CN109563141A - 对非细胞结构的治疗性靶向 - Google Patents

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L·胡格
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Universiteit Gent
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Abstract

本发明部分地涉及结合非细胞结构的嵌合蛋白质及其作为治疗剂的用途。本发明还涉及包含所述嵌合蛋白质的药物组合物及其在治疗多种疾病方面的用途。

Description

对非细胞结构的治疗性靶向
相关申请的交叉引用
本申请要求2016年5月13日提交的美国临时专利申请号62/335,990的权益，所述美国临时专利申请的全部内容以引用的方式并入本文中。
技术领域
本发明部分地涉及包含结合至非细胞结构的靶向部分的嵌合蛋白质及其作为治疗剂的用途。
以电子方式提交的文本文件的描述
与本文一起以电子方式提交的文本文件的内容以引用的方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式拷贝(文件名：ORN-015PC_Sequence_Listing；记录日期：2017年5月10日；文件大小：247KB)。
背景技术
非细胞分子可能由细胞分泌并且给周围的细胞提供结构和生物化学支撑，越来越被视为人类疾病的决定性组成部分。
举例来说，肿瘤微环境是可能存在肿瘤细胞的环境或生态位。肿瘤微环境包括例如周围的血管、信号传导分子和细胞外基质(ECM)或者抗原或受体或与其相关联的非蛋白质标记物。肿瘤细胞不断地与这个微环境的各种组分相互作用。举例来说，肿瘤细胞可以向微环境中释放细胞外信号以促进血管生成和周围免疫耐受性。
细胞外基质(ECM)已经成为肿瘤微环境的重要组分。ECM是所有组织和器官内都存在的非细胞组分。虽然ECM在胚胎发育和器官体内平衡期间受到严密控制，但在如癌症等疾病中受到异常调控和结构破坏。异常的ECM通过直接促进细胞转化和转移而影响癌症进展。另外，ECM异常还异常调控基质细胞的性质，促进肿瘤相关的血管生成和炎症，并且因此生成肿瘤生成微环境。
因此，仍然需要不仅可以有效地靶向细胞而且可以有效地靶向非细胞组分的新颖治疗剂。
发明内容
在各个方面，本发明涉及具有至少一个靶向部分的嵌合蛋白质，所述靶向部分特异性地结合至作为非细胞结构的一部分的靶标(例如，抗原或受体或非蛋白质分子)。在一些实施方案中，所述靶标不是完整细胞或细胞结构的组分。在一些实施方案中，所述靶标是细胞外抗原或受体。在说明性实施方案中，所述目标靶标是选自细胞外基质(ECM)抗原或受体或者与其相关联的蛋白质或非蛋白质标记物的非细胞结构的一部分。举例来说，所述靶向部分可以特异性地结合至选自肌腱蛋白、纤连蛋白、胶原蛋白、纤维蛋白、层粘连蛋白(laminin)和巢蛋白(nidogen)/内联蛋白(entactin)的靶标。在一个示例性实施方案中，所述靶向部分特异性地结合至肌腱蛋白。
在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质还包含信号传导剂。在各个实施方案中，所述信号传导剂包含一个或多个修饰(例如突变)，所述修饰提供与未修饰的(例如野生型)信号传导剂相比有所改善的安全性。说明性信号传导剂包括但不限于干扰素(IFN)、白介素(IL)和肿瘤坏死因子(TNF)。在一个具体实施方案中，所述信号传导剂是修饰的人IFNα2。在另一个具体实施方案中，所述信号传导剂是修饰的人TNF。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合至其它目标靶标的额外的靶向部分(例如但不限于双特异性构建体)。在一个实施方案中，所述其它靶向部分结合至细胞抗原或结构。在一个实施方案中，所述其它靶向部分结合至非细胞抗原或结构。在各个实施方案中，所述靶向部分和所述修饰的(例如突变)信号传导剂任选地通过一个或多个接头连接。
在一个说明性实施方案中，本发明的嵌合蛋白质是修饰的人IFNα2与靶向肌腱蛋白C1的只有重链的重组抗体(VHH，又名“NANOBODY”)或只有重链的鲨鱼抗体(VNAR)的融合物。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质得以用于治疗多种疾病或病症。在一些实施方案中，此类疾病或病症包括癌症、感染、免疫病症如炎症性病症，以及其它疾病和病症。在各个实施方案中，本发明涵盖多种治疗方法、供使用的组合物和/或制造供用于各种治疗的药物的方法。
在各个实施方案中，本发明涉及本文所描述的嵌合蛋白质作为药物的用途。在各个实施方案中，本发明涉及本发明的嵌合蛋白质用于治疗如本文所描述的癌症、感染、免疫病症、炎症性疾病或疾患和自身免疫疾病中的一种或多种的用途。另外，在各个实施方案中，本发明的剂中的任一种都能用于治疗多种疾病和疾患或制造用于治疗多种疾病和疾患的药物，所述疾病和疾患包括但不限于癌症、感染、免疫病症、炎症性疾病或疾患和自身免疫疾病。
附图说明
图1示出了嵌合mTNCA1-VHH在B16黑素瘤模型中的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞以诱导肿瘤，随后从第8天至第17天每天通过病变周围注射加以处理。具体来说，用野生型人或小鼠IFN或者包含与抗人hCD20VHH或抗小鼠mTNCA1VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质(各每次注射5,500IU)对小鼠进行处理(在括号中指出每组的小鼠数)。Acta或AcTaferon是指突变Q124R干扰素。分图A示出了从第8天至第16天经过处理的小鼠体内的肿瘤生长。分图B示出了从第8天至第17天经过处理的小鼠体内的肿瘤生长。分图C示出了相对体重。分图D示出了经过处理的小鼠的全血细胞计数。直方图从左到右表示：天然小鼠、用PBS处理的小鼠、用mIFN处理的小鼠、用hIFN处理的小鼠、用Acta-hCD20处理的小鼠和用Acta-TNCA1处理的小鼠。
图2示出了与肿瘤坏死因子(TNF)或多柔比星(dox)组合的嵌合mTNCA1-VHH的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞以诱导肿瘤，随后从第8天至第16天每天通过病变周围注射加以处理。具体来说，用单独的TNF(0.6ug)、单独的多柔比星(60ug)、单独或者与TNF(0.6ug)或多柔比星(60ug)组合的小鼠IFN(5,500IU)、单独或者与TNF(0.6ug)或多柔比星(60ug)组合的包含与抗小鼠mTNCA1VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质(Acta-TNC)(5500IU)对小鼠(在括号中指出每组的小鼠数)进行处理。分图A和分图B示出了肿瘤生长。分图C示出了相对体重。分图D示出了描绘存活率的Kaplan-Meyer曲线。
图3示出了全身施用的嵌合mTNCA1-VHH的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞以诱导肿瘤，随后从第8天至第11天每天通过静脉内注射加以处理(5,500IU各蛋白质构建体)。具体来说，用包含与抗人hCD20VHH或抗小鼠mTNCA1VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质对小鼠进行处理(在括号中指出每组的小鼠数)。分图A示出了肿瘤生长。分图B示出了经过处理的小鼠的全血细胞计数。直方图从左至右为：天然小鼠、PBS、包含与抗小鼠TNCA1VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质(AcTaferon-TNCA1)、包含与抗人CD20VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质(AcTaferon-hCD20)。
图4示出了嵌合mTNCA1-VHH在B16黑素瘤模型中的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠(每一组N＝5)在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞以诱导肿瘤，随后从第11天至第18天每天通过病变周围注射(50μg/注射)加以处理。具体来说，用非靶向性单链(sc)突变mTNF(Y86F)、包含与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(Y86F)的嵌合蛋白质或包含与抗mCD20VHH融合的sc mTNF(Y86F)的嵌合蛋白质对小鼠进行处理。分图A示出了肿瘤生长。分图B示出了体重变化。TSI：肿瘤大小指数，即肿瘤的两个最大垂直径的乘积。分图B示出了相对体重。数据表示为平均值±SEM，n＝5。
图5示出了嵌合抗mTNCA1VHH在B16黑素瘤模型中的体内抗肿瘤作用。通过在左腹侧经皮下注射6×105个B16-mCD20细胞来接种肿瘤(每一组N＝5)。当平均肿瘤大小指数(TSI)≥0.4cm2时开始治疗。具体来说，用包含与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(Y86F)、与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(L74G)或与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(D142A)的嵌合蛋白质对小鼠进行处理。作为对照，还用包含与抗Bcll10VHH融合的突变sc mTNF的嵌合蛋白质对小鼠进行处理(Bcll10是与研究无关的靶标)。每天用所指示的剂量通过病变周围注射对小鼠进行处理，连续6天(Bcll10NB-L74G)或连续8天(所有其它组)。分图A示出了肿瘤生长。TSI：肿瘤大小指数，即肿瘤的两个最大垂直径的乘积。分图B示出了相对体重。数据表示为平均值±SEM，n＝5。在所有分图中，符号是PBS。
图6示出了与嵌合CD8VHH组合的嵌合抗mTNCA1VHH的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠(每一组N＝5)在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞，并且从第11天至第18天每天通过病变周围注射加以处理。具体来说，用单独的非靶向性野生型sc mTNF(5ug)或突变sc mTNF(Y86F)(50ug)或者非靶向性野生型sc mTNF(5ug)或突变sc mTNF(Y86F)(50ug)与包含跟CD8VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质CD8-AcTaferon(30ug)组合的组合对小鼠进行处理。用单独或与CD8-AcTaferon(30ug)组合的包含与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(Y86F)的嵌合蛋白质(50ug)对其它小鼠进行处理。分图A示出了肿瘤生长。TSI：肿瘤大小指数，即肿瘤的两个最大垂直径的乘积(在分图A的所有图中，PBS是最上面的曲线)。分图B示出了相对体重。数据表示为平均值±SEM，n＝5。
图7示出了与嵌合CD8VHH组合的嵌合抗mTNCA1VHH的体内抗肿瘤作用。在第0天，将小鼠(每一组N＝5)在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞，并且从第11天至第18天每天通过病变周围注射加以处理。具体来说，用单独或与CD8-AcTaferon(30ug)组合的包含与抗mTNCA1VHH融合的突变sc mTNF(Y86F)的嵌合蛋白质(80ug)对小鼠进行处理。作为对照，还用单独或与CD8-AcTaferon(30ug)组合的包含与抗Bcll10VHH融合的突变sc mTNF(Y86F)的嵌合蛋白质(80ug)对小鼠进行处理。分图A示出了肿瘤生长。TSI：肿瘤大小指数，即肿瘤的两个最大垂直径的乘积。分图B示出了相对体重。数据表示为平均值±SEM，n＝5。
具体实施方式
本发明部分地基于惊喜地发现包含修饰的信号传导剂和识别并结合至作为非细胞结构的一部分的靶标(例如，抗原或受体或非蛋白质分子)的靶向部分的嵌合蛋白质提供有益的治疗效果。不希望受理论束缚，相信嵌合蛋白质向需要治疗作用的位点，如肿瘤或肿瘤微环境递送重要信号(例如经由所述修饰的信号传导剂)。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质还可以将效应细胞征募至需要治疗的位点。在各个实施方案中，本发明提供包含所述嵌合蛋白质的药物组合物及其在治疗多种疾病中的用途。施用本发明的嵌合蛋白质和药物组合物实现了有效的治疗效果与最低限度的副作用。
嵌合蛋白质
在各个实施方案中，本发明涉及一种嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质具有存在结合至非细胞结构上的靶标(例如，抗原、受体)的识别结构域的靶向部分和修饰的信号传导剂，所述修饰的信号传导剂携带一个或多个突变，所述突变致使所述信号传导剂适合用于药物用途，仅存在最低限度的副作用(尤其例如最低限度的细胞因子风暴样效应、流感样症状、自杀想法、脱靶副作用)。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质当用在药学上时提供至少两个治疗益处。举例来说，本发明的嵌合蛋白质可以有效地向适当的细胞递送重要信号和/或将适当的细胞征募至需要治疗的位点。因此，如本文所描述，本发明的嵌合蛋白质为有效治疗诸多疾病，包括但不限于治疗癌症提供了治疗相关选择的平台。
另外，在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有使其特别适合用于诸多疗法的药效学和药代动力学性质。举例来说，在各个实施方案，包括使用较小的基于抗体的形式进行靶向(如本文其它部分所描述)的实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有允许避免肾排泄从而允许在低剂量下实现治疗效果(例如，治疗剂通过肾时没有损失)的分子量。举例来说，在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质经工程化而具有约50KDa、或约60KDa、或约70KDa、或约80KDa、或约90KDa、或约100KDa、或大于约50KDa、或大于约60KDa、或大于约70KDa、或大于约80KDa、或大于约90KDa或大于约100KDa的分子质量。
在各个实施方案中，每一种个别嵌合蛋白质可以通过与另一种剂缀合和/或融合来延长半衰期或以其它方式改善药效学和药代动力学性质。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质可以与PEG、XTEN(例如呈rPEG形式)、聚唾液酸(POLYXEN)、白蛋白(例如，人血清白蛋白或HAS)、弹性蛋白样蛋白(ELP)、PAS、HAP、GLK、CTP、转铁蛋白等等中的一种或多种融合或缀合。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质可以与抗体或抗体片段如Fc片段融合或缀合。举例来说，所述嵌合蛋白质可以融合至人免疫球蛋白(Ig)G的Fc结构域的N末端或C末端。在各个实施方案中，每一种个别嵌合蛋白质与BioDrugs(2015)29:215-239中描述的剂中的一种或多种融合，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
如本文所描述，本发明的嵌合蛋白质可能由于一个或多个修饰，例如突变而具有提高的安全性。在各个实施方案中，提高的安全性意指本发明的嵌合蛋白质提供了较低的毒性(例如全身毒性和/或组织/器官相关的毒性)；和/或减轻或基本上消除的副作用；和/或增加的耐受性、减轻或基本上消除的不良事件；和/或减少或基本上消除的脱靶效应；和/或增加的治疗窗。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质通过降低蛋白质的全身毒性和维持或增加蛋白质对靶细胞或组织的选择效果而增加任何蛋白质治疗剂(例如基于天然存在或工程化的蛋白质或其片段)的治疗指数(例如约2倍、约5倍、约10倍、约25倍、约50倍、约100倍、约200倍或更多倍)。举例来说，治疗指数的这种增加(例如约2倍、约5倍、约10倍、约25倍、约50倍、约100倍、约200倍或更多倍)可能属于修饰的信号传导剂(例如相对于野生型信号传导剂，或在具有靶向部分的融合蛋白质的情况下相对于野生型信号传导剂，或在具有超过一个靶向部分的融合蛋白质的情况下相对于野生型信号传导剂)。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质允许所述靶向部分和所述信号传导剂与其靶标(例如，抗原或受体)有效结合。举例来说，在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质允许所述靶向部分与非细胞结构上的靶标(例如，抗原或受体)以及所述信号传导剂与相同非细胞结构上的靶标(例如，抗原或受体)的有效结合。在另一个实施方案中，所述嵌合蛋白质允许所述靶向部分与非细胞结构上的靶标以及所述信号传导剂与相邻细胞上的靶标的有效结合。如本文其它部分所描述，在各个实施方案中，使所述信号传导剂突变以提供减弱的活性，并且所述靶向部分和所述信号传导剂与其相应靶标的结合按顺序进行，例如，靶向部分/靶标结合在信号传导剂/靶标结合之前。举例来说，在一些实施方案中，所述信号传导剂本身在其突变形式下具有显著较低的活性(例如相对于野生型)，这是因为它不能有效地结合至它的受体。因此，本发明的嵌合蛋白质可用于避免由信号传导剂结合至其在非靶细胞上的天然靶标引起的不需要的副作用。然而，所述信号传导剂对其靶标具有活性，因为所述靶向部分弥补了实质性激活所需的结合(例如但不限于和/或亲合力)的缺失/不足。在各个实施方案中，在所述靶向部分结合至非细胞结构后，所述信号传导剂被征募在其靶标(例如，与所述非细胞结构相邻的细胞)附近并且与其靶标接触。在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有修饰的(例如突变)信号传导剂，这使得所述信号传导剂在通过身体去往治疗活性位点(例如与靶细胞，包括肿瘤细胞接触)的途径中无活性，并且其作用基本上针对特定靶位点，从而大大减少了不希望的副作用。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质对在所靶向的非细胞结构附近的细胞具有选择性生物活性，例如治疗相关的生物活性，但是对不在所靶向的非细胞结构附近的细胞则没有。因此，在各个实施方案中，本发明的剂靶向锚定所述信号传导结构域的非细胞结构，这样它可以调节附近的细胞。在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质提供协同的活性和/或治疗效果。在此类实施方案中，所述嵌合蛋白质的活性和/或治疗效果具有改善的治疗效果，例如与单独或经由共同施用而组合施用的个别组分(即，所述靶向部分和所述信号传导剂)的治疗效果相比，协同更佳。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质呈具有本文描述的组分的融合蛋白质的形式。
靶向部分
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有存在特异性地结合至目标靶标(例如抗原、受体)的识别结构域的靶向部分。在各个实施方案中，所述目标靶标(例如抗原、受体)是非细胞结构的一部分。在一些实施方案中，所述抗原或受体不是完整细胞或细胞结构的组成组分。在一些实施方案中，所述抗原或受体是细胞外抗原或受体。在一些实施方案中，所述靶标是非蛋白质非细胞标记物，包括但不限于核酸，包括DNA或RNA，举例来说，如从坏死的肿瘤细胞释放的DNA，或细胞外沉积物，如胆固醇。
在一些实施方案中，目标靶标(例如抗原、受体)是基质或细胞外基质(ECM)的非细胞组分的一部分或与其相关的标记物。如本文所使用，基质是指组织或器官的连接和支撑构架。基质可以包括细胞如成纤维细胞/成肌纤维细胞、神经胶质细胞、上皮细胞、脂肪细胞、免疫细胞、血管细胞、平滑肌细胞和免疫细胞以及细胞外基质(ECM)和细胞外分子的汇集。在各个实施方案中，目标靶标(例如抗原、受体)是基质如细胞外基质和细胞外分子的非细胞组分的一部分。如本文所使用，ECM是指所有组织和器官内存在的非细胞组分。ECM是由生物化学上独特的组分，包括但不限于蛋白质、糖蛋白、蛋白聚糖和多糖的大集合构成。ECM的这些组分通常由相邻的细胞产生并且经由胞吐作用分泌至ECM中。一旦被分泌，ECM组分便往往聚集而形成复杂的巨分子网状结构。在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含识别位于ECM的任何组分上的靶标(例如抗原或受体或非蛋白质分子)的靶向部分。ECM的说明性组分包括但不限于蛋白聚糖、非蛋白聚糖多糖、纤维和其它ECM蛋白质或ECM非蛋白质，例如多糖和/或脂质，或ECM相关分子(例如蛋白质或非蛋白质，例如多糖、核酸和/或脂质)。
在一些实施方案中，所述靶向部分识别ECM蛋白聚糖上的靶标(例如抗原、受体)。蛋白聚糖是糖基化的蛋白质。碱性蛋白聚糖单元包括具有一个或多个共价连接的糖胺聚糖(GAG)链的核心蛋白质。蛋白聚糖具有净负电荷，由此吸引带正电的钠离子(Na+)，后者经由渗透作用吸引水分子，从而保持ECM和驻留细胞含水。蛋白聚糖还可能有助于将生长因子捕获和存储在ECM内。本发明的嵌合蛋白质可以靶向的说明性蛋白聚糖包括但不限于硫酸乙酰肝素、硫酸软骨素和硫酸角质素。在一个实施方案中，所述靶向部分识别非蛋白聚糖多糖如透明质酸上的靶标(例如抗原、受体)。
在一些实施方案中，所述靶向部分识别ECM纤维上的靶标(例如抗原、受体)。ECM纤维包括胶原蛋白纤维和弹性蛋白纤维。在一些实施方案中，所述靶向部分识别胶原蛋白或胶原蛋白纤维上的一个或多个表位。胶原蛋白是ECM中最丰富的蛋白质。胶原蛋白呈纤维状蛋白形式存在于ECM中并且提供结构支撑以驻留细胞。在一个或多个实施方案中，所述靶向部分识别并且结合至ECM内存在的各种类型的胶原蛋白，包括但不限于纤维状胶原蛋白(I型、II型、III型、V型、XI型)、间杂有三螺旋的原纤维相关的胶原蛋白(IX型、XII型、XIV型)、短链胶原蛋白(VIII型、X型)、基底膜胶原蛋白(IV型)和/或VI型、VII型或XIII型胶原蛋白。弹性蛋白纤维给组织提供弹性，允许它们在需要时拉伸然后恢复到它们的原始状态。在一些实施方案中，所述靶向部分识别弹性蛋白或弹性蛋白纤维上的一个或多个表位。
在一些实施方案中，所述靶向部分识别一种或多种ECM蛋白，包括但不限于肌腱蛋白、纤连蛋白、纤维蛋白、层粘连蛋白(laminin)或巢蛋白(nidogen)/内联蛋白(entactin)。
在一个实施方案中，所述靶向部分识别并结合至肌腱蛋白。肌腱蛋白(TN)家族的糖蛋白包括至少四个成员，即肌腱蛋白-C、肌腱蛋白-R、肌腱蛋白-X和肌腱蛋白W。肌腱蛋白的一级结构包括若干个普通基序，所述基序按顺序处于同一连续序列中：氨基末端七价重复序列、表皮生长因子(EGF)样重复序列、III型纤连蛋白结构域重复序列和羧基末端纤维蛋白原样球形结构域。每一个蛋白质成员与EGF样重复序列和III型纤连蛋白重复序列的数目和特性的典型变异相关。还存在同种型变体，特别是就肌腱蛋白-C而言。已知肌腱蛋白C的超过27种剪接变体和/或同种型。在一个具体实施方案中，所述靶向部分识别并结合至肌腱蛋白-CA1。类似地，肌腱蛋白-R也有多种剪接变体和同种型。肌腱蛋白-R通常呈二聚体或三聚体形式存在。肌腱蛋白-X是肌腱蛋白家族中最大的成员，并且已知呈三聚体形式存在。肌腱蛋白-W呈三聚体形式存在。在一些实施方案中，所述靶向部分识别肌腱蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，所述靶向部分识别肌腱蛋白的单体和/或二聚体和/或三聚体和/或六聚体形式。
在一个实施方案中，所述靶向部分识别并结合至纤连蛋白。纤连蛋白是连接细胞与ECM中的胶原蛋白纤维，从而允许细胞通过ECM的糖蛋白。在结合至整合素后，纤连蛋白展开从而形成功能二聚体。在一些实施方案中，所述靶向部分识别纤连蛋白的单体和/或二聚体形式。在一些实施方案中，所述靶向部分识别纤连蛋白上的一个或多个表位。在说明性实施方案中，所述靶向部分识别纤连蛋白细胞外域A(EDA)或纤连蛋白细胞外域B(EDB)。EDA水准升高与各种疾病和病症相关，包括牛皮癣、类风湿性关节炎、糖尿病和癌症。在一些实施方案中，所述靶向部分识别含有EDA同种型的纤连蛋白，并且可以用于使所述嵌合蛋白质靶向病变细胞，包括癌细胞。在一些实施方案中，所述靶向部分识别含有EDB同种型的纤连蛋白。在各个实施方案中，此类靶向部分可以用于使所述嵌合蛋白质靶向肿瘤细胞，包括肿瘤新生血管。
在一个实施方案中，所述靶向部分识别并结合至纤维蛋白。纤维蛋白是ECM的基质网状结构中经常发现的另一种蛋白质种类。纤维蛋白是由引起纤维蛋白聚合的蛋白酶凝血酶对纤维蛋白原的作用而形成。在一些实施方案中，所述靶向部分识别纤维蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，所述靶向部分识别纤维蛋白的单体形式以及聚合形式。
在一个实施方案中，所述靶向部分识别并结合至层粘连蛋白。层粘连蛋白是基底层的主要组分，所述基底层是细胞和器官的蛋白质网状结构基础。层粘连蛋白是含有α链、β链和γ链的异源三聚蛋白。在一些实施方案中，所述靶向部分识别层粘连蛋白上的一个或多个表位。在一些实施方案中，所述靶向部分识别层粘连蛋白的单体形式、二聚体形式以及三聚体形式。
在一个实施方案中，所述靶向部分识别并结合至巢蛋白或内联蛋白。巢蛋白/内联蛋白是高度保守的硫酸化糖蛋白家族。它们组成了基底膜的主要结构组分，并且发挥连接基底膜中的层粘连蛋白与胶原蛋白IV网状结构的功能。这个家族的成员包括巢蛋白-1和巢蛋白-2。在各个实施方案中，所述靶向部分识别巢蛋白-1和/或巢蛋白-2上的表位。
在各个实施方案中，所述靶向部分包含识别本文描述的靶标(例如ECM蛋白)中的任一个上存在的表位的抗原识别结构域。在一个实施方案中，所述抗原识别结构域识别所述蛋白质上存在的一个或多个线性表位。如本文所使用，线性表位是指所述蛋白质上存在的任何连续氨基酸序列。在另一个实施方案中，所述抗原识别结构域识别所述蛋白质上存在的一个或多个构象表位。如本文所使用，构象表位是指形成具有能够被抗原识别结构域识别的特征和/或形状和/或三级结构的三维表面的一个或多个氨基酸区段(可能不连续)。
在各个实施方案中，所述靶向部分可以结合至本文描述的靶标(例如ECM蛋白)中的任一个的全长和/或成熟形式和/或同种型和/或剪接变体和/或片段和/或任何其它天然存在或合成的类似物、变体或突变体。在各个实施方案中，所述靶向部分可以结合至本文描述的蛋白质的任何形式，包括单体形式、二聚体形式、三聚体形式、四聚体形式、异源二聚体形式、多聚体形式和相关形式。在各个实施方案中，所述靶向部分可以结合至本文描述的蛋白质的任何翻译修饰后形式，如糖基化和/或磷酸化形式。
在各个实施方案中，所述靶向部分包含识别细胞外分子如DNA的抗原识别结构域。在一些实施方案中，所述靶向部分包含识别DNA的抗原识别结构域。在一个实施方案中，所述DNA从坏死或凋亡的肿瘤细胞或其它病变细胞脱落至细胞间隙中。
在各个实施方案中，所述靶向部分包含识别与动脉粥样硬化斑块相关的一个或多个非细胞结构的抗原识别结构域。已知两种类型的动脉粥样硬化斑块。纤维脂质(纤维脂肪)斑块的特征是载满脂质的细胞积聚在动脉内膜下面。内皮下面有覆盖所述斑块的动脉粥样化核心的纤维帽。所述核心包括具有升高的组织胆固醇和胆固醇酯含量的载满脂质的细胞(巨噬细胞和平滑肌细胞)、纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原蛋白、弹性蛋白和细胞碎屑。在晚期斑块中，所述斑块的中心核心通常含有细胞外胆固醇沉积物(从死细胞释放)，从而形成具有中空针样裂缝的胆固醇晶体的区域。在所述斑块外围是较年轻的泡沫状细胞和毛细管。纤维性斑块还位于内膜下、动脉壁内，从而引起壁变厚和膨胀，并且有时引起内腔的斑快性局部化狭窄与一定程度的肌肉层萎缩。纤维性斑块含有胶原蛋白纤维(嗜酸性)，使钙(嗜苏木精性)和载满脂质的细胞沉淀。在一些实施方案中，所述靶向部分识别并结合至这些斑块的一种或多种非细胞组分，如纤维蛋白、蛋白聚糖、胶原蛋白、弹性蛋白、细胞碎屑和钙或其它无机沉积物或沉淀物。在一些实施方案中，所述细胞碎屑是从死细胞释放的核酸，例如DNA或RNA。
在各个实施方案中，所述靶向部分包含识别与神经退化性疾病相关的脑斑块中发现的一个或多个非细胞结构的抗原识别结构域。在一些实施方案中，所述靶向部分识别并结合至位于阿兹海默病患者脑中发现的淀粉样斑块中的一个或多个非细胞结构。举例来说，所述靶向部分可以识别并且结合至作为淀粉样斑块的主要组分的肽淀粉样蛋白β。在一些实施方案中，所述靶向部分识别并结合至位于亨廷顿氏病患者中发现的脑斑块中的一个或多个非细胞结构。在各个实施方案中，所述靶向部分识别并且结合至与其它神经退化性或肌肉骨骼疾病如路易体痴呆和包涵体肌炎相关的斑块中发现的一个或多个非细胞结构。
靶向部分形式
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的靶向部分是能够特异性结合的基于蛋白质的剂，如抗体或其衍生物。在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗体。在各个实施方案中，所述抗体是包括两个重链和两个轻链的全长多聚体蛋白质。每一个重链包括一个可变区(例如，VH)和至少三个恒定区(例如，CH1、CH2和CH3)，并且每一个轻链包括一个可变区(VL)和一个恒定区(CL)。所述可变区决定所述抗体的特异性。每一个可变区包含由四个相对保守的构架区(FR)侧接的三个高变区，又称互补性决定区(CDR)。所述三个CDR，称为CDR1、CDR2和CDR3，有助于抗体结合特异性。在一些实施方案中，所述抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中，所述抗体是人源化抗体。
在一些实施方案中，所述靶向部分包含诸多抗体衍生物或抗体形式。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的靶向部分是单结构域抗体、只有重链的重组抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、只有重链的鲨鱼抗体(VNAR)、微蛋白(半胱氨酸结蛋白、打结素)、DARPin；四连接素(Tetranectin)；亲和体(Affibody)；反式体(Transbody)；Anticalin；AdNectin；Affilin；微型体(Microbody)；肽适体；奥特瑞斯(alterase)；塑料抗体；费洛体(phylomer)；斯塔都体(stradobody)；巨型体(maxibody)；伊维体(evibody)；菲诺体(fynomer)、犰狳重复蛋白、库尼茨型结构域(Kunitz domain)、高亲合性多聚体(avimer)、阿特里体(atrimer)、普罗体(probody)、免疫体(immunobody)、曲奥单抗(triomab)、特洛伊体(troybody)；佩普体(pepbody)；疫苗体(vaccibody)、单特异性体(UniBody)；高亲和力多聚体(affimer)、双特异性体(DuoBody)、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、肽模拟分子或合成分子，如以下美国专利号或专利公布号中所描述：US 7,417,130、US 2004/132094、US 5,831,012、US 2004/023334、US 7,250,297、US 6,818,418、US 2004/209243、US 7,838,629、US 7,186,524、US 6,004,746、US 5,475,096、US 2004/146938、US 2004/157209、US 6,994,982、US 6,794,144、US 2010/239633、US 7,803,907、US 2010/119446和/或US 7,166,697，所述美国专利或专利公布的内容以引用的方式整体并入本文。还参见Storz MAbs.2011年5月-6月；3(3):310-317。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含单结构域抗体，如来自例如产生VHH抗体的生物体如骆驼、鲨鱼的VHH或设计的VHH。VHH是含有天然存在的重链抗体的独特结构和功能性质的来源于抗体的治疗蛋白质。VHH技术是基于来自骆驼的缺乏轻链的完全功能抗体。这些重链抗体含有单个可变域(VHH)和两个恒定域(CH2和CH3)。VHH能以商标NANOBODY(或NANOBODIES)购自市面。
信号传导剂
在一方面，本发明提供了一种包括信号传导剂(例如，免疫调节剂)的嵌合蛋白质。在各个实施方案中，所述信号传导剂经过修饰以便对其受体中的一种或多种具有降低的亲和力或活性，从而允许减弱所述嵌合蛋白质的活性(包括激动或拮抗)和/或预防非特异性信号传导或不理想螯合。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质可以包括两个或更多个信号传导剂。
在各个实施方案中，所述信号传导剂在其野生型形式下具有拮抗性，并且携带一个或多个减弱其拮抗活性的突变。在各个实施方案中，所述信号传导剂由于一个或多个突变而具有拮抗性，例如激动性信号传导剂被转化成拮抗性信号传导剂，并且任选地，此类经过转化的信号传导剂还携带一个或多个减弱其拮抗活性的突变(例如，如WO 2015/007520中所描述，其全部内容以引用的方式并入本文)。
在各个实施方案中，所述信号传导剂是选自细胞因子、生长因子和激素的修饰型式。此类细胞因子、生长因子和激素的说明性实例包括但不限于淋巴因子、单核因子、传统多肽激素如人生长激素、N-甲硫氨酰人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素如促卵泡激素(FSH)、促甲状腺激素(TSH)和促黄体生成激素(LH)；肝脏生长因子；成纤维细胞生长因子；催乳激素；胎盘催乳激素；肿瘤坏死因子-α和肿瘤坏死因子-β；苗勒氏管抑制物；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；促血小板生成素(TPO)；神经生长因子如NGF-α；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子I和胰岛素样生长因子II；骨诱导因子；干扰素如例如干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ(以及I型、II型和III型干扰素)、集落刺激因子(CSF)如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)，如例如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13和IL-18；肿瘤坏死因子如例如TNF-α或TNF-β；和其它多肽因子，包括例如LIF和kit配体(KL)。如本文所使用，细胞因子、生长因子和激素包括获自天然来源或者由重组的细菌、真核生物或哺乳动物细胞培养系统产生的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物学活性等效物。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是选自但不限于转化生长因子(TGF)如TGF-α和TGF-β、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子如胰岛素样生长因子I和胰岛素样生长因子II、成纤维细胞生长因子(FGF)、遗传调节蛋白(heregulin)、血小板衍生生长因子(PDGF)、血管内皮生长因子(VEGF)的生长因子修饰型式。
在一个实施方案中，所述生长因子是成纤维细胞生长因子(FGF)的修饰型式。说明性FGF包括但不限于FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF5、FGF6、FGF7、FGF8、FGF9、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、鼠FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22和FGF23。
在一个实施方案中，所述生长因子是血管内皮生长因子(VEGF)的修饰型式。说明性VEGF包括但不限于VEGF-A、VEGF-B、VEGF-C、VEGF-D和PGF及其同种型，包括VEGF-A的各个同种型，如VEGF121、VEGF121b、VEGF145、VEGF165、VEGF165b、VEGF189和VEGF206。
在一个实施方案中，所述生长因子是转化生长因子(TGF)的修饰型式。说明性TGF包括但不限于TGF-α和TGF-β及其亚型，包括TGF-β的各个亚型，包括TGFβ1、TGFβ2和TGFβ3。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是选自但不限于以下各项的激素的修饰形式：人绒毛膜促性腺激素、促性腺激素释放激素、雄激素、雌激素、促甲状腺激素、促卵泡激素、促黄体生成激素、催乳激素、生长激素、促肾上腺皮质激素、抗利尿激素、催产素、促甲状腺激素释放激素、生长激素释放激素、促肾上腺皮质激素释放激素、生长激素抑制素、多巴胺、褪黑激素、甲状腺素、降血钙素、甲状旁腺激素、糖皮质激素、盐皮质激素、肾上腺素、去甲肾上腺素、黄体酮、胰岛素、升糖素、支链淀粉、钙三醇、钙化醇、心房利钠肽、胃泌素、分泌素、胆囊收缩素、神经肽Y、饥饿素、PYY3-36、胰岛素样生长因子(IGF)、瘦素、促血小板生成素、红细胞生成素(EPO)和血管紧张素原。在一些实施方案中，所述信号传导剂是EPO。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是免疫调节剂，例如白介素、干扰素和肿瘤坏死因子中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是白介素，包括例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-19、IL-20、IL-21、IL-22、IL-23、IL-24、IL-25、IL-26、IL-27、IL-28、IL-29、IL-30、IL-31、IL-32、IL-33、IL-35、IL-36或者其片段、变体、类似物或家族成员。白介素是由淋巴细胞、单核细胞和巨噬细胞合成的一组多功能细胞因子。已知的功能包括刺激免疫细胞(例如T辅助细胞、B细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞)的增殖、嗜中性粒细胞和T淋巴细胞的趋化性和/或对干扰素的抑制。可以使用本领域中已知的测定法来测定白介素活性：Matthews等,Lymphokines and Interferens:A Practical Approach,Clemens等编,IRL Press,Washington,D.C.1987,第221-225页；以及Orencole和Dinarello(1989)Cytokine 1,14-20。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是干扰素如I型干扰素、II型干扰素和III型干扰素的修饰型式。说明性干扰素包括例如干扰素-α-1、干扰素-α-2、干扰素-α-4、干扰素-α-5、干扰素-α-6、干扰素-α-7、干扰素-α-8、干扰素-α-10、干扰素-α-13、干扰素-α-14、干扰素-α-16、干扰素-α-17和干扰素-α-21、干扰素-β以及干扰素-γ、干扰素κ、干扰素ε、干扰素τ和干扰素。
在一些实施方案中，所述信号传导剂是肿瘤坏死因子(TNF)或TNF家族中的蛋白质，包括但不限于TNF-α、TNF-β、LT-β、CD40L、CD27L、CD30L、FASL、4-1BBL、OX40L和TRAIL的修饰型式。
在各个实施方案中，所述信号传导剂是具有一个或多个突变的信号传导剂的修饰(例如突变)形式。在各个实施方案中，所述突变允许修饰的信号传导剂相对于信号传导剂的未修饰或未突变，即野生型形式具有一种或多种减弱的活性，如降低的结合亲和力、降低的内源活性和降低的特定生物活性中的一种或多种(例如，比较同一种信号传导剂的野生型形式对比修饰(例如突变)形式)。在一些实施方案中，减弱或降低结合或亲和力的突变包括基本上降低或消除结合或活性的那些突变。在一些实施方案中，减弱或降低结合或亲和力的突变不同于基本上降低或消除结合或活性的那些突变。结果，在各个实施方案中，所述突变允许所述信号传导剂相对于未突变，即野生型信号传导剂更安全，例如，具有降低的全身性毒性、减少的副作用和减少的脱靶效应(例如，比较同一种信号传导剂的野生型形式对比修饰(例如突变)形式)。
在各个实施方案中，所述信号传导剂经过修饰以具有一个或多个能降低其对其受体中的一种或多种的结合亲和力或活性的突变。在一些实施方案中，所述信号传导剂经过修饰以具有一个或多个能基本上降低或消除对所述受体的结合亲和力或活性的突变。在一些实施方案中，所述野生型信号传导剂提供的活性是在所述受体处的激动作用(例如激活治疗部位的细胞效应)。举例来说，所述野生型信号传导剂可以激活其受体。在此类实施方案中，所述突变使得修饰的信号传导剂在所述受体处具有降低或消除的激活活性。举例来说，所述突变可以使得所述修饰的信号传导剂向靶细胞递送减弱的激活信号，或者可以消除所述激活信号。在一些实施方案中，所述野生型信号传导剂提供的活性是在所述受体处的拮抗作用(例如阻断或阻抑治疗部位的细胞效应)。举例来说，所述野生型信号传导剂可以拮抗或抑制所述受体。在这些实施方案中，所述突变使得所述修饰的信号传导剂在所述受体处具有降低或消除的拮抗活性。举例来说，所述突变可以使得所述修饰的信号传导剂向靶细胞递送减弱的抑制信号，或者可以消除所述抑制信号。在各个实施方案中，所述信号传导剂由于一个或多个突变而具有拮抗性，例如将激动性信号传导剂转化成拮抗性信号传导剂(例如，如WO 2015/007520中所描述，其全部内容以引用的方式并入本文)，并且任选地，此类经转化的信号传导剂还携带一个或多个降低其对其受体中的一种或多种的结合亲和力或活性，或者基本上降低或消除对其受体中的一种或多种的结合亲和力或活性的突变。
在一些实施方案中，与一个或多个靶向部分连接可恢复所述受体处的降低的亲和力或活性。在其它实施例中，所述靶向部分中的一个或多个的活性基本上不能恢复所述受体处的降低的亲和力或活性。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质减少了脱靶效应，这是因为它们的信号传导剂具有能削弱或消除在受体处的结合亲和力或活性的突变。在各个实施方案中，观察到副作用相对于例如野生型信号传导剂存在这种减少。在各个实施方案中，所述信号传导剂对靶细胞具有活性，因为所述靶向部分补偿了实质性激活所需的结合(例如但不限于和/或亲合力)的缺失/不足。在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂对通向治疗活性位点的途径基本上无活性，并且其效应基本上针对特定靶位点，从而大大减少了不希望的副作用。
在一些实施方案中，所述信号传导剂可以包括一个或多个减弱或降低对一个受体(即，治疗受体)的结合或亲和力的突变以及一个或多个基本上降低或消除第二受体处的结合或活性的突变。在此类实施方案中，这些突变可以处在相同或不同的位置上(即，相同的突变或多个突变)。在一些实施方案中，降低一个受体处的结合和/或活性的突变与基本上降低或消除另一个受体处的结合和/或活性的突变不同。在一些实施方案中，降低一个受体处的结合和/或活性的突变与基本上降低或消除另一个受体处的结合和/或活性的突变相同。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有修饰的信号传导剂，所述修饰的信号传导剂兼具减弱治疗性受体处的结合和/或活性且因此允许更受控制的中靶治疗效应(例如相对于野生型信号传导剂)的突变与基本上降低或消除另一个受体处的结合和/或活性且因此减少副作用(例如相对于野生型信号传导剂)的突变。
在一些实施方案中，利用靶向部分基本上不能恢复结合或活性的实质性降低或消除。在一些实施方案中，利用靶向部分可恢复结合或活性的实质性降低或消除。在各个实施方案中，基本上降低或消除第二受体处的结合或活性还能防止由另一个受体介导的不利效应。可选地或另外地，基本上降低或消除另一个受体处的结合或活性改善了治疗效果，因为治疗性嵌合蛋白质的降低或消除的螯合在远离治疗作用位点处。举例来说，在一些实施方案中，这就避免了需要高剂量的本发明嵌合蛋白质来补偿另一个受体处的损失。此类降低剂量的能力还提供了较低的副作用可能性。
在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述一个或多个突变致使所述信号传导剂对其受体中的一种或多种具有降低、基本上降低或消除的亲和力，例如结合(例如KD)和/或激活(例如，当所述修饰的信号传导剂是其受体的激动剂时，可测量为例如KA和/或EC50)和/或抑制(例如，当所述修饰的信号传导剂是其受体的拮抗剂时，可测量为例如KI和/或IC50)。在各个实施方案中，所述信号传导剂受体处降低的亲和力允许减弱活性(包括激动或拮抗)。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂相对于野生型信号传导剂对受体具有约1％或约3％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约95％或约10％-20％、约20％-40％、约50％、约40％-60％、约60％-80％、约80％-100％的亲和力。在一些实施方案中，所述结合亲和力相对于野生型信号传导剂低至少约2倍、低约3倍、低约4倍、低约5倍、低约6倍、低约7倍、低约8倍、低约9倍、低至少约10倍、低至少约15倍、低至少约20倍、低至少约25倍、低至少约30倍、低至少约35倍、低至少约40倍、低至少约45倍、低至少约50倍、低至少约100倍、低至少约150倍，或低约10-50倍、低约50-100倍、低约100-150倍、低约150-200倍或低超过200倍。
在所述嵌合蛋白质具有降低一个受体处的结合且基本上降低或消除第二受体处的结合的突变的实施方案中，修饰的信号传导剂对一个受体的结合亲和力的减弱或降低比对另一个受体的亲和力的实质性降低或消除低。在一些实施方案中，修饰的信号传导剂对一个受体的结合亲和力的减弱或降低比对另一个受体的亲和力的实质性降低或消除低约1％、或约3％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约60％、约65％、约70％、约75％、约80％、约85％、约90％或约95％。在各个实施方案中，实质性降低或消除是指在结合亲和力和/或活性方面存在比减弱或降低更大程度的降低。
在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述一个或多个突变使所述信号传导剂的内源活性例如相对于野生型信号传导剂降至约75％、或约70％、或约60％、或约50％、或约40％、或约30％、或约25％、或约20％、或约10％、或约5％、或约3％、或约1％。
在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述一个或多个突变致使所述信号传导剂对如本文描述的细胞因子、生长因子和激素中任一个的受体具有降低的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述一个或多个突变致使所述信号传导剂对其受体具有降低的亲和力，比所述靶向部分对其靶标的结合亲和力更低。在一些实施方案中，这种结合亲和力差别允许所述信号传导剂，例如突变的信号传导剂具有局部化中靶效应并且使构成在野生型信号传导剂情况下观察到的副作用的基础的脱靶效应最小化。在一些实施方案中，这种结合亲和力低至少约2倍、或至少约5倍、或至少约10倍、或至少约15倍、或低至少约25倍、或至少约50倍、或至少约100倍、或至少约150倍。
可以使用本领域中已知的方法来测量受体结合活性。举例来说，可以通过对结合数据进行斯卡查德图分析和计算机拟合(例如Scatchard,1949)或通过如Brecht等(1993)所描述在流经条件下进行反射干涉光谱来评价亲和力和/或结合活性，所有文献的全部内容都以引用的方式并入本文。
本文描述的野生型信号传导剂的氨基酸序列在本领域中是众所周知的。因此，在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含与本文描述的信号传导剂的已知野生型氨基酸序列具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％序列同一性(例如约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％、或约67％、或约68％、或约69％、或约70％、或约71％、或约72％、或约73％、或约74％、或约75％、或约76％、或约77％、或约78％、或约79％、或约80％、或约81％、或约82％、或约83％、或约84％、或约85％、或约86％、或约87％、或约88％、或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％序列同一性)的氨基酸序列。
在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含与本文公开的序列中的任一个具有至少约60％、或至少约61％、或至少约62％、或至少约63％、或至少约64％、或至少约65％、或至少约66％、或至少约67％、或至少约68％、或至少约69％、或至少约70％、或至少约71％、或至少约72％、或至少约73％、或至少约74％、或至少约75％、或至少约76％、或至少约77％、或至少约78％、或至少约79％、或至少约80％、或至少约81％、或至少约82％、或至少约83％、或至少约84％、或至少约85％、或至少约86％、或至少约87％、或至少约88％、或至少约89％、或至少约90％、或至少约91％、或至少约92％、或至少约93％、或至少约94％、或至少约95％、或至少约96％、或至少约97％、或至少约98％、或至少约99％序列同一性(例如约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％、或约67％、或约68％、或约69％、或约70％、或约71％、或约72％、或约73％、或约74％、或约75％、或约76％、或约77％、或约78％、或约79％、或约80％、或约81％、或约82％、或约83％、或约84％、或约85％、或约86％、或约87％、或约88％、或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％序列同一性)的氨基酸序列。
在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含具有一个或多个氨基酸突变的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述一个或多个氨基酸突变可以独立地选自取代、插入、缺失和截短。
在一些实施方案中，所述氨基酸突变是氨基酸取代，并且可以包括保守取代和/或非保守取代。
可以例如基于在所涉及的氨基酸残基的极性、电荷、大小、溶解性、疏水性、亲水性和/或两亲特性方面的相似性进行“保守取代”。20种天然存在的氨基酸可以分组至以下六个标准氨基酸组中：(1)疏水性：Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；以及(6)芳香族：Trp、Tyr、Phe。
如本文所使用，“保守取代”定义为一个氨基酸交换为以上所示的六个标准氨基酸组中的同一组内所列出的另一个氨基酸。举例来说，Asp交换为Glu使得经如此修饰的多肽中保留一个负电荷。另外，基于甘氨酸和脯氨酸能够破坏α螺旋，它们可以彼此取代。
如本文所使用，“非保守取代”定义为一个氨基酸交换为以上所示的六个标准氨基酸组(1)至(6)中的不同组中所列出的另一个氨基酸。
在各个实施方案中，所述取代还可以包括非经典氨基酸(总体上例如硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、N-甲酰基甲硫氨酸β丙氨酸、GABA和δ-氨基乙酰丙酸、4-氨基苯甲酸(PABA)、普通氨基酸的D-异构体、2,4-二氨基丁酸、α-氨基异丁酸、4-氨基丁酸、Abu、2-氨基丁酸、γ-Abu、ε-Ahx、6-氨基己酸、Aib、2-氨基异丁酸、3-氨基丙酸、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟基脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、磺基丙氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸、氟代氨基酸、设计师氨基酸如β甲基氨基酸、Cα-甲基氨基酸、Nα-甲基氨基酸和氨基酸类似物)。
如本文所描述，所述修饰的信号传导剂携带影响一个或多个受体处的亲和力和/或活性的突变。在各个实施方案中，降低了治疗性受体，例如介导所期望的治疗效果(例如激动作用或拮抗作用)的受体处的亲和力和/或活性。在各个实施方案中，所述修饰的信号传导剂携带基本上降低或消除受体，例如不介导所期望的治疗效果(例如，由于结合的混乱性)的受体处的亲和力和/或活性的突变。如本文描述的任何修饰的信号传导剂，例如细胞因子、生长因子和激素之一的受体在本领域中都是已知的。
在受体处提供降低的亲和力和/或活性(例如激动性)的说明性突变见于WO 2013/107791(例如，关于干扰素)、WO 2015/007542(例如，关于白介素)和WO 2015/007903(例如，关于TNF)中，各文献的全部内容以引用的方式并入本文。在治疗性受体处提供降低的亲和力和/或活性(例如拮抗性)的说明性突变见于WO 2015/007520中，该文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂包含一个或多个突变，所述突变致使所述信号传导剂对I型细胞因子受体、II型细胞因子受体、趋化因子受体、肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族中的受体、TGF-β受体、免疫球蛋白(Ig)超家族中的受体和/或酪氨酸激酶超家族中的受体具有降低的亲和力和/或活性。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是I型细胞因子受体。I型细胞因子受体在本领域中是已知的，并且包括但不限于IL2(β-亚单位)、IL3、IL4、IL5、IL6、IL7、IL9、IL11、IL12、GM-CSF、G-CSF、LIF、CNTF的受体，以及促血小板生成素(TPO)、催乳激素和生长激素的受体。说明性I型细胞因子受体包括但不限于GM-CSF受体、G-CSF受体、LIF受体、CNTF受体、TPO受体和I型IL受体。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是II型细胞因子受体。II型细胞因子受体是由异源亚单位构成的多聚体受体，并且是主要针对干扰素的受体。这个受体家族包括但不限于干扰素-α、干扰素-β和干扰素-γ、IL10、IL22和组织因子的受体。说明性II型细胞因子受体包括但不限于IFN-α受体(例如IFNAR1和IFNAR2)、IFN-β受体、IFN-γ受体(例如IFNGR1和IFNGR2)和II型IL受体。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是G蛋白偶联受体。趋化因子受体是具有七个跨膜结构并且偶联至G蛋白以便进行信号传导的G蛋白偶联受体。趋化因子受体包括但不限于CC趋化因子受体、CXC趋化因子受体、CX3C趋化因子受体和XC趋化因子受体(XCR1)。说明性趋化因子受体包括但不限于CCR1、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CCR10、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR3B、CXCR4、CXCR5、CSCR6、CXCR7、XCR1和CX3CR1。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是TNFR家族成员。肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员具有由三个二硫键围绕核心基序CXXCXXC从而产生细长分子而形成的富半胱氨酸结构域(CRD)。说明性肿瘤坏死因子受体家族成员包括：CD120a(TNFRSF1A)、CD120b(TNFRSF1B)、淋巴细胞毒素β受体(LTBR、TNFRSF3)、CD 134(TNFRSF4)、CD40(CD40、TNFRSF5)、FAS(FAS、TNFRSF6)、TNFRSF6B(TNFRSF6B)、CD27(CD27、TNFRSF7)、CD30(TNFRSF8)、CD137(TNFRSF9)、TNFRSF10A(TNFRSF10A)、TNFRSF10B、(TNFRSF10B)、TNFRSF10C(TNFRSF10C)、TNFRSF10D(TNFRSF10D)、RANK(TNFRSF11A)、骨保护素(TNFRSF11B)、TNFRSF12A(TNFRSF12A)、TNFRSF13B(TNFRSF13B)、TNFRSF13C(TNFRSF13C)、TNFRSF14(TNFRSF14)、神经生长因子受体(NGFR、TNFRSF16)、TNFRSF17(TNFRSF17)、TNFRSF18(TNFRSF18)、TNFRSF19(TNFRSF19)、TNFRSF21(TNFRSF21)和TNFRSF25(TNFRSF25)。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是TGF-β受体。TGF-β受体是单程丝氨酸/苏氨酸激酶受体。TGF-β受体包括但不限于TGFBR1、TGFBR2和TGFBR3。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是Ig超家族受体。免疫球蛋白(Ig)超家族中的受体与免疫球蛋白具有结构同源性。Ig超家族中的受体包括但不限于白介素-1受体、CSF-1R、PDGFR(例如PDGFRA和PDGFRB)和SCFR。
在各个实施方案中，所述信号传导剂的受体是酪氨酸激酶超家族受体。酪氨酸激酶超家族中的受体在本领域中是众所周知的。有大约58种已知的受体酪氨酸激酶(RTK)，分组至20个亚家族中。酪氨酸激酶超家族中的受体包括但不限于FGF受体及其各种同种型，如FGFR1、FGFR2、FGFR3、FGFR4和FGFR5。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是干扰素α。在此类实施方案中，所述修饰的IFN-α剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的IFN-α剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
干扰素α的突变形式对本领域技术人员是已知的。在一个说明性实施方案中，所述修饰的信号传导剂是具有以下氨基酸序列的等位基因形式IFN-α2a：
IFN-α2a：
在一个说明性实施方案中，所述修饰的信号传导剂是具有以下氨基酸序列的等位基因形式IFN-α2b(它与IFN-α2a在氨基酸位置23处不同)：
IFN-α2b：
在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体(IFN-α2a或IFN-α2b)在位置144-154处的一个或多个氨基酸，如氨基酸位置148、149和/或153处发生突变。在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体包含选自L153A、R149A和M148A的一个或多个突变。此类突变体描述于例如WO2013/107791和Piehler等,(2000)J.Biol.Chem,275:40425-33中，所有文献的全部内容都以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体对IFNAR1具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体包含选自如WO2010/030671中所描述的F64A、N65A、T69A、L80A、Y85A和Y89A的一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体包含选自如WO2008/124086中所描述的K133A、R144A、R149A和L153A的一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述IFN-α2突变体包含选自如WO2015/007520和WO2010/030671中所描述的R120E和R120E/K121E的一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在此类实施方案中，所述IFN-α2突变体拮抗野生型IFN-α2活性。在此类实施方案中，所述突变IFN-α2对IFNAR1具有降低的亲和力和/或活性，而保留对IFNR2的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含(1)选自R120E和R120E/K121E的一个或多个突变，不希望受理论束缚，所述突变能产生拮抗效应；和(2)选自K133A、R144A、R149A和L153A的一个或多个突变，不希望受理论束缚，所述突变允许例如IFNAR2处的减弱的效应。在一个实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含R120E和L153A。
在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含一个或多个突变，所述一个或多个突变选自如WO 2013/059885中所公开的L15A、A19W、R22A、R23A、L26A、F27A、L30A、L30V、K31A、D32A、R33K、R33A、R33Q、H34A、D35A、Q40A、D114R、L117A、R120A、R125A、K134A、R144A、A145G、A145M、M148A、R149A、S152A、L153A和N156A，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO 2013/059885中所公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或L30A。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO 2013/059885中所公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或R33A。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO 2013/059885中所公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或M148A。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO2013/059885中所公开的突变H57Y、E58N、Q61S和/或L153A。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO 2013/059885中所公开的突变N65A、L80A、Y85A和/或Y89A。在一些实施方案中，所述人IFN-α2突变体包含如WO 2013/059885中所公开的突变N65A、L80A、Y85A、Y89A和/或D114A。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是干扰素β。在此类实施方案中，所述修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的干扰素β剂对IFN-α/β受体(IFNAR)，即IFNAR1和/或IFNAR2链具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是干扰素γ。在此类实施方案中，所述修饰的干扰素γ剂对干扰素γ受体(IFNGR)，即IFNGR1和IFNGR2链具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的干扰素γ剂对干扰素γ受体(IFNGR)，即IFNGR1和/或IFNGR2链具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是血管内皮生长因子(VEGF)。VEGF是在生理性以及病理性血管生成中起重要作用、调控血管渗透性并且可以充当表达VEGF受体的细胞上的生长因子的有效生长因子。其它功能尤其包括在巨噬细胞系和内皮细胞中刺激细胞迁移。VEGF生长因子家族存在若干成员，以及至少三种受体(VEGFR-1、VEGFR-2和VEGFR-3)。VEGF家族成员可以结合并激活超过一种VEGFR类型。举例来说，VEGF-A结合VEGFR-1和VEGFR-2，而VEGF-C可结合VEGFR-2和VEGFR-3。VEGFR-1和VEGFR-2激活调控血管生成，而VEGFR-3激活与淋巴管生成相关。主要促血管生成信号是由VEGFR-2的激活而生成。已经报告了VEGFR-1激活可能与血管生成中的负面作用相关。还已经报告了VEGFR-1信号传导对肿瘤经由骨髓来源的VEGFR-1阳性细胞(有助于在骨中形成转移前环境)在体内发展来说非常重要。已经开发了若干种基于VEGF-A针对性/中和性治疗抗体的疗法，主要用于治疗各种依赖血管生成的人肿瘤。但这些疗法并不是没有副作用。考虑到这些疗法用作全身性非细胞/组织特异性VEGF/VEGFR相互作用抑制剂，这可能并不奇怪。因此，将会需要使VEGF(例如VEGF-A)/VEGFR-2抑制局限于特定靶细胞(例如肿瘤血管内皮细胞)或在某些细胞(例如肿瘤血管内皮细胞)附近的特定非细胞靶标。
在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-A、VEGF-B、VEFG-C、VEGF-D或VEGF-E及其同种型，包括VEGF-A的各种同种型，如VEGF121、VEGF121b、VEGF145、VEGF165、VEGF165b、VEGF189和VEGF206。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)和/或VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)和/或VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有降低的亲和力和/或活性，和/或对VEGFR-1(Flt-1)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。此类实施方案得以用于例如创伤愈合方法中或治疗局部缺血相关性疾病(不希望受理论束缚，通过VEGFR-2对内皮细胞功能和血管生成的影响来介导)。在各个实施方案中，避免与跟癌症和促炎症性活性相关的VEGFR-1(Flt-1)结合。在各个实施方案中，VEGFR-1(Flt-1)充当诱铒受体，并且因此基本上降低或消除该受体处的亲和力能避免治疗剂螯合。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-1(Flt-1)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性，和/或对VEGFR-2(KDR/Flk-1)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述VEGF是VEGF-C或VEGF-D。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-3具有降低的亲和力和/或活性。可选地，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-3具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
促血管生成疗法在各种疾病(例如缺血性心脏病、出血等)中也很重要，并且包括基于VEGF的治疗剂。VEGFR-2激活具有促血管生成作用(作用于内皮细胞)。VEFGR-1激活可以刺激炎性细胞(包括例如巨噬细胞)迁移并且造成炎症相关性多血管性渗透。VEFGR-1激活还可以促进骨髓相关的肿瘤环境形成。因此，在这种情况下，将需要对VEGFR-2激活具有选择性的基于VEGF的治疗剂。另外，将需要细胞特异性靶向至例如内皮细胞。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-2具有降低的亲和力和/或活性(例如拮抗性)，和/或对VEGFR-1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。举例来说，当经由结合至肿瘤内皮细胞标记物(例如PSMA等)的靶向部分来靶向至肿瘤血管内皮细胞时，此类构建体特异性地抑制此类标记物阳性细胞上的VEGFR-2激活，而不会激活途径中和靶细胞上的VEGFR-1(在活性被消除时)，因此消除炎性应答的诱导。相较于VEGF-A中和疗法，这将为众多肿瘤类型提供更具选择性而且更安全的抗血管生成疗法。但是，在各个实施方案中，所述靶向不是针对特定细胞，而是针对非细胞结构，从而允许所述信号传导剂靶向相邻的细胞。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对VEGFR-2具有降低的亲和力和/或活性(例如激动性)，和/或对VEGFR-1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，通过靶向至血管内皮细胞，此类构建体促进血管生成而不引起VEGFR-1相关的炎症性应答的诱导。因此，此类构建体将具有靶向性促血管生成效应，基本上降低由VEGFR-2以及VEGR-1的全身性激活引起的副作用的风险。
在一个说明性实施方案中，所述修饰的信号传导剂是VEGF165，它具有以下氨基酸序列：
VEGF 165(野生型)
在另一个说明性实施方案中，所述修饰的信号传导剂是VEGF165b，它具有以下氨基酸序列：
VEGF 165b(野生型)
在这些实施方案中，所述修饰的信号传导剂在氨基酸I83处具有突变(例如I83处的取代突变，例如I83K、I83R或I83H)。不希望受理论束缚，相信此类突变可以引起降低的受体结合亲和力。参见例如美国专利号9,078,860，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TNF-α。TNF是一种多效性细胞因子，它有许多种不同的功能，包括调控细胞生长、分化、细胞凋亡、肿瘤生成、病毒复制、自身免疫性、免疫细胞功能和迁移、炎症以及败血性休克。它结合至靶细胞上的两种独特的膜受体：TNFR1(p55)和TNFR2(p75)。TNFR1表现出非常广泛的表达模式，而TNFR2优先表达在某些淋巴细胞群体、Treg、内皮细胞、某些神经元、小胶质细胞、心肌细胞和间质干细胞上。应受体激活而激活非常独特的生物途径，但也存在一定的重叠。通常，不希望受理论束缚，TNFR1信号传导与细胞凋亡(细胞死亡)的诱导相关，而TNFR2信号传导与细胞存活信号的激活(例如，NFkB途径的激活)相关。TNF的施用具有全身性毒性，并且这主要是由于TNFR1啮合。然而，应当注意，TNFR2的激活还与多种活性相关，同TNFR1一样，在开发基于TNF的治疗剂的情况下，对TNF靶向和活性的控制非常重要。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。TNFR1表达于大部分组织中，并且参与细胞死亡信号传导，而相形之下，TNFR2参与细胞存活信号传导。因此，在针对癌症治疗方法的实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TNFR1具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在这些实施方案中，可以使所述嵌合蛋白质靶向需要细胞凋亡的细胞，例如肿瘤细胞或肿瘤血管内皮细胞，或者与需要凋亡、坏死或坏死性凋亡的细胞相邻的非细胞结构。在针对促进细胞存活的方法的实施方案中，举例来说，在用于治疗神经退化性病症的神经发生中，所述修饰的信号传导剂对TNFR2具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。换句话说，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含允许有利于死亡或存活信号的修饰的TNF-α剂。
在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质具有修饰的TNF，所述修饰的TNF对TNFR1具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，此类嵌合体与野生型TNF和/或仅携带致使对TNFR1具有降低的亲和力和/或活性的突变的嵌合体相比，是更有效的细胞凋亡诱导剂。在一些实施方案中，此类嵌合体得以用于诱导肿瘤细胞死亡或肿瘤血管内皮细胞死亡(例如，用于治疗癌症)。此外，在一些实施方案中，举例来说，这些嵌合体避免或减少经由TNFR2激活Treg细胞，因此进一步支持TNFR1介导的活体内抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质具有修饰的TNF，所述修饰的TNF对TNFR2具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，此类嵌合体在可能是各种疾病设定，包括但不限于刺激神经发生下的特定治疗目标的一些细胞类型中是更有效的细胞存活激活剂。另外，此类有利于TNFR2的嵌合体还可用于治疗自身免疫疾病(例如克罗恩氏病、糖尿病、MS、结肠炎等和本文描述的众多其它自身免疫疾病)。在一些实施方案中，所述嵌合体靶向自身反应性T细胞，或者预期与自身反应性T细胞接触或相邻的非细胞结构。在一些实施方案中，所述嵌合体促进了Treg细胞激活和对细胞毒性T细胞的间接抑制。
在一些实施方案中，所述嵌合体例如通过激活TNFR2和/或避免TNFR1而引起自身反应性T细胞的死亡(例如，对TNFR2具有降低的亲和力和/或活性和/或对TNFR1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性的修饰的TNF)。不希望受理论束缚，这些自身反应性T细胞让其细胞凋亡/存活信号例如被NFkB途径活性/信号传导变化改变。
在一些实施方案中，基于TNFR2的嵌合体在诸多疾病中具有额外的治疗应用，尤其包括各种自身免疫疾病、心脏病、脱髓鞘和神经退化性病症，以及感染性疾病。
在一个实施方案中，所述野生型TNF-α具有以下氨基酸序列：
TNF-α
在此类实施方案中，所述修饰的TNF-α剂在一个或多个氨基酸位置29、31、32、84、85、86、87、88、89、145、146和147上具有突变，从而产生了具有降低的受体结合亲和力的修饰的TNF-α。参见例如美国专利号7,993,636，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述修饰的人TNF-α部分在如例如WO/2015/007903中描述的一个或多个氨基酸位置R32、N34、Q67、H73、L75、T77、S86、Y87、V91、I97、T105、P106、A109、P113、Y115、E127、N137、D143和A145上具有突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文(编号根据人TNF序列，Genbank登记号BAG70306，版本BAG70306.1，GI：197692685)。在一些实施方案中，所述修饰的人TNF-α部分具有选自R32G、N34G、Q67G、H73G、L75G、L75A、L75S、T77A、S86G、Y87Q、Y87L、Y87A、Y87F、V91G、V91A、I97A、I97Q、I97S、T105G、P106G、A109Y、P113G、Y115G、Y115A、E127G、N137G、D143N、A145G和A145T的取代突变。在一个实施方案中，所述人TNF-α部分具有选自Y87Q、Y87L、Y87A和Y87F的突变。在另一个实施方案中，所述人TNF-α部分具有选自I97A、I97Q和I97S的突变。在另一个实施方案中，所述人TNF-α部分具有选自Y115A和Y115G的突变。
在一些实施方案中，所述修饰的TNF-α剂是修饰的人TNF-α，具有选自如WO2008/124086中所描述的N39Y、S147Y和Y87H的一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TNF-β。TNF-β可以与LT-β(LT-α1β2)形成同源三聚体或异源三聚体。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TNFR1和/或TNFR2和/或疱疹病毒进入介体(HEVM)和/或LT-βR具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型TNF-β具有以下氨基酸序列：
TNF-β
在此类实施方案中，所述修饰的TNF-β剂可以在位置106至113上的一个或多个氨基酸处包含突变，从而产生对TNFR2具有降低的受体结合亲和力的修饰的TNF-β。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂在氨基酸位置106至113上具有一个或多个取代突变。在说明性实施方案中，所述取代突变选自Q107E、Q107D、S106E、S106D、Q107R、Q107N、Q107E/S106E、Q107E/S106D、Q107D/S106E和Q107D/S106D。在另一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂在位置106至113上具有约1至约3个氨基酸的插入。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TNF家族成员(例如，TNF-α、TNF-β)，它可以是如WO2015/007903中所描述的单链三聚体型式，所述文献的全部内容以引用的方式并入。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其在TNFR1处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变所致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在这些实施方案中，所述修饰的剂是TNF家族成员(例如，TNF-α、TNF-β)，其还任选地对TNFR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的剂是TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)，其在TNFR2处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变所致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在这些实施方案中，所述修饰的剂是TNF家族成员(例如，TNF-α、TNF-β)，其还任选地对TNFR1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。此类实施方案的构建体得以用于例如以细胞特异性方式阻抑TNF应答的方法中。在一些实施方案中，所述拮抗性TNF家族成员(例如TNF-α、TNF-β)是如WO2015/007903中所描述的单链三聚体型式。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TRAIL。在一些实施方案中，所述修饰的TRAIL剂对DR4(TRAIL-RI)和/或DR5(TRAIL-RII)和/或DcR1和/或DcR2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的TRAIL剂对DR4(TRAIL-RI)和/或DR5(TRAIL-RII)和/或DcR1和/或DcR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型TRAIL具有以下氨基酸序列：
TRAIL
在此类实施方案中，所述修饰的TRAIL剂可以在氨基酸位置T127-R132、E144-R149、E155-H161、Y189-Y209、T214-1220、K224-A226、W231、E236-L239、E249-K251、T261-H264和H270-E271上包含突变(编号基于人序列，Genbank登记号NP_003801，版本10NP_003801.1，GI：4507593；参见上文)。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGFα。在此类实施方案中，所述修饰的TGFα剂对表皮生长因子受体(EGFR)具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的TGFα剂对表皮生长因子受体(EGFR)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGFβ。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂任选地对TGFBR3具有降低或者基本上降低或消除的亲和力和/或活性，不希望受理论束缚，TGFBR3可以充当TGF-β受体的配体的储备。在一些实施方案中，所述TGFβ可能偏好TGFBR1超过TGFBR2或偏好TGFBR2超过TGFBR1。类似地，不希望受理论束缚，LAP可以充当TGF-β受体的配体的储备。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对TGFBR1和/或TGFBR2具有降低的亲和力和/或活性，和/或对潜伏相关肽(LatencyAssociated Peptide，LAP)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，此类嵌合体得以用于卡-恩二氏病(Camurati-Engelmann disease)或与不当TGFβ信号传导相关的其它疾病。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，它在TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3中的一个或多个处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变导致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在这些实施方案中，所述修饰的剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，它还任选地在TGFBR1、TGFBR2、TGFBR3中的一个或多个处具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，它在TGFBR1和/或TGFBR2处具有降低的亲和力和/或活性，即拮抗活性(例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变导致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在这些实施方案中，所述修饰的剂是TGF家族成员(例如TGFα、TGFβ)，它还任选地在TGFBR3处具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-1。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-1α或IL-1β。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-1R1和/或IL-1RAcP具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-1R1和/或IL-1RAcP具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-1R2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-1R2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。举例来说，在一些实施方案中，本发明的修饰的IL-1剂避免IL-1R2处的相互作用，并且因此基本上降低其作为治疗剂诱铒和/或陷坑的功能。
在一个实施方案中，所述野生型IL-1β具有以下氨基酸序列：
IL-1β(成熟形式，野生型)
IL1是促炎性细胞因子和重要的免疫系统调控剂。它是CD4T细胞应答的有效激活剂，能增加Th17细胞的比例以及产生IFNγ和IL-4的细胞的扩增。IL-1还是CD8+T细胞的有效调控剂，从而增强抗原特异性CD8+T细胞扩增、分化、迁移至外围和记忆。IL-1受体包含IL-1R1和IL-1R2。结合至IL-1R1和经其进行信号传导构成了IL-1借以介导其生物学(和病理学)活性中的许多种的机制。IL1-R2可以起诱饵受体的作用，从而降低IL-1用于相互作用和经由IL-1R1进行信号传导的可用性。
在一些实施方案中，所述修饰的IL-1对IL-1R1具有降低的亲和力和/或活性(例如激动活性)。在一些实施方案中，所述修饰的IL-1对IL-1R2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在此类实施方案中，可恢复IL-1/IL-1R1信号传导，并且防止了IL-R2处治疗性嵌合体的损失，并且因此减少了所需IL-1的剂量(例如，相对于野生型或仅携带针对IL-R1的减弱突变的嵌合体)。此类构建体得以用于例如治疗癌症，包括例如刺激免疫系统以建立抗癌应答的方法中。
在一些实施方案中，所述修饰的IL-1对IL-1R1具有降低的亲和力和/或活性(例如拮抗活性，例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变所致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在一些实施方案中，所述修饰的IL-1对IL-1R2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在此类实施方案中，不可恢复IL-1/IL-1R1信号传导，并且防止了IL-R2处治疗性嵌合体的损失，并且因此减少了所需IL-1的剂量(例如，相对于野生型或仅携带针对IL-R1的减弱突变的嵌合体)。此类构建体得以用于例如治疗自身免疫疾病，包括例如抑制免疫系统的方法中。
在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂具有氨基酸52-54缺失，由此产生了对I型IL-1R具有降低的结合亲和力和降低的生物活性的修饰的人IL-1β。参见例如WO 1994/000491，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，所述修饰的人IL-1β具有选自A117G/P118G、R120X、L122A、T125G/L126G、R127G、Q130X、Q131G、K132A、S137G/Q138Y、L145G、H146X、L145A/L147A、Q148X、Q148G/Q150G、Q150G/D151A、M152G、F162A、F162A/Q164E、F166A、Q164E/E167K、N169G/D170G、I172A、V174A、K208E、K209X、K209A/K210A、K219X、E221X、E221S/N224A、N224S/K225S、E244K、N245Q的一个或多个取代突变(其中X可以是氨基酸的任何变化，例如非保守变化)，从而表现出降低的与IL-1R的结合，如例如WO2015/007542和WO/2015/007536中所描述，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文(编号基于人IL-1β序列，Genbank登记号NP_000567，版本NP-000567.1，GI：10835145)。在一些实施方案中，所述修饰的人IL-1β可以具有选自R120A、R120G、Q130A、Q130W、H146A、H146G、H146E、H146N、H146R、Q148E、Q148G、Q148L、K209A、K209D、K219S、K219Q、E221S和E221K的一个或多个突变。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变Q131G和Q148G。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变Q148G和K208E。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变R120G和Q131G。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变R120G和H146G。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变R120G和K208E。在一个实施方案中，所述修饰的人IL-1β包含突变R120G、F162A和Q164E。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-2。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-2Rα和/或IL-2Rβ和/或IL-2Rγ具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-2Rβ和/或IL-2Rγ具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-2Rα具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。此类实施方案可能有关于癌症的治疗，例如当所述修饰的IL-2在IL-2Rβ和/或IL-2Rγ处具有激动性时。举例来说，本发明的构建体可能有利于减弱具有IL2受体β和γ的CD8+T细胞的激活(这可以提供抗肿瘤效应)，而不利于具有IL2受体α、β和γ的Treg(这可以提供免疫抑制、促肿瘤效应)。此外，在一些实施方案中，偏好IL-2Rβ和/或IL-2Rγ超过IL-2Rα避免了诸多IL-2副作用，如肺水肿。此外，基于IL-2的嵌合体可用于治疗自身免疫疾病，例如当所述修饰的IL-2在IL-2Rβ和/或IL-2Rγ处具有拮抗性时(例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变所致的拮抗活性，参见例如WO 2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。举例来说，本发明的构建体可能有利于减弱对具有IL2受体β和γ的CD8+T细胞的抑制(并且因此阻抑免疫应答)，而不利于具有IL2受体α、β和γ的Treg。可选地，在一些实施方案中，携带IL-2的嵌合体有利于Treg的激活，并且因此有利于免疫抑制，而不利于CD8+T细胞的激活。举例来说，这些构建体得以用于治疗将受益于免疫抑制的疾病或疾病，例如自身免疫病症。
在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质对IL-2Rβ和/或IL-2Rγ具有降低的亲和力和/或活性和/或对IL-2Rα具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性的修饰的IL-2剂。在一些实施方案中，此类构建体与野生型IL-2相比具有增强的免疫刺激效应，同时消除或降低了与IL-2相关的全身毒性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-2具有以下氨基酸序列：
IL-2(成熟形式，野生型)
在此类实施方案中，所述修饰的IL-2剂有一个或多个突变处于氨基酸L72处(L72G、L72A、L72S、L72T、L72Q、L72E、L72N、L72D、L72R或L72K)、F42(F42A、F42G、F42S、F42T、F42Q、F42E、F42N、F42D、F42R或F42K)和Y45处(Y45A、Y45G、Y45S、Y45T、Y45Q、Y45E、Y45N、Y45D、Y45R或Y45K)。不希望受理论束缚，相信这些修饰的IL-2剂与野生型IL-2相比对高亲和力IL-2受体具有降低的亲和力，并且保留对中等亲和力IL-2受体的亲和力。参见例如美国专利公布号2012/0244112，所述美国专利公布的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-3。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-3受体具有降低的亲和力和/或活性，所述受体是与跟共用β(βc或CD131)亚单位配对的独特α链的异源二聚体。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-3受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性，所述受体是与跟共用β(βc或CD131)亚单位配对的独特α链的异源二聚体。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-4。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对1型和/或2型IL-4受体具有降低的亲和力和/或活性。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对1型和/或2型IL-4受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。1型IL-4受体由具有共用γ链的IL-4Rα亚单位构成并且特异性地结合IL-4。2型IL-4受体包括与被称为IL-13Rα1的不同的亚单位结合的IL-4Rα亚单位。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对2型IL-4受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-4具有以下氨基酸序列：
IL-4(成熟形式，野生型)
在此类实施方案中，所述修饰的IL-4剂有一个或多个突变处于氨基酸R121处(R121A、R121D、R121E、R121F、R121H、R121I、R121K、R121N、R121P、R121T、R121W)、E122(E122F)、Y124(Y124A、Y124Q、Y124R、Y124S、Y124T)和S125处(S125A)。不希望受理论束缚，相信这些修饰的IL-4剂维持I型受体介导的活性，但显著降低了其它受体介导的生物活性。参见例如美国专利号6,433,157，所述专利的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-6。IL-6通过细胞表面I型细胞因子受体复合体进行信号传导，包括配体结合IL-6R链(CD126)和信号传导组分gp130。IL-6还可以结合至IL-6R的可溶形式(sIL-6R)，即IL-6R的细胞外部分。sIL-6R/IL-6复合体可能参与神经突长出和神经元存活，并且因此可能在通过髓鞘再生进行的神经再生中非常重要。因此，在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-6R/gp130和/或sIL-6R具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-6R/gp130和/或sIL-6R具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-6具有以下氨基酸序列：
IL-6(成熟形式，野生型)
在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂在氨基酸58、160、163、171或177处具有一个或多个突变。不希望受理论束缚，相信这些修饰的IL-6剂表现出降低的对IL-6Rα的结合亲和力和降低的生物活性。参见例如WO 97/10338，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-10。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-10受体-1和IL-10受体-2具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-10受体-1和IL-10受体-2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-11。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-11Rα和/或IL-11Rβ和/或gp130具有降低的亲和力和/或活性。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-11Rα和/或IL-11Rβ和/或gp130具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-12。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-12Rβ1和/或IL-12Rβ2具有降低的亲和力和/或活性。在此类此实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-12Rβ1和/或IL-12Rβ2具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-13。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-4受体(IL-4Rα)和IL-13Rα1具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-4受体(IL-4Rα)或IL-13Rα1具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-13具有以下氨基酸序列：
IL-13(成熟形式，野生型)
在此类实施方案中，所述修饰的IL-13剂在氨基酸13、16、17、66、69、99、102、104、105、106、107、108、109、112、113和114处具有一个或多个突变。不希望受理论束缚，相信这些修饰的IL-13剂表现出降低的生物活性。参见例如WO 2002/018422，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-18。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-18Rα和/或IL-18Rβ具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IL-18Rα和/或IL-18Rβ具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对II型IL-18Rα，即缺乏信号传导所需的TIR结构域的IL-18Rα同种型具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-18具有以下氨基酸序列：
IL-18(野生型)
在此类实施方案中，所述修饰的IL-18剂可以如WO/2015/007542中所描述在选自Y37-K44、R49-Q54、D59-R63、E67-C74、R80、M87-A97、N 127-K129、Q139-M149、K165-K171、R183和Q190-N191的氨基酸或氨基酸区域中包含一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文(编号基于人IL-18序列，Genbank登记号AAV38697，版本AAV38697.1，GI：54696650)。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IL-33。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ST-2受体和IL-1RAcP具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ST-2受体和IL-1RAcP具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。
在一个实施方案中，所述野生型IL-33具有以下氨基酸序列：
在此类实施方案中，所述修饰的IL-33剂可以如WO/2015/007542中所描述在选自I113-Y122、S127-E139、E144-D157、Y163-M183、E200、Q215、L220-C227和T260-E269的氨基酸或氨基酸区域中包含一个或多个突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文(编号基于人序列，Genbank登记号NP_254274，版本NP_254274.1，GI:15559209)。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是表皮生长因子(EGF)。EGF是有效生长因子家族的成员。成员包括EGF、HB-EGF和其它，如TGFα、两性调节蛋白、神经调节蛋白、上皮调节蛋白、β细胞素。EGF家族受体包括EGFR(ErbB1)、ErbB2、ErbB3和ErbB4。这些可以充当同源二聚体和/或异源二聚体受体亚型。不同的EGF家族成员对不同的受体亚型表现出不同的选择性。举例来说，EGF与ErbB1/ErbB1、ErbB1/ErbB2、ErbB4/ErbB2和一些其它异源二聚体亚型缔合。HB-EGF具有类似的特性，但它还与ErbB4/4缔合。治疗上对正调节或负调节EGF(EGF样)生长因子信号传导相当感兴趣。举例来说，在治疗EGFR信号传导构成主要生长促进信号的各种癌症时对抑制EGFR信号传导感兴趣。可选地，在例如促进创伤愈合(急性和慢性)、口腔粘膜炎(各种癌症疗法，包括但不限于放射疗法的主要副作用)时，治疗上对刺激EGFR信号传导感兴趣。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4具有降低的亲和力和/或活性。此类实施方案得以用于例如治疗创伤的方法中。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂结合至ErbB1、ErbB2、ErbB3和ErbB4中的一个或多个，并且拮抗所述受体的活性。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ErbB1、ErbB2、ErbB3和/或ErbB4具有降低的亲和力和/或活性，从而允许以减弱的方式拮抗所述受体的活性。此类实施方案得以用于例如治疗癌症。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ErbB1具有降低的亲和力和/或活性。ErbB1是激酶抑制剂的治疗靶标，大部分具有副作用，这是因为它们没有很强的选择性(例如吉非替尼(gefitinib)、埃罗替尼(erlotinib)、阿法替尼(afatinib)、布加替尼(brigatinib)和埃克替尼(icotinib))。在一些实施方案中，减弱的拮抗性ErbB1信号传导与其它靶向EGF受体的剂相比具有更高的中靶性并且具有较少的副作用。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ErbB1具有降低的亲和力和/或活性(例如拮抗性，例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变导致的拮抗活性，参见例如WO2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)，和/或对ErbB4或能与它相互作用的其它亚型具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。通过经由所述靶向部分进行特异性靶向，将实现对ErbB1/ErbB1受体激活的细胞选择性抑制(拮抗，例如天然拮抗活性或者由于一个或多个突变导致的拮抗活性，参见例如WO 2015/007520，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)，而不啮合可能与抑制相关的副作用相关的其它受体亚型。因此，与抑制体内所有细胞类型中的EGFR活性的EGFR激酶抑制剂相反，此类构建体将提供细胞选择性(例如，由于受体扩增、过度表达等而具有激活的EGFR信号传导的肿瘤细胞)抗EGFR(ErbB1)药物效果与减少的副作用。
在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对ErbB4和/或能与它相互作用的其它亚型具有降低的亲和力和/或活性(例如激动性)。通过经由所述靶向部分靶向至特定靶细胞或特定细胞附近的非细胞结构，实现了ErbB1信号传导的选择性激活(例如上皮细胞)。在一些实施方案中，此类构建体得以用于治疗创伤(促进创伤愈合)，具有减少的副作用，尤其对于治疗慢性疾患和除局部施用治疗剂以外的应用(例如全身性创伤愈合)。
在一个实施方案中，所述修饰的信号剂是胰岛素或胰岛素类似物。在一些实施方案中，所述修饰的胰岛素或胰岛素类似物对胰岛素受体和/或IGF1或IGF2受体具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的胰岛素或胰岛素类似物对胰岛素受体和/或IGF1或IGF2受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。胰岛素受体处减弱的应答允许控制糖尿病、肥胖、代谢病症等等，同时引导远离IGF1或IGF2受体避免了促癌效应。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是胰岛素样生长因子-I或胰岛素样生长因子-II(IGF-1或IGF-2)。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是IGF-1。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对胰岛素受体和/或IGF1受体具有降低的亲和力和/或活性。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂可以结合至IGF1受体并且拮抗所述受体的活性。在此类实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IGF1受体具有降低的亲和力和/或活性，从而允许以减弱的方式拮抗所述受体的活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对胰岛素受体和/或IGF1受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的信号传导剂对IGF2受体具有降低的亲和力和/或活性，从而允许以减弱的方式拮抗所述受体的活性。在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂对胰岛素受体具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性，并且因此不干扰胰岛素信号传导。在各个实施方案中，这适用于癌症治疗。在各个实施方案中，本发明的剂可以防止IR同种型A引起对癌症治疗的抗性。
在一个实施方案中，所述修饰的信号传导剂是EPO。在各个实施方案中，所述修饰的EPO剂相对于本文描述的基于野生型EPO或其它EPO的剂对EPO受体(EPOR)受体和/或肝配蛋白受体(EphR)具有降低的亲和力和/或活性。在一些实施方案中，所述修饰的EPO剂对EPO受体(EPOR)受体和/或Eph受体(EphR)具有基本上降低或消除的亲和力和/或活性。说明性EPO受体包括但不限于EPOR同源二聚体或EPOR/CD131异源二聚体。还包括β-共用受体(βcR)作为EPO受体。说明性Eph受体包括但不限于EPHA1、EPHA2、EPHA3、EPHA4、EPHA5、EPHA6、EPHA7、EPHA8、EPHA9、EPHA10、EPHB1、EPHB2、EPHB3、EPHB4、EPHB5和EPHB6。在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含一个或多个突变，所述突变致使所述EPO蛋白对包含一种或多种不同的EPO受体或Eph受体的受体(例如异源二聚体、异源三聚体等，包括但不限于：EPOR-EPHB4、EPOR-βcR-EPOR)具有降低的亲和力。还提供了欧洲专利公布号2492355的受体，包括但不限于NEPOR，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述人EPO具有以下氨基酸序列(信号肽加下划线)：
在一个实施方案中，所述人EPO蛋白是EPO的成熟形式(信号肽被切割掉)，它是具有以下序列的166个氨基酸残基的糖蛋白：
预计人EPO蛋白的结构包含四螺旋束，包括螺旋A、螺旋B、螺旋C和螺旋D。在各个实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含位于EPO蛋白的对生物活性重要的四个区域，即氨基酸残基10-20、44-51、96-108和142-156中的一个或多个突变。在一些实施方案中，所述一个或多个突变位于残基11-15、44-51、100-108和147-151处。这些残基局限于螺旋A(Val11、Arg14和Tyr15)、螺旋C(Ser100、Arg103、Ser104和Leu108)、螺旋D(Asn147、Arg150、Gly151和Leu155)和A/B连接环(残基42-51)。在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白在氨基酸41-52之间以及氨基酸147、150、151和155的残基处包含突变。不希望受理论束缚，相信这些残基的突变对受体结合与体外生物学活性都具有实质性影响。在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白在残基11、14、15、100、103、104和108处包含突变。不希望受理论束缚，相信这些残基的突变对受体结合活性具有中度影响，而且对体外生物学活性具有大得多的影响。说明性取代包括但不限于Val11Ser、Arg14Ala、Arg14Gln、Tyr15Ile、Pro42Asn、Thr44Ile、Lys45Asp、Val46Ala、Tyr51Phe、Ser100Glu、Ser100Thr、Arg103Ala、Ser104Ile、Ser104Ala、Leu108Lys、Asn147Lys、Arg150Ala、Gly151Ala和Leu155Ala中的一个或多个。
在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含影响生物活性而不影响结合的突变，例如Eliot等,Mapping of the Active Site of Recombinant Human Erythropoietin,1997年1月15日；Blood:89(2)中列出的那些突变，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含涉及EPO蛋白中参与受体接触的表面残基的一个或多个突变。不希望受理论束缚，相信这些表面残基的突变不太可能影响蛋白质折叠，从而保留一定的生物活性。可以突变的说明性表面残基包括但不限于残基147和150。在说明性实施方案中，所述突变是取代，包括N147A、N147K、R150A和R150E中的一个或多个。
在一些实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含在残基N59、E62、L67和L70处的一个或多个突变以及影响二硫键形成的一个或多个突变。不希望受理论束缚，相信这些突变影响折叠和/或预计处在被包埋的位置上，并且因此间接地影响生物活性。
在一个实施方案中，所述修饰的EPO蛋白包含K20E取代，所述取代显著减少受体结合。参见Elliott等,(1997)Blood,89:493-502，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
可以并入本发明的嵌合EPO蛋白中的其它EPO突变公开于例如以下文献中：Elliott等,(1997)Blood,89:493-502，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文；和Taylor等,(2010)PEDS,23(4):251-260，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。
在各个实施方案中，所述信号传导剂是毒素或有毒的酶。在一些实施方案中，所述毒素或有毒的酶来源于植物和细菌。说明性的毒素或有毒的酶包括但不限于白喉毒素、假单胞菌毒素、炭疽毒素、核糖体灭活蛋白(RIP)如篦麻毒素和肥皂草素、蒴莲根毒素、相思子毒素、白树毒素和美洲商陆抗病毒蛋白。其它毒素包括Mathew等,(2009)Cancer Sci 100(8):1359-65中公开的那些，全部公开内容以引用的方式并入本文。在此类实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以用于以细胞类型特异性方式诱导细胞死亡。在此类实施方案中，所述毒素可以经过修饰，例如突变以降低所述毒素的亲和力和/或活性以便实现减弱的效应，如针对本文的其它信号传导剂所描述。
与信号传导剂的多特异性嵌合体和融合物
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质是与一个或多个如本文所描述的信号传导剂和/或一个或多个额外的靶向部分的嵌合体或融合物的一部分。因此，本发明提供了包括一个或多个信号传导剂和针对非细胞结构的靶向部分和/或一个或多个额外的靶向部分的嵌合或融合蛋白质。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有一个或多个靶向部分，所述靶向部分靶向两个不同的非细胞结构(例如，以形成突触)或相同的非细胞结构(例如以获得更浓的信号传导剂或治疗效果)。在一些实施方案中，一个所述靶向部分靶向非细胞结构，而另一个靶向部分靶向相邻细胞上的抗原或受体。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质是多特异性的，即所述嵌合蛋白质包含两个或更多个靶向部分，所述靶向部分具有识别并结合两个或更多个靶标(例如抗原或受体或表位)的识别结构域(例如抗原识别结构域)。在此类实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以包含两个或更多个靶向部分，所述靶向部分具有识别并结合相同抗原上或不同抗原上或不同受体上的两个或更多个表位的识别结构域。在各个实施方案中，此类多特异性嵌合蛋白质表现出诸多有利性质，如增加的亲合力和/或提高的选择性。在一个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含两个靶向部分并且是双特异性的，即结合并识别相同抗原上或不同抗原上或不同受体上的两个表位。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含两个或更多个靶向部分，每一个靶向部分是如本文描述的抗体或抗体衍生物。在一个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质至少包含一个包含针对非细胞结构的抗原识别结构域的VHH和一个包含针对肿瘤抗原或免疫细胞的识别结构域的抗体或抗体衍生物。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质具有靶向不同的抗原或受体的两个或更多个靶向部分，并且一个靶向部分可以减弱其抗原或受体，例如所述靶向部分以低亲和力或亲合力结合其抗原或受体(包括例如以比另一个靶向部分对其抗原或受体具有的亲和力或亲合力低的亲和力或亲合力，举例来说，结合亲和力之间的差异可以是约10倍、或25倍、或50倍、或100倍、或300倍、或500倍、或1000倍、或5000倍；举例来说，较低亲和力或亲合力靶向部分能以中至高nM或低至中μM范围内的KD结合其抗原或受体，而较高亲和力或亲合力靶向部分能以中至高pM或低至中nM范围内的KD结合其抗原或受体)。举例来说，在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含减弱的靶向部分，所述减弱的靶向部分针对混杂抗原或受体，从而可以改善对目标细胞的靶向(例如经由另一个靶向部分)并且防止对多个类型的细胞，包括未被疗法靶向的那些细胞的效应(例如通过以比这些实施方案中提供的亲和力更高的亲和力结合混杂抗原或受体)。
可以使用本领域中已知的方法来构建本发明的多特异性嵌合蛋白质，参见例如美国专利号9,067,991、美国专利公布号20110262348和WO 2004/041862，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在一个说明性实施方案中，可以通过化学交联，例如通过如Blattler等,Biochemistry 24,1517-1524和EP294703所描述使氨基酸残基与有机衍生化剂反应来构建本发明的包含两个或更多个靶向部分的多特异性嵌合蛋白质，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在另一个说明性实施方案中，通过基因融合，即构建包括个别靶向部分的多肽的单个多肽来构建包含两个或更多个靶向部分的多特异性嵌合蛋白质。举例来说，可以形成单个多肽构建体，所述构建体编码具有针对非细胞结构的抗原识别结构域的第一VHH和具有针对肿瘤抗原的识别结构域的第二抗体或抗体衍生物。PCT专利申请WO 96/34103中公开了一种产生二价或多价VHH多肽构建体的方法，所述专利申请的全部内容以引用的方式并入本文。在另一个说明性实施方案中，可以通过使用接头来构建本发明的多特异性嵌合蛋白质。举例来说，具有针对非细胞结构的抗原识别结构域的第一VHH的羧基末端可以连接至具有针对肿瘤抗原的识别结构域的第二抗体或抗体衍生物的氨基末端(或相反)。本文描述了可以使用的示例性接头。在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质的组分没有使用接头而直接与彼此连接。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质识别并结合至非细胞结构和一个或多个免疫细胞上发现的一个或多个抗原，所述免疫细胞可以包括但不限于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞(例如，细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤T细胞)、B淋巴细胞、浆细胞、树突状细胞或其子集。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质特异性地结合至目标抗原并且有效地直接或间接地征募一个或多个免疫细胞。在说明性实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以直接或间接地将免疫细胞，例如树突状细胞征募至作用位点(作为非限制性实例，如肿瘤微环境)。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质识别并结合至非细胞结构和癌细胞或肿瘤细胞上发现的一个或多个抗原。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质能够或得以用于涉及改变免疫细胞的平衡从而有利于对肿瘤进行免疫攻击的方法中。举例来说，本发明的嵌合蛋白质可以改变临床重要部位处的免疫细胞比率，从而有利于可以杀死和/或抑制肿瘤的细胞(例如T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀伤(NK)细胞、自然杀伤T(NKT)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)、B细胞和树突状细胞，并且对抗保护肿瘤的细胞(例如骨髓来源的抑制细胞(MDSC)、调控T细胞(Treg)、肿瘤相关的嗜中性粒细胞(TAN)、M2巨噬细胞、肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)或其子集)。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质能够增加效应T细胞与调控T细胞的比率。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性结合至与癌细胞或肿瘤细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募肿瘤细胞。举例来说，在一些实施方案中，将肿瘤细胞募集至可以杀死和/或抑制肿瘤细胞的一个或多个效应细胞(例如本文描述的免疫细胞)。
肿瘤细胞或癌细胞是指细胞或组织的不受控制的生长和/或细胞存活时间的异常增加和/或对干扰身体器官和系统的正常功能的细胞凋亡的抑制。举例来说，肿瘤细胞包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。说明性肿瘤细胞包括但不限于以下各项的细胞：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小非分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
肿瘤细胞或癌细胞还包括但不限于癌瘤，例如各种亚型，包括例如腺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和迁移细胞癌)、肉瘤(包括例如骨和软组织)、白血病(包括例如急性骨髓性、急性成淋巴细胞性、慢性骨髓性、慢性淋巴细胞性和毛细胞性)、淋巴瘤和骨髓瘤(包括例如霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、轻链、非分泌性、MGUS和浆细胞瘤)和中枢神经系统癌(包括例如脑(例如神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、寡枝神经胶质瘤和室管膜瘤)、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经瘤和脊髓肿瘤(例如脑膜瘤和纤维神经瘤)。
说明性肿瘤抗原包括但不限于MART-1/Melan-A、gp100、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脱氨酶结合蛋白(ADAbp)、亲环蛋白b、结肠直肠相关抗原(CRC)-0017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原性表位CAP-1和CAP-2、etv6、aml1、前列腺特异性抗原(PSA)及其免疫原性表位PSA-1、PSA-2和PSA-3、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、T细胞受体/CD3-ξ链、MAGE家族肿瘤抗原(例如MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10、MAGE-A11、MAGE-A12、MAGE-Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-C1、MAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、GAGE家族肿瘤抗原(例如GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-1、NAG、GnT-V、MUM-1、CDK4、酪氨酸酶、p53、MUC家族、HER2/neu、p21ras、RCAS1、α-胎儿球蛋白、E-钙粘蛋白、α-连锁蛋白、β-连锁蛋白和γ-连锁蛋白、p120ctn、gp100Pmel117、PRAME、NY-ESO-1、cdc27、腺瘤性结肠息肉病蛋白(APC)、胞衬蛋白、连接蛋白37、Ig独特型、p15、gp75、GM2和GD2神经节苷脂、病毒产物如人乳头状瘤病毒蛋白、Smad家族肿瘤抗原、lmp-1、NA、EBV编码的核抗原(EBNA)-1、脑糖原磷酸化酶、SSX-1、SSX-2(HOM-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1CT-7、c-erbB-2、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD37、CD56、CD70、CD74、CD138、AGS16、MUC1、GPNMB、Ep-CAM、PD-L1、PD-L2和PMSA。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些肿瘤抗原中的一个或多个的靶向部分。
一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质识别并结合至非细胞结构(例如，在肿瘤微环境内)以及相邻的肿瘤细胞或免疫细胞上的抗原。在一些实施方案中，所述多特异性嵌合蛋白质直接或间接地将免疫细胞征募至肿瘤细胞或肿瘤微环境。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与T细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募T细胞。在一个实施方案中，所述抗原识别结构域特异性地结合至效应T细胞。在一些实施方案中，所述抗原识别结构域直接或间接地征募效应T细胞，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。说明性效应T细胞包括细胞毒性T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD8+、CD45RO+)；CD4+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；CD8+效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD8+、CCR7+、CD62Lhi、IL-7R/CD127+)；效应记忆T细胞(例如CD62L低、CD44+、TCR、CD3+、IL-7R/CD127+、IL-15R+、CCR7低)；中枢记忆T细胞(例如CCR7+、CD62L+、CD27+；或CCR7hi、CD44+、CD62Lhi、TCR、CD3+、IL-7R/CD127+、IL-15R+)；CD62L+效应T细胞；CD8+效应记忆T细胞(TEM)，包括早期效应记忆T细胞(CD27+CD62L-)和晚期效应记忆T细胞(CD27-CD62L-)(分别是TemE和TemL)；CD127(+)CD25(低/-)效应T细胞；CD127(-)CD25(-)效应T细胞；CD8+干细胞记忆效应细胞(TSCM)(例如CD44(低)CD62L(高)CD122(高)sca(+))；TH1效应T细胞(例如CXCR3+、CXCR6+和CCR5+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-12R+、IFNγR+、CXCR3+)、TH2效应T细胞(例如CCR3+、CCR4+和CCR8+；或αβTCR、CD3+、CD4+、IL-4R+、IL-33R+、CCR4+、IL-17RB+、CRTH2+)；TH9效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+)；TH17效应T细胞(例如αβTCR、CD3+、CD4+、IL-23R+、CCR6+、IL-1R+)；CD4+CD45RO+CCR7+效应T细胞、ICOS+效应T细胞；CD4+CD45RO+CCR7(-)效应T细胞；以及分泌IL-2、IL-4和/或IFN-γ的效应T细胞。
说明性目标T细胞抗原包括例如(并且在适当时包括细胞外域)：CD8、CD3、SLAMF4、IL-2Rα、4-1BB/TNFRSF9、IL-2Rβ、ALCAM、B7-1、IL-4R、B7-H3、BLAME/SLAMFS、CEACAM1、IL-6R、CCR3、IL-7Rα、CCR4、CXCR1/IL-SRA、CCR5、CCR6、IL-10Rα、CCR7、IL-10Rβ、CCRS、IL-12Rβ1、CCR9、IL-12Rβ2、CD2、IL-13Rα1、IL-13、CD3、CD4、ILT2/CDS5j、ILT3/CDS5k、ILT4/CDS5d、ILT5/CDS5a、鲁特格林(lutegrin)α4/CD49d、CDS、整合素αE/CD103、CD6、整合素αM/CD11b、CDS、整合素αX/CD11c、整合素β2/CD1S、KIR/CD15S、CD27/TNFRSF7、KIR2DL1、CD2S、KIR2DL3、CD30/TNFRSFS、KIR2DL4/CD15Sd、CD31/PECAM-1、KIR2DS4、CD40配体/TNFSF5、LAG-3、CD43、LAIR1、CD45、LAIR2、CDS3、白三烯B4-R1、CDS4/SLAMF5、NCAM-L1、CD94、NKG2A、CD97、NKG2C、CD229/SLAMF3、NKG2D、CD2F-10/SLAMF9、NT-4、CD69、NTB-A/SLAMF6、共用γ链/IL-2Rγ、骨调素、CRACC/SLAMF7、PD-1、CRTAM、PSGL-1、CTLA-4、RANK/TNFRSF11A、CX3CR1、CX3CL1、L-选择素、CXCR3、SIRPβ1、CXCR4、SLAM、CXCR6、TCCR/WSX-1、DNAM-1、促胸腺生成素、EMMPRIN/CD147、TIM-1、EphB6、TIM-2、Fas/TNFRSF6、TIM-3、Fas配体/TNFSF6、TIM-4、FcγRIII/CD16、TIM-6、TNFR1/TNFRSF1A、粒溶素、TNF RIII/TNFRSF1B、TRAILR1/TNFRSF10A、ICAM-1/CD54、TRAIL R2/TNFRSF10B、ICAM-2/CD102、TRAILR3/TNFRSF10C、IFN-γR1、TRAILR4/TNFRSF10D、IFN-γR2、TSLP、IL-1 R1和TSLPR。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性T细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
作为非限制性实例，在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有针对T细胞上表达的检查点标记物，例如PD-1、CD28、CTLA4、ICOS、BTLA、KIR、LAG3、CD137、OX40、CD27、CD40L、TIM3和A2aR中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与B细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募B细胞，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。说明性目标B细胞抗原包括例如CD10、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD38、CD39、CD40、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CD78、CD79a/b、CD80、CD81、CD82、CD83、CD84、CD85、CD86、CD89、CD98、CD126、CD127、CDw130、CD138和CDw150。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性B细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与自然杀伤细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募自然杀伤细胞，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。说明性目标自然杀伤细胞抗原包括例如TIGIT、2B4/SLAMF4、KIR2DS4、CD155/PVR、KIR3DL1、CD94、LMIR1/CD300A、CD69、LMIR2/CD300c、CRACC/SLAMF7、LMIR3/CD300LF、Kir1α、DNAM-1、LMIR5/CD300LB、Fc-εRII、LMIR6/CD300LE、Fc-γR1/CD64、MICA、Fc-γRIIB/CD32b、MICB、Fc-γRIIC/CD32c、MULT-1、Fc-γRIIA/CD32a、结合素-2/CD112、Fc-γRIII/CD16、NKG2A、FcRH1/IRTA5、NKG2C、FcRH2/IRTA4、NKG2D、FcRH4/IRTA1、NKp30、FcRH5/IRTA2、NKp44、Fc受体样蛋白3/CD16-2、NKp46/NCR1、NKp80/KLRF1、NTB-A/SLAMF6、Rae-1、Rae-1α、Rae-1β、Rae-1δ、H60、Rae-1ε、ILT2/CD85j、Rae-1γ、ILT3/CD85k、TREM-1、ILT4/CD85d、TREM-2、ILT5/CD85a、TREM-3、KIR/CD158、TREML1/TLT-1、KIR2DL1、ULBP-1、KIR2DL3、ULBP-2、KIR2DL4/CD158d和ULBP-3。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性NK细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与巨噬细胞/单核细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募巨噬细胞/单核细胞，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。说明性目标巨噬细胞/单核细胞抗原包括例如SIRP1a、B7-1/CD80、ILT4/CD85d、B7-H1、ILT5/CD85a、共用β链、整合素α4/CD49d、BLAME/SLAMF8、整合素αX/CD11c、CCL6/C10、整合素β2/CD18、CD155/PVR、整合素β3/CD61、CD31/PECAM-1、胶乳素、CD36/SR-B3、白三烯B4R1、CD40/TNFRSF5、LIMPIIISR-B2、CD43、LMIR1/CD300A、CD45、LMIR2/CD300c、CD68、LMIR3/CD300LF、CD84/SLAMF5、LMIR5/CD300LB、CD97、LMIR6/CD300LE、CD163、LRP-1、CD2F-10/SLAMF9、MARCO、CRACC/SLAMF7、MD-1、ECF-L、MD-2、EMMPRIN/CD147、MGL2、内皮素/CD105、骨激活素/GPNMB、Fc-γRI/CD64、骨调素、Fc-γRIIB/CD32b、PD-L2、Fc-γRIIC/CD32c、Siglec-3/CD33、Fc-γRIIA/CD32a、SIGNR1/CD209、Fc-γRIII/CD16、SLAM、GM-CSFRα、TCCR/WSX-1、ICAM-2/CD102、TLR3、IFN-γR1、TLR4、IFN-γR2、TREM-1、IL-1RII、TREM-2、ILT2/CD85j、TREM-3、ILT3/CD85k、TREML1/TLT-1、2B4/SLAMF4、IL-10Rα、ALCAM、IL-10Rβ、氨基肽酶N/ANPEP、ILT2/CD85j、共用β链、ILT3/CD85k、Clq R1/CD93、ILT4/CD85d、CCR1、ILT5/CD85a、CCR2、CD206、整合素α4/CD49d、CCR5、整合素αM/CD11b、CCR8、整合素αX/CD11c、CD155/PVR、整合素β2/CD18、CD14、整合素β3/CD61、CD36/SR-B3、LAIR1、CD43、LAIR2、CD45、白三烯B4-R1、CD68、LIMPIIISR-B2、CD84/SLAMF5、LMIR1/CD300A、CD97、LMIR2/CD300c、CD163、LMIR3/CD300LF、凝血因子III/组织因子、LMIR5/CD300LB、CX3CR1、CX3CL1、LMIR6/CD300LE、CXCR4、LRP-1、CXCR6、M-CSF R、DEP-1/CD148、MD-1、DNAM-1、MD-2、EMMPRIN/CD147、MMR、内皮素/CD105、NCAM-L1、Fc-γRI/CD64、PSGL-1、Fc-γRIIIICD16、RP105、G-CSF R、L-选择素、GM-CSFRα、Siglec-3/CD33、HVEM/TNFRSF14、SLAM、ICAM-1/CD54、TCCR/WSX-1、ICAM-2/CD102、TREM-1、IL-6R、TREM-2、CXCR1/IL-8RA、TREM-3和TREML1/TLT-1。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性巨噬细胞/单核细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与树突状细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述靶向部分直接或间接地征募树突状细胞，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。说明性目标树突状细胞抗原包括例如Clec9A、XCR1、RANK、CD36/SRB3、LOX-1/SR-E1、CD68、MARCO、CD163、SR-A1/MSR、CD5L、SREC-1、CL-P1/COLEC12、SREC-II、LIMPIIISRB2、RP105、TLR4、TLR1、TLR5、TLR2、TLR6、TLR3、TLR9、4-IBB配体/TNFSF9、IL-12/IL-23p40、4-氨基-1,8-萘二甲酰亚胺、ILT2/CD85j、CCL21/6Ckine、ILT3/CD85k、8-氧代-dG、ILT4/CD85d、8D6A、ILT5/CD85a、A2B5、鲁特格林α4/CD49d、Aag、整合素β2/CD18、AMICA、朗格汉斯蛋白(Langerin)、B7-2/CD86、白三烯B4R1、B7-H3、LMIR1/CD300A、BLAME/SLAMF8、LMIR2/CD300c、Clq R1/CD93、LMIR3/CD300LF、CCR6、LMIR5/CD300LB CCR7、LMIR6/CD300LE、CD40/TNFRSF5、MAG/Siglec-4-a、CD43、MCAM、CD45、MD-1、CD68、MD-2、CD83、MDL-1/CLEC5A、CD84/SLAMF5、MMR、CD97、NCAML1、CD2F-10/SLAMF9、骨激活素GPNMB、Chern23、PD-L2、CLEC-1、RP105、CLEC-2、CLEC-8、Siglec-2/CD22、CRACC/SLAMF7、Siglec-3/CD33、DC-SIGN、DCE205、Siglec-5、DC-SIGNR/CD299、Siglec-6、DCAR、Siglec-7、DCIR/CLEC4A、Siglec-9、DEC-205、Siglec-10、Dectin-1/CLEC7A、Siglec-F、Dectin-2/CLEC6A、SIGNR1/CD209、DEP-1/CD148、SIGNR4、DLEC、SLAM、EMMPRIN/CD147、TCCR/WSX-1、Fc-γR1/CD64、TLR3、Fc-γRIIB/CD32b、TREM-1、Fc-γRIIC/CD32c、TREM-2、Fc-γRIIA/CD32a、TREM-3、Fc-γRIII/CD16、TREML1/TLT-1、ICAM-2/CD102和辣椒素R1。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性DC抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与选自但不限于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其子集的免疫细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述抗原识别结构域直接或间接地征募巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其子集，例如，在一些实施方案中，征募至治疗部位(例如具有一个或多个疾病细胞或者为了治疗效果而加以调节的细胞的位置)。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与巨核细胞和/或血小板相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。说明性目标巨核细胞和/或血小板抗原包括例如GP IIb/IIIa、GPIb、vWF、PF4和TSP。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性巨核细胞和/或血小板抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与红细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。说明性目标红细胞抗原包括例如CD34、CD36、CD38、CD41a(血小板糖蛋白IIb/IIIa)、CD41b(GPIIb)、CD71(转铁蛋白受体)、CD105、血型糖蛋白A、血型糖蛋白C、c-kit、HLA-DR、H2(MHC-II)和猕猴抗原。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些说明性红细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与肥大细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。说明性目标肥大细胞抗原包括例如SCFR/CD117、FcεRI、CD2、CD25、CD35、CD88、CD203c、C5R1、CMA1、FCER1A、FCER2、TPSAB1。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些肥大细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与嗜碱性粒细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。说明性目标嗜碱性粒细胞抗原包括例如FcεRI、CD203c、CD123、CD13、CD107a、CD107b和CD164。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些嗜碱性粒细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与嗜中性粒细胞相关的靶标(例如抗原或受体)的识别结构域的靶向部分。说明性目标嗜中性粒细胞抗原包括例如7D5、CD10/CALLA、CD13、CD16(FcRIII)、CD18蛋白(LFA-1、CR3和p150、95)、CD45、CD67和CD177。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些嗜中性粒细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在一些实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至与嗜酸性粒细胞相关的靶标(例如抗原或受体)或在此类细胞附近的靶标(例如非细胞靶标)的识别结构域的靶向部分。说明性目标嗜酸性粒细胞抗原包括例如CD35、CD44和CD69。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含结合这些嗜酸性粒细胞抗原中的一个或多个的靶向部分。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质包含具有特异性地结合至本领域技术人员已知的适当抗原或细胞表面标记物的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述抗原或细胞表面标记物是组织特异性标记物。说明性组织特异性标记物包括但不限于内皮细胞表面标记物如ACE、CD14、CD34、CDH5、ENG、ICAM2、MCAM、NOS3、PECAM1、PROCR、SELE、SELP、TEK、THBD、VCAM1、VWF；平滑肌细胞表面标记物如ACTA2、MYH10、MYH11、MYH9、MYOCD；成纤维细胞(基质)细胞表面标记物如ALCAM、CD34、COL1A1、COL1A2、COL3A1、FAP、PH-4；上皮细胞表面标记物如CD1D、K6IRS2、KRT10、KRT13、KRT17、KRT18、KRT19、KRT4、KRT5、KRT8、MUC1、TACSTD1；新生血管标记物，如CD13、TFNA、α-vβ-3(αVβ3)、E-选择素；和脂肪细胞表面标记物如ADIPOQ、FABP4和RETN。在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含结合这些抗原中的一个或多个的靶向部分。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质的靶向部分结合具有这些抗原的细胞中的一个或多个。
在各个实施方案中，本发明的多特异性嵌合蛋白质具有针对检查点标记物，例如PD-1/PD-L1或PD-L2、CD28/CD80或CD86、CTLA4/CD80或CD86、ICOS/ICOSL或B7RP1、BTLA/HVEM、KIR、LAG3、CD137/CD137L、OX40/OX40L、CD27、CD40L、TIM3/Gal9和A2aR中的一个或多个的一个或多个靶向部分。
作为非限制性实例，在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含针对以下的靶向部分：(i)T细胞上表达的检查点标记物，例如PD-1、PD-L1、PD-L2、CD28、CTLA4、ICOS、BTLA、KIR、LAG3、CD137、OX40、Cd27、CD40L、TIM3和A2aR中的一个或多个；和(ii)针对非细胞结构的靶向部分，以及本文描述的修饰的(例如突变)信号传导剂中的任一种。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有一个或多个针对PD-1的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质具有一个或多个选择性地结合PD-1多肽的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包含一个或多个选择性地结合PD-1多肽的抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或者融合蛋白质。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-1抗体喷罗珠单抗(pembrolizumab)(又名MK-3475、KEYTRUDA)或其片段。喷罗珠单抗和其它人源化抗PD-1抗体公开于Hamid等,(2013)New England Journal of Medicine 369(2):134-44、US 8,354,509和WO 2009/114335中，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的喷罗珠单抗或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-1抗体纳武单抗(nivolumab)(又名BMS-936558、MDX-1106、ONO-4538、OPDIVO)或其片段。纳武单抗(克隆5C4)和特异性地结合至PD-1的其它人单克隆抗体公开于US 8,008,449和WO 2006/121168中，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，纳武单抗或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-1抗体皮地利珠单抗(pidilizumab)(又名CT-011、hBAT或hBAT-1)或其片段。皮地利珠单抗和其它人源化抗PD-I单克隆抗体公开于US 2008/0025980和WO2009/101611中，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗PD-1抗体或其抗原结合片段包含含有选自US 2008/0025980的SEQ ID NO:15-18的氨基酸序列的轻链可变区：
US 2008/0025980的SEQ ID No:15：
US 2008/0025980的SEQ ID No:16：
US 2008/0025980的SEQ ID No:17：
US 2008/0025980的SEQ ID No:18：
和/或含有选自US 2008/0025980的SEQ ID NO:20-24的氨基酸序列的重链：
US 2008/0025980的SEQ ID No:20：
US 2008/0025980的SEQ ID No:21：
US 2008/0025980的SEQ ID No:22：
US 2008/0025980的SEQ ID No:23：
US 2008/0025980的SEQ ID No:24：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含含有US 2008/0025980的SEQ ID NO:18的轻链和含有US 2008/0025980的SEQ ID NO:22的重链。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含AMP-514(又名MEDI-0680)。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含WO2010/027827和WO2011/066342中公开的PD-L2-Fc融合蛋白AMP-224，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在此类实施方案中，所述靶向部分可以包括包含WO2010/027827的SEQ ID NO:4的靶向结构域：
和/或包含WO2010/027827的SEQ ID NO:83的B7-DC融合蛋白：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含肽AUNP 12或者US 2011/0318373或8,907,053中公开的其它肽中的任一种。举例来说，所述靶向部分可以包含具有以下序列的AUNP12(即，US 2011/0318373的化合物8或SEQ ID NO:49)：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1E3或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1E3或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1E8或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1E8或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-1抗体1H3或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1H3或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如例如US 8,907,065和WO 2008/071447中公开的针对PD-1的VHH，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，所述针对PD-1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID NO:347-351：
US 8,907,065的SEQ ID No:347：
US 8,907,065的SEQ ID No:348：
US 8,907,065的SEQ ID No:349：
US 8,907,065的SEQ ID No:350：
US 8,907,065的SEQ ID No:351：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-1抗体或其片段中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自US2011/0271358的SEQ ID NO:25-29的氨基酸序列的重链：
US2011/0271358的SEQ ID No:25：
US2011/0271358的SEQ ID No:26：
US2011/0271358的SEQ ID No:27：
US2011/0271358的SEQ ID No:28：
US2011/0271358的SEQ ID No:29：
和/或含有选自US2011/0271358的SEQ ID NO:30-33的氨基酸序列的轻链：
US2011/0271358的SEQ ID No:30：
US2011/0271358的SEQ ID No:31：
US2011/0271358的SEQ ID No:32：
US2011/0271358的SEQ ID No:33：
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含选自TSR-042(Tesaro,Inc.)、REGN2810(Regeneron Pharmaceuticals,Inc.)、PDR001(Novartis Pharmaceuticals)和BGB-A317(BeiGene Ltd.)的一个或多个针对PD-1的抗体或其抗体片段。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有一个或多个针对PD-L1的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质具有一个或多个选择性地结合PD-L1多肽的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包含一个或多个选择性地结合PD-L1多肽的抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或者融合蛋白质。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-L1抗体MEDI4736(又名度伐鲁单抗(durvalumab))或其片段。MEDI4736对PD-L1具有选择性，并且阻断PD-L1与PD-1和CD80受体的结合。用于本文提供的方法中的MEDI4736及其抗原结合片段包含重链和轻链或重链可变区和轻链可变区。MEDI4736的序列公开于WO/2016/06272中，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的MEDI4736或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链：
在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的MEDI4736或其抗原结合片段包含含有WO/2016/06272的SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有WO/2016/06272的SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-L1抗体阿特珠单抗(atezolizumab)(又名MPDL3280A、RG7446)或其片段。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的阿特珠单抗或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含抗PD-L1抗体阿维鲁单抗(avelumab)(又名MSB0010718C)或其片段。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的阿维鲁单抗或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体BMS-936559(又名12A4、MDX-1105)或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的BMS-936559或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体3G10或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的3G10或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体10A5或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的10A5或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体5F8或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的5F8或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体10H10或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的10H10或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体1B12或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1B12或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体7H1或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的7H1或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体11E6或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的11E6或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体12B7或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的12B7或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2013/0309250和WO2007/005874中公开的抗PD-L1抗体13G4或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的13G4或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-L1抗体1E12或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1E12或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-L1抗体1F4或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的1F4或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-L1抗体2G11或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2G11或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738中公开的抗PD-L1抗体3B6或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的3B6或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US 2014/0044738和WO2012/145493中公开的抗PD-L1抗体3D10或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的3D10或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自US2011/0271358的SEQ ID No:34-38的氨基酸序列的重链：
US2011/0271358的SEQ ID No:34：
US2011/0271358的SEQ ID No:35：
US2011/0271358的SEQ ID No:36：
US2011/0271358的SEQ ID No:37：
US2011/0271358的SEQ ID No:38：
和/或含有选自US2011/0271358的SEQ ID No:39-42的氨基酸序列的轻链：
US2011/0271358的SEQ ID No:39：
US2011/0271358的SEQ ID No:40：
US2011/0271358的SEQ ID No:41：
US2011/0271358的SEQ ID No:42：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.7A4或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.7A4或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:2：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:7：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.9D10或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.9D10或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:12：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:17：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.14H9或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.14H9或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:22：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:27：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.20A8或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.20A8或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:32：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:37：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体3.15G8或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的3.15G8或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:42：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:47：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体3.18G1或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的3.18G1或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:52：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:57：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.7A4OPT或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.7A4OPT或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:62：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:67：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如WO 2011/066389、US8,779,108和US2014/0356353中公开的抗PD-L1抗体2.14H9OPT或其片段，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的2.14H9OPT或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链可变区：
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和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2011/066389的SEQ ID No:77：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含WO2016/061142中公开的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自WO2016/061142的SEQ ID NO:18、30、38、46、50、54、62、70和78的氨基酸序列的重链：WO2016/061142的SEQ ID No:18：
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和/或含有选自WO2016/061142的SEQ ID No:22、26、34、42、58、66、74、82和86的氨基酸序列的轻链：
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在一个实施方案中，所述靶向部分包含WO2016/022630中公开的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自WO2016/022630的SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42和46的氨基酸序列的重链：
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和/或含有选自WO2016/022630的SEQ ID No:4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44和48的氨基酸序列的轻链：
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WO2016/022630的SEQ ID No:44：
WO2016/022630的SEQ ID No:48：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含WO2015/112900中公开的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自WO 2015/112900的SEQ ID No:38、50、82和86的氨基酸序列的重链：
WO2015/112900的SEQ ID No:38：
WO 2015/112900的SEQ ID No:50：
WO 2015/112900的SEQ ID No:82：
WO 2015/112900的SEQ ID No:86：
和/或含有选自WO 2015/112900的SEQ ID No:42、46、54、58、62、66、70、74和78的氨基酸序列的轻链：
WO2015/112900的SEQ ID No:42：
WO 2015/112900的SEQ ID No:46：
WO 2015/112900的SEQ ID No:54：
WO 2015/112900的SEQ ID No:58：
WO 2015/112900的SEQ ID No:62：
WO 2015/112900的SEQ ID No:66：
WO 2015/112900的SEQ ID No:70：
WO 2015/112900的SEQ ID No:74：
WO 2015/112900的SEQ ID No:78：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含WO 2010/077634和US8,217,149中公开的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗PD-L1抗体或其抗原结合片段包含含有以下氨基酸序列的重链区：
WO 2010/077634的SEQ ID No:20：
和/或含有以下氨基酸序列的轻链可变区：
WO 2010/077634的SEQ ID No:21：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含可获自如US 20120039906中公开的可在CNCM寄存编号CNCM I-4122、CNCM I-4080和CNCM I-4081下获取的杂交瘤的抗PD-L1抗体中的任一个，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如例如US 8,907,065和WO 2008/071447中公开的针对PD-L1的VHH，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，所述针对PD-L1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID NO:394-399：
US 8,907,065的SEQ ID No:394：
US 8,907,065的SEQ ID No:395：
US 8,907,065的SEQ ID No:396：
US 8,907,065的SEQ ID No:397：
US 8,907,065的SEQ ID No:398：
US 8,907,065的SEQ ID No:399：
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质具有一个或多个针对PD-L2的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质具有一个或多个选择性地结合PD-L2多肽的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包含一个或多个选择性地结合PD-L2多肽的抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或者融合蛋白质。
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如例如US 8,907,065和WO 2008/071447中公开的针对PD-L2的VHH，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，所述针对PD-1的VHH包含US 8,907,065的SEQ ID No:449-455：
US 8,907,065的SEQ ID No:449：
US 8,907,065的SEQ ID No:450：
US 8,907,065的SEQ ID No:451：
US 8,907,065的SEQ ID No:452：
US 8,907,065的SEQ ID No:453：
US 8,907,065的SEQ ID No:454：
US 8,907,065的SEQ ID No:455：
在一个实施方案中，所述靶向部分包含如US2011/0271358和WO2010/036959中公开的抗PD-L2抗体中的任一个，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在说明性实施方案中，用于本文提供的方法中的抗体或其抗原结合片段包含含有选自US2011/0271358的SEQ ID No:43-47的氨基酸序列的重链：
US2011/0271358的SEQ ID No:43：
US2011/0271358的SEQ ID No:44：
US2011/0271358的SEQ ID No:45：
US2011/0271358的SEQ ID No:46：
US2011/0271358的SEQ ID No:47：
和/或含有选自US2011/0271358的SEQ ID No:48-51的氨基酸序列的轻链：
US2011/0271358的SEQ ID No:48：
US2011/0271358的SEQ ID No:49：
US2011/0271358的SEQ ID No:50：
US2011/0271358的SEQ ID No:51：
在各个实施方案中，本发明的靶向部分可以包含靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的序列，所述序列与本文公开的序列中的任一个具有至少约60％、至少约61％、至少约62％、至少约63％、至少约64％、至少约65％、至少约66％、至少约67％、至少约68％、至少约69％、至少约70％、至少约71％、至少约72％、至少约73％、至少约74％、至少约75％、至少约76％、至少约77％、至少约78％、至少约79％、至少约80％、至少约81％、至少约82％、至少约83％、至少约84％、至少约85％、至少约86％、至少约87％、至少约88％、至少约89％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或100％同一性(例如，与本文公开的序列中的任一个具有约60％、或约61％、或约62％、或约63％、或约64％、或约65％、或约66％、或约67％、或约68％、或约69％、或约70％、或约71％、或约72％、或约73％、或约74％、或约75％、或约76％、或约77％、或约78％、或约79％、或约80％、或约81％、或约82％、或约83％、或约84％、或约85％、或约86％、或约87％、或约88％、或约89％、或约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、约99％或约100％序列同一性)。
在各个实施方案中，本发明的靶向部分可以包含如本文公开的靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的重链、轻链、重链可变区、轻链可变区、互补性决定区(CDR)和构架区序列的任何组合。
选择性地结合或靶向PD-1、PD-L1和/或PD-L2的其它抗体、抗体衍生物或形式、肽或多肽或者融合蛋白质公开于以下文献中：WO 2011/066389、US 2008/0025980、US 2013/0034559、US 8,779,108、US 2014/0356353、US 8,609,089、US 2010/028330、US 2012/0114649、WO 2010/027827、WO 2011/066342、US 8,907,065、WO 2016/062722、WO 2009/101611、WO2010/027827、WO 2011/066342、WO 2007/005874、WO 2001/014556、US2011/0271358、WO 2010/036959、WO 2010/077634、US 8,217,149、US 2012/0039906、WO 2012/145493、US 2011/0318373、美国专利号8,779,108、US 20140044738、WO 2009/089149、WO2007/00587、WO 2016061142、WO 2016,02263、WO 2010/077634和WO 2015/112900，所述文献的全部公开内容以引用的方式并入本文。
在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质可以包括靶向部分，所述靶向部分是能够特异性结合至细胞或非细胞受体的基于蛋白质的剂，如所述细胞或非细胞受体的天然配体。在各个实施方案中，所述细胞受体见于一种或多种免疫细胞上，所述免疫细胞可以包括但不限于T细胞、细胞毒性T淋巴细胞、T辅助细胞、自然杀手(NK)细胞、自然杀手T(NKT)细胞、抗肿瘤巨噬细胞(例如M1巨噬细胞)、B细胞、树突状细胞或其子集。在一些实施方案中，所述细胞受体见于巨核细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞或其子集上。
在一些实施方案中，所述靶向部分是天然配体，如趋化因子。可以包括在本发明的嵌合蛋白质中的说明性趋化因子包括但不限于CCL1、CCL2、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9、CCL10、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CL17、CCL18、CCL19、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CLL25、CCL26、CCL27、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCL17、XCL1、XCL2、CX3CL1、HCC-4和LDGF-PBP。在一个说明性实施方案中，所述靶向部分可以是XCL1，它是识别并结合至树突状细胞受体XCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL1，它是识别并结合至CCR8的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL2，它是识别并结合至CCR2或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL3，它是识别并结合至CCR1、CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL4，它是识别并结合至CCR1或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL5，它是识别并结合至CCR1或CCR3或CCR4或CCR5的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL6，它是识别并结合至CCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL7，它是识别并结合至CCR2或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL8，它是识别并结合至CCR1或CCR2或CCR2B或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL9，它是识别并结合至CCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL10，它是识别并结合至CCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL11，它是识别并结合至CCR2或CCR3或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL13，它是识别并结合至CCR2或CCR3或CCR5或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL14，这是识别并结合至CCR1或CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL15，它是识别并结合至CCR1或CCR3的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL16，它是识别并结合至CCR1、CCR2、CCR5或CCR8的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL17，它是识别并结合至CCR4的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL19，它是识别并结合至CCR7的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL20，它是识别并结合至CCR6的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL21，它是识别并结合至CCR7的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL22，它是识别并结合至CCR4的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL23，它是识别并结合至CCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL24，它是识别并结合至CCR3的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL25，它是识别并结合至CCR9的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL26，它是识别并结合至CCR3的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL27，它是识别并结合至CCR10的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CCL28，它是识别并结合至CCR3或CCR10的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL1，它是识别并结合至CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL2，它是识别并结合至CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL3，它是识别并结合至CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL4，它是识别并结合至CXCR3B的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL5，它是识别并结合至CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL6，它是识别并结合至CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL8，它是识别并结合至CXCR1或CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL9，它是识别并结合至CXCR3的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL10，它是识别并结合至CXCR3的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL11，它是识别并结合至CXCR3或CXCR7的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL12，它是识别并结合至CXCR4或CXCR7的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL13，它是识别并结合至CXCR5的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CXCL16，它是识别并结合至CXCR6的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是LDGF-PBP，它是识别并结合至CXCR2的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是XCL2，它是识别并结合至XCR1的趋化因子。在另一个说明性实施方案中，所述靶向部分是CX3CL1，它是识别并结合至CX3CR1的趋化因子。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含呈各种组合形式的靶向部分。在一个说明性实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以包含两个靶向部分，其中两个靶向部分都是抗体或其衍生物。在另一个说明性实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以包含两个靶向部分，其中所述靶向部分中一个是抗体或其衍生物，并且另一个靶向部分是细胞受体的天然配体。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域在功能上调节(作为非限制性实例，部分或完全中和)目标靶标(例如抗原、受体、细胞或非细胞)，例如基本上抑制、降低或中和所述抗原具有的生物效应。举例来说，各种识别结构域可以针对一种或多种正主动抑制或能够抑制例如携带肿瘤的患者的免疫系统的肿瘤抗原。举例来说，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质在功能上调节免疫抑制信号(例如检查点抑制剂)，例如TIM-3、BTLA、PD-1、CTLA-4、B7-H4、GITR、半乳糖凝集素-9、HVEM、PD-L1、PD-L2、B7-H3、CD244、CD160、TIGIT、SIRPα、ICOS、CD172a和TMIGD2中的一个或多个。举例来说，在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质经过工程化以破坏、阻断、降低和/或抑制免疫抑制信号的传递，作为非限制性实例，PD-1与PD-L1或PD-L2的结合和/或CTLA-4与AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A中的一或多个的结合。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域结合但不在功能上调节目标靶标(例如抗原、受体)，例如所述识别结构域是或近似于结合抗体。举例来说，在各个实施方案中，所述识别结构域仅仅靶向所述抗原或受体，但基本上不抑制、降低或在功能上调节所述抗原或受体具有的生物效应。举例来说，以上描述的较小抗体形式(例如与例如全长抗体相比)中有一些能够牢固靶向从而接入表位并且提供更大范围的特异性结合位置。在各个实施方案中，所述识别结构域结合在物理上与对其生物活性重要的抗原或受体位点(例如，抗原的活性位点)隔开的表位。
此类非中和性结合得以用于本发明的各个实施方案中，包括使用本发明的嵌合蛋白质经由效应抗原，如本文描述的那些效应抗原中的任一种将活性免疫细胞直接或间接地征募至有需要的位点的方法中。举例来说，在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质可以用在减少或消除肿瘤的方法中以便经由CD8将细胞毒性T细胞直接或间接地征募至肿瘤细胞或肿瘤微环境(例如，所述嵌合蛋白质可以包含抗CD8识别结构域和针对肿瘤微环境中的非细胞结构的识别结构域)。在此类实施方案中，需要直接或间接地征募表达CD8的细胞毒性T细胞但不在功能上调节CD8活性。相反，在这些实施方案中，CD8信号传导是肿瘤减少或消除作用的重要部分。作为另一个实例，在减少或消除肿瘤的各种方法中，使用本发明的嵌合蛋白质经由CLEC9A直接或间接地征募树突状细胞(DC)(例如，所述嵌合蛋白质可以包含抗CLEC9A识别结构域和针对肿瘤微环境中的非细胞结构的识别结构域)。在此类实施方案中，需要直接或间接地征募表达CLEC9A的DC但不在功能上调节CLEC9A活性。相反，在这些实施方案中，CLEC9A信号传导是肿瘤减少或消除作用的重要部分。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域结合至例如树突状细胞上的XCR1。举例来说，在一些实施方案中，所述识别结构域包含所有或一部分XCL1或非中和性抗XCR1剂。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域结合至免疫调节抗原(例如免疫刺激或免疫抑制)。在各个实施方案中，所述免疫调节抗原是4-1BB、OX-40、HVEM、GITR、CD27、CD28、CD30、CD40、ICOS配体、OX-40配体、LIGHT(CD258)、GITR配体、CD70、B7-1、B7-2、CD30配体、CD40配体、ICOS、ICOS配体、CD137配体和TL1A中的一种或多种。在各个实施方案中，此类免疫刺激抗原表达于肿瘤细胞上。在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域结合但不在功能上调节此类免疫刺激抗原，并且因此允许征募表达这些抗原的细胞而不降低或丧失其潜在肿瘤减少或消除能力。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质的识别结构域可能在包含两个具有中和活性的识别结构域，或者包含两个具有非中和(例如结合)活性的识别结构域，或者包含一个具有中和活性的识别结构域和一个具有非中和(例如结合)活性的识别结构域的嵌合蛋白质的情况下。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有一个靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)的识别结构域和一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素。在具体实施方案中，本发明的构建体具有一个靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)的识别结构域和一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的TNF。在具体实施方案中，本发明的构建体具有一个靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)的识别结构域和一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的白介素。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有一个靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)的识别结构域和两个信号传导剂，所述信号传导剂是以下情况之一：修饰的干扰素和修饰的干扰素、修饰的干扰素和修饰的TNF、修饰的干扰素和修饰的白介素、修饰的白介素和修饰的白介素、修饰的白介素和修饰的TNF，以及修饰的TNF和修饰的TNF。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)和CLEC9A的两个识别结构域以及一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素和/或修饰的白介素和/或修饰的TNF。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)和CD8的两个识别结构域以及一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素和/或修饰的白介素和/或修饰的TNF。
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含具有包含至少一个CDR1、CDR2和/或CDR3序列的可变域的VHH。
在一些实施方案中，所述CDR1序列是选自：
在一些实施方案中，所述CDR2序列是选自：
在一些实施方案中，所述CDR3序列是选自：
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215和SEQ ID NO:217。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ IDNO:215和SEQ ID NO:218。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:215和SEQ ID NO:219。
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:216和SEQ ID NO:217。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ IDNO:216和SEQ ID NO:218。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:213、SEQ ID NO:216和SEQ ID NO:219。
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215和SEQ ID NO:217。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ IDNO:215和SEQ ID NO:218。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:215和SEQ ID NO:219。
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:216和SEQ ID NO:217。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ IDNO:216和SEQ ID NO:218。在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含SEQ ID NO:214、SEQ ID NO:216和SEQ ID NO:219。
在各个实施方案中，靶向CD8的识别结构域包含与选自以下序列的氨基酸序列具有至少90％序列相似性、或至少93％序列相似性、或至少95％序列相似性、或至少97％序列相似性、或至少98％序列相似性、或至少99％序列相似性的氨基酸序列：
R3HCD27(SEQ ID NO:220)
或
R3HCD129(SEQ ID NO:221)
或
R2HCD26(SEQ ID NO:222)
在具体实施方案中，本发明的构建体具有靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)和CD3的两个识别结构域以及一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素和/或修饰的白介素和/或修饰的TNF。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)和Kir1或TIGIT的两个识别结构域以及一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素和/或修饰的白介素和/或修饰的TNF。
在具体实施方案中，本发明的构建体具有靶向肌腱蛋白(包括但不限于肌腱蛋白CA1)和内皮标记物的的两个识别结构域以及一个信号传导剂，所述信号传导剂是修饰的干扰素和/或修饰的白介素和/或修饰的TNF。
接头和官能团
在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质可以包括一个或多个官能团、残基或部分。在各个实施方案中，所述一个或多个官能团、残基或部分连接或基因融合至本文描述的信号传导剂或靶向部分中的任一个。在一些实施方案中，此类官能团、残基或部分赋予本发明的嵌合蛋白质以一种或多种所期望的性质或功能性。此类官能团和用于将其引入至嵌合蛋白质中的技术的实例在本领域中是已知的，举例来说，参见Remington's PharmaceuticalSciences,第16版,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.(1980)。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含合适的药理学上可接受的聚合物，如聚(乙二醇)(PEG)或其衍生物(如甲氧基聚(乙二醇)或mPEG)。在一些实施方案中，PEG部分的连接增加了半衰期和/或降低了嵌合蛋白质的免疫原性。一般来说，可以使用任何合适的形式的聚乙二醇化，如本领域中用于抗体和抗体片段的聚乙二醇化(包括但不限于单结构域抗体，如VHH)；参见例如Chapman,Nat.Biotechnol.,54,531-545(2002)；Veronese和Harris,Adv.Drug Deliv.Rev.54,453-456(2003)；Harris和Chess,Nat.Rev.Drug.Discov.,2,(2003)；以及WO04060965，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。用于对蛋白质进行聚乙二醇化的各种试剂也可以得自市面，例如，得自美国的Nektar Therapeutics。在一些实施方案中，使用定点聚乙二醇化，具体来说，经由半胱氨酸残基(参见例如Yang等,Protein Engineering,16,10,761-770(2003)，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。举例来说，出于这个目的，PEG可以连接至本发明的嵌合蛋白质中天然存在的半胱氨酸残基。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质经修饰以便适当地引入一个或多个供连接PEG用的半胱氨酸残基，或者可以使用本领域中已知的技术将包含一个或多个供连接PEG用的半胱氨酸残基的氨基酸序列融合至所述嵌合蛋白质的氨基和/或羧基末端。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含N连接或O连接的糖基化。在一些实施方案中，引入所述N连接或O连接的糖基化作为共翻译和/或翻译后修饰的一部分。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含一个或多个可检测标记或者其它信号产生基团或部分。用于连接、使用和检测它们的合适的标记和技术在本领域中是已知的，并且包括但不限于荧光标记(如荧光素、异硫氰酸酯、若丹明、藻红素、藻青素、别藻蓝素、邻苯二甲醛以及荧光胺和荧光金属如Eu或其它镧系金属)、磷光标记、化学发光标记或生物发光标记(如鲁米那(luminal)、异鲁米诺(isoluminol)、热稳定性吖啶酯、咪唑、吖啶盐、草酸酯、二氧杂环丁烷或GFP和其类似物)、放射性同位素、金属、金属螯合物或金属阳离子或者特别适用于体内、体外或原位诊断和成像的其它金属或金属阳离子，以及发色团和酶(如苹果酸脱氢酶、葡萄球菌核酸酶、δ-V-类固醇异构酶、酵母乙醇脱氢酶、α-甘油磷酸脱氢酶、磷酸丙糖异构酶、生物素亲和素过氧化酶、辣根过氧化酶、碱性磷酸酶、天冬酰胺酶、葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、核糖核酸酶、尿素酶、催化酶、葡萄糖-VI-磷酸脱氢酶、葡糖淀粉酶和乙酰化胆碱脂酶)。其它合适的标记包括可以使用NMR或ESR光谱加以检测的部分。本发明的此类标记的VHH和多肽可以例如用于体外、体内或原位测定(包括本身已知的免疫测定，如ELISA、RIA、EIA和其他“夹心测定”等)以及体内诊断和成像目的，取决于具体标记的选择。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含连接或基因融合至所述嵌合蛋白质的标签。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质可以包括单个标签或多个标签。举例来说，所述标签是不抑制或妨碍所述嵌合蛋白质与非细胞结构或任何其它目标抗原如肿瘤抗原结合的肽、糖或DNA分子。在各个实施方案中，所述标签是至少约：三至五个氨基酸长、五至八个氨基酸长、八至十二个氨基酸长、十二至十五个氨基酸长或十五至二十个氨基酸长。说明性标签描述于例如美国专利公布号US2013/0058962中。在一些实施方案中，所述标签是亲和力标签，如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签。在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含His标签。在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含HA标签。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含螯合基团，例如，以螯合金属或金属阳离子之一。合适的螯合基团例如包括但不限于二乙烯三胺五乙酸(DTPA)或乙二胺四乙酸(EDTA)。
在一些实施方案中，所述官能团、残基或部分包含作为特异性结合对，如生物素-(链霉)亲和素结合对的一个部分的官能团。此类官能团可以用来将本发明的嵌合蛋白质连接至与所述结合对的另一半结合的另一个蛋白质、多肽或化学化合物，即，通过形成结合对。举例来说，本发明的嵌合蛋白质可以缀合至生物素，并且连接至与亲和素或链霉亲和素缀合的另一个蛋白质、多肽、化合物或载体。举例来说，此类缀合的嵌合蛋白质可以用作例如诊断系统中的报告分子，其中可检测信号产生剂缀合至亲和素或链霉亲和素。此类结合对还可以例如用于使嵌合蛋白质结合至载体，包括适用于药物目的的载体。一个非限制性实例是Cao和Suresh,Journal of Drug Targeting,8,4,257(2000)描述的脂质体制剂。此类结合对还可以用于将治疗活性剂连接本发明的嵌合蛋白质。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质任选地包含一个或多个接头。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包括连接各结合区和/或靶向部分的接头。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包括连接每一个信号传导剂和靶向部分(或者，如果有多于一个靶向部分，则将信号传导剂连接至所述靶向部分之一)的接头。在一些实施方案中，所述接头可以用于将如本文描述的各种官能团、残基或部分连接至所述嵌合蛋白质。在一些实施方案中，所述接头是不影响或降低结合区和结合蛋白的稳定性、取向、结合、中和和/或清除率特征的单个氨基酸或多个氨基酸。在各个实施方案中，所述接头是选自肽、蛋白质、糖或核酸。
在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含连接所述靶向部分和所述信号转导剂的接头。在一些实施方案中，本发明的嵌合蛋白质包含处于所述信号转导剂内的接头(例如，在单链TNF的情况下，它可以包含两个接头以产生三聚体)。
本发明设想了使用多种接头序列。在各个实施方案中，所述接头可以来源于天然存在的多结构域蛋白质或者是如例如以下文献中描述的经验接头：Chichili等,(2013),Protein Sci.22(2):153-167；Chen等,(2013),Adv Drug Deliv Rev.65(10):1357-1369，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，可以使用接头设计数据库和计算机程序，如以下文献中描述的那些来设计所述接头：Chen等,(2013),Adv DrugDeliv Rev.65(10):1357-1369；和Crasto等,(2000),Protein Eng.13(5):309-312，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在各个实施方案中，所述接头可以是功能性的。举例来说但不限于，所述接头可以发挥功能以改善本发明的嵌合蛋白质的折叠和/或稳定性，改善表达，改善药代动力学，和/或改善生物活性。
在一些实施方案中，所述接头是多肽。在一些实施方案中，所述接头少于约100个氨基酸长。举例来说，所述接头可以少于约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸长。在一些实施方案中，所述接头是多肽。在一些实施方案中，所述接头超过约100个氨基酸长。举例来说，所述接头可以超过约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸长。在一些实施方案中，所述接头是柔性的。在另一个实施方案中，所述接头是刚性的。
在一些实施方案中，所述接头长度允许靶向部分和信号传导剂与其受体有效结合。举例来说，在一些实施方案中，所述接头长度允许靶向部分的一个(例如，如果有多于一个)与非细胞结构以及信号传导剂与附近细胞上的受体有效结合。
在一些实施方案中，所述接头长度允许靶向部分和信号传导剂与其受体有效结合。举例来说，在一些实施方案中，所述接头长度允许所述靶向部分中的一个和所述信号传导剂与相同细胞上的受体有效结合以及另一个靶向部分与另一个细胞有效结合。本文其它部分提供了说明性的成对细胞。
在一些实施方案中，所述接头长度至少等于所述靶向部分中的一个和所述信号传导剂与相同细胞上的受体的结合位点之间的最小距离。在一些实施方案中，所述接头长度是所述靶向部分中的一个和所述信号传导剂与相同细胞上的受体的结合位点之间的最小距离的至少两倍、或三倍、或四倍、或五倍、或十倍、或二十倍、或25倍、或50倍、或一百倍、或更多倍。
在一些实施方案中，一个接头将两个靶向部分彼此连接并且这个接头具有较短长度，而一个接头连接靶向部分和信号传导剂，这个接头比连接两个靶向部分的接头更长。举例来说，连接两个靶向部分的接头与连接靶向部分和信号传导剂的接头之间的氨基酸长度差异可以是约100、约95、约90、约85、约80、约75、约70、约65、约60、约55、约50、约45、约40、约35、约30、约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约12、约11、约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3或约2个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头是柔性的。在另一个实施方案中，所述接头是刚性的。
在各个实施方案中，所述接头基本上由甘氨酸和丝氨酸残基构成(例如约30％、或约40％、或约50％、或约60％、或约70％、或约80％、或约90％、或约95％、或约97％甘氨酸和丝氨酸)。举例来说，在一些实施方案中，所述接头是(Gly4Ser)n，其中n是约1至约8，例如1、2、3、4、5、6、7或8。在一个实施方案中，所述接头序列是GGSGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:195)。其它说明性接头包括但不限于具有序列LE、GGGGS(SEQ ID NO:196)、(GGGGS)n(n＝1-4)(SEQ ID NO:197)、(Gly)8(SEQ ID NO:198)、(Gly)6(SEQ ID NO:199)、(EAAAK)n(n＝1-3)(SEQ ID NO:200)、A(EAAAK)nA(n＝2-5)(SEQ ID NO:201)、AEAAAKEAAAKA(SEQ ID NO:202)、A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A(SEQ ID NO:203)、PAPAP(SEQ ID NO:204)、KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:205)、EGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO:206)、GSAGSAAGSGEF(SEQ ID NO:207)和(XP)n的接头，其中X表示任何氨基酸，例如Ala、Lys或Glu。在各个实施方案中，所述接头是GGS。
在一些实施方案中，所述接头是以下接头中的一个或多个：GGGSE(SEQ ID NO:208)、GSESG(SEQ ID NO:209)、GSEGS(SEQ ID NO:210)、GEGGSGEGSSGEGSSSEGGGSEGGGSEGGGSEGGS(SEQ ID NO:211)和每4个氨基酸间隔随机放置G、S和E的接头。
在一些实施方案中，所述接头是抗体(例如，IgG、IgA、IgD和IgE，包括子类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的铰链区。在各个实施方案中，所述接头是抗体(例如，IgG、IgA、IgD和IgE，包括子类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的铰链区。IgG、IgA、IgD和IgE类抗体中发现的铰链区充当柔性间隔基，从而允许Fab部分在空间上自由移动。与恒定区相反，所述铰链结构域在结构上具有多样性，在序列和长度方面都因免疫球蛋白类别和子类而各异。举例来说，铰链区的长度和柔性因IgG子类而各异。IgG1的铰链区涵盖氨基酸216-231，而且因为它自由灵活，所以Fab片段可以关于其对称轴旋转并且在以两个重链间二硫桥中的第一个为中心的球体内移动。IgG2具有比IgG1短的铰链，具有12个氨基酸残基和四个二硫桥。IgG2的铰链区缺乏甘氨酸残基，相对较短，并且含有通过额外的重链间二硫桥加以稳定的刚性聚脯氨酸双螺旋。这些性质约束了IgG2分子的柔性。IgG3因其独特的延长铰链区(长达IgG1铰链的约四倍)，含有62个氨基酸(包括21个脯氨酸和11个半胱氨酸)，形成非柔性聚脯氨酸双螺旋而不同于其它子类。在IgG3中，Fab片段相对远离Fc片段，从而赋予所述分子以更大的柔性。IgG3中的细长铰链还负责其相较于其它子类的较高分子量。IgG4的铰链区比IgG1的铰链区短，并且其柔性介于IgG1的柔性与IgG2的柔性之间。铰链区的柔性按降序报告为IgG3>IgG1>IgG4>IgG2。
根据结晶学研究，免疫球蛋白铰链区可以在功能上进一步细分为三个区域：上铰链区、核心区和下铰链区。参见Shin等,1992Immunological Reviews 130:87。上铰链区包括从CH1的羧基端至铰链中约束运动的第一个残基，一般是形成介于两个重链之间的链间二硫键的第一个半胱氨酸残基的氨基酸。上铰链区的长度与抗体的区段柔性相关。核心铰链区含有重链间二硫桥，而下铰链区接合CH2结构域的氨基末端并且包括CH2中的残基。同前。野生型人IgG1的核心铰链区含有序列Cys-Pro-Pro-Cys，所述序列当通过二硫键形成发生二聚时产生环状八肽，认为所述环状八肽充当枢轴，因此赋予柔性。在各个实施方案中，本发明的接头包含任何抗体(例如IgG、IgA、IgD和IgE，包括子类(例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，以及IgA1和IgA2))的上铰链区、核心区和下铰链区中的一个或两个或三个。铰链区还可以含有一个或多个糖基化位点，所述糖基化位点包括众多类型的结构独特的位点以供碳水化合物附接用。举例来说，IgA1含有铰链区的17个氨基酸区段内的五个糖基化位点，从而赋予铰链区多肽对肠蛋白酶的抗性，这被视为分泌免疫球蛋白的有利性质。在各个实施方案中，本发明的接头包含一个或多个糖基化位点。在各个实施方案中，所述接头是人IgG4抗体的铰链-CH2-CH3结构域。
在需要时，本发明的嵌合蛋白质可以连接至包含CH2和CH3结构域中的一个或两个和任选地铰链区的抗体Fc区。举例来说，作为单个核苷酸序列连接至Fc区的编码本发明的嵌合蛋白质的载体可用于制备此类多肽。
在一些实施方案中，所述接头是合成的接头，如PEG。
在各个实施方案中，所述接头可以是功能性的。举例来说但不限于，所述接头可以发挥功能以改善本发明的嵌合蛋白质的折叠和/或稳定性，改善表达，改善药代动力学，和/或改善生物活性。在另一个实例中，所述接头可以发挥功能以使所述嵌合蛋白质靶向特定的细胞类型或位置。
嵌合蛋白质的修饰和产生
在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含靶向部分，所述靶向部分是VHH。在各个实施方案中，所述VHH不局限于具体的生物来源或具体的制备方法。举例来说，所述VHH一般可以通过以下方式获得：(1)通过分离天然存在的重链抗体的VHH结构域；(2)通过表达编码天然存在的VHH结构域的核苷酸序列；(3)通过天然存在的VHH结构域的“人源化”或通过编码此类人源化VHH结构域的核酸的表达；(4)通过来自任何动物物种，如来自哺乳动物物种，如来自人的天然存在的VH结构域的“骆驼化”，或通过编码此类骆驼化VH结构域的核酸的表达；(5)通过如本领域中描述的“结构域抗体”或“Dab”的“骆驼化”，或通过编码此类骆驼化VH结构域的核酸的表达；(6)通过使用合成或半合成技术来制备本领域中已知的蛋白质、多肽或其它氨基酸序列；(7)通过使用本领域中已知的核酸合成技术来制备编码VHH的核酸，随后表达如此获得的核酸；和/或(8)通过上述一项或多项的任何组合。
在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含VHH，所述VHH对应于针对非细胞结构的天然存在的重链抗体的VHH结构域。在一些实施方案中，一般可以通过以下方式来产生或获得此类VHH序列：通过用非细胞结构适当地使一种骆驼免疫(即，以便产生免疫应答和/或针对非细胞结构的重链抗体)；通过从所述骆驼获得合适的生物样品(如血液样品或任何B细胞样品)；和通过以所述样品为起始物，使用任何合适的已知技术来产生针对非细胞结构的VHH序列。在一些实施方案中，针对非细胞结构的天然存在的VHH结构域可以获自骆驼VHH序列的天然库，例如，通过使用本领域中已知的一种或多种筛检技术，使用非细胞结构或其至少一个部分、片段、抗原决定子或表位对此类库进行筛检。举例来说，此类库和技术描述于WO9937681、WO0190190、WO03025020和WO03035694中，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，可以使用来源于天然VHH库的经过改善的合成或半合成库，如通过诸多技术如随机诱变和/或CDR改组而获自天然VHH库的VHH库，如例如WO0043507中所描述，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文。在一些实施方案中，用于获得针对非细胞结构的VHH序列的另一种技术包括适当地使能够表达重链抗体的转基因哺乳动物免疫(即，以便产生免疫应答和/或针对非细胞结构的重链抗体)，从所述转基因哺乳动物获得合适的生物样品(如血液样品，或任何B细胞样品)，然后使用任何合适的已知技术，以所述样品为起始物来产生针对非细胞结构的VHH序列。举例来说，出于这个目的，可以使用表达重链抗体的小鼠以及WO02085945中和WO04049794中描述的其它方法和技术(所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。
在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含已经“人源化”，即通过将天然存在的VHH序列的氨基酸序列中(并且具体来说是构架序列中)的一个或多个氨基酸残基置换为人的常规4链抗体的VH结构域中对应位置上存在的一或多个氨基酸残基的VHH。这可以使用本领域中已知的人源化技术来进行。在一些实施方案中，可能的人源化取代或人源化取代的组合可以通过本领域中已知的方法来确定，例如，通过在VHH序列与天然存在的人VH结构域序列之间进行比较。在一些实施方案中，对所述人源化取代进行选择，以使所得人源化VHH仍保留有利的功能性质。一般来说，作为人源化的结果，本发明的VHH与对应的天然存在的VHH结构域相比可能更“像人的”，同时仍保留有利性质，如降低的免疫原性。在各个实施方案中，本发明的人源化VHH可以用本领域中已知的任何合适的方式来获得，并且因此不严格限于已经使用包含天然存在的VHH结构域的多肽作为起始物质获得的多肽。
在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含已经“骆驼化”，即通过将常规4链抗体的天然存在的VH结构域的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸残基置换为骆驼重链抗体的VHH结构域中对应位置上存在的一或多个氨基酸残基的VHH。在一些实施方案中，此类“骆驼化”取代被插入在形成和/或存在于VH-VL界面上的氨基酸位置上和/或在所谓的骆驼科标志残基上(参见例如WO9404678，所述文献的全部内容以引用的方式并入本文)。在一些实施方案中，用作起始物质或起始点来产生或设计骆驼化VHH的VH序列是来自哺乳动物的VH序列，例如，人的VH序列，如VH3序列。在各个实施方案中，所述骆驼化VHH可以用本领域中已知的任何合适的方式获得(即，如以上第(1)至(8)点下面所指示)，并且因此不严格限于已经使用包含天然存在的VH结构域的多肽作为起始物质而获得的多肽。
在各个实施方案中，“人源化”与“骆驼化”可以通过以下方式来进行：分别提供编码天然存在的VHH结构域或VH结构域的核苷酸序列，然后用本领域中已知的方式改变所述核苷酸序列中的一个或多个密码子，以这种方式使得新的核苷酸序列分别编码“人源化”或“骆驼化”VHH。然后可以用本领域中已知的方式表达这种核酸，以便提供本发明的所期望的VHH。可选地，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列，可以分别设计本发明的所期望的人源化或骆驼化VHH的氨基酸序列，然后使用本领域中已知的肽合成技术从头合成。而且，分别基于天然存在的VHH结构域或VH结构域的氨基酸序列或核苷酸序列，可以分别设计编码所期望的人源化或骆驼化VHH的核苷酸序列，然后使用本领域中已知的核酸合成技术从头合成，此后可以用本领域中已知的方式表达如此获得的核酸，以便提供本发明的所期望的VHH。用于以天然存在的VH序列或VHH序列为起始物获得本发明的VHH和/或编码其的核酸的其它合适的方法和技术在本领域中是已知的，并且可以例如包括以合适的方式组合一种或多种天然存在的VH序列的一个或多个部分(如一个或多个FR序列和/或CDR序列)、一种或多种天然存在的VHH序列的一个或多个部分(如一个或多个FR序列或CDR序列)和/或一个或多个合成或半合成序列，以便提供本发明的VHH或者编码其的核苷酸序列或核酸。
本文描述了用于产生本发明的嵌合蛋白质的方法。举例来说，编码本发明的嵌合蛋白质的DNA序列可以使用本领域中已知的方法化学合成。合成DNA序列可以连接至其它适当的核苷酸序列，包括例如表达控制序列，以产生编码所期望的嵌合蛋白质的基因表达构建体。因此，在各个实施方案中，本发明提供了包含编码本发明的嵌合蛋白质的核苷酸序列的分离的核酸。
编码本发明的嵌合蛋白质的核酸可以并入(连接)至表达载体中，由此可以通过转染、转化或转导技术而引入宿主细胞中。举例来说，可以通过反转录病毒转导将编码本发明的嵌合蛋白质的核酸引入至宿主细胞中。说明性宿主细胞是大肠杆菌细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、人胚肾293(HEK 293)细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)和骨髓瘤细胞。可以使转化的宿主细胞在允许宿主细胞表达编码本发明的嵌合蛋白质的基因的条件下生长。因此，在各个实施方案中，本发明提供了包含编码本发明的嵌合蛋白质的核酸的表达载体。在各个实施方案中，本发明额外提供了包含此类表达载体的宿主细胞。
具体的表达和纯化条件将取决于所采用的表达系统而变化。举例来说，如果在大肠杆菌中表达基因，那么首先通过将工程化的基因置于合适的细菌启动子例如Trp或Tac和原核信号序列的下游而将它克隆至表达载体中。在另一个实例中，如果将要在真核宿主细胞，例如CHO细胞中表达工程化的基因，那么首先将它插入含有例如合适的真核启动子、分泌信号、增强子和各种内含子的表达载体中。可以使用转染、转化或转导技术将基因构建体引入至宿主细胞中。
本发明的嵌合蛋白质可以通过使经编码所述嵌合蛋白质的表达载体转染的宿主细胞在允许表达所述蛋白质的条件下生长来产生。在表达后，可以使用本领域中众所周知的技术，例如亲和力标签如谷胱甘肽-S-转移酶(GST)和组氨酸(His)标签或通过色谱法对所述蛋白质进行收集和纯化。在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含His标签。在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含His标签和允许切割所述His标签的蛋白水解位点。
因此，在各个实施方案中，本发明提供了一种编码本发明的嵌合蛋白质的核酸。在各个实施方案中，本发明提供了一种包含编码本发明的嵌合蛋白质的核酸的宿主细胞。
药学上可接受的盐和赋形剂
本文描述的嵌合蛋白质可以具有能与无机或有机酸反应的充分碱性的官能团，或能与无机或有机碱反应的羧基，以形成药学上可接受的盐。如本领域中众所周知，药学上可接受的酸加成盐是由药学上可接受的酸形成。此类盐包括例如以下文献中列出的药学上可接受的盐：Journal of Pharmaceutical Science,66,2-19(1977)；和The Handbook ofPharmaceutical Salts；Properties,Selection,and Use.P.H.Stahl和C.G.Wermuth(编),Verlag,Zurich(Switzerland)2002，所述文献以引用的方式整体并入本文。
作为非限制性实例，药学上可接受的盐包括硫酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、草酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、油酸盐、丹宁酸盐、泛酸盐、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐、双羟萘酸盐、苯基乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、氯代苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、异丁酸盐、苯基丁酸盐、α-羟基丁酸盐、丁炔-1,4-二甲酸盐、己炔-1,4-二甲酸盐、癸酸盐、辛酸盐、肉桂酸盐、乙醇酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、苹果酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、酞酸盐、对苯二酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、癸二酸盐、辛二酸盐、对溴代苯磺酸盐、氯代苯磺酸盐、乙基磺酸盐、2-羟乙基磺酸盐、甲基磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、萘-1,5-磺酸盐、二甲苯磺酸盐和酒石酸盐。
术语“药学上可接受的盐”还指具有酸性官能团，如羧酸官能团的本发明组合物与碱的盐。合适的碱包括但不限于碱金属如钠、钾和锂的氢氧化物；碱土金属如钙和镁的氢氧化物；其它金属如铝和锌的氢氧化物；氨和有机胺，如未经取代或经羟基取代的单烷基胺、二烷基胺或三烷基胺、二环己基胺；三丁胺；吡啶；N-甲基,N-乙基胺；二乙基胺；三乙基胺；单(2-OH-低级烷基胺)、双(2-OH-低级烷基胺)或三(2-OH-低级烷基胺)，如单(2-羟基乙基)胺、双(2-羟基乙基)胺或三(2-羟基乙基)胺、2-羟基-叔丁胺或三(羟甲基)甲胺、N,N-二-低级烷基-N-(羟基-低级烷基)-胺，如N,N-二甲基-N-(2-羟基乙基)胺或三(2-羟基乙基)胺；N-甲基-D-葡萄糖胺；和氨基酸，如精氨酸、赖氨酸等等。
在一些实施方案中，本文描述的组合物呈药学上可接受的盐的形式。
药物组合物和制剂
在各个实施方案中，本发明有关于包含本文描述的嵌合蛋白质和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物。本文描述的任何药物组合物都可以作为包含药学上可接受的载体或媒剂的组合物的组分施用至受试者。此类组合物可以任选地包含适量的药学上可接受的赋形剂，以便提供用于适当施用的形式。
在各个实施方案中，药物赋形剂可以是液体，如水和油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些液体，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等等。所述药物赋形剂可以是例如生理盐水、阿拉伯树胶、明胶、淀粉糊、滑石、角蛋白、胶体二氧化硅、脲等等。另外，可以使用助剂、稳定剂、增稠剂、润滑剂和着色剂。在一个实施方案中，当施用至受试者时，所述药学上可接受的赋形剂是无菌的。当本文描述的任何剂经静脉内施用时，水是可用的赋形剂。还可以采用生理盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液作为液体赋形剂，具体来说，用于可注射溶液。合适的药物赋形剂还包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等等。本文描述的任何剂在需要时还可以包含微量润湿剂或乳化剂或pH值缓冲剂。合适的药物赋形剂的其它实例描述于Remington’s Pharmaceutical Sciences 1447-1676(AlfonsoR.Gennaro编,第19版,1995)中，所述文献以引用的方式并入本文。
本发明包括所描述的药物组合物(和/或其它治疗剂)的各种制剂形式。本文描述的任何发明药物组合物(和/或其它治疗剂)可以呈溶液、悬浮液、乳液、滴剂、片剂、丸剂、丹剂、胶囊剂、含有液体的胶囊剂、明胶胶囊、粉剂、持续释放制剂、栓剂、乳液、气雾剂、喷雾剂、悬浮液、冻干粉剂、冷冻悬浮液、干燥粉剂的形式或任何其它合用的形式。在一个实施方案中，所述组合物呈胶囊剂形式。在另一个实施方案中，所述组合物呈锭剂形式。在另一个实施方案中，所述药物组合物被配制呈软凝胶胶囊形式。在另一个实施方案中，所述医药组合物被配制呈明胶胶囊形式。在另一个实施方案中，所述药物组合物被配制为液体。
在必要时，本发明的药物组合物(和/或额外的剂)还可以包括增溶剂。所述剂还可以与如本领域中已知的合适的媒剂或递送装置一起递送。本文概述的组合疗法可以在单个递送媒剂或递送装置中共同递送。
本发明的包含本发明药物组合物(和/或额外的剂)的制剂可能适宜呈单位剂型的形式存在，并且可以通过制药领域中众所周知的任何方法来制备。此类方法一般包括使所述治疗剂与构成一种或多种辅助成分的载体缔合的步骤。典型地，所述制剂是通过使所述治疗剂均匀地并且密切地与液体载体、细粉状固体载体或二者缔合，然后在必要时将产物成形为所期望的制剂的剂型(例如湿式或干式造粒、粉末掺合物等，随后使用本领域中已知的常规方法进行制片)来制备。
在各个实施方案中，本文描述的任何药物组合物(和/或额外的剂)根据常规程序配制为适合于本文描述的施用模式的组合物。
施用途径包括例如：口服、皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外、舌下、鼻内、脑内、叶鞘内、经皮、直肠、通过吸入或局部。施用可以是局部的或全身的。在一些实施方案中，所述施用是通过口服实现。在另一个实施方案中，所述施用是通过肠胃外注射。施用模式可以留给医师判断，并且部分取决于医学疾患的部位。在大部分情况下，施用引起本文描述的任何剂释放至血流中。
在一个实施方案中，本文描述的嵌合蛋白质根据常规程序配制为适合于口服施用的组合物。举例来说，用于口服递送的组合物可以呈片剂、糖锭、水性或油性悬浮液、颗粒剂、粉剂、乳液、胶囊、糖浆或酏剂形式。口服施用的组合物可以包含一种或多种剂，例如甜味剂，如果糖、阿斯巴特(aspartame)或糖精；调味剂，如薄荷油、冬青油或樱桃油；著色剂；和防腐剂，以提供药学上可口的制剂。此外，在呈片剂或丸剂形式时，所述组合物可以经过包衣以延迟胃肠道中的崩解和吸收，从而在较长时间段内提供持续作用。在驱动本文描述的任何嵌合蛋白质的渗透活性剂周围的选择性渗透膜也适用于口服施用的组合物。在后面的这些平台中，来自于所述胶囊剂周围的环境的流体被驱动化合物吸入，由此膨胀从而通过孔口置换所述剂或剂组合物。与立即释放制剂的尖峰分布相反，这些递送平台可以提供本质上零阶的递送分布。时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯或硬脂酸甘油酯也是可用的。口服组合物可以包括标准赋形剂，如甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素和碳酸镁。在一个实施方案中，所述赋形剂属于药物等级。悬浮液以及活性化合物可以含有悬浮剂，举例来说，如乙氧基化异硬脂醇、聚氧化乙烯山梨糖醇和脱水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、皂土、琼脂、黄芪胶等及其混合物。
适用于肠胃外施用(例如静脉内、肌肉内、腹膜内、皮下和关节内注射和输注)的剂型包括例如溶液、悬浮液、分散液、乳液等等。它们还可以制造呈无菌固体组合物(例如冻干组合物)形式，所述形式可以在紧邻使用前溶解或悬浮在无菌可注射介质中。它们可以含有例如本领域中已知的悬浮或分散剂。适合肠胃外施用的制剂组分包括无菌稀释剂如注射用水、生理盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如EDTA；缓冲液如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐；和张力调节剂如氯化钠或葡萄糖。
对于静脉内施用而言，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、克列莫佛(Cremophor)ELTM(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)。所述载体在制造和存储条件下应当是稳定的，并且应当经过防腐以免受微生物影响。所述载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物的溶剂或分散介质。
本文提供的组合物可以单独或与其它合适的组分组合而制成气雾剂制剂(即，“喷雾”)以便经由吸入施用。气雾剂制剂可以放入加压可接受的推进剂中，如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等等。
本文描述的任何发明药物组合物(和/或额外的剂)可以通过控制释放或持续释放手段或通过本领域普通技术人员众所周知的递送装置施用。实例包括但不限于美国专利号3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123、4,008,719、5,674,533、5,059,595、5,591,767、5,120,548、5,073,543、5,639,476、5,354,556和5,733,556中所描述的那些，各美国专利以引用的方式整体并入本文。此类剂型可用于使用例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、其它聚合物基质、凝胶、渗透膜、渗透系统、多层涂层、微粒、脂质体、微球体或其组合提供一种或多种活性成分的控制释放或持续释放，从而在变化的比例下提供所期望的释放分布。可以容易地选择本领域技术人员已知的合适的控制释放或持续释放制剂，包括本文描述的那些，以便与本文描述的剂的活性成分一起使用。本发明因此提供了适合口服施用的单个单位剂型，如但不限于适合于控制释放或持续释放的片剂、胶囊剂、囊形片和胶囊片。
可以通过各种条件包括但不限于pH值变化、温度变化来刺激、通过适当的光的波长、酶的浓度或可用性、水的浓度或可用性或者其它生理条件或化合物来刺激活性成分的控制释放或持续释放。
在另一个实施方案中，控制释放系统可以放在欲治疗的目标区域的附近，因此仅需要全身剂量的一部分(参见例如Goodson,Medical Applications of ControlledRelease,同上,第2卷,第115-138页(1984))。可以使用Langer,1990,Science 249:1527-1533)的综述中讨论的其它控制释放系统。
药物制剂优选地是无菌的。可以例如通过经无菌过滤膜过滤来实现灭菌。在组合物被冻干的情况下，可以在冻干和复水之前或之后进行过滤灭菌。
施用和剂量
应当了解，根据本发明施用的嵌合蛋白质的实际剂量将根据具体剂型和施用模式而变化。本领域技术人员可以考虑能调节嵌合蛋白质的作用的许多因素(例如体重、性别、饮食、施用时间、施用途径、排泄速率、受试者的状况、药物组合、遗传倾向和反应敏感性)。可以连续地或者以最大耐受剂量内的一个或多个离散剂量进行施用。本领域技术人员可以使用常规剂量施用测试来确定指定条件组的最佳施用速率。
在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质的合适的剂量在约0.01mg/kg至约10g/kg受试者体重、约0.01mg/kg至约1g/kg受试者体重、约0.01mg/kg至约100mg/kg受试者体重、约0.01mg/kg至约10mg/kg受试者体重，例如约0.01mg/kg、约0.02mg/kg、约0.03mg/kg、约0.04mg/kg、约0.05mg/kg、约0.06mg/kg、约0.07mg/kg、约0.08mg/kg、约0.09mg/kg、约0.1mg/kg、约0.2mg/kg、约0.3mg/kg、约0.4mg/kg、约0.5mg/kg、约0.6mg/kg、约0.7mg/kg、约0.8mg/kg、约0.9mg/kg、约1mg/kg、约1.1mg/kg、约1.2mg/kg、约1.3mg/kg、约1.4mg/kg、约1.5mg/kg、约1.6mg/kg、约1.7mg/kg、约1.8mg/kg、1.9mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg、约10mg/kg体重、约100mg/kg体重、约1g/kg体重、约10g/kg体重的范围内，包括所有值和介于其之间的范围。
所述嵌合蛋白质的个别剂量可以呈含有例如每个单位剂型约0.01mg至约100g、约0.01mg至约75g、约0.01mg至约50g、约0.01mg至约25g、约0.01mg至约10g、约0.01mg至约7.5g、约0.01mg至约5g、约0.01mg至约2.5g、约0.01mg至约1g、约0.01mg至约100mg、约0.1mg至约100mg、约0.1mg至约90mg、约0.1mg至约80mg、约0.1mg至约70mg、约0.1mg至约60mg、约0.1mg至约50mg、约0.1mg至约40mg活性成分、约0.1mg至约30mg、约0.1mg至约20mg、约0.1mg至约10mg、约0.1mg至约5mg、约0.1mg至约3mg、约0.1mg至约1mg或每单位剂型约5mg至约80mg的单位剂型(例如，片剂或胶囊)的形式施用。举例来说，单位剂型可以是约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约200mg、约500mg、约1g、约2.5g、约5g、约10g、约25g、约50g、约75g、约100g，包括所有值和介于其之间的范围。
在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质是以每天约0.01mg至约100g、每天约0.01mg至约75g、每天约0.01mg至约50g、每天约0.01mg至约25g、每天约0.01mg至约10g、每天约0.01mg至约7.5g、每天约0.01mg至约5g、每天约0.01mg至约2.5g、每天约0.01mg至约1g、每天约0.01mg至约100mg、每天约0.1mg至约100mg、每天约0.1mg至约95mg、每天约0.1mg至约90mg、每天约0.1mg至约85mg、每天约0.1mg至约80mg、每天约0.1mg至约75mg、每天约0.1mg至约70mg、每天约0.1mg至约65mg、每天约0.1mg至约60mg、每天约0.1mg至约55mg、每天约0.1mg至约50mg、每天约0.1mg至约45mg、每天约0.1mg至约40mg、每天约0.1mg至约35mg、每天约0.1mg至约30mg、每天约0.1mg至约25mg、每天约0.1mg至约20mg、每天约0.1mg至约15mg、每天约0.1mg至约10mg、每天约0.1mg至约5mg、每天约0.1mg至约3mg、每天约0.1mg至约1mg、或每天约5mg至约80mg的量施用。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质是以约0.01mg、约0.02mg、约0.03mg、约0.04mg、约0.05mg、约0.06mg、约0.07mg、约0.08mg、约0.09mg、约0.1mg、约0.2mg、约0.3mg、约0.4mg、约0.5mg、约0.6mg、约0.7mg、约0.8mg、约0.9mg、约1mg、约2mg、约3mg、约4mg、约5mg、约6mg、约7mg、约8mg、约9mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg、约30mg、约35mg、约40mg、约45mg、约50mg、约55mg、约60mg、约65mg、约70mg、约75mg、约80mg、约85mg、约90mg、约95mg、约100mg、约200mg、约500mg、约1g、约2.5g、约5g、约7.5g、约10g、约25g、约50g、约75g、约100g的每日剂量施用，包括所有值和介于其之间的范围。
根据本发明的某些实施方案，包含嵌合蛋白质的药物组合物可以施用例如每天超过一次(例如每天约两次、约三次、约四次、约五次、约六次、约七次、约八次、约九次或约十次)、约每天一次、约每隔一天一次、约每第三天一次、约一周一次、约每两周一次、约每个月一次、约每两个月一次、约每三个月一次、约每六个月一次或约每年一次。
组合疗法和其它治疗剂
在各个实施方案中，将本发明的药物组合物与其它治疗剂联合共施用。共施用可以同时或依序进行。
在一个实施方案中，将该其它治疗剂和本发明的嵌合蛋白质同时施用给受试者。如本文所使用，术语“同时”意指该其它治疗剂和嵌合蛋白质的施用时间间隔不超过约60分钟，如不超过约30分钟、不超过约20分钟、不超过约10分钟、不超过约5分钟或不超过约1分钟。该其它治疗剂和嵌合蛋白质的施用可以通过同时施用单一制剂(例如包含该其它治疗剂和嵌合蛋白质的制剂)或独立的制剂(例如包括该其它治疗剂的第一制剂和包括嵌合蛋白质的第二制剂)来进行。
共施用不需要同时施用各治疗剂，只要其施用时程使得该其它治疗剂和嵌合蛋白质的药理学活性在时间上重叠，由此发挥组合治疗作用即可。举例来说，该其它治疗剂和嵌合蛋白质可以依序施用。如本文所使用，术语“依序”意指该其它治疗剂和嵌合蛋白质的施用时间间隔超过约60分钟。举例来说，依序施用该其它治疗剂与嵌合蛋白质之间的时间可以超过约60分钟、超过约2小时、超过约5小时、超过约10小时、超过约1天、超过约2天、超过约3天、间隔超过约1周、间隔超过约2周或间隔超过约一个月。最佳的施用时间将取决于代谢速率、排泄速率和/或所施用的其它治疗剂和嵌合蛋白质的药物动力学活性。可以先施用其它治疗剂或嵌合蛋白质。
共施用也不需要通过相同施用途径向受试者施用所述治疗剂。实际上，各治疗剂可以通过任何适当的途径，例如经肠胃外或非肠胃外施用。
在一些实施方案中，本文所描述的嵌合蛋白质当与另一种治疗剂共施用时协同起作用。在此类实施方案中，所述嵌合蛋白质和其它治疗剂的施用剂量可以低于当各剂用于单药疗法情形时所采用的剂量。
在一些实施方案中，本发明涉及化疗剂作为其它治疗剂。举例来说但不限于，本发明的嵌合蛋白质与化疗剂的这种组合可用于治疗癌症，如本文中其它部分所描述。化疗剂的实例包括但不限于烷化剂类，如噻替派(thiotepa)和CYTOXAN环磷酰胺；烷基磺酸酯类，如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类，如苯佐替派(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙烯亚胺类和甲基蜜胺类，包括六甲密胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；多聚乙酰类(acetogenins)(例如布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物拓扑替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；海绵抑素(cally statin)；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；念珠藻环肽类(cryptophycins)(例如，念珠藻环肽1和念珠藻环肽8)；海兔抑素(dolastatin)；倍癌霉素(duocarmycin)(包括合成类似物、KW-2189和CB 1-TM1)；伊斯罗宾(eleutherobin)；水鬼蕉碱(pancratistatin)；匍枝珊瑚醇(sarcodictyin)；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类，如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氮芥氧化物盐酸盐(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑(melphalan)、新恩比兴(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、乌拉莫司汀(uracil mustard)；亚硝基脲类，如卡莫司汀(carmustine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫斯汀(ranimnustine)；抗生素类，如烯二炔类抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，尤其是刺孢霉素γII和刺孢霉素ωII(参见例如Agnew,Chem.Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；达内霉素(dynemicin)，包括达内霉素A；双膦酸盐类，如氯屈膦酸盐(clodronate)；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌菌素发色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色素蛋白烯二炔类抗生素发色团)、阿克拉霉素(aclacinomysin)、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素(bleomycin)、放线菌素C(cactinomycin)、卡拉比星(carabicin)、洋红霉素(caminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放线菌素D(dactinomycin)、佐柔比星(daunorubicin)、地托比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代-多柔比星)、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉基-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、伊达比星(idarubicin)、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)如丝裂霉素C、霉芬酸(mycophenolic acid)、诺加霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、泼非霉素(potfiromycin)、嘌呤霉素(puromycin)、奎那霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物类，如迪诺特宁(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、曲美沙特(trimetrexate)；嘌呤类似物类，如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯基嘌呤、噻咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物类，如环胞苷(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮杂尿苷、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，如卡芦睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺药类，如氨鲁米特(minoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；贝斯布西(bestrabucil)；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；磷胺氮芥(def of amine)秋水仙胺(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；依洛尼塞(elformithine)；依利醋铵(elliptinium acetate)；埃博霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；蘑菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；类美登素类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocins)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他汀(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine)；PSK多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofuran)；锗螺胺(spirogermanium)；替奴佐酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2"-三氯三乙胺；单端孢霉烯(trichothecenes)(例如T-2毒素、粘液霉素A(verracurin A)、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine)；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；加西托星(gacytosine)；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替派；类紫杉醇类(taxoids)，例如TAXOL太平洋紫杉醇(paclitaxel)(Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)、ABRAXANE太平洋紫杉醇的不含聚氧乙烯化蓖麻油(Cremophor)的经白蛋白工程化的纳米粒子制剂(American Pharmaceutical Partners，Schaumberg,Ill.)以及TAXOTERE多西他赛(doxetaxel)(Rhone-Poulenc Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥；GEMZAR吉西他滨(gemcitabine)；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物类，如顺铂(cisplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)；铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱(vincristine)；NAVELBINE.长春瑞滨(vinorelbine)；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；依达曲沙；柔红霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达(xeloda)；伊班膦酸盐(ibandronate)；伊立替康(irinotecan)(Camptosar、CPT-11)(包括伊立替康与5-FU的治疗方案)和亚叶酸(leucovorin))；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类视黄素类(retinoids)，如视黄酸(retinoic acid)；卡培他滨(capecitabine)；康普瑞汀(combretastatin)；亚叶酸(LV)；奥沙利铂(oxaliplatin)，包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX)；拉帕替尼(lapatinib)(Tykerb)；PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR的抑制剂(例如埃罗替尼(erlotinib)(Tarceva))和VEGF-A的抑制剂，这些抑制剂减少细胞增殖；以及以上任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。另外，治疗方法还可以包括使用辐射。另外，治疗方法还可以包括施用光动力疗法。
在一些实施方案中，包括但不限于感染性疾病应用，本发明涉及抗感染剂作为其它治疗剂。在一些实施方案中，所述抗感染剂是抗病毒剂，包括但不限于阿巴卡韦(Abacavir)、阿昔洛韦(Acyclovir)、阿德福韦(Adefovir)、安普那韦(Amprenavir)、阿扎那韦(Atazanavir)、西多福韦(Cidofovir)、达芦那韦(Darunavir)、地拉韦啶(Delavirdine)、去羟肌苷(Didanosine)、多可沙诺(Docosanol)、依非韦仑(Efavirenz)、埃替格韦(Elvitegravir)、恩曲他滨(Emtricitabine)、恩福韦地(Enfuvirtide)、依曲韦林(Etravirine)、泛昔洛韦(Famciclovir)和膦甲酸盐(Foscarnet)。在一些实施方案中，抗感染剂是抗细菌剂，包括但不限于头孢菌素类抗生素(头孢胺苄(cephalexin)、头孢呋辛(cefuroxime)、头孢羟胺苄(cefadroxil)、头孢唑林(cefazolin)、头孢噻吩(cephalothin)、头孢克洛(cefaclor)、头孢孟多(cefamandole)、头孢西丁(cefoxitin)、头孢丙烯(cefprozil)和头孢托罗酯(ceftobiprole))；氟喹诺酮类抗生素(fluoroquinoloneantibiotics)(环丙沙星(cipro)、左氟沙星(Levaquin)、氧氟沙星(floxin)、加替沙星(tequin)、莫西沙星(avelox)和诺氟沙星(norflox))；四环素类抗生素(四环素、米诺环素(minocycline)、羟四环素(oxytetracycline)和去氧环素(doxycycline))；青霉素类抗生素(阿莫西林(amoxicillin)、胺苄西林(ampicillin)、青霉素V、双氯西林(dicloxacillin)、羧苄西林(carbenicillin)、万古霉素(vancomycin)和甲氧西林(methicillin))；单酰胺环类抗生素(胺曲南(aztreonam))；以及碳青霉烯类抗生素(厄他培南(ertapenem)、多尼培南(doripenem)、亚胺培南(imipenem)/西司他丁(cilastatin)和美罗培南(meropenem))。在一些实施方案中，抗感染剂包括抗疟药(例如氯喹(chloroquine)、奎宁(quinine)、甲氟喹(mefloquine)、伯胺喹(primaquine)、去氧环素(doxycycline)、蒿甲醚(artemether)/苯芴醇(lumefantrine)、阿托伐醌(atovaquone)/氯胍(proguanil)和磺胺多辛(sulfadoxine)/乙胺嘧啶(pyrimethamine))、甲硝唑(metronidazole)、替硝唑(tinidazole)、伊维菌素(ivermectin)、双羟萘酸噻嘧啶(pyrantel pamoate)和阿苯达唑(albendazole)。
在一些实施方案中，包括但不限于自身免疫应用，该其它治疗剂是免疫抑制剂。在一些实施方案中，该免疫抑制剂是消炎剂，如类固醇类消炎剂或非类固醇类消炎剂(NSAID)。类固醇，特别是肾上腺皮质类固醇和其合成类似物在本领域中是众所周知的。可用于本发明中的皮质类固醇的实例包括但不限于羟基曲安西龙(hydroxyltriamcinolone)、α-甲基地塞米松(alpha-methyl dexamethasone)、β-甲基地塞米松、二丙酸倍氯米松(beclomethasone dipropionate)、苯甲酸倍他米松(betamethasonebenzoate)、二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、戊酸氯倍他索(clobetasol valerate)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoxymethasone)、地塞米松(dexamethasone)、二乙酸二氟拉松(diflorasone diacetate)、戊酸二氟可龙(diflucortolone valerate)、氟氢缩松(fluadrenolone)、氟氯奈德(fluclorolone acetonide)、特戊酸氟美松(flumethasonepivalate)、氟轻松(fluosinolone acetonide)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁酯(flucortine butylester)、氟可龙(fluocortolone)、醋酸氟泼尼定(fluprednidene/fluprednylidene)、氟氢缩松(flurandrenolone)、哈西奈德(halcinonide)、醋酸氢化可的松(hydrocortisone acetate)、丁酸氢化可的松(hydrocortisone butyrate)、甲泼尼龙(methylprednisolone)、曲安奈德(triamcinolone acetonide)、可的松(cortisone)、可托多松(cortodoxone)、醋酸氟轻松、氟氢可的松(fludrocortisone)、二醋酸二氟拉松(difluorosone diacetate)、丙酮化氟雄诺龙(fluradrenolone acetonide)、甲羟松(medrysone)、安西缩松(amcinafel)、安西非特(amcinafide)、倍他米松和其相应酯、氯泼尼松(chloroprednisone)、氯可托龙(clocortelone)、克西诺龙(clescinolone)、二氯松(dichlorisone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、氟氯奈德(flucloronide)、氟尼缩松(flunisolide)、氟米龙(fluoromethalone)、氟培龙(fluperolone)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)、甲泼尼松(meprednisone)、帕拉米松(paramethasone)、泼尼松龙(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、二丙酸倍他米松。可以用于本发明中的(NSAIDS)包括但不限于水杨酸、乙酰水杨酸、水杨酸甲酯、乙二醇水杨酸酯、水杨酰胺、苯甲基-2,5-二乙酰氧基苯甲酸、布洛芬(ibuprofen)、舒林酸(fulindac)、萘普生(naproxen)、酮洛芬(ketoprofen)、依托芬那酯(etofenamate)、保泰松(phenylbutazone)和吲哚美辛(indomethacin)。在一些实施方案中，免疫抑制剂可以是细胞抑制剂，如烷化剂类、抗代谢物类(例如硫唑嘌呤、甲氨蝶呤)、细胞毒性抗生素类、抗体类(例如巴利昔单抗(basiliximab)、达克珠单抗(daclizumab)和莫罗单抗(muromonab))、抗免疫亲和素类(anti-immunophilins)(例如环孢素(cyclosporine)、他克莫司(tacrolimus)、西罗莫司(sirolimus))、干扰素类、阿片类(opioids)、TNF结合蛋白、霉酚酸酯类(mycophenolates)以及小生物剂(例如芬戈莫德(fingolimod)、多球壳素(myriocin))。其它消炎剂描述于例如美国专利号4,537,776中，所述文献的完整内容以引用的方式并入本文。
在一些实施方案中，本发明有关于作为额外治疗剂用于治疗肥胖的各种剂。用于治疗肥胖的说明性剂包括但不限于奥利司他(orlistat)(例如ALL1、XENICAL)、氯卡色林(loracaserin)(例如BELVIQ)、苯丁胺(phentermine)-托吡酯(topiramate)(例如QSYMIA)、西布曲明(sibutramme)(例如REDUCTIL或MERJDIA)、利莫那班(rimonabant)(ACOMPLLA)、艾塞那肽(例如BYETTA)、普兰林肽(pramlintide)(例如SYMLIN)苯丁胺、苄非他明(benzphetamine)、二乙胺苯酮(diethylpropion)、苯甲曲秦(phendimetrazme)、安非他酮(bupropion)和二甲双胍(metformin)。干扰身体吸收食物中的特殊营养的能力的剂在所述额外的剂中，例如奥利司他(例如ALU、XENICAL)、葡甘露聚醣和瓜耳豆胶。抑制食欲的剂也在所述额外的剂中，例如儿茶酚胺类及其衍生物(如芬特明(phenteimine)和其它基于安非他明的药物)、各种抗抑郁剂和情绪稳定剂(例如安非他酮和托吡酯)、减食欲剂(例如dexedrine、地高辛(digoxin))。增加身体代谢的剂也在所述额外的剂中。
在一些实施方案中，其它治疗剂可以选自食欲抑制剂、神经递质再摄取抑制剂、多巴胺能激动剂、血清素能激动剂、GABA能信号传导调节剂、抗惊厥剂、抗抑郁剂、单胺氧化酶抑制剂、P物质(NK1)受体拮抗剂、黑皮质素受体激动剂和拮抗剂、脂肪酶抑制剂、脂肪吸收抑制剂、能量摄取或代谢调控剂、骆驼受体调节剂、用于治疗成瘾的剂、用于治疗代谢综合征的剂、过氧化物酶体增殖物激活型受体(PPAR)调节剂；二肽基肽酶4(DPP-4)拮抗剂、用于治疗心血管疾病的剂、用于治疗甘油三酯水平升高的剂、用于治疗低HDL的剂、用于治疗高胆固醇血症的剂和用于治疗高血压的剂。一些用于心血管疾病的剂包括他汀类药物(例如洛伐他汀(lovastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、瑞舒伐他汀(rosuvastatin)、辛伐他汀(simvastatin)和帕伐他汀(pravastatin))和ω-3剂(例如LOVAZA、EPANQVA、VASCEPA、酯化ω-3，一般有鱼油、磷虾油、海藻油)。在一些实施方案中，额外的剂可以选自安非他明、苯并二氮平、磺酰脲、美格替奈(meglitinides)、噻唑烷二酮、双胍、β-阻断剂、XCE抑制剂、利尿剂、硝酸盐、钙离子通道阻断剂、芬特明、西布曲明、洛卡色林、西替利司他(cetilistat)、利莫那班、泰伦那班(taranabant)、托吡酯、加巴喷丁(gabapentin)、丙戊酸(valproate)、维加巴因(vigabatrin)、安非他酮、噻加宾(tiagabine)、舍曲林(sertraline)、费洛克汀(fluoxetine)、曲唑酮(trazodone)、唑尼沙胺(zonisamide)、哌醋甲(methylphenidate)、伐伦克林(varenicline)、那曲酮(naltrexone)、二乙胺苯酮、苯甲曲秦、雷帕格奈德(rcpaglini.de)、那格列奈(nateglinide)、格列美脲(glimepiride)、二甲双胍、吡格列酮(pioglitazone)、罗格列酮(rosiglilazone)和西他列汀(sitagliptin)。
在一些实施方案中，本发明有关于作为额外治疗剂用于治疗糖尿病的剂。说明性抗糖尿病剂包括但不限于磺酰脲(例如DYMELOR(醋磺环已脲)、DIABINESE(氯磺丙脲)、ORINASE(甲磺丁脲)和TOLINASE(甲磺氮卓脲)、GLUCOTROL(格列甲嗪)、GLUCOTROL XL(延长释放)、DIABETA(格列本脲)、MICRONASE(格列本脲)、GLYNASE PRESTAB(格列本脲)和AMARYL(格列美脲))；双胍(例如二甲双胍(GLUCOPHAGE、GLUCOPHAGE XR、RIOMET、FORTAMET和GLUMETZA))；噻唑烷二酮(例如ACTOS(吡格列酮)和AVANDIA(罗格列酮)；α-葡萄糖苷酶抑制剂(例如PRECOSE(阿卡波糖)和GLYSET(米格列醇)；美格替奈(例如PRANDIN(瑞格列奈)和STARLIX(那格列奈))；二肽基肽酶IV(DPP-IV)抑制剂(例如JANUVIA(西他列汀)、NESINA(阿格列汀)、ONGLYZA(沙格列汀)和TRADJENTA(利格列汀))；钠-葡萄糖共转运蛋白2(SGLT2)抑制剂(例如INVOKANA(卡格列净))；和组合药丸(例如组合了格列本脲(磺酰脲)和二甲双胍的GLUCOVANCE、组合了格列甲嗪(磺酰脲)和二甲双胍的METAGLIP以及在一个药丸中使用二甲双胍与罗格列酮(AVANDIA)的AVANDAMET、KAZANO(阿格列酮和二甲双胍)、OSENI(阿格列汀加吡格列酮)、METFORMIN口服剂、ACTOS口服剂、BYETTA皮下剂、JANUVIA口服剂、WELCHOL口服剂、JANUMET口服剂、格列甲嗪口服剂、格列美脲口服剂、GLUCOPHAGE口服剂、LANTUS皮下剂、格列本脲口服剂、ONGLYZA口服剂、AMARYl口服剂、LANTUS SOLOSTAR皮下剂、BYDUREON皮下剂、LEVEMIR FLEXPEN皮下剂、ACTOPLUS MET口服剂、GLUMETZA口服剂、TRADJENTA口服剂、溴麦角环肽口服剂、KOMBIGLYZE XR口服剂、INVOKANA口服剂、PRANDIN口服剂、LEVEMIR皮下剂、PARLODEL口服剂、吡格列酮口服剂、NOVOLOG皮下剂、NOVOLOG FLEXPEN皮下剂、VICTOZA 2-PAK皮下剂、HUMALOG皮下剂、STARLIX口服剂、FORTAMET口服剂、GLUCOVANCE口服剂、GLUCOPHAGE XR口服剂、NOVOLOG Mix 70-30FLEXPEN皮下剂、GLYBURIDE-METFORMIN口服剂、阿卡波糖口服剂、SYMLINPEN 60皮下剂、GLUCOTROl XL口服剂、NOVOLIN R注射剂、GLUCOTROL口服剂、DUETACT口服剂、西他列汀口服剂、SYMLINPEN 120皮下剂、HUMALOGKWIKPEN皮下剂、JANUMET XR口服剂、GLIPIZIDE-METFORMIN口服剂、CYCLOSET口服剂、HUMALOG MIX 75-25皮下剂、那格列奈口服剂、HUMALOG Mix 75-25KWIKPEN皮下剂、HUMULIN70/30皮下剂、PRECOSE口服剂、APIDRA皮下剂、Humulin R注射剂、Jentadueto口服剂、Victoza 3-Pak皮下剂、Novolin 70/30皮下剂、NOVOLIN N皮下剂、地特胰岛素皮下剂、微粒化格列本脲口服剂、GLYNASE口服剂、HUMULIN N皮下剂、甘精胰岛素皮下剂、RIOMET口服剂、吡格列酮-二甲双胍口服剂、APIDRA SOLOSTAR皮下剂、赖脯胰岛素皮下剂、GLYSET口服剂、HUMULIN 70/30Pen皮下剂、考来维仑口服剂、西他列汀-二甲双胍口服剂、DIABETA口服剂、常规人胰岛素注射剂、HUMULIN N Pen皮下剂、艾塞那肽皮下剂、HUMALOG Mix 50-50KWIKPEN皮下剂、利拉鲁肽皮下剂、KAZANO口服剂、瑞格列奈口服剂、氯磺丙脲口服剂、门冬胰岛素皮下剂、NOVOLOG Mix 70-30皮下剂、HUMALOG Mix 50-50皮下剂、沙格列汀口服剂、ACTOPLUS Met XR口服剂、米格列醇口服剂、NPH重组人胰岛素皮下剂、NPH胰岛素和常规人胰岛素皮下剂、甲磺氮卓脲口服剂、米非司酮口服剂、门冬胰岛素鱼精蛋白门冬胰岛素皮下剂、瑞格列奈-二甲双胍口服剂、沙格列汀-二甲双胍口服剂、利格列汀-二甲双胍口服剂、NESINA口服剂、OSENI口服剂、甲磺丁脲口服剂、赖脯胰岛素赖脯鱼精蛋白皮下剂、普兰林肽皮下剂、谷赖胰岛素皮下剂、吡格列酮-格列美脲口服剂、PRANDIMET口服剂、NOVOLOGPenFill皮下剂、利格列汀口服剂、艾塞那肽微球体皮下剂、KORLYM口服剂、阿格列汀口服剂、阿格列汀-吡格列酮口服剂、阿格列汀-二甲双胍口服剂、卡格列净口服剂、赖脯胰岛素(HUMALOG)；门冬胰岛素(NOVOLOG)；谷赖胰岛素(APIDRA)；Regular(NOVOLIN R或HUMULINR)；NPH(NOVOLIN N或HUMULIN N)；甘精胰岛素(LANTUS)；地特胰岛素(LEVEMIR)；HUMULIN或NOVOLIN 70/30；和NOVOLOG Mix 70/30HUMALOG Mix 75/25或50/50。
在一些实施方案中，本发明涉及利用一种或多种免疫调节剂，例如但不限于调节免疫检查点的剂的组合疗法。在各个实施方案中，该免疫调节剂靶向PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种。在各个实施方案中，该免疫调节剂是PD-1抑制剂。在各个实施方案中，该免疫调节剂是对PD-1、PD-L1和PD-L2中的一种或多种具有特异性的抗体。举例来说，在一些实施方案中，该免疫调节剂是抗体，诸如但不限于，纳武单抗(nivolumab)(ONO-4538/BMS-936558、MDX1106、OPDIVO，BRISTOL MYERS SQUIBB)、派姆单抗(pembrolizumab)(KEYTRUDA，MERCK)、皮地利珠单抗(CT-011，CURE TECH)、MK-3475(MERCK)、BMS 936559(BRISTOL MYERSSQUIBB)、MPDL328OA(ROCHE)。在一些实施方案中，该免疫调节剂靶向CD137或CD137L中的一种或多种。在各个实施方案中，该免疫调节剂是对CD137或CD137L中的一种或多种具有特异性的抗体。举例来说，在一些实施方案中，该免疫调节剂是抗体，诸如但不限于乌瑞鲁单抗(urelumab)(又称为BMS-663513和抗4-1BB抗体)。在一些实施方案中，将本发明的嵌合蛋白质与乌瑞鲁单抗(任选地与纳武单抗、利丽单抗(lirilumab)和乌瑞鲁单抗中的一种或多种)组合以治疗实体肿瘤和/或B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和/或头颈癌和/或多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，该免疫调节剂是靶向以下一种或多种的剂：CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A。在各个实施方案中，该免疫调节剂是对以下一种或多种具有特异性的抗体：CTLA-4、AP2M1、CD80、CD86、SHP-2和PPP2R5A。举例来说，在一些实施方案中，该免疫调节剂是抗体，诸如但不限于，伊匹单抗(ipilimumab)(MDX-010、MDX-101，Yervoy,BMS)和/或曲美目单抗(tremelimumab)(Pfizer)。在一些实施方案中，将本发明的嵌合蛋白质与伊匹单抗(任选地与巴维昔单抗(bavituximab))组合以治疗黑素瘤、前列腺癌和肺癌中的一种或多种。在各个实施方案中，所述免疫调节剂靶向CD20。在各个实施方案中，该免疫调节剂是对CD20具有特异性的抗体。举例来说，在一些实施方案中，该免疫调节剂是抗体，诸如但不限于，奥法木单抗(Ofatumumab)(GENMAB)、奥滨尤妥珠单抗(obinutuzumab)(GAZYVA)、AME-133v(APPLIED MOLECULAR EVOLUTION)、奥瑞珠单抗(Ocrelizumab)(GENENTECH)、TRU-015(TRUBION/EMERGENT)、维妥珠单抗(veltuzumab)(IMMU-106)。
在一些实施方案中，本发明涉及利用WO 2013/10779、WO 2015/007536、WO 2015/007520、WO 2015/007542和WO 2015/007903中所描述的一种或多种嵌合剂的组合疗法，所述文献的全部内容以引用的方式整体并入本文。
在一些实施方案中，本文所描述的嵌合蛋白质包括经过修饰的衍生物，即通过将任何类型的分子共价附接至该组合物以使得共价附接不会妨碍该组合物的活性。举例来说但不限于，衍生物包括通过特别是糖基化、脂化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、利用已知的保护基团/阻断基团衍生化、蛋白水解裂解、连接至细胞配体或其它蛋白质等进行修饰的组合物。可以利用已知技术，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素(tunicamycin)的代谢合成等进行多种化学修饰中的任一种。
在其它实施方案中，本文所描述的嵌合蛋白质还包含细胞毒性剂，在说明性实施方案中，该细胞毒性剂包含毒素、化疗剂、放射性同位素以及引起细胞凋亡或细胞死亡的剂。此类剂可以与本文所描述的组合物缀合。
因此，本文所描述的嵌合蛋白质可以经历翻译后修饰以添加效应子部分，如化学接头；可检测部分，如荧光染料、酶、底物、生物发光材料、放射性材料和化学发光部分；或功能性部分，如链霉亲合素、抗生物素蛋白、生物素、细胞毒素、细胞毒性剂和放射性材料。
说明性细胞毒性剂包括但不限于甲氨蝶呤、氨基蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶、达卡巴嗪；烷化剂类，如氮芥、噻替派、苯丁酸氮芥、美法仑、卡莫司汀(BSNU)、丝裂霉素C、洛莫司汀(CCNU)、1-甲基亚硝基脲、环磷酰胺、氮芥、白消安、二溴甘露醇、链佐星(streptozotocin)、丝裂霉素C、顺-二氯二胺铂(II)(DDP)、顺铂和卡铂(伯尔定(paraplatin))；蒽环霉素类包括佐柔比星(先前的道诺霉素(daunomycin))、多柔比星(阿霉素(adriamycin))、地托比星(detorubicin)、卡米诺霉素(carminomycin)、伊达比星、表柔比星、米托蒽醌和比生群；抗生素类包括放线菌素D(dactinomycin/actinomycin D)、博来霉素、刺孢霉素、光辉霉素(mithramycin)和安曲霉素(anthramycin)(AMC)；以及抗有丝分裂剂，如长春生物碱类(vinca alkaloids)、长春新碱(vincristine)和长春花碱(vinblastine)。其它细胞毒性剂包括太平洋紫杉醇(紫杉醇)、蓖麻毒素、假单胞菌外毒素、吉西他滨、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴乙锭、依米丁(emetine)、依托泊苷、替尼泊苷、秋水仙素(colchicin)、二羟基蒽二酮、1-脱氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因(procaine)、丁卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛尔(propranolol)、嘌呤霉素(puromycin)、丙卡巴肼、羟基脲、天冬酰胺酶、皮质类固醇、米托坦(O,P'-(DDD))、干扰素，以及这些细胞毒性剂的混合物。
其它细胞毒性剂包括但不限于，化疗剂，如卡铂、顺铂、太平洋紫杉醇、吉西他滨、刺孢霉素、多柔比星、5-氟尿嘧啶、丝裂霉素C、放线菌素D、环磷酰胺、长春新碱、博来霉素、VEGF拮抗剂、EGFR拮抗剂、铂类、紫杉醇类、伊立替康、5-氟尿嘧啶、吉西他滨、亚叶酸、类固醇类、环磷酰胺、美法仑、长春生物碱类(例如长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨)、莫司汀类(mustines)、酪氨酸激酶抑制剂、放射疗法、性激素拮抗剂、选择性雄激素受体调节剂、选择性雌激素受体调节剂、PDGF拮抗剂、TNF拮抗剂、IL-1拮抗剂、白介素(例如IL-12或IL-2)、IL-12R拮抗剂、毒素缀合的单克隆抗体、肿瘤抗原特异性单克隆抗体、爱必妥(Erbitux)、阿瓦斯丁(Avastin)、帕妥珠单抗(Pertuzumab)、抗CD20抗体、美罗华(Rituxan)、奥瑞珠单抗、奥法木单抗、DXL625、或其任何组合。来自植物和细菌的有毒酶，如蓖麻毒素、白喉毒素和假单胞菌毒素可以与这些治疗剂(例如抗体)缀合以产生细胞类型特异性杀伤试剂(Youle等,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:5483(1980)；Gilliland等,Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 77:4539(1980)；Krolick等,Proc.Nat'lAcad.Sci.USA 77:5419(1980))。
其它细胞毒性剂包括如Goldenberg在美国专利号6,653,104中所描述的细胞毒性核糖核酸酶。本发明的实施方案还涉及放射免疫缀合物，其中在使用或不使用复合物形成剂的情况下，发射α或β粒子的放射性核种稳定偶合至嵌合蛋白质。此类放射性核种包括β-发射体，如磷-32、钪-47、铜-67、镓-67、钇-88、钇-90、碘-125、碘-131、钐-153、镥-177、铼-186或铼-188；和α-发射体，如砹-211、铅-212、铋-212、铋-213或锕-225。
说明性可检测部分还包括但不限于辣根过氧化酶、乙酰胆碱酯酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和荧光素酶。其它说明性荧光材料包括但不限于罗丹明(rhodamine)、荧光素、异硫氰酸荧光素、伞形酮、二氯三嗪基胺、藻红蛋白和丹磺酰氯。其它说明性化学发光部分包括但不限于鲁米诺(luminol)。其它说明性生物发光材料包括但不限于荧光素和水母素(aequorin)。其它说明性放射性材料包括但不限于碘-125、碳-14、硫-35、氚和磷-32。
在一些实施方案中，本发明涉及使用所述非细胞抗原结合剂和免疫抑制剂的组合疗法。在一些实施方案中，本发明涉及对利用免疫抑制剂进行治疗的患者施用所述TNCA1结合剂。在一个实施方案中，所述免疫抑制剂是TNF。在说明性实施方案中，所述TNCA1结合剂当与TNF共同施用时协同作用。在一个说明性实施方案中，所述TNCA1结合剂当与TNF共同施用以用于治疗肿瘤或癌症时协同作用。举例来说，共同施用所述TNCA1结合剂和TNF可以协同作用以减轻或消除肿瘤或癌症，或者减缓肿瘤或癌症的生长和/或进展和/或转移。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂与TNF的组合当与在单一疗法的情形下单独使用的剂相比时可以表现出提高的安全特性。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂和TNF可以按比当在单一疗法的情形下使用所述剂时采用的剂量更低的剂量施用。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂包含突变的干扰素，如突变的人IFNα。在说明性实施方案中，所述突变的人IFNα在位置144-154处包含一个或多个突变。举例来说，所述突变的人IFNα可以在148、149和153处包含一个或多个突变，如取代M148A、R149A和L153A。
因此，在各个实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本文描述的嵌合蛋白质和TNF。在一个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含含有特异性地结合人TNCA的识别结构域的靶向部分和修饰的IFN信号传导剂(例如，人IFN-α2)。在一些实施方案中，所述修饰的IFN信号传导剂在位置144-154处包含突变(例如，M148A、R149A和/或L153A)。
在一些实施方案中，本发明涉及使用所述非细胞抗原结合剂和第二免疫治疗嵌合蛋白质的组合疗法。在一些实施方案中，本发明涉及对利用第二免疫治疗嵌合蛋白质进行治疗的患者施用所述TNCA1结合剂。在一个实施方案中，所述第二免疫治疗嵌合蛋白质是CD8结合剂与修饰的IFN的融合物。在一些实施方案中，所述CD8结合剂包含突变的干扰素，如突变的人IFNα。在说明性实施方案中，所述突变的人IFNα在位置148、149和153处包含一个或多个突变，如取代M148A、R149A和L153A。在说明性实施方案中，所述TNCA1结合剂当与第二免疫治疗嵌合蛋白质共同施用时协同作用。在一个说明性实施方案中，所述TNCA1结合剂当与第二免疫治疗嵌合蛋白质，即CD8结合剂与修饰的IFN的融合物共同施用以用于治疗肿瘤或癌症时协同作用。举例来说，共同施用所述TNCA1结合剂和所述第二免疫治疗嵌合物可以协同作用以减轻或消除肿瘤或癌症，或者减缓肿瘤或癌症的生长和/或进展和/或转移。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂与第二免疫治疗嵌合蛋白质的组合当与在单一疗法的情形下单独使用的剂相比时可以表现出提高的安全特性。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂和第二免疫治疗嵌合蛋白质可以按比当在单一疗法的情形下使用所述剂时采用的剂量更低的剂量施用。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂包含突变的干扰素，如突变的IFNα。在说明性实施方案中，所述突变的人IFNα在位置148、149和153处包含一个或多个突变，如取代M148A、R149A和L153A。在一些实施方案中，所述TNCA1结合剂包含突变的TNF。在说明性实施方案中，所述突变的TNF是人TNF-α，并且在位置87处包含一个或多个突变，如Y87Q、Y87L、Y87A和Y87F。
因此，在各个实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本文描述的嵌合蛋白质和第二嵌合蛋白质，所述第二嵌合蛋白质包含：一个或多个修饰的信号传导剂，所述一个或多个修饰的信号传导剂具有一个或多个赋予相较于野生型信号传导剂有所提高的安全性的修饰；和一个或多个靶向部分，所述靶向部分包含特异性地结合至细胞上的目标抗原或受体的识别结构域。在各个实施方案中，所述第一嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分。在各个实施方案中，所述第一嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分和修饰的TNF信号传导剂。在各个实施方案中，所述修饰的TNF信号传导剂是人TNF-α，并且在位置Y87处包含突变(例如，Y87Q、Y87L、Y87A或Y87F)。在各个实施方案中，所述第二嵌合蛋白质包含含有特异性地结合CD8的识别结构域的靶向部分。在各个实施方案中，所述第二嵌合蛋白质包含含有特异性地结合CD8的识别结构域的靶向部分和修饰的IFN信号传导剂，例如在位置144-154处任选地具有一个或多个突变(例如，M148A、R149A和/或L153A)的人IFN-α2。
在各个实施方案中，本发明涉及一种治疗癌症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的本文描述的嵌合蛋白质和化疗剂。在各个实施方案中，所述嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分和在位置Y87处任选地包含突变(例如，Y87Q、Y87L、Y87A或Y87F)的修饰的TNF信号传导剂。在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分和修饰的IFN信号传导剂(例如IFN-α2)。在一些实施方案中，所述修饰的IFN信号传导剂在位置144-154处包含突变(例如，M148A、R149A和/或L153A)。在各个实施方案中，所述化疗剂是DNA插入剂，包括多柔比星、顺铂、佐柔比星和表柔比星。在各个实施方案中，所述化疗剂是多柔比星。
治疗方法
本文所描述的方法和组合物可应用于治疗各种疾病和病症，包括但不限于癌症、感染、免疫病症、贫血、自身免疫疾病、心血管疾病、创伤愈合、局部缺血相关疾病、神经退化性疾病、代谢疾病以及众多其它疾病和病症。
另外，任何本发明的剂都可以用于治疗各种疾病和病症，或制造用于治疗各种疾病和病症的药物，包括但不限于癌症、感染、免疫病症、炎症性疾病或疾患，以及自身免疫疾病。
在一些实施方案中，本发明涉及一种或多种以下疾病的治疗或患有一种或多种以下疾病的患者：癌症、心力衰竭、自身免疫疾病、镰状细胞病、地中海贫血、失血、输血反应、糖尿病、维生素B12缺乏症、胶原蛋白血管病、舒瓦克曼综合征(Shwachman syndrome)、血小板减少性紫癜、乳糜泻、内分泌缺乏状态如甲状腺功能减退或爱迪生氏病(Addison'sdisease)、自身免疫疾病如克罗恩氏病(Crohn's Disease)、全身性红斑狼疮、类风湿性关节炎或青少年类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎免疫病症如嗜酸性筋膜炎、低免疫球蛋白血症或胸腺瘤/胸腺癌、移植物对抗宿主疾病、白血病前期、非血液综合征(例如唐氏综合征(Down's)、杜波维茨综合征(Dubowwitz)、塞克尔综合征(Seckel))、费尔蒂综合征(Feltysyndrome)、溶血性尿毒症综合征、脊髓发育不良综合征、夜间阵发性血红蛋白尿症、骨髓纤维瘤、全血细胞减少症、纯红细胞再生障碍、舍亨二氏紫癜(Schoenlein-Henoch purpura)、疟疾、蛋白质饥饿、月经过多、系统性硬化、肝硬化、代谢减退状态和充血性心力衰竭。
在一些实施方案中，本发明涉及治疗患癌患者的治疗或患癌患者。如本文所使用，癌症是指可能干扰身体器官和系统的正常功能的任何不受控制的细胞生长，并且包括原发性和转移性肿瘤两种。原发性肿瘤或癌症从其原始位置迁移并且种在重要器官可以通过受影响器官的功能减退而最终导致受试者死亡。转移是由于癌细胞从原发性肿瘤播散至身体其它部分而在远离原发性肿瘤位置出现的一个癌细胞或一组癌细胞。转移最终可能导致受试者死亡。举例来说，癌症可以包括良性和恶性癌症、息肉、增生以及休眠肿瘤或微转移。
可以治疗的说明性癌症包括但不限于癌瘤(例如各种亚型，包括例如腺癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌和迁移细胞癌)、肉瘤(包括例如骨肉瘤和软组织肉瘤)、白血病(包括例如急性骨髓性、急性成淋巴细胞性、慢性骨髓性、慢性淋巴细胞性和毛细胞性白血病)、淋巴瘤和骨髓瘤(包括例如霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤、轻链、非分泌性、MGUS和浆细胞瘤)和中枢神经系统癌(包括例如脑癌(例如神经胶质瘤(例如星形细胞瘤、寡枝神经胶质瘤和室管膜瘤))、脑膜瘤、垂体腺瘤和神经瘤，以及脊髓肿瘤(例如脑膜瘤和纤维神经瘤))。
可以治疗的说明性癌症包括但不限于基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小非分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
在一些实施方案中，提供一种调节肌腱蛋白C，例如中和或降低其促癌活性以减少转移，包括降低转移活性程度的方法。举例来说，在各个实施方案中，本发明的组合物和方法靶向肌腱蛋白C以降低或停止癌症进展。在各个实施方案中，本发明的组合物和方法治疗癌症或预防进展至癌症晚期。
在一个实施方案中，所述癌症是乳腺癌。举例来说，在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质靶向肌腱蛋白C并且用于治疗乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌是雌激素受体(ER)阴性乳腺癌。
在一些实施方案中，所述癌症是肺癌，例如非小细胞肺癌(NSCLC)。举例来说，在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质靶向肌腱蛋白C并且用于治疗肺癌，例如NSCLC。
在一些实施方案中，所述癌症是头颈癌，包括但不限于喉癌和舌癌。举例来说，在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质靶向肌腱蛋白C并且用于治疗头颈癌，包括但不限于喉癌和舌癌。
在一些实施方案中，所述癌症是结肠直肠癌(CRC)。举例来说，在一些实施方案中，所述嵌合蛋白质靶向肌腱蛋白C并且用于治疗CRC。
在各个实施方案中，本发明涉及具有至少一个靶向部分的嵌合蛋白质，所述靶向部分特异性地结合至作为肿瘤微环境内的非细胞结构的一部分的靶标(例如，抗原或受体或非蛋白质分子)。在涉及治疗癌症的各个实施方案中，本发明的方法预防和/或减少与癌症和癌症转移相关的异常或异常调控的ECM塑造。举例来说，在一些实施方案中，本发明的方法预防和/或减少所述非细胞结构的与癌症状态相关的异常调控和/或结构破坏。在一些实施方案中，所述方法预防和/或减少癌症所特有的在非细胞结构的量、硬度、组成和/或形态方面的变化。举例来说，本发明的方法使肿瘤中可能增加的ECM中胶原蛋白I、胶原蛋白II、胶原蛋白III、胶原蛋白V和胶原蛋白IX沉积量减少。在另一个实施方案中，本发明的方法预防或减少与例如乳腺癌相关的异常胶原蛋白原纤化。在另一个实例中，所述方法可以使与癌症相关的增加的ECM硬度降低。举例来说，在一些实施方案中，本发明的方法使促进非细胞结构的异常调控和/或结构破坏的一种或多种酶的活性降低。说明性酶包括但不限于基质金属蛋白酶(MMP)、解整合素、具有血小板反应蛋白基序的金属蛋白酶、丝氨酸蛋白酶如纤溶酶、乙酰肝素酶、6-O-硫酸酯酶、半胱氨酸组织蛋白酶和尿激酶。
在各个实施方案中，本发明的方法减少或预防ECM中的异常信号传导。在一些实施方案中，所述方法减轻与所述非细胞结构的异常调控和/或结构破坏相关的各种生长因子信号传导途径的致癌作用。说明性信号传导途径包括例如ERK和PI3激酶信号传导途径。
本发明的方法在减轻或削弱癌症进展和/或转移方面有效。在一些实施方案中，本发明的方法预防或减少癌症干细胞过度扩增。在其它实施方案中，本发明的方法预防或减轻癌症干细胞分化的丧失。
在各个实施方案中，本发明的方法预防或减少肿瘤生成微环境的形成。在一些实施方案中，本发明的方法可以预防对肿瘤微环境内的基质细胞，包括但不限于内皮细胞、免疫细胞和成纤维细胞的异常调控。
在各个实施方案中，本发明的方法预防或减少肿瘤血管生成和/或淋巴管生成。在各个实施方案中，本发明的方法预防或减少肿瘤炎症。
在一些实施方案中，本发明涉及患有微生物感染和/或慢性感染的患者的治疗，或患有微生物感染和/或慢性感染的患者。说明性感染包括但不限于HIV/AIDS、结核病、骨髓炎、乙型肝炎、丙型肝炎、爱波斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus)或细小病毒、T细胞性白血病病毒、细菌过度生长综合征、真菌或寄生虫感染。
在各个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗或预防一种或多种炎症性疾病或疾患，如炎症、急性炎症、慢性炎症、呼吸道疾病、动脉粥样硬化、再狭窄、哮喘、过敏性鼻炎、特异性皮炎、脓毒性休克、类风湿性关节炎、炎症性肠病、炎症性盆腔病、疼痛、眼部炎症性疾病、脂泻病、莱氏综合征(Leigh Syndrome)、甘油激酶缺乏症、家族性嗜酸性粒细胞增多症(FE)、常染色体隐性痉挛性共济失调、喉部炎症性疾病；结核病、慢性胆囊炎、支气管扩张、硅肺病和其它尘肺病。
在各个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗或预防一种或多种自身免疫疾病或疾患，如多发性硬化、糖尿病、狼疮、脂泻病、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、古兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome)、硬皮病、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture'ssyndrome)、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener's granulomatosis)、自身免疫性癫痫、拉斯马森氏脑炎(Rasmussen's encephalitis)、原发性胆汁性硬化、硬化性胆管炎、自身免疫性肝炎、爱迪生氏病(Addison's disease)、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、纤维肌痛症、美尼尔氏综合征(Menier's syndrome)；移植排斥反应(例如防止同种异体移植排斥)、恶性贫血、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、皮肌炎、修格连氏综合征(Sjogren'ssyndrome)、红斑狼疮、多发性硬化、重症肌无力、瑞特氏综合征(Reiter's syndrome)、格雷夫氏病(Grave's disease)和其它自身免疫疾病。
在各个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗、控制或预防心血管疾病，如影响心脏和血管的疾病或疾患，包括但不限于冠心病(CHD)、脑血管疾病(CVD)、主动脉瓣狭窄、末梢血管病、动脉粥样硬化、动脉硬化、心肌梗塞(心脏病发作)、脑血管疾病(中风)、短暂性缺血发作(TIA)、心绞痛(稳定的和不稳定的)、心房纤维性颤动、心律不齐、血管疾病和/或充血性心力衰竭。
在各个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗或预防一种或多种代谢相关病症。在各个实施方案中，本发明可用于治疗、控制或预防糖尿病，包括1型糖尿病和2型糖尿病以及与肥胖相关的糖尿病。本发明的组合物和方法可用于治疗或预防糖尿病相关病症，包括但不限于糖尿病性肾病、高血糖症、糖耐量受损、胰岛素抗性、肥胖、脂质异常、血脂异常、高脂血症、高甘油三酯血症、高胆固醇血症、低HDL水平、高LDL水平、动脉粥样硬化及其后遗症、血管再狭窄、肠易激综合征、炎症性肠病(包括克罗恩氏病和溃疡性结肠炎)、其它炎症性疾患、胰脏炎、腹部肥胖、神经退化性疾病、视网膜病、赘生性疾患、脂肪细胞肿瘤、脂肪细胞癌如脂肪肉瘤、前列腺癌和其它癌症(包括胃癌、乳腺癌、膀胱癌和结肠癌)、血管生成、阿兹海默氏病、牛皮癣、高血压、代谢综合征(例如，人存在以下病症中的三种或更多种：腹部肥胖、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高血压和高空腹血浆葡萄糖)、卵巢雄激素过多症(多囊卵巢综合征)和胰岛素抗性是一个组成部分的其它病症，如睡眠呼吸暂停。本发明的组合物和方法可用于治疗、控制或预防肥胖(包括遗传性或环境性)和肥胖相关的病症。本文的肥胖相关病症与肥胖相关、由肥胖引起或者是肥胖的结果。肥胖相关病症的实例包括肥胖、糖尿病、过量进食、暴饮暴食和贪食症、高血压、血浆胰岛素浓度升高和胰岛素抗性、血脂异常、高脂血症、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌和结肠癌、骨关节炎、阻塞性睡眠呼吸暂停、胆结石、心脏病、心律异常和心律不齐、心肌梗塞、充血性心力衰竭、冠心病、猝死、中风、多囊卵巢病、颅咽管瘤、普拉德-威利综合征(Prader-Willi Syndrome)、弗勒利希氏综合征(Frohlich's syndrome)、GH缺乏型受试者、正常变异性身材矮小、特纳氏综合征(Turner's syndrome)和表现出代谢活性降低或静息时能量消耗量(占总不含脂肪物质的百分比)降低的其它病理学疾患，例如患有急性成淋巴细胞性白血病的儿童。肥胖相关病症的其它实例有代谢综合征、胰岛素抗性综合征、生殖激素异常、性功能障碍和生殖功能障碍如生育能力受损、不育症、男性性腺功能减退和女性多毛症、与母体肥胖相关的胎儿缺陷、胃肠动力障碍如肥胖相关的胃食管回流、呼吸障碍如肥胖性肺换气不足综合征(匹克威克综合征(Pickwickian syndrome))、呼吸急促、心血管病症、炎症如全身性血管炎症、动脉硬化、高胆固醇血症、下背部疼痛、胆囊疾病、高尿酸血症、痛风和肾癌，以及麻木风险增高。本发明的组合物和方法还可用于治疗阿兹海默氏病。
在各个实施方案中，使用本发明的组合物来治疗或预防一种或多种呼吸道疾病，如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)、支气管扩张、过敏性鼻炎、窦炎、肺血管收缩、炎症、过敏、呼吸受阻、呼吸窘迫综合征、囊性纤维化、肺高压、肺血管收缩、肺气肿、汉坦病毒肺综合征(Hantavirus pulmonary syndrome，HPS)、吕弗勒氏综合征(Loeffler's syndrome)、古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、胸膜炎、肺炎、肺水肿、肺纤维化、类肉瘤病、与呼吸道合胞病毒感染相关的并发症和其它呼吸道疾病。
在一些实施方案中，使用本发明来治疗或预防一种或多种神经退化性疾病。说明性神经退化性疾病包括但不限于多发性硬化(包括但不限于良性多发性硬化；复发-缓解型多发性硬化(RRMS)；继发性进行性多发性硬化(SPMS)；进行性复发性多发性硬化(PRMS)；和原发性进行性多发性硬化(PPMS))、阿滋海默氏病(包括但不限于早期发作型阿滋海默氏病、晚期发作型阿滋海默氏病和家族性阿滋海默氏病(FAD))、帕金森氏病和帕金森氏综合征(包括但不限于特发性帕金森氏病、血管性帕金森氏综合征、药物诱发型帕金森氏综合征、路易体痴呆、遗传性帕金森氏病、青少年帕金森氏病)、亨廷顿氏病(Huntington'sdisease)、肌萎缩性侧索硬化(ALS，包括但不限于偶发性ALS、家族性ALS、西太平洋ALS、青少年ALS、平山病(Hiramaya Disease))。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质得以用于治疗创伤，例如非愈合性创伤、溃疡、灼伤或冻伤、慢性或急性创伤、开放性或闭合性创伤、内伤或外伤(说明性外伤有穿透性和非穿透性创伤)。
在各个实施方案中，本发明的嵌合蛋白质得以用于治疗局部缺血，作为非限制性实例，与急性冠状动脉综合征相关的局部缺血、急性肺损伤(ALI)、急性心肌梗塞(AMI)、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、动脉阻塞性疾病、动脉硬化、关节软骨缺陷、无菌性全身性炎症、动脉粥样硬化性心血管疾病、自身免疫疾病、骨折、骨折、脑水肿、脑灌注不足、伯格氏病(Buerger's disease)、灼伤、癌症、心血管疾病、软骨损伤、脑梗塞、脑缺血、脑中风、脑血管疾病、化疗诱导的神经病、慢性感染、慢性肠系膜缺血、跛行、充血性心力衰竭、结缔组织损伤、挫伤、冠状动脉病(CAD)、严重型肢体缺血(CLI)、克罗恩氏病、深静脉血栓形成、深部创伤、溃疡愈合延迟、创伤愈合延迟、糖尿病(I型和II型)、糖尿病性神经病变、糖尿病诱导的局部缺血、弥漫性血管内凝血(DIC)、栓塞性脑缺血、冻伤、移植物对抗宿主病、遗传性出血性毛细管扩张缺血性血管病、高氧性损伤、缺氧、炎症、炎症性肠病、炎症性疾病、肌腱损伤、间歇性跛行、肠缺血、局部缺血、缺血性脑病、缺血性心脏病、缺血性末梢血管病、胎盘缺血、缺血性肾病、缺血性血管病、缺血性再灌注损伤、撕裂伤、左主冠状动脉疾病、肢体缺血、下肢缺血、心肌梗塞、心肌缺血、器官缺血、骨关节炎、骨质疏松症、骨肉瘤、帕金森氏病、末梢动脉病(PAD)、末梢动脉病、末梢缺血、末梢神经病、末梢血管病、癌前、肺水肿、肺栓塞、重塑障碍、肾缺血、视网膜缺血、视网膜病、败血症、皮肤溃疡、实体器官移植、脊髓损伤、中风、软骨下骨囊肿、血栓形成、血栓形成性脑缺血、组织缺血、短暂性缺血性发作(TIA)、外伤性脑损伤、溃疡性结肠炎、肾血管病、血管炎性疾患、希佩尔-林道综合征(von Hippel-Lindausyndrome)或者组织或器官创伤。
在各个实施方案中，本发明的方法涉及施用包含特异性地靶向肌腱蛋白-C(例如肌腱蛋白-CA1)的靶向部分的嵌合蛋白质。在此类实施方案中，本发明的方法可以用于治疗多种组织损伤和疾病，如炎症、心血管疾病如心力衰竭、动脉粥样硬化和癌症。在一些实施方案中，靶向肌腱蛋白-C可以预防或减轻淋巴细胞迁移、刺激Th2细胞激活、抑制T细胞激活、抑制骨髓细胞迁移、刺激TLR4介导的细胞因子产生、角化细胞粘着和迁移和/或与炎症相关的细胞分化中的一项或多项。在一些实施方案中，靶向肌腱蛋白-C可以预防或减少组织重建、组织重塑和/或与癌症相关的转移。
药盒
本发明还提供了用于施用本文所描述的任何剂(例如与或未与多种其它治疗剂一起的嵌合蛋白质)的药盒。该药盒是包括至少一种本文所描述的本发明药物组合物在内的材料或组分的组合体。因此，在一些实施方案中，该药盒含有至少一种本文所描述的药物组合物。
配置在药盒中的组分的确切性质取决于其预定目的。在一个实施方案中，该药盒被配置用于治疗人受试者的目的。
在该药盒中可以包括使用说明书。使用说明书典型地包括有形表示，其描述了使用该药盒的组分实现所期望的结果，如治疗癌症时将要采用的技术。任选地，该药盒还含有本领域技术人员容易了解的其它有用组分，如稀释剂、缓冲剂、药学上可接受的载体、注射器、导管、敷涂器、吸移工具或测量工具、包扎材料或其它有用的附件。
装配在药盒中的材料和组分可以提供给从业人员，以保持其可操作性和效用的任何便利并且适合的方式储存。举例来说，这些组分可以在室温、冷藏温度或冷冻温度下提供。这些组分典型地包含在合适的包装材料中。在各个实施方案中，包装材料是由众所周知的方法构造，优选地以提供无菌、无污染的环境。包装材料可以具有指示药盒和/或其组分的内含物和/或目的的外部标签。
定义
如本文所使用，“一个/一种(a/an)”或“所述(the)”可以意指一个或多于一个。
此外，术语“约”当与引用的数值指示结合使用时意指所引用的数值指示加或减所述引用的数值指示的至多10％。举例来说，语言“约50”覆盖45到55的范围。
“有效量”当与医学用途结合使用时是有效提供所关注的疾病的发病率的可测量治疗、预防或降低的量。
如本文所使用，如果活性和/或效应的读出在剂或刺激物存在下相对于不存在此类调节降低了显著量，如至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％或更多、多达并且包括至少约100％，那么某性质“降低”。如本领域普通技术人员所理解，在一些实施方案中，活性降低并且一些下游读出将降低但其它下游读出可以增加。
相反地，如果活性和/或效应的读出在剂或刺激物存在下相对于不存在此类剂或刺激物增加了显著量，例如至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约97％、至少约98％或更多、多达并且包括至少约100％或更多、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约50倍、至少约100倍，那么活性“增加”。
如本文中所提及，除非另外规定，否则全部组成百分比都以总组合物的重量计。如本文所使用，词语“包括”和其变化形式旨在是非限制性的，使得在列表中对项目的列举不应排除也可以用于这项技术的组合物和方法中的其它类似项目。类似地，术语“可以(can/may)”和其变化形式意在是非限制性的，使得一个实施方案可以包含某些要素或特征的列举不排除本发明技术的不含有那些要素或特征的其它实施方案。
尽管开放性的术语“包含”作为术语如包括、含有或具有的同义词在本文中用以描述和要求本发明，但本发明或其实施方案可以可选地使用替代性术语如“由……组成”或“基本上由……组成”加以描述。
如本文所使用，词语“优选的”和“优选地”是指所述技术的在某些情况下提供某些益处的实施方案。然而，其它实施方案在相同或其它情况下也可以是优选的。此外，列举一个或多个优选实施方案不意指其它实施方案是无用的，并且不打算将其它实施方案从所述技术的范围中排除。
用于实现治疗效应所需要的本文所述的组合物的量可以出于特定目的根据常规程序凭经验确定。一般来说，对于出于治疗目的而施用治疗剂来说，治疗剂是以药理学有效剂量给予。“药理学有效量”、“药理学有效剂量”、“治疗有效量”或“有效量”是指足以产生所期望的生理效应的量或能够实现所期望的结果、特别是用于治疗病症或疾病的量。如本文所使用，有效量将包括足以例如延迟病症或疾病的症状的发展、改变病症或疾病的症状的过程(例如，减缓疾病的症状的进展)、减少或消除病症或疾病的一种或多种症状或表现形式，以及逆转病症或疾病的症状的量。治疗益处还包括中断或减缓潜在疾病或病症的进展，无关于是否实现了改善。
有效量、毒性和治疗功效可以通过标准药物程序在细胞培养物或实验动物中测定，例如测定LD50(约50％群体的致死剂量)和ED50(在约50％群体中具有治疗有效性的剂量)。剂量可以取决于所用剂型和所用施用途径而变化。毒性与治疗效应之间的剂量比率是治疗指数并且可以表示为比率LD50/ED50。在一些实施方案中，展现较大治疗指数的组合物和方法是优选的。治疗有效剂量最初可以由体外分析(包括例如细胞培养物分析)加以估算。此外，剂量可以在动物模型中配制以实现包括如在细胞培养物中或在适当动物模型中测定的IC50的循环血浆浓度范围。所描述的组合物在血浆中的含量可以例如通过高效液相色谱法加以测量。任何特定剂量的效应都可以通过合适的生物分析来监控。剂量可以由医师确定并且根据需要调节以适应观察到的治疗效应。
在某些实施方案中，效应将引起至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约50％、至少约70％或至少约90％的可定量变化。在一些实施方案中，效应将引起约10％、约20％、约30％、约50％、约70％或甚至约90％或更大的可定量变化。治疗益处还包括中断或减缓潜在疾病或病症的进展，无关于是否实现了改善。
如本文所使用，“治疗方法”同样适用于组合物用于治疗本文所描述的疾病或病症的用途和/或组合物用于制造用以治疗本文所描述的疾病或病症的药物的一种和/或多种用途。通过以下非限制性实施例进一步说明本发明。
实施例
这些实施例中采用的VHH是抗小鼠TNCA1VHH(2TC24)，SEQ ID NO:212。
实施例1.包含抗TNCA1 VHH和干扰素(IFN)的嵌合蛋白质的体内抗肿瘤活性
在B16黑素瘤模型中使用嵌合抗TNCA1 VHH靶向体内干扰素活性
第0天，将小鼠在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞(稳定地表达小鼠CD20的小鼠黑素瘤细胞系)以诱导肿瘤。为了确定嵌合抗TNCA1 VHH的体内抗肿瘤作用，用野生型小鼠IFN、野生型人IFN、包含与抗人hCD20 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质或包含与抗小鼠mTNCA1 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质给小鼠进行病变周围(＝在肿瘤边缘经皮下)处理。用PBS处理对照小鼠。监控肿瘤生长和体重。如图1分图A和分图B中所示，包含与抗小鼠mTNCA1 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质显著减缓了肿瘤生长，功效与用野生型小鼠IFN进行治疗相当。然而，如图1分图C中所示，用野生型小鼠IFN治疗造成了显著的体重损失，这在使用嵌合抗TNCA1 VHH治疗时未见。用嵌合抗TNCA1VHH处理的小鼠维持正常的体重以及正常的全血细胞计数，包括淋巴细胞、嗜中性粒细胞、红细胞/血红蛋白和血小板(图1，分图D)。总而言之，这些结果表明嵌合抗TNCA1 VHH在减缓肿瘤生长方面有效，同时不造成显著的毒性或副作用。
在B16黑素瘤模型中使用嵌合抗TNCA1 VHH和肿瘤坏死因子或多柔比星的组合疗法
检验了使用肿瘤坏死因子(TNF)或多柔比星和嵌合抗TNCA1 VHH的组合疗法的抗肿瘤效果。给小鼠移植B16-mCD20细胞(稳定地表达小鼠CD20的小鼠黑素瘤细胞系)以诱导肿瘤。随后用单独的TNF、单独的多柔比星、包含与抗小鼠mTNCA1 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质或者使用所述嵌合抗mTNCA1 VHH与TNF或多柔比星的组合疗法给小鼠提供病变周围(＝在肿瘤边缘经皮下)处理。还包括单独或者与TNF或多柔比星组合的野生型mIFN作为对照。如图2分图A中所示，组合嵌合抗mTNCA1 VHH与TNF或多柔比星与用单独的嵌合抗mTNCA1 VHH进行治疗相比显著减小了肿瘤大小。因此，可以通过与TNF或多柔比星组合治疗来增强所述嵌合抗mTNCA1 VHH的抗肿瘤效果。如图2分图B和分图C中所示，组合治疗没有造成体重损失或死亡，这与用野生型mIFN与TNF或多柔比星组合治疗形成了鲜明对比。
在B16黑素瘤模型中系统施用嵌合抗TNCA1 VHH
在B16黑素瘤模型中检验系统施用的嵌合抗TNCA1 VHH的功效。具体来说，用包含与抗人hCD20 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质或包含与抗小鼠mTNCA1VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质给小鼠提供静脉内注射。在肿瘤接种后第8-11天以5,500IU的剂量经静脉内注射嵌合VHH。如图3分图A中所示，系统施用嵌合抗体引起肿瘤生长明显减缓，其中嵌合抗mTNCA1 VHH更有效。如图3分图B中所示，系统施用嵌合抗体没有引起毒性或血液学副作用。
实施例2.包含抗TNCA1 VHH和肿瘤坏死因子(TNF)的嵌合蛋白质的体内抗肿瘤活 性
在B16黑素瘤模型中使用嵌合抗TNCA1 VHH靶向体内TNF活性
第0天，将小鼠在左腹侧经皮下接种6×105个B16-mCD20细胞(稳定地表达小鼠CD20的小鼠黑素瘤细胞系)以诱导肿瘤。为了确定嵌合抗TNCA1 VHH的体内抗肿瘤作用，用带有Y86F突变的突变mTNF、包含与抗小鼠mCD20VHH融合的突变scTNF(Y86F)的嵌合蛋白质或包含与抗小鼠mTNCA1 VHH融合的突变sc TNF(Y86F)的嵌合蛋白质给小鼠提供病变周围(＝在肿瘤边缘经皮下)处理。用PBS处理对照小鼠。监控肿瘤生长和体重。如图4分图A中所示，包含与抗小鼠mTNCA1 VHH融合的突变sc TNF(Y86F)的嵌合蛋白质显著减缓了肿瘤生长。如图4分图B中所示，用嵌合抗TNCA1 VHH处理过的小鼠维持正常的体重。
在第二组实验中，检验了不同的TNF突变。具体来说，用包含与野生型sc TNF、带有Y86F突变、L74G突变或D142A突变的突变sc TNF融合的抗小鼠mTNCA1 VHH的嵌合蛋白质对小鼠进行处理。作为对照，还用包含与野生型sc TNF或多种突变sc TNF融合的抗Bcll10VHH的嵌合蛋白质对小鼠进行处理。监控肿瘤生长和体重。如图5分图A和分图B中所示，包含与野生型或变体TNF融合的抗mTNCA1 VHH的嵌合蛋白质显著减缓了肿瘤生长，而对体重没有不利影响。
在B16黑素瘤模型中使用嵌合抗TNCA1 VHH和嵌合抗CD8 VHH的组合疗法
检验了使用嵌合抗TNCA1和抗CD8 VHH的组合疗法的抗肿瘤效果。给小鼠移植B16-mCD20细胞(稳定地表达小鼠CD20的小鼠黑素瘤细胞系)以诱导肿瘤。随后用野生型sc TNF、带有Y86F突变的突变sc TNF、包含与抗CD8 VHH融合的突变Q124R干扰素的嵌合蛋白质或包含与抗TNCA1VHH融合的突变sc TNF(Y86F)的嵌合蛋白质给小鼠提供病变周围(＝在肿瘤边缘经皮下)处理。还使用野生型sc TNF和嵌合抗CD8VHH、突变sc TNF(Y86F)与嵌合抗CD8抗体或嵌合抗TNCA1和抗CD8 VHH来施用组合处理。结果表明尽管用单独的sc TNF(Y86F)进行处理没有抗肿瘤作用，但使用包含与抗TNCA1 VHH和嵌合抗CD8 VHH融合的突变sc TNF(Y86F)的嵌合蛋白质的组合疗法显著减缓了肿瘤生长(图6，分图A)。所述组合疗法对体重具有极小的不利作用(图6，分图B)。
作为对照，还检验了利用包含与突变sc TNF(Y86F)融合的抗Bcll10 VHH的嵌合蛋白质的处理。如图7分图A和分图B中所示，使用嵌合抗Bcll10和抗CD8 VHH的组合疗法对体重没有不利影响，但是也没有有效的抗肿瘤作用。
等效方案
尽管已经结合本发明的具体实施方案描述了本发明，但应当理解，总体来说，按照本发明的原理，能够进行进一步修改并且本申请意在涵盖本发明的任何变化方案、用途或改编，并且包括如在本发明所属领域内的已知或惯用实践范围内和如可以应用于上文所阐述的基本特征和如下所附权利要求书范围内的对本公开的背离。
本领域技术人员仅仅使用常规实验就将认识到或能够确定本文具体描述的具体实施方案的众多等效方案。此类等效方案意图涵盖在以下权利要求书的范围内。
以引用的方式并入
本文引用的所有专利和出版物都以引用的方式整体并入本文。
本文讨论的出版物只提供其在本申请提交日期之前的公开内容。本文不应被理解为承认本发明由于在先发明而无权先于此类出版物。
如本文所使用，所有标题都只用于组织，而非意在以任何方式限制本公开。任何个别部分的内容都可以同样适用于所有部分。
序列表
<110> ORIONIS BIOSCIENCES NV
VIB VZW
UNIVERSITEIT GENT
Tavernier, Jan
Kley, Nikolai
Huyghe, Leander
Cauwels, Anje
<120> 对非细胞结构的治疗性靶向
<130> ORN-015PC
<150> 62/235,990
<151> 2016-05-13
<160> 222
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
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<220>
<223> 合成序列
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35 40 45
Gly Glu Glu Ser Asn Asp Lys Ile Pro Val Ala Leu Gly Leu Lys Glu
50 55 60
Lys Asn Leu Tyr Leu Ser Cys Val Leu Lys Asp Asp Lys Pro Thr Leu
65 70 75 80
Gln Leu Glu Ser Val Asp Pro Lys Asn Tyr Pro Lys Lys Lys Met Glu
85 90 95
Lys Arg Phe Val Phe Asn Lys Ile Glu Ile Asn Asn Lys Leu Glu Phe
100 105 110
Glu Ser Ala Gln Phe Pro Asn Trp Tyr Ile Ser Thr Ser Gln Ala Glu
115 120 125
Asn Met Pro Val Phe Leu Gly Gly Thr Lys Gly Gly Gln Asp Ile Thr
130 135 140
Asp Phe Thr Met Gln Phe Val Ser Ser
145 150
<210> 9
<211> 133
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 9
Ala Pro Thr Ser Ser Ser Thr Lys Lys Thr Gln Leu Gln Leu Glu His
1 5 10 15
Leu Leu Leu Asp Leu Gln Met Ile Leu Asn Gly Ile Asn Asn Tyr Lys
20 25 30
Asn Pro Lys Leu Thr Arg Met Leu Thr Phe Lys Phe Tyr Met Pro Lys
35 40 45
Lys Ala Thr Glu Leu Lys His Leu Gln Cys Leu Glu Glu Glu Leu Lys
50 55 60
Pro Leu Glu Glu Val Leu Asn Leu Ala Gln Ser Lys Asn Phe His Leu
65 70 75 80
Arg Pro Arg Asp Leu Ile Ser Asn Ile Asn Val Ile Val Leu Glu Leu
85 90 95
Lys Gly Ser Glu Thr Thr Phe Met Cys Glu Tyr Ala Asp Glu Thr Ala
100 105 110
Thr Ile Val Glu Phe Leu Asn Arg Trp Ile Thr Phe Cys Gln Ser Ile
115 120 125
Ile Ser Thr Leu Thr
130
<210> 10
<211> 129
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 10
His Lys Cys Asp Ile Thr Leu Gln Glu Ile Ile Lys Thr Leu Asn Ser
1 5 10 15
Leu Thr Glu Gln Lys Thr Leu Cys Thr Glu Leu Thr Val Thr Asp Ile
20 25 30
Phe Ala Ala Ser Lys Asn Thr Thr Glu Lys Glu Thr Phe Cys Arg Ala
35 40 45
Ala Thr Val Leu Arg Gln Phe Tyr Ser His His Glu Lys Asp Thr Arg
50 55 60
Cys Leu Gly Ala Thr Ala Gln Gln Phe His Arg His Lys Gln Leu Ile
65 70 75 80
Arg Phe Leu Lys Arg Leu Asp Arg Asn Leu Trp Gly Leu Ala Gly Leu
85 90 95
Asn Ser Cys Pro Val Lys Glu Ala Asn Gln Ser Thr Leu Glu Asn Phe
100 105 110
Leu Glu Arg Leu Lys Thr Ile Met Arg Glu Lys Tyr Ser Lys Cys Ser
115 120 125
Ser
<210> 11
<211> 185
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 11
Ala Pro Val Pro Pro Gly Glu Asp Ser Lys Asp Val Ala Ala Pro His
1 5 10 15
Arg Gln Pro Leu Thr Ser Ser Glu Arg Ile Asp Lys Gln Ile Arg Tyr
20 25 30
Ile Leu Asp Gly Ile Ser Ala Leu Arg Lys Glu Thr Cys Asn Lys Ser
35 40 45
Asn Met Cys Glu Ser Ser Lys Glu Ala Leu Ala Glu Asn Asn Leu Asn
50 55 60
Leu Pro Lys Met Ala Glu Lys Asp Gly Cys Phe Gln Ser Gly Phe Asn
65 70 75 80
Glu Glu Thr Cys Leu Val Lys Ile Ile Thr Gly Leu Leu Glu Phe Glu
85 90 95
Val Tyr Leu Glu Tyr Leu Gln Asn Arg Phe Glu Ser Ser Glu Glu Gln
100 105 110
Ala Arg Ala Val Gln Met Ser Thr Lys Val Leu Ile Gln Phe Leu Gln
115 120 125
Lys Lys Ala Lys Asn Leu Asp Ala Ile Thr Thr Pro Asp Pro Thr Thr
130 135 140
Asn Ala Ser Leu Thr Thr Lys Leu Gln Ala Gln Asn Gln Trp Leu Gln
145 150 155 160
Asp Met Thr Thr His Leu Ile Leu Arg Ser Phe Lys Glu Phe Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Leu Arg Ala Leu Arg Gln Met
180 185
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 12
Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu
1 5 10 15
Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly
20 25 30
Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala
35 40 45
Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr
50 55 60
Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln
65 70 75 80
Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe
85 90 95
Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg
100 105 110
Phe Asn
<210> 13
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 13
Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met
1 5 10 15
Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Ala Glu Asp Asp Glu Asn
20 25 30
Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile
35 40 45
Arg Asn Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro
50 55 60
Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg
65 70 75 80
Thr Ile Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met
85 90 95
Ala Val Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys
100 105 110
Glu Asn Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile
115 120 125
Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly
130 135 140
His Asp Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe
145 150 155 160
Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys
165 170 175
Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu
180 185 190
Asp Leu
<210> 14
<211> 270
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 14
Met Lys Pro Lys Met Lys Tyr Ser Thr Asn Lys Ile Ser Thr Ala Lys
1 5 10 15
Trp Lys Asn Thr Ala Ser Lys Ala Leu Cys Phe Lys Leu Gly Lys Ser
20 25 30
Gln Gln Lys Ala Lys Glu Val Cys Pro Met Tyr Phe Met Lys Leu Arg
35 40 45
Ser Gly Leu Met Ile Lys Lys Glu Ala Cys Tyr Phe Arg Arg Glu Thr
50 55 60
Thr Lys Arg Pro Ser Leu Lys Thr Gly Arg Lys His Lys Arg His Leu
65 70 75 80
Val Leu Ala Ala Cys Gln Gln Gln Ser Thr Val Glu Cys Phe Ala Phe
85 90 95
Gly Ile Ser Gly Val Gln Lys Tyr Thr Arg Ala Leu His Asp Ser Ser
100 105 110
Ile Thr Gly Ile Ser Pro Ile Thr Glu Tyr Leu Ala Ser Leu Ser Thr
115 120 125
Tyr Asn Asp Gln Ser Ile Thr Phe Ala Leu Glu Asp Glu Ser Tyr Glu
130 135 140
Ile Tyr Val Glu Asp Leu Lys Lys Asp Glu Lys Lys Asp Lys Val Leu
145 150 155 160
Leu Ser Tyr Tyr Glu Ser Gln His Pro Ser Asn Glu Ser Gly Asp Gly
165 170 175
Val Asp Gly Lys Met Leu Met Val Thr Leu Ser Pro Thr Lys Asp Phe
180 185 190
Trp Leu His Ala Asn Asn Lys Glu His Ser Val Glu Leu His Lys Cys
195 200 205
Glu Lys Pro Leu Pro Asp Gln Ala Phe Phe Val Leu His Asn Met His
210 215 220
Ser Asn Cys Val Ser Phe Glu Cys Lys Thr Asp Pro Gly Val Phe Ile
225 230 235 240
Gly Val Lys Asp Asn His Leu Ala Leu Ile Lys Val Asp Ser Ser Glu
245 250 255
Asn Leu Cys Thr Glu Asn Ile Leu Phe Lys Leu Ser Glu Thr
260 265 270
<210> 15
<211> 193
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 15
Met Gly Val His Glu Cys Pro Ala Trp Leu Trp Leu Leu Leu Ser Leu
1 5 10 15
Leu Ser Leu Pro Leu Gly Leu Pro Val Leu Gly Ala Pro Pro Arg Leu
20 25 30
Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu Leu Glu Ala Lys Glu
35 40 45
Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His Cys Ser Leu Asn Glu
50 55 60
Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe Tyr Ala Trp Lys Arg
65 70 75 80
Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp Gln Gly Leu Ala Leu
85 90 95
Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu Leu Val Asn Ser Ser
100 105 110
Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp Lys Ala Val Ser Gly
115 120 125
Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu Gly Ala Gln Lys Glu
130 135 140
Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala Pro Leu Arg Thr Ile
145 150 155 160
Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val Tyr Ser Asn Phe Leu
165 170 175
Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala Cys Arg Thr Gly Asp
180 185 190
Arg
<210> 16
<211> 166
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 16
Ala Pro Pro Arg Leu Ile Cys Asp Ser Arg Val Leu Glu Arg Tyr Leu
1 5 10 15
Leu Glu Ala Lys Glu Ala Glu Asn Ile Thr Thr Gly Cys Ala Glu His
20 25 30
Cys Ser Leu Asn Glu Asn Ile Thr Val Pro Asp Thr Lys Val Asn Phe
35 40 45
Tyr Ala Trp Lys Arg Met Glu Val Gly Gln Gln Ala Val Glu Val Trp
50 55 60
Gln Gly Leu Ala Leu Leu Ser Glu Ala Val Leu Arg Gly Gln Ala Leu
65 70 75 80
Leu Val Asn Ser Ser Gln Pro Trp Glu Pro Leu Gln Leu His Val Asp
85 90 95
Lys Ala Val Ser Gly Leu Arg Ser Leu Thr Thr Leu Leu Arg Ala Leu
100 105 110
Gly Ala Gln Lys Glu Ala Ile Ser Pro Pro Asp Ala Ala Ser Ala Ala
115 120 125
Pro Leu Arg Thr Ile Thr Ala Asp Thr Phe Arg Lys Leu Phe Arg Val
130 135 140
Tyr Ser Asn Phe Leu Arg Gly Lys Leu Lys Leu Tyr Thr Gly Glu Ala
145 150 155 160
Cys Arg Thr Gly Asp Arg
165
<210> 17
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Val Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Ser Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Lys Ser Leu Gln Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Tyr Arg Phe Asp Met Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 18
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 18
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Lys Gly Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Tyr Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Asp Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 19
<211> 440
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser
115 120 125
Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
130 135 140
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
145 150 155 160
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys
180 185 190
Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
195 200 205
Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
210 215 220
Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
225 230 235 240
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
245 250 255
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
260 265 270
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
275 280 285
Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
290 295 300
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
325 330 335
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
340 345 350
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
355 360 365
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
370 375 380
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
405 410 415
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
420 425 430
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 20
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 21
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 21
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 22
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 22
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 23
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 24
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 24
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Trp Ile Tyr
35 40 45
Arg Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Cys Leu Thr Ile Asn Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Phe Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 117
<212> PRT
<213> 人
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Lys Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 27
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 28
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Gln Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Thr Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 29
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 29
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Asp Ser Gly Glu Ser Thr Tyr Ala Glu Glu Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Ser Leu Asn Ala Glu Asp Thr Gly Met Tyr Phe Cys
85 90 95
Val Arg Val Gly Tyr Asp Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 30
Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile Glu His Gly
1 5 10 15
Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser His Val Asn
20 25 30
Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn Asp Thr Ser
35 40 45
Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu Pro Leu Gly
50 55 60
Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp Glu Gly Gln
65 70 75 80
Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr Lys Tyr Leu
85 90 95
Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr His Ile Leu
100 105 110
Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln Ala Thr Gly
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val Pro Ala Asn
130 135 140
Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val Thr Ser Val
145 150 155 160
Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys Val Phe Trp
165 170 175
Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp Leu Gln Ser
180 185 190
Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His Ile Phe Ile
195 200 205
Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val Ile Ala Leu
210 215 220
Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp Thr Thr Lys
225 230 235 240
Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala Ile
245 250
<210> 31
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 31
Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln
1 5 10 15
Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile
20 25 30
Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser
35 40 45
His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn
50 55 60
Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu
65 70 75 80
Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp
85 90 95
Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr
100 105 110
Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr
115 120 125
His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln
130 135 140
Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val
145 150 155 160
Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val
165 170 175
Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys
180 185 190
Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp
195 200 205
Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 32
<211> 29
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 分支序列
<222> (9)..(15)
<223> SNTSESFK(SNTSESF)FRVTQLAPKAQIKE
<400> 32
Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Lys Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Phe
1 5 10 15
Arg Val Thr Gln Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu
20 25
<210> 33
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 33
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Arg Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Ile Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Ile Tyr Asp Gly Ser Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ala Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Cys Ala Ser Gln Gly
1 5 10 15
Gly Lys Val Thr Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Met Ala Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Lys Gly Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Ser Thr Leu Leu Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Arg Asp Tyr Ser Phe Ser Ile Ser Asn Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 35
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 35
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Asn Pro Ser Ser Gly Phe Thr Thr Tyr Asn Gln Asn Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Tyr Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 36
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 36
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Ser Val Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Tyr Thr Ile Tyr Tyr Thr Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Gly Tyr Gly Ser Phe Tyr Glu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 38
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Leu Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met
20 25 30
Tyr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Leu Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 39
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Lys
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Ala Glu Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 40
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ala Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Val Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Gly Asp Lys His Gln Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 41
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Ser Ser Ile His
20 25 30
Ala Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Trp Ser Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Leu
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Ala Gln Ser Ser Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 42
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Gly Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Ile Phe Ser Ile Asn
20 25 30
Ala Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Leu Ile Ser Trp Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Arg Val Asp Ser Asn Trp Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 43
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Arg Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ser Ile Pro Trp Ser Gly Gly Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Lys Glu Arg Ser Thr Gly Trp Asp Phe Ala Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Cys Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 44
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Asp
85 90 95
Cys Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 46
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 46
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 47
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 47
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly His Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Pro Ser Thr Gly Phe Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Ala Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Arg Asp Ser Ser Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 49
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 49
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Glu Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 50
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 51
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 52
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 52
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Leu Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gln Ser Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Phe Gly Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Trp
85 90 95
Glu Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 53
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 54
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 54
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 55
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 56
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 56
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 57
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly
130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn
145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln
165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser
180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser
195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr
210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 58
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 59
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 59
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ile Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe Tyr Ala Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Lys Leu Gly Thr Val Thr Thr Val Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 60
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 60
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Arg Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Gln
100 105 110
Pro Lys Ala Asn Pro Thr Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu
115 120 125
Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr
130 135 140
Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Gly Ser Pro Val Lys
145 150 155 160
Ala Gly Val Glu Thr Thr Lys Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr
165 170 175
Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His
180 185 190
Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys
195 200 205
Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 61
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 63
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 63
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Gly Phe Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Thr Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Phe Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 64
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 64
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 65
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 65
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asp Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Leu His Ala Asp Thr Gly Ile Thr Lys Phe Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Ile Gln Leu Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 66
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 67
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Val Ser Gly Gly Ile Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn His Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Gly Ile Ala Ala Ala Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 68
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 68
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 69
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Val Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Ser Gly Asn Ser Gly Asn Ile Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Val Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 70
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 70
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Glu Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 71
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Asp Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Arg Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Phe His Phe Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 72
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 72
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Thr
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Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Thr Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Lys Ala His Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Asp Tyr Val Ser Gly Ser Pro Phe Gly Met Asp Val
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Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Asp Asp Tyr
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<223> 合成序列
<400> 88
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<223> 合成序列
<400> 89
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<213> 人工序列
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<223> 合成序列
<400> 93
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<220>
<223> 合成序列
<400> 96
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<223> 合成序列
<400> 97
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<220>
<223> 合成序列
<400> 98
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<220>
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<400> 99
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<220>
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<223> 合成序列
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Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Arg Ser Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 102
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 102
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Gly Glu Gln Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Trp Asn Tyr Gly Tyr Tyr Asp Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 103
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 103
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Thr Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ser Ile
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
100 105
<210> 104
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 104
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 105
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 105
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Glu Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 106
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 106
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Arg Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Leu His Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 107
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 107
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ile Ser Arg Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 108
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 108
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Gly Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gln Leu Tyr Ser Asp Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 109
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 109
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Gly Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Leu Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser His Ser Leu Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 110
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 110
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Phe Thr Phe Ser Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Ser Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Lys Val Leu Val Gly Phe Asn Asn Gly Cys Trp Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 111
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 111
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Gly Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Asn Asp His
85 90 95
Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 112
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 112
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Asp Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Val Thr Ser Met Val Ala Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 113
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 113
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Ser Gly Asp Ala Leu Pro Gln Lys Tyr Val
20 25 30
Phe Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Thr Met Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Gln Val Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Tyr Ser Thr Asp Arg Ser Gly Asn His
85 90 95
Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 114
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 114
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 115
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 115
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro
85 90 95
Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 116
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 116
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 117
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 118
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 118
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 119
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 119
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 120
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 120
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 121
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 122
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val
65 70 75 80
Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 123
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 123
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 124
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Arg Gly Gln Arg Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Arg Lys Gly Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 125
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 分支序列
<222> (9)..(15)
<223> SNTSESFK(SNTSESF)FRVTQLAPKAQIKE
<400> 125
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 126
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 126
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 127
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 127
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 128
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 128
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 129
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 129
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 130
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 130
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 131
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 131
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 132
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ala
65 70 75 80
Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 133
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Gly Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 134
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Asp Cys Ala
85 90 95
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100 105 110
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
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50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
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100 105 110
Ile Val Ser Ala
115
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<211> 116
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 136
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 137
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Val Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
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Arg Leu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 138
Glu Val Lys Leu Phe Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
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65 70 75 80
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 139
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
Tyr Trp Asn Trp Ile Arg Lys Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Tyr Met
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Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 140
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr
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Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Ile Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Lys
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Thr Val Ser Ser
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 141
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ala Arg Gln Ile Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
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Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Thr Tyr Tyr Leu Gly Ser Val Gln
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Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
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Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
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115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 142
Glu Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Ser Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Thr Gly Asp Ser Ile Thr Ser Gly
20 25 30
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65 70 75 80
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
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<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 143
Glu Glu Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala
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100 105 110
Thr Ala Ser Ala
115
<210> 144
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 144
Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gln
1 5 10 15
Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr
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Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu
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Gly Val Ile Trp Arg Gly Val Thr Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Met
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Ser Arg Leu Thr Ile Thr Lys Asp Asn Ser Lys Asn Gln Val Val Leu
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Thr Met Asn Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala
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100 105 110
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115
<210> 145
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 145
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
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Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Asp Cys Ala
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100 105 110
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115
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<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 146
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
<210> 147
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 147
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 148
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1 5 10 15
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 149
Ser Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
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50 55 60
Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala
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Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys Gln Gln Asp Tyr Thr Ser Pro Tyr
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 150
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Tyr Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ile Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
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100 105 110
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<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 151
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Leu Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
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<210> 152
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 152
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Ala Asn Ser Ser Val Ser Tyr Met
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<210> 153
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 153
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
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100 105 110
<210> 154
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 154
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Ser Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
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Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Asn Arg Glu Ser Gly Val
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65 70 75 80
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Tyr Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu
100 105 110
Lys
<210> 155
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 155
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Tyr Ser Tyr Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Lys Tyr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
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100 105 110
<210> 156
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 156
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
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50 55 60
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 157
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 157
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Pro Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Ser Ser Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
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100 105 110
<210> 158
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 158
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 159
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 159
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 160
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 160
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 161
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 161
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Pro Gly Thr Gly Gly Ser Asn Phe Asp Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Trp Thr Thr Gly Thr Gly Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 162
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 162
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Asp Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 163
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 163
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Ile
50 55 60
Pro Pro Arg Phe Ser Gly Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Asn Ile Glu Ser Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 164
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 164
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 165
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 165
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 166
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 166
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 167
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 167
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Asp Phe Gln Ser Val Thr Pro Lys
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 168
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 168
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 169
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 169
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 170
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 170
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Phe Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Glu Ala Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 171
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 171
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 172
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 172
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 173
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 173
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Ala
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Ser Cys
85 90 95
Ala Ala Ser Gln Ala Pro Ile Thr Ile Ala Thr Met Met Lys Pro Phe
100 105 110
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 174
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 174
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Lys Cys Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Ala Arg His Gly Gly Pro Leu Thr Val Glu Tyr Phe Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 175
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 175
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ala Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Gly Gly Asp Asn Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gly Gly Trp Lys Tyr Cys Ser Gly Tyr Asp Pro Glu Tyr Ile
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 176
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 176
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Gln Tyr
20 25 30
Asp Val Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Phe Ser Ser Ser Gly Gly Arg Thr Ile Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Phe Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Lys
85 90 95
Ile Asp Trp Tyr Leu Asn Ser Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 177
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 177
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Val Asp Ala Ser Asn Ser
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Thr Gly Gly Gly Leu Ile Ala Tyr Thr Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Glu Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Thr Ile Asn Ser Arg Asp Gly Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 178
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 178
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asp Ser
20 25 30
Ile Val Ser Trp Tyr Arg Arg Ala Arg Gly Lys Gln Arg Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Ser Asn Gly Gly Thr Thr Lys Tyr Ala Glu Ser Val Leu
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Asn Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Gly Leu Asn Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Leu Cys Lys
85 90 95
Val Arg Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 179
<211> 130
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 179
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu Ser Thr Val Leu Ile Asn
20 25 30
Ala Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Asn
85 90 95
Ala Asp Val Tyr Pro Gln Asp Tyr Gly Leu Gly Tyr Val Glu Gly Lys
100 105 110
Val Tyr Tyr Gly His Asp Tyr Trp Gly Thr Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 180
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 180
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Val Ser Asn Tyr Ala Met Gly Trp Gly Arg Gln Ala Pro Gly Thr Gln
35 40 45
Arg Glu Leu Val Ala Ser Ile Ser Asn Gly Asp Thr Thr Asn Tyr Ala
50 55 60
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
65 70 75 80
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Phe Glu His Gln Val Ala Gly Leu Thr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 181
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (27)..(27)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (32)..(32)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (75)..(75)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 181
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Xaa Ala Leu Lys Ile Xaa
20 25 30
Val Met Gly Trp Tyr Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gln Arg Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ala Ile Thr Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Gly Asp Asn Ala Xaa Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Arg
85 90 95
Glu Trp Asn Ser Gly Tyr Pro Pro Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Gln Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 182
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 182
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Ser Ser Gly
20 25 30
Thr Met Gly Trp Phe Arg Arg Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Ser Ile Pro Trp Ser Gly Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Gln Asn Thr Val Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Phe Lys Glu Arg Ser Thr Gly Trp Asp Phe Ala Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 183
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 183
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Phe Ile Ser Gly Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Glu Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Asp Pro Trp Gly Pro Pro Ser Ile Ala Thr Met Thr Ser Tyr
100 105 110
Glu Tyr Lys His Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 184
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 184
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Ile Trp Leu Arg Arg Ala Pro Gly Lys Gly Phe Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asp Lys Asp Gly Asn Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ala Val Ser Arg Asp Asn Thr Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr
85 90 95
Lys His Gly Ser Ser Ala Arg Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 185
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 185
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Ser Gly Gly Gly Ile Thr Tyr Arg Gly Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Glu
85 90 95
Asn Gly Gly Ser Ser Tyr Arg Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 186
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 186
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 187
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 187
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 188
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 188
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 189
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 189
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 190
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 190
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Arg Ser Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Thr Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 191
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 191
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Thr Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 192
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 192
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 193
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 193
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 194
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 194
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Asn
85 90 95
Asp Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 195
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 195
Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 196
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 196
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 197
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复序列
<222> (1)..(5)
<223> (GGGGS)n (n=1-4)
<400> 197
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 198
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 198
Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly
1 5 10 15
Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr
20
<210> 199
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 199
Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly Leu Tyr Gly
1 5 10 15
Leu Tyr
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复序列
<222> (1)..(5)
<223> (EAAAK)n (n=1-3)
<400> 200
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
<210> 201
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复序列
<222> (2)..(6)
<223> A(EAAAK)nA (n = 2-5)
<400> 201
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Asn Ala
20 25
<210> 202
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 202
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
1 5 10
<210> 203
<211> 46
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> 重复序列
<222> (2)..(6)
<223> A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A
<220>
<221> 重复序列
<222> (10)..(15)
<223> A(EAAAK)4ALEA(EAAAK)4A
<400> 203
Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys
1 5 10 15
Glu Ala Ala Ala Lys Ala Leu Glu Ala Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala
20 25 30
Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Glu Ala Ala Ala Lys Ala
35 40 45
<210> 204
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 204
Pro Ala Pro Ala Pro
1 5
<210> 205
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 205
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 206
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 206
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr
1 5 10
<210> 207
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 207
Gly Ser Ala Gly Ser Ala Ala Gly Ser Gly Glu Phe
1 5 10
<210> 208
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 208
Gly Gly Gly Ser Glu
1 5
<210> 209
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 209
Gly Ser Glu Ser Gly
1 5
<210> 210
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 210
Gly Ser Glu Gly Ser
1 5
<210> 211
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 211
Gly Glu Gly Gly Ser Gly Glu Gly Ser Ser Gly Glu Gly Ser Ser Ser
1 5 10 15
Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu Gly Gly Gly Ser Glu
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 212
<211> 121
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 212
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Thr Ser Gly Leu Thr Phe
20 25 30
Arg Ser Phe Gly Leu Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
35 40 45
Glu Phe Val Gly Ala Ile Ser Met Thr Gly Gly Thr Ile Tyr Asn Pro
50 55 60
Asp Ser Ser Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
65 70 75 80
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Met Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Val Asn Gly Leu Gly Leu Asn Tyr Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 213
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 213
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Met Ser
1 5 10
<210> 214
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 214
Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr Ala Ile Gly
1 5 10
<210> 215
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 215
Thr Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Ala Glu Tyr Ala Glu Pro Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 216
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 216
Cys Ile Arg Val Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Pro Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 217
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 217
Lys Asp Ala Asp Leu Val Trp Tyr Asn Leu Ser
1 5 10
<210> 218
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 218
Lys Asp Ala Asp Leu Val Trp Tyr Asn Leu Arg
1 5 10
<210> 219
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 219
Ala Gly Ser Leu Tyr Thr Cys Val Gln Ser Ile Val Val Val Pro Ala
1 5 10 15
Arg Pro Tyr Tyr Asp Met Asp Tyr
20
<210> 220
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 220
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Ala Glu Tyr Ala Glu Pro Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Asp Leu Val Trp Tyr Asn Leu Ser Thr Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Tyr Pro Tyr Asp Val Pro
115 120 125
Asp Tyr Gly Ser
130
<210> 221
<211> 132
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 221
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Ala Glu Tyr Ala Glu Pro Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Asp Ala Asp Leu Val Trp Tyr Asn Leu Arg Thr Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Tyr Pro Tyr Asp Val Pro
115 120 125
Asp Tyr Gly Ser
130
<210> 222
<211> 145
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 222
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Arg Val Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Pro Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Ala Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Gly Ser Leu Tyr Thr Cys Val Gln Ser Ile Val Val Val Pro
100 105 110
Ala Arg Pro Tyr Tyr Asp Met Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Gln Val
115 120 125
Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Gly
130 135 140
Ser
145

Claims (63)

1.一种嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质包含：
(a)一个或多个修饰的信号传导剂，所述一个或多个修饰的信号传导剂具有一个或多个赋予相较于野生型信号传导剂有所提高的安全性的修饰，并且所述信号传导剂是干扰素；
(b)一个或多个靶向部分，所述靶向部分包含特异性地结合至腱生蛋白的识别结构域，其中
所述靶向部分和所述信号传导剂任选地用一个或多个接头连接。
2.如权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中所述腱生蛋白是选自腱生蛋白-C、腱生蛋白-R、腱生蛋白-X和腱生蛋白-W。
3.如权利要求2所述的嵌合蛋白质，其中所述腱生蛋白是腱生蛋白-CA1。
4.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述识别结构域是全长抗体、单结构域抗体、只有重链的重组抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、只有重链的鲨鱼抗体(VNAR)、微蛋白(例如半胱氨酸结蛋白、打结素)、锚蛋白重复蛋白、anticalin、adnectin、适配体、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2、肽模拟分子、受体的天然配体或合成分子。
5.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述识别结构域是单结构域抗体。
6.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述识别结构域是VHH、人源化VHH或骆驼化VHH。
7.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述识别结构域在功能上调节目标抗原或受体。
8.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述识别结构域结合但不在功能上调节所述目标抗原或受体。
9.如权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的信号传导剂包含赋予相对于野生型信号传导剂有所降低的受体亲和力或活性的一个或多个突变。
10.如权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的信号传导剂包含赋予相对于野生型信号传导剂基本上降低或消除的受体亲和力或活性的一个或多个突变。
11.如权利要求1所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的信号传导剂包含(a)赋予相对于野生型信号传导剂基本上降低或消除的受体亲和力的一个或多个突变与(b)赋予相对于野生型信号传导剂降低的受体亲和力或活性的一个或多个突变；并且其中所述受体是不同的。
12.如权利要求11所述的嵌合蛋白质，其中所述一个或多个突变允许减弱活性。
13.如权利要求12所述的嵌合蛋白质，其中激动活性或拮抗活性有所减弱。
14.如权利要求11或12所述的嵌合蛋白质，其中所述信号传导剂包含将其活性从激动性转化成拮抗性的一个或多个突变。
15.如权利要求9所述的嵌合蛋白质，其中所述突变赋予降低的亲和力或活性，所述降低的亲和力或活性能通过连接至一个或多个靶向部分而得以恢复。
16.如权利要求10所述的嵌合蛋白质，其中所述突变赋予基本上降低或消除的亲和力或活性，所述基本上降低或消除的亲和力或活性基本上不能通过连接至一个或多个靶向部分而得以恢复。
17.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的信号传导剂是修饰的人干扰素。
18.如权利要求17所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的信号传导剂是修饰的人IFNα2。
19.如权利要求18所述的嵌合蛋白质，其中所述修饰的人IFNα2在位置144-154处包含任选地选自M148A、R149A和L153A的一个或多个突变。
20.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述嵌合蛋白质适用于患有以下疾病中的一种或多种的患者：癌症、感染、免疫病症、自体免疫疾病、心血管疾病、创伤、局部缺血相关性疾病、神经退化性疾病和/或代谢疾病。
21.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述嵌合蛋白质包含两个信号传导剂或两个靶向部分或二者共两个。
22.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述嵌合蛋白质包含三个信号传导剂或三个靶向部分或二者共三个。
23.如上述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述嵌合蛋白质包含针对非细胞结构的靶向部分和针对细胞结构的靶向部分。
24.如前述权利要求中任一项所述的嵌合蛋白质，其中所述嵌合蛋白质包含两个针对非细胞结构的靶向部分。
25.如权利要求23所述的嵌合蛋白质，其中所述靶向部分中的一个针对Clec9A、CD8或CD3。
26.如权利要求23所述的嵌合蛋白质，其中所述靶向部分中的一个针对PD-1。
27.如权利要求23所述的嵌合蛋白质，其中所述靶向部分中的一个针对PD-L1。
28.一种重组核酸组合物，所述重组核酸组合物编码一种或多种上述权利要求中任一项的嵌合蛋白质。
29.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含权利要求28的核酸。
30.一种治疗癌症的方法，所述方法包括对有需要的患者施用有效量的如上述权利要求中任一项的嵌合蛋白质。
31.如权利要求30所述的方法，其中所述方法预防或减轻所述非细胞结构的与癌症状态相关的异常调控和/或结构破坏。
32.如权利要求30或31所述的方法，其中所述方法预防或减轻癌症所特有的在非细胞结构的量、硬度、组成或形态方面的变化。
33.如权利要求30-32中任一项所述的方法，其中所述方法降低一种或多种促进所述非细胞结构的异常调控和/或结构破坏的酶的活性，所述一种或多种酶任选地选自基质金属蛋白酶(MMP)、解整合素、任选地具有血小板反应蛋白基序的金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶，包括纤溶酶。
34.如权利要求30-33中任一项所述的方法，其中所述方法减轻与所述非细胞结构的异常调控和/或结构破坏相关的各种生长因子信号传导途径的致癌作用。
35.如权利要求30-34中任一项所述的方法，其中所述方法减缓或阻碍癌症和/或肿瘤细胞转移的进展。
36.如权利要求30-35中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减轻癌症干细胞过度扩增和/或丧失分化。
37.如权利要求30-36中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减缓肿瘤生成微环境的形成。
38.如权利要求30-37中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减缓肿瘤血管生成和/或肿瘤炎症。
39.如权利要求30-38中任一项所述的方法，其中所述癌症是选自以下癌症中的一种或多种：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小未分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述癌症是乳腺癌。
41.一种医药组合物，所述医药组合物包含如权利要求1-27中任一项所述的嵌合蛋白质。
42.如权利要求1-27中任一项所述的嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质是用于治疗癌症。
43.如权利要求1-27中任一项所述的嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质是用于治疗选自以下一种或多种的癌症：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小未分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
44.一种治疗癌症的方法，所述方法包括对有需要的患者施用有效量的第一嵌合蛋白质和第二嵌合蛋白质，其中所述第一嵌合蛋白质是上述权利要求中任一项的嵌合蛋白质，并且其中所述第二嵌合蛋白质包含：一个或多个修饰的信号传导剂，所述一个或多个修饰的信号传导剂具有赋予相较于野生型信号传导剂有所提高的安全性的一个或多个修饰和一个或多个靶向部分，所述靶向部分包含特异性地结合至细胞上的目标抗原或受体的识别结构域。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述第一嵌合蛋白质包含修饰的TNF信号传导剂。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述修饰的TNF信号传导剂是修饰的人TNF-α，并且在位置87处包含任选地选自Y87Q、Y87L、Y87A和Y87F的突变。
47.如权利要求44-46中任一项所述的方法，其中所述第二嵌合蛋白质包含含有特异性地结合CD8的识别结构域的靶向部分。
48.如权利要求47所述的方法，其中所述第一嵌合蛋白质包含含有特异性地结合CD8的识别结构域的靶向部分和修饰的IFN信号传导剂。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述修饰的IFN信号传导剂是人IFNα2，在位置144-154处包含任选地选自M148A、R149A和L153A的一个或多个突变。
50.如权利要求44-49中任一项所述的方法，其中所述癌症是选自以下癌症中的一种或多种：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小未分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
51.一种治疗癌症的方法，所述方法包括对有需要的患者施用有效量的如上述权利要求中任一项的嵌合蛋白质和化疗剂。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述嵌合蛋白质包含修饰的IFN信号传导剂。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述修饰的IFN信号传导剂是人IFNα2，并且在位置144-154处包含任选地选自M148A、R149A和L153A的一个或多个突变。
54.如权利要求51所述的方法，其中所述嵌合蛋白质包含修饰的TNF信号传导剂。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述修饰的TNF信号传导剂是修饰的人TNF-α，并且在位置87处包含任选地选自Y87Q、Y87L、Y87A和Y87F的突变。
56.如权利要求51-55中任一项所述的方法，其中所述化疗剂是DNA插入剂。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述DNA插入剂是选自多柔比星、顺铂、佐柔比星和表柔比星。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述DNA插入剂是多柔比星。
59.如权利要求51-58中任一项所述的方法，其中所述癌症是选自以下癌症中的一种或多种：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小未分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
60.一种治疗癌症的方法，所述方法包括对有需要的患者施用有效量的：
a)嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质包含含有特异性地结合TNCA的识别结构域的靶向部分和修饰的IFN信号传导剂；以及
b)TNF。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述修饰的IFN信号传导剂是人IFNα2，并且在位置144-154处包含任选地选自M148A、R149A和L153A的一个或多个突变。
62.如权利要求60或61所述的方法，其中所述癌症是选自以下癌症中的一种或多种：基底细胞癌、胆道癌；膀胱癌；骨癌；脑和中枢神经系统癌；乳腺癌；腹膜癌；宫颈癌；绒毛膜癌；结肠和直肠癌；结缔组织癌；消化系统癌；子宫内膜癌；食道癌；眼癌；头颈癌；胃癌(包括胃肠癌)；成胶质细胞瘤；肝癌；肝细胞瘤；上皮内赘瘤；肾脏癌或肾癌；喉癌；白血病；肝脏癌；肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌和肺鳞状细胞癌)；黑素瘤；骨髓瘤；成神经细胞瘤；口腔癌(唇、舌、口和咽)；卵巢癌；胰腺癌；前列腺癌；成视网膜细胞瘤；横纹肌肉瘤；直肠癌；呼吸系统癌；唾液腺癌；肉瘤；皮肤癌；鳞状细胞癌；胃癌；睾丸癌；甲状腺癌；子宫或子宫内膜癌；泌尿系统癌；外阴癌；淋巴瘤，包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)；小淋巴细胞(SL)性NHL；中级/滤泡性NHL；中级弥漫性NHL；高级成免疫细胞性NHL；高级成淋巴细胞性NHL；高级小未分裂细胞性NHL；巨大肿块性NHL；套细胞性淋巴瘤；AIDS相关性淋巴瘤；和瓦氏巨球蛋白血症；慢性淋巴细胞性白血病(CLL)；急性成淋巴细胞性白血病(ALL)；毛细胞性白血病；慢性成髓细胞性白血病；以及其它癌瘤和肉瘤；和移植后淋巴组织增生性病症(PTLD)，以及与斑痣性错构瘤相关的异常血管增生、浮肿(例如，与脑肿瘤相关的浮肿)和梅格斯氏综合征。
63.如权利要求1-43中任一项所述的嵌合蛋白质，所述嵌合蛋白质是用于制造供治疗癌症、感染、免疫病症、炎症性疾病或疾患和自体免疫疾病中的一种或多种用的药物。
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