KR20210122272A - 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ror1)에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체 - Google Patents

수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ror1)에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체 Download PDF

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KR20210122272A
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안드레이아 코스타
루페시 아민
제나 배일리
샘리티 베디
브라이언 벨몬트
아예 첸
스테펜 제이콥 골드플레스
에릭 제프리
위에 장
연주 오
메이드라인 윌리엄스
콜린 하우스킨스
캐서린 시에라
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주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
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Abstract

특히 항체 단편을 포함한 ROR1에 특이적인 인간 항체에 대한 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1)-결합 분자가 제공된다. 본 발명은 또한 상기 항체 또는 단편을 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한 재조합 수용체 및 ROR1에 특이적인 항체, 항원 결합 단편 또는 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 본 발명은 또한 입양 세포 요법에서 상기 ROR1 결합 단백질 및 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포 및 관련 방법 및 이의 용도와 관련된다.

Description

수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1)에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체
본 발명은 일부 측면에서, 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1, ROR1) 결합 분자, 특히 항체 단편을 포함하는, ROR1에 특이적인 인간 항체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항체 또는 단편을 함유하는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)를 포함하는 재조합 수용체 및 ROR1에 특이적인 항체, 항원 결합 단편 또는 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드와 관련된다. 본 발명은 또한 입양 세포 요법에서 상기 ROR1 결합 단백질 및 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포 및 관련 방법 및 이의 용도와 관련된다.
수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(또는 '수용체 티로신 키나제 유사 희귀 수용체 1'로 지칭될 수 있음)(ROR1)은 전형적으로 정상 성인 세포가 아닌 배발생 중 발현되는 막관통 수용체이다. 그러나, ROR1은 상이한 다양한 암의 상황에서 발현되고, 일부 경우에 세포 신호 전달에 관련되어 종양 세포 생존을 촉진한다. 이의 발현에 근거하여, ROR1이 치료를 위한 종양 특이적 및/또는 종양 관련 표적일 수 있다. ROR1 결합 분자, 수용체 및 상기 분자를 발현하는 세포가 이용 가능하다. 개선된 ROR1 결합 분자 및 조작된 ROR1 결합 수용체 발현 세포가 필요하다. 상기 요구를 충족시키는 구현예가 제공된다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 1월 29일에 출원된 미국 가출원 제62/798,456호(명칭 “수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1)에 특이적인 항체 및 키메라 항원 수용체”)의 우선권을 주장하고, 이의 내용은 그 전문이 참조로 포함된다.
참조로서 서열 목록의 포함
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2020년 1월 28일에 생성된 735042017740SeqList.txt 제목의 파일로 제공되며, 이의 크기는 225 킬로바이트이다. 상기 서열 목록의 전자 형식의 정보가 전체로서 참조로 포함된다.
요약
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 제공되고, 여기에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; 또는 (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 80 또는 50에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 69, 84, 54 또는 95에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 81 또는 51에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 70, 85, 55 또는 96에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 83 또는 53에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 72, 87, 57 또는 98에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74, 89, 59 또는 100에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 91 또는 61에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 78, 93 또는 63에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 50, 54 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 50, 95 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 and 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 51, 55 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 51, 96 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 53, 57 및 59에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 53, 98 및 100에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 61, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 항체는 전장 항체이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체는 항원 결합 단편이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 단리된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역의 적어도 일부는 인간이거나 인간 단백질 유래이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 단편이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 Fv(single chain Fv, scFv)이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 가요성 링커는 서열 번호: 41에 제시된 서열을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 109에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 134에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 116 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 117에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 125 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 항체 또는 단편은 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 면역 글로불린 불변 영역의 일부는 힌지 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부는 CH2 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부는 CH3 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부는 CH2 영역 및/또는 CH3 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부는 인간이거나 인간 단백질 또는 이의 변이체 유래이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질에 특이적으로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 단백질에 특이적으로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 199에 제시된 서열로 구성된 에피토프 또는 서열 번호: 199에 제시된 서열 내에 존재하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 200-214 중 어느 하나 중에서 선택된 서열로 구성된 하나 이상의 에피토프 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나 중에서 선택된 서열 내에 존재하는 에피토프에 또한 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 에피토프는 구조적 에피토프(conformational epitope)를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 인간 ROR2에 대한 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는 인간 ROR1 단백질에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다.
임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-8 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 5 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-10 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-3 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-4 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 단일 사슬 세포 표면 단백질이 또한 여기에 제공된다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이종 분자 또는 모이어티를 함유하는 접합체가 또한 여기에 제공된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 이종 분자 또는 모이어티는 치료 모이어티이다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공된다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공된다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; 또는 (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 80 또는 50에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 69, 84, 54 또는 95에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 81 또는 51에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 70, 85, 55 또는 96에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 83 또는 53에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, 서열 번호: 72, 87, 57 또는 98에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74, 89, 59 또는 100에 제시된 서열을 함유하는 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 91 또는 61에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, 서열 번호: 78, 93 또는 63에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 함유하는 CDR-L3을 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 50, 54 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 50, 95 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 51, 55 및 58에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 51, 96 및 99에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 53, 57 및 59에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 53, 98 및 100에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 61, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서: (i) VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (ii) VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; (iii) VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 (iv) VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)가 여기에 또한 제공되고, 여기에서: VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 단리된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역의 적어도 일부는 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 단편이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 Fv(scFv)이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 아미노 말단이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 가요성 링커는 서열 번호: 41에 제시된 서열을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 116 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 117에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 125 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 세포 외 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 스페이서를 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린의 힌지 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서의 길이는 (약) 15개 미만의 아미노산이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 또는 135에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG4 힌지 영역의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역의 적어도 일부는 인간 IgG4 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역의 적어도 일부는 인간 IgG2 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 2 또는 30 또는 서열 번호: 2 또는 30에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 30에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 192 또는 136 또는 서열 번호: 192 또는 136에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 136에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린의 CH3 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH3 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH3의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH3 영역의 적어도 일부는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH3 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, IgG4 CH3은 인간 IgG4 CH3이고 IgG2 CH3은 인간 IgG2 CH3이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체 중 힌지 영역의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서의 길이는 (약) 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 125개의 아미노산이거나 또는 상기 중 임의의 사이 길이이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 193 또는 139 또는 서열 번호: 193 또는 139에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 139에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 4 또는 137 또는 서열 번호: 4 또는 137에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 137에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린의 CH2 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH2 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH2의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH2 영역의 적어도 일부는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CH2 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, IgG4 CH2는 인간 IgG4 CH2이고, IgG2 CH2는 인간 IgG2 CH2이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체 중 힌지 영역의 적어도 일부, CH2의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서 길이는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 또는 230개의 아미노산이거나 또는 상기 중 임의의 사이의 길이이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역 중 하나 이상은 인간 IgG4 유래 CH2 영역의 전부 또는 일부 및 CH3 영역의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 힌지 영역, CH2 영역 및 CH3 영역 중 하나 이상은 키메라이고, 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 힌지, CH2 영역 및 CH3 영역을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는, IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지에 비해 하나 이상의 아미노산 교체를 함유하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 195 또는 196 또는 서열 번호: 195 또는 196에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 196에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 38 또는 140 또는 서열 번호: 38 또는 140에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 140에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있거나, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 구성 요소이거나 또는 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 이의 신호 전달 부분이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간이거나 또는 인간 단백질 유래이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시된 서열 또는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 10에 제시된 서열 또는 서열 번호: 10에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 12에 제시된 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 막관통 영역을 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 막관통 영역과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 존재한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 영역은 CD4, CD28 또는 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 영역은 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8 또는 서열 번호: 8에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 197 또는 198 또는 서열 번호: 197 또는 198에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 198에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 149 또는 서열 번호: 149에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 149에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 147 또는 148 또는 서열 번호: 147 또는 148에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 148에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단으로: 세포 외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역 순서로 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 변형된 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서; 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 서열 번호: 135에 제시된 서열을 함유하는 변형된 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 변형된 IgG4 힌지-CH3을 함유하는 스페이서; 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 서열 번호: 138에 제시된 서열을 함유하는 변형된 IgG4 힌지-CH3을 함유하는 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 외 항원 결합 도메인은 scFv이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 185에 제시된 서열 또는 서열 번호: 185에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 185에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 186에 제시된 서열 또는 서열 번호: 186에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 186에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 187에 제시된 서열 또는 서열 번호: 187에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 187에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 188에 제시된 서열 또는 서열 번호: 188에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 188에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 189에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 156에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 의해 암호화된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 157에 제시된 서열 또는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 의해 암호화된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질에 특이적으로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 인간 ROR1 단백질에 특이적으로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 인간 ROR2에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 인간 ROR2에 대한 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체의 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는 인간 ROR1에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 결합은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, ROR1 단백질의 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도에 비해 ROR2 단백질의 존재 하에서 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 인간 ROR1 단백질의 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도에 비해 인간 ROR2 단백질의 존재 하에서 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 인간 ROR1의 존재 하에 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도를 인간 ROR2의 존재 하에 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질의 존재 하에 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 인간 ROR2의 존재 하에 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질의 존재 하에 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 인간 ROR2 단백질의 존재 하에 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 높은 항원 특이적 신호 전달 또는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 동일, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 토닉(tonic) 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체의 토닉 신호 전달(tonic signaling) 또는 항원 비의존적 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 수준 또는 정도의 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 활성은 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에서 비교된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체는 항-ROR1 항체 R12 또는 항-ROR1 항체 2A2 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체는 R12 또는 2A2 유래 scFv를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체는 항-ROR1 항체 R12 또는 R12 또는 2A2 유래 scFv를 함유한다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 전부 또는 일부, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 여기에 또한 제공된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113, 122 또는 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 119에 제시된 서열 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 122에 제시된 서열 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 125에 제시된 서열 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 192에 제시된 서열 또는 서열 번호: 192에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 193에 제시된 서열 또는 서열 번호: 193에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 195에 제시된 서열 또는 서열 번호: 195에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체 또는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산은 하나 이상의 변형된 스플라이스 공여체 또는 스플라이스 수용체 부위 또는 둘 다를 함유하고, 상기 변형된 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위는 기준 스플라이스 공여체 부위 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위에 대응하는 하나 이상의 뉴클레오티드 변형을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오티드 변형은 핵산 치환을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 정규, 비정규 또는 숨은 스플라이스 부위이다. 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오티드는 스플라이스 부위 제거에 의해 최적화된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 스플라이스 공여체 또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들) 또는 둘 다는 (약) 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖거나; 기준 스플라이스 공여체 또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들) 또는 둘 다는 (약) 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 스플라이스 공여체 또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들) 또는 둘 다는 (약) 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나; 기준 스플라이스 공여체 또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들) 또는 둘 다는 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오티드 변형 중 하나 이상은 기준 스플라이스 수용체 및/또는 기준 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오티드 변형은 침묵하거나 퇴화 코돈을 초래하거나 암호화된 단백질 또는 상기 중 하나 이상 또는 전부의 아미노산 서열을 변경하지 않는다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포에서 폴리뉴클레오티드 발현 시, 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA는 (약) 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90% 또는 (약) 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포에서 발현 시, 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA는 기준 폴리뉴클레오티드에서 전사된 mRNA의 이질성에 비해 이질성의 감소를 나타내고, 상기 기준 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드와 동일한 아미노산 서열을 암호화하고, 여기에서 기준 폴리뉴클레오티드는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위 또는 둘 다의 존재에 의해 상이하거나 폴리뉴클레오티드에 비해 하나 이상의 뉴클레오티드 변형을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, RNA 이질성은 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 초과 또는 50% 이상까지 감소된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 기준 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA는 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 초과 또는 50% 이상의 RNA 이질성을 나타낸다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 전사된 RNA는 메신저 RNA(mRNA)이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, RNA 동질성 또는 이질성 또는 둘 다는 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오티드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈-최적화된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 제시된 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 제시된 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 111에 제시된 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114에 제시된 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 120에 제시된 서열을 함유하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 123에 제시된 서열을 함유하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 제시된 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117에 제시된 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 126에 제시된 서열을 함유하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 136에 제시된 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 139에 제시된 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 196에 제시된 서열을 함유하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156에 제시된 서열을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 157에 제시된 서열 또는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 157에 제시된 서열을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오티드는 CD33 신호 서열, GM-CSF 신호 서열, CD8 신호 서열 또는 Ig 카파 신호 서열을 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 폴리뉴클레오티드는 CD33 신호 서열을 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, CD33 신호 서열은 서열 번호: 190에 제시되거나 또는 서열 번호: 190에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열이다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터가 여기에 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 함유하는 세포가 여기에 또한 제공된다. 여기에 제공된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오티드 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 벡터를 함유하는 세포가 여기에 또한 제공된다. 여기에 제공된 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오티드 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 벡터를 함유하는 세포가 여기에 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 세포는 림프구이다. 일부 구현예에서, 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포는 T 세포이고, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포는 대상체에서 수득된 1차 세포이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 복수의 세포 중, 복수로 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 세포가, 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 함유한다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 함유하는 조성물이 여기에 또한 제공된다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 세포를 함유하는 조성물이 여기에 또한 제공된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고, CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고, CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:2 내지 2:1이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고, CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:1이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 조성물 내 복수의 세포 중, 복수로 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 세포가, 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 함유한다.
ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물을 투여하는 것을 함유한 치료 방법이 여기에 또한 제공된다.
ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오티드, 여기에 제공된 임의의 구현예의 벡터 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포를 투여하는 것을 함유한 치료 방법이 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위해 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물이 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물의 용도가 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위해 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물의 용도가 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포를 투여하는 것을 함유한 치료 방법이 여기에 또한 제공된다.
ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 폴리뉴클레오티드, 여기에 제공된 임의의 구현예의 벡터 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포를 투여하는 것을 함유한 치료 방법이 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포가 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하기 위한 약제의 제조를 위해 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포의 용도가 여기에 또한 제공된다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위해 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포의 용도가 여기에 또한 제공된다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 암은 ROR1 발현 암이다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 고형 종양과 관련된 암은 신경모세포종(neuroblastoma), 신장 세포 암종(renal cell carcinoma), 대장암(colon cancer), 결장암(colorectal cancer), 유방암, 편평상피세포암(epithelial squamous cell cancer), 흑색종(melanoma), 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암(head and neck cancer)으로 구성된 군에서 선택된다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 폐암은 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer, NSCLC), 폐선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종 및 비정형 암양종이다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 유방암은 삼중음성 유방암(triple negative breast cancer, TNBC)이다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 버킷 림프종(Burkitt's Lymphoma) 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)으로 구성된 군에서 선택된다.
여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 암이다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 고형 종양과 관련된 암은 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC), 폐선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종 및 비정형 암양종이다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 유방암은 삼중음성 유방암(TNBC)이다.
여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다. 여기에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)으로 구성된 군에서 선택된다.
여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 암이다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 고형 종양과 관련된 암은 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC), 폐선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종 및 비정형 암양종이다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 유방암은 삼중음성 유방암(TNBC)이다.
여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다. 여기에 제공된 용도를 위한 세포 또는 조성물의 일부 구현예에서, 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)으로 구성된 군에서 선택된다.
여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 암이다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 고형 종양과 관련된 암은 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 폐암은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 유방암은 삼중음성 유방암(TNBC)이다.
여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다. 여기에 제공된 용도의 일부 구현예에서, 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)으로 구성된 군에서 선택된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 ROR1 발현과 관련된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 암은 ROR1 발현 암이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1 발현 암은 B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 비-소세포 폐암(NSCLC), 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다.
여기에 제공된 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물 및 사용을 위한 지침서를 함유하는 키트가 여기에 또한 제공된다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 지침서는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 세포 또는 조성물의 투여를 위한 것이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 지침서는 여기에 제공된 임의의 구현예의 방법, 사용을 위한 조성물 또는 용도와 부합된다.
여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 여기에 제공된 임의의 구현예의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 여기에 제공된 임의의 구현예의 접합체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 여기에 제공된 임의의 구현예의 세포, 여기에 제공된 임의의 구현예의 조성물 또는 여기에 제공된 임의의 구현예의 키트를 함유하는 제조 물품이 여기에 또한 제공된다.
도 1은 실시예 1에 기재된 바와 같은 스크리닝으로부터 선택된 후보 항-ROR1 CAR 발현 T 세포를 발현하는 1차 T 세포에서 플레이트 결합 재조합 ROR1-Fc로 24 시간 자극 후, 기준 항-ROR1 (R12) CAR을 발현하는 세포에서 각 사이토카인의 수준과 비교하여 GFP+ CD4+ T 세포에서 ICS에 의한 세포 내 IFN-γ, TNF-α 또는 IL-2의 상대적인 발현 수준을 도시한다.
도 2는 ROR1을 발현하는 MDA-MB-231 표적 세포와 24-70 시간 공배양 후 기준 항-ROR1 (R12) CAR을 발현하는 세포에서 각 사이토카인의 수준에 비해 실시예 1에 기재된 바와 같은 스크리닝으로부터 선택된 후보 항-ROR1 CAR 발현 T 세포를 발현하는 1차 T 세포에서 ICS에 의해 세포 내 IFN-γ, TNF-α 또는 IL-2의 상대적인 발현 수준을 도시한다.
도 3a-3b는 0 내지 70 시간의 기간에 걸쳐 적색 형광 신호의 손실을 측정함으로써 평가된 바와 같이 6개의 선택된 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 1차 T 세포와 NLR(NucLight Red) 표지된 H1975 표적 세포의 공배양 후 시험관 내 세포 독성 평가의 결과를 도시한다. 대조군으로, 표적 세포 단독 배양 및 표적 세포와 모의 세포(CAR을 발현하지 않음)의 공배양이 평가되었다.
도 4a-4c는 2명의 별개 도너로부터 선택된 6개의 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 1차 T 세포 및 H1975와 70 시간의 공배양 후 IFN-γ, TNF-α 또는 IL-2의 생성(도 4a 및 도 4b) 또는 MDA-MB-231, A549 또는 BT-549 표적 세포와의 공배양 후 IL-2의 생성(도 4c)을 도시한다. 대조군으로, 표적 세포 단독 배양 및 표적 세포와 모의 세포(CAR을 발현하지 않음)의 공배양이 평가되었다.
도 5a-5d는 H1975 비-소세포 폐암(NSCLC) 마우스 모델에서 선택된 6개의 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 세포 또는 기준 항-ROR1 (R12) CAR 투여 후에 평균 또는 개별 종양 부피의 변화에 의해 평가된 바와 같은 항종양 활성을 도시한다. 도 5a(저 용량) 및 도 5b(고 용량)는 처리된 모든 마우스의 평균 종양 부피를 도시하고; 본 도시에서, 종양 곡선은 질병으로 죽은 군의 첫번째 마우스 후에 종료되었다. 모든 개별 마우스의 결과가 도 5c(저 용량) 또는 도 5d(고 용량)에 도시된다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 6a-6b는 H1975 비-소세포 폐암(NSCLC) 마우스 모델에서 선택된 6개의 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 세포 또는 기준 항-ROR1 (R12) CAR의 저 용량(도 6a) 또는 고 용량(도 6b) 투여 후에 카플란 마이어(Kaplan-Meier) 생존 곡선을 도시한다.
도 7a-7d는, 선택된 6개의 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 세포 또는 기준 항-ROR1 (R12) CAR을 저 용량(도 7a 및 7b) 또는 고 용량(도 7c 및 7d)으로 투여 후 10 일 및 24 일에 결정된 각 마우스의 혈액 중 CD4+ 및 CD8+ CAR 발현 세포의 평균 수를 도시한다. 도 7e-7f는, 선택된 6개의 후보 항-ROR1 CAR 중 하나를 발현하는 세포 또는 기준 항-ROR1 (R12) CAR을 저 용량(도 7e) 또는 고 용량(도 7f)으로 투여 후 10 일 및 24 일에 결정된 각 마우스의 혈액 중 CD3+ CAR 발현 세포의 평균 수를 도시한다. 데이터는 그룹 평균 ± 표준 편차와 함께 개별 값으로 도시된다.
도 8a-8c는 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 저 용량(평균: 도 8a; 개별: 도 8c) 또는 고 용량(평균: 도 8b; 개별: 도 8c)으로 투여된 H1975 비-소세포 폐암(NSCLC) 마우스에서 평균 및 개별 종양 부피의 변화를 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 9a-9b는 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 마우스 중 저 용량(도 9a) 또는 고 용량(도 9b) 투여 후 카플란 마이어 생존 곡선을 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 10a-10d는 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 저 용량(도 10a 및 10b) 또는 고 용량(도 10c 및 10d) 세포의 투여 후 7, 14 및 21 일에 혈액 마이크로리터 당 평균 CD4+(도 10a 및 10c) 및 CD8+(도 10b 및 10d) CAR+ T 세포 계수를 도시한다.
도 11a-11b는 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포의 투여 후 14 일에 종양에 존재하는 CD4+(도 11a) 및 CD8+(도 11b) CAR+ T 세포의 수를 도시한다.
도 12a-12c는 MDA-MB-231 삼중 음성 유방암 마우스 모델에서 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포의 저 용량(도 12b) 또는 고 용량(도 12c) 투여 후 최대 약 49 일까지 평가된 생물 발광 이미지를 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다(도 12a).
도 13a-13c는 그룹 평균 ± 표준 오차로 도시된 바와 같이 MDA-MB-231 삼중 음성 유방암 마우스 모델에서 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포의 저 용량(도 13a) 또는 고 용량(도 13b) 투여 후 최대 약 49 일까지 평가된 생물 발광 이미지로부터 측정된 평균 총 플럭스(p/s)를 도시한다. 도 13c는 개별 마우스의 측정된 총 플럭스(p/s)를 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 14a-14e는 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 저 용량(평균: 도 14a) 또는 고 용량(평균: 도 14b)으로 투여된 MDA-MB-231 삼중 음성 유방암 모델 마우스에서 평균 및 개별 종양 부피의 변화를 도시한다. 동일한 연구에서 추가 시점까지 T 세포 발현 항-ROR1 CAR F 및 기준 CAR R12의 투여 후에 평균 종양 부피의 변화가 고 용량(도 14c) 및 저 용량(도 14d)에 대해 도시된다. 각각의 처리 조건에 대해 고 용량 또는 저 용량으로 개별 처리된 마우스에 대한 종양 부피의 결과가 도 14e에 도시된다. 평균 종양 부피는 처리 그룹의 모든 마우스가 생존한 마지막 날까지 그룹 평균 ± 표준 오차로 도시된다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 15a 및 15b는 저 용량(도 15b) 또는 고 용량(도 15a)으로 항-ROR1 CAR-F 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 MDA-MB-231 삼중 음성 유방암 모델 마우스에서 카플란 마이어 생존 곡선을 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 16a-16d는, 저 용량(도 16a 및 16b) 또는 고 용량(도 16c 및 16d)으로 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 후 7, 14, 21 및 30 일에 결정된 동물 혈액 중 CD4+(도 16a 및 16c) 및 CD8+(도 16b 및 16d) CAR 발현 세포의 평균 수를 도시한다. 항-ROR1 CAR-F 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 각 마우스의 혈액 중 CD3+ CAR 발현 세포(CD45+ CD3+ CAR+)의 평균 수가 7, 14, 21 및 30 일에 또한 결정되었고, 도 16e에 도시된다. 도시된 바와 같이, 고 용량 및 저 용량 둘 다로 투여된 경우 MDA-MB-231 마우스 모델에서 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가 고도의 증폭을 나타냈다.
도 17은, 2개의 E:T 비율로 2개의 1차 CLL 도너에서 생성된 항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 CAR 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 조작된 세포와 함께 약 6 일 동안 공배양된 Rapid Red 표지 표적 세포(CD4/CD8 T 세포 고갈 백혈구 성분 채집술 샘플)의 손실을 도시한다.
도 18a는, 2개의 E:T 비율로 2개의 1차 CLL 도너에서 생성된 항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 CAR 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 조작된 세포와 함께 약 4 일 동안 공배양된 CD19+ 표적 세포 또는 CD19+ ROR1+ 표적 세포(CD4/CD8 T 세포 고갈 백혈구 성분 채집술 샘플)의 손실을 나타내는, 유세포 분석에 의한 세포 독성 평가 결과를 도시한다. 도 18b는, 2.5:1 및 0.25:1의 E:T 비율로 CLL을 앓는 대상체 유래 표적 세포와 함께 공배양되고, CellTrace™Violet(CTV) 세포 증식 시약으로 표지된 CAR 발현 세포(항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 CAR 또는 R12 기준 CAR)의 증식을 도시한다. 도 18c는 4 일에 공배양물의 상청액에서 평가된 바와 같은 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 생성을 도시한다. 모의 처리된 세포 또는 표적 세포 단독이 대조군으로 비교되었다.
도 19a-19d는 고 용량(평균: 도 19a; 개별: 도 19c) 또는 저 용량(평균: 도 19b; 개별: 도 19d)으로 항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 반딧불이 루시퍼라제 및 그린 형광 단백질(FfLuc-GFP) 발현 인간 맨틀 세포 림프종(mantel cell lymphoma, MCL) JeKo-1 세포로 이식된 맨틀 세포 림프종(MCL)의 마우스 모델에서 평균 및 개별 종양 부피의 변화를 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 20a-20b는 고 용량(도 20a) 또는 저 용량(도 20b)으로 항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 MCL의 마우스 모델에서 카플란 마이어 생존 곡선을 도시한다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 세포(모의)가 투여되거나 처리되지 않았다.
도 21은, 저 용량 또는 고 용량으로 항-ROR1 CAR-F, 항-CD19 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 조작된 세포의 투여 후 7, 14, 21 및 28 일에 결정된 MCL 마우스 모델의 혈액 중 CD3+ CAR 발현 세포의 평균 수를 도시한다.
도 22a-22e는 183, 61.0, 20.33, 6.78 및 2.26 nM의 농도로 재조합 인간 ROR1의 후속 주사에 의해 실행된 다중 사이클 동력학을 사용한 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance, SPR)에 의해 평가된, 항-ROR1 scFv ROR1-1(서열 번호: 118; 도 22a), ROR1-2(서열 번호: 127; 도 22b), ROR1-3(서열 번호: 109; 도 22c) 및 ROR1-4(서열 번호: 134; 도 22d), CAR-A, CAR-F, CAR-G, CAR-I, CAR-R 및 CAR-B1의 scFv 결합 도메인 및 기준 CAR R12의 scFv 항원 결합 도메인(서열 번호: 142; 도 22e)을 포함한 다양한 재조합 생성 항-ROR1 scFv-mFcs의 C-말단 6xHis 태그(ROR1 ECD 6xHis)에 대한 결합을 도시한다.
도 23은 K562-ROR1-TetOn 세포주에서 512 ng/mL 내지 0 ng/mL의 2배 증가 연속 희석 독시사이클린에 대한 반응에서 ROR1 발현을 도시한다. ROR1-부모 K562 세포, 2개의 내인성 발현 ROR1+ 세포주, MCL 세포주 JeKo-1 및 TNBC 세포주 MDA-MB-231이 대조군으로 사용되었다.
도 24는 증가하는 독시사이클린 농도로 첨가된 4:1의 E:T 비율에서 K562-ROR1-TetOn과 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 CAR R12를 발현하는 조작된 세포의 72 시간 공배양 상청액에서 평가된 IFNγIL-2 및 TNFα의 생성에 대한 용량 반응 곡선을 도시한다. CAR을 발현하지 않는 세포(모의)를 대조군으로 사용하였다.
도 25a-25b는 약 72 시간 동안 4:1 E:T 비율로 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 CAR R12를 발현하는 조작된 세포 및 다양한 농도(2 ng/mL-512 ng/mL)의 독시사이클린의 존재 하에 배양된 NucLight Red 표지된 K562-ROR1-TetOn 세포에서 적색 형광 신호의 손실로 결정된 바와 같은 세포 독성 평가 결과를 도시한다. DMSO, 독시사이클린이 없고 비처리 세포가 대조군으로 사용되었다.
도 26은 인간 ROR1(hROR1) 또는 뮤린 ROR1(mROR1)을 발현하도록 조작된 CT26 세포와 공배양된 ROR1 CAR-F 또는 ROR1 R12 CAR 중 어느 하나를 발현하는 Jurkat Nur77 리포터 세포에서 ROR1 종 교차 반응성의 평가를 도시한다. K562 세포 및 비변형 CT26 세포가 비특이적 대조군으로 사용되었다.
(단일 사슬 Fv 단편(scFvs)을 포함한 단일 사슬 단편과 같은 항원 결합 항체 단편을 포함하는) 항체와 같은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 결합 분자 및 상기 항체 또는 단편을 함유하는 키메라 수용체를 포함한 재조합 수용체 및 상기 항체, 단편 또는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산이 제공된다. 일부 측면에서, ROR1 및 ROR1 발현 세포 및 질병을 표적화하거나 또는 이에 대해 지시된 항체, 단편 및 키메라 항원 수용체(CAR)가 제공된다. ROR1은, 예를 들어 정상 조직 상에서 거의 발현되지 않는 재발되거나 새로이 진단된 골수종 환자와 같은 예를 들어, 악성 혈장 세포 상에서 특정 질병 및 병태 예컨대 악성 종양과 관련된 세포 또는 조직에서 발현되는 것으로 관찰된다. 제공된 구현예 중에는 ROR1 결합 항체, 단편 또는 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 암호화된 항체 또는 항원 결합 단편 및 수용체를 포함한 상기 세포 유형의 표적화 및/또는 질병 및 병태의 치료에 유용한 접근법이 있다. 상기를 포함하는 조성물 및 제조 물품이 또한 제공된다. 수용체는 일반적으로 예를 들어 항원 결합 도메인처럼 ROR1에 특이적인 항체(항원 결합 항체 단편, 예컨대 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 도메인 항체 단편 및 scFv를 포함한 단일 사슬 단편 포함)를 함유할 수 있다. 세포, 예컨대 상기 ROR1 결합 수용체, 예를 들어, 항-ROR1 CAR을 발현하고/거나 상기 수용체를 암호화하는 핵산 및 상기 세포를 함유하는 조성물 및 제조 물품 및 치료 용량을 함유하는 조작 또는 재조합 세포가 또한 제공된다. 항체 또는 이의 단편을 생성하기 위한 것과 같은 항체 및 단편을 발현 또는 함유하는 세포뿐만아니라 항체 및 단편을 제조 및 이용하는 방법이 또한 제공된다. 상기 항체, 항원 결합 단편을 함유하는 약학 조성물을 포함한 조성물, 수용체 또는 세포 및 상기 항체 또는 단편을 포함하는 접합체가 또한 제공된다. 일부 측면에서, 제공된 조성물, 항체, 항원 결합 단편, 수용체 또는 세포는 치료 요법 또는 방법과 관련하여 사용될 수 있다.
(다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법뿐만아니라 ROR1에 특이적인 키메라 항원 수용체(CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체와 같은 키메라 수용체를 발현하는 세포의 투여를 수반하는 것을 포함한) 예컨대 항-ROR1항체 또는 입양 세포 요법으로 ROR1을 표적화하는 요법은 암 및 기타 질병 및 장애, 예를 들어 ROR1의 치료에 효과적일 수 있다. 특정 상황에서, 입양 세포 요법에 대한 유용한 접근법이 항상 전적으로 만족스럽지 않을 수 있다. 일부 측면에서, 투여된 세포의 능력은 표적, 예를 들어, ROR1과 같은 표적 항원을 인식 및 결합하고, 대상체, 종양 및 이의 환경 내의 적절한 부위로 왕래, 국소화 및 성공적으로 진입하여 활성화, 증폭되고, 세포 독성 사멸 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함하여 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기를 포함하여 지속되고, 특정 표현형 상태로의 분화, 전환 또는 재프로그래밍에 관여하고, 클리어런스 및 표적 리간드 또는 항원에 대한 재노출 후에 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 소진, 아네르기, 말단 분화 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는 것이다.　
일부 상황에서, 항원 결합 도메인을 함유하는 항체 또는 재조합 수용체가 표적에 특이적으로 결합, 인식 또는 표적화하는 특정 표적 항원의 특성은 수용체의 활성에 영향을 미칠 수 있다. 일부 상황에서, ROR1은 특정 암에 의해 발현되고, 세포 요법을 위한 매력적인 치료 표적이다. 항체 또는 세포 요법에 대한 최적의 반응, 특히 ROR1에 특이적으로 결합, 인식 또는 표적화하는 재조합 수용체에 대한 개선된 전략이 필요하다. 상기 요구를 충족시키는 구현예가 제공된다.
일부 측면에서, 제공된 구현예는, 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 제공된 ROR1 결합 분자를 발현하는 조작된 세포의 투여가, 상이한 항원에 대한 최소한의 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달 또는 교차 반응성을 나타내는 반면, 투여된 경우 개선된 항원 특이적 활성, 신호 전달 및 기능, 높은 항종양 활성, 일관된 항원 의존적 활성 또는 신호 전달, 보다 많은 또는 장기간의 생체 내 증폭 및 개선된 지속성을 나타낸다는 관찰에 근거한다. 상기 항체 및 재조합 수용체가 사용되어 ROR1의 발현과 관련된 것과 같은 특정 질병 및 장애의 안전하고 효과적인 치료를 촉진할 수 있다.
일부 상황에서, 요법에 대한 최적의 반응은 항원 결합 도메인으로서 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 항체 또는 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체가 표적 항원을 인식하는 능력에 좌우될 수 있다. 일부 측면에서, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어 CAR)의 항원 결합 도메인으로서 존재할 경우 제공된 특정 항체 또는 항원 결합 단편의 ROR1에 대한 결합 친화도, 특이성 또는 동력학은 요법에 대한 개선되거나 보다 큰 반응성과 관련될 수 있음이 여기에서 관찰된다. 일부 측면에서, 제공된 구현예는, 제공된 결합 분자가 통용되는 항체에 비해 ROR1에 대해 보다 낮은 결합 친화도 및/또는 보다 빠른 해리 속도 상수(koff 또는 kd; 빠른 오프 속도)를 나타내고, 개선된 항종양 활성, 보다 많거나 장기간의 생체 내 증폭, 개선된 지속성 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달의 감소를 또한 나타낸다는 관찰에 근거한다. 일부 측면에서, 보다 낮은 결합 친화도(예를 들어 보다 높은 평형 해리 상수)를 갖는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포(예를 들어, T 세포)는 상이한 다양한 유형의 종양에 대한 것을 포함하여 실질적으로 개선된 생체 내 증폭, 지속성의 증가, 보다 큰 또는 개선된 항원 특이적 항종양 활성 및 장기간 생존을 나타낼 수 있다.
일부 측면에서, 보다 큰 해리 속도 상수(koff 또는 kd; 빠른 오프 속도)를 갖는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포(예를 들어, T 세포)는 상이한 다양한 유형의 종양에 대한 것을 포함하여 실질적으로 개선된 생체 내 증폭, 지속성의 증가, 보다 큰 또는 개선된 항원 특이적 항종양 활성 및 장기간 생존을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 보다 낮은 결합 친화도(예를 들어 보다 높은 평형 해리 상수) 및 보다 큰 해리 속도 상수(koff 또는 kd; 빠른 오프 속도)를 갖는 항원 결합 도메인(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)을 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포(예를 들어, T 세포)는 상이한 다양한 유형의 종양에 대한 것을 포함하여 실질적으로 개선된 생체 내 증폭, 지속성의 증가, 보다 큰 또는 개선된 항원 특이적 항종양 활성 및 장기간 생존을 나타낼 수 있다. 이론에 구속되길 바라지 않으면서, 일부 측면에서, ROR1 결합에 대한 예시적인 항-ROR1 CAR의 결합 도메인의 증가된 항원 결합 오프 속도는 잠재적으로 낮은 항원 수준에 대한 CAR의 증가된 민감도에 기여하는 것이 여기에서 관찰된다.
일부 상황에서, 세포 요법과 같은 요법에 대한 최적의 반응은 CAR과 같은 조작된 재조합 수용체가 세포의 표면 상에 일관되고 확실하게 발현되고/거나 표적 항원에 결합하는 능력에 좌우될 수 있다. 예를 들어, 일부 경우에, (예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는) 도입된 전이 유전자에서 전사된 RNA의 이질성은, 일부 경우에 세포 요법에 사용되는 인간 T 세포와 같은 세포에서 발현되는 경우, 재조합 수용체의 발현 및/또는 활성에 영향을 미칠 수 있다.
일부 상황에서, CAR과 같은 재조합 수용체에서 스페이서의 길이 및 유형은 수용체의 발현, 활성 및/또는 기능에 영향을 미칠 수 있다.
일부 상황에서, 특정 재조합 수용체는, 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 분화 및/또는 소진의 증가로 인해 바람직하지 않은 영향을 초래할 수 있는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달("토닉 신호 전달(tonic signaling)"로도 공지)을 또한 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 상기 활성은 T 세포의 활성, 효과 또는 효능을 제한할 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체 발현을 위한 세포의 조작 및 생체 외 증폭 중, 세포는 재조합 수용체를 통한 토닉 신호 전달로 인해 소진을 나타내는 표현형을 나타낼 수 있다.
본 출원에서 언급된 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전문이 참조로 포함된다. 여기에 제시된 정의가 여기에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 그렇지 않으면 일치하지 않는 경우, 여기에 제시된 정의는 여기에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.
여기에 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
I. ROR1 결합 분자
일부 측면에서, ROR1 결합 폴리펩티드와 같은 ROR1 결합 분자가 제공된다. 상기 결합 분자는 인간 ROR1 단백질과 같은 ROR1 단백질에 특이적으로 결합하는 (항원 결합 단편을 포함하는) 항체를 포함한다. 결합 분자 중에는 단일 사슬 세포 표면 단백질, 예를 들어 상기 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 재조합 수용체를 포함하는 상기 항체를 함유하는 폴리펩티드가 또한 존재한다. 일부 측면에서, ROR1 분자에 결합하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 ROR1 결합 세포 표면 단백질 및 ROR1 결합 세포 표면 단백질, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. 섹션 I.A 또는 I.D에 기재된 것과 같은 상기 항체, 항원 결합 단편 및 결합 분자의 전부 또는 일부를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 예시적인 상기 폴리뉴클레오티드는 섹션 I.E에 기재된 것을 포함한다. 일부 측면에서, 폴리뉴클레오티드가 세포로 도입되어 제공된 결합 분자, 예를 들어 ROR1 결합 항체, 항원 결합 도메인 및 수용체, 예컨대 CAR을 함유 또는 발현하는 조작된 세포를 생성할 수 있다.
A. ROR1 표적화 항체
항체 및 기능성 항원 결합 단편을 포함하는 항-ROR1 폴리펩티드가 제공된다. ROR1 결합 폴리펩티드 중에는 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역 또는 이의 일부를 함유하는 것과 같은 단일 사슬 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편)와 같은 항체가 존재한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 단일 사슬 Fv 단편(scFv)과 같은 VH 및 VL을 포함한다. 항체는 ROR1, 예를 들어 인간 ROR1에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 제공된 항-ROR1 항체 중에는 인간 항체 또는 인간 항체에서 변형되거나 이의 변이체인 항체가 존재한다. 항체는 단리된 항체를 포함한다. 항원 수용체를 포함하여 상기 항체, 예컨대 단일 사슬 단백질, 융합 단백질, 접합체 및/또는 재조합 수용체 예컨대 키메라 수용체를 함유하는 ROR1 결합 분자가 또한 제공된다. 일부 측면에서, ROR1 결합 분자는 단리된 분자를 포함한다.
ROR1 결합 세포 표면 단백질, 예컨대 ROR1 결합 재조합 수용체가 또한 제공된다. ROR1 결합 세포 표면 단백질은 ROR1, 예컨대 ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 특이적으로 결합하는 제공된 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편)를 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 결합 분자는 ROR1의 세포 외 부분에 결합한다. 일부 예에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체, 예컨대 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 것이다.
상기 항체, 항원 결합 단편 및 결합 분자의 전부 또는 일부를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오티드는, 암호화된 ROR1 결합 항체, 항원 결합 단편, 접합체 또는 수용체, 예를 들어, 항-ROR1 CAR의 발현을 위해 세포 내로 도입될 수 있는 것과 같은 데옥시리보 핵산(deoxyribonucleic acid, DNA) 또는 RNA 작제물과 같은 작제물에 통합될 수 있다. 일부 측면에서, ROR1 결합 폴리펩티드를 함유하는 것과 같은 암호화된 항체, 항원 결합 단편, 접합체 및 수용체 및 조성물 및 제조 물품 및 상기 용도가 또한 제공된다.
여기에서 용어 "항체(antibody)"는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원-결합) 항체 단편을 포함하는 다클론 및 단클론 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작되고/거나 그렇지 않으면 변형된 형태의 면역 글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 전체 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적, 예를 들어 이중 특이적 또는 삼중 특이적 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포괄한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 "항체(antibody)"는 여기에서 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"으로도 지칭되는 이의 기능성 항체 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 또한 포괄한다.
용어 "초가변 영역(hypervariable region)" 또는 "HVR"과 동의어인 "상보성 결정 영역(complementarity determining region)" 및 "CDR"은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고, 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 존재한다. "프레임워크 영역(Framework region)" 및 "FR"은 중쇄 및 경쇄의 가변 영역 중 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 존재한다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” 넘버링 체계); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” 넘버링 체계); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (“Contact” 넘버링 체계); Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” 넘버링 체계); Honegger A and Plukthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” 넘버링 체계); Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM” 넘버링 체계); 및 Ye et al., “IgBLAST: an immunoglobulin variable domain sequence analysis tool,” Nucleic Acids Res. 2013 Jul;41(Web Server issue):W34-40, (“IgBLAST 넘버링 체계)]에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 체계는 구조적 정렬을 근거로 하는 반면, Chothia 체계는 구조 정보에 근거한다. Kabat 및 Chothia 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 "30a"에 의해 제공된 삽입 및 일부 항체에서 나타나는 결실을 갖는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 근거한다. 두 가지 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(“인델(indel)”을 배치하여 차별적인 넘버링을 초래한다. Contact 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 근거하며, 여러 측면에서 Chothia 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular's AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된 것에 근거한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다. IgBLAST 체계는 생식 세포 계열 V, D 및 J 유전자에 대한 매칭에 근거하고, NCBI(National Center for Biotechnology Information)의 IgBLAST 툴을 사용하여 결정될 수 있다.
하기 표 1은 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 각각 식별된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계 둘 다를 사용하여 잔기 넘버링이 열거된다. FR은, 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 경우 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 달라짐에 주의한다.
[표 1]
Figure pct00001
따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 "CDR" 또는 "상보적 결정 영역(complementary determining region)" 또는 개별 특정된 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 상기 체계 중 어느 하나 또는 기타 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 V H 또는 VL 영역 아미노산 서열에 대응하는 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급된 경우, 상기 CDR은 상기 언급된 체계 중 어느 하나 또는 기타 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내에 대응하는 CDR(예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는 것으로 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체가 상기 언급된 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 기타 공지된 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해되나, 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계(예를 들어, 표 2 참조)를 사용하여 기재된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 특정된 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, Kabat, Chothia, AbM, IgBLAST, IMGT 또는 Contact 방법 또는 기타 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계가 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
용어 "가변 영역(variable region)" 또는 "가변 도메인(variable domain)"은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역(각각 VH 및 VL )은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(FR) 및 3개의 CDR을 포함한다(예를 들어, 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., 91 페이지 (2007)] 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체가 항원에 결합하는 항체 유래 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리되어 상보적인 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 각각 스크리닝할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다.
제공된 항체 중에는 항체 단편이 존재한다. "항체 단편(antibody fragment)" 또는 "항원 결합 단편(antigen-binding fragment)"은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 부분을 포함하는 온전한 항체가 아닌 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 디아바디; 선형 항체; 중쇄 가변(VH) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체; 및 항체 단편에서 형성된 다중 특이적 항체;를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 scFv와 같은 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편, 예컨대 scFv이다.
단일 도메인 항체(Single-domain antibody, sdAb)는 항체의 중쇄 가변 영역의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다.
항체 단편은 재조합 숙주 세포에 의한 생성뿐만아니라 온전한 항체의 단백질 분해 소화를 포함하나 이에 국한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 합성 링커, 예를 들어 펩티드 링커에 의해 연결된 2개 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것과 같이 자연적으로 발생하지 않고/거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 분해에 의해 생성되지 않을 수 있는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합 생성 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv이다.
"인간화된(humanized)" 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR에서 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR에서 유래된 항체이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체에서 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 "인간화된 형태(humanized form)"는 부모 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하나, 전형적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기가 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)의 대응하는 잔기로 치환되어 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화도가 회복 또는 개선된다.
제공된 항-ROR1 항체 중에는 인간 항체가 존재한다. "인간 항체(human antibody)"는 인간 또는 인간 세포 또는 인간 항체 라이브러리를 포함한 인간 항체 레퍼토리 또는 기타 인간 항체-암호화 서열을 이용하는 비인간 출처에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 대응하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 상기 용어는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간인 것과 같은 비인간 항원 결합 영역을 포함하는 비인간 항체의 인간화된 형태를 배제한다. 상기 용어는 인간 항체의 항원 결합 단편을 포함한다.
인간 항체는 항원의 도전에 대한 반응으로 인간 가변 영역을 가진 손상되지 않은 인간 항체 또는 손상되지 않은 항체를 생성하도록 변형된 전이 유전자 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 상기 동물은 전형적으로 내인성 면역 글로불린 유전자 좌를 대체하거나 또는 동물의 염색체 내로 무작위로 통합되거나 염색체 외에 존재하는 인간 면역 글로불린 유전자 좌의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 전이 유전자 동물에서, 내인성 면역 글로불린 유전자 좌는 일반적으로 비활성화되었다. 인간 항체는 인간 레퍼토리에서 유래된 항체 암호화 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무세포 라이브러리를 포함한, 인간 항체 라이브러리에서 또한 유래될 수 있다.
제공된 항체 중에는 단클론 항체 단편을 포함하는 단클론 항체가 존재한다. 여기에 사용된 바와 같은 용어 "단클론 항체(monoclonal antibody)"는 실질적으로 균질한 항체의 집단 내에서 또는 이로부터 수득된 항체를 지칭한다, 즉 집단을 포함하는 개별 항체는 단클론 항체 제조의 생성 중 발생하거나 자연적으로 발생하는 돌연변이를 함유하는 가능한 변이체를 제외하고 동일하며, 상기 변이체는 일반적으로 미미한 양으로 존재한다. 전형적으로 상이한 에피토프에 대하여 지시되는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제조와는 대조적으로, 단클론 항체 제조의 각 단클론 항체는 항원 상의 단일 에피토프에 대해 지시된다. 상기 용어는 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생성을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 단클론 항체는 하이브리도마, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 및 기타 항체 디스플레이 방법의 생성을 포함하되 이에 국한되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.　
용어 "폴리펩티드(polypeptide)" 및 "단백질(protein)"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 제공된 항체 및 항체 사슬 및 기타 펩티드, 예를 들어 링커 및 ROR1 결합 펩티드를 포함하는 폴리펩티드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어는 폴리펩티드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 또한 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩티드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 천연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 상기 변형은 부위-지정 돌연변이 유발을 통한 것과 같이 고의적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통한 것과 같이 우발적일 수 있다.
1. 예시적인 항체
일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 중쇄 및/또는 경쇄 가변(VH 또는 VL) 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 중쇄 가변 영역(VH) 서열 및/또는 경쇄 가변 영역(VL) 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 단일 사슬 Fv(scFv) 단편과 같은 단일 사슬 단편이다. 일부 측면에서, scFv는 VH 영역 및 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 VH 영역만을 함유하는 항체와 같은 단일 도메인 항체(single domain antibody, sdAb)이다.
일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은, 기재된 바와 같은 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및/또는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은, 기재된 바와 같은 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및/또는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 VL 영역 서열 또는 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열 또는 충분한 항원 결합 부분을 함유한다.
일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열을 함유하고, 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 항체 단편은 기재된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열을 함유하고, 기재된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열을 함유한다. 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 서열, 예를 들어 여기 기재된 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, VH, VL, scFv 서열 또는 이의 단편 중 항체의 다른 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상 동일한 서열을 갖는 것이 또한 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 85% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 86% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 87% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 88% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 89% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 91% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 92% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 93% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 94% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 96% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 97% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 98% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다. 일부 측면에서, 제공된 항체 및 이의 단편 중에는 상기 임의의 서열에 대해 (약) 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 것이 존재한다.
일부 구현예에서, 항체는 여기에 기재된 임의의 VH 서열(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 및/또는 CDR-H4)과 같은 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분만을 포함하는 sdAb이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은, VL 영역과 페어링하지 않고/거나 임의의 추가 항체 도메인 또는 결합 부위없이 ROR1에 특이적으로 결합할 수 있는 VH 영역을 함유하면서 단일 도메인 항체인 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 IgBLAST 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat, Chothia, AbM, IMGT 또는 IgBLAST 넘버링 또는 기타 넘버링 체계에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다.
일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변(VH) 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및/또는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유한다. 일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 112 또는 121에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112 또는 121에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 112에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 112에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 121에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 121에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 103에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 103에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 130에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 130에 제시된 VH 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 것과 같은 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 80 또는 50에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 69, 84, 54 또는 95에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 81 또는 51에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 70, 85, 55 또는 96에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 83 또는 53에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 72, 87, 57 또는 98에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 74, 89, 59 또는100에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 80 또는 50에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 69, 84, 54 또는 95에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 81 또는 51에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 70, 85, 55 또는 96에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 83 또는 53에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 72, 87, 57 또는 98에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74, 89, 59 또는 100에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67 또는 82에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 71 또는 86에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65 또는 80에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 69 또는 84에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66 또는 81에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 70 또는 85에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68 또는 83에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 72 또는 87에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74 또는 89에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73; 서열 번호: 82, 86 및 88; 서열 번호: 52, 56 및 58; 또는 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73; 서열 번호: 80, 84 및 88; 서열 번호: 50, 54 및 58; 또는 서열 번호: 50, 95 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73; 서열 번호: 81, 85 및 88; 서열 번호: 51, 55 및 58; 또는 서열 번호: 51, 96 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74; 서열 번호: 83, 87 및 89; 서열 번호: 53, 57 및 59; 또는 서열 번호: 53, 98 및 100에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 각각 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112 또는 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 기재된 바와 같은 임의의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 각각 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 103에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 130에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 103에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 130에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 119 또는 서열 번호: 110 또는 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111 또는 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 101 또는 서열 번호: 101에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 102에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 128 또는 서열 번호: 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 예를 들어, 제공된 결합 분자의 모든 부분을 암호화하는 여기 기재된 임의의 뉴클레오티드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR(예를 들어, 항-ROR1 CAR)의 항체 또는 항체 단편은 경쇄 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 포함한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 가변 경쇄(VL) 영역 또는 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역 또는 VH 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 상기 임의의 구현예에서, VH 영역 서열은 여기 기재된 임의의 VH 영역 서열일 수 있다. 상기 임의의 구현예에서, VL 영역 서열은 여기 기재된 임의의 VL 영역 서열일 수 있다. 상기 임의의 구현예에서, 여기에 기재된 임의의 VH 영역 서열 및 임의의 VL 영역 서열은 조합하여 사용될 수 있다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 여기에 기재된 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3 서열 중 임의의 하나 이상 및 여기에 기재된 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3 서열 중 임의의 하나 이상이 조합하여 사용될 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 항원 결합 단편, 예컨대 Fab 또는 scFv이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 더 포함한다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 여기에 제공된 수용체, 예를 들어 CAR과 같은 결합 분자는 항-ROR1 항체와 같은 항체 또는 VL 영역 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, CAR은 항체 또는 VH 영역 및 VL 영역 또는 VH 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 상기 임의의 구현예에서, VH 영역 서열은 여기 기재된 임의의 VH 영역 서열일 수 있다. 상기 임의의 구현예에서, VL 영역 서열은 여기 기재된 임의의 VL 영역 서열일 수 있다. 상기 임의의 구현예에서, 여기에 기재된 임의의 VH 영역 서열 및 임의의 VL 영역 서열은 조합하여 사용될 수 있다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 여기에 기재된 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3 서열 중 임의의 하나 이상 및 여기에 기재된 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3 서열 중 임의의 하나 이상이 조합하여 사용될 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 제공된 재조합 수용체에 함유된 항체는 Fab 또는 scFv와 같은 항원 결합 단편이다. 상기 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은, 예를 들어 하기 섹션 I.B에 기재된 바와 같은 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 일부와 같은 스페이서를 더 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 IMGT 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 IgBLAST 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat, Chothia, AbM, IMGT 또는 IgBLAST 넘버링 또는 기타 넘버링 체계에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변(VL) 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 것과 같은 상기 VL 서열에 존재하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및/또는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유한다. 일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 115 또는 124에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115 또는 124에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 것과 같은 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자는 서열 번호: 115에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 115에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 것과 같은 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 124에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 124에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 것과 같은 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체, 예를 들어 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 106에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 106에 제시된 VL 영역 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 것과 같은 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 76, 91 또는 61에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1을 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 78, 93 또는 63에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 76, 91 또는 61에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 78, 93 또는 63에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 75 또는 90에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77 또는 92에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 76 또는 91에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 78 또는 93에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79; 서열 번호: 90, 92 및 94; 서열 번호: 60, 62 및 64; 또는 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호:76, 78 및 79; 서열 번호: 91, 93 및 94; 서열 번호: 60, 63 및 64; 또는 서열 번호: 61, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 115 또는 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 기재된 바와 같은 임의의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고, 서열 번호: 115, 124 또는 106 중 어느 하나에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 115에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 124에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, VL 영역은 서열 번호: 106에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상을 갖는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 115에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 124에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 106에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 122 또는 서열 번호: 113 또는 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 114 또는 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 104 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 105에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VL 영역은 서열 번호: 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 scFv이다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112 또는 121에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115 또는 124에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 중 어느 하나에서 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3을 각각 포함하고; 서열 번호: 115, 124 또는 106 중 어느 하나에서 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3을 각각 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112 또는 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115 또는 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 80 또는 50에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 69, 84, 54 또는 95에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 81 또는 51에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 70, 85, 55 또는 96에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 83 또는 53에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 72, 87, 57 또는 98에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74, 89, 59 또는 100에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 91 또는 61에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 78, 93 또는 63에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67 또는 82에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 71 또는 86에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75 또는 90에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77 또는 92에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65 또는 80에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 69 또는 84에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75 또는 90에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77 또는 92에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66 또는 81에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 70 또는 85에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 73 또는 88에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75 또는 90에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 77 또는 92에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68 또는 83에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호: 72 또는 87에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H2 및 서열 번호: 74 또는 89에 제시된 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 76 또는 91에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 78 또는 93에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L2 및 서열 번호: 79 또는 94에 제시된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 50, 54 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 50, 95 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 51, 55 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 51, 96 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; VH 영역은 서열 번호: 53, 57 및 59 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 VH 영역은 서열 번호: 53, 98 및 100에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 61, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 65, 69 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 66, 70 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 68, 72 및 74에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 76, 78 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 80, 84 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 81, 85 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 83, 87 및 89에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 91, 93 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 50, 54 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 51, 55 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 53, 57 및 59에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 50, 95 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 51, 96 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 53, 98 및 100에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 61, 63 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130의 아미노산 서열을 포함하고, 항체 또는 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 VH 및 VL 영역 또는 상기 임의의 VH 및 VL에 대해 (약) 90% 이상의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 112 및 115; 서열 번호: 121 및 124; 서열 번호: 103 및 106; 또는 서열 번호: 130 및 106의 아미노산 서열을 각각 포함한다. 예를 들어, 그 안에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115; 서열 번호: 121 및 124; 서열 번호: 103 및 106; 또는 서열 번호: 130 및 106에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 119 또는 서열 번호: 110 또는 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 122 또는 서열 번호: 113 또는 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111 또는 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 114 또는 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 101 또는 서열 번호: 101에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 104 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 102에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 105에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 128 또는 서열 번호: 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 104 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, VL 영역은 서열 번호: 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv) 또는 디아바디 또는 단일 도메인 항체(sdAb)와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 scFv와 같은 다중 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어, scFv)은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함한다. 링커는 전형적으로 펩티드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 가용성 펩티드 링커이다. 링커 중에는 글리신과 세린이 풍부하고/거나 일부 경우에는 트레오닌이 풍부한 것이 있다. 일부 구현예에서, 링커는 가용성을 향상시킬 수 있는 리신 및/또는 글루타메이트와 같은 하전된 잔기를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 하나 이상의 프롤린을 더 포함한다.
따라서, 제공된 CAR은 전형적으로 VH 및 VL 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 링커(들)을 포함하면서 단일 사슬 항체 단편, 예컨대 scFv 및 디아바디, 특히 인간 단일 사슬 항체 단편을 포함하는 항-ROR1 항체를 함유한다. 링커는 전형적으로 펩티드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 가용성 펩티드 링커, 예컨대 글리신과 세린이 풍부한 것이다.
일부 측면에서, 글리신 및 세린(및/또는 트레오닌)이 풍부한 링커는 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 상기 아미노산(들)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들은 (약) 50%, 55%, 60%, 70% 또는 75% 이상의 글리신, 세린 및/또는 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 전체적으로 글리신, 세린 및/또는 트레오닌으로 실질적으로 구성된다. 링커는 일반적으로 약 5 내지 약 50개의 아미노산 길이, 전형적으로 (약) 10 내지 (약) 30개, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개 및 일부 예에서 10 내지 25개 아미노산 길이이다. 예시적인 링커는 서열 GGGGS(4GS; 서열 번호: 39) 또는 GGGS(3GS; 서열 번호: 40)의 다양한 반복 횟수, 예컨대 상기 서열의 2, 3, 4 내지 5회의 반복을 갖는 링커를 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 41(GGGGSGGGGSGGGGS)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 24(GSTSGSGKPGSGEGSTKG)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 더 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 162(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 더 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 163(GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 서열 번호: 41, 162 또는 163에 제시된 링커와 같은 GGGS(서열 번호: 40) 또는 GGGGS(서열 번호: 39)의 반복을 갖는 링커를 포함한, 글리신/세린이 풍부한 링커와 같은 상기 언급된 링커들 중 하나 이상을 포함한, 단일 사슬 항체 단편, 예를 들어, scFv를 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단일 수 있다. 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단일 수 있다. 특정 구현예에서, 단편, 예를 들어 scFv는 VH 영역 또는 이의 일부, 뒤이어 링커, 뒤이어 VL 영역 또는 이의 일부를 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 단편, 예를 들어 scFv는 VL 영역 또는 이의 일부, 뒤이어 링커, 뒤이어 VH 영역 또는 이의 일부를 포함할 수 있다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 118 또는 127에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118 또는 127에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 109에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 134에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
여기에 제공된 항체, 항원 결합 단편, 수용체, 예를 들어 CAR, 접합체 또는 결합 분자의 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, scFv는 서열 번호: 116 또는 125 또는 서열 번호: 116 또는 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 117 또는 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 117에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 108에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
표 2는 scFv와 같은 제공된 예시적인 항체 단편의 서열 번호를 제공한다. 일부 측면에서, 제공된 예시적인 항체 단편은 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 제공된 ROR1 결합 수용체에 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편, 예컨대 scFv는 (Kabat, Chothia, AbM 및 IgBLAST 넘버링 체계에 의해) 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 영역 및 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편, 예컨대 scFv는, 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열 또는 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 VH 영역 및 VL 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편, 예컨대 scFv는, 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편은, 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 scFv 서열 또는 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 scFv 서열에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 scFv 아미노산 서열을 포함하는 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편은 하기 표 2의 각 열에 열거된 서열 번호에 제시된 scFv 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 표 2의 각 열에 열거된 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 scFv는, 예를 들어 세포 외 항원 결합 도메인으로서 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 수용체에 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 영역 및 VL 영역을 포함하고, 여기에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 표 2에 제시된 임의의 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 아미노산 서열의 조합을 함유할 수 있고, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 표 2에 제시된 임의의 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 아미노산 서열의 조합을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 제시된 VH 영역 및/또는 VL 영역을 임의의 조합, 배양으로 또는 상이한 링커를 함유하면서 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 기재된 VH 영역을 포함한다. 일부 측면에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 기재된 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 제시된 VH 영역 또는 표 2에 제시된 VL 영역을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)이다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 표 2에 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 또는 표 2에 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)이다.
[표 2]
Figure pct00002
Figure pct00003
제공된 항체, 예를 들어 항원 결합 단편 중에는 인간 항체가 존재한다. 제공된 인간 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, 인간 항체는, 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 D 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VH 영역을 함유하고/거나; 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 카파 또는 람다 사슬 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 카파 또는 람다 사슬 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VL 영역을 함유한다.
제공된 항체, 예를 들어 항원 결합 단편 중에는 인간 항체가 존재한다. 제공된 인간 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, 인간 항체는, 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 D 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VH 영역을 함유하고; 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 카파 또는 람다 사슬 V 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 카파 또는 람다 사슬 J 세그먼트에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3에 대응한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3에 대응한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR2 및/또는 FR4에 대응한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3에 대응한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3에 대응한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 FR1, FR2, FR2 및/또는 FR4에 대응한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H1 영역에 대응하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-H1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H2 영역에 대응하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H2를 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-H2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트, D 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내의 CDR-H3 영역에 대응하는 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 중쇄 V 세그먼트, D 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-H3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 항원 결합 단편은, 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L1 영역의 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L1을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L2 영역의 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L2를 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L3 영역의 아미노산 서열에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L3을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식 세포 계열 뉴클레오티드 인간 경쇄 V 세그먼트 및 J 세그먼트에 의해 암호화된 서열 내에 대응하는 CDR-L3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 차이를 갖거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 생식 세포 계열 유전자 세그먼트 서열을 함유하는 프레임워크 영역을 함유한다. 예를 들어 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역, 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및 FR4가 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트, 예컨대 V 세그먼트 및/또는 J 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역, 예를 들어 FR1, FR2, FR3 및 FR4가 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트, 예컨대 V 세그먼트 및/또는 J 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL 영역을 함유한다. 예를 들어, 상기 일부 구현예에서, VH 영역 및/또는 VL 영역 내에 함유된 프레임워크 영역 서열은 인간 생식 세포 계열 항체 세그먼트에 의해 암호화된 프레임워크 영역 서열과 비교하여 10개 이내의 아미노산, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이내의 아미노산이 상이하다.
항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나 이상의 불변 영역 도메인과 같은 면역 글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 불변 영역은 경쇄 불변 영역 및/또는 중쇄 불변 영역 1(CH 1)을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 힌지 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 CH2 및/또는 CH3 도메인, 예컨대 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 영역은 IgG1 또는 IgG4와 같은 인간 IgG의 Fc 영역이다.
2. 예시적 특징
일부 측면에서, 제공된 항체는 특정 에피토프에 대한 결합 또는 관련되나 비특이적 항원에 대해 보다 낮거나 감소된 결합을 나타내는 것을 포함한 결합 특성과 같은 하나 이상의 기능성 특정 특징을 갖는다. 일부 측면에서, 제공된 항체는 기준 항체와 같은 다른 항체의 에피토프와 유사하거나 이와 중복되는 에피토프에 결합할 수 있고/거나 특정 결합 친화도를 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 항체는, 예를 들어 구조적 에피토프에 결합하는 다른 항체의 에피토프와 상이한 에피토프에 결합할 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질에 특이적으로 결합한다. 여기에 제공된 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1은 인간 ROR1을 지칭한다. 항체 또는 다른 결합 분자가 ROR1에 결합하거나 ROR1에 특이적으로 결합한다는 관찰이 반드시 모든 종 유래 ROR1에 결합한다는 것을 의미하지는 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, ROR1에 대한 결합 특징, 예컨대 이에 대해 특이적으로 결합하는 능력 및/또는 기준 항체와 이에 대한 결합을 두고 경쟁하는 능력 및/또는 특정 친화도로 결합하거나 또는 특정 정도로 경쟁하는 능력은, 일부 구현예에서, 인간 ROR1 단백질에 관한 능력을 지칭하고, 항체는 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 관하여 상기 특징을 갖지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 히말라야 원숭이 또는 시노몰구스 원숭이의 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체, 예컨대 항-ROR1 항체, 예를 들어 인간 항체는 ROR1의 특정 에피토프 또는 영역, 예컨대 일반적으로 세포 외 에피토프 또는 영역에 특이적으로 결합한다. ROR1은 면역 글로불린(Ig) 도메인, Fz(frizzled) 도메인 및 Kr(kringle) 도메인 후 막관통 도메인을 함유하는 세포 외 영역을 함유하는 유형 I 막 단백질이다. 서열 번호: 144(GenBank No. AAA60275.1; 서열 번호: 215, Uniprot No. Q01973에 제시된 신호 펩티드를 포함하는 서열)에 제시된 인간 ROR1에 관하여, 세포 외 영역은 1-377 아미노산에 대응하고, 13-118 아미노산은 Ig 도메인에 대응하고, 136-270 아미노산은 Fz 도메인에 대응하고, 283-362 아미노산은 Kr 도메인에 대응한다(서열 번호: 215에 제시된 아미노산에 관하여, Ig 도메인의 경우 42-147 아미노산, Fz 도메인의 경우 165-299 아미노산 및 Kr 도메인의 경우 312-391 아미노산에 대응됨). 일부 구현예에서, 항체, 예컨대 인간 항체는 Ig 도메인, Fz 도메인 및/또는 Kr 도메인 내에 에피토프 포함 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 예컨대 인간 항체는 Ig 도메인 및/또는 Fz 도메인을 갖는 에피토프 포함 잔기에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체, 예컨대 인간 항체는 Ig 및 Fz 도메인 둘 다 내의 에피토프 포함 잔기에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 144(GenBank No. AAA60275.1; 서열 번호: 215, Uniprot No. Q01973에 제시된 신호 펩티드를 포함하는 서열)에 제시된 인간 ROR1 또는 이의 대립유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 단백질 내의 하나 이상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일 구현예에서, 인간 ROR1은 서열 번호: 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 갖는 전사체 변이체 또는 동형 단백질이다. 일부 구현예에서, 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145, 146 또는 215에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 예를 들어 서열 번호: 144에 제시된 인간 ROR1 서열의 1-377 잔기에 대응(신호 펩티드를 포함하는 서열 번호: 215에 제시된 인간 ROR1 서열의 30-406 잔기에 대응)하는 ROR1의 세포 외 영역, 예컨대 인간 ROR1의 세포 외 영역 내에 존재하는 하나 이상의 세포 외 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 선형 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 하나 이상의 구조적 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프, 예컨대 서열 번호: 199-214 중 어느 하나 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 하나 이상의 에피토프 또는 서열 번호: 199-214 중 어느 하나 중에서 선택된 아미노산 서열 내에 존재하는 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프, 예컨대 서열 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시됨)을 포함하는 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 199에 제시된 서열로 구성된 에피토프 또는 서열 번호: 199에 제시된 서열 내에 존재하는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 추가 에피토프, 예컨대 하나 이상의 구조적 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시됨) 뿐만아니라 추가 에피토프에 결합한다. 예시적인 하나 이상의 추가 에피토프는 서열 번호: 200-214에 제시된 서열 중 하나 이상 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나 중에서 선택된 아미노산 서열 내에 존재하는 하나 이상의 에피토프를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 항체는 비인간 ROR1, 예컨대 히말라야 원숭이(Macaca mulatta) ROR1(서열 번호: 216, Uniprot No. F6RUP2에 제시됨) 또는 시노몰구스 원숭이(Macaca fasicularis) ROR1(서열 번호: 217, Uniprot No. A0A2K5WTX7; 또는 서열 번호: 218, Uniprot No. A0A2K5WTX4에 제시됨)에 결합한다. 일부 측면에서, 비인간 ROR1의 세포 외 도메인은 인간 ROR1 서열과 99% 이상 동일하다.
일부 구현예에서, 항체는 비인간 ROR1, 예컨대 원숭이, 토끼, 래트, 마우스 또는 기타 종의 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 마우스(Mus musculus) ROR1, 예컨대 마우스 ROR1의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 171(GenBank No. NP_038873; 서열 번호: 219, Uniprot No. Q9Z139에 제시된 신호 펩티드를 포함하는 서열)에 제시된 마우스 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 ROR1에 결합하고, 마우스 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 비인간 ROR1, 예컨대 마우스 ROR1에 대한 제공된 항-ROR1 항체 또는 이의 단편 중 일부의 결합 정도는 인간 ROR1에 대한 항체 결합의 적어도 (약) 75%, 80%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150% 이상이다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비인간 ROR1, 선택적으로 마우스 ROR1에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 관련 없는, 비-ROR1 단백질 또는 비인간 ROR1 단백질, 예컨대 마우스 ROR1 단백질 또는 기타 비-ROR1 단백질에 대한 항-ROR1 항체의 결합 정도는 측정된 바와 같이 인간 ROR1에 대한 항체 결합의 (약) 50%, 40%, 30%, 20% 또는 10% 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 마우스 ROR1, 예컨대 서열 번호: 171 또는 219에 제시된 마우스 ROR1에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 마우스 ROR1과 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 마우스 ROR1에 대한 제공된 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는 인간 ROR1에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질, 선택적으로 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 비-ROR1 단백질, 예컨대 ROR2 단백질에 대한 제공된 항-ROR1 항체 또는 이의 단편 중 일부의 결합 정도는 인간 ROR1에 대한 항체의 결합보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, ROR2 단백질, 선택적으로 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 중에는 마우스 ROR1에 대한 결합이 인간 ROR1에 대한 항체 결합의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만인 항체가 존재한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 중에는 ROR2, 예컨대 인간 ROR2에 대한 결합이 인간 ROR1에 대한 항체 결합의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만인 항체가 존재한다.
일부 구현예에서, 제공된 항체는 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된 바와 같이 ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 특정 친화도 이상으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 친화도는 평형 해리 상수(KD)로 표현된다. 일부 구현예에서, 친화도는 EC50으로 표현된다.
결합 친화도, 평형 해리 상수(KD), 평형 결합 상수(KA), EC50, 온-속도(결합 속도 상수; kon 또는 ka; 1/Ms 또는 M-1s-1 단위) 및 오프-속도(해리 속도 상수; koff 또는 kd; 1/s 또는 s-1 단위)를 평가하고/거나 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 단편)가 특정 리간드(예를 들어, 항원, 예컨대 ROR1 단백질)에 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하기 위한 다양한 평가가 공지되어 있다. 예컨대 잘 알려져 있는 다수의 임의의 결합 평가를 이용함으로써 항원, 예를 들어 ROR1, 예컨대 인간 ROR1 또는 시노몰구스 ROR1 또는 마우스 ROR1에 대한 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 친화도가 결정될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, BIAcore®기계가 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance, SPR) 분석을 이용하여, 2개의 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 단편과 항원, 예컨대 ROR1 단백질) 사이 복합체의 결합 동력학 및 상수를 결정하는 데 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993; 및 미국 특허 번호 5,283,173, 5,468,614 또는 동등물]을 참조한다).
SPR은 분자가 표면에 결합하거나 해리될 때 센서 표면의 분자 농도 변화를 측정한다. SPR 신호의 변화는 표면에 가까운 질량 농도의 변화에 정비례하여 두 분자 사이의 결합 동력학을 측정할 수 있다. 복합체에 대한 해리 속도 상수(koff 또는 kd), 결합 속도 상수(kon 또는 ka) 및/또는 평형 해리 상수(KD) 및/또는 평형 결합 상수(KA)는 완충액이 칩을 통해 전달됨에 따라 시간에 대한 굴절률의 변화를 모니터링함으로써 결정될 수 있다. 또 다른 단백질에 대한 어떤 단백질의 결합을 측정하기 위한 기타 적합한 평가는, 예를 들어, 효소 결합 면역 흡착 분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 및 방사선 면역 분석(radioimmunoassay, RIA)과 같은 면역 분석 또는 단백질의 분광학적 또는 광학적 특성의 변화를 형광, UV 흡수, 원편광 이색성(circular dichroism) 또는 핵 자기 공명(nuclear magnetic resonance, NMR)을 통해 모니터링함으로써 결합을 결정하는 것을 포함한다. 기타 예시적인 평가는 웨스턴 블롯(Western blot), ELISA, 분석적 초원심 분리, 분광법, 유세포 분석, 염기서열 결정, 유전자 리포자 분석, 유세포 분석 및 발현된 핵산 또는 단백질 결합을 검출하기 위한 기타 방법을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 단편은 항원, 예를 들어 ROR1 단백질 또는 그 안의 에피토프에 105 M-1 이상의 친화도 또는 KA(즉, 1/M 또는 M-1의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 결합 상수; 2 분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 온-속도(on-rate)[kon 또는 ka] 대 오프-속도(off-rate)[koff 또는 kd]의 비율과 동일)로 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 펩티드 결합 분자는 항원, 예를 들어 인간 ROR1의 에피토프에 (상기 결합 반응에 대한 온-속도[kon] 대 오프-속도[koff]의 비율과 동일한) 105 M-1 이상의 친화도 또는 KA(즉, 1/M 또는 M-1의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 결합 상수)로 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (약) 106 M-1 내지 (약) 1010 M-1, 예컨대 (약) 106 M-1 내지 (약) 109 M-1 또는 (약) 106 M-1 내지 (약) 108 M-1 범위의 친화도 또는 KA로 표적 폴리펩티드의 T 세포 에피토프에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 결합 친화도는 높은 친화도 또는 낮은 친화도로 분류될 수 있다. 예를 들어 일부 경우에, 특정 에피토프에 대해 높은 친화도 결합을 나타내는 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (약) 107 M-1 이상, (약) 108 M-1 이상, (약) 109 M-1 이상, (약) 1010 M-1 이상, (약) 1011 M-1 이상, (약) 1012 M-1 이상 또는 (약) 1013 M-1 이상의 KA로 상기 에피토프와 상호작용한다. 일부 경우에, 낮은 친화도 결합을 나타내는 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 최대 107 M-1, 최대 106 M-1, 최대 105 M-1의 KA를 나타낸다.
대안적으로, 친화도는 M 단위(예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M)로 특정 결합 상호 작용의 평형 해리 상수(KD)로 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 10-5 M 이하의 KD(즉, M 단위로 특정 결합 상호 작용의 평형 해리 상수; 2 분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 오프-속도[koff 또는 kd] 대 온-속도[kon 또는 ka]의 비율과 동일)로 에피토프에 대한 결합 친화도를 나타낸다. 예를 들어, 평형 해리 상수 KD는 10-5 M 내지 10-13 M, 예컨대 10-7 M 내지 10-11 M, 10-7 M 내지 10-10 M, 10-7 M 내지 10-9 M, 10-8 M 내지 10-10 M 또는 10-9 M 내지 10-10 M의 범위일 수 있다.
온-속도(결합 속도 상수; kon 또는 ka; 1/Ms 또는 M-1s-1의 단위) 및 오프-속도(해리 속도 상수; koff 또는 kd; 1/s 또는 s-1의 단위)는 임의의 공지된 평가 방법, 예를 들어 또 다른 단백질에 대한 어떤 단백질의 결합을 측정하기 위해 여기 기재된 표면 플라스몬 공명(SPR) 또는 기타 방법을 이용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 대한 항체의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수(KD)는 (약) 0.1 nM 내지 (약) 500 nM, (약) 0.1 nM 내지 (약) 100 nM, (약) 0.1 nM 내지 (약) 50 nM, (약) 0.1 nM 내지 (약) 10 nM, (약) 0.1 nM 내지 (약) 1 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 500 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 100 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 50 nM, (약) 1 nM 내지 (약) 10 nM, (약) 10 nM 내지 (약) 500 nM, (약) 10 nM 내지 (약) 100 nM, (약) 10 nM 내지 (약) 50 nM, (약) 50 nM 내지 (약) 500 nM, (약) 50 nM 내지 (약) 100 nM 또는 (약) 100 nM 내지 (약) 500 nM이다. 특정 구현예에서, ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 대한 항체의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수(KD)는 (약) 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 또는 (약) 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 미만 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 일부 구현예에서, 항체는 ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 나노몰 이하의 결합 친화도, 예를 들어 (약) 1 nM 미만, 예컨대 (약) 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM 또는 0.1 nM 미만의 결합 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD는 (약) 0.01 nM 내지 약 1 μM, 0.1 nM 내지 1 μM, 1 nM 내지 1 μM, 1 nM 내지 500 nM, 1 nM 내지 100 nM, 1 nM 내지 50 nM, 1 nM 내지 10 nM, 10 nM 내지 500 nM, 10 nM 내지 100 nM, 10 nM 내지 50 nM, 50 nM 내지 500 nM, 50 nM 내지 100 nM 또는 100 nM 내지 500 nM이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하 또는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하보다 작거나 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다.
일부 구현예에서, ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM 내지 (약) 90 nM, (약) 20 nM 내지 (약) 80 nM, (약) 30 nM 내지 (약) 70 nM, (약) 40 nM 내지 (약) 60 nM 또는 (약) 40 nM 내지 (약) 50 nM이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM 또는 100 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM 또는 100 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 단편의 EC50 및/또는 KD는 (약) 40 nM, 41 nM, 42 nM, 43 nM, 44 nM 또는 45 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다.
일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 제공된 결합 분자의 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하며, 인간 ROR1에 대한 평형 해리 상수(KD)는 (약) 30 nM 내지 (약) 50 nM이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하고, 인간 ROR1에 대한 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 40 nM이다.
일부 구현예에서, 제공된 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 수용체는 빠른 오프-속도(해리 속도 상수; koff 또는 kd; 1/s 또는 s-1의 단위)를 갖는다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 1 x 10-5 s-1 내지 (약) 1 x 10-2 s-1, 예컨대 (약) 5 x 10-5 s-1 내지 (약) 9 x 10-3 s-1, (약) 1 x 10-4 s-1 내지 (약) 8 x 10-3 s-1, (약) 5 x 10-4 s-1 내지 (약) 7 x 10-3 s-1, (약) 1 x 10-3 s-1 내지 (약) 6 x 10-3 s-1 및 (약) 4 x 10-3 s-1 내지 (약) 6 x 10-3 s-1이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 1 x 10-5 s-1, 5 x 10-5 s-1, 1 x 10-4 s-1, 5 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 또는 1 x 10-2 s-1 이상이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 6 x 10-4 s-1, 7 x 10-4 s-1, 8 x 10-4 s-1, 9 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 2 x 10-3 s-1, 3 x 10-3 s-1, 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1, 6 x 10-3 s-1, 7 x 10-3 s-1, 8 x 10-3 s-1, 9 x 10-3 s-1 또는 1 x 10-2 s-1 이상이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 또는 6 x 10-3 s-1 이상 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 수용체는, 기준 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 수용체, 예를 들어 항-ROR1 항체 R12의 오프-속도보다 (약) 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 이상 더 빠른 오프-속도를 갖는다.
일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 제공된 결합 분자의 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하며, 인간 ROR1에 대한 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 4 x 10-3 s-1 내지 (약) 6 x 10-3 s-1이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하고, 인간 ROR1에 대한 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 5 x 10-3 s-1이다.
일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종 유래 ROR1 단백질에 대한 항-ROR1 항체와 같은 결합 분자의 결합 친화도를 비교하여 종 교차 반응성을 결정할 수 있다. 예를 들어, 종 교차 반응성은 높은 교차 반응성 또는 낮은 교차 반응성으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어 , 상이한 종, 예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이 또는 마우스 유래 ROR1 단백질에 대한 평형 해리 상수, KD를 비교하여 종 교차 반응성을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-ROR1의 항체의 종 교차 반응성은 높을 수 있고, 예를 들어 항-ROR1 항체는 인간 ROR1 및 종 변이체 ROR1에 유사한 정도로 결합하고, 예를 들어 인간 ROR1에 대한 KD 및 종 변이체 ROR1에 대한 KD의 비율은 (약) 1이다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체의 종 교차 반응성은 낮을 수 있고, 예를 들어 항-ROR1 항체는 인간 ROR1에 대해 높은 친화도를 가지나 종 변이체 ROR1에 대해 낮은 친화도를 갖거나 이와 반대도 같다. 예를 들어, 종 변이체 ROR1에 대한 KD와 인간 ROR1에 대한 KD의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 이상보다 크며, 항-ROR1 항체는 낮은 종 교차 반응성을 갖는다. 종 교차 반응성의 정도는 기준 항체와 같은 공지된 항체의 종 교차 반응성과 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 단백질 및 비인간 ROR1 단백질에 유사한 정도로 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 단백질 또는 이의 대립유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 특정 평형 해리 상수(KD)로 결합하고, 비인간 ROR1, 예컨대 시노몰구스 원숭이 ROR1에 유사하거나 대략 동일하거나 2 배 미만 상이하거나 5 배 미만 상이한 KD로 결합한다.
예를 들어 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하 또는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하보다 더 작은 KD로 인간 ROR1에 결합하고, 약 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하 또는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하보다 더 작은 KD로 시노몰구스 원숭이 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하 또는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하보다 더 작은 KD로 마우스 ROR1 단백질에 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1, 시노몰구스 원숭이 ROR1 및 마우스 ROR1에 높은 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 및 시노몰구스 원숭이 ROR1에 높은 친화도로 결합하고, 마우스 ROR1에 낮은 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1 및 기타 종 유래 ROR1 또는 ROR1 단백질의 기타 변이체에 높은 친화도로 결합한다.
일부 구현예에서, 특정 표면 플라즈몬 공명(SPR) 조건을 사용하여 측정된 바와 같은 총 결합 용량(Rmax)이 사용되어 항원, 예를 들어 인간 ROR1 단백질과 같은 ROR1 단백질에 대한 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합 능력 또는 용량이 결정된다. SPR 분석의 경우, "리간드(ligand)"는 센서 표면 상의 고정된 표적 분자, 예를 들어 ROR1 단백질이고, "분석물(analyte)"은 "리간드"에 결합하기 위한 테스트 분자, 예를 들어 항체이다. 예를 들어, "분석물"은 ROR1 단백질에 결합하는 임의의 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편일 수 있다. SPR에서 특정 리간드 및 분석물 쌍의 경우, Rmax는 특정 조건에 대해 1:1 결합 화학량론 모델을 가정하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 결합 용량(Rmax)은: Rmax(RU) = (분석물 분자량)/(리간드 분자량) × 고정된 리간드 수준(RU) 식을 이용하여 결정될 수 있다. SPR 조건의 특정 측면에서, 임의의 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 또는 시노몰구스 ROR1 사이 결합의 Rmax는 (약) 50 공명 단위(resonance unit, RU) 이상, 예컨대 약 25 RU, 20 RU, 15 RU, 10 RU, 5 RU 또는 1 RU이다.
일부 구현예에서, 제공된 항체의 특성 또는 특징은 또 다른 항체, 예를 들어 기준 항체에서 관찰된 특성과 관련하여 기재된다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 비인간 항-ROR1 항체, 예컨대 토끼 또는 키메라 또는 인간화된 항-ROR1 항체이다. 일부 측면에서, 기준 항체는 R12로 나타낸 키메라 토끼/인간 IgG1 항체(예를 들어, 문헌[Yang et al. (2011) PloS ONE, 6:e21018; 미국 특허 출원 번호 US 2013/0251642] 참조) 및/또는 이의 scFv 단편과 같은 이로부터 유래된 단편 및/또는 상기 항체의 VH 및 VL 서열 및/또는 상기 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR을 함유하는 항체이다. R12의 항원 결합 scFv 단편을 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)는 CAR 요법에서 항종양 반응성을 효과적으로 촉진하는 것으로 입증되었다(Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153; PCT 국제 출원 공개 번호 WO2014031687). 일부 구현예에서, 기준 항체는 서열 번호: 142에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 scFv이다.
일부 구현예에서, 기준 항체는 2A2로 나타낸 마우스 항-인간 ROR1 항체 및/또는 이의 scFv 단편과 같은 이로부터 유래된 단편 및/또는 상기 항체의 VH 및 VL 서열 및/또는 상기 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR을 함유하는 항체이다(예를 들어, 문헌[Baskar et al. (2012) MAbs, 4:349-361; 공개된 미국 특허 출원 번호 US2012/20058051]을 참조한다). 예를 들어, 일부 구현예에서, 기준 항체는 서열 번호: 172에 제시된 서열을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 173에 제시된 서열을 함유하는 VL을 갖는다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 2A2 항체의 scFv 형태이다.
일부 구현예에서, 기준 항체는 인간 또는 인간화된 항-ROR1 항체이다. 예시적인 인간화된 항-ROR1 항체는 문헌[국제 PCT 출원 번호 WO2014/031174]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 99961로 지정된 항체의 인간화된 변이체이다. 일부 구현예에서, 기준 항체는 서열 번호: 174, 175, 176 또는 177에 제시된 서열을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 178, 179, 180 또는 181에 제시된 서열을 함유하는 VL을 갖는다.
일부 구현예에서, 제공된 항체는 기준 항체 또는 항체들에 존재하는 CDR과 구별되는 중쇄 및 경쇄 CDR을 함유한다. 제공된 항체 중에는 구별되는 CDR들, 예를 들어, 구별되는 중쇄 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 함유하더라도 기준 항체 또는 R12와 같은 항체에 결합하는 것과 동일하거나 중복되는 ROR1의 에피토프에 결합하고/거나 결합을 두고 경쟁하는 항체가 존재한다.
일부 구현예에서, 항체는 기준 항체의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 그보다 더 작은 친화도, 예를 들어, 기준 항체의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 (약) 1.5 배 이내 또는 (약) 2 배 초과 이내, (약) 3 배 초과 이내, 및/또는 (약) 10 배 초과 이내인 EC50 또는 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 기준 항체의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 보다 더 작은 친화도, 예를 들어, 기준 항체의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 적어도 (약) 1.5 배 초과, 적어도 (약) 2 배 초과, 적어도 (약) 3 배 초과, 적어도 (약) 5 배 초과, 적어도 (약) 10 배 초과, 적어도 (약) 20 배 초과, 적어도 (약) 25 배 초과, 적어도 (약) 30 배 초과, 적어도 (약) 40 배 초과, 적어도 (약) 50 배 초과 또는 적어도 (약) 100 배를 초과하는 EC50 또는 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 기준 항체의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 보다 더 작은 친화도, 기준 항체의 친화도보다 (약) 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 20 배, 25 배, 30 배, 40 배, 50 배 또는 100 배 더 작은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 기준 항체의 대응 형태의 그것보다 더 큰 친화도, 예를 들어 기준 항체의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 5 배, 10 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 100 배, 150 배, 200 배, 250 배 이하보다 더 작거나 또는 (약) 5 배, 10 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 100 배, 150 배, 200 배, 250 배 이하보다 더 작은 EC50 또는 KD를 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 ROR1 음성 세포, 예컨대 ROR1을 발현하는 것으로 공지되고/거나 여기 기재되고 ROR1을 발현하지 않는 것으로 공지되거나 관련되나 상이한 항원, 예를 들어, ROR2를 발현하는 특정 세포에 비해 ROR1 발현 세포에 대한 결합 선호를 나타낸다. 일부 구현예에서, 결합 선호는 비발현 세포 또는 관련되나 상이한 항원을 발현하는 세포에 비해 ROR1 발현에 대해 상당히 보다 큰 정도의 결합이 측정될 경우 관찰된다. 일부 구현예에서, 비-ROR1 발현 세포 또는 관련되나 상이한 항원을 발현하는 세포에 비해 ROR1 발현 세포에 대해 예를 들어, 유세포 분석 기반 평가에서 평균 형광 강도 및/또는 해리 상수 또는 EC50에 의해 측정된 바와 같이 검출된 결합 정도의 배수 변화는 적어도 (약) 1.5, 2, 3, 4, 5, 6 이상이고/거나 기준 항체의 대응 형태에 대해 관찰된 배수 변화에 대해 대략 그만큼 크거나, 대략 동일하거나, 적어도 그만큼 크거나 적어도 대략 그만큼 크거나 또는 그보다 크다. 일부 경우에, ROR1 또는 ROR1 발현 세포에 대해 관찰된 결합의 전체 크기는 기준 항체의 대응 형태에 대해 관찰된 것과 대략 동일하거나, 적어도 그만큼 크거나 또는 그보다 크다.
일부 측면에서, 친화도는 기준 항체, 예컨대 토끼 ROR1 항체의 대응 형태에 비해 (약) 동일한 정도 또는 실질적으로 동일한 정도의 친화도이다. 일부 측면에서, 친화도는 기준 항체의 대응 형태의 친화도와 동일하거나 또는 (약) 80, 85, 90, 95, 또는 99% 이상이다.
일부 구현예에서, 항체는 기준 항체에 결합하는 ROR1의 에피토프와 중복되는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 측면에서, 상기 항체 중에는 기준 항체와 동일하거나 유사한 에피토프에 결합하는 항체가 존재한다. 일부 구현예에서, 항체는 기준 항체, 예컨대 항-ROR1 항체 R12 또는 이의 scFv 단편(서열 번호: 142에 제시됨; 예를 들어, 문헌[Yang et al. (2011) PloS ONE, 6:e21018] 참조)과 동일하거나 유사한 에피토프 또는 동일한 영역 내의 에피토프 또는 동일한 ROR1 영역 내 잔기를 함유하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 인간 ROR1과 같은 ROR1에 대한 결합을 억제하고/거나 기준 항체와 이에 대한 결합을 두고 경쟁한다.
경쟁 억제 평가는 공지되어 있고 ELISA 기반, 유세포 분석 기반 평가 및 RIA 기반 평가를 포함한다. 일부 측면에서, 경쟁 억제 평가는 항체들 중 하나의 과량의 비표지 형태를 통합시키고, 검출 가능한 마커로 표지된 다른 항체의 결합을 차단하는 능력을 평가함으로써 수행되어 결합 정도 및 이의 감소가 표지 또는 마커의 검출에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 기준 항체의 양 또는 농도에 비해 과량, 예를 들어, 1-, 2-, 5-, 10-, 50- 또는 100 배 과량으로 제공된 항체의 첨가는 기준 항체가 항원에 결합하는 것을 억제한다(또는 반대도 마찬가지). 일부 구현예에서, 결합의 억제는 50% 이상까지이고, 일부 구현예에서 75%, 90% 또는 99% 이상까지이다. 일부 측면에서, 경쟁 억제는 경쟁 결합 평가에서 측정된 바와 같다(예를 들어, 문헌[Junghans et al., Cancer Res. 1990:50:1495-1502] 참조). 경쟁 평가를 사용하여 여기에 기재된 임의의 항체와 경쟁하는 항체를 확인할 수 있다. 항체 및 기준 항체에 의해 결합된 에피토프를 맵핑하는 평가가 또한 사용될 수 있고 공지되어 있다.
일부 구현예에서, 기준 항체가 (약) 2 nM의 농도로 존재할 경우, 제공된 항체는 (약) 200 nM, 150 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM 또는 10 nM 미만 또는 (약) 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM 또는 5 nM 미만의 IC50으로 기준 항체의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체가 (약) 2 nM의 농도로 존재할 경우, 기준 항체는 (약) 200 nM, 150 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM 또는 10 nM 미만 또는 (약) 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM 또는 5 nM 미만의 IC50으로 제공된 항체의 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, 제공된 항체에 의한 기준 항체 결합의 경쟁 억제(또는 반대도 마찬가지)는 기준 항체 그 자체, 예를 들어, 비표지된 기준 항체에 의한 기준 항체 결합의 경쟁 억제의 정도와 (약) 또는 적어도 (약) 동일한 정도이다. 일부 구현예에서, 제공된 항체는 인간 ROR1에 대한 기준 항체의 결합, 예컨대 R12 scFv의 결합을 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상까지 억제한다.
여기 제공된 항-ROR1 항체는 다양한 공지된 평가에 의해 이의 물리적/화학적 특성 및/또는 생물학적 활성에 대해 확인, 스크리닝 또는 특성화될 수 있다. 일 측면에서, 항체는, 일부 경우에 표적 항원, 예를 들어 ROR1을 발현하지 않는 세포 또는 상이한 항원, 예를 들어, ROR2를 발현하는 세포를 이용한 결과에 비해, 예를 들어, 표적 항원, 예를 들어 ROR1을 발현하는 세포에 대한 항체(예를 들어, 형광 마커에 접합되거나 태깅된)의 결합을 평가하는 세포 기반 결합 평가를 포함하여 예를 들어, 공지된 방법, 예컨대 ELISA, 웨스턴 블로팅 및/또는 유세포 분석 평가에 의한 항원 결합 활성에 대해 테스트된다. 결합 친화도는 KD, KA 또는 EC50으로 측정될 수 있다.
3. 변이체
특정 구현예에서, 항체는, 여기에 기재된 항체의 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산 변이, 예를 들어 치환, 결실, 삽입 및/또는 돌연변이를 포함한다. 예시적인 변이체는 항체의 결합 친화도 및/또는 기타 항체의 생물학적 특성을 개선하도록 설계된 것을 포함한다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 항체를 암호화하는 뉴클레오티드 서열에 적절한 변형을 도입함으로써 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 상기 변형은, 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 작제물이 원하는 특성, 예를 들어 항원 결합을 보유한다는 조건으로, 결실, 삽입 및 치환 중 임의의 조합이 이루어져 최종 작제물에 도달할 수 있다.
특정 구현예에서, 항체는, 예를 들어 여기에 기재된 항체 서열과 비교하여 및/또는 천연 레퍼토리, 예를 들어 인간 레퍼토리 서열과 비교하여 하나 이상의 아미노산 치환을 포함한다. 치환 돌연변이 유발을 위한 관심 부위는 CDR 및 FR을 포함한다. 아미노산 치환이 관심 항체에 도입될 수 있고, 생성물은 원하는 활성, 예를 들어, 항원 결합의 유지/개선, 면역원성의 감소, 반감기의 향상, 및/또는 이펙터 기능, 예컨대, 항체 의존 세포의 세포 독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC) 또는 보체 의존 세포 독성(complement-dependent cytotoxicity, CDC)을 촉진하는 능력의 개선에 대해 스크리닝될 수 있다.
일부 구현예에서, 부모 항체(예를 들어, 인간화된 또는 인간 항체)의 CDR 내 하나 이상의 잔기가 치환된다. 일부 구현예에서, 치환이, 생식 세포 계열(예를 들어, 인간 생식 세포 계열)에서 발견되는 항체 서열과 같은 생식 세포 계열 서열로 서열 또는 서열의 위치가 복원되도록 이루어져서, 예를 들어 인간 대상체에 투여 시, 예를 들어 면역원성의 가능성이 감소된다.
일부 구현예에서, CDR “핫스팟(hotspot)”체세포 성숙 과정 중 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 암호화된 잔기(예를 들어, 문헌[Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 항원과 접촉하는 잔기에서 변경이 이루어지고, 생성된 변이체 VH 또는 VL이 결합 친화도에 대해 테스트된다. 제2 라이브러리로부터 작제 및 재선택에 의한 친화도 성숙이, 예를 들어 문헌[Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))]에 기재되었다. 친화도 성숙의 일부 구현예에서, 다양한 임의의 방법(예를 들어, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 사슬 셔플링, 또는 올리고뉴클레오티드-유도 돌연변이 유발)에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자에 다양성이 도입된다. 이어서 제2 라이브러리가 형성된다. 이어서 라이브러리가 스크리닝되어 원하는 친화도를 갖는 임의의 항체 변이체가 식별된다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은, 몇몇 CDR 잔기(예를 들어, 한 번에 4-6개 잔기)가 무작위로 추출되는 CDR-유도 접근법을 포함한다. 항원 결합에 관여하는 CDR 잔기가, 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발 또는 모델링을 이용하여 특이적으로 식별될 수 있다. 특히 CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적이 된다.
특정 구현예에서, 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입 또는 결실이 하나 이상의 CDR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화도를 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들어, 여기에 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 CDR에서 이루어질 수 있다. 상기 변경은, 예를 들어 CDR에서 항원 접촉 잔기의 외부에 존재할 수 있다. 상기 제공된 변이체 VH 및 VL 서열의 특정 구현예에서, 각 CDR은 변경되지 않거나 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산 치환을 함유한다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기에서 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실- 말단 융합뿐만아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닌 잔기가 있는 항체를 포함한다. 항체 분자의 기타 삽입 변이체는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소 또는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단의 융합을 포함한다.
4. 변형
특정 구현예에서, 항체가 변경되어 예를 들어, 특정 세포주를 사용하여 예를 들어, 하나 이상의 글리코실화 부위를 제거 또는 삽입함으로써 아미노산 서열을 변경함으로서 및/또는 글리코실화 부위에 부착된 올리고당(들)을 변형함으로써 항체가 글리코실화되는 정도가 증가 또는 감소된다.
일부 구현예에서, 공통 서열 -Asn-Xaa-Ser/Thr의 아스파라긴에서 발생하는 글리코실화 부위인 N-결합 클리코실화가 제거되거나 삽입된다. 일부 구현예에서, 하나 이상이 또 다른 아미노산으로 교체되어 글리코실화 부위가 제거된다.
예시적인 변형, 변이체 및 세포주가, 예를 들어 문헌[특허 공개 번호 US 2003/0157108, US 2004/0093621, US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107); WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684(Umana et al.); 및 US 2005/0123546 (Umana et al.); WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); 및 WO 1999/22764 (Raju, S.)]에 기재되어 있다.
변형된 항체 중에는 하나 이상의 아미노산 위치에 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열 또는 불변 영역(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)의 다른 부분을 갖는 것과 같이 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 변형을 갖는 항체가 존재한다.
상기 변형이 이루어져 예를 들어, 반감기가 개선되고/거나, 하나 이상의 유형의 Fc 수용체에 대한 결합이 변경되고/거나 이펙터 기능이 변경될 수 있다.
변이체 중에는 예를 들어, 제제(agents) 및 링커-제제(linker-agents)의 접합에 사용하기 위해 접근 가능한 부위에서 반응성 티올기를 생성하여 면역 접합체를 생성하기 위해, “thioMAb”와 같은 시스테인 조작 항체 및 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 기타 시스테인 조작 변이체가 존재한다. 시스테인 조작 항체는 예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 7,855,275 및 7,521,541]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 항체가 변형되어 수용성 중합체를 포함한 추가의 비단백질성 모이어티를 함유한다. 예시적인 중합체는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로오스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레익 무수물 공중합체, 폴리아미노산(동일중합체 또는 무작위 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐 피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 동일중합체, 산화 프로일프로필렌/산화 에틸렌 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이의 혼합물을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드가 물에서의 안정성으로 인해 제조 시 장점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있고, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 이상의 중합체가 부착된 경우 이들은 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은, 개선될 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 정의된 조건 하에서 요법에 사용될지 여부 등을 포함하나 이에 국한되지 않는 고려 사항에 근거하여 결정될 수 있다.
B. 면역 접합체
일부 구현예에서, 항체는 면역 접합체이거나 이의 일부이고, 여기에서 상기 항체는 하나 이상의 이종 분자(들), 예컨대 비제한적으로 세포 독성 제제 또는 영상화 제제에 접합된다. 세포 독성 제제는, 방사성 동위 원소(예를 들어, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위 원소); 화학 요법 제제(예를 들어, 메토트렉세이트, 아드리아미신, 빈카 알칼로이드류(빈크리스틴, 빈블라스틴, 에토포시드), 독소루비신, 멜팔란, 미토마이신 C, 클로람부실, 다우노루비신 또는 기타 삽입제); 성장 억제제; 효소 및 이의 단편 예컨대 핵산 분해 효소; 항생제; 독소 예컨대 소분자 독소 또는 효소적 활성 독소;를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 하나 이상의 세포 독성 제제, 예컨대 화학 요법 제제 또는 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 세균, 곰팡이, 식물 또는 동물 기원의 효소적 활성 독소 또는 이의 단편) 또는 방사성 동위 원소에 접합된다.
면역 접합체 중에는, 항체가 마이탄시노이드를 포함하나 이에 국한되지 않는 하나 이상의 약물에 접합되는 항체 약물 접합체(antibody-drug conjugate, ADC)(문헌[미국 특허 번호 5,208,020, 5,416,064 및 유럽 특허 EP 0 425 235 B1] 참조); 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)와 같은 아우리스타틴(문헌[미국 특허 번호 5,635,483 및 5,780,588, 및 7,498,298] 참조); 돌라스타틴; 칼리케아미신 또는 이의 유도체(문헌[미국 특허 번호 5,712,374, 5,714,586, 5,739,116, 5,767,285, 5,770,701, 5,770,710, 5,773,001, 및 5,877,296; Hinman et al., Cancer Res. 53:3336-3342 (1993); 및 Lode et al., Cancer Res. 58:2925-2928 (1998)] 참조); 다우노마이신 또는 독소루비신과 같은 안트라사이클린(문헌[Kratz et al., Current Med. Chem. 13:477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16:358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16:717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97:829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12:1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45:4336-4343 (2002); 및 미국 특허 번호 6,630,579] 참조); 메토트렉세이트; 빈데신; 탁산 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀 및 오르타탁셀; 트리코테센; 및 CC1065;가 존재한다.
면역 접합체 중에는, 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나 단백질(PAPI, PAPII, 또한 PAP-S), 모모르디카 카란티아 억제제, 커신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센을 포함하나 이에 국한되지 않는 효소적 활성 독소 또는 이의 단편에 항체가 접합된 것이 또한 존재한다.
면역 접합체 중에는 항체가 방사성 원자에 접합되어 방사성 접합체를 형성하는 것이 또한 존재한다. 예시적인 방사성 동위 원소는 At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 및 Lu의 방사성 동위 원소를 포함한다.
항체 및 세포 독성 제제의 접합체가 임의의 공지된 수많은 단백질 커플링제, 예를 들어 링커를 사용하여 제조될 수 있다(문헌[Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)), WO94/11026] 참조). 링커는 산-불안정 링커, 펩티다제-민감 링커, 광불안정 링커, 디메틸 링커 및 이황화물 함유 링커와 같은 세포에서 세포 독성 약물의 방출을 촉진하는 "절단 가능한 링커(cleavable linker)"일 수 있다(Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); 미국 특허 번호 5,208,020).
C. 다중 특이적 항체
특정 구현예에서, ROR1 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 폴리펩티드, 예컨대 상기를 함유하는 키메라 수용체는 다중 특이적이다. 다중 특이적 결합 분자 중에는 예를 들어, 이중 특이적을 포함하는 다중 특이적 항체가 존재한다. 다중 특이적 결합 파트너, 예를 들어 항체는 동일하거나 상이한 항원에 존재할 수 있는 2개 이상의 상이한 부위에 대한 결합 특이성을 갖는다. 특정 구현예에서, 결합 특이성 중 하나는 ROR1에 대한 것이고 나머지 하나는 또 다른 항원에 대한 것이다. 특정 구현예에서, 이중 특이적 항체는 ROR1의 2개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다. 이중 특이적 항체가 또한 사용되어 ROR1을 발현하는 세포로 세포 독성 제제를 국소화할 수 있다. 이중 특이적 항체는 전장 항체 또는 항체 단편으로서 제조될 수 있다. 다중 특이적 항체 중에는 다중 특이적 단일 사슬 항체, 예를 들어, 디아바디, 트리아바디 및 테트라바디, 탠덤 디-scFv 및 탠덤 트리-scFv가 존재한다. 항체를 함유하는 다중 특이적 CAR과 같은 다중 특이적 키메라 수용체가 또한 제공된다. 항-ROR1 항체 및 추가의 세포 표면 단백질, 예컨대 ROR1 상에서 상이한 항원 또는 상이한 에피토프에 결합하는 추가 키메라 수용체를 포함하는 세포 표면 단백질을 함유하는 세포와 같은 상기를 포함하는 항체 또는 폴리펩티드를 함유하는 다중 특이적 세포가 또한 제공된다.
예시적인 추가 항원은 B 세포 특이적 항원, 기타 종양 특이적 항원, 예컨대 B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 비-소세포 폐암(NSCLC), 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및/또는 두경부암에서 특이적으로 발현되거나 이와 관련된 항원, 및 T 세포 상에서 발현되는 항원을 포함한다. 예시적인 항원은 CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, 테나신, 혈관형성 인자, VEGF, PIGF, ED-B 피브로넥틴, 종양 형성 유전자, 종양 형성 유전자 산물, CD66a-d, 괴사 항원, Ii, IL-2, T101, TAC, IL-6, TRAIL-R1(DR4) 및 TRAIL-R2(DR5)를 포함한다.
D. 재조합 수용체
제공된 결합 분자, 예를 들어 ROR1 결합 분자 중에는 세포 표면 단백질, 예컨대 제공된 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나를 포함하는 것과 같은 재조합 수용체가 존재한다. 상기 세포 표면 단백질, 예를 들어 수용체의 전부 또는 일부를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 수용체는 제공된 항-ROR1 항체, 예를 들어 항원 결합 단편을 함유하는 수용체와 같이 ROR1에 특이적으로 결합하는 항원 수용체 및 기타 키메라 수용체를 포함한다. 항원 수용체 중에는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR)가 존재한다. ROR1 결합 수용체는 일반적으로 ROR1, 예컨대 ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 및/또는 기타 결합 펩티드를 함유한다. 재조합 수용체를 발현하는 세포, 상기 세포를 함유하는 조성물 및 입양 세포 요법, 예컨대 ROR1 발현과 관련된 질병 및 장애의 치료에서 이의 용도, 조성물 및 제조 물품 및 상기의 용도가 또한 제공된다.
제공된 폴리뉴클레오티드 중에는 ROR1에 특이적으로 결합하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 것이 존재한다. 일부 측면에서, ROR1 결합 폴리펩티드를 함유하는 것과 같은 암호화된 수용체 및 조성물 및 제조 물품 및 상기 용도가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보 핵산(deoxyribonucleic acid, DNA) 또는 RNA 작제물, 예컨대 암호화된 재조합 ROR1 결합 수용체의 발현을 위해 세포 내로 도입될 수 있는 것과 같은 작제물에 통합될 수 있다.
1. 예시적인 수용체
제공된 ROR1 결합 세포 표면 단백질, 예컨대 수용체는 일반적으로 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 수용체, 예를 들어 재조합 수용체 중에는 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 제공된 항-ROR1 항체 또는 이의 단편 중 하나 이상을 함유하는 폴리펩티드가 존재한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포 표면 단백질은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 특이적으로 결합한다.
항원 수용체 중에는 키메라 및/또는 기능성 비-TCR 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체(CAR)가 존재한다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 항-ROR1 항체, 예컨대 여기 기재된 항-ROR1 항체 또는 이의 단편을 포괄하거나 이거나 이를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체, 예를 들어 CAR은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 스페이서 및/또는 막관통 도메인을 또한 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 세포 외 항원 결합 도메인과 막관통 도메인 사이에 위치한다. 일부 구현예에서, CAR은 세포 외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역을 함유한다. 여기 제공된 예시적인 CAR은 여기, 예를 들어 섹션 I.A 및/또는 표 2에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 여기 섹션 I.D, 표 3 및/또는 표 E1에 기재된 것을 포함하는 항원 결합 도메인을 함유하는 것을 포함한다. 여기 섹션 I.E, 표 3 및/또는 표 E1에 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 CAR이 또한 제공된다.
일부 경우에, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 측면에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합 시 CD3 사슬 유도 신호만을 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137과 같은 공자극 수용체 유래 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은 상기 신호 및 공자극 신호를 제공하는 것이고; 일부 측면에서, 제3 세대 CAR은 일부 측면에서 상이한 공자극 수용체의 복수의 공자극 도메인을 포함하는 것이다.
일부 구현예에서, CAR은, 일부 경우에, ROR1에 결합하는 항체, 예를 들어 항체 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD28 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분 및 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분을 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은, 일부 경우에, ROR1에 결합하는 항체, 예를 들어 항체 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 4-1BB 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분 및 CD3 제타 또는 이의 기능적 변이체의 신호 전달 부분을 함유하는 세포 내 신호 전달 도메인을 함유한다. 상기 일부 구현예에서, 수용체는 Ig 분자, 예컨대 인간 Ig 분자의 일부, 예컨대 Ig 힌지, 예를 들어 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서, 예컨대 힌지 단독 스페이서를 더 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 여기에 기재된 항체 또는 이의 단편을 함유하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 측면에서, 키메라 항원 수용체는 여기에 기재된 항체 또는 이의 단편을 함유하는 세포 외 부분 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 단편은 scFv를 포함하고, 세포 내 신호 전달 영역은 ITAM을 함유한다. 일부 측면에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 중 제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다.
CAR을 포함하는 기타 예시적 항원 수용체 및 상기 수용체를 세포 내로 조작 및 도입하는 방법은, 예를 들어 문헌[국제 출원 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061, 미국 특허 출원 공개 번호 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 번호 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118 및 유럽 특허 출원 번호 EP2537416]에 기재된 것들 및/또는 문헌[Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39; Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75]에 기재된 것들을 포함한다. 일부 측면에서, 항원 수용체는 문헌[미국 특허 번호 제7,446,190호]에 기재된 바와 같은 CAR 및 문헌[국제 출원 WO/2014055668 A1]에 기재된 것을 포함한다. 예시적인 CAR은 상기 언급된 발행물, 예컨대 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 번호 7,446,190, 미국 특허 번호 8,389,282 중 어느 하나에 개시된 바와 같은 CAR을 포함하고, 예를 들어 여기에서 항원 결합 부분, 예를 들어 scFv는, 예를 들어 여기에 제공된 바와 같은 항체로 교체된다.
기타 ROR1 표적화 CAR이, 예를 들어, 문헌[Hudecek et al., Clin Cancer Res, 19(12), 3153-3164 (2013) 및 Baskar et al. MAbs. 4(3): 349-361 (2012)]에 기재되어 있다. 또한 문헌[국제 출원 WO2014031687; 미국 출원 US2012/20058051]을 참조한다.
a. 세포 외 항원 결합 도메인
키메라 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(CAR)가 존재한다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 제공된 항-ROR1 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나 이상을 포함하거나, 이거나, 내에 포함된 세포 외 항원 결합 도메인을 포함한다. 따라서, 키메라 수용체, 예를 들어 CAR은 전형적으로 이의 세포 외 부분에 하나 이상의 ROR1 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원 결합 단편, 도메인 또는 부분 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인 및/또는 항체 분자, 예컨대 여기에 기재된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 scFv의 가변 중쇄(VH) 영역 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역과 같은 항체 분자의 ROR1 결합 부분 또는 부분들을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어 scFv의 가변 중쇄(VH) 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역과 같은 항체 분자의 ROR1 결합 부분 또는 부분들을 포함한다. 일부 측면에서, CAR은 여기, 예를 들어 섹션 I.A에 기재된 임의의 ROR1 결합 항체 또는 이의 항원 결합 단편 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, 표 2는 제공된 ROR1 결합 수용체, 예컨대 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)에 포함될 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편과 같은 예시적인 항원 결합 도메인의 서열 번호를 제공한다. 일부 측면에서, CAR은, 예를 들어 세포 외 항원 결합 도메인의 일부로서 표 2에 기재된 scFv를 포함한다. 일부 측면에서, CAR은, 예를 들어 세포 외 항원 결합 도메인의 일부로서 표 2에 기재된 VH 영역을 포함한다. 일부 측면에서, CAR은, 예를 들어 세포 외 항원 결합 도메인의 일부로서 표 2에 기재된 VL 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 수용체는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 서열을 포함하는 VH 영역 및 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는 ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 수용체는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열을 포함하는 ROR1 결합 항체 또는 이의 단편 또는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 VH 및 VL 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 수용체는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 VH 영역 서열 및 VL 영역 서열을 포함하는 ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 수용체는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열을 포함하는 ROR1 결합 항체 또는 이의 단편 또는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열에 대해 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 scFv 아미노산 서열을 포함하는 항체를 함유한다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 수용체는 표 2의 각 열에 나열된 서열 번호에 제시된 scFv 서열을 포함하는 ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 온전한 항체 및 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편을 포함하는 기능성(항원 결합) 항체 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함하면서, 다클론 및 단클론 항체를 포함한 항체의 전부 또는 일부를 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, CAR에 함유된 항체 또는 이의 단편은 일반적으로 유전자 조작되고/거나 그렇지 않으면 변형된 형태의 면역 글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 완전히 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적, 예를 들어 이중 특이적 또는 삼중 특이적 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포함한다.
b. 스페이서
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예컨대 CAR, 예컨대 이의 항체 부분은, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부, 예컨대 힌지 영역, 예를 들어 IgG4 힌지 영역 및/또는 CH1/CL, CH2 및/또는 CH3 및/또는 Fc 영역이거나 이를 포함할 수 있는 스페이서(일부 경우에 스페이서 영역으로도 명명)를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 인간 IgG, 예컨대 IgG4, IgG2 또는 IgG1의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 일부는 항원 인식 구성 요소, 예를 들어, scFv와 막 관통 도메인 사이에서 스페이서로 기능한다.
일부 구현예에서, 스페이서의 길이가 조정되어 CAR 발현 세포, 예컨대 CAR 발현 세포와 CAR의 표적, 예컨대 ROR1 발현 종양 세포 사이의 생물물리학적 시냅스 거리를 최적화한다. 일부 구현예에서, CAR은 T 세포에 의해 발현되고, 스페이서의 길이는 T 세포 활성화에 적합한 거리 또는 CAR T 세포 성능을 최적화하도록 조정된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 스페이서의 부재에 비해 또는 상이한 길이(예를 들어, 보다 더 긴 길이)의 대안적인 스페이서에 비해 항원 결합 후 세포의 반응성 증가를 제공하는 길이일 수 있다. 일부 예에서, 스페이서는 (약) 12개 아미노산 길이이거나 또는 (약) 12개 이내의 아미노산 길이이다. 일부 예에서, 스페이서는 (약) 15개 아미노산 길이이거나 또는 (약) 15개 이내의 아미노산 길이이다.
예시적인 스페이서는, (약) 10 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 229개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 200개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 175개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 150개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 125개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 100개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 75개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 50개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 40개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 30개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 20개의 아미노산 또는 (약) 10 내지 (약) 15개 이상의 아미노산 길이(및 임의의 나열된 범위의 종점 사이 임의의 정수를 포함함)를 갖는 스페이서를 포함한다. 예시적인 스페이서는, (약) 50 내지 (약) 175개의 아미노산, (약) 50 내지 (약) 150개의 아미노산, (약) 10 내지 (약) 125개의 아미노산, (약) 50 내지 (약) 100개의 아미노산, (약) 100 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 100 내지 (약) 250개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 250개의 아미노산 또는 (약) 200 내지 (약) 250개 이상의 아미노산(및 임의의 나열된 범위의 종점 사이 임의의 정수를 포함함)을 갖는 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 12개 이상의 아미노산, (약) 119개 이상의 아미노산, (약) 125개 이상의 아미노산, (약) 200개 이상의 아미노산 또는 (약) 220개 이상의 아미노산 또는 (약) 225개 이상의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 13개 이상의 아미노산, (약) 120개 이상의 아미노산, (약) 125개 이상의 아미노산, (약) 200개 이상의 아미노산 또는 (약) 220개 이상의 아미노산 또는 (약) 229개 이상의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 이하의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 100개 이상의 아미노산 길이, 예컨대 (약) 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 또는 250개 이상의 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 125 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 250개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 230개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 200개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 180개의 아미노산, (약) 125 내지 (약) 150개의 아미노산, (약) 150 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 150 내지 (약) 250개의 아미노산, (약) 150 내지 (약) 230개의 아미노산, (약) 150 내지 (약) 200개의 아미노산, (약) 150 내지 (약) 180개의 아미노산, (약) 180 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 180 내지 (약) 250개의 아미노산, (약) 180 내지 (약) 230개의 아미노산, (약) 180 내지 (약) 200개의 아미노산, (약) 200 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 200 내지 (약) 250개의 아미노산, (약) 200 내지 (약) 230개의 아미노산, (약) 230 내지 (약) 300개의 아미노산, (약) 230 내지 (약) 250개의 아미노산 길이 또는 250 내지 (약) 300개 이상의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 129, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 또는 230개 이상의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이의 길이이다.
예시적인 스페이서는 IgG 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인 중 하나 이상에 연결된 IgG 힌지 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG 힌지를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG 힌지 단독을 포함한다. 일부 구현예에서, IgG 힌지, CH2 및/또는 CH3은 IgG4 또는 IgG2로부터 전부 또는 일부, 예컨대 인간 IgG4 또는 인간 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4, IgG2 및/또는 IgG2 및 IgG4에서 유래된 힌지, CH2 및/또는 CH3 서열(들) 중 하나 이상을 함유하는 키메라 폴리펩티드일 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고, 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고/거나; 상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 영역 및/또는 IgG2 CH2 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH2 영역이고 상기 IgG2 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH2 영역이고/거나; 상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 영역 및/또는 IgG2 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH3 영역이고 상기 IgG2 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH3 영역이다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4 유래 각각의 힌지 영역, CH2 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 힌지 영역을 포함하고/거나; CH2 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 CH2 영역을 포함하고/거나; CH3 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 CH3 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4 힌지 영역과 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지; 인간 IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 인간 IgG4 CH3 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 면역 글로불린 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 15개 이하의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 면역 글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성되고/거나 약 15개 이하의 아미노산을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 13개 아미노산 길이이고/거나 면역 글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 12개 아미노산 길이이고/거나 면역 글로불린 힌지, 선택적으로 IgG4 힌지 또는 이의 변형된 버전의 전부 또는 일부를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 1, 26, 27, 28, 29, 31, 32, 33 또는 135의 서열 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 어느 하나의 변이체를 포함하거나 이로 구성된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 화학식 X1PPX2P(서열 번호: 25)을 포함하고, 여기에서 X1은 글리신, 시스테인 또는 아르기닌이고, X2는 시스테인 또는 트레오닌이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 CD28 세포 외 영역 또는 CD8 세포 외 영역을 포함하지 않는다. 특정 경우에, 스페이서는 C-말단에 메티오닌 잔기를 갖는다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 2 또는 30 또는 서열 번호: 2 또는 30에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 30에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 192 또는 136 또는 서열 번호: 192 또는 136에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 136에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 스페이서는, 예를 들어 인간 면역 글로불린, 예컨대 IgG4 및/또는 IgG2의 CH3 도메인에 연결된 IgG 힌지이거나 이를 포함한다. 일부 측면에서, 스페이서는 (약) 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 125개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이 길이를 갖는다. 일부 측면에서, 스페이서는 (약) 119 또는 120개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 3 또는 138의 서열 또는 이에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 상기 중 어느 하나의 변이체를 포함하거나 이로 구성된다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 193 또는 139 또는 서열 번호: 193 또는 139에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 139에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 4 또는 137 또는 서열 번호: 4 또는 137에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 137에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4 및/또는 IgG2에서 전부 또는 부분적으로 유래될 수 있고, 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 단일 아미노산 돌연변이와 같은 돌연변이를 함유할 수 있다. 일부 예에서, 아미노산 변형은 IgG4의 힌지 영역에서 세린(S)에 대한 프롤린(P)의 치환이다. 일부 구현예에서, 아미노산 변형은, 글리코실화 이질성을 감소시키기 위해 서열 번호: 48에 제시된 전장 IgG4 Fc 서열의 CH2 영역에서 177 위치의 돌연변이 N177Q 또는 서열 번호: 49에 제시된 전장 IgG2 Fc 서열의 CH2 영역에서 176 위치의 N176Q와 같은 아스파라긴(N)에 대한 글루타민(Q)의 치환이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역이거나 이를 포함하고, 선택적으로 약 228 또는 229개 아미노산 길이이거나; 또는 서열 번호: 37 또는 194에 제시된 스페이서이다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 195 또는 196 또는 서열 번호: 195 또는 196에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 196에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 38 또는 140 또는 서열 번호: 38 또는 140에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 140에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 코돈 발현 및/또는 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위의 제거에 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 30에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 136에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 137에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 139에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 140에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 196에 제시된 핵산 서열을 포함한다.
추가의 예시적인 스페이서는 문헌[Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3(2):125-135, 또는 국제 출원 WO2014031687]에 기재된 것을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오티드 서열이 최적화되어 발현 시 RNA 이질성이 감소된다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오티드 서열이 최적화되어 숨은 스플라이스 부위가 감소되거나 스플라이스 부위에서 스플라이스 이벤트의 가능성이 감소된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 2에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 192에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 4에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 193에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 38에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 195에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 예를 들어, 숨은 스플라이스 부위를 제거함으로써 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 30에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 136에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 137에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 138에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 139에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 140에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 196에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 1, 3 또는 37에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 135, 138 또는 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖고, 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다.
c. 막관통 도메인
항원 인식 구성 요소는, 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체 및/또는 또 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 통해 활성화를 모방하는 신호 전달 구성 요소와 같은 하나 이상의 세포 내 신호 전달 구성 요소에 연결된다. 따라서, 일부 구현예에서, ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)는 여기에 기재된 것과 같은 하나 이상의 막관통 도메인 및 여기에 기재된 것과 같은 하나 이상의 세포 내 구성 요소를 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 세포 외 도메인에 융합된다. 일 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 결합하는 막 관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 아미노산 치환에 의해 선택 또는 변형되어 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용을 최소화하도록 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합이 방지된다.
일부 구현예에서, 막 관통 도메인은 천연 또는 합성 출처에서 유래된다. 출처가 천연인 경우, 일부 측면에서 도메인은 임의의 막 결합 또는 막 관통 단백질에서 유래된다. 막 관통 도메인은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD3 입실론, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및/또는 CD154에서 유래된 것을 포함(즉 적어도 이의 막 관통 도메인(들)을 포함)한다. 예를 들어, 막관통 도메인은, 서열 번호: 149에 제시된 또는 서열 번호: 147 또는 148에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 CD28 막관통 도메인일 수 있다. 예를 들어, 막관통 도메인은, 서열 번호: 8에 제시된 또는 서열 번호: 197 또는 198에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함하는 CD198 막관통 도메인일 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어, CAR의 막관통 도메인은, 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 변이체, 예를 들어 인간 CD28의 27개 아미노산 막관통 도메인(수탁 번호 P01747.1) 또는 28개 아미노산 서열이거나 또는 서열 번호: 8 또는 149에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8 또는 149에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 예를 들어, 숨은 스플라이스 부위를 제거함으로써 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8 또는 149에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 서열 번호: 147, 148, 197 또는 198에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열 또는 이에 대해 90% 이상의 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 특정 경우에, 막관통 도메인은 N-말단에 메티오닌 잔기를 갖는다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8 또는 서열 번호: 8에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 197 또는 198 또는 서열 번호: 197 또는 198에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 198에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 149 또는 서열 번호: 149에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 149에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 147 또는 148 또는 서열 번호: 147 또는 148에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 148에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
대안적으로 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 루신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한다.
d. 세포 내 신호 전달 구성 요소
세포 내 신호 전달 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 함께 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 존재한다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.
수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 하나 이상의 세포 내 신호 전달 구성 요소 또는 구성 요소들을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체는 T 세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타(CD3-ζ사슬과 같은 TCR 복합체의 세포 내 구성 요소 또는 신호 전달 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, ROR1 결합 항체는 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포 내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 더 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR은 CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이에 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR의 결찰시, CAR의 세포질 도메인 또는 세포 내 신호 전달 영역은, 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 이펙터 기능 또는 반응 중 하나 이상을 자극 및/또는 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 상황에서, CAR은 T 세포의 기능, 예컨대 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예컨대 사이토카인 또는 기타 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 구성 요소 또는 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인의 절단 부분은, 예를 들어 그것이 이펙터 기능 신호를 형질 도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인 또는 도메인들은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열 및 일부 측면에서 또한 자연적인 상황에서 항원 수용체 결합 후에 신호 전달을 개시하기 위해 상기 수용체와 협력하여 작용하는 공수용체의 그것 및/또는 상기 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열을 포함한다.
천연 TCR의 상황에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만아니라 공자극 신호도 필요로 한다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2 차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 구성 요소가 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 구성 요소를 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가 CAR이 동일한 세포에서 발현되고, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 구성 요소를 제공한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 2 종류의 세포질 신호 전달 서열: TCR을 통한 항원-의존적 일차 활성화를 개시하는 것(1 차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2 차 또는 공자극 신호를 제공하는 것(2 차 세포질 신호 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 종류의 세포질 신호 전달 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1 차 자극 및/또는 활성화를 조절하는 1 차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1 차 세포질 신호 전달 서열은 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1 차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예는 TCR 또는 CD3 제타, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론에서 유래된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포 내 신호 전달 영역은 CD3 제타에서 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 일부 또는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, CD3 제타는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시되고, 서열 번호: 150 또는 182에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CD3 제타는 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 예를 들어, 숨은 스플라이스 부위를 제거함으로써 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, CD3 제타는 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 150에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 CD3 제타 자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체, 예컨대 인간 CD3ζ의 동형 단백질 3의 112 AA 세포질 도메인(수탁 번호: P20963.2) 또는 문헌[미국 특허 번호 7,446,190 또는 미국 특허 번호 8,911,993]에 기재된 바와 같은 CD3 제타 신호 전달 도메인을 포함한다.　일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은, 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 신호 전달 도메인(예를 들어, 세포 내 또는 세포질 신호 전달 도메인) 및/또는 공자극 분자, 예컨대 T 세포 공자극 분자의 막관통 부분을 포함한다. 예시적인 공자극 분자는 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS를 포함한다. 예를 들어, 공자극 분자는 4-1BB에서 유래될 수 있고, 서열 번호: 12에 제시되고, 서열 번호: 154 또는 155에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 4-1BB 유래 공자극 분자는 선택적으로 코돈 사용을 위해 최적화되고/거나 예를 들어, 숨은 스플라이스 부위를 제거함으로써 RNA 이질성이 감소되도록 최적화된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 4-1BB 유래 공자극 분자는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 155에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 세포 내 도메인은 4-1BB의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체 또는 이의 일부, 예컨대 인간 4-1BB의 42-아미노산 세포질 도메인(수탁 번호: Q07011.1) 또는 이의 기능성 변이체 또는 이의 일부, 예컨대 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 공자극 분자는 CD28에서 유래될 수 있고, 서열 번호: 10에 제시되고, 서열 번호: 183에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 CD28의 세포 내 공자극 신호 전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 이의 일부, 예컨대 이의 41 아미노산 도메인 및/또는 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL이 GG로 치환된 상기 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 10 또는 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 10 또는 11에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 자극성 또는 활성화 구성 요소(예를 들어, 세포질 신호 전달 서열) 및 공자극 구성 요소 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 함유한다. 세포 외 도메인 및 막관통은 직접 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포외 도메인 및 막관통은 여기에 기재된 임의의 것과 같은 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 예컨대 막관통 도메인과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 T 세포 공자극 분자의 세포 내 도메인을 함유한다. 일부 측면에서, T 세포 공자극 분자는 CD28 또는 41BB이다.
일부 구현예에서, 자극성 또는 활성화 구성 요소는 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 구성 요소는 또 다른 항원을 인식하는 또 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR 및 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO 2014/055668 참조). 일부 측면에서, ROR1 표적화 CAR은 자극성 또는 활성화 CAR이고; 다른 측면에서, 이는 공자극 CAR이다. 일부 구현예에서, 세포는 억제성 CAR(inhibitory CAR(iCAR), 문헌[Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)] 참조), 예컨대 ROR1이 아닌 항원을 인식하는 CAR을 더 포함하고, 이로써 ROR1 표적화 CAR을 통해 전달된 자극성 또는 활성화 신호는 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되어 예를 들어 오프 타깃 효과가 감소된다.
일부 구현예에서, 2개의 수용체가 각각 세포에 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 항원에 수용체 중 하나의 결찰은 세포를 활성화하거나 반응을 유도하나, 항원에 제2 억제성 수용체의 결찰은 상기 반응을 억제하거나 약화시키는 신호를 유도한다. 활성화 CAR 및 억제성 CAR(iCAR)을 조합하는 예가 있다. 상기 전략이 사용되어 예를 들어, 활성화 CAR이 질병 또는 병태에서 발현되나 정상 세포에서도 발현되는 항원에 결합하고, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되나 질병 또는 병태의 세포에서는 발현되지 않는 별개의 항원에 결합하는 상황에서 오프 타겟(off-target) 효과의 가능성이 감소될 수 있다.
일부 측면에서, 키메라 수용체는 억제 CAR(예를 들어 iCAR)이거나 이를 포함하고, 세포에서 면역 반응, 예컨대 ITAM- 및/또는 공자극- 촉진 반응을 약화 또는 억제하는 세포 내 구성 요소를 포함한다. 상기 세포 내 신호 전달 구성 요소의 예는 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, A2AR을 포함한 EP2/4 아데노신 수용체를 포함한 면역 체크포인트 분자에서 발견되는 것이다. 일부 측면에서, 조작된 세포는 상기 억제 분자의 또는 이로부터 유래된 신호 전달 도메인을 포함하는 억제성 CAR를 포함하여, 예를 들어, 활성화 및/또는 공자극 CAR에 의해 유도된 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.
특정 구현예에서, 세포 내 신호 전달 영역은 CD28 막관통 및 CD3(예를 들어, CD3 제타) 세포 내 도메인에 연결된 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결된 키메라 CD28 및 4-1BB(CD137; TNFRSF9) 공자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에 1개 이상, 예를 들어 2개 이상의 공자극 도메인 및 자극성 또는 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 구성 요소를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 제공된 구현예는 여기, 예컨대 섹션 I.A.1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 항-ROR1 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 약 12개의 아미노산 길이인 것과 같은 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서 또는 서열 번호: 2 또는 30에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 것과 같은 서열 번호: 1에 제시된 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 제공된 구현예는 여기, 예컨대 섹션 I.A.1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 항-ROR1 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 약 13개의 아미노산 길이인 것과 같은 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서 또는 서열 번호: 136 또는 192에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 것과 같은 서열 번호: 135에 제시된 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 함유한다.
일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 제공된 구현예는 여기, 예컨대 섹션 I.A.1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 항-ROR1 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 약 119개의 아미노산 길이인 것과 같은 변형된 IgG4 힌지-CH3을 포함하는 스페이서 또는 서열 번호: 4 또는 137에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 것과 같은 서열 번호: 3에 제시된 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 제공된 구현예는 여기, 예컨대 섹션 I.A.1 및/또는 표 2에 기재된 임의의 항-ROR1 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 세포 외 항원 결합 도메인; 약 120개의 아미노산 길이인 것과 같은 변형된 IgG4 힌지-CH3을 포함하는 스페이서 또는 서열 번호: 193 또는 139에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된 것과 같은 서열 번호: 138에 제시된 스페이서; 인간 CD28 유래 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 함유한다.
상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 149에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이다. 특정 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 12에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포질 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13에 제시된 것과 같은 인간 CD3-제타 세포질 신호 전달 도메인이다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 세포 내 신호 전달 영역은 서열 번호: 13 및 서열 번호: 12에 제시된 서열을 포함한다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 상기는 여기 섹션 I.D, 표 3 및/또는 표 E1에 기재되어 있다. 여기 섹션 I.E, 표 3 및/또는 표 E1에 기재된 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 CAR이 또한 제공된다. 예를 들어, 제공된 결합 분자의 모든 부분을 암호화하는 여기 기재된 임의의 뉴클레오티드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 특정 경우에, 막관통 도메인은 N-말단에 메티오닌 잔기를 갖는다. 특정 경우에, 스페이서는 C-말단에 메티오닌 잔기를 갖는다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 184에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 184에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 185에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 185에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 186에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 186에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 187에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 187에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 188에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 188에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 189에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 189에 제시된 아미노산 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 아미노산 서열을 갖는다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 156에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 156에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 157에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 157에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 158에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 158에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 159에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 159에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 160에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 160에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다. 임의의 구현예 중 일부에서, 항-ROR1 CAR은 서열 번호: 161에 제시된 뉴클레오티드 서열, 또는 서열 번호: 161에 제시된 뉴클레오티드 서열에 대해 (약) 85%, (약) 86%, (약) 87%, (약) 88%, (약) 89%, (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 이상의 서열이 동일한 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화된다.
2. 예시적 특징
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유하는 제공된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 ROR1, 예컨대 암 세포 또는 종양 세포의 표면 상의 ROR1에 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 임의의 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 특이적으로 결합한다. 예시적인 ROR1 결합 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 임의의 결합 친화도, 결합 특이성 및/또는 항원 인식의 기타 특징, 예컨대 여기, 예컨대 섹션 I.A.2에 기재된 바와 같은 종 교차 반응성을 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인을 함유하는 CAR은, 항체 또는 이의 단편과 유사 또는 실질적으로 동일한 결합 특성 및 특징을 나타낸다. 일부 경우에, 항체 또는 이의 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인을 함유하는 CAR은, 항체 또는 이의 단편과 상이한 결합 특성 및 특징을 나타낸다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질에 특이적으로 결합한다. 여기 임의의 구현예 중 일부에서, ROR1은 인간 ROR1을 지칭한다. 항체 또는 기타 결합 분자, 예를 들어 CAR이 ROR1에 결합하거나 ROR1에 특이적으로 결합한다는 관찰이 반드시 모든 종 유래 ROR1에 결합한다는 것을 의미하지는 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, ROR1에 대한 결합 특징, 예컨대 이에 대해 특이적으로 결합하는 능력 및/또는 기준 항체, 예를 들어 기준 항체를 함유하는 기준 CAR과 이에 대한 결합을 두고 경쟁하는 능력 및/또는 특정 친화도로 결합하거나 또는 특정 정도로 경쟁하는 능력은, 일부 구현예에서, 인간 ROR1 단백질에 관한 능력을 지칭하고, 항체는 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 관하여 상기 특징을 갖지 않을 수 있다. 일부 구현예에서, CAR은 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 히말라야 원숭이 또는 원숭이의 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, CAR은 인간 ROR1에 결합하고, 또 다른 종, 예컨대 마우스의 ROR1에 결합한다.
일부 구현예에서, CAR은 인간 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 144(GenBank No. AAA60275.1; 서열 번호: 215, Uniprot No. Q01973에 제시된 신호 펩티드를 포함하는 서열)에 제시된 인간 ROR1 또는 이의 대립유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 일 구현예에서, 인간 ROR1은 서열 번호: 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 갖는 전사체 변이체 또는 동형 단백질이다. 일부 구현예에서, 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145, 146 또는 215에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은, 예를 들어 서열 번호: 144에 제시된 인간 ROR1 서열의 1-377 잔기에 대응(신호 펩티드를 포함하는 서열 번호: 215에 제시된 인간 ROR1 서열의 30-406 잔기에 대응)하는 ROR1의 세포 외 영역, 예컨대 인간 ROR1의 세포 외 영역 내에 존재하는 하나 이상의 세포 외 에피토프에 결합한다.
일부 구현예에서, CAR은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 선형 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 에피토프는 구조적 에피토프를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 ROR1, 예컨대 인간 ROR1의 하나 이상의 구조적 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프, 예컨대 서열 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시됨) 또는 여기 표 2 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에 제시된 서열을 포함하는 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 ROR1의 하나 이상의 에피토프, 예컨대 서열 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시됨)을 포함하는 하나 이상의 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 추가 에피토프, 예컨대 서열 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시됨) 뿐만아니라 하나 이상의 구조적 에피토프에 결합한다. 예시적인 하나 이상의 추가 에피토프는 여기 표 2 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에 제시된 서열 중 하나 이상을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 항체는 비인간 ROR1, 예컨대 히말라야 원숭이(Macaca mulatta) ROR1(서열 번호: 216, Uniprot No. F6RUP2에 제시됨) 또는 시노몰구스 원숭이(Macaca fasicularis) ROR1(서열 번호: 217, Uniprot No. A0A2K5WTX7; 또는 서열 번호: 218, Uniprot No. A0A2K5WTX4에 제시됨)에 결합한다. 일부 측면에서, 비인간 ROR1의 세포 외 도메인은 인간 ROR1 서열과 99% 이상 동일하다.
일부 구현예에서, CAR은 비인간 ROR1, 예컨대 원숭이, 토끼, 래트, 마우스 또는 기타 종의 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 마우스(Mus musculus) ROR1, 예컨대 마우스 ROR1의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 171(GenBank No. NP_038873; 서열 번호: 219, Uniprot No. Q9Z139에 제시된 신호 펩티드를 포함하는 서열)에 제시된 마우스 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 인간 ROR1에 결합하고, 마우스 ROR1에 결합한다. 일부 구현예에서, 비인간 ROR1, 예컨대 마우스 ROR1에 대한 제공된 항-ROR1 항체 또는 이의 단편 중 일부의 결합 정도는 인간 ROR1에 대한 CAR 결합의 적어도 (약) 75%, 80%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150% 이상이다. 일부 구현예에서, 항체는 마우스 ROR1, 예컨대 서열 번호: 171에 제시된 마우스 ROR1에 결합하지 않는다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, 예를 들어, ROR1 결합 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 CAR의 결합 정도는, 비인간 ROR1, 선택적으로 마우스 ROR1에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 관련 없는, 비-ROR1 단백질 또는 비인간 ROR1 단백질, 예컨대 마우스 ROR1 단백질 또는 기타 비-ROR1 단백질에 대한 항-ROR1 항체의 결합 정도는, 측정된 바와 같이 인간 ROR1에 대한 CAR 결합의 (약) 50%, 40%, 30%, 20% 또는 10% 미만이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 마우스 ROR1, 예컨대 서열 번호: 171 또는 219에 제시된 마우스 ROR1에 결합하지 않는다.
제공된 임의의 구현예 중 일부에서, CAR 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질, 선택적으로 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 비-ROR1 단백질, 예컨대 ROR2 단백질에 대해 예를 들어, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유하는 제공된 CAR 중 일부의 결합 정도는, 인간 ROR1에 대한 CAR의 결합보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다. 일부 구현예에서, 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, ROR2 단백질, 선택적으로 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유하는 제공된 CAR 중에는 마우스 ROR1에 대한 결합이 인간 ROR1에 대한 CAR 결합의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만인 CAR이 존재한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, ROR1 결합 항체 또는 이의 단편을 함유하는 제공된 CAR 중에는 ROR2, 예컨대 인간 ROR2에 대한 결합이, 인간 ROR1에 대한 CAR 결합의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만인 CAR이 존재한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질에 대해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도의 결합을 나타낸다. 일부 측면에서, 특정 항원(예를 들어, 인간 ROR1)에 대한 결합 친화도 및/또는 특이성이, 여기 섹션 I.A.2에 기재된 어느 하나와 같이 결합을 평가하는 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된 바와 같이 ROR1, 예컨대 인간 ROR1에 특정 친화도 이상으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 친화도는 평형 해리 상수(KD)로 표현된다. 일부 구현예에서, 친화도는 EC50으로 표현된다.
일부 구현예에서, 결합 분자, 예를 들어 CAR은, 항원, 예를 들어 ROR1 단백질 또는 그 안의 에피토프에 여기, 예를 들어 여기, 섹션 I.A.2에 기재된 바와 같은 친화도 또는 KA(즉, 1/M 또는 M-1의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 결합 상수; 2 분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 온-속도[kon 또는 ka] 대 오프-속도[koff 또는 kd]의 비율과 동일), 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수(KD; 즉, M의 단위를 갖는 특정 결합 상호 작용의 평형 해리 상수; 2분자 상호 작용을 가정한 상기 결합 반응에 대한 오프-속도[koff 또는 kd] 대 온-속도[kon 또는 ka]의 비율과 동일) 또는 오프 속도(해리 속도 상수; koff 또는 kd)로 결합, 예컨대 특이적으로 결합한다. 예를 들어, 평형 해리 상수 KD는 10-5 M 내지 10-13 M, 예컨대 10-7 M 내지 10-11 M, 10-7 M 내지 10-10 M, 10-7 M 내지 10-9 M, 10-8 M 내지 10-10 M 또는 10-9 M 내지 10-10 M의 범위일 수 있다.
특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 CAR의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수, KD는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하 또는 (약) 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM 또는 1 nM 이하보다 더 작거나 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 일부 구현예에서, ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 CAR의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM 내지 (약) 90 nM, (약) 20 nM 내지 (약) 80 nM, (약) 30 nM 내지 (약) 70 nM, (약) 40 nM 내지 (약) 60 nM 또는 (약) 40 nM 내지 (약) 50 nM이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 CAR의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM 또는 100 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 CAR의 EC50 및/또는 KD는 (약) 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM 또는 100 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 특정 구현예에서, ROR1 단백질, 예컨대 인간 ROR1 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 항-ROR1 CAR의 EC50 및/또는 KD는 (약) 40 nM, 41 nM, 42 nM, 43 nM, 44 nM 또는 45 nM 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다.
일부 구현예에서, 제공된 결합 분자, 예를 들어, 항-ROR1 CAR은 빠른 오프-속도(해리 속도 상수; koff 또는 kd; 1/s 또는 s-1의 단위)를 갖는다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 1 x 10-5 s-1 내지 (약) 1 x 10-2 s-1, 예컨대 (약) 5 x 10-5 s-1 내지 (약) 9 x 10-3 s-1, (약) 1 x 10-4 s-1 내지 (약) 8 x 10-3 s-1, (약) 5 x 10-4 s-1 내지 (약) 7 x 10-3 s-1, (약) 1 x 10-3 s-1 내지 (약) 6 x 10-3 s-1 및 (약) 4 x 10-3 s-1 내지 (약) 6 x 10-3 s-1이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 1 x 10-5 s-1, 5 x 10-5 s-1, 1 x 10-4 s-1, 5 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 또는 1 x 10-2 s-1 이상이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 6 x 10-4 s-1, 7 x 10-4 s-1, 8 x 10-4 s-1, 9 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 2 x 10-3 s-1, 3 x 10-3 s-1, 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1, 6 x 10-3 s-1, 7 x 10-3 s-1, 8 x 10-3 s-1, 9 x 10-3 s-1 또는 1 x 10-2 s-1 이상이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자의 오프-속도(koff 또는 kd)는 (약) 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 또는 6 x 10-3 s-1 이상 또는 상기 중 어느 하나에 의해 정의된 범위이다. 일부 구현예에서, 제공된 결합 분자, 예를 들어, 항-ROR1 CAR은, 기준 항-ROR1 CAR, 예를 들어 항-ROR1 CAR R12의 오프-속도보다 (약) 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배 또는 10 배 이상 더 빠른 오프-속도를 갖는다.
일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종 유래 ROR1 단백질에 대한 항-ROR1과 같은 결합 분자의 결합 친화도를 비교하여 종 교차 반응성을 결정할 수 있다. 예를 들어, 종 교차 반응성은 높은 교차 반응성 또는 낮은 교차 반응성으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어 , 상이한 종, 예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이 또는 마우스 유래 ROR1 단백질에 대한 평형 해리 상수, KD를 비교하여 종 교차 반응성을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 종 교차 반응성이 높을 수 있고, 예를 들어 항-ROR1 CAR은 인간 ROR1 및 종 변이체 ROR1에 유사한 정도로 결합하며, 예를 들어 인간 ROR1에 대한 KD 및 종 변이체 ROR1에 대한 KD의 비율은 (약) 1이다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR의 종 교차 반응성이 낮을 수 있으며, 예를 들어 항-ROR1 CAR은 인간 ROR1에 대해 높은 친화도를 가지나 종 변이체 ROR1에 대해 낮은 친화도를 갖거나 이와 반대도 같다. 예를 들어, 종 변이체 ROR1에 대한 KD와 인간 ROR1에 대한 KD의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 이상보다 크며, 항-ROR1 CAR은 낮은 종 교차 반응성을 갖는다. 종 교차 반응성의 정도는 기준 CAR과 같은 공지된 CAR의 종 교차 반응성과 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR의 특성 또는 특징은 또 다른 CAR, 예를 들어 기준 CAR에 대해 관찰된 특성과 관련하여 설명된다. 일부 구현예에서, 기준 CAR은 세포 외 항원 결합 도메인으로서 여기 기재된 기준 항체 또는 이의 단편, 예컨대 R12로 지정된 키메라 토끼/인간 IgG1 항체(예를 들어, 문헌[Yang et al. (2011) PloS ONE, 6:e21018; 미국 특허 출원 번호 US 2013/0251642] 참조); 2A2로 지정된 마우스 항-인간 ROR1 항체(예를 들어, 문헌[Baskar et al. (2012) MAbs, 4:349-361; 미국 특허 출원 공개 번호 US2012/20058051] 참조); 문헌[PCT 국제 출원 번호 WO2014/031174]에 기재된 인간화된 항-ROR1 항체; 99961로 지정된 항체의 인간화된 변이체;를 함유한다.
일부 구현예에서, CAR은 기준 CAR의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 그보다 더 작은 친화도, 예를 들어, 기준 CAR의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 (약) 1.5 배 이내 또는 (약) 2 배 초과 이내, (약) 3 배 초과 이내, 및/또는 (약) 10 배 초과 이내인 EC50 또는 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, CAR은 기준 CAR의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 그보다 더 작은 친화도, 예를 들어, 기준 CAR의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 적어도 (약) 1.5 배 초과, 적어도 (약) 2 배 초과, 적어도 (약) 3 배 초과, 적어도 (약) 5 배 초과, 적어도 (약) 10 배 초과, 적어도 (약) 20 배 초과, 적어도 (약) 25 배 초과, 적어도 (약) 30 배 초과, 적어도 (약) 40 배 초과, 적어도 (약) 50 배 초과 또는 적어도 (약) 100 배를 초과하는 EC50 또는 KD를 갖는다. 일부 구현예에서, CAR은 기준 CAR의 대응 형태의 그것과 대략 동일하거나 그보다 더 작은 친화도, 기준 CAR의 친화도보다 (약) 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 6 배, 7 배, 8 배, 9 배, 10 배, 20 배, 25 배, 30 배, 40 배, 50 배 또는 100 배 더 작은 친화도를 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 기준 CAR의 대응 형태의 그것보다 더 큰 친화도, 예를 들어 기준 CAR의 대응 형태의 EC50 또는 KD 보다 5 배, 10 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 100 배, 150 배, 200 배, 250 배 이하보다 더 작거나 또는 (약) 5 배, 10 배, 20 배, 30 배, 40 배, 50 배, 60 배, 70 배, 80 배, 90 배, 100 배, 150 배, 200 배, 250 배 이하보다 더 작은 EC50 또는 KD를 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 기준 CAR에 결합하는 ROR1의 에피토프와 중복되는 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 측면에서, 상기 CAR 중에는 기준 CAR과 동일하거나 유사한 에피토프에 결합하는 CAR이 존재한다. 일부 구현예에서, CAR은, 기준 CAR, 예컨대 항-ROR1 CAR R12 또는 이의 scFv 단편(서열 번호: 142에 제시됨; 예를 들어, 문헌[Yang et al. (2011) PloS ONE, 6:e21018] 참조)과 동일하거나 유사한 에피토프 또는 동일한 영역 내의 에피토프 또는 동일한 ROR1 영역 내 잔기를 함유하는 에피토프에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 인간 ROR1과 같은 ROR1에 대한 결합을 억제하고/거나 기준 CAR과 이에 대한 결합을 두고 경쟁한다.
제공된 CAR 중에는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달, 즉 항원, 예를 들어 ROR1의 부재시 및/또는 비특이적 항원 존재 시에 배경 수준으로 또는 측정 가능하게 부재하는 신호 전달 활성을 나타내는 CAR이 존재한다. 따라서, 일부 측면에서, 제공된 CAR은, 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 항원, 예를 들어 ROR1의 부재 시에 존재하는 신호 전달을 나타내지 않거나 또는 배경 이하 또는 허용 가능하거나 낮은 수준의 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 활성 또는 항원, 예를 들어 ROR1의 부재 시에 존재하는 신호 전달을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR 발현 세포는 세포 독성 활성, 사이토카인 생성 및 증식 능력을 포함한 생물학적 활성 또는 기능을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 분석 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 또는 그보다 높은 항원 특이적 신호 전달 및/또는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은 항원, 예를 들어 ROR1의 부재 시에 활성 또는 신호 전달의 부재, 감소 또는 보다 낮은 수준을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은 토닉 신호 전달 또는 항원 비의존적 신호 전달 또는 활성, 예를 들어 항원 부재 시의 신호 전달 또는 활성의 감소, 보다 낮거나 거의 없거나 완벽한 부재를 나타내어 신호 전달 또는 활성이 인간 ROR1 존재 시 CAR의 신호 전달 또는 활성의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체(CAR)에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 보다 낮은 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다. 일부 측면에서, CAR을 발현하도록 조작된 복수의 세포 또는 세포 집단 중에서, (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 세포가 복수로 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 기준 ROR1 특이적 CAR은, 여기 섹션 I.A.2에 기재된 것과 같은 여기 기재된 임의의 기준 항-ROR1 항체, 예를 들어 R12, A2A 또는 99961 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항원 결합 도메인을 갖는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 비특이적 항원, 예컨대 상이하나 관련된 단백질, 예컨대 ROR2에 노출될 경우 활성 또는 신호 전달의 부재, 감소 또는 보다 낮은 수준을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질에 대해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도의 결합을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은 ROR2, 예컨대 인간 ROR2의 존재 하에 감소된 신호 전달 또는 활성을 나타내어 상기 신호 전달 또는 활성이 인간 ROR1의 존재 하에 CAR의 신호 전달 또는 활성의 (약) 또는 30%, 20% 또는 10% 미만, 예컨대 (약) 10% 미만이다.
일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR을 발현하는 조작된 세포는, 입양 세포 요법을 위해 대상체에 투여된 경우, 개선된 생물학적 활성 또는 기능적 활성, 예컨대 항종양 활성, 종양 성장 억제, 종양 부피 감소, 지속성, 증폭 또는 대상체의 장기간 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR을 발현하는 조작된 세포는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 세포에 비해, 개선된 생물학적 활성 또는 기능적 활성, 예컨대 항종양 활성, 종양 성장 억제, 종양 부피 감소, 지속성, 증폭 또는 대상체의 장기간 생존을 나타낸다. 일부 구현예에서, 세포 독성 활성과 같은 키메라 수용체의 생물학적 활성 또는 기능적 활성은 다수의 공지된 방법 중 어느 하나를 사용하여 측정될 수 있다. 활성은 시험관 내 또는 생체 내에서 평가되거나 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 대상체(예를 들어, 인간)에 투여되자 마자 활성이 평가될 수 있다. 평가 파라미터는, 예를 들어 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 대한 조작된 또는 천연 T 세포 또는 기타 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은, 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 평가와 같은 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 특정 사이토카인, 예컨대 인터레쿠킨-2(interlekukin-2, IL-2), 인터페론-감마(IFNγ인터루킨-4(interleukin-4, IL-4), TNF-알파(TNFα), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-10(IL-10), 인터루킨-12(IL-12), 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF), CD107a 및/또는 TGF-베타(TGFβ의 발현 및/또는 분비를 평가함으로써 또한 측정될 수 있다. 사이토카인을 측정하는 평가는 널리 공지되어 있으며, ELISA, 세포 내 사이토카인 염색, 세포 계량 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 관련 사이토카인에 대해 반응하는 세포가 테스트 샘플의 존재 하에 반응성(예를 들어, 증식)이 테스트되는 생체 분석을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은, 질병 또는 병태의 동물 모델, 예컨대 종양 이종 이식 모델을 이용하고, 종양 부담 또는 부하의 감소 및/또는 생존을 평가하여 측정될 수 있다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR을 발현하는 조작된 세포의 투여는, 기준 CAR, 예컨대 항-ROR1 R12를 발현하는 조작된 세포의 투여에 비해, 실질적으로 개선된 종양 성장 억제, 생체 내 지속성 및/또는 종양을 앓는 대상체의 장기간 생존을 나타낸다. 일부 측면에서, 상기 개선은, 폐암, 유방암, 만성 림프구성 백혈병(CLL), 난소암 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)을 포함하나 이에 국한되지 않는 다양한 유형의 ROR1 발현 암을 앓는 대상체에서 관찰된다.
일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR을 발현하는 조작된 세포는, 입양 세포 요법을 위해 대상체에 투여된 경우, 개선된 지속성 및 증폭을 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR을 발현하는 조작된 세포는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체를 발현하는 조작된 세포에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 보다 높은 지속성 및 증폭을 나타낸다. 일부 측면에서, 임의의 제공된 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 조작된 세포의 증식, 증폭 및/또는 지속성은, 조작된 세포, 예를 들어 입양 세포 요법을 위해 투여된 세포의 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식을 결정함으로써 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 조작된 T 세포, 예를 들어 T 세포 기반 요법을 위해 투여된 T 세포 또는 이의 하위 세트, 예컨대 CD3+ 세포, CD4+ 세포, CD8+ 세포, CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 또는 CD8+ CAR+ 세포의 노출, 수 또는 수준이, 조작된 세포가 투여되었던 예를 들어 대상체, 예컨대 인간 대상체 또는 동물 대상체로부터 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 노출, 수, 농도, 지속성 및 증식은 약동학적 파라미터와 관련된다. 일부 경우에, 약동학은 투여 후, 최대(피크) 혈장 농도(Cmax), 피크 시간(즉 최대 혈장 농도(Cmax)가 발생할 때; Tmax), 최소 혈잘 농도(즉 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 용량 사이 최소 혈장 농도; Cmin), 반감기(T1/2)의 제거 및 곡선 하 면적(즉 치료제 CAR+ T 세포의 시간 대 혈장 농도를 플롯팅하여 생성된 곡선 하 면적; AUC)과 같은 상기 파라미터를 측정함으로서 평가될 수 있다. 투여 후 혈장에서 특정 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 농도는, 혈액 샘플에서 치료제, 예를 들어 CAR+ T 세포의 농도를 평가하기에 적합한 임의의 공지된 방법, 또는 여기 기재된 임의의 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 핵산 기반 방법, 예컨대 정량적 PCR(qPCR) 또는 유세포 분석 기반 방법 또는 기타 평가, 예컨대 면역 분석, ELISA, 또는 크로마토그래피/질량 분광 분석 기반 평가가 사용될 수 있다.
일부 측면에서, 리포터 세포주를 사용하여 항-ROR1 CAR 발현 세포를 통한 항원 비의존적 활성 및/또는 토닉 신호 전달을 모니터링할 수 있다. 일부 구현예에서, 쥬르카트(Jurkat) 세포주와 같은 T 세포주는 내인성 Nur77 전사 조절 요소의 제어 하에 발현된 레드 형광 단백질과 같은 형광 단백질 또는 기타 검출 가능한 분자와 같은 리포터 분자를 함유한다. 일부 구현예에서, Nur77 리포터 발현은 세포 내인성이며, T 세포에서 1차 활성화 신호를 함유한 재조합 리포터를 통한 신호 전달, T 세포 수용체(TCR) 구성 요소의 신호 전달 도메인 및/또는 CD3ζ 사슬과 같은 면역 수용체 티로신-기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한 신호 전달 도메인에 의존한다. Nur77 발현은 일반적으로, 세포 외인성 방식으로 작용할 수 있고 재조합 수용체를 통한 신호 전달에 의존하지 않을 수 있는, 사이토카인 신호 전달 또는 톨-유사 수용체(toll-like receptor, TLR) 신호 전달과 같은 다른 신호 전달 경로에 의해 영향을 받지 않는다. 따라서, 적절한 신호 전달 영역을 함유하는 외인성 재조합 수용체, 예를 들어 항-ROR1 CAR을 발현하는 세포만이 자극(예를 들어, 특이적 항원의 결합) 시 Nur77을 발현할 수 있다. 일부 경우에, Nur77 발현은 자극(예를 들어, 항원)량에 대해 용량 의존적 반응을 나타낼 수도 있다.
일부 경우에, 수용체, 예를 들어, CAR의 특정 활성, 신호 전달 또는 기능의 특이성, 교차 반응성 및/또는 항원 의존성을 평가하기 위해, 수용체의 활성, 신호 전달 또는 생물학적 기능을 평가하는 임의의 기재된 평가가, 특정 표적 항원, 예를 들어 인간 ROR1의 존재 및 부재 하에 또는 특정 표적 항원, 예를 들어 인간 ROR1의 존재 하에 및 상이한 비특이적 항원, 예를 들어 인간 ROR2 또는 비인간 ROR1, 예컨대 마우스 ROR1의 존재 하에 평가될 수 있다.
임의의 구현예 중 일부에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 ROR1 단백질, 예를 들어 인간 ROR1의 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도에 비해 ROR2 단백질, 예를 들어 인간 ROR2의 존재 하에서 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 예를 들어, 일부 측면에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 인간 ROR1의 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도를 인간 ROR2의 존재 하에 나타낸다.
임의의 구현예 중 일부에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 CAR에 비해 ROR2 단백질, 예를 들어 인간 ROR2의 존재 하에 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 임의의 구현예 중 일부에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 CAR에 비해 ROR2 단백질, 예를 들어 인간 ROR2의 존재 하에 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다. 임의의 구현예 중 일부에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 CAR에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 또는 보다 높은 항원 특이적 신호 전달 및/또는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다.
임의의 구현예 중 일부에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 CAR에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 예를 들어 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 CAR의 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달의 수준 또는 정도를 나타낸다.
일부 구현예에서, 제공된 항-ROR1 CAR은, 동일한 아미노산 서열을 가지나 제거된 비-스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되는 예컨대 대안적인 CAR과 비교하여 세포의 표면 상에서 개선된 발현을 나타낸다. 일부 구현예에서, 세포의 표면 상에서 재조합 수용체의 발현이 평가될 수 있다. 세포의 표면 상에 재조합 수용체의 발현을 결정하는 접근법은, CAR 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체(CAR) 특이적 항체(예를 들어, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38), Protein L (Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), 에피토프 태그 및 단클론 항체의 사용을 포함할 수 있다(국제 출원 WO2014190273 참조). 일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 1차 T 세포의 표면 상에서 재조합 수용체의 발현이, 검출될 수 있는 재조합 수용체 또는 이의 일부에 결합할 수 있는 결합 분자를 사용하여 예를 들어 유세포 분석에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 발현을 검출하는 데 사용되는 결합 분자는, 항-이디오타입 항체, 예를 들어 결합 도메인, 예를 들어 scFv 또는 이의 일부에 특이적인 항-이디오타입 작용제 항체이다. 일부 구현예에서, 결합 분자는 단리되거나 정제된 항원, 예를 들어 재조합으로 발현된 항원이거나 이를 포함한다.
E. 결합 분자를 암호화하는 폴리뉴클레오티드
결합 분자, 예컨대 항-ROR1 항체, 이의 항원 결합 단편, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 이의 일부, 예를 들어 이의 사슬 또는 단편을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오티드 중에는 여기에 기재된 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 것이 존재한다. 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어 골격 변형을 갖는 것을 포함하여 천연 및/또는 비천연 발생 뉴클레오티드 및 염기를 포괄하는 것을 포함할 수 있다. 용어 "핵산 분자(nucleic acid molecule)", "핵산(nucleic acid)", “뉴클레오티드 서열(sequence of nucleotides)”및 "폴리뉴클레오티드(polynucleotide)"는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오티드 중합체를 지칭한다. 상기 뉴클레오티드 중합체는 천연 및/또는 비천연 뉴클레오티드를 함유할 수 있으며, DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이에 국한되지 않는다. “핵산 서열(nucleic acid sequence)”은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선형 뉴클레오티드 서열을 지칭한다.
여기에 기재된 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 이의 임의의 부분, 단편, 사슬 또는 도메인 중 어느 하나를 암호화하는 핵산을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 다중 도메인 또는 사슬(예를 들어, 중쇄 및 경쇄)을 함유하고, 모든 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 하나의 폴리뉴클레오티드에 암호화된다. 여기 기재된 임의의 단일 사슬 세포 표면 단백질을 암호화하는 핵산을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 여기 기재된 임의의 접합체를 암호화하는 핵산을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 여기 기재된 임의의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체는 다중 도메인 또는 사슬(예를 들어, 중쇄 및 경쇄)을 함유하고, 모든 결합 분자는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드, 예컨대 2개 이상의 폴리뉴클레오티드에 암호화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 벡터에 포함된다.
일부 측면에서, 여기, 예를 들어 섹션 I.A 및 I.D에 제공된 임의의 결합 분자를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 여기, 예를 들어 섹션 I.A 및 I.D에 제공된 임의의 결합 분자의 일부, 단편, 사슬 또는 도메인을 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
일부 경우에, ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는, 일부 경우에 ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 핵산 서열의 상류에 암호화되거나 또는 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산 서열의 5' 말단에 연결된 신호 펩티드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 경우에, ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드는 신호 펩티드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩티드에서 유래된 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩티드를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적인 신호 펩티드는, 서열 번호: 44에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되거나 서열 번호: 43에 제시된 IgG 카파 사슬의 신호 펩티드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적인 신호 펩티드는, 서열 번호: 46에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고, 서열 번호: 45에 제시된 GMCSFR 알파 사슬의 신호 펩티드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적인 신호 펩티드는, 서열 번호: 47에 제시된 CD8 알파 신호 펩티드의 신호 펩티드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적인 신호 펩티드는, 서열 번호: 190에 제시된 뉴클레오티드 서열에 의해 암호화되고, 서열 번호: 42에 제시된 CD33 신호 펩티드의 신호 펩티드를 포함한다. 일부 경우에, ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오티드는, 대리 마커 또는 기타 마커와 같은 추가 분자를 암호화하는 핵산 서열을 함유할 수 있거나, 추가 구성 요소, 예컨대 프로모터, 조절 요소 및/또는 다중 시스트론 요소를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 핵산 서열은 임의의 추가 구성 요소에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 가변 중쇄 도메인(VH) 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 가변 경쇄 도메인(VL) 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 가변 중쇄 도메인(VH) 및 가변 경쇄 도메인(VL) 또는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 113, 122 또는 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113, 122 또는 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 113에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 119에 제시된 서열 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 122에 제시된 서열 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 101에 제시된 서열 또는 서열 번호: 101에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산을 함유한다. 일부 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 119에 제시된 서열 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 122에 제시된 서열 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 101에 제시된 서열 또는 서열 번호: 101에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 125에 제시된 서열 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 107에 제시된 서열 또는 서열 번호: 107에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 132에 제시된 서열 또는 서열 번호: 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 30에 제시된 서열 또는 서열 번호: 30에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 192에 제시된 서열 또는 서열 번호: 192에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 193에 제시된 서열 또는 서열 번호: 193에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 195에 제시된 서열 또는 서열 번호: 195에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다.
코돈 사용에 최적화되고/거나 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하도록 최적화된 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드가 변형되어 코돈 사용이 최적화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 인간 세포, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포에서 발현에 최적화된 코돈이다. 일부 구현예에서, 여기에 제공된 임의의 항체, 수용체(예컨대 키메라 항원 수용체와 같은 항원 수용체) 및/또는 ROR1 특이적 결합 단백질을 암호화하는 것과 같은 폴리뉴클레오티드는, 여기에서 관찰된(예컨대 최적화 방법에 의함) 하나 이상의 핵산 서열을 함유하거나 이질성이 감소되도록 변형되거나 변형되었어서, 최적화되지 않은 구별된 기준 서열을 함유하는 것과 비교하여 CAR과 같은 폴리펩티드의 개선된 특징을 초래한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 스플라이스 부위 제거에 의해 최적화된다. 상기 특징 중에는 하나 이상의 숨은 스플라이스 부위와 같은 하나 이상의 스플라이스 부위의 존재를 초래하는 것과 같은 RNA 이질성의 개선 및/또는 폴리펩티드를 발현하도록 조작된 상이한 치료 세포 조성물 또는 세포 중에서 발현의 증가된 수준, 균일성, 또는 일관성과 같은 암호화된 단백질의 개선된 발현 및/또는 표면 발현을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 인간 세포에서 발현에 최적화된 코돈일 수 있다.
게놈 핵산 서열은 일반적으로, 사실상, 포유류 세포에서, 전사 직후 또는 전사와 동시에 프로세싱을 거치고, 여기에서 게놈의 디옥시리보핵산(DNA) 서열에서 전사된 초기 전구체 메신저 리보핵산(pre-mRNA)은, 일부 경우에 스플라이싱을 통해 편집되어, 진핵 세포에서 인트론이 제거된 뒤, 엑손이 결찰된다. 스플라이스 부위에 대한 컨센서스 서열은 공지되어 있으나, 일부 측면에서, 스플라이스 부위를 정의하는 특정 뉴클레오티드 정보는 복잡할 수 있고 이용 가능한 방법에 근거하여 용이하게 명백하지 않을 수 있다. 숨은 스플라이스 부위는 표준 컨센서스 서열에 근거하여 예측되지 않고 다양하게 활성화되는 스플라이스 부위이다. 따라서, 숨은 스플라이스 부위에서 전-mRNA의 가변적인 스플라이싱은 진핵 세포에서 발현 시 전사된 mRNA 생성물의 이종성으로 이어진다.
전이 유전자의 발현을 위해 생성된 폴리뉴클레오티드는 전형적으로 인트론을 함유하지 않는 상보적 DNA(cDNA)와 같은 핵산 서열 또는 이의 일부로부터 작제된다. 따라서, 상기 서열의 스플라이싱이 일어나지 않을 것으로 예상된다. 그러나, cDNA 서열 내 숨은 스플라이스 부위의 존재는 전사된 mRNA에서 의도하지 않거나 바람직하지 않는 스플라이싱 반응 및 이질성으로 이어질 수 있다. 상기 이질성은 변형된 발현 및/또는 활성을 나타내는 가변 아미노산 서열을 가진 절단된 단백질 생성물과 같은 의도하지 않은 단백질 생성물의 번역을 초래한다.
일부 구현예에서, 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하면 전이 유전자 생성물, 예컨대 전이 유전자에서 번역된 폴리펩티드, 예컨대 항-ROR1 CAR 폴리펩티드의 발현을 개선 또는 최적화할 수 있다. 암호화된 ROR1 CAR 분자와 같은 암호화된 전이 유전자의 숨은 스플라이스 부위에서의 스플라이싱은 단백질 발현, 예를 들어 세포 표면 상의 발현 감소 및/또는 기능, 예를 들어 세포 내 신호 전달의 감소로 이어질 수 있다. 최적화되어 숨은 스플라이스 부위가 감소 또는 제거된 항-ROR1 CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 여기에 제공된다. 코돈 발현을 위해 최적화되었고/거나 스플라이스 부위에 관해 여기의 방법 또는 관찰에 의해 확인된 것과 같은 하나 이상의 서열이 존재하고/거나 여기에서 확인된 스플라이스 부위 중 어느 하나와 같은 확인된 스플라이스 부위가 존재하지 않는 항-ROR1 CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 여기에 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오티드 중에는 특정 조건 하에서 발현되고/거나 특정 세포 유형, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포 및 상기 폴리펩티드를 함유하고/거나 상기 특성을 나타내는 세포 및 조성물 및 제조 물품으로 도입될 때 특정 정도 미만의 RNA 이질성 또는 스플라이스 형태를 나타내는 것이 존재한다. 일부 구현예에서, 전사된 RNA의 RNA 이질성이, 스플라이스 부위가 제거되도록 변형되지 않았고/거나 코돈 최적화에 의해 변형되지 않은 폴리뉴클레오티드에 비해 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상을 초과하여 감소된다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오티드는, 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 이상인 전사된 RNA의 RNA 동질성을 나타낸다.
RNA 이질성은 여기에 제공되거나 기재되거나 공지된 다수의 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 전사된 핵산의 RNA 이질성은, 예컨대 역전사 효소 중합 효소 연쇄 반응(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)에 의해 전사된 핵산을 증폭한 후 하나 이상의 증폭된 생성물에서 크기 차이와 같은 하나 이상의 차이를 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, RNA 이질성은 상이한 크기의 증폭 생성물의 수 또는 다양한 상이한 크기의 증폭 생성물의 비율에 근거하여 결정된다. 일부 구현예에서, RNA, 예컨대 총 RNA 또는 세포질의 폴리아데닐화된 RNA는, 일부 경우에 전사된 RNA에 있는 전이 유전자의 상류에 위치한 발현 벡터에서 프로모터 서열의 일부에 대응하는 5' 비번역 영역(5′UTR)에 특이적인 프라이머 및 전사된 RNA 서열에 있는 발현된 전이 유전자의 하류에 위치한 3' 비번역 영역(3′UTR)에 특이적인 프라이머 또는 전이 유전자 내의 서열에 특이적인 프라이머를 사용하여 역전사 효소 중합 효소 연쇄 반응(RT-PCR)에 의해 증폭되고 최적화된 전이 유전자를 발현하는 세포에서 수확된다. 특정 구현예에서, 5' 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머 및 3' 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머가 사용되어 전이 유전자가 증폭된다. 메신저 RNA와 같은 RNA가 분석될 수 있고, 몇몇 방법에 의해 이의 이질성이 분석될 수 있다. 비제한적인 예시적인 방법은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 원심 분리, 장흐름 분획법 및 크기 배제 크로마토그래피 또는 액체 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피를 포함한다.
일부 구현예에서, 여기 제공된 항-ROR1 CAR 또는 여기 제공된 작제물을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오티드는, 스플라이스 이벤트 및/또는 발현의 감소 및/또는 RNA 이질성의 증가에 기여할 수 있는 하나 이상의 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위를 제거하는 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 폴리뉴클레오티드는 스페이서 영역의 하나 이상의 폴리뉴클레오티드에서 변형되어 스플라이스 이벤트가 제거 또는 감소된다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 111에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 120에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 123에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 102에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 105에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 129에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 131에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 126에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 108에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 133에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 136에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 139에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 196에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 함유한다.
ROR1에 특이적인 예시적인 키메라 항원 수용체(CAR) 및 여기 기재된 임의의 예시적인 CAR의 모든 또는 일부, 단편, 도메인 또는 사슬을 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 예시적인 CAR은 섹션 I.A 및/또는 표 2에 기재된 것과 같은 ROR1 결합 항체 단편 중 하나를 함유한다. 일부 구현예에서, 예시적인 CAR은 표 E1 및/또는 표 3의 각 열에 기재된 것 중에 존재한다. CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 여기에 또한 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 하나 이상의 상이한 폴리뉴클레오티드, 예컨대 2개 이상의 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화될 수 있다. 상기 임의의 구현예 중 일부에서, 2개 이상의 폴리뉴클레오티드는 CAR의 일부, 단편, 도메인 또는 사슬을 암호화하는 핵산을 각각 함유할 수 있다.
코돈 최적화(O) 및/또는 스플라이스 부위 제거(splice site elimination, SSE)를 위해 변형된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 예시적인 변형된 폴리뉴클레오티드가 여기에 또한 제공된다. 상기 폴리뉴클레오티드에 대한 서열 번호의 예가 표 3에 제시되고, 여기에서 스플라이스 부위 제거 및 코돈 최적화 전(N/O)에 예시적인 CAR 작제물의 구성 요소에 대한 예시적인 뉴클레오티드(nt) 서열, 스플라이스 부위 제거 및 최적화 후(O/SSE)에 CAR 작제물의 구성 요소에 대한 핵산(nt) 서열 및 핵산 서열에 의해 암호화된 대응하는 아미노산(aa) 서열이 제공된다. 구성 요소는 항-ROR1 scFv, 스페이서, 막관통(transmembrane, tm) 도메인, 4-1BB 공자극 신호 전달 영역 서열(costim), CD3ζ 신호 전달 도메인(CD3ζ)을 포함한다. 스플라이스 부위 제거 및 최적화(CAR) 후에 예시적인 CAR의 전체 서열이 또한 제공된다. 일부 경우에, 폴리뉴클레오티드는 CD33 신호 서열(signal sequence, ss), T2A 리보솜 건너뛰기 요소(T2A) 및 절단형 EGF 수용체(EGFRt) 서열을 또한 포함한다. 예시적인 CAR의 폴리뉴클레오티드 서열이 서열 번호: 184-189에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는 서열 번호: 156-1612에 제시된다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156에 제시된 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 157에 제시된 서열 또는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 157에 제시된 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 158에 제시된 서열 또는 서열 번호: 158에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 158에 제시된 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 159에 제시된 서열 또는 서열 번호: 159에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 159에 제시된 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 160에 제시된 서열 또는 서열 번호: 160에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 160에 제시된 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 161에 제시된 서열을 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 184에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 184에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 184에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 185에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 185에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 185에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 186에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 186에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 186에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 187에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 187에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 187에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 188에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 188에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 188에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 189에 제시된 서열을 암호화하는 핵산 또는 서열 번호: 189에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리펩티드 서열을 암호화하는 서열을 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 189에 제시된 서열을 암호화하는 핵산을 함유한다.
[표 3]
Figure pct00004
Figure pct00005
II. 조작된 세포
여기에 기재된 바와 같은 항-ROR1 항체 또는 단편을 포함하는 세포 외 도메인을 함유하는 것과 같은 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)를 함유하는 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 예컨대 ROR1 결합 분자를 발현하는 세포가, 특정 유형의 세포, 예컨대 T 세포 또는 CD8+ 또는 CD4+ 세포 또는 조성물에서 총 세포 중 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 이상의 백분율을 이루는 상기 세포 집단, 상기 세포를 함유하고/거나 상기 세포로 농축된 조성물이 또한 제공된다. 조성물 중에는 예컨대 입양 세포 요법을 위한 약학 조성물 및 투여용 제형이 존재한다. 대상체, 예를 들어 환자에 세포 및 조성물을 투여하는 치료 방법이 또한 제공된다.
따라서 항체를 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작 세포, 예를 들어 CAR을 함유하는 세포가 또한 제공된다. 세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 전형적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 기관에서 유래되며, 선천적 또는 적응성 면역 세포와 같은 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 전형적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 기타 예시적인 세포는 유도된 다능성 줄기 세포(iPSC)를 포함한, 다능성 및 다분화능 줄기 세포와 같은 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 대상체에서 직접 단리되고/거나 대상체에서 단리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는, T 세포 또는 기타 세포 유형의 하나 이상의 하위 세트, 예컨대 전체 T 세포 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 증폭, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 용량, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것을 포함한다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종 이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 방법 중에는 기성품 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 기성품 기술의 경우, 세포는 다능성 및/또는 다분화능, 예컨대 줄기 세포, 예컨대 유도된 다능성 줄기 세포(iPSC)이다. 일부 구현예에서, 방법은 여기에 기재된 바와 같이 대상체에서 세포를 단리하고, 세포를 제조, 프로세싱, 배양 및/또는 조작하고, 동결 보존 전 또는 후에 동일한 환자에게 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위 유형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(TN) 세포, 이펙터 T 세포(TEFF), 기억 T 세포 및 이의 하위 유형, 예컨대 줄기 세포 기억 T(TSCM), 중앙 기억 T(TCM), 이펙터 기억 T(TEM) 또는 말단 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 관련 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 존재한다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살해(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 폴리뉴클레오티드를 포함하여 상기 폴리뉴클레오티드의 재조합 또는 유전적으로 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 이종 기원, 즉 예를 들어, 조작될 세포 및/또는 상기 세포가 유래한 유기체에서 보통 발견되지 않는 또 다른 유기체 또는 세포에서 수득된 것과 같이 세포 또는 세포에서 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는, 상이한 다중 세포 유형 유래 다양한 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한 자연에서 발견되지 않는 폴리뉴클레오티드과 같이 자연적으로 발생하지 않는다. 일부 구현예에서, 세포(예를 들어, 조작된 세포)는 여기에 기재된 재조합 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터와 같이 여기에 기재된 바와 같은 벡터(예를 들어, 바이러스 벡터, 발현 벡터 등)를 포함한다.
A. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어, 사슬을 암호화하는 핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드가 또한 제공된다. 제공된 핵산 중에는 여기에 기재된 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 암호화하는 것이 존재한다. 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부를 암호화하는 핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 여기에 기재된 하나 이상의 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 및/또는 다른 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 다른 표적 항원에 결합하는 항체 및/또는 이의 일부를 암호화하는 것이 또한 제공된다. 결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 포함하는 결합 분자(예를 들어, 항-ROR1 결합 분자)를 발현시키기 위한 및 상기 결합 분자를 발현하는 유전자 조작된 세포를 생산하기 위한 방법, 핵산, 조성물 및 키트가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 포함하는 하나 이상의 결합 분자가 세포 또는 복수의 세포로 유전자 조작될 수 있다. 유전자 조작은 일반적으로, 예컨대 레트로바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해 재조합 또는 조작된 구성 요소를 암호화하는 핵산을 세포 내로 도입시키는 것을 수반한다.
핵산은, 예를 들어 골격 변형을 갖는 것을 포함하여 천연 및/또는 비천연 발생 뉴클레오티드 및 염기를 포괄하는 것을 포함할 수 있다. 용어 "핵산 분자(nucleic acid molecule)", "핵산(nucleic acid)" 및 "폴리뉴클레오티드(polynucleotide)"는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오티드 중합체를 지칭한다. 상기 뉴클레오티드 중합체는 천연 및/또는 비천연 뉴클레오티드를 함유할 수 있으며, DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이에 국한되지 않는다. “핵산 서열(nucleic acid sequence)”은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 선형 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 일부 측면에서, 여기 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 scFv, 접합체, 수용체(예를 들어, CAR) 중 적어도 일부를 암호화하는 핵산 서열은, 인간 세포에서 발현을 위해 최적화, 예를 들어 코돈 최적화될 수 있고/거나 최적화되어 숨은 스플라이스 부위가 감소 또는 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는, 하나 이상의 추가 분자, 예컨대 마커 또는 프로모터, 조절 요소 및/또는 다중 시스트론 요소를 암호화하는 것과 같은 하나 이상의 추가 서열을 또한 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 폴리뉴클레오티드는 여기, 예를 들어, 섹션 I.E에 기재된 임의의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터 및 예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하기 위한 벡터를 함유하는 숙주 세포가 또한 제공된다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 생성하는 방법이 또한 제공된다. 핵산은 항체(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 핵산은 항체(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VL 영역을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드는, 임의의 순서 또는 방향으로 항체의 하나 이상의 VH 영역 및/또는 하나 이상의 VL 영역을 암호화한다. 일부 구현예에서, 핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드는 VH 영역 및 VL 영역을 암호화하고, VH 영역에 대한 코딩 서열은 VL 영역에 대한 코딩 서열의 상류에 존재한다. 일부 구현예에서, 핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드는 VH 영역 및 VL 영역을 암호화하고, VL 영역에 대한 코딩 서열은 VH 영역에 대한 코딩 서열의 상류에 존재한다.
핵산, 예를 들어 폴리뉴클레오티드를 함유하는 벡터, 및 벡터를 함유하는 조작된 세포, 예를 들어 재조합 수용체와 같은 결합 분자를 발현하는 조작된 면역 세포가 또한 제공된다. 항-ROR1 결합 분자, 예컨대 재조합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하도록 세포, 예컨대 면역 세포를 조작하는 방법이 또한 제공된다. 핵산은, 세포 외 항원 결합 도메인으로서 항체(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열; 막관통 도메인 및 세포 내 도메인, 예컨대 CD3 제타 및 공자극 신호 전달 도메인을 암호화할 수 있다.
추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 상기 일 구현예에서, 숙주 세포는, 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다(예를 들어, 상기 벡터로 형질 전환되었다). 상기 또 다른 구현예에서, 숙주 세포는, (1) 항체의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 및 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터 또는 (2) 항체의 VL 영역을 포함하는 아미노산 서열 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항체의 VH 영역을 포함하는 아미노산 서열을 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다(예를 들어, 상기 벡터로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 숙주 세포는, 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 이의 항원 결합 단편을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함한다(예를 들어, 상기 벡터로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 숙주 세포는 상이한 항체 또는 동일한 항체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 숙주 세포는 하나 이상의 항체를 발현할 수 있다.
항-ROR1 키메라 항원 수용체를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생성을 위해, 예를 들어 여기에 기재된 바와 같이 키메라 수용체 항체를 암호화하는 핵산 서열이, 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은, 통상적인 절차(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)를 이용하여 용이하게 단리 및 염기 서열 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 키메라 항원 수용체의 제조 방법이 제공되며, 여기에서 상기 방법은 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 상기 제공된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
항-ROR1 항체(항원 결합 단편 포함)를 제조하는 방법도 제공된다. 항-ROR1 항체의 재조합 생성을 위해, 예를 들어 상기 기재된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산 서열 또는 폴리뉴클레오티드가, 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은, 통상적인 절차(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브 사용)를 이용하여 용이하게 단리 및 염기 서열 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-ROR1 항체의 제조 방법이 제공되며, 여기에서 상기 방법은, 항체의 발현에 적합한 조건 하에서 상기 제공된 바와 같은 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계 및 선택적으로 숙주 세포(또는 숙주 세포 배양 배지)에서 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
원핵 생물뿐만아니라 사상 진균 또는 효모와 같은 진핵 생물 미생물은, 이의 글리코실화 경로가 인간 세포에서의 경로와 유사하거나 이를 모방하도록 변형되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생성을 초래하는 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체 암호화 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 문헌[Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
폴리펩티드를 발현하는 데 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는, COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S, DG44. Lec13 CHO 세포 및 FUT8 CHO 세포를 포함하는 CHO 세포; PER.C6®세포; 및 NSO 세포를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)가 효모에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 문헌[미국 출원 공개 번호 US 2006/0270045 A1]을 참조한다. 일부 구현예에서, 특정 진핵 생물 숙주 세포가, 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)에 대해 바람직한 번역 후 변형을 가할 수 있는 능력에 근거하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CHO 세포는, 293 세포에서 생성된 동일한 폴리펩티드보다 더 높은 수준의 시알릴화를 갖는 폴리펩티드를 생성한다.
일부 구현예에서, 여기 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 무세포 시스템에서 생성된다. 예시적인 무세포 시스템이, 예를 들어 문헌[Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 기재되어 있다.
제공된 구현예는, 무세포 발현 시스템뿐만아니라 인간 세포와 같은 포유 동물 세포뿐만아니라 세균, 사상균 및 효모를 포함한 진핵 생물 및 원핵 생물 숙주 세포를 포함하는 항체 및 기타 항원 결합 단백질을 발현 및 생성하기 위한 벡터 및 숙주 세포 및 기타 발현 시스템을 더 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 전달은, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현 뒤 활성화된 세포의 형질 도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서의 증폭에 의해 측정된 바와 같이, 먼저 세포를 자극함으로써, 예컨대 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 이를 조합함으로써 달성된다.
일부 상황에서, 자극 인자(예를 들어, 림포카인 또는 사이토카인)의 과발현은 대상체에게 유독할 수 있다. 따라서, 일부 상황에서, 조작된 세포는 예컨대 입양 면역 요법에서 투여 시 생체 내에서 세포를 음성 선택에 취약하게 하는 유전자 세그먼트를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 세포는 이들이 투여되는 환자의 생체 내 조건의 변화의 결과로서 제거될 수 있도록 조작된다. 음성 선택 가능한 표현형은, 투여된 제제, 예를 들어 화합물에 대한 민감성을 부여하는 유전자의 삽입을 초래할 수 있다. 음성 선택 가능한 유전자는, 간시클로비르(ganciclovir) 민감성을 부여하는 헤르페스 심플렉스 바이러스 유형 I 티미딘 인산화효소(HSV-I TK) 유전자(Wigler et al., Cell 2:223, 1977); 세포성 하이포잔틴 포스포리보실 전이 효소(hypoxanthine phosphoribosyltransferase, HPRT) 유전자, 세포성 아데닌 포스포리보실 전이 효소(adenine phosphoribosyltransferase, APRT) 유전자, 세균성 시토신 디아미나제(Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992))를 포함한다.
일부 측면에서, 세포가 더 조작되어 사이토카인 또는 기타 인자의 발현이 촉진된다. 유전자 조작된 구성 요소, 예를 들어, 항원 수용체, 예를 들어, CAR의 도입을 위한 다양한 방법이 잘 알려져 있고, 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은. 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질 도입, 트랜스포손 및 전기 천공을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드의 전달을 위한 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드는, 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV)에서 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포 내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드는, 재조합 렌티바이러스 벡터, 예컨대 HIV-1 렌티바이러스 기반 벡터(렌티벡터; 예를 들어, 문헌[Amado et al., Science. 1999 Jul 30;285(5428):674-676] 참조) 또는 레트로바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로바이러스 벡터(예를 들어, 문헌[Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557] 참조)를 사용하여 T 세포 내로 전달된다.
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(long terminal repeat, LTR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 벡터는, 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(Moloney murine leukemia virus, MoMLV), 골수 증식 육종 바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아 줄기 세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기 세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV), 비장 초점 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV), 인간 면역 결핍 바이러스 유형 1(human immunodeficiency virus type 1, HIV-1) 또는 인간 면역 결핍 바이러스 유형 2(HIV-2/SIV)에서 유래된다. 일부 구현예에서, 벡터는 자가 비활성화(self-inactivating, SIN)된다. 일부 구현예에서, 벡터는 조건부로 복제하는(동원 가능한) 벡터이다. 대부분의 렌티바이러스 벡터는 인간, 고양이 또는 시미안 렌티바이러스에서 유래된다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스에서 유래된다. 일부 구현예에서, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유 동물 세포 출처에서 유래된 것을 포함한다. 렌티바이러스 또는 레트로바이러스는 전형적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽(amphotropic)이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 렌티바이러스 형질 도입 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이, 예를 들어 문헌[Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505]에 기재되어 있다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 시스템이 예를 들어, 문헌[Amado et al., (1999) Science 285(5428):674-676, U.S. Pat. Nos. 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109]에 또한 기재되었다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드가 전기 천공을 통해 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌[Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437] 참조). 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오티드가 전위를 통해 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌[Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126] 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입 및 발현시키는 기타 방법은, 인산칼슘 형질 감염(예를 들어, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.]에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜 매개 형질 감염; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 인산 스트론튬 DNA 공침전(Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다. 재조합 생성물을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 전달을 위한 기타 접근법 및 벡터는, 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 것이다.
추가 폴리뉴클레오티드 중에, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예컨대 전달된 세포의 생존 능력 및/또는 기능을 촉진함으로써 요법의 결과를 향상시키는 유전자; 세포의 평가 및/또는 선택을 위한 유전자 마커를 제공하여 예컨대 생체 내에서 생존 또는 국소화를 평가하는 유전자; 예를 들어 문헌[Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); 또한 음성 선택 가능한 마커와 양성 선택 가능한 우성 마커의 융합에서 유래된 2작용성 선택 가능한 융합 유전자의 용도를 기재하는 국제 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton et al. 참조]에 기재된 바와 같이 생체 내에서 음성 선택에 세포를 취약하게 만들어 안정성을 향상시키는 유전자;가 존재한다. 예를 들어, 문헌[Riddell et al., 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17 열]을 참조한다.
일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물이 프로모터 및/또는 인핸서 또는 조절 요소를 함유하여 암호화된 재조합 수용체의 발현을 조절할 수 있다. 일부 예에서, 프로모터 및/또는 인핸서 또는 조절 요소는 조건 의존적인 프로모터, 인핸서 및/또는 조절 요소일 수 있다. 일부 예에서, 상기 요소가 전이 유전자의 발현을 구동한다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는, HTLV1 인핸서(서열 번호: 164)를 갖는 EF1알파 프로모터와 같은 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는, 전이 유전자의 하류에 위치한 우드척 간염 바이러스(Woodchuck Hepatitis Virus, WHP) 전사 후 조절 요소(WPRE; 서열 번호: 165)에 작동 가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동하는 단일 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 핵산 분자, 예를 들어, 전사체는 다중 시스트론(이중 시스트론 또는 삼중 시스트론, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,060,273 참조)일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터의 메시지에 의해 유전자 생성물(예를 들어, 제1 및 제2 키메라 수용체를 암호화)의 공발현을 허용하는 IRES(internal ribosome entry site, 내부 리보솜 진입 부위)를 함유하는 이중 시스트론 단위로 조작될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은, 단일 프로모터의 조절 하에 IRES에 의해 분리된 여기 제공된 항-ROR1 수용체(예를 들어, 항-ROR1 CAR)를 암호화하는 핵산 및 상이한 분자를 암호화하는 핵산을 함유할 수 있다.
대안적으로, 일부 경우에, 단일 프로모터가, 단일 오픈 리딩 프레임(open reading frame, ORF)에 자가 절단 펩티드(예를 들어, 2A 절단 서열) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어, 푸린)를 암호화하는 서열에 의해 서로 분리된, 2개 또는 3개의 유전자(예를 들어, 제1 및 제2 결합 분자, 예를 들어 항체 재조합 수용체를 암호화)를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서, ORF는, 번역 중(T2A의 경우) 또는 번역 후에 개별적인 단백질로 절단되는 단일 폴리펩티드를 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩티드는, 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩티드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 건너뛰기) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 하류의 다음 펩티드 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, 문헌[de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 de Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)] 참조). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 여기에 개시된 방법 및 폴리뉴클레오티드에 사용될 수 있는 2A 서열의 예는, 비제한적으로, 문헌[미국 특허 공개 번호 20070116690]에 기재된 바와 같은 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열번호: 21 또는 168), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열번호: 20 또는 167), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열번호: 6, 17 또는 166) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열번호: 18 또는 19) 유래 2A 서열이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상이한 또는 분리된 프로모터가, 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동한다.
여기에 제공된 임의의 재조합 수용체, 예를 들어, 항-ROR1 재조합 수용체 및/또는 추가의 재조합 수용체는, 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 임의의 조합 또는 배열로 함유하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 1개, 2개, 3개 이상의 폴리뉴클레오티드는 1개, 2개, 3개 이상의 상이한 수용체 또는 도메인을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 벡터 또는 작제물이 하나 이상의 재조합 수용체(들)를 암호화하는 핵산 분자를 함유하고, 별도의 벡터 또는 작제물은 추가 결합 분자, 예를 들어, 항체 및/또는 재조합 수용체, 예컨대 항-ROR1 수용체(예를 들어, 항-ROR1 CAR)를 암호화하는 핵산 분자를 함유한다.
일부 구현예에서, 핵산 분자는, 수용체를 발현하는 세포의 형질 도입 또는 조작을 확인하는 데 사용될 수 있는 하나 이상의 대리 마커(들), 예컨대 형광 단백질(예를 들어, 그린 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP)) 또는 세포 표면 마커(예를 들어, 절단형 표면 마커, 예컨대 절단형 EGFR(tEGFR))를 또한 암호화할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 외인성 마커 유전자는, 조작된 세포 요법과 관련하여 사용되어 세포의 검출 또는 선택을 가능하게 하고, 일부 경우에는 ADCC에 의한 세포 자살을 또한 촉진한다. 예시적인 마커 유전자는, 형질 도입된 세포에서 관심 전이 유전자(예를 들어, CAR 또는 TCR)와 함께 공발현될 수 있는 절단형 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFRt)를 포함한다(예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®에 의해 인식되는 에피토프를 함유한다. 상기 이유로 Erbitux®를 사용하여 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 또 다른 재조합 수용체와 함께 공-조작된 세포를 또한 포함하여 EGFRt 작제물로 조작된 세포를 확인하거나 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 결합 분자를 암호화하는 핵산은 하나 이상의 마커(들)를 암호화하는 핵산 서열을 더 함유한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 마커(들)는 형질 도입 마커, 대리 마커 및/또는 선택 마커이다.
일부 구현예에서, 마커는 형질 도입 마커 또는 대리 마커이다. 형질 도입 마커 또는 대리 마커가 사용되어 폴리뉴클레오티드, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 도입된 세포를 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 형질 도입 마커는 세포의 변형을 나타내거나 확인해 줄 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커는, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR과 함께 세포 표면 상에 공발현되도록 제조된 단백질이다. 특정 구현예에서, 상기 대리 마커는 거의 또는 전혀 활성을 갖지 않도록 변형된 표면 단백질이다. 특정 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체를 암호화하는 동일한 폴리뉴클레오티드 상에 암호화된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은, 선택적으로 내부 리보솜 진입 부위(IRES) 또는 자가 절단 펩티드 또는 2A 서열, 예컨대, T2A, P2A, E2A 또는 F2A와 같은 리보솜 건너뛰기를 야기하는 펩티드를 암호화하는 핵산에 의해 분리된, 마커를 암호화하는 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된다. 외인성 마커 유전자가 일부 경우에 조작된 세포와 관련하여 사용되어, 세포의 검출 또는 선택을 가능하게 할 수 있고, 일부 경우에 세포의 자살을 또한 촉진할 수 있다.
예시적인 대리 마커는, 세포 표면 폴리펩티드의 절단 형태, 예컨대 비기능적이며 전장 형태의 세포 표면 폴리펩티드에 의해 전달되는 신호 또는 이에 의해 일반적으로 전달되는 신호를 전달하지 않거나 전달할 수 없고/거나 내재화되지 않거나 내재화될 수 없는 절단 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절단형 세포 표면 폴리펩티드는, 성장 인자 또는 기타 수용체의 절단 형태, 예컨대 절단형 인간 표피 성장 인자 수용체 2(truncated human epidermal growth factor receptor 2, tHER2), 절단형 표피 성장 인자 수용체(tEGFR, 서열 번호: 7, 16 또는 153에 제시된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선 특이적 막 항원(prostate-specific membrane antigen, PSMA) 또는 이의 변형 형태를 포함한다. tEGFR은, 항체 세툭시맙(Erbitux®또는 기타 치료용 항-EGFR 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 함유할 수 있으며, 이는 tEGFR 작제물 및 암호화된 외인성 단백질로 조작된 세포를 확인 또는 선택 및/또는 암호화된 외인성 단백질을 발현하는 세포를 제거 또는 분리하는 데 사용될 수 있다. 문헌[미국 특허 번호 8,802,374 및 Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434]을 참조한다. 일부 측면에서, 마커, 예를 들어, 대리 마커는, CD34의 전부 또는 일부(예를 들어, 절단 형태), NGFR, CD19 또는 절단형 CD19, 예를 들어 절단형 비-인간 CD19 또는 표피 성장 인자 수용체(예를 들어, tEGFR)를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는, 형광 단백질, 예컨대 그린 형광 단백질(green fluorescent protein, GFP), 강화된 그린 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein, EGFP), 예컨대 슈퍼-폴드 GFP(super-fold GFP, sfGFP), 레드 형광 단백질(red fluorescent protein, RFP), 예컨대 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질(cyan fluorescent protein, CFP), 블루 그린 형광 단백질(blue green fluorescent protein, BFP), 강화된 블루 형광 단백질(enhanced blue fluorescent protein, EBFP) 및 옐로우 형광 단백질(yellow fluorescent protein, YFP) 및 형광 단백질의 종 변이체, 단량체 변이체 및 코돈-최적화 및/또는 강화된 변이체를 포함한 이의 변이체이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 효소, 예컨대 루시퍼라제, 대장균 유래 lacZ 유전자, 알칼리 포스파타제, 분비 배아 알칼리 포스파타제(secreted embryonic alkaline phosphatase, SEAP), 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제(chloramphenicol acetyl transferase, CAT)이거나 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자는 루시퍼라제(luciferase, luc), β갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸트랜스퍼라제(CAT), β글루쿠로니다제(βGUS) 또는 이의 변이체를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 선택 마커이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 외인성 제제 또는 약물에 대한 내성을 부여하는 폴리펩티드이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 포유 동물 세포에 대해 항생제 내성을 부여하는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선택 마커는 퓨로마이신 내성 유전자, 히그로마이신 내성 유전자, 블라스티사이딘 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 게네티신 내성 유전자 또는 제오신 내성 유전자 또는 이의 변형 형태이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커를 암호화하는 핵산은, 링커 서열, 예컨대 절단 가능한 링커 서열, 예를 들어 T2A를 암호화하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하게 연결된다. 예를 들어, 마커 및 선택적으로 링커 서열은 문헌[PCT 공개 번호 WO2014031687]에 개시된 바와 같은 어느 하나일 수 있다. 예를 들어, 마커는 링커 서열, 예컨대 T2A 절단 가능한 링커 서열에 선택적으로 연결된 절단형 EGFR(tEGFR)일 수 있다. 절단형 EGFR(예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩티드는, 서열 번호: 7, 16 또는 153에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7, 16 또는 153에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 분자, 예를 들어 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포 표면 상에서 자연적으로 발견되지 않는 세포 표면 단백질 또는 이의 일부이다.
일부 구현예에서, 분자는 비자기 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 “자기(self)”로 인식되지 않는 것이다.
일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않고/거나 유전자 조작, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 마커로서 사용되는 것이 아닌 다른 어떠한 효과도 생성하지 않는다. 기타 구현예에서, 마커는 치료 분자 또는 그렇지 않으면 일부 바람직한 효과를 나타내는 분자, 예컨대 생체 내에서 세포가 조우하게 될 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우 시 세포의 반응을 강화하고/거나 약화시키는 공자극 또는 면역 체크 포인트 분자일 수 있다.
상기 기재된 어느 하나와 같은 핵산 분자, 벡터 또는 작제물 중 하나 이상을 함유하는 조성물이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 핵산 분자, 벡터, 작제물 또는 조성물이 사용되어 임의의 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 재조합 수용체 및/또는 추가의 결합 분자를 발현하도록 T 세포와 같은 세포가 조작될 수 있다.
B. 조작을 위한 세포의 제조
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 도입을 위한 세포는, 샘플, 예컨대 생물학저 샘플, 예를 들어 대상체에서 수득되거나 유래된 샘플에서 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는, 질병 또는 병태를 갖거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 특정 치료적 개입, 예컨대 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법이 필요한 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 일차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플은, 대상체에서 직접 채취한 조직, 유체 및 기타 샘플뿐만아니라 분리, 원심분리, 유전적 조작(예를 들어 바이러스 벡터로 형질 도입), 세척 및/또는 인큐베이션과 같은 하나 이상의 프로세싱 단계에서 생성된 샘플을 포함한다. 생물학적 샘플은, 생물학적 출처에서 직접 수득된 샘플 또는 프로세싱된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플은, 체액, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 기관 샘플 (이로부터 유래된 프로세싱된 샘플 포함)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술 생성물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플은, 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 내장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 기관 및/또는 이로부터 유래된 세포를 포함한다. 샘플은, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 상황에서 자가 및 동종이계 출처의 샘플을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주에서 유래된다. 일부 구현예에서, 세포는 이종성 출처, 예를 들어 마우스, 래트, 비인간 영장류 또는 돼지에서 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화도 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심 분리 및/또는 인큐베이션되어, 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용해시키거나 제거한다. 일부 예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예컨대 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 내성에 근거하여 분리된다.
일부 예에서, 대상체의 순환 혈액의 세포가 예를 들어, 성분 채집술 또는 백혈구 성분 채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 샘플은, T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 핵 형성 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판이 아닌 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체에서 수집된 혈액 세포는 세척되어, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 프로세스 단계를 위한 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 둔다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조사의 지침에 따라 반자동 "플로우-쓰루(flow-through)" 원심 분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조사의 지침에 따라 접선 흐름 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후, 예를 들어 Ca++/Mg++이 없는 PBS와 같은 다양한 생체 적합성 완충제에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고, 세포는 배양 배지에서 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 방법은 적혈구를 용해시키고 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심 분리에 의해 말초 혈액에서 백혈구를 준비하는 것과 같은 밀도 기반 세포 분리 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은, 표면 마커, 예를 들어, 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 근거한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 마커에 근거한 분리를 위한 공지된 임의의 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역 친화도 기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리는, 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 세포의 발현 또는 발현 수준에 근거하여, 예를 들어 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너에 결합한 세포의 세척 단계 및 분리에 의한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함한다.
상기 분리 단계는, 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 유지되는 음성 선택에 근거할 수 있다. 일부 예에서, 두 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이하게 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 분리는 원하는 집단이 아닌 세포에 의해 발현된 마커에 근거하여 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 마커를 발현하는 특정 세포 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거를 초래할 필요가 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은, 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 초래할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은, 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 상기 모든 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다.
일부 예에서, 복수 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거친다. 일부 예에서, 단일 분리 단계가, 예컨대 음성 선택을 위해 표적화된 마커에 대해 각각 특이적인 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 복수의 마커를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다중 세포 유형이, 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, T 세포의 특정 하위 집단, 예컨대 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+ T 세포를 높은 수준으로 발현하거나 이에 대해 양성인 세포가, 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포가, 항-CD3/항-CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T 세포 증폭기, MACSiBeads™등)를 사용하여 양성으로 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는, 양성 선택에 의해 특정 세포 집단에 대한 농축 또는 음성 선택에 의해 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은, 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 발현(마커+)되거나 상대적으로 보다 높은 수준으로(마커고) 발현된 하나 이상의 표면 마커에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 기타 결합제와 세포를 인큐베이션함으로써 달성된다.
일부 구현예에서, T 세포는, B 세포, 단핵구 또는 다른 백혈구, 예컨대 CD14와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 마커의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플에서 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계가 사용되어 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포가 분리된다. 상기 CD4+ 및 CD8+ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 이펙터 T 세포 하위 집단에서 발현되거나 상대적으로 보다 높은 정도로 발현된 마커에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 더 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는, 예컨대 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 근거한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 이펙터 기억 및/또는 중앙 기억 줄기 세포로 더 농축되거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축이 수행되어 특정 특징의 증가, 예컨대 투여 후 장기간 생존, 증폭 및/또는 생착이 개선되며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다(문헌[Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701] 참조). 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포와 CD4+ T 세포의 결합은 반응을 더욱 향상시킨다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 하위 세트 모두에 존재한다. PBMC는, 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획이 농축되거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현에 근거하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 많이 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 근거한다. 일부 측면에서, TCM 세포로 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 근거하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 근거한 음성 선택 및 CD62L에 근거한 양성 선택의 대상이 된다. 일부 측면에서, 상기 선택은 동시에 수행되며 다른 측면에서 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포 집단 또는 하위 집단을 제조하는 데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계가 CD4+ 세포 집단 또는 하위 집단을 생성하는 데 또한 사용되어, CD4 기반 분리의 양성 및 음성 분획 둘 다가 보유되고, 선택적으로 하나 이상의 추가 양성 또는 음성 선택 단계 후, 후속 단계의 방법에 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플이 CD4+ 세포의 선택의 대상이 되고, 여기에서 음성 및 양성 분획 둘 다가 보유된다. 이어서 음성 분획이 CD14 및 CD45RA의 발현에 근거한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포에 특징적인 마커에 근거한 양성 선택의 대상이 되고, 여기에서 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인함으로써 나이브, 중앙 기억 및 이펙터 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너가 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합되어 양성 및/또는 음성 선택에 대한 세포 분리를 허용한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단이 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기술(문헌[Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒHumana Press Inc., Totowa, NJ]에서 검토됨)을 사용하여 분리되거나 단리된다.
일부 측면에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물이 작고, 자화 가능 또는 자성 반응 물질, 예컨대 자성 반응 입자 또는 미세입자, 예컨대 상자성 비드(예를 들어 Dynabeads®또는 MACS®비드와 같은)와 함께 인큐베이션된다. 자성 반응 물질, 예를 들어 입자는 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포, 세포들 또는 세포 집단에 존재하는 분자, 예를 들어 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예를 들어 항체에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는, 항체 또는 기타 결합 파트너와 같은 특정 결합 멤버에 결합된 자성 반응 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 잘 알려진 많은 자성 반응 물질이 있다. 적합한 자성 입자는 문헌[여기에 참조로 통합된 Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B]에 기재된 것을 포함한다. 콜로이드 크기의 입자, 예컨대 문헌[Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti et al., 미국 특허 번호 5,200,084]에 기재된 것이 다른 예이다.
항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 기타 시약이 샘플 내의 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건 하에서 인큐베이션이 일반적으로 수행된다.
일부 측면에서, 샘플이 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응 입자 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌리고 표지되지 않은 세포에서 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌린 세포가 유지되고; 음성 선택의 경우, 끌리지 않은 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 중 수행되며, 여기에서 양성 및 음성 분획이 유지되고 더 프로세싱되거나 추가 분리 단계의 대상이 된다.
특정 구현예에서, 자성 반응 입자가 1차 항체 또는 기타 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 2차 항체- 또는 기타 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자는 비오티닐화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자성 반응 입자는 후속적으로 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 입자는 환자에 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응 입자가 세포에서 제거된다. 세포에서 자화 가능 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체, 절단 가능한 링커에 접합된 자화 가능 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(MACS®, Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS®시스템은 이에 부착된 자화된 입자를 갖는 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS®는 외부 자기장의 적용 후에 비-표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 동안 제자리에 유지된다. 이어서, 상기 제1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리되는 것이 방지된 종은, 이들이 용리 및 회수될 수 있도록 상당한 방식으로 해제된다. 특정 구현예에서, 비표적 세포가 표지되고 이종 세포 집단에서 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는, 단리, 세포 준비, 분리, 프로세싱, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계의 방법 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 시스템이 사용되어 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각이 수행된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[국제 출원 WO2009/072003 또는 미국 출원 US 20110003380]에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치가, 통합되거나 독립적인 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 프로세싱, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는, 사용자가 프로세싱, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가하고/거나 프로세싱, 단리, 조작 및 제형화 단계의 다양한 측면을 조정하는 것을 허용하는 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는, 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준으로 세포의 자동화된 분리를 위해 CliniMACS®시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소는 통합 마이크로 컴퓨터, 자기 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브를 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 통합된 컴퓨터가 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템이 표준화된 순서로 반복된 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서, 자기 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프가 튜브 세트 전체의 유량을 제어하고 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충제의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
일부 측면에서, CliniMACS®시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자화 가능 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 제조 백은 튜브 세트에 연결되고, 이는 완충제를 함유하는 백 및 세포 수집 백에 차례로 연결된다. 튜브 세트는 사전 컬럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 튜브로 구성되며, 일회용이다. 분리 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼 상에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 컬럼 내에 유지되는 반면, 비표지 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 칼럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 칼럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장을 제거한 후 칼럼에서 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계가 CliniMACS Prodigy®시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, CliniMACS Prodigy®시스템은, 원심 분리에 의한 세포의 자동화된 세척 및 분획화를 가능하게 하는 세포 프로세싱 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy®시스템은 출처 세포 생성물의 거시적인 층을 식별하여 최적의 세포 분획화 종점을 결정하는 온보드 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어를 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리될 수 있다. CliniMACS Prodigy®시스템은, 예를 들어, 세포 분화 및 증폭, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합된 세포 배양 챔버를 또한 포함할 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 허용할 수 있고, 통합된 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다(예를 들어, 문헌[ Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701] 참조).
일부 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은, 다중 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포가 유체 스트림으로 운반되는 유세포 분석을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 일부 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은 분취 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 여기에 기재된 세포 집단은, FACS 기반 검출 시스템과 조합으로 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376] 참조). 두 경우 모두, 세포는 고순도로 잘 정의된 T 세포 하위 세트의 단리를 허용하는 복수의 마커로 표지될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너가 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택에 대한 분리를 촉진한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 근거할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 기타 결합 파트너의 결합에 근거한 세포의 분리는, 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과 조합으로 예컨대 분취 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 복수의 마커에 근거한 양성 및 음성 선택을 동시에 허용한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전 또는 후에 세포를 동결, 예를 들어, 동결 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 세척 단계 후에 동결 용액에 현탁되어 혈장 및 혈소판이 제거된다. 일부 측면에서, 공지된 다양한 임의의 동결 용액 및 파라미터가 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS 또는 기타 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 수반한다. 이어서, 상기가 배지로 1:1로 희석되어 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 된다. 이어서 세포를 분당 1 ℃의 속도로 -80 ℃로 동결시키고, 액체 질소 저장 탱크의 기상에서 보관한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 양성(cultivation), 인큐베이션, 배양 및/또는 유전적 조작 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 고갈된 세포 집단 및 배양 개시 조성물을 인큐베이션 및/또는 조작하는 방법이 제공된다.
따라서, 일부 구현예에서, 세포 집단은 배양 개시 조성물에서 인큐베이션된다. 인큐베이션 및/또는 조작은, 세포 배양 또는 세포 양성을 위한 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜브 세트, 밸브, 바이알, 배양 접시, 백 또는 기타 컨테이너에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작과 관련하여 또는 그 전에 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 양성, 자극, 활성화 및/또는 번식을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 증폭, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고/거나 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다.
조건은, 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어, 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화시키도록 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는, TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극 또는 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 제제, 예를 들어 리간드를 포함한다. 일부 측면에서, 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 켜거나 개시한다. 상기 제제는, 예를 들어 고체 지지체, 예컨대 비드 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합된 항체, 예컨대 TCR 구성 요소 및/또는 공자극 수용체, 예를 들어 항-CD3, 항-CD28에 특이적인 것을 포함할 수 있다. 선택적으로, 증폭 방법은, 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가(예를 들어, 약 0.5 ng/mL 이상의 농도로)하는 단계를 더 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제는 IL-2 및/또는 IL-15, 예를 들어, 약 10 유닛/mL 이상의 IL-2 농도를 포함한다.
일부 측면에서, 인큐베이션은, 예컨대 문헌[미국 특허 번호 6,040,1 77(Riddell et al.), Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82 및/또는 Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기재된 기술과 부합되게 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는, 배양 개시 조성물 배양보조 세포, 예컨대 비분열 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가되고(예를 들어, 생성된 세포 집단이 증폭될 초기 집단의 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40개 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유하도록); 배양물을 인큐베이션(예를 들어 T 세포 수를 증폭하기에 충분한 시간 동안)하여 증폭된다. 일부 측면에서, 비분열 배양보조 세포는 감마 조사된 PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC는 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열이 방지된다. 일부 측면에서, 배양보조 세포는 T 세포 집단에 첨가하기 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 약 25 ℃이상, 일반적으로 약 30 ℃이상 및 일반적으로 (약) 37 ℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분열 EBV 형질 전환된 림프모구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 배양보조 세포는 적합한 임의의 양, 예컨대 약 10:1 이상의 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율로 제공된다.
구현예에서, 항원 특이적 T 세포, 예컨대 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은, 감염된 대상체에서 T 세포를 단리하고 동일한 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원에 대해 생성될 수 있다.
C. 다중 표적화를 위한 조작된 세포, 벡터 및 조성물
복수의 항원에 결합하고/거나 표적화할 수 있는 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 복수의 항원을 표적화하는 전략을 통해 개선된 선택 및 특이성이 달성된다. 상기 전략은 일반적으로 별개의 유전자 조작된 항원 수용체 상에 전형적으로 존재하고 별개의 항원에 특이적으로 결합하는 복수의 항원-결합 도메인을 수반한다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 항원에 결합하는 능력으로 조작된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포가 조작되어 다중 특이적 결합 분자를 발현한다. 일부 구현예에서, 세포가 복수의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하고, 이들 각각이 하나의 항원 또는 복수의 항원, 예를 들어 여기에 기재된 어느 하나와 같은 ROR1을 표적화하는 하나의 수용체 및 또 다른 항원, 예를 들어 종양 항원을 표적화하는 또 다른 수용체를 표적화할 수 있다. 일부 측면에서, 복수의 유전자 조작된 항원 수용체가 세포 내로 도입되고, 이는 세포 또는 조직 또는 이의 세포로 표적화될 질병 또는 병태에서 또는 상기 질병 또는 병태 상에서 각각 발현되는 상이한 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 측면에서, 상기 특징은 표적 외 효과의 가능성을 해결하거나 감소시키거나 효능을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 질병 또는 병태에서 발현된 단일 항원이 비-질병 또는 정상 세포에서 또한 발현되는 경우, 상기 다중-표적화 접근법은 세포를 활성화시키거나 또는 특정 이펙터 기능을 유도하기 위해 다중 항원 수용체를 통한 결합을 요구함으로써 원하는 세포 유형에 대한 선택성을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 세포가 조작되어 하나 이상의 상이한 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현할 수 있으며, 이들 각각은 하나의 항원 또는 복수의 항원을 표적화할 수 있다.
여기에 기재된 임의의 결합 분자를 함유하는 다중 특이적 세포, 예컨대 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 ROR1 상의 상이한 항원 또는 상이한 에피토프에 결합하는 추가 세포 표면 단백질, 예컨대 추가 키메라 수용체를 포함하는 세포 표면 단백질을 함유하는 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 조성물이 제공되고, 여기에서 결합 분자, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체 중 하나 이상이 ROR1에 결합하고/거나 이를 표적화한다. 하나 이상의 상이한 결합 분자, 예를 들어, 하나 또는 복수의 항원을 표적화할 수 있는 재조합 수용체를 발현하는 복수의 세포를 함유하는 세포 조성물이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체는 ROR1 상의 하나 이상의 상이한 에피토프를 표적화한다.
일부 구현예에서, 세포의 조성물이 제공되고, 여기에서 각각의 세포 유형이 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현한다. 일부 구현예에서, 세포는, 하나 이상의 항체 및/또는 이의 일부, 예를 들어 이의 항원 결합 단편을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함한다(예를 들어, 이로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 세포가 상이한 항체 또는 동일한 항체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 세포가 하나 이상의 항체와 같은 하나 이상의 항체들을 발현한다. 일부 구현예에서, 각각의 세포는 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어 다중 특이적 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 세포는 ROR1 및 특정 질병 또는 병태와 관련된 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 다중 표적화 전략을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은, 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 각각 조작된 다중 특이적 결합 분자 및/또는 다중 결합 분자 및/또는 복수의 세포, 예를 들어 하나 이상의 세포에 의해 표적화된다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 재조합 수용체는 ROR1 결합 분자와 동일한 세포 상에서 또는 상이한 세포 상에서 발현된다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략을 위한 제2 또는 추가 항원 중, 항원 중 하나 이상이 보편적 종양 항원 또는 이의 패밀리 멤버인 것이 포함된다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 종양 상에서 발현되는 항원이다. 일부 구현예에서, 여기에 제공된 ROR1 결합 분자는 제2 또는 추가 항원과 동일한 종양 유형 상의 항원을 표적화한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 또한 보편적 종양 항원일 수 있거나 종양 유형에 특이적인 종양 항원일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포는 치료될 질병 또는 병태에서 발현되는 제2 또는 추가항원을 인식하고 자극 또는 활성화 신호를 유도하는 추가의 유전자 조작 항원 수용체를 더 포함한다.
예시적인 항원은 CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, 테나신(tenascin), 혈관형성 인자, VEGF, PIGF, ED-B 피브로넥틴, 종양 유전자, 종양 유전자 생성물, CD66a-d, 괴사 항원, Ii, IL-2, T101, TAC, IL-6, TRAIL-R1(DR4), TRAIL-R2(DR5), B 세포 성숙 항원(BCMA), Her2, L1-CAM, 메소텔린(mesothelin), CEA, B형 간염 표면 항원, 항 엽산 수용체, CD24, CD30, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, erbB 2량체, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y(Lewis Y), L1-세포 부착 분자(L1-cell adhesion molecule, L1-CAM), 흑색종 관련 항원(Melanoma-associated antigen, MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 흑색종 우선발현 항원(Preferentially expressed antigen of melanoma, PRAME), 서바이빈(survivin), EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2(IL-13Ra2), CA9, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린(integrin), 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아 AchR, NKG2D 리간드, 이중 항원, 범용 태그 관련 항원, 암 고환 항원, MUC1, MUC16, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양태아성 항원, VEGF-R2, 암배아 항원(carcinoembryonic antigen, CEA), 전립선 특이적 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2(OGD2), CE7, 빌름스 종양 1(Wilms Tumor 1, WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, hTERT, MDM2, CYP1B, WT1, 리빈(livin), AFP, p53, 사이클린(D1), CS-1, BCMA, BAFF-R, TACI, CD56, TIM-3, CD123, L1-세포 부착 분자, MAGE-A1, MAGE A3, 사이클린, 예컨대 사이클린 A1(CCNA1) 및/또는 병원체 특이적 항원, 비오티닐화 분자, HIV, HCV, HBV 및/또는 기타 병원체에 의해 발현되는 분자 및/또는 일부 측면에서 이의 신생 에피토프 또는 신생 항원을 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 범용 태그이거나 이와 관련된다.
일부 구현예에서, 복수의 항원, 예를 들어, 제1 항원, 예를 들어, ROR1 및 제2 또는 추가 항원은 암세포와 같이 표적화될 세포, 조직 또는 질병 또는 병태 상에서 발현된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 암 또는 종양이거나 이와 관련된다. 복수의 항원 중 하나 이상이 일반적으로 정상 또는 비질병 세포 또는 조직 및/또는 조작된 세포 자체와 같은 세포 요법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포 상에서도 발현된다. 상기 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다중 수용체의 결찰을 요구함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
일부 구현예에서, 세포 및 방법은 세포 상에 2개 이상의 유전자 조작된 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 포함하며, 각각이 상이한 항원 인식하고 전형적으로 각각이 상이한 세포 내 신호 전달 구성 요소를 포함한다. 상기 다중 표적화 전략이, 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2014055668(활성화 및 공자극 CAR의 조합, 예를 들어, 표적 외, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하나 치료될 질병 또는 병태의 세포에만 함께 존재하는 2개의 상이한 항원을 표적화하는 것을 기재) 및 Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (December, 2013)(활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포, 예컨대 활성화 CAR이 정상 또는 비질병 세포 및 치료될 질병 또는 병태의 세포 둘 다에서 발현된 하나의 항원에 결합하고, 억제 CAR이 치료가 바람직하지 않은 세포 또는 정상 세포 상에서만 발현되는 또 다른 항원에 결합하는 세포를 기재)]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 각각이 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 복수의 세포가 제공된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 하나의 세포가 조작되어 ROR1에 결합 및/또는 표적화하는 결합 분자를 발현하고, 또 다른 세포가 조작되어 추가 또는 제2 항원에 결합 및/또는 표적화하는 결합 분자를 발현한다. 일부 구현예에서, 세포는 각각 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어, 다중 특이적 재조합 수용체를 발현할 수 있고, 여기서 하나 이상의 표적 항원은 ROR1이다. 상기 구현예 중 일부에서, 복수의 세포가 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 세포 중 일부가 다른 세포들과 동시에 또는 함께 투여되고, 예를 들어, 같은 날에 투여되고/거나 복수의 또 다른 조작된 세포와 순차적으로 또는 간헐적으로 임의의 순서로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, ROR1 결합 분자, 예를 들어 CAR을 발현하는 조작된 세포가, ROR1 상의 상이한 표적 항원 또는 상이한 에피토프에 결합하는 결합 분자를 발현하는 또 다른 조작된 세포와 동시에 또는 순차적으로 임의의 순서로 투여된다. 일부 구현예에서, 복수의 세포가 동일한 조성물 또는 상이한 조성물에 존재할 수 있다. 예시적인 세포 조성물은 하기 섹션 III에 기재된 조성물을 포함한다.
III. 약학 조성물
약학 조성물 및 제형을 포함하면서 ROR1 결합 분자, 면역 접합체, 재조합 수용체 및 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 약학 조성물 및 제형을 포함하면서, 여기 제공된 ROR1 결합 분자, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다.
ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체), 면역 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체), 상기 분자들(예를 들어, 항체 또는 재조합 수용체)을 발현하는 조작된 세포, 상기 분자들(예를 들어, 재조합 수용체)을 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 병용 치료 또는 요법을 위한 추가 제제를 포함하는 약학 제형이 제공된다. 약학 조성물 및 제형은 일반적으로 하나 이상의 선택적인 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가 치료제를 포함한다.
용어 "약학 제형(pharmaceutical formulation)"은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있게 하는 그런 형태이고, 제형이 투여될 대상체에 허용 가능하지 않게 독성이 있는 추가 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
"약학적으로 허용 가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)"는 활성 성분이 아닌 약학 제형 안에 있는 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 방부제를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서, 담체의 선택은 부분적으로 특정 세포, 결합 분자 및/또는 항체에 의해 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 방부제를 함유할 수 있다. 적합한 방부제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 방부제의 혼합물이 사용된다. 방부제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.0001 중량% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기재되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는, 일반적으로 사용된 투여량 및 농도에서 수용체에 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 방부제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 염화 헥사메토늄; 염화 벤잘코늄; 염화 벤제토늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코오스, 만노오스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 기타 탄수화물; EDTA 와 같은 킬레이팅제; 수크로오스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염 형성 카운터 이온; 금속 착물(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
일부 측면에서, 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는, 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 기타 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2개 이상의 완충제 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 전체 조성물의 약 0.001 중량% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법이 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 보다 상세하게 기재되어 있다.
여기에 기재된 항체 제형은 동결 건조된 제형 및 수용액을 포함할 수 있다.
제형 또는 조성물은, 결합 분자 또는 세포, 바람직하게는 결합 분자 또는 세포에 상보적인 활성을 가진 것으로 치료될 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 또한 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 상기 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합하여 적합하게 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은, 기타 약학적 활성제 또는 약물, 예컨대 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 염, 예를 들어 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 투여된다. 적합한 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염은, 염산, 브롬화 수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산 및 타르타르산, 아세트산, 구연산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜 산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산과 같은 유기산에서 유도된 것을 포함한다.
활성 성분은 마이크로캡슐, 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 미세에멀젼, 나노 입자 및 나노캡슐) 또는 거대에멀젼에 포획될 수 있다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 시클로덱스트린 포함 복합체와 같은 포함 복합체 또는 리포솜으로 제형화된다. 리포솜은 특정 조직에 대해 숙주 세포(예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)를 표적화하는 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) 및 미국 특허 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028 및 5,019,369]에 기재된 것과 같은 리포솜 제조에 유용한 많은 방법이 있다.
일부 측면에서, 약학 조성물은 지속 방출, 지연 방출 및 지효성 전달 시스템을 이용할 수 있어서 치료될 부위의 감작을 유발하기 전 및 감작을 유발하기에 충분한 시간을 가지고 조성물의 전달이 발생한다. 많은 유형의 방출 전달 시스템이 이용 가능하고 공지되어 있다. 상기 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있어서, 대상체와 의사의 편의성을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 약학 조성물은, 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양, 예컨대 치료적 유효량 또는 예방적 유효량으로 결합 분자 및/또는 세포를 함유한다. 일부 구현예에서, 치료적 또는 예방적 효능은 치료 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 병태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 질병 증상의 바람직한 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 기타 투여량 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 바람직한 투여량이, 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 분자를 함유하는 유전자 조작된 세포의 상황에서, 대상체에, 예를 들어, (약) 1백만 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어, (약) 5백만개의 세포, (약) 2천 5백만개의 세포, (약) 5억개의 세포, (약) 10억개의 세포, (약) 50억개의 세포, (약) 200억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 400억개의 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 (약) 1천만 내지 (약) 1000억개의 세포 (예를 들어, (약) 2천만개의 세포, (약) 3천만개의 세포, (약) 4천만개의 세포, (약) 6천만개의 세포, (약) 7천만개의 세포, (약) 8천만개의 세포, (약) 9천만개의 세포, (약) 100억개의 세포, (약) 250억개의 세포, (약) 500억개의 세포, (약) 750억개의 세포, (약) 900억개의 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위) 및 일부 경우에 (약) 1억개의 세포 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어, (약) 1억 2천만개의 세포, (약) 2억 5천만개의 세포, (약) 3억 5천만개의 세포, (약) 4억 5천만개의 세포, (약) 6억 5천만개의 세포, (약) 8억개의 세포, (약) 9억개의 세포, (약) 30억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 450억개의 세포)와 같은 (약) 1백만 내지 (약) 1000억개의 세포 범위로 또는 상기 범위 사이에 있는 임의의 수치 및/또는 대상체의 체중 1킬로그램 당 상기 세포 수로 투여된다.
표준 투여 기술, 제형 및/또는 디바이스를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 보관 및 투여를 위한 제형 및 디바이스, 예컨대 주사기 및 바이알이 제공된다. 세포의 투여는 자가 또는 이종일 수 있다. 예를 들어, 면역 세포, 면역 반응성 세포 또는 전구체가 하나의 대상체에서 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이하고, 양립 가능한 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내 유래)이 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 세포, 예컨대 T 세포를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 이는 주사 가능한 단위 투여량 형태(용액, 현탁액, 에멀젼)으로 제형화될 것이다
제형은 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육, 비강, 볼, 설하 또는 좌약 투여를 위한 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 여기에 사용된 바와 같은 용어 "비경구(parenteral)"는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질, 두개내, 흉곽내 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 이용하여 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 조성물은 멸균 액체 제제, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 기타 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조하기에 보다 용이하다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 다른 한편으로, 점성 조성물은 적절한 점도 범위 내에서 제형화되어 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공할 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은, 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균 주사용 용액은 용매에 결합 분자를 통합함으로써, 예컨대 적합한 담체, 희석제 또는 부형제, 예컨대 멸균수, 생리식염수, 포도당, 덱스트로스 등과의 혼합물로 제조될 수 있다. 조성물은 또한 동결 건조될 수 있다. 조성물은, 바람직한 투여 및 제조 경로에 따라 보조 물질, 예컨대 습윤제, 분산제 또는 유화제(예를 들어, 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 향상 첨가제, 방부제, 향미제, 색소 등을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 표준 텍스트를 참조하여 적절한 제제를 제조할 수 있다.
항균 방부제, 항산화제, 킬레이팅제 및 완충제를 포함한 조성물의 안정성 및 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제가 첨가될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등에 의해 보장될 수 있다. 주사용 약학적 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 초래될 수 있다.
지효성 제제가 제조될 수 있다. 지효성 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품, 예를 들어 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체 내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
병용 요법을 위한 약학 조성물이 또한 제공된다. 여기에 기재된 병용 요법을 위한 임의의 추가 제제, 예컨대 섹션 IV.B에 기재된 제제는, ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체), 면역 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 여기에 기재된 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와 함께 하나 이상의 약학 조성물로 제조 및 투여될 수 있다. 병용 요법은 하나 이상의 약학 조성물로 투여될 수 있고, 예를 들어, 여기에서 결합 분자, 재조합 수용체 및/또는 세포가 추가 제제로 동일한 약학 조성물 또는 별도의 약학 조성물에 존재한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 추가 조작된 세포, 예를 들어 ROR1 상의 상이한 항원 또는 상이한 에피토프를 표적화하는 상이한 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포이고, 동일한 조성물 또는 별개의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 각각의 약학 조성물은 특정 결합 분자, 재조합 수용체, 세포, 예를 들어, 조작된 세포 및/또는 추가 제제 및 특정 투여 요법 및/또는 전달 방법에 따라 적합한 제형으로 제형화된다.
IV. 방법 및 용도
방법, 예컨대 ROR1이 발현되는 질병, 병태 및 장애의 치료에서 예컨대 ROR1 결합 분자, 면역 접합체, 재조합 수용체, 조작된 세포 및 이의 약학 조성물 및 제형의 용도 및 이를 이용하는 치료 방법 및/또는 검출, 진단 및 예후 방법이 또한 제공된다. 병용 요법 및/또는 치료 방법이 또한 제공된다.
A. 치료 및 예방 방법 및 용도
항-ROR1 항체, 예를 들어 상기를 함유하는 항체 단편 및 단백질, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 포함하는 ROR1 결합 분자의 치료 및 예방 용도와 같은 투여 및 사용 방법이 또한 제공된다. 상기 방법 및 용도는, 예를 들어 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자, 재조합 수용체), 세포(예를 들어, 조작된 세포) 또는 상기를 함유하는 조성물을, ROR1 발현과 관련되고/거나 세포 또는 조직이 ROR1을 발현, 예를 들어 특이적으로 발현하는 질병, 병태 또는 장애와 같은 ROR1과 관련된 질병, 병태 또는 장애가 있는 대상체에 투여하는 것을 수반한 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 분자, 세포 및/또는 조성물이 유효량으로 투여되어 질병 또는 장애의 치료가 달성된다. 상기 방법 및 치료에서 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 결합 분자(예를 들어, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편), 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 세포(예를 들어, 조작된 세포)의 용도가 여기에 제공된다. 용도는 상기 방법 및 치료에서 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 결합 분자, CAR, 항체 및 세포의 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은, 결합 분자 또는 세포 또는 상기를 포함하는 조성물을 질병 또는 병태를 앓는, 앓았던 또는 앓는 것으로 의심되는 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 방법은 이로써 대상체의 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다. ROR1과 관련된 질병 또는 장애, 예를 들어 ROR1 발현 암의 치료를 위해, 여기에 제공된 약학 조성물과 같은 임의의 조성물의 용도가 여기에 또한 제공된다.
여기에 사용된 바와 같은 "치료(treatment)"(및 "치료(treat)" 또는 "치료(treating)"와 같은 이의 문법적 변형)는 질병 또는 병태 또는 장애 또는 이와 관련된 증상, 불리한 효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 바람직한 치료 효과는, 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과 중 어느 하나의 감소, 전이 방지, 질병 진행 속도의 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 진정 또는 개선된 예후를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 용어는 질병의 완전한 치료 또는 모든 증상이나 결과에 있어 임의의 증상이나 결과(들)의 완전한 제거를 암시하지 않는다.
여기에 사용된 바와 같은 "질병의 발달 지연(delaying development of a disease)"은 질병(예컨대 암)의 발달을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 치료될 질병 및/또는 개인의 병력에 따라 시간의 길이가 다양할 수 있다. 당업자에게 자명한 바와 같이, 충분하거나 유의미한 지연은 개인이 질병을 발달시키지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포괄할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발달과 같은 말기 암이 지연될 수 있다.
여기에 사용된 바와 같은 "예방(preventing)"은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발에 관하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 분자 및 조성물이 사용되어 질병의 발달을 지연시키거나 질병의 진행을 늦춘다.
여기에 사용된 바와 같이 기능 또는 활성을 "억제(suppress)"하는 것은 관심 조건 또는 파라미터를 제외하고 그렇지 않으면 동일한 조건과 비교하거나 또는 대안적으로 또 다른 조건과 비교할 때 기능 또는 활성이 감소하는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 항체 또는 조성물 또는 세포는, 항체 또는 조성물 또는 세포의 부재 하에 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
투여의 상황에서, 제제, 예를 들어 약학 제형, 결합 분자, 항체 또는 세포 또는 조성물의 "유효량(effective amount)"은, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 바람직한 결과를 달성하는 데 필요한 투여량/양에서와 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다.
제제, 예를 들어 약학 제형, 항체 또는 세포의 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"은, 예컨대 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 바람직한 치료적 결과를 달성하는 데 필요한 투여량에서와 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중 및 투여된 세포 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 분자, 세포 및/또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
"예방적 유효량(prophylactically effective amount)"은 바람직한 예방적 결과를 달성하는데 필요한 투여량에서와 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 전형적으로, 예방 용량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
여기에 사용된 바와 같이, "대상체(subject)"는 인간 또는 기타 동물과 같은 포유 동물이며, 전형적으로 인간이다.
치료될 질병 중에는 임의의 ROR1 관련 질병 또는 병태 또는 ROR1이 특이적으로 발현되는 질병 또는 병태가 존재한다. 특정 질병 및 병태에서, ROR1이 악성 세포 및 암에서 발현된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 ROR1 발현 암이다. 치료될 수 있는 ROR1 관련 질병 또는 병태 중에는 B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 비-소세포 폐암(NSCLC), 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 CLL, MCL, 난소암, 폐암, 췌장암 또는 유방암에서 선택된다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 CLL이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 MCL이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 난소암이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 폐암이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 췌장암이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 유방암이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 폐암이고, 폐암은 폐 선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종, 비소세포 폐암(NSCLC) 및 비전형적 암양종 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 폐암이고, 폐암은 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 병태는 유방암이고, 유방암은 삼중 음성 유방암이다.
일부 측면에서, 특정 질병 및 병태에서, ROR1이, 고형 종양 또는 혈액암과 관련된 암을 포함한 악성 세포 및 암에서 발현된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 ROR1 발현 암이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 장애 중에는 암, 예컨대 ROR1 발현 암이 존재한다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양 또는 혈액암과 관련된다.
일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 장애는, 고형 종양과 관련된 암, 예컨대 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암이다. 일부 구현예에서, 폐암은 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 일부 구현예에서, 유방암은 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer, TNBC)이다. 일부 측면에서, 삼중 음성 유방암은, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체의 발현 및 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2)의 과발현에 대해 음성인 유방암을 지칭한다.
일부 구현예에서, 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다. 일부 구현예에서, ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 장애는, 핼액암 관련 암, 예컨대 B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)이다.
일부 구현예에서, 방법은, 제공된 결합 분자를 발현하는 조작된 세포(예를 들어, T 세포)를 ROR1관련 질병 또는 병태, 예컨대 ROR1 발현 암을 앓는 대상체에 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포(예를 들어 T 세포)는 제공된 항체의 항원 결합 도메인 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어 scFv)을 함유하는 재조합 수용체, 예컨대 CAR을 발현한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 치료될 대상체의 자가 조직이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 치료될 대상체의 동종 이계이고, 상기 경우 세포는 질병 대상체에서 수득되고 조작된 세포의 투여 전에 재조합 수용체(예를 들어, CAR)로 조작된다.
일부 상황에서, 재조합 수용체를 발현하도록 질병 또는 장애, 예컨대 만성 림프구성 백혈병(CLL)을 앓는 대상체에서 수득된 1차 T 세포의 조작은, 다른 혈액암을 앓는 대상체 유래 1차 T 세포에 비해 손상된 기능을 갖는 조작된 T 세포를 초래한다고 보고되었다(예를 들어, 문헌[Gorgun et al., J Clin Invest. 2005 Jul;115(7):1797-805; Ramsay et al., J Clin Invest. 2008 Jul;118(7):2427-37; Riches et al., Discov Med. 2013 Dec;16(90):295-302] 참조). 일부 경우에, 여기 기재된 바와 같이, 제공된 재조합 수용체가 기능의 손상이 관찰되지 않고 CLL을 앓는 대상체에서 수득된 1차 T 세포에서 발현될 수 있다. 일부 측면에서, 제공된 결합 분자, 예를 들어 ROR1을 표적화하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포가, 질병 또는 장애, 예컨대 CLL을 앓는 대상체의 세포를 사용하여 성공적으로 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 ROR1 관련 질병 또는 장애를 앓거나, 앓을 것으로 의심되거나 또는 발병할 위험이 있는 대상체를 확인할 수 있다. 따라서, ROR1 발현의 상승과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체를 식별하고, 임의의 항-ROR1 항체, 예를 들어 상기를 함유하는 항체 단편 및 단백질, 예컨대 키메라 수용체 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 포함하여 제공된 ROR1 결합 분자로 치료하기 위해 대상체를 선택하는 방법이 제공된다.
예를 들어, 대상체는 ROR1 발현 암과 같은 ROR1 발현의 상승과 관련된 질병 또는 장애의 존재에 대해 스크리닝될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 ROR1 관련 질병, 예를 들어, 종양의 존재를 스크리닝 또는 검출하는 것을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 샘플이 ROR1 발현의 상승과 관련된 질병 또는 장애가 있는 것으로 의심되는 환자에서 수득되고, ROR1의 발현 수준에 대해 평가될 수 있다. 일부 측면에서, ROR1 관련 질병 또는 장애에 대해 양성 반응을 보이는 대상체가, 본 방법에 의한 치료 대상으로 선정될 수 있고, 여기에 기재된 바와 같은 치료적 유효량의 항-ROR1 항체, ROR1 표적화 CAR, CAR을 함유하는 세포 또는 이의 약학 조성물을 투여받을 수 있다. 일부 구현예에서, 방법을 사용하여 시간의 흐름에 따라, 예를 들어, 방법에 의한 치료 전, 중 또는 후에 ROR1 발현 조직, 예를 들어, 종양의 크기 또는 밀도를 모니터링할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어 화학 요법, 방사선 및/또는 조혈 줄기 세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT), 예를 들어 동종 이계 HSCT를 포함하여 또 다른 ROR1 특이적 항체 및/또는 ROR1 표적화 키메라 수용체를 발현하는 세포 및/또는 기타 요법으로 치료 후에 지속적 또는 재발성 질병을 앓는다. 일부 구현예에서, 투여는, 대상체가 또 다른 ROR1 표적화 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 대상체는 재발하지 않았으나, 재발의 위험, 예컨대 재발의 위험이 높은 것으로 결정되고, 따라서 화합물 또는 조성물이 예방적으로 투여되어, 예를 들어 재발의 가능성을 낮추거나 재발을 예방한다.
일부 구현예에서, 치료는 요법에 대한 대상체에 의한 면역 반응을 유도하지 않고/거나 질병 또는 병태의 효과적인 치료를 방해할 정도로 상기 반응을 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 면역원성 및/또는 이식편 대 숙주 반응의 정도는 상이하나 유사한 치료로 관찰된 것보다 작다. 예를 들어, 제공된 항-ROR1 항체를 포함한 CAR을 발현하는 세포를 이용한 입양 세포 요법의 경우, 일부 구현예에서 면역원성의 정도는, 유사한, 예를 들어 중복 에피토프에 결합하고/거나 제공된 항체, 예컨대 마우스 또는 토끼 또는 인간화된 항체와 ROR1에 대한 결합을 두고 경쟁하는 상이한 항체를 포함한 CAR에 비해 감소된다.
일부 구현예에서, 방법은 입양 세포 요법을 포함하며, 이에 의해 제공된 ROR1 표적화 수용체(예를 들어, ROR1 표적화 항체 또는 이의 단편을 함유하는)를 발현하는 유전자 조작된 세포가 대상체에 투여된다. 상기 투여가 ROR1 표적화 방식으로 세포의 활성화(예를 들어, T 세포 활성화)를 촉진할 수 있어서, 질병 또는 장애의 세포가 파괴를 위해 표적화된다.
따라서, 제공된 방법 및 용도는 입양 세포 요법을 위한 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 질병, 병태 또는 장애를 앓거나, 앓을 위험이 있거나 또는 앓을 것으로 의심되는 것과 같은 대상체, 조직 또는 세포에 세포 또는 세포를 함유하는 조성물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포, 집단 및 조성물이 치료될 특정 질병 또는 병태를 앓는 대상체에 예를 들어, 입양 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 또는 조성물이 대상체, 예컨대 질병 또는 병태를 앓거나 질병 또는 병태의 위험이 있는 대상체에 투여된다. 일부 측면에서, 방법은, 예컨대 ROR1 발현 암의 종양 부담을 감소시킴으로써 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상을 이에 의해 치료, 예를 들어 개선한다.
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법이 공지되어 있으며, 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법이, 예를 들어 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되며, 여기에서 세포가 단리되고/거나 그렇지 않으면 세포 요법을 받을 대상체 또는 상기 대상체에서 유래된 샘플로부터 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료가 필요한 대상체, 예를 들어 환자에서 유래되고, 단리 및 프로세싱 후 세포가 동일한 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법이 동종 이계 전달에 의해 수행되며, 여기에서 세포가 단리되고/거나 그렇지 않으면 세포 요법을 받을 예정이거나 최종적으로 받은 대상체, 예를 들어 제1 대상체가 아닌 대상체로부터 제조된다. 상기 구현예에서, 이어서 세포는 상이한 대상체, 예를 들어, 같은 종의 제2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 상위 유형을 발현한다.
일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체는 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있으며, 유아, 소아, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은 비영장류 포유 동물이다. 일부 예에서, 환자 또는 대상체는 질병, 입양 세포 요법 및/또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)과 같은 독성 결과물의 평가를 위한 검증된 동물 모델이다.
ROR1 결합 분자, 예컨대 항체 및 항체를 함유하는 키메라 수용체 및 상기를 발현하는 세포가, 임의의 적합한 수단, 예를 들어 주사, 예를 들어 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하 주사(subconjectval injection, subconjuntival injection), 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 두개내, 흉곽내 또는 피하 투여를 포함한다. 투약 및 투여는 투여가 짧거나 만성인지 여부에 부분적으로 의존할 수 있다. 다양한 투약 스케쥴은 다양한 시점에 걸쳐 단일 또는 다중 투여, 볼러스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 국한되지 않는다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 결합 분자 또는 세포의 적절한 투여량이 치료될 질병의 유형, 결합 분자의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 결합 분자가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 요법, 환자의 임상 이력 및 결합 분자에 대한 반응 및 주치의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 및 분자 및 세포가 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 환자에게 적합하게 투여된다.
질병의 유형 및 중증도에 따라, 항체의 투여량은, (약) 1 μg/kg 내지 (약) 15 mg/kg (예를 들어, (약) 0.1mg/kg - (약) 10mg/kg), (약) 1 μg/kg 내지 (약) 100 mg/kg 이상, (약) 0.05 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 0.5 mg/kg, (약) 2.0 mg/kg, (약) 4.0 mg/kg 또는 (약) 10 mg/kg을 포함할 수 있다. 다중 용량은 간헐적으로, 예를 들어 매주 또는 3주 간격으로 투여될 수 있다. 초기 보다 높은 로딩 용량 후에 하나 이상의 보다 낮은 용량이 투여될 수 있다.
특정 구현예에서, 세포 또는 세포의 하위 유형의 개별 집단이, (약) 10만 내지 (약) 1000억개의 세포의 범위로 및/또는 예를 들어, (약) 10만 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어, (약) 5백만개의 세포, (약) 2천 5백만개의 세포, (약) 5억개의 세포, (약) 10억개의 세포, (약) 50억개의 세포, (약) 200억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 400억개의 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의되는 범위), (약) 1백만개의 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어, (약) 5백만개의 세포, (약) 2천 5백만개의 세포, (약) 5억개의 세포, (약) 10억개의 세포, (약) 50억개의 세포, (약) 200억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 400억개의 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의되는 범위), 예컨대 (약) 1천만 내지 (약) 1000억개의 세포(예를 들어, (약) 2천만개의 세포, (약) 3천만개의 세포, (약) 4천만개의 세포, (약) 6천만개의 세포, (약) 7천만개의 세포, (약) 8천만개의 세포, (약) 9천만개의 세포, (약) 100억개의 세포, (약) 250억개의 세포, (약) 500억개의 세포, (약) 750억개의 세포, (약) 900억개의 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의되는 범위) 및 일부 경우에 (약) 1억개의 세포 내지 (약) 500억개의 세포(예를 들어, (약) 1억 2천만개의 세포, (약) 2억 5천만개의 세포, (약) 3억 5천만개의 세포, (약) 6억 5천만개의 세포, (약) 8억개의 세포, (약) 9억개의 세포, (약) 30억개의 세포, (약) 300억개의 세포, (약) 450억개의 세포)와 같은 대상체의 체중 1kg 당 세포의 양 또는 상기 범위 사이의 임의의 수치 및/또는 대상체의 체중 1kg 당 세포의 양으로 대상체에 투여된다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 기타 치료에 특수한 속성에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 수치는 재조합 수용체 발현 세포의 수를 지칭하고; 다른 구현예에서, 이는 투여된 T 세포 또는 PBMC 또는 총 세포의 수를 지칭한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, 용량은 약 5 x 108개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어 CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵세포(PBMC), 예를 들어, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108개의 상기 세포, 예컨대 (약) 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108 또는 5 x 108개의 상기 총 세포의 범위 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, 용량은, (약) 1 x 106개 이상의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 (약) 2 x 109개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예를 들어, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1.2 x 109개의 상기 세포, 예컨대 (약) 2.5 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 8 x 108 또는 1.2 x 109개의 상기 총 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, 적어도 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR 발현(CAR+) T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 106개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 5 x 107개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 108 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, (약) 1 x 108 내지 (약) 2.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 또는 (약) 2.5 x 108 내지 (약) 5 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1.5 x 108개의 총 CAR+ T 세포, 예컨대 (약) 5 x 107 내지 (약) 1 x 108개의 총 CAR+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은, (약) 1 x 105개 이상의 CAR+ 세포, (약) 2.5 x 105개 이상의 CAR+ 세포, (약) 5 x 105개 이상의 CAR+ 세포, (약) 1 x 106개 이상의 CAR+ 세포, (약) 2.5 x 106개 이상의 CAR+ 세포, (약) 5 x 106개 이상의 CAR+ 세포, (약) 1 x 107개 이상의 CAR+ 세포, (약) 2.5 x 107개 이상의 CAR+ 세포, (약) 5 x 107개 이상의 CAR+ 세포, (약) 1 x 108개 이상의 CAR+ 세포, (약) 1.5 x 108개 이상의 CAR+ 세포, (약) 2.5 x 108개 이상의 CAR+ 세포 또는 (약) 5 x 108개 이상의 CAR+ 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 요법은, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은, (약) 1 x 105개 이상의 총 재조합 수용체 발현 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 예컨대 상기 세포 중 (약) 1 x 106개 이상, (약) 1 x 107개 이상, (약) 1 x 108개 이상의 세포 수를 포함하는 세포 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 수는 CD3+ 또는 CD8+, 일부 경우에 또한 재조합 수용체 발현(예를 들어 CAR+) 세포의 총 수에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 세포 요법은, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체 발현 세포(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 요법은, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107개의 총 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포(각각의 수치 포함)의 세포 수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, T 세포 용량은 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 용량을 포함하여, 용량 중 CD8+ T 세포는, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 발현 CD8+ 세포, 예를 들어, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108개의 상기 세포, 예컨대 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108 또는 5 x 108개의 상기 총 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 용량으로 투여되고, 각각의 용량 또는 총 용량은 임의의 상기 수치 내에 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 용량은, (약) 1 x 107 내지 (약) 0.75 x 108개의 총 재조합 수용체 발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 107개의 총 재조합 수용체 발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 0.25 x 108개의 총 재조합 수용체 발현 CD8+ T 세포(각각의 수치 포함)의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 용량은, (약) 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 2.5 x 108 또는 5 x 108개의 총 재조합 수용체 발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어 재조합 수용체 발현 T 세포의 용량은 단일 단위 용량으로 대상체에 투여되거나 2 주, 1 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년 이상의 기간 내에 1회만 투여된다.
일부 구현예에서, 세포는 또는 항체는, 병용 치료의 일부로서 또 다른 치료적 개입, 예컨대 또 다른 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 제제, 예컨대 세포 독성제 또는 치료제와 예컨대 동시에 또는 순차적으로, 임의의 순서로 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 또는 또 다른 치료적 개입과 관련하여 동시이든 순차적이든 임의의 순서로 공투여된다. 일부 상황에서, 세포가 시간에 있어 충분히 가깝게 또 다른 요법과 함께 공투여되어 세포 집단이 하나 이상의 추가 치료제의 효과를 향상시킨다(또는 반대도 마찬가지). 일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 하나 이상의 추가 치료제보다 먼저 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 하나 이상의 추가 치료제보다 나중에 투여된다.
세포가 포유 동물(예를 들어, 인간)에 투여되자마자, 일부 측면에서, 조작된 세포 집단 및/또는 항체의 생물학적 활성이 다수의 공지된 임의의 방법에 의해 측정된다. 평가 파라미터는, 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 대한 조작된 또는 천연 T 세포 또는 기타 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은, 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 평가와 같은 공지된 임의의 적합한 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은, 특정 사이토카인, 예컨대 CD 107a, IFNγIL-2 및 TNF의 발현 및/또는 분비를 평가함으로써 또한 측정될 수 있다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포가 다수의 임의의 방법으로 변형되어 이들의 치료적 또는 예방적 효능이 증가된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR이, 링커를 통해 표적화 모이어티에 직접적으로든 간접적으로든 접합된다. 화합물, 예를 들어 CAR 또는 TCR을 표적화 모이어티에 접합시키는 실시가 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 1 1 1 (1995) 및 미국 특허 5,087,616]을 참조한다.
B. 병용 요법
항-ROR1 항체, 예를 들어 상기를 함유하는 항체 단편, 접합체 및 단백질을 포함하는 ROR1 결합 분자, 예컨대 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 치료 및 예방 용도와 같은 용도 및 투여를 포함하는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 여기에 기재된 ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체), 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포가, 하나 이상의 추가의 치료적 개입과 예컨대 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 임의의 순서로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료적 개입은, 예를 들어 항체, 조작된 세포, 수용체 및/또는 제제, 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 세포 및/또는 세포 독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 하나 이상의 추가 제제, 요법 및/또는 치료, 예를 들어 여기에 기재된 임의의 추가 제제, 요법 및/또는 치료제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은, 면역 조절제, 면역 체크 포인트 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나제 억제제와 같은 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다. 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는또는 조성물 및 하나 이상의 추가 치료적 개입을 포함하는 병용 치료 또는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법을 위한 추가 제제가, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능 및/또는 치료 효과의 안전성을 향상, 부양 및/또는 촉진한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 결합 분자 또는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 효능, 생존 또는 지속성을 향상 또는 개선시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 포스파타제 억제제, 키나제 억제제, 사이토카인, 면역조절제 또는 조절 T(Treg) 세포의 수준 또는 활성을 감소시키는 제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 부작용을 감소시키거나 개선시킴으로써 안전성을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 동일한 질병, 병태 또는 동반 질병을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 불리한 효과 또는 부작용을 개선, 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 요법, 치료 또는 제제는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 이식, 입양 세포 요법, 항체, 세포 독성제, 화학 요법제, 사이토카인, 성장 억제제, 항 호르몬제, 키나제 억제제, 항 혈관 형성제, 심장 보호제, 면역 자극제, 면역 억제제, 면역 체크포인트 억제제, 항생제, 혈관 형성 억제제, 대사 조절제 또는 기타 치료제 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질, 펩티드, 핵산, 소분자 제제, 세포, 독소, 지질, 탄수화물 또는 이의 조합물 또는 기타 임의의 유형의 치료제, 예를 들어 방사선이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 수술, 화학 요법, 방사선 요법, 이식, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포의 투여, 키나제 억제제, 면역 체크포인트 억제제, mTOR 경로 억제제, 면역 억제제, 면역 조절제, 항체, 면역 제거제, 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편, 항체 접합체, 기타 항체 요법, 세포 독소, 스테로이드, 사이토카인, 펩티드 백신, 호르몬 요법, 항 대사제, 대사 조절제, 칼슘 의존성 포스파타제 칼시뉴린 또는 p70S6 키나제 FK506)을 억제하거나 또는 p70S6 키나제를 억제하는 약물, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드류, 단백질분해효소 복합체 억제제, GITR 작용제, 단백질 티로신 포스파타제 억제제, 단백질 키나제 억제제, 종양 용해성 바이러스 및/또는 기타 유형의 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 치료는 골수 이식, 화학 요법제, 예컨대 플루다라빈을 사용한 T 세포 제거 요법, 외부 빔 방사선 요법(external-beam radiation therapy, XRT), 시클로포스파미드 및/또는 항체 요법이다.
일부 구현예에서, 세포, 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포가, 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 키나제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나제(Bruton's tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료제는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어 단클론 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 화학 요법제(때때로 세포 독성제로 지칭됨)가 대상체에 투여되어 병소를 파괴한다. 특정 구현예에서, 병소는 종양이다. 특정 구현예에서, 병소는 암이다. 특정 구현예에서, 화학 요법제는, 과증식성 장애, 예컨대 암의 치료, 예방, 개선에 효과적인 것으로 당업자에게 공지된 임의의 제제이다. 화학 요법제는, 소분자, 합성 약물, 펩티드, 폴리펩티드, 단백질, 핵산(예를 들어, 안티센스 뉴클레오티드 서열, 생물학적 활성 단백질, 폴리펩티드 또는 펩티드를 암호화하는 삼중 나선 및 뉴클레오티드 서열을 포함하나 이에 국하되지 않는 DNA 및 RNA 폴리뉴클레오티드), 항체, 합성 또는 천연 무기 분자, 모방제 및 합성 또는 천연 유기 분자를 포함하나 이에 국한되지 않는다. 특정 구현예에서, 화학 요법 약물은, 알킬화제, 안트라사이클린, 세포골격 교란물질(탁산), 에포틸론, 히스톤 탈아세틸화효소 억제제, 국소이성화효소 억제제, 국소이성화 효소 II 억제제, 키나제 억제제, 뉴클레오티드 유사물 및 전구체 유사물, 펩티드 항생제, 백금계 제제 및 빈카 알칼로이드류 및 유도체를 포함한다.
특정 구현예에서, 병소가 화학 요법제를 투여함으로써 파괴되어 생체 내에서 유전자 조작된 세포가 조절된다. 화학 요법제는, 아바렐릭스, 알데스레우킨, 알렘투주맙, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 비소 삼산화물, 아스파라기나제, BCG 라이브, 베바세이주맙, 벡사로텐, 블레오마이신, 보르테조밉, 부술판, 칼루스테론, 캄프토테신, 카페시타빈, 카르보플라틴, 카르무스틴, 셀렉콕시브, 세툭시맙, 클로람부실, 시나칼세트, 시스플라틴, 클라드리빈, 시클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진, 닥티노마이신, 다르베포에틴 알파, 다우노루비신, 데닐레우킨 디프티톡스, 덱스라족산, 도세탁셀, 독소루비신, 드로모스타놀론, 엘리오트 B 용액, 에피루비신, 에포에틴 알파, 에스트라무스틴, 에토포시드, 엑세메스탄, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루다라빈, 플루오로우라실, 풀베스트란트, 겜시타빈, 겜투주맙 오조가마이신, 게피티닙, 고세렐린, 수산화 요소, 이브리투모맙 티욱세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티닙, 인터페론 알파-2a, 인터페론 알파-2b, 이리노테칸, 레트로졸, 레우코보린, 레바미솔, 로무스틴, 메클로레타민, 메게스트롤, 멜팔란, 메르캅토푸린, 메스나, 메토트렉세이트, 메톡살렌, 메틸프레드니솔론, 미토마이신 C, 미토탄, 미토산트론, 난드롤론, 노페투모맙, 오블리메르센, 오프렐베킨, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 팔미드론산, 페가데마세, 페가스파가제, 페그필그라스팀, 페메트렉세드, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 폴리페프로산, 포르피머, 프로카르바진, 퀴나크린, 라스부리카제, 리툭시맙, 사르그라모스팀, 스트렙토조신, 탈크, 타목시펜, 타르세바, 테모졸로미드, 테니포시드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모맙, 트라스투주맙, 트레티노인, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 비노렐빈 및 졸레드로네이트를 포함할 수 있으나 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 예시적인 화학 요법제는, 안트라사이클린(예를 들어, 리포솜의 독소루비신과 같은 독소루비신); 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈); 알킬화제(예를 들어, 시클로포스파미드, 데카르바진, 멜팔란, 이포스파미드, 테모졸로미드); 면역 세포 항체(예를 들어, 알렘투주맙, 겜투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙); 항 대사제(예를 들어, 엽산 길항제, 피리미딘 유사물, 푸린 유사물 및 아데노신 디아미나제 억제제, 예컨대 플루다라빈을 포함); TNFR 글루코코르티코이드 유도 TNFR 관련 단백질(GITR) 작용제; 단백질분해효소 복합체 억제제(예를 들어, 아클라시노마이신 A, 글리오톡신 또는 보르테조밉); 면역 조절제, 예컨대 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 요법 또는 치료는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 추가 요법은 조작된 세포, 예를 들어 추가의 CAR 발현 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는, 여기에 제공된 조작된 세포, 예를 들어 항-ROR1 CAR 발현 세포와 동일하거나 상이한 재조합 수용체를 발현하는 CAR 발현 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원 및/또는 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 여기에 기재된 재조합 수용체, 예를 들어 ROR1과 동일한 항원의 상이한 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원, 예를 들어 상이한 종양 항원 또는 항원의 조합물을 인식한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은, 초기 계통 마커, 예를 들어 암 줄기 세포를 발현하는 암 세포를 표적화하는 반면, 다른 CAR 발현 세포는 보다 후기 계통 마커를 발현하는 암 세포를 표적화한다. 상기 구현예에서, 추가 조작된 세포는 여기에 기재된 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입) 전, 동시 또는 투여 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는 동종 이계 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자의 구성은 1차 세포 내 신호 전달 도메인 및 2개 이상, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5개 이상의 공자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는, 동일하거나 상이한 1차 세포 내 신호 전달 도메인, 동일하거나 상이한 공자극 신호 전달 도메인 또는 동일한 수 또는 상이한 수의 공자극 신호 전달 도메인을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는, 분할된 CAR로서 구성될 수 있고, 여기서 CAR 분자 중 하나는 항원 결합 도메인 및 공자극 도메인(예를 들어, 4-1BB)을 포함하는 반면, 다른 CAR 분자는 항원 결합 도메인 및 1차 세포 내 신호 전달 도메인(예를 들어, CD3 제타)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 여기에 기재된 하나 이상의 결합 분자를 발현하도록 조작된 세포 및/또는 상이한 항원을 표적화하는 추가의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 여기, 예를 들어 섹션 I.C.에 기재된 세포 또는 복수의 세포 중 어느 하나를 포함한다 일부 구현예에서, 추가 제제는, 상이한 에피토프 및/또는 항원, 예를 들어 질병 또는 병태와 관련된 상이한 항원을 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 질병 또는 장애, 예를 들어 암 또는 종양에서 발현되는 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은, 예컨대 면역 억제 신호 전달을 억제하거나 면역 자극 신호 전달을 향상시킴으로써 항 종양 면역 반응, 예를 들어 투여된 조작된 세포 유래 항 종양 면역 반응을 자극, 증폭 및/또는 그렇지 않으면 향상시킬 수 있는 면역 조절제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 펩티드, 단백질이거나 소분자이다. 일부 구현예에서, 단백질은 융합 단백질 또는 재조합 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는, 면역 세포, 예컨대 T 세포, B 세포 또는 항원 제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 수용체와 같은 면역학적 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 융합 단백질, 소분자 또는 폴리펩티드이다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물이, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예컨대 단클론 항체인 추가 제제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 체크포인트 경로의 구성 요소를 차단, 억제 또는 방해한다. 면역 시스템은 자기 내성을 유지하고 면역 반응 조절에 관여하는 다중 억제 경로를 갖는다. 종양은 특히 종양 항원에 특이적인 T 세포(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264), 예를 들어 CAR 발현 세포와 같은 조작된 세포에 대한 면역 저항의 주요 메커니즘으로 특정 면역 체크포인트 경로를 사용할 수 있다. 상기 많은 면역 체크포인트가 리간드-수용체 상호 작용에 의해 개시되기 때문에, 이는 리간드 및/또는 이의 수용체에 대한 항체에 의해 용이하게 차단될 수 있다.
따라서, 소분자, 핵산 억제제(예를 들어, RNAi) 또는 항체 분자와 같은 면역 체크포인트 경로를 차단하는 길항 분자를 이용한 요법은 암 및 기타 질병에 대한 면역 요법의 유망한 수단이 되고 있다. 대다수의 항암제와 달리, 체크포인트 억제제는 반드시 종양 세포를 직접 표적화하는 것은 아니나, 면역 시스템의 내인성 항 종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 이의 리간드를 표적화한다.
여기에 사용된 바와 같은 용어 "면역 체크 포인트 억제제(immune checkpoint inhibitor)"는 하나 이상의 체크포인트 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 체크포인트 단백질은 T 세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 상기 단백질은 T 세포 반응의 공자극 또는 억제 상호 작용을 담당한다. 면역 체크포인트 단백질은 생리적 면역 반응의 자기 내성 및 지속 시간 및 진폭을 조절 및 유지한다. 일부 구현예에서, 대상체에 여기에 기재된 어느 하나와 같은 질병 또는 병태, 예를 들어 암에 대해, 면역 반응, 예를 들어 여기에 제공된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 의해 달성되는 면역 반응을 향상시키거나 증진시킬 수 있는 추가 제제를 투여할 수 있다.
면역 체크포인트 억제제는 면역 시스템의 억제 경로를 통계적으로 유의미한 방식으로 차단 또는 억제하는 임의의 제제를 포함한다. 상기 억제제는 소분자 억제제를 포함할 수 있거나 또는 면역 체크 포인트 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하고 차단 또는 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극이 면역 체크포인트 경로 구성 요소를 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극에 대해 표적화될 수 있는 예시적인 면역 체크포인트 분자는, PD-1(CD279), PD-L1(CD274, B7-H1), PDL2(CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3(CD223), TIM-3, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GITR(TNFRSF18, AITR), CD40, OX40(CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원(tumor associated antigens, TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4(CD2 분자 패밀리에 속하며 모든 NK, γδ및 기억 CD8+(αβT 세포에서 발현됨), CD160(또한 BY55로 지칭), CGEN-15049, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), HVEM(TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신 및 형질 전환 성장 인자 수용체(transforming growth factor receptor, TGFR; 예를 들어, TGFR 베타)를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 면역 체크포인트 억제제는, 임의의 상기 분자 중 하나 이상에 결합하고, 이의 활성을 차단 또는 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 기타 결합 단백질을 포함한다.
예시적인 면역 체크포인트 억제제는, 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체, 또한 티실리무맙, CP-675,206으로 공지), 항-OX40, PD-L1 단클론 항체(항-B7-H1; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항-PD-1 항체), CT-011(항-PD-1 항체), BY55 단클론 항체, AMP224(항-PD-L1 항체), BMS-936559(항-PD-L1 항체), MPLDL3280A(항-PD-L1 항체), MSB0010718C(항-PD-L1 항체) 및 이필리무맙(항-CTLA-4 항체, 또한 Yervoy®MDX-010 및 MDX-101로 공지됨)을 포함한다. 예시적인 면역 조절 항체는, 다클리주맙(Zenapax), 베바시주맙(Avastin®바실릭시맙, 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, MPDL3280A, 피딜리주맙(CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A(아테졸리주맙), 트레멜리무맙, IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙, PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C(아벨루맙), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙, BKT140, 바르릴루맙(CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 리릴루맙(BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙, CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 기타 예시적인 면역조절제는, 예를 들어, 아푸투주맙(Roche®에서 구매 가능); 페그필그라스팀(Neulasta®레날리도마이드(CC-5013, Revlimid®탈리도마이드(Thalomid®액티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터루킨 1, 인터루킨 2 및 인터페론 감마를 포함하는 인간 사이토카인의 혼합물, CAS 951209-71-5, IRX Therapeutics에서 구매 가능)을 포함한다.
프로그램된 세포 사멸 1(Programmed cell death 1, PD-1)은 B 세포, NK 세포 및 T 세포에서 발현되는 면역 체크포인트 단백질이다(Shinohara et al., 1995, Genomics 23:704-6; Blank et al., 2007, Cancer Immunol Immunother 56:739-45; Finger et al., 1997, Gene 197:177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). PD-1의 주요 역할은, 감염에 대한 반응에서 염증 중 말초 조직에서 T 세포의 활성을 제한하는 것뿐만아니라 자가 면역을 제한하는 것이다. PD-1 발현은 활성화된 T 세포에서 유도되고, 이의 내인성 리간드 중 하나에 PD-1의 결합이 자극성 키나아제를 억제함으로써 T 세포 활성화를 억제하도록 작용한다. PD-1이 또한 작용하여 TCR "정지 신호(stop signal)"를 억제한다. PD-1은 Treg 세포 상에서 고도로 발현되고, 리간드의 존재 하에서 이의 증식을 증가시킬 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-PD 1 항체가, 흑색종, 비-소세포 폐암, 방광암, 전립선암, 결장암, 두경부암, 삼중 음성 유방암, 백혈병, 림프종 및 신장 세포암의 치료에 사용되어 왔다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Lipson et al., 2013, Clin Cancer Res 19:462-8; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:3044-51; Gildener-Leapman et al., 2013, Oral Oncol 49:1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85). 예시적인 항-PD-1 항체는 니볼루맙(BMS의 Opdivo), 펨브롤리주맙(Merck의 Keytruda), 피딜리주맙(Cure Tech의 CT-011), 램브롤리주맙(Merck의 MK-3475) 및 AMP-224(Merck)를 포함하고, 니볼루맙(Opdivo, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭; Bristol-Myers Squibb)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(5C4 클론) 및 기타 인간 단클론 항체가 문헌[미국 출원 US 8,008,449 및 국제 출원 WO2006/121168]에 기재되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 단클론 항체이다. 피딜리주맙 및 기타 인간화된 항-PD-1 단클론 항체가 문헌[국제 출원 WO2009/101611]에 기재되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙으로 공지되었고, 키트루다, MK03475로도 지칭됨; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 단클론 항체이다. 펨브롤리주맙 및 기타 인간화된 항-PD-1 항체가 문헌[미국 출원 US 8,354,509 및 국제 출원 WO2009/114335]에 기재되어 있다. 기타 항-PD-1 항체는, 다른 것들, 예를 들어 문헌[미국 출원 US 8,609,089, US 2010028330, US 20120114649 및/또는 US 20150210769]에 기재된 항-PD-1 항체들 중에서 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/027827 및 WO2011/066342]에 기재됨)는 PD-1과 B7-H1 사이의 상호 작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
PD-L1(CD274 및 B7-H1로도 공지) 및 PD-L2(CD273 및 B7-DC로도 공지)는 활성화된 T 세포, B 세포, 골수성 세포, 대식세포 및 일부 유형의 종양 세포에서 발견되는 PD-1에 대한 리간드이다. 항 종양 요법은 항-PD-L1 항체에 집중되었다. PD-1 및 PD-L1의 복합체는 CD8+ T 세포의 증식을 억제하고, 면역 반응을 감소시킨다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65). 항-PD-L1 항체가. 비-소세포 폐암, 흑색종, 결장암, 신장 세포암, 췌장암, 위암, 난소암, 유방암 및 혈액암의 치료에 사용되어 왔다(Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300-9; Radvanyi et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:13044-51). 예시적인 항-PD-L1 항체는 MDX-1105(Medarex), MEDI4736(Medimmune) MPDL3280A(Genentech), BMS-935559(Bristol-Myers Squibb) 및 MSB0010718C를 포함한다. MEDI4736(Medimmune)은 PD-L1에 결합하는 인간 단클론 항체이고, PD-1과 리간드의 상호 작용을 억제한다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론 항체이다. PD-L1에 대한 MDPL3280A 및 다른 인간 단클론 항체가 문헌[미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 출원 공개 번호 20120039906]에 기재되어 있다. 기타 항-PD-L1 결합제는 YW243.55.S70(국제 출원 WO2010/077634 참조) 및 MDX-1105(BMS-936559로도 지칭되고, 예를 들어, 국제 출원 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 결합제)를 포함한다.
CD152로도 공지된 세포 독성 T 림프구 관련 항원(Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen, CTLA-4)은 T 세포 활성화를 조절하는 기능을 하는 공동 억제 분자이다. CTLA-4는 T 세포 상에서 배타적으로 발현되는 면역 글로불린 상과(superfamily)의 멤버이다. CTLA-4는 T 세포 활성화를 억제하는 작용을 하며, 헬퍼 T 세포 활성을 억제하고 조절 T 세포 면역 억제 활성을 향상시키는 것으로 보고된다. CTLA-4의 정확한 작용 메카니즘은 여전히 연구 중이나, 이는 CD80 및 CD86에 결합하는 데 CD28을 능가할뿐만아니라 T 세포에 억제 신호를 능동적으로 전달함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 것으로 암시되었다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-CTLA-4 항체가 흑색종, 전립선암, 소세포 폐암, 비-소세포 폐암의 치료를 위한 임상 시험에 사용되어 왔다(Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14:848-61; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300; Weber, 2007, Oncologist 12:864-72; Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89). 항-CTLA-4의 중요한 특징은, 생리적 반응에 필요한 초기 치료 후 최대 6 개월의 지연 기간을 갖는 항 종양 효과의 동역학이다. 일부 경우에, 종양은, 치료 개시 후 감소가 보이기 전에 실제로 크기가 증가할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 예시적인 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer)을 포함한다. 이필리무맙은 최근 전이성 흑색종 치료에 대한 FDA 승인을 받았다(Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89).
CD223으로도 공지된 림프구 활성화 유전자-3(Lymphocyte activation gene-3, LAG-3)은 또 다른 면역 체크포인트 단백질이다. LAG-3은 림프구 활성의 억제 및 일부 경우에 림프구 면역성 결여(anergy)의 유도와 관련이 있었다. LAG-3은 B 세포, NK 세포 및 수지상 세포를 포함한 면역 시스템의 다양한 세포 상에서 발현된다. LAG-3은 MHC 클래스 II 수용체에 대한 천연 리간드이며, 이는 강력한 면역 억제 활성이 부여된 것을 포함하여 흑색종 침윤성 T 세포 상에서 실질적으로 발현된다. 예시적인 항-LAG-3 항체는 LAG-3을 표적화하는 단클론 항체인 BMS-986016(Bristol-Myers Squib)을 포함한다. IMP701(Immutep)은 길항제 LAG-3 항체이고, IMP731(Immutep 및 GlaxoSmithKline)은 고갈시키는 LAG-3 항체이다. 다른 LAG-3 억제제는 LAG-3의 가용성 부분 및 MHC 클래스 II 분자에 결합하고 항원 제시 세포(APC)를 활성화시키는 Ig의 재조합 융합 단백질인 IMP321(Immutep)을 포함한다. 기타 항체가, 예를 들어 문헌[국제 출원 WO2010/019570 및 미국 출원 US2015/0259420]에 기재되어 있다.
활성화된 Th1 세포 상에서 초기에 확인된 T 세포 면역 글로불린 도메인 및 뮤신 도메인-3(TIM-3)이 면역 반응의 음성 조절자인 것으로 밝혀졌다. TIM-3의 봉쇄가 T 세포 매개 항 종양 면역을 촉진하고, 다양한 마우스 종양 모델에서 항 종양 활성을 갖는다. TIM-3 봉쇄와 다른 면역 치료제, 예컨대 TSR-042, 항-CD137 항체 및 기타의 조합물이 항 종양 효과를 증가시키는 데 부가적이거나 상승적일 수 있다. TIM-3 발현이 흑색종, NSCLC 및 신장암을 포함하는 다수의 상이한 종양 유형과 관련이 있었으며, 추가적으로 종양 내 TIM-3의 발현이 NSCLC, 자궁 경부암 및 위암을 포함하는 다양한 종양 유형에 걸친 나쁜 예후와 상관 관계가 있는 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 다수의 만성 바이러스성 질병에 대한 면역 증가를 촉진시키는 데 또한 관심이 있다. TIM-3은 또한 갈렉틴-9, 포스파티딜세린 및 HMGB1을 포함한 다수의 리간드와 상호 작용하는 것으로 나타났으나, 이들 중 어느 것이(있다 하더라도) 항 종양 반응의 조절과 관련이 있는지는 현재 명확하지 않다. 일부 구현예에서, TIM-3을 표적화하는 항체, 항체 단편, 소분자 또는 펩티드 억제제는 TIM-3의 IgV 도메인에 결합하여 이의 리간드와의 상호 작용을 억제할 수 있다. TIM-3을 억제하는 예시적인 항체 및 펩티드가 문헌[미국 출원 US 2015/0218274, 국제 출원 WO2013/006490 및 미국 출원 US 2010/0247521]에 기재되어 있다. 기타 항-TIM-3 항체는 인간화된 버전의 RMT3-23(Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) 및 클론 8B.2C12(Monney et al., 2002, Nature, 415:536-541)를 포함한다. TIM-3 및 PD-1을 억제하는 이중 특이적 항체가 문헌[미국 출원 US 2013/0156774]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CEACAM 억제제(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5 억제제)이다. 일부 구현예에서, CEACAM의 억제제는 항-CEACAM 항체 분자이다. 예시적인 항-CEACAM-1 항체, 예를 들어 단클론 항체 34B1, 26H7 및 5F4가 문헌[국제 출원 WO 2010/125571, WO 2013/082366, WO 2014/059251 및 WO 2014/022332]에 기재되어 있거나; 또는 이의 재조합 형태가 예를 들어 문헌[미국 출원 US 2004/0047858, US 7,132,255 및 국제 출원 WO 99/052552]에 기재된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항-CEACAM 항체는, 예를 들어 문헌[Zheng et al. PLoS One. (2011) 6(6): e21146]에 기재된 바와 같이 CEACAM-5에 결합하거나, 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2013/054331 및 미국 출원 US 2014/0271618]에 기재된 바와 같이 CEACAM-1 및 CEACAM-5와 교차 반응한다.
CD137로도 공지된 4-1BB는 TNFR 상과(superfamily)에 속하는 막관통 당단백질이다. 4-1BB 수용체는 활성화된 T 세포 및 B 세포 및 단핵구 상에 존재한다. 예시적인 항-4-1BB 항체는 잠재적 면역자극 및 항종양제 활성을 갖는 우렐루맙(BMS-663513)이다.
OX40 및 CD134로도 공지된 종양 괴사 인자 수용체 상과(superfamily), 멤버 4(TNFRSF4)는 TNFR 상과(superfamily)의 또 다른 멤버이다. OX40은 휴지기 나이브 T 세포 상에서 구성적으로 발현되지 않으며, 2 차 공자극 면역 체크포인트 분자로서 작용한다. 예시적인 항-OX40 항체는 MEDI6469 및 MOXR0916(RG7888, Genentech)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 조절 T 세포(Treg) 집단을 감소시키는 분자를 포함한다. Treg 세포의 수를 감소(예를 들어, 고갈)시키는 방법이 공지되어 있으며, 예를 들어 CD25 고갈, 시클로포스파미드 투여 및 글루코코르티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-induced TNFR family related gene, GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역 시스템을 향상시키는, 활성화된 T 세포 상에서 상향 조절되는 TNFR 상과의 멤버이다. 성분 채집술 전 또는 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에, 대상체에서 Treg 세포의 수를 감소시키는 것은, 종양 미세 환경에서 원치 않는 면역 세포(예를 들어, Treg)의 수를 감소시키고, 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 GITR 작용제 및/또는 GITR 항체와 같은, GITR을 표적화하고/거나 GITR 기능을 조절하는 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 시클로포스파미드를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능 조절 분자(예를 들어, GITR 항체를 고갈시키는 GITR 작용제 및/또는 Treg)가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제가 세포의 성분 채집술 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드가, 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재 주입) 전 또는 세포의 성분 채집술 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드 및 항-GITR 항체가, 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전에 또는 세포의 성분 채집술 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제이다. 예시적인 GITR 작용제는, 예를 들어, 문헌[미국특허 번호 6,111,090, 유럽 특허번호 090505B 1, 미국특허 번호 8,586,023, PCT 공개번호: WO 2010/003118 및 2011/090754]에 기재된 GITR 융합 단백질 또는 예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 7,025,962, 유럽특허 번호 1947183B 1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국특허 번호 8,388,967, 미국특허 번호 8,591,886, 유럽특허 번호 EP1866339, 국제 출원 WO 2011/028683, 국제 출원 WO 2013/039954, 국제 출원 WO2005/007190, 국제 출원 WO 2007/133822, 국제 출원 WO2005/055808, 국제 출원 WO 99/40196, 국제 출원 WO 2001/03720, 국제 출원 WO99/20758, 국제 출원 WO2006/083289, 국제 출원 WO 2005/115451, 미국특허 번호 7,618,632 및 국제 출원 WO 2011/051726]에 기재된 항-GITR 항체와 같은 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예를 들어, 2가 항-GITR 항체)를 포함한다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 추가 제제가 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 종양 침윤 또는 이동(transmigration)을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제가 CD40, 예컨대 CD40L, 예를 들어 재조합 인간 CD40L을 자극한다. 분화 클러스터 40(CD40)은 또한 TNFR 상과의 멤버이다. CD40은 항원 제시 세포 상에서 발견되는 공자극 단백질이며, 광범위한 면역 및 염증 반응을 매개한다. CD40은 일부 악성 종양에서 또한 발현되고, 여기에서 이는 증식을 촉진한다. 예시적인 항-CD40 항체는 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(Novartis, 길항제), SEA-CD40(Seattle Genetics) 및 CP-870,893이다. 일부 구현예에서, 종양 침윤을 향상시키는 추가 제제는, 티로신 키나제 억제제 수니트닙, 헤파라나제 및/또는 케모카인 수용체, 예컨대 CCR2, CCR4 및 CCR7을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 탈리도마이드의 구조적 또는 기능적 유사물 또는 유도체 및/또는 E3 유비퀴틴 리가제의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가 세레블론(CRBN)에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가 CRBN E3 유비퀴틴 리가제 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가, CRBN 및 CRBN E3 유비퀴틴 리가제 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가, CRBN의 단백질 또는 유전자 발현을 상향 조절한다. 일부 측면에서, CRBN은 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 대한 기질 어댑터이고, 효소의 특이성을 조절한다. 일부 구현예에서, CRB 또는 CRBN E3 유비퀴틴 리가제 복합체에 대한 결합이 E3 유비퀴틴 리가제 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가, KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 유비퀴틴화를 유도하고/거나 KZF1(이카로스) 및 IKZF3(아이올로스)의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제가, CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 의한 카제인 키나제 1A1(CK1α)의 유비퀴틴화를 유도한다. 일부 구현예에서, CK1α의 유비퀴틴화가 CK1α의 분해를 초래한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 이카로스(IKZF1) 전사 인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스의 유비퀴틴화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스의 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스 단백질 또는 유전자 발현을 하향 조절한다. 일부 구현예에서, 추가 제제의 투여가 이카로스 단백질 수준의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아이올로스(IKZF3) 전사 인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 아이올로스의 유비퀴틴화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 아이올로스의 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 아이올로스 단백질 또는 유전자 발현을 하향 조절한다. 일부 구현예에서, 추가 제제의 투여가 아이올로스 단백질 수준의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 이카로스(IKZF1) 및 아이올로스(IKZF3) 전사 인자 둘 다의 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스 및 아이올로스 둘 다의 유비퀴틴화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스 및 아이올로스 둘 다의 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 이카로스 및 아이올로스 둘 다의 유비퀴틴화 및 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제의 투여가 아이올로스 단백질 수준 및 이카로스 단백질 수준 둘 다의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 선택적인 사이토카인 억제 약물(selective cytokine inhibitory drug, SelCID)이다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 포스포디에스터라제-4(PDE4)의 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 CDC25 포스파타제의 효소 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 추가 제제가 CDC25 포스파타제의 세포 내 수송량을 변경한다.
일부 구현예에서, 추가 제제가, 탈리도마이드 (2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일)-lH-이소인돌- l,3(2H)-디온) 또는 탈리도마이드 유사물 또는 유도체이다. 특정 구현예에서, 탈리도마이드 유도체는 유사한 생물학적 활성을 갖는 탈리도마이드의 구조적 변이체를 포함한다. 예시적인 탈리도마이드 유도체는, 레날리도마이드(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™Celgene Corporation), 포말리도마이드(ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™또는 POMALYST™Corporation)으로도 공지됨), CC-1088, CDC-501 및 CDC- 801 및 문헌[미국 특허 번호 5,712,291; 7,320,991; 및 8,716,315; 미국 출원 번호 2016/0313300; 및 PCT 공개 번호 WO 2002/068414 및 WO 2008/154252]에 개시된 화합물을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 5,635,517]에 기재된 바와 같은 벤조 링에서 아미노로 치환된 1-옥소- 및 1,3 디옥소-2-(2,6-디옥소피페를딘-3-일) 이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 하기 화학식의 화합물이고:
Figure pct00006
여기에서, X 및 Y 중 하나는 -C(O)-이고, X 및 Y 중 나머지 다른 하나는 -C(O)- 또는 -CH2-이며, R5는 수소 또는 보다 낮은 알킬 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다. 일부 구현예에서, X는 -C(O)-이고, Y는 -CH2-이다. 일부 구현예에서, X 및 Y 둘 다가 -C(O)-이다. 일부 구현예에서, R5는 수소이다. 다른 구현예에서, R5는 메틸이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 각각 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,281,230; 6,316,471; 6,335,349; 및 6,476,052 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US97/13375(국제 공개 번호 WO 98/03502)]에 기재된 것과 같은 치환된 2-(2, 6-디옥소피페리딘-3-일)프탈레이트 면역 조절 화합물 및 치환된 2-(2,6-디옥소피페를딘-3-일)-1-옥소이소인돌 부류에 속하는 화합물이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 하기 화학식의 화합물이고:
Figure pct00007
여기에서,
X 및 Y 중 하나가 -C(O)-이고, X 및 Y 중 나머지 다른 하나가 -C(O)- 또는 -CH2-이고;
(1) R1, R2, R3, 및 R4 각각이 독립적으로 할로, 1 내지 4개 탄소 원자의 알킬 또는 1 내지 4개 탄소 원자의 알콕시이거나 또는
(2) R1, R3, R4, 및 R5 중 하나가 -NHRa이고, R1, R2, R3, 및 R4 중 나머지가 수소이며, 여기에서 Ra는 수소 또는 1 내지 8개 탄소 원자의 알킬이거나;
R5가 수소 또는 1 내지 8개 탄소 원자의 알킬, 벤질 또는 할로이거나;
X 및 Y가 -C(O)-인 경우 R5가 수소가 아닌 조건으로, (i) R1, R2, R3, 및 R4 각각이 플루오로이거나; 또는 R1, R2, R3, 및 R4 중 하나가 아미노이거나;
또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 각각 포함된 문헌[미국 특허 번호 7,091,353, 미국 특허 공개 번호 2003/0045552 및 국제 출원 번호 PCT/USOI/50401(국제 공개 번호 WO02/059106)]에 개시된 이소인돌 면역 조절 화합물 부류에 속하는 화합물이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는, [2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-4-일메틸]-아미드; (2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-4-일메틸)-카르밤산 t-부틸 에스테르; 4-(아미노메틸)-2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-이소인돌린-1,3-디온; N-(2-(2,6-디옥소-피페리딘-3-일)-1,3-디옥소-2,3-디히드로-1H-이소인돌-4-일메틸)-아세트아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜)-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}시클로프로필-카르복사미드; 2-클로로-N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}아세트아미드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-3-피리딜카르복사미드; 3-{1-옥소-4-(벤질아미노)이소인돌린-2-일}피페리딘-2,6-디온; 2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-4-(벤질아미노)이소인돌린-1,3-디온; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}프로판아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}-3-피리딜카르복사미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}헵탄아미드; N-{(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)메틸}-2-푸릴카르복사미드; {N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)카르바모일}메틸 아세테이트; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)펜탄아미드; N-(2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일)-2-티에닐카르복사미드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(부틸아미노)카르복사미드; N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(옥틸아미노)카르복사미드; 또는 N-{[2-(2,6-디옥소(3-피페리딜))-1,3-디옥소이소인돌린-4-일]메틸}(벤질아미노)카르복사미드;이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 각각 포함된 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2002/0045643, 국제 공개 번호 WO 98/54170 및 미국 특허 번호 6,395,754]에 개시된 이소인돌 면역 조절 화합물 부류에 속하는 화합물이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 5,798,368]에 기재된 4차 치환된 2-(2,6-디옥소피페르딘-3-일)-1-옥소이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,403,613]에 기재된 1-옥소 및 1,3-디옥소-2-(2,6-디옥소피페리딘-3-일) 이소인돌린이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 모두 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,380,239 및 미국 특허 번호 7,244,759]에 기재된 바와 같은 인돌 고리의 4- 또는 5-위치에서 치환된 1-옥소 또는 1,3-디옥소이소인돌린이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 2-(4-아미노-1-옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일)-4-카르바모일-부티르산 또는 4-(4-아미노-1-옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일)-4-카르바모일-부티르산이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은, 4-카르바모일-4-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일}-부티르산, 4-카르바모일-2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일}-부티르산, 2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일}-4-페닐카르바모일-부티르산 또는 2-{4-[(푸란-2-일-메틸)-아미노]-1,3-디옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일}-펜탄디오익산이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 참조로 포함된 문헌[미국 특허 번호 6,458,810]에 기재된 바와 같이 2-위치에서 2,6-디옥소-3-히드록시피페리딘-5-일로 치환된 이소인돌린-1-온 또는 이소인돌린-1,3-디온이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은, 3-(5-아미노-2-메틸-4-옥소-4H-퀴나졸린-3-일)-피페리딘-2,6-디온 또는 이의 거울상체 또는 거울상체의 혼합물; 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접화물 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은 3-[4-(4-모르폴린-4-일메틸-벤질옥시)-1-옥소-1,3-디히드로-이소인돌-2-일]-피페리딘-2,6-디온이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 문헌[Oshima, K. et al., Nihon Rinsho., 72(6):1130-5 (2014); Millrine, D. et al., Trends Mol Med., 23(4):348-364 (2017); and Collins, et al., Biochem J., 474(7):1127-1147 (2017)]에 기재된 바와 같다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 약물 또는 이의 유사물 및/또는 이의 유도체, 예컨대 레날리도마이드, 포말리도마이드 또는 아프레밀라스트를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Bertilaccio et al., Blood (2013) 122:4171, Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940; Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644 및 Kuramitsu et al., Cancer Gene Therapy (2015) 22:487-495]을 참조한다. 레날리도마이드((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디히드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온; 레블리미드(Revlimid)로도 공지됨)는 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 집행을 포함하여 다중 면역 조절 효과를 갖는다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접화물 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은, 레날리도마이드, 레날리도마이드의 입체 이성질체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 용매화물, 수화물, 공결정, 포접화물 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역 조절 화합물은, 레날리도마이드 또는 ((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디히드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온)이다.
특정 구현예에서, 병소가, 탈리도마이드 유도체 레날리도마이드, ((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디히드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온)을 대상체에 투여함으로써 파괴된다. 레날리도마이드는 다발성 골수종, 5q 결실과 관련된 골수 형성 이상 증후군 및 가장 최근에는 재발성/난치성 맨틀 세포 림프종(MCL)의 치료에 대해 FDA 승인을 받았다. 레날리도마이드는 일반적으로 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 집행을 포함한 다중 면역 조절 효과를 갖는 것으로 현재 이해된다. 예를 들어, 일부 경우에, 레날리도마이드는 T 세포 반응을 조절하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 인터루킨(IL)-2 생성의 증가를 초래하고, Th2에서 Th1으로 T 헬퍼(Th) 반응의 변경을 유도하고, T 세포의 조절성 하위 세트(Treg)의 증폭을 억제하고, 여포성 림프종 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)에서 면역학적 시냅스의 기능을 개선한다(Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). 레날리도마이드는 다발성 골수종(multiple myeloma, MM) 환자에서 직접적인 종양 사멸 활성을 또한 가지며, 림프 조직의 미세 환경에서 발견되는 간호사-유사 세포(nurse-like cell)와 같은 지지 세포에 영향을 미침으로써 CLL 종양 세포의 생존을 직접 및 간접적으로 조절한다. 레날리도마이드는 CD3 결찰 또는 수지상 세포 매개 활성화를 통해 T 세포의 활성화에 대한 반응으로 T 세포 증식 및 인터페론-γ 생성을 향상시킬 수 있다. 추가로, 레날리도마이드가 TNF-a, IL-1, IL-6, 및 IL-12를 포함한 전 염증성 사이토카인의 증식을 감소시키고, NK 세포 활성화의 증가를 통해 항체 의존적 세포의 세포 독성(antibody-dependent cellular cytotoxicity, ADCC)을 향상시키는 것으로 여겨진다. 레날리도마이드가 CD80, CD86, HLA-DR, CD95 및 CD40과 같은 면역 자극 분자를 보다 높은 수준으로 발현하도록 악성 B 세포를 또한 유도할 수 있다(Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644). 세레블론, E3 유비퀴틴 리가제가 탈리도마이드 유도 기형 발생에 대한 1차 표적으로 확인되었다. 레날리도마이드가 세레블론을 또한 표적화하고, 이는 c-Myc 및 IRF4 발현의 감소로 이어지는 반면, G1 세포 주기 휴지기를 초래하는 p21의 발현을 또한 증가시키는 것으로 나타났다(Lopez-Girona et al., (2012) Leukemia 26: 2326-2335).
일부 구현예에서, 추가 제제는 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1의 억제제 또는 이들의 조합물 중에서 선택된 하나 이상의 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, B-세포 억제제는 항체(예를 들어, 단일- 또는 이중 특이적 항체) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 표적, 예를 들어 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1을 표적화하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD20 억제제, 예를 들어 항-CD20 항체(예를 들어, 항-CD20 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD20 항체는, 리툭시맙, 오파투무맙, 옥렐리주맙(GA101 또는 RO5072759로도 공지), 벨투주맙, 오비누투주맙, TRU-015(Trubion Pharmaceuticals), 옥카라투주맙(AME-133v 또는 옥카라투주맙으로도 공지) 및 Pro131921(Genentech)을 포함하나 이에 국한되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Lim et al. Haematologica. (2010) 95(1):135-43]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 리툭시맙을 포함한다. 리툭시맙은, CD20에 결합하고 CD20 발현 세포의 세포 용해를 유발하는 키메라 마우스/인간 단클론 항체 IgG1 카파이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20 억제제는 소분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD22 억제제, 예를 들어 항-CD22 항체(예를 들어, 항-CD22 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD22 항체는 에프라투주맙 및 RFB4를 포함한다. 일부 구현예에서, CD22 억제제는 소분자이다. 일부 구현예에서, 항체는 선택적으로 화학 요법제와 같은 제2 제제에 접합된 단일 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 단클론 항체-MMAE 접합체(예를 들어, DCDT2980S)이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 항체의 scFv, 예를 들어 항체 RFB4의 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, BL22)의 전부 또는 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, 목세투모맙 파수도톡스)의 전부 또는 단편(예를 들어, 이의 38 kDa 단편)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 선택적으로 독소에 접합된, 항-CD19/CD22 이중 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는, 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)의 전부 또는 일부, 예를 들어, 디프테리아 독소(DT)의 처음 389개의 아미노산, DT 390, 예를 들어 리간드-지향 독소, 예컨대 DT2219ARL에 선택적으로 연결된 항-CD19/CD22 이중 특이적 부분(예를 들어, 인간 CD19 및 CD22를 인식하는 2개의 scFv 리간드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 부분(예를 들어, 항-CD 19/항-CD22)은 독소, 예컨대 탈당화된 리신 A 사슬(예를 들어, 콤보톡스)에 연결된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이거나 종양 미세 환경에서 사이토카인의 발현 증가를 유도하는 제제이다. 사이토카인은 T 세포 증폭, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 갖는다. 여기에 제공된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물을 받는 대상체에 투여될 수 있는 사이토카인은, IL-2, IL-4, IL-7, IL- 9, IL-15, IL-18 및 IL-21 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여된 사이토카인은 IL-7, IL-15 또는 IL-21 또는 이의 조합물이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여에 대해 차선의 반응을 갖는 대상체에 사이토카인의 투여가, 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 효능 및/또는 항 종양 활성을 개선한다.
"사이토카인(cytokine)"은 세포 간 매개체로서 또 다른 세포에 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질에 대한 일반적인 용어를 의미한다. 상기 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당 단백질 호르몬, 예컨대 여포 자극 호르몬(follicle stimulating hormone, FSH), 갑상선 자극 호르몬(thyroid stimulating hormone, TSH) 및 황체 형성 호르몬(luteinizing hormone, LH); 간 성장 인자; 섬유 아세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 뮬러관 억제 물질; 마우스 성선 자극 호르몬 관련 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴(thrombopoietin, TPO); 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-베타; 혈소판 성장 인자; TGF-알파 및 TGF-베타와 같은 형질 전환 성장 인자(transforming growth factor, TGF); 인슐린 유사 성장 인자 -I 및 -II; 적혈구 생성 촉진 인자(erythropoietin, EPO); 골 유도 인자; 인터페론-알파, 베타 및 -감마와 같은 인터페론; 대식세포-CSF(M-CSF)와 같은 콜로니 자극 인자(colony stimulating factor, CSF); 과립구 대식세포 CSF(GM-CSF); 과립구 CSF(G-CSF); 인터루킨(interleukin, IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양 괴사 인자; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand, KL)를 포함하는 기타 폴리펩티드 인자가 포함된다. 여기에 사용된 바와 같은 용어 사이토카인은 천연 출처 또는 재조합 세포 배양물 유래 단백질 및 천연 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 예를 들어, 면역 조절제는 사이토카인이고, 사이토카인은 IL-4, TNF-α, GM-CSF 또는 IL-2이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 인터루킨-15(IL-15) 폴리펩티드, 인터루킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 폴리펩티드 또는 이의 조합물, 예를 들어 hetIL-15(Admune Therapeutics, LLC)를 포함한다. hetIL-15는 IL-15 및 IL-15Rα의 이종 2량체 비공유 복합체이다. HetIL-15는 예를 들어, 문헌[미국 출원 U.S. 8,124,084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 및 U.S. 2011/0081311]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 하나 이상의 사이토카인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 인터루킨은 천연 사이토카인의 조합물인 백혈구 인터루킨 주사(멀티킨)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 톨 유사 수용체(Toll-like receptor, TLR) 작용제, 보조제 또는 사이토카인이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법과 관련된 하나 이상의 독성 또는 부작용을 개선 또는 중화시키는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), TNFα 억제제 및 IL-6의 억제제 중에서 선택된다. TNFα 억제제의 예는 항-TNFα 항체 분자, 예컨대 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골 및 골리무맙이다. TNFα 억제제의 또 다른 예는 엔타네르셉트(entanercept)와 같은 융합 단백질이다. TNFα의 소분자 억제제는 잔틴 유도체(예를 들어, 펜톡시필린) 및 부프로피온을 포함하나 이에 국한되지 않는다. IL-6 억제제의 예는, 항-IL-6 항체 분자, 예컨대 토실리주맙, 사릴루맙, 엘실리모맙, CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI-2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 및 FM101이다. 일부 구현예에서, 항-IL-6 항체 분자는 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아나킨라와 같은 IL-1R 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수준 및/또는 아데노신 경로 구성 요소의 조절제이다. 아데노신은 신체에서 면역 조절제로서 기능할 수 있다. 예를 들어, 아데노신 수용체 하위 유형을 비선택적으로 활성화시키는 아데노신 및 일부 아데노신 유사물이, 염증성 산화 생성물의 호중구 생성을 감소시킨다(Cronstein et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier et al., J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). 일부 경우에, 세포 외 아데노신 또는 아데노신 유사물의 농도가, 특정 환경, 예를 들어, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 증가할 수 있다. 일부 경우에, 아데노신 또는 아데노신 유사물 신호 전달은, 저산소증 또는 저산소증 또는 이의 조절과 관련된 인자, 예를 들어 저산소증 유도성 인자(hypoxia inducible factor, HIF)에 의존한다. 일부 구현예에서, 아데노신 신호 전달의 증가는, 전염증 사이토카인 생성의 억제를 초래하는 세포 내 cAMP 및 cAMP 의존 단백질 키나아제를 증가시킬 수 있고, 면역 억제 분자의 합성 및 Treg의 발달로 이어질 수 있다(Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605). 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신, 아데노신 유사물 및/또는 아데노신 신호 전달의 면역 억제 효과를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 구동 A2 아데노신성 T 세포 면역 억제를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 아데노신 수용체의 길항제, 세포 외 아데노신 분해제, CD39/CD73 체외 효소에 의한 아데노신 생성 억제제 및 저산소증-HIF-1α 신호 전달 억제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다.
세포 외 아데노신의 억제제(예컨대, 세포 외 아데노신의 형성 방지, 이의 분해, 불활성화 및/또는 감소시키는 제제)에 의한 세포 외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제 또는 감소 및/또는 아데노신 수용체 억제제(예컨대 아데노신 수용체 길항제)가, 대식세포, 호중구, 과립구, 수지상 세포, T- 및/또는 B 세포 매개 반응과 같은 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 추가로, Gs 단백질 매개 cAMP 의존 세포 내 경로의 억제제 및 아데노신 수용체 유발 Gi 단백질 매개 세포 내 경로의 억제제가, 급성 및 만성 염증을 또한 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제, 예를 들어 아데노신 수용체 A2a, A2b, A1 및 A3 중 하나 이상의 길항제 또는 작용제이다. 아데닐레이트 시클라제 활성을 각각 A1 및 A3은 억제하고, A2a 및 A2b는 자극한다. A2a, A2b 및 A3과 같은 특정 아데노신 수용체가 염증 중 면역 반응을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 따라서, 면역억제 아데노신 수용체의 길항이, 면역 반응, 예를 들어, 투여된 세포, 예를 들어 CAR 발현 T 세포 유래 면역 반응을 증강, 증진 또는 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제가, 세포 외 아데노신의 생성 및 아데노신 수용체를 통한 아데노신 유발 신호 전달을 억제한다. 면역 반응, 국소 조직 염증 및 표적화된 조직 파괴의 향상이, 아데노신 생성 국소 조직 저산소증의 억제 또는 감소에 의해; 축적된 세포 외 아데노신의 분해(또는 불활성화)에 의해; 면역 세포 상에서 아데노신 수용체 발현의 방지 또는 감소에 의해; 및/또는 아데노신 수용체를 통해 아데노신 리간드에 의한 신호 전달의 억제/길항에 의해; 향상될 수 있다.
길항제는, 생물학적 반응을 유발하지 않으면서 세포 수용체에 결합하는 제제로서 또 다른 것의 작용을 무효화하는 경향이 있는 임의의 물질이다. 일부 구현예에서, 길항제는, 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3 수용체에 대한 길항제인 화학적 화합물이다. 일부 구현예에서, 길항제는, 아데노신 수용체에 결합하나 Gi 단백질 의존 세포 내 경로를 유발하지 않는 펩티드 또는 펩티드 모방체이다. 예시적인 길항제가, 문헌[미국 특허 번호 5,565,566; 5,545, 627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 A2a 길항제와 같은 A2 수용체(A2R) 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제는, KW6002(이스트라데필린(istrafyline)), SCH58261, 카페인, 파라잔틴, 3,7-디메틸-1-프로파르길잔틴(DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데난트, 비파데난트(BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP 및 A2R 발현을 표적화하는 억제 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA 또는 A2R을 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 예를 들어 문헌[Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; 미국 출원 US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; 국제 출원 WO2008/147482; 미국 출원 US 8,883,500; US 20140377240; 국제 출원 WO02/055083; 미국 출원 US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279]에 기재된 A2R 길항제이다.
일부 구현예에서, 길항제는, 아데노신 수용체를 암호화하는 mRNA에 특이적으로 결합하는 안티센스 분자, 억제 핵산 분자(예를 들어, 짧은 억제 RNA(small inhibitory RNA, siRNA)) 또는 촉매 핵산 분자(예를 들어 리보자임)이다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제 핵산 분자 또는 촉매 핵산 분자가, A2a, A2b 또는 A3을 암호화하는 핵산에 결합한다. 일부 구현예에서, 안티센스 분자, 억제 핵산 분자 또는 촉매 핵산이, 아데노신 수용체의 생화학적 경로 하류를 표적화한다. 예를 들어, 안티센스 분자 또는 촉매 핵산이, Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존 세포 내 경로에 관여하는 효소를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3의 우세한 음성 돌연변이 형태를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 외 아데노신을 억제하는 추가 제제는, 세포 외 아데노신을 비기능성으로 만드는(또는 상기 기능을 감소시키는) 제제, 예컨대, 아데노신의 구조를 변형시켜 아데노신 수용체를 통해 신호 전달하는 아데노신의 능력을 억제하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 세포 외 아데노신 생성 또는 아데노신 분해 효소, 이의 변형된 형태 또는 이의 조절제이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는, 아데노신에 선택적으로 결합 및 파괴하여, 아데노신 수용체를 통해 신호 전달하는 내생적으로 형성된 아데노신의 능력을 폐지 또는 현저히 감소시키고 염증을 종결시키는 효소(예를 들어, 아데노신 디아미나제) 또는 또 다른 촉매 분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 아데노신 디아미나제(adenosine deaminase, ADA) 또는 이의 변형된 형태, 예를 들어 재조합 ADA 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 변형된 ADA(ADA-PEG)이며, 이는 세포 외 아데노신의 국소 조직 축적을 억제할 수 있다. ADA-PEG가 ADA SCID 환자의 치료에 사용되었다(Hershfield (1995) Hum Mutat. 5:107). 일부 구현예에서, 세포 외 아데노신을 억제하는 제제는, 세포 외 아데노신의 형성을 방지 또는 감소시키고/거나 세포 외 아데노신의 축적을 방지 또는 감소시켜 아데노신의 면역 억제 효과를 폐지 또는 실질적으로 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제가, 핵 전사 인자의 조절제를 포함하여 전염증 분자의 합성 및/또는 분비 조절에 관여하는 효소 및 단백질을 특이적으로 억제한다. 아데노신 수용체 발현 또는 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존 세포 내 경로 또는 cAMP 의존 세포 내 경로 발현의 억제가 면역 반응의 증가/향상을 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제가, 세포 외 아데노신을 생성 또는 생산하는 체외 효소를 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제가, 세포 외 아데노신을 생성하기 위해 협력하여 기능하는 CD39 및 CD73 체외 효소를 표적화한다. CD39(엑토뉴클레오시드 트리포스페이트 디포스포히드롤라제로도 명명)가, 세포 외 ATP(또는 ADP)를 5'AMP로 전환한다. 이어서, CD73(5' 뉴클레오티다제로도 명명)이 5'AΜΡ를 아데노신으로 전환한다. CD39의 활성은 NDP 키나아제 및 아데닐레이트 키나아제의 작용에 의해 가역적이나, CD73의 활성은 비가역적이다. CD39 및 CD73은 내피 세포 및 Treg를 포함하는 종양 간질 세포(tumor stromal cell)에서 발현되고 많은 암 세포 상에서도 발현된다. 예를 들어, 내피 세포 상의 CD39 및 CD73의 발현이, 종양 미세 환경의 저산소 조건 하에서 증가된다. 종양 저산소증이, 산소 전달을 손상시키는 불충분한 혈액 공급 및 조직화되지 않은 종양 혈관 구조를 초래할 수 있다(Carroll and Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7(6):1-16). 저산소증이, 아데노신을 AMP로 전환하는 아데닐레이트 키나제(adenylate kinase, AK)를 억제하여 세포 외 아데노신의 매우 높은 농도로 또한 이어진다. 따라서, 아데노신이, 고형 종양에서 또는 고형 종양 주위 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 빈번하게 발생시키는 상태인 저산소증에 대한 반응으로 고농도로 방출된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 항-CD39 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-CD73 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 MEDI9447 또는 TY/23, α-β메틸렌-아데노신 디포스페이트(ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52 중 하나 이상이다(예를 들어, 문헌[Allard et al. Clin Cancer Res (2013) 19(20):5626-5635; Hausler et al., Am J Transl Res (2014) 6(2):129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70(16):6407-6411] 참조).
일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도성 인자 1 알파(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α) 신호 전달의 억제제이다 HIF-1α의 예시적인 억제제는, 디곡신, 아크리플라빈, 시르투인-7 및 가네테스핍을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 단백질 티로신 포스파타제 억제제, 예를 들어 여기에 기재된 단백질 티로신 포스파타제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타제 억제제는, SHP-1 억제제, 예를 들어, 스티보글루콘산 나트륨과 같은 예를 들어, 여기 기재된 SHP-1 억제제이다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타제 억제제는, SHP-2 억제제, 예를 들어 여기에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나제 억제제이다. CDK4 키나제 억제제, BTK 키나제 억제제, MNK 키나제 억제제 또는 DGK 키나제 억제제와 같은 키나제 억제제가, 종양 세포에 존재하는 구성적인 활성 생존 경로를 조절하고/거나 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 브루톤 티로신 키나아제(Bruton's tyrosine kinase, BTK) 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는, 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나제(PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는, CDK4 억제제, 예를 들어 CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는, 예를 들어 라파마이신, 라파마이신 유사물, OSI-027과 같은 mTOR 억제제이다. mTOR 억제제는, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는, MNK 억제제 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 기타 예시적인 키나제 억제제는, AKT 억제제 페리포신, mTOR 억제제 템시롤리무스, Src 키나제 억제제 다사티닙 및 포스타마티닙, JAK2 억제제 파크리티닙 및 룩솔리티닙, PKCβ억제제 엔자스타우린 및 브리오스타틴 및 AAK 억제제 알리세르팁을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는, 이브루티닙(PCI- 32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13에서 선택된 BTK억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터루킨-2-유도성 키나제(ITK)의 키나제 활성을 감소 또는 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13에서 선택된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는, BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로프-2-엔-1-온; PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(PCI-32765)이다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 이상 주기의 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 문헌[국제 출원 WO 2015/079417]에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십(PI3Kδ억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 라파마이신(mTOR)의 포유류 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는, 템시롤리무스; 리다포롤리무스(AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버롤리무스(RAD001); 라파마이신(AY22989); 시마피모드; AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765에서 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 베무라페닙, 다브라페닙 및 트라메티닙과 같은 미토겐 활성화 단백질 키나제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 전- 또는 항-세포 자멸사 단백질을 조절하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, B 세포 림프종2(B-cell lymphoma 2, BCL-2) 억제제(예를 들어, 베네토클락스, ABT-199 또는 GDC-0199로도 명명; 또는 ABT-737)를 포함한다. 베네토클락스는, 항-세포 자멸사 단백질, BCL-2를 억제하는, 소분자(4-(4-{[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸-1-시클로헥센-1-일]메틸}-1-피페라지닐)-N-({3-니트로-4-[(테트라히드로-2H-피란-4-일메틸)아미노]페닐}술포닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일옥시)벤즈아미드)이다. 전- 또는 항-세포 자멸사 단백질을 조절하는 기타 제제는, 최대 효능을 위한 BCL-2 억제제 ABT-737, 나비토클락스(ABT-263); Mcl-1 siRNA 또는 Mcl-1 억제제 레티노이드 N-(4-히드록시페닐) 레틴아미드(4-HPR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 재조합 종양 괴사 인자 관련 세포 자멸사 유도 리간드(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)와 같은 전-세포 자멸사 자극을 제공하며, 이는 종양 세포 표면 상의 TRAIL 사멸 수용체 DR-4 및 DR-5 또는 TRAIL-R2 작용제 항체에 결합함으로써 세포 자멸사 경로를 활성화시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 인돌아민 2,3-디옥시게나제(indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO) 억제제를 포함한다. IDO는 아미노산, L-트립토판을 키누레닌(kynurenine)으로의 분해를 촉매하는 효소이다. 많은 암, 예를 들어, 전립선암, 결장암, 췌장암, 자궁 경부암, 위암, 난소암, 두부암 및 폐암이 IDO를 과발현한다. 형질세포종 수지상 세포(Plasmacytoid dendritic cell, pDC), 대식세포 및 수지상 세포(DC)가 IDO를 발현할 수 있다. 일부 측면에서, L-트립토판의 감소(예를 들어, IDO에 의해 촉매됨)가, T 세포 면역성 결여 및 세포 자멸사를 유도함으로써 면역 억제 환경을 초래한다. 따라서, 일부 측면에서, IDO 억제제가, 예를 들어, 투여된 CAR 발현 세포의 억제 또는 사멸을 감소시킴으로써 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능을 향상시킬 수 있다. 예시적인 IDO 억제제는, 1-메틸-트립토판, 인독시모드, 및 INCB024360(에파카도스타트)을 포함하나, 이에 국한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 세포독성제, 예를 들어 CPX-351(Celator Pharmaceuticals), 시타라빈, 다우노루비신, 보사록신(Sunesis Pharmaceuticals), 사파시타빈(Cyclacel Pharmaceuticals), 이다루비신 또는 미톡산트론을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 저메틸화제, 예를 들어 DNA 메틸 전달효소 억제제, 예를 들어 아자시티딘 또는 데시타빈을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 추가 요법은 이식, 예를 들어 동종이계 줄기 세포 이식이다.
일부 구현예에서, 추가 요법은 림프구 제거 요법이다. 일부 구현예에서, 림프구 제거는, 예를 들어, 조작된 세포 예를 들어, CAR 발현 세포를 투여하기 전에 대상체에서 수행된다. 일부 구현예에서, 림프구 제거는, 멜팔란, 시톡산, 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 제거 화학요법은, 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입) 전, 동시 또는 후에 대상체에 투여된다. 일 예에서, 림프구 제거 화학요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 종양 용해 바이러스이다. 일부 구현예에서, 종양 용해 바이러스는, 암세포에서 선택적으로 복제하고 암세포의 사멸을 유발하거나 암세포의 성장을 느리게할 수 있다. 일부 경우에, 종양 용해 바이러스는 비 암세포에 영향을 미치지 않거나 최소한의 영향을 미친다. 종양 용해 바이러스는, 종양 용해 아데노바이러스, 종양 용해 단순 헤르페스 바이러스, 종양 용해 레트로바이러스, 종양 용해 파보바이러스, 종양 용해 백시니아 바이러스, 종양 용해 신비스 바이러스, 종양 용해 인플루엔자 바이러스 또는 종양 용해 RNA 바이러스(예를 들어 종양 용해 레오바이러스, 종양 용해 뉴캐슬 질병 바이러스(Newcastle Disease Virus, NDV), 종양 용해 홍역 바이러스 또는 종양 용해 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus, VSV)를 포함하나 이에 국한되지 않는다.
기타 예시적인 병용 요법, 치료 및 제제는, 항알레르기성 제제, 항구토제, 진통제 및 부가 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는, 신경 보호제, 자유라디칼 제거제, 심장 보호제, 안트라사이클린 삼출 중화제 및 영양소와 같은 세포 보호제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제로 사용되는 항체는, 치료제, 예를 들어, 화학 치료제(예를 들어, 시톡산, 플루다라빈, 히스톤 탈아세틸화효소 억제제, 탈메틸화제, 펩티드 백신, 항종양 항생제, 티로신 키나제 억제제, 알킬화제, 항미세소관제 또는 항유사분열제), 항알레르기제, 항구역질제(또는 항구토제), 진통제 또는 여기에 기재된 세포 보호제에 접합되거나 그렇지 않으면 이에 결합된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항체 약물 접합체이다.
일부 구현예에서, 추가 제제가 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 특정 인자를 조절, 억제 또는 자극하여 여기에 제공된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능을 향상 또는 증진시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제가, 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA 수준에서 투여된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 내에서 인자를 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제 핵산, 예를 들어, 억제 핵산, 예를 들어, dsRNA, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA 또는 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 팔린드롬 반복체(clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR), 전사 활성제 유사 이펙터 뉴클레아제(transcription-activator like effector nuclease, TALEN) 또는 아연 핑거 엔도뉴클레아제(zinc finger endonuclease, ZFN)가 사용되어 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포에서 억제 분자의 발현을 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제제는 shRNA이다. 일부 구현예에서, 억제 분자는, 조작된 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포 내에서 억제된다. 일부 구현예에서, T 세포 기능을 조절 또는 조정, 예를 들어, 억제하는 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자를 암호화하는 핵산 분자가, 프로모터, 예를 들어, HI- 또는 U6-유래 프로모터에 작동가능하게 연결되어 억제 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포 내에서 발현된다. 예를 들어, 문헌[Brummelkamp TR, et al. (2002) Science 296: 550- 553; Miyagishi M, et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500]을 참조한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는, 여기에 기재된 임의의 면역 체크포인트 억제제와 같은 억제 분자를 암호화하는 유전자를 파괴할 수 있다. 일부 구현예에서, 파괴는, 결실, 예를 들어, 전체 유전자, 엑손 또는 영역의 결실 및/또는 외인성 서열로의 교체 및/또는 돌연변이, 예를 들어 유전자 내, 전형적으로 유전자의 엑손 내에서 프레임 시프트 또는 미스센스 돌연변이에 의한다. 일부 구현예에서, 파괴가, 조기 정지 코돈이 유전자 내로 통합되는 것을 초래하여, 억제 분자가 발현되지 않거나 세포 표면 상에서 발현될 수 있고/거나 세포 신호 전달을 매개할 수 있는 형태로 발현되지 않는다. 파괴는 일반적으로 DNA 수준에서 수행된다. 파괴는 일반적으로 영구적이거나 비가역적이거나 일시적이지 않다.
일부 측면에서, 파괴는, 예컨대 DNA 결합 단백질 또는 DNA 결합 핵산을 사용하는 유전자 편집에 의해 수행되며, 이는 파괴에 표적화된 영역의 유전자에 특이적으로 결합 또는 혼성화한다. 일부 측면에서, 단백질 또는 핵산은, 예컨대 키메라 또는 융합 단백질에서 뉴클레아제에 결합 또는 이와 복합체를 형성한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 파괴는, 파괴될 유전자에 특이적인, DNA 표적화 단백질 및 뉴클레아제, 예컨대 아연 핑거 뉴클레아제(ZFN) 또는 TAL 이펙터 뉴클레아제(TALEN) 또는 RNA 가이드 뉴클레아제, 예컨대 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 팔린드롬 핵산(CRISPR)-Cas 시스템, 예컨대 CRISPR-Cas9 시스템을 포함하는 융합체를 이용하여 달성된다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포를 생성 또는 생산하는 방법은, 유전자 조작된 항원 수용체(예를 들어 CAR)를 암호화하는 핵산 분자 및 억제 분자에 특이적인 유전자 편집 뉴클레아제, 예컨대 DNA 표적화 단백질과 뉴클레아제, 예컨대 ZFN 또는 TALEN 또는 CRISPR-Cas9 시스템과 같은 RNA 가이드 뉴클레아제의 융합체인 억제 분자를 표적화하는 제제를 암호화하는 핵산 분자를 세포 집단으로 도입하는 것을 포함한다.
여기에 기재된 임의의 추가 제제가, 예컨대 병용 요법 중 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 예컨대 여기에 기재된 어느 하나를 포함하는 약학 조성물 내에 여기에 기재된 ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체), 면역 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와의 병용 요법으로 제조 및 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, ROR1 결합 분자(예를 들어, 항체), 면역 접합체, 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체), 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포, 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 복수의 조작된 세포가, 추가 제제, 요법 또는 치료와 동시에, 함께 또는 순차적으로 어떠한 순서로든 투여될 수 있으며, 여기에서 상기 투여는 대상체의 신체에 각각의 제제를 치료적 유효 수준으로 제공한다. 제제가, 예를 들어 동일한 약학 조성물의 일부로서 또는 동일한 전달 방법을 사용하여 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물과 공투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제가, 세포의 투여 전에 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포와 함께 인큐베이션된다.
일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제가, 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 투여 전 또는 후속적으로 선택된 기간에 의해 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 기간은 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 1 주, 2 주, 3 주, 1 개월, 2 개월 또는 3 개월이다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제가 복수 회 투여되고/거나 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물이 복수 회 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제가, 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 전에, 예를 들어, 투여하기 2 주, 12 일, 10 일, 8 일, 1 주, 6 일, 5 일, 4 일, 3 일, 2 일 또는 1 일 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제가, 여기에 기재된 결합 분자(예를 들어, ROR1 결합 분자), 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 후에, 예를 들어, 투여 후 2 주, 12 일, 10 일, 8 일, 1 주, 6 일, 5 일, 4 일, 3 일, 2 일 또는 1 일에 투여된다.
추가 제제의 용량은, 임의의 치료적 유효량, 예를 들어 여기에 기재된 임의의 용량일 수 있고, 추가 제제의 적절한 투여량은, 치료될 질병의 유형, 투여된 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 유형, 용량 및/또는 빈도, 질병의 중증도 및 경과, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 선행 요법, 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 대한 환자의 임상 이력 및 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 및/또는 추가 제제 및/또는 요법은 한 번, 반복해서 환자에게 투여되거나 일련의 치료에 걸쳐 투여될 수 있다.
C. 진단 및 검출 방법
ROR1의 검출, 예를 들어, ROR1 발현 질병 또는 병태와 관련된 진단 및/또는 예후 방법에서 제공된 결합 분자, 예를 들어 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 용도를 수반하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은, 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 함께 생물학적 샘플을 인큐베이션하고/거나 대상체에 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 생물학적 샘플은 종양 또는 암 조직과 같은 세포 또는 조직을 포함한다. 특정 구현예에서, 접촉은 ROR1에 항-ROR1 항체의 결합이 허용된 조건 하이고, 복합체가 항-ROR1 항체 및 ROR1 사이에 형성되는지 여부를 검출하는 것이다. 상기 방법은 시험관 내 또는 생체 내 방법일 수 있다. 일 구현예에서, 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)이 사용되어 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 재조합 수용체를 이용한 요법에 적합한 대상체가 선택되고, 예를 들어, 여기에서 ROR1은 환자 선택을 위한 바이오마커이다.
일부 구현예에서, 샘플, 예컨대 세포, 조직 샘플, 용해물, 조성물, 또는 이로부터 유래된 기타 샘플이 항-ROR1 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)와 접촉되고, 항체와 샘플(예를 들어, 샘플 내 ROR1) 사이에 복합체의 결합 또는 형성이 결정 또는 검출된다. 테스트 샘플의 결합이 동일한 조직 유형의 기준 세포와 비교하여 입증 또는 검출된 경우, 이는 관련된 질병 또는 병태의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 인간 조직 유래이다.
특정 항체-항원 결합을 검출하는 공지된 다양한 방법이 사용될 수 있다. 예시적인 면역 분석은, 형광 편광 면역분석(fluorescence polarization immunoassay, FPIA), 형광 면역분석(fluorescence immunoassay, FIA), 효소 면역분석(enzyme immunoassay, EIA), 혼탁 억제 면역분석(nephelometric inhibition immunoassay, NIA), 효소 결합 면역흡착 분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA), 및 방사선 면역분석(radioimmunoassay, RIA)을 포함한다. 지표 모이어티 또는 표지 그룹이 대상 항체에 부착될 수 있으며, 종종 분석 장비 및 양립 가능한 면역 분석 절차의 가용성에 의해 좌우되는 방법 중 다양한 용도의 필요성이 충족되도록 선택된다. 예시적인 표지는, 방사성 핵종(예를 들어, 125I, 131I, 35S, 3H 또는 32P), 효소(예를 들어, 알칼리 포스파타제, 서양고추냉이 과산화효소, 루시퍼라제, 또는 β갈락토시다제), 형광 모이어티 또는 단백질(예를 들어, 플루오레세인, 로다민, 피코에리트린, GFP, 또는 BFP), 또는 발광 모이어티(예를 들어, Quantum Dot Corporation, Palo Alto, Calif.에서 공급하는 QdotTM 나노 입자)를 포함한다. 상기 언급된 다양한 면역 분석을 수행하는 데 사용되는 일반적인 기술이 당업계의 당업자에게 공지되어 있다.
진단 목적의 경우, 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)가, 당업계에 공지된 방사성 동위원소, 형광 표지, 및 다양한 효소 기질 표지를 포함하나 이에 국한되지 않는, 검출 가능한 모이어티로 표지될 수 있다. 항체에 표지를 접합시키는 방법이 공지되어 있다.
일부 구현예에서, 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)가 표지될 필요가 없으며, 이의 존재는 항체에 결합하는 표지된 항체를 사용하여 검출될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)가 경쟁적 결합 분석, 직간접 샌드위치 분석 및 면역침강 분석과 같은 공지된 임의의 분석 방법에 사용될 수 있다(Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)).
항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 및 폴리펩티드가, 생체 내 영상화와 같은 생체 내 진단 분석에 또한 사용될 수 있다. 일반적으로, 항체가 방사성 핵종(예컨대 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I 또는 3H)으로 표지되어 관심 세포 또는 조직이 대상체에 투여된 후 생체 내에서 국소화될 수 있다.
항체(예를 들어, 항원 결합 단편)가, 예를 들어 공지된 기술을 사용하여 병리학에서 염색 시약으로 또한 사용될 수 있다.
Ⅴ. 제조 물품 또는 키트
제공된 결합 분자(예를 들어, 항체), 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 유전자 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 함유하는 제조 물품 또는 키트가 또한 제공된다. 제조 물품은, 컨테이너 및 컨테이너 상에 또는 컨테이너와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 컨테이너는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 테스트 튜브, IV 용액 백 등을 포함한다. 컨테이너는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 컨테이너는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 컨테이너는, 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 있는 것을 포함하여 정맥내 용액 백, 바이알을 포함한다. 제조 물품 또는 키트는, 조성물이 여기에 기재된 병태(예를 들어, ROR1 발현 암)와 같은 특정 병태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 더 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 제조 물품 또는 키트는, 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 또 다른 컨테이너 또는 동일한 컨테이너를 더 포함할 수 있다. 상기는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같은 다른 물질을 더 포함할 수 있다.
라벨 또는 패키지 삽입물은, 조성물이 개체에서 ROR1 발현 또는 ROR1 관련 질병, 장애 또는 병태의 치료에 사용됨을 나타낼 수 있다. 컨테이너 상에 있거나 컨테이너와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물은, 제형의 재구성 및/또는 사용에 대한 지시를 나타낼 수 있다. 라벨 또는 패키지 삽입물은, 제형이 개체에서 ROR1 발현 또는 ROR1 관련 질병, 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 피하, 정맥 내 또는 기타 투여 방식에 유용하거나 의도된 것임을 더 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, 라벨 또는 패키지 삽입물은, 사용 지침, 예를 들어 일부 측면에서, 여기에 기재된 임의의 방법 또는 용도와 부합되게 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 세포 또는 조성물의 투여 지침을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 컨테이너는, 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는 데 효과적인 또 다른 조성물 그 자체로 또는 이와 조합된 조성물을 보유한다. 제조 물품 또는 키트는, (a) 그안에 조성물이 함유된 제1 컨테이너(즉, 제1 약제) - 여기에서 상기 조성물은 항체(예를 들어, 항-ROR1 항체) 또는 이의 항원 결합 단편 또는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)을 포함함 - ; 및 (b) 그안에 조성물이 함유된 제2 컨테이너(즉, 제2 약제) - 여기에서 상기 조성물은 세포 독성제 또는 그렇지 않으면 치료제와 같은 추가 제제를 포함함 - 를 포함할 수 있고, 이의 물품 또는 키트는 유효량의 제2 약제로 대상체를 치료하기 위한 라벨 또는 패키지 삽입물 상에 지침을 더 포함한다.
Ⅵ. 정의
여기에 사용된 바와 같이, 항체의 "대응 형태(corresponding form)"에 대한 참조는, 두 항체의 특성 또는 활성을 비교할 때, 동일한 형태의 항체를 사용하여 특성이 비교됨을 의미한다. 예를 들어, 어떤 항체가 제1 항체의 대응하는 형태의 활성에 비해 보다 큰 활성을 갖는다고 언급된 경우, 이는 상기 항체의 scFv와 같은 특정 형태가 제1 항체의 scFv 형태에 비해 보다 큰 활성을 갖는다는 것을 의미한다.
“이펙터 기능(effector function)”은 항체 아이소타입에 따라 다른, 항체의 Fc 영역에 기인하는 이의 생물학적 활성을 지칭한다. 항체 이펙터 기능의 예는, C1q 결합 및 보체 의존 세포독성(complement dependent cytotoxicity: CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존 세포 매개 세포독성(antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity: ADCC); 식세포작용; 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체)의 하향 조절; 및 B 세포 활성화;를 포함한다.
여기에서 용어 “Fc 영역(Fc region)”이 사용되어, 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역 글로불린 중쇄의 C-말단 영역이 정의된다. 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은, Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실 말단까지 확장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 여기에 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은, 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은 EU 색인으로도 명명되는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
용어 "전장 항체(full length antibody)", "손상되지 않은 항체(intact antibody)" 및 "전체 항체(whole antibody)"는 여기에서 상호 교환적으로 사용되어 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 여기에 정의된 바와 같은 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다.
"단리된(isolated)" 항체는 이의 자연 환경의 구성 요소에서 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는, 예를 들어 전기 영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전 포커싱(isoelectric focusing, IEF), 모세관 전기 영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도까지 정제된다. 항체 순도 평가 방법의 검토를 위해, 예를 들어, 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
"단리된(isolated)" 핵산은 자연 환경의 구성 요소에서 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하나, 핵산 분자가 염색체 외 또는 이의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
"항-ROR1 항체를 암호화하는 단리된 핵산(isolated nucleic acid encoding an anti-ROR1 antibody)"은, 단일 벡터 또는 별도의 벡터 내 상기 핵산 분자(들) 및 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재하는 상기 핵산 분자(들)을 포함하여 항체 중쇄 및 경쇄(또는 이의 단편)를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭한다.
용어 "숙주 세포(host cell)", "숙주 세포주(host cell line)" 및 "숙주 세포 배양(host cell culture)"은 상호 교환적으로 사용되며, 상기 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질 전환체(transformants)" 및 "형질 전환된 세포(transformed cells)"를 포함하고, 이는 1차 형질 전환된 세포 및 계대 수에 관계없이 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 부모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으나 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질 전환된 세포에서 선별되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 여기에 포함된다.
여기에 사용된 바와 같이, "아미노산 서열 동일성 백분율(percent (%) amino acid sequence identity)”및 “동일성 백분율(percent identity)”및 "서열 동일성(sequence identity)"이 아미노산 서열(기준 폴리펩티드 서열)에 관하여 사용될 경우, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고 최대의 서열 동일성 백분율을 달성하기 위해 서열 및 필요하다면 도입 갭을 정렬한 후 기준 폴리펩티드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어, 대상 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 정렬은, 예를 들어 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 당업계 기술 범위 내의 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 당업자는, 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하는 데 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
아미노산 치환은, 폴리펩티드에서 하나의 아미노산을 또 다른 아미노산으로 교체하는 것을 포함할 수 있다. 치환은 보존적 아미노산 치환 또는 비보존적 아미노산 치환일 수 있다. 아미노산 치환이, 관심 결합 분자, 예를 들어 항체에 도입될 수 있고, 생성물이, 바람직한 활성, 예를 들어 보유/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 스크리닝될 수 있다.
아미노산은 일반적으로 하기의 공통적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르루신(Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
일부 구현예에서, 보존적 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤머를 동일한 클래스의 또 다른 멤버로 교환하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 비보존적 아미노산 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤버를 또 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 수 있다.
여기에 사용된 바와 같은 용어 "벡터(vector)"는 이에 연결된 또 다른 핵산을 번식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 용어는, 상기가 도입된 숙주 세포의 게놈에 통합된 벡터뿐만아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 여기에서 "발현 벡터(expression vector)"로 지칭된다.
용어 “패키지 삽입물(package insert)”은, 지시, 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 상기 치료 생성물의 용도와 관련한 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유한 치료 생성물의 상업적 패키지에 관례적으로 포함되는 지시 사항을 지칭하는 데 사용된다.
여기에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, "a" 또는 "an"은 "적어도 하나(at least one)" 또는 "하나 이상(one or more)"을 의미한다. 여기에 기재된 측면, 구현예 및 변형은, 측면, 구현예 및 변형을 “포함하는(comprising)”"구성하는(consisting)" 및/또는 "본질적으로 구성하는(consisting essentially of)"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 개시를 통해, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 상기 범위 내의 개별 수치뿐만아니라 모든 가능한 하위 범위를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 수치의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이 각각의 사이에 오는 수치와 상기 언급된 범위에서 임의의 다른 언급되거나 사이에 오는 수치가 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 상기 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한도를 조건으로 청구된 주제 내에 또한 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 경우, 상기 포함된 한계 중 하나 또는 둘 다를 제외한 범위가 청구된 주제에 또한 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
여기에 사용된 바와 같은 용어 "약(about)"은, 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 공지된 각각의 수치에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 여기에서 "약"의 수치 또는 파라미터에 대한 언급은, 상기 수치 또는 파라미터 자체에 관한 구현예를 포함(및 설명)한다. 예를 들어, "약 X(about X)”를 지칭하는 기재는 "X"의 기재를 포함한다.
여기에 사용된 바와 같이, “조성물(composition)”은 세포를 포함하여 둘 이상의 생성물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이의 임의의 조합물일 수 있다.
여기에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성(positive)"이라는 진술은, 특정 마커, 전형적으로 표면 마커가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 마커를 지칭할 경우, 용어가, 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 유세포 분석에 의해 검출된 때 표면 발현의 존재를 지칭하며, 여기에서 염색은, 그렇지 않으면 동일한 조건 하에서 아이소타입 매칭된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.
여기에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 “음성(negative)”이라는 진술은, 특정 마커, 전형적으로 표면 마커가 세포 상에 또는 세포 내에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 마커를 지칭할 경우, 용어가, 예를 들어 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 유세포 분석에 의해 검출된 때 표면 발현의 부재를 지칭하며, 여기에서 염색은, 그렇지 않으면 동일한 조건 하에서 아이소타입 매칭된 대조군으로 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.
달리 정의되지 않는 한, 여기에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 기타 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는, 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어가 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 여기에 정의되며, 여기에 상기 정의의 포함이 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되어서는 안된다.
Ⅶ. 예시적인 구현예
제공된 구현예 중에는 하기가 있다:
1. 중쇄 가변(VH) 영역, 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함한다.
2. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서
상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
3. 구현예 1 또는 구현예 2에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
4. 구현예 1 또는 구현예 2에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
5. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함한다.
6. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
7. 구현예 5 또는 구현예 6에서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
8. 구현예 5 또는 구현예 6에서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
9. 구현예 1, 2, 5 및 6 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
10. 구현예 1, 2, 및 5-7 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
11. 구현예 1-10 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서 상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
12. 구현예 1-10 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서 상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
13. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
14. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
15. 구현예 13 또는 구현예 14에서, 여기에서 상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
16. 구현예 13 또는 구현예 14에서, 여기에서 상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
17. 구현예 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13 및 14 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
18. 구현예 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14 및 17 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
19. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
20. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서, 여기에서:
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
21. 구현예 1-20 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
22. 구현예 1-20 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
23. 구현예 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14 및 17-20 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
24. 구현예 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17-20 및 23 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
25. 구현예 1-24 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
26. 구현예 1-25 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
27. 구현예 1-24 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
28. 구현예 1-25 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
29. 구현예 1-28 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 단리된다.
30. 구현예 1-29 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합이다.
31. 구현예 1-30 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역 중 적어도 일부가 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
32. 구현예 1-31 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 단편, 선택적으로 단일 사슬 Fv(single chain Fv, scFv)를 포함한다.
33. 구현예 1-32 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
34. 구현예 1-32 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다.
35. 구현예 1-34 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다.
36. 구현예 35에서, 상기 가요성 링커는 서열 번호: 41에 제시된 서열을 포함한다.
37. 구현예 32, 33, 35 및 36 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
38. 구현예 32, 33 및 35-37 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
39. 구현예 32, 33 및 35-37 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
40. 구현예 32, 33 및 35-37 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
41. 구현예 32, 33, 35-37 및 40 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
42. 구현예 32-41 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 116 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
43. 구현예 32-42 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 117에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
44. 구현예 32-41 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 125 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
45. 구현예 32-41 및 43 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
46. 구현예 1-45 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 단편은 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 더 포함한다.
47. 구현예 46에서, 상기 면역 글로불린 불변 영역의 일부는 힌지 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
48. 구현예 46 또는 구현예 47에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 상기 적어도 일부는 CH2 영역 및/또는 CH3 영역 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
49. 구현예 46-48 중 어느 하나의 구현예에서, 면역 글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체의 상기 적어도 일부는 인간이거나 인간 단백질 또는 이의 변이체 유래이다.
50. 구현예 1-49 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1, ROR1) 단백질, 선택적으로 인간 ROR1에 특이적으로 결합한다.
51. 구현예 50에서, 상기 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
52. 구현예 1-51 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질, 선택적으로 인간 ROR2에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다.
53. 구현예 1-52 중 어느 하나의 구현예에서, 인간 ROR2에 대한 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는, 인간 ROR1에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다.
54. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 단일 사슬 세포 표면 단백질.
55. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이종 분자 또는 모이어티를 포함하는, 접합체.
56. 구현예 55에서, 상기 이종 분자 또는 모이어티는 치료 모이어티이다.
57. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR).
58. 중쇄 가변(VH) 영역, 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서 상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 82 또는 52에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 서열 번호: 71, 86, 56 또는 97에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 서열 번호: 73, 88, 58 또는 99에 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 90 또는 60에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 서열 번호: 77, 92 또는 62에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 서열 번호: 79, 94 또는 64에 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함한다.
59. 중쇄 가변(VH) 영역, 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서
상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
60. 구현예 58 또는 구현예 59에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
61. 구현예 58 또는 구현예 59에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
62. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함한다.
63. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
64. 구현예 62 또는 구현예 63에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
65. 구현예 62 또는 구현예 63에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
66. 구현예 58, 59, 62 및 63 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
67. 구현예 58, 59, 및 62-64 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
68. 구현예 58-67 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호:115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
69. 구현예 58-67 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호:124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
70. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
71. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
72. 구현예 70 또는 구현예 71에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
73. 구현예 70 또는 구현예 71에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
74. 구현예 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70 및 71 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
75. 구현예 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71 및 74 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
76. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역은 서열 번호: 112, 121, 103 또는 130에 제시된 서열이거나 이를 포함하고,
상기 VL 영역은 서열 번호: 115, 124 또는 106에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
77. 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)로서, 여기에서:
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
78. 구현예 58-77 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
79. 구현예 58-77 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
80. 구현예 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71 및 74-77 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 113, 122 또는 104 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
81. 구현예 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71, 74-77 및 80 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
82. 구현예 58-81 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 110 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 113 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
83. 구현예 58-82 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 111에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 114에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
84. 구현예 58-81 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 119 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 122 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
85. 구현예 58-82 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 120에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 123에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
86. 구현예 58-85 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단리된다.
87. 구현예 58-86 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합이다.
88. 구현예 58-87 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역 중 적어도 일부는 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
89. 구현예 58-88 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 단편, 선택적으로 단일 사슬 Fv(scFv)를 포함한다.
90. 구현예 58-89 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 아미노 말단이다.
91. 구현예 58-89 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대해 카르복시 말단이다.
92. 구현예 58-91 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다.
93. 구현예 92에서, 상기 가요성 링커는 서열 번호: 41에 제시된 서열을 포함한다.
94. 구현예 89, 90, 92 및 93 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
95. 구현예 89, 90 및 92-94 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
96. 구현예 89, 90 및 92-94 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
97. 구현예 89, 90 및 92-94 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
98. 구현예 89, 90, 92-94 및 40 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
99. 구현예 89-98 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 116 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
100. 구현예 89-99 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 117에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
101. 구현예 89-98 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 125 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
102. 구현예 89-98 및 100 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 126에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
103. 구현예 58-102 중 어느 하나의 구현예에서, 스페이서를 더 포함한다.
104. 구현예 103에서, 상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 포함한다.
105. 구현예 103 또는 구현예 104에서, 상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함한다.
106. 구현예 103-105 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 (약) 15개 미만의 아미노산 길이이다.
107. 구현예 103-106 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 또는 135에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
108. 구현예 105-107 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG4 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함한다.
109. 구현예 105-107 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG2 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함한다.
110. 구현예 103-109 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
111. 구현예 103-110 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 192 또는 서열 번호: 192에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
112. 구현예 103-111 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 136에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
113. 구현예 103-112 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다.
114. 구현예 103-113 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CH3 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서, 상기 IgG4 CH3는 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고, 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3이다.
115. 구현예 103-114 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다.
116. 구현예 103-115 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, (약) 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 125개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이 길이를 갖는다.
117. 구현예 103-116 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이이다.
118. 구현예 103-117 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 138에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
119. 구현예 103-118 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 138에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
120. 구현예 103-119 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 193 또는 서열 번호: 193에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
121. 구현예 103-120 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 139에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
122. 구현예 103-121 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 CH2의 적어도 일부를 포함한다.
123. 구현예 103-122 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CH2 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서, 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고, 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이다.
124. 구현예 103-123 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부, CH2의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다.
125. 구현예 103-124 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 또는 230개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이의 길이를 갖는다.
126. 구현예 103-125 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상은 인간 IgG4 유래 CH2 영역의 전부 또는 일부 및 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함한다.
127. 구현예 103-125 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상이 키메라이고, 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 힌지, CH2 영역 및 CH3 영역을 포함한다.
128. 구현예 103-125 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지에 비해 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역;을 포함한다.
129. 구현예 103-125 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
130. 구현예 103-129 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 194에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
131. 구현예 103-130 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 195 또는 서열 번호: 195에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
132. 구현예 103-131 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 196에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
133. 구현예 58-132 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
134. 구현예 133에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고/거나, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 구성 요소이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함한다.
135. 구현예 133 또는 구현예 134에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은, CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 기능성 변이체 또는 신호 전달 부분이거나 이를 포함한다.
136. 구현예 133-135 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
137. 구현예 133-136 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은, 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시된 서열 또는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
138. 구현예 133-137 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
139. 구현예 133-138 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함한다.
140. 구현예 139에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
141. 구현예 139 또는 구현예 140에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함한다.
142. 구현예 140-141 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
143. 구현예 140-142 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
144. 구현예 140-143 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은, 서열 번호: 10에 제시된 서열 또는 서열 번호: 10에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
145. 구현예 140-144 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다.
146. 구현예 140-142 및 145 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은, 서열 번호: 12에 제시된 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
147. 구현예 58-146 중 어느 하나의 구현예에서, 막관통 영역을 더 포함한다.
148. 구현예 140-147 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 막관통 영역과 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 존재한다.
149. 구현예 147 또는 구현예 148에서, 상기 막관통 영역은 CD4, CD28, 또는 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
150. 구현예 147-149 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 영역은 CD28에서 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
151. 구현예 147-150 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
152. 구현예 147-151 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 도메인은, 서열 번호: 8 또는 서열 번호: 8에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
153. 구현예 147-152 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단으로: 세포 외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역 순서로 포함한다.
154. 구현예 58-153 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인; 선택적으로 서열 번호: 135에 제시된 서열을 포함하는 변형된 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 포함한다.
155. 구현예 58-153 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로: scFv를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인; 선택적으로 서열 번호: 138에 제시된 서열을 포함하는 변형된 IgG4 힌지-CH3을 포함하는 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역; 순서로 포함한다.
156. 구현예 58-155 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
157. 구현예 58-156 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
158. 구현예 58-157 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
159. 구현예 58-156 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 185에 제시된 서열 또는 서열 번호: 185에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
160. 구현예 58-156 및 159 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 185에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
161. 구현예 58-156 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다.
162. 구현예 58-158 및 161 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 156에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다.
163. 구현예 58-158, 161 및 162 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 의해 암호화된다.
164. 구현예 58-156 및 159-161 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 157에 제시된 서열 또는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 암호화된다.
165. 구현예 58-156, 159-161 및 164 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 의해 암호화된다.
166. 구현예 58-165 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질, 선택적으로 인간 ROR1에 특이적으로 결합한다.
167. 구현예 166에서, 상기 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
168. 구현예 58-167 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(ROR2) 단백질, 선택적으로 인간 ROR2에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합한다.
169. 구현예 58-168 중 어느 하나의 구현예에서, 인간 ROR2에 대한 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 인간 ROR1에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작다.
170. 구현예 58-169 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 ROR1 단백질, 선택적으로 인간 ROR1의 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도에 비해 ROR2 단백질, 선택적으로 인간 ROR2의 존재 하에서 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다.
171. 구현예 58-170 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 인간 ROR1 존재 하의 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 신호 전달 또는 활성의 수준 또는 정도를 인간 ROR2의 존재 하에 나타낸다.
172. 구현예 58-171 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질, 선택적으로 인간 ROR2의 존재 하에 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다.
173. 구현예 58-172 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 ROR2 단백질, 선택적으로 인간 ROR2의 존재 하에 동일하거나, 실질적으로 동일하거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도의 신호 전달 또는 활성을 나타낸다.
174. 구현예 58-173 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 또는 그보다 높은 항원 특이적 신호 전달 및/또는 항원 의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다.
175. 구현예 58-174 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체에 비해 동일하거나 실질적으로 동일하거나 또는 그보다 낮은 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다.
176. 구현예 58-175 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 선택적으로 동일하거나 실질적으로 동일한 조건 또는 평가 하에 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체의 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성의 수준 또는 정도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 수준 또는 정도의 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타낸다.
177. 구현예 172-176 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 기준 ROR1 특이적 키메라 항원 수용체는, 항-ROR1 항체 R12 또는 항-ROR1 항체 2A2 또는 이의 항원 결합 단편, 선택적으로 R12 또는 2A2 유래 scFv를 포함한다.
178. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체 또는 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
179. 구현예 178에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110, 119, 101 또는 128에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113, 122 또는 104에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113, 122 또는 104에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
180. 구현예 178 또는 구현예 179에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 110에 제시된 서열 또는 서열 번호: 110에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 113에 제시된 서열 또는 서열 번호: 113에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
181. 구현예 178 또는 구현예 179에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 119에 제시된 서열 또는 서열 번호: 119에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 122에 제시된 서열 또는 서열 번호: 122에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
182. 구현예 178-180 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116, 125, 107 또는 132에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
183. 구현예 178-180 및 182 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 116에 제시된 서열 또는 서열 번호: 116에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
184. 구현예 178-180 및 182 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 125에 제시된 서열 또는 서열 번호: 125에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
185. 구현예 178-184 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 192에 제시된 서열 또는 서열 번호: 192에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
186. 구현예 178-184 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 193에 제시된 서열 또는 서열 번호: 193에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
187. 구현예 178-184 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 195에 제시된 서열 또는 서열 번호: 195에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
188. 구현예 187에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체 또는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산은, 하나 이상의 변형된 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형된 스플라이스 공여체 및/또는 수용체 부위는, 기준 스플라이스 공여체 부위 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위에 대응하는 하나 이상의 뉴클레오티드 변형을 포함한다.
189. 구현예 188에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오티드 변형은 핵산 치환을 포함한다.
190. 구현예 188 또는 구현예 189에서, 상기 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 정규, 비정규 또는 숨은 스플라이스 부위이다.
191. 구현예 188-190 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 (약) 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나;
상기 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 (약) 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
192. 구현예 188-191 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 (약) 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 이상 또는 1.0의 스플라이스 부위 예상 점수를 갖고/거나;
상기 기준 스플라이스 공여체 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 (약) 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 이상 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예상된다.
193. 구현예 188-192 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오티드 변형 중 하나 이상이, 기준 스플라이스 수용체 및/또는 기준 스플라이스 공여체 부위의 스플라이스 부위 교차점 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다.
194. 구현예 188-193 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 하나 이상의 뉴클레오티드 변형은 침묵하고/거나 퇴화 코돈을 초래하고/거나 암호화된 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않는다.
195. 구현예 188-194 중 어느 하나의 구현예에서, 세포에서 폴리뉴클레오티드 발현 시, 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 (약) 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90% 또는 (약) 95% 이상의 RNA 동질성을 나타낸다.
196. 구현예 188-195 중 어느 하나의 구현예에서, 세포에서 발현 시, 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 기준 폴리뉴클레오티드에서 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 기준 폴리뉴클레오티드는 폴리뉴클레오티드와 동일한 아미노산 서열을 암호화하고, 여기에서 상기 기준 폴리뉴클레오티드는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여체 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나 폴리뉴클레오티드에 비해 하나 이상의 뉴클레오티드 변형을 포함한다.
197. 구현예 196에서, 상기 RNA 이질성이 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 또는 50% 이상보다 더 많이 감소된다.
198. 구현예 196 또는 구현예 197에서, 기준 폴리뉴클레오티드에서 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 또는 50% 이상보다 더 높은 RNA 이질성을 나타낸다.
199. 구현예 188-198 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기 영동, 칩-기반 모세관 전기 영동, 분석적 초 원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
200. 구현예 188-199 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다.
201. 구현예 178, 179, 182, 185, 186 및 188-200 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 111, 120, 102 또는 129에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114, 123, 105 또는 131에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
202. 구현예 178-180, 182, 183, 185, 186 및 198-201 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 111에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 114에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
203. 구현예 178, 179, 181, 182, 184-186 및 198-201 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 120에 제시된 서열을 포함하는 VH를 암호화하는 핵산 및 서열 번호: 123에 제시된 서열을 포함하는 VL을 암호화하는 핵산을 포함한다.
204. 구현예 178, 179, 182, 185, 186 및 188-201 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117, 126, 108 또는 133에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
205. 구현예 178-180, 182, 183, 185, 186, 198-201 및 204 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 117에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
206. 구현예 178, 179, 181, 182, 184-186, 198-201 및 204 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 126에 제시된 서열을 포함하는 scFv를 암호화하는 핵산을 포함한다.
207. 구현예 178-185 및 188-206 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 136에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
208. 구현예 178-184, 186 및 188-206 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 139에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
209. 구현예 178-184 및 187-206 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 196에 제시된 서열을 포함하는 스페이서를 암호화하는 핵산을 포함한다.
210. 구현예 178-186 및 188-209 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156, 157, 158, 159, 160 또는 161에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
211. 구현예 178-186 및 188-210 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 156에 제시된 서열 또는 서열 번호: 156에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
212. 구현예 178-186 및 188-211 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 156에 제시된 서열을 포함한다.
213. 구현예 178-186 및 188-210 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는, 서열 번호: 157에 제시된 서열 또는 서열 번호: 157에 제시된 서열에 대해 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
214. 구현예 178-186, 188-210 및 213 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열 번호: 157에 제시된 서열을 포함한다.
215. 구현예 178-214 중 어느 하나의 구현예는 CD33 신호 서열, GM-CSF 신호 서열, CD8 신호 서열 또는 Ig 카파 신호 서열을 더 포함한다.
216. 구현예 178-214 중 어느 하나의 구현예는 CD33 신호 서열을 더 포함한다.
217. 구현예 215 또는 구현예 216에서, 상기 CD33 신호 서열은, 서열 번호: 190에 제시되거나 또는 서열 번호: 190에 대해 (약) 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 핵산 서열이다.
218. 구현예 178-217 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
219. 구현예 218에서, 상기 벡터는 바이러스 벡터이다.
220. 구현예 219에서, 상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터이다.
221. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 구현예 178-217 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 구현예 218-220 중 어느 하나의 벡터를 포함하는, 세포.
222. 구현예 221의 세포는 림프구이다.
223. 구현예 222의 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다.
224. 구현예 222 또는 구현예 223에서, 상기 세포는 T 세포이고 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다.
225. 구현예 221-224 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포는 대상체에서 수득된 1차 세포이다.
226. 구현예 221-225 중 어느 하나의 구현예에서, 복수의 세포 중, (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 세포가 복수로 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함한다.
227. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질 또는 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함하는, 조성물.
228. 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포를 포함하는, 조성물.
229. 구현예 227 또는 구현예 228의 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함한다.
230. 구현예 228 또는 구현예 229에서, 상기 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 (약) 1:2 내지 2:1, 선택적으로 (약) 1:1이다.
231. 구현예 227-230 중 어느 하나의 구현예에서, 복수의 세포 중, (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 세포가 복수로 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함한다.
232. ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
233. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 구현예 178-217 중 어느 하나의 폴리뉴클레오티드, 구현예 218-220 중 어느 하나의 벡터 또는 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포를 ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
234. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물.
235. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 약제를 제조하기 위한 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물의 용도.
236. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물의 용도.
237. 구현예 232-236 및 298-311 중 어느 하나의 용도 또는 사용을 위한 방법, 조성물에서, 상기 ROR1 관련 질병 또는 장애는 ROR1 발현과 관련된다.
238. 구현예 232-237 및 298-311 중 어느 하나의 용도 또는 사용을 위한 방법, 조성물에서, 상기 ROR1 관련 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다.
239. 구현예 232-238 및 298-311 중 어느 하나의 용도 또는 사용을 위한 방법, 조성물에서, 상기 ROR1 관련 질병 또는 장애는 암이다.
240. 구현예 239에서, 상기 암은 ROR1 발현 암이다.
241. 구현예 240에서, 상기 ROR1 발현 암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종, 맨틀 세포 림프종(MCL), 비-소세포 폐암(NSCLC), 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다.
242. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체, 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 선택적으로 여기에서 상기 지침은, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 단일 사슬 세포 표면 단백질, 상기 접합체, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 상기 세포 또는 상기 조성물을 선택적으로 구현예 234-241 및 298-311 중 어느 하나의 용도 또는 사용을 위한 방법, 조성물과 부합되게 투여하기 위한 것이다.
243. 구현예 1-53 및 244-265 중 어느 하나의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 구현예 54의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 구현예 55 또는 구현예 56의 접합체, 구현예 57-177 및 266-297 중 어느 하나의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포, 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물 또는 구현예 242의 키트를 포함하는, 제조 물품.
244. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
245. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 각각 제시된 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
246. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
247. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함한다.
248. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
249. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
250. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
251. 구현예 1-53 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
252. 구현예 1-53 및 244-251 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체는 전장 항체이다.
253. 구현예 1-53 및 244-251 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체는 항원 결합 단편이다.
254. 구현예 1-53 및 244-253 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합이다.
255. 구현예 1-53 및 244-254 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래이다.
256. 구현예 1-53 및 244-255 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 109에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
257. 구현예 1-53 및 244-255 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 scFv는 서열 번호: 134에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
258. 구현예 1-53 및 244-257 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 199에 제시된 서열로 구성된 에피토프 또는 서열 번호: 199에 제시된 서열 내에 존재하는 에피토프에 특이적으로 결합한다.
259. 구현예 1-53 및 244-257 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에서 선택된 서열로 구성된 하나 이상의 에피토프 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에서 선택된 서열 내에 존재하는 에피토프에 더 결합한다.
260. 구현예 1-53 및 244-259 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 1 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
261. 구현예 1-53 및 244-260 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 1 x 10-8 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
262. 구현예 1-53 및 244-260 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 5 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-10 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
263. 구현예 1-53 및 244-262 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
264. 구현예 1-53 및 244-263 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 1 x 10-3 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
265. 구현예 1-53 및 244-263 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-4 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합한다.
266. 구현예 57-177 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG4 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함한다.
267. 구현예 57-1777 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG2 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함한다.
268. 구현예 57-177 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
269. 구현예 57-177 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
270. 구현예 57-177 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다.
271. 구현예 57-177 및 270 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CH3 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서, 상기 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고, 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3이다.
272. 구현예 57-177, 270 및 271 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, (약) 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 125개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이 길이를 갖는다.
273. 구현예 57-177 및 270-272 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이이다.
274. 구현예 57-177 및 270-273 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 3 또는 138에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
275. 구현예 57-177 및 270-274 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 3 또는 138에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
276. 구현예 57-177 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부, CH2의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함한다.
277. 구현예 57-177 및 276 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 CH2 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고, 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이다.
278. 구현예 57-177, 276 및 277 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 또는 230개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 사이의 길이를 갖는다.
279. 구현예 57-177 및 276-278 중 어느 하나의 구현예에서, 여기에서:
상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상이 인간 IgG4 유래 CH2 영역의 전부 또는 일부 및 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하거나; 또는
상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상이 키메라이고, 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 힌지, CH2 영역 및 CH3 영역을 포함하거나; 또는
상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지에 비해 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역;을 포함한다.
280. 구현예 57-177 및 276-279 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 37 또는 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
281. 구현예 57-177 및 276-280 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 스페이서는 서열 번호: 37 또는 194에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
282. 구현예 57-177 및 266-281 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 영역은 CD4, CD28, 또는 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
283. 구현예 57-177 및 266-282 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 영역은 CD28, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함한다.
284. 구현예 57-177 및 266-283 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 막관통 도메인은, 서열 번호: 8 또는 149 또는 서열 번호: 8 또는 149에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함한다.
285. 구현예 57-177 및 266-284 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 세포 내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함한다.
286. 구현예 57-177 및 266-285 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
287. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
288. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
289. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 185에 제시된 서열 또는 서열 번호: 185에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
290. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 185에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
291. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 186에 제시된 서열 또는 서열 번호: 186에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
292. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 186에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
293. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 187에 제시된 서열 또는 서열 번호: 187에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
294. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 187에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
295. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 188에 제시된 서열 또는 서열 번호: 188에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
296. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 188에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
297. 구현예 57-177 및 266-286 중 어느 하나의 구현예에서, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함한다.
298. ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에게 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물을 투여하는 것을 포함한, 치료 방법.
299. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물.
300. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 약제의 제조를 위한 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물의 용도.
301. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 구현예 221-226 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227-231 중 어느 하나의 조성물의 용도.
302. 구현예 232-241 및 298-302 중 어느 하나의 사용 또는 용도를 위한 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터로서, 여기에서 ROR1과 관련된 질병 또는 장애는 암이다.
303. 구현예 302에서, 여기에서 상기 암은 ROR1 발현 암이다.
304. 구현예 232-241 및 298-303 중 어느 하나의 사용 또는 용도를 위한 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터로서, 여기에서 상기 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
305. 구현예 232-241 및 298-304 중 어느 하나의 사용 또는 용도를 위한 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터로서, 여기에서 상기 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된다.
306. 구현예 304 또는 구현예 305에서, 고형 종양과 관련된 상기 암은, 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택된다.
307. 구현예 306에서, 상기 폐암은, 비-소세포 폐암(NSCLC), 폐 선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종 및 비정형 암양종이다.
308. 구현예 307에서, 상기 폐암은 NSCLC이다.
309. 구현예 306에서, 상기 유방암은 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer, TNBC)이다.
310. 구현예 232-241 및 298-304 중 어느 하나의 사용 또는 용도를 위한 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터로서, 여기에서 상기 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된다.
311. 구현예 310에서, 상기 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(CLL), 급성 골수성 백혈병(AML), 급성 림프구성 백혈병(ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(MCL)으로 구성된 군에서 선택된다.
Ⅷ. 실시예
하기 실시예는 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.
실시예 1: 항-ROR1 항체의 생성 및 평가
ROR1 발현 세포에 특이적으로 결합하는 예시적인 항-수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 항체가 유전자 조작된 마우스의 면역화에 의해 생성되었고 평가되었다.
A. 항체 생성
완전한 인간 항체 가변 영역을 함유하는 항체를 생성하도록 유전적으로 변형된 마우스(Trianni, Inc., San Francisco, CA)가 히스티딘 태그에 융합된 인간 ROR1의 재조합 세포 외 도메인(extracellular domain, ECD)으로 면역되었다. 비장, 림프절 및 골수가 수집되었고, ROR1 특이적 기억 B 세포 및 혈장 세포가 면역 친화도 기반 선택에 의해 농축되었다.
농축된 분획의 세포 집단이 항체 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)의 고처리량 단일 세포 페어링된 염기 서열 결정의 대상이 되었다. 고처리량 단일 세포 항체 염기 서열 결정이, 문헌[국제 출원 WO2012/048340, WO2012/048341, WO2016/044227 및 WO2016/176322]에 일반적으로 기재된 바와 같이 수행되었다. 액적 및 분자 바코드를 갖는 단일 세포 액적을 이용하여 항체 VH 및 VL의 개별 쌍을 식별하는 염기 서열 결정 방법은, 세포 집단에 존재하는 수많은 단일 세포 각각에 대해 단일 세포 수준에서 염기 서열을 결정한다. 항체 VH/VL 쌍 서열이 합성을 위해 선택되었고, 쌍을 이룬 후보 각각을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가, VH 및 VL 사슬 방향(VH-VL) 또는 VL-VH 방향 중 어느 하나의 단일 사슬 Fv 단편(scFv)으로 합성되었다.
B. 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR) 생성
합성된 scFv 암호화 서열이 예시적인 폴리뉴클레오티드 작제물로 클로닝되어 항원 결합 도메인으로 후보 scFv를 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 후보 폴리뉴클레오티드가 생성되었다. 특정적으로, 폴리뉴클레오티드 CAR 작제물은, 단일 펩티드; 후보 항-ROR1 scFv; 3개의 예시적인 스페이서 중의 스페이서: 변형된 IgG4/IgG2-힌지 CH2-CH3(서열 번호: 194)을 함유하는 스페이서, 변형된 IgG4 힌지-CH3(서열 번호: 138)을 함유하는 스페이서 또는 변형된 IgG4 힌지 영역(서열 번호: 135)을 함유하는 스페이서; 인간 CD28 막관통 도메인; 인간 4-1BB 세포 내 신호 전달 영역; 및 인간 CD3-제타 세포 내 신호 전달 영역;을 암호화하는 핵산 서열을 함유했다. 작제물은, CAR 암호화 서열과 형질 도입 마커로 사용하기 위한 그린 형광 단백질을 암호화하는 서열 사이에 T2A 리보솜 건너뛰기 요소(서열 번호: 6)을 하류에 또한 함유했다. CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드가 T 세포 형질 도입을 위해 렌티바이러스 발현 벡터로 클로닝되었다.
C. 후보 항-ROR1 CAR의 평가
대략 400개의 후보 항-ROR1 CAR 암호화 작제물이 상기 기재된 바와 같이 생성되었고, 다양한 후보 항-ROR1 CAR을 암호화하는 작제물을 함유하는 바이러스 제제가, Nur77 녹-인(knock-in) 리포터를 함유하는 쥬르카트 T 세포주로 개별적으로 도입되었다(예를 들어 문헌[국제 출원 WO 2019/089982] 참조) Nur77 녹-인 세포주는, 내인성 Nur77 유전자 좌로 녹-인된 리포터 분자(예를 들어, 레드 형광 단백질)를 암호화하는 핵산 서열을 함유했고, 이는 T 세포 수용체 유래 신호의 자극에 의해 및/또는 면역 수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유하는 분자를 통해 유도된 즉각적인 초기 반응 유전자이다. 쥬르카트 리포터 세포가, CAR의 세포 표면 발현, 항원 의존적 및 항원 비의존적 신호 전달 및 관련되나 별개의 항원 ROR2에 대한 교차 반응성에 대해 평가되었다.
형질 도입 후, 리포터 세포가, K562 인간 골수성 백혈병 세포(ROR1 음성), 높은 수준의 ROR1을 발현하도록 형질 도입된 K562 세포, 낮은 수준의 ROR1을 발현하도록 형질 도입된 K562 세포 및 비특이적 항원 ROR2를 발현하는 K562 세포를 포함하는 표적 세포와 함께 공배양 후 레드 형광 단백질의 발현에 대해 평가되었다. 항원 비의존적 활성을 더 평가하기 위해, 형질 도입된 리포터 세포가 항원 발현 표적 세포의 부재 하에 단독으로 배양되었다. 형질 도입된 리포터 세포가, GFP 발현(형질 도입 마커)에 대해 및 가용성 재조합 ROR1-Fc(IgG의 Fc 영역에 융합된 가용성 인간 ROR1)의 결합에 대해 또한 평가되었다.
후보 항-ROR1 CAR로 형질 도입된 쥬르카트 리포터 세포는, 고수준 또는 저수준의 ROR1을 발현하는 ROR1 발현 표적 세포와 함께 공배양 후 리포터 발현에 의해 나타난 바와 같은 다양한 수준의 항원 특이적 활성; ROR1을 발현하지 않는 K562 세포와 함께 공배양 후 또는 항원 발현 표적 세포없이 배양 후 리포터 발현에 의해 나타난 바와 같은 다양한 수준의 항원 비의존적(토닉) 신호 전달; 비특이적 항원 ROR2를 발현하는 세포와 함께 공배양 후 리포터 발현에 의해 나타난 바와 같은 다양한 수준의 비특이적 활성; 및 가용성 ROR1-Fc에 의한 다양한 수준의 결합;을 나타냈다. 높은 ROR1 항원 의존적 활성, 낮은 토닉 신호 전달, 높은 ROR1-Fc 결합 및 낮은 ROR2 교차 반응성을 나타낸 후보 CAR이, 1차 인간 T 세포에서 평가를 위해 선택되었다.
실시예 2: 1차 T 세포에서 CAR 발현 및 기능의 평가
실시예 1에 기재된 선택된 항-ROR1 CAR이 발현 및 기능이 1차 인간 T 세포에서 평가되었다.
CD4+ 및 CD8+ T 세포가, 3명의 인간 도너 중 하나의 백혈구 성분 채집술 샘플에서 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리되었다. 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포가, 대략 1:1 비율로 혼합되었고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 선택된 항-ROR1 CAR 중 하나를 암호화하는 렌티바이러스 제제(A-Z 및 A1-M1 중 하나가 개별적으로 지정됨)로 자극 및 형질 도입되었고 증폭 조건 하에서 배양되었다. 3명의 인간 도너는, 백혈구 성분 채집술 샘플에 존재하는 T 세포 하위 세트의 백분율이 달랐고(예를 들어, 15% 미만의 나이브 T 세포, 약 40-60% 나이브 T 세포 또는 약 20% 이펙터 기억 RA T 세포(TEMRA)), 질병 대상체 중 T 세포 하위 세트의 다양성을 나타냈다. 대조군으로, 1차 T 세포가, 항-CD19 CAR, 기준 항-ROR1 CAR(서열 번호: 143에 제시된 토끼 유래 기준 항체 R12, scFv) 또는 상이한 출처에서 수득된 2개의 항-ROR1 CAR 중 하나(N1, O1로 지정됨)를 암호화하는 렌티바이러스 제제로 또한 유사하게 자극 및 형질 도입되었다.
CAR 발현 1차 T 세포가 플레이트 결합된 ROR1-Fc로 자극되었고, 24 시간 후에 세포 내 사이토카인 염색(intracellular cytokine staining, ICS)에 의해 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 세포 내 수준을 유세포 분석으로 평가하였다. IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 생성하는 세포의 백분율 및 세포 당 생성 수준(평균 형광 강도(mean fluorescence intensity, MFI)에 의해 결정된 바와 같음)이 결정되었다. 자극 후, CAR 발현 1차 T 세포가, T 세포 활성화 마커(예를 들어, CD25), 공자극 마커, 특정 T 세포 하위 유형, 예컨대 기억 세포 하위 유형을 나타내는 마커, 기타 T 세포 마커, 예를 들어 CD4 및 CD8의 세포 표면 발현, ROR1-Fc 결합에 대해 또한 염색되었고, GFP 형질 도입 마커의 발현에 대해 평가되었다.
CAR 발현 1차 T 세포가, 1:4의 이펙터:표적(E:T) 비율로 ROR1 발현 삼중 음성 인간 유방암 세포주(MDA-MB-231 (ATCC®HTB-26™)와 함께 공배양으로 자극되었고, 세포 독성 및 사이토카인 생성에 대해 평가되었다. MDA-MB-231 세포주가 NLR(NucLight Red)로 표지되어 현미경 검사법에 의한 표적 세포의 추적이 가능했다. 세포 용해 활성이, 레드 형광 신호의 변화에 의해 결정된 바와 같이 0 내지 72 시간의 기간에 걸쳐 살아있는 표적 세포의 손실을 측정함으로써 평가되었다. 상청액 내 사이토카인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 생성이 또한 평가되었다.
도 1에 도시된 바와 같이, 특정 후보 항-ROR1 CAR 발현 T 세포가, 플레이트 결합 재조합 ROR1-Fc로 24 시간 자극 후 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 세포에서 각 사이토카인의 수준에 비해, ICS에 의해 GFP+ CD4+ T 세포에서 유사하거나 보다 큰 상대적인 세포 내 IFN-γ, TNF-α 또는 IL-2 발현 수준을 나타냈다. ROR1을 발현하는 MDA-MB-231 표적 세포로의 공배양 평가에서, 선택된 특정 후보가, 도 2에 도시된 바와 같이, 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 세포에서 사이토카인 분비에 비해, 유사하거나 보다 큰 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 분비를 또한 나타냈다. ICS에 의해 유사하거나 보다 큰 사이토카인 발현 수준을 나타냈던 항-ROR1 후보 수에 비해 더 소수의 항-ROR1 후보가, 공배양 평가에서 기준 항-ROR1(R12) CAR에 비해 유사하거나 보다 큰 사이토카인 분비를 나타냈다.
상기 결과는, 재조합 항원 또는 항원 발현 표적 세포에 의해 자극 후 후보 항-ROR1 CAR을 발현하도록 조작된 1차 인간 T 세포에 의한 다양한 반응을 보여주었다.
실시예 3: 선택된 항-ROR1 키메라 항원 수용체(CAR)의 폴리뉴클레오티드 최적화
후보 항-ROR1 CAR 중, 6개의 후보 CAR이, 실시예 2에 기재된 바와 같은 3명의 상이한 도너 유래 조작된 1차 인간 T 세포에서 기능적 활성의 평가 결과에 근거하여 더 선택되었다. 선택된 후보 CAR을 암호화하는 작제물이 코돈 최적화(codon-optimization, CO)의 대상이 되었고, 잠재적 스플라이스 부위에 대해 평가되었으며, 예컨대 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오티드 작제물 내 잠재적인 예측 스플라이스 부위의 제거(SSE)를 포함하여 암호화된 아미노산 서열을 변경하지 않음으로써 보존적인 방식으로 변형되었다. 작제물이 더 변형되어 CAR 발현을 위한 대리 형질 도입 마커로서 GFP 형질 도입 마커가 절단형 수용체로 교체되었다.
표 E1은, 각 사슬의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 및 상보성 결정 영역(Kabat 넘버링에 의한CDR)에 대응하는 아미노산 서열을 포함하여 선택된 후보 CAR의 항원 결합 도메인의 아미노산(amino acid, aa) 서열에 대응하는 서열 식별자(서열 번호:)를 나열한다. 기준 R12 CAR의 VH 및 VL 사슬의 서열 식별자(서열 번호:)가 표 E1에 또한 제시된다. 예시적인 CAR이 VH-VL 방향의 scFv를 함유했다.
[표 E1]
Figure pct00008
폴리뉴클레오티드에 의해 암호화된 CAR의 활성을 평가하기 위해, 2명의 인간 도너 대상체 유래 백혈구 성분 채집술 샘플에서 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포가, 6개의 후보 CAR 중 하나 또는 대조군으로 기준 항-ROR1(R12) CAR을 암호화하는 렌티바이러스 제제로 자극 및 형질 도입되었다.
후보 CAR을 발현하는 세포가, NLR(NucLight Red)로 표지된 ROR1 발현 인간 비-소세포 폐암 세포주 H1975(ATCC® CRL-5908™)와 함께 공배양되었고, 세포 독성 및 사이토카인 생성이 평가되었다. 세포 용해 활성이, 레드 형광 신호의 변화에 의해 결정된 바와 같이 0 내지 70 시간의 기간에 걸쳐 살아있는 표적 세포의 손실을 측정함으로써 평가되었다. 상청액 내 사이토카인 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2의 생성이 공배양 70 시간 후에 또한 평가되었다. 대조군으로, 표적 세포 단독 배양 및 표적 세포와 모의 세포(CAR을 발현하지 않음)의 공배양이 평가되었다.
도 3a-3b에 도시된 바와 같이, 테스트된 후보 항-ROR1 CAR 모두가 H1975 표적 세포에 대해 시험관 내에서 유사한 세포 독성 활성을 나타냈다. 도 4a-4b에 도시된 바와 같이, 테스트된 후보 항-ROR1 CAR 모두가 H1975 표적 세포와 함께 시험관 내에서 공배양된 후 다양한 수준으로 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 생성했다. 결과는, 코돈 최적화 및 스플라이스 부위 제거 후 모든 테스트 작제물이 H1975(NSCLC) 세포주와의 공배양에서 세포 독성을 입증했음을 나타냈다. 상기 평가 내 테스트된 CAR 중에, 항-ROR1 CAR-A, 항-ROR1 CAR-F 및 항-ROR1 CAR-G를 발현하는 세포가 일반적으로 그중 가장 많은 사이토카인 생성을 나타냈고, 이는 평가된 다양한 사이토카인에 대해 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 세포의 사이토카인 생성과 유사하거나 그보다 더 많았다. 특히, 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가, 기타 후보 항-ROR1 CAR 및 기준 항-ROR1(R12) CAR에 비해 가장 많은 IL-2 생성을 나타냈다. 결과가 H1975 표적 세포와의 공배양에서 후보 CAR의 강력한 시험관 내 기능적 활성과 일치했다.
상청액 내 사이토카인 IL-2의 생성이, 1:4의 E:T 비율로, MDA-MB-231 인간 삼중 음성 유방암 세포, A549 인간 상피 폐 암종 세포 및 BT-549 인간 상피 유방 관암종 세포를 포함한 기타 ROR1 발현 표적 세포주와 공배양 후 또한 평가되었다. 도 4c에 도시된 바와 같이, 테스트된 후보 항-ROR1 CAR 모두가 MDA-MB-231, A549 및 BT-549 표적 세포와 함께 시험관 내에서 공배양된 후 다양한 수준으로 IL-2를 생성했다. 결과는, 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가, 모든 다양한 표적 세포와 함께 공배양될 경우, 기타 후보 항-ROR1 CAR 및 기준 항-ROR1(R12) CAR에 비해 가장 많은 IL-2 생성을 나타냈음을 보여주었다.
실시예 4: 동물 모델에서 입양 전달 후 생체 내 항-ROR1 CAR 발현 T 세포의 항종양 효과
예시적인 조작된 항-ROR1 CAR 발현 1차 인간 T 세포의 항종양 효과가, H1975 인간 비-소세포 폐암 이종 이식 모델 및 MDA-MB-231 인간 삼중 음성 유방암 이종 이식 모델을 포함한 종양 보유 동물 모델에서 세포의 입양 전달 후 종양을 모니터링함으로써 평가되었다. 마우스에 표 E1에 나열된 바와 같은 항-ROR1 CAR -A, -F, -G, -I, -R 및 -B1 중 하나 또는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는, 인간 도너 중 하나에서 생성된 조작된 1차 인간 T 세포 제제가 투여되었고, 실시예 3에 기재된 시험관 내 분석으로 평가되었다.
A. H1975 비-소세포 폐암 모델
1. 연구 1
80 마리의 NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgt m1Wjl /SzJ (NSG) 마우스에 대략 5 x 106개의 H1975 비-소세포 폐암 세포를 피하로 각각 주사했다. 종양 생착 후 16 일에, 각 군에서 5 마리의 마우스에 1 x 106개의 세포 (저용량) 또는 3 x 106개의 세포(고용량)으로 항-ROR1 CAR -A, -F, -G, -I, -R 및 -B1 중 하나 또는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 조작된 1차 인간 T 세포를 단일 정맥 내(i.v.) 주사하였다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 3 x 106개의 세포가 투여(모의)되거나 처리되지 않았다. 생존, 종양 부피 및 혈액 내 순환하는 CAR+ 세포의 수가 대략 65 일에 걸쳐 평가되었다.
입양 전달된 항-ROR1 CAR+ T 세포의 항종양 활성이, 투여 후 3 내지 6일 간격으로 종양 부피를 결정함으로써 모니터링되었다. 도 5a(저 용량) 및 도 5b(고 용량)는 처리된 모든 마우스의 평균 종양 부피를 도시하고; 본 도시에서, 종양 곡선은 질병으로 죽은 군의 첫번째 마우스 후에 종료되었다. 모든 개별 마우스의 결과가 도 5c(저 용량) 또는 도 5d(고 용량)에 도시된다. 도 5a-5d에 도시된 바와 같이, 후보 항-ROR1 CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포가, H1975 마우스 모델에서 다양한 수준의 항종양 활성을 나타냈다. 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 1차 인간 T 세포가, 고 용량 투여 후에 종양 부피의 감소로 나타난 바와 같이 항-ROR(R12) 기준 CAR을 포함하여 테스트된 항-ROR1 CAR 중 가장 높은 항종양 활성을 나타냈다. 특정적으로, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포의 투여가, 기준 R12 CAR 발현 세포의 경우 6 일에 비해 최대 52 일까지 평균 종양 퇴보(기준선 미만)를 초래했다. 고 용량의 항-ROR1 CAR-F 발현 세포로 처리된 H1975 종양 보유 마우스 중 80%(5 마리 중 4 마리)가 완전하고 지속적인 종양 제거를 나타낸 반면, 고 용량의 기준 R12 CAR 발현 세포로 처리된 어떤 동물도 완전한 종양 제거를 나타내지 않았다. 저 용량에서, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포가 투여된 5 마리 중 3 마리의 동물이 최대 17 일까지 기준선 미만의 종양 퇴보를 나타낸 반면, R12 CAR 발현 세포가 투여된 5 마리 중 1 마리의 동물이 기준선 미만의 종양 퇴보를 나타냈다.
상기 기재된 바와 같이 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 그룹 중 각각의 카플란 마이어 생존 곡선이 도 6a-6b에 도시된다. 도시된 바와 같이, 후보 CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포의 투여가 테스트된 마우스의 생존에 다양한 영향을 나타냈다. 상기 모델에서, 항-ROR1 CAR-F 또는 항-ROR1 CAR-A를 발현하는 1차 인간 T 세포가 투여된 마우스가, 테스트된 용량 중 하나 또는 둘 다에서 기준 항-ROR1(R12) CAR의 생존과 유사하거나 이보다 더 긴 생존을 나타냈다. 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가 투여된 마우스가, 상기 모델에서 최고 용량의 CAR 발현 세포의 투여 개시 후 65 일에 100% 이상의 마우스 생존으로 가장 긴 생존을 나타냈다.
각 마우스의 혈액 중 CD4+ 및 CD8+ CAR 발현 세포의 평균 수가, 저 용량(도 7a 및 7b) 또는 고 용량(도 7c 및 7d)으로 CAR 발현 T 세포 투여 후 10 일 및 24 일에 결정되었다. 각 마우스의 혈액 중 CD3+ CAR 발현 세포(CD45+ CD3+ CAR+)의 평균 수가, 저 용량(도 7e) 또는 고 용량(도 7f)으로 CAR 발현 T 세포 투여 후 10 일 및 24 일에 결정되었다. 도 7a-7f에 도시된 바와 같이, 보다 많은 평균 CAR+ T 세포 수가 보다 많은 용량의 CAR+ T 세포가 투여된 마우스에서 관찰되었다. 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 T 세포가, 상기 모델에서 저 용량 및 고 용량 둘 다에서 투여 후 강력한 증폭을 나타냈다. 주입 후 10 일에, R12 발현 세포의 평균 계수가 고 용량 및 저 용량 각각에 대해 혈액 μl 당 7.6 및 2.5개의 세포였던 것에 비해, CAR-F 발현 세포의 평균 계수는 고 용량 및 저 용량 각각에 대해 혈액 μl 당 226.5 및 13.1개의 세포였다. 주입 후 24 일에, R12 발현 세포의 계수가 고 용량 및 저 용량 각각에 대해 혈액 μl 당 27.6 및 4.2개의 세포였던 것에 비해, CAR-F 발현 세포의 평균 계수는 고 용량 및 저 용량 각각에서 혈액 μl 당 471.8 및 44.0개의 세포였다.
2. 연구 2
동일한 H1975 마우스 모델을 이용한 상이한 연구에서, 이식된 H1975 종양이 있는 64 마리의 마우스가 종양 부피의 측정에 근거하여 단계가 지어졌고, 각 군에서 8 마리의 마우스에 1 x 106개의 세포(저용량) 또는 3 x 106개의 세포(고용량)으로 항-ROR1 CAR-F, 항-ROR1 CAR-A 또는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 조작된 1차 인간 T 세포를 단일 정맥 내(i.v.) 주사로 투여하였다. 대조군으로, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 3 x 106개의 세포가 투여(모의)되거나 처리되지 않았다. 종양 부피가 대략 최대 70 일까지 측정되었고, 순환하는 CAR+ T 세포 수 및 생존이 대략 최대 40 일까지 측정되었다.
저 용량 또는 고 용량으로 항-ROR1 CAR-F, CAR-A 또는 R12 기준 CAR이 투여되었던 마우스에서 평균 종양 부피의 변화가 도 8a 및 도 8b에 각각 도시된다. 개별 마우스에서 평균 종양 부피의 변화가 도 8c에 도시된다. 항-ROR1 CAR-F 발현 세포의 투여가, 기준선 미만의 평균 종양 퇴보를 나타내지 않았던 기준 R12 CAR 발현 세포의 투여에 비해 15일에 평균 종양 퇴보(기준선 미만)를 초래했다. 고 용량의 항-ROR1 CAR-F 발현 세포로 처리된 H1975 종양 보유 마우스 중 25%(8 마리 중 2 마리)가 완전하고 지속적인 종양 제거를 나타낸 반면, 고 용량의 기준 R12 CAR 발현 세포 3개로 처리된 마우스 중 12.5%(8 마리 중 1 마리)가 완전한 종양 제거를 나타냈다.
마우스는 CAR T 세포 전달 후 69 일 동안 주 2회 이상 종양 성장 및 건강 상태에 대해 모티터링되었고, 종양 부피가 1500mm3를 초과한 경우, 종양 궤양을 경험하는 경우, 심각한 이종 이식편 대 숙주 질환(xenogeneic graft versus host disease, xGvHD)의 징후를 나타낼 경우 또는 그렇지 않으면 빈사 상태인 경우 안락사되었다. 각 군에서 마우스의 생존이 도 9a- 9b에 도시된다. 처리되지 않은 H1975 이종 이식 마우스의 생존 중간값이 남겨졌거나 또는 모의 처리된 세포가 투여된 경우 20 일이었다. 고 용량 또는 저 용량의 R12 CAR T 세포가 투여된 동물의 생존 중간값은 각각 33 및 29 일이었다. 항-ROR1 CAR-F가 투여된 마우스의 생존 중간값은 저 용량의 경우 37.5 일까지 생존했고, 고 용량에서 생존 중간값은 결정되지 않았으며, 연구 종료 시에 살아 남은 동물이 62.5%(8 마리 중 5 마리)였다.
투여 후 7, 14 및 21 일에 혈액 마이크로리터 당 평균 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포 계수가 도 10a-10d에 도시된다. 상기 기재된 연구의 결과와 일관되게, CAR-F 발현 세포의 평균 계수가, 특히 21 일에 및/또는 CD4+ T 세포 중에서(도 10a 및 도 10c) 또는 고 용량에서(도 10c 및 도 10d) 기타 CAR 발현 세포의 평균 계수에 비해 가장 많았다. 고 용량 투여 후 7, 14, 및 21 일에, 항-ROR1 CAR-F 발현 T 세포는 혈액 μl 당 37.6, 105.6, 및 46.6개 세포의 평균 계수를 각각 나타낸 반면, 기준 R12 발현 세포는 혈액 μl 당 28.9, 39.8, 및 20.3개 세포의 평균 계수를 나타냈다. 고 용량 투여 후 7, 14, 및 21 일에, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포는 혈액 μl 당 2.2, 55.4, 및 6.9개 세포의 평균 계수를 각각 나타낸 반면, 기준 R12 발현 세포는 혈액 μl 당 3.1, 40.8, 및 5.5개 세포의 평균 계수를 각각 나타냈다.
도 11a 및 11b는 투여 후 14 일에 종양에 존재하는 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포의 수를 도시한다. 14 일에 종양 내 CAR+ 세포의 수는 테스트된 CAR 사이에 유사했다.
3. 요약
도시된 바와 같이, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포가 투여된 H1975 폐 선암 이종 이식 종양이 있는 마우스는, 기준 항-ROR1 R12 CAR이 투여된 마우스에 비해 종양 부피 감소로 나타난 바와 같이 보다 높은 항종양 활성을 나타냈고, 순환하는 CAR+ T 세포 수가 증가했다. 항종양 활성, 생존 및 CAR+ T 세포 수가, 항-ROR1 R12 CAR 발현 세포에 비해 항-ROR1 CAR-A 발현 세포가 투여된 마우스에서 유사했다.
B. MDA-MB-231 삼중 음성 유방암 모델
64 마리의 NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) 마우스 각각에 반딧불이 루시퍼라제를 발현하는 1 x 106개의 MDA-MB-231 세포가 피하로 주사되었다. 종양 생착 후 7 일에, 각 군에서 8 마리의 마우스에 1 x 106개의 세포(저용량) 또는 3 x 106개의 세포(고용량)으로 항-ROR1 CAR-A, 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 조작된 1차 인간 T 세포를 단일 정맥 내(i.v.) 주사하였다. 대조군으로서, 마우스에 CAR을 발현하지 않는 3 x 106개의 T 세포를 투여(모의)하거나 처리되지 않았다. 종양 부담의 생체 발광 영상화 및 혈액 중 순환하는 CAR+ 세포 수의 유세포 분석이 대략 100 일에 걸쳐 평가되었다.
입양 전달된 CAR 발현 T 세포의 항종양 활성이, CAR T 세포 투여 후 4 내지 7 일 간격으로 생체 발광 영상화에 의해 모니터링되었다. 생체 발광 영상화를 위해, 마우스에 PBS에 재현탁된 루시페린 기질(PerkinElmer, Waltham, MA)을 복강내(intraperitoneal, i.p.) 주사하였다(대략 체중 1 kg 당 150 mg). 본질적으로 문헌[국제 출원 WO2015/095895]에 기재된 바와 같이 마우스를 마취하고 영상화하였다. 총 플럭스(광자/s)를 각 시점에 결정하였다.
처리된 마우스의 생체 발광 영상의 결과 및 측정된 총 플럭스(p/s) 평균이, 저 용량의 CAR 발현 세포의 투여 후 도 12b 및 13a에 각각 도시되거나; 또는 고 용량의 CAR 발현 세포의 투여 후 도 12c 및 13b에 각각 도시된다 도 12a는 처리되지 않은 마우스 또는 모의 T 세포가 투여된 마우스의 생체 발광 영상이 도시된다. 도 13c는 개별 마우스의 측정된 총 플럭스(p/s)를 도시한다.
저 용량 또는 고 용량에서 평균 종양 부피의 변화가 도 14a 및 14b에 각각 도시된다. 도시된 바와 같이, 저 용량 및 고 용량 둘 다에서 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가 투여된 마우스가 일반적으로 보다 낮은 정도의 생체 발광 신호를 갖는 것으로 관찰되었고, 이는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 세포가 투여된 마우스에 비해 처리된 동물에서 시간의 흐름이 따른 종양 성장의 감소 및/또는 보다 낮은 정도의 종양 성장을 나타낸다. 저 용량 및 고 용량 둘 다에서 항-ROR1 CAR-A를 발현하는 세포가 투여된 마우스가 일반적으로 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 세포가 투여된 마우스와 비교하여 유사한 생체 발광 신호를 갖는 것으로 관찰되었다.
동일한 연구에서 추가 시점까지 항-ROR1 CAR F 및 기준 CAR R12를 발현하는 T 세포의 투여 후에 평균 종양 부피의 변화가, 고 용량 및 저 용량에 대해 도 14c 및 14d에 각각 도시된다. 각각의 처리 조건에 대해 고 용량 또는 저 용량으로 개별 처리된 마우스에 대한 종양 부피의 결과가 도 14e에 도시된다. 항-ROR1 CAR-F 발현 세포의 투여가, BLI 측정이 종료된 때인 35 일 이상 동안 평균 종양 퇴보(BLI에 의해 측정된 기준선 미만)를 초래했다. 기준 R12 CAR은 고 용량(도 14c 및 14e) 또는 저 용량(도 14d 및 14e)에서 기준선 미만의 평균 종양 퇴보를 나타내지 않았다. 피하 종양 부피에 의해, 고 용량의 항-ROR1 CAR-F 발현 세포가 투여된 마우스 중 50%(8 마리 중 4 마리)가 완전하고 지속적인 종양 제거를 나타낸 반면, 고 용량의 R12 CAR 발현 세포로 처리된 마우스 중 12.5%(8 마리 중 1 마리)만이 완전한 종양 제거를 나타냈다(도 14c 및 14e). 저 용량에서, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포로 처리된 동물 중 25%(8 마리 중 2 마리)가 완전한 종양 제거를 나타낸 반면, 저 용량의 기준 R12 CAR 발현 세포로 처리된 어떤 동물도 완전한 종양 제거를 초래하지 않았다(도 14d 및 14e).
마우스는 CAR T 세포 전달 후 97 일 동안 주 2회 이상 종양 성장 및 건강 상태에 대해 모티터링되었고, 종양 부피가 1500 mm3를 초과한 경우, 종양 궤양을 경험하는 경우, 심각한 xGvHD의 징후(예를 들어, xGvHD로 인한 심각한 피부염 및/또는 20% 체중 감소)를 나타낼 경우 또는 그렇지 않으면 빈사 상태인 경우 안락사되었다. 상기 기재된 바와 같이 처리된 마우스의 생존이 평가되었다. 그룹 중 각각의 카플란 마이어 생존 곡선이 도 15a-15b에 도시된다. 처리되지 않은 마우스에 대한 생존 중간값은 61 일이었다. 고 용량에서, 모의 처리된 세포가 투여된 동물 중 62.5%(8 마리 중 5 마리)가 연구 종료 시에 생존했고, CAR T 세포가 투여된 어느 그룹에서도 사망이 없었기 때문에(도 15a), 항-ROR1 CAR-F 발현 세포, R12 기준 CAR 발현 세포 또는 모의 처리된 세포가 투여된 마우스에 대한 생존 중간값이 결정되지 않았다. 저 용량에서, 저 용량의 R12 CAR 발현 세포가 투여된 마우스에 대한 생존 중간값은 96 일이었고, 연구 종료 시에 8 마리의 동물 중 3 마리만이 살아 남았던 반면, CAR-F 발현 세포가 투여된 마우스에서 100% 생존(8 마리 중 8 마리)이 관찰되었다(도 15b).
동물의 혈액 중 CD4+ 및 CD8+ CAR 발현 세포의 평균 수가, 저 용량(도 16a-16b) 또는 고 용량(도 16c-16d)으로 CAR 발현 T 세포의 투여 후 7, 14, 21 및 30 일에 결정되었다. 항-ROR1 CAR-F 또는 R12 기준 CAR을 발현하는 세포가 투여된 각 마우스의 혈액 중 CD3+ CAR 발현 세포(CD45+ CD3+ CAR+)의 평균 수가 7, 14, 21 및 30 일에 또한 결정되었고, 도 16e에 도시된다. 고 용량에서, R12 발현 T 세포의 평균 계수가 혈액 μ 당 6.0, 5.4, 3.9, 및 5.4개의 세포였던 것에 비해, CAR-F 발현 T 세포의 평균 계수는 7, 14, 21, 및 30 일 각각에 대해 혈액 μ 당 5.0, 19.4, 50.7 및 119.2개의 세포였다. R12 발현 세포의 평균 계수가 혈액 μ 당 1.3, 0.6, 0.9, 및 0.4개의 세포였던 것에 비해, CAR-F 발현 세포의 평균 계수는 7, 14, 21, 및 30 일 각각에 대해 혈액 μ 당 1.4, 4.9, 20.9 및 58.5개의 세포로, 저 용량의 투여도 유사한 증폭을 나타냈다. 도시된 바와 같이, 고 용량 및 저 용량 둘 다로 투여된 경우 MDA-MB-231 마우스 모델에서 항-ROR1 CAR-F를 발현하는 세포가 고도의 증폭을 나타냈다. 특히, 항-ROR1 CAR F 발현 세포는, 투여 후 14 일에 시작하여 30 일까지 계속 실질적으로 고도의 증폭을 나타냈다.
C. 결론
결과는, 삼중 음성 유방암 이종 이식 종양 모델을 포함한 2개의 상이한 생체 내 마우스 종양 모델을 이용하여 항-ROR1 CAR-F가 투여된 마우스의 높은 항종양 활성 및 T 세포 증폭 및 연장된 생존을 지지했다. 대부분의 측정에 의해, 항-ROR1 CAR F 발현 세포는 항-ROR1 기준 R12 CAR에 비해 개선을 나타냈다.
실시예 5: 만성 림프구성 백혈병(Chronic Lymphocytic Leukemia, CLL)의 인간 대상체에서 생성된 항-ROR1 CAR 발현 T 세포
조작된 항-ROR CAR 발현 1차 T 세포가 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 인간 대상체에서 생성되었고, 시험관 내에서 세포 독성 및 사이토카인 생성에 대해 평가되었다.
A. CLL 대상체에서 항-ROR1 CAR 발현 세포의 생성
만성 림프구성 백혈병(CLL)의 인간 대상체 유래 1차 T 세포가 조작되어 상기 실시예 3에 기재된 예시적인 항-ROR1 CAR, 항-ROR1 CAR-F를 발현하였다.
CD4+ 및 CD8+ T 세포가, CLL을 앓는 2명의 인간 도너 중 하나의 백혈구 성분 채집술 샘플에서 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리되었다. 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포가, 대략 1:1 비율로 혼합되었고, 실시예 3에 기재된 바와 같은 항-ROR1 CAR-F, 대조군으로 항-CD19 CAR 또는 기준 항-ROR1 CAR(R12)를 암호화하는 렌티바이러스 제제로 자극 및 형질 도입되었고 증폭 조건 하에서 배양되었다. CD4- 및 CD8- 고갈 백혈구 성분 채집술 샘플이 CD19 및 ROR1 발현 수준에 대해 평가되었고, 평가에서 표적 세포 집단으로 사용되었다. CLL을 앓는 대상체 중 한 명(CLL 도너 1)의 경우, ROR1 발현 수준이 낮았고, 거의 독시사이클린을 첨가하지 않고 테트라사이클린 유도체 독시사이클린에 대한 반응으로 ROR1을 발현하도록 조작된 K562 인간 만성 골수성 백혈병(CML) 세포주만큼 낮았다(실시예 9 참조).
B. 세포 용해 활성 및 사이토카인 생성
예시적인 항-ROR1 CAR F를 발현하는 CLL을 앓는 대상체 유래 1차 T 세포의 세포 용해 활성이 평가되었다.
일 실험에서, 대상체에서 수득된 표적 세포(CD4- 및 CD8- 고갈 백혈구 성분 채집술 샘플)가 Rapid Red 세포 표지 시약으로 표지되어 현미경 검사법에 의한 표적 세포의 추적이 가능했고, 2.5:1 및 0.25:1의 E:T 비율로 CAR 발현 세포와 인큐베이션되거나 대조군으로 모의 세포와 배양되거나 단독 배양되었다. 세포 용해 활성이, 대조군에 비해 0 내지 60 시간의 기간에 걸쳐 레드 형광 신호의 손실을 측정함으로써 평가되었다.
도 17에 도시된 바와 같이, 두개의 도너 둘 다 및 두개의 E:T 비율 둘 다의 경우, 표지된 표적 세포의 레드 형광 신호가, 단독 또는 모의 형질 도입된 세포와 공배양된 표적 세포에서 관찰된 정상적인 세포 분열로부터 예상되는 손실에 비해, CAR 발현 세포와 공배양된 경우 보다 빠르게 손실되었다. 표적 세포의 보다 많은 손실이, 항-ROR1 R12 발현 세포에 비해 항-ROR1 CAR-F 발현 세포와 함께 표적 세포를 공배양한 후에 관찰되었고, 항-CD19 CAR 발현 세포와의 공배양 후 표적 세포의 손실과 유사했다.
상이한 실험에서, ROR1 발현 표적 세포의 손실이 유세포 분석으로 평가되었다. 이를 위해, 조작된 CAR 발현 세포가 CellTrace™Violet(CTV) 세포 증식 시약으로 표지되었고, 2.5:1 및 0.25:1의 E:T 비율로 CLL을 앓는 대상체 유래 표적 세포와 함께 공배양되었다. 4 일에, 상청액이 수집되어 사이토카인 생성(IFN-γ, TNF-α 및 IL-2)이 평가되었고, 세포가 수집되어 유세포 분석에 의한 CTV 수준이 평가되었다.
도 18a에 도시된 바와 같이, CLL을 앓는 대상체에서 생성된 항-ROR1 CAR F 발현 세포와 함께 공배양된 ROR1+ 표적 세포의 수가, 단독 배양된 표적 세포 또는 모의 형질 도입된 T 세포와 공배양된 표적 세포에 비해 실질적으로 감소했다. 감소가, E:T 비율 둘 다 및 도너 둘 다에 대해 R12 발현 세포와 공배양으로 관찰된 감소보다 더 컸다. 도 18b-18c에 도시된 바와 같이, CLL을 앓는 대상체에서 생성된 항-ROR1 CAR F 발현 세포가 분열했고(도 18b), 동일한 대상체 유래 표적 세포와의 공배양에서 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2를 생성했다(도 18c). 증식 및 사이토카인 생성이 동일한 조건에서 테스트된 R12 발현 세포와 유사하거나 또는 이보다 더 많았다.
결과는, 예시적인 항-ROR1 CAR F를 발현하는 조작된 T 세포가 CLL을 앓는 인간 대상체 유래 1차 T 세포에서 성공적으로 생성되었다는 관찰과 일치했다. 세포가, 동일한 대상체 유래 ROR1 발현 표적 세포와 인큐베이션된 경우, 일부 경우에 표적 세포가 낮은 수준의 ROR1을 발현한 경우조차 생존 가능했고, 세포 용해 활성을 나타냈고, 사이토카인을 생성했으며 증식했다. 결과는, 예시적인 항-ROR1 CAR F를 발현하는 세포가 CLL을 앓는 대상체 유래 세포로 생성될 수 있음을 지지했고, 이전에 조작된 CAR 발현 세포를 생성하는 데 어려움이 있는 것으로 보고되었다(예를 들어, 문헌[Gorgun et al., J Clin Invest. 2005 Jul;115(7):1797-805; Ramsay et al., J Clin Invest. 2008 Jul;118(7):2427-37; Riches et al., Discov Med. 2013 Dec;16(90):295-302] 참조). 결과는, 예시적인 항-ROR1 CAR 발현 세포가 심지어 낮은 수준의 ROR1을 발현하는 표적 세포를 사멸시키는 데 효과적임을 또한 나타냈고, 이는 높은 민감도를 입증한다. 대부분의 측정에 의해, 항-ROR1 CAR F 발현 세포는 항-ROR1 기준 R12 CAR을 발현하는 세포에 비해 개선을 나타냈다.
실시예 6: B 세포 악성 종양의 동물 모델에서 입양 전달 후 생체 내 항-ROR1 CAR 발현 T 세포의 항종양 효과
예시적인 조작된 항-ROR1 CAR 발현(CAR+) 1차 인간 T 세포의 항종양 효과가, 산재성 인간 B 세포 악성 종양의 동물 모델에서 세포의 입양 전달 후 종양을 모니터링함으로써 평가되었다. 마우스에, 상기 실시예 3에 기재된 바와 같은 기준 항-ROR1(R12) CAR 또는 항-CD19 CAR과 비교하여 예시적인 항-ROR1 CAR-F를 발현하는, 인간 도너에서 생성된 조작된 1차 인간 T 세포 제제가 투여되었다.
NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgt m1Wjl /SzJ(NSG) 마우스에, 1.0 x 106개의 반딧불이 루시퍼라제 및 그린 형광 단백질(FfLuc-GFP) 발현 인간 맨틀 세포 림프종(MCL) JeKo-1 세포를 0 일에 정맥 내로 주사했다. 종양 부담이, 3 mg의 D-루시페린을 복강내로 마우스에 주사한 뒤 생체 발광 순간을 검출함으로써 생체 발광 영상화(bioluminescent imaging, BLI)에 의해 평가되었다. 6 일에 마우스를 그룹에 무작위 배정하여 종양 부담의 균형을 유지했다. 7 일에, 마우스에 예시적인 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 항-ROR1(R12) CAR을 발현하는 인간 도너에서 생성된 조작된 1차 인간 T 세포를 마우스 당 1 x 106개의 세포(저용량) 또는 3 x 106개의 세포(고용량)로 투여했다. 대조군으로, 마우스는 어떠한 T 세포도 받지 않았거나 또는 동일한 대상체로부터 3 x 106개의 세포 모의 처리된 T 세포를 받았다. 마우스는 투여 후 139 일 동안 종양 부담 및 생존에 대해 모니터링되었다. 순환하는 CAR+ T 세포의 수가 투여 후 28 일 동안 모니터링되었다.
도 19a(고 용량) 및 도 19b(저 용량)는 처리된 모든 마우스의 평균 종양 부피를 도시한다. 모든 개별 마우스의 결과가 도 19c(고 용량) 또는 도 19d(저 용량)에 도시된다. 도 19a 및 19c에 도시된 바와 같이, 3 x 106개(고 용량)의 항-ROR1 CAR-F 발현 세포 또는 항-CD19 CAR+ 세포가 투여된 JeKo-1 MCL 이종 이식 마우스는, 111 일(마지막 BLI 측정 일) 이상 동안 평균 종양 퇴보(기준선 미만)를 초래했다. 이에 비해, R12 CAR+ 세포가 투여된 마우스는 단지 최대 27 일 동안 평균 종양 퇴보를 나타냈다. 도 19b 및 19d에 도시된 바와 같이, 보다 낮은 1 x 106개의 세포 용량으로 CAR-F를 발현하는 세포의 투여는 전체 연구 과정(최대 111 일) 동안 평균 종양 퇴보를 초래했다. 이에 비해, 항-CD19 CAR+ 세포가 투여된 마우스는 최대 36 일 동안 평균 종양 퇴보를 나타냈고, R12 기준 항-ROR1 CAR이 투여된 마우스에 대해서는 평균 종양 퇴보가 관찰되지 않았다.
마우스는 CAR T 세포 투여 후 139 일 동안 주 2회 이상 건강 상태에 대해 모티터링되었고, 빈사 상태이거나 심각한 이종 이식편 대 숙주 질환(xGvHD)의 징후를 나타낼 경우 안락사되었다. 그룹 중 각각의 카플란 마이어 생존 곡선이 도 20a(고 용량) 및 도 20b(저 용량)에 도시된다. 처리되지 않은 JeKo-1 이종 이식 마우스는 26.5 일의 생존 중간값을 가졌다. 3 x 106개의 모의 처리된 세포가 투여된 동물은 56 일의 생존 중간값을 가졌다. 고 용량(3 x 106개의 세포; 도 20a) 또는 저 용량(1 x 106개의 세포; 도 20b) 중 어느 하나가 투여된 동물 중 75%(8 마리 중 6 마리)가 연구 종료 시에 살아 남았기 때문에, 항-ROR1 CAR-F 발현 T 세포의 어느 용량으로든 처리된 모든 동물에 대해 생존 중간값이 결정될 수 없었다. 특히, 항-ROR1 CAR-F가 투여된 마우스에서 관찰된 죽음은 림프종 부담이라기보다 xGvHD와 관련되었다. 저 용량 및 고 용량으로 R12 CAR+ T 세포가 투여된 동물에 대한 생존 중간값은 각각 70 및 106 일이었다. 저 용량으로 항-CD19 CAR+ T 세포를 받은 마우스에 대한 생존 중간값은 결정될 수 없었고(연구 종료까지 8 마리 동물 중 7 마리가 생존함), 고 용량의 경우 생존 중간값은 139 일이었다(8 마리 동물 중 4 마리가 생존함). 상기 그룹에서 죽음도 림프종 부담이라기보다 주로 xGvHD와 관련되었다.
각 마우스의 말초 혈액 중 CAR+ T 세포의 평균 수가 CAR+ T 세포 투여 후 7, 14, 21 및 28 일에 유세포 분석에 의해 평가되었다. 도 21에 도시된 바와 같이, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포는, 검사된 용량 수준 둘 다에서 투여 후 21 일 또는 28 일에 말초 혈액 중 순환하는 CAR+ T 세포의 최대 농도를 나타냈다. 고 용량에서, 항-CD19 CAR+ T 세포가, 투여 후 14 일에 항-ROR1 CAR-F(혈액 μ 당 77.0개의 세포) 또는 R12 CAR(혈액 μ 당 25.0개의 세포) 발현 세포 중 어느 하나보다 실질적으로 더 많은 증폭(혈액 μ 당 172.5개의 세포)을 입증했다. 그러나, 21 일까지, 항-ROR1 CAR-F 발현 세포는, 저 용량에서 R12 CAR+(혈액 μ 당 0.3개의 세포) 및 항-CD19 CAR+(혈액 μ 당 17.2개의 세포) 세포 둘 다에 비해 실질적으로 계수(혈액 μ 당 140.9개의 세포)가 증가했다, 유사한 증폭의 증가가, R12 CAR+ 및 항-CD19 CAR+ 세포에서 혈액 μ 당 각각 10.2 및 66.8개의 세포에 비해 혈액 μ 당 392.7개의 세포로 고 용량의 항-ROR1 CAR-F 발현 세포에서 관찰되었다. 상기 증폭의 개선은 세포 투여 후 28 일에 또한 관찰되었다.
결과는, MCL을 앓는 마우스 이종 이식 모델에서 예시적인 항-ROR1 CAR-F가 투여된 마우스의 높은 항종양 활성, T 세포 증폭의 개선 및 연장된 생존을 지지했다. 대부분의 측정에 의해, 항-ROR1 CAR F 발현 세포는 항-ROR1 기준 R12 CAR에 비해 실질적인 개선을 나타냈고, 항-CD19 CAR을 발현하는 세포에 비해 MCL에 대해 유사하거나 개선된 활성을 나타냈다.
실시예 7: 에피토프 맵핑
예시적인 항-ROR1 CAR-F 및 CAR-G(서열 번호: 118에 제시된 scFv 서열)에 함유된 예시적인 항-ROR1 항원 결합 도메인에 의해 인식되는 에피토프가, 스캐폴드에 펩티드의 화학적 연결에 의한 불연속 전체 에피토프 맵핑을 이용하여 평가되었다(CLIPS; Pepscan Presto BV, Lelystad, The Netherlands; see, e.g., Timmerman et al., (2007) J. Mol. Recognit. 20: 283-329). 맵핑은, scFv가 인간 Fc(scFv-hFc; IgG1) 또는 마우스 Fc(scFv-mFc)와 융합된 항-ROR1 scFv 클론을 사용하여 수행되었다.
예시적인 항-ROR1 scFv-mFc 및 scFv-hFc가 일시적으로 형질 감염된 HEK293 세포에서 발현 및 정제되었고, 황산 도데실 나트륨 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, SDS-PAGE) 및 분석적 크기 배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography, SEC)에 의해 평가되었다. ROR1의 세포 외 도메인(ROR1 ECD)이 재조합으로 발현되었고, 일시적으로 형질 감염된 HEK293 세포에서 정제되었으며, SDS-PAGE 및 SEC에 의해 평가되었다. 결과는, 항-ROR1 scFv-hFc, scFv-mFc 및 ROR1-ECD의 매우 순수한(>99% 순수한, <1 scFv-hFc 및 ROR1-ECD에 대한 고분자량 다량체; >97% 순수한, <3% scFv-mFc에 대한 고분자량 다량체) 조성물을 나타냈다.
다양한 길이의 선형 및 구조가 있는 합성 펩티드 라이브러리가, 각각 하나의 아미노산 잔기에 의해 상쇄된 인간 ROR1(예를 들어, 서열 번호: 144-146에 제시됨)으로부터 생성되었다. 구조가 있는 펩티드 라이브러리가 제조되어 ROR1의 임의의 단일 루프, 이중 루프, α-헬릭스 및 β턴 세그먼트를 포함한 정의된 3D 구조로 상이한 길이의 펩티드를 고정했다. 라이브러리가 조합 맵으로 배열되어 비편향적인 방식으로 ROR1의 구조 및/또는 불연속 에피토프를 나타내는 루프 및 선형 펩티드의 조합을 산출했다.
ELISA 기반 히트 맵이 결합제가 있는 ROR1의 개별 및 조합된 선형 및 구조가 있는 펩티드에 대해 생성되었다. 결합 양성을 나타내는 펩티드 내 모든 잔기의 반복적인 이중 알라닌 치환이 수행되었다(야생형 알라닌 잔기의 경우 글리신이 치환됨). 알라닌으로 치환된 경우 결합의 70% 이상 감소를 초래한 아미노산이, 에피토프의 핵심 구성 요소로 결정되었다
에피토프 맵핑의 분석은, 예시적인 항-ROR1 CAR-F 및 CAR-G(서열 번호: 118에 제시된 scFv 서열)에 함유된 예시적인 항-ROR1 항원 결합 도메인의 scFv-hFC가 아미노산 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199에 제시; 서열 번호: 144에 제시된 인간 ROR1 서열 중 78-92 잔기에 대응함) 주위에 주로 집중된 불연속, 구조 의존적 에피토프에 결합했음을 나타냈다. 표 E2는 에피토프 맵핑에서 확인된 에피토프를 제시한다. 관찰된 대부분의 결합은 FRSTIYGSRLRIRNL(서열 번호: 199)의 일부와 조합에 대한 것이었고, 이는 에피토프의 상이한 영역 사이의 일부 협동과 일치한다.
[표 E2]
Figure pct00009
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실시예 8: 항-ROR1 항원 결합 도메인의 친화도 및 결합 동력학
항원 ROR1에 대한 예시적인 항-ROR1 항원 결합 도메인의 결합 친화도 및 동력학이 표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance, SPR)에 의해 평가되었다.
A. 결합 친화도 및 동력학
재조합 인간 ROR1과 예시적인 ROR1 CAR의 결합 도메인 사이 상호 작용의 평형 해리 상수(KD), 결합 속도 상수(ka 또는 kon), 및 해리 속도 상수(kd 또는 koff)가 Biacore™T200 계기 및 Biacore™ T200 분석 소프트웨어 v3을 이용하여 표면 플라스몬 공명(SPR)에 의해 결정되었다. 특정적으로, scFv ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 및 ROR1-4(서열 번호: 118, 127, 109 및 134에 각각 제시됨; CAR-A, CAR-F, CAR-G, CAR-I, CAR-R 및 CAR-B1의 scFv 결합 도메인)를 포함하여 상기 실시예 3 및 표 E1에 기재된 바와 같은 CAR의 scFv 결합 도메인 및 기준 CAR R12의 항원 결합 도메인(서열 번호: 142)이 평가되었다.
재조합으로 생성된 항-ROR1 scFv 결합 도메인 및 C-말단 6xHis 태그를 갖는 ROR1 세포 외 도메인(ROR1 ECD 6xHis)이 결합 친화도 및 동력학 분석에 사용되었다. 결합 도메인이 scFv와 뮤린 면역 글로불린 중쇄 IgG2a(scFv-mFc)의 Fc 부분과 융합으로 작제되었다. 뮤린 IgG2a 도메인이 4개의 점 돌연변이를 함유하여 Fc 수용체 및 보체 결합 둘 다가 감소된다. ROR1 ECD 6xHis의 활성 농도가 무교정 농도 분석(calibration-free concentration analysis, CFCA) 평가에 의해 결정되었다.
SPR의 경우, 항-마우스 IgG 포획 표면 칩(마우스 항체 포획 키트 유형 2, 카탈로그 번호 29215281 및 시리즈 S 센서 칩 CM5, 카탈로그 번호 29104988, GE Healthcare Bio-Sciences)을 사용하여 항-ROR1 scFv-mFc 결합 도메인을 유동 세포에서 포획하면서, 또 다른 유동 세포는 참조를 위해 공백으로 남겨두었다. 다중 주기 동력학이, 활성 및 기준 유동 세포 둘 다에 대한 가변 해리로 183, 61.0, 20.33, 6.78 및 2.26 nM 농도에서 재조합 인간 ROR1의 후속 주사에 의해 구현되었다.
ROR1 ECD가 다중 주기 동력학을 사용하여 다중 농도에서 scFv-mFc 결합 칩 위로 주사되었다. 1가 1:1 모델을 사용하여 센소그램을 분석하고 상호작용의 친화도 및 동력학 측정을 계산했다.
도 22a-22e는 항-ROR1 scFv ROR1-1(서열 번호: 118; 도 22a), ROR1-2(서열 번호: 127; 도 22b), ROR1-3(서열 번호: 109; 도 22c) 및 ROR1-4(서열 번호: 134; 도 22d)에 대한 이중 기준 센소그램 및 기준 CAR R12의 scFv 항원 결합 도메인(서열 번호: 142; 도 22e)을 도시한다. 항-ROR1 scFv 결합 도메인과 ROR1 사이 상호 작용의 친화도(평형 해리 상수, KD)가 표 E3에 제시된다. 항-ROR1 scFv ROR1-1(CAR-F의 결합 도메인)과 ROR1 사이 상호 작용의 친화도(평형 해리 상수, KD)가 42nM인 것으로 측정되었고, 상호 작용의 동력학 결합 속도 상수(ka 또는 kon; 온-속도) 및 해리 속도 상수(kd 또는 koff, 오프-속도)가 각각 ka = 1.2 x 105 1/Ms 및 kd = 5.0 x 10-3 1/s인 것으로 관찰되었다. 항-ROR1 scFv ROR1-1(CAR-F의 결합 도메인)이 기준 R12 scFv 결합 도메인에 비해 실질적으로 보다 큰 KD(보다 낮은 친화도) 및 보다 빠른 오프 속도(kd 또는 koff)를 나타냈다. 항-ROR1 scFv ROR1-2(CAR-A의 결합 도메인)이 기준 R12 scFv 결합 도메인에 비해 실질적으로 보다 작은 KD(보다 높은 친화도) 및 보다 느린 오프 속도(kd 또는 koff)를 나타냈다.
[표 E3]
Figure pct00011
B. 에피토프 비닝
SPR이 에피토프 비닝 분석에 사용되어 항-ROR1 기준 R12 결합 도메인의 에피토프에 비해 예시적인 ROR1 결합 도메인에 의해 인식되는 에피토프 결합 영역을 비교했다. 기준 R12 scFv 결합 도메인이 표면 상에 고정되었고, ROR1 ECD 6xHis이 R12 결합 도메인에 도입되었고 결합되었으며, scFv ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 및 ROR1-4(서열 번호: 118, 127, 109 및 134에 각각 제시됨; CAR-A, CAR-F, CAR-G, CAR-I, CAR-R 및 CAR-B1의 scFv 결합 도메인)를 포함한, 예시적인 항-ROR1 CAR의 재조합 scFv 결합 도메인이 주입되어 재조합 scFv가 R12 결합 도메인과 유사한 ROR1 영역에 결합했는지 여부를 평가했다. 결과는, ROR1 ECD에 대한 scFv R12의 결합이 후보 항-ROR1 scFv 결합 도메인 ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 및 ROR1-4에 의해 경쟁될 수 있음을 나타냈고, 이는 후보 scFv 결합 도메인이 R12 결합 도메인에 의해 결합된 것과 같은 중복 에피토프 또는 영역에 결합할 수 있다는 관찰과 일치한다.
실시예 9: 항-ROR1 항원 결합 도메인의 항원 민감도 평가
예시적인 항-ROR1 CAR-F 및 기준 항-ROR1 CAR R12를 발현하는 T 세포의 항원 민감도가, 조절 가능한 ROR1 발현 수준을 갖는 ROR1 별현 세포주를 이용하여 자극 후 사이토카인 생성 능력 및 세포 독성 활성에 대해 평가되었다.
K562 인간 골수성 백혈병 세포주가 조작되어 테트라사이클린 유도체 독시사이클린(TetOn)에 대한 반응으로 ROR1을 발현했다. 내인성 ROR1 발현 세포주에 비해, K562-ROR1-TetOn 조작된 세포주는 심지어 독시사이클린 처리 부재 시에 기준선에서 ROR1을 매우 낮은 수준으로 발현했다.
2 x 104개의 K562-ROR1-TetOn 또는 부모 K562 표적 세포가 형질 도입되어 IncuCyte®NucLight Red를 안정적으로 발현했다. R10 배양 배지(RPMI 1640; 1X BME; 1X NEAA, 1X NaPyr; 10% 열로 비활성화된 FBS)가 광학적으로 투명한 96 웰 평평한 바닥 플레이트에 첨가되었다. 해동된 CAR 발현 T 세포가 R10 배지에서 1.6 x 106개의 CAR+ 세포/mL의 농도로 재현탁되었다. 이어서 CAR-T가 웰 당 8 x 104개의 세포의 최종 CAR+ T 세포 계수로 K562 표적 세포에 첨가되어 4:1의 E:T 비율을 초래했다. 독시사이클린 염산염이 DMSO를 사용하여 원하는 농도(2 ng/mL - 512 ng/mL)로 희석되었고, 기술적 삼중으로 플레이팅된 CAR-T/표적 세포 혼합물에 첨가되었다. 플레이트를 IncuCyte®을 사용하여 NucLight Red 형광을 주기적으로 측정하면서 72 시간 동안 37oC/5% CO2로 인큐베이션하였다.
도 23에 도시된 바와 같이, 독시사이클린 단독과 함께 인큐베이션 후에 K562-ROR1-TetOn 세포 상에 ROR1 발현은, ROR1 발현이 독시사이클린 농도의 증가와 함께 증가했음을 나타냈다. 72 시간 인큐베이션 후에, 상청액이, 증가하는 양의 ROR1을 발현하는 K562-ROR1-TetOn 표적 세포와 혼합되었던, 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 R12 CAR을 발현하는 T 세포를 함유하는 웰에서 수집되었다. 도 24에 도시된 바와 같이, CAR-F 발현 T 세포는, R12 발현 세포에 비해 테스트된 모든 ROR1 발현 수준에서 IFNγIL-2 및 TNFα의 동등한 또는 보다 많은 생성을 초래했다. 도 25a-25b에 도시된 바와 같이, 시간이 흐름에 따른 레드 형광 신호의 손실에 의해 결정된 바와 같은 세포 독성 기능 분석은, CAR-F 발현 세포가 R12 발현 세포에 비해 보다 낮은 수준의 ROR1에 보다 효과적으로 반응했음을 나타냈고, 이는 부모 세포주에 대한 반응 결여에 의해 입증된 바와 같이 특이성의 손실없이 보다 큰 항원 민감도를 나타낸다.
실시예 10: 결합 특이성 평가
예시적인 항-ROR1 CAR-F의 결합 도메인의 잠재적인 표적외 결합 및 종 교차 반응성이 다양한 방법에 의해 평가되었다.
A. 원형질 막 단백질 배열
표적외 결합이 원형질 막 단백질 배열에 근거하여 평가되었다. 상기 칩 기반 플랫폼은, 인간 세포 외 프로테옴 중 75% 이상을 함께 나타내는 개별 인간 세포 외 막 단백질을 과발현하도록 유전자 조작된 세포 중 4400 군 이상을 함유한다. 패널은 1000개 이상의 묶인 분비 단백질 표적을 또한 포함한다. scFv-Fc(서열 번호: 118에 제시된 scFv 서열)가 생성되었고, 배열에 있는 세포에 대해 면역 조직 화학을 위해 사용되었다. 확인 스크리닝이 수행되었다. scFv는, ROR2를 포함하여 확인된 추가의 특이적 상호 작용없이 ROR1에 대해 매우 선택적인 것으로 결정되었다. 상기 결과는 항-ROR1 CAR-F 발현 세포의 표적외 활성에 대한 낮은 위험을 나타낸다.
B. 종 교차 반응성
표 E4는 인간(Homo sapiens), 히말라야 원숭이(Macaca mulatta), 시노몰구스 원숭이(Macaca fasicularis) 및 마우스(Mus musculus) 사이에 ROR1에 대한 세포 외 도메인(ECD) 상동성을 나타낸다. ROR1이 인간과 비인간 영장류 사이에 ECD에서 100% 보존된다.
[표 E4]
Figure pct00012
항-ROR1 CAR-F 및 R12 CAR의 종 교차 반응성이, Nur77-tdTomato 리포터를 함유하고 항-ROR1 CAR-F 또는 기준 R12 CAR을 발현하는 조작된 쥬르카트 T 세포주(상기 실시예 1.C에 기재된 바와 같음)를 마우스 ROR1을 발현하도록 조작된 CT26 뮤린 섬유아세포(CT26-mROR1), 인간 ROR1을 발현하도록 조작된 CT26 세포(CT26-hROR1) 또는 변형되지 않은 CT26 세포 또는 변형되지 않은 K562 인간 골수성 백혈병 세포와 함께 공배양하고 리포터의 발현을 분석함으로써 평가되었다.
도 26에 도시된 바와 같이, 인간과 마우스 ROR1 사이에 98.7% 상동성이 존재하나, 마우스 ROR1 발현 표적 세포에 대한 항-ROR1 CAR-F 또는 R12 CAR의 결합에 대해 교차 반응성이 관찰되지 않았다.
본 발명은, 예를 들어 본 발명의 다양한 측면을 설명하기 위해 제공된 개시된 특정 구현예로 범위를 한정하려는 의도가 아니다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형이 여기의 기재 및 교시에서 명백해질 것이다. 상기 변형은 공개의 진정한 범위와 정신에서 벗어나지 않고 실행될 수 있으며, 본 개시의 범위에 속하도록 의도된다.
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SEQUENCE LISTING <110> Juno Therapeutics, Inc. <120> ANTIBODIES AND CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR RECEPTOR TYROSINE KINASE LIKE ORPHAN RECEPTOR 1 (ROR1) <130> 735042017740 <140> PCT/US2020/015489 <141> 2020-01-28 <150> 62/798,456 <151> 2019-01-29 <160> 219 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Spacer (IgG4 hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> Spacer (IgG4 hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 50 55 60 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 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caagccaaga ggaaatgacc 420 aagaaccagg tgtccctgac ctgcctggtc aagggcttct acccttccga tatcgccgtg 480 gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540 agcgacggct cattcttcct gtacagccgg ctgaccgtgg acaagagcag atggcaagag 600 ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 660 tctctgagcc tgagcctggg caag 684 <210> 36 <211> 229 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> Hinge-CH2-CH3 spacer <400> 36 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe 1 5 10 15 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 20 25 30 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 35 40 45 Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 50 55 60 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser 65 70 75 80 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 85 90 95 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser 100 105 110 Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln 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gagccaggag gatccagaag tgcagttcaa ctggtacgtg 180 gacggcgtgg aagtccacaa tgctaagact aaaccccgag aggaacagtt tcagtcaact 240 taccgggtcg tgagcgtgct gaccgtcctg catcaggatt ggctgaacgg gaaggagtat 300 aagtgcaaag tgtctaataa gggactgcct agctccatcg agaaaacaat tagtaaggca 360 aaagggcagc ctcgagaacc acaggtgtat accctgcccc ctagccagga ggaaatgacc 420 aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtc aaaggcttct atccaagtga catcgccgtg 480 gagtgggaat caaatgggca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 540 tctgatggaa gtttctttct gtattccagg ctgaccgtgg ataaatctcg ctggcaggag 600 ggcaacgtgt tctcttgcag tgtcatgcac gaagccctgc acaatcatta tacacagaag 660 tcactgagcc tgtccctggg caaa 684 <210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> 4GS linker <400> 39 Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 <210> 40 <211> 4 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> 3GS linker <400> 40 Gly Gly Gly Ser 1 <210> 41 <211> 15 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> (4GS)3 linker <400> 41 Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 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gcaaaggcct ggaatggatc ggcaccatct tctacagcgg caagacctac 180 aacaacccca gcctgaagtc cagagtgacc atgagcgtgg acaccagcaa gaaccacttc 240 agcctgaaag tgaacagcgt gacagccgcc gataccgccg tgtactactg cgccagattc 300 gactacggct tccacgacgc cttcgacatc tggggccagg gcacaatggt cacagtttct 360 agcggaggcg gaggatctgg tggcggagga agtggcggag gcggttctga gattgtgatg 420 acacagagcc ccgccactct gagccttagt cctggcgaaa gagccacact gagctgcaga 480 gccagccaga gcatcaccag cgattacctg agctggtatc agcagaagcc cggacaggct 540 cccagactgc tgatctatgg cgcctctaca agagccaccg gcattcccgc ccgcttttct 600 ggctctggaa gcggcaccga cttcaccctg accatatcta gcctgcagcc tgaggacttc 660 gtggtgtact attgccagca ggactacaac ctgtacacct tcggccaggg gaccaagctg 720 gaaatcaaga ga 732 <210> 127 <211> 244 <212> PRT <213> ARTIFICIAL SEQUENCE <220> <223> scFv (VH-VL) <400> 127 Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Thr 20 25 30 Thr Ser Tyr Trp Ala Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly 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Phe Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro Gln Gly 785 790 795 800 Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Pro Ile Pro Gln Asn Gln Arg Phe 805 810 815 Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala Phe Pro 820 825 830 Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln His Cys 835 840 845 Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ser 850 855 860 Thr Gly His Val Thr Ser Leu Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln Glu Ala 865 870 875 880 Asn Ile Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro Asn His Pro Gly Gly 885 890 895 Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr Lys Ile 900 905 910 Asp Ala Lys Gln Ala Ser Leu Leu Gly Asp Ala Asn Ile His Gly His 915 920 925 Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Leu 930 935 <210> 217 <211> 923 <212> PRT <213> macaca fasicularis <220> <221> MISC_FEATURE <223> ROR1 (Uniprot A0A2K5WTX7) <400> 217 Met Leu Arg Thr Ala His Lys Leu Leu Tyr Leu Ile Leu Pro Leu Ser 1 5 10 15 Phe Ser Leu Pro Phe Phe Phe Phe Ser Glu Thr Glu Leu Ser Val Ser 20 25 30 Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Ile Ser Ser Glu Leu Asn 35 40 45 Lys Asp Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met Asn Asn Ile Thr Thr 50 55 60 Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys Val Ser Gly Asn Pro 65 70 75 80 Pro Pro Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala Pro Val Val Gln Glu 85 90 95 Pro Arg Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr Gly Ser Arg Leu Arg 100 105 110 Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr Phe Gln Cys Val Ala 115 120 125 Thr Asn Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys 130 135 140 Phe Gly Lys Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg 145 150 155 160 Gly Ile Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu 165 170 175 Ser Leu His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe 180 185 190 Thr Met Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe 195 200 205 Ala Ile Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr 210 215 220 Ser Ser Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu Ile 225 230 235 240 Leu Glu Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn 245 250 255 Pro Met Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro 260 265 270 Gln Pro Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro 275 280 285 Met Ala Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly 290 295 300 Val Asp Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys 305 310 315 320 Gln Pro Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Thr Phe Thr Ala Leu 325 330 335 Arg Phe Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly 340 345 350 Asn Gln Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys 355 360 365 Ser Asp Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu 370 375 380 Lys Asn Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser Val Ala Ile 385 390 395 400 Pro Leu Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn 405 410 415 Asn Gln Lys Ser Ser Ser Pro Pro Val Gln Arg Gln Pro Lys His Val 420 425 430 Arg Gly Gln Asn Val Glu Met Ser Met Leu Asn Ala Tyr Lys Pro Lys 435 440 445 Ser Lys Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser 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Val Val Leu Trp Glu Ile Phe 660 665 670 Ser Phe Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly Phe Ser Asn Gln Glu Val Ile 675 680 685 Glu Met Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu Pro Cys Ser Glu Asp Cys Pro 690 695 700 Pro Arg Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu Cys Trp Asn Glu Ile Pro Ser 705 710 715 720 Arg Arg Pro Arg Phe Lys Asp Ile His Val Arg Leu Arg Ser Trp Glu 725 730 735 Gly Leu Ser Ser His Thr Ser Ser Thr Thr Pro Ser Gly Gly Asn Ala 740 745 750 Thr Thr Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala Ser Pro Val Ser Asn Leu Ser 755 760 765 Asn Pro Arg Tyr Pro Asn Tyr Ile Phe Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro 770 775 780 Gln Gly Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Pro Ile Pro Gln Asn Gln 785 790 795 800 Arg Phe Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala 805 810 815 Phe Pro Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln 820 825 830 His Cys Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser 835 840 845 Thr Ser Thr Gly His Val Thr Ser Leu Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln 850 855 860 Glu Ala Asn Ile Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro Asn His Pro 865 870 875 880 Gly Gly Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr 885 890 895 Lys Ile Asp Ala Lys Gln Ala Ser Leu Leu Gly Asp Ala Asn Ile His 900 905 910 Gly His Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Leu 915 920 <210> 218 <211> 882 <212> PRT <213> macaca fasicularis <220> <221> MISC_FEATURE <223> ROR1 (Uniprot A0A2K5WTX4) <400> 218 Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu 1 5 10 15 Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro 20 25 30 Thr Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala Pro Val Val Gln Glu Pro Arg 35 40 45 Arg Leu Ser Phe Arg Ser Thr Ile Tyr Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg 50 55 60 Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn 65 70 75 80 Gly Lys Glu Val Val Ser Ser Thr Gly Val Leu Phe Val Lys Phe Gly 85 90 95 Pro Pro Pro Thr Ala Ser Pro Gly Tyr Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp 100 105 110 Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg Gly Ile Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly 115 120 125 Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu Ser Leu His Met Gln Gly Glu Ile Glu 130 135 140 Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe Thr Met Ile Gly Thr Ser Ser His Leu 145 150 155 160 Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe Ala Ile Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala 165 170 175 Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr Ser Ser Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu 180 185 190 Cys Arg Asp Glu Cys Glu Ile Leu Glu Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu 195 200 205 Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn Pro Met Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu 210 215 220 Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro Gln Pro Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn 225 230 235 240 Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro Met Ala Asp Pro Ile Asn Lys Asn His 245 250 255 Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly Val Asp Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val 260 265 270 Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys Gln Pro Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His 275 280 285 Thr His Thr Phe Thr Ala Leu Arg Phe Pro Glu Leu Asn Gly Gly His 290 295 300 Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly Asn Gln Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe 305 310 315 320 Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys Ser Asp Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys 325 330 335 Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu Lys Asn Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile 340 345 350 Leu Val Pro Ser Val Ala Ile Pro Leu Ala Ile Ala Leu Leu Phe Phe 355 360 365 Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn Asn Gln Lys Ser Ser Ser Pro Pro Val 370 375 380 Gln Arg Gln Pro Lys His Val Arg Gly Gln Asn Val Glu Met Ser Met 385 390 395 400 Leu Asn Ala Tyr Lys Pro Lys Ser Lys Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser 405 410 415 Ala Val Arg Phe Met Glu Glu Leu Gly Glu Cys Ala Phe Gly Lys Ile 420 425 430 Tyr Lys Gly His Leu Tyr Leu Pro Gly Met Asp His Ala Gln Leu Val 435 440 445 Ala Ile Lys Thr Leu Lys Asp Tyr Asn Asn Pro Gln Gln Trp Thr Glu 450 455 460 Phe Gln Gln Glu Ala Ser Leu Met Ala Glu Leu His His Pro Asn Ile 465 470 475 480 Val Cys Leu Leu Gly Ala Val Thr Gln Glu Gln Pro Val Cys Met Leu 485 490 495 Phe Glu Tyr Met Asn Gln Gly Asp Leu His Glu Phe Leu Ile Met Arg 500 505 510 Ser Pro His Ser Asp Val Gly Cys Ser Ser Asp Glu Asp Gly Thr Val 515 520 525 Lys Ser Ser Leu Asp His Gly Asp Phe Leu His Ile Ala Ile Gln Ile 530 535 540 Ala Ala Gly Met Glu Tyr Leu Ser Ser His Phe Phe Val His Lys Asp 545 550 555 560 Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Ile Gly Glu Gln Leu His Val Lys Ile 565 570 575 Ser Asp Leu Gly Leu Ser Arg Glu Ile Tyr Ser Ala Asp Tyr Tyr Arg 580 585 590 Val Gln Ser Lys Ser Leu Leu Pro Ile Arg Trp Met Pro Pro Glu Ala 595 600 605 Ile Met Tyr Gly Lys Phe Ser Ser Asp Ser Asp Ile Trp Ser Phe Gly 610 615 620 Val Val Leu Trp Glu Ile Phe Ser Phe Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly 625 630 635 640 Phe Ser Asn Gln Glu Val Ile Glu Met Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu 645 650 655 Pro Cys Ser Glu Asp Cys Pro Pro Arg Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu 660 665 670 Cys Trp Asn Glu Ile Pro Ser Arg Arg Pro Arg Phe Lys Asp Ile His 675 680 685 Val Arg Leu Arg Ser Trp Glu Gly Leu Ser Ser His Thr Ser Ser Thr 690 695 700 Thr Pro Ser Gly Gly Asn Ala Thr Thr Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala 705 710 715 720 Ser Pro Val Ser Asn Leu Ser Asn Pro Arg Tyr Pro Asn Tyr Ile Phe 725 730 735 Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro Gln Gly Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly 740 745 750 Pro Pro Ile Pro Gln Asn Gln Arg Phe Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro 755 760 765 Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala Phe Pro Ala Ala His Tyr Gln Pro Thr 770 775 780 Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln His Cys Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser 785 790 795 800 Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ser Thr Gly His Val Thr Ser Leu 805 810 815 Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln Glu Ala Asn Ile Pro Leu Leu Pro His 820 825 830 Met Ser Ile Pro Asn His Pro Gly Gly Met Gly Ile Thr Val Phe Gly 835 840 845 Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr Lys Ile Asp Ala Lys Gln Ala Ser Leu 850 855 860 Leu Gly Asp Ala Asn Ile His Gly His Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala 865 870 875 880 Glu Leu <210> 219 <211> 937 <212> PRT <213> mus musculus <220> <221> MISC_FEATURE <223> ROR1 (Uniprot Q9Z139) <400> 219 Met His Arg Pro Arg Arg Arg Gly Thr Arg Pro Pro Pro Leu Ala Leu 1 5 10 15 Leu Ala Ala Leu Leu Leu Ala Ala Arg Gly Ala Asp Ala Gln Glu Thr 20 25 30 Glu Leu Ser Val Ser Ala Glu Leu Val Pro Thr Ser Ser Trp Asn Thr 35 40 45 Ser Ser Glu Ile Asp Lys Gly Ser Tyr Leu Thr Leu Asp Glu Pro Met 50 55 60 Asn Asn Ile Thr Thr Ser Leu Gly Gln Thr Ala Glu Leu His Cys Lys 65 70 75 80 Val Ser Gly Asn Pro Pro Pro Ser Ile Arg Trp Phe Lys Asn Asp Ala 85 90 95 Pro Val Val Gln Glu Pro Arg Arg Ile Ser Phe Arg Ala Thr Asn Tyr 100 105 110 Gly Ser Arg Leu Arg Ile Arg Asn Leu Asp Thr Thr Asp Thr Gly Tyr 115 120 125 Phe Gln Cys Val Ala Thr Asn Gly Lys Lys Val Val Ser Thr Thr Gly 130 135 140 Val Leu Phe Val Lys Phe Gly Pro Pro Pro Thr Ala Ser Pro Gly Ser 145 150 155 160 Ser Asp Glu Tyr Glu Glu Asp Gly Phe Cys Gln Pro Tyr Arg Gly Ile 165 170 175 Ala Cys Ala Arg Phe Ile Gly Asn Arg Thr Val Tyr Met Glu Ser Leu 180 185 190 His Met Gln Gly Glu Ile Glu Asn Gln Ile Thr Ala Ala Phe Thr Met 195 200 205 Ile Gly Thr Ser Ser His Leu Ser Asp Lys Cys Ser Gln Phe Ala Ile 210 215 220 Pro Ser Leu Cys His Tyr Ala Phe Pro Tyr Cys Asp Glu Thr Ser Ser 225 230 235 240 Val Pro Lys Pro Arg Asp Leu Cys Arg Asp Glu Cys Glu Val Leu Glu 245 250 255 Asn Val Leu Cys Gln Thr Glu Tyr Ile Phe Ala Arg Ser Asn Pro Met 260 265 270 Ile Leu Met Arg Leu Lys Leu Pro Asn Cys Glu Asp Leu Pro Gln Pro 275 280 285 Glu Ser Pro Glu Ala Ala Asn Cys Ile Arg Ile Gly Ile Pro Met Ala 290 295 300 Asp Pro Ile Asn Lys Asn His Lys Cys Tyr Asn Ser Thr Gly Val Asp 305 310 315 320 Tyr Arg Gly Thr Val Ser Val Thr Lys Ser Gly Arg Gln Cys Gln Pro 325 330 335 Trp Asn Ser Gln Tyr Pro His Thr His Ser Phe Thr Ala Leu Arg Phe 340 345 350 Pro Glu Leu Asn Gly Gly His Ser Tyr Cys Arg Asn Pro Gly Asn Gln 355 360 365 Lys Glu Ala Pro Trp Cys Phe Thr Leu Asp Glu Asn Phe Lys Ser Asp 370 375 380 Leu Cys Asp Ile Pro Ala Cys Asp Ser Lys Asp Ser Lys Glu Lys Asn 385 390 395 400 Lys Met Glu Ile Leu Tyr Ile Leu Val Pro Ser Val Ala Ile Pro Leu 405 410 415 Ala Ile Ala Phe Leu Phe Phe Phe Ile Cys Val Cys Arg Asn Asn Gln 420 425 430 Lys Ser Ser Ser Pro Pro Val Gln Arg Gln Pro Lys Pro Val Arg Gly 435 440 445 Gln Asn Val Glu Met Ser Met Leu Asn Ala Tyr Lys Pro Lys Ser Lys 450 455 460 Ala Lys Glu Leu Pro Leu Ser Ala Val Arg Phe Met Glu Glu Leu Gly 465 470 475 480 Glu Cys Thr Phe Gly Lys Ile Tyr Lys Gly His Leu Tyr Leu Pro Gly 485 490 495 Met Asp His Ala Gln Leu Val Ala Ile Lys Thr Leu Lys Asp Tyr Asn 500 505 510 Asn Pro Gln Gln Trp Thr Glu Phe Gln Gln Glu Ala Ser Leu Met Ala 515 520 525 Glu Leu His His Pro Asn Ile Val Cys Leu Leu Gly Ala Val Thr Gln 530 535 540 Glu Gln Pro Val Cys Met Leu Phe Glu Tyr Met Asn Gln Gly Asp Leu 545 550 555 560 His Glu Phe Leu Ile Met Arg Ser Pro His Ser Asp Val Gly Cys Ser 565 570 575 Ser Asp Glu Asp Gly Thr Val Lys Ser Ser Leu Asp His Gly Asp Phe 580 585 590 Leu His Ile Ala Ile Gln Ile Ala Ala Gly Met Glu Tyr Leu Ser Ser 595 600 605 His Phe Phe Val His Lys Asp Leu Ala Ala Arg Asn Ile Leu Ile Gly 610 615 620 Glu Gln Leu His Val Lys Ile Ser Asp Leu Gly Leu Ser Arg Glu Ile 625 630 635 640 Tyr Ser Ala Asp Tyr Tyr Arg Val Gln Ser Lys Ser Ser Leu Pro Ile 645 650 655 Arg Trp Met Pro Pro Glu Ala Ile Met Tyr Gly Lys Phe Ser Ser Asp 660 665 670 Ser Asp Ile Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Phe Ser Phe 675 680 685 Gly Leu Gln Pro Tyr Tyr Gly Phe Ser Asn Gln Glu Val Ile Glu Met 690 695 700 Val Arg Lys Arg Gln Leu Leu Pro Cys Ser Glu Asp Cys Pro Pro Arg 705 710 715 720 Met Tyr Ser Leu Met Thr Glu Cys Trp Asn Glu Ile Pro Ser Arg Arg 725 730 735 Pro Arg Phe Lys Asp Ile His Val Arg Leu Arg Ser Trp Glu Gly Leu 740 745 750 Ser Ser His Thr Ser Ser Thr Thr Pro Ser Gly Gly Asn Ala Thr Thr 755 760 765 Gln Thr Thr Ser Leu Ser Ala Ser Pro Val Ser Asn Leu Ser Asn Pro 770 775 780 Arg Phe Pro Asn Tyr Met Phe Pro Ser Gln Gly Ile Thr Pro Gln Gly 785 790 795 800 Gln Ile Ala Gly Phe Ile Gly Pro Ala Ile Pro Gln Asn Gln Arg Phe 805 810 815 Ile Pro Ile Asn Gly Tyr Pro Ile Pro Pro Gly Tyr Ala Ala Phe Pro 820 825 830 Ala Ala His Tyr Gln Pro Ala Gly Pro Pro Arg Val Ile Gln His Cys 835 840 845 Pro Pro Pro Lys Ser Arg Ser Pro Ser Ser Ala Ser Gly Ser Thr Ser 850 855 860 Thr Gly His Val Ala Ser Leu Pro Ser Ser Gly Ser Asn Gln Glu Ala 865 870 875 880 Asn Val Pro Leu Leu Pro His Met Ser Ile Pro Asn His Pro Gly Gly 885 890 895 Met Gly Ile Thr Val Phe Gly Asn Lys Ser Gln Lys Pro Tyr Lys Ile 900 905 910 Asp Ser Lys Gln Ser Ser Leu Leu Gly Asp Ser His Ile His Gly His 915 920 925 Thr Glu Ser Met Ile Ser Ala Glu Val 930 935

Claims (146)

  1. 항-수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1, ROR1) 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하며,
    여기에서:
    상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 112 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 121 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 103 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제 1 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 130 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하며,
    여기에서:
    상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 제시된 서열을 각각 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 제시된 서열을 각각 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제 1 항, 제 2 항 및 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 67, 71 및 73에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 75, 77 및 79에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제 1 항, 제 3 항 및 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 82, 86 및 88에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 90, 92 및 94에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제 1 항, 제 4 항 및 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 56 및 58에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제 1 항, 제 5 항 및 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 52, 97 및 99에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 60, 62 및 64에 제시된 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제 1 항 또는 제 6 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하며,
    여기에서:
    상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제 1 항, 제 2 항, 제 6 항, 제 7 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서
    상기 VH 영역은 서열 번호: 112에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 115에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제 1 항, 제 3 항, 제 6 항, 제 8 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서
    상기 VH 영역은 서열 번호: 121에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 124에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제 1 항, 제 4 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서
    상기 VH 영역은 서열 번호: 103에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 제 1 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 10 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서
    상기 VH 영역은 서열 번호: 130에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 106에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제 1 항, 제 6 항, 제 11 항 및 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서:
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
    중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하며,
    여기에서:
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나;
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하거나; 또는
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  19. 제 1 항, 제 2 항, 제 6 항, 제 7 항, 제 11 항, 제 12 항, 제 13 항, 제 17 항 및 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 112 및 115에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  20. 제 1 항, 제 3 항, 제 6 항, 제 8 항, 제 11 항, 제 12 항, 제 14 항, 제 17 항 및 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 121 및 124에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  21. 제 1 항, 제 4 항, 제 6 항, 제 9 항, 제 11 항, 제 12 항, 제 15 항, 제 17 항 및 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 103 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  22. 제 1 항, 제 5 항, 제 6 항, 제 10 항, 제 11 항, 제 12 항, 제 16 항, 제 17 항 및 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 서열 번호: 130 및 106에 각각 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  23. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 전장 항체인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  24. 제 1 항 내지 제 22 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 항원 결합 단편인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  25. 제 1 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  26. 제 1 항 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 인간이거나 인간 단백질 유래인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  27. 제 1 항 내지 제 22 항 및 제 24 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 Fv(single chain Fv, scFv)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  28. 제 27 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대하여 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  29. 제 27 항에 있어서,
    상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대하여 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  30. 제 27 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  31. 제 30 항에 있어서,
    상기 가요성 링커는 서열 번호: 41에 제시된 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  32. 제 27 항, 제 28 항, 제 30 항 및 제 31 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 제시된 서열 또는 서열 번호: 118, 127, 109 또는 134에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  33. 제 27 항, 제 28 항 및 제 30 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열 번호: 118에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  34. 제 27 항, 제 28 항 및 제 30 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열 번호: 127에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  35. 제 27 항, 제 28 항 및 제 30 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열 번호: 109에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  36. 제 27 항, 제 28 항 및 제 30 항 내지 제 32 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 scFv는 서열 번호: 134에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  37. 제 1 항 내지 제 36 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 1(ROR1) 단백질에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  38. 제 37 항에 있어서,
    상기 인간 ROR1 단백질은 서열 번호: 144, 145 또는 146에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  39. 제 37 항 또는 제 38 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 199에 제시된 서열로 구성된 에피토프 또는 서열 번호: 199에 제시된 서열 내에 존재하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  40. 제 37 항 내지 제 39 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에서 선택된 서열로 구성된 하나 이상의 에피토프 또는 서열 번호: 200-214 중 어느 하나에서 선택된 서열 내에 존재하는 에피토프에 더 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  41. 제 1 항 내지 제 40 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편은, 수용체 티로신 키나제 유사 고아 수용체 2(Receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 2, ROR2) 단백질, 선택적으로 인간 ROR2 단백질에 결합하지 않거나, 교차 반응하지 않거나 또는 보다 낮은 수준 또는 정도 또는 친화도로 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  42. 제 1 항 내지 제 41 항 중 어느 한 항에 있어서,
    인간 ROR2에 대한 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도는, 인간 ROR1 단백질에 대한 결합의 크기, 수준 또는 정도 또는 친화도보다 (약) 75%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 작은 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  43. 제 1 항 내지 제 42 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  44. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-8 M 내지 약 1 x 10-7 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  45. 제 1 항 내지 제 43 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 5 x 10-11 M 내지 약 1 x 10-10 M의 평형 해리 상수(KD)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  46. 제 1 항 내지 제 45 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  47. 제 1 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-3 1/s 내지 약 1 x 10-2 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  48. 제 1 항 내지 제 46 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 1 x 10-5 1/s 내지 약 1 x 10-4 1/s의 해리 속도 상수(kd 또는 koff)로 인간 ROR1 단백질에 결합하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  49. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는, 단일 사슬 세포 표면 단백질.
  50. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이종 분자 또는 모이어티를 포함하는, 접합체.
  51. 제 50 항에 있어서,
    상기 이종 분자 또는 모이어티는 치료 모이어티인 것을 특징으로 하는, 접합체.
  52. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인, 막관통 영역 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR).
  53. 제 52 항에 있어서,
    상기 세포 외 항원 결합 도메인과 상기 막관통 도메인 사이에 스페이서를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  54. 제 53 항에 있어서,
    상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 적어도 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  55. 제 53 항 또는 제 54 항에 있어서,
    상기 스페이서는 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  56. 제 53 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 (약) 15개 미만의 아미노산 길이인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  57. 제 53 항 내지 제 56 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 또는 135에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  58. 제 53 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG4 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  59. 제 53 항 내지 제 57 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 힌지 영역의 적어도 일부는 IgG2 힌지 영역, 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역 또는 이의 변이체의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  60. 제 53 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 1에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  61. 제 53 항 내지 제 58 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 135에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  62. 제 53 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  63. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 62 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CH3 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서 상기 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고, 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  64. 제 53 항 내지 제 55 항, 제 62 항 및 제 63 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는, (약) 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 125개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 값 사이의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  65. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 62 항 내지 제 64 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 (약) 120개의 아미노산 길이인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  66. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 62 항 내지 제 65 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 3 또는 138에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  67. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 62 항 내지 제 66 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 3 또는 138에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  68. 제 53 항 내지 제 55 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는, 면역 글로불린 또는 이의 변이체의 힌지 영역의 적어도 일부, CH2영역의 적어도 일부 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  69. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 68 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 CH2 영역의 적어도 일부는 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기에서 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고, 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2인 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  70. 제 53 항 내지 제 55 항, 제 68 항 및 제 69 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 또는 230개의 아미노산 길이이거나 또는 상기 중 임의의 값 사이의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  71. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 68 항 내지 제 70 항 중 어느 한 항에 있어서, 여기에서:
    상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상이 인간 IgG4 유래 CH2 영역의 전부 또는 일부 및 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하거나; 또는
    상기 힌지 영역, 상기 CH2 영역 및 상기 CH3 영역 중 하나 이상이 키메라이고, 인간 IgG4 및 인간 IgG2 유래 힌지, CH2 영역 및 CH3 영역을 포함하거나; 또는
    상기 스페이서가 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지에 비해 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하는;
    것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  72. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 68 항 내지 제 71 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 37 또는 194에 대해 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  73. 제 53 항 내지 제 55 항 및 제 68 항 내지 제 72 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 스페이서는 서열 번호: 37 또는 194에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  74. 제 52 항 내지 제 73 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 막관통 영역은 CD4, CD28, 또는 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  75. 제 52 항 내지 제 74 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 막관통 영역은 CD28, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  76. 제 52 항 내지 제 75 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 막관통 도메인은, 서열 번호: 8 또는 149, 또는 서열 번호: 8 또는 149에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  77. 제 52 항 내지 제 76 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 내 신호 전달 영역은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하고/거나, T 세포 수용체(T cell receptor, TCR) 구성 요소이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(immunoreceptor tyrosine-based activation motif, ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  78. 제 52 항 내지 제 77 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬, 선택적으로 인간 CD3ζ 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  79. 제 52 항 내지 제 78 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 내 신호 전달 도메인은, 서열 번호: 13, 14 또는 15에 제시된 서열, 또는 서열 번호: 13, 14 또는 15에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  80. 제 52 항 내지 제 79 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 13에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  81. 제 52 항 내지 제 80 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포 내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  82. 제 81 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 상기 막관통 영역과 상기 세포 내 신호 전달 도메인 사이에 존재하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  83. 제 81 항 또는 제 82 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  84. 제 81 항 내지 제 83 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  85. 제 81 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 선택적으로 인간 CD28의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  86. 제 81 항 내지 제 85 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은, 서열 번호: 10에 제시된 서열 또는 서열 번호: 10에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  87. 제 81 항 내지 제 84 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  88. 제 81 항 내지 제 84 항 및 제 87 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 공자극 신호 전달 영역은, 서열 번호: 12에 제시된 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 (약) 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  89. 제 81 항 내지 제 88 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단으로의 순서로: 상기 세포 외 항원 결합 도메인, 상기 스페이서, 상기 막관통 영역 및 상기 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  90. 제 81 항 내지 제 89 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 도메인은 scFv이고, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로의 순서로: scFv를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인; 선택적으로 서열 번호: 135에 제시된 서열을 포함하는 변형된 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  91. 제 81 항 내지 제 89 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 도메인은 scFv이고, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는, N 말단에서 C 말단으로의 순서로: scFv를 포함하는 세포 외 항원 결합 도메인; 선택적으로 서열 번호: 138에 제시된 서열을 포함하는 변형된 IgG4 힌지-CH3을 포함하는 스페이서; 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 선택적으로 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 공자극 신호 전달 영역의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  92. 제 52 항 내지 제 91 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열, 또는 서열 번호: 184, 185, 186, 187, 188 또는 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  93. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 184에 제시된 서열 또는 서열 번호: 184에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  94. 제 52 항 내지 제 93 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 184에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  95. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 185에 제시된 서열 또는 서열 번호: 185에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  96. 제 52 항 내지 제 92 항 및 제 95 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 185에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  97. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 186에 제시된 서열 또는 서열 번호: 186에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  98. 제 52 항 내지 제 92 항 및 제 97 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 186에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  99. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 187에 제시된 서열 또는 서열 번호: 187에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  100. 제 52 항 내지 제 92 항 및 제 99 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 187에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  101. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 188에 제시된 서열 또는 서열 번호: 188에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  102. 제 52 항 내지 제 92 항 및 제 101 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 188에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  103. 제 52 항 내지 제 92 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는, 서열 번호: 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 189에 제시된 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  104. 제 52 항 내지 제 92 항 및 제 103 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 189에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 항-ROR1 키메라 항원 수용체.
  105. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
  106. 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
  107. 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체를 암호화하는 핵산을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
  108. 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는, 폴리뉴클레오티드.
  109. 제 105 항 내지 제 108 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 스플라이스 부위 제거에 의해 최적화된 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
  110. 제 105 항 내지 제 109 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 폴리뉴클레오티드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오티드.
  111. 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는, 벡터.
  112. 제 111 항에 있어서,
    상기 벡터는 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
  113. 제 112 항에 있어서,
    상기 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
  114. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질 또는 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체를 포함하는, 세포.
  115. 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함하는, 세포.
  116. 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터를 포함하는, 세포.
  117. 제 114 항 내지 제 116 항 중 어느 한 항에 있어서,
    림프구인 것을 특징으로 하는, 세포.
  118. 제 114 항 내지 제 116 항 중 어느 한 항에 있어서,
    NK 세포 또는 T 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
  119. 제 114 항 내지 제 118 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 T 세포이고, 상기 T 세포는 CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
  120. 제 114 항 내지 제 119 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 세포는 대상체에서 수득된 1차 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
  121. 제 114 항 내지 제 120 항 중 어느 한 항에 있어서,
    복수의 상기 세포 중, (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 상기 세포가 복수로 토닉 신호 전달(tonic signaling) 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
  122. 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포를 포함하는, 조성물.
  123. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체 또는 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함하는, 조성물.
  124. 제 122 항 또는 제 123 항에 있어서,
    약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  125. 제 122 항 또는 제 124 항에 있어서,
    상기 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율이 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 (약) 1:2 내지 2:1, 선택적으로 (약) 1:1인 것을 특징으로 하는, 조성물.
  126. 제 122 항, 제 124 항 및 제 125 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물 내 복수의 세포 중, (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만의 상기 세포가 복수로 토닉 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 항-ROR1 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
  127. 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물을 ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
  128. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물.
  129. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 약제의 제조를 위한 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
  130. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
  131. 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터를 ROR1과 관련된 질병 또는 장애가 있는 대상체에 투여하는 것을 포함하는, 치료 방법.
  132. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 데 사용하기 위한 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터.
  133. ROR1과 관련된 질병 또는 장애를 치료하는 약제의 제조를 위한 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터의 용도.
  134. ROR1과 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한 제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드 또는 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터의 용도.
  135. 제 127 항 내지 제 134 항 중 어느 한 항에 있어서,
    ROR1과 관련된 상기 질병 또는 장애가 암인 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  136. 제 135 항에 있어서,
    상기 암은 ROR1 발현 암인 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  137. 제 127 항 내지 제 136 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 ROR1 발현 고형 종양 또는 ROR1 발현 혈액암과 관련된 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  138. 제 127 항 내지 제 137 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 ROR1 발현 고형 종양과 관련된 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  139. 제 137 항 또는 제 138 항에 있어서,
    고형 종양과 관련된 상기 암은, 신경모세포종, 신장 세포 암종, 대장암, 결장암, 유방암, 편평상피세포암, 흑색종, 골수종, 위암, 뇌암, 폐암, 췌장암, 자궁 경부암, 난소암, 간암, 방광암, 전립선암, 고환암, 갑상선암, 자궁암, 부신암 및 두경부암으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  140. 제 139 항에 있어서,
    상기 폐암은, 비-소세포 폐암(non-small cell lung cancer, NSCLC), 폐 선암, 선암, 편평상피 세포 암종, 소세포 암종 및 비정형 암양종인 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  141. 제 140 항에 있어서,
    상기 폐암은 NSCLC인 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  142. 제 139 항에 있어서,
    상기 유방암은 삼중 음성 유방암(triple negative breast cancer, TNBC)인 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  143. 제 127 항 내지 제 137 항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 암은 ROR1 발현 혈액암과 관련된 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  144. 제 143 항에 있어서,
    상기 혈액암은, B 세포 백혈병, 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL), 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia, AML), 급성 림프구성 백혈병(acute lymphocytic leukemia, ALL), 버킷 림프종 또는 맨틀 세포 림프종(mantle cell lymphoma, MCL)으로 구성된 군에서 선택된 것을 특징으로 하며, 상기 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터.
  145. 키트로서,
    제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터, 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물 및 사용 지침을 포함하며,
    선택적으로 여기에서 상기 지침은, 제 127 항 내지 제 144 항 중 어느 한 항의 사용 또는 용도를 위한, 방법, 세포, 조성물, 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 단일 사슬 세포 표면 단백질, 접합체, 키메라 항원 수용체, 폴리뉴클레오티드 또는 벡터와 선택적으로 부합되게, 상기 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 상기 단일 사슬 세포 표면 단백질, 상기 접합체, 상기 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 상기 세포 또는 상기 조성물을 투여하기 위한 것임을 특징으로 하는, 키트.
  146. 제조 물품으로서,
    제 1 항 내지 제 48 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 제 49 항의 단일 사슬 세포 표면 단백질, 제 50 항 또는 제 51 항의 접합체, 제 52 항 내지 제 104 항 중 어느 한 항의 항-ROR1 키메라 항원 수용체, 제 105 항 내지 제 110 항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오티드, 제 111 항 내지 제 113 항 중 어느 한 항의 벡터, 제 114 항 내지 제 121 항 중 어느 한 항의 세포 또는 제 122 항 내지 제 126 항 중 어느 한 항의 조성물 또는 제 145 항의 키트를 포함하는 것을 특징으로 하는, 제조 물품.
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