TWI702232B - Pd-1結合蛋白及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本發明所提供係涉及特異性結合至程式化死亡-1(Programmed Death-1;PD-1)並調節PD-1之表現及/或活性之抗體的組合物、方法及用途。
Description
本文所提供係涉及特異性結合至人類程式化死亡-1(PD-1)並調節PD-1之表現及/或活性之抗體的組合物、方法及用途。
本發明提供結合至PD-1(例如,人類PD-1,SEQ ID NO:43)之蛋白質,包括結合蛋白,例如結合至PD-1之抗體。該等結合蛋白(包括抗體)可結合至PD-1多肽、PD-1片段及/或PD-1表位。該等結合蛋白(包括抗體)可為激動劑(例如,誘導PD-1配體樣信號傳導)。在一些實施例中,結合蛋白並不與PD-1配體(例如,PD-L1及PD-L2)競爭與PD-1(例如,非封阻抗體)相互作用。
在某些實施例中,本發明亦提供如下結合蛋白(包括抗體或其片段):(i)結合至人類PD-1,(ii)誘導PD-1配體樣信號傳導,及(iii)不與PD-L1及/或PD-L2競爭與PD-1相互作用。
本文亦提供包含編碼該等抗體之序列之多核苷酸及載體、包含該等多核苷酸或載體之細胞(例如,宿主細胞)及包含該等抗體之組合物、試劑及套組。在另一態樣中,本文提供調節PD-1活性(例如,活化PD-1信號傳導)或PD-1表現程度之方法、診斷方法及該等抗PD-1抗體之用途。
在一些實施例中,結合蛋白(例如,抗PD-1抗體)包含6個互補決定區(CDR)或少於6個CDR。在其他實施例中,結合蛋白(例如,抗PD-1抗體)包含1個、2個、3個、4個、5個或6個選自重鏈可變區(VH)CDR1、VH CDR2、VH CDR3、輕鏈可變區(VL)CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3之CDR。在某些實施例中,結合蛋白(例如,抗PD-1抗體)包含1個、2個、3個、4個、5個或6個選自如本文所述之命名為PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6之單株抗體或其人類化變體之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2、及/或VL CDR3的CDR。在一些實施例中,結合蛋白(例如,抗PD-1抗體)進一步包含架構區或框架區(FR),包括人類免疫球蛋白胺基酸序列或其變體之VH FR1、VH FR2、VH FR3、VH FR4、VL FR1、VL FR2、VL FR3及/或VL FR4。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段結合至由包含具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之輕鏈可變區及具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列之重鏈可變區之抗體識別的人類PD-1之表位。
在其他實施例中,抗體或其抗體片段與具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列之輕鏈可變區及具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列之重鏈可變區之抗體競爭結合至人類PD-1。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含如表1中所述之抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3的VL。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含如表2中所述之抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3的VH。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)VL,包含如表3中所述之抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中任一者之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4;及(b)VH,包含如表4中所述之抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO:1、2及3之胺基酸序列,且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO:4、5及6之胺基酸序列。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段之VL CDR1、VL CDR2及VL CDR3分別包含SEQ ID NO:7、2及3之胺基酸序列,且抗體或其抗原結合片段之VH CDR1、VH CDR2及VH CDR3分別包含SEQ ID NO:4、5及6之胺基酸序列。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之VL。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之VL。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之VL。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之VH。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之VH。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之VH。在一些實施例中,胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之VH。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之VH。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:11之胺基酸序列之VH。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之VH。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之VH。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12之胺基酸序列之VH。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之VH。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之VH。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10之胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13之胺基酸序列之VH。
在一些實施例中,VL之胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。在一
些實施例中,VH之胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。在一些實施例中,VL及VH之胺基酸序列包含其一或多個保守修飾。
在一些實施例中,抗體包含人類IgG1 Fc區。在其他實施例中,抗體包含變體人類IgG1 Fc區。
在一個實施例中,抗體包含人類IgG1-K322A Fc區。
在一些實施例中,抗體包含人類IgG4 Fc區。在其他實施例中,抗體包含變體人類IgG4 Fc區。
在另一實施例中,抗體包含人類IgG4P Fc區。
在另一實施例中,抗體包含人類IgG4PE Fc區。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段進一步包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段進一步包括包含選自由SEQ ID NO:36-40組成之群之胺基酸序列之重鏈Fc區。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段進一步包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區;及包含選自由SEQ ID NO:36-40組成之群之胺基酸序列之重鏈Fc區。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之輕鏈。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列之重鏈。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列之重鏈。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:33之
胺基酸序列之重鏈。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列之重鏈。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之重鏈。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列之重鏈。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之重鏈。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列之重鏈。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之殘基100-109中之至少一者。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之殘基100-105中之至少一者。
在特定實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之至少一個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之兩個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之三個或更多個選自由以下組成之群之殘基:
N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之四個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之五個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之六個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之七個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之八個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之九個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之所有十個來自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ
ID NO:42之胺基酸序列內之N33。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之T51。
在特定實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之S57。
在一個具體實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之L100。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之N102。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之G103。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之R104。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之G103及R104。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之D105。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之H107。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之S109。
在一個實施例中,人類PD-1之表位不同於PD-L1結合位點。在另一實施例中,人類PD-1之表位不同於PD-L2結合位點。在具體實施例中,人類
PD-1之表位不同於PD-L1結合位點及PD-L2結合位點二者。
在實施例中,抗體或其抗原結合片段特異性結合人類PD-1及/或猴PD-1(例如,食蟹猴)而非齧齒類動物PD-1。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段具有減弱之抗體依賴性細胞毒性(ADCC)活性。在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段具有減弱之補體依賴性細胞毒性(CDC)活性。在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段具有減弱之ADCC及/或減弱之CDC活性。
在一態樣中,本文提供結合至人類PD-1之表位之抗體或其抗原結合片段,其中抗體或其抗原結合片段:(a)減弱T細胞活性;及/或(b)下調T細胞表面上之PD-1表現。
在一個實施例中,抗體減弱T細胞活性。在另一實施例中,抗體下調T細胞表面上之PD-1表現。
在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由T細胞效應物功能量測。
在某些實施例中,藉由抗體或其抗原結合片段之T細胞活性之減弱發生在人類PBMC或全血試樣中。
在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由抑制細胞介素產生來量測。
在其他實施例中,由抗體或其抗原結合片段抑制之細胞介素包含IL-2、IL-17及/或IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在一些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在另一實施例中,細胞介素係IL-12。在一些其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在其他實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素
係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之兩者、三者或更多者之其他組合。
在某些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後6小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後8小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後10小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後12小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後14小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後16小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後18小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後20小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後22小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後24小時。在一些實施例中,與抗體接觸。在其他實施例中,與其抗原結合片段接觸。
在一些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調先於細胞介素抑制。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例
中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後16小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且先於細胞介素抑制。
在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後16小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且係與細胞介素抑制
同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且係與細胞介素抑制同時。
在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後16小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且係在細胞介素抑制之後。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段用於結合至純化人類PD-1之KD係約1nM至約100nM。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段用於結合至在細胞表面上表現之人類PD-1之KD係約100pM至約10nM。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段用於結合至在細胞表面上表現之猴
PD-1之KD係約100pM至約10nM。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段減弱T細胞活性之EC50係約1pM至約10pM、約10pM至約100pM、約100pM至約1nM、約1nM至約10nM或約10nM至約100nM。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段減弱減弱T細胞活性之最大%係至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。
在某些實施例中,抗體係單株抗體。在一些實施例中,抗體係人類、人類化或嵌合抗體。在另一實施例中,人類化抗體係去免疫抗體或複合人類抗體。在某些實施例中,抗體係人類化抗體。在具體實施例中,抗體係特異性結合人類PD-1之人類化抗體。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段係Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、雙價抗體、三價抗體或四價抗體。在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段係自抗體片段形成之多特異性抗體。在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段係雙特異性抗體。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段偶聯至試劑。在一個實施例中,試劑係放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物或化學發光化合物。
本文亦提供包含本文提供之抗體或其抗原結合片段之組合物。在某些實施例中,組合物進一步包含醫藥上可接受之載劑。
本文亦提供包含編碼本文提供之抗體之VH、VL或VH及VL二者之核苷酸序列的多核苷酸。
在某些實施例中,本發明亦提供包含編碼本文提供之抗體之重鏈、輕鏈或重鏈及輕鏈二者之核苷酸序列的多核苷酸。
在某些實施例中,多核苷酸可操作連接至啟動子。
本文亦提供多核苷酸之群體,其包含:(a)包含編碼本文提供之抗體之VH或重鏈之核苷酸序列的第一多核苷酸,及(b)包含編碼本文提供之抗體之VL或輕鏈之核苷酸序列的第二多核苷酸。在某些實施例中,第一多核苷酸可操作連接至第一啟動子,且第二多核苷酸可操作連接至第二啟動子。
本文亦提供包含本文提供之多核苷酸之載體。
在某些實施例中,本發明亦提供載體之群體,其包含:(a)包含編碼本文提供之抗體之VH或重鏈之核苷酸序列的第一載體,及(b)包含編碼本文提供之抗體之VL或輕鏈之核苷酸序列的第二載體。
在某些實施例中,本發明進一步提供載體之群體,其包含:(a)包含編碼本文提供之可操作連接至第一啟動子之抗體之VH或重鏈的核苷酸序列之第一載體,及(b)包含編碼本文提供之可操作連接至第二啟動子之抗體之VL或輕鏈的核苷酸序列之第二載體。
在某些實施例中,本發明提供包含本文提供之多核苷酸或多核苷酸之群體的細胞。
在某些實施例中,本發明亦提供包含本文提供之載體或載體之群體的細胞。
在某些實施例中,本發明進一步提供產生本文提供之抗體或其抗原結合片段之經分離細胞。
本文亦提供細胞之群體,其包含:(a)包括包含編碼本文提供之抗體之VH或重鏈之核苷酸序列的多核苷酸之第一宿主細胞,及(b)包括包含編碼本文提供之抗體之VL或輕鏈之核苷酸序列的多核苷酸之第二宿主細胞。
本文進一步提供細胞之群體,其包含:(a)包括包含編碼本文提供之可操作連接至第一啟動子之抗體之VH或重鏈之核苷酸序列的多核苷酸之第一宿主細胞,及(b)包括包含編碼本文提供之可操作連接至第二啟動子之抗體之VL或輕鏈之核苷酸序列的多核苷酸之第二宿主細胞。
本文亦提供包含本文提供之抗體或其抗原結合片段之套組。
本文亦提供製備特異性結合至人類PD-1之表位之抗體或其抗原結合片段的方法。在某些實施例中,該方法包含培養本文提供之細胞以表現抗體或其抗原結合片段。在其他實施例中,該方法包含使本文提供之多核苷酸表現。在一個實施例中,人類PD-1之表位不同於PD-L1結合位點。在另一實施例中,人類PD-1之表位不同於PD-L2結合位點。在具體實施例中,人類PD-1之表位不同於PD-L1結合位點及PD-L2結合位點二者。
在另一態樣中,本文提供減弱T細胞之活性之方法,其包含使T細胞與有效量之本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸。在一個實施例中,細胞與本文提供之抗體接觸。在另一實施例中,細胞與本文提供之抗體之抗原結合片段接觸。在一個實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由抑制細胞介素產生來量測。在一些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、
IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在一些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在另一實施例中,細胞介素係IL-12。在一些其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在其他實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之兩者、三者或更多者之其他組合。在某些實施例中,細胞介素產生之抑制係在T細胞表面上PD-1表現之下調之後。在一些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時或24小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後4小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後6小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後8小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後10小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後12小時,且先於細胞介素抑制。在實施例中,下調發生在早至接觸後14小時,且先於細胞介素抑制。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後16小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後18小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後20小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後22小時,且先於細胞介素抑制。在一些實施例中,下調發生在早至接觸後24小時,
且先於細胞介素抑制。在一些實施例中,細胞介素產生之抑制係與T細胞表面上PD-1表現之下調同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後4小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後6小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後8小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後10小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後12小時,且係與細胞介素抑制同時。在實施例中,下調發生在早至接觸後14小時,且係與細胞介素抑制同時。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後16小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後18小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後20小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後22小時,且係與細胞介素抑制同時。在一些實施例中,下調發生在早至接觸後24小時,且係與細胞介素抑制同時。在一些實施例中,細胞介素產生之抑制先於T細胞表面上PD-1表現之下調。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後4小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後6小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後8小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後10小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後12小時,且係在細胞介素抑制之後。在實施例中,下調發生在早至接觸後14小時,且係在細胞介素抑制之後。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後16小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後18小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後20小時,
且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後22小時,且係在細胞介素抑制之後。在一些實施例中,下調發生在早至接觸後24小時,且係在細胞介素抑制之後。
在另一態樣中,本文提供下調T細胞表面上PD-1表現之方法,其包含使T細胞有效量之本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸。在一個實施例中,細胞與本文提供之抗體接觸。在另一實施例中,細胞與本文提供之抗體之抗原結合片段接觸。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約10%、20%、30%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在另一實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調先於細胞介素抑制。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係在細胞介素抑制之後。在某些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在一些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在另一實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在其他實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細
胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之兩者、三者或更多者之其他組合。
在另一態樣中,本文提供抑制T細胞之細胞介素產生的方法,其包含使T細胞與有效量之本文所述抗體或其抗原結合片段接觸。在一個實施例中,細胞與本文提供之抗體接觸。在另一實施例中,細胞與本文提供之抗體之抗原結合片段接觸。在一些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在一些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在另一實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在其他實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之兩者、三者或更多者之其他組合。
圖1A-1B顯示T細胞減弱抗PD-1抗體(PD1AB)不與結合至PD-1之PD-L1(PD-L1-DyL650表示與染料DyL650偶聯之PD-L1)競爭:(A)PD1AB-1、PD1AB-2及PD1AB-6;(B)PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4及PD1AB-5。MDX 4H1(即拮抗劑抗體)阻斷PD-L1結合至PD-1。
圖2繪示PD-1:PD1AB-6 Fab相互作用位點相對於PD-1:PD-L1相互作
用位點係在PD-1之遠側。
圖3繪示PD1AB-6 Fab針對PD-1 β摺疊結合,且與由殘基100-105構成之PD-1環形成顯著相互作用。
圖4顯示PD1AB-6-IgG1之重鏈(HC)及輕鏈(LC)及其變體PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P之HC的胺基酸序列。
圖5A-5B繪示PD1AB-6-IgG1對CHO細胞上表現之食蟹猴(A)或人類(B)PD-1之親和力。
圖6繪示PD1AB-6-IgG1、同型對照及人類PD-L1 Fc融合蛋白(hPD-L1 Fc)與CD4+ T細胞上門控之活化人類PBMC的結合。
圖7繪示PD1AB-6-IgG1、同型對照及人類PD-L1 Fc融合蛋白(hPD-L1 Fc)與CD4+ T細胞上門控之活化食蟹猴PBMC的結合。
圖8A-8D顯示使用Cisbio Tag-liteTM檢測之結合至HEK293細胞上表現之FcγRI(A)、FcγRIIIa(V158)(B)或FcγRIIb(C)的PD1AB-6變體、及(D)結合至FcγRI、FcγRIIIa(V158)或FcγRIIb之PD1AB-6變體之EC50值。
圖9A-9C繪示使用FACS之結合至CHO細胞上表現之FcγRIIIa(V158)(A)或FcγRI(B)的PD1AB-6變體、及(C)結合至FcγRI或FcγRIIIa之PD-1抗體變體之EC50值。
圖10A-10B繪示四個個別健康供體之兩個代表中的PD1AB-6變體及對照人類IgG1 Fc之ADCC活性:(A)供體7及(B)供體8。
圖11繪示PD1AB-6變體之CDC活性。數據係3個獨立實驗之代表:(i)PD1AB-6-IgG1及抗人類CD20 IgG1之CDC活性;(ii)PD1AB-6-IgG1及PD1AB-6-K3之CDC活性;(iii)PD1AB-6-4P及市售人類IgG4同型對照抗體及人類IgG1 Fc蛋白質之CDC活性。
圖12繪示人類PBMC分析中PD1AB-6變體之強效減弱活性,其係藉由刺激後24小時培養上清液中之IL-2含量來量測。
圖13繪示人類全血分析中PD1AB-6-K3之活性。該圖顯示用於計算IFN-γ抑制之EC50之供體4之代表曲線。該表顯示4個具有PD1AB-6變體及CTLA4Ig之健康供體之IFN-γ抑制之EC50值。
圖14A-14C繪示藉由PD1AB-6-IgG1之PD-1表現之下調,如藉由以下所測定:(A)同型對經抗CD3+抗CD28活化48小時之人類PBMC中CD3+ T細胞上的PD-1染色,(B)同型IgG1對PD1AB-6-IgG1處理之PBMC(檢測抗PD-1抗體未由PD1AB-6封阻)中之PD-1表現,及(C)3個經抗CD3+抗CD28活化之不同供體及三個不同濃度之同型IgG1或PD1AB-6-IgG1之人類PBMC中CD3+ T細胞上的PD-1表現。
圖15A-15C顯示(A)PD1AB-6-IgG1、(B)PD1AB-6-4P及(C)PD1AB-6-K3在Biacore® T200上結合至PD-1抗原。
本申請案主張於2015年9月29日提出申請之美國臨時專利申請案第62/234,535號之優先權之權益,該揭示內容之全部內容以引用方式併入本文中。
本文提供結合蛋白,例如結合至PD-1(包括人類及/或食蟹猴PD-1)之抗體。在一些實施例中,本文提供之結合蛋白(例如結合至人類及/或食蟹猴PD-1之抗體)不結合至齧齒類動物PD-1。在某些實施例中,PD-1結合蛋白(包括本文揭示之抗體)係激動劑(例如,可模擬PD-1配體之效應並誘導PD-1信號傳導)。在一些實施例中,結合蛋白(例如本文提供之針對PD-1之
抗體)(i)結合至人類及/或食蟹猴PD-1,(ii)不與PD-1配體(例如,PD-L1及/或PD-L2)競爭結合,及/或(iii)誘導PD-1信號傳導。在一個實施例中,PD-1抗體結合至人類PD-1。在一個實施例中,PD-1抗體結合至食蟹猴PD-1。在一個實施例中,PD-1抗體結合至人類PD-1及食蟹猴PD-1二者。在一些實施例中,PD-1抗體不與PD-L1競爭結合至PD-1。在其他實施例中,PD-1抗體不與PD-L2競爭結合至PD-1。在其他實施例中,PD-1抗體不與PD-L1或PD-L2競爭結合至PD-1。在其他實施例中,PD-1抗體誘導PD-1信號傳導。在具體實施例中,本文提供之PD-1抗體結合至人類PD-1及食蟹猴PD-1二者,不與PD-L1或PD-L2競爭結合至PD-1,且誘導PD-1信號傳導。在一些實施例中,在活體外、例如在基於細胞之分析中分析結合、競爭及/或信號傳導。在其他實施例中,離體、例如在T細胞功能分析中分析結合、競爭及/或信號傳導。在其他實施例中,使用來自個體(例如,人類個體)之試樣分析結合、競爭及/或信號傳導。在某些實施例中,分析包括(1)人類或食蟹猴PBMC分析(例如,參見實例5.2.1及5.2.2);(2)人類全血試樣分析(例如,參見實例5.2.1)。在某些實施例中,如本文所述之結合蛋白(例如抗PD-1抗體)展現與PD-L1及/或PD-L2之天然生物功能一致之活性。在一些實施例中,活性係在活體外展現。在其他實施例中,活性係離體展現。
在具體實施例中,本文提供之結合蛋白(例如結合至PD-1之抗體)共用彼此競爭結合PD-1之常見特徵。此競爭性抑制可指示,每一抗體結合至PD-1之相同區(例如,相同表位),藉此維護類似效應。在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體包括人類化抗PD-1抗體,例如源自或基於抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及/或PD1AB-6之彼等。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體與源自或基於
PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及/或PD1AB-6之抗體競爭結合。在一些實施例中,抗PD-1抗體具有如表1-2中所述之CDR序列。在某些實施例中,抗PD-1抗體結合至人類PD-1之特異性結構域或表位(例如,殘基100-105;參見實例5.1.4)。此外,該結合可在很大程度上歸因於區內之特定胺基酸殘基(例如,G103及R104;參見實例5.1.4),其包含本文提供之抗PD-1抗體識別之表位。總之,本文所述結果展現,針對源自或基於PD1AB-6之抗PD-1抗體(包括具有一或多個如表1-2中所述之CDR之抗體)觀察之效應可外推至具有相同或類似表位特異性(例如,相同或類似CDR)之本文提供之其他抗PD-1抗體。舉例而言,對於實例性人類化抗PD-1抗體,如實例5.1.2-3、5.1.7-10、5.2.1-3及5.3.1中所示之抗體之活性代表本文提供之抗PD-1抗體之活性及效應。
在本發明之一些實施例中,結合蛋白(例如抗PD-1抗體)可包括包含一或多個如表1-2中所述之CDR之免疫球蛋白可變區。在該等結合蛋白(例如,抗PD-1抗體)中,CDR可與一或多個架構區或框架區(FR)接合,該等架構區或框架區定向CDR,使得達成CDR之適當抗原結合性質。該等結合蛋白(包括如本文所述之抗PD-1抗體)可誘導PD-1信號傳導。
本文闡述或參考之技術及程序包括由熟習此項技術者使用習用方法通常充分理解及/或常用之彼等,例如以下中所述之廣泛採用之方法:Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版,2001);Current Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人編輯,2003);Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic(An編輯,2009);Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols(Albitar
編輯,2010);及Antibody Engineering,第1及2卷(Kontermann及Dübel編輯,第2版,2010)。
除非另有所述,否則本文所用之所有技術及科學術語具有與由熟習此項技術者通常所理解相同之含義。出於闡釋本說明書之目的,術語之以下說明將適用且若適當,以單數使用之術語應亦包括複數且反之亦然。所有專利、申請案、公開申請案及其他出版物均以其全文引用的方式併入本文中。倘若所述術語之任何說明與以引用方式併入本文中之任何文件矛盾,則將以下文所述之術語之說明為準。
除非另外指示,否則術語「程式化死亡1」、「程式化細胞死亡1」、「蛋白質PD-1」、「PD-1」、「PD-1多肽」或「PD1」涵蓋多肽(「多肽」及「蛋白質」在本文中可互換使用)包括來自任何脊椎動物來源(包括哺乳動物(例如靈長類動物(例如,人類及食蟹猴(cynomolgus monkeys,cynomolgus)、狗及齧齒類動物(例如,小鼠及大鼠))之任何天然多肽。在某些實施例中,該等術語包括「相關PD-1多肽」,包括其SNP變體。術語「PD-1」亦涵蓋未經處理之「全長」PD-1以及在細胞中處理產生之任一形式的PD-1。在一些實施例中,PD1具有SEQ ID NO:43之胺基酸序列。GenBankTM登錄號U64863提供其他實例性人類PD-1核酸序列。
「相關PD-1多肽」包括等位基因變體(例如,SNP變體);剪接變體;片段;衍生物;取代、缺失及插入變體;融合多肽;及種間同系物,其可保留PD-1活性。如熟習此項技術者應瞭解,本文提供之抗PD-1抗體可結合至PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1抗原及/或PD-1表位。「表位」可為較大PD-1抗原之一部分,該較大PD-1抗原可為較大PD-1多肽片段之一部
分,該較大PD-1多肽片段又可為較大PD-1多肽的一部分。PD-1可以天然或變性形式存在。本文所述PD-1多肽可自多種來源、例如自人類組織類型或自另一來源分離出或藉由重組或合成方法製備。業內亦熟知PD-1多肽之直向同源物。
PD-1多肽「細胞外結構域」或「ECD」係指基本上不含跨膜及細胞質結構域之PD-1多肽之形式。舉例而言,PD-1多肽ECD可具有小於1%之該等跨膜及/或細胞質結構域且可藉由小於0.5%之該等結構域。
術語「PD1AB-6-IgG1」、「PD1AB-6 IgG1」、「PD1AB-6_IgG1」、「IgG1_PD1AB-6」及「IgG1-PD1AB-6」可互換使用,且係指具有IgG1 Fc區之抗體PD1AB-6。在某些實施例中,抗體PD1AB-6包含LC_PD1AB-6-IgG1之輕鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:31)及HC_PD1AB-6-IgG1之重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:32),例如如圖4中所示。
術語「PD1AB-6-K3」、「PD1AB-6-IgG1-K322A」、「PD1AB-6-K322A」、「IgG1_PD1AB-6_K322A」、「IgG1_PD1AB-6_K3」、「IgG1-PD1AB-6-K322A」及「IgG1-PD1AB-6-K3」可互換使用且係指IgG1 Fc區中具有K322A突變之PD1AB-6變體。在某些實施例中,PD1AB-6變體具有HC_PD1AB-6-IgG1-K322A之重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:33),例如如圖4中所示。
術語「PD1AB-6-4P」、「IgG4P_PD1AB-6」、「IgG4P-PD1AB-6」、「PD1AB-6_IgG4P」及「PD1AB-6-IgG4P」可互換使用且係指具有IgG4P Fc區之PD1AB-6變體。在某些實施例中,PD-1抗體變體具有
HC_PD1AB-6-IgG4P之重鏈胺基酸序列(SEQ ID NO:34),例如如圖4中所示。
術語「PD1AB-6-4PE」、「IgG4PE_PD1AB-6」、「IgG4PE-PD1AB-6」及「PD1AB-6_IgG4PE」及「PD1AB-6-IgG4PE」可互換使用且係指具有作為HC_PD1AB-6-IgG4PE(SEQ ID NO:35)之IgG4PE重鏈胺基酸序列之PD1AB-6變體。
術語「PD-1配體」係指例如在活體內或活體外結合至PD-1之分子。PD-1配體之非限制性實例包括天然配體(例如PD-1配體1(PD-L1,亦稱為B7-H1或CD274)及PD-1配體2(PD-L2,亦稱為B7-DC或CD273))及人工生成之配體。
術語「PD-L1」及「PDL-1」在本文中可互換使用且係指PD-1配體1(亦稱為B7-H1或CD274)。
術語「PD-1活性」、「PD-1信號傳導」及「PD-1配體樣信號傳導」在適用於結合蛋白(例如結合至本發明之PD-1之抗體)時意指結合蛋白(例如,抗體)模擬或調節藉由PD-1配體之結合誘導之生物效應,且誘導原本可自例如在活體內或活體外結合至PD-1之PD-1配體產生的生物反應。在評價抗PD-1抗體(例如結合至PD-1(例如,人類PD-1)之抗體或其片段)之結合特異性中,在生物反應係野生型PD-1配體標準物之活性之等於或大於5%、例如等於或大於10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、100%、125%、150%、175%或200%時,將抗體視為誘導該反應。在一個實施例中,抗PD-1抗體或PD-1配體經固定(例如,在塑膠表面或珠粒上)。在某些實施例中,抗體具有以下性質:展現等於或超過PD-1配體標準物之5%之效能位準,且
在以下分析中EC50等於或小於100nM,例如90nM、80nM、70nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、5nM、2nM、1nM、0.5nM、0.2nM或0.1nM:(1)人類或食蟹猴PBMC分析(例如,參見實例4.2.1及4.2.2);或(2)人類全血試樣分析(例如,參見實例4.2.1)。
術語「結合蛋白」係指包含結合至PD-1(包括人類及/或食蟹猴PD-1)之部分(例如,一或多個結合區,例如CDR)及視情況容許結合部分採取促進結合蛋白與PD-1多肽、片段或表位結合之構象的架構或框架部分(例如,一或多個架構或框架區)的蛋白質。該等結合蛋白之實例包括抗體,例如人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、重組體抗體、單鏈抗體、雙價抗體、三價抗體、四價抗體、Fab片段、F(ab’)2片段、IgD抗體、IgE抗體、IgM抗體、IgG1抗體、IgG2抗體、IgG3抗體或IgG4抗體及其片段。結合蛋白可包含(例如)具有移植CDR或CDR衍生物之替代蛋白質架構或人工架構。該等架構包括(但不限於)包含所引入突變以(例如)穩定結合蛋白之三維結構的抗體源架構以及包含(例如)生物相容性聚合物之完全合成架構。參見(例如)Korndorfer等人,2003,Proteins:Structure,Function,and Bioinformatics 53(1):121-29;及Roque等人,2004,Biotechnol.Prog.20:639-54。另外,可使用肽抗體模擬物(「PAM」)、以及基於利用纖連蛋白組份作為架構之抗體模擬物的架構。在本發明上下文中,例如在解離常數(KD)係10-7M時,據稱結合蛋白特異性結合或選擇性結合至PD-1。在一些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)可以約10-7M至約10-12M之KD特異性結合至PD-1。在某些實施例中,在KD係10-8M或KD係10-9M時,結合蛋白(例如,抗體)可以高親和力特異性結合至PD-1。在一個實施例中,結合蛋白(例如,抗體)可以如藉由Biacore®量測之1×10-9M至10×10-9M
之KD特異性結合至純化人類PD-1。在另一實施例中,結合蛋白(例如,抗體)可以如藉由KinExATM(Sapidyne,Boise,ID)量測之0.1×10-9M至1×10-9M之KD特異性結合至純化人類PD-1。在另一實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以0.1×10-9M至10×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之人類PD-1。在某些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以0.1×10-9M至1×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之人類PD-1。在一些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以1×10-9M至10×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之人類PD-1。在某些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以約0.1×10-9M、約0.5×10-9M、約1×10-9M、約5×10-9M、約10×10-9M或其任一範圍或間隔之KD特異性結合至細胞上表現之人類PD-1。在另一實施例中,結合蛋白(例如,抗體)可以0.1×10-9M至10×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之食蟹猴PD-1。在某些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以0.1×10-9M至1×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之食蟹猴PD-1。在一些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以1×10-9M至10×10-9M之KD特異性結合至細胞上表現之食蟹猴PD-1。在某些實施例中,結合蛋白(例如,抗體)以約0.1×10-9M、約0.5×10-9M、約1×10-9M、約5×10-9M、約10×10-9M或其任一範圍或間隔之KD特異性結合至細胞上表現之食蟹猴PD-1。
術語「抗體」、「免疫球蛋白」或「Ig」在本文中可互換使用,且係以其最廣泛含義使用,且具體而言涵蓋(例如)個別抗PD-1單株抗體(包括激動劑、拮抗劑、中和抗體、全長或完整單株抗體)、具有多表位或單表位特異性之抗PD-1抗體組合物、多株或單價抗體、多價抗體、多特異性抗體(例如,雙特異性抗體,只要其展現期望生物活性),其係自至少兩個完整抗體、單鏈抗PD-1抗體及抗PD-1抗體之片段形成,如下文所述。抗體可為人類、
人類化、嵌合及/或親和力成熟抗體以及來自其他物種(例如小鼠及兔等)之抗體。術語「抗體」意欲包括免疫球蛋白類多肽內之B細胞之多肽產物,其能結合至特異性分子抗原且由多肽鏈之兩個相同對構成,其中每一對具有一條重鏈(約50-70kDa)及一條輕鏈(約25kDa),每一鏈之每一胺基末端部分包括約100至約130或更多個胺基酸之可變區,且每一鏈之每一羧基末端部分包括恆定區。參見(例如)Antibody Engineering(Borrebaeck編輯,第2版,1995);及Kuby,Immunology(第3版,1997)。在具體實施例中,特異性分子抗原可由本文提供之抗體(包括PD-1多肽、PD-1片段或PD-1表位)結合。抗體亦包括(但不限於)合成抗體、重組體產生之抗體、駱駝化抗體、細胞內抗體、抗個體基因型(抗Id)抗體及上述中之任一者之功能片段(例如,抗原結合片段,例如PD-1結合片段),其係指保留片段源自之抗體之結合活性之一些或全部的抗體重鏈或輕鏈多肽之一部分。功能片段(例如,抗原結合片段,例如PD-1結合片段)之非限制性實例包括單鏈Fv(scFv)(例如,包括單特異性、雙特異性等)、Fab片段、F(ab’)片段、F(ab)2片段、F(ab’)2片段、二硫鍵連接之Fv(dsFv)、Fd片段、Fv片段、雙價抗體、三價抗體、四價抗體及微小抗體。具體而言,本文提供之抗體包括免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分,例如含有結合至PD-1抗原之抗原結合位點之抗原結合結構域或分子(例如,抗PD-1抗體之一或多個CDR)。該等抗體片段可參見(例如)Harlow及Lane,Antibodies:A Laboratory Manual(1989);Mol.Biology and Biotechnology:A Comprehensive Desk Reference(Myers編輯,1995);Huston等人,1993,Cell Biophysics 22:189-224;Plückthun及Skerra,1989,Meth.Enzymol.178:497-515;及Day,Advanced Immunochemistry(第2版,1990)。本文提供之抗體可為
任何種類(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)之免疫球蛋白分子。抗PD-1抗體可激動性抗體或拮抗性抗體。本文提供PD-1之激動性抗體,包括誘導PD-1信號傳導之抗體。在具體實施例中,PD-1之激動性抗體並不競爭結合PD-L1及/或PD-L2與PD-1。
如本文所用術語「單株抗體」係指自實質上同源之抗體群體獲得之抗體,即,除可能存在極少量天然存在之突變外,構成該群體之個別抗體均相同,且每一單株抗體通常識別抗原上之單一表位。在具體實施例中,如本文所用「單株抗體」係由單一雜交瘤或其他細胞產生之抗體,其中抗體僅結合至PD-1表位,如藉由(例如)ELISA或業內已知之其他抗原結合或競爭性結合分析所測定。術語「單株」並不限於製備抗體之任何特定方法。舉例而言,本發明中有用之單株抗體可藉由首先由Kohler等人,1975,Nature 256:495闡述之雜交瘤方法製備,或可在細菌或真核動物或植物細胞中使用重組體DNA方法製得(例如,參見美國專利第4,816,567號)。「單株抗體」亦可自噬菌體抗體文庫使用(例如)Clackson等人,1991,Nature 352:624-28及Marks等人,1991,J.Mol.Biol.222:581-97中所述之技術來分離。製備純系細胞系及藉此表現之單株抗體之其他方法為業內所熟知。參見(例如)Short Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人編輯,第5版,2002)。產生單株抗體之實例性方法提供於本文中之實例中。
如本文所用之「多株抗體」係指針對具有許多表位之蛋白質免疫原性反應生成之抗體群體,且因此,包括針對蛋白質內之相同或不同表位之多種不同抗體。產生多株抗體之方法為業內已知(例如,參見Short Protocols in Molecular Biology(Ausubel等人編輯,第5版,2002))。
在肽或多肽之上下文中,如本文所用術語「片段」係指包含小於全長胺基酸序列之肽或多肽。該片段可自(例如)胺基末端處之截短、羧基末端處之截短及/或自胺基酸序列之殘基之內部缺失而產生。片段可自(例如)交替RNA剪接或活體內蛋白酶活性產生。在某些實施例中,PD-1片段或抗PD-1抗體片段包括包含PD-1多肽或抗PD-1抗體之胺基酸序列之至少5個鄰接胺基酸殘基、至少10個鄰接胺基酸殘基、至少15個鄰接胺基酸殘基、至少20個鄰接胺基酸殘基、至少25個鄰接胺基酸殘基、至少30個鄰接胺基酸殘基、至少40個鄰接胺基酸殘基、至少50個鄰接胺基酸殘基、至少60個鄰接胺基殘基、至少70個鄰接胺基酸殘基、至少80個鄰接胺基酸殘基、至少90個鄰接胺基酸殘基、至少鄰接100個胺基酸殘基、至少125個鄰接胺基酸殘基、至少150個鄰接胺基酸殘基、至少175個鄰接胺基酸殘基、至少200個鄰接胺基酸殘基、至少250、至少300、至少350、至少400、至少450、至少500、至少550、至少600、至少650、至少700、至少750、至少800、至少850、至少900或至少950個鄰接胺基酸殘基的胺基酸序列之多肽。在具體實施例中,PD-1多肽或抗PD-1抗體之片段保留多肽或抗體之至少1種、至少2種、至少3種或更多種功能。
「抗原」係抗體可選擇性結合之預定抗原。靶抗原可為多肽、碳水化合物、核酸、脂質、半抗原或其他天然或合成化合物。在一些實施例中,靶抗原係多肽。
術語「抗原結合片段」、「抗原結合結構域」、「抗原結合區」及類似術語係指與抗原相互作用且在結合劑上賦予其對抗原之特異性及親和力之胺基酸殘基的抗體之該部分(例如,CDR)。
「表位」係單一抗體分子結合之抗原分子表面上之位點,例如抗原表
面上之定位區,例如PD-1多肽或PD-1多肽片段,其能結合至抗體之一或多個抗原結合區,且在動物(例如哺乳動物(例如,人類))中具有抗原性或免疫原性活性,能引發免疫反應。具有免疫原性活性之表位係在動物中引發抗體反應之多肽之部分。具有抗原性活性之表位係抗體結合之多肽之部分,如藉由業內熟知之任何方法、包括(例如)藉由免疫分析所測定。抗原性表位不必具有免疫原性。表位通常係由分子之化學活性表面基團(例如胺基酸或糖側鏈)組成,且具有特定三維結構特徵以及特定電荷特徵。抗體表位可為線性表位或構象表位。線性表位係藉由蛋白質中之胺基酸之連續序列形成。構象表位係由在蛋白質序列中中斷、但在將蛋白質摺疊成其三維結構後聚在一起之胺基酸形成。在蛋白質之三維結構呈改變構象時,例如在另一蛋白質或配體活化或結合後,形成誘導之表位。在某些實施例中,PD-1表位係PD-1多肽之三維表面特徵。在其他實施例中,PD-1表位係PD-1多肽之線性特徵。通常,抗原具有若干或許多不同表位且可與許多不同抗體反應。
在兩種抗體識別三維空間中之相同、重疊或毗鄰表位時,抗體結合「表位」、與參考抗體「實質上相同之表位」或「相同表位」。用於確定兩種抗體是否結合至三維空間中之相同、重疊或毗鄰表位之最方法使用之快速方法係競爭分析,其可以多種不同格式使用(例如)經標記之抗原或經標記之抗體來構形。在一些分析中,抗原固定於96孔板上,或在細胞表面上表現,且使用放射性、螢光或酶標記量測未經標記之抗體阻斷經標記之抗體之結合的能力。
「表位定位」係鑑別其靶抗原上抗體之結合位點或表位的方法。「表位分揀」係基於其識別之表位對抗體進行分組之方法。更具體而言,表位
分揀包含使用競爭分析以及基於抗體之表位識別性質集群抗體及鑑別具有不同結合特異性之抗體的計算方法辨別不同抗體之表位識別性質的方法及系統。
術語「結合(「binds」或「binding」)係指分子之間之相互作用,包括(例如)形成複合物。相互作用可為(例如)非共價相互作用,包括氫鍵、離子鍵、疏水相互作用及/或凡得瓦相互作用(van der Waals interaction)。複合物亦可包括兩個或更多個藉由共價或非共價鍵、相互作用或力保持在一起之分子之結合。抗體上之單一抗原結合位點與靶分子(例如PD-1)之單一表位之間之總非共價相互作用之強度係抗體或功能片段對該表位之親和力。抗體對單價抗原之解離速率(koff)對締合速率(kon)之比率(koff/kon)係解離常數KD,其與親和力成反比。KD值愈低,抗體之親和力愈高。對於抗體及抗原之不同複合物,KD值變化且取決於kon及koff二者。本文提供之抗體之解離常數KD可使用本文提供之任何方法或熟習此項技術者熟知之任何其他方法來測定。一個結合位點處之親和力並不總是反映抗體與抗原之間之相互作用的真實強度。在含有多個重複抗原性決定子之複合抗原(例如多價PD-1)與含有多個結合位點之抗體接觸時,一個位點處抗體與抗原之相互作用將增加第二位點處反應之機率。多價抗體與抗原之間之該等多個相互作用之強度稱作親合力。抗體之親合力可為較其個別結合位點之親和力更佳之其結合能力的量度。舉例而言,高親合力可補償低親和力,如有時針對五聚體IgM抗體(其可具有較IgG低之親和力)所發現,但自其多價產生之IgM之高親合力使得其能夠有效結合抗原。
術語「特異性結合至PD-1之抗體」、「特異性結合至PD-1表位之抗體」及類似術語在本文中亦可互換使用且係指特異性結合至PD-1多肽、例
如PD-1抗原、或片段或表位(例如,人類PD-1,例如人類PD-1多肽、抗原或表位)之抗體。特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1)之抗體可結合至細胞外結構域或源自PD-1之細胞外結構域之肽。特異性結合至PD-1抗原(例如,人類PD-1)之抗體可與相關抗原(例如,食蟹猴PD-1)交叉反應。在某些實施例中,特異性結合至PD-1抗原之抗體不與其他抗原交叉反應。可藉由(例如)免疫分析、Biacore®或彼等熟習此項技術者已知之其他技術鑑別特異性結合至PD-1抗原之抗體。抗體在以較與交叉反應性抗原高之親和力結合至PD-1抗原時,抗體特異性結合至PD-1抗原,如使用實驗技術(例如放射免疫分析(RIA)及酶聯免疫吸附分析(ELISA))所測定。通常,特異性或選擇性反應將為背景信號或噪音之至少兩倍,且可為背景之10倍以上。關於抗體特異性之論述,參見(例如)Fundamental Immunology 332-36(Paul編輯,第2版,1989)。「結合目標抗原」(例如,靶抗原,例如PD-1)之抗體係以足夠親和力結合抗原者,使得抗體可在靶向表現抗原之細胞或組織中用作治療劑,且並不與其他蛋白質顯著交叉反應。在該等實施例中,抗體與「非靶」蛋白結合之程度小於抗體與其特定靶蛋白之結合之約10%,例如如藉由螢光活化細胞分選(FACS)分析或RIA所測定。關於抗體與靶分子之結合,術語「特異性結合」、「特異性結合至」特定多肽或特定多肽靶上之表位或「對其具有特異性」意指結合與非特異性相互作用可量測地不同。可藉由(例如)測定與對照分子之結合相比之分子之結合來量測特異性結合,該對照分子通常係不具有結合活性之類似結構之分子。舉例而言,可藉由與對照分子競爭來測定特異性結合,該對照分子類似於靶標,例如過量未經標記之靶標。在此情形中,若經標記之靶標與探針之結合由過量未經標記之靶標競爭性抑制,則指示特異性結合。術語「抗PD-1抗體」或
「結合至PD-1之抗體」包括能以足夠親和力結合PD-1之抗體,使得抗體可(例如)作為診斷試劑用於靶向PD-1。如本文所用術語「特異性結合」、「特異性結合至」特定多肽或特定多肽靶上之表位或「對其具有特異性」係指分子結合至特定多肽或特定多肽上之表位而不實質上結合至任何其他多肽或多肽表位的結合。在某些實施例中,結合至PD-1之抗體之解離常數(KD)為小於或等於10nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM或0.1nM。在某些實施例中,抗PD-1抗體結合至在不同物種之PD-1中(例如,人類與食蟹猴PD-1之間)保守之PD-1之表位。
術語「競爭」在抗PD-1抗體(例如,結合至PD-1並競爭靶標上之相同表位或結合位點之激動性抗體及結合蛋白)意指如藉由分析測定之競爭,其中其抗體(或結合片段)在研究下防止或抑制參考分子(例如,參考配體或參考抗原結合蛋白,例如參考抗體)與共用抗原(例如,PD-1或其片段)特異性結合。可使用多種類型之競爭性結合分析以確定測試抗體是否與參考抗體競爭結合至PD-1(例如,人類PD-1)。可採用之分析之實例包括固相直接或間接RIA、固相直接或間接酶免疫分析(EIA)、三明治式(sandwich)競爭分析(例如,參見Stahli等人,1983,Methods in Enzymology 9:242-53)、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA(例如,參見Kirkland等人,1986,J.Immunol.137:3614-19)、固相直接標記之分析、固相直接標記之三明治式分析(例如,參見Harlow及Lane,Antibodies,A Laboratory Manual(1988))、使用I-125標記之固相直接標記RIA(例如,參見Morel等人,1988,Mol.Immunol.25:7-15)及直接標記之RIA(Moldenhauer等人,1990,Scand.J.Immunol.32:77-82)。通常,該分析涉及使用結合至固體表面之
純化抗原(例如,PD-1,例如人類PD-1)、或帶有未經標記之測試抗原結合蛋白(例如,測試抗PD-1抗體)或經標記之參考抗原結合蛋白(例如,參考抗PD-1抗體)之任一者之細胞。藉由在測試抗原結合蛋白存在下測定結合至固體表面或細胞之標記之量來量測競爭抑制。通常存在過量測試抗原結合蛋白。藉由競爭分析鑑別之抗體(競爭抗體)包括與參考抗體結合至相同表位之抗體及/或因出現立體阻礙而結合至與參考抗體所結合表位足夠接近的毗鄰表位之抗體。本文中闡述關於測定競爭性結合之方法之詳細內容。通常,在存在過量競爭抗體蛋白時,其將參考抗體與共用抗原之特異性結合抑制至少30%,例如40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或75%。在一些情況下,將結合抑制至少80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或更多。
「經分離」抗體實質上不含細胞材料或來自細胞或組織來源之其他污染蛋白及/或抗體源自之其他污染物組份,或在化學合成時實質上不含化學前體或其他化學品。語言「實質上不含細胞材料」包括抗體自細胞之細胞組份分離之抗體之製劑,該抗體係自該等細胞分離或重組產生。因此,實質上不含細胞材料之抗體包括具有小於約30%、25%、20%、15%、10%、5%、或1%(以乾重計)之異源蛋白(本文中亦稱作「污染蛋白」)之抗體的製劑。在某些實施例中,在抗體係重組產生時,其實質上不含培養基,例如,培養基佔蛋白製劑之體積之小於約20%、15%、10%、5%或1%。在某些實施例中,在抗體係藉由化學合成產生時,其實質上不含化學前體或其他化學品,例如,其係自參與蛋白質合成之化學前體或其他化學品分離出。因此,抗體之該等製劑具有小於約30%、25%、20%、15%、10%、5%或1%(以乾重計)之除目標抗體外之化學前體或化合物。污染物組份亦可包括(但
不限於)可干擾抗體之治療用途之材料,且可包括酶、激素及其他蛋白質性或非蛋白質性溶質。在某些實施例中,抗體將純化(1)至大於95重量%抗體,如藉由Lowry方法(Lowry等人,1951,J.Bio.Chem.193:265-75)所測定,例如96%、97%、98%或99%,(2)至藉由使用旋杯式序列分析儀足以獲得至少15個N-末端或內部胺基酸序列殘基之程度,或(3)至均質性,如藉由SDS-PAGE在還原或非還原條件下使用考馬斯藍(Coomassie blue)或銀染色所量測。由於不應存在至少一種抗體之天然環境組份,因此經分離抗體包括重組體細胞內之原位抗體。然而,經分離抗體通常將藉由至少一個純化步驟製備。在具體實施例中,分離本文提供之抗體。
4-鏈抗體單元係由兩條相同輕(L)鏈及兩條相同重(H)鏈構成之異源四聚體醣蛋白。在IgG之情形下,4-鏈單元通常係約150,000道爾頓(dalton)。每一L鏈藉由一個共價二硫鍵連接至H鏈,而端視H鏈同型而定,兩條H鏈藉由一或多個二硫鍵彼此連接。每一H及L鏈亦具有規則地間隔開之鏈內二硫鍵。每一H鏈在N-末端處具有可變結構域(VH)、之後對於α及γ鏈中之每一者係三個恆定結構域(CH)且對於μ及ε同型係四個CH結構域。每一L鏈在N-末端處具有可變結構域(VL),之後在其另一端具有恆定結構域(CL)。VL與VH比對,且CL與重鏈之第一恆定結構域(CH1)比對。據信,特定胺基酸殘基可在輕鏈與重鏈可變結構域之間形成界面。VH及VL之配對一起形成單一抗原結合位點。對於不同種類之抗體之結構及性質,參見(例如)Basic and Clinical Immunology 71(Stites等人編輯,第8版,1994)。
術語「重鏈」在參照抗體使用時係指約50-70kDa之多肽鏈,其中胺基末端部分包括約120至130或更多個胺基酸之可變區,且羧基末端部分包括恆定區。基於重鏈恆定區之胺基酸序列,恆定區可屬五種不同類型(例
如,同型)(稱作阿爾法(α)、德爾塔(δ)、ε(ε)、伽瑪(γ)及繆(μ))中之一者。不同重鏈之大小不同:α、δ及γ含有約450個胺基酸,而μ及ε含有約550個胺基酸。在與輕鏈組合時,該等不同類型之重鏈分別產生五個熟知種類(例如,同型)之抗體IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,包括四個亞類之IgG,即IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。重鏈可為人類重鏈。
術語「輕鏈」在參照抗體使用時係指約25kDa之多肽鏈,其中胺基末端部分包括約100至約110或更多個胺基酸之可變區,且羧基末端部分包括恆定區。輕鏈之近似長度係211至217個胺基酸。基於恆定結構域之胺基酸序列,存在兩個不同類型,稱作卡帕(κ)或蘭布達(λ)。輕鏈胺基酸序列為業內所熟知。輕鏈可為人類輕鏈。
術語「可變區」、「可變結構域」、「V區」或「V結構域」係指抗體之輕鏈或重鏈中通常位於輕鏈或重鏈之胺基末端處且在重鏈中長度為約120至130個胺基酸且在輕鏈中長度為約100至110個胺基酸的部分,且用於每一特定抗體對其特定抗原之結合及特異性。重鏈之可變區可稱作「VH」。輕鏈之可變區可稱作「VL」。術語「可變」係指抗體之間可變區之某些區段之序列差異極大的事實。V區介導抗原結合並界定特定抗體對其特定抗原之特異性。然而,可變性在可變區之110個胺基酸跨度內並不均勻分佈。相反,V區由由較大可變性(例如,極端可變性)之較短區(稱作「超變區」,其係各自約9-12個胺基酸長)隔開之變化較小(例如,相對不變)之拉伸段(稱作約15-30個胺基酸之框架區(FR)組成。重鏈及輕鏈之可變區各自包含由三個超變區連接之主要採用β摺疊構形的四個FR區,該等超變區形成連接β摺疊結構且在某些情形下構成β摺疊結構一部分之環。每條鏈中之超變區藉助FR保持緊密靠近,且與來自另一鏈之超變區一起促進形成抗體之抗原
結合位點(參見Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest(第5版,1991))。恆定區並不直接參與抗體與抗原之結合,但呈現多種效應子功能,例如,抗體參與抗體依賴性細胞細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)。不同抗體之間之可變區之序列差異極大。在具體實施例中,可變區係人類可變區。
術語「如Kabat中之可變區殘基編號」或「如Kabat中之胺基酸位置編號」及其變化形式係指用於抗體之編譯之重鏈可變區或輕鏈可變區的編號系統,如Kabat等人,上文文獻。使用此編號系統,實際直鏈胺基酸序列可含有較少或額外之對應於可變結構域之FR或CDR之縮短或插入之胺基酸。舉例而言,重鏈可變結構域可包括在殘基52後之單胺基酸插入(根據Kabat之殘基52a)及殘基82後之插入殘基(例如,根據Kabat之殘基82a、82b及82c等)。可藉由將抗體序列之同源區與「標準」Kabat編號序列比對來確定給定抗體殘基之Kabat編號。在提及可變結構域中之殘基(大約輕鏈之殘基1-107及重鏈之殘基1-113)時,通常使用Kabat編號系統(例如,Kabat等人,上文文獻)。在提及免疫球蛋白重鏈恆定區中之殘基時,通常使用「EU編號系統」或「EU索引」(例如,Kabat等人,上文文獻中報告之EU索引)。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG 1 EU抗體之殘基編號。其他編號系統已由(例如)AbM、Chothia、Contact、IMGT及AHon闡述。
「CDR」係指免疫球蛋白(Ig或抗體)VH β-摺疊框架之非框架區內之三個超變區(H1、H2或H3)中之一者、或抗體VL β-摺疊框架之非框架區內之三個超變區(L1、L2或L3)中之一者。因此,CDR係散佈在框架區序列內之可變區序列。CDR區已為熟習此項技術者熟知且藉由(例如)Kabat定義為抗體可變(V)結構域內之最大超變區(Kabat等人,1997,J.Biol.Chem.
252:6609-16;Kabat,1978,Adv.Prot.Chem.32:1-75)。CDR區序列亦藉由Chothia在結構上定義為並非保守β-摺疊框架之部分之彼等殘基,且因此能適於不同構象(Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-17)。兩種術語皆在業內充分識別。CDR區序列亦藉由AbM、Contact及IMGT進行定義。藉由比較多種結構測定正準抗體可變區內之CDR之位置(Al-Lazikani等人,1997,J.Mol.Biol.273:927-48;Morea等人,2000,Methods 20:267-79)。由於超變區內之殘基之數目在不同抗體中變化,故利用a、b、c等靠近正準可變區編號方案中之殘基數目對相對於正準位置之額外殘基按慣例進行編號(Al-Lazikani等人,上文文獻)。該命名類似地為熟習此項技術者熟知。
術語「超變區」、「HVR」或「HV」在本文中使用時係指抗體可變區中序列超變及/或結構上形成所定義環之區。通常,抗體包含6個超變區,3個位於VH中(H1、H2、H3),且3個位於VL中(L1、L2、L3)。本文使用且涵蓋多個超變區之描述。Kabat互補決定區(CDR)係基於序列可變性且最通常使用(例如,參見Kabat等人,上文文獻)。而Chothia涉及結構環之位置(例如,參見Chothia及Lesk,1987,J.Mol.Biol.196:901-17)。Chothia CDR-H1環之末端在使用Kabat編號慣例編號時端視環之長度在H32與H34之間變化(此乃因Kabat編號方案將插入置於H35A及H35B處;若35A及35B皆不存在,環於32處為末端;若僅存在35A,環於33處為末端;若35A及35B二者皆存在,則環於34處為末端)。AbM超變區代表Kabat CDR與Chothia結構環之間之折衷,且由Oxford Molecular’s AbM抗體建模軟體使用(例如,參見Antibody Engineering第2卷(Kontermann及Dübel編輯,第2版,2010))。「接觸」超變區係基於對可獲得複雜晶體結構之分析。來自
該等超變區或CDR中每一者之殘基如下所述。
最近,已研發並廣泛採取通用編號系統,ImMunoGeneTics(IMGT)Information System®(Lafranc等人,2003,Dev.Comp.Immunol.27(1):55-77)。IMGT係人類及其他脊椎動物之免疫球蛋白(IG)、T細胞受體(TCR)及主要組織相容性複合體(MHC)中專門之整合資訊系統。在本文中,CDR係在胺基酸序列及輕鏈或重鏈內之位置兩個方面提及。由於免疫球蛋白可變結構域之結構內之CDR之「位置」在物種之間保守且存於稱作環之結構中,易於鑑別藉由使用根據結構特徵、CDR及框架殘基比對可變結構域序列之編號系統。此資訊可用於將一個物種之免疫球蛋白之CDR殘基移植並置換成通常人類抗體之受體框架。額外編號系統(AHon)已由Honegger及Plückthun,2001,J.Mol.Biol.309:657-70研發。編號系統(包括(例如)Kabat編號及IMGT獨特編號系統)之間之一致性為熟習此項技術者熟知(例如,參見Kabat,上文文獻;Chothia及Lesk,上文文獻;Martin,上文文獻;Lefranc等人,上文文獻)。在一些實施例中,CDR係藉由IMGT編號系統定義。在其他實施例中,CDR係如藉由Kabat編號系統所定義。在某些實施例中,CDR係如藉由AbM編號系統所定義。在其他實施例中,CDR係如藉由Chothia系統所定義。在其他實施例中,CDR係如藉由Contact編號系統所定義。
超變區可包含如下「經延伸超變區」:VL中之24-36或24-34(L1)、46-56或50-56(L2)及89-97或89-96(L3)以及VH中之26-35或26-35A(H1)、50-65或49-65(H2)、及93-102、94-102、或95-102(H3)。如本文所用術語「HVR」及「CDR」可互換使用。
術語「恆定區」或「恆定結構域」係指輕鏈及重鏈中不直接參與抗體與抗原結合、但展現各種效應物功能(例如與Fc受體相互作用)之羧基末端部分。該術語係指相對於免疫球蛋白之另一部分、含有抗原結合位點之可變區具有更保守胺基酸序列之免疫球蛋白分子的部分。恆定區可含有重鏈之CH1、CH2及CH3區及輕鏈之CL區。
術語「框架」或「FR」係指側接CDR之彼等可變區殘基。FR殘基存在於(例如)嵌合、人類化、人類結構域抗體、雙價抗體、直鏈抗體及雙特異性抗體中。FR殘基係除超變區殘基或CDR殘基外之彼等可變結構域殘基。
術語「Fc區」在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈之C-末端區,包括(例如)天然序列Fc區、重組體Fc區及變體Fc區。儘管免疫球蛋白重鏈之Fc區之邊界可有所變化,但通常將人類IgG重鏈Fc區界定為自Cys226位處之胺基酸殘基或自Pro230延伸至其羧基末端。可(例如)在抗體產生或純化期間、或藉由重組改造編碼抗體之重鏈之核酸移除Fc區之C-末端離胺酸(根據EU編號系統之殘基447)。因此,完整抗體之組合物可包含移除所有K447殘基之抗體群體、未移除K447殘基之抗體群體及具有抗體與及無K447殘基之混合物之抗體群體。
「功能Fc區」具有天然序列Fc區之「效應物功能」。實例性「效應物功能」包括C1q結合;CDC;Fc受體結合;ADCC;吞噬作用;細胞表面
受體(例如,B細胞受體)之下調等。該等效應物功能通常需要Fc區與結合區或結合結構域(例如,抗體可變區或結構域)組合且可使用如所揭示之各種分析進行評價。
「天然序列Fc區」包含與自然界中發現且未由人類操縱、修飾及/或改變(例如,分離、純化、選擇,包括或與其他序列(例如可變區序列)組合)之Fc區之胺基酸序列相同的胺基酸序列。天然序列人類IgG1 Fc區包括天然序列人類IgG1 Fc區(非A及A同種異型);天然序列人類IgG2 Fc區;天然序列人類IgG3 Fc區;及天然序列人類IgG4 Fc區以及其天然變體。舉例而言,天然人類IgG1 Fc區胺基酸序列提供如下:
(SEQ ID NO:36,K322著重)。
「變體Fc區」包含由於至少一個胺基酸修飾(例如,取代、添加或缺失)不同於天然序列Fc區之胺基酸序列。在某些實施例中,與天然序列Fc區或親代多肽之Fc區相比,變體Fc區具有天然序列Fc區或親代多肽之Fc區中之至少一個胺基酸取代,例如約1至約10個胺基酸取代、或約1至約5個胺基酸取代。本文中之變體Fc區可與天然序列Fc區及/或親代多肽之Fc區具有至少約80%同源性,或與其至少約90%同源性,例如與其至少約95%同源性。舉例而言,人類IgG1 Fc胺基酸序列中322位處之一個胺基酸K變為A之變體IgG1-K322A Fc區提供如下:
(SEQ ID NO:37,K322A取代著重)。
術語「變體」在關於PD-1或抗PD-1抗體使用時可係指與天然或未經修飾之序列相比包含一或多個(例如約1至約25、約1至約20、約1至約15、約1至約10或約1至約5個)胺基酸序列取代、缺失及/或添加的肽或多肽。舉例而言,PD-1變體可自天然PD-1之胺基酸序列之一或多個(例如約1至約25、約1至約20、約1至約15、約1至約10或約1至約5個)變化產生。亦舉例而言,抗PD-1抗體之變體可自天然或先前未經修飾之抗PD-1抗體之胺基酸序列一或多個(例如約1至約25、約1至約20、約1至約15、約1至約10或約1
至約5個)變化產生。變體可為天然的,例如等位基因或剪接變體,或可經人工構造。多肽變體可自編碼變體之相應核酸分子製備。在具體實施例中,PD-1變體或抗PD-1抗體變體分別至少保留PD-1或抗PD-1抗體功能活性。在具體實施例中,抗PD-1抗體變體結合PD-1及/或對PD-1活性具有拮抗性。在具體實施例中,抗PD-1抗體變體結合PD-1及/或對PD-1活性具有激動性。在某些實施例中,變體係由編碼PD-1或抗PD-1抗體VH或VL區或子區(例如一或多個CDR)之核酸分子之單核苷酸多型性(SNP)變體編碼。
「完整」抗體係包含抗原結合位點以及CL及至少重鏈恆定區CH1、CH2及CH3者。恆定區可包括人類恆定區或其胺基酸序列變體。在某些實施例中,完整抗體具有一或多種效應物功能。
「抗體片段」包含完整抗體之一部分,例如完整抗體之抗原結合區或可變區。抗體片段之實例包括(但不限於)Fab、Fab’、F(ab’)2及Fv片段;雙價抗體及二-雙價抗體(例如,參見Holliger等人,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.90:6444-48;Lu等人,2005,J.Biol.Chem.280:19665-72;Hudson等人,2003,Nat.Med.9:129-34;WO 93/11161;及美國專利第5,837,242號及第6,492,123號);單鏈抗體分子(例如,參見美國專利第4,946,778號;第5,260,203號;第5,482,858號;及第5,476,786號);雙重可變結構域抗體(例如,參見美國專利第7,612,181號);單一可變結構域抗體(sdAb)(例如,參見Woolven等人,1999,Immunogenetics 50:98-101;及Streltsov等人,2004,Proc Natl Acad Sci USA.101:12444-49);及自抗體片段形成之多特異性抗體。
治療抗體之「功能片段」、「結合片段」或「抗原結合片段」將展現至少一種(若並非一些或全部)歸因於完整抗體之生物功能,該功能包含至
少結合至靶抗原(例如,PD-1結合片段或結合至PD-1之片段)。
如本文所用術語「融合蛋白」係指包含抗體之胺基酸序列及異源多肽或蛋白質(例如,通常並非抗體(例如,非抗PD-1抗原結合抗體)之部分之多肽或蛋白質)之胺基酸序列的多肽。術語「融合」在關於PD-1或抗PD-1抗體使用時係指肽或多肽或其片段、變體及/或衍生物與異源肽或多肽接合。在某些實施例中,融合蛋白保留PD-1或抗PD-1抗體之生物活性。在某些實施例中,融合蛋白包含PD-1抗體VH區、VL區、VH CDR(1個、2個或3個VH CDR)及/或VL CDR(1個、2個或3個VL CDR),其中融合蛋白結合至PD-1表位、PD-1片段及/或PD-1多肽。
術語「天然」在結合生物材料(例如核酸分子、多肽、宿主細胞及諸如此類)使用時係指於自然界中發現且未由人類操縱、修飾及/或改變(例如,分離、純化、選擇)之彼等。
本文提供之抗體可包括「嵌合」抗體,其中重鏈及/或輕鏈之一部分與源自特定物種或屬特定抗體種類或亞類之抗體的相應序列相同或同源,而該(等)鏈之其餘部分與源自另一物種或屬另一抗體種類或亞類之抗體的相應序列相同或同源;以及該等抗體之片段,只要其呈現期望生物學活性即可(參見美國專利第4,816,567號;及Morrison等人,1984,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-55)。
非人類(例如,鼠類)抗體之「人類化」形式係包括人類免疫球蛋白之嵌合抗體(例如,受體抗體),其中天然CDR殘基由具有期望特異性、親和力及能力之非人類物種(例如,供體抗體)(例如小鼠、大鼠、兔或非人類靈長類動物)之相應CDR之殘基置換。在一些情況下,人類免疫球蛋白之一或多個FR區殘基由相應非人類殘基置換。此外,人類化抗體可包含在受體抗
體或供體抗體中未發現之殘基。實施該等修飾以進一步改良抗體特性。人類化抗體重鏈或輕鏈可包含實質上全部至少一或多個可變區,其中全部或實質上全部CDR對應於非人類免疫球蛋白之彼等,且全部或實質上全部FR係人類免疫球蛋白序列之彼等。在某些實施例中,人類化抗體將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)(通常為人類免疫球蛋白恆定區)的至少一部分。關於其他詳細內容,參見Jones等人,1986,Nature 321:522-25;Riechmann等人,1988,Nature 332:323-29;Presta,1992,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-96;Carter等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-89;美國專利第6,800,738號;第6,719,971號;第6,639,055號;第6,407,213號及第6,054,297號。
「人類抗體」係具有對應於由人類產生之抗體之胺基酸序列之胺基酸序列及/或使用用於製備如本文所揭示人類抗體的任一技術者。此人類抗體之定義明確排除包含非人類抗原結合殘基之人類化抗體。人類抗體可使用業內已知之各種技術產生,該等技術包括噬菌體-展示文庫(Hoogenboom及Winter,1991,J.Mol.Biol.227:381;Marks等人,1991,J.Mol.Biol.222:581)及酵母展示文庫(Chao等人,2006,Nature Protocols 1:755-68)。以下中所述之方法亦可用於製備人類單株抗體:Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77(1985);Boerner等人,1991,J.Immunol.147(1):86-95;及van Dijk及van de Winkel,2001,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74。人類抗體可藉由向轉基因動物(例如小鼠)投與抗原來製備,該轉基因動物經修飾以因應抗原性攻擊產生該等抗體,但其內源基因座已禁用(例如,參見Jakobovits,1995,Curr.Opin.Biotechnol.6(5):561-66;Brüggemann及Taussing,1997,Curr.Opin.Biotechnol.
8(4):455-58;及關於XENOMOUSETM技術之美國專利第6,075,181號及第6,150,584號)。關於經由人類B細胞雜交瘤技術生成之人類抗體,亦參見(例如)Li等人,2006,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103:3557-62。
「親和力成熟」抗體係在其一或多個HVR中存在一或多處改變之抗體(例如,胺基酸序列變化,包括改變、添加及/或缺失),該等改變會使抗體對抗原之親和力與不具有彼等改變之親代抗體相比有所改良。親和力成熟抗體可對靶抗原具有奈莫耳或甚至皮莫耳親和力。親和力成熟抗體係藉由業內已知之程序產生。關於綜述,參見Hudson及Souriau,2003,Nature Medicine 9:129-34;Hoogenboom,2005,Nature Biotechnol.23:1105-16;Quiroz及Sinclair,2010,Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51。
「阻斷」抗體或「拮抗劑」抗體係抑制或降低所結合抗原之生物活性的抗體。舉例而言,阻斷抗體或拮抗劑抗體可實質上或完全地抑制抗原之生物活性。
「激動劑」抗體係觸發反應之抗體,例如模擬目標多肽(例如,PD-L1)之至少一種功能活性者。激動劑抗體包括作為配體模擬物之抗體,例如,其中配體結合至細胞表面受體且結合經由細胞間細胞信號傳導路徑誘導細胞信號傳導或活化且其中抗體誘導類似細胞信號傳導或活化。PD-1之「激動劑」係指能活化或以其他方式增加(例如)表現PD-1之細胞中之PD-1之生物活性中之一或多者的分子。在一些實施例中,PD-1之激動劑(例如,如本文所述之激動性抗體)可(例如)藉由活化或以其他方式增加表現PD-1蛋白質之細胞之活化或及/或細胞信號傳導路徑起作用,藉此相對於在不存在激動劑下PD-1介導之生物活性增加細胞之PD-1介導之生物活性。在一些實施例中,本文提供之抗體激動性抗PD-1抗體,包括誘導PD-1信號傳導之抗體。
「結合親和力」通常係指分子(例如結合蛋白,例如抗體)之單一結合位點與其結合配偶體(例如抗原)之間之非共價相互作用的總強度。除非另外指明,否則如本文所使用,「結合親和力」係指反映結合對之成員(例如,抗體與抗原)之間之1:1相互作用的固有結合親和力。分子X對於其配偶體Y之親和力通常可由解離常數(KD)表示。可藉由業內已知之常用方法(包括彼等闡述於本文中者)來量測親和力。低親和力抗體通常緩慢地結合抗原且往往易於解離,而高親和力抗體通常較快結合抗原且往往較長時間保持結合。多種量測結合親和力之方法為業內已知,其任一者皆可用於本發明目的。具體闡釋性實施例包括以下。在一個實施例中,「KD」或「KD值」可藉由業內已知之分析、例如藉由結合分析來量測。KD可於(例如)利用目標抗體及其抗原之Fab型式實施之RIA中量測(Chen等人,1999,J.Mol Biol 293:865-81)。KD或KD值亦可藉由使用表面電漿共振分析藉由使用(例如)Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000之Biacore®、或藉由使用(例如)Octet®QK384系統之生物層干涉來量測。「解離速率」(「on-rate」或「rate of association」或「association rate」)或「kon」亦可利用上述相同表面電漿共振或生物層干涉技術使用(例如)Biacore®TM-2000或Biacore®TM-3000或Octet®QK384系統測定。
術語「抑制」(「inhibition」或「inhibit」)在本文中使用時係指部分(例如,1%、2%、5%、10%、20%、25%、50%、75%、90%、95%、99%)或完全(即,100%)抑制。
術語「減弱」(「attenuate」、「attenuation」或「attenuated」)在本文中使用時係指性質、活性、效應或值之部分(例如,1%、2%、5%、10%、20%、25%、50%、75%、90%、95%、99%)或完全(即,100%)減少。
「抗體效應物功能」係指可歸因於抗體之Fc區(例如,天然序列Fc區或胺基酸序列變體Fc區)之生物活性且隨抗體同型有所變化。抗體效應物功能之實例包括(但不限於):C1q結合;CDC;Fc受體結合;ADCC;吞噬作用;細胞表面受體(例如,B細胞受體)之下調;及B細胞活化。
「T細胞效應物功能」係指可歸因於不同類型之T細胞(包括(但不限於)細胞毒性T細胞、T輔助細胞及記憶體T細胞)之生物活性。T細胞效應物功能之實例包括:增加T細胞增殖、分泌細胞介素、釋放細胞毒素、表現膜相關之分子、殺死靶細胞、活化巨噬細胞及活化B細胞。
「抗體依賴性細胞介導之細胞毒性」或「ADCC」係指以下細胞毒性形式:其中結合至存在於某些細胞毒性細胞(例如自然殺傷(NK)細胞、嗜中性球及巨噬球)上之Fc受體(FcR)上之分泌免疫球蛋白使該等細胞毒性效應物細胞能夠特異性結合帶抗原靶細胞且隨後利用細胞毒素殺死該靶細胞。抗體「武裝」該等細胞毒性細胞且為該殺死過程絕對所需。用於介導ADCC之原代細胞(NK細胞)僅表現Fc γ RIII,而單核球表現Fc γ RI、Fc γ RII及Fc γ RIII。已知造血細胞上之FcR表現(例如,參見Ravetch及Kinet,1991,Annu.Rev.Immunol.9:457-92)。為評價目標分子之ADCC活性,可實施活體外ADCC分析(例如,參見美國專利第5,500,362號及第5,821,337號)。可用於該等分析之效應物細胞包括末梢血單核細胞(PBMC)及自然殺傷(NK)細胞。或者或另外,可在活體內、例如在動物模型中評價目標分子之ADCC活性(例如,參見Clynes等人,1998,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:652-56)。可選擇具有極小或無ADCC活性之抗體使用。
「抗體依賴性細胞吞噬作用」或「ADCP」係指在免疫球蛋白結合至存在於某些吞噬細胞(例如,嗜中性球、單核球及巨噬細胞)上之Fc受體
(FcR)上時經由單核球或巨噬細胞介導之吞噬作用之靶細胞之破壞使該等吞噬細胞能夠特異性結合帶抗原靶細胞且隨後殺死該靶細胞。為評價目標分子之ADCP活性,可實施活體外ADCP分析(例如,參見Bracher等人,2007,J.Immunol.Methods 323:160-71)。可用於該等分析之吞噬細胞包括末梢血單核細胞(PBMC)、PBMC之純化單核球或分化成單核型之U937細胞。或者或另外,目標分子之ADCP活性可在活體內、例如在動物模型中評價(例如,參見Wallace等人,2001,J.Immunol.Methods 248:167-82)。可選擇具有極小或無ADCP活性之抗體使用。
「Fc受體」或「FcR」闡述與抗體之Fc區結合之受體。實例性FcR係天然序列人類FcR。另外,實例性FcR係結合IgG抗體者(γ受體)且包括Fc γ RI、Fc γ RII及Fc γ RIII亞類之受體,包括該等受體之對偶基因變體及交替剪接形式。Fc γ RII受體包括Fc γ RIIA(「活化受體」)及Fc γ RIIB(「抑制受體」),二者具有類似胺基酸序列,主要在其胞質結構域上有所不同(例如,參見Daëron,1997,Annu.Rev.Immunol.15:203-34)。已知各種FcR(例如,參見Ravetch及Kinet,1991,Annu.Rev.Immunol.9:457-92;Capel等人,1994,Immunomethods 4:25-34;及de Haas等人,1995,J.Lab.Clin.Med.126:330-41)。本文之術語「FcR」涵蓋其他FcR,包括彼等欲在將來鑑別者。該術語亦包括新生受體FcRn,其負責將母源性IgG轉移至胎兒(例如,參見Guyer等人,1976,J.Immunol.117:587-93;及Kim等人,1994,Eu.J.Immunol.24:2429-34)。已闡述具有改良或降低之與FcR之結合之抗體變體(例如,參見WO 2000/42072;美國專利第7,183,387號;第7,332,581號;及第7.335,742號;Shields等人,2001,J.Biol.Chem.9(2):6591-604)。
「補體依賴性細胞毒性」或「CDC」係指在補體存在下靶細胞之溶解。
經典補體路徑之活化係藉由補體系統之第一補體(C1q)與抗體(適當亞類)之結合來起始,該等抗體結合其同族抗原。為評價補體活化,可實施CDC分析(例如,參見Gazzano-Santoro等人,1996,J.Immunol.Methods 202:163)。已闡述具有改變之Fc區胺基酸序列(具有變體Fc區之多肽)及增加或降低之C1q結合能力之肽變體(例如,參見美國專利第6,194,551號;WO 1999/51642;Idusogie等人,2000,J.Immunol.164:4178-84)。可選擇具有極小或無CDC活性之抗體使用。
術語「一致性」係指兩個或更多個多肽分子或兩個或更多個核酸分子之序列之間的關係,如藉由對序列進行比對及比較測定。就參考肽序列而言,「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對序列並引入空位(視需要)以達到最大序列一致性百分比後候選序列中與參考肽序列中之胺基酸殘基一致之胺基酸殘基的百分比,且不將任何保守取代視為序列一致性之一部分。出於確定胺基酸序列一致性百分比之目的,比對可以熟習此項技術者所熟知之各種方式來達成,例如使用可公開獲得之電腦軟體,例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或MEGALIGN(DNAStar,Inc.)軟體。彼等熟習此項技術者可確定用於比對序列之適當參數,包括在所比較序列之全長範圍內達成最大比對所需要之任何算法。
胺基酸殘基/位置之「修飾」係指與起始胺基酸序列相比主要胺基酸序列之變化,其中該變化自涉及該胺基酸殘基/位置之序列改變產生。舉例而言,典型修飾包括用另一胺基酸取代殘基(例如,保守或非保守取代)、毗鄰該殘基/位置插入一或多個(例如,通常少於5、4或3個)胺基酸、及/或該殘基/位置缺失。
在多肽之上下文中,如本文所用術語「類似物」係指具有與PD-1多肽、
PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體類似或相同之功能但不必包含PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體之類似或相同胺基酸序列、或具有PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體之類似或相同結構的多肽。具有類似胺基酸序列之多肽係指滿足以下中之至少一者之多肽:(a)具有與本文提供之PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體之胺基酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的胺基酸序列之多肽;(b)由在嚴格條件下與編碼本文所述PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體(或其VH或VL區)之核苷酸序列雜交之核苷酸序列編碼的多肽,至少5個胺基酸殘基、至少10個胺基酸殘基、至少15個胺基酸殘基、至少20個胺基酸殘基、至少25個胺基酸殘基、至少30個胺基酸殘基、至少40個胺基酸殘基、至少50個胺基酸殘基、至少60個胺基殘基、至少70個胺基酸殘基、至少80個胺基酸殘基、至少90個胺基酸殘基、至少100個胺基酸殘基、至少125個胺基酸殘基或至少150個胺基酸殘基(例如,參見Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(2001);及Maniatis等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(1982));或(c)由與編碼本文所述PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體(或其VH或VL區)之核苷酸序列至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少99%一致之核苷酸序列編碼的多肽。具有與本文提供之PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體類似之結構之多肽係指具有本文提供之PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體之類似二級、三級或四級結構的多肽。多肽之結構可藉由熟習此
項技術者已知之方法(包括但不限於X射線結晶學、核磁共振及結晶學電子顯微鏡)來測定。
在多肽之上下文中,如本文所用術語「衍生物」係指包含PD-1多肽、PD-1多肽之片段或結合至PD-1多肽之抗體之胺基酸序列的多肽,其藉由引入胺基酸殘基取代、缺失或添加得以改變。如本文所用術語「衍生物」亦係指PD-1多肽、PD-1多肽之片段或結合至PD-1多肽之抗體,其藉由(例如)任何類型之分子共價附接至多肽進行化學修飾。舉例而言,但不限於,PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體可藉由(例如)增加或減少醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、藉由已知保護/阻斷基團衍生、蛋白水解裂解、化學裂解、鏈接至配體或其他蛋白質等經化學修飾。衍生物係以所附接分子之類型或位置不同於天然或起始肽或多肽之方式經修飾。衍生物進一步包括一或多個天然存在於肽或多肽上之化學基團之缺失。此外,PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體之衍生物可含有一或多個非典型胺基酸。多肽衍生物具有與本文提供之PD-1多肽、PD-1多肽之片段或抗PD-1抗體類似或相同之功能。
如本文所用術語「宿主」係指動物,例如哺乳動物(例如,人類)。
如本文所用術語「宿主細胞」係指可經核酸分子轉染之特定個別細胞及該細胞之後代或潛在後代。由於可在後續各代中發生之突變或環境影響或核酸分子整合至宿主細胞基因體中,該細胞之後代可不與經核酸分子轉染之母體細胞一致。
術語「載體」係指用於攜帶或包括核酸序列(包括(例如)編碼如本文所述之抗PD-1抗體之核酸序列)以將核酸序列引入宿主細胞中之物質。適用之載體包括(例如)表現載體、質體、噬菌體載體、病毒載體、游離基因體及
人工染色體,其可包括可操作用於穩定整合至宿主細胞之染色體中之選擇序列或標記物。另外,載體可包括一或多個可選標記物基因及適當表現控制序列。可包括之可選標記物基因(例如)提供對抗生素或毒素之抗性、補體營養缺陷型缺陷,或供應培養基中不存在之關鍵營養素。表現控制序列可包括組成型及可誘導啟動子、轉錄增強子、轉錄終止子及諸如此類,其為業內所熟知。在欲共表現兩個或更多個核酸分子(例如,抗體重鏈及輕鏈或抗體VH及VL)時,可將兩個核酸分子插入(例如)單一表現載體或單獨表現載體中。對於單一載體表現,編碼核酸可操作地連接至一個共用表現控制序列或連接至不同表現控制序列,例如一個可誘導啟動子及一個組成型啟動子。可使用業內熟知之方法確認向宿主細胞中引入核酸分子。該等方法包括(例如)核酸分析,例如北方印跡或mRNA之聚合酶鏈式反應(PCR)擴增、用於基因產物之表現之免疫印跡、或其他適宜分析方法,以測試所引入核酸序列或其相應基因產物之表現。熟習此項技術者應瞭解,核酸分子係以足以產生期望產物(例如,如本文所述之抗PD-1抗體)之量表現,且應進一步瞭解,可使用業內熟知之方法最佳化表現程度以獲得足夠表現。
「經分離核酸」係實質上自其他基因體DNA序列分離之核酸(例如RNA、DNA或混合核酸)以及蛋白質或複合物(例如天然伴隨天然序列之核糖體及聚合酶)。「經分離」核酸分子係自核酸分子之天然來源中存在之其他核酸分子分離者。此外,「經分離」核酸分子(例如cDNA分子)在藉由重組體技術產生時可實質上不含其他細胞材料或培養基,或在化學合成時實質上不含化學前體或其他化學品。在具體實施例中,分離或純化一或多個編碼如本文所述之抗體之核酸分子。該術語涵蓋自其天然環境移出之核酸序列,且包括重組體或選殖DNA分離株及化學合成之類似物或藉由異源系
統生物合成之類似物。實質上純之分子可包括分子之分離形式。
如本文所互換使用之「多核苷酸」或「核酸」係指任一長度之核苷酸之聚合物,且包括DNA及RNA。核苷酸可為去氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾核苷酸或鹼基及/或其類似物、或任一可藉由DNA或RNA聚合酶或藉由合成反應納入聚合物中之受質。多核苷酸可包含經修飾核苷酸,例如甲基化核苷酸及其類似物。如本文所用「寡核苷酸」係指短的、通常單鏈之合成多核苷酸,其長度通常(但不必)小於約200個核苷酸。術語「寡核苷酸」及「多核苷酸」並不互斥。上文針對多核苷酸之說明同樣且完全適於寡核苷酸。產生本發明之抗PD-1抗體之細胞可包括其中已引入編碼該抗體之核酸之親代雜交瘤細胞、以及細菌及真核宿主細胞。下文揭示適宜宿主細胞。
除非另外指明,否則本文揭示之任何單鏈多核苷酸序列之左手端係5’端;雙鏈多核苷酸序列之左手方向稱作5’方向。初生RNA轉錄物之5’至3’添加之方向稱作轉錄方向;DNA鏈上係RNA轉錄物之5’至5’端之具有與RNA轉錄物相同之序列之序列區稱作「上游序列」;DNA鏈上係RNA轉錄物之3’至3’端之具有與RNA轉錄物相同之序列之序列區稱作「下游序列」。
術語「編碼核酸」或其語法等效形式在提及核酸分子使用時係指呈其天然狀態之核酸分子或在藉由熟習此項技術者熟知之方法操縱時可經轉錄以產生mRNA、隨後轉譯成多肽及/或其片段之核酸分子。反義鏈係該核酸分子之補體,且編碼序列可自推斷出。
術語「重組體抗體」係指藉由重組體方式製備、表現、產生或分離之抗體。重組體抗體可為使用轉染至宿主細胞中之重組體表現載體表現之抗體、自重組體、組合抗體文庫分離之抗體、自針對人類免疫球蛋白基因轉
基因及/或轉染色體之動物(例如,小鼠或牛)分離之抗體(例如,參見Taylor等人,1992,Nucl.Acids Res.20:6287-95)、或藉由涉及將免疫球蛋白基因序列剪接成其他DNA序列之任何其他方式製備、表現、產生或分離之抗體。該等重組體抗體可具有可變區及恆定區,包括源自人類種系免疫球蛋白序列之彼等(參見Kabat等人,上文文獻)。然而,在某些實施例中,可使該等重組體抗體經歷活體外誘變(或,當使用人類Ig序列之轉基因動物時,經歷活體內體細胞誘變),因此重組體抗體之VH及VL區之胺基酸序列儘管源自人類種系VH及VL序列並與其相關,但其係可不天然存在於人類活體內抗體種系譜內的序列。
術語「可檢測探針」係指提供可檢測信號之組合物。該術語包括(但不限於)經由其活性提供可檢測信號之任何螢光團、發色團、放射標記、酶、抗體或抗體片段及諸如此類。
術語「可檢測試劑」係指可用於確定試樣或個體中期望分子(例如如本文所述之抗PD-1抗體)之生存或存在。可檢測試劑可為能可視化之物質或能以其他方式經測定及/或量測(例如,藉由定量)之物質。
術語「診斷試劑」係指投與個體以有助於診斷疾病、病症或病況之物質。該等物質可用於揭示、指出及/或界定疾病引起過程之位置。在某些實施例中,診斷試劑包括在投與個體或接觸個體之試樣時有助於診斷PD-1介導之疾病之偶聯至如本文所述之抗PD-1抗體之物質。
術語「組合物」意欲涵蓋含有視情況指定量之指定成份(例如,本文提供之抗體)的產物。
如本文所用之「載劑」包括在所用劑量及濃度下對所暴露細胞或哺乳動物無毒之醫藥上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑。通常,生理上可接受
之載劑係pH緩衝水溶液。生理上可接受之載劑的實例包括緩衝劑,例如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸;抗氧化劑,包括抗壞血酸;低分子量(例如,小於約10個殘基)多肽;蛋白質,例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白;親水性聚合物,例如聚乙烯吡咯啶酮;胺基酸,例如甘胺酸、麩醯胺酸、天門冬醯胺、精胺酸或離胺酸;單醣、二醣及其他碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或糊精;螯合劑,例如EDTA;糖醇,例如甘露糖醇或山梨糖醇;形成鹽之抗衡離子,例如鈉;及/或非離子型表面活性劑,例如TWEENTM、聚乙二醇(PEG)及PLURONICSTM。術語「載劑」亦可係指稀釋劑、佐劑(例如,弗式佐劑(Freund’s adjuvant)(完全或不完全))、賦形劑或媒劑。該等載劑(包括醫藥載劑)可為無菌液體,例如水及油,包括石油、動物、植物或合成來源之彼等,例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油及諸如此類。在組合物(例如,醫藥組合物)係靜脈內投與時,水係實例性載劑。亦可採用鹽水溶液及水性右旋糖及甘油溶液作為液體載劑、具體而言用於可注射溶液。適宜賦形劑(例如醫藥賦形劑)包括澱粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、水稻、麵粉、白堊、矽膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇及諸如此類。組合物(若需要)亦可含有極少量之潤濕劑或乳化劑或pH緩衝劑。組合物可採取溶液、懸浮液、乳液、錠劑、丸劑、膠囊、粉末、持續釋放調配物及諸如此類。經口組合物(包括調配物)可包括標準載劑,例如醫藥級甘露醇、乳糖、澱粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適宜醫藥載劑之實例闡述於Remington及Gennaro,Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版,1990)中。組合物(包括醫藥化合物)可含有(例如)呈分離或純化形式之抗PD-1抗體以及適宜量之載劑。
如本文中所用術語「醫藥上可接受的」意指已獲得聯邦或州政府管理機構批准或已列於美國藥典(United States Pharmacopeia)、歐洲藥典(European Pharmacopeia)或其他公認藥典中可用於動物(且更具體而言用於人類)中。
術語「賦形劑」係指通常用作稀釋劑、媒劑、防腐劑、黏合劑或穩定劑之惰性物質,且包括(但不限於)蛋白質(例如,血清白蛋白等)、胺基酸(例如,天冬胺酸、麩胺酸、離胺酸、精胺酸、甘胺酸、組胺酸等)、脂肪酸及磷脂(例如,磺酸烷基酯、辛酸酯等)、表面活性劑(例如,SDS、聚山梨醇酯、非離子型表面活性劑等)、醣(例如,蔗糖、麥芽糖、海藻糖等)及多元醇(例如,甘露醇、山梨醇等)。亦參見Remington及Gennaro,Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版,1990),其全文以引用方式併入本文中。
術語「個體」及「患者」可互換使用。在某些實施例中,如本文所用之個體係哺乳動物,例如非靈長類動物(例如,牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類動物(例如,猴及人類)。在具體實施例中,個體係人類。
「投與」(「Administer」或「administration」)係指將物質以其在體外存在之形式(例如,如本文所述之抗PD-1抗體)注射或以其他方式物理遞送至患者中,例如藉由黏膜、真皮內、靜脈內、肌內遞送及/或本文所述或業內已知之任何其他物理遞送方法。
如本文所用術語「有效量」係指本文提供之抗體或醫藥組合物足以產生期望結果的量。
術語「約」及「大約」意指在給定值或範圍之20%內、15%內、10%內、9%內、8%內、7%內、6%內、5%內、4%內、3%內、2%內、1%內或更小。
「實質上所有」係指至少約60%、至少約65%、至少約70%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%、至少約99%或約100%。
片語「實質上類似」或「實質上相同」表示兩個數值(通常一者與本發明抗體相關且另一者與參考抗體相關)之間之足夠高類似度,使得熟習此項技術者認為該兩個值間之差異在藉由該等值(例如,KD值)所量測之生物學特性之背景下具有較小或不具有生物學及/或統計學顯著性。舉例而言,該兩個值間之差異可小於約50%、小於約40%、小於約30%、小於約20%、小於約10%或小於約5%,其隨參考抗體之值而變化。
如本文所用之片語「實質上增加」、「實質上減少」或「實質上不同」表示兩個數值(通常一者與本發明抗體相關且另一者與參考抗體相關)之間之足夠高差異度,使得熟習此項技術者會認為該兩個值間之差異在藉由該等值所量測之生物學特性之背景下具有統計學顯著性。舉例而言,該兩個值之間之差異可大於約10%、大於約20%、大於約30%、大於約40%、或大於約50%,其隨參考抗體之值而變化。
本文提供結合至PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位之抗體。
在某些實施例中,本文提供之抗體結合至人類及/或食蟹猴PD-1。在一個實施例中,PD-1抗體結合至人類PD-1。在一個實施例中,PD-1抗體結合至食蟹猴PD-1。在一個實施例中,PD-1抗體結合至人類PD-1及食蟹猴PD-1二者。在其他實施例中,本文提供之抗體不結合至齧齒類動物PD-1。
在一些實施例中,抗PD-1抗體結合至PD-1之細胞外結構域(ECD)。在
某些實施例中,抗PD-1抗體結合至PD-1之ECD中之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗PD-1抗體結合至PD-1之ECD中之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗PD-1抗體結合至PD-1之ECD中之表位,其不同於PD-L1及PD-L2-結合位點二者。
亦提供競爭性阻斷本文提供之抗PD-1抗體結合至PD-1多肽之抗體。
亦提供與本文提供之抗PD-1抗體競爭結合至PD-1多肽之抗體。
在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L1結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L2結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L1或PD-L2結合至PD-1多肽。
在一些實施例中,抗PD-1抗體不與PD-L1競爭結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不與PD-L2競爭結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不與PD-L1或PD-L2競爭結合至PD-1多肽。
在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
本文提供之抗PD-1抗體亦可偶聯或重組融合至(例如)診斷試劑或可檢測試劑。進一步提供包含抗PD-1抗體之組合物。
本文亦提供編碼結合至PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位之抗PD-1抗體之免疫球蛋白重鏈、輕鏈、VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的經分離核酸分子。
進一步提供包含編碼結合至PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位之抗PD-1抗體之核酸分子的載體及宿主細胞。亦提供製備結合至
PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位之抗體的方法。
在一個實施例中,本發明提供在本文中發現可用作診斷試劑之抗PD-1抗體。實例性抗體包括多株、單株、人類化、人類、雙特異性及異源偶聯物抗體、以及具有改良親和力或其他性質之其變體。
在一些實施例中,本文提供結合至PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)之抗體。在某些實施例中,本文提供之抗體結合至人類及/或食蟹猴PD-1。在其他實施例中,本文提供之抗體不結合至齧齒類動物PD-1(例如,小鼠PD-1)。在一個實施例中,本文提供之抗體結合至人類PD-1。在另一實施例中,本文提供之抗體結合至食蟹猴PD-1。在另一實施例中,本文提供之抗體結合至人類PD-1及食蟹猴PD-1。在一些實施例中,本文提供之抗體結合至人類PD-1且不結合至齧齒類動物PD-1(例如,小鼠PD-1)。在一些實施例中,本文提供之抗體結合至食蟹猴PD-1且不結合至齧齒類動物PD-1(例如,小鼠PD-1)。在一些實施例中,本文提供之抗體結合至人類PD-1,結合至食蟹猴PD-1,且不結合至齧齒類動物PD-1(例如,小鼠PD-1)。在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L1結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L2結合至PD-1多肽。在一些實施例中,抗PD-1抗體不阻斷PD-L1或PD-L2結合至PD-1多肽。在其他實施例中,抗PD-1抗體係結合PD-1(包括PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位)之人類化抗體(例如,包含人類恆定區)。
在某些實施例中,抗PD-1抗體包含本文提供之鼠類單株抗體中之任一者之VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3,例如繪示於表1-6中之胺基酸序列。因此,在一些實施例
中,本文提供之經分離抗體或其功能片段包含來自以下抗體之1個、2個及/或3個重鏈CDR及/或1個、2個及/或3個輕鏈CDR:(a)抗體PD1AB-1,(b)抗體PD1AB-2,(c)抗體PD1AB-3,(d)抗體PD1AB-4,(e)抗體PD1AB-5或(f)抗體PD1AB-6,如表1-2中所示。
在一些實施例中,本文提供之抗體包含表1-2中鑑別之6個CDR(例如,VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3)或由其組成。在一些實施例中,本文提供之抗體可包含少於6個CDR。在一些實施例中,抗體包含1個、2個、3個、4個或5個選自由表1-2中鑑別之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3組成之群之CDR或由其組成。在一些實施例中,抗體包含1個、2個、3個、4個或5個選自由以下組成之群之CDR或由其組成:選自由以下組成之群之本文所述單株抗體之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3:(a)抗體PD1AB-1,(b)抗體PD1AB-2,(c)抗體PD1AB-3,(d)抗體PD1AB-4,(e)抗體PD1AB-5及(f)抗體PD1AB-6。因此,在一些實施例中,抗體包含1個、2個、3個、4個或5個表1-2中鑑別之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3中之任一者之CDR或由其組成。
在一些實施例中,本文提供之抗體包含一或多個(例如,1個、2個或3個)表2中所列舉之VH CDR。在其他實施例中,本文提供之抗體包含一或多個(例如,1個、2個或3個)表1中所列舉之VL CDR。在其他實施例中,本文提供之抗體包含一或多個(例如,1個、2個或3個)表2中所列舉之VH CDR及一或多個表1中所列舉之VL CDR。因此,在一些實施例中,抗體包含具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列之VH CDR1。在一些實施例中,抗體包
含具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列之VH CDR2。在一些實施例中,抗體包含具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之VH CDR3。在一些實施例中,抗體包含獨立地選自如表2中所繪示之VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3胺基酸序列中之任一者之VH CDR1及/或VH CDR2及/或VH CDR3。在一些實施例中,抗體包含具有SEQ ID NO:1及7中之任一者之胺基酸序列之VL CDR1。在另一實施例中,抗體包含具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2。在一些實施例中,抗體包含具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。在一些實施例中,抗體包含獨立地選自如表1中所繪示之VL CDR1、VL CDR2、VL CDR3胺基酸序列中之任一者之VL CDR1及/或VL CDR2及/或VL CDR3。
在某些實施例中,本文提供之抗體包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列之VH CDR1;(2)具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列之VH CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之VH CDR3;及VL區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。
在某些實施例中,本文提供之抗體包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列之VH CDR1;(2)具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列之VH CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之VH CDR3;及VL區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。
在一些實施例中,本文提供之抗體包含VH區,其包含:(1)具有SEQ
ID NO:4之胺基酸序列之VH CDR1;(2)具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列之VH CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之VH CDR3。
在其他實施例中,本文提供之抗體包含VL區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。
在一些實施例中,本文提供之抗體包含VL區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。
本文亦提供包含表1-2中所列舉之一或多個(例如,1個、2個或3個)VH CDR及一或多個(例如,1個、2個或3個)VL CDR的抗體。具體而言,本文提供包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)之抗體。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID
NO:5)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1
(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID
NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR2(SEQ ID NO:2)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一些實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含VH CDR1(SEQ ID NO:4)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在一個實施例中,抗體包含VH CDR2(SEQ ID NO:5)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在其他實施例中,抗體包含VH CDR3(SEQ ID NO:6)、VL CDR1(SEQ ID NO:1或7)、VL CDR2(SEQ ID NO:2)及VL CDR3(SEQ ID NO:3)。在另一實施例中,抗體包含表1-2中所列舉之VH
CDR及VL CDR之其任一組合。
在另一態樣中,本文揭示之CDR包括源自相關抗體之群之共有序列(例如,參見表1-2)。如本文所述之「共有序列」係指具有在多個序列間共用之保守胺基酸及在給定胺基酸序列中變化之可變胺基酸的胺基酸序列。
在一些實施例中,本文提供之經分離抗體或其功能片段進一步包含來自以下抗體之1、2、3及/或4個重鏈FR及/或1、2、3及/或4個輕鏈FR:(a)抗體PD1AB-1,(b)抗體PD1AB-2,(c)抗體PD1AB-3,(d)抗體PD1AB-4,(e)抗體PD1AB-5,或(f)抗體PD1AB-6,如表3-4中所示。
在某些實施例中,本文提供之經分離抗體或其功能片段進一步包含來自以下抗體之1、2、3及/或4個重鏈FR:(a)抗體PD1AB-1,(b)抗體PD1AB-2,(c)抗體PD1AB-3,(d)抗體PD1AB-4,(e)抗體PD1AB-5,或(f)抗體PD1AB-6,如表4中所示。在一些實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-1。在一些實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-2。在其他實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-3。在某些實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-4。在其他實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-5。在另一實施例中,抗體重鏈FR係來自抗體PD1AB-6。
在一些實施例中,本文提供之經分離抗體或其功能片段進一步包含來自以下抗體之1、2、3及/或4個輕鏈FR:(a)抗體PD1AB-1,(b)抗體PD1AB-2,(c)抗體PD1AB-3,(d)抗體PD1AB-4,(e)抗體PD1AB-5,或(f)抗體PD1AB-6,如表3中所示。在一些實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-1。在一些實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-2。在其他實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-3。在某些實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-4。在其他實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-5。在另一實施例中,抗體輕鏈FR係來自抗體PD1AB-6。
在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區,其包含:(1)具有選自由SEQ ID NO:19及24組成之群之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有選自由SEQ ID NO:21及23組成之群之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4。在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4。在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4。在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序
列之VH FR4。在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4。在具體實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。
因此,在一些實施例中,人類化抗體包含包括具有選自由SEQ ID NO:19及24組成之群之胺基酸序列之VH FR1的VH區。在一個實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1的VH區。在一個實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1的VH區。在一些實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2的VH區。在一些實施例中,人類化抗體包含包括具有選自由SEQ ID NO:21及23組成之群之胺基酸序列之VH FR3的VH區。在一個實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3的VH區。在一個實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3的VH區。在其他實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4的VH區。
在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VL區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有選自由SEQ ID NO:16及18組成之群之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID
NO:16之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在其他實施例中,包含以下之VL區:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。
因此,在一些實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1之VL區。在某些實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2之VL區。在其他實施例中,人類化抗體包含包括具有選自由SEQ ID NO:16及18組成之群之胺基酸序列之VL FR3的VL區。在一個實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之VL FR3的VL區。在其他實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3的VL區。在其他實施例中,人類化抗體包含包括具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4的VL區。
在某些實施例中,本文所述抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有選自由SEQ ID NO:19及24組成之群之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有選自由SEQ ID NO:21及23組成之群之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有選自由SEQ ID NO:16及18組成之群之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4
中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID
NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:19之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20
之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及
VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:21之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL
FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
在一些實施例中,抗體或其片段包含VH區及VL區,其中VH區包含:(1)具有SEQ ID NO:24之胺基酸序列之VH FR1;(2)具有SEQ ID NO:20之胺基酸序列之VH FR2;(3)具有SEQ ID NO:23之胺基酸序列之VH FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:22之胺基酸序列之VH FR4;且其中VL區包含:(1)具有SEQ ID NO:14之胺基酸序列之VL FR1;(2)具有SEQ ID NO:15之胺基酸序列之VL FR2;(3)具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列之VL FR3;及/或(4)具有SEQ ID NO:17之胺基酸序列之VL FR4。在一些實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。在其他實施例中,抗體包括包含上文所提及之VH FR1、VH FR2、VH FR3及VH FR4中之所有四者之VH區、及包含上文所提及之VL FR1、VL FR2、VL FR3及VL FR4中之所有四者之VL區。
本文亦提供包含表3-4中所列舉之一或多個(例如,1個、2個、3個或4個)VH FR及一或多個(例如,1個、2個、3個或4個)VL FR之抗體。具體而言,本文提供包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)及VL FR1(SEQ ID NO:14)之抗體。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含
VH FR1(SEQ ID NO:19或24)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其他實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在另一實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID
NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體
包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其他實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19
或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實
施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID
NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含
VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含
VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其他實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或
18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR1(SEQ ID NO:14)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)及VL FR4(SEQ
ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID
NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID
NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體
包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)
及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ
ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR2(SEQ ID NO:15)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、
VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL
FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在一些實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID
NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR3(SEQ ID NO:16或18)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2
(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在另一實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在其他實施例中,抗體包含VH FR1(SEQ ID NO:19或24)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一個實施例中,抗體包含VH FR2(SEQ ID NO:20)、VH FR3(SEQ ID NO:21或23)、VH FR4(SEQ ID NO:22)、VL FR1(SEQ ID NO:14)、VL FR2(SEQ ID NO:15)、VL FR3(SEQ ID NO:16或18)及VL FR4(SEQ ID NO:17)。在一些實施例中,抗體包含表3-4中所列舉之VH FR(SEQ ID NO:19-24)及VL FR(SEQ ID NO:14-18)之其任一組合。
在一些實施例中,本文提供之抗體包含VH區或VH結構域。在其他實施例中,本文提供之抗體包含VL區或VL結構域。在某些實施例中,本文提供之抗體具有以下之組合:(i)VH結構域或VH區;及/或(ii)VL結構域
或VL區。在其他實施例中,本文提供之抗體具有以下之組合:(i)VH結構域或VH區;及/或(ii)選自由如表5-6中所述之SEQ ID NO:8-13組成之群之VL結構域或VL區。在其他實施例中,本文提供之抗體具有以下之組合:(i)VH結構域或VH區;及/或(ii)如表5-6中所述之抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中任一者之VL結構域或VL區。
在某些實施例中,本文提供之抗體包含VH區,其包含:(1)具有SEQ ID NO:4之胺基酸序列之VH CDR1;(2)具有SEQ ID NO:5之胺基酸序列之VH CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:6之胺基酸序列之VH CDR3;及選自由如表5中所述之SEQ ID NO:8-10組成之群之VL區。在一些實施例中,VL區具有SEQ ID NO:8之胺基酸序列。在其他實施例中,VL區具有SEQ ID NO:9之胺基酸序列。在一些實施例中,VL區具有SEQ ID NO:10之胺基酸序列。
在其他實施例中,本文提供之抗體包含選自由如表6中所述之SEQ ID NO:11-13組成之群之VH區;及包含以下之VL區:(1)具有選自由SEQ ID NO:1及7組成之群之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。在又一些實施例中,本文提供之抗體包含選自由如表6中所述之SEQ ID NO:11-13組成之群之VH區;及包含以下之VL區:(1)具有SEQ ID NO:1之胺基酸序列之VL CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。在其他實施例中,本文提供之抗體包含選自由如表6中所述之SEQ ID NO:11-13組成之群之VH區;及包含以下之VL區:(1)具有SEQ ID NO:7之胺基酸序列之VL
CDR1;(2)具有SEQ ID NO:2之胺基酸序列之VL CDR2;及(3)具有SEQ ID NO:3之胺基酸序列之VL CDR3。在一些實施例中,VH區具有SEQ ID NO:11之胺基酸序列。在一些實施例中,VH區具有SEQ ID NO:12之胺基酸序列。在一些實施例中,VH區具有SEQ ID NO:13之胺基酸序列。
本文亦提供編碼結合至PD-1多肽、PD-1多肽片段、PD-1肽或PD-1表位之抗PD-1抗體之免疫球蛋白重鏈、輕鏈、VH區、VL區、VH CDR1、VH CDR2、VH CDR3、VL CDR1、VL CDR2及/或VL CDR3的經分離核酸分子。抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6中之任一者之VL區及VH區之實例性核酸序列示於表7-8中。
在一些實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-1之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:11之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:8之VL胺基酸序列。
在其他實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-2之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:11之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:9之VL胺基酸序列。
在一些實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-3之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:12之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:10之VL胺基酸序列。
在其他實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-4之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:12之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:9之VL胺基酸序列。
在一些實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-5之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:13之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:9之VL胺基酸序列。
在其他實施例中,本文提供之抗體具有PD1AB-6之VH及VL胺基酸序列。在一些實施例中,抗體包含SEQ ID NO:13之VH胺基酸序列及SEQ ID NO:8之VL胺基酸序列。
在某些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中輕鏈包含具有以下之胺基酸序列之恆定區:
(SEQ ID NO:41)。
在其他實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含具有以下之胺基酸序列之人類IgG1 Fc區:
(SEQ ID NO:36,K322著重)。
在一些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈不包含具有SEQ ID NO:36之胺基酸序列之人類IgG1 Fc區。
在某些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含具有以下之胺基酸序列之人類IgG1-K322A Fc區:
(SEQ ID NO:37,K322A取代著重)。
在一些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含具有以下之胺基酸序列之人類IgG4 Fc區:
(SEQ ID NO:38,S228及L235著重)。
在另一實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含具有以下之胺基酸序列之人類IgG4P Fc區:
(SEQ ID NO:39,S228P取代著重)。
在另一實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含具有以下之胺基酸序列之人類IgG4PE Fc區:
(SEQ ID NO:40,S228P及L235E取代著重)。
在一些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中重鏈不包含具有SEQ ID NO:40之胺基酸序列之人類IgG4PE Fc區。
在另一實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文所述抗體或其抗原結合片段包含輕鏈及重鏈,其中輕鏈包含具有SEQ ID NO:41之胺基酸序列之恆定區;且重鏈包含具有選自由SEQ ID NO:36-40組成之群之胺基酸序列之Fc區。
在某些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中輕鏈包含如下胺基酸序列:
(SEQ ID NO:31,
LC_PD1AB-6-IgG1)。
在一些實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含如下胺基酸序列:
(SEQ ID
NO:32,HC_PD1AB-6-IgG1,K322著重)。
在其他實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含如下胺基酸序列:
(SEQ ID
NO:33,HC_PD1AB-6-IgG1-K322A,K322A取代著重)。
在另一實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含如下胺基酸序列:
(SEQ ID NO:34,HC_PD1AB-6-IgG4P,
IgG4P Fc主鏈加斜體及下劃線)。
在另一實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中重鏈包含如下胺基酸序列:
(SEQ ID NO:35,HC_PD1AB-6-IgG4PE,
IgG4PE Fc主鏈加斜體及下劃線)。
在一個特定實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中(i)輕鏈包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列;且(ii)重鏈包含SEQ ID NO:32之胺基酸序列。
在另一特定實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中(i)輕鏈包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列;且(ii)重鏈包含SEQ ID NO:33之胺基酸序列。
在另一特定實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中(i)輕鏈包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列;且(ii)重鏈包含SEQ ID NO:34之胺基酸序列。
在另一特定實施例中,特異性結合至PD-1多肽(例如,PD-1(例如人類PD-1)之ECD)之本文提供之抗體包含輕鏈及重鏈,其中(i)輕鏈包含SEQ ID NO:31之胺基酸序列;且(ii)重鏈包含SEQ ID NO:35之胺基酸序列。
在另一態樣中,提供與所例示之抗體或功能片段中之一者競爭結合至
PD-1之抗體。該等抗體亦可結合至與本文例示之抗體中之一者相同之表位或重疊表位。預計與所例示抗體競爭或結合至相同表位之抗體及片段顯示類似功能性質。所例示抗原結合蛋白及片段包括具有本文提供之VH及VL區及CDR之彼等,包括表1-6中之彼等。因此,作為具體實例,所提供抗體包括與包含以下之抗體競爭之彼等:(a)1、2、3、4、5或所有6個針對表1-2中所列舉抗體列舉之CDR;(b)選自針對表5-6中所列舉抗體列舉之VH及VL區的VH及VL;或(c)包含如針對表5-6中所列舉抗體指定之VH及VL的兩條輕鏈及兩條重鏈。在一些實施例中,抗體係PD1AB-1。在一些實施例中,抗體係PD1AB-2。在一些實施例中,抗體係PD1AB-3。在一些實施例中,抗體係PD1AB-4。在一些實施例中,抗體係PD1AB-5。在一些實施例中,抗體係PD1AB-6。
在另一態樣中,本文提供之抗體或其抗原結合片段結合至人類PD-1或食蟹猴PD-1之區,包括表位。舉例而言,在一些實施例中,本文提供之抗體結合至包含人類PD-1之胺基酸殘基33至109之人類PD-1(SEQ ID NO:42)的區。在又一態樣中,本文提供之抗體結合至人類PD-1之特異性表位。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之殘基100-109(SEQ ID NO:43)中之至少一者。在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之殘基100-105(SEQ ID NO:44)中之至少一者。
在特定實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之至少一個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。在一些實
施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之至少一個選自由以下組成之群之殘基:L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之兩個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之三個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之四個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之五個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之六個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之七個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之八個或更多個選自由以下組成之群之殘基:
N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之九個或更多個選自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之所有十個來自由以下組成之群之殘基:N33、T51、S57、L100、N102、G103、R104、D105、H107及S109。
在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之N33。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之T51。在具體實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之S57。在一個具體實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之L100。在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之N102。在其他實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之G103。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之R104。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之G103及R104。在另一實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之D105。在一些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之H107。在某些實施例中,抗體或其抗原結合片段在結合至PD-1時結合至SEQ ID NO:42之胺基酸序列內之S109。
亦涵蓋上文所提及之胺基酸PD-1結合位點中之二者、三者、四者、五者、六者、七者、八者、九者、十者或更多者之任一組合。
在一態樣中,本文提供特異性結合至PD-1且可調節PD-1活性及/或表現(例如,活化PD-1信號傳導及/或抑制PD-1表現)之抗體。在某些實施例中,本文提供PD-1激動劑,其係特異性結合至人類PD-1之ECD且活化(例如,部分活化)至少一種PD-1活性(例如,抑制細胞介素產生)之本文提供之抗體。在某些實施例中,本文提供之PD-1激動劑係特異性結合至人類PD-1之ECD且下調PD-1表現之本文提供之抗體。在某些實施例中,本文提供如下抗體:特異性結合至PD-1且(a)減弱T細胞活性,例如如藉由細胞介素產生之抑制所測定;及/或(b)下調細胞中之PD-1表現。在某些實施例中,本文提供如下抗體:特異性結合至PD-1且(a)減弱T細胞活性,例如如藉由細胞介素產生之抑制所測定;(b)下調細胞中之PD-1表現;及/或(c)不抑制PD-L1及/或PD-L2結合至PD-1。在某些實施例中,特異性結合至PD-1之抗體結合至人類PD-1之ECD、或其人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
PD-1活性可與PD-1之任何活性(例如業內已知或闡述之彼等)相關。PD-1活性及PD-1信號傳導在本文中可互換使用。在某些態樣中,PD-1活
性係由結合至PD-1之PD-1配體(例如,PD-L1)誘導。可藉由本文所述或熟習此項技術者已知之方法(例如,西方墨點法、ELISA、免疫組織化學或流式細胞術)評價PD-1之表現程度。在某些實施例中,本文提供特異性結合至PD-1且降低PD-1表現之抗體。在某些實施例中,本文提供特異性結合至PD-1且減弱T細胞活性之抗體。在某些實施例中,本文提供特異性結合至PD-1且抑制細胞介素產生之抗體。在某些實施例中,本文提供特異性結合至PD-1且活化(例如,部分活化)PD-1信號傳導之抗體。在某些實施例中,特異性結合至PD-1之抗體結合至人類PD-1之ECD或其人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體減弱(例如,部分減弱)T細胞活性。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約10%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約15%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約20%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約25%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約35%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少
約40%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約45%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約55%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約60%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約65%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約70%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約80%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約85%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約90%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約98%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約99%。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體將T細胞活性減弱至少約100%。在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體可將T細胞活性減弱(例如,部分減弱)至少約25%至約65%。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價T細胞活性減弱。在一些實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法評價T細胞活性減弱。在某些實施例中,T細胞活性減弱係相對於在刺激存在下而無任何抗PD-1抗體之T細胞活性。在某些實施例中,T細胞活性減弱係相對於在刺激存在下具有無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之T細胞活性。T細胞活性之非限制性實例係細胞介素之分泌。在一些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、
IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在一些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在另一實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在其他實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-2分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提
供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-2分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-2分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MesoScaleTM Discovery(MSD)多工分析)評價IL-2分泌之抑制。在具體實施例中,IL-2分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-2分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-2分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、
PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)會抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-2分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-2分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-2分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,
本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-2分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-2分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-2分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-2分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-2分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-17分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約5%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約10%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約15%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約
20%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約25%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約35%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約40%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約45%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約50%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約55%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約65%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約70%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約80%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約85%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約95%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約98%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-17分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-17分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,
MSD多工分析)評價IL-17分泌之抑制。在具體實施例中,IL-17分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-17分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-17分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-17分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-17分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至
多約0.001nM之EC50抑制IL-17分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-17分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-17分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-17分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-17分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-17分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-17分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IFN-γ分
泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約5%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約10%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約15%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約25%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約30%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約35%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約40%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約45%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約50%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約55%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約60%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約65%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約70%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約75%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約80%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約85%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約90%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約95%。
在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約98%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IFN-γ分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IFN-γ分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IFN-γ分泌之抑制。在具體實施例中,IFN-γ分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IFN-γ分泌會被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IFN-γ分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另
一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IFN-γ分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分
析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-1分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,
本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-1分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-1分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-1分泌之抑制。在具體實施例中,IL-1分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-1分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-1分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-1分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約
5nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-1分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-1分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-1分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-1分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-1分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體
以至少約0.005nM之EC50抑制IL-1分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-1分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-6分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分
泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-6分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-6分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-6分泌之抑制。在具體實施例中,IL-6分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-6分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-6分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-6分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-6分
泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-6分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-6分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-6分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-6
分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-6分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-6分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-6分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-6分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-12分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本
文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-12分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-12分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-12分泌之抑制。在具體實施例中,IL-12分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-12分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-12分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、
PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-12分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-12分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-12分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個
實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-12分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-12分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-12分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-12分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-12分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-22分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約
20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-22分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-22分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,
MSD多工分析)評價IL-22分泌之抑制。在具體實施例中,IL-22分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-22分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-22分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-22分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-22分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至
多約0.001nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-22分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-22分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-22分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-22分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-22分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-22分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-22分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-22分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-22分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制IL-23分
泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗
體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將IL-23分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-23分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-23分泌之抑制。在具體實施例中,IL-23分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之IL-23分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之IL-23分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制IL-23分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制IL-23分泌。在其他實施
例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制IL-23分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制IL-23分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制IL-23分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制IL-23分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制IL-23分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制IL-23分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制IL-23分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制IL-23分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制IL-23分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。
在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制GM-CSF分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約35%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約70%。在另一實施例
中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將GM-CSF分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價GM-CSF分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價GM-CSF分泌之抑制。在具體實施例中,GM-CSF分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之GM-CSF分泌會被抑制。在其他實施例中,GM-CSF分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之GM-CSF分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM
之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在其他實施例中,本文提
供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制GM-CSF分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且抑制TNF-α分泌(例如,自細胞,例如T細胞)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約5%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約10%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約15%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約20%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約30%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約35%。在一個實施例
中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約45%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約50%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約60%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約75%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約80%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約90%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約95%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將TNF-α分泌抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價TNF-α分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價TNF-α分泌之抑制。在具體實施例中,TNF-α分泌相對於在不存在抗PD-1抗體下之TNF-α分泌會被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之TNF-α分泌會被抑制。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50抑制TNF-α分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50抑制TNF-α分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50抑制TNF-α分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50抑制
TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50抑制TNF-α分泌。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50抑制TNF-α分泌。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50抑制TNF-α分泌。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50抑制TNF-α分泌。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之其他方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,藉由MSD多工分析評價EC50。
在具體實施例中,本文提供之抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)特異性結合至PD-1且下調PD-1表現(例如,在細胞、例如T細胞中)。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約5%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約10%。在另一實施例
中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約15%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約20%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約25%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約30%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約35%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約40%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約45%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約50%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約55%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約60%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約65%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約70%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約75%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約80%。在一些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約85%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約90%。在其他實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約95%。在一個實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約98%。在另一實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約25%
或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價PD-1表現之下調。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,流式細胞術、西方墨點法、北方墨點法或RT-PCR)評價PD-1表現之下調。在具體實施例中,藉由流式細胞術評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由西方墨點法評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由北方墨點法評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由RT-PCR評價PD-1表現之下調。在具體實施例中,PD-1表現相對於在不存在抗PD-1抗體下之PD-1表現下調而下調。在其他實施例中,PD-1表現相對於在存在無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)下之PD-1表現下調而下調。
在某些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體(例如,抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體)下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約50nM之EC50下調PD-1表現。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約40nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約30nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約20nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約10nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約5nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約1nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.75nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.5nM之EC50下調PD-1表現。在其他實施例
中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.1nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.05nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.01nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.005nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至多約0.001nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約50nM之EC50下調PD-1表現。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約40nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約30nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約20nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約10nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約5nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約1nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.75nM之EC50下調PD-1表現。在其他實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.5nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.1nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.05nM之EC50下調PD-1表現。在一些實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.01nM之EC50下調PD-1表現。在另一實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.005nM之EC50下調PD-1表現。在一個實施例中,本文提供之抗PD-1抗體以至少約0.001nM之EC50下調PD-1表現。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,流式細胞術、西方墨點法、北方墨點
法或RT-PCR)評價EC50。在具體實施例中,藉由流式細胞術評價EC50。在另一實施例中,藉由西方墨點法評價EC50。在另一實施例中,藉由北方墨點法評價EC50。在另一實施例中,藉由RT-PCR評價EC50。
在某些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後6小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後8小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後10小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後12小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後14小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後16小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後18小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後20小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後22小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後24小時。在一些實施例中,與抗體接觸。在其他實施例中,與其抗原結合片段接觸。
在一些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調先於細胞介素抑制。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後
16小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且先於細胞介素抑制。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且先於細胞介素抑制。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且先於細胞介素抑制。
在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後16小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且係與細胞介素抑制同時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且係與細胞介素抑制同時。
在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後6小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後8小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後10小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後12小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後14小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後16小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後18小時,且係在細胞介素抑制之後。在一個實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後20小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後22小時,且係在細胞介素抑制之後。在另一實施例中,下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時,且係在細胞介素抑制之後。
本發明抗體可包含多株抗體。製備多株抗體之方法為熟習此項技術者已知。多株抗體可在哺乳動物中藉由(例如)一或多次注射免疫試劑及(若期望)佐劑來產生。通常,在哺乳動物中藉由多次皮下或腹膜內注射來注射免疫試劑及/或佐劑。免疫試劑可包括PD-1多肽或其融合蛋白。可有用地將免疫試劑偶聯至已知在經免疫之哺乳動物中具有免疫原性之蛋白質、或用蛋
白質及一或多種佐劑對哺乳動物實施免疫。該等免疫原性蛋白質之實例包括(但不限於)鑰孔帽貝血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白及大豆胰蛋白酶抑制劑。可採用之佐劑之實例包括Ribi、CpG、Poly 1C、弗式完全佐劑及MPL-TDM佐劑(單磷醯脂質A、合成海藻糖二棒狀黴菌酸酯)。免疫方案可由熟習此項技術者無需過度實驗來選擇。隨後可使哺乳動物出血,且分析血清之PD-1抗體效價。若期望,可對哺乳動物實施加強免疫直至抗體效價增加或達到平臺期。另外或或者,可如下文所述自經免疫動物獲得淋巴球用於自雜交瘤融合及製備單株抗體。
或者,本發明抗體可為單株抗體。單株抗體可使用首先由Kohler等人,1975,Nature 256:495-97闡述之雜交瘤方法製得或可藉由重組體DNA方法(例如,參見美國專利第4,816,567號)製得。
在雜交瘤方法中,如上文所述對小鼠或其他適當宿主動物(例如倉鼠)實施免疫以引發產生或能產生特異性結合至蛋白質之抗體的淋巴球用於免疫。或者,可在活體外對淋巴球實施免疫。在免疫後,分離淋巴球且隨後使用適宜融合試劑(例如聚乙二醇)將其與骨髓瘤細胞系融合以形成雜交瘤細胞(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice 59-103(1986))。
使由此製備之雜交瘤細胞在適宜培養基中接種並生長,在某些實施例中,該培養基含有一或多種抑制未融合、親代骨髓瘤細胞(亦稱為融合配偶體)之生長或存活的物質。舉例而言,若親代骨髓瘤細胞無酶次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉移酶(HGPRT或HPRT),則雜交瘤之選擇性培養基通常將包括次黃嘌呤、胺喋呤及胸苷(HAT培養基),其防止HGPRT缺陷細胞生長。
實例性融合配偶體骨髓瘤細胞係有效融合、支持藉由所選抗體產生細胞之抗體之穩定高程度產生、且對針對未融合親代細胞選擇之選擇性培養基敏感的彼等。實例性骨髓瘤細胞系係鼠類骨髓瘤系,例如SP-2及衍生物,例如自American Type Culture Collection(Manassas,VA)獲得之X63-Ag8-653細胞、及自Salk Institute Cell Distribution Center(San Diego,CA)獲得之源自MOPC-21及MPC-11小鼠腫瘤之彼等。亦已針對人類單株抗體之產生闡述人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系(Kozbor,1984,Immunol.133:3001-05;及Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63(1987))。
分析雜交瘤細胞生長之培養基用於針對抗原之單株抗體之產生。藉由免疫沈澱或藉由活體外結合分析(例如RIA或ELISA)測定由雜交瘤細胞產生之單株抗體之結合特異性。可藉由(例如)Munson等人,1980,Anal.Biochem.107:220-39中闡述之Scatchard分析測定單株抗體之結合親和性。
在鑑別產生期望特異性、親和力及/或活性之抗體之雜交瘤細胞後,可藉由限制稀釋程序亞選殖純系且藉由標準方法(Goding,上文文獻)使其生長。出於此目的之適宜培養基包括例如DMEM或RPMI-1640培養基。另外,可使雜交瘤細胞作為動物中之腹水腫瘤在活體內生長,例如藉由向小鼠中i.p.注射細胞。
可藉由習用抗體純化程序適宜地將亞純系分泌之單株抗體與培養基、腹水或血清分離,該等抗體純化程序係(例如)親和力層析(例如,使用蛋白A或蛋白G-Sepharose)或離子交換層析、羥基磷灰石層析、凝膠電泳、透析等。
編碼單株抗體之DNA可使用習用程序容易地分離並測序(例如,藉由
使用能特異性結合至編碼鼠類抗體之重鏈及輕鏈之基因的寡核苷酸探針)。雜交瘤細胞可用作該DNA之來源。分離後,可將DNA放入表現載體中,隨後將其轉染至原本不產生抗體蛋白之宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞)中,以在重組宿主細胞中合成單株抗體。關於編碼抗體之DNA在細菌中之重組表現的綜述文章包括Skerra等人,1993,Curr.Opinion in Immunol.5:256-62及Plückthun,1992,Immunol.Revs.130:151-88。
在一些實施例中,結合PD-1表位之抗體包含由核苷酸序列編碼之VH結構域之胺基酸序列及/或VL結構域之胺基酸序列,該核苷酸序列在嚴格條件下(例如,在6X氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中於約45℃下與過濾器結合之DNA雜交,之後在0.2X SSC/0.1% SDS中於約50℃至65℃下洗滌一或多次)、在高度嚴格條件下(例如,在6X SSC中於約45℃下與過濾器結合之核酸雜交,之後在0.1X SSC/0.2% SDS中於約68℃下洗滌一或多次)、或在彼等熟習此項技術者已知之其他嚴格雜交條件下與(1)編碼本文所述VH及/或VL結構域中之任一者之核苷酸序列之補體雜交。參見(例如)Current Protocols in Molecular Biology,第I卷,6.3.1-6.3.6及2.10.3(Ausubel 等人編輯,1989)。
在一些實施例中,結合PD-1表位之抗體包含由核苷酸序列編碼之VH CDR之胺基酸序列或VL CDR之胺基酸序列,該核苷酸序列在嚴格條件下(例如,在6X SSC中於約45℃下與過濾器結合之DNA雜交,之後在0.2X SSC/0.1% SDS中於約50℃至65℃下洗滌一或多次)、在高度嚴格條件下(例如,在6X SSC中於約45℃下與過濾器結合之核酸雜交,之後在0.1X SSC/0.2% SDS中於約68℃下洗滌一或多次)、或在彼等熟習此項技術者已
知之其他嚴格雜交條件下(例如,參見Ausubel等人,上文文獻)與編碼表1-2中繪示之VH CDR及/或VL CDR中之任一者之核苷酸序列之補體雜交。
在又一實施例中,單株抗體或抗體片段可自使用(例如)Antibody Phage Display:Methods and Protocols(O’Brien及Aitken編輯,2002)中所述之技術生成之抗體噬菌體文庫分離。原則上,藉由篩選含有展示融合至噬菌體外殼蛋白之抗體可變區(Fv)之各個片段之噬菌體的噬菌體文庫選擇合成抗體純系。針對期望抗原篩選該等噬菌體文庫。將表現能結合至期望抗原之Fv片段之純系吸附至抗原且由此與文庫中之非結合純系分離。隨後將結合純系自抗原溶析且藉由額外抗原吸附/溶析循環進一步富集。
可變結構域可在噬菌體上功能性展示為單鏈Fv(scFv)片段,其中VH及VL經由短的撓性肽共價連接,或展示為Fab片段,其中其各自融合至恆定結構域並以非共價方式相互作用,如(例如)Winter等人,1994,Ann.Rev.Immunol.12:433-55中所述。
VH及VL基因之譜可藉由PCR單獨選殖且隨機重組於噬菌體文庫中,隨後可搜索該等文庫用於抗原結合純系,如Winter等人,上文文獻中所述。來自經免疫來源之文庫可向免疫原提供高親和力抗體而無需構築雜交瘤。或者,可對天然譜進行選殖以提供針對廣泛範圍之非自身亦及自身抗原之人類抗體之單一來源而無需任何免疫,如Griffiths等人,1993,EMBO J 12:725-34所述。最後,亦可藉由以下方式以合成方式製得天然文庫:選殖來自幹細胞之未重排V-基因片段,及使用含有隨機序列之PCR引子編碼高度可變CDR3區並在活體外達成重排,如(例如)由Hoogenboom及Winter,1992,J.Mol.Biol.227:381-88所述。
文庫之篩選可藉由業內已知之各種技術完成。舉例而言,PD-1(例如,
PD-1多肽、片段或表位)可用於塗佈吸附板之孔,在貼附至吸附板之宿主細胞上表現或用於細胞分選,偶聯至生物素以用鏈黴抗生物素蛋白塗佈之珠粒捕獲,或用於淘選展示文庫之其他其他方法中。可藉由使用長洗滌及單價噬菌體展示(如Bass等人,1990,Proteins 8:309-14及WO 92/09690中所述)及藉由使用抗原之低塗佈密度(如Marks等人,1992,Biotechnol.10:779-83中所述)促進具有緩慢解離動力學(例如,良好結合親和力)之抗體之選擇。
抗PD-1抗體可藉由以下方式獲得:設計適宜抗原篩選程序以選擇目標噬菌體純系、之後使用來自目標噬菌體純系之VH及/或VL序列(例如,Fv序列)或來自VH及VL序列之各種CDR序列及Kabat等人(上文文獻)中所述之適宜恆定區(例如,Fc)序列構築全長抗PD-1抗體純系。
在另一實施例中,抗PD-1抗體係藉由使用以下中所述之方法生成:Bowers等人,2011,Proc Natl Acad Sci USA.108:20455-60,例如SHM-XHLTM平臺(AnaptysBio,San Diego,CA)。簡言之,在此方法中,在哺乳動物細胞系(例如,HEK293)中構築IgG之完全人類文庫作為起始文庫。選擇(例如,藉由FACS分選)展示結合至靶肽或表位之免疫球蛋白之哺乳動物細胞,隨後在活體外再現活化誘導之胞苷去胺酶(AID)觸發之體細胞高度突變以擴展初始選擇之抗體池之多樣性。在藉由偶合哺乳動物細胞表面展示與活體外體細胞高度突變進行若干輪親和力成熟後,生成高親和力、高特異性抗PD-1抗體。可用於生成抗體文庫及/或抗體親和力成熟之其他方法揭示於(例如)美國專利第8,685,897號及第8,603,930號及美國公開案第2014/0170705號、第2014/0094392號、第2012/0028301號、第2011/0183855號及第2009/0075378號中,其各自以引用方式併入本文中。
本發明提供結合至PD-1之抗體及抗體片段。在某些情況下,使用抗體片段而非全抗體存在優點。片段之較小大小容許快速清除,且可改良地進入細胞、組織或器官。關於某些抗體片段之綜述,參見Hudson等人,2003,Nature Med.9:129-34。
已研發用於產生抗體片段之各種技術。傳統上,該等片段係經由完整抗體之蛋白水解消解衍生(例如,參見Morimoto等人,1992,J.Biochem.Biophys.Methods 24:107-17;及Brennan等人,1985,Science 229:81-83)。然而,該等片段現可直接由重組宿主細胞產生。Fab、Fv及scFv抗體片段皆可在大腸桿菌或酵母細胞中表現並自其分泌,由此容許容易地產生大量該等片段。抗體片段可自上文論述之抗體噬菌體文庫分離。或者,Fab’-SH片段可直接自大腸桿菌回收並化學偶合以形成F(ab’)2片段(Carter等人,1992,Bio/Technology 10:163-67)。根據另一方法,F(ab’)2片段可直接自重組宿主細胞培養物分離。具有增加之活體內半衰期之包含補救受體結合表位殘基之Fab及F(ab’)2片段闡述於(例如)美國專利第5,869,046號中。熟練從業者將明瞭其他用於產生抗體片段之技術。在某些實施例中,抗體係單鏈Fv片段(scFv)(例如,參見WO 93/16185;美國專利第5,571,894號及第5,587,458號)。Fv及scFv具有不含恆定區之完整組合位點;因此,其可適於活體內使用期間之降低之非特異性結合。scFv融合蛋白可經構築以在scFv之胺基或羧基末端處產生效應物蛋白之融合(例如,參見Borrebaeck編輯,上文文獻)。抗體片段亦可為「直鏈抗體」,例如,如上文引用之參考文獻中所述。該等直鏈抗體可為單特異性或多特異性(例如雙特異性)的。
較小抗體源結合結構係亦稱作單一可變結構域抗體(sdAb)之單獨可
變結構域(V結構域)。某些類型之生物體駱駝科動物及軟骨魚具有安裝於Fc等效結構域結構上之高親和力單一V樣結構域作為其免疫系統之一部分。(Woolven等人,1999,Immunogenetics 50:98-101;及Streltsov等人,2004,Proc Natl Acad Sci USA.101:12444-49)。V樣結構域(在駱駝科動物中稱作VhH且在鯊魚中V-NAR)通常展示長的表面環,其容許靶抗原之腔之滲透。其亦藉由掩蔽疏水表面貼片穩定分離之VH結構域。
該等VhH及V-NAR結構域已用於改造sdAb。已使用自噬菌體文庫之選擇及產生穩定高結合VL-及VH源結構域之其他方法設計人類V結構域變體。
本文提供之抗體包括(但不限於)免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分,例如含有結合至PD-1表位之抗原結合位點之分子。本文提供之免疫球蛋白分子可為任何種類(例如IgG、IgE、IgM、IgD及IgA)或任何亞類(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)之免疫球蛋白分子。
抗體之變體及衍生物包括保留結合至PD-1表位之能力之抗體功能片段。實例性功能片段包括Fab片段(例如,含有抗原結合結構域且包含由二硫鍵橋接之輕鏈及重鏈之一部分的抗體片段);Fab’(例如,含有經由鉸鏈區包含Fab及重鏈之額外部分之單一抗原結合結構域的抗體片段);F(ab’)2(例如,重鏈之鉸鏈區中藉由鏈間二硫鍵之接合之兩個Fab’分子;Fab’分子可針對相同或不同表位);雙特異性Fab(例如,具有兩個抗原結合結構域之Fab分子,該等抗原結合結構域可各自針對不同表位);包含可變區之單鏈,亦稱為scFv(例如,藉由10-25個胺基酸連接在一起之抗體之單一輕鏈及重鏈之可變抗原結合決定區);二硫鍵連接之Fv、或dsFv(例如,藉由二硫鍵連接在一起之抗體之單一輕鏈及重鏈之可變抗原結合決定區);駱駝化
VH(例如,抗體之單一重鏈之可變抗原結合決定區,其中VH界面處之一些胺基酸係在天然駱駝抗體之重鏈中發現之彼等);雙特異性scFv(例如,具有兩個抗原結合結構域之scFv或dsFv分子,該等抗原結合結構域可針對不同表位);雙價抗體(例如,二聚化scFv,在第一scFv之VH結構域與第二scFv之VL結構域裝配及第一scFv之VL結構域與第二scFv之VH結構域裝配時形成;雙價抗體之兩個抗原結合區可針對相同或不同表位);及三價抗體(例如,三聚化scFv,以類似於雙價抗體之方式形成,但其中在單一複合物中產生三個抗原結合結構域;三個抗原結合結構域可針對相同或不同表位)。
在一些實施例中,本文提供之抗體可為結合PD-1(包括人類及/或食蟹猴PD-1)之人類化抗體。舉例而言,本發明之人類化抗體可包含一或多個如表1-2中所示之CDR。人類化非人類抗體之各種方法為業內已知。舉例而言,人類化抗體可具有一或多個來自非人類來源之引入其中之胺基酸殘基。該等非人類胺基酸殘基經常稱為「輸入」殘基,其通常取自「輸入」可變結構域。人類化可遵循(例如)以下之方法藉由用超變區序列取代人類抗體之相應序列來實施:Jones等人,1986,Nature 321:522-25;Riechmann等人,1988,Nature 332:323-27;及Verhoeyen等人,1988,Science 239:1534-36)。
在一些情形下,藉由CDR移植構築人類化抗體,其中親代非人類抗體(例如,齧齒類動物)之6個CDR之胺基酸序列移植至人類抗體框架上。舉例而言,Padlan等人確定實際上CDR中僅約三分之一殘基接觸抗原,且將該等殘基稱作「特異性決定殘基」或SDR(Padlan等人,1995,FASEB J.
9:133-39)。在SDR移植之技術中,僅SDR殘基移植至人類抗體框架上(例如,參見Kashmiri等人,2005,Methods 36:25-34)。
欲用於製備人類化抗體之人類可變結構域(輕及重)之選擇對於減小抗原性可為重要的。舉例而言,根據所謂的「最佳擬合」方法,針對已知人類可變結構域序列之整個文庫來篩選非人類(例如齧齒類動物)抗體之可變結構域之序列。將最接近齧齒類動物之人類序列選擇為用於人類化抗體之人類框架(Sims等人,1993,J.Immunol.151:2296-308;及Chothia等人,1987,J.Mol.Biol.196:901-17)。另一方法使用源自輕鏈或重鏈之特定亞組之所有人類抗體之共有序列的特定框架。相同框架可用於若干不同人類化抗體(Carter等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-89;及Presta等人,1993,J.Immunol.151:2623-32)。在一些情形下,框架係源自最豐富之人類亞類VL6亞組I(VL6I)及VH亞組III(VHIII)之共有序列。在另一方法中,人類種系基因用作框架區之來源。
在替代典範中,基於CDR之比較,所謂超人類化、FR同源性無關。該方法由比較非人類序列與功能人類種系基因譜組成。隨後選擇編碼鼠類序列之相同或緊密相關正準結構之彼等基因。接下來,在與非人類抗體共用正準結構之基因內,選擇CDR內具有最高同源性之彼等作為FR供體。最後,將非人類CDR移植至該等FR上(例如,參見Tan等人,2002,J.Immunol.169:1119-25)。
另外通常期望人類化抗體並保留其對抗原之親和力及其他有利之生物性質。為達成此目標,根據一種方法,藉由使用親代與人類化序列之三維模型分析親代序列及各種概念性人類化產物之方法來製備人類化抗體。三維免疫球蛋白模型通常有市售且為彼等熟習此項技術者所熟悉。可使用
電腦程式,該等電腦程式闡釋並展示所選候選免疫球蛋白序列之可能的三維構型結構。該等程式包括(例如)WAM(Whitelegg及Rees,2000,Protein Eng.13:819-24)、Modeller(Sali及Blundell,1993,J.Mol.Biol.234:779-815)及Swiss PDB Viewer(Guex及Peitsch,1997,Electrophoresis 18:2714-23)。藉由檢查該等顯示內容可分析殘基在候選免疫球蛋白序列功能發揮中之可能作用,例如分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原之能力的殘基。以此方式,可自受體序列及輸入序列選擇FR殘基並組合以達成期望抗體特性,例如對靶抗原之親和力增加。一般而言,超變區殘基直接且最為實質性地參與影響抗原結合。
抗體人類化之另一方法係基於抗體人類性之度量,稱作人類序列含量(Human String Content,HSC)。此方法比較小鼠序列與人類種系基因之譜,且將差異評分為HSC。隨後藉由使靶序列之HSC最大化、而非使用總鑑別量度人類化靶序列以生成多種不同人類化變體(Lazar等人,2007,Mol.Immunol.44:1986-98)。
除上述方法外,可使用經驗方法以生成並選擇人類化抗體。該等方法包括基於使用富集技術或高通量篩選技術之人類化變體之大文庫之生成及最佳純系之選擇的彼等。抗體變體可自噬菌體、核糖體及酵母展示文庫以及藉由細菌群落篩選分離(例如,參見Hoogenboom,2005,Nat.Biotechnol.23:1105-16;Dufner等人,2006,Trends Biotechnol.24:523-29;Feldhaus等人,2003,Nat.Biotechnol.21:163-70;及Schlapschy等人,2004,Protein Eng.Des.Sel.17:847-60)。
在FR文庫方法中,在FR中之特定位置處引入殘基變體之集合,之後篩選文庫以選擇最佳支持移植CDR之FR。欲取代之殘基可包括鑑別為潛在
地促進CDR結構(例如,參見Foote及Winter,1992,J.Mol.Biol.224:487-99)或來自由Baca等人(1997,J.Biol.Chem.272:10678-84)鑑別之靶殘基之更受限組之「標」殘基之一些或全部。
在FR改組中,將全FR與非人類CDR組合,而非產生所選殘基變體之組合文庫(例如,參見Dall’Acqua等人,2005,Methods 36:43-60)。文庫可經篩選用於在兩步製程(首先人類化VL、之後VH)中結合。或者,可使用一步FR改組製程。已顯示該製程較兩步篩選更有效,此乃因所得抗體展現改良之生物化學及物理化學性質,包括增強之表現、增加之親和力及熱穩定性(例如,參見Damschroder等人,2007,Mol.Immunol.44:3049-60)。
「人類化改造」方法係基於基本最小特異性決定子(MSD)之實驗鑑別且係基於非人類片段至人類FR之文庫之依序置換及結合之評價。其始於非人類VH及VL鏈之CDR3之區且逐漸將非人類抗體之其他區置換為人類FR,包括VH及VL二者之CDR1及CDR2。此方法通常引起表位保留及自具有不同人類V-區段CDR之多個亞類鑑別抗體。人類化改造容許分離與人類種系基因抗體91-96%同源之抗體(例如,參見Alfenito,Cambridge Healthtech Institute’s Third Annual PEGS,The Protein Engineering Summit,2007)。
「人類改造」方法涉及藉由對抗體之胺基酸序列進行特定改變來改變非人類抗體或抗體片段(例如小鼠或嵌合抗體或抗體片段),以便產生在人類中具有降低免疫原性、但保留初始非人類抗體之期望結合性質之經修飾抗體。通常,該技術涉及將非人類(例如,小鼠)抗體之胺基酸殘基分類為「低風險」、「中等風險」或「高風險」殘基。分類係使用整體風險/回報計算來實施,該計算評估進行特定取代(例如,針對人類中之免疫原性)針
對該取代影響所得抗體之摺疊之風險的預測益處。可藉由將非人類抗體之可變區之胺基酸序列與特異性或共有人類抗體序列之相應區比對來選擇在非人類(例如,小鼠)抗體序列之給定位置(例如,低或中等風險)處欲取代之特定人類胺基酸殘基。根據比對,可用非人類序列中低或中等風險位置處之胺基酸殘基取代人類抗體序列中之相應殘基。製備人類改造之蛋白質之技術更詳細闡述於Studnicka等人,1994,Protein Engineering 7:805-14;美國專利第5,766,886號;第5,770,196號;第5,821,123號;及第5,869,619號;及PCT公開案WO 93/11794中。
可藉由組合選自人類源噬菌體展示文庫之組合Fv純系可變結構域序列與人類恆定結構域序列構築人類抗PD-1抗體。或者,本發明之人類單株抗PD-1抗體可藉由雜交瘤方法製備。用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類異源骨髓瘤細胞系已由(例如)Kozbor,1984,J.Immunol.133:3001-05;Brodeur等人,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications 51-63(1987);及Boerner等人,1991,J.Immunol.147:86-95闡述。
亦可產生轉基因動物(例如小鼠),其在實施免疫後能夠在不產生內源性免疫球蛋白之情況下產生完整人類抗體譜。表現人類抗體譜之轉基因小鼠用於產生針對眾多種潛在藥物靶標之高親和力人類序列單株抗體(例如,參見Jakobovits,A.,1995,Curr.Opin.Biotechnol.6(5):561-66;Brüggemann及Taussing,1997,Curr.Opin.Biotechnol.8(4):455-58;美國專利第6,075,181號及第6,150,584號;及Lonberg等人,2005,Nature Biotechnol.23:1117-25)。
或者,人類抗體可經由產生針對靶抗原之抗體之人類B淋巴球(例如,該等B淋巴球可自個體回收或可在活體外經免疫)之無限增殖來製備(例如,參見Cole等人,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy (1985);Boerner等人,1991,J.Immunol.147(1):86-95;及美國專利第5,750,373號)。
基因改組亦可用於自非人類(例如齧齒類動物)抗體衍生人類抗體,其中人類抗體與起始非人類抗體具有類似親和力及特異性。根據此方法(其亦稱作「表位壓印」或「引導選擇」),藉由如本文所述之噬菌體展示技術獲得之非人類抗體片段之重鏈或輕鏈可變區經人類V結構域基因之譜置換,從而產生非人類鏈/人類鏈scFv或Fab嵌合體之群體。經抗原之選擇可分離非人類鏈/人類鏈嵌合scFv或Fab,其中人類鏈恢復在移除原代噬菌體展示純系中之相應非人類鏈時破壞之抗原結合位點(例如,表位引導(壓印)人類鏈配偶體之選擇)。在重複該製程以置換其餘非人類鏈時,獲得人類抗體(例如,參見PCT WO 93/06213;及Osbourn等人,2005,Methods 36:61-68)。不同於藉由CDR移植之非人類抗體之傳統人類化,此技術提供完全人類抗體,其無非人類來源之FR或CDR殘基。朝向細胞表面抗原引導選擇以人類化小鼠抗體之實例包括卵巢癌細胞上存在之葉酸鹽結合蛋白(例如,參見Figini等人,1998,Cancer Res.58:991-96)及在肝細胞癌上高度表現之CD147(例如,參見Bao等人,2005,Cancer Biol.Ther.4:1374-80)。
引導選擇方法之潛在缺點在於一條抗體鏈之改組、同時保持其他恆定可引起表位漂移。為維持由非人類抗體識別之表位,可施加CDR保留(例如,參見Klimka等人,2000,Br.J.Cancer.83:252-60;及Beiboer等人,2000,J.Mol.Biol.296:833-49)。在此方法中,通常保留非人類VH CDR3,
此乃因此CDR可在抗原結合位點之中心處且可為用於抗原識別之抗體之最重要區。然而,在一些情況下,可保留非人類抗體之VH CDR3及VL CDR3以及VH CDR2、VL CDR2及VL CDR1。
雙特異性抗體係對至少兩種不同抗原具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中,雙特異性抗體係人類或人類化抗體。在某些實施例中,結合特異性中之一者係針對PD-1且另一者係針對任一其他抗原。在一些實施例中,結合特異性中之一者係針對PD-1,且另一者係針對在表現PD-1之細胞上表現之另一表面抗原。在某些實施例中,雙特異性抗體可結合至PD-1之兩個不同表位。雙特異性抗體可製備為全長抗體或抗體片段(例如,F(ab’)2雙特異性抗體)。
製備雙特異性抗體之方法為業內已知,例如藉由兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對之共表現,其中兩條重鏈具有不同特異性(例如,參見Milstein及Cuello,1983,Nature 305:537-40)。關於生成雙特異性抗體之其他詳細內容,參見(例如)Bispecific Antibodies(Kontermann編輯,2011)。
多價抗體較二價抗體可更快地由表現抗體結合之抗原之細胞內化(及/或分解代謝)。本發明抗體可為具有三個或更多個抗原結合位點之多價抗體(其不屬IgM種類)(例如,四價抗體),其可藉由編碼抗體之多肽鏈之核酸之重組表現容易地產生。多價抗體可包含二聚化結構域及三個或更多個抗原結合位點。在某些實施例中,二聚化結構域包含Fc區或鉸鏈區(或由其組成)。在此情況下,抗體包含Fc區及Fc區之胺基末端之三個或更多個抗原結合位點。在某些實施例中,多價抗體包含3個至約8個抗原結合位點(或由其
組成)。在一個該實施例中,多價抗體包含4個抗原結合位點(或由其組成)。多價抗體包含至少一個多肽鏈(例如,兩個多肽鏈),其中多肽鏈包含兩個或更多個可變結構域。舉例而言,多肽鏈可包含VD1-(X1)n-VD2-(X2)n-Fc,其中VD1係第一可變結構域,VD2係第二可變結構域,Fc係Fc區之一個多肽鏈,X1及X2代表胺基酸或多肽,且n係0或1。舉例而言,多肽鏈可包含:VH-CH1-撓性連接體-VH-CH1-Fc區鏈;或VH-CH1-VH-CH1-Fc區鏈。本文中之多價抗體可進一步包含至少兩個(例如,四個)輕鏈可變結構域多肽。本文中之多價抗體可(例如)包含約2至約8個輕鏈可變結構域多肽。本文涵蓋之輕鏈可變結構域多肽包含輕鏈可變結構域,且視情況進一步包含CL結構域。
可期望藉由Fc改造修飾本文提供之抗PD-1抗體。在某些實施例中,抗體之Fc區之修飾可降低或消除抗體之效應物功能。在某些實施例中,效應物功能係ADCC、ADCP及/或CDC。在一些實施例中,效應物功能係ADCC。在其他實施例中,效應物功能係ADCP。在其他實施例中,效應物功能係CDC。在一個實施例中,效應物功能係ADCC及ADCP。在一個實施例中,效應物功能係ADCC及CDC。在一個實施例中,效應物功能係ADCP及CDC。在一個實施例中,效應物功能係ADCC、ADCP及CDC。此可藉由在抗體之Fc區中引入一或多個胺基酸取代來達成。舉例而言,顯示在233-236位處使用IgG2殘基及在327、330及331位處使用IgG4殘基取代至人類IgG1中可大大降低ADCC及CDC(例如,參見Armour等人,1999,Eur.J.Immunol.29(8):2613-24;及Shields等人,2001,J.Biol.Chem.276(9):6591-604)。本文中別處提供其他Fc變體。
為增加抗體之血清半衰期,可將補救受體結合表位納入抗體(尤其抗體片段)中,例如如美國專利第5,739,277號中所述。術語「補救受體結合表位」係指IgG分子(例如,IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之負責增加IgG分子之活體內血清半衰期之Fc區的表位。
本發明涵蓋與本文揭示之抗PD-1抗體特異性結合至相同表位之非免疫球蛋白結合試劑。在一些實施例中,非免疫球蛋白結合試劑鑑別為在競爭性結合分析中置換本發明之抗PD-1抗體或由其置換的試劑。該等替代結合試劑可包括(例如)業內已知之經改造蛋白架構中之任一者。該等架構可包含一或多個如表1-2中所示之CDR。該等架構包括(例如)基於脂質運載蛋白架構之抗運載蛋白(anticalin),即特徵在於支撐四個形成配體結合位點之超變環之剛性β-桶之蛋白結構。可藉由環區中之靶向隨機誘變、以及功能展示及引導選擇改造新穎結合特異性(例如,參見Skerra,2008,FEBS J.275:2677-83)。其他適宜架構可包括(例如)阿德樂汀(adnectin)或單一抗體,其基於人類纖連蛋白III之第十細胞外結構域(例如,參見Koide及Koide,2007,Methods Mol.Biol.352:95-109);雙鏈抗體,其基於葡萄球菌蛋白A之Z結構域(例如,參見Nygren等人,2008,FEBS J.275:2668-76);DARPin,其基於錨蛋白重複蛋白(例如,參見Stumpp等人,2008,Drug.Discov.Today 13:695-701);芬諾體(fynomer),其基於人類Fyn蛋白激酶之SH3結構域(例如,參見Grabulovski等人,2007,J.Biol.Chem.282:3196-204);阿非汀(affitin),其基於來自硫化葉菌屬(Sulfolobus acidolarius)之Sac7d(例如,參見Krehenbrink等人,2008,J.Mol.Biol.383:1058-68);親和素,其基於人類y-B-晶狀體蛋白(例如,參見Ebersbach
等人,2007,J.Mol.Biol.372:172-85);高親和性多聚物,其基於膜受體蛋白之A結構域(例如,參見銀Silverman等人,2005,Biotechnol.23:1556-61);富含半胱胺酸之打結素肽(例如,參見Kolmar,2008,FEBS J.275:2684-90);及經改造之Kunitz型抑制劑(例如,參見Nixon及Wood,2006,Curr.Opin.Drug.Discov.Dev.9:261-68)。關於綜述,參見(例如)Gebauer及Skerra,2009,Curr.Opin.Chem.Biol.13:245-55。
在一些實施例中,涵蓋結合至PD-1或本文所述之抗體之胺基酸序列修飾。舉例而言,可期望改良抗體之結合親和性及/或其他生物性質,包括(但不限於)特異性、熱穩定性、表現程度、效應物功能、醣基化、降低之免疫原性或溶解性。因此,除本文提供之抗PD-1抗體外,預期亦可製備抗PD-1抗體變體。舉例而言,抗PD-1抗體變體可藉由向編碼DNA中引入適當核苷酸變化及/或藉由合成期望抗體或多肽來製備。明瞭胺基酸變化之熟習此項技術者可改變抗PD-1抗體之轉譯後製程(例如改變醣基化位點之數目或位置或改變膜錨固特徵)。
在一些實施例中,本文提供之抗體係藉由(例如)任一類型之分子與抗體之共價附接經化學修飾。抗體衍生物可包括藉由(例如)藉由已知保護/阻斷基團、化學解離、蛋白水解解離、連接至細胞配體或其他蛋白質等增加或減少醣基化、乙醯化、聚乙二醇化、磷酸化、醯胺化、衍生經化學修飾的抗體。另外,抗體可含有一或多個非典型胺基酸。
變化可為一或多個編碼抗體或多肽之密碼子之取代、缺失或插入,與天然序列抗體或多肽相比,此引起胺基酸序列變化。胺基酸取代可為用具有類似結構及/或化學性質之另一胺基酸置換一個胺基酸、例如用絲胺酸置
換白胺酸、例如保守胺基酸置換的結果。插入或缺失可視情況在約1至5個胺基酸之範圍內。在某些實施例中,取代,缺失或插入包括相對於初始分子少於25個胺基酸取代、少於20個胺基酸取代、少於15個胺基酸取代、少於10個胺基酸取代、少於5個胺基酸取代、少於4個胺基酸取代、少於3個胺基酸取代或少於2個胺基酸取代。在具體實施例中,取代係在一或多個預測非必需胺基酸殘基處進行之保守胺基酸取代。所容許變化可藉由系統性進行序列中胺基酸之插入、缺失或取代及測試所得變體由全長或成熟天然序列展現之活性來測定。
胺基酸序列插入包括胺基-及/或羧基末端融合物(長度在一個殘基至含有上百或更多殘基之多肽範圍內)、以及單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N-末端甲二磺醯殘基之抗體。抗體分子之其他插入變體包括抗體之N末端或C末端與酶(例如,用於抗體針對之酶前藥療法)或延長抗體血清半衰期之多肽之融合物。
抗體之生物性質之顯著改變係藉由選擇取代完成,該等取代對於維持以下之效應顯著不同:(a)取代區域中多肽主鏈之結構,例如呈摺疊或螺旋構象形式,(b)靶位點處分子之電荷或疏水性,或(c)側鏈之大小。或者,可進行保守(例如,具有類似性質及/或側鏈之胺基酸基團內)取代,以便維持或不顯著改變性質。胺基酸可根據其側鏈之性質之類似性分組(例如,參見Lehninger,Biochemistry 73-75(2d ed.1975)):(1)非極性:Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M);(2)不帶電極性:Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q);(3)酸性:Asp(D)、Glu(E);及(4)鹼性:Lys(K)、Arg(R)、His(H)。
或者,天然殘基可基於常見側鏈性質分成若干組:(1)疏水性:正白
胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile;(2)中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;(3)酸性:Asp、Glu;(4)鹼性:His、Lys、Arg;(5)影響鏈定向之殘基:Gly、Pro;及(6)芳香族:Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將使得需要將該等種類之一者之成員與另一種類交換。該等經取代之殘基亦可引入保守取代位點或其餘(非保守)位點中。因此,在一個實施例中,結合至PD-1表位之抗體或其片段包含與本文提供之鼠類單株抗體之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致之胺基酸序列。在一個實施例中,結合至PD-1表位之抗體或其片段包含與表1-6中繪示之胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、或至少99%一致的胺基酸序列。在另一實施例中,結合至PD-1表位之抗體或其片段包含與表2中繪示之VH CDR胺基酸序列及/或表1中繪示之VL CDR胺基酸序列至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%一致的VH CDR及/或VL CDR胺基酸序列。變化可使用業內已知之方法(例如寡核苷酸介導之(定點)誘變、丙胺酸掃描及PCR誘變)來進行。定點誘變(例如,參見Carter,1986,Biochem J.237:1-7;及Zoller等人,1982,Nucl.Acids Res.10:6487-500)、盒誘變(例如,參見Wells等人,1985,Gene 34:315-23)或其他已知技術可在選殖DNA上實施以產生抗PD-1抗體變體DNA。
任何不參與維持抗PD-1抗體之適當構象之半胱胺酸殘基亦可經(例
如)另一胺基酸(例如丙胺酸或絲胺酸)取代,以改良分子之氧化穩定性並防止異常交聯。相反,可將半胱胺酸鍵添加至抗PD-1抗體以改良其穩定性(例如,在抗體係諸如Fv片段等抗體片段時)。
在一些實施例中,本發明之抗PD-1抗體分子係「去免疫」抗體。「去免疫」抗PD-1抗體係源自人類化或嵌合抗PD-1抗體之抗體,與各別初始非去免疫抗體相比,其具有其胺基酸序列之一或多個變化,從而引起抗體之免疫原性降低。用於生成該等抗體突變體之程序之一涉及抗體分子之T細胞表位之鑑別及移除。在第一步驟中,抗體分子之免疫原性可藉由如業內已知之若干方法、例如藉由活體外測定T細胞表位或在電腦中預測該等表位來測定。一旦鑑別出T細胞表位功能之關鍵殘基,可進行突變以移除免疫原性並保留抗體活性。關於綜述,參見(例如)Jones等人,2009,Methods in Molecular Biology 525:405-23。
在一些實施例中,可藉由活體外親和力成熟製備與親代抗體相比具有改良性質(例如親和力、穩定性或表現程度)之抗體變體。與天然原型一樣,活體外親和力成熟係基於突變及選擇之原則。抗體之文庫在生物體(例如,噬菌體、細菌、酵母或哺乳動物細胞)之表面上或與其編碼mRNA或DNA結合(例如,共價或非共價)展示為Fab、scFv或V結構域片段。所展示抗體之親和力選擇容許分離攜帶編碼抗體之遺傳資訊之生物體或複合物。使用展示方法(例如噬菌體展示)之兩輪或三輪突變及選擇通常產生具有低奈莫耳範圍內之親和力之抗體片段。親和力成熟抗體可具有奈莫耳或甚至皮莫耳之對靶抗原之親和力。
噬菌體展示係抗體之展示及選擇之廣泛傳播之方法。抗體在Fd或M13
噬菌體表面上展示為與噬菌體外殼蛋白之融合物。選擇涉及暴露於抗原以容許噬菌體展示之抗體結合其靶標(即稱作「淘選」之過程)。回收結合至抗原之噬菌體並使用其感染細菌以產生噬菌體用於其他輪之選擇。關於綜述,參見(例如)Hoogenboom,2002,Methods.Mol.Biol.178:1-37;及Bradbury及Marks,2004,J.Immunol.Methods 290:29-49。
在酵母展示系統(例如,參見Boder等人,1997,Nat.Biotech.15:553-57;及Chao等人,2006,Nat.Protocols 1:755-68)中,抗體可展示為單鏈可變融合物(scFv),其中重鏈及輕鏈由撓性連接體連接。scFv融合至酵母凝集素蛋白Aga2p之黏附亞單位,其經由與Aga1p之二硫鍵附接至酵母細胞壁。經由Aga2p之蛋白質之展示將蛋白質離開細胞表面,從而最小化與酵母細胞壁上之其他分子的潛在相互作用。使用磁分離及流式細胞術篩選文庫以選擇具有改良親和力或穩定性之抗體。藉由用生物素化抗原及二級試劑(例如與螢光團偶聯之鏈黴抗生物素蛋白)標記酵母來測定與可溶性目標抗原之結合。可經由對scFv側翼之血球凝集素或c-Myc表位標識進行免疫螢光標記來量測抗體之表面表現之變化。已顯示表現與所展示蛋白之穩定性相關,且因此,可針對改良之穩定性以及親和力選擇抗體(例如,參見Shusta等人,1999,J.Mol.Biol.292:949-56)。酵母展示之額外優點係所展示蛋白質在真核酵母細胞之內質網中摺疊,從而利用內質伴護蛋白及品質控制機制。一旦成熟完成,則可便捷地「滴定」抗體親和力,同時在酵母表面上展示,從而消除了對每一純系之表現及純化的需要。酵母表面展示之理論限制係較其他展示方法之潛在更小的功能文庫大小;然而,最近方法使用酵母細胞之交配系統以產生估計為1014大小的組合多樣性(例如,參見美國專利公開案2003/0186374;及Blaise等人,2004,Gene
342:211-18)。
在核糖體展示中,生成抗體-核糖體-mRNA(ARM)複合物用於在無細胞之系統中進行選擇。編碼特定抗體文庫之DNA文庫與缺少終止密碼子之間隔序列遺傳融合。此間隔序列在轉譯時仍附接至肽基tRNA並佔據核糖體隧道,且由此容許目標蛋白自核糖體突出並摺疊。mRNA、核糖體及蛋白質之所得複合物可結合至表面結合之配體,從而容許經由與配體之親和力捕獲同時分離抗體及其編碼mRNA。隨後將核糖體結合之mRNA逆轉錄回cDNA,其可隨後經歷誘變並用於下一輪選擇(例如,參見Fukuda等人,2006,Nucleic Acids Res.34:e127)。在mRNA展示中,使用嘌呤黴素作為銜接分子建立抗體與mRNA之間之共價鍵(Wilson等人,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98:3750-55)。
由於該等方法完全在活體外實施,故其提供超過其他選擇技術之兩個主要優點。首先,文庫之多樣性不受細菌細胞之轉變效率限制,而是僅受試管中存在之核糖體及不同mRNA分子的數目限制。其次,在每輪選擇後可容易地引入隨機突變,例如藉由非校對聚合酶,此乃因在任何多樣化步驟後不必轉變文庫。
在哺乳動物細胞展示系統(例如,參見Bowers等人,2011,Proc Natl Acad Sci USA.108:20455-60)中,基於接合至預重組D(J)區之種系序列V-基因區段構築IgG之完全人類文庫。重鏈及輕鏈之全長V區與人類重鏈及輕鏈恆定區組裝並轉染至哺乳動物細胞系(例如,HEK293)中。將經轉染之文庫擴增並使其經受針對鏈黴抗生物素蛋白(SA)偶聯之磁性珠粒的若干輪負向選擇,之後針對經生物素化靶蛋白、肽片段或表位塗佈之SA偶聯的磁性珠粒進行一輪陽性選擇。擴增陽性選擇之細胞,且隨後藉由多輪FACS分
選,以分離展示特異性結合至靶蛋白、肽片段或表位之抗體的單細胞純系。來自該等單細胞純系之重鏈及輕鏈對用AID再轉染以進一步成熟。若干輪哺乳動物細胞展示以及AID觸發之體細胞高度突變生成高特異性、高親和力抗體。
亦可以靶向方式或經由隨機引入將多樣性引入抗體文庫之CDR或全部V基因中。前一方法包括經由高或低程度之誘變依序靶向抗體之所有CDR或靶向體細胞高度突變之分離熱點(例如,參見Ho等人,2005,J.Biol.Chem.280:607-17)或在實驗基礎或結構原因上懷疑影響親和力之殘基。在具體實施例中,體細胞高度突變係藉由AID觸發之體細胞高度突變、例如使用SHM-XELTM平臺(AnaptysBio,San Diego,CA)來實施。可使用大腸桿菌突變株、利用DNA聚合酶(例如,參見Hawkins等人,1992,J.Mol.Biol.226:889-96)或RNA複製酶之易錯複製在整個V基因中引入隨機突變。亦可藉由經由DNA改組或類似技術置換天然多樣性之區來引入多樣性(例如,參見Lu等人,2003,J.Biol.Chem.278:43496-507;美國專利第5,565,332號及第6,989,250號)。替代技術靶向延伸至框架-區殘基中之超變環(例如,參見Bond等人,2005,J.Mol.Biol.348:699-709)在CDR中使用環缺失及插入或使用基於雜交之多樣化(例如,參見美國專利公開案第2004/0005709號)。在CDR中生成多樣性之額外方法揭示於(例如)美國專利第7,985,840號中。可用於生成抗體文庫及/或抗體親和力成熟之其他方法揭示於(例如)美國專利第8,685,897號及第8,603,930號及美國公開案第2014/0170705號、第2014/0094392號、第2012/0028301號、第2011/0183855號及第2009/0075378號中,其各自以引用方式併入本文中。
文庫之篩選可藉由業內已知之各種技術完成。舉例而言,PD-1可固定
於固體載體、管柱、針或纖維素/聚(二氟亞乙烯)膜/其他過濾器上,在貼附於吸附板或用於細胞分選之宿主細胞上表現,或偶聯至生物素用於利用鏈黴抗生物素蛋白塗佈之珠粒捕獲或用於淘選展示文庫之任何其他方法中。
關於活體外親和力成熟方法之綜述,參見(例如)Hoogenboom,2005,Nature Biotechnology 23:1105-16;Quiroz及Sinclair,2010,Revista Ingeneria Biomedia 4:39-51;及其中之參考文獻。
抗PD-1抗體之共價修飾包括於本發明之範疇內。共價修飾包括使抗PD-1抗體之靶向胺基酸殘基與能夠與抗PD-1抗體之所選側鏈或N-或C-末端殘基反應的有機衍生劑反應。其他修飾包括麩胺醯胺醯基及天冬醯胺醯基殘基分別去醯胺為相應麩胺醯基及天冬胺醯殘基、脯胺酸及離胺酸之羥基化、絲胺醯或蘇胺醯殘基之羥基的磷酸化、離胺酸、精胺酸及組胺酸側鏈之α-胺基的甲基化(例如,參見Creighton,Proteins:Structure and Molecular Properties 79-86(1983))、N-末端胺之乙醯化及任何C-末端羧基之醯胺化。
本發明之範疇內包括之抗PD-1抗體之其他類型之共價修飾包括改變抗體或多肽之天然醣基化型式(例如,參見Beck等人,2008,Curr.Pharm.Biotechnol.9:482-501;及Walsh,2010,Drug Discov.Today15:773-80)、及以(例如)美國專利第4,640,835號、第4,496,689號、第4,301,144號、第4,670,417號、第4,791,192號或第4,179,337號中所述之方式將抗體連接至多種非蛋白質性聚合物(例如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯)中之一者。
本發明之抗PD-1抗體亦可經修飾以形成包含與另一異源多肽或胺基
酸序列(例如表位標識(例如,參見Terpe,2003,Appl.Microbiol.Biotechnol.60:523-33)或IgG分子之Fc區(例如,參見Aruffo,Antibody Fusion Proteins 221-42(Chamow及Ashkenazi編輯,1999)))融合之抗PD-1抗體的嵌合分子。
本文亦提供包含結合至PD-1抗原及異源多肽之本文提供之抗體的融合蛋白。在一些實施例中,與抗體融合之異源多肽可用於將抗體靶向具有細胞表面表現之PD-1之細胞。
本文亦提供結合至PD-1抗原之抗體組。在具體實施例中,抗體組具有不同締合速率、不同解離速率、對PD-1抗原之不同親和力及/或對PD-1抗原之不同特異性。在一些實施例中,該等組包含約10、約25、約50、約75、約100、約125、約150、約175、約200、約250、約300、約350、約400、約450、約500、約550、約600、約650、約700、約750、約800、約850、約900、約950或約1000或更多個抗體或由其組成。抗體組可在(例如)96孔或384孔板中用於分析(例如ELISA)。
抗PD-1抗體可藉由培養經含有抗PD-1抗體編碼核酸之載體轉變或轉染之細胞來產生。編碼本發明抗體之多肽組份之多核苷酸序列可使用標準重組技術獲得。可自產生抗體之細胞(例如雜交瘤細胞)分離並測序期望多核苷酸序列。或者,可使用核苷酸合成器或PCR技術合成多核苷酸。一旦獲得,將編碼多肽之序列插入能夠在宿主細胞中複製並表現異源多核苷酸之重組載體中。業內可用且已知之許多載體可用於本發明之目的。適當載體之選擇將主要取決於欲插入載體中之核酸之大小及欲經載體轉變之特定宿主細胞。適於表現本發明抗體之宿主細胞包括原核生物(例如古原細菌
(Archaebacteria)及真細菌(Eubacteria),包括革蘭氏陰性或革蘭氏陽性生物體)、真核微生物(例如絲狀真菌或酵母)、無脊椎動物細胞(例如昆蟲或植物細胞)及脊椎動物細胞(例如哺乳動物宿主細胞系)。用上述表現載體轉變宿主細胞,並在習用營養培養基中培養,該等營養培養基經修改為適於誘導啟動子、選擇轉變體或擴增編碼所需序列之基因。使用如業內已知之標準蛋白質純化方法純化由宿主細胞產生之抗體。
抗體產生之方法(包括載體構築、表現及純化)進一步闡述於以下中:Plückthun等人,Antibody Engineering:Producing antibodies in Escherichia coli:From PCR to fermentation 203-52(McCafferty等人編輯,1996);Kwong及Rader,E.coli Expression and Purification of Fab Antibody Fragments,in Current Protocols in Protein Science(2009);Tachibana及Takekoshi,Production of Antibody Fab Fragments in Escherischia coli,in Antibody Expression and Production(Al-Rubeai編輯,2011);及Therapeutic Monoclonal Antibodies:From Bench to Clinic(An編輯,2009)。
當然,預期可採用業內熟知之替代方法來製備抗PD-1抗體。舉例而言,適當胺基酸序列或其部分可藉由直接肽合成使用固相技術來產生(例如,參見Stewart等人,Solid-Phase Peptide Synthesis(1969);及Merrifield,1963,J.Am.Chem.Soc.85:2149-54)。活體外蛋白質合成可使用人工技術或藉由自動化實施。抗PD-1抗體之各個部分可單獨化學合成並使用化學或酶促方法組合以產生期望抗PD-1抗體。或者,可自經改造以表現抗體之轉基因動物之細胞或體液(例如牛奶)中純化抗體,如(例如)美國專利第5,545,807號及第5,827,690號中所揭示。
本發明亦提供包含藉由合成連接體共價結合至一或多種非抗體試劑之本發明之抗PD-1抗體中的任一者的偶聯物。
在一些實施例中,本文提供之抗體偶聯或重組融合至(例如)診斷或可檢測分子。偶聯或重組融合之抗體可用於(例如)監測或或預測PD-1介導之疾病之發作、發展、進展及/或嚴重程度。
該診斷及檢測可藉由(例如)將抗體偶聯至可檢測物質來完成,該等可檢測物質包括(但不限於)各種酶,例如但不限於辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙醯基膽鹼酯酶;輔基,例如但不限於鏈黴抗生物素蛋白/生物素或抗生物素蛋白/生物素;螢光材料,例如但不限於傘形酮、螢光黃、異硫氰酸螢光黃、玫瑰紅、二氯三嗪基胺螢光黃、丹磺醯氯或藻紅素;發光材料,例如但不限於發光胺;生物發光材料,例如但不限於螢光素酶、螢光素或水母素;化學發光材料,例如但不限於基於吖啶鎓之化合物或HALOTAG;放射性材料,例如但不限於碘(131I、125I、123I及121I、)、碳(14C)、硫(35S)、氚(3H)、銦(115In、113In、112In及111In)、鍀(99Tc)、鉈(201Ti)、鎵(68Ga及67Ga)、鈀(103Pd)、鉬(99Mo)、氙(133Xe)、氟(18F)、153Sm、177Lu、159Gd、149Pm、140La、175Yb、166Ho、90Y、47Sc、186Re、188Re、142Pr、105Rh、97Ru、68Ge、57Co、65Zn、85Sr、32P、153Gd、169Yb、51Cr、54Mn、75Se、113Sn或117Sn;使用各種正電子發射斷層掃描之正電子發射金屬;及非放射性順磁金屬離子。
本文亦提供與異源蛋白質或多肽(或其片段,例如,約10、約20、約30、約40、約50、約60、約70、約80、約90或約100個胺基酸)重組融合或化學偶聯(共價或非共價偶聯)以生成融合蛋白的抗體、以及其用途。具體
而言,本文提供包含本文提供之抗體之抗原結合片段(例如Fab片段、Fc片段、Fv片段、F(ab)2片段、VH結構域、VH CDR、VL結構域或VL CDR)及異源蛋白、多肽或肽之融合蛋白。在一個實施例中,與抗體融合之異源蛋白、多肽或肽可用於將抗體靶向特定細胞類型,例如表現PD-1之細胞。舉例而言,結合至由特定細胞類型表現之細胞表面受體之抗體可融合或偶聯至本文提供之經修飾抗體。
此外,本文提供之抗體可融合至標記物或「標識」序列(例如肽)以有利於純化。在具體實施例中,標記物或標識胺基酸序列係六組胺酸肽,例如pQE載體中提供之標識(例如,參見QIAGEN,Inc.),其中許多尤其有市售。舉例而言,如Gentz等人,1989,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:821-24中所述,六組胺酸提供融合蛋白之便利純化。可用於純化之其他肽標識包括(但不限於)血球凝集素(「HA」)標識(其對應於源自流行性感冒血球凝集素蛋白之表位(Wilson等人,1984,Cell 37:767-78))及「FLAG」標識。
已知用於將部分(包括多肽)融合或偶聯至抗體之方法(例如,參見Arnon等人,Monoclonal Antibodies for Immunotargeting of Drugs in Cancer Therapy,in Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 243-56(Reisfeld等人編輯,1985);Hellstrom等人,Antibodies for Drug Delivery,in Controlled Drug Delivery 623-53(Robinson等人編輯,第2版,1987);Thorpe,Antibody Carriers of Cytotoxic Agents in Cancer Therapy:A Review,in Monoclonal Antibodies:Biological and Clinical Applications 475-506(Pinchera等人編輯,1985);Analysis,Results,and Future Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody in Cancer Therapy,in Monoclonal Antibodies for Cancer Detection and Therapy 303-16(Baldwin等人編輯,1985);Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.62:119-58;美國專利第5,336,603號;第5,622,929號;第5,359,046號;第5,349,053號;第5,447,851號;第5,723,125號;第5,783,181號;第5,908,626號;第5,844,095號及第5,112,946號;EP 307,434;EP 367,166;EP 394,827;PCT公開案WO 91/06570、WO 96/04388、WO 96/22024、WO 97/34631及WO 99/04813;Ashkenazi等人,1991,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:10535-39;Traunecker等人,1988,Nature,331:84-86;Zheng等人,1995,J.Immunol.154:5590-600;及Vil等人,1992,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:11337-41)。
可(例如)經由基因改組、基序改組、外顯子改組及/或密碼子改組(統稱為「DNA改組」)之技術生成融合蛋白。DNA改組可用於改變如本文提供之抗PD-1抗體(包括(例如)具有較高親和力及較低解離速率之抗體)之活性(例如,參見美國專利第5,605,793號;第5,811,238號;第5,830,721號;第5,834,252號及第5,837,458號;Patten等人,1997,Curr.Opinion Biotechnol.8:724-33;Harayama,1998,Trends Biotechnol.16(2):76-82;Hansson等人,1999,J.Mol.Biol.287:265-76;及Lorenzo及Blasco,1998,Biotechniques 24(2):308-13)。可藉由在重組之前經受隨機誘變(藉由易錯PCR)、隨機核苷酸插入或其他方法來改變抗體或編碼抗體。編碼本文提供之抗體之多核苷酸可與一或多種異源分子之一或多種組份、基序、區段、部分、結構域、片段等重組。
本文提供之抗體亦可偶聯至第二抗體以形成抗體異源偶聯物,如(例如)美國專利第4,676,980號中所述。
如本文提供之結合至PD-1之抗體亦可附接至固體載體,其尤其可用於
靶抗原之免疫分析或純化。該等固體載體包括(但不限於)玻璃、纖維素、聚丙烯醯胺、耐綸、聚苯乙烯、聚氯乙烯或聚丙烯。
連接體可為促進細胞中偶聯試劑之釋放的「可裂解連接體」,但本文亦涵蓋不可裂解之連接體。用於本發明偶聯物中之連接體包括(但不限於)酸不穩定連接體(例如,腙連接體)、含二硫鍵之連接體、肽酶敏感性連接體(例如,包含胺基酸之肽連接體,例如纈胺酸及/或瓜胺酸,例如瓜胺酸-纈胺酸或苯丙胺酸-離胺酸)、光不穩定連接體、二甲基連接體(例如,參見Chari等人,1992、Cancer Res.52:127-31;及美國專利第5,208,020號),硫醚連接體、或經設計以逃避多藥物運輸蛋白介導之抗性之親水性連接體(例如,參見Kovtun等人,2010,Cancer Res.70:2528-37)。
抗體與藥劑之偶聯物可使用多種雙功能蛋白偶聯劑製備,該等偶聯劑係(例如)BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC、磺基-SMPB及SVSB(琥珀醯亞胺基-(4-乙烯基碸)苯甲酸酯)。本發明進一步涵蓋抗體與藥劑之偶聯物可使用如業內揭示之任何適宜方法來製備(例如,參見Bioconjugate Techniques(Hermanson編輯,第2版,2008))。
抗體及藥劑之習用偶聯策略已基於涉及Lys殘基之ε-胺基或Cys殘基之硫醇基團的隨機偶聯化學,其產生異源偶聯物。最近研發之技術容許位點特異性偶聯至抗體,從而引起均勻加載並避免具有改變抗原結合或藥物動力學之偶聯物亞群體。該等技術包括「thiomab」之改造,其包含在重鏈及輕鏈上之位置之半胱胺酸取代,該等取代提供反應性硫醇基團並且不破壞免疫球蛋白摺疊及裝配或改變抗原結合(例如,參見Junutula等人,2008,
J.Immunol.Meth.332:41-52;及Junutula等人,2008,Nature Biotechnol.26:925-32)。在另一種方法中,藉由將終止密碼子UGA自終止重新編碼至硒代半胱胺酸插入將硒代半胱胺酸共轉譯插入至抗體序列中,從而在其他天然胺基酸存在下容許硒代半胱胺酸之親核硒醇基處之位點特異性共價偶聯(例如,參見Hofer等人,2008,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 105:12451-56;及Hofer等人,2009,Biochemistry 48(50):12047-57)。
本文提供在個體中(a)減弱T細胞活性、及/或(b)下調PD-1表現之方法。在某些實施例中,本文提供之方法下調個體細胞中之PD-1表現。在某些實施例中,本文提供之方法減弱個體中之T細胞活性。T細胞活性之非限制性實例係細胞介素之分泌。在某些實施例中,本文提供抑制細胞介素之分泌之方法。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在一些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、及IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在其他實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在某些實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之二者、三者或更多者之其他組合。
在一個實施例中,本文提供抑制IL-2之分泌之方法。在一些實施例中,本文提供抑制IL-2之分泌之方法。在另一實施例中,減弱T細胞活性之方法係抑制IFN-γ之分泌之方法。
在一態樣中,本文提供減弱T細胞之活性之方法,其包含使T細胞與有效量之本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸。在其他實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約10%。在另一實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約20%。在一些實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約30%。在一個實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約40%。在另一實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約45%。在其他實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約50%。在一個實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約55%。在另一實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約60%。在一些實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約65%。在其他實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約70%。在另一實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約75%。在一個實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約80%。在其他實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約85%。在另一實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約90%。在一個實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約95%。在一些實施例中,減弱T細胞活性之最大%係至少約100%。
在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由調節細胞介素之產生來量測。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由調節細胞介素之分泌來量測。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由調節細胞介素之表現來量測。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由調節細胞介素之抑制來量測。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由抑制細胞介素之分泌來量
測。在一些實施例中,T細胞活性之減弱係藉由抑制細胞介素之表現來量測。在某些實施例中,調節細胞介素產生(例如,細胞介素蛋白產生)。在某些實施例中,調節細胞介素分泌(例如,細胞介素蛋白分泌)。在其他實施例中,調節細胞介素表現(例如,細胞介素基因表現)。在一些實施例中,調節係細胞介素之減少、抑制或下調。在其他實施例中,調節係細胞介素之增加或上調。在某些實施例中,抑制細胞介素產生(例如,細胞介素蛋白產生)。在某些實施例中,抑制細胞介素分泌(例如,細胞介素蛋白分泌)。在其他實施例中,抑制細胞介素表現(例如,細胞介素基因表現)。在某些實施例中,調節自細胞之細胞介素產生。在某些實施例中,調節自細胞之細胞介素分泌。在某些實施例中,調節自細胞之細胞介素表現。在某些實施例中,抑制自細胞之細胞介素產生。在某些實施例中,抑制自細胞之細胞介素分泌。在某些實施例中,抑制自細胞之細胞介素表現。在某些實施例中,細胞係T細胞。在一些實施例中,細胞並非T細胞。
在一些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在一個實施例中,細胞介素係IL-2。在另一實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17及IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在其他實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在某些實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係
GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之二者、三者或更多者之其他組合。
在一些實施例中,細胞介素產生之抑制係與T細胞表面上PD-1表現之下調同時。在一些實施例中,細胞介素產生之抑制係在T細胞表面上PD-1表現之下調之後。在一些實施例中,細胞介素產生之抑制先於T細胞表面上PD-1表現之下調。在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時。
在一態樣中,本文提供調節細胞中PD-1活性及/或表現之方法,其包含使該細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之如本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在一個實施例中,調節PD-1活性。在另一實施例中,調節PD-1表現。在另一實施例中,調節PD-1活性及PD-1表現二者。在一個實施例中,活化PD-1信號傳導。在另一實施例中,抑制PD-1表現。在某些實施例中,抗體係PD-1激動劑。在某些實施例中,本文提供之抗體特異性結合至人類PD-1,且活化(例如,部分活化)或以其他方式調節至少一種PD-1活性。在具體實施例中,至少一種PD-1活性係細胞介素產生之抑制。在某些實施例中,特異性結合至PD-1之抗體結合至人類PD-1之ECD、或其人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實
施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
在另一態樣中,本文提供下調細胞中PD-1表現之方法,其包含使該細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係本文提供之PD-1激動劑。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
在另一態樣中,本文提供在細胞中減弱T細胞活性及下調PD-1表現之方法,其包含使該細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之如本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,T細胞活性之減弱係細胞介素產生之抑制。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
PD-1活性可與PD-1之任何活性(例如業內已知或闡述之彼等)相關。PD-1活性及PD-1信號傳導在本文中可互換使用。在某些態樣中,PD-1活性係由結合至PD-1之PD-1配體(例如,PD-L1)誘導。可藉由本文所述或熟習此項技術者已知之方法(例如,西方墨點法、ELISA、免疫組織化學或流式細胞術)評價PD-1之表現程度。
本文亦提供抑制細胞中細胞介素產生之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之如本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。
本文亦提供活化細胞中PD-1信號傳導之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之如本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表
位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。在一個實施例中,部分活化PD-1信號傳導。
在一態樣中,本文提供減弱T細胞活性之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之如本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD。在一些實施例中,抗體結合至人類PD-1之ECD之表位。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L2結合位點。在某些實施例中,抗體特異性結合至人類PD-1之ECD之表位,其不同於PD-L1及PD-L2結合位點二者。在某些實施例中,PD-L1與PD-1之結合不受該抗體抑制。在其他實施例中,PD-L2與PD-1之結合不受該抗體抑制。在具體實施例中,PD-L1與PD-1之結合及PD-L2與PD-1之結合皆不受該抗體抑制。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約10%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約15%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約20%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約25%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約30%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約35%。在一些實施例中,T細胞活性減弱
至少約40%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約45%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約50%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約55%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約60%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約65%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約70%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約75%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約80%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約85%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約90%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約95%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約98%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約99%。在一些實施例中,T細胞活性減弱至少約100%。在某些實施例中,T細胞活性減弱至少約25%至約65%。在具體實施例中,藉由本文所述方法評價T細胞活性減弱。在一些實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法評價T細胞活性減弱。在某些實施例中,T細胞活性減弱係相對於在未接觸抗PD-1抗體之細胞中之T細胞活性。在某些實施例中,T細胞活性減弱係相對於接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之T細胞活性。
T細胞活性之非限制性實例係細胞介素之分泌。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在一些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、及IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。
在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在其他實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在某些實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之二者、三者或更多者之其他組合。
在某些實施例中,由於細胞介素產生之抑制,抑制細胞介素分泌。在其他實施例中,由於細胞介素表現之抑制,抑制細胞介素分泌。
在具體實施例中,本文提供抑制自細胞之細胞介素分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR之抗體。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在一些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在某些實施例中,細胞介素係IL-2。在其他實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-2及IL-17。在一些實施例中,細胞介素係IL-2及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-17及IFN-γ。在其他實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、及IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在其他實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在某些實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係
GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之二者、三者或更多者之其他組合。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-2分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-2分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,IL-2分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-2分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-2分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-2分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-2分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-2分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-2分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-2分泌被抑制至
少約98%。在另一實施例中,IL-2分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,IL-2分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-2分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-2分泌之抑制。在具體實施例中,IL-2分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-2分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-2分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-2分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至少約10nM之EC50被抑
制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-2分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-2分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-2分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-2分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-2分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-2分泌被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-17分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-17分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約15%。
在其他實施例中,IL-17分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-17分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-17分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-17分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-17分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-17分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-17分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-17分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-17分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,IL-17分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-17分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-17分泌之抑制。在具體實施例中,IL-17分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-17分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌相對於接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞中之IL-17分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-17分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至多約5nM之EC50
被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以之EC50被抑制至多約0.5nM。在其他實施例中,IL-17分泌係以之EC50被抑制至多約0.1nM。在一個實施例中,IL-17分泌係以之EC50被抑制至多約0.05nM。在另一實施例中,IL-17分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-17分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-17分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-17分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-17分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-17分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-17分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合
至PD-1之抗體)之細胞之IL-17分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IFN-γ分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約
99%。在具體實施例中,IFN-γ分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IFN-γ分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IFN-γ分泌之抑制。在具體實施例中,IFN-γ分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IFN-γ分泌會被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IFN-γ分泌會被抑制。
在某些實施例中,IFN-γ分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌
係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IFN-γ分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IFN-γ分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IFN-γ分泌會被抑制。在其他實施例中,IFN-γ分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IFN-γ分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-1分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-1分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約15%。
在其他實施例中,IL-1分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-1分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-1分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-1分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-1分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-1分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-1分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-1分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-1分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,IL-1分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-1分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-1分泌之抑制。在具體實施例中,IL-1分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-1分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-1分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-1分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至多約5nM之EC50被
抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-1分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-1分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-1分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-1分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-1分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-1分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之
IL-1分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-6分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-6分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,IL-6分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-6分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-6分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-6分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-6分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-6分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-6分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-6分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-6分泌被抑制至少約99%。在具體實施例
中,IL-6分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-6分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MesoScaleTM Discovery(MSD)多工分析)評價IL-6分泌之抑制。在具體實施例中,IL-6分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-6分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-6分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-6分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至少約10nM之EC50被抑
制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-6分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-6分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-6分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-6分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-6分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-6分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-6分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-12分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-12分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約15%。
在其他實施例中,IL-12分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-12分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-12分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-12分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-12分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-12分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-12分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-12分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-12分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,IL-12分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-12分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-12分泌之抑制。在具體實施例中,IL-12分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-12分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌相對於接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞中之IL-12分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-12分泌係以之EC50被抑制至多約50nM。在其他實施例中,IL-12分泌係以之EC50被抑制至多約40nM。在另一實施例中,IL-12分泌係以之EC50被抑制至多約30nM。在一些實施例中,IL-12分泌係以之EC50被抑制至多約20nM。在一個實施例中,IL-12分泌係以之EC50被抑制至多約10nM。在另一實施例中,IL-12分泌係以至多約5nM之EC50
被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-12分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-12分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-12分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-12分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-12分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-12分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-12分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-12分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-12分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-12分泌相對於接觸無關抗體(例如,非特異性結合至
PD-1之抗體)之細胞中之IL-12分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-22分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-22分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,IL-22分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-22分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-22分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-22分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-22分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-22分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-22分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-22分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-22分泌被抑制至少約99%。
在具體實施例中,IL-22分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-22分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-22分泌之抑制。在具體實施例中,IL-22分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-22分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-22分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-22分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至少約5nM之EC50被抑
制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-22分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-22分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-22分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-22分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-22分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-22分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-22分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之IL-23分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,IL-23分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,IL-23分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,IL-23分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,IL-23
分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,IL-23分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,IL-23分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,IL-23分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,IL-23分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,IL-23分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,IL-23分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,IL-23分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,IL-23分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,IL-23分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,IL-23分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,IL-23分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,IL-23分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價IL-23分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價IL-23分泌之抑制。在具體實施例中,IL-23分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-23分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-23分泌會被抑制。
在某些實施例中,IL-23分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-23分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在
一些實施例中,IL-23分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-23分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-23分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-23分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,IL-23分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,IL-23分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,IL-23分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,IL-23分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之IL-23分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-23分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之IL-23分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之GM-CSF分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,GM-CSF分泌被
抑制至少約99%。在具體實施例中,GM-CSF分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價GM-CSF分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MesoScaleTM Discovery(MSD)多工分析)評價GM-CSF分泌之抑制。在具體實施例中,GM-CSF分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之GM-CSF分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之GM-CSF分泌會被抑制。
在某些實施例中,GM-CSF分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,GM-CSF分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,GM-CSF分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至少
約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,GM-CSF分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,GM-CSF分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之GM-CSF分泌會被抑制。在其他實施例中,IL-2分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之GM-CSF分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供抑制自細胞之TNF-α分泌之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約5%。在一些實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約10%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約15%。在其他實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約20%。在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約25%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約30%。在一些實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約35%。在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約40%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約45%。在其他實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約50%。在一些實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約55%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約60%。在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約65%。在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約70%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約75%。在一些實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約80%。在其他實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約85%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約90%。在一個實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約95%。在一些實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約98%。在另一實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約99%。在具體實施例中,TNF-α分泌被抑制至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價TNF-α分泌之抑制。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價TNF-α分泌之抑制。在具體實施例中,TNF-α分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之TNF-α分泌被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之TNF-α分泌會被抑制。
在某些實施例中,TNF-α分泌係以至多約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌係以至多約40nM之EC50被抑制。在另一實施例
中,TNF-α分泌係以至多約30nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至多約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至多約10nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至多約5nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至多約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.75nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.5nM之EC50被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.05nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.01nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至多約0.001nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至少約50nM之EC50被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌係以至少約40nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至少約30nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至少約20nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至少約10nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至少約5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至少約1nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.75nM之EC50被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.5nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.1nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.05nM之EC50被抑制。在一些實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.01nM之EC50被抑制。在另一實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.005nM之EC50被抑制。在一個實施例中,TNF-α分泌係以至少約0.001nM之EC50被抑制。在一些實施例中,藉由本文所述方法評
價EC50。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,MSD多工分析)評價EC50。在具體實施例中,TNF-α分泌相對於自未接觸抗PD-1抗體之細胞之TNF-α分泌會被抑制。在其他實施例中,TNF-α分泌相對於自接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞之TNF-α分泌會被抑制。
在一些實施例中,本文提供下調細胞中PD-1表現之方法,其包含使細胞與如本文提供之特異性結合至PD-1(例如,人類PD-1之ECD或人類PD-1之ECD之表位)之抗體接觸。在具體實施例中,細胞係T細胞。在某些實施例中,細胞與有效量之本文所述之抗體或其抗原結合片段接觸。在某些實施例中,抗體係抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者或其抗原結合片段、或包含抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6中之任一者之CDR的抗體。
在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約5%。在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約10%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約15%。在一些實施例中,PD-1表現被下調至少約20%。在其他實施例中,PD-1表現被下調至少約25%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約30%。在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約35%。在一些實施例中,PD-1表現被下調至少約40%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約45%。在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約50%。在其他實施例中,PD-1表現被下調至少約55%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約60%。在一些實施例中,PD-1表現被下調至少約65%。在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約70%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約75%。在一個實
施例中,PD-1表現被下調至少約80%。在一些實施例中,PD-1表現被下調至少約85%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約90%。在其他實施例中,PD-1表現被下調至少約95%。在一個實施例中,PD-1表現被下調至少約98%。在另一實施例中,PD-1表現被下調至少約99%。在具體實施例中,本文提供之抗體特異性結合至PD-1且將PD-1表現下調至少約25%或35%、視情況至約75%。在一些實施例中,藉由本文所述方法評價PD-1表現之下調。在其他實施例中,藉由熟習此項技術者已知之方法(例如,流式細胞術、西方墨點法、北方墨點法或RT-PCR)評價PD-1表現之下調。在具體實施例中,藉由流式細胞術評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由西方墨點法評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由北方墨點法評價PD-1表現之下調。在另一實施例中,藉由RT-PCR評價PD-1表現之下調。在具體實施例中,PD-1表現相對於未接觸抗PD-1抗體之細胞中之PD-1表現下調。在其他實施例中,PD-1表現相對於接觸無關抗體(例如,非特異性結合至PD-1之抗體)之細胞中之PD-1表現下調。
在一個實施例中,本文提供下調T細胞表面上PD-1表現之方法,其包含使T細胞有效量之本文提供之抗體或其抗原結合片段接觸。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約10%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約20%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約30%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約40%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約45%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約50%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片
段下調PD-1表現之最大%係至少約55%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約60%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約65%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約70%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約75%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約80%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約85%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約90%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約95%。在一個實施例中,抗體或其抗原結合片段下調PD-1表現之最大%係至少約100%。
在某些實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時。在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時或22小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後4小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後6小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後8小時。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後10小時。在一些實施例中,下調發生在早至接觸後12小時。在一個實施例中,下調發生在早至接觸後14小時。在另一實施例中,下調發生在早至接觸後16小時。在一些實施例中,下調發生在早至接觸後18小時。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後20小時。在其他實施例中,下調發生在早至接觸後22小時。在其他實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調發生在早至接觸抗體或其抗原結合片段後24小時。
在一個實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調先於細胞介素抑制。在另一實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係與細胞介素抑制同時。在另一實施例中,T細胞表面上PD-1表現之下調係在細胞介素抑制之後。在某些實施例中,細胞介素係IL-2、IL-17、IFN-γ或其任一組合。在一個實施例中,細胞介素係IL-2。在另一實施例中,細胞介素係IL-17。在其他實施例中,細胞介素係IFN-γ。在某些實施例中,細胞介素選自由以下組成之群:IL-1、IL-2、IL-6、IL-12、IL-17、IL-22、IL-23、GM-CSF、IFN-γ及TNF-α。在某些實施例中,細胞介素係IL-1。在其他實施例中,細胞介素係IL-6。在其他實施例中,細胞介素係IL-12。在其他實施例中,細胞介素係IL-22。在某些實施例中,細胞介素係IL-23。在一些實施例中,細胞介素係GM-CSF。在其他實施例中,細胞介素係TNF-α。亦涵蓋上文所提及細胞介素中之二者、三者或更多者之其他組合。
在其他態樣中,本發明之抗PD-1抗體及其片段可用於檢測生物試樣中PD-1之存在。該等抗PD-1抗體可包括結合至人類及/或食蟹猴PD-1但不誘導PD-1信號傳導活性之彼等。如本文所用之術語「檢測」涵蓋定量或定性檢測。在某些實施例中,生物試樣包含體液、細胞或組織。
在一態樣中,本發明進一步提供包含本發明之至少一種抗PD-1抗體之醫藥組合物。在一些實施例中,醫藥組合物包含1)抗PD-1抗體,及2)醫藥上可接受之載劑。
藉由混合具有期望純度之抗體與可選生理上可接受之載劑、賦形劑或穩定劑(例如,參見Remington,Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版,1980))以水溶液形式或凍乾或其他乾燥形式製備包含抗體之醫藥組
合物用於儲存。
本發明之抗體可以適於遞送至靶細胞/組織之形式、例如呈微膠囊或巨乳液形式(Remington,上文文獻;Park等人,2005,Molecules 10:146-61;Malik等人,2007,Curr.Drug.Deliv.4:141-51)、呈持續釋放調配物形式(Putney及Burke,1998,Nature Biotechnol.16:153-57)或於脂質體中(Maclean等人,1997,Int.J.Oncol.11:325-32;Kontermann,2006,Curr.Opin.Mol.Ther.8:39-45)調配。
本文提供之抗體亦可分別裝入藉由(例如)凝聚技術或藉由界面聚合製得之微膠囊(例如羥甲基纖維素或明膠微膠囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊)中、膠質藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米膠囊)或巨乳液中。該等技術揭示於(例如)Remington,上文文獻中。
已知各種組合物及遞送系統且可與結合至如本文所述之PD-1之抗體一起使用,包括但不限於囊封於能表現抗體之脂質體、微粒、微膠囊、重組細胞中、受體介導之胞吞作用(例如,參見Wu及Wu,1987,J.Biol.Chem.262:4429-32)、構築核酸作為反轉錄病毒或其他載體之一部分等。在另一實施例中,組合物可提供為控制釋放或持續釋放系統。在一個實施例中,可使用幫浦來達成控制釋放或持續釋放(例如,參見Langer,上文文獻;Sefton,1987,Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201-40;Buchwald等人,1980,Surgery 88:507-16;及Saudek等人,1989,N.Engl.J.Med.321:569-74)。在另一實施例中,可使用聚合物質以達成預防劑或治療劑(例如,如本文所述之結合至PD-1之抗體)或本發明之組合物之控制釋放或持續釋放(例如,參見Medical Applications of Controlled Release(Langer及Wise編輯,
1974);Controlled Drug Bioavailability,Drug Product Design and Performance(Smolen及Ball編輯,1984);Ranger及Peppas,1983,J.Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.23:61-126;Levy等人,1985,Science 228:190-92;During等人,1989,Ann.Neurol.25:351-56;Howard等人,1989,J.Neurosurg.71:105-12;美國專利第5,679,377號;第5,916,597號;第5,912,015號;第5,989,463號及第5,128,326號;PCT公開案第WO 99/15154號及第WO 99/20253號)。持續釋放調配物中所用之聚合物之實例包括(但不限於)聚(甲基丙烯酸2-羥基乙基酯)、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸)、聚(乙烯-共-乙酸乙烯酯)、聚(甲基丙烯酸)、聚乙交酯(PLG)、聚酸酐、聚(N-乙烯基吡咯啶酮)、聚(乙烯醇)、聚丙烯醯胺、聚(乙二醇)、聚乳酸(PLA)、聚(乳酸交酯-共-乙交酯)(PLGA)及聚原酸酯。在一個實施例中,持續釋放調配物中所用之聚合物係惰性的、不含可浸出雜質、在儲存時穩定、無菌且生物可降解。
在另一實施例中,可將控制釋放或持續釋放系統靠近特定靶組織(例如,鼻道或肺)放置,因此僅需要全身劑量之一部分(例如,參見Goodson,Medical Applications of Controlled Release,第2卷,115-38(1984))。控制釋放系統係由(例如)Langer,1990,Science 249:1527-33論述。可使用熟習此項技術者已知之任何技術以產生包含一或多種如本文所述之結合至PD-1之抗體的持續釋放調配物(例如,參見美國專利第4,526,938號、PCT公開案第WO 91/05548號及第WO 96/20698號,Ning等人,1996,Radiotherapy & Oncology 39:179-89;Song等人,1995,PDA J.of Pharma.Sci.& Tech.50:372-97;Cleek等人,1997,Pro.Int’l.Symp.Control.Rel.Bioact.Mater.24:853-54;及Lam等人,1997,Proc.Int’l.Symp.Control
Rel.Bioact.Mater.24:759-60)。
本文亦提供包含包裝至適宜包裝材料中之本文提供之抗體(例如,抗PD-1抗體)或其組合物(例如,醫藥組合物)的套組。套組視情況包括標記或包裝插頁,其包括組份之說明或其中之組份之活體外、活體內或離體使用的說明書。
術語「包裝材料」係指容納套組之組份之物理結構。包裝材料可無菌地維持組份,且可由常用於該等目的之材料(例如,紙、波紋纖維、玻璃、塑膠、箔、安瓿、小瓶、管等)製得。
本文提供之套組可包括標記或插頁。標記或插頁包括單獨或附著至組份、套組或封裝材料(例如,盒)、或附接至(例如)含有套組組份之安瓿、管或小瓶的「印刷品」(例如紙或紙板)。標記或插頁可另外包括電腦可讀媒體,例如盤(例如,硬碟、卡、記憶盤)、光碟(例如CD-或DVD-ROM/RAM、DVD、MP3、磁帶)或電儲存媒體(例如RAM及ROM)或該等之混雜物(例如磁/光學儲存媒體、FLASH媒體或記憶體類型卡)。標記或插頁可包括鑑別製造商資訊、批號、製造商位置及日期之資訊。
本文提供之套組可另外包括其他組份。套組之每一組份可密封於個別容器內,且全部各個容器可在單一包裝內。套組亦可經設計用於冷儲存。套組可進一步經設計以含有本文提供之抗體、或含有編碼本文提供之抗體之核酸的細胞。套組中之細胞可維持在適當儲存條件下直至即用。
除非另有定義,否則本文所用之所有技術及科學術語皆具有與熟習本發明所屬領域技術者通常所理解之含義相同的含義。儘管本發明之實踐或測試中可使用類似或等效於本文所述之方法及材料的方法及材料,但本文
闡述適宜方法及材料。
本文中引用之所有申請案、公開案、專利及其他參考文獻、GenBank引用及ATCC引用的全文皆以引用方式併入。倘若出現衝突,則以本說明書(包括定義)為準。
除非上下文另外明確指出,否則如本文所用單數形式「一」(a、an)及「該」包括複數個指示物。因此,例如,在提及「肽序列」時包括複數個該序列等。
貫穿此文件,如本文所用,數值通常係以範圍格式提供。除非上下文另外明確指明,否則使用範圍格式僅用於方便及簡潔且不應理解為對本發明範疇之硬性限制。因此,除非上下文另外明確指明,否則使用範圍明確包括所有可能之子範圍、該範圍內之所有個別數值、及所有數值或數值範圍,包括該等範圍內之整數及範圍內之值或整數之分數。與範圍之寬度無關且在所有上下文中貫穿此專利文件,此構築使用。因此,例如,在提及90-100%之範圍時包括91-99%、92-98%、93-95%、91-98%、91-97%、91-96%、91-95%、91-94%、91-93%等。在提及90-100%之範圍時亦包括91%、92%、93%、94%、95%、95%、97%等、以及91.1%、91.2%、91.3%、91.4%、91.5%等、92.1%、92.2%、92.3%、92.4%、92.5%等等。
另外,在提及1-3、3-5、5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100、100-110、110-120、120-130、130-140、140-150、150-160、160-170、170-180、180-190、190-200、200-225、225-250之範圍時包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20等。在又一實例中,在提及25-250、250-500、500-1,000、1,000-2,500、2,500-5,000、5,000-25,000、25,000-50,000之
範圍時包括該等值內或涵蓋該等值之任何數值或範圍,例如25、26、27、28、29...250、251、252、253、254...500、501、502、503、504...等。
亦如本文中所用,貫穿此文件揭示一系列範圍。一系列範圍之使用包括上範圍與下範圍之組合以提供另一範圍。與範圍之寬度無關且在所有上下文中貫穿此專利文件,此構築使用。因此,例如,在提及一系列範圍(例如5-10、10-20、20-30、30-40、40-50、50-75、75-100、100-150)時包括諸如5-20、5-30、5-40、5-50、5-75、5-100、5-150、及10-30、10-40、10-50、10-75、10-100、10-150、及20-40、20-50、20-75、20-100、20-150等範圍。
本發明通常係使用肯定語言揭示於本文中以闡述各個實施例。本發明亦明確包括完全或部分排除特定標的物之實施例,例如物質或材料、方法步驟及條件、方案、程序、分析(assay)或分析(analysis)。因此,即使本發明通常不在本發明不包括之方面在本文中表述,但是在本文中仍揭示未明確包括在本發明中之態樣。
已闡述本發明之多個實施例。然而,將理解,可在不背離本發明的精神及範圍的情況下作出各種修改。因此,以下實例意欲闡釋但不限制申請專利範圍中所述之本發明之範疇。
此章節(即,章節5)中之實例係以闡釋方式而非以限制方式提供。
最初藉由小鼠免疫方法使用人類PD-1細胞外結構域(ECD)抗原或CHO-hPD-1轉染細胞生成親代PD-1-IgG1 mAb。雜交瘤池之初始表徵鑑別命名為PD1Sub1之亞純系,其產生之抗人類PD-1、PD-L1非封阻及PD-L2非封阻抗體(數據未顯示),且針對可溶性抗原之KD藉由Biacore®量測為約6nM。對PD1Sub1雜交瘤之小鼠VH及VL基因進行測序並用於利用最接近J區(分別IgH J6及Igκ J2)將人類CDR移植至最大同源人類VH及VL框架基因之人類γ1及κ恆定區(分別IgH1-f及Vκ4-1)中。對於僅人類種系HG1 VH及VL區,將小鼠CDR3區段分別放置於人類VH及VL框架種系基因IgH 1-f及Vκ
4-1中。
生成在具有穩定AID(活化誘導之去胺酶)之DeciduousTM構築體中表現CDR移植或種系HG1抗體之穩定HEK-293c18細胞系用於SHM-XELTM親和力成熟平臺(AnaptysBio,San Diego,CA)中。抗體可變結構域中遺傳多樣性之原位生成產生表現親代抗體之較高親和力變體的細胞。該等細胞係藉由流式細胞術使用單體或二聚體hPD-1分離。多輪親和力純化及選擇產6個通道及45個純系。該等純系之Sanger及深度測序以及額外「電腦中SHM」事件引起多輪定點誘變,其將富集突變納入VH及VL CDR中。最高親和力結合12種突變蛋白質進一步經生物化學、生物物理學表徵用於與PD-1之結合動力學、以及用於結合至CHO細胞表面上表現之全長PD-1。在兩個分析中實施純化抗體之功能表徵:PD-L1競爭結合至細胞表面PD-1、及自活化人類CD4+ T細胞之再活化在IL-2產生中具有抑制活性。
基於該等方法,生成抗PD-1抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5或PD1AB-6,如表9中所示。
在自白血球減少系統(LRS)分離之人類PBMC上於37℃下以PHA活化48小時來誘導PD-1表現。使用CD4分離套組(Miltenyi Biotec,San Diego,CA)自PBMC純化CD4+ T細胞並利用固定之抗CD3或抗CD3加上經滴定之抗PD-1或hIgG1同型對照抗體將其再平鋪至96孔上。於24及48小時收集上清液用於IL-2、IFN-γ及IL-17細胞介素測定。所有六個抗PD-1純系皆顯示類似抑制EC50,針對IL-2之範圍為20-36nM,針對IFN-γ為34-58nM,且針對IL-17為27-41nM,如表10中所示。
隨後在人類全血基質中評價特異性T細胞功能之抑制。將新鮮抽出且肝素化之人類血液平鋪於經抗CD3或抗CD3加上經滴定之抗PD-1或hIgG1
同型對照抗體固定的孔上。量測24及48小時收集之血漿之IL-2(24小時)及IFN-γ/IL-17(48小時)。與三種其他測試之抗體純系相比,PD1AB-6顯示特異性IL-2(EC50 4.0±0.9nM,n=4)、IFN-γ(EC50 4.1±2.2nM,n=2)及IL-17(EC50 3.6±1.2nM,n=3)抑制之功效增加2-3倍,如表11中所示。
為評價配體競爭,將細胞結合分析置於適當位置以評估所鑑別之六種抗體純系。簡言之,將100nM至100pM之半對數濃度之個別抗體純系與10nM DyL650-PD-L1預混合,之後添加至人類PD-1-CHO細胞(2×105個細胞)中並在冰上保持45分鐘。隨後洗滌細胞,之後在BD FACSArrayTM上分析DyL650-PD-L1結合並於每一濃度下繪示相對於同型對照抗體之中值螢光強度的圖。如圖1A-1B中所示,PD1AB-6以及其他五種純系(包括親代純系PD1AB-1)顯示高達100nM針對DyL650-PD-L1結合無顯著競爭。相比之下,MDX 4H1(AnaptysBio,San Diego,CA)、即拮抗劑、配體阻斷之PD-1抗體劑量獨立地阻斷經標記之PD-L1結合,從而產生約5-10nM之結合EC50。
藉由將與人類PD-1細胞外結構域複合之PD1AB-6 Fab之結晶結構解析至1.8Å解析度測定PD-1表位。PD-1:PD1AB-6 Fab相互作用位點相對於PD-1:PD-L1相互作用位點出現在PD-1之遠端側(圖2),此與PD-L1及
PD1AB-6不競爭PD-1結合之觀察一致。PD1AB-6 Fab針對PD-1 β摺疊結合,且與由殘基100-105構成之PD-1環形成實質相互作用(圖3)。PD-1上之R104與Fab CDR H1上之殘基發生多重極性相互作用。毗鄰殘基G103亦與Fab形成緊密之極性相互作用。R104及G103二者在小鼠PD-1中皆突變(分別突變成組胺酸及精胺酸),從而提供PD1AB-6不與鼠類PD-1結合之結構原理。與PD-1相互作用之PD1AB-6 Fab區係CDR H1、H2、H3、L1及L2。PD-1:PD1AB-6 Fab相互作用之原子詳情闡述於表12中。闡述與PD-1表位相互作用之HC及LC殘基。縮寫係如下:HB-氫鍵、HYD-疏水相互作用、ION-離子相互作用。
生成PD1AB-6 IgG1抗體(PD1AB-6-IgG1)及Fc修飾之IgG4PE抗體(PD1AB-6-4PE)。PD1AB-6-4PE經設計以具有顯著較低之Fc介導之效應物功能。CH區γ4含有兩個非標準胺基酸取代S228P及L235E(EU編號系統,Kabat及Wu 1991)。將絲胺酸228(IgG4之鉸鏈中之常見胺基酸類型)變為脯胺酸(IgG4中較不通常觀察到之胺基酸類型及IgG1中之高度保守胺基酸)。此變化顯著降低通常在IgG4-亞類抗體之產生中觀察到之「半抗體」的含量。將亮胺酸235(參與與Fcγ受體之重鏈相互作用之關鍵胺基酸中之一者)變為麩胺酸。L235E取代顯著降低γ4鏈與FcγR之相互作用,從而消除表現PD-1之正常細胞之ADCC及Fc-受體介導之消除。另外,由γ4重鏈之補體結合之固有缺乏使得PD1AB-6-4PE分子缺乏CDC功能。生成兩種其他變體以最小化對Clq之結合親和性用於降低之CDC(圖4)。為生成PD1AB-6-K3,在PD1AB-6-IgG1內用丙胺酸取代離胺酸322。據報導K322A取代抑制利妥昔單抗(rituximab,一種具有人類IgG1 Fc之嵌合抗體)上之Clq結合(Idusogie等人,2000,J.Immunol.164(8):4178-84)。藉由利用S228P取代將PD1AB-6-IgG1之Fc-主鏈轉化成IgG4之Fc-主鏈來生成PD1AB-6-4P。將絲胺酸228(IgG4之鉸鏈中之常見胺基酸類型)變為脯胺酸(IgG4中較不通常觀察到之胺基酸類型及IgG1中之高度保守胺基酸)。此變化顯著降低通常在IgG4-亞類抗體之產生中觀察到之半抗體的含量。據報導IgG4抗體具有減弱之ADCC及CDC功能(Overdijk等人,2012,J.Immunol.189(7):3430-38)。所有變化皆係在CH區中產生且可變區中無變化。PD1AB-6-IgG1之重鏈及輕鏈之胺基酸序列分別係經標記HC_PD1AB-6-IgG1及LC_PD1AB-6-IgG1(圖4)。兩個重鏈變體包括
HC_PD1AB-6-IgG1-K322A及HC_PD1AB-6-IgG4P。輕鏈LC_PD1AB-6-IgG1與三條個別重鏈配對以分別生成PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P。
IgG LC表現載體pFUSE2ss-CLIg-hk及IgG HC表現載體pFUSEss-CHIg-hG1係購自InvivoGen(San Diego,CA)。
將編碼LC_PD1AB-6-IgG1之胺基酸序列(圖4)轉化成密碼子最佳化基因序列用於哺乳動物細胞中之蛋白質表現。向最佳化基因中添加5’-端處之限制酶位點EcoRI及3’-端處之NheI。合成具有EcoRI及NheI位點之最佳化LC基因,從而產生插入片段。用EcoRI及NheI消化IgG LC表現載體pFUSE2ss-CLIg-hk,從而產生約3.5kb pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI片段。將插入片段連接至pFUSE2ss-CLIg-hk-EcoRI/NheI片段中,從而引起產生作為pFUSE2ss-CLIg-hk-LC_PD1AB-6-IgG1之pJS-1。
將編碼HC_PD1AB-6-IgG1、HC_PD1AB-6-IgG1-K322A或HC_PD1AB-6-IgG4P之胺基酸序列(圖4)轉化成密碼子最佳化基因序列用於哺乳動物細胞中之蛋白質表現。將5’-端處之限制酶位點EcoRI(終止密碼子之恆定區(在pFUSEss-CHIg-hG1中之HC序列之3’-端之後))添加至3’-端處之HpaI。合成具有EcoRI及HpaI位點之最佳化基因,其產生含有分別編碼HC_PD1AB-6-IgG1、HC_PD1AB-6-IgG1-K322A及HC_PD1AB-6-IgG4P之基因之插入片段。用EcoRI及HpaI消化IgG HC表現載體pFUSEss-CHIg-hG1,從而產生約3.4kb pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI片段。將插入片段連接至pFUSEss-CHIg-hG1-EcoRI/HpaI片段中,從而產生pJS-2、pJS-3及pJS-12,
其分別係pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1、pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG1-K322A及pFUSEss-CHIg-hG1-HC_PD1AB-6-IgG4P。
PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P之所有三種變體皆係以實驗室規模在振盪燒瓶中製造用於活體外及活體內效能研究。在50L生物反應器(50L攪拌罐及50L波動包)中使用來自Life Technologies(Carlsbad,CA)之FreeStyleTM MAX CHO表現系統以及Expi293TM表現系統製造用於非GLP毒理學研究及額外表徵之PD1AB-6-4P及PD1AB-6-K3抗體。使用製造商之標準方案使用FreeStyleTM MAX CHO表現系統用於CHO-S細胞之瞬時轉染。使用製造商之標準方案使用Expi293TM表現系統用於Expi293細胞之瞬時轉染。在轉染期間針對DNA混合物以1mg/1L培養物使用3:2比率之輕鏈對重鏈。將細胞於37℃下以50萬細胞/mL接種於50L生物反應器中並生長過夜以達到100萬細胞/mL。隨後使用製造商之標準方案轉染細胞。轉染後一天,向生物反應器中添加1mM丁酸鈉加上1% v/v進料培養基(Yeastolate,CHO CD EfficientFeedTM A,Glutamax and Glucose),且溫度下降至32℃。針對50L攪拌罐接種40升細胞加上添加劑,且針對50L波生物反應器接種25L細胞加上添加劑。每天監測細胞存活率及效價,且在細胞存活率下降低於50%時收穫批料。Vi-CellTM儀器用於存活率分析,且使用配備有抗人類IgG感測器之Octet RED用於使用標準曲線之純化抗體的效價分析。使用GE Life Sciences深過濾及滅菌管柱收穫細胞及上清液,使用ULTA Prime GF 5μm膠囊進行深過濾,之後使用ULTA Pure HC 0.6/0.2μm滅菌膠囊。使用交叉流過濾將澄清上清液濃縮5-8倍,使用來自GE Life Science之50Kd截止值KvickTM Lab SCU進行TFF。在收
穫時針對每一同型獲得之效價及最大細胞密度於表13中給出。
藉由一系列下游純化步驟(包括蛋白質A親和力層析及低pH病毒去活化)、之後IEX相互作用(CaptoTM Adhere及CaptoTM Sp ImpRes)層析步驟實施所產生物質之純化。藉由針對(10mM琥珀酸鹽pH 5.5、9%蔗糖、0.05% PS20)緩衝液更換之緩衝液將純化抗體整體調配,經由0.2μm過濾器過濾,並分成等份。
利用MabSelect SuReTM實施蛋白質A親和力層析,經設計以捕獲產物並移除過程相關雜質。在酸性條件(pH 3.4±0.1,持續45min.)下實施後續病毒去活化步驟,之後將去活化池條件化至pH 5.5±0.1。在病毒去活化後,陰離子交換劑以穿流模式用於使用CaptoTM Adhere之中間體精製步驟,以移除雜質(例如聚集物、DNA、宿主細胞蛋白質及內毒素)。將產物池條件化至pH 6.5±0.1,且在下一過程步驟之前,將導電率降低至2mS/cm。使用陽離子交換劑CaptoTM SP ImpRes作為精製步驟,且以10mS/cm解析產物。隨後將抗體在原液進行緩衝液更換(10mM琥珀酸鹽、9%蔗糖、0.05% PS20,pH 5.5),並濃縮至20mg/mL。隨後將產物池經由0.2μm過濾器過濾並分成等份。
在表現人類PD-1及食蟹猴PD-1之CHO細胞上(圖5A-5B)及在原代人類PBMC(圖6)及食蟹猴PBMC(圖7)上評估PD1AB-6-IgG1結合。
於4℃下將表現人類PD-1及食蟹猴PD-1之CHO細胞與不同濃度之未經標記之PD1AB-6-IgG1抗體一起培育30分鐘,洗滌,並於4℃下用抗人類IgG Fc(eBioscience,San Diego,CA)染色30分鐘。使用人類IgG1 Fc作為陰性對照。PD1AB-6-IgG1以EC50=0.4nM結合至CHO細胞上表現之人類PD-1且以EC50=0.8nM結合至CHO細胞上表現之食蟹猴PD-1(圖5A-5B)。
將人類PBMC用1μg/mL板結合之抗CD3活化3天以誘導T細胞上之PD-1表現。於4℃下將細胞與不同濃度之未經標記之PD1AB-6-IgG1抗體一起培育30分鐘,洗滌,並於4℃下用抗人類IgG Fc(eBioscience,San Diego,CA)染色30分鐘。使用人類IgG1 Fc作為陰性對照。利用CD4+ T細胞測定幾何MFI。來自2個人類健康供體中之1個之數據示於圖6中。
將食蟹猴PBMC用1μg/mL抗食蟹猴CD3/CD28活化2天以誘導T細胞上之PD-1表現。於4℃下將細胞與不同濃度之未經標記之PD1AB-6-IgG1抗體一起培育30分鐘,洗滌,並於4℃下用抗人類IgG Fc(eBioscience)染色30分鐘。使用人類IgG1 Fc作為陰性對照。利用CD4+ T細胞測定幾何MFI。來自2個食蟹猴供體中之1個之數據示於圖7中。
為確認變體生成之目標,即降低之FcγR介導之效應物功能,藉由兩種方法分析結合至PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P變體之FcγR。首先,利用使用Cisbio Tag-lite®檢測之置換FcγR分析測試結合(圖8A-8D)。將經改造以表現經鋱(Tb)供體染料預標記之特異性FcγR(FcγRI、FcγRIIIa或FcγRIIb)
的HEK293細胞與在介於10000nM至0.1pM範圍內之對數濃度之參照對照或PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P抗體混合。隨後添加第二人類-hIgG-d2(受體)以競爭受體結合。量測藉由Tb-d2靠近生成之螢光共振能量轉移(FRET)信號之檢測且其與PD1AB-6變體結合之FcγR成反比。如圖8A-8D中所示,PD1AB-6-K3變體顯示與FcγRIIIa(CD16)(即負責ADCC活性之NK細胞上之低親和力受體)之結合降低。與FcγRI(在顆粒球、樹突細胞(DC)或單核球上表現)之結合類似於親代PD1AB-6-IgG1分子。
其次,在基於FACS之結合分析中測試PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P變體(圖9A-9C)。簡言之,將表現FcγRI-CHO或FcγRIIIaV158-CHO之細胞系脫離並洗滌,之後在冰上與不同濃度之PD1AB-6-K3及PD1AB-6-4P變體混合1小時。在冰上利用經標記之PE偶聯之F(ab’)2山羊抗人類二級抗體檢測PD1AB-6變體結合之細胞額外小時,洗滌並固定,之後藉由FACS分析,且於每一濃度下繪示平均螢光強度。PD1AB-6-4P變體針對FcγRI及FcγRIIIa系分別恢復至顯著較高結合EC50(>15X及>21X)(圖9A-9C)。
在涉及健康供體之天然殺傷(NK)細胞及表現PD-1之靶細胞之共培養分析中評估PD1AB-6變體誘導ADCC之能力。將經PD1AB-6變體預處理之靶細胞(NCI-OCI-Ly3)與活化NK細胞共培養4小時。使用上清液LDH濃度以計算特定溶解。使用Prism計算EC50(nM)。誤差槓代表一式三份實驗。數據係4個個別健康供體中之2個代表。如圖10A-10B中所示,PD1AB-6-IgG1之滴定誘導劑量依賴性ADCC,而PD1AB-6-K3顯示降低之ADCC活性。
使用表現PD-1之CD20+ NCI-OCI-Ly3細胞評估PD1AB-6變體誘導CDC之能力。將經抗體預處理之靶細胞(NCI-OCI-Ly3)在補充有5%兔補體之無血清之培養基中培養4小時。藉由7-AAD+細胞藉由FACS測定細胞溶解。數據係3個獨立實驗之代表:(i)PD1AB-6-IgG1及抗CD20 IgG1之CDC活性;(ii)PD1AB-6-IgG1及PD1AB-6-K3之CDC活性;(iii)PD1AB-6-4P及市售小鼠抗PD-1 IgG1抗體之CDC活性。如圖11中所示,PD1AB-6-K3並不始終誘導CDC(n=3)。親代PD1AB-6-IgG1及PD1AB-6-4P亦不誘導CDC。此並非係由於靶細胞系對補體殺傷之抗性,此乃因在5%兔補體存在下抗CD20 IgG1重複誘導NCI-OCI-Ly3細胞上之劑量依賴性CDC。
藉由兩種方法實施關於抑制T細胞效應物功能之PD1AB-6變體之功能評價。在一種分析中,將末梢血單核細胞預活化以表現PD-1並在可溶性PD1AB-6-K3存在下再刺激(圖12)。將來自健康供體之末梢血單核細胞(PBMC)用促分裂原PHA預活化48h以上調PD-1表現。隨後在稀釋之PD1AB-6變體存在下在100nM至0.1nM終濃度範圍內使用抗CD3偶聯之Dynabeads®(Life Technologies,Carlsbad,CA)再刺激該等細胞。在刺激後24h使用培養上清液中IL-2含量量測T細胞活化。如圖12中所示,PD1AB-6-K3及兩個其他變體在此分析中以5-25nM之EC50顯示強效T細胞抑制活性。
使用第二分析以直接離體量測PD1AB-6-K3之抑制T細胞功能(圖13)。此係藉由以下方式進行:將新鮮人類全血直接平鋪於經抗CD3+/-
PD1AB-6-K3共塗佈之96孔板中、及將IL-17及IFN-γ含量量測為T細胞活化之讀出值。在該等分析中使用CTLA4Ig(Orencia®)作為陽性對照,且使用人類IgG Fc片段作為陰性對照。如圖13中所示,總之,PD1AB-6-K3較PD1AB-6-4P傾向於更佳效能。陰性對照hIgG Fc不顯示活性且EC50>100nM。
類似於人類試樣、使用新鮮分離之食蟹猴PBMC實施與主要PD1AB-6-K3之功能食蟹猴交叉反應性之測定,利用如所指示抗食蟹猴CD3、CD28及PD1AB-6變體活化。在該等分析中使用CTLA4Ig作為陽性對照,且使用hIgG1 Fc作為陰性對照。48小時後移除培養上清液以使用食蟹猴IL-2 MSD分析進行細胞介素測定。如表14中所示,該等分析展現,PD1AB-6-K3將食蟹猴T細胞細胞介素分泌減弱至與陽性對照CTLA4Ig相當之程度,且活性與人類分析中所觀察者相當。
結合至T細胞表面分子(例如CD3及CD4)之若干抗體導致信號傳導及隨後下調彼等分子之表面表現。由於PD1AB-6抗體經設計以經由PD-1提供激動劑信號,故其為評估活體外PD1AB-6處理後之PD-1表現所關注。
將不同供體之人類PBMC用具有不同濃度之可溶性對照IgG1或PD1AB-6-IgG1之1μg/mL板結合之抗CD3+0.25μg/mL板結合之抗CD28活化。4小時至72小時培育後,將細胞染色用於CD3、CD45RO及PD-1以評價T細胞上之PD-1表現。圖14A-14C顯示48小時PD1AB-6-IgG1處理後人類CD3+ T細胞上之PD-1之表現降低。PD-1表現之分析顯示PD1AB-6-IgG1處理導致T細胞表面上PD-1表現之下調(圖14A-14B中之一個供體之代表性直方圖及圖14C中之橫跨三個供體及不同抗體濃度之48小時之平均螢光強度之分析)。早至與PD1AB-6-IgG1一起培育4小時觀察到PD-1下調。表面PD-1表現之下調可能係由於經由PD-1之PD1AB-6誘導之信號傳導,且係經由與利用T細胞受體信號傳導所觀察者類似之機制(San Jose等人,2000,Immunity 12(2):161-70)。
使用捕獲方法在Biacore® T200上分析純化之PD1AB-6變體抗體與hPD1抗原之結合。將Fc特異性抗人類IgG固定於Fc2上,且將Fc1留為空白用於參照通道。將純化之PD1抗體捕獲於抗人類IgG上,且使用自100nM至200pM之兩倍稀釋系列使內部產生之hPD1抗原(PD1_002)在兩個通道上流動以測定結合之動力學。所用PD-1係作為包涵體在大腸桿菌中表現並再摺疊之人類PD-1之細胞外結構域(殘基32-160)。使用3M氯化鎂在每一抗原濃度之間再生表面。PD1AB-6-IgG1、PD1AB-6-4P及PD1AB-6-K3之結合動力學之實例以及kon、koff及KD之值示於圖15A-15C中。所有三種變體具有類似之針對PD-1抗原之締合及解離速率且相當之KD值為19-22nM。
本說明書係以序列表之電腦可讀形式(CRF)拷貝申請。標題為10624-294-228_SEQLIST.txt之CRF(其係於2016年9月22日創建,且係50,870字節大小)與序列表之紙質拷貝相同且其全文以引用方式併入本文中。
<110> 美商西建公司
<120> PD-1結合蛋白及其使用方法
<140> TBA
<141> On even date herewith
<150> 62/234,535
<151> 2015-09-29
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<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
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<213> 人工序列
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<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-3及PD1AB-6之VL CDR1
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<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6之VL FR2
<210> 16
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6之VL FR3
<210> 17
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6之VL FR4
<210> 18
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-3之VL FR3
<210> 19
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3及PD1AB-4之VH FR1
<210> 20
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6之VH FR2
<210> 21
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-5及PD1AB-6之VH FR3
<210> 22
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1、PD1AB-2、PD1AB-3、PD1AB-4、PD1AB-5及PD1AB-6之VH FR4
<210> 23
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-3及PD1AB-4之VH FR3
<210> 24
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-5及PD1AB-6之VH FR1
<210> 25
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1及PD1AB-6之VL
<210> 26
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-2、PD1AB-4及PD1AB-5之VL
<210> 27
<211> 341
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-3之VL
<210> 28
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-1及PD1AB-2之VH
<210> 29
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-3及PD1AB-4之VH
<210> 30
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-5及PD1AB-6之VH
<210> 31
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-IgG1之輕鏈
<210> 32
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-IgG1之重鏈
<210> 33
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-K3之重鏈
<210> 34
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-4P之重鏈
<210> 35
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-4PE之重鏈
<210> 36
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類IgG1之Fc區
<210> 37
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有K322A取代之人類IgG1之Fc區,亦稱作IgG1-K322A Fc區
<210> 38
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類IgG4之Fc區
<210> 39
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有S228P取代之人類IgG4之Fc區,亦稱作IgG4P Fc區
<210> 40
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有S228P及L235E取代之人類IgG4之Fc區,亦稱作IgG4PE Fc區
<210> 41
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體PD1AB-6-IgG1之輕鏈之恆定區
<210> 42
<211> 198
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<223> 人類PD-1
<210> 43
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 編碼用於抗PD-1抗體結合之表位之人類PD-1的胺基酸100-109
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 編碼用於抗PD-1抗體結合之表位之人類PD-1的胺基酸100-105
Claims (75)
- 一種結合至PD-1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)輕鏈可變區(VL),其包含:包含SEQ ID NO:1之VL互補決定區1(CDR1);包含SEQ ID NO:2之VL CDR2;及包含SEQ ID NO:3之VL CDR3;及(b)重鏈可變區(VH),其包含:包含SEQ ID NO:4之VH CDR1;包含SEQ ID NO:5之VH CDR2;及包含SEQ ID NO:6之VH CDR3。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:8胺基酸序列之VL。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:10胺基酸序列之VL。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:11胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段 包括包含SEQ ID NO:12胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:13胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:11胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:8胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10胺基酸序列之VL;及 (b)包含SEQ ID NO:11胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12胺基酸序列之VH。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:10胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13胺基酸序列之VH。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG1 Fc區或其突變體。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG1-K322A Fc區。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4 Fc區或其突變體。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4P Fc區。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4PE Fc區。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括重鏈Fc區,該重鏈Fc區包含選自由SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40組成之群之胺基酸序列。
- 如請求項1及7至12中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區。
- 如請求項18之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段進一步包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:31胺基酸序列之輕鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:32胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含: (a)包含SEQ ID NO:31胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:32胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:33胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:33胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:34胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:31胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:34胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:35胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段 包含:(a)包含SEQ ID NO:31胺基酸序列之輕鏈;及(b)包含SEQ ID NO:35胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係單株抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係人類化抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係人類抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係嵌合抗體。
- 如請求項31之抗體或其抗原結合片段,其中該人類化抗體係去免疫抗體。
- 如請求項31之抗體或其抗原結合片段,其中該人類化抗體係複合人類抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段係Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、雙價抗體、三價抗體、四價抗體或從抗體片段形成之多特異性抗體。
- 如請求項1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段 經偶聯至試劑。
- 如請求項37之抗體或其抗原結合片段,其中該試劑選自由以下組成之群:放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物及化學發光化合物。
- 一種結合至PD-1之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)VL,其包含:包含SEQ ID NO:7之VL CDR1;包含SEQ ID NO:2之VL CDR2;及包含SEQ ID NO:3之VL CDR3;及(b)VH,其包含:包含SEQ ID NO:4之VH CDR1;包含SEQ ID NO:5之VH CDR2;及包含SEQ ID NO:6之VH CDR3。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:9胺基酸序列之VL。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:11胺基酸序列之VH。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:12胺基酸序列之VH。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:13胺基酸序列之VH。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:11胺基酸序列之VH。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:12胺基酸序列之VH。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含:(a)包含SEQ ID NO:9胺基酸序列之VL;及(b)包含SEQ ID NO:13胺基酸序列之VH。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG1 Fc區或其突變體。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG1-K322A Fc區。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4 Fc區或其突變體。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4P Fc區。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包含人類IgG4PE Fc區。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括重鏈Fc區,該重鏈Fc區包含選自由SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39或SEQ ID NO:40組成之群之胺基酸序列。
- 如請求項39及44至46中任一項之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區。
- 如請求項52之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段進一步包括包含SEQ ID NO:41之胺基酸序列之輕鏈恆定區。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:32胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:33胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:34胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段包括包含SEQ ID NO:35胺基酸序列之重鏈。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係單株抗體。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係人類化抗體。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係人類抗體。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體係嵌合抗體。
- 如請求項60之抗體或其抗原結合片段,其中該人類化抗體係去免疫抗體。
- 如請求項60之抗體或其抗原結合片段,其中該人類化抗體係複合人類抗體。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段係Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、scFv、dsFv、雙價抗體、三價抗體、四價抗體或從抗體片段形成之多特異性抗體。
- 如請求項39之抗體或其抗原結合片段,其中該抗體或其抗原結合片段經偶聯至試劑。
- 如請求項66之抗體或其抗原結合片段,其中該試劑選自由以下組成之群:放射性同位素、金屬螯合劑、酶、螢光化合物、生物發光化合物及化學發光化合物。
- 一種組合物,其包含如請求項1或39之抗體或其抗原結合片段及醫藥上可接受之載劑。
- 一種多核苷酸,其包含編碼如請求項1或39之抗體之VH、VL、或VH及VL二者之核苷酸序列。
- 如請求項69之多核苷酸,其中該多核苷酸係可操作連接至啟動子。
- 一種載體,其包含如請求項69之多核苷酸。
- 一種細胞,其包含如請求項69之多核苷酸。
- 一種細胞,其包含如請求項71之載體。
- 一種細胞,其產生如請求項1或39之抗體或其抗原結合片段。
- 一種套組,其包含如請求項1或39之抗體或其抗原結合片段。
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