MX2010008786A - Anticuerpos monoclonales para tratamiento de tumores. - Google Patents

Abstract

La presente invención se relaciona con métodos para inhibir el crecimiento de tumores, aumentar la sobrevivencia de un sujeto que tiene un tumor e inducir la protección contra recurrencia de tumores en un mamífero. Los métodos comprenden administrar un anticuerpo monoclonal humanizado que comprende regiones CDR derivadas del anticuerpo monoclonal murino designado como mBAT-1, en combinación con al menos un agente quimioterapéutico.

Description

t ! I i ANTICUERPOS MONOCLONALES PARA TRATAMIENTO DE TUMORES j i l CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se relaciona con métodos para inhibir el crecimiento de tumores, aumentar ja sobrevivencia de un sujeto que tiene un tumor e inducir ía protección contra recurrencia de tumores en un mamífero.

! Los métodos comprenden administrar un anticuerpo monoclonál I humanizado que comprende regiones CDR derivadas del anticuerpo monoclonál murino designado como mBAT-1, en i combinación con al menos un agente quimioterapéutico . ! I í I I ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN ¡ El rápido incremento de conocimiento en años recientes acerca de las bases moleculares y celulares de la inmunorregulación, particularmente al nivel de las í respuestas de las células T, proporciona un nuevo arsenal de métodos inmunoterapéuticos que incluyen el desarrollo ele vacunas contra tumores. Se demostró que ciertos anticuerpos monoclonales tienen actividad inmunomoduladora, lo cuál incluye la capacidad para enlazar determinantes en ia superficie de las células T y para inducir la proliferación, activación, dichas células.

El anticuerpo BAT los Estados Unidos Núm. 2003/0026800. En la Publicación de i solicitud de patente de los Estados Unidos Núm. 2008/0025980 se revela una serie de anticuerpos monoclonales humanizados basados en el anticuerpo murin ío ! BAT De conformidad con lo revelado, el anticuerpo i monoclonal BAT humanizado parece inducir un mayor efecto antitumoral que los inducidos por el anticuerpo murino BAT. í Entre los diversos sistemas modelo probados, se estudió la I actividad antitumoral del BAT en ratones que padecían inmunodeficiencia combinada grave (SCID) , ratones beige cbn ¡ deficiencia de células NK y ratones inmunológicamente deficientes con carencia de células T (Hardy, B., 1997, Proc. Nati. Acad. Sci . USA 94:5756). Todos los ratones recibieron una inyección intravenosa con melanoma BÍ6 i murino que posteriormente desarrolla tumores en los i pulmones. El anticuerpo BAT tuvo un efecto antitumorál únicamente en los ratones que padecían SCID en los que se 12:1623 y Quaglino E. et al., 2005, Vaccine 9 : 23 (25) : 3280- 7, respectivamente). Además, se descubrió que el anticuer o I BAT activa la proliferación de las células T e incrementa la actividad citolítica (Hardy, B. et al., 1997, Hufn. Antibodies, 8 : 95) . ¡ Berger et al. (2008) revelan la administración i del anticuerpo monoclonal humanizado CT-011, que está basado en el anticuerpo mBAT-1, en pacientes con neoplasias I tumorales hematológicas avanzadas y farmacocinética ! asociada (Berger et al. Clin. Cáncer Res. 2008:14(10); jj.5 de mayo de 2008) . fármacos para quimioterapia incluyen: agentes ! alcalinizantes, nitrosoureas , antimetabolitos , i antraciclinas , inhibidores de topoisomerasa I y IÍ, í inhibidores de la mitosis e inhibidores de esteroides. ¡ Un fármaco quimioterapéutico puede ser i proporcionado como una terapia única, pero con frecuencia se utiliza en combinación con uno o más agentes activos. En í algunos casos, se han adaptado combinaciones específicas I para obtener resultados clínicos significativamente I mejores. Por ejemplo, el fluorouracilo antimetabolito (5FU) y el agente alcalinizante oxaliplatina se utilizan junt s en un régimen combinado para el tratamiento de cánc r 5FU o mostaza de uracilo con radiación y con un anticuerpo I i monoclonal, que se une específicamente a un dominio extracelular de un receptor VEGF. Esta terapia combinaba i apunta a inhibir la angiogénesis . La Patente de los Estados j Unidos Núm. 6,217,866, revela un método para inhibir él ! crecimiento de células tumorosas humanas que expresan receptores de factor de crecimiento epidérmico (EGFi) humano; dicho método comprende la administración de una i cantidad eficaz de un agente antineoplásico y una cantidad efectiva de un anticuerpo monoclonal en un paciente humano con cáncer que presenta dichas células tumorales en dondé : í (i) el anticuerpo se une al dominio extra-celular del receptor de factor de crecimiento epidérmico (EGF) humano de dicha célula tumoral ; (ii) el anticuerpo no se conjuga I con el agente antineoplásico y (iii) el anticuerpo inhibe i el enlace del EGF al receptor de EGF. j I En la técnica anterior, en ningún lugar se revela o se sugiere que el uso de un anticuerpo monoclonal mBATrl humanizado en combinación con monoterapia tenga alguna ventaja. De hecho, desde que se sabe que los anticuerpos BAT y los anticuerpos basados en aquél tienen propiedades inmunoestimuladoras, resulta altamente sorprendente · e ¡ inesperado que puedan usarse dichos anticuerpos en i combinación con fármacos citotóxicos u otros fármacos i quimioterapéuticos (que actúan al matar poblaciones de células proliferantes) a fin de alcanzar una mayor eficacia clínica que cada tipo de agente de manera individual. ¡ ! SUMARIO DE LA INVENCIÓN I La presente invención proporciona métodos para inhibir el crecimiento de tumores, reducir el volumen de i los tumores, incrementar la sobrevivencia de un pacientej e inducir protección contra reaparición de tumores en sujetps que presentan tumores sólidos y no sólidos. Los métodps comprenden el uso de un anticuerpo monoclonal humanizado que tiene al menos una región determinante complementaria (CDR) de anticuerpo monoclonal murino BAT- 1 (mBAT-1) y ujna región estructural (FR) derivada de la inmunoglobulina ? 7 I ? aceptora humana. Un ejemplo de este tipo de anticuerpo es el hBAT-1 (también llamado CT-011 en la presente) . Algunps de los métodos revelados en la presente, de preferencia comprenden el uso del anticuerpo monoclonal humanizado en un régimen de combinación con al menos un agente quimioterapéutico, mientras que otros métodos revelados fen la presente se relacionan con el uso del anticuerpo monoclonal humanizado solo, que opcionalmente puede emplearse en combinación con uno o más agentés quimioterapéuticos .

Los principios de la invención se demuestran en la presente con el uso tanto de mBAT-1 como de CT-011 en cultivos de linfocitos y en modelos de tumores animales, al igual que CT-011 en pacientes humanos con diferentes tipps de tumores hematológicos .

La invención se basa, en parte, en el hallazgo inesperado de que la incorporación del CT-011 a un régimen de tratamiento con varios agentes quimioterapéuticos ida como resultado varios efectos benéficos antitumorales ', y anticancerigenos , incluida por ejemplo, la reducción en 0.a velocidad de crecimiento tumoral, inhibición de crecimiento tumoral e incremento de tiempo de sobrevivencia, en comparación con las monoterapias con alguno de l'os i tratamientos de forma individual. También se ha demostrado que la incorporación de un anticuerpo humanizado como 'el La invención también se basa, en parte, en la observación de que el tratamiento de los tumores inducidos en modelos animales con los anticuerpos mencionados, ya sea solos o en combinación con un agente quimioterapéutico, da ¡ I como resultado la "curación" , asi como un efecto en la í memoria para la protección a largo plazo contra la reaparición de tumores en exposiciones posteriores a l s mismas células tumorales. De esta manera, los animales qüe se curaron por medio del tratamiento con el anticuerpo CT-011 se volvieron resistentes a la reaparición o re-exposición al tumor. Más aún, en la presente se revela que en ciertos casos, los sujetos humanos que se sometiéronla estudios clínicos con CT-011 en etapas tempranas también i demostraron un control y una protección contra tumores j a i largo plazo después de la administración de una sola dosis de este anticuerpo y de su eliminación de la sangre. j i Sin la intención de quedar limitados por alguna i teoría o mecanismo de acción, la actividad del anticuerpo monoclonal BAT humanizado en la protección contra la ¡ recurrencia o reaparición de tumores podría estar asociaba a la actividad de dicho anticuerpo en la protección de las células T efectoras / de memoria contra la apoptosis, tal como se revela en la presente y se ejemplifica con el anticuerpo CT-011.

De esta manera, en varios aspectos, la presente invención proporciona combinaciones de agentes combinación que se utiliza en la presente descripción y n ! las reivindicaciones podría hacer referencia a cualquier número de tratamientos de combinación diferentes, que podrían incluir, por ejemplo: periodos sustancialmente sobrepuestos de administración de dos o más tratamientos; administración simultánea, secuencial o sucesiva de dos ¡ o más tratamientos o administración programada de dos o más tratamientos durante periodos de tiempo alternados . j De conformidad con un primer aspecto, la presente invención proporciona un método para tratar un tumor; él método comprende: (i) administrar en un sujeto que lo necesite una cantidad de un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo i o el fragmento de anticuerpo tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural de inmunoglobuliíia aceptora humana o modificada a partir de la misma; y (ii) administrar en el sujeto una cantidad eficaz de al menos ün agente qui .mi.oterape.uti.co ,. dando asi tratamiento para eíl tumor . ^ De conformidad con otro aspecto, la invención invención, se proporciona un método para mejorar la sobrevivencia o inhibir el avance de la enfermedad en un I I sujeto que tiene un tumor, en donde el sujeto recibe i tratamiento al menos con un agente quimioterapéutico ; el método comprende administrar una cantidad eficaz de un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, i del tumor también comprende administrar en el sujeto al menos un agente quimioterapéutico . j De conformidad con ciertas modalidades particulares, el sujeto ya ha terminado o se encuentra en quimioterapia al menos con un agente quimioterapéutico. ¡ De conformidad con varias modalidades, la región variable de cadena ligera del anticuerpo monoclonal humanizado se caracteriza por esta fórmula: : FRL1-CDRLi- FRL2-CDRL2 -FRL3 - CDRL3 - FRL4 en donde cada FR es una región estructural independiente de un anticuerpo humano y cada CDR es una región determinante complementaria del anticuerpo monoclonal mBAT-1. ¡ De conformidad con varias modalidades, la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humanizado se caracteriza por esta fórmula: ¡ FRHI - CDRHI - FRH2 - CDRH2 - FRH3 - CDRH3 - FRH4 j en donde cada FR es una región estructural independiente de un anticuerpo humano y cada CDR es una 1 región determinante complementaria del anticuerpo ¡ monoclonal mBAT-1. ! De conformidad con varias modalidades, las regiones estructurales FR se derivan de la región variable í de la cadena ligera del anticuerpo humano TEL9 (SEQ ID N(D: 130) o se modifican a partir de la misma. ¡ De conformidad con varias modalidades, las secuencias de aminoácidos de la región estructural derivadas o modificadas a partir de la región variable <Le i cadena ligera del anticuerpo humano TEL9 son seleccionadas de entre el grupo que consiste en: FRL1, [EIVLT QSPSS LSASV GDRVT ITC; SEQ ID NO: 1]; FRL2 , [W (F ó Y) QQKPG KAPKL (w!ó j L) IY; SEQ ID NO: 2] 3 (FRL3 , [GVPSR FSGSG SGT (D ó S) (Y¡ó F) (C Ó T) LTINS LQPED FATYY C; SEQ ID NO: 3] ; y FRLj4 , [FGGGT KLEIK; SEQ ID NO : 4] . j i De conformidad con varias modalidades, las i I regiones estructurales FR se derivan de la región variable i de la cadena pesada del anticuerpo humano hsighvl295 (SÉQ ID NO: 146) o se modifican a partir de la misma.

De conformidad con varias modalidades, las i secuencias de aminoácidos de la región estructural derivadas o modificadas a partir de la región variable de i cadena pesada del anticuerpo humano hsighv295 son I seleccionadas de entre el grupo que consiste en: FRH1, ¡[Q i (I ó V) QLV QSGSE LKKPG ASVKI SCKAS GY (T ó S) F (T ó S) ; SEQ ID NO: 5] ; FRH2 , [WV (R ó K) QAPGQ GL (Q ó K) WMG; SEQ ID NO: 6] ; FRH3 , [RF (V ó A) FSLDT SV (N ó S) TAYLQ ITSL Í(T Ó N) AEDTG MYFC (V ó A) (R ó K) ; SEQ ID NO: 7]; y FR† , [WGQGT LVTVS S ; SEQ ID NO : 8] .

De conformidad con varias modalidades, la región variable de cadena ligera comprende al menos una secuencia De conformidad con otra modalidad más, él anticuerpo humanizado comprende regiones variables I seleccionadas de entre el grupo que consiste en: BATRHA/BATRKa (SEQ ID NO: 20/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATRKA De conformidad con varias modalidades, él i fragmento del anticuerpo humanizado se selecciona de entre I el grupo que consiste en Fv, F (ab') , F (ab1) 2 y un anticuerpo de cadena sencilla. ¡ i De preferencia, el anticuerpo monoclonal humanizado de la presente invención se genera mediante tecnología de recombinación de ADN con implantes de uman za o, a reg n var ab e e ca ena l gera, la reg ón variable de cadena pesada o la región variable de ambas i gera e ant cuerpo human zado se cod f ca med ante una secuencia de polinucleótidos seleccionados de entre el ¡ grupo que consiste en: SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88 y SÉQ I ID NO: 89. ¡ De conformidad con varias modalidades, la cadena I pesada del anticuerpo humanizado se codifica mediante una secuencia de polinucleótidos seleccionados de entre el grupo que consiste en: SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91 y SEíQ ID NO: 92. j De conformidad con varias modalidades, se selecciona al menos un agente quimioterapéutico de entre él grupo que consiste en: antimetabolitos , fármacos a base de platino, inhibidores mitóticos, antibióticos antraciclinos , inhibidores de topoisomerasa, agentes anti-angiogénicos | y combinaciones de los anteriores. ! i De conformidad con una modalidad preferida actualmente, se selecciona al menos un agente i quimioterapéutico a fin de que el anticuerpo hBAT-1 mejore la sobrevivencia de los linfocitos al ser aprovechado en combinación con el agente quimioterapéutico. Típicamente j y de manera conveniente, la sobrevivencia mejorada jo incrementada puede ser probada in vitro, tal como se í ejemplifica a continuación. ' ¡ De conformidad con algunas modalidades, al menos un agente quimioterapéutico es un antimetabolito, lo cuál incluye antagonistas de purina, antagonistas de pirimidiña y antagonistas de folato. De conformidad con algunas I modalidades, el antimetabolito es un antagonista de la pirimidiña. De conformidad con algunas modalidades, él ! antimetabolito es seleccionado de entre el grupo que i consiste en: 5-fluorouracilo, mostaza de uracilo, uracilo, i capecitabina, 6-mercaptopurina, metotrexato, gemcitabiná, citarabina, fludarabina y pemetrexed. j De conformidad con algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es 5-fluorouracilo. i I De conformidad con algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es citarabina. ; De conformidad con algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es un fármaco a base de platino, seleccionado de entre el grupo que consiste en: cisplatinó, ¡ carboplatino y oxaliplatino . ¡ De conformidad con otras modalidades más, él agente quimioterapéutico es un inhibidor mitótieo seleccionado de entre el grupo que consiste en: paclitaxei, docetaxel, etoposida, vinblastina, vincristina jy vinorelbina. ¡ De conformidad con otras modalidades más, é Il agente quimioterapéutico es un antibiótico antraciclino seleccionado de entre el grupo que consiste en: i daunorrubicina, respinomicina D e idarubicina. | De conformidad con algunas modalidades, el agente i quimioterapéutico es un agente anti-angiogénico seleccionado de entre el grupo que consiste en ¡: bevacizumab, dopamina, tetratiomolibdato y variantes anti- ¡ angiogénicas del factor de crecimiento endotelial vascular (Vascular Endothelial Growth Factor, o VEGF) . ! De conformidad con algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es distinto al inhibidor de topoisomerasa í I. De conformidad con algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es distinto a un agente alcalinizante. i De conformidad con varias modalidades, la administración del anticuerpo humanizado y del agente quimioterapéutico se lleva a cabo sustancialmente de manera I simultánea, concomitante, alternada, secuencial o sucesivá.

En algunas modalidades, el anticuerpo humanizado y él í agente quimioterapéutico se administran de acuerdo con plazos que se traslapan. ! I De conformidad con modalidades particulares, la administración del anticuerpo humanizado se lleva a cabo antes de la administración inicial del agente quimioterapéutico . j i De conformidad con otras modalidades, la I administración de alguno o de ambos anticuerpos humanizados i y del agente o agentes quimioterapéuticos se lleva a ca¿>o por medio de una vía seleccionada de entre el grupo que i consiste en vía intravenosa, oral, intraperitoneajL , subcutánea, perfusión aislada en extremidades e infusión en un órgano o combinaciones de las anteriores. j i De conformidad con varias modalidades, lps métodos también comprenden dar tratamiento al sujeto con i radiación. De conformidad con varias modalidades, lps i métodos comprenden administrar el anticuerpo humanizado, i administrar el agente quimioterapéutico y tratar al sujejto I con radiación. | De conformidad con algunas modalidades, jsl anticuerpo humanizado, el agente o agentas quimioterapéuticos y el tratamiento de radiación se administran sustancialmente de manera simultánea, concomitante, alternativa, sucesiva o con plazos que se I traslapan. ! En ciertas modalidades particulares, los métodos i de la invención también comprenden evaluar al menos ¡un parámetro seleccionado del grupo que consiste en: velocidad de crecimiento tumoral, volumen del tumor, número de metástasis, reaparición del tumor y combinaciones de los anteriores. i carcinoma ovárico, un carcinoma cérvicouterino, un tumor i cancerígeno pancreático, un carcinoma de cabeza y cuello, un carcinoma gastrointestinal, un tumor esofágico, un carcinoma hepatocelular, un mieloma múltiple, un carcinoma ! de células renales, un tumor prostático, linfoma no i Hodgkiniano, enfermedad de Hodgkin, linfoma de células del manto, sarcoma de Kaposi, carcinoma de células escamosak, carcinoma de células básales, leucemia mielocítica agüela (LMA) , leucemia mielocítica crónica (CML) , leucemia linfocítica aguda (LLA) y leucemia linfocítica crónica (LLC) . I De conformidad con varias modalidades, el sujeto es un mamífero humano o no humano. De conformidad con varias modalidades preferidas, el sujeto es un humano. ; inmunoglobulina aceptora humana, o modificada a partir ele la misma; y (ii) al menos un agente quimioterapéutico, tocio lo anterior con el objetivo de preparar un medicamento para ! el tratamiento de un tumor. i ! En otro aspecto más, la invención proporciona el uso de un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragment Io del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo * i tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región ! estructural FR proveniente de inmunoglobulina aceptora humana, o modificada a partir de la misma, para la preparación de un medicamento que pretende mejorar la tolerancia al agente o agentes quimioterapéuticos en un sujeto que se encuentra en quimioterapia con dicho (s) agente (s) quimioterapéutico (s) . ¡ i En otro aspecto más, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo i monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural FR proveniente de inmunoglobulina aceptora humana, ! o modificada a partir de la misma, con el objetivo de mejorar la tolerancia al agente o agentes quimioterapéuticos en un sujeto que se encuentra en quimioterapia con dicho (s) agente (s) quimioterapéutico (s) .

De conformidad con otro aspecto, la invención proporciona el uso de un anticuerpo monoclonal humanizadoij o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o él ¡ fragmento del mismo tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-Q.) y una región estructural FR proveniente de inmunoglobulina I aceptora humana, o modificada a partir de la misma, para la preparación de un medicamento que pretende mejorar 0.a ¡ sobrevivencia o inhibir el avance de la enfermedad en |un sujeto que tiene un tumor, en donde el sujeto se encuentra en tratamiento con al menos un agente quimioterapéutico .

De conformidad con otro aspecto, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal humanizado o Im fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT- í ) I y una región estructural FR proveniente de inmunoglobulifia aceptora humana, o modificada a partir de la misma, paira mejorar la sobrevivencia o inhibir el avance de la ! enfermedad en un sujeto que tiene un tumor, en donde el sujeto recibe tratamiento al menos con un quimioterapéutico.

En otro aspecto más, la invención proporciona el uso de un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmenko i del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo i tiene al menos una región determinante complementaria CDR de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural FR proveniente de inmunoglobulina aceptora ¡ humana, o modificada a partir de la misma, con el objetivo ¡ de preparar un medicamento para reducir o prevenir la ¡ reaparición de un tumor. j En otro aspecto más, la invención proporciona un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo tiene al j menos una región determinante complementaria GDR de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural FR proveniente de inmunoglobulina aceptóla humana, o modificada a partir de la misma, para reducir ; o prevenir la reaparición de un tumor.

En modalidades particulares, el sujeto ha concluido, se encuentra o tiene programada una quimioterapia con al menos un agente quimioterapéutico .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Las figuras 1A-1C muestran el efecto del anticuerpo hBAT-1 en una prueba basada en la viabilidad de los linfocitos, cuando se agrega a cultivos de manera concomitante con control de vehículo (barras grises) o en combinación con 5FU (0.5mg/ml, barras blancas) y se incuba por 72 horas. La figura 1A muestra la actividad del hBAT^-l (0.5 o 0.75 yg/ml, como se indique) en ausencia y presencia de 5FU, representada como una diferencia porcentual en la sobrevivencia celular. La figura IB muestra la actividad del hBAT-1 (0.75 yg/ml) en ausencia y presencia de 5FU , expresada por área debajo de la curva de respuesta a la dosis (AUC se muestra como diferencia % por pg/ml) . El tiempo de incubación con hBAT-1 (72 horas) se indica en el eje x. Fig. 1C. El efecto del 5FU o del control de vehículo en la prueba funcional se presenta como células viables/ml. El tiempo de incubación con 5FU o control de vehículo ('72 horas) se indica en el eje x.

Las figuras 2A-2B muestran el efecto del anticuerpo hBAT-1 en una prueba basada en la viabilidad de los linfocitos, cuando se agrega a cultivos 24 horas antes de agregar el control de vehículo (barras grises) o el 5FU (0.5mg/ml, barras blancas), a lo que sigue un periodo de incubación de 72 horas. La figura 2A muestra la actividad i del hBAT-1 (0.5 o 0.75 yg/ml, como se indique) en ausencia i y presencia de 5FU, representada como una diferencia porcentual en la sobrevivencia celular. La figura 2B muestra la actividad del hBAT-1 (0.75 g/ml) en ausencia j y presencia de 5FU, expresada como área debajo de la curva e i respuesta a la dosis (AUC se muestra como diferencia % por g/ml) . El tiempo de incubación con hBAT-1 (72 horas) se ¡ indica en el eje x. ! I Las figuras 3A-3B muestran el efecto del I anticuerpo hBAT-1 en una prueba basada en la viabilidad qe I los linfocitos, cuando se agrega a cultivos de manera concomitante con control de vehículo (barras grises), o en I combinación con SN-38 (forma activa de irinotecán j a O.lmg/ml, barras blancas) y se incuba por 72 horas. La I figura 3A muestra la actividad del hBAT-1 (0.5 o 0.75 i yg/ml, como se indique) en ausencia y presencia de SN-38, representada como una diferencia porcentual en la j sobrevivencia celular. La figura 3B muestra la actividad los linfocitos, cuando se agrega a cultivos 24 horas antes de agregar el control de vehículo (barras grises) o el SÑ- 38 (forma activa del irinotecán a 0.1 pg/ml, barras blancas) , a lo que sigue un periodo de incubación de 72 ¡ horas. La figura 4A muestra la actividad del hBAT-1 (0.5 ¡o 0.75 pg/ml, como se indique) en ausencia y presencia de SN- i 38, representada como una diferencia porcentual en la sobrevivencia celular. La figura 4B muestra la actividad del hBAT-1 (0.75 pg/ml) expresada como área debajo de la i curva de respuesta a la dosis (AUC se muestra como ! diferencia % por pg/ml) . El tiempo de incubación con hBATs-1 (72 horas) se indica en el eje x. ! Las figuras 5A-5B muestran el efecto del hBATj-1 en una prueba basada en la viabilidad de linfocitos cuan&o se agrega en cultivos (a concentraciones de respuesta a la dosis de 0.25 a 1.25 pg/ml) de manera concomitante (figura I 5A) o 24 horas antes (figura 5B) de agregar el control de vehículo (barras grises) o el agente quimioterapéutico ? ¡ indicado (barras blancas) , a lo que le sigue un periodo de ? J i incubación de 72 horas. Cis, cisplatino (10 pg/ml); Oxá, oxaliplatino (10 pg/ml); Tax, paclitaxel (0.43 pg/ml); Dac, dacarbazina (1 pg/ml) . La actividad del hBAT-1 se presenta como área bajo la curva de respuesta a la dosis (AUC se muestra como una diferencia % por pg/ml) . El tiempo de incubación con hBAT-1 (72 horas) se indica en el eje x.

Las figuras 6A-6B muestran el efecto del hBATj-1 (0.75 o 1 pg/ml, según se indique) en una prueba basada en la viabilidad de linfocitos cuando se agrega de manera concomitante a cultivos con un control de vehículo (barras negras) o en combinación con un agente quimioterapéutiqo (barras blancas) , a lo que sigue un periodo de incubación de 72 horas. Los agentes quimioterapéuticos utilizados fueron: citarabina a 2 mg/ml (figura 6A) , ciclofosfamida · a 1 mg/ml (figura 6B) y doxorrubicina a 0.03 mg/ml (figura 6C) . La actividad del hBAT-1 se representa como diferencia % en la sobrevivencia celular. ! Las figuras 7A-7B muestran el efecto del hBATrl en una prueba basada en la viabilidad de linfocitos humanos CD4 + aislados cuando se agrega (a 0.75 pg/ml) 24 horks antes de agregar el control de vehículo (barras negras) ; o un agente quimioterapéutico (barras blancas) , a lo que sigue un periodo de incubación de 72 horas. Los agentes quimioterapéuticos utilizados fueron: 5FU a 1 pg/ml (figura 7A) y cisplatino a 10 pg/ml (figura 7B) . La actividad del 6-9 y 15-16; cuadros blancos) ; hBAT-1 (10 pg/rat<bn ¡ administrados en el día 10; cuadros negros) ; y un régimen I de combinación (círculos blancos) de hBAT-1 (10 pg/ratén administrados en el día 10) y 5FU (20 mg/kg administrados í en los días 6-9 y 15-16) . ! La figura 9 muestra el efecto antitumoral en adenocarcinoma colorrectal en ratones en los que se administra 5FU (20 mg/kg) en los días 6-9, 15-17, 22-24 ¡ y ! 29-31; cuadros blancos) y un régimen de combinación (triángulos blancos) de hBAT-1 (10 pg/ratón administrados en los días 10, 18 y 25) y 5FU (20 mg/kg administrados en los días 6-9, 15-17, 22-24 y 29-31) .

La figura 10 muestra el porcentaje de sobrevivencia de ratones que padecen colorrectal con vehículo (círculos blancos) ; administrados en los días 6-9, 15-17, 22-24, 43-45; triángulos negros) ; hBAT-1 (10 pg/ratón administrados en los días 10, 18, 25, 32 y 39; cuadros i negros) y un régimen de combinación (diamantes negros) ele hBAT-1 (10 pg/ratón administrados en los días 10, 18, 25, 32 y 39) y 5FU (20 mg/kg administrados en los días 6-9, 15- i 17, 22-24, 29-31, 36-38 y 43-45). I ¡ La figura 11 muestra el porcentaje de sobrevivencia de los ratones que recibieron una inyección de células de melanoma B16 y que fueron (50 mg/kg administrados en los días 1-4 negros) o con un régimen de combinación (cuadros blancos) I de hBAT-1 (10 pg/ratón administrado en el día 10) y 5FU (50 mg/kg administrados en los días 1-4 y 7-8) . ? ¡ La figura 12 muestra el efecto antitumorai, evaluado por mediana de volumen tumoral, con el tratamiento con vehículo (círculos negros) , irinotecán (100 mg/kg administrados en los días 7 y 15; cuadros negros); hBATrl (10 yg/ratón administrados en el día 10; círculos blanco ) y un régimen de combinación (triángulos blancos) de hBATf-1 (10 pg/ratón administrados en el día 10) e irinotecán (100 ¡ mg/kg administrados en los días 7 y 15) en ratones qüe y 15, 22 y 29; triángulos negros) ; hBAT-1 (10 pg/rat<n I administrados en los días 10, 18, 25 y 32; cuadros blanco ) y un régimen de combinación (diamantes negros) de hBATl-l (10 yg/ratón administrados en los días 10, 18, 25 y 32) | e ¡ irinotecán (100 mg/kg administrados en los días 7 y 15, 22 cuadros blancos) ; y un régimen de combinación ( triángulas negros) de hBAT-1 (10 yg/ratón administrados en los días 11 I y 18) y oxaliplatiño (lmg/kg administrado en los días 4, |7- 10, 14-17 y 22-23) en ratones que padecían adenocarcinoma colorrectal . ¡ La figura 15 muestra el porcentaje de j sobrevivencia en ratones que padecían adenocarcinoma colorrectal y que fueron tratados con vehículo (círculos i negros); oxaliplatiño (lmg/kg administrado en los días 4, I 7-10, 14- 17, 22- 24, 29-31; cuadros blancos); y un régimen de combinación (triángulos negros) de hBAT-1 (10 yg/ratpn administrados en los días 11, 18, 25 y 32) y oxaliplatiño i (1 mg/kg administrado en los días 4, 7-10, 14- 17, 22- 2-4, 29-31) . ! I Las figuras 16A-16B muestran el efecto de una combinación de hBAT-1 y un agente quimioterapéutico en jla protección contra la reaparición de tumores, según ¡se i evaluó con la mediana de volumen tumoral (figura 16A) j y porcentaje de sobrevivencia (figura 16B) . Los ratones (n=3) que se curaron de adenocarcinoma colorrectal durante 2 015 meses mediante un régimen combinado de hBAT-1 con oxaliplatino fueron expuestos nuevamente a la misma línea de células de adenocarcinoma colorrectal (cuadros blancos) .

Además, algunos ratones sanos (n=6) recibieron una i inyección con adenocarcinoma colorrectal por primera vez (círculos negros) . I Las figuras 17A-17B muestran el efecto de uña combinación de hBAT-1 y un agente quimioterapéutico en la protección contra la reaparición de tumores, según s'e evaluó con la mediana de volumen tumoral (figura 17A) ¡y porcentaje de que se habían un régimen combinado de hBAT-1 y oxaliplatino (indicado por la falta de reapariciones tumorales después de u a exposición a la misma línea de células adenocarcinoma colorrectal) , fueron expuestos nuevamente a carcinoma de mama (cuadros blancos) . La exposición a carcinoma mamario se llevó a cabo 2 meses después de que los ratones exhibieran resistencia contra la reaparición de adenocarcinoma colorrectal . Además, algunos ratones sanos (n=6) recibieron una inyección con adenocarcinoma colorrectal por primera vez (círculos negros) . ' La figura 18 muestra el efecto de CT-11 en una I i sobrevivencia celular. ; i La figura 19 muestra las secuencias de [ aminoácidos de varias modalidades de la región VK humanizada BAT-1 (SEQ ID NO: 15-18) . Se muestra un punto Salud y Servicios Humanos de los Estados Unidos, Imprenta del Gobierno de los Estados Unidos, 1991) . ¡j La figura 20 muestra las secuencias de aminoácidos de varias modalidades de la región n I humanizada del BAT-1 (SEQ ID NO: 20- 24) . Se muestra jan ¡ I punto [ . ] en los lugares donde se interceptan los residuos denota una parte del ciclo estructural Hl . La numeración ! utilizada corresponde con Kabat (Kabat et al., Ibíd.). ! DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION I I Definiciones } El término "anticuerpo" (también llamado " inmunoglobulina" ) se utiliza en su sentido más amplio \ y específicamente engloba anticuerpos monoclonales (incluidos los anticuerpos monoclonales más grandes) y fragmentos de ! anticuerpos que exhiban la actividad biológica deseada. Los "fragmentos de anticuerpos" comprenden una fracción de un i anticuerpo de tamaño normal, generalmente el enlace i antigeno o una región variable del mismo. Los ejemplos de compuesto de dos cadenas ligeras idénticas (L) y dos cadenas pesadas idénticas (H) , enlazadas entre sí pór asociaciones no covalentes y enlaces bisulfúricos . Cada cadena pesada y ligera también tiene puentes de bisulfuro ? distribuidos de manera regular dentro de la cadena. Existen ! cinco clases de anticuerpos humanos (IgG, IgA, IgM, IgD : e IgE) y dentro de estas clases, se reconocen varias subclases con base en las diferencias estructurales, como el i número de unidades de inmunoglobulina en una molécula ele anticuerpo, la estructura del puente de bisulfuro en las ¡ unidades individuales y las diferencias en la longitud y la secuencia de las cadenas. La clase y la sub-clase de ün ! anticuerpo es su isotipo. ¡ Las regiones terminales amino de las cadenas I j pesada y ligera tienen secuencias más diversas que las regiones terminales carboxi, y por ello se les conoce coiiio i campos variables. Esta parte de la estructura del anticuerpo confiere al anticuerpo su especificidad de enlace con antígeno. Un campo variable pesado (VH) y un campo variable ligero (VL) forman en conjunto un solo sitio i i de enlace con antígeno; de esta manera, la unidad básica de la inmunoglobulina tiene dos sitios de enlace con antígenc?. Se piensa que los residuos aminoácidos particulares forman una interfaz entre los campos variables de cadena ligerajy de cadena pesada (Chothia et al., J. Mol. Biol . 186, 651-63 i (1985); Novotny y Haber, (1985) Proc . Nati. Acad. Sci. USA i 82 4592-4596) . I La fracción terminal carboxi de las cadenas pesada y ligera forman los campos constantes, es decir, i CH1, CH2 , CH3 , CL . Si bien la diversidad en estos campos és mucho menor, existen diferencias entre una especie animal 'y otra y por consiguiente, dentro del mismo individuó, existen varios isotipos diferentes de anticuerpos, cada uno I de los cuales tiene una función diferente. ¡ i El término "región estructural" o "FR" hace I referencia a los residuos aminoácidos en el campo variable i de un anticuerpo, que son distintos a los residuos aminoácidos en la región hiper-variable tal como se define en la presente. Tal como se usa en la "región hipervariable" se refiere aminoácidos en el campo variable de cuales son responsables del enlace con hipervariable comprende residuos aminoácidos de una "región determinante complementaria" o "región CDR" . Las regiones determinantes complementarias son principalmente ! i I responsables del enlace entre un determinante antigénicojy un antígeno. Se ha definido con precisión la extensión de las regiones estructurales y de las regiones determinantés complementarias (ver: Kabat et al, Ibíd.) .

El término " inmunoglobulina aceptora humana" se refiere a la inmunoglobulina humana que proporciona la estructura para un anticuerpo humanizado. ¡ Como se utiliza en la presente, el término "anticuerpo humanizado se refiere a un anticuerpo que comprende una región estructural de un anticuerpo humano i y una o más regiones determinantes complementarias de una inmunoglobulina no humana (generalmente de ratón o rata) .

Algunas partes de la inmunoglobulina humanizada, excepto quizá las regiones determinantes complementarias, i son sustancialmente idénticas a las partes correspondientes ! de las secuencias de inmunoglobulina humana natural. Sin embargo, en algunos casos, los residuos aminoácidos i específicos, por ejemplo en las regiones estructurales, pueden ser modificados para mejorar el rendimiento del I anticuerpo humanizado. Es de resaltar que se espera que el i anticuerpo humanizado se enlace con el mismo antígeño que el anticuerpo donador que proporciona las regiones j determinantes complementarias . Para más conocer mas ¡ detalles, vea por ejemplo la Patente de los Estados Unidbs i Número 5,225,539 asignada al Consejo de Investigación Médica (Medical Research Council) del Reino Unido.

Los términos "una región estructural proveniente misma, que tiene la misma secuencia de aminoácidos que la inmunoglobulina aceptora humana. \ La expresión "una región estructural modificada' a ! partir de una inmunoglobulina aceptora humana" y cualquier otra expresión gramática similar, hace referencia a uña i región estructural con una secuencia de aminoácidos ! alterada, por ejemplo, mediante sustitución, eliminaciónj o i modificación química de uno o más residuos aminoácidos, en i comparación con la secuencia de la inmunoglobulina aceptora í i. humana original. Puede efectuarse la modificación en ¡la región estructural a fin de optimizar el desempeño dpi i anticuerpo humanizado que se esta construyendo, pjor ejemplo, para optimizar el enlace del antígeno y evitar choques estéricos. En la Publicación de Solicitud jde I Patente de los Estados Unidos Número 2008/0025980 se I proporciona una explicación de las bases y las razones pa a modificar los residuos específicos en las region'és estructurales de una inmunoglobulina aceptora para la construcción de un anticuerpo humano BAT j Más aún, es posible modificar químicamente una ! región estructural en uno o más residuos aminoácidos, ya sea por procesos naturales, como modificaciones en el procesamiento u otros cambios posteriores a la traducción, o por medio de técnicas de modificación química. Las modificaciones químicas incluyen, entre otras, acetilación, acilación, amidación, ADP-ribosilación, glicosilación, ¡ formación de un ancla de GPI, anexión covalente de ün i derivado líquido o lípido, metilación, miristilacióri, pegilación, prenilación, fosforilación, ubiquitinación ! o cualquier otro proceso similar. i El término "anticuerpo humano" hace referenciaJ a I un anticuerpo codificado por un gen que realmente está ¡ presente en un humano o un alelo, variante o mutación de los anteriores. j Tal como se utiliza en la presente, el término "efecto antitumoral" se refiere a un efecto biológi o i benéfico que puede manifestarse por medio de alguno de los siguientes: un decremento o estabilización del volumen tumoral, un decremento o estabilización del número de i células tumorales, un decremento o estabilización de la velocidad de crecimiento tumoral, un decremento estabilización del número de metástasis, proyección ele reaparición tumoral, incremento en la esperanza de vida sobrevivencia del sujeto con el tumor, incremento en la ! esperanza de vida o sobrevivencia sin avance de la enfermedad del sujeto con el tumor o la mejora de diversos síntomas fisiológicos asociados al cáncer. Un "efecto ¡ antitumoral" también puede manifestarse por medio de ía capacidad de la combinación de la presente invención para prevenir la aparición de un tumor por primera vez o la reaparición del mismo. Dadas sus propiedades, los métodos de la invención pueden utilizarse en el tratamiento del cáncer agudo, cáncer latente, controlado o estabilizado j y en tratamiento profiláctico contra el cáncer. ; El término "mamífero" significa cualquie ?r mamífero, incluidas las mascotas como los perros y los i quimioterapéuticos de la invención debe entenderse como la cantidad de cada uno de estos agentes activos que sea I necesaria para lograr un efecto terapéutico, sin provocar efectos secundarios adversos excesivos o incontrolables. La i cantidad eficaz necesaria para alcanzar el resultado terapéutico final puede depender de una serie de factores, por ejemplo, del tipo específico del tumor la condición del paciente y de si la administra también con radiación. En el presente invención, la cantidad eficaz agentes activos debe ser suficiente para efectuar una respuesta terapéutica benéfica en el sujeto con el paso del tiempo, lo cual incluye la inhibición del crecimientio tumoral, la reducción de la velocidad de crecimiento tumoral, la prevención del crecimiento del tumor y la metástasis y la mejora de la sobrevivencia.

Tal como se utiliza en la presente, el término "mejora de la sobrevivencia" hace referencia a una duración prolongada del tiempo durante el cual el sujeto o el/la paciente permanece con vida después del tratamiento con µ? i método de la presente invención. La mejora de la sobrevivencia denota una mayor probabilidad de mantenerse libre del avance de la enfermedad para un individuo que ! padece cáncer después de un tratamiento en particular.

! También se utiliza para describir el porcentaje elevado de individuos en un grupo, cuya enfermedad tiene ! probabilidades de permanecer estable (sin manifestar signos ¡ de empeoramiento) después de un periodo específico, en comparación con un grupo de control. También se utiliza I para describir el porcentaje elevado de individuos en un grupo, cuya enfermedad tiene probabilidades de ser curada (sin manifestar signos de la enfermedad) después de un periodo específico, en comparación con un grupo de control. Es posible medir este parámetro por medio de alguno de los criterios de valoración clínica habituales denotados como ! "sobrevivencia sin avance de la enfermedad", "sobrevivencia general" y "sobrevivencia sin enfermedad", utilizados como una indicación de la eficacia de un tratamiento en I particular. j El término "tolerancia a agentes quimioterapéuticos " se refiere a la capacidad fisiológica, i fisioquímica e inmunológica que tiene un sujeto paira tolerar los efectos secundarios adversos asociados a un I tratamiento con uno o más agentes quimioterapéuticos. Por i consiguiente, el término "mejorar la tolerancia a los i agentes quimioterapéuticos" se refiere a incrementar la capacidad fisiológica y fisioquímica para soportar tal s i efectos secundarios adversos, de manera que disminuye la I gravedad y/o el número de los mismos. Por consiguiente, I "mejorar la tolerancia a los agentes quimioterapéuticos" ¡ puede hacer referencia a mejorar la calidad de vida de los i pacientes con cáncer que reciben tratamiento con agentes quimioterapéuticos. ! El término "reaparición tumoral" o "reaparici n del tumor" se refiere al re-surgimiento, re-manifestación, re-crecimiento o proliferación de un tumor del mismo tipo ya sea en la misma ubicación o en una diferente, después de un periodo durante el cual el se había logrado revertir, detener o inhibir el crecimiento del tumor original. Ii Tal como se utiliza en la presente, el término "mejora o incrementa la supervivencia linfocítica / de l s linfocitos" hace referencia a la capacidad de una combinación particular de tratamientos para prolongar la viabilidad de los linfocitos in vitro o in vivo, én comparación con la viabilidad de una población celular idéntica con uno solo de los tratamientos. Por ejemplo, ciertas combinaciones de hBAT-1 y de agentes quimioterapéuticos mejoran la supervivencia linfocítica, según un estudio in vitro, tal como se ejemplifica en el Ejemplo 1 de la presente.

¡ Métodos de la Invención ¡ La inmunoterapia contra el cáncer apunta a la modulación de la respuesta del sistema inmunológico pata inducir o mejorar la destrucción de las células tumoralesj y a controlar el crecimiento tumoral . Este enfoque utiliza prevé el uso de varios inmunomoduladores , incluidos lps anticuerpos monoclonales que se enlazan de manera selectijva a determinantes específicos en las células T, con lo cual ! se inicia una ruta de activación o se induce un efecto cié inhibición. j I tratamientos por separado. En una modalidad preferida, existe una sinergia cuando los tumores reciben tratamiento I con el anticuerpo humanizado de la presente invención en conjunto con uno o más agentes quimioterapéuticos y, I opcionalmente , también en conjunto radiación. ¡ En otras palabras, de conformidad con un aspecto de la presente invención, el efecto antitumoral del anticuerpo humanizado de la presente invención aumenta más de lo esperado cuando se combina con al menos un agente I quimioterapéutico. La sinergia puede ser demostrada por el presente invención, ejerce un mayor efecto antitumoral, i según se midió con el volumen tumoral y con la sobrevivencia de los ratones que padecían el tumor, ein comparación con el efecto del anticuerpo o del agente quimioterapéutico por separado. Más específicamente, para evaluar el efecto en el volumen tumoral, la figura , 8 muestra que la administración combinada de hBAT-1 y 5FU tiene varias ventajas sobre cada uno de los agentes por separado, y la figura 9 muestra que la combinación hBAT-l|y ! 5FU genera sinergia en comparación con el 5FU por separado.

De manera similar, en la evaluación del efecto en lia sobrevivencia, se ha demostrado que la administración de la combinación de hBAT-1 y 5FU presenta varias ventajas con respecto a cada uno de los agentes por separado (figura 10) o con respecto al 5FU por separado (figura 11) . Una combinación diferente, hBAT-1 con oxaliplatino, presenta i numerosas ventajas en comparación con el oxaliplatino individual en cuanto al incremento de la sobrevivencia, 10, 15, 16A-16B, 17A-17B) .

Los efectos in vivo que ejercen las combinaciones de la presente invención tienen su respaldo en las pruebas funcionales in vitro de la sobrevivencia celular de los i linfocitos, tal como se revela en el ejemplo 1 de la presente invención. Tal como se ejemplifica, el tratamiento secuencial de linfocitos murinos con hBAT-1 seguido de 5FU sólo un incremento ligero en la sobrevivencia de los i linfocitos (figura 1A) en comparación con el tratamiento con hBAT-1 por separado, y el 5FU de forma individual ñío í mejoró la sobrevivencia celular (figura 1C) , lo cual indica una sinergia farmacodinámica del tratamiento programado en forma secuencial. La actividad sinérgica también se observó I en estudios in vitro con la combinación del agente quimioterapéutico cisplatina y el anticuerpo humanizado (figura 7B) . De esta manera, la combinación de ciertos agentes quimioterapéuticos con el anticuerpo humanizado ele la presente invención, da como resultado efectos sinérgieps tanto in vitro como in vivo.

El efecto sinérgico revelado y ejemplificado én la presente es completamente inesperado dado que ya se sabe que los anticuerpos BAT y los agentes quimioterapéuticos tienen tanto mecanismos de acción como tipos de objetivos I totalmente diferentes e incluso opuestos. Es decir, los anticuerpos BAT funcionan mediante la estimulación de pirimidina o la citarabina) o un fármaco a base de platipo I (como el oxaliplatino o el cisplatino) . Más aún, en varias modalidades, el agente quimioterapéutico puede ser distinjto al agente seleccionado entre un inhibidor de topoisomerasa í ! ¡ i I (como el SN-38) y un agente alcalinizante (como ía ciclofosfamida) . El efecto antitumoral inducido por las combinaciones de la presente invención incluye .'.a. prevención e inhibición del progreso de un tumor, la reducción del crecimiento tumoral y la protección contra la reaparición tumoral, incluidos tumores cancerígenos y ijio cancerígenos. El desarrollo de un tumor abarca la invasión, í metástasis, reaparición e incremento de tamaño tumoral. La 1 reducción del crecimiento tumoral también abarca la destrucción o eliminación de un tumor que lleva a una ! remisión completa. I i Además, también se ha demostrado que la invención resulta efectiva para mejorar la tolerancia a agentes I quimioterapéuticos . Como ya se sabe en la técnica, una gran desventaja para los pacientes que se someten a una quimioterapia para combatir el cáncer es la aparición de efectos secundarios adversos graves que deterioran la salud, debido a la poderosa toxicidad de la mayoría de l s agentes quimioterapéuticos. Tal como se ejemplifica en ¡el i Ejemplo 3 de la presente, el uso de un anticuerpo BAT humanizado (CT-011) en combinación con el 5FU a niveles de toxicidad limitantes de dosis, con un programa jde administración en secuencia, da como resultado una maypr sobrevivencia de los ratones. Estas observaciones respaldjan el uso de anticuerpos BAT humanizados para mejorar ¡la tolerancia a agentes quimioterapéuticos en pacientes que se someten a una quimioterapia. j La invención también proporciona un método para ! mejorar la sobrevivencia en un sujeto con un tumor, lo cuál ¡ comprende la administración del anticuerpo humanizado de la presente invención, ya sea de forma individual o, de manera opcional, en combinación con la administración adicional de i uno o más agentes quimioterapéuticos. Por ejemplo, él i efecto curativo inducido por el CT-011 en pacientes humanos i con cáncer (ejemplo 8) , respalda dicha monoterapia con él I anticuerpo. Este aspecto de la invención particularmente presenta ventajas en los casos donde la quimioterapia ha fallado o el paciente es incapaz de tolerar los agentes quimioterapéuticos. · La invención también proporciona un método paira reducir o prevenir la reaparición de un tumor, lo cuál comprende la administración del anticuerpo humanizado de [La ! presente invención, ya sea de forma individual o, de manera opcional, en combinación con la administración adicional ele uno o más agentes quimioterapéuticos. Tal como se demuestra en el ejemplo 6 de la presente, el tratamiento combinado fen i animales experimentales con el anticuerpo humanizado de la presente invención y los agentes quimioterapéuticos, claramente indujo un efecto de "memoria", de manera que Jse inhibió la reaparición tumoral al momento de la exposición tipo de tumor original .

I Todos los tipos de tumores pueden ser tratados con los métodos de la presente invención. Los tumores pueden ser sólidos o no sólidos.

Algunos ejemplos de tumores sólidos que pueden ser tratados con la combinación de la presente invención incluyen carcinomas, sarcomas, blastomas o gliomas. Algunos ejemplos de dichos tumores abarcan tumores epidermoides , tumores de células escamosas (como tumores en cabeza j Iy cuello) tumores colorrectales , tumores prostáticos, tumores de mama, tumores pulmonares (incluidos tumores de células pequeñas y no pequeñas) , tumores pancreáticos , tumores tiroideos, tumores ováricos, tumores hepáticos, tumores esofágicos y tumores gástricos. Otros ejemplos incluyein sarcoma de Kaposi, neoplasias del Sistema Nervioso Central (SNC) , neuroblastomas , hemangioblastomas capilares, ! 50 Algunos ejemplos de tumores no sólidos incluyen leucemias, mielomas múltiples y linfornas. Algunos ejemplos de leucemias incluyen leucemia mielocítica aguda (LMA) , leucemia mielocítica crónica (LMC) , leucemia linfocítica Los tipos de tumores preferidos actualmente se j seleccionan de entre los siguientes: carcinoma colorrectal, carcinoma pulmonar (incluido cáncer pulmonar de células no pequeñas y de células pequeñas) , carcinoma de mamá, i melanoma, carcinoma ovárico, carcinoma cérvicouterinó, cáncer pancreático, carcinoma de cabeza y cuello, carcinoma gastrointestinal, tumores esofágicos, carcinom Ia hepatocelular, mieloma múltiple, carcinoma de células otros programas de administración, por ejemplo, programas ! que se traslapan o que involucran la administración ele ambos tipos de tratamiento en forma alternada, secuencial o sucesiva. ¡ I i ! Anticuerpo humanizado de la presente invención j Tal como se utilizan en la presente, los términos I "BAT" y "anticuerpo BAT" , se utilizan en sentido amplio] y específicamente abarcan los anticuerpos idénticos o basados FRLi-CDRLI-FRL2- CDRL2-FRL3 -CDRL3 - FRL4 I en donde cada FR es una región estructural independiente de un anticuerpo humano y cada CDR es una I I región determinante complementaria del anticuerpo I monoclonal mBAT-1. j En general, la región variable de cadena pesada del anticuerpo monoclonal humanizado se caracteriza por j esta fórmula: I FRHI - CDRHI - FRH2 - CDRH2 - FRH3 - CDRH3 - FRH4 | en donde cada FR es una región estructural independiente de un anticuerpo humano y cada CDR es uña región determinante complementaria del anticuerpo monoclonal mBAT-1. j En ciertas modalidades particulares, las regiones i estructurales FR se derivan de la región variable de la í cadena ligera del anticuerpo humano TEL9 (SEQ ID NO: 130) ¡o se modifican a partir de la misma en ciertos residuos aminoácidos. ¡ í El anticuerpo humano TEL-9 fue identificado en literatura diversa sobre genes variables (V) de cadena j pesada (VH) y ligera (V kappa y V lambda) , preparados | a partir de linfocitos en sangre periférica de donadores no vacunados (Marks et al. J. Mol. Biol., 1991, 222:581-97) .

Se demostró que este anticuerpo se enlazó específicamente al antígeno de lisozima de clara de huevo de pavo (Turkey Egg-white Lysozyme, o TEL) . ¡ i Las secuencias de aminoácidos de la región estructural derivadas o modificadas a partir de la región variable de cadena ligera del TEL9 humano pueden ser seleccionadas de entre el grupo que consiste en: FRL¾., [EIVLT QSPSS LSASV GDRVT ITC; SEQ ID NO: 1]; FRL2 , [W (F¡ó Y) QQKPG KAPKL (W ó L) IY; SEQ ID NO: 2] ; FRL3 , [GVPSR FSGSG SGT (D Ó S) (Y Ó F) (C Ó T) LTINS LQPED FATYY C; SEQ ID NO: 3] ; y FRL4, [FGGGT KLEIK; SEQ ID NO: 4] . ! En ciertas modalidades particulares, las regiones estructurales FR se derivan de la región variable de ía cadena pesada del anticuerpo humano hsighvl295 (SEQ ID NO: ! 146) o se modifican a partir de la misma en ciertos residuos aminoácidos. j i El anticuerpo humano hsigghvl295 fue aislado n I hibridomas estables y líneas de células B transformadas por el virus de Epstein-Barr del líquido sinovial o la sangre periférica de tres pacientes con artritis reumatoide y un paciente con lupus eritematoso sistémico (Fang et al., Exp Med. 1994, 179:1445-56).

Las secuencias de aminoácidos de la estructural derivadas o modificadas a partir de la variable de cadena pesada del anticuerpo hsighvl295 humano pueden ser seleccionadas de entre el grupo que consiste en: i FRHi, [Q (I ó V) QLV QSGSE LKKPG ASVKI SCKAS GY (T ó S) F ¡(T ó S) ; SEQ ID NO: 5] ; FRH2 , [WV (R ó K) QAPGQ GL (Q ó K) MG; SEQ ID NO: 6] ; FRH3 , [RF (V ó A) FSLDT SV (N ó S) TAYLQ ITSL i (T Ó N) AEDTG MYFC (V ó A) (R Ó K) ; SEQ ID NO: 7] ; y FR¿ , [ GQGT LVTVS S; SEQ ID NO: 8] . ¡ De conformidad con varias modalidades, la región variable de cadena ligera comprende al menos una secuencia de aminoácidos seleccionados de entre el grupo que consiste en: CDRLi [SARSS VSYMH; SEQ ID NO: 9] ; CDRL2 [RTSNL AS; SEQ ID NO: 10] ; CDRL3 [QQRSS FPLT; SEQ ID NO: 11] , en donde lis regiones determinantes complementarias CDR se derivan del anticuerpo murino BAT-1 y los subíndices "L" y "H" se I refiere a regiones de cadena ligera (L) y pesada (H) , spectivamente .

De conformidad con varias modalidades, la región í variable de cadena pesada comprende al menos una secuencia i de aminoácidos seleccionados de entre el grupo que consiste en: CDRHI [NYGMN; SEQ ID NO: 12] ; CDRH2 [WINTD SGEST YAEEF KG; SEQ ID NO: 13] ; CDRH3 [VGYDA LDY; SEQ ID NO: 14] . j I De conformidad con varias modalidades, el anticuerpo humanizado comprende: una región variable ke cadena ligera seleccionada de entre el grupo que consisjte i en: BATRKa (SEQ ID NO: 15), BATRKb (SEQ ID NO : 16) , BATRKC (SEQ ID NO: 17) , y BATRKd (SEQ ID NO: 18) ; y j una región variable de cadena pesada seleccionada ! de entre el grupo que consiste en: A (SEQ ID NO: 20¡) , BATRHB (SEQ ID NO: 21), BATRHC (SEQ ID NO : 22) , BATRHD (SEQ ID NO: 23) y BATRHE (SEQ ID NO: 24) .

I De conformidad con otra modalidad más, 'el anticuerpo humanizado comprende regiones variables seleccionadas de entre el grupo que consiste eh: BATRHA/BATRKA (SEQ ID NO: 20/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BAT (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO : 15) , BATRHB/BATR b (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 16), BATRHC/BATR b (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 16), BATRHB/BATRKD (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 18), jy BATRHC/BATR d (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . j De conformidad con varias modalidades preferidas, el anticuerpo monoclonal humanizado tiene regiones variables que corresponden a BATRHC/BATR d (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . I En una modalidad, el anticuerpo BAT humanizaelo tiene una región variable de cadena pesada, como se establece en SEQ ID NO: 22, que puede ser codificada por la secuencia de polinucleótido que se indica en SEQ ID NO:90.j En una modalidad, el anticuerpo humanizado tiene una región variable de cadena ligera, como se establece en SEQ ID NO: 18, que puede ser codificada por la secuencia die polinucleótido que se indica en SEQ ID NO: 89. En la í Publicación de Solicitud de Patente de los Estados . Unidos - . i Núm. 2008/0025980, se revelan secuencias de aminoácidos : y nucleótidos de anticuerpos humanizados adecuadas para su uso en la presente invención. Las regiones estructurales de anticuerpos humanos de las regiones variables de cade ia pesada y de las regiones variables de cadena ligera que son í adecuadas para su uso en la presente invención, abarcan por ejemplo, los SEQ ID NO: 111-128 y los SEQ ID NO: 130-144, respectivamente. j i Quimioterapia lj Los fármacos utilizados en quimioterapia se dividen en varios grupos con base en el efecto que tienén en las células cancerosas, las actividades o procesos ? celulares con los que interfieren los fármacos o las fases ? específicas del ciclo celular que afecta el fármaco. De esta manera, los fármacos quimioterapéuticos pertenecen i¡ a alguna de las siguientes categorías: agentes ! alcalinizantes , nitrosoureas , antimetabolitos, ! antraciclinas , inhibidores de topoisomerasa I y II, inhibidores mitóticos, fármacos a base de platino entre ) otros, agentes esteroideos y anti-angiogenicos . j Los antimetabolitos, también denominados I "análogos de nucleósidos" , reemplazan las sustancias ! naturales como bloques de construcción en moléculas de ADN/ con lo cual alteran la función de las enzimas necesarias ¡ para el metabolismo celular y la síntesis de proteínas. En caso de que imiten nutrientes necesarios para el I crecimiento celular, las células eventualmente experimentan lisis celular. Si un nucleósido es reemplazado con un í análogo de nucleósido no funcional, éste último se incorpora en el ADN y el ARN, y finalmente inducen el alto del ciclo celular y la apoptosis al inhibir la capacidad de la célula para sintetizar ADN. Los antimetabolitos son específicos para el ciclo celular y son más eficaces ! durante la fase S de la división celular, ya qúe principalmente actúan en las células que están en la fasie de síntesis de ADN nuevo para la formación de célulás ! nuevas. La toxicidad asociada a estos fármacos se observa en células que crecen y se dividen rápidamente. Los ejemplos de los antimetabolitos incluyen antagonistas de i purina, antagonistas de pirimidina y antagonistas de folato. Estos agentes dañan las células durante la fase síy se utilizan comúnmente para tratar leucemia, tumores i mamarios, ováricos y gastrointestinales, así como otros ¡ I tipos de cáncer. Los ejemplos específicos ele antimetabolitos incluyen 5-fluorouracilo (también conocido como 5FU) , capecitabina, 6-mercaptopurina, metotrexato , í gemcitabina, citarabina, fludarabina y pemetrexed. j Los fármacos quimioterapéuticos a base de platino se entrelazan con ADN en diferentes maneras, interfiriendo i así con la división celular mediante mitosis. El ADN dañad Io activa los mecanismos de reparación de ADN, que a su ve ¡z i activan la apoptosis cuando la reparación se vuelye I imposible. Los cambios más notables en el ADN son los enlaces cruzados 1 , 2 - intrahebra con bases de purina. Estos incluyen adiciones d(GpG) 1 , 2 - intrahebra que forman casi el 90% de las adiciones, así como las adiciones d(ApG) 1,2- 1 intrahebra, que son menos comunes. Llegan a ocurrir adiciones d(GpXpG) 1 , 3-intrahebra, pero son raramenie i corregidas por la reparación por escisión de nucleótido (NER) . Otros aductos incluyen enlaces cruzados interhebra ¡y I aductos no funcionales que se ha dicho que contribuyen a la í actividad de los fármacos a base de platino. La interacción I con proteínas celulares, particularmente proteínas dél i campo HMG, también se ha sugerido como un mecanismo para interferir con la mitosis, aunque probablemente este no sea i su método de acción principal. Los fármacos ¡ quimioterapéuticos a base de platino incluyen el cisplatiijio i (también conocido como cisplatin o cis- I diaminodicloroplatino II), carboplatino y oxaliplatino . Él cisplatino es designado con frecuencia como un agente alcalinizante , aunque no tiene un grupo alquilo y no puede realizar reacciones alcalinizantes . Se le clasificia convenientemente como "tipo alcalinizante" . Los fármacos quimioterapéuticos a base de platino se utilizan paira tratar varios tipos de cáncer, incluidos los sarcomas, algunos carcinomas (p.ej. cáncer pulmonar de célulás pequeñas y cáncer ovárico) , linfomas y tumores de célulájs germinales . ; Los inhibidores de la mitosis interfieren con la r I división celular. El agente quimioterapéutico más conocido I en esta categoría es el paclitaxel (también conocido como i Taxol®, "alcaloide del tejo", "taxano" y "agente i antimicrotubular" ) . Junto con el docetaxel, conforma la categoría de fármacos de los taxanos . Sin embargo, se conocen otros inhibidores de la mitosis, como la etoposida, ! vinblastina y vincristina, entre otros. El paclitaxel actúa al interferir con el crecimiento microtubular normal ! i durante la división celular al detener su funcionamiento ; I hiper-estabiliza su estructura. De esta manera, se destruye i la capacidad de la célula para utilizar su citoesqueleto ¿le I manera flexible. Específicamente, el paclitaxel se une a la sub-unidad ß de la tubulina, el "bloque de construcción" cié I los microtúbulos , y la unión del paclitaxel asegura estos bloques de construcción en su lugar. El compleijo I microtúbulo/paclitaxel resultante no tiene la capacidad cié desensamblarse. Esto afecta de manera adversa la función celular, ya que la célula necesita acortar y alargar los microtúbulos (lo cual se denomina inestabilidad dinámica) Í para que funcionen correctamente como un mecanismo para i transportar otros componentes celulares. Por ejemplo, I durante la mitosis, los microtúbulos posicionan a los I cromosomas por toda la replicación y la posterior separación en los dos núcleos de las células hijas. Mcis 1 aún, el paclitaxel induce la muerte celular programada fármacos interactúan con el ADN al intercalar e inhibir la j biosíntesis macromolecular, con lo cual se inhibe él i progreso de la enzima topoisomerasa II, que deshilvana él i ADN para su transcripción. Estos fármacos estabilizan el complejo de topoisomerasa II después de romper la cadena ele ADN para su replicación, y previenen asi que la doble eventualmente provoca que los tumores "mueran de inanición". Los ejemplos de agentes anti-angiogénicps incluyen, entre otros, el anticuerpo monoclonal bevacizumab, la dopamina y el tetrahiomolibdato .

El factor de crecimiento endotelial vascular es una glicoproteína dimérica 32-42 kDa que media jLa vasodilatación, la permeabilidad vascular incrementada y la mitogénesis celular endotelial. El corte y empalme i diferencial de exones del gen del factor de crecimiento I endotelial vascular da como resultado tres tipos de mARN principales que codifican para tres isoformas secretadks (los subíndices denotan los números de los aminoácidos!) : VEGF189, VEGF165, y VEGF121. También se han descrito algunas variaciones menores del corte y empalme (VEGF20 , VEGF183, VEGF145 y VEGF148) . Las variantes de los polipéptidos del factor de crecimineto endotelial vascular y su uso en la terapia contra el cáncer se revelan, por ejemplo, en WO/2003/012105.

Radiación La fuente de radiación puede ser utilizada en combinación con el anticuerpo humanizado de la presente I invención y el agente- o agentes quimioterapéuticos pueden ser externos o internos en el paciente que está recibiendo tratamiento. Cuando la fuente es externa al paciente, ¡la terapia se conoce como radioterapia con haz externo (External Beam Radiation Therapy, o EBRT) . Cuando la fuente de la radiación es interna, el tratamiento se denomina braquiterapia .

La radiación se administra de conformidad con la Is técnicas estándar conocidas con el uso de equipo estandarizado fabricado para este propósito, como el AECL Theratron radiación cualquier i entre la destrucción de las células objetivo y la implantes temporales incluyen radio, cesio-137 e iridió- 192. Algunos otros átomos radiactivos que se han utilizado ¡ en la braquiterapia incluyen americio-241 y oro-198. j Como se sabe en este campo técnico, la dosis áe la radiación depende de varios factores, entre los que se I incluyen: el órgano que está recibiendo tratamiento, los órganos sanos que se hallan en el camino de la radiaciónjy i que podrían resultar afectados de manera inadvertida, la tolerancia del/de la paciente a la radioterapia y el área ¡ I del cuerpo que necesita el tratamiento. Por lo general, la dosis será de entre 1 y 100 Gy y más particularmente, entre i 2 y 80 Gy. Algunas dosis que se han reportado incluyen 35 I Gy en la columna vertebral, 15 Gy en los ríñones, 20 Gy en el hígado y 65-80 Gy en la próstata. Sin embargo, cabe í señalar que la invención no está limitada a alguna dosis en particular. El médico tratante será quien determine la i dosis, dependiendo de los factores particulares de uña situación dada, incluidos todos los factores ya mencionados anteriormente .

La dosis de la radiación para la braquiterapia puede ser la misma que la mencionada anteriormente para la i radioterapia con haz externo. Además de los factores í mencionados anteriormente que se consideran para determinar la dosis de la radioterapia con haz externo, también pe toma en cuenta la naturaleza del átomo radiactivo utilizad Go para determinar la dosis de la braquiterap Composiciones, administración y dosis ! Para su uso en los métodos de la presente invención, el anticuerpo humanizado puede ser formulado <he propilenglicol . ¡ El anticuerpo puede ser formulado como formas ¡ neutras o salinas. Las sales farmacéuticamente aceptables I incluyen sales de adición acida (formadas con grupos amino ! libres) que se forman con ácidos inorgánicos como el áciclo clorhídrico o fosfórico, o con ácidos orgánicos tales como el ácido acético, oxálico, tartárico y maleico. Las sales I formadas con los grupos carboxilo libres también pueden ser derivadas de bases inorgánicas como sodio, potasio, l amoniaco, calcio o hidróxidos férricos, y de bases compatible con condiciones fisiológicas a fin de producir una solución acuosa y haciéndola estéril. Éstas pueden ser ¡ preparadas en envases unitarios o para dosis múltiples, por ejemplo, ampolletas o viales sellados. j Las composiciones pueden incorporar ün preferencia en el rango de 6-8. Puede utilizarse un agente anti-adsorción para formular el anticuerpo. Otros i excipientes adecuados podrían incluir un antioxidante como el ácido ascórbico. J Las composiciones pueden ser formuladas como preparaciones de liberación controlada, que pueden obtenerse a través del uso de polímero a complejo absorción de proteínas . Los polímeros adecuados para las formulaciones de liberación controlada incluyen, por ejemplo, poliéster, poliaminoácidos , polivinilói, pirrolidona, etilenvinilacetato y metilcelulosa . Otro posible método para lograr una liberación controlada es incorporar el anticuerpo en partículas de un material polimérico, como los poliésteres, poliaminoácidos, hidrogeles, poli (ácido láctico) o copolímeros de etileno mantenimiento periódicas (p.ej., semanales) durante un tiempo. Los anticuerpos también pueden ser transportados mediante sistemas de transporte de liberación retardada, I bombas y otros sistemas de transporte conocidos para una infusión continua. Los regímenes de las dosis pueden variar ! para proporcionar los niveles de circulación deseados de ün ? I i í i i anticuerpo particular con base en su farraacocinética . De ¡ esta manera, se calcularán las dosis de manera que se conserve el nivel de circulación deseado del agentie presente invención en un sujeto en particular. Para determinar la cantidad eficaz de la composición terapéutica que se administrará, el médico necesita evaluar, entre I otras cosas, los niveles circulantes en plasma, la toxicidad y el avance de la enfermedad.

En varias modalidades de los métodos de la i combinación de la presente invención, el anticuerpo humanizado y administrarse de tratamiento, dosificación" y referencia a la cada agente activo. Por ejemplo, el anticuerpo humanizado |y incluye la administración de un agente durante un periodo particular, por ejemplo, a lo largo de unos días o una semana, seguido de la administración del otro agente ! durante un periodo idéntico y después, se repite el patrón ! durante uno o más ciclos. La administración secuencial ¡ o emplearse un programa que se traslapa, que incluye la administración de los agentes activos en días diferentes a lo largo del periodo que dure el tratamiento, lio necesariamente conforme a la secuencia regular. También I pueden utilizarse variaciones de estos lineamientós generales, dependiendo de los agentes utilizados y de la condición del sujeto. j En algunas combinaciones particulares, podría ser una ventaja utilizar una secuencia específica de administración, p. ej . , un agente antes del otro. Por ejemplo, tal como se demuestra en la presente (Figuras 5 -5B) , la dacarbazina afecta de manera adversa la actividad del anticuerpo cuando se administra en forma concomitante, pero no cuando se agrega 24 horas después del anticuerpo humanizado. ! Habiendo descrito la invención en general, ke comprenderá más fácilmente si se hace referencia a los ejemplos siguientes, que se proporcionan a manera cié I ilustración, sin la intención de limitar la presente invención a dichos ejemplos. i EJEMPLOS i Ejemplo 1. Prueba funcional in vitro ' I La prueba funcional se basa en la capacidad del hBAT-1 para mejorar la sobrevivencia de los linfocit s murinos y humanos en el cultivo. En el presente Ejemplo, e evaluó el efecto del hBAT-1 en la mejora de la ¡ sobrevivencia de los linfocitos tanto por separado como en combinación con los fármacos quimioterapéuticos , y se i i í expresó como la diferencia % en la sobrevivencia o por medio del área bajo la curva de respuesta a la dosis (en donde AUC se expresa en diferencia % por g/ml) . El 'agente í quimioterapéutico fue aplicado de manera concomitante o 24 horas después del tratamiento con hBAT-1 en las concentraciones indicadas. Los agentes quimioterapéuticos i probados en la prueba funcional incluyeron 5FU (figuras lij.- I 1C, 2A-2B y 7A-7B) , SN-38 (un derivado activo del irinotecán, figuras 3A-3B y 4A-4B) , cisplatino, oxaliplatino, Taxol (paclitaxel) y dacarbazina (figuras 5¿j.- 5B y 7A-7B) , citarabina, ciclofosfamida y doxorrubiciia i (figuras 6A-6C) . j Los resultados indican que los agentés específicos (p.ej. 5FU, cisplatino, oxaliplatino, paclitaxel y citarabina) no afectan de manera adversa la i actividad del hBAT-1 en los linfocitos murinos . Es más, cuando se administran de manera concomitante con (cisplatino) o secuencial (5FU y paclitaxel) con el hBAT-1, se observa un efecto sinérgico, expresado por la mejora de I 20% a 30% en los valores de actividad (diferencia % en la í sobrevivencia celular y AUC) . El uso de un agente quimioterapéutico solo no tuvo ninguna actividad para j incrementar la sobrevivencia de los linfocitos en esta í prueba funcional (figura 1C) . Se obtuvieron resultados que muestran sinergia con los linfocitos CD4+ humanos aislados, I i i ¡ i i lo cual demuestra que el tratamiento secuencial con 5FU j o cisplatino en combinación con el hBAT dio como resultado una actividad (diferencia % en sobrevivencia celular) qle fue 2 veces mas alta que la actividad del anticuerpo sol 1o i (figuras 7A-7B) . Los resultados también sugieren qúe i ciertos agentes quimioterapéuticos (p.ej. SN-38; ciclofosfamida) podrían no ser adecuados para usarse en r combinación con anticuerpos BAT humanizados, ya que no mejoraron la sobrevivencia celular cuando se administraron en combinación con el hBAT- 1 en cultivo de linfocitos murinos . Además, ciertos agentes quimioterapéuticos (p.e]. ! dacarbazina) podrían ser adecuados únicamente cuando se i utilizan en un programa de administración secuencial (figuras 3A-3B, 4A-4B y 5A-5B) .

I i i Ejemplo 2. Terapia combinada para tumores de cáncer colorrectal . J i Se inocularon tumores de carcinoma colorrectál ! (CT26) por medio de la inyección subcutánea de células I CT26, 106 células/ratón (n=6) . En la presente, se hace referencia al día de la inyección como día 0. El 5FU (20 I mg/kg) fue administrado vía I.P. en los días 6-9, 15-17, 22-24 y 29-31, 36-38 y 43-45. El hBAT- 1 (10 mg/ratón) füe administrado vía I.V. en los días 10, 18, 25, 32 y 39 (figuras 8-10) . Un caso de recaída posterior a la remisión completa (que se observó sólo en el grupo de terapia combinada) recibió un tratamiento adicional con 5FU a 20 mg/kg en los días 73-74, 77-80, 85-87, 92-93 y el hBATj-1 (10 mg/ratón) se administró vía I.V. en los días 81 y 88.

En un estudio de seguimiento sobre el tamaño del tumor después de un solo ciclo de tratamiento, se midió el Dicho de otra manera, el tratamiento combinadlo con el uso de un programa de administración secuencial én el que el anticuerpo humanizado se administró después de ! 9 i ciclos diarios de 5FU a niveles de toxicidad limitantes de i dosis (50 mg/kg/día) , dio como resultado una mejora en la i sobrevivencia de los ratones en un modelo de melanoma í i experimental. Los resultados claramente sugieren que la terapia combinada mejora la tolerancia a los niveles de toxicidad limitantes de la dosis del 5FU .

Ejemplo 4. Terapia de combinación con irinotecán (1) . j I1 Se inocularon tumores de carcinoma colorrectál i (CT26) por medio de la inyección subcutánea de células CT26, 106 células/ratón (n=6) . En la presente, se hace referencia al día de la inyección como día 0. El irinotecán (100 mg/kg) fue administrado via I.P. en los días 7 y 15. El hBAT-1 (10 mg/ratón) se administró vía I.y. en el día 10 (figura 12) . j I En un estudio de seguimiento sobre el tamaño del i tumor después de un solo ciclo de tratamiento, se midió el volumen tumoral en los días 4 a 18. Los resultados indican que la terapia combinada del anticuerpo hBAT-1 con el irinotecán es tan eficaz como la monoterapia con í irinotecán, pero menos eficaz que la monoterapia con hBATj-1 i (figura 12) . ! ! i Ejemplo 5. Terapia de combinación con irinotecán (2) . j Se inocularon tumores de carcinoma colorrectál í (CT26) por medio de la inyección subcutánea de células CT26, 106 células/ratón (n=6) . En la presente, se hace referencia al día de la inyección como día 0. El irinotecán (100 mg/kg) fue administrado via I.P. en los días 7 y 15. El hBAT-1 (10 mg/ratón) se administró vía I.V. en el día 10 (figura 13) . ¡ El porcentaje de sobrevivencia fue monitoreado al inicio del día 16. Los resultados indican que en lj>s ratones tratados con la terapia de combinación, £1 porcentaje de sobrevivencia es comparable al de los ratones tratados con monoterapia de irinotecán, pero menor que én los ratones tratados con monoterapia de hBAT-1 (figura 13)>.

Ejemplo 6. Terapia de combinación con oxaliplatino . ¡ Se inocularon tumores de carcinoma colorrectál (CT26) por medio de la inyección subcutánea de células CT26, 106 células/ratón (n=6) . En la presente, se hace referencia al día de la inyección como día 0. El i oxaliplatino (1 mg/kg) fue administrado vía I.P. en los días 4, 7-10, 14-17, 22-24 y 29-31. El hBAT-1 (10 mg/ratóh) fue administrado vía I.V. en los días 11, 18, 25 y 32 (figuras 14-15) . 1 En un estudio de seguimiento sobre el tamaño del tumor, se midió el volumen tumoral en los días que no se ¡ dio tratamiento en los días 4 a 23 después de ia j inoculación tumoral. Los resultados indican que la terapia combinada con oxaliplatino presenta ventajas con respecto! a la terapia con oxaliplatino solo (figura 14) . i ! En un seguimiento de la sobrevivencia general, él porcentaje de sobrevivencia fue monitoreado a partir del i no se observaron tumores durante el seguimiento de 2 mesei, mientras que en el grupo de control, el tumor se desarrolló en pocos días en todos los ratones (figura 16A) .

En un seguimiento de la sobrevivencia general, el ? porcentaje de sobrevivencia fue monitoreado a partir del día 21 después de la re-inoculación tumoral. Los resultados muestran claramente que los ratones que fueron expuestos por primera vez al tumor de adenocarcinoma colorrectal, í murieron en 35 días, mientras que los ratones que ya se habían curado con la terapia combinada con hBAT-1 !y oxaliplatino, quedaron protegidos contra el crecimiento ¡ tumoral, reaparición tumoral y muerte por un tiempo más prolongado que los 72 días que duró el estudio seguimiento (figura 16B) . ¡ ! Se indujeron tumores de adenocarcinoma mamario (tumores 4T1) por medio de una inyección subcutánea de células 4T1 (10s células/ratón) en ratones que ya se habían i curado con hBAT y oxaliplatino, y que habían quedado protegidos contra la re-exposición a adenocarcinoma colorrectal durante alrededor de 3 meses (ratones descritos en las figuras 16A-16B; n=2) . En estos ratones, se inyectó el tumor vía subcutánea en un sitio diferente que el sitio utilizado para la la y la 2a inyección de adenocarcinoma colorrectal (reexposición a tumores ele adenocarcinoma colorrectal) . También se indujeron tumores de adenocarcinoma mamario en ratones sanos de una edád ¡ similar (n=6) . En la presente, se hace referencia al día de la inyección como día 0 (figuras 17A-17B) . I¡ En un estudio de seguimiento sobre el tamaño del tumor, se midió el volumen tumoral en los días que no se dio tratamiento y se muestra a partir de los días 3 a 2 ¡1 I después de la inoculación tumoral. Los resultados indican que los tumores de adenocarcinoma mamario avanzaron én i ambos grupos de ratones (figura 17A) . Estos resultados i, claramente demuestran que los ratones que han adquirido protección completa contra el carcinoma colorrectal después de una terapia combinada, de hBAT-1 y oxaliplatino (figura i 16A) , no estuvieron tan bien protegidos contra el carcinoma mamario (figura 17A) . j En un seguimiento de la sobrevivencia general, él porcentaje de sobrevivencia fue monitoreado a partir del día 21 después de la re-inoculación tumoral. Los resultados muestran claramente que los ratones en ambos grupos i murieron a los 28 a 35 días debido al carcinoma mamario, lo cual indica que los ratones que exhiben una protección ¡a largo plazo contra la reaparición de adenocarcinoma colorrectal (re-exposición) , no estuvieron protegidos contra un tipo de tumor diferente, carcinoma mamario. Dado que todos los ratones tratados ¡ anteriormente fueron evaluados para comprobar ía i eliminación completa de niveles séricos del anticuerpo de la presente invención, parece que la protección adquirida crecimiento tumoral y la mejora de la sobrevivencia en los ratones que padecían un tumor. De manera inesperada, los ratones en los grupos de la terapia combinada, han alcanzado una remisión completa y duradera, y en el caso del oxaliplatino, incluso adquirieron una memoria de protección contra la reaparición tumoral, según se evaluó con la re-exposición al tumor específico (adenocarcinotjia Los linfoci'tos efectores / de memoria CD4+CD45R0+ I y linfocitos sanos CD4+CD45RO- recibieron tratamiento ccjm hBAT a 1 g/ml, a lo que siguió un periodo de incubación de 72 y 96 horas. Los resultados se expresan como diferencia! % en sobrevivencia celular (figura 18) . ¡ Los resultados indican claramente que el CT-oil tiene un efecto significativo en la mejora de la sobrevivencia de los linfocitos efectores / de memoria CD4+CD45RO+, pero no en la de linfocitos sanos CD4+CD45ROf .

! La actividad demostrada del CT-011 en la mejora de la viabilidad de células precursoras de memoria corresponde i con los resultados in vivo que demuestran que el CT-011 tiene una actividad para inducir una memoria inmunológica en contra de la reaparición tumoral .

Ejemplo 8: Estudio clínico de fase 1 del anticuerpo monoclonal CT-011 humanizado. j i ¡ Introducción j Los objetivos de este estudio fueron evaluar los I niveles de toxicidad limitantes de la dosis a fin de ¡ determinar la dosis máxima tolerada y estudiar la farmacocinética del CT-011 que se administra una vez en pacientes con neoplasias malignas hematológicas avanzadas. Una descripción completa del estudio se proporciona en I ! Berger et al. Clin. C ncer Res. 2008 14 ( 10 ) , 15 de mayo de Pacientes y Métodos Los criterios de inclusión para el estudio exigían que los pacientes inscritos debían tener una de las siguientes neoplasias malignas hematológicas : leucemia ¡ mielocítica aguda (LMA) , leucemia linfocítica crónica i (LLC) , linfoma no Hodgkiniano (LNH) , linfoma de Hodgkin ¡ (LH) o mieloma múltiple (MM) en una etapa avanzada de su I enfermedad y estar en quimioterapia y/o transplante de excluyó a los pacientes que estuvieran recibiendo o que no se hubieran recuperado del efecto de las terapias con i efectos inmunodepresivos o que padecieran algún trastorno i inmunológico . La excepción a lo anterior fue el tratamiento i con hidroxiurea de pacientes con LMA, a los cuales sí se les permitió continuar en el estudio. El uso de ün tratamiento anti-cancerígeno concomitante (quimioterapia ! e nmunoterapia) estuvo prohibido y, en consecuencia, 1.5 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg. Se autorizó el incremento de i un nivel de dosis al nivel siguiente después de que todos ? los pacientes en el nivel anterior fueran evaluados al menos durante 7 días después de la administración de 0.a en cuenta como toxicidad en términos de este increment ¡o paulatino de la dosis y en las reglas de la dosis máxima tolerada. ! j Después de la administración del fármaco, se I i Resultados J Las características principales de los pacientes inscritos (n=17) se muestran en la Tabla 1. El Pacienl Ie I 003, que inicialmente recibió tratamiento con una dosis de 0.2 mg/kg, solicitó un tratamiento compasivo reiterado jy nuevamente recibió tratamiento con una dosis de 3 mg/kg. Debido al intervalo de 5 meses entre el primero y él segundo tratamiento, se analizaron los diferentes tratamientos como individuos por separado. Por lo tanto, él número de administraciones de CT-011 utilizadas para lois análisis fue igual a 18. ! Tabla 1. Características de los pacientes ¡ Abreviaturas: ALCL - Linforna linfocítico agudo; CMML - Leucemia mielomonocítica crónica; DLBCL - Linforna difuso de células grandes B; Clasificación FAB - Francia, EE.UU. y Reino Unido; MI, M2, M4 - conforme a la clasificación FAB; NR - No relevante; SCT - Transplante de células madre. ' I I No se alcanzaron niveles de toxicidad limitantes de dosis en este estudio. Se descubrió que el CT-011 is seguro y bien tolerado con toxicidades no relacionadas con el tratamiento. No se encontraron dosis máximas toleradas con una sola dosis en este estudio. | Durante el estudio, el 61% (11 de cada 18) de los pacientes reportó eventos adversos, de los cuales, el más I común fue la diarrea, pero se concluyó que no estaba relacionada con el tratami·ento con CT-011. i1 Ocurrieron cuatro eventos adversos graves, todos los cuales provocaron la muerte de los pacientes y todos ocurrieron en pacientes con LMA. Los análisis clínicos ¡ concluyeron que todos estos pacientes murieron debido a una leucemia fulminante resistente al tratamiento y ninguna de I las muertes estuvo relacionada con el fármaco del estudio.' Durante los 21 días del estudio, no se observaron cambios en el porcentaje promedio de los blastos en la en 2 pacientes con LLC, 4 pacientes con LNH y un paciente ! con mieloma múltiple. \ ! La sobrevivencia global de todos los pacientes (n=18) a los 21 días fue del 76%, con un intervalo de í confianza al 95% de 48%-90%. No se observó ninguna I diferencia en la media del tiempo de sobrevivencia entire los grupos de dosis. ' ¡ Se dio seguimiento a los pacientes para comprobar su sobrevivencia después de los 21 días, del estudio, ¿a media del tiempo de sobrevivencia en el estudio fue de 25 ¡+ 27 semanas, y varió de 1.7 a más de 77 semanas. Este estudio de seguimiento sugiere que 6 pacientes exhibierón una respuesta aparente al tratamiento con una sobrevivencia prolongada de al menos 60 semanas. Los 6 pacientes qüíe exhibieron una respuesta se muestran en la Tabla 2. Hubo una remisión completa en la paciente #015, quien recibió cuarto nivel de dosis: 3.0 mg/kg. A esta paciente se diagnosticó linfoma folicular de etapa III con nodulos debajo y arriba del diafragma. La paciente no recibió ningún tratamiento previo para su enfermedad. En una tratamiento posterior durante el periodo que transcurrió entre el tratamiento con CT-011 y el examen de revisiónj a los 10 meses. La paciente ha demostrado una remisión constante a las 68 semanas del tratamiento con CT-011. ¡Se observó una respuesta mínima en un paciente con LMA que i i i recibió CT-011 a una dosis de 0.2 y 3 mg/kg. El paciente j manifestó progreso 61 semanas después de recibir el CT-Oli. Cuatro pacientes han mostrado una enfermedad estable: uno con linfoma de Hodgkin que recibía CT-011 a 0.6 mg/kg mostró una enfermedad estable durante 35 semanas. Dos i pacientes con LLC que recibían el anticuerpo a una dosis de 0.6 mg/kg y 1.5 mg/kg se mantuvieron estables durante 36 semanas y por más de 78 semanas, respectivamente. Un paciente con mieloma múltiple que recibió CT-011 a una dosis de 6.0 mg/kg se mostró estable durante más de 60 semanas . I Tabla Respuestas clínicas durante el periodo cié seguimiento del estudio.

EnfermeSobrevivendad (núm. Dosis Observacia general paciente) (mg/kg) ciones (semanas) Comentarios LNH (015) 3.0 CR >68 Linfoma folicular de células B con grandes masas tumorales en nódulos arriba y abajo del diafragma en el mediastino .

Sin tratamiento previo Con una tomografía computarizada se observó la eliminación de masas tumorales 10 meses después del tratamiento con CT-011. i EnfermeSobrevivendad (núm. Dosis Observacia general paciente) (mg/kg) ciones (semanas) Comentarios LLC (008) 1.5 SD >78 Etapa A de Binet, afectación de médula espinal y ECOG 3.

Recibió Leukeran durante alrededor de 2 años antes del CT-011. Estable durante >17 meses LLC (005) 0.6 SD 36 Etapa C de Binet con masas tumorales grandes que no responden a quimioterapia ni radioterapia y SCT alogénico .

Estable durante 8 meses antes de comenzar el deterioro.

LH (006) 0.6 SD 35 Clasificación IV B; Enfermedad resistente; SCT autólogo y radioterapia fallidos. Estable durante 8 meses antes de comenzar el deterioro.

MM (017) 6.0 SD >60 IgG Kappa de tipo común en etapa IA y ECOG 1; no recibió tratamiento previo para su enfermedad. Estable durante >13 meses L A 0.2/3.0 MR 61 Segunda dosis: 5 meses (003/016) después de la primera dosis .

Sin transfusión de plaquetas por 9 meses. Reducción de blastos periféricos (del 50% al 5%) con la primera dosis.

CR = respuesta completa; SD = enfermedad estable; MR = respuesta mínima. i la naturaleza general de la invención que, al aplicar conocimientos actuales, otras personas podrían modificar y/o adaptar fácilmente para varias aplicaciones con los experimentos debidos, sin que por ello se alejaran del concepto genérico y, por tanto, dichas adaptaciones ¡ y modificaciones quedarían comprendidas dentro del espírituj y el rango de las modalidades revelados de la presente invención.

Cabe señalar que las estructuras o la terminología empleadas en la presente son sólo con propósitos descriptivos y nunca limitativos. Los medios, materiales y pasos para efectuar las diversas funciones reveladas podrían presentarse en múltiples formais alternativas sin que por ello se alejaran del espíritujy rango de la presente invención. |

Claims (1)

1. ? 95 ; ¡ REIVINDICACIONES | 1. Un método para tratar un tumor; el método comprende: (i) administrar en un sujeto que lo necesite una cantidad eficaz de un anticuerpo monoclonal humanizado o un I fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento ¡ de anticuerpo tiene al menos una región determinante complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-i) i y una región estructural de inmunoglobulina aceptora humana o modificada a partir de la misma; y (ii) administrar en él sujeto una cantidad eficaz de al menos un agente quimioterapéutico, dando así tratamiento para el tumor. ; 2. El método según la reivindicación 1, en donde el anticuerpo humanizado comprende: una región variable de cadena ligera seleccionada de entre el grupo que consiste en: BATRKa (SEQ ID NO: 15), BATRKb (SEQ ID NO: 16) , BATRKc (SEQ ID NO: 17), y BATRKd (SEQ ID NO: 18), y uña región variable de cadena pesada seleccionada de entre el grupo que consiste en: A (SEQ ID NO: 20) , BATRHB (SEQ ÍD NO: 21), BATRHc (SEQ ID NO: 22), BATRHD (SEQ ID NO: 23) jy BATRHE (SEQ ID NO: 24) . j 3. El método según la reivindicación 1, kn donde el anticuerpo humanizado comprende regiones variables i seleccionadas de entre el grupo que consiste en: BATRHA/BATRKa (SEQ ID NO: 20/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATRKA (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 15) , BATRHB/BATRKb (SEQ ID NO: i i i I i 21/SEQ ID NO: 16) , BATRHC/BATRKb (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 16), BATRHB/BATRKd (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 18), :y BATRHC/BATR d (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . i i 4. El método según la reivindicación 3, en donde el anticuerpo monoclonal humanizado tiene regiones variables que corresponden a BATRHC/BATRKd (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . I 5. El método según cualquiera de las reivindicaciones 1-3, en donde el fragmento del anticuerpo humanizado se selecciona de entre el grupo que consiste en Fv, F (ab1), F (ab1) 2 y un anticuerpo de cadena sencilla. 6. El método según cualquiera de las ¡ reivindicaciones 1-3, en donde el anticuerpo humanizado¦ o el fragmento del mismo conserva la actividad antitumorkl del mBAT-1. 7. El método según la reivindicación 1, en donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: antimetabolitos , agentes! a base de platino, inhibidores mitóticos, antibióticos antraciclinos , inhibidores de topoisomerasa, agentes anti-angiogénicos y combinaciones de los anteriores. ; 8. El método según la reivindicación 7, en donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: un antimetabolijto seleccionado de entre el grupo que consiste en: 5- j fluorouracilo, mostaza de uracilo, uracilo, capecitabiná, 6-mercaptopurina, metotrexato, gemcitabina, citarabina, fludarabina y pemetrexed; un agente a base de platino que se selecciona de entre el grupo que consiste eñ: cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; un inhibidor mitótico seleccionado de entre el grupo que consiste en: paclitaxel, docetaxel, etoposida, vinblastina, vincristina y vinorelbina; agente anti-angiogénico seleccionado de entre el grupo que consiste en: bevacizumab, dopaminá, tetratiomolibdato, variantes anti-angiogénicas del factor de crecimiento endotelial vascular y combinaciones de los anteriores . ! 9. El método según la reivindicación 8, én donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan de entre el grupo que consiste en 5-fluorouracilo, citarabiná, oxaliplatino, paclitaxel y combinaciones de los anteriores. i 10. El método según la reivindicación 1, n donde uno o más agentes quimioterapéuticos son distintos ¡ a los siguientes: inhibidor de topoisomerasa I y un agente alcalinizante . ! 11. El método según la reivindicación 1, én i donde la administración del anticuerpo humanizado y del agente o agentes quimioterapéuticos se lleva a cabo sustancialmente de manera simultánea, concomitante, alternada, secuencial o sucesiva. ; 12. El método según la reivindicación 1, en donde el anticuerpo humanizado y el agente o agentes quimioterapeuticos se administran de conformidad con uín programa que se traslapa. j I 13. El método según la reivindicación 1, en donde la administración del anticuerpo humanizado se lleva a cabo antes de la administración inicial del agente j o agentes quimioterapéuticos . 14. El método según la reivindicación 1, n donde la administración de alguno o de ambos anticuerpos ! humanizados y del agente o agentes quimioterapéuticos se I lleva a cabo por medio de una vía seleccionada de entre el i grupo que consiste en vía intravenosa, oral, intraperitoneal , subcutánea, perfusión aislada en extremidades e infusión en un órgano o combinaciones de las ¡ anteriores . i I 15. El método según la reivindicación 1, qjie además comprenden dar tratamiento al sujeto con radiación .| 16. El método según la reivindicación 1, que además comprende evaluar al menos uno de los siguientes parámetros: velocidad de crecimiento tumoral, volumen del tumor, número de metástasis, reaparición del tumor jy combinaciones de los anteriores . ¡ I 17. El método según la reivindicación 1, en donde el tumor puede ser alguno de los siguientes: grupo que consiste en: A (SEQ ID NO: 20) , BATRHB (SEQ ID NO: 21), BATRHc (SEQ ID NO: 22), BATRHD (SEQ ID NO: 23) 1 101 donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: antimetabolitos , agentes base de platino, inhibidores mitóticos, antibióticos antraciclinos , inhibidores de topoisomerasa, agentes anti-angiogénicos y combinaciones de los anteriores. 25. El método según la reivindicación 24, en donde uno o mas agentes terapéuticos se seleccionan de entre el grupo que consiste en: un antimetabolilo seleccionado de entre el grupo que consiste en: 5 ¡-fluorouracilo, mostaza de uracilo, uracilo, capecitabina, 6-mercaptopurina, metotrexato, gemcitabina, citarabina, fludarabina y pemetrexed; un agente a base de platino quíe se selecciona de entre el grupo que consiste en: i cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; un inhibidor mitótico seleccionado de entre el grupo que consiste en: i paclitaxel, docetaxel, etoposida, vinblastina, vincristina y vinorelbina; un agente anti-angiogenico seleccionado de entre el grupo que consiste en: bevacizumab, dopamina jy tetratiomolibdato, variantes anti-angiogénicas del factor de crecimiento endotelial vascular y combinaciones de los I anteriores . | 26. El método según la reivindicación 25, en donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan cié entre el grupo que consiste en 5- fluorouracilo, citarabiná, oxaliplatino, paclitaxel y combinaciones de los anteriores. i I / 102 ¡ i 27. El método según la reivindicación 18, en donde uno o más agentes quimioterapéuticos son distintos; a los siguientes: inhibidor de topoisomerasa I y un alcalinizante . 1 28. El método según la reivindicación 18, én donde la administración del anticuerpo humanizado y del agente o agentes quimioterapéuticos se lleva a cabo sustancialmente de manera simultánea, concomitante, j alternada, secuencial o sucesiva. I 29. El método según la reivindicación 18, én donde la administración del anticuerpo humanizado se lleva a cabo antes de la administración inicial del agente o agentes quimioterapéuticos . 30. El método según la reivindicación 18, én donde la administración de alguno o de ambos anticuerpos humanizados y del agente o agentes quimioterapéuticos se lleva a cabo por medio de una vía seleccionada de entre el grupo que consiste en vía intravenosa, oral, intraperitoneal , subcutánea, perfusión aislada en extremidades e infusión en un órgano o combinaciones de las anteriores. : ¡ 31. El método según la reivindicación 18, en donde la quimioterapia se utiliza para dar tratamiento a jun tumor que puede ser alguno de los siguientes: carcinoma colorrectal, carcinoma pulmonar, carcinoma mamari'o, melanoma, carcinoma ovárico, carcinoma cérvicouterinó, ! cáncer pancreático, mieloma múltiple, carcinoma de células I renales, linfoma no Hodgkiniano, linfoma de Hodgkiri, I leucemia mielocítica aguda (LMA) , leucemia mielocítiéa ! crónica (LMC) , leucemia linfocítica aguda (LLA) y leucemia linfocitica crónica (CLL) . ¡ 32. Un método para mejorar la sobrevivencia de un sujeto que padece un tumor, en donde el sujeto recibe tratamiento al menos con un agente quimioterapéutico; el método comprende administrar una cantidad eficaz de n anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento de anticuerpo tiene al menos una región determinante complementaria de ?? anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural de inmunoglobulina aceptora humana o modificada a partir de la misma, con lo cual mejora la sobrevivencia del sujeto. 33. El método según la reivindicación 32, n donde el anticuerpo humanizado comprende: una región variable de cadena ligera seleccionada de entre el grupo que consiste en: BATRKa (SEQ ID NO: 15), BATRKb (SEQ ID NO: 16), BATRKc (SEQ ID NO: 17), y BATRKd (SEQ ID NO: 18), y u†ia región variable de cadena pesada seleccionada de entre el grupo que consiste en: A (SEQ ID NO: 20) , BATRHB (SEQ ID NO: 21), BATRHC (SEQ ID NO: 22), BATRHD (SEQ ID NO: 23) j y BATRHE (SEQ ID NO: 24) . 34. El método según la reivindicación 32, én donde el anticuerpo humanizado comprende regiones variables seleccionadas de entre el grupo que consiste en: BATRHA/BATRKa (SEQ ID NO: 20/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATR A i (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATRKb (SEQ ID NO: i 21/SEQ ID NO: 16) , BATRHC/BATRKb (SEQ ID NO: 22/SEQ ID ?T : 16), BATRHB/BATRKD (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 18), ¡y BATRHC/BATRKd (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO : 18) . ! 35. El método según la reivindicación 32, én donde el anticuerpo monoclonal humanizado tiene regiones base de platino, inhibidores mitóticos, antibióticos i antraciclinos , inhibidores de topoisomerasa, agentes anti-angiogénicos y combinaciones de los anteriores. 39. El método según la reivindicación 38, én ¡ donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan <ke entre el grupo que consiste en: un antimetabolito seleccionado de entre el grupo que consiste en: !»-fluorouracilo, mostaza de uracilo, uracilo, capecitabina, 6-mercaptopurina, metotrexato, gemcitabina, citarabina, fludarabina y pemetrexed; un agente a base de platino que i se selecciona de entre el grupo que consiste en: cisplatino, carboplatino y oxaliplatino; un inhibidor I mitótico seleccionado de entre el grupo que consiste en: paclitaxel, docetaxel, etoposida, vinblastina, vincristina y vinorelbina; un agente anti-angiogénico seleccionado de entre el grupo que consiste en: bevacizumab, dopamina., tetratiomolibdato, variantes anti-angiogénicas del factór de crecimiento endotelial vascular y combinaciones de los anteriores . J 40. El método según la reivindicación 39, en ¡ donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan cié entre el grupo que consiste en 5- fluorouracilo, citarabina, oxaliplatino, paclitaxel y combinaciones de los anteriores. 41. El método según la reivindicación 32, en donde uno o más agentes quimioterapéuticos son distintos j a i 48. El método según la reivindicación 47, jsn donde el anticuerpo humanizado comprende: una región variable de cadena ligera seleccionada de entre el grupo I que consiste en: BATR A (SEQ ID NO: 15), BATRKB (SEQ ID N : i 16), BATRKc (SEQ ID NO: 17), y BATRKd (SEQ ID NO: 18), y una región variable de cadena pesada seleccionada de entre él grupo que consiste en: A (SEQ ID NO: 20) , BATRHB (SEQ ID NO: 21), BATRHc (SEQ ID NO: 22), BATRHD (SEQ ID NO: 23) y BATRHE (SEQ ID NO: 24) . I 49. El método según la reivindicación 47, jen donde el anticuerpo humanizado comprende regiones variabljes i seleccionadas de entre el grupo que consiste ejn: BATRHA/BATRKa (SEQ ID NO: 20/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATRKA (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 15), BATRHB/BATRKb (SEQ ID NO: 108 i 21/SEQ ID NO: 16) , BATRHC/BATRKb (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NQ : 16), BATRHB/BATRKd (SEQ ID NO: 21/SEQ ID NO: 18), ¡y ! BATRHc/BATRKD (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . , 50. El método según la reivindicación 49, en donde el anticuerpo monoclonal humanizado tiene regiones variables que corresponden a BATRHC/BATRKd (SEQ ID NO: 22/SEQ ID NO: 18) . 51. El método según cualquiera de las reivindicaciones 47-49, en donde el fragmento del anticuerpo humanizado se selecciona de entre el grupo qiie consiste en Fv, F (ab1), F (ab1) 2 y un anticuerpo de cadena sencilla. 52. El método según cualquiera de las reivindicaciones 47-49, en donde el anticuerpo humanizado o I el fragmento del mismo conserva la actividad antitumoral del mBAT-1. : 53. El método según la reivindicación 47, ¡en donde el método también comprende administrar en el sujeto al menos un agente quimioterapéutico . ! I 54. El método según la reivindicación 53, ¡en donde uno o más agentes terapéuticos se seleccionan ¡de entre el grupo que consiste en: antimetabolitos , agentes, a base de platino, inhibidores mitóticos, antibióticos antraciclinos , inhibidores de topoisomerasa, agentes antji- i angiogénicos y combinaciones de los anteriores. ! 110 donde la administración del anticuerpo humanizado y d†l agente o agentes quimioterapéuticos se lleva a cabo sustancialmente de manera simultánea, concomitante, alternada, secuencial o sucesiva. 59. El método según la reivindicación 53, en donde el anticuerpo humanizado y el agente o agentes quimioterapéuticos se administran de conformidad con ikn programa que se traslapa. 60. El método según la reivindicación 53, en donde la administración del anticuerpo humanizado se lleva I a cabo antes de la administración inicial del agente i o agentes quimioterapéuticos. 1 i 61. El método según la reivindicación 53, que 63. El uso de (i) un anticuerpo monoclorial humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo i o el fragmento del mismo tiene al menos una región determinante complementaria CDR de anticuerpo monoclonál i I BAT murino (mBAT-1) y una región estructural FR proveniente i de inmunoglobulina aceptora humana, o modificada a partir de la misma; y (ii) al menos un agente quimioterapéutico, ! todo lo anterior con el objetivo de preparar un medicamento para el tratamiento de un tumor. ¡ 64. Un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmento del mismo tiene al menos una región determinante i complementaria CDR de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural FR proveniente cié ? inmunoglobulina aceptora humana, o modificada a partir de la misma para el tratamiento de un tumor en un sujeto qúe i agente (s) quimioterapéutico (s) . 66. Un anticuerpo monoclonal humanizado o †n fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o el fragmenio del mismo tiene al menos una región determinante ! complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-í) I y una región estructural FR proveniente de inmunoglobuliria aceptora humana o modificada a partir de la misma, con él objetivo de mejorar la tolerancia al agente o agentes quimioterapéuticos en un sujeto que se encuentra <sn quimioterapia con dicho(s) agente(s) quimioterapéutico ( s ) j i 67. Uso de un anticuerpo monoclonal humanizado! o inmunoglobulina aceptora humana o modificada a partir de la misma, para mejorar la sobrevivencia de un sujeto que tiene un tumor, en donde el sujeto se encuentra en tratamiento al menos con un agente quimioterapéutico . 69. Uso de un anticuerpo monoclonal humanizado o un fragmento del mismo, en donde el anticuerpo o al fragmento del mismo tiene al menos una región determinante complementaria CDR de anticuerpo monoclonal BAT murino I complementaria de anticuerpo monoclonal BAT murino (mBAT-1) y una región estructural (FR) proveniente de inmunoglobulina aceptora humana o modificada a partir de lia misma, para reducir o prevenir la reaparición de un tumor