TW202136318A

TW202136318A - 用於治療癌症的 IL15/IL15R α 異二聚體 Fc 融合蛋白質

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Publication number: TW202136318A
Application number: TW110103329A
Authority: TW
Inventors: 亞歷山大喬克姆保羅昂格威克爾; 大衛利博維茨; 維塔習瓦; 拉傑巴拉恩亞達
Original assignee: 美商建南德克公司; 美商山可爾股份有限公司
Priority date: 2020-01-28
Filing date: 2021-01-28
Publication date: 2021-10-01
Also published as: KR20220132598A; CA3165460A1; BR112022014849A2; WO2021155042A1; JP2023511439A; US20230149509A1; CN115397456A; EP4096698A1; AU2021213767A1; MX2022009100A; IL294944A

Abstract

本揭示提供藉由投予異二聚體蛋白來治療癌症之方法，該異二聚體蛋白包含：含 IL15 蛋白-Fc 結構域融合體的第一單體，及含 IL15Rα 蛋白-Fc 結構域融合體的第二單體。

Description

用於治療癌症的　IL15/IL15R　α　異二聚體　Fc　融合蛋白質

本揭示涉及使用 IL15-IL15R 異二聚體 Fc 融合蛋白治療癌症之領域。

癌症是全球主要的死亡原因，2012 年全球估計有 1400 萬新病例且 800 萬人死亡 (Torre等人，Cancer Epidemiol Biomarkers Prev.2016；25(1):16-27)。到 2018 年，此趨勢呈現上升，新增病例超過 1800 萬，且超過 900 萬人死亡 (新的全球癌症數據：GLOBOCAN 2018. https://www.uicc.org/news/new-global-cancer-data-globocan-2018)。這些趨勢暗示危機日增，需要有效的癌症治療療法。近年來，癌症免疫療法 (CIT) 已發展成為一種有前景的腫瘤學方法，且其廣泛地包括檢查點抑制劑、過繼細胞輸入、靶向抗體 (T/NK 細胞接合劑)、癌症疫苗及細胞激素。

細胞激素可藉由控制白血球的增殖、分化和存活來增強免疫細胞 (Berraondo等人，Br J Cancer 2019;120(1):6-15)。儘管已知細胞激素生物學及其在免疫系統和癌症生物學中的作用，但只有有限數量的細胞激素被批准用於選擇適應症的癌症治療，這些適應症包括 IFNα (例如，毛細胞白血病和慢性骨髓性白血病等) 和 IL-2 (例如晚期黑色素瘤和轉移性 RCC)。這部分地與這些細胞激素不佳的耐受性、狹窄的治療指數以及不佳的 PK 行為有關 (Berraondo 等人，2019,supra )。

例如，重組 IL-2，亦稱為阿地介白素 (aldesleukin) (Proleukin^® )，在臨床上用作 CIT 劑已有二十多年的歷史。儘管已證明 Proleukin^® 作為抗腫瘤劑具有臨床優勢，但仍可引起主要毒性，例如毛細血管滲漏症候群 (capillary leak syndrome，CLS)，且接受 Proleukin 的病患需要在住院環境進行大量監測。IL-2 是一種作用於細胞的分泌性細胞激素，例如分化簇-4 陽性 (CD4⁺ ) 調節性 T 細胞 (Treg)、內皮細胞和活化性 T 細胞，其在高親和力三聚體受體複合物中與 CD122 和 CD132 一起表現 IL-2Rα (CD25)。亦已知 IL-2 引起活化誘導的細胞死亡 (AICD)。Treg 功能的增強和 AICD 的誘導是兩個隨時間推移會削弱抗腫瘤免疫力的過程。

與其他常見的 γ 鏈 (CD132) 細胞激素 (例如 IL-2、IL-4、IL-7、IL-9 及 IL-21) 一樣，介白素 (IL)-15 在調節免疫反應中發揮重要作用。除了常見的 γ 鏈外，IL-15 和 IL-2 在它們的異三聚體受體複合物中亦共享 β 次單元 (CD122)，並具有重疊的生物學效應。然而，IL-15 和 IL-2 具有用於下游信號傳導的獨特的 α 受體次單元。已知 IL-15 和 IL-2 在癌症免疫中發揮重要作用，並顯示藉由誘導自然殺手 (NK) 細胞和分化簇-8 陽性 (CD8⁺ ) T 細胞的增殖和活化來增強免疫系統。

IL-15 在 IL-15Rα (CD215) 的背景下由單核細胞和樹突狀細胞反式呈遞給主要表現 CD122 和 CD132 (中等親和力的異二聚體受體複合物) 的其他細胞，例如 NK 細胞和記憶 CD8⁺ T 細胞。因此，當 IL-15/IL-15Rα 與 NK 和 T 細胞上的 CD122 和 CD132 結合時，其導致藉由誘導 CD8⁺ T 細胞增殖和記憶 CD8⁺ T 細胞之維持而增強的持久性 T 細胞反應以及增強的 NK-細胞增殖和細胞毒性。重要的是，對表現 CD25 的 Treg，IL-15/IL-15Rα 的生物學作用微乎其微，且認為 IL-15/IL-15Rα 引起的血管滲漏少於與 IL-2 相關的血管滲漏，並且不知道會誘導 AICD。

因此，IL-15 作為 CIT 劑比 IL-2 具有潛在的優勢。在過去的十年中，已經在各種目的在於實現改善的臨床益處和降低毒性的臨床試驗 (例如重組人體 IL-15 (rhIL-15) 及工程化 IL-15/IL-15Rα-Fc 超激動劑 (ALT-803)) 中測試幾種基於 IL-2 及 IL-15 的治療劑。然而，至今為止，藥物動力學 (PK) 暴露、藥效學 (PD) 反應或急性毒性限制了它們的臨床影響。例如，由於高的標靶媒介的藥物分布 (target-mediated drug disposition，TMDD) 和快速的腎臟清除率 (CL) (由於約 60 kDa 大小的小分子)，IV 推注投予 rhIL-15 或 rhIL-15/rhIL-15Rα 複合物導致低 PK 暴露；並需要頻繁給藥。此外，IV 推注投予受到包括 CLS 和低血壓的急性毒性的限制。與 IV 推注投予相關的 PK 和安全性限制導致替代性投予途徑的探索，例如皮下 (SC) 注射或連續 IV 輸注以改善耐受性和 PD 效果。儘管這些方法中的一些方法改善了 PD 反應 (即，NK 和 CD8⁺ T 細胞的擴增) 和耐受性，但 rhIL-15 和 ALT-803 的 SC 投予已與頻繁的注射部位反應相關聯，且頻繁給藥 (SC) 或連續輸注對於每個治療週期都需要幾天的時間。IL-15 途徑激動劑的可用臨床數據為開發具有優化 PK 特徵及改善治療指數的 IL-15 治療劑提供了依據。

因此，仍然需要 CIT 劑，特別是 IL-15 途徑激動劑。

在第一方面，本揭示提供一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。

在第二方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。

在第三方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。

在第四方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。

在第五方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/ G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由根據 EU 編號之 L328R；S239K；及 S267K 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。

在一些實施例中，IL-15 蛋白包含選自由 N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D 及 Q108E 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。

在一些實施例中，IL-15 蛋白和 IL-15Rα 蛋白分別包含選自下列各項之一組胺基酸取代或添加：E87C：65DPC；E87C：65DCA；V49C：S40C；L52C：S40C；E89C：K34C；Q48C：G38C；E53C：L42C；C42S：A37C 及 L45C：A37C。

在一些實施例中，IL-15 蛋白包含選自由 SEQ ID NO: 2 (全長人體 IL-15) 和 SEQ ID NO: 1 (截短人體 IL-15) 所組成之群組之多肽序列。在一些實施例中，該 IL-15Rα 蛋白包含選自由 SEQ ID NO: 3 (全長人體 IL-15Rα) 和 SEQ ID NO: 4 (人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域) 所組成之群組之多肽序列。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、S364K 及 E357Q；該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、L368D 及 K370S；該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。

在一些實施例中，IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於第一 Fc 結構域的 N 端。在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於第二 Fc 結構域的 N 端。在一些實施例中，IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於第一 Fc 結構域的 N 端，且 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於第二 Fc 結構域的 N 端。

在一些實施例中，第一連接子及/或第二連接子獨立地為可變長度的 Gly-Ser 連接子。在一些實施例中，第一連接子及/或第二連接子獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之連接子：(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser- Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID No: 42)，其中，n 為 1 至 5 之間的整數。

在一些實施例中，異二聚體蛋白選自由下列各項所組成之群組：XENP22822、XENP23504、XENP24045、XENP24306、XENP22821、XENP23343、XENP23557、XENP24113、XENP24051、XENP24341、XENP24052、XENP24301 及 XENP32803 蛋白。在一些實施例中，異二聚體蛋白為 XENP24306。在一些實施例中，異二聚體蛋白為 XENP32803。在一些實施例中，異二聚體蛋白為 XENP24306 與 XENP32803 的組合。

在第六方面，本揭示提供一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N 和 E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。

在第七方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N 和 E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。

在第八方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N 和 E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。

在第九方面，本揭示提供一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量的異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N 和 E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。

在第十方面，本揭示提供一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N 和 E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代

在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，根據 EU 編號。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，根據 EU 編號。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，根據 EU 編號。

在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，根據 EU 編號。

在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 K246T，根據 EU 編號。

在一些實施例中，IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。

在一些實施例中，IL-15 蛋白包含 SEQ ID NO: 5 所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域包含 SEQ ID NO: 4 所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於第一 Fc 結構域的 N 端。

在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於第二 Fc 結構域的 N 端。在一些實施例中，IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於第一 Fc 結構域的 N 端，且 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於第二 Fc 結構域的 N 端。

在本文所揭示之方法的一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，異二聚體蛋白為 XENP24306。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，異二聚體蛋白為 XENP32803。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，使用 XENP24306 和 XENP32803 的組合。

在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 50% - 約 100%、約 70% - 約 95%、約 80% - 約 90% 或約 80% - 約 85% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP32803 蛋白表示組合中約 1% - 約 50%、約 5% - 約 30%、約 10% - 約 20% 或約 15% - 約 20% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 85% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 15% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 84% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 16% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 83% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 17% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 82% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 18% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 81% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 19% 的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中約 80% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示組合中約 20% 的異二聚體蛋白。

在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，將兩種或更多種異二聚體蛋白的組合投予個體。在一些實施例中，將第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白的組合投予個體。

在一些實施例中，第一異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列的第二單體；且第二異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列的第二單體。

在一些實施例中，同時投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，依序投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，於相同的組成物中投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，於分開的組成物中投予第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。

在一些實施例中，將藉由本文所揭示之任何方法治療的實性瘤是局部晚期的、復發的或轉移的。在一些實施例中，該實性瘤選自由下列各項所組成之群組：鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸道癌、胃癌 (gastric cancer)、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脂肪肉瘤、軟組織肉瘤、泌尿上皮癌、輸尿管和腎盂、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、肝腫瘤、黑色素瘤、胃癌 (stomach cancer)、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌、肝癌、食道癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、默克細胞癌 (Merkel cell carcinoma)、生殖細胞癌、高度微衛星不穩定性癌症和頭頸部鱗狀上皮細胞癌。在一些實施例中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。在一些實施例中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌和非小細胞肺癌。在一些實施例中，該實性瘤選自黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。

在一些實施例中，個體先前並未被投予用於治療該病症的藥劑。在一些實施例中，個體目前正被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，個體先前已被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-L1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 CTLA-4。

在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白：約 0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.10 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.20 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白：約 0.01 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.09 mg/kg、約 0.135 mg/kg 及約 0.2025 mg/kg 體重。在一些實例中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予異二聚體蛋白：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 QW6。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白：0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.10 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白：0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.06 mg/kg、0.09 mg/kg、0.135 mg/kg 及 0.2025 mg/kg 體重。在一些實例中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予異二聚體蛋白：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 Q6W。

在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白的組合 (例如 XENP24306 + XENP32803)：0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.10 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.20 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白的組合 (例如 XENP24306 + XENP32803)：約 0.01 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.09 mg/kg、約 0.135 mg/kg 及約 0.2025 mg/kg 體重。在一些實例中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予異二聚體蛋白的組合：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 Q6W。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白的組合 (例如 XENP24306 + XENP32803)：0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.10 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予異二聚體蛋白的組合 (例如 XENP24306 + XENP32803)：0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg、0.06 mg/kg、0.09 mg/kg、0.135 mg/kg 及 0.2025 mg/kg 體重。在一些實例中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予異二聚體蛋白的組合：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 Q6W。

在一些實施例中，本文所揭示之方法進一步包含投予個體靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。在一些實施例中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑是抗 PD-1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體選自納武單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、匹定利珠單抗 (pidilizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、斯巴達珠單抗 (spartalizumab)、卡瑞利珠單抗 (camrelizumab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、MDX-1106、AMP-514 及 AMP-224。在一些實施例中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑是抗 PD-L1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體選自阿維魯單抗 (avelumab)、度伐魯單抗 (durvalumab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、BMS-936559、BMS-39886、KN035、CK-301 及 MSB0010718C。

按本揭示整體，這些和其他方面對於技術人員將是顯而易見的。

相關申請案之交叉引用

本申請案要求 2020 年 1 月 28 日提交的美國臨時申請號 62/966,976 之優先權權益，其內容藉由引用全文併入本文。序列表

本申請案包含序列表，其已經以 ASCII 格式以電子方式提交，並藉由引用全文併入本文。該 ASCII 副本創建於 2021 年 1 月 26 日，命名為 000218-0006-WO1_SL.txt，大小為 110,469 位元組。

一般

除非另有說明，否則本文所揭示之方法的實施以及組成物的製備和使用均採用分子生物學、生物化學、染色質結構和分析、計算化學、細胞培養、重組 DNA 和在本領域技術範圍內相關領域的常規技術。這些技術在文獻中已充分解釋。參見，例如，Sambrook等人，MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 第二版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 和第三版，2001；Ausubel等人，CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULAR BIOLOGY, John Wiley & Sons, New York, 1987 及定期更新；METHODS IN ENZYMOLOGY 系列，Academic Press, San Diego；Wolffe, CHROMATIN STRUCTURE AND FUNCTION, 第三版，Academic Press, San Diego, 1998；METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 304, “Chromatin” (P.M. Wassarman 和 A. P. Wolffe, eds.), Academic Press, San Diego, 1999；及 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, Vol. 119, “Chromatin Protocols” (P.B.Becker, 編輯) Humana Press, Totowa, 1999。

術語「本文」是指整個申請案。

應理解，除非明確聲明或不當，否則本文所描述之任何實施例，包括在本揭示的不同方面和說明書的不同部分下描述的那些實施例 (包括僅在實例中描述的實施例) 可與本文所揭示之一個或多個其他實施例組合。實施例的組合不限於經由多個附屬請求項所請求的那些特定組合。

在本申請案中提及的任何出版物、專利和公開的專利申請案均藉由引用特別地併入本文中。倘若出現衝突，則以本說明書 (包括其特定定義) 為準。

在整個說明書中，單詞「包含 (comprise)」或諸如「包含 (comprises)」或「包含 (comprising)」的變形將被理解為表示包括陳述的整體 (或組分) 或整體 (或組分) 之群組，但不排除任何其他整體 (或組分) 或整體 (或組分) 之群組。

在整個說明書中，當組成物被描述為具有、包括或包含 (或其變異體) 特定組分時，可預期組成物亦可實質上由所列舉的組分組成或由其組成。類似地，當方法或過程描述為具有、包括或包含特定過程步驟時，該過程亦可實質上由所列舉的處理步驟組成或由其組成。此外，應理解，步驟的順序或執行某些動作的順序並不重要，只要本文所述的組成物和方法保持可操作性即可。而且，可同時進行兩個或更多個步驟或動作。

術語「包括」用於表示「包括但不限於」。「包括」和「包括但不限於」可互換使用。

術語「例如」或「舉例而言」之後的任何實例並不意味著窮舉或限制。

冠詞「一」、「一個」和「該」在本文中用於指該冠詞的語法對象的一個或多個 (即，至少一個)。舉例來說，「一個元件」意指一個元件或一個以上的元件。

如本文所用，術語「約」修飾在本揭示的方法中所使用的組成物中的成分、參數、計算或測量的數量，涉及可能發生的數值變化，例如透過用於在現實世界中製備分離的多肽或藥物組成物的典型測量和液體處理程序；透過這些程序中的無意錯誤；透過製造組成物或進行該方法所使用之成分的製造、來源或純度方面的差異等，而對本揭示的組成物或方法的化學或物理特性沒有實質性影響。這種變化可在給定值或範圍的一個數量級之內，通常在給定值或範圍的 10% 之內，更通常在 5% 之內。術語「約」亦涵蓋由於自特定的初始混合物產生的組成物的不同平衡條件而不同的數量。無論是否用術語「約」修飾，這些段落都包含與數量等效的內容。本文提及「約」值或參數包括 (和描述) 針對該值或參數本身的實施例。例如，涉及「約 X」的描述包括對「X」的描述，數字範圍包括定義該範圍的數字。

除非上下文另外明確指出，否則本文所用的術語「或」應理解為意指「及/或」。

儘管本揭示列出廣泛範圍的數值範圍和參數是近似值，但在具體實例中所列的數值被盡可能精確地報告。然而，任何數值都固有地包含某些誤差，這些誤差必然是由它們各自的測試測量中的標準偏差引起的。此外，本文揭示的所有範圍應理解為涵蓋其中包含的任何和所有子範圍。例如，指定範圍「1 至 10」應被視為包括最小值 1 和最大值 10 之間 (包括該範圍) 的任何和所有子範圍；亦即，所有子範圍均以最小值 1 或更大的值起始，例如 1 至 6.1，且以最大值 10 或更小的值結束，例如 5.5 至 10。範圍的揭示亦應被視為該範圍端點的揭示。

例示方法及材料闡述於本文中，惟與本文所述的那些類似或等同的方法和材料亦可用於本申請的實施或測試中。該材料、方法及實例僅為說明性且不意圖具有限制性。

定義

除非另有指出，否則以下術語應理解為具有以下含義：

如本文所用，術語「消除」是指活性的降低或去除。因此，例如，「消除 FcγR 結合」係指相比於不包含特定變異體的 Fc 區域，該 Fc 區域胺基酸變異體具有小於 50% 的起始結合度，具有小於 70%、小於 80%、小於 90%、小於 95% 或小於 98% 的活性喪失是較佳的，且一般而言，活性應低於 BIACORE^® 測定 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden 和 Piscataway, N.J.) 中可檢出之結合水平。除非另有說明，否則本文所述 Fc 結構域保持與 FcRn 受體的結合。

將物質、化合物或藥劑「施用」或「投予」個體涉及將該物質、化合物或藥劑與個體或個體的細胞、組織、器官或體液接觸。此類投予可使用本領域技術人員已知的多種方法中之一種進行。例如，化合物或藥劑可舌下給藥或藉由吸入肺中鼻內給藥或直腸給藥。該投予亦可執行例如一次、多次及/或在一個或多個延長期間內執行。在一些實施例中，該投予包括直接投予 (包括自我投予) 和間接投予 (包括開藥的行為)。例如，如本文所用，指示病患自我投予藥物或由另一人投予藥物及/或向病患提供藥物處方的醫師正在向病患投予藥物。

如本文所用，術語分子的「親和力」涉及分子與結合伙伴 (例如受體、配體或抗原) 之間相互作用的強度。分子對其結合伙伴的親和力通常表示為特定相互作用的結合親和力平衡解離常數 (Kd)，其中 KD 越低，親和力越高。可藉由表面電漿共振來測量 KD 結合親和常數，例如使用 BIACORE^® 系統 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden 和 Piscataway, N.J.)。另請參見，Jonsson 等人，Ann. Biol. Clin. 51:19 26 (1993)；Jonsson 等人，Biotechniques 11:620 627 (1991)；Jonsson 等人，J. Mol. Recognit.8:125 131 (1995)；Johnsson 等人，Anal. Biochem. 198:268 277 (1991)；Hearty S 等人，Methods Mol Biol. 907:411-42 (2012)，各藉由引用併入本文。KD 亦可使用 KinExA® 系統 (Sapidyne Instruments, Hanover, Germany 和 Boise, ID) 進行測量。在一些實施例中，與野生型 IL-15 相比，本文所述的異二聚體蛋白的 IL-15 變異體對於 IL-2/IL-15βγ 受體的結合親和力降低。在一些實施例中，本文所述的異二聚體蛋白的第一及/或第二 Fc 變異體對人類、食蟹獼猴和小鼠 Fcγ 受體的親和力降低。在一些實施例中，本文所述的異二聚體蛋白的第一及/或第二 Fc 變異體不結合人類、食蟹獼猴和小鼠 Fcγ 受體。

如本文所用之「胺基酸」和「胺基酸特性」是指由 DNA 和 RNA 編碼的 20 種天然存在的胺基酸之一。

本文所用之術語「胺基酸取代」或「取代」涉及用不同胺基酸取代親本多肽序列中特定位置的胺基酸。具體地，在某些實施例中，取代涉及在特定位置並非天然存在或並非天然存在於生物體內或任何生物中的胺基酸。例如，取代 E272Y 係指變異體多肽，在本例中為 Fc 變異體，其中位置 272 處的麩胺酸被酪胺酸取代。為清楚起見，經改造以改變核酸編碼序列但不改變起始胺基酸 (例如 CGG (編碼精胺酸) 交換為 CGA (仍編碼精胺酸) 以增加宿主生物表現水準) 的蛋白質並非「胺基酸取代」；亦即，儘管創建了編碼相同蛋白質的新基因，但是如果該蛋白質在其起始位置的特定位置具有相同的胺基酸，則它並不認為是胺基酸取代。

如本文所用之術語「胺基酸插入」、「胺基酸添加」或「添加」或「插入」是指在親本多肽序列的特定位置添加胺基酸序列。例如，-233E 或 233E 表示位置 233 之後和位置 234 之前插入麩胺酸。此外，-233ADE 或 233ADE 表示在位置 233 之後和位置 234 之前插入 AlaAspGlu。

如本文所用之術語「胺基酸缺失」或「缺失」係指去除親本多肽序列中特定位置的胺基酸序列。例如，E233- 或 E233#、E233() 或 E233del 表示在位置 233 處缺失麩胺酸。此外，EDA233- 或 EDA233# 表示從位置 233 開始缺失序列 GluAspAla。

如本文所用，術語「抗體」或「Ab」涉及透過至少一個位於免疫球蛋白分子可變區中的抗原識別位點，能夠識別並結合特定標靶或抗原 (例如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽等) 的免疫球蛋白分子 (例如，完整抗體，抗體片段或經修飾的抗體)。如本文所用，術語「抗體」可涵蓋任何類型的抗體，包括但不限於特定結合至給定抗原的單株抗體、多株抗體、人類抗體、工程化抗體 (包括人源化抗體、完全人類抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、人工選擇性抗體、CDR 授予抗體等)。在一些實施例中，「抗體」及/或「免疫球蛋白」 (Ig) 涉及包含至少兩條重 (H) 鏈 (約 50-70 kDa) 和兩條輕 (L) 鏈 (約 25 kDa) 的多肽，任選地藉由雙硫鍵相互連接。輕鏈有兩種類型：λ 和 κ。在人類中，λ 和 κ 輕鏈相似，但在每種抗體中僅存在一種類型。重鏈分為 μ、δ、γ、α 或 ε，並分別定義該抗體的同型為 IgM、IgD、IgG、IgA 和 IgE。一般參見，Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., 編輯，第二版，Raven Press, N.Y.(1989)) (藉由引用全文併入)。

如本文所用，術語「檢查點抑制劑」涉及靶向並阻斷檢查點蛋白質的化合物。檢查點抑制劑會干擾檢查點蛋白質及其伙伴蛋白質之間的相互作用。檢查點抑制劑之實例包括但不限於靶向 PD-1/PD-L1 軸的藥劑及靶向 CTLA-4 的藥劑。

如本文所用，術語「效應子功能」涉及由抗體 Fc 區域與 Fc 受體或另一效應子分子 (例如，Fc 受體樣 (FcRL) 分子、補體組分 C1q 和三分模體包含蛋白質 21 (Tripartite motif-containing protein 21，TRIM21)) 相互作用引起的生化事件。效應子功能包括但不限於抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性 (antibody dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC)、抗體依賴性細胞媒介的吞噬作用 (antibody dependent cell-mediated phagocytosis，ADCP) 和補體依賴性細胞毒性 (complement-dependent cellular cytotoxicity，CDC)。如本文所用之術語「ADCC」或「抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性」涉及細胞媒介反應，其中表現 FcγR 的非特異性細胞毒性細胞識別標靶細胞上結合之抗體，隨後引起標靶細胞的溶解。ADCC 與 FcγRIIIa 的結合相關；與 FcγRIIIa 的結合增加導致 ADCC 活性升高。如本文所述，本揭示之許多實施例完全消除 ADCC 活性。如本文所用之術語「ADCP」或「抗體依賴性細胞媒介的吞噬作用」涉及細胞媒介反應，其中表現 FcγR 的非特異性細胞毒性細胞識別標靶細胞上結合之抗體，隨後引起標靶細胞的吞噬作用。如本文所用之術語「CDC」或「補體依賴性細胞毒性」涉及導致典型補體途徑之活化的效應子功能，其藉由抗體與靶細胞上抗原的結合而觸發，可活化一系列包含血液中補體相關蛋白質組的級聯反應。

如本文所用，術語「Fc」、「Fc 區域」或「Fc 結構域」於本文中可互換使用，並指多肽包含抗體的恒定區的多肽，在一些情況下，其排除第一恒定區免疫球蛋白結構域 (例如 CH1) 或其一部分，且在一些情況下排除鉸鏈的一部分。因此，Fc 可指 IgA、IgD 和 IgG 的最後兩個恆定區免疫球蛋白結構域 (例如，CH2 和 CH3)，IgE 和 IgM 的最後三個恆定區免疫球蛋白結構域，及這些結構域的柔性鉸鏈 N 端。對於 IgA 和 IgM，Fc 可包括 J 鏈。對於 IgG，Fc 結構域包含免疫球蛋白結構域 Cγ2 和 Cγ3 (Cγ2 和 Cγ3) 以及介於 Cγ1 (Cγ1) 和 Cγ2 (Cγ2) 之間的鉸鏈區。在一些實施例中，Fc 涉及截短 CH1 結構域及免疫球蛋白的 CH2 和 CH3。儘管 Fc 區域的邊界可能有所不同，但人 IgG 重鏈 Fc 區域通常被定義為在其羧基端包含殘基 E216 或 C226 或 P230，其中編號根據 EU 編號進行。在一些實施例中，如本文更充分的描述，對 Fc 區域進行胺基酸修飾，例如用以改變與一種或多種 FcγR 受體或與 FcRn 受體的結合。在一些實施例中，Fc 結構域衍生自人 IgG1 重鏈 Fc 結構域。在一些實施例中，Fc 結構域衍生自人 IgG2 重鏈 Fc 結構域。「如愛德曼 (Edelman) 中所列的 EU 格式」或「EU 編號」或「EU 索引」涉及如 Edelman GM 等人 (Proc. Natl. Acad. USA (1969), 63, 78-85，藉由引用全文併入本文) 所述的人 Fc 結構域的殘基編號。

如本文所用，術語「Fc 融合蛋白」及「免疫黏附素」可互換使用，且指包含通常連接 (任選地透過如本文所述之連接子部分) 至不同蛋白質，例如本文所述之 IL-15 及/或 IL-15R 的 Fc 區域。在一些實例中，兩個 Fc 融合蛋白可形成同源二聚 Fc 融合蛋白或異二聚體 Fc 融合蛋白，其中後者較佳。

如本文所用，術語「Fc 變異體」或「變異體 Fc」涉及包含 Fc 結構域中的胺基酸修飾的蛋白質。本發明之 Fc 變異體根據構成它們的胺基酸修飾來定義。因此，例如，N434S 或 434S 是一個相對於親本 Fc 多肽在位置 434 處具有取代絲胺酸的 Fc 變異體，其中，編號根據 EU 指數進行。同樣，M428L/N434S 定義了相對於親本 Fc 多肽的取代 M428L 和 N434S 的 Fc 變異體。WT 胺基酸的特性可能不確定，在這種情況下，上述變異體稱為 428L/434S。注意，本文所提供之取代基順序為任意的，也就是說，例如，428L/434S 與 M428L/N434S 相同的 Fc 變異體，以此類推。對於本發明中所述之與抗體有關的所有位置，除非另有說明，否則胺基酸位置編號根據 EU 指數進行。修飾可為添加、缺失或取代。取代可包括天然存在的胺基酸，並且在一些情況下包括合成胺基酸。實例包括但不限於美國專利號 6,586,207；WO 98/48032；WO 03/073238；US2004-0214988A1；WO 05/35727A2；WO 05/74524A2；J. W. Chin 等人，(2002)，Journal of the American Chemical Society 124:9026-9027；J. W. Chin 和 P. G. Schultz (2002)，ChemBioChem 11:1135-1137；J. W. Chin 等人，(2002)，PICAS United States of America 99:11020-11024；以及 L. Wang 和 P. G. Schultz (2002)，Chem. 1-10；其所有內容藉由引用全文併入本文。

如本文所用之術語「Fcγ 受體」、「FcγR」或「FcgammaR」可互換使用，並指結合 IgG 抗體 Fc 區域並由 FcγR 基因編碼的蛋白質家族的任何成員。FcγR 可來自任何生物。在一些實施例中，該 FcγR 為人 FcγR。在人體中，該蛋白質家族包括但不限於 FcγRI (CD64)，其包括同功型 FcγRIa、FcγRIb 和 FcγRIc；FcγRII (CD32)，其包括同功型 FcγRIIa (包括異型 H131 和 R131)、FcγRIIb (包括 FcγRIIb-1 和 FcγRIIb-2) 和 FcγRIIc；以及 FcγRIII (CD16)，其包括同功型 FcγRIIIa (包括異型 V158 和 F158) 和 FcγRIIIb (包括異型 FcγRIIb-NA1 和 FcγRIIb-NA2) (Jefferis 等人，2002，Immunol Lett 82:57-65，藉由引用併入本文) 以及任何未發現的人 FcγR 或 FcγR 同功型或異型。

如本文所用之術語「FcRn」或「新生兒 Fc 受體」涉及結合 IgG 抗體 Fc 區域並至少部分由 FcRn 基因編碼的蛋白質。FcRn 可來自任何生物。在一些實施例中，該 FcRn 為人 FcRn。如本領域中已知的，功能 FcRn 蛋白包含兩個多肽，通常稱為重鏈和輕鏈。輕鏈為 β-2-微球蛋白，並且重鏈由 FcRn 基因編碼。除非本文另有說明，否則 FcRn 或 FcRn 蛋白係指 FcRn 重鏈與 β-2-微球蛋白的複合物。可使用各種 FcRn 變異體以增加與 FcRn 受體的結合，並且在一些情況下，可延長血清半衰期。通常，除非另有說明，否則本文所揭示之 Fc 受體保持與 FcRn 受體的結合 (並且，如下文所述，可包括胺基酸變異體以增加與 FcRn 受體之結合)。

如本文所用之術語「修飾」涉及在多肽序列中胺基酸取代、插入及/或缺失或化學連接至蛋白質的部分的改變。例如，修飾可為接附於蛋白質的改變的碳水化合物或 PEG 結構。本文所用之「胺基酸修飾」係指多肽序列中的胺基酸取代、插入及/或缺失。為清楚起見，除非另有說明，否則胺基酸修飾始終涉及由 DNA 編碼的胺基酸，例如 DNA 和 RNA 中具有密碼子的 20 種胺基酸。

術語「核酸」，「多核苷酸」及「寡核苷酸」可互換使用，且指線性或環狀構型以及單股或雙股形式的去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物。為了本揭示之目的，這些術語不應解釋為對聚合物長度的限制。該術語可涵蓋天然核苷酸的已知類似物，及在鹼基、糖及/或磷酸部分 (例如硫代磷酸酯骨架) 中修飾的核苷酸。通常，特定核苷酸的類似物具有相同的鹼基配對特異性；即，A 的類似物將與 T 鹼基配對。

如本文所用之術語「非天然存在的修飾」涉及並非同型的胺基酸修飾。例如，由於任何 IgG 在位置 434 處均不含絲胺酸，因此 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4 (或其混合體) 中的 434S 取代基被視為非天然修飾。

術語「病患」、「個體」和「受試者」在本文可互換使用，並指需要治療的人類或非人類動物。這些術語包括哺乳動物，例如人類，及靈長類動物 (例如，猴子)。在一些實施例中，該個體為人。在一些實施例中，該個體需要治療癌症。如本文所用之術語「治療」是指減輕症狀的嚴重性及/或頻率，消除症狀及/或根本原因，預防症狀及/或其根本原因的發生以及改善或補救損傷。

如本文所用，相對於蛋白質序列所述之「百分比 (%) 胺基酸序列同一性」，是指候選序列中胺基酸殘基與特定 (親本) 序列中之胺基酸殘基相同之百分比，在比對序列並引入差異後 (如有必要)，可實現最大的序列同一性百分比，並且不考慮將任何保守取代作為序列同一性之一部分。為確定胺基酸百分比序列同一性之目的而進行的比對可透過本領域中技術範圍內之各種方式實現，例如，使用公眾可取得的電腦軟體諸如 BLAST、BLAST-2、ALIGN 或 Megalign (DNASTAR) 軟件。本發明所屬技術領域中具有通常知識者可確定用於測量比對的合適參數，包括在所比較之序列全長上達成最大比對所需之任何演算法。一種特定程式為 ALIGN-2 程式，其概述於美國專利公開號 20160244525 段落 [0279] 至 [0280]，藉由引用併入本文。

如本文所用，術語「多肽」、「肽」和「蛋白質」可互換使用，指胺基酸殘基的聚合物。該術語亦適用於胺基酸聚合物，其中一種或多種胺基酸是對應天然胺基酸的化學類似物或修飾衍生物。融合蛋白在細胞中的表現可藉由將融合蛋白遞送至細胞或藉由將編碼融合蛋白的多核苷酸遞送至細胞而產生，其中轉錄多核苷酸並轉譯轉錄物以生成融合蛋白。反式剪接、多肽切割和多肽連接亦可參與蛋白質在細胞中的表現。用於將多核苷酸和多肽遞送至細胞的方法為本技術領域已知的。

如本文所用之術語「位置」涉及蛋白質序列中的位置。位置可以按順序編號，也可以根據既定格式 (例如用於抗體編號的 EU 指數) 編號。可相對於參考序列定義位置。在此種情況下，提供參考序列用於比較目的，且本揭示的異二聚體蛋白 (或其一部分) 可包含相對於參考序列的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。在一些實施例中，本揭示的異二聚體蛋白 (或其一部分) 相對於參考序列不包含任何額外胺基酸改變。

如本文所用之術語「殘基」涉及蛋白質中的位置及其相關的胺基酸特性。例如，天冬醯胺酸 297 (亦稱為 Asn297 或 N297) 為特定蛋白質中位置 297 處的殘基。

如本文所用，術語「治療有效量」涉及以單一藥劑或與一種或多種額外的藥劑組合投予的治療劑的量，其將在一定程度上減輕正在治療的病症之一種或多種症狀。在一些實施例中，治療有效量是足以實現有益或期望的臨床結果的量。關於癌症的治療，治療有效量涉及具有以下效果中至少一種的量：緩和、改善、穩定、逆轉、預防、減慢或延遲癌症 (及/或與之相關的症狀) 的發展。可在本揭示中使用的有效量依據投予方式、年齡、體重和個體的總體健康狀況而變化。可使用本領域的常規技術來確定合適的數量和劑量方案。

如本文所用，術語「有效量」涉及以單一藥劑或與一種或多種額外的藥劑組合投予的藥劑的量，其為將足以引起完全或部分有益或期望的結果的量。可在本揭示中使用的有效量依據投予方式、年齡、體重和個體的總體健康狀況而變化。可使用本領域的常規技術來確定合適的數量和劑量方案。

術語「野生型」或「WT」在本文中可互換使用，並指存在於自然界的胺基酸序列或核苷酸序列，包括等位基因變異。WT 蛋白具有胺基酸序列或被未經故意修飾的核苷酸序列所編碼。

一般

本揭示涉及治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包括向個體投予治療有效量的包括 IL-15 和 IL-15 受體 α (IL-15Rα) 蛋白結構域之異二聚體 Fc 融合蛋白 (或異二聚體 Fc 融合蛋白的組合)。本揭示涉及用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應子記憶 T 細胞及/或 NK 細胞增殖或在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包括向個體投予有效量的包括 IL-15 和 IL-15 受體 α (IL-15Rα) 蛋白結構域之異二聚體 Fc 融合蛋白 (或異二聚體 Fc 融合蛋白的組合)。該 Fc 結構域可衍生自 IgG Fc 結構域，例如，IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4 Fc 結構域。

IL15-IL15R α 異二聚體 Fc 融合蛋白

US2018/0118805 (其全部揭示內容藉由引用併入本文) 所揭示的任何 IL15-IL15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白或其組合，皆可用於本文所揭示的方法中。這些尤其包括 Fc 變異體，例如空間變異體 (例如，「杵狀物 (knob)」和「臼狀物 (hole)」、「偏斜」、「靜電轉向 (electrostatic steering)」、「帶電對偶」變異體)、pI 變異體、同型變異體、FcγR 變異體和消除變異體 (例如，「FcγR 消除變異體」或「Fc 敲除 (FcKO 或 KO)」變異體)，以及其中所揭示的各種 IL-15 和 IL15Rα 蛋白。

因此，在一些實施例中，可用於本文所揭示之方法的異二聚體蛋白包含 (i) 包含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 包含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S:S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q:L368D/K370S；L368D/K370S:S364K；L368E/K370S:S364K；T411E/K360E/Q362E:D401K；L368D/K370S:S364K/E357L；K370S:S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q:S267K/L368D/K370S；L368D/K370S:S364K/E357Q；S364K:L368D/K370S；S364K:L368E/K370S；D401K:T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L:L368D/K370S；及 S364K/E357Q:K370S，根據 EU 編號。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S267K/L368D/K370S:S267K/S364K/E357Q 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S364K/E357Q:L368D/K370S 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 L368D/K370S:S364K 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 L368E/K370S:S364K 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 T411E/K360E/Q362E:D401K 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 L368D/K370S:S364K/E357L 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 K370S:S364K/E357Q 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S267K/S364K/E357Q:S267K/L368D/K370S 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 L368D/K370S:S364K/E357Q 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S364K:L368D/K370S 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S364K:L368E/K370S 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 D401K:T411E/K360E/Q362E 組之胺基酸取代,根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S364K/E357L:L368D/K370S 組之胺基酸取代,根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域分別包含 S364K/E357Q:K370S 組之胺基酸取代，根據 EU 編號。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，根據 EU 編號，第一 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域各自進一步包含由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，根據 EU 編號。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第二 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域二者包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之任一胺基酸取代：根據 EU 編號之 E233P、L234V、L235A、G236del、G236R、S239K、S267K、A327G 及 L328R，或其組合。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 和 S267K。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之任一胺基酸取代：根據 EU 編號之 E233P、L234V、L235A、G236del、G236R、S239K、S267K、A327G 及 L328R，或其組合。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域各包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K。

各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12) 中的對應位置。野生型 IgG1 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 12) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白之 Fc 結構域可包含相對於野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG1 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。技術人員將能夠確定在衍生自 IgG2、IgG3 或 IgG4 Fc 結構域的 Fc 結構域中的對應取代。例如，技術人員將認知到殘基 E233，L234，L235 和 G236 存在於衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域的 Fc 結構域中。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14) 中的對應位置。野生型 IgG3 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 14) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白之 Fc 結構域可包含相對於野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG3 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一第二 Fc 結構域進一步包含選自下列所組成群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，其中 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。在一些實施例中，該第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。

技術人員亦將認知到，在衍生自的 IgG2 Fc 結構域的 Fc 結構域中的對應殘基為 P233、V234 和 A235，且衍生自 IgG2 的 Fc 結構域缺少對應於殘基 G236 的殘基。因此，技術人員將認知到，若 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域 (即，存在於野生型 IgG2 中的 PVA 序列)，則本文中 E233P、L234V、L235A 和 G236del 是指 P233、V234、A235 和 -236。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13) 中的對應位置。野生型 IgG2 Fc 結構域之胺基酸序列 (SEQ ID NO: 13) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白之 Fc 部分可包含相對於野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG2 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自根據 EU 編號之 L328R；S239K；S267K；S239K/A327G；及 S267K/A327G 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域進一步包含選自根據 EU 編號之 L328R；S239K；S267K；S239K/A327G；及 S267K/A327G 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。在一些實施例中，該第二 Fc 結構域進一步包含選自根據 EU 編號之 L328R；S239K；S267K；S239K/A327G；及 S267K/A327G 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域進一步包含選自根據 EU 編號之 L328R、S239K、S267K、S239K/A327G、及 S267K/A327G 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。

技術人員亦將認知到，在衍生自 IgG4 的 Fc 結構域中，殘基 234 是苯丙胺酸。因此，本領域技術人員將認知到，若 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域，則本文所指的 L234 (例如，L234V) 是指 F234 (例如，F234V)。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15) 中的對應位置。野生型 IgG4 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 15) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白之 Fc 結構域可包含相對於野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG4 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中，Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。在一些實施例中，該第二 Fc 域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中，Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中，Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 或 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 N434S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 或 N434S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 及 N434S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 及 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域各進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 及 N434S。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 K246T。在一些實施例中，第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 K246T。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 K246T，根據 EU 編號。當 K246T 取代出現在第二 Fc 結構域中時，基於第二單體的胺基酸編號，其亦可稱為 K100T 突變 (參見，例如，SEQ ID NO: 10 和 SEQ ID NO: 16)。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 K246T。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 和 K370S；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 和 E357Q；且該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，根據 EU 編號。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 和 E357Q；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 和 K370S；且該第一和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 和 K370S；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、S364K 和 E357Q；且該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 和 E357Q；第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、L368D 和 K370S；且該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S。

在一些實施例中，異二聚體蛋白之第一 Fc 結構域包含 SEQ ID NO: 6 所示之序列。在一些實施例中，異二聚體蛋白之第二 Fc 結構域包含 SEQ ID NO: 7 所示之序列。在一些實施例中，異二聚體蛋白之第二 Fc 結構域包含 SEQ ID NO: 8 所示之序列。

在一些實施例中，本文所述之 Fc 變異體結構域的任何一個胺基酸取代是在一個單體上或在兩個單體上 (例如，在第一 Fc 結構域上；在第二 Fc 結構域上或在兩個 Fc 結構域上)。

在一些實施例中，第一單體的 Fc 結構域衍生自 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4。在一些實施例中，第一單體的 Fc 結構域衍生自 IgG1。在一些實施例中，第一單體的 Fc 結構域衍生自 IgG2。在一些實施例中，第一單體的 Fc 結構域衍生自 IgG3。在一些實施例中，第一單體的 Fc 結構域衍生自 IgG4。在一些實施例中，第二單體的 Fc 結構域衍生自 IgG1、IgG2、IgG3 或 IgG4。在一些實施例中，第二單體的 Fc 結構域衍生自 IgG1。在一些實施例中，第二單體的 Fc 結構域衍生自 IgG2。在一些實施例中，第二單體的 Fc 結構域衍生自 IgG3。在一些實施例中，第二單體的 Fc 結構域衍生自 IgG4。

如本文所用，「IL-15」、「IL15」或「介白素 15」可以互換使用，並指屬於細胞激素家族的四-α-螺旋蛋白。IL-15 透過由 IL-2/IL-15 受體 β (IL-15Rβ) (CD122) 次單元組成的受體複合物發出信號。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含 SEQ ID NO: 2 (全長人體 IL-15) 所示之多肽序列。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含 SEQ ID NO: 1 (截短或成熟人體 IL-15) 所示之多肽序列。

在一些實施例中，第一單體的 IL-15 蛋白是具有與野生型 IL-15 蛋白 (SEQ ID NO: 1) 不同的胺基酸序列的 IL-15 蛋白變異體。在一些實施例中，將 IL-15 變異體工程化以對於 IL-2/IL-15βγ 受體複合物具有降低的結合親和力 (與野生型 IL-15 相比)，以藉由降低急性毒性來提高耐受性和擴展藥物動力學之目標，並透過在 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞上的 IL-15 媒介的信號傳導最終增強抗腫瘤免疫力。在某些實施例中，與野生型 IL-15 序列蛋白 (SEQ ID NO: 1) 相比，第一單體的 IL-15 蛋白變異體之序列具有至少一個 (即，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10 或更多個) 胺基酸取代。在一些實施例中，胺基酸取代可包括在與 IL-15R 及/或 IL-2/IL-15βγ 受體複合物相互作用的 IL-15 結構域中的胺基酸取代或刪除中的一種或多種。在一些實施例中，胺基酸取代可包括在 IL-15 蛋白結構域中的胺基酸取代或刪除中的一種或多種，其對於 IL-2/IL-15βγ 受體複合物，與野生型 IL-15 的親和力相比，導致降低的結合親和力。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含選自由 N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D 及 Q108E 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。在一些實施例中，該 IL15 蛋白包含選自由 E87C、V49C、L52C、E89C、Q48C、E53C、C42S 及 L45C 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。對於本文所揭示的 IL-15 蛋白之胺基酸取代是相對於野生型 IL-15 (成熟型；SEQ ID NO: 1)。野生型 IL-15 之胺基酸序列 (成熟型；SEQ ID NO：1) 是提供用於比較目的之例示性序列，且異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白可包含相對於野生型 IL-15 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 IL‑15 蛋白可衍生自不同的野生型人體 IL‑15 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IL-15，異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，存在於第一單體中的 IL-15 蛋白變異體包含 SEQ ID NO:5 所示之胺基酸序列 (XENP24306/XENP32803)。

在一些實施例中，IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含下列胺基酸取代：N4D 及 N65D。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含下列胺基酸取代：D30N 及 N65D。在一些實施例中，存在於第一單體中的 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。在一些實施例中，存在於第一單體中的 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。在一些實施例中，存在於第一單體中的 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代且由胺基酸取代 N4D、D30N、E64Q 所組成。對於本文所揭示的 IL-15 蛋白之胺基酸取代是相對於野生型 IL-15 (SEQ ID NO: 1) 的。野生型 IL-15 之胺基酸序列 (SEQ ID NO: 1) 是提供用於比較目的之例示性序列，且異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白可包含相對於野生型 IL-15 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 IL‑15 蛋白可衍生自不同的野生型人體 IL‑15 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IL-15，異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白不包含任何額外的胺基酸改變。

IL-15Rα 蛋白是一種對 IL-15 親和力很高的跨膜蛋白，其促進 IL-15 從內質網 (endoplasmic reticulum，ER) 穿過細胞質轉運，並在細胞表面呈現 IL-15/IL-15Rα 複合物。如本文所用，術語「IL-15Rα 的 sushi 結構域」是指 IL-15Rα 的截短細胞外區域或重組人體 IL-15 受體 α。在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:3 (全長人體 IL-15Rα) 之多肽序列。在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4 之多肽序列 (人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域)。

在一些實施例中，該 IL15Rα 蛋白包含選自由下列各項所組成之群組之一種或多種胺基酸改變：殘基 65 之後的 DPC 或 DCA 插入 (65DPC 或 D96/P97/C98、65DCA 或 D96/C97/A98)、S40C、K34C、G38C、L42C 及 A37C。IL-15Rα 蛋白的這些胺基酸取代的編號相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)。人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 4) 是提供用於比較目的之例示性序列，且相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)，異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含額外的胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白的 IL‑15Rα 蛋白可衍生自不同的野生型人體 IL-15Rα 對偶基因。在一些實施例中，相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)，異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，IL15 蛋白和 IL15Rα 蛋白各包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代或添加：E87C：65DPC (在殘基 65 或 D96/P97/C98 之後的 DPC 插入)；E87C：65DCA (在殘基 65 或 D96/C97/A98 之後的 DCA 插入)；V49C:S40C；L52C:S40C；E89C:K34C；Q48C:G38C；E53C:L42C；C42S:A37C；及 L45C:A37C。IL-15Rα 蛋白的這些胺基酸取代的編號相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)。人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 4) 是提供用於比較目的之例示性序列，且相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)，異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含額外的胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白的 IL‑15Rα 可衍生自不同的野生型人體 IL‑15Rα 對偶基因。在一些實施例中，相對於人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)，異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:3 (全長人體 IL-15Rα) 之胺基酸序列。在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白包含胺基酸序列 SEQ ID NO:4 (人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域)。在一些實施例中，IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4 (人體 IL-15Rα 的 sushi 結構域)。

本揭示之異二聚體蛋白為一種 IL-15/IL-15Rα-Fc 異二聚體融合蛋白。異二聚體 Fc 結構域的一側的 N 端共價接附於 IL-15 蛋白的 C 端，而另一側共價接附於 IL-15Rα 的 sushi 結構域 (截短細胞外區域)。在一些實施例中，IL-15 蛋白和 IL-15Rα (sushi 結構域) 可在 IL-15 和 IL-15Rα 的 C 端與各個 Fc 區域的 N 端之間具有可變長度的連接子。在一些實施例中，IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於第一 Fc 結構域的 N 端。在一些實施例中，IL-15Rα 蛋白使用第二連接子共價接附於第二 Fc 結構域的 N 端。如本文所用，術語「連接子」是指連接兩個或更多結構域的多肽序列。連接子的特性及其對特定目的的適用性是本領域中已知的。參見，例如，Chen 等人，Adv Drug Deliv Rev. October 15; 65(10): 1357-1369 (2013) (揭示各種類型的連接子，其特性及相關的連接子設計工具和資料庫)，其藉由引用併入本文。在一些實施例中，連接子是柔性的、剛性的或體內可裂解的。在某些實施例中，該連接子是柔性的。柔性連接子通常包含小的非極性胺基酸 (例如 Gly) 或極性胺基酸 (例如，Ser 或 Thr)。可在本揭示中使用的柔性連接子的實例是主要由 Gly 和 Ser 殘基 (「GS」連接子) 的伸展組成之序列。在一些實施例中，柔性連接子包含 4 個 Gly 和 Ser 殘基的重複。在一些實施例中，柔性連接子包含五個 Gly 和 Ser 殘基的 1-5 個重複。柔性連接子的非限制性實例包括 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser-Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 42)，其中，n 可為 1-5 之間的任何整數。在一些實施例中，連接子的長度為 5 至 25 個胺基酸殘基。在一些實施例中，柔性連接子包含 5、10、15、20 或 25 個殘基。其他合適的連接子可選由自下列項所組成之群組：AS (SEQ ID NO: 43)、AST (SEQ ID NO: 44)、TVAAPS (SEQ ID NO: 45)、TVA (SEQ ID NO: 46)、ASTSGPS (SEQ ID NO: 47)、KESGSVSSEQLAQFRSLD (SEQ ID NO: 48)、EGKSSGSGSESKST (SEQ ID NO: 49)、 (Gly) 6 (SEQ ID NO: 50)、(Gly) 8 (SEQ ID NO: 51) 及 GSAGSAAGSGEF (SEQ ID NO: 52)。通常，柔性連接子提供良好的柔性和溶解性，且可用作被動連接子以保持功能結構域之間的距離。可調節柔性連接子的長度以允許正確折疊或實現融合蛋白的最佳生物學活性。在一些實施例中，連接子包含序列 (Gly-Gly-Gly-Gly-Ser；SEQ ID NO: 53)。在一些實施例中，第一連接子和第二連接子包含不同的序列。在一些實施例中，第一連接子和第二連接子包含相同的序列。在一些實施例中，第一連接子和第二連接子包含 SEQ ID NO: 53 所示之序列。在一些實施例中，第一連接子和第二連接子由 SEQ ID NO: 53 所示之序列組成。

在一些實施例中，可用於本文所揭示之方法的異二聚體蛋白包含 (i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自獨立地包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12) 中的對應位置。野生型 IgG1 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 12) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含相對於野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG1 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG1 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 12)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。對於本文所揭示的 IL-15 蛋白之胺基酸取代是相對於野生型 IL-15 (成熟型；SEQ ID NO: 1)。野生型 IL-15 之胺基酸序列 (成熟型；SEQ ID NO：1) 是提供用於比較目的之例示性序列，且異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白可包含相對於野生型 IL-15 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 IL‑15 蛋白可衍生自不同的野生型人體 IL‑15 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IL-15，異二聚體蛋白之 IL-15 蛋白不包含任何額外的胺基酸改變。

技術人員將能夠確定在衍生自 IgG2、IgG3 或 IgG4 Fc 結構域的 Fc 結構域中的對應取代。例如，技術人員將認知到，殘基 E233、L234、L235、G236 及 A327 存在於衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域的 Fc 結構域中。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14) 中的對應位置。野生型 IgG3 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 14) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含相對於野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG3 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG3 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 14)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。因此，本領域技術人員將認知到，當 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域時，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自獨立地包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K。

技術人員亦將認知到，在衍生自 IgG2 Fc 結構域的 Fc 結構域中的對應殘基為 P233、V234、A235 和 G327，且衍生自 IgG2 的 Fc 結構域缺少對應於殘基 G236 的殘基。因此，技術人員將認知到，若 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域 (即，存在在野生型 IgG2 中的 PVA- 序列)，則本文中 E233P、L234V、L235A、G236del 和 A327G 是指 P233、V234、A235、-236，且在殘基 327 中並無取代。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13) 中的對應位置。野生型 IgG2 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 13) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含相對於野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG2 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG2 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 13)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。因此，本領域技術人員將認知到，當 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域時，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自獨立地包含根據 EU 編號之胺基酸取代 S267K。

技術人員亦將認知到，在衍生自 IgG4 的 Fc 結構域中，殘基 234 是苯丙胺酸且殘基 327 是甘胺酸。因此，本領域技術人員將認知到，若 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域，則本文中提及之 L234 (例如，L234V) 和 A327 (例如，A327G) 分別是指 F234 (例如，F234V) 且在殘基 327 中並無取代。在一些實施例中，各種 Fc 結構域取代的位置是指野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15) 中的對應位置。野生型 IgG4 Fc 結構域的胺基酸序列 (SEQ ID NO: 15) 是提供用於比較目的的例示性序列，且異二聚體蛋白的 IL-15Rα 蛋白可包含相對於野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15) 的額外胺基酸改變 (例如，取代、插入和刪除)。例如，異二聚體蛋白之 Fc 結構域可衍生自不同的野生型人 IgG4 對偶基因。在一些實施例中，相對於野生型 IgG4 Fc 結構域 (SEQ ID NO: 15)，異二聚體蛋白之 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。因此，本領域技術人員將認知到，當 Fc 結構域衍生自 IgG4 結構域時，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自獨立地包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、F234V、L235A、G236del 和 S267K。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域被獨立地工程化以進一步延長全身暴露並透過在較低 pH (6.0) 下增強 FcRn 結合來增加半衰期。在一些實施例中，在 Fc 區域上的額外工程化使得本揭示的異二聚體蛋白無效應 (即，徹底破壞與 Fcγ 受體的結合)，並消除 T 細胞和 NK 細胞的抗體媒介的 CL。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域被獨立地工程化以促進異源二聚化形成超過同二聚化形成。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域被獨立地工程化以具有改善的 PK。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域被獨立地工程化以允許藉由增加兩個單體之間的 pI 差異來從異二聚體中純化同二聚體。在某些實施例中，Fc 變異體結構域可進一步包含缺少一個或多個天然 Fc 胺基酸殘基的分子或序列，該天然 Fc 殘基影響或參與 (1) 二硫鍵形成，(2) 與所選宿主細胞不相容，(3) 在所選宿主細胞中表現後的 N 端異質性，(4) 糖基化，(5) 與補體相互作用，(6) 與新生受體以外的 Fc 受體結合，(7) 抗體依賴性細胞媒介的細胞毒性 (ADCC)，或 (8) 抗體依賴性細胞吞噬作用 (ADCP)。Fc 變異體在下文中進一步詳細描述。

在一些實施例中，本揭示的第一 Fc 結構域或第二 Fc 結構域可包含「偏斜」變異體 (例如，如美國專利號 10,259,887 的圖 1A-1C 所示之一組胺基酸取代；其所有內容藉由引用全文併入本文)。偏斜變異體促進異源二聚化形成作用超過同二聚化形成作用。在一些實施例中，偏斜變異體選自 S364K/E357Q (在第一 Fc 結構域上)：L368D/K370S (在第二 Fc 結構域上)；L368D/K370S:S364K；L368E/K370S:S364K；T411E/K360E/Q362E:D401K；L368D/K370S: S364K/E357L；K370S: S364K/E357Q；T366S/L368A/Y407V: T366W 及 T366S/L368A/Y407V/Y349C: T366W/S354C，根據 EU 編號。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 L368D 及 K370S，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 S364K 及 E357Q，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S。

在一些實施例中，根據 EU 編號，第一 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，第二 Fc 結構域進一步包含選自由下列各項所組成之群組之任一胺基酸取代：根據 EU 編號之 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D，或其組合。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。在一些實施例中，該第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。

在一些實施例中，第一 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第二 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域在位置 220 處不包含游離半胱胺酸。在一些實施例中，第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S。

在一些實施例中，本揭示之第一 Fc 結構域或第二 Fc 結構域可包括用於改善的 PK 的胺基酸取代 (Xtend 取代)。在一些實施例中，本揭示之第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域獨立地包含根據 EU 編號之胺基酸取代 M428L 及/或 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L 或 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L 及 N434S。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L。在一些實施例中，第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 N434S。在一些實施例下，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L 或 N434S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L 及 N434S。在一些實施例中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 M428L。在一些實施例中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 N434S。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域包含下列胺基酸取代：根據 EU 編號之 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、L368D、K370S、M428L 及 N434S。在一些實施例中，該第二 Fc 結構域包含下列根據 EU 編號之胺基酸取代: C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、S364K、E357Q、M428L 及 N434S。在一些實施例中，該第二 Fc 結構域包含下列胺基酸取代：根據 EU 編號之 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、L368D、K370S、M428L 及 N434S。在一些實施例中，該第一 Fc 結構域包含下列胺基酸取代：根據 EU 編號之 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、S364K、E357Q、M428L 及 N434S。在一些實施例中，相較於野生型 IgG Fc 結構域，第一 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，相較於野生型 IgG1 Fc 結構域，第一 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，相較於 SEQ ID NO: 12，第一 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，相較於野生型 IgG Fc 結構域，第二 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，相較於野生型 IgG1 Fc 結構域，第二 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。在一些實施例中，相較於 SEQ ID NO: 12，第二 Fc 結構域不包含任何額外的胺基酸改變。

在一些實施例中，該第一 Fc 結構域及第二 Fc 結構域各自獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之一組額外的胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R、S239K、L328R 及 A327G。

在一些實施例中，異二聚體蛋白包含 (i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的野生型 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、Q295E、L368D、K370S、N384D、Q418E、N421D、M428L 及 N434S，且其中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、E357Q、S364K、M428L 及 N434S；且其中，相較於野生型 IL-15 蛋白 (SEQ ID No:1)，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。

在一些實施例中，異二聚體蛋白包含 (i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的野生型 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、Q295E、E357Q、S364K、N384D、Q418E、N421D、M428L 及 N434S；且其中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、L368D、K370S、M428L 及 N434S；且其中，相較於野生型 IL-15 蛋白 (SEQ ID No:1)，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。

在一些實施例中，異二聚體蛋白包含 (i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的野生型 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、Q295E、L368D、K370S、N384D、Q418E、N421D、M428L 及 N434S，且其中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、K246T、S267K、E357Q、S364K、M428L 及 N434S；且其中，相較於野生型 IL-15 蛋白 (SEQ ID No:1)，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。

在一些實施例中，異二聚體蛋白包含 (i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的野生型 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，第一 Fc 結構域包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、Q295E、E357Q、S364K、N384D、Q418E、N421D、M428L 及 N434S；且其中，第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、K246T、S267K、L368D、 K370S、M428L 及 N434S；且其中，相較於野生型 IL-15 蛋白 (SEQ ID No:1)，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。

在一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列。在一些實施例中，第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且第二單體包含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列。

在一些實施例中，第一單體包含 (1) IL-15 和 (2) 第一 Fc 結構域，其包含 SEQ ID NO: 6 所示之序列。在一些實施例中，第二單體包含 (1) IL-15Rα 和 (2) 第二 Fc 結構域，其包含 SEQ ID NO: 7 所示之序列。

在一些實施例中，存在於異二聚體蛋白中的胺基酸取代揭示於美國專利公開號 US 2018/0118805，且其全文藉由引用併入本文。

以下表 1 中提供本文所引用之序列。

表 1 .描述於本揭示中的胺基酸序列之彙編。

SEQ ID NO: 1	野生型成熟或截短 IL-15 蛋白	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
SEQ ID NO: 2	野生型全長 IL-15 蛋白	MRISKPHLRSISIQCYLCLLLNSHFLTEAGIHVFILGCFSAGLPKTEANWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
SEQ ID NO: 3	野生型全長 IL-15Rα 蛋白	MAPRRARGCRTLGLPALLLLLLLRPPATRGITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTVAISTSTVLLCGLSAVSLLACYLKSRQTPPLASVEMEAMEALPVTWGTSSRDEDLENCSHHL
SEQ ID NO: 4	IL-15Rα 蛋白的sushi 結構域	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIR
SEQ ID NO: 5	XENP24306 或 XENP32803 IL-15 蛋白變異體	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESNVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVQDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
SEQ ID NO: 6	XENP24306 或 XENP32803 第一 IgG1 Fc 結構域 (IL-15 單體)	EPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 7	XENP24306 第二 IgG1 Fc 結構域 (IL-15Rα 單體)	EPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 8	XENP32803 第二 IgG1 Fc 結構域 (IL-15Rα 單體)	EPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPTPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 9	XENP24306 或 XENP32803 第一單體 (IL-15-第一 Fc 結構域單體)	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESNVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVQDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 10	XENP24306 第二單體 (IL-15Rα-第二 Fc 結構域單體)	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 11	XENP22853 野生型第一單體 (IL-15-第一 Fc 結構域單體)	NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 12	未修飾的 Fc IgG1 結構域 (對偶基因 3；Y14737)	EPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 13	未修飾的 Fc IgG2 結構域 (對偶基因 1；J00230/AH005273)	ERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 14	未修飾的 Fc IgG3 結構域 (對偶基因 8；AJ390241/X03604)	EPKSCDTPPPCPRCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFKWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKTKQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYNTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNIFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO: 15	未修飾的 Fc IgG4 結構域 (對偶基因 1；K01316/AH005273)	ESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
SEQ ID NO: 16	XENP32803 第二單體 (IL-15Rα 單體)。	ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPTPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK

在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白選自由下列各項所組成之群組：XENP20818、XENP20819、XENP21471、XENP21472、XENP21473、XENP21474、XENP21475、XENP21476、XENP21477、XENP21988、XENP21989、XENP21990、XENP21991、XENP21992、XENP22013、XENP22014、XENP22015、XENP22017、XENP22815、XENP22816、XENP22817、XENP22818、XENP22819、XENP22820、XENP22821、XENP22822、XENP22823、XENP22824、XENP22825、XENP22826、XENP22827、XENP22828、XENP22829、XENP22830、XENP22831、XENP22832、XENP22833、XENP22834、XENP23343、XENP23472、XENP23504、XENP23554、XENP23555、XENP23557、XENP23559、XENP23560、XENP23561、XENP24017、XENP24018、XENP24019、XENP24020、XENP24043、XENP24044、XENP24046、XENP24051、XENP24052、XENP24113、XENP24301、XENP24306、XENP24341 及 XENP32803 異二聚體蛋白，其序列揭示於 US10,501,543 之圖 104A-104AY，其藉由引用併入本文。

在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白選自由下列各項所組成之群組：XENP22822、XENP23504、XENP24045、XENP24306、XENP22821、XENP23343、XENP23557、XENP24113、XENP24051、XENP24341、XENP24052、XENP24301 及 XENP32803 異二聚體蛋白，其描述於下表 2 中。XENP22822、XENP23504、XENP24045、XENP24306、XENP22821、XENP23343、XENP23557、XENP24113、XENP24051、XENP24341、XENP24052 及 XENP24301 之序列亦提供於 US 2018/0118805 中，並藉由引用併入本文。在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白為 XENP24306。在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白為 XENP32803。在一些實施例中，本揭示之兩種或更多種 (例如 2 種、3 種、4 種、5 種等) 異二聚體蛋白的組合用於本文所揭示之方法中。在一些實施例中，本揭示之兩種異二聚體蛋白的組合用於本文所揭示之方法中。在一些實施例中，XENP24306 和 XENP32803 的組合用於本文所揭示之方法中。

在一些實施例中， XENP24306 蛋白表示在組合中約 99%、約 98%、約 97%、約 96%、約 95%、約 94%、約 93%、約 92%、約 91%、約 90%、約 89%、約 88%、約 87%、約 86%、約 85%、約 84%、約 83%、約 82%、約 81%、約 80%、約 75%、約 70%、約 65%、約 60%、約 55%、約 50%、約 45%、約 40%、約 35%、約 30%、約 25%、約 20%、約 15%、約 10% 或約 5% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 85% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 84% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 83% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 82% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 81% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 80% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 95%、約 90%、約 85%、約 80%、約 75%、約 70%、約 75%、約 70%、約 65%、約 55%、約 50%、約 45%、約 40%、約 35%、約 30%、約 25%、約 20%、約 19%、約 18%、約 17%、約 16%、約 15%、約 14%、約 13%、約 12%、約 11%、約 10%、約 9%、約 8%、約 7%、約 6%、約 5%、約 4%、約 3%、約 2% 或約 1% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 50%-100%、約 70%-95%、約 80%-90% 或約 80%-85% 之間的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中約 1%-50%、約 5%-30%、約 10%-20% 或約 15%-20% 之間的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 85% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 84% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 83% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 82% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 81% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中約 80% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中約 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10% 或 5% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 85% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 84% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 83% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 82% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 81% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 80% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 95%、90%、85%、80%、75%、70%、75%、70%、65%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2% 或 1% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示組合中 50%-100%、70%-95%、80%-90% 或 80%-85% 之間的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，XENP32803 蛋白表示在組合中 1%-50%、5%-30%、10%-20% 或 15%-20% 之間的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 85% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 84% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 83% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 82% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 81% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，XENP24306 蛋白表示在組合中 80% 的異二聚體蛋白，而 XENP32803 蛋白表示在組合中 20% 的異二聚體蛋白。

表 2 .

XENP22821	單體 1 (IL-15 (N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 17 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 18 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP22822	單體 1 (IL-15 (Q108E)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 19 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVEMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 20 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP23557	單體 1 (IL-15 (N4D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 21 NWVDVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 22 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAP PVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP24045	單體 1 (IL-15 (D30N/E64Q/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 23 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESNVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVQDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLS PGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 24 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAP PVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP24051	單體 1 (IL-15 (N1D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 25 DWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 26 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIREPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP24052	單體 1 (IL-15 (N4D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 27 NWVDVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 28 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIREPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
XENP23504	單體 1 (IL-15 (Q108E)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 29 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVENLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVEMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 30 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
XENP23343	單體 1 (IL-15 (N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 31 NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 32 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
XENP24113	單體 1 (IL-15 (N4D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 33 NWVDVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 34 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
XENP24341	單體 1 (IL-15 (N1D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 35 DWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 36 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIREPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK
XENP24301	單體 1 (IL-15 (N4D/N65D)- 第一 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 37 NWVDVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISLESGDASIHDTVEDLIILANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTSEPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEEYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCDVSGFYPSDIAVEWESDGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWEQGDVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK單體 2 (IL-15Rα- 第二 Fc 結構域) 。 SEQ ID NO: 38 ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTSSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIREPKSSDKTHTCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVKHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREQMTKNQVKLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVLHEALHSHYTQKSLSLSPGK

以 IL15-IL15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白治療之方法

在一方面，本揭示提供治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向個體投予治療有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。

在另一方面，本揭示提供本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合，用於治療有此需要之個體的實性瘤。

在另一方面，本揭示提供治療有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合在製造用於治療有此需要之個體的實性瘤的藥物中的用途。

在一些實施例中，兩種或更多種 (例如，2 種、3 種、4 種、5 種、6 種等) 的異二聚體蛋白的組合用於本文所述之方法中。在一些實施例中，將第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白的組合投予個體。

在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 99%、約 98%、約 97%、約 96%、約 95%、約 94%、約 93%、約 92%、約 91%、約 90%、約 89%、約 88%、約 87%、約 86%、約 85%、約 84%、約 83%、約 82%、約 81%、約 80%、約 75%、約 70%、約 65%、約 60%、約 55%、約 50%、約 45%、約 40%、約 35%、約 30%、約 25%、約 20%、約 15%、約 10% 或約 5% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 85% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 84% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 83% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 82% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 81% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 80% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示約 95%、約 90%、約 85%、約 80%、約 75%、約 70%、約 75%、約 70%、約 65%、約 55%、約 50%、約 45%、約 40%、約 35%、約 30%、約 25%、約 20%、約 19%、約 18%、約 17%、約 16%、約 15%、約 14%、約 13%、約 12%、約 11%、約 10%、約 9%、約 8%、約 7%、約 6%、約 5%、約 4%、約 3%、約 2% 或約 1% 的組合物。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 50% - 約 100%、約 70% - 約 95%、約 80% - 約 90% 或約 80% - 約 85% 之間的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中約 1% - 約 50%、約 5% - 約 30%、約 10% - 約 20% 或約 15% - 約 20% 之間的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 85% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 84% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 83% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 82% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 81% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中約 80% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中約 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 99%、98%、97%、96%、95%、94%、93%、92%、91%、90%、89%、88%、87%、86%、85%、84%、83%、82%、81%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、10% 或 5% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 85% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 84% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 83% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 82% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 81% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 80% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示 95%、90%、85%、80%、75%、70%、75%、70%、65%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2% 或 1% 的組合物。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示組合中 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 50% - 100%、70% - 95%、80% - 90% 或 80% - 85% 之間的異二聚體蛋白。在本文所揭示之任何方法的一些實施例中，第二異二聚體蛋白表示在組合中 1% - 50%、5% - 30%、10% - 20% 或 15% - 20% 之間的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 85% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 15% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 84% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 16% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 83% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 17% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 82% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 18% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 81% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 19% 的異二聚體蛋白。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白表示在組合中 80% 的異二聚體蛋白，而第二異二聚體蛋白表示在組合中 20% 的異二聚體蛋白。

在一些實施例中，同時投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，依序投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，在第二異二聚體蛋白之前投予第一異二聚體蛋白。在一些實施例中，在第一異二聚體蛋白之前投予第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，於相同的組成物中投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。在一些實施例中，於分開的組成物中投予第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。

實性瘤是指通常不包含囊腫或液體區域的異常組織腫塊。不同類型的實性瘤因形成它們的細胞類型而命名。藉由本文所揭示之方法和用途治療的實性瘤的實例包括但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤和肉瘤。此類腫瘤的更具體實例包括鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌 (cSCC)、小細胞肺癌 (SCLC)、非小細胞肺癌 (NSCLC)、胃腸道癌、胃癌 (gastric cancer, Gc)、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脂肪肉瘤、軟組織肉瘤、泌尿上皮癌 (UCC)、輸尿管和腎盂、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、肝腫瘤、黑色素瘤、胃癌 (stomach cancer)、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌 (RCC)、肝癌、食道癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、默克細胞癌 (MCC)、生殖細胞癌、高度微衛星不穩定性 (MSI-H) 癌和頭頸癌。在一些實施例中，實性瘤是局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤。在一些實施例中，實性瘤選自由下列各項所組成之群組：黑色素瘤、NSCLC、頭頸部鱗狀上皮細胞癌 (HNSCC)、三陰性乳癌 (TNBC)、UCC、RCC、SCLC、GC、MCC、cSCC 和 MSI-H 癌。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、RCC、NSCLC、HNSCC 和 TNBC。在一些實施例中，實性瘤為黑色素瘤。在一些實施例中，實性瘤為 RCC。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、RCC 和 NSCLC。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、NSCLC、HNSCC 和 TNBC。在一些實施例中，實性瘤為 NSCLC。在一些實施例中，實性瘤為 HNSCC。在一些實施例中，實性瘤為 TNBC。在一些實施例中，實性瘤是一種不存在標準療法、標準療法已被證明是無效或不能耐受或被認為不合適的實性瘤，或對於該實性瘤，研究藥劑的臨床試驗是公認的護理標準。

本文所述之方法和用途包括向個體投予治療有效量之本文所述之任何異二聚體蛋白，或其組合，或本文所述之組成物以產生此類效果。確認需要此類治療之個體可在個體或衛生保健專業人員的判斷中，並可以是主觀的 (例如意見) 或客觀的 (例如可藉由測試或診斷方法測量)。此類治療將適當地投予罹患癌症、具有癌症、受癌症影響或有罹患癌症風險之個體。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應子記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合，且其中，當投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合後，NK 細胞的增殖反應比 CD8⁺ 效應子記憶 T 細胞的增殖反應更強。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 CD8⁺ 效應子記憶 T 細胞及 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。在一些實施例中，當投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合後，NK 細胞的增殖反應比 CD8⁺ 效應子記憶 T 細胞的增殖反應更強。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 CD4⁺ 效應子記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。

在另一方面，本揭示提供用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之本文所揭示之任何異二聚體蛋白或其任何組合。

投予途徑包括但不限於腸胃道外、經口、經鼻、滴入膀胱或經由含有常規的、無毒的醫藥上可接受之載體和佐劑的合適的遞送裝置或植入物。在一些實施例中，腸胃道外投予是藉由注射、輸注或植入。在一些實施例中，腸胃道外投予是皮下、靜脈內、動脈內、肌內、腹膜內、皮內、鞘腔內、骨內、心內、膀胱內、玻璃體內、海綿體內、硬膜外、大腦內、腦室內、胸膜內、吸入、經皮等投予。在一些實施例中，腸胃道外投予是皮下投予。在一些實施例中，腸胃道外投予是靜脈內投予。在一些實施例中，腸胃道外投予是肌內投予。在一些實施例中，腸胃道外投予是腹膜內投予。

在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白為全身性投予。在一些實施例中，異二聚體蛋白為局部投予。在一些實施例中，以包含醫藥上可接受之緩衝液的組成物投予異二聚體蛋白。合適的載體及其調配物描述於例如 E.W.Martin 的 Remington's Pharmaceutical Sciences。在一些實施例中，以適於腸胃道外投予之途徑的劑型提供異二聚體蛋白。

可以單位劑型 (例如，於單一劑量安瓿、注射器或袋中) 提供包含異二聚體蛋白的組成物。在一些實施例中，在包含數種劑量的小瓶中提供異二聚體蛋白。可以將合適的防腐劑添加至組成物中 (見下文)。該組成物可為溶液、懸浮液、乳劑、輸注裝置或用於植入的遞送裝置之形式，或可以乾粉形式存在，在使用前以水或另一合適媒液進行重構。除了本文所揭示之異二聚體蛋白之外，組成物可包括合適的可接受之載體及/或賦形劑。在一些實施例中，組成物適於腸胃道外投予。可將異二聚體蛋白併入微球、微膠囊、奈米顆粒、脂質體等之中，用於控制釋放。此外，組成物可包括懸浮劑、增溶劑、穩定劑、pH 調節劑、張力調節劑及/或分散劑。

包含異二聚體蛋白的醫藥組成物可為適於無菌注射的形式。為了製備此類組成物，將蛋白質溶解或懸浮在腸胃道外可接受之液體媒液中。在可接受之媒液和溶劑中可使用的是水 (藉由添加適量的鹽酸、氫氧化鈉或合適的緩衝液將水調整至合適的 pH 值)、1,3-丁二醇、林格氏 (Ringer) 溶液和等張氯化鈉溶液及右旋糖溶液。水性調配物亦可包含一種或多種防腐劑 (例如，對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸乙酯或對羥基苯甲酸正丙酯)。

在一些實施例中，本揭示之異二聚體蛋白為口服投予。口服投予生物活性蛋白質和肽的方法為本技術領域已知的。已建議許多防止口服蛋白質降解的策略。口服投予異二聚體蛋白之方法的實例包括但不限於使用內核-外殼顆粒 (US 7,090,868) 和奈米管 (US 7,195,780)；脂質體和水性乳液和懸浮液 (US 7,316,818；WO 06/062544；US 6,071,535；和 US 5,874,105)；充氣脂質體 (US 6,551,576；US 6,808,720；和 US 7,083,572)；分散於水性介質中的奈米液滴 (US 2007/0184076)；含肽效應子的基質載體，其提供跨生物屏障的滲透以用於投予疏水性蛋白質 (WO 06/097793，WO 05/094785 和 WO 03/066859)；使用非共價蛋白-多醣複合物 (EP0491114B1)；US 8,936,786 中所述之醫藥組成物的用途；Peptelligence^® 系統的使用 (來自 Enteris Biopharma) (WO 2014/138241、WO 2016/115082 和 WO 2004/064758)。所有這些出版物和專利均藉由引用明確地併入本文。

待投予之本揭示之異二聚體蛋白的量依據投予方法、病患年齡和體重及待治療之癌症的臨床症狀而變化。人纇劑量可首先藉由從小鼠或非人靈長類動物中所使用的蛋白質量來確定。在某些實施例中，劑量可在下列數量之間變化：約 0.0001 mg 蛋白質/kg 體重至約 5 mg 化合物/kg 體重；或約 0.001 mg/kg 體重至約 4 mg/kg 體重、或約 0.005 mg/kg 體重至約1 mg/kg 體重、或約 0.005 mg/kg 體重至約 0.3 mg/kg 體重、或約 0.005 mg/kg 體重至約 0.2 mg/kg 體重、或約 0.005 mg/kg 體重至約 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為約 0.0001、約 0.00025、約 0.0003、約 0.0005、約 0.001、約 0.003、約 0.005、約 0.008、約 0.01、約 0.015、約 0.02、約 0.03、約 0.04、約 0.05、約 0.06、約 0.07、約 0.08、約 0.09、約 0.1、約 0.12、約 0.135、約 0.15、約 0.16、約 0.2、約 0.2025、約 0.24、約 0.25、約 0.3、約 0.32、約 0.35、約 0.4、約 0.45、約 0.5、約 0.55、約 0.6、約 0.65、約 0.7、約 0.75、約 0.8、約 0.85、約 0.9、約 0.95、約 1、約 1.1、約 1.15、約 1.2、約 1.25、約 1.3、約 1.35、約 1.4、約 1.45、約 1.5、約 1.6、約 1.7、約 1.8、約 1.9、約 2、約 2.5、約 3、約 3.5、約 4、約 4.5 或約 5 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.1 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.2 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.0025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.01 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.015 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.03 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.04 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.06 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.08 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.09 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.12 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.135 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.16 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.2025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.24 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，根據這些劑量，藉由 IV 輸注投予本揭示之異二聚體蛋白。

在某些實施例中，劑量可在下列數量之間變化：0.0001 mg 蛋白質/kg 體重至 5 mg 化合物/kg 體重；或 0.001 mg/kg 體重至 4 mg/kg 體重、或 0.005 mg/kg 體重至 1 mg/kg 體重、或 0.005 mg/kg 體重至 0.3 mg/kg 體重、或 0.005 mg/kg 體重至 0.2 mg/kg 體重、或 0.005 mg/kg 體重至 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為 0.0001、0.0003、0.0005、0.001、0.003、0.005、0.008、0.01、0.015、0.02、0.03、0.05、0.08、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1、1.1、1.15、1.2、1.25、1.3、1.35、1.4、1.45、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5 或 5 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量選自由下列各項所組成之群組：0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.09 mg/kg、0.10 mg/kg、0.12 mg/kg、0.135 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.2025 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.0025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.01 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.015 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.03 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.04 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.06 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.08 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.09 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.12 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.135 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.16 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.2025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.24 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，根據這些劑量，藉由 IV 輸注投予本揭示之異二聚體蛋白。

在某些實施例中，異二聚體蛋白的組合的劑量可在下列數量之間變化：約 0.0001 mg 蛋白質/kg 體重至約 5 mg 化合物/kg 體重；或約 0.001 mg/kg 體重至約 4 mg/kg 體重，或約 0.005 mg/kg 體重至約1 mg/kg 體重，或約 0.005 mg/kg 體重至約0.3 mg/kg 體重，或約 0.005 mg/kg 體重至約 0.2 mg/kg 體重，或約 0.005 mg/kg 體重至約 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為約 0.0001、約 0.0003、約 0.0005、約 0.001、約 0.003、約 0.005、約 0.008、約 0.01、約 0.015、約 0.02、約 0.03、約 0.05、約 0.08、約 0.1、約 0.15、約 0.2、約 0.25、約 0.3、約 0.35、約 0.4、約 0.45、約 0.5、約 0.55、約 0.6、約 0.65、約 0.7、約 0.75、約 0.8、約 0.85、約 0.9、約 0.95、約 1、約 1.1、約 1.15、約 1.2、約 1.25、約 1.3、約 1.35、約 1.4、約 1.45、約 1.5、約 1.6、約 1.7、約 1.8、約 1.9、約 2、約 2.5、約 3、約 3.5、約 4、約 4.5 或約 5 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.10 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.20 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.0025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.01 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.015 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.03 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.04 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.06 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.08 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.12 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.16 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.24 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為約 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，根據這些劑量，藉由 IV 輸注投予本揭示之異二聚體蛋白的組合。

在某些實施例中，異二聚體蛋白的組合的劑量可在下列數量之間變化：0.0001 mg 蛋白質/kg 體重至 5 mg 化合物/kg 體重；或 0.001 mg/kg 體重至 4 mg/kg 體重，或 0.005 mg/kg 體重至 1 mg/kg 體重，或 0.005 mg/kg 體重至 0.3 mg/kg 體重，或 0.005 mg/kg 體重至 0.2 mg/kg 體重，或 0.005 mg/kg 體重至 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為 0.0001、0.0003、0.0005、0.001、0.003、0.005、0.008、0.01、0.015、0.02、0.03、0.05、0.08、0.1、0.15、0.2、0.25、0.3、0.35、0.4、0.45、0.5、0.55、0.6、0.65、0.7、0.75、0.8、0.85、0.9、0.95、1、1.1、1.15、1.2、1.25、1.3、1.35、1.4、1.45、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2、2.5、3、3.5、4、4.5 或 5 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、 0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.10 mg/kg、0.12 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.0025 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.01 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.015 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.02 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.03 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.04 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.06 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.08 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.12 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.16 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.24 mg/kg 體重。在一些實施例中，劑量為 0.32 mg/kg 體重。在一些實施例中，根據這些劑量，藉由 IV 輸注投予本揭示之異二聚體蛋白的組合。

在一些實施例中，每天，即，每 24 小時投予本揭示之異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每週，即，每週一次 (Q1W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每兩週一次，即，每 14 天一次 (Q2W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每三週一次，即，每 21 天一次 (Q3W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每四週一次，即，每 28 天一次 (Q4W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每五週一次 (Q5W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每六週一次 (Q6W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每七週一次 (Q7W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每八週一次 (Q8W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每九週一次 (Q9W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十週一次 (Q10W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十一週一次 (Q11W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十二週一次 (Q12W) 投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每二個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每三個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每四個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每五個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每六個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每七個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每八個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每九個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十一個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每十二個月一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，每年一次投予異二聚體蛋白或其組合。在一些實施例中，根據本文所揭示之頻率，藉由 IV 輸注投予本揭示之異二聚體蛋白或其組合。

在一些實施例中，個體先前並未接受投予用於治療該病症的藥劑。在一些實施例中，個體目前正被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，個體先前已被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-L1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 CTLA-4。在一些實施例中，靶向 PD-1 的檢查點抑制劑為抗 ‑PD-1 抗體。特異性結合 PD-1 的抗體是本技術領域已知的，並已描述於例如 Naidoo 等人，Ann Oncol.2015; 26(12): 2375-2391、Philips 等人，Int Immunol. 2015; 27(1):39-46、Tunger 等人，J Clin Med. 2019; 8(10) 及 Sunshine 等人，Curr Opin Pharmacol. 2015;32-8；及 US 8008449、US 8168757、US 20110008369、US 20130017199、US 20130022595 及 W02006121168、W020091154335、W02012145493、W02013014668、W02009101611、EP2262837 及 EP2504028。抗 PD-1 抗體的實例包括但不限於納武單抗 (BMS-936558)、帕博利珠單抗 (，商品名 Keytruda，原名派姆單抗 (lambrolizumab)；亦稱為 Merck 3475 及 SCH-900475)、匹定利珠單抗 (CT-011)、西米普利單抗、斯巴達珠單抗 (PDR001)、卡瑞利珠單抗 (SHR1210)、信迪利單抗 (IBI308)、替雷利珠單抗 (BGB-A317)、特瑞普利單抗 (JS 001)、MDX-1106、AMP-514 (Amplimmune) 及 AMP-224 (Amplimmune)。納武單抗是一種抗 PD-1 抗體，描述於 WO2006/121168 中。帕博利珠單抗是一種抗 PD-1 抗體，描述於 W02009/114335 及 Hamid 等人，(2013).New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44。匹定利珠單抗是一種與 PD-1 結合的人源化 IgGk 單株抗體。匹定利珠單抗及其他人源化抗 PD1 單株抗體揭示於 W02009/101611 中。AMP-224 是 PD-L2 Fc 融合可溶性受體，其阻斷 PD-1 與 B7-H1 之間的相互作用，並揭示於 WO2010/027827 和 WO2011/066342。其他抗 PD-1 抗體包括 AMP 514，尤其，例如美國專利號 US 8609089、US 2010028330 及/或 US 20120114649 中所揭示之抗 PD-1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體為納武單抗。

在一些實施例中，靶向 PD-L1 的檢查點抑制劑是抗 PD-L1 抗體。特異性結合 PD-L1 的抗體是本技術領域已知的，並已描述於例如 Naidoo 等人，Ann Oncol.2015 Dec; 26(12): 2375-2391, Philips 等人，Int Immunol. 2015 Jan;27(1):39-46、Tunger 等人，J Clin Med. 2019 Sep 25;8(10)、Sunshine 等人，Curr Opin Pharmacol. 2015:32-8 及美國專利號 7943743 及美國公開號 20120039906。抗 PD-L1 抗體的實例包括但不限於 BMS-936559 (亦稱為 MSB-0010718C 和 MDX-1105)、BMS-39886、阿替利珠單抗 (MDPL3280A；Tecentriq)、阿維魯單抗 (Bavencio)、度伐魯單抗 (MEDI4736；Imfinzi)、KN035、CK-301 (檢查點治療劑) 及 MSB0010718C。BMS-936559 是一種抗 PD-L1 抗體，描述於 W02007/005874 中。阿替利珠單抗是一種人源化單株抗體，具有與 PD-L 1 結合的人 Fc 優化 IgG1。BMS-39886 是一種抗 PD-L1 抗體，描述於 Brahmer JR 等人，N Engl J Med 2012; 366: 2455-2465。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體為阿替利珠單抗。

在一些實施例中，靶向 CTLA-4 的檢查點抑制劑是抗‑CTLA-4 抗體。特異性結合 CTLA-4 的抗體是本技術領域已知的，且已描述於例如 Callahan MK 等人，Semin Oncol.2010;37(5):473–484。抗 CTLA-4 抗體的實例包括但不限於伊匹木單抗 (ipilimumab)和曲美木單抗 (tremelimumab)。伊匹木單抗和曲美木單抗皆為針對 CTLA-4 的完全人類抗體。伊匹木單抗 (亦稱為 MDX-010 或 Yervoy；Bristol-Myers Squibb，Princeton，NJ) 是一種 IgG1，血漿半衰期為 12-14 天 (Hodi, F. S 等人，The New England Journal of Medicine.2010; 363 (8): 711–723)。曲美木單抗 (亦稱為 CP-675,206 或托珠單抗 (ticilimumab)；Pfizer，New York，NY) 是一種 IgG2，血漿半衰期約為 22 天 (Reuben, JM 等人，Cancer. 2006; 106 (11): 2437–44)。

IL15-IL15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白與 PD-L1/PD-1 抑制劑組合治療之方法

本揭示之另一方面提供治療有此需要之個體的如本文所揭示之實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予有效量之 (a) 本文所揭示之任何異二聚體蛋白 (即，IL15-IL15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白) 或其組合，及 (b) 靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。異二聚體蛋白可根據任何本文所揭示之方法投予。異二聚體蛋白可於任何本文所揭示之組成物中投予。

在一些實施例中，將本文所揭示之兩種或更多種異二聚體蛋白投予個體。在一些實施例中，將本文所揭示之三種或更多種異二聚體蛋白投予個體。在一些實施例中，將本文所揭示之四種或更多種異二聚體蛋白投予個體。在一些實施例中，將本文所揭示之五種或更多種異二聚體蛋白投予個體。

在一些實施例中，將第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白的組合投予個體。在一些實施例中，第一異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列的第二單體；且第二異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列的第二單體。

程序性死亡配體-1 (Programmed death-ligand-1，PD-L1) 是一種細胞表面蛋白質，在許多人類癌症中均廣泛表現於腫瘤細胞和腫瘤浸潤的免疫細胞中。PD-L1 的過表現與罹患一些癌症之病患的預後不良有關。PD-L1 結合至 PD-1 和 B7.1，其二者為已知的受體，它們在慢性刺激 (例如慢性感染或癌症) 的狀態下得以維持在活化性 T 細胞上的表現。PD-L1 與 PD-1 或 B7.1 的連接會抑制 T 細胞增殖、細胞激素生成和細胞溶解活性，從而導致 T 細胞功能去活化或抑制。已報導 PD-L1 在腫瘤細胞上的異常表現會阻礙抗腫瘤免疫力，從而導致免疫迴避。PD-L1/PD-1 和 PD-L1/B7.1 途徑的中斷是重新激發腫瘤特異性 T 細胞免疫力的一種具有吸引力的策略，且實際上，PD-L1 或 PD-1 的多種抑制劑已證實在包括黑色素瘤、RCC、NSCLC、SCLC、尿路上皮膀胱癌、HNSCC、卵巢癌和 TNBC 的多種腫瘤類型中具有臨床功效或有前景的抗腫瘤活性。迄今為止，已被證明的益處已導致在選擇適應症中批准了多種抗 PD-L1 抗體 (例如，阿替利珠單抗、阿維魯單抗和度伐魯單抗) 及抗 PD-1抗體 (例如，納武單抗、帕博利珠單抗和西米普利單抗-rwlc)。

在一些實施例中，靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為 PD-1 的抑制劑。在一些實施例中，靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為 PD-L1 的抑制劑。

在一些實施例中，PD-1 的抑制劑為抗 PD-1 抗體。特異性結合 PD-1 的抗體是本技術領域已知的，並已描述於例如 Naidoo 等人，Ann Oncol.2015; 26(12): 2375-2391、Philips 等人，Int Immunol. 2015; 27(1):39-46、Tunger 等人，J Clin Med. 2019; 8(10) 及 Sunshine 等人，Curr Opin Pharmacol. 2015;32-8；及 US 8008449、US 8168757、US 20110008369、US 20130017199、US 20130022595 及 W02006121168、W020091154335、W02012145493、W02013014668、W02009101611、EP2262837 及 EP2504028。抗 PD-1 抗體的實例包括但不限於納武單抗 (BMS-936558)、帕博利珠單抗 (商品名 Keytruda，原名派姆單抗 (lambrolizumab)；亦稱為 Merck 3475 及 SCH-900475)、匹定利珠單抗 (CT-011)、西米普利單抗、斯巴達珠單抗 (PDR001)、卡瑞利珠單抗 (SHR1210)、信迪利單抗 (IBI308)、替雷利珠單抗 (BGB-A317)、特瑞普利單抗 (JS 001)、MDX-1106、AMP-514 (Amplimmune) 及 AMP-224 (Amplimmune)。納武單抗是一種抗 PD-1 抗體，描述於 WO2006/121168 中。帕博利珠單抗是一種抗 PD-1 抗體，描述於 W02009/114335 及 Hamid 等人，(2013).New England Journal of Medicine 369 (2): 134-44。匹定利珠單抗是一種與 PD-1 結合的人源化 IgGk 單株抗體。匹定利珠單抗及其他人源化抗 PD1 單株抗體揭示於 W02009/101611 中。AMP-224 是 PD-L2 Fc 融合可溶性受體，其阻斷 PD-1 與 B7-H1 之間的相互作用，並揭示於 WO2010/027827 和 WO2011/066342。其他抗 PD-1 抗體包括 AMP 514，尤其，例如美國專利號 US 8609089、US 2010028330 及/或 US 20120114649 中所揭示之抗 PD-1 抗體。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體為納武單抗。在一些實施例中，將抗 PD-1 抗體與 XENP24306 組合投予。在一些實施例中，將抗 PD-1 抗體與 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將抗 PD-1 抗體與 XENP24306 及 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將納武單抗與 XENP24306 組合投予。在一些實施例中，將納武單抗與 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將納武單抗與 XENP24306 和 XENP32803 組合投予。

在一些實施例中，PD-L1 的抑制劑為抗 PD-L1 抗體。特異性結合 PD-L1 的抗體是本技術領域已知的，並已描述於例如 Naidoo 等人，Ann Oncol.2015 Dec; 26(12): 2375-2391, Philips 等人，Int Immunol. 2015 Jan;27(1):39-46、Tunger 等人，J Clin Med. 2019 Sep 25;8(10)、Sunshine 等人，Curr Opin Pharmacol. 2015:32-8 及美國專利號 7943743 及美國公開號 20120039906。抗 PD-L1 抗體的實例包括但不限於 BMS-936559 (亦稱為 MSB-0010718C 和 MDX-1105)、BMS-39886、阿替利珠單抗 (MDPL3280A；Tecentriq)、阿維魯單抗 (Bavencio)、度伐魯單抗 (MEDI4736；Imfinzi)、KN035、CK-301 (檢查點治療劑) 及 MSB0010718C。BMS-936559 是一種抗 PD-L1 抗體，描述於 W02007/005874 中。阿替利珠單抗是一種人源化單株抗體，具有與 PD-L 1 結合的人 Fc 優化 IgG1。BMS-39886 是一種抗 PD-L1 抗體，描述於 Brahmer JR 等人，N Engl J Med 2012; 366: 2455-2465。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體為阿替利珠單抗。在一些實施例中，將抗 PD-L1 抗體與 XENP24306 組合投予。在一些實施例中，將抗 PD-L1 抗體與 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將抗 PD-L1 抗體與 XENP24306 及 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將阿替利珠單抗與 XENP24306 組合投予。在一些實施例中，將阿替利珠單抗與 XENP32803 組合投予。在一些實施例中，將阿替利珠單抗與 XENP24306 和 XENP32803 組合投予。

與本揭示之異二聚體蛋白 (或其組合) 組合投予的靶向 PD-L1/PD-1 軸之藥劑的量依據投予方式、病患年齡和體重及待治療癌症的臨床症狀而變化。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體或抗 PD-L1 抗體以其批准的劑量投予。醫生將能夠確定適當的劑量以與本揭示之蛋白質組合投予。在一些實施例中，使用批准的劑量方案投予靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。在某些實施例中，劑量可在下列數值間變化：約 0.5 mg 蛋白質/kg 體重至約 100 mg 化合物/kg 體重；或約 1 mg 蛋白質/kg 體重至約 100 mg 化合物/kg 體重；或約 2 mg 蛋白質/kg 體重至約 50 mg 化合物/kg 體重；或約 2.5 mg 蛋白質/kg 體重至約 10 mg 化合物/kg 體重；或約 3 mg 蛋白質/kg 體重至約 5 mg 化合物/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為約 0.1、約 0.3、約 0.5、約 1、約 3、約 5、約 7.5、約 10、約 15、約 25、約 50、約 75、約 100 mg/kg 體重。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體的劑量為 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為約 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每兩週約 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為約 1 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為約 240 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為約 480 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每兩週約 240 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每四週約 480 mg。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體的劑量為約 3 mg/kg。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體的劑量為約 840mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為約 840 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為約 1200 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為約 1680 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 2 週約 840 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 3 週約 1200 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 4 週約 1680 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為約 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每三週約 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每兩週約 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每週約 200 mg。

在某些實施例中，劑量可在下列數值之間變化：0.5 mg 蛋白質/kg 體重至 100 mg 化合物/kg 體重；或 1 mg 蛋白質/kg 體重至 100 mg 化合物/kg 體重；或 2 mg 蛋白質/kg 體重至 50 mg 化合物/kg 體重；或 2.5 mg 蛋白質/kg 體重至 10 mg 化合物/kg 體重，或 3 mg 蛋白質/kg 體重至 5 mg 化合物/kg 體重。在一些實施例中，此劑量可為 0.1、0.3、0.5、1、3、5、7.5、10、15、25、50、75、100 mg/kg 體重。在一些實施例中，抗 PD-1 抗體的劑量為 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每兩週 3 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為 1 mg/kg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為 240 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為 480 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每兩週 240 mg。在一些實施例中，納武單抗的劑量為每四週 480 mg。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體的劑量為 3 mg/kg。在一些實施例中，抗 PD-L1 抗體的劑量為 840mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為 840 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為 1200 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為 1680 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 2 週 840 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 3 週 1200 mg。在一些實施例中，阿替利珠單抗的劑量為每 4 週 1680 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每三週 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每兩週 200 mg。在一些實施例中，帕博利珠單抗的劑量為每週 200 mg。

本文所揭示之異二聚體蛋白或其組合可與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體) 同時或依序投予。在一些實施例中，在投予異二聚體蛋白後投予靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。在一些實施例中，在投予異二聚體蛋白之前投予靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。在一些實施例中，於相同的組成物中投予本文所揭示之異二聚體蛋白或其組合與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體)。在一些實施例中，以與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體) 不同的組成物投予本文所揭示之異二聚體蛋白或其組合。

在一些實施例中，使用靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑的治療是針對癌症的既定療法，且將異二聚體蛋白治療增加至方案中可改善對病患的治療益處。可以每位病患增加的反應或病患群體中增加的反應來衡量這種改善。本文所揭示之異二聚體蛋白或其組合與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑可協同作用。在一些實施例中，本文所揭示之異二聚體蛋白或其組合可以小於其作為單一療法投予時的治療有效劑量的劑量投予。在一些實施例中，靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑可以小於其作為單一療法投予時的治療有效劑量的劑量投予。

在一些實施例中，藉由 IV 輸注投予靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。在一些實施例中，靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑與本揭示之異二聚體蛋白組合，以固定劑量在每 14 天為週期的第 1 天藉由 IV 輸注投予。在一些實施例中，阿替利珠單抗以約 840 mg 的劑量在每 14 天為週期的第 1 天與本揭示之異二聚體蛋白組合投予。在一些實施例中，阿替利珠單抗以 840 mg 的劑量在每 14 天為週期的第 1 天與本揭示之異二聚體蛋白組合投予。在一些實施例中，使用批准的劑量方案投予阿替利珠單抗。在一些實施例中，使用批准的劑量方案投予納武單抗。在一些實施例中，使用批准的劑量方案投予帕博利珠單抗。

在一些實施例中，個體先前並未接受投予用於治療該病症的藥劑。在一些實施例中，個體目前正被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，個體先前已被投予檢查點抑制劑。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 PD-L1。在一些實施例中，檢查點抑制劑靶向 CTLA-4。

藉由組合本揭示之異二聚體蛋白與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體) 所治療的實性瘤的實例包括但不限於癌、淋巴瘤、胚細胞瘤及肉瘤。此類實性瘤的更具體實例包括鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌 (cSCC)、小細胞肺癌 (SCLC)、非小細胞肺癌 (NSCLC)、胃腸道癌、胃癌 (gastric cancer，Gc)、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脂肪肉瘤、軟組織肉瘤、泌尿上皮癌 (UCC)、輸尿管和腎盂、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、肝腫瘤、黑色素瘤、胃癌 (stomach cancer)、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌 (RCC)、肝癌、食道癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、默克細胞癌 (MCC)、生殖細胞癌、高度微衛星不穩定性 (MSI-H) 癌和頭頸癌。在一些實施例中，實性瘤是局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤。在一些實施例中，實性瘤選自由下列各項所組成之群組：黑色素瘤、NSCLC、頭頸部鱗狀上皮細胞癌 (HNSCC)、三陰性乳癌 (TNBC)、UCC、RCC、SCLC、GC、MCC、cSCC 和 MSI-H 癌。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌 (RCC)、NSCLC、頭頸部鱗狀上皮細胞癌 (HNSCC) 及三陰性乳癌。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、RCC、NSCLC、HNSCC 和 TNBC。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、RCC 及 NSCLC。在一些實施例中，實性瘤選自黑色素瘤、NSCLC、HNSCC 和 TNBC。在一些實施例中，實性瘤為黑色素瘤。在一些實施例中，實性瘤為 RCC。在一些實施例中，癌症為 NSCLC。在一些實施例中，實性瘤為 HNSCC。在一些實施例中，實性瘤為 TNBC。在一些實施例中，實性瘤是一種不存在標準療法、標準療法已被證明是無效或不能耐受或被認為不合適的實性瘤，或對於該實性瘤，研究藥劑的臨床試驗是公認的護理標準。

組合療法亦可以較低或較小頻率劑量的靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥物 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體) 提供改善的反應，從而產生更好的耐受治療方案。例如，異二聚體蛋白與靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥物 (例如抗 PD1 或抗 PD-L1 抗體) 的組合療法可透過多種機制提供增強的臨床活性，包括增強的 ADCC、ADCP 及/或 NK 細胞、T細胞、嗜中性球或單核球細胞水平或免疫反應。

編號實施例

在下列編號實施例中闡述本揭示之特定實施例： 1. 一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。 2. 一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。 3. 一種用於誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。 4. 一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。 5. 一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。 6. 如實施例 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。 7. 如實施例 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。 8. 如實施例 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由根據 EU 編號之 L328R；S239K；及 S267K 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。 9. 如實施例 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；及 E233P/F234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。 10. 如實施例 1-9 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含選自由 N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D 及 Q108E 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 11. 如實施例 1-9 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白和該 IL-15Rα 蛋白分別包含選自下列各項之一組胺基酸取代或添加：E87C：65DPC；E87C：65DCA；V49C：S40C；L52C：S40C；E89C：K34C；Q48C：G38C；E53C：L42C；C42S：A37C 及 L45C：A37C。 12. 如實施例 1-11 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含選自由 SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO:2 所組成之群組之多肽序列。 13. 如實施例 1-12 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白包含選自由 SEQ ID NO:3 和 SEQ ID NO:4 所組成之群組之多肽序列。 14. 如實施例 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；其中，該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。 15. 如實施例 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。 16. 如實施例 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、S364K 及 E357Q；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。 17. 如實施例 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、L368D 及 K370S；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。 18. 如實施例 1-17 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端。 19. 如實施例 1-18 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。 20. 如實施例 1-19 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，且該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。 21. 如實施例 18-20 中任一項之方法，其中，該第一連接子及/或第二連接子獨立地為可變長度的 Gly-Ser 連接子。 22. 如實施例 21 之方法，其中，該第一連接子及/或該第二連接子獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之連接子：(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser- Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID No: 42)，其中，n 為 1 至 5 之間的整數。 23. 如實施例 1-22 中任一項之方法，其中，該異二聚體蛋白選自由下列各項所組成之群組：XENP22822、XENP23504、XENP24045、XENP24306、XENP22821、XENP23343、XENP23557、XENP24113、XENP24051、XENP24341、XENP24052、XENP24301 及 XENP32803 蛋白。 24. 一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 25. 一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 26. 一種用於誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 27. 一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 28. 一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。 29. 如實施例 24-28 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，根據 EU 編號。 30. 如實施例 24-28 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，根據 EU 編號。 31. 如實施例 24-30 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。 32. 如實施例 24-30 中任一項之方法，其中，該第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。 33. 如實施例 24-32 中任一項之方法，其中，該第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 K246T。 34. 如實施例 24-33 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。 35. 如實施例 24-34 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含 SEQ ID NO: 5 所示之胺基酸序列。 36. 如實施例 24-35 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域包含 SEQ ID NO: 4 所示之胺基酸序列。 37. 如實施例 24-36 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端。 38. 如實施例 24-37 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。 39. 如實施例 24-38 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，且該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。 40. 如實施例 37-39 中任一項之方法，其中，該第一連接子及/或第二連接子獨立地為可變長度的 Gly-Ser 連接子。 41. 如實施例 40 之方法，其中，該第一連接子及/或該第二連接子獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之連接子：(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser- Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID No: 42)，其中，n 為 1 至 5 之間的整數。 42. 如實施例 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且該第二單體包含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列。 43. 如實施例 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且該第二單體包含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列。 44. 如實施例 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該異二聚體蛋白為 XENP24306、XENP32803、或其組合。 45. 如實施例 1-44 中任一項之方法，其中，將第一異二聚體蛋白與第二異二聚體蛋白的組合投予該個體。 46. 如實施例 45 之方法，其中，該第一異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列的第二單體；且該第二異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列的第二單體。 47. 如實施例 45 或 46 之方法，其中，同時投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。 48. 如實施例 45 或 46 之方法，其中，依序投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。 49. 如實施例 1、6-24 及 29-48 中任一項之方法，其中，該實性瘤是局部晚期的、復發的或轉移的。 50. 如實施例 1、6-24 及 29-48 中任一項之方法，其中，該實性瘤選自由下列各項所組成之群組：鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸道癌、胃癌 (gastric cancer)、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脂肪肉瘤、軟組織肉瘤、泌尿上皮癌、輸尿管和腎盂、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、肝腫瘤、黑色素瘤、胃癌 (stomach cancer)、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌、肝癌、食道癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、默克細胞癌、生殖細胞癌、高度微衛星不穩定性癌和頭頸部鱗狀上皮細胞癌。 51. 如實施例 50 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。 52. 如實施例 51 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌和非小細胞肺癌。 53. 如實施例 51 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。 54. 如實施例 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體先前未被投予藥劑治療該實性瘤。 55. 如實施例 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體目前正被投予檢查點抑制劑。 56. 如實施例 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體先前已經被投予檢查點抑制劑。 57. 如實施例 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 PD-1。 58. 如實施例 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 PD-L1。 59. 如實施例 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 CTLA-4。 60. 如實施例 1-59 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：約 0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.1 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.2 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。 61. 如實施例 60 之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：約 0.01 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.04 mg/kg 及約 0.06 mg/kg 體重。 62. 如實施例 1-60 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.10 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。 63. 如實施例 62 之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg 及 0.06 mg/kg 體重。 64. 如實施例 1-63 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予該異二聚體蛋白：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 Q6W。 65. 如實施例 64 之方法，其中，以 Q2W 之頻率投予該異二聚體蛋白。 66. 如實施例 1-65 中任一項之方法，其中，該方法進一步包含投予該個體靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。 67. 如實施例 66 之方法，其中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為抗 PD-1 抗體。 68. 如實施例 67 之方法，其中，該抗 PD-1 抗體選自納武單抗、帕博利珠單抗、匹定利珠單抗、西米普利單抗、斯巴達珠單抗、卡瑞利珠單抗、信迪利單抗、替雷利珠單抗、特瑞普利單抗、MDX-1106、AMP-514 及 AMP-224。 69. 如實施例 68 之方法，其中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為抗 PD-L1 抗體。 70. 如實施例 69 之方法，其中，該抗 PD-L1 抗體選自阿維魯單抗、度伐魯單抗、阿替利珠單抗、BMS-936559、BMS-39886、KN035、CK-301 及 MSB0010718C。

實例

實例 1 ： XmAb24306 的非臨床藥理學

如下詳述，在多個活體外 和活體內 研究中評估 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白 (XENP24306 (~82%) 及 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 的組合，以表徵非臨床藥理學性質。活體外 研究證實 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合顯示與人纇和食蟹獼猴 IL-2/IL-15βγ 受體複合物 (CD122/CD132) 結合，在人纇和食蟹獼猴 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞中具有活性，但在囓齒動物細胞 (小鼠和大鼠) 中並沒有活性。XENP24306 + XENP32803 顯示出增加的新生兒 Fc 受體 (FcRn) 結合 (在 pH 6.0)，但在媒介抗體依賴性細胞毒性 (antibody-dependent cellular cytotoxicity，ADCC) 或補體依賴性細胞毒性 (complement-dependent cytotoxicity，CDC) 方面沒有效應子功能。活體外 和活體內 研究均顯示，XENP24306 + XENP32803 較佳地擴增 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞，對 CD4⁺ T 輔助淋巴球的擴增具有適度的影響，同時對 Treg 群體的擴增和細胞激素釋放症候群 (cytokine release syndrome，CRS) 相關細胞激素的影響最小。

活體外 研究

XENP24306 和 XENP32803 的 IL-15 成分包含三個胺基酸取代 (D30N、E64Q 及 N65D)。這些取代導致 IL-15 的效力降低。以表面電漿共振測定 XENP24306 + XENP32803 對於人纇和食蟹獼猴 IL-2/IL-15 βγ 受體複合物 (CD122/CD132) 之結合親和力。在兩個物種之間觀察到相似的結合動力學和親和力，建立以食蟹獼猴作為藥理學和毒性研究的臨床前動物物種的相關性。

藉由缺乏與 FcγR 和人類補體成分 1q (C1q) 的結合證實 XENP24306 和 XENP32803 並無效應，且預期不會經由 ADCC 或 CDC 機制誘導靶細胞殺傷。具體而言，對 Fc 區域 XENP24306 和 XENP32803 進行工程化，以移除與人類、食蟹獼猴和小鼠 FcγR 的結合；以 Bio-Layer Interferometry (BLI) 方法未檢測到結合相互作用。亦使用 BLI 評估 XENP24306 + XENP32803 與人 C1q (一種啟動補體系統之 C1 複合物的關鍵成分) 的結合，但未觀察到結合。

此外，XENP24306 和 XENP32803 的 Fc 區域經工程化後可在較低 pH (6.0) 下增強與 FcRn 的結合，目的是延長 XmAb24306 的半衰期。使用 BLI 方法確定了與人類、食蟹獼猴和小鼠 FcRn 的結合相互作用，及在 pH 6.0 (胞內體運輸的生理相關 pH) 下，XENP24306 + XENP32803 對這些受體的親和力顯著提高。

使用 phospho-STAT5 測定評估 XENP24306 + XENP32803-物種選擇性。IL-15/IL-15Rα 受體複合物與表現 CD122/CD132 之淋巴球的結合導致詹納斯氏激酶 (Janus kinase) 信號轉導物和轉錄信號途徑活化子的活化，從而導致 STAT5 的磷酸化及隨後的細胞增殖。在小鼠或大鼠 CD8⁺ T 細胞中，XENP24306 + XENP32803 不會誘導 STAT5 的磷酸化，因此排除使用囓齒動物進行毒性研究或使用同系小鼠模型評估 XENP24306 + XENP32803 的抗腫瘤功效。

在活體外 細胞增殖測定中評估 XENP24306 + XENP32803 的效力。人 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞顯示對於 XENP24306 + XENP32803 處理的強烈增殖反應。在這兩種靶細胞群中，XENP24306 + XENP32803 對於 NK 細胞顯示相對較高的效力 (半數最大有效濃度 [EC₅₀ ]：1.2 µg/mL)，相較於 CD8⁺ T 細胞 (EC₅₀ ：12.7 µg/mL) 增殖 (圖 1A 和圖 1B )。除 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞增殖外，XENP24306 + XENP32803 亦在人 PBMC 中誘導產生 IFNγ。XENP24306 + XENP32803 亦在食蟹獼猴 PBMC 中促進 NK 細胞 (EC₅₀ ：0.5 µg/mL) 和 CD8⁺ T 細胞 (EC₅₀ ：3.8 µg/mL) 增殖，證實了食蟹獼猴作為非臨床動物可用於藥理學和毒性研究。

XENP24306 和 XENP32803 是效力降低的重組人體 IL-15，設計為 IL-15/IL-15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白。觀察到 XENP24306 + XENP32803 的效力比重組野生型 IL-15 低約 900 倍，且比相似形式的重組野生型 IL-15 (rIL15) (野生型 IL-15/野生型 IL-15Rα 異二聚體 Fc 融合體；命名為 XENP22853；SEQ ID NO: 11 (野生型 IL-15-Fc 第一單體) 及 SEQ ID NO: 7 (IL-15Rα-Fc 第二單體)) 低約 400 倍，如顯示於 CD8⁺ 末端效應子 T 細胞 (圖 2 )。在不同的人類免疫細胞亞群上評估 XENP24306 + XENP32803 的效力。具體而言，將人 PBMC 以濃度增加的 XENP24306 + XENP32803、重組野生型 IL15 或野生型 IL-15/野生型 IL-15Rα 異二聚體 Fc 融合體 (XENP22853) 處理 4 天，並藉由流式細胞儀進行增殖測定，透過細胞內染色測定細胞週期蛋白質 Ki67。圖 2 顯示藉由閘控 CD3⁺ CD8⁺ CD45RA⁺ CCR7^- CD28^- CD95⁺ 群體所定義的 CD8⁺ 末端效應子 T 細胞的結果。使用最小平方法生成曲線擬合。EC₅₀ 值是藉由使用激動劑與反應的非線性回歸分析和可變斜率 (四參數) 方程式確定的。XENP24306 + XENP32803 增強了效應子記憶 CD8⁺ 和 CD4⁺ T 細胞和 NK 細胞的活化，這些表現細胞增殖標誌物 Ki67 和細胞活化標誌物 CD69 及 CD25 的細胞亞群的增加之頻率表明了這一點。XmAb24306 對初始的 CD8⁺ 或 CD4⁺ T 細胞影響最小。

進行兩項額外的活體外 毒性研究：(1) 使用人類漿質膜蛋白質細胞陣列評估 XENP24306 + XENP32803 的結合特徵，及 (2) 評估經 XENP24306 + XENP32803 誘導的細胞激素釋放，比較可溶性能力並固定 XENP24306 + XENP32803 以誘導細胞激素的產生。使用優化濃度的 XENP24306 + XENP32803 (20 µg/mL) 進行的多次實驗數據表明，對於 XENP24306 + XENP32803 的鑑定，並無令人信服的脫靶結合相互作用。XENP24306 + XENP32803 的細胞激素釋放症候群 (CRS) 的潛在風險在活體外 使用未刺激的人 PBMC 進行調查。為了評估 XENP24306 + XENP32803 誘導與 CRS 相關的細胞激素產生的潛力，以 10 µg/mL 和 20 µg/mL (在推薦的 FIH 劑量 (0.01 mg/kg) 下，比血液中預期的 Cmax (0.23 µg/mL) 高 43 倍和 87 倍) 的 XENP24306 + XENP32803 濃度，對人 PBMC 進行活體外 刺激。XENP24306 + XENP32803 的固定和可溶性形式均可誘導 IFNγ 產生。XmAb24306 對 IFNγ 的誘導強度 (與媒液對照相比為 9 到 14 倍) 比作為陽性對照的抗 CD28 抗體 (與媒液對照相比為 393 倍) 或抗 CD3 抗體 (與媒液對照相比為 1605 倍) 所觀察到的低數倍。沒有觀察到例如 IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-13 或 TNF 的任何其他細胞激素的誘導。XENP24306 + XENP32803 並不會誘導已知與 CRS 相關的炎性細胞激素，例如 IL-6 和 TNF，其表明 XENP24306 + XENP32803 誘導 CRS 的風險較低。

活體內 研究

單次或重複劑量的 XENP24306 + XENP32803 後，對食蟹獼猴的免疫反應進行評估。在 XENP24306 + XENP32803 的 IV 劑量後，並未觀察到炎性細胞激素 (例如 IL-6、腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNFα) 和 IFNγ) 的明顯升高。觀察到其他細胞激素和趨化因子的瞬時升高，例如 IP-10、MCP-1 (單核球趨化蛋白質-1)、MIP-1α (巨噬細胞炎性蛋白質-1α)、MIP-1β (巨噬細胞炎性蛋白質-1β)、TARC (胸線及活化調控趨化激素) 及伊紅趨素 (eotaxin)，表明 PD 活性。這些細胞激素和趨化因子的最高血清濃度在投予後 1 天內達到，並在第 15 天恢復到治療前水平。可溶性 CD25 血清濃度在治療後約第 4 天達到峰值，並在第 15 天恢復到治療前水平。

XENP24306 + XENP32803 治療擴大了周邊血液中 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞的數量，從而驗證所預期的免疫細胞群的靶向性。在血液淋巴細胞最初減少 (可能由於邊緣化) 之後，CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞程現超過預處理水平的劑量依賴性擴展。給藥後一週，達到血液中反應峰值，而細胞計數似乎在 2 週後恢復到接近預處理水平。包括中樞和效應子記憶、末端效應子和幹細胞記憶細胞的 CD8⁺ 記憶 T 細胞亞群被擴增，但初始 CD8⁺ T 細胞則沒有。CD4⁺ T 細胞、Tregs、B 細胞和顆粒球顯示最小的擴增或對 XENP24306 + XENP32803 無反應。在這些靶細胞群中亦觀察到 Ki67 表現頻率 (細胞增殖標誌物) 的瞬時和劑量依賴性增加，與絕對細胞數的增加一致。XENP24306 + XENP32803 (0.03、0.2 和 0.6 mg/kg，Q2W) 的重複給藥顯示每一劑量後細胞激素和趨化因子反應的短暫升高。對 XENP24306 + XENP32803 的反應是劑量依賴性的，且細胞激素、趨化因子和 sCD25 水平是可逆的。重複劑量毒性研究證實，每次給藥後，周邊血液中的 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞擴增 (中劑量時約為 6 倍，高劑量時約為 14-17 倍) 是短暫的，重複 XENP24306 + XENP32803 處理後觀察到的峰值較低 (圖 3 )。在 4 週恢復期後，周邊 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞數量恢復到治療前水平。

XENP24306 + XENP32803 增強白血球增殖和效應子活性的能力已在小鼠的移植物抗宿主疾病 (graft-versus-host-disease，GVHD) 模型的重複劑量研究中進行測試。在移植有人 PBMC 的非肥胖型糖尿病/嚴重複合型免疫缺乏症 γ (NSG) 小鼠中，評估作為單一藥劑的 XENP24306 + XENP32803 (在 0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg 或 0.3 mg/kg 的四個劑量水平，在第 0 天、7 天、14 天和 21 天給藥)。此研究監測針對小鼠宿主的免疫反應，該反應可藉由 GVHD 的臨床體徵 (即體重減輕和死亡率) 以及免疫監測評估 (例如周邊人 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度升高) 來衡量。在以 0.3 mg/kg XENP24306 + XENP32803 治療的小鼠中觀察到劑量依賴性 GVHD 誘導活性的顯著體重降低，而在較低劑量下，檢測到 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度的顯著升高。在 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數中觀察到時間 (第 7、14、21 天) 和劑量依賴性增加。僅在第 14 天在兩個最高劑量水平下觀察到 CD4⁺ T 細胞的擴增。藉由 NK 細胞擴增增加所顯示的最小藥理活性劑量為 0.01 mg/kg，而需要更高劑量才能證明 CD8⁺ T 細胞和血清 IFNγ 顯著增強。因此，XENP24306 + XENP32803 促進了促成 GVHD 的 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞的增殖和效應子增強。

評估 XENP24306 + XENP32803 作為單一藥劑 (在 0.1 mg/kg、0.3 mg/kg 或 1.0 mg/kg 的三種劑量水平，分別在第 0 天、7 天、14 天和 21 天給藥) 在小鼠中的抗腫瘤功效。使用移植有 MCF-7 人類乳癌細胞及人 PBMC 的 NSG 小鼠以確定 XENP24306 + XENP32803 是否促進抗腫瘤反應。當以單一藥劑提供時，在所有 XENP24306 + XENP32803 劑量水平 (0.1 mg/kg、0.3 mg/kg 和 1.0 mg/kg) 均觀察到如減少的腫瘤生長所示的顯著抗腫瘤活性。測量周邊 CD8⁺ T 細胞、CD4⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度的隨時間和劑量的升高，證實 XENP24306 + XENP32803 促進抗腫瘤反應。

實例 2 ：動物體內的藥物動力學和藥物代謝

XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」) 的組合以可比較的親和力與人類和食蟹獼猴 IL-2/IL-15βγ 異二聚體受體複合物結合，且對於人類和食蟹獼猴 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞均具有活性。因此，在食蟹獼猴中對 XENP24306 + XENP32803 的藥物動力學 (PK) 進行研究，以支持針對「優良實驗室操作」 (Good Laboratory Practice，GLP) 毒性研究的劑量選擇，並支持首次於人體 (first-in-human，FIH) 研究中的劑量選擇和劑量方案。為了支持 GLP 毒性研究，開發並驗證一種電化學發光測定法以定量食蟹獼猴血清樣品中的 XENP24306 + XENP32803。使用山羊抗人體 IL-15Rα 抗體作為捕獲物，而使用小鼠抗人/靈長 IL-15 生物素化抗體和硫標記的卵白素作為第一檢測試劑和第二檢測試劑。定量下限 (lower limit of quantification，LLOQ) 為 30.0 ng/mL。

開發一種時間分辨螢光法，在非 GLP PK/PD 研究中定量食蟹獼猴血清樣品中的 XENP24306 + XENP32803 濃度。在此測定中的 LLOQ 為 1.4 ng/mL。

食蟹獼猴的單一劑量藥物動力學

初步的先期研究被設計為評估功效並幫助定義 GLP 研究設計的最大耐受劑量。XENP24306 + XENP32803 的單一劑量藥物動力學的特徵是在兩項獨立的 PK/PD 研究中，對食蟹獼猴的雄性劑量為 3.0 mg/kg，對雌性的劑量為 0.6 mg/kg。在單一 3.0 mg/kg IV 投予雄性食蟹獼猴後，XENP24306 + XENP32803 證實具有平均清除率 (mean Clearance，CL) 為 66.4 mL/天/kg，穩態時的平均分佈體積 (V_ss ) 為 107 mL/kg 的多相特徵。平均 C_max 和暴露量 (從時間 0 至無限的濃度-時間曲線下面積 [AUC_0-∞ ]) 分別為 69.6 µg/mL 和 45.4 天·µg/mL。對於雌性食蟹獼猴單一 IV 投予 0.6 mg/kg XENP24306 + XENP32803 後，平均 C_max 為 11.9 µg/mL，暴露量 (AUC_0-∞ ) 為 11.7 天·μg/mL，CL 為 52.6 mL/天/kg，且 V_ss 為 89.0 mL/kg。參見表 3 。

表 3 .摘要 (平均值 ±SD) 在雄性食蟹獼猴中單一靜脈內 3.0 mg/kg 劑量及在雌性食蟹獼猴中單一靜脈內 0.6 mg/kg 劑量後，對於 XENP24306 + XENP32803 的藥物動力學參數

PK 參數	3.0 mg/kg ( 雄性； n=3)	0.6 mg/kg ( 雌性； n=3)
Cmax (ug/mL)	69.6 ± 5.03	11.9 ± 0.618
AUC_0-∞ (天•µg/mL)	45.4^a	11.7 ± 2.1
CL (mL/天/kg)	66.4^a	52.6 ± 8.81
V_ss (mL/kg)	107^a	89.0 ± 4.58

^a 2 隻動物的平均值，因此沒有報導 SD。3.0 mg/kg 劑量耐受不良。

食蟹獼猴的重複劑量藥物動力學

在為期 5 週的食蟹獼猴 GLP，重複劑量，毒性研究中表徵 XENP24306 + XENP32803 的毒物動力學 (TK)。以 14 天間隔提供 3 種劑量水平 (0.03 mg/kg、0.2 mg/kg 及 0.6 mg/kg XENP24306 + XENP32803)，共 3 劑。在所有動物中均確認全身性暴露，且在食蟹獼猴的 XENP24306 + XENP32803 暴露未觀察到性別差異 (圖 4) 。在第一劑量後，C_max 與劑量成比例。重複給藥有降低 C_max 的輕微趨勢；然而，在第一、第二和第三劑量後，C_max 的範圍 (平均值 ± SD) 重疊。第一劑量後，AUC_0-14 略小於劑量比例。除此之外，以重複 XENP24306 + XENP32803 給藥，暴露量 (AUC) 降低，尤其是在 0.2 mg/kg 劑量 (從 7.74 至 5.96 天·µg g/mL，降低 22%) 及 0.6 mg/kg 劑量 (從 21.1 至 14.9 天·µg/mL，下降 30%；表 4 )。重複給藥後全身暴露量 (AUC) 的減少可能歸因於靶細胞群增加導致 TMDD 升高。第一劑量後，XENP24306 + XENP32803 CL 的範圍在 18 至 28 mL/天/ kg，而 V_ss 的範圍在 52 至 86 mL/kg。在這些研究中所觀察到的 XENP24306 + XENP32803 的高於正常 IgG 清除率 (典型 IgG ＜10 mL/天/kg) 可能是 TMDD 的後果。XENP24306 + XENP32803 在整個劑量水平上均觀察到隨時間變化的非線性 PK 行為，如第一劑量後隨劑量增加而增加的 CL，以及重複給藥後 AUC_0-14 進一步的小於劑量比例的增加。XENP24306 + XENP32803 在人類中預期會有類似的 PK 行為。如本研究中所觀察到的，對於 XENP24306 + XENP32803 給藥的反應的增加的靶細胞群預期會增加 TMDD 效應，導致時變藥物動力學。在重複給藥後並未觀察到蓄積，如降低的 AUC 值所示，在第一劑量和第二劑量之間的 AUC 比率為 0.704 至 0.991 倍 (表 4 )。

表 4. Q2W (每 2 週) 靜脈內給藥後，食蟹獼猴對於 XENP24306 + XENP32803 的組平均 (± SD) 毒物動力學參數 (雄性和雌性合計)。

毒物動力學參數	組別 2 (0.03 mg/kg)	組別 3 (0.2 mg/kg)	組別 4 (0.6 mg/kg)
C_max ，第一劑量 (µg/mL)	0.750±0.0410	5.03 ± 0.851	14.7 ± 1.73
C_max ，第二劑量 (µg/mL)	0.776 ± 0.0415	4.73 ± 0.455	13.6 ± 1.88
C_max ，第三劑量 (µg/mL)	0.687 ± 0.0510	4.75 ± 0.555	12.4 ± 1.58
AUC_0–14 ，第一劑量 (天·µg/mL)	1.56 ± 0.148	7.74 ± 0.960	21.1 ± 1.21
AUC_0-14 ，第二劑量 (天·µg/mL)	1.55 ± 0.247	5.96 ± 0.489	14.9 ± 1.36
CL，第一劑量 (mL/天/kg)	17.9 ± 2.22	26.0 ± 3.09	28.4 ± 1.61
Vss，第一劑量 (mL/kg)	86.2 ± 6.31	56.1 ± 5.72	52.3 ± 6.98

實例 3 ：藥效學作用

對細胞激素、趨化因子和可溶性 CD25 的影響

在兩種獨立的食蟹獼猴 PK/PD 研究中，於單一劑量 0.6 或 3.0 mg/kg IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 後評估細胞激素。在 XENP24306 + XENP32803 劑量為 0.6 mg/kg 和 3.0 mg/kg 時，血清標誌物以及細胞激素和趨化因子的升高在給藥後 8 到 16 小時內達到峰值，且通常在第 15 天恢復到治療前水平。在 XENP24306 + XENP32803 治療後升高的血清標誌物包括伊紅趨素、伊紅趨素-3、IL-8、IP-10、MCP-1、MCP-4、MDC、MIP-1α、MIP-1β 及 TARC。這些細胞激素和趨化因子的表現增加可能進一步有助於 XENP24306 + XENP32803 誘導的淋巴球擴增。

在兩種獨立的 PK/PD 研究中，在單一劑量 0.6 或 3.0 mg/kg XENP24306 + XENP32803 後評估 sCD25/IL-2Rα。在 0.6 mg/kg 和 3.0 mg/kg XENP24306 + XENP32803 劑量組中，對於 sCD25 的模式顯示在給藥後 3 至 4 天逐漸增加，其與在 T 細胞上 CD25 的表現一致。對淋巴球的影響

在單一劑量 0.6 mg/kg 或 3.0 mg/kg XENP24306 + XENP32803 後，淋巴球輕度至中度減少，直至給藥後 3 天。隨後是可變的、劑量依賴性的、中度至顯著性的增加，其在給藥後 7 至 9 天達到峰值。到研究結束時，淋巴球隨後恢復或部分恢復至預處理水平。單核球傾向於鏡像淋巴球，但程度上小得多。對 0.6 mg/kg 劑量的動物執行的血液抹片檢查表明，許多淋巴球是非典型的/反應性的。

單核細胞浸潤

在單一劑量 0.6 mg/kg XENP24306 + XENP32803 後，在肝竇狀隙中觀察到最小程度至輕度的單核細胞浸潤。在單一劑量的 3.0 mg/kg XENP24306 + XENP32803，於肝、腎、肺、空腸、膀胱和皮膚中發現單核細胞浸潤。

實例 4 ：重複劑量毒性

進行兩次重複劑量的 GLP 研究：(1) 此實例中所述之為期 5 週的毒性研究，恢復期為期 4 週；(2) 實例 5 中所述之專門的心血管安全藥理學研究。

在雄性和雌性食蟹獼猴中進行為期 5 週的重複劑量 GLP 毒性研究，以評估 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 的毒性、藥理學和 TK。在第 1 天、15 天和 29 天，動物經 IV 推注接受媒液 (對照組) 或投予 0.03 mg/kg、0.2 mg/kg 或 0.6 mg/kg XENP24306 + XENP32803，並在第 34 天 (主要研究群組) 或第 64 天 (恢復群組；對照和 0.6 mg/kg XmAb24306) 進行驗屍。設計 30 天的恢復期以評估任何 XENP24306 + XENP32803 相關效果的可逆性或持久性。

毒性評估是基於臨床觀察、體重、定性食物評估、眼科、ECG、臨床病理學參數 (血液學、凝血、臨床化學、尿液分析和尿液化學)、生物分析和 TK 參數、ADA、細胞激素、流式細胞術分析，總體驗屍結果、器官重量和組織病理學檢查。

TK 分析確認了在所有測試的劑量水平下 XENP24306 + XENP32803 的全身暴露量。二種性別之間的暴露量並無差異。第一劑量後，C_max 與劑量成比例。第一劑量後的 AUC_0–14 隨著劑量增加而增加，但略小於劑量比例，且重複給藥後暴露量 (AUC) 降低。在食蟹獼猴中由於 TMDD，XENP24306 + XENP32803 在所測試的劑量水平下表現出非線性動力學 (實例 2)。

重複劑量 GLP 毒性研究中的所有發現均與預期的 T 細胞藥理反應及 NK 細胞的擴增和活化以及相關的促炎反應一致。由專屬的重複劑量 GLP 毒性研究定義的 NOAEL 被確定為 0.03 mg/kg XENP24306 + XENP32803。實例 5 中所描述的建議的 XENP24306 + XENP32803 FIH 劑量對於 NOAEL 的 0.01 mg/kg IV Q2W 的對應安全界限。

實例 5 ：安全性藥理學

在遙測式儀器測量的雄性食蟹獼猴 (每組四隻，包括媒液對照組) 中進行單一專屬的 GLP 安全性藥理學研究，以評估 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 對於心血管系統的潛在影響。在第 1 天和第 15 天藉由 IV 推注注射投予 0.03 mg/kg、0.2 mg/kg 和 0.6 mg/kg (與 GLP 毒性研究相同的劑量) XENP24306 + XENP32803，並在第 23 天將動物送回群體中。評估以下參數和端點：臨床體徵、食物消耗 (品質評估)、體重、心血管評估 (收縮、舒張、及 MAP、心率、及 ECG (包括品質評估，及 RR-、PR-、QRS-和 QT-間隔，以及導出的心率校正的 QT [QTca] 間隔的測量)、體溫、血清白蛋白質濃度及 XENP24306 + XENP32803 暴露量和 ADA 發生率。

XENP24306 + XENP32803 以所有劑量 (0.03 mg/kg、0.2 mg/kg 和 0.6 mg/kg) 均具有臨床上良好的耐受性，所有動物均在研究期內倖存且無需進行獸醫干預。在任何劑量下均未觀察到不良的臨床體徵、在食物消耗上與測試物品相關的變化、體重變化或 ECG 異常。食蟹獼猴的 ECG 被認為是品質上正常的，在 PR-、QRS‑或 QTca-間隔上無治療相關變化。

在所有劑量水平下均證實 XENP24306 + XENP32803 的全身暴露量。在研究過程中，未發生與體重或品質的食物消耗上的治療相關變化。

基於在食蟹獼猴中自 GLP 研究的結果總和，將未觀察到不良反應的水平 (no-observed-adverse-effect level，NOAEL) 劑量視為 0.03 mg/kg XENP24306 + XENP32803。由於 XENP24306 + XENP32803 的免疫激動劑特性，因此 FIH 劑量的確定是基於最小預期生物學效果水平 (minimum anticipated biological effect level，MABEL) 方法。以單一藥劑的 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803，IV 被建議作為對於 XENP24306 + XENP32803 的 FIH 劑量。此 FIH 劑量是基於 EC₂₀ (0.23 µg/mL；20 個供體的幾何平均值)，而且是衍生自在人 PBMC 中使用活體外 NK 細胞 (CD3^- CD56⁺ ) 增殖 (表現 Ki67 之細胞的百分比)，以 XENP24306 + XENP32803 的最敏感活體外 測定。參見圖 1 。0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803 的推薦的 FIH 劑量預期是安全的，期待提供最小的生物學效應且對人類治療媒介的反應具有最小的風險。以推薦的 FIH 劑量 (即，0.01 mg/kg) IV 投予人類的 XENP24306 + XENP32803 的 C_max 預計不會超過此 EC₂₀ 水平。在為期 5 週的食蟹獼猴 GLP 毒性研究中，人類的 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803 起始劑量的安全界限是 NOAEL 劑量 (0.03 mg/kg XENP24306 + XENP32803，Q2W) 的安全界限的三倍。以 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803 IV 投予人類的 XENP24306 + XENP32803 之 C_max 預計比在食蟹獼猴中以 NOAEL 劑量所觀察到的 C_max (0.75 ± 0.04 µg/mL；第一劑量) 低 3.3 倍。參見表 5 。此外，0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803 在人類中的 AUC 預期比在食蟹獼猴中以 NOAEL 劑量所觀察到的 AUC 低 1.8 倍 (表 5 )。總之，在相關的非臨床 GLP 毒性模型 (食蟹獼猴) 中，在 XENP24306 + XENP32803 的 NOAEL 所觀察到的 C_max 和 AUC 進一步支持基於 MABEL 的 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803 IV 的起始劑量，並對於研究提供足夠的安全界限 (表5 )。

XENP24306 + XENP32803 在人類中的給藥頻率為 Q2W，並得到為期 5 週的食蟹獼猴 GLP 毒性研究的支持，其中，XENP24306 + XENP32803 以 Q2W 提供時通常耐受性良好，且沒有明顯的急性毒性。給藥後一週後達到峰值、周邊 PD 反應 (靶細胞擴增，例如 NK 和 CD8⁺ T 細胞)，並且在投予 XENP24306 + XENP32803 後，這些周邊靶細胞計數在 2 週結束後朝向其基線下降。此外，在給藥後 8 至 16 小時間，PD 活性的細胞激素和趨化因子指示達到峰值，並在給藥後 14 天內恢復至基線 (參見實例 3)。因此，在 XENP24306 + XENP32803 的單一治療劑量遞增研究中，劑量限制毒性觀察期涵蓋研究治療的第一個週期，Q2W 的初始給藥頻率被認為是適當的。

表 5. 在建議的 FIH 劑量下估算 XENP24306 + XENP32803 的非臨床安全界限：在為期 5 週的食蟹獼猴 GLP 毒性研究中，XENP24306 + XENP32803 (0.01 mg/kg，Q2W) 的推薦起始劑量與 NOAEL (0.03 mg/kg，Q2W) 的劑量、AUC、及基於 C_max 的暴露倍數

	C_max (µg/mL)	AUC ( 天 ·µg/mL)^a	劑量 (mg/kg)
在人類中的起始劑量：0.01 mg/kg 預期值	0.23	0.86	0.01
食蟹獼猴中的 NOAEL：0.03 mg/kg 觀察值	0.75	1.56	0.03
安全界限	3.3x	1.8x	3x

AUC=濃度-時間曲線下的面積；Cmax=最大觀察血清濃度；GLP=優良實驗室操作；IV=靜脈內；NOAEL=未觀察到不良反應的水平；Q2W=每 2 週。^a 在為期 5 週的食蟹獼猴 GLP 毒性研究中，在以 NOAEL (0.03 mg/kg) 之第一劑量後，AUC_人類為預期的 AUC_0-14 (即，劑量/成比例的人類清除率) 及 AUC_食蟹獼猴為觀察的 AUC_0-14 。成比例的人類清除率=11.6 mL/天/kg。

實例 6 ： IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合的單一治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究

將進行一項單一治療，開放式，多中心，整體，劑量遞增研究以評估 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 的安全性、耐受性藥物動力學和活性。

研究包括長達 28 天的篩選期、治療期以及治療後最少 90 天的追蹤期。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入劑量遞增階段研究。XENP24306 + XENP32803 的起始劑量為 0.01 mg/kg Q2W。將以 IV 輸注投予 XENP24306 + XENP32803。對於各個連續群組，XENP24306 + XENP32803 劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的劑量限制性毒性 (DLT) 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定單一藥劑 XENP24306 + XENP32803 的最大耐受劑量 (MTD) 或最大投予劑量 (MAD)。圖 7 .

在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期 (Q2W) 的第一天藉由 IV 輸注接受 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803。將評估 XENP24306 + XENP32803 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP24306 + XENP32803 治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

加入單一治療劑量遞增群組 (即，回填群組) 的明確群組的病患必須患有以下 PD-L1 選擇的腫瘤類型之一：黑色素瘤、非小細胞肺癌 (NSCLC)、頭頸部鱗狀上皮細胞癌 (HNSCC)、三陰性乳癌 (TNBC)、泌尿上皮癌 (UCC)、腎細胞癌 (RCC)、小細胞肺癌 (SCLC)、GC、默克細胞癌 (MCC)、皮膚鱗狀細胞癌 (cSCC)、高度微衛星不穩定性 (MSI-H) 癌。

約有 185-240 名罹患局部晚期的、復發的、或在可用的標準療法後仍進展的轉移性不可治癒的惡性腫瘤；或已證明標準療法對他們無效或無法忍受或被認為不適當的；或研究藥劑的臨床試驗對於他們是公認的護理標準的病患，將加入研究的擴展群組。此擴展階段將由確定的病患群組組成，以更好地表徵 XENP24306 + XENP32803 作為單一藥劑的安全性、藥物動力學、PD 活性和初步抗腫瘤活性。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP24306 + XENP32803。臨時的 XENP24306 + XENP32803 推薦擴展劑量 (recommended expansion dose，RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。一旦提出 XENP24306 + XENP32803 的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

在整個研究期間以及在研究治療的最終劑量後或直到開始進行另一種全身性抗癌治療之前 (以先發生者為準) 至少 90 天，將密切監測所有病患的不良事件。不良事件將根據 NCI CTCAE v5.0 分級。

為了表徵 XENP24306 + XENP32803 作為單一藥劑的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由實性瘤反應評估標準 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST) v1.1 進行量測。對於基於免疫療法的改良 RECIST v1.1 (iRECIST) 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並更好地了解 XENP24306 + XENP32803 的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對作為單一藥劑投予的 XENP24306 + XENP32803 的活性進行初步評估： § XENP24306 + XENP32803 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

此研究的安全性目標是基於不良事件的發生率和嚴重程度以及目標生命體徵相對於基線的變化、或臨床實驗室測試結果、或 ECG 參數，評估 XENP24306 + XENP32803 作為單一藥劑投予時的安全性。

此研究的藥物動力學 (PK) 目標是基於指定時間點的 XENP24306 + XENP32803 血清濃度，表徵作為單一藥劑投予時的 XENP24306 + XENP32803 PK 特徵。

此研究的免疫原性目標是基於在基線時對 XENP24306 + XENP32803 的 ADAs 及在研究期間對 XENP24306 + XENP32803 的 ADAs 的發生率，評估以單一藥劑 (Ia) 投予時對 XENP24306 + XENP32803 的免疫反應。

實例 7 ： XENP24306 的單一治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究

將進行一項單一治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究以評估 XENP24306 的安全性、耐受性、藥物動力學和活性。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入劑量遞增階段研究。XENP24306 的起始劑量為 0.01 mg/kg Q2W。將以 IV 輸注投予 XENP24306。對於各個連續群組，XENP24306 的劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的劑量限制性毒性 (DLT) 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定單一藥劑 XENP24306 的最大耐受劑量 (MTD) 或最大投予劑量 (MAD)。圖 7 .

在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期 (Q2W) 的第一天藉由 IV 輸注接受 0.01 mg/kg XENP24306。將評估 XENP24306 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP24306 治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

約有 185-240 名罹患局部晚期的、復發的、或在可用的標準療法後仍進展的轉移性不可治癒的惡性腫瘤；或已證明標準療法對他們無效或無法忍受或被認為不適當的；或研究藥劑的臨床試驗對於他們是公認的護理標準的病患，將加入研究的擴展群組。此擴展階段將由確定的病患群組組成，以更好地表徵 XENP24306 作為單一藥劑的安全性、藥物動力學、PD活性和初步抗腫瘤活性。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP24306。臨時的 XENP24306 推薦擴展劑量 (RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。一旦提出 XENP24306 的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

為了表徵 XENP24306 作為單一藥劑的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由實性瘤反應評估標準 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST) v1.1 進行量測。對於基於免疫療法的改良 RECIST v1.1 (iRECIST) 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並更好地了解 XENP24306 的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對作為單一藥劑投予的 XENP24306 的活性進行初步評估： § XENP32803 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

此研究的安全性目標是基於不良事件的發生率和嚴重程度以及目標生命體徵相對於基線的變化、或臨床實驗室測試結果、或 ECG 參數，評估 XENP32803 作為單一藥劑投予時的安全性。

此研究的藥物動力學 (PK) 目標是基於指定時間點的 XENP32803 血清濃度，表徵作為單一藥劑投予時的 XENP32803 PK 特徵。

此研究的免疫原性目標是基於在基線時對 XENP32803 的 ADAs 及在研究期間對 XENP32803 的 ADAs 的發生率，評估以單一藥劑 (Ia) 投予時對 XENP32803 的免疫反應。

實例 8 ： XENP32803 的單一治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究

將進行一項單一治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究以評估 XENP32803 的安全性、耐受性、藥物動力學和活性。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入劑量遞增階段研究。XENP32803 的起始劑量為 0.01 mg/kg Q2W。將以 IV 輸注投予 XENP32803。對於各個連續群組，XENP32803 的劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的劑量限制性毒性 (DLT) 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定單一藥劑 XENP32803 的最大耐受劑量 (MTD) 或最大投予劑量 (MAD)。圖 7 .

在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期 (Q2W) 的第一天藉由 IV 輸注接受 0.01 mg/kg XENP32803。將評估 XENP32803 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP32803 治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

約有 185-240 名罹患局部晚期的、復發的、或在可用的標準療法後仍進展的轉移性不可治癒的惡性腫瘤；或已證明標準療法對他們無效或無法忍受或被認為不適當的；或研究藥劑的臨床試驗對於他們是公認的護理標準的病患，將加入研究的擴展群組。此擴展階段將由確定的病患群組組成，以更好地表徵 XENP32803 作為單一藥劑的安全性、藥物動力學、PD活性和初步抗腫瘤活性。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP32803。臨時的 XENP32803 推薦擴展劑量 (RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。一旦提出 XENP32803 的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

為了表徵 XENP32803 作為單一藥劑的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由實性瘤反應評估標準 (Response Evaluation Criteria in Solid Tumors，RECIST) v1.1 進行量測。對於基於免疫療法的改良 RECIST v1.1 (iRECIST) 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並更好地了解 XENP32803 的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對作為單一藥劑投予的 XENP32803 的活性進行初步評估： § XENP32803 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

實例 9 ： XENP24306 + XENP32803 與抗 PD-L1/PD-1 抑制劑組合的非臨床藥理學。活體內 研究。

在重複劑量研究的小鼠移植物抗宿主病 (GVHD) 模型中，測試 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 及 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 增強白血球增殖和效應子活性的能力。在移植有人 PBMC 的非肥胖型糖尿病/嚴重複合型免疫缺乏症 γ (NSG) 小鼠中，與 XENP16432 (一種抗 PD-1 抑制劑，給予固定劑量 3.0 mg/kg) 結合，評估 XENP24306 + XENP32803 (在 0.01 mg/kg、0.03 mg/kg、0.1 mg/kg 或 0.3 mg/kg 的四個劑量水平，在第 0 天、7 天、14 天和 21 天給藥)。此研究監測針對小鼠宿主的免疫反應，該反應可藉由 GVHD 的臨床體徵 (即體重減輕和死亡率) 以及免疫監測評估 (例如周邊人 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度升高) 來衡量。在以 0.3 mg/kg XENP24306 + XENP32803 治療的小鼠中觀察到劑量依賴性 GVHD 誘導活性的顯著體重降低，而在較低劑量下，檢測到 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度的顯著升高 (圖 5 )。在 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞計數中觀察到時間 (第 7、14、21 天) 和劑量依賴性增加。僅在第 14 天在兩個最高劑量水平下觀察到 CD4⁺ T 細胞的擴增。藉由 NK 細胞擴增增加所顯示的最小藥理活性劑量為 0.01 mg/kg，而需要更高劑量才能證明 CD8⁺ T 細胞和血清 IFN γ 顯著增強。因此，XENP24306 + XENP32803 促進了促成 GVHD 的 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞的增殖和效應子增強。相較於單獨的抗 PD-1 抗體，XENP24306 + XENP32803 (以 0.1 及 0.3 mg/kg 的劑量) 與抗 PD-1 抗體的組合的組別顯示出明顯較優越的 GVHD 誘導活性。

此研究描述 XENP24306 + XENP32803 (一種 IL15/IL15Rα-Fc 融合蛋白) 對人類免疫細胞的免疫刺激活性。重要的是，此研究證實使用 XENP24306 + XENP32803 與 XENP16432/抗 PD1 (一種抗 PD1 二價抗體) 組合治療以增強免疫反應的益處超越單獨使用抗 PD1 治療，表明藉由組合已批准的抗 PD-L1 藥劑與 XENP24306 + XENP32803 來改善臨床益處的可能性。

當單獨施用 XENP24306 + XENP32803 時，藉由 NK 細胞相對於未處理的對照組所展現的擴增增加，最小藥理活性劑量 (MPAD) 為 0.01 mg/kg。需要更高的劑量才能證明 T 細胞和血清 IFNγ 顯著增強以及 GVHD 的加劇。

相較於抗 PD1 單一藥劑治療，XENP24306 + XENP32803 與 XENP16432/抗 PD1 的組合治療亦促進白血球數量和 IFNγ 產生的顯著增強。尤其，隨著對於 XENP24306 + XENP32803 之增生作用的反應而擴大白血球數目，所測量的 XENP24306 + XENP32803 的最低血清濃度降低，據推測是由於標靶媒介的藥物在逐漸擴大的白血球群體上的處置所致。

與 XENP16432 (一種抗 PD-1 抑制劑，給予固定劑量 3.0 mg/kg) 組合，評估 XENP24306 + XENP32803 (在 0.1 mg/kg、0.3 mg/kg 或 1.0 mg/kg 的三種劑量水平，在第 0 天、7 天、14 天和 21 天給藥) 在小鼠中的抗腫瘤功效。使用移植有 MCF-7 人類乳癌細胞及人 PBMC 的 NSG 小鼠以確定 XENP24306 + XENP32803 與抗 PD-1 組合是否促進抗腫瘤反應。測量周邊 CD8⁺ T 細胞、CD4⁺ T 細胞和 NK 細胞計數及血清 IFNγ 濃度的隨時間和劑量的升高，證實 XENP24306 + XENP32803 促進抗腫瘤反應。圖 6.

在研究結束前，以 PBS 治療的動物 (A 組) 顯示出穩定的腫瘤生長。在研究過程中，沒有安樂死/發現 A 組動物死亡。到第 13 天，以 XENP16432/抗 PD1 治療的動物 (B 組) 最初顯示出與經 PBS 治療的動物 (A 組) 相似的腫瘤生長動力學。然而，從第 15 天開始，相較於經 PBS 治療的小鼠，XENP16432/經抗 PD1 治療的動物顯示出統計學上顯著的腫瘤生長抑制作用。在 XENP16432/經抗 PD1 治療的動物中見到的腫瘤體積減小與一般的同種異體抗腫瘤反應一致。在整個研究過程中，XENP16432/經抗 PD1 治療的小鼠沒有實施安樂死/發現死亡。最早在第 8 天與經 PBS 治療的動物比較，以 0.1 mg/kg XENP24306 + XENP32803 (E 組) 治療誘導出明顯的腫瘤大小減少。到第 13 天，相較於經 PBS 治療的小鼠，XENP24306 + XENP32803 的所有三個劑量水平 (1.0 mg/kg、0.3 mg/kg 和 0.1 mg/kg；C 組、D 組和 E 組) 均顯示出明顯且劑量依賴性的腫瘤生長降低。在研究結束之前，腫瘤的體積仍然減少。對於經 0.1 mg/kg XENP24306 + XENP32803 治療的動物 (E 組)，最早在第 8 天與單一藥劑 XENP16432/抗 PD1 (B 組) 治療相比，經單一藥劑 XENP24306 + XENP32803 治療亦產生顯著的腫瘤生長抑制作用。到第 13 天，1.0 mg/kg XENP24306 + XENP32803 (C 組) 在腫瘤體積減小方面獲得改善明顯超越 XENP16432/抗 PD1，而 0.3 mg/kg XENP24306 + XENP32803 (D 組) 明顯超越 XENP16432/抗 PD1 發生在第 19 天。

此外，相較於抗 PD-1 (單獨) 治療組別，更高劑量的 XENP24306 + XENP32803 (0.3 mg/kg 和 1.0 mg/kg) 合併抗 PD-1 抑制劑在腫瘤生長方面顯示出顯著更大的減少，更高的周邊 CD8⁺ T 細胞和 NK 細胞擴增，及 IFNγ 升高。特別地，相較於 PBS 對照和單一藥劑 XENP16432/抗 PD1 二組，當與 XENP16432/抗 PD1 合併給藥時，0.3 和 0.1 mg/kg XENP24306 + XENP32803 (G 組和 H 組) 最早在第 8 天即產生劑量依賴性和統計學上顯著的腫瘤體積減少。於第 11 天，相較於 PBS 和單一藥劑 XENP16432/抗 PD1 二組，XENP24306 + XENP32803 與 XEN16432 的所有三組組合劑量組別均顯示出劑量依賴性、統計學上顯著的腫瘤尺寸減小。

此研究敘述 XENP24306 + XENP32803 (一種 IL15/IL15Rα-Fc 融合蛋白) 的抗腫瘤活性。重要的是，此研究亦證實使用 XENP24306 + XENP32803 與 XENP16432 (一種抗 PD1 二價抗體) 一起投予的組合治療以增強抗腫瘤免疫反應的額外益處超越單獨使用抗 PD1 治療，表明藉由組合已批准的抗 PD-L1 藥劑與 XENP24306 + XENP32803 來改善臨床益處的可能性。劑量依賴性的 XENP24306 + XENP32803 的抗腫瘤活性與周邊血液白血球數量的劑量依賴性增加即 IFNγ 產生的升高有關。

在此抗腫瘤模型中，包括最低水平的 0.1 mg/kg XENP24306 + XENP32803 的所有劑量水平均具有活性，且 XENP24306 + XENP32803 的所有劑量水平均促進白血球擴增及 IFNγ 產生的增加，且 XENP24306 + XENP32803 最高的 1 mg/kg 劑量媒介出最大作用。相較於抗 PD1 單一治療，XENP24306 + XENP32803 與 XENP16432/抗 PD1 的組合治療亦導致白血球數量和 IFNγ 產生的增加提升。

實例 10 ： XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗的組合治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究研究

進行一項組合治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究，以評估 XENP24306 (例如~82%) + XENP32803 (例如~18%) 與抗 PD-L1/PD-1 抗體組合 (例如阿替利珠單抗) 的安全性、耐受性藥物動力學和活性。

研究包括長達 28 天的篩選期、治療期以及治療後最少 90 天的追蹤期。考慮加入罹患 PD-L1 選擇的腫瘤的組合治療擴展群組中的病患可在 28 天的篩選期間之前對 PD-L1 的狀態進行組織預篩選。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入對於研究的組合治療部分的劑量遞增階段。將以 IV 輸注投予 XENP24306 + XENP32803 及阿替利珠單抗。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期的第一天藉由 IV 輸注接受 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合。XENP24306 + XENP32803 的組合治療起始劑量為每兩週 0.01 mg/kg IV。阿替利珠單抗將在每個 14 天週期的第 1 天藉由 IV 輸注 840 mg 固定劑量與 XENP24306 + XENP32803 組合投予。將在 XENP24306 + XENP32803 之後及隨後的觀察期投予阿替利珠單抗。

對於各個連續群組，XENP24306 + XENP32803 的劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的 DLT 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合的 MTD (或 MAD)。圖 8 .

加入組合治療劑量遞增群組 (即，回填群組) 的明確群組的病患必須符合患有以下 PD-L1 選擇的腫瘤類型之一：黑色素瘤、非小細胞肺癌 (NSCLC)、頭頸部鱗狀上皮細胞癌 ( HNSCC)、三陰性乳癌 (TNBC)、泌尿上皮癌 (UCC)、腎細胞癌 (RCC)、小細胞肺癌 (SCLC)、胃癌 (GC)、默克細胞癌 (MCC)，皮膚鱗狀細胞癌 (cSCC)、高度微衛星不穩定性 (MSI-H) 癌。

總計，在大約 25-35 個全球調查地點，最多可加入 225-350 名病患至本研究中。在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合的起始劑量將不高於在該研究 (實例 6) 之單一治療部分中證實 PD 活性的 XENP24306 + XENP32803 劑量以下一個劑量水平。如果 0.01 mg/kg 的初始單一治療 XENP24306 + XENP32803 的劑量水平證實 PD 活性，則在初始阿替利珠單抗組合群組中，XENP24306 + XENP32803 的起始劑量將不高於 0.005 mg/kg。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP24306 + XENP32803 及阿替利珠單抗。臨時的 XENP24306 + XENP32803 推薦擴展劑量 (recommended expansion dose，RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。

一旦提出 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

將評估 XENP24306 + XENP32803 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

為了表徵 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由 RECIST v1.1 進行量測。iRECIST 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並更好地了解 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對於 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的活性進行初步評估： § XENP24306 + XENP32803 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為在連續兩次相隔 ≥4 週的完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

此研究的安全性目標是基於不良事件的發生率和嚴重程度以及目標生命體徵相對於基線的變化、或臨床實驗室測試結果、或 ECG 參數，評估 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的安全性。

此研究的藥物動力學 (PK) 目標是基於指定時間點的 XENP24306 + XENP32803 血清濃度，表徵與阿替利珠單抗組合投予時的 XENP24306 + XENP32803 PK 特徵。

此研究的免疫原性目標是基於對 XENP24306 + XENP32803 的 ADAs 及在研究期間對 XENP24306 + XENP32803 的 ADAs 的發生率，評估對 XENP24306 + XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的免疫反應。

實例 11 ： XENP24306 與阿替利珠單抗組合治療、開放標籤、多中心、全球的、劑量遞增研究

進行一項組合治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究，以評估 XENP24306 與抗 PD-L1/PD-1 抗體 (例如阿替利珠單抗) 組合的安全性、耐受性藥物動力學和活性。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入對於研究的組合治療部分的劑量遞增階段。將藉由 IV 輸注投予 XENP24306 及阿替利珠單抗。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期的第一天藉由 IV 輸注接受 XENP24306 與阿替利珠單抗組合。XENP24306 的組合治療起始劑量為每兩週 0.01 mg/kg IV。阿替利珠單抗將在每個 14 天週期的第 1 天藉由 IV 輸注 840 mg 固定劑量與 XENP24306 組合投予。將在 XENP24306 之後及隨後的觀察期投予阿替利珠單抗。

對於各個連續群組，XENP24306 的劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的 DLT 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定 XENP24306 與阿替利珠單抗組合的 MTD (或 MAD)。圖 8 .

總計，在大約 25-35 個全球調查地點，最多可加入 225-350 名病患至本研究中。在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。XENP24306 合併阿替利珠單抗的起始劑量將不高於在該研究 (實例 6) 之單一治療部分中證實 PD 活性的 XENP24306 劑量以下的一個劑量水平。如果 0.01 mg/kg 的初始單一治療 XENP24306 的劑量水平證實 PD 活性，則在初始阿替利珠單抗組合群組中，XENP24306 的起始劑量將不高於 0.005 mg/kg。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP24306 及阿替利珠單抗。臨時的 XENP24306 推薦擴展劑量 (RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。

一旦提出 XENP24306 與阿替利珠單抗組合的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

將評估 XENP24306 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP24306 與阿替利珠單抗組合治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

為了表徵 XENP24306 與阿替利珠單抗組合的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間點採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由 RECIST v1.1 進行量測。iRECIST 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並允許更好地了解 XENP24306 與阿替利珠單抗組合的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對於 XENP24306 與阿替利珠單抗組合投予時的活性進行初步評估： § XENP24306 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為在連續兩次相隔 ≥4 週的完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

此研究的安全性目標是基於不良事件的發生率和嚴重程度以及目標生命體徵相對於基線的變化、或臨床實驗室測試結果、或 ECG 參數，評估 XENP24306 與阿替利珠單抗組合投予時的安全性。

此研究的藥物動力學 (PK) 目標是基於指定時間點的 XENP24306 血清濃度，表徵與阿替利珠單抗組合投予時的 XENP24306 PK 特徵。

此研究的免疫原性目標是基於對 XENP24306 的 ADAs 及在研究期間對 XENP24306 和阿替利珠單抗的 ADAs 的發生率，評估對 XENP24306 與阿替利珠單抗組合投予時的免疫反應。

實例 12 ： XENP32803 與阿替利珠單抗組合治療、開放標籤、多中心、全球的、劑量遞增研究

進行一項組合治療、開放式、多中心、整體、劑量遞增研究，以評估 XENP32803 與抗 PD-L1/PD-1 抗體 (例如阿替利珠單抗) 組合的安全性、耐受性藥物動力學和活性。

病患將加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段。

約有 21-54 名罹患局部晚期的、復發的、或轉移性不可治癒的實性瘤病患將加入對於研究的組合治療部分的劑量遞增階段。將藉由 IV 輸注投予 XENP32803 及阿替利珠單抗。在確認資格後，病患將在每個 14 天週期的第一天藉由 IV 輸注接受 XENP32803 與阿替利珠單抗組合。XENP32803 的組合治療起始劑量為每兩週 0.01 mg/kg IV。阿替利珠單抗將在每個 14 天週期的第 1 天藉由 IV 輸注 840 mg 固定劑量與 XENP32803 組合投予。將在 XENP32803 之後及隨後的觀察期投予阿替利珠單抗。

對於各個連續群組，XENP32803 的劑量將增加之前劑量水平的 100%，直到觀察到安全閾值 (定義為在給定群組中的 DLT 評估窗口期間，在至少 2 名病患中有 1 名病患的 DLT 或在至少 2 名病患中沒有歸因於另一可明確識別之原因的 ≥2 級主要器官不良事件)。隨後，將按照 3 + 3 + 3 設計，以遞增劑量水平各自評估 3-9 名病患的群組，以確定 XENP32803 與阿替利珠單抗組合的 MTD (或 MAD)。圖 8 .

總計，在大約 25-35 個全球調查地點，最多可加入 225-350 名病患至本研究中。在篩選期間 (持續 ≤28 天)，將首先評估此研究中的病患是否合格。XENP32803 合併阿替利珠單抗的起始劑量將不高於在該研究 (實例 6) 之單一治療部分中證實 PD 活性的 XENP32803 劑量以下的一個劑量水平。如果 0.01 mg/kg 的初始單一治療 XENP32803 的劑量水平證實 PD 活性，則在初始阿替利珠單抗組合群組中，XENP32803 的起始劑量將不高於 0.005 mg/kg。將在擴展階段藉由 IV 輸注投予 XENP32803 及阿替利珠單抗。臨時的 XENP32803 推薦擴展劑量 (RED) 將被建議等於或低於劑量遞增中所既定的 MTD/MAD。

一旦提出 XENP32803 與阿替利珠單抗組合的 RED，將在擴展階段加入額外的病患，並以 RED 治療。

將評估 XENP32803 PK。在劑量遞增期間，對於 XENP32803 與阿替利珠單抗組合治療的前八個週期、在擴展期間的前兩個週期，每週藉由體檢和血液採集對病患進行常規血液及代謝實驗室評估，及在此後頻率降低。腫瘤評估將在基線和研究開始後進行。

為了表徵 XENP32803 與阿替利珠單抗組合的藥物動力學、免疫原性反應和 PD 特性，在給藥前後的不同時間點採集血液樣品。

病患將在篩選 (基線) 及研究期間的固定間隔接受腫瘤評估，其將藉由 RECIST v1.1 進行量測。iRECIST 亦將用於此研究中，以更好地表徵與癌症免疫療法 (CIT) 相關的不同反應模式，並允許更好地了解 XENP32803 與阿替利珠單抗組合的初步活性特徵。iRECIST 旨在補充此研究中的標準 RECIST v1.1，以使研究者能夠對病患的益處和風險進行綜合評估。

此研究的活動目標是基於以下端點對於 XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的活性進行初步評估： § XENP32803 的血清濃度； § 具有不良事件之參與者的百分比； § 客觀緩解率 (Objective response rate，ORR)，定義為在連續兩次相隔 ≥4 週的完全緩解 (CR) 或部分緩解 (PR) 的病患比例； § 緩解持續時間 (Duration of response，DOR)，定義為從首次有記錄的客觀反應至疾病進展或任何原因引起之死亡 (以先發生者為準) 的時間； § 加入後疾病無惡化存活期 (Progression-free survival，PFS)，定義為從加入至疾病進展的首次發生或因任何原因死亡 (以先發生者為準) 的時間；及 § 加入後的整體存活期 (Overall survival，OS)，定義為從加入至因任何原因死亡的時間。

此研究的安全性目標是基於不良事件的發生率和嚴重程度以及目標生命體徵相對於基線的變化、或臨床實驗室測試結果、或 ECG 參數，評估 XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的安全性。

此研究的藥物動力學 (PK) 目標是基於指定時間點的 XENP32803 血清濃度，表徵與阿替利珠單抗組合投予時的 XENP32803 PK 特徵。

此研究的免疫原性目標是基於對 XENP32803 的 ADAs 及在研究期間對 XENP32803 和阿替利珠單抗的 ADAs 的發生率，評估對 XENP32803 與阿替利珠單抗組合投予時的免疫反應。

儘管本揭示為了清楚理解的目的以說明和實例的方式提供一些細節，但對於本領域技術人員顯而易見的是，在不脫離本揭示的精神或範圍的情況下，可進行各種改變和修飾。因此，前述說明和實例不應被解釋為限制性的。

實例 13 ： IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白單獨或與阿替利珠單抗組合之開放式、多中心、全球性、劑量遞增研究

進行一項單一治療、開放式、多中心、全球性、劑量遞增研究以評估根據實例 6 的 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的組合 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) (「XENP24306 + XENP32803」)) 的安全性、耐受性藥物動力學和活性，及進行組合治療、開放式、多中心、全球性、劑量遞增研究以評估根據實例 10 的 XENP24306 + XENP32803 與抗 PD-L1/PD-1 抗體 (例如阿替利珠單抗) 組合的安全性、耐受性藥物動力學和活性。

招募十二名罹患實性瘤的病患至本研究中。在研究的劑量遞增組 (階段 1a) 中，在每 14 天週期 (Q2W) 的第一天，藉由 IV 輸注，使一名病患接受 0.01 mg/ml XENP24306 + XENP32803；三名病患接受 0.02 mg/ml XENP24306 + XENP32803；三名病患接受 0.04 mg/ml XENP24306 + XENP32803；兩名病患接受 0.06 mg/ml XENP24306 + XENP32803。參見，實例 6 和圖 7。這些病患的藥效學 (PD) 活性藉由 CD8+ T 細胞及/或 NK 細胞的擴增進行監測。

在階段 1a 劑量遞增研究中，使用 XENP24306 + XENP32803 觀察到 CD3-CD16+/CD56+ NK 細胞的劑量依賴性擴增。研究的組合治療組 (階段 1b) 的 XENP24306 + XENP32803 起始劑量設定為 0.01 mg/kg XENP24306 + XENP32803，且三名病患藉由 IV Q2W 接受 0.01 mg/ml XENP24306 + XENP32803 與 840 mg 阿替利珠單抗的組合。參見，實例 10 和圖 8。

圖 1A 和圖 1B 顯示 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合促進人 PBMC 中人 NK 細胞 (圖 1A ) 及 CD8⁺ T 細胞 (圖 1B ) 的劑量依賴性增殖。用指定總濃度的 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合治療來自 22 個獨特人類供體的 PBMC 4 天，並藉由流式細胞術確定 CD3^- CD56⁺ NK 細胞 (圖 1A) 或 CD3⁺ CD8⁺ CD16^- T 細胞 (圖 1B) 的 Ki67⁺ (細胞增殖標誌物) 頻率。每個點表示 22 個供體的平均值，誤差線表示 SEM。使用最小平方法生成曲線擬合。EC₅₀ 值藉由使用激動劑與反應的非線性回歸分析，使用可變斜率 (四參數) 方程式來確定。[CD=分化簇；NK=自然殺手；PBMC=周邊血液單核細胞]。圖 2 顯示 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合、重組野生型 IL-15 (rIL15) 和野生型 IL-15/野生型 IL-15Rα 異二聚體 Fc 融合蛋白 (XENP22853) 在人 PBMC 中誘導 CD8⁺ 末端效應子 T 細胞增殖的比較。[EC₅₀ =最大有效濃度的一半]。圖 3 顯示一圖，其表示用重複劑量的 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 及不同劑量 (0；0.03 mg/kg；0.2 mg/kg 及 0.6 mg/kg) 處理的食蟹獼猴全血中的 CD8β⁺ T 細胞 (圖3A (雄性) 和 3B (雌性)) 和 NK 細胞 (圖3C (雄性) 和 3D (雌性)) 的絕對計數。以抗體對食蟹獼猴的全血進行染色，以鑑定作為 CD45⁺ CD3⁺ CD8β⁺ CD4^- CD16^- 的 CD8⁺ T 細胞及作為 CD45⁺ CD3^- CD16⁺ 的 NK 細胞。每個數據點表示每組 3 至 5 隻食蟹獼猴的平均值；誤差線表示 SD。圖 4 為表示在異二聚體蛋白 Q2W 靜脈內給藥 (0.03 mg/kg；0.2 mg/kg 和 0.6 mg/kg 的劑量) 總共 3 劑後，食蟹獼猴 (組合雄性和雌性) 的平均 (±SD) 異二聚體蛋白 (XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合) 血清濃度 (ng/mL) 與時間 (天) 的關係曲線之圖。圖 5 為表示移植有人 PBMC 的非肥胖型糖尿病/嚴重複合型免疫缺乏症 γ (NSG) 小鼠的體重減輕的圖，其中在存在或不存在 3 mg/kg 之 XENP16432 (其為一種抗 PD1 二價抗體) 下，以各種濃度投予 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合。樣品：(A) PBS；(B) 3.0 mg/kg XENP16432；(C) 0.3 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(D) 0.1 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(E) 0.03 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(F) 0.01 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(G) 0.3 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432；(H) 0.1 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432；(I) 0.03 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432；及 (J) 0.01 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432。圖 6 為表示移植有人類腫瘤細胞 (pp65-MCF7) 和作為人類白血球來源的 huPBMC 的非肥胖型糖尿病/嚴重複合型免疫缺乏症 γ (NSG) 小鼠中腫瘤體積變化的組別中位數的圖，其中在存在或不存在 3 mg/kg 的 XENP16432 下，以各種濃度投予 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合。樣品：(A) PBS；(B) 3.0 mg/kg XENP16432；(C) 1.0 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(D) 0.3 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(E) 0.1 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合；(F) 1.0 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432；(G) 0.3 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432；及 (H) 0.1 mg/kg 之 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合 + 3.0 mg/kg XENP16432。圖 7 為 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白 (例如，XENP24306、XENP32803 或 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合) 的單一療法研究圖式，顯示病患加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段以及這兩個階段的細節。DL=劑量水平；DLT=劑量限制毒性；MTD=最大耐受劑量；PD=藥效學；Q2W=每 2 週；Q3W=每 3 週；Q4W=每 4 週；RCC=腎細胞癌；RED=建議的擴展劑量。^a 藉由周邊血液 NK 細胞及 CD8⁺ T 細胞的計數和 Ki67 染色來評估 PD 作用。^b 在實例 6 中定義從 n=1/劑量水平變化為 3+3+3 設計的安全閾值。^c 實例 6 中定義從 ≤100% 劑量增量變化為 ≤50% 劑量增量的安全閾值。^d 如果累積毒性導致不可接受的耐受性 (例如，IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的頻繁劑量延遲)，則 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白的給藥頻率可能會降低。圖 8 為 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白 (例如，XENP24306、XENP32803 或 XENP24306 (~82%) 和 XENP32803 (~18%) 的組合) 組合阿替利珠單抗 (抗 PD-L1 抗體) 的組合療法研究圖式，顯示病患加入兩個階段：劑量遞增階段和擴展階段以及這兩個階段的細節。Bx=生檢；CIT=癌症免疫療法；cSCC=皮膚鱗狀細胞癌；DL=劑量水平；DLT=劑量限制毒性；GC=胃癌；HNSCC=頭頸部鱗狀上皮細胞癌；MCC=默克細胞癌；MSI-H=微衛星不穩定性高；MTD=最大耐受劑量；NSCLC=非小細胞肺癌；PD=藥效學；Q2W=每 2 週；Q3W=每 3 週；Q4W=每 4 週；RCC=腎細胞癌；RED=建議的擴展劑量；SCLC=小細胞肺癌；TBD=待確定；TNBC=三陰性乳癌；UCC=泌尿上皮癌。^a 實例 6 中定義從^≤ 100% 劑量增加增量切換至^≤ 50% 的安全閾值。^b 如果初始單一療法 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白劑量水平 0.01 mg/kg 證實 PD 活性，則在初始組合療法阿替利珠單抗組合群組中，IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白起始劑量將不高於 0.005 mg/kg。^c 如果累積毒性導致不可接受的耐受性 (例如，IL15 /IL15Rα 異二聚體蛋白的頻繁劑量延遲)，則 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白/阿替利珠單抗的給藥頻率可能會降低。^d 實例 6 中定義告知初始 IL15/IL15Rα 異二聚體蛋白劑量水平的 PD 作用。^e 病患必須已經接受過抗 PD-L1/PD-1 抑制劑作為單一藥劑或組合，並從先前的治療中獲得臨床效益。^f 適應症包括黑色素瘤、NSCLC、HNSCC、TNBC、UCC、RCC、SCLC、GC、MCC、cSCC、MSI-H 癌。^g 將加入患有黑色素瘤、RCC、UCC、NSCLC、HNSCC 及 TNBC 的病患。^h PD-L1 閾值在指示之間可能有所不同，並將被確定。圖 9 提供 XENP24306 單體 1 (SEQ ID NO: 9)、XENP24306 單體 2 (SEQ ID NO: 10)、XENP32803 單體 1 (SEQ ID NO:9) 及 XENP32803 單體 2 (SEQ ID NO: 16) 的胺基酸序列。在單體 1 序列中，IL15 部分用底線標出，連接子用斜線偏移，並用粗體底線標出，且 Fc 部分在第二斜線後且不包含任何格式。在單體 2 序列中，IL15Rα 部分用底線標出，連接子用斜線偏移，並用粗體底線標出，且 Fc 部分在第二斜線後且不包含任何格式。圖 10A 和圖 10B 提供人體 IL-15 前體蛋白 (全長人體 IL-15) (SEQ ID NO: 2)、成熟或截短人體 IL-15 蛋白 (SEQ ID NO: 1)、全長人體 IL-15Rα 蛋白 (SEQ ID NO: 3)、人體 IL-15Rα 蛋白的胞外結構域 (SEQ ID NO: 54)、人體 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域 (SEQ ID NO: 4)、全長人體 IL-15Rβ 蛋白 (SEQ ID NO: 55) 和人體 IL-15Rβ 蛋白的胞外結構域 (SEQID NO: 56) 的胺基酸序列。圖 11A 至圖 11G 提供 XENP2853 野生型 IL-15-Fc 第一單體 (SEQ ID NO: 11)、XENP2822 蛋白 (SEQ ID NO: 19 和 SEQ ID NO: 20)、XENP23504 蛋白 (SEQ ID NO: 29 和 SEQ ID NO: 30)、XENP24045 蛋白 (SEQ ID NO: 23 和 SEQ ID NO: 24)、XENP22821 蛋白 (SEQ ID NO: 17 和 SEQ ID NO: 18)、XENP23343 蛋白 (SEQ ID NO: 31 和 SEQ ID NO: 32)、XENP23557 蛋白 (SEQ ID NO: 21 和 SEQ ID NO: 22)、XENP24113 蛋白 (SEQ ID NO: 33 和 SEQ ID NO: 34)、XENP24051 蛋白 (SEQ ID NO: 25 和 SEQ ID NO: 26)、XENP24341 蛋白 (SEQ ID NO: 35 和 SEQ ID NO: 36)、XENP24052 蛋白 (SEQ ID NO: 27 和 SEQ ID NO: 28)、及 XENP24301 蛋白 (SEQ ID NO: 37 和 SEQ ID NO: 38) 的胺基酸序列。

Claims

一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。
一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。
一種用於誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E；S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。
一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L：L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。
一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；其中，該第一 Fc 結構域和該第二 Fc 結構域包含選自由下列各項所組成之群組之一組胺基酸取代：S267K/L368D/K370S：S267K/S364K/E357Q；S364K/E357Q：L368D/K370S；L368D/K370S：S364K；L368E/K370S：S364K；T411E/K360E/Q362E：D401K；L368D/K370S：S364K/E357L；K370S：S364K/E357Q；S267K/S364K/E357Q：S267K/L368D/K370S；L368D/K370S：S364K/E357Q；S364K：L368D/K370S；S364K：L368E/K370S；D401K：T411E/K360E/Q362E； S364K/E357L： L368D/K370S；及 S364K/E357Q：K370S，根據 EU 編號。
如請求項 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。
如請求項 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/L234V/L235A/G236del/S239K；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K；E233P/L234V/L235A/G236del/ S239K/A327G；E233P/L234V/L235A/G236del/S267K/A327G；及 E233P/L234V/L235A/G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG1 或 IgG3 Fc 結構域。
如請求項 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由根據 EU 編號之 L328R；S239K；及 S267K 所組成之群組之胺基酸取代；且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG2 Fc 結構域。
如請求項 1-6 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域及/或第二 Fc 結構域各自獨立地進一步包含選自由下列各項所組成之群組之胺基酸取代：根據 EU 編號之 G236R/L328R；E233P/F234V/L235A/G236del/S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；E233P/F234V/L235A/G236del/ S239K；E233P/F234V/L235A/G236del/S267K；及 E233P/F234V/L235A/ G236del，且其中，該 Fc 結構域衍生自 IgG4 Fc 結構域。
如請求項 1-9 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含選自由 N1D、N4D、D8N、D30N、D61N、E64Q、N65D 及 Q108E 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
如請求項 1-9 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白和該 IL-15Rα 蛋白分別包含選自下列各項之一組胺基酸取代或添加：E87C：65DPC；E87C：65DCA；V49C：S40C；L52C：S40C；E89C：K34C；Q48C：G38C；E53C：L42C；C42S：A37C 及 L45C：A37C。
如請求項 1-11 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含選自由 SEQ ID NO:1 和 SEQ ID NO:2 所組成之群組之多肽序列。
如請求項 1-12 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白包含選自由 SEQ ID NO:3 和 SEQ ID NO:4 所組成之群組之多肽序列。
如請求項 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；其中，該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。
如請求項 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。
如請求項 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 L368D 及 K370S；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、S364K 及 E357Q；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。
如請求項 1-5 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q；其中，該第二 Fc 結構域包含胺基酸取代 K246T、L368D 及 K370S；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 C220S、E233P、L234V、L235A、G236del、S267K、M428L 及 N434S；其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D；且其中，該 IL-15Rα 蛋白包含 SEQ ID NO:4。
如請求項 1-17 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 1-18 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 1-19 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，且該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 18-20 中任一項之方法，其中，該第一連接子及/或第二連接子獨立地為可變長度的 Gly-Ser 連接子。
如請求項 21 之方法，其中，該第一連接子及/或該第二連接子獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之連接子：(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser- Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID No: 42)，其中，n 為 1 至 5 之間的整數。
如請求項 1-22 中任一項之方法，其中，該異二聚體蛋白選自由下列各項所組成之群組：XENP22822、XENP23504、XENP24045、XENP24306、XENP22821、XENP23343、XENP23557、XENP24113、XENP24051、XENP24341、XENP24052、XENP24301 及 XENP32803 蛋白。
一種治療有此需要之個體的實性瘤之方法，該方法包含向該個體投予治療有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
一種用於誘導 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
一種用於誘導 CD8⁺ 效應記憶 T 細胞和 NK 細胞增殖之方法，該方法包含向個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
一種用於在個體中誘導 IFNγ 產生之方法，該方法包含向該個體投予有效量之異二聚體蛋白，其中，該異二聚體蛋白包含：(i) 含 IL-15 蛋白和第一 Fc 結構域的第一單體，其中，該 IL-15 蛋白共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，及 (ii) 含 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域和第二 Fc 結構域的第二單體，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端；且其中，該第一 Fc 結構域和第二 Fc 結構域各自包含根據 EU 編號之胺基酸取代 E233P、L234V、L235A、G236del 及 S267K；且其中，該 IL-15 蛋白包含 N65D 胺基酸取代及選自由 N4D、D30N、E64Q 所組成之群組之一種或多種胺基酸取代。
如請求項 24-28 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，根據 EU 編號。
如請求項 24-28 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 S364K 及 E357Q，且該第二 Fc 結構域進一步包含胺基酸取代 L368D 及 K370S，根據 EU 編號。
如請求項 24-30 中任一項之方法，其中，該第一 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。
如請求項 24-30 中任一項之方法，其中，該第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 Q295E、N384D、Q418E 及 N421D。
如請求項 24-32 中任一項之方法，其中，該第二 Fc 結構域進一步包含根據 EU 編號之胺基酸取代 K246T。
如請求項 24-33 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含胺基酸取代 D30N、E64Q 及 N65D。
如請求項 24-34 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白包含 SEQ ID NO: 5 所示之胺基酸序列。
如請求項 24-35 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白的 sushi 結構域包含 SEQ ID NO: 4 所示之胺基酸序列。
如請求項 24-36 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 24-37 中任一項之方法，其中，該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 24-38 中任一項之方法，其中，該 IL-15 蛋白經由第一連接子共價接附於該第一 Fc 結構域的 N 端，且該 IL-15Rα 蛋白經由第二連接子共價接附於該第二 Fc 結構域的 N 端。
如請求項 37-39 中任一項之方法，其中，該第一連接子及/或第二連接子獨立地為可變長度的 Gly-Ser 連接子。
如請求項 40 之方法，其中，該第一連接子及/或該第二連接子獨立地包含選自由下列各項所組成之群組之連接子：(Gly-Gly-Gly-Gly-Ser)n (SEQ ID NO: 39)、(Ser-Ser-Ser- Ser-Gly)n (SEQ ID NO: 40)、(Gly-Ser-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID NO: 41) 及 (Gly-Gly-Ser-Gly-Gly)n (SEQ ID No: 42)，其中，n 為 1 至 5 之間的整數。
如請求項 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且該第二單體包含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列。
如請求項 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該第一單體包含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列，且該第二單體包含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列。
如請求項 1-5 及 24-28 中任一項之方法，其中，該異二聚體蛋白為 XENP24306、XENP32803、或其組合。
如請求項 1-44 中任一項之方法，其中，將第一異二聚體蛋白與第二異二聚體蛋白的組合投予該個體。
如請求項 45 之方法，其中，該第一異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 10 所示之胺基酸序列的第二單體；且該第二異二聚體蛋白包含：含 SEQ ID NO: 9 所示之胺基酸序列的第一單體，及含 SEQ ID NO: 16 所示之胺基酸序列的第二單體。
如請求項 45 或 46 之方法，其中，同時投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。
如請求項 45 或 46 之方法，其中，依序投予該第一異二聚體蛋白和第二異二聚體蛋白。
如請求項 1、6-24 及 29-48 中任一項之方法，其中，該實性瘤是局部晚期的、復發的或轉移的。
如請求項 1、6-24 及 29-48 中任一項之方法，其中，該實性瘤選自由下列各項所組成之群組：鱗狀細胞癌、皮膚鱗狀細胞癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、胃腸道癌、胃癌、胰臟癌、神經膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、脂肪肉瘤、軟組織肉瘤、泌尿上皮癌、輸尿管和腎盂、多發性骨髓瘤、骨肉瘤、肝腫瘤、黑色素瘤、胃癌、乳癌、大腸癌、大腸直腸癌、子宮內膜癌、唾液腺癌、腎細胞癌、肝癌、食道癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌、默克細胞癌、生殖細胞癌、高度微衛星不穩定性癌症和頭頸部鱗狀上皮細胞癌。
如請求項 50 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。
如請求項 51 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、腎細胞癌和非小細胞肺癌。
如請求項 51 之方法，其中，該實性瘤選自黑色素瘤、非小細胞肺癌、頭頸部鱗狀上皮細胞癌和三陰性乳癌。
如請求項 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體先前未被投予藥劑治療該實性瘤。
如請求項 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體目前正被投予檢查點抑制劑。
如請求項 1、6-24 及 29-53 中任一項之方法，其中，該個體先前已經被投予檢查點抑制劑。
如請求項 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 PD-1。
如請求項 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 PD-L1。
如請求項 55 或 56 之方法，其中，該檢查點抑制劑靶向 CTLA-4。
如請求項 1-59 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：約 0.0025 mg/kg、約 0.005 mg/kg、約 0.01 mg/kg、約 0.015 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.025 mg/kg、約 0.03 mg/kg、約 0.04 mg/kg、約 0.05 mg/kg、約 0.06 mg/kg、約 0.08 mg/kg、約 0.1 mg/kg、約 0.12 mg/kg、約 0.16 mg/kg、約 0.2 mg/kg、約 0.24 mg/kg 及約 0.32 mg/kg 體重。
如請求項 60 之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：約 0.01 mg/kg、約 0.02 mg/kg、約 0.04 mg/kg 及約 0.06 mg/kg 體重。
如請求項 1-60 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：0.0025 mg/kg、0.005 mg/kg、0.01 mg/kg、0.015 mg/kg、0.02 mg/kg、0.025 mg/kg、0.03 mg/kg、0.04 mg/kg、0.05 mg/kg、0.06 mg/kg、0.08 mg/kg、0.10 mg/kg、0.16 mg/kg、0.20 mg/kg、0.24 mg/kg 及 0.32 mg/kg 體重。
如請求項 62 之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之劑量投予該異二聚體蛋白或異二聚體蛋白的組合：0.01 mg/kg、0.02 mg/kg、0.04 mg/kg 及 0.06 mg/kg 體重。
如請求項 1-63 中任一項之方法，其中，以選自由下列各項所組成之群組之頻率投予該異二聚體蛋白：Q1W、Q2W、Q3W、Q4W、Q5W 及 Q6W。
如請求項 64 之方法，其中，以 Q2W 之頻率投予該異二聚體蛋白。
如請求項 1-65 中任一項之方法，其中，該方法進一步包含投予該個體靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑。
如請求項 66 之方法，其中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為抗 PD-1 抗體。
如請求項 67 之方法，其中，該抗 PD-1 抗體選自納武單抗 (nivolumab)、帕博利珠單抗 (pembrolizumab)、匹定利珠單抗 (pidilizumab)、西米普利單抗 (cemiplimab)、斯巴達珠單抗 (spartalizumab)、卡瑞利珠單抗 (camrelizumab)、信迪利單抗 (sintilimab)、替雷利珠單抗 (tislelizumab)、特瑞普利單抗 (toripalimab)、MDX-1106、AMP-514 及 AMP-224。
如請求項 68 之方法，其中，該靶向 PD-L1/PD-1 軸的藥劑為抗 PD-L1 抗體。
如請求項 69 之方法，其中，該抗 PD-L1 抗體選自阿維魯單抗 (avelumab)、度伐魯單抗 (durvalumab)、阿替利珠單抗 (atezolizumab)、BMS-936559、BMS-39886、KN035、CK-301 及 MSB0010718C。