CN107206088A - 使用pd‑1轴拮抗剂和hpk1拮抗剂用于治疗癌症的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

提供了用于增强免疫应答和治疗癌症的组合物和方法。组合物包含PD‑1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。PD‑1轴拮抗剂包括PD‑1拮抗剂，PD‑L1拮抗剂，和PD‑L2拮抗剂。PD‑1轴拮抗剂能抑制PD‑L1和/或PD‑L2对PD‑1的结合。HPK1拮抗剂包括抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性的化合物。用于增强免疫应答或治疗癌症的方法包括对有需要的受试者顺序或同时施用PD‑1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

Description

使用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂用于治疗癌症的方法和组 合物

相关申请

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序列表

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发明背景

肿瘤学家用于治疗癌症的主要治疗形态是手术切除，放射疗法，和经典的化疗药物。不幸的是，手术切除对于许多肿瘤或形式的癌症不是一个可行的选项。而且，放射疗法和化疗药物不仅靶向患病细胞，并且因此以伤害健康细胞告终。通过利用抗原的肿瘤特异性表达或肿瘤细胞内特定蛋白质的不当过表达或活化，正在开发更加特异性地靶向肿瘤细胞的治疗剂，但是肿瘤细胞倾向于突变且能变成对特异性靶向肿瘤细胞的药物有抗性的。

一种新的癌症治疗范例已经浮现，它驾驭患者自己的免疫系统来克服许多癌症利用的免疫逃避策略及增强抗肿瘤免疫。一种此类策略是抑制免疫应答的负调节物，它们在正常情况下发挥维持外周耐受的功能，容许肿瘤抗原识别为非自身实体。

发明概述

本文中提供了包含(编程性死亡-1)PD-1轴拮抗剂和造血先祖激酶1(HPK1)拮抗剂的组合物。该PD-1轴拮抗剂能结合及拮抗PD-1或它的两种配体(PD-L1或PD-L2)任一，干扰PD-1下游的信号转导或阻止配体结合PD-1受体。此类组合物可用于在受试者中增强免疫功能，特别是抗肿瘤免疫。因而，包含这两种拮抗剂的组合物还可用于治疗想要增强免疫原性，诸如提高肿瘤免疫原性来治疗癌症的状况。

附图简述

图1描绘人HPK1的长同等型，其包含一个氨基末端激酶域，四个富脯氨酸(PR)基序和一个羧基末端citron(枸橼)同源域。

图2展现HPK1激酶抑制和抗PDL1抗体的抗肿瘤效果。比较性数据显示HPK1激酶失效敲入小鼠中与野生型小鼠中相比抗PD-L1抗体抗肿瘤功效的差异。图2提供用对照抗体或抗PD-L1抗体处理的野生型和HPK1.kd小鼠的平均肿瘤体积。线图代表18-20只小鼠每组。天值代表抗PD-L1抗体处理起始日后的天数。

图3展现HPK1激酶抑制和抗PD-1抗体的抗肿瘤效果。比较性数据显示HPK1激酶失效敲入小鼠中与野生型小鼠中相比抗PD-1抗体抗肿瘤功效的差异。图3提供用对照抗体或抗PD-1抗体处理的野生型和HPK1.kd小鼠的平均肿瘤体积。线图代表15只小鼠每组。天值代表抗PD-1抗体处理起始日后的天数。

发明详述

I.定义

术语“抗体”包括单克隆抗体(包括具有免疫球蛋白Fc区的全长抗体)，具有多表位特异性的抗体组合物，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，双抗体，和单链分子，及抗体片段(例如Fab，F(ab’)₂，和Fv)。术语“免疫球蛋白”(Ig)在本文中与“抗体”可互换使用。

基本的4链抗体单元是由两条相同的轻链(L)和两条相同的重链(H)构成的异四聚体糖蛋白。IgM抗体由5个基本的异四聚体单元及称作J链的另外多肽组成，而且包含10个抗原结合位点，而IgA抗体包含与J链组合的2-5个能聚合而形成多价装配物的基本4链单元。在IgG的情况中，4链单元通常是约150,000道尔顿。每条轻链通过一个共价二硫键与重链相连，而两条重链通过一个或多个二硫键彼此相连，二硫键的数目取决于重链的同种型。每条重链和轻链还具有间隔规律的链内二硫桥。每条重链在N-末端具有一个可变域(V_H)，接着是三个(对于α和γ链)或四个(对于μ和ε同种型)恒定域(C_H)。每条轻链在N-末端具有一个可变域(V_L)，接着是其另一端的一个恒定域(C_L)。V_L与V_H排列在一起，而C_L与重链第一恒定域(C_H1)排列在一起。认为特定的氨基酸残基在轻链和重链可变域之间形成界面。一个V_H和一个V_L一起配对而形成一个抗原结合位点。关于不同类别抗体的结构和性质，参见例如Basicand Clinical Immunology,第8版,Daniel P.Sties,Abba I.Terr and TristramG.Parsolw(编),Appleton&Lange,Norwalk,CT,1994,第71页和第6章。根据其恒定域氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的L链可归入两种截然不同类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。根据其重链恒定域(C_H)氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类别或同种型。有五类免疫球蛋白：IgA，IgD，IgE，IgG和IgM，分别具有称作α，δ，ε，γ和μ的重链。根据C_H序列和功能的较小差异，γ和α类可进一步分为亚类，例如人类表达下列亚类：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3，IgG4，IgA1和IgA2。

抗体的“可变区”或“可变域”指抗体重链或轻链的氨基末端结构域。重链可变域和轻链可变域分别可以称为“VH”和“VL”。这些结构域一般是抗体的最易变部分(相对于同一类的其它抗体而言)且包含抗原结合位点。

术语“可变的”指可变域中的某些区段在抗体间序列差异广泛的实情。V结构域介导抗原结合且限定特定抗体对其特定抗原的特异性。然而，变异性并非均匀分布于可变域的整个跨度。而是，它集中于轻链和重链可变域二者中称作高变区(HVR)的三个区段。可变域中更加高度保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR区，它们大多采取β-折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β-折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR区非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR一起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat等,Sequences of Immunological Interest,第5版,National Institute of Health,Bethesda,MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体在抗体依赖性细胞的细胞毒性中的参与。

术语“单克隆抗体”在用于本文时指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体相同，除了可能以极小量存在的可能的天然存在突变和/或翻译后修饰(例如异构化，酰胺化)外。单克隆抗体是高度特异性的，针对单一抗原性位点。与典型的包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。在它们的特异性以外，单克隆抗体的优势在于它们是由杂交瘤培养物合成的，未受到其它免疫球蛋白的污染。修饰语“单克隆”指示抗体从基本上同质的抗体群获得的特征，不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，当前公开的组合物和方法的单克隆抗体可通过多种技术来生成，包括例如杂交瘤法(例如Kohler and Milstein.,Nature,256:495-97(1975)；Hongo等,Hybridoma,14(3):253-260(1995),Harlow等,Antibodies:ALaboratory Manual,(Cold Spring Harbor Laboratory Press,2nd ed.1988)；Hammerling等,in:Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563-681(Elsevier,N.Y.,1981))，重组DNA法(参见例如美国专利No.4,816,567)，噬菌体展示技术(参见例如Clackson等,Nature 352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Nat.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；Lee等,J.Immunol.Methods 284(1-2):119-132(2004))，及用于在具有部分或整个人免疫球蛋白基因座或编码人免疫球蛋白序列的基因的动物中生成人或人样抗体的技术(参见例如WO1998/24893；WO 1996/34096；WO 1996/33735；WO 1991/10741；Jakobovits等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551(1993)；Jakobovits等,Nature 362:255-258(1993)；Bruggemann等,Year in Immunol.7:33(1993)；美国专利No.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；及5,661,016；Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)；Lonberg等,Nature 368:856-859(1994)；Morrison,Nature 368:812-813(1994)；Fishwild等,Nature Biotechnol.14:845-851(1996)；Neuberger,Nature Biotechnol.14:826(1996)；Lonberg and Huszar,Intern.Rev.Immunol.13:65-93(1995))。

术语“裸抗体(裸露的抗体)”指未缀合细胞毒性模块或放射性标记物的抗体。

术语“全长抗体”，“完整抗体”和“全抗体”可互换使用，指基本上完整形式的抗体，与抗体片段不同。具体而言，完整抗体包括那些具有重链和轻链(包括Fc区)的。恒定域可以是天然序列恒定域(例如人天然序列恒定域)或其氨基酸序列变体。在有些情况中，完整抗体可具有一项或多项效应器功能。

“抗体片段”包含完整抗体的一部分，在大多数情况中，完整抗体的抗原结合和/或可变区。抗体片段的例子包括Fab，Fab’，F(ab’)₂和Fv片段；双抗体；线性抗体(参见美国专利5,641,870,实施例2；Zapata等,Protein Eng.8(10):1057-1062(1995))；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称作“Fab”片段，和一个残余“Fc”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。Fab片段由完整L链及H链可变区域(V_H)和重链第一恒定域(C_H1)组成。每个Fab片段对于抗原结合是单价的，即它具有一个抗原结合位点。胃蛋白酶处理抗体产生一个较大F(ab’)₂片段，它大体相当于两个通过二硫键相连的Fab片段，具有不同抗原结合活性且仍能够交联抗原。Fab’片段因在C_H1结构域的羧基末端增加了少数残基而与Fab片段有所不同，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’-SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。F(ab’)₂抗体片段最初是作为成对Fab’片段生成的，在Fab’片段之间具有铰链半胱氨酸。还知道抗体片段的其它化学偶联。

Fc片段包含通过二硫键保持在一起的两条H链的羧基末端部分。抗体的效应器功能由Fc区中的序列来决定，该区域也受到在某些类型的细胞上找到的Fc受体(FcR)识别。

“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。此片段由紧密，非共价结合的一个重链可变区和一个轻链可变区的二聚体组成。从这两个结构域的折叠中生发出六个高变环(重链和轻链各3个环)，贡献出抗原结合的氨基酸残基并赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个HVR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，尽管亲和力低于完整结合位点。

“单链Fv”，也缩写成“sFv”或“scFv”，是包含连接成一条多肽链的V_H和V_L抗体结构域的抗体片段。在一些情况中，sFv多肽在V_H与V_L结构域之间进一步包含多肽接头，其使得sFv能够形成结合抗原的期望结构。关于sFv的综述参见Pluckthun，于《The Pharmacologyof Monoclonal Antibodies》，第113卷，Rosenburg和Moore编，Springer-Verlag，NewYork，第269-315页，1994。

在当前公开的组合物和方法中有用的“功能性片段”包含完整抗体的一部分，一般包括完整抗体的抗原结合或可变区或抗体的保留或具有改良FcR结合能力的Fc区。抗体片段的例子包括线性抗体，单链抗体分子和自抗体片段形成的多特异性抗体。

术语“双抗体”指通过在V_H和V_L结构域之间使用短接头(约5-10个残基)构建sFv片段(见上一段)而制备的小型抗体片段，由于接头短，使得V结构域实行链间而非链内配对，由此导致二价片段，即具有两个抗原结合位点的片段。双特异性双抗体是两个“交叉”sFv片段的异二聚体，其中两种抗体的V_H和V_L结构域存在于不同多肽链上。双抗体更详细的描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)。

在当前公开的组合物和方法中有用的单克隆抗体具体包括“嵌合”抗体(免疫球蛋白)，其中重链和/或轻链的一部分与衍生自特定物种或属于特定抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，而链的剩余部分与衍生自另一物种或属于另一抗体类别或亚类的抗体中的相应序列相同或同源，以及此类抗体的片段，只要它们展现出期望的生物学活性(美国专利No.4,816,567；Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-6855(1984))。本文中感兴趣的嵌合抗体包括“灵长类化”抗体，其中抗体的抗原结合区衍生自通过用例如感兴趣抗原免疫短尾猴(macaque monkey)而生成的抗体。如本文中所使用的，“人源化抗体”作为“嵌合抗体”的一个子集使用。

非人(例如鼠)抗体的“人源化”形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗体。在一个实施方案中，人源化抗体指人免疫球蛋白(受体抗体)中的HVR残基(下文限定)用具有期望特异性，亲和力和/或能力的非人物种(供体抗体)(诸如小鼠，大鼠，家兔或非人灵长类动物)的HVR残基替换的免疫球蛋白。在有些情况中，将人免疫球蛋白的框架(“FR”)残基用相应的非人残基替换。此外，人源化抗体可包含在受体抗体中或在供体抗体中没有找到的残基。进行这些修饰可以是为了进一步改进抗体的性能，诸如结合亲和力。一般而言，人源化抗体将包含至少一个，通常两个基本上整个如下的可变域，其中所有或基本上所有高变环对应于非人免疫球蛋白序列的高变环，且所有或基本上所有FR区是人免疫球蛋白序列的FR区，尽管FR区可包含一处或多处改进抗体性能(诸如结合亲和力，异构化，免疫原性等)的个别FR残基替代。FR中这些氨基酸替代的数目，H链中通常不超过6处，L链中通常不超过3处。人源化抗体任选还将包含至少部分免疫球蛋白恒定区(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定区。更多细节参见例如Jones等,Nature 321:522-525(1986)；Riechmann等,Nature332:323-329(1988)；及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)。还可参见例如Vaswani and Hamilton,Ann.Allergy,Asthma&Immunol.1:105-115(1998)；Harris,Biochem.Soc.Transactions 23:1035-1038(1995)；Hurle and Gross,Curr.Op.Biotech.5:428-433(1994)；及美国专利No.6,982,321和7,087,409。

“人抗体”指拥有与由人生成的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列和/或使用本文所公开的用于生成人抗体的任何技术生成的抗体。人抗体的这种定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.227:381(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Cole等,MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner等,J.Immunol.147(1):86-95(1991)。还可参见van Dijk and van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性刺激而生成人抗体但其内源基因座已经失去能力的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSE^TM技术)。还可参见例如Li等,Proc.Natl.Ascad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。

术语“高变区”，“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，三个在VL中(L1，L2，L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如Xu等，Immunity 13:37-45(2000)；Johnsonand Wu,于:Methods in Molecular Biology 248:1-25(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在骆驼(camelid)抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Casterman等,Nature 363:446-448(1993)；Sheriff等,NatureStruct.Biol.3:733-736(1996)。

本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(CDR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991))。Chothia改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbM HVR代表Kabat HVR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到OxfordMolecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触”HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。

HVR可包括如下“延伸的HVR”：VL中的24-36或24-34(L1)，46-56或50-56(L2)和89-97或89-96(L3)及VH中的26-35(H1)，50-65或49-65(H2)和93-102，94-102，或95-102(H3)。对于这些定义中的每一个，可变域残基是依照Kabat等,见上文编号的。

表述“依照Kabat的可变域残基编号方式”或“依照Kabat的氨基酸位置编号方式”及其变体指Kabat等,见上文中用于抗体重链可变域或轻链可变域编辑的编号系统。使用此编号系统，实际的线性氨基酸序列可包含较少或另外的氨基酸，对应于可变域FR或HVR的缩短或插入。例如，重链可变域可包含H2残基52后的单一氨基酸插入(依照Kabat为残基52a)及重链FR残基82后的插入残基(例如依照Kabat为残基82a，82b和82c等)。给定抗体的Kabat残基编号方式可通过将抗体序列与“标准”Kabat编号序列对比同源区来确定。

“框架”或“FR”残基指可变域中除本文中所定义的HVR残基外的那些残基。

“人共有框架”或“受体人框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常见的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991)中的亚组。例子包括对于V_L，亚组可以是亚组κI，κII，κIII或κIV，如在Kabat等,见上文中的。另外，对于VH，亚组可以是亚组I，亚组II，或亚组III，如在Kabat等,见上文中的。或者，人共有框架可以自上述框架衍生，其中特定残基，诸如人框架残基通过比对供体框架序列与各种人框架序列的集合基于其与供体框架的同源性选择。自人免疫球蛋白框架“衍生”的受体人框架或人共有框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有先前存在的氨基酸序列变化。在一些实施方案中，先前存在的氨基酸变化的数目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。

“VH亚组III共有框架”包含从Kabat等，见上文的可变重链亚型III中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VH亚型III共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一项的至少一部分或整个全部：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(HC-FR1)(SEQ ID NO:15)，

WVRQAPGKGLEWV(HC-FR2)(SEQ ID NO:16)，

RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(HC-FR3)(SEQ ID NO:17)，

WGQGTLVTVSA(HC-FR4)(SEQ ID NO:18)。

“VLκI共有框架”包含从Kabat等，见上文的可变轻链κ亚型I中的氨基酸序列获得的共有序列。在一个实施方案中，VL亚型I共有框架氨基酸序列包含下列各序列中每一项的至少一部分或整个：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(LC-FR1)(SEQ ID NO:19)，

WYQQKPGKAPKLLIY(LC-FR2)(SEQ ID NO:20)，

GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(LC-FR3)(SEQ ID NO:21)，

FGQGTKVEIKR(LC-FR4)(SEQ ID NO:22)。

指定位置(例如Fc区的)处的“氨基酸修饰”指指定残基的替代或删除，或指定残基附近至少一个氨基酸残基的插入。指定残基“附近”的插入意味着其一个至两个残基内的插入。插入可以在指定残基的N端或C端。在一些实施方案中，氨基酸修饰是替代。

“亲和力成熟的”抗体指在抗体的一个或多个HVR中具有一处或多处改变，导致该抗体对抗原的亲和力与没有这些改变的亲本抗体相比有所改进的抗体。在一个实施方案，亲和力成熟的抗体具有纳摩尔或甚至皮摩尔量级的对靶抗原的亲和力。亲和力成熟的抗体可通过本领域已知规程来生成。例如，Marks等,Bio/Technology 10:779-783(1992)记载了通过VH和VL结构域改组进行的亲和力成熟。以下文献记载了HVR和/或框架残基的随机诱变：例如，Barbas等,Proc.Nat.Acad.Sci.USA 91:3809-3813(1994)；Schier等,Gene 169:147-155(1995)；Yelton等,J.Immunol.155:1994-2004(1995)；Jackson等,J.Immunol.154(7):3310-9(1995)；Hawkins等,J.Mol.Biol.226:889-896(1992)。

如本文中使用的，术语“特异性结合”或“对…特异性的”指可测量且可再现的相互作用，诸如靶物和抗体之间的结合，其确定在存在分子(包括生物学分子)的异质群体的情况中靶物的存在。例如，特异性结合靶物(其可以是表位)的抗体是以比其结合其它无关靶物更大的亲和力，亲合力，更容易，和/或以更大的持续时间结合此靶物的抗体。在一个实施方案中，抗体结合无关靶物的程度小于抗体结合此靶物的约10％，如例如通过放射性免疫测定法(RIA)测量的。在某些实施方案中，特异性结合靶物的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗体特异性结合蛋白质上在来自不同物种的蛋白质间保守的表位。在另一个实施方案中，特异性结合可以包括但不需要排他结合。

“特异性拮抗剂”意指比无关靶物更大地降低，抑制，或以其它方式减小限定靶物的活性的药剂。例如，HPK1特异性拮抗剂降低HPK1的至少一种生物学活性的量在统计学上大于拮抗剂对任何其它蛋白质(例如其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制效果。在一些实施方案中，拮抗剂对于靶物的IC₅₀是拮抗剂对非靶物的IC₅₀的约90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％，20％，10％，5％，1％，0.1％，0.01％，0.001％或更少。

如本文中使用的，术语“免疫粘附素”指组合异源蛋白质(“粘附素”)的结合特异性与免疫球蛋白恒定域的效应器功能的抗体样分子。在结构上，免疫粘附素包含具有与抗体的抗原识别和结合位点不同的期望结合特异性的氨基酸序列(即，是“异源的”)和免疫球蛋白恒定域序列的融合物。免疫粘附素分子的粘附素部分通常是至少包含受体或配体的结合位点的连续氨基酸序列。免疫粘附素中的免疫球蛋白恒定域序列可以获自任何免疫球蛋白，诸如IgG-1，IgG-2(包括IgG2A和IgG2B)，IgG-3，或IgG-4亚型，IgA(包括IgA-1和IgA-2)，IgE，IgD或IgM。Ig融合物可以包含用本文中描述的多肽或抗体的域替换Ig分子内的至少一个可变区的取代。在一些实施方案中，免疫球蛋白融合物包括IgG1分子的铰链，CH2和CH3，或铰链，CH1，CH2和CH3区。为了生成免疫球蛋白融合物，还可见美国专利No.5,428,130。IgFc和细胞表面受体胞外域的免疫粘附素组合有时称作可溶性受体。

“融合蛋白”和“融合多肽”指具有两个共价连接在一起的部分的多肽，其中每个部分是具有不同特性的多肽。特性可以是生物学特性，诸如体外或体内活性。特性也可以是简单的化学或物理特性，诸如对靶分子的结合，反应的催化，等等。两个部分可以通过单一肽键直接连接，或者经由肽接头连接，但是为彼此以符合读码框的方式。

“阻断性”抗体或“拮抗性”抗体是抑制或降低其结合的抗原的生物学活性的抗体。在一些实施方案中，阻断性抗体或拮抗性抗体实质性或完全抑制抗原的生物学活性。

术语“Fc区”在本文中用于定义免疫球蛋白重链的C端区，包括天然序列Fc区和变异Fc区。虽然免疫球蛋白重链Fc区的边界可以变化，但是人IgG重链Fc区通常定义为自其Cys226或Pro230位置的氨基酸残基至羧基末端的区段。Fc区的C-末端赖氨酸(残基447，依照EU编号系统)可以消除，例如在生产或纯化抗体的过程中，或者通过对编码抗体重链的核酸进行重组工程改造。因而，完整抗体的组合物可包括所有K447残基都被消除的抗体群，无一K447残基被消除的抗体群，以及混合了有和无K447残基的抗体的抗体群。对于在本文所述抗体中使用而言合适的天然序列Fc区包括人IgG1，IgG2(IgG2A，IgG2B)，IgG3和IgG4。

“Fc受体”或“FcR”描述结合抗体Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然序列人FcR。此外，FcR可以是结合IgG抗体的FcR(γ受体)，包括FcγRI，FcγRII和FcγRIII亚类的受体，包括这些受体的等位变体和可变剪接形式。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”)和FcγRIIB(“抑制受体”)，它们具有相似的氨基酸序列，区别主要在其胞质结构域中。活化受体FcγRIIA在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)(参见M.Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR的综述参见Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)；Capel等,Immunomethods 4:25-34(1994)；de Haas等,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR，包括那些未来将会鉴定的。

术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体，FcRn，它负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。测量对FcRn的结合的方法是已知的(参见例如Ghetie and Ward,Immunol Today 18(12):592-8(1997)；Ghetie等,Nature Biotechnology,15(7):637-40(1997)；Hinton等,J.Biol.Chem 279(8):6213-6(2004)；and WO2004/92219(Hinton等))。可测定人FcRn高亲和力结合多肽与FcRn的体内结合和血清半衰期，例如在表达人FcRn的转基因小鼠或经转染的人细胞系中，或者在施用了具有变异Fc区的多肽的灵长类动物中。WO2004/42072(Presta)记载了对FcR的结合得到改良或消除的抗体变体。还可参见例如Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。

术语“胞内抗体”(intrabody)指能够在细胞内结合细胞内蛋白质的抗体。胞内抗体一般经由投递编码该抗体的表达盒而在细胞内表达，通常作为scFv，而且包含多种定位信号以将抗体靶向感兴趣的细胞内隔室(参见Lo et al.(2008)Handb Exp Pharmacol181:343-373，将其完整收入本文)。使胞内抗体稳定化的方法是本领域已知的，而且包括但不限于导致超稳定性的对免疫球蛋白VL域的修饰(Cohen(1998)Oncogene 17(19):2445-2456)或作为与其它稳定的细胞内蛋白质，诸如麦芽糖结合蛋白的融合蛋白表达抗体(Shaki-Loewenstein(2005)J Immunol Methods 303(1-2):19-39)。

短语“实质性降低”或“实质性不同”在用于本文时表示两个数值(通常一个与某分子有关而另一个与参照/比较分子有关)之间足够高的差异程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有统计学显著性。作为参照/比较分子该数值的函数，所述两个数值之间的差异例如大于约10％，大于约20％，大于约30％，大于约40％，和/或大于约50％。

短语“实质性相似”或“实质性相同”在用于本文时表示两个数值(例如，一个涉及本文所述抗体而另一个涉及参照/比较抗体)之间足够高的相似程度，以致本领域技术人员将认为在用所述数值(例如Kd值)所测量的生物学特性背景内两个数值之间的差异具有很小的或没有生物学和/或统计学显著性。作为参照/比较值的函数，所述两个数值之间的差异例如小于约50％，小于约40％，小于约30％，小于约20％，和/或小于约10％。

如本文中使用的，术语“细胞因子”一般指由一种细胞群体释放的，作为细胞间介质对另一细胞起作用或者对生成该蛋白质的细胞具有自分泌影响的蛋白质。此类细胞因子的例子包括淋巴因子，单核因子；白介素(“IL”)，诸如IL-1，IL-1α，IL-2，IL-3，IL-4，IL-5，IL-6，IL-7，IL-8，IL-9，IL10，IL-11，IL-12，IL-13，IL-15，IL-17A-F，IL-18至IL-29(诸如IL-23)，IL-31，包括rIL-2；肿瘤坏死因子，诸如TNF-α或TNF-β，TGF-β1-3；和其它多肽因子，包括白血病抑制因子(“LIF”)，睫状节神经细胞营养因子(“CNTF”)，CNTF样细胞因子(“CLC”)，心肌营养蛋白(“CT”)，和kit配体(“KL”)。

如本文中使用的，术语“趋化因子”指具有选择性诱导白细胞的趋化性和活化的能力的可溶性因子(例如细胞因子)。它们还触发血管发生，炎症，伤口愈合，和肿瘤发生的过程。趋化因子的一个非限制性例子是IL-8，即鼠角质形成细胞化学引诱物(KC)的人同系物。

II.包含PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂的组合物及其使用方法

本文中提供了包含PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂的组合物及其使用方法。本文中呈现的数据证明HPK1抑制和PD-1轴阻断的组合以超过叠加的方式降低肿瘤细胞的生长。PD-1(连同它的配体PD-L1和PD-L2)和HPK1二者作为T细胞活化的负调节物发挥功能。HPK1还负调节B细胞，而且抑制HPK1导致增强的抗原呈递细胞(诸如树突细胞)的抗原呈递。PD-L1在许多癌症中过表达，而且伴随的PD-1过表达常常在肿瘤浸润性T细胞中发生，导致削弱T细胞活化和逃避免疫监督，这促成受损的抗肿瘤免疫应答(Keir ME et al.(2008)Annu.Rev.Immunol.26:677)。虽然不受任何理论或作用机制束缚，认为同时靶向PD-1轴和HPK1二者以超过叠加的方式增强抗肿瘤免疫应答，导致出乎意料的肿瘤生长降低。在一些实施方案中，所得效果大于预期的或计算的分开的各个成分的叠加效应。如此，包含PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合物在增强免疫应答和治疗癌症中找到令人惊讶地有效的用途。

A.PD-1轴拮抗剂

编程性死亡-1(PD-1)蛋白，也称作CD279或SLEB2，是一种I型跨膜蛋白和B7-CD28家族的T细胞调节物的成员。PD-1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Ishida et al.(1992)EMBO J 11(11):3887-3895，通过援引将其完整收入本文)。PD-1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含SEQ ID NO:1(GenBank登录号NM_005018.2的核苷酸69-935)中所列人PD-1多核苷酸和SEQ ID NO:2中所列所编码的288个氨基酸的人PD-1多肽(登录号NP_005009.2)。

为了容易提及，会将它们涉及人PD-1讨论PD-1多肽的基序，人PD-1由包含Ig样V型域(aa35-145)的胞外域(aa35-145)，接着是跨膜域(aa171-191)，和具有免疫受体基于酪氨酸的抑制性基序(ITIM)和免疫受体基于酪氨酸的开关基序(ITSM)(它们中的后者对于抑制TCR信号传导是至关重要的)的胞内尾(192-288)组成。

PD-1由活化的T细胞，B细胞，和髓样细胞表达。而且，大多数肿瘤浸润性T淋巴细胞相对于正常组织中的T淋巴细胞和外周血T淋巴细胞过表达PD-1(Ahmadzadeh et al.(2009)Blood 114(8):1537)。

PD-1具有两种已知的配体，编程性死亡配体1(PD-L1)和编程性死亡配体2(PD-L2)。PD-L1，也称作B7-H1，B7-4，CD274，和B7-H，是一种细胞表面蛋白质和B7家族的成员。PD-L1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Dong et al.(1999)Nat Med 5(12):1365-1369，通过援引将其完整收入本文)。PD-L1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含SEQ ID NO:3(GenBank登录号NM_014143.3的核苷酸109-981)中所列人PD-L1同等型1多核苷酸和SEQ IDNO:4中所列所编码的290个氨基酸的人PD-L1同等型1多肽(登录号NP_054862.1)；SEQ IDNO:5(GenBank登录号NM_001267706.1的核苷酸109-639)中所列人PD-L1同等型2多核苷酸和SEQ ID NO:6中所列所编码的176个氨基酸的人PD-L1同等型2多肽(登录号NP_001254635.1)；和SEQ ID NO:7(GenBank登录号XM_006716759.1的核苷酸213-749)中所列预测的人PD-L1同等型3多核苷酸和SEQ ID NO:8中所列所编码的178个氨基酸的预测的人PD-L1同等型3多肽(登录号XP_006716822.1)。

PD-L1是一种推定的跨膜蛋白质，具有推定的人PD-L1同等型胞外域(跨越氨基酸残基19-238)，螺旋跨膜域(aa239-259)，和推定的胞质尾(延伸aa260-290)。在胞外域内存在Ig样V型和Ig样C型域(分别为aa19-127和aa133-225)。

PD-L1在几乎所有类型的淋巴造血细胞上找到，由T细胞，B细胞，巨噬细胞和树突细胞组成性表达，而且认为是PD-1依赖性免疫遏制的主要介导物。PD-L1还由一些非造血细胞表达且在许多癌症中过表达，其中它的过表达常常与较差的预后有关(Okazaki T etal.,Intern.Immun.2007 19(7):813；Thompson RH et al.,Cancer Res 2006,66(7):3381)。

连同结合PD-1，PD-L1还已经显示结合CD80或B7-1，这抑制T细胞活化和细胞因子生成。

PD-1的另一种已知的配体，PD-L2，也称作B7-DC，Btdc，和CD273，是一种细胞表面蛋白质。PD-L2多核苷酸和多肽是本领域已知的(Latchman et al.(2001)Nature Immunol2:261-268；及Tseng et al.(2001)J Exp Med 193:839-845，通过援引将其每一篇完整收入本文)。PD-L2多核苷酸和多肽的非限制性例子包含SEQ ID NO:9(GenBank登录号NM_025239的核苷酸274-1095)中所列人PD-L2多核苷酸和SEQ ID NO:10中所列所编码的273个氨基酸的人PD-L2多肽(登录号NP_079515)。

像PD-L1一样，PD-L2是一种推定的跨膜蛋白质，具有推定的人PD-L2胞外域(跨越aa20-220)，推定的跨膜域(aa221-241)和推定的胞质域(aa242-273)。胞外域包含Ig样V型域(aa21-118)和Ig样C2型域(aa122-203)。

PD-L2由抗原呈递细胞表达，包括树突细胞，表达还在其它非造血组织中找到。

如本文中证明的，同时抑制HPK1和PD-1轴导致出乎意料地有效的抗肿瘤应答。如此，本文中提供的组合物包含PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

术语“PD-1轴拮抗剂”指抑制PD-1轴结合配偶(即PD-1，PD-L1，PD-L2)与一种或多种其结合配偶任一的相互作用，使得消除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍(结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤))的分子。如本文中使用的，PD-1轴拮抗剂包括PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂和PD-L2拮抗剂。

术语“PD-1拮抗剂”指降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种其结合配偶(诸如PD-L1，PD-L2)的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是抑制PD-1与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-1拮抗剂抑制PD-1与PD-L1和/或PD-L2的结合。例如，PD-1拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。PD-1拮抗剂包括那些结合PD-1的拮抗剂(在本文中也称作PD-1结合拮抗剂)和降低PD-1表达的分子，诸如本文中别处描述的沉默元件。

在一个实施方案中，PD-1拮抗剂降低负共刺激信号，从而增强对抗原识别的效应器应答，所述负共刺激信号由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白介导或经由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白。

在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是免疫粘附素，例如包含与恒定区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)融合的PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素。在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是AMP-224。AMP-224，也称作B7-DCIg，是一种PD-L2-Fc融合可溶性受体，记载于WO2010/027827和WO2011/066342。

在一些实施方案中，PD-1拮抗剂是抗PD-1抗体(例如人抗体，人源化抗体，或嵌合抗体)。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是选自下组的抗体片段：Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-1抗体是人抗体。

在一些实施方案中，抗PD-1抗体是选自由MDX-1106，Merck 3475和CT-011组成的组。

在一些实施方案中，抗PD-1抗体是MDX-1106(记载于WO2006/121168，将其完整收入本文)或其抗原结合片段。“MDX-1106”的备选名称包括MDX-1106-04，ONO-4538，BMS-936558，Nivolumab，和在一些实施方案中，抗PD-1抗体是Nivolumab(CAS注册号：946414-94-4)。在其它实施方案中，抗PD-1抗体是结合能够结合MDX-1106的表位或在竞争性结合测定法中与MDX-1106竞争结合PD-1的抗体。

在仍有又一个实施方案中，作为PD-1拮抗剂有用的抗PD-1抗体包含包含来自SEQID NO:23的重链氨基酸序列的重链和/或包含来自SEQ ID NO:24的轻链氨基酸序列的轻链。在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-1抗体还可以是抗PD-1抗体，其包含重链和/或轻链序列，其中：

(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:23)，或

(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:24)。

在其它实施方案中，抗PD-1抗体是Merck 3475，也称作MK-3475，SCH-900475，pembrolizumab，lambrolizumab，和(CAS注册号：1374853-91-4，而且记载于WO2009/114335和美国专利No.8,354,509，通过援引将其每一篇完整收入本文)，或其抗原结合片段。在其它实施方案中，抗PD-1抗体是结合能够结合Merck 3475的表位或在竞争性结合测定法中与Merck 3475竞争结合PD-1的抗体。

在仍有其它实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-1抗体是CT-011，也称作hBAT，hBAT-1，或pidilizumab(记载于WO2009/101611，通过援引将其完整收入本文)，或其抗原结合片段。在其它实施方案中，抗PD-1抗体是结合能够结合CT-011的表位或在竞争性结合测定法中与CT-011竞争结合PD-1的抗体。

抗PD-1抗体可包含人或鼠恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在这些实施方案的一些中，人恒定区是IgG1。在其它实施方案中，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在这些实施方案的一些中，鼠恒定区是IgG2A。

在一些实施方案中，抗PD-1抗体具有降低的或最小的效应器功能。在这些实施方案的一些中，最小效应器功能源自“效应器较小(effector-less)的Fc突变”或无糖基化(aglycosylation)。在一些实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

在当前公开的组合物和方法中有用的PD-1轴拮抗剂可包含PD-L1拮抗剂。术语“PD-L1拮抗剂”指降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种其结合配偶(诸如PD-1，B7-1)任一的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是抑制PD-L1与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-L1拮抗剂抑制PD-L1与PD-1和/或B7-1的结合。

在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种其结合配偶(诸如PD-1，B7-1)的相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。PD-L1拮抗剂包括结合PD-L1的分子(本文中也称作PD-L1结合拮抗剂)和降低PD-L1表达的分子，诸如本文中别处描述的沉默元件。

在一个实施方案中，PD-L1拮抗剂降低负共刺激信号，从而增强对抗原识别的效应器应答，所述负共刺激信号由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白介导或经由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白。

在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是免疫粘附素，诸如包含与免疫球蛋白序列的恒定域(例如Fc区)融合的PD-1的胞外或PD-L1结合部分的多肽。

在一些实施方案中，PD-L1拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是选自下组的抗体片段：Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体是人抗体。

在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体的非限制性例子及其生成方法记载于PCT专利申请WO 2010/077634 A1，通过援引将其收入本文。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体选自由YW243.55.S70，MPDL3280A，MDX-1105，和MEDI4736组成的组。

在一些实施方案中，抗PD-L1是MDX-1105抗体，也称作BMS-936559，(其记载于WO2007/005874，通过援引完整收入本文)或其抗原结合片段。在仍有其它实施方案中，抗PD-L1抗体是结合能够结合MDX-1105的表位或在竞争性结合测定法中与MDX-1105竞争结合PD-L1的抗体。

在其它实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736(其记载于WO2011/066389和US2013/034559，通过援引将其每一篇完整收入本文)或其抗原结合片段。在仍有其它实施方案中，抗PD-L1抗体是结合能够结合MEDI4736的表位或在竞争性结合测定法中与MEDI4736竞争结合PD-L1的抗体。

在一个实施方案中，抗PD-L1抗体含有重链可变区多肽，其包含HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3序列，其中：

(a)HVR-H1序列是GFTFSX₁SWIH(SEQ ID NO:29)；

(b)HVR-H2序列是AWIX₂PYGGSX₃YYADSVKG(SEQ ID NO:30)；

(c)HVR-H3序列是RHWPGGFDY(SEQ ID NO:31)；

进一步其中：X₁是D或G；X₂是S或L；X₃是T或S。

在一个具体的方面，X₁是D；X₂是S且X₃是T。在另一个方面，多肽进一步包含依照下式的HVR间并置的可变区重链框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在别的方面，框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：

HC-FR1是EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:15)

HC-FR2是WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:16)

HC-FR3是RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)

HC-FR4是WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:18)。

在又一个方面，重链多肽与可变区轻链进一步组合，所述可变区轻链包含HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3，其中：

(a)HVR-L1序列是RASQX₄X₅X₆TX₇X₈A(SEQ ID NO:32)；

(b)HVR-L2序列是SASX₉LX₁₀S(SEQ ID NO:33)；

(c)HVR-L3序列是QQX₁₁X₁₂X₁₃X₁₄PX₁₅T(SEQ ID NO:34)；

进一步其中：X₄是D或V；X₅是V或I；X₆是S或N；X₇是A或F；X₈是V或L；X₉是F或T；X₁₀是Y或A；X₁₁是Y，G，F，或S；X₁₂是L，Y，F或W；X₁₃是Y，N，A，T，G，F或I；X₁₄是H，V，P，T或I；X₁₅是A，W，R，P或T。

在又一个方面，X₄是D；X₅是V；X₆是S；X₇是A；X₈是V；X₉是F；X₁₀是Y；X₁₁是Y；X₁₂是L；X₁₃是Y；X₁₄是H；X₁₅是A。在又一个方面，轻链进一步包含依照下式的HVR间并置的可变区轻链框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，至少一个框架序列如下：

LC-FR1是DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:19)

LC-FR2是WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:20)

LC-FR3是GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:21)

LC-FR4是FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:22)。

在另一个实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体包含重链和轻链可变区序列，其中：

(a)重链包含HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3，其中进一步：

(i)HVR-H1序列是GFTFSX₁SWIH(SEQ ID NO:29)，

(ii)HVR-H2序列是AWIX₂PYGGSX₃YYADSVKG(SEQ ID NO:30)

(iii)HVR-H3序列是RHWPGGFDY(SEQ ID NO:31)，且

(b)轻链包含HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3，其中进一步：

(i)HVR-L1序列是RASQX₄X₅X₆TX₇X₈A(SEQ ID NO:32)，

(ii)HVR-L2序列是SASX₉LX₁₀S(SEQ ID NO:33)，和

(iii)HVR-L3序列是QQX₁₁X₁₂X₁₃X₁₄PX₁₅T(SEQ ID NO:34)

进一步其中：X₁是D或G；X₂是S或L；X₃是T或S；X₄是D或V；X₅是V或I；X₆是S或N；X₇是A或F；X₈是V或L；X₉是F或T；X₁₀是Y或A；X₁₁是Y，G，F，或S；X₁₂是L，Y，F或W；X₁₃是Y，N，A，T，G，F或I；X₁₄是H，V，P，T或I；X₁₅是A，W，R，P或T。

在一个具体的方面，X₁是D；X₂是S且X₃是T。在另一个方面，X₄是D；X₅是V；X₆是S；X₇是A；X₈是V；X₉是F；X₁₀是Y；X₁₁是Y；X₁₂是L；X₁₃是Y；X₁₄是H；X₁₅是A。在又一个方面，X₁是D；X₂是S且X₃是T，X₄是D；X₅是V；X₆是S；X₇是A；X₈是V；X₉是F；X₁₀是Y；X₁₁是Y；X₁₂是L；X₁₃是Y；X₁₄是H且X₁₅是A。

在别的方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，并且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：

HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:15)

HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:16)

HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)

HC-FR4 WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:18)。

在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：

LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:19)

LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:20)

LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:21)

LC-FR4 FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:22)。

抗PD-L1抗体可进一步包含人或鼠恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在这些实施方案的一些中，人恒定区是IgG1。在其它实施方案中，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在这些实施方案的一些中，鼠恒定区是IgG2A。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体具有降低的或最小的效应器功能。在这些实施方案的一些中，最小效应器功能源自“效应器较小(effector-less)的Fc突变”或无糖基化(aglycosylation)。在一些实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

在又一个实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体包含重链和轻链可变区序列，其中：

(a)重链进一步包含分别与GFTFSDSWIH(SEQ ID NO:35)，AWISPYGGSTYYADSVKG(SEQ ID NO:36)和RHWPGGFDY(SEQ ID NO:31)具有至少85％序列同一性的HVR-H1，HVR-H2和HVR-H3序列，或(b)轻链进一步包含分别与RASQDVSTAVA(SEQ ID NO:37)，SASFLYS(SEQID NO:38)和QQYLYHPAT(SEQ ID NO:39)具有至少85％序列同一性的HVR-L1，HVR-L2和HVR-L3序列。

在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：

HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:15)

HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:16)

HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)

HC-FR4 WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:18)。

在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：

LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:19)

LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:20)

LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:21)

LC-FR4 FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:22)。

抗PD-L1抗体可进一步包含人或鼠恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在这些实施方案的一些中，人恒定区是IgG1。在其它实施方案中，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在这些实施方案的一些中，鼠恒定区是IgG2A。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体具有降低的或最小的效应器功能。在这些实施方案的一些中，最小效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在一些实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

抗体YW243.55.S70(重和轻链可变区序列分别显示于SEQ ID NO.25和26)是一种抗PD-L1抗体，记载于WO 2010/077634 A1。在一些实施方案中，抗PD-L1抗体YW243.55.S70抗体或其抗原结合片段。在其它实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体包含结合能够结合YW243.55S70的表位或在竞争性结合测定法中与YW243.55.S70竞争结合PD-L1的抗体。

在另一个实施方案中，抗PD-L1抗体包含重链和轻链可变区序列，其中：

(a)重链可变区序列与下述重链可变区序列具有至少85％序列同一性：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:25)，或

(b)轻链可变区序列与下述轻链可变区序列具有至少85％序列同一性：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:26)。

在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：

HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:15)

HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:16)

HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)

HC-FR4 WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:18)。

在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：

LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:19)

LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:20)

LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:21)

LC-FR4 FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:22)。

抗PD-L1抗体可进一步包含人或鼠恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在这些实施方案的一些中，人恒定区是IgG1。在其它实施方案中，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在这些实施方案的一些中，鼠恒定区是IgG2A。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体具有降低的或最小的效应器功能。在这些实施方案的一些中，最小效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在一些实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

在其它实施方案中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(其记载于WO2010/077634，通过援引完整收入本文)或其抗原结合片段。在仍有其它实施方案中，抗PD-L1抗体是结合能够结合MPDL3280A的表位或在竞争性结合测定法中与MPDL3280A竞争结合PD-L1的抗体。

在另一个实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体包含重链和轻链可变区序列，其中：

(a)重链可变区序列与下述重链可变区序列具有至少85％序列同一性：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:27)，或

(b)轻链可变区序列与下述轻链可变区序列具有至少85％序列同一性：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:26)。

在一个具体的方面，序列同一性是86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％或100％。在另一个方面，重链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(HC-FR1)-(HVR-H1)-(HC-FR2)-(HVR-H2)-(HC-FR3)-(HVR-H3)-(HC-FR4)，且轻链可变区包含如下的HVR间并置的一个或多个框架序列：(LC-FR1)-(HVR-L1)-(LC-FR2)-(HVR-L2)-(LC-FR3)-(HVR-L3)-(LC-FR4)。在又一个方面，框架序列自人共有框架序列衍生。在又一个方面，重链框架序列自Kabat亚组I，II，或III序列衍生。在又一个方面，重链框架序列是VH亚组III共有框架。在又一个方面，一个或多个重链框架序列如下：

HC-FR1 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS(SEQ ID NO:15)

HC-FR2 WVRQAPGKGLEWV(SEQ ID NO:16)

HC-FR3 RFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAR(SEQ ID NO:17)

HC-FR4 WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO:28)。

在又一个方面，轻链框架序列自KabatκI，II，II或IV亚组序列衍生。在又一个方面，轻链框架序列是VLκI共有框架。在又一个方面，一个或多个轻链框架序列如下：

LC-FR1 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC(SEQ ID NO:19)

LC-FR2 WYQQKPGKAPKLLIY(SEQ ID NO:20)

LC-FR3 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:21)

LC-FR4 FGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:22)。

在仍有又一个实施方案中，在当前公开的组合物和方法中有用的抗PD-L1抗体包含包含来自SEQ ID NO:40的重链氨基酸序列的重链和/或包含来自SEQ ID NO:41的轻链氨基酸序列的轻链。在仍有又一个实施方案中，抗PD-1抗体包含重链和/或轻链序列，其中：

(a)重链序列与下述重链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:40)，或

(b)轻链序列与下述轻链序列具有至少85％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或100％序列同一性：

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQ ID NO:41)。

抗PD-L1抗体可进一步包含人或鼠恒定区。在一些实施方案中，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在这些实施方案的一些中，人恒定区是IgG1。在其它实施方案中，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在这些实施方案的一些中，鼠恒定区是IgG2A。

在一些实施方案中，抗PD-L1抗体具有降低的或最小的效应器功能。在这些实施方案的一些中，最小效应器功能源自“效应器较小(effector-less)的Fc突变”或无糖基化(aglycosylation)。在一些实施方案中，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

在其它实施方案中，在组合物和方法中有用的PD-1轴拮抗剂包含PD-L2拮抗剂。术语“PD-L2拮抗剂”指降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种其结合配偶(诸如PD-1)任一的相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂是抑制PD-L2与其结合配偶结合的分子。在一个具体的方面，PD-L2拮抗剂抑制PD-L2与PD-1的结合。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种其结合配偶(诸如PD-1)任一的相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。PD-L2拮抗剂包括结合PD-L2的分子(本文中也称作PD-L2结合拮抗剂)和降低PD-L2表达的分子，诸如本文中别处描述的沉默元件。

在一个实施方案中，PD-L2拮抗剂降低负共刺激信号，从而增强对抗原识别的效应器应答，所述负共刺激信号由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白介导或经由T淋巴细胞上表达的PD-1细胞表面蛋白。

在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂是免疫粘附素，诸如包含与免疫球蛋白序列的恒定域(例如Fc区)融合的PD-1的胞外或PD-L2结合部分的多肽。

在一些实施方案中，抗PD-L2抗体是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗PD-L2抗体是选自下组的抗体片段：Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段。在一些实施方案中，抗PD-L2抗体是人源化抗体。在一些实施方案中，抗PD-L2抗体是人抗体。

在仍有又一个具体方面，本文中描述的抗体(诸如抗PD-1抗体，抗PD-L1抗体，或抗PD-L2抗体)进一步包含人或鼠恒定区。在仍有又一个方面，人恒定区选自下组：IgG1，IgG2，IgG2，IgG3，IgG4。在仍有又一个具体方面，人恒定区是IgG1。在仍有又一个方面，鼠恒定区选自下组：IgG1，IgG2A，IgG2B，IgG3。在仍有又一个方面，鼠恒定区是IgG2A。在仍有又一个具体方面，抗体具有降低的或最小的效应器功能。在仍有又一个具体方面，最小效应器功能源自原核细胞中的生成。在仍有又一个具体方面，最小的效应器功能源自“效应器较小的Fc突变”或无糖基化。在仍有又一个方面，效应器较小的Fc突变是恒定区中的N297A或D265A/N297A替代。

在仍有又一个方面，本文中提供的是编码本文中描述的任何抗PD-1，抗PD-L1，或抗PD-L2抗体的核酸。在一些实施方案中，核酸进一步包含适合于表达核酸的载体，所述核酸编码所描述的抗PD-L1，抗PD-1，或抗PD-L2抗体之任一种。在仍有又一个具体方面，载体进一步包含适合于表达核酸的宿主细胞。在仍有又一个具体方面，宿主细胞是真核细胞或原核细胞。在仍有又一个具体方面，真核细胞是哺乳动物细胞，诸如中国仓鼠卵巢(CHO)。

可以使用本领域中已知的方法，例如通过如下的方法生成抗体或其抗原结合片段，所述方法包括在适合于生成此类抗体的条件下培养含有核酸的宿主细胞，并回收抗体，所述核酸编码适合于表达的形式的先前描述的抗PD-L1，抗PD-1，或抗PD-L2抗体之任一种。

在一些实施方案中，PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂，或PD-L2拮抗剂包含寡肽。“PD-1寡肽”，“PD-L1寡肽”，或“PD-L2寡肽”是分别结合(在一些实施方案中，特异性结合)PD-1，PD-L1或PD-L2负共刺激多肽的寡肽，分别包括受体，配体或信号传导组分，如本文中描述的。此类寡肽可以使用已知的寡肽合成方法学化学合成或者可以使用重组技术制备并纯化。此类寡肽的长度通常是至少约5个氨基酸，或者长度为至少约6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99，或100个氨基酸或更多。可以使用公知的技术鉴定此类寡肽。在这点上，注意到用于对寡肽文库筛选能够特异性结合多肽靶物的寡肽的技术是本领域中公知的(见例如美国专利No.5,556,762，5,750,373，4,708,871，4,833,092，5,223,409，5,403,484，5,571,689，5,663,143；PCT公开文本No.WO WO 84/03506和WO84/03564；Geysenetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,81:3998-4002(1984)；Geysen et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,82:178-182(1985)；Geysen et al.,in SyntheticPeptides as Antigens,130-149(1986)；Geysen et al.,J.Immunol.Meth.,102:259-274(1987)；Schoofs et al.,J.Immunol.,140:611-616(1988)；Cwirla,S.E.etal.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6378(1990)；Lowman,H.B.et al.Biochemistry,30:10832(1991)；Clackson,T.et al.Nature,352:624(1991)；Marks,J.D.et al.,J.Mol.Biol.,222:581(1991)；Kang,A.S.et al.Proc.Natl.Acad.Sci.USA,88:8363(1991)；及Smith,G.P.,Current Opin.Biotechnol.,2:668(1991))。

B.HPK1拮抗剂

造血祖先激酶1或HPK1，也称作丝裂原活化的蛋白质激酶激酶激酶激酶1或MAP4K1，是Ste20相关丝氨酸/苏氨酸激酶的生发中心激酶亚家族的一个成员。HPK1多核苷酸和多肽是本领域已知的(Hu et al.(1996)Genes Dev.10:2251-2264，通过援引将其完整收入本文)。HPK1多核苷酸和多肽的非限制性例子包含SEQ ID NO:11(GenBank登录号NM_007181.5的核苷酸141-2642)中所列人HPK1多核苷酸和所编码的SEQ ID NO:12中所列的人HPK1多肽(登录号NP_009112.1)。人中存在HPK1的一种较短的821个氨基酸的同等型，其编码序列和氨基酸序列分别在SEQ ID NO:13和14(分别为GenBank登录号NM_001042600.2的核苷酸141-2606和GenBank登录号NP_001036065.1)中列出。

HPK1多肽包含多个保守的结构基序。为了容易提及，会将它们涉及较长的人HPK1同等型讨论此类基序，较长的人HPK1同等型在SEQ ID NO:12中列出，包含833个氨基酸残基，且在图1中描绘。HPK1多肽包含氨基端Ste20样激酶域，其跨越氨基酸残基17-293，包括来自氨基酸残基23-46的ATP结合位点。激酶域的后面是四个富脯氨酸(PR)基序，它们充当含SH3蛋白(诸如CrkL，Grb2，HIP-55，Gads，Nck，和Crk)的结合位点。四个PR基序分别跨越氨基酸残基308-407，394-402，432-443，和468-477。HPK1响应TCR或BCR刺激而变成磷酸化的和活化的。TCR和BCR诱导的第381位酪氨酸(位于PR1和PR2之间)磷酸化介导经由SLP-76或BLNK SH2域对T细胞中的SLP-76或B细胞中的BLNK的结合，而且是激酶活化所需要的。在HPK1的C末端中找到的citron同源域(大致跨越残基495-800)可能起调节域的作用，而且可能牵涉高分子相互作用。

虽然HPK1在出生后在所有胚胎组织中表达，但是它的表达主要局限于造血器官和细胞。HPK1通过磷酸化和活化MAP3K蛋白(包括MEKK1，MLK3和TAK1)发挥MAP4K的功能，导致MAPK Jnk活化。

HPK1是T和B细胞应答的负调节物。在T细胞中，认为HPK1通过降低信号传导微簇的持久性从而负调节T细胞活化，其在Ser376处磷酸化SLP76(Di Bartolo et al.(2007)JEM204:681-691)并在Thr254处磷酸化Gads，这导致募结合磷酸化SLP76和Gads的14-3-3蛋白质，自含LAT微簇释放SLP76-Gads-14-3-3复合物(Lasserre et al.(2011)J Cell Biol195(5):839-853)。HPK1还能响应前列腺素E2而变成活化的，前列腺素E2常常由肿瘤分泌，促进肿瘤细胞逃避免疫系统。

当前公开的组合物包含PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂二者，能用于增强免疫应答及通过抑制肿瘤生长来治疗癌症。

如本文中使用的，“HPK1拮抗剂”是降低，抑制，或以其它方式减小HPK1的一种或多种生物学活性(例如丝氨酸/苏氨酸激酶活性，在TCR活化后募集TCR复合物，与蛋白质结合配偶诸如SLP76相互作用)的分子。使用HPK1拮抗剂实现的拮抗并非必然指示完全消除HPK1活性。反而，活性可以与适宜对照相比降低统计上显著的量，包括例如降低至少约5％，10％，15％，20％，25％，30％，35％，40％，45％，50％，55％，60％，65％，70％，75％，80％，85％，95％或100％的HPK1活性。在一些实施方案中，HPK1拮抗剂降低，抑制，或以其它方式减小HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案的一些中，HPK1拮抗剂降低，抑制，或以其它方式减小HPK1介导的SLP76和/或Gads磷酸化。

如本文中显示的，任何HPK1抑制在与PD1轴拮抗剂组合时提供卓越的抗肿瘤功效。有用的HPK1拮抗剂，也可以鉴定为丝裂原活化的蛋白质激酶激酶激酶激酶1拮抗剂或MAP4K1拮抗剂，包括那些如上文描述的及如通过本领域的任何测定方法测定的显示抑制的。特异性HPK1抑制剂包括那些在本文中别处描述的MC38模型中展现抑制活性的。在特别有用的实施方案中，HPK1抑制剂是如本文中别处描述的小分子抑制剂。许多此类抑制剂是已知化合物。已知化合物的例行筛选能鉴定出作为HPK1抑制剂的化合物。化合物包括结合酶的铰链区的杂芳基化合物。HPK1拮抗剂可以直接或间接结合HPK1，抑制它的活性，或HPK1拮抗剂可以发挥功能降低或抑制HPK1，诸如HPK1沉默元件表达的，在本文中别处有更加信息的记载。

例如，HPK1拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰HPK1生物学活性的抗HPK1胞内抗体和其它分子。

HPK1拮抗剂可以是小分子，它可以是有机或无机化合物(即包括杂原子有机和有机金属化合物)。HPK1拮抗剂还可以是肽，肽模拟物，氨基酸，氨基酸类似物，多核苷酸，多核苷酸类似物，核苷酸，核苷酸类似物，或脂质。在一些实施方案中，小分子具有小于约10,000，5,000，1,000，或500克每摩尔的重量。

而且，HPK1拮抗剂可以是或不是特异性HPK1拮抗剂。特异性HPK1拮抗剂以在统计上比该拮抗剂对任何其它蛋白质(例如其它丝氨酸/苏氨酸激酶)的抑制效果要大的量降低HPK1的生物学活性。在某些实施方案中，HPK1拮抗剂特异性抑制HPK1的丝氨酸/苏氨酸激酶活性。在这些实施方案的一些中，HPK1拮抗剂对HPK1的IC₅₀是该HPK1拮抗剂对另一种丝氨酸/苏氨酸激酶或其它类型的激酶(例如酪氨酸激酶)的IC₅₀的约90％，80％，70％，60％，50％，40％，30％，20％，10％，0.1％，0.01％，0.001％，或更少。

抑制HPK1的丝氨酸-苏氨酸激酶活性的HPK1拮抗剂可以是阻止底物(ATP或蛋白质底物)结合的竞争性(competitive)抑制剂，无论底物(ATP或蛋白质底物)是否结合都结合酶的非竞争性(non-competitive)抑制剂，或只在结合底物(ATP和蛋白质底物)后才结合酶的不竞争性(un-competitive)抑制剂。HPK1拮抗剂可以是结合HPK1上除活性位点以外的位点的变构抑制剂。

拮抗剂可以作为竞争性抑制剂发挥功能，通过在底物结合域(ATP结合域或蛋白质底物结合域)内结合，如此阻断底物(ATP或蛋白质底物)的结合。或者，竞争性抑制剂可以作为变构抑制剂发挥功能，而且结合游离酶上底物结合位点以外的位点，阻断底物(ATP或蛋白质底物)的结合。

在一些实施方案中，HPK1拮抗剂是HPK1的竞争性抑制剂。在这些实施方案的一些中，HPK1拮抗剂是当HPK1处于活性构象时结合HPK1的ATP结合位点的竞争性抑制剂，抑制ATP的结合并作为ATP模拟物发挥功能。在其它实施方案中，HPK1拮抗剂结合HPK1的无活性构象。

HPK1小分子拮抗剂是本领域已知的，而且包括但不限于staurosporine，bosutinib，sunitinib，lestaurtinib，crizotinib，foretinib，dovitinib，和KW-2449(Davis et al.(2011)Nat Biotechnol 29(11):1046-1051；Wodicka et al.(2010)ChemBiol 17(11):1241-1249，通过援引将其每一篇完整收入本文)。

由于HPK1的胞质定位，抗体不是有效的HPK1拮抗剂。然而，在一些实施方案中，HPK1拮抗剂可以是编码胞内抗体的多核苷酸。当将多核苷酸导入表达HPK1的细胞并在该细胞内表达时，胞内抗体结合HPK1并拮抗它的活性。胞内抗体结合HPK1并抑制生物学活性，诸如激酶活性，在TCR活化后募集至TCR复合物，或与蛋白质结合配偶(诸如SLP76)相互作用。

在其它实施方案中，HPK1拮抗剂是编码能够结合HPK1并抑制其活性的肽的多核苷酸。当将此类多核苷酸导入表达HPK1的细胞并在该细胞内表达时，细胞内肽结合并抑制HPK1活性。

在还有其它实施方案中，HPK1拮抗剂是介导定点诱变的多核苷酸，经由HPK1基因的同源重组生成激酶失效HPK1蛋白。例如，如本文中证明的，人和鼠HPK1二者中氨基酸第46位处保守赖氨酸变成谷氨酸的突变产生激酶失效HPK1蛋白质。

HPK1和/或PD-1轴拮抗剂可包含沉默元件。如本文中使用的，术语“沉默元件”指在表达或导入细胞时能够降低或消除靶多核苷酸序列或由其编码的多肽的表达水平的多核苷酸。在一些实施方案中，沉默元件可以可操作连接至启动子以容许该沉默元件在细胞中表达。

在一个实施方案中，沉默元件编码结合HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因，导致该基因表达降低的锌指蛋白。在特定的实施方案中，锌指蛋白结合HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因的调节区。在其它实施方案中，锌指蛋白结合编码HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的信使RNA并阻止它的翻译。选择锌指蛋白所靶向的位点的方法已有记载，例如美国专利No.6,453,242，通过援引将其收入本文。

在一些实施方案中，分别通过破坏HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因来降低或消除HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的活性。可以通过本领域已知的任何方法来破坏HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因。例如，在一个实施方案中，通过转座子标签来破坏基因。在另一个实施方案中，通过使用随机或靶向诱变来诱变细胞，并选择具有降低的HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2活性的细胞来破坏基因。

在一个实施方案中，使用转座子标签来降低或消除HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的活性。转座子标签包含在内源HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因内插入转座子以降低或消除HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的表达。在这个实施方案中，通过在HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因的调节区或编码区内插入转座子来降低或消除HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因的表达。可以分别使用在HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因的外显子，内含子，5′或3′非翻译序列，启动子，或任何其它调节序列内的转座子来降低或消除所编码的HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的表达和/或活性。在这些实施方案中，沉默元件包含或编码能在HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因内插入的靶向转座子。

在其它实施方案中，沉默元件包含对于经由HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2基因的某个区域内的同源重组的定点诱变有用的核苷酸序列。基因外显子中的插入突变通常导致无效突变体。可以使用另外的用于降低或消除HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2的活性或表达的方法，诸如那些涉及基于启动子的沉默的。参见例如Mette et al.(2000)EMBO J.19:5194-5201；Sijen et al.(2001)Curr.Biol.11:436-440；Jones et al.(2001)Curr.Biol.11:747-757，通过援引将其每一篇完整收入本文。

沉默元件可包含或编码反义寡核苷酸或干扰RNA(RNAi)。术语“干扰RNA”或“RNAi”指能进入RNAi途径并由此降低靶基因表达的任何RNA分子，诸如小RNA(sRNA)，短干扰RNA(siRNA)，micro-RNA(miRNA)，双链RNA(dsRNA)，发夹RNA，短发夹RNA(shRNA)，和其它。参见例如Meister and Tuschl(2004)Nature 431:343-349；Bonetta et al.(2004)NatureMethods 1:79-86；Chuang and Meyerowitz(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:4985-4990；McManus et al.(2002)Nature Reviews Genetics 3:737-747；Dykxhoorn et al.(2003)Nature Reviews Molecular Cell Biology 4:457-467。

还有多种计算机程序可用于辅助选择siRNA序列，例如来自Ambion(web站点URLwww.ambion.com)，在web站点URLwww.sinc.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html。还可采用的另外的设计考虑事项记载于Semizarov et al.Proc.Natl.Acad.Sci.100:6347-6352。

在一些实施方案中，沉默元件包含或编码反义寡核苷酸。“反义寡核苷酸”是与靶基因整个或部分互补的单链核酸序列，而且可以是DNA，或它的RNA对应物(即其中DNA的T残基在RNA对应物中为U残基)。

在当前公开的组合物和方法中有用的反义寡核苷酸设计成与靶RNA(例如mRNA)或DNA可杂交的。例如，可使用与mRNA分子杂交的寡核苷酸(例如DNA寡核苷酸)来靶向mRNA进行RNA酶H消化。或者，可使用与mRNA分子的翻译起始位点杂交的寡核苷酸来阻止mRNA翻译。在另一种办法中，可施用与双链DNA结合的寡核苷酸。此类寡核苷酸能形成三联构建物并抑制DNA转录。叁螺旋配对阻止双螺旋充分打开以容许聚合酶，转录因子，或调节分子结合。可以使用叁螺旋形成的碱基配对规则和靶基因的核苷酸序列来构建此类寡核苷酸。

作为非限制性例子，可以将反义寡核苷酸靶向成与下述区域杂交：mRNA帽区，翻译起始位点，翻译终止位点，转录起始位点，转录终止位点，聚腺苷酸化信号，3'非翻译区，5'非翻译区，5'编码区，中间编码区，和3'编码区。在一些实施方案中，互补寡核苷酸设计成与基因的最独特5'序列杂交，包括任何跨越5'编码序列的约15-35个核苷酸。可以通过标准技术来生成反义核酸(参见例如Shewmaker等人，美国专利No.5,107,065)。可以使用OLIGO软件来设计适宜的寡核苷酸(Molecular Biology Insights,Inc.,Cascade,Colo.；http://www.oligo.net)。

当前公开的方法和组合物中采用的沉默元件可包含用于dsRNA(例如shRNA)或反义RNA的DNA模板。在此类实施方案中，在表达盒中找到编码dsRNA或反义RNA的DNA分子。另外，可以在表达盒中找到包含多肽或抗体(例如抑制HPK1，PD-1，PD-L1，或PD-L2活性的抗体)的编码序列的多核苷酸。

表达盒可包含一种或多种与编码沉默元件，多肽，或抗体的核苷酸序列可操作连接的推动多核苷酸或多肽表达的调节序列。“调节序列”指位于编码序列上游(5'非编码序列)，之内，或下游(3'非编码序列)且影响转录，RNA加工或稳定性，或相关编码序列翻译的核苷酸序列。参见例如Goeddel(1990)in Gene Expression Technology:Methods inEnzymology 185(Academic Press,San Diego,California)。调节序列可包括启动子，翻译前导序列，内含子，和聚腺苷酸化识别序列。

调节序列与编码序列可操作连接以容许由该编码序列编码的多肽表达或容许所编码的多核苷酸沉默元件表达。“可操作连接”意图表示编码序列(即编码沉默元件的DNA或感兴趣多肽的编码序列)以容许核苷酸序列表达的方式与调节序列功能性连接。可操作连接的元件可以是连续的或非连续的。多核苷酸可以以有义或反义取向与调节序列可操作连接。

调节区(即启动子，转录调节区，和翻译终止区)和/或编码多核苷酸对于多核苷酸所导入的细胞或彼此可以是天然的/类似的。或者，调节区和/或编码多核苷酸对于多核苷酸所导入的细胞或彼此可以是异源的。

如本文中使用的，提到某序列的“异源”指序列源自外来物种，或者，如果源自相同物种的话，通过有意的人为干预在组成和/或基因座上相对于它的天然形式得到实质性修饰。例如，与异源多核苷酸可操作连接的启动子来自与衍生该多核苷酸的物种不同的物种，或者，如果源自相同/类似物种的话，之一或二者相对于它们的最初形式和/或基因座得到实质性修饰，或者启动子不是可操作连接的多核苷酸的天然启动子。或者，对于细胞而言异源的序列指序列源自外来物种，或者，如果源自相同物种的话，在细胞中通过有意的人为干预在组成和/或基因座上相对于它的天然形式得到实质性修饰。

一般而言，在重组DNA技术中有用的表达盒常常处于质粒(载体)的形式。然而，可以使用其它形式的表达盒，诸如病毒载体(例如复制缺陷型逆转录病毒，腺病毒，慢病毒，和腺伴随病毒)。参见例如美国公开文本2005214851，通过援引收入本文。通过将载体包装入病毒粒体中，之后与细胞接触来转导逆转录病毒载体，特别是慢病毒载体。

表达盒可进一步包含选择标志。如本文中使用的，术语“选择标志”包含当在细胞中表达时容许选择经载体转化的细胞的任何多核苷酸。

此类方法涉及将多肽或多核苷酸导入细胞中。“导入”意图表示以使得序列实现到达细胞的内部的方式将多核苷酸或多肽呈递给细胞。当前公开的方法不依赖于特定方法将序列导入细胞中，只是多核苷酸或多肽实现到达细胞的内部。用于将多核苷酸或多肽导入各种细胞类型的方法是本领域已知的，包括但不限于稳定转化方法，瞬时转化方法，和病毒介导的方法。

用于将外来多核苷酸导入宿主细胞中的例示性公认技术包括但不限于磷酸钙或氯化钙共沉淀，DEAE-右旋糖苷介导的转染，脂转染，颗粒枪(基因枪)，或电穿孔和病毒载体。用于转化或转染宿主细胞的合适方法可见于美国专利No.5,049,386，美国专利No.4,946,787，和美国专利No.4,897,355，Sambrook et al.(1989)Molecular Cloning:ALaboratory Manual(2d ed.,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Plainview,NewYork)及其它标准分子生物学实验室手册。多种转染剂可用于这些技术。此类药剂是已知的，参见例如WO 2005012487。技术人员会认识到，取决于将多核苷酸导入细胞中的方法，沉默元件能稳定并入细胞的基因组中，在自主载体或质粒上复制，或在细胞中瞬时呈现。

病毒载体投递系统包括在投递至细胞之后具有附加型或整合型基因组任一的DNA和RNA病毒。关于病毒载体规程的综述，参见Anderson(1992)Science 256:808-813；Haddada et al.(1995)Current Topics in Microbiology and Immunology Doerflerand Bohm(eds)；及Yu et al.(1994)Gene Therapy1:13-26。常规的用于投递多核苷酸的基于病毒的系统可包括用于基因转移的逆转录病毒，慢病毒，腺病毒，腺伴随病毒和单纯疱疹病毒载体。宿主基因组中的整合凭借逆转录病毒，慢病毒，和腺伴随病毒基因转移方法是可能的，常常导致所插入的转基因的长期表达。

当前公开的组合物和方法包含PD-1轴拮抗剂和HPK-1拮抗剂，其中该拮抗剂中至少一项是能利用体内基因疗法的多核苷酸，其中经由对受试者施用该多核苷酸或离体基因疗法(其中在受试者以外将该多核苷酸导入细胞，然后将包含该多核苷酸的细胞施用于受试者)将该多核苷酸导入该受试者内的细胞。在将PD-1轴拮抗剂和HPK-1拮抗剂中至少一项离体导入细胞的实施方案的一些中，其中导入多核苷酸且随后施用于受试者的细胞就该受试者而言是自体，同种异体，或异种细胞。在那些利用离体基因疗法的实施方案的一些中，其中导入多核苷酸的细胞是干细胞，诸如造血干细胞，或造血祖细胞。在其它实施方案中，其中离体导入多核苷酸的细胞是T细胞，B细胞，或树突细胞。

C.药物组合物

PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂可以在药物组合物或配制剂中。在一些实施方案中，药物组合物或配制剂包含本文中描述的一种或多种HPK1拮抗剂和/或一种或多种PD-1轴拮抗剂和药学可接受载剂。

短语“药学可接受的”指明该物质或组合物必须是在化学和/或毒理学方面与构成配制剂的其它组分和/或用它治疗的受试者相容的。

如本文中使用的，“载剂”包括药剂学可接受的载剂，赋形剂，或稳定剂，它们在所采用的剂量和浓度对暴露于其的细胞或哺乳动物是无毒的。通常，生理学可接受的载剂是pH缓冲水溶液。生理学可接受载剂的例子包括缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶，或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖，和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖，或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖醇，诸如甘露醇或山梨醇；成盐反荷离子，诸如钠；和/或非离子表面活性剂，诸如TWEEN^TM，聚乙二醇(PEG)，和PLURONICS^TM。在某些实施方案中，药物组合物包含非天然发生的药学可接受载剂。

药物组合物配制成与它的预定施用路径相容。在一些实施方案中，在囊泡中投递活性化合物，诸如脂质体(参见例如Langer(1990)Science249:1527-33；及Treat et al.,in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer,Lopez Beresteinand Fidler(eds.),Liss,N.Y.,pp.353-65,1989)。

在还有另一个实施方案中，可以在受控释放系统中投递活性化合物。在一个例子中，可以使用泵(参见例如Langer(1990)Science 249:1527-33；Sefton(1987)Crit.Rev.Biomed.Eng.14:201-40；Buchwald et al.(1980)Surgery 88:507-16；Saudeket al.(1989)N.Engl.J.Med.321:574-79)。在另一个例子中，可以使用聚合材料(参见例如Levy et al.(1985)Science228:190-92；During et al.(1989)Ann.Neurol.25:351-56；Howard et al.(1989)J.Neurosurg.71:105-12)。也可以使用其它受控释放系统，诸如Langer(1990)Science 249:1527-33中讨论的那些。

用于胃肠外，皮内，或皮下应用的溶液或悬浮液可包括下述成分：无菌稀释剂，诸如注射用水，盐水溶液，不挥发性油，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其它合成溶剂；抗细菌剂，诸如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，诸如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸；缓冲剂，诸如乙酸盐，柠檬酸盐或磷酸盐；及用于调节张度的药剂，诸如氯化钠或右旋糖。可以用酸或碱(诸如氢氯酸或氢氧化钠)来调节pH。胃肠外制备物可封装在玻璃或塑料制成的安瓿，一次性注射器或多剂管形瓶中。

适合于注射使用的药物组合物包括无菌水溶液(在水溶性的情况中)或分散体及用于即时制备无菌可注射溶液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载剂包括生理盐水，抑菌水，EL(BASF；Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。在所有情况中，组合物必须是无菌的，而且流动性的程度应当易于注射。它在制造和贮存的条件下必须是稳定的，而且必须针对微生物(诸如细菌和真菌)的污染作用提供防护。载剂可以是溶剂或分散介质，包括例如水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇，和液体聚乙二醇，等等)，及其合适混合物。恰当的流动性可以例如通过使用涂层诸如卵磷脂，通过维持所需粒度(在分散的情况中)及通过使用表面活性剂来维持。针对微生物作用的防护可以通过各种抗细菌和抗真菌剂来实现，例如对羟基苯甲酸酯类，氯丁醇，酚，抗坏血酸，硫柳汞，等等。在许多情况中，在组合物中包括等张剂，例如糖，多元醇诸如甘露醇，山梨醇，氯化钠。可注射组合物的延迟吸收可通过在组合物中包括延迟吸收的药剂例如单硬脂酸铝和明胶来获得。

无菌可注射溶液可以通过在根据需要具有上文所列一种组分或组分组合的适宜溶剂中掺入所需量的活性化合物，接着过滤除菌来制备。通常，分散体通过将活性化合物掺入含有来自上文所列的基本分散介质和所需其它组分的无菌媒介来制备。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况中，制备方法可以包括真空干燥和冷冻干燥，其自先前无菌过滤的溶液产生活性组分加任何别的期望组分的粉末。

口服组合物一般包括惰性稀释剂或可食用载剂。它们可以封装在明胶胶囊中或压缩成片剂。出于口服治疗性施用的目的，可以将活性化合物与赋形剂掺合在一起并以片剂，锭剂，或胶囊剂的形式使用。口服组合物也可使用流体载剂来制备，供作为漱口水使用，其中流体载剂中的化合物口腔应用，嗖嗖漱口，并吐出或吞下。可以包含药学相容的结合剂和/或佐剂物质作为组合物的一部分。片剂，丸剂，胶囊，锭剂等可以含有任何下述组分或具有相似性质的化合物：粘合剂诸如微晶纤维素，黄蓍胶或明胶；赋形剂诸如淀粉或乳糖，崩解剂诸如褐藻酸，Primogel，或玉米淀粉；滑润剂诸如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂诸如胶体二氧化硅；甜味剂诸如蔗糖或糖精；或调味剂诸如薄荷，水杨酸甲酯，或桔味剂。对于通过吸入进行的施用，从含有合适推进剂(例如气体诸如二氧化碳)的加压容器或分配器，或喷雾器以气溶胶喷射形式投递化合物。

系统施用也可以是通过经粘膜或经皮手段。对于经粘膜或经皮施用，在配制剂中使用适合于要渗透的屏障的渗透剂。一般而言，此类渗透剂是本领域中已知的，而且包括例如用于经粘膜施用的去污剂，胆汁盐，和梭链孢酸衍生物。可以经由使用鼻喷雾或栓剂来实现经粘膜施用。对于经皮施用，将活性化合物配制成软膏剂，油膏剂，凝胶剂，或乳膏，如本领域中普遍知道的。化合物还可以以用于直肠投递的栓剂(例如用常规栓剂基质，诸如可可脂及其它甘油酯)或保留灌肠剂形式来制备。

在一个实施方案中，活性化合物与会保护化合物免于从身体内快速消除的载剂一起制备，诸如受控释放配制剂，包括植入物和微囊化投递系统。可以使用生物可降解的，生物相容的聚合物，诸如乙烯-乙酸乙烯，聚(酸)酐，聚乙醇酸，胶原，多正酯(polyorthoester)，和聚乳酸。用于制备此类配制剂的方法对于本领域技术人员会是显而易见的。材料也可以购自Alza Corporation和Nova Pharmaceuticals,Inc。脂质体悬浮液(包括用针对病毒抗原的单克隆抗体靶向受感染细胞的脂质体)也可以用作药学可接受载剂。这些可以依照本领域技术人员已知的方法来制备，例如如记载于美国专利号4,522,811的。

为了容易施用和剂量的一致性以单位剂量形式配制口服或胃肠外组合物是尤其有利的。如本文中所使用的，剂量单位形式指物理上离散的单元，适合作为要治疗的受试者的单一剂量，每个单元含有与所需药学载剂联合的，预先确定数量的活性化合物，其根据计算，产生期望的治疗效果。化合物的剂量单位形式的规格由下述各项规定，并直接依赖于下述各项：活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗效果，及本领域配合此类活性化合物以治疗受试者所固有的局限性。

D.试剂盒

另一方面，提供的是试剂盒，其包含PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂，和印有使用说明书包装插页。“包装插页”指通常包括在药物的商业包装中的说明书，它们包含有关涉及此类药物应用的适应征，用法，剂量，施用，禁忌症，与该包装产品联合的其它药物，和/或警告等的信息。

在一些实施方案中，该试剂盒包含PD-1轴拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与HPK1拮抗剂组合使用该PD-1轴拮抗剂以在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。在一些实施方案中，该试剂盒包含HPK1拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与PD-1轴拮抗剂组合使用该HPK1拮抗剂在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。在一些实施方案中，该试剂盒包含PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂，和包装插页，该包装插页包含关于使用该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。该试剂盒中可以包含本文中描述的任何PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂。

在一些实施方案中，该试剂盒包含含有本文中描述的一种或多种PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的容器。合适的容器包括例如瓶，管形瓶(例如双室管形瓶)，注射器(诸如单或双室注射器)和试管。容器可以由多种材料诸如玻璃或塑料形成。在一些实施方案中，试剂盒可以包含标签(例如在容器上或与容器联合)。标签可以指示其中含有的化合物可用于或意图用于在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症。试剂盒可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。

在一些实施方案中，该试剂盒进一步包含化疗剂，包括但不限于本文中其它地方描述的那些。

E.使用PD-1轴拮抗剂和HPK-1拮抗剂的方法

本文中提供的是在有需要的受试者中增强免疫应答的方法，其包括施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

如本文中使用的，“增强免疫应答”指任何针对抗原的免疫原性应答的改善。针对抗原的免疫原性应答的改善的非限制性例子包括增强的树突细胞的成熟或迁移，增强的T细胞(例如CD4 T细胞，CD8 T细胞)的活化，增强的T细胞(例如CD4 T细胞，CD8 T细胞)增殖，增强的B细胞增殖，延长的T细胞和/或B细胞的存活，改善的抗原呈递细胞(例如树突细胞)的抗原呈递，改善的抗原清除，升高的T细胞的细胞因子生成(例如白介素-2)，升高的对前列腺素E2诱导的免疫遏制的抗性，和增强的CD8 T细胞的引发和/或溶胞活性。

在一些实施方案中，受试者中的CD8 T细胞具有相对于施用PD-1途径拮抗剂和HPK1拮抗剂之前增强的引发，活化，增殖和/或溶胞活性。在一些实施方案中，CD8 T细胞引发特征在于CD8 T细胞中升高的CD44表达和/或增强的溶胞活性。在一些实施方案中，CD8 T细胞活化特征在于升高的γ-IFN⁺CD8 T细胞频率。在一些实施方案中，CD8 T细胞是抗原特异性T细胞。在一些实施方案中，通过经由PD-L1表面表达的信号传导实现的免疫逃避受到调控。

在一些实施方案中，受试者中的抗原呈递细胞具有相对于施用PD-1途径拮抗剂和HPK1拮抗剂之前增强的成熟和活化。在一些实施方案中，抗原呈递细胞是树突细胞。在一些实施方案中，抗原呈递细胞的成熟特征在于升高的CD83⁺树突细胞频率。在一些实施方案中，抗原呈递细胞的活化特征在于树突细胞上升高的CD80和CD86表达。

在一些实施方案中，受试者中细胞因子IL-10和/或趋化因子IL-8，鼠KC的人同系物的血清水平相对于施用PD-1拮抗剂和HPK1拮抗剂之前降低。

PD-L1或PD-L2结合PD-1导致PD-1胞质域的酪氨酸磷酸化和随后磷酸酶(包括SHP2)的募集，这导致ZAP70和其它TCR近程信号传导分子的去磷酸化，导致削弱TCR信号传导和T细胞功能障碍，包括无反应性和耗竭(Chemnitz et al.(2004)J Immunol 173(2):945-954)。

术语“功能障碍”在免疫功能障碍的背景中指降低的对抗原性刺激的免疫响应性的状态。该术语包括可以发生抗原识别，但是随后的免疫应答对于控制感染或肿瘤生长无效的耗竭和/或无反应性二者的共同要素。

如本文中使用的，术语“功能障碍性的”还包括对抗原识别的不感受或不响应，特别地，将抗原识别转化成下游T细胞效应器功能，诸如增殖，细胞因子生成(例如IL-2，γ-IFN)和/或靶细胞杀伤的能力受损。

术语“无反应性”指源自经由T细胞受体投递的不完全或不充分信号(例如在缺乏ras活化的情况中胞内Ca⁺²增加)的对抗原刺激的无响应性状态。T细胞无反应性也可以在缺乏共刺激的情况中在用抗原刺激后发生，生成即使在共刺激的背景中对抗原的随后活化变得不感受的细胞。无响应性状态经常可以被白介素-2的存在超越。无反应性T细胞不经历克隆扩充和/或获得效应器功能。

术语“耗竭”指作为源自在许多慢性感染和癌症期间发生的持续TCR信号传导的T细胞功能障碍状态的T细胞耗竭。它与无反应性的区别在于它不经由不完全或缺乏的信号传导，而是由于持续信号传导而发生。它以较差的效应器功能，持续的抑制性受体表达和与功能性效应或记忆T细胞的转录状态不同的转录状态限定。耗竭阻止感染和肿瘤的最佳控制。耗竭可以源自外在负调节途径(例如免疫调节细胞因子)及细胞固有负调节(共刺激)途径(PD-1，B7-H3，B7-H4，等等)二者。

在一些实施方案中，对受试者施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂导致T细胞功能的增强。

“增强T细胞功能”意指诱导，引起或刺激T细胞具有持续或放大的生物学功能，或者恢复或再活化耗竭的或无活性的T细胞。增强T细胞功能的例子包括：相对于干预前的此类水平，CD8 T细胞的升高的细胞因子(例如γ-干扰素，IL-2，IL-12，和TNFα)分泌，升高的增殖，升高的抗原响应性(例如病毒，病原体，或肿瘤清除)，和升高的效应器颗粒生成，诸如粒酶B。在一个实施方案中，增强的水平是至少50％，或者60％，70％，80％，90％，100％，120％，150％，200％。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。

因而，PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合疗法在治疗T细胞功能障碍性病症中是有用的。“T细胞功能障碍性病症”是特征在于降低的对抗原性刺激的响应性的T细胞病症或疾患。在一个特定的实施方案中，T细胞功能障碍性病症是与不恰当的升高的经由PD-1的信号传导和/或不恰当的升高的HPK1激酶活性特异性相关的病症。在另一个实施方案中，T细胞功能障碍性病症是其中的T细胞是无反应性的或具有降低的能力来分泌细胞因子，增殖，或执行溶胞活性的病症。在一个具体的方面，降低的响应性导致对病原体或表达免疫原的肿瘤的无效控制。特征在于T细胞功能障碍的细胞功能障碍性病症的例子包括未解析的急性感染，慢性感染，和肿瘤免疫。

如此，当前公开的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合疗法可用于治疗期望增强的免疫原性的疾患，诸如提高肿瘤免疫原性来治疗癌症。

“免疫原性”指特定物质引发免疫应答的能力。肿瘤是免疫原性的，并且增强肿瘤免疫原性有助于通过免疫应答清除肿瘤细胞。

“肿瘤免疫”指肿瘤逃避免疫识别和清除的过程。如此，作为治疗概念，肿瘤免疫在此类逃避减弱时得到“治疗”，并且肿瘤被免疫系统识别并攻击。肿瘤识别的例子包括肿瘤结合，肿瘤收缩和肿瘤清除。

在一个方面，本文中提供的是一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括对该受试者施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

术语“癌症”和“癌性”指受试者中特征在于不受调节的细胞生长的疾患，其中癌性细胞能够局部侵入和/或转移至非邻近部位。此定义中包括的是良性和恶性癌症。如本文中使用的，“癌细胞”，“癌性细胞”，或“肿瘤细胞”指特征在于这种不受调节的细胞生长和侵入性特性的细胞。术语“癌症”涵盖所有类型的癌症，包括但不限于所有形式的癌，黑素瘤，肉瘤，淋巴瘤和白血病，包括但不限于膀胱癌，脑瘤，乳腺癌，宫颈癌，结直肠癌，食管癌，子宫内膜癌，肝细胞癌，喉癌，肺癌，骨肉瘤，卵巢癌，胰腺癌，前列腺癌，肾的癌和甲状腺癌，急性淋巴细胞性白血病，急性髓样白血病，室管膜瘤，尤因(Ewing)氏肉瘤，成胶质细胞瘤，髓母细胞瘤，成神经细胞瘤，骨肉瘤，横纹肌肉瘤，横纹肌样癌(rhabdoid cancer)，和肾母细胞瘤(Wilm氏肿瘤)。癌症的其它具体例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和成视网膜细胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)，神经内分泌肿瘤(包括类癌肿瘤，胃泌素瘤，和岛细胞癌)，间皮瘤，施旺细胞瘤(包括听神经瘤)，脑脊膜瘤，腺癌，黑素瘤，和白血病或淋巴样恶性。此类癌症的更加特别的例子包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌(SCLC)，非小细胞肺癌(NSCLC)，肺的腺癌和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌(包括转移性乳腺癌)，结肠癌，直肠癌，结直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，肛门癌，阴茎癌，梅克尔细胞癌，蕈样霉菌病，睾丸癌，食管癌，胆道肿瘤，以及头和颈癌和血液学恶性。

在一些实施方案中，该受试者具有黑素瘤。该黑素瘤可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有结直肠癌。该结直肠癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有非小细胞肺癌。该非小细胞肺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有胰腺癌。该胰腺癌可以处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有血液学恶性。该血液学恶性可以处于早期阶段或晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有卵巢癌。该卵巢癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有乳腺癌。该乳腺癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。在一些实施方案中，该受试者具有肾细胞癌。该肾细胞癌可以处于早期阶段或处于晚期阶段。

在一些实施方案中，癌症具有升高的T细胞浸润水平。

如本文中使用的，术语“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。

如本文中使用的，术语“治疗/处理”指设计用于改变临床病理学过程期间所治疗/处理受试者或细胞的自然进程的临床干预。治疗/处理的期望效果包括降低疾病进展速率，改善或减轻疾病状态，和消退或改善的预后。例如，若一种或多种与癌症有关的症状是减轻或消除的，包括但不限于对癌性细胞的降低增殖(或破坏)，减少源自疾病的症状，提高那些患有疾病的受试者的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，延迟疾病的进展，和/或延长受试者的存活，则受试者得到成功“治疗”。

如本文中使用的，“延迟疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病(诸如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的受试者，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为受试者不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。

“有效量”至少是实现特定病症的可测量改善或预防需要的最小浓度。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发受试者中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。对于预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。对于治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的受试者的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现或者实现期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。

与HPK1拮抗剂联合将PD-1轴拮抗剂施用于受试者来增强免疫应答或治疗癌症。如本文中使用的，“与……联合/组合/一起”指在一种治疗形态外施用另一种治疗形态。因而，“与……联合/组合/一起”指在对受试者施用一种治疗形态之前，期间，或者之后施用另一种治疗形态。

在一些实施方案中，通过施用表达HPK1和/或PD-1拮抗剂的细胞来将HPK1和/或PD-1拮抗剂施用于受试者。

可以以本领域已知的任何合适方式施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。例如，可以序贯(在不同时间)或并行(在相同时间)施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

在一些实施方案中，连续施用HPK1拮抗剂。在其它实施方案中，间歇施用HPK1拮抗剂。在一些实施方案中，连续施用PD-1轴拮抗剂。在其它实施方案中，间歇施用PD-1轴拮抗剂。在一些实施方案中，在施用PD-1轴拮抗剂之前施用HPK1拮抗剂。在一些实施方案中，与施用PD-1轴拮抗剂同时施用HPK1拮抗剂。在一些实施方案中，在施用PD-1轴拮抗剂之后施用HPK1拮抗剂。此外，用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂治疗受试者可以包括单次治疗，或者可以包括一系列治疗。

可以通过相同施用路径或者通过不同施用路径施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。在一些实施方案中，静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，肿瘤内，或鼻内施用PD-1轴拮抗剂。在一些实施方案中，静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，肿瘤内，或鼻内施用HPK1拮抗剂。

理解的是，此类活性化合物的适宜剂量取决于普通技能的内科医师或兽医的知识内的一些因素。活性化合物的剂量会变化，例如取决于所施用拮抗剂的类型，受试者的年龄，体重，整体健康，性别，和饮食，施用的时间，施用的路径，排泄的速率，任何药物组合。

还会领会，PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂用于治疗的有效剂量可以在特定治疗过程里提高或降低。剂量的变化可源自诊断测定法的结果并变得显而易见。

在一些实施方案中，以介于约0.001μg/kg和约1000mg/kg之间的剂量将PD-1轴拮抗剂和/或HPK1拮抗剂施用于受试者，包括但不限于约0.001μg/kg，0.01μg/kg，0.05μg/kg，0.1μg/kg，0.5μg/kg，1μg/kg，10μg/kg，25μg/kg，50μg/kg，100μg/kg，250μg/kg，500μg/kg，1mg/kg，5mg/kg，10mg/kg，25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，和200mg/kg。

在PD-1轴拮抗剂是抗体的一些实施方案中，以介于约0.01mg/kg和约1000mg/kg之间的剂量将抗体施用于受试者，包括但不限于约0.01mg/kg，0.05mg/kg，0.1mg/kg，0.5mg/kg，1mg/kg，2mg/kg，3mg/kg，4mg/kg，5mg/kg，6mg/kg，7mg/kg，8mg/kg，9mg/kg，10mg/kg，11mg/kg，12mg/kg，13mg/kg，14mg/kg，15mg/kg，16mg/kg，17mg/kg，18mg/kg，19mg/kg，20mg/kg，25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg，和250mg/kg。

在一些实施方案中，提供的是一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其包括对该受试者施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂，进一步包括施用另外的疗法。另外的疗法可以是放射疗法，手术(例如乳房肿瘤切除术和乳房切除术)，化学疗法，基因疗法，DNA疗法，病毒疗法，RNA疗法，免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法(nanotherapy)，单克隆抗体疗法，或前述疗法的组合。另外的疗法可以为辅助或新辅助疗法形式。在一些实施方案中，另外的疗法是施用小分子酶促抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，另外的疗法是施用副作用限制剂(例如意图减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，另外的疗法是放射疗法。在一些实施方案中，另外的疗法是手术。在一些实施方案中，另外的疗法是放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，另外的疗法是γ照射。在一些实施方案中，另外的疗法是靶向PI3K/AKT/mTOR途径的疗法，HSP90抑制剂，微管蛋白抑制剂，凋亡抑制剂，和/或化学预防剂。另外的疗法可以是一种或多种化疗剂。

“化疗剂”指可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)；磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(trietylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylolomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，)；β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinic acid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan)，CPT-11(伊立替康(irinotecan)，)，乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；培美曲塞(pemetrexed)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；TLK-286；CDP323，一种口服α-4整联蛋白抑制剂；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，胆磷酰胺(cholophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Nicolaou等,Angew,Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994))；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素C(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(carminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycinis)，放线菌素D(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸，多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星，多柔比星盐酸脂质体注射液(和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C，霉酚酸(mycophenolicacid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(potfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤，吉西他滨(gemcitabine)，替加氟(tegafur)卡培他滨(capecitabine)，埃坡霉素(epothilone)；和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，和氟尿苷(floxuridine)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(folinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素，疣孢菌素(verracurin)A，杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine) 达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANE^TM)，和多西他塞(doxetaxel)苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂类似物，诸如顺铂(cisplatin)和卡铂(carboplatin)；长春碱(vinblastine)铂；依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；长春新碱(vincristine)奥沙利铂(oxaliplatin)；亚叶酸(leucovovin)；长春瑞滨(vinorelbine)能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)；任何上述物质的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述物质的组合，诸如CHOP(环磷酰胺，多柔比星，长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATIN^TM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。

化疗剂的别的例子包括作用为调节，降低，阻断，或抑制可促进癌生长的激素效果的抗激素剂，且常常是系统或全身治疗的形式。它们自身可以是激素。实例包括抗雌激素类和选择性雌激素受体调节剂类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)屈洛昔芬(droloxifene)，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，LY117018，奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)抗孕酮类；雌激素受体下调剂类(ERD)；雌激素受体拮抗剂，诸如氟维司群(fulvestrant)功能为抑制或关闭卵巢的药剂，例如促黄体生成激素释放激素(LHRH)激动剂，诸如醋酸亮丙瑞林(leuprolide acetate)(和)，醋酸戈舍瑞林(goserelin acetate)，醋酸布舍瑞林(buserelin acetate)和曲普瑞林(tripterelin)；抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide)；及抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)依西美坦(exemestane)福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，伏罗唑(vorozole)来曲唑(letrozole)和阿那曲唑(anastrozole)另外，化疗剂的这种定义包括二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如或)，依替膦酸钠(etidronate)NE-58095，唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)阿伦膦酸盐(alendronate)帕米膦酸盐(pamidronate)替鲁膦酸盐(tiludronate)或利塞膦酸盐(risedronate)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制涉及异常(abherant)细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Raf，H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)；疫苗，诸如疫苗和基因疗法疫苗，例如疫苗，疫苗和疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如)；抗雌激素，诸如氟维司群(fulvestrant)；EGFR抑制剂，诸如erlotinib或西妥昔单抗(cetuximab)；抗VEGF抑制剂，诸如贝伐单抗(bevacizumab)；arinotecan；rmRH(例如)；17AAG(格尔德霉素(geldanamycin)衍生物，其是热休克蛋白(Hsp)90毒物)；及任何上述物质的药学可接受盐，酸或衍生物。

在一些实施方案中，治疗导致该治疗停止之后受试者中持久的应答。“持久的应答”指在治疗停止之后降低肿瘤生长的持久效果。例如，与施用期开始时的大小相比，肿瘤大小可保持相同或更小。在一些实施方案中，持久的应答具有至少与治疗持续时间相同，治疗持续时间的至少1.5倍，2.0倍，2.5倍，或3.0倍长度的持续时间。

本文中公开的治疗方法可导致部分或完全响应。如本文中使用的，“完全响应”或“CR”指所有靶损伤的消失；“部分响应”或“PR”指将基线SLD视为参照，靶损伤的最长直径和(SLD)的至少30％降低；且“稳定疾病”或“SD”指将治疗开始起的最小SLD视为参照，既没有足够的靶损伤收缩以符合PR，也没有足够的增加以符合PD。如本文中使用的，“总体响应率”(ORR)指完全响应(CR)率和部分响应(PR)率的总和。

本文中公开的治疗方法可导致施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的受试者的无进展存活和总体存活延长。如本文中使用的，“无进展存活”(PFS)指治疗期间和治疗后，所治疗疾病(例如癌症)不变坏的时间长度。无进展存活可以包括患者已经经历完全响应或部分响应的时间量，及患者已经经历稳定疾病的时间量。

如本文中使用的，“总体存活”指组中在特定持续时间后很可能活着的受试者的百分比。

在一些实施方案中，施用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的受试者为哺乳动物，诸如驯养动物(例如牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类动物(例如人和非人灵长类动物诸如猴)，家兔，和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在一些实施方案中，所治疗的受试者是人。

需要治疗癌症的受试者可以是展现癌症症状的受试者，已经诊断有癌症的受试者，处于癌症消退的受试者，或具有升高的风险发生癌症(例如遗传素因，某些饮食或环境暴露)的受试者。

本文中描述的主题的特定实施方案包括下述：

1.一种组合物，其包含PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂。

2.实施方案1的组合物，其中该PD-1轴拮抗剂选自由PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂，和PD-L2拮抗剂组成的组。

3.实施方案2的组合物，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-1拮抗剂。

4.实施方案3的组合物，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。

5.实施方案4的组合物，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。

6.实施方案4的组合物，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。

7.实施方案4的组合物，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和PD-L2二者。

8.实施方案4-7任一项的组合物，其中该PD-1拮抗剂是抗体。

9.实施方案8的组合物，其中该抗PD-1抗体是单克隆抗体。

10.实施方案8的组合物，其中该抗PD-1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

11.实施方案8-10任一项的组合物，其中该抗PD-1抗体是人源化抗体。

12.实施方案8-10任一项的组合物，其中该抗PD-1抗体是人抗体。

13.实施方案8的组合物，其中该PD-1拮抗剂选自由下述各项组成的组：

a)MDX-1106；

b)Merck 3475；

c)CT-011；

d)结合能够结合MDX-1106的表位的抗体；

e)结合能够结合Merck 3475的表位的抗体；

f)结合能够结合CT-011的表位的抗体；

g)在竞争性结合测定法中与MDX-1106竞争结合PD-1的抗体；

h)在竞争性结合测定法中与Merck 3475竞争结合PD-1的抗体；和

i)在竞争性结合测定法中与CT-011竞争结合PD-1的抗体。

14.实施方案8的组合物，其中该PD-1拮抗剂是MDX-1106。

15.实施方案8的组合物，其中该PD-1拮抗剂是Merck 3475。

16.实施方案8的组合物，其中该PD-1拮抗剂是CT-011。

17.实施方案4的组合物，其中该PD-1拮抗剂是AMP-224。

18.实施方案2的组合物，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L1拮抗剂。

19.实施方案18的组合物，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。

20.实施方案18的组合物，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。

21.实施方案18的组合物，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。

22.实施方案18的组合物，其中该PD-L1拮抗剂是抗体。

23.实施方案22的组合物，其中该抗PD-L1抗体是单克隆抗体。

24.实施方案22的组合物，其中该抗PD-L1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

25.实施方案22-24任一项的组合物，其中该抗PD-L1抗体是人源化抗体。

26.实施方案22-24任一项的组合物，其中该抗PD-L1抗体是人抗体。

27.实施方案22的组合物，其中该PD-L1拮抗剂选自由下述各项组成的组：

a)YW243.55.S70；

b)MPDL3280A；

c)MEDI4736；

d)MDX-1105；

e)结合能够结合YW243.55.S70的表位的抗体；

f)结合能够结合MPDL3280A的表位的抗体；

g)结合能够结合MEDI4736的表位的抗体；

h)结合能够结合MDX-1105的表位的抗体；

i)在竞争性结合测定法中与YW243.55.S70竞争结合PD-1的抗体；

j)在竞争性结合测定法中与MPDL3280A竞争结合PD-1的抗体；

k)在竞争性结合测定法中与MEDI4736竞争结合PD-1的抗体；和

l)在竞争性结合测定法中与MDX-1105竞争结合PD-1的抗体。

28.实施方案22的组合物，其中该PD-L1拮抗剂是YW243.55.S70。

29.实施方案22的组合物，其中该PD-L1拮抗剂是MPDL3280A。

30.实施方案22的组合物，其中该PD-L1拮抗剂是MEDI4736。

31.实施方案22的组合物，其中该PD-L1拮抗剂是MDX-1105。

32.实施方案22的组合物，其中该抗体包含包含HVR-H1序列SEQ ID NO:35，HVR-H2序列SEQ ID NO:36，和HVR-H3序列SEQ ID NO:31的重链；和包含HVR-L1序列SEQ ID NO:37，HVR-L2序列SEQ ID NO:38，和HVR-L3序列SEQ ID NO:39的轻链。

33.实施方案22的组合物，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的轻链可变区。

34.实施方案2的组合物，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L2拮抗剂。

35.实施方案34的组合物，其中该PD-L2拮抗剂是抗体。

36.实施方案35的组合物，其中该抗PD-L2抗体是单克隆抗体。

37.实施方案34的组合物，其中该PD-L2拮抗剂是免疫粘附素。

38.实施方案1-37任一项的组合物，其中该HPK1拮抗剂是特异性HPK1拮抗剂。

39.实施方案1-38任一项的组合物，其中该HPK1拮抗剂是竞争性抑制剂。

40.实施方案39的组合物，其中该HPK1拮抗剂是ATP模拟物。

41.实施方案1-40任一项的组合物，其中该组合物进一步包含化疗剂。

42.一种药物组合物，其包含实施方案1-41任一项的组合物和药学可接受载剂。

43.一种用于在有需要的受试者中增强免疫应答的方法，其中该方法包括施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合。

44.实施方案43的方法，其中该受试者中的T细胞具有相对于施用该组合之前增强的引发，增强的活化，增强的迁移，增强的增殖，增强的存活，和增强的溶胞活性中至少一项。

45.实施方案44的方法，其中该T细胞活化特征在于相对于施用该组合之前升高的γ-IFN⁺CD8 T细胞的频率或增强的T细胞的IL-2或粒酶B生成的水平。

46.实施方案45的方法，其中T细胞的数目相对于施用该组合之前升高。

47.实施方案44-46任一项的方法，其中该T细胞是抗原特异性CD8 T细胞。

48.实施方案43的方法，其中该受试者中的抗原呈递细胞具有相对于施用该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂之前增强的成熟和活化。

49.实施方案48的方法，其中该抗原呈递细胞是树突细胞。

50.实施方案48的方法，其中该抗原呈递细胞的成熟特征在于升高的CD83⁺树突细胞的频率。

51.实施方案48的方法，其中该抗原呈递细胞的活化特征在于树突细胞上升高的CD80和CD86表达。

52.实施方案43-51任一项的方法，其中该受试者具有癌症。

53.一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中该方法包括对该受试者施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合。

54.实施方案52或53的方法，其中该癌症包含至少一种选自由结直肠癌，黑素瘤，非小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，血液学恶性，和肾细胞癌组成的组的癌症；或该癌症是选自由癌，淋巴瘤，母细胞瘤(包括髓母细胞瘤和成视网膜细胞瘤)，肉瘤(包括脂肪肉瘤和滑膜细胞肉瘤)，神经内分泌肿瘤(包括类癌肿瘤，胃泌素瘤，和岛细胞癌)，间皮瘤，施旺细胞瘤(包括听神经瘤)，脑脊膜瘤，腺癌，黑素瘤，和白血病或淋巴样恶性组成的组。此类癌症的更加特别的例子包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌(SCLC)，非小细胞肺癌(NSCLC)，肺的腺癌和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃的癌或胃癌(包括胃肠癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌(包括转移性乳腺癌)，结肠癌，直肠癌，结直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，肛门癌，阴茎癌，梅克尔细胞癌，蕈样霉菌病，睾丸癌，食管癌，胆道肿瘤，以及头和颈癌和血液学恶性。

55.实施方案52-54任一项的方法，其中该癌症具有升高的T细胞浸润的水平。

56.实施方案52-55任一项的方法，其中该受试者中的癌细胞选择性地具有相对于施用该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂之前升高的MHC I类抗原表达。

57.实施方案52-56任一项的方法，其中该方法进一步包括对该受试者施用化疗剂。

58.实施方案57的方法，其中与该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂中至少一项同时对该受试者施用该化疗剂。

59.实施方案57的方法，其中在施用该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂中至少一项之前对该受试者施用该化疗剂。

60.实施方案57的方法，其中在施用该PD-1轴拮抗剂和该HPK1拮抗剂中至少一项之后对该受试者施用该化疗剂。

61.实施方案43-60任一项的方法，其中该PD-1轴拮抗剂选自由PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂，和PD-L2拮抗剂组成的组。

62.实施方案61的方法，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-1拮抗剂。

63.实施方案62的方法，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。

64.实施方案63的方法，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。

65.实施方案63的方法，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。

66.实施方案63的方法，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和PD-L2二者。

67.实施方案62-66任一项的方法，其中该PD-1拮抗剂是抗体。

68.实施方案67的方法，其中该抗PD-1抗体是单克隆抗体。

69.实施方案67的方法，其中该抗PD-1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

70.实施方案67或69的方法，其中该抗PD-1抗体是人源化抗体。

71.实施方案67或69的方法，其中该抗PD-1抗体是人抗体。

72.实施方案67的方法，其中该PD-1拮抗剂是选自由下述各项组成的组：

a)MDX-1106；

b)Merck 3475；

c)CT-011；

d)结合能够结合MDX-1106的表位的抗体；

e)结合能够结合Merck 3475的表位的抗体；

f)结合能够结合CT-011的表位的抗体；

g)在竞争性结合测定法中与MDX-1106竞争结合PD-1的抗体；

h)在竞争性结合测定法中与Merck 3475竞争结合PD-1的抗体；和

i)在竞争性结合测定法中与CT-011竞争结合PD-1的抗体。

73.实施方案67的方法，其中该PD-1拮抗剂是MDX-1106。

74.实施方案67的方法，其中该PD-1拮抗剂是Merck 3475。

75.实施方案67的方法，其中该PD-1拮抗剂是CT-011。

76.实施方案62的方法，其中该PD-1拮抗剂是AMP-224。

77.实施方案61的方法，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L1拮抗剂。

78.实施方案77的方法，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。

79.实施方案77的方法，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。

80.实施方案77的方法，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。

81.实施方案77的方法，其中该PD-L1拮抗剂是抗体。

82.实施方案81的方法，其中该抗PD-L1抗体是单克隆抗体。

83.实施方案81的方法，其中该抗PD-L1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

84.实施方案81或82的方法，其中该抗PD-L1抗体是人源化抗体。

85.实施方案81或82的方法，其中该抗PD-L1抗体是人抗体。

86.实施方案81的方法，其中该PD-L1拮抗剂选自由下述各项组成的组：

a)YW243.55.S70；

b)MPDL3280A；

c)MEDI4736；

d)MDX-1105；

e)结合能够结合YW243.55.S70的表位的抗体；

f)结合能够结合MPDL3280A的表位的抗体；

g)结合能够结合MEDI4736的表位的抗体；

h)结合能够结合MDX-1105的表位的抗体；

i)在竞争性结合测定法中与YW243.55.S70竞争结合PD-1的抗体；

j)在竞争性结合测定法中与MPDL3280A竞争结合PD-1的抗体；

k)在竞争性结合测定法中与MEDI4736竞争结合PD-1的抗体；和

l)在竞争性结合测定法中与MDX-1105竞争结合PD-1的抗体。

87.实施方案81的方法，其中该PD-L1拮抗剂是YW243.55.S70。

88.实施方案81的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MPDL3280A。

89.实施方案81的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MEDI4736。

90.实施方案81的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MDX-1105。

91.实施方案81的方法，其中该抗体包含包含HVR-H1序列SEQ ID NO:35，HVR-H2序列SEQ ID NO:36，和HVR-H3序列SEQ ID NO:31的重链；和包含HVR-L1序列SEQ ID NO:37，HVR-L2序列SEQ ID NO:38，和HVR-L3序列SEQ ID NO:39的轻链。

92.实施方案81的方法，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的轻链可变区。

93.实施方案61的方法，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L2拮抗剂。

94.实施方案93的方法，其中该PD-L2拮抗剂是抗体。

95.实施方案94的方法，其中该抗PD-L2抗体是单克隆抗体。

96.实施方案93的方法，其中该PD-L2拮抗剂是免疫粘附素。

97.实施方案43-96任一项的方法，其中该HPK1拮抗剂是特异性HPK1拮抗剂。

98.实施方案43-97任一项的方法，其中该HPK1拮抗剂是竞争性抑制剂。

99.实施方案98的方法，其中该HPK1拮抗剂是ATP模拟物。

100.实施方案43-99任一项的方法，其中该治疗导致该治疗停止之后该受试者中持久的应答。

101.实施方案43-100任一项的方法，其中静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，肿瘤内，或鼻内施用该PD-1轴拮抗剂。

102.实施方案43-100任一项的方法，其中静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，肿瘤内，或鼻内施用该HPK1拮抗剂。

103.实施方案43-102任一项的方法，其中连续施用该HPK1拮抗剂。

104.实施方案43-102任一项的方法，其中间歇施用该HPK1拮抗剂。

105.实施方案43-102任一项的方法，其中在该PD-1轴拮抗剂之前施用该HPK1拮抗剂。

106.实施方案43-102任一项的方法，其中与该PD-1轴拮抗剂同时施用该HPK1拮抗剂。

107.实施方案43-102任一项的方法，其中在该PD-1轴拮抗剂之后施用该HPK1拮抗剂。

108.一种试剂盒，其包含PD-1轴拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与HPK1拮抗剂组合使用该PD-1轴拮抗剂以在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。

109.一种试剂盒，其包含HPK1拮抗剂和包装插页，该包装插页包含关于与PD-1轴拮抗剂组合使用该HPK1拮抗剂以在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。

110.一种试剂盒，其包含PD-1轴拮抗剂，HPK拮抗剂，和包装插页，该包装插页包含关于使用该PD-1轴拮抗剂和该HPK拮抗剂以在有需要的受试者中增强免疫应答或治疗癌症的用法说明书。

111.实施方案108-110任一项的试剂盒，其中该PD-1轴拮抗剂选自由PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂，和PD-L2拮抗剂组成的组。

112.实施方案111的试剂盒，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-1拮抗剂。

113.实施方案112的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合它的配体结合配偶。

114.实施方案113的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1。

115.实施方案113的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L2。

116.实施方案113的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和PD-L2二者。

117.实施方案113-116任一项的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂是抗体。

118.实施方案117的试剂盒，其中该抗PD-1抗体是单克隆抗体。

119.实施方案117的试剂盒，其中该抗PD-1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

120.实施方案117或118的试剂盒，其中该抗PD-1抗体是人源化抗体。

121.实施方案117或118的试剂盒，其中该抗PD-1抗体是人抗体。

122.实施方案117-121任一项的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂选自由下述各项组成的组：

a)MDX-1106；

b)Merck 3475；

c)CT-011；

d)结合能够结合MDX-1106的表位的抗体；

e)结合能够结合Merck 3475的表位的抗体；

f)结合能够结合CT-011的表位的抗体；

g)在竞争性结合测定法中与MDX-1106竞争结合PD-1的抗体；

h)在竞争性结合测定法中与Merck 3475竞争结合PD-1的抗体；和

i)在竞争性结合测定法中与CT-011竞争结合PD-1的抗体。

123.实施方案117的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂是MDX-1106。

124.实施方案117的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂是Merck 3475。

125.实施方案117的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂是CT-011。

126.实施方案112的试剂盒，其中该PD-1拮抗剂是AMP-224。

127.实施方案111的试剂盒，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L1拮抗剂。

128.实施方案127的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1。

129.实施方案127的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合B7-1。

130.实施方案127的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和B7-1二者。

131.实施方案127的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂是抗体。

132.实施方案131的试剂盒，其中该抗PD-L1抗体是单克隆抗体。

133.实施方案131的试剂盒，其中该抗PD-L1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

134.实施方案131或132的试剂盒，其中该抗PD-L1抗体是人源化抗体。

135.实施方案131或132的试剂盒，其中该抗PD-L1抗体是人抗体。

136.实施方案131的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂选自由下述各项组成的组：

a)YW243.55.S70；

b)MPDL3280A；

c)MEDI4736；

d)MDX-1105；

e)结合能够结合YW243.55.S70的表位的抗体；

f)结合能够结合MPDL3280A的表位的抗体；

g)结合能够结合MEDI4736的表位的抗体；

h)结合能够结合MDX-1105的表位的抗体；

i)在竞争性结合测定法中与YW243.55.S70竞争结合PD-1的抗体；

j)在竞争性结合测定法中与MPDL3280A竞争结合PD-1的抗体；

k)在竞争性结合测定法中与MEDI4736竞争结合PD-1的抗体；和

l)在竞争性结合测定法中与MDX-1105竞争结合PD-1的抗体。

137.实施方案131的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂是YW243.55.S70。

138.实施方案131的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂是MPDL3280A。

139.实施方案131的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂是MEDI4736。

140.实施方案131的试剂盒，其中该PD-L1拮抗剂是MDX-1105。

141.实施方案131的试剂盒，其中该抗体包含包含HVR-H1序列SEQ ID NO:35，HVR-H2序列SEQ ID NO:36，和HVR-H3序列SEQ ID NO:31的重链；和包含HVR-L1序列SEQ ID NO:37，HVR-L2序列SEQ ID NO:38，和HVR-L3序列SEQ ID NO:39的轻链。

142.实施方案131的试剂盒，其中该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的重链可变区和包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的轻链可变区。

143.实施方案111的试剂盒，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L2拮抗剂。

144.实施方案143的试剂盒，其中该PD-L2拮抗剂是抗体。

145.实施方案144的试剂盒，其中该抗PD-L2抗体是单克隆抗体。

146.实施方案143的试剂盒，其中该PD-L2拮抗剂是免疫粘附素。

147.实施方案108-146任一项的试剂盒，其中该HPK1拮抗剂是特异性HPK1拮抗剂。

148.实施方案108-146任一项的试剂盒，其中该HPK1拮抗剂是竞争性抑制剂。

149.实施方案148的试剂盒，其中该HPK1拮抗剂是ATP模拟物。

150.实施方案108-149任一项的试剂盒，其中该试剂盒进一步包含化疗剂。

151.实施方案43-102任一项的方法，其中该HPK1拮抗剂是作为单一药剂或与PD-1或PD-L1拮抗剂组合能够抑制MC38肿瘤细胞生长的分子。

152.实施方案43-102任一项的方法，其中该HPK1拮抗剂是与PD-1或PD-L1拮抗剂组合能够抑制MC38肿瘤细胞生长的分子。

要注意，术语“一个”或“一种”实体指一个/种或多个/种该实体；例如，“一个/种多肽”理解为代表一个/种或多个/种多肽。照此，术语“一个/种”，“一个/种或多个/种”，和“至少一个/种”在本文中可互换使用。

本文中使用的所有技术和科学术语具有相同的含义。已经做出了努力来确保就所使用的数值(例如量，温度，等)而言的精确性，但是应当考虑一些实验误差和偏差。

贯穿此说明书和权利要求书，词语“包含”以非排他意义使用，上下文另有要求的情况除外。理解的是，本文中描述的实施方案包括“由……组成”和/或“基本上由……组成”实施方案。

如本文中使用的，当下述变动对于实施所公开的方法或采用所公开的组合物是适宜的时，术语“约”在提到数值时意图涵盖一些实施方案中的规定量±50％，一些实施方案中的±20％，一些实施方案中的±10％，一些实施方案中的±5％，一些实施方案中的±1％，一些实施方案中的±0.5％，和一些实施方案中的±0.1％的变动。

在提供数值范围的情况中，理解为该范围的上限与下限之间相差下限十分之一(除非上下文另有清楚指明)的每一个居间值及该叙述的范围中任何其它叙述的或居间的值涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立包括在更小的范围中，而且也涵盖在本发明内，服从叙述的范围中任何具体排除的极限。在所述范围包括一个或两个极限的情况中，排除一个或两个那些包括的极限的范围也包括在本发明中。

受益于在前的描述和相关的附图中呈现的教导，本文中所列发明所属领域的技术人员会想到这些发明的许多修改和其它实施方案。因此，要理解，本发明不限于所公开的具体实施方案，而且修改和其它实施方案意图包括在所附权利要求的范围内。虽然本文中采用具体术语，但是它们仅仅以一般性和描述性意义使用，而非用于限制目的。

作为例示而非限制，提供下面的实施例。

实施例

实施例1

HPK1激酶抑制和PD-1阻断的抗肿瘤效果

方法：

在C57BL/6背景上生成HPK1激酶失效敲入(HPK1.kd)小鼠。简言之，将点突变K46E引入HPK1的激酶域中，产生激酶无活性的HPK1。从HPK1.kd繁殖群落中选择野生型对照小鼠，因此是同窝对照。在体侧中给39只野生型和37只HPK1.kd小鼠接种100μL体积的HBSS:Matrigel中的1x10⁵个MC38鼠同基因结直肠肿瘤细胞。一旦肿瘤达到平均体积125-250mm³，就将每个野生型和HPK1.kd小鼠群组分成两个组，并用对照抗体(抗gp120)或抗PDL1抗体(克隆6E11.1.9，它是与YW243.55.S70和MPDL3280A具有相同CDR的鼠抗PDL1抗体)任一处理。治疗方案由持续三周每周三次腹膜内注射10mg/kg抗gp120或抗PDL1抗体组成。19只野生型小鼠和18只HPK1.kd小鼠是用抗gp120处理的，而20只野生型和19只HPK1.kd小鼠是用抗PD-L1抗体处理的。密切监测肿瘤生长，每周测量两次，以确定HPK1.kd小鼠是否在用抗PDL1抗体处理后具有相对于野生型对照缩小的肿瘤体积。对肿瘤达到2000mm³或更大体积或超出IACUC关于啮齿动物中的肿瘤给出的任何指导方针的动物处以安乐死或与兽医人员讨论。

结果：

在起始抗PDL1处理方案之前，在野生型和HPK1.kd小鼠之间没有观察到MC38肿瘤获取和生长测量的惹人注目的差异(图2，第0天)。在抗PDL1抗体处理之后，HPK1.kd群组中的MC38肿瘤体积显示比野生型小鼠显著更多的缩小，证明HPK1激酶抑制和PD-L1共阻断的有效抗肿瘤应答(图2)。

实施例2

HPK1激酶抑制和PD1阻断的抗肿瘤效果

方法：

在C57BL/6背景上生成HPK1激酶失效敲入(HPK1.kd)小鼠。简言之，将点突变K46E引入HPK1的激酶域中，产生激酶无活性的HPK1。从HPK1.kd繁殖群落中选择野生型对照小鼠，因此是同窝对照。在体侧中给30只野生型和30只HPK1.kd小鼠接种100μL体积的HBSS:Matrigel中的1x10⁵个MC38鼠同基因结直肠肿瘤细胞。一旦肿瘤达到平均体积125-250mm³，就将每个野生型和HPK1.kd小鼠群组分成15只小鼠的组，并用对照抗体(抗gp120)或抗PD1抗体(克隆8F11.19.1.1，它是鼠抗PD-1抗体)任一处理。治疗方案由持续三周每周三次腹膜内注射10mg/kg抗gp120或5mg/kg抗PD-1抗体组成。密切监测肿瘤生长，每周测量两次，以确定HPK1.kd小鼠是否在用抗PD-1抗体处理后具有相对于野生型对照缩小的肿瘤体积。对肿瘤达到2000mm³或更大体积或超出IACUC关于啮齿动物中的肿瘤给出的任何指导方针的动物处以安乐死或与兽医人员讨论。

结果：

在起始抗PD-1处理方案之前，在野生型和HPK1.kd小鼠之间没有观察到MC38肿瘤获取和生长测量的惹人注目的差异(图3，第0天)。在抗PD-1抗体处理之后，HPK1.kd群组中的MC38肿瘤体积在研究过程期间保持平坦，而且显示比野生型小鼠更加突出的缩小，证明HPK1激酶抑制和PD-1共阻断的有效抗肿瘤应答(图3)。

序列表

<110> 基因泰克公司（GENENTECH, INC.）

豪夫迈·罗氏有限公司（F. HOFFMANN-LA ROCHE AG）

<120> 使用PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂用于治疗癌症的方法和组合物

<130> P32458-WO

<140>

<141>

<150> 62/087,944

<151> 2014-12-05

<160> 41

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 867

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 1

atgcagatcc cacaggcgcc ctggccagtc gtctgggcgg tgctacaact gggctggcgg 60

ccaggatggt tcttagactc cccagacagg ccctggaacc cccccacctt ctccccagcc 120

ctgctcgtgg tgaccgaagg ggacaacgcc accttcacct gcagcttctc caacacatcg 180

gagagcttcg tgctaaactg gtaccgcatg agccccagca accagacgga caagctggcc 240

gccttccccg aggaccgcag ccagcccggc caggactgcc gcttccgtgt cacacaactg 300

cccaacgggc gtgacttcca catgagcgtg gtcagggccc ggcgcaatga cagcggcacc 360

tacctctgtg gggccatctc cctggccccc aaggcgcaga tcaaagagag cctgcgggca 420

gagctcaggg tgacagagag aagggcagaa gtgcccacag cccaccccag cccctcaccc 480

aggccagccg gccagttcca aaccctggtg gttggtgtcg tgggcggcct gctgggcagc 540

ctggtgctgc tagtctgggt cctggccgtc atctgctccc gggccgcacg agggacaata 600

ggagccaggc gcaccggcca gcccctgaag gaggacccct cagccgtgcc tgtgttctct 660

gtggactatg gggagctgga tttccagtgg cgagagaaga ccccggagcc ccccgtgccc 720

tgtgtccctg agcagacgga gtatgccacc attgtctttc ctagcggaat gggcacctca 780

tcccccgccc gcaggggctc agctgacggc cctcggagtg cccagccact gaggcctgag 840

gatggacact gctcttggcc cctctga 867

<210> 2

<211> 288

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 2

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 3

<211> 873

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 3

atgaggatat ttgctgtctt tatattcatg acctactggc atttgctgaa cgcatttact 60

gtcacggttc ccaaggacct atatgtggta gagtatggta gcaatatgac aattgaatgc 120

aaattcccag tagaaaaaca attagacctg gctgcactaa ttgtctattg ggaaatggag 180

gataagaaca ttattcaatt tgtgcatgga gaggaagacc tgaaggttca gcatagtagc 240

tacagacaga gggcccggct gttgaaggac cagctctccc tgggaaatgc tgcacttcag 300

atcacagatg tgaaattgca ggatgcaggg gtgtaccgct gcatgatcag ctatggtggt 360

gccgactaca agcgaattac tgtgaaagtc aatgccccat acaacaaaat caaccaaaga 420

attttggttg tggatccagt cacctctgaa catgaactga catgtcaggc tgagggctac 480

cccaaggccg aagtcatctg gacaagcagt gaccatcaag tcctgagtgg taagaccacc 540

accaccaatt ccaagagaga ggagaagctt ttcaatgtga ccagcacact gagaatcaac 600

acaacaacta atgagatttt ctactgcact tttaggagat tagatcctga ggaaaaccat 660

acagctgaat tggtcatccc agaactacct ctggcacatc ctccaaatga aaggactcac 720

ttggtaattc tgggagccat cttattatgc cttggtgtag cactgacatt catcttccgt 780

ttaagaaaag ggagaatgat ggatgtgaaa aaatgtggca tccaagatac aaactcaaag 840

aagcaaagtg atacacattt ggaggagacg taa 873

<210> 4

<211> 290

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 4

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

20 25 30

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

35 40 45

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

50 55 60

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

65 70 75 80

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

100 105 110

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

115 120 125

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

130 135 140

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

165 170 175

Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn

180 185 190

Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr

195 200 205

Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu

210 215 220

Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His

225 230 235 240

Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr

245 250 255

Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys

260 265 270

Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu

275 280 285

Glu Thr

290

<210> 5

<211> 531

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 5

atgaggatat ttgctgtctt tatattcatg acctactggc atttgctgaa cgccccatac 60

aacaaaatca accaaagaat tttggttgtg gatccagtca cctctgaaca tgaactgaca 120

tgtcaggctg agggctaccc caaggccgaa gtcatctgga caagcagtga ccatcaagtc 180

ctgagtggta agaccaccac caccaattcc aagagagagg agaagctttt caatgtgacc 240

agcacactga gaatcaacac aacaactaat gagattttct actgcacttt taggagatta 300

gatcctgagg aaaaccatac agctgaattg gtcatcccag aactacctct ggcacatcct 360

ccaaatgaaa ggactcactt ggtaattctg ggagccatct tattatgcct tggtgtagca 420

ctgacattca tcttccgttt aagaaaaggg agaatgatgg atgtgaaaaa atgtggcatc 480

caagatacaa actcaaagaa gcaaagtgat acacatttgg aggagacgta a 531

<210> 6

<211> 176

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 6

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro

20 25 30

Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys

35 40 45

Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys

50 55 60

Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr

65 70 75 80

Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr

85 90 95

Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile

100 105 110

Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His Leu Val

115 120 125

Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr Phe Ile

130 135 140

Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys Gly Ile

145 150 155 160

Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu Glu Thr

165 170 175

<210> 7

<211> 537

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 7

atgaggatat ttgctgtctt tatattcatg acctactggc atttgctgaa cgcatttact 60

gtcacggttc ccaaggacct atatgtggta gagtatggta gcaatatgac aattgaatgc 120

aaattcccag tagaaaaaca attagacctg gctgcactaa ttgtctattg ggaaatggag 180

gataagaaca ttattcaatt tgtgcatgga gaggaagacc tgaaggttca gcatagtagc 240

tacagacaga gggcccggct gttgaaggac cagctctccc tgggaaatgc tgcacttcag 300

atcacagatg tgaaattgca ggatgcaggg gtgtaccgct gcatgatcag ctatggtggt 360

gccgactaca agcgaattac tgtgaaagtc aatgccccat acaacaaaat caaccaaaga 420

attttggttg tggatccagt cacctctgaa catgaactga catgtcaggc tgagggctac 480

cccaaggccg aagtcatctg gacaagcagt gaccatcaag tcctgagtgg agattag 537

<210> 8

<211> 178

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 8

Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu

1 5 10 15

Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr

20 25 30

Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu

35 40 45

Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile

50 55 60

Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser

65 70 75 80

Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn

85 90 95

Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr

100 105 110

Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val

115 120 125

Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val

130 135 140

Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr

145 150 155 160

Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser

165 170 175

Gly Asp

<210> 9

<211> 822

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 9

atgatcttcc tcctgctaat gttgagcctg gaattgcagc ttcaccagat agcagcttta 60

ttcacagtga cagtccctaa ggaactgtac ataatagagc atggcagcaa tgtgaccctg 120

gaatgcaact ttgacactgg aagtcatgtg aaccttggag caataacagc cagtttgcaa 180

aaggtggaaa atgatacatc cccacaccgt gaaagagcca ctttgctgga ggagcagctg 240

cccctaggga aggcctcgtt ccacatacct caagtccaag tgagggacga aggacagtac 300

caatgcataa tcatctatgg ggtcgcctgg gactacaagt acctgactct gaaagtcaaa 360

gcttcctaca ggaaaataaa cactcacatc ctaaaggttc cagaaacaga tgaggtagag 420

ctcacctgcc aggctacagg ttatcctctg gcagaagtat cctggccaaa cgtcagcgtt 480

cctgccaaca ccagccactc caggacccct gaaggcctct accaggtcac cagtgttctg 540

cgcctaaagc caccccctgg cagaaacttc agctgtgtgt tctggaatac tcacgtgagg 600

gaacttactt tggccagcat tgaccttcaa agtcagatgg aacccaggac ccatccaact 660

tggctgcttc acattttcat ccccttctgc atcattgctt tcattttcat agccacagtg 720

atagccctaa gaaaacaact ctgtcaaaag ctgtattctt caaaagacac aacaaaaaga 780

cctgtcacca caacaaagag ggaagtgaac agtgctatct ga 822

<210> 10

<211> 273

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 10

Met Ile Phe Leu Leu Leu Met Leu Ser Leu Glu Leu Gln Leu His Gln

1 5 10 15

Ile Ala Ala Leu Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Glu Leu Tyr Ile Ile

20 25 30

Glu His Gly Ser Asn Val Thr Leu Glu Cys Asn Phe Asp Thr Gly Ser

35 40 45

His Val Asn Leu Gly Ala Ile Thr Ala Ser Leu Gln Lys Val Glu Asn

50 55 60

Asp Thr Ser Pro His Arg Glu Arg Ala Thr Leu Leu Glu Glu Gln Leu

65 70 75 80

Pro Leu Gly Lys Ala Ser Phe His Ile Pro Gln Val Gln Val Arg Asp

85 90 95

Glu Gly Gln Tyr Gln Cys Ile Ile Ile Tyr Gly Val Ala Trp Asp Tyr

100 105 110

Lys Tyr Leu Thr Leu Lys Val Lys Ala Ser Tyr Arg Lys Ile Asn Thr

115 120 125

His Ile Leu Lys Val Pro Glu Thr Asp Glu Val Glu Leu Thr Cys Gln

130 135 140

Ala Thr Gly Tyr Pro Leu Ala Glu Val Ser Trp Pro Asn Val Ser Val

145 150 155 160

Pro Ala Asn Thr Ser His Ser Arg Thr Pro Glu Gly Leu Tyr Gln Val

165 170 175

Thr Ser Val Leu Arg Leu Lys Pro Pro Pro Gly Arg Asn Phe Ser Cys

180 185 190

Val Phe Trp Asn Thr His Val Arg Glu Leu Thr Leu Ala Ser Ile Asp

195 200 205

Leu Gln Ser Gln Met Glu Pro Arg Thr His Pro Thr Trp Leu Leu His

210 215 220

Ile Phe Ile Pro Phe Cys Ile Ile Ala Phe Ile Phe Ile Ala Thr Val

225 230 235 240

Ile Ala Leu Arg Lys Gln Leu Cys Gln Lys Leu Tyr Ser Ser Lys Asp

245 250 255

Thr Thr Lys Arg Pro Val Thr Thr Thr Lys Arg Glu Val Asn Ser Ala

260 265 270

Ile

<210> 11

<211> 2502

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 11

atggacgtcg tggaccctga cattttcaat agagaccccc gggaccacta tgacctgcta 60

cagcggctgg gtggcggcac gtatggggaa gtctttaagg ctcgagacaa ggtgtcaggg 120

gacctggtgg cactgaagat ggtgaagatg gagcctgatg atgatgtctc cacccttcag 180

aaggaaatcc tcatattgaa aacttgccgg cacgccaaca tcgtggccta ccatgggagt 240

tatctctggt tgcagaaact ctggatctgc atggaattct gtggggctgg ttctctccag 300

gacatctacc aagtgacagg ctccctgtca gagctccaga ttagctatgt ctgccgggaa 360

gtgctccagg gactggccta tttgcactca cagaagaaga tacacaggga catcaaggga 420

gctaacatcc tcatcaatga tgctggggag gtcagattgg ctgactttgg catctcggcc 480

cagattgggg ctacactggc cagacgcctc tctttcattg ggacacccta ctggatggct 540

ccggaagtgg cagctgtggc cctgaaggga ggatacaatg agctgtgtga catctggtcc 600

ctgggcatca cggccatcga actggccgag ctacagccac cgctctttga tgtgcaccct 660

ctcagagttc tcttcctcat gaccaagagt ggctaccagc ctccccgact gaaggaaaaa 720

ggcaaatggt cggctgcctt ccacaacttc atcaaagtca ctctgactaa gagtcccaag 780

aaacgaccca gcgccaccaa gatgctcagt catcaactgg tatcccagcc tgggctgaat 840

cgaggcctga tcctggatct tcttgacaaa ctgaagaatc ccgggaaagg accctccatt 900

ggggacattg aggatgagga gcccgagcta ccccctgcta tccctcggcg gatcagatcc 960

acccaccgct ccagctctct ggggatccca gatgcagact gctgtcggcg gcacatggag 1020

ttcaggaagc tccgaggaat ggagaccaga cccccagcca acaccgctcg cctacagcct 1080

cctcgagacc tcaggagcag cagccccagg aagcaactgt cagagtcgtc tgacgatgac 1140

tatgacgacg tggacatccc cacccctgca gaggacacac ctcctccact tccccccaag 1200

cccaagttcc gttctccatc agacgagggt cctgggagca tgggggatga tgggcagctg 1260

agcccggggg tgctggtccg gtgtgccagt gggcccccac caaacagccc ccgtcctggg 1320

cctcccccat ccaccagcag cccccacctc accgcccatt cagaaccctc actctggaac 1380

ccaccctccc gggagcttga caagccccca cttctgcccc ccaagaagga aaagatgaag 1440

agaaagggat gtgcccttct cgtaaagttg ttcaatggct gccccctccg gatccacagc 1500

acggccgcct ggacacatcc ctccaccaag gaccagcacc tgctcctggg ggcagaggaa 1560

ggcatcttca tcctgaaccg gaatgaccag gaggccacgc tggaaatgct ctttcctagc 1620

cggactacgt gggtgtactc catcaacaac gttctcatgt ctctctcagg aaagaccccc 1680

cacctgtatt ctcatagcat ccttggcctg ctggaacgga aagagaccag agcaggaaac 1740

cccatcgctc acattagccc ccaccgccta ctggcaagga agaacatggt ttccaccaag 1800

atccaggaca ccaaaggctg ccgggcgtgc tgtgtggcgg agggtgcgag ctctgggggc 1860

ccgttcctgt gcggtgcatt ggagacgtcc gttgtcctgc ttcagtggta ccagcccatg 1920

aacaaattcc tgcttgtccg gcaggtgctg ttcccactgc cgacgcctct gtccgtgttc 1980

gcgctgctga ccgggccagg ctctgagctg cccgctgtgt gcatcggcgt gagccccggg 2040

cggccgggga agtcggtgct cttccacacg gtgcgctttg gcgcgctctc ttgctggctg 2100

ggcgagatga gcaccgagca caggggaccc gtgcaggtga cccaggtaga ggaagatatg 2160

gtgatggtgt tgatggatgg ctctgtgaag ctggtgaccc cggaggggtc cccagtccgg 2220

ggacttcgca cacctgagat ccccatgacc gaagcggtgg aggccgtggc tatggttgga 2280

ggtcagcttc aggccttctg gaagcatgga gtgcaggtgt gggctctagg ctcggatcag 2340

ctgctacagg agctgagaga ccctaccctc actttccgtc tgcttggctc ccccaggctg 2400

gagtgcagtg gcacgatctc gcctcactgc aacctcctcc tcccaggttc aagcaattct 2460

cctgcctcag cctcccgagt agctgggatt acaggcctgt ag 2502

<210> 12

<211> 833

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 12

Met Asp Val Val Asp Pro Asp Ile Phe Asn Arg Asp Pro Arg Asp His

1 5 10 15

Tyr Asp Leu Leu Gln Arg Leu Gly Gly Gly Thr Tyr Gly Glu Val Phe

20 25 30

Lys Ala Arg Asp Lys Val Ser Gly Asp Leu Val Ala Leu Lys Met Val

35 40 45

Lys Met Glu Pro Asp Asp Asp Val Ser Thr Leu Gln Lys Glu Ile Leu

50 55 60

Ile Leu Lys Thr Cys Arg His Ala Asn Ile Val Ala Tyr His Gly Ser

65 70 75 80

Tyr Leu Trp Leu Gln Lys Leu Trp Ile Cys Met Glu Phe Cys Gly Ala

85 90 95

Gly Ser Leu Gln Asp Ile Tyr Gln Val Thr Gly Ser Leu Ser Glu Leu

100 105 110

Gln Ile Ser Tyr Val Cys Arg Glu Val Leu Gln Gly Leu Ala Tyr Leu

115 120 125

His Ser Gln Lys Lys Ile His Arg Asp Ile Lys Gly Ala Asn Ile Leu

130 135 140

Ile Asn Asp Ala Gly Glu Val Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ile Ser Ala

145 150 155 160

Gln Ile Gly Ala Thr Leu Ala Arg Arg Leu Ser Phe Ile Gly Thr Pro

165 170 175

Tyr Trp Met Ala Pro Glu Val Ala Ala Val Ala Leu Lys Gly Gly Tyr

180 185 190

Asn Glu Leu Cys Asp Ile Trp Ser Leu Gly Ile Thr Ala Ile Glu Leu

195 200 205

Ala Glu Leu Gln Pro Pro Leu Phe Asp Val His Pro Leu Arg Val Leu

210 215 220

Phe Leu Met Thr Lys Ser Gly Tyr Gln Pro Pro Arg Leu Lys Glu Lys

225 230 235 240

Gly Lys Trp Ser Ala Ala Phe His Asn Phe Ile Lys Val Thr Leu Thr

245 250 255

Lys Ser Pro Lys Lys Arg Pro Ser Ala Thr Lys Met Leu Ser His Gln

260 265 270

Leu Val Ser Gln Pro Gly Leu Asn Arg Gly Leu Ile Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Asp Lys Leu Lys Asn Pro Gly Lys Gly Pro Ser Ile Gly Asp Ile Glu

290 295 300

Asp Glu Glu Pro Glu Leu Pro Pro Ala Ile Pro Arg Arg Ile Arg Ser

305 310 315 320

Thr His Arg Ser Ser Ser Leu Gly Ile Pro Asp Ala Asp Cys Cys Arg

325 330 335

Arg His Met Glu Phe Arg Lys Leu Arg Gly Met Glu Thr Arg Pro Pro

340 345 350

Ala Asn Thr Ala Arg Leu Gln Pro Pro Arg Asp Leu Arg Ser Ser Ser

355 360 365

Pro Arg Lys Gln Leu Ser Glu Ser Ser Asp Asp Asp Tyr Asp Asp Val

370 375 380

Asp Ile Pro Thr Pro Ala Glu Asp Thr Pro Pro Pro Leu Pro Pro Lys

385 390 395 400

Pro Lys Phe Arg Ser Pro Ser Asp Glu Gly Pro Gly Ser Met Gly Asp

405 410 415

Asp Gly Gln Leu Ser Pro Gly Val Leu Val Arg Cys Ala Ser Gly Pro

420 425 430

Pro Pro Asn Ser Pro Arg Pro Gly Pro Pro Pro Ser Thr Ser Ser Pro

435 440 445

His Leu Thr Ala His Ser Glu Pro Ser Leu Trp Asn Pro Pro Ser Arg

450 455 460

Glu Leu Asp Lys Pro Pro Leu Leu Pro Pro Lys Lys Glu Lys Met Lys

465 470 475 480

Arg Lys Gly Cys Ala Leu Leu Val Lys Leu Phe Asn Gly Cys Pro Leu

485 490 495

Arg Ile His Ser Thr Ala Ala Trp Thr His Pro Ser Thr Lys Asp Gln

500 505 510

His Leu Leu Leu Gly Ala Glu Glu Gly Ile Phe Ile Leu Asn Arg Asn

515 520 525

Asp Gln Glu Ala Thr Leu Glu Met Leu Phe Pro Ser Arg Thr Thr Trp

530 535 540

Val Tyr Ser Ile Asn Asn Val Leu Met Ser Leu Ser Gly Lys Thr Pro

545 550 555 560

His Leu Tyr Ser His Ser Ile Leu Gly Leu Leu Glu Arg Lys Glu Thr

565 570 575

Arg Ala Gly Asn Pro Ile Ala His Ile Ser Pro His Arg Leu Leu Ala

580 585 590

Arg Lys Asn Met Val Ser Thr Lys Ile Gln Asp Thr Lys Gly Cys Arg

595 600 605

Ala Cys Cys Val Ala Glu Gly Ala Ser Ser Gly Gly Pro Phe Leu Cys

610 615 620

Gly Ala Leu Glu Thr Ser Val Val Leu Leu Gln Trp Tyr Gln Pro Met

625 630 635 640

Asn Lys Phe Leu Leu Val Arg Gln Val Leu Phe Pro Leu Pro Thr Pro

645 650 655

Leu Ser Val Phe Ala Leu Leu Thr Gly Pro Gly Ser Glu Leu Pro Ala

660 665 670

Val Cys Ile Gly Val Ser Pro Gly Arg Pro Gly Lys Ser Val Leu Phe

675 680 685

His Thr Val Arg Phe Gly Ala Leu Ser Cys Trp Leu Gly Glu Met Ser

690 695 700

Thr Glu His Arg Gly Pro Val Gln Val Thr Gln Val Glu Glu Asp Met

705 710 715 720

Val Met Val Leu Met Asp Gly Ser Val Lys Leu Val Thr Pro Glu Gly

725 730 735

Ser Pro Val Arg Gly Leu Arg Thr Pro Glu Ile Pro Met Thr Glu Ala

740 745 750

Val Glu Ala Val Ala Met Val Gly Gly Gln Leu Gln Ala Phe Trp Lys

755 760 765

His Gly Val Gln Val Trp Ala Leu Gly Ser Asp Gln Leu Leu Gln Glu

770 775 780

Leu Arg Asp Pro Thr Leu Thr Phe Arg Leu Leu Gly Ser Pro Arg Leu

785 790 795 800

Glu Cys Ser Gly Thr Ile Ser Pro His Cys Asn Leu Leu Leu Pro Gly

805 810 815

Ser Ser Asn Ser Pro Ala Ser Ala Ser Arg Val Ala Gly Ile Thr Gly

820 825 830

Leu

<210> 13

<211> 2466

<212> DNA

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 13

atggacgtcg tggaccctga cattttcaat agagaccccc gggaccacta tgacctgcta 60

cagcggctgg gtggcggcac gtatggggaa gtctttaagg ctcgagacaa ggtgtcaggg 120

gacctggtgg cactgaagat ggtgaagatg gagcctgatg atgatgtctc cacccttcag 180

aaggaaatcc tcatattgaa aacttgccgg cacgccaaca tcgtggccta ccatgggagt 240

tatctctggt tgcagaaact ctggatctgc atggaattct gtggggctgg ttctctccag 300

gacatctacc aagtgacagg ctccctgtca gagctccaga ttagctatgt ctgccgggaa 360

gtgctccagg gactggccta tttgcactca cagaagaaga tacacaggga catcaaggga 420

gctaacatcc tcatcaatga tgctggggag gtcagattgg ctgactttgg catctcggcc 480

cagattgggg ctacactggc cagacgcctc tctttcattg ggacacccta ctggatggct 540

ccggaagtgg cagctgtggc cctgaaggga ggatacaatg agctgtgtga catctggtcc 600

ctgggcatca cggccatcga actggccgag ctacagccac cgctctttga tgtgcaccct 660

ctcagagttc tcttcctcat gaccaagagt ggctaccagc ctccccgact gaaggaaaaa 720

ggcaaatggt cggctgcctt ccacaacttc atcaaagtca ctctgactaa gagtcccaag 780

aaacgaccca gcgccaccaa gatgctcagt catcaactgg tatcccagcc tgggctgaat 840

cgaggcctga tcctggatct tcttgacaaa ctgaagaatc ccgggaaagg accctccatt 900

ggggacattg aggatgagga gcccgagcta ccccctgcta tccctcggcg gatcagatcc 960

acccaccgct ccagctctct ggggatccca gatgcagact gctgtcggcg gcacatggag 1020

ttcaggaagc tccgaggaat ggagaccaga cccccagcca acaccgctcg cctacagcct 1080

cctcgagacc tcaggagcag cagccccagg aagcaactgt cagagtcgtc tgacgatgac 1140

tatgacgacg tggacatccc cacccctgca gaggacacac ctcctccact tccccccaag 1200

cccaagttcc gttctccatc agacgagggt cctgggagca tgggggatga tgggcagctg 1260

agcccggggg tgctggtccg gtgtgccagt gggcccccac caaacagccc ccgtcctggg 1320

cctcccccat ccaccagcag cccccacctc accgcccatt cagaaccctc actctggaac 1380

ccaccctccc gggagcttga caagccccca cttctgcccc ccaagaagga aaagatgaag 1440

agaaagggat gtgcccttct cgtaaagttg ttcaatggct gccccctccg gatccacagc 1500

acggccgcct ggacacatcc ctccaccaag gaccagcacc tgctcctggg ggcagaggaa 1560

ggcatcttca tcctgaaccg gaatgaccag gaggccacgc tggaaatgct ctttcctagc 1620

cggactacgt gggtgtactc catcaacaac gttctcatgt ctctctcagg aaagaccccc 1680

cacctgtatt ctcatagcat ccttggcctg ctggaacgga aagagaccag agcaggaaac 1740

cccatcgctc acattagccc ccaccgccta ctggcaagga agaacatggt ttccaccaag 1800

atccaggaca ccaaaggctg ccgggcgtgc tgtgtggcgg agggtgcgag ctctgggggc 1860

ccgttcctgt gcggtgcatt ggagacgtcc gttgtcctgc ttcagtggta ccagcccatg 1920

aacaaattcc tgcttgtccg gcaggtgctg ttcccactgc cgacgcctct gtccgtgttc 1980

gcgctgctga ccgggccagg ctctgagctg cccgctgtgt gcatcggcgt gagccccggg 2040

cggccgggga agtcggtgct cttccacacg gtgcgctttg gcgcgctctc ttgctggctg 2100

ggcgagatga gcaccgagca caggggaccc gtgcaggtga cccaggtaga ggaagatatg 2160

gtgatggtgt tgatggatgg ctctgtgaag ctggtgaccc cggaggggtc cccagtccgg 2220

ggacttcgca cacctgagat ccccatgacc gaagcggtgg aggccgtggc tatggttgga 2280

ggtcagcttc aggccttctg gaagcatgga gtgcaggtgt gggctctagg ctcggatcag 2340

ctgctacagg agctgagaga ccctaccctc actttccgtc tgcttggctc ccccaggcct 2400

gtagtggtgg agacacgccc agtggatgat cctactgctc ccagcaacct ctacatccag 2460

gaatga 2466

<210> 14

<211> 821

<212> PRT

<213> 人（Homo sapiens）

<400> 14

Met Asp Val Val Asp Pro Asp Ile Phe Asn Arg Asp Pro Arg Asp His

1 5 10 15

Tyr Asp Leu Leu Gln Arg Leu Gly Gly Gly Thr Tyr Gly Glu Val Phe

20 25 30

Lys Ala Arg Asp Lys Val Ser Gly Asp Leu Val Ala Leu Lys Met Val

35 40 45

Lys Met Glu Pro Asp Asp Asp Val Ser Thr Leu Gln Lys Glu Ile Leu

50 55 60

Ile Leu Lys Thr Cys Arg His Ala Asn Ile Val Ala Tyr His Gly Ser

65 70 75 80

Tyr Leu Trp Leu Gln Lys Leu Trp Ile Cys Met Glu Phe Cys Gly Ala

85 90 95

Gly Ser Leu Gln Asp Ile Tyr Gln Val Thr Gly Ser Leu Ser Glu Leu

100 105 110

Gln Ile Ser Tyr Val Cys Arg Glu Val Leu Gln Gly Leu Ala Tyr Leu

115 120 125

His Ser Gln Lys Lys Ile His Arg Asp Ile Lys Gly Ala Asn Ile Leu

130 135 140

Ile Asn Asp Ala Gly Glu Val Arg Leu Ala Asp Phe Gly Ile Ser Ala

145 150 155 160

Gln Ile Gly Ala Thr Leu Ala Arg Arg Leu Ser Phe Ile Gly Thr Pro

165 170 175

Tyr Trp Met Ala Pro Glu Val Ala Ala Val Ala Leu Lys Gly Gly Tyr

180 185 190

Asn Glu Leu Cys Asp Ile Trp Ser Leu Gly Ile Thr Ala Ile Glu Leu

195 200 205

Ala Glu Leu Gln Pro Pro Leu Phe Asp Val His Pro Leu Arg Val Leu

210 215 220

Phe Leu Met Thr Lys Ser Gly Tyr Gln Pro Pro Arg Leu Lys Glu Lys

225 230 235 240

Gly Lys Trp Ser Ala Ala Phe His Asn Phe Ile Lys Val Thr Leu Thr

245 250 255

Lys Ser Pro Lys Lys Arg Pro Ser Ala Thr Lys Met Leu Ser His Gln

260 265 270

Leu Val Ser Gln Pro Gly Leu Asn Arg Gly Leu Ile Leu Asp Leu Leu

275 280 285

Asp Lys Leu Lys Asn Pro Gly Lys Gly Pro Ser Ile Gly Asp Ile Glu

290 295 300

Asp Glu Glu Pro Glu Leu Pro Pro Ala Ile Pro Arg Arg Ile Arg Ser

305 310 315 320

Thr His Arg Ser Ser Ser Leu Gly Ile Pro Asp Ala Asp Cys Cys Arg

325 330 335

Arg His Met Glu Phe Arg Lys Leu Arg Gly Met Glu Thr Arg Pro Pro

340 345 350

Ala Asn Thr Ala Arg Leu Gln Pro Pro Arg Asp Leu Arg Ser Ser Ser

355 360 365

Pro Arg Lys Gln Leu Ser Glu Ser Ser Asp Asp Asp Tyr Asp Asp Val

370 375 380

Asp Ile Pro Thr Pro Ala Glu Asp Thr Pro Pro Pro Leu Pro Pro Lys

385 390 395 400

Pro Lys Phe Arg Ser Pro Ser Asp Glu Gly Pro Gly Ser Met Gly Asp

405 410 415

Asp Gly Gln Leu Ser Pro Gly Val Leu Val Arg Cys Ala Ser Gly Pro

420 425 430

Pro Pro Asn Ser Pro Arg Pro Gly Pro Pro Pro Ser Thr Ser Ser Pro

435 440 445

His Leu Thr Ala His Ser Glu Pro Ser Leu Trp Asn Pro Pro Ser Arg

450 455 460

Glu Leu Asp Lys Pro Pro Leu Leu Pro Pro Lys Lys Glu Lys Met Lys

465 470 475 480

Arg Lys Gly Cys Ala Leu Leu Val Lys Leu Phe Asn Gly Cys Pro Leu

485 490 495

Arg Ile His Ser Thr Ala Ala Trp Thr His Pro Ser Thr Lys Asp Gln

500 505 510

His Leu Leu Leu Gly Ala Glu Glu Gly Ile Phe Ile Leu Asn Arg Asn

515 520 525

Asp Gln Glu Ala Thr Leu Glu Met Leu Phe Pro Ser Arg Thr Thr Trp

530 535 540

Val Tyr Ser Ile Asn Asn Val Leu Met Ser Leu Ser Gly Lys Thr Pro

545 550 555 560

His Leu Tyr Ser His Ser Ile Leu Gly Leu Leu Glu Arg Lys Glu Thr

565 570 575

Arg Ala Gly Asn Pro Ile Ala His Ile Ser Pro His Arg Leu Leu Ala

580 585 590

Arg Lys Asn Met Val Ser Thr Lys Ile Gln Asp Thr Lys Gly Cys Arg

595 600 605

Ala Cys Cys Val Ala Glu Gly Ala Ser Ser Gly Gly Pro Phe Leu Cys

610 615 620

Gly Ala Leu Glu Thr Ser Val Val Leu Leu Gln Trp Tyr Gln Pro Met

625 630 635 640

Asn Lys Phe Leu Leu Val Arg Gln Val Leu Phe Pro Leu Pro Thr Pro

645 650 655

Leu Ser Val Phe Ala Leu Leu Thr Gly Pro Gly Ser Glu Leu Pro Ala

660 665 670

Val Cys Ile Gly Val Ser Pro Gly Arg Pro Gly Lys Ser Val Leu Phe

675 680 685

His Thr Val Arg Phe Gly Ala Leu Ser Cys Trp Leu Gly Glu Met Ser

690 695 700

Thr Glu His Arg Gly Pro Val Gln Val Thr Gln Val Glu Glu Asp Met

705 710 715 720

Val Met Val Leu Met Asp Gly Ser Val Lys Leu Val Thr Pro Glu Gly

725 730 735

Ser Pro Val Arg Gly Leu Arg Thr Pro Glu Ile Pro Met Thr Glu Ala

740 745 750

Val Glu Ala Val Ala Met Val Gly Gly Gln Leu Gln Ala Phe Trp Lys

755 760 765

His Gly Val Gln Val Trp Ala Leu Gly Ser Asp Gln Leu Leu Gln Glu

770 775 780

Leu Arg Asp Pro Thr Leu Thr Phe Arg Leu Leu Gly Ser Pro Arg Pro

785 790 795 800

Val Val Val Glu Thr Arg Pro Val Asp Asp Pro Thr Ala Pro Ser Asn

805 810 815

Leu Tyr Ile Gln Glu

820

<210> 15

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 15

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 16

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 16

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10

<210> 17

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的poly肽"

<400> 17

Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln

1 5 10 15

Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

20 25 30

<210> 18

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 18

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

1 5 10

<210> 19

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 19

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys

20

<210> 20

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 20

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 21

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 21

Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 22

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 22

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

1 5 10

<210> 23

<211> 440

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 23

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser

100 105 110

Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser

115 120 125

Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp

130 135 140

Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr

145 150 155 160

Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr

165 170 175

Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys

180 185 190

Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp

195 200 205

Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala

210 215 220

Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro

225 230 235 240

Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val

245 250 255

Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val

260 265 270

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln

275 280 285

Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln

290 295 300

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly

305 310 315 320

Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro

325 330 335

Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr

340 345 350

Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser

355 360 365

Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr

370 375 380

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr

385 390 395 400

Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe

405 410 415

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys

420 425 430

Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440

<210> 24

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 24

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 25

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 26

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 26

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 27

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 27

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 28

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 28

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

1 5 10

<210> 29

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<220>

<221> 变异

<222> (6)..(6)

<223> /替换="Gly"

<220>

<221> 混杂特征

<222> (1)..(10)

<223> /注释="对于变异位置序列中给出的变异残基就注解中的那些而言没有偏爱"

<400> 29

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His

1 5 10

<210> 30

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<220>

<221> 变异

<222> (4)..(4)

<223> /替换="Leu"

<220>

<221> 变异

<222> (10)..(10)

<223> /替换="Ser"

<220>

<221> 混杂特征

<222> (1)..(18)

<223> /注释="对于变异位置序列中给出的变异残基就注解中的那些而言没有偏爱"

<400> 30

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 31

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 31

Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr

1 5

<210> 32

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<220>

<221> 变异

<222> (5)..(5)

<223> /替换="Val"

<220>

<221> 变异

<222> (6)..(6)

<223> /替换="Ile"

<220>

<221> 变异

<222> (7)..(7)

<223> /替换="Asn"

<220>

<221> 变异

<222> (9)..(9)

<223> /替换="Phe"

<220>

<221> 变异

<222> (10)..(10)

<223> /替换="Leu"

<220>

<221> 混杂特征

<222> (1)..(11)

<223> /注释="对于变异位置序列中给出的变异残基就注解中的那些而言没有偏爱"

<400> 32

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 33

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<220>

<221> 变异

<222> (4)..(4)

<223> /替换="Thr"

<220>

<221> 变异

<222> (6)..(6)

<223> /替换="Ala"

<220>

<221> 混杂特征

<222> (1)..(7)

<223> /注释="对于变异位置序列中给出的变异残基就注解中的那些而言没有偏爱"

<400> 33

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 34

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<220>

<221> 变异

<222> (3)..(3)

<223> /替换="Gly" 或 "Phe" 或 "Ser"

<220>

<221> 变异

<222> (4)..(4)

<223> /替换="Tyr" 或 "Phe" 或 "Trp"

<220>

<221> 变异

<222> (5)..(5)

<223> /替换="Asn" 或 "Ala" 或 "Thr" 或 "Gly" 或 "Phe" 或 "Ile"

<220>

<221> 变异

<222> (6)..(6)

<223> /替换="Val" 或 "Pro" 或 "Thr" 或 "Ile"

<220>

<221> 变异

<222> (8)..(8)

<223> /替换="Trp" 或 "Arg" 或 "Pro" 或 "Thr"

<220>

<221> 混杂特征

<222> (1)..(9)

<223> /注释="对于变异位置序列中给出的变异残基就注解中的那些而言没有偏爱"

<400> 34

Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr

1 5

<210> 35

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 35

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His

1 5 10

<210> 36

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 36

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 37

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 37

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 38

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 38

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 39

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"

<400> 39

Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr

1 5

<210> 40

<211> 448

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 40

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Ser

20 25 30

Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

435 440 445

<210> 41

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<221> 来源

<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"

<400> 41

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

Claims (25)

1.一种用于在有需要的受试者中治疗癌症的方法，其中该方法包括对该受试者施用有效量的PD-1轴拮抗剂和HPK1拮抗剂的组合。

2.权利要求1的方法，其中该癌症包含至少一种选自由结直肠癌，黑素瘤，非小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，胰腺癌，血液学恶性，和肾细胞癌组成的组的癌症。

3.权利要求1的方法，其中所述癌症选自由癌，淋巴瘤，母细胞瘤，髓母细胞瘤，成视网膜细胞瘤，肉瘤，脂肪肉瘤，滑膜细胞肉瘤，神经内分泌肿瘤，类癌肿瘤，胃泌素瘤，岛细胞癌，间皮瘤，施旺细胞瘤，听神经瘤，脑脊膜瘤，腺癌，黑素瘤，白血病或淋巴样恶性，鳞状细胞癌，上皮鳞状细胞癌，肺癌，小细胞肺癌(SCLC)，非小细胞肺癌(NSCLC)，肺的腺癌，肺的鳞癌，腹膜癌，肝细胞癌，胃的癌或胃癌，胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，乳腺癌，转移性乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结直肠癌，子宫内膜或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，肛门癌，阴茎癌，梅克尔(Merkel)细胞癌，蕈样霉菌病，睾丸癌，食管癌，胆道肿瘤，头和颈癌，和血液学恶性组成的组。

4.权利要求1的方法，其中该癌症具有升高水平的T细胞浸润。

5.权利要求1的方法，其中所述PD-1轴拮抗剂选自由PD-1拮抗剂，PD-L1拮抗剂，和PD-L2拮抗剂组成的组。

6.权利要求5的方法，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-1拮抗剂。

7.权利要求6任一项的方法，其中该PD-1拮抗剂是抗体。

8.权利要求7的方法，其中该抗PD-1抗体是单克隆抗体。

9.权利要求7的方法，其中该抗PD-1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

10.权利要求7的方法，其中该PD-1拮抗剂是MDX-1106。

11.权利要求7的方法，其中该PD-1拮抗剂是Merck 3475。

12.权利要求7的方法，其中该PD-1拮抗剂是CT-011。

13.权利要求6的方法，其中该PD-1拮抗剂是AMP-224。

14.权利要求5的方法，其中该PD-1轴拮抗剂是PD-L1拮抗剂。

15.权利要求14的方法，其中该PD-L1拮抗剂是抗体。

16.权利要求15的方法，其中该抗PD-L1抗体是单克隆抗体。

17.权利要求15的方法，其中该抗PD-L1抗体是选自由Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和(Fab’)₂片段组成的组的抗体片段。

18.权利要求15的方法，其中该PD-L1拮抗剂是YW243.55.S70。

19.权利要求15的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MPDL3280A。

20.权利要求15的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MEDI4736。

21.权利要求15的方法，其中该PD-L1拮抗剂是MDX-1105。

22.权利要求1的方法，其中静脉内，肌肉内，皮下，表面，口服，经皮，腹膜内，眶内，通过植入，通过吸入，鞘内，室内，肿瘤内，或鼻内施用该PD-1轴拮抗剂或该HPK1拮抗剂。

23.权利要求22的方法，其中该HPK1拮抗剂在该PD-1轴拮抗剂之前施用。

24.权利要求22的方法，其中该HPK1拮抗剂与该PD-1轴拮抗剂同时施用。

25.权利要求22的方法，其中该HPK1拮抗剂在该PD-1轴拮抗剂之后施用。