제 248 항 내지 제 274 항 중 어느 한 항의 방법 중 하나 이상의 단계를 수행하게하는 작동 가능한 명령을 포함하는 것을 특징으로 하는,
방법.
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