ES2961666T3

ES2961666T3 - Métodos para determinar la dosificación de células CAR-T

Info

Publication number: ES2961666T3
Application number: ES17825663T
Authority: ES
Inventors: He Li; Tina Albertson; Mark Heipel; Claire Sutherland
Original assignee: Juno Therapeutics Inc
Current assignee: Juno Therapeutics Inc
Priority date: 2016-12-03
Filing date: 2017-12-01
Publication date: 2024-03-13
Anticipated expiration: 2037-12-01
Also published as: MX2019006286A; CA3045355A1; BR112019011065A2; WO2018102787A1; JP2022084710A; JP7227131B2; KR20190104528A; EP4279136A2; AU2017368333A1; JP2024045372A; RU2019120398A; CN110290807A; MA46963A; EP3548084B1; JP2020511406A; WO2018102787A9; EP4279136A3; US20200078400A1; CN110290807B; RU2019120398A3

Abstract

Se proporcionan métodos para determinar la dosificación de células diseñadas con un receptor recombinante, tal como un receptor de células T (TCR) o un receptor de antígeno quimérico (CAR). En algunas realizaciones, los métodos incluyen determinar un rango terapéutico para la dosificación mediante las probabilidades estimadas de riesgo de desarrollar toxicidad y las probabilidades estimadas de respuesta a las células diseñadas cuando se administran. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Métodos para determinar la dosificación de células CAR-T

Referencia cruzada a aplicaciones relacionadas

La presente solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de Estados Unidos N° 62/429.738, presentada el 3 de diciembre de 2016, titulada "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY", la solicitud provisional de Estados Unidos N° 62/514,765, presentada el 2 de junio de 2017, titulada "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY", y la solicitud provisional de Estados Unidos N° 62/515,523, presentada el 5 de junio de 2017, titulada "METHODS FOR DETERMINING DOSING IN CELL THERAPY".

Listado de secuencias

La presente solicitud se presenta junto con un listado de secuencias en formato electrónico. El listado de secuencias se presenta como un archivo titulado 735042009240SeqList.txt, creado el 29 de noviembre de 2017, que tiene un tamaño de 34 kilobytes.

Campo

La presente invención se refiere a un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR en el tratamiento del cáncer. También se describen en la presente métodos que en algunos casos incluyen determinar un intervalo terapéutico y/o ventana para la dosificación, por ejemplo, basándose en las probabilidades estimadas de riesgo de desarrollar una toxicidad y las probabilidades estimadas de un resultado o respuesta del tratamiento, como tratamiento, reducción o mejora de un signo o síntoma del mismo, o grado o durabilidad del mismo, tras la administración de la terapia celular o células manipuladas.

Antecedentes

Hay disponibles varios enfoques para la inmunoterapia, por ejemplo, métodos de terapia celular adoptiva que implican la administración de células T, como las que expresan receptores de antígenos manipulados genéticamente, como los CAR. En algunos aspectos, los métodos disponibles pueden no ser totalmente satisfactorios. Hay una necesidad de estrategias adicionales para la inmunoterapia y la terapia celular adoptiva, por ejemplo, estrategias para mejorar la persistencia, la actividad y/o la proliferación de las células y respuestas administradas y estrategias para modular el fenotipo de las células T. En la presente se describen métodos, células, composiciones, artículos de fabricación y sistemas para abordar tales necesidades.

La WO2017/165571 describe métodos de intervención temprana para prevenir o mejorar la toxicidad provocada por o debida a una terapia, como una inmunoterapia o una terapia celular.

Sumario

La presente invención se expone en las reivindicaciones adjuntas. En particular, la presente invención proporciona un agente que es capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR en el tratamiento del cáncer, en donde el método comprende:

administrar el agente al sujeto;

en donde el sujeto es aquel en el que el nivel, la cantidad o la concentración de una medida volumétrica de la carga tumoral o de un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto es igual o superior a un nivel umbral;

en donde la muestra se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR;

en donde la medida volumétrica es una suma de los productos de los diámetros (SPD) y el valor umbral es mayor o igual a 50 cm2;

en donde el marcador inflamatorio es la lactato deshidrogenasa (LDH) y el valor umbral es mayor o igual a 500 unidades por litro; y

en donde el agente es un esteroide.

La invención también proporciona un agente que es capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto y células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un CAR para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR y el tratamiento del cáncer, en donde las células T manipuladas genéticamente se administran para tratar el cáncer y el agente se administra para modular la actividad de las células T manipuladas genéticamente, y en donde el método comprende:

a) administrar el agente al sujeto; y

b) administrar una dosis de células T manipuladas genéticamente que expresen un CAR,

en donde:

(i) el sujeto es aquel en el que el nivel, la cantidad o la concentración de una medida volumétrica de la carga tumoral o de un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto es igual o superior a un nivel umbral;

(ii) la muestra se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR;

(iii) la medida volumétrica es una suma de los productos de los diámetros (SPD) y el valor umbral es superior o igual a 50 cm2;

(iv) el marcador inflamatorio es la lactato deshidrogenasa (LDH) y el valor umbral es mayor o igual a 500 unidades por litro; y

(v) el agente es un esteroide.

En la presente se describen, como parte de la divulgación, métodos de dosificación o tratamiento de un sujeto, que en algunos aspectos implican administrar al sujeto una dosis de células manipuladas, como las manipuladas con un receptor de antígeno quimérico (CAR), y/o evaluar y/o administrar otro u otros agentes a los sujetos a los que se han administrado tales células manipuladas. En algunos casos, la dosis administrada está dentro de un intervalo y/o ventana terapéuticos y/o es suficiente para alcanzar una cantidad o número total o máximo de células manipuladas, por ejemplo, células CAR+, en una muestra o tejido o fluido corporal del sujeto, como en la sangre del sujeto, dentro de un intervalo especificado, como dentro de un intervalo terapéutico especificado o determinado, opcionalmente dentro de o durante un cierto periodo de tiempo después de la administración. En algunos casos, el intervalo terapéutico se determina sobre la base de o se relaciona con las probabilidades, como probabilidades estimadas, por ejemplo, probabilidad de respuesta y/o probabilidad o riesgo de desarrollar un signo o síntoma de toxicidad, como una toxicidad grave y/o de grado 3 o superior, como neurotoxicidad (NT), por ejemplo, una toxicidad de grado 3 o superior.

En algunos casos, la administración implica la administración de una dosis subóptima o reducida o baja de células que, en algunos aspectos, es insuficiente para estar dentro o lograr o resultar dentro de un intervalo y/o ventana terapéuticos y/o es insuficiente para lograr una cantidad o número total o máximo de células manipuladas, por ejemplo, células CAR+, en una muestra o tejido o fluido corporal del sujeto, como en la sangre del sujeto, dentro de un intervalo especificado, como dentro de un intervalo terapéutico especificado o determinado, opcionalmente dentro o durante un cierto periodo de tiempo tras la administración. En algunos casos, los métodos descritos incluyen además la administración al sujeto de un compuesto distinto o adicional a las células manipuladas. En algunos casos, dicho agente puede ser un agente que se sabe o se sospecha que es capaz de potenciar o aumentar la probabilidad, el grado, la rapidez o el nivel de expansión, persistencia y/o exposición del sujeto a las células manipuladas, como las células CAR+. En algunos casos, el o los agentes aumentan o promueven la expansión de las células in vivo, y/o son capaces de dar lugar a niveles, grado o rapidez de expansión, niveles máximos, AUC, u otra medida de las células en el sujeto, tales como las células CAR+, la expansión está dentro del intervalo y/o ventana terapéutica. En algunos de tales casos, el intervalo terapéutico en algunos aspectos se determina basándose en o se relaciona con probabilidades, como probabilidades estimadas, por ejemplo, probabilidad de respuesta y/o probabilidad o riesgo de desarrollar un signo o síntoma de una toxicidad, como una toxicidad grave y/o de grado 3 o superior, como neurotoxicidad (NT), por ejemplo, una toxicidad de grado 3 o superior.

En algunos casos, los métodos incluyen, por ejemplo, después de la administración al sujeto de la terapia celular o las células manipuladas, la monitorización de los niveles de células manipuladas o de otro tipo en una muestra del sujeto, como sangre o muestras derivadas de la sangre (como picos de células CAR en la sangre), opcionalmente a lo largo del tiempo, por ejemplo, para evaluar si las células se encuentran dentro de un intervalo y/o ventana terapéuticos. En algunos casos, si las células no se encuentran dentro de un intervalo o ventana terapéuticos, los métodos descritos incluyen una administración al sujeto, como la administración de un compuesto para mejorar la expansión o exposición a las células manipuladas, como para mejorar la expansión de células CAR+ in vivo, por ejemplo, de tal manera que la expansión y/o niveles y/o exposición y/o AUC máximos de CAR+ se encuentren dentro del intervalo terapéutico o deseado.

En algunos de tales casos, el nivel de células manipuladas, por ejemplo, CAR+, en la muestra se determina como el número de células, por ejemplo, células CAR+, por microlitro de la muestra; en algunos casos, el nivel máximo es la medición más alta después de, opcionalmente durante un periodo de tiempo especificado después de, la administración de las células o la terapia celular al sujeto.

En algunos de tales casos, el intervalo terapéutico es un intervalo en el que la probabilidad estimada de una toxicidad o resultado tóxico o signo o síntoma del mismo, como una toxicidad grave y/o una neurotoxicidad (NT) o CRS, es menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5%; en algunos aspectos, la probabilidad se basa en una curva de probabilidad, por ejemplo, basada en resultados de sujetos tratados con o a los que se les ha administrado la terapia celular y/o células modificadas para expresar el receptor recombinante. En algunos casos, la probabilidad estimada de lograr una respuesta, efecto, mejora o tratamiento es superior al 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más.

En algunos de tales casos, la toxicidad es una neurotoxicidad y/o es una toxicidad grave y/o es una neurotoxicidad de grado 3-5.

En algunos casos, la respuesta o el indicador de respuesta es una respuesta medular o un resultado medido en la médula ósea del sujeto. En algunos casos, la presencia o ausencia de la respuesta medular es o se determina mediante citometría de flujo y/o secuenciación de IgH y/o indica o es una reducción o eliminación de células de la enfermedad o afección en una muestra del sujeto, opcionalmente un órgano, tejido o fluido del sujeto, como un ganglio linfático, médula ósea, sitio tumoral, sangre u otra muestra, del sujeto.

En algunos de tales casos, la enfermedad o afección es un cáncer. En algunos aspectos, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en sarcomas, carcinomas, linfomas, linfomas no Hodgkin (LNH), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), leucemia, CLL, ALL, AML y mieloma. En algunos casos, el cáncer es un cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de útero, cáncer gástrico, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cánceres neuroendocrinos, cánceres del SNC, tumores cerebrales, cáncer de hueso o sarcoma de tejidos blandos.

En algunos de tales casos, el receptor de antígeno quimérico (CAR) contiene un dominio extracelular de reconocimiento de antígeno que se une específicamente al antígeno y un dominio de señalización intracelular que comprende un ITAM. En algunos aspectos, el dominio de señalización intracelular contiene un dominio intracelular de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico (CAR) comprende además una región de señalización coestimuladora. En algunos casos, la región de señalización coestimuladora comprende un dominio de señalización de CD28 o 4-1BB. En algunos casos, el dominio coestimulador es un dominio de CD28. En algunos casos, el dominio coestimulador es un dominio de 4-1BB.

En algunos de cualquiera de tales casos, el CAR reconoce o se une específicamente a un antígeno seleccionado entre antígenos expresados por células B, ROR1, antígeno de maduración de células B (BCMA), tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, Cd 22, mesotelina, CEA y antígeno de superficie de hepatitis B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, o 4, dímeros erbB, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, GPRC5D, receptor fetal de la aceticolina e, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1, (L1-CAM), antígeno asociado al melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, antígeno expresado preferentemente del melanoma (PRAME), survivina, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, receptor a2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor-a de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores VEGF, 5T4, AchR fetal, ligandos NKG2D, CD44v6, antígeno dual, y un antígeno asociado a un marcador universal, un antígeno de cáncer de testículos, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, ligandos NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno prostático específico, PSMA, Her2/neu, receptor de estrógenos, receptor de progesterona, efrinB2, CD123, c-Met, g D-2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), una ciclina, ciclina A2, CCL-1, CD138 y un antígeno específico de patógeno.

En algunos de tales casos, las células son células T. En algunos casos, las células T son CD4+ o CD8+.

También se describen en la presente, pero no se reivindican, artículos de fabricación y composiciones, como los que contienen las células e instrucciones para su administración de acuerdo con los métodos y usos de cualquiera de los casos descritos en la presente.

Se describen aquí, pero no se reivindican, métodos de tratamiento que incluyen administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) para tratar la enfermedad o afección, después de administrar la dosis de células manipuladas genéticamente, monitorizar las células T CAR+ en la sangre del sujeto para evaluar si las células se encuentran dentro de un intervalo terapéutico, y si las células manipuladas genéticamente no se encuentran dentro del intervalo terapéutico, administrar al sujeto un agente capaz de modular, opcionalmente aumentando o disminuyendo, la expansión o proliferación de células T CAR+, en el sujeto, en donde el intervalo terapéutico: (i) se basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o superior a aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, y una probabilidad estimada de una toxicidad menor o igual a aproximadamente el 30%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, tras la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, tras la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

En la presente se divulgan, pero no se reivindican, métodos de tratamiento que incluyen monitorizar, en la sangre de un sujeto, la presencia de células manipuladas genéticamente que contienen células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) para evaluar si las células están dentro de un intervalo terapéutico, en donde al sujeto se le ha administrado previamente una dosis de las células manipuladas genéticamente para tratar una enfermedad o afección; y si las células manipuladas genéticamente no se encuentran dentro del intervalo terapéutico, administrar al sujeto un agente capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir, la expansión o proliferación de células T CAR+, en el sujeto, en donde el intervalo terapéutico: (i) se basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor de o mayor de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, y una probabilidad estimada de una toxicidad de menos de o de aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, tras la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, tras la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro. En algunos casos, si el número pico de células T CAR+ en la sangre del sujeto es el menor número mínimo de células T CAR+ pico en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de aumentar la expansión o proliferación de células T CAR+. En algunos casos, el agente es capaz de expansión específica de CAR.

En algunos casos, el agente es un anticuerpo antiidiotipo o fragmento de unión a antígeno del mismo específico del CAR, un inhibidor del punto de control inmunitario, un modulador de una vía metabólica, un antagonista del receptor de adenosina, un inhibidor de quinasa, un anticuerpo anti-TGFp o un anticuerpo anti-TGFpR o una citoquina.

En algunos casos, si el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto es mayor que el número máximo de células T CAR+ en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T CAR+. En algunos ejemplos, el agente es un esteroide. En algunos casos, el esteroide es un corticosteroide. En algunos casos, el esteroide es dexametasona o metilprednisolona.

En algunos de cualquiera de tales casos, el esteroide se administra en una cantidad que está entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 40 mg, entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 5,0 mg y aproximadamente 25,0 mg, entre o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 20 mg de dexametasona o equivalente de la misma, cada uno inclusive.

En algunos de cualquiera de tales casos, se monitoriza al sujeto para detectar células T CAR+ en la sangre en un momento de por lo menos 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, se monitoriza al sujeto en busca de células T CAR+ en la sangre en un momento comprendido entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, cada uno inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, el agente se administra en un momento que es mayor o mayor que aproximadamente 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, el agente se administra en un momento comprendido entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, cada uno inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

En la presente se describen, pero no se reivindican, métodos de modulación de la actividad de células manipuladas, el método incluye la selección de un sujeto en el que el nivel, la cantidad o la concentración de una medida volumétrica de la carga tumoral o un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto es igual o está por encima de un nivel umbral, en donde la muestra no contiene células T manipuladas genéticamente que expresen un receptor de antígeno quimérico (CAR) y/o se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresen un CAR; y administrar al sujeto seleccionado un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

Se proporciona en la presente como parte de la invención reivindicada un agente que es capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas genéticamente que expresan un<c>A<r>en el tratamiento del cáncer, el método incluyendo administrar el agente al sujeto, en donde el sujeto es uno en el que el nivel, cantidad o concentración de una medida volumétrica de carga tumoral o un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto está en o por encima de un nivel umbral, en donde la muestra se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR, en donde la medida volumétrica es una suma de los productos de los diámetros (SPD) y el valor umbral es mayor o igual a 50 cm2, en donde el marcador inflamatorio es la lactato deshidrogenasa (LDH) y el valor umbral es mayor o igual a 500 unidades por litro, y en donde el agente es un esteroide.

En algunas realizaciones, el agente se administra antes o concurrentemente con el inicio de la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico. En algunos casos, el método incluye además administrar una dosis de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

Las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR sirven para tratar el cáncer.

En algunas realizaciones, antes de administrar el agente, el sujeto seleccionado tiene riesgo de desarrollar una toxicidad tras la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunas realizaciones, la administración del agente es suficiente para alcanzar un pico de células T CAR+ en un intervalo terapéutico en el sujeto, o en la mayoría de los sujetos seleccionados tratados por el método o en más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% de los sujetos seleccionados tratados por el método.

En algunos aspectos, el intervalo terapéutico se basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, y una probabilidad estimada de toxicidad menor de o de aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%; o un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

En la invención reivindicada, la medida volumétrica de la carga tumoral es una suma de los productos de los diámetros (SPD). Las medidas volumétricas alternativas de la carga tumoral incluyen los diámetros tumorales más largos (LD), la suma de los diámetros tumorales más largos (SLD), el volumen tumoral, el volumen de necrosis, la relación necrosis-tumor (NTR), el edema peritumoral (PTE) y la relación edema-tumor (ETR). En algunas realizaciones, la medida volumétrica se mide usando tomografía computarizada (TC), tomografía por emisión de positrones (PET) y/o resonancia magnética (MRI) del sujeto.

Se mide un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto. En la invención reivindicada, el marcador inflamatorio es la lactato deshidrogenasa (LDH). Otros marcadores inflamatorios alternativos incluyen la proteína C reactiva (CRP), la velocidad de sedimentación globular (ESR), la albúmina, la ferritina, la p2 microglobulina (p2-M), una citoquina o una quimiocina. En algunos casos de la divulgación descrita en la presente, el marcador inflamatorio es una citoquina o una quimioquina que es IL-7, IL15, MIP-1-alfa o TNF-alfa. En algunos casos, la citoquina o quimioquina está asociada con la activación de macrófagos o monocitos. En algunas realizaciones, la muestra es o contiene una muestra de sangre, plasma o suero. En algunos casos, el marcador inflamatorio se evalúa usando un ensayo colorimétrico o un inmunoensayo. En algunos casos, el marcador inflamatorio se evalúa mediante un inmunoensayo y el inmunoensayo se selecciona entre ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), inmunoensayo enzimático (EIA), radioinmunoensayo (RIA), resonancia de plasmones superficiales (SPR), transferencia Western, ensayo de flujo lateral, inmunohistoquímica, matriz de proteínas o inmuno-PCR (iPCR).

En algunos casos de la divulgación descrita en la presente, el valor umbral es un valor que está dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10%, o dentro del 5% por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio y/o está dentro de una desviación estándar por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio en una pluralidad de sujetos de control; está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio, opcionalmente dentro del 50%, dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10% o dentro del 5% por encima de dicho cambio de veces más alto, medido en por lo menos un sujeto de entre una pluralidad de sujetos de control; y/o está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio medido entre más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% de los sujetos de una pluralidad de sujetos de control.

En algunos casos de la divulgación, la pluralidad de sujetos de control es un grupo de sujetos antes de recibir una dosis de las células manipuladas genéticamente, en donde cada uno de los sujetos de control del grupo mostró un pico de células T CAR+ en la sangre mayor que el pico más alto de células T CAR+ en el intervalo terapéutico; cada uno de los sujetos de control del grupo pasó a desarrollar en toxicidad, opcionalmente una neurotoxicidad o un síndrome de liberación de citoquinas (CRS), una neurotoxicidad de grado 2 o de grado 3 o superior o un CRS de grado 3 o superior, después de recibir una dosis de las células manipuladas para tratar la misma enfermedad o afección; cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta, opcionalmente una respuesta completa (CR) o una respuesta parcial (PR), después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente; y/o cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta duradera, opcionalmente a los o aproximadamente o más de o aproximadamente 3 meses, o a o aproximadamente o más de o aproximadamente 6 meses, después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente.

En la invención reivindicada, la medida volumétrica es SPD y el valor umbral es mayor o igual a 50 por cm2. En algunas realizaciones, el valor umbral es o es de aproximadamente 60 por cm2, o es o es aproximadamente 70 por cm2. Los valores umbral alternativos incluyen 30 o aproximadamente 30 por cm2, o 40 o aproximadamente 40 por cm2.

En la invención reivindicada, el marcador inflamatorio es LDH y el valor umbral es mayor o igual a 500 unidades por litro. En algunas realizaciones, el valor umbral es o es de aproximadamente 600 unidades por litro. Valores umbral alternativos incluyen 300 o aproximadamente 300 unidades por litro, o 400 o aproximadamente 400 unidades por litro.

El agente es un esteroide. En algunos casos, el esteroide es un corticosteroide. En algunos ejemplos, el esteroide es dexametasona o metilprednisolona. En algunas de tales realizaciones, el esteroide se administra en una cantidad que está entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 40 mg, entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 5,0 mg y aproximadamente 25,0 mg, entre o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 20 mg de dexametasona o equivalente de la misma, cada uno inclusive. En algunas realizaciones, la medida volumétrica o marcador inflamatorio se mide en el sujeto en el plazo de 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 6 días, 8 días, 12 días, 16 días, 20 días, 24 días, 28 días o más antes del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

Se describen, pero no se reivindican, métodos de dosificar a un sujeto, el método incluye administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis de células manipuladas genéticamente que incluye células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis contiene un número de células manipuladas genéticamente que es suficiente para lograr un pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de sujetos tratados por el método o en más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% de los sujetos tratados por el método, en donde el intervalo terapéutico se: (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, y una probabilidad estimada de una toxicidad de menos o de aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

En algunos de tales casos, la dosis de células manipuladas genéticamente contiene de o de aproximadamente 1 x 105 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 2,5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 107 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, cada una inclusive. En algunos casos, la dosis de células manipuladas genéticamente contiene por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 107 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 107 células que expresan CAR, por lo menos 0 por lo menos aproximadamente 5 x 107 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 108 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 108 células que expresan CAR, o por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 108 células que expresan CAR.

Se describen, pero no se reivindican, métodos de dosificación a un sujeto, el método incluyendo administrar a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis subóptima de células manipuladas genéticamente que incluyen células T manipuladas con un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis contiene un número de células manipuladas genéticamente que es insuficiente para lograr un pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de sujetos tratados por el método o en más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% de los sujetos tratados por el método; y después de administrar las células manipuladas genéticamente, administrar un agente para potenciar la expansión o proliferación de las células CAR+ en el sujeto para alcanzar un pico de células T CAR+ en la sangre dentro del intervalo terapéutico, en donde el intervalo terapéutico se: (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% y una probabilidad estimada de toxicidad menor o de aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

En algunos casos, después de administrar la dosis de células manipuladas genéticamente, el método incluye monitorizar las células T CAR+ en la sangre del sujeto. En algunos casos, después de la administración del agente, el método logra un aumento de la frecuencia del pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, en comparación con un método que implica la administración de la misma dosis de células manipuladas genéticamente pero sin el agente; o el pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de sujetos tratados de este modo por el método o en más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% de los sujetos tratados mediante el método.

En algunos casos, la dosis de células manipuladas genéticamente es de menos o de menos de aproximadamente 1 x 107 células que expresan CAR, de menos o de menos de aproximadamente 5 x 106 células que expresan CAR, de menos o de menos de aproximadamente 2,5 x 106 células que expresan CAR, de menos o de menos de aproximadamente 1 x 106 células que expresan CAR, de menos o de menos aproximadamente 5 x 105 células que expresan CAR, de menos o de menos de aproximadamente 2,5 x 105 células que expresan CAR, de menos o de menos de aproximadamente 1 x 105 células que expresan CAR.

En algunos casos, el agente es capaz de aumentar la expansión de las células T CAR+, opcionalmente la expansión específica de CAR. En algunos casos, el agente es un anticuerpo antiidiotipo o un fragmento de unión a antígeno del mismo específico del CAR, un inhibidor del punto de control inmunitario, un modulador de una vía metabólica, un antagonista del receptor de adenosina, un inhibidor de la quinasa, un anticuerpo anti-TGFp o un anticuerpo anti-TGFpR o una citoquina.

En algunos de tales casos, entre una pluralidad de sujetos tratados, el método logra un aumento en el porcentaje de sujetos que logran una respuesta duradera, opcionalmente una respuesta completa (CR) o una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR), opcionalmente dura durante o más de 3 meses o durante o más de 6 meses, en comparación con un método que no contiene la administración del agente. En algunos ejemplos, el aumento es mayor o mayor de aproximadamente 1,2 veces, 1,5 veces, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces o más. En algunos casos, por lo menos el 15%, por lo menos el 20%, por lo menos el 25%, por lo menos el 30%, por lo menos el 35%, por lo menos el 40% o por lo menos el 50% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una respuesta completa (CR) que dura durante o más de 3 meses o durante o más de 6 meses; y/o por lo menos el 25%, por lo menos el 30%, por lo menos el 40%, por lo menos el 50%, por lo menos el 60% o por lo menos el 70% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una respuesta objetiva (OR) que dura durante o más de 3 meses o durante o más de 6 meses.

En algunos casos, más de o más de aproximadamente el 50%, más de o más de aproximadamente el 60%, más de o más de aproximadamente el 70%, o más de o más de aproximadamente el 80% de los sujetos tratados de acuerdo con el método no presentan un síndrome de liberación de citoquinas (CRS) de grado 3 o más y/o no presentan una neurotoxicidad de grado 2 o más o de grado 3 o más; o más de o más de aproximadamente el 40%, más de o más de aproximadamente el 50% o más de o más de aproximadamente el 55% de los sujetos tratados de acuerdo con el método no presentan neurotoxicidad ni CRS.

En algunos de tales casos, el pico de células T CAR+ se determina como el número de células T CAR+ por microlitro en la sangre del sujeto. En algunos casos, el intervalo terapéutico es el intervalo en el que la probabilidad estimada de toxicidad es menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% y la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más.

En algunos casos, la probabilidad de toxicidad se basa en una toxicidad seleccionada entre cualquier neurotoxicidad o síndrome de liberación de citoquinas (CRS); toxicidad grave o toxicidad de grado 3 o superior; CRS grave o CRS de grado 3 o superior; o neurotoxicidad grave, neurotoxicidad de grado 2 o superior o neurotoxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, la probabilidad de una toxicidad se basa en la probabilidad de una toxicidad grave o una toxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, la toxicidad grave es neurotoxicidad de grado 3-5.

En algunos casos, la probabilidad de respuesta se basa en una respuesta que es una respuesta completa (CR), una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR), opcionalmente en donde la respuesta es duradera, opcionalmente duradera durante o durante por lo menos 3 meses o durante o durante por lo menos 6 meses. En algunos casos, la respuesta es una respuesta medular determinada sobre la base de la evaluación de la presencia de un locus de cadena pesada de inmunoglobulina (IGH) maligno y/o un clon índice en la médula ósea del sujeto. En algunos casos, el IGH maligno y/o el clon índice se evalúan mediante citometría de flujo o secuenciación de IgH.

Se describe, pero no se reivindica, un método para evaluar la probabilidad de una respuesta duradera, el método incluye detectar, en una muestra biológica de un sujeto, niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios y/o niveles máximos de células manipuladas genéticamente, incluyendo células T que expresan un receptor de antigénico quimérico (CAR), en donde al sujeto se le ha administrado previamente una dosis de células manipuladas genéticamente para tratar una enfermedad o afección; y comparar, individualmente, los niveles máximos con un valor umbral, determinando de este modo la probabilidad de que el sujeto logre una respuesta duradera a la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si los niveles máximos del uno o más marcadores inflamatorios están por debajo de un valor umbral y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si los niveles máximos del uno o más marcadores inflamatorios están por encima de un valor umbral; o es probable que el sujeto obtenga una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra dentro de un intervalo terapéutico comprendido entre un valor umbral inferior y un valor umbral superior, y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra por debajo del valor umbral inferior o por encima del valor umbral superior.

En algunos casos, si se determina que no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera, comprende además seleccionar un sujeto para el tratamiento con un agente terapéutico o con un tratamiento terapéutico alternativo distinto de las células manipuladas genéticamente. En algunos aspectos, si se determina que no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera, comprende además administrar un agente terapéutico o un tratamiento terapéutico alternativo distinto de las células manipuladas genéticamente.

Se describe, pero no se reivindica, un método de tratamiento que incluye seleccionar a un sujeto que ha recibido administración de células manipuladas genéticamente que incluyen células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en el que los niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios en una muestra del sujeto están por encima de un valor umbral; y/o el nivel máximo de células T que incluyen un receptor de antígeno quimérico (CAR) en una muestra del sujeto está por debajo de un valor umbral inferior o está por encima de un valor umbral superior; y administrar al sujeto un agente terapéutico o tratamiento terapéutico alternativo distinto de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, la respuesta es una respuesta completa (CR), una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR). En algunos casos, la respuesta es duradera durante o más de 3 meses, 4 meses, 5 meses o 6 meses.

En algunos casos, los niveles máximos se evalúan y/o la muestra se obtiene del sujeto en un momento que es por lo menos 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, los niveles máximos se evalúan y/o la muestra se obtiene del sujeto en un momento que está entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, cada uno inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, el nivel máximo es un nivel máximo de uno o más marcadores inflamatorios y el marcador inflamatorio se selecciona entre proteína C reactiva (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-alfa, MIP-1-alfa, MIP-1-beta, MCP-1, CXCL10 o CCL13. En algunos casos, se evalúa el nivel máximo de uno o más marcadores inflamatorios y el valor umbral está dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10% o dentro del 5% y/o está dentro de una desviación estándar de la mediana o media del nivel máximo del marcador inflamatorio determinado entre un grupo de sujetos de control que han recibido la administración de las células manipuladas genéticamente, en donde cada uno de los sujetos del grupo no logró una respuesta duradera, opcionalmente una CR y/o PR, opcionalmente a o más de 3 meses o 6 meses después de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, los sujetos de control mostraron enfermedad estable (SD) o enfermedad progresiva (PD) después de la administración de las células manipuladas genéticamente, opcionalmente a o más de 3 meses o 6 meses después de la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, el nivel máximo es un nivel máximo de células T CAR+, o un subconjunto de células T CD8+ de las mismas. En algunos casos, el valor umbral inferior y el valor umbral superior son el extremo inferior y superior, respectivamente, de un intervalo terapéutico de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ de las mismas, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% y una probabilidad estimada de toxicidad menor de o de aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%.

En algunos casos, el intervalo terapéutico es el intervalo en el que la probabilidad estimada de toxicidad es menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% y la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más. En algunos casos, la probabilidad de toxicidad se basa en una toxicidad seleccionada entre cualquier neurotoxicidad o síndrome de liberación de citoquinas (CRS); toxicidad grave o toxicidad de grado 3 o superior; CRS grave o un CRS de grado 3 o superior; o neurotoxicidad grave, neurotoxicidad de grado 2 o superior o neurotoxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, la probabilidad de respuesta se basa en una respuesta que es una respuesta completa (CR), una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR), opcionalmente en donde la respuesta es duradera, opcionalmente duradera durante o durante por lo menos 3 meses o durante o durante por lo menos 6 meses.

En algunos casos, el pico de células T CAR+ se determina como el número de células T CAR+ por microlitro en la sangre del sujeto. En algunos casos, el valor umbral superior está comprendido entre o entre aproximadamente 300 células por microlitro y 1000 células por microlitro o 400 células por microlitro y 600 células por microlitro, o es aproximadamente 300 células por microlitro, 400 células por microlitro, 500 células por microlitro, 600 células por microlitro, 700 células por microlitro, 800 células por microlitro, 900 células por microlitro o 1000 células por microlitro; o el valor umbral inferior es menor de o menor de aproximadamente 10 células por microlitro, 9 células por microlitro, 8 células por microlitro, 7 células por microlitro, 6 células por microlitro, 5 células por microlitro, 4 células por microlitro, 3 células por microlitro, 2 células por microlitro o 1 célula por microlitro.

En algunos casos, la muestra es una muestra de sangre o plasma. En algunos casos, el método se lleva a cabo ex vivo.

En algunos casos, el nivel máximo de células T CAR+ está por debajo de un valor umbral inferior y el agente terapéutico es un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T CAR+. En algunos casos, el agente es un esteroide. En algunos casos, el esteroide es un corticosteroide. En algunos ejemplos, el esteroide es dexametasona o metilprednisolona. En algunos casos, el esteroide se administra en una cantidad que está entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 40 mg, entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 5,0 mg y aproximadamente 25,0 mg, entre o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 20 mg de dexametasona o equivalente de la misma, cada uno inclusive.

En algunos casos, el nivel máximo de células T CAR+ está por encima del valor umbral superior y el agente terapéutico es un agente capaz de aumentar la expansión de las células T CAR+, opcionalmente la expansión específica de CAR.

En algunos casos, el agente es un anticuerpo antiidiotipo o un fragmento de unión a antígeno del mismo específico para el CAR, un inhibidor del punto de control inmunitario, un modulador de una vía metabólica, un antagonista del receptor de adenosina, un inhibidor de la quinasa, un anticuerpo anti-TGFp o un anticuerpo anti-TGFpR o una citoquina.

En algunos de tales casos, la enfermedad o afección es un cáncer. En algunos casos, el cáncer es una enfermedad maligna de células B. En algunos ejemplos, el cáncer se selecciona del grupo que consiste en sarcomas, carcinomas, linfomas, linfomas no Hodgkin (NHL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), leucemia, CLL, ALL, AML y mieloma. En algunos casos, el cáncer es cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer de páncreas, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de útero, cáncer gástrico, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cánceres neuroendocrinos, cánceres del SNC, tumores cerebrales, cáncer de hueso o sarcoma de tejidos blandos.

En algunos casos, el sujeto es un humano.

En algunos casos, el CAR se une específicamente a un antígeno asociado a una enfermedad o afección y/o expresado en células asociadas a la enfermedad o afección. En algunos ejemplos, el antígeno se selecciona entre 5T4, 8H9, integrina avb6, B7-H6, antígeno de maduración de células B (BCMA), CA9, un antígeno de cáncer de testículos, anhidrasa carbónica 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22,<c>E<a>, antígeno de superficie de hepatitis B, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, antígeno carcinoembrionario (CEA), CE7, ciclina a, ciclina A2, c-Met, antígeno dual, EGFR, glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), EPHa2, efrinB2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, dímeros erbB, EGFR vIII, receptor de estrógenos, AchR fetal, receptor de folato alfa, proteína de unión a folato (FBP), FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, He¿/neu (receptor tirosina quinasa erbB2), HMW-MAA, IL-22R-alfa, receptor IL-13 alfa 2 (IL-13Ra2), receptor de dominio de inserción de quinasa (kdr), cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1 (L1-CAM), antígeno asociado a melanoma (MAg E)-A1, MAGE-A3, Ma Ge -A6, MART-1, mesotelina, CMV murino, mucina 1 (MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, ligandos de NKG2D, NY-ESO-1, GD2 O-acetilado (OGD2), antígeno oncofetal, antígeno preferentemente expresado del melanoma (PRAME), PSCA, receptor de progesterona, survivina, ROR1, TAG72, tEGFR, receptores de VEGF, VEGF-R2, tumor de Wilms 1 (WT-1), un antígeno específico de patógenos.

En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico (CAR) contiene un dominio de reconocimiento de antígeno extracelular que se une específicamente al antígeno y un dominio de señalización intracelular que contiene un ITAM. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular contiene un dominio intracelular de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico (CAR) contiene además una región de señalización coestimuladora. En algunos aspectos, la región de señalización coestimuladora contiene un dominio de señalización de CD28 o 4-1BB. En algunos casos, el dominio coestimulador es un dominio de 4-1BB.

En algunos casos, las células son células T. En algunos casos, las células T son CD4+ o CD8+. En algunos ejemplos, las células T son células T primarias obtenidas de un sujeto. En algunos de tales casos, las células manipuladas genéticamente son autólogas del sujeto. En algunos casos, las células son alogénicas al sujeto.

También se describen, pero no se reivindican, kits que contienen una composición que contiene células manipuladas genéticamente que incluyen células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) e instrucciones para administrar una dosis de las células a un sujeto después o basándose en los resultados de la evaluación de si el pico de células T CAR+ se encuentra dentro de un intervalo terapéutico, en donde el intervalo terapéutico se: (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de una toxicidad menor de o de aproximadamente el 30%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro. En algunos casos, las instrucciones especifican que si las células manipuladas genéticamente no están dentro del intervalo terapéutico, se administre al sujeto un agente capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir, la expansión o proliferación de células T CAR+, en el sujeto. En algunos casos, el kit contiene además el agente.

Se describen, pero no se reivindican, kits que contienen un agente capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir, la expansión o proliferación de células manipuladas genéticamente incluyendo células T CAR+ en un sujeto, e instrucciones para administrar el agente a un sujeto, habiéndosele administrado a dicho sujeto las células manipuladas genéticamente, basándose en los resultados de evaluar si el pico de células T CAR+ se encuentra dentro de un intervalo terapéutico, en donde el intervalo terapéutico se (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de toxicidad menor o de aproximadamente el 30%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro. En algunos casos, las instrucciones especifican que si el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto es inferior al número mínimo de células T CAR+ máximo en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de aumentar la expansión o proliferación de células T CAR+. En algunos casos, el agente es capaz de expansión específica de CAR.

En algunos casos, el agente es un anticuerpo antiidiotipo o un fragmento de unión a antígeno del mismo específico del CAR, un inhibidor del punto de control inmunitario, un modulador de una vía metabólica, un antagonista del receptor de adenosina, un inhibidor de la quinasa, un anticuerpo anti-TGFp o un anticuerpo anti-TGFpR o una citoquina. En algunos casos, si el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto es superior al número máximo de células T CAR+ en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T CAR+.

Se describen, pero no se reivindican, kits que contienen un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células manipuladas genéticamente incluyendo células T CAR+ en un sujeto, e instrucciones para evaluar en un sujeto el nivel, cantidad o concentración de una medida volumétrica de carga tumoral o un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto y administrar al sujeto el agente si el nivel, cantidad o concentración es igual o superior a un nivel umbral, en donde la muestra no contiene células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) y/o se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR. En algunos casos, la medida volumétrica es una suma de los productos de diámetros (SPD), diámetros tumorales más largos (LD), suma de diámetros tumorales más largos (SLD), volumen tumoral, volumen de necrosis, relación necrosis-tumor (NTR), edema peritumoral (PTE) y relación edematumor (ETR). En algunos casos, la medida volumétrica es una suma de los productos del diámetro (SPD).

En algunos casos, el marcador inflamatorio es la proteína C reactiva (CRP), la velocidad de sedimentación globular (ESR), la albúmina, la ferritina, la p2 microglobulina (p2-M), la lactato deshidrogenasa (LDH), una citoquina o una quimiocina. En algunos ejemplos, el marcador inflamatorio es la LDH.

En algunos casos, el agente es un esteroide. En algunos casos, el esteroide es un corticosteroide. En algunos ejemplos, el esteroide es dexametasona o metilprednisolona. En algunos casos, el esteroide se formula para su administración en una cantidad que está entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 40 mg, entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 5,0 mg y aproximadamente 25,0 mg, entre o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 20 mg de dexametasona o equivalente de la misma, cada uno inclusive.

En algunos casos, el CAR se une específicamente a un antígeno asociado con una enfermedad o afección y/o es expresado en células asociadas con la enfermedad o afección. En algunos casos, las células manipuladas genéticamente incluyen células T, opcionalmente células T CD4+ o CD8+.

También se describen, pero no se reivindican, artículos de fabricación que contienen cualquiera de los kits de acuerdo con la divulgación.

Breve descripción de los dibujos

LaFIG. 1muestra una curva de probabilidad estimada de respuesta y una probabilidad estimada de desarrollar neurotoxicidad de Grado 3-5 construida sobre la base del número de células CAR-T CD4+/receptor truncado+ o CD8+/receptor truncado+ en sangre.

LaFIG. 2Amuestra el número de células T CD3+/CAR+ en sangre periférica medido en ciertos puntos temporales después de la infusión para sujetos agrupados por mejor respuesta global.

LasFIGS. 2B-2Dmuestran los niveles de células T CD3+/cAr , células T CD4+/CAR+ y células T CD8+/CAR+ en sangre periférica medidos en ciertos momentos tras la infusión en sujetos que lograron una respuesta, agrupados por respuesta continuada a los 3 meses.

LaFIG. 3muestra el porcentaje de sujetos que experimentaron anomalías de laboratorio y eventos adversos emergentes del tratamiento (TEAE) que se produjeron en >20% de los sujetos. *: Un AE de grado 5 de fallo multiorgánico no relacionado con el tratamiento del estudio y debido a la progresión del linfoma; f: Un AE de grado 5 de daño alveolar difuso, evaluado por el investigador como relacionado con la terapia con fludarabina, ciclofosfamida y células T CAR, que se produjo el día 23 en un sujeto que rechazó la ventilación mecánica por insuficiencia respiratoria progresiva mientras estaba neutropénico con factores de crecimiento y antibióticos y antifúngicos de amplio espectro.

LaFIG. 4es una curva de Kaplan Meier que representa el tiempo observado hasta la aparición del CRS y la neurotoxicidad.

LasFIG. 5AyFIG. 5Brepresentan las tasas de respuesta entre los subgrupos de sujetos tratados.

LasFIG. 6AyFIG. 6Bmuestran la duración de la respuesta (CR/PR, CR o PR) y la supervivencia global en la cohorte completa y en la cohorte central de sujetos.

LaFIG. 7Amuestra la farmacocinética de las células T CAR+ en sangre periférica en varios puntos temporales postratamiento a diferentes niveles de dosis.

LaFIG.7Bmuestra la farmacocinética de las células T CAR+ en sangre periférica en varios puntos temporales tras el tratamiento entre respondedores y no respondedores.

LaFIG. 7Cmuestra la farmacocinética de las células T CAR+ en sangre periférica en varios puntos temporales postratamiento en sujetos que desarrollaron neurotoxicidad o no.

LaFIG. 8muestra los niveles de analitos medidos en el suero de los sujetos antes de la administración de las células T CAR+ y su correlación con el desarrollo de neurotoxicidad.

LaFIG. 9muestra un gráfico que traza el tiempo libre de progresión (meses) e indica la mejor respuesta global y la durabilidad de la respuesta, así como los resultados clínicos individuales observados a lo largo del tiempo en sujetos individuales dentro de una cohorte completa y una cohorte básica de sujetos con NHL tratados con una terapia celular anti-CD19 que contiene células T CD4+ y CD8+ que expresan CAR-T. a Los pacientes lograron el BOR en el mes 1, salvo que se indique lo contrario; b: Resolución completa de la afectación del SNC por el linfoma observada en 2 pacientes; c: Un paciente se reexpandió después de una biopsia tras la progresión de la enfermedad.

LaFIG. 10Arepresenta la mediana (±cuartiles) del número de células CD3+/pl de sangre que expresan CAR, evaluado por citometría de flujo usando un anticuerpo específico para un receptor truncado (CD3, círculo; N=87); o mediana (±cuartiles) del número de copias del transgén CAR integrado/pg de ADN genómico, evaluado mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) usando cebadores específicos para un elemento regulador postranscripcional del virus de la hepatitis de la marmota (WPRE) presente en el vector que codifica el CAR (qPCR, cuadrado; N=85) en muestras de sangre de 87 sujetos a los que se han administrado células anti-CD19 que expresan CAR. El punto de corte para la detección de células CAR+ en citometría de flujo se fijó en >25 eventos en la puerta CAR+, y el límite de detección para la qPCR fue de > 12,5 copias del transgén CAR por pg de ADN genómico.

LaFIG. 10Brepresenta los números relativos de células CD4+ y CD8+ que expresan CAR/pl en muestras de sangre y médula ósea de 67 sujetos a los que se han administrado células anti-CD19 que expresan CAR, en el día 11 ± 3 días. La línea representa la línea de unidad y no es una línea de regresión.

LasFIGS. 11Ay11Brepresentan la mediana (±cuartiles) del área bajo la curva entre los días 0 y 28 (AUC<0-28>;

FIG. 11A)y la concentración sérica máxima (Cmax; células CAR+/pl sangre;FIG. 11B)de células CD4+ y CD8+ CAR+ en subgrupos de sujetos con linfoma difuso de células B grandes de novo o transformado de linfoma indolente (DLBCL, NOS; N=27), linfoma folicular transformado (tFL; N=10), DLBCL transformado de linfoma de zona marginal o leucemia linfocítica crónica (tMZL/tCLL; N=4), o linfoma de células del manto (LCM; N-5), que han recibido células T que expresan CAR en DL1.

LasFIGS. 12Ay12Brepresentan la mediana (±cuartiles) del área bajo la curva entre los días 0 y 28 (AUC<0-28>;

FIG. 12A)y la concentración sérica máxima (Cmax; células CAR /pl sangre;FIG. 12B)de células CD3+, CD4+ y CD8+ CAR+ en sujetos que han recibido células CAR+ en DL1 o Dl2.

LasFIGS. 13A-13Drepresentan la mediana (±cuartiles) del número de células CD4+ y CD8+ que expresan CAR+/|jl de sangre a lo largo del tiempo, en sujetos que desarrollaron el síndrome de liberación de citoquinas (cualquier CRS) en comparación con sujetos que no han desarrollado CRS (no CRS) (CD4+:FIG. 13A; CD8+:

FIG. 13B)o en sujetos que desarrollaron neurotoxicidad (cualquier NT) en comparación con sujetos que no desarrollaron NT (no NT) (CD4+:FIG. 13C; CD8+:FIG. 13D).

LaFIG. 14representa el número máximo de células CD3+<c>A<r>+ / j l (CD3+ Cmax) en sujetos agrupados por sujetos que tuvieron la mejor respuesta global (BOR) de CR, PR o PD.

LaFIG. 15Arepresenta los niveles de analitos en sangre antes de la linfodepleción en muestras de suero de sujetos que mostraron una alta expansión de células CAR+ (CD3+ Cmax > 500) y sujetos que mostraron una baja expansión de células CAR+ (CD3+ Cmax < 500).

LaFIG. 15Brepresenta los niveles máximos de analitos en sangre en muestras de suero de sujetos que mostraron una alta expansión de células CAR+ (CD3+ Cmax > 500) y sujetos que mostraron una baja expansión de células CAR+ (CD3+ Cmax < 500).

LaFIG. 16representa un gráfico que representa la SPD previa a la linfodepleción (cm2) frente a la AUC<0-28>(células*día/jl) de células CD3+ CAR+, para sujetos individuales a los que se administró DL1 o DL2 de células CAR+.

LasFIGS. 17Ay17Brepresentan los niveles de analitos en sangre antes de la linfodepleción en muestras de suero de sujetos que desarrollaron el síndrome de liberación de citoquinas (CRS grado 1-4) en comparación con sujetos que no han desarrollado CRS (CRS grado 0)(FIG. 17A)o en sujetos que desarrollaron neurotoxicidad (NT grado 0) en comparación con sujetos que no han desarrollado N<t>(NT grado 1-4) (FIG. 17B).Las unidades fueron: Ferritina y dímero D (jg/l); PCR (mg/l) y citoquinas (pg/ml).

LaFIG. 18representa la evaluación de la suma de parámetros del paciente antes de la linfodepleción de las dimensiones del producto (SPD; cm2), indicativa de la carga tumoral, y el nivel de lactato deshidrogenasa (LDH; U/l), en sujetos que desarrollaron el síndrome de liberación de citoquinas (cualquier CRS) en comparación con sujetos que no desarrollaron CRS (sin CRS) o en sujetos que desarrollaron neurotoxicidad (cualquier NT) en comparación con sujetos que no desarrollaron NT (sin NT).

LaFIG. 19Aes un gráfico que representa la SPD antes de la linfodepleción (cm2) frente a los niveles de LDH previos a la linfodepleción (U/l), en individuos que han desarrollado neurotoxicidad (NT de grado 1-4) o sujetos que no han desarrollado NT (NT de grado 0) (panel izquierdo), y en individuos que han desarrollado CRS (CRS de grado 1-4) o sujetos que no han desarrollado CRS (CRS de grado 0) (panel derecho). Las líneas discontinuas representan los niveles de SPD (50 cm2 o superior) o LDH (500 o superior) que se asocian con mayores tasas de CRS o NT. LaFIG. 19Brepresenta las estimaciones de razón de probabilidades para desarrollar CRS o NT en función de los niveles de SPD (50 cm2 o superior) o LDH (500 o superior), con intervalos de confianza (IC) del 95%. LaFIG. 20representa el parámetro de carga tumoral (SPD) previo a la linfodepleción y los niveles de analitos en sangre de los sujetos que tuvieron una respuesta duradera a los 3 meses frente a los sujetos que no tuvieron una respuesta a los 3 meses. Las unidades fueron: Ferritina y dímero D (jg/l); CRP y SAA-1 (mg/l) y citoquinas (pg/ml). LasFIGS. 21Ay21Brepresentan los niveles máximos de analitos en sangre en muestras de suero de sujetos que desarrollaron el síndrome de liberación de citoquinas (cualquier CRS) en comparación con sujetos que no desarrollaron CRS (sin CRS)(FIG. 21A)o en sujetos que desarrollaron neurotoxicidad (cualquier Nt ) en comparación con sujetos que no desarrollaron NT (sin NT) (FIG. 21B). Las unidades fueron: CRP (mg/l), SAA-1 (mg/l) y citoquinas (pg/ml).

LaFIG. 22Arepresenta los niveles máximos de analitos sanguíneos en muestras de suero de sujetos que tuvieron una mejor respuesta global (BOR) de respuesta completa (CR) o respuesta parcial (PR) (N=57) en comparación con los niveles en sujetos que tuvieron enfermedad estable (SD) o enfermedad progresiva (PD) (N=17). LaFIG.

22Brepresenta los niveles máximos de analitos en sangre en muestras de suero de sujetos que tuvieron una respuesta a los 3 meses de SD/PD (N=31), en comparación con sujetos que tuvieron una respuesta a los 3 meses de CR/PR (N=35). Las unidades fueron: CRP (mg/l), SAA-1 (mg/l) y citoquinas (pg/ml).

LasFIGS. 23A-23Crepresentan curvas de probabilidad estimadas para los resultados de respuesta, toxicidad y respuesta duradera, basadas en la concentración sérica máxima de células CD3+ (FIG. 23A), CD4+ (FIG. 23B)o CD8+ (FIG. 23C)que expresan CAR (Cmax; células/jl de sangre). Las curvas de probabilidad estimadas para la tasa de respuesta global (ORR; incluyendo sujetos con respuesta completa (CR) y respuesta parcial (PR)), respuesta a los 3 meses (respuesta M3; incluyendo CR y PR en el mes 3 después de la administración), cualquier NT, cualquier CRS, NT Grado 3-4, NT Grado 3-5 o CRS Grado 2-5.

Descripción detallada

Las realizaciones de la invención se describen en algunos de los casos y aspectos siguientes.

I. MÉTODO PARA DETERMINAR EL INTERVALO DE DOSIFICACIÓN TERAPÉUTICA

Entre los casos descritos en la presente como parte de la divulgación se encuentran métodos, usos, composiciones y artículos de fabricación que implican y están relacionados con la administración de terapias celulares, como las que incluyen células manipuladas, a sujetos que tienen o se sospecha que tienen una enfermedad o afección, como las reconocidas específicamente por las células de la terapia. Los casos descritos en algunos aspectos se refieren a la dosificación de un sujeto, por ejemplo, la administración de una dosis particular de la terapia celular al sujeto, como la administración de una dosis que está o se sospecha que está dentro de un intervalo y/o ventana de dosificación terapéutica, que generalmente es un intervalo y/o ventana que logra o es probable que logre un nivel deseado de las células manipuladas en una muestra, fluido, tejido, órgano o localización del sujeto.

Las terapias celulares adoptivas (incluyendo las que implican la administración de células que expresan receptores quiméricos específicos para una enfermedad o trastorno de interés, como los receptores de antígenos quiméricos (CAR) y/u otros receptores de antígenos recombinantes, así como otras terapias con células inmunitarias adoptivas y células T adoptivas) pueden ser eficaces en el tratamiento del cáncer y otras enfermedades y trastornos. En ciertos contextos, los enfoques disponibles para la terapia celular adoptiva pueden no ser siempre totalmente satisfactorios. En algunos contextos, la respuesta óptima a la terapia puede depender de la capacidad de las células administradas para reconocer y unirse a un objetivo, por ejemplo, un antígeno objetivo, de que trafiquen, se localicen y se introduzcan con éxito en los lugares apropiados del sujeto, los tumores y sus entornos, de que se activen, se expandan, ejerzan varias funciones efectoras, incluyendo la destrucción citotóxica y la secreción de diversos factores como las citoquinas, de que persistan, incluso a largo plazo, de que se diferencien, hagan la transición o se acoplen reprogramación a determinados estados fenotípicos (como estados efectores, de memoria de larga duración, menos diferenciados y efectores), para proporcionar respuestas de recuerdo eficaces y sólidas tras la depuración y reexposición al ligando o antígeno objetivo, y evitar o reducir el agotamiento, la anergia, la diferenciación terminal y/o la diferenciación a un estado supresivo.

En algunos aspectos, el efecto terapéutico de la terapia celular adoptiva puede verse limitado por el desarrollo de toxicidad en el sujeto al que se administran dichas células, toxicidad que en algunos casos puede ser grave, a determinadas dosis o exposición de las células administradas. En algunos casos, aunque una dosis más alta de tales células puede aumentar el efecto terapéutico, por ejemplo, aumentando la exposición a las células, como promoviendo la expansión y/o la persistencia, también pueden dar como resultado un riesgo aún mayor de desarrollar una toxicidad o una toxicidad más grave. Además, en algunos casos, los sujetos con una mayor carga de enfermedad también pueden tener un mayor riesgo de desarrollar una toxicidad o una toxicidad más grave. Ciertos métodos disponibles para dosificar la terapia celular en sujetos pueden no ser siempre totalmente satisfactorios. Aumentar una dosis de células o promover la expansión o proliferación de las células administradas en el sujeto puede estar relacionado con mayores tasas de respuesta, pero también con un aumento en el desarrollo de toxicidad.

Los métodos descritos ofrecen ventajas sobre los enfoques disponibles para determinar la dosis de la terapia celular. Los métodos descritos permiten administrar una dosis a un sujeto que está o se sospecha que está dentro de un intervalo y/o ventana de dosificación terapéutica, que generalmente es un intervalo y/o ventana que logra o es probable que logre un nivel deseado de las células manipuladas en el sujeto. Los métodos descritos permiten la dosificación de células que pueden lograr o pueden asociarse con un grado deseado alto o especificado de probabilidad de un resultado del tratamiento como un resultado o respuesta favorable y/o una respuesta o resultado duradero, y también asociado con un grado relativamente bajo o minimizado o deseado de probabilidad de riesgo de desarrollar un resultado tóxico o toxicidad después de la administración al sujeto de la terapia celular. Los métodos descritos también ofrecen ventajas sobre los enfoques disponibles permitiendo la modulación, modificación y/o alteración de la terapia celular si se determina que no es probable que el sujeto logre una respuesta y/o una respuesta duradera, optimizando de este modo la respuesta sin aumentar sustancialmente el riesgo de toxicidad. En algunos casos, pueden usarse los parámetros farmacocinéticos, los atributos del paciente, la carga tumoral y/o la expresión de biomarcadores, como los marcadores inflamatorios para determinar la probabilidad de respuesta y/o cualquier necesidad de modular, modificar o alterar la terapia, para lograr una mayor respuesta o una respuesta más duradera, sin aumentar sustancialmente el riesgo de toxicidad.

En algunos casos, el intervalo y/o ventana de dosificación terapéutica alcanza o es probable que alcance un nivel deseado de las células manipuladas, por ejemplo, células T CAR que, en algunos aspectos, es un nivel máximo, que generalmente se refiere al número, concentración o porcentaje máximos de las células observados o medidos en la muestra, fluido, tejido, órgano u otra localización relevante tras el tratamiento o en un periodo determinado tras el tratamiento. En algunos aspectos, el nivel puede ser un número, concentración o porcentaje (como el número de células por peso, volumen, área o número total de células) o la exposición del sujeto, tejido, órgano, fluido o localización en las células, en un momento dado o durante un periodo de tiempo. En algunos aspectos, el nivel es un área bajo la curva (AUC) con respecto a un gráfico del número o porcentaje u otra lectura de las células relevantes en el tejido o muestra o fluido u órgano u otra localización, durante un periodo de tiempo dado después del tratamiento o administración de las células o iniciación del mismo.

En algunos ejemplos, el nivel se expresa como concentración de células CAR+ (por ejemplo, células/pl) en la sangre, AUC de una curva de células CAR+/volumen (por ejemplo, células CAR+/microlitro) durante un periodo de tiempo, máximo o pico de células CAR+/volumen (por ejemplo, células CAR+/microlitro) en la sangre después del tratamiento, o células CAR+/microlitro de sangre el día 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 21, o la semana 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 o más después del tratamiento o el inicio del mismo. En algunos casos, el nivel deseado está dentro de, o es un nivel dentro de, un intervalo terapéutico determinado.

En algunos casos, el intervalo terapéutico es un intervalo y/o ventana terapéuticos asociados con un grado deseado alto o especificado de probabilidad de un resultado del tratamiento, como un resultado o respuesta favorable y/o una respuesta o resultado duradero, y también asociado con un grado relativamente bajo o minimizado o deseado de probabilidad de riesgo de desarrollar un resultado tóxico o toxicidad después de la administración al sujeto de la terapia celular, por ejemplo, las células manipuladas. En algunos aspectos, la toxicidad o resultado tóxico es el síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o neurotoxicidad (NT). En algunos aspectos, la toxicidad o resultado tóxico es cualquier CRS o CRS de grado 1 o superior o cualquier neurotoxicidad o neurotoxicidad de grado 1 o superior. En algunos aspectos, la toxicidad o el resultado tóxico es CRS grave o CRS de grado 3 o superior o neurotoxicidad grave o neurotoxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, el riesgo de toxicidad está correlacionado con la carga de la enfermedad, la dosis de células, la expansión de las células y la farmacocinética (PK) de las células, por ejemplo, la exposición celular o la concentración celular máxima. Sin embargo, al mismo tiempo para maximizar la respuesta, en algunos casos, se requiere una dosis más alta o mayor de células, exposición de células o concentración pico de células. En algunos aspectos, sin embargo, se ha descubierto en la presente que la probabilidad de respuesta duradera, por ejemplo, respuesta que persiste después de un periodo de tiempo desde el inicio de la terapia, puede aumentar con una dosis mayor o más alta de células, exposición de células o concentración pico de células, hasta una cierta dosis, exposición o concentración; después puede disminuir. En la presente se encuentra, a partir de las curvas de probabilidad de toxicidad (por ejemplo, c Rs o neurotoxicidad, CRS grave o neurotoxicidad grave) y respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula ósea) y/o respuesta duradera generadas a partir de una población de sujetos tratados con células T CAR+, se observa que hay un intervalo y/o ventana terapéutica, por ejemplo, el intervalo más amplio entre curvas, en el que puede determinarse una dosis para maximizar la probabilidad estimada de respuesta o respuesta duradera y minimizar el riesgo estimado de toxicidad. En algunos casos, tales curvas de probabilidad pueden usarse en métodos para elegir o determinar una dosis de células para administrar a un sujeto. En algunos casos, dichas curvas de probabilidad pueden usarse en métodos para modificar la dosis de células y/o modular la expansión y/o actividad de las células, por ejemplo, administrando un agente y/o intervención que afecte a la expansión, actividad y/o función celular.

En algunos casos, los métodos descritos incluyen la administración al sujeto de una dosis de células manipuladas con un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis es suficiente para alcanzar un pico de células CAR+/pl dentro de un intervalo terapéutico determinado y/o una exposición (por ejemplo, AUC) dentro de un intervalo terapéutico determinado, en donde el intervalo terapéutico se determina sobre la base de la probabilidad estimada de un resultado de respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula) y/o respuesta duradera, por ejemplo, respuesta a los 3 meses, y la probabilidad estimada de un resultado tóxico (por ejemplo, neurotoxicidad de grado 3 5).

En algunos casos, la probabilidad estimada se determina a partir de una curva de probabilidad generada sobre la base de los resultados de una población de sujetos, como por lo menos 10, 25, 50, 100, 150, 300, 400, 500 o más sujetos. En algunos casos, la población de sujetos está formada por sujetos enfermos, como sujetos que padecen una enfermedad o afección, como un tumor o cáncer. En algunos casos, la población de sujetos es o incluye sujetos que es probable que sean o que son candidatos o que están o han estado recibiendo tratamiento con células manipuladas genéticamente, por ejemplo, células CAR-T, para tratar la enfermedad o afección. En algunos casos, el sujeto tiene un sarcoma, un carcinoma o un linfoma, opcionalmente un linfoma no Hodgkin (NHL), un linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), una leucemia, una leucemia linfocítica crónica (CLL), una leucemia linfoblástica aguda (ALL), una leucemia mieloide aguda (AML) y un mieloma. En algunos casos, el sujeto padece CLL. En algunos casos, se genera una primera curva de probabilidad para el riesgo de un resultado tóxico (por ejemplo, CRS o neurotoxicidad, como neurotoxicidad de grado 3-5) y se genera una segunda curva de probabilidad para un resultado de respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula). En algunos casos, se genera una primera curva de probabilidad para el riesgo de un resultado tóxico (por ejemplo, CRS o neurotoxicidad, como neurotoxicidad de grado 3-5) y se genera una segunda curva de probabilidad para el resultado de respuesta duradera. En algunos casos, las curvas de probabilidad se transforman o se proporcionan como una curva sigmoidal.

En algunos casos, la probabilidad estimada de toxicidad (por ejemplo, CRS o neurotoxicidad, como CRS o neurotoxicidad de grado 3-5) y/o la probabilidad estimada de respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula) o respuesta duradera (por ejemplo, respuesta a los 3 meses) se correlaciona con la concentración máxima de células CAR+ (células/pl) en una muestra biológica, como en sangre. En algunos casos, las células CAR+ son o comprenden células T, por ejemplo, son o comprenden células T CD3+. En algunos casos, las células T son células T CD4+ o CD8+. En algunos casos, la composición administrada comprende células T CAR+ CD4+ y CD8+ y las curvas de probabilidad se generan por separado para las células CD4+ y para las células CD8+ y/o para las células CD3+.

En algunos casos, los métodos descritos incluyen un método de dosificación a un sujeto que comprende administrar al sujeto una dosis de células manipuladas con un receptor recombinante, como un receptor de antígeno, por ejemplo, un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis es suficiente para alcanzar un pico de células CAR+/pl dentro de un intervalo terapéutico determinado, en donde el intervalo terapéutico se determina sobre la base de la probabilidad estimada de un resultado de respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula) y/o respuesta duradera (por ejemplo, respuesta a los 3 meses) y la probabilidad estimada de un resultado tóxico (por ejemplo, CRS o neurotoxicidad, como neurotoxicidad de grado 3-5). En algunos casos, la probabilidad estimada de provocar toxicidad es menor del 35%, menor del 30%, menor del 25%, menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% en la curva de probabilidad de toxicidad. En algunos casos, la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más. En algunos casos, la toxicidad es CRS, como cualquier CRS, como CRS de grado 1 o superior, o neurotoxicidad, como cualquier neurotoxicidad, como neurotoxicidad de grado 1 o superior. En algunos casos, la toxicidad grave es CRS grave o CRS de grado 3 o superior o neurotoxicidad grave o neurotoxicidad de grado 3 o superior. En algunos casos, la respuesta es una respuesta medular. En algunos casos, la respuesta se evalúa usando secuenciación profunda de IgH. En algunos casos, el resultado de toxicidad es neurotoxicidad grave o neurotoxicidad de grado 3 o superior, como neurotoxicidad de grado 3-5.

También se describe un método de dosificación mediante la administración, a un sujeto que padece una enfermedad o afección (por ejemplo, tumor o cáncer), de una dosis de células, y la monitorización del sujeto tras la infusión para determinar el pico de células CAR+/jl, como en uno o más puntos temporales diversos, por ejemplo a o aproximadamente o más de 3 días, 7 días, 14 días, 28 días, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 1 año, 2 años o más después de la infusión con la terapia celular, o AUC a lo largo del tiempo, como hasta uno o más puntos temporales después de la administración, por ejemplo, hasta o hasta aproximadamente o más de 3 días, 7 días, 14 días, 28 días, 2 meses, 3 meses, 4 meses, 5 meses, 6 meses, 1 año, 2 años o más después de la infusión con la terapia celular. En algunos casos, el método puede incluir determinar o evaluar la probabilidad de que el pico de células CAR+/|jl esté en el intervalo terapéutico, como se determina a partir de una curva de probabilidad de toxicidad y/o una curva de probabilidad de respuesta y/o una curva de probabilidad de respuesta duradera. En algunos casos, si el pico de células CAR+/jl o AUC no está en el intervalo terapéutico, el método comprende además administrar un compuesto o agente para mejorar o potenciar la expansión de células CAR+in vivode tal manera que el pico de expansión de CAR+ esté dentro del intervalo terapéutico, como se determina mediante los métodos descritos y/o para reducir, inhibir, prevenir y/o retrasar la actividad y/o expansión de células T CAR+.

También se describe un método de dosificación, a un sujeto que padece una enfermedad o afección (por ejemplo, tumor o cáncer), mediante la administración al sujeto de una dosis subóptima de células, en donde la dosis es insuficiente para alcanzar un pico de células CAR+/jl dentro de un intervalo terapéutico determinado. En algunos casos, el método implica además la administración de un compuesto o agente para mejorar o potenciar la expansión de células CAR+in vivode tal manera que el pico de expansión de CAR+ esté dentro del intervalo terapéutico, tal como se determina mediante los métodos descritos.

En algunos casos, el método comprende además administrar al sujeto una segunda dosis de células sobre la base de las curvas de probabilidad de respuesta y toxicidad para la concentración pico de células T CD3+, CD4+ y/o CD8+ CAR+ (células/jl) y/o AUC, por ejemplo, concentraciones pico de células T CD8+ CAR+. En algunos casos, el método comprende además administrar al sujeto un agente dirigido al microambiente tumoral (TME) basado en las curvas de probabilidad de respuesta y toxicidad para concentraciones pico de células T CD8+ CAR+. En algunos aspectos, el método permite la selección de un intervalo de dosificación que logra una respuesta y/o remisión más duradera. También se describen métodos que implican evaluar, determinar o monitorizar parámetros farmacocinéticos, como la concentración plasmática máxima (pico) (Cmax) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática del agente terapéutico de células T CAR+; AUC) de las células administradas en el sujeto. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse para determinar si las células administradas se encuentran dentro de un intervalo o ventana terapéutica. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse como indicador para modular, modificar y/o alterar la terapia, por ejemplo, administrando agentes capaces de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células T c A r administradas, administrar dosis adicionales y/o modificadas, y/o administrar una terapia alternativa. En algunos casos, también se describen métodos para administrar un agente terapéutico en consecuencia. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse para monitorizar el progreso de la terapia y/o para evaluar el efecto de la terapia modulada. En algunos casos, tales mediciones pueden usarse para evaluar la probabilidad de una respuesta o una respuesta duradera.

También se describen métodos que implican evaluar, determinar o monitorizar otros parámetros, como atributos del paciente, carga tumoral y/o expresión de biomarcadores, como marcadores inflamatorios. En algunos casos, la evaluación puede realizarse usando una muestra del sujeto obtenida antes de la administración de la terapia celular o del inicio de la misma. En algunos casos, la evaluación puede realizarse usando una muestra del sujeto obtenida después de la administración de la terapia celular o el inicio de la misma. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse para determinar si es probable que las células administradas estén, o es probable que se correlacionen o asocien con estar, dentro de un intervalo o ventana terapéutica. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse como indicador para modular, modificar y/o alterar la terapia, por ejemplo, administrando agentes capaces de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+ administradas, administrar dosis adicionales y/o modificadas, y/o administrar una terapia alternativa. En algunos casos, también se describen métodos para administrar un agente terapéutico en consecuencia. En algunos casos, tales evaluaciones pueden usarse para monitorizar el progreso de la terapia y/o para evaluar el efecto de la terapia modulada. En algunos casos, tales mediciones pueden usarse para evaluar la probabilidad de una respuesta o una respuesta duradera.

II. CURVAS DE TOXICIDAD Y PROBABILIDAD DE RESPUESTA

En algunos casos, las curvas de probabilidad de una población de sujetos como se describe se generan y correlacionan con el riesgo de resultado tóxico (por ejemplo, CRS o neurotoxicidad, por ejemplo, neurotoxicidad de grado 3-5) o respuesta (por ejemplo, respuesta de la médula), y/o durabilidad de la respuesta (por ejemplo, respuesta en el mes 3). En algunos casos, la información referente al resultado tóxico y el resultado de la respuesta descritos anteriormente se combinan y/o correlacionan con los datos recogidos sobre los niveles y/o concentraciones celulares máximos, o la exposición (por ejemplo, AUC) en el sujeto. En algunos casos, la información sobre el resultado tóxico y el resultado de respuesta se recopila de una cohorte de sujetos, cada uno correlacionado con datos de nivel celular (por ejemplo, número o concentración pico de células T CAR+), y se evalúa independientemente. En algunos casos, por ejemplo, los datos del resultado tóxico se recogen y evalúan con el número de células CAR+ para construir una curva de probabilidad de toxicidad. En algunos casos, los datos de resultados de respuesta, incluyendo los datos de resultados de respuesta duradera, se recopilan y evalúan con los números de células CAR+ para construir una curva de probabilidad de respuesta y/o una curva de probabilidad de respuesta duradera.

En algunos casos, las curvas resultantes de toxicidad y respuesta y/o de probabilidad de respuesta duradera pueden evaluarse conjuntamente, por ejemplo, en paralelo o aproximadamente al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo, para informar las decisiones de dosificación o los tratamientos adaptativos de los sujetos.

En algunos casos, el resultado tóxico y el resultado de la respuesta se usan para construir una curva de probabilidad estimada de respuesta y una probabilidad estimada de desarrollar toxicidad sobre la base del número, la concentración y/o la exposición de las células T CAR+ en la sangre. En algunos casos, la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más. En algunos casos, la probabilidad estimada de lograr una respuesta duradera, por ejemplo, una respuesta duradera de 3 o 6 meses, es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más. En algunos casos, la probabilidad estimada de provocar o dar como resultado una toxicidad es menor del 35%, menor del 30%, menor del 25%, menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% en la curva de probabilidad de toxicidad.

En algunos casos, los métodos implican la administración de un número o dosis de células suficiente para alcanzar una concentración máxima de células CAR+ en el sujeto que se encuentre dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo determinado. En algunos casos, los métodos implican administrar un número o dosis de células suficiente para alcanzar un pico de concentración de células CAR+ en una mayoría de los sujetos tratados por el método, o mayor de o mayor de aproximadamente el 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% o más, como mayor del 75% de los sujetos tratados por el método, se encuentra dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo determinada. En los métodos descritos, se evalúan uno o más resultados o eventos terapéuticos asociados con la toxicidad (resultado tóxico) y uno o más resultados o eventos terapéuticos asociados con la eficacia (resultado de respuesta, incluido el resultado de respuesta duradera) del agente terapéutico y se toman decisiones de dosificación de acuerdo con los métodos descritos. En algunos casos, la información referente al resultado tóxico y al resultado de la respuesta se combina y/o correlaciona con los datos recopilados referentes a los niveles celulares máximos, las concentraciones y/o la exposición en el sujeto. En algunos casos, la información sobre el resultado tóxico y el resultado de la respuesta se recopila de una cohorte de sujetos, cada uno correlacionado con datos de nivel celular, y se evalúa independientemente. En algunos casos, por ejemplo, los datos del resultado tóxico se recopilan y evalúan para construir una curva de probabilidad de toxicidad y los datos del resultado de respuesta se recopilan y evalúan para construir una curva de probabilidad de respuesta. En algunos casos, se recopilan los datos de resultados de respuesta duradera (por ejemplo, respuesta duradera a los 3, 6, 9 o 12 meses) y se evalúan para construir una curva de probabilidad de respuesta duradera.

En algunos casos, las curvas de toxicidad y probabilidad de respuesta pueden evaluarse conjuntamente, por ejemplo, en paralelo o casi al mismo tiempo o sustancialmente al mismo tiempo, para informar de las decisiones de dosificación o los tratamientos adaptativos de los sujetos.

En algunos casos, el resultado tóxico y el resultado de respuesta se monitorizan en un momento en el que están presentes un resultado de toxicidad y un resultado de respuesta. El momento particular en el que puede estar presente dicho resultado dependerá del agente terapéutico concreto y es conocido por un artesano experto, como un médico o un clínico, o está dentro del nivel de determinación de los expertos en la técnica. En algunos casos, el momento en el que se evalúa un resultado tóxico o un resultado de respuesta se encuentra dentro o aproximadamente dentro de un periodo de tiempo en el que un síntoma de toxicidad o eficacia es detectable en un sujeto o en dicho momento en el que un resultado adverso asociado con la falta de respuesta o la toxicidad no es detectable en el sujeto. En algunos casos, el periodo de tiempo está cerca o sustancialmente cerca del momento en que el resultado tóxico y/o el resultado de respuesta han alcanzado su punto máximo en el sujeto. En algunos casos, el periodo de tiempo incluye el tiempo requerido para evaluar la durabilidad de la respuesta, por ejemplo, la respuesta duradera a los 3, 6, 9 o 12 meses después de la primera administración de las células.

En algunos casos, el resultado tóxico o el resultado de la respuesta puede evaluarse en el sujeto en un momento en el plazo de o aproximadamente en el plazo de 120 días después del inicio de la primera dosis del agente terapéutico al sujeto, en el plazo o aproximadamente en el plazo de 90 días después del inicio de la primera dosis, en el plazo de o aproximadamente en el plazo de 60 días después del inicio de la primera dosis del agente terapéutico o en el plazo de o aproximadamente en el plazo de 30 días después del inicio de la primera dosis a un sujeto. En algunos casos, el resultado o la respuesta tóxica puede evaluarse en el sujeto en el plazo de o aproximadamente en el plazo de 6 días, 12 días, 16 días, 20 días, 24 días, 28 días, 32 días, 36 días, 40 días, 44 días, 48 días, 52 días, 56 días, 60 días, 64 días, 68 días, 72 días, 76 días, 80 días, 84 días, 88 días, 92 días, 96 días o 100 días después del inicio de la primera dosis a un sujeto.

En algunos casos, el resultado tóxico o el resultado de la respuesta está presente o puede evaluarse o monitorizarse en dicho periodo de tiempo en donde se administra una única dosis del agente terapéutico. En el contexto de la terapia celular adoptiva, la administración de una "dosis" dada abarca la administración de la cantidad o el número dados de células como una composición única y/o administración única ininterrumpida, por ejemplo, como inyección única o infusión continua, y también abarca la administración de la cantidad o el número dados de células como dosis dividida, proporcionada en múltiples composiciones o infusiones individuales, durante un periodo de tiempo especificado, que no es mayor de 3 días. Por tanto, en algunos contextos, la primera dosis es una administración única o continua del número especificado de células, administrada o iniciada en un único momento. En algunos contextos, sin embargo, la primera dosis se administra en múltiples inyecciones o infusiones durante un período de no más de tres días, como una vez al día durante tres días o durante dos días o mediante múltiples infusiones durante un período de un solo día.

El término "dosis dividida" se refiere a una dosis que se divide para que se administre durante más de un día. Este tipo de dosificación está abarcada en los presentes métodos y se considera una dosis única.

Como se usa en la presente, "primera dosis" se usa para describir la cadencia de una dosis dada que, en algunos casos, puede ser la única dosis o puede ir seguida de una o más dosis repetidas o adicionales. El término no implica necesariamente que el sujeto no haya recibido nunca antes una dosis de un agente terapéutico, ni siquiera que el sujeto no haya recibido antes una dosis del mismo agente terapéutico o sustancialmente del mismo.

En algunos casos, el resultado tóxico o el resultado de respuesta está presente y/o puede evaluarse o monitorizarse en un periodo de tiempo que es después de un primer ciclo de administración del agente terapéutico, después de un segundo ciclo de administración del agente terapéutico, después de un tercer ciclo de administración del agente terapéutico, o después de un cuarto ciclo de administración del agente terapéutico. En algunos casos, un ciclo de administración puede ser un programa repetido de un régimen de dosificación que se repite durante administraciones sucesivas. En algunos casos, un programa de administración puede ser diario, cada dos días, o una vez a la semana durante una semana, dos semanas, tres semanas o cuatro semanas (por ejemplo, 28 días).

En algunos casos, el resultado tóxico y el resultado de respuesta pueden evaluarse monitorizando uno o más síntomas o eventos asociados con un resultado tóxico y uno o más síntomas o eventos asociados con un resultado de respuesta. En algunos casos, la enfermedad o afección es un tumor o cáncer.

A. Resultado de la toxicidad

En algunos casos, puede evaluarse o monitorizarse un resultado tóxico en un sujeto a la administración de un agente terapéutico (por ejemplo, células T CAR). En algunos casos, el resultado tóxico es o está asociado con la presencia de un evento tóxico, como el síndrome de liberación de citoquinas (CRS), CRS grave (sCRS), síndrome de activación de macrófagos, síndrome de lisis tumoral, fiebre de por lo menos o aproximadamente 38 grados Celsius durante tres o más días y un nivel plasmático de proteína C reactiva (CRP) de por lo menos o aproximadamente 20 mg/dl, neurotoxicidad y/o neurotoxicidad grave. En algunos casos, el resultado tóxico es un signo o síntoma, signos y síntomas particulares y/o cantidades o grados de los mismos cuya presencia o ausencia puede especificar un grado, gravedad o nivel particular de toxicidad en un sujeto. Está dentro de la habilidad de un experto en la técnica especificar o determinar un signo, síntoma y/o cantidades o grados particulares de los mismos que estén relacionados con un resultado tóxico no deseado de un agente terapéutico (por ejemplo, células CAR-T).

En algunos casos, el resultado tóxico es un indicador asociado con el evento tóxico. En algunos casos, el resultado tóxico es la presencia o ausencia de uno o más biomarcadores o la presencia o ausencia de un nivel de uno o más biomarcadores. En algunos casos, el biomarcador es una molécula presente en el suero u otro fluido corporal o tejido indicativo del síndrome de liberación de citoquinas (CRS), CRS grave o resultados relacionados con el CRS. En algunos casos, el biomarcador es una molécula presente en el suero u otro fluido corporal o tejido indicativo de neurotoxicidad o neurotoxicidad grave.

En algunos casos, el sujeto presenta toxicidad o un resultado tóxico si un evento tóxico, como los resultados relacionados con el CRS, por ejemplo si un nivel sérico de un indicador de CRS u otro indicador bioquímico de la toxicidad es más de o aproximadamente 10 veces, más de o aproximadamente 15 veces, más de o aproximadamente 20 veces, más de o aproximadamente 25 veces, más de o aproximadamente 50 veces, más de o aproximadamente 75 veces, más de o aproximadamente 100 veces, más de o aproximadamente 125 veces, más de o aproximadamente 150 veces, más de o aproximadamente s 200 veces o más de o aproximadamente 250 veces el nivel de referencia o de pretratamiento, como el nivel sérico del indicador inmediatamente antes de la administración de la primera dosis del agente terapéutico.

En algunos aspectos, el resultado tóxico es o está asociado con o es indicativo de síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o CRS grave (sCRS). El CRS, por ejemplo, el sCRS, puede producirse en algunos casos tras la terapia de células T adoptivas y la administración a sujetos de otros productos biológicos. Consultar Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); y Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78.

Típicamente, el CRS está provocado por una respuesta inmunitaria sistémica exagerada mediada, por ejemplo, por células T, células B, células NK, monocitos y/o macrófagos. Tales células pueden liberar una gran cantidad de mediadores inflamatorios, como citoquinas y quimiocinas. Las citoquinas pueden desencadenar una respuesta inflamatoria aguda y/o inducir daños en los órganos endoteliales, lo que puede provocar fugas microvasculares, insuficiencia cardíaca o la muerte. El CRS grave y potencialmente mortal puede llevar infiltración pulmonar y lesión pulmonar, insuficiencia renal o coagulación intravascular diseminada. Otras toxicidades graves y potencialmente mortales pueden incluir toxicidad cardiaca, dificultad respiratoria, toxicidad neurológica y/o insuficiencia hepática.

En el contexto de la administración de células que expresan CAR, el CRS se produce típicamente entre 6 y 20 días después de la infusión de células que expresan un CAR. Consultar Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172 78. En algunos casos, el CRS se produce menos de 6 días o más de 20 días después de la infusión de células T CAR. La incidencia y la cadencia del CRS pueden estar relacionados con los niveles de referencia de citoquinas o la carga<tumoral en el momento de la infusión. Por lo general, el CRS implica niveles séricos elevados de interferón (IFN)-y>, factor de necrosis tumoral (TNF)-a y/o interleucina (II)-2. Otras citoquinas que pueden inducirse rápidamente en el CRS son la IL-1 p, la IL-6, la IL-8 y la IL-10.

Los signos o síntomas ejemplares asociados al CRS incluyen fiebre, rigidez, escalofríos, hipotensión, disnea, síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS), encefalopatía, elevación de la aspartato transaminasa (AST)/alanina transaminasa (ALT), insuficiencia renal, trastornos cardíacos, hipoxia, alteraciones neurológicas y muerte. Las complicaciones neurológicas incluyen delirio, actividad convulsiva, confusión, dificultad para encontrar palabras, afasia y obnubilación. Otros signos o resultados relacionados con el CRS incluyen fatiga, náuseas, cefalea, convulsiones, taquicardia, mialgias, erupción cutánea, síndrome de fuga vascular aguda, deterioro de la función hepática e insuficiencia renal. En algunos aspectos, el CRS se asocia a un aumento de uno o más factores como la ferritina sérica, el dímero d, las aminotransferasas, la deshidrogenasa láctica y los triglicéridos, o a hipofibrinogenemia o hepatoesplenomegalia.

En algunos casos, los signos o síntomas asociados con el CRS incluyen uno o más de los siguientes: fiebre persistente, por ejemplo, fiebre de una temperatura determinada, por ejemplo, de más de o de aproximadamente 38 grados centígrados, durante dos o más, por ejemplo, tres o más, por ejemplo, cuatro o más días o durante por lo menos tres días consecutivos; fiebre de más de o de aproximadamente 38 grados Celsius; elevación de citoquinas<(por ejemplo,>IFN<y o IL-6); y/o por lo menos un signo clínico de toxicidad, como hipotensión (por ejemplo, medida por>al menos un presor vasoactivo intravenoso); hipoxia (por ejemplo, niveles de oxígeno plasmático (POz) inferiores al 90% o aproximadamente); y/o uno o más trastornos neurológicos (incluyendo cambios del estado mental, obnubilación y convulsiones).

Los resultados ejemplares relacionados con el CRS incluyen niveles séricos elevados o aumentados de uno o más factores, incluyendo citoquinas y quimiocinas y otros factores asociados con el CRS. Los resultados ejemplares incluyen además aumentos en la síntesis o secreción de uno o más de tales factores. Dicha síntesis o secreción puede ser por parte de la célula T o de una célula que interactúe con la célula T, como una célula inmunitaria innata o una célula B.

En algunos casos, se monitorizan uno o más marcadores inflamatorios, por ejemplo, citoquinas o quimiocinas, antes, durante o después del tratamiento con CAR. En algunos aspectos, la una o más citoquinas o quimiocinas<incluyen IFN-y>,<TNF-a, IL-2, IL-1 p, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Ra, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF) o proteína inflamatoria de macrófagos (MIP). En algunos casos, se monitorizan el IFN-y>,<el>TNF-a y la IL-6.

En algunos casos, la presencia de uno o más biomarcadores es indicativa del grado, gravedad o extensión de un evento tóxico, como el CRS o la neurotoxicidad. En algunos casos, el resultado tóxico es un grado, gravedad o extensión particulares de un evento tóxico, como un grado, gravedad o extensión particulares de CRS o neurotoxicidad. En algunos casos, la presencia de un evento tóxico de un cierto grado, gravedad o extensión puede ser una toxicidad limitante de la dosis. En algunos casos, la ausencia de un evento tóxico o la presencia de un evento tóxico por debajo de un cierto grado, gravedad o extensión puede indicar la ausencia de una toxicidad limitante de la dosis.

Se han desarrollado criterios de CRS que parecen correlacionarse con la aparición de CRS para predecir qué pacientes tienen más probabilidades de estar en riesgo de desarrollar sCRS (consultar Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25). Los factores incluyen fiebres, hipoxia, hipotensión, cambios neurológicos, niveles séricos elevados de citoquinas inflamatorias cuya elevación inducida por el tratamiento puede correlacionarse bien tanto con la carga tumoral previa al tratamiento como con los síntomas del sCRS. Se conocen otras directrices sobre el diagnóstico y el tratamiento del sCRS (consultar, por ejemplo, Lee et al, Blood.

2014;124(2):188-95). En algunos casos, los criterios que reflejan el grado de CRS son los que se detallan en laTabla 1a continuación.

En algunos casos, el resultado tóxico es un CRS grave. En algunos casos, el resultado tóxico es la ausencia de CRS grave (por ejemplo, CRS moderada o leve). En algunos casos, el CRS grave incluye el CRS con un grado de 3 o superior, como se expone en laTabla 1.En algunos casos, el CRS grave incluye el CRS con un grado de 2 o superior, como los grados 2, 3, 4 o 5 de CRS.

En algunos casos, el nivel del resultado tóxico, por ejemplo, el resultado relacionado con el CRS, por ejemplo, el nivel sérico de un indicador del CRS, se mide mediante ELISA. En algunos casos, puede medirse la fiebre y/o los niveles de proteína C reactiva (CRP). En algunos casos, los sujetos con fiebre y una CRP > 15 mg/dl pueden considerarse de alto riesgo de desarrollar CRS grave. En algunos casos, los factores séricos asociados al CRS o los resultados relacionados con el CRS incluyen un aumento del nivel y/o la concentración de citoquinas y/o quimiocinas inflamatorias, incluyendo Flt-3L, fracktalcina, factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos (GM-CSF),<interleucina-1 beta (IL-1p), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, interferón gamma (IFN-y>),<proteína inflamatoria de>macrófagos (MIP)-1, MIP-1, sIL-2Ra, o factor de necrosis tumoral alfa (TNFa). En algunos casos, el factor o resultado incluye la proteína C reactiva (CRP). Además de ser un factor de riesgo precoz y fácilmente medible de CRS, el CRP también es un marcador de expansión celular. En algunos casos, los sujetos en los que se miden niveles elevados de CRP, como > 15 mg/dl, tienen CRS. En algunos casos, los sujetos a los que se les miden niveles altos de CRP no tienen CRS. En algunos casos, una medida de CRS incluye una medida de CRP y otro factor indicativo de CRS.

En algunos aspectos, el resultado tóxico es o está asociado a neurotoxicidad. En algunos casos, los signos o síntomas asociados con un riesgo clínico de neurotoxicidad incluyen confusión, delirio, afasia expresiva, obnubilación, mioclonía, letargo, estado mental alterado, convulsiones, actividad similar a convulsiones, convulsiones (opcionalmente confirmadas por electroencefalograma (EEG)), niveles elevados de beta amiloide (Ap), niveles elevados de glutamato y niveles elevados de radicales de oxígeno. En algunos casos, la neurotoxicidad se clasifica sobre la base de la gravedad (por ejemplo, usando una escala de Grado 1-5 [consultar, por ejemplo, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (diciembre de 2010); National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria version 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)]. En algunos casos, se considera que un sujeto desarrolla "neurotoxicidad grave" en respuesta a o secundaria a la administración de una terapia celular o dosis de células de la misma si, después de la administración, el sujeto muestra síntomas que limitan el autocuidado (por ejemplo, bañarse, vestirse y desvestirse, alimentarse, ir al baño, tomar medicamentos) de entre: 1) síntomas de neuropatía motora periférica, incluyendo inflamación o degeneración de los nervios motores periféricos; 2) síntomas de neuropatía sensorial periférica, incluyendo inflamación o degeneración de los nervios sensoriales periféricos, disestesia, como distorsión de la percepción sensorial, que da como resultado una sensación anormal y desagradable, neuralgia, como sensación dolorosa intensa a lo largo de un nervio o un grupo de nervios, y/o parestesia, como alteraciones funcionales de las neuronas sensoriales que dan como resultado sensaciones cutáneas anormales de hormigueo, entumecimiento, presión, frío y calor en ausencia de estímulo. En algunos casos, la neurotoxicidad grave incluye la neurotoxicidad grado 3 o superior, como se expone en laTabla 2.En algunos casos, la neurotoxicidad grave incluye neurotoxicidad con un grado 2 o superior, como neurotoxicidad de grados 2, 3, 4 o 5.

En algunos casos, el resultado tóxico es una toxicidad limitante de la dosis. En algunos casos, el resultado tóxico es la ausencia de una toxicidad limitante de la dosis. En algunos casos, una toxicidad limitante de la dosis (DLT) se define como cualquier toxicidad de grado 3 o superior evaluada por cualquier directriz conocida o publicada para evaluar la toxicidad particular, como cualquiera de las descritas anteriormente e incluyendo los Criterios Terminológicos Comunes para Eventos Adversos (CTCAE) versión 4.0 del Instituto Nacional del Cáncer (NCI).

B. Resultado de la respuesta

En algunos casos, puede monitorizarse o evaluarse el resultado de la respuesta de un sujeto a la administración de un agente terapéutico. En algunos casos, el resultado de la respuesta es la ausencia de respuesta. En algunos casos, el resultado de la respuesta es una respuesta parcial. En algunos casos, el resultado de la respuesta es una respuesta completa (CR). En algunos casos, el resultado de la respuesta se evalúa monitorizando la carga de la enfermedad en el sujeto. En algunos casos, puede evaluarse la ausencia de respuesta, una respuesta parcial o una respuesta clínica o completa.

En algunos casos, una respuesta parcial (PR) o una respuesta completa (CR) es aquella en la que el agente terapéutico reduce o impide la expansión o la carga de la enfermedad o afección en el sujeto. Por ejemplo, cuando la enfermedad o afección es un tumor, hay o está presente una carga de enfermedad reducida si hay una reducción del tamaño del tumor, la masa, la metástasis, el porcentaje de blastos en la médula ósea o el cáncer detectable molecularmente y/o una mejora del pronóstico o la supervivencia u otro síntoma asociado con la carga tumoral en comparación con antes del tratamiento con el agente terapéutico (por ejemplo, células T CAR).

En algunos casos, la administración trata eficazmente al sujeto a pesar de que éste se haya vuelto resistente a otra terapia. En algunos casos, por lo menos el 35%, por lo menos el 40% o por lo menos el 50% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una respuesta completa (CR); y/o por lo menos el 50%, por lo menos el 60% o por lo menos el 70% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una tasa de respuesta objetiva (ORR). En algunos casos, por lo menos o aproximadamente por lo menos el 50% de los sujetos, por lo menos o aproximadamente por lo menos el 60% de los sujetos, por lo menos o aproximadamente por lo menos el 70% de los sujetos, por lo menos o aproximadamente por lo menos el 80% de los sujetos o por lo menos o aproximadamente por lo menos el 90% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran CR y/o logran una respuesta objetiva (OR). En algunos casos, los criterios evaluados para un tratamiento eficaz incluyen la tasa de respuesta global o la tasa de respuesta objetiva (ORR), la respuesta completa (CR), la duración de la respuesta (DOR), la supervivencia sin progresión (PFS) y/o la supervivencia global (OS).

En algunos casos, por lo menos el 40% o por lo menos el 50% de los sujetos tratados de acuerdo con los métodos descritos en la presente logran la remisión completa (CR), presentan una supervivencia sin progresión (PFS) y/o una supervivencia global (OS) de más de por lo menos 3 meses, 6 meses o 12 meses o más de 13 meses o aproximadamente 14 meses; de media, los sujetos tratados de acuerdo con el método presentan una PFS u OS mediana de más de por lo menos 6 meses, 12 meses o 18 meses; y/o el sujeto presenta PFS u OS después del tratamiento durante por lo menos o aproximadamente 6 meses, 12 meses, 18 meses o más.

En algunos aspectos, las tasas de respuesta en sujetos, como los sujetos con NHL, se basan en los criterios de Lugano. (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5). En algunos aspectos, la evaluación de la respuesta utiliza cualquiera de los métodos clínicos, hematológicos y/o moleculares. En algunos aspectos, la evaluación de la respuesta usando los criterios de Lugano comprende el uso de tomografía por emisión de positrones (PET)-tomografía computarizada (CT) y/o CT, según sea apropiado. Las evaluaciones PET-CT pueden comprender además el uso de fluorodesoxiglucosa (FDG) para linfomas ávidos de FDG. En algunos aspectos, cuando la PET-CT se usa para evaluar la respuesta en histologías ávidas de FDG, puede usarse una escala de 5 puntos. En algunos aspectos, la escala de 5 puntos comprende los siguientes criterios: 1, ausencia de captación por encima del fondo; 2, captación < mediastino; 3, captación > mediastino pero < hígado; 4, captación moderadamente > hígado; 5, captación notablemente superior al hígado y/o lesiones nuevas; X, áreas nuevas de captación que probablemente no estén relacionadas con el linfoma.

En algunos aspectos, una respuesta completa, como se describe usando los criterios de Lugano, implica una respuesta metabólica completa y una respuesta radiológica completa en varios sitios medibles. En algunos aspectos, estos sitios incluyen ganglios linfáticos y sitios extralinfáticos, en donde una CR se describe como una puntuación de 1, 2 o 3 con o sin masa residual en la escala de 5 puntos, cuando se usa PET-CT. En algunos aspectos, en el anillo de Waldeyer o en sitios extraganglionares con alta captación fisiológica o con activación en el bazo o la médula (por ejemplo, con quimioterapia o factores estimulantes de colonias mieloides), la captación puede ser mayor que en el mediastino y/o el hígado normales. En estas circunstancias, puede inferirse una respuesta metabólica completa si la captación en los sitios de afectación inicial no es mayor que la del tejido normal circundante, incluso si el tejido tiene una captación fisiológica elevada. En algunos aspectos, la respuesta se evalúa en los ganglios linfáticos usando CT, en donde una CR se describe como la ausencia de sitios extralinfáticos de la enfermedad y los ganglios/masas ganglionares objetivo deben retroceder hasta < 1,5 cm en el diámetro transversal más largo de una lesión (LDi). Sitios adicionales de evaluación incluyen la médula ósea, en donde la evaluación basada en PET-CT debe indicar una ausencia de evidencia de enfermedad ávida de FDG en la médula y una evaluación basada en CT debe indicar una morfología normal, que si es indeterminada debe ser negativa para IHC. Otros sitios pueden incluir la evaluación del aumento de tamaño de los órganos, que debería volver a la normalidad. En algunos aspectos, se evalúan las lesiones no medibles y las lesiones nuevas, que en caso de CR deberían estar ausentes (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).

En algunos aspectos, una respuesta parcial (PR) descrita usando los criterios de Lugano implica una respuesta parcial metabólica y/o radiológica en varios sitios medibles. En algunos aspectos, estos sitios incluyen ganglios linfáticos y sitios extralinfáticos, en los que una PR se describe como una puntuación de 4 o 5 con captación reducida en comparación con el valor inicial y la masa o masas residuales de cualquier tamaño, cuando se usa PET-CT. De manera provisional, estos descubrimientos pueden indicar una respuesta de la enfermedad. Al final del tratamiento, estos descubrimientos pueden indicar enfermedad residual. En algunos aspectos, la respuesta se evalúa en los ganglios linfáticos usando CT, donde una PR se describe como una disminución >50% en la suma de las dimensiones del producto (SPD) de hasta 6 ganglios objetivo medibles y sitios extraganglionares. Si una lesión es demasiado pequeña para medirla con CT, se asigna como valor por defecto 5 mm x 5 mm; si la lesión ya no es visible, el valor es 0 mm x 0 mm; para un ganglio de >5 mm x 5 mm, pero más pequeño de lo normal, se usan mediciones reales para el cálculo. Sitios adicionales para la evaluación incluyen la médula ósea, en donde la evaluación basada en PET-CT debe indicar una captación residual superior a la captación en la médula normal pero reducida en comparación con el valor de referencia (captación difusa compatible con cambios reactivos de la quimioterapia permitidos). En algunos aspectos, si hay cambios focales persistentes en la médula en el contexto de una respuesta ganglionar, debe considerarse una evaluación adicional con MRI o biopsia, o una exploración a intervalos. En algunos aspectos, los sitios adicionales pueden incluir la evaluación del agrandamiento del órgano, donde el bazo debe haber retrocedido >50% en longitud por encima de lo normal. En algunos aspectos, se evalúan las lesiones no medidas y las lesiones nuevas, que en el caso de la PR deben estar ausentes/normales, haber retrocedido, pero no haber aumentado. La ausencia de respuesta/enfermedad estable (SD) o la enfermedad progresiva (PD) también pueden medirse mediante evaluaciones basadas en PET-CT y/o CT. (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).

En algunos aspectos, la supervivencia libre de progresión (PFS) se describe como la cantidad de tiempo durante y después del tratamiento de una enfermedad, como el cáncer, que un sujeto vive con la enfermedad pero ésta no empeora. En algunos aspectos, la respuesta objetiva (OR) se describe como una respuesta medible. En algunos aspectos, la tasa de respuesta objetiva (ORR) se describe como la proporción de pacientes que lograron CR o PR. En algunos aspectos, la supervivencia global (OS) se describe como el tiempo transcurrido o desde la fecha de diagnóstico o el inicio del tratamiento para una enfermedad, como el cáncer, en la que los sujetos diagnosticados con la enfermedad siguen vivos. En algunos aspectos, la supervivencia libre de eventos (EFS) se describe como el periodo de tiempo tras finalizar el tratamiento de un cáncer en donde el sujeto permanece libre de ciertas complicaciones o eventos que el tratamiento pretendía prevenir o retrasar. Estos eventos pueden incluir la reaparición del cáncer o la aparición de ciertos síntomas, como dolor óseo debido a un cáncer que se ha extendido al hueso, o la muerte.

En algunos casos, la medida de la duración de la respuesta (DOR) incluye el tiempo transcurrido desde la documentación de la respuesta tumoral hasta la progresión de la enfermedad. En algunos casos, el parámetro para evaluar la respuesta puede incluir la respuesta duradera, por ejemplo, la respuesta que persiste después de un periodo de tiempo desde el inicio de la terapia y/o la respuesta positiva de larga duración a la terapia. En algunos casos, la respuesta duradera se indica mediante la tasa de respuesta a aproximadamente 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 o 24 meses después del inicio de la terapia. En algunos casos, la respuesta es duradera durante más de 3 meses o más de 6 meses. En algunos casos, la respuesta duradera es la respuesta medida en el mes 3 después de la administración de la terapia, por ejemplo, una respuesta de 3 meses. En algunos casos, la respuesta duradera es la respuesta medida en el mes 6 después de la administración de la terapia, por ejemplo, una respuesta de 6 meses.

En algunos aspectos, se usan los criterios RECIST para determinar la respuesta tumoral objetiva; en algunos aspectos, en tumores sólidos. (Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.) En algunos aspectos, se usan los criterios RECIST para determinar la respuesta tumoral objetiva en lesiones objetivo. En algunos aspectos, una respuesta completa determinada usando los criterios RECIST se describe como la desaparición de todas las lesiones objetivo y cualquier ganglio linfático patológico (ya sea objetivo o no) debe tener una reducción en el eje corto a <10 mm. En otros aspectos, una respuesta parcial determinada usando los criterios RECIST se describe como una disminución de por lo menos el 30% en la suma de diámetros de las lesiones objetivo, tomando como referencia la suma de diámetros de referencia. En otros aspectos, la enfermedad progresiva (PD) se describe como un aumento de por lo menos el 20% en la suma de los diámetros de las lesiones objetivo, tomando como referencia la suma más pequeña del estudio (esto incluye la suma de referencia si es la más pequeña del estudio). Además del aumento relativo del 20%, la suma también debe demostrar un aumento absoluto de por lo menos 5 mm (en algunos aspectos, la aparición de una o más lesiones nuevas también se considera progresión). En otros aspectos, la enfermedad estable (SD) se describe como la ausencia de contracción suficiente para calificar como PR y de aumento suficiente para calificar como PD, tomando como referencia los diámetros más pequeños de la suma durante el estudio.

En algunos casos, la enfermedad o afección es un tumor y la reducción de la carga de la enfermedad es una reducción del tamaño del tumor. En algunos casos, la reducción de la carga de enfermedad se indica mediante una reducción de uno o más factores, como la carga o el número de células enfermas en el sujeto o fluido u órgano o tejido del mismo, la masa o volumen de un tumor, o el grado o extensión de las metástasis. En algunos casos, la carga de enfermedad, por ejemplo, la carga tumoral, puede evaluarse o monitorizarse para determinar la extensión de la enfermedad morfológica y/o la enfermedad residual mínima.

En algunos casos, se detecta, evalúa o mide la carga de una enfermedad o afección en el sujeto. En algunos aspectos la carga de la enfermedad puede detectarse detectando el número total de células de la enfermedad o asociadas a la enfermedad, por ejemplo, células tumorales, en el sujeto, o en un órgano, tejido o fluido corporal del sujeto, como sangre o suero. En algunos casos, la carga de la enfermedad, por ejemplo la carga tumoral, se evalúa midiendo la masa de un tumor sólido y/o el número o extensión de las metástasis. En algunos aspectos, se evalúa la supervivencia del sujeto, la supervivencia dentro de un periodo de tiempo determinado, la extensión de la supervivencia, la presencia o duración de la supervivencia libre de eventos o libre de síntomas, o la supervivencia libre de recaídas. En algunos casos, se evalúa cualquier síntoma de la enfermedad o afección. En algunos casos, se especifica la medida de la carga de la enfermedad o afección.

En algunos casos, la carga de enfermedad puede abarcar un número total de células de la enfermedad en el sujeto o en un órgano, tejido o fluido corporal del sujeto, como el órgano o tejido del tumor u otra localización, por ejemplo, lo que indicaría metástasis. Por ejemplo, las células tumorales pueden detectarse y/o cuantificarse en la sangre o la médula ósea en el contexto de ciertas enfermedades malignas hematológicas. La carga de la enfermedad puede incluir, en algunos casos, la masa de un tumor, el número o la extensión de las metástasis y/o el porcentaje de células blásticas presentes en la médula ósea.

En algunos casos, un sujeto tiene leucemia. El alcance de la carga de la enfermedad puede determinarse mediante la evaluación de la leucemia residual en la sangre o la médula ósea.

En algunos aspectos, las tasas de respuesta en sujetos, como sujetos con leucemia linfocítica crónica (CLL), se basan en los criterios de respuesta del Taller Internacional sobre Leucemia Linfocítica Crónica (IWCLL) (Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456). En algunos aspectos, estos criterios se describen de la siguiente manera: remisión completa (CR), que en algunos aspectos requiere la ausencia de linfocitos clonales en sangre periférica mediante inmunofenotipado, ausencia de linfadenopatía, ausencia de hepatomegalia o esplenomegalia, ausencia de síntomas constitucionales y recuentos sanguíneos satisfactorios; remisión completa con recuperación incompleta de la médula (RCi), que en algunos aspectos se describe como la CR anterior, pero sin recuentos sanguíneos normales; remisión parcial (PR), que en algunos aspectos se describe como > 50% de descenso en el recuento de linfocitos, > 50% de reducción de linfadenopatías o > 50% de reducción en hígado o bazo, junto con mejora en los recuentos de sangre periférica; enfermedad progresiva (PD), que en algunos aspectos se describe como > 50% de aumento en el recuento de linfocitos hasta > 5 x109/l, > 50% de aumento de las linfadenopatías, >50% de aumento del tamaño del hígado o del bazo, transformación de Richter o nuevas citopenias debidas a CLL; y enfermedad estable, que en algunos aspectos se describe como no cumplir los criterios de CR, CRi, PR o PD.

En algunos casos, los sujetos presentan una CR u OR si, en el plazo de 1 mes desde la administración de la dosis de células, los ganglios linfáticos del sujeto tienen un tamaño menor de o aproximadamente 20 mm, un tamaño menor de o aproximadamente 10 mm, o un tamaño menor de o aproximadamente 10 mm.

En algunos casos, no se detecta un clon índice de CLL en la médula ósea del sujeto (o en la médula ósea de más del 50%, 60%, 70%, 80%, 90% o más de los sujetos tratados de acuerdo con los métodos). En algunos casos, un clon índice de la CLL se evalúa mediante secuenciación profunda de IgH. En algunos casos, el clon índice no se detecta en un momento que se encuentra en o aproximadamente o por lo menos en o aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 o 24 meses después de la administración de las células.

En algunos casos, existe un resultado de respuesta si hay una reducción del porcentaje de blastos en la médula ósea en comparación con el porcentaje de blastos en la médula ósea antes del tratamiento con el agente terapéutico. En algunos casos, existe reducción de la carga de la enfermedad si hay una disminución o reducción de por lo menos o por lo menos aproximadamente el 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% o más en el número o porcentaje de blastos en la médula ósea en comparación con el número o porcentaje de blastos en la médula ósea antes del tratamiento.

En algunos casos, el sujeto presenta una respuesta si no presenta enfermedad morfológica (enfermedad no morfológica) o no presenta enfermedad morfológica sustancial. En algunos casos, un sujeto presenta enfermedad morfológica si hay más o igual al 5% de blastos en la médula ósea, por ejemplo, detectados mediante microscopía óptica. En algunos casos, un sujeto presenta remisión completa o clínica si hay menos del 5% de blastos en la médula ósea.

En algunos casos, un sujeto presenta una carga de enfermedad reducida o disminuida si presentaba enfermedad morfológica antes del tratamiento y presenta una remisión completa (por ejemplo, menos del 5% de blastos en la médula ósea) con o sin enfermedad molecular (por ejemplo, enfermedad residual mínima (MRD) que es molecularmente detectable, por ejemplo, detectada mediante citometría de flujo o PCR cuantitativa) después del tratamiento. En algunos casos, un sujeto presenta una carga de enfermedad reducida o disminuida si presentaba enfermedad molecular antes del tratamiento y no presenta enfermedad molecular después del tratamiento.

En algunos casos, un sujeto puede presentar una remisión completa, pero con una pequeña proporción de células leucémicas residuales morfológicamente indetectables (mediante técnicas de microscopía óptica). Se dice que un sujeto presenta enfermedad residual mínima (MRD) si presenta menos del 5% de blastos en la médula ósea y cáncer detectable molecularmente. En algunos casos, el cáncer detectable molecularmente puede evaluarse usando cualquiera de las varias técnicas moleculares que permiten la detección sensible de un pequeño número de células. En algunos aspectos, dichas técnicas incluyen ensayos de PCR, que pueden determinar reordenamientos únicos de genes receptores de células Ig/T o transcripciones de fusión producidas por translocaciones cromosómicas. En algunos casos, puede usarse citometría de flujo para identificar células cancerosas basándose en inmunofenotipos específicos de la leucemia. En algunos casos, la detección molecular del cáncer puede detectar tan sólo 1 célula leucémica o blástica en 100.000 células normales o 1 célula leucémica o blástica en 10.000 células normales. En algunos casos, un sujeto presenta MRD detectable molecularmente si se detecta por lo menos o más de 1 célula leucémica en 100.000 células, como por PCR o citometría de flujo.

En algunos casos, la carga de enfermedad de un sujeto es molecularmente indetectable o MRD-, de tal manera que, en algunos casos, no pueden detectarse células leucémicas en el sujeto usando técnicas de PCR o citometría de flujo.

En algunos casos, el resultado de la respuesta es la ausencia de una CR o la presencia de una respuesta completa en la que el sujeto alcanza o muestra una enfermedad residual mínima o un estado de enfermedad detectable molecularmente. En algunos casos, el resultado de la respuesta es la presencia de una CR con enfermedad molecularmente detectable o la presencia de una CR sin enfermedad molecularmente detectable. En algunos casos, se evalúa la carga de enfermedad de los sujetos mediante métodos como los descritos en la presente, como los métodos que evalúan los blastos en la médula ósea o la enfermedad molecular mediante citometría de flujo o métodos de qPCR.

En algunos casos de los métodos descritos en la presente, la respuesta se determina por la remisión completa o respuesta completa (CR) y/o respuesta objetiva (OR); y/o el sujeto presenta CR, OR, ganglios linfáticos de tamaño inferior a o aproximadamente 20 mm, en el plazo de 1 mes desde la administración de la dosis de células; y/o no se detecta un clon índice de la enfermedad o afección, como la CLL o NHL, en la médula ósea del sujeto (o en la médula ósea de más del 50% de los sujetos tratados de acuerdo con los métodos), opcionalmente evaluado mediante secuenciación profunda de IgH, opcionalmente en un momento que es o aproximadamente o por lo menos o aproximadamente 1,2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, o 24 meses después de la administración de la dosis de células.

C. Determinación de la farmacocinética (PK) de las células manipuladas, por ejemplo, niveles celulares máximos En algunos casos, el método incluye la evaluación de la exposición, número, concentración, persistencia y proliferación de las células T, por ejemplo, células T administradas para la terapia basada en células T. En algunos casos, la exposición, o expansión prolongada y/o persistencia de las células, y/o cambios en los fenotipos celulares o actividad funcional de las células, por ejemplo, células administradas para inmunoterapia, por ejemplo terapia de células T, en los métodos descritos en la presente, pueden medirse evaluando las características de las células T in vitro o ex vivo. En algunos casos, dichos ensayos pueden usarse para determinar o confirmar la función de las células T usadas para la inmunoterapia, por ejemplo, terapia con células T, antes o después de administrar la terapia celular descrita en la presente.

En algunos aspectos, la exposición, el número, la concentración, la persistencia y la proliferación están relacionados con parámetros farmacocinéticos. En algunos casos, la farmacocinética puede evaluarse midiendo parámetros como la concentración plasmática máxima (pico) (Cmax), el tiempo de pico (es decir, cuando se produce la concentración plasmática máxima (Cmax); Tmax), la concentración plasmática mínima (es decir, la concentración plasmática mínima entre dosis de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+; Cmin), la semivida de eliminación (T<1/2>) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática de las células T CAR+ del agente terapéutico; AUC), después de la administración. La concentración de un agente terapéutico particular, por ejemplo, células T CAR+, en el plasma después de la administración puede medirse usando cualquier método conocido en la técnica adecuado para evaluar las concentraciones de los agentes terapéuticos, por ejemplo, células T CAR+, en muestras de sangre, o cualquier método descrito en la presente. Por ejemplo, pueden usarse métodos basados en ácidos nucleicos, como PCR cuantitativa (qPCR) o métodos basados en citometría de flujo, u otros ensayos, como un inmunoensayo, ELISA, o ensayos basados en cromatografía/espectrometría de masas.

En algunos casos, se determina la farmacocinética (PK) de las células administradas, por ejemplo, la composición de células T CAR+, para evaluar la disponibilidad, por ejemplo, la biodisponibilidad, de las células administradas. En algunos casos, los parámetros farmacocinéticos determinados de las células administradas incluyen concentraciones plasmáticas máximas (pico) (Cmax), como Cmax de células CD3+ CAR+, células CD4+ CAR+ y/o células T CD8+ CAR+; el punto temporal en el que se alcanza la C max (Tmax), como el Tmax de células CD3+ CAR+, células CD4+ CAR+ y/o células T CD8+ CAR+, y o el área bajo la curva (Au C), como la AUC<0-28>, de células CD3+ CAR+, células CD4+ CAR+ y/o células T CD8+ c Ar . En algunos casos, el parámetro farmacocinético es la concentración máxima de células T CD3+ CAR+ (Cmax células T CD3+ CAR+), o la concentración de células T CD8+ CAR+ (Cmax células T CD8+ CAR+). En algunos casos, el parámetro farmacocinético es la AUC<0-28>, de células T CD3+ CAR+, (AUC0-28 células T CD3+ CAR+), o AUC<0-28>, de células T CD8+ CAR+, (AUC0-28 células T CD8+ CAR+),

En algunos casos, "exposición" puede referirse a la exposición corporal de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+ en el plasma (sangre o suero) después de la administración del agente terapéutico durante un cierto periodo de tiempo. En algunos casos, la exposición puede exponerse como el área bajo la curva de concentración-tiempo del agente terapéutico (AUC) determinada mediante análisis farmacocinético después de la administración de una dosis del agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+. En algunos casos, la AUC se expresa en células*días/pl, para células administradas en terapia celular, o en unidades correspondientes de las mismas. En algunos casos, la AUC se mide como una AUC media en una población de pacientes, como una población de pacientes de muestra, por ejemplo, la AUC media de uno o más pacientes. En algunos casos, la exposición sistémica se refiere al área bajo la curva (AUC) dentro de un cierto periodo de tiempo, por ejemplo, desde el día 0 hasta el día 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28 días o más, o la semana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más, o el mes 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 o más. En algunos casos, la AUC se mide como una AUC desde el día 0 hasta el día 28 (AUC<0-28>) después de la administración del agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+, incluyendo todos los datos medidos y los datos extrapolados de parámetros farmacocinéticos (PK) medidos, como una AUC media de una población de pacientes, como una población de pacientes de muestra. En algunos casos, para determinar la exposición a lo largo del tiempo, por ejemplo, la AUC durante un cierto periodo de tiempo, como la AUC<0>-<28>, se genera una curva de concentración-tiempo del agente terapéutico, usando múltiples mediciones o evaluación de parámetros, por ejemplo, concentraciones celulares, a lo largo del tiempo, por ejemplo, mediciones tomadas cada 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21 o 28 días o más.

En algunos casos, se detecta la presencia y/o cantidad de células que expresan el receptor recombinante (por ejemplo, células que expresan CAR administradas para la terapia basada en células T) en el sujeto después de la administración de las células T y antes, durante y/o después de que se detecte la administración de la terapia. En algunos aspectos, se usan métodos basados en ácidos nucleicos, como PCR cuantitativa (qPCR), para evaluar la cantidad de células que expresan el receptor recombinante (por ejemplo, células que expresan CAR administradas para la terapia basada en células T) en la sangre o suero o muestra de órgano o tejido (por ejemplo, sitio de la enfermedad, por ejemplo, muestra de tumor) del sujeto. En algunos aspectos, la persistencia se cuantifica como copias de ADN o plásmido que codifica el receptor, por ejemplo, CAR, por microgramo de ADN, o como el número de células que expresan el receptor, por ejemplo, CAR, por microlitro de la muestra, por ejemplo, de sangre o suero, o por número total de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) o glóbulos blancos o células T por microlitro de la muestra. En algunos casos, los cebadores o sonda usados para la qPCR u otros métodos basados en ácidos nucleicos son específicos para unir, reconocer y/o amplificar ácidos nucleicos que codifican el receptor recombinante, y/u otros componentes o elementos del plásmido y/o vector, incluyendo elementos reguladores, por ejemplo, promotores, elementos reguladores transcripcionales y/o postranscripcionales o elementos de respuesta, o marcadores, por ejemplo, marcadores sustitutos. En algunos casos, los cebadores pueden ser específicos para elementos reguladores, como el elemento regulador postranscripcional del virus de la hepatitis de la marmota (WPRE).

En algunos aspectos, las células se detectan en el sujeto a o por lo menos a los 4, 14, 15, 27 o 28 días después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR. En algunos aspectos, las células se detectan a o por lo menos a las 2, 4, o 6 semanas siguientes, o 3, 6, o 12, 18, o 24, o 30 o 36 meses, o 1, 2, 3, 4, 5, o más años, después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR.

En algunos casos, se evalúan los niveles máximos y/o la AUC y/o la muestra se obtiene del sujeto por lo menos 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, se evalúan los niveles máximos y/o la AUC y/o la muestra se obtiene del sujeto en un momento que está entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, cada uno inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

La exposición, por ejemplo, número o concentración de células, por ejemplo, células T administradas para terapia de células T, indicativa de expansión y/o persistencia, puede establecerse en términos de número máximo o concentración de las células a las que se expone el sujeto, duración de células detectables o células por encima de un cierto número o porcentaje, área bajo la curva (AUC) para número o concentración de células a lo largo del tiempo, y/o combinaciones de los mismos e indicadores de los mismos. Tales resultados pueden evaluarse mediante métodos conocidos, como qPCR para detectar el número de copias del ácido nucleico que codifica el receptor recombinante en comparación con la cantidad total de ácido nucleico o ADN en la muestra concreta, por ejemplo, sangre, suero, plasma o tejido, como una muestra de tumor, y/o ensayos de citometría de flujo que detectan células que expresan el receptor generalmente usando anticuerpos específicos para los receptores. También pueden usarse ensayos basados en células para detectar el número, porcentaje o concentración de células funcionales, como células capaces de unirse a y/o neutralizar y/o inducir respuestas, por ejemplo, respuestas citotóxicas, contra células de la enfermedad o afección o que expresan el antígeno reconocido por el receptor.

En algunos aspectos, el aumento de la exposición del sujeto a las células incluye el aumento de la expansión de las células. En algunos casos, las células que expresan receptores, por ejemplo, células que expresan CAR, se expanden en el sujeto después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR.

En algunos casos, las células que expresan el receptor son detectables en el suero, plasma, sangre o tejido, por ejemplo, muestra tumoral, del sujeto, por ejemplo, mediante un método especificado, como qPCR o método de detección basado en citometría de flujo, por lo menos 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41,42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, o 60 o más días después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR, durante por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 o 24 semanas o más después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR.

En algunos aspectos, por lo menos aproximadamente 1 x 102, por lo menos aproximadamente 1 x 103, por lo menos aproximadamente 1 x 104, por lo menos aproximadamente 1 x 105, o por lo menos aproximadamente 1 x 106 o por lo menos aproximadamente 5 x 106 o por lo menos aproximadamente 1 x 107 o por lo menos aproximadamente 5 x 107 o por lo menos aproximadamente 1 x 108 células que expresan receptores recombinantes, por ejemplo, células que expresan CAR, y/o por lo menos 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, o 500, o 1000 células que expresan receptores por microlitro, por ejemplo, por lo menos 10 por microlitro, son detectables o están presentes en el sujeto o fluido, plasma, suero, tejido, o compartimento del mismo, como en la sangre, por ejemplo, sangre periférica, o sitio de enfermedad, por ejemplo, tumor, del mismo. En algunos casos, dicho número o concentración de células es detectable en el sujeto durante por lo menos aproximadamente 20 días, por lo menos uno aproximadamente s 40 días, o por lo menos aproximadamente 60 días, o por lo menos aproximadamente 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses, o por lo menos 2 o 3 años, después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR. Dicho número de células puede detectarse mediante citometría de flujo o métodos cuantitativos basados en PCR y extrapolación al número total de células mediante métodos conocidos. Consultar, por ejemplo, Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al., Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828.

En algunos aspectos, el número de copias del ácido nucleico que codifica el receptor recombinante, por ejemplo, número de copias del vector, por 100 células, por ejemplo en la sangre periférica o médula ósea u otro compartimento, medido por inmunohistoquímica, PCR, y/o citometría de flujo, es por lo menos 0,01, por lo menos 0,1, por lo menos 1, o por lo menos 10, en aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, o por lo menos aproximadamente 6 semanas, o por lo menos aproximadamente 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, o 12 meses o por lo menos 2 o 3 años después de la administración de las células, por ejemplo, células T que expresan CAR. En algunos casos, el número de copias del vector que expresa el receptor, por ejemplo CAR, por microgramo de ADN genómico es de por lo menos 100, por lo menos 1000, por lo menos 5000, o por lo menos 10.000, o por lo menos 15.000 o por lo menos 20.000 en un momento de aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, o por lo menos aproximadamente 4 semanas después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR o por lo menos 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, o 12 meses o por lo menos 2 o 3 años después de dicha administración.

En algunos aspectos, el receptor, por ejemplo CAR, expresado por las células, es detectable por PCR cuantitativa (qPCR) o por citometría de flujo en el sujeto, plasma, suero, sangre, tejido y/o sitio de enfermedad del mismo, por ejemplo, tumor, en un momento que es de por lo menos aproximadamente 3 meses, por lo menos aproximadamente 6 meses, por lo menos aproximadamente 12 meses, por lo menos aproximadamente 1 año, por lo menos aproximadamente 2 años, por lo menos aproximadamente 3 años, o más de 3 años, después de la administración de las células, por ejemplo, tras el inicio de la administración de las células T. En algunos casos, se mide el área bajo la curva (AUC) para la concentración de células que expresan receptores (por ejemplo, CAR) en un fluido, plasma, suero, sangre, tejido, órgano y/o sitio de la enfermedad, por ejemplo, sitio del tumor, del sujeto a lo largo del tiempo después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR.

También se describen métodos para evaluar la probabilidad de una respuesta o una respuesta duradera. En algunos casos, los métodos implican detectar, en una muestra biológica de un sujeto, niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios y/o niveles máximos de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde al sujeto se le ha administrado previamente una dosis de las células manipuladas genéticamente para tratar una enfermedad o afección. En algunos casos, los métodos comprenden comparar, individualmente, los niveles máximos con un valor umbral, determinando de este modo una probabilidad de que un sujeto logre una respuesta duradera a la administración de las células manipuladas.

En algunos casos, es probable que el sujeto logre una respuesta o una respuesta duradera si los niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios están por debajo de un valor umbral y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si los niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios están por encima de un valor umbral. En algunos casos, es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra dentro de un intervalo terapéutico entre un valor umbral inferior y un valor umbral superior, y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra por debajo del valor umbral inferior o por encima del valor umbral superior.

III.MÉTODO DE TRATAMIENTO

En algunos casos, se describen métodos de tratamiento. En algunos casos, los métodos incluyen la administración de una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, los métodos incluyen la administración de células manipuladas genéticamente, por ejemplo, células manipuladas para que expresen un receptor recombinante como un receptor de antígeno quimérico (CAR). En algunos casos, los métodos incluyen la administración de una dosis de células, por ejemplo, células que expresan CAR+, a un sujeto de tal manera que las células se encuentren dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo. En algunos casos, puede determinarse o evaluarse si las células en el sujeto se encuentran dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo mediante la monitorización de parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, como la concentración celular máxima (C max). En algunos aspectos, los métodos descritos también incluyen un método de determinación de una dosis de un sujeto, o un método de dosificación de un sujeto, basado en una evaluación de los parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, como la concentración celular máxima (Cmax), atributos del paciente y/o biomarcadores.

En algunos casos, se administra una dosis de células que expresan un receptor recombinante a un sujeto para tratar o prevenir enfermedades, afecciones y trastornos, incluyendo cánceres. En algunos casos, las células, poblaciones y composiciones se administran a un sujeto o paciente que padece la enfermedad o afección particular a tratar, por ejemplo, mediante terapia celular adoptiva, como terapia de células T adoptiva. En algunos casos, las células y composiciones, como composiciones manipuladas y composiciones al final de la producción después de la incubación y/u otros pasos de procesamiento, se administran a un sujeto, como un sujeto que tiene o está en riesgo de tener la enfermedad o afección. En algunos aspectos, los métodos tratan de este modo, por ejemplo, mejoran uno o más síntomas de la enfermedad o afección, por ejemplo, disminuyendo la carga tumoral en un cáncer que expresa un antígeno reconocido por una célula T manipulada.

Los métodos de administración de células para terapia celular adoptiva son conocidos y pueden usarse en relación con los métodos y composiciones descritos. Por ejemplo, los métodos de terapia de células T adoptiva se describen, por ejemplo, en la Publicación de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° 2003/0170238 de Gruenberg et al; Patente de Estados Unidos N° 4.690.915 de Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85). Consultar, por ejemplo, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338.

La enfermedad o afección que se trata puede ser cualquiera en la que esté asociada y/o implicada la expresión de un antígeno en la etiología de una enfermedad, afección o trastorno, por ejemplo, que provoque, exacerbe o esté implicada de otro modo en dicha enfermedad, afección o trastorno. Las enfermedades y afecciones ejemplares pueden incluir enfermedades o afecciones asociadas con enfermedades malignas o transformación de células (por ejemplo, cáncer), enfermedad autoinmune o inflamatoria, o una enfermedad infecciosa, por ejemplo, provocada por un patógeno bacteriano, viral o de otro tipo. Los antígenos ejemplares, que incluyen antígenos asociados con varias enfermedades y afecciones que pueden tratarse, se han descrito con anterioridad. En casos particulares, el receptor de antígeno quimérico o<t>C<r>transgénico se une específicamente a un antígeno asociado con la enfermedad o afección.

Entre las enfermedades, afecciones y trastornos se encuentran los tumores, incluyendo los tumores sólidos, las enfermedades malignas hematológicas y los melanomas, e incluidos los tumores localizados y metastásicos, las enfermedades infecciosas, como la infección por un virus u otro patógeno, por ejemplo, VIH, VHC, VHB, CMV, y las enfermedades parasitarias, y las enfermedades autoinmunes e inflamatorias. En algunos casos, la enfermedad o afección es un tumor, cáncer, enfermedad maligna, neoplasia u otra enfermedad o trastorno proliferativo. Tales enfermedades incluyen, entre otras, la leucemia, el linfoma, por ejemplo, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), linfoma no Hodgkin, leucemia mieloide aguda, mieloma múltiple, linfoma folicular refractario, linfoma de células del manto, linfoma indolente de células B, enfermedades malignas de células B, cánceres de colon, pulmón, hígado, mama, próstata, ovario, piel, melanoma, hueso y cerebro, cáncer de ovario, cánceres epiteliales, carcinoma de células renales, adenocarcinoma pancreático, linfoma de Hodgkin, carcinoma cervical, cáncer colorrectal, glioblastoma, neuroblastoma, sarcoma de Ewing, meduloblastoma, osteosarcoma, sarcoma sinovial y/o mesotelioma. En algunos casos, el sujeto padece leucemia linfoblástica aguda (ALL). En algunos casos, el sujeto padece linfoma no Hodgkin.

En algunos casos, la enfermedad o afección es una enfermedad o afección infecciosa como, pero no limitadas a, infecciones víricas, retrovíricas, bacterianas y protozoarias, inmunodeficiencia, citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr (EBV), adenovirus, poliomavirus b K. En algunos casos, la enfermedad o afección es una enfermedad o afección autoinmune o inflamatoria, como la artritis, por ejemplo, la artritis reumatoide (AR), la diabetes de tipo I, el lupus eritematoso sistémico (LES), la enfermedad inflamatoria intestinal, la psoriasis, la esclerodermia, la enfermedad tiroidea autoinmune, la enfermedad de Grave, la enfermedad de Crohn, la esclerosis múltiple, el asma y/o una enfermedad o afección asociada a un trasplante.

En algunos casos, el antígeno asociado con la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en integrina avp6 (integrina avb6), antígeno de maduración de células B (BCMA), B7-H3, B7-H6, anhidrasa carbónica 9 (CA9, también conocido como CAIX o G250), un antígeno de cáncer de testículos, antígeno de cáncer de testículos 1B (CTAG, también conocido como NY-ESO-1 y LAGE-2), antígeno carcinoembrionario (CEA), una ciclina, ciclina A2, Ligando 1 de quimiocina de motivo C-C 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, proteína del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), proteína truncada del factor de crecimiento epidérmico (tEGFR), mutación del receptor del factor de crecimiento epidérmico tipo III (EGFR vIII), glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), efrinaB2, receptor de efrina A<2>(EPHa2), receptor de estrógenos, receptor Fc tipo 5 (FCRL5; también conocido como receptor Fc homólogo 5 o FCRH5), receptor de acetilcolina fetal (AchR fetal), proteína de unión a folato (FBP), receptor de folato alfa, gangliósido GD2, GD2 O-acetilado (OGD2), gangliósido g D3, glicoproteína 100 (gp100), receptor 5D acoplado a proteína G (GPCR5D), Her2/neu (receptor tirosina quinasa erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), dímeros erbB, antígeno humano de alto peso molecular asociado a melanoma (HMW-MAA), antígeno de superficie de la hepatitis B, antígeno leucocitario humano A1 (HLA-A1), antígeno leucocitario humano A2 (HLA-A2), receptor IL-22 alfa(IL-22Ra), receptor IL-13 alfa 2 (IL-13Ra2), receptor de dominio de inserción de quinasa (kdr), cadena ligera kappa, molécula de adhesión celular L1 (L1-CAM), epítopo CE7 de L1-CAM, Miembro A de la Familia 8 que contiene repetición rica en leucina (LRRC8A), Lewis Y, antígeno asociado a melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, mesotelina, c-Met, citomegalovirus murino (CMV), mucina 1 (MUC1), MUC16, ligandos del miembro D del grupo de asesinas naturales 2 (NKG2D), melano A (MART-1), molécula de adhesión celular neural (NCAM), antígeno oncofetal, antígeno de melanoma expresado preferentemente (PRAME), receptor de progesterona, antígeno específico de próstata, antígeno de células madre de próstata (PSCA), antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), receptor tirosina quinasa similar al receptor huérfano 1 (ROR1), survivina, glicoproteína de trofoblasto (TPBG también conocida como 5T4), glicoproteína 72 asociada a tumor (TAG72), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR), receptor 2 del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR2), tumor de Wilms 1 (WT-1), un antígeno específico de patógeno, o un antígeno asociado a un marcador universal, y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por el VIH, el VHC, el VHB u otros patógenos. Los antígenos a los que se dirigen los receptores en algunos casos incluyen antígenos asociados con una neoplasia de células B, como cualquiera de una serie de marcadores de células B conocidos. En algunos casos, el antígeno es o incluye CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b o CD30.

En algunos casos, el antígeno asociado con la enfermedad o trastorno se selecciona del grupo que consiste en receptor huérfano de tirosina quinasa ROR1, tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA y antígeno de superficie de la hepatitis B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, 0EPHa2, ErbB2, 3, o 4, FBP, receptor fetal de la aceticolina e, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1, MAGE-A1, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, ligandos de NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno prostático específico, PSMA, Her2/neu, receptor de estrógenos, receptor de progesterona, efrinB2, CD123, CS-1, c-Met, GD-2, y MAGE A3, CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), una ciclina, como la ciclina A1 (CCNA1), y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por el VIH, el VHC, el VHB u otros patógenos.

En algunos casos, la terapia celular, por ejemplo, la terapia de células T adoptiva, se lleva a cabo mediante transferencia autóloga, en la que las células se aíslan y/o se preparan de otro modo a partir del sujeto que va a recibir la terapia celular, o a partir de una muestra derivada de dicho sujeto. Así, en algunos aspectos, las células se derivan de un sujeto, por ejemplo, un paciente, con necesidad de un tratamiento y las células, tras su aislamiento y procesamiento, se administran al mismo sujeto.

En algunos casos, la terapia celular, por ejemplo, la terapia de células T adoptiva, se lleva a cabo mediante transferencia alogénica, en la que las células se aíslan y/o se preparan de otro modo a partir de un sujeto distinto del que va a recibir o que finalmente recibe la terapia celular, por ejemplo, un primer sujeto. En tales casos, las células se administran a un sujeto diferente, por ejemplo, un segundo sujeto, de la misma especie. En algunos casos, el primer y el segundo sujeto son genéticamente idénticos. En algunos casos, el primer y el segundo sujeto son genéticamente similares. En algunos casos, el segundo sujeto expresa la misma clase o supertipo de HLA que el primer sujeto.

Las células pueden administrarse mediante cualquier medio adecuado, por ejemplo, por infusión en bolo, por inyección, por ejemplo, inyecciones intravenosas o subcutáneas, inyección intraocular, inyección periocular, inyección subretiniana, inyección intravítrea, inyección transeptal, inyección subescleral, inyección intracoroidea, inyección intracameral, inyección subconyuntival, inyección subconjuntival, inyección subtenoniana, inyección retrobulbar, inyección peribulbar o administración yuxtaescleral posterior. En algunos casos, se administran por vía parenteral, intrapulmonar e intranasal y, si se desea para un tratamiento local, intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea. En algunos casos, una dosis dada se administra mediante una única administración en bolo de las células. En algunos casos, se administra mediante múltiples administraciones en bolo de las células, por ejemplo, durante un periodo de no más de 3 días, o mediante la administración de infusión continua de las células.

Para la prevención o el tratamiento de enfermedades, la dosificación apropiada puede depender del tipo de enfermedad a tratar, el tipo de células o receptores recombinantes, la gravedad y el curso de la enfermedad, si las células se administran con propósitos preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial clínico del sujeto y la respuesta a las células, y la discreción del médico tratante. En algunos casos, las composiciones y las células se administran adecuadamente al sujeto de una sola vez o a lo largo de una serie de tratamientos.

En algunos casos, las células se administran como parte de un tratamiento combinado, por ejemplo, simultánea o secuencialmente con, en cualquier orden, otra intervención terapéutica, como un anticuerpo o célula manipulada o receptor o agente, como un agente citotóxico o terapéutico. En algunos casos, las células se coadministran con uno o más agentes terapéuticos adicionales o en conexión con otra intervención terapéutica, ya sea simultánea o secuencialmente en cualquier orden. En algunos contextos, las células se coadministran con otra terapia lo suficientemente cerca en el tiempo como para que las poblaciones celulares potencien el efecto de uno o más agentes terapéuticos adicionales, o viceversa. En algunos casos, las células se administran antes de uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunos casos, las células se administran después de uno o más agentes terapéuticos adicionales. En algunos casos, el uno o más agentes adicionales incluyen una citoquina, como IL-2, por ejemplo, para mejorar la persistencia. En algunos casos, los métodos comprenden la administración de un agente quimioterapéutico.

En algunos casos, los métodos comprenden la administración de un agente quimioterapéutico, por ejemplo, un agente quimioterapéutico condicionante, para reducir la carga tumoral antes de la administración.

En algunos aspectos, preacondicionar a los sujetos con terapias inmunodepletoras (por ejemplo, linfodepletoras) puede mejorar los efectos de la terapia celular adoptiva (ACT).

Por tanto, en algunos casos, los métodos incluyen la administración de un agente preacondicionador, como un agente linfodepletor o quimioterapéutico, como ciclofosfamida, fludarabina, o combinaciones de los mismos, a un sujeto antes del inicio de la terapia celular. Por ejemplo, puede administrarse al sujeto un agente preacondicionador por lo menos 2 días antes, como por lo menos 3, 4, 5, 6 o 7 días antes, del inicio de la terapia celular. En algunos casos, al sujeto se le administra un agente preacondicionador no más de 7 días antes, como no más de 6, 5, 4, 3 o 2 días antes, del inicio de la terapia celular.

En algunos casos, el sujeto se preacondiciona con ciclofosfamida a una dosis comprendida entre o entre aproximadamente 20 mg/kg y 100 mg/kg, como entre o entre aproximadamente 40 mg/kg y 80 mg/kg. En algunos aspectos, el sujeto se preacondiciona con o con aproximadamente 60 mg/kg de ciclofosfamida. En algunos casos, la ciclofosfamida puede administrarse en una dosis única o puede administrarse en una pluralidad de dosis, como administrarse diariamente, cada dos días o cada tres días. En algunos casos, la ciclofosfamida se administra una vez al día durante uno o dos días.

En algunos casos, cuando el agente linfodepletor comprende fludarabina, al sujeto se le administra fludarabina a una dosis entre o entre aproximadamente 1 mg/m2 y 100 mg/m2, como entre o entre aproximadamente 10 mg/m2 y 75 mg/m2, 15 mg/m2 y 50 mg/m2, 20 mg/m2 y 30 mg/m2, o 24 mg/m2 y 26 mg/m2. En algunos casos, al sujeto se le administran 25 mg/m2 de fludarabina. En algunos casos, la fludarabina puede administrarse en una dosis única o en varias dosis, por ejemplo, diariamente, cada dos días o cada tres días. En algunos casos, la fludarabina se administra diariamente, por ejemplo, durante 1-5 días, por ejemplo, de 3 a 5 días.

En algunos casos, el agente linfodepletor comprende una combinación de agentes, como una combinación de ciclofosfamida y fludarabina. Por tanto, la combinación de agentes puede incluir ciclofosfamida a cualquier dosis o pauta de administración, como las descritas anteriormente, y fludarabina a cualquier dosis o pauta de administración, como las descritas anteriormente. Por ejemplo, en algunos aspectos, al sujeto se le administran 60 mg/kg (~2 g/m2) de ciclofosfamida y de 3 a 5 dosis de 25 mg/m2 de fludarabina antes de la primera dosis o la posterior.

Después de la administración de las células, en algunos casos se mide la actividad biológica de las poblaciones celulares modificadas, por ejemplo, mediante cualquiera de los métodos conocidos. Los parámetros a evaluar incluyen la unión específica de una célula T natural o manipulada u otra célula inmunitaria al antígeno, in vivo, por ejemplo, mediante imágenes, o ex vivo, por ejemplo, mediante ELISA o citometría de flujo. En ciertos casos, la capacidad de las células manipuladas para destruir células objetivo puede medirse usando cualquier método adecuado conocido en la técnica, como los ensayos de citotoxicidad descritos en, por ejemplo, Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), y Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004). En ciertos casos, la actividad biológica de las células se mide ensayando la expresión y/o secreción de una o más citoquinas, como CD107a, IFN<y>, IL-2 y TNF. En algunos aspectos, la actividad biológica se mide evaluando el resultado clínico, como la reducción de la carga tumoral.

En ciertos casos, las células manipuladas se modifican adicionalmente de varias maneras de tal manera que se aumenta su eficacia terapéutica o profiláctica. Por ejemplo, el CAR o TCR manipulado expresado por la población puede conjugarse directa o indirectamente a través de un conector con una fracción objetivo. La práctica de conjugar compuestos, por ejemplo, el CAR o el TCR, con elementos objetivo es conocida en la técnica. Consultar, por ejemplo, Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 111 (1995), y la Patente de Estados Unidos 5,087,616.

A. Dosificación

En algunos casos, al sujeto se le administra una dosis que logra o es probable que logre el intervalo y/o ventana terapéuticos de células T CAR+. En algunos casos, el método consiste en administrar una dosis de células en una cantidad que logre o es probable que logre un número máximo de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo en el que el número máximo de células CAR+ tenga menos de una cierta probabilidad estimada de provocar toxicidad. En algunos casos, el método consiste en administrar una dosis de células en una cantidad que logre o es probable que logre un número máximo de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo en el que los números máximos de células CAR+ tengan más de una cierta probabilidad estimada de provocar una respuesta o una respuesta duradera. En algunos casos, la cantidad de células es una cantidad eficaz para tratar la enfermedad o afección, como una cantidad terapéuticamente eficaz o profilácticamente eficaz. En algunos casos, la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más. En algunos casos, la probabilidad estimada de provocar toxicidad es menor del 35%, menor del 30%, menor del 25%, menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% en la curva de probabilidad de toxicidad. En algunos casos, la dosis de células está por encima de la probabilidad estimada deseada de lograr una respuesta y por debajo de la probabilidad estimada deseada de provocar toxicidad.

En algunos casos, la cantidad o dosis de células que se administra se basa en la evaluación de parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, y la probabilidad estimada de respuesta y/o toxicidad, por ejemplo, como se describe en la Sección II.

En algunos casos, los métodos implican la administración de un número o dosis de células suficiente para alcanzar una concentración máxima de células CAR+ en el sujeto que se encuentre dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo determinada. En algunos casos, los métodos implican la administración de un número o dosis de células suficiente para alcanzar un máximo de concentración de células CAR+ en una mayoría de los sujetos tratados por el método, o mayor de o mayor de aproximadamente el 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% o más, como mayor del 75% de los sujetos tratados por el método, se encuentra dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo determinada.

En algunos casos, la ventana o intervalo terapéutico se determina como se ha descrito anteriormente, por ejemplo, en la Sección II. En algunos casos, el intervalo terapéutico se basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta de más o más de aproximadamente el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más, y una probabilidad estimada de toxicidad de menos o aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% o menos.

En algunos casos, la ventana o intervalo terapéutico se determina sobre la base de un intervalo específico de números y/o concentraciones de células, por ejemplo, células T CD3+, CD4+ o CD8+. En algunos casos, una concentración máxima ejemplar de células T CD3+CAR+ en la sangre que puede lograr una ventana terapéutica, es o incluye entre aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 células T CD3+ CAR+ por microlitro en la sangre y aproximadamente 200, 300, 400, 500, 600, 700 o 750, células T CD3+ CAR+ por microlitro en la sangre. En algunos casos, una concentración pico ejemplar de células T CD8+ CAR+ en la sangre que puede lograr una ventana terapéutica, es o incluye entre aproximadamente 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 células T CD8+ CAR+ por microlitro en la sangre y aproximadamente 200, 300, 400, 500, 600, 700 o 750, células T CD8+ CAR+ por microlitro en la sangre.

En algunos casos, el intervalo o ventana terapéutica objetivo es un pico de concentración de células T CD3+CAR+ de entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro en la sangre después de la administración. En algunos casos, el intervalo o ventana terapéutica objetivo es un pico de concentración de células T CD8+CAR+ de entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro en la sangre después de la administración.

En algunos casos, se describen métodos de dosificación de un sujeto que implican la administración, a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, de una dosis de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis comprende una cantidad de células manipuladas genéticamente que es suficiente para lograr un pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de sujetos tratados por el método o en más del 75% de los sujetos tratados por el método, en donde el intervalo terapéutico se: (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de toxicidad menor o de aproximadamente el 30%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

En algunos casos, se describen métodos de dosificación a un sujeto que implican (a) administrar, a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis subóptima de células manipuladas genéticamente que comprenden células T manipuladas con un receptor de antigénico quimérico (CAR), en donde la dosis comprende una cantidad de células manipuladas genéticamente que es insuficiente para lograr un pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de los sujetos tratados por el método o en más del 75% de los sujetos tratados por el método; y (b) después de administrar las células manipuladas genéticamente, administrar un agente para mejorar la expansión o proliferación de las células CAR+ en el sujeto para lograr un pico de células T CAR+ en la sangre dentro del intervalo terapéutico, en donde el intervalo terapéutico se: (i) basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de toxicidad menor o de aproximadamente el 30%; o (ii) un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o (iii) un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, comprendido entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro. En algunos casos, se administra al sujeto una dosis que puede lograr el intervalo o ventana terapéutica objetivo. En algunos casos, la dosis es menor de o menor de aproximadamente 1 x 107 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 5 x 106 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 2.5 x 106 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 1 x 106 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 5 x 105 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 2.5 x 105 células que expresan CAR, menor de o menor de aproximadamente 1 x 105 células que expresan CAR,

En el contexto de la terapia celular adoptiva, la administración de una "dosis" dada abarca la administración de la cantidad o el número dado de células como una única composición y/o administración única ininterrumpida, por ejemplo, como inyección única o infusión continua, y también abarca la administración de la cantidad o el número dados de células como una dosis dividida, proporcionada en múltiples composiciones o infusiones individuales, durante un periodo de tiempo especificado, que no es de más de 3 días. Por tanto, en algunos contextos, la dosis es una administración única o continua del número especificado de células, administrada o iniciada en un único momento.

En algunos contextos, sin embargo, la dosis se administra en múltiples inyecciones o infusiones durante un período de no más de tres días, como una vez al día durante tres días o durante dos días o mediante múltiples infusiones durante un período de un solo día.

Por tanto, en algunos aspectos, las células de la dosis se administran en una única composición farmacéutica. En algunos casos, las células de la dosis se administran en una pluralidad de composiciones, que contienen colectivamente las células de la primera dosis.

El término "dosis dividida" se refiere a una dosis que se divide para que se administre durante más de un día. Este tipo de dosificación se incluye en los presentes métodos y se considera una dosis única.

Por tanto, en algunos aspectos, la dosis puede administrarse como una dosis dividida. Por ejemplo, en algunos casos, la dosis puede administrarse al sujeto durante 2 o durante 3 días. Los métodos ejemplares para la dosificación dividida incluyen la administración del 25% de la dosis el primer día y la administración del 75% restante de la dosis el segundo día. En otros casos, puede administrarse el 33% de la primera dosis el primer día y el 67% restante el segundo día. En algunos aspectos, el 10% de la dosis se administra el primer día, el 30% de la dosis se administra el segundo día y el 60% de la dosis se administra el tercer día. En algunos casos, la dosis dividida no se reparte en más de 3 días.

En algunos casos, las células de la dosis pueden administrarse mediante la administración de una pluralidad de composiciones o soluciones, como una primera y una segunda, opcionalmente más, cada una de las cuales contiene algunas células de la dosis. En algunos aspectos, la pluralidad de composiciones, cada una de las cuales contiene una población diferente y/o subtipos de células, se administran por separado o independientemente, opcionalmente dentro de un periodo de tiempo determinado. Por ejemplo, las poblaciones o subtipos de células pueden incluir células T CD8+ y CD4+, respectivamente, y/o poblaciones enriquecidas con CD8+ y c D4+, respectivamente, por ejemplo, células T CD4+ y/o CD8+ que incluyen cada una individualmente células manipuladas genéticamente para expresar el receptor recombinante. En algunos casos, la administración de la dosis comprende la administración de una primera composición que comprende una dosis de células T CD8+ o una dosis de células T CD4+ y la administración de una segunda composición que comprende la otra de la dosis de células T CD4+ y las células T CD8+.

En algunos casos, la administración de la composición o dosis, por ejemplo, la administración de la pluralidad de composiciones celulares, implica la administración de las composiciones celulares por separado. En algunos aspectos, las administraciones separadas se llevan a cabo simultáneamente, o secuencialmente, en cualquier orden. En algunos casos, la dosis comprende una primera composición y una segunda composición, y la primera composición y la segunda composición se administran con de 0 a 12 horas de diferencia, de 0 a 6 horas de diferencia o de 0 a 2 horas de diferencia. En algunos casos, el inicio de la administración de la primera composición y el inicio de la administración de la segunda composición se llevan a cabo con no más de 2 horas, no más de 1 hora, o no más de 30 minutos de diferencia, no más de 15 minutos, no más de 10 minutos o no más de 5 minutos de diferencia. En algunos casos, el inicio y/o la finalización de la administración de la primera composición y la finalización y/o el inicio de la administración de la segunda composición se llevan a cabo con no más de 2 horas, no más de 1 hora, o no más de 30 minutos de diferencia, no más de 15 minutos, no más de 10 minutos o no más de 5 minutos de diferencia.

En alguna composición, la primera composición, por ejemplo, la primera composición de la dosis, comprende células T CD4+. En alguna composición, la primera composición, por ejemplo, la primera composición de la dosis, comprende células T CD8+. En algunos casos, la primera composición se administra antes de la segunda composición.

En algunos casos, la dosis o composición de células incluye una proporción definida o deseada de células CD4+ que expresan un receptor recombinante con respecto a células CD8+ que expresan un receptor recombinante y/o de células CD4+ con respecto a células CD8+, proporción que opcionalmente es de aproximadamente 1:1 o está comprendida entre aproximadamente 1:3 y aproximadamente 3:1, como aproximadamente 1:1. En algunos aspectos, la administración de una composición o dosis con la proporción objetivo o deseada de diferentes poblaciones celulares (como la proporción CD4+:CD8+ o la proporción CAR+CD4+:CAR+CD8+, por ejemplo, 1:1) implica la administración de una composición celular que contiene una de las poblaciones y, a continuación, la administración de una composición celular separada que comprende la otra de las poblaciones, donde la administración se encuentra o se encuentra aproximadamente en la proporción objetivo o deseada.

En algunos casos, pueden administrarse al sujeto una o más dosis consecutivas o posteriores de células. En algunos casos, la dosis consecutiva o posterior de células se administra más o más de aproximadamente 7 días, 14 días, 21 días, 28 días o 35 días después del inicio de la administración de la primera dosis de células. La dosis consecutiva o posterior de células puede ser superior, aproximadamente igual o inferior a la primera dosis. En algunos casos, puede repetirse la administración de la terapia de células T, como la administración de la primera y/o segunda dosis de células.

En algunos casos, se administra una dosis de células a los sujetos de acuerdo con los métodos descritos. En algunos casos, el tamaño o la cadencia de administración de las dosis se determina en función de la enfermedad o afección particular del sujeto. Un experto en la técnica puede determinar empíricamente el tamaño o la cadencia de administración de las dosis para una enfermedad particular. Las dosificaciones pueden variar en función de los atributos particulares de la enfermedad o trastorno y/o del paciente y/o de otros tratamientos.

En algunos aspectos, el tiempo entre la administración de la primera dosis y la administración de la dosis consecutiva es de aproximadamente 9 a aproximadamente 35 días, de aproximadamente 14 a aproximadamente 28 días, o de 15 a 27 días. En algunos casos, la administración de la dosis consecutiva se realiza en un momento posterior de más de aproximadamente 14 y menos de aproximadamente 28 días después de la administración de la primera dosis. En algunos aspectos, el tiempo transcurrido entre la primera dosis y la dosis consecutiva es de aproximadamente 21 días. En algunos casos, se administran una o varias dosis adicionales, por ejemplo, dosis consecutivas, después de la administración de la dosis consecutiva. En algunos aspectos, la dosis o dosis consecutivas adicionales se administran por lo menos aproximadamente 14 y menos de aproximadamente 28 días después de la administración de una dosis anterior. En algunos casos, la dosis adicional se administra menos de aproximadamente 14 días después de la dosis anterior, por ejemplo, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o 13 días después de la dosis anterior. En algunos casos, no se administra ninguna dosis menos de aproximadamente 14 días después de la dosis anterior y/o no se administra ninguna dosis más de aproximadamente<28>días después de la dosis anterior.

En algunos casos, la dosis de células, por ejemplo, células que expresan receptores recombinantes, comprende dos dosis (por ejemplo, una dosis doble), que comprende una primera dosis de las células T y una dosis consecutiva de las células T, en donde una o ambas de la primera dosis y la segunda dosis comprende la administración de la dosis dividida de células T.

En ciertos casos, las células, o poblaciones individuales de subtipos de células, se administran al sujeto en un intervalo de aproximadamente 0,1 millones a aproximadamente 100.000 millones de células y/o esa cantidad de células por kilogramo de peso corporal del sujeto, como, por ejemplo, de 0,1 millones a aproximadamente 50 mil millones de células (por ejemplo, aproximadamente 5 millones de células, aproximadamente 25 millones de células, aproximadamente 500 millones de células, aproximadamente 1.000 millones de células, aproximadamente 5.000 millones de células, aproximadamente 20.000 millones de células, aproximadamente 30.000 millones de células, aproximadamente 40.000 millones de células, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores), de 1 millón a aproximadamente 50.000 millones de células (por ejemplo, aproximadamente 5 millones de células, aproximadamente 25 millones de células, aproximadamente 500 millones de células, aproximadamente 1.000 millones de células, aproximadamente 5.000 millones de células, aproximadamente 20.000 millones de células, aproximadamente 30.000 millones de células, aproximadamente 40.000 millones de células, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores), por ejemplo, de aproximadamente 10 millones a aproximadamente 100.000 millones de células (por ejemplo, aproximadamente 20 millones de células, aproximadamente 30 millones de células, aproximadamente 40 millones de células, aproximadamente 60 millones de células, aproximadamente 70 millones de células, aproximadamente 80 millones de células, aproximadamente 90 millones de células, aproximadamente 10.000 millones de células, aproximadamente 25.000 millones de células, aproximadamente 50.000 millones de células, aproximadamente 75.000 millones de células, aproximadamente 90.000 millones de células, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores), y en algunos casos entre aproximadamente 100 millones de células y aproximadamente 50.000 millones de células (por ejemplo, aproximadamente 120 millones de células, aproximadamente 250 millones de células, aproximadamente 350 millones de células, aproximadamente 450 millones de células, aproximadamente 650 millones de células, aproximadamente 800 millones de células, aproximadamente 900 millones de células, aproximadamente 3.000 millones de células, aproximadamente 30.000 millones de células, aproximadamente 45.000 millones de células) o cualquier valor entre estos intervalos y/o por kilogramo de peso corporal del sujeto. Las dosificaciones pueden variar dependiendo de los atributos particulares de la enfermedad o trastorno y/o del paciente y/o de otros tratamientos. En algunos casos, dichos valores se refieren al número de células recombinantes que expresan receptores; en otros casos, se refieren al número de células T o PBMC o al células totales administradas.

En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células que es por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente 0,1 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto, 0,2 x 106 células/kg, 0,3 x 106 células/kg, 0,4 x 106 células/kg, 0,5 x 106 células/kg, 1 x 106 células/kg, 2,0 x 106 células/kg, 3 x 106 células/kg o 5 x 106 células/kg.

En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células comprendido entre o entre aproximadamente 0,1 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 1,0 x 107 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 5 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 2 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 0,5 x 106 células/kg y 1 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 1 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 1,0 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 1,0 x 106 células/kg y 2 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 2,0 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, entre o entre aproximadamente 2,0 x 106 células/kg y 3 x 106 células/kg, o entre o entre aproximadamente 3,0 x 106 células/kg de peso corporal del sujeto y 5 x 106 células/kg, cada uno inclusive.

En algunos casos, la dosis de células comprende entre o aproximadamente 2 x 105 de las células/kg y o aproximadamente 2 x 106 de las células/kg, como entre o aproximadamente 4 x 105 de las células/kg y o aproximadamente 1 x 106 de las células/kg o entre o aproximadamente 6 x 105 de las células/kg y o aproximadamente 8 x 105 de las células/kg. En algunos casos, la dosis de células comprende no más de 2 x 105 de las células (por ejemplo que expresan el antígeno, como células que expresan CAR) por kilogramo de peso corporal del sujeto (células/kg), como no más de o aproximadamente 3 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 4 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 5 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 6 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 7 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 8 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 9 x 105 células/kg, no más de o aproximadamente 1 x 106 células/kg, o no más de o aproximadamente 2 x 106 células/kg. En algunos casos, la dosis de células comprende por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 2 x 105 de las células (por ejemplo células que expresan antígeno, como células que expresan CAR) por kilogramo de peso corporal del sujeto (células/kg), como por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 3 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 4 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 5 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 6 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 7 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 8 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 9 x 105 células/kg, por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 1 x 106 células/kg, o por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente o 2 x 106 células/kg.

En algunos casos, las células se administran a una dosificación deseada, que en algunos aspectos incluye una dosis o número deseado de células o tipo o tipos de células y/o una proporción deseada de tipos de células. Por tanto, la dosificación de células en algunos casos se basa en un número total de células (o número por kg de peso corporal) y una proporción deseada de las poblaciones o subtipos individuales, como la proporción de CD4+ a CD8+. En algunos casos, la dosificación de células se basa en un número total deseado (o número por kg de peso corporal) de células en las poblaciones individuales o de tipos celulares individuales. En algunos casos, la dosificación se basa en una combinación de tales características, como un número deseado de células totales, una proporción deseada y un número total deseado de células en las poblaciones individuales.

En algunos casos, las poblaciones o subtipos de células, como las células T CD8+ y CD4+, se administran a o dentro de una diferencia tolerada de una dosis deseada de células totales, como una dosis deseada de células T. En algunos aspectos, la dosis deseada es un número deseado de células o un número deseado de células por unidad de peso corporal del sujeto al que se administran las células, por ejemplo, células/kg. En algunos aspectos, la dosis deseada es igual o superior a un número mínimo de células o un número mínimo de células por unidad de peso corporal. En algunos aspectos, entre las células totales, administradas a la dosis deseada, las poblaciones o subtipos individuales están presentes en o cerca de una proporción de salida deseada (como la proporción de CD4+ a CD8+), por ejemplo, dentro de una cierta diferencia o error tolerado de dicha proporción.

En algunos casos, las células se administran en o dentro de una diferencia tolerada de una dosis deseada de una o más de las poblaciones individuales o subtipos de células, como una dosis deseada de células CD4+ y/o una dosis deseada de células CD8+. En algunos aspectos, la dosis deseada es un número deseado de células del subtipo o población, o un número deseado de tales células por unidad de peso corporal del sujeto al que se administran las células, por ejemplo, células/kg. En algunos aspectos, la dosis deseada es igual o superior a un número mínimo de células de la población o subtipo, o a un número mínimo de células de la población o subtipo por unidad de peso corporal.

Por tanto, en algunos casos, la dosificación se basa en una dosis fija deseada de células totales y una proporción deseada, y/o se basa en una dosis fija deseada de uno o más, por ejemplo, cada uno, de los subtipos o subpoblaciones individuales. Por tanto, en algunos casos, la dosificación se basa en una dosis fija o mínima deseada de células T y una proporción deseada de células CD4+ a CD8+, y/o se basa en una dosis fija o mínima deseada de células CD4+ y/o CD8+.

En algunos casos, las células se administran en o dentro de un intervalo tolerado de una proporción de salida deseada de múltiples poblaciones o subtipos celulares, como células o subtipos de CD4+ y<c>D8+. En algunos aspectos, la proporción deseada puede ser una proporción específica o puede ser un intervalo de proporciones por ejemplo, en algunos casos, la proporción deseada (por ejemplo, proporción de células CD4+ a células CD8+) está entre o aproximadamente 5:1 y entre o aproximadamente 5:1 (o mayor de aproximadamente 1:5 y menor de aproximadamente 5:1), o entre o entre aproximadamente 1:3 y entre o aproximadamente 3:1 (o mayor de aproximadamente 1:3 y menor de aproximadamente 3:1), como entre o aproximadamente 2:1 y entre o aproximadamente 1:5 (o mayor de aproximadamente 1:5 y menor de aproximadamente 2:1, como entre o aproximadamente 5:1, 45:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, o 1:5. En algunos aspectos, la diferencia tolerada está dentro de aproximadamente el 1%, aproximadamente el 2%, aproximadamente el 3%, aproximadamente el 4%, aproximadamente el 5%, aproximadamente el 10%, aproximadamente el 15%, aproximadamente el 20%, aproximadamente el 25%, aproximadamente el 30%, aproximadamente el 35%, aproximadamente el 40%, aproximadamente el 45%, aproximadamente el 50% de la proporción deseada, incluyendo cualquier valor entre estos intervalos.

En casos particulares, los números y/o concentraciones de células se refieren al número de células que expresan receptores recombinantes (por ejemplo, CAR). En otros casos, los números y/o concentraciones de células se refieren al número o concentración de todas las células, células T o células mononucleares de sangre periférica (PBMC) administradas.

En algunos casos, por ejemplo, cuando el sujeto es un humano, la dosis incluye menos de aproximadamente 5 x 108 células totales que expresan receptores recombinantes (por ejemplo, CAR), células T o células mononucleares de sangre periférica (PBMC), por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 1 x 106 a 5 x 108 de tales células, como 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, o 5 x 108 de tales células totales, o el intervalo entre dos cualquiera de los valores anteriores.

En algunos casos, la dosis de células manipuladas genéticamente comprende desde o desde aproximadamente 1 x 105 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 2.5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 1 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 5 x 106 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 2.5 x 106 células T que expresan CAR totales, de 1 x 105 a 1 x 106 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 2.5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 1 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 5 x 106 células T que expresan CAR totales, de 1 x 106 a 2.5 x 106 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 2.5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 1 x 107 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 106 a 5 x 106 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 2.5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 5 x 106 a 1 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 1 x 107 a 2.5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 107 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 107 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 107 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 2.5 x 107 a 5 x 107 células T que expresan CAR totales, de 5 x 107 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 107 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 5 x 107 a 1 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 108 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales, de 1 x 108 a 2.5 x 108 células T que expresan CAR totales, o de 2.5 x 108 a 5 x 108 células T que expresan CAR totales.

En algunos casos, la dosis de células manipuladas genéticamente comprende por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 105 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 25 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 106 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 107 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2.5 x 107 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 107 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 108 células que expresan CAR, por lo menos o por lo menos aproximadamente 2,5 x 108 células que expresan CAR, o por lo menos o por lo menos aproximadamente 5 x 108 células que expresan CAR.

En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células desde o desde aproximadamente 1 x 105 a 5 x 108 células totales que expresan receptores recombinantes, células T totales o células mononucleares de sangre periférica (PBMC) totales, desde o desde aproximadamente 5 x 105 a 1 x 107 células totales que expresan receptores recombinantes, células T totales, o células mononucleares de sangre periférica (PBMCs), cada uno inclusive. En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis de células que comprende un número de células de por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 105 células totales que expresan receptores recombinantes, células T totales o células mononucleares de sangre periférica (PBMC) totales, como por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 106, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 107, por lo menos o por lo menos aproximadamente 1 x 108 de tales células. En algunos casos, el número se refiere al número total de células CD3+ o CD8+, en algunos casos también células que expresan receptores recombinantes (por ejemplo, CAR+). En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células de o de aproximadamente 1 x 105 a 5 x 108 células T CD3+ o CD8+ totales o células c D3+ o CD8+ que expresan receptores recombinantes, de o de aproximadamente 5 x 105 a 1 x 107 células T totales CD3+ o CD8+ o células CD3+ o CD8+ que expresan receptores recombinantes, o de o de aproximadamente 1 x 106 a 1 x 107 células T totales CD3+ o CD8+ o células CD3+ o CD8+ que expresan receptores recombinantes, cada una inclusive. En algunos casos, la terapia celular comprende la administración de una dosis que comprende un número de células de o de aproximadamente 1 x 105 a 5 x 108 células CD3+/CAR+ o CD8+/CAR+ totales, de o de aproximadamente 5 x 105 a 1 x 107 células CD3+/CAR+ o CD8+/CAR+ totales, o de o de aproximadamente 1 x 106 a 1 x 107 células CD3+/CAR+ o CD8+/CAR+ totales, cada una inclusive.

En algunos casos, las células T de la dosis incluyen células T CD4+, células T CD8+ o células T CD4+ y CD8+.

En algunos casos, por ejemplo, cuando el sujeto es humano, las células T CD8+ de la dosis, incluyendo en una dosis que incluye células T CD4+ y CD8+, incluye entre aproximadamente 1 x 106 y 5 x 108 células totales que expresan receptores recombinantes (por ejemplo, células CD8+ que expresan CAR, por ejemplo, en el intervalo de aproximadamente 5 x 106 a 1 x 108 de tales células, tales células 1 x 107, 2,5 x 107, 5 x 107, 7,5 x 107, 1 x 108, o 5 x 108 de tales células totales, o el intervalo entre dos cualquiera de los valores anteriores. En algunos casos, al paciente se le administran múltiples dosis, y cada una de las dosis o la dosis total puede estar dentro de cualquiera de los valores anteriores. En algunos casos, la dosis de células comprende la administración de o de aproximadamente 1 x 107 a 0,75 x 108 células T CD8+ que expresan receptores recombinantes totales, de 1 x 107 a 2,5 x 107 células T CD8+ que expresan receptores recombinantes totales, de 1 x 107 a 0,75 x 108 células T CD8+ que expresan receptores recombinantes totales, cada una inclusive. En algunos casos, la dosis de células comprende la administración de o de aproximadamente 1 x 10', 2,5 x 107, 5 x 1077,5 x 107, 1 x 108, o 5 x 108 células T CD8+ totales que expresan receptores recombinantes.

En algunos casos, la dosis de células, por ejemplo, células T recombinantes que expresan receptores, se administra al sujeto como dosis única o se administra una sola vez en un periodo de dos semanas, un mes, tres meses, seis meses, 1 año o más.

En algunos aspectos, el tamaño de la dosis se determina basándose en uno o más criterios, como la respuesta del sujeto a un tratamiento previo, por ejemplo quimioterapia, la carga de la enfermedad en el sujeto, como carga tumoral, volumen, tamaño, o grado, extensión o tipo de metástasis, estadio, y/o probabilidad o incidencia de que el sujeto desarrolle resultados tóxicos, por ejemplo<c>R<s>, síndrome de activación de macrófagos, síndrome de lisis tumoral, neurotoxicidad, y/o una respuesta inmunitaria del huésped contra las células y/o receptores recombinantes que se están administrando.

IV.MÉTODOS DE MONITORIZACIÓN, EVALUACIÓN Y MODULACIÓN DE LA TERAPIA

En algunos casos, se describen métodos de tratamiento. En algunos casos, los métodos incluyen administrar una inmunoterapia y/o una terapia celular. En algunos casos, los métodos incluyen la administración de células manipuladas genéticamente, por ejemplo, células manipuladas para que expresen un receptor recombinante como un receptor de antígeno quimérico (CAR). En algunos casos, los métodos incluyen administrar una dosis de células, por ejemplo, células que expresan CAR+, a un sujeto de tal manera que las células se encuentren dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo. En algunos casos, los métodos también incluyen monitorizar parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, como la concentración celular máxima (Cmax), para determinar si las células en el sujeto se encuentran dentro del intervalo o ventana terapéutica. En algunos casos, si las células no están dentro del intervalo o ventana terapéuticos, puede modificarse el tratamiento, por ejemplo, administrando dosis adicionales, alterando dosis posteriores o adicionales, y/o administrando un agente que pueda modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+. En algunos aspectos, los métodos descritos también incluyen un método de determinación de una dosis de un sujeto, o un método de dosificación de un sujeto, sobre la base de una evaluación de los parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, como la concentración celular máxima (Cmax), atributos del paciente y/o biomarcadores.

En algunos aspectos, se describen métodos para modular una terapia, por ejemplo, una terapia celular como una terapia de células T con células que expresan receptores recombinantes. En algunos casos, la terapia celular se modula administrando al sujeto que recibe la terapia celular un agente capaz de modular la expansión, proliferación, expansión, supervivencia, actividad y/o función de las células T CAR+, por ejemplo, aumenta o disminuye la expansión, proliferación, supervivencia y/o actividad de las células T CAR+.

En algunos casos, el agente se administra tras la evaluación de parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, concentración máxima de células T CAR+, exposición (por ejemplo, AUC) y/o nivel o concentración celular. En algunos casos, el agente se administra tras la evaluación de otros parámetros, como atributos del paciente, factores, características y/o expresión de biomarcadores, que se asocian y/o correlacionan con parámetros farmacocinéticos, respuesta, respuesta duradera y/o desarrollo de toxicidad.

En algunos casos, se describen métodos de tratamiento que implican administrar, a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor recombinante, como un receptor de antígeno quimérico (CAR) para tratar la enfermedad o afección. En algunos casos, el método comprende, después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente, la monitorización de parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, células T CAR+, en la sangre del sujeto para evaluar si las células se encuentran dentro de un intervalo o ventana terapéutica. En algunos casos, el método implica administrar un agente al sujeto capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir, la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+ en el sujeto si las células manipuladas genéticamente no están dentro del intervalo terapéutico.

En algunos casos, también se describen métodos de tratamiento que implican monitorizar, en la sangre de un sujeto, la presencia de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) para evaluar si las células están dentro de un intervalo terapéutico, en donde al sujeto se le ha administrado previamente una dosis de las células manipuladas genéticamente para tratar una enfermedad o afección. En algunos casos, los métodos también incluyen la administración de un agente capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir, la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+ en el sujeto si las células manipuladas genéticamente no se encuentran dentro del intervalo terapéutico.

En algunos aspectos, si el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto es menor que el número máximo de células T CAR+ en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de aumentar la expansión o proliferación de células T CAR+. En algunos aspectos, si el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto es mayor que el número más alto de células T CAR+ en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T CAR+.

En algunos casos, también se describen métodos para modular la actividad de las células manipuladas. En algunos casos, los métodos implican evaluar el nivel, la cantidad o la concentración de un parámetro, como una medida volumétrica de la carga tumoral o un marcador inflamatorio, en una muestra del sujeto que está en o por encima de un nivel umbral. En algunos casos, la muestra no comprende células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) y/o se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR. En algunos casos, se selecciona un sujeto para la administración de un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR. En algunos casos, se administra al sujeto el agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

En algunos casos, también se describen métodos de modulación de la actividad de células manipuladas, que implican administrar a un sujeto un agente capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto, en donde el sujeto es uno en el que el nivel, cantidad o concentración de un parámetro, por ejemplo, una medida volumétrica de la carga tumoral o un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto está en o por encima de un nivel umbral.

En algunos casos, los métodos descritos implican la administración de una célula manipulada genéticamente, por ejemplo, una célula T manipulada para que exprese un receptor recombinante, por ejemplo, CAR. En algunos casos, un agente capaz de modular, por ejemplo, aumentar o disminuir, la expansión, proliferación y/o actividad de células T CAR+, se administra antes o concurrentemente con el inicio de la administración de una dosis de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico. En algunos aspectos, antes de administrar el agente, el sujeto seleccionado está en riesgo de desarrollar una toxicidad después de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, la administración del agente es suficiente para alcanzar un pico de células T CAR+ en un intervalo o ventana terapéutica en el sujeto. En algunos casos, la administración del agente es suficiente para alcanzar concentraciones máximas de células T CAR+ en la sangre en la mayoría de los sujetos tratados con el método, o mayores o mayores a aproximadamente el 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% o 95% o más, como mayores del 75% de los sujetos tratados con el método, dentro de un intervalo o ventana terapéutica objetivo determinada.

En algunos casos, también se describen métodos de dosificación a un sujeto. En algunos casos, los métodos comprenden administrar, a un sujeto que tiene una enfermedad o afección, una dosis subóptima de células manipuladas genéticamente que comprenden células T manipuladas con un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde la dosis comprende un número de células manipuladas genéticamente que es insuficiente para lograr un pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en una mayoría de los sujetos tratados por el método o en más del 75% de los sujetos tratados por el método. En algunos casos, los métodos implican la administración de un agente para potenciar la expansión o proliferación de células CAR+ en el sujeto para lograr un pico de células T CAR+ en la sangre dentro del intervalo o ventana terapéutica, después de administrar las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, la dosis de células manipuladas genéticamente es menor o menor a aproximadamente 1 x 107 células que expresan CAR, menor o menor a aproximadamente 5 x 106 células que expresan CAR, menor o menor a aproximadamente 2,5 x 106 células que expresan CAR, menor o menor de aproximadamente 1 x 106 células que expresan CAR, menor o menor de aproximadamente 5 x 105 células que expresan CAR, menor o menor de aproximadamente 2,5 x 105 células que expresan CAR, menor o menor de aproximadamente 1 x 105 células que expresan CAR.

En algunos casos, después de la administración del agente, el método logra un aumento de la frecuencia del pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, en comparación con un método que implica la administración de la misma dosis de células manipuladas genéticamente pero sin el agente; o el pico de células CAR+ en la sangre dentro de un intervalo terapéutico determinado en el sujeto, o en la mayoría de los sujetos tratados con el método o en más del 75% de los sujetos tratados con el método.

En algunos casos, el intervalo o ventana terapéuticos se determinan como se describe en la presente, por ejemplo, en la Sección II o en otro lugar. En algunos casos, el intervalo terapéutico se basa en el intervalo de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta de más o menos el 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más, y una probabilidad estimada de toxicidad de menos o aproximadamente el 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% o menos.

En algunos casos, la ventana o intervalo terapéuticos se determina basándose en un intervalo específico de números y/o concentraciones de células, por ejemplo, células T CD3+, CD4+ o CD8+. En algunos casos, una concentración máxima ejemplar de células T CD3+CAR+ en la sangre que puede lograr una ventana terapéutica, es o incluye entre aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 células T CD3+ CAR+ por microlitro en la sangre y aproximadamente 200, 300, 400, 500, 600, 700 o 750, células T CD3+ CAR+ por microlitro en la sangre. En algunos casos, una concentración pico ejemplar de células T CD8+ CAR+ en la sangre que puede lograr una ventana terapéutica, es o incluye entre aproximadamente 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50 células T CD8+ CAR+ por microlitro en la sangre y aproximadamente 200, 300, 400, 500, 600, 700 o 750, células T CD8+ CAR+ por microlitro en la sangre.

En algunos casos, los métodos también incluyen monitorizar las células T CAR+ en la sangre del sujeto después de administrar la dosis de células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, se monitoriza la presencia de células T CAR+ en la sangre del sujeto por lo menos 8 días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, se monitoriza al sujeto para determinar células T CAR+ en la sangre en un momento comprendido entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, ambos inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

También se describen métodos para evaluar la probabilidad de una respuesta o una respuesta duradera, y métodos para administrar un agente terapéutico en consecuencia. En algunos casos, los métodos implican detectar, en una muestra biológica de un sujeto, niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios y/o niveles máximos de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR), en donde al sujeto se le ha administrado previamente una dosis de las células manipuladas genéticamente para tratar una enfermedad o afección. En algunos casos, los métodos implican comparar, individualmente, los niveles máximos con un valor umbral, determinando de este modo una probabilidad de que un sujeto logre una respuesta duradera a la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, es probable que el sujeto logre una respuesta o una respuesta duradera si los niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios están por debajo de un valor umbral y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si los niveles máximos del uno o más marcadores inflamatorios están por encima de un valor umbral. En algunos casos, es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra dentro de un intervalo terapéutico entre un valor umbral inferior y un valor umbral superior, y no es probable que el sujeto logre una respuesta duradera si el nivel máximo de las células manipuladas genéticamente se encuentra por debajo del valor umbral inferior o por encima del valor umbral superior.

En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10%, o dentro del 5% por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio y/o está dentro de una desviación estándar por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio en una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o marcador inflamatorio, opcionalmente dentro del 50%, dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10%, o dentro del 5% por encima de dicho cambio de veces más alto, medido en por lo menos un sujeto de entre una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o marcador inflamatorio medido en más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% de los sujetos de una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, la pluralidad de sujetos de control es un grupo de sujetos antes de recibir una dosis de las células manipuladas genéticamente, en donde: cada uno de los sujetos de control del grupo mostraba un pico de células T CAR+ en la sangre mayor que el pico más alto de células T CAR+ en el intervalo terapéutico; cada uno de los sujetos de control del grupo pasó a desarrollar en toxicidad, opcionalmente una neurotoxicidad o un síndrome de liberación de citoquinas (CRS), una neurotoxicidad de grado 2 o de grado 3 o superior o un CRS de grado 3 o superior, después de recibir una dosis de las células manipuladas para tratar la misma enfermedad o afección; cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta, opcionalmente una respuesta completa (CR) o una respuesta parcial (PR), después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente; y/o cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta duradera, opcionalmente durante o aproximadamente o más de o aproximadamente 3 meses, o durante o aproximadamente o más de o aproximadamente 6 meses, después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, los métodos también implican administrar un agente o una terapia alternativa, basándose en la evaluación de la probabilidad de lograr una respuesta o una respuesta duradera. En algunos casos, si se determina que no es probable que el sujeto obtenga una respuesta o una respuesta duradera, se selecciona al sujeto para el tratamiento con un agente terapéutico o con un tratamiento terapéutico alternativo distinto de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, si se determina que no es probable que el sujeto logre una respuesta o una respuesta duradera, se administra al sujeto un agente terapéutico o un tratamiento terapéutico alternativo distinto de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, también se describen métodos de tratamiento que implican seleccionar un sujeto para la administración de un agente terapéutico y/o un tratamiento terapéutico alternativo. En algunos casos, los métodos implican seleccionar un sujeto que haya recibido la administración de células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en el que: los niveles máximos de uno o más marcadores inflamatorios en una muestra del sujeto están por encima de un valor umbral; y/o el nivel máximo de células T que comprenden un receptor de antígeno quimérico (CAR) en una muestra del sujeto está por debajo de un valor umbral inferior o está por encima de un valor umbral superior.

En algunos casos, la respuesta es una respuesta completa (CR), una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR). En algunos casos, la respuesta es duradera durante o durante más de 3 meses, 4 meses, 5 meses o 6 meses.

En algunos casos, el nivel máximo es o incluye el nivel máximo de uno o más marcadores inflamatorios, por ejemplo, proteína C reactiva (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-alfa, MIP-1-alfa, MIP-1-beta, MCP-1, CXCL10 o CCL13.

En algunos casos, se evalúa el nivel máximo de uno o más marcadores inflamatorios y el valor umbral está dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10% o dentro del 5% y/o está dentro de una desviación estándar de la mediana o media del nivel máximo del marcador inflamatorio según se determina entre un grupo de sujetos de control que han recibido la administración de las células manipuladas genéticamente, en donde cada uno de los sujetos del grupo no logró una respuesta duradera, opcionalmente una CR y/o PR, opcionalmente a lo más de 3 meses o 6 meses después de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, los sujetos de control mostraron enfermedad estable (SD) o enfermedad progresiva (PD) después de la administración de las células manipuladas genéticamente, opcionalmente a o más de 3 meses o 6 meses después de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, el nivel máximo es un nivel máximo de células T CAR+, o un subconjunto de células T CD8+ de las mismas.

En algunos casos, el valor umbral inferior y el valor umbral superior son el extremo inferior y el superior, respectivamente, de un intervalo terapéutico de pico de células T CD3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ del mismo, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta de más de o más de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de toxicidad menor de o aproximadamente el 30%. En algunos casos, el intervalo terapéutico es el intervalo en el que la probabilidad estimada de toxicidad es menor del 20%, menor del 15%, menor del 10% o menor del 5% y la probabilidad estimada de lograr una respuesta es mayor del 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o más.

En algunos casos, la probabilidad de respuesta se basa en una respuesta que es una respuesta completa (CR), una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR), opcionalmente en donde la respuesta es duradera, opcionalmente duradera durante o durante por lo menos 3 meses o durante o durante por lo menos 6 meses.

En algunos casos, el pico de células T CAR+ se determina como el número de células T CAR+ por microlitro en la sangre del sujeto. En algunos casos, el valor umbral superior está comprendido entre o entre aproximadamente 300 células por microlitro y 1000 células por microlitro o 400 células por microlitro y 600 células por microlitro, o es de aproximadamente 300 células por microlitro, 400 células por microlitro, 500 células por microlitro, 600 células por microlitro, 700 células por microlitro, 800 células por microlitro, 900 células por microlitro o 1000 células por microlitro; o el valor umbral inferior es menor o menor de aproximadamente 10 células por microlitro, 9 células por microlitro, 8 células por microlitro, 7 células por microlitro, 6 células por microlitro, 5 células por microlitro, 4 células por microlitro, 3 células por microlitro, 2 células por microlitro o 1 célula por microlitro.

En algunos casos de los métodos descritos en la presente, entre una pluralidad de sujetos tratados, el método logra un aumento en el porcentaje de sujetos que logran una respuesta duradera, opcionalmente una respuesta completa (CR) o una respuesta objetiva (OR) o una respuesta parcial (PR), opcionalmente duradera durante o durante más de 3 meses o durante o durante más de 6 meses, en comparación con un método que no comprende la administración del agente. En algunos casos, el aumento es mayor o mayor de aproximadamente 1,2 veces, 1,5 veces, 2 veces, 3 veces, 4 veces, 5 veces, 10 veces o más.

En algunos casos, por lo menos el 15%, por lo menos el 20%, por lo menos el 25%, por lo menos el 30%, por lo menos el 35%, por lo menos el 40% o por lo menos el 50% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una respuesta completa (CR) que es duradera durante o durante más de 3 meses o durante o durante más de 6 meses; y/o por lo menos el 25%, por lo menos el 30%, por lo menos el 40%, por lo menos el 50%, por lo menos el 60% o por lo menos el 70% de los sujetos tratados de acuerdo con el método logran una respuesta objetiva (OR) que es duradera durante o durante más de 3 meses o durante o durante más de 6 meses. En algunos casos, más de o más de aproximadamente el 50%, más de o más de aproximadamente el 60%, más de o más de aproximadamente el 70%, o más de o más de aproximadamente el 80% de los sujetos tratados de acuerdo con el método no muestran un síndrome de liberación de citoquinas (CRS) de grado 3 o más y/o no muestran una neurotoxicidad de grado 2 o más o de grado 3 o más; o más de o más de aproximadamente el 40%, más de o más de aproximadamente el 50% o más de o más de aproximadamente el 55% de los sujetos tratados de acuerdo con el método no presentan neurotoxicidad ni CRS.

En algunos casos, los parámetros, como atributos, factores, características del paciente y/o la enfermedad o afección, y/o expresión de biomarcadores, se evalúan antes de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular. En algunos casos, los parámetros, como atributos, factores, características del paciente y/o la enfermedad o afección, y/o expresión de biomarcadores, se evalúan después de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular. En algunos casos, los parámetros incluyen niveles o mediciones, por ejemplo, niveles máximos, de atributos, factores, características del paciente y/o la enfermedad o afección, y/o expresión de biomarcadores, que pueden evaluarse después de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular.

En algunos casos, el parámetro es SPD y en algunos casos, el desarrollo de toxicidad, por ejemplo, CRS o NT, se correlaciona con el valor de SPD que está por encima de un valor umbral. En algunos casos, la medida volumétrica es SPD, y el valor umbral es o es de aproximadamente 30 por cm2, es o es de aproximadamente 40 por cm2, es o es de aproximadamente 50 por cm2, es o es de aproximadamente 60 por cm2, o es o es de aproximadamente 70 por cm2. En algunos casos, la medida volumétrica es SPD y el valor umbral es o es de aproximadamente 30 por cm2, es o es de aproximadamente 40 por cm2, es o es de aproximadamente 50 por cm2, es o es de aproximadamente 60 por cm2, o es o es de aproximadamente 70 por cm2.

En algunos casos, el parámetro es LDH y en algunos casos, el desarrollo de toxicidad, por ejemplo, CRS o NT, se correlaciona con el valor de LDH que está por encima de un valor umbral. En algunos casos, el marcador inflamatorio es LDH y el valor umbral es o es de aproximadamente 300 unidades por litro, es o es de aproximadamente 400 unidades por litro, es o es de aproximadamente 500 unidades por litro o es o es de aproximadamente 600 unidades por litro.

A. Parámetros farmacocinéticos

En algunos casos, los casos descritos implican administrar al sujeto un agente capaz de modular la expansión, proliferación y/o actividad de células T CAR+, basándose en la evaluación de parámetros farmacocinéticos (PK). En algunos casos, los parámetros farmacocinéticos incluyen cualquiera de los descritos en la presente, por ejemplo, en la Sección II.C. En algunos casos, los parámetros farmacocinéticos incluyen la concentración plasmática máxima (pico) (Cmax), el tiempo pico (es decir, cuando se produce la concentración plasmática máxima (Cmax); Tmax), la concentración plasmática mínima (es decir, la concentración plasmática mínima entre dosis de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+; Cmin), la semivida de eliminación (T<1/2>) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática de las células T CAR+ del agente terapéuticos; AUC), después de la administración.

En algunos casos, si los parámetros farmacocinéticos evaluados indican que la dosis de células administrada no está dentro o está fuera de un intervalo y/o ventana terapéuticos, puede administrarse al sujeto un agente capaz de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células T c Ar . En algunos casos, el intervalo y/o ventana terapéuticos son cualquiera de los descritos en la presente y/o están asociados con cualquiera de los parámetros farmacocinéticos descritos en la presente.

En algunos casos, si un parámetro farmacocinético, por ejemplo, el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto, es menor del número más bajo del parámetro farmacocinético, por ejemplo, el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente que aumenta la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+.

En algunos casos, si un parámetro farmacocinético, por ejemplo, el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto, es superior al número más alto del parámetro farmacocinético, por ejemplo, el número máximo de células T CAR+ en la sangre del sujeto en el intervalo terapéutico, se administra al sujeto un agente que disminuye la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+.

En algunos casos, el agente se administra después de la evaluación de los parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, la concentración máxima de células T CAR+, la exposición (por ejemplo, AUC) y/o el nivel o concentración celular.

En algunos aspectos, los casos descritos implican evaluar y/o monitorizar parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, el número o la concentración de células T CAR+ en la sangre. En algunos casos, los métodos implican monitorizar el número y/o la concentración de células T CAR+ en la sangre del sujeto para evaluar si las células están dentro de un intervalo y/o ventana terapéuticos. En algunos casos, los métodos implican administrar un agente al sujeto capaz de modular la expansión de células T CAR+, opcionalmente aumentar o disminuir la expansión de células T CAR+, en el sujeto, si los sujetos no están dentro del intervalo terapéutico.

En algunos casos, el intervalo y/o ventana terapéuticos se determinan y/o se basan en cualquier criterio basado en la evaluación de los parámetros descritos en la presente. En algunos casos, el intervalo y/o ventana terapéuticos se basan en el intervalo de picos de células T c D3+ CAR+, o un subconjunto de células T CD8+CAR+ de las mismas, en la sangre entre uno o más sujetos tratados previamente con las células manipuladas genéticamente que se asocia con una probabilidad estimada de respuesta mayor o mayor de aproximadamente el 65% y una probabilidad estimada de toxicidad menor o de aproximadamente el 30%; o un pico de células T CD3+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o entre aproximadamente 10 células por microlitro y 500 células por microlitro; o un pico de células T CD8+CAR+ en la sangre, después de la administración de las células manipuladas genéticamente, que esté entre o entre aproximadamente 2 células por microlitro y 200 células por microlitro.

B. Atributos de los pacientes y biomarcadores

En algunos casos, los casos descritos implican evaluar parámetros como atributos, factores, características del paciente y/o la enfermedad o afección, y/o expresión de biomarcadores. En algunos casos, los parámetros evaluados están asociados y/o correlacionados con parámetros farmacocinéticos, respuesta, respuesta duradera y/o desarrollo de toxicidad. En algunos casos, los parámetros incluyen factores del paciente o atributos del paciente. En algunos casos, los parámetros incluyen atributos, factores, características de la enfermedad o afección. En algunos casos, los parámetros se evalúan antes del tratamiento, por ejemplo, antes de la administración de la terapia celular. En algunos casos, los parámetros se evalúan después del tratamiento, por ejemplo, después de la administración de una o más dosis de la terapia celular.

En algunos casos, el parámetro es o incluye parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, la concentración plasmática máxima (pico) (Cmax), el tiempo de pico (es decir, cuando se produce la concentración plasmática máxima (Cmax); Tmax), la concentración plasmática mínima (es decir, la concentración plasmática mínima entre dosis de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+s; Cmin), la semivida de eliminación (T<1/2>) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática de las células T CAR+ del agente terapéutico; AUC; como AUC<0-28>).

En algunos casos, el parámetro es o incluye uno o más factores indicativos del estado del paciente y/o de la enfermedad o condición del paciente. En algunos casos, el parámetro es indicativo de la carga tumoral. En algunos casos, el factor indicativo de la carga tumoral es una medida volumétrica del tumor o tumores. En algunos casos, la medida volumétrica es una medida de la lesión o lesiones, como el tamaño del tumor, el diámetro del tumor, el volumen del tumor, la masa del tumor, la carga o volumen del tumor, el edema relacionado con el tumor, la necrosis relacionada con el tumor y/o el número o extensión de las metástasis. En algunos casos, la medida volumétrica del tumor es una medida bidimensional. Por ejemplo, en algunos casos, el área de la lesión o lesiones se calcula como el producto del diámetro más largo y el diámetro perpendicular más largo de todos los tumores medibles. En algunos casos, la medida volumétrica del tumor es una medida unidimensional. En algunos casos, el tamaño de las lesiones medibles se evalúa como el diámetro más largo. En algunos casos, se mide la suma de los productos de los diámetros (SPD), los diámetros tumorales más largos (LD), la suma de los diámetros tumorales más largos (SLD), la necrosis, el volumen tumoral, el volumen de necrosis, la relación necrosis-tumor (NTR), el edema peritumoral (PTE) y la relación edema-tumor (ETR).

Los métodos ejemplares para medir y evaluar la carga tumoral se incluyen los descritos en, por ejemplo, Carceller et al., Pediatr Blood Cáncer. (2016) 63(8): 1400-1406 y Eisenhauer et al., Eur J Cáncer. (2009) 45(2):228-247. En algunos casos, la volumetría es una suma de los productos de los diámetros (SPD) medida mediante la determinación de la suma de los productos de los diámetros perpendiculares más largos de todos los tumores medibles. En algunos aspectos, el tumor o la lesión se miden en una dimensión con el diámetro más largo (LD) y/o determinando la suma de los diámetros tumorales más largos (SLD) de todas las lesiones medibles. En algunos casos, la medida volumétrica del tumor es una cuantificación volumétrica de la necrosis tumoral, como el volumen de necrosis y/o la relación necrosis-tumor (NTR), consultar Monsky et al., Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961. En algunos aspectos, la medida volumétrica del tumor es una cuantificación volumétrica del edema relacionado con el tumor, como el edema peritumoral (PTE) y/o la relación edema-tumor (ETR). En algunos casos, la medición puede realizarse usando técnicas de imagenología como la tomografía computarizada (TC), la tomografía por emisión de positrones (PET) y/o la resonancia magnética (MRI) del sujeto.

En algunos casos, la medida volumétrica es SPD y en algunos casos, el desarrollo de toxicidad, por ejemplo, CRS o NT, se correlaciona con el valor SPD que está por encima de un valor umbral. En algunos casos, la medida volumétrica es SPD, y el valor umbral es o es de aproximadamente 30 por cm2, es o es de aproximadamente 40 por cm2, es o es de aproximadamente 50 por cm2, es o es de aproximadamente 60 por cm2, o es o es de aproximadamente 70 por cm2. En algunos casos, la medida volumétrica es SPD y el valor umbral es o es de aproximadamente 30 por cm2, es o es de aproximadamente 40 por cm2, es o es de aproximadamente 50 por cm2, es o es de aproximadamente 60 por cm2, o es o es de aproximadamente 70 por cm2.

En algunos casos, la medida volumétrica del tumor se determina en una sesión de selección, como una evaluación rutinaria o una extracción de sangre para confirmar y/o identificar la afección o enfermedad en el sujeto.

En algunos aspectos, el parámetro, por ejemplo, mediciones de la carga tumoral, se correlaciona y/o se asocia con parámetros farmacocinéticos. En algunos casos, el parámetro, incluyendo los parámetros farmacocinéticos, se asocia con la respuesta y/o la respuesta duradera, y/o un riesgo de desarrollar toxicidad, por ejemplo, CRS o neurotoxicidad (NT).

En algunos casos, el parámetro es o incluye por lo menos uno o un panel de biomarcadores. En algunos casos, la expresión y/o presencia del biomarcador se asocia y/o correlaciona con parámetros farmacocinéticos, respuesta, respuesta duradera y/o desarrollo de toxicidad. En algunos casos, el parámetro se compara con un valor de referencia particular, por ejemplo, los asociados con respuesta y/o respuesta duradera, y/o un riesgo de desarrollar toxicidad, por ejemplo, CRS o neurotoxicidad (NT). En algunos casos, los métodos también implican administrar al sujeto un agente capaz de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células T CAR+, sobre la base de la evaluación de los factores y/o biomarcadores del paciente.

En algunos aspectos, los casos implican obtener una muestra biológica para detectar el parámetro y/o evaluar la presencia de y/o detectar el parámetro. En algunos casos, la muestra biológica se obtiene generalmente en el plazo de 4 horas a 12 meses desde la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores, como generalmente en el plazo o en el plazo de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 1314, 21, 28, 30, 60 o 90 o más días, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más semanas, o 1,2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 o más meses, después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores. En algunos casos, el parámetro se evalúa o mide en un sujeto antes de la administración de la terapia celular o poco después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores, como generalmente en el plazo de 4 horas a 3 días desde la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de las anteriores, como generalmente en el plazo de 1 día, 2 días o 3 días después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de las anteriores. En algunos casos, se evalúa o mide el parámetro. En algunos casos, el parámetro se evalúa generalmente en un plazo de 4 horas a 12 meses después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores, como generalmente en un plazo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 o 90 o más días, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más semanas, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 o más meses, después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores.

En algunos aspectos, el parámetro, por ejemplo, factor del paciente y/o biomarcador, se correlaciona y/o se asocia con parámetros farmacocinéticos. En algunos casos, el parámetro, incluyendo los parámetros farmacocinéticos, se asocia con la respuesta y/o la respuesta duradera, y/o un riesgo de desarrollar toxicidad, por ejemplo, CRS o neurotoxicidad (NT).

En algunos casos, el parámetro es un biomarcador. En algunos casos, el parámetro es o incluye la expresión del biomarcador y/o el número, concentración y/o porcentaje de células que expresan un biomarcador particular. En algunos casos, el parámetro incluye biomarcadores o cada biomarcador en un panel que comprende una pluralidad de biomarcadores. En algunos casos, el biomarcador es o comprende una citoquina y/u otro factor sérico o sanguíneo, como cualquiera de los descritos en la presente. En algunos casos, el biomarcador o cada biomarcador en un panel es una citoquina que, en algunos casos, puede ser una quimioquina. En algunos casos, los biomarcadores o cada biomarcador de un panel comprende un receptor soluble. En algunos casos, los biomarcadores o cada biomarcador de un panel comprende una proteína sérica soluble. En la presente se describen biomarcadores o paneles de biomarcadores ejemplares.

En algunos casos, el parámetro es o incluye niveles y/o concentraciones de un analito sanguíneo. En algunos casos, el parámetro es o incluye niveles y/o concentraciones de un marcador inflamatorio. En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de interleucina-7 (IL-7), IL-15, proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a). En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de IL-6, IL-10, IL-16, interferón gamma (IFN-y), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), MIP-1a, MIP-1 p, proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1), y quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10). En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de ferritina, proteína C reactiva (CRP), dímero D (producto de degradación de la fibrina), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-a, MIP-1a y MIP-1 p. En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de LDH, ferritina, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-a, IFN-a2, MCP-1 y/o MIP-1 p. En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de CRP, amiloide sérico A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-a, MIP-1a, MIP-1 p, Mc P-1, CXCL10 y ligando 13 de quimiocina con motivo C-C (CCL13). En algunos casos, el analito sanguíneo y/o marcador inflamatorio es o incluye niveles y/o concentraciones de LDH, ferritina, CRP, dímero D, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-a, IFN-y y/o MIP-1a.

En algunos casos, se detecta y evalúa un marcador inflamatorio que es o incluye el nivel o la presencia de proteína C reactiva (CRP), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, ferritina, p2 microglobulina (p2-M) o lactato deshidrogenasa (LDH). En algunos casos, el marcador inflamatorio se evalúa usando un ensayo inmunológico. Por ejemplo, para detectar el marcador inflamatorio puede usarse un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), un inmunoensayo enzimático (EIA), un radioinmunoensayo (RIA), una resonancia de plasmones de superficie (SPR), transferencia Western, un ensayo de flujo lateral, una inmunohistoquímica, una matriz de proteínas o una inmuno-PCR (iPCR). En algunos casos, el uso de los artículos de fabricación incluye detectar un marcador inflamatorio indicativo de la carga tumoral. En algunos casos, el ensayo o la evaluación de un marcador inflamatorio se realiza usando citometría de flujo. En algunos casos, el reactivo es una proteína soluble que se une al marcador inflamatorio. En algunos ejemplos, el reactivo es una proteína que se une a la proteína C reactiva (CRP), la velocidad de sedimentación globular (ESR), la albúmina, la ferritina, la p2 microglobulina (p2-M) o la lactato deshidrogenasa (LDH).

En algunos casos, el biomarcador, por ejemplo, marcador inflamatorio, es o incluye la proteína C reactiva (CRP). En algunos casos, la CRP se evalúa usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro para obtener una medición cuantitativa de la CRP humana a partir de una muestra como suero, plasma o sangre. En algunos ejemplos, la CRP se detecta usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) humano. En algunos casos, el biomarcador, por ejemplo marcador inflamatorio, es o incluye la velocidad de sedimentación globular (ESR). En algunos casos, la ESR se evalúa midiendo la distancia (en milímetros por hora) en la que han descendido los glóbulos rojos tras separarse del plasma en una pipeta o tubo vertical. En algunos casos, el biomarcador es o incluye albúmina. En algunos aspectos, la albúmina se evalúa usando una prueba colorimétrica o un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro. En algunos ejemplos, la albúmina se detecta usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) humano. En algunos casos, el biomarcador, por ejemplo, marcador inflamatorio es o incluye ferritina o p2 microglobulina. En algunos casos, la ferritina o p2 microglobulina se evalúa usando un inmunoensayo o se detecta usando un ELISA. En algunos aspectos, el biomarcador, por ejemplo, marcador inflamatorio es o incluye la lactato deshidrogenasa (LDH), y la LDH se evalúa usando una prueba colorimétrica o un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro.

En algunos casos, el uno o más biomarcadores incluyen dos o más biomarcadores, por ejemplo, citoquinas, como citoquinas inflamatorias, y/o atributos del paciente, por ejemplo, carga tumoral y/o expresión de marcadores inflamatorios. En algunos aspectos, los dos o más biomarcadores se miden simultáneamente a partir de la misma muestra. En otros aspectos, los dos o más biomarcadores se miden secuencialmente a partir de la misma muestra o de diferentes muestras del sujeto.

En algunos casos, el nivel, la cantidad, la concentración u otro parámetro del biomarcador o del panel de biomarcadores son indicativos de parámetros farmacocinéticos de las células, por ejemplo, la concentración plasmática máxima (pico) (Cmax), el tiempo de pico (es decir, cuando se produce la concentración plasmática máxima (Cmax); Tmax), la concentración plasmática mínima (es decir, la concentración plasmática mínima entre dosis de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+; Cmin), la semivida de eliminación (T<1/2>) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática de células T CAR+ del agente terapéutico; AUC; como AUC<0-28>). En algunos casos, el nivel, la cantidad, la concentración del biomarcador o el panel de biomarcadores son indicativos del riesgo de desarrollar una toxicidad, por ejemplo, neurotoxicidad, como neurotoxicidad grave y/o CRS, como sCRS. En algunos casos, el nivel, la cantidad, la concentración del biomarcador o el panel de biomarcadores son indicativos de, se correlacionan con y/o se asocian con la probabilidad de respuesta, por ejemplo, respuesta objetiva (OR), respuesta completa (CR) o respuesta parcial (PR), o respuesta duradera, por ejemplo, respuesta a los 3 meses.

En algunos casos, el parámetro es o incluye niveles, concentraciones y/o números de proteína C reactiva (CRP), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, ferritina, p2 microglobulina (p2-M), lactato deshidrogenasa (LDH) y/o es una citoquina inflamatoria. En algunos casos, el marcador inflamatorio es LDH. En algunos casos, el nivel, la concentración y/o el número de LDH es un sustituto de la carga de enfermedad, por ejemplo, para tumores o cánceres, y puede ser útil para la evaluación del riesgo de neurotoxicidad potencial y/o la dosificación adaptada al riesgo o el ajuste del tratamiento de ciertos sujetos. En algunos aspectos, los niveles de LDH pueden evaluarse solos y/o en combinación con otro parámetro de pretratamiento, como otra medida o indicador de la carga de enfermedad, como una medición volumétrica del tumor como la suma de las dimensiones del producto (SPD) u otra medición volumétrica de la carga de enfermedad basada en CT o MRI, como cualquiera de las descritas en la presente. En algunos aspectos, se evalúan uno o más parámetros indicativos de la carga de enfermedad, y en algunos contextos pueden indicar la presencia, ausencia o grado de riesgo de desarrollar neurotoxicidad tras la terapia con células T. En algunos aspectos, el uno o más parámetros incluyen LDH y/o una medición volumétrica del tumor. En algunos casos, el parámetro es SPD y/o LDH.

En algunos casos, el parámetro es un atributo, factor y/o característica del paciente. En algunos casos, el parámetro es una medición pretratamiento, por ejemplo, una medición de referencia, una medición previa a la infusión y/o una medición previa a la linfodepleción. En algunos casos, el parámetro se evalúa antes del tratamiento, por ejemplo, antes de la administración de la terapia celular, o de una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de las anteriores. y/o linfodepleción previa a la terapia celular. En algunos casos, el parámetro se evalúa antes de la linfodepleción.

En algunos casos, la medición pretratamiento es o incluye el nivel y/o la concentración de proteína C reactiva (CRP), dímero D (producto de degradación de la fibrina), ferritina, IFN-a2, IFN-<y>, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, lactato deshidrogenasa (LDH), proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), MIP-1 p, MCP-1, SAA-1 y/o TNF-a.

En algunos casos, una medición pretratamiento más alta o más baja de uno o más de los parámetros se correlaciona y/o se asocia con parámetros farmacocinéticos más altos o más bajos, por ejemplo, Cmax o AUC, de células T CAR+ y/o una tasa y/o incidencia de toxicidad más alta o más baja, por ejemplo, CRS o NT, como CRS grave o NT grave. En algunos casos, una medición más alta o más baja de uno o más de los parámetros antes del tratamiento se correlaciona con y/o se asocia con una respuesta más alta o más baja, por ejemplo, ORR incluyendo CR y PR, y/o una durabilidad más alta o más baja de la respuesta, por ejemplo, respuesta a los 3 meses.

En algunos casos, una medición previa al tratamiento más alta de uno o más de los parámetros se correlaciona y/o se asocia con parámetros farmacocinéticos más altos, por ejemplo, Cmax o AUC, de células T CAR+ y/o tasa y/o incidencia de toxicidad más altas, por ejemplo, CRS o NT, como CRS grave o NT grave.

En algunos casos, el parámetro es o incluye una medición postratamiento, por ejemplo, una medición pico o máxima después de la administración de la terapia, por ejemplo, terapia celular, y/o una medición posinfusión y/o medición después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de las anteriores. En algunos casos, la medición pico es o incluye el valor pico o máximo dentro de un periodo de tiempo después de una cierta cantidad de tiempo después de la administración de la terapia celular y/o inicio de la misma, como en el plazo de o en el plazo de aproximadamente 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 o 90 o más días, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 o más semanas, o 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 o más meses, después de la administración de la terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores.

En algunos casos, el parámetro es o incluye el nivel y/o la concentración máximos de marcadores inflamatorios, incluyendo citoquinas o quimiocinas. En algunos casos, las mediciones pico más bajas de uno o más de los parámetros se correlacionan y/o se asocian con parámetros farmacocinéticos más altos, por ejemplo, Cmax o AUC, de células T CAR+ y/o tasa y/o incidencia de toxicidad más altas, por ejemplo, CRS o NT, como c Rs grave o NT grave. En algunos casos, una medición pretratamiento más baja de uno o más de los parámetros se correlaciona con y/o se asocia con la respuesta, por ejemplo, ORR incluyendo CR y PR, y/o una durabilidad de la respuesta más baja, por ejemplo, respuesta a los 3 meses.

En algunos casos, el parámetro es o incluye el nivel máximo y/o la concentración de marcadores inflamatorios, incluyendo citoquinas o quimiocinas. En algunos casos, el parámetro es o incluye el nivel máximo y/o la concentración de biomarcadores, incluyendo el ligando 13 de quimioquina con motivo C-C (CCL13), la proteína C reactiva (CRP), la quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10), la IL-2, la IL-5, la IL-6, la IL-7, la IL-8, la IL-10, la IL-15, la IL-16, interferón gamma (IFN-<y>), linfotoxina alfa (LT-a), proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1), proteína 1 inflamatoria de macrófagos alfa (MIP-1a), MIP-1 p, amiloide sérico A1 (SAA-1), factor de crecimiento transformante beta (TGF-p) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a). En algunos casos, niveles máximos y/o concentraciones más altos de uno o más de los parámetros se correlacionan y/o se asocian con una tasa y/o incidencia más altas de toxicidad, por ejemplo, CRS o NT, como CRS grave o NT grave. En algunos casos, niveles máximos y/o concentraciones más bajos se correlacionan y/o se asocian con una respuesta más alta, por ejemplo, ORR incluyendo CR y PR, y/o una mayor durabilidad de la respuesta, por ejemplo, respuesta a los 3 meses.

En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10%, o dentro del 5% por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio y/o está dentro de una desviación estándar por encima del valor medio de la medida volumétrica o del marcador inflamatorio en una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o marcador inflamatorio, opcionalmente dentro del 50%, dentro del 25%, dentro del 20%, dentro del 15%, dentro del 10%, o dentro del 5% por encima de dicho cambio de veces más alto, medido en por lo menos un sujeto de entre una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, el valor umbral es un valor que: está por encima del valor más alto de la medida volumétrica o marcador inflamatorio medido entre más del 75%, 80%, 85%, 90%, 95% o 98% de los sujetos de una pluralidad de sujetos de control. En algunos casos, la pluralidad de sujetos de control es un grupo de sujetos antes de recibir una dosis de las células manipuladas genéticamente, en donde: cada uno de los sujetos de control del grupo mostraba un pico de células T CAR+ en la sangre superior al pico más alto de células T CAR+ en el intervalo terapéutico; cada uno de los sujetos de control del grupo pasó a desarrollar en toxicidad, opcionalmente una neurotoxicidad o un síndrome de liberación de citoquinas (CRS), una neurotoxicidad de grado 2 o 3 o superior o un CRS de grado 3 o superior, después de recibir una dosis de las células manipuladas genéticamente para tratar la misma enfermedad o afección; cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta, opcionalmente una respuesta completa (CR) o una respuesta parcial (PR), después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente; y/o cada uno de los sujetos de control del grupo no desarrolló una respuesta duradera, opcionalmente durante o aproximadamente o más de o aproximadamente 3 mesess, durante o aproximadamente o más de o aproximadamente 6 meses, después de la administración de la dosis de células manipuladas genéticamente.

C. Reactivos para la medición

En algunos casos, el parámetro, por ejemplo, factor del paciente, biomarcador, marcador inflamatorio y/o citoquina, se detecta usando uno o más reactivos capaces de detectar o que son específicos para el parámetro. En algunos casos, también se describen kits y artículos de fabricación, para la detección o evaluación de los parámetros y/o para modular la terapia, por ejemplo, la terapia celular.

En algunos casos, también se describen instrucciones para usar el reactivo para analizar una muestra biológica de un sujeto candidato a tratamiento, opcionalmente con una terapia celular, dicha terapia celular incluyendo opcionalmente una dosis o composición de células manipuladas genéticamente que expresan un receptor recombinante. En algunos casos de uso de los artículos de fabricación, se detecta o evalúa el nivel o la presencia de ligando 13 de quimioquina con motivo C-C (CCL13), proteína C reactiva (CRP), quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10), dímero D (producto de degradación de la fibrina), ferritina, IFN-a2, interleucina-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, interferón gamma (IFN-y), lactato deshidrogenasa (LDH), proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), MIP-1 p, proteína quimioatrayente de monocitos 1 (MCP-1), SAA-1, amiloide sérico A1 (SAA-1), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a). En algunos casos de uso de los artículos de fabricación, se detecta y evalúa el nivel o la presencia de proteína C reactiva (CRP), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, ferritina, p2 microglobulina (p2-M) o lactato deshidrogenasa (LDH). También se describen métodos para detectar y evaluar uno o más atributos del paciente, factores y/o biomarcadores indicativos de la carga tumoral.

En algunos casos, la medición del valor de uno o más parámetros, por ejemplo, biomarcadores, comprende poner en contacto un reactivo capaz de detectar directa o indirectamente el analito con la muestra biológica y determinar la presencia o ausencia, nivel, cantidad o concentración del analito en la muestra biológica. En algunos casos, se detectan y evalúan el uno o más parámetros, por ejemplo, biomarcadores, es ligando 13 de quimioquina con motivo C-C (CCL13), proteína C reactiva (CRP), quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10), dímero D (producto de degradación de la fibrina), ferritina, IFN-a2, interleucina-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, interferón gamma (IFN-<y>), lactato deshidrogenasa (LDH), proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), MIP-1 p, proteína quimioatrayente de monocitos 1 (MCP-1), SAA-1, amiloide sérico A1 (SAA-1), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a). En algunos casos de uso de los artículos de fabricación, se detecta y evalúa el nivel o la presencia de proteína C reactiva (CRP), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, ferritina, p2 microglobulina (p2-M) o lactato deshidrogenasa (LDH). En algunos casos, el uno o más parámetros, por ejemplo, biomarcadores, es o incluye LDH.

En algunos aspectos, el reactivo es una molécula de unión que se une específicamente al biomarcador. Por ejemplo, en algunos casos, el reactivo es un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo. En algunos casos, el reactivo es o incluye un sustrato o compañero de unión del biomarcador.

En algunos casos, se detecta o determina la presencia, ausencia o nivel, cantidad, concentración y/u otra medida de LDH en una muestra. Se conocen varios métodos para detectar o determinar la LDH. Por ejemplo, para detectar la LDH en la muestra puede usarse un ensayo que mide la conversión de lactato a piruvato por LDH a través de la reducción de NAD+ a nA d H. En algunos casos, la muestra se pone en contacto con lactato en presencia de coenzima NAD que, como medida de LDH en la muestra, da como resultado NADH que luego se oxida en presencia de un agente de transferencia de electrones. En algunos casos, el NADH interactúa con una sonda o precursor de colorante que es detectable midiendo la absorción en un intervalo de luz visible. En algunos ejemplos, la diaforasa usa el NADH para reducir la sal de tetrazolio (INT) a un producto de formazán rojo y se mide el producto. Por lo tanto, en algunos casos, la cantidad de producto coloreado formado es directamente proporcional a la actividad de LDH en la muestra.

En algunos casos, los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente se evalúan usando un ensayo inmunológico. Por ejemplo, puede usarse un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), un inmunoensayo enzimático (EIA), un radioinmunoensayo (RIA), una resonancia de plasmones de superficie (SPR), una transferencia Western, un ensayo de flujo lateral, una inmunohistoquímica, una matriz de proteínas o una inmunoPCR (iPCR) para detectar los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente. En algunos casos, el uso de los artículos de fabricación incluye detectar los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente indicativos de la carga tumoral. En algunos casos, el ensayo o evaluación de atributos, factores y/o biomarcadores de un paciente se realiza usando citometría de flujo. En algunos casos, el reactivo es una proteína soluble que se une a los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente. En algunos ejemplos, el reactivo es una proteína que se une a la proteína C reactiva (CRP), la velocidad de sedimentación globular (ESR), la albúmina, la ferritina, la p2 microglobulina (p2-M) o la lactato deshidrogenasa (LDH).

En algunos casos, la proteína C reactiva (CRP) se evalúa usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro para obtener una medición cuantitativa de la CRP humana a partir de una muestra como suero, plasma o sangre. En algunos ejemplos, la CRP se detecta usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) humano. En algunos casos, la velocidad de sedimentación globular (ESR) se evalúa midiendo la distancia (en milímetros por hora) que han descendido los eritrocitos después de separarse del plasma en una pipeta o tubo vertical. En algunos aspectos, la albúmina se evalúa usando una prueba colorimétrica o un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro. En algunos ejemplos, la albúmina se detecta usando un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) humano. En algunos casos, la ferritina o la p2 microglobulina se evalúan mediante un inmunoensayo o se detectan mediante un ELISA. En algunos aspectos, la lactato deshidrogenasa (LDH) se evalúa usando una prueba colorimétrica o un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas in vitro.

El término "anticuerpo" se usa en la presente en el sentido más amplio e incluye anticuerpos policlonales y monoclonales, incluyendo anticuerpos intactos y fragmentos de anticuerpos funcionales (de unión a antígeno), incluyendo fragmentos de unión a antígeno (Fab), fragmentos F(ab')<2>, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rIgG), fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla, incluyendo fragmentos variables de cadena sencilla (scFv), y fragmentos de anticuerpos de dominio único (por ejemplo, sdAb, sdFv, nanocuerpo). El término abarca formas de inmunoglobulinas manipuladas genéticamente y/o modificadas de otro modo, como intracuerpos, pepticuerpos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos completamente humanos, anticuerpos humanizados y anticuerpos heteroconjugados, anticuerpos multiespecíficos, por ejemplo, biespecíficos, diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos, discFv en tándem, tri-scFv en tándem. A menos que se indique lo contrario, debe entenderse que el término "anticuerpo" abarca los fragmentos funcionales de anticuerpo de los mismos. El término también abarca anticuerpos intactos o de longitud completa, incluyendo anticuerpos de cualquier clase o subclase, incluyendo IgG y subclases de las mismas, IgM, IgE, IgA e IgD.

Entre los anticuerpos descritos hay fragmentos de anticuerpos. Un "fragmento de anticuerpo" se refiere a una molécula distinta de un anticuerpo intacto que comprende una parte de un anticuerpo intacto que se une al antígeno al que se une el anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')<2>; diacuerpos; anticuerpos lineales; moléculas de anticuerpo de cadena sencilla (por ejemplo, scFv); y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. En casos particulares, los anticuerpos son fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla que comprenden una región variable de cadena pesada y/o una región variable de cadena ligera, como los scFv.

Los anticuerpos de dominio único son fragmentos de anticuerpos que comprenden todo o parte del dominio variable de cadena pesada o todo o parte del dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo. En ciertos casos, un anticuerpo de dominio único es un anticuerpo humano de dominio único.

Los fragmentos de anticuerpos pueden fabricarse mediante varias técnicas incluyendo, entre otras, la digestión proteolítica de un anticuerpo intacto, así como la producción mediante células huésped recombinantes. En algunos casos, los anticuerpos son fragmentos producidos recombinantemente, como fragmentos que comprenden disposiciones que no se producen de manera natural, como aquellos con dos o más regiones o cadenas de anticuerpos unidas por conectores sintéticos, por ejemplo, conectores peptídicos, y/o que no pueden producirse por digestión enzimática de un anticuerpo intacto que se produce de manera natural. En algunos aspectos, los fragmentos de anticuerpo son scFvs.

Un anticuerpo "humanizado" es un anticuerpo en el que todos o casi todos los residuos de aminoácidos de la CDR proceden de CDR no humanas y todos o casi todos los residuos de aminoácidos de la FR se derivan de FR humanas. Un anticuerpo humanizado puede incluir opcionalmente por lo menos una parte de una región constante de anticuerpo derivada de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo no humano se refiere a una variante del anticuerpo no humano que se ha humanizado, típicamente para reducir la inmunogenicidad para los humanos, mientras se conserva la especificidad y afinidad del anticuerpo no humano original. En algunos casos, algunos residuos de FR en un anticuerpo humanizado se sustituyen por residuos correspondientes de un anticuerpo no humano (por ejemplo, el anticuerpo del que se derivan los residuos de CDR), por ejemplo, para restaurar o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.

Entre los anticuerpos descritos se encuentran los anticuerpos humanos. Un "anticuerpo humano" es un anticuerpo con una secuencia de aminoácidos correspondiente a la de un anticuerpo producido por un humano o una célula humana, o una fuente no humana que utiliza repertorios de anticuerpos humanos u otras secuencias codificantes de anticuerpos humanos, incluyendo las bibliotecas de anticuerpos humanos. El término excluye las formas humanizadas de anticuerpos no humanos que comprenden regiones de unión a antígeno no humanas, como aquellas en las que todas o casi todas las CDR son no humanas.

Los anticuerpos humanos pueden prepararse administrando un inmunógeno a un animal transgénico que haya sido modificado para producir anticuerpos humanos intactos o anticuerpos intactos con regiones variables humanas en respuesta a un desafío antigénico. Tales animales contienen típicamente todos o una parte de los loci de inmunoglobulina humana, que sustituyen a los loci de inmunoglobulina endógena, o que están presentes extracromosómicamente o integrados aleatoriamente en los cromosomas del animal. En tales animales transgénicos, generalmente se han inactivado los loci de inmunoglobulina endógenos. Los anticuerpos humanos también pueden derivarse de bibliotecas de anticuerpos humanos, incluyendo bibliotecas de presentación en fagos y bibliotecas libres de células, que contengan secuencias codificantes de anticuerpos derivadas de un repertorio humano.

Entre los anticuerpos descritos se encuentran los anticuerpos monoclonales, incluyendo los fragmentos de anticuerpos monoclonales. El término "anticuerpo monoclonal", como se usa en la presente, se refiere a un anticuerpo obtenido a partir de o dentro de una población de anticuerpos sustancialmente homogéneos, es decir, los anticuerpos individuales que comprenden la población son idénticos, excepto por posibles variantes que contengan mutaciones de origen natural o que surjan durante la producción de una preparación de anticuerpo monoclonal, dichas variantes estando generalmente presentes en cantidades menores. Al contrario que los preparados de anticuerpos policlonales, que típicamente incluyen diferentes anticuerpos dirigidos contra diferentes epítopos, cada anticuerpo monoclonal de un preparado de anticuerpos monoclonales está dirigido contra un único epítopo de un antígeno. No debe interpretarse el término en el sentido de que requiera la producción del anticuerpo por un método particular. Un anticuerpo monoclonal puede producirse mediante una variedad de técnicas, incluyendo pero no limitándose a la generación a partir de un hibridoma, métodos de ADN recombinante, presentación en fagos y otros métodos de visualización de anticuerpos.

También se describen inmunoconjugados de anticuerpos que comprenden un anticuerpo contra un biomarcador unido a un marcador, que puede generar una señal detectable, indirecta o directamente. Estos inmunoconjugados de anticuerpos pueden usarse para aplicaciones de investigación o diagnóstico. El marcador es preferiblemente capaz de producir, directa o indirectamente, una señal detectable. Por ejemplo, el marcador puede ser radioopaco o un radioisótopo, como 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I; un compuesto fluorescente (fluoróforo) o quimioluminiscente (cromóforo), como isotiocianato de fluoresceína, rodamina o luciferina; una enzima, como la fosfatasa alcalina, la p-galactosidasa o la peroxidasa de rábano picante; un agente de imagenología; o un ion metálico. En algunos casos, el marcador es un átomo radiactivo para estudios centellográficos, por ejemplo 99Tc o 123I, o un marcador de espín para imagenología por resonancia magnética nuclear (NMR) (también conocida como imagenología por resonancia magnética, MRI), como circonio-89, yodo-123, yodo-131, indio-111, flúor-19, carbono-13, nitrógeno-15, oxígeno-17, gadolinio, manganeso o hierro. El circonio-89 puede formar complejos con varios agentes quelantes metálicos y conjugarse con anticuerpos, por ejemplo, para la imagenología PET (Wo 2011/056983).

En algunos casos, el anticuerpo inmunoconjugado es detectable indirectamente. Por ejemplo, para detectar el inmunoconjugado de anticuerpo puede usarse un anticuerpo secundario que sea específico para el anticuerpo contra el marcador expresado en una población de células mieloides y que contenga un marcador detectable.

En algunos casos, los anticuerpos capaces de detectar o que son específicos de los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente descritos en la presente pueden identificarse, seleccionarse o caracterizarse por sus propiedades físico-químicas y/o actividades biológicas mediante varios ensayos conocidos. En un aspecto, el anticuerpo se prueba por su actividad de unión a antígeno, por ejemplo, por métodos conocidos como un inmunoensayo, ELISA, transferencia Western, y/o ensayos de citometría de flujo, incluyendo ensayos de unión basados en células.

D. Muestras

En ciertos casos, se miden, evalúan y/o determinan uno o más atributos, factores y/o biomarcadores del paciente en una o más muestras obtenidas en dos o más puntos temporales para determinar un cambio de veces en el factor indicativos de la carga de la enfermedad. En casos particulares, la muestra es una muestra biológica que se toma, recoge y/u obtiene de un sujeto. En ciertos casos, el sujeto tiene una enfermedad o afección y/o se sospecha que tiene una enfermedad o afección. En algunos casos, el sujeto ha recibido, recibirá o es candidato a recibir una terapia. En algunos casos, la terapia consiste en la administración de una terapia celular. En casos particulares, la terapia es una inmunoterapia. En ciertos casos, la terapia de células trata y/o es capaz de tratar la enfermedad o afección. En algunos casos, la terapia es una terapia celular que contiene una o más células manipuladas. En algunos casos, las células manipuladas expresan un receptor recombinante. En casos particulares, el receptor recombinante es un CAR. En casos particulares, la muestra se toma, recoge y/u obtiene de un sujeto al que se le ha administrado, se le administrará o es candidato a que se le administre una terapia. En casos particulares, la muestra se toma, recoge y/u obtiene antes del tratamiento o administración con la terapia, por ejemplo, la terapia celular.

En algunos casos, la muestra no comprende células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antigénico quimérico (CAR) y/o se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

En casos particulares, la muestra se toma, recoge y/u obtiene de un sujeto al que se le ha administrado, se le administrará o es candidato a que se le administre una terapia. En casos particulares, la muestra se toma, recoge y/u obtiene antes del tratamiento o administración con la terapia, por ejemplo, la terapia celular. De acuerdo con los métodos, kits y artículos de fabricación descritos en la presente, la muestra puede evaluarse para uno o más atributos, factores y/o biomarcadores del paciente asociados y/o correlacionados con la toxicidad o el riesgo de toxicidad. Los atributos, factores y/o biomarcadores de paciente ejemplares asociados con y/o correlacionados con un riesgo de desarrollar toxicidad y/o respuesta que pueden detectarse en una muestra recogida u obtenida de un sujeto antes de recibir una inmunoterapia incluyen proteína C reactiva (CRP), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, ferritina, p2 microglobulina (p2-M), o lactato deshidrogenasa (LDH). En algunos casos, los atributos, factores y/o biomarcadores del paciente asociados con y/o correlacionados con un riesgo de desarrollar toxicidad y/o respuesta que pueden detectarse en una muestra recogida u obtenida de un sujeto antes o después de recibir una inmunoterapia incluyen ligando 13 de quimiocina con motivo C-C (CCL13), proteína C-reactiva (CRP), quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10), dímero D (producto de degradación de la fibrina), ferritina, IFN-a2, interleucina-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, interferón gamma (IFN-y), lactato deshidrogenasa (LDH), proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), MIP-1 p, proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1),<s>A<a>-1, amiloide sérico A1 (SAA-1), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a). Por tanto, en algunos aspectos, los métodos descritos se relacionan con la identificación de sujetos, antes de recibir una inmunoterapia, como una terapia celular (por ejemplo, células CAR-T), que pueden alcanzar parámetros farmacocinéticos dentro de una ventana o intervalo terapéutico. En algunos casos, los métodos descritos se refieren a la identificación de sujetos, antes o después de recibir una inmunoterapia o terapia celular, para modular la inmunoterapia o terapia celular, por ejemplo, mediante la administración del agente al sujeto capaz de modular, opcionalmente aumentar o disminuir la expansión, proliferación y/o actividad de células T c Ar . Como se describe en otras partes de la presente, los métodos pueden usarse para determinar si el sujeto debe vigilarse estrechamente después de la administración de la inmunoterapia, si es candidato para terapia ambulatoria o si debe recibir tratamiento de la terapia en un entorno hospitalario y/o si es candidato para recibir un agente capaz de modular la expansión y/o proliferación de células T CAR+ y/o una intervención de prevención, tratamiento o mejora de un riesgo de toxicidad.

En algunos casos, la muestra se toma, recoge y/u obtiene de un sujeto que tiene o se sospecha que tiene una afección o enfermedad. En algunos casos, el sujeto tiene o se sospecha que tiene un cáncer o una enfermedad proliferativa. En casos particulares, el sujeto tiene o se sospecha que tiene una enfermedad o afección asociada a un antígeno y/o asociada a células enfermas que expresan el antígeno. En algunos casos, la enfermedad o afección, por ejemplo un cáncer o trastorno proliferativo, está asociado con la integrina avp6 (integrina avb6), el antígeno de maduración de células B (BCMA), B7-H6, la anhidrasa carbónica 9 (CA9, también conocida como CAIX o G250), un antígeno de cáncer de testículos, el antígeno de cáncer de testículos 1B (CTAG, también conocido como NY-ESO-1 y LAGE-2), el antígeno carcinoembrionario (CEA), una ciclina, la ciclina A2, el ligando 1 de quimioquinas con motivo C-C (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, proteína del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), proteína truncada del factor de crecimiento epidérmico (tEGFR), mutación del receptor del factor de crecimiento epidérmico de tipo III (EGFR vIII), glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), efrinaB2, receptor de efrina A2 (EPHa2), receptor de estrógenos, receptor Fc tipo 5 (FCRL5; también conocido como receptor Fc homólogo 5 o FCRH5), receptor de acetilcolina fetal (AchR fetal), una proteína de unión a folato (FBP), receptor de folato alfa, receptor de acetilcolina fetal, gangliósido GD2, GD2 O-acetilado (OGD2), gangliósido<g>D3, receptor 5D acoplado a proteína G (GPCR5D), glicoproteína 100 (gp100), Her2/neu (receptor tirosina quinasa erbB2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), dímeros erbB, antígeno humano de alto peso molecular asociado a melanoma (HMW-MAA), antígeno de superficie de la hepatitis B, antígeno leucocitario humano A1 (HLA-AI), antígeno leucocitario humano A2 (HLA-A2), receptor alfa de IL-22 (IL-22Ra), receptor alfa 2 de IL-13 (IL-13Ra2), receptor de dominio de inserción de quinasa (kdr), cadena ligera kappa, molécula de adhesión celular L1 (L1CAM), epítopo CE7 de L1-CAM, Miembro A de la Familia<8>que contiene repetición rica en leucina (LRRC<8>A), Lewis Y, antígeno asociado al melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A<6>, mesotelina, c-Met, citomegalovirus murino (CMV), mucina 1 (MUC1), MUC16, ligandos del miembro D del grupo de asesinas naturales 2 (NKG2D), melan A (MART-1), molécula de adhesión de células neurales (NCAM), antígeno oncofetal, antígeno expresado preferentemente de melanoma (PRAME), receptor de progesterona, antígeno específico de próstata, antígeno de células madre de próstata (PSCA), antígeno de membrana específico de próstata (PSMA), receptor de tirosina quinasa como receptor huérfano 1 (RORl), survivina, glicoproteína de trofoblasto (TPBG también conocida como 5T4), glicoproteína 72 asociada a tumor (TAG72), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular 2 (VEGFR2), tumor de Wilms 1 (WT-1), y/o un antígeno específico de patógeno. En ciertos casos, el sujeto tiene una enfermedad o afección, o se sospecha que tiene una enfermedad o afección, que está asociada con CD19 y/o está asociada con células enfermas que expresan CD19.

En algunos casos, la muestra se toma, se recoge y/o se obtiene de un sujeto que tiene o se sospecha que tiene un cáncer o una enfermedad proliferativa que es una enfermedad maligna de células B o una enfermedad maligna hematológica. En algunos casos, el cáncer o la enfermedad proliferativa es un mieloma, por ejemplo, un mieloma múltiple (MM), un linfoma o una leucemia, leucemia linfoblástica (ALL), linfoma no Hodgkin (NHL), leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) y/o leucemia mieloide aguda (AML). En algunos casos, el cáncer o trastorno proliferativo es la ALL. En algunos casos, el sujeto tiene o se sospecha que tiene ALL. En algunos casos, la ALL es ALL en adultos. En algunos casos, la ALL es pediátrica.

En casos particulares, se obtienen, recogen o toman dos o más muestras del sujeto antes de la administración de la terapia. En ciertos casos, la muestra es una muestra biológica. En ciertos casos, la muestra es una muestra de sangre, plasma o suero. En ciertos casos, la muestra es una muestra de tejido. En algunos casos, la muestra es una biopsia. En algunos casos, la muestra se obtiene del sujeto en una sesión de selección, como una evaluación rutinaria o una extracción de sangre para confirmar y/o identificar la afección o enfermedad en el sujeto.

E. Agentes para modular la expansión y actividad celular

En algunos aspectos, se describen métodos para modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células administradas, por ejemplo, células T CAR+, basándose en la evaluación y/o determinación de los parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos y/u otros parámetros como atributos del paciente y/o expresión de un biomarcador. En algunos casos, el método implica administrar agentes que modulan, como aumentan o disminuyen, la expansión, proliferación y/o actividad de las células administradas, por ejemplo, células T CAR+, dependiendo de la determinación de los parámetros. En algunos casos, se administra un agente si las células manipuladas genéticamente no se encuentran dentro del intervalo terapéutico sobre la base de la evaluación de los parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos, como la concentración máxima o pico de células CAR+. En algunos casos, el agente es un agente que aumenta, incrementa o potencia la proliferación y/o expansión de las células T CAR+. En algunos casos, el agente es un agente que disminuye, reduce y/o amortigua la proliferación y/o expansión de las células T CAR+.

En algunos casos, el agente puede administrarse secuencialmente, intermitentemente, o al mismo tiempo que o en la misma composición que la terapia, como células para terapia celular adoptiva. En algunos casos, el agente se administra antes, simultáneamente con, intermitentemente con, durante, durante el curso de o después de la administración de las células, por ejemplo, células que expresan un receptor recombinante, por ejemplo CAR. En algunos casos, tales agentes incluyen agentes que modulan la expansión celular y/o la actividad de las células administradas, por ejemplo, células inmunitarias, como células T. En algunos casos, tales agentes incluyen agentes que reducen o disminuyen la expansión y/o proliferación de la expansión y/o actividad celular de las células administradas, por ejemplo, células inmunitarias, como las células T.

En algunos casos, el agente se administra en un momento que es mayor o mayor que aproximadamente<8>días, 9 días, 10 días, 11 días, 12 días, 13 días, 14 días, 15 días, 16 días, 17 días, 18 días, 19 días, 20 días o 21 días después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente. En algunos casos, el agente se administra en un momento comprendido entre o entre aproximadamente 11 y 22 días, 12 y 18 días o 14 y 16 días, cada uno inclusive, después del inicio de la administración de las células manipuladas genéticamente.

En algunos casos, el agente se administra en el momento como se describe en la presente y de acuerdo con los métodos descritos, y/o con los artículos de fabricación o composiciones descritos. En algunos casos, el agente se administra en un momento que está dentro de, como menos de o no más de, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9 o 10 días después del inicio de la inmunoterapia y/o terapia celular. En algunos casos, el agente se administra en el plazo de o en el plazo de aproximadamente 1 día, 2 días o 3 días después del inicio de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular.

En algunos casos, el agente o terapia o intervención, se administra solo o se administra como parte de una composición o formulación, como una composición o formulación farmacéutica, tal como se describe en la presente.

Por tanto, el agente solo o como parte de una composición farmacéutica puede administrarse por vía intravenosa u oral, o por cualquier otra vía de administración conocida aceptable o como se describe en la presente.

1. Agentes para aumentar o mejorar la expansión celular

En algunos casos, los métodos incluyen métodos que implican la administración combinada, por ejemplo, administración simultánea o secuencial, con un fármaco o agente capaz de aumentar, potenciar o mejorar la expansión, proliferación, supervivencia y/o eficacia de las células administradas, por ejemplo, células que expresan receptores recombinantes. En algunos casos, dicho agente se administra para alcanzar un pico de expansión de células T CAR+ en el intervalo terapéutico. En algunos casos, la dosis de células administradas es subóptima y la administración combinada del agente potencia o aumenta la expansión para lograr un pico de células T CAR+ en la sangre en el intervalo terapéutico. En algunos casos, el método incluye administrar una dosis de células y monitorizar el pico de células T CAR+ en la sangre para garantizar que se mantiene o alcanza el intervalo terapéutico y, si no es así, administrar un agente o compuesto para potenciar o aumentar la dosis terapéutica. En algunos casos, la expansión baja o limitada de las células, por ejemplo, a parámetros farmacocinéticos bajos como la concentración máxima baja de células T CAR+ (Cmax), puede limitar el efecto de supresión tumoral.

En algunos casos, el agente se administra antes, durante, durante el transcurso o después de la administración de las células, por ejemplo, células que expresan un receptor recombinante, por ejemplo, CAR. En algunos casos, tales agentes incluyen agentes que aumentan, potencian o mejoran específicamente la expansión, proliferación, supervivencia y/o eficacia de las células manipuladas en virtud de la modulación específica del transgén, por ejemplo, el transgén que codifica un receptor recombinante. En algunos casos, tales agentes incluyen agentes que modulan la expansión celular y/o la actividad de las células administradas, por ejemplo, células inmunitarias, como las células T.

En algunos casos, la célula administrada, por ejemplo, las células manipuladas para que expresen un receptor recombinante, se modifican para aumentar, potenciar o mejorar la expansión, proliferación, supervivencia y/o eficacia de las células administradas. En algunos casos, la célula administrada, por ejemplo, las células manipuladas para que expresen un receptor recombinante, se modifican de tal manera que la expansión, proliferación, supervivencia y/o eficacia de las células manipuladas puedan regularse y/o controlarse, por ejemplo, mediante la administración de un agente. En algunos casos, el agente minimiza los efectos de los factores inhibidores que suprimen la proliferación, expansión y/o supervivencia de las células manipuladas in vivo.

En algunos casos, el agente adicional es una molécula pequeña, un péptido, un polipéptido, un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, un mimético de anticuerpo, un aptámero o una molécula de ácido nucleico (por ejemplo, ARNip), un lípido, un polisacárido o cualquier combinación de los mismos. En algunos casos, el agente adicional es un inhibidor o un activador de un factor, molécula, receptor, función y/o enzima particular. En algunos casos, el agente adicional es un agonista o un antagonista de un factor, molécula, receptor, función y/o enzima particular. En algunos casos, el agente adicional es un análogo o un derivado de uno o más factores y/o metabolitos. En algunos casos, el agente adicional es una proteína o polipéptido. En algunos casos, el agente adicional es una célula, por ejemplo, una célula artificial, como una dosis adicional de la misma célula manipulada que se administró y/o una célula manipulada diferente.

En algunos casos, el agente es capaz de expansión específica del transgén. En algunos casos, los métodos o agentes ejemplares para la expansión específica del transgén incluyen exposición a antígenos endógenos, vacunación, anticuerpos antiidiotipo o fragmento de unión a antígeno de los mismos y/o receptor recombinante regulable. Por ejemplo, en algunos casos, los métodos para la expansión específica del transgén incluyen métodos de vacunación. En algunos casos, el agente es una vacuna peptídica o una vacuna basada en células, por ejemplo, células manipuladas para que expresen un antígeno particular reconocido por el receptor recombinante (consultar, por ejemplo,laWO 2016/069647, la WO 2011/066048, la US 2016/0304624, la Patente de Estados Unidos N° 9.476.028 y Hailemichael y Overwijk, Int J Biochem Cell Biol. (2014) 53: 46-50). En algunos casos, los métodos para la expansión específica del transgén incluyen la administración de anticuerpos antiidiotipos. Los anticuerpos antiidiotipo, incluyendo fragmentos de unión a antígeno de los mismos, reconocen específicamente, se dirigen específicamente a, y/o se unen específicamente a un idiotopo de un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno del mismo, por ejemplo, el dominio de unión a antígeno de un receptor recombinante como un receptor de antígeno quimérico (CAR). Un idiotopo es cualquier determinante antigénico único o epítopo dentro de la porción variable de un anticuerpo. En algunos casos, los anticuerpos antiidiotipo o fragmentos de unión a antígeno de los mismos son agonistas y/o presentan actividad específica para estimular células que expresan un anticuerpo particular, incluyendo conjugados o receptores recombinantes que contienen el mismo o un fragmento de unión a antígeno del mismo (consultar, por ejemplo, las publicaciones de Patente de Estados Unidos N° US 2016/0096902; US 2016/0068601; US 2014/0322183; US 2015/0175711; US 2015/283178; la Patente de Estados Unidos N° 9.102.760; Jena et al. PloS one (2013) 8(3):e57838; Long et al., Nature Medicine (2015) 21(6):581-590; Lee et al., The Lancet (2015) 385(9967):517-528; Zhao et al., PloS One (2014) 9(5):e96697; Leung et al., MAbs. (2015) 7(1):66-76).

En algunos casos, los métodos incluyen modular la expansión de las células manipuladas, por ejemplo, inhibiendo el regulador negativo de la proliferación, expansión y/o activación de las células administradas, por ejemplo, células inmunitarias manipuladas. En un entorno particular del cuerpo del sujeto, las células administradas que expresan el receptor recombinante pueden encontrarse con un entorno que reprime o suprime el crecimiento, la proliferación, la expansión y/o la supervivencia de las células, por ejemplo, un entorno inmunosupresor. Por ejemplo, los entornos inmunosupresores pueden contener citoquinas inmunosupresoras, moduladores reguladores y receptores coinhibidores. En algunos casos, puede usarse un agente adicional para modular la expansión de las células administradas, por ejemplo, para superar los entornos supresores.

En algunos casos, el agente adicional incluye un agente inmunomodulador, un inhibidor del punto de control inmunitario, moduladores de las vías metabólicas, un antagonista o agonista de la vía de la adenosina o del receptor de la adenosina y moduladores de las vías de señalización, por ejemplo, inhibidores de la quinasa.

En algunos casos, el agente adicional es un agente inmunomodulador, como un inhibidor del punto de control inmunitario. En algunos ejemplos, el agente adicional aumenta, potencia o incrementa la expansión y/o proliferación de las células administradas y, de este modo, aumenta, potencia o incrementa la respuesta inmunitaria mediante el bloqueo de una proteína de punto de control inmunitario (es decir, un inhibidor de punto de control inmunitario). En algunos casos, el agente adicional es un agente que potencia la actividad de la célula manipulada, por ejemplo, una célula recombinante que expresa receptores, es una molécula que inhibe una molécula inhibidora inmunitaria o una molécula de punto de control inmunitario. Ejemplos de moléculas inhibidoras inmunitarias incluyen PD-1, PD-L1, CTLA4, TEVI3, CEACAM (por ejemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 y/o CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 y TGFpR. En algunos casos, el inhibidor del punto de control inmunitario puede ser un anticuerpo dirigido contra una proteína del punto de control inmunitario, como un anticuerpo dirigido contra el antígeno 4 de linfocitos T citotóxicos (CTLA4 o CD152), la proteína 1 de muerte celular programada (PD-1) o el ligando 1 de la proteína 1 de muerte celular programada (PD-L1) (consultar, por ejemplo, Pardoll, Nat Rev Cancer. 2012 Mar. 22; 12(4):252-264).

Los inhibidores de puntos de control inmunitarios incluyen cualquier agente que bloquee o inhiba de manera estadísticamente significativa las vías inhibidoras del sistema inmunitario. Tales inhibidores pueden incluir inhibidores de moléculas pequeñas o pueden incluir anticuerpos, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, que se unen y bloquean o inhiben los receptores de puntos de control inmunitarios, los ligandos y/o la interacción receptor-ligando. En algunos casos, la modulación, potenciación y/o estimulación de receptores particulares puede superar los componentes de la vía del punto de control inmunitario. Las moléculas de punto de control inmunitario ilustrativas a las que puede dirigirse el bloqueo, inhibición, modulación, potenciación y/o estimulación incluyen, entre otras, PD-1 (CD279), PD-L1 (CD274, B7-H1), PDL2 (CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3 (CD223), TIM-3, 4-1BB (CD137), 4-1BBL (CD137L), GITR (TNFRSF18, AITR), CD40, OX40 (CD134, TNFRSF4), CXCR2, antígenos asociados a tumores (TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4 (pertenece a la familia CD2 de moléculas y se expresa en todos los linfocitos NK, y§ y células T CD8+ (ap) de memoria), CD160 (también denominado BY55), CGEN-15049, CEACAM (por ejemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 y/o CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 o CD270), KIR, A2aR, MHC clase I, MHC clase II, GAL9, adenosina y un receptor del factor de crecimiento transformante (TGFR; por ejemplo, TGFR beta). Los inhibidores del punto de control inmunitario incluyen anticuerpos, o fragmentos de unión a antígeno de los mismos, u otras proteínas de unión, que se unen a y bloquean o inhiben y/o potencian o estimulan la actividad de una o más de dichas moléculas.

Los inhibidores de puntos de control inmunitarios ejemplares incluyen Tremelimumab (anticuerpo bloqueante de CTLA-4, también conocido como ticilimumab, CP-675.206), anti-OX40, anticuerpo monoclonal de PD-L1 (Anti-B7-H1; MEDI4736), MK-3475 (bloqueante de PD-1), nivolumab (anticuerpo anti-PD-1), CT-011 (anticuerpo anti-PD-1), anticuerpo monoclonal de BY55, AMP224 (anticuerpo anti-PD-L1), BMS-936559 (anticuerpo anti-PD-L1), MPLDL3280A (anticuerpo anti-PD-L1), MSB0010718C (anticuerpo anti-PD-L1) e ipilimumab (anticuerpo anti-CTLA-4, también conocido como Yervoy®, MDX-010 y MDX-101). Ejemplos de anticuerpos inmunomoduladores incluyen, entre otros, daclizumab (Zenapax), bevacizumab (Avastin®), basiliximab, ipilimumab, nivolumab, pembrolizumab, MPDL3280A, Pidilizumab (CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A (Atezolizumab), tremelimumab, IMP321, BMS-986016, LAG525, urelumab, PF-05082566, TRX518, MK-4166, dacetuzumab (SGN-40), lucatumumab (HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C (Avelumab), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, Ulocuplumab, BKT140, Varlilumab (CDX-1127), ARGX-110, MGA271, lirilumab (BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, Emactuzumab, CC-90002 y MNRP1685A o un fragmento de unión a anticuerpos de los mismos. Otros inmunomoduladores ejemplares incluyen, por ejemplo, afutuzumab (disponible de Roche®); pegfilgrastim (Neulasta®); lenalidomida (CC-5013, Revlimid®); talidomida (Thalomid®), actimid (CC4047); e IRX-2 (mezcla de citoquinas humanas que incluyen interleucina 1, interleucina 2 e interferón gamma, CAS 951209 71-5, disponible de IRX Therapeutics).

En algunos casos, el agente incluye una molécula que disminuye la población de células T reguladoras (Treg). Los métodos que disminuyen el número de células Treg (por ejemplo, agotarlas) son conocidos en la técnica e incluyen, por ejemplo, el agotamiento de CD25, la administración de ciclofosfamida y la modulación de la función del gen relacionado con la familia TNFR inducida por glucocorticoides (GITR). El GITR es un miembro de la superfamilia TNFR que se regula por incremento en las células T activadas, lo que mejora el sistema inmunitario. La reducción del número de células Treg en un sujeto antes de la aféresis o antes de la administración de células manipuladas, por ejemplo, células que expresan CAR, puede reducir el número de células inmunitarias no deseadas (por ejemplo, Tregs) en el microambiente tumoral y reduce el riesgo de recaída del sujeto. En algunos casos, el agente incluye una molécula dirigida al GITR y/o que modula las funciones del GITR, como un agonista del GITR y/o un anticuerpo del GITR que agota las células T reguladoras (Tregs). En algunos casos, el agente incluye ciclofosfamida. En algunos casos, la molécula de unión a GITR y/o la molécula que modula la función de GITR (por ejemplo, agonista de GITR y/o anticuerpos GITR que agotan las células Treg) se administra antes de las células manipuladas, por ejemplo, las células que expresan CAR. Por ejemplo, en algunos casos, el agonista GITR puede administrarse antes de la aféresis de las células. En algunos casos, se administra ciclofosfamida al sujeto antes de la administración (por ejemplo, infusión o reinfusión) de las células manipuladas, por ejemplo, células que expresan CAR o antes de la aféresis de las células. En algunos casos, la ciclofosfamida y un anticuerpo anti-GITR se administran al sujeto antes de la administración (por ejemplo, infusión o reinfusión) de las células manipuladas, por ejemplo, células que expresan CAR o antes de la aféresis de las células.

En algunos casos, el agente es un agonista del GITR. Los agonistas de GITR ejemplares incluyen, por ejemplo, proteínas de fusión de GITR y anticuerpos anti-GITR (por ejemplo, anticuerpos bivalentes anti-GITR) como, por ejemplo, una proteína de fusión de GITR descrita en la Patente de Estados Unidos N° 6.111.090, la Patente Europea N° 090505B1, la Patente de Estados Unidos N° 8.586.023, las Publicaciones de PCT N°: WO 2010/003118 y 2011/090754, o un anticuerpo anti-GITR descrito, por ejemplo, en la Patente de Estados Unidos N° 7.025.962, la patente europea N° 1947183B1, la Patente de Estados Unidos N° 7.812.135, la Patente de Estados Unidos N° 8.388.967, la Patente de Estados Unidos N° 8.591.886, la patente europea N° EP 1866339, la publicación de PCT N° WO 2011/028683, la publicación de PCT N° WO 2013/039954, la publicación de PCT N° W02005/007190, la publicación de PCT N° WO 2007/133822, la publicación de PCT N° W02005/055808, la publicación de PCT N° WO 99/40196, la publicación de PCT N° WO 2001/03720, la publicación de PCT N° WO99/20758, la publicación de PCT N° WO2006/083289, la publicación de PCT N° WO 2005/115451, la Patente de Estados Unidos N° 7.618.632 y la publicación de PCT N° W<o>2011/051726. Un anticuerpo anti-GITR ejemplar es TRX518.

En algunos casos, el agente es un análogo estructural o funcional o un derivado de la talidomida y/o un inhibidor de la ubiquitina ligasa E3. En algunos casos, el agente inmunomodulador se une al cereblón (CRBN). En algunos casos, el agente inmunomodulador se une al complejo ubiquitina-ligasa E3 CRBN. En algunos casos, el agente inmunomodulador se une a CRBN y al complejo ubiquitina-ligasa E3 CRBN. En algunos casos, el agente inmunomodulador regula por incremento la expresión proteica o génica de CRBN. En algunos aspectos, CRBN es el adaptador de sustrato para la CRL4CRBN E3 ubiquitina ligasa, y modula la especificidad de la enzima. En algunos casos, la unión a CRB o al complejo de ubiquitina ligasa E3 CRBN inhibe la actividad de la ubiquitina ligasa E3. En algunos casos, el agente inmunomodulador induce la ubiquitinación de KZF1 (Ikaros) e IKZF3 (Aiolos) y/o induce la degradación de IKZF1 (Ikaros) e IKZF3 (Aiolos). En algunos casos, el agente inmunomodulador induce la ubiquitinación de la caseína quinasa 1A1 (CK1a) por la CRL4<crbn>E3 ubiquitina ligasa. En algunos casos, la ubiquitinación de CK1a provoca la degradación de cK la .

En algunos casos, el agente es un inhibidor del factor de transcripción Ikaros (IKZF1). En algunos casos, el agente potencia la ubiquitinación de Ikaros. En algunos casos, el agente potencia la degradación de Ikaros. En algunos casos, el agente regula por disminución la expresión proteica o génica de Ikaros. En algunos casos, la administración del agente provoca una disminución de los niveles de proteína Ikaros.

En algunos casos, el agente es un inhibidor del factor de transcripción Aiolos (IKZF3). En algunos casos, el agente potencia la ubiquitinación de Aiolos. En algunos casos, el agente potencia la degradación de Aiolos. En algunos casos, el agente regula por disminución la expresión proteica o génica de Aiolos. En algunos casos, la administración del agente provoca una disminución de los niveles de proteína Aiolos.

En algunos casos, el agente es la talidomida (2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona) o un análogo o derivado de la talidomida. En ciertos casos, un derivado de la talidomida incluye variantes estructurales de la talidomida que tienen una actividad biológica similar. Los derivados ejemplares de la talidomida incluyen, entre otros, lenalidomida (REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), pomalidomida (también conocida como ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ o POMALYST™ (Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501 y CDC- 801, y los compuestos descritos en las Patentes de Estados Unidos N° 5,712,291; 7,320,991; y 8,716,315; la Solicitud de Estados Unidos N° 2016/0313300; y las publicaciones de PCT N° WO 2002/068414 y WO 2008/154252.

En algunos casos, el agente es 1-oxo- y 1,3 dioxo-2-(2,6-dioxopiperldin-3-yl) isoindolines sustituidos con amino en el anillo benzo como se describe en Patente de Estados Unidos N° 5,635,517.

En algunos casos, el agente es un compuesto que pertenece a una clase de compuestos inmunomoduladores de isoindol descritos en la Patente de Estados Unidos N° 7.091.353, la publicación de Patente de Estados Unidos N° 2003/0045552 y la Solicitud Internacional N° PCT/USOI/50401 (Publicación Internacional N° W002/059106). Por ejemplo, en algunos casos, el agente es [2-(2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-ilmetil]-amida; éster terc-butílico del ácido (2-(2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-ilmetil)-carbámico; 4(aminometil)-2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-isoindolina-1,3-diona; N-(2-(2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-dihidro-1H-isoindol-4-ilmetil)-acetamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}ciclopropil-carboxamida; 2-cloro-N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}acetamida; N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)-3-piridilcarboxamida; 3-{1-oxo-4-(bencilamino)isoindolin-2-il}piperidina-2,6-diona; 2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-4-(bencilamino)isoindolina-1,3-diona; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}propanamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}-3-piridilcarboxamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}heptanamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}-2-furilcarboxamida; {N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)carbamoil}acetato de metilo; N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)pentanamida; N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)-2-tienilcarboxamida; N-f [2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il]metil}(butilamino)carboxamida; N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il]metil}(octilamino)carboxamida; o N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il]metil}(bencilamino)carboxamida.

En algunos casos, el agente es lenalidomida, pomalidomida, avadomida, un estereoisómero de lenalidomida, pomalidomida, avadomida o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable de los mismos. En algunos casos, el compuesto inmunomodulador es lenalidomida, un estereoisómero de lenalidomida o una sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato o polimorfo farmacéuticamente aceptable del mismo. En algunos casos, el compuesto inmunomodulador es lenalidomida, o ((RS)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona).

En algunos casos, los métodos incluyen poner en contacto las células que expresan el receptor recombinante con un agente que inhibe los receptores inhibidores de la superficie celular, por ejemplo, el receptor beta del factor de crecimiento transformante (TGFpR). En algunos casos, las células administradas, por ejemplo, las células que expresan el receptor recombinante, pueden manipularse para que resistan los efectos de las citoquinas inmunosupresoras que pueden inhibir sus funciones efectoras (consultar, por ejemplo, Foster et al., J Immunother. (2008) 31:500-505; Bollard et al., Molecular Therapy. (2012) 20:S22; Bendle et al., J. Immunol. (2013) 191(6):3232-3239). En algunos casos, el agente adicional es un anticuerpo anti-TGFp o un anticuerpo anti-TGFpR (consultar, por ejemplo, la WO 2011/109789).

En algunos casos, el agente adicional modula el metabolismo, la señalización y/o el transporte de factores inmunosupresores, por ejemplo, la adenosina. En algunos casos, el agente adicional es un inhibidor de la adenosina extracelular o del receptor de adenosina, o un agente que provoca una reducción o una disminución de los niveles de adenosina extracelular, como un agente que impide la formación de, degrada, inactiva y/o disminuye la adenosina extracelular. En algunos casos, el agente adicional es un antagonista del receptor de adenosina, como el receptor A2a, A2b y/o A3. En algunos casos, el antagonista es un péptido, o un pepidomimético, que se une al receptor de adenosina pero no desencadena una vía intracelular dependiente de la proteína G1. Los antagonistas del receptor de adenosina ejemplares se describen en las Patentes de Estados Unidos N° 5,565,566; 5,545,627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; y 6,322,771; y Jacobson y Gao, Nat Rev Drug Discov. (2006) 5(3): 247-264.

En algunos casos, el agente es un antagonista del receptor de A2 (A2R), como un antagonista A2a. Los antagonistas de A2R ejemplares incluyen KW6002 (istradefyline), SCH58261, cafeína, paraxantina, 3,7-dimetil-1-propargilxantina (DMPX), 8-(m-clorostiril) cafeína (CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, preladenante, vipadenante (BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP, y un ácido nucleico inhibidor dirigido a la expresión de A2R, por ejermplo, ARNip o ARNhc, o cualquier anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo que se dirija a un A2R. En algunos casos, el agente es un antagonista de A2R descrito en, por ejemplo, Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; y Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8,883,500; US 20140377240; WO02/055083; US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 y US 8,987,279).

En algunos casos, los métodos incluyen la administración de agentes adicionales que son inmunoestimulantes. En algunos casos, el agente adicional puede promover de manera general la proliferación, expansión, supervivencia y/o eficacia de las células inmunitarias. En algunos casos, el agente adicional puede promover específicamente las células administradas, por ejemplo, células que expresan receptores recombinantes. En algunos casos, el agente adicional es una citoquina. En algunos casos, el agente adicional es un ligando.

En algunos casos, el agente adicional es un ligando inmunoestimulador, por ejemplo, CD40L. En algunos casos, el agente adicional es una citoquina, por ejemplo, IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, factor estimulante de colonias de granulocitos macrófagos (GM-CSF), interferón alfa, beta o gamma (IFN) y eritropoyetina (EPO). En algunos casos, el agente es una citoquina. En algunos casos, el agente inmunomodulador es una citoquina o es un agente que induce la expresión aumentada de una citoquina en el microambiente tumoral. Las citoquinas tienen funciones importantes relacionadas con la expansión, diferenciación, supervivencia y homeostasis de las células T. Las citoquinas que pueden administrarse al sujeto que recibe las células y/o composiciones descritas en la presente incluyen una o más de IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-18 e IL-21. En algunos casos, la citoquina induce un aumento de la expresión de células T en el microambiente tumoral. En algunos casos, la citoquina administrada es IL-7, IL-15 o IL-21, o una combinación de las mismas. En algunos casos, la administración de la citoquina al sujeto que tiene una respuesta subóptima a la administración de las células manipuladas, por ejemplo, las células que expresan CAR, mejora la eficacia y/o la actividad antitumoral de las células administradas, por ejemplo, las células que expresan CAR.

En algunos casos, el agente es un inhibidor de la señalización del factor 1 alfa inducible por hipoxia (HIF-1a). Los inhibidores ejemplares de HIF-1a son digoxina, acriflavina, sirtuina-7 y ganetespib.

En algunos casos, el agente incluye un inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa, por ejemplo, un inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa descrito en la presente. En algunos casos, el inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa es un inhibidor de SHP-1, por ejemplo, un inhibidor de SHP-1 descrito en la presente, como, por ejemplo, estibogluconato sódico. En algunos casos, el inhibidor de la proteína tirosina fosfatasa es un inhibidor de SHP-2, por ejemplo, un inhibidor de SHP-2 descrito en la presente.

En algunos aspectos, el método da como resultado un aumento de por lo menos 2 veces, por lo menos 4 veces, por lo menos 10 veces o por lo menos 20 veces en las copias de ácido nucleico que codifica el receptor recombinante, por ejemplo, CAR, por microgramo de ADN, por ejemplo, en el suero, plasma, sangre o tejido, por ejemplo, muestra tumoral, del sujeto. (de la sección antigua, pasar a la sección de método de modulación)

En algunos aspectos, el método da como resultado una proliferaciónin vivoalta de las células administradas, por ejemplo, medida por citometría de flujo. En algunos aspectos, se detectan proporciones pico elevadas de las células. Por ejemplo, en algunos casos, en un nivel o concentración pico o máximo después de la administración de las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR, en la sangre o en el sitio de la enfermedad del sujeto o fracción de glóbulos blancos de la misma, por ejemplo, fracción de PBMC o fracción de células T, por lo menos aproximadamente el 10%, por lo menos aproximadamente el 20%, por lo menos aproximadamente el 30%, por lo menos aproximadamente el 40%, por lo menos aproximadamente el 50%, por lo menos aproximadamente el 60%, por lo menos aproximadamente el 70%, por lo menos aproximadamente el 80%, o por lo menos aproximadamente el 90% de las células expresan el receptor recombinante, por ejemplo, el CAR.

En algunos casos, el método da como resultado una concentración máxima, en la sangre o suero u otro fluido corporal u órgano o tejido del sujeto, de por lo menos 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10.000 o 15.000 copias de ácido nucleico que codifica el receptor, por ejemplo, el CAR, por microgramo de ADN, o por lo menos 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 o 0,9 células que expresan el receptor, por ejemplo, el CAR, por número total de células mononucleares de sangre periférica (PBMC), número total de células mononucleares, número total de células T o número total de microlitros de sangre o suero u otro fluido corporal u órgano o tejido del sujeto. En algunos casos, las células que expresan el receptor se detectan en por lo menos el 10, 20, 30, 40, 50 o 60% del total de PBMC en la sangre del sujeto, y/o en dicho nivel durante por lo menos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48 o 52 semanas después de que se hayan administrado las células T, por ejemplo, células T que expresan CAR o durante 1, 2, 3, 4 o 5, o más años después de dicha administración.

2. Agentes para reducir la expansión celular

En algunos casos, los métodos y artículos de fabricación descritos pueden usarse en conexión con, o implicar o incluir, uno o más agentes o tratamientos capaces de modular, por ejemplo, aumentar o disminuir, la expansión, proliferación y/o actividad de células T CAR+. En algunos casos, el agente es capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+. En algunos casos, la expansión y/o proliferación de células T CAR+ por encima de un determinado valor umbral, o la expresión elevada de determinados biomarcadores, como marcadores inflamatorios, puede asociarse con una respuesta reducida y/o una respuesta duradera reducida. En algunos casos, si se determina que las células administradas en el sujeto tienen una expansión muy alta o excesiva, o si se determina que el sujeto expresa biomarcadores asociados con una expansión muy alta o excesiva, puede determinarse que no es probable que el sujeto logre una respuesta y/o una respuesta duradera. En algunos casos, la expansión muy alta o excesiva también se asocia a una carga tumoral alta y a la producción de citoquinas inflamatorias. En algunos casos, puede administrarse a estos sujetos un agente que reduzca, disminuya y/o amortigüe la expansión y/o proliferación de células T CAR+.

En algunos contextos, la eficacia óptima de una terapia celular administrada, por ejemplo, la terapia de células T CAR+, puede depender de la capacidad de las células administradas para activarse, expandirse, ejercer varias funciones efectoras, persistir, incluso a largo plazo, diferenciarse, transicionar o participar en la reprogramación hacia ciertos estados fenotípicos (como estados de memoria de larga duración, menos diferenciados y efectores), para evitar o reducir las condiciones inmunosupresoras en el microentorno local de una enfermedad, para proporcionar respuestas de recuerdo eficaces y robustas tras la eliminación y reexposición al ligando o antígeno objetivo, y evitar o reducir el agotamiento, la anergia, la tolerancia periférica, la diferenciación terminal y/o la diferenciación a un estado supresivo. En algunos aspectos, una expansión o proliferación excesiva o muy elevada de las células T administradas puede dar lugar a agotamiento, anergia, tolerancia periférica, diferenciación terminal y/o diferenciación a un estado supresivo. En algunos aspectos, un agente que puede reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ puede prevenir o reducir dicho agotamiento o diferenciación.

En algunos casos, la administración del agente es capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+, como un esteroide, puede dar lugar a una expansión reducida de las células T CAR+ administradas. En algunos casos, la administración del agente puede dar lugar a cambios en los parámetros, por ejemplo, medidas volumétricas reducidas, por ejemplo, SPD, o expresión de marcadores inflamatorios, por ejemplo, LDH.

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es un esteroide, es un antagonista o inhibidor de un receptor de citoquinas, como el receptor de IL-6, el receptor CD122 (receptor de IL-2Rbeta) o CCR2, o es un inhibidor de una citoquina, como IL-6, MCP-1, IL-10, IFN-Y, IL-8 o IL-18. En algunos casos, el agente es un agonista del receptor de citoquina y/o citoquina, como TGF-p. En algunos casos, el agente, por ejemplo, agonista, antagonista o inhibidor, es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno, una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es un esteroide, por ejemplo, un corticosteroide. Los corticosteroides incluyen típicamente glucocorticoides y mineralocorticoides.

En los métodos descritos en la presente puede usarse cualquier corticosteroide, por ejemplo, un glucocorticoide. En algunos casos, los glucocorticoides incluyen glucocorticoides sintéticos y no sintéticos. Los glucocorticoides ejemplares incluyen, pero no se limitan a: alclometasonas, algestonas, beclometasonas (por ejemplo dipropionato de beclometasona), betametasonas (por ejemplo 17-valerato de betametasona, acetato sódico de betametasona, fosfato sódico de betametasona, valerato de betametasona), budesónidas, clobetasoles (por ejemplo, propionato de clobetasol), clobetasonas, clocortolonas (por ejemplo, pivalato de clocortolona). pivalato de clocortolona), cloprednoles, corticosteronas, cortisonas e hidrocortisonas (por ejemplo, acetato de hidrocortisona), cortivazoles, deflazacortes, desonidas, desoximetasonas, dexametasonas (por ejemplo dexametasona 21-fosfato, dexametasona acetato, dexametasona fosfato sódico), diflorasonas (por ejemplo, diflorasona diacetato), diflucortolonas, difluprednatos, enoxolonas, fluazacortes, flucloronidas, fludrocortisonas (por ejemplo, acetato de fludrocortisona), flumetasonas (por ejemplo, pivalato de flumetasona), flunisólidos, fluocinolonas (por ejemplo, acetónido de fluocinolona), fluocinónidos, fluocortinas, fluocortolonas, fluorometolonas (por ejemplo, acetato de fluorometolona), fluperolonas (por ejemplo, acetato de fluperolona), acetato de fluperolona), fluprednidenos, fluprednisolonas, flurandrenólidos, fluticasonas (por ejemplo propionato de fluticasona), formocortales, halcinónidos, halobetasoles, halometasonas, halopredonas, hidrocortamatos, hidrocortisonas (por ejemplo hidrocortisona 21-butirato, hidrocortisona aceponato, hidrocortisona acetato, hidrocortisona buteprato, hidrocortisona butirato, hidrocortisona cipionato, hidrocortisona hemisuccinato, hidrocortisona probutato, hidrocortisona fosfato sódico, hidrocortisona succinato sódico, valerato de hidrocortisona), etabonato de loteprednol, mazipredonas, medrisonas, meprednisonas, metilprednisolonas (aceponato de metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, hemisuccinato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona), mometasonas (por ejemplo, aceponato de metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, hemisuccinato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona).g., furoato de mometasona), parametasonas (por ejemplo, acetato de parametasona), prednicarbatos, prednisolonas (por ejemplo prednisolona 25-dietilaminoacetato, prednisolona fosfato sódico, prednisolona 21-hemisuccinato, prednisolona acetato; famesilato de prednisolona, hemisuccinato de prednisolona, prednisolona-21 (beta-D-glucurónido), metasulfobenzoato de prednisolona, esteaglato de prednisolona, tebutato de prednisolona, tetrahidroftalato de prednisolona), prednisonas, prednivales, prednilidenos, rimexolonas, tixocortoles, triamcinolonas (por ej.ej. acetónido de triamcinolona, benetónido de triamcinolona, hexacetónido de triamcinolona, acetónido de triamcinolona 21-palmitato, diacetato de triamcinolona). Estos glucocorticoides y las sales de los mismos se analizan con detalle, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16a ed. 1980).

En algunos casos, el esteroide se administra después de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular, o una primera administración o dosis de las mismas, o después del inicio de cualquiera de las anteriores. En algunos casos, el esteroide se administra en el plazo de 12, 18, 24, 36 o 48 horas, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 días o más, o 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 semanas o más, después de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores. En algunos casos, el esteroide se administra en un plazo de 12, 24, 36 o 48 horas, o en un plazo de 2, 3 o 4 días después de la administración de la inmunoterapia y/o terapia celular, o una primera administración o dosis de la misma, o después del inicio de cualquiera de los anteriores.

En algunos ejemplos, el glucocorticoide se selecciona entre cortisonas, dexametasonas, hidrocortisonas, metilprednisolonas, prednisolonas y prednisonas. En un ejemplo particular, el glucocorticoide es la dexametasona.

En algunos casos, el agente es un corticosteroide y se administra en una cantidad terapéuticamente eficaz para reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+. En algunos casos, los indicadores de mejora o éxito del tratamiento incluyen la determinación de parámetros farmacocinéticos, por ejemplo, cualquiera de los descritos en la presente, como la concentración pico de células T CAR+ y/o la AUC.

En algunos aspectos, el corticosteroide se proporciona en una dosis terapéuticamente eficaz. La concentración terapéuticamente eficaz puede determinarse empíricamente mediante pruebas en sistemas in vitro o in vivo (por ejemplo, modelos animales) conocidos. Además, pueden emplearse modelos animales para ayudar a identificar los intervalos de dosificación óptimos. La dosificación precisa, que puede determinarse empíricamente, puede depender de la preparación terapéutica concreta, el régimen y el calendario de dosificación, la vía de administración y la gravedad de la enfermedad.

El corticosteroide puede administrarse en cualquier cantidad que sea eficaz para reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+. El corticosteroide, por ejemplo, glucocorticoide, puede administrarse, por ejemplo, en una cantidad comprendida entre<0 ,1>y<100>mg, o aproximadamente, por dosis,<0 ,1>y 80 mg, 0,1 y 60 mg, 0,1 y 40 mg, 0,1 y 30 mg, 0,1 y 20 mg, 0,1 y 15 mg, 0,1 y 10 mg, 0,1 y 5 mg, 0,2 y 40 mg, 0,2 y 30 mg, 0,2 y 20 mg, 0,2 y 15 mg, 0,2 y 10 mg, 0,2 y 5 mg, 0,4 y 40 mg, 0,4 y 30 mg, 0,4 y 20 mg, 0,4 y 15 mg, 0,4 y 10 mg, 0,4 y 5 mg, 0,4 y 4 mg, 1 y 20 mg, 1 y 15 mg o 1 y 10 mg, a un sujeto humano adulto de 70 kg. Típicamente, el corticosteroide, como un glucocorticoide, se administra en una cantidad entre 0,4 y 20 mg, de o de aproximadamente 0,4 mg, 0,5 mg, 0,6 mg, 0,7 mg, 0,75 mg, 0,8 mg, 0,9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg,<6>mg, 7 mg,<8>mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg o 20 mg por dosis, a un sujeto humano adulto medio.

En algunos casos, el corticosteroide puede administrarse, por ejemplo, a una dosificación de o de aproximadamente 0,001 mg/kg (del sujeto), 0,002 mg/kg, 0,003 mg/kg, 0,004 mg/kg, 0,005 mg/kg, 0,006 mg/kg, 0,007 mg/kg, 0,008 mg/kg, 0,009 mg/kg, 0,01 mg/kg, 0,015 mg/kg, 0,02 mg/kg, 0,025 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,035 mg/kg, 0,04 mg/kg, 0,045 mg/kg, 0,05 mg/kg, 0,055 mg/kg, 0,06 mg/kg, 0,065 mg/kg, 0,07 mg/kg, 0,075 mg/kg, 0,08 mg/kg, 0,085 mg/kg, 0,09 mg/kg, 0,095 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,15 mg/kg, 0,2 mg/kg, 0,25 mg/kg, 0,30 mg/kg, 0,35 mg/kg, 0,40 mg/kg, 0,45 mg/kg, 0,50 mg/kg, 0,55 mg/kg, 0,60 mg/kg, 0,65 mg/kg, 0,70 mg/kg, 0,75 mg/kg, 0,80 mg/kg, 0.85 mg/kg, 0,90 mg/kg, 0,95 mg/kg, 1 mg/kg, 1,05 mg/kg, 1,1 mg/kg, 1,15 mg/kg, 1,20 mg/kg, 1,25 mg/kg, 1,3 mg/kg, 1,35 mg/kg o 1,4 mg/kg, a un sujeto humano adulto medio, que suele pesar entre 70 kg y 75 kg.

El corticosteroide, o glucocorticoide, por ejemplo la dexametasona, puede administrarse por vía oral (comprimidos, líquido o concentrado líquido), PO, intravenosa (IV), intramuscular o por cualquier otra vía conocida o descrita en la presente (por ejemplo, con respecto a las formulaciones farmacéuticas). En algunos aspectos, el corticosteroide se administra como un bolo, y en otros aspectos puede administrarse durante un periodo de tiempo. En algunos aspectos, el corticosteroide se administra como un bolo, y en otros aspectos puede administrarse durante un periodo de tiempo, por ejemplo, durante 1,2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50,<6 0>, 70, 80, 90, 120, 180, 240, 360, 480 o 720 minutos o más, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores.

En algunos aspectos, el glucocorticoide puede administrarse durante un periodo de más de un día, como por ejemplo durante dos días, durante 3 días o durante 4 o más días. En algunos casos, el corticosteroide puede administrarse una vez al día, dos veces al día, o tres veces o más al día. Por ejemplo, el corticosteroide, por ejemplo, dexametasona, puede administrarse en algunos ejemplos a 10 mg (o equivalente) IV dos veces al día durante tres días.

En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide, se administra en dosis múltiples durante un período de tiempo. En algunos aspectos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide, puede administrarse durante un período de más de 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 11, 12, 13, 14 días o más, o más de 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10 semanas o más. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide, puede administrarse en dosis múltiples o repetidas durante una duración total de aproximadamente<6>, 12, 18, 24 horas o más, o 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 11, 12, 13, 14 días o más, o 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10 semanas o más. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide, puede administrarse una vez al día, dos veces al día, o tres veces o más al día. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide, puede administrarse por lo menos o por lo menos aproximadamente cada 1, 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 horas, o cada 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 11, 12, 13, 14 días, o cada 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9 o 10 semanas o más. En algunos aspectos, el esteroide, por ejemplo, glucocorticoide, puede administrarse en dosis múltiples o repetidas, durante un periodo de más de un día, como durante dos días, durante 3 días o durante 4 o más días. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide o glucocorticoide, puede administrarse durante una duración total de<6>, 12, 18, 24 horas o 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9 o 10 días o más. En algunos casos, el corticosteroide puede administrarse una vez al día, dos veces al día, o tres veces o cuatro veces o más al día. En algunos casos, el corticosteroide puede administrarse por lo menos o aproximadamente cada 1, 2, 3, 4, 5,<6>, 7,<8>, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 horas o más.

En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide o glucocorticoide, puede administrarse a una dosis dada al día, por ejemplo, una dosis específica al día. En algunos casos, la dosis ejemplar por día incluye 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 mg/kg por día, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores y equivalentes de los mismos. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide o glucocorticoide, puede administrarse a o aproximadamente 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2,0, 2,5, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 110, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 16,0, 17,0, 18,0, 19,0, 20,0, 25,0, 50,0 o 100,0 mg/kg/día, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores y equivalentes de los mismos. En algunos casos, la dosis ejemplar por día incluye 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 o 200 mg por día, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores y equivalentes de los mismos. En algunos casos, el esteroide, por ejemplo, corticosteroide o glucocorticoide, puede administrarse a o aproximadamente a 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 o 200 mg/día, o un intervalo definido por dos cualquiera de los valores anteriores y equivalentes de los mismos.

En algunos casos, la dosificación de corticosteroide, por ejemplo, glucocorticoide, se administra en dosificaciones sucesivamente más bajas por tratamiento. Por lo tanto, en algunos de estos regímenes de tratamiento, la dosis de corticosteroide se reduce gradualmente. Por ejemplo, el corticosteroide puede administrarse a una dosis inicial (o dosis equivalente, como en el caso de la dexametasona) de 4 mg, y en cada administración sucesiva la dosis puede reducirse, de tal manera que la dosis sea de 3 mg en la siguiente administración, 2 mg en la siguiente administración y 1 mg en la siguiente administración.

Generalmente, la dosis de corticosteroide administrada depende del corticosteroide específico, ya que hay una diferencia de potencia entre los distintos corticosteroides. Típicamente se entiende que los fármacos varían en potencia y que, por lo tanto, las dosis pueden variar para obtener efectos equivalentes. La Tabla 4 muestra la equivalencia en términos de potencia para varios glucocorticoides y vías de administración. La potencia equivalente en la dosificación clínica es bien conocida. La información relativa a la dosificación equivalente de esteroides (de manera no cronoterapéutica) puede encontrarse en el British National Formulary (BNF) 37, marzo de 1999.

Por tanto, en algunos casos, el esteroide se administra en una cantidad de dosificación equivalente de o de aproximadamente 1,0 mg a 20 mg de dexametasona al día, como de 1,0 mg a 15 mg de dexametasona al día, de 1,0 mg a 10 mg de dexametasona al día, de 2,0 mg a 8 mg de dexametasona al día, o de 2,0 mg a 6,0 mg de dexametasona al día, cada uno inclusive. En algunos casos, el esteroide se administra en una dosis equivalente de o de aproximadamente 4 mg o de o de aproximadamente 8 mg de dexametasona al día.

En algunos casos, el esteroide se administra si la fiebre persiste tras el tratamiento con tocilizumab. Por ejemplo, en algunos casos, se administra dexametasona por vía oral o intravenosa a una dosificación de 5-10 mg hasta cada 6-12 horas con fiebres continuadas. En algunos casos, el tocilizumab se administra concurrentemente o después de la administración de suplementos de oxígeno.

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es un inhibidor de la actividad de una célula microglial. En algunos casos, la administración del inhibidor modula la actividad de la microglía. En algunos casos, el inhibidor es un antagonista que inhibe la actividad de una vía de señalización en la microglía. En algunos casos, el inhibidor de la microglía afecta a la homeostasis, supervivencia y/o proliferación microglial. En algunos casos, el inhibidor se dirige a la vía de señalización de CSF1R. En algunos casos, el inhibidor es un inhibidor de CSF1R. En algunos casos, el inhibidor es una molécula pequeña. En algunos casos, el inhibidor es un anticuerpo.

En algunos aspectos, la administración del inhibidor da como resultado uno o más efectos seleccionados entre una alteración de la homeostasis y viabilidad microglial, una disminución o bloqueo de la proliferación de células microgliales, una reducción o eliminación de células microgliales, una reducción de la activación microglial, una reducción de la producción de óxido nítrico de la microglía, una reducción de la actividad de la óxido nítrico sintasa en la microglía, o la protección de las neuronas motoras afectadas por la activación microglial. En algunos casos, el agente altera el nivel de un biomarcador sérico o sanguíneo de inhibición del CSF1R, o una disminución del nivel de N-telopéptido reticulado con colágeno tipo 1 (NTX) urinario en comparación con el momento justo antes del inicio de la administración del inhibidor. En algunos casos, la administración del agente inhibe transitoriamente la actividad de la microglía y/o en donde la inhibición de la actividad de la microglía no es permanente. En algunos casos, la administración del agente inhibe transitoriamente la actividad del CSF1R y/o en donde la inhibición de la actividad del CSF1R no es permanente.

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ se selecciona entre un agente antiinflamatorio, un inhibidor de la NADPH oxidasa (NOX2), un bloqueante de los canales de calcio, un bloqueante de los canales de sodio, inhibe el GM-CSF, inhibe el CSF1R, se une específicamente al CSF-1, se une específicamente a la IL-34 inhibe la activación del factor nuclear kappa B (NF-<k>B), activa un receptor CB<2>y/o es un agonista de CB<2>, un inhibidor de la fosfodiesterasa, inhibe el microARN-155 (miR-155), regula por incremento el microARN-124 (miR-124), inhibe la producción de óxido nítrico en la microglía, inhibe la óxido nítrico sintasa o activa el factor de transcripción NRF2 (también denominado factor nuclear (eritroide derivado 2) tipo 2 o NFE2L2).

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es uno que se dirige a una citoquina, por ejemplo es un antagonista o inhibidor de una citoquina, como el factor de crecimiento transformante beta (TGF-beta), interleucina 6 (IL-6), interleucina 10 (IL-10), IL-2, MIP1p (CCL4), TNF alfa, IL-1, interferón gamma (IFN-gamma) o proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1). En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es uno que se dirige a (por ejemplo inhibe o es antagonista de) un receptor de citoquinas, como el receptor de IL-6 (IL-6R), el receptor de IL-2 (IL-2R/CD25), el receptor de MCP-1 (CCL2) (CCR2 o CCR4), un receptor de TGF-beta (TGF-beta I, II o III), el receptor de IFN-gamma (IFNGR), el receptor de MlP1p (por ejemplo, CCR5), receptor de TNF alfa (por ejemplo, Tn FR1), receptor de IL-1 (IL1-Ra/IL-1Rp) o receptor de IL-10 (IL-10R).

La cantidad de un agente seleccionado capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ puede determinarse mediante técnicas clínicas estándar. Los eventos adversos ejemplares incluyen, entre otros, un aumento de la alanina aminotransferasa, un aumento de la aspartato aminotransferasa, escalofríos, neutropenia febril, dolor de cabeza, hipotensión, disfunción ventricular izquierda, encefalopatía, hidrocefalia, convulsiones y/o temblor.

En algunos casos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de o de aproximadamente 30 mg a 5000 mg, como de 50 mg a 1000 mg, de 50 mg a 500 mg, de 50 mg a 200 mg, de 50 mg a 100 mg, de 100 mg a 1000 mg, de 100 mg a 500 mg, de 100 mg a 200 mg, de 200 mg a 1000 mg, de 200 mg a 500 mg o de 500 mg a 1000 mg.

En algunos casos, el agente se administra de o de aproximadamente 0,5 mg/kg a 100 mg/kg, como de o de aproximadamente 1 mg/kg a 50 mg/kg, de 1 mg/kg a 25 mg/kg, de 1 mg/kg a 10 mg/kg, de 1 mg/kg a 5 mg/kg, de 5 mg/kg a 100 mg/kg, de 5 mg/kg a 50 mg/kg, de 5 mg/kg a 25 mg/kg, de 5 mg/kg a 10 mg/kg, de 10 mg/kg a 100 mg/kg, de 10 mg/kg a 50 mg/kg, de 10 mg/kg a 25 mg/kg, de 25 mg/kg a 100 mg/kg, de 25 mg/kg a 50 mg/kg de 50 mg/kg a 100 mg/kg. En algunos casos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de o de aproximadamente 1 mg/kg a 10 mg/kg, de 2 mg/kg a 8 mg/kg, de 2 mg/kg a 6 mg/kg, de 2 mg/kg a 4 mg/kg o de 6 mg/kg a 8 mg/kg, cada uno inclusive. En algunos aspectos, el agente se administra en una cantidad de dosificación de por lo menos o por lo menos aproximadamente o aproximadamente 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg o más. En algunos aspectos, el agente se administra en una dosis de 4 mg/kg u 8 mg/kg.

En algunos casos, el agente se administra por inyección, por ejemplo, inyecciones intravenosas o subcutáneas, inyección intraocular, inyección periocular, inyección subretiniana, inyección intravítrea, inyección transeptal, inyección subescleral, inyección intracoroidea, inyección intracameral, inyección subconyuntival, inyección subconjuntival, inyección subtenoniana, inyección retrobulbar, inyección peribulbar o administración yuxtaescleral posterior. En algunos casos, se administran por vía parenteral, intrapulmonar e intranasal y, si se desea un tratamiento local, administración intralesional. Las infusiones parenterales incluyen la administración intramuscular, intravenosa, intraarterial, intraperitoneal o subcutánea.

En algunos casos, la cantidad del agente se administra alrededor de o aproximadamente dos veces al día, diariamente, cada dos días, tres veces a la semana, semanalmente, cada dos semanas o una vez al mes.

En algunos casos, el agente se administra como parte de una composición o formulación, como una composición o formulación farmacéutica como se describe a continuación. Por tanto, en algunos casos, la composición que comprende el agente se administra como se describe más adelante. En otros aspectos, el agente se administra solo y puede administrarse por cualquier vía de administración aceptable conocida o por una descrita en la presente, como con respecto a composiciones y formulaciones farmacéuticas.

En algunos casos, el agente es una molécula pequeña, péptido, proteína, anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, un mimético de anticuerpo, un aptámero o una molécula de ácido nucleico. En algunos casos, el método implica la administración de un inhibidor de la actividad de la microglía. En algunos casos, el agente es un antagonista que inhibe la actividad de una vía de señalización en la microglía. En algunos casos, el agente afecta a la homeostasis, supervivencia y/o proliferación microglial.

En algunos casos, el agente capaz de reducir, disminuir y/o amortiguar la expansión y/o proliferación de células T CAR+ es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno. En algunos casos, el agente es tocilizumab, siltuximab, sarilumab, olokizumab (CDP6038), elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 o FM101.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de la IL-6 o del receptor de IL-6 (IL-6R). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IL-6, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a IL-6 o IL-6R. Por ejemplo, en algunos casos, el agente es o comprende tocilizumab (atlizumab) o sarilumab, anticuerpos anti-IL-6R. En algunos casos, el agente es un anticuerpo anti-IL-6R descrito en la Patente de Estados Unidos N° 8.562.991. En algunos casos, el agente que se dirige a la IL-6 es un anticuerpo anti-IL-6, como siltuximab, elsilimomab, ALD518/BMS-945429, sirukumab (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301, FM101 u olokizumab (CDP6038). En algunos aspectos, el agente puede neutralizar la actividad de la IL-6 inhibiendo las interacciones ligando-receptor. La viabilidad de este tipo general de enfoque se ha demostrado con un antagonista del receptor de origen natural de la interleucina-1. Consultar Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343:336-340. En algunos aspectos, el antagonista o inhibidor de IL-6/IL-6R es una muteína de IL-6, como la descrita en la Patente de Estados Unidos N° 5591827. En algunos aspectos, el agente que es un antagonista o inhibidor de IL-6/IL-6R es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es tocilizumab. En algunos casos, el tocilizumab se administra como intervención temprana de acuerdo con los métodos descritos, y/o con los artículos de fabricación o composiciones descritos, a una dosificación de o de aproximadamente 1 mg/kg a 12 mg/kg, como de o de aproximadamente 4 mg/kg, 8 mg/kg o 10 mg/kg. En algunos casos, el tocilizumab se administra mediante infusión intravenosa. En algunos casos, el tocilizumab se administra para una fiebre persistente de más de 39° C que dura 10 horas y que no responde al acetaminofeno. En algunos casos, se administra una segunda dosis de tocilizumab si los síntomas reaparecen después de 48 horas de la dosis inicial.

En algunos casos, el agente es un agonista o estimulador del TGF-p o de un receptor del TGF-p (por ejemplo, el receptor I, II o III de TGF-p). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que aumenta la actividad de TGF-p, tal como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a TGF-p o a uno de sus receptores. En algunos casos, el agente que es un agonista o estimulador de TGF-p y/o su receptor es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de MCP-1 (CCL2) o un receptor de MCP-1 (por ejemplo, el receptor de MCP-1 CCR2 o CCR4). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de MCP-1, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a MCP-1 o a uno de sus receptores (CCR2 o CCR4). En algunos casos, el antagonista o inhibidor de m CP-1 es cualquiera de los descritos en Gong et al. J Exp Med. 1997 Jul 7; 186(1): 131-137 o Shahrara et al. J Immunol 2008; 180:3447-3456. En algunos casos, el agente que es un antagonista o inhibidor de MCP-1 y/o su receptor (CCR2 o CCR4) es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de IFN-y o un receptor de IFN-y (IFNGR). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad del IFN-<y>, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une al IFN-<y>o a su receptor (IFNGR). En algunos aspectos, el anticuerpo neutralizante de IFN-gamma es cualquiera de los descritos en Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92 u Ozmen et al. J Immunol. Abril de 1993 1;150(7):2698-705. En algunos casos, el agente que es un antagonista o inhibidor de IFN-y/IFNGR es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de IL-10 o el receptor de IL-10 (IL-10R). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IL-10, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a IL-10 o IL-10R. En algunos aspectos, el anticuerpo neutralizante de IL-10 es cualquiera de los descritos en Dobber et al. Cell Immunol. febrero 1995;160(2):185-92 o Hunter et al. J Immunol. junio 2005 1;174(11):7368-75. En algunos casos, el agente que es un antagonista o inhibidor de IL-10/IL-10R es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de la IL-1 o el receptor de la IL-1 (IL-1R). En algunos aspectos, el agente es un antagonista del receptor de IL-1, que es una forma modificada de IL-1R, como la anakinra (consultar, por ejemplo, Fleischmann et al., (2006) Annals of the rheumatic diseases. 65(8): 1006-12). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que neutraliza la actividad de IL-1, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a IL-1 o IL-1R, como canakinumab (consultar también EP 2277543). En algunos casos, el agente que es antagonista o inhibidor de IL-1/IL-1R es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de un factor de necrosis tumoral (TNF) o un receptor del factor de necrosis tumoral (TNFR). En algunos aspectos, el agente es un anticuerpo que bloquea la actividad del TNF, como un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que se une a un TNF, como TNFa, o a su receptor (TNFR, por ejemplo, TNFRp55 o TNFRp75). En algunos aspectos, el agente se selecciona entre infliximab, adalimumab, certolizumab pegol, golimumab y etanercept. En algunos casos, el agente que es un antagonista o inhibidor de TNF/TNFR es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un antagonista o inhibidor de la señalización a través de la cascada de señalización Janus quinasa (JAK) y dos transductores de señales y activador de la transcripción (STAT). Las proteínas JAK/STAT son componentes comunes de la señalización de citoquinas y receptores de citoquinas. En algunos casos, el agente que es antagonista o inhibidor de JAK/STAT, como ruxolitinib (consultar, por ejemplo, Mesa et al. (2012) Nature Reviews Drug Discovery. 11 (2):103-104), tofacitinib (también conocido como Xeljanz, Jakvinus tasocitinib y CP-690550), Baricitinib (también conocido como LY-3009104, INCB-28050), Filgotinib (G-146034, GLPG-0634), Gandotinib (LY-2784544), Lestaurtinib (CEP-701), Momelotinib (GS-0387, CYT-387), Pacritinib (SB1518) y Upadacitinib (ABT-494). En algunos casos, el agente es una molécula pequeña, una proteína o péptido, o un ácido nucleico.

En algunos casos, el agente es un inhibidor de la quinasa. Los inhibidores de la quinasa, como un inhibidor de la quinasa CDK4, un inhibidor de la quinasa BTK, un inhibidor de la quinasa MNK o un inhibidor de la quinasa DGK, pueden regular las vías de supervivencia constitutivamente activas que existen en las células tumorales y/o modular la función de las células inmunitarias. En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de la tirosina quinasa de Bruton (BTK), por ejemplo, ibrutinib. En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de la fosfatidilinositol-4,5-bisfosfato 3-quinasa (PI3K). En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de CDK4, por ejemplo, un inhibidor de CDK4/6. En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de mTOR como, por ejemplo, rapamicina, un análogo de rapamicina, OSI-027. El inhibidor de mTOR puede ser, por ejemplo, un inhibidor de mTORC1 y/o un inhibidor de mTORC2. En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de MNK, o un inhibidor dual de PI3K/mTOR. En algunos casos, otros inhibidores de la quinasa ejemplares incluyen el inhibidor de AKT perifosina, el inhibidor de mTOR temsirolimus, los inhibidores de la quinasa Src dasatinib y fostamatinib, los inhibidores de JAK2 pacritinib y ruxolitinib, los inhibidores de PKCp enzastaurina y briostatina, y el inhibidor de AAK alisertib.

En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de BTK seleccionado entre ibrutinib (PCI-32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; y LFM-A13. En algunos casos, el inhibidor de BTK no reduce ni inhibe la actividad quinasa de la quinasa inducible por interleucina-2 (ITK), y se selecciona entre GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; y LFM-A13.

En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de BTK, por ejemplo, ibrutinib (1-[(3R)-3-[4-amino-3 -(4-fenoxifenil)-1H-pirazolo[3,4-d]pirimidin-1-il]piperidin-1-il]prop-2-en-1-ona; también conocido como PCI-32765). En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de BTK, por ejemplo, ibrutinib (PCI-32765). En algunos casos, se administran 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 o más ciclos de ibrutinib. En algunos casos, el inhibidor de BTK es un inhibidor de BTK descrito en la Solicitud Internacional WO 2015/079417.

En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de PI3K. La PI3K es fundamental en la vía PI3K/Akt/mTOR implicada en la regulación del ciclo celular y la supervivencia del linfoma. Un inhibidor de PI3K ejemplar incluye idelalisib (inhibidor de PI3K6). En algunos casos, el agente es idelalisib y rituximab.

En algunos casos, el agente es un inhibidor del objetivo de rapamicina en mamíferos (mTOR). En algunos casos, el inhibidor de la quinasa es un inhibidor de mTOR seleccionado entre temsirolimus; ridaforolimus (también conocido como AP23573 y MK8669); everolimus (RAD001); rapamicina (AY22989); simapimod; AZD8055; PF04691502; SF1126; y XI,765. En algunos casos, el agente es un inhibidor de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK), como vemurafenib, dabrafenib y trametinib.

En algunos casos, puede usarse un dispositivo, como la tecnología de resina absorbente con filtración de sangre o plasma, para reducir los niveles de citoquinas. En algunos casos, el dispositivo usado para reducir los niveles de citoquinas es un absorbedor físico de citoquinas, como un absorbedor extracorpóreo de citoquinas. En algunos casos, puede usarse un absorbedor físico de citoquinas para eliminar las citoquinas del torrente sanguíneo de maneraex vivo,extracorpórea. En algunos casos, el agente es un polímero poroso. En algunos casos, el agente es CytoSorb (consultar, por ejemplo, Basu et al. Indian J Crit Care Med. (2014) 18(12): 822-824).

V. CÉLULAS MANIPULADAS

En algunos casos, los métodos descritos se asocian con la administración de una terapia celular, como para el tratamiento de enfermedades o afecciones que incluyen diversos tumores. En algunos casos, la terapia de células T para su uso de acuerdo con los métodos descritos incluye la administración de células manipuladas que expresan receptores recombinantes diseñados para reconocer y/o unirse específicamente a moléculas asociadas con la enfermedad o afección y dan como resultado una respuesta, como una respuesta inmunitaria contra tales moléculas al unirse a tales moléculas. Los receptores pueden incluir receptores quiméricos, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR), y otros receptores de antígenos transgénicos incluyendo receptores de células T transgénicos (TCR) o receptores de autoanticuerpos quiméricos (CAAR).

En algunos casos, las células contienen o están manipuladas para que contengan un receptor manipulado, por ejemplo, un receptor de antígeno manipulado, como un receptor de antígeno quimérico (CAR) o un receptor de células T (TCR). También se describen poblaciones de tales células, composiciones que contienen tales células y/o enriquecidas para tales células, por ejemplo, en las que se enriquecen o seleccionan células de un cierto tipo, como células T o células CD8+ o CD4+. Entre las composiciones se encuentran composiciones farmacéuticas y formulaciones para administración, como por ejemplo para terapia celular adoptiva. También se describen métodos terapéuticos para administrar las células y composiciones a sujetos, por ejemplo, pacientes.

Por tanto, en algunos casos, las células incluyen uno o más ácidos nucleicos introducidos mediante ingeniería genética, y de este modo expresan productos recombinantes o genéticamente manipulados de tales ácidos nucleicos. En algunos casos, la transferencia de genes se lleva a cabo estimulando primero las células, por ejemplo combinándolas con un estímulo que induce una respuesta como la proliferación, la supervivencia y/o la activación, por ejemplo, medida por la expresión de una citoquina o marcador de activación, seguido de la transducción de las células activadas y la expansión en cultivo hasta un número suficiente para aplicaciones clínicas.

A. Receptores recombinantes

Por lo general, las células expresan receptores recombinantes, como receptores de antígenos que incluyen receptores de antígenos funcionales no TCR, por ejemplo, receptores de antígenos quiméricos (CAR), y otros receptores de unión a antígenos, como receptores de células T transgénicos (TCR). Entre los receptores también se encuentran otros receptores quiméricos, como los receptores quiméricos de autoanticuerpos (CAAR).

1. Receptores de antígenos quiméricos (CAR)

En algunos casos, el receptor recombinante incluye un receptor de antígeno quimérico (CAR). En algunos casos, el CAR es específico para un antígeno particular (o marcador o ligando), como un antígeno expresado en la superficie de un tipo de célula particular. En algunos casos, el antígeno es un polipéptido. En algunos casos, es un carbohidrato u otra molécula. En algunos casos, el antígeno se expresa selectivamente o se sobreexpresa en las células de la enfermedad o afección, por ejemplo, el tumor o las células patógenas, en comparación con las células o tejidos normales o no objetivo. En otros casos, el antígeno se expresa en las células normales y/o en las células manipuladas.

En casos particulares, el receptor recombinante, como un receptor quimérico, contiene una región de señalización intracelular, que incluye un dominio de señalización citoplasmática (también denominado indistintamente dominio de señalización intracelular), como una región citoplasmática (intracelular) capaz de inducir una señal de activación primaria en una célula T, por ejemplo, un dominio de señalización citoplasmática de un componente del receptor de células T (TCR) (por ejemplo, un dominio de señalización citoplasmática de una cadena zeta de una cadena CD3-zeta (CD3Z) o una variante funcional o porción de señalización de la misma) y/o que comprende un motivo de activación basado en tirosina inmunorreceptora (ITAM).

En algunos casos, el receptor quimérico contiene además un dominio de unión extracelular que se une específicamente a un antígeno (o a un ligando). En algunos casos, el receptor quimérico es un CAR que contiene un dominio extracelular de reconocimiento de antígeno que se une específicamente a un antígeno. En algunos casos, el antígeno (o ligando) es una proteína expresada en la superficie de las células. En algunos casos, el CAR es un CAR de tipo TCR y el antígeno es un antígeno peptídico procesado, como un antígeno peptídico de una proteína intracelular, que, como un TCR, se reconoce en la superficie celular en el contexto de una molécula del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC).

Los receptores de antígeno ejemplares, incluyendo los CAR, y los métodos de manipulación e introducción de tales receptores en células, incluyen los descritos, por ejemplo, en los números de publicación de solicitud de patente internacional WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 números de publicación de solicitud de Patente de Estados Unidos US2002131960, US2013287748, US20130149337, Patentes de Estados Unidos N° 6.451.995, 7.446.190, 8.252.592,, 8.339.645, 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319, 7.070.995, 7.265.209, 7.354.762, 7.446.191, 8.324.353, y 8.479.118, y número de solicitud de Patente Europea EP2537416, y/o los descritos por Sadelain et al, Cancer Discov., 3(4): 388 398 (2013); Davila et al. PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol. 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 18(2): 160-75 (2012). En algunos aspectos, los receptores de antígeno incluyen un CAR como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.446.190, y los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente Internacional N° WO/2014055668 A1. Ejemplos de los CAR incluyen CAR como los divulgados en cualquiera de las publicaciones mencionadas anteriormente, como la WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, Patente de Estados Unidos N° 7,446,190, Patente de Estados Unidos N° 8,389,282, Kochenderfer et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); y Brentjens et al., Sci Transl Med,. 5(177) (2013). Consultar también la WO2014031687, la US 8,339,645, la US 7,446,179, la US 2013/0149337, la Patente de Estados Unidos N° 7,446,190, y la Patente de Estados Unidos N° 8,389,282. Los receptores quiméricos, como los CAR, generalmente incluyen un dominio de unión a antígeno extracelular, como una porción de una molécula de anticuerpo, generalmente una región de cadena pesada variable (VH) y/o una región de cadena ligera variable (VL) del anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo scFv.

En algunos casos, el antígeno al que se dirige el receptor es un polipéptido. En algunos casos, es un carbohidrato u otra molécula. En algunos casos, el antígeno se expresa selectivamente o se sobreexpresa en las células de la enfermedad o afección, por ejemplo, el tumor o las células patógenas, en comparación con las células o tejidos normales o no objetivo. En otros casos, el antígeno se expresa en las células normales y/o en las células manipuladas.

En algunos casos, el CAR se construye con una especificidad para un antígeno particular (o marcador o ligando), como un antígeno expresado en un tipo celular particular al que se dirige la terapia adoptiva, por ejemplo, un marcador de cáncer, y/o un antígeno destinado a inducir una respuesta amortiguadora, como un antígeno expresado en un tipo celular normal o no enfermo. Por tanto, el CAR incluye típicamente en su porción extracelular una o más moléculas de unión a antígeno, como uno o más fragmentos, dominios o porciones de unión a antígeno, o uno o más dominios variables de anticuerpo, y/o moléculas de anticuerpo. En algunos casos, el CAR incluye una porción o porciones de unión a antígeno de una molécula de anticuerpo, como un fragmento de anticuerpo de cadena sencilla (scFv) derivado de las cadenas variables pesada (VH) y ligera (VL) de un anticuerpo monoclonal (mAb).

En algunos casos, el anticuerpo o la porción de unión a antígeno del mismo se expresa en las células como parte de un receptor recombinante, como un receptor de antígeno. Entre los receptores de antígenos se encuentran los receptores de antígenos funcionales no TCR, como los receptores de antígenos quiméricos (CAR). En general, un CAR que contiene un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que muestra una especificidad similar al TCR dirigida contra complejos péptido-MHC también puede denominarse CAR similar al TCR. En algunos casos, el dominio de unión a antígeno extracelular específico para un complejo MHC-péptido de un CAR de tipo TCR está unido a uno o más componentes de señalización intracelular, en algunos aspectos mediante conectores y/o dominio o dominios transmembrana. En algunos casos, tales moléculas pueden imitar o aproximar típicamente una señal a través de un receptor de antígeno natural, como un TCR, y, opcionalmente, una señal a través de dicho receptor en combinación con un receptor coestimulador.

En algunos casos, el receptor recombinante, como un receptor quimérico (por ejemplo, CAR), incluye un dominio de unión a ligando que se une, por ejemplo se une específicamente, a un antígeno (o a un ligando). Entre los antígenos a los que se dirigen los receptores quiméricos se encuentran los expresados en el contexto de una enfermedad, afección o tipo de célula a la que se dirige a través de terapia celular adoptiva. Entre las enfermedades y afecciones se encuentran enfermedades y trastornos proliferativos, neoplásicos y malignos, incluyendo cánceres y tumores, incluyendo cánceres hematológicos, cánceres del sistema inmunitario, como linfomas, leucemias y/o mielomas, como leucemias B, T y mieloides, linfomas y mielomas múltiples.

En algunos casos, el antígeno (o un ligando) es un polipéptido. En algunos casos, es un carbohidrato u otra molécula. En algunos casos, el antígeno (o ligando) se expresa o sobreexpresa selectivamente en las células de la enfermedad o afección, por ejemplo, el tumor o las células patógenas, en comparación con las células o tejidos normales o no objetivo.

En algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, scFv) que reconoce específicamente un antígeno, como un antígeno intacto, expresado en la superficie de una célula.

Los antígenos a los que se dirigen los receptores en algunos casos son o incluyen avp6 integrina (avb6 integrina), antígeno de maduración de células B (BCMA), B7-H3, B7-H6, anhidrasa carbónica 9 (CA9, también conocida como CAIX o G250), un antígeno de cáncer de testículos, el antígeno de cáncer de testículos 1B (CTAG, también conocido como NY-ESO-1 y LAGE-2), el antígeno carcinoembrionario (CEA), una ciclina, la ciclina A2, el ligando 1 de quimiocinas con motivo C-C (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, proteína del factor de crecimiento epidérmico (EGFR), proteína truncada del factor de crecimiento epidérmico (tEGFR), mutación del receptor del factor de crecimiento epidérmico de tipo III (EGFR vIII), glicoproteína epitelial 2 (EPG-2), glicoproteína epitelial 40 (EPG-40), efrinaB2, receptor de efrina A2 (EPHa2), receptor de estrógenos, receptor Fc tipo 5 (FCRL5; también conocido como receptor Fc homólogo 5 o FCRH5), receptor de acetilcolina fetal (AchR fetal), proteína de unión a folato (FBP), receptor de folato alfa, gangliósido GD2, GD2 O-acetilado (OGD2), gangliósido<g>D3, glicoproteína 100 (gp100), receptor 5D acoplado a proteína G (GPCR5D), Her2/neu (receptor tirosina quinasa erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), dímeros erbB, antígeno humano de alto peso molecular asociado a melanoma (HMW-MAA), antígeno de superficie de la hepatitis B, antígeno leucocitario humano A1 (HLA-A1), antígeno leucocitario humano A2 (HLA-A2), receptor de IL-22 alfa (IL-22Ra), receptor de IL-13 alfa 2 (IL-13Ra2), receptor de dominio de inserción de quinasa (kdr), cadena ligera kappa, molécula de adhesión celular L1 (L1-CAM), epítopo CE7 de L1-CAM, miembro A de la familia 8 que contiene repetición rica en leucina (LRRC8A), Lewis Y, antígeno asociado a melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, mesotelina, c-Met, citomegalovirus murino (CMV), mucina 1 (MUC1), MUC16, miembro D de ligandos del grupo de asesinas naturales 2 (NKG2D), melanina A (MART-1), molécula de adhesión celular neural (NCAM), antígeno oncofetal, antígeno preferentemente expresado del melanoma (PRAME), receptor de progesterona, antígeno prostático específico, antígeno de células madre prostáticas (PSCA), antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA), receptor tirosina quinasa similar al receptor huérfano 1 (ROR1), survivina, glicoproteína trofoblástica (TPBG también conocida como 5T4), glicoproteína 72 asociada a tumores (TAG72), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGFR), receptor del factor de crecimiento endotelial vascular 2 (VEGFR2), tumor de Wilms 1 (WT-1), un antígeno específico de patógeno o expresado por patógeno, o un antígeno asociado con un marcador universal, y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por el VIH, VHC, VHB u otros patógenos. En algunos casos, los antígenos a los que se dirigen los receptores incluyen antígenos asociados con una enfermedad maligna de células B, como cualquiera de una serie de marcadores de células B conocidos. En algunos casos, el antígeno es o incluye CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Igkappa, Iglambda, CD79a, CD79b o CD30.

Los antígenos a los que se dirigen los receptores en algunos casos son o incluyen el receptor de tirosina quinasa huérfano ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, mesotelina, CEA y antígeno de superficie de la hepatitis B, receptor antifolato, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, o 4, FBP, receptor fetal de la aceticolina e, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadena ligera kappa, Lewis Y, molécula de adhesión celular L1, MAGE-A1, mesotelina, MUC1, MUC16, PSCA, ligandos NKG2D, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, ROR1, TAG72, VEGF-R2, antígeno carcinoembrionario (CEA), antígeno prostático específico, PSMA, Her2/neu, receptor de estrógenos, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD-2, y MAGE A3, CE7, tumor de Wilms 1 (W<t>-1 ), una ciclina, como la ciclina A<1>(CCNA1), y/o moléculas biotiniladas, y/o moléculas expresadas por el VIH, el VHC, el VHB u otros patógenos. En algunos casos, el CAR se une a un antígeno específico de un patógeno o a un antígeno expresado por un patógeno. En algunos casos, el CAR es específico para antígenos víricos (como el VIH, el VHC, el VHB, etc.), antígenos bacterianos y/o antígenos parasitarios.

En algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo similar al TCR, como un anticuerpo o un fragmento de unión a antígeno (por ejemplo, scFv) que reconoce específicamente un antígeno intracelular, como un antígeno asociado a tumor, presentado en la superficie celular como un complejo MHC-péptido. En algunos casos, un anticuerpo o una porción de unión a antígeno del mismo que reconoce un complejo MHC-péptido puede expresarse en células como parte de un receptor recombinante, como un receptor de antígeno. Entre los receptores de antígenos se encuentran los receptores de antígenos funcionales no TCR, como los receptores de antígenos quiméricos (CAR). En general, un CAR que contiene un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno que muestra una especificidad similar al TCR dirigida contra complejos péptido-MHC también puede denominarse CAR similar al TCR.

La referencia al "complejo mayor de histocompatibilidad" (MHC) se refiere a una proteína, generalmente una glicoproteína, que contiene un sitio de unión a péptidos polimórficos o ranura de unión que puede, en algunos casos, formar complejos con antígenos peptídicos de polipéptidos, incluyendo antígenos peptídicos procesados por la maquinaria celular. En algunos casos, las moléculas MHC pueden mostrarse o expresarse en la superficie celular, incluso como un complejo con péptido, es decir, complejo MHC-péptido, para la presentación de un antígeno en una conformación reconocible por un receptor de antígeno en células T, como un TCR o anticuerpo similar al TCR. Generalmente, las moléculas de MHC de clase I son heterodímeros que tienen una cadena a que abarca toda la membrana, en algunos casos con tres dominios a, y una microglobulina p2 asociada no covalentemente. Por lo general, las moléculas de MHC de clase II están compuestas por dos glicoproteínas transmembrana, a y p, ambas de las cuales abarcan típicamente la membrana. Una molécula de MHC puede incluir una porción efectiva de un MHC que contenga un sitio o sitios de unión a un antígeno para unir un péptido y las secuencias necesarias para el reconocimiento por parte del receptor de antígeno apropiado. En algunos casos, las moléculas de MHC de clase I transportan péptidos originados en el citosol a la superficie celular, donde un complejo MHC-péptido es reconocido por células T, como generalmente las células T CD8+, pero en algunos casos las células T CD4+. En algunos casos, las moléculas de MHC de clase II transportan péptidos originados en el sistema vesicular a la superficie celular, donde son reconocidos típicamente por las células T CD4+. Generalmente, las moléculas de MHC están codificadas por un grupo de loci enlazados, que se denominan colectivamente H-2 en el ratón y antígeno leucocitario humano (HLA) en el ser humano. Por lo tanto, el MHC típicamente humano también puede denominarse antígeno leucocitario humano (HLA).

El término "complejo MHC-péptido" o "complejo péptido-MHC", o variaciones de los mismos, se refiere a un complejo o asociación de un antígeno peptídico y una molécula de MHC, por ejemplo, generalmente, mediante interacciones no covalentes del péptido en la ranura o hendidura de unión de la molécula de MHC. En algunos casos, el complejo MHC-péptido está presente o se muestra en la superficie de las células. En algunos casos, el complejo MHC-péptido puede ser reconocido específicamente por un receptor de antígeno, como un TCR, un CAR similar a TCR o porciones de unión a antígeno del mismo.

En algunos casos, un péptido, como un antígeno peptídico o epítopo, de un polipéptido puede asociarse con una molécula de MHC, por ejemplo para ser reconocido por un receptor antigénico. Generalmente, el péptido se deriva o se basa en un fragmento de una molécula biológica más larga, como un polipéptido o una proteína. En algunos casos, el péptido tiene típicamente entre 8 y 24 aminoácidos de longitud. En algunos casos, un péptido tiene una longitud de o de aproximadamente 9 a 22 aminoácidos para su reconocimiento en el complejo MHC Clase II. En algunos casos, un péptido tiene una longitud de o de aproximadamente 8 a 13 aminoácidos para su reconocimiento en el complejo MHC de clase I. En algunos casos, tras el reconocimiento del péptido en el contexto de una molécula de MHC, como el complejo MHC-péptido, el receptor de antígeno, como TCR o CAR similar a TCR, produce o desencadena una señal de activación a la célula T que induce una respuesta de célula T, como proliferación de célula T, producción de citoquinas, una respuesta de célula T citotóxica u otra respuesta.

En algunos casos, un anticuerpo similar al TCR o una porción de unión a antígeno son conocidos o pueden producirse mediante métodos conocidos (consultar, por ejemplo, las solicitudes publicadas de Estados Unidos N° US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; US 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; y la publicación internacional de PCT N° WO 03/068201).

En algunos casos, un anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a un complejo MHC-péptido, puede producirse inmunizando a un huésped con una cantidad eficaz de un inmunógeno que contenga un complejo MHC-péptido específico. En algunos casos, el péptido del complejo MHC-péptido es un epítopo de antígeno capaz de unirse al MHC, como un antígeno tumoral, por ejemplo un antígeno tumoral universal, antígeno de mieloma u otro antígeno como se describe a continuación. En algunos casos, se administra entonces una cantidad eficaz del inmunógeno a un huésped para provocar una respuesta inmunitaria, en donde el inmunógeno retiene una forma tridimensional del mismo durante un periodo de tiempo suficiente para provocar una respuesta inmunitaria contra la presentación tridimensional del péptido en la ranura de unión de la molécula del MHC. A continuación, se analiza el suero recogido del huésped para determinar si se producen anticuerpos deseados que reconozcan la presentación tridimensional del péptido en la ranura de unión de la molécula de MHC. En algunos casos, pueden evaluarse los anticuerpos producidos para confirmar que el anticuerpo puede diferenciar el complejo MHC-péptido de la molécula de MHC sola, el péptido de interés solo, y un complejo de MHC y péptido irrelevante. A continuación, pueden aislarse los anticuerpos deseados.

En algunos casos, un anticuerpo o porción de unión a antígeno del mismo que se une específicamente a un complejo MHC-péptido puede producirse empleando métodos de presentación de bibliotecas de anticuerpos, como bibliotecas de anticuerpos de fagos. En algunos casos, pueden generarse bibliotecas de presentación en fagos de Fab mutante, scFv u otras formas de anticuerpo, por ejemplo, en las que los miembros de la biblioteca están mutados en uno o más residuos de una CDR o varias CDR. Consultar, por ejemplo, la solicitud publicada de Estados Unidos N° US20020150914, US2014/0294841; y Cohen CJ. et al. (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332.

El término "anticuerpo" se usa en la presente en el sentido más amplio e incluye anticuerpos policlonales y monoclonales, incluyendo anticuerpos intactos y fragmentos de anticuerpos funcionales (de unión a antígeno), incluyendo fragmentos de unión a antígeno (Fab), fragmentos F(ab')<2>, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rIgG), regiones de cadena pesada variable (Vh) capaces de unirse específicamente al antígeno, fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla, incluyendo fragmentos variables de cadena sencilla (scFv), y anticuerpos de dominio único (por ejemplo, sdAb, sdFv, nanocuerpo). El término abarca formas de inmunoglobulinas manipuladas genéticamente y/o modificadas de otro modo, como intracuerpos, pepticuerpos, anticuerpos quiméricos, anticuerpos totalmente humanos, anticuerpos humanizados y anticuerpos heteroconjugados, anticuerpos multiespecíficos, por ejemplo, biespecíficos, diacuerpos, triacuerpos y tetracuerpos, di-scFv en tándem, tri-scFv en tándem. A menos que se indique lo contrario, debe entenderse que el término "anticuerpo" abarca los fragmentos funcionales de anticuerpo de los mismos. El término también abarca anticuerpos intactos o de longitud completa, incluyendo anticuerpos de cualquier clase o subclase, incluyendo IgG y subclases de la misma, IgM, IgE, IgA e IgD.

En algunos casos, las proteínas de unión a antígeno, los anticuerpos y fragmentos de unión a antígeno de los mismos reconocen específicamente un antígeno de un anticuerpo de longitud completa. En algunos casos, las cadenas pesada y ligera de un anticuerpo pueden ser de longitud completa o pueden ser una porción de unión a antígeno (un Fab, F(ab')2, Fv o un fragmento Fv de cadena sencilla (scFv)). En otros casos, la región constante de la cadena pesada del anticuerpo se elige entre, por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, e IgE, particularmente elegida entre, por ejemplo, IgG1, IgG2, IgG3, e IgG4, más particularmente, IgG1 (por ejemplo, IgG1 humana). En otro caso, la región constante de la cadena ligera del anticuerpo se elige entre, por ejemplo, kappa o lambda, en particular kappa.

Entre los anticuerpos descritos hay fragmentos de anticuerpos. Un "fragmento de anticuerpo" se refiere a una molécula distinta de un anticuerpo intacto que comprende una porción de un anticuerpo intacto que se une al antígeno al que se une el anticuerpo intacto. Ejemplos de fragmentos de anticuerpos incluyen, pero no se limitan a, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')<2>; diacuerpos; anticuerpos lineales; regiones de cadena pesada variable (V<h>), moléculas de anticuerpo de cadena sencilla como scFvs y anticuerpos de cadena sencilla Vh; y anticuerpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticuerpos. En casos particulares, los anticuerpos son fragmentos de anticuerpo de cadena sencilla que comprenden una región de cadena pesada variable y/o una región de cadena ligera variable, como scFvs.

El término "región variable" o "dominio variable" se refiere al dominio de la cadena pesada o ligera de un anticuerpo que interviene en la unión del anticuerpo al antígeno. Los dominios variables de la cadena pesada y de la cadena ligera (V<h>y V<l>, respectivamente) de un anticuerpo nativo generalmente tienen estructuras similares, y cada dominio comprende cuatro regiones marco conservadas (FR) y tres CDR. (Consultar, por ejemplo, Kindt et al. Kuby Immunology, 6a ed., W.H. Freeman and Co., página 91 (2007). Un único dominio V<h>o V<l>puede ser suficiente para conferir especificidad de unión al antígeno. Además, los anticuerpos que se unen a un antígeno particular pueden aislarse usando un dominio V<h>o V<l>de un anticuerpo que se une al antígeno para seleccionar una biblioteca de dominios V<l>o V<h>complementarios, respectivamente. Consultar, por ejemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991).

Los anticuerpos de dominio único son fragmentos de anticuerpos que comprenden todo o parte del dominio variable de cadena pesada o todo o parte del dominio variable de cadena ligera de un anticuerpo. En ciertos casos, un anticuerpo de dominio único es un anticuerpo humano de dominio único. En algunos casos, el CAR comprende un dominio de cadena pesada de anticuerpo que se une específicamente al antígeno, como un marcador de cáncer o un antígeno de superficie celular de una célula o enfermedad a la que está dirigido, como una célula tumoral o una célula cancerosa, como cualquiera de los antígenos objetivo descritos en la presente o conocidos.

Los fragmentos de anticuerpos pueden elaborarse mediante varias técnicas, incluyendo, entre otras, la digestión proteolítica de un anticuerpo intacto, así como la producción mediante células huésped recombinantes. En algunos casos, los anticuerpos son fragmentos producidos recombinantemente, como fragmentos que comprenden disposiciones que no se producen de manera natural, como aquellos con dos o más regiones o cadenas de anticuerpos unidas por conectores sintéticos, por ejemplo, conectores peptídicos, y/o que no pueden producirse por digestión enzimática de un anticuerpo intacto que se produce de manera natural. En algunos casos, los fragmentos de anticuerpo son scFv.

Un anticuerpo "humanizado" es un anticuerpo en el que todos o casi todos los residuos de aminoácidos de la CDR proceden de CDR no humanas y todos o casi todos los residuos de aminoácidos de la FR proceden de FR humanas. Un anticuerpo humanizado puede incluir opcionalmente por lo menos una parte de una región constante de anticuerpo derivada de un anticuerpo humano. Una "forma humanizada" de un anticuerpo no humano se refiere a una variante del anticuerpo no humano que se ha humanizado, típicamente para reducir la inmunogenicidad para los humanos, conservando la especificidad y afinidad del anticuerpo no humano original. En algunos casos, algunos residuos de FR en un anticuerpo humanizado se sustituyen por residuos correspondientes de un anticuerpo no humano (por ejemplo, el anticuerpo del que se derivan los residuos de CDR), por ejemplo, para restaurar o mejorar la especificidad o afinidad del anticuerpo.

Por tanto, en algunos casos, el receptor de antígeno quimérico, incluyendo los CAR similares a TCR, incluye una porción extracelular que contiene un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En algunos casos, el anticuerpo o fragmento incluye un scFv. En algunos aspectos, el receptor de antígeno quimérico incluye una porción extracelular que contiene el anticuerpo o fragmento y una región de señalización intracelular. En algunos casos, la región de señalización intracelular comprende un dominio de señalización intracelular. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular es o comprende un dominio de señalización primaria, un dominio de señalización que es capaz de inducir una señal de activación primaria en una célula T, un dominio de señalización de un componente del receptor de células T (TCR), y/o un dominio de señalización que comprende un motivo de activación basado en tirosina inmunorreceptora (ITAM).

En algunos casos, el receptor recombinante como el CAR, incluyendo la porción de anticuerpo del receptor recombinante, por ejemplo, CAR, incluye además por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina, como una región bisagra, por ejemplo, una región bisagra de IgG4, y/o una región C<h>1/C<l>y/o Fc. En algunos casos, el receptor recombinante como el CAR, incluyendo la porción de anticuerpo del mismo, incluye además un espaciador, que puede ser o incluir por lo menos una porción de una región constante de inmunoglobulina o variante o versión modificada de la misma, como una región bisagra, por ejemplo, una región bisagra de IgG4, y/o una región C<h>1/C<l>y/o Fc. En algunos casos, el receptor recombinante comprende además un espaciador y/o una región bisagra. En algunos casos, la región constante o porción es de una IgG humana, como IgG4 o IgG1. En algunos aspectos, la porción de la región constante sirve como región espaciadora entre el componente de reconocimiento de antígeno, por ejemplo, scFv, y el dominio transmembrana. El espaciador puede tener una longitud que proporcione una mayor capacidad de respuesta de la célula tras la unión al antígeno, en comparación con la ausencia del espaciador. Los espaciadores ejemplares, por ejemplo, las regiones bisagra, incluyen los descritos en la solicitud de patente internacional número de publicación WO2014031687. En algunos ejemplos, el espaciador tiene o tiene aproximadamente 12 aminoácidos de longitud o no tiene más de 12 aminoácidos de longitud. Los espaciadores ejemplares incluyen aquellos que tienen por lo menos aproximadamente de 10 a 229 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 200 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 175 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 150 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 125 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 100 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 75 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 50 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 40 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 30 aminoácidos, aproximadamente de 10 a 20 aminoácidos, o aproximadamente de 10 a 15 aminoácidos, e incluyendo cualquier número entero entre los puntos extremos de cualquiera de los intervalos enumerados. En algunos casos, una región espaciadora tiene aproximadamente 12 aminoácidos o menos, aproximadamente 119 aminoácidos o menos, o aproximadamente 229 aminoácidos o menos. Los espaciadores ejemplares incluyen la bisagra de IgG4 sola, la bisagra de IgG4 unida a los dominios Ch2 y Ch3, o la bisagra de IgG4 enlazada al dominio Ch3. Los espaciadores ejemplares incluyen, pero no se limitan a, los descritos en Hudecek et al. Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), la solicitud de patente internacional número de publicación WO2014031687, la Patente de Estados Unidos N° 8.822.647 o la solicitud publicada N° US2014/0271635.

En algunos casos, la región o porción constante es de una IgG humana, como IgG4 o IgG1. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia ESKYGPPCPPCP (expuesta en la SEQ ID NO: 1), y está codificado por la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 2. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 3. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 4. En algunos casos, la región o porción constante es de IgD. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia expuesta en la SEQ ID NO: 5. En algunos casos, el espaciador tiene una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente el 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con cualquiera de las SEQ ID NOS: 1, 3, 4 y 5. En algunos casos, el espaciador tiene la secuencia expuesta en las SEQ ID NO: 26-34. En algunos casos, el espaciador tiene una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente el 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con cualquiera de las SEQ ID NO: 26-34.

El dominio de reconocimiento de antígeno generalmente está enlazado a uno o más componentes de señalización intracelular, como componentes de señalización que imitan la activación a través de un complejo receptor de antígeno, como un complejo de TCR, en el caso de un CAR, y/o señal a través de otro receptor de superficie celular. Por tanto, en algunos casos, el componente de unión a antígeno (por ejemplo, anticuerpo) está enlazado a uno o más dominios o regiones transmembrana y de señalización intracelular. En algunos casos, el dominio transmembrana está fusionado al dominio extracelular. En un caso, se usa un dominio transmembrana que se asocia de manera natural con uno de los dominios del receptor, por ejemplo, CAR. En algunos casos, el dominio transmembrana se selecciona o modifica mediante sustitución de aminoácidos para evitar la unión de dichos dominios a los dominios transmembrana de las mismas o diferentes proteínas de membrana de superficie para minimizar las interacciones con otros miembros del complejo receptor.

En algunos casos, el dominio transmembrana se deriva de una fuente natural o sintética. Cuando la fuente es natural, el dominio en algunos aspectos se deriva de cualquier proteína de membrana o transmembrana. Las regiones transmembrana incluyen las derivadas de (es decir, comprenden por lo menos la región o regiones transmembrana de) la cadena alfa, beta o zeta del receptor de células T, CD28, CD3 épsilon, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154. Alternativamente, el dominio transmembrana en algunos casos es sintético. En algunos aspectos, el dominio transmembrana sintético comprende residuos predominantemente hidrófobos como leucina y valina. En algunos aspectos, se encontrará un triplete de fenilalanina, triptófano y valina en cada extremo de un dominio transmembrana sintético. En algunos casos, el enlace se realiza mediante conectores, espaciadores y/o dominio o dominios transmembrana.

Entre los dominios o regiones de señalización intracelular están los que imitan o se aproximan a una señal a través de un receptor de antígeno natural, una señal a través de dicho receptor en combinación con un receptor coestimulador, y/o una señal a través de un receptor coestimulador solo. En algunos casos, está presente un conector oligo o polipeptídico corto, por ejemplo, un conector de entre 2 y 10 aminoácidos de longitud, como uno que contenga glicinas y serinas, por ejemplo, un doblete glicina-serina, y forma un enlace entre el dominio transmembrana y el dominio o región de señalización citoplasmática del CAR.

El receptor, por ejemplo, el CAR, generalmente incluye por lo menos un componente o componentes de señalización intracelular. En algunos casos, el receptor incluye un componente intracelular de un complejo TCR, como una cadena de TCR CD3 que media la activación de células T y la citotoxicidad, por ejemplo, la cadena CD3 zeta. Por tanto, en algunos aspectos, la porción de unión a antígeno está unida a uno o más módulos de señalización celular. En algunos casos, los módulos de señalización celular incluyen el dominio transmembrana de CD3, dominios de señalización intracelular de CD3 y/u otros dominios transmembrana de CD. En algunos casos, el receptor, por ejemplo, CAR, incluye además una porción de una o más moléculas adicionales como el receptor y de Fc, c D8, CD4, CD25 o CD16. Por ejemplo, en algunos aspectos, el CAR u otro receptor quimérico incluye una molécula quimérica entre CD3-zeta (CD3-Z) o receptor y de Fc y CD8, CD4, CD25 o CD16.

En algunos casos, tras la ligadura del CAR u otro receptor quimérico, el dominio citoplasmático o los dominios o regiones de señalización intracelular del receptor activan por lo menos una de las funciones efectoras o respuestas normales de la célula inmunitaria, por ejemplo, la célula T manipulada para que exprese el CAR. Por ejemplo, en algunos contextos, el CAR induce una función de una célula T, como la actividad citolítica o la actividad T-coadyuvante, como la secreción de citoquinas u otros factores. En algunos casos, se usa una porción truncada de un dominio o región de señalización intracelular de un componente receptor de antígeno o molécula coestimuladora en lugar de una cadena inmunoestimuladora intacta, por ejemplo, si transduce la señal de función efectora. En algunos casos, el dominio o dominios o regiones de señalización intracelular incluyen las secuencias citoplasmáticas del receptor de células T (TCR), y en algunos aspectos también las de los correceptores que en el contexto natural actúan en concierto con tales receptores para iniciar la transducción de señales después del acoplamiento del receptor de antígeno, y/o cualquier derivado o variante de tales moléculas, y/o cualquier secuencia sintética que tenga la misma capacidad funcional.

En el contexto de un TCR natural, la activación completa generalmente requiere no sólo la señalización a través del TCR, sino también una señal coestimuladora. Por lo tanto, en algunos casos, para promover la activación completa, también se incluye en el CAR un componente para generar una señal secundaria o coestimuladora. En otros casos, el CAR no incluye un componente para generar una señal coestimuladora. En algunos aspectos, se expresa un CAR adicional en la misma célula y proporciona el componente para generar la señal secundaria o coestimuladora.

En algunos aspectos, la activación de células T se describe como mediada por dos clases de secuencias de señalización citoplasmática: las que inician la activación primaria dependiente de antígeno a través del TCR (secuencias de señalización citoplasmática primaria), y las que actúan de manera independiente del antígeno para proporcionar una señal secundaria o coestimuladora (secuencias de señalización citoplasmática secundaria). En algunos aspectos, el CAR incluye uno o ambos de dichos componentes de señalización.

En algunos aspectos, el CAR incluye una secuencia de señalización citoplasmática primaria que regula la activación primaria del complejo de TCR. Las secuencias de señalización citoplasmática primaria que actúan de manera estimuladora pueden contener motivos de señalización que se conocen como motivos de activación basados en tirosina inmunorreceptora o ITAM. Ejemplos de ITAM que contienen secuencias de señalización citoplasmáticas primarias incluyen las derivadas de TCR zeta, FcR gamma, FcR beta, CD3 gamma, CD3 delta, CD3 épsilon, CD8, CD22, CD79a, CD79b y CD66d. En algunos casos, la molécula o moléculas de señalización citoplasmática en el CAR contienen un dominio o región de señalización citoplasmática, porción del mismo o secuencia derivada de CD3 zeta.

En algunos casos, el CAR incluye un dominio o región de señalización y/o una porción transmembrana de un receptor coestimulador, como CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 e ICOS. En algunos aspectos, el mismo CAR incluye tanto los componentes activadores como los coestimuladores.

En algunos casos, el dominio activador está incluido en un CAR, mientras que el componente coestimulador lo proporciona otro CAR que reconoce otro antígeno. En algunos casos, los<c>A<r>incluyen CAR activadores o estimuladores, CAR coestimuladores, ambos expresados en la misma célula (consultar la WO2014/055668). En algunos aspectos, las células incluyen uno o más CAR estimuladores o activadores y/o un CAR coestimulador. En algunos casos, las células incluyen además CAR inhibidores (iCARs, consultar Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013), como un CAR que reconoce un antígeno distinto del asociado y/o específico para la enfermedad o afección, por lo que una señal activadora emitida a través del CAR dirigido a la enfermedad se ve disminuida o inhibida por la unión del CAR inhibidor a su ligando, por ejemplo, para reducir los efectos fuera del objetivo.

En ciertos casos, el dominio de señalización intracelular comprende un dominio transmembrana y de señalización CD28 enlazado a un dominio intracelular CD3 (por ejemplo, CD3-zeta). En algunos casos, el dominio de señalización intracelular comprende unos dominios coestimuladores quiméricos de CD28 y CD137 (4-1BB, TNFRSF9), enlazados a un dominio intracelular de CD3 zeta.

En algunos casos, el CAR abarca uno o más, por ejemplo, dos o más, dominios coestimuladores y un dominio de activación, por ejemplo, dominio de activación primario, en la porción citoplasmática. Los CAR ejemplares incluyen componentes intracelulares de CD3-zeta, CD28 y 4-1BB.

En algunos casos, el CAR u otro receptor de antígeno incluye además un marcador, como un marcador de superficie celular, que puede usarse para confirmar la transducción o manipulación de la célula para expresar el receptor, como una versión truncada de un receptor de superficie celular, como EGFR truncado (tEGFR). En algunos aspectos, el marcador incluye todo o parte (por ejemplo, forma truncada) de CD34, un NGFR, o receptor del factor de crecimiento epidérmico (por ejemplo, tEGFR). En algunos casos, el ácido nucleico que codifica el marcador está enlazado operativamente a un polinucleótido que codifica para una secuencia conectora, como una secuencia conectora escindible, por ejemplo, T2A. Por ejemplo, un marcador, y opcionalmente una secuencia conectora, puede ser cualquiera de los divulgados en la solicitud de patente publicada N° WO2014031687. Por ejemplo, el marcador puede ser un EGFR truncado (tEGFR) que está, opcionalmente, enlazado a una secuencia conectora, como una secuencia conectora escindible T2A. Un polipéptido ejemplar para un EGFR truncado (por ejemplo, tEGFR) comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 7 o 16 o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 7 o 16. Una secuencia conectora de T2A ejemplar comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 6 o 17 o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 6 o 17.

En algunos casos, el marcador es una molécula, por ejemplo, una proteína de la superficie celular, que no se encuentra de manera natural en las células T o que no se encuentra de manera natural en la superficie de las células T, o una parte de la misma. En algunos casos, la molécula es una molécula no propia, por ejemplo, una proteína no propia, es decir, una que no es reconocida como "propia" por el sistema inmunitario del huésped al que se transferirán las células adoptivamente.

En algunos casos, el marcador no tiene ninguna función terapéutica y/o no produce ningún efecto, salvo el de ser usado como marcador para la ingeniería genética, por ejemplo, para seleccionar las células manipuladas con éxito. En otros casos, el marcador puede ser una molécula terapéutica o una molécula que ejerza algún efecto deseado, como un ligando para una célula que se va a encontrar in vivo, como una molécula coestimuladora o de punto de control inmunitario para mejorar y/o amortiguar las respuestas de las células tras la transferencia adoptiva y el encuentro con el ligando.

En algunos casos, los CAR se denominan CAR de primera, segunda y/o tercera generación. En algunos aspectos, un CAR de primera generación es aquel que únicamente proporciona una señal inducida por la cadena CD3 tras la unión al antígeno; en algunos aspectos, un CAR de segunda generación es aquel que proporciona dicha señal y una señal coestimuladora, como la que incluye un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador como CD28 o CD137; en algunos aspectos, un CAR de tercera generación es aquel que incluye múltiples dominios coestimuladores de diferentes receptores coestimuladores.

En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico incluye una porción extracelular que contiene un anticuerpo o fragmento de anticuerpo. En algunos aspectos, el receptor de antígeno quimérico incluye una porción extracelular que contiene el anticuerpo o fragmento y un dominio de señalización intracelular. En algunos casos, el anticuerpo o fragmento incluye un scFv y el dominio intracelular contiene un ITAM. En algunos aspectos, el dominio de señalización intracelular incluye un dominio de señalización de una cadena zeta de una cadena CD3-zeta (CD3Z). En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico incluye un dominio transmembrana que enlaza el dominio extracelular y el dominio de señalización intracelular. En algunos aspectos, el dominio transmembrana contiene una porción transmembrana de CD28. En algunos aspectos, el receptor de antígeno quimérico contiene un dominio intracelular de una molécula coestimuladora de células T. El dominio extracelular y el dominio transmembrana pueden estar enlazados directa o indirectamente. En algunos casos, el dominio extracelular y transmembrana están enlazados por un espaciador, como cualquiera descrito en la presente. En algunos casos, el receptor contiene la porción extracelular de la molécula de la que se deriva el dominio transmembrana, como una porción extracelular de CD28. En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico contiene un dominio intracelular derivado de una molécula coestimuladora de células T o una variante funcional de la misma, como entre el dominio transmembrana y el dominio de señalización intracelular. En algunos aspectos, la molécula coestimuladora de células T es CD28 o 4-1BB.

En algunos casos, el scFv se deriva del FMC63. El FMC63 es un anticuerpo monoclonal de IgG1 de ratón creado contra células Nalm-1 y -16 que expresan CD19 de origen humano (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). El anticuerpo FMC63 comprende la CDRH1y H2 expuestaas en las SEQ ID NO: 38 y 39 respectivamente, y la CDRH3 expuesta en las SEQ ID NO: 40 o 54 y la CDRL1 expuesta en las SEQ ID NO: 35 y la CDR L2 expuesta en las SEQ ID NO: 36 o 55 y la CDR L3 expuesta en las SEQ ID No : 37 o 56. El anticuerpo FMC63 comprende la región variable de cadena pesada (V<h>) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 41 y la región variable de cadena ligera (V<l>) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 42. En algunos casos, el svFv comprende una cadena ligera variable que contiene la CDRL1 expuesta en la SEQ ID NO: 35, una CDRL2 expuesta en la SEQ ID NO: 36 o 55, y una CDRL3 expuesta en la SEQ ID NO: 37 o 56 y/o una cadena pesada variable que contiene una CDRH1 expuesta en la SEQ ID NO:38, una CDRH2 expuesta en la SEQ ID n O:39, y una CDRH3 expuesta en la SEQ ID NO:40 o 54. En algunos casos, el scFv comprende una región de cadena pesada variable de f Mc 63 expuesta en la SEQ ID NO:41 y una región de cadena ligera variable de FMC63 expuesta en la SEQ ID NO: 42. En algunos casos, la cadena pesada variable y la cadena ligera variable están conectadas por un conector. En algunos casos, el conector se expone en la SEQ ID NO:24. En algunos casos, la scFv comprende, en orden, una VH, un conector y una VL. En algunos casos, el scFv comprende, en orden, una VL, un conector y una VH. En algunos casos, el svFc está codificado por una secuencia de nucleótidos expuesta en la SEQ ID NO:25 o una secuencia que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:25. En algunos casos, el scFv comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:43 o una secuencia que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:43.

En algunos casos, el scFv se deriva de SJ25C1. El SJ25C1 es un anticuerpo monoclonal de IgG1 de ratón creado contra células Nalm-1 y -16 que expresan CD19 de origen humano (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). El anticuerpo SJ25C1 comprende las CDRH1, H2 y H3 expuestas en las SEQ ID NO: 47-49, respectivamente, y las secuencias de CDRL1, L2 y L3 expuestas en las<s>E<q>ID NO: 44-46, respectivamente. El anticuerpo SJ25C1 comprende la región variable de cadena pesada (V<h>) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 50 y la región variable de cadena ligera (Vl) que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 51. En algunos casos, el svFv comprende una cadena ligera variable que contiene la CDRL1 expuesta en la SEQ ID NO: 44, una CDRL2 expuesta en la SEQ ID NO: 45, y una CDRL3 expuesta en la SEQ ID NO:46 y/o una cadena pesada variable que contiene una CDRH1 expuesta en la SEQ ID NO: 47, una CDRH2 expuesta en la SEQ ID NO: 48, y una CDRH3 expuesta en la SEQ ID NO:49. En algunos casos, el svFv comprende una región de cadena pesada variable de SJ25C1 expuesta en la SEQ ID NO:50 y una región de cadena ligera variable de SJ25C1 expuesta en la SEQ ID NO: 51. En algunos casos, la cadena pesada variable y la cadena ligera variable están conectadas por un conector. En algunos casos, el conector se expone en la SEQ ID NO:52. En algunos casos, el scFv comprende, en orden, una VH, un conector y una VL. En algunos casos, el scFv comprende, en orden, una VL, un conector y una VH. En algunos casos, el scFv comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:53 o una secuencia que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, o 99% de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:53.

Por ejemplo, en algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo, un dominio transmembrana que es o contiene una porción transmembrana de<c>D28 o una variante funcional del mismo, y un dominio de señalización intracelular que contiene una porción de señalización de CD28 o una variante funcional del mismo y una porción de señalización de CD3 zeta o una variante funcional del mismo. En algunos casos, el CAR contiene un anticuerpo, por ejemplo, un fragmento de anticuerpo, un dominio transmembrana que es o contiene una porción transmembrana de CD28 o una variante funcional del mismo, y un dominio de señalización intracelular que contiene una porción de señalización de un 4-1BB o una variante funcional del mismo y una porción de señalización de CD3 zeta o una variante funcional del mismo. En algunos de tales casos, el receptor incluye además un espaciador que contiene una porción de una molécula Ig, como una molécula de Ig humana, como una bisagra de Ig, por ejemplo una bisagra de IgG4, como un espaciador de sólo bisagra.

En algunos casos, el dominio transmembrana del receptor recombinante, por ejemplo, el CAR, es o incluye un dominio transmembrana de CD28 humano (por ejemplo, N° de registro P01747.1) o variante del mismo, como un dominio transmembrana que comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO:<8>o una secuencia de aminoácidos que muestra por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,<96>%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO:<8>; en algunos casos, la porción del receptor recombinante que contiene el dominio transmembrana comprende la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 9 o una secuencia de aminoácidos que tiene por lo menos o aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la misma, o como un dominio transmembrana de 27 aminoácidos de un CD28 humano.

En algunos casos, el receptor de antígeno quimérico contiene un dominio intracelular de una molécula coestimuladora de células T. En algunos aspectos, la molécula coestimuladora de células T es CD28 o 4-1BB.

En algunos casos, el dominio, región o componente o componentes de señalización intracelular del receptor recombinante, por ejemplo el CAR, contiene un dominio de señalización coestimuladora intracelular de CD28 humano o una variante funcional o porción del mismo, como un dominio con una sustitución LL a GG en las posiciones 186 187 de una proteína CD28 nativa. Por ejemplo, en algunos casos, el dominio o región de señalización intracelular puede comprender la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 10 u 11 o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 10 u 11. En algunos casos, el dominio o región intracelular comprende un dominio o región de señalización coestimuladora intracelular de 4-1BB (por ejemplo, Registro N° Q07011.1) o variante funcional o porción de la misma, como la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEQ ID NO: 12 o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 12 o como un dominio citoplasmático de 42 aminoácidos de un 4-1BB humano.

En algunos casos, el dominio o región de señalización intracelular del receptor recombinante, por ejemplo, el CAR, comprende una cadena de CD3 humana, opcionalmente un dominio o región de señalización estimuladora zeta o una variante funcional de la misma, como un dominio o región citoplasmática 112 AA de la isoterma 3 de CD3Z humana (N° de registro P20963.2) o un dominio o región de señalización de CD3 zeta como se describe en la Patente de Estados Unidos N° 7.446.190 o Patente de Estados Unidos N° 8.911.993. Por ejemplo, en algunos casos, el dominio o región de señalización intracelular comprende la secuencia de aminoácidos como se expone en la SEQ ID NO: 13, 14 o 15 o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%,<86>%, 87%,<88>%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 13, 14 o 15.

En algunos aspectos, el espaciador contiene sólo una región bisagra de una IgG, como sólo una bisagra de IgG4 o IgG1, como el espaciador sólo bisagra expuesto en la SEQ ID NO: 1. En otros casos, el espaciador es o contiene una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra derivada de IgG4, opcionalmente enlazada a un dominio de C<h>2 y/o C<h>3. En algunos casos, el espaciador es una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra de IgG4, enlazada a los dominios de Ch2 y Ch3, como se expone en la SEQ ID NO: 4. En algunos casos, el espaciador es una bisagra de Ig, por ejemplo, una bisagra de IgG4, enlazada a un dominio de C<h>3 solamente, como se expone en la SEQ ID NO: 3. En algunos casos, el espaciador es o comprende una secuencia rica en glicina-serina u otro conector flexible como los conectores flexibles conocidos.

Por ejemplo, en algunos casos, el CAR incluye un anticuerpo como un fragmento de anticuerpo, incluyendo scFv, un espaciador, como un espaciador que contiene una porción de una molécula de inmunoglobulina, como una región bisagra y/o una o más regiones constantes de una molécula de cadena pesada, como un espaciador que contiene bisagras de Ig, un dominio transmembrana que contiene todo o una porción de un dominio transmembrana derivado de CD28, un dominio de señalización intracelular derivado de CD28 y un dominio de señalización CD3 zeta. En algunos casos, el CAR incluye un anticuerpo o fragmento, como scFv, un espaciador como cualquiera de los espaciadores que contienen una bisagra de Ig, un dominio transmembrana derivado de CD28, un dominio de señalización intracelular derivado de 4-1BB y un dominio de señalización derivado de CD3 zeta.

En algunos casos, las moléculas de ácido nucleico que codifican tales constructos de CAR incluyen además una secuencia que codifica un elemento de omisión ribosomal T2A y/o una secuencia de tEGFR, por ejemplo, en sentido descendente de la secuencia que codifica el CAR. En algunos casos, la secuencia codifica un elemento de salto ribosómico T2A expuesta en la SEQ ID NO: 6 o 17, o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 6 o 17. En algunos casos, las células T que expresan un receptor de antígeno (por ejemplo, CAR) también pueden generarse para que expresen un EGFR truncado (EGFRt) como epítopo de selección no inmunogénico (por ejemplo, mediante la introducción de un constructo que codifica el CAR y el EGFRt separados por un conmutador ribosómico T2A para expresar dos proteínas del mismo constructo), que luego puede usarse como marcador para detectar tales células (consultar, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos N° 8.802.374). En algunos casos, la secuencia codifica una secuencia de tEGFR expuesta en la SEQ ID NO: 7 o 16, o una secuencia de aminoácidos que presenta por lo menos o por lo menos aproximadamente un 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o más de identidad de secuencia con la SEQ ID NO: 7 o 16.

Los receptores recombinantes, como los CAR, expresados por las células administradas al sujeto generalmente reconocen o se unen específicamente a una molécula que se expresa en, está asociada a y/o es específica de la enfermedad o afección o de las células de la misma que se están tratando. Tras la unión específica a la molécula, por ejemplo, el antígeno, el receptor generalmente envía una señal inmunoestimuladora, como una señal inducida por ITAM, a la célula, promoviendo de este modo una respuesta inmunitaria dirigida a la enfermedad o afección. Por ejemplo, en algunos casos, las células expresan un<c>A<r>que se une específicamente a un antígeno expresado por una célula o tejido de la enfermedad o afección o asociado con la enfermedad o afección.

2. Receptores de células T (TCR)

En algunos casos, se describen células manipuladas, como células T, que expresan un receptor de células T (TCR) o una porción de unión a antígeno del mismo que reconoce un epítopo peptídico o un epítopo de células T de un polipéptido objetivo, como un antígeno de una proteína tumoral, vírica o autoinmunitaria.

En algunos casos, un "receptor de células T" o "TCR" es una molécula que contiene cadenas a y p variables (también conocidas como TCRa y TCRp, respectivamente) o cadenas y y 6 variables (también conocidas como TCRa y TCRp, respectivamente), o porciones de unión a antígeno de las mismas, y que es capaz de unirse específicamente a un péptido unido a una molécula de MHC. En algunos casos, el TCR está en la forma ap. Típicamente, los TCR que existen en las formas ap y y6 son estructuralmente similares, pero las células T que los expresan pueden tener localizaciones anatómicas o funciones distintas. Un TCR puede encontrarse en la superficie de una célula o en forma soluble. Por lo general, un TCR se encuentra en la superficie de las células T (o linfocitos T), donde suele encargarse de reconocer antígenos unidos a moléculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC).

A menos que se indique lo contrario, debe entenderse que el término "TCR" abarca los TCR completos, así como porciones de unión a antígeno o fragmentos de unión a antígeno de los mismos. En algunos casos, el TCR es un TCR intacto o de longitud completa, incluyendo los TCR en forma ap o y6. En algunos casos, el TCR es una porción de unión a antígeno que es menor que un TCR de longitud completa pero que se une a un péptido específico unido en una molécula MHC, de tal manera que se une a un complejo MHC-péptido. En algunos casos, una porción o fragmento de unión a antígeno de un TCR puede contener sólo una porción de los dominios estructurales de un TCR de longitud completa o intacto, pero aun así es capaz de unirse al epítopo peptídico, como el complejo MHC-péptido, al que se une el TCR completo. En algunos casos, una porción de unión a antígeno contiene los dominios variables de un TCR, como la cadena a variable y la cadena p variable de un TCR, suficientes para formar un sitio de unión para unirse a un complejo MHC-péptido específico. Generalmente, las cadenas variables de un TCR contienen regiones determinantes de la complementariedad implicadas en el reconocimiento del péptido, MHC y/o complejo MHC-péptido.

En algunos casos, los dominios variables del TCR contienen bucles hipervariables, o regiones determinantes de la complementariedad (CDR), que generalmente son los principales contribuyentes al reconocimiento del antígeno y a las capacidades y especificidad de unión. En algunos casos, una CDR de un TCR o una combinación de las mismas forma todo o casi todo el sitio de unión al antígeno de una molécula de TCR dada. Las varias CDR dentro de una región variable de una cadena de TCR generalmente están separadas por regiones marco (FR), que generalmente muestran menos variabilidad entre las moléculas de TCR en comparación con las CDR (consultar, por ejemplo, Jores et al., Proc. Nat'1 Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990; Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988; consultar también Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003). En algunos casos, la CDR3 es la CDR principal responsable de la unión al antígeno o de la especificidad, o es la más importante entre las tres CDR de una región variable del TCR dada para el reconocimiento del antígeno, y/o para la interacción con la porción de péptido procesado del complejo péptido-MHC. En algunos contextos, la CDR1 de la cadena alfa puede interactuar con la parte N-terminal de ciertos péptidos antigénicos. En algunos contextos, la CDR1 de la cadena beta puede interactuar con la parte C-terminal del péptido. En algunos contextos, la CDR2 contribuye en mayor medida o es la CDR principal responsable de la interacción con o el reconocimiento de la porción MHC del complejo MHC-péptido. En algunos casos, la región variable de la cadena p puede contener otra región hipervariable (CDR4 o HVR4), que generalmente está implicada en la unión al superantígeno y no en el reconocimiento del antígeno (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).

En algunos casos, un TCR también puede contener un dominio constante, un dominio transmembrana y/o una cola citoplasmática corta (consultar, por ejemplo, Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3a Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997). En algunos aspectos, cada cadena del TCR puede poseer un dominio variable de inmunoglobulina N-terminal, un dominio constante de inmunoglobulina, una región transmembrana y una cola citoplasmática corta en el extremo C-terminal. En algunos casos, un TCR se asocia con proteínas invariantes del complejo CD3 implicadas en la mediación de la transducción de señales.

En algunos casos, una cadena de TCR contiene uno o más dominios constantes. Por ejemplo, la porción extracelular de una cadena de TCR dada (por ejemplo, cadena a o cadena p) puede contener dos dominios similares a inmunoglobulinas, como un dominio variable (por ejemplo, Va o Vp; típicamente aminoácidos 1 a 116 basado en la numeración de Kabat, Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991,5a ed.) y un dominio constante (por ejemplo, dominio constante de cadena a o Ca, típicamente posiciones 117 a 259 de la cadena basado en la numeración de Kabat o dominio constante de cadena p o Cp, típicamente posiciones 117 a 295 de la cadena basado en Kabat) adyacente a la membrana celular. Por ejemplo, en algunos casos, la porción extracelular del TCR formada por las dos cadenas contiene dos dominios constantes proximales a la membrana, y dos dominios variables distales a la membrana, tales dominios variables contienen cada uno las CDR. El dominio constante del TCR puede contener secuencias de conexión cortas en las que un residuo de cisteína forma un enlace disulfuro, enlazando de este modo las dos cadenas del TCR. En algunos casos, un TCR puede tener un residuo de cisteína adicional en cada una de las cadenas a y p, de manera que el TCR contiene dos enlaces disulfuro en los dominios constantes.

En algunos casos, las cadenas de TCR contienen un dominio transmembrana. En algunos casos, el dominio transmembrana está cargado positivamente. En algunos casos, la cadena de TCR contiene una cola citoplasmática. En algunos casos, la estructura permite que el TCR se asocie con otras moléculas como CD3 y subunidades de la misma. Por ejemplo, un TCR que contenga dominios constantes con una región transmembrana puede anclar la proteína en la membrana celular y asociarse con subunidades invariantes del aparato o complejo de señalización de CD3. Las colas intracelulares de las subunidades de señalización de CD3 (por ejemplo, las cadenas CD3y, CD3ó, CD3s y CD3Z) contienen uno o más motivos de activación basados en tirosina inmunorreceptora o ITAM que intervienen en la capacidad de señalización del complejo TCR.

En algunos casos, el TCR puede ser un heterodímero de dos cadenas a y p (u opcionalmente<y>y 6) o puede ser un constructo de TCR de cadena sencilla. En algunos casos, el TCR es un heterodímero que contiene dos cadenas separadas (cadenas a y p o cadenas<y>y 6) que están enlazadas, por ejemplo mediante un enlace disulfuro o enlaces disulfuro.

En algunos casos, el TCR puede generarse a partir de una secuencia o secuencias de TCR conocidas, como secuencias de cadenas Va,p, para las que se dispone fácilmente de una secuencia codificante sustancialmente de longitud completa. Los métodos para obtener secuencias de TCR de longitud completa, incluyendo secuencias de cadena V, a partir de fuentes celulares son bien conocidos. En algunos casos, los ácidos nucleicos que codifican el TCR pueden obtenerse de una variedad de fuentes, como por amplificación por reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de ácidos nucleicos que codifican el TCR dentro o aislados de una célula o células dadas, o síntesis de secuencias de ADN del TCR disponibles públicamente.

En algunos casos, el TCR se obtiene de una fuente biológica, por ejemplo, de células como las de una célula T (por ejemplo, célula T citotóxica), hibridomas de células T u otra fuente disponible públicamente. En algunos casos, las células T pueden obtenerse a partir de células aisladas in vivo. En algunos casos, el TCR es un TCR seleccionado tímicamente. En algunos casos, el TCR es un TCR restringido a neoepítopos. En algunos casos, las células T pueden ser un hibridoma o clon de células T cultivadas. En algunos casos, el TCR o la porción de unión a antígeno del mismo puede generarse sintéticamente a partir del conocimiento de la secuencia del TCR.

En algunos casos, el TCR se genera a partir de un TCR identificado o seleccionado a partir de la selección de una biblioteca de TCR candidatos contra un antígeno polipéptido objetivo, o epítopo de células T objetivo del mismo. Las bibliotecas de TCR pueden generarse por amplificación del repertorio de Va y Vp de células T aisladas de un sujeto, incluyendo células presentes en PBMC, bazo u otro órgano linfoide. En algunos casos, las células T pueden amplificarse a partir de linfocitos infiltrantes de tumores (TIL). En algunos casos, las bibliotecas de TCR pueden generarse a partir de células CD4+ o CD8+. En algunos casos, los TCR pueden amplificarse a partir de una fuente de células T de un sujeto normal o sano, es decir, bibliotecas de TCR normales. En algunos casos, los TCR pueden amplificarse a partir de una fuente de células T de un sujeto enfermo, es decir, bibliotecas de TCR enfermos. En algunos casos, se usan cebadores degenerados para amplificar el repertorio génico de Va y Vp, como por RT-PCR en muestras, como células T, obtenidas de humanos. En algunos casos, pueden ensamblarse bibliotecas de scTv a partir de bibliotecas Va y Vp no tratadas en las que los productos amplificados se clonan o ensamblan para ser separados por un conector. Dependiendo de la fuente del sujeto y de las células, las bibliotecas pueden ser específicas de alelos de HLA. Alternativamente, en algunos casos, las bibliotecas de TCR pueden generarse mediante mutagénesis o diversificación de una molécula de TCR original o andamiaje. En algunos aspectos, los TCR se someten a evolución dirigida, como por mutagénesis, por ejemplo, de la cadena a o p. En algunos aspectos, se alteran residuos particulares dentro de las CDR del TCR. En algunos casos, los TCR seleccionados pueden modificarse mediante maduración por afinidad. En algunos casos, pueden seleccionarse células T específicas de antígeno, como por ejemplo mediante selección para evaluar la actividad de CTL contra el péptido. En algunos aspectos, los TCR, por ejemplo presentes en las células T específicas de antígeno, pueden seleccionarse, como por actividad de unión, por ejemplo, afinidad o avidez particular por el antígeno.

En algunos casos, los receptores de antígenos manipulados genéticamente incluyen receptores de células T recombinantes (TCR) y/o TCR clonados a partir de células T naturales. En algunos casos, se identifica un clon de células T de alta afinidad para un antígeno objetivo (por ejemplo, un antígeno canceroso), se aísla de un paciente y se introduce en las células. En algunos casos, el clon de TCR para un antígeno objetivo se ha generado en ratones transgénicos manipulados genéticamente con genes del sistema inmunitario humano (por ejemplo, el sistema de antígenos leucocitarios humanos o HLA). Consultar, por ejemplo, los antígenos tumorales (consultar, por ejemplo, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 y Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808. En algunos casos, se usa la presentación en fagos para aislar TCR contra un antígeno objetivo (consultar, por ejemplo, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 y Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354.

En algunos casos, el TCR o la porción de unión a antígeno del mismo es uno que se ha modificado o manipulado. En algunos casos, se usan métodos de evolución dirigida para generar TCR con propiedades alteradas, como una mayor afinidad por un complejo MHC-péptido específico. En algunos casos, la evolución dirigida se logra mediante métodos de presentación que incluyen, entre otros, presentación en levadura (Holler et al. (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), presentación en fagos (Li et al. (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54), o presentación en células T (Chervin et al. (2008) J Immunol Methods, 339, 175-84). En algunos casos, los enfoques de presentación implican la manipulación, o modificación, de un TCR conocido, original o de referencia. Por ejemplo, en algunos casos, puede usarse un TCR de tipo salvaje como plantilla para producir TCR mutagenizados en los que se mutan uno o más residuos de las CDR, y se seleccionan mutantes con una propiedad alterada deseada, como una mayor afinidad por un antígeno objetivo deseado.

En algunos casos, los péptidos de un polipéptido objetivo para su uso en la producción o generación de un TCR de interés son conocidos o pueden ser fácilmente identificados por un experto en la técnica. En algunos casos, los péptidos adecuados para su uso en la generación de TCR o porciones de unión a antígeno pueden determinarse basándose en la presencia de un motivo restringido por HLA en un polipéptido objetivo de interés, como un polipéptido objetivo descrito a continuación. En algunos casos, los péptidos se identifican usando modelos informáticos de predicción conocidos por los expertos en la técnica. En algunos casos, para predecir sitios de unión a MHC clase I, tales modelos incluyen, pero no se limitan a, ProPred1 (Singh y Raghava (2001) Bioinformatics 17(12): 1236-1237, y SYFPEITHI (consultar Schuler et al. (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-932007). En algunos casos, el epítopo restringido por MHC es HLA-A0201, que se expresa en aproximadamente el 39-46% de todos los caucásicos y, por lo tanto, representa una elección adecuada de antígeno de MHC para su uso en la preparación de un TCR u otra molécula de unión a péptidos de MHC.

Los expertos en la técnica conocen los motivos de unión de HLA-A0201 y los sitios de escisión de proteasomas e inmunoproteasomas mediante modelos informáticos de predicción. Para predecir sitios de unión a MHC clase I, tales modelos incluyen, pero no se limitan a, ProPred1 (descrito con más detalle en Singh y Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites.BIOINFORMATICS17(12):1236-1237 2001), y SYFPEITHI (consultar Schuler et al. SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. en Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-932007)

En algunos casos, el TCR o la porción de unión a antígeno del mismo puede ser una proteína natural producida recombinantemente o una forma mutada de la misma en la que se han alterado una o más propiedades, como la característica de unión. En algunos casos, un TCR puede derivarse de una de varias especies de animales, como humano, ratón, rata u otro mamífero. Un TCR puede estar unido a células o en forma soluble. En algunos casos, para los propósitos de los métodos descritos, el TCR está en forma unido células expresado en la superficie de una célula.

En algunos casos, el TCR es un TCR de longitud completa. En algunos casos, el TCR es una porción de unión a antígeno. En algunos casos, el TCR es un TCR dimérico (dTCR). En algunos casos, el TCR es un TCR de cadena sencilla (sc-TCR). En algunos casos, un dTCR o un scTCR tienen las estructuras descritas en la WO 03/020763, la WO 04/033685, la WO2011/044186.

En algunos casos, el TCR contiene una secuencia correspondiente a la secuencia transmembrana. En algunos casos, el TCR contiene una secuencia correspondiente a la secuencia citoplasmática. En algunos casos, el TCR es capaz de formar un complejo de TCR con CD3. En algunos casos, cualquiera de los TCR, incluyendo un dTCR o un scTCR, puede unirse a dominios de señalización que producen un TCR activo en la superficie de una célula T. En algunos casos, el TCR se expresa en la superficie de las células.

En algunos casos, un dTCR contiene un primer polipéptido en donde una secuencia correspondiente a una secuencia de región variable de cadena a del TCR se fusiona con el extremo N terminal de una secuencia correspondiente a una secuencia extracelular de región constante de cadena a del TCR, y un segundo polipéptido en el que una secuencia correspondiente a una secuencia de región variable de cadena p del TCR se fusiona con el extremo N terminal de una secuencia correspondiente a una secuencia extracelular de región constante de cadena p del TCR, el primer y el segundo polipéptidos estando enlazados por un enlace disulfuro. En algunos casos, el enlace puede corresponder al enlace disulfuro entre cadenas nativo presente en los TCR ap diméricos nativos. En algunos casos, los enlaces disulfuro entre cadenas no están presentes en un TCR nativo. Por ejemplo, en algunos casos, pueden incorporarse una o más cisteínas en las secuencias extracelulares de región constante del par de polipéptidos de dTCR. En algunos casos, puede ser deseable tanto un enlace disulfuro nativo como uno no nativo. En algunos casos, el TCR contiene una secuencia transmembrana para anclarse a la membrana.

En algunos casos, un dTCR contiene una cadena TCR a que comprende un dominio a variable, un dominio a constante y un primer motivo de dimerización unido al extremo C terminal del dominio a constante, y una cadena p de TCR que comprende un dominio p variable, un dominio p constante y un primer motivo de dimerización unido al extremo C terminal del dominio p constante, en el que el primer y el segundo motivo de dimerización interactúan fácilmente para formar un enlace covalente entre un aminoácido del primer motivo de dimerización y un aminoácido del segundo motivo de dimerización que une la cadena a de TCR y la cadena p de TCR entre sí.

En algunos casos, el TCR es un scTCR. Típicamente, un scTCR puede generarse usando métodos conocidos por los expertos en la técnica, Consultar, por ejemplo, Soo Hoo, W. F. et al. PNAS (USA) 89, 4759 (1992); Wülfing, C. and Plückthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994); Kurucz, I. et al. PNAS (USA) 90 3830 (1993); PCT internacionales publicados N° WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; y Schlueter, C. J. et al. J. Mol. Biol. 256, 859 (1996). En algunos casos, un scTCR contiene un enlace disulfuro no nativo entre cadenas introducido para facilitar la asociación de las cadenas del TCR (consultar, por ejemplo, el PCT internacional publicado N° WO 03/020763). En algunos casos, un scTCR es un TCR truncado sin enlace disulfuro en el que cremalleras de leucina heterólogas fusionadas a los extremos C terminales del mismo facilitan la asociación de cadenas (consultar, por ejemplo, el PCT internacional publicado N° WO99/60120). En algunos casos, un scTCR contiene un dominio variable de TCRa unido covalentemente a un dominio variable de TCRp a través de un conector peptídico (consultar, por ejemplo, PCT Internacional publicado N° WO99/18129).

En algunos casos, un scTCR contiene un primer segmento constituido por una secuencia de aminoácidos correspondiente a una región variable de cadena a del TCR, un segundo segmento constituido por una secuencia de aminoácidos correspondiente a una secuencia de región variable de cadena p del TCR fusionada al extremo N terminal de una secuencia de aminoácidos correspondiente a una secuencia extracelular de dominio constante de cadena p del TCR, y una secuencia conectora que une el extremo C terminal del primer segmento al extremo N terminal del segundo segmento.

En algunos casos, un scTCR contiene un primer segmento constituido por una secuencia de región variable de cadena a fusionada al extremo N terminal de una secuencia de dominio constante extracelular de cadena a, y un segundo segmento constituido por una secuencia de región variable de cadena p fusionada al extremo N terminal de una secuencia constante extracelular y transmembrana de cadena p, y, opcionalmente, una secuencia conectora que une el extremo C terminal del primer segmento al extremo N terminal del segundo segmento.

En algunos casos, un scTCR contiene un primer segmento constituido por una secuencia de región variable de cadena p del TCR fusionada al extremo N terminal de una secuencia de dominio constante extracelular de cadena p, y un segundo segmento constituido por una secuencia de región variable de cadena a fusionada al extremo N terminal de una secuencia transmembrana y constante extracelular de cadena a, y, opcionalmente, una secuencia conectora que une el extremo C terminal del primer segmento al extremo N terminal del segundo segmento.

En algunos casos, el conector de un scTCR que une el primer y el segundo segmentos del TCR puede ser cualquier conector capaz de formar una única cadena polipeptídica, a la vez que conserva la especificidad de unión al TCR. En algunos casos, la secuencia conectora puede, por ejemplo, tener la fórmula - P-AA-P- en donde P es prolina y AA representa una secuencia de aminoácidos en donde los aminoácidos son glicina y serina. En algunos casos, el primer y el segundo segmentos están emparejados de tal manera que las secuencias de región variable de los mismos están orientadas para dicha unión. Por lo tanto, en algunos casos, el conector tiene una longitud suficiente para abarcar la distancia entre el extremo C terminal del primer segmento y el extremo N terminal del segundo segmento, o viceversa, pero no es demasiado largo para bloquear o reducir la unión del scTCR al ligando objetivo. En algunos casos, el conector puede contener de o de aproximadamente 10 a 45 aminoácidos, como de 10 a 30 aminoácidos o de 26 a 41 residuos de aminoácidos, por ejemplo 29, 30, 31 o 32 aminoácidos. En algunos casos, el conector tiene la fórmula -PGGG-(SGGGG)5-P- donde P es prolina, G es glicina y S es serina (SEQ ID NO: 22). En algunos casos, el conector tiene la secuencia GSADDAKK<d>A<a>KKDGKS (SEQ ID NO: 23).

En algunos casos, el scTCR contiene un enlace disulfuro covalente que enlaza un residuo de la región de inmunoglobulina del dominio constante de la cadena a con un residuo de la región de inmunoglobulina del dominio constante de la cadena p. En algunos casos, el enlace disulfuro entre cadenas en un TCR nativo no está presente. Por ejemplo, en algunos casos, pueden incorporarse una o más cisteínas en las secuencias extracelulares de la región constante del primer y el segundo segmentos del polipéptido de scTCR. En algunos casos, puede ser deseable tanto un enlace disulfuro nativo como no nativo.

En algunos casos de un dTCR o scTCR que contiene enlaces disulfuro entre cadenas introducidos, los enlaces disulfuro nativos no están presentes. En algunos casos, la una o más de las cisteínas nativas que forman enlaces disulfuro nativos entre cadenas se sustituyen por otro residuo, como una serina o una alanina. En algunos casos, puede formarse un enlace disulfuro introducido mutando residuos no cisteína en el primer y el segundo segmentos a cisteína. Los enlaces disulfuro no nativos ejemplares de un TCR se describen en el PCT internacional publicado N° W02006/000830.

En algunos casos, el TCR o fragmento de unión a antígeno del mismo presenta una afinidad con una constante de unión de equilibrio para un antígeno objetivo de entre o entre aproximadamente 10-5 y 10-12 M y todos los valores individuales e intervalos de los mismos. En algunos casos, el antígeno objetivo es un complejo MHC-péptido o ligando.

En algunos casos, el ácido nucleico o los ácidos nucleicos que codifican un TCR, como las cadenas a y p, pueden amplificarse por PCR, clonación u otros medios adecuados y clonarse en un vector o vectores de expresión adecuados. El vector de expresión puede ser cualquier vector de expresión recombinante adecuado, y puede usarse para transformar o transfectar cualquier huésped adecuado. Los vectores adecuados incluyen aquellos diseñados para la propagación y expansión o para la expresión o ambas, como plásmidos y virus.

En algunos casos, el vector puede ser un vector de la serie pUC (Fermentas Life Sciences), la serie pBluescript (Stratagene, LaJolla, Calif.), la serie pET (Novagen, Madison, Wis.), la serie pGEX (Pharmacia Biotech, Uppsala, Suecia), o la serie pEX (Clontech, Palo Alto, California). En algunos casos, también pueden usarse vectores bacteriófagos, como AG10, AGT11, AZapII (Stratagene), AEMBL4 y ANM1149. En algunos casos, pueden usarse vectores de expresión vegetal e incluyen pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 y pBIN19 (Clontech). En algunos casos, los vectores de expresión animal incluyen pEUK-Cl, pMAM y pMAMneo (Clontech). En algunos casos, se usa un vector viral, como un vector retroviral.

En algunos casos, los vectores de expresión recombinante pueden prepararse usando técnicas estándar de ADN recombinante. En algunos casos, los vectores pueden contener secuencias reguladoras, como codones de inicio y terminación de la transcripción y traducción, que son específicas del tipo de huésped (por ejemplo, bacteria, hongo, planta o animal) en el que se va a introducir el vector, según sea apropiado y teniendo en cuenta si el vector está basado en ADN o ARN. En algunos casos, el vector puede contener un promotor no nativo enlazado operativamente a la secuencia de nucleótidos que codifica el TCR o la porción de unión a antígeno (u otra molécula de unión a péptido MHC). En algunos casos, el promotor puede ser un promotor no vírico o un promotor vírico, como un promotor de citomegalovirus (CMV), un promotor de SV40, un promotor de RSV y un promotor que se encuentra en la repetición terminal larga del virus de células madre murino. También se contemplan otros promotores conocidos por un experto en la técnica.

En algunos casos, después de obtener el clon de células T, las cadenas TCR alfa y beta se aíslan y clonan en un vector de expresión génica. En algunos casos, los genes TCR alfa y beta se enlazan mediante un péptido de omisión ribosomal picornavirus 2A de tal manera que ambas cadenas se encuentran en coexpresión. En algunos casos, la transferencia genética del TCR se realiza mediante vectores retrovirales o lentivirales, o mediante transposones (consultar, por ejemplo, Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063; Frecha et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757; y Hackett et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683.

En algunos casos, para generar un vector que codifique un TCR, las cadenas a y p se amplifican por PCR a partir de ADNc total aislado de un clon de células T que exprese el TCR de interés y se clonan en un vector de expresión. En algunos casos, las cadenas a y p se clonan en el mismo vector. En algunos casos, las cadenas a y p se clonan en vectores diferentes. En algunos casos, las cadenas a y p generadas se incorporan a un vector retroviral, por ejemplo lentiviral.

3. Receptores quiméricos de autoanticuerpos (CAAR)

En algunos casos, el receptor recombinante es un receptor quimérico de autoanticuerpos (CAAR). En algunos casos, el CAAR es específico para un autoanticuerpo. En algunos casos, una célula que expresa el CAAR, como una célula T manipulada para que exprese un CAAR, puede usarse para unirla específicamente a células que expresan autoanticuerpos y destruirlas, pero no a células que expresan anticuerpos normales. En algunos casos, las células que expresan CAAR pueden usarse para tratar una enfermedad autoinmune asociada con la expresión de autoantígenos, como las enfermedades autoinmunes. En algunos casos, las células que expresan CAAR pueden dirigirse a las células B que en última instancia producen los autoanticuerpos y muestran los autoanticuerpos en sus superficies celulares, marcando estas células B como objetivos específicos de la enfermedad para la intervención terapéutica. En algunos casos, pueden usarse células que expresan CAAR para dirigir y eliminar eficazmente las células B patógenas en enfermedades autoinmunes, dirigiéndose a las células B causantes de la enfermedad mediante un receptor quimérico de autoanticuerpos específico de antígeno. En algunos casos, el receptor recombinante es un CAAR, como cualquiera de los descritos en la Publicación de Solicitud de Patente de Estados Unidos N° US 2017/0051035.

En algunos casos, el CAAR comprende un dominio de unión a autoanticuerpos, un dominio transmembrana y una región de señalización intracelular. En algunos casos, la región de señalización intracelular comprende un dominio de señalización intracelular. En algunos casos, el dominio de señalización intracelular es o comprende un dominio de señalización primaria, un dominio de señalización que es capaz de inducir una señal de activación primaria en una célula T, un dominio de señalización de un componente del receptor de células T (TCR), y/o un dominio de señalización que comprende un motivo de activación basado en tirosina inmunorreceptora (ITAM). En algunos casos, la región de señalización intracelular comprende una región de señalización secundaria o coestimuladora (regiones de señalización intracelular secundaria).

En algunos casos, el dominio de unión a autoanticuerpos comprende un autoantígeno o un fragmento del mismo. La elección del autoantígeno puede depender del tipo de autoanticuerpo objetivo. Por ejemplo, el autoantígeno puede elegirse porque reconoce un autoanticuerpo en una célula objetivo, como una célula B, asociada con un estado de enfermedad particular, por ejemplo, una enfermedad autoinmune, como una enfermedad autoinmune mediada por autoanticuerpos. En algunos casos, la enfermedad autoinmune incluye el pénfigo vulgar (PV). Los autoantígenos ejemplares incluyen desmogleína 1 (Dsg1) y Dsg3.

4. Multiobjetivo

En algunos casos, las células y los métodos incluyen estrategias multiobjetivo, como la expresión de dos o más receptores manipulados genéticamente en la célula, cada uno de los cuales reconoce el mismo antígeno o un antígeno diferente y típicamente cada uno incluye un componente de señalización intracelular diferente. Tales estrategias multiobjetivo se describen, por ejemplo, en la Solicitud de Patente Internacional, N° de publicación WO 2014055668 A1 (que describe combinaciones de CAR activadores y coestimuladores, por ejemplo, dirigidos a dos antígenos diferentes presentes individualmente en células fuera del objetivo, por ejemplo, normales, pero presentes juntos solo en células de la enfermedad o afección que se va a tratar) y Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) (en el que se describen células que expresan un CAR activador y un CAR inhibidor, como aquellas en las que el CAR activador se une a un antígeno expresado tanto en células normales o no enfermas como en células de la enfermedad o afección que se desea tratar, y el CAR inhibidor se une a otro antígeno expresado únicamente en las células normales o en las células que no se desea tratar).

Por ejemplo, en algunos casos, las células incluyen un receptor que expresa un primer receptor de antígeno manipulado genéticamente (por ejemplo, CAR o TCR) que es capaz de inducir una señal activadora o estimuladora a la célula, generalmente tras la unión específica al antígeno reconocido por el primer receptor, por ejemplo, el primer antígeno. En algunos casos, la célula incluye además un segundo receptor de antígeno manipulado genéticamente (por ejemplo, CAR o TCR), por ejemplo, un receptor coestimulador quimérico, que es capaz de inducir una señal coestimuladora a la célula inmunitaria, generalmente tras la unión específica a un segundo antígeno reconocido por el segundo receptor. En algunos casos, el primer antígeno y el segundo antígeno son el mismo. En algunos casos, el primer antígeno y el segundo antígeno son diferentes.

En algunos casos, el primer y/o segundo receptor de antígeno manipulado genéticamente (por ejemplo, CAR o TCR) es capaz de inducir una señal activadora a la célula. En algunos casos, el receptor incluye un componente de señalización intracelular que contiene ITAM o motivos similares a ITAM. En algunos casos, la activación inducida por el primer receptor implica una transducción de señales o un cambio en la expresión de proteínas en la célula que da lugar al inicio de una respuesta inmunitaria, como la fosforilación de ITAM y/o el inicio de una cascada de transducción de señales mediada por ITAM, la formación de una sinapsis inmunitaria y/o la agrupación de moléculas cerca del receptor unido (por ejemplo, CD4 o CD8, etc.), activación de uno o más factores de transcripción, como NF-<k>B y/o AP1, y/o inducción de la expresión génica de factores como citoquinas, proliferación y/o supervivencia.

En algunos casos, el primer y/o el segundo receptor incluyen dominios o regiones de señalización intracelular de receptores coestimuladores como CD28, CD137 (4-1BB), OX40, y/o ICOS. En algunos casos, el primer y el segundo receptores incluyen un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador que son diferentes. En un caso, el primer receptor contiene una región de señalización coestimuladora CD28 y el segundo receptor contiene una región de señalización coestimuladora 4-1BB o viceversa.

En algunos casos, el primer y/o el segundo receptores incluye tanto un dominio de señalización intracelular que contiene motivos ITAM o similares a ITAM como un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador.

En algunos casos, el primer receptor contiene un dominio de señalización intracelular que contiene motivos ITAM o similares a ITAM y el segundo receptor contiene un dominio de señalización intracelular de un receptor coestimulador. La señal coestimuladora en combinación con la señal activadora inducida en la misma célula es la que da como resultado una respuesta inmunitaria, como una respuesta inmunitaria robusta y sostenida, como el aumento de la expresión génica, la secreción de citoquinas y otros factores, y funciones efectoras mediadas por células T, como la destrucción celular.

En algunos casos, ni la ligadura del primer receptor solo ni la ligadura del segundo receptor solo inducen una respuesta inmunitaria robusta. En algunos aspectos, si sólo se liga un receptor, la célula se tolera o no responde al antígeno, o se inhibe, y/o no se induce a proliferar o secretar factores o llevar a cabo funciones efectoras. En algunos de tales casos, sin embargo, cuando la pluralidad de receptores está ligada, como en el encuentro de una célula que expresa el primero y el segundo antígenos, se consigue una respuesta deseada, como la activación o estimulación inmunitaria completa, por ejemplo, como indica la secreción de una o más citoquinas, la proliferación, la persistencia y/o la realización de una función efectora inmunitaria como la destrucción citotóxica de una célula objetivo.

En algunos casos, los dos receptores inducen, respectivamente, una señal activadora y una señal inhibidora a la célula, de tal manera que la unión de uno de los receptores a su antígeno activa la célula o induce una respuesta, pero la unión del segundo receptor inhibidor a su antígeno induce una señal que suprime o amortigua esa respuesta. Algunos ejemplos son las combinaciones de CAR activadores y CAR inhibidores o iCAR. Puede usarse una estrategia de este tipo, por ejemplo, en la que el CAR activador se une a un antígeno expresado en una enfermedad o afección pero que también se expresa en células normales, y el receptor inhibidor se une a un antígeno separado que se expresa en las células normales pero no en las células de la enfermedad o afección.

En algunos casos, la estrategia multiobjetivo se emplea cuando un antígeno asociado con una enfermedad o afección particular se expresa en una célula no enferma y/o se expresa en la propia célula manipulada, ya sea transitoriamente (por ejemplo, tras la estimulación asociada a la manipulación genética) o permanente. En tales casos, al requerir la ligadura de dos receptores de antígenos separados e individualmente específicos, puede mejorarse la especificidad, selectividad y/o eficacia.

En algunos casos, la pluralidad de antígenos, por ejemplo, el primer y el segundo antígenos, se expresan en la célula, tejido, enfermedad o afección que es el objetivo, como en la célula cancerosa. En algunos aspectos, la célula, tejido, enfermedad o afección es mieloma múltiple o una célula de mieloma múltiple. En algunos casos, uno o más de la pluralidad de antígenos generalmente también se expresan en una célula a la que no se desea dirigir la terapia celular, como una célula o tejido normal o no enfermo, y/o las propias células manipuladas. En tales casos, al requerir la ligadura de múltiples receptores para lograr una respuesta de la célula, se consigue especificidad y/o eficacia.

B. Vectores y métodos de ingeniería genética

Se conocen bien varios métodos para la introducción de componentes genéticamente manipulados, por ejemplo, receptores recombinantes, por ejemplo, CAR o TCR, y pueden usarse con los métodos y composiciones descritos. Los métodos ejemplares incluyen aquellos para la transferencia de ácidos nucleicos que codifican los receptores, incluyendo vía viral, por ejemplo, retroviral o lentiviral, transducción, transposones y electroporación.

En algunos casos, la transferencia génica se logra estimulando primero la célula, como combinándola con un estímulo que induce una respuesta como la proliferación, la supervivencia y/o la activación, por ejemplo, medida por la expresión de una citoquina o un marcador de activación, seguido de la transducción de las células activadas y la expansión en cultivo hasta un número suficiente para aplicaciones clínicas.

En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células usando partículas de virus infecciosos recombinantes, como, por ejemplo, vectores derivados del virus simio 40 (SV40), adenovirus, virus adenoasociados (AAV). En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T usando vectores lentivirales recombinantes o vectores retrovirales, como los vectores gamma-retrovirales (consultar, por ejemplo, Koste et al. Gene Therapy doi: 10.1038/gt.2014.25 (2014); Carlens et al. Exp Hematol., 28(10): 1137-46 (2000); Alonso-Camino et al. Mol Ther Nucí Acids, 2, e93 (2013); Park et al., Trends Biotechnol., noviembre 29(11): 550-557 (2011).

En algunos casos, el vector retroviral tiene una secuencia de repetición terminal larga (LTR), por ejemplo, un vector retroviral derivado del virus de la leucemia murina de Moloney (MoMI,V), el virus del sarcoma mieloproliferativo (MPSV), el virus de las células madre embrionarias murinas (MESV), el virus de las células madre murinas (MSCV), el virus formador de focos en el bazo (SFFV) o el virus adenoasociado (AAV). La mayoría de los vectores retrovirales derivan de retrovirus murinos. En algunos casos, los retrovirus incluyen los derivados de cualquier fuente celular aviar o mamífera. Los retrovirus son típicamente anfotrópicos, lo que significa que son capaces de infectar células huésped de varias especies, incluyendo la humana. En un caso, el gen a expresar sustituye a las secuencias retrovirales gag, pol y/o env. Se han descrito varios sistemas retrovirales ilustrativos (por ejemplo, Patentes de Estados Unidos N° 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman, BioTechniques, 7:980-990 (1989); Miller, A. D. Human Gene Therapy, 1:5-14 (1990); Scarpa et al. Virology, 180:849-852 (1991); Burns et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:8033-8037 (1993); y Boris-Lawrie y Temin, Cur. Opin. Genet. Develop., 3:102-109 (1993).

Se conocen métodos de transducción lentiviral. Se describen métodos ejemplares en, por ejemplo, Wang et al., J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); Cooper et al. Blood. 101:1637-1644 (2003); Verhoeyen et al., Methods Mol Biol., 506: 97-114 (2009); y Cavalieri et al., Blood., 102(2): 497-505 (2003).

En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T mediante electroporación (consultar, por ejemplo, Chicaybam et al, PLoS ONE 8(3): e60298 (2013) y Van Tedeloo et al. Gene Therapy 7(16): 1431-1437 (2000)). En algunos casos, los ácidos nucleicos recombinantes se transfieren a las células T mediante transposición (consultar, por ejemplo, Manuri et al. Hum Gene Ther 21(4): 427-437 (2010); Sharma et al. Molec Ther Nucl Acids 2, e74 (2013); y Huang et al. Methods Mol Biol 506: 115-126 (2009)). Otros métodos para introducir y expresar material genético en células inmunitarias incluyen la transfección con fosfato de calcio (por ejemplo, como se describe en Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), la fusión de protoplastos, la transfección mediada por liposomas catiónicos; el bombardeo de micropartículas facilitado por partículas de tungsteno (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); y coprecipitación de ADN con fosfato de estroncio (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)).

Otros enfoques y vectores para la transferencia de los ácidos nucleicos que codifican los productos recombinantes son los descritos, por ejemplo, en la solicitud de patente internacional, N° de Publicación WO2014055668, y en la Patente de Estados Unidos N° 7.446.190.

En algunos casos, las células, por ejemplo, las células T, pueden transfectarse durante o después de la expansión, por ejemplo, con un receptor de células T (TCR) o un receptor de antígeno quimérico (CAR). Esta transfección para la introducción del gen del receptor deseado puede llevarse a cabo con cualquier vector retroviral adecuado, por ejemplo. A continuación, la población de células manipuladas genéticamente puede liberarse del estímulo inicial (el estímulo CD3/CD28, por ejemplo) y estimularse posteriormente con un segundo tipo de estímulo (por ejemplo, a través de un receptor introducido de novo). Este segundo tipo de estímulo puede incluir un estímulo antigénico en forma de una molécula de péptido/MHC, el ligando cognado (reticulado) del receptor introducido genéticamente (por ejemplo, el ligando natural de un CAR) o cualquier ligando (como un anticuerpo) que se una directamente en el marco del nuevo receptor (por ejemplo, mediante el reconocimiento de regiones constantes dentro del receptor). Consultar, por ejemplo, Cheadle et al, Methods Mol Biol. 907:645-66 (2012); o Barrett et al, Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine, Vol. 65: 333-347 (2014).

En algunos casos, puede usarse un vector que no requiera que las células, por ejemplo, las células T, estén activadas. En algunos casos, las células pueden seleccionarse y/o transducirse antes de la activación. Por lo tanto, las células pueden ser manipuladas antes o después del cultivo de las células y, en algunos casos, al mismo tiempo o durante por lo menos una parte del cultivo.

En algunos aspectos, las células se manipulan además para promover la expresión de citoquinas u otros factores. Entre los ácidos nucleicos adicionales, por ejemplo, los genes para la introducción son aquellos para mejorar la eficacia de la terapia, como por ejemplo promoviendo la viabilidad y/o función de las células transferidas; genes para proporcionar un marcador genético para la selección y/o evaluación de las células, como por ejemplo para evaluar la supervivencia o localización in vivo; genes para mejorar la seguridad, por ejemplo, haciendo que la célula sea susceptible a la selección negativa in vivo como se describe por Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); y Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); consultar también las publicaciones PCT/US91/08442 y PCT/US94/05601 de Lupton et al. en las que se describe el uso de genes de fusión seleccionables bifuncionales derivados de la fusión de un marcador seleccionable positivo dominante con un marcador seleccionable negativo. Consultar, por ejemplo, Riddell et al., Patente de Estados Unidos N° 6,040,177, en las columnas 14-17.

En algunos casos, un único promotor puede dirigir la expresión de un ARN que contiene, en un único marco de lectura abierto (ORF), dos o tres genes (por ejemplo, que codifican la molécula implicada en la modulación de una vía metabólica y que codifican el receptor recombinante) separados entre sí por secuencias que codifican un péptido de autoescisión (por ejemplo, secuencias 2A) o un sitio de reconocimiento de proteasas (por ejemplo, furina). Por tanto, el ORF codifica un único polipéptido que, ya sea durante (en el caso de 2A) o después de la traducción, se procesa en las proteínas individuales. En algunos casos, el péptido, como el T2A, puede hacer que el ribosoma se salte (salto de ribosomas) la síntesis de un enlace peptídico en el extremo C terminal de un elemento 2A, lo que lleva a la separación entre el final de la secuencia 2A y el siguiente péptido en sentido descendente (consultar, por ejemplo, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) y deFelipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)). Se conocen muchos elementos 2A. Ejemplos de secuencias 2A que pueden usarse en los métodos y ácidos nucleicos divulgados en la presente, sin limitación, secuencias 2A del virus de la fiebre aftosa (F2A, por ejemplo, SEQ ID NO: 21), virus de la rinitis equina A (E2A, por ejemplo, SEQ ID NO: 20), virus Thosea asigna (T2A, por ejemplo, SEQ ID<n>O: 6 o 17), y teschovirus-1 porcino (P2A, por ejemplo, SEQ ID NO: 18 o 19) según se describe en la Publicación de Patente de Estados Unidos N° 20070116690.

C. Células y preparación de células para manipulación genética

Entre las células que expresan los receptores y se administran mediante los métodos descritos se encuentran las células manipuladas. La manipulación genética implica generalmente la introducción de un ácido nucleico que codifica el componente recombinante o manipulado en una composición que contiene las células, por ejemplo mediante transducción retroviral, transfección o transformación.

En algunos casos, los ácidos nucleicos son heterólogos, es decir, normalmente no están presentes en una célula o muestra obtenida de la célula, como una obtenida de otro organismo o célula, que por ejemplo, no se encuentra normalmente en la célula que se está manipulando y/o en un organismo del que se deriva dicha célula. En algunos casos, los ácidos nucleicos no son de origen natural, como un ácido nucleico que no se encuentra en la naturaleza, incluyendo uno que comprende combinaciones quiméricas de ácidos nucleicos que codifican varios dominios de múltiples tipos de células diferentes.

Generalmente, las células son eucariotas, como las de los mamíferos, y típicamente son células humanas. En algunos casos, las células se derivan de la sangre, médula ósea, linfa u órganos linfoides, son células del sistema inmunitario, como células de la inmunidad innata o adaptativa, por ejemplo, células mieloides o linfoides, incluyendo linfocitos, típicamente células T y/o células NK. Otras células ejemplares son las células madre, como las células madre multipotentes y pluripotentes, incluyendo las células madre pluripotentes inducidas (iPSC). Las células típicamente son células primarias, como las aisladas directamente de un sujeto y/o aisladas de un sujeto y congeladas. En algunos casos, las células incluyen uno o más subconjuntos de células T u otros tipos celulares, como poblaciones de células T completas, células CD4+, células CD8+ y subpoblaciones de las mismas, como las definidas por función, estado de activación, madurez, potencial de diferenciación, expansión, recirculación, localización y/o capacidades de persistencia, especificidad antigénica, tipo de receptor antigénico, presencia en un órgano o compartimento particular, perfil de secreción de marcadores o citoquinas y/o grado de diferenciación. Con referencia al sujeto a tratar, las células pueden ser alogénicas y/o autólogas. Entre los métodos se incluyen los métodos "ya existentes". En algunos aspectos, tales como para tecnologías ya existentes, las células son pluripotentes y/o multipotentes como células madre, como células madre pluripotentes inducidas (iPSCs). En algunos casos, los métodos incluyen aislar células del sujeto, prepararlas, procesarlas, cultivarlas y/o manipularlas, y reintroducirlas en el mismo sujeto, antes o después de la crioconservación.

Entre los subtipos y subpoblaciones de células T y/o de células T CD4+ y/o CD8+ se encuentran las células T ingenuas (T<n>), las células T efectoras (T<eff>), las células T de memoria y subtipos de las mismas, como las células T con memoria de células madre (Tscm), las células T con memoria central (Tcm), las células T de memoria efectoras (Tem), o las células T con memoria efectoras diferenciadas terminalmente, los linfocitos infiltrantes de tumores (TIL), células T inmaduras, células T maduras, células T auxiliares, células T citotóxicas, células T invariantes asociadas a mucosas (MAIT), células T reguladores (Treg) naturales y adaptativas, células T auxiliares, como células TH1, células TH2, células TH3, células TH17, células TH9, células TH22, células T auxiliares foliculares, células T alfa/beta y células T delta/gamma.

En algunos casos, las células son células asesinas naturales (NK). En algunos casos, las células son monocitos o granulocitos, por ejemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastocitos, eosinófilos y/o basófilos.

En algunos casos, las células incluyen uno o más ácidos nucleicos introducidos mediante manipulación genética y de este modo expresan productos recombinantes o manipulados genéticamente de tales ácidos nucleicos. En algunos casos, los ácidos nucleicos son heterólogos, es decir, normalmente no están presentes en una célula o muestra obtenida de la célula, como una obtenida de otro organismo o célula, que por ejemplo, no se encuentra normalmente en la célula que se está manipulando y/o en un organismo del que se deriva dicha célula. En algunos casos, los ácidos nucleicos no son de origen natural, como un ácido nucleico que no se encuentra en la naturaleza, incluyendo uno que comprende combinaciones quiméricas de ácidos nucleicos que codifican varios dominios de múltiples tipos de células diferentes.

En algunos casos, la preparación de las células manipuladas incluye uno o más pasos de cultivo y/o preparación. Las células para la introducción del ácido nucleico que codifica el receptor transgénico, como el<c>A<r>, pueden aislarse de una muestra, como una muestra biológica, por ejemplo, una obtenida de o derivada de un sujeto. En algunos casos, el sujeto del que se aísla la célula es uno que padece la enfermedad o afección o que necesita una terapia celular o al que se le administrará la terapia celular. En algunos casos, el sujeto es un humano con necesidad de una intervención terapéutica concreta, como la terapia celular adoptiva para la que se aíslan, procesan y/o manipulan las células.

Por consiguiente, las células en algunos casos son células primarias, por ejemplo, células humanas primarias. Las muestras incluyen tejido, fluido y otras muestras tomadas directamente del sujeto, así como muestras resultantes de uno o más pasos de procesamiento, como separación, centrifugación, manipulación genética (por ejemplo, transducción con vector viral), lavado y/o incubación. La muestra biológica puede ser una muestra obtenida directamente de una fuente biológica o una muestra procesada. Las muestras biológicas incluyen, entre otras, fluidos corporales, como sangre, plasma, suero, líquido cefalorraquídeo, líquido sinovial, orina y sudor, muestras de tejidos y órganos, incluyendo las muestras procesadas derivadas de los mismos.

En algunos aspectos, la muestra de la que se derivan o aíslan las células es sangre o una muestra derivada de sangre, o es o se deriva de un producto de aféresis o leucaféresis. Las muestras ejemplares incluyen sangre total, células mononucleares de sangre periférica (PBMC), leucocitos, médula ósea, timo, biopsia de tejido, tumor, leucemia, linfoma, ganglio linfático, tejido linfoide asociado a la mucosa, tejido linfoide asociado a mucosa, bazo, otros tejidos linfoides, hígado, pulmón, estómago, intestino, colon, riñón, páncreas, mama, hueso, próstata, cuello uterino, testículos, ovarios, amígdala u otro órgano, y/o células derivadas de los mismos. Las muestras incluyen, en el contexto de la terapia celular, por ejemplo, la terapia celular adoptiva, muestras de fuentes autólogas y alogénicas.

En algunos casos, las células se derivan de líneas celulares, por ejemplo, líneas de células T. En algunos casos, las células se obtienen de una fuente xenogénica, por ejemplo, de ratón, rata, primate no humano y cerdo.

En algunos casos, el aislamiento de las células incluye uno o más pasos de preparación y/o separación celular no basada en afinidad. En algunos ejemplos, las células se lavan, centrifugan y/o incuban en presencia de uno o más reactivos, por ejemplo, para eliminar componentes no deseados, enriquecer para componentes deseados, lisar o eliminar células sensibles a reactivos particulares. En algunos ejemplos, las células se separan sobre la base de una o más propiedades, como la densidad, las propiedades adherentes, el tamaño, la sensibilidad y/o la resistencia a componentes particulares.

En algunos ejemplos, se obtienen células de la sangre circulante de un sujeto, por ejemplo, mediante aféresis o leucaféresis. Las muestras, en algunos aspectos, contienen linfocitos, incluyendo células T, monocitos, granulocitos, células B, otros glóbulos blancos nucleados, glóbulos rojos y/o plaquetas, y en algunos aspectos contiene células distintas de los glóbulos rojos y las plaquetas.

En algunos casos, las células sanguíneas recogidas del sujeto se lavan, por ejemplo, para eliminar la fracción de plasma y colocar las células en un tampón o medio apropiados para los pasos de procesamiento posteriores. En algunos casos, las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato (PBS). En algunos casos, la solución de lavado carece de calcio y/o magnesio y/o muchos o todos los cationes divalentes. En algunos aspectos, el paso de lavado se realiza en una centrifugadora semiautomática de "flujo continuo" (por ejemplo, el procesador celular Cobe 2991, Baxter) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En algunos aspectos, el paso de lavado se realiza mediante filtración de flujo tangencial (TFF) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. En algunos casos, las células se vuelven a suspender en una variedad de tampones biocompatibles después del lavado, como, por ejemplo, PBS libre de Ca++/Mg++. En algunos casos, se eliminan los componentes de una muestra de células sanguíneas y las células se vuelven a suspender directamente en medios de cultivo.

En algunos casos, los métodos incluyen métodos de separación celular basados en la densidad, como la preparación de glóbulos blancos a partir de sangre periférica mediante lisis de los glóbulos rojos y centrifugación a través de un gradiente Percoll o Ficoll.

En algunos casos, los métodos de aislamiento incluyen la separación de diferentes tipos de células basándose en la expresión o presencia en la célula de una o más moléculas específicas, como marcadores de superficie, por ejemplo, proteínas de superficie, marcadores intracelulares o ácido nucleico. En algunos casos, puede usarse cualquier método conocido de separación basado en tales marcadores. En algunos casos, la separación se basa en afinidad o inmunoafinidad. Por ejemplo, el aislamiento en algunos aspectos incluye la separación de células y poblaciones celulares basada en la expresión o nivel de expresión de las células de uno o más marcadores, típicamente marcadores de superficie celular, por ejemplo, mediante incubación con un anticuerpo o compañero de unión que se une específicamente a tales marcadores, seguido generalmente de pasos de lavado y separación de las células que se han unido al anticuerpo o compañero de unión, de aquellas células que no se han unido al anticuerpo o compañero de unión.

Tales pasos de separación pueden basarse en la selección positiva, en la que las células que se han unido a los reactivos se retienen para su uso posterior, y/o en la selección negativa, en la que se retienen las células que no se han unido al anticuerpo o al compañero de unión. En algunos ejemplos, se retienen ambas fracciones para su uso posterior. En algunos aspectos, la selección negativa puede ser especialmente útil cuando no se dispone de un anticuerpo que identifique específicamente un tipo de célula en una población heterogénea, de tal manera que la separación se realiza mejor basándose en marcadores expresados por células distintas de la población deseada.

La separación no tiene por qué resultar en un enriquecimiento o eliminación del 100% de una población celular particular o de células que expresen un marcador particular. Por ejemplo, la selección positiva o el enriquecimiento de células de un tipo particular, como las que expresan un marcador, se refiere al aumento del número o porcentaje de dichas células, pero no tiene por qué dar lugar a una ausencia total de células que no expresen el marcador. De igual manera, la selección negativa, eliminación o agotamiento de células de un tipo particular, como las que expresan un marcador, se refiere a la disminución del número o porcentaje de dichas células, pero no tiene por qué dar como resultado una eliminación completa de todas estas células.

En algunos ejemplos, se llevan a cabo múltiples rondas de pasos de separación, en los que la fracción seleccionada positiva o negativamente de un paso se somete a otro paso de separación, como una selección positiva o negativa posterior. En algunos ejemplos, un único paso de separación puede agotar las células que expresan múltiples marcadores simultáneamente, por ejemplo incubando las células con una pluralidad de anticuerpos o compañeros de unión, cada uno específico para un marcador objetivo de selección negativa. De igual manera, pueden seleccionarse positivamente múltiples tipos de células simultáneamente incubando las células con una pluralidad de anticuerpos o compañeros de unión expresados en los varios tipos de células.

Por ejemplo, en algunos aspectos, se aíslan subpoblaciones específicas de células T, como células positivas o que expresan altos niveles de uno o más marcadores de superficie, por ejemplo, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, y/o células T CD45RO+, mediante técnicas de selección positiva o negativa.

Por ejemplo, las células T CD3+, CD28+ pueden seleccionarse positivamente usando perlas magnéticas conjugadas anti-CD3/anti-CD28 (por ejemplo, expansor de células T CD3/CD28 DYNABEADS® M-450).

En algunos casos, el aislamiento se lleva a cabo por enriquecimiento para una población celular particular mediante selección positiva, o agotamiento de una población celular particular, mediante selección negativa. En algunos casos, la selección positiva o negativa se lleva a cabo incubando las células con uno o más anticuerpos u otro agente de unión que se unen específicamente a uno o más marcadores de superficie expresados o expresados (marcador+) a un nivel relativamente más alto (marcadoralto) en las células seleccionadas positiva o negativamente, respectivamente.

En algunos casos, las células T se separan de una muestra de PBMC mediante selección negativa de marcadores expresados en células que no son T, como células B, monocitos u otros glóbulos blancos, como CD14. En algunos aspectos, se usa un paso de selección de CD4+ o CD8+ para separar las células T auxiliares CD4+ y citotóxicas CD8+. Tales poblaciones de CD4+ y CD8+ pueden clasificarse además en subpoblaciones mediante selección positiva o negativa para marcadores expresados o expresados en un grado relativamente más alto en una o más subpoblaciones de células T ingenuas, de memoria y/o efectoras.

En algunos casos, las células CD8+ se enriquecen adicionalmente o se agotan de las células madre ingenuas, de memoria central, de memoria efectora y/o de memoria central, por ejemplo mediante selección positiva o negativa basada en antígenos de superficie asociados con la subpoblación respectiva. En algunos casos, el enriquecimiento para células T de memoria central (Tcm) se lleva a cabo para aumentar la eficacia, como para mejorar la supervivencia a largo plazo, la expansión y/o el injerto después de la administración, que en algunos aspectos es particularmente robusto en tales subpoblaciones. Consultar Terakura et al. Blood.1:72-82 (2012); Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012). En algunos casos, la combinación de células T CD4+ y células T CD8+ enriquecidas con MTC mejora aún más la eficacia.

En algunos casos, las células T de memoria están presentes en los subconjuntos CD62L+ y CD62L- de los linfocitos CD8+ de la sangre periférica. Las PBMC pueden enriquecerse o agotarse de las fracciones CD62L-CD8+ y/o CD62L+CD8+, por ejemplo usando anticuerpos anti-CD8 y anti-CD62L.

En algunos casos, el enriquecimiento para células T de memoria central (T<cm>) se basa en la expresión superficial positiva o alta de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, y/o CD127; en algunos aspectos, se basa en la selección negativa para células que expresan o expresan altamente CD45RA y/o granzima B. En algunos aspectos, el aislamiento de una población CD8+ enriquecida para células MTC se lleva a cabo por depleción de células que expresan CD4, CD14, CD45RA, y selección positiva o enriquecimiento para células que expresan CD62L. En un aspecto, el enriquecimiento para células T de memoria central (TCM) se lleva a cabo comenzando con una fracción negativa de células seleccionadas basándose en la expresión de CD4, que se somete a una selección negativa basada en la expresión de CD14 y CD45RA, y una selección positiva basada en CD62L. Tales selecciones en algunos aspectos se llevan a cabo simultáneamente y en otros aspectos se llevan a cabo secuencialmente, en cualquier orden. En algunos aspectos, también se usa el mismo paso de selección basado en la expresión de CD4 usado en la preparación de la población o subpoblación de células CD8+, para generar la población o subpoblación de células CD4+, de tal manera que tanto las fracciones positivas como las negativas de la separación basada en CD4 se retienen y usan en pasos posteriores de los métodos, opcionalmente después de uno o más pasos adicionales de selección positiva o negativa.

En un ejemplo particular, una muestra de PBMC u otra muestra de glóbulos blancos se somete a selección de células CD4+, donde se retienen tanto la fracción negativa como la positiva. Luego, la fracción negativa se somete a selección negativa basada en la expresión de CD14 y CD45RA o CD 19, y a selección positiva basada en un marcador característico de células T de memoria central, como CD62L o CCR7, donde las selecciones positiva y negativa se llevan a cabo en cualquier orden.

las células T auxiliares CD4+ se clasifican en ingenuas, de memoria central y efectoras identificando poblaciones celulares que tienen antígenos de superficie celular. Los linfocitos CD4+ pueden obtenerse mediante métodos estándar. En algunos casos, los linfocitos T CD4+ ingenuos son linfocitos T CD4+ CD45RO-, CD45RA+, CD62L+. En algunos casos, los linfocitos CD4+ de memoria central son CD62L+ y CD45RO+. En algunos casos, las células efectoras CD4+ son CD62L- y CD45RO-.

En un ejemplo, para enriquecer las células CD4+ mediante selección negativa, un cóctel de anticuerpos monoclonales incluye típicamente anticuerpos contra CD 14, CD20, CD11b, CD 16, HLA-DR y CD8. En algunos casos, el anticuerpo o compañero de unión está unido a un soporte sólido o matriz, como una perla magnética o paramagnética, para permitir la separación de células para la selección positiva y/o negativa. Por ejemplo, en algunos casos, las células y poblaciones celulares se separan o aíslan usando técnicas de separación inmunomagnéticas (o afinimagnéticas) (revisado en Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Editado por: S. A. Brooks y U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).

En algunos aspectos, la muestra o composición de células a separar se incuba con material pequeño, magnetizable o que responde magnéticamente, como partículas o micropartículas que responden magnéticamente, como perlas paramagnéticas (por ejemplo, como Dynalbeads o perlas MACS). El material que responde magnéticamente, por ejemplo, la partícula, generalmente está unido directa o indirectamente a un compañero de unión, por ejemplo, un anticuerpo, que se une específicamente a una molécula, por ejemplo, un marcador de superficie, presente en la célula, células o población de células que se desea separar, por ejemplo, que se desea seleccionar negativa o positivamente.

En algunos casos, la partícula o perla magnética comprende un material magnéticamente sensible unido a un miembro de unión específico, como un anticuerpo u otro compañero de unión. Hay muchos materiales magnéticos bien conocidos que se usan en los métodos de separación magnética. Entre las partículas magnéticas adecuadas se incluyen las descritas en Molday, Patente de Estados Unidos N°. 4,452,773, y la Memoria Descriptiva de la Patente europea EP 452342 B. Las partículas de tamaño coloidal, como las descritas en Owen Patente de Estados Unidos N° 4,795,698, y Liberti et al., Patente de Estados Unidos N° 5,200,084 son otros ejemplos.

Por lo general, la incubación se lleva a cabo en condiciones en las que los anticuerpos o las moléculas de unión, como los anticuerpos secundarios u otros reactivos, que se unen específicamente a dichos anticuerpos o moléculas de unión, que están unidos a la partícula o perla magnética, se unen específicamente a las moléculas de la superficie celular si están presentes en las células de la muestra.

En algunos aspectos, la muestra se coloca en un campo magnético, y las células que tengan adheridas partículas magnetizables o que respondan magnéticamente a las mismas serán atraídas por el imán y separadas de las células no marcadas. Para la selección positiva, se retienen las células que son atraídas por el imán; para la selección negativa, se retienen las células que no son atraídas (células no marcadas). En algunos aspectos, se realiza una combinación de selección positiva y negativa durante el mismo paso de selección, en el que se retienen las fracciones positivas y negativas y se procesan o someten a pasos de separación adicionales.

En ciertos casos, las partículas magnéticas están recubiertas de anticuerpos primarios u otros compañeros de unión, anticuerpos secundarios, lectinas, enzimas o estreptavidina. En ciertos casos, las partículas magnéticas se unen a las células mediante un recubrimiento de anticuerpos primarios específicos para uno o más marcadores. En algunos casos, se marcan las células, en lugar de las perlas, con un anticuerpo primario o un compañero de unión y, a continuación, se añaden partículas magnéticas recubiertas de anticuerpos secundarios específicos del tipo celular u otro compañero de unión (por ejemplo, estreptavidina). En ciertos casos, las partículas magnéticas recubiertas de estreptavidina se uszan junto con anticuerpos primarios o secundarios biotinilados.

En algunos casos, las partículas que responden magnéticamente se dejan adheridas a las células que se van a incubar, cultivar y/o manipular posteriormente; en algunos aspectos, las partículas se dejan adheridas a las células para su administración a un paciente. En algunos casos, las partículas magnetizables o que responden magnéticamente se eliminan de las células. Los métodos para eliminar las partículas magnetizables de las células son conocidos e incluyen, por ejemplo, el uso de anticuerpos no marcados competidores, y partículas magnetizables o anticuerpos conjugados con conectores escindibles. En algunos casos, las partículas magnetizables son biodegradables.

En algunos casos, la selección basada en la afinidad se realiza mediante la selección celular activada magnéticamente (MACS) (Miltenyi Biotech, Auburn, CA). Los sistemas de selección celular activada magnéticamente (MACS) son capaces de seleccionar células de gran pureza con partículas magnetizadas adheridas a las mismas. En ciertos casos, la MACS funciona en un modo en el que las especies objetivo y no objetivo se eluyen secuencialmente tras la aplicación del campo magnético externo. Es decir, las células adheridas a las partículas magnetizadas se mantienen en su lugar mientras se eluyen las especies no adheridas. A continuación, una vez completado este primer paso de elución, las especies que quedaron atrapadas en el campo magnético y no pudieron ser eluidas se liberan de alguna manera para que puedan ser eluidas y recuperadas. En ciertos casos, las células no objetivo se marcan y se agotan de la población heterogénea de células.

En ciertos casos, el aislamiento o separación se lleva a cabo usando un sistema, dispositivo o aparato que realiza uno o más de los pasos de aislamiento, preparación celular, separación, procesamiento, incubación, cultivo y/o formulación de los métodos. En algunos aspectos, el sistema se usa para llevar a cabo cada uno de estos pasos en un entorno cerrado o estéril, por ejemplo, para minimizar los errores, la manipulación por parte del usuario y/o la contaminación. En un ejemplo, el sistema es un sistema como el descrito en la Solicitud de Patente Internacional, Número de Publicación WO2009/072003, o US 20110003380 A1.

En algunos casos, el sistema o aparato lleva a cabo uno o más, por ejemplo, todos los pasos de aislamiento, procesamiento, manipulación y formulación en un sistema integrado o autónomo, y/o de manera automatizada o programable. En algunos aspectos, el sistema o aparato incluye un ordenador y/o un programa informático en comunicación con el sistema o aparato, que permite a un usuario programar, controlar, evaluar el resultado y/o ajustar diversos aspectos de los pasos de procesamiento, aislamiento, manipulación y formulación.

En algunos aspectos, la separación y/u otros pasos se llevan a cabo usando el sistema CliniMACS (Miltenyi Biotec), por ejemplo, para la separación automatizada de células a escala clínica en un sistema cerrado y estéril. Los componentes pueden incluir un microordenador integrado, una unidad de separación magnética, una bomba peristáltica y varias válvulas de pellizco. El ordenador integrado en algunos aspectos controla todos los componentes del instrumento y dirige el sistema para realizar procedimientos repetidos en una secuencia estandarizada. En algunos aspectos, la unidad de separación magnética incluye un imán permanente móvil y un soporte para la columna de selección. La bomba peristáltica controla el caudal en todo el conjunto de tubos y, junto con las válvulas de pellizco, garantiza el flujo controlado de tampón a través del sistema y la suspensión continua de las células.

En algunos aspectos, el sistema CliniMACS usa partículas magnetizables acopladas a anticuerpos que se suministran en una solución estéril no pirogénica. En algunos casos, tras marcar las células con partículas magnéticas, éstas se lavan para eliminar el exceso de partículas. Luego, se conecta una bolsa de preparación celular al conjunto de tubos, que a su vez está conectado a una bolsa que contiene tampón y a una bolsa de recogida de células. El conjunto de tubos consiste en tubos estériles premontados, que incluyen una precolumna y una columna de separación, y son de un solo uso. Después de iniciar el programa de separación, el sistema aplica automáticamente la muestra celular en la columna de separación. Las células marcadas se retienen dentro de la columna, mientras que las no marcadas se eliminan mediante una serie de pasos de lavado. En algunos casos, las poblaciones celulares para su uso con los métodos descritos en la presente están marcadas y no se retienen en la columna. En algunos casos, las poblaciones celulares para su uso con los métodos descritos en la presente están marcadas y se retienen en la columna. En algunos casos, las poblaciones celulares para su uso con los métodos descritos en la presente se eluyen de la columna después de la eliminación del campo magnético, y se recogen dentro de la bolsa de recogida de células.

En ciertos casos, la separación y/u otros pasos se llevan a cabo usando el sistema CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). En algunos aspectos, el sistema CliniMACS Prodigy está equipado con una unidad de procesamiento celular que permite el lavado y fraccionamiento automatizado de las células mediante centrifugación. El sistema CliniMACS Prodigy también puede incluir una cámara incroporada y un software de reconocimiento de imágenes que determina el criterio de valoración óptimo de fraccionamiento celular discerniendo las capas macroscópicas del producto celular fuente. Por ejemplo, la sangre periférica se separa automáticamente en capas de eritrocitos, glóbulos blancos y plasma. El sistema CliniMACS Prodigy también puede incluir una cámara de cultivo celular integrada que realiza protocolos de cultivo celular como, por ejemplo, diferenciación y expansión celular, carga de antígenos y cultivo celular a largo plazo. Los puertos de entrada pueden permitir la extracción y reposición estéril de medios y las células pueden monitorizarse usando un microscopio integrado. Consultar, por ejemplo, Klebanoff et al. J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al. Blood. 1:72-82 (2012), y Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

En algunos casos, una población celular descrita en la presente se recoge y enriquece (o agota) mediante citometría de flujo, en la que las células teñidas para múltiples marcadores de superficie celular se transportan en una corriente fluídica. En algunos casos, una población celular descrita en la presente se recoge y enriquece (o agota) mediante clasificación a escala preparativa (FACS). En ciertos casos, una población celular descrita en la presente se recoge y enriquece (o agota) mediante el uso de chips de sistemas microelectromecánicos (MEMS) en combinación con un sistema de detección basado en FACS (consultar, por ejemplo, la WO 2010/033140, Cho et al. Lab Chip 10, 1567-1573 (2010); y Godin et al. J Biophoton. 1(5):355-376 (2008). En ambos casos, las células pueden marcarse con múltiples marcadores, lo que permite aislar subconjuntos de células T bien definidos con gran pureza.

En algunos casos, los anticuerpos o compañeros de unión están marcados con uno o más marcadores detectables, para facilitar la separación para la selección positiva y/o negativa. Por ejemplo, la separación puede basarse en la unión a anticuerpos marcados con fluorescencia. En algunos ejemplos, la separación de células basada en la unión de anticuerpos u otros compañeros de unión específicos para uno o más marcadores de la superficie celular se lleva a cabo en una corriente fluídica, como por ejemplo mediante clasificación de células activada por fluorescencia (FACS), incluyendo chips a escala preparativa (FACS) y/o de sistemas microelectromecánicos (MEMS), por ejemplo, en combinación con un sistema de detección citométrica de flujo. Tales métodos permiten la selección positiva y negativa basada en múltiples marcadores simultáneamente.

En algunos casos, los métodos de preparación incluyen pasos para congelar, por ejemplo, criopreservar, las células, ya sea antes o después del aislamiento, incubación y/o manipulación. En algunos casos, el paso de congelación y posterior descongelación elimina los granulocitos y, en cierta medida, los monocitos de la población celular. En algunos casos, las células se suspenden en una solución de congelación, por ejemplo, después de un paso de lavado para eliminar el plasma y las plaquetas. En algunos aspectos puede usarse cualquiera de una variedad de soluciones y parámetros de congelación conocidos. Un ejemplo implica usar PBS con un 20% de DMSO y un 8% de albúmina sérica humana (HSA), u otro medio de congelación celular adecuado. A continuación, esto se diluye 1:1 con medio de tal manera que la concentración final de DMSO y HSA sea del 10% y 4%, respectivamente. A continuación, las células se congelan generalmente a -80° C a una velocidad de 1° por minuto y se almacenan en la fase de vapor de un tanque de almacenamiento de nitrógeno líquido.

En algunos casos, las células se incuban y/o cultivan antes o en relación con la manipulación genética. Los pasos de incubación pueden incluir el cultivo, la estimulación, la activación y/o la propagación. La incubación y/o manipulación puede llevarse a cabo en un recipiente de cultivo, como una unidad, cámara, pocillo, columna, tubo, conjunto de tubos, válvula, vial, plato de cultivo, bolsa u otro recipiente para cultivo de células. En algunos casos, las composiciones o células se incuban en presencia de condiciones estimulantes o de un agente estimulante. Tales condiciones incluyen las diseñadas para inducir la proliferación, expansión, activación y/o supervivencia de las células en la población, para imitar la exposición al antígeno y/o para preparar las células para la manipulación genética, como por ejemplo para la introducción de un receptor de antígeno recombinante.

Las condiciones pueden incluir uno o más de los medios particulares, temperatura, contenido de oxígeno, contenido de dióxido de carbono, tiempo, agentes, por ejemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, iones, y/o factores estimulantes, como citoquinas, quimioquinas, antígenos, compañeros de unión, proteínas de fusión, receptores solubles recombinantes, y cualquier otro agente diseñado para activar las células.

En algunos casos, las condiciones o agentes de estimulación incluyen uno o más agentes, por ejemplo, ligando, que es capaz de activar un dominio de señalización intracelular de un complejo TCR. En algunos aspectos, el agente activa o inicia la cascada de señalización intracelular TCR/CD3 en una célula T. Tales agentes pueden incluir anticuerpos, como los específicos para un TCR, por ejemplo, anti-CD3. En algunos casos, las condiciones estimulantes incluyen uno o más agentes, por ejemplo, ligandos, que son capaces de estimular un receptor coestimulador, por ejemplo, anti-CD28. En algunos casos, dichos agentes y/o ligandos pueden estar unidos a un soporte sólido, como una perla, y/o a una o más citoquinas. Opcionalmente, el método de expansión puede comprender además el paso de añadir anticuerpos anti-CD3 y/o anti CD28 al medio de cultivo (por ejemplo, a una concentración de por lo menos aproximadamente 0,5 ng/ml). En algunos casos, los agentes de estimulación incluyen IL-2, IL-15 y/o IL-7. En algunos aspectos, la concentración de IL-2 es de por lo menos unas 10 unidades/ml.

En algunos aspectos, la incubación se lleva a cabo de acuerdo con técnicas como las descritas en la Patente de Estados Unidos N° 6.040.177 de Riddell et al., Klebanoff et al. J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al. Blood.1:72-82 (2012), y/o Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012).

En algunos casos, las células T se expanden añadiendo a una composición de células alimentadoras iniciadora de cultivo, como células mononucleares de sangre periférica (PBMC) no divididas (por ejemplo, de tal manera que la población resultante de células contenga por lo menos aproximadamente 5, 10, 20 o 40 o más células alimentadoras PBMC por cada linfocito T de la población inicial que se va a expandir); e incubando el cultivo (por ejemplo, durante un tiempo suficiente para expandir el número de células T). En algunos aspectos, las células alimentadoras que no se dividen pueden comprender células alimentadoras de PBMC irradiadas con rayos gamma. En algunos casos, las PBMC se irradian con rayos gamma en un intervalo de aproximadamente 3000 a 3600 rads para impedir la división celular. En algunos aspectos, las células alimentadoras se añaden al medio de cultivo antes de la adición de las poblaciones de células T.

En algunos casos, las condiciones de estimulación incluyen una temperatura adecuada para el crecimiento de linfocitos T humanos, por ejemplo, por lo menos aproximadamente 25 grados Celsius, generalmente por lo menos aproximadamente 30 grados, y generalmente aproximadamente 37 grados Celsius. Opcionalmente, la incubación puede comprender además la adición de células linfoblastoides (LCL) no divididas transformadas por VEB como células alimentadoras. Las LCL pueden irradiarse con rayos gamma en un intervalo de aproximadamente 6000 a 10.000 rads. Las células alimentadoras LCL en algunos aspectos se proporcionan en cualquier cantidad adecuada, como una proporción de células alimentadoras LCL a linfocitos T iniciales de por lo menos aproximadamente 10:1.

En algunos casos, las células T específicas de antígeno, como las células T CD4+ y/o CD8+ específicas de antígeno, se obtienen estimulando linfocitos T ingenuos o específicos de antígeno con antígeno. Por ejemplo, pueden generarse líneas o clones de células T específicas de antígeno para antígenos de citomegalovirus aislando células T de sujetos infectados y estimulando las células in vitro con el mismo antígeno.

VI. COMPOSICIONES Y FORMULACIONES

En algunos casos, la terapia celular se proporciona como una composición o formulación, como una composición o formulación farmacéutica. Tales composiciones pueden usarse de acuerdo con los métodos descritos, como en la prevención o el tratamiento de enfermedades, afecciones y trastornos, o en métodos de detección, diagnóstico y pronóstico.

El término "formulación farmacéutica" se refiere a una preparación cuya forma permite que la actividad biológica de un ingrediente activo contenido en la misma sea eficaz, y que no contiene componentes adicionales que sean inaceptablemente tóxicos para un sujeto al que se administraría la formulación.

Un "portador farmacéuticamente aceptable" ese refiere a un ingrediente de una formulación farmacéutica, distinto del principio activo, que no es tóxico para el sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable incluye, entre otros, un tampón, un excipiente, un estabilizador o un conservante.

En algunos casos, la terapia de células T, como las células T manipuladas (por ejemplo, células T CAR), se formula con un portador farmacéuticamente aceptable. En algunos aspectos, la elección del portador viene determinada en parte por la célula particular y/o por el método de administración. Por consiguiente, hay una variedad de formulaciones adecuadas. Por ejemplo, la composición farmacéutica puede contener conservantes. Los conservantes adecuados pueden incluir, por ejemplo, metilparabeno, propilparabeno, benzoato sódico y cloruro de benzalconio. En algunos aspectos, se usa una mezcla de dos o más conservantes. El conservante o las mezclas de los mismos están típicamente presentes en una cantidad comprendida entre el 0,0001% y el 2% en peso de la composición total. Los portadores se describen, por ejemplo, en Remington's Pharmaceutical Sciences 16a edición, Osol, A. Ed. (1980). Los portadores farmacéuticamente aceptables son generalmente no tóxicos para los receptores a las dosificaciones y concentraciones empleadas, e incluyen, pero no se limitan a: tampones, como fosfato, citrato y otros ácidos orgánicos; antioxidantes, que incluyen ácido ascórbico y metionina; conservantes (como cloruro de octadecildimetilbencilamonio; cloruro de hexametonio; cloruro de benzalconio; cloruro de bencetonio; fenol, alcohol butílico o bencílico; alquilparabenos como metil o propilparabeno; catecol; resorcinol; ciclohexanol; 3-pentanol; y mcresol); polipéptidos de bajo peso molecular (menos de aproximadamente 10 residuos); proteínas, como la albúmina sérica, la gelatina o las inmunoglobulinas; polímeros hidrófilos, como la polivinilpirrolidona; aminoácidos, como la glicina, la glutamina, la asparagina, la histidina, la arginina o la lisina; monosacáridos, disacáridos y otros hidratos de carbono, incluyendo glucosa, manosa o dextrinas; agentes quelantes, como EDTA; azúcares, como sacarosa, manitol, trehalosa o sorbitol; contraiones formadores de sal, como sodio; complejos metálicos (por ejemplo, complejos Znproteína); y/o surfactantes no iónicos como el polietilenglicol (PEG).

En algunos aspectos se incluyen agentes tamponadores en las composiciones. Entre los agentes tamponadores adecuados se incluyen, por ejemplo, ácido cítrico, citrato sódico, ácido fosfórico, fosfato potásico y otros ácidos y sales. En algunos aspectos, se usa una mezcla de dos o más agentes tamponadores. El agente tampón o las mezclas de los mismos típicamente estar presentes en una cantidad de entre aproximadamente el 0,001% y aproximadamente el 4% en peso de la composición total. Se conocen métodos para preparar composiciones farmacéuticas administrables. Los métodos ejemplares se describen con más detalle en, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21a ed.<(1>de mayo de 2005).

Las formulaciones pueden incluir soluciones acuosas. La formulación o composición también puede contener más de un ingrediente activo útil para la indicación, enfermedad o afección concreta que se pretende prevenir o tratar con las células, incluyendo uno o más ingredientes activos cuyas actividades sean complementarias y/o las respectivas actividades no se afecten negativamente entre sí. Tales ingredientes activos están convenientemente presentes en combinación en cantidades que son eficaces para el propósito pretendido. Por tanto, en algunos casos, la composición farmacéutica incluye además otros agentes o fármacos farmacéuticamente activos, como agentes quimioterapéuticos, por ejemplo, asparaginasa, busulfán, carboplatino, cisplatino, daunorrubicina, doxorrubicina, fluorouracilo, gemcitabina, hidroxiurea, metotrexato, paclitaxel, rituximab, vinblastina, vincristina, etc.

En algunos casos, la composición farmacéutica contiene células en cantidades eficaces para tratar o prevenir la enfermedad o afección, como una cantidad terapéutica o profilácticamente eficaz. En algunos casos, la eficacia terapéutica o profiláctica se monitoriza mediante la evaluación periódica de los sujetos tratados. Para administraciones repetidas durante varios días o más, dependiendo de la afección, el tratamiento se repite hasta que se produce una supresión deseada de los síntomas de la enfermedad. Sin embargo, pueden ser útiles y pueden determinarse otros regímenes de dosificación. La dosificación deseada puede administrarse mediante una única administración en bolo de la composición, mediante múltiples administraciones en bolo de la composición o mediante la administración en infusión continua de la composición.

Las células pueden administrarse usando técnicas, formulaciones y/o dispositivos de administración estándar. Se describen formulaciones y dispositivos, como jeringuillas y viales, para el almacenamiento y la administración de las composiciones. Con respecto a las células, la administración puede ser autóloga o heteróloga. Por ejemplo, las células o progenitores inmunosensibles pueden obtenerse de un sujeto y administrarse al mismo sujeto o a un sujeto diferente y compatible. Las células inmunosensibles derivadas de sangre periférica o su progenie (por ejemplo, derivadas in vivo, ex vivo o in vitro) pueden administrarse mediante inyección localizada, incluyendo la administración por catéter, inyección sistémica, inyección localizada, inyección intravenosa o administración parenteral. Cuando se administra una composición terapéutica (por ejemplo, una composición farmacéutica que contiene una célula inmunosensible manipulada genéticamente), generalmente se formulará en una forma inyectable de dosis unitaria (solución, suspensión, emulsión).

Las formulaciones incluyen las de administración oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o en supositorios. En algunos casos, el agente o las poblaciones celulares se administran por vía parenteral. El término "parenteral", como se usa en la presente, incluye la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea, rectal, vaginal e intraperitoneal. En algunos casos, el agente o las poblaciones celulares se administran a un sujeto mediante administración sistémica periférica por inyección intravenosa, intraperitoneal o subcutánea.

En algunos casos, las composiciones se proporcionan como preparaciones líquidas estériles, por ejemplo, soluciones acuosas isotónicas, suspensiones, emulsiones, dispersiones o composiciones viscosas, que en algunos aspectos pueden estar tamponadas a un pH seleccionado. Las preparaciones líquidas son normalmente más fáciles de preparar que los geles, otras composiciones viscosas y composiciones sólidas. Además, las composiciones líquidas son algo más cómodas de administrar, especialmente por inyección. Por otra parte, las composiciones viscosas pueden formularse dentro del intervalo de viscosidad adecuado para proporcionar periodos de contacto más prolongados con tejidos específicos. Las composiciones líquidas o viscosas pueden comprender portadores, que pueden ser un solvente o medio de dispersión que contenga, por ejemplo, agua, solución salina, solución salina tamponada con fosfato, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido) y mezclas adecuadas de los mismos.

Las soluciones inyectables estériles pueden prepararse incorporando las células en un solvente, por ejemplo en mezcla con un portador, diluyente o excipiente adecuado, como agua estéril, solución salina fisiológica, glucosa, dextrosa o similares. Las composiciones también pueden liofilizarse. Las composiciones pueden contener sustancias auxiliares como agentes humectantes, dispersantes o emulsionantes (por ejemplo, metilcelulosa), agentes de tamponamiento del pH, aditivos gelificantes o potenciadores de la viscosidad, conservantes, agentes aromatizantes, colorantes y similares, dependiendo de la vía de administración y de la preparación deseada. En algunos aspectos, pueden consultarse textos estándar para preparar las preparaciones adecuadas.

Pueden añadirse varios aditivos que potencian la estabilidad y esterilidad de las composiciones, incluyendo conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y tampones. La prevención de la acción de microorganismos puede garantizarse mediante varios agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. La absorción prolongada de la forma farmacéutica inyectable puede conseguirse mediante el uso de agentes retardadores de la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina.

Las formulaciones que se usarán para la administración in vivo son generalmente estériles. La esterilidad puede lograrse fácilmente, por ejemplo, por filtración a través de membranas de filtración estériles.

Para la prevención o el tratamiento de enfermedades, la dosificación adecuada puede depender del tipo de enfermedad a tratar, el tipo de agente o agentes, el tipo de células o receptores recombinantes, la gravedad y el curso de la enfermedad, si el agente o las células se administran con propósitos preventivos o terapéuticos, la terapia previa, el historial clínico del sujeto y la respuesta al agente o las células, y la discreción del médico tratante. En algunos casos, las composiciones se administran adecuadamente al sujeto de una sola vez o a lo largo de una serie de tratamientos.

VII .KITS Y ARTÍCULOS DE FABRICACIÓN

También se describen artículos de fabricación o kit que contienen las células manipuladas genéticamente descritas, y uno o más agentes para modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células manipuladas genéticamente, y/o un agente terapéutico adicional y/o composiciones que comprenden el mismo, opcionalmente reactivos para evaluar y/o medir uno o más parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos y/o atributos del paciente y/o expresión de biomarcadores, y opcionalmente instrucciones de uso, por ejemplo, instrucciones para administrar y/o evaluar, de acuerdo con los métodos descritos. Los artículos de fabricación pueden incluir un envase y una etiqueta o prospecto en el envase o asociado al mismo. Los recipientes adecuados incluyen, por ejemplo, botellas, viales, jeringuillas, tubos de ensayo, bolsas de solución intravenosa, etc. Los recipientes pueden formarse a partide una variedad de materiales, como vidrio o plástico. En algunos casos, el recipiente tiene un puerto de acceso estéril. Los recipientes ejemplares incluyen bolsas de solución intravenosa, viales, incluyendo aquellos con tapones perforables por una aguja para inyección.

Los artículos de fabricación descritos en la presente contienen materiales de envasado. Los materiales de envasado para su uso en el envasado de los materiales descritos son bien conocidos por los expertos en la técnica. Consultar, por ejemplo, las Patentes de Estados Unidos N° 5.323.907, 5.052.558 y 5.033.252, cada una de las cuales se incorpora en la presente en su totalidad. Los ejemplos de materiales de envasado incluyen, pero no se limitan a, blísteres, botellas, tubos, inhaladores, bombas, bolsas, viales, contenedores, jeringuillas, material de laboratorio desechable, por ejemplo, puntas de pipeta y/o placas de plástico, o botellas. Los artículos de fabricación o kits pueden incluir un dispositivo para facilitar la dispensación de los materiales o para facilitar el uso de una manera de alto rendimiento o a gran escala, por ejemplo, para facilitar el uso en equipos robóticos. Típicamente, el envase no es reactivo con las composiciones que contiene.

El artículo de fabricación o kit puede incluir además un prospecto que indique que las composiciones pueden usarse para tratar una afección particular, como una afección descrita en la presente (por ejemplo, mieloma múltiple). Alternativa o adicionalmente, el artículo de fabricación o kit puede incluir además otro o el mismo recipiente que comprenda un tampón farmacéuticamente aceptable. Puede incluir además otros materiales, como otros tampones, diluyentes, filtros, agujas y/o jeringuillas.

En algunos casos, los artículos de fabricación o kits incluyen uno o más recipientes, típicamente una pluralidad de recipientes, material de envasado, y una etiqueta o prospecto en o asociado con el recipiente o recipientes y/o envase, que generalmente incluye instrucciones de uso, por ejemplo, instrucciones para el ensamblaje de ácidos nucleicos y/o introducción de las moléculas de ácidos nucleicos ensambladas o conjuntos de moléculas de ácidos nucleicos en células, como transfección o transducción de células usadas en los métodos descritos, como células T, líneas de células T y/o composiciones de células T.

En algunos casos, el recipiente contiene una composición sola o combinada con otra composición que contiene uno o más agentes capaces de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células manipuladas, como cualquiera de los descritos en la presente. El artículo de fabricación o kit puede incluir uno o más recipientes con una composición contenida en los mismos, en los que la composición incluye uno o más agentes capaces de modular la expansión, proliferación y/o actividad de las células manipuladas, como cualquiera de los descritos en la presente; en donde la composición incluye opcionalmente un agente terapéutico adicional, y dicho artículo o kit comprende además instrucciones en la etiqueta o prospecto para tratar al sujeto en una cantidad eficaz.

En algunos casos, los artículos de fabricación y/o kits comprenden además un agente para la terapia de linfodepleción, y opcionalmente incluyen además instrucciones para administrar la terapia de linfodepleción. En algunos casos, las instrucciones pueden incluirse en una etiqueta o prospecto que acompañe a las composiciones para su administración.

En algunos casos, los artículos de fabricación y/o kits incluyen además uno o más reactivos para el ensayo de muestras biológicas, por ejemplo, muestras biológicas de sujetos candidatos a la administración o a los que se ha administrado la terapia, y opcionalmente instrucciones para el uso de los reactivos o ensayos, por ejemplo, evaluación de uno o más parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos y/o atributos del paciente y/o expresión de biomarcadores, y opcionalmente instrucciones de uso, por ejemplo, instrucciones para la administración y/o evaluación. En algunos casos, la muestra biológica es o se obtiene a partir de una muestra de sangre, plasma o suero.

En algunos casos, los reactivos pueden usarse antes o después de la administración de la terapia celular. Por ejemplo, en algunos casos, el artículo de fabricación y/o los kits contienen además reactivos para medir el nivel de atributos particulares del paciente y/o marcadores inflamatorios, que están asociados con ciertos parámetros farmacocinéticos, resultado de la respuesta y/o toxicidad, e instrucciones para la medición. En algunos casos, los reactivos incluyen componentes para realizar un ensayo in vitro para medir los parámetros, como un inmunoensayo, un ensayo basado en aptámeros, un ensayo histológico o citológico, o un ensayo de nivel de expresión de ARNm. En algunos casos, el ensayo in vitro se selecciona entre un ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), inmunotransferencia, inmunoprecipitación, radioinmunoensayo (RIA), inmunotinción, ensayo de citometría de flujo, resonancia de plasmones de superficie (SPR), ensayo de quimioluminiscencia, inmunoensayo de flujo lateral, ensayo de inhibición y ensayo de avidez. En algunos aspectos, el reactivo es un reactivo de unión que se une específicamente a los biomarcadores (por ejemplo, analitos). En algunos casos, el reactivo de unión es un anticuerpo o fragmento de unión a antígeno del mismo, un aptámero o una sonda de ácido nucleico. En algunos casos, el artículo de fabricación contiene cualquier reactivo descrito en la presente para evaluar los parámetros.

En algunos casos, los artículos de fabricación y/o kits comprenden uno o más reactivos capaces de detectar uno o más parámetros, por ejemplo, parámetros farmacocinéticos y/o atributos del paciente y/o expresión de biomarcadores, por ejemplo, instrucciones para administrar y/o evaluar, e instrucciones para usar el reactivo para analizar una muestra biológica de un sujeto candidato a tratamiento, en donde el uno o más parámetros se seleccionan entre concentración plasmática máxima (pico) (Cmax) de células CAR+, por ejemplo, CD3+, CD4+ y/o CD8+ CAR+, el tiempo de pico (es decir, cuando se produce la concentración plasmática máxima (Cmax); Tmax), la concentración plasmática mínima (es decir, la concentración plasmática mínima entre dosis de un agente terapéutico, por ejemplo, células T CAR+; Cmin), la semivida de eliminación (T<1/2>) y el área bajo la curva (es decir, el área bajo la curva generada al trazar el tiempo frente a la concentración plasmática de las células T CAR+ del agente terapéutico; AUC), las mediciones volumétricas de un tumor, por ejemplo, suma de los productos de los diámetros (SPD), diámetros tumorales más largos (LD), suma de los diámetros tumorales más largos (SLD), necrosis, volumen tumoral, volumen de necrosis, relación necrosis-tumor (NTR), edema peritumoral (PTE) y relación edema-tumor (ETR), velocidad de sedimentación globular (ESR), albúmina, p2 microglobulina (p2-M), ligando 13 de quimiocinas con motivo C-C (CCL13), proteína C reactiva (CRP), quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, interferón gamma (IFN-y), linfotoxina alfa (LT-a), proteína 1 quimioatrayente de monocitos (MCP-1), proteína 1 alfa inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), MIP-10, amiloide sérico A1 (SAA-1), factor de crecimiento transformante beta (TGF-p) y factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a). En algunos casos, también se incluyen instrucciones para evaluar la presencia o ausencia, nivel, cantidad o concentración de un parámetro en el sujeto en comparación con un nivel umbral del analito y/o parámetros.

VIII. DEFINICIONES

A menos que se defina de otro modo, todos los términos de la técnica, anotaciones y otros términos o terminología técnica y científica usados en la presente tienen el mismo significado que el entendido comúnmente por un experto en la técnica a la que pertenece la materia reivindicada. En algunos casos, los términos con significados comúnmente entendidos se definen en la presente por mayor claridad y/o para facilitar la referencia, y la inclusión de tales definiciones en la presente no debe interpretarse necesariamente como una diferencia sustancial sobre lo que se entiende generalmente en la técnica.

Como se usa en la presente, un "sujeto" es un mamífero, como un humano u otro animal, y típicamente es humano. En algunos casos, el sujeto, por ejemplo, el paciente, al que se administran los polipéptidos inmunomoduladores, las células artificiales o las composiciones, es un mamífero, típicamente un primate, como un humano. En algunos casos, el primate es un mono o un simio. El sujeto puede ser macho o hembra y puede tener cualquier edad adecuada, incluyendo sujetos lactantes, jóvenes, adolescentes, adultos y geriátricos. En algunos casos, el sujeto es un mamífero no primate, como un roedor.

Como se usa en la presente, "tratamiento" (y variaciones gramaticales del mismo, como "tratar" o "que trata") se refiere a la mejora o reducción completa o parcial de una enfermedad, afección o trastorno, o de un síntoma, efecto adverso o resultado, o fenotipo asociado con los mismos. Los efectos deseables del tratamiento incluyen, entre otros, la prevención de la aparición o recurrencia de la enfermedad, el alivio de los síntomas, la disminución de cualquier consecuencia patológica directa o indirecta de la enfermedad, la prevención de la metástasis, la disminución de la tasa de progresión de la enfermedad, la mejora o paliación del estado de la enfermedad y la remisión o mejora del pronóstico. Los términos no implican la curación completa de una enfermedad o la eliminación completa de cualquier síntoma o efecto sobre todos los síntomas o resultados.

Como se usa en la presente, "retrasar el desarrollo de una enfermedad" significa diferir, dificultar, ralentizar, retardar, estabilizar, suprimir y/o posponer el desarrollo de la enfermedad (como el cáncer). Este retraso puede ser de duración variable, dependiendo del historial de la enfermedad y/o del individuo a tratar. Como es evidente para un experto en la técnica, un retraso suficiente o significativo puede, en efecto, abarcar la prevención, en el sentido de que el individuo no desarrolle la enfermedad. Por ejemplo, puede retrasarse un cáncer en fase avanzada, como el desarrollo de metástasis.

"Prevenir", como se usa en la presente, incluye proporcionar profilaxis con respecto a la aparición o recurrencia de una enfermedad en un sujeto que puede estar predispuesto a la enfermedad pero al que aún no se le ha diagnosticado la enfermedad. En algunos casos, las células y composiciones descritas se usan para retrasar el desarrollo de una enfermedad o ralentizar su progresión.

Como se usa en la presente, "suprimir" una función o actividad es reducir la función o actividad en comparación con las mismas condiciones excepto por una condición o parámetro de interés, o alternativamente, en comparación con otra condición. Por ejemplo, las células que suprimen el crecimiento tumoral reducen la tasa de crecimiento del tumor en comparación con la tasa de crecimiento del tumor en ausencia de las células.

Una "cantidad eficaz" de un agente, por ejemplo, una formulación farmacéutica, células o composición, en el contexto de la administración, se refiere a una cantidad eficaz, en dosificaciones/cantidades y durante los períodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado deseado, como un resultado terapéutico o profiláctico.

Una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un agente, por ejemplo, una formulación farmacéutica o células manipuladas, se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr un resultado terapéutico deseado, como para el tratamiento de una enfermedad, afección o trastorno, y/o el efecto farmacocinético o farmacodinámico del tratamiento. La cantidad terapéuticamente eficaz puede variar en de acuerdo con factores como el estado de la enfermedad, la edad, el sexo y el peso del sujeto, y los polipéptidos inmunomoduladores o células manipuladas administrados. En algunos casos, los métodos descritos implican administrar los polipéptidos inmunomoduladores, las células manipuladas o las composiciones en cantidades eficaces, por ejemplo, cantidades terapéuticamente eficaces.

Una "cantidad profilácticamente eficaz" se refiere a una cantidad eficaz, a las dosificaciones y durante los periodos de tiempo necesarios, para lograr el resultado profiláctico deseado. Típicamente, pero no necesariamente, como una dosis profiláctica se usa en sujetos antes o en una fase más temprana de la enfermedad, la cantidad profilácticamente eficaz será menor que la cantidad terapéuticamente eficaz.

Un "portador farmacéuticamente aceptable" es un ingrediente de una formulación farmacéutica, distinto del ingrediente activo, que no es tóxico para el sujeto. Un portador farmacéuticamente aceptable incluye, entre otros, un tampón, un excipiente, un estabilizador o un conservante.

Como se usa en la presente, la exposición de que las posiciones de nucleótidos o aminoácidos "se corresponden" con las posiciones de nucleótidos o aminoácidos de una secuencia divulgada, como se expone en el listado de secuencias, se refiere a las posiciones de nucleótidos o aminoácidos identificadas tras la alineación con la secuencia divulgada para maximizar la identidad usando un algoritmo de alineación estándar, como el algoritmo GAP. Al alinear las secuencias, un experto en la técnica puede identificar los residuos correspondientes, por ejemplo, usando residuos de aminoácidos conservados e idénticos como guías. En general, para identificar las posiciones correspondientes, las secuencias de aminoácidos se alinean de tal manera que se obtenga la coincidencia de mayor orden (consultar, por ejemplo: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., y Griffin, H.G., eds., Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. y Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073).

El término "vector", como se usa en la presente, se refiere a una molécula de ácido nucleico capaz de propagar otro ácido nucleico al que está enlazado. El término incluye el vector como estructura de ácido nucleico autorreplicante, así como el vector incorporado en el genoma de una célula huésped en la que se ha introducido. Ciertos vectores son capaces de dirigir la expresión de los ácidos nucleicos a los que están operativamente enlazados. Tales vectores se denominan en la presente "vectores de expresión". Entre los vectores se encuentran los vectores virales, como los retrovirales, por ejemplo, los vectores gammaretrovirales y lentivirales.

Los términos "célula huésped", "línea celular huésped" y "cultivo celular huésped" se usan indistintamente y se refieren a células en las que se ha introducido ácido nucleico exógeno, incluyendo la progenie de dichas células. Las células huésped incluyen "células transformantes" y "células transformadas", que incluyen la célula transformada primaria y la progenie derivada de la misma sin tener en cuenta el número de pases. La progenie puede no ser completamente idéntica en contenido de ácido nucleico a una célula progenitora, sino que puede contener mutaciones. En la presente se incluye la progenie mutante que tiene la misma función o actividad biológica que la célula originalmente transformada.

Como se usa en la presente, una afirmación de que una célula o población de células es "positiva" para un marcador particular se refiere a la presencia detectable sobre o en la célula de un marcador concreto, típicamente un marcador de superficie. Cuando se hace referencia a un marcador de superficie, el término se refiere a la presencia de expresión de superficie detectada por citometría de flujo, por ejemplo, mediante tinción con un anticuerpo que se une específicamente al marcador y la detección de dicho anticuerpo, en donde la tinción es detectable por citometría de flujo a un nivel sustancialmente superior a la tinción detectada llevando a cabo el mismo procedimiento con un control de isotipo coincidente en condiciones por lo demás idénticas y/o a un nivel sustancialmente similar al de la célula que se sabe que es positiva para el marcador, y/o a un nivel sustancialmente superior al de una célula que se sabe que es negativa para el marcador.

Como se usa en la presente, una afirmación de que una célula o población de células es "negativa" para un marcador particular se refiere a la ausencia de presencia detectable sustancial sobre o en la célula de un marcador particular, típicamente un marcador de superficie. Cuando se hace referencia a un marcador de superficie, el término se refiere a la ausencia de expresión de superficie detectada por citometría de flujo, por ejemplo, mediante tinción con un anticuerpo que se une específicamente al marcador y detección de dicho anticuerpo, en donde la tinción no se detecta por citometría de flujo a un nivel sustancialmente superior a la tinción detectada llevando a cabo el mismo procedimiento con un control de isotipo coincidente en condiciones por lo demás idénticas, y/o a un nivel sustancialmente menor del de la célula que se sabe que es positiva para el marcador, y/o a un nivel sustancialmente similar en comparación con el de una célula que se sabe que es negativa para el marcador.

Como se usa en la presente, el "porcentaje (%) de identidad de secuencia de aminoácidos" y el "porcentaje de identidad" con respecto a una secuencia de aminoácidos (secuencia polipeptídica de referencia) se definen como el porcentaje de residuos de aminoácidos en una secuencia candidata (por ejemplo, el anticuerpo o fragmento en cuestión) que son idénticos a los residuos de aminoácidos en la secuencia polipeptídica de referencia, tras alinear las secuencias e introducir huecos, si es necesario, para alcanzar el porcentaje máximo de identidad de secuencia, y sin considerar ninguna sustitución conservadora como parte de la identidad de secuencia. La alineación con el propósito de determinar el porcentaje de identidad de secuencia de aminoácidos puede lograrse de varias maneras que están dentro de la capacidad de la técnica, por ejemplo, usando software informático disponible públicamente como BLAST, BLAST-2, ALIGN o Megalign (DNAS-TAR). Los expertos en la técnica pueden determinar los parámetros adecuados para alinear las secuencias, incluyendo cualquier algoritmo necesario para lograr la alineación máxima en toda la longitud de las secuencias comparadas.

Como se usan en la presente, las formas singulares "un", "uno" y "el" incluyen referentes plurales a menos que el contexto indique claramente lo contrario. Por ejemplo, "un" o "uno" significa "por lo menos uno" o "uno o más". Se entiende que los aspectos y variaciones descritos en la presente incluyen aspectos y variaciones "que consisten" y/o "que consisten esencialmente en".

A lo largo de esta divulgación, varios aspectos de la materia reivindicada se presentan en un formato de intervalo. Debe entenderse que la descripción en formato de intervalo es meramente por conveniencia y brevedad y no debe interpretarse como una limitación inflexible en el alcance de la materia reivindicada. Por consiguiente, debe considerarse que la descripción de un intervalo ha divulgado específicamente todos los posibles subintervalos, así como los valores numéricos individuales dentro de ese intervalo. Por ejemplo, cuando se proporciona un intervalo de valores, se entiende que cada valor intermedio, entre el límite superior e inferior de ese intervalo y cualquier otro valor indicado o intermedio en ese intervalo indicado está incluido en la materia reivindicada. Los límites superior e inferior de estos intervalos más pequeños pueden incluirse independientemente en los intervalos más pequeños, y también se incluyen en el objeto reivindicado, sujeto a cualquier límite específicamente excluido en el intervalo indicado. Cuando el intervalo indicado incluye uno o ambos límites, los intervalos que excluyan uno o ambos de esos límites incluidos también se incluyen en la materia reivindicada. Esto se aplica independientemente de la amplitud del intervalo.

El término "aproximadamente", como se usa en la presente, se refiere al intervalo de error habitual para el valor respectivo fácilmente conocido por el experto en este campo técnico. La referencia a "aproximadamente" un valor o parámetro en la presente incluye (y describe) casos que están dirigidos a ese valor o parámetro per se. Por ejemplo, la descripción referida a "aproximadamente X" incluye la descripción de "X".

Como se usa en la presente, una composición se refiere a cualquier mezcla de dos o más productos, sustancias o compuestos, incluyendo las células. Puede ser una solución, una suspensión, un líquido, un polvo, una pasta, acuosa, no acuosa o cualquier combinación de los mismos.

Si una definición expuesta en la presente es contraria o incoherente con una definición expuesta en las patentes, solicitudes, solicitudes publicadas y otras publicaciones a las que se hace referencia en la presente, prevalecerá la definición expuesta en la presente.

Los títulos de las secciones que se usan en la presente tienen únicamente propósitos organizativos y no deben interpretarse como una limitación de la materia descrita.

IX. EJEMPLOS

Los siguientes ejemplos se incluyen únicamente con propósitos ilustrativos y no se pretende que limiten el alcance de la invención.

Ejemplo 1: Probabilidad de respuesta medular basada en el pico de expansión y respuesta de células T CAR y neurotoxicidad en pacientes con CLL de alto riesgo

A veinticuatro (24) sujetos humanos adultos con leucemia linfocítica crónica (CLL) CD19+ en recaída o refractaria (R/R) se les administraron células T autólogas que expresaban un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico para CD19 y se evaluaron como se describe a continuación.

El CAR incluía un scFv (en orientación VL-conector-VH) específico para CD19, con regiones variables derivadas de FMC63, una región bisagra IgG, una región transmembrana y dominios de señalización intracelular derivados de 41BB y CD3zeta humanos. El constructo codificaba además un EGFR truncado (EGFRt), que servía como marcador sustitutivo de la expresión de CAR; la región codificante de EGFRt estaba separada de la secuencia CAR por una secuencia de salto T2A. Antes de la administración de las células, los pacientes se sometieron a leucaféresis; las poblaciones CD4+ y CD8+ se seleccionaron mediante métodos de enriquecimiento basados en inmunoafinidad, se transdujeron con un vector viral con el constructo de CAR y se expandieron en cultivo durante quince (15) días.

Comenzando por lo menos cuarenta y ocho (48) (y hasta noventa y seis (96)) horas antes de la infusión de células T CAR+, los sujetos recibieron una quimioterapia de linfodepleción con (a) ciclofosfamida (Cy, 60 mg/kg) con o sin etopósido (2/13 sujetos), o (b) ciclofosfamida (Cy, 60 mg/kg) en combinación con fludarabina (flu, 25 mg/m2 diarios durante 3-5 días (cy/flu, 11/13 sujetos).

Las células para la administración generalmente se formularon en una proporción de células T CAR+ CD4+ a células T CAR+ CD8+ de aproximadamente 1:1. Las composiciones terapéuticas se produjeron con éxito para todos los sujetos. Para 1/13 sujetos, se produjeron menos células que la dosis objetivo (2x106/kg CAR+).

Se infundió a los sujetos una composición con una proporción aproximada de 1:1 de células T CD8+ CAR+ y células T CD4+ CAR, en uno de tres niveles de dosis diferentes (2x105 (N=4) 2x106 (N=8) o 2x107 (N=1) células T CAR+ por kilogramo (kg) de peso del sujeto). La terapia de linfodepleción y las infusiones de células T se administraron de manera ambulatoria.

La incidencia y el grado del síndrome de liberación de citoquinas (CRS) se determinaron de acuerdo con Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95. Después del tratamiento, se evaluó y monitorizó la neurotoxicidad de los sujetos (complicaciones neurológicas que incluyen síntomas de confusión, afasia, ataques, convulsiones, letargo y/o alteración del estado mental), calificada en función de la gravedad mediante una escala de Grados 1-5 (consultar, por ejemplo, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (diciembre de 2010). Los grados 3 (síntomas graves), 4 (síntomas potencialmente mortales) o 5 (muerte) indicaban neurotoxicidad grave.

Sobre la base del número de células CAR-T CD4+/EGFRt+ o CD8+/EGFRt+ en la sangre (FIG. 1), se construyó una curva de probabilidad estimada de respuesta y una probabilidad estimada de desarrollar neurotoxicidad de Grado 3-5. En general, a medida que aumentaba el número de células CAR- T, la probabilidad de respuesta aumentaba y luego se estabilizaba, mientras que la probabilidad de desarrollar neurotoxicidad de Grado 3-5 aumentaba.

Ejemplo 2: Administración de células CAR anti-CD19 a los sujetos

A 28 sujetos con linfoma no Hodgkin (NHL) en recaída o refractario (R/R) se les administraron células T autólogas que expresaban un receptor de antígeno quimérico (CAR) anti-CD19. Los datos demográficos y las características de referencia de los sujetos se exponen en laTabla 3.El CAR contenía un scFv anti-CD19 derivado de un anticuerpo murino, un espaciador derivado de inmunoglobulina, un dominio transmembrana derivado de CD28, una región coestimuladora derivada de 4-1BB y un dominio de señalización intracelular CD3-zeta. Para generar las células T autólogas que expresan CAR, se aislaron células T mediante enriquecimiento basado en inmunoafinidad a partir de muestras de leucaféresis de sujetos individuales, se activaron y se transdujeron con un vector viral que codificaba un CAR anti-CD 19, seguido de expansión (en una proporción objetivo de aproximadamente 1:1 de células T CD4+ a CD8+ CAR+).

continuación

Antes de la administración de las células T que expresan CAR, los sujetos fueron tratados con 30 mg/m2 de fludarabina al día durante 3 días y 300 mg/m2 de ciclofosfamida al día durante 3 días. Las composiciones celulares crioconservadas se descongelaron antes de la administración intravenosa. La dosis de células T terapéuticas se administró como una composición celular definida mediante la administración de una población de células CD4+ CAR+ formulada y una población de CD8+ CAR+ formulada administradas en una proporción objetivo de aproximadamente 1:1. En d=0, los sujetos se trataron luego con un programa de dosis única o doble de 5 x 107 (DL1) o 1 x 108 (DL2) células T que expresan CAR mediante infusión intravenosa (cada dosis única mediante infusiones separadas de células T que expresan CAR CD4+ y células T que expresan CAR CD8+, respectivamente).

Se evaluó la presencia o ausencia de varios eventos adversos emergentes del tratamiento en sujetos tratados con diversos programas de dosis de terapia de células CAR-T (Tablas 4 y 5). Como se muestra en laTabla 5,no se observó ningún Síndrome de Liberación de Citoquinas (sCRS) grave (Grado 3-5); el Síndrome de Liberación de Citoquinas (CRS) se observó en el 36% (10/28) de los sujetos. Se observó neurotoxicidad de grado 3-4 en el 14% (4/28) de los sujetos y el 18% (5/28) de los sujetos presentaron neurotoxicidad de cualquier grado. Un sujeto fue tratado con tocilizumab y cuatro pacientes recibieron dexametasona por CRS o neurotoxicidad de grado 2 de aparición temprana. Seis sujetos recibieron antiepilépticos profilácticos.

continuación

Se evaluó la mejor respuesta global de los sujetos del grupo, observada durante un periodo de hasta un punto temporal concreto en un estudio en curso tras la última infusión de células T CAR+ de dosis única de DL1. Los resultados de las respuestas globales se muestran en laTabla 6.De los 20 sujetos que fueron tratados con la dosis única de DL1 en la cohorte de linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), se observó una tasa de respuesta global (ORR) del 80% (16/20) y el 60% (12/20) de los sujetos mostraron indicios de remisión completa (CR). El 20% (4/20) de los sujetos mostraron evidencia de respuesta parcial (PR) y el 20% (4/20) de los sujetos mostraron evidencia de enfermedad progresiva (PP). De los sujetos que habían sido quimiorrefractarios (que habían mostrado enfermedad estable o progresiva tras el último régimen con quimioterapia o recaída menos de 12 meses después de un SCT autólogo) antes de la administración de células T CAR+, la tasa de respuesta global fue del 83% (10 RRO, 7 CR, 3 PR, 2 PP, n=12). Entre los sujetos que habían sido refractarios (que habían mostrado una remisión no completa después del último tratamiento pero que no se consideraron quimiorrefractarios), la tasa de respuesta global fue del 77% (13 ORR, 9 CR, 4 PR, 4 PD, n=17).

De tres sujetos con DLBCL que en el momento de la evaluación habían sido tratados con dos dosis de DL1, dos (2) mostraron respuesta parcial (PR) y uno (1) mostró enfermedad progresiva (PD). Entre los 2 sujetos con DLBCL que en el momento de la evaluación habían sido tratados con una dosis única de DL2, se observó que ambos alcanzaron la CR. Entre una cohorte de MCL con un total de dos sujetos tratados en el momento de la evaluación con una dosis única de DL1, se observó 1 PR y 1 PD. Se trató a dos sujetos con doble impacto, tres sujetos con triple impacto y cuatro sujetos con DLBCL de expresor doble, y todos lograron una respuesta (7 CR, 2 PR).

El número de células T CAR+ en sangre periférica se determinó en ciertos puntos temporales tras el tratamiento incubando las células con un reactivo específico del transgén. En laFIG. 2Ase muestra el número de linfocitos T CD3+/CAR+ en sangre periférica medido en ciertos puntos temporales después de la infusión en sujetos tratados con una dosis única de DL1 agrupados por mejor respuesta global.Se observó un pico más alto de células T CD3+/CAR+ en los respondedores (CR/PR) que en los PD. LasFIGS. 2B-2Dmuestran los niveles de células T CD3+/CAR+, células T CD4+/CAR+ y células T CD8+/CAR+ (células/pl de sangre; media ± SEM) en sujetos que lograron una respuesta, agrupados por respuesta continuada (CR/PR) o PD a los 3 meses.

Se determinaron la Cmax (células CAR+/pl de sangre) y el área bajo la curva (AUC) para respondedores (CR/PR) y PD, y se muestran en laTabla 7.Los resultados fueron coherentes con la conclusión de que las respuestas duraderas se correlacionaban con mayores niveles de células T CD3+/CAR+ en sangre, a lo largo del tiempo y en el momento de máxima expansión.

Ejemplo 3: Administración de células anti-CD19 que expresan CAR a sujetos con linfoma no Hodgkin (NHL) recidivante y refractario

A. Sujetos y tratamiento

Se administraron composiciones terapéuticas de células T CAR+ que contenían células T autólogas que expresaban un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico para CD19 a sujetos con enfermedades malignas de células B. Los resultados se describen en este ejemplo para la evaluación a través de un punto temporal particular en un estudio en curso para una cohorte (cohorte completa) de cincuenta y cinco (55) sujetos humanos adultos con linfoma no Hodgkin (NHL) agresivo en recaída o refractario (R/R), incluyendo linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), de novo o transformado de linfoma indolente (NOS), linfoma mediastínico primario de células B grandes (PMBCL) y linfoma folicular de grado 3b (FLG3B) tras el fracaso de 2 líneas de tratamiento. Entre los sujetos tratados se encontraban aquellos con puntuaciones del Eastern Cooperative Oncology Group (ECOG) de entre 0 y 2 (mediana de seguimiento de 3,2 meses). Los 55 sujetos no incluían sujetos con linfoma de células del manto (MCL). No se excluyó a ningún sujeto por haber recibido previamente un trasplante alogénico de células madre (SCT) y no se exigió un recuento absoluto mínimo de linfocitos (ALC) para la aféresis.

Se evaluaron por separado los resultados en este punto temporal de un subconjunto central de los 55 sujetos (el subconjunto excluyendo a los sujetos con un estado funcional deficiente (ECOG 2), DLBCL transformado de linfomas de zona marginal (MZL) y/o leucemia linfocítica crónica (CLL, de Richter) (cohorte central)).

Los datos demográficos y las características de referencia de la cohorte completa y de la cohorte central se exponen en laTabla 8.

continuación

Las composiciones de células T terapéuticas administradas se habían generado mediante un proceso que incluía el enriquecimiento basado en inmunoafinidad de células CD4+ y CD8+ a partir de muestras de leucaféresis de los sujetos individuales a tratar. Las células T CD4+ y CD8+ aisladas se activaron y transdujeron con un vector viral que codificaba un CAR anti-CD 19, seguido de la expansión y criopreservación de las poblaciones celulares manipuladas. El CAR contenía un scFv anti-CD19 derivado de un anticuerpo murino, un espaciador derivado de inmunoglobulina, un dominio transmembrana derivado de CD28, una región coestimuladora derivada de 4-1BB y un dominio de señalización intracelular CD3-zeta.

Las composiciones celulares crioconservadas se descongelaron antes de la administración intravenosa. La dosis de células T terapéuticas se administró como una composición celular definida mediante la administración de una población de células CD4+ CAR+ formuladas y una población de células CD8+ CAR+ formuladas administradas en una proporción objetivo de aproximadamente 1:1. A los sujetos se les administró una dosis única o doble de células T que expresan CAR (cada dosis única mediante infusiones separadas de células T que expresan CAR CD4+ y células T que expresan CAR CD8+, respectivamente) de la siguiente manera: una dosis única de nivel de dosis 1 (DL1) que contenía 5 x 107 células T totales que expresaban CAR (n=30), una dosis doble de DL1 en la que cada dosis se administró aproximadamente con catorce (14) días de diferencia (n=6, incluyendo un sujeto que recibió inadvertidamente dos dosis de DL2 mediante el programa de dos dosis, debido a un error de dosificación), o una dosis única de nivel de dosis 2 (DL2) que contenía 1 x 108 (DL2) células T totales que expresaban CAR (n=18). Comenzando tres (3) días antes de la infusión de células T CAR+, los sujetos recibieron una quimioterapia de linfodepleción con flurabina (flu, 30 mg/m2) y ciclofosfamida (Cy, 300mg/m2).

B. Seguridad

Se evaluó la presencia o ausencia de eventos adversos emergentes del tratamiento (TEAE) de la terapia con células CAR-T. LaFIG. 3representa el porcentaje de sujetos en los que se observaron anomalías de laboratorio y TEAE, que se produjeron en >20% de los sujetos. Además de los TEAe mostrados en laFIG. 3,se observaron los siguientes términos de eventos en Grado 3-4 en >5% de los pacientes: disminución del recuento de glóbulos blancos (13,6%), encefalopatía (12%), hipertensión (7%). El grado de toxicidad observado fue consistente entre los niveles de dosis 1 y 2.

También se evaluó y monitorizó la neurotoxicidad de los sujetos (complicaciones neurológicas que incluyen síntomas de confusión, afasia, encefalopatía, ataques mioclónicos, convulsiones, letargo y/o alteración del estado mental), calificada en una escala de 1 a 5, según la escala de Criterios Comunes de Toxicidad (CTCAE) del Instituto Nacional del Cáncer, versión 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). Escala de Criterios Comunes de Toxicidad (CTCAE), versión 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). Consultar Terminología común para los efectos adversos (CTCAE), versión 4, Departamento de Salud y Servicios Humanos de Estados Unidos, Publicado: 28 de mayo de 2009 (v4.03: 14 de junio de 2010); y Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (diciembre de 2010). También se determinó y monitorizó el síndrome de liberación de citoquinas (CRS), calificado sobre la base de la gravedad.

En el 84% de los sujetos de la cohorte completa no se observó síndrome de liberación de citoquinas (CRS) grave (grado 3 o superior) ni neurotoxicidad grave. Además, se observó que el 60% de los sujetos de la cohorte completa no desarrollaron ningún grado de CRS o neurotoxicidad. No se observaron diferencias en la incidencia de CRS, neurotoxicidad (NT), sCRS o neurotoxicidad grave (sNT) entre los niveles de dosis. LaTabla 9resume la incidencia del síndrome de liberación de citoquinas (CRS) y los eventos adversos de neurotoxicidad en pacientes 28 días después de recibir por lo menos una dosis de células CAR-T. Como se muestra en laTabla 9, no se observó ningún sCRS (Grado 3-4) en ninguno de los sujetos que recibieron una dosis única de DL2 o una dosis doble de DL1. Se observó neurotoxicidad grave o CRS grave (grado 3-4) en el 16% (9/55) de la cohorte completa de sujetos y en el 18% (8/44) de los sujetos del subconjunto básico. El 11% (n=6) de los sujetos recibieron tocilizumab y el 24% (n=13) de los sujetos recibieron dexametasona. Entre los sujetos de ECOG2 de la cohorte completa, las tasas observadas de CRS y neurotoxicidad fueron del 71% y el 29%, respectivamente.

LaFIG. 4muestra una curva de Kaplan Meier que representa el tiempo observado hasta la aparición del CRS y/o la neurotoxicidad. Como se muestra, los tiempos medios observados hasta el inicio del CRS y hasta el inicio de la neurotoxicidad fueron de 5 y 11 días, respectivamente, y sólo el 11% de los pacientes experimentaron el inicio del CRS menos de 72 horas después del inicio de la administración de la terapia celular. La mediana del tiempo transcurrido hasta la resolución del CRS y la neurotoxicidad de grado 1 o superior fue de 5 y 7 días, respectivamente. La mediana del tiempo transcurrido hasta la resolución completa del CRS y la neurotoxicidad fue de 5 y 11 días, respectivamente. Los resultados fueron coherentes con la conclusión de que había una baja tasa de aparición precoz de cualquier CRS o neurotoxicidad en los sujetos.

C. Respuesta al tratamiento

Se monitorizó la respuesta de los sujetos, incluyendo la evaluación de la carga tumoral, 1, 3, 6, 7, 12, 18 y 24 meses después de la administración de las células T CAR+. Las tasas de respuesta se enumeran en laTabla 10.

Se observaron altas tasas de respuesta duradera en la cohorte de sujetos, que incluía sujetos altamente pretratados o con mal pronóstico y/o con enfermedad recidivante o refractaria. Para los sujetos de todas las dosis de la cohorte básica (n=44), la tasa de respuesta global (ORR) observada fue del 86% y la tasa de respuesta completa (CR) observada fue del 59%. A los tres meses, en la cohorte central, la tasa de respuesta global (ORR) fue del 66%; la tasa de CR a los tres meses fue del 50% en la cohorte central. En la cohorte central, la ORR a los 3 meses fue del 58% (11/19) en el nivel de dosis 1 y del 78% en el nivel de dosis 2; la tasa de CR a los 3 meses fue del 42% (8/19) en el nivel de dosis 1 y del 56% (5/9) en el nivel de dosis 2, lo que es consistente con un efecto de respuesta a la dosis sugerido en el resultado del tratamiento. Además, los resultados fueron consistentes con una relación entre la dosis y la durabilidad de la respuesta.

En lasFIGS. 5Ay5B, respectivamente, se muestran las tasas de respuesta global entre varios subgrupos de sujetos de las cohortes completa y central. En los subgrupos de DLBCL de bajo riesgo, las tasas de respuesta fueron generalmente elevadas. Se observó una ORR superior al 50% a los 3 meses en pacientes con subtipo molecular de doble/triple impacto, que tenían DLBCL refractario primario o quimiorrefractario o que nunca antes habían logrado una CR. En 2 pacientes se observó una resolución completa de la afectación del SNC por el linfoma.

Entre los sujetos tratados seis meses o más antes del momento particular de la evaluación, de los diez (10) pacientes que habían respondido a los tres meses, nueve (90%) seguían respondiendo a los seis meses. En el momento de la evaluación, el 97% de los sujetos del subconjunto básico que habían respondido estaban vivos y en seguimiento, con una mediana de tiempo de seguimiento de 3,2 meses.

Los resultados de la duración de la respuesta y la supervivencia global (agrupados por la mejor respuesta global (no respondedor, CR/PR, RC y/o RP)) se muestran para las cohortes completa y central de sujetos, en lasFIGS.

6Ay6B,respectivamente. Como se muestra, se observó una supervivencia prolongada en los respondedores, con una mayor durabilidad de la respuesta en los sujetos con CR. Todos los pacientes en respuesta a los tres meses seguían vivos en el momento de la evaluación, aunque 5/6 sujetos con un estado funcional deficiente (ECOG 2) habían fallecido.

C. Evaluación de las células T CAR+ en sangre

Se llevó a cabo un análisis farmacocinético para evaluar el número de células T CAR+ en sangre periférica en varios puntos temporales después del tratamiento. Como se muestra en laFIG. 7A,se detectaron células CD4+ y CD8+ que expresan CAR, medidas por el número de células/pl de sangre (mediana ± cuartiles) trazadas en una escala logarítmica, durante todo el curso de la evaluación en ambos niveles de dosis administrados.

Se observó un aumento de la mediana del área bajo la curva (AUC) (número de células CD8+ CAR+ en la sangre a lo largo del tiempo) entre los sujetos a los que se administró el nivel de dosis más alto, en comparación con el nivel de dosis más bajo, sin que se observara un aumento de la toxicidad. Se observó una mayor exposición máxima de células T CD8+/CAR+ en los pacientes que respondieron (CR/PR) que en los que no respondieron (PD); se observó la persistencia de las células durante el tiempo de evaluación, incluso hasta los 3 y 6 meses, incluso en sujetos cuya enfermedad había progresado (FIG. 7B). Los resultados fueron consistentes con la conclusión de que el tratamiento dio como resultado una exposición prolongada y persistencia de las células manipuladas, incluso en sujetos con respuestas pobres. En algunos casos, se usan enfoques combinados, como la administración de un modulador de punto de control inmunitario u otro agente modulador inmunitario, por ejemplo, tras la recaída o la progresión de la enfermedad, en un momento en el que las células manipuladas persisten en el sujeto, por ejemplo, según se mide por los niveles de células en sangre periférica. En algunos aspectos, las células, habiendo persistido durante un periodo prolongado, vuelven a expandirse o activarse y/o muestran función antitumoral, después de la administración del otro agente o tratamiento. En general, se observó una mediana más alta de células T CD4+ y CD8+ CAR+ a lo largo del tiempo en la sangre de sujetos que desarrollaron neurotoxicidad (FIG. 7C).

D. Analitos sanguíneos y neurotoxicidad

Se midieron varios analitos sanguíneos pretratamiento, incluyendo las citoquinas, en la sangre de los sujetos antes de la administración de las células T CAR+. Las correlaciones potenciales con el riesgo de desarrollar neurotoxicidad se evaluaron usando análisis estadístico. LaFIG. 8muestra los niveles medianos de los analitos evaluados en unidades (LDH, U/l; ferritina, ng/ml; CRP, mg/l; citoquinas, pg/ml) en sujetos que no desarrollaron neurotoxicidad frente a sujetos que sí desarrollaron neurotoxicidad tras la terapia con células T<c>A<r>+. Se observó que los niveles de determinados analitos sanguíneos, incluyendo LDH, ferritina, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-a, IFN- a2, MCP-1 y MIP-1 p, estaban asociados con el nivel de riesgo de desarrollar neurotoxicidad (valores p de Wilcoxon <0,05,sin ajuste por multiplicidad). En particular, los resultados fueron consistentes con la conclusión de que los niveles de LDH pretratamiento, que en algunos casos es un sustituto de la carga de enfermedad, pueden ser útiles para la evaluación del riesgo potencial de neurotoxicidad y/o la dosificación adaptada al riesgo o el ajuste del tratamiento de ciertos sujetos. Además, la carga tumoral medida antes de la administración de la composición de células CAR-T se correlacionó (valores de p de Spearman <0,05) con el riesgo de desarrollar neurotoxicidad. En algunos aspectos, los niveles de LDH pueden evaluarse solos y/o en combinación con otro parámetro pretratamiento, como otra medida o indicador de la carga de enfermedad, como una medida volumétrica del tumor como la suma de las dimensiones del producto (SPD) u otra medición volumétrica de la carga de enfermedad basada en CT o basada en MRI. En algunos aspectos, se evalúan uno o más parámetros indicativos de la carga de enfermedad, y en algunos contextos pueden indicar la presencia, ausencia o grado de riesgo de desarrollar neurotoxicidad tras la terapia con células T. En algunos aspectos, el uno o más parámetros incluyen LDH y/o una medición volumétrica del tumor.

LaFIG. 9muestra un gráfico que traza el tiempo libre de progresión (meses) para sujetos individuales dentro de las cohortes completa y central. Cada barra representa a un único paciente. El sombreado indica la mejor respuesta global (en cada caso, a menos que se indique lo contrario, conseguida al de 1 mes); la textura indica la dosis (sólido=nivel de dosis 1 (DL1), dosis única; sombreado cruzado, nivel de dosis 2 (DL2), dosis única; sombreado vertical=nivel de dosis 1 (DL1), dos dosis). Las flechas horizontales indican una respuesta en curso. Ciertos sujetos individuales fueron evaluados inicialmente (por ejemplo, al mes) con enfermedad estable (SD) o respuesta parcial (PR), y posteriormente se observó que habían alcanzado una PR (por ejemplo, conversión de SD a RP) o CR. En estos casos, el sombreado de la barra de cada paciente, como se ha indicado, indica la mejor respuesta global, y los puntos (la misma correspondencia del sombreado con la respuesta conseguida) a lo largo de la barra de cada sujeto individual, indican cuándo se observó que se había producido cada SS, PR y/o CR en el sujeto. En dos pacientes se observó una resolución completa de la afectación del SNC por el linfoma. En un sujeto se observó que las células CAR+ se habían expandido tras una biopsia después de la recaída.

Ejemplo4<: A d m i n i s t r a c i ó n d e c é l u l a s q u e e x p r e s a n C A R a n t i - C D>19<a s u j e t o s c o n l i n f o m a d e c é l u l a s d e l m a n t o>( M C L ) .

Se administraron composiciones terapéuticas de células T CAR+ que contenían células T autólogas que expresaban un receptor de antígeno quimérico (CAR) específico para CD19, generadas como se describe en el Ejemplo 1, a cuatro (4) sujetos humanos con linfoma de células del manto (MCL) en los que había fracasado 1 línea de terapia. Las composiciones celulares crioconservadas se descongelaron antes de la administración intravenosa. La composición de células T terapéuticas se administró como un producto celular de composición definida con poblaciones CD4+ y CD8+ formuladas de células T manipuladas CAR+ derivadas del mismo sujeto administradas en una proporción objetivo de aproximadamente 1:1. Se administró a los sujetos una dosis de células T que expresan CAR (como una dosis dividida de las células T que expresan CAR CD4+ y CD8+) en una dosis única de nivel de dosis 1 (DL1) que contenía 5 x 107 células T que expresan CAR. Comenzando tres (3) días antes de la infusión de células T CAR+, los sujetos recibieron una quimioterapia de linfodepleción con flurabina (flu, 30 mg/m2) y ciclofosfamida (Cy, 300mg/m2).

Se monitorizaron la respuesta y las toxicidades de los sujetos como se describe en el Ejemplo 1. No se observó CRS ni neurotoxicidad en ninguno de los sujetos. De los 4 sujetos que fueron tratados, dos (2) sujetos lograron PR (no duradera) y dos (2) pacientes tuvieron enfermedad progresiva.

Ejemplo5<: E v a l u a c i ó n a d i c i o n a l d e l a f a r m a c o c i n é t i c a , l a f a r m a c o d i n á m i c a y l o s a n a l i t o s s a n g u í n e o s e n>s u j e t o s c o n l i n f o m a n o H o d g k i n ( N H L ) r e c i d i v a n t e y r e f r a c t a r i o d e s p u é s d e l a a d m i n i s t r a c i ó n d e c é l u l a s a n t i -<C D>19<q u e e x p r e s a n C A R .>

Los parámetros farmacocinéticos y farmacodinámicos y los analitos sanguíneos se evaluaron en pacientes en un momento posterior del estudio clínico descrito en el Ejemplo 3 anterior.

A. Sujetos, respuesta y seguridad

El análisis en este punto temporal presentado en este ejemplo se basa en la evaluación de un total de 91 sujetos de la cohorte completa de DLBCl (88 (34 de la cohorte CENTRAL) evaluados para la respuesta y 91 evaluados para la seguridad) a los que se habían administrado las células anti-CD 19 CAR. Como se muestra en la<T a b l a>11<.>La tasa de respuesta objetiva (ORR) fue del 74%, incluyendo un 52% de sujetos que mostraron una respuesta completa (CR). La incidencia de cualquier grado de síndrome de liberación de citoquinas (CRS) fue del 35%, con un 1% de CRS grave; y la incidencia de cualquier grado de neurotoxicidad (NT) fue del 19%, con un 1% de NT grave.

B. Evaluación farmacocinética

Números de células T CAR+ en sangre periférica y médula ósea en puntos temporales antes de la administración (pretratamiento o quimioterapia prelinfodepletora (LDC)) y varios puntos temporales postratamiento (con el día de administración como día 1) en 86 sujetos de la cohorte de DLBCL con PK evaluable, mediante citometría de flujo usando un anticuerpo específico para el receptor truncado usado como marcador sustitutivo, y reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa (qPCR) usando cebadores específicos para un elemento regulador postranscripcional del virus de la hepatitis de la marmota (WPRE) presente en el vector que codifica el receptor de antígeno quimérico (CAR). Se evaluó el área bajo la curva que representa el número por microlitros de la población de células CAR+ indicada entre los días 0 y 28 (AUC<0-28>) y la concentración sanguínea máxima o pico de células CAR+ (Cmax; células CAR+ /pl blood). La aplasia de células B se evaluó en sangre periférica mediante citometría de flujo, por tinción con CD19. Las citoquinas se midieron mediante un ensayo multiplex de citoquinas. Para el análisis de seguridad, se agruparon los datos de todos los sujetos que recibieron diferentes niveles de dosis. Para el análisis de la respuesta, los datos se estratificaron por niveles de dosis. El análisis estadístico fue bilateral sin ajuste de multiplicidad.

LaFIG. 10Amuestra los números detectados de células T CAR por microlitro de sangre en varios puntos temporales indicados, evaluados mediante qPCR o qPCR. LaFIG. 10Bmuestra las células CAR+ por microlitro de sangre frente a microlitro de médula ósea en el día 11 3. Como se muestra en laFIG. 10A, los niveles de células que expresan CAR en las muestras de los sujetos se observaron tanto mediante ensayos basados en citometría de flujo como mediante ensayos basados en qPCR. Como se muestra en laFIG. 10B,todos los sujetos (n= 87 y 85 para citometría de flujo y qPCR, respectivamente) con resultados PK evaluados, mostraron números detectables de las células que expresan CAR en la sangre y la médula ósea. Los resultados fueron coherentes con la observación de que las células T CAR+ habían transitado de manera similar a la médula ósea y la sangre.

Se compararon los niveles a lo largo del tiempo de células CD4+ y CD8+ que expresan CAR (evaluados mediante AUC<0-28>y Cmax) en diferentes subgrupos de pacientes: linfoma difuso de células B grandes de novo o transformado a partir de linfoma folicular (DLBCL, NOS; N=27), linfoma folicular transformado (tFL; N=10), DLBCL transformado a partir de linfoma de zona marginal o leucemia linfocítica crónica (tMZL/tCLL; N=4), o linfoma de células del manto (MCL; N-5), que habían recibido células T que expresaban CAR en DL1. Como se muestra en lasFIGS.

11Ay11B, las AUC<0-28>y Cmax, variaron entre los sujetos de los distintos subgrupos de enfermedades, con una expansión de células CD4+ y CD8+ que expresan CAR que tiende a ser menor en los subconjuntos no CENTRALES.

C. Evaluación farmacocinéticapornivel de dosis

También se compararon la AUC<0-28>y la Cmax para células CD3+, CD4+ y CD8+ que expresan CAR para sujetos que habían recibido el nivel de dosis 1 (DL1) y los que habían recibido el nivel de dosis 2 (DL2), en la cohorte CENTRAL (sujetos con DLBCL, NOS o linfoma de células B de alto grado (doble/triple impacto); N=65). Como se muestra en lasFIGS. 12Ay12By en laTabla 12, se observó una mediana más alta de AUC<0-28>para las células CD3+, CD4+ y CD8+ que expresaban CAR en los sujetos que recibieron DL2, en comparación con los sujetos que habían recibido DL1. De manera similar, se observó una tendencia de mayor expansión en los sujetos que habían recibido DL2 en la cohorte completa de DLBCL. También se observó una mayor durabilidad de la respuesta (DOR) a los 3 meses entre los sujetos que habían recibido DL2 en comparación con los que habían recibido DL1, sin un aumento de la toxicidad. La mediana del tiempo hasta la Cmax (Tmax) para las células CD4+ y CD8+ CAR+ fue similar entre los sujetos que recibieron DL1 y DL2.

Se observó una mayor exposición de células T CAR+ en DL2 frente a DL1, lo que corresponde a una mayor durabilidad de la respuesta sin mayor toxicidad en los sujetos DL2.

continuación

D. Persistencia

Se evaluó la persistencia de células que expresan CAR y la aplasia de células B CD19+ (bajo número o ausencia de células B CD19+) en varios momentos en sujetos evaluables con DLBCL a los que se habían administrado células T CAR+, sobre la base de los niveles detectables de células CD3+, CD4+ o CD8+ que expresan CAR y los niveles de células B CD19+ detectados en la sangre, respectivamente. Los resultados se exponen en laTabla 13.

Entre los sujetos evaluados en la progresión (n=37), se observó una mediana de 0,17 células c D4+ CAR+/pl (intervalo, 0-65,5 células/pl) y una mediana de 0,15 células CD8+ CAR+/pl (intervalo, 0-131,8 células/pl) en la progresión. Entre los sujetos evaluados en la recaída (progresión tras alcanzar la CR/PR) (n=12), se observó una mediana de células CD4+ CAR que expresan de 0,17/pl (intervalo, 0-35,1 células/pl) y una mediana de 0,20 células/pl (intervalo, 0-131,8 células/pl). Se observó persistencia a largo plazo de células que expresaban CAR en el 75% de los sujetos evaluables con DLBCL a los 12 meses. La persistencia a largo plazo de la aplasia de células B también se observó en el 75% de los sujetos a los 12 meses, y en sujetos independientemente del estado de recaída. Los resultados son coherentes con la conclusión de que las células que expresan CAR anti-CD19 mostraron persistencia a largo plazo en la mayoría de los sujetos, y sugieren la posibilidad de un control de la enfermedad continuo y de bajo nivel incluso en pacientes con recaída.

De los sujetos que recayeron, el 91,7% (11/12) tenían células con expresión de CAR detectables en la sangre en el momento de la recaída. Este resultado es consistente con la conclusión de que, en algunos casos, puede usarse una terapia combinada u otra intervención para aumentar y/o potenciar las células que expresan CAR, como las que pueden agotarse.

E. Evaluación farmacocinética y toxicidad

También se comparó la AUC<0-28>y la Cmax de las células CD4+ y CD8+ que expresan CAR en sujetos con cualquier grado (en esta evaluación, cualquiera de los grados 1-4; no se observó CRS o NT de grado 5) de síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o neurotoxicidad (NT) con sujetos que no se evaluó que presentaran ningún grado de CRS o NT. La mediana de la AUC<0-28>de CD4+ CAR+ (Q1, Q3) fue de 59 (18, 210) para ninguna CRS (grado 0), y de 267 (91, 1510) para cualquier CRS (grados 1-4) (p = 0,001); la mediana de la AUC<0-28>de CD8+ CAR+ (Q1, Q3) fue de 310 (36, 900) para ninguna CRS (grado 0), y de<605>(174, 5619) para cualquier CRS (grados 1-4) (p = 0. 021); la mediana de la AUC<0-28>de CD4+ CAR+ (Q1, Q3) fue de 71 (23, 244) para ninguna NT (grado 0), y de 1269 (184, 3057) para cualquier NT (grados 1-4) (p = 0.003); la mediana de la AUC<0-28>de CD8+ CAR+ (Q1, Q3) fue de 304 (43, 799) para ninguna NT (grado 0), y 2463 (607, 7691) para cualquier NT (grados 1-4) (p = 0,004). Como se ha descrito anteriormente y se muestra en lasFIGS. 13A-13D, el aumento de los niveles de células CD4+ y CD8+ que expresan CAR a lo largo del tiempo se asoció con el CRS y la NT.

F. Evaluación farmacocinética y respuesta

Se evaluó a lo largo del tiempo el número máximo de células CD3+ CAR+/pl (CD3+ Cmax) en sujetos que tuvieron una mejor respuesta global (BOR) de CR, PR o PD. Como se muestra en laFlG. 14,se observó una tendencia hacia una mejor BOR en los sujetos con mayor expansión, con variabilidad entre los sujetos.

G. Evaluación farmacocinética mediante analitos sanguíneos y parámetros del paciente

Se evaluaron los niveles plasmáticos de citoquinas previos al tratamiento con células T CAR+ (quimioterapia prelinfodepleción), incluyendo la interleucina-7 (IL-7), la IL-15 y la proteína inflamatoria de macrófagos (MIP-1a), en sujetos que presentaban una Cmax en sangre de CAR+CD3+ > 500 (N=55) en comparación con sujetos que presentaban una Cmax en sangre de CAR+CD3+ < 500 (N=7). Como se muestra en laFlG. 15A,se observaron niveles plasmáticos elevados de citoquinas pretratamiento con células T CAR+ asociados con Cmax de CAR+CD3+ > 500

También se evaluaron los niveles máximos de varias citoquinas plasmáticas (IL-6, IL-10, IL-16, interferón gamma (IFN-y), factor de necrosis tumoral alfa (TNF-a), MIP-1a, MIP-1 p, proteína quimioatrayente de monocitos-1 (MCP-1) y quimioquina 10 con motivo C-X-C (CXCL10)) en sujetos que presentaban Cmax de CAR+ CD3+ en sangre > 500 (N=68) en comparación con los sujetos que presentaban Cmax de CAR+ CD3+ en sangre < 500; N=9). Como se muestra en laFlG. 15b, se observaron niveles máximos más altos de citoquinas asociados con Cmax de CAR+CD3+ > 500 (valores P de Wilcoxon < 0,05; sin multiplicidad de ajuste).

Se evaluó la relación entre la medición volumétrica tumoral de la suma de las dimensiones del producto (SPD) antes del tratamiento con células T CAR+ (quimioterapia prelinfodepletora [LDC]), como indicador de la carga tumoral, y la AUC<0 -28>de las células T CAR+ CD3+, que representa la exposición a CAR+ T a lo largo del tiempo. Como se muestra en laFlG. 16, se observó una correlación positiva entre la SPD de referencia y la AUC de CD30-28+, con una correlación de Spearman de 0,32 y p = 0,019.

H. Parámetros del paciente pretratamiento y resultados de respuesta y toxicidad

Se compararon los niveles de analitos pretratamiento con células T CAR+ (pre-LDC), incluyendo las citoquinas y los marcadores inflamatorios como ferritina, proteína C reactiva (CRP), dímero D (producto de degradación de la fibrina), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-a, MIP-1a y MIP-1 p, de los sujetos con cualquier grado (aquí, grado 1-4) de síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o neurotoxicidad (NT) con los sujetos que no presentaron ningún CRS o NT (grado 0). En esta cohorte, entre los sujetos con CRS de grado 1-4, se determinó que todos menos uno de los eventos de CRS eran de grado 1 o 2. Como se muestra en laFlG. 17A(CRS) y en laFlG. 17B(NT), se observaron niveles plasmáticos máximos más altos de citoquinas y de marcadores inflamatorios asociados con el CRS y la NT, basándose en un análisis univariante (valores de Wilcoxon P < 0,05 para todos los analitos excepto ferritina para CRS (p = 0,14) y PCR para CRS (p = 0,09)).

Se compararon los parámetros del paciente pretratamiento (pre-LDC), como los niveles de lactato deshidrogenasa (LDH) y una medición volumétrica del tumor como la suma de las dimensiones del producto (SPD), como indicador de la carga tumoral, entre los sujetos en los que no se observó el desarrollo de CRS o neurotoxicidad frente a los sujetos en los que se observó el desarrollo de CRS o NT. Como se muestra en laFlG. 18, los sujetos con CRS o NT mostraron niveles más altos de parámetros del paciente pretratamiento, como los niveles de SPD y LDH; se observó que dichos niveles estaban correlacionados con el CRS o la NT, con un análisis estadístico univariante. Otros parámetros de los pacientes que se observó que estaban asociados con el CRS y la NT incluían un menor tiempo desde el diagnóstico (p=0,05 y p=0,09, para CRS y NT, respectivamente). Los parámetros de los pacientes que se observó que no estaban asociados con el CRS o la NT fueron la edad (p=0,19 y p=0,54, respectivamente), el número de terapias anteriores (p=0,67 y p=0,59, respectivamente) y el peso del paciente (p=0,35 y p=0,44, respectivamente).

LaFlG. 19Amuestra los niveles de SPD y LDH pretratamiento entre pacientes individuales (puntos; con sombreado de los puntos individuales indica si los pacientes individuales mostraron o no mostraron neurotoxicidad de cualquier grado (panel izquierdo) o mostraron o no mostraron CRS de cualquier grado (panel derecho). En laFlG.

19A, las líneas de puntos en los ejes y y x delinean SPD >50 cm2 y LDH >500, respectivamente. Como se muestra en laFlG. 19A,se observó que un SPD de aproximadamente 50 cm2 o superior, y/o un LDH de aproximadamente 500 o superior, estaban asociados con el riesgo de NT y CRS. En laFlG. 19Bse representan las estimaciones de cociente de probabilidades calculadas para desarrollar CRS o NT en sujetos por encima o por debajo de los niveles de SPD y LDH indicados por líneas de puntos en laFIG. 19A,con intervalos de confianza (IC) del 95%.Un cociente de probabilidades superior a 1 indica una mayor probabilidad de desarrollar CRS o NT. Como se muestra, se observó que SPD de 50 cm2 o superior, y LDH de 500 o superior, se asociaban con un mayor riesgo de desarrollar CRS o NT. Se observó que una s Pd de 50 cm2 o superior y una LDH de 500 o superior estaban asociados a un riesgo aproximadamente 8 veces mayor de desarrollar CRS y NT de cualquier grado.

Se compararon varios parámetros de los pacientes pretratamiento (pre-LDC), incluyendo marcadores asociados con la carga tumoral (SPD), citoquinas inflamatorias y otros analitos sanguíneos, incluyendo LDH, ferritina, CRP, dímero D, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-a, IFN-y y MIP-1a, en sujetos con y sin respuesta duradera a los 3 meses, con análisis estadístico univariante. Como se muestra en laFIG. 20, se observó que ciertos marcadores de carga tumoral, marcadores de inflamación o citoquinas inflamatorias eran más bajos en los sujetos que presentaban una respuesta duradera (valor de p < 0,05 para todos los parámetros excepto SPD (p = 0,1274)).

I. Picos de analitos en sangre, respuesta y toxicidad

Se compararon los niveles plasmáticos máximos postratamiento de analitos sanguíneos, incluyendo citoquinas y marcadores inflamatorios como CRP, amiloide sérico A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-a, MIP-1a, MIP-1 p, MCP-1, CXCL10 y Ligando 13 de quimiocina con motivo C-C (CCL13) en sujetos con síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o neurotoxicidad (NT) de grado 1-4 con sujetos en los que no se observó ningún CRS o NT. Como se muestra en laFIG. 21A(CRS) y en laFIG. 21B(NT), se observaron mayores niveles plasmáticos máximos de citoquinas y niveles de marcadores inflamatorios asociados con CRS y NT (valores de Wilcoxon P < 0,001 para no CRS frente a cualquier CRS y para no NT frente a cualquier NT, excepto IL-15 (P= 0,05 y 0,006, respectivamente)).

Se evaluaron los niveles plasmáticos máximos de analitos sanguíneos, incluyendo citoquinas y marcadores inflamatorios como PCR, SAA-1, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, linfotoxina alfa (LT-a), TNF-a, IFN-y, MIP-1a, MIP-1 p, MCP-1, CXCL10 y factor de crecimiento transformante beta (TGF-p) en sujetos con una mejor respuesta global (BOR) de respuesta completa (CR) o respuesta parcial (PR) (N=57) en comparación con los niveles en sujetos con enfermedad estable (SD) o enfermedad progresiva (PD) (N=17); o para sujetos con SD o PP a los 3 meses (SD/PD) (N=31), en comparación con sujetos que presentaron CR/PR a los 3 meses (N=35). Como se muestra en laFIG. 22A(mejor respuesta global [BOR]) y en laFIG. 22B(respuesta en el mes 3), se observó que los niveles plasmáticos máximos más bajos de citoquinas y los niveles de marcadores inflamatorios estaban asociados con una mejor BOR y respuesta en el mes 3 (valores de Wilcoxon P < 0,05 sin multiplicidad de ajuste).

Ejemplo 6: Probabilidad de respuesta, respuesta duradera y toxicidad sobre la base del número máximo de células T CAR

Las probabilidades de respuesta, respuesta duradera y toxicidad se calcularon basándose en el número máximo de células que expresan CAR+, en sujetos evaluables de la población principal de DLBCL, después de la administración de células que expresan CAR anti-CD 19, del estudio clínico descrito en los Ejemplos 3-5 anteriores. Los sujetos incluyeron los analizados en el punto temporal del Ejemplo 5.

Una curva de probabilidad estimada de respuesta (tasa de respuesta global, ORR; incluyendo los sujetos con respuesta completa (CR) y respuesta parcial (PR)), respuesta a 3 meses (respuesta M3; incluyendo CR y PR en el mes 3 después de la administración), cualquier NT, cualquier CRS, NT de Grado 3-4, NT de Grado 3-5 o CRS de Grado 2-5, basada en la concentración sanguínea máxima de células CD3+, CD4+ o CD8+ que expresan CAR (Cmax; células/pl de sangre). Para las curvas de probabilidad, se usó un ajuste de modelo de regresión logística lineal, excepto CR/PR en el mes 3 para CD3+ y CR/PR en el mes 3 para CD8+, donde se usó un ajuste de modelo cuadrático.

Como se muestra en lasFIG. 23A(CD3+),FIG. 23B(CD8+) yFIG. 23C(CD4+), se observó que una mayor expansión de CD3+, CD8+ y CD4+ se correlacionaba con mayores tasas de CRS, NT y respuesta (ORR). Se observó que una mayor expansión de CD3+ y CD8+ daba como resultado una menor probabilidad de respuesta duradera (CR/PR a los 3 meses) a C max alta.

Los resultados son consistentes con una conclusión de que ciertas características de los pacientes antes del tratamiento, incluyendo una elevada carga tumoral y altos niveles de biomarcadores inflamatorios, se asociaron con un aumento del CRS y de la neurotoxicidad, así como con un aumento de la expansión de células T CAR. La menor respuesta duradera se asoció a niveles muy elevados de número o expansión de células CAR+, lo que concuerda con la observación de que ciertos grados elevados de expansión de CAR pueden llevar al agotamiento de las células CAR+ en gran expansión.

En algunos casos descritos en la presente, los métodos, las composiciones o las dosificaciones administradas se dirigen a un intervalo o ventana terapéuticos de exposición a células T CAR+ o niveles máximos de células T CAR+, o mediante estos métodos se logran composiciones o dosificaciones que minimizan o están diseñados para minimizar el riesgo de toxicidad y/o maximizar u optimizar la probabilidad de respuesta y/o la durabilidad de la respuesta. En algunos casos, a los sujetos con expansión o exposición por debajo de un cierto nivel se les puede administrar una o más intervenciones adicionales, como para potenciar la función de CAR-T; en algunos casos, a los sujetos que presentan altos niveles de exposición o expansión (como los asociados con riesgo de toxicidad y/o disminución de la probabilidad de durabilidad de la respuesta) se les puede administrar una o más intervenciones, como medidas tempranas o profilácticas, como las destinadas a reducir o limitar la expansión de células T CAR+ y/o reducir la toxicidad o mejorar la durabilidad de la respuesta, como las basadas en uno o más de los parámetros observados.

En este estudio, en este punto temporal, se observó una exposición de células T CAR+ aumentada y una expansión mediana más alta en DL2 frente a DL1, lo que corresponde a una durabilidad aumentada de la respuesta (DOR) sin toxicidad aumentada en los sujetos DL2. Los resultados son consistentes con la conclusión de que el aumento de la expansión de células CAR+ en un intervalo se correlaciona con respuestas duraderas, pero que un grado muy elevado de expansión puede asociarse con un riesgo de toxicidad más alto y/o una durabilidad de la respuesta más baja. Ciertos factores específicos del paciente, como los factores de referencia del paciente, como los niveles de citoquinas homeostáticas e inflamatorias y los parámetros indicativos de la carga tumoral, pueden asociarse en algunos casos con grados más altos de expansión y con un mayor riesgo de toxicidad.

No se pretende que la presente invención se limite en su alcance a las realizaciones particulares divulgadas, que se proporcionan, por ejemplo, para ilustrar varios aspectos de la invención. Varias modificaciones de las composiciones y métodos descritos resultarán evidentes a partir de la descripción y las enseñanzas de la presente.

SECUENCIAS

continuación

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un agente que es capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas que expresan un CAR en el tratamiento del cáncer, en donde el método comprende:

administrar el agente al sujeto;

en donde el sujeto es uno en el que el nivel, la cantidad o la concentración de una medida volumétrica de la carga tumoral o de un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto es igual o superior a un nivel umbral;

en donde el agente es un esteroide.

2. Un agente que es capaz de disminuir la expansión o proliferación de células T manipuladas genéticamente que expresan un receptor de antígeno quimérico (CAR) en un sujeto y células manipuladas genéticamente que comprenden células T que expresan un CAR para su uso en un método de modulación de la actividad de células T manipuladas que expresan un CAR y el tratamiento del cáncer, en donde las células T manipuladas se administran para tratar el cáncer y el agente se administra para modular la actividad de las células T manipuladas, y en donde el método comprende:

a) administrar el agente al sujeto; y

en donde:

(i) el sujeto es uno en el que el nivel, la cantidad o la concentración de una medida volumétrica de la carga tumoral o de un marcador inflamatorio en una muestra del sujeto es igual o superior a un nivel umbral;

(ii) la muestra se obtiene del sujeto antes de recibir la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR;

(v) el agente es un esteroide.

3. El agente para el uso de la reivindicación 1, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de la reivindicación 2, en donde el método comprende además seleccionar un sujeto en el que el nivel, la cantidad o la concentración de la medida volumétrica de la carga tumoral o del marcador inflamatorio en la muestra del sujeto está en o por encima de un nivel umbral.

4. El agente para el uso de la reivindicación 1 o la reivindicación 3, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de la reivindicación 2 o la reivindicación 3, en donde el agente se administra antes, simultáneamente con, intermitentemente con, durante, durante el curso de o después de la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

5. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1, 3 o 4, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-4, en donde el agente se administra antes o concurrentemente con el inicio de la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

6. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-5, en donde el método comprende además administrar una dosis de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

7. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3-6, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 3-6 en donde, antes de administrar el agente, el sujeto seleccionado está en riesgo de desarrollar el síndrome de liberación de citoquinas (CRS) o una neurotoxicidad después de la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

8. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-7, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-7, en donde la SPD se mide mediante usando tomografía computarizada (CC), tomografía por emisión de positrones (PET), y/o resonancia magnética (MRI) del sujeto.

9. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-8, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-8, en donde la muestra es o comprende una muestra de sangre, una muestra de plasma o una muestra de suero.

10. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-9, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-9, en donde el esteroide es un corticosteroide y/o el esteroide es dexametasona o metilprednisolona.

11. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-10, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-10, en donde el esteroide se administra en una cantidad que está entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 40 mg, entre o entre aproximadamente 1,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 2,0 mg y aproximadamente 20 mg, entre o entre aproximadamente 5,0 mg y aproximadamente 25,0 mg, entre o entre aproximadamente 10 mg y aproximadamente 20 mg de dexametasona o equivalente de la misma, cada uno inclusive.

12. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-11, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-11, en donde la SPD o la LDH se miden en el sujeto en el plazo de 1 día, 2 días, 3 días, 4 días, 6 días, 8 días, 12 días, 16 días, 20 días, 24 días, 28 días o más antes del inicio de la administración de las células T manipuladas genéticamente que expresan un CAR.

13. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-12, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-12, en donde el nivel, la cantidad o la concentración de SPD o LDH se evalúa antes de la linfodepleción.

14. El agente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 1 o 3-13, o el agente y las células manipuladas genéticamente para el uso de cualquiera de las reivindicaciones 2-13, en donde el cáncer es una enfermedad maligna de células B, como un cáncer seleccionado del grupo que consiste en sarcomas, carcinomas, linfomas, linfomas no Hodgkin (NHL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL), leucemia, leucemia linfocítica crónica (CLL), leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia mieloide aguda (AML) y mieloma, cáncer de páncreas, cáncer de vejiga, cáncer colorrectal, cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer renal, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón, cáncer de ovario, cáncer de cuello uterino, cáncer rectal, cáncer de tiroides, cáncer de útero, cáncer gástrico, cáncer de esófago, cáncer de cabeza y cuello, melanoma, cánceres neuroendocrinos, cánceres del sistema nervioso central (SNC), tumores cerebrales, cáncer óseo o sarcoma de tejidos blandos.