KR20180054824A - Pd-1 결합 단백질 및 이의 사용 방법 - Google Patents
Pd-1 결합 단백질 및 이의 사용 방법 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20180054824A KR20180054824A KR1020187011467A KR20187011467A KR20180054824A KR 20180054824 A KR20180054824 A KR 20180054824A KR 1020187011467 A KR1020187011467 A KR 1020187011467A KR 20187011467 A KR20187011467 A KR 20187011467A KR 20180054824 A KR20180054824 A KR 20180054824A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- antigen
- binding fragment
- amino acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 138
- 102100023990 60S ribosomal protein L17 Human genes 0.000 title 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 118
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 95
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 481
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 410
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 404
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 378
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 378
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 378
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 186
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 186
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 120
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 claims description 111
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 109
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 102
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 95
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 95
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 93
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 91
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 91
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 72
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 72
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 72
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 72
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 71
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 71
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 71
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 claims description 71
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 70
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 claims description 69
- 102000013264 Interleukin-23 Human genes 0.000 claims description 69
- 108010065637 Interleukin-23 Proteins 0.000 claims description 69
- 101000611936 Homo sapiens Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 65
- 102000048362 human PDCD1 Human genes 0.000 claims description 61
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 54
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 32
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 32
- 102100040678 Programmed cell death protein 1 Human genes 0.000 claims description 30
- 101100188738 Astyanax fasciatus G103 gene Proteins 0.000 claims description 29
- 101710089372 Programmed cell death protein 1 Proteins 0.000 claims description 26
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 19
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 18
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 claims description 16
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 13
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 claims description 11
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 11
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 9
- 230000007302 negative regulation of cytokine production Effects 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 8
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 4
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 claims description 4
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 claims description 2
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims 1
- 101100519207 Mus musculus Pdcd1 gene Proteins 0.000 abstract description 496
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 567
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 167
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 156
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 150
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 123
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 78
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 62
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 61
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 42
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 40
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 40
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 37
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 34
- 102100024213 Programmed cell death 1 ligand 2 Human genes 0.000 description 34
- 108700030875 Programmed Cell Death 1 Ligand 2 Proteins 0.000 description 33
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 33
- 101100407308 Mus musculus Pdcd1lg2 gene Proteins 0.000 description 32
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 30
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 30
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 description 29
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 description 29
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 29
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 28
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 27
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 26
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 22
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 22
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 20
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 17
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 17
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 230000006870 function Effects 0.000 description 16
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 16
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 16
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 15
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 13
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 12
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 12
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 12
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 8
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 8
- 230000002998 immunogenetic effect Effects 0.000 description 8
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 7
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 6
- 230000005888 antibody-dependent cellular phagocytosis Effects 0.000 description 6
- 102000025171 antigen binding proteins Human genes 0.000 description 6
- 108091000831 antigen binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 6
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 6
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100029193 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Human genes 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 5
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 5
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 4
- 101710182312 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 4
- 101000834898 Homo sapiens Alpha-synuclein Proteins 0.000 description 4
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 4
- 101000652359 Homo sapiens Spermatogenesis-associated protein 2 Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 3
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 3
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 1-monostearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO VBICKXHEKHSIBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091006020 Fc-tagged proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 101710094000 Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 231100000599 cytotoxic agent Toxicity 0.000 description 2
- 239000002619 cytotoxin Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 2
- 238000005304 joining Methods 0.000 description 2
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 238000002794 lymphocyte assay Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000020402 negative regulation of interleukin-2 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000022632 negative regulation of interleukin-6 secretion Effects 0.000 description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 2
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000486679 Antitype Species 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003844 B-cell-activation Effects 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101100463133 Caenorhabditis elegans pdl-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 1
- 241001022645 Chondria <beetle> Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108010021468 Fc gamma receptor IIA Proteins 0.000 description 1
- 108010021472 Fc gamma receptor IIB Proteins 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101001117312 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 1
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029205 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Human genes 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 208000002720 Malnutrition Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 102100026933 Myelin-associated neurite-outgrowth inhibitor Human genes 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 229940122544 PD-1 agonist Drugs 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 102220492414 Ribulose-phosphate 3-epimerase_H35A_mutation Human genes 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 238000012452 Xenomouse strains Methods 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000008052 alkyl sulfonates Chemical class 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 1
- 238000004159 blood analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000023549 cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- -1 etc. ) Chemical class 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N glycerine monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC(CO)CO YQEMORVAKMFKLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N glycerol monostearate Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(O)CO SVUQHVRAGMNPLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009878 intermolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 1
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AFCCDDWKHLHPDF-UHFFFAOYSA-M metam-sodium Chemical compound [Na+].CNC([S-])=S AFCCDDWKHLHPDF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000024717 negative regulation of secretion Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 235000018343 nutrient deficiency Nutrition 0.000 description 1
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M octanoate Chemical compound CCCCCCCC([O-])=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 230000036515 potency Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 1
- 238000002818 protein evolution Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M sodium octadecanoate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O RYYKJJJTJZKILX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000427 somatic mutation induction Toxicity 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000009987 spinning Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 150000003852 triazoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2818—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/567—Framework region [FR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
- C07K2317/734—Complement-dependent cytotoxicity [CDC]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
프로그래밍된 사망-1 (PD-1)에 특이적으로 결합하고 PD-1의 발현 및/또는 활성을 조절하는 항체를 수반하는 조성물, 방법 및 용도가 본 명세서에서 제공된다.
Description
관련 출원에 대한 교차 참조
본원은 U.S. 특허 가출원 번호 62/234,535(2015년 9월 29일 출원)에 대한 우선권의 이점을 주장하고, 그것의 개시내용은 그 전문이 본 명세서에 참고로 편입되어 있다.
1. 분야
인간 프로그래밍된 사망-1 (PD-1)에 특이적으로 결합하고 PD-1의 발현 및/또는 활성을 조절하는 항체를 수반하는 조성물, 방법, 및 용도가 본 명세서에 제공된다.
2. 요약
본 개시내용은 결합 단백질 예컨대 PD-1에 결합하는 항체를 포함하는 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1, 서열식별번호: 43)에 결합하는 단백질을 제공한다. 항체를 포함하는 그와 같은 결합 단백질은, PD-1 폴리펩타이드, PD-1 단편, 및/또는 PD-1 에피토프에 결합할 수 있다. 항체를 포함하는 그와 같은 결합 단백질은, (예를 들면, PD-1 리간드-유사 신호전달을 유도하는) 효능제일 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 단백질은 하기와 경쟁하지 않는다: PD-1 리간드 (예를 들면, PD-L1 및 PD-L2), PD-1 (예를 들면, 비-차단 항체)와의 상호작용을 위해.
본 개시내용은 또한, 특정 구현예에서, (i) 인간 PD-1에 결합하고, (ii) PD-1 리간드-유사 신호전달에 유도하고, 그리고 (iii) PD-1와의 상호작용을 위해 PD-L1 및/또는 PD-L2와 경쟁하지 않는, 항체 또는 그것의 단편을 포함하는 결합 단백질을 제공한다.
그와 같은 항체를 인코딩하는 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 및 벡터, 그와 같은 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 세포 (예를 들면, 숙주세포), 및 그와 같은 항체를 포함하는 조성물, 시약, 및 키트가 또한 본 명세서에서 제공된다. 또 다른 측면에서, PD-1 활성 (예를 들면, PD-1 신호전달을 활성화하거나) 또는 PD-1 발현 수준을 조절하는 방법, 그와 같은 항-PD-1 항체의 진단 방법 및 용도가 본 명세서에서 제공된다.
일부 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항-PD-1 항체)은 6개의 상보성 결정 영역 (CDR) 또는 6개 미만의 CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항-PD-1 항체)은 중쇄 가변 영역 (VH) CDR1, VH CDR2, VH CDR3, 경쇄 가변 영역 (VL) CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항-PD-1 항체)은 본 명세서에서 기재된 바와 같은 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6, 또는 그것의 인간화된 변이체 로서 지정된 단클론성 항체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3으로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항-PD-1 항체)은 인간 면역글로불린 아미노산 서열 또는 그것의 변이체의 VH FR1, VH FR2, VH FR3, VH FR4, VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및/또는 VL FR4을 포함하는 스캐폴드 영역 또는 프레임워크 영역 (FR)을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체에 의해 기술적으로 인식된 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항체 단편은 인간 PD-1에의 결합을 위해, 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 1에서 제시된 바와 같은 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 VL을 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 표 2에서 제시된 바와 같은 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 VH를 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
표 3에서 제시된 바와 같은 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4를 포함하는 VL; 및
표 4에서 제시된 바와 같은 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4를 포함하는 VH.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 서열식별번호: 1, 2, 및 3 각각의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3은 서열식별번호: 4, 5, 및 6 각각의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 서열식별번호: 7, 2, 및 3 각각의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3은 서열식별번호: 4, 5, 및 6 각각의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및 (b) 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH.
일부 구현예에서, VL의 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, VH의 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, VL 및 VH의 아미노산 서열은 그것의 하나 이상의 보존적 변형을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 항체는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 변이체 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다.
일 구현예에서, 본 항체는 인간 IgG1-K322A Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 항체는 인간 IgG4 Fc 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 변이체 인간 IgG4 Fc 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 항체는 인간 IgG4P Fc 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 항체는 인간 IgG4PE Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 추가로, 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 추가로, 서열식별번호: 36-40으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 Fc 영역을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 추가로, 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역; 및 서열식별번호: 36-40으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 (b) 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 (b) 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 (b) 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다: (a) 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및 (b) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-109 중 적어도 하나에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-105 중 적어도 하나에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1개의 잔기에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 잔기에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 3개 이상의 잔기에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 4개 이상의 잔기에 결합한다.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 5개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 6개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 7개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 8개 이상의 잔기에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 9개 이상의 잔기에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 10개 모두에 결합한다.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 T51에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 S57에 결합한다.
하나의 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 L100에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N102에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 G103에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 R104에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 G103 및 R104에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 D105에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 H107에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 S109에 결합한다.
일 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L1 결합 부위와 구별된다. 또 다른 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L2 결합 부위와 구별된다. 특정 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L1 결합 부위 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별된다.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 PD-1 및/또는 원숭이 PD-1 (예를 들면, 사이노몰구스 원숭이)에 특이적으로 결합하지만 설치류 PD-1에는 그렇지 않다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약화된 항체 의존적 세포 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약화된 보체 의존적 세포독성 (CDC) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약화된 ADCC 및/또는 약화된 CDC 활성을 갖는다.
일 측면에서, 인간 PD-1의 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되되, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은,(a) T 세포 활성을 약화시키고/거나; (b) T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절한다.
일 구현예에서, 항체는 T 세포 활성을 약화시킨다. 또 다른 구현예에서, 항체는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절한다.
일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 T 세포 효과기 기능에 의해 측정된다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 T 세포 활성의 감쇠는 인간 PBMC 또는 전혈 샘플에서 일어난다.
일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인 생산의 억제에 의해 측정된다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 억제된 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및/또는 IFN-γ를 포함한다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 일부 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
특정 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 24시간만큼 일찍 일어난다. 일부 구현예에서, 상기 접촉은 항체와의 접촉이다. 다른 구현예에서, 상기 접촉은 그것의 항원-결합 단편과의 접촉이다.
일부 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다.
다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다.
또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다.
일 구현예에서, 정제된 인간 PD-1에 결합하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 KD는 약 1 nM 내지 약 100 nM이다. 또 다른 구현예에서, 세포 표면 상에서 발현된 인간 PD-1에게 결합하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 KD는 약 100 pM 내지 약 10 nM이다. 또 다른 구현예에서, 세포 표면 상에서 발현된 원숭이 PD-1에 결합하기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 KD는 약 100 pM 내지 약 10 nM이다.
일부 구현예에서, T 세포 활성을 약화시키기 위한 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 EC50는 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 또는 약 10 nM 내지 약 100 nM이다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%이다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%이다.
특정 구현예에서, 본 항체는 단클론성 항체이다. 일부 구현예에서, 본 항체는 인간화된, 인간, 또는 키메라성 항체이다. 또 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 탈면역화된 항체 또는 복합 인간 항체이다. 특정 구현예에서, 본 항체는 인간화된 항체이다. 특정 구현예에서, 본 항체는 인간 PD-1에 특이적으로 결합하는 인간화된 항체이다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, scFv, dsFv, 디아바디, 트리아바디, 또는 테트라바디이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체이다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이중특이적 항체이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제제에 접합된다. 일 구현예에서, 제제는 방사선동위원소, 금속 킬레이터, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 또는 화학발광 화합물이다.
본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 조성물이 또한 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 조성물은 추가로, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.
본 명세서에서 제공된 항체의 VH, VL, 또는 VH와 VL 둘 모두를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 본 명세서에서 제공된다.
본 개시내용은 또한, 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체의 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄와 경쇄 둘 모두를 포함하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 제공한다.
특정 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 프로모터에 작동가능하게 연결된다.
하기를 포함하는 폴리뉴클레오타이드의 집단이 또한 본 명세서에서 제공된다: (a) 제1 본 명세서에서 제공된 항체의 VH 또는 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드, 및 (b) 제2 본 명세서에서 제공된 항체의 VL 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드. 특정 구현예에서, 제1 폴리뉴클레오타이드는 제1 프로모터에 작동가능하게 연결되고, 그리고 제2 폴리뉴클레오타이드는 제2 프로모터에 작동가능하게 연결된다.
본 명세서에서 제공된 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터가 또한 본 명세서에서 제공된다.
본 개시내용은 또한, 특정 구현예에서, 하기를 포함하는 벡터의 집단을 제공한다: (a) 본 명세서에서 제공된 항체의 VH 또는 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제1 벡터, 및 (b) 본 명세서에서 제공된 항체의 VL 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제2 벡터.
본 개시내용은 추가로, 특정 구현예에서, 하기를 포함하는 벡터의 집단을 제공한다: (a) 제1 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 명세서에서 제공된 항체의 VH 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제1 벡터, 및 (b) 제2 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 명세서에서 제공된 항체의 VL 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제2 벡터.
본 개시내용은, 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드의 집단을 포함하는 세포를 제공한다.
본 개시내용은 또한, 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 벡터 또는 본 벡터의 집단을 포함하는 세포를 제공한다.
본 개시내용은 추가로, 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 단리된 세포를 제공한다.
하기를 포함하는 세포의 집단이 또한 본 명세서에서 제공된다: (a) 본 명세서에서 제공된 항체의 VH 또는 중쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제1 숙주세포, 및 (b) 본 명세서에서 제공된 항체의 VL 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제2 숙주세포.
하기를 포함하는 세포의 집단이 본 명세서에서 또한 제공된다: (a) 제1 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 명세서에서 제공된 항체의 VH 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제1 숙주세포, 및 (b) 제2 프로모터에 작동가능하게 연결된 본 명세서에서 제공된 항체의 VL 또는 경쇄를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제2 숙주세포.
본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트가 또한 본 명세서에서 제공된다.
인간 PD-1의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법이 또한 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에서 제공된 세포를 배양하여 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에서 제공된 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L1 결합 부위와 구별된다. 또 다른 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L2 결합 부위와 구별된다. 특정 구현예에서, 인간 PD-1의 에피토프는 PD-L1 결합 부위 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별된다.
또 다른 측면에서, T 세포의 활성을 감쇠시키는 방법이 본 명세서에서제공되고, 상기 방법은 상기 T 세포를, 유효량의 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체와 접촉된다. 또 다른 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체의 항원-결합 단편과 접촉된다. 일 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%이다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인 생산의 억제에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 일부 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다. 특정 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절에 의해 선행된다. 일부 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 또는 24시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일부 구현예에서, 하향조절은 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절과 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일부 구현예에서, 하향조절은 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 일부 구현예에서, 하향조절은 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 의해 선행된다.
또 다른 측면에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 T 세포를, 유효량의 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체와 접촉된다. 또 다른 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체의 항원-결합 단편과 접촉된다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
또 다른 측면에서, T 세포에 의해 사이토카인 생산을 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 T 세포를, 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체와 접촉된다. 또 다른 구현예에서, 세포는 본 명세서에서 제공된 항체의 항원 결합 단편과 접촉된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
3. 도면의 간단한 설명
도1A-1B는 T 세포 약화 항-PD-1 항체 (PD1AB)가 PD-1에 결합하는 PD-L1 (PD-L1-DyL650은 염료 DyL650과 접합된 PD-L1을 나타냄)과 경쟁하지 않는다는 것을 나타낸다: (A) PD1AB-1, PD1AB-2, 및 PD1AB-6; (B) PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, 및 PD1AB-5.길항제 항체 MDX 4H1은 PD-1에 대한 PD-L1 결합을 차단한다.
도2 는 PD-1: PD1AB-6 Fab 상호작용 부위가 PD-1: PD-L1 상호작용 부위와 비교하여 PD-1의 원위 쪽에 있음을 나타낸다.
도3 은 PD1AB-6 Fab가 PD-1 시트에 결합하고, 실질적인 상호작용이 잔기 100-105로 구성된 PD-1 루프로 형성된다는 것을 나타낸다.
도4 는 PD1AB-6-IgG1의 중쇄 (HC) 및 경쇄 (LC) 및 그것의 변이체 PD1AB-6-K3 및 PD1AB-6-4P의 HC의 아미노산 서열을 나타낸다.
도5A-5B는 CHO 세포 상에 발현된 사이노몰구스 (A) 또는 인간 (B) PD-1에 대한 PD1AB-6-IgG1 친화성을 나타낸다.
도6 은 CD4+ T 세포 상에 게이팅된 활성화된 인간 PBMC에 대한 PD1AB-6-IgG1, 아이소타입 대조군, 및 인간 PD-L1 Fc 융합 단백질 (hPD-L1 Fc)의 결합을 나타낸다.
도7은 CD4+ T 세포 상에 게이팅된 활성화된 사이노몰구스 PBMC에 대한 PD1AB-6-IgG1, 아이소타입 대조군, 및 인간 PD-L1 Fc 융합 단백질 (hPD-L1 Fc)의 결합을 도시한다.
도8A-8D는 Cisbio Tag-lite™ 검출을 사용하여 HEK293 세포 상에 발현된 FcRI (A), FcRIIIa (V158) (B), 또는 FcRIIb (C) 에 결합하는 PD1AB-6 변이체, 및 (D) FcRI, FcRIIIa (V158), 또는 FcRIIb에 결합하는 PD1AB-6 변이체의 EC50 값을 나타낸다.
도9A-9C는 FACS를 사용하여 CHO 세포 상에 발현된 FcRIIIa (V158) (A) 또는 FcRI (B)에 결합하는 PD1AB-6 변이체, 및 (C) FcRI 또는 FcRIIIa에 결합하는 PD-1 항체 변이체의 EC50 값을 나타낸다.
도10A-10B는 4명의 개별적인 건강한 공여체 중 2명의 대표 사이에서 PD1AB-6 변이체 및 대조군 인간 IgG1 Fc의 ADCC 활성을 나타낸다: (A) 공여체 7 및 (B) 공여체 8.
도11은 PD1AB-6 변이체의 CDC 활성을 나타낸다. 데이터는 3개의 독립적인 실험을 대표한다: (i) PD1AB-6-IgG1 및 항-인간 CD20 IgG1의 CDC 활성; (ii) PD1AB-6-IgG1 및 PD1AB-6-K3의 CDC 활성; (iii) PD1AB-6-4P 및 상업적 인간 IgG4 아이소타입 대조군 항체 및 인간 IgG1 Fc 단백질의 CDC 활성.
도12는 자극 후 24시간에 배양 상청액에서 IL-2 수준에 의해 측정된 인간 PBMC 분석에서 PD1AB-6 변이체의 강력한 약화 활성을 나타낸다.
도13은 인간 전혈 분석에서 PD1AB-6-K3의 활성을 나타낸다. 상기 그래프는 IFN-γ 억제의 EC50을 계산하기 위해 사용된 공여체 4로부터의 대표적인 곡선을 나타낸다. 상기 표는 PD1AB-6 변이체 및 CTLA4Ig를 갖는 4명의 건강한 공여체에 대한 IFN-γ의 EC50 값을 나타낸다.
도14A-14C는 하기에 의해 결정된 바와 같이 PD1AB-6-IgG1에 의한 PD-1 발현의 하향 조절을 나타낸다: (A) 48시간 동안 항-CD3 + 항-CD28로 활성화된 인간 PBMC에서 CD3+ T 세포에 대한 아이소타입 대PD-1 염색, (B) 아이소타입 IgG1 대PD1AB-6-IgG1 처리된 PBMC에서 PD-1 발현 (검출 항-PD-1 항체는 PD1AB-6에 의해 차단되지 않음), 및 (C) 항-CD3 + 항-CD28 및 3개의 상이한 농도의 아이소타입 IgG1 또는 PD1AB-6-IgG1로 활성화된, 3명의 상이한 공여체로부터의 인간 PBMC에서 CD3+ T 세포 상의 PD-1 발현.
도15A-15C는 Biacore® T200 상의 PD-1 항원에 결합하는> (A) PD1AB-6-IgG1, (B) PD1AB-6-4P, 및 (C) PD1AB-6-K3을 나타낸다.
4. 상세한 설명
인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1을 포함하는 PD-1에 결합하는 항체와 같은 결합 단백질이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1에 결합하는 항체와 같은 본원에 제공된 결합 단백질은 설치류 PD-1에 결합하지 않는다. 특정 구현예에서, 본원에 개시된 항체를 포함하는 PD-1 결합 단백질은 효능제이다 (예를 들면, PD-1 리간드의 효과를 모방할 수 있고 PD-1 신호전달을 유도할 수 있음). 일부 구현예에서, 본원에 제공된 PD-1에 대한 항체와 같은 결합 단백질은 (i) 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1에 결합하고, (ii) PD-1 리간드 (예를 들면, PD-L1 및/또는 PD-L2)와 결합에 대해 경쟁하지 않고/않거나 (iii) PD-1 신호전달을 유도한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 인간 PD-1에 결합한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 항체는 인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1 둘 모두에 결합한다. 일부 구현예에서, PD-1 항체는 PD-1에 결합하는 것에 대해 PD-L1과 경쟁하지 않는다. 다른 구현예에서, PD-1 항체는 PD-1에 결합하는 것에 대해 PD-L2와 경쟁하지 않는다. 또 다른 구현예에서, PD-1 항체는 PD-1에 결합하는 것에 대해 PD-L1 또는 PD-L2와 경쟁하지 않는다. 다른 구현예에서, PD-1 항체는 PD-1 신호전달을 유도한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 PD-1 항체는 인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1 모두에 결합하고, PD-1에 결합하는 것에 대해 PD-L1 또는 PD-L2와 경쟁하지 않으며, PD-1 신호전달을 유도한다. 일부 구현예에서, 결합, 경쟁, 및/또는 신호전달은 시험관내에서, 예를 들면, 세포 기반 분석에서 분석된다. 다른 구현예에서, 결합, 경쟁, 및/또는 신호전달은 생체외에서, 예를 들면, T 세포 기능 분석에서 분석된다. 다른 구현예에서, 결합, 경쟁, 및/또는 신호전달은 대상체 (예를 들면, 인간 대상체)로부터의 샘플을 사용하여 분석된다. 특정 구현예에서, 분석은 하기를 포함한다: (1) 인간 또는 사이노몰구스 PBMC 분석 (참고, 예를 들면, 실시예 5.2.1 및 5.2.2); (2) 인간 전혈 샘플 분석 (참고, 예를 들면, 실시예 5.2.1). 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체와 같은 결합 단백질은 PD-L1 및/또는 PD-L2의 천연 생물학적 기능과 일치하는 활성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 활성은 시험관내에서 나타난다. 다른 구현예에서, 활성은 생체외에서 나타난다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 PD-1에 결합하는 항체와 같은 결합 단백질은 PD-1의 결합에 대해 서로 경쟁하는 공통적인 특징을 공유한다. 이 경쟁적 억제는 각각의 항체가 PD-1의 동일한 영역 (예를 들면, 동일한 에피토프)에 결합하여 유사한 효과를 발휘한다는 것을 나타낼 수 있다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 인간화된 항-PD-1 항체, 예컨대 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 및/또는 PD1AB-6으로부터 유래되거나 이에 기반한 것을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 및/또는 PD1AB-6으로부터 유래되거나 이에 기반한 항체와의 결합에 대해 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 표 1-2에 기재된 바와 같은 CDR 서열을 갖는다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 인간 PD-1의 특이적인 도메인 또는 에피토프 (예를 들면, 잔기 100-105; 참고 실시예 5.1.4)에 결합한다. 또한, 이러한 결합은 주로 상기 영역 내의 특정한 아미노산 잔기에 기인할 수 있으며 (예를 들면, G103 및 R104; 참고 실시예 5.1.4), 이는 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체에 의해 인식된 에피토프를 포함한다. 종합하면, 본원에 기재된 결과는 표 1-2에 기재된 하나 이상의 CDR을 갖는 항체를 포함하는, PD1AB-6으로부터 유래되거나 이에 기반한 항-PD-1 항체에게 관찰된 효과가, 동일 또는 유사한 에피토프 특이성 (예를 들면, 동일 또는 유사한 CDR)을 갖는 본원에 제공된 다른 항-PD-1 항체로 추론될 수 있다는 것을 입증한다. 예를 들면, 예시적인 인간화된 항-PD-1 항체에 대해 실시예 5.1.2-3, 5.1.7-10, 5.2.1-3, 및 5.3.1에서 나타낸 바와 같은 항체의 활성은 본원에 제공된 항-PD-1 항체의 활성 및 효과를 대표한다.
본 발명의 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체와 같은 결합 단백질은 표 1-2에 기재된 바와 같은 하나 이상의 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역을 포함할 수 있다. 이러한 결합 단백질 (예를 들면, 항-PD-1 항체)에서, CDR은 하나 이상의 스캐폴드 영역 또는 프레임워크 영역 (FR)과 연결될 수 있고, 이는 CDR(들)의 적절한 항원 결합 특성이 달성되도록 CDR(들)을 배향시킨다. 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체를 포함하는 이러한 결합 단백질은 PD-1 신호전달을 유도할 수 있다.
4.1 일반적인 기술
본원에 기재되고 언급된 기술 및 절차는, 예를 들어 하기에 기재된 널리 이용된 방법론과 같이, 당해 분야의 숙련가에 의해 종래의 방법론을 사용하여 일반적으로 널리 이해되고/되거나 통상적으로 이용되는 것을 포함한다: Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed.2001); CurrentProtocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed.2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed.2010); 및 Antibody Engineering Vols 1 and 2 (Kontermann and Dbel eds., 제2판 2010).
4.2 용어
달리 기재되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서를 해석하기 위한 목적으로, 용어들의 하기 설명이 적용될 것이며, 적절한 경우, 단수형으로 사용된 용어들은 또한 복수형을 포함할 것이며, 그 반대도 마찬가지이다. 모든 특허, 출원, 공개된 출원, 및 다른 문헌이 그 전문이 참고로 본원에 포함된다. 제시된 용어들의 임의의 설명이 본원에 참고로 포함된 임의의 문서와 충돌하는 경우, 아래에 제시된 용어의 설명이 우선할 것이다.
용어들 “프로그래밍된 사멸 1,” “프로그래밍된 세포사 1,” “단백질 PD-1,” “PD-1,” “PD-1 폴리펩타이드,” 또는 “PD1”은 달리 나타내지 않는 한 영장류 (예를 들면, 인간 및 사이노몰구스 원숭이 (사이노몰구스)), 개, 및 설치류 (예를 들면, 마우스 및 랫트)와 같은 포유동물을 포함하는 임의의 척추동물 공급원으로부터의 임의의 원상태 폴리펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드 (“폴리펩타이드” 및 “단백질”이 본원에서 상호교환적으로 사용됨)를 포괄한다. 특정 구현예에서, 상기 용어들은 “관련된 PD-1 폴리펩타이드” (이의 SNP 변이체 포함)를 포함한다. 용어 “PD-1”은 또한 “전장,” 가공되지 않은 PD-1 뿐만 아니라 세포에서의 가공으로부터 비롯되는 PD-1의 임의의 형태를 포괄한다. 일부 구현예에서, PD1은 서열번호: 43의 아미노산 서열을 갖는다. 유전자은행™ 수탁 번호 U64863은 또 다른 예시적인 인간 PD-1 핵산 서열을 제공한다.
“관련된 PD-1 폴리펩타이드”는 PD-1 활성을 보유하는 대립유전자 변이체 (예를 들면, SNP 변이체); 스플라이스 변이체; 단편; 유도체; 치환, 결실, 및 삽입 변이체; 융합 폴리펩타이드; 및 종간 동족체를 포함한다. 당해 분야의 숙련가는, 본원에 제공된 항-PD-1 항체가 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 항원, 및/또는 PD-1 에피토프에 결합할 수 있음을 이해할 것이다. “에피토프”는 더 큰 PD-1 항원의 일부일 수 있으며, 이는 더 큰 PD-1 폴리펩타이드 단편의 일부일 수 있고, 이는 결국 더 큰 PD-1 폴리펩타이드의 일부일 수 있다. PD-1은 원상태 또는 변성된 형태로 존재할 수 있다. 본원에 기재된 PD-1 폴리펩타이드는 다양한 공급원, 예컨대 인간 조직 유형 또는 또 다른 공급원으로부터 단리되거나, 또는 재조합 또는 합성 방법에 의해 제조될 수 있다. PD-1 폴리펩타이드에 대한 오쏘로그가 또한 당해 분야에서 잘 알려져 있다.
D-1 폴리펩타이드 “세포외 도메인” 또는 “ECD”는막관통 및 세포질 도메인이 본질적으로 없는 PD-1 폴리펩타이드의 형태를 지칭한다. 예를 들면, PD-1 폴리펩타이드 ECD는 1% 미만의 이러한 막관통 및/또는 세포질 도메인을 가질 수 있고 0.5% 미만의 이러한 도메인을 가질 수 있다.
용어들 “PD1AB-6-IgG1,” “PD1AB-6 IgG1,” “PD1AB-6_IgG1,” “IgG1_PD1AB-6,” 및 “IgG1-PD1AB-6”은 상호교환적으로 사용되며, IgG1 Fc 영역을 갖는 항체 PD1AB-6을 지칭한다. 특정 구현예에서, 항체 PD1AB-6은 LC_PD1AB-6-IgG1의 경쇄 아미노산 서열 (서열번호: 31) 및 HC_PD1AB-6-IgG1의 중쇄 아미노산 서열 (서열번호: 32)을 포함하며, 예를 들면, 도4에 나타낸 바와 같다.
용어 “PD1AB-6-K3,” “PD1AB-6-IgG1-K322A,” “PD1AB-6-K322A,” “IgG1_PD1AB-6_K322A,” “IgG1_PD1AB-6_K3,” “IgG1-PD1AB-6-K322A,” 및 “IgG1-PD1AB-6-K3”은 상호교환적으로 사용되고, IgG1 Fc 영역에 K322A 치환을 갖는 PD1AB-6 변이체를 지칭한다. 특정 구현예에서, PD1AB-6 변이체는 HC_PD1AB-6-IgG1-K322A의 중쇄 아미노산 서열 (서열번호: 33)을 가지며, 예를 들면, 도4에 나타낸 바와 같다.
용어 “PD1AB-6-4P,” “IgG4P_PD1AB-6,” “IgG4P-PD1AB-6,” “PD1AB-6_IgG4P,” 및 “PD1AB-6-IgG4P”는 상호교환적으로 사용되고, IgG4P Fc 영역을 갖는 PD1AB-6 변이체를 지칭한다. 특정 구현예에서, PD-1 항체 변이체는 HC_PD1AB-6-IgG4P의 중쇄 아미노산 서열 (서열번호: 34)을 가지며, 예를 들면, 도4에 나타낸 바와 같다.
용어 “PD1AB-6-4PE,” “IgG4PE_PD1AB-6,” “IgG4PE-PD1AB-6,” 및 “PD1AB-6_IgG4PE,” 및 “PD1AB-6-IgG4PE”는 상호교환적으로 사용되고, HC_PD1AB-6-IgG4PE (서열번호: 35)와 같은 IgG4PE 중쇄 아미노산 서열을 갖는 PD1AB-6 변이체를 지칭한다.
용어 “PD-1 리간드”는, 예를 들면, 생체내 또는 시험관내에서 PD-1에 결합하는 분자를 지칭한다. PD-1 리간드의 비-제한적인 예는 하기를 포함한다: 자연 발생 리간드, 예를 들면, PD-1 리간드 1 (PD-L1, B7-H1 또는 CD274로도 공지됨) 및 PD-1 리간드 2 (PD-L2, B7-DC 또는 CD273으로도 공지됨), 및 인공적으로 생성된 리간드.
용어 “PD-L1” 및 “PDL-1”은 본원에서 상호교환적으로 사용되며, PD-1 리간드 1 (B7-H1 또는 CD274로도 공지됨)을 지칭한다.
본 발용의 PD-1에 결합하는 항체와 같은 결합 단백질에 적용될 때 용어 “PD-1 활성,” “PD-l 신호전달,” 및 “PD-1 리간드 유사 신호전달”은 상기 결합 단백질 (예를 들면, 항체)이 PD-1 리간드의 결합에 의해 유도된 생물학적 효과를 모방하거나 조절하고, 예를 들면, 생체내에서 또는 시험관내에서 PD-1에 결합하는 PD-1 리간드로부터 비롯되는 생물학적 반응을 유도한다는 것을 의미한다. 항-PD-1 항체, 예를 들면, PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1)에 결합하는 항체 또는 그것의 단편의 결합 특이성을 평가하는데 있어서, 반응이 야생형 PD-1 리간드 표준의 활성의 5% 이상, 예컨대 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 125%, 150%, 175%, 또는 200% 이상일 때, 상기 항체는 생물학적 반응을 유도하는 것으로 간주된다. 일 구현예에서, 항-PD-1 항체 또는 PD-1 리간드는 고정된다 (예를 들면, 플라스틱 표면 또는 비드 상에). 특정 구현예에서, 항체는 하기 특성을 갖는다: 하기 분석에서, 하기의 EC50으로, PD-1 리간드 표준의 5% 이하의 효능 수준을 나타낸다: 100 nM 이하의 EC50, 예를 들면, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 20 nM, 10 nM, 5 nM, 2 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM: (1) 인간 또는 사이노몰구스 PBMC 분석 (참고, 예를 들면, 실시예 4.2.1 및 4.2.2); 또는 (2) 인간 전혈 샘플 분석 (참고, 예를 들면, 실시예 4.2.1).
용어 “결합 단백질”은 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1을 포함하는 PD-1에 결합하는 부분 (예를 들면, 하나 이상의 결합 영역, 예컨대 CDR) 및, 선택적으로, 결합 부분이 PD-1 폴리펩타이드, 단편, 또는 에피토프에 대한 결합 단백질의 결합을 촉진하는 형태를 채택하게 하는 스캐폴드 또는 프레임워크 부분 (예를 들면, 하나 이상의 스캐폴드 또는 프레임워크 영역)을 포함하는 단백질을 지칭한다. 이러한 결합 단백질의 예는 항체, 예컨대 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 재조합 항체, 단일 사슬 항체, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, Fab 단편, F(ab’)2 단편, IgD 항체, IgE 항체, IgM 항체, IgG1 항체, IgG2 항체, IgG3 항체, 또는 IgG4 항체, 및 이의 단편을 포함한다. 결합 단백질은, 예를 들면, 이식된 CDR 또는 CDR 유도체를 갖는 대안적인 단백질 스캐폴드 또는 인공 스캐폴드를 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는, 비제한적으로, 예를 들면, 결합 단백질의 3차원 구조를 안정화하기 위해 도입된 돌연변이를 포함하는 항체 유래 스캐폴드뿐만 아니라, 예를 들면 생체적합성 폴리머를 포함하는 전적으로 합성 스캐폴드를 포함한다. 참고, 예를 들면, Korndorfer 등, 2003, Proteins: Structure, Function,and Bioinformatics 53(1): 121-29; 및 Roque 등, 2004, Biotechnol. Prog. 20: 639-54.또한, 펩타이드 항체 모방체 (“PAM”), 뿐만 아니라 스캐폴드로서 피브로넥틴 성분을 이용한 항체 모방체에 기반한 스캐폴드가 사용될 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 예를 들면, 해리 상수 (KD)가 ≤10-7 M인 경우, 결합 단백질은 PD-1에 특이적으로 결합하거나 선택적으로 결합한다고 한다. 일부 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 약 10-7 M 내지 약 10-12 M의 KD로 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 KD가 ≤10-8 M이거나 KD가 ≤10-9 M인 경우 고친화도로 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 일 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 Biacore®에 의해 측정된 바와 같이 1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 정제된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 KinExA™ (Sapidyne, Boise, ID)에 의해 측정된 바와 같이 0.1 x 10-9 M 내지 1 x 10-9 M의 KD로 정제된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 0.1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 0.1 x 10-9 M 내지 1 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 약 0.1 x 10-9 M, 약 0.5 x 10-9 M, 약 1 x 10-9 M, 약 5 x 10-9 M, 약 10 x 10-9 M의 KD, 또는 이의 임의의 범위 또는 간격으로 세포 상에 발현된 인간 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 0.1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 사이노몰구스 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 0.1 x 10-9 M 내지 1 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 사이노몰구스 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 1 x 10-9 M 내지 10 x 10-9 M의 KD로 세포 상에 발현된 사이노몰구스 PD-1에 특이적으로 결합할 수 있다. 특정 구현예에서, 결합 단백질 (예를 들면, 항체)은 약 0.1 x 10-9 M , 약 0.5 x 10-9 M, 약 1 x 10-9 M, 약 5 x 10-9 M, 약 10 x 10-9 M의 KD, 또는 이의 임의의 범위 또는 간격으로 세포 상에서 발현된 사이노몰구스 PD-1에 특이적으로 결합한다.
용어 “항체,” “면역글로불린,” 또는 “Ig”는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, 가장 넓은 의미로 사용되고, 구체적으로, 예를 들면, 개별 항-PD-1 단클론성 항체 (효능제, 길항제, 중화 항체, 전장 또는 온전한 단클론성 항체 포함), 폴리에피토프 또는 모노에피토프 특이성을 갖는 항-PD-1 항체 조성물, 다클론성 또는 1가 항체, 다가 항체, 적어도 2개의 온전한 항체로부터 형성된 다중특이적 항체 (예를 들면, 요구되는 생물학적 활성을 나타내는 한 이중특이적 항체), 단일 사슬 항-PD-1 항체, 및 하기에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체의 단편을 포괄한다. 항체는 인간, 인간화, 키메라 및/또는 친화성 성숙된 항체, 뿐만 아니라 다른 종, 예를 들면, 마우스 및 토끼, 등으로부터의 항체일 수 있다. 용어 “항체”는 특이적인 분자 항원에 결합할 수 있고 2개의 동일한 쌍의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 폴리펩타이드의 면역글로불린 부류 내의 B 세포의 폴리펩타이드 생성물을 포함하는 것으로 의도되며, 여기서 각각의 쌍은 하나의 중쇄 (약 50-70 kDa) 및 하나의 경쇄 (약 25 kDa)를 갖고, 각각의 사슬의 각각의 아미노-말단부는 약 100 내지 약 130 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 각각의 사슬의 각각의 카복시-말단부는 불변 영역을 포함한다. 참고, 예를 들면, Antibody Engineering (Borrebaeck ed., 제2판 1995); 및 Kuby,Immunology (3d ed.1997). 특정 구현예에서, 특이적인 분자 항원은 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 단편, 또는 PD-1 에피토프를 포함하는 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한, 비제한적으로, 합성 항체, 재조합으로 생산된 항체, 낙타화된 항체, 인트라바디, 항-개체특이형 (항-Id) 항체, 및 상기 중 어느 것의 기능적 단편 (예를 들면, 항원-결합 단편, 예컨대 PD-1-결합 단편)을 포함하며, 이는 단편이 유래된 항체의 결합 활성의 일부 또는 모두를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩타이드의 부분을 지칭한다. 기능적 단편 (예를 들면, 항원-결합 단편, 예컨대 PD-1-결합 단편)의 비-제한적인 예는 하기를 포함한다: 단일-사슬 Fv (scFv) (예를 들면, 단일특이적, 이중특이적, 등 포함),Fab 단편, F(ab’) 단편, F(ab)2 단편, F(ab’)2 단편, 디설파이드-연결된 Fv (dsFv), Fd 단편, Fv 단편, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 및 미니바디. 특히, 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 예를 들면, PD-1 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 항원-결합 도메인 또는 분자 (예를 들면, 항-PD-1 항체의 하나 이상의 CDR)를 포함한다. 이러한 항체 단편은 아래에서 발견될 수 있다: 예를 들면, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989); Mol.Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers ed., 1995); Huston등, 1993, Cell Biophysics 22: 189-224; Pl
ckthun and Skerra, 1989, Meth.Enzymol.178: 497-515; 및 Day, Advanced Immunochemistry (제2판 1990). 본원에 제공된 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 부류 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA) 또는 임의의 서브클래스 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)일 수 있다. 항-PD-1 항체는 작용적 항체 또는 길항적 항체일 수 있다. PD-1 신호전달을 유도하는 항체를 포함하는, PD-1에 대한 작용적 항체가 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 대한 작용적 항체는 PD-1에 대한 PD-L1 및/또는 PD-L2의 결합에 대해 경쟁하지 않는다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “단클론성 항체”는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득된 항체를 지칭하며, 예를 들면, 상기 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고 동일하며, 각각의 단클론성 항체는 전형적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 특정 구현예에서, 본원에 사용된 바와 같이 “단클론성 항체”는 단일 하이브리도마 또는 다른 세포에 의해 생산된 항체이며, 여기서 상기 항체는, 예를 들면, ELISA 또는 당해 분야에서 공지된 다른 항원-결합 또는 경쟁적 결합 분석에 의해 결정된 바와 같이, PD-1 에피토프에만 결합한다. 용어 “단클론성”은 항체를 제조하는 임의의 특정 방법에 제한되지 않는다. 예를 들면, 본 발명에 유용한 단클론성 항체는 하기 문헌에 의해 처음으로 기재된 하이브리도마 방법론에 의해 제조될 수 있거나: Kohler 등, 1975, Nature 256: 495, 또는 박테리아 또는 진핵 동물 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, 미국특허제4,816,567호). “단클론성 항체”는 또한, 예를 들면 하기 문헌에 기재된 기술을 사용하여 파아지 항체 라이브러리로부터 단리될 수 있다: Clackson 등, 1991, Nature 352: 624-28 및 Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222: 581-97.클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단클론성 항체의 제조를 위한 다른 방법이 당해 기술에 공지되어 있다. 참고, 예를 들면, Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., 5th ed.2002). 단클론성 항체를 생산하는 예시적인 방법이 본원 실시예에 제공된다.
본원에 사용된 바와 같이 “다클론성 항체”는 많은 에피토프를 갖는 단백질에 대한 면역원성 반응에서 생성되는 항체 집단을 지칭하며, 따라서 단백질 내에 동일하거나 상이한 에피토프에 대한 다양한 상이한 항체를 포함한다. 다클론성 항체를 생산하는 방법은 당해 기술에 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel 등 eds., 5th ed.2002)).
펩타이드 또는 폴리펩타이드의 문맥에서, 본원에 사용된 바와 같이 용어 “단편”은 전장 미만의 아미노산 서열을 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭한다. 이러한 단편은, 예를 들면, 아미노 말단에서의 절단, 카복시 말단에서의 절단, 및/또는 아미노산 서열로부터 잔기(들)의 내부 결실로부터 생성될 수 있다. 단편은, 예를 들면, 선택적 RNA 스플라이싱 또는 생체내 프로테아제 활성으로부터 비롯될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-1 단편 또는 항-PD-1 항체 단편은 PD-1 폴리펩타이드 또는 항-PD-1 항체의 아미노산 서열의 적어도 5개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 10개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 15개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 20개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 25개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 30개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 40개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 50개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 60개의 인접한 아미노 잔기, 적어도 70개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 80개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 90개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 인접한 100개의 아미노산 잔기, 적어도 125개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 150개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 175개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 200개의 인접한 아미노산 잔기, 적어도 250개, 적어도 300개, 적어도 350개, 적어도 400개, 적어도 450개, 적어도 500개, 적어도 550개, 적어도 600개, 적어도 650개, 적어도 700개, 적어도 750개, 적어도 800개, 적어도 850개, 적어도 900개, 또는 적어도 950개의 인접 아미노산 잔기의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. 특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 또는 항-PD-1 항체의 단편은 폴리펩타이드 또는 항체의 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 또는 그 이상의 기능을 보유한다.
“항원”은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 미리 결정된 항원이다. 표적 항원은 폴리펩타이드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐, 또는 다른 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 폴리펩타이드이다.
용어 “항원-결합 단편,” “항원-결합 도메인,” “항원-결합 영역,” 및 유사한 용어들은 항체의 부분을 지칭하며, 이는 항원과 상호작용하고 이것은 결합제 상에서 항원에 대한 그의 특이성 및 친화성을 제공하는 아미노산 잔기를 포함한다 (예를 들면, CDR).
“에피토프”는 항체의 하나 이상의 항원 결합 영역에 결합할 수 있고, 동물, 예컨대 포유동물 (예를 들면, 인간)에서 항원성 또는 면역원성 활성을 갖고, 면역 반응을 유발할 수 있는, PD-1 폴리펩타이드 또는 PD-1 폴리펩타이드 단편과 같은 항원의 표면 상의 국재화된 영역과 같이, 단일 항체 분자가 결합하는 항원 분자의 표면의 부위이다. 면역원성 활성을 갖는 에피토프는 동물에서 항체 반응을 유발하는 폴리펩타이드의 부분이다. 항원성 활성을 갖는 에피토프는, 예를 들면, 면역분석을 포함하는 당해 기술에 공지된 임의의 방법에 의해 결정된 바와 같이 항체가 결합하는 폴리펩타이드의 부분이다. 항원성 에피토프는 반드시 면역원성일 필요는 없다. 에피토프는 종종 분자의 화학적으로 활성 표면 그룹화, 예컨대 아미노산 또는 당 측쇄로 이루어지며 특이적인 3차원 구조적 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 갖는다. 항체 에피토프는 선형 에피토프 또는 형태적 에피토프일 수 있다. 선형 에피토프는 단백질 내의 아미노산의 연속 서열에 의해 형성된다. 형태적 에피토프는 단백질 서열 내에서 불연속적이지만 단백질이 그의 3차원 구조로 폴딩시 합쳐지는 아미노산 서열로 형성된다. 유도된 에피토프는 단백질의 3차원 구조가, 예컨대 또 다른 단백질 또는 리간드의 활성화 또는 결합 후에 변경된 형태일 때 형성된다. 특정 구현예에서, PD-1 에피토프는 PD-1 폴리펩타이드의 3차원 표면 특징이다. 다른 구현예에서, PD-1 에피토프는 PD-1 폴리펩타이드의 선형 특징이다. 일반적으로 항원은 몇 개의 또는 많은 상이한 에피토프를 가지며 많은 상이한 항체와 반응할 수 있다.
2개의 항체가 3차원 공간에서 동일하거나, 중첩되거나, 또는 인접한 에피토프를 인식할 때, 항체는 참조 항체로서 “에피토프,” “본질적으로 동일한 에피토프,” 또는 “동일한 에피토프”에 결합한다. 2개의 항체가 3차원 공간에서 동일하거나, 중첩되거나, 또는 인접한 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 가장 널리 사용되고 빠른 방법은 경쟁 분석이며, 이는, 예를 들면, 표지된 항원 또는 표지된 항체를 사용하여 많은 상이한 포맷으로 구성될 수 있다. 일부 분석에서, 항원은 96-웰 플레이트 상에 고정되거나, 또는 세포 표면 상에서 발현되며, 표지된 항체의 결합을 차단하는 비표지된 항체의 능력은 방사성, 형광성, 또는 효소 표지를 사용하여 측정된다.
“에피토프 맵핑”은 그의 표적 항원 상에서 항체의 결합 부위, 또는 에피토프를 확인하는 공정이다. “에피토프 비닝 (binning)”은 이들이 인식하는 에피토프에 기반하여 항체를 그룹화하는 공정이다. 더 상세하게는, 에피토프 비닝은 이들의 에피토프 인식 특성에 기초하여 항체를 클러스터링하고 뚜렷한 결합 특이성을 갖는 항체를 확인하는 컴퓨터를 이용한 공정과 조합된 경쟁 분석을 사용하여, 상이한 항체의 에피토프 인식 특성을 구별하는 방법 및 시스템을 포함한다.
용어 “결합하다” 또는 “결합하는”은, 예를 들면 복합체를 형성하는 것을 포함하는, 분자 간의 상호작용을 지칭한다. 상호작용은, 예를 들면, 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호작용, 및/또는 반데르발스 상호작용을 포함하는 비-공유 상호작용일 수 있다. 복합체는 또한 공유 또는 비-공유 결합, 상호작용, 또는 힘에 의해 함께 결합된 둘 이상의 분자의 결합을 포함할 수 있다. 항체 상의 단일 항원-결합 부위 및 PD-1과 같은 표적 분자의 단일 에피토프 사이의 총 비-공유 상호작용의 강도는, 상기 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화성이다. 1가 항원에 대한 항체의 해리 속도 (koff) 대 결합 속도 (kon)의 비율 (koff/kon)은 해리 상수 KD이며, 이는 친화성과 반비례한다. KD 값이 낮을수록, 항체의 친화성은 더 높다. KD 값은 항체 및 항원의 상이한 복합체에 대해 달라지며 kon 및 koff 모두에 좌우된다. 본원에 제공된 항체에 대한 해리 상수 KD는 본원에 제공된 임의의 방법 또는 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화성이 항체 및 항원 사이의 상호작용의 실제 강도를 항상 반영하는 것은 아니다. 다수의 반복되는 항원 결정기를 함유하는 복합 항원, 예컨대 다가 PD-1이 다중 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉될 때, 하나의 부위에서의 항원과 항체의 상호작용은 제2 부위에서의 반응의 개연성을 증가시킬 것이다. 다가 항체 및 항원 사이의 이러한 다중 상호작용의 강도는 결합능(avidity)으로 불린다. 항체의 결합능은 그것의 개별 결합 부위의 친화성보다 그것의 결합 능력의 더 나은 척도일 수 있다. 예를 들면, 높은 결합능은 IgG보다 더 낮은 친화성을 가질 수 있는 오량체 IgM 항체에서 종종 발견되는 바와 같은 낮은 친화성을 보상할 수 있지만, 그의 다중원자가로부터 비롯되는 IgM의 높은 결합능은 항원에 효과적으로 결합할 수 있게 해준다.
용어 “PD-1에 특이적으로 결합하는 항체,” “PD-1 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체,” 및 유사한 용어들은 또한 본원에서 상호교환적으로 사용되며, PD-1 폴리펩타이드, 예컨대 PD-1 항원, 또는 단편, 또는 에피토프 (예를 들면, 인간 PD-1, 예컨대 인간 PD-1 폴리펩타이드, 항원, 또는 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체는 PD-1의 세포외 도메인 또는 세포외 도메인으로부터 유래된 펩타이드에 결합할 수 있다. PD-1 항원 (예를 들면, 인간 PD-1)에 특이적으로 결합하는 항체는 관련된 항원 (예를 들면, 사이노몰구스 PD-1)과 교차반응할 수 있다. 특정 구현예에서, PD-1 항원에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 항원과 교차반응하지 않는다. PD-1 항원에 특이적으로 결합하는 항체는, 예를 들면, 면역분석, Biacore®, 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 기술에 의해 확인될 수 있다. 항체는, 그것이 방사선면역분석 (RIA) 및 효소 연결된 면역흡착 분석 (ELISA)과 같은 실험 기술을 사용하여 결정된 바와 같이 임의의 교차-반응성 항원보다 더 높은 친화성으로 PD-1 항원에 결합할 때, PD-1에 특이적으로 결합한다. 전형적으로 특이적 또는 선택적 반응은 배경 신호 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이며, 배경의 10배 초과일 수 있다. 참고, 하기를 위해 예를 들면, FundamentalImmunology 332-36 (Paul ed., 제2판 1989): 항체 특이성에 관한 논의를 위해.“관심 항원 (예를 들면, PD-1과 같은 표적 항원)에 결합하는” 항체는 충분한 친화성으로 항원에 결합하는 항체로서 상기 항체는 상기 항원을 발현하는 세포 또는 조직을 표적화하는데 있어서 치료제로서 유용하고, 다른 단백질과 유의하게 교차반응하지 않는다. 그러한 구현예에서, “비-표적” 단백질에 대한 항체의 결합의 정도는, 예를 들면, 형광 활성화된 세포 분류 (FACS) 분석 또는 RIA에 의해 결정된 바와 같이 그의 특정한 표적 단백질에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만일 것이다. 표적 분자에 대한 항체의 결합에 대해, 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대한 용어 “특이적 결합,” “특이적으로 결합한다,” 또는 “특이적이다”는 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들면, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있다. 예를 들면, 특이적 결합은 표적과 유사한 대조군 분자, 예를 들면, 과잉의 비-표지된 표적과의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 이 경우에, 프로브에 대한 표지된 표적의 결합이 과잉의 비표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면, 특이적 결합이 표시된다. 용어 “항-PD-1 항체” 또는 “PD-1에 결합하는 항체”는 충분한 친화성으로 PD-1에 결합할 수 있는 항체로서, 상기 항체는 예를 들면 PD-1을 표적화하는데 있어서 진단제로서 유용하다. 본원에서 사용된 바와 같이 특정 폴리펩타이드 또는 특정 폴리펩타이드 표적 상의 에피토프에 대한 용어 “특이적 결합,” “특이적으로 결합한다,” 또는 “특이적이다”는 분자가 임의의 다른 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드 에피토프에 실질적으로 결합하지 않으면서 특정한 폴리펩타이드 또는 특정한 폴리펩타이드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다. 특정 구현예에서, PD-1에 결합하는 항체는 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수 (KD)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 상이한 종으로부터의 PD-1 중에서 (예를 들면, 인간 및 사이노몰구스 PD-1 사이에서) 보존된 PD-1의 에피토프에 결합한다.
항-PD-1 항체 (예를 들면, PD-1에 결합하고 표적 상의 동일한 에피토프 또는 결합 부위와 경쟁하는 작용적 항체 및 결합 단백질)의 문맥에서 사용될 때 용어 “경쟁하다”는 연구 중인 이의 항체 (또는 결합 단편)가 참조 분자 (예를 들면, 참조 리간드 또는 참조 항원-결합 단백질, 예컨대 참조 항체)의 하기에의 특이적 결합을 방지하거나 억제하는 분석에 의해 결정된 바와 같은 경쟁을 의미한다: 공통 항원 (예를 들면, PD-1 또는 그것의 단편). 많은 유형의 경쟁적 결합 분석이 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1)에의 결합에 대해 시험 항체가 참조 항체와 경쟁하는지 결정하는데 사용될 수 있다. 이용될 수 있는 분석의 예는 하기를 포함한다: 고상 직접 또는 간접적 RIA, 고상 직접 또는 간접적 효소 면역분석 (EIA), 샌드위치 경쟁 분석 (참고, 예를 들면, Stahli 등, 1983, Methods in Enzymology 9: 242-53), 고상 직접 바이오틴-아비딘 EIA (참고, 예를 들면, Kirkland 등, 1986, J. Immunol. 137: 3614-19), 고상 직접 표지된 분석, 고상 직접 표지된 샌드위치 분석 (참고, 예를 들면, Harlow and Lane, Antibodies, A Laboratory Manual (1988)), I-125 표지를 사용한 고상 직접 표지 RIA (참고, 예를 들면, Morel 등, 1988, Mol.Immunol.25: 7-15), 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer 등, 1990, Scand.J. Immunol. 32: 77-82). 전형적으로, 이러한 분석은 고체 표면에 결합된 정제된 항원 (예를 들면, 인간 PD-1과 같은 PD-1), 또는 표지되지 않은 시험 항원-결합 단백질 (예를 들면, 시험 항-PD-1 항체) 또는 표지된 참조 항원-결합 단백질 (예를 들면, 참조 항-PD-1 항체)을 갖는 세포의 사용을 포함한다. 경쟁적 억제는 시험 항원-결합 단백질의 존재하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정될 수 있다. 일반적으로 시험 항원-결합 단백질은 과잉으로 존재한다. 경쟁 분석 (경쟁 항체)에 의해 확인된 항체는 참조 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 및/또는 입체 방해가 일어나는 참조 항체가 결합한 에피토프에 충분히 가까운 인접한 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 경쟁적 경쟁을 결정하는 방법에 관한 추가의 세부사항이 본원에 기재되어 있다. 일반적으로, 경쟁 항체 단백질이 과잉으로 존재할 때, 그것은 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 30%, 예를 들면 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 또는 75%까지 억제할 것이다. 일부 사례에서, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 이상까지 억제된다.
“단리된” 항체는 세포 또는 조직 공급원의 세포 물질 또는 다른 오염 단백질 및/또는 항체가 유래된 다른 오염물질 성분이 실질적으로 없거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없다. 표현 “세포 물질이 실질적으로 없는”은 항체가 그것이 단리되거나 재조합으로 생산된 세포의 세포 성분으로부터 분리된, 항체의 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 없는 항체는 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% (건조 중량으로) 미만의 이종성 단백질 (본원에서 “오염 단백질”로도 지칭됨)을 갖는 항체의 제제를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체가 재조합으로 생산되는 경우, 그것은 배양 배지가 실질적으로 없으며, 예를 들면, 배양 배지는 단백질 제제의 부피의 약 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 미만에 해당한다. 특정 구현예에서, 항체가 화학적 합성에 의해 생산될 때, 그것은 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없으며, 예를 들면, 그것은 단백질의 합성에 관여하는 화학적 전구체 또는 다른 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 이러한 항체의 제제는 관심 항체 이외에 약 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 또는 1% 미만 (건조 중량에 의해)의 화학적 전구체 또는 화합물을 갖는다. 오염물질 성분은 또한, 비제한적으로, 항체에 대한 치료 용도를 방해할 물질을 포함할 수 있고, 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 용질을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체는 (1) 로우리 방법에 의해 결정된 바와 같이 항체의 95 중량% 초과 (Lowry 등, 1951, J.Bio.Chem.193: 265-75), 예컨대 96%, 97%, 98%, 또는 99%까지, (2) 스피닝 컵 시쿼네이터(sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 얻기에 충분한 정도까지, 또는 (3) 쿠마씨 블루 또는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건하에 SDS-PAGE에 의해 균질한 정도까지 정제될 것이다. 단리된 항체는 재조합 세포 내의 원 위치에서의 항체를 포함하는데, 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문이다. 그러나, 통상적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 단리된다.
4-사슬 항체 단위는 2개의 동일한 경쇄 (L) 및 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된 헤테로사량체 당단백질이다. IgG의 경우, 4-사슬 단위는 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각각의 L 사슬은 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 H 사슬에 연결되는 반면, 2개의 H 사슬은 H 사슬 아이소타입에 따라 하나 이상의 디설파이드 결합에 의해 서로 연결된다. 각각의 H 및 L 사슬은 또한 규칙적으로 이격된 사슬내 디설파이드 브릿지를 갖는다. 각각의 H 사슬은 N-말단에, 가변 도메인 (VH)을 갖고, 그 뒤에 α 및 γ 사슬의 경우 3개의 불변 도메인 (CH)을 가지며 μ 및 ε 아이소타입의 경우 4개의 CH 도메인을 갖는다. 각각의 L 사슬은 N-말단에, 가변 도메인 (VL)을 갖고, 그 뒤에 그의 다른 말단에 불변 도메인 (CL)을 갖는다. VL은 VH와 정렬되며, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이에 계면을 형성한다고 여겨진다. VH 및 VL의 쌍형성은 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 부류의 항체의 구조 및 특성을 위해, 하기를 참고한다: 예를 들면, Basic and Clinical Immunology 71 (Stites 등 eds., 8th ed.1994).
항체와 관련하여 사용될 때, 용어 “중쇄”는 약 50-70 kDa의 폴리펩타이드 사슬을 지칭하며, 여기서 상기 아미노-말단부는 약 120 내지 130개 또는 이를 초과하는 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시-말단부는 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열에 기초하여 알파 (α), 델타 (δ), 엡실론 (ε), 감마 (γ), 및 뮤 (μ)로 불리는 5개의 구별되는 유형 (예를 들면, 아이소타입) 중 하나일 수 있다. 구별되는 중쇄는 크기가 다르다: α, δ, 및 γ는 대략 450개의 아미노산을 함유하는 반면, μ 및 ε는 대략 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 조합될 때, 이러한 구별되는 중쇄의 유형은 항체의 잘 알려진 부류 (예를 들면, 아이소타입)인 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM을 각각 생성하며, 이는 IgG의 4개의 서브클래스, 즉 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함한다. 중쇄는 인간 중쇄일 수 있다.
항체와 관련하여 사용될 때 용어 “경쇄”는 약 25 kDa의 폴리펩타이드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단부는 약 100 내지 약 110개 또는 이를 초과하는 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시-말단부는 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 근사 길이는 211 내지 217개 아미노산이다. 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파 (κ) 또는 람다 (λ)로 불리는 2개의 구별되는 유형이 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당해 기술에 공지되어 있다. 경쇄는 인간 경쇄일 수 있다.
용어 “가변 영역,” “가변 도메인,” “V 영역,” 또는 “V 도메인”은 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노-말단에 위치한 항체의 경쇄 또는 중쇄의 부분을 지칭하며, 중쇄에서 약 120 내지 130개 아미노산 및 경쇄에서 약 100 내지 110개 아미노산의 길이를 갖고, 그의 특정 항원에 대한 각각의 특정 항체의 결합 및 특이성에 사용된다. 중쇄의 가변 영역은 “VH”로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 “VL”로 지칭될 수 있다. 용어 “가변”은 상기 가변 영역의 특정 분절이 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다는 사실을 지칭한다. V 영역은 항원 결합을 매개하며 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나, 가변성은 가변 영역의 110-아미노산 범위에 고르게 분포되지 않는다. 대신, V 영역은 각각 약 9-12개 아미노산 길이인 “초가변 영역”으로 불리는 더 큰 가변성 (예를 들면, 극한의 가변성)의 더 짧은 영역에 의해 분리된 약 15-30개의 아미노산의 프레임워크 영역 (FR)으로 불리는 덜 가변성 (예를 들면, 상대적으로 불변)의 구간으로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 β 시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고 일부 경우에 β 시트 구조의 일부를 형성하는 주로 β 시트 구성을 채택하는 4개의 FR을 포함한다. 각각의 사슬 내의 초가변 영역은 FR에 의해 근접하고, 다른 사슬의 초가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (참고, 예를 들면, Kabat 등, Sequences of Proteins of Immunological Interest (5th ed.1991)). 불변 영역은 항체가 항원에 결합하는데 직접 관여하지 않지만, 항체 의존적 세포 세포독성 (ADCC) 및 보체 의존적 세포독성 (CDC)에서 항체의 참여와 같은 다양한 효과기 기능을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체 사이에서 서열이 광범위하게 상이하다. 특정 구현예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 “카밧에서와 같은 가변 영역 잔기 넘버링” 또는 “카밧에서와 같은 아미노산 위치 넘버링”, 및 이의 변형은 상기카밧 등에서 항체 편집 (compilation)의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 대해 사용된 넘버링 시스템을 지칭한다. 이 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 FR 또는 CDR 내로의 삽입에 상응하는 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들면, 중쇄 가변 도메인은 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입 (카밧에 따른 잔기 52a) 및 잔기 82 뒤에 3개의 삽입된 잔기 (예를 들면, 카밧에 따른 잔기 82a, 82b, 및 82c, 등)를 포함할 수 있다. 주어진 항체에 대해 잔기의 카밧 넘버링은 항체의 서열의 상동성 영역에서 “표준” 카밧 넘버링된 서열과 정렬함으로써 결정될 수 있다. 카밧 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인 (대략 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113) 내의 잔기를 언급할 때 사용된다 (예를 들면, Kabat 등, 상기). “EU 넘버링 시스템” 또는 “EU 지수”는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 내의 잔기를 언급할 때 사용된다 (예를 들면, 상기 Kabat 등에서 보고된 EU 지수). “카밧에서와 같은 EU 지수”는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 다른 넘버링 시스템이, 예를 들면, AbM, Chothia Contact, IMGT, 및 AHon에 의해 기술되었다.
“CDR”은 면역글로불린 (Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역 (H1, H2 또는 H3) 중 하나, 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내의 3개의 초가변 영역 (L1, L2 또는 L3) 중 하나를 지칭한다. 따라서, CDR은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다. CDR 영역은 당해 분야의 숙련가에게 널리 알려져 있으며, 예를 들면 카밧에 의해 항체 가변성 (V) 도메인 내의 가장 초가변성 영역으로서 정의되었다 (Kabat 등, 1997, J. Biol. Chem. 252: 6609-16; Kabat, 1978, Adv. Prot. Chem. 32: 1-75). CDR 영역 서열은 또한 보존된 β-시트 프레임워크의 일부가 아니며, 따라서 상이한 형태로 조정될 수 있는 잔기로서 초티아에 의해 구조적으로 정의되었다 (Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17). 두 용어는 당업계에서 널리 인식되고 있다. CDR 영역 서열은 또한 AbM, Contact, 및 IMGT에 의해 정의되었다. 표준 항체 가변 영역 내의 CDR의 위치는 많은 구조의 비교에 의해 결정되었다 (Al-Lazikani 등, 1997, J. Mol. Biol. 273: 927-48; Morea 등, 2000, Methods 20: 267-79). 초가변 영역 내의 잔기의 수가 상이한 항체에서 다양하기 때문에, 표준 위치 대비 추가의 잔기는 표준 가변 영역 넘버링 체계에서 잔기 번호 다음에 a, b, c 등으로 통상적으로 넘버링된다 (Al-Lazikani 등, 상기). 이러한 명명법은 유사하게 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다.
본원에 사용될 때 용어 “초가변 영역,” “HVR,” 또는 “HV”는 서열이 초가변성이고/이거나 구조적으로 정의된 루프를 형성하는 항체 가변 영역의 영역을 지칭한다. 일반적으로, 항체는 VH 내에 3개 (H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개 (L1, L2, L3)인 6개의 초가변 영역을 포함한다. 많은 초가변 영역 묘사가 사용되고 있으며, 이는 본원에 포함되어 있다. 카밧 상보성 결정 영역 (CDR)은 서열 가변성에 기초하며, 가장 흔하게 사용된다 (참고, 예를 들면, Kabat 등, 상기). 초티아는 대신에 구조적 루프의 위치를 지칭한다 (참고, 예를 들면, Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17). 카밧 넘버링 규약을 사용하여 넘버링될 때 초티아 CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32 및 H34로 달라진다 (이것은 카밧 넘버링 체계가 H35A 및 H35B에 삽입을 두며; 35A 또는 35B 중 어느 것도 존재하지 않으면, 루프는 32에서 끝나고; 35A만 있으면 루프는 33에서 끝나고; 35A 및 35B 모두가 존재하면, 루프는 34에서 끝나기 때문임). AbM 초가변 영역은 카밧 CDR 및 초티아 구조적 루프 사이에 타협을 나타내며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다 (참고, 예를 들면, Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann and Dbel eds., 제2판 2010)). “접촉” 초가변 영역은 이용가능한 복잡한 결정 구조의 분석에 기초한다. 이들 초가변 영역 또는 CDR 각각으로부터의 잔기가 하기에 표시되어 있다.
최근에, 보편적인 넘버링 시스템인 ImMunoGeneTics (IMGT) 정보 시스템®이 개발되었고 널리 채택되었다 (Lafranc 등, 2003, Dev. Comp. Immunol. 27(1): 55-77). IMGT는 인간 및 다른 척추동물의 면역글로불린 (IG), T 세포 수용체 (TCR), 및 주조직 적합성 복합체 (MHC)를 전문으로 하는 통합 정보 시스템이다. 본원에서, CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열 및 위치 모두의 측면에서 지칭된다. 면역글로불린 가변 도메인의 구조 내의 CDR의 “위치”는 종 간에 보존되고 루프로 불리는 구조 내에 존재하므로, 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용하여, CDR 및 프레임워크 잔기는 쉽게 확인된다. 이 정보는 하나의 종의 면역글로불린으로부터의 CDR 잔기를 전형적으로 인간 항체로부터의 수용체 프레임워크 내로 이식하고 대체하는데 사용될 수 있다. 추가의 넘버링 시스템 (AHon)이 하기에 의해 개발되었다: Honegger and Pl
ckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309: 657-70. 예를 들면, 카밧 넘버링 및 IMGT 고유의 넘버링 시스템을 포함하는 넘버링 시스템 간의 대응은 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려져 있다 (참고, 예를 들면, Kabat, 상기; Chothia and Lesk, 상기; Martin, 상기; Lefranc 등, 상기). 일부 구현예에서, CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같다. 다른 구현예에서, CDR은 카밧 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같다. 특정 구현예에서, CDR은 AbM 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같다. 다른 구현예에서, CDR은 초티아 시스템에 의해 정의된 바와 같다. 또 다른 구현예에서, CDR은 Contact 넘버링 시스템에 의해 정의된 바와 같다.
가변 영역은 다음과 같이 “연장된 초가변 영역”을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2), 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 26-35 또는 VH에서 26-35A (H1), 50-65 또는 49-65 (H2), 및 93-102, 94-102, 또는 95-102 (H3). 본원에 사용된 바와 같이, 용어 “HVR” 및 “CDR”은 상호교환적으로 사용된다.
용어 “불변 영역” 또는 “불변 도메인”은 항체가 항원에 결합하는데 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 효과기 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카복시 말단부를 지칭한다. 상기 용어는 면역글로불린의 다른 부분인 항원 결합 부위를 함유하는 가변 영역과 비교하여 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 부분을 지칭한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2, 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 “프레임워크” 또는 “FR”은 CDR에 측접하는 가변 영역 잔기를 지칭한다. FR 잔기는, 예를 들면, 키메라, 인간화, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체, 및 이중특이적 항체에 존재한다. FR 잔기는 초가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본원에서 용어 “Fc 영역”은 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용되고, 예를 들면, 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역, 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 달라질 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터, 이의 카복실-말단까지 이어진 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들면, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합으로 조작함으로써, 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기를 갖는 항체 및 K447 잔기를 갖지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.
“기능성 Fc 영역”은 천연 서열 Fc 영역의 “효과기 기능”을 갖는다. 예시적인 “효과기 기능”은 하기를 포함한다: C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균작용; 세포 표면 수용체의 하향조절 (예를 들면, B 세포 수용체), 등이러한 효과기 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인 (예를 들면, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 조합될 것을 요구하고 개시된 바와 같은 다양한 분석을 사용하여 평가될 수 있다.
“천연 서열 Fc 영역”은 자연에서 발견되는 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일하고 인간에 의해 조작되고, 변형되고, 및/또는 변화되지 않은 (예를 들면, 가변 영역 서열과 같은 다른 서열을 포함하거나 또는 조합되어, 단리된, 정제된, 선택된) 아미노산 서열을 포함한다. 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역은 천연 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이인자형); 천연 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 천연 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 천연 서열 인간 IgG4 Fc 영역 뿐만 아니라 이의 자연 발생 변이체를 포함한다. 예를 들면, 원상태 인간 IgG1 Fc 영역 아미노산 서열이 하기에 제공된다: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC K VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 36, 강조된 K322).
예시적인 원상태 인간 IgG4 Fc 영역 서열이 하기에 제공된다: ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP S CPAPEF L GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 38, S228 및 L235 강조됨).
“변이체 Fc 영역”은 적어도 1종의 아미노산 변형 (예를 들면, 치환, 첨가, 또는 결실)에 의해 천연 서열 Fc 영역과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역과 비교하여 또는 친계 폴리펩타이드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 1종의 아미노산 치환, 예를 들면, 천연 서열 Fc 영역에 또는 친계 폴리펩타이드의 Fc 영역에 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 또는 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 친계 폴리펩타이드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 또는 이들과 적어도 약 90% 상동성, 예를 들면, 이들과 적어도 약 95% 상동성을 가질 수 있다. 예를 들면, 인간 IgG1 Fc 아미노산 서열, IgG1-K322A Fc 영역 내의 322 위치에서 아미노산 K의 A로의 변화를 갖는 변이체가 하기에 제공된다:
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC A VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 37, 강조된 K322A 치환).
인간 IgG4 Fc 아미노산 서열, IgG4P Fc 영역 내의 228 위치에서 하나의 아미노산 S의 P로의 변화를 갖는 예시적인 변이체가 하기에 제공된다:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 39, S228P 치환 강조됨).
인간 IgG4 Fc 아미노산 서열, IgG4PE Fc 영역 내의 228 및 235 위치에 2개의 아미노산 변화를 갖는 예시적인 변이체가 하기에 제공된다:
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEF E GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열번호: 40, S228P 및 L235E 치환 강조됨).
PD-1 또는 항-PD-1 항체에 관련하여 사용될 때 용어 “변이체”는 원상태 또는 비변형된 서열과 비교하여 하나 이상 (예컨대, 예를 들면, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 아미노산 서열 치환, 결실, 및/또는 부가를 포함하는 펩타이드 또는 폴리펩타이드를 지칭할 수 있다. 예를 들면, PD-1 변이체는 원상태 PD-1의 아미노산 서열에 대해 하나 이상 (예컨대, 예를 들면, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 비롯될 수 있다. 또한 예로써, 항-PD-1 항체의 변이체는 원상태 또는 이전에 비변형된 항-PD-1 항체의 아미노산 서열에 대한 하나 이상 (예컨대, 예를 들면, 약 1 내지 약 25개, 약 1 내지 약 20개, 약 1 내지 약 15개, 약 1 내지 약 10개, 또는 약 1 내지 약 5개)의 변화로부터 비롯될 수 있다. 변이체는 대립유전자 또는 스플라이스 변이체과 같이 자연 발생일 수 있거나, 또는 인공적으로 제작될 수 있다. 폴리펩타이드 변이체는 상기 변이체를 코딩하는 대응하는 핵산 분자로부터 제조될 수 있다. 특정 구현예에서, PD-1 변이체 또는 항-PD-1 항체 변이체는 적어도 PD-1 또는 항-PD-1 항체 기능적 활성을 각각 보유한다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 변이체는 PD-1에 결합하고/하거나 PD-1 활성에 길항적이다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체 변이체는 PD-1에 결합하고/하거나 PD-1 활성에 작용적이다. 특정 구현예에서, 변이체는 PD-1 또는 항-PD-1 항체 VH 또는 VL 영역 또는 하위영역, 예컨대 하나 이상의 CDR을 코딩하는 핵산 분자의 단일 뉴클레오타이드 다형성 (SNP) 변이체에 의해 코딩된다.
“온전한” 항체는 항원-결합 부위뿐만 아니라 CL 및 적어도 중쇄 불변 영역, CH1, CH2 및 CH3을 포함하는 항체이다. 불변 영역은 인간 불변 영역 또는 이의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 온전한 항체는 하나 이상의 효과기 기능을 갖는다.
“항체 단편”은 온전한 항체의 부분, 예컨대 온전한 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 단편의 예는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: Fab, Fab’, F(ab’)2, 및 Fv 단편; 디아바디 및 디-디아바디 (참고, 예를 들면, Holliger 등, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90: 6444-48; Lu등, 2005, J. Biol. Chem. 280: 19665-72; Hudson등, 2003, Nat.Med.9: 129-34; WO 93/11161; 및 미국특허제5,837,242호 및 제6,492,123호); 단일-사슬 항체 분자 (참고, 예를 들면, 미국특허제4,946,778호; 제5,260,203호; 제5,482,858호; 및 제5,476,786호); 이중 가변 도메인 항체 (참고, 예를 들면, 미국특허제7,612,181호); 단일 가변 도메인 항체 (sdAb) (참고, 예를 들면, Woolven 등, 1999, Immunogenetics 50: 98-101; 및 Streltsov 등, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101: 12444-49); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체.
치료 항체의 “기능적 단편,” “결합 단편,” 또는 “항원-결합 단편”은 온전한 항체의 생물학적 기능의 일부 또는 전부는 아니더라도 적어도 하나를 나타낼 것이며, 상기 기능은 표적 항원에 적어도 결합하는 것을 포함한다 (예를 들면, PD-1 결합 단편 또는 PD-1에 결합하는 단편).
본원에 사용된 바와 같이 용어 “융합 단백질”은 항체의 아미노산 서열 및 이종성 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 일반적으로 항체의 일부가 아닌 폴리펩타이드 또는 단백질 (예를 들면, 비-항-PD-1 항원-결합 항체))의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. PD-1 또는 항-PD-1 항체와 관련하여 사용될 때 용어 “융합”은 펩타이드 또는 폴리펩타이드, 또는 이의 단편, 변이체, 및/또는 유도체와 이종성 펩타이드 또는 폴리펩타이드와의 연결을 지칭한다. 특정 구현예에서, 융합 단백질은 PD-1 또는 항-PD-1 항체의 생물학적 활성을 보유한다. 특정 구현예에서, 융합 단백질은 PD-1 항체 VH 영역, VL 영역, VH CDR (1, 2, 또는 3 VH CDR), 및/또는 VL CDR (1, 2, 또는 3 VL CDR)을 포함하며, 여기서 상기 융합 단백질은 PD-1 에피토프, PD-1 단편, 및/또는 PD-1 폴리펩타이드에 결합한다.
핵산 분자, 폴리펩타이드, 숙주 세포 등과 같은 생물학적 물질과 관련하여 사용될 때 용어 “원상태”는 자연에서 발견되고 인간에 의해 조작되고, 변형되고/되거나 변화되지 않은 (예를 들면, 단리된, 정제된, 선택된) 것을 지칭한다.
본원에 제공된 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 부분이 특정 종으로부터 비롯되거나 특정 항체 부류 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 반면, 상기 사슬(들)의 나머지가 또 다른 종으로부터 유래되거나 또 다른 항체 부류 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 상동인 “키메라성” 항체를 포함할 수 있을뿐만 아니라 요망된 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체의 단편을 포함할 수 있다 (참고 미국특허제4,816,567호; 및 Morrison 등, 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55).
비인간 (예를 들면, 쥣과) 항체의 “인간화된” 형태는 원상태 CDR 잔기가 원하는 특이성, 친화성, 및 능력을 갖는 비인간 종 (예를 들면, 공여체 항체), 예컨대 마우스, 랫트, 토끼, 또는 비인간 영장류의 상응하는 CDR로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린 (예를 들면, 수령체 항체)를 포함하는 키메라 항체이다. 일부 사례에서, 인간 면역글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기에 의해 대체된다. 더욱이, 인간화 항체는 수령체 항체에서 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더 개선하기 위해 이뤄진다. 인간화 항체 중쇄 또는 경쇄는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간 면역글로불린의 것과 상응하거나 모든 또는 실질적으로 모든 FR이 인간 면역글로불린 서열과 상응하는, 실질적으로 모든 적어도 하나 이상의 가변 영역을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 인간화 항체는 전형적으로 인간 면역글로불린의 것인, 면역글로불린 불변 영역 (Fc)의 적어도 일부분을 포함할 것이다. 추가 세부사항을 위해, 하기를 참고한다: Jones 등, 1986, Nature 321: 522-25; Riechmann 등, 1988, Nature 332: 323-29; Presta, 1992, Curr.Op.Struct.Biol. 2: 593-96; Carter 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285-89; U.S. 특허제6,800,738호; 제6,719,971호; 제6,639,055호; 제6,407,213호; 및 제6,054,297호.
“인간 항체”는 인간에 의해 생산된 항체의 것과 상응하는 아미노산 서열을 갖고/갖거나 본원에 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하는 임의의 기술을 사용하여 제조된 것이다. 이러한 인간 항체의 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명시적으로 배제한다. 인간 항체는 하기를 포함하는 당해 분야에서 공지된 다양한 기술을 사용하여 생산될 수 있다: 파아지-디스플레이 라이브러리 (Hoogenboom 및 Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227: 381; Marks 등, 1991, J. Mol. Biol. 222: 581) 및 효모 디스플레이 라이브러리 (Chao 등, 2006, Nature Protocols 1: 755-68). 또한 하기에 기재된 방법이 인간 단클론성 항체의 제조에 이용가능하다: Cole 등, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985); Boerner 등, 1991, J. Immunol. 147(1): 86-95; 및 van Dijk and van de Winkel, 2001, Curr.Opin.Pharmacol.5: 368-74. 인간 항체는 항원 투여에 대한 반응으로 항체를 생산하도록 변형되었으나, 그의 내인성 유전자좌는 장애가 있는 트랜스제닉 동물, 예를 들면, 마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, Jakobovits, 1995, Curr.Opin.Biotechnol. 6(5): 561-66; Br
ggemann and Taussing, 1997, Curr.Opin.Biotechnol. 8(4): 455-58; 및 미국특허제6,075,181호 및 제6,150,584호: XENOMOUSETM 기술에 관한 것임). 또한 하기를 참조한다: 예를 들면, Li 등, 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103: 3557-62: 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 것임.
“친화성 성숙된” 항체는 하나 이상의 HVR 내에 하나 이상의 변경 (예를 들면, 변화, 부가, 및/또는 결실을 포함하는 아미노산 서열 변이)을 갖는 항체이며, 이는 상기 변경(들)을 갖지 않는 친계 항체와 비교하여, 항원에 대한 항체의 친화성을 개선시킨다. 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 수 있다. 친화성 성숙된 항체는 당해 분야에서 공지된 절차에 의해 생산된다. 검토를 위해, 하기를 참고한다: Hudsonand Souriau, 2003, Nature Medicine 9: 129-34; Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnol. 23: 1105-16; Quirozand Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51.
“차단” 항체 또는 “길항제” 항체는 상기 항체가 결합하는 항원의 생물학적 활성을 억제하거나 감소시키는 것이다. 예를 들면, 차단 항체 또는 길항제 항체는 항원의 생물학적 활성을 실질적으로 또는 완전히 억제할 수 있다.
“효능제” 항체는 반응을 촉발하는 항체, 예컨대, 관심 폴리펩타이드의 기능성 활성 중 적어도 하나를 모방하는 항체이다 (예컨대,PD-L1). 효능제 항체는, 예를 들면, 리간드 모방체인 항체를 포함하며, 여기서 리간드는 세포 표면 수용체에 결합하고, 상기 결합은 세포간 세포 신호전달 경로를 통해 세포 신호전달 또는 활성을 유도하고, 여기서 상기 항체는 유사한 세포 신호전달 또는 활성화를 유도한다. PD-1의 “효능제”는, 예컨대 PD-1을 발현하는 세포에서 PD-1의 생물학적 활성 중 하나 이상을 활성화시키거나 증가시킬 수 있는 분자를 지칭한다. 일부 구현예에서, PD-1의 효능제 (예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 효능적 항체)는, 예를 들면, PD-1 단백질을 발현하는 세포의 활성화 및/또는 세포 신호전달 경로를 활성화시키거나 증가시키고, 이로써 효능제의 부재하의 PD-1-매개된 생물학적 활성에 비해 세포의 PD-1-매개된 생물학적 활성을 증가시킴으로써 작용할 수 있다. 일부 구현예에서 본원에 제공된 항체는 PD-1 신호전달을 유도하는 항체를 포함하는, 효능적 항-PD-1 항체이다.
“결합 친화성”은 일반적으로 분자 (예를 들면, 결합 단백질, 예컨대 항체)의 단일 결합 부위 및 그의 결합 파트너 (예를 들면, 항원) 간의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 나타내지 않는 한, 본원에 사용된 바와 같이, “결합 친화성”은 결합 쌍의 구성원 (예를 들면, 항체 및 항원) 간의 1: 1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 결합 분자 X의 그의 결합 파트너 Y에 대한 친화성은 일반적으로 해리 상수 (KD)에 의해 나타낼 수 있다. 친화성은 본원에 기재된 것을 포함하는 당업계에 공지된 일반 방법에 의해 측정될 수 있다. 저-친화성 항체는 일반적으로 느리게 항원에 결합하고 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면, 고-친화성 항체는 일반적으로 항원에 더 빠르게 결합하고 더 길게 결합된 상태를 유지하는 경향이 있다. 결합 친화성을 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 이들 중 어느 것이 본 개시내용의 목적을 위해 사용될 수 있다. 특정 예시적인 구현예는 하기를 포함한다. 일 구현예에서, “KD” 또는 “KD 값”은 당해 분야에 공지된 분석에 의해, 예를 들면 결합 분석에 의해 측정될 수 있다. KD는 RIA에서 측정될 수 있으며, 예를 들면, 관심 항체의 Fab 버전 및 그의 항원으로 수행될 수 있다 (Chen 등, 1999, J.Mol Biol 293: 865-81). KD 또는 KD 값은 또한, 예를 들면, Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 사용한 Biacore®에 의한 표면 플라즈몬 공명 분석을 사용하여 또는, 예를 들면, Octet®QK384 시스템을 사용한 생물층 간섭법에 의해 측정될 수 있다. “온-레이트 (on-rate)” 또는 “결합의 속도” 또는 “결합 속도” 또는 “kon”은 또한 예를 들면, Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000, 또는 Octet®QK384 시스템을 사용하여 상기 기재된 동일한 표면 플라즈몬 공명 또는 생물층 간섭법 기술으로 결정될 수 있다.
본원에 사용될 때 용어 “억제” 또는 “억제하다”는 하기를 지칭한다: 부분적인 (예컨대, 1%, 2%, 5%, 10%, 20%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%) 또는 완전한 (즉, 100%) 억제.
본원에 사용될 때 용어 “약화시키다,” “약화,” 또는 “약화된”은 하기를 지칭한다: 특성, 활성, 효과, 또는 값의 부분적인 (예컨대, 1%, 2%, 5%, 10%, 20%, 25%, 50%, 75%, 90%, 95%, 99%) 또는 완전한 (즉, 100%) 감소.
“항체 효과기 기능”은 항체의 Fc 영역 (예를 들면, 천연 서열 Fc 영역 또는 아미노산 서열 변이체 Fc 영역)에 기인하는 생물학적 활성을 지칭하며, 이는 항체 아이소타입마다 달라진다. 항체 효과기 기능의 예는 비제한적으로 하기를 포함한다: C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균작용; 세포 표면 수용체의 하향조절 (예를 들면, B 세포 수용체); 및 B 세포 활성화.
“T 세포 효과기 기능”은 비제한적으로 세포독성 T 세포, T 헬퍼 세포, 및 기억 T 세포를 포함하는 다양한 유형의 T 세포에 기인하는 생물학적 활성을 지칭한다. T 세포 효과기 기능의 예는 하기를 포함한다: T 세포 증식을 증가시키는 것, 사이토카인을 분비하는 것, 세포독소를 방출하는 것, 막-관련된 분자를 발현하는 것, 표적 세포를 사멸시키는 것, 대식세포를 활성화시키는 것, 및 B 세포를 활성화시키는 것.
“항체-의존적 세포-매개된 세포독성” 또는 “ADCC”는 특정 세포독성 세포 (예를 들면, 자연 살해 (NK) 세포, 중성구, 및 대식세포)에 존재하는 Fc 수용체 (FcR) 상에 결합된 분비된 면역글로불린이 이러한 세포독성 효과기 세포를 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합시킨 다음 표적 세포를 세포독소로 사멸시키는 세포독성의 형태를 지칭한다. 항체는 세포독성 세포에게 “팔을 뻗으며(arm)”, 이는 이러한 사멸에 절대적으로 필요하다. ADCC를 매개하기 위한 일차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Ravetch and Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92). 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 분석 (참고, 예를 들면, 미국 특허제5,500,362호 및 제5,821,337호)이 수행될 수 있다. 이러한 분석을 위한 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들면, 동물 모델에서 평가될 수 있다 (참고, 예를 들면, Clynes 등, 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 652-56). ADCC 활성이 거의 또는 전혀 없는 항체가 사용을 위해 선택될 수 있다.
“항체-의존적 세포 식균작용” 또는 “ADCP”는 특정 식균작용 세포 (예를 들면, 중성구, 단핵구, 및 대식세포) 상에 존재하는 Fc 수용체 (FcR) 상에 결합된 면역글로불린이 이들 식균작용 세포를 항원-보유 표적 세포에 특이적으로 결합시킨 다음 표적 세포를 사멸할 때, 단핵구 또는 대식세포-매개된 식균작용을 통한 표적 세포의 파괴를 지칭한다. 관심 분자의 ADCP 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCP 분석 (참고, 예를 들면, Bracher 등, 2007, J. Immunol. Methods 323: 160-71)이 수행될 수 있다. 이러한 분석을 위한 유용한 식균작용 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), PBMC로부터의 정제된 단핵구, 또는 단핵 유형으로 분화된 U937 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 관심 분자의 ADCP 활성은 생체내에서, 예를 들면, 동물 모델에서 평가될 수 있다 (참고, 예를 들면, Wallace 등, 2001, J. Immunol. Methods 248: 167-82). ADCP 활성이 거의 또는 전혀 없는 항체가 사용을 위해 선택될 수 있다.
“Fc 수용체” 또는 “FcR”은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 기술한다. 예시적인 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 또한, 예시적인 FcR은 IgG 항체에 결합하는 것 (예를 들면, 감마 수용체)이고, 이는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 서브클래스의 수용체를 포함하며, 이는 이들 수용체의 대립유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA (“활성화 수용체”) 및 FcγRIIB (“억제 수용체”)를 포함하며, 이는 주로 이의 세포질 도메인이 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다 (참고, 예를 들면, Da
ron, 1997, Annu. Rev. Immunol. 15: 203-34). 다양한 FcR이 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Ravetch and Kinet, 1991, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92; Capel 등, 1994, Immunomethods 4: 25-34; 및 de Haas 등, 1995, J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41). 미래에 확인될 것을 포함하는 다른 FcR이 본원의 용어 “FcR”에 포함된다. 상기 용어는 또한 모계 IgG를 태아로 전달하는 것을 담당하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다 (참고, 예를 들면, Guyer등, 1976, J. Immunol. 117: 587-93; 및 Kim 등, 1994, Eu.J. Immunol. 24: 2429-34). FcR에 대한 결합이 개선되거나 줄어든 항체 변이체가 기술되어 왔다 (참고, 예를 들면, WO 2000/42072; 미국특허제7,183,387호; 제7,332,581호; 및 제7.335,742호; Shields 등2001, J. Biol. Chem. 9(2): 6591-604).
“보체 의존적 세포독성” 또는 “CDC”는 보체의 존재하에 표적 세포의 용해를 지칭한다. 고전적 보체 경로의 활성화는 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)이 그의 동족 항원에 결합된 항체 (적절한 서브클래스의)에 결합함으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석 (참고, 예를 들면, Gazzano-Santoro 등, 1996, J. Immunol. Methods 202: 163)이 수행될 수 있다. 변경된 Fc 영역 아미노산 서열 (변이체 Fc 영역을 갖는 폴리펩타이드) 및 증가되거나 감소된 C1q 결합 능력을 갖는 폴리펩타이드 변이체가 기술되어 왔다 (참고, 예를 들면, 미국 특허제6,194,551호; WO 1999/51642; Idusogie 등, 2000, J. Immunol. 164: 4178-84). CDC 활성이 거의 또는 전혀 없는 항체가 사용을 위해 선택될 수 있다.
용어 “동일성”은, 서열을 정렬하고 비교함으로써 결정된 바와 같이 둘 이상의 폴리펩타이드 분자 또는 둘 이상의 핵산 분자의 서열 간의 관계를 지칭한다. 참조 폴리펩타이드 서열에 대한 “퍼센트 (%) 아미노산 서열 동일성”은, 최대 퍼센트 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 필요한 경우 갭을 도입한 후, 그리고 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고, 참조 폴리펩타이드 서열 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은 당해 분야의 기술에 속하는 다양한 방식으로, 예를 들면, 공공연하게 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, 또는 MEGALIGN (DNAStar, Inc.) 소프트웨어를 사용하여, 달성될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는, 비교되는 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하는, 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 잔기/위치의 “변형”은 시작 아미노산 서열과 비교하여 일차 아미노산 서열의 변화를 지칭하며, 여기서 상기 변화는 상기 아미노산 잔기/위치를 포함하는 서열 변이로부터 비롯된다. 예를 들면, 전형적인 변형은 잔기와 또 다른 아미노산과의 치환 (예를 들면, 보존적 또는 비-보존적 치환), 상기 잔기/위치에 인접한 하나 이상 (예를 들면, 일반적으로 5, 4, 또는 3개 미만)의 아미노산의 삽입, 및/또는 상기 잔기/위치의 결실을 포함한다.
폴리펩타이드의 문맥에서, 본원에 사용된 바와 같이 용어 “유사체”는 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체와 유사하거나 동일한 기능을 갖지만 반드시 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체와 유사하거나 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것은 아닌 폴리펩타이드, 또는 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체의 유사하거나 동일한 구조를 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 유사한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드는 하기 중 적어도 하나를 만족하는 폴리펩타이드를 지칭한다: (a) PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 본원에 제공된 항-PD-1 항체의 아미노산 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드; (b) 적어도 5개의 아미노산 잔기, 적어도 10개의 아미노산 잔기, 적어도 15개의 아미노산 잔기, 적어도 20개의 아미노산 잔기, 적어도 25개의 아미노산 잔기, 적어도 30개의 아미노산 잔기, 적어도 40개의 아미노산 잔기, 적어도 50개의 아미노산 잔기, 적어도 60개의 아미노 잔기, 적어도 70개의 아미노산 잔기, 적어도 80개의 아미노산 잔기, 적어도 90개의 아미노산 잔기, 적어도 100개의 아미노산 잔기, 적어도 125개의 아미노산 잔기, 또는 적어도 150개의 아미노산 잔기인 본원에 기재된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체 (또는 이의 VH 또는 VL 영역)를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 엄격한 조건하에 혼성화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드 (참고, 예를 들면, Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2001); 및 Maniatis 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982)); 또는 (c) 본원에 기재된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체 (또는 이의 VH 또는 VL 영역)를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드.본원에 제공된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, 또는 항-PD-1 항체에 유사한 구조를 갖는 폴리펩타이드는 본원에 제공된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체의 유사한 2차, 3차, 또는 4차 구조를 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 폴리펩타이드의 구조는 비제한적으로, X-선 결정학, 핵자기 공명, 및 결정학 전자 현미경검사를 포함하는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 결정될 수 있다.
폴리펩타이드의 문맥에서, 본원에 사용된 바와 같이 용어 “유도체”는 아미노산 잔기 치환, 결실, 또는 부가의 도입에 의해 변경된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 PD-1 폴리펩타이드에 결합하는 항체의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 지칭한다. 본원에 사용된 바와 같이 용어 “유도체”는 또한, 예를 들면, 임의의 유형의 분자가 폴리펩타이드에 공유결합함으로써 화학적으로 변형된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 PD-1 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 지칭한다. 예를 들면, 비제한적으로, PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체는, 예를 들면, 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 단백분해 절단, 화학적 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 연결, 등의 증가 또는 감소에 의해 화학적으로 변형될 수 있다유도체는 부착된 분자의 유형 또는 위치에 있어서 자연 발생 또는 시작 펩타이드 또는 폴리펩타이드와 상이한 방식으로 변형된다. 유도체는 펩타이드 또는 폴리펩타이드 상에 자연적으로 존재하는 하나 이상의 화학기의 결실을 추가로 포함한다. 또한, PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체의 유도체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다. 폴리펩타이드 유도체는 본원에 제공된 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드의 단편, 또는 항-PD-1 항체와 유사하거나 동일한 기능을 갖는다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “숙주”는 동물, 예컨대 포유동물 (예를 들면, 인간)을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “숙주 세포”는 핵산 분자로 형질감염될 수 있는 특정한 대상 세포 및 그와 같은 세포의 자손 또는 잠재적인 자손을 지칭한다. 그와 같은 세포의 자손은 숙주 세포 게놈 내로 핵산 분자의 계속되는 생성 또는 통합에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 핵산 분자로 형질감염된 친계 세포와 동일할 수 있다.
용어 “벡터”는 핵산 서열을 숙주 세포 내로 도입하기 위해, 예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 서열을 갖거나 포함하기 위해 사용되는 물질을 지칭한다. 사용하기 위해 적용가능한 벡터는, 예를 들면, 숙주 세포의 염색체 내로의 안정적인 통합을 위해 작동가능한 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있는 발현 벡터, 플라스미드, 파아지 벡터, 바이러스 벡터, 에피솜, 및 인공 염색체를 포함한다. 추가로, 벡터는 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 조절 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택가능한 마커 유전자는, 예를 들면, 항생제 또는 독소에 대한 저항성을 제공하고, 영양요구성 결핍을 보완하고, 또는 배양 배지에 없는 중요 영양소를 제공한다. 발현 조절 서열은 당해 기술에 널리 공지된 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결자 등을 포함할 수 있다. 2개 이상의 핵산 분자가 공-발현되는 경우 (예를 들면, 항체 중쇄 및 경쇄 또는 항체 VH 및 VL 모두), 두 핵산 분자가, 예를 들면, 단일 발현 벡터 내로 또는 별도의 발현 벡터에 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현을 위해, 코딩 핵산은 하나의 공통된 발현 조절 서열에 적동가능하게 연결될 수 있거나 또는 상이한 발현 조절 서열, 예컨대 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 항시성 프로모터에 연결될 수 있다. 핵산 분자의 숙주 세포 내로의 도입은 당해 분야에서 잘 알려진 방법을 사용하여 확인될 수 있다. 그와 같은 방법은, 예를 들면, 핵산 분석 예컨대 노던 블랏 또는 mRNA의 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR) 증폭, 유전자 생성물의 발현을 위한 면역블로팅, 또는 도입된 핵산 서열 또는 그의 대응하는 유전자 생성물의 발현을 시험하는 다른 적합한 분석 방법을 포함한다. 핵산 분자가 원하는 생성물 (예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체)을 생산하기에 충분한 양으로 발현된다는 것이 당해 분야의 숙련가에 의해 이해되며, 발현 수준이 당해 분야에서 잘 알려진 방법을 사용하여 충분한 발현을 달성하기 위해 최적화될 수 있음이 추가로 이해된다.
“단리된 핵산”은 자연적으로 천연 서열을 수반하는 다른 게놈 DNA 서열뿐만 아니라 단백질 또는 복합체, 예컨대 리보솜 및 폴리머라제와 실질적으로 분리된 핵산, 예를 들면, RNA, DNA, 또는 혼합된 핵산이다. “단리된” 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자와 분리된 것이다. 또한, “단리된” 핵산 분자, 예컨대 cDNA 분자는 재조합 기술에 의해 생산될 때 다른 세포 물질, 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 바와 같은 항체를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자가 단리되거나 정제된다. 상기 용어는 그의 자연 발생 환경으로부터 제거된 핵산 서열을 포함하며, 및 재조합 또는 클로닝된 DNA 단리물 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 분자의 단리된 형태를 포함할 수 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 바와 같은 “폴리뉴클레오타이드” 또는 “핵산”은 임의의 길이의 뉴클레오타이드를 지칭하며 DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오타이드는 데옥시리보뉴클레오타이드, 리보뉴클레오타이드, 변형된 뉴클레오타이드 또는 염기, 및/또는 그것의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 또는 합성 반응에 의해 폴리머 내로 포함될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리뉴클레오타이드는 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대 메틸화된 뉴클레오타이드 및 그것의 유사체를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, “올리고뉴클레오타이드”는 일반적으로 약 200개 미만의 뉴클레오타이드 길이이지만 반드시 그렇지는 않은 일반적으로 단일가닥, 합성 폴리뉴클레오타이드를 지칭한다. 용어 “올리고뉴클레오타이드” 및 “폴리뉴클레오타이드”는 상호 배타적이지 않다. 폴리뉴클레오타이드에 대한 상기 설명은 올리고뉴클레오타이드에 동등하게 그리고 완전히 적용가능하다. 본 개시내용의 항-PD-1 항체를 생산하는 세포는 항체를 코딩하는 핵산이 도입된 친계 하이브리도마 세포, 뿐만 아니라 박테리아 및 진핵생물 숙주 세포를 포함할 수 있다. 적합한 숙주 세포가 하기에 개시되어 있다.
달리 구체화되지 않는 한, 본원에 개시된 임의의 단일가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌측 말단은 5’ 말단이고; 이중-가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌측 방향은 5’ 방향으로 지칭된다. 초기 RNA 전사체의 5’에서 3’ 부가 방향은 전사 방향으로 지칭되고; RNA 전사체의 5’ 말단에 대해 5’에 있는, RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 “업스트림 서열”로 지칭되며; RNA 전사체의 3’ 말단에 대해 3’에 있는, RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 “다운스트림 서열”로 지칭된다.
핵산 분자와 관련하여 사용될 때 용어 “코딩 핵산” 또는 이의 문법적 등가물은 그의 원상태의 핵산 분자 또는 당해 분야의 숙련가에게 잘 알려진 방법에 의해 조작될 때 전사되어 mRNA를 생산할 수 있고, 이후 폴리펩타이드 및/또는 그의 단편으로 번역되는 핵산 분자를 지칭한다. 안티센스 가닥은 그와 같은 핵산 분자의 보체이며, 코딩 서열은 이로부터 추론될 수 있다.
용어 “재조합 항체”는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 항체를 지칭한다. 재조합 항체는 숙주 세포 내로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉이고/이거나 트랜스크로모좀인 동물 (예를 들면, 마우스 또는 소)로부터 단리된 항체 (참고, 예를 들면, Taylor 등, 1992, Nucl.Acids Res. 20: 6287-95), 또는 면역글로불린 유전자 서열의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 단리된 항체일 수 있다. 이러한 재조합 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 것을 포함하는 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다 (참고 카밧 등, 상기). 그러나, 특정 구현예에서, 이러한 재조합 항체는 시험관내 돌연변이유발 (또는, 인간 Ig 서열에 대한 트랜스제닉 동물이 생체내 체세포 돌연변이유발에 사용되는 경우)을 거칠 수 있으므로, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 관련될 수 있지만, 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
용어 “검출가능한 프로브”는 검출가능한 신호를 제공하는 조성물을 지칭한다. 상기 용어는, 비제한적으로, 그의 활성을 통해 검출가능한 신호를 제공하는 임의의 형광단, 발색단, 방사선표지, 효소, 항체 또는 항체 단편 등을 지칭한다.
용어 “검출가능한 제제”는 샘플 또는 대상체에서 원하는 분자, 예컨대 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체의 실재 또는 존재를 확인하는데 사용될 수 있는 물질일 수 있다. 검출가능한 제제는 시각화될 수 있는 물질 또는 결정되고/되거나 측정될 수 있는 (예를 들면, 정량화에 의해) 물질일 수 있다.
용어 “진단제”는 질환, 장애, 또는 병태의 진단을 돕는 대상체에게 투여된 물질을 지칭한다. 이러한 물질은 질환을 일으키는 과정의 부위를 밝히고, 정확히 찾아내고/내거나 정의하는데 사용될 수 있다.. 특정 구현예에서, 진단제는 대상체에게 투여되거나 대상체의 샘플과 접촉될 때 PD-1-매개된 질환의 진단을 돕는, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체에 접합된 물질을 포함한다.
용어 “조성물”은 선택적으로, 지정된 양의 지정된 성분 (예를 들면, 본원에 제공된 항체)을 함유하는 생성물을 포함하는 것으로 의도된다.
본원에 사용된 바와 같이 “캐리어”는 이용된 복용량 및 농도로 이에 노출되는 세포 또는 포유동물에 비독성인 약제학적으로 허용가능한 캐리어, 부형제, 또는 안정화제를 포함한다. 종종 생리적으로 허용가능한 캐리어는 수성 pH 완충 용액이다. 생리적으로 허용가능한 캐리어의 예는 완충액, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기산; 산화방지제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 (예를 들면, 약 10개 미만의 아미노산 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 폴리머, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 다른 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 플루로닉스™를 포함한다. 용어 “캐리어”는 또한 하기를 지칭할 수 있다: 희석제, 아쥬반트 (예를 들면, 프로인트 아쥬반트 (완전한 또는 불완전한)), 부형제, 또는 비히클.약제학적 캐리어를 포함하는 이러한 캐리어는 멸균된 액체, 예컨대 물 및 오일, 예컨대 석유, 동물, 야채, 또는 합성 기원, 예컨대 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등일 수 있다. 물은 조성물 (예를 들면, 약제학적 조성물)이 정맥내로 투여될 때 예시적인 캐리어이다. 염수 용액 및 수성 덱스트로오스 및 글리세롤 용액은 또한, 특히 주사가능 용액을 위한 액체 캐리어로서 이용될 수있다. 적합한 부형제 (예를 들면, 약제학적 부형제)는 전분, 글루코스, 락토오스, 수크로오스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 백악, 실리카겔, 스테아르산나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 탈지분유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물은, 원하는 경우, 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 제형을 포함하는 경구 조성물은 표준 캐리어, 예컨대 약제학적 등급의 만니톨, 락토오스, 전분, 스테아르산마그네슘, 나트륨 사카린, 셀룰로오스, 탄산마그네슘, 등을 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 캐리어의 예는 하기에 기재되어 있다: Remington and Gennaro, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th ed.1990). 약제학적 화합물을 포함하는 조성물은, 예를 들면, 적합한 양의 캐리어와 함께, 단리된 또는 정제된 형태의 항-PD-1 항체를 함유할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “약제학적으로 허용가능한”은 동물에서, 및 더 상세하게는 인간에서 사용하기 위해 연방 또는 주 정부의 관리 기관에 의해 승인되거나 또는 미국 약전, 유럽 약전, 또는 다른 일반적으로 기술적으로 인식된 약전에 열거된 것을 의미한다.
용어 “부형제”는 희석제, 비히클, 보존제, 결합제, 또는 안정화제로서 통상적으로 사되는 불활성 물질을 지칭하며, 비제한적으로, 단백질 (예를 들면, 혈청 알부민, 등), 아미노산 (예를 들면, 아스파르트산, 글루탐산, 라이신, 아르기닌, 글리신, 히스티딘, 등), 지방산 및 인지질 (예를 들면, 알킬 설포네이트, 카프릴레이트, 등), 계면활성제 (예를 들면, SDS, 폴리소르베이트, 비이온성 계면활성제, 등), 당류 (예를 들면, 수크로오스, 말토오스, 트레할로오스, 등), 및 폴리올 (예를 들면, 만니톨, 소르비톨, 등)을 포함한다. 또한, 문헌[Remington and Gennaro, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th ed.1990)을 참고하며, 이는 그 전체가 본원에 참고로 포함되어 있다.
용어들 “대상체” 및 “환자”는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 특정 구현예에서, 대상체는 포유동물, 예컨대 비-영장류 (예를 들면, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 랫트, 등) 또는 영장류 (예를 들면, 원숭이 및 인간)이다. 특정 구현예에서, 상기 대상체는 인간이다.
“투여한다” 또는 “투여”는, 예컨대 점막, 진피내, 정맥내, 근육내 전달, 및/또는 본원에 기재되거나 당해 분야에서 공지된 물리적 전달의 임의의 다른 방법에 의해, 신체 외부에 존재하는 물질 (예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 항-PD-1 항체)을 환자 내로 주사하거나 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “유효량”은 원하는 결과를 낳기에 충분한 본원에 제공된 항체 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭한다.
용어 “약” 및 “대략”은 주어진 값 또는 범위의 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내, 1% 이내, 또는 그 미만을 의미한다.
“실질적으로 모든”은 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100%를 지칭한다.
문구 “실질적으로 유사한” 또는 “실질적으로 동일한”은 2개의 수치 (예를 들면, 본 개시내용의 항체와 관련된 하나 및 참조 항체와 관련된 다른 하나) 사이의 충분히 높은 정도의 유사성을 나타내며, 따라서 당해 분야의 숙련가가 상기 2개의 값 사이의 차이가 상기 값에 의해 측정된 생물학적 특징의 문맥 내에서 생물학적 및/또는 통계적 유의성이 거의 또는 전혀 없다고 고려할 것이다 (예를 들면, KD 값). 예를 들면, 2개의 값 사이의 차이는 참조 항체에 대한 값의 함수로서, 약 50% 미만, 약 40% 미만, 약 30% 미만, 약 20% 미만, 약 10% 미만, 또는 약 5% 미만일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 문구 “실질적으로 증가된,” “실질적으로 감소된,” 또는 “실질적으로 상이한”은 2개의 수치 (예를 들면, 본 개시내용의 항체와 관련된 하나 및 참조 항체와 관련된 다른 하나) 사이에 충분히 높은 정도의 차이를 나타내며, 따라서 당해 분야의 숙련가는 상기 2개의 값 사이의 차이가 상기 값에 의해 측정된 생물학적 특징의 문맥 내에서 통계적 유의한 것으로 고려할 것이다. 예를 들면, 상기 2개의 값 사이의 차이는 참조 항체에 대한 값의 함수로서 약 10% 초과, 약 20% 초과, 약 30% 초과, 약 40% 초과, 또는 약 50% 초과일 수 있다.
조성물 및 이를 제조하는 방법
PD-1에 결합하는 항체 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프가 본 명세서에서 제공된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 인간 PD-1에 결합한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 일 구현예에서, PD-1 항체는 항체는 인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1 둘 모두에 결합한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 설치류 PD-1에 결합하지 않는다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-1의 세포외 도메인 (ECD)에 결합한다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 PD-1의 ECD에서 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 PD-1의 ECD에서 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1 및 PD-L2-결합 부위 둘 모두와 구별되는 PD-1의 ECD에서 에피토프에 결합한다.
본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체가 PD-1 폴리펩타이드에 결합하는 것을 경쟁적으로 차단하는 항체가 또한 제공된다.
PD-1 폴리펩타이드에 결합하기 위해, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체와 경쟁하는 항체가 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L2의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1 또는 PD-L2의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다.
일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-1 폴리펩타이드에 결합하기 위해 PD-L1과 경쟁하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-1 폴리펩타이드에 결합하기 위해 PD-L2와 경쟁하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-1 폴리펩타이드에 결합하기 위해 PD-L1 또는 PD-L2 와 경쟁하지 않는다.
특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 또한, 예를 들면, 진단제 또는 검출가능한 제제에 접합되거나 재조합으로 융합될 수 있다. 항-PD-1 항체를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체의 면역글로불린 중쇄, 경쇄, VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3를 인코딩하는 단리된 핵산 분자가 본 명세서에서 또한 제공된다.
PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체를 인코딩하는 헥산 분자를 포함하는 벡터 및 숙주세포가 또한 제공된다. PD-1에 결합하는 항체 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프를 제조하는 방법이 또한 제공된다.
항-PD-1 항체
일 구현예에서, 본 개시내용은 진단제로서 본 명세서에서 사용될 수 있는 항-PD-1 항체를 제공한다. 예시적인 항체는 개선된 친화성 또는 다른 특성을 갖는 다클론성, 단클론성, 인간화된, 인간, 이중특이적, 및 헤테로콘주게이트 항체, 뿐만 아니라 그것의 변이체를 포함한다.
일부 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프를 포함하는 PD-1에 결합하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 설치류 PD-1 (예를 들면, 마우스 PD-1)에 결합하지 않는다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 PD-1에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1에 결합한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 PD-1에 결합하고 설치류 PD-1 (예를 들면, 마우스 PD-1)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 사이노몰구스 PD-1에 결합하고 설치류 PD-1 (예를 들면, 마우스 PD-1)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 PD-1에 결합하고, 사이노몰구스 PD-1에 결합하고, 그리고 설치류 PD-1 (예를 들면, 마우스 PD-1)에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L2의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-L1 또는 PD-L2의 PD-1 폴리펩타이드에의 결합을 차단하지 않는다. 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프를 포함하는 PD-1에 결합하는 인간화된 항체 (예를 들면, 인간 불변 영역을 포함함) 이다.
특정 구현예에서, 항-PD-1 항체는 본 명세서에서 제공된 쥣과 단클론성 항체 중 임의의 하나, 예컨대 표 1-6에서 묘사된 아미노산 서열의 VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 단리된 항체 또는 이의 기능적 단편은 하기로부터 1, 2, 및/또는 3개의 중쇄 CDR 및/또는 1, 2, 및/또는 3개의 경쇄 CDR 을 포함한다: (a) 항체 PD1AB-1, (b) 항체 PD1AB-2, (c) 항체 PD1AB-3, (d) 항체 PD1AB-4, (e) 항체 PD1AB-5, 또는 (f) 항체 PD1AB-6 (표 1-2에서 나타냄).
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 6개의 CDR, 예를 들면, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3 (표 1-2에서 확인됨) 을 포함하거나 그것으로 구성된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 6개 미만의 CDR을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 표 1-2에서 확인된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3 로 구성된 군으로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR을 포함하거나 그것으로 구성된다. 일부 구현예에서, 항체는 하기로 구성된 군으로부터 선택된 단클론성 항체의 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3 로 구성된 군으로부터 선택된 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR을 포함하거나 그것으로 구성된다: (a) 항체 PD1AB-1, (b) 항체 PD1AB-2, (c) 항체 PD1AB-3, (d) 항체 PD1AB-4, (e) 항체 PD1AB-5, 및 (f) 항체 PD1AB-6 (본 명세서에서 기재됨). 따라서, 일부 구현예에서, 항체는 표 1-2에서 확인된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3 중 임의의 것의 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 CDR 을 포함하거나 그것으로 구성된다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 표 2에서 열거된 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 또는 3)개의 VH CDR을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는표 1에서 열거된 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 또는 3)개의 VL CDR을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 표 2에서 열거된 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 또는 3)개의 VH CDR 및 표 1에서 열거된 1개 이상의 VL CDR 을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 표 2에서 묘사된 VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3 아미노산 서열(들) 중 임의의 것으로부터 독립적으로 선택된 VH CDR1 및/또는 VH CDR2 및/또는 VH CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 1 및 7 중 임의의 하나의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 표 1에서 묘사된 바와 같이 VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3 아미노산 서열 중 임의의 하나로부터 독립적으로 선택된 VL CDR1 및/또는 VL CDR2 및/또는 VL CDR3을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; (2) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및 하기를 포함하는 VL 영역: (1) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; (2) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및 하기를 포함하는 VL 영역: (1) 서열식별번호: 7의 아미노산을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; (2) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1: 7; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.
하기를 포함화는 항체가 본 명세서에서 또한 제공된다: 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 또는 3)개의 VH CDR 및 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 또는 3)개의 VL CDR (표 1-2에서 열거됨). 특히, VH CDR1 (서열식별번호: 4) 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4) 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4) 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5) 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5) 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5) 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6) 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6) 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6) 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR2 (서열식별번호: 2)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR1 (서열식별번호: 4), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH CDR2 (서열식별번호: 5), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH CDR3 (서열식별번호: 6), VL CDR1 (서열식별번호: 1 또는 7), VL CDR2 (서열식별번호: 2), 및 VL CDR3 (서열식별번호: 3)를 포함한다. 또 다른 구현예에서, 항체는 표 1-2에서 열거된 VH CDR 및 VL CDR의 이들의 임의의 조합을 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 명세서에서 개시된 CDR은 관련된 항체의 그룹으로부터 유래된 공통 서열을 포함한다 (참고, 예를 들면, 표 1-2). 본 명세서에서 기재된 바와 같이, “공통 서열”은 주어진 아미노산 서열 내에서 변하는 수많은 서열 및 가변성 아미노산 중에서 공통인 보존된 아미노산을 갖는 아미노산 서열을 지칭한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 단리된 항체 또는 이의 기능적 단편은 추가로, 하기로부터 1, 2, 3, 및/또는 4 중쇄 FR 및/또는 1, 2, 3, 및/또는 4개의 경쇄 FR을 포함한다: (a) 항체 PD1AB-1, (b) 항체 PD1AB-2, (c) 항체 PD1AB-3, (d) 항체 PD1AB-4, (e) 항체 PD1AB-5, 또는 (f) 항체 PD1AB-6 (표 3-4에서 나타냄).
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 단리된 항체 또는 이의 기능적 단편은 추가로, 하기로부터 1, 2, 3, 및/또는 4개의 중쇄 FR을 포함한다: (a) 항체 PD1AB-1, (b) 항체 PD1AB-2, (c) 항체 PD1AB-3, (d) 항체 PD1AB-4, (e) 항체 PD1AB-5, 또는 (f) 항체 PD1AB-6 (표 4에서 나타냄). 일부 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-1로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-2로부터 유래한다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-3로부터 유래한다. 특정 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-4로부터 유래한다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-5로부터 유래한다. 또 다른 구현예에서, 항체 중쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-6으로부터 유래한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 단리된 항체 또는 이의 기능적 단편은 추가로, 하기로부터의 1, 2, 3, 및/또는 4개 경쇄 FR을 포함한다: (a) 항체 PD1AB-1, (b) 항체 PD1AB-2, (c) 항체 PD1AB-3, (d) 항체 PD1AB-4, (e) 항체 PD1AB-5, 또는 (f) 항체 PD1AB-6 (표 3에서 나타냄). 일부 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-1로부터 유래한다. 일부 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-2로부터 유래한다. 다른 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-3로부터 유래한다. 특정 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-4로부터 유래한다. 다른 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-5로부터 유래한다. 또 다른 구현예에서, 항체 경쇄 FR(들)는 항체 PD1AB-6으로부터 유래한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 19 및 24로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21 및 23로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3: 23; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1: 24; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3: 23; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4. 특정 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 19 및 24로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR1 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2 을 포함하는 VH 영역을 포함한다: 20. 일부 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 21 및 23로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR3 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3 을 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4 을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16 및 18로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4.다른 구현예에서, VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3: 18; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4.
따라서, 일부 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1 을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 특정 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2 을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 16 및 18로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL FR3 을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간화된 항체는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 하기의 서열식별번호의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3 을 포함하는 VL 영역을 포함한다: 18.또 다른 구현예에서, 인간화된 항체는 을 포함하는 VL 영역을 포함한다 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 기재된 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 19 및 24로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21 및 23로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16 및 18로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 그것의 단편의 항체는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하되, 여기서 상기 VH 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 갖는 VH FR1; (2) 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 갖는 VH FR2; (3) 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 갖는 VH FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 갖는 VH FR4; 그리고 여기서 상기 VL 영역은 하기를 포함한다: (1) 서열식별번호: 14의 아미노산 서열을 갖는 VL FR1; (2) 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 갖는 VL FR2; (3) 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 갖는 VL FR3; 및/또는 (4) 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 갖는 VL FR4. 일부 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 상기-언급된 VH FR1, VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4 중 모두 4개를 포함하는 VH 영역, 및 상기-언급된 VL FR1, VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4 중 모두 4개를 포함하는 VL 영역을 포함한다.
1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 또는 4) 개의 VH FR 및 1개 이상 (예를 들면, 1, 2, 3, 또는 4) 개의 표 3-4에서 열거된 VL FR을 포함하는 항체가 본 명세서에서 또한 제공된다. 특히, VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24) 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24) 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20) 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20) 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21) 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21) 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22) 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22) 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15) 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 하기를 포함한다: VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18). 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR1 (서열식별번호: 14)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR2 (서열식별번호: 15)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 항체는 VH FR1 (서열식별번호: 19 또는 24), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일 구현예에서, 본 항체는 VH FR2 (서열식별번호: 20), VH FR3 (서열식별번호: 21 또는 23), VH FR4 (서열식별번호: 22), VL FR1 (서열식별번호: 14), VL FR2 (서열식별번호: 15), VL FR3 (서열식별번호: 16 또는 18), 및 VL FR4 (서열식별번호: 17)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 표 3-4에서 열거된 VH FR (서열식별번호: 19-24) 및 VL FR (서열식별번호: 14-18)의 이들의 임의의 조합을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 VH 영역 또는 VH 도메인을 포함한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 VL 영역 또는 VL 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 (i) VH 도메인 또는 VH 영역; 및/또는 (ii) VL 도메인 또는 VL 영역의 조합을 갖는다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기의 서열식별번호로 구성된 군으로부터 선택된 (i) VH 도메인 또는 VH 영역; 및/또는 (ii) VL 도메인 또는 VL 영역의 조합을 갖는다: 8-13 (표 5-6에서 제시됨). 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는표 5-6에서 제시된 바와 같이 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 (i) VH 도메인 또는 VH 영역; 및/또는 (ii) VL 도메인 또는 VL 영역의 조합을 갖는다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 하기를 포함하는 VH 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR1; (2) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 갖는 VH CDR3; 및 서열식별번호: 8-10로 구성된 군으로부터 선택된 VL 영역 (표 5에서 제시됨). 일부 구현예에서, VL 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 갖는다. 다른 구현예에서, VL 영역은 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, VL 영역은 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 갖는다.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 표 6에서 제시된 바와 같이 서열식별번호: 11-13으로 구성된 군으로부터 선택된 VH 영역; 및 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 1 및 7로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.또한 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 표 6에서 제시된 바와 같이 서열식별번호: 11-13으로 구성된 군으로부터 선택된 VH 영역; 및 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3.또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 표 6에서 제시된 바와 같이 서열식별번호: 11-13으로 구성된 군으로부터 선택된 VH 영역; 및 하기를 포함하는 VL 영역을 포함한다: (1) 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR1; (2) 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR2; 및 (3) 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 갖는 VL CDR3. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열식별번호: 11의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열식별번호: 12의 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열식별번호: 13의 아미노산 서열을 갖는다.
PD-1 폴리펩타이드, PD-1 폴리펩타이드 단편, PD-1 펩타이드, 또는 PD-1 에피토프에 결합하는 항-PD-1 항체의 면역글로불린 중쇄, 경쇄, VH 영역, VL 영역, VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3, VL CDR1, VL CDR2, 및/또는 VL CDR3을 인코딩하는 단리된 핵산 분자가 본 명세서에서 또한 제공된다. 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 및 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VL 영역 및 VH 영역에 대한 예시적인 핵산 서열은 표 7-8에 나타나 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-1의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 11의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-2의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 11의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-3의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 12의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 10의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-4의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 12의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-5의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 9의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD1AB-6의 VH 및 VL 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 VH 서열식별번호: 13의 아미노산 서열, 및 VL 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 경쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 불변 영역을 포함한다:
TVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 41).
다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC K VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 36, 강조된 K322).
일부 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하지 않는다.
특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG1-K322A Fc 영역을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC A VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 37, 강조된 K322A 치환).
일부 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4 Fc 영역을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP S CPAPEF L GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 38, 강조된 S228 및 L235).
또 다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4P Fc 영역을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 39, 강조된 S228P 치환).
또 다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 하기의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4PE Fc 영역을 포함한다: ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEF E GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 40, 강조된 S228P 및 L235E 치환).
일부 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 갖는 인간 IgG4PE Fc 영역을 포함하지 않는다.
또 다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 경쇄는 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 갖는 불변 영역을 포함하고; 그리고 중쇄는 서열식별번호: 36-40로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 경쇄는 아래와 같은 아미노산 서열을 포함한다:
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSGQSVLYSSNQKNFLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQYLYSWTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (서열식별번호: 31, LC_PD1AB-6-IgG1).
일부 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 아래와 같은 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC K VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 32, HC_PD1AB-6-IgG1, 강조된 K322).
다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 아래와 같은 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKC A VSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 33, HC_PD1AB-6-IgG1-K322A, 강조된 K322A 치환).
또 다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 아래와 같은 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 34, HC_PD1AB-6-IgG4P, 이탤릭채 및 밑줄친 IgG4P Fc 골격).
또 다른 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 상기 중쇄는 아래와 같은 아미노산 서열을 포함한다:
EVQLVQSGAEVKKPGATVKISCKASGFNIKDTYMHWVQQAPGKGLEWMGRIDPANGDRKYDPKFQGRVTITADTSTDTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSGPVYYYGSSYVMDYWGQGTTVTVSS ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP P CPAPEF E GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (서열식별번호: 35, HC_PD1AB-6-IgG4PE, 이탤릭채 및 밑줄친 IgG4PE Fc 골격).
하나의 특별한 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 (i) 상기 경쇄는 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 (ii) 상기 중쇄는 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 (i) 상기 경쇄는 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 (ii) 상기 중쇄는 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 특정한 구현예, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 (i) 상기 경쇄는 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 (ii) 상기 중쇄는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 특정 구현예에서, PD-1 폴리펩타이드 (예를 들면, PD-1, 예를 들면 인간 PD-1의 ECD)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에서 제공된 항체는, 경쇄 및 중쇄를 포함하되, 여기서 (i) 상기 경쇄는 서열식별번호: 31의 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 (ii) 상기 중쇄는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다.
또 다른 측면에서, PD-1에 결합하기 위해 예시된 항체 또는 기능적 단편 중 하나와 경쟁한는 항체가 제공된다. 그와 같은 항체는 또한, 본 명세서의 예시된 항체, 또는 중첩 에피토프와 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 예시된 항체와 동일한 에피토프와 경쟁하거나 그것에 결합하는 항체 및 단편은 유사한 기능 특성을 나타내는 것으로 기대된다. 예시된 항원-결합 단백질 및 단편은 표 1-6의 것들을 포함하는, 본 명세서에서 제공된 VH 및 VL 영역, 및 CDR을 갖는 것들을 포함한다. 따라서, 특정 예로서, 제공된 항체는 하기를 포함하는 항체와 경쟁하는 것들을 포함한다: (a) 표 1-2에서 열거된 항체에 대해 열거된 CDR 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 모두; (b) 표 5-6의 항체에 대해 열거된 VH 및 VL 영역으로부터 선택된 VH 및 VL; 또는 (c) 표 5-6에서 열거된 항체에 대해 지정된 VH 및 VL을 포함하는 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-1이다. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-2이다. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-3이다. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-4이다. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-5이다. 일부 구현예에서, 항체는 PD1AB-6이다.
또 다른 측면에서, 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 PD-1 또는 사이노몰구스 PD-1의 에피토프를 포함하는 영역에 결합한다. 예를 들면, 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 인간 PD-1의 아미노산 잔기 33 내지 109를 포함하는 인간 PD-1 (서열식별번호: 42)의 영역에 결합한다. 또 다른 측면에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 특이적인 인간 PD-1의 에피토프에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-109 (서열식별번호: 43) 중 적어도 하나에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-105 (서열식별번호: 44) 중 적어도 하나에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1개의 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1개의 잔기에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 2개 이상의 잔기에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 3개 이상의 잔기에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 4개 이상의 잔기에 결합한다.
일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 5개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 6개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 7개 이상의 잔기에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 8개 이상의 잔기에 결합한다.
특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 9개 이상의 잔기에 결합한다.
다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 10개 모두에 결합한다.
또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N33에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 T51에 결합한다. 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 S57에 결합한다. 하나의 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 L100에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 N102에 결합한다. 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 G103에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 R104에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 G103 및 R104에 결합한다. 또 다른 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 D105에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 H107에 결합한다. 특정 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, PD-1에 결합될 때, 서열식별번호: 42의 아미노산 서열 내의 S109에 결합한다. 상기-언급된 아미노산 PD-1 결합 부위 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 초과 개의 임의의 조합이 또한 고려된다.
일 측면에서, PD-1에 특이적으로 결합하고 PD-1 활성 및/또는 발현 (예를 들면, PD-1 신호전달을 활성화하고/거나 PD-1 발현을 억제할 수 있는) 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 인간 PD-1의 ECD에 특이적으로 결합하고, 적어도 1종의 PD-1 활성을 활성화하고 (예를 들면, 부분적으로 활성화하고) (예를 들면, 사이토카인 생산을 억제하는) 본 명세서에서 제공된 항체인 PD-1 효능제가 제공된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 PD-1 효능제는 인간 PD-1의 ECD에 특이적으로 결합하고 PD-1 발현을 하향조절하는, 본 명세서에서 제공된 항체이다. 특정 구현예에서, (a) 예를 들면, 사이토카인 생산의 억제에 의한 측정시, T 세포 활성을 약화시키고/거나 (b) 세포에서 PD-1 발현을 하향조절하는 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, (a) 예를 들면, 사이토카인 생산의 억제에 의한 측정시, T 세포 활성을 약화시키고; (b) 세포에서 PD-1 발현을 하향조절하고/거나; (c) PD-1에 결합하는 PD-L1 및/또는 PD-L2를 억제하지 않는 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 PD-1의 ECD, 또는 그것의 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
PD-1 활성은 PD-1 예컨대 당해 분야에서 공지되거나 기재된 것들의 임의의 활성과 관련될 수 있다. PD-1 활성 및 PD-1 신호전달은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 특정 측면에서, PD-1 활성은 하기에 의해 유도된다: PD-1 리간드 (예를 들면, PD-L1) (이는 PD-1에 결합함). PD-1의 발현 수준은 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다 (예를 들면, 웨스턴 블랏팅, ELISA, 면역조직화학, 또는 유세포측정). 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하고 PD-1 발현을 감소시키는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하고 T 세포 활성를 약화시키는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하고 사이토카인 생산을 억제하는 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하고 PD-1 신호전달을 활성화하고 (예를 들면, 부분적으로 활성화하는) 항체가 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 PD-1의 ECD, 또는 그것의 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 T 세포 활성을 약화시킨다 (예를 들면, 부분적으로 약화시킨다). 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 15%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 25%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 35%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 45%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 55%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 60%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 65%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 70%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 75%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 80%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 85%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 90%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 95%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 98%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 99%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 100%까지 T 세포 활성을 약화시킨다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 25% 내지 약 65%까지 T 세포 활성을 약화시킬 수 있다 (예를 들면, 부분적으로 약화시킬 수 있다). 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 임의의 항-PD-1 항체 없는 자극의 존재에서 T 세포 활성에 관한 것이다. 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)에 의한 자극의 존재에서 T 세포 활성에 관한 것이다. T 세포 활성의 비-제한적인 예는 사이토카인의 분비이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-2 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-2 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MesoScale™ Discovery (MSD) 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-2 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-2 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-2 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는의 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-2 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-17 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-17 분비의 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비의 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-17 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 에서 IL-17 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재 에서 IL-17 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-17 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IFN-γ 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IFN-γ 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IFN-γ 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IFN-γ 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-1 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-1 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-1 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-1 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-1 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-1 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-6 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-6 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-6 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-6 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-6 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-6 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-12 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-12 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-12 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-12 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-12 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-12 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-22 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-22 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-22 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-22 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-22 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-22 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 적어도 약 85%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 적어도 약 90%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 IL-23 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, IL-23 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-23 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 IL-23 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 IL-23 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 IL-23 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, GM-CSF 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 GM-CSF 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 GM-CSF 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 GM-CSF 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포로부터) TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 까지 TNF-α 분비를 억제한다 적어도 약 90%이다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, TNF-α 분비는 항-PD-1 항체의 부재에서 TNF-α 분비 와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 TNF-α 분비 와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)는 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 TNF-α 분비를 억제한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 방법에 의해 평가된다 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, EC50는 MSD 멀티플렉스 검정에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체) PD-1에 특이적으로 결합하고 (예를 들면, 세포, 예를 들면, T 세포에서) PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 5%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 10%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 15%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 20%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 30%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 35%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 40%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 45%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 50%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 55%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 60%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 65%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 70%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 75%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 80%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 85%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 90%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 95%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 98%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 99%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, 유세포측정, 웨스턴 블랏팅, 노던 블랏팅, 또는 RT-PCR)에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 유세포측정에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 웨스턴 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 노던 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 RT-PCR에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, PD-1 발현은 항-PD-1 항체의 부재에서 PD-1 발현 하향조절과 관련하여 하향조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현은 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)의 존재에서 PD-1 발현 하향조절과 관련하여 하향조절된다.
특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 (예를 들면, 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체)은 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 50 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 40 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 30 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 20 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 10 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 5 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 1 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 50 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 40 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 30 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 20 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 10 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 5 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 1 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 일 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 PD-1 발현을 하향조절한다. 특정 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 다른 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, 유세포측정, 웨스턴 블랏팅, 노던 블랏팅, 또는 RT-PCR)에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, EC50는 유세포측정에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, EC50는 웨스턴 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, EC50는 노던 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, EC50는 RT-PCR에 의해 평가된다.
특정 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 24시간만큼 일찍 일어난다. 일부 구현예에서, 상기 접촉은 항체와의 접촉이다. 다른 구현예에서, 상기 접촉은 그것의 항원-결합 단편과의 접촉이다.
일부 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제에 선행한다.
다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제와 동반된다.
또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 6시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 8시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 10시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 12시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 14시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 16시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 18시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 일 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 20시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 22시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어나고, 그리고 사이토카인 억제 후이다.
4.3.1.1
다클론성 항체
본 개시내용의 항체는 다클론성 항체를 포함할 수 있다. 다클론성 항체를 제조하는 방법은 숙련가에게 공지되어 있다. 다클론성 항체는, 예를 들면, 면역화 제제 및, 원하는 경우, 아쥬반트의 하나 이상의 주사에 의해, 포유동물에서 상승될 수 있다. 전형적으로, 면역화 제제 및/또는 아쥬반트는 다중 피하 또는 복강내 주사에 의해 포유동물에서 주사될 것이다. 면역화 제제는 PD-1 폴리펩타이드 또는 이의 융합 단백질을 포함할 수 있다. 면역화 제제를 면역화될 포유동물에서 면역원성인 것으로 공지된 단백질에 접합시키거나 포유동물을 단백질 및 하나 이상의 아쥬반트로 면역화시키는 것이 유용할 수 있다. 이러한 면역원성 단백질의 예는, 비제한적으로, 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청 알부민, 소 티로글로불린, 및 대두 트립신 억제제를 포함한다. 이용될 수 있는 아쥬반트의 예는 Ribi, CpG, Poly 1C, 프로인트 완전 아주반트, 및 MPL-TDM 아쥬반트 (모노포스포릴 지질 A, 합성 트레할로오스 디코리노마이콜레이트)를 포함한다. 면역화 프로토콜은 과도한 실험과정 없이 당해 분야의 숙련가에 의해 선택될 수 있다. 이후, 포유동물을 출혈시키고, 혈청이 PD-1 항체 역가에 대해 분석될 수 있다. 원하는 경우, 포유동물은 항체 역가가 증가하거나 안정상태를 유지할 때까지 부스팅될 수 있다. 추가로 또는 대안적으로, 림프구는 아래에 기재된 바와 같은 하이브리도마로부터 단클론성 항체의 융합 및 제조를 위해 면역화된 동물로부터 수득될 수 있다.
4.3.1.2
단클론성 항체
본 개시내용의 항체는 대안적으로 단클론성 항체일 수 있다. 단클론성 항체는 문헌[Kohler 등, 1975, Nature 256: 495-97]에 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조될 수 있거나, 또는 하기에 의해 제조될 수 있다: 재조합 DNA 방법 (참고, 예를 들면, 미국특허제4,816,567호).
하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대 햄스터는 상기에 기재된 바와 같이 면역화되어 림프구를 유도하며, 상기 림프구는 면역화를 위해 사용되는 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 면역화 후, 림프구는 단리된 다음 적합한 융합 제제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여 골수종 세포주와 융합되어, 하이브리도마 세포를 형성한다 (Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice 59-103 (1986)).
이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 비융합된 친계 골수종 세포 (융합 파트너로도 불림)의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 씨딩되고 성장된다. 예를 들면, 친계 골수종 세포가 효소 하이포잔틴 구아닌 포스포리보실 전달효소 (HGPRT 또는 HPRT)가 결여되면, 하이브리도마를 위한 선택적 배양 배지는 전형적으로 하이포잔틴, 아미노프테린, 및 티미딘 (HAT 배지)을 포함할 것이고, 이는 HGPRT-결핍된 세포의 성장을 방지한다.
예시적인 융합 파트너 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의해 항체의 안정적인 고-수준 생산을 지원하며, 비융합된 친계 세포에 대해 선택된 선택적 배지에 민감한 세포이다. 예시적인 골수종 세포주는 쥣과 골수종 주, 예컨대 SP-2 및 유도체, 예를 들면, 미국 종균 협회 (Manassas, VA)로부터 이용가능한 X63-Ag8-653 세포, 및 솔크 연구소 세포 분배 센터 (San Diego, CA)로부터 이용가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주가 또한 인간 단클론성 항체의 생산을 위해 기술되었다 (Kozbor, 1984, Immunol.133: 3001-05; 및 Brodeur 등, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987)).
하이브리도마 세포가 성장하고 있는 배양 배지는 항원에 대한 단클론성 항체의 생산을 위해 분석된다. 하이브리도마 세포에 의해 생상된 단클론성 항체의 결합 특이성은 면역침강에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 RIA 또는 ELISA에 의해 결정된다. 단클론성 항체의 결합 친화성은, 예를 들면, 하기에 기재된 스카차드(Scatchard) 분석에 의해 결정될 수 있다: Munson등, 1980, Anal.Biochem.107: 220-39.
원하는 특이성, 친화성, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 확인되면, 클론은 제한 희석 절차에 의해 서브클론되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다 (Goding, 상기). 이러한 목적을 위한 적합한 배양 배지는, 예를 들면, DMEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 또한, 하이브리도마 세포는, 예를 들면, 세포를 마우스 내로 i.p. 주사함으로써 동물에서 복수 (ascites) 종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
아클론에 의해 분비된 단클론성 항체는 종래의 항체 정제 절차, 예컨대, 예를 들면, 친화성 크로마토그래피 (예를 들면, 단백질 A 또는 단백질 G-세파로오스를 사용하여) 또는 이온교환 크로마토그래피, 하이드록실인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 등에 의해 배양 배지, 복수 유체, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
단클론성 항체를 코딩하는 DNA는 쉽게 단리되고 종래의 절차 (예를 들면, 쥣과 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여)를 사용하여 서열분석된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원으로서 작용할 수 있다. 단리되면, DNA는 발현 벡터에 들어갈 수 있고, 이는 이후에 항체 단백질을 생산하지 않는 숙주 세포, 예컨대 E. 콜리 세포, 유인원 COS 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 내로 형질감염되어, 재조합 숙주 세포에서 단클론성 항체의 합성을 얻을 수 있다. 항체를 코딩하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 관한 검토 논문은 하기를 포함한다: Skerra 등, 1993, Curr.Opinionin Immunol.5: 256-62 및 Plckthun, 1992, Immunol.Revs.130: 151-88.
일부 구현예에서, PD-1 에피토프에 결합하는 항체는 (1) 엄격한 조건 하에 (예를 들면, 약 45 ℃의 6X 염화나트륨/나트륨 시트레이트 (SSC)에서 필터-결합된 DNA에의 혼성화 후 약 50-65 ℃의 0.2X SSC/0.1% SDS에서 1회 이상의 세척), 고도로 엄격한 조건 하에 (예를 들면, 약 45 ℃의 6X SSC에서 필터-결합된 DNA에의 혼성화 후 약 68 ℃의 0.1X SSC/0.2% SDS에서 1회 이상 세척), 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건 하에 본원에 기재된 VH 및/또는 VL 도메인 중 어느 하나를 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 보체에 혼성화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 VH 도메인의 아미노산 서열 및/또는 VL 도메인의 아미노산 서열을 포함한다. 참고, 예를 들면, CurrentProtocols in Molecular Biology Vol. I, 6.3.1-6.3.6 and 2.10.3 (Ausubel 등 eds., 1989).
일부 구현예에서, PD-1 에피토프에 결합하는 항체는 엄격한 조건 하에 (예를 들면, 약 45 ℃의 6X SSC에서 필터-결합된 DNA에의 혼성화 후 약 50-65 ℃의 0.2X SSC/0.1% SDS에서 1회 이상의 세척), 고도로 엄격한 조건 하에 (예를 들면, 약 45 ℃의 6X SSC에서 필터-결합된 핵산에의 혼성화 후 약 68 ℃의 0.1X SSC/0.2% SDS에서 1회 이상 세척), 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 엄격한 혼성화 조건 하에 표 1-2에 묘사된 VH CDR 및/또는 VL CDR 중 어느 것을 코딩하는 뉴클레오타이드 서열의 보체에 혼성화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 코딩된 VH CDR의 아미노산 서열 또는 VL CDR의 아미노산 서열을 포함한다 (참고, 예를 들면, Ausubel등, 상기).
추가 구현예에서, 단클론성 항체 또는 항체 단편은, 예를 들면, 하기에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다: Antibody Phage Display: Methods and Protocols (O’Brien and Aitken eds., 2002). 원칙적으로, 합성 항체 클론은 파아지 코트 단백질에 융합된 항체 가변 영역 (Fv)의 다양한 단편을 디스플레이하는 파아지를 함유하는 파아지 라이브러리를 선별함으로써 선택된다. 이러한 파아지 라이브러리는 원하는 항원에 대해 선별된다. 원하는 항원에 결합할 수 있는 Fv 단편을 발현하는 클론은 항원에 흡착되며 따라서 라이브러리 내의 비-결합 클론과 분리된다. 이후, 결합 클론은 항원으로부터 용출되고 항원 흡착/용출의 추가의 사이클에 의해 더 농축될 수 있다.
가변 도메인은, 예를 들어 하기에 기재된 바와 같이, VH 및 VL가 짧은, 가요성 펩타이드를 통해 공유결합되는 단일-사슬 Fv (scFv) 단편으로서, 또는 이들이 각각 불변 도메인에 융합되고 비-공유적으로 상호작용하는 Fab 단편으로서 기능적으로 표시될 수 있다: Winter 등, 1994, Ann. Rev. Immunol. 12: 433-55.
VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 PCR에 의해 개별적으로 클로닝될 수 있고 파아지 라이브러리에서 무작위로 재조합될 수 있으며, 이후 상기 라이브러리는 하기에 기재된 바와 같이 항원-결합 클론에 대해 탐색될 수 있다: Winter 등, 상기. 면역화된 공급원으로부터의 라이브러리는 하이브리도마를 제작하는 요건 없이 면역원에게 고-친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 원상태 레퍼토리는 하기에 기재된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에게 인간 항체의 단일 공급원을 제공하도록 클로닝될 수 있다: Griffiths 등, 1993, EMBO J 12: 725-34. 마지막으로, 원상태 라이브러리는 또한 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 분절을 클로닝하고, 무작위 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도의 가변성 CDR3 영역을 코딩하고, 예를 들면 하기에 기재된 바와 같이 시험관내 재배열을 달성함으로써 합성으로 제조될 수 있다: Hoogenboom 및 Winter, 1992, J. Mol. Biol. 227: 381-88.
라이브러리의 선별은 당해 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, PD-1 (예를 들면, PD-1 폴리펩타이드, 단편, 또는 에피토프)은 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포 상에 발현된 흡착 플레이트의 웰을 코팅하는데 사용될 수 있거나 스트렙타비딘-코팅된 비드를 이용한 포획을 위한 바이오틴에 접합된 세포 분류에서 사용될 수 있거나, 또는 패닝 디스플레이 라이브러리를 위한 임의의 다른 방법에서 사용될 수 ㅇㅆ다. 느린 해리 동력학 (예를 들면, 양호한 결합 친화성)을 갖는 항체의 선택은 Bass 등, 1990, Proteins 8: 309-14 및 WO 92/09690에 기재된 바와 같이 긴 세척 및 1가 파아지 디스플레이에 의해, 및 하기에 기재된 바와 같이 항원의 낮은 코팅 밀도의 사용에 의해 촉진될 수 있다: Marks 등, 1992, Biotechnol. 10: 779-83.
항-PD-1 항체는 관심 파아지 클론을 선택하는 적합한 항원 선별하는 절차를 설계한 다음, 하기로부터, VH 및/또는 VL 서열 (예를 들면, Fv 서열), 또는 VH 및 VL 서열로부터의 다양한 CDR 서열을 사용한 전장 항-PD-1 항체 클론의 제작에 의해 수득될 수 있다: 하기에 기재된 관심 파아지 클론 및 적합한 불변 영역 (예를 들면, Fc) 서열: Kabat 등, 상기.
또 다른 구현예에서, 항-PD-1 항체는 Bowers 등, 2011, Proc Natl Acad Sci USA. 108: 20455-60에 기재된 바와 같은 방법, 예를 들면, SHM-XHLTM 플랫폼 (AnaptysBio, San Diego, CA)을 사용하여 생성된다. 간단히, 이 접근법에서, IgG의 완전 인간 라이브러리는 하기로서 포유동물 세포주 (예를 들면, HEK293)에서 제작된다: 시작 라이브러리.표적 펩타이드 또는 에피토프에 결합하는 면역글로불린을 디스플레이하는 포유동물 세포가 선택된 다음 (예를 들면, FACS 분류에 의해), 활성화-유도 시티딘 데아미나제 (AID)-촉발된 체세포 과돌연변이가 시험관내에서 재생성되어 항체의 초기에 선택된 풀의 다양성을 확장시킨다. 포유동물 세포 표면 디스플레이를 시험관내 체세포 과돌연변이와 결합시키는 것에 의한 친화성 성숙의 몇 라운드 후, 고친화도, 고특이성 항-PD-1 항체가 생성된다. 항체 라이브러리 및/또는 항체 친화성 성숙을 생성하기 위해 사용될 수 있는 추가의 방법은, 예를 들면, 하기에 개시되어 있으며: 미국특허 제8,685,897호 및 제8,603,930호, 및 미국공개제2014/0170705호, 제2014/0094392호, 제2012/0028301호, 제2011/0183855호, 및 제2009/0075378호, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.
4.3.1.3
항체 단편
본 개시내용은 PD-1에 결합하는 항체 및 항체 단편을 제공한다. 특정 상황에서, 전체의 항체보다 항체 단편을 사용하는 이점이 있다. 단편의 더 작은 크기는 빠른 청소능을 가능하게 하며, 세포, 조직, 또는 기관으로의 개선된 접근으로 이어질 수 있다. 특정 항체 단편의 검토를 위해, 하기를 참고한다: Hudson등, 2003, Nature Med.9: 129-34.
다양한 기술이 항체 단편의 생산을 위해 개발되었다. 종래에, 이들 단편은 온전한 항체의 단백분해 소화를 통해 유래되었다 (참고, 예를 들면, Morimoto 등, 1992, J.Biochem.Biophys.Methods 24: 107-17; 및 Brennan 등, 1985, Science 229: 81-83). 그러나, 이들 단편은 현재 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생산될 수 있다. Fab, Fv, 및 scFv 항체 단편은 모두 E. 콜리 또는 효모 세포에서 발현되고 이로부터 분비될 수 있으므로, 이들 단편은 다량으로 손쉽게 생산될 수 있다. 항체 단편은 상기 논의된 항체 파아지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 대안적으로, Fab’-SH 단편은 E. 콜리로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab’)2 단편을 형성할 수 있다 (Carter 등, 1992, Bio/Technology 10: 163-67). 또 다른 접근법에 따르면, F(ab’)2 단편은 재조합 숙주 세포 배양으로부터 직접 단리될 수 있다. 구제 (salvage) 수용체 결합 에피토프 잔기를 포함하는 증가된 생체내 반감기를 갖는 Fab 및 F(ab’)2 단편은, 예를 들면 하기에 기재되어 있다: 미국특허제5,869,046호. 항체 단편의 생산을 위한 다른 기술은 당업자에게 분명할 것이다특정 구현예에서, 항체는 단일 사슬 Fv 단편 (scFv)이다 (참고, 예를 들면, WO 93/16185; 미국특허제5,571,894호 및 제5,587,458호). Fv 및 scFv는 불변 영역이 결여된 온전한 결합 부위를 가지므로; 이들은 생체내 사용 동안 감소된 비특이적 결합에 적합할 수 있다. scFv 융합 단백질은 scFv의 아미노 또는 카복시 말단에서 효과기 단백질의 융합을 생성하도록 제작될 수 있다 (참고, 예를 들면, Borrebaeck ed., 상기). 항체 단편은 또한, 예를 들면, 상기에 인용된 참조문헌에 기재된 바와 같이 “선형 항체”일 수 있다. 이러한 선형 항체는 단일특이적 또는 다중-특이적, 예컨대 이중특이적일 수 있다.
더 작은 항체-유래 결합 구조는 단일 가변 도메인 항체 (sdAb)로도 불리는 별개의 가변 도메인 (V 도메인)이다. 특정 유형의 유기체, 낙타과 및 연골 어류 (cartilaginous fish)는 그의 면역계의 일부로서 Fc 등가 도메인 구조 위에 실장된 고친화도 단일 V-유사 도메인을 갖는다. (Woolven 등, 1999, Immunogenetics 50: 98-101; 및 Streltsov 등, 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101: 12444-49). V-유사 도메인 (낙타과에서 VhH 및 상어에서 V-NAR로 불림)은 전형적으로 긴 표면 루프를 디스플레이하여, 표적 항원의 공동 (cavity)의 침투를 허용한다. 이들은 또한 소수성 표면 패치를 마스킹함으로써 단리된 VH 도메인을 안정화시킨다.
이들 VhH 및 V-NAR 도메인은 sdAb를 조작하는데 사용되어 왔다. 인간 V 도메인 변이체는 안정적인 높은 결합 VL- 및 VH-유래 도메인을 야기하는 파아지 라이브러리 및 다른 접근법으로부터의 선택을 사용하여 설계되었다.
본원에 제공된 항체는, 비제한적으로, 면역글로불린 분자 및 면역글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 예를 들면, PD-1 에피토프에 결합하는 항원 결합 부위를 함유하는 분자를 포함한다. 본원에 제공된 면역글로불린 분자는 면역글로불린 분자의 임의의 부류 (예를 들면, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA) 또는 임의의 서브클래스 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)일 수 있다.
항체의 변이체 및 유도체는 PD-1 에피토프에 결합하는 능력을 보유하는 항체 기능적 단편을 포함한다. 예시적인 기능적 단편은 Fab 단편 (예를 들면, 항원-결합 도메인을 함유하고 경쇄 및 디설파이드 결합에 의해 브릿지된 중쇄의 일부를 포함하는 항체 단편); Fab’ (예를 들면, Fab를 포함하는 단일 항원-결합 도메인 및 중쇄 내지 힌지 영역의 추가의 부분을 포함하는 항체 단편); F(ab’)2 (예를 들면, 중쇄의 힌지 영역 내의 사슬간 디설파이드 결합에 의해 연결된 2개의 Fab’ 분자; Fab’ 분자는 동일 또는 상이한 에피토프로 지향될 수 있음); 이중특이적 Fab (예를 들면, 2개의 항원 결합 도메인을 갖는 Fab 분자, 이들 각각은 상이한 에피토프로 지향됨); scFv로도 알려진 가변 영역을 포함하는 단일 사슬 (예를 들면, 10-25개 아미노산의 사슬에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변성, 항원-결합 결정 영역); 디설파이드-연결된 Fv, 또는 dsFv (예를 들면, 디설파이드 결합에 의해 함께 연결된 항체의 단일 경쇄 및 중쇄의 가변성, 항원-결합 결정 영역); 낙타화된 VH (예를 들면, VH 계면에 있는 일부 아미노산이 자연 발생 낙타 항체의 중쇄에서 발견되는 것인 항체의 단일 중쇄의 가변성, 항원-결합 결정적 영역); 이중특이적 scFv (예를 들면, 2개의 항원-결합 도메인을 갖는 scFv 또는 dsFv 분자, 이들 각각은 상이한 에피토프로 지향될 수 있음); 디아바디 (예를 들면, 제1 scFv의 VH 도메인이 제2 scFv의 VL 도메인과 조립되고 제1 scFv의 VL 도메인이 제2 scFv의 VH 도메인과 조립될 때 형성되는 이량체화된 scFv; 디아바디의 2개의 항원-결합 영역은 동일 또는 상이한 에피토프로 지향될 수 있음); 및 트리아바디 (예를 들면, 디아바디와 유사한 방식으로 형성되지만 3개의 항원-결합 도메인이 단일 복합체로 생성되는 삼량체화된 scFv; 3개의 항원-결합 도메인은 동일 또는 상이한 에피토프로 지향될 수 있음)를 포함한다.
4.3.1.4
인간화 항체
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1을 포함하는 PD-1에 결합하는 인간화 항체일 수 있다. 예를 들면, 본 개시내용의 인간화 항체는 표 1-2에 나타낸 바와 같이 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 비-인간 항체를 인간화하기 위한 다양한 방법이 당해 기술에 공지되어 있다. 예를 들면, 인간화 항체는 내부에 도입된 비-인간 공급원으로부터의 하나 이상의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 “도입” 잔기로 불리며, 이는 전형적으로 “도입” 가변 도메인으로부터 취해진다. 인간화는, 예를 들면, 하기에 의해 Jones 등, 1986, Nature 321: 522-25; Riechmann 등, 1988, Nature 332: 323-27; 및 Verhoeyen 등, 1988, Science 239: 1534-36)의 방법에 따라 수행될 수 있다: 초가변 영역 서열을 인간 항체의 대응하는 서열로 대체.
일부 경우에, 인간화 항체는 CDR 이식에 의해 제작되며, 여기서 친계 비-인간 항체 (예를 들면, 설치류)의 6개의 CDR의 아미노산 서열은 인간 항체 프레임워크 상에 이식된다. 예를 들면, Padlan 등은 CDR 내의 잔기 중 약 3분의 1만이 실제로 항원과 접촉한다는 것을 결정하였고, 이들을 “특이성 결정 잔기,” 또는 SDR로 명명하였다 (Padlan 등, 1995, FASEB J.9: 133-39). SDR 이식 기술에서, SDR 잔기만이 인간 항체 프레임워크 상에 이식된다(참고, 예를 들면, Kashmiri 등, 2005, Methods 36: 25-34).
인간화 항체를 제조하는데 사용되는 경쇄 및 중쇄의 인간 가변 도메인의 선택은 항원성을 감소시키는데 중요할 수 있다. 예를 들면, 소위 “최적 적합(best-fit)” 방법에 따르면, 비-인간 (예를 들면, 설치류) 항체의 가변 도메인의 서열은 공지된 인간 가변성-도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 선별된다. 설치류의 것과 가장 근접한 인간 서열은 인간화 항체에 대한 인간 프레임워크로서 선택될 수 있다 (Sims 등, 1993, J. Immunol. 151: 2296-308; 및 Chothia 등, 1987, J. Mol. Biol. 196: 901-17). 또 다른 방법은 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크를 사용한다. 동일한 프레임워크가 몇 가지 상이한 인간화 항체에 대해 사용될 수 있다 (Carter 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4285-89; 및 Presta 등, 1993, J. Immunol. 151: 2623-32). 일부 경우에, 프레임워크는 가장 풍부한 인간 서브클래스, VL6 하위그룹 I (VL6I) 및 VH 하위그룹 III (VHIII)의 공통 서열로부터 유래된다. 또 다른 방법에서, 인간 생식계열 유전자는 프레임워크 영역의 공급원으로서 사용된다.
초인간화 (superhumanization)로 불리는 CDR의 비교에 기초한 대안적인 패러다임에서, FR 상동성은 무관하다. 상기 방법은 비-인간 서열을 기능성 인간 생식계열 유전자 레퍼토리와 비교하는 것으로 구성된다. 이후, 쥣과 서열과 동일하거나 밀접하게 관련된 표준 구조를 코딩하는 유전자가 선택된다. 다음으로, 비-인간 항체와 표준 구조를 공유하는 유전자 내에서, CDR 내에서 가장 높은 상동성을 갖는 것이 FR 공여체로서 선택된다. 마지막으로, 비-인간 CDR은 이들 FR 상에 이식된다 (참고, 예를 들면, Tan 등, 2002, J. Immunol. 169: 1119-25).
또한, 항체가 항원에 대한 이들의 친화성 및 다른 양호한 생물학적 특성을 유지하면서 인간화되는 것이 일반적으로 바람직하다. 이 목표를 달성하기 위해, 하나의 방법에 따르면, 인간화 항체는 친계 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용한 친계 서열 및 다양한 개념의 인간화된 생성물의 분석 과정에 의해 제조된다. 3차원 면역글로불린 모델이 통상적으로 이용가능하며 이는 당해 분야의 숙련가에게 익숙하다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 정황적 3차원 형태적 구조를 예시하고 나타내는 컴퓨터 프로그램이 이용가능하다. 이들은, 예를 들면, 하기를 포함한다: WAM (Whitelegg and Rees, 2000, Protein Eng.13: 819-24), Modeller (Sali and Blundell, 1993, J. Mol. Biol. 234: 779-815), 및 Swiss PDB Viewer (Guex and Peitsch, 1997, Electrophoresis 18: 2714-23). 이들 디스플레이의 검사는 후보 면역글로불린 서열의 기능에서 잔기의 가능한 역할의 분석, 예를 들면, 후보 면역글로불린이 그의 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기의 분석을 허용한다. 이런 식으로, FR 잔기는 수령체 및 도입 서열로부터 선택되고 조합되어, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성과 같은 원하는 항체의 특징이 달성된다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합에 영향을 미치는데 직접 및 가장 실질적으로 관여한다.
항체 인간화를 위한 또 다른 방법은 인간 스트링 함량 (HSC)으로 불리는 항체 인간화의 측정기준에 기초한다. 이 방법은 마우스 서열을 인간 생식계열 유전자의 레퍼토리와 비교하며, 차이를 HSC로서 채점한다. 이후, 표적 서열은 전반적인 동일성 측정법을 사용하기 보다는 그의 HSC를 최대화하여 다수의 다양한 인간화된 변이체를 생성함으로써 인간화된다 (Lazar 등, 2007, Mol.Immunol.44: 1986-98).
상기 기재된 방법 외에도, 경험적 방법이 인간화 항체를 생성하고 선택하는데 사용될 수 있다. 이들 방법은 인간화된 변이체의 큰 라이브러리의 생성 및 농축 기술 또는 고처리량 선별 기술을 사용한 최상의 클론의 선택에 기초한 방법을 포함한다. 항체 변이체는 파아지, 리보솜, 및 효모 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있을 뿐만 아니라 박테리아 콜로니 선별에 의해 단리될 수 있다 (참고, 예를 들면, Hoogenboom, 2005, Nat.Biotechnol. 23: 1105-16; Dufner등, 2006, Trends Biotechnol. 24: 523-29; Feldhaus 등, 2003, Nat.Biotechnol. 21: 163-70; 및 Schlapschy 등, 2004, Protein Eng.Des.Sel.17: 847-60).
FR 라이브러리 접근법에서, 잔기 변이체의 수집물이 FR 내의 특이적인 위치에 도입된 다음 이식된 CDR을 가장 잘 지원하는 FR을 선택하는 라이브러리의 선별이 수행된다. 치환될 잔기는 CDR 구조에 잠재적으로 기여하는 것으로 확인된 “베르니어” 잔기의 일부 또는 모두 (참고, 예를 들면, Foote 및 Winter, 1992, J. Mol. Biol. 224: 487-99), 또는 하기에 의해 확인된 표적 잔기의 보다 제한된 세트로부터 확인된 “베르니어” 잔기의 일부 또는 모두를 포함할 수 있다: Baca 등(1997, J. Biol. Chem. 272: 10678-84).
FR 셔플링에서, 전체 FR은 선택된 잔기 변이체의 조합 라이브러리를 생성하는 대신에 비-인간 CDR과 조합된다 (참고, 예를 들면, Dall’Acqua 등, 2005, Methods 36: 43-60). 상기 라이브러리는 VL을 먼저 인간화한 다음 VH를 인간화하는 2-단계 공정에서 결합에 대해 선별될 수 있다. 대안적으로, 1-단계 FR 셔플링 공정이 사용될 수 있다. 그와 같은 공정은 수득한 항체가 향상된 발현, 증가된 친화성, 및 열적 안정성을 포함하는 개선된 생화학적 및 물리화학 특성을 나타냈기 때문에, 2-단계 선별보다 더 효율적인 것으로 나타났다 (참고, 예를 들면, Damschroder 등, 2007, Mol.Immunol.44: 3049-60).
“인간화조작 (humaneering)” 방법은 필수적인 최소 특이성 결정인자 (MSD)의 실험적 확인에 기반하며 비-인간 단편의 인간 FR의 라이브러리로의 순차적 대체 및 결합의 평가에 기반한다. 그것은 비-인간 VH 및 VL 사슬의 CDR3의 영역으로 시작하며 비-인간 항체의 다른 영역을 VH 및 VL 모두의 CDR1 및 CDR2를 포함하는 인간 FR로 점진적으로 대체한다. 이 방법론은 전형적으로 구별되는 인간 V-분절 CDR을 갖는 다수의 서브클래스로부터 항체의 에피토프 유지 및 확인을 야기한다. 인간화조작은 인간 생식계열 유전자 항체와 91-96% 상동성인 항체의 단리를 허용한다 (참고, 예를 들면, Alfenito, Cambridge Healthtech Institute’s Third Annual PEGS, The Protein Engineering Summit,2007).
“인간 공학기술” 방법은 인간에서 감소된 면역원성을 가짐에도 불구하고 최초 비-인간 항체의 바람직한 결합 특성을 보유하는 변형된 항체를 생산하기 위해, 항체의 아미노산 서열을 특이적으로 변화시킴으로써, 비-인간 항체 또는 항체 단편, 예컨대 마우스 또는 키메라 항체 또는 항체 단편을 변화시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 상기 기술은 비-인간 (예를 들면, 마우스) 항체의 아미노산 잔기를 “저 위험,” “중간 위험,” 또는 “고 위험” 잔기로 분류하는 것을 포함한다. 상기 분류는 치환이 수득한 항체의 폴딩에 영향을 미칠 위험성에 대해 특정한 치환 (예를 들면, 인간에서의 면역원성을 위해)을 하는 예상된 이점을 평가하는 전반적인 위험/보상 계산을 사용하여 수행된다. 비-인간 (예를 들면, 마우스) 항체 서열의 주어진 위치 (예를 들면, 저 또는 중간 위험)에서 치환될 특정한 인간 아미노산 잔기는 비-인간 항체의 가변 영역으로부터의 아미노산 서열을 특이적인 또는 공통 인간 항체 서열의 상응하는 영역과 정렬함으로써 선택될 수 있다. 비-인간 서열 내의 저 또는 중간 위험 위치에 있는 아미노산 잔기는 정렬에 따라 인간 항체 서열 내의 상응하는 잔기로 치환될 수 있다. 인간 조작된 단백질을 제조하기 위한 기술은 하기 문헌에 더 상세히 기재되어 있다: Studnicka 등, 1994, Protein Engineering 7: 805-14; U.S. 특허제5,766,886호; 제5,770,196호; 제5,821,123호; 및 제5,869,619호; 및 PCT 공개 WO 제93/11794호.
4.3.1.5
인간 항체
인간 항-PD-1 항체는 인간-유래 파아지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열(들)을 공지된 인간 불변 도메인 서열(들)과 조합시킴으로써 제작될 수 있다. 대안적으로, 본 개시내용의 인간 단클론성 항-PD-1 항체는 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단클론성 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 헤테로골수종 세포주는, 예를 들면, 하기 문헌에 기재되었다: Kozbor, 1984, J. Immunol. 133: 3001-05; Brodeur 등, Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63 (1987); 및 Boerner 등, 1991, J. Immunol. 147: 86-95.
또한 내인성 면역글로불린 생산의 부재하에 면역화시 인간 항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예를 들면, 마우스)을 생산할 수 있다. 인간 항체 레퍼토리를 발현하는 트랜스제닉 마우스가 다양한 잠재적인 약물 표적에 대한 고-친화성 인간 서열 단클론성 항체를 생성하기 위해 사용되어 왔다 (참고, 예를 들면, Jakobovits, A., 1995, Curr.Opin.Biotechnol. 6(5): 561-66; Brggemann and Taussing, 1997, Curr.Opin.Biotechnol. 8(4): 455-58; U.S. 특허제6,075,181호 및 제6,150,584호; 및 Lonberg 등, 2005, Nature Biotechnol. 23: 1117-25).
대안적으로, 인간 항체는 표적 항원에 대한 항체를 생산하는 인간 B 림프구 (예를 들면, 이러한 B 림프구는 개체로부터 회수될 수 있거나 시험관내에서 면역화되었을 수 있음)의 불멸화를 통해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, Cole 등, Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985); Boerner 등, 1991, J. Immunol. 147(1): 86-95; 및 미국특허제5,750,373호).
유전자 셔플링은 또한 인간 항체가 시작 비-인간 항체와 유사한 친화성 및 특이성을 갖는 경우 비-인간, 예를 들면, 설치류, 항체로부터 인간 항체를 얻는데 사용될 수 있다. “에피토프 각인 (imprinting)” 또는 “유도 선택”으로도 불리는 이 방법에 따르면, 본원에 기재된 바와 같은 파아지 디스플레이 기술에 의해 수득된 비-인간 항체 단편의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역은 인간 V 도메인 유전자의 레퍼토리로 대체되어, 비-인간 사슬/인간 사슬 scFv 또는 Fab 키메라의 집단을 생성한다. 항원을 이용한 선택은 비-인간 사슬/인간 사슬 키메라성 scFv 또는 Fab를 단리시키며, 여기서 상기 인간 사슬은 일차 파아지 디스플레이 클론에서 상응하는 비-인간 사슬의 제거시 파괴된 항원 결합 부위를 회복시킨다 (예를 들면, 상기 에피토프는 인간 사슬 파트너의 선택을 유도(각인)함). 남아있는 비-인간 사슬을 대체하기 위해 상기 공정이 반복되는 경우, 인간 항체가 수득된다 (참고, 예를 들면, PCT WO 93/06213; 및 Osbourn 등, 2005, Methods 36: 61-68). CDR 이식에 의한 비-인간 항체의 전통적인 인간화와 달리, 이 기술은 비-인간 기원의 FR 또는 CDR 잔기가 없는 완전 인간 항체를 제공한다. 세포 표면 항원에 대한 마우스 항체를 인간화하기 위한 유도 선택의 예는 난소암 세포 상에 존재하는 폴레이트-결합 단백질 (참고, 예를 들면, Figini 등, 1998, Cancer Res. 58: 991-96) 및 간세포 암종 상에서 고도로 발현되는 CD147을 포함한다 (참고, 예를 들면, Bao 등, 2005, Cancer Biol. Ther. 4: 1374-80).
유도 선택 접근법의 잠재적인 약점은 다른 것은 일정하게 유지시키면서 하나의 항체 사슬을 셔플링하는 것이 에피토프 소변이 (drift)를 초래할 수 있다는 점이다. 비-인간 항체에 의해 인식되는 에피토프를 유지시키기 위해, CDR 유지가 적용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Klimka 등, 2000, Br.J.Cancer.83: 252-60; 및 Beiboer 등, 2000, J. Mol. Biol. 296: 833-49). 이 방법에서, 비-인간 VH CDR3은 통상적으로 유지되는데, 이 CDR이 항원-결합 부위의 중심에 있을 수 있고 항원 인식을 위한 항체의 가장 중요한 영역일 수 있기 때문이다. 그러나, 일부 사례에서, 비-인간 항체의 VH CDR3 및 VL CDR3, 뿐만 아니라 VH CDR2, VL CDR2, 및 VL CDR1은 유지될 수 있다.
4.3.1.6
이중특이적 항체
이중특이적 항체는 적어도 2개의 상이한 항원에 대한 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 인간 또는 인간화 항체이다. 특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 PD-1에 대한 것이고, 다른 것은 임의의 다른 항원에 대한 것이다. 일부 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 PD-1에 대한 것이고, 다른 것은 PD-1을 발현하는 세포 상에서 발현된 또 다른 표면 항원에 대한 것이다. 특정 구현예에서, 이중특이적 항체는 PD-1의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다 (예를 들면, F(ab’)2 이중특이적 항체).
2개의 중쇄가 상이한 특이성을 갖는 경우 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공-발현에 의하는 것과 같은 이중특이적 항체를 제조하는 방법이 당해 기술에 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Milstein and Cuello,1983, Nature 305: 537-40). 이중특이적 항체를 생성하는 추가의 세부사항을 위해, 참고, 예를 들면, 하기를 참고한다: Bispecific Antibodies (Kontermann ed., 2011).
4.3.1.7
다가 항체
다가 항체는 항체들이 결합하는 하나의 항원에 의해 2가 항체보다 더 빠르게 내재화 (및/또는 이화)될 수 있다. 본 개시내용의 항체는 3개 이상의 항원 결합 부위를 갖는 다가 항체 (IgM 부류 이외) (예를 들면, 4가 항체)일 수 있으며, 이는 항체의 폴리펩타이드 사슬을 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 쉽게 생산될 수 있다. 다가 항체는 이량체화 도메인 및 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 이량체화 도메인은 Fc 영역 또는 힌지 영역을 포함한다(또는 구성된다). 이 시나리오에서, 항체는 Fc 영역 및 Fc 영역의 아미노-말단에 있는 3개 이상의 항원 결합 부위를 포함할 것이다. 특정 구현예에서, 다가 항체는 3 내지 약 8개의 항원 결합 부위를 포함한다 (구성된다). 이러한 하나의 구현예에서, 다가 항체는 4개의 항원 결합 부위를 포함한다 (또는 구성된다). 다가 항체는 적어도 하나의 폴리펩타이드 사슬 (예를 들면, 2개의 폴리펩타이드 사슬)을 포함하며, 여기서 상기 폴리펩타이드 사슬(들)은 2개 이상의 가변 도메인을 포함한다. 예를 들면, 폴리펩타이드 사슬(들)은 VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc를 포함할 수 있고, 여기서 VD1은 제1 가변 도메인이며, VD2는 제2 가변 도메인이고, Fc는 Fc 영역의 하나의 폴리펩타이드 사슬이며, X1 및 X2는 아미노산 또는 폴리펩타이드를 나타내고, n은 0 또는 1이다. 예를 들면, 폴리펩타이드 사슬(들)은 하기를 포함할 수 있다: VH-CH1-가요성 링커-VH-CH1-Fc 영역 사슬; 또는 VH-CH1-VH-CH1-Fc 영역 사슬.본원에서 다가 항체는 적어도 2개의 (예를 들면, 4개) 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 추가로 포함할 수 있다. 본원에서 다가 항체는, 예를 들면, 약 2개 내지 약 8개의 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. 본원에서 고려되는 경쇄 가변 도메인 폴리펩타이드는 경쇄 가변 도메인을 포함하고, 선택적으로, CL 도메인을 추가로 포함한다.
4.3.1.8
Fc 조작
Fc 조작에 의해 본원에 제공된 항-PD-1 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체의 Fc 영역의 변형은 항체의 효과기 기능을 감소 또는 제거한다. 특정 구현예에서, 효과기 기능은 ADCC, ADCP, 및/또는 CDC이다. 일부 구현예에서, 효과기 기능은 ADCC이다. 다른 구현예에서, 효과기 기능은 ADCP이다. 다른 구현예에서, 효과기 기능은 CDC이다. 일 구현예에서, 효과기 기능은 ADCC 및 ADCP이다. 일 구현예에서, 효과기 기능은 ADCC 및 CDC이다. 일 구현예에서, 효과기 기능은 ADCP 및 CDC이다. 일 구현예에서, 효과기 기능은 ADCC, ADCP 및 CDC이다. 이것은 항체의 Fc 영역 내에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 위치 233-236에서의 IgG2 잔기 및 위치 327, 330, 및 331에서의 IgG4 잔기를 사용하여 인간 IgG1로의 치환은 ADCC 및 CDC를 크게 감소시키는 것으로 나타났다 (참고, 예를 들면, Armour 등, 1999, Eur.J. Immunol. 29(8): 2613-24; 및 Shields 등, 2001, J. Biol. Chem. 276(9): 6591-604). 다른 Fc 변이체가 본원의 다른 곳에 제공된다.
항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들면 하기에 기재된 바와 같이 항체 (특히 항체 단편) 내로 구제 수용체 결합 에피토프를 포함시킬 수 있다: 미국특허제5,739,277호. 용어 “구제 수용체 결합 에피토프”는 하기 분자의 Fc 영역의 에피토프를 지칭하고: IgG 분자 (예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), 이는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는 것을 담당한다.
4.3.1.9
대안적인 결합제
본 개시내용은 본원에 개시된 항-PD-1 항체와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 비-면역글로불린 결합제를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-면역글로불린 결합제는 경쟁적 결합 분석에서 본 개시내용의 항-PD-1 항체를 대체하거나 이에 의해 대체된 제제로서 확인된다. 이러한 대안적인 결합제는, 예를 들면, 당해 분야에서 공지된 조작된 단백질 스캐폴드 중 어느 것을 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는 표 1-2 에서 나타낸 바와 같이 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다. 이러한 스캐폴드는, 예를 들면, 리간드 결합 부위를 형성하는 4개의 초가변성 루프를 지지하는 단단한 베타-배럴을 특징으로 하는 단백질 구조인 리포칼린 스캐폴드를 기초로 하는 안티칼린을 포함한다. 신규한 결합 특이성은 기능성 디스플레이 및 유도 선택과 조합된 루프 영역 내의 표적화된 무작위 돌연변이유발에 의해 조작될 수 있다 (참고, 예를 들면, Skerra, 2008, FEBS J.275: 2677-83). 다른 적합한 스캐폴드는, 예를 들면, 하기를 포함할 수 있다: 인간 피브로넥틴 III의 제10 세포외 도메인에 기초한 아드넥틴, 또는 모노바디 (참고, 예를 들면, Koide 및 Koide, 2007, Methods Mol.Biol. 352: 95-109); 포도상구균 단백질 A의 Z 도메인에 기초한 아피바디 (참고, 예를 들면, Nygren 등, 2008, FEBS J.275: 2668-76); 안키린 반복 단백질에 기초한 DARPin (참고, 예를 들면, Stumpp 등, 2008, Drug.Discov.Today 13: 695-701); 인간 Fyn 단백질 키나제의 SH3 도메인에 기초한 피노머 (fynomer) (참고, 예를 들면, Grabulovski 등, 2007, J. Biol. Chem. 282: 3196-204); 설포로버스 아시도라리우스로부터의 Sac7d에 기초한 아피틴 (참고, 예를 들면, Krehenbrink 등, 2008, J. Mol. Biol. 383: 1058-68); 인간 y-B-크리스탈린에 기초한 아필린 (참고, 예를 들면, Ebersbach 등, 2007, J. Mol. Biol. 372: 172-85); 막 수용체 단백질의 A 도메인에 기초한 아비머 (참고, 예를 들면, Silverman 등, 2005, Biotechnol. 23: 1556-61); 시스테인-풍부 노틴 (knottin) 펩타이드 (참고, 예를 들면, Kolmar, 2008, FEBS J.275: 2684-90); 및 조작된 쿠니츠-유형 억제제 (참고, 예를 들면, Nixon 및 Wood, 2006, Curr.Opin.Drug.Discov.Dev.9: 261-68). 검토를 위해, 예를 들면, 하기 문헌을 참고한다: Gebauer 및 Skerra, 2009, Curr.Opin.Chem.Biol. 13: 245-55.
4.3.2
항체 변이체
일부 구현예에서, PD-1에 결합하거나 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들면, 비제한적으로 특이성, 열안정성, 발현 수준, 효과기 기능, 당화, 감소된 면역원성, 또는 용해도를 포함하는, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 제공된 항-PD-1 항체 외에도, 항-PD-1 항체 변이체가 제조될 수 있음이 고려된다. 예를 들면, 항-PD-1 항체 변이체는 코딩 DNA 내로 적절한 뉴클레오타이드 변화를 도입함으로써, 및/또는 원하는 항체 또는 폴리펩타이드의 합성에 의해 제조될 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 아미노산 변화가, 예컨대 당화 부위의 수 또는 위치를 변화시키는 것 또는 막 고착 특징을 변경시키는 것과 같이 항-PD-1 항체의 번역후 과정을 변경시킬 수 있음을 이해할 것이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는, 예를 들면, 임의의 유형의 분자가 항체에 공유결합함으로써 화학적으로 변형된다. 항체 유도체는, 예를 들면, 당화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호/차단 그룹에 의한 유도체화, 화학적 절단, 단백분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 연결 등의 증가 또는 감소에 의해, 화학적으로 변형된 항체를 포함할 수 있다추가로, 항체는 하나 이상의 비-고전적 아미노산을 함유할 수 있다.
변이는 천연 서열 항체 또는 폴리펩타이드와 비교하여 아미노산 서열을 변화시키는 항체 또는 폴리펩타이드를 코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실, 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 하나의 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 대체하는 것, 예컨대 류신을 세린으로 대체하는 것, 예를 들면, 보존적 아미노산 대체의 결과일 수 있다. 삽입 또는 결실은 선택적으로 약 1 내지 5개 아미노산의 범위일 수 있다. 특정 구현예에서, 치환, 결실, 또는 삽입은 최초 분자 대비 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 치환은 하나 이상의 예상된 비-필수 아미노산 잔기에서 이뤄진 보존적 아미노산 치환이다. 상기 허용된 변이는 서열 내에서 체계적으로 아미노산의 삽입, 결실, 또는 치환을 수행하고, 생성된 변이체를 전장 또는 성숙한 천연 서열에 의해 나타난 활성에 대해 시험함으로써 결정될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 1개의 잔기부터 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩타이드까지의 길이 범위의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합, 뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 다른 삽입 변이체는 항체의 N- 또는 C-말단을 효소 (예를 들면, 항체-지향된 효소 전구약물 요법을 위해) 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩타이드와 융합시키는 것을 포함한다.
항체의 생물학적 특성의 실질적인 변형은 (a) 예를 들면, 시트 또는 나선 형태로서 치환의 영역에서 폴리펩타이드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지하는 것에 미치는 그의 효과가 유의하게 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 대안적으로, 특성을 유지시키거나 유의하게 변화시키지 않기 위해, 보존적 (예를 들면, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 갖는 아미노산 그룹 내에서) 치환이 이뤄질 수 있다. 아미노산은 그의 측쇄의 특성의 유사성에 따라 그룹화될 수 있다 (참고, 예를 들면, Lehninger, Biochemistry 73-75 (제2판 1975)): (1) 무극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 무전하 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); 및 (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H).
대안적으로, 자연 발생 잔기는 공통 측쇄 특성에 기초하여 그룹으로 분류될 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비-보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원을 또 다른 부류로 교환하는 것을 수반한다. 이러한 치환된 잔기는 또한 보존적 치환 부위 내로 또는, 잔존 (비-보존된) 부위 내로 도입될 수 있다. 따라서, 일 구현예에서, PD-1 에피토프에 결합하는 항체 또는 그것의 단편은 본원에 제공된 쥣과 단클론성 항체의 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일 구현예에서, PD-1 에피토프에 결합하는 항체 또는 그것의 단편은 표 1-6에 묘사된 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현예에서, PD-1 에피토프에 결합하는 항체 또는 그것의 단편은 표 2에 묘사된 VH CDR 아미노산 서열 및/또는 표 1에 묘사된 VL CDR 아미노산 서열과 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 VH CDR 및/또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함한다. 상기 변이는 당해 분야에서 공지된 방법, 예컨대 올리고뉴클레오타이드-매개된 (부위 지향적) 돌연변이유발, 알라닌 스캐닝, 및 PCR 돌연변이유발을 사용하여 이뤄질 수 있다. 부위 지향적 돌연변이유발 (참고, 예를 들면, Carter, 1986, Biochem J.237: 1-7; 및 Zoller 등, 1982, Nucl.Acids Res. 10: 6487-500), 카세트 돌연변이유발 (참고, 예를 들면, Wells 등, 1985, Gene 34: 315-23), 또는 다른 공지된 기술이 항-PD-1 항체 변이체 DNA를 생산하기 위해 클로닝된 DNA 상에서 수행될 수 있다.
분자의 산화적 안정성을 개선하고 비정상적인 가교결합을 방지하기 위해, 항-PD-1 항체의 적절한 형태를 유지하는데 관여하지 않는 임의의 시스테인 잔기가 또한 예를 들면 또 다른 아미노산, 예컨대 알라닌 또는 세린으로 치환될 수 있다. 반대로, 시스테인 결합(들)이 안정성을 개선하기 위해 (예를 들면, 항체가 항체 단편, 예컨대 Fv 단편인 경우) 항-PD-1 항체에 부가될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 항-PD-1 항체 분자는 “탈-면역화된” 항체이다. “탈-면역화된” 항-PD-1 항체는 인간화된 또는 키메라성 항-PD-1 항체로부터 유래된 항체이며, 이는 각각의 최초 비-탈-면역화된 항체와 비교하여, 그의 아미노산 서열에서 하나 이상의 변경을 가져 항체의 면역원성을 감소시킨다. 이러한 항체 돌연변이체를 생성하기 위한 절차 중 하나는 항체 분자의 T 세포 에피토프의 확인 및 제거를 포함한다. 제1 단계에서, 항체 분자의 면역원성은 몇 가지 방법에 의해, 예를 들면, 당해 분야에서 공지된 바와 같이 T 세포 에피토프의 시험관내 결정 또는 이러한 에피토프의 인실리코 예측에 의해 결정될 수 있다. T 세포 에피토프 기능을 위한 중요 잔기가 확인되면, 면역원성을 제거하고 항체 활성을 보유하도록 돌연변이가 이뤄질 수 있다. 검토를 위해, 예를 들면, 하기를 참고한다: Jones 등, 2009, Methods in Molecular Biology 525: 405-23.
4.3.2.1
시험관내
친화성 성숙
일부 구현예에서, 친계 항체와 비교하여 개선된 특성, 예컨대 친화성, 안정성, 또는 발현 수준을 갖는 항체 변이체는 시험관내 친화성 성숙에 의해 제조될 수 있다. 천연 원형과 같이, 시험관내 친화성 성숙은 돌연변이 및 선택의 원리에 기반한다. 항체의 라이브러리는 유기체 (예를 들면, 파아지, 박테리아, 효모, 또는 포유동물 세포)의 표면 상에서 Fab, scFv, 또는 V 도메인 단편으로서 디스플레이되거나 또는 이들의 코딩 mRNA 또는 DNA와 회합하여 (예를 들면, 공유적으로 또는 비-공유적으로) 디스플레이된다. 디스플레이된 항체의 친화성 선택은 항체를 코딩하는 유전적 정보를 갖는 유기체 또는 복합체의 단리를 가능하게 한다. 디스플레이 방법, 예컨대 파아지 디스플레이를 사용한 2 또는 3회의 돌연변이 및 선택은 일반적으로 낮은 나노몰 범위의 친화성으로 항체 단편을 초래한다. 친화성 성숙된 항체는 표적 항원에 대해 나노몰 또는 심지어 피코몰 친화성을 가질 수 있다.
파아지 디스플레이는 항체의 디스플레이 및 선택을 위한 널리 사용되는 방법이다. 항체는 박테리오파아지 코트 단백질에의 융합체로서 Fd 또는 M13 박테리오파아지의 표면 상에 디스플레이된다. 선택은 “패닝”으로 지칭되는 과정인 파아지-디스플레이된 항체를 그의 표적에 결합시키는 항원에의 노출을 포함한다. 항원에 결합된 파아지는 회수되고, 선택의 추가 라운드를 위한 파아지를 생산하기 위해 박테리아를 감염시키는데 사용된다. 검토를 위해, 예를 들면, 하기를 참고한다: Hoogenboom, 2002, Methods.Mol.Biol. 178: 1-37; 및 Bradbury 및 Marks, 2004, J. Immunol. Methods 290: 29-49.
효모 디스플레이 시스템 (참고, 예를 들면, Boder 등, 1997, Nat.Biotech.15: 553-57; 및 Chao 등, 2006, Nat.프로토콜 1: 755-68)에서, 항체는 중쇄 및 경쇄가 가요성 링커에 의해 연결된 단일-사슬 가변성 융합 (scFv)으로서 디스플레이될 수 있다. scFv는 Aga1p에 대한 디설파이드 결합을 통해 효모 세포벽에 부착되는 효모 응집소 단백질 Aga2p의 부착 하위단위에 융합된다. Aga2p를 통한 단백질의 디스플레이는 세포 표면으로부터 단백질을 방출시켜, 효모 세포벽 상의 다른 분자와의 잠재적인 상호작용을 최소화한다. 자기 분리 및 유세포측정은 라이브러리를 스크리닝하여 개선된 친화성 또는 안정성을 갖는 항체를 선택하는데 사용된다. 관심있는 가용성 항원에의 결합은 효모를 바이오티닐화된 항원 및 2차 시약, 예컨대 형광단에 접합된 스트렙타비딘으로 라벨링함으로써 결정된다. 항체의 표면 발현의 차이는 scFv에 측접한 혈구응집소 또는 c-Myc 에피토프 태그의 면역형광 라벨링을 통해 측정될 수 있다. 발현은 디스플레이된 단백질의 안정성과 상관관계가 있는 것으로 나타났으며, 따라서 항체는 개선된 안정성 뿐만 아니라 친화성에 대해 선택될 수 있다 (참고, 예를 들면, Shusta 등, 1999, J. Mol. Biol. 292: 949-56). 효모 디스플레이의 추가의 이점은 디스플레이된 단백질이, 소포체 샤페론 및 품질-관리 기계를 이용하여, 진핵 효모 세포의 소포체에서 폴딩된다는 점이다. 성숙이 완료되면, 항체 친화성은 효모의 표면 상에 디스플레이되면서 편리하게 “적정”될 수 있어, 각각의 클론의 발현 및 정제 필요성을 제거한다. 효모 표면 디스플레이의 이론적 제한은 다른 디스플레이 방법의 것보다 잠재적으로 더 작은 기능성 라이브러리 크기이지만; 최근 접근법은 1014 크기로 추정되는 조합 다양성을 생성하는 효모 세포 교배 (mating) 시스템을 사용한다 (참조, 예를 들면, 미국특허공보 2003/0186374; 및 Blaise 등, 2004, Gene 342: 211-18).
리보솜 디스플레이에서, 항체-리보솜-mRNA (ARM) 복합체는 무세포 시스템에서의 선택을 위해 생성된다. 항체의 특정한 라이브러리를 코딩하는 DNA 라이브러리는 정지 코돈이 결여된 스페이서 서열에 유전적으로 융합된다. 이 스페이서 서열은 번역될 때 여전히 펩티딜 tRNA에 부착되어 있고 리보솜 터널을 차지하므로, 관심 단백질을 리보솜 밖으로 돌출시켜 폴딩되게 한다. mRNA, 리보솜, 및 단백질의 생성된 복합체는 표면-결합된 리간드에 결합하여, 리간드를 이용한 친화성 포획을 통해 항체 및 그의 코딩 mRNA를 동시에 단리시킨다. 이후, 리보솜-결합된 mRNA는 다시 cDNA로 역전사되고, 상기 cDNA는 이후에 돌연변이유발되고, 다음 선택 라운드에서 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Fukuda등, 2006, NucleicAcids Res. 34: e127). mRNA 디스플레이에서, 항체 및 mRNA 사이의 공유결합은 어댑터 분자로서 퓨로마이신을 사용하여 확립된다 (Wilson 등, 2001, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98: 3750-55).
이들 방법은 전적으로 시험관내에서 수행되므로, 이들은 다른 선택 기술에 비해 2가지 주요 이점을 제공한다. 첫째, 라이브러리의 다양성은 박테리아 세포의 전환 효율에 의해서뿐만 아니라, 시험관에 존재하는 리보솜 및 상이한 mRNA 분자의 수에 의해 제한되지 않는다. 둘째, 어떤 라이브러리도 임의의 다양화 단계 후에 전환되지 않기 때문에, 무작위 돌연변이가 각각의 선택 라운드 후에, 예를 들면, 비-교정 폴리머라제에 의해 쉽게 도입될 수 있다.
포유동물 세포 디스플레이 시스템에서 (참고, 예를 들면, Bowers 등, 2011, Proc Natl Acad Sci USA. 108: 20455-60), IgG의 완전 인간 라이브러리는 미리재조합된 D(J) 영역에 연결된 생식계열 서열 V-유전자 분절에 기초하여 제작된다. 중쇄 및 경쇄에 대한 전장 V 영역은 인간 중쇄 및 경쇄 불변 영역과 조립되고 포유동물 세포주 내로 형질감염된다 (예를 들면, HEK293). 형질감염된 라이브러리는 확장되고 스트렙타비딘 (SA)-커플링된 자기 비드에 대한 몇 라운드의 음성 선택을 거친 다음, 바이오티닐화된 표적 단백질, 펩타이드 단편, 또는 에피토프로 코팅된 SA-커플링된 자기 비드에 대해 1 라운드의 양성 선택을 거친다. 양성으로 선택된 세포는 확장된 다음, 수 라운드의 FACS에 의해 분류되어 표적 단백질, 펩타이드 단편, 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체를 디스플레이하는 단일 세포 클론을 단리한다. 이들 단일 세포 클론으로부터의 중쇄 및 경쇄 쌍은 추가 성숙을 위해 AID로 재형질감염된다. AID-촉발된 체세포 과돌연변이와 결합된, 몇 라운드의 포유동물 세포 디스플레이는 높은 특이성, 고친화도 항체를 생성한다.
다양성은 또한, 표적화된 방식으로 또는 무작위 도입을 통해 항체 라이브러리의 CDR 또는 전체 V 유전자 내로 도입될 수 있다. 전자 접근법은 높은 또는 낮은 수준의 돌연변이유발을 통해 항체의 모든 CDR을 순차적으로 표적화하는 것 또는 체세포 과돌연변이의 단일된 열점 (참고, 예를 들면, Ho 등, 2005, J. Biol. Chem. 280: 607-17) 또는 실험적 기준 또는 구조적 이유로 친화성에 영향을 미친다고 의심되는 잔기를 표적화하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 체세포 과돌연변이는, 예를 들면, SHM-XELTM 플랫폼 (AnaptysBio, San Diego, CA)을 사용하여 AID-촉발된 체세포 과돌연변이에 의해 수행된다. 무작위 돌연변이는 하기를 사용하여 전체 V 유전자에 도입될 수 있다: E. 콜리 돌연변이유발자 균주, DNA 폴리머라제 (참고, 예를 들면, Hawkins 등, 1992, J. Mol. Biol. 226: 889-96), 또는 RNA 레플리카제를 이용한 오류유발 복제. 다양성은 또한, DNA 셔플링 또는 유사한 기술을 통해 자연적으로 다양한 영역의 대체에 의해 도입될 수 있다 (참고, 예를 들면, Lu등, 2003, J. Biol. Chem. 278: 43496-507; U.S. 특허제5,565,332호 및 제6,989,250호). 프레임워크-영역 잔기 내로 연장되는 초가변성 루프를 표적화하는 대안적인 기술 (참고, 예를 들면, Bond 등, 2005, J. Mol. Biol. 348: 699-709)은 CDR 내의 루프 결실 및 삽입을 이용하거나 혼성화-기반 다양성을 사용한다 (참고, 예를 들면, 미국특허공개 제2004/0005709호). CDR에서 다양성을 생성하는 추가의 방법이, 예를 들면, 하기에 개시되어 있다: 미국특허제7,985,840호. 항체 라이브러리 및/또는 항체 친화성 성숙을 생성하기 위해 사용될 수 있는 추가의 방법은, 예를 들면, 하기에 개시되어 있으며: 미국특허 제8,685,897호 및 제8,603,930호, 및 미국공개제2014/0170705호, 제2014/0094392호, 제2012/0028301호, 제2011/0183855호, 및 제2009/0075378호, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함되어 있다.
라이브러리의 선별은 당해 분야에 공지된 다양한 기술에 의해 달성될 수 있다. 예를 들면, PD-1은 고형 지지체, 칼럼, 핀, 또는 셀룰로오스/폴리(비닐리덴 플루오라이드) 막/다른 필터에 고정될 수 있거나, 흡착 플레이트에 부착된 숙주 세포 상에서 발현되거나 세포 분류에서 사용될 수 있거나, 또는 스트렙타비딘-코팅된 비드를 사용한 포획을 위해 바이오틴에 접합되거나 또는 디스플레이 라이브러리를 패닝하기 위한 임의의 다른 방법에서 사용될 수 있다.
시험관내 친화성 성숙 방법의 검토를 위해, 하기를 참고한다: 예를 들면, Hoogenboom, 2005, Nature Biotechnology 23: 1105-16; Quirozand Sinclair, 2010, Revista Ingeneria Biomedia 4: 39-51; 내부 참조문헌.
4.3.2.2
항-PD-1 항체의 변형
항-PD-1 항체의 공유 변형이 본 개시내용의 범위 내에 포함된다. 공유 변형은 항-PD-1 항체의 표적화된 아미노산 잔기를 항-PD-1 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C- 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도화제와 반응시키는 것을 포함한다. 다른 변형은 글루타미닐 및 아스파르기닐 잔기의 각각 대응하는 글루타밀 및 아스파르틸 잔기로의 탈아미노화, 프롤린 및 라이신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실기의 인산화, 라이신, 아르기닌, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화 (참고, 예를 들면, Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983)), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카복실기의 아미드화를 포함한다.
본 개시내용의 범위 내에 포함된 항-PD-1 항체의 공유 변형의 다른 유형은, 예를 들면 하기에 제시된 방식으로, 항체 또는 폴리펩타이드의 원상태 당화 패턴을 변화시키는 것 (참고, 예를 들면, Beck 등, 2008, Curr.Pharm.Biotechnol. 9: 482-501; 및 Walsh, 2010, Drug Discov.Today 15: 773-80), 및 항체를 다양한 비단백질성 폴리머, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌과 연결하는 것을 포함한다: 미국특허제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제4,791,192호; 또는 제4,179,337호.
본 개시내용의 항-PD-1 항체는 또한, 하기에 융합된 항-PD-1 항체를 포함하는 키메라성 분자를 형성하기 위해 변형될 수 있다: 또 다른, 이종성 폴리펩타이드 또는 아미노산 서열, 예를 들면, 에피토프 태그 (참고, 예를 들면, Terpe, 2003, Appl.MicroBiol. Biotechnol. 60: 523-33) 또는 IgG 분자의 Fc 영역 (참고, 예를 들면, Aruffo, Antibody FusionProteins 221-42 (Chamow 및 Ashkenazi eds., 1999)).
또한 PD-1 항원에 결합하는 본원에 제공된 항체 및 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 융합 단백질이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 항체가 융합되는 이종성 폴리펩타이드는 항체를 세포 표면-발현된 PD-1을 갖는 세포에 표적화시키는데 유용하다.
또한 PD-1 항원에 결합하는 항체의 패널이 본원에 제공된다. 특정 구현예에서, 항체의 패널은 PD-1 항원에 대해 상이한 결합 속도, 상이한 해리 속도, 상이한 친화성, 및/또는 PD-1 항원에 대해 상이한 특이성을 갖는다. 일부 구현예에서, 패널은 약 10개, 약 25개, 약 50개, 약 75개, 약 100개, 약 125개, 약 150개, 약 175개, 약 200개, 약 250개, 약 300개, 약 350개, 약 400개, 약 450개, 약 500개, 약 550개, 약 600개, 약 650개, 약 700개, 약 750개, 약 800개, 약 850개, 약 900개, 약 950개, 또는 약 1000개 항체 이상을 포함하거나 구성된다. 항체의 패널은, 예를 들면, ELISA와 같은 분석을 위해, 96-웰 또는 384-웰 플레이트에서 사용될 수 있다.
4.3.3
항-PD-1 항체의 제조
항-PD-1 항체는 항-PD-1 항체-코딩 핵산을 함유하는 벡터로 형질전환되거나 형질감염된 세포를 배양함으로써 생산될 수 있다. 본 개시내용의 항체의 폴리펩타이드 성분을 코딩하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 표준 재조합 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 원하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 항체 생산 세포, 예컨대 하이브리도마 세포로부터 단리되고 서열분석될 수 있다. 대안적으로, 폴리뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 합성기 또는 PCR 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 수득되면, 폴리펩타이드를 코딩하는 서열은 숙주 세포에서 이종성 폴리뉴클레오타이드를 복제하고 발현할 수 있는 재조합 벡터 내로 삽입된다. 당해 분야에서 이용가능하고 공지된 많은 벡터가 본 개시내용의 목적을 위해 사용될 수 있다. 적절한 벡터의 선택은 벡터 내로 삽입될 핵산의 크기 및 벡터로 형질전환될 특정한 숙주 세포에 주로 좌우될 것이다. 본 개시내용의 항체를 발현하는데 적합한 숙주 세포는 원핵생물, 예컨대 그램-음성 또는 그램-양성 유기체를 포함하는 고세균 (Archaebacteria) 및 진정세균 (Eubacteria), 진핵 미생물, 예컨대 사상균 또는 효모, 무척추동물 세포, 예컨대 곤충 또는 식물 세포, 및 척추동물 세포, 예컨대 포유동물 숙주 세포주를 포함한다. 숙주 세포는 상기-기재된 발현 벡터로 형질전환되고, 프로모터를 유도하거나, 형질전환체를 선택하거나, 또는 원하는 서열을 코딩하는 유전자를 증폭시키기 위해 적절히 변형된 종래의 영양 배지에서 배양된다. 숙주 세포에 의해 생산된 항체는 당해 분야에서 공지된 바와 같은 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 정제된다.
벡터 제작, 발현, 및 정제를 포함하는 항체 생산을 위한 방법은 하기에 추가로 기재되어 있다: Pl
ckthun 등, Antibody Engineering: Producing antibodies in Escherichia coli: From PCR to fermentation 203-52 (McCafferty 등 eds., 1996); Kwong and Rader, E. coli Expression and Purificationof Fab Antibody Fragments, in CurrentProtocols in Protein Science (2009); Tachibana and Takekoshi, Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli, in Antibody Expression and Production (Al-Rubeai ed., 2011); 및 Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed., 2009).
물론, 당해 분야에서 잘 알려진 대안적인 방법이, 항-PD-1 항체를 제조하는데 이용될 수 있음이 고려된다. 예를 들면, 적절한 아미노산 서열, 또는 그의 일부가 고체상 기술을 사용한 직접적인 펩타이드 합성에 의해 생산될 수 있다 (참고, 예를 들면, Stewart 등, Solid-Phase Peptide Synthesis (1969); 및 Merrifield, 1963, J.Am.Chem.Soc.85: 2149-54). 시험관내 단백질 합성은 매뉴얼 기술을 사용하여 또는 자동화에 의해 수행될 수 있다. 항-PD-1 항체의 다양한 부분은 개별적으로 화학적으로 합성되고 화학적 또는 효소적 방법을 사용하여 조합되어 원하는 항-PD-1 항체를 생산할 수 있다. 대안적으로, 항체는, 예를 들면 하기에 개시된 바와 같이, 항체를 발현하도록 조작된 트랜스제닉 동물의 세포 또는 체액, 예컨대 우유로부터 정제될 수 있다: 미국특허제5,545,807호 및 제5,827,690호.
4.3.4
면역접합체
본 개시내용은 또한 합성 링커에 의해 하나 이상의 비-항체 제제에 공유결합된 본 개시내용의 항-PD-1 항체 중 어느 하나를 포함하는 접합체를 제공한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는, 예를 들면, 진단 또는 검출가능한 분자에 접합되거나 재조합으로 융합된다. 접합되거나 재조합으로 융합된 항체는, 예를 들면, PD-1-매개된 질환의 개시, 발달, 진행, 및/또는 중증도를 모니터링하거나 예측하는데 유용할 수 있다.
이러한 진단 및 검출은, 예를 들면, 비제한적으로, 다양한 효소, 예컨대, 비제한적으로, 홀스래디쉬 페록시다아제, 알칼리성 포스파타제, 베타-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린에스테라제; 보철 그룹, 예컨대, 비제한적으로, 스트렙타비딘/바이오틴 또는 아비딘/바이오틴; 형광 물질, 예컨대, 비제한적으로, 엄벨리페론, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐아민 플루오레신, 단실 염화물, 또는 파이코에리트린; 발광성 물질, 예컨대, 비제한적으로, 루미놀; 생물발광 물질, 예컨대, 비제한적으로, 루시퍼라아제, 루시페린, 또는 에쿼린; 화학발광 물질, 예컨대, 비제한적으로, 아크리디늄계 화합물 또는 HALOTAG; 방사선활성 물질, 예컨대, 비제한적으로, 요오드 (131I, 125I, 123I, 및 121I,), 탄소 (14C), 황 (35S), 삼중수소 (3H), 인듐 (115In, 113In, 112In, 및 111In), 테크네튬 (99Tc), 탈륨 (201Ti), 갈륨 (68Ga 및 67Ga), 팔라듐 (103Pd), 몰리브데늄 (99Mo), 크세논 (133Xe), 불소 (18F), 153Sm, 177Lu,159Gd, 149Pm, 140La, 175Yb, 166Ho, 90Y, 47Sc, 186Re, 188Re, 142Pr, 105Rh, 97Ru,68Ge, 57Co, 65Zn, 85Sr, 32P, 153Gd, 169Yb, 51Cr, 54Mn, 75Se, 113Sn, 또는 117Sn; 다양한 양전자 방출 단층촬영을 사용한 양전자 방출 금속; 및 비-방사성 상자성 금속 이온을 포함하는 검출가능한 물질에 항체를 결합시킴으로써 달성될 수 있다.
또한 융합 단백질을 생성하기 위해 이종성 단백질 또는 폴리펩타이드 (또는 이의 단편, 예를 들면, 약 10, 약 20, 약 30, 약 40, 약 50, 약 60, 약 70, 약 80, 약 90, 또는 약 100 아미노산의 폴리펩타이드)에 재조합으로 융합되거나 화학적으로 접합된 (공유 또는 비-공유 접합) 항체, 뿐만 아니라 그것의 용도가 본원에 제공된다. 특히, 본원에 제공된 항체의 항원-결합 단편 (예를 들면, Fab 단편, Fc 단편, Fv 단편, F(ab)2 단편, VH 도메인, VH CDR, VL 도메인, 또는 VL CDR) 및 이종성 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드를 포함하는 융합 단백질이 본원에 제공된다. 일 구현예에서, 항체가 융합되는 이종성 단백질, 폴리펩타이드, 또는 펩타이드는 항체를 특정한 세포 유형, 예컨대 PD-1을 발현하는 세포에 표적화하는데 유용하다. 예를 들면, 특정한 세포 유형에 의해 발현된 세포 표면 수용체에 결합하는 항체는 본원에 제공된 변형된 항체에 융합되거나 접합될 수 있다.
또한, 본원에 제공된 항체는, 정제를 용이하게 하기 위해, 마커 또는 “태그” 서열, 예컨대 펩타이드에 융합될 수 있다. 특정 구현예에서, 마커 또는 태그 아미노산 서열은 헥사-히스티딘 펩타이드, 예컨대 pQE 벡터에서 제공된 태그이며 (참고, 예를 들면, QIAGEN, Inc.), 특히, 이들 중 많은 것은 상업적으로 이용가능하다. 예를 들면, Gentz 등, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 821-24에 기재된 바와 같이, 헥사-히스티딘은 융합 단백질의 편리한 정제를 제공한다. 정제에 유용한 다른 펩타이드 태그는, 비제한적으로, 인플루엔자 혈구응집소 단백질로부터 유래된 에피토프에 해당하는 혈구응집소 (“HA”) 태그 (Wilson 등, 1984, Cell 37: 767-78), 및 “FLAG” 태그를 포함한다.
모이어티 (폴리펩타이드 포함)를 항체에 융합시키거나 접합시키는 방법은 공지되어 있다 (참고, 예를 들면, Arnon 등, Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56 (Reisfeld 등 eds., 1985); Hellstrom 등, Antibodies for Drug Delivery, in Controlled Drug Delivery 623-53 (Robinson 등 eds., 제2판 1987); Thorpe, Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy: A Review, in Monoclonal Antibodies: Biological and Clinical Applications 475-506 (Pinchera 등 eds., 1985); Analysis, Results, and FutureProspective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy, in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16 (Baldwin 등 eds., 1985); Thorpe 등, 1982, Immunol.Rev.62: 119-58; 미국특허제5,336,603호; 제5,622,929호; 제5,359,046호; 제5,349,053호; 제5,447,851호; 제5,723,125호; 제5,783,181호; 제5,908,626호; 제5,844,095호; 및 제5,112,946호; EP 307,434; EP 367,166; EP 394,827; PCT 공개 WO 91/06570, WO 96/04388, WO 96/22024, WO 97/34631, 및 WO 99/04813; Ashkenazi 등, 1991, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10535-39; Traunecker 등, 1988, Nature, 331: 84-86; Zheng 등, 1995, J. Immunol. 154: 5590-600; 및 Vil 등, 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 11337-41).
융합 단백질은, 예를 들면, 유전자-셔플링, 모티프-셔플링, 엑손-셔플링, 및/또는 코돈-셔플링 (집합적으로 “DNA 셔플링”으로 칭함)의 기술을 통해 생성될 수 있다. DNA 셔플링은 예를 들면, 더 높은 친화성 및 더 낮은 해리 속도를 갖는 항체를 포함하는, 본원에 제공된 바와 같은 항-PD-1 항체의 활성을 변경하는데 이용될 수 있다 (참고, 예를 들면, 미국특허제제5,605,793호; 제5,811,238호; 제5,830,721호; 제5,834,252호; 및 제5,837,458호; Patten 등, 1997, Curr.OpinionBiotechnol. 8: 724-33; Harayama, 1998, Trends Biotechnol. 16(2): 76-82; Hansson 등, 1999, J. Mol. Biol. 287: 265-76; 및 Lorenzo 및 Blasco, 1998, Biotechniques 24(2): 308-13). 항체, 또는 코딩된 항체는 재조합 이전에 오류유발 PCR, 무작위 뉴클레오타이드 삽입, 또는 다른 방법에 의한 무작위 돌연변이유발을 거쳐 변경될 수 있다. 본원에 제공된 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오타이드는 하나 이상의 이종성 분자의 하나 이상의 성분, 모티프, 절편, 부분, 도메인, 단편, 등과 재조합될 수 있다.
본원에 제공된 항체는 또한 제2 항체와 접합되어, 예를 들면, 하기에 기재된 바와 같은 항체 이종접합체를 형성할 수 있다: 미국특허제4,676,980호.
본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1에 결합하는 항체는 또한, 표적 항원의 면역분석 또는 정제에 특히 유용한 고형 지지체에 부착될 수 있다. 이러한 고형 지지체는, 비제한적으로, 유리, 셀룰로오스, 폴리아크릴아미드, 나일론, 폴리스티렌, 폴리염화비닐, 또는 폴리프로필렌을 포함한다.
링커는 세포에서 접합된 제제의 방출을 용이하게 하는 “절단가능 링커”일 수 있지만, 비-절단가능 링커가 또한 본원에서 고려된다. 본 개시내용의 접합체에서 사용하기 위한 링커는, 비제한적으로, 하기를 포함한다: 산 불안정성 링커 (예를 들면, 하이드라존 링커), 디설파이드-함유 링커, 펩티다아제-감수성 링커 (예를 들면, 아미노산, 예를 들면, 발린 및/또는 시트룰린, 예컨대 시트룰린-발린 또는 페닐알라닌-라이신을 포함하는 펩타이드 링커), 광불안정적인 링커, 디메틸 링커 (참고, 예를 들면, Chari 등, 1992, Cancer Res. 52: 127-31; 및 미국. 특허제5,208,020호), 티오에테르 링커, 또는 다중약물 수송체-매개 저항을 회피하도록 설계된 친수성 링커 (참고, 예를 들면, Kovtun 등, 2010, Cancer Res. 70: 2528-37).
항체 및 제제의 접합체는 다양한 이중기능성 단백질 커플링제, 예컨대 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 설포-SMPB, 및 SVSB (석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 제조될 수 있다. 본 개시내용은 항체 및 제제의 접합체가 당해 분야에 개시된 바와 같은 임의의 적합한 방법을 사용하여 제조될 수 있음을 추가로 고려한다 (참고, 예를 들면, 바이오접합체 기술 (Hermanson ed., 제2판 2008)).
항체 및 제제를 위한 종래의 접합 전략은 Lys 잔기의 ε-아미노기 또는 Cys 잔기의 티올기를 포함하는 무작위 접합 화학에 기반하여, 불균일 접합체를 초래하였다. 최근에 개발된 기술은 항체에의 부위-특이적인 접합을 가능하게 하여, 균일한 로딩을 야기하고 변경된 항원-결합 또는 약동학을 갖는 접합체 하위집단을 피한다. 이들은 반응성 티올기를 제공하고 면역글로불린 폴딩을 파괴하지 않고 항원 결합을 조립하거나 변경하는 중쇄 및 경쇄 상의 위치에서 시스테인 치환을 포함하는 “티오맙 (thiomab)”의 조작을 포함한다 (참고, 예를 들면, Junutula등, 2008, J. Immunol. Meth.332: 41-52; 및 Junutula 등, 2008, Nature Biotechnol. 26: 925-32). 또 다른 방법에서, 셀레노시스테인은 종료부터 셀레노시스테인 삽입까지 정지 코돈 UGA를 기록함으로써 항체 서열 내로 동시번역으로 삽입되어, 다른 천연 아미노산의 존재하에 셀레노시스테인의 친핵성 셀레놀기에서 부위 특이적인 공유 접합을 가능하게 한다 (참고, 예를 들면, Hofer 등, 2008, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 105: 12451-56; 및 Hofer 등, 2009, Biochemistry 48(50): 12047-57).
4.4
항체 및 조성물을 사용하는 방법
(a) T 세포 활성을 약화시키고/거나 (b) 대상체에서 PD-1 발현을 하향조절하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법은 대상체의 세포에서 PD-1 발현을 하향조절한다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 방법은 대상체에서 T 세포 활성을 약화시킨다. T 세포 활성의 비-제한적인 예는 사이토카인의 분비이다. 특정 구현예에서, 사이토카인의 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
일 구현예에서, IL-2의 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공된다. 일부 구현예에서, IL-1의 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공된다 7.또 다른 구현예에서, T 세포 활성을 감쇠시키는 방법은 IFN-γ의 분비를 억제하는 방법이다.
일 측면에서, T 세포의 활성을 감쇠시키는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 T 세포를, 유효량의 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 접촉시키는 것을 포함한다. 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 10%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 20%이다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 30%이다. 일 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 40%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 45%이다. 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 50%이다. 일 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 55%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 60%이다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 65%이다. 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 70%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 75%이다. 일 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 80%이다. 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 85%이다. 또 다른 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 90%이다. 일 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 95%이다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 100%이다.
일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 생산의 조절에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 분비의 조절에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 발현의 조절에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 생산의 억제에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 분비의 억제에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인의 발현의 억제에 의해 측정된다. 특정 구현예에서, 사이토카인 생산 (예를 들면, 사이토카인 단백질 생산)가 조절된다. 특정 구현예에서, 사이토카인 분비 (예를 들면, 사이토카인 단백질 분비)가 조절된다. 다른 구현예에서, 사이토카인 발현 (예를 들면, 사이토카인 유전자 발현)가 조절된다. 일부 구현예에서, 조절은 사이토카인의 감소, 억제, 또는 하향-조절이다. 다른 구현예에서, 조절은 사이토카인의 증가 또는 상향조절이다. 특정 구현예에서, 사이토카인 생산 (예를 들면, 사이토카인 단백질 생산)이 억제된다. 특정 구현예에서, 사이토카인 분비 (예를 들면, 사이토카인 단백질 분비)이 억제된다. 다른 구현예에서, 사이토카인 발현 (예를 들면, 사이토카인 유전자 발현)이 억제된다. 특정 구현예에서, 세포로부터의 사이토카인 생산은 조절된다. 특정 구현예에서, 세포로부터의 사이토카인 분비는 조절된다. 특정 구현예에서, 사이토카인 발현은 조절된다. 특정 구현예에서, 세포로부터의 사이토카인 생산는 억제된다. 특정 구현예에서, 세포로부터의 사이토카인 분비는 억제된다. 특정 구현예에서, 세포로부터의 사이토카인 발현은 억제된다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 T 세포가 아니다.
일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
일부 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절과 동반된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절에 의해 선행된다. 일부 구현예에서, 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절에 선행한다. 일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다.
일 측면에서, 세포에서 PD-1 활성 및/또는 발현을 조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 일 구현예에서, PD-1 활성은 조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 활성 및 PD-1 발현 둘 모두는 조절된다. 일 구현예에서, PD-1 신호전달은 활성화된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 억제된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-1 효능제이다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 특이적으로 인간 PD-1에 결합하고, 적어도 1종의 PD-1 활성을 활성화하고 (예를 들면, 부분적으로 활성화하고) 또는 달리 조절한다. 특정 구현예에서, 적어도 1종의 PD-1 활성은 사이토카인 생산의 억제이다. 특정 구현예에서, PD-1에 특이적으로 결합하는 항체는 인간 PD-1의 ECD, 또는 그것의 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
또 다른 측면에서, 세포에서 PD-1 발현을 하향조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 본 항체는 본 명세서에서 제공된 PD-1 효능제이다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
또 다른 측면에서, 세포에서 T 세포 활성을 감쇠시키고 PD-1 발현을 하향-조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인 생산의 억제이다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
PD-1 활성은 PD-1 예컨대 당해 분야에서 공지되거나 기재된 것들의 임의의 활성과 관련될 수 있다. PD-1 활성 및 PD-1 신호전달은 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 특정 측면에서, PD-1 활성은 하기에 의해 유도된다: PD-1 리간드 (예를 들면, PD-L1) (이는 PD-1에 결합함). PD-1의 발현 수준은 본 명세서에서 기재되거나 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 평가될 수 있다 (예를 들면, 웨스턴 블랏팅, ELISA, 면역조직화학, 또는 유세포측정).
세포에서 사이토카인 생산을 억제하는 방법이 본 명세서에서 또한 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 바와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다.
세포에서 PD-1 신호전달을 활성화하는 방법이 또한 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다. 일 구현예에서, PD-1 신호전달은 부분적으로 활성화된다.
일 측면에서, T 세포 활성을 감쇠시키는 방법이 본 명세서세어 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L2 결합 부위와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, 본 항체는 PD-L1 및 PD-L2 결합 부위 둘 모두와 구별되는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 다른 구현예에서, PD-L2의 PD-1에의 결합은 상기 항체에 의해 억제되지 않는다. 특정 구현예에서, PD-L1의 PD-1에의 결합도 PD-L2의 PD-1에의 결합도 항체에 의해 억제되지 않는다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 10%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 15%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 20%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 25%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 30%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 35%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 40%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 45%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 50%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 55%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 60%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 65%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 70%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 75%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 80%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 85%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 90%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 95%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 98%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 99%까지 약화된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 100%까지 약화된다. 특정 구현예에서, T 세포 활성은 적어도 약 25% 내지 약 65%까지 약화된다. 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포에서 T 세포 활성에 관한 것이다. 특정 구현예에서, T 세포 활성 감쇠는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 T 세포 활성에 관한 것이다.
T 세포 활성의 비-제한적인 예는 사이토카인의 분비이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
특정 구현예에서, 사이토카인 분비는 사이토카인 생산의 억제의 결과로서 억제된다. 다른 구현예에서, 사이토카인 분비는 사이토카인 발현의 억제의 결과로서 억제된다.
특정 구현예에서, 세포로부터 사이토카인 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IL-17이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 IL-2 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17 및 IFN-γ이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, 및 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-2 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-2 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-2 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-2 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-2 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-2 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-2 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-2 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-17 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비의 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비의 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-17 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-17 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포에서 IL-17 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-17 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-17 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-17 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-17 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-17 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IFN-γ 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IFN-γ 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IFN-γ 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IFN-γ 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IFN-γ 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IFN-γ 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IFN-γ 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IFN-γ 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IFN-γ 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-1 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-1 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-1 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-1 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-1 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-1 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-1 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-1 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-1 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-6 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MesoScale™ Discovery (MSD) 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-6 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-6 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-6 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-6 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-6 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-6 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-6 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터 IL-6 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-12 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-12 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-12 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포에서 IL-12 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-12 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-12 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터 IL-12 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-12 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포에서 IL-12 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-22 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-22 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 IL-22 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 IL-22 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-22 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-22 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 IL-22 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-22 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 IL-22 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 IL-23 분비를 억제하는 방법이 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-23 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 IL-23 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 IL-23 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, IL-23 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, IL-23 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 IL-23 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-23 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 IL-23 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 GM-CSF 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MesoScale™ Discovery (MSD) 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, GM-CSF 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 GM-CSF 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 GM-CSF 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, GM-CSF 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, GM-CSF 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 GM-CSF 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, IL-2 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 GM-CSF 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포로부터 TNF-α 분비를 억제하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 5%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 10%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 15%까지 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 20%까지 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 25%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 30%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 35%까지 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 40%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 45%까지 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 50%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 55%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 60%까지 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 65%까지 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 70%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 80%까지 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 85%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 90%까지 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 95%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 98%까지 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 99%까지 억제된다. 특정 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비의 억제는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비의 억제는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, TNF-α 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 TNF-α 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 TNF-α 분비와 관련하여 억제된다.
특정 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 최대 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 50 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 40 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 30 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 20 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 10 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 1 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.75 nM의 EC50로 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.5 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.1 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.05 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.01 nM의 EC50로 억제된다. 또 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.005 nM의 EC50로 억제된다. 일 구현예에서, TNF-α 분비는 적어도 약 0.001 nM의 EC50로 억제된다. 일부 구현예에서, EC50는 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, EC50는 하기에 의해 평가된다: 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, MSD 멀티플렉스 검정). 특정 구현예에서, TNF-α 분비는 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포로부터의 TNF-α 분비와 관련하여 억제된다. 다른 구현예에서, TNF-α 분비는 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포로부터의 TNF-α 분비와 관련하여 억제된다.
일부 구현예에서, 세포에서 PD-1 발현을 하향조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 세포를, 본 명세서에서 제공된 바와 같은 PD-1 (예를 들면, 인간 PD-1의 ECD 또는 인간 PD-1의 ECD의 에피토프)에 특이적으로 결합하는 항체와 접촉시키는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 세포는 T 세포이다. 특정 구현예에서, 세포는 유효량의 본 명세서에서 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉된다. 특정 구현예에서, 항체는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나 또는 그것의 항원-결합 단편, 또는 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 CDR을 포함하는 항체이다.
일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 5%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 10%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 15%까지 하향조절된다. 일부 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 20%까지 하향조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 25%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 30%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 35%까지 하향조절된다. 일부 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 40%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 45%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 50%까지 하향조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 55%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 60%까지 하향조절된다. 일부 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 65%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 70%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 75%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 80%까지 하향조절된다. 일부 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 85%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 90%까지 하향조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 95%까지 하향조절된다. 일 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 98%까지 하향조절된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현은 적어도 약 99%까지 하향조절된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에서 제공된 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하고 적어도 약 25% 또는 35%, 선택적으로 내지 약 75%까지 PD-1 발현을 하향조절한다. 일부 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 본 명세서에서 기재된 방법에 의해 평가된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 방법 (예를 들면, 유세포측정, 웨스턴 블랏팅, 노던 블랏팅, 또는 RT-PCR)에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 유세포측정에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 웨스턴 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 노던 블랏팅에 의해 평가된다. 또 다른 구현예에서, PD-1 발현의 하향 조절은 RT-PCR에 의해 평가된다. 특정 구현예에서, PD-1 발현은 항-PD-1 항체와 접촉되지 않은 세포에서 PD-1 발현과 관련하여 하향조절된다. 다른 구현예에서, PD-1 발현은 관련없는 항체 (예를 들면, PD-1에 특이적으로 결합하지 않는 항체)와 접촉된 세포에서 PD-1 발현과 관련하여 하향조절된다.
일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절하는 방법이 본 명세서에서 제공되고, 상기 방법은 상기 T 세포를, 유효량의 본 명세서에서 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 접촉시키는 것을 포함한다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 10%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 20%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 30%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 40%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 45%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 50%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 55%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 60%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 65%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 70%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 75%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 80%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 85%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 90%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 95%이다. 일 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 100%이다.
특정 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다. 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 또는 22시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 4시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 6시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 8시간만큼 일찍 일어난다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 10시간만큼 일찍 일어난다. 일부 구현예에서, 하향조절은 접촉후 12시간만큼 일찍 일어난다. 일 구현예에서, 하향조절은 접촉후 14시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 16시간만큼 일찍 일어난다. 일부 구현예에서, 하향조절은 접촉후 18시간만큼 일찍 일어난다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 20시간만큼 일찍 일어난다. 다른 구현예에서, 하향조절은 접촉후 22시간만큼 일찍 일어난다. 또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 24시간만큼 일찍 일어난다.
일 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 선행한다. 또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제와 동반된다. 또 다른 구현예에서, T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 의해 선행된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일 구현예에서, 사이토카인은 IL-2이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-17이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IFN-γ이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, IFN-γ, 및 TNF-α로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-1이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-6이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-12이다. 또 다른 구현예에서, 사이토카인은 IL-22이다. 특정 구현예에서, 사이토카인은 IL-23이다. 일부 구현예에서, 사이토카인은 GM-CSF이다. 다른 구현예에서, 사이토카인은 TNF-α이다. 상기-언급된 사이토카인의 2, 3 또는 그 초과 개의 조합이 또한 고려된다.
다른 측면에서, 본 개시내용의 항-PD-1 항체 및 이의 단편은 생물학적 샘플에서 PD-1의 존재를 검출하는데 유용하다. 그와 같은 항-PD-1 항체는 인간 및/또는 사이노몰구스 PD-1에 결합하지만 PD-1 신호전달 활성을 유도하지 않는 것들을 포함할 수 있다. 본 명세서에서 사용된 용어 “검출하는”은 정량적 또는 정성적 검출을 포괄한다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 체액, 세포, 또는 조직을 포함한다.
4.5
약제학적 조성물
일 측면에서, 본 개시내용은 본 개시내용의 적어도 하나의 항-PD-1 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 추가로 제공한다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 1) 항-PD-1 항체, 및 2) 약제학적으로 허용가능한 캐리어를 포함한다.
항체를 포함하는 약제학적 조성물은 원하는 정도의 순도를 갖는 항체를 하기의 형태의 선택적인 생리적으로 허용가능한 캐리어, 부형제, 또는 안정화제와 혼합함으로써 저장을 위해 제조될 수 있다 (참고, 예를 들면, Remington, Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th ed.1980)): 수용액의 형태 또는 동결건조된 또는 다른 건조된 형태.
본 개시내용의 항체는, 예를 들면, 하기로서, 표적 세포/조직에 전달하기 위한 임의의 적합한 형태로 제형화될 수 있다: 마이크로캡슐 또는 매크로에멀젼 (Remington, 상기; Park 등, 2005, Molecules 10: 146-61; Malik 등, 2007, Curr.Drug.Deliv.4: 141-51), 지속 방출 제형 (Putney 및 Burke, 1998, Nature Biotechnol. 16: 153-57), 또는 리포좀에서 (Maclean 등, 1997, Int.J.Oncol.11: 325-32; Kontermann, 2006, Curr.Opin.Mol.Ther. 8: 39-45).
본원에 제공된 항체는 또한 콜로이드성 약물 전달 시스템 (예를 들면, 리포좀, 알부민 마이크로구형체, 마이크로에멀젼, 나노-입자, 및 나노캡슐) 또는 매크로에멀젼에서, 예를 들면, 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들면, 각각 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐 내에 포획될 수 있다. 이러한 기술은, 예를 들면, 상기Remington에 개시되어 있다.
다양한 조성물 및 전달 시스템은 공지되어 있으며, 본 명세서에서 기재된 바와 같은 PD-1에 결합하는 항체와 함께 사용될 수 있으며, 비제한적으로, 리포좀에서의 캡슐화, 극미립자, 마이크로캡슐, 항체를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매개된 세포내이입 (참고, 예를 들면, Wu및 Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262: 4429-32), 레트로바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 핵산의 제작 등을 포함한다. 또 다른 구현예에서, 조성물은 제어 방출 또는 지속 방출 시스템으로서 제공될 수 있다. 일 구현예에서, 펌프는 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하는데 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Langer, 상기; Sefton, 1987, Crit. Ref. Biomed. Eng. 14: 201-40; Buchwald등, 1980, Surgery88: 507-16; 및 Saudek 등, 1989, N. Engl. J. Med. 321: 569-74). 또 다른 구현예에서, 폴리머성 물질이 예방제 또는 치료제 (예를 들면, 본원에 기재된 바와 같은 PD-1에 결합하는 항체) 또는 본 발명의 조성물의 제어 방출 또는 지속 방출을 달성하는데 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, Medical Applications of Controlled Release (Langer and Wise eds., 1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance (Smolen and Ball eds., 1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23: 61-126; Levy 등., 1985, Science 228: 190-92; During등, 1989, Ann. Neurol. 25: 351-56; Howard 등, 1989, J. Neurosurg. 71: 105-12; 미국특허제5,679,377호; 제5,916,597호; 제5,912,015호; 제5,989,463호; 및 제5,128,326호; PCT 공개 번호WO 99/15154 및 WO 99/20253). 지속 방출 제형에서 사용되는 폴리머의 예는, 비제한적으로, 폴리(2-하이드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐 아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글라이콜라이드 (PLG), 폴리무수물, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐 알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌 글리콜), 폴리락타이드 (PLA), 폴리(락타이드-코-글라이콜라이드) (PLGA), 및 폴리오르토에스테르를 포함한다. 일 구현예에서, 지속 방출 제형에서 사용되는 폴리머는 불활성이며, 여과할 수 있는 불순물이 없고, 저장시 안정적이며, 멸균되고, 생분해성이다.
또 다른 구현예에서, 제어 방출 또는 지속 방출 시스템은 특정한 표적 조직, 예를 들면, 비강 또는 폐에 근접하여 위치할 수 있고, 따라서 전신 용량의 분획만을 필요로 한다 (참고, 예를 들면, Goodson, Medical Applications of Controlled Release Vol. 2, 115-38 (1984)). 제어 방출 시스템은, 예를 들면, Langer, 1990, Science 249: 1527-33에 의해 논의된다. 당해 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 기술이 본원에 기재된 바와 같은 PD-1에 결합하는 하나 이상의 항체를 포함하는 지속 방출 제형을 생산하는데 사용될 수 있다 (참고, 예를 들면, 미국특허제4,526,938호, PCT 공개 번호WO 91/05548 및 WO 96/20698, Ning 등, 1996, Radiotherapy & Oncology 39: 179-89; Song 등, 1995, PDA J. of Pharma. Sci. & Tech. 50: 372-97; Cleek 등, 1997, Pro.Int’l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24: 853-54; 및 Lam 등, 1997, Proc.Int’l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24: 759-60).
4.6
키트
또한 적합한 포장재 내로 포장된 본원에 제공된 항체 (예를 들면, 항-PD-1 항체), 또는 이의 조성물 (예를 들면, 약제학적 조성물)을 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 키트는 선택적으로 성분의 설명을 포함하는 라벨 또는 패키징 삽입물 또는 내부에 성분의 시험관내, 생체내, 또는 생체외 사용을 위한 지침을 포함한다.
용어 “포장재”는 키트의 성분을 보관하는 물리적 구조를 지칭한다. 포장재는 성분을 멸균된 상태로 유지시킬 수 있고, 이러한 목적을 위해 통상적으로 사용되는 물질 (예를 들면, 종이, 주름진 섬유, 유리, 플라스틱, 포일, 앰풀, 바이알, 튜브, 등)로 만들어질 수 있다.
본원에 제공된 키트는 라벨 또는 삽입물을 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 “인쇄물,” 예를 들면, 성분, 키트 또는 팩킹 물질 (예를 들면, 박스)에 분리되거나 부착된 종이 또는 판지, 또는 예를 들면, 키트 구성요소를 함유하는 앰풀, 튜브, 또는 바이알에 부착된 종이 또는 판지를 포함한다. 라벨 또는 삽입물은 컴퓨터 해독가능한 매체, 예컨대 디스크 (예를 들면, 하드 디스크, 카드, 메모리 디스크), 광학 디스크, 예컨대 CD- 또는 DVD-ROM/RAM, DVD, MP3, 자기 테이프, 또는 전기 저장 매체, 예컨대 RAM 및 ROM 또는 이들의 하이브리드, 예컨대 자기/광학 저장 매체, 플래시 매체, 또는 메모리 유형 카드를 추가로 포함할 수 있다. 라벨 또는 삽입물은 제조자 정보, 로트 번호, 제조자 위치, 및 일자를 식별하는 정보를 포함할 수 있다.
본원에 제공된 키트는 다른 성분을 추가로 포함할 수 있다. 키트의 각각의 성분은 개별적인 용기 내에 봉입될 수 있고, 다양한 용기 모두는 단일 패키지 내에 있을 수 있다. 키트는 또한 저온 저장용으로 설계될 수 있다. 키트는 추가로 본원에 제공된 항체, 또는 본원에 제공된 항체를 코딩하는 핵산을 함유하는 세포를 함유하도록 설계될 수 있다. 키트 내의 세포는 사용할 준비가 될 때까지 적절한 저장 조건 하에 유지될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질이 본 명세서에 기재되어 있다.
본원에 인용된 모든 출원, 공개, 특허 및 다른 문헌, 유전자은행 언급 및 ATCC 언급은 그 전문이 참고로 포함된다. 충돌이 있는 경우, 정의를 포함하는 명세서가 제어할 것이다.
본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태 “a,” “및,” 및 “the”는 문맥이 달리 명확하게 나타내지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들면, “펩타이드 서열”에 대한 언급은 복수의 이러한 서열 등을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, 수치는 종종 본 문서 전반에 범위 형식으로 제공된다. 범위 형식의 사용은 편의성 및 간결성을 위한 것일 뿐 본 발명 문맥이 달리 명확하게 나타내지 않는 한 본 발명의 범위를 변경할 수 없게 제한하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 따라서, 범위의 사용은, 문맥이 달리 명확하게 나타내지 않는 한, 명확히 모든 가능한 하위범위, 상기 범위 내의 모든 개별 수치, 및 모든 수치 또는 수치 범위, 예컨대 상기 범위 내의 정수 및 범위 내의 값 또는 정수의 분획을 포함한다. 이러한 구성은 범위의 폭에 관계없이 적용되며 본 특허 문서 전체에 걸쳐 모든 문맥에서 적용된다. 따라서, 예를 들면, 90-100%의 범위에 대한 언급은 91-99%, 92-98%, 93-95%, 91-98%, 91-97%, 91-96%, 91-95%, 91-94%, 91-93%, 등을 포함한다. 90-100%의 범위의 언급은 또한 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 95%, 97%, 등, 뿐만 아니라 91.1%, 91.2%, 91.3%, 91.4%, 91.5%, 등, 92.1%, 92.2%, 92.3%, 92.4%, 92.5%, 등을 포함한다.
또한, 1-3, 3-5, 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60-70, 70-80, 80-90, 90-100, 100-110, 110-120, 120-130, 130-140, 140-150, 150-160, 160-170, 170-180, 180-190, 190-200, 200-225, 225-250의 범위의 언급은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 등을 포함한다. 추가 예에서, 25-250, 250-500, 500-1,000, 1,000-2,500, 2,500-5,000, 5,000-25,000, 25,000-50,000의 범위의 언급은 상기 값 내의 임의의 수치 또는 범위 또는 상기 값을 포함하는 임의의 수치 또는 범위, 예를 들면, 25, 26, 27, 28, 29…250, 251, 252, 253, 254…500, 501, 502, 503, 504…, 등을 포함한다.
본원에 또한 사용된 바와 같이, 일련의 범위가 본 문서 전반에 개시되어 있다. 일련의 범위의 사용은 또 다른 범위를 제공하기 위하여 상부 및 하부 범위의 조합을 포함한다. 이러한 구성은 범위의 폭에 관계없이 적용되며 본 특허 문서 전체에 걸쳐 모든 문맥에서 적용된다. 따라서, 예를 들면, 일련의 범위, 예컨대 5-10, 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-75, 75-100, 100-150의 언급은, 5-20, 5-30, 5-40, 5-50, 5-75, 5-100, 5-150, 및 10-30, 10-40, 10-50, 10-75, 10-100, 10-150, 및 20-40, 20-50, 20-75, 20-100, 20-150, 등과 같은 범위를 포함한다.
간결성을 위해, 특정 약어가 본원에서 사용된다. 하나의 예는 아미노산 잔기를 나타내는 단일 글자 약어이다. 아미노산 및 그것의 대응하는 3개의 글자 및 단일 글자 약어는 아래와 같다:
본 발명은 일반적으로 많은 구현예를 설명하기 위해 긍정적인 언어를 사용하여 본원에 개시된다. 본 발명은 또한 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 절차, 검정 또는 분석과 같은, 특정 주제가 전체적으로 또는 부분적으로 배제된 구현예를 구체적으로 포함한다. 따라서, 본 발명이 본 발명의 포함되지 않는 것의 측면에서 본원에서 일반적으로 표현되지 않지만 본 발명에 명시적으로 포함되지 않는 양태는 그럼에도 불구하고 본원에 개시되어 있다.
본 발명의 많은 구현에가 기재되었다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 다양한 변형이 이뤄질 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 하기 실시예는 청구범위에 기재된 발명의 범위를 예시하기 위한 것일 뿐 제한하는 것이 아니다.
5. 실시예
본 부문 (즉, 부문 5)에서의 실시예는 제한이 아닌 예시로서 제공된다.
5.1 실시예 1: 항-PD-1 항체의 생성
5.1.1 항-PD-1 항체의 생성
친계 PD-1-IgG1 mAb를 인간 PD-1 세포외 도메인 (ECD) 항원 또는 CHO-hPD-1 형질감염된 세포를 사용한 마우스 면역화 방법에 의해 초기에 생성하였다. 하이브리도마 풀의 초기 특성규명은 가용성 항원에 대한 Biacore®에 의해 측정된 KD ~ 6 nM를 갖는 항-인간 PD-1, PD-L1 비-차단 및 PD-L2 비-차단 항체를 생산하는 PD1Sub1로 명명된 아클론을 확인하였다 (데이터 도시되지 않음). PD1Sub1 하이브리도마로부터의 마우스 VH 및 VL 유전자를 서열분석하고 가장 가까운 J 영역 (각각 IgH J6 및 Igκ J2)을 사용하여 가장 상동성인 인간 VH 및 VL 프레임워크 유전자 (각각 IgH1-f 및 Vκ4-1)의 인간 γ1 및 κ 불변 영역 내로 인간 CDR-이식에 사용하였다. 인간 생식계열 HG1 VH 및 VL 영역에만, 마우스 CDR3 분절을 인간 VH 및 VL 프레임워크 생식계열 유전자인 IgH 1-f 및 Vκ 4-1 내에 각각 위치시켰다.
안정적인 AID (활성화-유도된 데아미나제)을 갖는 DeciduousTM 구조물에서 CDR-이식된 또는 생식계열 HG1 항체를 발현하는 안정적인 HEK-293c18 세포주를 SHM-XELTM 친화성 성숙 플랫폼 (AnaptysBio, San Diego, CA)에서 사용하기 위해 생성하였다. 항체 가변 도메인에서 유전적 다양성의 원 위치생성은 친계 항체의 더 높은 친화성 변이체를 발현하는 세포를 야기하였다. 이들을 단량체성 또는 이량체성 hPD-1을 사용한 유세포측정에 의해 단리하였다. 여러 라운드의 친화성 정제 및 선택을 통해 6개의 통로 (corridor) 및 45개의 클론을 생성하였다. 추가의 “인실리코 SHM” 사건과 함께, 이들 클론의 생어 및 심층 서열분석은 VH 및 VL CDR 내로 풍부한 돌연변이를 포함시키는 여러 라운드의 부위 지향적 돌연변이유발을 야기하였다. 가장 높은 친화성으로 결합하는 12개의 뮤테인을 PD-1에 대한 결합 동력학, 및 CHO 세포의 표면 상에 발현된 전장 PD-1에 대한 결합에 대해 생화학적으로, 생물물리학적으로 추가로 특성을 규명하였다. 정제된 항체의 기능적 특성규명을 두 가지 분석에서 수행하였다: 세포 표면 PD-1에 결합하는 PD-L1 경쟁 및 활성화된 인간 CD4+ T 세포의 재활성화로부터의 IL-2 생산에서의 억제 활성.
이들 방법에 기초하여, 항-PD-1 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6을 표 9에 나타낸 바와 같이 생성하였다.
5.1.2 인간 PBMC 또는 인간 전혈에서 CD4+ 재활성화 분석
백혈구 환원 시스템 (LRS)로부터 단리된 인간 PBMC 상에서 37 ℃에서 48시간 동안 PHA 활성화를 이용하여 PD-1 발현을 유도하였다. CD4+ T 세포를 CD4 단리 키트 (Miltenyi Biotec, San Diego, CA)를 사용하여 PBMC로부터 정제하고 항-CD3 또는 항-CD3 및 적정된 항-PD-1 또는 hIgG1 아이소타입 대조군 항체로 고정된 96-웰에 재도말하였다. 상청액을 IL-2, IFN-γ, 및 IL-17 사이토카인 결정을 위해 24 및 48 시간에 수집하였다. 6개의 모든 항-PD-1 클론은 유사한 억제 EC50을 나타내었고, 표 10에서 나타낸 바와 같이 IL-2의 경우 20-36 nM, IFN- γ의 경우 34-58 nM, 및 IL-17의 경우 27-41 nM의 범위였다.
이후, 특이적 T 세포 기능의 억제를 인간 전혈 매트릭스에서 평가하였다. 새롭게 채혈되고 헤파린처리된 인간 혈액을 항-CD3 또는 항-CD3 및 적정된 항-PD-1 또는 hIgG1 아이소타입 대조군 항체로 고정화된 웰에 도말하였다. 24 및 48 시간에 수집된 혈장을 IL-2 (24 시간) 및 IFN- γ /IL-17 (48 시간)에 대해 측정하였다. 3개의 다른 시험된 항체 클론과 비교하여, PD1AB-6은 표 11에 나타낸 바와 같이 특이적 IL-2 (EC50 4.0+0.9 nM, n=4), IFN-γ (EC50 4.1+2.2 nM, n=2), 및 IL-17 (EC50 3.6+1.2 nM, n=3) 억제에서 2-3배 증가된 효능을 나타내었다.
5.1.3 세포 기반 리간드 결합 분석
리간드 경쟁을 평가하기 위해, 세포 결합 분석을 실시하여 확인된 6개의 항체 클론을 평가하였다. 간단히, 100 nM 내지 100 pM의 반-로그 농도의 개별 항체 클론을 10 nM DyL650-PD-L1과 미리 혼합한 후 얼음 상에서 45분 동안 인간 PD-1-CHO 세포 (2 x 105 세포)에 첨가하였다. 이후, 세포를 세척한 후, DyL650-PD-L1 결합을 BD FACSArrayTM 상에서 분석하고, 아이소타입 대조군 항체 대비 중앙 형광 강도를 각각의 농도에서 플롯팅하였다. 하기에 나타낸 바와 같이: 도1A-1B, PD1AB-6, 뿐만 아니라 친계 클론 PD1AB-1을 포함하는 다른 5개의 클론은 100 nM까지 DyL650-PD-L1 결합에 대해 유의한 경쟁을 나타내지 않았다. 그에 반해서, MDX 4H1 (AnaptysBio, San Diego, CA), 길항제, 리간드-차단, PD-1 항체는 표지된 PD-L1 결합을 용량-의존적으로 차단하여, 결합 EC50 ~ 5-10 nM를 생성하였다.
5.1.4 에피토프 맵핑
PD-1 에피토프를 인간 PD-1 세포외 도메인과 복합된 PD1AB-6 Fab의 결정 구조를 1.8 Å 해상도로 풀음으로써 결정하였다. PD-1: PD1AB-6 Fab 상호작용 부위는 PD-1: PD-L1 상호작용 부위와 비교하여 PD-1의 원위 측에 존재하며 (도2), 이는 PD-L1 및 PD1AB-6이 PD-1 경합에 대해 경쟁하지 않는다는 관찰과 일치한다. PD1AB-6 Fab는 잔기 100-105로 구성된 PD-1 루프로 형성된 실질적인 상호작용으로, PD-1 β 시트에 결합한다 (도3). PD-1 상의 R104는 Fab CDR H1 상의 잔기와 다중 극성 상호작용을 한다. 인접한 잔기 G103은 또한 Fab와 단단한 극성 상호작용을 한다. R104 및 G103 모두는 마우스 PD-1에서 돌연변이되어 (각각 히스티딘 및 아르기닌으로), PD1AB-6이 쥣과 PD-1에 결합하지 못하는 구조적 근거를 제공한다. PD-1과 상호작용하는 PD1AB-6 Fab 영역은 CDR H1, H2, H3, L1 및 L2이다. PD-1: PD1AB-6 Fab 상호작용의 원자적 세부사항은 표 12에 기재되어 있다. PD-1 에피토프와 상호작용하는 HC 및 LC 잔기가 기재되어 있다. 약어는 아래와 같다: HB-수소 결합, HYD-소수성 상호작용, 이온-이온성 상호작용.
5.1.5 PD1AB-6의 변이체의 생성
PD1AB-6 IgG1 항체 (PD1AB-6-IgG1) 및 Fc 변형된 IgG4PE 항체 (PD1AB-6-4PE)를 생성하였다. PD1AB-6-4PE를 유의하게 더 낮은 Fc-매개된 효과기 기능을 갖도록 설계하였다. CH 영역, γ4는 2개의 비-표준 아미노산 치환, S228P 및 L235E (EU 넘버링 시스템, 카밧 및 Wu 1991)를 함유한다. IgG4의 힌지 내의 공통 아미노산 유형인 세린 228은 IgG4에서 덜 흔히 관찰되는 아미노산 유형이며 IgG1에서 고도로 보존된 아미노산인 프롤린으로 변화되었다. 이러한 변화는 IgG4-서브클래스 항체의 생산에서 흔히 관찰되는 “절반-항체”의 수준을 유의하게 감소시켰다. Fcγ 수용체와의 중쇄 상호작용에 관여하는 핵심 아미노산 중 하나인 류신 235가 글루탐산으로 변화되었다. L235E 치환은 FcγR에 대한 γ4 사슬의 상호작용을 유의하게 감소시켜, PD-1-발현 정상 세포의 ADCC 및 Fc-수용체-매개된 제거를 제거하였다. 또한, γ4 중쇄에 의한 보체 결합의 고유한 결여는 CDC 기능이 없는 PD1AB-6-4PE 분자를 만든다. 감소된 CDC를 위한 C1q에 대한 결합 친화성을 감소시키기 위해 2개의 다른 변이체를 생성하였다 (도4). PD1AB-6-K3을 생성하기 위해, PD1AB-6-IgG1에서 라이신 322를 알라닌으로 치환하였다. K322A 치환은 인간 IgG1 Fc (Idusogie 등, 2000, J. Immunol. 164(8): 4178-84)를 갖는 키메라 항체인 리툭시맙 상의 C1q 결합을 억제하는 것으로 보고된다. PD1AB-6-IgG1의 Fc-골격을 S228P 치환을 갖는 IgG4의 Fc-골격으로 변환함으로써 PD1AB-6-4P를 생성하였다. IgG4의 힌지 내의 공통 아미노산 유형인 세린 228은 IgG4에서 덜 흔히 관찰되는 아미노산 유형이며 IgG1에서 고도로 보존된 아미노산인 프롤린으로 변화되었다. 이러한 변화는 IgG4-서브클래스 항체의 생산에서 흔히 관찰되는 “절반-항체”의 수준을 유의하게 감소시켰다. IgG4 항체는 약화된 ADCC 및 CDC 기능 (Overdijk 등, 2012, J. Immunol. 189(7): 3430-38)을 갖는 것으로 보고되었다. 모든 변화는 가변 영역의 변화 없이 CH 영역에서 생성되었다. PD1AB-6-IgG1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열은 LC_PD1AB-6-IgG1 및 HC_PD1AB-6-IgG1로 라벨링된다 (도4). 2개의 중쇄 변이체는 HC_PD1AB-6-IgG1-K322A 및 HC_PD1AB-6-IgG4P를 포함한다. 경쇄 LC_PD1AB-6-IgG1은 3개의 개별 중쇄와 쌍을 이루어 각각 PD1AB-6-IgG1, PD1AB-6-K3, 및 PD1AB-6-4P를 생성한다.
5.1.6 일시적 형질감염으로부터 세포주 개발 및 항체 제조
5.1.6.1
중쇄 및 경쇄의 분자 클로닝
IgG LC 발현 벡터 pFUSE2ss-CLIg-hk 및 IgG HC 발현 벡터 pFUSEss-CHIg-hG1을 InvivoGen (San Diego, CA)로부터 구입하였다.
LC_PD1AB-6-IgG1을 코딩하는 아미노산 서열 (도4)을 포유동물 세포에서의 단백질 발현을 위해 코돈-최적화된 유전자 서열로 전환하였다. 5’-말단의 제한 효소 부위 EcoRI 및 3’-말단의 NheI를 상기 최적화된 유전자에 부가하였다. EcoRI 및 NheI 부위를 갖는 최적화된 LC 유전자를 합성하여 삽입 단편을 생산하였다. IgG LC 발현 벡터 pFUSE2ss-CLIg-hk를 EcoRI 및 NheI로 소화시켜 대략 3.5 kb pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI 단편을 생산하였다. 상기 삽입 단편을 pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI 단편 내로 결찰시켜 pFUSE2ss-CLIg-hk-LC_PD1AB-6-IgG1인 pJS-1을 생산하였다.
HC_PD1AB-6-IgG1, HC_PD1AB-6-IgG1-K322A, 또는 HC_PD1AB-6-IgG4P를 코딩하는 아미노산 서열 (도4)을 포유동물 세포에서의 단백질 발현을 위해 코돈-최적화된 유전자 서열로 전환시켰다. 5’-말단의 제한 효소 부위 EcoRI, 정지 코돈 (pFUSEss-CHIg-hG1에서 HC 서열의 3’-말단 이후)부터 3’-말단의 HpaI까지의 불변 영역을 부가하였다. EcoRI 및 HpaI 부위를 갖는 최적화된 유전자를 합성하여 각각 HC_PD1AB-6-IgG1, HC_PD1AB-6-IgG1-K322A, 및 HC_PD1AB-6-IgG4P를 코딩하는 유전자를 함유하는 삽입 단편을 생산하였다. IgG HC 발현 벡터 pFUSEss-CHIg-hG1을 EcoRI 및 HpaI로 소화시켜 대략 3.4 kb pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI 단편을 생산하였다. 상기 삽입 단편을 pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI 단편 내로 결찰시켜 각각 pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1, pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1-K322A, 및 pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG4P인 pJS-2, pJS-3, 및 pJS-12를 생산하였다.
5.1.6.2
단백질 생산
PD1AB-6-IgG1, PD1AB-6-K3, 및 PD1AB-6-4P의 3개의 모든 변이체를 시험관내 및 생체내 효능 연구를 위해 쉐이크-플라스크에서 실험실 규모로 제조하였다. 비-GLP 독성학 연구 및 추가의 특성규명을 위한 PD1AB-6-4P 및 PD1AB-6-K3 항체를 Life Technologies (Carlsbad, CA)사의 FreeStyleTM MAX CHO 발현 시스템뿐만 아니라 Expi293TM 발현 시스템을 사용하여 50 L 생물반응기 (50 L 교반 탱크 및 50 L 웨이브 백)에서 제조하였다. FreeStyleTM MAX CHO 발현 시스템을 제조자의 표준 프로토콜을 사용하여 CHO-S 세포의 일시적 형질감염에 사용하였다. Expi293TM 발현 시스템을 제조자의 표준 프로토콜을 사용하여 Expi293 세포의 일시적 형질감염에 사용하였다. 형질감염 동안 1 L의 배양물당 1 mg의 DNA 혼합물에 대해 경쇄 대 중쇄의 3: 2 비율을 사용하였다. 세포를 37 ℃의 50 L 생물반응기에서 0.5 백만개의 세포/mL로 시딩하고 밤새 성장시켜 1 백만 세포/mL에 도달하게 하였다. 그리고 나서, 세포를 제조자의 표준 프로토콜을 사용하여 형질감염시켰다. 형질감염 후 1일째에, 1 mM 나트륨 부티레이트 및 1% v/v의 공급 배지 (Yeastolate, CHO CD EfficientFeedTM A, 글루타맥스 및 글루코스)를 생물반응기에 첨가하고, 온도를 32 ℃로 낮추었다. 40리터의 세포 및 첨가제를 50 L 교반 탱크에 대해 시딩하고, 25 L의 세포 및 첨가제를 50 L 웨이브 생물반응기에 대해 시딩하였다. 세포 생존력 및 역가를 매일 모니터링하고, 세포 생존력이 50% 미만으로 떨어지면 배치를 수확하였다. Vi-세포TM 기기를 생존력 분석에 사용하였고, 항-인간 IgG 센서가 장착된 Octet RED를 표준 곡선을 위해 정제된 항체를 사용한 역가 분석에 사용하였다. 세포 및 상청액을 GE Life Sciences 심층 여과 및 멸균 칼럼을 사용하여 수확하고, ULTA Prime GF 5 μm 캡슐을 심층 여과에 사용한 다음 ULTA 순수한 HC 0.6/0.2 μm 멸균 캡슐을 사용하였다. 정화된 상청액을 교차유동 여과를 사용하여 5-8배로 농축하였고, GE Life Science로부터의 50 Kd 컷오프 Kvick™ Lab SCU를 TFF에 사용하였다. 수확시 각각의 아이소타입에 대해 수득된 역가 및 최대 세포 밀도가 표 13에 제공되어 있다.
5.1.6.3
단백질 정제
단백질 A 친화성 크로마토그래피 및 낮은 pH 바이러스 불활성화를 포함하는 일련의 다운스트림 정제 단계 후 IEX 상호작용 (CaptoTM Adhere & CaptoTM SP ImpRes) 크로마토그래피 단계에 의해 생산된 물질의 정제를 수행하였다. 정제된 항체는 완충액에 대해 교환된 완충액 ((10 mM 석시네이트 pH 5.5, 9% 수크로오스, 0.05% PS20)에 의해 벌크 제형화되고, 0.2 μm 필터를 통해 여과되고, 분주된다.
생성물을 포획하고 공정 관련된 불순물을 제거하도록 설계된, MabSelect SuReTM을 사용하여 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 수행하였다. 차후의 바이러스 불활성화 단계를 산성 조건 하에서 (45분 동안 pH 3.4 ± 0.1) 수행한 다음, 불활성화 풀을 pH 5.5 ± 0.1로 조정하였다. 바이러스 불활성화 후, 음이온 교환기를 응집물, DNA, 숙주 세포 단백질, 및 내독소와 같은 불순물을 제거하기 위해 CaptoTM Adhere를 사용하는 중간 연마 단계에서 통과 방식으로 사용하였다. 생성물 풀을 pH 6.5 ±0.1로 조정하였고, 전도도를 다음 공정 단계 전에 2 mS/cm으로 감소시켰다. 양이온 교환기 CaptoTM SP ImpRes를 연마 단계로서 사용하였고, 생성물을 10 mS/cm에서 분해하였다. 그리고 나서, 항체를 모액 (10 mM 석시네이트, 9% 수크로오스, 0.05% PS20, pH 5.5)에서 완충액 교환하고, 20 mg/mL로 농축시켰다. 그리고 나서, 생성물 풀을 0.2 μm 필터를 통해 여과하고 분주하였다.
5.1.7 세포 기반 PD-1 결합 분석
PD1AB-6-IgG1 결합을 하기 상에서 평가하였다: 인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1을 발현하는 CHO 세포 (도5A-5B), 및 원발성 인간 PBMC (도6) 및 사이노몰구스 PBMC (도7).
인간 PD-1 및 사이노몰구스 PD-1을 발현하는 CHO 세포를 4 ℃에서 30분간 다양한 농도의 비표지된 PD1AB-6-IgG1 항체와 함께 배양하고, 세척하고, 4 ℃에서 30분간 항-인간 IgG Fc (eBioscience, San Diego, CA)로 염색하였다. 인간 IgG1 Fc를 음성 대조군으로 사용하였다. PD1AB-6-IgG1은 EC50 = 0.4 nM로 CHO 세포 상에서 발현된 인간 PD-1에 결합하고 EC50 = 0.8 nM로 CHO 세포 상에서 발현된 사이노몰구스 PD-1에 결합한다 (도5A-5B).
인간 PBMC를 3일간 1 μg/mL 플레이트 결합된 항-CD3로 활성화시켜 T 세포 상에서 PD-1 발현을 유도하였다. 세포를 4 ℃에서 30분간 다양한 농도의 비표지된 PD1AB-6-IgG1 항체와 함께 배양하고, 세척하고, 4 ℃에서 30분간 항-인간 IgG Fc (eBioscience, San Diego, CA)로 염색하였다. 인간 IgG1 Fc를 음성 대조군으로 사용하였다. 기하학적 MFI를 CD4+ T 세포 상에서 결정하였다. 2개의 인간 건강한 공여체 중 1명으로부터의 데이터가 도6에 나타나 있다.
사이노몰구스 PBMC를 2일간 1 μg/mL 항-사이노몰구스 CD3/CD28로 활성화시켜 T 세포 상에서 PD-1 발현을 유도하였다. 세포를 4 ℃에서 30분간 다양한 농도의 비표지된 PD1AB-6-IgG1 항체와 함께 배양하고, 세척하고, 4 ℃에서 30분간 항-인간 IgG Fc (eBioscience)로 염색하였다. 인간 IgG1 Fc를 음성 대조군으로 사용하였다. 기하학적 MFI를 CD4+ T 세포 상에서 결정하였다. 2개의 사이노몰구스 공여체 중 1개로부터의 데이터가 도7에 나타나 있다.
5.1.8 Fc 수용체 결합 분석
변이체 생성의 목적, 즉, 감소된 FcγR-매개된 효과기 기능을 확인하기 위해, PD1AB-6-K3 및 PD1AB-6-4P 변이체에 대한 FcγR 결합을 두 가지 방법론에 의해 분석하였다. 첫째, 결합을 Cisbio Tag-lite® 검출을 사용한 변위 FcγR 분석으로 시험하였다 (도8A-8D). 테르븀 (Tb) 공여체 염료로 미리 라벨링된 특이적인 FcγR (FcγRI, FcγRIIIa, 또는 FcγRIIb)을 발현하도록 조작된 HEK293 세포를 10000 nM 내지 0.1 pM 범위의 로그 농도에 대해 참조 대조군 또는 PD1AB-6-IgG1, PD1AB-6-K3, 및 PD1AB-6-4P 항체와 혼합하였다. 둘째, 이후 인간-hIgG-d2 (수용체)를 첨가하여 수용체 결합에 대해 경쟁시켰다. Tb-d2 근접에 의해 생성된 형광 공명 에너지 전달 (FRET) 신호의 검출을 측정하며, 이는 PD1AB-6 변이체-결합된 FcγR에 반비례한다. 도8A-8D 에 나타낸 바와 같이, PD1AB-6-K3 변이체는 ADCC 활성을 담당하는 NK 세포 상의 저친화도 수용체인 FcγRIIIa (CD16)에 대해 감소된 결합을 나타내었다. FcγRI (과립구, 수지상 세포 (DC), 또는 단핵구 상에서 발현됨)에 대한 결합은 친계 PD1AB-6-IgG1 분자와 유사하였다.
둘째, PD1AB-6-K3 및 PD1AB-6-4P 변이체 모두를 FACS-기반 결합 분석에서 시험하였다 (도9A-9C). 간단히, FcγRI-CHO 또는 FcγRIIIaV158-CHO 발현 세포주를 분리하고, PD1AB-6-K3 및 PD1AB-6-4P 변이체와 혼합하기 전에 상이한 농도로 얼음 상에서 1시간 동안 세척하였다. PD1AB-6 변이체-결합된 세포를 얼음에서 추가 1시간 동안 표지된 PE-접합된 F(ab’)2 염소 항-인간 2차 항체로 검출하고, 세척하고, FACS에 의해 분석하기 전에 고정시키고, 평균 형광 강도를 각각의 농도에서 플롯팅하였다. PD1AB-6-4P 변이체는 FcγRI 및 FcγRIIIa 주에 대해 각각 유의하게 더 높은 결합 EC50 (>15X 및 >21X)을 나타내었다 (도9A-9C).
5.1.9
시험관내
ADCC 분석
ADCC를 유도하는 PD1AB-6 변이체의 능력을 건강한 공여체로부터의 자연 살해 (NK) 세포 및 PD-1 발현 표적 세포를 포함하는 공-배양 분석에서 평가하였다. PD1AB-6 변이체로 전처리된 표적 세포 (NCI-OCI-Ly3)를 활성화된 NK 세포와 함께 4시간 동안 공-배양하였다. 상청액 LDH 농도를 사용하여 특이적인 용해를 계산하였다. EC50 (nM)을 Prism을 사용하여 계산하였다. 오차 막대는 3개의 실험을 나타낸다. 데이터는 4명의 개별 건강한 공여체 중 2명의 대표이다. 도10A-10B에 나타낸 바와 같이, PD1AB-6-IgG1의 적정은 용량 의존적 ADCC를 유도한 반면, PD1AB-6-K3은 감소된 ADCC 활성을 나타내었다.
5.1.10
시험관내
CDC 분석
CDC를 유도하는 PD1AB-6 변이체의 능력을 CD20+ NCI-OCI-Ly3 세포를 발현하는 PD-1을 사용하여 평가하였다. 항체로 전처리된 표적 세포 (NCI-OCI-Ly3)를 5% 토끼 보체가 보충된 무혈청 배지에서 4시간 동안 배양하였다. 세포 용해를 FACS에 의해 7-AAD+ 세포에 의해 결정하였다. 데이터는 3개의 독립적인 실험을 대표한다: (i) PD1AB-6-IgG1 및 항-CD20 IgG1의 CDC 활성; (ii) PD1AB-6-IgG1 및 PD1AB-6-K3의 CDC 활성; (iii) PD1AB-6-4P 및 상업적 마우스 항-PD-1 IgG1 항체의 CDC 활성. 도11에 나타낸 바와 같이, PD1AB-6-K3은 일관되게 CDC를 유도하지 않았다 (n=3). 친계 PD1AB-6-IgG1 및 PD1AB-6-4P는 또한 CDC를 유도하지 않았다. 항-CD20 IgG1이 5% 토끼 보체의 존재하에 NCI-OCI-Ly3 세포 상에서 용량 의존적 CDC를 반복적으로 유도하므로, 이것은 보체 사멸에 대한 표적 세포주의 저항 때문은 아니였다.
5.2 실시예 2: 활성 분석
5.2.1 인간 T 세포 활성화 분석
T 세포 효과기 기능 억제에 대한 PD1AB-6 변이체의 기능 평가를 두 가지 방법으로 수행하였다. 한 가지 분석에서, PD-1을 발현시키기 위해 말초 혈액 단핵 세포를 미리 활성화시키고 가용성 PD1AB-6-K3의 존재하에 재자극하였다 (도12). PD-1 발현을 상향조절하기 위해, 건강한 공여체의 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 미토겐, PHA로 48시간 동안 미리 활성화시켰다. 그리고 나서, 100 nM 내지 0.1 nM 최종 농도 범위에서 희석된 PD1AB-6 변이체의 존재하에 항-CD3 접합된 Dynabeads® (Life Technologies, Carlsbad, CA)를 사용하여 이들 세포를 재자극시켰다. T 세포 활성화를 자극 후 24시간에 배양 상청액에서 IL-2 수준을 사용하여 측정하였다. 도12에 나타낸 바와 같이, PD1AB-6-K3 및 2개의 다른 변이체는 5-25 nM의 EC50으로 이 분석에서 강력한 T 세포 억제 활성을 나타내었다.
두 번째 분석을 T 세포 기능을 억제하는데 있어서 PD1AB-6-K3의 생체외 측정에 사용하였다 (도13). 이것은 항-CD3 +/- PD1AB-6-K3으로 공동-코팅된 96-웰 플레이트에 신선한 인간 전혈을 직접 도말하고, T 세포 활성화의 판독값으로서 IL-17 및 IFN-γ 수준을 측정함으로써 수행하였다. CTLA4Ig (Orencia®)를 이들 분석에서 양성 대조군으로 사용하였고, 인간 IgG Fc 단편을 음성 대조군으로 사용하였다. 도13에 나타낸 바와 같이, 전반적으로, PD1AB-6-K3은 PD1AB-6-4P보다 더 나은 효능 쪽으로의 추세를 나타내었다. 음성 대조군, hIgG Fc는 EC50 > 100 nM으로 활성을 나타내지 않았다.
5.2.2 사이노몰구스 원숭이 교차반응성 분석
선도 PD1AB-6-K3과 기능적 사이노몰구스 원숭이 교차 반응성의 결정을 지시된 바와 같이 항-사이노몰구스 CD3, CD28, 및 PD1AB-6 변이체로 활성화된 새롭게 단리된 사이노몰구스 PBMC를 사용하여, 인간 샘플과 유사하게 수행하였다. CTLA4Ig를 이들 분석에서 양성 대조군으로 사용하였고, hIgG1 Fc를 음성 대조군으로 사용하였다. 사이노몰구스 IL-2 MSD 분석을 사용한 사이토카인 결정을 위해 48시간 후에 배양 상청액을 제거하였다. 표 14에 나타낸 바와 같이, 이들 분석은 PD1AB-6-K3이 사이노몰구스 T 세포 사이토카인 분비를 양성 대조군 CTLA4Ig와 대등한 수준으로 약화시켰고, 활성은 인간 분석에서 관찰된 것과 대등하였음을 보여주었다.
5.2.3
시험관내
작용 기전
T 세포 표면 분자, 예컨대 CD3 및 CD4에 결합하는 몇 개의 항체는 상기 분자의 신호전달 및 차후의 하향조절을 야기한다. PD1AB-6 항체는 PD-1을 통해 효능제 신호를 제공하도록 설계되므로, 시험관내에서 PD1AB-6 처리 후 PD-1 발현을 평가하는 것이 관심대상이었다.
5.2.3.1
PD1AB-6 처리 후 감소된 PD-1 발현
상이한 공여체의 인간 PBMC를 다양한 농도의 가용성 대조군 IgG1 또는 PD1AB-6-IgG1과 함께 1 μg/mL 플레이트 결합된 항-CD3 + 0.25 g/mL 플레이트 결합된 항-CD28을 사용하여 활성화시켰다. 4 시간 내지 72시간 배양 후, 세포를 CD3, CD45RO, 및 PD-1에 대해 염색하여 T 세포 상에서 PD-1 발현을 평가하였다. 도14A-14C는 48시간 PD1AB-6-IgG1 처리 후 인간 CD3+ T 세포 상에서 PD-1의 감소된 발현을 나타낸다. PD-1 발현의 분석은 PD1AB-6-IgG1 처리가 T 세포의 표면 상에서 PD-1 발현의 하향 조절을 야기하였음을 나타내었다 (도14A-14B에서 하나의 공여체로부터의 대표적인 히스토그램 및 하기에서 3명의 공여체 및 다양한 항체 농도에 걸쳐, 48시간에 평균 형광 강도의 분석: 도14C). PD-1 하향조절은 PD1AB-6-IgG1과의 배양 4시간 정도와 같이 초기에 관찰되었다. 표면 PD-1 발현의 하향조절은 PD-1을 통한 PD1AB-6 유도된 신호전달 때문인 것 같았으며, T 세포 수용체 신호전달에서 관찰된 것과 유사한 기전을 통해 일어났다 (San Jose 등, 2000, Immunity 12(2): 161-70).
5.3 실시예 3: PD1AB-6 변이체의 물리화학 특성규명
5.3.1 Biacore
®
결합 분석
정제된 PD1AB-6 변이체 항체를 포획 방법을 사용하여 hPD1 항원에의 결합에 대해 Biacore® T200에서 분석하였다. Fc-특이적인 항-인간 IgG를 Fc2에 고정시키고, Fc1을 참조 채널로서 블랭크로 남겨 두었다. 정제된 PD1 항체를 항-인간 IgG에 포획하고, 내부적으로 생산된 hPD1 항원 (PD1_002)을 100 nM 내지 200 pM의 2배 희석 시리즈를 사용하여 양 채널에 유동시켜 결합 동력학을 결정하였다. 사용된 PD-1은 봉입체로서 E. 콜리에서 발현되고 재폴딩된 인간 PD-1 (잔기 32-160)의 세포외 도메인이었다. 표면을 3M 염화마그네슘을 사용하여 각각의 항원 농도 사이에서 재생하였다. PD1AB-6-IgG1, PD1AB-6-4P, 및 PD1AB-6-K3에 대한 결합 동력학뿐만 아니라 kon, koff, 및 KD의 값의 예가 도15A-15C에 나타나 있다. 3개의 모든 변이체는 19-22 nM의 대등한 KD 값으로 PD-1 항원과 유사한 회합 및 해리 속도를 가지고 있었다.
6. 서열목록
본 명세서는 서열목록의 컴퓨터 판독가능한 형태 (CRF) 사본으로 제출된다. 2016년 9월 22일에 생성되고 50,870 바이트 크기인 10624-294-228_SEQLIST.txt라는 제목의 CRF는 서열목록의 종이 사본과 동일하며 그 전체가 참고로 본원에 포함되어 있다.
<110> Celgene Corporation
<120> PD-1 BINDING PROTEINS AND METHODS OF USE THEREOF
<130> 10624-294-228
<140> PCT/US 16/054089
<141> 2016-09-28
<150> US 62/234,535
<151> 2015-09-29
<160> 44
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR1 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-3 and PD1AB-6
<400> 1
Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR2 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 2
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 3
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR3 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 3
His Gln Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr
1 5
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR1 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 4
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Met His
1 5 10
<210> 5
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR2 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 5
Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys
1 5 10
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH CDR3 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 6
Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 7
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL CDR1 of Antibodies PD1AB-2, PD1AB-4, and PD1AB-5
<400> 7
Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 8
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL domain of Antibodies PD1AB-1 and PD1AB-6
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 9
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL domain of Antibodies PD1AB-2, PD1AB-4 and PD1AB-5
<400> 9
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 10
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL domain of Antibody PD1AB-3
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 11
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH domain of Antibodies PD1AB-1 and PD1AB-2
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH domain of Antibodies PD1AB-3 and PD1AB-4
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 13
<211> 124
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH domain of Antibodies PD1AB-5 and PD1AB-6
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL FR1 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys
20
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL FR2 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 15
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 16
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL FR3 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-4, PD1AB-5 and
PD1AB-6
<400> 16
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL FR4 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 17
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
1 5 10
<210> 18
<211> 32
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL FR3 of Antibody PD1AB-3
<400> 18
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 19
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR1 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3 and PD1AB-4
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Val Ser
20 25
<210> 20
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR2 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 20
Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR3 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-5 and PD1AB-6
<400> 21
Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR4 of Antibodies PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5
and PD1AB-6
<400> 22
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR3 of Antibodies PD1AB-3 and PD1AB-4
<400> 23
Tyr Asp Pro Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser
1 5 10 15
Thr Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 24
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH FR1 of Antibodies PD1AB-5 and PD1AB-6
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 25
<211> 341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL of Antibodies PD1AB-1 and PD1AB-6
<400> 25
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccggtca aagtgtttta tacagttcaa atcagaagaa cttcttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 26
<211> 341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL of Antibodies PD1AB-2, PD1AB-4 and PD1AB-5
<400> 26
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 27
<211> 341
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VL of Antibody PD1AB-3
<400> 27
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccggtca aagtgtttta tacagttcaa atcagaagaa cttcttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcaacc tgcaagctga agatgtggca gtttattact gtcatcaata cctctactcg 300
tggacgtttg gccaggggac caagctggag atcaaacgga c 341
<210> 28
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH of Antibodies PD1AB-1 and PD1AB-2
<400> 28
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg tttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 29
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH of Antibodies PD1AB-3 and PD1AB-4
<400> 29
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg tttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaaa cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 30
<211> 372
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> VH of Antibodies PD1AB-5 and PD1AB-6
<400> 30
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggctac agtgaaaatc 60
tcctgcaagg cttctggatt caacattaaa gacacgtata tgcactgggt gcaacaggcc 120
cctggaaaag ggcttgagtg gatgggaagg attgatcctg cgaatggtga taggaaatat 180
gacccgaagt tccagggcag agtcaccata accgcggaca cgtctacaga cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc tagatcaggc 300
cctgtttatt actacggtag tagctacgtt atggactact ggggtcaagg aaccacagtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 31
<211> 219
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> light chain of Antibody PD1AB-6-IgG1
<400> 31
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Gly Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln
85 90 95
Tyr Leu Tyr Ser Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 32
<211> 454
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> heavy chain of Antibody PD1AB-6-IgG1
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 33
<211> 454
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> heavy chain of Antibody PD1AB-6-K3
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 34
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> heavy chain of Antibody PD1AB-6-4P
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 35
<211> 451
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> heavy chain of Antibody PD1AB-6-4PE
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Gln Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Asp Arg Lys Tyr Asp Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Pro Val Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Val Met Asp
100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu
130 135 140
Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn
195 200 205
Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser
210 215 220
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Glu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(330)
<223> Fc region of a human IgG1
<400> 36
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 37
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc region of a human IgG1 with K322A substitution, also named as
IgG1-K322A Fc region
<400> 37
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Ala Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 38
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(327)
<223> Fc region of a human IgG4
<400> 38
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 39
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc region of a human IgG4 with S228P substitution, also named as
IgG4P Fc region
<400> 39
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 40
<211> 327
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Fc region of a human IgG4 with S228P and L235E substitutions,
also named as IgG4PE Fc region
<400> 40
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 41
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> constant region of the light chain of Antibody PD1AB-6-IgG1
<400> 41
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 42
<211> 198
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(198)
<223> human PD-1
<400> 42
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly
195
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid 100-109 of human PD-1 encoding an epitope for
anti-PD-1 antibody binding
<400> 43
Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser
1 5 10
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid 100-105 of human PD-1 encoding an epitope for
anti-PD-1 antibody binding
<400> 44
Leu Pro Asn Gly Arg Asp
1 5
Claims (104)
- 하기인 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체에 의해 기술적으로 인식된 인간 PD-1의 에피토프에 결합하거나; 또는
(b) 인간 PD-1에의 결합을 위해, 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역 및 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁한다. - PD-1에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 표 1에서 제시된 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VL 상보성 결정 영역 1 (CDR1), VL CDR2, 및 VL CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL); 및/또는
(b) 표 2에서 제시된 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VH 상보성 결정 영역 1 (CDR1), VH CDR2, 및 VH CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH). - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 표 3에서 제시된 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VL 프레임워크 1 (FR1), VL FR2, VL FR3, 및 VL FR4을 추가로 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL); 및/또는
(b) 표 4에서 제시된 항체 PD1AB-1, PD1AB-2, PD1AB-3, PD1AB-4, PD1AB-5, 또는 PD1AB-6 중 임의의 하나의 VH 프레임워크 1 (FR1), VH FR2, VH FR3, 및 VH FR4를 추가로 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH). - 청구항 2에 있어서, 상기 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 서열식별번호:1, 2, 및 3 각각의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3은 서열식별번호:4, 5, 및 6 각각의 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 VL CDR1, VL CDR2, 및 VL CDR3은 서열식별번호:7, 2, 및 3 각각의 아미노산 서열을 포함하고, 그리고 상기 VH CDR1, VH CDR2, 및 VH CDR3은 서열식별번호:4, 5, 및 6 각각의 아미노산 서열을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:11의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:12의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:8의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:9의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 2에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:10의 아미노산 서열을 포함하는 VL; 및
(b) 서열식별번호:13의 아미노산 서열을 포함하는 VH. - 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1 Fc 영역 또는 그것의 돌연변이체를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG1-K322A Fc 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG4 Fc 영역 또는 그것의 돌연변이체를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG4P Fc 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 IgG4PE Fc 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:36-40으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 Fc 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 26에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 추가로, 서열식별번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:41의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역; 및
(b) 서열식별번호:36-40으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 Fc 영역. - 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열식별번호:32의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄. - 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열식별번호:33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄. - 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열식별번호:34의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄. - 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열식별번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 서열식별번호:31의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄; 및
(b) 서열식별번호:35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄. - 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-109 중 적어도 하나에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 38에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 잔기 100-105 중 적어도 하나에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42 내의 아미노산 서열 내의 N33, T51, S57, L100, N102, G103, R104, D105, H107, 및 S109로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 1개의 잔기에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 N33에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 T51에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 S57에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 L100에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 N102에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 G103에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 R104에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 D105에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 H107에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 S109에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 40에 있어서, PD-1에 결합될 때, 상기 항체 또는 항원-결합 단편은 서열식별번호:42의 아미노산 서열 내의 G103 및 R104에 결합하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기인 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) T 세포 활성을 약화시키고/거나;
(b) T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절한다. - 청구항 1 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 PD-1 및/또는 원숭이 PD-1에 특이적으로 결합하지만 설치류 PD-1에는 그렇지 않은 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약화된 ADCC 활성 및/또는 약화된 CDC 활성을 갖는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 52에 있어서, 상기 T 세포 활성의 감쇠는 인간 PBMC 또는 전혈 샘플에서 일어나는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 52 또는 55에 있어서, 상기 T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인 생산의 억제에 의해 측정되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 56에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의해 억제된 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, 및/또는 IFN-γ를 포함하는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 52에 있어서, 상기 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 하기인 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
(a) 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 처리후 4시간만큼 일찍 일어나고/거나;
(b) 사이토카인 억제과 동반하거나 그것에 선행한다. - 청구항 53에 있어서, 상기 정제된 인간 PD-1에 결합하기 위한 KD는 약 100 pM 내지 약 10 nM이고, 그리고 세포 표면 상에서 발현된 인간 PD-1 및 세포 표면 상에서 발현된 원숭이 PD-1에 결합하기 위한 KD은 약 100 pM 내지 약 10 nM인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 56에 있어서, 상기 T 세포 활성을 감쇠시키기 위한 EC50은 약 1 pM 내지 약 10 pM, 약 10 pM 내지 약 100 pM, 약 100 pM 내지 약 1 nM, 약 1 nM 내지 약 10 nM, 또는 약 10 nM 내지 약 100 nM 인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 56에 있어서, 상기 T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 52 또는 58에 있어서, 상기 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 62 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론성 항체인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 63 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 인간화된, 인간, 또는 키메라성 항체인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 64에 있어서, 상기 인간화된 항체는 탈면역화된 항체 또는 복합 인간 항체인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 65 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fab, Fab’, F(ab’)2, Fv, scFv, dsFv, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 또는 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 66 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제제에 접합되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 67에 있어서, 상기 제제는 방사선동위원소, 금속 킬레이터, 효소, 형광 화합물, 생물발광 화합물, 및 화학발광 화합물 로 구성된 군으로부터 선택되는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
- 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
- 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체의 VH, VL, 또는 VH와 VL 둘 모두를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
- 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체의 중쇄, 경쇄, 또는 중쇄와 경쇄 둘 모두를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
- 청구항 70 또는 71에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 프로모터에 작동가능하게 연결되는, 폴리뉴클레오타이드.
- 청구항 71 또는 72의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터.
- 청구항 71 또는 72의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포.
- 청구항 73의 벡터를 포함하는 세포.
- 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는, 단리된 세포.
- 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 키트.
- 인간 PD-1의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법으로서, 청구항 74 내지 76 중 어느 한 항의 세포를 배양하여 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는 것을 포함하는, 방법.
- 인간 PD-1의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제조하는 방법으로서, 청구항 70 내지 72 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 발현시키는 것을 포함하는, 방법.
- T 세포의 활성을 감쇠시키는 방법으로서, 상기 T 세포를 유효량의, 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
- 청구항 80에 있어서, 상기 T 세포 활성의 최대 퍼센트 감쇠는 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%인, 방법.
- 청구항 80 또는 81에 있어서, 상기 T 세포 활성의 감쇠는 사이토카인 생산의 억제에 의해 측정되는, 방법.
- 청구항 80 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 청구항 80 내지 83 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인 생산의 억제는 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절과 동반하거나 그것을 뒤따르는, 방법.
- 청구항 84에 있어서, 상기 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 유효량의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나는, 방법.
- T 세포의 표면 상의 PD-1 발현을 하향조절하는 방법으로서, 상기 T 세포를 유효량의, 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
- 청구항 86에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 의한 PD-1 발현의 최대 퍼센트 하향 조절은 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%인, 방법.
- 청구항 86 또는 87에 있어서, 상기 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편과의 접촉후 4시간만큼 일찍 일어나는, 방법.
- 청구항 86 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포의 표면 상의 PD-1 발현의 하향 조절은 사이토카인 억제에 선행하는, 방법.
- 청구항 89에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- T 세포에 의해 사이토카인 생산을 억제하는 방법으로서, 상기 T 세포를 유효량의, 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
- 청구항 91에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-1, IL-2, IL-6, IL-12, IL-17, IL-22, IL-23, GM-CSF, TNF-α, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2, IL-17, IFN-γ, 또는 이들의 임의의 조합인, 방법.
- 청구항 93에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-2인, 방법.
- 청구항 93에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-17인, 방법.
- 청구항 93에 있어서, 상기 사이토카인은 IFN-γ인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-1인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-6인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-12인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-17인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-22인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 IL-23인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 GM-CSF인, 방법.
- 청구항 82, 89 또는 91 중 어느 한 항에 있어서, 상기 사이토카인은 TNFα인, 방법.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201562234535P | 2015-09-29 | 2015-09-29 | |
| US62/234,535 | 2015-09-29 | ||
| PCT/US2016/054089 WO2017058859A1 (en) | 2015-09-29 | 2016-09-28 | Pd-1 binding proteins and methods of use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20180054824A true KR20180054824A (ko) | 2018-05-24 |
Family
ID=58409303
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020187011467A KR20180054824A (ko) | 2015-09-29 | 2016-09-28 | Pd-1 결합 단백질 및 이의 사용 방법 |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US10428145B2 (ko) |
| EP (1) | EP3355920A4 (ko) |
| JP (2) | JP6843868B2 (ko) |
| KR (1) | KR20180054824A (ko) |
| CN (1) | CN108289953B (ko) |
| AR (1) | AR106184A1 (ko) |
| AU (1) | AU2016332725A1 (ko) |
| BR (1) | BR112018006237A2 (ko) |
| CA (1) | CA2997963A1 (ko) |
| CL (1) | CL2018000778A1 (ko) |
| CO (1) | CO2018003973A2 (ko) |
| EA (1) | EA201890790A1 (ko) |
| EC (1) | ECSP18030970A (ko) |
| HK (1) | HK1251158A1 (ko) |
| IL (1) | IL258273A (ko) |
| MX (1) | MX2018003689A (ko) |
| TW (1) | TWI702232B (ko) |
| WO (1) | WO2017058859A1 (ko) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190069399A (ko) * | 2016-09-19 | 2019-06-19 | 셀진 코포레이션 | Pd-1 결합 단백질을 사용하는 면역 질환의 치료 방법 |
Families Citing this family (38)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA2991976A1 (en) | 2015-07-13 | 2017-01-19 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof |
| PE20181322A1 (es) | 2015-09-01 | 2018-08-14 | Agenus Inc | Anticuerpo anti-pd1 y sus metodos de uso |
| WO2017058859A1 (en) * | 2015-09-29 | 2017-04-06 | Celgene Corporation | Pd-1 binding proteins and methods of use thereof |
| CR20180234A (es) | 2015-11-03 | 2018-09-11 | Janssen Biotech Inc | Anticuerpos que se unen especificamente a pd-1 y sus usos |
| KR102220275B1 (ko) | 2015-11-18 | 2021-02-26 | 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 | Pd1 및/또는 lag3 결합제 |
| WO2017220990A1 (en) | 2016-06-20 | 2017-12-28 | Kymab Limited | Anti-pd-l1 antibodies |
| JP2019534859A (ja) * | 2016-09-19 | 2019-12-05 | セルジーン コーポレイション | Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して白斑を治療する方法 |
| BR112019011582A2 (pt) | 2016-12-07 | 2019-10-22 | Agenus Inc. | anticorpos e métodos de utilização dos mesmos |
| WO2018170288A1 (en) | 2017-03-15 | 2018-09-20 | Pandion Therapeutics, Inc. | Targeted immunotolerance |
| AU2018246252A1 (en) * | 2017-03-29 | 2019-09-19 | Celgene Corporation | Formulations comprising PD-1 binding proteins and methods of making thereof |
| WO2018204303A1 (en) * | 2017-05-01 | 2018-11-08 | The Children's Medical Center Coporation | Methods and compositions relating to anti-pd1 antibody reagents |
| CN111010866A (zh) | 2017-05-24 | 2020-04-14 | 潘迪恩治疗公司 | 靶向免疫耐受性 |
| KR102692379B1 (ko) | 2017-06-05 | 2024-08-05 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | Pd-1과 특이적으로 결합하는 항체 및 사용 방법 |
| CA3082383A1 (en) * | 2017-11-08 | 2019-05-16 | Xencor, Inc. | Bispecific and monospecific antibodies using novel anti-pd-1 sequences |
| US10946068B2 (en) | 2017-12-06 | 2021-03-16 | Pandion Operations, Inc. | IL-2 muteins and uses thereof |
| US10174092B1 (en) | 2017-12-06 | 2019-01-08 | Pandion Therapeutics, Inc. | IL-2 muteins |
| CN108285493B (zh) * | 2018-02-02 | 2020-09-15 | 上海科医联创生物科技有限公司 | 一种恢复衰竭性免疫细胞功能的融合蛋白及其应用 |
| AR114127A1 (es) * | 2018-03-02 | 2020-07-22 | Lilly Co Eli | Anticuerpos agonistas contra pd-1 y usos de estos |
| US20210386829A1 (en) | 2018-05-04 | 2021-12-16 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for modulating cgrp signaling to regulate innate lymphoid cell inflammatory responses |
| CN111349162A (zh) * | 2018-12-21 | 2020-06-30 | 神州细胞工程有限公司 | 人源化抗pd-1抗体及其用途 |
| WO2020186101A1 (en) | 2019-03-12 | 2020-09-17 | The Broad Institute, Inc. | Detection means, compositions and methods for modulating synovial sarcoma cells |
| EP3937969A1 (en) | 2019-03-14 | 2022-01-19 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for modulating cgrp signaling to regulate intestinal innate lymphoid cells |
| JP2022525238A (ja) * | 2019-04-01 | 2022-05-11 | インメタス セラピューティクス， インコーポレイテッド | 腫瘍微小環境および免疫チェックポイントタンパク質を標的とする二重特異性結合分子 |
| JP2022533702A (ja) | 2019-05-20 | 2022-07-25 | パンディオン・オペレーションズ・インコーポレイテッド | ＭＡｄＣＡＭ標的化免疫寛容 |
| CN117447596A (zh) * | 2019-06-30 | 2024-01-26 | 福州创方医药科技有限公司 | 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用 |
| CN112225809B (zh) * | 2019-06-30 | 2023-09-05 | 福州创方医药科技有限公司 | 一种靶向pd-1的单克隆抗体及其应用 |
| EP3998081A4 (en) | 2019-07-05 | 2023-07-12 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | TREATMENT OF BLOOD CANCER WITH PD-1/CD3 DUAL SPECIFICITY PROTEIN |
| WO2021025140A1 (ja) | 2019-08-08 | 2021-02-11 | 小野薬品工業株式会社 | 二重特異性タンパク質 |
| EP3786174A1 (en) * | 2019-08-27 | 2021-03-03 | Ichnos Sciences SA | Methods for antibody purification |
| CA3167689A1 (en) | 2020-01-28 | 2021-08-05 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination treatments and uses and methods thereof |
| WO2021168079A1 (en) | 2020-02-21 | 2021-08-26 | Pandion Operations, Inc. | Tissue targeted immunotolerance with a cd39 effector |
| PE20231076A1 (es) | 2020-05-26 | 2023-07-17 | Boehringer Ingelheim Int | Anticuerpos anti-pd-1 |
| US20230331848A1 (en) * | 2020-08-31 | 2023-10-19 | Biosion Inc. | Pd-1 binding antibodies and uses thereof |
| IL307887A (en) | 2021-05-13 | 2023-12-01 | Foundation For Biomedical Res And Innovation At Kobe | An anti-human PD-1 agonist antibody and a pharmaceutical preparation comprising the antibody for the treatment or prevention of inflammatory diseases |
| GB202107994D0 (en) | 2021-06-04 | 2021-07-21 | Kymab Ltd | Treatment of cancer |
| AU2022392804A1 (en) | 2021-11-19 | 2024-05-02 | Mirobio Limited | Engineered PD-1 antibodies and uses thereof |
| US12030945B2 (en) | 2022-10-25 | 2024-07-09 | Seismic Therapeutic, Inc. | Variant IgG Fc polypeptides and uses thereof |
| US20240294651A1 (en) | 2023-01-30 | 2024-09-05 | Kymab Limited | Antibodies |
Family Cites Families (196)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4179337A (en) | 1973-07-20 | 1979-12-18 | Davis Frank F | Non-immunogenic polypeptides |
| JPS6023084B2 (ja) | 1979-07-11 | 1985-06-05 | 味の素株式会社 | 代用血液 |
| US4640835A (en) | 1981-10-30 | 1987-02-03 | Nippon Chemiphar Company, Ltd. | Plasminogen activator derivatives |
| DE3378250D1 (en) | 1982-04-22 | 1988-11-24 | Ici Plc | Continuous release formulations |
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US4496689A (en) | 1983-12-27 | 1985-01-29 | Miles Laboratories, Inc. | Covalently attached complex of alpha-1-proteinase inhibitor with a water soluble polymer |
| US5128326A (en) | 1984-12-06 | 1992-07-07 | Biomatrix, Inc. | Drug delivery systems based on hyaluronans derivatives thereof and their salts and methods of producing same |
| DE3675588D1 (de) | 1985-06-19 | 1990-12-20 | Ajinomoto Kk | Haemoglobin, das an ein poly(alkenylenoxid) gebunden ist. |
| US4676980A (en) | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
| US4791192A (en) | 1986-06-26 | 1988-12-13 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Chemically modified protein with polyethyleneglycol |
| US5260203A (en) | 1986-09-02 | 1993-11-09 | Enzon, Inc. | Single polypeptide chain binding molecules |
| US4946778A (en) | 1987-09-21 | 1990-08-07 | Genex Corporation | Single polypeptide chain binding molecules |
| IL85035A0 (en) | 1987-01-08 | 1988-06-30 | Int Genetic Eng | Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same |
| JP3101690B2 (ja) | 1987-03-18 | 2000-10-23 | エス・ビィ・２・インコーポレイテッド | 変性抗体の、または変性抗体に関する改良 |
| AU612370B2 (en) | 1987-05-21 | 1991-07-11 | Micromet Ag | Targeted multifunctional proteins |
| US5258498A (en) | 1987-05-21 | 1993-11-02 | Creative Biomolecules, Inc. | Polypeptide linkers for production of biosynthetic proteins |
| US5336603A (en) | 1987-10-02 | 1994-08-09 | Genentech, Inc. | CD4 adheson variants |
| GB8823869D0 (en) | 1988-10-12 | 1988-11-16 | Medical Res Council | Production of antibodies |
| KR900005995A (ko) | 1988-10-31 | 1990-05-07 | 우메모또 요시마사 | 변형 인터류킨-2 및 그의 제조방법 |
| EP0394827A1 (en) | 1989-04-26 | 1990-10-31 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Chimaeric CD4-immunoglobulin polypeptides |
| US5112946A (en) | 1989-07-06 | 1992-05-12 | Repligen Corporation | Modified pf4 compositions and methods of use |
| WO1991005548A1 (en) | 1989-10-10 | 1991-05-02 | Pitman-Moore, Inc. | Sustained release composition for macromolecular proteins |
| US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| WO1991006570A1 (en) | 1989-10-25 | 1991-05-16 | The University Of Melbourne | HYBRID Fc RECEPTOR MOLECULES |
| EP0550436A1 (en) | 1989-11-06 | 1993-07-14 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Protein microspheres and methods of using them |
| US6075181A (en) | 1990-01-12 | 2000-06-13 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US6150584A (en) | 1990-01-12 | 2000-11-21 | Abgenix, Inc. | Human antibodies derived from immunized xenomice |
| US5349053A (en) | 1990-06-01 | 1994-09-20 | Protein Design Labs, Inc. | Chimeric ligand/immunoglobulin molecules and their uses |
| WO1992009690A2 (en) | 1990-12-03 | 1992-06-11 | Genentech, Inc. | Enrichment method for variant proteins with altered binding properties |
| ES2096749T3 (es) | 1990-12-14 | 1997-03-16 | Cell Genesys Inc | Cadenas quimericas para vias de transduccion de señal asociada a un receptor. |
| US5571894A (en) | 1991-02-05 | 1996-11-05 | Ciba-Geigy Corporation | Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor |
| US6800738B1 (en) | 1991-06-14 | 2004-10-05 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| LU91067I2 (fr) | 1991-06-14 | 2004-04-02 | Genentech Inc | Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines |
| WO1994004679A1 (en) | 1991-06-14 | 1994-03-03 | Genentech, Inc. | Method for making humanized antibodies |
| US5844095A (en) | 1991-06-27 | 1998-12-01 | Bristol-Myers Squibb Company | CTLA4 Ig fusion proteins |
| ES2136092T3 (es) | 1991-09-23 | 1999-11-16 | Medical Res Council | Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados. |
| DE69229477T2 (de) | 1991-09-23 | 1999-12-09 | Cambridge Antibody Technology Ltd., Melbourn | Methoden zur Herstellung humanisierter Antikörper |
| US5587458A (en) | 1991-10-07 | 1996-12-24 | Aronex Pharmaceuticals, Inc. | Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof |
| ES2241710T3 (es) | 1991-11-25 | 2005-11-01 | Enzon, Inc. | Procedimiento para producir proteinas multivalentes de union a antigeno. |
| US5869619A (en) | 1991-12-13 | 1999-02-09 | Xoma Corporation | Modified antibody variable domains |
| ES2202310T3 (es) | 1991-12-13 | 2004-04-01 | Xoma Corporation | Metodos y materiales para la preparacion de dominios variables de anticuerpos modificados y sus usos terapeuticos. |
| US5622929A (en) | 1992-01-23 | 1997-04-22 | Bristol-Myers Squibb Company | Thioether conjugates |
| CA2372813A1 (en) | 1992-02-06 | 1993-08-19 | L.L. Houston | Biosynthetic binding protein for cancer marker |
| US5912015A (en) | 1992-03-12 | 1999-06-15 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Modulated release from biocompatible polymers |
| US5447851B1 (en) | 1992-04-02 | 1999-07-06 | Univ Texas System Board Of | Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells |
| GB9225453D0 (en) | 1992-12-04 | 1993-01-27 | Medical Res Council | Binding proteins |
| CA2150262C (en) | 1992-12-04 | 2008-07-08 | Kaspar-Philipp Holliger | Multivalent and multispecific binding proteins, their manufacture and use |
| US5827690A (en) | 1993-12-20 | 1998-10-27 | Genzyme Transgenics Corporatiion | Transgenic production of antibodies in milk |
| US7435802B2 (en) * | 1994-01-25 | 2008-10-14 | Elan Pharaceuticals, Inc. | Humanized anti-VLA4 immunoglobulins |
| IL108501A (en) | 1994-01-31 | 1998-10-30 | Mor Research Applic Ltd | Antibodies and pharmaceutical compositions containing them |
| US5837458A (en) | 1994-02-17 | 1998-11-17 | Maxygen, Inc. | Methods and compositions for cellular and metabolic engineering |
| US5605793A (en) | 1994-02-17 | 1997-02-25 | Affymax Technologies N.V. | Methods for in vitro recombination |
| US5834252A (en) | 1995-04-18 | 1998-11-10 | Glaxo Group Limited | End-complementary polymerase reaction |
| CA2143491C (en) | 1994-03-01 | 2011-02-22 | Yasumasa Ishida | A novel peptide related to human programmed cell death and dna encoding it |
| GB9415379D0 (en) | 1994-07-29 | 1994-09-21 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
| CN1117155C (zh) | 1994-07-29 | 2003-08-06 | 史密丝克莱恩比彻姆有限公司 | 新型化合物 |
| EP0805678B1 (en) | 1995-01-05 | 2003-10-29 | THE BOARD OF REGENTS acting for and on behalf of THE UNIVERSITY OF MICHIGAN | Surface-modified nanoparticles and method of making and using same |
| US6030613A (en) | 1995-01-17 | 2000-02-29 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Receptor specific transepithelial transport of therapeutics |
| DK1323346T3 (da) | 1995-01-17 | 2006-10-30 | Brigham & Womens Hospital | Receptorspecifik transport af immunogener gennem epitelet |
| US5739277A (en) | 1995-04-14 | 1998-04-14 | Genentech Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| US5869046A (en) | 1995-04-14 | 1999-02-09 | Genentech, Inc. | Altered polypeptides with increased half-life |
| CA2230494A1 (en) | 1995-08-31 | 1997-03-06 | Alkermes Controlled Therapeutics Inc. | Composition for sustained release of an agent |
| US5723125A (en) | 1995-12-28 | 1998-03-03 | Tanox Biosystems, Inc. | Hybrid with interferon-alpha and an immunoglobulin Fc linked through a non-immunogenic peptide |
| AU728657B2 (en) | 1996-03-18 | 2001-01-18 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Immunoglobulin-like domains with increased half-lives |
| GB9701425D0 (en) | 1997-01-24 | 1997-03-12 | Bioinvent Int Ab | A method for in vitro molecular evolution of protein function |
| US5989463A (en) | 1997-09-24 | 1999-11-23 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Methods for fabricating polymer-based controlled release devices |
| SE512663C2 (sv) | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
| US20060029600A1 (en) | 1998-01-21 | 2006-02-09 | Elan Pharmaceuticals, Inc. | Treatment of viral encephalitis by agents blocking alpha-VLA-4 integrin function |
| US6194551B1 (en) | 1998-04-02 | 2001-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants |
| DK1068241T3 (da) | 1998-04-02 | 2008-02-04 | Genentech Inc | Antistofvarianter og fragmenter deraf |
| US7183387B1 (en) | 1999-01-15 | 2007-02-27 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| US6737056B1 (en) | 1999-01-15 | 2004-05-18 | Genentech, Inc. | Polypeptide variants with altered effector function |
| KR101155191B1 (ko) | 1999-01-15 | 2012-06-13 | 제넨테크, 인크. | 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체 |
| EP2360254A1 (en) | 1999-08-23 | 2011-08-24 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Assays for screening anti-pd-1 antibodies and uses thereof |
| US7605238B2 (en) | 1999-08-24 | 2009-10-20 | Medarex, Inc. | Human CTLA-4 antibodies and their uses |
| ES2402546T3 (es) | 2000-06-28 | 2013-05-06 | Genetics Institute, Llc | Moléculas PD-L2: nuevos ligandos de PD-1 y usos de lso mismos |
| AR036993A1 (es) | 2001-04-02 | 2004-10-20 | Wyeth Corp | Uso de agentes que modulan la interaccion entre pd-1 y sus ligandos en la submodulacion de respuestas inmunologicas |
| JP2004533226A (ja) | 2001-04-02 | 2004-11-04 | ワイス | Ｂ７−４に対するｐｄ−１、ａレセプター、およびその使用 |
| WO2003011911A1 (en) * | 2001-07-31 | 2003-02-13 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Substance specific to pd-1 |
| ATE434040T1 (de) | 2001-10-01 | 2009-07-15 | Dyax Corp | Mehrkettige eukaryontische display-vektoren und deren verwendungen |
| US20040005709A1 (en) | 2001-10-24 | 2004-01-08 | Hoogenboom Henricus Renerus Jacobus Mattheus | Hybridization control of sequence variation |
| IL149820A0 (en) | 2002-05-23 | 2002-11-10 | Curetech Ltd | Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency |
| EP1513879B1 (en) | 2002-06-03 | 2018-08-22 | Genentech, Inc. | Synthetic antibody phage libraries |
| JP4409430B2 (ja) | 2002-07-03 | 2010-02-03 | 小野薬品工業株式会社 | 免疫賦活組成物 |
| TWI323265B (en) * | 2002-08-06 | 2010-04-11 | Glaxo Group Ltd | Antibodies |
| CN101899114A (zh) | 2002-12-23 | 2010-12-01 | 惠氏公司 | 抗pd-1抗体及其用途 |
| US7563869B2 (en) | 2003-01-23 | 2009-07-21 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Substance specific to human PD-1 |
| GB0400440D0 (en) | 2004-01-09 | 2004-02-11 | Isis Innovation | Receptor modulators |
| MX2007004176A (es) | 2004-10-06 | 2007-06-15 | Mayo Foundation | B7-h1 y metodos de diagnosis, prognosis, y tratamiento de cancer. |
| CN117534755A (zh) * | 2005-05-09 | 2024-02-09 | 小野药品工业株式会社 | 程序性死亡-1(pd-1)的人单克隆抗体及使用抗pd-1抗体来治疗癌症的方法 |
| BRPI0611766A2 (pt) | 2005-06-08 | 2011-12-20 | Dana Farber Cancer Inst Inc | métodos e composições para o tratamento de infecções persistentes e cáncer por inibição da rota de morte celular programada |
| US7612181B2 (en) | 2005-08-19 | 2009-11-03 | Abbott Laboratories | Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof |
| US8603930B2 (en) | 2005-10-07 | 2013-12-10 | Sulzer Metco (Us), Inc. | High-purity fused and crushed zirconia alloy powder and method of producing same |
| KR101571027B1 (ko) | 2006-06-12 | 2015-11-23 | 이머전트 프로덕트 디벨롭먼트 시애틀, 엘엘씨 | 효과기 기능을 갖는 단일쇄 다가 결합 단백질 |
| JP5676849B2 (ja) | 2006-10-20 | 2015-02-25 | 中外製薬株式会社 | 抗ｈｂ−ｅｇｆ抗体を有効成分として含む癌治療剤 |
| US8907065B2 (en) | 2006-12-15 | 2014-12-09 | Ablynx N.V. | Polypeptides that modulate the interaction between cells of the immune system |
| WO2008103474A1 (en) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Anaptysbio, Inc. | Methods of generating libraries and uses thereof |
| JP6071165B2 (ja) | 2007-05-31 | 2017-02-01 | ゲンマブ エー／エス | 安定なＩｇＧ４抗体 |
| NZ600758A (en) * | 2007-06-18 | 2013-09-27 | Merck Sharp & Dohme | Antibodies to human programmed death receptor pd-1 |
| EP2195347A1 (en) | 2007-08-17 | 2010-06-16 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Method for treating and diagnosing hematologic malignancies |
| EA020886B1 (ru) | 2007-11-13 | 2015-02-27 | ТЕВА БИОФАРМАСЬЮТИКАЛЗ ЮЭсЭй, ИНК. | Гуманизированные антитела против tl1a |
| CN104548091A (zh) | 2008-02-11 | 2015-04-29 | 治疗科技公司 | 用于肿瘤治疗的单克隆抗体 |
| US8168757B2 (en) | 2008-03-12 | 2012-05-01 | Merck Sharp & Dohme Corp. | PD-1 binding proteins |
| SI2274008T1 (sl) | 2008-03-27 | 2014-08-29 | Zymogenetics, Inc. | Sestavki in metode za zaviranje PDGFRBETA in VEGF-A |
| JP5794917B2 (ja) | 2008-09-12 | 2015-10-14 | アイシス・イノベーション・リミテッドＩｓｉｓ Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｌｉｍｉｔｅｄ | Ｐｄ−１特異抗体およびその使用 |
| US8927697B2 (en) | 2008-09-12 | 2015-01-06 | Isis Innovation Limited | PD-1 specific antibodies and uses thereof |
| US8552154B2 (en) | 2008-09-26 | 2013-10-08 | Emory University | Anti-PD-L1 antibodies and uses therefor |
| US9493564B2 (en) * | 2008-10-02 | 2016-11-15 | Aptevo Research And Development Llc | CD86 antagonist multi-target binding proteins |
| CA2745439C (en) | 2008-12-03 | 2019-10-15 | Genmab A/S | Antibody variants having modifications in the constant region |
| ES2629337T3 (es) | 2009-02-09 | 2017-08-08 | Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale | Anticuerpos contra PD-1 y anticuerpos contra PD-L1 y usos de los mismos |
| US10909545B2 (en) * | 2009-07-24 | 2021-02-02 | Oracle International Corporation | Interactive store design interface based system |
| WO2011100841A1 (en) | 2010-02-16 | 2011-08-25 | Valorisation-Recherche, Limited Partnership | Pd-1 modulation and uses thereof for modulating hiv replication |
| WO2011110604A1 (en) | 2010-03-11 | 2011-09-15 | Ucb Pharma, S.A. | Pd-1 antibody |
| TW201134488A (en) | 2010-03-11 | 2011-10-16 | Ucb Pharma Sa | PD-1 antibodies |
| US20180237525A9 (en) | 2010-03-26 | 2018-08-23 | Randolph J. Noelle | VISTA Agonist and Methods of Use |
| PL2558499T3 (pl) * | 2010-04-16 | 2017-10-31 | Biogen Ma Inc | Przeciwciała anty-VLA-4 |
| TR201810298T4 (tr) | 2011-03-31 | 2018-08-27 | Merck Sharp & Dohme | İnsan programlı ölüm reseptörü PD-1'e karşı antikorların stabil formülasyonları ve ilgili tedaviler. |
| EP2699264B1 (en) * | 2011-04-20 | 2018-03-14 | Medlmmune, LLC | Antibodies and other molecules that bind b7-h1 and pd-1 |
| KR20140064768A (ko) * | 2011-07-01 | 2014-05-28 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 항-프로퍼딘 항체 및 그의 용도 |
| CA2840018C (en) | 2011-07-24 | 2019-07-16 | Curetech Ltd. | Variants of humanized immunomodulatory monoclonal antibodies |
| EP3939613A1 (en) | 2011-08-11 | 2022-01-19 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | Therapeutic agent for autoimmune diseases comprising pd-1 agonist |
| WO2013078230A1 (en) | 2011-11-23 | 2013-05-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of pdl1 expressing cells to convert t cells into regulatory t cells |
| WO2013142255A2 (en) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | University Of Miami | Multi-specific binding agents |
| WO2013177102A2 (en) | 2012-05-21 | 2013-11-28 | Felder Mitchell S | Treatment of cancer by manipulating the immune system |
| BR112014032276A2 (pt) | 2012-06-22 | 2017-11-28 | King S College London | construtos de vista-ig e o uso de vista-ig para o tratamento de distúrbios autoimunes, alérgicos e inflamatórios |
| EP2879710B1 (en) | 2012-08-03 | 2019-11-13 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Medical uses of agents that modulate immune cell activation and corresponding screening methods |
| WO2014116846A2 (en) | 2013-01-23 | 2014-07-31 | Abbvie, Inc. | Methods and compositions for modulating an immune response |
| EP2950814A4 (en) | 2013-01-31 | 2016-06-08 | Univ Jefferson | PD-L1 AND PD-L2 BASED FUSION PROTEINS AND USES THEREOF |
| WO2014122271A1 (en) | 2013-02-07 | 2014-08-14 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for predicting the survival time of patients suffering from diffuse large b-cell lymphomas |
| PT2961831T (pt) | 2013-02-26 | 2020-10-12 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Composições e métodos para imunoterapêutica |
| EP2970486B1 (en) | 2013-03-15 | 2018-05-16 | Xencor, Inc. | Modulation of t cells with bispecific antibodies and fc fusions |
| ES2699599T3 (es) | 2013-03-15 | 2019-02-11 | Abbvie Biotherapeutics Inc | Variantes de Fc |
| US10047137B2 (en) | 2013-04-05 | 2018-08-14 | Versitech Limited | Antibodies against novel PD1 isoforms and uses thereof |
| JP6742903B2 (ja) | 2013-05-02 | 2020-08-19 | アナプティスバイオ インコーポレイティッド | プログラム死−１（ｐｄ−１）に対する抗体 |
| CA3175360C (en) | 2013-05-31 | 2024-05-28 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antigen binding proteins that bind pd-1 |
| WO2014204762A1 (en) | 2013-06-19 | 2014-12-24 | Massachusetts Institute Of Technology | In vivo targeting of cells with ligand-conjugated particles |
| CN104250302B (zh) | 2013-06-26 | 2017-11-14 | 上海君实生物医药科技股份有限公司 | 抗pd‑1抗体及其应用 |
| US20150004161A1 (en) | 2013-07-01 | 2015-01-01 | University Of Maryland | Fc Coupled Compositions and Methods of Their Use |
| WO2015036394A1 (en) * | 2013-09-10 | 2015-03-19 | Medimmune Limited | Antibodies against pd-1 and uses thereof |
| WO2015038538A1 (en) | 2013-09-10 | 2015-03-19 | Medimmune, Llc | Compositions and methods for treating sepsis |
| SI3702373T1 (sl) | 2013-09-13 | 2022-11-30 | Beigene Switzerland Gmbh | Protitelesa proti PD-1 in njihova uporaba kot terapevtiki in diagnostiki |
| PT3049441T (pt) | 2013-09-27 | 2020-01-21 | Hoffmann La Roche | Formulações de anticorpos anti-pdl1 |
| EP3052131B1 (en) | 2013-10-01 | 2018-12-05 | Mayo Foundation for Medical Education and Research | Methods for treating cancer in patients with elevated levels of bim |
| CN104558177B (zh) | 2013-10-25 | 2020-02-18 | 苏州思坦维生物技术股份有限公司 | 拮抗抑制程序性死亡受体pd-1与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与用途 |
| JP6483117B2 (ja) * | 2013-11-20 | 2019-03-13 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッドＲｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ， Ｉｎｃ． | Ａｐｌｎｒモジュレーター及びその使用 |
| EA035037B1 (ru) | 2013-12-12 | 2020-04-21 | Шанхай Хэнжуй Фармасьютикал Ко., Лтд. | Антитело к pd-1, его антигенсвязывающий фрагмент и их медицинское применение |
| US9067998B1 (en) | 2014-07-15 | 2015-06-30 | Kymab Limited | Targeting PD-1 variants for treatment of cancer |
| US9914769B2 (en) | 2014-07-15 | 2018-03-13 | Kymab Limited | Precision medicine for cholesterol treatment |
| EP4071177A1 (en) | 2013-12-30 | 2022-10-12 | Epimab Biotherapeutics, Inc. | Fabs-in-tandem immunoglobulin and uses thereof |
| KR20150132581A (ko) | 2013-12-31 | 2015-11-25 | 재단법인 생물기술개발중심 | 항-vegf 항체 및 그것의 용도 |
| TWI681969B (zh) * | 2014-01-23 | 2020-01-11 | 美商再生元醫藥公司 | 針對ｐｄ-１的人類抗體 |
| JOP20200094A1 (ar) * | 2014-01-24 | 2017-06-16 | Dana Farber Cancer Inst Inc | جزيئات جسم مضاد لـ pd-1 واستخداماتها |
| WO2015119841A1 (en) | 2014-02-05 | 2015-08-13 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Role of il-23 and pd-1 in autoreactive immune response |
| EP3105318A1 (en) | 2014-02-10 | 2016-12-21 | Nvigen, Inc. | Cell modulation nanocomposition, and methods of use |
| SG11201607143UA (en) | 2014-03-11 | 2016-09-29 | Univ Leland Stanford Junior | Anti sirp-alpha antibodies and bi-specific macrophage enhancing antibodies |
| US10519237B2 (en) | 2014-03-12 | 2019-12-31 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS |
| US9394365B1 (en) | 2014-03-12 | 2016-07-19 | Yeda Research And Development Co., Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of alzheimer's disease |
| WO2017042633A2 (en) | 2015-09-10 | 2017-03-16 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Reducing systemic regulatory t cell levels or activity for treatment of disease and injury of the cns |
| AU2015228372B2 (en) | 2014-03-12 | 2018-05-31 | Yeda Research And Development Co. Ltd | Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS |
| CN107172880B (zh) | 2014-03-24 | 2021-09-28 | 癌症研究技术有限公司 | 含有修饰IgG2结构域的引起激动或拮抗特性的修饰抗体及其用途 |
| WO2015195163A1 (en) | 2014-06-20 | 2015-12-23 | R-Pharm Overseas, Inc. | Pd-l1 antagonist fully human antibody |
| TWI693232B (zh) | 2014-06-26 | 2020-05-11 | 美商宏觀基因股份有限公司 | 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法 |
| WO2016011069A1 (en) | 2014-07-15 | 2016-01-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Medical uses of cd38 agonists (antibodies) |
| US10428146B2 (en) | 2014-07-22 | 2019-10-01 | Cb Therapeutics, Inc. | Anti PD-1 antibodies |
| WO2016014799A1 (en) | 2014-07-23 | 2016-01-28 | University Of Iowa Research Foundation | Epidermal growth factor and blockade of immune checkpoints in cancer immunotherapy |
| CN105330740B (zh) | 2014-07-30 | 2018-08-17 | 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 | 抗pd-1抗体及其应用 |
| CA2957258C (en) | 2014-08-05 | 2023-11-07 | MabQuest SA | Immunological reagents |
| GB201419084D0 (en) | 2014-10-27 | 2014-12-10 | Agency Science Tech & Res | Anti-PD-1 antibodies |
| US10822414B2 (en) | 2014-11-11 | 2020-11-03 | Sutro Biopharma, Inc. | Anti-PD-1 antibodies, compositions comprising anti-PD-1 antibodies and methods of using anti-PD-1 antibodies |
| TWI595006B (zh) | 2014-12-09 | 2017-08-11 | 禮納特神經系統科學公司 | 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法 |
| EP3916017A1 (en) | 2014-12-22 | 2021-12-01 | PD-1 Acquisition Group, LLC | Anti-pd-1 antibodies |
| US20180244779A1 (en) | 2015-02-06 | 2018-08-30 | Kadmon Corporation Llc | Immunomodulatory agents |
| AR103726A1 (es) | 2015-02-27 | 2017-05-31 | Merck Sharp & Dohme | Cristales de anticuerpos monoclonales anti-pd-1 humanos |
| SG11201708223QA (en) | 2015-04-17 | 2017-11-29 | Bristol Myers Squibb Co | Compositions comprising a combination of an anti-pd-1 antibody and another antibody |
| CN105061597B (zh) | 2015-06-09 | 2016-04-27 | 北京东方百泰生物科技有限公司 | 一种抗pd-1的单克隆抗体及其获得方法 |
| WO2016210129A1 (en) | 2015-06-23 | 2016-12-29 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Novel pd-1 immune modulating agents |
| CA2991976A1 (en) | 2015-07-13 | 2017-01-19 | Cytomx Therapeutics, Inc. | Anti-pd-1 antibodies, activatable anti-pd-1 antibodies, and methods of use thereof |
| CN106699888B (zh) | 2015-07-28 | 2020-11-06 | 上海昀怡健康科技发展有限公司 | 一种pd-1抗体及其制备方法和应用 |
| SG10201906059VA (en) | 2015-07-30 | 2019-08-27 | Macrogenics Inc | Pd-1-binding molecules and methods of use thereof |
| WO2017021910A1 (en) | 2015-08-04 | 2017-02-09 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Combination treatments and uses and methods thereof |
| WO2017024465A1 (en) | 2015-08-10 | 2017-02-16 | Innovent Biologics (Suzhou) Co., Ltd. | Pd-1 antibodies |
| WO2017024515A1 (en) | 2015-08-11 | 2017-02-16 | Wuxi Biologics (Cayman) Inc. | Novel anti-pd-1 antibodies |
| BR112018002824A2 (pt) | 2015-08-11 | 2018-11-06 | Open Monoclonal Tech Inc | anticorpo, polinucleotídeo, vetor, célula, métodos para expressar o anticorpo, para tratar uma condição associada com pd-1 e para tratar uma condição em um sujeito, kit, composição farmacêutica e uso do anticorpo |
| PE20181322A1 (es) | 2015-09-01 | 2018-08-14 | Agenus Inc | Anticuerpo anti-pd1 y sus metodos de uso |
| LU92821B1 (en) | 2015-09-09 | 2017-03-20 | Mologen Ag | Combination comprising immunostimulatory oligonucleotides |
| AU2016329960A1 (en) | 2015-09-28 | 2018-04-26 | Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. | Stable anti-PD-1 antibody pharmaceutical preparation and application thereof in medicine |
| EP3356416B1 (en) | 2015-09-29 | 2021-03-24 | Shanghai Zhangjiang Biotechnology Co., Ltd | Pd-1 antibodies and uses thereof |
| WO2017058859A1 (en) * | 2015-09-29 | 2017-04-06 | Celgene Corporation | Pd-1 binding proteins and methods of use thereof |
| AU2016333517B2 (en) | 2015-10-02 | 2023-09-07 | Les Laboratoires Servier | Anti-PD-1 antibodies and compositions |
| PL3356404T3 (pl) | 2015-10-02 | 2022-01-03 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Przeciwciała anty-pd1 i sposoby ich stosowania |
| WO2017066561A2 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | President And Fellows Of Harvard College | Regulatory t cell pd-1 modulation for regulating t cell effector immune responses |
| CN107586342A (zh) | 2016-07-08 | 2018-01-16 | 生命序有限公司 | 重组免疫检查点受体及其应用 |
| JP2019534859A (ja) | 2016-09-19 | 2019-12-05 | セルジーン コーポレイション | Ｐｄ−１結合タンパク質を使用して白斑を治療する方法 |
| EA201990747A1 (ru) * | 2016-09-19 | 2019-10-31 | Способы лечения иммунных нарушений с применением белков, связывающих pd–1 | |
| AU2018246252A1 (en) | 2017-03-29 | 2019-09-19 | Celgene Corporation | Formulations comprising PD-1 binding proteins and methods of making thereof |
| CN107137712A (zh) | 2017-05-09 | 2017-09-08 | 中山大学 | Pd‑1h激动剂或拮抗剂的应用 |
-
2016
- 2016-09-28 WO PCT/US2016/054089 patent/WO2017058859A1/en active Application Filing
- 2016-09-28 EP EP16852445.2A patent/EP3355920A4/en active Pending
- 2016-09-28 BR BR112018006237A patent/BR112018006237A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2016-09-28 CA CA2997963A patent/CA2997963A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-28 EA EA201890790A patent/EA201890790A1/ru unknown
- 2016-09-28 CN CN201680068507.8A patent/CN108289953B/zh active Active
- 2016-09-28 US US15/278,425 patent/US10428145B2/en active Active
- 2016-09-28 KR KR1020187011467A patent/KR20180054824A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-09-28 AR ARP160102967A patent/AR106184A1/es not_active Application Discontinuation
- 2016-09-28 MX MX2018003689A patent/MX2018003689A/es unknown
- 2016-09-28 JP JP2018536085A patent/JP6843868B2/ja active Active
- 2016-09-28 AU AU2016332725A patent/AU2016332725A1/en not_active Abandoned
- 2016-09-29 TW TW105131416A patent/TWI702232B/zh not_active IP Right Cessation
-
2018
- 2018-03-21 IL IL258273A patent/IL258273A/en unknown
- 2018-03-26 CL CL2018000778A patent/CL2018000778A1/es unknown
- 2018-04-13 CO CONC2018/0003973A patent/CO2018003973A2/es unknown
- 2018-04-20 EC ECIEPI201830970A patent/ECSP18030970A/es unknown
- 2018-08-17 HK HK18110609.2A patent/HK1251158A1/zh unknown
-
2019
- 2019-09-17 US US16/573,322 patent/US20200255525A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-02-24 JP JP2021027687A patent/JP2021087448A/ja not_active Withdrawn
-
2022
- 2022-08-01 US US17/878,667 patent/US20230272076A1/en active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20190069399A (ko) * | 2016-09-19 | 2019-06-19 | 셀진 코포레이션 | Pd-1 결합 단백질을 사용하는 면역 질환의 치료 방법 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HK1251158A1 (zh) | 2019-01-25 |
| AU2016332725A1 (en) | 2018-03-22 |
| JP6843868B2 (ja) | 2021-03-17 |
| WO2017058859A1 (en) | 2017-04-06 |
| MX2018003689A (es) | 2018-04-30 |
| BR112018006237A2 (pt) | 2018-10-09 |
| US20170088618A1 (en) | 2017-03-30 |
| US20200255525A1 (en) | 2020-08-13 |
| EA201890790A1 (ru) | 2018-10-31 |
| CA2997963A1 (en) | 2017-04-06 |
| JP2021087448A (ja) | 2021-06-10 |
| US10428145B2 (en) | 2019-10-01 |
| EP3355920A4 (en) | 2019-05-15 |
| TWI702232B (zh) | 2020-08-21 |
| CN108289953A (zh) | 2018-07-17 |
| TW201718653A (zh) | 2017-06-01 |
| IL258273A (en) | 2018-05-31 |
| CN108289953B (zh) | 2022-03-11 |
| ECSP18030970A (es) | 2018-05-31 |
| CL2018000778A1 (es) | 2019-03-22 |
| JP2018533973A (ja) | 2018-11-22 |
| CO2018003973A2 (es) | 2018-07-19 |
| AR106184A1 (es) | 2017-12-20 |
| US20230272076A1 (en) | 2023-08-31 |
| EP3355920A1 (en) | 2018-08-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20230272076A1 (en) | PD-1 Binding Proteins and Methods of Use Thereof | |
| US12084499B2 (en) | SIRP-α binding proteins and methods of use thereof | |
| US20210069325A1 (en) | Methods of treating immune disorders using pd-1 binding proteins | |
| US20210163595A1 (en) | Methods of treating vitiligo using pd-1 binding antibodies | |
| CA3101642A1 (en) | Anti-mesothelin constructs and uses thereof | |
| US20180289802A1 (en) | Formulations comprising pd-1 binding proteins and methods of making thereof | |
| US11591390B2 (en) | SIRP-α binding proteins and methods of use thereof | |
| CA3211501A1 (en) | Materials and methods for targeting regulatory t cells for enhancing immune surveillance |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A201 | Request for examination | ||
| E902 | Notification of reason for refusal | ||
| E601 | Decision to refuse application |