BR112021014833A2

BR112021014833A2 - Anticorpos e receptores antigênicos quiméricos específicos para receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ror1)

Info

Publication number: BR112021014833A2
Application number: BR112021014833-7A
Authority: BR
Inventors: Andreia COSTA; Yeonjoo Oh; Madeline Williams; Collin HAUSKINS; Catherine Sierra; Rupesh Amin; Jenna BAILEY; Samriti BEDI; Brian Belmont; Aye Chen; Stephen Jacob Goldfless; Eric Jeffery; Yue Jiang
Original assignee: Juno Therapeutics, Inc.
Priority date: 2019-01-29
Filing date: 2020-01-28
Publication date: 2021-10-05
Also published as: IL285182A; PE20212198A1; WO2020160050A1; AR119683A1; AU2020215576A1; MX2021009087A; JP2022518925A; CA3123303A1; US20220096651A1; CN113365660A; SG11202107976SA; CO2021011327A2; CL2021001986A1; EP3917570A1; EA202192103A1; KR20210122272A; TW202043280A; MA54863A

Abstract

anticorpos e receptores antigênicos quiméricos específicos para receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ror1). a presente invenção refere-se a moléculas de ligação ao receptor órfão 1 (ror1) de tipo tirosina quinase de receptor, em particular anticorpos humanos específicos para ror1, incluindo fragmentos de anticorpos. a presente invenção refere-se ainda a receptores recombinantes, incluindo receptores antigênicos quiméricos (cars), que contêm tais anticorpos ou fragmentos, e polinucleotídeos que codificam os anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno ou receptores específicos para ror1. a invenção refere-se ainda a células geneticamente modificadas que contêm tais proteínas e receptores de ligação à proteína ror1 e métodos relacionados e usos dos mesmos em terapia celular adotiva.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICORPOS E RECEPTORES ANTIGÊNICOS QUIMÉRICOS ESPECÍFICOS PARA RECEPTOR ÓRFÃO 1 DE TIPO TIROSINA QUINASE DE RECEPTOR (ROR1)". Referência Cruzada a Pedidos Relacionados

[001] O presente pedido reivindica a prioridade ao Pedido Provisório Norte-Americano Nº 62/798.456, depositado em 29 de janeiro de 2019, intitulado "ANTIBODIES AND CHIMERIC ANTIGEN

RECEPTORS SPECIFIC FOR RECEPTOR TYROSINE QUINASE LIKE ORPHAN RECEPTOR 1 (ROR1)," cujos conteúdos são incorporados a título de referência na íntegra. Incorporação a Título de Referência de Listagem de Sequências

[002] O presente pedido está sendo depositado juntamente com uma Listagem de Sequências em formato eletrônico. A Listagem de Sequência é fornecida como um arquivo intitulado 735042017740SeqList.txt, criado em 28 de janeiro de 2020, que tem 225 kilobytes de tamanho. As informações no formato eletrônico da Listagem de Sequência são incorporadas a título de referência na íntegra. Campo

[003] A presente invenção refere-se, em alguns aspectos, a moléculas de ligação ao receptor do receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase (ROR1), em particular, a anticorpos humanos específicos para ROR1, incluindo fragmentos de anticorpo. A presente invenção refere- se ainda a receptores recombinantes, incluindo receptores antigênicos quiméricos (CARs) que contêm tais anticorpos ou fragmentos e polinucleotídeos que codificam os anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno ou receptores específicos para ROR1. A invenção refere-se ainda a células geneticamente modificadas que contêm tais proteínas e receptores de ligação a ROR1 e métodos relacionados e seus usos na terapia celular adotiva. Antecedentes

[004] O receptor órfão de tipo tirosina quinase (ROR1) é um receptor transmembrana expresso durante a embriogênese, mas normalmente não em células adultas normais. O ROR1, no entanto, é expresso no contexto de uma variedade de diferentes cânceres e, em alguns casos, está envolvido na sinalização celular para promover a sobrevivência das células tumorais. Com base em sua expressão, o ROR1 pode ser um alvo específico para tumor e/ou associado a tumor para terapia. Estão disponíveis moléculas de ligação ao ROR1, receptores e células que expressam tais moléculas. São necessárias moléculas de ligação ao ROR1 aprimoradas e células que expressam o receptor de ligação a ROR1 manipuladas. São fornecidas modalidades que atendem a tais necessidades. Sumário

[005] É fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: (i) a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR- H3) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (ii) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65, 80 ou 50, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69, 84, 54 ou 95 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (iii) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66, 81 ou 51, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70, 85, 55 ou 96 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68, 83 ou 53, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72, 87, 57 ou 98 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74, 89, 59 ou 100 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76, 91 ou 61, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78, 93 ou 63; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[006] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: (i) a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR- H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 54 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 95 e 99, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 55 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 96 e 99, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente,

e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 57 e 59, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 63 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 98 e 100, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 61, 63 e 64, respectivamente.

[007] Em algumas de tais modalidades: (i) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente.

[008] Em algumas de tais modalidades: (i) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente.

[009] Em algumas modalidades, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente. Em algumas de quaisquer modalidades, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 compreendendo as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[0010] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0011] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém:

uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante da complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115; a região VH contém uma CDR- H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[0012] Em algumas de tais modalidades, a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID N O: 112 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115. Em algumas de tais modalidades, a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124. Em algumas de quaisquer modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106. Em algumas de quaisquer modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR- L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[0013] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%,

86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[0014] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124. Em algumas das modalidades, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106. Em algumas das modalidades, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[0015] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0016] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[0017] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[0018] Em algumas de tais modalidades: a região VH é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106. Em algumas de tais modalidades: a região VH e a região

VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[0019] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0020] Também é fornecido no presente documento um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[0021] Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente. Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente. Em algumas das modalidades, a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente. Em algumas das modalidades,

a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[0022] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 110 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 1 13 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 120 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

123.

[0023] Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total. Em algumas das modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno. Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é isolado. Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante. Em algumas de tais modalidades, pelo menos uma parte da região VH e da região VL é humana ou é proveniente de uma proteína humana. Em algumas de tais modalidades, o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é ou contém um fragmento com uma única cadeia. Em algumas de tais modalidades, o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é ou contém um Fv com uma única cadeia (scFv).

[0024] Em algumas de tais modalidades, a região VH é amino- terminal à região VL. Em algumas de tais modalidades, a região VH é carbóxi-terminal à região VL. Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível. Em algumas de tais modalidades, o ligante flexível contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41.

[0025] Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127. Em algumas de quaisquer modalidades, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 109. Em algumas das modalidades, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 134.

[0026] Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

117. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos em ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125. Em algumas destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 126.

[0027] Em algumas de tais modalidades, o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento contém ainda pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a porção de uma região constante de imunoglobulina contém pelo menos uma porção de uma região de dobradiça ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma contém pelo menos uma porção de uma região CH2 ou uma variante da mesma. Em algumas destas modalidades, a pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma contém pelo menos uma porção de uma região CH3 ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma contém pelo menos uma porção de uma região CH2 e/ou uma região CH3 ou uma variante das mesmas. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma é humana ou de uma proteína humana ou uma variante da mesma.

[0028] Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1). Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a uma proteína ROR1 humana. Em algumas de tais modalidades, a proteína ROR1 humana contém uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145 ou 146.

[0029] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a um epitopo que consiste na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199 ou um epitopo presente na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199. Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga ainda a um ou mais epitopos que consistem em uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214 ou um epitopo presente dentro de uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214. Em algumas das modalidades, o um ou mais epitopos compreendem um epitopo conformacional.

[0030] Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga a, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína receptor órfão 2 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR2). Em algumas destas modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga a, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína ROR2 humana. Em algumas de tais modalidades, a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo a uma proteína ROR2 humana é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana.

[0031] Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10-11 M a cerca de 1 x 10-7 M. Em algumas de quaisquer modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10-8 M a cerca de 1 x 10-7 M. Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) de cerca de 5 x 10-11 M a cerca de 1 x 10-10 M.

[0032] Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s. Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-3 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s. Em algumas das modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-4 1/s.

[0033] Também é fornecida no presente documento uma proteína da superfície celular com uma única cadeia que contém o anticorpo anti- ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

[0034] Também é fornecido no presente documento um conjugado que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e uma molécula ou porção heteróloga. Em algumas de tais modalidades, a molécula ou porção heteróloga é uma porção terapêutica.

[0035] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e uma região de sinalização intracelular.

[0036] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, uma região transmembrana e uma região de sinalização intracelular.

[0037] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: (i) a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (ii) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65, 80 ou 50, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69, 84, 54 ou 95 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (iii) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66, 81 ou 51, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70, 85, 55 ou 96 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68, 83 ou 53, uma CDR-H2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72, 87, 57 ou 98 e uma CDR-H3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74, 89, 59 ou 100 e a região VL contém uma CDR-L1 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76, 91 ou 61, uma CDR-L2 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78, 93 ou 63; e uma CDR-L3 que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[0038] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: (i) a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que contém o sequência apresentada em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR- L2) e uma cadeia leve região determinante de complementaridade 3

(CDR-L3) que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 54 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 95 e 99, respectivamente,

e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 55 e 58, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 96 e 99, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 57 e 59, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 63 e 64, respectivamente; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 98 e 100, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 61, 63 e 64, respectivamente.

[0039] Em algumas de tais modalidades: (i) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente.

[0040] Em algumas de tais modalidades: (i) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região

VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; (ii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; (iii) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, a CDR-L2 e uma CDR-L3 que contém as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; ou (iv) a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente.

[0041] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0042] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115; a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124; a região VH contém uma CDR- H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106; ou a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[0043] Em algumas de tais modalidades, a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115. Em algumas de tais modalidades, a região VH contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124.

[0044] Em algumas de tais modalidades: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de

85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106. Em algumas de tais modalidades: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[0045] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115. Em alguns dos qualquer sucesso h modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[0046] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0047] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[0048] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, a região VH é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[0049] Em algumas de tais modalidades: a região VH é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[0050] Em algumas de tais modalidades: a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[0051] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou

106.

[0052] Também é fornecido no presente documento um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que contém: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[0053] Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente. Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são ou contêm as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente.

[0054] Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos em ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80 ou cerca de %, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122. Em algumas de tais modalidades, a região VH é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 120 e a região VL é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 123.

[0055] Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é isolado. Em algumas de tais modalidades, o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante. Em algumas de tais modalidades, pelo menos uma parte da região VH e da região VL é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[0056] Em algumas de tais modalidades, o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é ou contém um fragmento com uma única cadeia. Em algumas de tais modalidades, o fragmento de ligação a antígeno do mesmo é ou contém um Fv com uma única cadeia (scFv).

[0057] Em algumas de tais modalidades, a região VH é amino- terminal à região VL. Em algumas de tais modalidades, a região VH é carbóxi-terminal à região VL. Em algumas de tais modalidades, a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível. Em algumas de tais modalidades, o ligante flexível contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41.

[0058] Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127. Em alguns de qualquer uma destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133. Em algumas de tais modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de

80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116. Em algumas destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117. Em algumas destas modalidades, scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125. Em algumas destas modalidades, o scFv é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 126.

[0059] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 contém ainda um espaçador entre o domínio de ligação a antígeno extracelular e o domínio transmembrana. Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma região de dobradiça de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem menos ou tem cerca de 15 aminoácidos de comprimento. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 ou 135.

[0060] Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região de dobradiça contém a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região de dobradiça contém a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 humana ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região de dobradiça contém a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG2. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região de dobradiça contém a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG2 humana ou uma variante da mesma.

[0061] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 1. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 2 ou 30 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 2 ou 30. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 30.

[0062] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 192 ou 136 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 192 ou 136. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 136.

[0063] Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região CH3 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região CH3 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG2. Em algumas de tais modalidades,

a pelo menos uma porção de uma região CH3 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 e/ou uma região CH3 de IgG2. Em algumas de tais modalidades, a CH3 de IgG4 é uma região CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é uma região CH3 de IgG2 humana. Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma região de dobradiça e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem cerca de 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ou 125 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores. Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento.

[0064] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 138. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 193 ou 139 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193 ou

139. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 139.

[0065] Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 3. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 3. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 4 ou 137 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 4 ou 137. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 137.

[0066] Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma região CH2 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região CH2 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região CH2 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG2. Em algumas de tais modalidades, a pelo menos uma porção de uma região CH2 contém a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4 e/ou uma região CH2 de IgG2. Em algumas de tais modalidades, a região CH2 de IgG4 é uma região CH2 de IgG4 humana e a região CH2 de IgG2 é uma região CH2 de IgG2 humana. Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém pelo menos uma porção de uma região de dobradiça, pelo menos uma porção de uma região CH2 e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 ou 230 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores. Em algumas de tais modalidades, uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 contêm a totalidade ou uma porção de uma região CH2 e a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 humana. Em algumas de tais modalidades, uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 são quiméricas e contêm uma dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana.

[0067] Em algumas de tais modalidades, o espaçador contém uma região de dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que contém pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com uma dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de IgG2/4; e uma região CH3 de IgG4.

[0068] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 194. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 194. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 195 ou 196 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195 ou 196. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

196.

[0069] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 37. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 37. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 38 ou 140 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%,

92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 38 ou 140. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 140.

[0070] Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização intracelular contém um domínio de sinalização intracelular. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente de receptor de célula T (TCR) ou contém um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptor (ITAM). Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou contém um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é humano ou é proveniente de uma proteína humana. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13.

[0071] Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização intracelular contém ainda uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou uma porção de sinalização da mesma. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização dos mesmos. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora é humana ou é proveniente de uma proteína humana. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de CD28. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 10 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº:

10. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora contém um domínio de sinalização intracelular de 4- 1BB. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 12.

[0072] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 contém ainda uma região transmembrana. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora está entre a região transmembrana e o domínio de sinalização intracelular. Em algumas de tais modalidades, a região transmembrana é ou contém um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8. Em algumas de tais modalidades, a região transmembrana é ou contém um domínio transmembrana de CD28. Em algumas de tais modalidades, a região transmembrana é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[0073] Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém SEQ ID Nº: 8 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 8. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 197 ou 198 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 197 ou 198. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 198.

[0074] Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém SEQ ID Nº: 149 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 149. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 149. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 147 ou 148 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 147 ou 148. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 148.

[0075] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N- para C-términos na ordem: o domínio de ligação a antígeno extracelular, o espaçador, a região transmembrana e a região de sinalização intracelular. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N- para C-términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém um scFv, um espaçador que contém uma dobradiça de IgG4 modificada; um domínio transmembrana; e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta

(CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora.

Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N- para C-términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém um scFv, um espaçador que contém uma dobradiça de IgG4 modificada que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135; um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora que contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N- para C-términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém um scFv, um espaçador que contém uma região de dobradiça-CH3 de IgG4 modificada; um domínio transmembrana; e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora.

Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico codificado contém, a partir de seu N- para C-términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém um scFv, um espaçador que contém uma região de dobradiça-CH3 de IgG4 modificada que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138; um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que contém um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora que contém um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

Em algumas de tais modalidades, o domínio de ligação a antígeno extracelular é um scFv.

[0076] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189.

[0077] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

184. Em algumas de qualquer uma destas modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185. Em algumas de quaisquer modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186. Em algumas das modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186. Em algumas de quaisquer modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187. Em algumas de quaisquer modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187. Em algumas de quaisquer modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188. Em algumas das modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188. Em algumas de quaisquer modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

189. Em algumas das modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

189.

[0078] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%,

91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti- ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti- ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157.

[0079] Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 se liga especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1). Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 se liga especificamente a uma proteína ROR1 humana. Em algumas de tais modalidades, a proteína ROR1 humana contém uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145 ou 146. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 não se liga a, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína receptor órfão 2 de tipo tirosina quinase (ROR2) de receptor. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 não se liga a, não tem reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína ROR2 humana.

[0080] Em algumas de tais modalidades, a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 a uma proteína ROR2 humana é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana. Em algumas de tais modalidades, a ligação é comparada sob as mesmas condições ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas destas modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 comparado com o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 humana comparado com o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1 humana. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe um nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR2 humana que é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1 humana. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[0081] Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 humana comparado com um receptor antigênico quimérico específico para

ROR1 de referência. Em algumas das modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[0082] Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2 humana comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe a mesma, substancialmente a mesma ou uma sinalização específica para antígeno ou atividade ou sinalização dependente de antígeno maior comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas destas modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe a mesma, substancialmente a mesma ou uma sinalização tônica ou atividade ou sinalização independente de antígeno menor comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas de tais modalidades, o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe um nível ou grau de sinalização tônica ou atividade ou sinalização independente de antígeno que é pelo menos 75% ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização tônica ou atividade independente de antígeno de um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência. Em algumas de tais modalidades, a atividade é comparada sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[0083] Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência contém o anticorpo anti- ROR1 R12 ou o anticorpo anti-ROR1 2A2 ou um fragmento de ligação a antígeno dos mesmos. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência contém um scFv de R12 ou 2A2. Em algumas de tais modalidades, o receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência contém o anticorpo anti-ROR1 R12 ou um scFv de R12 ou 2A2.

[0084] Também é fornecido no presente documento um polinucleotídeo que contém um ácido nucleico que codifica a totalidade ou uma parte do anticorpo anti-ROR1 ou domínio de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

[0085] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem em pelo menos ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algum de qualquer tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem em pelo menos ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122.

[0086] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125,

107 ou 132. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125.

[0087] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 192 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 192. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 193 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%. %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 195 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195.

[0088] Em algumas de tais modalidades, o ácido nucleico que codifica o anticorpo anti-ROR1 ou domínio de ligação a antígeno do mesmo, a proteína da superfície celular com uma única cadeia, o conjugado ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 contém pelo menos um sítio doador de emenda (splice) ou sítio aceitador de emenda modificado, ou ambos, os ditos sítio doador e/ou sítio aceitador de emenda modificado contendo uma ou mais modificações de nucleotídeos que correspondem a um sítio doador de emenda de referência e/ou sítio aceitador de emenda de referência. Em algumas de tais modalidades, a uma ou mais modificações de nucleotídeos contêm uma substituição de ácido nucleico. Em algumas de tais modalidades, os sítios doadores de emenda de referência e/ou os sítios aceitadores de emenda de referência são sítios de emenda canônicos, não canônicos ou crípticos. Em algumas das modalidades, o polinucleotídeo é otimizado pela eliminação do sítio de emenda.

[0089] Em algumas de tais modalidades: os sítios doadores de emenda de referência ou aceitadores de emenda de referência, ou ambos, têm uma pontuação de predição de sítio de emenda de pelo menos cerca de 0,4, 0,5, 0,6, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85 0,90, 0,95, 0,99 ou 1,0; ou os sítios doadores de emenda de referência ou aceitadores de emenda de referência, ou ambos, estão previstos como estando envolvidos em um evento de emenda com uma probabilidade de pelo menos cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou 100%.

[0090] Em algumas de tais modalidades: os sítios doadores de emenda de referência ou aceitadores de emenda de referência, ou ambos, têm uma pontuação de predição de sítio de emenda de pelo menos 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 0,99 ou 1.0; e/ou os sítios doadores de emenda de referência ou aceitadores de emenda de referência, ou ambos, estão previstos como estando envolvidos em um evento de emenda com uma probabilidade de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou 100%.

[0091] Em algumas de tais modalidades, pelo menos uma das uma ou mais modificações de nucleotídeos estão dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 resíduos da junção do sítio de emenda do sítio aceitador de emenda de referência e/ou do sítio doador de emenda de referência. Em algumas de tais modalidades, a uma ou mais modificações de nucleotídeos são silenciosas ou resultam em um códon degenerado ou não altera a sequência de aminoácidos da proteína codificada ou um ou mais ou todos os anteriores.

[0092] Em algumas de tais modalidades, após expressão do polinucleotídeo em uma célula, o RNA transcrito a partir do polinucleotídeo exibe pelo menos igual ou cerca de 70% ou cerca de 75%, igual ou cerca de 80% ou cerca de 85%, igual ou cerca de 90% ou igual ou cerca de 95% de homogeneidade de RNA. Em algumas de tais modalidades, após expressão em uma célula, o RNA transcrito a partir do polinucleotídeo exibe heterogeneidade reduzida comparado com a heterogeneidade do mRNA transcrito a partir de um polinucleotídeo de referência, o dito polinucleotídeo de referência codificando a mesma sequência de aminoácidos que o polinucleotídeo, em que o polinucleotídeo de referência difere pela presença de um ou mais sítios doadores de emenda ou um ou mais sítios aceitadores de emenda, ou ambos, no ácido nucleico que codifica o espaçador ou contém uma ou mais modificações de nucleotídeos comparado com o polinucleotídeo. Em algumas de tais modalidades, a heterogeneidade do RNA é reduzida em mais de igual ou cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% ou mais. Em algumas de tais modalidades, o RNA transcrito a partir do polinucleotídeo de referência exibe mais de igual ou cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% ou mais de heterogeneidade de RNA. Em algumas de tais modalidades, o RNA mensageiro (mRNA)

é transcrito. Em algumas de tais modalidades, a homogeneidade ou heterogeneidade do RNA, ou ambas, é determinada por meio de eletroforese em gel de agarose, eletroforese capilar com base em chip, ultracentrifugação analítica, fracionamento de fluxo de campo ou cromatografia de líquido.

[0093] Em algumas de tais modalidades, o polinucleotídeo tem códons otimizados para expressão em uma célula humana.

[0094] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 120 e um ácido nucleico que codifica a VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 123.

[0095] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

117. Em algumas destas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 126.

[0096] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 136. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 139. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 196.

[0097] Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156 ou uma sequência que exibe em pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157. Em algumas de tais modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

157.

[0098] Em algumas de tais modalidades, o polinucleotídeo contém ainda uma sequência sinalizadora de CD33, uma sequência sinalizadora de GM-CSF, uma sequência sinalizadora de CD8 ou uma sequência sinalizadora de Ig capa. Em algumas de tais modalidades, o polinucleotídeo contém ainda uma sequência sinalizadora de CD33. Em algumas de tais modalidades, a sequência sinalizadora de CD33 é apresentada em SEQ ID Nº: 190 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 190.

[0099] Também é fornecido no presente documento um vetor que contém o polinucleotídeo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o vetor é um vetor viral. Em algumas modalidades, o vetor viral é um vetor retroviral ou um vetor lentiviral.

[00100] Também é fornecida no presente documento uma célula que contém o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Também é fornecida no presente documento uma célula que contém o polinucleotídeo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou o vetor de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Também é fornecida no presente documento uma célula que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o polinucleotídeo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou o vetor de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

[00101] Em algumas modalidades, a célula é um linfócito. Em algumas modalidades, a célula é uma célula NK ou uma célula T. Em algumas de tais modalidades, a célula é uma célula T e a célula T é uma célula T CD4+ ou CD8+. Em algumas de tais modalidades, a célula é uma célula primária obtida a partir de um indivíduo.

[00102] Em algumas de tais modalidades, dentre uma pluralidade de células, menos do que igual ou cerca de 10% ou cerca de 9% ou cerca de 8% ou cerca de 7% ou cerca de 5% ou cerca de 4% ou cerca de 3% ou cerca de 2% ou cerca de 1% das células na pluralidade contêm um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

[00103] Também é fornecida no presente documento uma composição que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

[00104] Também é fornecida no presente documento uma composição que contém a célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento. Em algumas de tais modalidades, a composição contém ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável. Em algumas de tais modalidades, a composição contém células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de igual ou cerca de 1:3 a 3:1. Em algumas de tais modalidades, a composição contém células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de igual ou cerca de 1:2 a 2:1. Em algumas de tais modalidades, a composição contém células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de igual ou cerca de 1:1.

[00105] Em algumas de tais modalidades, dentre uma pluralidade de células na composição, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8%, igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade contêm um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

[00106] Também é fornecido no presente documento um método de tratamento que compreende administrar a composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00107] Também é fornecido no presente documento um método de tratamento que compreende administrar o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o polinucleotídeo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o vetor de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou a célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecida no presente documento uma composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecido no presente documento o uso de uma composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecido no presente documento o uso de uma composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecido no presente documento um método de tratamento que compreende administrar as células de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00108] Também é fornecido no presente documento um método de tratamento que compreende administrar o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o polinucleotídeo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o vetor de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou a célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecida no presente documento uma célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecido no presente documento o uso de uma célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Também é fornecido no presente documento o uso de uma célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00109] Em algumas das modalidades fornecidas, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer. Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer é um câncer que expressa ROR1. Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[00110] Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1. Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer associado a um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas e carcinoide atípico. Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC).

[00111] Em algumas das modalidades fornecidas, o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1. Em algumas das modalidades fornecidas, a malignidade hematológica é selecionada a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

[00112] Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer é um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[00113] Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer associado a um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas e carcinoide atípico. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC).

[00114] Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos métodos fornecidos no presente documento, a malignidade hematológica é selecionada a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

[00115] Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer é um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[00116] Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer associado a um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas e carcinoide atípico. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC).

[00117] Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1. Em algumas modalidades das células ou composições para uso fornecidas no presente documento, a malignidade hematológica é selecionada a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

[00118] Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer. Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer é um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[00119] Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer associado a um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, testicular câncer, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC).

[00120] Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1. Em algumas modalidades dos usos fornecidos no presente documento, a malignidade hematológica é selecionada a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

[00121] Em algumas de tais modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 está associado à expressão de ROR1. Em algumas de tais modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um transtorno relacionado às células B. Em algumas de tais modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer. Em algumas de tais modalidades, o câncer é um câncer que expressa ROR1. Em algumas de tais modalidades, o câncer que expressa ROR1 é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt, linfoma de células do manto (MCL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer pancreático, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer de útero, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço.

[00122] Também é fornecido no presente documento um kit que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou a composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento e instruções de uso. Em algumas de tais modalidades, as instruções são para administração do anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, a proteína da superfície celular com uma única cadeia, o conjugado, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1, a célula ou a composição. Em algumas de tais modalidades, as instruções estão de acordo com o método, a composição para uso ou o uso de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

[00123] Também é fornecido no presente documento um artigo de manufatura que contém o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, o conjugado de qualquer um de as modalidades fornecidas no presente documento, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a célula de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento, a composição de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento ou o kit de qualquer uma das modalidades fornecidas no presente documento.

Breve Descrição dos Desenhos

[00124] A Figura 1 representa os níveis de expressão intracelular relativa de IFN-, TNF-α ou IL-2 por ICS em células T GFP+ CD4+ comparado com os níveis de cada citocina em células que expressam o CAR anti-ROR1 (R12) de referência, após 24 horas de estimulação com ROR1-Fc recombinante ligado à placa, em células T primárias que expressam células T que expressam CARs anti-ROR1 candidatos selecionados a partir de uma triagem, conforme descrito no Exemplo 1.

[00125] A Figura 2 mostra os níveis de expressão intracelulares relativos de IFN-, TNF-α ou IL-2 por ICS em células T primárias que expressam CARs anti-ROR1 candidatos selecionados a partir de uma triagem conforme descrito no Exemplo 1 comparado com os níveis de cada citocina em células que expressam o CAR anti-ROR1 (R12) de referência, após 24-70 horas de cocultura com células alvo MDA-MB- 231 que expressam ROR1.

[00126] As Figuras 3A-3B representam os resultados de um ensaio de citotoxicidade in vitro após cocultura de células alvo H1975 marcadas com NucLight Red (NLR) e células T primárias que expressam um dos 6 CARs anti-ROR1 candidatos selecionados, conforme avaliado pela medição da perda de sinal fluorescente vermelho durante um período entre 0 e 70 horas. Como controles, culturas de células alvo apenas e coculturas de células simuladas (não expressam um CAR) com as células alvo foram avaliadas.

[00127] As Figuras 4A-4C mostram a produção de IFN-, TNF-α ou IL- 2 após 70 horas de cocultura de células T primárias que expressam um dos 6 CAR anti-ROR1 candidatos selecionados de dois doadores separados, com H1975 (Figuras 4A e 4B) ou a produção de IL-2 após cocultura com células alvo MDA-MB-231, A549 ou BT-549 (Figura 4C). Como controles, culturas de células alvo apenas e coculturas de células simuladas (não expressam um CAR) com as células alvo foram avaliadas.

[00128] As Figuras 5A-5D mostram a atividade antitumoral, conforme avaliada pelas mudanças no volume médio ou no volume individual do tumor após administração de células que expressam um dos 6 CARs anti-ROR1 candidatos selecionados ou o CAR anti-ROR1 (R12) de referência, em um modelo de câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) H1975 em camundongos. A Figura 5A (dose baixa) e a Figura 5B (dose alta) representam o volume médio do tumor de todos os camundongos tratados; nesta representação, as curvas do tumor foram encerradas após o primeiro camundongo de um grupo sucumbir à doença. Os resultados de todos os camundongos individuais são mostrados na Figura 5C (dose baixa) ou Figura 5D (dose alta). Como um controle, os camundongos receberam com células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00129] As Figuras 6A-6B representam as curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier após a administração de uma dose baixa (Figura 6A) ou uma dose alta (Figura 6B) de células que expressam um dos 6 CARs anti-ROR1 candidatos selecionados ou o CAR anti-ROR1 de referência (R12) em um modelo de câncer de pulmão de células não pequenas H1975 (NSCLC) em camundongos.

[00130] As Figuras 7A-7D mostram o número médio de células que expressam CAR CD4+ e CD8+ no sangue de cada camundongo determinado no dia 10 e dia 24 após a administração de células que expressam um dos 6 CARs anti-ROR1 candidatos selecionados ou o CAR anti-ROR1 de referência (R12) na dose baixa (Figuras 7A e 7B) ou na dose alta (Figuras 7C e 7D). As Figuras 7E-7F mostram o número médio de células CD3+que expressam CAR no sangue de cada camundongo determinado no dia 10 e dia 24 após administração de células que expressam um dos 6 CARs anti-ROR1 candidatos selecionados ou o CAR anti-ROR1 (R12) de referência, na dose baixa (Figura 7E) ou dose alta (Figura 7F). Os dados são apresentados como valores individuais juntamente com as médias do grupo ± desvio padrão.

[00131] As Figuras 8A-8C representam as mudanças no volume médio e individual do tumor em camundongos com câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) H1975 que receberam com células que expressam o CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência, na dose baixa (média: Figura 8A; individual: Figura 8C) ou na dose alta (média: Figura 8B; individual: Figura 8C). Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00132] As Figuras 9A-9B representam as curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier após administração de uma dose baixa (Figura 9A) ou uma dose alta (Figura 9B) de camundongos que reeberam células que expressam CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência. Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00133] As Figuras 10A-10D representam a contagem média de células T CD4+ (Figuras 10A e 10C) e CD8+ (Figuras 10B e 10D) CAR+ por microlitro de sangue nos dias 7, 14 e 21 após a administração de uma dose baixa (Figuras 10A e 10B) ou uma dose alta (Figuras 10C e 10D) de células que expressam o CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência.

[00134] As Figuras 11A-11B representam o número de células T CD4+ (Figura 11A) e CD8+ (Figura 11B) CAR+ presentes no tumor 14 dias após a administração de células que expressam CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência.

[00135] As Figuras 12A-12C representam imagens de bioluminescência avaliadas até aproximadamente o dia 49 após a administração de uma dose baixa (Figura 12B) ou uma dose alta (Figura 12C) de células que expressam CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência no modelo de câncer de mama triplo negativo MDA-MB-231 em camundongos. Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados (Figura 12A).

[00136] As Figuras 13A-13C representam o fluxo total médio medido (p/s) a partir de imagiologia de bioluminescência, avaliada até aproximadamente o dia 49 após a administração de uma dose baixa (Figura 13A) ou uma dose alta (Figura 13B) de células que expressam CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência no modelo de câncer de mama triplo negativo MDA-MB-231 em camundongos, mostrado como médias de grupo ± erro padrão. A Figura 13C representa o fluxo total medido (p/s) de camundongos individuais. Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00137] As Figuras 14A-14E representam as mudanças no volume médio e individual do tumor no modelo de câncer de mama triplo negativo MDA-MB-231 em camundongos que receberam células que expressam o CAR-F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência, na dose baixa (média: Figura 14A) ou na dose alta (média: Figura 14B). As mudanças no volume médio do tumor após a administração de células T que expressam CAR-F anti-ROR1 e CAR R12 de referência até um ponto de tempo adicional no mesmo estudo são representadas para a dose alta (Figura 14C) e dose baixa (Figura 14D). Os resultados do volume do tumor para camundongos tratados individualmente na dose alta ou na dose baixa para cada condição tratada são mostrados na Figura 14E. O volume médio do tumor é representado como médias do grupo ± erro padrão até o último dia em que todos os camundongos nos grupos de tratamento sobreviveram. Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00138] As Figuras 15A e 15B representam a curva de sobrevivência de Kaplan-Meier no modelo de câncer de mama triplo negativo MDA-MB-231 em camundongos que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência na dose baixa (Figura 15B) ou na dose alta (Figura 15A). Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00139] As Figuras 16A-16D mostram o número médio de células CD4+ (Figuras 16A e 16C) e CD8+ (Figuras 16B e 16D) que expressam CAR no sangue do animal que foram determinados nos dias 7, 14, 21 e 30 após a administração de células que expressam o CAR- F, CAR-A anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência na dose baixa (Figuras 16A e 16B) ou uma dose alta (Figuras 16C e 16D). O número médio de células CD3+ (CD45+ CD3+ CAR+) que expressam CAR no sangue de cada camundongo que recebeu células que expressam CAR- F anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência também foi determinado nos dias 7, 14, 21 e 30 e são mostrados na Figura 16E. Conforme mostrado, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram alta expansão no modelo de camundongo MDA-MB-231, quando administradas em doses altas e baixas.

[00140] A Figura 17 representa a perda de células alvo marcadas com Rapid Red (amostras de leucaferese depletadas de células T CD4/CD8) cocultivadas durante aproximadamente 6 dias com células manipuladas que expressam CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência gerado a partir de dois doadores com CLL primária, em duas proporções E:T.

[00141] A Figura 18A mostra os resultados de um ensaio de citotoxicidade por citometria de fluxo, mostrando a perda de células alvo CD19+ ou células alvo CD19+ ROR1+ (amostras de leucaferese depletadas de células T CD4/CD8) cocultivadas durante aproximadamente 4 dias com células manipuladas que expressam CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência gerado a partir de dois doadores com CLL primária, em duas proporções E:T. A Figura 18B representa a proliferação de células que expressam CAR (CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência) marcadas com reagente de proliferação celular CellTrace™ Violet (CTV) e cocultivadas com células alvo dos indivíduos com CLL em uma proporção E:T de 2,5:1 e 0,25:1. A Figura 18C mostra a produção de IFN-, TNF-α e IL-2, conforme avaliado a partir do sobrenadante da cocultura no dia 4. Células tratadas com simulação ou células alvo apenas foram comparadas como controles.

[00142] As Figuras 19A-19D representam as mudanças no volume médio e individual do tumor em um modelo de linfoma de células do manto (MCL) em camundongos implantados com luciferase de pirilampo e proteína fluorescente verde (FfLuc-GFP) que expressam células JeKo-1 de linfoma de células do manto humano (MCL) e receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência na dose alta (média: Figura 19A; individual: Figura 19C) ou na dose baixa (média: Figura 19B; individual: Figura 19D). Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00143] As Figuras 20A-20B representam a curva de sobrevivência de Kaplan-Meier em um modelo de MCL em camundongos que receberam células que expressam o CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência na dose alta (Figura 20A) ou na dose baixa (Figura 20B). Como um controle, os camundongos receberam células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados.

[00144] A Figura 21 mostra o número médio de células CD3+que expressam CAR no sangue de um modelo de MCL em camundongos, determinado nos dias 7, 14, 21 e 28 após a administração de células manipuladas que expressam CAR-F anti-ROR1, CAR anti-CD19 ou o CAR R12 de referência, na dose baixa ou na dose alta.

[00145] As Figuras 22A-22E representam a ligação de vários scFv- mFcs anti-ROR1 produzidos de forma recombinante, incluindo scFv anti-ROR1 ROR1-1 (SEQ ID Nº: 118; Figura 22A), ROR1-2 (SEQ ID Nº: 127; Figura 22B), ROR1-3 (SEQ ID Nº: 109; Figura 22C) e ROR1-4 (SEQ ID Nº: 134; Figura 22D), os domínios de ligação de scFv de CAR- A, CAR-F, CAR-G, CAR- I, CAR-R e CAR-B1 e o domínio de ligação a antígeno scFv do CAR R12 de referência (SEQ ID Nº: 142; Figura 22E), com uma etiqueta 6xHis C-terminal (ROR1 ECD 6xHis), avaliado através de ressonância plasmônica em superfície (SPR) usando cinética de múltiplos ciclos implementada por injeções subsequentes de ROR1 humana recombinante em concentrações de 183, 61,0, 20,33, 6,78 e 2,26 nM.

[00146] A Figura 23 representa a expressão de ROR1 em resposta a uma série de diluições crescentes de duas vezes de doxiciclina a 512 ng/mL a 0 ng/mL em uma linhagem de células K562-ROR1-TetOn. As células ROR1- precursoras K562, duas linhagens de células ROR1+ de expressão endógena, a linhagem de células MCL JeKo-1 e a linhagem de células TNBC MDA-MB-231 foram usadas como controles.

[00147] A Figura 24 representa uma curva de resposta à dose para a produção de IFNγ, IL-2 e TNFα avaliada a partir de sobrenadantes de uma cocultura de 72 horas de células modificadas que expressam CAR- F anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência, com K562-ROR1-TetOn em um proporção E:T de 4:1 com a adição de concentrações crescentes de doxiciclina. Células que não expressam um CAR (simulação) foram usadas como controle.

[00148] As Figuras 25A-25B representam os resultados de um ensaio de citotoxicidade, conforme determinado pela perda de sinal fluorescente vermelho de células K562-ROR1-TetOn marcadas com vermelho NucLight cultivadas na presença de várias concentrações (2 ng/mL - 512 ng/mL) de doxiciclina e de células manipuladas que expressam CAR-F anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência, na proporção E:T de 4:1 durante aproximadamente 72 horas. DMSO, sem doxiciclina e células não tratadas foram usados como controles.

[00149] A Figura 26 mostra a avaliação da reatividade cruzada de espécies ROR1 em células repórter Jurkat Nur77 que expressam o CAR anti-ROR1 CAR-F ou o CAR R12 de referência cocultivadas com células CT26 manipuladas para expressar ROR1 humana (hROR1) ou ROR1 de murino (mROR1). Células K562 e células CT26 não modificadas foram usadas como controles não específicos. Descrição Detalhada

[00150] São fornecidas moléculas de ligação ao receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1), tais como anticorpos (incluindo fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno, tais como fragmentos com uma única cadeia, incluindo fragmentos Fv com uma única cadeia (scFvs)) e receptores recombinantes, incluindo receptores quiméricos que contém tais anticorpos ou fragmentos e ácidos nucleicos que codificam tais anticorpos, fragmentos ou receptores recombinantes. Em alguns aspectos, são fornecidos anticorpos, fragmentos e receptores antigênicos quiméricos (CARs) direcionados ou que têm como alvo a ROR1 e células e doenças que expressam ROR1. Foi observado que a ROR1 é expressa em células ou tecidos associados a determinadas doenças e condições, tais como doenças malignas, por exemplo, em células plasmáticas malignas, tal como de pacientes com mieloma em recidiva ou recém-diagnosticados, por exemplo, com pouca expressão em tecidos normais. Dentre as modalidades fornecidas estão abordagens úteis no tratamento de doenças e condições e/ou para direcionar tais tipos de células, incluindo moléculas de ácidos nucleicos que codificam anticorpos de ligação à ROR1, fragmentos ou receptores e anticorpos codificados ou fragmentos de ligação a antígeno e receptores. Também são fornecidas composições e artigos de manufatura que compreendem os mesmos. Os receptores podem, em geral, conter anticorpos (incluindo fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno, tais como regiões variáveis de cadeia pesada (VH), fragmentos de anticorpo com um único domínio e fragmentos com uma única cadeia, incluindo scFvs) específicos para ROR1, por exemplo, como o domínio de ligação a antígeno. Também são fornecidas células, tais como células modificadas ou recombinantes, que expressam tais receptores de ligação à ROR1, por exemplo, CARs anti-ROR1 e/ou que contém ácidos nucleicos que codificam tais receptores e composições e artigos de manufatura e doses terapêuticas que contém tais células. Também são fornecidos métodos de produção e uso de anticorpos e fragmentos, bem como células que expressam ou contêm os anticorpos e fragmentos, tal como para a produção dos anticorpos ou fragmentos dos mesmos. Também são fornecidas composições, incluindo composições farmacêuticas que contém tais anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno, receptores ou células e conjugados que compreendem tais anticorpos ou fragmentos. Em alguns aspectos, as composições, anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno, receptores ou células fornecidos podem ser usados em associação com uma terapia ou um método de tratamento.

[00151] Terapias que têm como alvo a ROR1, tal como com anticorpos anti-ROR1 ou terapias celulares adotivas (incluindo aquelas envolvendo a administração de células que expressam receptores quiméricos, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs) e/ou outros receptores antigênicos recombinantes, específicos para ROR1, como bem como outras células imunes adotivas e terapias de células T adotivas) podem ser eficazes no tratamento de câncer e outras doenças e transtornos, por exemplo, ROR1. Em determinados contextos, as abordagens disponíveis para a terapia celular adotiva podem nem sempre ser inteiramente satisfatórias. Em alguns aspectos, a capacidade das células administradas de reconhecer e se ligar a um alvo, por exemplo, antígeno alvo, tal como ROR1, de trafegar, localizar e entrar com sucesso em locais apropriados dentro do indivíduo, tumores e ambientes dos mesmos, para se tornarem ativadas, expandir, exercer várias funções efetoras, incluindo morte citotóxica e secreção de vários fatores, tais como citocinas, persistir, incluindo a longo prazo, diferenciar, fazer a transição ou se envolver na reprogramação em determinados estados fenotípicos para fornecer respostas de memória eficazes e robustas após eliminação e reexposição ao ligante ou antígeno alvo e evitar ou reduzir a exaustão, anergia, diferenciação terminal e/ou diferenciação em um estado supressor.

[00152] Em alguns contextos, as propriedades de antígenos alvo específicos que os anticorpos ou receptores recombinantes que contêm domínios de ligação a antígeno especificamente se ligam, reconhecem ou têm como alvo, que podem afetar a atividade do receptor. Em alguns contextos, a ROR1 é expressa por determinados cânceres e é um alvo terapêutico atraente para terapia celular. Estratégias aprimoradas são necessárias para respostas ideais a anticorpos ou terapias celulares, em particular para receptores recombinantes que se ligam especificamente, reconhecem ou têm alvo a ROR1. São fornecidas modalidades que atendem a tais necessidades.

[00153] Em alguns aspectos, as modalidades fornecidas são com base em observações de que a administração de células modificadas que expressam as moléculas de ligação à ROR1 fornecidas, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs), exibem uma atividade, sinalização e função específicas para antígeno aprimoradas, alta atividade antitumoral ou atividade ou sinalização dependente de antígeno consistente, expansão in vivo maior ou prolongada e persistência aumentada quando administradas, ao mesmo tempo em que exibem atividade independente de antígeno mínima ou sinalização ou reatividade cruzada por um antígeno diferente. Estes anticorpos e receptores recombinantes podem ser usados para facilitar o tratamento seguro e eficaz de doenças e transtornos específicos, tais como aqueles associados à expressão de ROR1.

[00154] Em alguns contextos, a resposta ideal à terapia pode depender da capacidade do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno ou receptores recombinantes que contêm tal anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno como domínios de ligação a antígeno de reconhecer o antígeno alvo. Em alguns aspectos, é observado no presente documento que a afinidade de ligação, especificidade ou cinética de ligação à ROR1 de determinados anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno fornecidos, tal como quando presentes como o domínio de ligação a antígeno de um receptor recombinante (por exemplo, CAR), pode estar associada a uma resposta melhor ou maior à terapia. Em alguns aspectos, as modalidades fornecidas são com base em observações de que moléculas de ligação exibem uma afinidade de ligação inferior e/ou uma constante de taxa de dissociação mais rápida (koff ou kd; taxa de desativação rápida) para ROR1 comparado com anticorpos disponíveis e também exibem atividade antitumoral, expansão in vivo maior ou prolongada, persistência aumentada e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno reduzida. Em alguns aspectos, células modificadas (por exemplo, células T) que expressam um receptor recombinante que contém um domínio de ligação a antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) com uma afinidade de ligação menor (por exemplo, constante de dissociação em equilíbrio maior) podem exibir uma melhora substancial na expansão in vivo, maior persistência, atividade antitumoral específica para antígeno maior ou aumentada e sobrevida prolongada, incluindo contra vários tipos diferentes de tumores.

[00155] Em alguns aspectos, células modificadas (por exemplo, células T) que expressam um receptor recombinante que contém um domínio de ligação a antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) com uma constante de taxa de dissociação mais rápida (koff ou kd; taxa de desativação rápida) podem exibir expansão in vivo substancialmente aumentada, persistência aumentada, atividade antitumoral específica para antígeno maior ou aumentada e sobrevida prolongada, incluindo contra vários tipos diferentes de tumores. Em alguns aspectos, células modificadas (por exemplo, células T) que expressam um receptor recombinante que contém um domínio de ligação a antígeno (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) com uma afinidade de ligação menor (por exemplo, constante de dissociação em equilíbrio maior) e uma constante de taxa de dissociação mais rápida (koff ou kd; taxa de desativação rápida) podem exibir expansão in vivo substancialmente aumentada, persistência aumentada, atividade antitumoral específica para antígeno maior ou aumentada e sobrevida prolongada, incluindo contra vários tipos diferentes de tumores. Sem desejar estar limitado pela teoria, em alguns aspectos, é observado no presente documento que o aumento da taxa de desativação de ligação a antígeno do domínio de ligação de um CAR anti-ROR1 exemplificativo para ligação à ROR1 contribui potencialmente para o aumento da sensibilidade do CAR a baixos níveis de antígeno.

[00156] Em alguns contextos, a resposta ideal à terapia, tal como terapia celular, pode depender da capacidade dos receptores recombinantes manipulados, tais como os CARs, de serem expressos de forma consistente e confiável na superfície das células e/ou se ligarem ao antígeno alvo. Por exemplo, em alguns casos, a heterogeneidade do RNA transcrito a partir de um transgene introduzido (por exemplo, que codifica o receptor recombinante) pode afetar a expressão e/ou atividade do receptor recombinante, em alguns casos quando expresso em uma célula, tal como uma célula T humana, usada em terapia celular.

[00157] Em alguns contextos, o comprimento e o tipo de espaçador no receptor recombinante, tal como um CAR, podem afetar a expressão, atividade e/ou função do receptor.

[00158] Além disso, em alguns contextos, determinados receptores recombinantes podem exibir atividade ou sinalização independente de antígeno (também conhecida como "sinalização tônica"), o que pode levar a efeitos indesejáveis, tal como em virtude do aumento da diferenciação e/ou exaustão de células T que expressam o receptor recombinante. Em alguns aspectos, tais atividades podem limitar a atividade, efeito ou potência das células T. Em alguns casos, durante a manipulação e a expansão ex vivo das células para expressão do receptor recombinante, as células podem exibir fenótipos indicativos de exaustão em virtude de sinalização tônica através do receptor recombinante.

[00159] Todas as publicações, incluindo documentos de patentes, artigos científicos e bancos de dados, citados no presente pedido são incorporados a título de referência na íntegra para todas as finalidades, na mesma medida como se cada publicação individual fosse individualmente incorporada a título de referência. Se uma definição apresentada no presente documento for contrária ou de outra forma inconsistente com uma definição apresentada nas patentes, pedidos, pedidos publicados e outras publicações que são incorporadas a título de referência, a definição apresentada no presente documento prevalece em relação à definição incorporada a título de referência.

[00160] Os títulos das seções usados no presente documento são apenas para fins organizacionais e não devem ser interpretados como limitando o assunto descrito. MOLÉCULAS DE LIGAÇÃO À ROR1

[00161] Em alguns aspectos, são fornecidas moléculas de ligação à ROR1, tais como polipeptídeos de ligação à ROR1. Estas moléculas de ligação incluem anticorpos (incluindo fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos) que se ligam especificamente a proteínas ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Também dentre as moléculas de ligação estão polipeptídeos que contém tais anticorpos, incluindo proteínas na superfície celular com uma única cadeia, por exemplo, receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs) que contém tais anticorpos. Em alguns aspectos, são fornecidas proteínas da superfície celular de ligação à ROR1, tais como receptores recombinantes ou receptores antigênicos quiméricos (CARs), que se ligam a moléculas de ROR1 e polinucleotídeos que codificam proteínas na superfície celular de ligação à ROR1, tais como receptores recombinantes (por exemplo, CARs) e células que as expressam receptores. Também são fornecidos polinucleotídeos que contém sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma parte de tais anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno e moléculas de ligação, tais como aquelas descritas na Seção I.A ou I.D. Exemplos de tais polinucleotídeos incluem aqueles descritos na Seção I.E. Em alguns aspectos, os polinucleotídeos podem ser introduzidos em uma célula para gerar uma célula modificada que contém ou expressa as moléculas de ligação fornecidas, por exemplo, anticorpos de ligação à ROR1, domínios de ligação a antígeno e receptores, tais como CARs. Anticorpos Que Têm Como Alvo a ROR1

[00162] São fornecidos polipeptídeos anti-ROR1, incluindo anticorpos e fragmentos funcionais de ligação a antígeno. Dentre os polipeptídeos de ligação à ROR1 estão anticorpos, tais como anticorpos com uma única cadeia (por exemplo, fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno), tais como aqueles que contém uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou uma região variável de cadeia leve (VL) ou uma porção das mesmas. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno incluem uma VH e uma VL, tais como fragmentos Fv com uma única cadeia (scFvs). Os anticorpos incluem anticorpos que se ligam especificamente à ROR1, por exemplo, ROR1 humana. Dentre os anticorpos anti-ROR1 fornecidos estão anticorpos humanos ou anticorpos que são modificados ou variantes de anticorpos humanos. Os anticorpos incluem anticorpos isolados. Também são fornecidas moléculas de ligação à ROR1 que contém tais anticorpos, tais como proteínas com uma única cadeia, proteínas de fusão, conjugados e/ou receptores recombinantes, tais como receptores quiméricos, incluindo receptores antigênicos. Em alguns aspectos, as moléculas de ligação à ROR1 incluem moléculas isoladas.

[00163] Também são fornecidas proteínas da superfície celular de ligação à ROR1, tais como receptores recombinantes de ligação à ROR1. As proteínas da superfície celular de ligação à ROR1 podem conter os anticorpos fornecidos (por exemplo, fragmentos de anticorpos de ligação a antígeno dos mesmos) que se ligam especificamente à ROR1, tais como proteínas ROR1, tal como a proteína ROR1 humana. Em alguns aspectos, as moléculas de ligação fornecidas se ligam a uma porção extracelular de ROR1. Em alguns exemplos, os receptores recombinantes são receptores antigênicos quiméricos, tais como aqueles que contém anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos.

[00164] Também são fornecidos polinucleotídeos que contém sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma parte de tais anticorpos, fragmentos de ligação a antígeno dos mesos e moléculas de ligação. Os polinucleotídeos fornecidos podem ser incorporados em construções, tais como construções de ácido desoxirribonucleico (DNA) ou de RNA, tais como aquelas que podem ser introduzidas em células para expressão dos anticorpos de ligação à ROR1 codificados, fragmentos de ligação a antígeno, conjugados ou receptores, por exemplo, CARs anti-ROR1. Em alguns aspectos, os anticorpos codificados, fragmentos de ligação a antígeno, conjugados e receptores, tais como aqueles que contém polipeptídeos de ligação à ROR1 e composições e artigos de manufatura e usos dos mesmos, também são fornecidos.

[00165] O termo "anticorpo", no presente documento, é usado no sentido mais amplo e inclui anticorpos policlonais e monoclonais, incluindo anticorpos intactos e fragmentos de anticorpos funcionais (ligação a antígeno), incluindo fragmentos de ligação a antígeno (Fab), fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rIgG), regiões variáveis de cadeia pesada (VH) capazes de se ligar especificamente ao antígeno, fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, incluindo fragmentos variáveis com uma única cadeia (scFv) e fragmentos de anticorpos com um único domínio (por exemplo, sdAb, sdFv, nanocorpo). O termo abrange formas geneticamente manipuladas e/ou de outra forma modificadas de imunoglobulinas, tais como intracorpos, pepticorpos, anticorpos quiméricos, anticorpos totalmente humanos, anticorpos humanizados e anticorpos heteroconjugados, anticorpos multiespecíficos, por exemplo, biespecíficos ou triespecíficos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di- scFv em tandem, tri-scFv em tandem. A menos que indicado de outra forma, o termo "anticorpo" deve ser entendido como abrangendo fragmentos de anticorpos funcionais dos mesmos, também denominados no presente documento como "fragmentos de ligação a antígeno". O termo também abrange anticorpos intactos ou de comprimento total, incluindo anticorpos de qualquer classe ou subclasse, incluindo IgG e suas subclasses, IgM, IgE, IgA e IgD.

[00166] Os termos "região determinante de complementaridade" e "CDR", sinônimos de "região hipervariável" ou "HVR", são conhecidos, em alguns casos, por referir-se a sequências não contíguas de aminoácidos dentro de regiões variáveis de anticorpo que conferem especificidade antigênica e/ou afinidade de ligação. Em geral, há três CDRs em cada região variável de cadeia pesada (CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3) e três CDRs em cada região variável de cadeia leve (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3). "Regiões estruturais" e "FR" são conhecidas, em alguns casos, por referir-se às porções não CDR das regiões variáveis das cadeias pesadas e leves. Em geral, há quatro FRs em cada região variável de cadeia pesada de comprimento total (FR-H1, FR-H2, FR-H3 e FR-H4) e quatro FRs em cada região variável de cadeia leve de comprimento total (FR- L1, FR-L2, FR-L3 e FR-L4).

[00167] Os limites precisos da sequência de aminoácidos de uma dada CDR ou FR podem ser facilmente determinados usando qualquer um de uma série de esquemas bem conhecidos, incluindo aqueles descritos por Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (esquema de numeração de "Kabat"); Al- Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (esquema de numeração de "Chothia"); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262: 732-745 (1996), " Antibody-Antigen Interactions: Contact Analysis and Binding Site Topography", J. Mol. Biol. 262, 732-745. " (Esquema de numeração "Contact"); Lefranc M.P. et al., "IMGT Unique Numbering for Immunoglobulin and T Cell Receiver Variables and Ig Superfamily V- Like Domains", Dev Comp Immunol, Janeiro de 2003; 27 (1): 55-77 (esquema de numeração "IMGT"); Honegger A. e Plückthun A., "Yet Another Numbering Scheme for Immunoglobulin Variable Domains: An

Automatic Modeling and Analysis Tool", J Mol Biol, 08 de junho de 2001; 309 (3): 657-70 (esquema de numeração "Aho"); Martin et al., "Modeling Antibody Hypervariable Loops: A Combined Algorithm", PNAS, 1989, 86 (23): 9268-9272, (esquema de numeração "AbM"); e Ye et al., "IgBLAST: an immunoglobulin variable domain sequence analysis tool", Nucleic Acids Res. Julho de 2013; 41 (problema do servidor da Web): W34-40 ("esquema de numeração IgBLAST").

[00168] Os limites de uma determinada CDR ou FR podem variar dependendo do esquema usado para identificação. Por exemplo, o esquema de Kabat se baseia em alinhamentos estruturais, enquanto que o esquema de Chothia se baseia em informações estruturais. A numeração para os esquemas de Kabat e Chothia se baseia nos comprimentos de sequência de região de anticorpo mais comuns, com inserções acomodadas por letras de inserção, por exemplo, "30a" e eliminações aparecendo em alguns anticorpos. Os dois esquemas colocam determinadas inserções e eliminações ("indels") em posições diferentes, resultando em numeração diferencial. O esquema Contact se baseia na análise de estruturas cristalinas complexas e é similar, em muitos aspectos, ao esquema de numeração de Chothia. O esquema AbM é um meio-termo entre as definições de Kabat e Chothia com base naquelas usadas pelo software de modelagem de anticorpos AbM da Oxford Molecular. O esquema IgBLAST é com base na correspondência dos genes V, D e J de linhagem germinativa e pode ser determinado usando a ferramenta IgBLAST do National Center for Biotechnology Information (NCBI).

[00169] A Tabela 1, abaixo, lista limites de posição exemplificativos de CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 e CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3 conforme identificado pelos esquemas de Kabat, Chothia, AbM e Contact, respectivamente. Para CDR-H1, a numeração de resíduos é listada usando os esquemas de numeração de Kabat e Chothia. FRs estão localizadas entre CDRs, por exemplo, com a FR-L1 localizada antes da CDR-L1, FR-L2 localizada entre a CDR-L1 e a CDR-L2, a FR-L3 localizada entre a CDR-L2 e a CDR-L3 e assim por diante. Deve ser observado que, uma vez que o esquema de numeração de Kabat mostrado coloca inserções em H35A e H35B, o final do loop de CDR- H1 de Chothia, quando numerado usando a convenção de numeração Kabat mostrada, varia entre H32 e H34, dependendo do comprimento do loop. Tabela 1. Limites da CDRs de Acordo com Vários Esquemas de Numeração CDR Kabat Chothia AbM Contact CDR-L1 L24--L34 L24--L34 L24--L34 L30--L36 CDR-L2 L50--L56 L50--L56 L50--L56 L46--L55 CDR-L3 L89--L97 L89--L97 L89--L97 L89--L96 CDR-H1 H31--H35B H26--H32.34 H26--H35B H30--H35B (numeração de Kabat1) CDR-H1 H31--H35 H26--H32 H26--H35 H30--H35 (numeração de Chothia2) CDR-H2 H50--H65 H52--H56 H50--H58 H47--H58 CDR-H3 H95--H102 H95--H102 H95--H102 H93--H101 1 - Kabat et al. (1991), "Sequences of Proteins of Immunological Interest", 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273: 927-948

[00170] Assim, a menos que especificado de outra forma, uma "CDR" ou "região determinante de complementaridade" ou CDRs individuais especificadas (por exemplo, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3), de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma região variável do mesmo, deve ser entendida como abrangendo uma (ou a específica) região determinante de complementaridade, conforme definido por qualquer um dos esquemas supracitados ou outros esquemas conhecidos. Por exemplo, onde é afirmado que uma CDR particular (por exemplo, uma CDR-H3) contém a sequência de aminoácidos de uma CDR correspondente em uma determinada sequência de aminoácidos da região VH ou VL, deve ser entendido que tal CDR tem uma sequência da CDR correspondente (por exemplo, CDR-H3) dentro da região variável, conforme definido por qualquer um dos esquemas supracitados ou outros esquemas conhecidos. Em algumas modalidades, sequências de CDR específicas são especificadas. Sequências de CDR exemplificativas de anticorpos fornecidos são descritas usando vários esquemas de numeração, embora seja entendido que um anticorpo fornecido pode incluir CDRs conforme descrito de acordo com qualquer um dos outros esquemas de numeração supracitados ou outros esquemas de numeração conhecidos por aqueles versados na técnica.

[00171] Da mesma forma, a menos que especificado de outra forma, uma FR ou FR(s) individua(is) especificada(s) (por exemplo, FR-H1, FR- H2, FR-H3, FR-H4), de um determinado anticorpo ou região do mesmo, tal como uma variável região da mesma, deve ser entendido como abrangendo uma (ou a específica) região estrutural, conforme definido por qualquer um dos esquemas conhecidos. Em alguns casos, o esquema para identificação de uma determinada CDR, FR ou FRs ou CDRs é especificado, tal como a CDR conforme definido por meio do método de Kabat, Chothia, IgBLAST, IMGT ou Contact ou outros esquemas conhecidos. Em outros casos, é fornecida a sequência de aminoácidos particular de uma CDR ou FR.

[00172] O termo "região variável" ou "domínio variável" refere-se ao domínio de uma cadeia pesada ou leve de anticorpo que está envolvida na ligação do anticorpo ao antígeno. As regiões variáveis de cadeia pesada e cadeia leve (VH e VL, respectivamente) de um anticorpo nativo têm, em geral, estruturas similares, com cada domínio que compreende quatro regiões estruturais conservadas (FRs) e três CDRs

(consulte, por exemplo, Kindt et al., Kuby Immunology, 6ª ed., WH Freeman and Co., página 91 (2007). Um único domínio VH ou VL pode ser suficiente para conferir especificidade de ligação a antígeno. Além disso, os anticorpos que se ligam a um antígeno particular podem ser isolados usando um domínio VH ou VL de um anticorpo que se liga ao antígeno para rastrear uma biblioteca de domínios VL ou VH complementares, respectivamente. Consulte, por exemplo, Portolano et al., J. Immunol. 150: 880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352: 624- 628 (1991).

[00173] Dentre os anticorpos incluídos nos CARs fornecidos estão fragmentos de anticorpos. Um "fragmento de anticorpo" ou "fragmento de ligação a antígeno" refere-se a uma molécula diferente de um anticorpo intacto que compreende uma porção de um anticorpo intacto que se liga ao antígeno ao qual o anticorpo intacto se liga. Exemplos de fragmentos de anticorpo incluem, porém sem limitações, Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; diacorpos; anticorpos lineares; regiões variáveis de cadeia pesada (VH), moléculas de anticorpo com uma única cadeia, tais como scFvs, e anticorpos com um único domínio que compreendem apenas a região VH; e anticorpos multiespecíficos formados a partir de fragmentos de anticorpos. Em algumas modalidades, o anticorpo é ou compreende um fragmento de anticorpo que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma variável de cadeia leve (VL). Em modalidades particulares, os anticorpos são fragmentos de anticorpos com uma única cadeia que compreendem uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou uma região variável de cadeia leve (VL), tais como scFvs.

[00174] Os anticorpos com um único domínio (sdAbs) são fragmentos de anticorpos que compreendem a totalidade ou uma parte do domínio variável de cadeia pesada ou a totalidade ou uma parte do domínio variável de cadeia leve de um anticorpo. Em determinadas modalidades, um anticorpo com um único domínio é um anticorpo com um único domínio humano.

[00175] Os fragmentos de anticorpos podem ser produzidos por meio de várias técnicas incluindo, porém sem limitações, digestão proteolítica de um anticorpo intacto, bem como produção por células hospedeiras recombinantes. Em algumas modalidades, os anticorpos são fragmentos produzidos de forma recombinante, tais como fragmentos que compreendem arranjos que não ocorrem naturalmente, tais como aqueles que têm duas ou mais regiões ou cadeias de anticorpos unidas através de ligantes sintéticos, por exemplo, ligantes peptídicos, e/ou que não podem ser produzidos por meio de digestão enzimática de um anticorpo intacto de ocorrência natural. Em algumas modalidades, os fragmentos de anticorpo são scFvs.

[00176] Um anticorpo "humanizado" é um anticorpo no qual todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos das CDRs são derivados de CDRs não humanas e todos ou substancialmente todos os resíduos de aminoácidos das FRs são derivados de FRs humanas. Um anticorpo humanizado pode opcionalmente incluir pelo menos uma porção de uma região constante de anticorpo derivada de um anticorpo humano. Uma "forma humanizada" de um anticorpo não humano refere- se a uma variante do anticorpo não humano que foi submetido à humanização, tipicamente para reduzir a imunogenicidade para seres humanos, ao mesmo tempo em que retém a especificidade e afinidade do anticorpo não humano original. Em algumas modalidades, alguns resíduos de FR em um anticorpo humanizado são substituídos por resíduos correspondentes de um anticorpo não humano (por exemplo, o anticorpo do qual os resíduos da CDR são derivados), por exemplo, para restaurar ou melhorar a especificidade ou afinidade do anticorpo.

[00177] Dentre os anticorpos anti-ROR1 fornecidos estão anticorpos humanos. Um "anticorpo humano" é um anticorpo que tem uma sequência de aminoácidos que corresponde àquela de um anticorpo produzido por uma célula humana ou fonte humana ou não humana que usa repertórios de anticorpos humanos ou outras sequências codificadoras de anticorpos humanos, incluindo bibliotecas de anticorpos humanos. O termo exclui formas humanizadas de anticorpos não humanos que compreendem regiões de ligação a antígeno não humanas, tais como aquelas em que todas ou substancialmente todas as CDRs não são humanas. O termo inclui fragmentos de ligação a antígeno de anticorpos humanos.

[00178] Os anticorpos humanos podem ser preparados pela administração de um imunogênio a um animal transgênico que foi modificado para produzir anticorpos humanos intactos ou anticorpos intactos com regiões variáveis humanas em resposta ao desafio antigênico. Estes animais normalmente contêm todos ou uma parte dos loci de imunoglobulina humana, os quais substituem os loci da imunoglobulina endógena ou que estão presentes extracromossomicamente ou integrados aleatoriamente nos cromossomos do animal. Em tais animais transgênicos, os loci de imunoglobulina endógena foram geralmente inativados. Os anticorpos humanos também podem ser derivados de bibliotecas de anticorpos humanos, incluindo bibliotecas de exibição em fagos e bibliotecas isentas de células que contêm sequências codificadoras de anticorpos derivadas de um repertório humano.

[00179] Dentre os anticorpos fornecidos estão anticorpos monoclonais, incluindo fragmentos de anticorpos monoclonais. O termo "anticorpo monoclonal", conforme usado no presente documento, refere-se a um anticorpo obtido a partir de ou dentro de uma população de anticorpos substancialmente homogênea, ou seja, os anticorpos individuais que compreendem a população são idênticos, exceto quanto a possíveis variantes que contém mutações de ocorrência natural ou que surgem durante a produção de uma preparação de anticorpos monoclonais, tais variantes geralmente estando presentes em quantidades menores. Em contraste com as preparações de anticorpos policlonais as quais incluem, tipicamente, diferentes anticorpos que têm como alvo diferentes epitopos, cada anticorpo monoclonal de uma preparação de anticorpos monoclonais tem como alvo um único epitopo em um antígeno. O termo não deve ser interpretado como requerendo a produção do anticorpo através de qualquer método particular. Um anticorpo monoclonal pode ser produzido por meio de uma variedade de técnicas incluindo, porém sem limitações, geração a partir de um hibridoma, métodos de DNA recombinante, exibição em fagos e outros métodos de exibição de anticorpos.

[00180] Os termos "polipeptídeo" e "proteína" são usados indistintamente para referir-se a um polímero de resíduos de aminoácidos e não estão limitados a um comprimento mínimo. Os polipeptídeos, incluindo os anticorpos e cadeias de anticorpos e outros peptídeos fornecidos, por exemplo, ligantes e peptídeos de ligação à ROR1, podem incluir resíduos de aminoácidos que incluem resíduos de aminoácidos naturais e/ou não naturais. Os termos também incluem modificações pós-expressão do polipeptídeo, por exemplo, glicosilação, sialilação, acetilação, fosforilação e assim por diante. Em alguns aspectos, os polipeptídeos podem conter modificações em relação a uma sequência nativa ou natural, contanto que a proteína retenha a atividade desejada. Estas modificações podem ser deliberadas, tal como por meio de mutagênese sítio-dirigida, ou podem ser acidentais, tal como por meio de mutações de hospedeiros que produzem as proteínas ou erros em virtude de amplificação por PCR. Anticorpos Exemplificativos

[00181] Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região variável de cadeia pesada e/ou leve (VH ou VL) conforme descrito ou uma porção de ligação a antígeno suficiente do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região variável de cadeia pesada (VH) e/ou uma sequência de região variável de cadeia leve (VL) conforme descrito ou uma porção de ligação a antígeno suficiente do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, é um fragmento com uma única cadeia, tal como um fragmento Fv com uma única cadeia (scFv). Em alguns aspectos, o scFv compreende uma região VH e uma região VL. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, é um anticorpo com um único domínio (sdAb), tal como um anticorpo que contém apenas uma região VH.

[00182] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH ou porção de ligação a antígeno suficiente da mesma que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e/ou uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH ou porção de ligação a antígeno suficiente da mesma que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VL ou porção de ligação a antígeno suficiente que contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e/ou uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3), conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VL ou porção de ligação a antígeno suficiente que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3, conforme descrito.

[00183] Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 conforme descrito e contém uma sequência de região VL que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 conforme descrito. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1, por exemplo, fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, contém uma sequência de região VH que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 conforme descrito e contém uma sequência de região VL que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 conforme descrito. Também dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências pelo menos igual ou cerca de 85%, igual ou cerca de 86%, igual ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% idêntica a tal sequência, por exemplo, qualquer uma das sequências de CDR-H1, CDR-H2, CDR- H3, CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, VH, VL, scFv ou outras sequências de fragmentos de anticorpos descritos no presente documento. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 85% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 86% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 87% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 88% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmento dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 89% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências de pelo menos 90% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 91% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências de pelo menos igual ou cerca de 92% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências de pelo menos igual ou cerca de 93% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 94% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 95% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 96% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 97% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 98% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências. Em alguns aspectos, dentre os anticorpos fornecidos e fragmentos dos mesmos estão aqueles que têm sequências que têm pelo menos igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com qualquer uma destas sequências.

[00184] Em algumas modalidades, o anticorpo é um sdAb que compreende apenas uma sequência de região VH ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma, tal como qualquer uma das sequências de VH descritas no presente documento (por exemplo, uma CDR-H1, uma CDR-H2, uma CDR-H3 e/ou uma CDR-H4). Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos incluem anticorpos com um único domínio que contêm uma região VH a qual, sem emparelhar com uma região VL) e/ou sem qualquer domínio de anticorpo ou sítio de ligação adicional, são capazes de se ligar especificamente à ROR1.

[00185] Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1,

uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 de acordo com a numeração de Kabat. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR- H2 e/ou uma CDR-H3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 de acordo com a numeração AbM. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 de acordo com a numeração IgBLAST. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 de acordo com a numeração de Kabat, Chothia, AbM, IMGT ou IgBLAST ou outros esquemas de numeração.

[00186] Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento têm uma região variável de cadeia pesada (VH) que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 ou contém uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e/ou uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) presentes em tal sequência de VH, tal como aquela que contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH. Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR,

conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento têm uma região VH que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 112 ou 121 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 112 ou 121 ou contêm uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH, tal como uma que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH.

[00187] Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento tem uma região VH que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 112 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 112 ou contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH, tal como uma que contém uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tem uma região VH que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 121 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 121 ou contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH, tal como uma que contém uma CDR- H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH.

Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento tem uma região VH que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 103 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 103 ou contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH, tal como uma que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tem uma região VH que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 130 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VH apresentada SEQ ID Nº: 130 ou contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH, tal como uma que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 presentes em tal sequência de VH.

[00188] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99.

[00189] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65, 80 ou 50. Em algumas das modalidades fornecidas,

a região VH compreende uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69, 84, 54 ou 95. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99.

[00190] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66, 81 ou 51. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70, 85, 55 ou 96. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99.

[00191] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68, 83 ou 53. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72, 87, 57 ou 98. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VH compreende uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74, 89, 59 ou 100.

[00192] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65, 80 ou 50, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69, 84, 54 ou 95 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99. Em algumas modalidades do anticorpo, a ligação a antígeno fragmento, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR- H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66, 81 ou 51, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70, 85, 55 ou 96 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68, 83 ou 53, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72, 87, 57 ou 98 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74, 89, 59 ou 100.

[00193] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67 ou 82, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71 ou 86 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65 ou 80, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69 ou 84 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno,

receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR- H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66 ou 81, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada i n SEQ ID Nº: 70 ou 85 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68 ou 83, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72 ou 87 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74 ou 89.

[00194] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente; SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88; SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente; SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente; SEQ ID Nºs: 50, 54 e 58, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 50, 95 e 99, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73,

respectivamente; SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente; SEQ ID Nºs: 51, 55 e 58, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 51, 96 e 99. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente; SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente; SEQ ID Nºs: 53, 57 e 59, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 53, 98 e 100, respectivamente.

[00195] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente.

[00196] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente.

[00197] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3, respectivamente, que compreende a sequência de aminoácidos de uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 contidas na sequência de aminoácidos da região VH apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 112, 121, 103 ou 130. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR- H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 ou 121.

[00198] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº:

112. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº:

121. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº:

103. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº:

130.

[00199] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende qualquer uma das CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 conforme descrito e compreende uma região estrutural 1 (FR1), uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VH apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 112, 121, 103 ou 130. Em algumas modalidades, a região VH compreende uma FR1, uma FR2,

uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos de uma região VH apresentada em SEQ ID Nº: 112. Em algumas modalidades, a região VH compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos 85% ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 121. Em algumas modalidades, a região VH compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 103. Em algumas de quaisquer modalidades, a região VH compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VH apresentada em SEQ ID Nº: 130.

[00200] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 112, 121, 103 ou 130. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 112. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 121. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº:

103. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº:

130.

[00201] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129.

[00202] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 ou 119. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 ou 120.

[00203] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreen- de a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº:

110. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreen- de a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111.

[00204] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

120.

[00205] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 101 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 101. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

102.

[00206] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 128. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

129. Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm qualquer uma das sequências de nucleotídeos descritas no presente documento, por exemplo, que codificam a totalidade ou uma porção das moléculas de ligação fornecidas.

[00207] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de anticorpo no CAR fornecido (por exemplo, um CAR anti-ROR1) compreende uma cadeia leve ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma região de variável de cadeia leve (VL) ou uma porção de ligação a antígeno suficiente de uma região VL. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma região VH e uma região de variável de cadeia leve (VL) ou uma porção de ligação a antígeno suficiente de uma região VH e VL. Em qualquer uma destas modalidades, uma sequência de região VH pode ser qualquer uma das sequências de região VH descritas no presente documento. Em qualquer uma destas modalidades, uma sequência de região VL pode ser qualquer uma das sequências de região VL descritas no presente documento. Em qualquer uma destas modalidades, qualquer uma das sequências de região VH e qualquer uma das sequências de região VL descritas no presente documento podem ser usadas em combinação. Em algumas de tais modalidades, qualquer uma ou mais das sequências de CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 descritas no presente documento e qualquer uma ou mais das sequências de CDR-L1, CDR-L2 e/ou CDR-L3 descritas no presente documento podem ser usadas em combinação. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno, tal como um Fab ou um scFv. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno compreende ainda pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma. Em algumas destas modalidades, o anticorpo é um anticorpo de comprimento total que também contém uma região constante.

[00208] Em algumas modalidades, uma molécula de ligação, tal como um receptor, por exemplo, um CAR fornecido no presente documento, contém um anticorpo, tal como um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém qualquer uma de uma região VL ou uma porção de ligação a antígeno suficiente da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que contém uma região VH e uma região VL ou uma porção de ligação a antígeno suficiente de uma região VH e VL. Em qualquer uma destas modalidades, uma sequência de região VH pode ser qualquer uma das sequências de região VH descritas no presente documento. Em qualquer uma destas modalidades, uma sequência de região VL pode ser qualquer uma das sequências de região VL descritas no presente documento. Em qualquer uma destas modalidades, qualquer uma das sequências de região VH e qualquer uma das sequências de região VL descritas no presente documento podem ser usadas em combinação. Em algumas de tais modalidades, qualquer uma ou mais das sequências de CDR-H1, CDR-H2 e/ou CDR-H3 descritas no presente documento e qualquer uma ou mais das sequências de CDR-L1, CDR- L2 e/ou CDR-L3 descritas no presente documento podem ser usadas em combinação. Em algumas destas modalidades, o anticorpo contido no receptor recombinante fornecido é um fragmento de ligação a antígeno, tal como um Fab ou um scFv. Em algumas de tais modalidades, o receptor, por exemplo, CAR, contém ainda um espaçador, tal como uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma, por exemplo, conforme descrito abaixo na Seção I.B.

[00209] Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração de Kabat. Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração de Chothia. Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração AbM. Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração IMGT. Em algumas modalidades, a região VH de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração IgBLAST. Em algumas modalidades, a região VL de um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 de acordo com a numeração de Kabat, Chothia, AbM, IMGT ou IgBLAST ou outros esquemas de numeração.

[00210] Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, têm uma região variável de cadeia leve (VL) que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106 ou contém uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e/ou uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR- L3) presentes em tal sequência de VL, tal como uma que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL. Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, têm uma região VL que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 115 ou 124 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 115 ou 124 ou contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL, tal como uma que contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL.

[00211] Em algumas modalidades, o anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, têm uma região VL que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 115 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 115 ou contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL, tal como uma que contém uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tem uma região VL que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 124 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 124 ou contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL, tal como uma que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL. Em algumas modalidades, o anticorpo, por exemplo, fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tem uma região VL que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 106 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%,

94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 106 ou contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL, tal como uma que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 presentes em tal sequência de VL.

[00212] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64

[00213] Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76, 91 ou 61. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78, 93 ou 63. Em algumas das modalidades fornecidas, a região VL compreende uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64

[00214] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62 e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76, 91 ou 61, uma

CDR-L2 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nº: 78, 93 ou 63; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00215] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75 ou 90, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77 ou 92; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76 ou 91, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78 ou 93; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94.

[00216] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94; SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente; SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente; SEQ ID Nºs: 60, 63 e 64, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 61, 63 e 64, respectivamente.

[00217] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente.

[00218] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente.

[00219] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3, respectivamente, que compreende a sequência de aminoácidos de uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 contida na sequência de aminoácidos da região VL apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 115, 124 ou 106. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno,

receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115 ou 124.

[00220] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[00221] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL compreende qualquer uma das CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 conforme descrito e compreende uma região estrutural 1 (FR1), uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VL apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 115, 124 ou 106. Em algumas modalidades, a região VL compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 115. Em algumas de quaisquer modalidades, a região VL compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 124. Em algumas modalidades, a região VL compreende uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 que têm pelo menos 85% ou cerca de 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade, respectivamente, com uma FR1, uma FR2, uma FR3 e/ou uma FR4 contidas na sequência de aminoácidos da região VL apresentada em SEQ ID Nº: 106.

[00222] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nºs: 115, 124 ou 106. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 115. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 124. Em algumas modalidades do anticorpo, o antígeno - fragmento de ligação, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº:

106.

[00223] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131.

[00224] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113 ou 122. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecida no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114 ou 123.

[00225] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou um ácido nucleico sequência tendo pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%,

94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

114.

[00226] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

123.

[00227] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 104 ou um ácido nucleico sequência tendo pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

105. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

131.

[00228] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um scFv que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85% ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 112 ou 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência t o SEQ ID Nº: 115 ou

124.

[00229] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%,

86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00230] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%

ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85% ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00231] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno compreende uma CDR-H1, uma CDR- H2, uma CDR-H3, respectivamente, que compreendem as sequências de aminoácidos de CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas na sequência de aminoácidos da região VH selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 112, 121, 103 ou 130; e compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2, uma CDR-L3, respectivamente, que compreendem as sequências de aminoácidos de CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3, respectivamente, contidas dentro da sequência de aminoácidos da região VL selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 115, 124 ou 106. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 ou 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115 ou 124.

[00232] Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR- L3 contidas em SEQ ID Nº: 115. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR- H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106. Em algumas de tais modalidades, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[00233] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR -H3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00234] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65, 80 ou 50, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69, 84, 54 ou 95 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00235] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66, 81 ou 51, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70, 85, 55 ou 96 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00236] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 68, 83 ou 53, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72, 87, 57 ou 98 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74, 89, 59 ou 100 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76, 91 ou 61, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78, 93 ou 63; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00237] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67 ou 82, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71 ou 86 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88 e a região VL compreende uma

CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75 ou 90, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77 ou 92; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94.

[00238] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 65 ou 80, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 69 ou 84 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75 ou 90, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77 ou 92; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94.

[00239] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 66 ou 81, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 70 ou 85 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73 ou 88 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75 ou 90, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77 ou 92; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94.

[00240] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID

Nº: 68 ou 83, uma CDR-H2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 72 ou 87 e uma CDR-H3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 74 ou 89 e a região VL compreende uma CDR-L1 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 76 ou 91, uma CDR-L2 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 78 ou 93; e uma CDR-L3 que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79 ou 94.

[00241] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região

VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00242] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 54 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 95 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente;

[00243] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente,; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 55 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 96 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00244] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente,; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94,

respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 57 e 59, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 63 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 98 e 100, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 61, 63 e 64, respectivamente.

[00245] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

[00246] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 65, 69 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

[00247] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 66, 70 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

[00248] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 68, 72 e 74, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 76, 78 e 79, respectivamente.

[00249] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

[00250] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 80, 84 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

[00251] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 81, 85 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

[00252] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 83, 87 e 89, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 91, 93 e 94, respectivamente.

[00253] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00254] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 54 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00255] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 55 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00256] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 57 e 59, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 63 e 64, respectivamente.

[00257] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00258] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 50, 95 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00259] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 51, 96 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00260] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 53, 98 e 100, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L 2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 61, 63 e 64, respectivamente.

[00261] Em algumas modalidades, a região VH do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nºs: 112, 121, 103 ou 130 e as regiões VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno compreendem a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nºs: 115, 124 ou 106. Em algumas modalidades, as regiões VH e VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação compreendem as sequências de aminoácidos de SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente ou qualquer anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que tenha pelo menos igual ou cerca de 90% de identidade de sequência com qualquer uma das VH e VL acima, tal como pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com as mesmas. Por exemplo, as regiões VH e VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo fornecido compreendem sequências de aminoácidos selecionadas a partir de: SEQ ID Nºs: 112 e 115; SEQ ID Nºs: 121 e 124; SEQ ID Nºs: 103 e 106; ou SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00262] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00263] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104. Em algumas modalidades do anticorpo, ligação a antígeno fragmento, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou

131.

[00264] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 ou 119 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113 ou 122. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecida no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 ou 120 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114 ou 123.

[00265] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114.

[00266] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 120 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 123.

[00267] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 101 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 101 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 102 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 105.

[00268] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 128 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 129 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 131.

[00269] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, no CAR fornecido, é um fragmento de anticorpo com uma única cadeia, tal como um fragmento variável com uma única cadeia (scFv) ou um diacorpo ou um anticorpo com um único domínio (sdAb). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno é um anticorpo com múltiplos domínios, tal como um scFv que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). Em algumas modalidades, o fragmento de anticorpo com uma única cadeia (por exemplo, scFv) inclui um ou mais ligantes que unem dois domínios ou regiões de anticorpo, tal como uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL). O ligante é, tipicamente, um ligante peptídico, por exemplo, um ligante peptídico flexível e/ou solúvel. Dentre os ligantes estão aqueles ricos em glicina e serina e/ou, em alguns casos, treonina. Em algumas modalidades, os ligantes incluem ainda resíduos carregados, tais como lisina e/ou glutamato, os quais podem melhorar a solubilidade. Em algumas modalidades, os ligantes incluem ainda uma ou mais prolinas.

[00270] Consequentemente, os CARs fornecidos contêm anticorpos anti-ROR1 que incluem fragmentos de anticorpos com uma única cadeia, tais como scFvs e diacorpos, particularmente fragmentos de anticorpos humanos com uma única cadeia, tipicamente que compreendem ligante(s) que une(m) dois domínios ou regiões de anticorpo, tais como regiões VH e VL. O ligante é, tipicamente, um ligante peptídico, por exemplo, um ligante peptídico flexível e/ou solúvel, tal como um rico em glicina e serina.

[00271] Em alguns aspectos, os ligantes ricos em glicina e serina (e/ou treonina) incluem pelo menos 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% deste(s) aminoácido(s). Em algumas modalidades, eles incluem pelo menos igual ou cerca de 50%, 55%, 60%, 70% ou 75% de glicina, serina e/ou treonina. Em algumas modalidades, o ligante é inteiramente composto substancialmente por glicina, serina e/ou treonina. Os ligantes têm, em geral, entre cerca de 5 e cerca de 50 aminoácidos de comprimento, tipicamente entre cerca de 10 e cerca de 30, por exemplo, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 ou 30 e, em alguns exemplos, entre 10 e 25 aminoácidos de comprimento. Ligantes exemplificativos incluem ligantes com vários números de repetições da sequência GGGGS (4GS; SEQ ID Nº: 39) ou GGGS (3GS; SEQ ID Nº: 40), tal como entre 2, 3, 4 e 5 repetições de tal sequência. Ligantes exemplificativos incluem aqueles que têm ou consistem em uma sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41 (GGGGSGGGGSGGGGS). Ligantes exemplificativos incluem ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 24 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG). Ligantes exemplificativos incluem ainda aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 162 (SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA). Um ligante exemplificativo inclui aqueles que têm ou consistem na sequência apresentada em SEQ ID Nº; 163 (GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA).

[00272] Consequentemente, em algumas modalidades, as modalidades fornecidas incluem fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, por exemplo, scFvs, que compreendem um ou mais dos ligantes supracitados, tais como ligantes ricos em glicina/serina, incluindo ligantes que têm repetições de GGGS (SEQ ID Nº: 40) ou GGGGS (SEQ ID Nº: 39), tal como o ligante apresentado em SEQ ID Nº: 41, 162 ou 163.

[00273] Em algumas modalidades, a região VH pode ser amino terminal à região VL. Em algumas modalidades, a região VH pode ser carbóxi terminal à região VL. Em modalidades particulares, o fragmento, por exemplo, scFv, pode incluir uma região VH ou parte da mesma, seguido pelo ligante, seguido por uma região VL ou parte da mesma. Em outras modalidades, o fragmento, por exemplo, o scFv, pode incluir a região VL ou parte da mesma, seguido pelo ligante, seguido pela região VH ou parte da mesma.

[00274] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidas no presente documento, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134. Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118 ou 127 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118 ou 127. Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118. Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127. Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 109. Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 134.

[00275] Em algumas modalidades do anticorpo, fragmento de ligação a antígeno, receptor, por exemplo, CAR, conjugados ou moléculas de ligação fornecidos no presente documento, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132. Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133.

[00276] Em algumas das modalidades fornecidas, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116 ou 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 116 ou 125. Em algumas modalidades, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117 ou 126. Em algumas modalidades, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117. Em algumas modalidades, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por

SEQ ID Nº: 126. Em algumas modalidades, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 108. Em algumas modalidades, o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 133.

[00277] A Tabela 2 fornece a SEQ ID Nºs: de fragmentos de anticorpo exemplificativos fornecidos, tais como scFvs. Em alguns aspectos, os fragmentos de anticorpo exemplificativos fornecidos podem estar compreendidos nos receptores de ligação à ROR1 fornecidos, tais como receptores antigênicos quiméricos anti-ROR1 (CARs). Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, tal como um scFv, compreende uma região VH que compreende as sequências de CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 e uma região VL que compreende as sequências de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo (através dos esquemas de numeração de Kabat, Chothia, AbM e IgBLAST). Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, tal como um scFv, compreende uma sequência de região VH e uma sequência de região VL apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo ou um anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos de região VH e de região VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de região VH e a sequência de região VL apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, tal como um scFv, compreende uma sequência de região VH e uma sequência de região VL apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo compreende uma sequência de scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo ou um anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos de scFv que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo. Em algumas modalidades, o anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo compreende uma sequência scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 abaixo. Em algumas modalidades, qualquer um do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tal como scFv, listado em cada linha da Tabela 2 pode estar compreendido em um receptor, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR), por exemplo, como o domínio de ligação a antígeno extracelular.

[00278] Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma região VH e uma região VL, em que a região VH do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode conter uma combinação de qualquer uma das sequências de aminoácidos de CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 apresentadas na Tabela 2 e a região VL do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode conter uma combinação de qualquer uma das sequências de aminoácidos de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 apresentadas na Tabela 2. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma região VH e/ou uma região VL apresentadas na Tabela 2, em qualquer combinação, orientação ou que contêm um ligante diferente. Em alguns aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma região VH descrita na Tabela 2. Em alguns aspectos, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende uma região VL descrita na Tabela 2. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é um anticorpo com um único domínio (sdAb) que compreende uma região VH apresentada na Tabela 2 ou uma região VL apresentada na Tabela 2. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é um anticorpo com um único domínio (sdAb) que compreende uma região VH que contém uma CDR-H1, uma CDR-H2 e/ou uma CDR-H3 apresentadas na Tabela 2 ou uma região VL que contém uma CDR-L1, uma CDR-L2 e/ou uma CDR-L3 apresentadas na Tabela 2. Tabela 2. Identificador de sequência (SEQ ID NO) para scFvs exemplificativos scFv CDR-H1 CDR-H2 CDR-H3 CDR-L1 CDR-L2 CDR-L3 VH VL Ligante Ordem scFv Kabat Kabat ROR1-1 67 71 73 75 77 79 112 115 41 VH-VL 118 ROR1-2 82 86 88 90 92 94 121 124 41 VH-VL 127 ROR1-3 52 56 58 60 62 64 103 106 41 VH-VL 109 ROR1-4 52 97 99 60 62 64 130 106 41 VH-VL 134 Chothia Chothia ROR1-1 65 69 73 75 77 79 112 115 41 VH-VL 118 ROR1-2 80 84 88 90 92 94 121 124 41 VH-VL 127 ROR1-3 50 54 58 60 62 64 103 106 41 VH-VL 109 ROR1-4 50 95 99 60 62 64 130 106 41 VH-VL 134 AbM AbM ROR1-1 66 70 73 75 77 79 112 115 41 VH-VL 118 ROR1-2 81 85 88 90 92 94 121 124 41 VH-VL 127 ROR1-3 51 55 58 60 62 64 103 106 41 VH-VL 109 ROR1-4 51 96 99 60 62 64 130 106 41 VH-VL 134 IgBLAST IgBLAST ROR1-1 68 72 74 76 78 79 112 115 41 VH-VL 118 ROR1-2 83 87 89 91 93 94 121 124 41 VH-VL 127 ROR1-3 53 57 59 61 63 64 103 106 41 VH-VL 109 ROR1-4 53 98 100 61 63 64 130 106 41 VH-VL 134

[00279] Dentre os anticorpos fornecidos, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, estão anticorpos humanos. Em algumas modalidades de um anticorpo anti-ROR1 humana fornecido, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, o anticorpo humano contém uma região VH que compreende uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana, uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento D de cadeia pesada de linhagem germinativa humana e/ou uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento J de cadeia pesada de linhagem germinativa humana; e/ou contém uma região VL que compreende uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia capa ou lambda de linhagem germinativa humana e/ou uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento J de cadeia capa ou lambda de linhagem germinativa humana.

[00280] Dentre os anticorpos fornecidos, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, estão anticorpos humanos. Em algumas modalidades de um anticorpo anti-ROR1 humana fornecido, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno, o anticorpo humano contém uma região VH que compreende uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana, uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento D de cadeia pesada de linhagem germinativa humana e/ou uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento J de cadeia pesada de linhagem germinativa humana; e contém uma região VL que compreende uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia capa ou lambda de linhagem germinativa humana e/ou uma porção que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento J de cadeia capa ou lambda de linhagem germinativa humana. Em algumas modalidades, a porção da região VH corresponde à CDR-H1, à CDR-H2 e/ou à CDR-H3. Em algumas modalidades, a porção da região VH corresponde à CDR-H1, à CDR-H2 e à CDR-H3. Em algumas modalidades, a porção da região VH corresponde à região estrutural 1 (FR1), FR2, FR2 e/ou FR4. Em algumas modalidades, a porção da região VL corresponde à CDR-L1, à CDR-L2 e/ou à CDR-L3. Em algumas modalidades, a porção da região VL corresponde à CDR- L1, à CDR-L2 e à CDR-L3. Em algumas modalidades, a porção da região VL corresponde à FR1, FR2, FR2 e/ou FR4.

[00281] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-H1 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H1 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H1 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-H1 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana.

[00282] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-H2 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H2 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H2 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-H2 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia pesada de linhagem germinativa humana.

[00283] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-H3 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-H3 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-H3 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-H3 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V, segmento D e segmento J de cadeia pesada de linhagem germinativa humana.

[00284] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-L1 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L1 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia leve de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L1 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-L1 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia leve de linhagem germinativa humana.

[00285] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-L2 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L2 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia leve de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades, contém uma CDR-L2 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-L2 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V de cadeia leve de linhagem germinativa humana.

[00286] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma CDR-L3 que tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma sequência de aminoácidos da região CDR-L3 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V e segmento J de cadeia leve de linhagem germinativa humana. Por exemplo, o anticorpo humano, em algumas modalidades,

contém uma CDR-L3 que tem uma sequência que é 100% idêntica ou com não mais do que uma, duas ou três diferenças de aminoácidos comparado com a região CDR-L3 correspondente dentro de uma sequência codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento V e segmento J de cadeia leve de linhagem germinativa humana.

[00287] Em algumas modalidades, o anticorpo humano ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém uma região estrutural que contém sequências de segmento gênico de linhagem germinativa humana. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo humano contém uma região VH na qual a região estrutural, por exemplo, FR1, FR2, FR3 e FR4, tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma região estrutural codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmentos de anticorpo de linhagem germinativa humana, tal como um segmento V e/ou segmento J. Em algumas modalidades, o anticorpo humano contém uma região VL na qual a região estrutural, por exemplo, FR1, FR2, FR3 e FR4, tem pelo menos 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou 100% de identidade de sequência com uma região estrutural codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmentos de anticorpo de linhagem germinativa humana, tal como um segmento V e/ou segmento J. Por exemplo, em algumas destas modalidades, a sequência de região estrutural contida na região VH e/ou região VL difere em não mais do que 10 aminoácidos, tal como não mais do que 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 ou 1 aminoácidos, comparado com a sequência de região estrutural codificada por uma sequência de nucleotídeos de segmento de anticorpo de linhagem germinativa humana.

[00288] O anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo pode conter pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina, tal como um ou mais domínios de região constante. Em algumas modalidades, as regiões constantes incluem uma região constante da cadeia leve e/ou uma região constante 1 de cadeia pesada (CH1). Em algumas modalidades, o anticorpo inclui pelo menos uma porção de uma região de dobradiça ou uma variante da mesma. Em algumas modalidades, o anticorpo inclui um domínio CH2 e/ou CH3, tal como uma região Fc. Em algumas modalidades, a região Fc é uma região Fc de uma IgG humana, tal como uma IgG1 ou IgG4.

2. Características Exemplificativas

[00289] Em alguns aspectos, os anticorpos fornecidos têm uma ou mais características funcionais especificadas, tais como propriedades de ligação, incluindo ligação a epitopos particulares ou exibição de ligação menor ou reduzida a um antígeno relacionado, mas não específico. Em alguns aspectos, os anticorpos fornecidos podem se ligar a um epitopo que é similar ou se sobrepõe a epitopos de outros anticorpos, tais como anticorpos de referência, e/ou exibir afinidades de ligação particulares. Em alguns aspectos, os anticorpos fornecidos podem se ligar a um epitopo que é diferente dos epitopos de outros anticorpos, por exemplo, se ligar a um epitopo conformacional.

[00290] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1). Em algumas das modalidades fornecidas no presente documento, ROR1 refere-se à ROR1 humana. A observação de que um anticorpo ou outra molécula de ligação se liga à ROR1 ou se liga especificamente à ROR1 não significa necessariamente que se liga à ROR1 de todas as espécies. Por exemplo, em algumas modalidades, características de ligação à ROR1, tal como a capacidade de se ligar especificamente à mesma e/ou competir pela ligação com a mesma com um anticorpo de referência e/ou se ligar em uma afinidade particular ou competir em um determinado grau, em algumas modalidades, refere-se à capacidade em relação a uma proteína ROR1 humana e o anticorpo pode não ter tal característica em relação a uma ROR1 de outra espécie, tal como camundongo. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 humana e se liga à ROR1 de outra espécie, tal como macaco Rhesus ou macaco cynomolgus. Em algumas modalidades, o anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à ROR1 humana e não se liga à ROR1 de outra espécie, tal como camundongo. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 humana e se liga à ROR1 de outra espécie, tal como camundongo.

[00291] Em algumas modalidades, os anticorpos, tais como os anticorpos anti-ROR1, por exemplo, anticorpos humanos, se ligam especificamente a um epitopo ou região particular de ROR1 tal como, de modo geral, um epitopo ou região extracelular. A ROR1 é uma proteína da membrana de tipo I que contém uma região extracelular que contém um domínio de imunoglobulina (Ig), um domínio frizzled (Fz) e um domínio kringle (Kr), seguido por um domínio transmembrana. Com referência à ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 144 (GenBank Nº AAA60275.1; sequência incluindo o peptídeo sinalizador apresentada em SEQ ID Nº: 215, Uniprot Nº Q01973), a região extracelular corresponde aos aminoácidos 1-377, os aminoácidos 13- 118 correspondem ao domínio Ig, os aminoácidos 136-270 correspondem ao domínio Fz e os aminoácidos 283-362 correspondem ao domínio Kr (correspondendo aos aminoácidos 42-147 para o domínio Ig, aminoácidos 165-299 para o domínio Fz e aminoácidos 312-391 para o domínio Kr com referência à sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 215). Em algumas modalidades, os anticorpos, tais como anticorpos humanos, se ligam a um epitopo que compreende resíduos dentro do domínio Ig, domínio Fz e/ou domínio Kr. Em algumas modalidades, os anticorpos, tais como anticorpos humanos, se ligam a um epitopo que compreende resíduos que têm o domínio Ig e/ou domínio Fz. Em algumas modalidades, os anticorpos, tais como anticorpos humanos, se ligam a um epitopo que compreende resíduos tanto dentro do domínio Ig como Fz.

[00292] Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam, tal como se ligam especificamente, à ROR1 humana, tal como a um ou mais epitopos ou região da ROR1 humana, tal como a ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 144 (GenBank Nº AAA60275.1; sequência incluindo o peptídeo sinalizador apresentada em SEQ ID Nº: 215, Uniprot Nº Q01973) ou uma variante alélica ou variante de emenda da mesma. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam especificamente a um ou mais epitopos dentro de uma proteína ROR1 humana. Em uma modalidade, a ROR1 humana é uma variante transcrita ou isoforma que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 145 ou 146. Em algumas modalidades, a proteína ROR1 humana compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145, 146 ou 215. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam à região extracelular da ROR1, tal como um ou mais epitopos extracelulares presentes na região extracelular da ROR1 humana, por exemplo, correspondendo aos resíduos 1-377 da sequência da ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 144 (correspondendo aos resíduos 30-406 da sequência da ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 215 que inclui o peptídeo sinalizador).

[00293] Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos de ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um epitopo linear de ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos conformacionais de ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana.

[00294] Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos de ROR1 humana, tais como um ou mais epitopos que compreendem ou consistem em uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 199- 214 ou um ou mais epitopos presentes dentro de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 199-214. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos de ROR1 humana, tais como um ou mais epitopos que incluem a sequência FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a um epitopo que consiste na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199 ou um epitopo presente na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a epitopos adicionais, tais como um ou mais epitopos conformacionais. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a epitopos adicionais, além da sequência FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199). Exemplos de um ou mais epitopos adicionais incluem, porém sem limitações, uma ou mais das sequências apresentadas em SEQ ID Nº: 200-214 ou um ou mais epitopos presentes dentro de uma sequência de aminoácidos selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214.

[00295] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 não humana, tal como ROR1 de macaco Rhesus (Macaca mulatta) (apresentada em SEQ ID Nº: 216, Uniprot Nº F6RUP2) ou ROR1 de macaco cynomolgus (Macaca fasicularis) (apresentada em SEQ ID Nº: 217, Uniprot Nº A0A2K5WTX7; ou SEQ ID Nº: 218, Uniprot Nº A0A2K5WTX4). Em alguns aspectos, o domínio extracelular da ROR1 não humana é pelo menos 99% idêntico à sequência da ROR1 humana.

[00296] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 não humana, tal como ROR1 de macaco, coelho, rato, camundongo ou outras espécies. Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 de camundongo (Mus musculus), tal como a um epitopo ou região da ROR1 de camundongo, tal como a ROR1 de camundongo apresentada em SEQ ID Nº: 171 (GenBank Nº NP_038873; sequência incluindo o peptídeo sinalizador apresentada em SEQ ID Nº: 219, Uniprot Nº Q9Z139). Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 humana e se liga à ROR1 de camundongo. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de alguns dos anticorpos anti-ROR1 fornecidos ou fragmentos dos mesmos a uma ROR1 não humana, tal como ROR1 de camundongo, é de pelo menos 75%, 80%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150% ou mais da ligação do anticorpo à ROR1 humana.

[00297] Em algumas das modalidades fornecidas, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em uma extensão, nível ou grau ou afinidade menor a uma ROR1 não humana, opcionalmente uma ROR1 de camundongo. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de um anticorpo anti-ROR1 a uma proteína diferente da ROR1 não relacionada ou a uma proteína ROR1 não humana, tal como uma proteína ROR1 de camundongo ou outra proteína diferente da ROR1, é menor do que igual ou cerca de 50%, 40%, 30%, 20% ou 10% da ligação do anticorpo à ROR1 humana, conforme medido. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos não se ligam à ROR1 de camundongo, tal como a ROR1 de camundongo apresentada em SEQ ID Nº: 171 ou 219. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno não se ligam a, não exibem reatividade cruzada com ou se ligam em um nível ou grau ou afinidade menor a uma ROR1 de camundongo. Em algumas modalidades, a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do anticorpo anti-ROR1 fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo a uma ROR1 de camundongo é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana.

[00298] Em algumas das modalidades fornecidas, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em uma extensão, nível ou grau ou afinidade menor a um receptor de tirosina quinase - tal como a proteína receptor órfão 2 (ROR2), opcionalmente uma proteína ROR2 humana. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de alguns dos anticorpos anti-ROR1 fornecidos ou fragmentos dos mesmos a uma proteína diferente da ROR1, tal como uma proteína ROR2, é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a ligação do anticorpo à ROR1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga a, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína ROR2, opcionalmente uma proteína ROR2 humana. Em algumas modalidades, dentre os anticorpos fornecidos estão anticorpos nos quais a ligação à ROR1 de camundongo é menor do que ou igual a ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que igual ou cerca de 10% da ligação do anticorpo à ROR1 humana. Em algumas modalidades, dentre os anticorpos fornecidos estão anticorpos nos quais a ligação a uma ROR2, tal como uma proteína ROR2 humana, é menor do que ou igual ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que igual ou cerca de 10% da ligação do anticorpo à ROR1 humana.

[00299] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos são capazes de se ligar à ROR1, tal como ROR1 humana, que tem pelo menos uma determinada afinidade, medida através de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Em algumas modalidades, a afinidade é representada por uma constante de dissociação em equilíbrio (KD). Em algumas modalidades, a afinidade é representada pela EC50.

[00300] Uma variedade de ensaios são conhecidos para avaliar a afinidade de ligação, a constante de dissociação em equilíbrio (KD), a constante de associação em equilíbrio (KA), a EC50, a taxa de ativação (constante de taxa de associação; kon ou ka; unidades de 1/Ms ou M- 1s- 1 ) e a taxa de dissociação (constante de taxa de dissociação; koff ou kd; unidades de 1/s ou s-1) e/ou determinar se uma molécula de ligação (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo) se liga especificamente a um determinado ligante (por exemplo, um antígeno, tal como uma proteína ROR1). Pode-se determinar a afinidade de ligação de uma molécula de ligação, por exemplo, um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, por um antígeno, por exemplo, ROR1, tal como ROR1 humana ou ROR1 de cynomolgus ou ROR1 de camundongo, usando qualquer um de uma série de ensaios de ligação que são bem conhecidos. Por exemplo, em algumas modalidades, um instrumento BIAcore pode ser usado para determinar a cinética de ligação e constantes de um complexo entre duas proteínas (por exemplo, um anticorpo ou fragmento do mesmo e um antígeno, tal como uma proteína ROR1), usando análise de ressonância plasmônica em superfície (SPR) (consulte, por exemplo, Scatchard et al., Ann. NY Acad. Sci. 51: 660, 1949; Wilson, Science 295: 2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53: 2560, 1993; e Patentes Norte-Americanas Nos

5.283.173, 5.468.614 ou equivalente).

[00301] SPR mede mudanças na concentração de moléculas em uma superfície do sensor à medida que as moléculas se ligam ou se dissociam da superfície. A mudança no sinal de SPR é diretamente proporcional à mudança na concentração de massa próxima à superfície, deste modo, permitindo medição da cinética de ligação entre duas moléculas. A constante de taxa de dissociação (koff ou kd), a constante de taxa de associação (kon ou ka) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio (KD) e/ou constante de associação em equilíbrio (KA) para o complexo podem ser determinadas ao monitorar as mudanças no índice de refrativo em relação ao tempo, à medida que o tampão é passado pelo chip. Outros ensaios adequados para medir a ligação de uma proteína à outra incluem, por exemplo, imunoensaios, tais como ensaios de imunoabsorção enzimática (ELISA) e radioimunoensaios (RIA) ou determinação da ligação ao monitorar a mudança nas propriedades espectroscópicas ou ópticas das proteínas por meio de fluorescência, absorção de UV, dicroísmo circular ou ressonância magnética nuclear (RMN). Outros ensaios exemplificativos incluem, porém sem limitações, Western blot, ELISA, ultracentrifugação analítica, espectroscopia, citometria de fluxo, sequenciamento, ensaios genéticos repórter, citometria de fluxo e outros métodos para detecção de ácidos nucleicos expressos ou ligação de proteínas.

[00302] Em algumas modalidades, a molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento do mesmo, se liga, tal como se liga especificamente, a um antígeno, por exemplo, uma proteína ROR1 ou um epitopo na mesma, com uma afinidade ou KA (ou seja, uma constante de associação em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de 1/M ou M-1; igual à proporção da taxa de ativação [kon ou ka] para a taxa de desativação [koff ou kd] para esta reação de associação, assumindo uma interação bimolecular) igual ou maior do que 105 M-1. Em algumas modalidades, a molécula de ligação se liga, tal como se liga especificamente, a um epitopo de um antígeno, por exemplo, ROR1 humana, com uma afinidade ou KA (ou seja, uma constante de associação em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de 1/M ou M-1) igual ou maior do que 105 M-1 (a qual é igual à proporção entre a taxa de ativação [kon] e a taxa de desativação [koff] para esta reação de associação). Em algumas modalidades, a molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, exibe uma afinidade de ligação por um epitopo de célula T do polipeptídeo alvo com uma afinidade ou KA que varia a partir de igual ou cerca de 106 M-1 a igual ou cerca de 1010 M-1, tal como a partir de igual ou cerca de 106 M-1 a igual ou cerca de 109 M-1 ou a partir de igual ou cerca de 106 M-1 a igual ou cerca de 108 M-1. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação pode ser classificada como alta afinidade ou baixa afinidade. Por exemplo, em alguns casos, uma molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que exibe ligação de alta afinidade a um epitopo particular interage com tal epitopo com uma KA de pelo menos igual ou cerca de 107 M-1, pelo menos igual ou cerca de 108 M-1, pelo menos igual ou cerca de 109 M-1, pelo menos igual ou cerca de 1010 M-1, pelo menos igual ou cerca de 1011 M-1, pelo menos igual ou cerca de 1012 M-1 ou pelo menos igual ou cerca de 1013 M-1. Em alguns casos, uma molécula de ligação, por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, que exibe ligação de baixa afinidade exibe uma KA de até 107 M-1, até 106 M-1, até 105 M-1.

[00303] Alternativamente, a afinidade pode ser definida como uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) de uma interação de ligação particular com unidades de M (por exemplo, 10-5 M a 10-13 M). Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento do mesmo exibe uma afinidade de ligação pelo epitopo com uma KD (ou seja, uma constante de dissociação em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de M; igual à proporção da taxa de desativação [koff ou kd] para a taxa de ativação [kon ou ka] para esta reação de associação, assumindo uma interação bimolecular) igual ou menor do que 10-5 M. Por exemplo, a constante de dissociação em equilíbrio KD pode variar a partir de 10-5 M a 10-13 M, tal como 10-7 M a 10-11 M, 10-7 M a 10-10 M, 10-7 M a 10-9 M, 10-8 M a 10-10 M ou 10-9 M a 10-10 M.

[00304] A taxa de ativação (constante de taxa de associação; kon ou ka; unidades de 1/Ms ou M-1s-1) e a taxa de desativação (constante de taxa de dissociação; koff ou kd; unidades de 1/s ou s-1) pode ser determinada usando qualquer um dos métodos de ensaio conhecidos, por exemplo, ressonância plasmônica em superfície (SPR) ou outros métodos descritos no presente documento para medir a ligação de uma proteína à outra.

[00305] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio (KD) do anticorpo pela ROR1, tal como ROR1 humana, é a partir igual ou cerca de 0,1 nM a igual ou cerca de 500 nM, a partir de igual ou cerca de 0,1 nM a igual ou cerca de 100 nM, a partir de igual ou cerca de 0,1 nM a igual ou cerca de 50 nM, a partir de igual ou cerca de 0,1 nM a igual ou cerca de 10 nM, a partir de igual ou cerca de 0,1 nM a igual ou cerca de 1 nM, a partir de igual ou cerca de 1 nM a igual ou cerca de 500 nM, a partir de igual ou cerca de 1 nM a igual ou cerca de 100 nM, a partir de igual ou cerca de 1 nM a igual ou cerca de 50 nM, a partir de igual ou cerca de 1 nM a igual ou cerca de 10 nM, de igual ou cerca de 10 nM a igual ou cerca de 500 nM, a partir de igual ou cerca de 10 nM a igual ou cerca de 100 nM, a partir de igual ou cerca de 10 nM a igual ou cerca de 50 nM, a partir de igual ou cerca de 50 nM a igual ou cerca de 500 nM, a partir de igual ou cerca de 50 nM a igual ou cerca de 100 nM ou a partir de igual ou cerca de 100 nM a igual ou cerca de 500 nM. Em determinadas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio (KD) do anticorpo pela ROR1, tal como ROR1 humana, é igual a ou cerca de ou menos de cerca de 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM,

3 nM, 2 nM ou 1 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em algumas modalidades, os anticorpos se ligam à ROR1, tal como ROR1 humana, com uma afinidade de ligação sub-nanomolar, por exemplo, com uma afinidade de ligação menor do que igual ou cerca de 1 nM, tal como menor do que igual ou cerca de 0,9 nM, 0,8 nM, 0,7 nM, 0,6 nM, 0,5 nM, 0,4 nM, 0,3 nM, 0,2 nM ou 0,1 nM. Em algumas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio, KD, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, por uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é a partir de igual ou cerca de 0,01 nM a cerca de 1 μM, 0,1 nM a 1 μM, 1 nM a 1 μM, 1 nM a 500 nM, 1 nM a 100 nM, 1 nM a 50 nM, 1 nM a 10 nM, 10 nM a 500 nM, 10 nM a 100 nM, 10 nM a 50 nM, 50 nM a 500 nM, 50 nM a 100 nM ou 100 nM a 500 nM. Em determinadas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio, KD, da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, por uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca ou menos de igual ou cerca de 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 nM ou menos ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores.

[00306] Em algumas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, para uma proteína ROR1, está entre igual ou cerca de 10 nM e igual ou cerca de 90 nM, entre igual ou cerca de 20 nM e igual ou cerca de 80 nM, entre igual ou cerca de 30 nM e igual ou cerca de 70 nM, entre igual ou cerca de 40 nM e igual ou cerca de 60 nM ou entre igual ou cerca de 40 nM e igual ou cerca de 50 nM. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, para uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM ou 100 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, a uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM ou 100 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo, para uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 40 nM, 41 nM, 42 nM, 43 nM, 44 nM ou 45 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores.

[00307] Em algumas modalidades, a região VH das moléculas de ligação fornecidas compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL das moléculas de ligação fornecidas compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR- L3 contidas em SEQ ID Nº: 115 e a constante de dissociação em equilíbrio (KD) para a ROR1 humana está entre igual ou cerca de 30 nM e igual ou cerca de 50 nM. Em algumas modalidades, a região VH e a região VL das moléculas de ligação fornecidas são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente, e a taxa de desativação (koff ou kd) para a ROR1 humana é igual ou cerca de 40 nM.

[00308] Em algumas modalidades, a molécula de ligação fornecida, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou receptores que contêm tal anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno, tem uma taxa de dissociação rápida (constante de taxa de dissociação; koff ou kd; unidades de 1/s ou s-1). Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas está entre igual ou cerca de 1 x 10-5 s-1 e igual ou cerca de 1 x 10-2 s-1, tal como igual ou cerca de 5 x 10-5 s-1 e igual ou cerca de 9 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 1 x 10-4 s-1 e igual ou cerca de 8 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 5 x 10-4 s-1 e igual ou cerca de 7 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 1 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 6 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 4 x 10- 3 s-1 e igual ou cerca de 6 x 10-3 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos 1 x 10-5 s-1, 5 x 10-5 s-1, 1 x 10-4 s-1, 5 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 ou 1 x 10-2 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos igual ou cerca de 6 x 10-4 s-1, 7 x 10-4 s-1, 8 x 10-4 s-1, 9 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 2 x 10-3 s-1, 3 x 10-3 s-1, 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1, 6 x 10-3 s-1, 7 x 10-3 s-1, 8 x 10-3 s-1, 9 x 10-3 s-1 ou 1 x 10-2 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos igual ou cerca de 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 ou 6 x 10-3 s-1 ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em algumas modalidades, a molécula de ligação fornecida, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou receptores que contêm tal anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno, tem uma taxa de dissociação que é pelo menos 2 ou cerca de duas vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes mais rápida do que a taxa de dissociação de um anticorpo anti-ROR1 de referência ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou receptores que contêm tal anticorpo ou fragmentos de ligação a antígeno, por exemplo, anticorpo anti-ROR1 R12.

[00309] Em algumas modalidades, a região VH das moléculas de ligação fornecidas compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL das moléculas de ligação fornecidas compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR- L3 contidas em SEQ ID Nº: 115 e a taxa de dissociação (koff ou kd) para

ROR1 humana está entre igual ou cerca de 4 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 6 x 10-3 s-1. Em algumas modalidades, a região VH e a região VL das moléculas de ligação fornecidas são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente, e a taxa de dissociação (koff ou kd) para a ROR1 humana é igual ou cerca de 5 x 10-3 s-1.

[00310] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação de uma molécula de ligação, tal como um anticorpo anti-ROR1, por diferentes antígenos, por exemplo, proteínas ROR1 de diferentes espécies, pode ser comparada para determinar a reatividade cruzada entre espécies. Por exemplo, a reatividade cruzada entre espécies pode ser classificada como alta reatividade cruzada ou baixa reatividade cruzada. Em algumas modalidades, a constante de dissociação em equilíbrio, KD, para diferentes antígenos, por exemplo, proteínas ROR1 de diferentes espécies, tais como humana, de macaco cynomolgus ou camundongo, pode ser comparada para determinar a reatividade cruzada entre espécies. Em algumas modalidades, a reatividade cruzada entre espécies de um anticorpo anti-ROR1 pode ser alta, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1 se liga à ROR1 humana e uma variante de espécie da ROR1 em um grau similar, por exemplo, a proporção de KD para ROR1 humana e KD para a espécie variante de ROR1 é igual ou é cerca de 1. Em algumas modalidades, a reatividade cruzada entre espécies de um anticorpo anti-ROR1 pode ser baixa, por exemplo, o anticorpo anti-ROR1 tem uma alta afinidade pela ROR1 humana, mas uma baixa afinidade por uma espécie variante de ROR1 ou vice-versa. Por exemplo, a proporção de KD para a espécie variante de ROR1 e a KD para a ROR1 humana é maior do que 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 ou mais e o anticorpo anti-ROR1 tem baixa reatividade cruzada entre espécies. O grau de reatividade cruzada entre espécies pode ser comparado com a reatividade cruzada entre espécies de um anticorpo conhecido, tal como um anticorpo de referência.

[00311] Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam em um grau similar a uma proteína ROR1 humana e uma proteína ROR1 não humana. Por exemplo, em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína ROR1 humana ou uma variante alélica ou variante de emenda da mesma com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) específica e a uma ROR1 não humana, tal como uma ROR1 de macaco cynomolgus, com uma KD que é similar ou quase a mesma ou menos de duas vezes diferente ou menos de 5 vezes diferente.

[00312] Por exemplo, em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína ROR1 humana com uma KD de cerca ou menos de igual ou cerca de 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 nM ou menos e se liga a uma ROR1 de macaco cynomolgus com uma KD de cerca ou menos de igual ou cerca de 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 nM ou menos. Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína ROR1 de camundongo com uma KD de cerca ou menos de igual ou cerca de 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 nM ou menos. Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína

ROR1 humana, uma ROR1 de macaco cynomolgus e uma ROR1 de camundongo com alta afinidade. Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína ROR1 humana e ROR1 de macaco cynomolgus com uma alta afinidade e a uma ROR1 de camundongo com baixa afinidade. Em algumas modalidades, os anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a uma proteína ROR1 humana e ROR1 de outras espécies ou outras variantes da proteína ROR1 com alta afinidade.

[00313] Em algumas modalidades, a capacidade de ligação total (Rmax), conforme medida usando condições particulares de ressonância plasmônica em superfície (SPR), é usada para determinar a habilidade ou capacidade de ligação do anticorpo ou fragmento de ligação do antígeno fornecido, por exemplo, uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Para análise SPR, o "ligante" é a molécula alvo mobilizada sobre a superfície do sensor, por exemplo, uma proteína ROR1, e o "analito" é a molécula testada, por exemplo, anticorpo, para ligação ao "ligante". Por exemplo, o "analito" pode ser qualquer um dos anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos que se ligam a uma proteína ROR1. Para um par de ligante e analito em particular em SPR, a Rmax pode ser determinada assumindo um modelo de estequiometria de ligação a 1:1 para uma condição particular. Em algumas modalidades, a capacidade de ligação (Rmax) pode ser determinada usando a seguinte fórmula: Rmax (RU) = (peso molecular do analito)/(peso molecular do ligante) × nível de ligante imobilizado (RU). Em aspectos particulares das condições de SPR, a Rmax de ligação entre qualquer um dos anticorpos fornecidos ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo e uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana ou uma ROR1 de cynomolgus, é pelo menos igual ou pelo menos cerca de 50 unidades de ressonância (RU), tal como cerca de 25 RU, 20 RU, 15 RU, 10 RU, 5 RU ou 1 RU.

[00314] Em algumas modalidades, as propriedades ou características dos anticorpos fornecidos são descritas em relação às propriedades observadas para outro anticorpo, por exemplo, um anticorpo de referência. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é um anticorpo anti-ROR1 não humana, tal como um anticorpo anti-ROR1 de coelho quimérico ou humanizado. Em alguns aspectos, o anticorpo de referência é o anticorpo quimérico de coelho/IgG1 humano designado R12 (consulte, por exemplo, Yang et al. (2011) PloS ONE, 6: e21018; Pedido de Patente Norte-Americana N° US 2013/0251642), e/ou um fragmento derivado do mesmo, tal como um fragmento scFv do mesmo, e/ou um anticorpo que contém as sequências de VH e VL de tal anticorpo e/ou as CDRs de cadeias pesada e leve de tal anticorpo. Foi demonstrado que um receptor antigênico quimérico (CAR) que contém um fragmento de ligação a antígeno scFv de R12 promove efetivamente a reatividade antitumoral em uma terapia com CAR (Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19: 3153; Pedido Internacional PCT Publicado Nº WO2014031687). Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é um scFv que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº:

142.

[00315] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é o anticorpo anti-ROR1 humana de camundongo designado 2A2 e/ou um fragmento derivado do mesmo, tal como um fragmento scFv do mesmo, e/ou um anticorpo que contém as sequências de VH e VL de tal anticorpo e/ou as CDRs de cadeia pesadas e leve de tal anticorpo (consulte, por exemplo, Baskar et al. (2012) MAbs, 4: 349-361; publicado no Pedido de Patente US2012/20058051). Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo de referência tem uma região VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 172 e uma VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 173. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é uma forma scFv do anticorpo 2A2.

[00316] Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é um anticorpo anti-ROR1 humano ou humanizado. Anticorpos anti-ROR1 humanizados exemplificativos são descritos no Pedido Internacional PCT Nº WO2014/031174. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência é uma variante humanizada de um anticorpo designado

99961. Em algumas modalidades, o anticorpo de referência tem uma região VH que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 174, 175, 176 ou 177 e uma VL que contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 178, 179, 180 ou 181.

[00317] Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido contém CDRs de cadeias pesada e leve que são distintas das CDRs presentes no anticorpo ou anticorpos de referência. Dentre os anticorpos fornecidos estão aqueles que competem pela ligação com e/ou se ligam aos mesmos epitopos ou epitopos sobrepostos da ROR1, tais como aqueles ligados por um anticorpo de referência ou um anticorpo tal como R12, mas, no entanto, contêm CDRs distintas, por exemplo, CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de cadeia leve distintas.

[00318] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade que é quase igual ou menor do que aquela da forma correspondente do anticorpo de referência, por exemplo, EC50 ou KD que não é mais do que 1,5 vezes ou não mais do que ou cerca de duas vezes maior, não mais do que ou cerca de 3 vezes maior e/ou não mais do que ou cerca de 10 vezes maior do que a EC50 ou KD da forma correspondente do anticorpo de referência. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade que é quase igual ou menor do que aquela da forma correspondente do anticorpo de referência, por exemplo, EC50 ou KD que é pelo menos 1,5 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de duas vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 3 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 5 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 10 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 20 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 25 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 30 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 40 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 50 vezes maior ou pelo menos igual ou cerca de 100 vezes maior do que a EC 50 ou KD da forma correspondente do anticorpo de referência. Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade que é quase igual ou menor do que aquela da forma correspondente do anticorpo de referência, uma afinidade que é cerca de 1,5 vezes, duas vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 25 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes ou 100 vezes menor do que a afinidade do anticorpo de referência.

[00319] Em algumas modalidades, o anticorpo tem uma afinidade que é maior do que a forma correspondente do anticorpo de referência, por exemplo, uma EC50 ou KD que é menor ou menor do que igual ou cerca de 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes, 150 vezes, 200 vezes, 250 vezes ou menor do que a EC50 ou KD da forma correspondente do anticorpo de referência.

[00320] Em algumas modalidades, os anticorpos exibem uma preferência de ligação por células que expressam ROR1 comparado com células negativas para ROR1, tais como células particulares conhecidas e/ou descritas no presente documento como expressando ROR1 e conhecidas por não expressar ROR1 ou expressar um antígeno relacionado, mas diferente, por exemplo, ROR2. Em algumas modalidades, a preferência de ligação é observada onde um grau significativamente maior de ligação é medido para as células que expressam ROR1 comparado com as células que não expressam ou que expressam um antígeno relacionado, mas diferente. Em algumas modalidades, a alteração do grau de ligação detectada, por exemplo,

conforme medido pela intensidade média de fluorescência em um ensaio com base em citometria de fluxo e/ou constante de dissociação ou EC50 para as células que expressam ROR1 comparado com as células não expressam ROR1 ou células que expressam um antígeno relacionado, mas diferente, é pelo menos igual ou cerca de 1,5, 2, 3, 4, 5, 6 ou mais e/ou é quase tão grande, quase a mesma, pelo menos tão grande ou pelo menos tão grande ou maior do que a alteração observada para a forma correspondente do anticorpo de referência. Em alguns casos, o grau total de ligação à ROR1 ou células que expressam a ROR1 observado é aproximadamente o mesmo, pelo menos tão grande ou maior do que aquele observado para a forma correspondente do anticorpo de referência.

[00321] Em alguns aspectos, a afinidade é igual ou aproximadamente o mesmo grau ou substancialmente o mesmo grau de afinidade comparado com a forma correspondente do anticorpo de referência, tal como o anticorpo anti-ROR1 de coelho. Em alguns aspectos, a afinidade é de pelo menos 80, 85, 90, 95 ou 99% ou igual àquela da forma correspondente do anticorpo de referência.

[00322] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga especificamente a um epitopo que se sobrepõe ao epitopo de ROR1 ligado por um anticorpo de referência. Em alguns aspectos, dentre estes anticorpos estão anticorpos que se ligam ao mesmo epitopo ou a um epitopo similar ao anticorpo de referência. Em algumas modalidades, os anticorpos se ligam ao mesmo epitopo ou a um epitopo similar ou a um epitopo dentro da mesma região ou que contém resíduos dentro da mesma região de ROR1 que um anticorpo de referência, tal como o anticorpo anti-ROR1 R12 ou fragmento scFv do mesmo (apresentado em SEQ ID Nº: 142; consulte, por exemplo, Yang et al. (2011) PloS ONE, 6: e21018). Em algumas modalidades, o anticorpo inibe a ligação e/ou compete pela ligação à ROR1, tal como ROR1 humana, com o anticorpo de referência.

[00323] Os ensaios de inibição competitiva são conhecidos e incluem ensaios com base em ELISA, ensaios com base em citometria de fluxo e ensaios com base em RIA. Em alguns aspectos, os ensaios de inibição competitiva são realizados ao incorporar um excesso de uma forma não marcada de um dos anticorpos e avaliar sua capacidade de bloquear a ligação do outro anticorpo, o qual é marcado com um marcador detectável, de modo que o grau de ligação e redução dos mesmos possa ser avaliado através de detecção do marcador ou rótulo. Em algumas modalidades, a adição do anticorpo fornecido em excesso, por exemplo, excesso de 1, 2, 5, 10, 50 ou 100 vezes comparado com a quantidade ou concentração do anticorpo de referência, inibe a ligação a antígeno pelo anticorpo de referência (ou vice-versa). Em algumas modalidades, a inibição da ligação é de pelo menos 50% e, em algumas modalidades, de pelo menos 75%, 90% ou 99%. Em alguns aspectos, a inibição competitiva é medida em um ensaio de ligação competitiva (consulte, por exemplo, Junghans et al., Cancer Res. 1990: 50: 1495- 1502). Os ensaios de competição podem ser usados para identificar um anticorpo que compete com qualquer um dos anticorpos descritos no presente documento. Ensaios para mapear epitopos ligados pelos anticorpos e anticorpos de referência também podem ser usados e são conhecidos.

[00324] Em algumas modalidades, onde o anticorpo de referência está presente em uma concentração de ou de cerca de 2 nM, o anticorpo fornecido inibe a ligação do anticorpo de referência com uma IC50 de menos de igual ou cerca de 200 nM, 150 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM ou 10 nM ou menos de igual ou cerca de 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM ou 5 nM. Em algumas modalidades, onde o anticorpo fornecido está presente em uma concentração de ou cerca de 2 nM, o anticorpo de referência inibe a ligação do anticorpo fornecido com uma

IC50 de menos de igual ou cerca de 200 nM, 150 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM ou 10 nM ou menos de igual ou cerca de 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM ou 5 nM. Em algumas modalidades, a inibição competitiva da ligação do anticorpo de referência pelo anticorpo fornecido (ou vice-versa) é igual ou aproximadamente ou pelo menos no mesmo grau que o grau de inibição competitiva da ligação do anticorpo de referência pelo próprio anticorpo de referência, por exemplo, anticorpo de referência não marcado. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido inibe a ligação do anticorpo de referência, tal como a ligação de scFv R12, à ROR1 humana em pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%.

[00325] Os anticorpos anti-ROR1 fornecidos no presente documento podem ser identificados, rastreados ou caracterizados por suas propriedades físicas/químicas e/ou atividades biológicas através de vários ensaios conhecidos. Em um aspecto, o anticorpo é testado quanto à sua atividade de ligação a antígeno, por exemplo, através de métodos conhecidos, tais como ELISA, Western blotting e/ou ensaios de citometria de fluxo, incluindo ensaios de ligação com base em células, por exemplo, ao avaliar a ligação do anticorpo (por exemplo, conjugado a um marcador fluorescente ou marcado) a uma célula que expressa o antígeno alvo, por exemplo, ROR1, em alguns casos comparado com os resultados usando células que não expressam o antígeno alvo, por exemplo, ROR1, ou células que expressam um antígeno diferente, por exemplo, ROR2. A afinidade de ligação pode ser medida como a KD, KA ou EC50.

3. Variantes

[00326] Em determinadas modalidades, os anticorpos incluem uma ou mais variações de aminoácidos, por exemplo, substituições,

eliminações, inserções e/ou mutações comparado com a sequência de um anticorpo descrito no presente documento. Variantes exemplificativas incluem aquelas concebidas para melhorar a afinidade de ligação e/ou outras propriedades biológicas do anticorpo. As variantes da sequência de aminoácidos de um anticorpo podem ser preparadas ao introduzir modificações apropriadas na sequência de nucleotídeos que codifica o anticorpo ou através de síntese de peptídeos. Estas modificações incluem, por exemplo, eliminações e/ou inserções e/ou substituições de resíduos nas sequências de aminoácidos do anticorpo. Qualquer combinação de eliminação, inserção e substituição pode ser feita para chegar à construção final, contanto que a construção final possua as características desejadas, por exemplo, ligação a antígeno.

[00327] Em determinadas modalidades, os anticorpos incluem uma ou mais substituições de aminoácidos, por exemplo, comparado com uma sequência de anticorpo descrita no presente documento e/ou comparado com uma sequência de um repertório natural, por exemplo, repertório humano. Os locais de interesse para mutagênese por substituição incluem as CDRs e as FRs. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em um anticorpo de interesse e os produtos selecionados quanto a uma atividade desejada, por exemplo, ligação a antígeno retida/aumentada, imunogenicidade diminuída, meia- vida aumentada e/ou função efetora aumentada, tal como a capacidade de promover a citotoxicidade celular dependente de anticorpo (ADCC) ou citotoxicidade dependente de complemento (CDC).

[00328] Em algumas modalidades, um ou mais resíduos dentro de uma CDR de um anticorpo precursor (por exemplo, um anticorpo humanizado ou humano) é/são substituídos. Em algumas modalidades, a substituição é feita para reverter uma sequência ou posição na sequência para uma sequência de linhagem germinativa, tal como uma sequência de anticorpo encontrada na linhagem germinativa (por exemplo, linhagem germinativa humana), por exemplo, para reduzir a probabilidade de imunogenicidade, por exemplo, após administração a um ser humano.

[00329] Em algumas modalidades, as alterações são feitas em "pontos de acesso" de CDR, resíduos codificados por códons que sofrem mutação em alta frequência durante o processo de maturação somática (consulte, por exemplo, Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207: 179-196 (2008)), e/ou resíduos que contatam o antígeno, com a variante de VH ou VL resultante sendo testada quanto à afinidade de ligação. A maturação por afinidade por construção e nova seleção de bibliotecas secundárias foi descrita, por exemplo, em Hoogenboom et al. em Methods in Molecular Biology 178: 1-37 (O’Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001)). Em algumas modalidades de maturação por afinidade, a diversidade é introduzida nos genes variáveis escolhidos para maturação através de qualquer um de uma variedade de métodos (por exemplo, PCR propensa a erros, embaralhamento de cadeias ou mutagênese dirigida por oligonucleotídeo). Uma biblioteca secundária é, então, criada. A biblioteca é, então, rastreada para identificar quaisquer variantes de anticorpos com a afinidade desejada. Outro método para introduzir diversidade envolve abordagens direcionadas à CDR, nas quais vários resíduos de CDR (por exemplo, 4-6 resíduos de cada vez) são randomizados. Os resíduos de CDR envolvidos na ligação a antígeno podem ser especificamente identificados, por exemplo, usando mutagênese ou modelagem por varredura de alanina. CDR-H3 e CDR-L3 em particular são frequentemente alvos.

[00330] Em determinadas modalidades, substituições, inserções ou eliminações podem ocorrer em uma ou mais CDRs, contanto que tais alterações não reduzam substancialmente a capacidade do anticorpo de se ligar ao antígeno. Por exemplo, alterações conservativas (por exemplo, substituições conservativas conforme fornecido no presente documento) que não reduzem substancialmente a afinidade de ligação podem ser feitas em CDRs. Tais alterações podem, por exemplo, estar fora dos resíduos de contato com o antígeno nas CDRs. Em determinadas modalidades das sequências variantes de VH e VL fornecidas acima, cada CDR está inalterada ou contém não mais do que uma, duas ou três substituições de aminoácidos.

[00331] As inserções de sequência de aminoácidos incluem fusões amino e/ou carboxila terminais que variam, quanto ao comprimento, de um resíduo a polipeptídeos que contêm cem ou mais resíduos, bem como inserções intra-sequência de resíduos de um único ou múltiplos aminoácidos. Exemplos de inserções terminais incluem um anticorpo com um resíduo de metionila N-terminal. Outras variantes de inserção da molécula de anticorpo incluem a fusão N- ou C-término a uma enzima ou polipeptídeo que aumenta a meia-vida sérica do anticorpo.

4. Modificações

[00332] Em determinadas modalidades, o anticorpo é alterado para aumentar ou diminuir a extensão até a qual o anticorpo é glicosilado, por exemplo, ao remover ou inserir um ou mais sítios de glicosilação, alterar a sequência de aminoácidos e/ou modificar o(s) oligossacarídeo(s) ligado(s) aos sítios de glicosilação, por exemplo, usando determinadas linhagens de células.

[00333] Em algumas modalidades, uma glicosilação N-ligada, a qual é um sítio de glicosilação que ocorre nas asparaginas na sequência de consenso -Asn-Xaa-Ser/Thr, é removida ou inserida. Em algumas modalidades, um ou mais são substituídos por outro aminoácido para remover o sítio de glicosilação.

[00334] Modificações, variantes e linhagens de células exemplificativas são descritas, por exemplo, nas Publicações de Patentes Norte-Americanas Nos 2003/0157108, US 2004/0093621, US

2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al., J. Mol. Biol. 336: 1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004). Ripka et al., Arc. Biochem. Biophys. 249: 533-545 (1986); Pedido de Patente Norte-Americana N° US 2003/0157108 A1, Presta, L.; e documento WO 2004/056312 A1, Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94 (4): 680-688 (2006); e documentos WO2003/085107); WO 2003/011878 (Jean-Mairet et al.); Patente Norte-Americana N° 6.602.684 (Umana et al.); e documentos US 2005/0123546 (Umana et al.); WO 1997/30087 (Patel et al.); WO 1998/58964 (Raju, S.); e WO 1999/22764 (Raju, S.).

[00335] Dentre os anticorpos modificados estão aqueles que têm uma ou mais modificações de aminoácidos na região Fc, tais como aqueles que têm uma sequência de região Fc humana ou outra porção de uma região constante (por exemplo, uma região Fc de IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 humana) que compreende uma modificação de aminoácido (por exemplo, uma substituição) em uma ou mais posições de aminoácidos.

[00336] Tais modificações podem ser feitas, por exemplo, para melhorar a meia-vida, alterar a ligação a um ou mais tipos de receptores Fc e/ou alterar funções efetoras.

[00337] Também dentre as variantes estão anticorpos manipulados com cisteína, tais como "tioMAbs" e outras variantes manipuladas com cisteína, em que um ou mais resíduos de um anticorpo são substituídos por resíduos de cisteína, a fim de gerar grupos tiol reativos em locais acessíveis, por exemplo, para uso na conjugação de agentes e agentes de ligação, para produzir imunoconjugados. Anticorpos manipulados com cisteína são descritos, por exemplo, nas Patentes Norte- Americanas Nos 7.855.275 e 7.521.541.

[00338] Em algumas modalidades, os anticorpos são modificados para conter porções não proteicas adicionais, incluindo polímeros solúveis em água. Polímeros exemplificativos incluem, porém sem limitações, polietileno glicol (PEG), copolímeros de etileno glicol/propileno glicol, carboximetilcelulose, dextrana, álcool polivinílico, polivinilpirrolidona, poli-1,3-dioxolano, poli-1,3,6-trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos (homopolímeros ou copolímeros aleatórios) e dextrana ou poli(n-vinil pirrolidona)polietileno glicol, homopolímeros de polipropileno glicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, polióis polioxietilados (por exemplo, glicerol), álcool polivinílico e misturas dos mesmos. O polietileno glicol/propionaldeído pode apresentar vantagens na fabricação em virtude de sua estabilidade em água. O polímero pode ter qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou não ramificado. O número de polímeros ligados ao anticorpo pode variar e, se mais de um polímero estiver ligado, eles podem ser moléculas iguais ou diferentes. Em geral, o número e/ou tipo de polímeros usados para derivatização pode ser determinado com base em considerações incluindo, porém sem limitações, propriedades ou funções particulares do anticorpo a ser aprimorado, se o derivado de anticorpo será usado em uma terapia sob condições definidas, etc. B. Imunoconjugados

[00339] Em algumas modalidades, o anticorpo é ou faz parte de um imunoconjugado, no qual o anticorpo é conjugado a uma ou mais moléculas heterólogas tais como, porém sem limitações, um agente citotóxico ou de imagiologia. Os agentes citotóxicos incluem, porém sem limitações, isótopos radioativos (por exemplo, At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu); agentes quimioterapêuticos (por exemplo, metotrexato, adriamicina, vinca alcaloides (vincristina, vinblastina, etoposídeo), doxorrubicina, melfalano, mitomicina C, clorambucil, daunorrubicina ou outros agentes intercalantes); agentes inibidores do crescimento; enzimas e fragmentos das mesmas, tais como enzimas nucleolíticas; antibióticos; toxinas, tais como toxinas de moléculas pequenas ou toxinas enzimaticamente ativas. Em algumas modalidades, o anticorpo é conjugado a um ou mais agentes citotóxicos, tais como agentes quimioterapêuticos ou fármacos, agentes inibidores de crescimento, toxinas (por exemplo, toxinas de proteínas, toxinas enzimaticamente ativas de origem bacteriana, fúngica, vegetal ou animal ou fragmentos das mesmas) ou isótopos radioativos.

[00340] Dentre os imunoconjugados estão os conjugados anticorpo- fármaco (ADCs), em que um anticorpo é conjugado a um ou mais fármacos incluindo, porém sem limitações um maitansinoide (consulte Patentes Norte-Americanas Nos 5.208.020, 5.416.064 e Patente Europeia EP 0 425 235 B1); uma auristatina, tais como porções DE e DF do fármaco monometilauristatina (MMAE e MMAF) (consulte Patentes Norte-Americanas Nos 5.635.483 e 5.780.588 e 7.498.298); uma dolastatina; uma caliqueamicina ou derivado da mesma (consulte Patentes Norte-Americanas Nos 5.712.374, 5.714.586, 5.739.116,

5.767.285, 5.770.701, 5.770.710, 5.773.001 e 5.877.296; Hinman et al., Cancer Res. 53: 3336-3342 (1993); e Lode et al., Cancer Res. 58: 2925- 2928 (1998)); uma antraciclina, tal como daunomicina ou doxorrubicina (consulte Kratz et al., Current Med. Chem. 13: 477-523 (2006); Jeffrey et al., Bioorganic & Med. Chem. Letters 16: 358-362 (2006); Torgov et al., Bioconj. Chem. 16: 717-721 (2005); Nagy et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 829-834 (2000); Dubowchik et al., Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002); King et al., J. Med. Chem. 45: 4336-4343 (2002); e Patente Norte-Americana N° 6.630.579); metotrexato;

vindesina; um taxano, tal como docetaxel, paclitaxel, larotaxel, tesetaxel e ortataxel; um tricoteceno; e CC1065.

[00341] Também dentre os imunoconjugados estão aqueles nos quais o anticorpo é conjugado com uma toxina enzimaticamente ativa ou fragmento da mesma incluindo, porém sem limitações, a cadeia A de difteria, fragmentos ativos não ligados da toxina de difteria, cadeia A de exotoxina (de Pseudomonas aeruginosa), cadeia A de ricina, cadeia A de abrina, cadeia A de modeccina, alfa-sarcina, proteínas de Aleurites fordii, proteínas diantina, proteínas de Phytolaca americana (PAPI, PAPII e PAP-S), inibidor de Momordica charantia, curcina, crotina, inibidor de Sapaonaria officinalis, gelonina, mitogelina, restrocina, fenomicina, enomicina e os tricotecenos.

[00342] Também dentre os imunoconjugados estão aqueles nos quais o anticorpo é conjugado a um átomo radioativo para formar um radioconjugado. Isótopos radioativos exemplificativos incluem At211, I131, I125, Y90, Re186, Re188, Sm153, Bi212, P32, Pb212 e isótopos radioativos de Lu.

[00343] Os conjugados de um anticorpo e agente citotóxico podem ser feitos usando qualquer um de uma série de agentes de acoplamento de proteína conhecidos, por exemplo, ligantes (consulte Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)), documento WO94/11026. O ligante pode ser um "ligante clivável" que facilita a liberação de um fármaco citotóxico na célula, tais como ligantes instáveis a ácidos, ligantes sensíveis à peptidase, ligantes fotolábeis, ligantes de dimetila e ligantes que contêm dissulfeto (Chari et al., Cancer Res. 52:127-131 (1992); Patente Norte- Americana N° 5.208.020). C. Anticorpos Multiespecíficos

[00344] Em determinadas modalidades, as moléculas de ligação à ROR1, por exemplo, anticorpos ou polipeptídeos, tais como receptores quiméricos que contém os mesmos, são multiespecíficas. Dentre as moléculas de ligação multiespecíficas estão anticorpos multiespecíficos incluindo, por exemplo, biespecíficos. Parceiros de ligação multiespecíficos, por exemplo, anticorpos, têm especificidades de ligação por pelo menos dois sítios diferentes, os quais podem estar no mesmo antígeno ou em antígenos diferentes. Em determinadas modalidades, uma das especificidades de ligação é pela ROR1 e a outra é por outro antígeno. Em determinadas modalidades, os anticorpos biespecíficos podem se ligar a dois epitopos diferentes da ROR1. Os anticorpos biespecíficos também podem ser usados para localizar agentes citotóxicos em células que expressam ROR1. Os anticorpos biespecíficos podem ser preparados como anticorpos de comprimento total ou fragmentos de anticorpos. Dentre os anticorpos multiespecíficos estão anticorpos multiespecíficos com uma única cadeia, por exemplo, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di-scFvs em tandem e tri-scFvs em tandem. Também são fornecidos receptores quiméricos multiespecíficos, tais como CARs multiespecíficos, que contêm os anticorpos. Também são fornecidas células multiespecíficas que contêm os anticorpos ou polipeptídeos que incluem as mesmas, tais como células que contêm uma proteína da superfície celular que inclui o anticorpo anti-ROR1 e uma proteína da superfície celular adicional, tal como um receptor quimérico adicional, que se liga a um antígeno diferente ou um epitopo diferente na ROR1.

[00345] Antígenos adicionais exemplificativos incluem antígenos específicos para células B, outros antígenos específicos para tumor, tais como antígenos expressos especificamente em ou associados à leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), aguda leucemia linfocítica (ALL), linfoma de Burkitt, linfoma de células do manto (MCL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama,

câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e/ou câncer de cabeça e pescoço e antígenos expressos em células T. Antígenos exemplificativos incluem CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, tenascina, um fator de angiogênese, VEGF, PIGF, ED-B fibronectina, um oncogene, um produto de oncogene, CD66a-d, antígenos de necrose, Ii, IL-2, T101, TAC, IL- 6, TRAIL-R1 (DR4) e TRAIL-R2 (DR5). D. Receptores Recombinantes

[00346] Dentre as moléculas de ligação fornecidas, por exemplo, moléculas de ligação à ROR1, estão proteínas da superfície celular, tais como receptores recombinantes, tais como aqueles que incluem um dos anticorpos fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Também são fornecidos polinucleotídeos que codificam a na totalidade ou uma porção de tais proteínas da superfície celular, por exemplo, receptores. Os receptores incluem receptores antigênicos e outros receptores quiméricos que se ligam especificamente à ROR1, tais como receptores que contêm os anticorpos anti-ROR1 fornecidos, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno. Dentre os receptores antigênicos estão os receptores antigênicos não-TCR funcionais, tais como receptores antigênicos quiméricos (CARs). Os receptores de ligação à ROR1 geralmente contêm anticorpos (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno) e/ou outros peptídeos de ligação que se ligam especificamente à ROR1, tais como proteínas ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Também são fornecidas células que expressam os receptores recombinantes, composições que contêm tais células e seus usos em terapia de células adotivas, tal como no tratamento de doenças e transtornos associados à expressão de ROR1, composições e artigos de manufatura e usos dos mesmos.

[00347] Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam receptores recombinantes, tais como receptores antigênicos, que se ligam especificamente à ROR1. Em alguns aspectos, também são fornecidos receptores codificados, tais como aqueles que contém polipeptídeos de ligação à ROR1 e composições e artigos de manufatura e usos dos mesmos. Os polinucleotídeos fornecidos podem ser incorporados em construções, tais como construções de ácido desoxirribonucleico (DNA) ou de RNA, tais como aquelas que podem ser introduzidas em células para expressão dos receptores de ligação à ROR1 recombinantes codificados. Receptores Exemplificativos

[00348] As proteínas da superfície celular de ligação à ROR1 fornecidas, tais como receptores, geralmente contêm um domínio de ligação a antígeno extracelular e uma região de sinalização intracelular. Dentre os receptores fornecidos, por exemplo, receptores recombinantes, estão polipeptídeos que contêm os anticorpos fornecidos ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tal como um ou mais dos anticorpos anti-ROR1 fornecidos ou fragmento dos mesmos. Em algumas modalidades, as proteínas da superfície celular fornecidas se ligam especificamente à ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana.

[00349] Dentre os receptores antigênicos estão os receptores antigênicos não-TCR quiméricos e/ou funcionais, tais como os receptores antigênicos quiméricos (CARs). Os receptores quiméricos, tais como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação a antígeno extracelular que inclui, é ou compreende um anticorpo anti-ROR1, tal como um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento do mesmo descrito no presente documento. Em algumas modalidades, os receptores quiméricos, por exemplo, CARs, incluem um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, os receptores quiméricos também incluem um espaçador e/ou um domínio transmembrana. Em algumas modalidades, o espaçador está localizado entre o domínio de ligação a antígeno extracelular e o domínio transmembrana. Em algumas modalidades, o CAR contém um domínio de ligação a antígeno extracelular, um espaçador, uma região transmembrana e uma região de sinalização intracelular. CARs exemplificativos fornecidos no presente documento incluem aqueles que contêm um domínio de ligação a antígeno que compreende um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento, por exemplo, na Seção IA e/ou na Tabela 2 ou aqueles descritos na Seção ID no presente documento, na Tabela 3 e/ou na Tabela E1. Também são fornecidos CARs codificados pelos polinucleotídeos descritos na Seção I.E no presente documento, na Tabela 3 e/ou na Tabela E1.

[00350] Em alguns casos, os CARs são denominados de CARs de primeira, segunda e/ou terceira gerações. Em alguns aspectos, um CAR de primeira geração é aquele que fornece apenas um sinal induzido pela cadeia de CD3 mediante ligação a antígeno; em alguns aspectos, um CAR de segunda geração é aquele que fornece tal sinal e um sinal coestimulador, tal como um incluindo um domínio de sinalização intracelular de um receptor coestimulador, tal como CD28 ou CD137; em alguns aspectos, um CAR de terceira geração é, em alguns aspectos, aquele que inclui vários domínios coestimuladores de diferentes receptores coestimuladores.

[00351] Em algumas modalidades, o CAR contém um domínio de ligação a antígeno extracelular, em alguns casos que compreende um anticorpo, por exemplo, um fragmento de anticorpo que se liga à ROR1, um domínio transmembrana que é ou contém uma porção transmembrana de CD28 ou uma variante funcional do mesmo e um domínio de sinalização intracelular que contém uma porção de sinalização de CD28 ou variante funcional do mesmo e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou variante funcional do mesmo. Em algumas modalidades, o CAR contém um domínio de ligação a antígeno extracelular, em alguns casos que compreende um anticorpo, por exemplo, fragmento de anticorpo que se liga à ROR1, um domínio transmembrana que é ou contém uma porção transmembrana de CD28 ou uma variante funcional do mesmo e um domínio de sinalização intracelular que contém uma porção de sinalização de uma 4-1BB ou variante funcional do mesmo e uma porção de sinalização de CD3 zeta ou variante funcional do mesmo. Em algumas destas modalidades, o receptor inclui ainda um espaçador que contém uma porção de uma molécula de Ig, tal como uma molécula de Ig humana, tal como uma dobradiça de Ig, por exemplo, uma dobradiça de IgG4, tal como um espaçador de dobradiça apenas.

[00352] Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico inclui uma porção extracelular que contém o anticorpo ou fragmento do mesmo descrito no presente documento. Em alguns aspectos, o receptor antigênico quimérico inclui uma porção extracelular que contém o anticorpo ou fragmento do mesmo descrito no presente documento e um domínio de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento do mesmo inclui um scFv e a região de sinalização intracelular contém um ITAM. Em alguns aspectos, o domínio de sinalização intracelular inclui um domínio de sinalização de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ). Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico inclui um domínio transmembrana que liga o domínio extracelular e o domínio de sinalização intracelular.

[00353] Outros receptores antigênicos exemplificativos, incluindo

CARs e métodos para manipulação e introdução de tais receptores em células, incluem aqueles descritos, por exemplo, nos documentos WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/12306, Publicações de Patente Norte-Americanas Nos US2002131960, US2013287748, US20130149337, Patentes Norte-Americanas Nºs: 6.451.995,

7.446.190, 8.252.592, 8.339.645, 8.398.282, 7.446.179, 6.410.319,

7.070.995, 7.265.209, 7.354.762, 7.446.191, 8.324.353 e 8,479,118 e o Pedido de Patente Europeia EP2537416, e/ou aqueles descritos por Sadelain et al., Cancer Discov. Abril de 2013; 3 (4): 388–398; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338; Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., Outubro de 2012; 24 (5): 633-39; Wu et al., Cancer, 18 de março de 2012 (2): 160-75. Em alguns aspectos, os receptores antigênicos incluem um CAR conforme descrito na Patente Norte-Americana N°

7.446.190 e aqueles descritos no documento WO/2014055668 A1. Exemplos dos CARs incluem CARs conforme descrito em qualquer uma das publicações supracitadas, tais como os documentos WO2014031687, US 8.339.645, US 7.446.179, US 2013/0149337, Patente Norte-Americana N° 7.446.190, Patente Norte-Americana N°

8.389.282, por exemplo, e em que a porção de ligação a antígeno, por exemplo, scFv, é substituída por um anticorpo, por exemplo, conforme fornecido no presente documento.

[00354] Outros CARs que têm como alvo a ROR1 são descritos, por exemplo, por Hudecek et al., Clin Cancer Res, 19 (12), 3153-3164 (2013) e Baskar et al., MAbs. 4 (3): 349-361 (2012). Consulte também documentos WO2014031687; US2012/20058051. Domínio de Ligação a Antígeno Extracelular

[00355] Dentre os receptores quiméricos estão os receptores antigênicos quiméricos (CARs). Os receptores quiméricos, tais como CARs, geralmente incluem um domínio de ligação a antígeno extracelular que inclui, é ou está compreendido em um ou mais dos anticorpos anti-ROR1 fornecidos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Assim, os receptores quiméricos, por exemplo, CARs, normalmente incluem em suas porções extracelulares uma ou mais moléculas de ligação à ROR1, tal como um ou mais fragmentos de ligação a antígeno, domínio ou porção ou um ou mais domínios variáveis de anticorpo e/ou anticorpo moléculas, tais como aquelas descritas no presente documento. Em algumas modalidades, o CAR inclui uma porção ou porções de ligação à ROR1 da molécula de anticorpo, tal como uma região variável de cadeia pesada (VH) e/ou região de variável de cadeia leve (VL) do anticorpo, por exemplo, um scFv. Em algumas modalidades, o CAR inclui uma porção ou porções de ligação à ROR1 da molécula de anticorpo, tal como uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região de variável de cadeia leve (VL) do anticorpo, por exemplo, um scFv. Em alguns aspectos, o CAR inclui um ou mais de qualquer um dos anticorpos de ligação à ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos descritos no presente documento, por exemplo, na Seção I.A.

[00356] Em algumas modalidades, a Tabela 2 fornece a SEQ ID Nºs: de exemplos de domínios de ligação a antígeno, tais como anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno, que podem ser compreendidos nos receptores de ligação à ROR1 fornecidos, tais como receptores antigênicos quiméricos anti-ROR1 (CARs). Em alguns aspectos, o CAR compreende um scFv descrito na Tabela 2, por exemplo, como uma parte do domínio de ligação a antígeno extracelular. Em alguns aspectos, o CAR compreende uma região VH descrita na Tabela 2, por exemplo, como uma parte do domínio de ligação a antígeno extracelular. Em alguns aspectos, o CAR compreende uma região VL descrita na Tabela 2, por exemplo, como uma parte do domínio de ligação a antígeno extracelular. Em algumas modalidades, o receptor de ligação à ROR1 contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo que compreende uma região VH que compreende uma sequência de CDR-H1, CDR-H2 e CDR-H3 e uma região VL que compreende uma sequência de CDR-L1, CDR-L2 e CDR-L3 apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2. Em algumas modalidades, o receptor de ligação à ROR1 contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo que compreende uma sequência de região VH e uma sequência de região VL apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha de Tabela 2 ou um anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos das regiões VH e VL que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência com a sequência de região VH e a sequência de região VL apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2. Em algumas modalidades, o receptor de ligação à ROR1 contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo que compreende uma sequência de região VH e uma sequência de região VL apresentadas em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2. Em algumas modalidades, o receptor de ligação à ROR1 contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo que compreende uma sequência scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2 ou um anticorpo que compreende uma sequência de aminoácidos de scFv que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência de scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2. Em algumas modalidades, o receptor de ligação à ROR1 contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo que compreende uma sequência scFv apresentada em SEQ ID Nºs: listadas em cada linha da Tabela 2.

[00357] Em algumas modalidades, os CARs fornecidos podem incluir um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém a na totalidade ou uma porção de um anticorpo, incluindo anticorpos policlonais e monoclonais, incluindo anticorpos intactos e fragmentos de anticorpo funcionais (ligação a antígeno), incluindo fragmentos de ligação a antígeno (Fab), fragmentos F(ab')2, fragmentos Fab', fragmentos Fv, fragmentos de IgG recombinante (rIgG), regiões variáveis de cadeia pesada (VH) capazes de se ligar especificamente ao antígeno, fragmentos de anticorpo com uma única cadeia, incluindo fragmentos variáveis com uma única cadeia (scFv), e fragmentos de anticorpos com um único domínio (por exemplo, sdAb, sdFv, nanocorpo). Em alguns aspectos, o anticorpo ou fragmento do mesmo contido nos CARs incluem formas geneticamente modificadas e/ou de outra forma modificadas de imunoglobulinas, tais como intracorpos, pepticorpos, anticorpos quiméricos, anticorpos totalmente humanos, anticorpos humanizados e anticorpos heteroconjugados, multiespecíficos, por exemplo, biespecíficos ou triespecíficos, anticorpos, diacorpos, triacorpos e tetracorpos, di-scFv em tandem, tri- scFv em tandem. b. Espaçador

[00358] Em algumas modalidades, o receptor recombinante, tal como o CAR, tal como a porção de anticorpo do mesmo, inclui ainda um espaçador (em alguns casos também denominado de região espaçadora) que pode ser ou incluir pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou variante ou versão modificada da mesma, tal como uma região de dobradiça, por exemplo, uma região de dobradiça de IgG4 e/ou uma região CH1/CL, CH2 e/ou CH3 e/ou Fc. Em algumas modalidades, a região ou porção constante é de uma IgG humana, tal como IgG4, IgG2 ou IgG1. Em alguns aspectos, a porção de região constante serve como um espaçador entre o componente de reconhecimento antigênico, por exemplo, scFv, e o domínio transmembrana.

[00359] Em algumas modalidades, o comprimento do espaçador é ajustado para otimizar a distância de sinapse biofísica entre a célula que expressa CAR, tal como uma célula que expressa CAR e o alvo do CAR, tal como uma célula tumoral que expressa ROR1. Em algumas modalidades, o CAR é expresso por uma célula T e o comprimento do espaçador é ajustado para um comprimento que seja compatível para a ativação das células T ou para otimizar o desempenho das células T do CAR.

[00360] Em algumas modalidades, o espaçador pode ser de um comprimento que confere maior capacidade de resposta da célula quando de ligação ao antígeno comparado com a ausência do espaçador ou comparado com um espaçador alternativo de comprimento diferente (por exemplo, de comprimento mais longo). Em alguns exemplos, o espaçador tem igual ou cerca de 12 aminoácidos de comprimento ou não tem mais de ou cerca de 12 aminoácidos de comprimento. Em alguns exemplos, o espaçador tem igual ou cerca de 15 aminoácidos de comprimento ou não tem mais de ou cerca de 15 aminoácidos de comprimento.

[00361] Espaçadores exemplificativos incluem aqueles que têm pelo menos igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 229 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 200 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 175 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 150 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 125 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 100 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de ou cerca de 75 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 50 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 40 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 30 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 20 aminoácidos ou igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 15 aminoácidos de comprimento e incluindo qualquer número inteiro entre os pontos finais de qualquer uma das faixas listadas. Espaçadores exemplificativos incluem aqueles que têm pelo menos igual ou cerca de 50 a igual ou cerca de 175 aminoácidos, igual ou cerca de 50 a igual ou cerca de 150 aminoácidos, igual ou cerca de 10 a igual ou cerca de 125 aminoácidos, igual ou cerca de 50 a igual ou cerca de 100 aminoácidos, igual ou cerca de 100 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 100 a igual ou cerca de 250 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 250 aminoácidos ou a igual ou cerca de 200 a igual ou cerca de 250 aminoácidos e incluindo qualquer número inteiro entre os pontos finais de qualquer uma das faixas listadas. Em algumas modalidades, um espaçador tem pelo menos igual ou cerca de 12 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 119 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 125 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 200 aminoácidos ou pelo menos igual ou cerca de 220 aminoácidos ou pelo menos igual ou cerca de 225 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um espaçador tem pelo menos igual ou cerca de 13 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 120 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 125 aminoácidos, pelo menos igual ou cerca de 200 aminoácidos ou pelo menos igual ou cerca de 220 aminoácidos ou pelo menos igual ou cerca de 229 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, um espaçador tem cerca de 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25 aminoácidos ou menos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador tem pelo menos igual ou cerca de 100 aminoácidos de comprimento, tal como pelo menos igual ou cerca de 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 ou 250 aminoácidos de comprimento.

[00362] Em algumas modalidades, o espaçador tem pelo menos igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 250 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 230 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 200 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 180 aminoácidos, igual ou cerca de 125 a igual ou cerca de 150 aminoácidos, igual ou cerca de 150 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 150 a igual ou cerca de 250 aminoácidos, igual ou cerca de 150 a igual ou cerca de 230 aminoácidos, igual ou cerca de 150 a igual ou cerca de 200 aminoácidos, igual ou cerca de 150 a igual ou cerca de 180 aminoácidos, igual ou cerca de 180 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 180 a igual ou cerca de 250 aminoácidos, igual ou cerca de 180 a igual ou cerca de 230 aminoácidos, igual ou cerca de 180 a igual ou cerca de 200 aminoácidos, igual ou cerca de 200 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 200 a igual ou cerca de 250 aminoácidos, igual ou cerca de 200 a igual ou cerca de 230 aminoácidos, igual ou cerca de 230 a igual ou cerca de 300 aminoácidos, igual ou cerca de 230 a igual ou cerca de 250 aminoácidos de comprimento ou 250 a igual ou cerca de 300 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador é pelo menos igual ou cerca de 129, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 ou 230 aminoácidos de comprimento ou um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

[00363] Espaçadores exemplificativo incluem uma dobradiça de IgG apenas, uma dobradiça de IgG ligada a um ou mais de um domínio CH2 e CH3 ou dobradiça de IgG ligada ao domínio CH3. Em algumas modalidades, o espaçador inclui uma dobradiça de IgG apenas. Em algumas modalidades, a dobradiça de IgG, CH2 e/ou CH3 pode ser derivada total ou parcialmente de IgG4 ou IgG2, tal como a totalidade ou parte de IgG4 humana ou IgG2 humana. Em algumas modalidades,

o espaçador pode ser um polipeptídeo quimérico que contém uma ou mais de uma dobradiça, sequência(s) de CH2 e/ou CH3 derivada(s) de IgG4, IgG2 e/ou IgG2 e IgG4. Em algumas modalidades, a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4. Em algumas modalidades, a região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4 e/ou de uma região de dobradiça de IgG2, em que a região de dobradiça de IgG4 é opcionalmente uma região de dobradiça de IgG4 humana e a região de dobradiça de IgG2 é opcionalmente uma região de dobradiça de IgG2 humana; a região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4 e/ou de uma região CH2 de IgG2, em que a região CH2 de IgG4 é opcionalmente uma região CH2 de IgG4 humana e a região CH2 de IgG2 é opcionalmente uma região CH2 de IgG2 humana; e/ou a região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 e/ou de uma região CH3 de IgG2, em que a região CH3 de IgG4 é opcionalmente uma região CH3 de IgG4 humana e a região CH3 de IgG2 é opcionalmente uma região CH3 de IgG2 humana.

Em algumas modalidades, a dobradiça, CH2 e CH3 compreende a totalidade ou uma porção de cada uma de uma região de dobradiça, CH2 e CH3 de IgG4. Em algumas modalidades, a região de dobradiça é quimérica e compreende uma região de dobradiça de IgG4 humana e IgG2 humana; a região CH2 é quimérica e compreende uma região CH2 de IgG4 humana e IgG2 humana; e/ou a região CH3 é quimérica e compreende uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana.

Em algumas modalidades, o espaçador compreende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com a região de dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de IgG2/4 humana; e uma região CH3 de IgG4 humana.

[00364] Em algumas modalidades, o espaçador compreende ou consiste na totalidade ou uma porção de uma dobradiça de imunoglobulina ou uma versão modificada da mesma. Em algumas modalidades, o espaçador tem cerca de 15 aminoácidos ou menos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador compreende ou consiste na totalidade ou uma porção de uma dobradiça de imunoglobulina, opcionalmente, uma dobradiça de IgG4 ou uma versão modificada da mesma e/ou compreende cerca de 15 aminoácidos ou menos. Em algumas modalidades, o espaçador tem cerca de 13 aminoácidos de comprimento e/ou compreende ou consiste na totalidade ou uma porção de uma dobradiça de imunoglobulina, opcionalmente uma IgG4 ou uma versão modificada da mesma. Em algumas modalidades, o espaçador tem ou tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento e/ou compreende ou consiste na totalidade ou uma porção de uma dobradiça de imunoglobulina, opcionalmente uma IgG4 ou uma versão modificada da mesma. Em algumas modalidades, o espaçador compreende ou consiste na sequência de SEQ ID Nº: 1, 26, 27, 28, 29, 31, 32, 33 ou 135 ou uma variante de qualquer uma das anteriores que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência. Em algumas modalidades, o espaçador compreende a fórmula X1PPX2P (SEQ ID Nº: 25), em que X1 é glicina, cisteína ou arginina e X2 é cisteína ou treonina. Em algumas modalidades, o espaçador não compreende uma região extracelular de CD28 ou uma região extracelular de CD8. Em determinados casos, o espaçador tem um resíduo de metionina no C-término.

[00365] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 1. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 2 ou 30 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 2 ou 30. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 30.

[00366] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 192 ou 136 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 192 ou 136. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 136.

[00367] Em algumas modalidades, o espaçador é ou compreende a dobradiça de IgG ligada ao domínio CH3, por exemplo, de uma imunoglobulina humana, tal como IgG4 e/ou IgG2. Em alguns aspectos, o espaçador tem cerca de 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ou 125 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores. Em alguns aspectos, o espaçador tem cerca de 119 ou 120 aminoácidos de comprimento. Em algumas modalidades, o espaçador compreende ou consiste na sequência de SEQ ID Nº: 3 ou 138 ou uma variante de qualquer uma das anteriores que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência.

[00368] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 138. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 193 ou 139 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193 ou 139. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 139.

[00369] Em algumas de tais modalidades, o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 3. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 3. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 4 ou 137 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 4 ou 137. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 137.

[00370] Em algumas modalidades, o espaçador pode ser, no todo ou em parte, de IgG4 e/ou IgG2 e pode conter mutações, tais como uma ou mais mutações de um único aminoácido em um ou mais domínios. Em alguns exemplos, a modificação de aminoácido é uma substituição de uma prolina (P) por uma serina (S) na região de dobradiça de uma IgG4. Em algumas modalidades, a modificação de aminoácido é uma substituição de uma glutamina (Q) por uma asparagina (N) para reduzir a heterogeneidade de glicosilação, tal como uma mutação N177Q na posição 177, na região CH2, da sequência Fc de IgG4 de comprimento completo apresentada em SEQ ID Nº: 48 ou N176Q na posição 176, na região CH2, da sequência Fc de IgG2 de comprimento completo apresentada em SEQ ID Nº: 49. Em algumas modalidades, o espaçador é ou compreende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada; uma região CH2 quimérica de IgG2/4; e uma região CH3 de IgG4 e tem opcionalmente cerca de 228 ou 229 aminoácidos de comprimento; ou um espaçador apresentado em SEQ ID Nº: 37 ou 194.

[00371] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 194. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 194. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 195 ou 196 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195 ou 196. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 196

[00372] Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 37. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 37. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 38 ou 140 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%,

90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 38 ou 140. Em algumas de tais modalidades, o espaçador é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 140.

[00373] Em algumas modalidades, o espaçador é codificado por um polinucleotídeo que foi otimizado para expressão de códons e/ou para eliminar sítios de emenda, tais como sítios de emenda crípticos. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 30. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 136. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 137. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 139. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 140. Em algumas modalidades, a sequência codificadora para o espaçador compreende a sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 196.

[00374] Espaçadores exemplificativos adicionais incluem, porém sem limitações, aqueles descritos em Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19: 3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3 (2): 125- 135 ou documento WO2014031687. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos do espaçador é otimizada para reduzir a heterogeneidade do RNA após expressão. Em algumas modalidades, a sequência de nucleotídeos do espaçador é otimizada para reduzir os sítios de emenda crípticos ou reduzir a probabilidade de um evento de emenda em um sítio de emenda.

[00375] Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 1 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 2. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 135 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 192. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 3 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 4. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 138 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 193. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 37 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 38. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 194 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 195.

[00376] Em algumas modalidades, o espaçador é codificado por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade de RNA, por exemplo, ao remover sítios de emenda crípticos. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 1 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº:

30. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 135 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 136. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 3 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 137. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 138 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 139. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 37 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 140. Em algumas modalidades, o espaçador tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 194 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 196. Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 1, 3 ou 37 e é codificado por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade do RNA. Em algumas modalidades, o espaçador tem uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 135, 138 ou 194 e é codificado por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade do RNA. c. Domínio Transmembrana

[00377] O componente de reconhecimento antigênico geralmente está ligado a um ou mais componentes de sinalização intracelular, tais como componentes de sinalização que mimetizam a ativação por meio de um complexo de receptor antigênico, tal como um complexo de TCR, no caso de um CAR e/ou sinal via outro receptor na superfície celular. Assim, em algumas modalidades, uma molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo) está ligada a um ou mais domínios transmembrana, tais como aqueles descritos no presente documento, e domínios de sinalização intracelular que compreendem um ou mais componentes intracelulares, tais como aqueles descritos no presente documento. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é fundido ao domínio extracelular. Em uma modalidade, um domínio transmembrana que está naturalmente associado a um dos domínios no receptor, por exemplo, CAR, é usado. Em alguns casos, o domínio transmembrana é selecionado ou modificado por meio de substituição de aminoácidos para evitar a ligação de tais domínios aos domínios transmembrana das mesmas ou diferentes proteínas da membrana na superfície para minimizar as interações com outros membros do complexo receptor.

[00378] O domínio transmembrana, em algumas modalidades, é derivado de uma fonte natural ou sintética. Quando a fonte é natural, o domínio é, em alguns aspectos, derivado de qualquer proteína ligada à membrana ou transmembrana. Domínios transmembranas incluem aqueles derivados (ou seja, compreendem pelo menos o(s) domínio(s) transmembrana) da cadeia alfa, beta ou zeta do receptor de células T, CD3 épsilon, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 e/ou CD154. Por exemplo, o domínio transmembrana pode ser um domínio transmembrana de CD28 que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 149, codificada pela sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 147 ou 148. Por exemplo, o domínio transmembrana pode ser um domínio transmembrana de CD28 que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 8, codificada pela sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 197 ou 198. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana do receptor, por exemplo, CAR, é um domínio transmembrana de CD28 humana ou variante do mesmo, por exemplo, um domínio transmembrana de 27 aminoácidos de uma CD28 humana (Nº de

Acesso: P10747.1) ou uma sequência de 28 aminoácidos ou é um domínio transmembrana que compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 8 ou 149 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8 ou 149. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana é codificado por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade de RNA, por exemplo, ao remover sítios de emenda crípticos. Em algumas modalidades, o domínio transmembrana tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 8 ou 149 e é codificado pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 147, 148, 197 ou 198 ou uma sequência polinucleotídica que tem pelo menos 90% de identidade de sequência com as mesmas. Em determinados casos, o domínio transmembrana tem um resíduo de metionina no N-término.

[00379] Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém SEQ ID Nº: 8 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 8. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 197 ou 198 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 197 ou 198. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 198.

[00380] Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém SEQ ID Nº: 149 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 149. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 149. Em algumas das qualquer uma destas modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 147 ou 148 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 147 ou 148. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou contém a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 148.

[00381] Alternativamente, o domínio transmembrana, em algumas modalidades, é sintético. Em alguns aspectos, o domínio transmembrana sintético compreende resíduos predominantemente hidrofóbicos, tais como leucina e valina. Em alguns aspectos, um tripleto de fenilalanina, triptofano e valina será encontrado em cada extremidade de um domínio transmembrana sintético. Em algumas modalidades, a ligação é através de ligantes, espaçadores e/ou domínio(s) transmembrana. d. Componentes de Sinalização Intracelular

[00382] Dentre os domínios de sinalização intracelular estão aqueles que imitam ou aproximam um sinal através de um receptor antigênico natural, um sinal através de tal receptor em combinação com um receptor coestimulador e/ou um sinal através de um receptor coestimulador apenas. Em algumas modalidades, um ligante de oligo- ou polipeptídeo curto, por exemplo, um ligante de entre 2 e 10 aminoácidos de comprimento, tal como um que contém glicinas e serinas, por exemplo, uma dupla de glicina-serina, está presente e forma uma ligação entre o domínio transmembrana e o domínio de sinalização intracelular do CAR.

[00383] O receptor, por exemplo, o CAR, geralmente inclui uma região de sinalização intracelular que compreende pelo menos um componente ou componentes de sinalização intracelular. Em algumas modalidades, o receptor inclui um componente intracelular ou domínio de sinalização de um complexo de TCR, tal como uma cadeia de CD3 de TCR que media a ativação de células T e citotoxicidade, por exemplo, cadeia de CD3 zeta (CD3-ζ). Assim, em alguns aspectos, o anticorpo de ligação à ROR1 está ligado a um ou mais módulos de sinalização celular. Em algumas modalidades, os módulos de sinalização celular incluem um domínio transmembrana de CD3, domínios de sinalização intracelular de CD3 e/ou outros domínios transmembrana CD. Em algumas modalidades, o receptor, por exemplo, CAR, inclui ainda uma porção de uma ou mais moléculas adicionais, tais como o receptor Fcγ, CD8, CD4, CD25 ou CD16. Por exemplo, em alguns aspectos, o CAR inclui uma molécula quimérica entre CD3-zeta (CD3-ζ) ou receptor Fcγ e CD8, CD4, CD25 ou CD16.

[00384] Em algumas modalidades, após a ligação do CAR, o domínio citoplasmático ou região de sinalização intracelular do CAR estimula e/ou ativa pelo menos uma das funções efetoras ou respostas normais da célula imune, por exemplo, célula T manipulada para expressar o CAR. Por exemplo, em alguns contextos, o CAR induz a uma função de uma célula T, tal como atividade citolítica ou atividade T auxiliar, tal como secreção de citocinas ou outros fatores. Em algumas modalidades, uma porção truncada de um domínio de sinalização intracelular de um componente do receptor antigênico ou molécula coestimuladora é usada no lugar de uma cadeia imunoestimuladora intacta, por exemplo, se transduz o sinal da função efetora. Em algumas modalidades, o domínio ou domínios de sinalização intracelular incluem as sequências citoplasmáticas do receptor de células T (TCR) e, em alguns aspectos, também aqueles de correceptores que, no contexto natural, atuam em conjunto com este receptor para iniciar a transdução de sinal após o envolvimento do receptor antigênico e/ou qualquer derivado ou variante de tais moléculas e/ou qualquer sequência sintética que tenha a mesma capacidade funcional.

[00385] No contexto de um TCR natural, a ativação completa geralmente requer não apenas a sinalização por meio do TCR, mas também um sinal coestimulador. Assim, em algumas modalidades, para promover a ativação completa, um componente para gerar sinal secundário ou coestimulador também está incluído no CAR. Em outras modalidades, o CAR não inclui um componente para gerar um sinal coestimulador. Em alguns aspectos, um CAR adicional é expresso na mesma célula e fornece o componente para gerar o sinal secundário ou coestimulador.

[00386] A ativação de células T é, em alguns aspectos, descrita como sendo mediada por duas classes de sequências de sinalização citoplasmática: aquelas que iniciam a ativação primária dependente de antígeno por meio do TCR (sequências de sinalização citoplasmática primária) e aquelas que atuam de uma maneira independente de antígeno para fornecer um sinal secundário ou coestimulador (sequências de sinalização citoplasmática secundárias). Em alguns aspectos, o CAR inclui uma ou ambas as classes de sequências de sinalização citoplasmática.

[00387] Em alguns aspectos, o CAR inclui uma sequência de sinalização citoplasmática primária que regula a estimulação primária e/ou ativação do complexo TCR. As sequências de sinalização citoplasmática primárias que atuam de maneira estimuladora podem conter motivos de sinalização que são conhecidos como motivos de ativação com base em tirosina imunorreceptores ou ITAMs. Exemplos de ITAM que contêm sequências de sinalização citoplasmática primárias incluem aqueles derivados de TCR ou CD3 zeta, FcR gama,

CD3 gama, CD3 delta e CD3 épsilon. Em algumas modalidades, a região de sinalização intracelular no CAR contém um domínio de sinalização citoplasmático, porção do mesmo ou sequência derivada de CD3 zeta. Em algumas modalidades, a CD3 zeta compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15, codificada pela sequência de ácidos nucleicos apresentada em SEQ ID Nº: 150 ou 182. Em algumas modalidades, a CD3 zeta é codificada por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade do RNA, por exemplo, ao remover sítios de emenda crípticos. Em algumas modalidades, a CD3 zeta tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 13 e é codificada pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº:

150. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização estimulador de CD3 zeta humana ou variante funcional do mesmo, tal como um domínio citoplasmático 112 AA da isoforma 3 de CD3ζ humana (Nº de acesso: P20963.2) ou um domínio de sinalização de CD3 zeta conforme descrito na Patente Norte-Americana N° 7.446.190 ou na Patente Norte- Americana N° 8.911.993. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15.

[00388] Em algumas modalidades, o CAR inclui um domínio de sinalização (por exemplo, um domínio de sinalização intracelular ou citoplasmático) e/ou porção transmembrana de uma molécula coestimuladora, tal como uma molécula coestimuladora de células T. Moléculas coestimuladoras exemplificativas incluem CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 e ICOS. Por exemplo, uma molécula coestimuladora pode ser derivada de 4-1BB e pode compreender a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 12, codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 154 ou 155. Em algumas modalidades, molécula coestimuladora de 4-1BB é codificada por um polinucleotídeo que foi opcionalmente otimizado para uso de códons e/ou para reduzir a heterogeneidade de RNA, por exemplo, ao remover sítios de emenda crípticos.

Em algumas modalidades, a molécula coestimuladora de 4-1BB tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 12 e é codificada pela sequência polinucleotídica apresentada em SEQ ID Nº: 155. Em algumas modalidades, o domínio intracelular compreende um domínio de sinalização coestimulador intracelular de 4-1BB ou uma variante funcional ou porção do mesmo, tal como um domínio citoplasmático de 42 aminoácidos de uma 4-1BB humana (Nº de Acesso Q07011.1) ou variante funcional ou porção da mesma, tal como a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 12 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID Nº: 12. Em algumas modalidades, uma molécula coestimuladora pode ser derivada de CD28 e pode compreender a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 10, codificada pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 183. Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização coestimulador intracelular de CD28 humana ou variante funcional ou porção do mesmo, tal como um domínio de 41 aminoácidos do mesmo e/ou tal domínio com uma substituição de LL por GG nas posições 186- 187 de uma proteína CD28 nativa.

Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular pode compreender a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 10 ou 11 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%,

90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID Nº: 10 ou 11. Em alguns aspectos, o mesmo CAR inclui tanto componentes estimuladores ou ativadores (por exemplo, sequência de sinalização citoplasmática) como componentes coestimuladores.

[00389] Em alguns aspectos, o domínio transmembrana contém uma porção transmembrana de CD28. O domínio extracelular e o domínio transmembrana podem ser ligados direta ou indiretamente. Em algumas modalidades, o domínio extracelular e o domínio transmembrana são ligados através de um espaçador, tal como qualquer um descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o receptor antigênico quimérico contém um domínio intracelular de uma molécula coestimuladora de células T, tal como entre o domínio transmembrana e o domínio de sinalização intracelular. Em alguns aspectos, a molécula coestimuladora de células T é CD28 ou 4-1BB.

[00390] Em algumas modalidades, os componentes estimuladores ou de ativação estão incluídos em um CAR, enquanto que o componente coestimulador é fornecido por outro CAR que reconhece outro antígeno. Em algumas modalidades, os CARs incluem CARs ativadores ou estimuladores e CARs coestimuladores, ambos expressos na mesma célula (consulte documento WO 2014/055668). Em alguns aspectos, o CAR que tem como alvo a ROR1 é o CAR estimulador ou ativador; em outros aspectos, é o CAR coestimulador. Em algumas modalidades, as células incluem ainda CARs inibidores (iCARs, consulte Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (dezembro de 2013), tal como um CAR que reconhece um antígeno diferente de ROR1, em que um sinal estimulador ou de ativação distribuído através do CAR que tem como alvo a ROR1 é diminuído ou inibido pela ligação do CAR inibidor ao seu ligante, por exemplo, para reduzir os efeitos fora do alvo.

[00391] Em algumas modalidades, os dois receptores induzem, respectivamente, a um sinal de ativação e um sinal inibidor para a célula, de modo que a ligação de um dos receptores ao seu antígeno ative a célula ou induza a uma resposta, mas a ligação do segundo receptor inibidor a seu antígeno induz a um sinal que suprime ou amortece esta resposta. Exemplos são combinações de CARs ativadores e CARs inibidores (iCARs). Tal estratégia pode ser usada, por exemplo, para reduzir a probabilidade de efeitos fora do alvo no contexto em que o CAR de ativação se liga a um antígeno expresso em uma doença ou condição, mas que também é expresso em células normais e o receptor inibidor se liga a um antígeno separado que é expresso nas células normais, mas não nas células da doença ou condição.

[00392] Em alguns aspectos, o receptor quimérico é ou inclui um CAR inibidor (por exemplo, iCAR) e inclui componentes intracelulares que amortecem ou suprimem uma resposta imune, tal como uma resposta promovida por ITAM e/ou coestimulador na célula. Exemplos de tais componentes de sinalização intracelular são aqueles encontrados em moléculas do ponto de verificação imune, incluindo PD- 1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, receptores PGE2, receptores de adenosina EP2/4, incluindo A2AR. Em alguns aspectos, a célula manipulada inclui um CAR inibidor que inclui um domínio de sinalização ou derivado de tal molécula inibidora, de modo que sirva para amortecer a resposta da célula, por exemplo, aquela induzida por um CAR de ativação e/ou coestimulador.

[00393] Em determinadas modalidades, a região de sinalização intracelular compreende uma transmembrana de CD28 e um domínio de sinalização ligado a um domínio intracelular de CD3 (por exemplo, CD3-zeta). Em algumas modalidades, o domínio de sinalização intracelular compreende domínios coestimuladores quiméricos de CD28 e 4-1BB (CD137; TNFRSF9), ligados a um domínio intracelular de CD3 zeta.

[00394] Em algumas modalidades, o CAR abrange um ou mais, por exemplo, dois ou mais, domínios coestimuladores e um domínio estimulador ou um domínio de ativação, por exemplo, domínio de ativação primário, na porção citoplasmática. CARs exemplificativos incluem componentes intracelulares de CD3-zeta, CD28 e 4-1BB.

[00395] Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas do CAR anti-ROR1 contêm um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém qualquer um dos anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno descritos no presente documento, tal como na Seção I.A.1 e/ou Tabela 2; um espaçador que compreende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada, tal como uma que tem cerca de 12 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID Nº: 1, tal como codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nºs: 2 ou 30; um domínio transmembrana, tal como um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas de CAR anti-ROR1 contêm um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém qualquer um dos anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno descritos no presente documento, tal como na Seção I.A.1 e/ou Tabela 2; um espaçador que compreende uma dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma dobradiça de IgG4 modificada, tal como uma que tem cerca de 13 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID Nº: 135, tal como codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nºs: 136 ou 192; um domínio transmembrana, tal como um domínio transmembrana de uma

CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e uma região de sinalização coestimuladora.

[00396] Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas do CAR anti-ROR1 contêm um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém qualquer um dos anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno descritos no presente documento, tal como na Seção I.A.1 e/ou Tabela 2; um espaçador que compreende uma região de dobradiça-CH3 de IgG4 modificada, tal como uma que tem cerca de 119 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID Nº: 3, tal como codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 4 ou 137; um domínio transmembrana, tal como um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e uma região de sinalização coestimuladora. Em algumas modalidades, as modalidades fornecidas de CAR anti-ROR1 contêm um domínio de ligação a antígeno extracelular que contém qualquer um dos anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno descritos no presente documento, tal como na Seção I.A.1 e/ou Tabela 2; um espaçador que compreende uma região de dobradiça-CH3 de IgG4 modificada, tal como uma que tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento ou um espaçador apresentado em SEQ ID Nº: 138, tal como codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 193 ou 139; um domínio transmembrana, tal como um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e um intracelular região de sinalização que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e uma região de sinalização coestimuladora.

[00397] Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 8. Em algumas de tais modalidades, o domínio transmembrana é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 149. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização coestimuladora é um domínio de sinalização intracelular de CD28 humana, 4-1BB humana ou ICOS humana ou uma porção de sinalização dos mesmos. Em modalidades particulares, o domínio de sinalização intracelular é um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB humana. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 12. Em algumas de tais modalidades, o domínio de sinalização citoplasmática é um domínio de sinalização citoplasmática de CD3-zeta humana, conforme apresentado em SEQ ID Nº: 13. Em algumas de tais modalidades, a região de sinalização intracelular compreende as sequências apresentadas em SEQ ID Nº: 13 e SEQ ID Nº: 12, em algumas de tais modalidades, aquelas descritas na Seção I.D no presente documento, na Tabela 3 e/ou na Tabela E1. Também são fornecidos CARs codificados pelos polinucleotídeos descritos na Seção I.E no presente documento, na Tabela 3 e/ou na Tabela E1. Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm qualquer uma das sequências de nucleotídeos descritas no presente documento, por exemplo, que codificam a totalidade ou uma porção das moléculas de ligação fornecidas. Em determinados casos, o domínio transmembrana tem um resíduo de metionina no N-término. Em determinados casos, o espaçador tem um resíduo de metionina no C-término.

[00398] Em algumas das modalidades fornecidas, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186,

187, 188 ou 189. Em algumas das modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85%, igual ou cerca de 86%, igual ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 184. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 185. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 186 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 186. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 187 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 187. Em algumas das modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 188 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 188. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 têm a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 189 ou uma sequência de aminoácidos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência que tem a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 189.

[00399] Em algumas das modalidades fornecidas, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161. Em algumas das modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 156 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85%, igual ou cerca de 86%, igual ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 157. Em algumas das modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 158 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 158. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº:

159 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 159. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 160 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 160. Em algumas de quaisquer modalidades, os CARs anti-ROR1 são codificados pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 161 ou uma sequência de nucleotídeos que é pelo menos igual ou cerca de 85% ou cerca de 86% ou cerca de 87%, igual ou cerca de 88%, igual ou cerca de 89%, igual ou cerca de 90%, igual ou cerca de 91%, igual ou cerca de 92%, igual ou cerca de 93%, igual ou cerca de 94%, igual ou cerca de 95%, igual ou cerca de 96%, igual ou cerca de 97%, igual ou cerca de 98% ou igual ou cerca de 99% de identidade de sequência com a sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 161.

2. Características Exemplificativas

[00400] Em algumas das modalidades fornecidas, os receptores recombinantes fornecidos, por exemplo, CARs que contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, se ligam, tal como se ligam especificamente à ROR1, tal como a ROR1 na superfície de uma célula cancerosa ou uma célula tumoral. Em qualquer uma das modalidades, um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno, nos CARs fornecidos, se liga especificamente à ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Receptores recombinantes de ligação à ROR1 exemplificativos, por exemplo, CARs, podem exibir qualquer afinidade de ligação, especificidade de ligação e/ou outras características de reconhecimento antigênico, tal como reatividade cruzada entre espécies, conforme descrito no presente documento, tal como na Seção I.A.2. Em algumas modalidades, um CAR que contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende os anticorpos ou fragmentos dos mesmos exibe propriedades e características de ligação similares ou substancialmente as mesmas que o anticorpo ou fragmento do mesmo. Em alguns casos, o CAR que contém um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende os anticorpos ou fragmento dos mesmos exibe propriedades e características de ligação diferentes do anticorpo ou fragmento do mesmo.

[00401] Em algumas modalidades, os CARs fornecidos se ligam especificamente a uma proteína receptor 1 órfão de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1). Em algumas das modalidades no presente documento, ROR1 refere-se à ROR1 humana. A observação de que um anticorpo ou outra molécula de ligação, por exemplo, CAR, se liga à ROR1 ou se liga especificamente à ROR1, não significa necessariamente que se liga à ROR1 de todas as espécies. Por exemplo, em algumas modalidades, características de ligação à ROR1, tal como a capacidade de se ligar especificamente à mesma e/ou competir pela ligação à mesma com um receptor de referência, por exemplo, CAR de referência que contém um anticorpo de referência e/ou se ligar com uma afinidade particular ou competir em um determinado grau, em algumas modalidades, refere-se à capacidade em relação a uma proteína ROR1 humana e o anticorpo pode não ter esta característica em relação a uma ROR1 de outra espécie, tal como camundongo. Em algumas modalidades, o CAR se liga à ROR1 humana e se liga à ROR1 de outra espécie, tal como macaco ou macaco Rhesus. Em algumas modalidades, o CAR ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à ROR1 humana e não se liga à ROR1 de outra espécie, tal como camundongo. Em algumas modalidades, o CAR se liga à ROR1 humana e se liga à ROR1 de outra espécie, tal como camundongo.

[00402] Em algumas modalidades, os CARs se ligam, tal como se ligam especificamente, à ROR1 humana, tal como a um epitopo ou região da ROR1 humana, tal como a sequência da ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 144 (GenBank Nº AAA60275. 1; sequência incluindo o peptídeo sinalizador apresentado em SEQ ID Nº: 215, Uniprot Nº Q01973) ou uma variante alélica ou variante de emenda da mesma. Em uma modalidade, a ROR1 humana é uma variante de transcrição ou isoforma que tem a sequência de aminoácidos de SEQ ID Nº: 145 ou 146. Em algumas modalidades, a proteína ROR1 humana compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145, 146 ou 215. Em algumas modalidades, os CARs se ligam à região extracelular da ROR1, tal como a um ou mais epitopos extracelulares presentes na região extracelular da ROR1 humana, por exemplo, correspondendo aos resíduos 1-377 das sequências de ROR1 humana apresentadas em SEQ ID Nº: 144 (correspondendo aos resíduos 30-406 da sequência de ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 215 que inclui o peptídeo sinalizador).

[00403] Em algumas modalidades, o CAR se liga a um epitopo linear de ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Em algumas modalidades, o um ou mais epitopos compreendem um epitopo conformacional. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos conformacionais de ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos da ROR1 humana, tal como um ou mais epitopos que incluem a sequência FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199) ou a sequência apresentada em qualquer uma de SEQ ID Nº: 200-214 ou na Tabela E2 no presente documento. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a um ou mais epitopos da ROR1 humana, tal como um ou mais epitopos que incluem a sequência FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199). Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno dos mesmos se ligam a epitopos adicionais, tal como um ou mais epitopos conformacionais, além da sequência FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199). Exemplos de um ou mais epitopos adicionais incluem, porém sem limitações, uma ou mais das sequências apresentadas em qualquer uma de SEQ ID Nº: 200-214 ou na Tabela E2 do presente documento.

[00404] Em algumas modalidades, o anticorpo se liga à ROR1 não humana, tal como ROR1 de macacos Rhesus (Macaca mulatta) (apresentada em SEQ ID Nº: 216, Uniprot Nº F6RUP2) ou ROR1 de macacos cynomolgus (Macaca fasicularis) (apresentada em SEQ ID Nº: 217, Uniprot Nº A0A2K5WTX7; ou SEQ ID Nº: 218, Uniprot Nº A0A2K5WTX4). Em alguns aspectos, o domínio extracelular da ROR1 não humana é pelo menos 99% idêntico à sequência da ROR1 humana.

[00405] Em algumas modalidades, o CAR se liga à ROR1 não humana, tal como ROR1 de macaco, coelho, rato, camundongo ou outras espécies. Em algumas modalidades, o CAR se liga à ROR1 de camundongo (Mus musculus), tal como a um epitopo ou região da ROR1 de camundongo, tal como a ROR1 de camundongo apresentada em SEQ ID Nº: 171 (GenBank Nº NP_038873; sequência incluindo o peptídeo sinalizador apresentada em SEQ ID Nº: 219, Uniprot Nº Q9Z139). Em algumas modalidades, o CAR se liga à ROR1 humana e à ROR1 de camundongo. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de alguns dos anticorpos anti-ROR1 fornecidos ou fragmentos dos mesmos a uma ROR1 não humana, tal como ROR1 de camundongo, é de pelo menos 75%, 80%, 90%, 95%, 100%, 110%, 120%, 130%, 140%, 150% ou mais da ligação do CAR à ROR1 humana. Em algumas modalidades, os anticorpos não se ligam à ROR1 de camundongo, tal como a ROR1 de camundongo apresentada em SEQ ID Nº: 171.

[00406] Em algumas das modalidades fornecidas, a extensão da ligação do CAR, por exemplo, que contém um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga a um menor extensão, nível ou grau ou afinidade a uma ROR1 não humana, opcionalmente uma ROR1 de camundongo. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de um anticorpo anti-ROR1 a uma proteína diferente da ROR1 não relacionada ou a uma proteína ROR1 não humana, tal como uma proteína ROR1 de camundongo ou outra proteína diferente da ROR1, é menor do que igual ou cerca de 50%, 40%, 30%, 20% ou 10% da ligação do CAR à ROR1 humana, conforme medido. Em algumas modalidades, os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos não se ligam à ROR1 de camundongo, tal como a ROR1 de camundongo apresentada em SEQ ID Nº: 171 ou 219.

[00407] Em algumas das modalidades fornecidas, o CAR ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga a uma extensão, nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína receptor de tirosina quinase, tal como a proteína receptor órfão 2 (ROR2), opcionalmente uma proteína ROR2 humana. Em algumas modalidades, a extensão da ligação de alguns dos CAR fornecidos, por exemplo, que contêm um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo a uma proteína diferente da ROR1, tal como uma proteína ROR2, é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a ligação do CAR à ROR1 humana. Em algumas modalidades, o anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga a, não exibe reatividade cruzada ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína ROR2, opcionalmente uma proteína ROR2 humana. Em algumas modalidades, dentre os CARs fornecidos, por exemplo, que contêm um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, estão CARs cuja ligação à ROR1 de camundongo é menor do que ou igual ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que igual ou cerca de 10%, da ligação do CAR à ROR1 humana. Em algumas modalidades, dentre os CAR fornecidos, por exemplo, que contêm um anticorpo de ligação à ROR1 ou fragmento do mesmo, estão CARs cuja ligação a uma ROR2, tal como uma proteína ROR2 humana, é menor do que ou igual ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que igual ou cerca de 10% da ligação do CAR à ROR1 humana. Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem o mesmo, substancialmente o mesmo ou um menor nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR2 comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em alguns aspectos, a afinidade de ligação e/ou especificidade por um antígeno particular (por exemplo, ROR1 humana) pode ser avaliada usando quaisquer métodos para avaliar a ligação, tal como qualquer um descrito na Seção I.A.2 no presente documento.

[00408] Em algumas modalidades, os CARs fornecidos são capazes de ligar à ROR1, tal como ROR1 humana, que tem pelo menos uma determinada afinidade, conforme medido através de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Em algumas modalidades, a afinidade é representada por uma constante de dissociação em equilíbrio (KD). Em algumas modalidades, a afinidade é representada pela EC50.

[00409] Em algumas modalidades, a molécula de ligação, por exemplo, CAR, se liga, tal como se liga especificamente, a um antígeno, por exemplo, uma proteína ROR1 ou um epitopo na mesma, com uma afinidade ou KA (ou seja, uma constante de associação em equilíbrio de um interação de ligação particular com unidades de 1/M ou M -1; igual à proporção da taxa de ativação [kon ou ka] para a taxa de desativação [koff ou kd] para esta reação de associação, assumindo uma interação bimolecular), a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio (KD; ou seja, uma constante de dissociação em equilíbrio de uma interação de ligação particular com unidades de M; igual à proporção da taxa de desativação [koff ou kd] para a taxa de ativação [kon ou ka] para esta reação de associação, assumindo uma interação bimolecular) ou uma taxa de dissociação (constante de taxa de dissociação; koff ou kd) conforme descrito no presente documento, por exemplo, na Seção IA2 no presente documento. Por exemplo, a constante de dissociação em equilíbrio KD pode variar a partir de 10-5 M a 10-13 M, tal como 10-7 M a 10-11 M, 10-7 M a 10-10 M, 10-7 M a 10-9 M, 10-8 M a 10-10 M ou 10-9 M a 10-10 M.

[00410] Em determinadas modalidades, a afinidade de ligação (EC50) e/ou a constante de dissociação em equilíbrio, KD, da molécula de ligação, por exemplo, CAR anti-ROR1, a uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca ou menos de igual ou cerca de 1 μM, 500 nM, 100 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 25 nM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 nM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM ou 1 nM ou menos ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em algumas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, CAR anti-ROR1, a uma proteína ROR1, está entre igual ou cerca de 10 nM e igual ou cerca de 90 nM, entre igual ou cerca de 20 nM e igual ou cerca de 80 nM, entre igual ou cerca de 30 nM e igual ou cerca de 70 nM, entre igual ou cerca de 40 nM e igual ou cerca de 60 nM ou entre igual ou cerca de 40 nM e igual ou cerca de 50 nM. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, CAR anti-ROR1, a uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM ou 100 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, CAR anti-ROR1, a uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM ou 100 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em determinadas modalidades, a EC50 e/ou a KD da molécula de ligação, por exemplo, CAR anti-ROR1, a uma proteína ROR1, tal como uma proteína ROR1 humana, é igual ou cerca de 40 nM, 41 nM, 42 nM, 43 nM, 44 nM ou 45 nM ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores.

[00411] Em algumas modalidades, a molécula de ligação fornecida, por exemplo, CAR anti-ROR1, tem uma taxa de dissociação rápida (constante de taxa de dissociação; koff ou kd; unidades de 1/s ou s-1). Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas está entre igual ou cerca de 1 x 10-5 s-1 e igual ou cerca de 1 x 10-2 s-1, tal como igual ou cerca de 5 x 10-5 s-1 e igual ou cerca de 9 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 1 x 10-4 s-1 e igual ou cerca de 8 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 5 x 10-4 s-1 e igual ou cerca de 7 x 10-3 s-1, igual ou cerca de 1 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 6 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 4 x 10-3 s-1 e igual ou cerca de 6 x 10-3 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos 1 x 10-5 s-1, 5 x 10-5 s-1, 1 x 10-4 s-1, 5 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 ou 1 x 10-2 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos 6 x 10-4 s-1, 7 x 10-4 s-1, 8 x 10-4 s-1, 8 x 10-4 s-1, 9 x 10-4 s-1, 1 x 10-3 s-1, 2 x 10-3 s-1, 3 x 10-3 s-1, 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1, 6 x 10-3 s-1, 7 x 10-3 s-1, 8 x 10-3 s-1, 9 x 10-3 s-1 ou 1 x 10-2 s-1. Em algumas modalidades, a taxa de dissociação (koff ou kd) das moléculas de ligação fornecidas é de pelo menos 4 x 10-3 s-1, 5 x 10-3 s-1 ou 6 x 10-3 s-1 ou uma faixa definida por qualquer um dos anteriores. Em algumas modalidades, a molécula de ligação fornecida, por exemplo, CAR anti- ROR1, tem uma taxa de dissociação que é pelo menos 2 vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes ou 10 vezes mais rápida do que a taxa de dissociação de um CAR anti-ROR1 de referência, por exemplo, CAR anti-ROR1 R12.

[00412] Em algumas modalidades, a afinidade de ligação de uma molécula de ligação, tal como um CAR anti-ROR1, por diferentes antígenos, por exemplo, proteínas ROR1 de diferentes espécies, pode ser comparada para determinar a reatividade cruzada entre espécies. Por exemplo, a reatividade cruzada entre espécies pode ser classificada como alta reatividade cruzada ou baixa reatividade cruzada. Em algumas modalidades, a constante de dissociação em equilíbrio, KD, para diferentes antígenos, por exemplo, proteínas ROR1 de diferentes espécies, tal como humana, de macaco cynomolgus ou camundongo, podem ser comparadas para determinar a reatividade cruzada entre espécies. Em algumas modalidades, a reatividade cruzada entre espécies de um CAR anti-ROR1 pode ser alta, por exemplo, o CAR anti- ROR1 se liga à ROR1 humana e uma variante de espécie de ROR1 em um grau similar, por exemplo, a proporção de KD para a ROR1 humana e KD para a espécie variante de ROR1 é ou é cerca de 1. Em algumas modalidades, a reatividade cruzada entre espécies de um CAR anti- ROR1 pode ser baixa, por exemplo, o CAR anti-ROR1 tem uma alta afinidade pela ROR1 humana, mas uma baixa afinidade por uma espécie variante de ROR1 ou vice-versa. Por exemplo, a proporção de KD para a espécie variante de ROR1 e a KD para a ROR1 humana é maior do que 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 ou mais e o CAR anti-ROR1 tem baixa reatividade cruzada entre espécies. O grau de reatividade cruzada entre espécies pode ser comparado com a reatividade cruzada entre espécies de um CAR conhecido, tal como um CAR de referência.

[00413] Em algumas modalidades, propriedades ou características dos CARs fornecidos são descritas em relação às propriedades observadas para outro CAR, por exemplo, um CAR de referência. Em algumas modalidades, o CAR de referência contém, como um domínio de ligação a antígeno extracelular, um anticorpo de referência descrito no presente documento ou fragmento do mesmo, tal como o anticorpo quimérico/IgG1 humana de coelho designado R12 (consulte, por exemplo, Yang et al. (2011) PloS ONE, 6: e21018; Pedido de Patente Norte-Americana N° 2013/0251642); anticorpo anti-ROR1 humana de camundongo designado 2A2 (consulte, por exemplo, Baskar et al. (2012) MAbs, 4: 349-361; Publicação de Pedido de Patente Norte- Americana Nº US2012/20058051); anticorpos anti-ROR1 humanizados descritos no Pedido PCT Internacional Nº WO2014/031174; a variante humanizada de um anticorpo designado 99961.

[00414] Em algumas modalidades, o CAR tem uma afinidade que é quase igual ou menor do que aquela da forma correspondente do CAR de referência, por exemplo, EC50 ou KD que é não mais do que 1,5 vezes ou não mais do que ou cerca de 2 vezes maior, não mais do que ou cerca de 3 vezes maior e/ou não mais do que ou cerca de 10 vezes maior do que a EC50 ou KD da forma correspondente do CAR de referência. Em algumas modalidades, o CAR tem uma afinidade que é aproximadamente igual ou menor do que aquela da forma correspondente do CAR de referência, por exemplo, uma EC50 ou KD que é pelo menos 1,5 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 2 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 3 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 5 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 10 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 20 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 25 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 30 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 40 vezes maior, pelo menos igual ou cerca de 50 vezes maior ou pelo menos igual ou cerca de 100 vezes maior do que a EC50 ou KD da forma correspondente do CAR de referência. Em algumas modalidades, o CAR tem uma afinidade que é aproximadamente igual ou menor do que aquela da forma correspondente do CAR de referência, uma afinidade que é cerca de 1,5 vezes, duas vezes, 3 vezes, 4 vezes, 5 vezes, 6 vezes, 7 vezes, 8 vezes, 9 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 25 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes ou 100 vezes menor do que a afinidade do CAR de referência.

[00415] Em algumas modalidades, o CAR tem uma afinidade que é maior do que a forma correspondente do CAR de referência, por exemplo, EC50 ou KD que é menor ou menor do que igual ou cerca de 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 30 vezes, 40 vezes, 50 vezes, 60 vezes, 70 vezes, 80 vezes, 90 vezes, 100 vezes, 150 vezes, 200 vezes, 250 vezes ou menor do que a EC50 ou KD da forma correspondente do CAR de referência.

[00416] Em algumas modalidades, o CAR se liga especificamente a um epitopo que se sobrepõe ao epitopo da ROR1 ligado por um CAR de referência. Em alguns aspectos, dentre estes CARs estão CARs que se ligam ao mesmo epitopo ou a um epitopo similar ao CAR de referência. Em algumas modalidades, os CARs se ligam ao mesmo epitopo ou a um epitopo similar ou a um epitopo dentro da mesma região ou que contém resíduos dentro da mesma região da ROR1 que um CAR de referência, tal como CAR anti-ROR1 R12 ou fragmento scFv do mesmo (apresentado em SEQ ID Nº: 142; consulte, por exemplo, Yang et al. (2011) PloS ONE, 6: e21018). Em algumas modalidades, o CAR inibe a ligação e/ou compete pela ligação à ROR1, tal como ROR1 humana, com o CAR de referência.

[00417] Dentre os CARs fornecidos estão CARs que exibem atividade ou sinalização dependente de antígeno, isto é, atividade de sinalização que está ausente de forma mensurável ou em níveis de fundo na ausência de antígeno, por exemplo, ROR1 e/ou na presença de antígeno não específico. Assim, em alguns aspectos, os CARs fornecidos não exibem ou exibem não mais do que um nível de fundo ou um nível tolerável ou baixo de sinalização tônica ou atividade ou sinalização independente de antígeno na ausência de antígeno, por exemplo, ROR1, quando presente. Em algumas modalidades, as células que expressam o CAR anti-ROR1 fornecidas exibem atividade ou função biológica, incluindo atividade citotóxica, produção de citocinas e capacidade de proliferar. Em algumas modalidades, o receptor de CARs fornecido exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou uma sinalização específica para antígeno e/ou atividade dependente de antígeno ou sinalização superiores comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00418] Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem níveis ausentes, reduzidos ou mais baixos de atividade ou sinalização na ausência de antígeno, por exemplo, ROR1. Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem redução, redução ou quase ausência ou ausência total de sinalização tônica ou sinalização ou atividade independente de antígeno, por exemplo, sinalização ou atividade na ausência de antígeno, de modo que a sinalização ou atividade seja menor do que ou igual ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que ou cerca de 10%, da sinalização ou atividade do CAR na presença da ROR1 humana. Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem a mesma, substancialmente a mesma ou uma sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno inferior comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 (CAR), opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em alguns aspectos, dentre uma pluralidade ou população de células que são manipuladas para expressar os CARs, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8%, igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade compreendem um receptor antigênico quimérico que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno. Em algumas modalidades, os CARs específicos para ROR1 de referência incluem aqueles que têm um domínio de ligação a antígeno que compreende quaisquer anticorpos anti-ROR1 de referência descritos no presente documento, tais como aqueles descritos na Seção IA2 no presente documento, por exemplo, R12, A2A ou 99961 ou um fragmento de ligação a antígeno dos mesmos.

[00419] Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem níveis ausentes, reduzidos ou mais baixos de atividade ou sinalização quando expostos a um antígeno não específico, tal como uma proteína diferente, mas relacionada, tal como ROR2. Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau ou afinidade de ligação menor a uma proteína ROR2 comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas modalidades, os CARs fornecidos exibem sinalização ou atividade reduzida na presença de uma ROR2, tal como uma proteína ROR2 humana, de modo que a sinalização ou atividade seja menor do que ou igual ou cerca de 30%, 20% ou 10%, tal como menor do que igual ou cerca de 10% da sinalização ou atividade do CAR na presença de ROR1 humana.

[00420] Em algumas modalidades, as células modificadas que expressam os CARs anti-ROR1 fornecidos exibem atividade biológica ou atividade funcional aprimorada, tal como atividade antitumoral, inibição de crescimento tumoral, redução do volume tumoral, persistência, expansão ou sobrevida prolongada do indivíduo, quando administradas a um indivíduo para terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, as células modificadas que expressam os CARs fornecidos exibem atividade biológica ou funcional aprimorada, tal como atividade antitumoral, inibição de crescimento tumoral, redução do volume tumoral, persistência, expansão ou sobrevida prolongada do indivíduo comparado com células modificadas que expressam um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas modalidades, a atividade biológica ou atividade funcional de um receptor quimérico, tal como a atividade citotóxica, pode ser medida usando qualquer um de uma série de métodos conhecidos. A atividade pode ser avaliada ou determinada in vitro ou in vivo. Em algumas modalidades, a atividade pode ser avaliada uma vez que as células são administradas ao indivíduo (por exemplo, ser humano). Os parâmetros para avaliar incluem a ligação específica de uma célula T manipulada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, por exemplo, in vivo, por exemplo, através de imagiologia, ou ex vivo, por exemplo, através de ELISA ou citometria de fluxo. Em determinadas modalidades, a capacidade das células modificadas de destruir células alvo pode ser medida usando quaisquer métodos conhecidos adequados, tais como ensaios de citotoxicidade descritos, por exemplo, em Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em determinadas modalidades, a atividade biológica das células também pode ser medida pelo ensaio da expressão e/ou secreção de determinadas citocinas, tais como interleucucina-2 (IL-2), interferon- gama (IFN), interleucina-4 (IL- 4), TNF-alfa (TNFα), interleucina-6 (IL- 6), interleucina-10 (IL-10), interleucina-12 (IL-12), fator estimulador de colônia de granulócitos-macrófagos (GM-CSF), CD107a e/ou TGF-beta (TGFβ). Ensaios para medir citocinas são bem conhecidos e incluem, porém sem limitações, ELISA, coloração de citocina intracelular, matriz de esferas citométricas, RT-PCR, ELISPOT, citometria de fluxo e bioensaios nos quais as células responsivas à citocina relevante são testadas quanto à capacidade de resposta (por exemplo, proliferação) na presença de uma amostra de teste. Em alguns aspectos, a atividade biológica pode ser significativamente assegurada usando um modelo animal da doença ou condição, tal como um modelo de xenoenxerto de tumor e avaliação da redução na contagem ou carga tumoral e/ou sobrevida. Em alguns aspectos, a atividade biológica é medida ao avaliar o resultado clínico, tal como a redução na contagem ou carga tumoral.

[00421] Em algumas modalidades, a administração de células manipuladas que expressam os CARs anti-ROR1 fornecidos permite inibição do crescimento tumoral substancialmente aumentada, persistência in vivo e/ou sobrevida prolongada do indivíduo que tem um tumor comparado com a administração de células manipuladas que expressam CAR de referência, tal como anti-ROR1 R12. Em alguns aspectos, tal melhora é observada em indivíduos que têm vários tipos de cânceres que expressam ROR1 incluindo, porém sem limitações, câncer de pulmão, câncer de mama, leucemia linfocítica crônica (CLL), câncer de ovário ou linfoma de células do manto (MCL).

[00422] Em algumas modalidades, as células manipuladas que expressam os CARs anti-ROR1 fornecidos exibem persistência e expansão aumentadas quando administradas a um indivíduo para terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, as células manipuladas que expressam os CARs fornecidos exibem a mesma, substancialmente a mesma ou maior persistência e expansão comparado com células manipuladas que expressam um receptor antigênico quimérico específico para ROR1, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em alguns aspectos, a proliferação, expansão e/ou persistência de uma célula manipulada que expressa qualquer um dos receptores fornecidos, por exemplo, CARs, pode ser avaliada ao determinar a exposição, número, concentração, persistência e proliferação das células manipuladas, por exemplo, células administradas para terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, a exposição, número ou nível de células T manipuladas, por exemplo, células T administradas para a terapia com base em células T ou subconjunto das mesmas, tais como células CD3+, células CD4+, células CD8+, células CD3+ CAR+, células CD4+ CAR+ ou células CD8+ CAR+ podem ser avaliados, por exemplo, a partir de um indivíduo, tal como um ser humano ou um animal, que recebeu as células modificadas. Em alguns aspectos, a exposição, número, concentração, persistência e proliferação estão relacionados a parâmetros farmacocinéticos. Em alguns casos, a farmacocinética pode ser avaliada ao medir parâmetros tais como a concentração plasmática máxima (pico) (Cmax), o tempo de pico (ou seja, quando a concentração plasmática máxima (Cmax) ocorre; Tmax), a concentração plasmática mínima (ou seja, a concentração plasmática mínima entre as doses de um agente terapêutico, por exemplo, células T CAR+; Cmin), a meia-vida de eliminação (T1/2) e a área sob a curva (ou seja, a área sob a curva gerada pelo gráfico de tempo em função da concentração plasmática do agente terapêutico de células T CAR+; AUC), após administração. A concentração de um determinado agente terapêutico, por exemplo, células T CAR+, no plasma após a administração pode ser medida usando quaisquer métodos conhecidos adequados para avaliar as concentrações de agentes terapêuticos, por exemplo, células T CAR+, em amostras de sangue ou quaisquer métodos descritos no presente documento. Por exemplo, métodos com base em ácidos nucleicos, tal como PCR quantitativa (qPCR), ou métodos com base em citometria de fluxo ou outros ensaios, tal como um imunoensaio, ELISA ou ensaios com base em cromatografia/espectrometria de massa, podem ser usados.

[00423] Em alguns aspectos, uma linhagem de células repórter pode ser empregada para monitorar a atividade independente de antígeno e/ou sinalização tônica através de células que expressam CAR anti- ROR1. Em algumas modalidades, uma linhagem de células T, tal como uma linhagem de células Jurkat, contém uma molécula repórter, tal como uma proteína fluorescente ou outra molécula detectável, tal como uma proteína fluorescente vermelha, expressa sob o controle dos elementos reguladores de transcrição Nur77 endógenos. Em algumas modalidades, a expressão do repórter Nur77 é intrínseca à célula e dependente da sinalização por meio de um repórter recombinante que contém um sinal de ativação primário em uma célula T, um domínio de sinalização de um componente de receptor de célula T (TCR) e/ou um domínio de sinalização que compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptor (ITAM), tal como uma cadeia de CD3ζ. A expressão de Nur77 geralmente não é afetada por outras vias de sinalização, tal como sinalização a citocinas ou sinalização ao receptor

Toll-like (TLR), que podem atuar de maneira celular extrínseca e podem não depender da sinalização através do receptor recombinante. Assim, apenas células que expressam o receptor recombinante exógeno, por exemplo, CAR anti-ROR1 que contém as regiões de sinalização apropriadas, são capazes de expressar Nur77 mediante estimulação (por exemplo, ligação ao antígeno específico). Em alguns casos, a expressão de Nur77 também pode mostrar uma resposta dependente da dose à quantidade de estimulação (por exemplo, antígeno).

[00424] Em alguns casos, para avaliar a especificidade, reatividade cruzada e/ou dependência de antígeno de uma determinada atividade, sinalização ou função do receptor, por exemplo, CAR, qualquer um dos ensaios descritos para avaliar a atividade, sinalização ou função biológica dos receptores pode ser usado na presença e ausência do antígeno alvo específico, por exemplo, ROR1 humana, ou na presença do antígeno alvo específico, por exemplo, ROR1 humana e na presença de um antígeno não específico diferente, por exemplo, ROR2 humana ou uma ROR1 não humana, tal como uma ROR1 de camundongo.

[00425] Em algumas modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, por exemplo, uma proteína ROR2 humana comparado com o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1, por exemplo, uma proteína ROR1 humana, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Por exemplo, em alguns aspectos, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe um nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR2 humana que é pelo menos igual ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1 humana, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00426] Em algumas modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, por exemplo, uma proteína ROR2 humana comparado com um CAR específico para ROR1 de referência, por exemplo, sob as mesmas condições ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas de quaisquer modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, por exemplo, uma proteína ROR2 humana comparado com um CAR específico para ROR1 de referência, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Em algumas de quaisquer modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe a mesma, substancialmente a mesma ou superior sinalização específica para antígeno e/ou atividade dependente de antígeno ou sinalização comparado com um CAR específico para ROR1 de referência, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00427] Em algumas das modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe a mesma, substancialmente a mesma ou menor sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno comparado com um CAR específico para ROR1 de referência, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio. Por exemplo, em algumas modalidades, o CAR anti-ROR1 fornecido exibe um nível ou grau de sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno que é pelo menos 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização tônica e/ou atividade independente de antígeno de um CAR específico para ROR1 de referência, por exemplo, sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00428] Em algumas modalidades, os CARs anti-ROR1 fornecidos exibem expressão aumentada na superfície das células quando comparado com um CAR alternativo que tem uma sequência de aminoácidos idêntica, mas que é codificada por sítio de emenda eliminado e/ou uma sequência de nucleotídeos com códons otimizados. Em algumas modalidades, a expressão do receptor recombinante sobre a superfície da célula pode ser avaliada. Abordagens para determinar a expressão do receptor recombinante sobre a superfície da célula podem incluir o uso de anticorpos específicos para o receptor antigênico quimérico (CAR) (por exemplo, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. março de 2013; 5 (177): 177ra38), Proteína L (Zheng et al., J. Transl. Med. fevereiro de 2012; 10: 29), marcadores de epitopo e anticorpos monoclonais que se ligam especificamente a um polipeptídeo de CAR (consulte documento WO2014190273). Em algumas modalidades, a expressão do receptor recombinante sobre a superfície da célula, por exemplo, célula T primária, pode ser avaliada, por exemplo, através de citometria de fluxo, usando moléculas de ligação que podem se ligar ao receptor recombinante ou uma porção das mesmas que pode ser detectada. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação usadas para detectar a expressão do receptor recombinante é um anticorpo anti-idiotípico, por exemplo, um anticorpo agonista anti-idiotípico específico para um domínio de ligação, por exemplo, scFv ou uma porção do mesmo. Em algumas modalidades, a molécula de ligação é ou compreende um antígeno isolado ou purificado, por exemplo, antígeno expresso de forma recombinante. E. Polinucleotídeos Que Codificam Moléculas de Ligação

[00429] Também são fornecidos polinucleotídeos que codificam as moléculas de ligação, tais como anticorpos anti-ROR1, fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, receptores recombinantes (por exemplo, receptores antigênicos quiméricos) e/ou porções, por exemplo, cadeias ou fragmentos dos mesmos. Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que codificam os anticorpos anti-ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) ou receptores antigênicos quiméricos descritos no presente documento. Os polinucleotídeos podem incluir aqueles que abrangem nucleotídeos e bases naturais e/ou não naturais, por exemplo, incluindo aqueles com modificações na estrutura principal. Os termos "molécula de ácidos nucleicos", "ácido nucleico", "sequência de nucleotídeos" e "polinucleotídeo" podem ser usados indistintamente e referem-se a um polímero de nucleotídeos. Estes polímeros de nucleotídeos podem conter nucleotídeos naturais e/ou não naturais e incluem, porém sem limitações, DNA, RNA e PNA. "Sequência de ácidos nucleicos" refere- se à sequência linear de nucleotídeos que compreende a molécula de ácidos nucleicos do polinucleotídeo.

[00430] São fornecidos polinucleotídeos que contêm um ácido nucleico que codifica qualquer um do anticorpo anti-ROR1 ou domínio de ligação a antígeno do mesmo descrito no presente documento ou qualquer porção, fragmento, cadeia ou domínio do mesmo. Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo contém vários domínios ou cadeias (por exemplo, uma cadeia pesada e uma cadeia leve) e todo o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é codificado em um polinucleotídeo. Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm um ácido nucleico que codifica qualquer uma das proteínas da superfície celular com uma única cadeia descritas no presente documento. Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm um ácido nucleico que codifica qualquer um dos conjugados descritos no presente documento. Também são fornecidos polinucleotídeos que contêm um ácido nucleico que codifica qualquer um dos receptores antigênicos quiméricos anti-ROR1 descritos no presente documento. Em algumas modalidades, a molécula de ligação,

tal como o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou receptores recombinantes, contém vários domínios ou cadeias (por exemplo, uma cadeia pesada e uma cadeia leve) e toda a molécula de ligação é codificada em mais de um polinucleotídeo, tal como dois ou mais polinucleotídeos. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos estão compreendidos em um vetor.

[00431] Em alguns aspectos, são fornecidos polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam qualquer uma das moléculas de ligação fornecidas no presente documento, por exemplo, nas Seções I.A e I.D. Em algumas modalidades, são fornecidos polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam uma porção, fragmento, cadeia ou domínio de qualquer uma das moléculas de ligação fornecidas no presente documento, por exemplo, nas Seções I.A e I.D.

[00432] Em alguns casos, o polinucleotídeo que codifica as moléculas de ligação à ROR1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante (por exemplo, CAR) contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador, em alguns casos codificado a montante das sequências de ácidos nucleicos que codificam as moléculas de ligação à ROR1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante (por exemplo, CAR) ou unidas no terminal 5' das sequências de ácidos nucleicos que codificam o domínio de ligação a antígeno. Em alguns casos, o polinucleotídeo que contém sequências de ácidos nucleicos que codificam as moléculas de ligação à ROR1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante (por exemplo, CAR), contém uma sequência sinalizadora que codifica um peptídeo sinalizador. Em alguns aspectos, a sequência sinalizadora pode codificar um peptídeo sinalizador derivado de um polipeptídeo nativo. Em outros aspectos, a sequência sinalizadora pode codificar um peptídeo sinalizador heterólogo ou não nativo. Em alguns aspectos, o peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador da cadeia capa de IgG apresentada em SEQ ID Nº: 43 ou codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 44. Em alguns aspectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de uma cadeia de GMCSFR alfa apresentada em SEQ ID Nº: 45 e codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 46. Em alguns aspectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de um peptídeo sinalizador de CD8 alfa apresentada em SEQ ID Nº: 47. Em alguns aspectos, um peptídeo sinalizador exemplificativo não limitativo inclui um peptídeo sinalizador de um peptídeo sinalizador de CD33 apresentado em SEQ ID Nº: 42 e codificado pela sequência de nucleotídeos apresentada em SEQ ID Nº: 190. Em alguns casos, o polinucleotídeo que codifica as moléculas de ligação à ROR1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante (por exemplo, CAR) pode conter uma sequência de ácidos nucleicos que codifica moléculas adicionais, tal como um marcador substituto ou outros marcadores, ou pode conter componentes adicionais, tais como promotores, elementos reguladores e/ou elementos multicistrônicos. Em algumas modalidades, a sequência de ácidos nucleicos que codifica as moléculas de ligação à ROR1, tal como um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante (por exemplo, CAR), pode ser operativamente ligado a qualquer um dos componentes adicionais.

[00433] Em algumas modalidades, são fornecidos polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam um domínio de cadeia pesada variável (VH) de um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante que contém um anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, são fornecidos polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam um domínio de variável de cadeia leve (VL) de um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante que contém um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, são fornecidos polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam um domínio de cadeia pesada variável (VH) e um domínio de variável de cadeia leve (VL) de um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou um receptor recombinante que contém um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo.

[00434] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentado em SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104.

[00435] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%,

97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104.

[00436] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para SEQ ID Nº: 110. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119. Em algumas modalidades, polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122.

[00437] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 101 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para SEQ ID Nº: 101. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 128. Em algumas modalidades, polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104.

[00438] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade a SEQ ID Nº: 110 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de

80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 119 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122.

[00439] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 101 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 101 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 128 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 104.

[00440] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81% %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade y para SEQ ID Nº: 125. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 107 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 107. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80 ou cerca de %, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%,

90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 132.

[00441] Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 30 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para SEQ ID Nº: 30. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 192 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 192. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 193 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 195 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195.

[00442] Também são fornecidos polinucleotídeos que foram otimizados para uso de códons e/ou para eliminar sítios de emenda, tais como sites de emenda crípticos. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos são modificados para otimizar o uso de códons. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos têm códons otimizados para expressão em uma célula humana, tal como uma célula T humana, tal como uma célula T humana primária. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos, tais como aqueles que codificam qualquer um dos anticorpos, receptores (tais como receptores antigênicos, tais como receptores antigênicos quiméricos) e/ou proteínas de ligação específicas para ROR1 fornecidas no presente documento, são ou foram modificados para reduzir a heterogeneidade ou conter um ou mais sequências de ácidos nucleicos fornecidas no presente documento (tal como através de métodos de otimização) para resultar em características aprimoradas dos polipeptídeos, tais como os CARs, comparado com aqueles que contém sequências distintas, de referência ou que não foram otimizadas. Em algumas modalidades, o polinucleotídeo é otimizado através de eliminação do sítio de emenda. Dentre estas características incluem melhorias na heterogeneidade do RNA, tal como resultante da presença de um ou mais sítios de emenda, tal como um ou mais sítios de emenda crípticos e/ou expressão aumentada e/ou expressão na superfície da proteína codificada, tal como níveis, uniformidade ou consistência de expressão aumentados entre as células ou diferentes composições de células terapêuticas manipuladas para expressar os polipeptídeos. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos podem ter códons otimizados para expressão em células humanas.

[00443] As sequências de ácidos nucleicos genômico geralmente, na natureza, em uma célula de mamífero, sofrem processamento de cotranscrição ou imediatamente após transcrição, em que um ácido ribonucleico mensageiro precursor nascente (pré-mRNA), transcrito a partir de uma sequência de ácido desoxirribonucleico (DNA) genômico é, em alguns casos, editado por meio de splicing, para remover os íntrons, seguido pela ligação dos éxons em células eucariotas. As sequências de consenso para sítios de emenda são conhecidas, porém,

em alguns aspectos, informações específicas de nucleotídeos que definem um sítio de emenda podem ser complexas e podem não ser prontamente evidentes com base nos métodos disponíveis. Os sítios de emenda crípticos são sítios de emenda que não são previstos com base nas sequências de consenso padrão e são ativados de forma variável. Assim, o splicing variável de pré-mRNA em sítios de emenda críptico leva à heterogeneidade nos produtos de mRNA transcritos após expressão em células eucariotas.

[00444] Os polinucleotídeos gerados para a expressão de transgenes são, tipicamente, construídos a partir de sequências de ácidos nucleicos, tal como DNA complementar (cDNA) ou porções dos mesmos, que não contêm íntrons. Assim, não se espera que ocorra o splicing de tais sequências. No entanto, a presença de sítios de splicing crípticos dentro da sequência de cDNA pode levar a reações de splicing não intencionais ou indesejadas e heterogeneidade no mRNA transcrito. Tal heterogeneidade resulta na tradução de produtos proteicos indesejados, tais como produtos proteicos truncados com sequências de aminoácidos variáveis que exibem expressão e/ou atividade modificada.

[00445] Em algumas modalidades, a eliminação de sítios de emenda, tais como sítios de emenda crípticos, pode melhorar ou otimizar a expressão de um produto transgênico, tal como um polipeptídeo traduzido a partir do transgene, tal como um polipeptídeo de CAR anti- ROR1. O splicing em sítios de emenda críptico de um transgene codificado, tal como uma molécula ROR1 codificada por CAR, pode levar a uma expressão reduzida da proteína, por exemplo, expressão em superfícies celulares, e/ou função reduzida, por exemplo, sinalização intracelular reduzida. São fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam proteínas CAR anti-ROR1 que foram otimizadas para reduzir ou eliminar sítios de emenda crípticos. Também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam proteínas CAR anti-ROR1 que foram otimizadas para a expressão de códons e/ou nas quais uma ou mais sequências, tal como uma identificada através dos métodos ou observações no presente documento relacionadas aos sítios de emenda, estão presentes e/ou nas quais um sítio de emenda identificado, tal como qualquer um dos sítios de emenda identificados no presente documento, não está presente. Dentre os polinucleotídeos fornecidos estão aqueles que exibem abaixo de um determinado grau de heterogeneidade de RNA ou formas de emenda quando expressos sob determinadas condições e/ou introduzidos em um tipo de célula especificado, tal como uma célula T humana, tal como uma célula T humana primária, e células e composições e artigos de manufatura que contém tais polipeptídeos e/ou exibem tais propriedades. Em algumas modalidades, a heterogeneidade do RNA do RNA transcrito é reduzida em mais ou mais do que cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% ou mais comparado com um polinucleotídeo que não foi modificado para remover sítios de emenda crípticos e/ou através de otimização de códons. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos fornecidos que codificam um CAR anti-ROR1 exibem homogeneidade de RNA do RNA transcrito que é de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90% ou 95% ou mais.

[00446] A heterogeneidade do RNA pode ser determinada através de qualquer um de uma série de métodos fornecidos ou descritos no presente documento ou conhecidos. Em algumas modalidades, a heterogeneidade do RNA de um ácido nucleico transcrito é determinada pela amplificação do ácido nucleico transcrito, tal como através de reação em cadeia de polimerase por transcriptase reversa (RT-PCR) seguido por detecção de uma ou mais diferenças, tais como diferenças de tamanho, em um ou produtos mais amplificados. Em algumas modalidades, a heterogeneidade do RNA é determinada com base no número de produtos amplificados de tamanhos diferentes ou a proporção de vários produtos amplificados de tamanhos diferentes. Em algumas modalidades, o RNA, tal como o RNA total ou o RNA poliadenilado citoplasmático, é coletado das células que expressam o transgene a ser otimizado e amplificado pela reação em cadeia de polimerase por transcriptase reversa (RT-PCR) usando um iniciador específico para a região 5' não traduzida (5' UTR), em alguns casos correspondendo a uma porção da sequência do promotor no vetor de expressão, localizada a montante do transgene no RNA transcrito, e um iniciador específico para a região 3' não traduzida (3' UTR), localizado a jusante do transgene expresso na sequência de RNA transcrita ou um iniciador específico para uma sequência dentro do transgene. Em modalidades particulares, pelo menos um iniciador complementar a uma sequência na região 5' não traduzida (UTR) e pelo menos um iniciador complementar a uma sequência na região 3' não traduzida (UTR) são empregados para amplificar o transgene. Pode-se decompor o RNA, tal como o RNA mensageiro, e analisar a heterogeneidade do mesmo através de vários métodos. Métodos exemplificativos não limitativos incluem eletroforese em gel de agarose, eletroforese capilar com base em chip, centrifugação analítica, fracionamento de fluxo de campo e cromatografia, tal como cromatografia de exclusão por tamanho ou cromatografia de líquido.

[00447] Em algumas modalidades, um polinucleotídeo fornecido que codifica um CAR anti-ROR1 fornecido no presente documento ou uma construção fornecida no presente documento inclui modificações para remover um ou mais sítios doadores e/ou aceitadores de emenda que podem contribuir para eventos de emenda e/ou expressão reduzida e/ou maior heterogeneidade de RNA. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos fornecidos são modificados em um ou mais polinucleotídeos na região espaçadora para eliminar ou reduzir eventos de emenda.

[00448] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 120 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 123. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 102 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 105. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 129 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 131.

[00449] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 117. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 126. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 108. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 133.

[00450] Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 136. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 139. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 196.

[00451] São fornecidos receptores antigênicos quiméricos (CARs) exemplificativos específicos para ROR1 e polinucleotídeos que contêm sequências de ácidos nucleicos que codificam a totalidade ou uma porção, fragmento, domínio ou cadeia de qualquer um dos CARs exemplificativos descritos no presente documento. Em algumas modalidades, os CARs exemplificativos contêm um fragmento de anticorpo de ligação à ROR1, tais como aqueles descritos na Seção IA e/ou Tabela 2. Em algumas modalidades, CARs exemplificativos estão dentre aqueles descritos em cada linha da Tabela E1 e/ou Tabela 3. Também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos que codificam os CARs. Em algumas modalidades, o CAR pode ser codificado por mais de um polinucleotídeo diferente, tais como dois ou mais polinucleotídeos. Em algumas de tais modalidades, dois ou mais polinucleotídeos podem, cada um, conter ácidos nucleicos que codificam uma porção, fragmento, domínio ou cadeia do CAR.

[00452] Também são fornecidos no presente documento polinucleotídeos modificados exemplificativos que incluem polinucleotídeos que foram modificados para otimização de códons (O) e/ou eliminação de sítio de emenda (SSE). Exemplos de SEQ ID Nºs: para tais polinucleotídeos são apresentados na Tabela 3, em que são fornecidas sequências de nucleotídeos (nt) exemplificativas para os componentes das construções de CAR exemplificativas antes de eliminação do sítio de emenda e otimização de códons (N/O), sequências de ácidos nucleicos (nt) para os componentes das construções de CAR após eliminação e otimização do sítio de emenda (O/SSE) e as sequências de aminoácidos (aa) que correspondem àquelas codificadas pelas sequências de ácidos nucleicos. Os componentes incluem o scFv anti-ROR1, espaçador, domínio transmembrana (tm), sequência de região de sinalização coestimuladora de 4-1BB (costim), domínio de sinalização de CD3ζ (CD3ζ). As sequências completas dos CARs exemplificativos após a eliminação e otimização do sítio de emenda (CAR) também são fornecidas. Em alguns casos, o polinucleotídeo também inclui a sequência sinalizadora de CD33 (ss), um elemento de salto ribossômico T2A (T2A) e a sequência truncada do receptor de EGF (EGFRt). As sequências polinucleotídicas do CAR exemplificativo são apresentadas em SEQ ID Nºs: 156-161, as quais codificam as sequências de aminoácidos apresentadas em SEQ ID Nºs: 184-189.

[00453] Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% da sequência identidade com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 15 6 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 158 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 158. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 158. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 159 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 159. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 159. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 160 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

160. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 160. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 161. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 161.

[00454] Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

184. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

185. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº:

185. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência se na SEQ ID Nº: 188. Em algumas modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188. Em algumas das modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189 ou uma sequência que codifica uma sequência polipeptídica que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189. Em algumas de quaisquer modalidades, o dito polinucleotídeo contém um ácido nucleico que codifica a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189. Tabela 3. Exemplos de componentes do CAR de ligação à ROR1 (SEQ ID Nºs:) Nucleotídeos (nt) scFv espaçador TM 4-1BB CD3ζ CAR CAR# scFv# N/O O/SSE N/O O/SSE N/O O/SSE N/O O/SSE N/O O/SSE O/SSE F ROR1-1 116 117 192 136 197 198 154 155 182 150 156 A ROR1-2 125 126 192 136 197 198 154 155 182 150 157 G ROR1-1 116 117 193 139 197 198 154 155 182 150 158 I ROR1-3 107 108 193 139 197 198 154 155 182 150 159 R ROR1-2 125 126 193 139 197 198 154 155 182 150 160 B1 ROR1-4 132 133 193 139 197 198 154 155 182 150 161 Aminoácidos (aa) CAR# scFv# scFv espaçador TM 4-1BB CD3z CAR F ROR1-1 118 135 8 12 13 184 A ROR1-2 127 135 8 12 13 185 G ROR1-1 118 138 8 12 13 186 I ROR1-3 109 138 8 12 13 187 R ROR1-2 127 138 8 12 13 188 B1 ROR1-4 134 138 8 12 13 189 II. CÉLULAS MANIPULADAS

[00455] Também são fornecidas células, tais como células modificadas que contêm um receptor recombinante (por exemplo, um receptor antigênico quimérico), tal como um que contém um domínio extracelular que inclui um anticorpo anti-ROR1 ou fragmento conforme descrito no presente documento. Também são fornecidas populações de tais células, composições que contém tais células e/ou enriquecidas por tais células, tal como onde as células que expressam a molécula de ligação à ROR1 perfazem pelo menos 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ou mais por cento do total de células na composição ou células de um determinado tipo, tais como células T ou células CD8+ ou CD4+. Dentre as composições estão composições farmacêuticas e formulações para administração, tal como para terapia celular adotiva.

Também são fornecidos métodos terapêuticos para administrar as células e composições a indivíduos, por exemplo, pacientes.

[00456] Assim, também são fornecidas células geneticamente modificadas que expressam os receptores recombinantes que contêm os anticorpos, por exemplo, células que contêm os CARs. As células geralmente são células eucariotas, tais como células de mamíferos e, normalmente, são células humanas. Em algumas modalidades, as células são derivadas do sangue, medula óssea, linfa ou órgãos linfoides, são células do sistema imune, tais como células da imunidade inata ou adaptativa, por exemplo, células mieloides ou linfoides, incluindo linfócitos, tipicamente células T e/ou células NK. Outras células exemplificativas incluem células-tronco, tais como células-tronco multipotentes e pluripotentes, incluindo células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). As células são, tipicamente, células primárias, tais como aquelas isoladas diretamente de um indivíduo e/ou isoladas de um indivíduo e congeladas. Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais subconjuntos de células T ou outros tipos de células, taisl como populações de células T inteiras, células CD4+, células CD8+ e subpopulações das mesmas, tais como aquelas definidas por função, estado de ativação, maturidade, potencial para capacidades de diferenciação, expansão, recirculação, localização e/ou persistência, especificidade antigênica, tipo de receptor antigênico, presença em um órgão ou compartimento particular, perfil de secreção de marcador ou citocina e/ou grau de diferenciação. Com referência ao indivíduo a ser tratado, as células podem ser alogênicas e/ou autólogas. Dentre os métodos, incluem-se os métodos prontos para uso. Em alguns aspectos, tal como para tecnologias prontas para uso, as células são pluripotentes e/ou multipotentes, tais como células-tronco, tais como células-tronco pluripotentes induzidas (iPSCs). Em algumas modalidades, os métodos incluem isolar células do indivíduo, preparar,

processar, cultivar e/ou manipulá-las, conforme descrito no presente documento, e reintroduzi-las no mesmo paciente, antes ou após a criopreservação.

[00457] Dentre os subtipos e subpopulações de células T e/ou de células T CD4+ e/ou CD8+ estão células T (TN) não expostas, células T efetoras (TEFF), células T de memória e subtipos das mesmas, tais como células T de memória de células-tronco (TSCM), células T de memória centrais (TCM), células T de memória efetoras (TEM) ou células T de memória efetoras terminalmente diferenciadas, linfócitos infiltrantes de tumor (TIL), células T imaturas, células T maduras, células T auxiliares, células T citotóxicas, células T invariantes associadas à mucosa (MAIT), células T reguladoras adaptativas e de ocorrência natural (Treg), células T auxiliares, tais como células TH1, células TH2, células TH3, células TH17, células TH9, células TH22, células T auxiliares foliculares, células T alfa/beta e células T delta/gama.

[00458] Em algumas modalidades, as células são células assassinas naturais (NK). Em algumas modalidades, as células são monócitos ou granulócitos, por exemplo, células mieloides, macrófagos, neutrófilos, células dendríticas, mastócitos, eosinófilos e/ou basófilos.

[00459] Em algumas modalidades, as células incluem um ou mais polinucleotídeos introduzidos por meio de engenharia genética e, assim, expressam produtos recombinantes ou geneticamente modificados de tais polinucleotídeos. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos são heterólogos, ou seja, normalmente não estão presentes em uma célula ou amostra obtida da célula, tal como uma obtida de outro organismo ou célula que, por exemplo, normalmente não é encontrada na célula que está sendo manipulada e/ou um organismo do qual tal célula é derivada. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos não ocorrem naturalmente, tal como um polinucleotídeo não encontrado na natureza, incluindo um que compreende combinações quiméricas de polinucleotídeos que codificam vários domínios de vários tipos de células diferentes. Em algumas modalidades, as células (por exemplo, células modificadas) compreendem um vetor (por exemplo, um vetor viral, vetor de expressão, etc.), conforme descrito no presente documento, tal como um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica um receptor recombinante descrito no presente documento. Vetores e Métodos Para Engenharia Genética

[00460] Também são fornecidos ácidos nucleicos, por exemplo, polinucleotídeos, que codificam os anticorpos e/ou porções, por exemplo, cadeias dos mesmos. Dentre os ácidos nucleicos fornecidos estão aqueles que codificam os anticorpos anti-ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) descritos no presente documento. Também são fornecidos ácidos nucleicos, por exemplo, polinucleotídeos, que codificam um ou mais anticorpos e/ou porções dos mesmos, por exemplo, aqueles que codificam um ou mais dos anticorpos anti-ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) descritos no presente documento e/ou outros anticorpos e/ou porções dos mesmos, por exemplo, anticorpos e/ou porções dos mesmos que se ligam a outros antígenos alvo. Também são fornecidos métodos, ácidos nucleicos, composições e kits para expressar as moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação anti-ROR1), incluindo receptores recombinantes (por exemplo, CARs) que compreendem as moléculas de ligação e para produzir as células geneticamente modificadas que expressam tais moléculas de ligação. Em algumas modalidades, uma ou mais moléculas de ligação, incluindo receptores recombinantes (por exemplo, CARs) podem ser geneticamente modificadas em células ou pluralidade de células. A engenharia genética geralmente envolve a introdução de um ácido nucleico que codifica o componente recombinante ou modificado na célula, tal como através de transdução retroviral, transfecção ou transformação.

[00461] Os ácidos nucleicos podem incluir aqueles que abrangem nucleotídeos e bases naturais e/ou não naturais, por exemplo, incluindo aqueles com modificações na estrutura principal. Os termos "molécula de ácidos nucleicos", "ácido nucleico" e "polinucleotídeo" podem ser usados indistintamente e referem-se a um polímero de nucleotídeos. Estes polímeros de nucleotídeos podem conter nucleotídeos naturais e/ou não naturais e incluem, porém sem limitações, DNA, RNA e PNA. "Sequência de ácidos nucleicos" refere-se à sequência linear de nucleotídeos que compreende a molécula de ácidos nucleicos ou polinucleotídeos. Em alguns aspectos, a sequência de ácidos nucleicos que codifica pelo menos uma porção do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tal como um scFv, conjugados, receptores (por exemplo, CARs) fornecidos no presente documento pode ser otimizada, por exemplo, ter códons otimizados, para expressão em uma célula humana e/ou otimizados para reduzir ou eliminar sítios de emenda crípticos.

[00462] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos também incluem uma ou mais sequências adicionais, tais como aquelas que codificam uma ou mais moléculas adicionais, tal como um marcador ou promotores, elementos reguladores e/ou elementos multicistrônicos. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos fornecidos incluem qualquer um dos polinucleotídeos descritos no presente documento, por exemplo, na Seção I.E.

[00463] Também são fornecidos vetores que contêm os ácidos nucleicos, por exemplo, polinucleotídeos e células hospedeiras que contêm os vetores, por exemplo, para a produção de anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Também são fornecidos métodos para produzir os anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. O ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos que compreende a região VL e/ou uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo). O ácido nucleico pode codificar uma ou mais sequências de aminoácidos que compreendem a região VL e/ou uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo). Em algumas modalidades, o ácido nucleico, por exemplo, polinucleotídeo, codifica uma ou mais regiões VH e/ou uma ou mais regiões VL do anticorpo, em qualquer ordem ou orientação. Em algumas modalidades, o ácido nucleico, por exemplo, polinucleotídeo, codifica uma região VH e uma região VL e a sequência codificadora para a região VH está a montante da sequência codificadora para a região VL. Em algumas modalidades, o ácido nucleico, por exemplo, polinucleotídeo, codifica uma região VH e uma região VL e a sequência codificadora para a região VL está a montante da sequência codificadora para a região VH.

[00464] Também são fornecidos vetores que contêm os ácidos nucleicos, por exemplo, polinucleotídeos e células manipuladas que contêm os vetores, por exemplo, células imunes manipuladas que expressam as moléculas de ligação, tais como receptores recombinantes. Também são fornecidos métodos para a manipulação de células, tais como células imunes, para expressar a molécula de ligação anti-ROR1, tal como um receptor recombinante, por exemplo, um receptor antigênico quimérico (CAR). O ácido nucleico pode codificar uma sequência de aminoácidos que compreende a região VL e/ou uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo (por exemplo, as cadeias leves e/ou pesadas do anticorpo) como o domínio de ligação a antígeno extracelular; um domínio transmembrana e domínios intracelulares, tal como um domínio de CD3 zeta e um domínio de sinalização coestimulador.

[00465] Em uma outra modalidade, são fornecidos um ou mais vetores (por exemplo, vetores de expressão) que compreendem tais polinucleotídeos. Em uma outra modalidade, é fornecida uma célula hospedeira que compreende tais polinucleotídeos. Em tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo. Em outra tal modalidade, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) (1) um vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a região VL do anticorpo e uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo ou (2) um primeiro vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a região VL do anticorpo e um segundo vetor que compreende um ácido nucleico que codifica uma sequência de aminoácidos que compreende a região VH do anticorpo. Em algumas modalidades, uma célula hospedeira compreende (por exemplo, foi transformada com) um ou mais vetores que compreendem um ou mais ácidos nucleicos que codificam uma ou mais uma sequência de aminoácidos que compreende um ou mais anticorpos e/ou porções da mesma, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Em algumas modalidades, uma ou mais destas células hospedeiras são fornecidas. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição que contém uma ou mais destas células hospedeiras. Em algumas modalidades, uma ou mais células hospedeiras podem expressar anticorpos diferentes ou o mesmo anticorpo. Em algumas modalidades, cada uma das células hospedeiras pode expressar mais de um anticorpo.

[00466] Também são fornecidos métodos para produzir os receptores antigênicos quiméricos anti-ROR1. Para a produção recombinante dos receptores quiméricos, uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um anticorpo de receptor quimérico, por exemplo, conforme descrito no presente documento, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser facilmente isoladas e sequenciadas usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo). Em algumas modalidades, é fornecido um método de preparação do receptor antigênico quimérico anti-ROR1, em que o método compreende cultura de uma célula hospedeira que compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do receptor.

[00467] Também são fornecidos métodos de produção de anticorpos anti-ROR1 (incluindo fragmentos de ligação a antígeno). Para a produção recombinante do anticorpo anti-ROR1, uma sequência de ácidos nucleicos ou um polinucleotídeo que codifica um anticorpo, por exemplo, conforme descrito acima, pode ser isolada e inserida em um ou mais vetores para posterior clonagem e/ou expressão em uma célula hospedeira. Estas sequências de ácidos nucleicos podem ser facilmente isoladas e sequenciadas usando procedimentos convencionais (por exemplo, usando sondas de oligonucleotídeos que são capazes de se ligar especificamente a genes que codificam as cadeias pesadas e leves do anticorpo). Em algumas modalidades, é fornecido um método de preparação do anticorpo anti-ROR1, em que o método compreende cultura de uma célula hospedeira que compreende uma sequência de ácidos nucleicos que codifica o anticorpo, conforme fornecido acima, sob condições adequadas para a expressão do anticorpo e, opcionalmente, recuperar o anticorpo a partir da célula hospedeira (ou meio de cultura da célula hospedeira).

[00468] Além de procariotas, micróbios eucariotas, tais como fungos filamentosos ou leveduras, são hospedeiros de clonagem ou expressão adequados para vetores que codificam anticorpos, incluindo fungos e cepas de levedura cujas vias de glicosilação foram modificadas para imitar ou se aproximar daquelas em células humanas, resultando na produção de um anticorpo com um padrão de glicosilação parcial ou totalmente humano. Consulte Gerngross, Nat. Biotech. 22: 1409-1414 (2004) e Li et al., Nat. Biotech. 24: 210-215 (2006).

[00469] Células eucariotas exemplificativas que podem ser usadas para expressar polipeptídeos incluem, porém sem limitações, células COS, incluindo células COS 7; células 293, incluindo células 293-6E; células CHO, incluindo CHO-S, DG44, células Lec13 CHO e células FUT8 CHO; Células PER.C6; e células NSO. Em algumas modalidades, as cadeias pesadas e/ou cadeias leves do anticorpo (por exemplo, região VH e/ou região VL) podem ser expressas em levedura. Consulte, por exemplo, Publicação Norte-Americana N° 2006/0270045 A1. Em algumas modalidades, uma célula hospedeira eucariota particular é selecionada com base em sua capacidade de fazer as modificações pós-traducionais desejadas nas cadeias pesadas e/ou cadeias leves (por exemplo, região VH e/ou região VL). Por exemplo, em algumas modalidades, as células CHO produzem polipeptídeos que têm um nível mais alto de sialilação do que o mesmo polipeptídeo produzido em células 293.

[00470] Em algumas modalidades, o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno fornecido no presente documento é produzido em um sistema isento de células. Sistemas isentos de células exemplificativos são descritos, por exemplo, em Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003).

[00471] As modalidades fornecidas incluem ainda vetores e células hospedeiras e outros sistemas de expressão para expressar e produzir os anticorpos e outras proteínas de ligação a antígeno, incluindo células hospedeiras eucariotas e procariotas, incluindo bactérias, fungos filamentosos e leveduras, bem como células de mamíferos, tais como células humanas, bem como sistemas de expressão isentos de células.

[00472] Em algumas modalidades, a transferência gênica é realizada estimulando primeiro a célula, por exemplo, combinando-a com um estímulo que induz a uma resposta, tal como proliferação, sobrevivência e/ou ativação, por exemplo, conforme medido pela expressão de uma citocina ou marcador de ativação, seguido pela transdução das células ativadas e expansão em cultura para números suficientes para aplicações clínicas.

[00473] Em alguns contextos, a superexpressão de um fator estimulador (por exemplo, uma linfocina ou uma citocina) pode ser tóxica para um indivíduo. Assim, em alguns contextos, as células modificadas incluem segmentos gênicos que fazem com que as células sejam suscetíveis à seleção negativa in vivo, tal como após a administração em imunoterapia adotiva. Por exemplo, em alguns aspectos, as células são manipuladas de modo que possam ser eliminadas como o resultado de uma mudança na condição in vivo do paciente ao qual são administradas. O fenótipo selecionável negativo pode resultar da inserção de um gene que confere sensibilidade a um agente administrado, por exemplo, um composto. Genes selecionáveis negativos incluem o gene da timidina quinase do vírus do Herpes simplex tipo I (HSV-I TK) (Wigler et al., Cell 2: 223, 1977) que confere sensibilidade ao ganciclovir; o gene celular de hipoxantina fosforibosiltransferase (HPRT), o gene celular de adenina fosforibosiltransferase (APRT), citosina desaminase bacteriana, (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89: 33 (1992)).

[00474] Em alguns aspectos, as células são adicionalmente manipuladas para promover a expressão de citocinas ou outros fatores. Vários métodos para a introdução de componentes geneticamente modificados, por exemplo, receptores antigênicos, por exemplo, CARs, são bem conhecidos e podem ser usados com os métodos e composições fornecidos. Métodos exemplificativos incluem aqueles para transferência de polinucleotídeos que codificam os receptores, incluindo via viral, por exemplo, retroviral ou lentiviral, transdução, transposons e eletroporação.

[00475] Em algumas modalidades, os polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células usando partículas de vírus infecciosos recombinantes tais como, por exemplo, vetores derivados do vírus símio 40 (SV40), adenovírus, vírus adeno-associado (AAV). Em algumas modalidades, os polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células T usando vetores lentivirais recombinantes, tais como vetores com base em lentivírus de HIV-1 (consulte, por exemplo, Amado et al., Science. 30 de julho de 1999; 285 (5428): 674- 676) ou vetores retrovirais, tais como vetores retrovirais gama (consulte, por exemplo, Koste et al. (2014) Gene Therapy, 3 de abril de 2014. Doi:

10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28 (10): 1137- 46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 29 de novembro de 2011 (11): 550-557).

[00476] Em algumas modalidades, o vetor retroviral ou vetor lentiviral tem uma sequência de repetição terminal (LTR) longa. Em algumas modalidades, o vetor é derivado do vírus da leucemia de Moloney de murino (MoMLV), vírus do sarcoma mieloproliferativo (MPSV), vírus da célula-tronco embrionária de murino (MESV), vírus da célula-tronco de murino (MSCV), vírus formador de foco em baço (SFFV), vírus da imunodeficiência humana de tipo 1 (HIV-1) ou vírus da imunodeficiência humana de tipo 2 (HIV-2/SIV). Em algumas modalidades, os vetores são autoinativados (SIN). Em algumas modalidades, os vetores são vetores de replicação condicional (mobilizáveis). A maioria dos vetores lentivirais são derivados de lentivírus humanos, felinos ou símios. A maioria dos vetores retrovirais são derivados de retrovírus de murino. Em algumas modalidades, os lentivírus ou retrovírus incluem aqueles derivados de qualquer fonte de células de aves ou mamíferos. Os lentivírus ou retrovírus são tipicamente anfotrópicos, o que significa que são capazes de infectar células hospedeiras de várias espécies, incluindo seres humanos. Em uma modalidade, o gene a ser expresso substitui as sequências retrovirais gag, pol e/ou env. Métodos de transdução lentiviral são conhecidos. Métodos exemplificativos são descritos, por exemplo, em Wang et al. (2012) J. Immunother. 35 (9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637–1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; e Cavalieri et al. (2003) Blood. 102 (2): 497-505. Uma série de sistemas retrovirais ilustrativos também foram descritos (por exemplo, Amado et al., (1999) Science 285 (5428): 674-676, Patentes Norte-Americanas Nos 5.219.740; 6.207.453;

5.219.740; Miller e Rosman (1989) BioTechniques 7: 980-990; Miller (1990) Human Gene Therapy 1: 5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180: 849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 8033-8037; e Boris-Lawrie e Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3: 102-109).

[00477] Em algumas modalidades, polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células T via eletroporação (consulte, por exemplo, Chicaybam et al., (2013) PLoS ONE 8 (3): e60298 e Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7 (16): 1431-1437). Em algumas modalidades, os polinucleotídeos recombinantes são transferidos para células T via transposição (consulte, por exemplo, Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21 (4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; e Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126). Outros métodos de introdução e expressão de material genético em células imunes incluem transfecção de fosfato de cálcio (por exemplo, conforme descrito em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.), fusão de protoplastos, transfecção mediada por lipossoma catiônico; bombardeamento de micropartículas facilitado por partículas de tungstênio (Johnston (1990) Nature 346: 776- 777); e coprecipitação com DNA de fosfato de estrôncio (Brash et al., (1987) Mol. Cell Biol. 7: 2031-2034). Outras abordagens e vetores para transferência dos polinucleotídeos que codificam os produtos recombinantes são aqueles descritos, por exemplo, no documento WO2014055668 e Patente Norte-Americana N° 7.446.190.

[00478] Dentre os polinucleotídeos adicionais, por exemplo, os genes para introdução, estão aqueles para melhorar o resultado da terapia, tal como por meio da promoção da viabilidade e/ou função das células transferidas; genes para fornecer um marcador genético para seleção e/ou avaliação das células, tal como para avaliar a sobrevivência ou localização in vivo; genes para melhorar a segurança, por exemplo, tornar a célula suscetível à seleção negativa in vivo, conforme descrito por Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11: 6 (1991); e Riddell et al., Human Gene Therapy 3: 319-338 (1992); consulte também as publicações PCT/US91/08442 e PCT/US94/05601 para Lupton et al. que descrevem o uso de genes de fusão selecionáveis bifuncionais derivados da fusão de um marcador selecionável positivo dominante com um marcador selecionável negativo. Consulte, por exemplo, Riddell et al., Patente Norte-Americana N° 6.040.177, nas colunas 14-17.

[00479] Em algumas modalidades, o vetor ou construção pode conter um promotor e/ou intensificador ou elementos reguladores para regular a expressão do receptor recombinante codificado. Em alguns exemplos, o promotor e/ou intensificador ou elementos reguladores podem ser promotores, intensificadores e/ou elementos reguladores dependentes da condição. Em alguns exemplos, estes elementos controlam a expressão do transgene. Em alguns exemplos, o transgene do CAR pode ser operativamente ligado a um promotor, tal como um promotor EF1alfa com um intensificador de HTLV1 (SEQ ID Nº: 164). Em alguns exemplos, o transgene do CAR está operativamente ligado a um Elemento Regulador Pós-transcricional do Vírus da Hepatite da Marmota (WHP) (WPRE; SEQ ID Nº: 165), localizado a jusante do transgene.

[00480] Em algumas modalidades, o vetor ou construção pode conter um único promotor que controla a expressão de uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos. Em algumas modalidades, tais moléculas de ácidos nucleicos, por exemplo, transcritos, podem ser multicistrônicas (bicistrônicas ou tricistrônicas; consulte, por exemplo, Patente Norte- Americana N° 6.060.273). Por exemplo, em algumas modalidades, as unidades de transcrição podem ser manipuladas como uma unidade bicistrônica que contém um IRES (sítio de entrada ribossômica interno), o qual permite a coexpressão de produtos gênicos (por exemplo, que codificam um primeiro e um segundo receptor quimérico) através de uma mensagem de um único promotor. Por exemplo, em algumas modalidades, o vetor ou construção pode conter um ácido nucleico que codifica um receptor anti-ROR1 (por exemplo, um CAR anti-ROR1) fornecido no presente documento e um ácido nucleico que codifica uma molécula diferente, separada por um IRES, sob o controle de um único promotor.

[00481] Alternativamente, em alguns casos, um único promotor pode controlar a expressão de um RNA que contém, em um único quadro de leitura aberta (ORF), dois ou três genes (por exemplo, codificação de uma primeira e segunda moléculas de ligação, por exemplo, receptor de anticorpo recombinante) separados entre si por sequências que codificam um peptídeo de autoclivagem (por exemplo, sequências de clivagem 2A) ou um sítio de reconhecimento de protease (por exemplo, furina). O ORF codifica, assim, um único polipeptídeo o qual, durante (no caso de T2A) ou após a tradução, é clivado nas proteínas individuais. Em alguns casos, o peptídeo, tal como T2A, pode fazer com que o ribossomo pule (salto ribossômico) a síntese de uma ligação peptídica no C-término de um elemento 2A, levando à separação entre o final da sequência 2A e o próximo peptídeo a jusante (consulte, por exemplo, de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2: 13 (2004) e deFelipe et al., Traffic 5: 616-626 (2004)). Muitos elementos 2A são conhecidos. Exemplos de sequências 2A que podem ser usadas nos métodos e polinucleotídeos descritos no presente documento incluem, sem limitação, sequências 2A do vírus da febre aftosa (F2A, por exemplo, SEQ ID Nº: 21 ou 168), vírus da rinite A equina (E2A, por exemplo, SEQ ID Nº: 20 ou 167), vírus de Thosea asigna (T2A, por exemplo, SEQ ID Nº: 6, 17 ou 166) e tescovírus-1 suíno (P2A, por exemplo, SEQ ID Nº: 18 ou 19) conforme descrito na Publicação de Patente Norte-Americana N° 20070116690. Em algumas modalidades, um ou mais promotores diferentes ou separados controlam a expressão de uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam uma ou mais moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes.

[00482] Qualquer um dos receptores recombinantes fornecidos no presente documento, por exemplo, receptores recombinantes anti- ROR1 e/ou os receptores recombinantes adicionais, pode ser codificado por polinucleotídeos que contêm uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam os receptores, em quaisquer combinações ou arranjos. Por exemplo, um, dois, três ou mais polinucleotídeos podem codificar um, dois, três ou mais receptores ou domínios diferentes. Em algumas modalidades, um vetor ou construção contém moléculas de ácidos nucleicos que codificam um ou mais receptores recombinantes e um vetor ou construção separada contém moléculas de ácidos nucleicos que codificam uma molécula de ligação adicional, por exemplo, anticorpo e/ou receptor recombinante, tal como um receptor anti-ROR1 (por exemplo, CAR anti-ROR1).

[00483] Em algumas modalidades, as moléculas de ácidos nucleicos também podem codificar um ou mais marcadores substitutos, tal como proteína fluorescente (por exemplo, proteína fluorescente verde (GFP)) ou um marcador na superfície celular (por exemplo, um marcador na superfície truncado, tal como como EGFR truncado (tEGFR), que pode ser usado para confirmar a transdução ou manipulação da célula para expressar o receptor. Por exemplo, em alguns aspectos, genes marcadores extrínsecos são usados em conjunto com terapias celulares manipuladas para permitir a detecção ou seleção de células e, em alguns casos, também para promover o suicídio celular por ADCC. Genes marcadores exemplificativos incluem receptor de fator de crescimento epidérmico truncado (EGFRt), o qual pode ser coexpresso com um transgene de interesse (por exemplo, um CAR ou TCR) em células transduzidas (consulte, por exemplo, Patente Norte-Americana N° 8.802.374). O EGFRt contém um epitopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux). Por esta razão, o Erbitux pode ser usado para identificar ou selecionar células que foram manipuladas com a construção de EGFRt, incluindo em células também comanipuladas com outro receptor recombinante, tal como um receptor antigênico quimérico (CAR).

[00484] Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica as moléculas de ligação contém ainda uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um ou mais marcador(es). Em algumas modalidades, o um ou mais marcador(es) é um marcador de transdução, marcador substituto e/ou um marcador de seleção.

[00485] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de transdução ou um marcador substituto. Um marcador de transdução ou um marcador substituto pode ser usado para detectar células que foram introduzidas com o polinucleotídeo, por exemplo, um polinucleotídeo que codifica um receptor recombinante. Em algumas modalidades, o marcador de transdução pode indicar ou confirmar a modificação de uma célula. Em algumas modalidades, o marcador substituto é uma proteína que é produzida para ser coexpressa na superfície da célula com o receptor recombinante, por exemplo, CAR. Em modalidades particulares, tal marcador substituto é uma proteína da superfície que foi modificada para ter pouca ou nenhuma atividade. Em determinadas modalidades, o marcador substituto é codificado no mesmo polinucleotídeo que codifica o receptor recombinante. Em algumas modalidades, a sequência de ácidos nucleicos que codifica o receptor recombinante está operativamente ligada a uma sequência de ácidos nucleicos que codifica um marcador, opcionalmente separada por um sítio de entrada ribossômica interno (IRES) ou um ácido nucleico que codifica um peptídeo de autoclivagem ou um peptídeo que causa o salto ribossômico, tal como uma sequência 2A, tal como uma sequência T2A, P2A, E2A ou F2A. Genes marcadores extrínsecos podem, em alguns casos, ser usados em conjunto com células modificadas para permitir a detecção ou seleção de células e, em alguns casos, também para promover o suicídio celular.

[00486] Marcadores substitutos exemplificativos podem incluir formas truncadas de polipeptídeos na superfície celular, tais como formas truncadas que não são funcionais e não transduzem ou não são capazes de transduzir um sinal ou um sinal normalmente transduzido pela forma de comprimento completo do polipeptídeo da superfície celular e/ou não são ou não são capazes de internalizar. Polipeptídeos da superfície celular truncados exemplificativos, incluindo formas truncadas de fatores de crescimento ou outros receptores, tal como um receptor de fator de crescimento epidérmico humano truncado 2 (tHER2), um receptor de fator de crescimento epidérmico truncado

(tEGFR, sequência de tEGFR exemplificativa apresentada em SEQ ID Nº: 7, 16 ou 153) ou um antígeno da membrana específico para próstata (PSMA) ou uma forma modificada do mesmo. O tEGFR pode conter um epitopo reconhecido pelo anticorpo cetuximabe (Erbitux) ou outro anticorpo anti-EGFR terapêutico ou molécula de ligação que pode ser usada para identificar ou selecionar células que foram manipuladas com a construção de tEGFR e uma proteína exógena codificada e/ou eliminar ou separar células que expressam a proteína exógena codificada. Consulte Patente Norte-Americana No 8.802.374 e Liu et al., Nature Biotech. Abril de 2016; 34 (4): 430–434). Em alguns aspectos, o marcador, por exemplo marcador substituto, inclui a totalidade ou parte (por exemplo, forma truncada) de CD34, um NGFR, uma CD19 ou uma CD19 truncada, por exemplo, uma CD19 não humana truncada ou receptor de fator de crescimento epidérmico (por exemplo, tEGFR).

[00487] Em algumas modalidades, o marcador é ou compreende uma proteína fluorescente, tal como proteína fluorescente verde (GFP), proteína fluorescente verde intensificada (EGFP), tal como GFP Super- Fold (sfGFP), proteína fluorescente vermelha (RFP), tal como tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed ou DsRed2, proteína fluorescente ciano (CFP), proteína fluorescente azul verde (BFP), proteína fluorescente azul intensificada (EBFP) e proteína fluorescente amarela (YFP) e variantes das mesmas, incluindo variantes de espécies, variantes monoméricas e variantes com códons otimizados e/ou intensificadas das proteínas fluorescentes. Em algumas modalidades, o marcador é ou compreende uma enzima, tal como uma luciferase, o gene lacZ de E. coli, fosfatase alcalina, fosfatase alcalina embrionária secretada (SEAP), cloranfenicol acetiltransferase (CAT). Genes repórter emissores de luz exemplificativos incluem luciferase (luc), β-galactosidase, cloranfenicol acetiltransferase (CAT), β- glucuronidase (GUS) ou variantes dos mesmos.

[00488] Em algumas modalidades, o marcador é um marcador de seleção. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é ou compreende um polipeptídeo que confere resistência a agentes exógenos ou fármacos. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é um gene de resistência a antibióticos. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é um gene de resistência a antibióticos que confere resistência a antibióticos a uma célula de mamífero. Em algumas modalidades, o marcador de seleção é ou compreende um gene de resistência à Puromicina, um gene de resistência à Higromicina, um gene de resistência à Blasticidina, um gene de resistência à Neomicina, um gene de resistência à Geneticina ou um gene de resistência à Zeocina ou uma forma modificada dos mesmos.

[00489] Em algumas modalidades, o ácido nucleico que codifica o marcador está operativamente ligado a um polinucleotídeo que codifica uma sequência ligante, tal como uma sequência ligante clivável, por exemplo, uma T2A. Por exemplo, um marcador e, opcionalmente, uma sequência ligante, pode ser qualquer um conforme descrito na Pub. PCT. Nº WO2014031687. Por exemplo, o marcador pode ser um EGFR truncado (tEGFR) o qual é, opcionalmente, ligado a uma sequência ligante, tal como uma sequência ligante clivável T2A. Um polipeptídeo exemplificativo para um EGFR truncado (por exemplo, tEGFR) compreende a sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 7, 16 ou 153 ou uma sequência de aminoácidos que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais identidade de sequência com SEQ ID Nº: 7, 16 ou 153.

[00490] Em algumas modalidades, o marcador é uma molécula, por exemplo, proteína da superfície celular, não encontrada naturalmente em células T ou não encontrada naturalmente na superfície das células T ou uma porção das mesmas.

[00491] Em algumas modalidades, a molécula é uma molécula não própria, por exemplo, proteína não própria, ou seja, uma que não é reconhecida como "própria" pelo sistema imune do hospedeiro ao qual as células serão transferidas de forma adotiva.

[00492] Em algumas modalidades, o marcador não tem função terapêutica e/ou não produz nenhum efeito além de ser usado como um marcador para engenharia genética, por exemplo, para selecionar células manipuladas com sucesso. Em outras modalidades, o marcador pode ser uma molécula terapêutica ou molécula que exerce algum efeito desejado, tal como um ligante para uma célula a ser encontrada in vivo, tal como uma molécula do ponto de verificação imune ou coestimuladora para aumentar e/ou amortecer as respostas das células após a transferência adotiva e encontro com o ligante.

[00493] Também são fornecidas composições que contêm uma ou mais das moléculas de ácidos nucleicos, vetores ou construções, tal como qualquer um descrito acima. Em algumas modalidades, as moléculas de ácidos nucleicos, vetores, construções ou composições podem ser usados para manipular células, tais como células T, para expressar qualquer uma das moléculas de ligação, por exemplo, anticorpo ou receptor recombinante e/ou as moléculas de ligação adicionais. B. Preparação de Células Para Manipulação

[00494] Em algumas modalidades, a preparação das células manipuladas inclui uma ou mais etapas de cultura e/ou preparação. As células para introdução do receptor recombinante (por exemplo, CAR) podem ser isoladas de uma amostra, tal como uma amostra biológica, por exemplo, uma obtida ou derivada de um indivíduo. Em algumas modalidades, o indivíduo do qual a célula é isolada é aquele que tem a doença ou condição ou precisa de uma terapia celular ou ao qual a terapia celular será administrada. O indivíduo, em algumas modalidades, é um ser humano que precisa de uma intervenção terapêutica particular, tal como a terapia celular adotiva para a qual as células estão sendo isoladas, processadas e/ou manipuladas.

[00495] Consequentemente, as células, em algumas modalidades, são células primárias, por exemplo, células humanas primárias. Amostras incluem tecido, fluido e outras amostras retiradas diretamente do indivíduo, bem como amostras resultantes de uma ou mais etapas de processamento, tal como separação, centrifugação, manipulação genética (por exemplo, transdução com vetor viral), lavagem e/ou incubação. A amostra biológica pode ser uma amostra obtida diretamente de uma fonte biológica ou uma amostra que é processada. Amostras biológicas incluem, porém sem limitações, fluidos corporais, tais como sangue, plasma, soro, líquido cefalorraquidiano, líquido sinovial, urina e suor, amostras de tecido e órgãos, incluindo amostras processadas derivadas dos mesmos.

[00496] Em alguns aspectos, a amostra da qual as células são derivadas ou isoladas é sangue ou uma amostra derivada de sangue ou é ou é derivada de um produto de aferese ou leucaferese. Amostras exemplificativas incluem sangue total, células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), leucócitos, medula óssea, timo, biópsia de tecido, tumor, leucemia, linfoma, nódulo linfático, tecido linfoide associado ao intestino, tecido linfoide associado à mucosa, baço, outros tecidos linfoides, fígado, pulmão, estômago, intestino, cólon, rim, pâncreas, mama, osso, próstata, colo do útero, testículos, ovários, amígdalas ou outro órgão e/ou células derivadas dos mesmos. As amostras incluem, no contexto da terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, amostras de fontes autólogas e alogênicas.

[00497] Em algumas modalidades, as células são derivadas de linhagens de células, por exemplo, linhagens de células T. As células, em algumas modalidades, são obtidas de uma fonte xenogênica, por exemplo, de camundongo, rato, primata não humano ou porco.

[00498] Em algumas modalidades, o isolamento das células inclui uma ou mais etapas de separação de células com base em preparação e/ou não afinidade. Em alguns exemplos, as células são lavadas, centrifugadas e/ou incubadas na presença de um ou mais reagentes, por exemplo, para remover componentes indesejados, enriquecer para componentes desejados, lisar ou remover células sensíveis a reagentes específicos. Em alguns exemplos, as células são separadas com base em uma ou mais propriedades, tais como densidade, propriedades aderentes, tamanho, sensibilidade e/ou resistência a componentes específicos.

[00499] Em alguns exemplos, as células sanguíneas em circulação de um indivíduo são obtidas, por exemplo, por meio de aferese ou leucaferese. As amostras, em alguns aspectos, contêm linfócitos, incluindo células T, monócitos, granulócitos, células B, outros glóbulos brancos nucleados, glóbulos vermelhos e/ou plaquetas e, em alguns aspectos, contêm células diferentes de glóbulos vermelhos e plaquetas.

[00500] Em algumas modalidades, as células sanguíneas coletadas do indivíduo são lavadas, por exemplo, para remover a porção plasmática e colocar as células em um tampão ou meio apropriado para as etapas de processamento subsequentes. Em algumas modalidades, as células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Em algumas modalidades, a solução de lavagem carece de cálcio e/ou magnésio e/ou muitos ou todos os cátions divalentes. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada em uma centrífuga de "fluxo direto" semiautomática (por exemplo, o processador de células Cobe 2991, Baxter) de acordo com as instruções do fabricante. Em alguns aspectos, uma etapa de lavagem é realizada através de filtração de fluxo tangencial (TFF) de acordo com as instruções do fabricante. Em algumas modalidades, as células são ressuspensas em uma variedade de tampões biocompatíveis após a lavagem tal como, por exemplo, PBS isento de Ca++/Mg++. Em determinadas modalidades, os componentes de uma amostra de células sanguíneas são removidos e as células diretamente ressuspensas no meio de cultura.

[00501] Em algumas modalidades, os métodos incluem métodos de separação de células com base na densidade, tal como a preparação de glóbulos brancos a partir do sangue periférico por meio de lise dos glóbulos vermelhos e centrifugação através de um gradiente de Percoll ou Ficoll.

[00502] Em algumas modalidades, os métodos de isolamento incluem a separação de diferentes tipos de células com base na expressão ou presença na célula de uma ou mais moléculas específicas, tais como marcadores na superfície, por exemplo, proteínas da superfície, marcadores intracelulares ou ácido nucleico. Em algumas modalidades, qualquer método conhecido para separação com base em tais marcadores pode ser usado. Em algumas modalidades, a separação é uma separação com base em afinidade ou imunoafinidade. Por exemplo, o isolamento, em alguns aspectos, inclui a separação de células e populações de células com base na expressão das células ou nível de expressão de um ou mais marcadores, normalmente marcadores na superfície celular, por exemplo, através de incubação com um anticorpo ou parceiro de ligação que se liga especificamente a tais marcadores, seguido geralmente por etapas de lavagem e separação de células que se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação daquelas células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação.

[00503] Estas etapas de separação podem ser com base em seleção positiva, na qual as células que se ligaram aos reagentes são retidas para uso posterior, e/ou seleção negativa, na qual as células que não se ligaram ao anticorpo ou parceiro de ligação são retidas. Em alguns exemplos, ambas as frações são retidas para uso posterior. Em alguns aspectos, a seleção negativa pode ser particularmente útil onde nenhum anticorpo está disponível que identifica especificamente um tipo de célula em uma população heterogênea, de modo que a separação é melhor realizada com base em marcadores expressos por células diferentes da população desejada.

[00504] A separação não precisa resultar em 100% de enriquecimento ou remoção de uma determinada população de células ou células que expressam um determinado marcador. Por exemplo, seleção positiva ou enriquecimento para células de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um marcador, refere-se ao aumento do número ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar em uma ausência completa de células que não expressam o marcador. Da mesma forma, a seleção negativa, remoção ou esgotamento de células de um tipo particular, tais como aquelas que expressam um marcador, refere-se à diminuição do número ou porcentagem de tais células, mas não precisa resultar na remoção completa de todas estas células.

[00505] Em alguns exemplos, vários ciclos de etapas de separação são realizados, em que a porção selecionada positiva ou negativamente de uma etapa é submetida à outra etapa de separação, tal como uma seleção positiva ou negativa subsequente. Em alguns exemplos, uma única etapa de separação pode esgotar células que expressam vários marcadores simultaneamente, tal como por meio de incubação das células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação, cada um específico para um marcador direcionado para seleção negativa. Da mesma forma, múltiplos tipos de células podem ser simultaneamente selecionados positivamente ao incubar as células com uma pluralidade de anticorpos ou parceiros de ligação expressos nos vários tipos de células.

[00506] Por exemplo, em alguns aspectos, subpopulações específicas de células T, tais como células positivas ou que expressam altos níveis de um ou mais marcadores na superfície, por exemplo, células T CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ e/ou CD45RO+, são isoladas por meio de técnicas de seleção positiva ou negativa.

[00507] Por exemplo, células T CD3+, CD28+ podem ser selecionadas positivamente usando esferas magnéticas conjugadas anti-CD3/anti-CD28 (por exemplo, DYNABEADS M-450 CD3/CD28 T Cell Expander, MACSiBeads™, etc.).

[00508] Em algumas modalidades, o isolamento é realizado por enriquecimento para uma determinada população de células através de seleção positiva ou depleção de uma determinada população de células através de seleção negativa. Em algumas modalidades, a seleção positiva ou negativa é realizada ao incubar as células com um ou mais anticorpos ou outro agente de ligação que se liga especificamente a um ou mais marcadores expressos ou expressos na superfície (marcador+) em um nível relativamente mais alto (marcador high) nas células positiva ou negativamente selecionadas, respectivamente.

[00509] Em algumas modalidades, as células T são separadas de uma amostra de PBMC através de seleção negativa de marcadores expressos em células não T, tais como células B, monócitos ou outros glóbulos brancos, tal como CD14. Em alguns aspectos, uma etapa de seleção de CD4+ ou CD8+ é usada para separar células T auxiliares CD4+ e CD8+ citotóxicas. Estas populações CD4+ e CD8+ podem ser ainda classificadas em subpopulações através de seleção positiva ou negativa para marcadores expressos ou expressos em um grau relativamente mais alto em uma ou mais subpopulações de células T não expostas, de memória e/ou efetoras.

[00510] Em algumas modalidades, as células CD8+ são ainda enriquecidas ou esgotadas de células-tronco não expostas, de memória central, de memória efetoras e/ou de memória centrais, tal como através de preferência seleção positiva ou negativa com base em antígenos na superfície associados à respectiva subpopulação. Em algumas modalidades, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é realizado para aumentar determinadas características, tal como melhorar a sobrevivência de longo prazo, expansão e/ou enxertia após a administração o que, em alguns aspectos, é particularmente robusto em tais subpopulações (consulte Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701). Em algumas modalidades, a combinação de células T CD8+ enriquecidas com TCM e células T CD4+ aumenta ainda mais a resposta.

[00511] Em modalidades, as células T de memória estão presentes tanto em subconjuntos CD62L+ como CD62L- de linfócitos de sangue periférico CD8+. PBMCs podem ser enriquecidas ou esgotadas de porções CD62L-CD8+ e/ou CD62L+CD8+, tal como o uso de anticorpos anti-CD8 e anti-CD62L.

[00512] Em algumas modalidades, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é com base na expressão na superfície positiva ou alta de CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 e/ou CD 127; em alguns aspectos, é com base na seleção negativa por células que expressam ou expressam CD45RA e/ou granzima B. Em alguns aspectos, o isolamento de uma população CD8+ enriquecida por células TCM é realizado através de depleção de células que expressam CD4, CD14, CD45RA e seleção positiva ou enriquecimento por células que expressam CD62L. Em um aspecto, o enriquecimento por células T de memória centrais (TCM) é realizado começando com uma porção negativa de células selecionadas com base na expressão de CD4, a qual é submetida a uma seleção negativa com base na expressão de CD14 e CD45RA e uma seleção positiva com base em CD62L. Estas seleções, em alguns aspectos, são realizadas simultaneamente e, em outros aspectos, são realizadas sequencialmente, em qualquer ordem.

Em alguns aspectos, a mesma etapa de seleção com base na expressão de CD4 usada na preparação da população ou subpopulação de células CD8+ também é usada para gerar a população ou subpopulação de células CD4+, de modo que tanto frações positivas como negativas provenientes da separação com base em CD4 sejam retidas e usadas em etapas subsequentes dos métodos, opcionalmente após uma ou mais etapas de seleção positiva ou negativa adicionais.

[00513] Em um exemplo particular, uma amostra de PBMCs ou outra amostra de glóbulos brancos é submetida à seleção de células CD4+, onde as frações negativas e positivas são retidas. A porção negativa é, então, submetida à seleção negativa com base na expressão de CD14 e CD45RA e seleção positiva com base em um marcador característico de células T de memória centrais, tais como CD62L ou CCR7, onde as seleções positiva e negativa são realizadas em qualquer ordem.

[00514] As células T auxiliares CD4+ são classificadas em células não expostas, de memória centrais e efetoras por meio da identificação de populações de células que têm antígenos na superfície celular. Os linfócitos CD4+ podem ser obtidos por meio de métodos padrão. Em algumas modalidades, os linfócitos T CD4+ não expostos são células T CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+. Em algumas modalidades, as células CD4+ de memória centrais são CD62L+ e CD45RO+. Em algumas modalidades, as células efetoras CD4+ são CD62L- e CD45RO-.

[00515] Em um exemplo, para enriquecer por células CD4+ através de seleção negativa, um coquetel de anticorpos monoclonais inclui, tipicamente, anticorpos contra CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR e CD8. Em algumas modalidades, o anticorpo ou parceiro de ligação é ligado a um suporte sólido ou matriz, tal como uma esfera magnética ou esfera paramagnética, para permitir a separação de células para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, em algumas modalidades,

as células e as populações de células são separadas ou isoladas usando técnicas de separação imunomagnética (ou afinidade magnética) (revisadas em Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, páginas 17-25 Editado por: S.A. Brooks e U. Schumacher © Humana Press Inc., Totowa, NJ).

[00516] Em alguns aspectos, a amostra ou composição de células a serem separadas é incubada com um material pequeno, magnetizável ou magneticamente responsivo, tais como partículas magneticamente responsivas ou micropartículas, tais como esferas paramagnéticas (por exemplo, tais como esferas Dynabeads ou MACS). O material magneticamente responsivo, por exemplo, partícula, geralmente é direta ou indiretamente ligado a um parceiro de ligação, por exemplo, um anticorpo, que se liga especificamente a uma molécula, por exemplo, marcador na superfície, presente na célula, células ou população de células que se deseja separar, por exemplo, que se deseja selecionar negativa ou positivamente.

[00517] Em algumas modalidades, a partícula ou esfera magnética compreende um material magneticamente responsivo ligado a um elemento de ligação específico, tal como um anticorpo ou outro parceiro de ligação. Há muitos materiais magneticamente responsivos bem conhecidos usados em métodos de separação magnética. Partículas magnéticas adequadas incluem aquelas descritas em Molday, Patente Norte-Americana N° 4.452.773 e no Relatório Descritivo da Patente Europeia EP 452342 B, os quais são incorporados ao presente documento a título de referência. Partículas de tamanho coloidal, tais como aquelas descritas em Owen, Patente Norte-Americana N°

4.795.698, e Liberti et al., Patente Norte-Americana N° 5.200.084, são outros exemplos.

[00518] A incubação geralmente é realizada sob condições pelas quais os anticorpos ou parceiros de ligação ou moléculas, tais como anticorpos secundários ou outros reagentes que se ligam especificamente a tais anticorpos ou parceiros de ligação, que estão ligados à partícula ou esfera magnética, se ligam especificamente às moléculas da superfície celular, se presentes nas células da amostra.

[00519] Em alguns aspectos, a amostra é colocada em um campo magnético e as células com partículas magneticamente responsivas ou magnetizáveis ligadas à mesma serão atraídas para o ímã e separadas das células não marcadas. Para seleção positiva, as células que são atraídas pelo ímã são retidas; para seleção negativa, as células que não são atraídas (células não marcadas) são retidas. Em alguns aspectos, uma combinação de seleção positiva e negativa é realizada durante a mesma etapa de seleção, onde as frações positivas e negativas são retidas e posteriormente processadas ou submetidas a outras etapas de separação.

[00520] Em determinadas modalidades, as partículas responsivas magneticamente são revestidas em anticorpos primários ou outros parceiros de ligação, anticorpos secundários, lectinas, enzimas ou estreptavidina. Em determinadas modalidades, as partículas magnéticas são fixadas às células por meio de um revestimento de anticorpos primários específicos para um ou mais marcadores. Em determinadas modalidades, as células, em vez das esferas, são marcadas com um anticorpo primário ou parceiro de ligação e, em seguida, partículas magnéticas revestidas de anticorpo secundário específico para tipo de célula ou outro parceiro de ligação (por exemplo, estreptavidina) são adicionadas. Em determinadas modalidades, partículas magnéticas revestidas com estreptavidina são usadas em conjunto com anticorpos primários ou secundários biotinilados.

[00521] Em algumas modalidades, as partículas magneticamente responsivas são deixadas ligadas às células que devem ser subsequentemente incubadas, cultivadas e/ou manipuladas; em alguns aspectos, as partículas são deixadas ligadas às células para administração a um paciente. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis ou magneticamente responsivas são removidas das células. Métodos para remover partículas magnetizáveis de células são conhecidos e incluem, por exemplo, o uso de anticorpos não marcados concorrentes, partículas magnetizáveis ou anticorpos conjugados a ligantes cliváveis, etc. Em algumas modalidades, as partículas magnetizáveis são biodegradáveis.

[00522] Em algumas modalidades, a seleção com base em afinidade é via classificação de células ativadas magneticamente (MACS) (Miltenyi Biotec, Auburn, CA). Os sistemas Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) são capazes de seleção de alta pureza de células com partículas magnetizadas ligadas às mesmas. Em determinadas modalidades, o MACS opera em um modo pelo qual as espécies não alvo e alvo são sequencialmente eluídas após aplicação do campo magnético externo. Ou seja, as células presas às partículas magnetizadas são mantidas no lugar, enquanto que as espécies não presas são eluídas. Então, após conclusão desta primeira etapa de eluição, as espécies que estavam presas ao campo magnético e foram impedidas de serem eluídas são liberadas de alguma maneira para que possam ser eluídas e recuperadas. Em determinadas modalidades, as células não-alvo são marcadas e esgotadas da população heterogênea de células.

[00523] Em determinadas modalidades, o isolamento ou separação é realizado usando um sistema, dispositivo ou equipamento que realiza uma ou mais das etapas de isolamento, preparação celular, separação, processamento, incubação, cultura e/ou formulação dos métodos. Em alguns aspectos, o sistema é usado para realizar cada uma destas etapas em um ambiente fechado ou estéril, por exemplo, para minimizar o erro, manuseio do usuário e/ou contaminação. Em um exemplo, o sistema é um sistema conforme descrito nos documentos WO2009/072003 ou US 20110003380.

[00524] Em algumas modalidades, o sistema ou equipaento realiza uma ou mais, por exemplo, todas as etapas de isolamento, processamento, manipulação e formulação em um sistema integrado ou autocontido e/ou de forma automatizada ou programável. Em alguns aspectos, o sistema ou equipamento inclui um computador e/ou programa de computador em comunicação com o sistema ou equipamento, o que permite que um usuário programe, controle, avalie o resultado e/ou ajuste vários aspectos das etapas de processamento, isolamento, manipulação e formulação.

[00525] Em alguns aspectos, a separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CliniMACS (Miltenyi Biotec), por exemplo, para separação automatizada de células em um nível de escala clínica em um sistema fechado e estéril. Os componentes podem incluir um microcomputador integrado, unidade de separação magnética, bomba peristáltica e várias válvulas de estrangulamento. O computador integrado, em alguns aspectos, controla todos os componentes do instrumento e direciona o sistema para realizar procedimentos repetidos em uma sequência padronizada. A unidade de separação magnética, em alguns aspectos, inclui um ímã permanente móvel e um suporte para a coluna de seleção. A bomba peristáltica controla a vazão em todo o conjunto de tubos e, juntamente com as válvulas de estrangulamento, assegura o fluxo controlado de tampão através do sistema e a suspensão contínua das células.

[00526] O sistema CliniMACS, em alguns aspectos, usa partículas magnetizáveis acopladas a anticorpos que são fornecidas em uma solução estéril não pirogênica. Em algumas modalidades, após marcação das células com partículas magnéticas, as células são lavadas para remover o excesso de partículas. Um saco de preparação de células é, então, conectado ao conjunto de tubos o qual, por sua vez, é conectado a um saco que contém tampão e um saco de coleta de células. O conjunto de tubos consiste em tubos estéreis pré-montados, incluindo uma pré-coluna e uma coluna de separação e são para uso único. Após o início do programa de separação, o sistema aplica automaticamente a amostra de células na coluna de separação. As células marcadas são retidas na coluna, enquanto que as células não marcadas são removidas através de uma série de etapas de lavagem. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento não são marcadas e não são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento são marcadas e são retidas na coluna. Em algumas modalidades, as populações de células para uso com os métodos descritos no presente documento são eluídas da coluna após remoção do campo magnético e são coletadas dentro do saco de coleta de células.

[00527] Em determinadas modalidades, a etapa de separação e/ou outras etapas são realizadas usando o sistema CliniMACS Prodigy (Miltenyi Biotec). O sistema CliniMACS Prodigy, em alguns aspectos, é equipado com uma unidade de processamento de células que permite a lavagem e fracionamento automatizado de células por meio de centrifugação. O sistema CliniMACS Prodigy também pode incluir uma câmera integrada e um software de reconhecimento de imagem que determina o ponto final de fracionamento de célula ideal por meio do discernimento das camadas macroscópicas do produto da célula de origem. Por exemplo, o sangue periférico pode ser automaticamente separado em camadas de eritrócitos, glóbulos brancos e plasma. O sistema CliniMACS Prodigy também pode incluir uma câmara de cultivo de células integrada que realiza protocolos de cultura de células tais como, por exemplo, diferenciação e expansão de células, carregamento de antígeno e cultura de células de longo prazo. As aberturas de entrada podem permitir a remoção estéril e a reposição de meio e as células podem ser monitoradas usando um microscópio integrado (consulte, por exemplo, Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 651–660, Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82 e Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701).

[00528] Em algumas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) por meio de citometria de fluxo, na qual as células coradas para múltiplos marcadores na superfície celular são transportadas em uma corrente fluídica. Em algumas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) por meio de classificação em escala preparativa (FACS). Em determinadas modalidades, uma população de células descrita no presente documento é coletada e enriquecida (ou esgotada) pelo uso de sistemas microeletromecânicos (MEMS) em combinação com um sistema de detecção com base em FACS (consulte, por exemplo, documento WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567- 1573; e Godin et al. (2008) J Biophoton. 1 (5) : 355-376. Em ambos os casos, as células podem ser marcadas com vários marcadores, permitindo o isolamento de subconjuntos de células T bem definidos em alta pureza.

[00529] Em algumas modalidades, os anticorpos ou parceiros de ligação são marcados com um ou mais marcadores detectáveis para facilitar a separação para seleção positiva e/ou negativa. Por exemplo, a separação pode ser com base na ligação a anticorpos marcados com fluorescência. Em alguns exemplos, a separação de células com base na ligação de anticorpos ou outros parceiros de ligação específicos para um ou mais marcadores na superfície celular são transportados em uma corrente fluídica, tal como através de classificação de células ativadas por fluorescência (FACS), incluindo em escala preparativa (FACS) e/ou chips de sistemas microeletromecânicos (MEMS), por exemplo, em combinação com um sistema de detecção de citometria de fluxo. Estes métodos permitem a seleção positiva e negativa com base em vários marcadores simultaneamente.

[00530] Em algumas modalidades, os métodos de preparação incluem etapas para congelamento, por exemplo, criopreservação, das células, antes ou após o isolamento, incubação e/ou manipulação. Em algumas modalidades, a etapa de congelamento e descongelamento subsequente remove granulócitos e, até determinado ponto, monócitos na população de células. Em algumas modalidades, as células são suspensas em uma solução de congelamento, por exemplo, após uma etapa de lavagem para remover o plasma e as plaquetas. Qualquer uma de uma variedade de soluções e parâmetros de congelamento conhecidos pode, em alguns aspectos, ser usada. Um exemplo envolve o uso de PBS que contém DMSO a 20% e albumina de soro humano (HSA) a 8% ou outro meio de congelamento de células adequado. Este é, então, diluído para 1:1 com meio de modo que a concentração final de DMSO e HSA sejam 10% e 4%, respectivamente. As células são, então, congeladas a −80°C em uma taxa de 1°C por minuto e armazenadas na fase de vapor de um tanque de armazenamento de nitrogênio líquido.

[00531] Em algumas modalidades, os métodos fornecidos incluem etapas de cultivo, incubação, cultura e/ou manipulação genética. Por exemplo, em algumas modalidades, são fornecidos métodos para incubar e/ou manipular as populações de células esgotadas e composições iniciadoras de cultura.

[00532] Assim, em algumas modalidades, as populações de células são incubadas em uma composição iniciadora de cultura. A incubação e/ou manipulação pode ser realizada em um recipiente de cultura, tal como uma unidade, câmara, cavidade, coluna, tubo, conjunto de tubulação, válvula, frasco, disco de cultura, saco ou outro recipiente para cultura ou cultivo de células.

[00533] Em algumas modalidades, as células são incubadas e/ou cultivadas antes ou em conjunto com a manipulação genética. As etapas de incubação podem incluir cultura, cultivo, estimulação, ativação e/ou propagação. Em algumas modalidades, as composições ou células são incubadas na presença de condições estimulantes ou um agente estimulador. Tais condições incluem aquelas concebidas para induzir à proliferação, expansão, ativação e/ou sobrevivência de células na população, para imitar a exposição ao antígeno e/ou para preparar as células para manipulação genética, tal como para a introdução de um receptor antigênico recombinante.

[00534] As condições podem incluir um ou mais de meios específicos, temperatura, teor de oxigênio, teor de dióxido de carbono, tempo, agentes, por exemplo, nutrientes, aminoácidos, antibióticos, íons e/ou fatores estimuladores, tais como citocinas, quimiocinas, antígenos, parceiros de ligação, proteínas de fusão, receptores solúveis recombinantes e quaisquer outros agentes manipulados para ativar as células.

[00535] Em algumas modalidades, as condições ou agentes estimulantes incluem um ou mais agentes, por exemplo, ligante, que são capazes de estimular ou ativar um domínio de sinalização intracelular de um complexo de TCR. Em alguns aspectos, o agente se liga ou inicia a cascata de sinalização intracelular de TCR/CD3 em uma célula T. Tais agentes podem incluir anticorpos, tais como aqueles específicos para um componente de TCR e/ou receptor coestimulador, por exemplo, anti-CD3, anti-CD28, por exemplo, ligado a um suporte sólido, tal como uma esfera e/ou uma ou mais citocinas. Opcionalmente,

o método de expansão pode compreender ainda a etapa de adicionar anticorpo anti-CD3 e/ou anti-CD28 ao meio de cultura (por exemplo, em uma concentração de pelo menos cerca de 0,5 ng/mL). Em algumas modalidades, os agentes estimulantes incluem IL-2 e/ou IL-15, por exemplo, uma concentração de IL-2 de pelo menos cerca de 10 unidades/mL.

[00536] Em alguns aspectos, a incubação é realizada de acordo com técnicas tais como aquelas descritas na Patente Norte-Americana N°

6.040.177 para Riddell et al., Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 651–660, Terakura et al. (2012) Blood 1: 72–82 e/ou Wang et al. (2012) J Immunother. 35 (9): 689-701.

[00537] Em algumas modalidades, as células T são expandidas ao adicionar à composição iniciadora de cultura células alimentadoras, tais como células mononucleares de sangue periférico (PBMC) sem divisão (por exemplo, de modo que a população de células resultante contenha pelo menos cerca de 5, 10, 20 ou 40 ou mais células alimentadoras de PBMCs para cada linfócito T na população inicial a ser expandida); e incubar a cultura (por exemplo, durante um tempo suficiente para expandir o número de células T). Em alguns aspectos, as células alimentadoras sem divisão podem compreender células alimentadoras de PBMCs com radiação gama. Em algumas modalidades, as PBMC são irradiadas com raios gama na faixa de cerca de 3000 a 3600 rads para evitar a divisão celular. Em alguns aspectos, as células alimentadoras são adicionadas ao meio de cultura antes da adição das populações de células T.

[00538] Em algumas modalidades, as condições de estimulação incluem uma temperatura adequada para o crescimento de linfócitos T humanos, por exemplo, pelo menos cerca de 25 graus Celsius, geralmente pelo menos cerca de 30 graus e geralmente igual ou cerca de 37 graus Celsius. Opcionalmente, a incubação pode ainda compreender a adição de células linfoblastoides transformadas por EBV sem divisão (LCL) como células alimentadoras. As LCLs podem ser irradiadas com raios gama na faixa de cerca de 6.000 a 10.000 rads. As células alimentadoras LCLs, em alguns aspectos, são fornecidas em qualquer quantidade adequada, tal como uma proporção de células alimentadoras LCLs para linfócitos T iniciais de pelo menos cerca de 10:1.

[00539] Em modalidades, células T específicas para antígeno, tais como células T CD4+ e/ou CD8+ específicas para antígeno, são obtidas ao estimular linfócitos T não expostos ou específicos para antígeno com antígeno. Por exemplo, linhagens de células T específicas para antígeno ou clones podem ser gerados para antígenos de citomegalovírus ao isolar células T de indivíduos infectados e estimular as células in vitro com o mesmo antígeno. C. Células, Vetores e Composições Manipuladas Para Direcionamento Múltiplo

[00540] Também são fornecidas células, tais como células modificadas que podem se ligar a e/ou ter como alvo múltiplos antígenos. Em algumas modalidades, a seletividade e especificidade aprimoradas são alcançadas por meio de estratégias que têm como alvo múltiplos antígenos. Estas estratégias geralmente envolvem vários domínios de ligação a antígeno que normalmente estão presentes em receptores antigênicos geneticamente modificados distintos e se ligam especificamente a antígenos distintos. Em algumas modalidades, as células são manipuladas com a capacidade de se ligar a mais de um antígeno. Por exemplo, em algumas modalidades, as células são manipuladas para expressar moléculas de ligação multiespecíficas. Em algumas modalidades, as células expressam múltiplas moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes, cada um dos quais pode ter como alvo um antígeno ou vários antígenos, por exemplo, um receptor que tem como alvo ROR1, tal como qualquer um descrito no presente documento, e outro receptor que tem como alvo outro antígeno, por exemplo, antígeno tumoral. Em alguns aspectos, uma pluralidade de receptores antigênicos geneticamente modificados são introduzidos na célula, os quais se ligam especificamente a diferentes antígenos, cada um expresso na doença ou condição a ser direcionada com as células ou tecidos ou células das mesmas. Tais características podem, em alguns aspectos, abordar ou reduzir a probabilidade de efeitos fora do alvo ou aumentar a eficácia. Por exemplo, onde um único antígeno expresso em uma doença ou condição também é expresso em ou em células normais ou não-doentes, tais abordagens de multidirecionamento podem fornecer seletividade para os tipos de células desejados, requerendo a ligação através de múltiplos receptores antigênicos, a fim de ativar a célula ou induzir a uma função efetora particular. Em algumas modalidades, uma pluralidade de células pode ser manipulada para expressar uma ou mais moléculas de ligação diferentes, por exemplo, receptores recombinantes, cada um dos quais pode ter como alvo um antígeno ou vários antígenos.

[00541] Também são fornecidas células multiespecíficas que contêm qualquer uma das moléculas de ligação descritas no presente documento, tais como células que contêm uma proteína da superfície celular que inclui o anticorpo anti-ROR1 ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo e uma proteína da superfície celular adicional, tal como um receptor quimérico adicional, que se liga a um antígeno diferente ou um epitopo diferente na ROR1. Em algumas modalidades, são fornecidas composições de células que expressam receptores recombinantes, em que uma ou mais das moléculas de ligação, moléculas de ligação multiespecíficas e/ou receptores recombinantes se ligam e/ou têm como alvo a ROR1. Também são fornecidas composições de células que contêm uma pluralidade de células que expressam uma ou mais moléculas de ligação diferentes, por exemplo, receptores recombinantes que podem ter como alvo um ou vários antígenos. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação multiespecíficas e/ou receptores recombinantes têm como alvo um ou mais epitopos diferentes na ROR1.

[00542] Em algumas modalidades, são fornecidas composições de células, em que cada tipo de célula expressa uma ou mais moléculas de ligação, por exemplo, receptores recombinantes. Em algumas modalidades, a célula compreende (por exemplo, foi transformada com) um ou mais vetores que compreendem um ou mais ácidos nucleicos que codificam uma ou mais uma sequência de aminoácidos que compreendem um ou mais anticorpos e/ou porções dos mesmos, por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos. Em algumas modalidades, uma ou mais destas células são fornecidas. Em algumas modalidades, é fornecida uma composição que contém uma ou mais destas células. Em algumas modalidades, uma ou mais células podem expressar anticorpos diferentes ou o mesmo anticorpo. Em algumas modalidades, cada uma das células expressa um ou mais anticorpos, tal como mais de um anticorpo. Em algumas modalidades, cada uma das células expressa uma molécula de ligação multiespecífica, por exemplo, um receptor multiespecífico, por exemplo, CAR.

[00543] Em algumas modalidades, as células incluem estratégias de multidirecionamento que têm como alvo a ROR1 e um segundo ou antígeno adicional associado a uma doença ou condição específica. Em algumas modalidades, o segundo ou antígeno adicional é direcionado por uma molécula de ligação multiespecífica e/ou moléculas de ligação múltiplas e/ou uma pluralidade de células, por exemplo, uma ou mais células, cada uma manipulada para expressar um ou mais receptores recombinantes. Em algumas modalidades, um receptor recombinante que tem como alvo um segundo antígeno ou antígeno adicional é expresso na mesma célula que uma molécula de ligação à ROR1 ou em uma célula diferente.

[00544] Em algumas modalidades, dentre os segundos antígenos ou antígenos adicionais para estratégias de multidirecionamento estão incluídos aqueles nos quais pelo menos um dos antígenos é um antígeno tumoral universal ou um membro da família do mesmo. Em algumas modalidades, o segundo antígeno ou antígeno adicional é um antígeno expresso em um tumor. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação à ROR1 fornecidas no presente documento têm como alvo um antígeno no mesmo tipo de tumor que o segundo antígeno ou antígeno adicional. Em algumas modalidades, o segundo antígeno ou antígeno adicional também pode ser um antígeno tumoral universal ou pode ser um antígeno tumoral específico para um tipo de tumor. Em algumas modalidades, a célula compreende ainda um receptor antigênico geneticamente modificado que reconhece um segundo ou antígeno adicional expresso em uma doença ou condição a ser tratada e induz a um sinal estimulador ou de ativação.

[00545] Antígenos exemplificativos incluem CD4, CD5, CD8, CD14, CD15, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD33, CD37, CD38, CD40, CD40L, CD46, CD52, CD54, CD74, CD80, CD126, CD138, B7, MUC-1, Ia, HM1.24, HLA-DR, tenascina, um fator de angiogênese, VEGF, PIGF, fibronectina ED-B, um oncogene, um produto do oncogene, CD66a-d, antígenos de necrose, Ii, IL-2, T101, TAC, IL-6, TRAIL-R1 (DR4), TRAIL-R2 (DR5), antígeno de maturação de células B (BCMA), Her2, L1-CAM, mesotelina, CEA, antígeno na superfície da hepatite B, antirreceptor de folato, CD24, CD30, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, ErbB3, ErbB4, dímeros de erbB, EGFR VIII, FBP, FCRL5, FCRH5, receptor fetal de acetilcolina, GD2, GD3, HMW- MAA, IL-22R-alfa, IL-13R-alfa2, kdr, cadeia leve capa, Lewis Y, molécula de adesão de células L1 (L1-CAM), antígeno associado a melanoma (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, antígeno expresso preferencialmente em melanoma (PRAME), survivina, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, receptor a2 de IL-13 (IL-13Ra2), CA9, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, receptor- de folato, CD44v6, CD44v7/8, integrina avb6, 8H9, NCAM, receptores VEGF, 5T4, AchR fetal, ligantes NKG2D, antígeno duplo, um antígeno associado a uma etiqueta universal, um antígeno de câncer testicular, MUC1, MUC16, NY-ESO-1, MART-1, gp100, antígeno oncofetal, VEGF- R2, antígeno carcinoembrionário (CEA), antígeno específico para próstata, PSMA, Her2/neu, receptor de estrogênio, receptor de progesterona, efrinaB2, CD123, c-Met, GD -2, GD2 O-acetilado (OGD2), CE7, tumor de Wilms 1 (WT-1), uma ciclina, ciclina A2, CCL-1, hTERT, MDM2, CYP1B, WT1, livina, AFP, p53, ciclina (D1), CS-1, BCMA, BAFF-R, TACI, CD56, TIM-3, CD123, molécula de adesão de células L1, MAGE-A1, MAGE A3, uma ciclina, tal como ciclina A1 (CCNA1) e/ou um patógeno específico para antígeno, moléculas biotiniladas, moléculas expressas por HIV, HCV, HBV e/ou outros patógenos e/ou, em alguns aspectos, neoepítopos ou neoantígenos dos mesmos. Em algumas modalidades, o antígeno está associado ou é uma etiqueta universal.

[00546] Em algumas modalidades, a pluralidade de antígenos, por exemplo, o primeiro antígeno, por exemplo, ROR1, e o segundo ou antígenos adicionais, são expressos na célula, tecido ou doença ou condição que está sendo alvo, tal como na célula cancerosa. Em alguns aspectos, a célula, tecido, doença ou condição é ou está associada a um câncer ou tumor. Um ou mais dentre a pluralidade de antígenos geralmente também é expresso em uma célula que não se deseja atingir com a terapia celular, tal como uma célula ou tecido normal ou não doente e/ou as próprias células modificadas. Em tais modalidades, ao requerer a ligação de múltiplos receptores para atingir uma resposta da célula, a especificidade e/ou eficácia é/são alcançadas.

[00547] Em algumas modalidades, as células e métodos incluem estratégias de multidirecionamento, tal como a expressão de dois ou mais receptores geneticamente modificados na célula, cada um reconhecendo um antígeno diferente e, tipicamente, cada um incluindo um componente de sinalização intracelular diferente. Tais estratégias de multidirecionamento são descritas, por exemplo, no documento WO 2014055668 (que descreve combinações de CARs ativadores e coestimuladores, por exemplo, que têm como alvo dois antígenos diferentes presentes individualmente fora do alvo, por exemplo, células normais, mas presentes juntos apenas nas células da doença ou condição a ser tratada) e Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5 (215) (dezembro de 2013) (que descreve células que expressam um CAR inibidor, tal como aquelas nas quais o CAR de ativação se liga a um antígeno expresso em células normais ou não doentes e células da doença ou condição a ser tratada e o CAR inibidor se liga a outro antígeno expresso apenas nas células normais ou células que não se deseja tratar).

[00548] Em algumas modalidades, é fornecida uma pluralidade de células, cada uma manipulada para expressar um ou mais receptores recombinantes. Por exemplo, em algumas modalidades, uma célula é manipulada para expressar uma molécula de ligação que se liga e/ou tem como alvo a ROR1 e outra célula é manipulada para expressar uma molécula de ligação que se liga e/ou tem como alvo um segundo antígeno adicional. Em algumas modalidades, as células podem expressar cada molécula de ligação multiespecífica, por exemplo, um receptor recombinante multiespecífico, onde um ou mais antígenos alvo é ROR1. Em algumas destas modalidades, a pluralidade de células pode ser administrada em conjunto ou separadamente. Em algumas modalidades, algumas células da pluralidade de células são administradas simultânea ou concorrentemente com outras células, por exemplo, administradas no mesmo dia, e/ou sequencial ou intermitentemente com, em qualquer ordem, outra célula manipulada na pluralidade. Por exemplo, em algumas modalidades, uma célula manipulada que expressa uma molécula de ligação à ROR1, por exemplo, CAR, é administrada simultânea ou sequencialmente com, em qualquer ordem, outra célula manipulada que expressa uma molécula de ligação que se liga a um antígeno alvo diferente ou um epitopo diferente na ROR1. Em algumas modalidades, a pluralidade de células pode estar na mesma composição ou em composições diferentes. Composições exemplificativas das células incluem composições descritas na Seção III abaixo. III. COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS

[00549] Também são fornecidas composições que incluem as moléculas de ligação à ROR1, imunoconjugados, receptores recombinantes e células modificadas, incluindo composições e formulações farmacêuticas. Também são fornecidas composições que compreendem células manipuladas que expressam as moléculas de ligação à ROR1 fornecidas no presente documento, tais como receptores recombinantes (por exemplo, CARs), incluindo composições e formulações farmacêuticas.

[00550] São fornecidas formulações farmacêuticas que compreendem uma molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo), um imunoconjugado, um receptor recombinante (por exemplo, receptor antigênico quimérico), células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, anticorpo ou receptor recombinante), uma pluralidade de células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) e/ou agentes adicionais para tratamento ou terapia combinada. As composições e formulações farmacêuticas geralmente incluem um ou mais veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis opcionais. Em algumas modalidades, a composição inclui pelo menos um agente terapêutico adicional.

[00551] O termo "formulação farmacêutica" refere-se a uma preparação que está em uma forma que permite que a atividade biológica de um ingrediente ativo contido na mesma seja eficaz e que não contém componentes adicionais que são inaceitavelmente tóxicos para um indivíduo ao qual a formulação será administrada.

[00552] Um "veículo farmaceuticamente aceitável" refere-se a um ingrediente em uma formulação farmacêutica, diferente de um ingrediente ativo, que não é tóxico para um indivíduo. Um veículo farmaceuticamente aceitável inclui, porém sem limitações, um tampão, excipiente, estabilizante ou conservante.

[00553] Em alguns aspectos, a escolha do veículo é determinada, em parte, pela célula, molécula de ligação e/ou anticorpo e/ou pelo método de administração particular. Consequentemente, há uma variedade de formulações adequadas. Por exemplo, a composição farmacêutica pode conter conservantes. Conservantes adequados podem incluir, por exemplo, metil parabeno, propil parabeno, benzoato de sódio e cloreto de benzalcônio. Em alguns aspectos, uma mistura de dois ou mais conservantes é usada. O conservante ou misturas dos mesmos está, tipicamente, presente em uma quantidade a partir de cerca de 0,0001% a cerca de 2% em peso da composição total. Os veículos são descritos, por exemplo, por Remington’s Pharmaceutical Sciences 16ª edição, Osol, A. Ed. (1980). Veículos farmaceuticamente aceitáveis geralmente não são tóxicos para os receptores nas dosagens e concentrações empregadas e incluem, porém sem limitações: tampões tais como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes (tais como cloreto de octadecildimetilbenzilamônio; cloreto de hexametônio; cloreto de benzalcônio; cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzílico;

alquil parabenos, tais como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol; ciclo-hexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular (menos de cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos, tal como polivinilpirrolidona; aminoácidos, tais como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos, incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes, tal como EDTA; açúcares, tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contraíons formadores de sal, tal como sódio; complexos metálicos (por exemplo, complexos de Zn- proteína); e/ou tensoativos não iônicos, tal como polietileno glicol (PEG).

[00554] Agentes de tamponamento, em alguns aspectos, estão incluídos nas composições. Agentes de tamponamento adequados incluem, por exemplo, ácido cítrico, citrato de sódio, ácido fosfórico, fosfato de potássio e vários outros ácidos e sais. Em alguns aspectos, é usada uma mistura de dois ou mais agentes de tamponamento. O agente de tamponamento ou misturas dos mesmos estão, tipicamente, presentes em uma quantidade de cerca de 0,001% a cerca de 4% em peso da composição total. Métodos para preparar composições farmacêuticas administráveis são conhecidos. Métodos exemplificativos são descritos em mais detalhes, por exemplo, em Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21ª ed. (1° de maio de 2005).

[00555] As formulações dos anticorpos descritos no presente documento podem incluir formulações liofilizadas e soluções aquosas.

[00556] A formulação ou composição também pode conter mais de um ingrediente ativo útil para a indicação, doença ou condição particular a ser tratada com as moléculas ou células de ligação, de preferência aquelas com atividades complementares à molécula ou célula de ligação, onde as respectivas atividades não afetam adversamente uma à outra. Tais ingredientes ativos estão, adequadamente, presentes em combinação em quantidades que são eficazes para a finalidade pretendida. Assim, em algumas modalidades, a composição farmacêutica inclui ainda outros agentes ou fármacos farmaceuticamente ativos, tais como agentes quimioterapêuticos, por exemplo, asparaginase, busulfan, carboplatina, cisplatina, daunorrubicina, doxorrubicina, fluorouracil, gencitabina, hidroxiureia, metotrexato, paclitaxel, rituximabe, vinblastina, vincristina, etc. Em algumas modalidades, as células ou anticorpos são administrados na forma de um sal, por exemplo, um sal farmaceuticamente aceitável. Sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem aqueles derivados de ácidos minerais, tais como ácidos clorídrico, bromídrico, fosfórico, metafosfórico, nítrico e sulfúrico, e ácidos orgânicos, tais como tartárico, acético, cítrico, málico, láctico, fumárico, benzoico, glicólico, ácidos glucônico, succínico e arilsulfônico, por exemplo, ácido p-toluenossulfônico.

[00557] Os ingredientes ativos podem ser retidos em microcápsulas, em sistemas de distribuição de fármaco coloidais (por exemplo, lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e nanocápsulas) ou em macroemulsões. Em determinadas modalidades, a composição farmacêutica é formulada como um complexo de inclusão, tal como o complexo de inclusão de ciclodextrina ou como um lipossoma. Os lipossomas podem servir para direcionar as células hospedeiras (por exemplo, células T ou células NK) a um tecido específico. Muitos métodos estão disponíveis para preparar lipossomas, tais como aqueles descritos, por exemplo, em Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) e Patentes Norte-Americanas Nos

4.235.871, 4.501.728, 4.837.028 e 5.019.369.

[00558] A composição farmacêutica pode, em alguns aspectos, empregar sistemas de liberação prolongada, liberação retardada e liberação sustentada, de modo que a administração da composição ocorra antes e com tempo suficiente para causar a sensibilização do local a ser tratado. Muitos tipos de sistemas de liberação estão disponíveis e são conhecidos. Tais sistemas podem evitar administrações repetidas da composição, deste modo, aumentando a conveniência para o indivíduo e o médico.

[00559] A composição farmacêutica, em algumas modalidades, contém as moléculas de ligação e/ou células em quantidades eficazes para tratar ou prevenir a doença ou condição, tal como uma quantidade terapeuticamente eficaz ou profilaticamente eficaz. A eficácia terapêutica ou profilática, em algumas modalidades, é monitorada através de uma avaliação periódica dos indivíduos tratados. Para administrações repetidas durante vários dias ou mais, dependendo da condição, o tratamento é repetido até que ocorra a supressão desejada dos sintomas da doença. No entanto, outros regimes de dosagem podem ser úteis e podem ser determinados. A dosagem desejada pode ser distribuída por uma única administração em bolus da composição, através de múltiplas administrações em bolus da composição ou através de administração por infusão contínua da composição.

[00560] Em determinadas modalidades, no contexto de células geneticamente modificadas que contêm as moléculas de ligação, um indivíduo recebe na faixa de ou cerca de um milhão a igual ou cerca de 100 bilhões de células tal como, por exemplo, igual ou cerca de 1 milhão a igual ou cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 5 milhões de células, igual ou cerca de 25 milhões de células, igual ou cerca de 500 milhões de células, igual ou cerca de 1 bilhão de células, igual ou cerca de 5 bilhões de células, igual ou cerca de 20 bilhões de células, igual ou cerca de 30 bilhões de células, igual ou cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), tal como igual ou cerca de 10 milhões a igual ou cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 20 milhões de células, igual ou cerca de 30 milhões de células, igual ou cerca de 40 milhões de células, igual ou cerca de 60 milhões de células, igual ou cerca de 70 milhões de células, igual ou cerca de 80 milhões de células, igual ou cerca de 90 milhões de células, igual ou cerca de 10 bilhões de células ou cerca de 25 bilhões de células ou cerca de 50 bilhões de células ou cerca de 75 bilhões de células ou cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores) e em alguns casos igual ou cerca de 100 milhões de células a igual ou cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 120 milhões de células, igual ou cerca de 250 milhões de células, igual ou cerca de 350 milhões de células, igual ou cerca de 450 milhões de células, igual ou cerca de 650 milhões de células, igual ou cerca de 800 milhões de células, igual ou cerca de 900 milhões de células, igual ou cerca de 3 bilhões de células, igual ou cerca de 30 bilhões de células, igual ou cerca de 45 bilhões de células) ou qualquer valor entre estas faixas e/ou tal número de células por quilograma de peso corporal do indivíduo.

[00561] A composição pode ser administrada usando técnicas de administração, formulações e/ou dispositivos padrão. São fornecidas formulações e dispositivos, tais como seringas e frascos, para armazenamento e administração das composições. A administração das células pode ser autóloga ou heteróloga. Por exemplo, células imunes, células imunorresponsivas ou progenitoras podem ser obtidas de um indivíduo e administradas ao mesmo indivíduo ou a um indivíduo compatível diferente. Células imunorresponsivas derivadas de sangue periférico ou sua progênie (por exemplo, derivadas in vivo, ex vivo ou in vitro) podem ser administradas por meio de injeção localizada, incluindo administração através de um cateter, injeção sistêmica, injeção localizada, injeção intravenosa ou administração parentérica. Ao administrar uma composição terapêutica (por exemplo, uma composição farmacêutica que contém uma célula imune geneticamente modificada, tal como uma célula T), ela geralmente será formulada em uma forma injetável de dosagem unitária (solução, suspensão, emulsão).

[00562] Formulações incluem aquelas para administração oral, intravenosa, intraperitoneal, subcutânea, pulmonar, transdérmica, intramuscular, intranasal, bucal, sublingual ou supositório. Em algumas modalidades, as populações de células são administradas através da via parentérica. O termo "parentérico", conforme usado no presente documento, inclui administração intravenosa, intramuscular, subcutânea, retal, vaginal, intracraniana, intratorácica e intraperitoneal. Em algumas modalidades, as populações de células são administradas a um indivíduo usando distribuição sistêmica periférica através de injeção intravenosa, intraperitoneal ou subcutânea.

[00563] As composições, em algumas modalidades, são fornecidas como preparações líquidas estéreis, por exemplo, soluções aquosas isotônicas, suspensões, emulsões, dispersões ou composições viscosas as quais podem, em alguns aspectos, ser tamponadas para um pH selecionado. As preparações líquidas normalmente são mais fáceis de preparar do que géis, outras composições viscosas e composições sólidas. Além disso, as composições líquidas são um pouco mais convenientes para administrar, especialmente através de injeção. As composições viscosas, por outro lado, podem ser formuladas dentro da faixa de viscosidade apropriada para fornecer períodos de contato mais longos com tecidos específicos. As composições líquidas ou viscosas podem compreender veículos, os quais podem ser um solvente ou meio de dispersão que contém, por exemplo, água, solução salina, solução salina tamponada com fosfato, poliol (por exemplo, glicerol, propileno glicol, polietileno glicol líquido) e misturas adequadas dos mesmos.

[00564] As soluções injetáveis estéreis podem ser preparadas ao incorporar a molécula de ligação em um solvente, tal como em mistura com um veículo, diluente ou excipiente adequado, tal como água estéril, soro fisiológico, glicose, dextrose ou similar. As composições também podem ser liofilizadas. As composições podem conter substâncias auxiliares, tais como agentes umectantes, dispersantes ou emulsificantes (por exemplo, metilcelulose), agentes de tamponamento de pH, aditivos gelificantes ou para aumento de viscosidade, conservantes, agentes aromatizantes, cores e assim por diante, dependendo da via de administração e da preparação desejada. Textos padrão podem ser consultados, em alguns aspectos, para preparar preparações adequadas.

[00565] Vários aditivos que aumentam a estabilidade e esterilidade das composições, incluindo conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes e tampões, podem ser adicionados. A prevenção da ação de micro-organismos pode ser assegurada por vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico e assim por diante. A absorção prolongada da forma farmacêutica injetável pode ser conseguida pelo uso de agentes que retardam a absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

[00566] Podem ser preparadas preparações de liberação sustentada. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidrofóbicos sólidos que contêm o anticorpo, matrizes as quais estão na forma de artigos moldados, por exemplo, filmes ou microcápsulas.

[00567] As formulações a serem usadas para administração in vivo geralmente são estéreis. A esterilidade pode ser facilmente obtida, por exemplo, por meio de filtração através de membranas de filtração estéreis.

[00568] Também são fornecidas composições farmacêuticas para terapia combinada. Qualquer um dos agentes adicionais para terapia combinada descritos no presente documento, tais como agentes descritos na Seção IV.B, podem ser preparados e administrados como uma ou mais composições farmacêuticas, com a molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo), imunoconjugado, receptor recombinante (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descrito no presente documento. A terapia combinada pode ser administrada em uma ou mais composições farmacêuticas, por exemplo, onde as moléculas de ligação, receptores e/ou células recombinantes estão na mesma composição farmacêutica que o agente adicional ou em composições farmacêuticas separadas. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula adicional manipulada, por exemplo, célula manipulada para expressar um receptor recombinante diferente que tem como alvo um antígeno diferente ou um epitopo diferente na ROR1 e é administrado na mesma composição ou em uma composição separada. Em algumas modalidades, cada composição farmacêutica é formulada em uma formulação adequada de acordo com a molécula de ligação, receptor recombinante, célula, por exemplo, célula manipulada e/ou agente adicional particular e o regime de dosagem e/ou método de distribuição particular.

4. MÉTODOS E USOS

[00569] Também são fornecidos métodos, tais como métodos de tratamento, de uso e usos das moléculas de ligação de ROR1, imunoconjugados, receptores recombinantes, células modificadas e composições farmacêuticas e formulações dos mesmos, tal como no tratamento de doenças, condições e transtornos nos quais a ROR1 é expressa e/ou métodos de detecção, diagnóstico e prognóstico.

Também são fornecidos métodos de terapia e/ou tratamento combinado. Métodos e Usos Terapêuticos e Profiláticos

[00570] Também são fornecidos métodos de administração e usos, tais como usos terapêuticos e profiláticos, das moléculas de ligação à ROR1, incluindo os anticorpos anti-ROR1, por exemplo, fragmentos de anticorpos e proteínas que contêm os mesmos, tais como os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), células modificadas que expressam os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), a pluralidade de células modificadas que expressam os receptores e/ou composições que compreendem os mesmos. Tais métodos e usos incluem métodos e usos terapêuticos, por exemplo, que envolvem a administração das moléculas (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1, receptores recombinantes), células (por exemplo, células modificadas) ou composições que contêm os mesmos, a um indivíduo que tem uma doença, condição ou transtorno associado à proteína ROR1, tal como uma doença, condição ou transtorno associado à expressão de ROR1 e/ou em que células ou tecidos expressam, por exemplo, expressam especificamente, a ROR1. Em algumas modalidades, a molécula, célula e/ou composição é administrada em uma quantidade eficaz para efetuar o tratamento da doença ou transtorno. São fornecidos no presente documento os usos das moléculas de ligação (por exemplo, anticorpos anti-ROR1 ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos), receptores recombinantes (por exemplo, CARs) e células (por exemplo, células modificadas) em tais métodos e tratamentos e na preparação de um medicamento para realizar tais métodos terapêuticos. Os usos incluem o uso de moléculas de ligação, CARs, anticorpos e células em tais métodos e tratamentos e na preparação de um medicamento para realizar tais métodos terapêuticos. Em algumas modalidades, os métodos são realizados ao administrar as moléculas ou células de ligação ou composições que compreendem as mesmas ao indivíduo que tem, teve ou suspeito de ter a doença ou condição. Em algumas modalidades, os métodos tratam, assim, a doença ou condição ou transtorno no indivíduo. Também são fornecidos no presente documento o uso de qualquer uma das composições, tais como composições farmacêuticas fornecidas no presente documento, para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1, por exemplo, um câncer que expressa ROR1.

[00571] Conforme usado no presente documento, "tratamento" (e variações gramaticais do mesmo, tal como "tratar" ou "tratando") refere- se à melhora ou redução completa ou parcial de uma doença ou condição ou transtorno ou um sintoma, efeito adverso ou resultado ou fenótipo associado ao mesmo. Os efeitos desejáveis do tratamento incluem, porém sem limitações, prevenção da ocorrência ou recorrência da doença, alívio dos sintomas, diminuição de quaisquer consequências patológicas diretas ou indiretas da doença, prevenção da metástase, diminuição da taxa de progressão da doença, melhora ou paliação do estado patológico e remissão ou melhor prognóstico. Os termos não implicam na cura completa de uma doença ou na eliminação completa de qualquer sintoma ou efeito(s) em todos os sintomas ou resultados.

[00572] Conforme usado no presente documento, "retardar o desenvolvimento de uma doença" significa adiar, impedir, diminuir, reduzir, estabilizar, suprimir e/ou adiar o desenvolvimento da doença (tal como câncer). Este retardo pode ser de tempo variável, dependendo do histórico da doença e/ou do indivíduo a ser tratado. Conforme é evidente para aqueles versados na técnica, um retardo suficiente ou significativo pode, na verdade, abranger a prevenção, onde o indivíduo não desenvolve a doença. Por exemplo, um câncer em estágio avançado, tal como o desenvolvimento de metástases, pode ser retardado.

[00573] "Prevenção", conforme usado no presente documento, inclui o fornecimento de profilaxia com relação à ocorrência ou recorrência de uma doença em um indivíduo que pode estar predisposto à doença, mas ainda não foi diagnosticado com a doença. Em algumas modalidades, as moléculas e composições fornecidas são usadas para retardar o desenvolvimento de uma doença ou retardar a progressão de uma doença.

[00574] Conforme usado no presente documento, "suprimir" uma função ou atividade é reduzir a função ou atividade quando comparado sob as mesmas condições, exceto quanto uma condição ou parâmetro de interesse ou, alternativamente, comparado com outra condição. Por exemplo, um anticorpo ou composição ou célula que suprime o crescimento do tumor reduz a taxa de crescimento do tumor comparado com a taxa de crescimento do tumor na ausência do anticorpo ou composição ou célula.

[00575] Uma "quantidade eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, molécula de ligação, anticorpo ou células ou composição, no contexto da administração, refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens/quantidades e durante períodos de tempo necessário, para alcançar um resultado desejado, tal como um resultado terapêutico ou profilático.

[00576] Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um agente, por exemplo, uma formulação farmacêutica, anticorpo ou células, refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo necessários, para atingir um resultado terapêutico desejado, tal como para tratamento de uma doença, condição ou transtorno e/ou efeito farmacocinético ou farmacodinâmico do tratamento. A quantidade terapeuticamente eficaz pode variar de acordo com fatores tais como o estado patológico, idade, sexo e peso do indivíduo e as populações de células administradas. Em algumas modalidades, os métodos fornecidos envolvem a administração de moléculas, células e/ou composições em quantidades eficazes, por exemplo, quantidades terapeuticamente eficazes.

[00577] Uma "quantidade profilaticamente eficaz" refere-se a uma quantidade eficaz, em dosagens e durante períodos de tempo necessários, para atingir o resultado profilático desejado. Tipicamente, mas não necessariamente, uma vez que uma dose profilática é usada em indivíduos antes ou em um estágio inicial da doença, a quantidade profilaticamente eficaz será menor do que a quantidade terapeuticamente eficaz.

[00578] Conforme usado no presente documento, um "indivíduo" é um mamífero, tal como um ser humano ou outro animal, e normalmente é um ser humano.

[00579] Dentre as doenças a serem tratadas estão qualquer doença ou condição associada à ROR1 ou doença ou condição na qual a ROR1 é especificamente expressa. Em determinadas doenças e condições, a ROR1 é expressa em células malignas e cânceres. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer que expressa a ROR1. Dentre as doenças ou condições associadas à ROR1 que podem ser tratadas incluem, porém sem limitações, leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt, linfoma de células do manto (MCL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer de testículo, câncer de tireoide, câncer de útero, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é selecionada a partir de uma CLL, um MCL, um câncer de ovário, um câncer de pulmão, um câncer de pâncreas ou um câncer de mama. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é uma CLL. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um MCL. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de ovário. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de pulmão. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer pancreático. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de mama. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de pulmão e o câncer de pulmão é selecionado entre adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC) e carcinoide atípico. Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de pulmão e o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades, a doença ou condição a ser tratada é um câncer de mama e o câncer de mama é um câncer de mama triplo-negativo.

[00580] Em alguns aspectos, em determinadas doenças e condições, a ROR1 é expressa em células malignas e cânceres, incluindo cânceres associados a um tumor sólido ou malignidade hematológica. Em algumas modalidades, a doença ou condição é um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades, dentre a doença ou transtorno a ser tratado está um câncer, tal como um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades, o câncer está associado a um tumor sólido ou uma malignidade hematológica.

[00581] Em algumas modalidades, o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno a ser tratado é um câncer associado a um tumor sólido,

tal como neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, cérebro câncer, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço. Em algumas modalidades, o câncer de pulmão é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC). Em algumas modalidades, o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC). Em alguns aspectos, o câncer de mama triplo negativo refere-se a um câncer de mama que é negativo para a expressão de receptores de estrogênio, receptores de progesterona e superexpressão do receptor do fator de crescimento epidérmico humano 2 (HER2).

[00582] Em algumas modalidades, o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um transtorno relacionado às células B. Em algumas modalidades, a doença ou transtorno a ser tratado é um câncer associado a uma malignidade hematológica, tal como leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

[00583] Em algumas modalidades, os métodos incluem administrar células modificadas (por exemplo, células T) que expressam uma molécula de ligação fornecida a um indivíduo que tem uma doença ou condição associada à ROR1, tal como um câncer que expressa ROR1. Em modalidades particulares, as células modificadas (por exemplo, células T) expressam um receptor recombinante, tal como um CAR que contém, como um domínio de ligação a antígeno, um anticorpo fornecido ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo (por exemplo, scFv). Em algumas modalidades, as células manipuladas são autólogas ao indivíduo a ser tratado. Em algumas modalidades, as células manipuladas são alogênicas ao indivíduo a ser tratado, caso no qual as células são obtidas do indivíduo doente e manipuladas com o receptor recombinante (por exemplo, CAR) antes da administração das células manipuladas.

[00584] Em alguns contextos, a manipulação de células T primárias obtidas de indivíduos que têm doenças ou transtornos, tal como leucemia linfocítica crônica (CLL), para expressar receptores recombinantes foi relatado como resultando em células T manipuladas com função comprometida comparado com células T primárias de indivíduos que têm outras doenças hematológicas malignas (consulte, por exemplo, Gorgun et al., J Clin Invest. Julho de 2005; 115 (7): 1797- 805; Ramsay et al., J Clin Invest. Julho de 2008; 118 (7): 2427-37; Riches et al., Discov Med. Dez. 2013; 16 (90): 295-302). Em alguns casos, conforme descrito no presente documento, os receptores recombinantes fornecidos podem ser expressos a partir de células T primárias obtidas de indivíduos com CLL, sem prejuízo observado na função. Em alguns aspectos, células modificadas que expressam moléculas de ligação fornecidas, por exemplo, receptores recombinantes que têm como alvo a ROR1, podem ser geradas com sucesso usando células de indivíduos com doenças ou transtornos, tal como CLL.

[00585] Em algumas modalidades, os métodos podem identificar um indivíduo que tem, é suspeito de ter ou está em risco de desenvolver uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1. Assim, são fornecidos métodos para identificar indivíduos que têm doenças ou transtornos associados à expressão elevada de ROR1 e selecioná-los para tratamento com uma molécula de ligação de ROR1 fornecida,

incluindo qualquer um dos anticorpos anti-ROR1, por exemplo, fragmentos de anticorpos e proteínas que contêm os mesmos, tais como os receptores quiméricos e/ou células modificadas que expressam os receptores recombinantes.

[00586] Por exemplo, um indivíduo pode ser rastreado quanto à presença de uma doença ou transtorno associado à expressão elevada de ROR1, tal como um câncer que expressa ROR1. Em algumas modalidades, os métodos incluem rastrear ou detectar a presença de uma doença associada à ROR1, por exemplo, um tumor. Assim, em alguns aspectos, uma amostra pode ser obtida de um paciente suspeito de ter uma doença ou transtorno associado à expressão elevada de ROR1 e testado quanto ao nível de expressão de ROR1. Em alguns aspectos, um indivíduo que testa positivo para uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1 pode ser selecionado para tratamento através dos presentes métodos e pode ser administrado com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo anti-ROR1, um CAR que tem como alvo a ROR1, células que contêm um CAR ou uma composição farmacêutica do mesmo, conforme descrito no presente documento. Em algumas modalidades, os métodos podem ser usados para monitorar o tamanho ou a densidade de um tecido que expressa a ROR1, por exemplo, tumor, antes, durante ou após o tratamento através dos métodos.

[00587] Em algumas modalidades, o indivíduo tem doença persistente ou recidivante, por exemplo, após tratamento com outro anticorpo específico para ROR1 e/ou células que expressam um receptor quimérico que tem como alvo a ROR1 e/ou outra terapia, incluindo quimioterapia, radiação e/ou transplante de células-tronco hematopoéticas (TCTH), por exemplo, TCTH alogênica. Em algumas modalidades, a administração trata efetivamente o indivíduo, apesar do indivíduo ter se tornado resistente à outra terapia que tem como alvo a

ROR1. Em algumas modalidades, o indivíduo não teve uma recidiva, mas foi determinado como estando em risco de recidiva, tal como um alto risco de recidiva e, assim, o composto ou composição é administrado profilaticamente, por exemplo, para reduzir a probabilidade ou prevenir a recidiva.

[00588] Em algumas modalidades, o tratamento não induz a uma resposta imune no indivíduo à terapia e/ou não induz a tal resposta em um grau que impeça o tratamento eficaz da doença ou condição. Em alguns aspectos, o grau de imunogenicidade e/ou resposta enxerto versus hospedeiro é menor do que aquele observado com um tratamento diferente, mas comparável. Por exemplo, no caso de terapia celular adotiva usando células que expressam CARs que incluem os anticorpos anti-ROR1 fornecidos, o grau de imunogenicidade, em algumas modalidades, é reduzido comparado com CARs que incluem um anticorpo diferente que se liga a um epitopo similar, por exemplo, sobreposto e/ou que compete pela ligação à ROR1 com o anticorpo fornecido, tal como um anticorpo de camundongo ou coelho ou anticorpo humanizado.

[00589] Em algumas modalidades, os métodos incluem terapia celular adotiva, em que células geneticamente modificadas que expressam os receptores fornecidos que têm como alvo a ROR1 (por exemplo que contêm um anticorpo que tem como alvo a ROR1 ou fragmento do mesmo) são administradas aos indivíduos. Tal administração pode promover a ativação das células (por exemplo, ativação de células T) em uma forma de direcionamento de ROR1, de modo que as células da doença ou transtorno sejam direcionadas para destruição.

[00590] Assim, os métodos e usos fornecidos incluem métodos e usos para terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, os métodos incluem administrar as células ou uma composição que contém as células a um indivíduo, tecido ou célula, tal como aquele que tem, está em risco ou é suspeito de ter a doença, condição ou transtorno. Em algumas modalidades, as células, populações e composições são administradas a um indivíduo com a doença ou condição específica a ser tratada, por exemplo, por meio de terapia com células adotivas, tal como terapia com células T adotiva. Em algumas modalidades, as células ou composições são administradas ao indivíduo, tal como um indivíduo com ou em risco para a doença ou condição. Em alguns aspectos, os métodos tratam assim, por exemplo, melhoram um ou mais sintomas da doença ou condição, tal como diminuem a carga tumoral em um câncer que expressa ROR1.

[00591] Métodos para administração de células para terapia celular adotiva são conhecidos e podem ser usados em conjunto com os métodos e composições fornecidos. Por exemplo, métodos de terapia com células T adotivas são descritos, por exemplo, na Publicação de Pedido de Patente Norte-Americana N° 2003/0170238 para Gruenberg et al.; Patente Norte-Americana N° 4.690.915 para Rosenberg; Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8 (10): 577-85). Consulte, por exemplo, Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31 (10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438 (1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8 (4): e61338.

[00592] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, por exemplo, terapia de células T adotivas, é realizada por meio de transferência autóloga, na qual as células são isoladas e/ou preparadas de outra forma a partir do indivíduo que deve receber a terapia celular ou uma amostra derivada de tal indivíduo. Assim, em alguns aspectos, as células são derivadas de um indivíduo, por exemplo, paciente, que precisa de um tratamento e as células, após isolamento e processamento, são administradas ao mesmo indivíduo.

[00593] Em algumas modalidades, a terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva, por exemplo, terapia de células T adotivas, é realizada por meio de transferência alogênica, em que as células são isoladas e/ou preparadas a partir de um indivíduo diferente de um indivíduo que deve receber ou que, em última análise, recebe a terapia celular, por exemplo, um primeiro indivíduo. Em tais modalidades, as células são administradas a um indivíduo diferente, por exemplo, um segundo indivíduo da mesma espécie. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamente idênticos. Em algumas modalidades, os primeiro e segundo indivíduos são geneticamente similares. Em algumas modalidades, o segundo indivíduo expressa a mesma classe HLA ou supertipo que o primeiro indivíduo.

[00594] Em algumas modalidades, o indivíduo a quem as células, populações de células ou composições são administradas é um primata, tal como um ser humano. Em algumas modalidades, o primata é um macaco ou um chimpanzé. O indivíduo pode ser homem ou mulher e pode ter qualquer idade adequada, incluindo crianças, jovens, adolescentes, adultos e indivíduos geriátricos. Em algumas modalidades, o indivíduo é um mamífero não primata, tal como um roedor. Em alguns exemplos, o paciente ou indivíduo é um modelo animal validado para doença, terapia celular adotiva e/ou para avaliar resultados tóxicos, tal como síndrome de liberação de citocinas (CRS).

[00595] As moléculas de ligação à ROR1, tais como anticorpos e receptores quiméricos que contêm os anticorpos e células que expressam os mesmos, podem ser administradas através de qualquer meio adequado, por exemplo, através de injeção, por exemplo, injeções intravenosas ou subcutâneas, injeção intraocular, injeção periocular, injeção sub-retiniana, injeção intravítrea, injeção trans-septal, injeção subescleral, injeção intracoroidal, injeção intracameral, injeção subconjuntival, injeção subconjuntival, injeção sub-tenoniana, injeção retrobulbar, injeção peribulbar ou distribuição juxtascleral posterior. Em algumas modalidades, eles são administrados através da via parentérica, intrapulmonar e intranasal e, se desejado para tratamento local, administração intralesional. As infusões parentéricas incluem administração intramuscular, intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intracraniana, intratorácica ou subcutânea. A dosagem e a administração podem depender, em parte, se a administração é breve ou crônica. Vários esquemas de dosagem incluem, porém sem limitações, administrações únicas ou múltiplas ao longo de vários pontos de tempo, administração em bolus e infusão pulsada.

[00596] Para prevenção ou tratamento da doença, a dosagem apropriada da molécula de ligação ou célula pode depender de tipo de doença a ser tratada, o tipo de molécula de ligação, a gravidade e o curso da doença, se a molécula de ligação é administrada para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, histórico clínico do paciente e resposta à molécula de ligação e a critério do médico que faz o atendimento. As composições e moléculas e células são, em algumas modalidades, adequadamente administradas ao paciente em um momento ou ao longo de uma série de tratamentos.

[00597] Dependendo de tipo e da gravidade da doença, as dosagens de anticorpos podem incluir a igual ou cerca de 1 µg/kg a igual ou cerca de 15 mg/kg (por exemplo, igual ou cerca de 0,1 mg/kg a igual ou cerca de 10 mg/kg), igual ou cerca de 1 µg/kg a igual ou cerca de 100 mg/kg ou mais, igual ou cerca de 0,05 mg/kg a igual ou cerca de 10 mg/kg, igual ou cerca de 0,5 mg/kg, igual ou cerca de 2,0 mg/kg, igual ou cerca de 4,0 mg/kg ou a igual ou cerca de 10 mg/kg. Doses múltiplas podem ser administradas intermitentemente, por exemplo, toda semana ou a cada três semanas. Pode ser administrada uma dose de carga inicial mais alta, seguida por uma ou mais doses mais baixas.

[00598] Em determinadas modalidades, as células ou populações individuais de subtipos de células, são administradas ao indivíduo em uma faixa de ou cerca de 0,1 milhão a igual ou cerca de 100 bilhões de células e/ou uma quantidade de células por quilograma do peso corporal do indivíduo tal como, por exemplo, igual ou cerca de 0,1 milhão a igual ou cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 5 milhões de células, igual ou cerca de 25 milhões de células, igual ou cerca de 500 milhões de células, igual ou cerca de 1 bilhão de células, igual ou cerca de 5 bilhões de células, igual ou cerca de 20 bilhões de células, igual ou cerca de 30 bilhões de células, igual ou cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), igual ou cerca de 1 igual ou cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 5 milhões de células, igual ou cerca de 25 milhões de células, igual ou cerca de 500 milhões de células, igual ou cerca de 1 bilhão de células, igual ou cerca de 5 bilhões de células, igual ou cerca de 20 bilhões de células, igual ou cerca de 30 bilhões de células, igual ou cerca de 40 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores), tal como igual ou cerca de 10 milhões a igual ou cerca de 100 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 20 milhões de células, igual ou cerca de 30 milhões de células, igual ou cerca de 40 milhões de células, igual ou cerca de 60 milhões de células, igual ou cerca de 70 milhões de células, igual ou cerca de 80 milhões de células, igual ou cerca de 90 milhões de células, igual ou cerca de 10 bilhões de células, igual ou cerca de 25 bilhões de células, igual ou cerca de 50 bilhões de células, igual ou cerca de 75 bilhões de células, igual ou cerca de 90 bilhões de células ou uma faixa definida por quaisquer dois dos valores anteriores) e, em alguns casos, igual ou cerca de 100 milhões de células a igual ou cerca de 50 bilhões de células (por exemplo, igual ou cerca de 120 milhões de células, igual ou cerca de 250 milhões de células, igual ou cerca de 350 milhões de células ou cerca de 650 milhões de células ou cerca de 800 milhões de células ou cerca de 900 milhões de células ou cerca de 3 bilhões de células ou cerca de 30 bilhões de células ou cerca de 45 bilhões de células) ou qualquer valor entre estas faixas e/ou por quilograma de peso corporal do indivíduo. As dosagens podem variar dependendo dos atributos específicos da doença ou transtorno e/ou paciente e/ou outros tratamentos. Em algumas modalidades, tais valores referem-se a números de células que expressam receptores recombinantes; em outras modalidades, referem-se ao número de células T ou PBMCs ou células totais administradas.

[00599] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um ser humano, a dose inclui menos de cerca de 5 x 108 células que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares do sangue periférico (PBMCs), por exemplo, na faixa de igual ou cerca de 1 x 10 6 a igual ou cerca de 5 x 108 de tais células, tal como igual ou cerca de 2 x 10 6, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1,5 x 108 ou 5 x 108 no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores. Em algumas modalidades, por exemplo, quando o indivíduo é um ser humano, a dose inclui mais de igual ou cerca de 1 x 106 células que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) e menos de igual ou cerca de 2 x 10 9 células que expressam o receptor recombinante no total (por exemplo, CAR), células T ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs), por exemplo, na faixa de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 1,2 x 109 de tais células, tal como igual ou cerca de 2,5 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1,5 x 108, 8 x 108 ou 1,2 x 109 no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores.

[00600] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas compreende pelo menos igual ou cerca de ou é 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 108 células T que expressam CAR (CAR+) no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 10 5 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 1 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 10 5 a igual ou cerca de 5 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 2,5 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 1 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 10 6 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 10 6 a igual ou cerca de 1 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 5 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 106 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 106 células T, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 10 7 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 107 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 10 7 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 108 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 108 a igual ou cerca de 2,5 x 108 células T CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 2,5 x 108 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CAR+ no total.

Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas compreende a partir de igual ou de cerca de 2,5 x 107 a igual ou cerca de 1,5 x 108 células T CAR+ no total, tal como a partir de igual ou de cerca de 5 x 107 a igual ou cerca de 1 x 108 células T CAR+ no total.

[00601] Em algumas modalidades, a dose de células geneticamente modificadas compreende pelo menos igual ou cerca de 1 x 105 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 2,5 x 105 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 5 x 105 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 1 x 106 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 2,5 x 106 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 5 x 106 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 1 x 107 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 2,5 x 107 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 5 x 107 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 1 x 108 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 1,5 x 108 células CAR+, pelo menos igual ou cerca de 2,5 x 108 células CAR+ ou pelo menos igual ou cerca de 5 x 108 células CAR+.

[00602] Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 108 células que expressam o receptor recombinante no total, células T no total ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 105 a igual ou cerca de 1 x 107 células que expressam o receptor recombinante no total, células T no total ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) no total ou a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células que expressam o receptor recombinante no total, células T no total ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) no total, cada um inclusive. Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose de células que compreende um número de células de pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 105 células que expressam o receptor recombinante no total, células T no total ou células mononucleares de sangue periférico (PBMCs) no total, tal como pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 106, pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 107, pelo menos ou pelo menos cerca de 1 x 108 de tais células. Em algumas modalidades, o número é com referência ao número total de células CD3+ ou CD8+, em alguns casos também células que expressam o receptor recombinante (por exemplo, CAR+). Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de igual ou cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 108 células T CD3+ ou CD8+ no total ou células CD3+ ou CD8+ que expressam o receptor recombinante, a partir de igual ou cerca de 5 x 105 a igual ou cerca de 1 x 107 células T CD3+ ou CD8+ no total ou células CD3+ ou CD8+ que expressam o receptor recombinante ou a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células T CD3+ ou CD8+ no total ou células CD3+ ou CD8+ que expressam o receptor recombinante no total, cada um inclusive. Em algumas modalidades, a terapia celular compreende administrar uma dose que compreende um número de células a partir de igual ou de cerca de 1 x 105 a igual ou cerca de 5 x 108 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ no total, a partir de igual ou cerca de 5 x 105 a igual ou cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ no total ou a partir de igual ou cerca de 1 x 106 a igual ou cerca de 1 x 107 células CD3+/CAR+ ou CD8+/CAR+ no total, cada inclusive.

[00603] Em algumas modalidades, as células T da dose incluem células T CD4+, células T CD8+ ou células T CD4+ e CD8+.

[00604] Em algumas modalidades, por exemplo, onde o indivíduo é um ser humano, as células T CD8+ da dose, incluindo em uma dose que inclui células T CD4+ e CD8+, incluem entre igual ou cerca de 1 x 106 e igual ou cerca de 5 x 108 células CD8+ que expressam receptor recombinante no total (por exemplo, CAR), por exemplo, na faixa de igual ou cerca de 5 x 106 a igual ou cerca de 1 x 108 de tais células, tais como 1 x 107, 2,5 x 107, 5 x 107, 7,5 x 107, 1 x 108, 1,5 x 108 ou 5 x 108 no total de tais células ou uma faixa entre quaisquer dois dos valores anteriores. Em algumas modalidades, o paciente recebe doses múltiplas e cada uma das doses ou a dose total pode estar dentro de qualquer um dos valores anteriores. Em algumas modalidades, a dose de células compreende administrar a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 0,75 x 108 células T CD8+ que expressam o receptor recombinante no total, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 5 x 107 células T CD8+ no total que expressam receptor recombinante, a partir de igual ou cerca de 1 x 107 a igual ou cerca de 0,25 x 108 células T CD8+ que expressam receptor recombinante no total, cada um inclusive. Em algumas modalidades, a dose de células compreende administrar de pelo menos 1 x 107, 2,5 x 107, 5 x 107, 7,5 x 107, 1 x 108, 1,5 x 108, 2,5 x 108 ou 5 x 108 células T CD8+ que expressam receptor recombinante no total.

[00605] Em algumas modalidades, a dose de células, por exemplo, células T que expressam o receptor recombinante, é administrada ao indivíduo como uma dose única ou é administrada apenas uma vez dentro de um período de duas semanas, um mês, três meses, seis meses, 1 ano ou mais.

[00606] Em algumas modalidades, as células ou anticorpos são administrados como parte de um tratamento combinado, tal como simultânea ou sequencialmente com, em qualquer ordem, outra intervenção terapêutica, tal como outro anticorpo ou célula ou receptor ou agente manipulado, tal como um agente citotóxico ou terapêutico.

[00607] As células ou anticorpos, em algumas modalidades, são coadministrados com um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou em conjunto com outra intervenção terapêutica, simultânea ou sequencialmente em qualquer ordem. Em alguns contextos, as células são coadministradas com outra terapia suficientemente próxima no tempo, de modo que as populações de células aumentem o efeito de um ou mais agentes terapêuticos adicionais ou vice-versa. Em algumas modalidades, as células ou anticorpos são administrados antes de um ou mais agentes terapêuticos adicionais. Em algumas modalidades, as células ou anticorpos são administrados após um ou mais agentes terapêuticos adicionais.

[00608] Uma vez que as células são administradas a um mamífero (por exemplo, um ser humano), a atividade biológica das populações de células manipuladas e/ou anticorpos, em alguns aspectos, é medida através de qualquer um de uma série de métodos conhecidos. Os parâmetros para avaliar incluem a ligação específica de uma célula T manipulada ou natural ou outra célula imune ao antígeno, in vivo, por exemplo, através de imagiologia, ou ex vivo, por exemplo, através de ELISA ou citometria de fluxo. Em determinadas modalidades, a capacidade das células modificadas para destruir células alvo pode ser medida usando quaisquer métodos conhecidos adequados, tais como ensaios de citotoxicidade descritos, por exemplo, em Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32 (7): 689-702 (2009) e Herman et al., J. Immunological Methods, 285 (1): 25-40 (2004). Em determinadas modalidades, a atividade biológica das células também pode ser medida pelo ensaio da expressão e/ou secreção de determinadas citocinas, tais como CD 107a, IFNγ, IL-2 e TNF. Em alguns aspectos, a atividade biológica é medida ao avaliar o resultado clínico, tal como redução na contagem ou carga tumoral.

[00609] Em determinadas modalidades, as células manipuladas são modificadas de várias maneiras, de modo que sua eficácia terapêutica ou profilática seja aumentada. Por exemplo, o CAR ou TCR manipulado expresso pela população, em algumas modalidades, são conjugados direta ou indiretamente através de um ligante a uma porção de direcionamento. A prática de conjugação de compostos, por exemplo, o

CAR ou TCR, a porções de direcionamento é conhecida. Consulte, por exemplo, Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 111 (1995) e Patente Norte- Americana N° 5.087.616. B. Terapia Combinada

[00610] Também são fornecidos métodos de terapia combinada que incluem a administração e usos, tais como usos terapêuticos e profiláticos, das moléculas de ligação à ROR1, incluindo os anticorpos anti-ROR1, por exemplo, fragmentos de anticorpos, conjugados e proteínas que contêm os mesmos, tais como os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), células modificadas que expressam os receptores recombinantes (por exemplo, CARs), a pluralidade de células modificadas que expressam os receptores e/ou composições que compreendem os mesmos.

[00611] Em algumas modalidades, a molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo), imunoconjugado, receptor recombinante (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descritas no presente documento são administradas como parte de um tratamento combinado ou terapia combinada, tal como simultaneamente com, sequencialmente com ou intermitentemente com, em qualquer ordem, uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais. Em algumas modalidades, uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais incluem, por exemplo, um anticorpo, uma célula modificada, um receptor e/ou um agente, tal como uma célula que expressa um receptor recombinante e/ou agente citotóxico ou terapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui administrar um ou mais agentes, terapias e/ou tratamentos adicionais, por exemplo, qualquer um dos agentes, terapia e/ou tratamentos adicionais descritos no presente documento. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui administrar um ou mais agentes adicionais para o tratamento ou terapia, tal como um agente imunomodulador, inibidor do ponto de verificação imune, via de adenosina ou antagonista ou agonista do receptor de adenosina e inibidores de quinase. Em algumas modalidades, o tratamento combinado ou terapia combinada inclui um tratamento adicional, tal como um tratamento cirúrgico, transplante e/ou radioterapia. Também são fornecidos métodos de tratamento combinado ou terapia combinada que incluem administrar moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento e uma ou mais intervenções terapêuticas adicionais.

[00612] Em algumas modalidades, o agente adicional para tratamento combinado ou terapia combinada aumenta, intensifica e/ou promove a eficácia e/ou segurança do efeito terapêutico de moléculas de ligação, receptores recombinantes, células e/ou composições. Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta ou melhora a eficácia, sobrevivência ou persistência das células administradas, por exemplo, células que expressam a molécula de ligação ou um receptor recombinante. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de um inibidor de proteína fosfatase, um inibidor de quinase, uma citocina, um imunomodulador ou um agente que diminui o nível ou atividade de uma célula T reguladora (Treg). Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a segurança, em virtude da redução ou melhoria dos efeitos adversos das moléculas de ligação, receptores, células e/ou composições recombinantes administrados. Em algumas modalidades, o agente adicional pode tratar a mesma doença, condição ou uma comorbidade. Em algumas modalidades, o agente adicional pode melhorar, reduzir ou eliminar uma ou mais toxicidades, efeitos adversos ou efeitos colaterais que estão associados à administração das moléculas de ligação, receptores recombinantes, células e/ou composições, por exemplo, células que expressam CAR.

[00613] Em algumas modalidades, a terapia, tratamento ou agente adicional inclui quimioterapia, radioterapia, cirurgia, transplante, terapia celular adotiva, anticorpos, agentes citotóxicos, agentes quimioterapêuticos, citocinas, agentes inibidores de crescimento, agentes anti-hormonais, inibidores de quinase, agentes antiangiogênicos, cardioprotetores, agentes imunoestimuladores, agentes imunossupressores, inibidores do ponto de verificação imune, antibióticos, inibidores de angiogênese, moduladores metabólicos ou outros agentes terapêuticos ou qualquer combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma proteína, um peptídeo, um ácido nucleico, um agente de pequena molécula, uma célula, uma toxina, um lipídeo, um carboidrato ou combinações dos mesmos ou qualquer outro tipo de agente terapêutico, por exemplo, radiação. Em algumas modalidades, a terapia, agente ou tratamento adicional inclui cirurgia, quimioterapia, radioterapia, transplante, administração de células que expressam um receptor recombinante, por exemplo, CAR, inibidor de quinase, inibidor do ponto de verificação imune, inibidor da via mTOR, agentes imunossupressores, imunomoduladores, anticorpos, agentes imunoablativos, anticorpos e/ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, conjugados de anticorpos, outras terapias com anticorpos, citotoxinas, esteroides, citocinas, vacinas peptídicas, terapia hormonal, antimetabólitos, moduladores metabólicos, fármacos que inibem a fosfatase calcineurina dependente de cálcio ou a quinase p70S6 FK506) ou inibem a quinase p70S6, agentes alquilantes, antraciclinas, vinca alcaloides, inibidores de proteassoma, agonistas de GITR, inibidores de proteína tirosina fosfatase, inibidores de proteína quinase, um vírus oncolítico e/ou outros tipos de imunoterapia. Em algumas modalidades, o agente ou tratamento adicional é o transplante de medula óssea, terapia ablativa de células T usando agentes quimioterapêuticos, tal como fludarabina, radioterapia de feixe externo (XRT), ciclofosfamida e/ou terapia com anticorpos.

[00614] Em algumas modalidades, as células, moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes e/ou composições, por exemplo, células que expressam CAR, são administradas em combinação com outras células modificadas, por exemplo, outras células que expressam CAR. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de quinase, por exemplo, um inibidor de tirosina quinase de Bruton (Btk), por exemplo, ibrutinibe. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista da via de adenosina ou do receptor de adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional é um imunomodulador, tal como talidomida ou um derivado de talidomida (por exemplo, lenalidomida). Em algumas modalidades, a terapia, agente ou tratamento adicional é um agente citotóxico ou quimioterapêutico, uma terapia biológica (por exemplo, anticorpo, por exemplo, anticorpo monoclonal ou terapia celular) ou um inibidor (por exemplo, inibidor de quinase).

[00615] Em algumas modalidades, um agente quimioterapêutico (algumas vezes denominado como um agente citotóxico) é administrado ao indivíduo para interromper uma lesão. Em determinadas modalidades, a lesão é um tumor. Em modalidades particulares, a lesão é cancerosa. Em modalidades particulares, o agente quimioterapêutico é qualquer agente conhecido por versados na técnica como sendo eficaz para o tratamento, prevenção ou melhora de transtornos hiperproliferativos, tal como câncer. Agentes quimioterapêuticos incluem, porém sem limitações, pequenas moléculas, fármacos sintéticos, peptídeos, polipeptídeos, proteínas, ácidos nucleicos (por exemplo, polinucleotídeos de DNA e RNA incluindo, porém sem limitações, sequências de nucleotídeos antissenso, hélices triplas e sequências de nucleotídeos que codificam proteínas, polipeptídeos ou peptídeos biologicamente ativos), anticorpos, moléculas inorgânicas sintéticas ou naturais, agentes miméticos e moléculas orgânicas sintéticas ou naturais. Em modalidades particulares, fármacos quimioterapêuticos incluem agentes alquilantes, antraciclinas, desreguladores do citoesqueleto (taxanos), epotilonas, inibidores de histona desacetilase, inibidores de topoisomerase, inibidores de topoisomerase II, inibidores de quinase, análogos de nucleotídeos e análogos precursores, antibióticos peptídicos, agentes com base em platina e derivados de vinca alcaloides.

[00616] Em determinadas modalidades, uma lesão é interrompida pela administração de um agente quimioterapêutico para modular células geneticamente modificadas in vivo. Os agentes quimioterapêuticos podem incluir, porém sem limitações, abarelix, aldesleucina, alentuzumabe, alitretinoína, alopurinol, altretamina, amifostina, anastrozol, trióxido de arsênico, asparaginase, BCG vivo, bevaceizumabe, bexaroteno, bleomicina, bortezomibe, busulfan, calusterona, camptotecina, capecitabina, carboplatina, carmustina, celecoxibe, cetuximabe, clorambucil, cinacalcete, cisplatina, cladribina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, darbepoetina alfa, daunorrubicina, denileucina diftitox, dexrazoxana, docetaxel, doxorrubicina, dromostanolona, solução B de Elliott, epirrubicina, epoetina alfa, estramustina, etoposídeo, exemestano, filgrastim, floxuridina, fludarabina, fluorouracil, fulvestrante, gencitabina, gentuzumabe ozogamicina, gefitinibe, goserelina, hidroxiureia, ibritumomabe tiuxetano, idarrubicina, ifosfamida, imatinibe, interferon alfa-2a, interferon alfa-2b, irinotecano, letrozol, leucovorina, levamisol, lomustina, mecloretamina, megestrol, melfalan, mercaptopurina, mesna, metotrexato, metoxsaleno, metilprednisolona, mitomicina C,

mitotano, mitoxantrona, nandrolona, nofetumomabe, oblimerseno, oprelvecina, oxaliplatina, paclitaxel, pamidronato, pegademase, pegaspargase, pegfilgrastim, pemetrexede, pentostatina, pipobromano, plicamicina, polifeprosana, porfímero, procarbazina, quinacrina, rasburicase, rituximabe, sargramostim, estreptozocina, talco, tamoxifeno, tarceva, temozolomida, teniposídeo, testolactona, tioguanina, tiotepa, topotecano, toremifeno, tositumomabe, trastuzumabe, tretinoína, mostarda de uracila, valrubicina, vinblastina, vincristina, vinorelbina e zoledronato.

[00617] Em algumas modalidades, agentes quimioterapêuticos exemplificativos incluem uma antraciclina (por exemplo, doxorrubicina, tal como doxorrubicina lipossômica); um vinca alcaloide (por exemplo, vinblastina, vincristina, vindesina, vinorelbina); um agente alquilante (por exemplo, ciclofosfamida, decarbazina, melfalano, ifosfamida, temozolomida); um anticorpo de célula imune (por exemplo, alentuzumabe, gentuzumabe, rituximabe, tositumomabe); um antimetabólito (incluindo, por exemplo, antagonistas de ácido fólico, análogos de pirimidina, análogos de purina e inibidores de adenosina desaminase, tal como fludarabina); um agonista da proteína relacionada ao TNFR induzida por glucocorticoides TNFR (GITR); um inibidor de proteassoma (por exemplo, aclacinomicina A, gliotoxina ou bortezomibe); um imunomodulador, tal como talidomida ou um derivado de talidomida (por exemplo, lenalidomida).

[00618] Em algumas modalidades, a terapia ou tratamento adicional é a terapia celular, por exemplo, terapia celular adotiva. Em algumas modalidades, a terapia adicional inclui administrar células modificadas, por exemplo, células que expressam CAR adicionais. Em algumas modalidades, a célula manipulada adicional é uma célula que expressa CAR que expressa o mesmo ou um receptor recombinante diferente das células manipuladas fornecidas no presente documento, por exemplo,

células que expressam CAR anti-ROR1. Em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional manipulada, reconhece um antígeno e/ou epitopo diferente. Em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional modificada, reconhece um epitopo diferente do mesmo antígeno que os receptores recombinantes descritos no presente documento, por exemplo, ROR1. Em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional modificada, reconhece um antígeno diferente, por exemplo, um antígeno tumoral diferente ou combinação de antígenos. Por exemplo, em algumas modalidades, o receptor recombinante, por exemplo, CAR, expresso na célula adicional modificada, tem como alvo células cancerosas que expressam marcadores de linhagem precoce, por exemplo, células-tronco cancerosas, enquanto que outras células que expressam CAR têm como alvo células cancerosas que expressam marcadores de linhagem posterior. Em tais modalidades, a célula manipulada adicional é administrada antes, simultaneamente ou após a administração (por exemplo, infusão) das células que expressam CAR descritas no presente documento. Em algumas modalidades, a célula manipulada adicional expressa CAR alogênico.

[00619] Em algumas modalidades, as configurações de uma ou mais das moléculas CAR compreendem um domínio de sinalização intracelular primário e dois ou mais, por exemplo, 2, 3, 4 ou 5 ou mais, domínios de sinalização coestimuladores. Em algumas modalidades, uma ou mais das moléculas de CAR podem ter o mesmo ou um domínio de sinalização intracelular primário diferente, o mesmo ou um domínio de sinalização coestimulador diferente ou o mesmo número ou um número diferente de domínios de sinalização coestimuladores Em algumas modalidades, uma ou mais das moléculas de CAR podem ser configuradas como um CAR dividido, em que uma das moléculas de

CAR compreendem um domínio de ligação a antígeno e um domínio coestimulador (por exemplo, 4-1BB), enquanto que a outra molécula de CAR compreende um domínio de ligação a antígeno e um domínio de sinalização intracelular primário (por exemplo, CD3 zeta).

[00620] Em algumas modalidades, o agente adicional é qualquer uma das moléculas de ligação multiespecíficas e/ou células manipuladas para expressar uma ou mais das moléculas de ligação descritas no presente documento e/ou células manipuladas para expressar moléculas de ligação adicionais, por exemplo, receptores recombinantes, por exemplo, CAR, que têm como alvo um antígeno diferente. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui qualquer uma das células ou pluralidade de células descritas no presente documento, por exemplo, na Seção I.C. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada para expressar um receptor recombinante, por exemplo, CAR, que tem como alvo um epitopo e/ou antígeno diferente, por exemplo, um antígeno diferente associado a uma doença ou condição. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada para expressar um receptor recombinante, por exemplo, CAR, que tem como alvo um segundo ou antígeno adicional expresso na doença ou transtorno, por exemplo, um câncer ou tumor.

[00621] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente imunomodulador. Em algumas modalidades, a terapia combinada inclui um agente imunomodulador que pode estimular, amplificar e/ou de outra forma aumentar uma resposta imune antitumoral, por exemplo, resposta imune antitumoral das células modificadas administradas, tal como inibe a sinalização imunossupressora ou aumenta a sinalização imunoestimuladora. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador é um peptídeo, proteína ou uma pequena molécula. Em algumas modalidades, a proteína pode ser uma proteína de fusão ou uma proteína recombinante. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador se liga a um alvo imune, tal como um receptor na superfície celular expresso em células imunes, tais como células T, células B ou células apresentadoras de antígeno. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente imunomodulador é um anticorpo ou fragmento de anticorpo de ligação a antígeno, uma proteína de fusão, uma pequena molécula ou um polipeptídeo. Em algumas modalidades, as moléculas de ligação, receptores, células e/ou composições recombinantes são administradas em combinação com um agente adicional que é um anticorpo ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo, tal como um anticorpo monoclonal.

[00622] Em algumas modalidades, o agente imunomodulador bloqueia, inibe ou neutraliza um componente da via do ponto de verificação imune. O sistema imune possui múltiplas vias inibidoras que estão envolvidas na manutenção da autotolerância e na modulação das respostas imunológicas. Os tumores podem usar determinadas vias do ponto de verificação imune como um mecanismo principal de resistência imune, particularmente contra células T que são específicas para antígenos tumorais (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252- 264), por exemplo, células modificadas que expressam CAR. Uma vez que muitos destes pontos de verificação imunes são iniciados por interações ligante-receptor, eles podem ser facilmente bloqueados por anticorpos contra os ligantes e/ou seus receptores.

[00623] Portanto, a terapia com moléculas antagonistas que bloqueiam uma via do ponto de verificação imune, tais como pequenas moléculas, inibidores de ácidos nucleicos (por exemplo, RNAi) ou moléculas de anticorpo, estão se tornando caminhos promissores de imunoterapia para o câncer e outras doenças. Em contraste com a maioria dos agentes anticâncer, os inibidores do ponto de verificação imune não têm coo alvo necessariamente as células tumorais diretamente, mas sim os receptores de linfócitos ou seus ligantes, a fim de aumentar a atividade antitumoral endógena do sistema imune.

[00624] Conforme usado no presente documento, o termo "inibidor do ponto de verificação imune" refere-se a moléculas que reduzem, inibem, interferem ou modulam uma ou mais proteínas do ponto de verificação imune total ou parcialmente. As proteínas do ponto de verificação imune regulam a ativação ou função das células T. Estas proteínas são responsáveis pelas interações coestimuladoras ou inibidoras das respostas de células T. As proteínas do ponto de verificação imune regulam e mantêm a autotolerância e a duração e amplitude das respostas imunes fisiológicas. Em algumas modalidades, o indivíduo pode receber um agente adicional que pode intensificar ou aumentar a resposta imune, por exemplo, a resposta imune efetuada pelas moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições fornecidas no presente documento, contra uma doença ou condição, por exemplo, um câncer, tal como qualquer um descrito no presente documento.

[00625] Os inibidores do ponto de verificação imune incluem qualquer agente que bloqueia ou inibe de uma maneira estatisticamente significativa as vias inibidoras do sistema imune. Tais inibidores podem incluir inibidores de pequenas moléculas ou podem incluir anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos que se ligam a e bloqueiam ou inibem os receptores do ponto de verificação imune, ligantes e/ou interação receptor-ligante. Em algumas modalidades, a modulação, o aumento e/ou a estimulação de receptores específicos podem superar os componentes da via do ponto de verificação imune. Moléculas do ponto de verificação imune ilustrativas que podem ser alvo de bloqueio, inibição, modulação, intensificação e/ou estimulação incluem, porém sem limitações, PD-1 (CD279), PD-L1 (CD274, B7-H1),

PDL2 (CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3 (CD223), TIM-3, 4-1BB (CD137), 4-1BBL (CD137L), GITR (TNFRSF18, AITR), CD40, OX40 (CD134, TNFRSF4), CXCR2, antígenos associados a tumor (TAA), B7- H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4 (pertence à família de moléculas CD2 e é expresso em todas as células NK, γ, δ e células T CD8+ (αβ) de memória), CD160 (também denominada como BY55), CGEN-15049, CEACAM (por exemplo, CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 ou CD270), KIR, A2aR, MHC classe I, MHC classe II, GAL9, adenosina e um receptor de fator de crescimento transformador (TGFR; por exemplo, TGFR beta). Os inibidores do ponto de verificação imune incluem anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos ou outras proteínas de ligação que se ligam e bloqueiam ou inibem e/ou aumentam ou estimulam a atividade de uma ou mais de qualquer uma das ditas moléculas.

[00626] Inibidores do ponto de verificação imune exemplificativos incluem Tremelimumabe (anticorpo bloqueador de CTLA-4, também conhecido como ticilimumabe, CP-675,206), anti-OX40, anticorpo monoclonal anti-PD-L1 (Anti-B7-H1; MEDI4736), MK-3475 (bloqueador de PD-1), nivolumabe (anticorpo anti-PD-1), CT-011 (anticorpo anti-PD- 1), anticorpo monoclonal BY55, AMP224 (anticorpo anti-PD-L1), BMS- 936559 (anticorpo anti-PD-L1), MPLDL3280A (anticorpo anti-PD-L1), MSB0010718C (anticorpo anti-PD-L1) e ipilimumabe (anticorpo anti- CTLA-4, também conhecido como Yervoy, MDX-010 e MDX-101). Exemplos de anticorpos imunomoduladores incluem, porém sem limitações, Daclizumabe (Zenapax), Bevacizumabe (Avastin), Basiliximabe, Ipilimumabe, Nivolumabe, Pembrolizumabe, MPDL3280A, Pidilizumabe (CT-011), MMSD-933275A, (BMSD- 93327559), (BMSD-93327559) Atezolizumabe), Tremelimumabe,

IMP321, BMS-986016, LAG525, Urelumabe, PF-05082566, TRX518, MK-4166, Dacetuzumabe (SGN-40), Lucatumumabe (HCD122), SEA- CD40, CP-870 MEDI, CP-893, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C (Avelumabe), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, Ulocuplumabe, BKT140, Varlilumabe (CDX-1127), ARGX-110, MGA271, lirilumabe (BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, Emactuzumabe, CC-90002 e MNRP1685A ou um fragmento de ligação a anticorpo dos mesmos. Outros imunomoduladores exemplificativos incluem, por exemplo, afutuzumabe (disponível a partir da Roche); pegfilgrastim (Neulasta); lenalidomida (CC-5013, Revlimid); talidomida (Thalomid), actimida (CC4047); e IRX-2 (mistura de citocinas humanas, incluindo interleucina 1, interleucina 2 e interferon gama, CAS 951209-71-5, disponível a partir da IRX Therapeutics).

[00627] A morte celular programada 1 (PD-1) é uma proteína do ponto de verificação imune que é expressa em células B, células NK e células T (Shinohara et al., 1995, Genomics 23: 704-6; Blank et al., 2007, Cancer Immunol Immunother 56: 739-45; Finger et al., 1997, Gene 197: 177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). O principal papel da PD-1 é limitar a atividade das células T nos tecidos periféricos durante a inflamação em resposta à infecção, bem como limitar a autoimunidade. A expressão de PD-1 é induzida em células T ativadas e a ligação de PD-1 a um de seus ligantes endógenos atua ao inibir a ativação de células T, inibindo quinases estimuladoras. A PD-1 também atua ao inibir o "sinal de parada" do TCR. A PD-1 é altamente expressa em células Treg e pode aumentar sua proliferação na presença de ligante (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Os anticorpos anti-PD 1 têm sido usados para o tratamento de melanoma, câncer de pulmão de células não pequenas, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer colorretal, câncer de cabeça e pescoço, câncer de mama triplo-negativo, leucemia, linfoma e câncer de células renais

(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366: 2443-54; Lipson et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 462-8; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14: 3044-51; Gildener-Leapman et al., 2013, Oral Oncol 49: 1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5: 278-85). Anticorpos anti- PD-1 exemplificativos incluem nivolumabe (Opdivo da BMS), pembrolizumabe (Keytruda da Merck), pidilizumabe (CT-011 da Cure Tech), lambrolizumabe (MK-3475 da Merck) e AMP-224 (Merck), nivolumabe (também denominado como Opdivo, BMS-936558 ou MDX1106; Bristol-Myers Squibb) é um anticorpo monoclonal IgG4 totalmente humano que bloqueia especificamente a PD-1. Nivolumabe (clone 5C4) e outros anticorpos monoclonais humanos que se ligam especificamente à PD-1 são descritos nos documentos US 8.008.449 e WO2006/121168. Pidilizumabe (CT-011; Cure Tech) é um anticorpo monoclonal IgG1k humanizado que se liga à PD-1. Pidilizumabe e outros anticorpos monoclonais anti-PD-1 humanizados são descritos no documento WO2009/101611. Pembrolizumabe (anteriormente conhecido como lambrolizumabe e também denominado como Keytruda, MK03475; Merck) é um anticorpo monoclonal IgG4 humanizado que se liga à PD-1. Pembrolizumabe e outros anticorpos anti-PD-1 humanizados são descritos nos documentos US 8.354.509 e WO2009/114335. Outros anticorpos anti-PD-1 incluem AMP 514 (Amplimmune), dentre outros, por exemplo, anticorpos anti-PD-1 descritos nos documentos US 8.609.089, US 2010028330, US 20120114649 e/ou US 20150210769. AMP-224 (B7-DCIg; Amplimmune; por exemplo, descrito nos documentos WO2010/027827 e WO2011/066342), é um receptor solúvel de fusão PD-L2 Fc que bloqueia a interação entre PD-1 e B7-H1.

[00628] PD-L1 (também conhecida como CD274 e B7-H1) e PD-L2 (também conhecida como CD273 e B7-DC) são ligantes para PD-1, encontrados em células T ativadas, células B, células mieloides,

macrófagos e alguns tipos de células tumorais. As terapias antitumorais têm se focado em anticorpos anti-PD-L1. O complexo de PD-1 e PD-L1 inibe a proliferação de células T CD8+ e reduz a resposta imune (Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366: 2443-54; Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366: 2455-65). Os anticorpos anti-PD-L1 foram usados para o tratamento de câncer de pulmão de células não pequenas, melanoma, câncer colorretal, câncer de células renais, câncer de pâncreas, câncer gástrico, câncer de ovário, câncer de mama e malignidades hematológicas (Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366: 2455-65; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 5300-9; Radvanyi et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5: 278-85; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14: 13044-51). Anticorpos anti-PD-L1 exemplificativos incluem MDX-1105 (Medarex), MEDI4736 (Medimmune) MPDL3280A (Genentech), BMS-935559 (Bristol-Myers Squibb) e MSB0010718C. MEDI4736 (Medimmune) é um anticorpo monoclonal humano que se liga à PD-L1 e inibe a interação do ligante com PD-1. MDPL3280A (Genentech/Roche) é um anticorpo monoclonal IgG1 otimizado para Fc humana que se liga à PD-L1. MDPL3280A e outros anticorpos monoclonais humanos contra PD-L1 são descritos na Patente Norte-Americana N° 7.943.743 e Publicação Norte-Americana N° 20120039906. Outros agentes de ligação anti-PD- L1 incluem YW243.55.S70 (consulte documento WO2010/077634) e MDX-1105 (também denominado como BMS-936559 e, por exemplo, agentes de ligação anti-PD-L1 descritos no documento WO2007/005874).

[00629] O antígeno associado a linfócitos T citotóxicos (CTLA-4), também conhecido como CD152, é uma molécula coinibidora que funciona para regular a ativação de células T. CTLA-4 é um membro da superfamília das imunoglobulinas que é expresso exclusivamente em células T. CTLA-4 atua ao inibir a ativação das células T e é relatado que inibe a atividade das células T auxiliares e aumenta a atividade imunossupressora das células T reguladoras. Embora o mecanismo de ação preciso de CTLA-4 permaneça sob investigação, foi sugerido que ele inibe a ativação de células T ao superar a competição de CD28 na ligação à CD80 e CD86, bem como ao distribuir ativamente sinais de inibição à célula T (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Os anticorpos anti-CTLA-4 têm sido usados em ensaios clínicos para o tratamento de melanoma, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não pequenas (Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14: 848-61; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19: 5300; Weber, 2007, Oncologist 12: 864-72; Wada et al., 2013, J Transl Med 11: 89). Uma característica significativa do anticorpo anti- CTLA-4 é a cinética do efeito antitumoral, com um período de latência de até 6 meses após o tratamento inicial necessário para a resposta fisiológica. Em alguns casos, os tumores podem realmente aumentar de tamanho após o início do tratamento, antes que uma redução seja observada (Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12: 252-264). Anticorpos anti-CTLA-4 exemplificativos incluem ipilimumabe (Bristol- Myers Squibb) e tremelimumabe (Pfizer). O ipilimumabe recebeu recentemente a aprovação da FDA para o tratamento de melanoma metastático (Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89).

[00630] O gene de ativação de linfócitos-3 (LAG-3), também conhecido como CD223, é outra proteína do ponto de verificação imune. A LAG-3 foi associada à inibição da atividade de linfócitos e, em alguns casos, à indução de anergia dos linfócitos. A LAG-3 é expressa em várias células do sistema imune, incluindo células B, células NK e células dendríticas. A LAG-3 é um ligante natural para o receptor MHC de classe II, o qual é substancialmente expresso em células T infiltrantes de melanoma, incluindo aquelas dotadas de atividade imunossupressora potente. Anticorpos anti-LAG-3 exemplificativos incluem BMS-986016 (Bristol-Myers Squib), o qual é um anticorpo monoclonal que tem como alvo a LAG-3. IMP701 (Immutep) é um anticorpo antagonista de LAG-3 e IMP731 (Immutep e GlaxoSmithKline) é um anticorpo de depleção de LAG-3. Outros inibidores de LAG-3 incluem IMP321 (Immutep), o qual é uma proteína de fusão recombinante de uma porção solúvel de LAG-3 e Ig que se liga a moléculas de MHC de classe II e ativa células apresentadoras de antígeno (APC). Outros anticorpos são descritos, por exemplo, nos documentos WO2010/019570 e US 2015/0259420

[00631] Foi mostrado que o domínio de imunoglobulina de células T e o domínio de mucina-3 (TIM-3), inicialmente identificados em células Th1 ativadas, são um regulador negativo da resposta imune. O bloqueio de TIM-3 promove imunidade antitumoral mediada por células T e possui atividade antitumoral em uma variedade de modelos de tumor em camundongos. As combinações de bloqueio de TIM-3 com outros agentes imunoterapêuticos, tal como TSR-042, anticorpos anti-CD137 e outros, podem ser aditivas ou sinérgicas no aumento dos efeitos antitumorais. A expressão de TIM-3 foi associada a uma série de diferentes tipos de tumor, incluindo melanoma, NSCLC e câncer renal e, adicionalmente, foi demonstrado que a expressão de TIM-3 intratumoral está correlacionada a um mau prognóstico em uma variedade de tipos de tumor, incluindo NSCLC, câncer cervical e gástrico. O bloqueio de TIM-3 também é interessante para promover o aumento da imunidade a uma série de doenças virais crônicas. Também foi demonstrado que a TIM-3 interage com uma série de ligantes, incluindo galectina-9, fosfatidilserina e HMGB1, embora quais destes, se houver, sejam relevantes na regulação de respostas antitumorais não esteja claro no momento. Em algumas modalidades, anticorpos, fragmentos de anticorpos, pequenas moléculas ou inibidores peptídicos que têm como alvo a TIM-3 podem se ligar ao domínio IgV de TIM-3 para inibir a interação com seus ligantes. Anticorpos e peptídeos exemplificativos que inibem a TIM-3 são descritos nos documentos US 2015/0218274, WO2013/006490 e US 2010/0247521. Outros anticorpos anti-TIM-3 incluem versões humanizadas de RMT3-23 (Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71: 3540-3551) e o clone 8B.2C12 (Monney et al., 2002, Nature, 415: 536-541). Os anticorpos biespecíficos que inibem a TIM-3 e PD-1 são descritos no documento US 2013/0156774.

[00632] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de CEACAM (por exemplo, inibidor de CEACAM-1, CEACAM-3 e/ou CEACAM-5). Em algumas modalidades, o inibidor de CEACAM é uma molécula de anticorpo anti-CEACAM. Anticorpos anti-CEACAM-1 exemplificativos são descritos nos documentos WO 2010/125571, WO 2013/082366 WO 2014/059251 e WO 2014/022332, por exemplo, um anticorpo monoclonal 34B1, 26H7 e 5F4; ou uma forma recombinante do mesmo conforme descrito, por exemplo, nos documentos US 2004/0047858, US 7.132.255 e WO 99/052552. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CEACAM se liga à CEACAM-5 conforme descrito, por exemplo, em Zheng et al., PLoS One. (2011) 6 (6): e21146) ou reage de forma cruzada com CEACAM-1 e CEACAM-5 conforme descrito, por exemplo, nos documentos WO 2013/054331 e US 2014/0271618.

[00633] 4-1BB, também conhecida como CD137, é uma glicoproteína transmembrana pertencente à superfamília TNFR. Os receptores de 4-1BB estão presentes em células T ativadas e células B e monócitos. Um exemplo de anticorpo anti-4-1BB é o urelumabe (BMS- 663513), o qual tem atividades imunoestimulantes e antineoplásicas potenciais.

[00634] A superfamília do receptor do fator de necrose tumoral, membro 4 (TNFRSF4), também conhecido como OX40 e CD134, é outro membro da superfamília TNFR. OX40 não é expresso constitutivamente em células T não expostas em repouso e atua como uma molécula do ponto de verificação imune coestimuladora secundária. Anticorpos anti-OX40 exemplificativos são MEDI6469 e MOXR0916 (RG7888, Genentech).

[00635] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui uma molécula que diminui a população de células T reguladoras (Treg). Métodos que diminuem o número de células Treg (por exemplo, esgotam) são conhecidos e incluem, por exemplo, depleção de CD25, administração de ciclofosfamida e modulação da função do gene relacionado à família TNFR induzida por glicocorticoide (GITR). O GITR é um membro da superfamília TNFR que é regulado positivamente em células T ativadas, o que melhora o sistema imune. A redução do número de células Treg em um indivíduo antes de aferese ou antes da administração de células modificadas, por exemplo, células que expressam CAR, pode reduzir o número de células imunes indesejadas (por exemplo, Tregs) no microambiente tumoral e reduz o risco de recidiva no indivíduo. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui uma molécula direcionada a GITR e/ou modulando funções de GITR, tal como um agonista de GITR e/ou um anticorpo de GITR que esgota as células T reguladoras (Tregs). Em algumas modalidades, o agente adicional inclui ciclofosfamida. Em algumas modalidades, a molécula de ligação à GITR e/ou molécula moduladora da função de GITR (por exemplo, agonista de GITR e/ou anticorpos anti-GITR de depleção de Treg) é administrada antes das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR. Por exemplo, em algumas modalidades, o agonista de GITR pode ser administrado antes de aferese das células. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida é administrada ao indivíduo antes da administração (por exemplo, infusão ou reinfusão) das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR ou antes de aferese das células. Em algumas modalidades, a ciclofosfamida e um anticorpo anti-GITR são administrados ao indivíduo antes da administração (por exemplo, infusão ou reinfusão) das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR ou antes de aferese das células.

[00636] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agonista de GITR. Agonistas de GITR exemplificativos incluem, por exemplo, proteínas de fusão à GITR e anticorpos anti-GITR (por exemplo, anticorpos anti-GITR bivalentes) tais como, por exemplo, uma proteína de fusão à GITR descrita na Patente Norte-Americana N° 6.111.090, Patente Europeia Nº 090505B 1, Patente Norte-Americana N°

8.586.023, Publicações PCT Nos WO 2010/003118 e 2011/090754 ou um anticorpo anti-GITR descrito, por exemplo, na Patente Norte- Americana N° 7.025.962, Patente Europeia Nº 1947183B 1, Patente Norte-Americana N° 7.812.135, Patente Norte-Americana N° 8.388.967, Patente Norte-Americana N° 8.591.886, Patente Europeia Nº EP 1866339, documentos WO 2011/028683, WO 2013/039954, WO2005/007190, WO 2007/133822, WO2005/055808, WO 99/40196, WO 2001/03720, WO99/20758, WO2006/083289, WO 2005/115451, Patente Norte-Americana N° 7.618.632 e documento WO 2011/051726. Um exemplo de anticorpo anti-GITR é TRX518.

[00637] Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a infiltração tumoral ou a transmigração das células administradas, por exemplo, células que expressam CAR. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional estimula CD40, tal como CD40L, por exemplo, CD40L humana recombinante. O agrupamento de diferenciação 40 (CD40) também é membro da superfamília TNFR. CD40 é uma proteína coestimuladora encontrada em células apresentadoras de antígeno e media uma ampla variedade de respostas imunes e inflamatórias. A CD40 também é expressa em algumas doenças malignas, onde promove a proliferação. Anticorpos anti-CD40 exemplificativos são dacetuzumabe (SGN-40), lucatumumabe (Novartis, antagonista), SEA-CD40 (Seattle Genetics) e CP-870.893. Em algumas modalidades, o agente adicional que aumenta a infiltração tumoral inclui o inibidor de tirosina quinase sunitnibe, heparanase e/ou receptores de quimiocina, tais como CCR2, CCR4 e CCR7.

[00638] Em algumas modalidades, o agente adicional é um análogo estrutural ou funcional ou derivado da talidomida e/ou um inibidor de ubiquitina ligase E3. Em algumas modalidades, o agente adicional se liga à Cereblon (CRBN). Em algumas modalidades, o agente adicional se liga ao complexo de ubiquitina-ligase CRBN E3. Em algumas modalidades, o agente adicional se liga ao CRBN e ao complexo de CRBN E3 ubiquitina-ligase. Em algumas modalidades, o agente adicional regula positivamente a proteína ou expressão gênica de CRBN. Em alguns aspectos, CRBN é o adaptador de substrato para a ubiquitina ligase CRL4CRBN E3 e modula a especificidade da enzima. Em algumas modalidades, a ligação ao CRB ou ao complexo de ubiquitina ligase CRBN E3 inibe a atividade da ubiquitina ligase E3. Em algumas modalidades, o agente adicional induz à ubiquitinação de KZF1 (Ikaros) e IKZF3 (Aiolos) e/ou induz a degradação de IKZF1 (Ikaros) e IKZF3 (Aiolos). Em algumas modalidades, o agente adicional induz à ubiquitinação da caseína quinase 1A1 (CK1α) pela ubiquitina ligase CRL4CRBN E3. Em algumas modalidades, a ubiquitinação de CK1α resulta na degradação de CK1α.

[00639] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor do fator de transcrição Ikaros (IKZF1). Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a ubiquitinação de Ikaros. Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a degradação de Ikaros. Em algumas modalidades, o agente adicional regula negativamente a proteína ou expressão gênica de Ikaros. Em algumas modalidades, a administração do agente adicional causa uma diminuição nos níveis da proteína Ikaros.

[00640] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor do fator de transcrição Aiolos (IKZF3). Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a ubiquitinação de Aiolos. Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a degradação de Aiolos. Em algumas modalidades, o agente adicional regula negativamente a proteína ou expressão gênica de Aiolos. Em algumas modalidades, a administração do agente adicional causa uma diminuição nos níveis da proteína Aiolos.

[00641] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor dos fatores de transcrição Ikaros (IKZF1) e Aiolos (IKZF3). Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a ubiquitinação de Ikaros e Aiolos. Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a degradação de Ikaros e Aiolos. Em algumas modalidades, o agente adicional aumenta a ubiquitinação e degradação de Ikaros e Aiolos. Em algumas modalidades, a administração do agente adicional faz com que os níveis da proteína Aiolos e da proteína Ikaros diminuam.

[00642] Em algumas modalidades, o agente adicional é um fármaco inibidor de citocina seletivo (SelCID). Em algumas modalidades, o agente adicional inibe a atividade de fosfodiesterase-4 (PDE4). Em algumas modalidades, o agente adicional suprime a atividade enzimática das fosfatases CDC25. Em algumas modalidades, o agente adicional altera o tráfego intracelular de fosfatases CDC25.

[00643] Em algumas modalidades, o agente adicional é a talidomida (2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1H-isoindol-1,3(2H)-diona) ou um análogo ou derivado da talidomida. Em determinadas modalidades, um derivado da talidomida inclui variantes estruturais da talidomida que têm uma atividade biológica similar. Derivados de talidomida exemplificativos incluem, porém sem limitações, lenalidomida

(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™; Celgene Corporation), pomalidomida (também conhecido como ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™ ou POMALYST™ (Celgene Corporation)), CC-1088, CDC-501 e CDC-501 e os compostos descritos nas Patentes Norte- Americanas Nos 5.712.291; 7.320.991; e 8.716.315; Pedido Norte- Americano Nº 2016/0313300; e Publicações PCT Nos WO 2002/068414 e WO 2008/154252.

[00644] Em algumas modalidades, o agente adicional é 1-oxo- e 1,3- dioxo-2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)isoindolinas substituídas por amino no anel benzo, conforme descrito na Patente Norte-Americana Nº

5.635.517, a qual é incorporada ao presente documento a título de referência.

[00645] Em algumas modalidades, o agente adicional é um composto da seguinte fórmula: em que um de X e Y é –C(O)- e o outro de X e Y é –C(O)- ou –CH2-, e R5 é hidrogênio ou alquila inferior, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, X é –C(O)- e Y é –CH2-. Em algumas modalidades, X e Y são –C(O)-. Em algumas modalidades, R5 é hidrogênio. Em outras modalidades, R5 é metila.

[00646] Em algumas modalidades, o agente adicional é um composto que pertence a uma classe de compostos de 2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)ftalimida substituídos e 2-(2,6-dioxopiperidin-3-il)-1- oxoisoindóis substituídos, tais como aqueles descritos nas Patentes Norte-Americanas Nos 6.281.230; 6.316.471; 6.335.349; e 6.476.052, e Pedido de Patente Internacional Nº PCT/US97/13375 (Publicação Internacional Nº WO 98/03502), cada um dos quais é incorporado ao presente documento a título de referência.

[00647] Em algumas modalidades, o agente adicional é um composto da seguinte fórmula: em que um de X e Y é –C(O)- e o outro de X e Y é –C(O)- ou –CH2-; cada um de R1, R2, R3 e R4 é independentemente halo, alquila de 1 a 4 átomos de carbono ou alcóxi de 1 a 4 átomos de carbono, ou um de R1, R3, R4 e R5 é –NHRa e o restante de R1, R2, R3 e R4 é hidrogênio, em que Ra é hidrogênio ou alquila de 1 a 8 átomos de carbono; R5 é hidrogênio ou alquila de 1 a 8 átomos de carbono, benzila ou halo; contanto que R5 seja diferente de hidrogênio se X e Y forem –C(O)- e (i) cada um de R1, R2, R3 e R4 é flúor; ou (ii) um de R1, R2, R3 e R4 é amino; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[00648] Em algumas modalidades, o agente adicional é um composto que pertence a uma classe de compostos imunomoduladores de isoindol descritos na Patente Norte-Americana Nº 7.091.353, Publicação de Patente Norte-Americana N° 2003/0045552 e Pedido Internacional Nº PCT/USOI/50401 (Publicação Internacional Nº WO02/059106), cada um dos quais é incorporado ao presente documento a título de referência. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é [2-(2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo- 2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-ilmetil]-amida; éster terc-butílico de ácido (2- (2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol-4-ilmetil)- carbâmico; 4-(aminometil)-2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-isoindolina-1,3-

diona; N-(2-(2,6-dioxo-piperidin-3-il)-1,3-dioxo-2,3-di-hidro-1H-isoindol- 4-ilmetil)-acetamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil)-1,3-dioxoisoindolin-4- il)metil}ciclopropil-carboxamida; 2-cloro-N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))- 1,3-dioxoisoindolin-4-il) metil}acetamida; N-(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))- 1,3-dioxoisoindolin-4-il)-3-piridilcarboxamida; 3-{1-oxo-4- (benzilamino)isoindolin-2-il}piperidina-2,6-diona; 2-(2,6-dioxo(3-piperi- dil))-4-(benzilamino)isoindolina-1,3-diona; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))- 1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}propanamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3-piperidil))- 1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}-3-piridilcarboxamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3- piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}heptanamida; N-{(2-(2,6-dioxo(3- piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)metil}-2-furilcarboxamida; {N-(2-(2,6- dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)carbamoil}acetato de metila; N- (2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)pentanamida; N-(2-(2,6- dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il)-2-tienilcarboxamida; N-{[2-(2,6- dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il]metil}(butilamino)carboxamida; N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4-il]metil}(octilamino)car- boxamida; ou N-{[2-(2,6-dioxo(3-piperidil))-1,3-dioxoisoindolin-4- il]metil}(benzilamino)carboxamida.

[00649] Em algumas modalidades, o agente adicional é um composto que pertence a uma classe de compostos imunomoduladores isoindol descritos na Publicação do Pedido de Patente Norte-Americana N° 2002/0045643, Publicação Internacional Nº WO 98/54170 e Patente Norte-Americana N° 6.395.754, cada uma das quais é incorporada ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma 2-(2,6-dioxopiperdin-3-il)-1-oxoisoindolina tetra- substituída descrita na Patente Norte-Americana Nº 5.798.368, a qual é incorporada ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, o agente adicional é 1-oxo e 1,3-dioxo-2-(2,6- dioxopiperidin-3-il)isoindolina descrita na Patente Norte-Americana Nº

6.403.613, a qual é incorporada ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma 1-oxo ou 1,3-dioxoisoindolina substituída na posição 4 ou 5 do anel de indolina, conforme descrito na Patente Norte-Americana N° 6.380.239 e Patente Norte-Americana N° 7.244.759, ambas as quais são incorporadas ao presente documento a título de referência.

[00650] Em algumas modalidades, o agente adicional é ácido 2-(4- amino-1-oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il)-4-carbamoil-butírico ou ácido 4- (4-amino-1 ácido-oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il)-4-carbamoil-butírico. Em algumas modalidades, o composto imunomodulador é ácido 4- carbamoil-4-{4-[(furan-2-il-metil)-amino]-1,3-dioxo-1,3-di-hidro-isoindol- 2-il}-butírico, ácido 4-carbamoil-2-{4-[(furan-2-il-metil)-amino]-1,3-dioxo- 1,3-di-hidro-isoindol-2-il}-butírico, ácido 2-{4-[(furan-2-il-metil)-amino]- 1,3-dioxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il}-4-fenilcarbamoil-butírico ou ácido 2- {4-[(furan-2-il-metil)-amino]-1,3-dioxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il}- pentanodioico.

[00651] Em algumas modalidades, o agente adicional é uma isoindolina-1-ona ou isoindolina-1,3-diona substituída na posição 2 por 2,6-dioxo-3-hidroxipiperidin-5-ila, conforme descrito na Patente Norte- Americana N° 6.458.810, a qual é incorporada ao presente documento a título de referência. Em algumas modalidades, o composto imunomodulador é 3-(5-amino-2-metil-4-oxo-4H-quinazolin-3-il)- piperidina-2,6-diona, ou um enantiômero ou uma mistura de enantiômeros da mesma; ou um sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável da mesma. Em algumas modalidades, o composto imunomodulador é 3-[4-(4-morfolin-4-ilmetil- benziloxi)-1-oxo-1,3-di-hidro-isoindol-2-il]-piperidina-2,6-diona.

[00652] Em algumas modalidades, o agente adicional é conforme descrito em Oshima, K. et al., Nihon Rinsho., 72 (6): 1130-5 (2014); Millrine, D. et al., Trends Mol Med., 23 (4): 348-364 (2017); e Collins, et al., Biochem J., 474 (7): 1127-1147 (2017).

[00653] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui fármacos de talidomida ou análogos e/ou derivados dos mesmos, tais como lenalidomida, pomalidomida ou apremilaste. Consulte, por exemplo, Bertilaccio et al., Blood (2013) 122: 4171, Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5 (4): e1115940; Fecteau et al., Blood (2014) 124 (10): 1637-1644 e Kuramitsu et al., Cancer Gene Therapy (2015) 22: 487-495). A lenalidomida ((RS)-3-(4-Amino-1-oxo-1,3-di-hidro-2H- isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona; também conhecida como Revlimid) é um derivado sintético da talidomida e tem múltiplos efeitos imunomoduladores, incluindo reforço da formação de sinapses imunes entre a célula T e células apresentadoras de antígeno (APCs). Em algumas modalidades, o agente adicional é lenalidomida, pomalidomida, avadomida, um estereômero de lenalidomida, pomalidomida, avadomida ou um sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável das mesmas. Em algumas modalidades, o composto imunomodulador é lenalidomida, um estereômero de lenalidomida ou um sal, solvato, hidrato, cocristal, clatrato ou polimorfo farmaceuticamente aceitável da mesma. Em algumas modalidades, o composto imunomodulador é lenalidomida ou ((RS)-3-(4-amino-1-oxo-1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6- diona).

[00654] Em determinadas modalidades, a lesão é interrompida pela administração do derivado de talidomida lenalidomida, ((RS)-3-(4- Amino-1-oxo-1,3-di-hidro-2H-isoindol-2-il)piperidina-2,6-diona) ao indivíduo. A lenalidomida foi aprovada pelo FDA para o tratamento de mieloma múltiplo, síndrome mielodisplásica associada à eliminação de 5q e, mais recentemente, linfoma recidivante/refratário de células do manto (MCL). A lenalidomida é, de modo geral, um derivado sintético da talidomida e é atualmente considerada como tendo múltiplos efeitos imunomoduladores, incluindo a imposição da formação de sinapses imunes entre as células T e as células apresentadoras de antígenos (APCs). Por exemplo, em alguns casos, a lenalidomida modula as respostas das células T e resulta no aumento da produção de interleucina (IL)-2 em células T CD4+ e CD8+, induz ao deslocamento das respostas T auxiliares (Th) de Th2 para Th1, inibe a expansão do subconjunto de células T reguladoras (Tregs) e melhora o funcionamento das sinapses imunes em linfoma folicular e leucemia linfocítica crônica (CLL) (Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5 (4): e1115940). A lenalidomida também tem atividade tumoricida direta em pacientes com mieloma múltiplo (MM) e modula direta e indiretamente a sobrevivência das células tumorais em CLL ao afetar as células de suporte, tais como células de tipo "nurse" encontradas no microambiente dos tecidos linfoides. A lenalidomida também pode aumentar a proliferação de células T e a produção de interferon-γ em resposta à ativação de células T via ligação à CD3 ou ativação mediada por células dendríticas. Além disso, acredita-se que a lenalidomida reduza a proliferação de citocinas pró-inflamadoras, incluindo TNF-, IL-1, IL-6 e IL-12, e aumente a citotoxicidade celular dependente de anticorpos (ADCC) através do aumento de ativação das células NK. A lenalidomida também pode induzir células B malignas a expressarem níveis mais elevados de moléculas imunoestimuladoras, tais como CD80, CD86, HLA-DR, CD95 e CD40 (Fecteau et al., Blood (2014) 124 (10): 1637-1644). A Cereblon, uma ubiquitina ligase E3, foi identificada como o principal alvo para a teratogênese induzida pela talidomida (Ito, T. et al. (2010) Science 327: 1345–1350). A lenalidomida também tem como alvo a Cereblon e foi demonstrado que isto leva à redução da expressão de c-Myc e IRF4, ao mesmo tempo em que também aumenta a expressão de p21 que leva à parada do ciclo celular G1 (Lopez-Girona et al., (2012) Leukemia 26: 2326–2335).

[00655] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de células B. Em algumas modalidades, o agente adicional é um ou mais inibidores de células B selecionados a partir de inibidores de CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 ou ROR1 ou uma combinação dos mesmos. Em algumas modalidades, o inibidor de células B é um anticorpo (por exemplo, um anticorpo mono- ou biespecífico) ou um fragmento de ligação a antígeno do mesmo. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma célula manipulada que expressa receptores recombinantes que têm como alvo células B, por exemplo, CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 ou ROR1.

[00656] Em algumas modalidades, o agente adicional que é administrado de acordo com os métodos fornecidos e/ou com os artigos de fabricação ou composições fornecidos é um inibidor de CD20, por exemplo, um anticorpo anti-CD20 (por exemplo, um anticorpo anti-CD20 mono ou biespecífico) ou um fragmento do mesmo. Anticorpos anti- CD20 exemplificativos incluem, porém sem limitações, rituximabe, ofatumumabe, ocrelizumabe (também conhecido como GA101 ou RO5072759), veltuzumabe, obinutuzumabe, TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals), ocaratuzumabe (também conhecido como AME-133v ou ocaratuzumabe) e Pro131921 (Genentech). Consulte, por exemplo, Lim et al., Haematologica. (2010) 95 (1): 135-43. Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD20 compreende rituximabe. O rituximabe é um anticorpo monoclonal de IgG1 capa de camundongo/humano quimérico que se liga à CD20 e causa citólise de uma célula que expressa CD20. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui rituximabe. Em algumas modalidades, o inibidor de CD20 é uma pequena molécula.

[00657] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de CD22, por exemplo, um anticorpo anti-CD22 (por exemplo, um anticorpo anti-CD22 mono ou biespecífico) ou um fragmento do mesmo.

Anticorpos anti-CD22 exemplificativos incluem epratuzumabe e RFB4. Em algumas modalidades, o inibidor de CD22 é uma pequena molécula. Em algumas modalidades, o anticorpo é um anticorpo monoespecífico, opcionalmente conjugado a um segundo agente, tal como um agente quimioterapêutico. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo é um conjugado de anticorpo monoclonal anti-CD22-MMAE (por exemplo, DCDT2980S). Em algumas modalidades, o anticorpo é um scFv de um anticorpo anti-CD22, por exemplo, um scFv do anticorpo RFB4. Em algumas modalidades, o scFv é fundido à totalidade ou a um fragmento da exotoxina-A de Pseudomonas (por exemplo, BL22). Em algumas modalidades, o scFv é fundido à totalidade ou a um fragmento (por exemplo, um fragmento de 38 kDa) de exotoxina A de Pseudomonas (por exemplo, pseudotoxina moxetumomabe). Em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD22 é um anticorpo biespecífico anti-CD19/CD22, opcionalmente conjugado a uma toxina. Por exemplo, em algumas modalidades, o anticorpo anti-CD22 compreende uma porção biespecífica anti-CD19/CD22 (por exemplo, dois ligantes de scFv, que reconhecem CD19 e CD22 humanas) opcionalmente ligada à totalidade ou uma porção da toxina da difteria (DT), por exemplo, os primeiros 389 aminoácidos da toxina da difteria (DT), DT 390, por exemplo, uma toxina controlada por ligante, tal como DT2219ARL). Em algumas modalidades, a porção biespecífica (por exemplo, anti-CD 19/anti-CD22) está ligada a uma toxina, tal como a cadeia A de ricina desglicosilada (por exemplo, Combotox).

[00658] Em algumas modalidades, o agente adicional é uma citocina ou é um agente que induz a o aumento da expressão de uma citocina no microambiente tumoral. As citocinas têm funções importantes relacionadas à expansão, diferenciação, sobrevivencia e homeostase das células T. As citocinas que podem ser administradas ao indivíduo que recebe a terapia combinada nos métodos ou usos fornecidos,

receptores, células e/ou composições recombinantes fornecidas no presente documento incluem um ou mais dentre IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL- 15, IL-18 e IL-21. Em algumas modalidades, a citocina administrada é IL-7, IL-15 ou IL-21 ou uma combinação das mesmas. Em algumas modalidades, a administração da citocina ao indivíduo que tem uma resposta abaixo do ideal à administração das células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR, melhora a eficácia e/ou atividade antitumoral das células administradas, por exemplo, células que expressam CAR.

[00659] Por "citocina" entenda-se um termo genérico para proteínas liberadas por uma população de células que atuam em outra célula como mediadores intercelulares. Exemplos de tais citocinas são linfocinas, monocinas e hormônios polipeptídicos tradicionais. Incluídos dentre as citocinas estão os hormônios do crescimento, tal como o hormônio do crescimento humano, o hormônio do crescimento humano N-metionila e o hormônio do crescimento bovino; hormônio da paratireoide; tiroxina; insulina; pró-insulina; relaxina; pró-relaxina; hormônios glicoproteicos, tais como hormônio estimulante folicular (FSH), hormônio estimulante da tiroide (TSH) e hormônio luteinizante (LH); fator de crescimento hepático; fator de crescimento de fibroblastos; prolactina; lactogênio placentário; fator de necrose tumoral alfa e beta; substância inibidora Muleriana; peptídeo associado à gonadotropina de camundongo; inibina; activina; fator de crescimento endotelial vascular; integrina; trombopoietina (TPO); fatores de crescimento do nervo, tal como NGF-beta; fator de crescimento plaquetário; fatores de crescimento de transformação (TGFs), tais como TGF-alfa e TGF-beta; fator de crescimento similar à insulina-I e -II; eritropoietina (EPO); fatores osteoindutivos; interferons, tais como interferons alfa, beta e gama; fatores estimuladores de colônias (CSFs), tais como macrófago-CSF (M-CSF); granulócito-macrófago-CSF (GM-

CSF); e granulócito-CSF (G-CSF); interleucinas (ILs), tais como IL-1, IL-1alfa, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL- 15, um fator de necrose tumoral, tal como TNF-alfa ou TNF-beta; e outros fatores polipeptídicos, incluindo LIF e ligante kit (KL). Conforme usado no presente documento, o termo citocina inclui proteínas provenientes de fontes naturais ou de cultura de células recombinantes e equivalentes biologicamente ativos das citocinas de sequência nativa. Por exemplo, o agente imunomodulador é uma citocina e a citocina é IL-4, TNF-α, GM-CSF ou IL-2.

[00660] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um polipeptídeo de interleucina-15 (IL-15), um polipeptídeo de receptor alfa de interleucina-15 (IL-15Rα), ou combinação dos mesmos, por exemplo, hetIL-15 (Admune Therapeutics, LLC). hetIL-15 é um complexo heterodimérico não covalente de IL-15 e IL-15Rα. hetIL-15 é descrito, por exemplo, nos documentos U.S. 8.124.084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 e U.S. 2011/0081311. Em algumas modalidades, o agente adicional pode conter uma ou mais citocinas. Por exemplo, a interleucina pode incluir injeção de interleucina leucocitária (Multikine), a qual é uma combinação de citocinas naturais. Em algumas modalidades, o agente imunomodulador de um agonista receptor tipo toll (TLR), um adjuvante ou uma citocina.

[00661] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente que melhora ou neutraliza uma ou mais toxicidades ou efeitos colaterais associados à terapia celular. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de um esteroide (por exemplo, corticosteroide), um inibidor de TNFα e um inibidor de IL-6. Um exemplo de um inibidor de TNFα é uma molécula de anticorpo anti-TNFα, tal como infliximabe, adalimumabe, certolizumabe pegol e golimumabe. Outro exemplo de um inibidor de TNFα é uma proteína de fusão, tal como entanercepte. Inibidores de pequenas moléculas de TNFα incluem, porém sem limitações, derivados de xantina (por exemplo, pentoxifilina) e bupropiona. Um exemplo de um inibidor de IL-6 é uma molécula de anticorpo anti-IL-6, tal como tocilizumabe, sarilumabe, elsilimomabe, CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI- 2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 e FM101. Em algumas modalidades, a molécula de anticorpo anti-IL-6 é o tocilizumabe. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de IL-1R, tal como anakinra.

[00662] Em algumas modalidades, o agente adicional é um modulador dos níveis de adenosina e/ou um componente da via de adenosina. A adenosina pode funcionar como um agente adicional no corpo. Por exemplo, a adenosina e alguns análogos de adenosina que ativam não seletivamente os subtipos de receptor de adenosina diminuem a produção de neutrófilos de produtos oxidativos inflamatórios (Cronstein et al., Ann. NY Acad. Sci. 451: 291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227: 669, 1985; Schrier et al., J. Immunol. 137: 3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42: 76, 1987). Em alguns casos, a concentração de adenosina extracelular ou análogos de adenosina pode aumentar em ambientes específicos, por exemplo, microambiente tumoral (TME). Em alguns casos, a sinalização à adenosina ou análogo de adenosina depende da hipóxia ou fatores envolvidos na hipóxia ou sua regulação, por exemplo, fator indutível por hipóxia (HIF). Em algumas modalidades, o aumento na sinalização à adenosina pode aumentar o cAMP intracelular e proteína quinase dependente de cAMP que resulta em inibição da produção de citocinas pró-inflamatórias e pode levar à síntese de moléculas imunossupressoras e desenvolvimento de Tregs (Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2 (7): 598-605). Em algumas modalidades, o agente adicional pode reduzir ou reverter os efeitos imunossupressores da adenosina, análogos de adenosina e/ou sinalização à adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional pode reduzir ou reverter a imunossupressão de células T adenossinérgicas A2 induzida por hipóxia. Em algumas modalidades, o agente adicional é selecionado a partir de antagonistas de receptores de adenosina, agentes extracelulares de degradação de adenosina, inibidores da geração de adenosina por ectoenzimas CD39/CD73 e inibidores da sinalização de hipóxia-HIF-1α. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista do receptor de adenosina.

[00663] A inibição ou redução da adenosina extracelular ou do receptor de adenosina em virtude de um inibidor de adenosina extracelular (tal como um agente que previne a formação, degrada, torna inativa e/ou diminui a adenosina extracelular) e/ou um inibidor do receptor de adenosina (tal como um antagonista do receptor de adenosina) pode aumentar a resposta imune, tal como um macrófago, neutrófilo, granulócito, célula dendrítica e/ou resposta mediada por células T ou B. Além disso, os inibidores da via intracelular dependente de cAMP mediada pela proteína Gs e inibidores das vias intracelulares mediadas pela proteína Gi desencadeada pelo receptor de adenosina também podem aumentar a inflamação aguda e crônica.

[00664] Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista ou agonista do receptor de adenosina, por exemplo, um antagonista ou agonista de um ou mais dos receptores de adenosina A2a, A2b, A1 e A3. A1 e A3 inibem, e A2a e A2b estimulam, respectivamente, a atividade da adenilato ciclase. Determinados receptores de adenosina, tais como A2a, A2b e A3, podem suprimir ou reduzir a resposta imune durante a inflamação. Assim, a antagonização dos receptores de adenosina imunossupressores pode aumentar, impulsionar ou melhorar a resposta imune, por exemplo, a resposta imune de células administradas, por exemplo, células T que expressam

CAR. Em algumas modalidades, o agente adicional inibe a produção de adenosina extracelular e sinalização desencadeada por adenosina por meio de receptores de adenosina. Por exemplo, o aumento de uma resposta imune, a inflamação tecidual local e a destruição direcionada do tecido podem ser aumentados pela inibição ou redução da hipóxia local do tecido produtor de adenosina; degradar (ou tornar inativa) a adenosina extracelular acumulada; prevenir ou diminuir a expressão de receptores de adenosina em células imunes; e/ou inibir/antagonizar a sinalização por ligantes de adenosina através de receptores de adenosina.

[00665] Um antagonista é qualquer substância que tende a anular a ação de outra, tal como um agente que se liga a um receptor celular sem desencadear uma resposta biológica. Em algumas modalidades, o antagonista é uma pequena molécula ou composto químico de um receptor de adenosina, tal como o receptor A2a, A2b ou A3. Em algumas modalidades, o antagonista é um peptídeo, ou um peptidomimético, que se liga ao receptor de adenosina, mas não desencadeia uma via intracelular dependente da proteína Gi. Exemplos de tais antagonistas são descritos nas Patentes Norte-Americanas Nos

5.565.566; 5.545, 627, 5.981.524; 5.861.405; 6.066.642; 6.326.390;

5.670.501; 6.117.998; 6.232.297; 5.786.360; 5.424.297; 6.313.131,

5.504.090; e 6.322.771.

[00666] Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista do receptor A2 (A2R), tal como um antagonista A2a. Antagonistas A2R exemplificativos incluem, porém sem limitações, KW6002 (istradefilina), SCH58261, cafeína, paraxantina, 3,7-dimetil-1- propargilxantina (DMPX), 8-(m-cloroestiril)cafeína (CSC), MSX-2, MSX- 3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, pré-adenante, vipadenante (BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP e um ácido nucleico inibidor que tem como alvo a expressão de A2R, por exemplo, siRNA ou shRNA, ou quaisquer anticorpos ou fragmento de ligação a antígeno destes que tem como alvo um A2R. Em algumas modalidades, o agente adicional é um antagonista de A2R descrito, por exemplo, em Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103: 13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70 (6): 2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13: 265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110: 14711–14716; e Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18: 1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2 (7): 598-605; documentos US 8.080.554; US 8.716.301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8.883.500; US 20140377240; WO02/055083; US 7.141.575; US 7.405.219; US 8.883.500; US

8.450.329 e US 8.987.279).

[00667] Em modalidades particulares, um antagonista do receptor de adenosina é uma molécula antissenso, molécula de ácido nucleico inibidora (por exemplo, pequeno RNA inibidor (siRNA)) ou molécula de ácido nucleico catalítica (por exemplo, uma ribozima) que se liga especificamente ao mRNA que codifica um receptor de adenosina. Em algumas modalidades, a molécula antissenso, a molécula de ácido nucleico inibidora ou a molécula de ácido nucleico catalítica se liga aos ácidos nucleicos que codificam A2a, A2b ou A3. Em algumas modalidades, uma molécula antissenso, molécula de ácido nucleico inibidora ou molécula ácido nucleico catalítica tem como alvo as vias bioquímicas a jusante do receptor de adenosina. Por exemplo, a molécula antissenso ou a molécula de ácido nucleico catalítica pode inibir uma enzima envolvida na via intracelular dependente da proteína Gs ou Gi. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui a forma mutante negativa dominante de um receptor de adenosina, tal como A2a, A2b ou A3.

[00668] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente que inibe a adenosina extracelular. Os agentes que inibem a adenosina extracelular incluem agentes que tornam a adenosina extracelular não funcional (ou diminuem esta função), tal como uma substância que modifica a estrutura da adenosina para inibir a capacidade da adenosina de sinalizar através dos receptores de adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional é uma enzima extracelular geradora de adenosina ou degradante de adenosina, uma forma manipulada da mesma ou um modulador da mesma. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é uma enzima (por exemplo, adenosina desaminase) ou outra molécula catalítica que se liga e destrói seletivamente a adenosina ao abolir ou diminuir significativamente a capacidade da adenosina formada endogenamente de sinalizar através dos receptores de adenosina e encerrar a inflamação.

[00669] Em algumas modalidades, o agente adicional é uma adenosina desaminase (ADA) ou uma forma manipulada da mesma, por exemplo, ADA recombinante e/ou ADA manipulada com polietileno glicol (ADA-PEG), a qual pode inibir o acúmulo local de adenosina extracelular no tecido. ADA-PEG foi usada no tratamento de pacientes com ADA SCID (Hershfield (1995) Hum Mutat. 5: 107). Em algumas modalidades, um agente que inibe a adenosina extracelular inclui agentes que previnem ou diminuem a formação de adenosina extracelular e/ou previnem ou diminuem o acúmulo de adenosina extracelular ao abolir ou diminuir substancialmente os efeitos imunossupressores da adenosina. Em algumas modalidades, o agente adicional inibe especificamente enzimas e proteínas que estão envolvidas na regulação da síntese e/ou secreção de moléculas pró-inflamatórias, incluindo moduladores de fatores de transcrição nuclear. A supressão da expressão do receptor de adenosina ou expressão da via intracelular dependente da proteína Gs ou da proteína Gi, ou da via intracelular dependente de cAMP, pode resultar em um aumento/intensificação da resposta imune.

[00670] Em algumas modalidades, o agente adicional pode ter como alvo ectoenzimas que geram ou produzem adenosina extracelular.

Em algumas modalidades, o agente adicional tem como alvo as ectoenzimas CD39 e CD73, as quais funcionam em conjunto para gerar adenosina extracelular.

CD39 (também denominada de ectonucleosídeo trifosfato difosfo-hidrolase) converte ATP extracelular (ou ADP) em 5'AMP.

Posteriormente, a CD73 (também denominada de 5'nucleotidase) converte 5'AΜΡ em adenosina.

A atividade de CD39 é reversível pelas ações da NDP quinase e adenilato quinase, enquanto que a atividade da CD73 é irreversível.

CD39 e CD73 são expressas em células tumorais do estroma, incluindo células endoteliais e Tregs, e também em muitas células cancerosas.

Por exemplo, a expressão de CD39 e CD73 em células endoteliais é aumentada sob as condições de hipóxia do microambiente tumoral.

A hipóxia tumoral pode resultar de suprimento sanguíneo inadequado e vasculatura tumoral desorganizada, prejudicando a distribuição de oxigênio (Carroll e Ashcroft (2005), Expert.

Rev.

Mol.

Med. 7 (6): 1-16). A hipóxia também inibe a adenilato quinase (AK), a qual converte a adenosina em AMP, levando em uma concentração extracelular muito alta de adenosina.

Assim, a adenosina é liberada em altas concentrações em resposta à hipóxia, a qual é uma condição que ocorre frequentemente no microambiente tumoral (TME), dentro ou ao redor de tumores sólidos.

Em algumas modalidades, o agente adicional é um ou mais de um anticorpo anti-CD39 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, anticorpo anti-CD73 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, por exemplo, MEDI9447 ou TY/23, α-β-metileno-adenosina difosfato (ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52 (consulte, por exemplo, Allard et al., Clin Cancer Res (2013) 19 (20): 5626-5635; Hausler et al., Am J Transl Res (2014) 6 (2): 129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70 (16): 6407- 6411).

[00671] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor da sinalização ao fator 1 alfa indutível por hipóxia (HIF-1α). Inibidores exemplificativos de HIF-1α incluem digoxina, acriflavina, sirtuína-7 e ganetepibe.

[00672] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um inibidor de proteína tirosina fosfatase, por exemplo, um inibidor de proteína tirosina fosfatase descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o inibidor de proteína tirosina fosfatase é um inibidor de SHP-1, por exemplo, um inibidor de SHP-1 descrito no presente documento tal como, por exemplo, estibogluconato de sódio. Em algumas modalidades, o inibidor da proteína tirosina fosfatase é um inibidor de SHP-2, por exemplo, um inibidor de SHP-2 descrito no presente documento.

[00673] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor de quinase. Inibidores de quinase, tal como um inibidor de quinase CDK4, um inibidor de quinase BTK, um inibidor de quinase MNK ou um inibidor de quinase DGK, podem regular as vias de sobrevivência constitutivamente ativas que existem nas células tumorais e/ou modular a função das células imunes. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de tirosina quinase de Bruton (BTK), por exemplo, ibrutinibe. Em algumas modalidades, o inibidor dequinase é um inibidor de fosfatidilinositol-4,5-bifosfato 3-quinase (PI3K). Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de CDK4, por exemplo, um inibidor de CDK4/6. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de mTOR tal como, por exemplo, rapamicina, um análogo de rapamicina, OSI-027. O inibidor de mTOR pode ser, por exemplo, um inibidor de mTORC1 e/ou um inibidor de mTORC2, por exemplo, um inibidor de mTORC1 e/ou inibidor de mTORC2. Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de MNK ou um inibidor duplo de PI3K/mTOR. Em algumas modalidades, outros inibidores de quinase exemplificativos incluem o inibidor de AKT perifosina, o inibidor de mTOR tensirolímus, os inibidores de CRS quinase dasatinibe e fostamatinibe, os inibidores de JAK2 pacritinibe e ruxolitinibe, o inibidor de PKCβ enzastaurina e briostatina, e o inibidor AAK alisertib

[00674] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de BTK selecionado a partir de ibrutinibe (PCI-32765); GDC-0834; RN- 486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; e LFM-A13. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK não reduz ou inibe a atividade de quinase da quinase indutível por interleucina-2 (ITK) e é selecionado a partir de GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; e LFM-A13.

[00675] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de BTK, por exemplo, ibrutinibe (1-[(3R)-3-[4-Amino-3-(4-fenoxifenil)- 1H-pirazol[3,4-d]pirimidin-1-il]piperidin-1-il]prop-2-en-1-ona; também conhecido como PCI-32765). Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de BTK, por exemplo, ibrutinibe (PCI-32765). Em algumas modalidades, são administrados 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 ou mais ciclos de ibrutinibe. Em algumas modalidades, o inibidor de BTK é um inibidor de BTK descrito no Pedido Internacional WO 2015/079417.

[00676] Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de PI3K. A PI3K é central para a via de PI3K/Akt/mTOR envolvida na regulação do ciclo celular e sobrevivência do linfoma. O inibidor de PI3K exemplificativo inclui idelalisibe (inibidor de PI3Kδ). Em algumas modalidades, o agente adicional é idelalisibe e rituximabe.

[00677] Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor do alvo em mamíferos da rapamicina (mTOR). Em algumas modalidades, o inibidor de quinase é um inibidor de mTOR selecionado a partir de temsirolímus; ridaforolímus (também conhecido como AP23573 e MK8669); everolímus (RAD001); rapamicina (AY22989);

simapimode; AZD8055; PF04691502; SF1126; e XL765. Em algumas modalidades, o agente adicional é um inibidor da proteína quinase ativada por mitogênio (MAPK), tal como vemurafenibe, dabrafenibe e trametinibe.

[00678] Em algumas modalidades, o agente adicional é um agente que regula proteínas pró- ou antiapoptóticas. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um inibidor de linfoma 2 de células B (BCL-2) (por exemplo, venetoclax, também denominado de ABT-199 ou GDC- 0199; ou ABT-737). O venetoclax é uma pequena molécula (4-(4-{[2-(4- clorofenil)-4,4-dimetil-1-ciclo-hexen-1-il]metil}-1-piperazinil)-N-({3-nitro- 4-[(tetra-hidro-2H-piran-4-ilmetil)amino]fenil}sulfonil)-2-(1H-pirrolo[2,3- b]piridin-5-iloxi)benzamida) que inibe a proteína antiapoptótica, BCL-2. Outros agentes que modulam a proteína pró- ou antiapoptótica incluem o inibidor BCL-2 ABT-737, navitoclax (ABT-263); siRNA de Mcl-1 ou retinoide inibidor de Mcl-1 N-(4-hidroxifenil)retinamida (4-HPR) para eficácia máxima. Em algumas modalidades, o agente adicional fornece um estímulo pró-apoptótico, tal como o ligante indutor de apoptose relacionado ao fator de necrose tumoral recombinante (TRAIL), o qual pode ativar a via de apoptose ao se ligar aos receptores de morte TRAIL DR-4 e DR-5 na superfície da célula tumoral ou anticorpos agonistas de TRAIL-R2.

[00679] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um inibidor de indolamina 2,3-dioxigenase (IDO). A IDO é uma enzima que catalisa a degradação do aminoácido L-triptofano em quinurenina. Muitos cânceres superexpressam IDO, por exemplo, câncer de próstata, colorretal, pancreático, cervical, gástrico, de ovário, de cabeça e de pulmão. As células dendríticas plasmocitoides (pDCs), macrófagos e células dendríticas (DCs) podem expressar a IDO. Em alguns aspectos, uma diminuição no L-triptofano (por exemplo, catalisado pela IDO) resulta em um meio imunossupressor que induz a energia de células T e apoptose. Assim, em alguns aspectos, um inibidor de IDO pode aumentar a eficácia das moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento, por exemplo, ao diminuir a supressão ou morte da célula que expressa CAR administrada. Inibidores de IDO exemplificativos incluem, porém sem limitações, 1-metil-triptofano, indoximode e INCB024360 (epacadostate).

[00680] Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um agente citotóxico, por exemplo, CPX-351 (Celator Pharmaceuticals), citarabina, daunorrubicina, vosaroxina (Sunesis Pharmaceuticals), sapacitabina (Cyclacel Pharmaceuticals), idarrubicina ou mitoxantrona. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui um agente hipometilante, por exemplo, um inibidor de DNA metiltransferase, por exemplo, azacitidina ou decitabina.

[00681] Em outra modalidade, a terapia adicional é um transplante, por exemplo, transplante alogênico de células-tronco.

[00682] Em algumas modalidades, a terapia adicional é uma terapia de linfodepleção. Em algumas modalidades, a linfodepleção é realizada em um indivíduo, por exemplo, antes da administração de células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR. Em algumas modalidades, a linfodepleção compreende administrar um ou mais dentre melfalano, citoxano, ciclofosfamida e fludarabina. Em algumas modalidades, uma quimioterapia de linfodepleção é administrada ao indivíduo antes, simultaneamente ou após a administração (por exemplo, infusão) de células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR. Em um exemplo, a quimioterapia de linfodepleção é administrada ao indivíduo antes da administração de células manipuladas, por exemplo, células que expressam CAR.

[00683] Em algumas modalidades, o agente adicional é um vírus oncolítico. Em algumas modalidades, os vírus oncolíticos são capazes de se replicar seletivamente e desencadear a morte ou retardar o crescimento de uma célula cancerosa. Em alguns casos, os vírus oncolíticos não têm efeito ou têm efeito mínimo sobre as células não cancerosas. Um vírus oncolítico inclui, porém sem limitações, um adenovírus oncolítico, vírus oncolítico do Herpes Simplex, retrovírus oncolítico, parvovírus oncolítico, vírus da vaccinia oncolítico, vírus Sinbis oncolítico, vírus da influenza oncolítico ou vírus de RNA oncolítico (por exemplo, vírus reovírus oncolítico da doença de Newcastle, Newcastle (NDV), vírus oncolítico do sarampo ou vírus oncolítico da estomatite vesicular (VSV)).

[00684] Outros exemplos de terapia, tratamento e/ou agentes combinados incluem agentes antialérgicos, antieméticos, analgésicos e terapias auxiliares. Em algumas modalidades, o agente adicional inclui agentes citoprotetores, tais como neuroprotetores, absorventes de radicais livres, cardioprotetores, neutralizadores de extravasamento de antraciclina e nutrientes.

[00685] Em algumas modalidades, um anticorpo usado como um agente adicional é conjugado ou de outra forma ligado a um agente terapêutico, por exemplo, um agente quimioterapêutico (por exemplo, Cytoxan, fludarabina, inibidor de histona desacetilase, agente desmetilante, vacina peptídica, antibiótico antitumoral, inibidor de tirosina quinase, agente alquilante, agente antimicrobiano ou antimitótico), agente antialérgico, agente antináusea (ou antiemético), analgésico ou agente citoprotetor descrito no presente documento. Em algumas modalidades, o agente adicional é um conjugado de anticorpo- fármaco.

[00686] Em algumas modalidades, o agente adicional pode modular, inibir ou estimular fatores específicos nos níveis de DNA, RNA ou proteína para intensificar ou aumentar a eficácia das moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições fornecidas no presente documento. Em algumas modalidades, o agente adicional pode modular os fatores no nível de ácido nucleico, por exemplo, DNA ou RNA, dentro das células administradas, por exemplo, células manipuladas para expressar receptores recombinantes, por exemplo, CAR. Em algumas modalidades, um inibidor de ácido nucleico, por exemplo, um dsRNA, por exemplo, um siRNA ou shRNA ou um agrupamento de repetições palindrômicas curtas regularmente espaçadas (CRISPR), um ativador de transcrição de tipo nuclease efetora (TALEN) ou uma endonuclease de dedo de zinco (ZFN), pode ser usado para inibir a expressão de uma molécula inibidora na célula modificada, por exemplo, célula que expressa CAR. Em algumas modalidades, o inibidor é um shRNA. Em algumas modalidades, a molécula inibidora é inibida dentro da célula manipulada, por exemplo, célula que expressa CAR. Em algumas modalidades, uma molécula de ácido nucleico que codifica uma molécula de dsRNA que inibe a expressão da molécula que modula ou regula, por exemplo, inibe, a função da célula T está operativamente ligada a um promotor, por exemplo, um promotor derivado de H1 ou U6, de modo que a molécula de dsRNA que inibe a expressão da molécula inibidora seja expressa dentro da célula modificada, por exemplo, célula que expressa CAR. Consulte, por exemplo, Brummelkamp T.R. et al. (2002) Science 296: 550-553; Miyagishi M., et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500.

[00687] Em algumas modalidades, o agente adicional é capaz de romper o gene que codifica uma molécula inibidora, tais como quaisquer inibidores do ponto de verificação imune descritos no presente documento. Em algumas modalidades, a ruptura é através de eliminação, por exemplo, eliminação de todo um gene, éxon ou região e/ou substituição por uma sequência exógena, e/ou através de mutação,

por exemplo, mutação por desvio de quadro ou "missense", dentro do gene, tipicamente dentro um éxon do gene. Em algumas modalidades, a ruptura resulta em um códon terminal prematuro sendo incorporado ao gene, de modo que a molécula inibidora não seja expressa ou não seja expressa em uma forma que seja capaz de ser expressa sobre a superfície das células e/ou capaz de mediar a sinalização às células. A ruptura é geralmente realizada no nível do DNA. A ruptura geralmente é permanente, irreversível ou não transitória.

[00688] Em alguns aspectos, a ruptura é realizada por edição gênica, tal como o uso de uma proteína de ligação ao DNA ou ácido nucleico de ligação ao DNA, que se liga ou hibridiza especificamente com o gene em uma região alvo de ruptura. Em alguns aspectos, a proteína ou ácido nucleico é acoplado a ou tornado em complexo com uma nuclease, tal como em uma proteína quimérica ou de fusão. Por exemplo, em algumas modalidades, a ruptura é executada usando uma fusão que compreende uma proteína que tem como alvo o DNA e uma nuclease, tal como uma nuclease de dedo de zinco (ZFN) ou nuclease efetora TAL (TALEN) ou uma nuclease guiada por RNA, tal como um sistema de ácido nucléico palindrômico curto agrupado regularmente intercalado (CRISPR), tal como o sistema CRISPR-Cas9, específico para o gene que está sofrendo a ruptura. Em algumas modalidades, os métodos de produção ou geração de células geneticamente modificadas, por exemplo, células que expressam CAR, incluem introduzir, em uma população de células, moléculas de ácidos nucleicos que codificam um receptor antigênico geneticamente modificado (por exemplo, CAR) e moléculas de ácidos nucleicos que codificam um agente que tem como alvo uma molécula inibidora que é uma nuclease de edição gênica, tal como uma fusão de uma proteína de que tem como alvo o DNA e uma nuclease, tal como uma ZFN ou uma TALEN ou uma nuclease guiada por RNA, tal como o sistema CRISPR-Cas9, específico para uma molécula inibidora.

[00689] Qualquer um dos agentes adicionais descritos no presente documento pode ser preparado e administrado como uma terapia combinada com a molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo), imunoconjugado, receptor recombinante (por exemplo, receptor antigênico quimérico) e/ou células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante) descritas no presente documento, tal como em composições farmacêuticas que compreendem um ou mais agentes para terapia combinada e um veículo farmaceuticamente aceitável, tal como qualquer um descrito no presente documento. Em algumas modalidades, a molécula de ligação à ROR1 (por exemplo, anticorpo), imunoconjugado, receptor recombinante (por exemplo, receptor antigênico quimérico), células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante), pluralidade de células modificadas que expressam as ditas moléculas (por exemplo, receptor recombinante), pode ser administrada simultânea, concorrente ou sequencialmente, em qualquer ordem com os agentes, terapia ou tratamento adicionais, em que tal administração fornece níveis terapeuticamente eficazes de cada um dos agentes no corpo do indivíduo. Os agentes podem ser coadministrados com as moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento, por exemplo, como parte da mesma composição farmacêutica ou usando o mesmo método de distribuição. Em algumas modalidades, o agente adicional é incubado com a célula manipulada, por exemplo, células que expressam CAR, antes de administração das células.

[00690] Em alguns exemplos, um ou mais agentes adicionais são administrados subsequentemente ou antes da administração das moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento, separados por um período de tempo. Em alguns exemplos, o período de tempo é de 1 dia, 2 dias, 3 dias, 4 dias, 5 dias, 6 dias, 1 semana, 2 semanas, 3 semanas, 1 mês, 2 meses ou 3 meses. Em alguns exemplos, o um ou mais agentes adicionais são administrados várias vezes e/ou as moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento são administrados várias vezes. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é administrado antes das moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento, por exemplo, duas semanas, 12 dias, 10 dias, 8 dias, uma semana, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 dias, 2 dias ou 1 dia antes da administração. Por exemplo, em algumas modalidades, o agente adicional é administrado após as moléculas de ligação (por exemplo, moléculas de ligação à ROR1), receptores recombinantes, células e/ou composições descritas no presente documento, por exemplo, duas semanas, 12 dias, 10 dias, 8 dias, uma semana, 6 dias, 5 dias, 4 dias, 3 dias, 2 dias ou 1 dia após a administração.

[00691] A dose do agente adicional pode ser qualquer quantidade terapeuticamente eficaz, por exemplo, qualquer quantidade de dose descrita no presente documento, e a dosagem apropriada do agente adicional pode depender de tipo de doença a ser tratada, o tipo, a dose e/ou frequência da molécula de ligação, receptor recombinante, célula e/ou composição administrada, a gravidade e o curso da doença, se a molécula de ligação, receptor recombinante, célula e/ou composição é administrada para fins preventivos ou terapêuticos, terapia anterior, o histórico clínico do paciente e resposta à molécula de ligação, receptor recombinante, célula e/ou composição e a critério do médico que faz o atendimento. A molécula de ligação, receptor recombinante, célula e/ou composição e/ou o agente e/ou terapia adicional podem ser administrados ao paciente de uma vez, repetidos ou administrados ao longo de uma série de tratamentos. C. Métodos de Diagnóstico e Detecção

[00692] Também são fornecidos métodos que envolvem o uso das moléculas de ligação fornecidas, por exemplo, anticorpos ou fragmentos de ligação a antígeno dos mesmos, na detecção de ROR1, por exemplo, em métodos diagnósticos e/ou prognósticos em associação com uma doença ou condição que expressa a ROR1. Os métodos, em algumas modalidades, incluem incubar uma amostra biológica com o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo e/ou administrar o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo a um indivíduo. Em determinadas modalidades, uma amostra biológica inclui uma célula ou tecido, tal como tumor ou tecido canceroso. Em determinadas modalidades, o contato é realizado sob condições que permitam a ligação do anticorpo anti-ROR1 à ROR1 e a detecção se um complexo é formado entre o anticorpo anti-ROR1 e a ROR1. Tal método pode ser um método in vitro ou in vivo. Em uma modalidade, um anticorpo anti- ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) é usado para selecionar indivíduos elegíveis para terapia com um anticorpo anti- ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) ou receptor recombinante, por exemplo, onde a ROR1 é um biomarcador para seleção de pacientes.

[00693] Em algumas modalidades, uma amostra, tal como uma célula, amostra de tecido, lisado, composição ou outra amostra derivada do mesmo é colocada em contato com o anticorpo anti-ROR1 (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) e a ligação ou formação de um complexo entre o anticorpo e a amostra (por exemplo, ROR1 na amostra) é determinada ou detectada. Quando a ligação na amostra de teste é demonstrada ou detectada comparado com uma célula de referência do mesmo tipo de tecido, isto pode indicar a presença de uma doença ou condição associada. Em algumas modalidades, a amostra é de tecidos humanos.

[00694] Vários métodos conhecidos para a detecção de ligação específica de anticorpo-antígeno podem ser usados. Imunoensaios exemplificativos incluem imunoensaio de polarização de fluorescência (FPIA), imunoensaio de fluorescência (FIA), imunoensaio enzimático (EIA), imunoensaio de inibição nefelométrica (NIA), ensaio de imunoabsorção enzimática (ELISA) e radioimunoensaio (RIA). Uma porção indicadora ou grupo marcador pode ser ligada aos anticorpos em questão e é selecionada de modo a atender às necessidades de vários usos do método que são frequentemente orientados pela disponibilidade do equipamento de ensaio e procedimentos de imunoensaio compatíveis. Marcadores exemplificativos incluem 125 131 35 radionuclídeos (por exemplo, I, I, S, 3H, ou 32 P), enzimas (por exemplo, fosfatase alcalina, peroxidase de rábano, luciferase ou β- galactosidase), porções fluorescentes ou proteínas (por exemplo, fluoresceína, rodamina, ficoeritrina, GFP ou BFP) ou porções luminescentes (por exemplo, nanopartículas QdotTM fornecidas pela Quantum Dot Corporation, Palo Alto, Califórnia). As técnicas gerais a serem usadas na realização dos vários imunoensaios observados acima são conhecidas por aqueles versados na técnica.

[00695] Para fins de diagnóstico, os anticorpos (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno) podem ser marcados com uma porção detectável incluindo, porém sem limitações, radioisótopos, marcadores fluorescentes e vários marcadores de enzima-substrato conhecidos na técnica. Métodos de conjugação de marcadores a um anticorpo são conhecidos.

[00696] Em algumas modalidades, os anticorpos (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno) não precisam ser marcados e a presença dos mesmos pode ser detectada usando um anticorpo marcado que se liga aos anticorpos.

[00697] Os anticorpos fornecidos (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno) podem, em algumas modalidades, ser empregados em qualquer método de ensaio conhecido, tais como ensaios de ligação competitiva, ensaios em sanduíche diretos e indiretos e ensaios de imunoprecipitação. Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, páginas 147-158 (CRC Press, Inc. 1987).

[00698] Os anticorpos (por exemplo, fragmentos de ligação a antígeno) e polipeptídeos também podem ser usados para ensaios diagnósticos in vivo, tal como imagiologia in vivo. Em geral, o anticorpo 111 99 14 131 125 é marcado com um radionuclídeo (tal como In, Tc, C, I, I ou 3 H), de modo que as células ou tecido de interesse possam ser localizados in vivo após administração a um indivíduo.

[00699] O anticorpo (por exemplo, fragmento de ligação a antígeno) também pode ser usado como reagente de coloração em patologia, por exemplo, usando técnicas conhecidas. V. ARTIGOS DE FABRICAÇÃO OU KITS

[00700] Também são fornecidos artigos de fabricação ou kit que contêm as moléculas de ligação fornecidas (por exemplo, anticorpos), receptores recombinantes (por exemplo, CARs), células geneticamente modificadas e/ou composições que compreendem os mesmos. Os artigos de fabricação podem incluir um recipiente e um rótulo ou bula no recipiente ou associado ao mesmo. Recipientes adequados incluem, por exemplo, garrafas, frascos, seringas, tubos de ensaio, sacos de solução IV, etc. Os recipientes podem ser formados a partir de uma variedade de materiais, tal como vidro ou plástico. Em algumas modalidades, o recipiente tem uma abertura de acesso estéril. Recipientes exemplificativos incluem sacos de solução intravenosa, frascos, incluindo aqueles com rolhas perfuráveis por uma agulha para injeção. O artigo de fabricação ou kit pode incluir ainda uma bula indicando que as composições podem ser usadas para tratar uma condição particular, tal como uma condição descrita no presente documento (por exemplo, câncer que expressa ROR1). Alternativa ou adicionalmente, o artigo de fabricação ou kit pode incluir ainda outro ou o mesmo recipiente que compreende um tampão farmaceuticamente aceitável. Ele pode ainda incluir outros materiais, tais como outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e/ou seringas.

[00701] O rótulo ou bula pode indicar que a composição é usada para tratar a doença, transtorno ou condição que expressa ROR1 ou associada à ROR1 em um indivíduo. O rótulo ou bula que está no recipiente ou associada ao mesmo pode indicar instruções para reconstituição e/ou uso da formulação. O rótulo ou bula pode ainda indicar que a formulação é útil ou destinada à administração subcutânea, intravenosa ou outros modos de administração para tratar ou prevenir uma doença, transtorno ou condição que expressa a ROR1 ou associada à ROR1 em um indivíduo. Em alguns aspectos, o rótulo ou bula pode incluir instruções de uso, por exemplo, instruções para a administração do anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, a proteína da superfície com uma única cadeia, o conjugado, o receptor antigênico quimérico, a célula ou a composição, em alguns aspectos de acordo com qualquer um dos métodos ou usos descritos no presente documento.

[00702] O recipiente, em algumas modalidades, contém uma composição que é por si só ou combinada com outra composição eficaz para tratar, prevenir e/ou diagnosticar a condição. O artigo de fabricação ou kit pode incluir (a) um primeiro recipiente com uma composição contida no mesmo (ou seja, primeiro medicamento), em que a composição inclui o anticorpo (por exemplo, anticorpo anti-ROR1) ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo ou receptor recombinante

(por exemplo, CAR); e (b) um segundo recipiente com uma composição contida no mesmo (isto é, segundo medicamento), em que a composição inclui um outro agente, tal como um agente citotóxico ou terapêutico, e cujo artigo ou kit compreende ainda instruções no rótulo ou bula para tratar o indivíduo com o segundo medicamento, em uma quantidade eficaz. VI. DEFINIÇÕES

[00703] Conforme usado no presente documento, referência a uma "forma correspondente" de um anticorpo significa que, ao comparar uma propriedade ou atividade de dois anticorpos, a propriedade é comparada usando a mesma forma do anticorpo. Por exemplo, se for afirmado que um anticorpo tem maior atividade comparado com a atividade da forma correspondente de um primeiro anticorpo, isto significa que uma forma particular, tal como um scFv deste anticorpo, tem maior atividade comparado com a forma de scFv do primeiro anticorpo.

[00704] "Funções efetoras" refere-se às atividades biológicas atribuíveis à região Fc de um anticorpo, as quais variam com o isotipo do anticorpo. Exemplos de funções efetoras de anticorpos incluem: ligação a C1q e citotoxicidade dependente de complemento (CDC); ligação ao receptor de Fc; citotoxicidade mediada por células dependente de anticorpos (ADCC); fagocitose; regulação negativa de receptores na superfície celular (por exemplo, receptor de células B); e ativação de células B.

[00705] O termo "região Fc" no presente documento é usado para definir uma região C-terminal de uma cadeia pesada de imunoglobulina que contém pelo menos uma porção da região constante. O termo inclui regiões Fc de sequência nativa e regiões Fc variantes. Em uma modalidade, uma região Fc de cadeia pesada de IgG humana se estende a partir de Cys226 ou a partir de Pro230, até o terminal carboxila da cadeia pesada. No entanto, a lisina C-terminal (Lys447) da região Fc pode ou não estar presente. A menos que especificado de outra forma no presente documento, a numeração de resíduos de aminoácidos na região Fc ou região constante está de acordo com o sistema de numeração EU, também denominado de índice EU, conforme descrito em Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5ª Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.

[00706] Os termos "anticorpo de comprimento completo", "anticorpo intacto" e "anticorpo inteiro" são usados indistintamente no presente documento para referir-se a um anticorpo que tem uma estrutura substancialmente similar a uma estrutura de anticorpo nativo ou que tem cadeias pesadas que contêm uma região Fc conforme definido no presente documento.

[00707] Um anticorpo "isolado" é aquele que foi separado de um componente de seu ambiente natural. Em algumas modalidades, um anticorpo é purificado para mais de 95% ou 99% de pureza, conforme determinado, por exemplo, através de eletroforese (por exemplo, SDS- PAGE, focagem isoelétrica (IEF), eletroforese capilar) ou cromatografia (por exemplo, troca iônica ou HPLC de reversa fase). Para uma revisão dos métodos de avaliação da pureza do anticorpo consulte, por exemplo, Flatman et al., J. Chromatogr. B 848: 79-87 (2007).

[00708] Um ácido nucleico "isolado" refere-se a uma molécula de ácidos nucleicos que foi separada de um componente de seu ambiente natural. Um ácido nucleico isolado inclui uma molécula de ácidos nucleicos contida em células que normalmente contêm a molécula de ácidos nucleicos, mas a molécula de ácidos nucleicos está presente extracromossomicamente ou em uma localização cromossômica que é diferente de sua localização cromossômica natural.

[00709] "Ácido nucleico isolado que codifica um anticorpo anti- ROR1" refere-se a uma ou mais moléculas de ácidos nucleicos que codificam cadeias pesadas e leves de anticorpo (ou fragmentos dos mesmos), incluindo aquelas moléculas de ácidos nucleicos em um único vetor ou vetores separados e aquelas moléculas de ácidos nucleicos presentes em um ou mais locais em uma célula hospedeira.

[00710] Os termos "célula hospedeira", "linhagem de células hospedeira" e "cultura de células hospedeiras" são usados indistintamente e referem-se a células nas quais o ácido nucleico exógeno foi introduzido, incluindo a progênie de tais células. As células hospedeiras incluem "transformantes" e "células transformadas", incluindo a célula transformada primária e a progênie derivada da mesma, independentemente do número de passagens. A descendência pode não ser completamente idêntica, quanto ao teor de ácidos nucleicos, a uma célula-mãe, mas pode conter mutações. A progênie mutante que tem a mesma função ou atividade biológica conforme rastreado ou selecionado na célula originalmente transformada está incluída no presente documento.

[00711] Conforme usado no presente documento, "porcentagem (%) de identidade de sequência de aminoácidos" e "porcentagem de identidade" e "identidade de sequência", quando usados em relação a uma sequência de aminoácidos (sequência polipeptídica de referência), é definido como a porcentagem de resíduos de aminoácidos em uma sequência candidata (por exemplo, o anticorpo ou fragmento em questão) que são idênticos aos resíduos de aminoácidos na sequência polipeptídica de referência, após alinhar as sequências e introduzir lacunas, se necessário, para atingir a porcentagem máxima de identidade de sequência e não considerando quaisquer substituições conservativas como parte da identidade de sequência. O alinhamento para fins de determinação da identidade percentual da sequência de aminoácidos pode ser alcançado de várias maneiras que estão dentro da perícia na técnica, por exemplo, usando um software de computador disponível publicamente, tal como software BLAST, BLAST-2, ALIGN ou Megalign (DNASTAR). Aqueles versados na técnica podem determinar os parâmetros apropriados para o alinhamento de sequências, incluindo quaisquer algoritmos necessários para atingir o alinhamento máximo ao longo de todo o comprimento das sequências que estão sendo comparadas.

[00712] Uma substituição de aminoácido pode incluir a substituição de um aminoácido em um polipeptídeo por outro aminoácido. A substituição pode ser uma substituição conservativa de aminoácidos ou uma substituição não conservativa de aminoácidos. As substituições de aminoácidos podem ser introduzidas em uma molécula de ligação, por exemplo, anticorpo, de interesse e os produtos selecionados quanto a uma atividade desejada, por exemplo, ligação a antígeno retida/aprimorada, imunogenicidade diminuída ou ADCC ou CDC aumentadas.

[00713] Os aminoácidos podem, em geral, ser agrupados de acordo com as seguintes propriedades em comum da cadeia lateral: hidrofóbicos: Norleucina, Met, Ala, Val, Leu, Ile; hidrofílicos neutros: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; ácidos: Asp, Glu; básicos: His, Lys, Arg; resíduos que influenciam a orientação da cadeia: Gly, Pro; aromáticos: Trp, Tyr, Phe.

[00714] Em algumas modalidades, as substituições conservativas podem envolver a troca de um membro de uma destas classes por outro membro da mesma classe. Em algumas modalidades, as substituições não conservativas de aminoácidos podem envolver a troca de um membro de uma destas classes por outra classe.

[00715] O termo "vetor", conforme usado no presente documento, refere-se a uma molécula de ácidos nucleicos capaz de propagar outro ácido nucleico ao qual ela está ligada. O termo inclui o vetor como uma estrutura de ácidos nucleicos autorreplicante, bem como o vetor incorporado no genoma de uma célula hospedeira na qual ele foi introduzido. Determinados vetores são capazes de controlar a expressão de ácidos nucleicos aos quais eles estão operativamente ligados. Tais vetores são denominados no presente documento como "vetores de expressão".

[00716] O termo "bula" é usado para referir-se a instruções normalmente incluídas em embalagens comerciais de produtos terapêuticos, a qual contém informações sobre as indicações, uso, dosagem, administração, terapia combinada, contraindicações e/ou advertências relativas ao uso de tais produtos terapêuticos.

[00717] Conforme usado no presente documento, as formas no singular "um", "uma" e "o/a" incluem as referências no plural, a menos que o contexto dite claramente o contrário. Por exemplo, "um" ou "uma" significa "pelo menos um(a)" ou "um(a) ou mais". Deve ser entendido que aspectos, modalidades e variações descritos no presente documento incluem "que compreende(m)", "que consiste(m)" e/ou "que consiste(m) essencialmente em" aspectos, modalidades e variações.

[00718] Ao longo da presente invenção, vários aspectos do assunto reivindicado são apresentados em um formato de faixas. Deve ser entendido que a descrição em formato de faixas é meramente por conveniência e brevidade e não deve ser interpretada como uma limitação inflexível no escopo do assunto reivindicado. Consequentemente, a descrição de uma faixa deve ser considerada como tendo descrito especificamente todas as subfaixas possíveis, bem como valores numéricos individuais dentro desta faixa. Por exemplo, onde uma faixa de valores é fornecida, deve ser entendido que cada valor intermediário, entre os limites máximo e mínimo desta faixa e qualquer outro valor declarado ou intermediário nesta faixa declarada,

está abrangido no assunto reivindicado. Os limites máximo e mínimo destas faixas menores podem ser independentemente incluídos nas faixas menores e também são abrangidos dentro do assunto reivindicado, sujeito a qualquer limite especificamente excluído na faixa declarada. Quando a faixa declarada inclui um ou ambos os limites, faixas que excluem um ou ambos os limites incluídos também estão incluídas no assunto reivindicado. Isto se aplica independentemente da amplitude da faixa.

[00719] O termo "cerca de", conforme usado no presente documento, refere-se à faixa de erro usual para o respectivo valor prontamente conhecido pelo especialista neste campo técnico. Referência a "cerca de" um valor ou parâmetro no presente documento inclui (e descreve) modalidades que são dirigidas a este valor ou parâmetro per se. Por exemplo, a descrição referente a "cerca de X" inclui a descrição de "X".

[00720] Conforme usado no presente documento, uma "composição" refere-se a qualquer mistura de dois ou mais produtos, substâncias ou compostos, incluindo células. Ela pode ser uma solução, uma suspensão, líquido, pó, uma pasta, solução aquosa, não aquosa ou qualquer combinação dos mesmos.

[00721] Conforme usado no presente documento, uma declaração de que uma célula ou população de células é "positiva" para um marcador específico refere-se à presença detectável em ou na célula de um marcador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à presença de expressão na superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração é detectável através de citometria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração detectada realizando o mesmo procedimento com um controle de isotipo compatível sob outras condições idênticas e/ou em um nível substancialmente similar àquele da célula conhecida por ser positiva para o marcador e/ou em um nível substancialmente mais alto do que para uma célula conhecida por ser negativa para o marcador.

[00722] Conforme usado no presente documento, uma declaração de que uma célula ou população de células é "negativa" para um marcador específico refere-se à ausência de presença detectável substancial em ou na célula de um marcador específico, tipicamente um marcador na superfície. Quando de referência a um marcador na superfície, o termo refere-se à ausência de expressão na superfície detectada por meio de citometria de fluxo, por exemplo, através de coloração com um anticorpo que se liga especificamente ao marcador e detecção do dito anticorpo, em que a coloração não é detectada através de citometria de fluxo em um nível substancialmente acima da coloração detectada realizando o mesmo procedimento com um controle de isotipo compatível sob condições idênticas e/ou em um nível substancialmente menor do que aquele da célula conhecida por ser positiva para o marcador e/ou em um nível substancialmente similar àquele de uma célula conhecida por ser negativa para o marcador.

[00723] A menos que definido de outra forma, todos os termos da técnica, notações e outros termos técnicos e científicos ou terminologia usados no presente documento se destinam a ter o mesmo significado conforme comumente entendido por aqueles versados na técnica a qual o assunto reivindicado se refere. Em alguns casos, termos com significados comumente compreendidos são definidos no presente documento para clareza e/ou para pronta referência e a inclusão de tais definições no presente documento não deve necessariamente ser interpretada como representando uma diferença substancial sobre o que é geralmente entendido na técnica.

VII. MODALIDADES EXEMPLIFICATIVAS

[00724] Dentre as modalidades fornecidas estão:

[00725] 1. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00726] 2. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00727] 3. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 1 ou modalidade 2, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

[00728] 4. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 1 ou modalidade 2, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma

CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

[00729] 5. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00730] 6. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR- L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma

CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106; ou a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[00731] 7. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 5 ou modalidade 6, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115.

[00732] 8. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 5 ou modalidade 6, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124.

[00733] 9. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2, 5 e 6, em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00734] 10. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2 e 5-7, em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% o r 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00735] 11. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 10, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115.

[00736] 12. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 10, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[00737] 13. O Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que:

[00738] a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00739] 14. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00740] 15. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 13 ou modalidade 14, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85% ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 115.

[00741] 16. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 13 ou modalidade 14, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade com SEQ ID Nº: 124.

[00742] 17. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13 e 14, em que:

[00743] a região VH é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e

[00744] a região VL é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00745] 18. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14 e 17, em que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente;

a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00746] 19. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00747] 20. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00748] 21. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 20, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente.

[00749] 22. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 20, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente.

[00750] 23. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14 e 17-20, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104.

[00751] 24. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1, 2, 5, 6, 9, 10, 13, 14, 17-20 e 23, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificado pela SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131.

[00752] 25. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 24, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113.

[00753] 26. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 25, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114.

[00754] 27. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-24, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122.

[00755] 28. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 25, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 120 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 123.

[00756] 29. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 28, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é isolado.

[00757] 30. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 29, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante.

[00758] 31. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 30, em que pelo menos uma parte da região VH e da região VL é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[00759] 32. O anti-ROR1 anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 31, em que o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende um fragmento com uma única cadeia, opcionalmente um Fv com uma única cadeia (scFv).

[00760] 33. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 32, em que a região VH é amino terminal à região VL.

[00761] 34. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 32, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL.

[00762] 35. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 34, quando a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível.

[00763] 36. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 35, em que o ligante flexível compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41.

[00764] 37. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32, 33, 35 e 36, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134.

[00765] 38. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32, 33 e 35-37, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118.

[00766] 39. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32, 33 e 35-37, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127.

[00767] 40. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32, 33 e 35-37, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132.

[00768] 41. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32, 33, 35-37 e 40, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133.

[00769] 42. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32- 41, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80 ou cerca de %, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116.

[00770] 43. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32- 42, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117.

[00771] 44. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32- 41, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80 ou cerca de %, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125.

[00772] 45. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 32- 41 e 43, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 126.

[00773] 46. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 45, em que o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento compreende ainda pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00774] 47. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 46, em que a porção de uma região constante de imunoglobulina compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça ou uma variante da mesma.

[00775] 48. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 46 ou modalidade 47, em que pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma compreende pelo menos uma porção de uma região CH2 e/ou uma região CH3 ou uma variante das mesmas.

[00776] 49. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 46- 48, em que pelo menos uma porção de uma região constante de imunoglobulina ou uma variante da mesma é humana ou de uma proteína humana ou uma variante da mesma.

[00777] 50. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 49, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1), opcionalmente uma proteína ROR1 humana.

[00778] 51. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com a modalidade 50, em que a proteína ROR1 humana compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145 ou 146.

[00779] 52. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 51, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína receptor órfão 2 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR2), opcionalmente uma proteína ROR2 humana.

[00780] 53. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 52, em que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo por uma proteína ROR2 humana é pelo menos igual ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana.

[00781] 54. Uma proteína da superfície celular que tem uma única cadeia que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-265.

[00782] 55. Um conjugado que compreende o anticorpo anti- ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265 e uma molécula ou porção heteróloga.

[00783] 56. O conjugado de acordo com a modalidade 55 em que a molécula ou porção heteróloga é uma porção terapêutica.

[00784] 57. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244- 265 e uma região de sinalização intracelular.

[00785] 58. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 67, 82 ou 52, uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 71, 86, 56 ou 97 e uma complementaridade de cadeia pesada região determinante 3 (CDR-H3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 73, 88, 58 ou 99 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 75, 90 ou 60, uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 77, 92 ou 62; e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR- L3) que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 79, 94 ou 64.

[00786] 59. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00787] 60. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 58 ou modalidade 59, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

[00788] 61. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 58 ou modalidade 59, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR- L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

[00789] 62. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00790] 63. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR- L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106; ou a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[00791] 64. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 62 ou modalidade 63, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115.

[00792] 65. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 62 ou modalidade 63, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124.

[00793] 66. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59, 62 e 63, em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00794] 67. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59 e 62-64, em que:

[00795] a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%,

88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00796] 68. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-67, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115.

[00797] 69. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-67, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%,

86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[00798] 70. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compre- ende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00799] 71. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compre- ende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115;

a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00800] 72. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 70 ou modalidade 71, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115.

[00801] 73. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 70 ou modalidade 71, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

[00802] 74. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70 e 71, em que: a região VH é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00803] 75. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71 e 74, em que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00804] 76. um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 112, 121, 103 ou 130, e a região VL é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 115, 124 ou 106.

[00805] 77. Um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR) que compreende: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL) e uma região de sinalização intracelular, em que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00806] 78. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-77, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente.

[00807] 79. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-77, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente.

[00808] 80. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71 e 74- 77, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104.

[00809] 81. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58, 59, 62, 63, 66, 67, 70, 71, 74- 77 e 80, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131.

[00810] 82. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-81, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%. %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113.

[00811] 83. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-82, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 111 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 114.

[00812] 84. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-81, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 122.

[00813] 85. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-82, em que a região VH é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 120 e a região VL é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 123.

[00814] 86. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-85, em que o dito anticorpo anti- ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é isolado.

[00815] 87. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-86, em que o dito anticorpo anti- ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante.

[00816] 88. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-87, em que pelo menos uma parte da região VH e da região VL é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[00817] 89. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-88, em que o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende um fragmento com uma única cadeia, opcionalmente um Fv com uma única cadeia (scFv).

[00818] 90. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-89, em que a região VH é amino-terminal à região VL.

[00819] 91. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-89, em que a região VH é carbóxi-terminal à região VL.

[00820] 92. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-91, em que a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível.

[00821] 93. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 92, em que o ligante flexível compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41.

[00822] 94. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89, 90, 92 e 93, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% da sequência identidade com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134.

[00823] 95. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89, 90 e 92-94, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118.

[00824] 96. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89, 90 e 92-94, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127.

[00825] 97. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89, 90 e 92-94, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ IDNO: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132.

[00826] 98. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89, 90, 92-94 e 40, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133.

[00827] 99. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89-98, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116.

[00828] 100. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89-99, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

117.

[00829] 101. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89-98, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125.

[00830] 102. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 89-98 e 100, em que o scFv é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

126.

[00831] 103. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-102 que compreende ainda um espaçador.

[00832] 104. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a modalidade 103, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00833] 105. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a modalidade 103 ou modalidade 104, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00834] 106. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-105, em que o espaçador tem menos ou cerca de 15 aminoácidos de comprimento.

[00835] 107. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-106, em que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 ou 135.

[00836] 108. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 105-107, em que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG4 humana ou uma variante da mesma.

[00837] 109. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 105-107, em que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG2, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG2 humana ou uma variante da mesma.

[00838] 110. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-109, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135.

[00839] 111. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-110, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 192 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 192.

[00840] 112. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-111, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

136.

[00841] 113. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-112, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00842] 114. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-113, em que pelo menos uma porção de uma região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 e/ou uma região CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente uma região CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcionalmente uma região CH3 de IgG2 humana.

[00843] 115. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-114, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00844] 116. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-115, em que o espaçador tem ou tem cerca de 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ou 125 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

[00845] 117. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-116, em que o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento.

[00846] 118. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-117, em que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 138.

[00847] 119. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-118, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138.

[00848] 120. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-119, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 193 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193.

[00849] 121. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-120, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

139.

[00850] 122. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-121, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região CH2 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00851] 123. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-122, em que pelo menos uma porção de uma região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4 e/ou uma região CH2 de IgG2, em que a região

CH2 de IgG4 é opcionalmente uma região CH2 de IgG4 humana e a região CH2 de IgG2 é opcionalmente uma região CH2 de IgG2 humana.

[00852] 124. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-123, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça, pelo menos uma porção de uma região CH2 e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante do mesmo.

[00853] 125. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-124, em que o espaçador tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 ou 230 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

[00854] 126. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-125, em que um ou mais dentre a região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 compreendem a totalidade ou uma porção de uma região CH2 e a totalidade ou uma porção de um CH3 região de IgG4 humana.

[00855] 127. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-125, em que uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 são quiméricas e compreendem uma dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana.

[00856] 128. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-125, em que o espaçador compreende uma região de dobradiça quimérica IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com uma dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de IgG2/4; e uma região CH3 de IgG4.

[00857] 129. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-125, em que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 194.

[00858] 130. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-129, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 194.

[00859] 131. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-130, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº: 195 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195.

[00860] 132. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 103-131, em que o espaçador é ou compreende a sequência de aminoácidos codificada por SEQ ID Nº:

196.

[00861] 133. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-132, em que a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização intracelular.

[00862] 134. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 133, em que o domínio de sinalização intracelular é capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente de receptor de célula T (TCR) e/ou compreende uma ativação com base em tirosina imunorreceptor motivo (ITAM).

[00863] 135. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 133 ou modalidade 134, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) ou uma variante funcional ou porção de sinalização da mesma.

[00864] 136. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 133-135, em que o domínio de sinalização intracelular é humano ou é proveniente de uma proteína humana.

[00865] 137. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 133-136, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15.

[00866] 138. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 133-137, em que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13.

[00867] 139. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 133-138, em que a região de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.

[00868] 140. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 139, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou uma porção de sinalização da mesma.

[00869] 141. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a modalidade 139 ou modalidade 140, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS ou uma porção de sinalização dos mesmos.

[00870] 142. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-141, em que a região de sinalização coestimuladora é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[00871] 143. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-142, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28.

[00872] 144. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-143, em que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 10 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% ou cerca de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 10.

[00873] 145. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-144, em que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

[00874] 146. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-142 e 145, em que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 12.

[00875] 147. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-146, que compreende ainda uma região transmembrana.

[00876] 148. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 140-147, em que a região de sinalização coestimuladora está entre a região transmembrana e o domínio de sinalização intracelular.

[00877] 149. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 147 ou modalidade 148, em que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8.

[00878] 150. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 147-149, em que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana derivado de CD28.

[00879] 151. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 147-150, em que a região transmembrana é humana ou é proveniente de uma proteína humana.

[00880] 152. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 147-151, em que o domínio transmembrana é ou compreende SEQ ID Nº: 8 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8.

[00881] 153. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 147-152, em que o receptor antigênico quimérico codificado compreende a partir de seus N- para C- términos na ordem: o domínio de ligação a antígeno extracelular, o espaçador, a região transmembrana e a região de sinalização intracelular.

[00882] 154. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-153, em que o receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seu N- para C- términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende um scFv, um espaçador que compreende uma IgG4 modificada dobradiça, opcionalmente que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135; um domínio transmembrana, opcionalmente um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora, opcionalmente que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

[00883] 155. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-153, em que o receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seus N- para C-términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende um scFv, um espaçador que compreende uma IgG4 modificada dobradiça-CH3, opcionalmente que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138; um domínio transmembrana, opcionalmente um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia de CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora, opcionalmente que compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

[00884] 156. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-155, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189.

[00885] 157. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

[00886] 158. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-157, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

[00887] 159. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

[00888] 160. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156 e 159, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

[00889] 161. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161.

[00890] 162. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-158 e 161, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156.

[00891] 163. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-158, 161 e 162, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156.

[00892] 164. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156 e 159-161, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157.

[00893] 165. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-156, 159-161 e 164, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é codificado pela sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157.

[00894] 166 O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-165, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 se liga especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase (ROR1), opcionalmente uma proteína ROR1 humana.

[00895] 167. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com a modalidade 166, em que a proteína ROR1 humana compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145 ou 146.

[00896] 168. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-167, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade menor a uma proteína receptor órfão 2 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR2), opcionalmente uma proteína ROR2 humana.

[00897] 169. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-168, em que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 a uma proteína ROR2 humana é pelo menos igual ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00898] 170. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-169, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, opcionalmente uma proteína ROR2 humana, comparado com o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1, opcionalmente uma proteína ROR1 humana, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00899] 171. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-170, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe um nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR2 humana que é pelo menos igual ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização ou atividade na presença de uma proteína ROR1 humana, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00900] 172. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-171, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, opcionalmente uma proteína ROR2 humana, comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00901] 173. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-172, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe o mesmo, substancialmente o mesmo ou um nível ou grau de sinalização ou atividade menor na presença de uma proteína ROR2, opcionalmente uma proteína ROR2 humana, comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00902] 174. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-173, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe a mesma, substancialmente a mesma ou sinalização específica para antígeno e/ou atividade ou sinalização dependente de antígeno superior comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00903] 175. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-174, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe a mesma, substancialmente a mesma ou inferior sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno comparado com um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00904] 176. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 58-175, em que o dito receptor antigênico quimérico anti-ROR1 exibe um nível ou grau de sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno que é pelo menos igual ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que o nível ou grau de sinalização tônica e/ou atividade independente de antígeno de um receptor antigênico quimérico específico para ROR1 de referência, opcionalmente sob as mesmas ou substancialmente as mesmas condições ou ensaio.

[00905] 177. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 172-176, em que o receptor antigênico quimérico específico para ROR1 compreende o anticorpo anti-ROR1 R12 ou o anticorpo anti-ROR1 2A2 ou um fragmento de ligação a antígeno dos mesmos, opcionalmente um scFv de R12 ou 2A2.

[00906] 178. Um polinucleotídeo caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica o anticorpo anti-ROR1 ou seu domínio de ligação a antígeno de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56 ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57- 177 e 266-297.

[00907] 179. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 178, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%. %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110, 119, 101 ou 128 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 113, 122 ou 104.

[00908] 180. O polinucleotídeo, de acordo com a modalidade 178 ou modalidade 179, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 110 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 110 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 113 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para SEQ ID Nº: 113.

[00909] 181. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 178 ou de acordo com a modalidade 179, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 119 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 119 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 122 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade para SEQ ID Nº: 122.

[00910] 182. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-180, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos um ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116, 125, 107 ou 132.

[00911] 183. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-180 e 182, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 116 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%. %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 116.

[00912] 184. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-180 e 182, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 125 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80% ou cerca de 81%. %, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 125.

[00913] 185. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-184, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 192 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos igual ou cerca de 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 192.

[00914] 186. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 178-184, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 193 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 193.

[00915] 187. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 178-184, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 195 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 195.

[00916] 188. O polinucleotídeo, de acordo com a modalidade 187, em que o ácido nucleico que codifica o anticorpo anti-ROR1 ou domínio de ligação a antígeno do mesmos, a proteína da superfície celular com uma única cadeia, o conjugado ou o receptor antigênico quimérico anti- ROR1 compreende pelo menos um sítio doador de emenda e/ou sítio aceitador de emenda modificado, o dito sítio doador e/ou aceitador de emenda modificado compreendendo uma ou mais modificações de nucleotídeos que correspondem a um sítio dador de emenda de referência e/ou sítio aceitador de emenda de referência.

[00917] 189. O polinucleotídeo, de acordo com a modalidade 188, em que a uma ou mais modificações de nucleotídeos compreendem uma substituição de ácido nucleico.

[00918] 190. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 188 ou modalidade 189, em que o sítio doador de emenda de referência e/ou o sítio aceitador de emenda de referência são sítios de emenda canônicos, não canônicos ou crípticos.

[00919] 191. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 188-190, em que:

o sítio doador de emenda de referência e/ou o sítio aceitador de emenda de referência tem/têm uma pontuação de predição de sítio de emenda de pelo menos igual ou cerca de 0,4, 0,5, 0,6, 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 0,99 ou 1,0; e/ou o sítio doador de emenda de referência e/ou sítio aceitador de emenda de referência é/estão previstos como estando envolvidos em um evento de emenda com uma probabilidade de pelo menos cerca de 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou 100%.

[00920] 192. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 188-191, em que: o sítio doador de emenda de referência e/ou o sítio aceitador de emenda de referência tem/têm uma pontuação de predição de sítio de emenda de pelo menos 0,70, 0,75, 0,80, 0,85, 0,90, 0,95, 0,99 ou 1,0; e/ou o sítio doador de emenda de referência e/ou sítio aceitador de emenda de referência é/estão previstos como estando envolvidos em um evento de emenda com uma probabilidade de pelo menos 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ou 100%.

[00921] 193. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 188-192, em que pelo menos uma das uma ou mais modificações de nucleotídeos estão dentro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10 resíduos da junção do sítio aceitador de emenda de emenda de referência e/ou sítio doador de emenda de referência.

[00922] 194. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 188-193, em que a uma ou mais modificações de nucleotídeo são silenciosas e/ou resultam em um códon degenerado e/ou não alteram a sequência de aminoácidos da proteína codificada.

[00923] 195. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 188-194 em que, após expressão do polinucleotídeo em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (mRNA),

a partir do polinucleotídeo, exibe pelo menos igual ou cerca de 70% ou cerca de 75%, igual ou cerca de 80%, igual ou cerca de 85%, igual ou cerca de 90% ou igual ou cerca de 95% de homogeneidade de RNA.

[00924] 196. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 188-195 em que, após expressão em uma célula, o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (mRNA), a partir do polinucleotídeo exibe heterogeneidade reduzida comparado com a heterogeneidade do mRNA transcrito a partir de um polinucleotídeo de referência, o dito polinucleotídeo de referência codificando a mesma sequência de aminoácidos que o polinucleotídeo, em que o polinucleotídeo de referência difere pela presença de um ou mais sítios doadores de emenda e/ou um ou mais sítios aceitadores de emenda no ácido nucleico que codifica o espaçador e/ou compreende uma ou mais modificações de nucleotídeos comparado com o polinucleotídeo.

[00925] 197. O polinucleotídeo, de acordo com a modalidade 196, em que a heterogeneidade do RNA é reduzida em mais de igual ou cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% ou mais.

[00926] 198. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 196 ou modalidade 197, em que o RNA transcrito, opcionalmente RNA mensageiro (mRNA), a partir do polinucleotídeo de referência exibe mais do que ou cerca de 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% ou 50% ou mais de heterogeneidade de RNA.

[00927] 199. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 188-198, em que a homogeneidade e/ou heterogeneidade do RNA é determinada por meio de eletroforese em gel de agarose, eletroforese capilar com base em chip, ultracentrifugação analítica, fracionamento de fluxo de campo ou cromatografia de líquido.

[00928] 200. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 188-199, em que o polinucleotídeo tem códons otimizados para expressão em uma célula humana.

[00929] 201. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178, 179, 182, 185, 186 e 188-200, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111, 120, 102 ou 129 e um ácido nucleico que codifica uma VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114, 123, 105 ou 131.

[00930] 202. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-180, 182, 183, 185, 186 e 198-201, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 111 e um ácido nucleico codificar o VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 114.

[00931] 203. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178, 179, 181, 182, 184-186 e 198-201, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica uma VH que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 120 e um ácido nucleico codificar o VL que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 123.

[00932] 204. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178, 179, 182, 185, 186 e 188-201, em que o dito polinu- cleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que com- preende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 117, 126, 108 ou 133.

[00933] 205. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-180, 182, 183, 185, 186, 198-201 e 204, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 117.

[00934] 206. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178, 179, 181, 182, 184-186, 198-201 e 204, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o scFv que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 126.

[00935] 207. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-185 e 188-206, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 136.

[00936] 208. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-184, 186 e 188-206, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 139.

[00937] 209. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-184 e 187-206, em que o dito polinucleotídeo compreende um ácido nucleico que codifica o espaçador que compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 196.

[00938] 210. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-186 e 188-209, em que o dito polinucleotídeo compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156, 157, 158, 159, 160 ou 161.

[00939] 211. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-186 e 188-210, em que o dito polinucleotídeo compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156.

[00940] 212. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-186 e 188-211, em que o dito polinucleotídeo compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 156.

[00941] 213. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-186 e 188-210, em que o dito polinucleotídeo compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157 ou uma sequência que exibe pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência para a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157.

[00942] 214. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-186, 188-210 e 213, em que o dito polinucleotídeo compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 157.

[00943] 215. O polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das modalidades 178-214, caracterizado pelo fato de que compreende ainda uma sequência sinalizadora de CD33, uma sequência sinalizadora de GM-CSF, uma sequência sinalizadora de CD8 ou uma sequência sinalizadora de Ig capa.

[00944] 216. O polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-214, que compreende ainda uma sequência sinalizadora de CD33.

[00945] 217. O polinucleotídeo de acordo com a modalidade 215 ou modalidade 216, em que a sequência sinalizadora de CD33 é apresentada em SEQ ID Nº: 190 ou uma sequência de ácidos nucleicos que tem pelo menos 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 190.

[00946] 218. Um vetor que compreende o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-217.

[00947] 219. O vetor de acordo com a modalidade 218, em que o vetor é um vetor viral.

[00948] 220. O vetor, de acordo com a modalidade 219, em que o vetor viral é um vetor retroviral ou um vetor lentiviral.

[00949] 221. Uma célula que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57- 177 e 266-297, o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-217 ou o vetor de acordo com qualquer uma das modalidades 218-220.

[00950] 222. A célula de acordo com a modalidade 221, a qual é um linfócito.

[00951] 223. A célula, de acordo com a modalidade 222, a qual é uma célula NK ou uma célula T.

[00952] 224. A célula de acordo com a modalidade 222 ou modalidade 223, em que a célula é uma célula T e a célula T é uma célula T CD4+ ou CD8+.

[00953] 225. A célula, de acordo com qualquer uma das modalidades 221-224, em que a célula é uma célula primária obtida a partir de um indivíduo.

[00954] 226. A célula, de acordo com qualquer uma das modalidades 221-225 em que, dentre uma pluralidade de células, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8% igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade compreendem um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

[00955] 227. Uma composição que compreende o anticorpo anti- ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54 ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-297.

[00956] 228. Uma composição que compreende a célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221-226.

[00957] 229. A composição de acordo com a modalidade 227 ou modalidade 228, que compreende ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável.

[00958] 230. A composição de acordo com a modalidade 228 ou modalidade 229, em que a composição compreende células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de igual ou cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente igual ou cerca de 1:2 a 2:1, opcionalmente igual ou cerca de 1:1.

[00959] 231. A composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-230 em que, dentre uma pluralidade de células, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8%, igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade compreendem um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

[00960] 232. Um método de tratamento que compreende administrar a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00961] 233. Um método de tratamento que compreende administrar o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244- 265, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-297, o polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das modalidades 178-217, o vetor de acordo com qualquer uma das modalidades 218-220 ou a célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221-226 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00962] 234. Uma composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00963] 235. Um uso de uma composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00964] 236. O uso de uma composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[00965] 237. O método, composição para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-236 e 298-311, em que a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 está associado à expressão de ROR1.

[00966] 238. O método, composição para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-237 e 298-311, em que a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um transtorno relacionado às células B.

[00967] 239. O método, a composição para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-238 e 298-311, em que a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer.

[00968] 240. O método, composição para uso ou uso de acordo com a modalidade 239, em que o câncer é um câncer que expressa ROR1.

[00969] 241. O método, composição para uso ou uso de acordo com a modalidade 240, em que o câncer que expressa ROR1 é selecionado a partir do grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt, linfoma de células do manto (MCL), câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer uterino, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço.

[00970] 242. Um kit que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57- 177 e 266-297, a célula de acordo com a modalidade 221-226 ou a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 e instruções de uso, opcionalmente em que as instruções são para administrar o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, a proteína da superfície celular com uma única cadeia, o conjugado, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1, a célula ou a composição, opcionalmente de acordo com o método, a composição para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 234- 241 e 298-311.

[00971] 243. Um artigo de fabricação que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-53 e 244-265, a proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a modalidade 54, o conjugado de acordo com a modalidade 55 ou modalidade 56, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-297, a célula de acordo com a modalidade 221-226, a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 ou o kit de acordo com a modalidade 242.

[00972] 244. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00973] 245. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

[00974] 246. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº:

106.

[00975] 247. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma

CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

[00976] 248. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00977] 249. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

[00978] 250. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente.

[00979] 251. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53, em que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

[00980] 252. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1-

53 e 244-251, em que o anticorpo é um anticorpo de comprimento total.

[00981] 253. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-251, em que o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno.

[00982] 254. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-253, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante.

[00983] 255. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-254, em que a região VH e a região VL são humanas ou são de uma proteína humana.

[00984] 256. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-255, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 109.

[00985] 257. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-255, em que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 134.

[00986] 258. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-257, em que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a um epitopo que consiste na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199 ou um epitopo presente na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199.

[00987] 259. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-257, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga ainda a um ou mais epitopos que consistem em uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214 ou um epitopo presente dentro de uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214.

[00988] 260. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-259, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10-11 M a cerca de 1 x 10-7 M.

[00989] 261. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-260, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10-8 M a cerca de 1 x 10-7 M.

[00990] 262. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-260, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) de cerca de 5 x 10-11 M a cerca de 1 x 10-10 M.

[00991] 263. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-262, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s.

[00992] 264. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-263, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-3 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s.

[00993] 265. O anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das modalidades 1- 53 e 244-263, em que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-4 1/s.

[00994] 266. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG4 humana ou uma variante da mesma.

[00995] 267. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG2, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG2 humana ou uma variante da mesma.

[00996] 268. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 1.

[00997] 269. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135.

[00998] 270. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

[00999] 271. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 270, em que pelo menos uma porção de uma região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 e/ou uma região CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente, uma região CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcionalmente uma região CH3 de IgG2 humana.

[001000] 272. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, 270 e 271, em que o espaçador tem ou tem cerca de 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ou 125 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

[001001] 273. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 270-272, em que o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento.

[001002] 274. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 270-273, em que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 3 ou 138.

[001003] 275. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 270-274, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 3 ou 138.

[001004] 276. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, em que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça, pelo menos uma porção de uma região CH2 e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante do mesmo.

[001005] 277. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 276, em que pelo menos uma porção de uma região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4 e/ou uma região CH2 de IgG2, em que a região CH2 de IgG4 é opcionalmente, uma região CH2 de IgG4 humana e a região CH2 de IgG2 é opcionalmente uma região CH2 de IgG2 humana.

[001006] 278. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177, 276 e 277, em que o espaçador tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 ou 230 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

[001007] 279. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 276-278, em que:

[001008] uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 compreendem a totalidade ou uma porção de uma região CH2 e a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 humana; ou

[001009] uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 é quimérica e compreende uma dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana; ou o espaçador compreende uma região de dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com uma região de dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de IgG2/4; e uma região CH3 de IgG4.

[001010] 280. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 276-279, em que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 37 ou

194.

[001011] 281. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 276-280, em que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 37 ou 194.

[001012] 282. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-281, em que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8.

[001013] 283. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-282, em que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD28, opcionalmente uma CD28 humana.

[001014] 284. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-283, em que o domínio transmembrana é ou compreende SEQ ID Nº: 8 ou 149 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90% ou cerca de 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8 ou 149.

[001015] 285. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-284, em que a região de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.

[001016] 286. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-285, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189.

[001017] 287. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

[001018] 288. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

[001019] 289. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

[001020] 290. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

[001021] 291. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186.

[001022] 292. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186.

[001023] 293. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187.

[001024] 294. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187.

[001025] 295. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188.

[001026] 296. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188.

[001027] 297. O receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das modalidades 57-177 e 266-286, em que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,

96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189.

[001028] 298. Um método de tratamento que compreende administrar a célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221- 226 ou a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[001029] 299. A célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221-226 ou a composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[001030] 300. O uso da célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221-226 ou da composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[001031] 301. O uso da célula de acordo com qualquer uma das modalidades 221-226 ou da composição de acordo com qualquer uma das modalidades 227-231 para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

[001032] 302. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-241 e 298-302, em que a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer.

[001033] 303. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade 302, em que o câncer é um câncer que expressa ROR1.

[001034] 304. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-241 e 298-303, em que o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[001035] 305. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-241 e 298-304, em que o câncer está associado a um tumor sólido que expressa ROR1.

[001036] 306. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade 304 ou modalidade 305, em que o câncer está associado com um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, ovário câncer, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer de útero, câncer adrenal e câncer de cabeça e pescoço.

[001037] 307. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular de cadeia simples, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade

306, em que ong câncer é um câncer de pulmão de células não pequenas (NSCLC), adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas e carcinoide atípico.

[001038] 308. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade 307, em que o câncer de pulmão é um NSCLC.

[001039] 309. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular de cadeia simples, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade 306, em que o câncer de mama é um triplo negativo câncer de mama (TNBC).

[001040] 310. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das modalidades 232-241 e 298-304, em que o câncer está associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

[001041] 311. O método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a modalidade 310, em que a malignidade hematológica é selecionada a partir de grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (LMA), leucemia linfocítica aguda (LLA), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

VIII. EXEMPLOS

[001042] Os exemplos a seguir são incluídos apenas para fins ilustrativos e não se destinam a limitar o escopo da invenção. Exemplo 1: Geração e Avaliação de Anticorpos Anti-ROR1

[001043] Anticorpos antirreceptor órfão 1 de tipo tirosina quinase (ROR1) exemplificativos que se ligam especificamente a células que expressam ROR1 foram gerados por meio de imunização de camundongos geneticamente modificados e avaliados. Geração de Anticorpos

[001044] Camundongos que foram geneticamente modificados para produzir anticorpos que contêm regiões variáveis de anticorpos totalmente humanos (Trianni, Inc., San Francisco, CA) foram imunizados com domínio extracelular recombinante (ECD) de ROR1 humana fundido a um marcador de histidina. O baço, os nódulos linfáticos e a medula óssea foram coletados e as células B de memória específicas para ROR1 e as células plasmáticas foram enriquecidas através de seleção com base em imunoafinidade.

[001045] As populações de células das frações enriquecidas foram submetidas a sequenciamento emparelhado de uma única célula de alto rendimento da cadeia pesada variável (VH) e cadeia leve variável (VL) do anticorpo. O sequenciamento de anticorpo de uma única célula de alto rendimento foi realizado conforme descrito de modo geral nos documentos WO2012/048340, WO2012/048341, WO2016/044227 e WO2016/176322. Os métodos de sequenciamento empregaram gotículas de uma única célula, com gotículas e códigos de barras moleculares, para identificar pares individuais de sequências de VH e VL de anticorpos ao nível de uma única célula para cada um de um grande número de células únicas presentes em uma população de células. As sequências de pares VH/VL de anticorpos foram selecionadas para síntese e os polinucleotídeos que codificam cada um dos candidatos emparelhados foram sintetizados como um fragmento Fv com uma única cadeia (scFv), em uma orientação de cadeia VH e VL (VH-VL) ou uma orientação VL-VH. B. Geração do Receptor Antigênico Quimérico Anti-ROR1 (CAR)

[001046] As sequências codificantes de scFv sintetizadas foram clonadas em uma construção polinucleotídica exemplificativa para gerar polinucleotídeos candidatos que codificam receptores antigênicos quiméricos (CARs) que contém os scFvs candidatos como os domínios de ligação a antígeno. Especificamente, as construções de CAR polinucleotídicas continham sequências de ácidos nucleicos que codificam um peptídeo sinalizador; um scFv anti-ROR1 candidato; um espaçador entre três espaçadores exemplificativos: um espaçador que contém uma dobradiça de CH2-CH3 de IgG4/IgG2 modificada (SEQ ID Nº: 194), um espaçador que contém uma dobradiça de IgG4-CH3 modificada (SEQ ID Nº: 138) ou um espaçador que contém uma região de dobradiça de IgG4 modificada (SEQ ID Nº: 135); um domínio transmembrana de CD28 humana; uma região de sinalização intracelular humana de 4-1BB; e uma região de sinalização intracelular de CD3-zeta humana. As construções também continham elementos de salto ribossômico T2A a jusante (SEQ ID Nº: 6) entre as sequências codificantes do CAR e sequências que codificam uma proteína fluorescente verde para uso como um marcador de transdução. Os polinucleotídeos que codificam os CARs foram clonados em um vetor de expressão lentiviral para transdução de células T. C. Avaliação de CARs Anti-ROR1 Candidatos

[001047] Aproximadamente 400 construções codificantes de CAR anti-ROR1 candidatos foram geradas conforme descrito acima e as preparações virais que contêm construções que codificam os vários CARs anti-ROR1 candidatos foram individualmente introduzidos em uma linhagem de células T Jurkat que contém um repórter com silenciamento (knock-in) de Nur77 (consulte, por exemplo, documento WO 2019/089982). A linhagem de células com silenciamento de Nur77 continha sequências de ácidos nucleicos que codificam uma molécula repórter (por exemplo, uma proteína fluorescente vermelha) com silenciamento no locus de Nur77 endógeno, o qual é um gene de resposta precoce induzida pela estimulação do sinal do receptor de células T e/ou através de moléculas que contêm motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptor (ITAM). As células repórter Jurkat foram avaliadas quanto à expressão do CAR na superfície celular, sinalização dependente de antígeno e independente de antígeno e reatividade cruzada com um antígeno ROR2 relacionado, mas distinto.

[001048] Após a transdução, as células repórter foram avaliadas quanto à expressão da proteína fluorescente vermelha após cocultura com células-alvo, incluindo células de leucemia mieloide humana K562 (ROR1 negativas), células K562 transduzidas para expressar um alto nível de ROR1 transduzidas, células K562 para expressar um baixo nível de ROR1 e células K562 que expressam o antígeno não específico ROR2. Para avaliar ainda mais a atividade independente do antígeno, as células repórter transduzidas foram cultivadas individualmente na ausência de células-alvo que expressam o antígeno. As células repórter transduzidas também foram avaliadas quanto à expressão de GFP (marcador de transdução) e quanto à ligação à ROR1-Fc recombinante solúvel (ROR1 humana solúvel fundida a uma região Fc de uma IgG).

[001049] As células repórter Jurkat transduzidas com CARs anti- ROR1 candidatos exibiram níveis variáveis de atividade específica para antígeno, conforme indicado pela expressão do repórter após cocultura com células-alvo que expressam ROR1 que expressam níveis altos ou baixos de ROR1; níveis variáveis de sinalização independente de antígeno (tônica), conforme indicado pela expressão do repórter após cocultura com células K562 que não expressam ROR1 ou após cultura sem células-alvo que expressam antígeno; níveis variáveis de atividade não específica, conforme indicado pela expressão do repórter após cocultura com células que expressam o antígeno não específico ROR2; e níveis variáveis de ligação à ROR1-Fc solúvel. Os CARs candidatos que exibiram alta atividade dependente do antígeno ROR1, baixa sinalização tônica, alta ligação à ROR1-Fc e baixa reatividade cruzada com a ROR2 foram selecionados para avaliação em células T humanas primárias. Exemplo 2: Avaliação da Expressão e Função de CAR em Células T Primárias

[001050] A expressão e a função de CARs anti-ROR1 selecionados, descritos no Exemplo 1, foram avaliadas em células T humanas primárias.

[001051] Células T CD4+ e CD8+ foram isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leucaferese de um de três doadores humanos. Células T CD4+ e CD8+ isoladas foram misturadas na proporção de aproximadamente 1:1, estimuladas e transduzidas com preparações lentivirais que codificam um dos CARs anti-ROR1 selecionados conforme descrito no Exemplo 1 (designados individualmente como um de A-Z e A1-M1) e cultivadas sob condições para expansão. Os três doadores humanos variaram quanto à porcentagem de subconjuntos de células T presentes na amostra de leucaferese (por exemplo, menos de 15% de células T não expostas, cerca de 40-60% de células T não expostas ou cerca de 20% de células T RA efetoras de memória (TEMRA)), representando variabilidade em subconjuntos de células T entre os indivíduos com doenças. Como controles, as células T primárias também foram estimuladas de forma similar e transduzidas com preparações lentivirais que codificam um CAR anti-CD19, um CAR anti-ROR1 de referência (um anticorpo de referência R12 derivado de coelho, scFv apresentado em SEQ ID Nº:

143) ou um dos dois CARs anti-ROR1 obtidos a partir de uma fonte diferente (designados N1, O1).

[001052] As células T primárias que expressam CAR foram estimuladas com ROR1-Fc ligada à placa e após 24 horas foram avaliadas por meio de citometria de fluxo quanto aos níveis intracelulares de IFN-, TNF-α e IL-2 através de coloração de citocina intracelular (ICS). A porcentagem de células que produzem IFN-, TNF- α e IL-2 e o nível de produção por célula (conforme determinado pela intensidade média de fluorescência (MFI)) foram determinados. Após a estimulação, as células T primárias que expressam CAR também foram coradas para a expressão na superfície celular de marcadores de ativação de células T (por exemplo, CD25), marcadores coestimuladores, marcadores indicativos de determinados subtipos de células T, tais como subtipos de células de memória, outros marcadores de células T, por exemplo, CD4 e CD8, ligação à ROR1-Fc e avaliadas quanto à expressão do marcador de transdução GFP.

[001053] Células T primárias que expressam CAR também foram estimuladas através de cocultura com uma linhagem de células de câncer de mama triplo-negativo que expressa ROR1 (MDA-MB-231 (ATCC HTB-26™), em uma proporção de efetor:alvo (E:T) de 1:4 e avaliadas quanto à citotoxicidade e produção de citocinas. A linhagem de células MDA-MB-231 foi marcada com NucLight Red (NLR) para permitir o rastreamento de células-alvo por meio de microscopia. A atividade citolítica foi avaliada ao medir a perda de células-alvo viáveis durante um período de entre 0 e 72 horas, conforme determinado por alterações no sinal fluorescente vermelho. A produção de citocinas IFN- , TNF-α e IL-2 no sobrenadante também foi avaliada.

[001054] Conforme mostrado na Figura 1, algumas células T que expressam CAR anti-ROR1 candidatos exibiram níveis de expressão intracelulares comparáveis ou maiores de IFN-, TNF-α ou IL-2 através de ICS em células T GFP+ CD4+ comparado com os níveis de cada citocina em células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência (R12), após 24 horas de estimulação com ROR1-Fc recombinante ligada à placa. No ensaio de cocultura com células-alvo MDA-MB-231 que expressam ROR1, alguns candidatos selecionados também exibiram secreção de IFN-, TNF-α ou IL-2 comparável ou maior comparado com a secreção de citocinas em células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência (R12), conforme mostrado na Figura 2. Menos CARs anti-ROR1 candidatos exibiram secreção de citocina comparável ou maior comparado com o CAR anti-ROR1 de referência (R12) no ensaio de cocultura comparado com o número de CARs anti- ROR1 candidatos que mostraram níveis de expressão de citocinas comparáveis ou maiores através de ICS.

[001055] Estes resultados mostraram respostas variadas por células T humanas primárias manipuladas para expressar os CARs anti-ROR1 candidatos após estimulação por antígeno recombinante ou células-alvo que expressam antígeno. Exemplo 3: Otimização de Polinucleotídeo de Receptores Antigênicos Quiméricos (CARs) Anti-ROR1 Selecionados

[001056] Dentre os CARs anti-ROR1 candidatos, seis (6) CARs candidatos foram ainda selecionados com base nos resultados da avaliação da atividade funcional em células T humanas primárias manipuladas a partir de 3 doadores diferentes, conforme descrito no Exemplo 2. As construções que codificam os CARs candidatos selecionados foram submetidas à otimização de códons (CO) e avaliadas quanto a potenciais sítios de emenda e modificadas de uma maneira conservadora, tal como ao não alterar a sequência de aminoácidos codificada, incluindo a eliminação de potenciais sítios de emenda previstos (SSE) na construção polinucleotídica que codifica o CAR. As construções foram ainda modificadas para substituir o marcador de transdução GFP por um receptor truncado como um marcador de transdução substituto para a expressão de CAR.

[001057] A Tabela E1 lista os identificadores de sequência (SEQ ID Nº:) que correspondem às sequências de aminoácidos (aa) dos domínios de ligação a antígeno dos CARs candidatos selecionados, incluindo sequências de aminoácidos de cadeia pesada variável (VH) e variável de cadeia leve (VL) correspondentes e regiões determinantes de complementaridade (CDRs, por numeração de Kabat) de cada cadeia. O identificador de sequência (SEQ ID Nº:) das cadeias VH e VL do CAR R12 de referência também é apresentado na Tabela E1. Os CARs exemplificativos continham um scFv com a orientação VH-VL. Tabela E1. Identificador de Sequência (SEQ ID Nº:) para CARs Candidatos Exemplificativos Ácido nucleico (códon otimizado e sítio Aminoácido (numeração de CDR de Kabat) de emenda eliminado)

CD CA Espa- CDR- CDR- CDR CDR- CDR- scF Espa- scFv # VH VL scFv VH R- VL R çador H1 H2 -L1 L2 L3 v çador H3 A ROR1-2 120 123 126 136 121 82 86 88 124 90 92 94 127 135 F ROR1-1 111 114 117 136 112 67 71 73 115 75 77 79 118 135 G ROR1-1 111 114 117 139 112 67 71 73 115 75 77 79 118 138 I ROR1-3 102 105 108 139 103 52 56 58 106 60 62 64 109 138 R ROR1-2 120 123 126 139 121 82 86 88 124 90 92 94 127 138 B1 ROR1-4 129 131 133 139 130 52 97 99 106 60 62 64 134 138 R12 142

[001058] Para avaliar a atividade de CARs codificados pelos polinucleotídeos, células T CD4+ e CD8+ isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade de amostras de leucaferese de dois (2) indivíduos doadores humanos foram estimuladas e transduzidas com preparações lentivirais que codificam um dos 6 CARs candidatos ou o CAR anti-ROR1 de referência (R12) como um controle.

[001059] As células que expressam os CARs candidatos foram cocultivadas com uma linhagem de células de câncer de pulmão de células não pequenas humana H1975 (ATCC CRL-5908™) marcada com NucLight Red (NLR) e a citotoxicidade e produção de citocinas foram avaliadas. A atividade citolítica foi avaliada ao medir a perda de células-alvo viáveis ao longo de um período entre 0 e 70 horas, conforme determinado por mudanças no sinal fluorescente vermelho. A produção das citocinas IFN-, TNF-α e IL-2 no sobrenadante também foi avaliada após 70 horas de cocultura. Como controles, as culturas de células-alvo apenas e coculturas de células simuladas (não expressam um CAR) com as células-alvo foram avaliadas.

[001060] Conforme mostrado nas Figuras 3A-3B, todos os CARs anti- ROR1 candidatos testados mostraram atividade citotóxica in vitro similar contra as células-alvo H1975. Conforme mostrado nas Figuras 4A-4B, todos os CAR anti-ROR1s candidatos testados produziram IFN-, TNF- α e IL-2 em vários níveis após cocultura in vitro com células-alvo H1975. Os resultados mostraram que, após a otimização de códons e eliminação do sítio de emenda, todas as construções de teste demonstraram citotoxicidade em cocultura com a linhagem de células H1975 (NSCLC). Dentre os CARs testados neste ensaio, células que expressam CAR-A anti-ROR1, CAR-F anti-ROR1 e CAR-G anti-ROR1 geralmente exibiram a maior produção de citocinas a qual, para as várias citocinas avaliadas, foi similar ou maior do que a produção de citocinas das células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência (R12). Em particular, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram a maior produção de IL-2 comparado com outros CARs anti- ROR1 candidatos e o CAR anti-ROR1 de referência (R12). Os resultados foram consistentes com a atividade funcional in vitro robusta dos CARs candidatos em cocultura com células-alvo H1975.

[001061] A produção de citocinas IL-2 no sobrenadante também foi avaliada após cocultura com outras linhagens de células-alvo que expressam ROR1, incluindo células de câncer de mama triplo-negativo humano MDA-MB-231, células de carcinoma epitelial pulmonar humano A549 e células de carcinoma dutal de mama epitelial humano BT-549, em uma proporção E:T de 1:4. Conforme mostrado na Figura 4C, todos os CARs anti-ROR1 candidatos testados produziram IL-2 em vários níveis após cocultura in vitro com células-alvo MDA-MB-231, A549 e BT-

549. Os resultados mostraram que as células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram a maior produção de IL-2 comparado com outros CARs anti-ROR1 candidatos e o CAR anti-ROR1 de referência (R12) quando cocultivadas com todas as várias células-alvo. Exemplo 4: Efeito Antitumoral de Células T que Expressam CAR Anti-ROR1 Após Transferência Adotiva In Vivo em um Modelo Animal

[001062] Os efeitos antitumorais de células T humanas primárias que expressam CARs anti-ROR1 manipulados exemplificativos foram avaliados ao monitorar tumores após a transferência adotiva de células em modelos animais portadores de tumor, incluindo um modelo de xenoenxerto de câncer de pulmão de células não pequenas humano H1975 e um modelo de xenoenxerto de câncer de mama triplo negativo humano MDA-MB-231. Os camundongos receberam uma preparação de células T humanas primárias manipuladas geradas a partir de um dos doadores humanos que expressam um dos CARs anti-ROR1 -A, -F, -G, -I, -R e -B1 conforme listado na Tabela E1 ou um CAR anti-ROR1 de referência (R12) e foram avaliados nos ensaios in vitro descritos no Exemplo 3. Modelo de Câncer de Pulmão de Células Não Pequenas H1975 Estudo 1

[001063] Oitenta (80) camundongos NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) foram, cada um, injetados através da via subcutânea com aproximadamente 5 x 106 células de câncer pulmonar de células não pequenas H1975. No dia 16 após o enxerto de tumor, cinco (5) camundongos em cada grupo receberam uma única injeção intravenosa (i.v.) de células T humanas primárias manipuladas que expressam um dos CARs anti-ROR1 -A, -F, -G, -I, -R e –B1 ou o CAR anti-ROR1 de referência (R12), na dose de 1 x 106 células (dose baixa) ou 3 x 106 células (dose alta). Como um controle, os camundongos receberam 3 x 106 células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados. A sobrevida, o volume do tumor e o número de células CAR+ em circulação no sangue foram avaliados ao longo de aproximadamente 65 dias.

[001064] A atividade antitumoral das células T CAR anti-ROR1+ transferidas de forma adotiva foi monitorada pela determinação do volume do tumor a cada 3 a 6 dias após a administração. A Figura 5A (dose baixa) e Figura 5B (dose alta) representam o volume médio do tumor de todos os camundongos tratados; nesta representação, as curvas do tumor foram encerradas após o primeiro camundongo de um grupo sucumbir à doença. Os resultados de todos os camundongos individuais são mostrados na Figura 5C (dose baixa) ou Figura 5D (dose alta). Conforme mostrado nas Figuras 5A-5D, células T humanas primárias que expressam os CARs anti-ROR1 candidatos mostraram níveis variáveis de atividade antitumoral no modelo de camundongo H1975. Células T humanas primárias que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram a maior atividade antitumoral após uma administração de alta dose, conforme mostrado pela redução no volume do tumor, dentre os CARs anti-ROR1 testados, incluindo o CAR anti-ROR1 de referência (R12). Especificamente, a administração de células que expressam CAR-F anti-ROR1 resultou na regressão média do tumor (abaixo da linha de base) até 52 dias comparado com 6 dias para as células que expressam o CAR de referência R12. 80% dos camundongos com tumor H1975 (4 de 5) tratados com a alta dose de células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram eliminação completa e durável do tumor, enquanto que nenhum animal tratado com a dose alta das células que expressam CAR de referência R12 exibiu eliminação completa do tumor. Na dose baixa, 3 de 5 animais que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram regressão do tumor abaixo da linha de base até 17 dias, enquanto que apenas 1 de 5 animais que receberam células que expressam CAR de referência R12 exibiram regressão tumoral abaixo da linha de base.

[001065] A sobrevida de camundongos tratados conforme descrito acima foi avaliada. As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier de cada um dos grupos são mostradas nas Figuras 6A-6B. Conforme mostrado, a administração de células T humanas primárias que expressam os CARs candidatos mostrou efeitos variados sobre sobrevida dos camundongos tratados. Neste modelo, camundongos que receberam células T humanas primárias que expressam CAR-F anti-ROR1 ou CAR-A anti-ROR1 exibiram uma sobrevida que foi similar ou mais longa do que a sobrevida do CAR anti-ROR1 de referência (R12) em uma ou ambas as doses testadas. Camundongos que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram a sobrevida mais longa, com mais de 100% dos camundongos sobrevivendo em 65 dias após o início da administração de células que expressam CAR na dose mais alta neste modelo.

[001066] O número médio de células que expressam CAR CD4+ e CD8+ no sangue de cada camundongo foi determinado no dia 10 e dia 24 após a administração de células T que expressam CAR, na dose baixa (Figuras 7A e 7B) ou alta dose (Figuras 7C e 7D). O número médio de células que expressam CAR CD3+ (CD45+ CD3+ CAR+) no sangue de cada camundongo também foi determinado no dia 10 e dia 24 após a administração de células T que expressam CAR, na dose baixa (Figura 7E) ou dose alta (Figura 7F). Conforme mostrado nas Figuras

7A-7F, um número médio de células T CAR+ mais alto foi observado em camundongos aos quais foi administrada uma dose mais alta de células T CAR+. As células T que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram expansão robusta após administração tanto nas doses baixas como altas neste modelo. Em 10 dias após a infusão, a contagem média de células que expressam CAR-F foi de 226,5 e 13,1 células/μl de sangue para as doses altas e baixas, respectivamente, comparado com a contagem média de células que expressam R12 de 7,6 e 2,5 células/μl de sangue para as doses altas e baixas, respectivamente. Em 24 dias após a infusão, a contagem média de células que expressam CAR-F foi de 471,8 e 44,0 células/μl de sangue nas doses altas e baixas, respectivamente, comparado com a contagem de células que expressam R12 de 27,6 e 4,2 células/μl de sangue para as doses altas e baixas, respectivamente.

2. Estudo 2

[001067] Em um estudo diferente usando o mesmo modelo de camundongo H1975, sessenta e quatro (64) camundongos com tumores H1975 enxertados foram avaliados com base na medição do volume do tumor e receberam uma única injeção intravenosa (i.v.) de células T humanas primárias manipuladas que expressam CAR-F anti- ROR1, CAR-A anti-ROR1 ou CAR anti-ROR1 de referência (R12), na dose de 1 x 106 células (dose baixa) ou 3 x 106 células (dose alta), oito (8) camundongos em cada grupo. Como um controle, os camundongos receberam 3 x 106 células que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados. O volume do tumor foi medido até aproximadamente 70 dias e o número de células T CAR+ em circulação e a sobrevida foram medidos até aproximadamente 40 dias.

[001068] As alterações no volume médio do tumor em camundongos que receberam CAR-F anti-ROR1, CAR-A ou o CAR R12 de referência nas doses baixa ou alta são mostradas nas Figuras 8A e 8B,

respectivamente. As mudanças no volume médio do tumor em camundongos individuais são mostradas na Figura 8C. A administração de células que expressam CAR-F anti-ROR1 resultou na regressão média do tumor (abaixo da linha de base) em 15 dias comparado com a administração de células que expressam CAR de referência R12, as quais não exibiram regressão média do tumor abaixo da linha de base (Figura 8B). 25% dos camundongos com tumor H1975 (2 de 8) tratados com a alta dose de células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram eliminação completa e durável do tumor, enquanto que 12,5% dos camundongos (1 de 8) tratados com 3 a dose alta das células que expressam CAR de referência R12 exibiram eliminação completa do tumor.

[001069] Os camundongos foram monitorados quanto ao crescimento do tumor e condição corporal pelo menos duas vezes por semana durante 69 dias após a transferência de células T CAR e foram sacrificados quando o volume do tumor excedeu 1.500 mm3, quando experimentavam ulceração do tumor, quando exibiram sinais de doença enxerto versus hospedeiro xenogênica grave (xGvHD) ou quando de outra forma moribundos. A sobrevida dos camundongos em cada grupo é mostrada nas Figuras 9A-9B. A sobrevida média em camundongos com xenoenxerto H1975 não tratados ou tratados simuladamente com células foi de 20 dias. A sobrevida mediana de animais que receberam a dose alta ou baixa de células T CAR R12 foi de 33 e 29 dias, respectivamente. A sobrevida média em camundongos que receberam o CAR-F anti-ROR1 foi de 37,5 dias com a dose baixa e a sobrevida média foi indeterminada com a dose alta, com 62,5% (5 de 8) animais vivos ao final do estudo.

[001070] A contagem média de células T CD4+ e CD8+ CAR+ por microlitro de sangue nos dias 7, 14 e 21 após a administração é mostrada nas Figuras 10A-10D. Consistente com os resultados do estudo descrito acima, a contagem média de células que expressam CAR-F foi mais alta comparado com a contagem média das outras células que expressam CAR, particularmente no dia 21 e/ou entre células T CD4+ (Figura 10A e Figura 10C) ou na dose alta (Figura 10C e Figura 10D). Em 7, 14 e 21 dias após administração da dose alta, as células T que expressam CAR-F anti-ROR1 mostraram contagens médias de 37,6, 105,6 e 46,6 células/μl de sangue, respectivamente, enquanto que células T que expressam CAR R12 de referência apresentaram contagens médias de 28,9, 39,8 e 20,3 células/μl de sangue. Nos dias 7, 14 e 21 após a administração da dose mais baixa, as células que expressam o CAR-F anti-ROR1 mostraram contagens médias de 2,2, 55,4 e 6,9 células/μl de sangue, respectivamente, enquanto que as células que expressam CAR R12 de referência apresentaram contagens médias de 3,1, 40,8 e 5,5 células/μl de sangue, respectivamente.

[001071] As Figuras 11A e 11B representam o número de células T CD4+ e CD8+ CAR+ presentes no tumor 14 dias após a administração. O número de células CAR+ no tumor no dia 14 foi similar entre os CARs testados.

3. Sumário

[001072] Conforme mostrado, camundongos com tumores de xenoenxerto de adenocarcinoma de pulmão H1975 que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram maior atividade antitumoral, conforme indicado pela redução do volume do tumor, sobrevida mais longa e número aumentado de células T CAR+ em circulação comparado com camundongos que receberam CAR anti- ROR1 R12 de referência. A atividade antitumoral, sobrevida e número de células T CAR+ foram similares em camundongos que receberam células que expressam CAR anti-ROR1-A comparado com células que expressam CAR anti-ROR1 R12.

B. Modelo de Câncer de Mama Triplo-Negativo MDA-MB-231

[001073] Sessenta e quatro (64) camundongos NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) foram, cada um, injetados por via subcutânea com 1 x 106 células MDA-MB-231 que expressam luciferase de vaga-lume. No dia 7 após o enxerto de tumor, oito (8) camundongos em cada grupo receberam uma única injeção intravenosa (i.v.) de células T humanas primárias manipuladas que expressam CAR- A anti-ROR1, CAR-F anti-ROR1 ou CAR anti-ROR1 de referência (R12), na dose de 1 x 106 células (dose baixa) ou 3 x 106 células (dose alta). Como um controle, os camundongos receberam 3 x 106 células T que não expressam um CAR (simulação) ou não foram tratados. Imagens de bioluminescência da carga tumoral e análise de citometria de fluxo do número de células CAR+ em circulação no sangue foram avaliadas ao longo de aproximadamente 100 dias.

[001074] A atividade antitumoral das células T que expressam CAR transferidas de forma adotiva foi monitorada por meio de imagiologia de bioluminescência a cada 4 a 7 dias após a administração das células T CAR. Para imagiologia de bioluminescência, os camundongos receberam injeções intraperitoneais (i.p.) de substrato de luciferina (PerkinElmer, Waltham, MA) ressuspenso em PBS (aproximadamente 150 mg/kg de peso corporal). Os camundongos foram anestesiados e fotografados essencialmente conforme descrito no documento WO2015/095895. O fluxo total (fóton/s) foi determinado em cada ponto de tempo.

[001075] Os resultados para imagiologia de bioluminescência de camundongos tratados e o fluxo total médio medido (p/s) são mostrados nas Figuras 12B e 13A, respectivamente, após a administração da dose baixa de células que expressam CAR; ou nas Figuras 12C e 13B, respectivamente, após a administração da alta dose de células que expressam CAR. A Figura 12A representa imagens de bioluminescência de camundongos não tratados ou camundongos que receberam células T simuladas. A Figura 13C representa o fluxo total medido (p/s) de camundongos individuais.

[001076] As alterações no volume médio do tumor na dose baixa ou dose alta são mostradas nas Figuras 14A e 14B, respectivamente. Conforme mostrado, camundongos que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1, tanto nas doses baixa como alta, foram observados geralmente com um menor grau de sinal de bioluminescência, indicando uma redução no crescimento do tumor ao longo do tempo e/ou um menor grau de crescimento do tumor nos animais tratados comparado com camundongos que receberam células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência (R12). Observou-se que camundongos que receberam células que expressam CAR anti-ROR1- A, tanto nas doses baixa como alta têm, em geral, sinal de bioluminescência similar comparado com camundongos que receberam células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência (R12).

[001077] As alterações no volume médio do tumor após a administração de células T que expressam CAR anti-ROR1 F e CAR R12 de referência, até um ponto de tempo adicional no mesmo estudo são mostradas para a dose alta e dose baixa nas Figuras 14C e 14D, respectivamente. Os resultados do volume do tumor para camundongos tratados individualmente na dose alta ou dose baixa para cada condição tratada são mostrados na Figura 14E. A administração de células que expressam CAR-F anti-ROR1 resultou na regressão média do tumor (abaixo da linha de base, conforme medido por BLI) para um mínimo de 35 dias, quando as medições BLI terminaram. O CAR R12 de referência não exibiu regressão média do tumor abaixo da linha de base, seja na dose alta (Figuras 14C e 14E) ou na dose baixa (Figuras 14D e 14E). Pelo volume de tumor subcutâneo, 50% dos camundongos (4 de 8) que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1 na dose alta exibiram eliminação completa e durável do tumor, enquanto que apenas 12,5% dos camundongos (1 de 8) tratados com a dose alta de células que expressam R12 CAR exibiram eliminação completa do tumor (Figuras 14C e 14E). Na dose baixa, 25% (2 de 8) dos animais tratados com células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram eliminação completa do tumor, enquanto que nenhum animal tratado com células que expressam R12 CAR de referência na dose baixa resultou na eliminação completa do tumor (Figuras 14D e 14E).

[001078] Os camundongos foram monitorados quanto ao crescimento do tumor e condição corporal pelo menos duas vezes por semana durante 97 dias após a transferência de células T CAR e foram sacrificados quando o volume do tumor excedeu 1500 mm3, quando experimentaram ulceração do tumor, quando mostraram sinais de xGvHD grave (por exemplo, dermatite grave e/ou perda de peso de 20% atribuída à xGvHD) ou quando de outra forma moribundos. A sobrevida de camundongos tratados conforme descrito acima foi avaliada. As curvas de sobrevivência de Kaplan-Meier de cada um dos grupos são mostradas nas Figuras 15A-15B. A sobrevida média para camundongos não tratados foi de 61 dias. Na dose alta, a sobrevida média foi indeterminada para camundongos que receberam células que expressam CAR-F anti-ROR1, células que expressam CAR R12 de referência ou células tratadas simuladamente, uma vez que 62,5% (5 de 8) dos animais que receberam células tratadas simuladamente sobreviveram ao final do estudo e não houve mortes em nenhum dos grupos aos quais foram administradas células CAR T (Figura 15A). Na dose baixa, a sobrevida média para os camundongos que receberam células que expressam CAR R12 na dose baixa foi de 96 dias, com apenas 3 de 8 animais vivos ao final do estudo, enquanto que 100% de sobrevida (8 de 8) foi observada em camundongos que receberam células que expressam CAR-F (Figura 15B).

[001079] O número médio de células que expressam CAR CD4+ e CD8+ no sangue do animal foi determinado nos dias 7, 14, 21 e 30 após a administração de células T que expressam CAR na dose baixa (Figuras 16A-16B) ou dose elevada (Figuras 16C-16D). O número médio de células que expressam CD3+ CAR (CD45+ CD3+ CAR+) no sangue de cada camundongo que recebeu células que expressam CAR- F anti-ROR1 ou o CAR R12 de referência também foi determinado nos dias 7, 14, 21 e 30 são mostrados na Figura. 16E. Na dose alta, a contagem média de células T que expressam CAR-F foi 5,0, 19,4, 50,7 e 119,2 células/μl de sangue para os dias 7, 14, 21 e 30, respectivamente, comparado com a contagem média para células T que expressam R12 de 6,0, 5,4, 3,9 e 5,4 células/μl de sangue. A administração da dose baixa também mostrou uma expansão similar, com a contagem média de células que expressam CAR-F de 1,4, 4,9, 20,9 e 58,5 células/μl de sangue para os dias 7, 14, 21 e 30, respectivamente comparado com a contagem média de células que expressam R12 de 1,3, 0,6, 0,9 e 0,4 células/μl de sangue. Conforme mostrado, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram alta expansão no modelo de camundongo MDA-MB-231, quando administradas em doses altas e baixas. Em particular, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 exibiram uma expansão substancialmente elevada, começando no dia 14 continuando até o dia 30 após a administração. C. Conclusão

[001080] Os resultados suportaram alta atividade antitumoral e expansão de células T e sobrevida prolongada em camundongos que receberam CAR-F anti-ROR1, usando dois modelos diferentes de tumor de camundongo in vivo, incluindo o modelo de tumor de xenoenxerto de câncer de mama triplo-negativo. Pela maioria das medições, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 mostraram melhorias comparado com o anti-ROR1 R12 de referência.

Exemplo 5: Células T que Expressam CAR Anti-ROR1 Geradas a Partir de Seres Humanos com Leucemia Linfocítica Crônica (CLL)

[001081] Células T primárias que expressam CAR anti-ROR1 manipuladas foram geradas a partir de seres humanos com leucemia linfocítica crônica (CLL) e avaliadas quanto à citotoxicidade e produção de citocinas in vitro. Geração de Células Que Expressam CAR Anti-ROR1 a Partir de Indivíduos Com CLL

[001082] Células T primárias de seres humanos com leucemia linfocítica crônica (CLL) foram manipuladas para expressar o CAR anti- ROR1 exemplificativo, CAR-F anti-ROR1, descrito no Exemplo 3 acima.

[001083] As células T CD4+ e CD8+ foram isoladas por meio de enriquecimento com base em imunoafinidade a partir de amostras de leucaferese de um de dois doadores humanos com CLL. Células T CD4+ e CD8+ isoladas foram misturadas na proporção de aproximada- mente 1:1, estimuladas e transduzidas com preparações lentivirais que codificam CAR-F anti-ROR1 conforme descrito no Exemplo 3, um CAR anti-CD19 como um controle ou um CAR anti-ROR1 de referência (R12) e cultivadas sob condições de expansão. As amostras de leucaferese depletadas de CD4 e CD8 foram avaliadas quanto aos níveis de expressão de CD19 e ROR1 e usadas como população de células-alvo nos ensaios. Para um dos indivíduos com CLL (doador CLL 1), o nível de expressão de ROR1 era baixo, quase tão baixo quanto uma linhagem de células de leucemia mieloide crônica humana K562 (CML) manipulada para expressar ROR1 em resposta ao derivado de tetraciclina doxiciclina, sem adição de doxiciclina (consulte Exemplo 9). B. Atividade Citolítica e Produção de Citocinas

[001084] A atividade citolítica das células T primárias de indivíduos com CLL que expressam o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo foi avaliada.

[001085] Em um experimento, as células-alvo obtidas dos indivíduos (amostras de leucaferese depletadas de CD4 e CD8) foram marcadas com reagente de marcação celular Rapid Red para permitir o rastreamento de células-alvo por meio de microscopia e incubadas com as células que expressam CAR em uma proporção E:T de 2,5:1 e 0,25:1 ou cultivadas com células simuladas ou cultivadas individualmente como controles. A atividade citolítica foi avaliada ao medir a perda do sinal fluorescente vermelho ao longo de um período entre 0 e 60 horas comparado com os controles.

[001086] Conforme mostrado na Figura 17, para ambos os doadores e ambas as proporções E:T, o sinal fluorescente vermelho das células- alvo marcadas foi perdido mais rapidamente quando cocultivadas com células que expressam CAR comparado com a perda esperada pela divisão celular normal observada nas células-alvo individualmente ou cocultura com células simuladas transduzidas. Uma maior perda de células-alvo foi observada após cocultura das células-alvo com células que expressam CAR-F anti-ROR1 comparado com células que expressam anti-ROR1 R12 e foi comparável à perda de células-alvo após cocultura com células que expressam CAR anti-CD19.

[001087] Em um experimento diferente, a perda de células-alvo que expressam ROR1 foi avaliada por meio de citometria de fluxo. Para isto, as células que expressam CAR manipuladas foram marcadas com reagente de proliferação celular CellTrace™ Violet (CTV) e cocultivadas com células-alvo de indivíduos com CLL em uma proporção E:T de 2,5:1 e 0,25:1. No dia 4, os sobrenadantes foram coletados para avaliar a produção de citocinas (IFN-, TNF-α e IL-2) e as células foram coletadas para avaliar os níveis de CTV por meio de citometria de fluxo.

[001088] Conforme mostrado na Figura 18A, o número de células-alvo ROR1+ cocultivadas com células que expressam CAR-F anti-ROR1 geradas a partir de indivíduos com CLL foi substancialmente reduzido comparado com células-alvo cultivadas individualmente ou células-alvo cocultivadas com células T transduzidas simuladamente. A redução foi maior do que a redução observada com uma cocultura com células que expressam R12, em ambas as proporções E:T para ambos os doadores. Conforme mostrado nas Figuras 18B-18C, células que expressam CAR- F anti-ROR1 geradas a partir de indivíduos com CLL divididos (Figura 18B) e produziram IFN-, TNF-α e IL-2 (Figura 18C) em uma cocultura com células-alvo do mesmo indivíduo. A proliferação e a produção de citocinas foram similares ou superiores àquelas das células que expressam R12 testadas sob a mesma condição.

[001089] Os resultados foram consistentes com uma observação de que células T manipuladas que expressam o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo foram geradas com sucesso a partir de células T primárias de seres humanos que têm CLL. As células eram viáveis, exibiram atividade citolítica, produziram citocinas e proliferaram quando incubadas com células-alvo que expressam ROR1 do mesmo indivíduo, em alguns casos, mesmo quando as células-alvo expressaram baixos níveis de ROR1. Os resultados apoiaram que as células que expressam o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo podem ser geradas com células de indivíduos com CLL, relatado anteriormente como tendo dificuldades em gerar células que expressam CAR manipuladas (consulte, por exemplo, Gorgun et al., J Clin Invest. Julho de 2005; 115 (7): 1797-805; Ramsay et al., J Clin Invest. Julho de 2008; 118 (7): 2427-37; Riches et al., Discov Med. dezembro de 2013; 16 (90): 295- 302). Os resultados também mostraram que as células que expressam CARs anti-ROR1 exemplificativos são eficazes em matar células-alvo que expressam até mesmo níveis baixos de ROR1, demonstrando uma alta sensibilidade. Pela maioria das medições, as células que expressam CAR-F anti- ROR1 mostraram melhorias comparado com células que expressam o CAR anti-ROR1 de referência R12.

Exemplo 6: Efeito Antitumoral de Células T que Expressam CAR Anti-ROR1 Após Transferência Adotiva In Vivo em um Modelo Animal de Malignidade de Células B

[001090] Os efeitos antitumorais de células T humanas primárias que expressam CAR anti-ROR1 (CAR+) manipuladas exemplificativas foram avaliados ao monitorar tumores após a transferência adotiva de células em um modelo animal de uma malignidade de células B humanas disseminada. Os camundongos receberam uma preparação de células T humanas primárias manipuladas geradas a partir de doadores humanos que expressam um CAR-F anti-ROR1 exemplificativo comparado com um CAR anti-ROR1 de referência (R12) ou um CAR anti-CD19, conforme descrito no Exemplo 3 acima.

[001091] Camundongos NOD.Cg.PrkdcscidIL2rgtm1Wjl/SzJ (NSG) foram injetados por via intravenosa com 1,0 x 106 células de linfoma de células do manto humano (MCL) JeKo-1 que expressam luciferase de vaga- lume e proteína fluorescente verde (FfLuc-GFP) no dia 0. A carga tumoral foi avaliada através de imagiologia bioluminescente (BLI), através de detecção de bioluminescência minutos após os camundon- gos serem injetados intraperitonealmente com 3 mg de D-Luciferina. No dia 6, os camundongos foram randomizados em grupos para equilibrar a carga tumoral. No dia 7, os camundongos receberam células T humanas primárias manipuladas geradas a partir de um doador humano que expressa o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo ou o CAR anti-ROR1 de referência (R12) em uma dose de 1 x 106 células (dose baixa) ou 3 x 106 células (alta dose) por camundongo. Como controles, os camundongos não receberam quaisquer células T ou receberam 3 x 106 células T tratadas simuladamente do mesmo doador. Os camundongos foram monitorados quanto à carga tumoral e sobrevida durante 139 dias após a administração. O número de células T CAR+ em circulação foi monitorado durante 28 dias após a administração.

[001092] A Figura 19A (dose alta) e Figura 19B (dose baixa) representa o volume médio do tumor de todos os camundongos tratados. Os resultados de todos os camundongos individuais são mostrados na Figura 19C (dose alta) ou Figura 19D (dose baixa). Conforme mostrado nas Figuras 19A e 19C, camundongos com xenoenxerto de MCL JeKo-1 que receberam 3 x 106 (dose alta) células que expressam CAR-F anti-ROR1 ou células CAR anti-CD19+ tiveram uma regressão média do tumor (abaixo da linha de base) por pelo menos 111 dias (o último dia de medição de BLI). Comparado, os camundongos que receberam as células CAR R12+ exibiram regressão média do tumor por apenas até 27 dias. Conforme mostrado nas Figuras 19B e 19D, na dose mais baixa de 1 x 106 células, a administração de células que expressam CAR-F resultou na regressão média do tumor durante todo o curso do estudo (até 111 dias). Comparado, os camundongos que receberam as células CAR+ anti-CD19 exibiram regressão média do tumor por até 36 dias e nenhuma regressão média do tumor foi observada para os camundongos que receberam o CAR anti-ROR1 de referência R12.

[001093] Os camundongos foram monitorados quanto à condição corporal pelo menos duas vezes por semana durante 139 dias após a administração das células T CAR e foram sacrificados quando moribundos ou exibindo sinais de doença do enxerto versus hospedeiro xenogênica grave (xGvHD). As curvas de sobrevivência de Kaplan- Meier de cada um dos grupos são mostradas na Figura 20A (dose alta) e Figura 20B (dose baixa). Os camundongos com xenoenxerto JeKo-1 não tratados tiveram uma sobrevida média de 26,5 dias. Os animais que receberam 3 x 106 células tratadas simuladamente tiveram uma sobrevida média de 56 dias. A sobrevida média não pôde ser determinada para todos os animais tratados com qualquer dose de células T que expressam CAR-F anti-ROR1, tal como 75% (6 de 8) dos animais que receberam a dose alta (3 x 106 células; Figura 20A) ou a dose baixa (1 x 106 células; Figura 20B) permaneceram vivos ao final do estudo. Particularmente, as mortes observadas nos camundongos que receberam CAR-F anti-ROR1 foram associadas à xGvHD em vez da carga de linfoma. A sobrevida média foi de 70 e 106 dias para animais que receberam células T CAR R12+ nas doses baixas e altas, respectivamente. A sobrevida média não pôde ser determinada para camundongos que receberam células T CAR anti-CD19+ na dose baixa (7 de 8 animais sobreviveram até o final do estudo) e a sobrevida média foi de 139 dias na dose alta (4 de 8 animais sobreviveram). As mortes neste grupo também foram associadas principalmente à xGvHD, em vez da carga de linfoma.

[001094] O número médio de células T CAR+ no sangue periférico de cada camundongo foi avaliado por meio de citometria de fluxo nos dias 7, 14, 21 e 28 após a administração de células T CAR+. Conforme mostrado na Figura 21, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 mostraram a maior concentração de células T CAR+ em circulação no sangue periférico no dia 21 ou dia 28 após a administração em ambos os níveis de dose examinados. Na dose alta, as células T CAR anti- CD19+ demonstraram expansão substancialmente maior (172,5 células/µl de sangue) no dia 14 após a administração de células que expressam CAR-F anti-ROR1 (77,0 células/µl de sangue) ou CAR R12 (25,0 células/µl de sangue). No entanto, no dia 21, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 aumentaram substancialmente as contagens (140,9 células/µl de sangue) comparado com células CAR R12+ (0,3 células/µl de sangue) e CAR anti-CD19+ (17,2 células/µl de sangue)) na dose baixa. Expansão aumentada similar foi observada nas células que expressam CAR-F anti-ROR1 em alta dose, com 392,7 células/µl de sangue comparado com 10,2 e 66,8 células/µl de sangue nas células CAR R12+ e CAR anti-CD19+, respectivamente. Esta melhoria na expansão também foi observada no dia 28 após a administração das células.

[001095] Os resultados apoiaram alta atividade antitumoral, expansão de células T aprimorada e sobrevida prolongada de camundongos que receberam o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo no modelo de xenoenxerto de MCL em camundongos. Pela maioria das medições, as células que expressam CAR-F anti-ROR1 mostraram melhorias substanciais comparado com o CAR anti-ROR1 de referência R12 e mostraram atividade similar ou aprimorada contra MCL comparado com células que expressam um CAR anti-CD19. Exemplo 7: Mapeamento de Epitopo

[001096] Os epitopos reconhecidos pelo domínio de ligação a antígeno anti-ROR1 exemplificativo contido no CAR-F e CAR-G anti- ROR1 exemplificativos (sequência do scFv apresentada em SEQ ID Nº: 118) foram avaliados usando mapeamento de epitopo descontínuo completo por Chemical Linkage of Peptides on Scaffolds (CLIPS; Pepscan Presto B.V., Lelystad, Países Baixos; consulte, por exemplo, Timmerman et al., (2007) J. Mol. Recognit. 20: 283-329). O mapeamento foi realizado usando clones de scFv anti-ROR1 nos quais o scFv foi fundido com uma Fc humana (scFv-hFc; IgG1) ou uma Fc de camundongo (scFv-mFc).

[001097] Os scFv-mFc e scFv-hFc anti-ROR1 exemplificativos foram expressos e purificados a partir de células HEK293 transfectadas transitoriamente e avaliados por meio de eletroforese em gel de poliacrilamida e dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) e cromatografia analítica de exclusão por tamanho (SEC). O domínio extracelular de ROR1 (ROR1 ECD) foi expresso de forma recombinante e purificado a partir de células HEK293 transfectadas transitoriamente e avaliado através de SDS-PAGE e SEC. Os resultados mostraram uma composição altamente pura de scFv-hFc, scFv-mFc anti-ROR1 e

ROR1-ECD (> 99% puro, < 1 multímeros de elevado peso molecular para scFv-hFc e ROR1-ECD; > 97% puro, < 3% de multímeros de elevado peso molecular para scFv-mFc).

[001098] Bibliotecas de peptídeos sintéticos lineares e estruturados de vários comprimentos foram geradas a partir de ROR1 humana (por exemplo, apresentadas em SEQ ID Nº: 144-146), cada um deslocado por um resíduo de aminoácido. A biblioteca de peptídeos estruturada foi preparada para fixar peptídeos de diferentes comprimentos em estruturas 3D definidas, incluindo qualquer alça única, alça dupla, segmento α-helicoidal e β giro de ROR1. As bibliotecas foram organizadas em mapas combinatórios para produzir combinações de alças e peptídeos lineares que representam o epitopo conformacional e/ou descontínuo de ROR1 de uma maneira não polarizada.

[001099] Um mapa térmico com base em ELISA foi gerado no indivíduo e peptídeos lineares e estruturados combinados de ROR1 com os ligantes. Foi realizada a substituição iterativa de alanina dupla de todos os resíduos dentro dos peptídeos que mostraram ligação positiva (para resíduos de alanina de tipo selvagem, a glicina foi substituída). Os aminoácidos que resultaram em uma redução de 70% ou mais na ligação quando substituídos por alanina foram determinados como componentes centrais do epitopo.

[001100] A análise de mapeamento de epitopo mostrou que um scFv- hFC do domínio de ligação a antígeno anti-ROR1 exemplificativo contido no CAR-F e CAR-G anti-ROR1 exemplificativos (sequência do scFv apresentada em SEQ ID Nº: 118) se ligou a um epitopo descontínuo dependente da conformação principalmente centralizado em torno dos aminoácidos FRSTIYGSRLRIRNL (apresentada em SEQ ID Nº: 199; correspondendo aos resíduos 78-92 da sequência de ROR1 humana apresentada em SEQ ID Nº: 144). A Tabela E2 apresenta os epitopos identificados a partir do mapeamento de epitopos. A maior parte da ligação observada foi a combinações com partes de FRSTIYGSRLRIRNL (SEQ ID Nº: 199), consistente com alguma cooperatividade entre diferentes regiões do epitopo. Tabela E2. Epitopos de ligação do domínio de ligação a antígeno anti- ROR1 exemplificativo Resíduo de aminoácido

SEQ ID (com referência a SEQ ID Sequência Nº: Nº:144) 5-17 LSVSAELVPTSSW 200 49-62 HCKVSGNPPPTIRW 201 62-87 WFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRL* 202 111-119 VSSTGVLFV 203 117-129 LFVKFGPPPTASP 204 133-143 DEYEEDGFCQP 205 142-155 QPYRGIACARFIGN* 206 191-204 SQFAIPSLCHYAFP 207 202-213 AFPYCDETSSVP 208 228-247 NVLCQTEYIFARSNPMILMR* 209 248-259 LKLPNCEDLPQP 210 259-273 PESPEAANCIRIGIP 211 290-303 VDYRGTVSVTKSGR 212 310-323 SQYPHTHTFTALRF 213 366-380 DSKEKNKMEILYILV 214

[001101] Os resíduos centrais, determinados por ≥ 70% de redução na ligação após substituição de alanina dupla, estão sublinhados e em negrito. *provavelmente contém várias partes menores do epitopo. Exemplo 8: Afinidade e Cinética de Ligação de Domínios de Ligação a Antígeno Anti-ROR1

[001102] A afinidade de ligação e a cinética dos domínios de ligação a antígeno anti-ROR1 exemplificativos para o antígeno ROR1 foram avaliadas por meio de ressonância plasmônica de superfície (SPR). Afinidade e Cinética de Ligação

[001103] Constante de dissociação em equilíbrio (KD), constante de taxa de associação (ka ou kon) e constante de taxa de dissociação (kd ou koff) da interação entre a ROR1 humana recombinante e o domínio de ligação à ROR1 de CARs exemplificativos foram determinadas por meio de ressonância plasmônica de superfície (SPR) usando o instrumento Biacore™ T200 e o software de avaliação Biacore™ T200 v3. Especificamente, o domínio de ligação de scFv de CARs conforme descrito no Exemplo 3 e Tabela E1 acima, incluindo scFv ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 e ROR1-4 (apresentados em SEQ ID Nºs: 118, 127, 109 e 134, respectivamente; os domínios de ligação de scFv de CAR- A, CAR-F, CAR-G, CAR-I, CAR-R e CAR-B1) e o domínio de ligação de antígeno do CAR R12 de referência (SEQ ID Nº: 142), foram avaliados.

[001104] Domínios de ligação de scFv anti-ROR1 gerados de forma recombinante e domínio extracelular de ROR1 com um marcador 6xHis C-terminal (ROR1 ECD 6xHis) foram usados para análises de afinidade e cinética de ligação. Os domínios de ligação foram construídos como uma fusão do scFv com a porção Fc da IgG2a de cadeia pesada de imunoglobulina de murino (scFv-mFc). O domínio de IgG2a de murino continha 4 mutações pontuais para diminuir a ligação ao receptor Fc e ao complemento. A concentração ativa de ROR1 ECD 6xHis foi determinada através de um ensaio de análise de concentração isenta de calibração (CFCA).

[001105] Para SPR, um chip de superfície de captura anti-IgG de camundongo (kit Mouse Antibody Capture tipo 2, catálogo número 29215281 e Series S Sensor Chip CM5, catálogo número 29104988, GE Healthcare Bio-Sciences) foi usado para capturar os domínios de ligação do scFv-mFc anti-ROR1 em uma célula de fluxo, enquanto que outra célula de fluxo foi deixada em branco para referência. A cinética multiciclo foi implementada por injeções subsequentes de ROR1 humana recombinante em concentrações de 183, 61,0, 20,33, 6,78 e 2,26 nM com dissociação variável sobre as células de fluxo ativa e de referência.

[001106] ROR1 ECD foi injetado sobre o chip ligado ao scFv-mFc em múltiplas concentrações usando cinética multiciclo. Um modelo monovalente a 1:1 foi usado para analisar os sensogramas e calcular a afinidade e as cinéticas de interação medidas.

[001107] As Figuras 22A-22E representam os sensogramas de referência dupla para os scFvs anti-ROR1 ROR1-1 (SEQ ID Nº: 118; Figura 22A), ROR1-2 (SEQ ID Nº: 127; Figura 22B), ROR1-3 (SEQ ID Nº: 109; Figura 22C) e ROR1-4 (SEQ ID Nº: 134; Figura 22D) e o domínio de ligação a antígeno scFv do CAR R12 de referência (SEQ ID Nº: 142; Figura 22E). A afinidade (constante de dissociação em equilíbrio, KD) da interação entre os domínios de ligação a scFv anti- ROR1 e ROR1 são apresentados na Tabela E3. A afinidade (constante de dissociação em equilíbrio, KD) da interação entre o scFv anti-ROR1 ROR1-1 (domínio de ligação de CAR-F) e ROR1 foi medida como sendo 42 nM e a constante de taxa de associação cinética (ka ou kon; taxa de associação) e constante de taxa de dissociação (kd ou koff; taxa de dissociação) da interação foram observadas como sendo ka = 1,2 x 105 1/Ms e kd = 5,0 x 10-3 1/s, respectivamente. O scFv anti-ROR1 ROR1-1 (domínio de ligação de CAR-F) exibiu uma KD substancialmente maior (menor afinidade) e taxa de dissociação mais rápida (kd ou koff) comparado com o domínio de ligação do scFv de referência R12. O scFv anti-ROR1 ROR1-2 (domínio de ligação de CAR-A) exibiu uma KD substancialmente menor (maior afinidade) e taxa de dissociação mais lenta (kd ou koff) comparado com o domínio de ligação do scFv de referência R12.

Tabela E3. Afinidade e cinética de ligação de domínios de ligação anti- ROR1 exemplificativos scFv # R12 ROR1-1 ROR1-2 ROR1-3 ROR1-4 SEQ ID Nº: 142 118 127 134 109 CAR R12 CAR-F, CAR-G CAR-A, CAR-R CAR-B1 CAR-I KD (M) 9,420E-10 4,20E-08 9,57E-11 1,38E-08 9,24E-10 ka ou kon (1/Ms) 6,14E+05 1,19E+05 4,12E+05 1,60E+04 1,17E+04 kd ou koff (1/s) 5,79E-04 5,00E-03 3,94E-05 2,20E-04 1,08E-05 B. Compartimentalização de Epitopos

[001108] SPR foi usada na análise de compartimentalização (binning) de epitopos para comparar as regiões de ligação ao epitopo reconhecidas pelos domínios de ligação à ROR1 exemplificativos comparado com o epitopo do domínio de ligação do scFv anti-ROR1 de referência R12. O domínio de ligação do scFv de referência R12 foi imobilizado sobre a superfície, ROR1 ECD 6xHis foi introduzida e ligada ao domínio de ligação de R12 e domínios de ligação de scFv recombinante de CARs anti-ROR1 exemplificativos, incluindo scFv ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 e ROR1-4 (apresentado em SEQ ID Nºs: 118, 127, 109 e 134, respectivamente; os domínios de ligação de scFv CAR-A, CAR-F, CAR-G, CAR-I, CAR-R e CAR-B1) foram injetados para avaliar se o scFv recombinante se ligou a regiões da ROR1 similares ao domínio de ligação de R12. Os resultados mostraram que houve competição de ligação do scFv R12 ao ECD de ROR1 com os domínios de ligação de scFv anti-ROR1 candidatos ROR1-1, ROR1-2, ROR1-3 e ROR1-4, consistente com uma observação de que os domínios de ligação de scFvs candidatos podem se ligar a um epitopo ou região sobreposta àquela ligada pelo domínio de ligação de R12.

Exemplo 9: Avaliação da Sensibilidade ao Antígeno de Domínios de Ligação a Antígeno Anti-ROR1

[001109] A sensibilidade ao antígeno de células T que expressam o CAR-F anti-ROR1 exemplificativo e o CAR anti-ROR1 R12 de referência foi avaliada quanto à capacidade de produzir citocinas e atividade citotóxica após estimulação usando uma linhagem de células que expressa ROR1 com níveis de expressão reguláveis de ROR1.

[001110] A linhagem de células de leucemia mieloide humana K562 foi manipulada para expressar ROR1 em resposta ao derivado de tetraciclina, doxiciclina (TetOn). Comparado com as linhagens de células que expressam ROR1 endogenamente, a linhagem de células manipulada K562-ROR1-TetOn expressou níveis muito baixos de ROR1 na linha de base, mesmo na ausência de tratamento com doxiciclina.

[001111] 2 x 104 células K562-ROR1-TetOn ou células-alvo K562 precursoras foram transduzidas para expressar de forma estável IncuCyte NucLight Red. Os meios de cultura R10 (RPMI 1640; 1X BME; 1X NEAA, 1X NaPyr; FBS a 10% termicamente inativado) foram adicionados a uma placa de fundo plano com 96 cavidades opticamente transparente. As células T que expressam CAR descongeladas foram ressuspensas em uma concentração de 1,6 x 106 células CAR+/mL em meio R10. Células T CAR foram, então, adicionadas às células-alvo K562 para uma contagem final de células T CAR+ de 8 x 104 células por cavidade, resultando em uma proporção E:T de 4:1. O cloridrato de doxiciclina foi diluído para as concentrações desejadas (2 ng/mL - 512 ng/mL) usando DMSO e adicionado às misturas de células T CAR/células-alvo em triplicatas técnicas. As placas foram incubadas a 37°C/5% de CO2 durante 72 horas com medição periódica da fluorescência NucLight Red usando o IncuCyte.

[001112] Conforme mostrado na Figura 23, a expressão de ROR1 em células K562-ROR1-TetOn após incubação com doxiciclina apenas mostrou que a expressão de ROR1 aumentou com o aumento da concentração de doxiciclina. Após 72 horas de incubação, os sobrenadantes foram coletados de cavidades que contêm células T que expressam CAR-F anti-ROR1 ou o CAR de referência R12 que foram misturados com células-alvo K562-ROR1-TetOn que expressam quantidades crescentes de ROR1. Conforme mostrado na Figura 24, células T que expressam CAR-F resultaram em produção equivalente ou maior de IFNγ, IL-2 e TNFα comparado com células que expressam R12, em todos os níveis de expressão de ROR1 testados. Conforme mostrado nas Figuras 25A-25B, a análise da função citotóxica, conforme determinado pela perda de sinal fluorescente vermelho ao longo do tempo, mostrou que as células que expressam CAR-F responderam a níveis mais baixos de ROR1 de forma mais eficaz comparado com células que expressam R12, indicando maior sensibilidade antigênica sem a perda de especificidade, conforme demonstrado pela falta de resposta à linhagem de células precursora. Exemplo 10: Avaliação de Especificidade da Ligação

[001113] A ligação potencial fora do alvo e a reatividade cruzada entre espécies do domínio de ligação do CAR-F anti-ROR1 exemplificativo foram avaliadas através de vários métodos. Matriz de Proteínas de Membrana Plasmática

[001114] A ligação fora do alvo foi avaliada com base em uma matriz de proteínas da membrana plasmática. Esta plataforma com base em chip contém mais de 4400 grupos de células geneticamente modificadas para superexpressar proteínas individuais da membrana extracelular humana que, juntas, representam mais de 75% do proteoma extracelular humano. O painel também inclui mais de 1000 alvos de proteína secretada agrupados. Um scFv-Fc (sequência do scFv apresentada em SEQ ID Nº: 118) foi gerado e usado para imuno-

histoquímica (IHC) contra as células na matriz. A triagem de confirmação foi realizada. O scFv foi determinado como sendo altamente seletivo para ROR1, sem interações específicas adicionais identificadas, incluindo ROR2. Estes resultados indicam baixo risco de atividade fora do alvo das células que expressam CAR-F anti-ROR1. B. Reatividade Cruzada Entre Espécies

[001115] A Tabela E4 mostra a homologia do domínio extracelular (ECD) para ROR1 entre seres humanos (Homo sapiens), macacos Rhesus (Macaca mulatta), macacos cynomolgus (Macaca fasicularis) e camundongos (Mus musculus). ROR1 é 100% conservada no ECD entre primatas humanos e não humanos. Tabela E4. Homologia do ECD de ROR1 entre espécies Macaca Macaca Mus mulatta fasicularis musculus Homo 100% 100% 98,7% sapiens Domínio extracelular a.a. 30-406 de ROR1 humana Homo sapiens: Uniprot Q01973 (apresentada em SEQ ID Nº: 214) Macaca mulatta: Uniprot F6RUP2 (apresentada em SEQ ID Nº: 215) Macaca fasicularis: Uniprot A0A2K5WTX7 (apresentada em SEQ ID Nº: 216), Uniprot A0A2K5WTX4 (apresentada em SEQ ID Nº: 217) Mus musculus: Uniprot Q9Z139 (apresentada em SEQ ID Nº: 218)

[001116] A reatividade cruzada entre espécies de CAR-F anti-ROR1 e CAR R12 foi avaliada por meio de cocultura de uma linhagem de células T Jurkat manipulada que contém um repórter Nur77-tdTomato e que expressam o CAR-F anti-ROR1 ou o CAR de referência R12 (conforme descrito acima no Exemplo 1.C), com fibroblastos de murino CT26 manipulados para expressar uma ROR1 de camundongo (CT26- mROR1), células CT26 manipuladas para expressar uma proteína ROR1 humana (CT26-hROR1) ou células CT26 não modificadas ou células de leucemia mieloide humana K562 não modificadas e para avaliar a expressão do repórter.

[001117] Conforme mostrado na Figura 26, embora haja 98,7% de homologia entre a ROR1 humana e de camundongo, nenhuma reatividade cruzada foi observada para a ligação do CAR-F ou CAR anti- ROR1 R12 a células-alvo que expressam ROR1 de camundongo.

[001118] A presente invenção não se destina a ter o escopo limitado às modalidades particulares descritas as quais são fornecidas, por exemplo, para ilustrar vários aspectos da invenção. Várias modificações nas composições e métodos descritos se tornarão evidentes a partir da descrição e dos ensinamentos no presente documento. Tais variações podem ser praticadas sem se afastar do verdadeiro escopo e espírito da invenção e se destinam a cair dentro do escopo da presente invenção. Sequências

SEQ ID Sequência Descrição Nº: Espaçador 1 ESKYGPPCPPCP (dobradiça de IgG4) (aa) Espaçador 2 gaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccct (dobradiça de IgG4)(nt) ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG Espaçador de 3 FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK dobradiça-CH3 SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK (aa)

GAATCTAAGTACGGACCGCCTTGTCCTCCATGTCCTGGCCAGCCAAG AGAACCCCAGGTGTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCA

AGAACCAGGTGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCC Espaçador de

GATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTA 4 dobradiça-CH3

CAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCCTGT (nt)

ACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAAGAGGGCAACGTG TTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCA GAAGTCTCTGAGCCTGAGCCTGGGCAAG

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

RWPESPKAQASSVPTAQPQAEGSLAKATTAPATTRNTGRGGEE KKKEKEKEEQEERETKTPECPSHTQPLGVYLLTPAVQDLWLRD

KATFTCFVVGSDLKDAHLTWEVAGKVPTGGVEEGLLERHSNGS IgD-dobradiça- 5 QSQHSRLTLPRSLWNAGTSVTCTLNHPSLPPQRLMALREPAAQ Fc

APVKLSLNLLASSDPPEAASWLLCEVSGFSPPNILLMWLEDQR EVNTSGFAPARPPPQPGSTTFWAWSVLRVPAPPSPQPATYTCV

VSHEDSRTLLNASRSLEVSYVTDH 6 LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR T2A

MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINAT NIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKT VKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAV

VSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGT 7 SGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSC tEGFR

RNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNI TCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYAD AGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALL

LLLVVALGIGLFM CD28 (aminoácidos 8 FWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV 153-179 de Nº de Acesso P10747) CD28 (aminoácidos

IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKPFWVL 9 114-179 de Nº

VVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV de Acesso P10747) CD28 (aminoácidos 10 RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS 180-220 de P10747) 11 RSKRSRGGHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS CD28 (LL a GG) 4-1BB (aminoácidos 12 KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL 214-255 de Q07011.1)

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP 13 EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGH CD3 zeta

DGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

RVKFSRSAEPPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP 14 EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGH CD3 zeta

DGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR

RVKFSRSADAPAYKQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDP 15 EMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGH CD3 zeta

DGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR RKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAF RGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHA FENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVI

ISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQV 16 tEGFR

CHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPRE FVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHC VKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLE

GCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM 17 EGRGSLLTCGDVEENPGP T2A 18 GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 19 ATNFSLLKQAGDVEENPGP P2A 20 QCTNYALLKLAGDVESNPGP E2A 21 VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP F2A PGGG-(SGGGG)5-P- wherein P is proline, G is 22 Ligante glycine and S is serine 23 GSADDAKKDAAKKDGKS Ligante 24 GSTSGSGKPGSGEGSTKG Ligante X1PPX2P X1 is glycine, cysteine or arginine 25 Dobradiça X2 is cysteine or threonine 26 EPKSCDKTHTCPPCP Dobradiça 27 ERKCCVECPPCP Dobradiça

ELKTPLGDTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCP 28 Dobradiça

RCPEPKSCDTPPPCPRCP

SEQ ID Sequência Descrição Nº: 29 ESKYGPPCPSCP Dobradiça Espaçador (dobradiça de 30 gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtccc IgG4) (nt) O/SSE 31 YGPPCPPCP Dobradiça 32 KYGPPCPPCP Dobradiça 33 EVVVKYGPPCPPCP Dobradiça

ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDV SQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDW Espaçador de 34 LNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK dobradiça-CH2- NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY CH3 (aa)

SRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK GAATCTAAGTACGGACCGCCTTGTCCTCCATGTCCTGCTCCTC CAGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAA GGACACCCTGATGATCAGCAGAACCCCTGAAGTGACCTGCGTG GTGGTGGACGTGTCCCAAGAGGATCCTGAGGTGCAGTTCAACT GGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCC TAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTG

CTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACA Espaçador de

AGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAA 35 dobradiça-CH2-

AACCATCAGCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAACCCCAGGTG CH3 (nt)

TACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAACCAGG TGTCCCTGACCTGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATAT CGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTAC AAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTCTTCC TGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATGGCAAGAGGG CAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAAC CACTACACCCAGAAGTCTCTGAGCCTGAGCCTGGGCAAG ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC

VVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVS Espaçador de

VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQ 36 dobradiça-CH2-

VYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENN CH3 (aa)

YKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALH NHYTQKSLSLSLGK

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCV Espaçador de

VVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSV dobradiça de

LTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQV 37 IgG4/IgG2-

YTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNY IgG2/IgG4 CH2- KTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHN IgG4 CH3 (aa)

HYTQKSLSLSLGK gaatctaagtacggaccgccctgccctccctgccctgctcctcctgt ggctggaccaagcgtgttcctgtttccacctaagcctaaagataccc tgatgatttcccgcacacctgaagtgacttgcgtggtcgtggacgtg agccaggaggatccagaagtgcagttcaactggtacgtggacggcgt ggaagtccacaatgctaagactaaaccccgagaggaacagtttcagt caacttaccgggtcgtgagcgtgctgaccgtcctgcatcaggattgg Espaçador de ctgaacgggaaggagtataagtgcaaagtgtctaataagggactgcc dobradiça de 38 tagctccatcgagaaaacaattagtaaggcaaaagggcagcctcgag IgG4/IgG2- aaccacaggtgtataccctgccccctagccaggaggaaatgaccaag IgG2/IgG4 CH2- aaccaggtgtccctgacatgtctggtcaaaggcttctatccaagtga IgG4 CH3 (nt) catcgccgtggagtgggaatcaaatgggcagcccgagaacaattaca agaccacaccacccgtgctggactctgatggaagtttctttctgtat tccaggctgaccgtggataaatctcgctggcaggagggcaacgtgtt ctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgcacaatcattatacacaga agtcactgagcctgtccctgggcaaa Ligante 4GS 39 GGGGS (aa) Ligante 3GS 40 GGGS (aa) Ligante (4GS)3 41 GGGGSGGGGSGGGGS (aa) Peptídeo 42 MPLLLLLPLLWAGALA sinalizador de CD33 Peptídeo sinalizador de 43 MVLQTQVFISLLLWISGAYG IgG-capa humana (aa) Sequência atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtgga sinalizadora de 44 tctccggagcatacgga IgG-capa humana (nt)

SEQ ID Sequência Descrição Nº: Peptídeo sinalizador da 45 MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP cadeia de GMCSFR alfa (aa) Sequência sinalizadora da atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccac 46 cadeia de acccagcattcctcctgatccca GMCSFR alfa (nt) Peptídeo 47 MALPVTALLLPLALLLHA sinalizador de CD8 alfa

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVD

HKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDT Fc de IgG2

LMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPRE 48 humana (Uniprot

EQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTI P01859)

SKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISV EWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNV FSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNS GALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVD

HKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKD Fc de IgG4

TLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPR 49 humana (Uniprot

EEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKT P01861)

ISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN

VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK 50 GYTFTSY CDR-H1 51 GYTFTSYGIS CDR-H1 52 SYGIS CDR-H1 53 GYTFTSYG CDR-H1 54 SAYNGN CDR-H2 55 WISAYNGNTK CDR-H2

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

56 WISAYNGNTKYAQKLQG CDR-H2

57 ISAYNGNT CDR-H2

58 DEDILTGYNYYGMDV CDR-H3

59 ARDEDILTGYNYYGMDV CDR-H3

60 TLSSGHSSYAIA CDR-L1

61 SGHSSYA CDR-L1

62 LNSDGSHSKGD CDR-L2

63 LNSDGSH CDR-L2

64 QTWGTGIRV CDR-L3

65 GGSISNY CDR-H1

66 GGSISNYYWS CDR-H1

67 NYYWS CDR-H1

68 GGSISNYY CDR-H1

69 YTSGS CDR-H2

70 RIYTSGSTN CDR-H2

71 RIYTSGSTNYNPSLKS CDR-H2

72 IYTSGST CDR-H2

73 YYDILTGFFDY CDR-H3

74 ARYYDILTGFFDY CDR-H3

75 RMSQDISSYLA CDR-L1

76 QDISSY CDR-L1

77 AASSLQS CDR-L2

78 AAS CDR-L2

79 QQYDSFPPT CDR-L3

80 GGSINSTTS CDR-H1

81 GGSINSTTSYWA CDR-H1

82 STTSYWA CDR-H1

SEQ ID Sequência Descrição Nº: 83 GGSINSTTSY CDR-H1 84 FYSGK CDR-H2 85 TIFYSGKTY CDR-H2 86 TIFYSGKTYNNPSLKS CDR-H2 87 IFYSGKT CDR-H2 88 FDYGFHDAFDI CDR-H3 89 ARFDYGFHDAFDI CDR-H3 90 RASQSITSDYLS CDR-L1 91 QSITSDY CDR-L1 92 GASTRAT CDR-L2 93 GAS CDR-L2 94 QQDYNLYT CDR-L3 95 SAYTGN CDR-H2 96 WISAYTGNTR CDR-H2 97 WISAYTGNTRYAQKLQG CDR-H2 98 ISAYTGNT CDR-H2 99 EEGATTDYDYYGMDV CDR-H3 100 AREEGATTDYDYYGMDV CDR-H3

CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCC TGGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACA CCTTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCT GGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAA

TGGTAACACAAAGTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCA 101 VH (nt)

CCATGACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAG CTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTG TGCGAGAGATGAGGATATTTTGACTGGTTACAACTACTACG GTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCC TCA

SEQ ID Sequência Descrição Nº: caggtgcagctggttcaatctggcgccgaagtgaagaaacc aggcgcctctgtgaaggtgtcctgcaaggccagcggctaca cctttaccagctacggcatcagctgggtccgacaggctcct ggacaaggcttggaatggatgggctggatcagcgcctacaa cggcaacaccaaatacgcccagaaactgcagggcagagtga 102 VH (nt) O/SSE ccatgaccaccgacaccagcacaagcaccgcctacatggaa ctgcggagcctgagatccgatgacaccgccgtgtactactg cgccagagatgaggacatcctgaccggctacaactactacg gcatggacgtgtggggccagggcacaacagtgacagtttct tct

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAP

GQGLEWMGWISAYNGNTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYME 103 VH (aa)

LRSLRSDDTAVYYCARDEDILTGYNYYGMDVWGQGTTVTVS S CAGCTTGTGCTGACTCAATCGCCCTCTGCCTCTGCCTCCCT GGGAGCCTCGGTCAAGCTCACCTGCACTCTGAGCAGTGGGC ACAGCAGCTACGCCATCGCATGGCATCAGCAGCAGCCAGAG

AAGGGCCCTCGGTACTTGATGAAGCTTAACAGTGATGGCAG 104 CCACAGCAAGGGGGACGGGATCCCTGATCGCTTCTCAGGCT VL (nt)

CCAGCTCTGGGGCTGAGCGCTACCTCACCATCTCCAGCCTC CAGTCTGAGGATGAGGCTGACTATTACTGTCAGACCTGGGG CACTGGCATTCGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTG

TCCTAGGC caactggtgctgacacagtctcctagcgcctctgcttctct gggagccagcgtgaagctgacctgtacactgtctagcggcc acagcagctacgccattgcttggcatcagcagcagcccgag aagggccctagatacctgatgaagctgaacagcgacggcag 105 ccactctaaaggcgacggcatccccgatagattcagcggca VL (nt) O/SSE gttctagcggagccgagcgctacctgacaatcagctctctg caatccgaggacgaggccgactactactgtcagacatgggg caccggcatcagagtgtttggcggaggcaccaagctgacag tgcttgga

QLVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHSSYAIAWHQQQPEK 106 GPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSSGAERYLTISSLQS VL (aa)

EDEADYYCQTWGTGIRVFGGGTKLTVLG

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

CAGGTTCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCT GGGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACC TTTACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGA CAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGT AACACAAAGTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATG ACCACAGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGG AGCCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGA

GATGAGGATATTTTGACTGGTTACAACTACTACGGTATGGAC GTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCAGGTGGT scFv (VH-VL) 107 GGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCAG (nt)

CTTGTGCTGACTCAATCGCCCTCTGCCTCTGCCTCCCTGGGA GCCTCGGTCAAGCTCACCTGCACTCTGAGCAGTGGGCACAGC AGCTACGCCATCGCATGGCATCAGCAGCAGCCAGAGAAGGGC CCTCGGTACTTGATGAAGCTTAACAGTGATGGCAGCCACAGC AAGGGGGACGGGATCCCTGATCGCTTCTCAGGCTCCAGCTCT GGGGCTGAGCGCTACCTCACCATCTCCAGCCTCCAGTCTGAG GATGAGGCTGACTATTACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCATT

CGGGTGTTCGGTGGAGGAACCAAACTGACTGTCCTAGGC caggtgcagctggttcaatctggcgccgaagtgaagaaacca ggcgcctctgtgaaggtgtcctgcaaggccagcggctacacc tttaccagctacggcatcagctgggtccgacaggctcctgga caaggcttggaatggatgggctggatcagcgcctacaacggc aacaccaaatacgcccagaaactgcagggcagagtgaccatg accaccgacaccagcacaagcaccgcctacatggaactgcgg agcctgagatccgatgacaccgccgtgtactactgcgccaga gatgaggacatcctgaccggctacaactactacggcatggac gtgtggggccagggcacaacagtgacagtttcttctggcggc scFv (VH-VL) 108 ggaggatctggcggaggtggaagcggaggcggtggatctcaa (nt) O/SSE ctggtgctgacacagtctcctagcgcctctgcttctctggga gccagcgtgaagctgacctgtacactgtctagcggccacagc agctacgccattgcttggcatcagcagcagcccgagaagggc cctagatacctgatgaagctgaacagcgacggcagccactct aaaggcgacggcatccccgatagattcagcggcagttctagc ggagccgagcgctacctgacaatcagctctctgcaatccgag gacgaggccgactactactgtcagacatggggcaccggcatc agagtgtttggcggaggcaccaagctgacagtgcttgga

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQ

GLEWMGWISAYNGNTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSL RSDDTAVYYCARDEDILTGYNYYGMDVWGQGTTVTVSSGGGGS scFv (VH-VL) 109 GGGGSGGGGSQLVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHSSYAI (aa)

AWHQQQPEKGPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSSGAERY LTISSLQSEDEADYYCQTWGTGIRVFGGGTKLTVLG CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTT CGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGAGGCTCCAT CAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGGCAGCCCGCCGGGAAG

GGACTGGAGTGGATTGGGCGTATCTATACCAGTGGGAGCACCA 110 ACTACAACCCCTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGA VH (nt)

CACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTTTGACC GCCGCGGACACGGCCATATATTACTGTGCGAGGTATTACGATA TTTTGACTGGTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGT

CACCGTCTCCTCA Caggttcagctgcaagagtctggccctggcctggtcaagccta gcgaaacactgagcctgacctgtaccgtgtctggcggcagcat ctccaactactactggtcctggatcagacagcctgccggcaaa ggcctggaatggatcggcagaatctacaccagcggcagcacca 111 actacaaccccagcctgaagtccagagtgaccatgagcgtgga VH (nt) O/SSE caccagcaagaaccagttctccctgaagctgagcagcctgaca gccgccgataccgccatctactactgtgcccggtactacgata tcctgaccggcttcttcgactactggggccagggaacactggt cacagtttctagc

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNYYWSWIRQPAGK 112 GLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKLSSLT VH (aa)

AADTAIYYCARYYDILTGFFDYWGQGTLVTVSS GTCATCTGGATGACCCAGTCTCCATCCTTACTCTCTGCATCTA CAGGAGACAGTGTCACCATCAGTTGTCGGATGAGTCAGGACAT TAGCAGTTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCC

CCTGAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGG 113 VL (nt)

TCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGACAGACTTCAC TCTCACCATCAGTTCCCTGCAGTCTGAAGATTTTGCTACTTAT TACTGTCAACAGTATGATAGTTTCCCTCCGACGTTCGGCCAAG GGACCAAGGTGGAATTCAAACGG

SEQ ID Sequência Descrição Nº: Gtgatttggatgacacagagccctagcctgctgagcgc cagcacaggcgatagcgtgaccatcagctgcagaatga gccaggacatcagcagctacctggcttggtatcagcag aagcctggcaaggcccctgaactgctgatctatgccgc 114 ttccagtctgcagagcggcgtgccatctagattttccg VL (nt) O/SSE gcagcggctctggcaccgacttcaccctgacaatcagc tccctgcagtccgaggacttcgccacctactattgcca gcagtacgacagcttccctccaacctttggccagggca ccaaggtggaattcaagcgc

VIWMTQSPSLLSASTGDSVTISCRMSQDISSYLAWYQQ 115 KPGKAPELLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTIS VL (aa)

SLQSEDFATYYCQQYDSFPPTFGQGTKVEFKR CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAA GCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTG GAGGCTCCATCAGTAATTACTACTGGAGCTGGATCCGG CAGCCCGCCGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGCGTAT CTATACCAGTGGGAGCACCAACTACAACCCCTCCCTCA AGAGTCGAGTCACCATGTCAGTAGACACGTCCAAGAAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGTTCTTTGACCGCCGCGGA CACGGCCATATATTACTGTGCGAGGTATTACGATATTT

TGACTGGTTTCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTG GTCACCGTCTCCTCAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGG scFv (VH-VL) 116 CGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCGTCATCTGGATGACCC (nt)

AGTCTCCATCCTTACTCTCTGCATCTACAGGAGACAGT GTCACCATCAGTTGTCGGATGAGTCAGGACATTAGCAG TTATTTAGCCTGGTATCAGCAAAAACCAGGGAAAGCCC CTGAGCTCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGT GGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGGATCTGGGAC AGACTTCACTCTCACCATCAGTTCCCTGCAGTCTGAAG ATTTTGCTACTTATTACTGTCAACAGTATGATAGTTTC CCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAATTCAA ACGG

SEQ ID Sequência Descrição Nº: caggttcagctgcaagagtctggccctggcctggtcaag cctagcgaaacactgagcctgacctgtaccgtgtctggc ggcagcatctccaactactactggtcctggatcagacag cctgccggcaaaggcctggaatggatcggcagaatctac accagcggcagcaccaactacaaccccagcctgaagtcc agagtgaccatgagcgtggacaccagcaagaaccagttc tccctgaagctgagcagcctgacagccgccgataccgcc atctactactgtgcccggtactacgatatcctgaccggc ttcttcgactactggggccagggaacactggtcacagtt scFv (VH-VL) 117 tctagcggaggcggaggatctggtggcggaggaagtggc (nt) O/SSE ggaggcggttctgtgatttggatgacacagagccctagc ctgctgagcgccagcacaggcgatagcgtgaccatcagc tgcagaatgagccaggacatcagcagctacctggcttgg tatcagcagaagcctggcaaggcccctgaactgctgatc tatgccgcttccagtctgcagagcggcgtgccatctaga ttttccggcagcggctctggcaccgacttcaccctgaca atcagctccctgcagtccgaggacttcgccacctactat tgccagcagtacgacagcttccctccaacctttggccag ggcaccaaggtggaattcaagcgc

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNYYWSWIRQPA

GKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTMSVDTSKNQFSLKL SSLTAADTAIYYCARYYDILTGFFDYWGQGTLVTVSSGGGG scFv (VH-VL) 118 SGGGGSGGGGSVIWMTQSPSLLSASTGDSVTISCRMSQDIS (aa)

SYLAWYQQKPGKAPELLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDF TLTISSLQSEDFATYYCQQYDSFPPTFGQGTKVEFKR CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAG CCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGT GGCTCCATCAACAGTACTACTTCCTACTGGGCCTGGATC CGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGACT

ATCTTTTATAGTGGGAAAACCTACAACAACCCGTCCCTC 119 VH (nt)

AAGAGTCGAGTCACCATGTCCGTAGACACGTCCAAGAAC CACTTCTCCCTGAAGGTGAACTCTGTGACCGCCGCAGAC ACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGTTTGACTACGGTTTT CATGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGGACAATGGTC ACCGTCTCTTCA

SEQ ID Sequência Descrição Nº: cagctccagctgcaagaatctggacctggcctggtcaagc ccagcgagacactgtctctgacctgtacagtgtccggcgg cagcatcaatagcaccacaagctactgggcctggatcaga cagcctcctggcaaaggcctggaatggatcggcaccatct tctacagcggcaagacctacaacaaccccagcctgaagtc 120 VH (nt) O/SSE cagagtgaccatgagcgtggacaccagcaagaaccacttc agcctgaaagtgaacagcgtgacagccgccgataccgccg tgtactactgcgccagattcgactacggcttccacgacgc cttcgacatctggggccagggcacaatggtcacagtttct agc

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSTTSYWAWIR

QPPGKGLEWIGTIFYSGKTYNNPSLKSRVTMSVDTSKNHF 121 VH (aa)

SLKVNSVTAADTAVYYCARFDYGFHDAFDIWGQGTMVTVS S GAAATTGTAATGACACAGTCTCCAGCCACCCTGTCTTTGT CTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTCCTGCAGGGCCAGTCA GAGTATTACCAGCGACTACTTATCCTGGTACCAACAAAAA

CCTGGGCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATGGTGCATCCA 122 CCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGGCAGTGG VL (nt)

GTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAG CCTGAAGATTTTGTAGTTTATTACTGTCAGCAGGATTATA ACTTGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAA

ACGG gagattgtgatgacacagagccccgccactctgagccttagt cctggcgaaagagccacactgagctgcagagccagccagagc atcaccagcgattacctgagctggtatcagcagaagcccgga caggctcccagactgctgatctatggcgcctctacaagagcc 123 VL (nt) O/SSE accggcattcccgcccgcttttctggctctggaagcggcacc gacttcaccctgaccatatctagcctgcagcctgaggacttc gtggtgtactattgccagcaggactacaacctgtacaccttc ggccaggggaccaagctggaaatcaagaga

EIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSITSDYLSWYQQK 124 PGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLQ VL (aa)

PEDFVVYYCQQDYNLYTFGQGTKLEIKR

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTT CGGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGTGGCTCCAT CAACAGTACTACTTCCTACTGGGCCTGGATCCGCCAGCCCCCA GGGAAGGGGCTGGAGTGGATTGGGACTATCTTTTATAGTGGGA AAACCTACAACAACCCGTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATGTC CGTAGACACGTCCAAGAACCACTTCTCCCTGAAGGTGAACTCT GTGACCGCCGCAGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGGTTTG

ACTACGGTTTTCATGATGCTTTTGATATCTGGGGCCAGGGGAC AATGGTCACCGTCTCTTCAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGC scFv (VH-VL) 125 GGCTCTGGTGGTGGTGGATCCGAAATTGTAATGACACAGTCTC (nt)

CAGCCACCCTGTCTTTGTCTCCAGGGGAAAGAGCCACCCTCTC CTGCAGGGCCAGTCAGAGTATTACCAGCGACTACTTATCCTGG TACCAACAAAAACCTGGGCAGGCTCCCAGGCTCCTCATCTATG GTGCATCCACCAGGGCCACTGGCATCCCAGCCAGGTTCAGTGG CAGTGGGTCTGGGACAGACTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTG CAGCCTGAAGATTTTGTAGTTTATTACTGTCAGCAGGATTATA ACTTGTACACTTTTGGCCAGGGGACCAAGCTGGAGATCAAACG

G Cagctccagctgcaagaatctggacctggcctggtcaagccca gcgagacactgtctctgacctgtacagtgtccggcggcagcat caatagcaccacaagctactgggcctggatcagacagcctcct ggcaaaggcctggaatggatcggcaccatcttctacagcggca agacctacaacaaccccagcctgaagtccagagtgaccatgag cgtggacaccagcaagaaccacttcagcctgaaagtgaacagc gtgacagccgccgataccgccgtgtactactgcgccagattcg actacggcttccacgacgccttcgacatctggggccagggcac aatggtcacagtttctagcggaggcggaggatctggtggcgga scFv (VH-VL) 126 ggaagtggcggaggcggttctgagattgtgatgacacagagcc (nt) O/SSE ccgccactctgagccttagtcctggcgaaagagccacactgag ctgcagagccagccagagcatcaccagcgattacctgagctgg tatcagcagaagcccggacaggctcccagactgctgatctatg gcgcctctacaagagccaccggcattcccgcccgcttttctgg ctctggaagcggcaccgacttcaccctgaccatatctagcctg cagcctgaggacttcgtggtgtactattgccagcaggactaca acctgtacaccttcggccaggggaccaagctggaaatcaagag a

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSTTSYWAWIRQPP

GKGLEWIGTIFYSGKTYNNPSLKSRVTMSVDTSKNHFSLKVNS VTAADTAVYYCARFDYGFHDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGSGGG scFv (VH-VL) 127 GSGGGGSEIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSITSDYLSW (aa)

YQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSL QPEDFVVYYCQQDYNLYTFGQGTKLEIKR CAGGTTCAGCTGCTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTG GGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTT TACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAA

GGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACACTGGTAACA 128 CAAGGTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAC VH (nt)

AGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTG AGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGAAG GAGCTACTACGGACTACGACTACTACGGTATGGACGTCTGGGG

CCAAGGGACTGCGGTCACCGTCTCCTCA caggttcagctgcttcagtctggcgccgaagtgaagaaacctg gcgcctctgtgaaggtgtcctgcaaggccagcggctacacctt taccagctacggcatcagctgggtccgacaggctcctggacaa ggcttggaatggatgggctggatcagcgcctacaccggcaata 129 ccagatacgcccagaaactgcagggcagagtgaccatgaccac VH (nt) O/SSE cgacaccagcacaagcaccgcctacatggaactgcggagcctg agatccgatgacaccgccgtgtactactgcgccagagaagaag gcgccaccaccgactacgactactacggcatggatgtgtgggg ccagggaacagccgtgacagtttcttct

QVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQ 130 GLEWMGWISAYTGNTRYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSL VH (aa)

RSDDTAVYYCAREEGATTDYDYYGMDVWGQGTAVTVSS caactggttctgacacagagcccaagcgcctctgcatctctgg gagcttccgtgaagctgacctgcacactgtctagcggccacag cagctatgccattgcctggcatcagcaacagcccgagaagggc cctagatacctgatgaagctgaacagcgacggcagccactcta 131 VL (nt) O/SSE aaggcgacggcatccccgatagattcagcggcagttctagcgg agccgagcgctacctgacaatcagctctctgcaatccgaggac gaggccgattactactgtcagacatggggcaccggcatcagag tgtttggcggcggaacaaagctgaccgtgctgggc

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

CAGGTTCAGCTGCTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTG GGGCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTT TACCAGCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAA GGGCTTGAGTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACACTGGTAACA CAAGGTATGCACAGAAGCTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAC AGACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGGAGCCTG AGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGAAGAAG

GAGCTACTACGGACTACGACTACTACGGTATGGACGTCTGGGG CCAAGGGACTGCGGTCACCGTCTCCTCAGGTGGTGGTGGTAGC scFv (VH-VL) 132 GGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCAGCTTGTGCTGA (nt)

CTCAATCGCCCTCTGCCTCTGCCTCCCTGGGAGCCTCGGTCAA GCTCACCTGCACTCTGAGCAGTGGGCACAGCAGCTACGCCATC GCATGGCATCAGCAGCAGCCAGAGAAGGGCCCTCGGTACTTGA TGAAGCTTAACAGTGATGGCAGCCACAGCAAGGGGGACGGGAT CCCTGATCGCTTCTCAGGCTCCAGCTCTGGGGCTGAGCGCTAC CTCACCATCTCCAGCCTCCAGTCTGAGGATGAGGCTGACTATT ACTGTCAGACCTGGGGCACTGGCATTCGGGTGTTCGGTGGAGG

AACCAAACTGACTGTCCTAGGC caggttcagctgcttcagtctggcgccgaagtgaagaaacctg gcgcctctgtgaaggtgtcctgcaaggccagcggctacacctt taccagctacggcatcagctgggtccgacaggctcctggacaa ggcttggaatggatgggctggatcagcgcctacaccggcaata ccagatacgcccagaaactgcagggcagagtgaccatgaccac cgacaccagcacaagcaccgcctacatggaactgcggagcctg agatccgatgacaccgccgtgtactactgcgccagagaagaag gcgccaccaccgactacgactactacggcatggatgtgtgggg ccagggaacagccgtgacagtttcttctggtggcggaggatct scFv (VH-VL) 133 ggcggaggtggaagcggcggaggcggatctcaactggttctga (nt) O/SSE cacagagcccaagcgcctctgcatctctgggagcttccgtgaa gctgacctgcacactgtctagcggccacagcagctatgccatt gcctggcatcagcaacagcccgagaagggccctagatacctga tgaagctgaacagcgacggcagccactctaaaggcgacggcat ccccgatagattcagcggcagttctagcggagccgagcgctac ctgacaatcagctctctgcaatccgaggacgaggccgattact actgtcagacatggggcaccggcatcagagtgtttggcggcgg aacaaagctgaccgtgctgggc

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

QVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQ

GLEWMGWISAYTGNTRYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSL RSDDTAVYYCAREEGATTDYDYYGMDVWGQGTAVTVSSGGGGS scFv (VH-VL) 134 GGGGSGGGGSQLVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHSSYAI (aa)

AWHQQQPEKGPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSSGAERY

LTISSLQSEDEADYYCQTWGTGIRVFGGGTKLTVLG Espaçador de 135 ESKYGPPCPPCPM dobradiça de IgG4 (aa) Espaçador de 136 gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccatg dobradiça de IgG4 (nt) O/SSE gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccggccagc caagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagagga aatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggc ttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggcc Espaçador de 137 agcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacag dobradiça-CH3 cgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaa (nt) O/SSE tcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgc acgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcct gtctctgggcaag ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG Espaçador de 138 FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDK dobradiça-CH3 SRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKM (aa) gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccggccagc caagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagagga aatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggc ttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggcc Espaçador de 139 agcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacag dobradiça-CH3 cgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaa (nt) O/SSE tcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgc acgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcct gtctctgggcaagatg

SEQ ID Sequência Descrição Nº: gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctg ttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacac cctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggat gtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacg gcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagtt Espaçador de ccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccag dobradiça de gattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagg IgG4/IgG2- 140 gcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggcca IgG2/IgG4 CH2- gccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaa IgG4 CH3 (nt) atgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttct O/SSE acccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctga gaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagt ttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaag agggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaa ccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaag cttgaaggtggtggcgaaggcagaggcagcctgcttacatgcggag 141 T2A (nt) O/SSE atgtggaagagaaccccggacctaga

QEQLVESGGRLVTPGGSLTLSCKASGFDFSAYYMSWVRQAPGKGLE

WIATIYPSSGKTYYATWVNGRFTISSDNAQNTVDLQMNSLTAADRA TYFCARDSYADDGALFNIWGPGTLVTISSGGGGSGGGGSGGGGSEL R12 VH-VL scFv 142 VLTQSPSVSAALGSPAKITCTLSSAHKTDTIDWYQQLQGEAPRYLM (aa)

QVQSDGSYTKRPGVPDRFSGSSSGADRYLIIPSVQADDEADYYCGA

DYIGGYVFGGGTQLTVTG caagaacagctggtggaatctggcggcagactggttacacctggcg gaagcctgacactgagctgtaaagccagcggcttcgacttcagcgc ctactacatgagctgggtccgacaggcccctggcaaaggactggaa tggatcgccacaatctaccccagctccggcaagacctactacgcca catgggtcaacggccggttcaccatcagcagcgacaacgcccagaa caccgtggacctgcagatgaactctctgacagccgccgaccgggcc acctacttttgtgccagagatagctacgccgacgacggcgccctgt tcaatatttggggacctggcacactcgtgaccatctctagcggagg R12 VH-VL scFv 143 cggaggaagtggtggcggaggatcaggcggtggtggatctgaactg (nt) gtgctgacacagagcccctctgtgtctgctgctctgggaagccctg ccaagatcacatgtaccctgagcagcgcccacaagaccgacaccat cgactggtatcagcagctgcagggcgaagcccctagatacctgatg caggttcagagcgacggcagctacaccaaaagacctggcgtgcccg atagattcagcggcagttcttctggcgccgatcgctacctgatcat cccttctgtgcaagccgacgatgaggccgactattactgcggagcc gattacatcggcggctacgttttcggtggcggcacacagttgacag tgacaggcg

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

QETELSVSAELVPTSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTSLG QTAELHCKVSGNPPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSR LRIRNLDTTDTGYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASP GYSDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIENQ ITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSSVPKP RDLCRDECEILENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQ PESPEAANCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKS GRQCQPWNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPW CFTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAIPL

AIALLFFFICVCRNNQKSSSAPVQRQPKHVRGQNVEMSMLNAY ROR1 humana

KPKSKAKELPLSAVRFMEELGECAFGKIYKGHLYLPGMDHAQL 144 (aa) GenBank:

VAIKTLKDYNNPQQWTEFQQEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQE AAA60275.1

QPVCMLFEYINQGDLHEFLIMRSPHSDVGCSSDEDGTVKSSLD HGDFLHIAIQIAAGMEYLSSHFFVHKDLAARNILIGEQLHVKI SDLGLSREIYSADYYRVQSKSLLPIRWMPPEAIMYGKFSSDSD IWSFGVVLWEIFSFGLQPYYGFSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDC PPRMYSLMTECWNEIPSRRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTT PSGGNATTQTTSLSASPVSNLSNPRYPNYMFPSQGITPQGQIA GFIGPPIPQNQRFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTGPPRVIQ HCPPPKSRSPSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEANIPLLPHMS IPNHPGGMGITVFGNKSQKPYKIDSKQASLLGDANIHGHTESM ISAEL QETELSVSAELVPTSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTS LGQTAELHCKVSGNPPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTI YGSRLRIRNLDTTDTGYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGP PPTASPGYSDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLH MQGEIENQITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPY

CDETSSVPKPRDLCRDECEILENVLCQTEYIFARSNPMILM ROR1 humana, 145 RLKLPNCEDLPQPESPEAANCIRIGIPMADPINKNHKCYNS isoforma 2 (aa)

TGVDYRGTVSVTKSGRQCQPWNSQYPHTHTFTALRFPELNG GHSYCRNPGNQKEAPWCFTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKE KNKMEILYILVPSVAIPLAIALLFFFICVCRNNQKSSSAPV QRQPKHVRGQNVEMSMLNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELG ECAFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEFQ QEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQEQPVC

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

QETELSVSAELVPTSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNIT TSLGQTAELHCKVSGNPPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSF RSTIYGSRLRIRNLDTTDTGYFQCVATNGKEVVSSTGVL

FVKFGPPPTASPGYSDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNR ROR1 humana,

TVYMESLHMQGEIENQITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAI 146 isoforma 3

PSLCHYAFPYCDETSSVPKPRDLCRDECEILENVLCQTE (aa)

YIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQPESPEAANCIRIGIP MADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKSGRQCQPWNSQY PHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWCFTLDEN

FKSDLCDIPACGK atgttttgggtgctggtcgtggtcggaggggtgctggcc Domínio 147 tgttacagcctgctggtgacagtcgctttcatcatcttc transmembrana tgggtg de CD28 (nt) Domínio atgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcc transmembrana 148 tgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttt de CD28 (nt) tgggtc (O/SSE) Domínio 149 MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV transmembrana de CD28 (aa) agagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctat cagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctg Domínio de gggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggaga sinalização ggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaag intracelular 150 aatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagac derivado de aagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggc CD3-zeta gagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccag (nt) (O/SSE) ggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactg cacatgcaggccctgccacctaga

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtga gttaccacacccagcattcctcctgatcccacgca aagtgtgtaacggaataggtattggtgaatttaaa gactcactctccataaatgctacgaatattaaaca cttcaaaaactgcacctccatcagtggcgatctcc acatcctgccggtggcatttaggggtgactccttc acacatactcctcctctggatccacaggaactgga tattctgaaaaccgtaaaggaaatcacagggtttt tgctgattcaggcttggcctgaaaacaggacggac ctccatgcctttgagaacctagaaatcatacgcgg caggaccaagcaacatggtcagttttctcttgcag tcgtcagcctgaacataacatccttgggattacgc tccctcaaggagataagtgatggagatgtgataat ttcaggaaacaaaaatttgtgctatgcaaatacaa Sequência taaactggaaaaaactgtttgggacctccggtcag de EGFR 151 aaaaccaaaattataagcaacagaggtgaaaacag truncada ctgcaaggccacaggccaggtctgccatgccttgt (tEGFR) gctcccccgagggctgctggggcccggagcccagg (nt) gactgcgtctcttgccggaatgtcagccgaggcag ggaatgcgtggacaagtgcaaccttctggagggtg agccaagggagtttgtggagaactctgagtgcata cagtgccacccagagtgcctgcctcaggccatgaa catcacctgcacaggacggggaccagacaactgta tccagtgtgcccactacattgacggcccccactgc gtcaagacctgcccggcaggagtcatgggagaaaa caacaccctggtctggaagtacgcagacgccggcc atgtgtgccacctgtgccatccaaactgcacctac ggatgcactgggccaggtcttgaaggctgtccaac gaatgggcctaagatcccgtccatcgccactggga tggtgggggccctcctcttgctgctggtggtggcc ctggggatcggcctcttcatgtga

SEQ ID Sequência Descrição Nº:

atgctgctcctcgtgacaagcctgctcctgtgtgaact ccctcatccagcttttctgctcattcctcggaaagtgt gcaacggcatcggcatcggagagttcaaggacagcctg agcatcaatgccaccaacatcaagcacttcaagaattg caccagcatcagcggcgacctgcacattctgcctgtgg cctttagaggcgacagcttcacccacacacctccactg gatccccaagagctggatatcctgaaaaccgtgaaaga gattaccggattcctcctgatccaagcctggccagaga acagaaccgatctgcacgccttcgagaacctcgagatc atcagaggccggaccaaacagcacggccagtttagcct ggctgtggtgtctctgaacatcaccagtctgggcctga gaagcctgaaagaaatctccgacggcgacgtgatcatc tccggaaacaagaacctgtgctacgccaacaccatcaa Sequência ctggaagaagctgttcggcacctccggccagaaaacaa de EGFR (tEGFR) 152 agatcatctctaaccggggcgagaacagctgcaaggcc truncada accggacaagtttgtcacgccctgtgtagccctgaagg (nt) ctgttggggacccgaacctagagactgtgtgtcctgcc (O/SSE) ggaatgtgtcccggggcagagaatgtgtggataagtgc aacctgctggaaggcgagccccgcgagtttgtggaaaa cagcgagtgcatccagtgtcaccccgagtgtctgcccc aggccatgaacattacatgcaccggcagaggccccgac aactgtattcagtgcgcccactacatcgacggccctca ctgcgtgaaaacatgtccagctggcgtgatgggagaga acaacaccctcgtgtggaagtatgccgacgccggacat gtgtgccacctgtgtcaccctaattgcacctacggctg taccggacctggcctggaaggatgccctacaaacggcc ctaagatccccagcattgccaccggaatggttggagcc ctgctgcttctgttggtggtggccctcggaatcggcct gttcatgtga

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIPRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNC

TSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPEN RTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIIS Sequência de 153 GNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGC EGFR (tEGFR) WGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQA truncada (aa)

MNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVC

HLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFM Sequência de aagcgggggagaaagaaactgctgtatattttcaaacagccctttatgaga co-sinalização 154 cctgtgcagactacccaggaggaagacggatgcagctgtaggtttcccgag intracelular de gaagaggaaggaggctgtgagctg 4-1BB (nt) Sequência de aagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcgg co-sinalização 155 cccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgag intracelular de gaagaagaaggcggctgcgagctg 4-1BB (nt) - (O/SSE) caggttcagctgcaagagtctggccctggcctggtcaagcctagcgaaaca ctgagcctgacctgtaccgtgtctggcggcagcatctccaactactactgg tcctggatcagacagcctgccggcaaaggcctggaatggatcggcagaatc tacaccagcggcagcaccaactacaaccccagcctgaagtccagagtgacc atgagcgtggacaccagcaagaaccagttctccctgaagctgagcagcctg acagccgccgataccgccatctactactgtgcccggtactacgatatcctg accggcttcttcgactactggggccagggaacactggtcacagtttctagc ggaggcggaggatctggtggcggaggaagtggcggaggcggttctgtgatt tggatgacacagagccctagcctgctgagcgccagcacaggcgatagcgtg accatcagctgcagaatgagccaggacatcagcagctacctggcttggtat cagcagaagcctggcaaggcccctgaactgctgatctatgccgcttccagt ctgcagagcggcgtgccatctagattttccggcagcggctctggcaccgac ttcaccctgacaatcagctccctgcagtccgaggacttcgccacctactat CAR anti-ROR1 156 tgccagcagtacgacagcttccctccaacctttggccagggcaccaaggtg (nt) gaattcaagcgcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccatg ttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctg gttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctg ctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagag gaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgag ctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggc caaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgac gtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccaga cggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatg gccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaag ggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctat gacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga

SEQ ID Descrição Nº: Sequência cagctccagctgcaagaatctggacctggcctggtcaagc ccagcgagacactgtctctgacctgtacagtgtccggcgg cagcatcaatagcaccacaagctactgggcctggatcaga cagcctcctggcaaaggcctggaatggatcggcaccatct tctacagcggcaagacctacaacaaccccagcctgaagtc cagagtgaccatgagcgtggacaccagcaagaaccacttc agcctgaaagtgaacagcgtgacagccgccgataccgccg tgtactactgcgccagattcgactacggcttccacgacgc cttcgacatctggggccagggcacaatggtcacagtttct agcggaggcggaggatctggtggcggaggaagtggcggag gcggttctgagattgtgatgacacagagccccgccactct gagccttagtcctggcgaaagagccacactgagctgcaga gccagccagagcatcaccagcgattacctgagctggtatc agcagaagcccggacaggctcccagactgctgatctatgg cgcctctacaagagccaccggcattcccgcccgcttttct ggctctggaagcggcaccgacttcaccctgaccatatcta CAR anti- 157 gcctgcagcctgaggacttcgtggtgtactattgccagca ROR1 (nt) ggactacaacctgtacaccttcggccaggggaccaagctg gaaatcaagagagagtctaaatacggaccgccttgtcctc cttgtcccatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagt gctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatc atcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctaca tcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacaca agaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaa gaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccg ccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgta caacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtg ctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggca agcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatga gctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatc ggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatg gactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggataccta tgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga

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SEQ ID Descrição Nº: Sequência cagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccc cgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttca gcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaac cagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagta cgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgg gcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtat aatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcga gatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacg atggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacc tatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga caggttcagctgcttcagtctggcgccgaagtgaagaaacc tggcgcctctgtgaaggtgtcctgcaaggccagcggctaca cctttaccagctacggcatcagctgggtccgacaggctcct ggacaaggcttggaatggatgggctggatcagcgcctacac cggcaataccagatacgcccagaaactgcagggcagagtga ccatgaccaccgacaccagcacaagcaccgcctacatggaa ctgcggagcctgagatccgatgacaccgccgtgtactactg cgccagagaagaaggcgccaccaccgactacgactactacg gcatggatgtgtggggccagggaacagccgtgacagtttct tctggtggcggaggatctggcggaggtggaagcggcggagg cggatctcaactggttctgacacagagcccaagcgcctctg catctctgggagcttccgtgaagctgacctgcacactgtct agcggccacagcagctatgccattgcctggcatcagcaaca 161 gcccgagaagggccctagatacctgatgaagctgaacagcg CAR anti-ROR1 (nt) acggcagccactctaaaggcgacggcatccccgatagattc agcggcagttctagcggagccgagcgctacctgacaatcag ctctctgcaatccgaggacgaggccgattactactgtcaga catggggcaccggcatcagagtgtttggcggcggaacaaag ctgaccgtgctgggcgagtctaaatacggaccgccttgtcc tccttgtcccggccagccaagagagccccaggtttacacac tgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtcc ctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgc cgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactaca agaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttc ctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaaga gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc acaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggc

SEQ ID Descrição Nº: Sequência aagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggc ctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatctttt gggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaag cagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaaga tggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggct gcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctcca gcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaa cctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcgga gaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaag aatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaa gatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagc gcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctg agcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgca ggccctgccacctaga

162 SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA ligante

163 GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA ligante ggatctgcgatcgctccggtgcccgtcagtgggcagagcg cacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtc ggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaa actgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcc cgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgcc gtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacac Promotor EF1alfa agctgaagcttcgaggggctcgcatctctccttcacgcgc 164 com intensificador ccgccgccctacctgaggccgccatccacgccggttgagt de HTLV1 cgcgttctgccgcctcccgcctgtggtgcctcctgaactg cgtccgccgtctaggtaagtttaaagctcaggtcgagacc gggcctttgtccggcgctcccttggagcctacctagactc agccggctctccacgctttgcctgaccctgcttgctcaac tctacgtctttgtttcgttttctgttctgcgccgttacag atccaagctgtgaccggcgcctac aatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactg Elemento regulador gtattcttaactatgttgctccttttacgctatgtggata pós-transcricional 165 cgctgctttaatgcctttgtatcatgctattgcttcccgt (WPRE) do vírus da atggctttcattttctcctccttgtataaatcctggttgc hepatite de tgtctctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacg marmota (WHP)

SEQ ID Descrição Nº: Sequência tggcgtggtgtgcactgtgtttgctgacgcaacccccact ggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccggga ctttcgctttccccctccctattgccacggcggaactcat cgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctg ttgggcactgacaattccgtggtgttgtcggggaaatcat cgtcctttccttggctgctcgcctgtgttgccacctggat tctgcgcgggacgtccttctgctacgtcccttcggccctc aatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctc tgcggcctcttccgcgtcttcgccttcgccctcagacgag tcggatctccctttgggccgcctccccgc

166 GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP Peptídeo T2A (aa)

167 GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP Peptídeo E2A (aa)

168 GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP Peptídeo F2A (aa)

ctcgagggcggcggagagggcagaggaagtcttctaacat 169 Peptídeo T2A (nt) gcggtgacgtggaggagaatcccggccctagg gagctggagcagccgccaccgccgccgccgagggagccccg ggacggcagcccctgggcgcagggtgcgctgttctcggagt ccgacccagggcgactcacgcccactggtgcgacccggaca gcctgggactgacccgccggcccaggcgaggctgcagccag agggctgggaagggatcgcgctcgcggcatccagaggcggc caggcggaggcgagggagcaggttagagggacaaagagctt tgcagacgtccccggcgtcctgcgagcgccagcggccggga cgaggcggccgggagcccgggaagagcccgtggatgttctg cgcgcggcctgggagccgccgccgccgccgcctcagcgaga ggaggaatgcaccggccgcgccgccgcgggacgcgcccgcc ROR1 humana (nt) 170 gctcctggcgctgctggccgcgctgctgctggccgcacgcg GenBank: M97675.1 gggctgctgcccaagaaacagagctgtcagtcagtgctgaa ttagtgcctacctcatcatggaacatctcaagtgaactcaa caaagattcttacctgacccttgatgaaccaatgaataaca tcaccacgtctctgggccagacagcagaactgcactgcaaa gtctctgggaatccacctcccaccatccgctggttcaaaaa tgatgctcctgtggtccaggagccccggaggctctcctttc ggtccaccatctatggctctcggctgcggattagaaacctc gacaccacagacacaggctacttccagtgcgtggcaacaaa cggcaaggaggtggtttcttccactggagtcttgtttgtca

SEQ ID Descrição Nº: Sequência agtttggcccccctcccactgcaagtccaggatactcagat gagtatgaagaagatggattctgtcagccatacagagggat tgcatgtgcaagatttattggcaaccgcaccgtctatatgg agtctttgcacatgcaaggggaaatagaaaatcagatcaca gctgccttcactatgattggcacttccagtcacttatctga taagtgttctcagttcgccattccttccctgtgccactatg ccttcccgtactgcgatgaaacttcatccgtcccaaagccc cgtgacttgtgtcgcgatgaatgtgaaatcctggagaatgt cctgtgtcaaacagagtacatttttgcaagatcaaatccca tgattctgatgaggctgaaactgccaaactgtgaagatctc ccccagccagagagcccagaagctgcgaactgtatccggat tggaattcccatggcagatcctataaataaaaatcacaagt gttataacagcacaggtgtggactaccgggggaccgtcagt gtgaccaaatcagggcgccagtgccagccatggaattccca gtatccccacacacacactttcaccgcccttcgtttcccag agctgaatggaggccattcctactgccgcaacccagggaat caaaaggaagctccctggtgcttcaccttggatgaaaactt taagtctgatctgtgtgacatcccagcttgcgattcaaagg attccaaggagaagaataaaatggaaatcctgtacatacta gtgccaagtgtggccattcccctggccattgctttactctt cttcttcatttgcgtctgtcggaataaccagaagtcatcgt cggcaccagtccagaggcaaccaaaacacgtcagaggtcaa aatgtggagatgtcaatgctgaatgcatataaacccaagag caaggctaaagagctacctctttctgctgtacgctttatgg aagaattgggtgagtgtgcctttggaaaaatctataaaggc catctctatctcccaggcatggaccatgctcagctggttgc tatcaagaccttgaaagactataacaacccccagcaatgga tggaatttcaacaagaagcctccctaatggcagaactgcac caccccaatattgtctgccttctaggtgccgtcactcagga acaacctgtgtgcatgctttttgagtatattaatcaggggg atctccatgagttcctcatcatgagatccccacactctgat gttggctgcagcagtgatgaagatgggactgtgaaatccag cctggaccacggagattttctgcacattgcaattcagattg cagctggcatggaatacctgtctagtcacttctttgtccac aaggaccttgcagctcgcaatattttaatcggagagcaact tcatgtaaagatttcagacttggggctttccagagaaattt actccgctgattactacagggtccagagtaagtccttgctg

SEQ ID Descrição Nº: Sequência cccattcgctggatgccccctgaagccatcatgtatggcaa attctcttctgattcagatatctggtcctttggggttgtct tgtgggagattttcagttttggactccagccatattatgga ttcagtaaccaggaagtgattgagatggtgagaaaacggca gctcttaccatgctctgaagactgcccacccagaatgtaca gcctcatgacagagtgctggaatgagattccttctaggaga ccaagatttaaagatattcacgtccggcttcggtcctggga gggactctcaagtcacacaagctctactactccttcagggg gaaatgccaccacacagacaacctccctcagtgccagccca gtgagtaatctcagtaaccccagatatcctaattacatgtt cccgagccagggtattacaccacagggccagattgctggtt tcattggcccgccaatacctcagaaccagcgattcattccc atcaatggatacccaatacctcctggatatgcagcgtttcc agctgcccactaccagccaacaggtcctcccagagtgattc agcactgcccacctcccaagagtcggtccccaagcagtgcc agtgggtcgactagcactggccatgtgactagcttgccctc atcaggatccaatcaggaagcaaatattcctttactaccac acatgtcaattccaaatcatcctggtggaatgggtatcacc gtttttggcaacaaatctcaaaaaccctacaaaattgactc aaagcaagcatctttactaggagacgccaatattcatggac acaccgaatctatgatttctgcagaactgtaaaatgcacaa cttttgtaaatgtggtatacaggacaaactagacggccgta gaaaagatttatattcaaatgtttttattaaagtaaggttc tcatttagcagacatcgcaacaagtaccttctgtgaagttt cactgtgtcttaccaagcaggacagacactcggccag

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LRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWCFTLDENFKSDLCDIP ACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAIPLAIAFLFFFICVCR NNQKSSSPPVQRQPKPVRGQNVEMSMLNAYKPKSKAKELP LSAVRFMEELGECTFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVAIKTLK

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

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LTMTNMDPVDTATYYCARGWYYFDYWGHGTLVTVSS

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYAFTAYNIHWVRQA 99961 VH 175 PGQGLEWMGSFDPYDGGSSYNQKFKDRLTISKDTSKNQVV humanizada

LTMTNMDPVDTATYYCARGWYYFDYWGHGTLVTVSS

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYAFTAYNIHWIRQP 99961 VH 176 PGKGLEWIGSFDPYDGGSSYNQKFKDRLTISKDTSKNQVV humanizada

LTMTNMDPVDTATYYCARGWYYFDYWGHGTLVTVSS

QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGYAFTAYNIHWIRQP 99961 VH 177 PGKGLEWIGSFDPYDGGSSYNQKFKDRLTISKDTSKNQVV humanizada

LTMTNMDPVDTATYYCARGWYYFDYWGHGTLVTVSS

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKSISKYLAWYQQKP 99961 VL 178 GQAPRLLIYSGSTLQSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIES humanizada

EDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIK 179 DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASKSISKYLAWYQQKP 99961 VL

SEQ ID Descrição Nº: Sequência GKAPKLLIYSGSTLQSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIES humanizada

EDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIK

DIVMTQTPLSLPVTPGEPASISCRASKSISKYLAWYQQKP 99961 VL 180 GQAPRLLIYSGSTLQSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIES humanizada

EDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIK

DVVMTQSPLSLPVTLGQPASISCRASKSISKYLAWYQQKP 99961 VL 181 GKAPKLLIYSGSTLQSGIPPRFSGSGYGTDFTLTINNIES humanizada

EDAAYYFCQQHDESPYTFGEGTKVEIK agagtcaagttttccaggtccgccgacgctccagcctacc agcaggggcagaaccagctgtacaacgagctgaacctggg cagaagggaagagtacgacgtcctggataagcggagaggc Domínio de cgggaccctgagatgggcggcaagcctcggcggaagaacc sinalização 182 cccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagat intracelular ggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcgg derivado de CD3- aggcggggcaagggccacgacggcctgtatcagggcctgt zeta (nt) ccaccgccaccaaggatacctacgacgccctgcacatgca ggccctgcccccaagg aggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatga acatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcatta Endodomínio de 183 ccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgc CD28 (nt) tcc

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNYYWSWIRQ PAGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTMSVDTSKNQF SLKLSSLTAADTAIYYCARYYDILTGFFDYWGQGTLVTV SSGGGGSGGGGSGGGGSVIWMTQSPSLLSASTGDSVTIS CRMSQDISSYLAWYQQKPGKAPELLIYAASSLQSGVPSR

FSGSGSGTDFTLTISSLQSEDFATYYCQQYDSFPPTFGQ 184 CAR anti-ROR1 (aa)

GTKVEFKRESKYGPPCPPCPMFWVLVVVGGVLACYSLLV TVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSC RFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLG RREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDK MAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALH MQALPPR

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSTTSYWAWI RQPPGKGLEWIGTIFYSGKTYNNPSLKSRVTMSVDTSKN HFSLKVNSVTAADTAVYYCARFDYGFHDAFDIWGQGTMV TVSSGGGGSGGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSLSPGERAT LSCRASQSITSDYLSWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGI

PARFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFVVYYCQQDYNLYTF 185 CAR anti-ROR1 (aa)

GQGTKLEIKRESKYGPPCPPCPMFWVLVVVGGVLACYSL LVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGC SCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELN LGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQK DKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDA LHMQALPPR QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISNYYWSWIRQ PAGKGLEWIGRIYTSGSTNYNPSLKSRVTMSVDTSKNQF SLKLSSLTAADTAIYYCARYYDILTGFFDYWGQGTLVTV SSGGGGSGGGGSGGGGSVIWMTQSPSLLSASTGDSVTIS CRMSQDISSYLAWYQQKPGKAPELLIYAASSLQSGVPSR FSGSGSGTDFTLTISSLQSEDFATYYCQQYDSFPPTFGQ

GTKVEFKRESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMT 186 CAR anti-ROR1 (aa)

KNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVL DSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYT QKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVK RGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGC ELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDK RRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGM KGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPG QGLEWMGWISAYNGNTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELR SLRSDDTAVYYCARDEDILTGYNYYGMDVWGQGTTVTVSSGG GGSGGGGSGGGGSQLVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHS

SYAIAWHQQQPEKGPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSS 187 CAR anti-ROR1 (aa)

GAERYLTISSLQSEDEADYYCQTWGTGIRVFGGGTKLTVLGE SKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVV GGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTT

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYN ELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQK DKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM QALPPR QLQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSINSTTSYWAWIRQP PGKGLEWIGTIFYSGKTYNNPSLKSRVTMSVDTSKNHFSLKV NSVTAADTAVYYCARFDYGFHDAFDIWGQGTMVTVSSGGGGS GGGGSGGGGSEIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSITSD YLSWYQQKPGQAPRLLIYGASTRATGIPARFSGSGSGTDFTL

TISSLQPEDFVVYYCQQDYNLYTFGQGTKLEIKRESKYGPPC 188 PPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIA CAR anti-ROR1 (aa)

VEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACY SLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCS CRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRR EEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAY SEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR QVQLLQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPG QGLEWMGWISAYTGNTRYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELR SLRSDDTAVYYCAREEGATTDYDYYGMDVWGQGTAVTVSSGG GGSGGGGSGGGGSQLVLTQSPSASASLGASVKLTCTLSSGHS SYAIAWHQQQPEKGPRYLMKLNSDGSHSKGDGIPDRFSGSSS GAERYLTISSLQSEDEADYYCQTWGTGIRVFGGGTKLTVLGE

SKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG 189 CAR anti-ROR1 (aa)

FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVD KSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVV GGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTT QEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYN ELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQK DKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHM

QALPPR Sequência atgcctctgctgctgcttctgcctcttctttgggctggtg 190 sinalizadora de ctctggct CD33 (nt) (O/SSE) Sequência atgccgctgctgctactgctgcccctgctgtgggcagggg sinalizadora de 191 ccctggct CD33 (nt) GenBank: M23197.1

SEQ ID Descrição Nº: Sequência Espaçador 192 gaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccctatg (dobradiça de IgG4)(nt)

GAATCTAAGTACGGACCGCCTTGTCCTCCATGTCCTGG CCAGCCAAGAGAACCCCAGGTGTACACACTGCCTCCAA GCCAAGAGGAAATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACC

TGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCTTCCGATATCGCCGT Espaçador de

GGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACA 193 dobradiça-CH3

AGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCTCATTC (nt)

TTCCTGTACAGCCGGCTGACCGTGGACAAGAGCAGATG GCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACG AGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAGTCTCTGAGC CTGAGCCTGGGCAAG

ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTP EVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQ Espaçador de FQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIE dobradiça 194 KTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKG IgG4/IgG2- FYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSR IgG2/IgG4 CH2- LTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK IgG4 CH3 (aa)

M gaatctaagtacggaccgccctgccctccctgccctgc tcctcctgtggctggaccaagcgtgttcctgtttccac ctaagcctaaagataccctgatgatttcccgcacacct gaagtgacttgcgtggtcgtggacgtgagccaggagga tccagaagtgcagttcaactggtacgtggacggcgtgg Espaçador de aagtccacaatgctaagactaaaccccgagaggaacag dobradiça tttcagtcaacttaccgggtcgtgagcgtgctgaccgt 195 IgG4/IgG2 - cctgcatcaggattggctgaacgggaaggagtataagt IgG2/IgG4 CH2- gcaaagtgtctaataagggactgcctagctccatcgag IgG4 CH3 (nt) aaaacaattagtaaggcaaaagggcagcctcgagaacc acaggtgtataccctgccccctagccaggaggaaatga ccaagaaccaggtgtccctgacatgtctggtcaaaggc ttctatccaagtgacatcgccgtggagtgggaatcaaa tgggcagcccgagaacaattacaagaccacaccacccg

SEQ ID Descrição Nº: Sequência tgctggactctgatggaagtttctttctgtattccagg ctgaccgtggataaatctcgctggcaggagggcaacgt gttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgcacaatc attatacacagaagtcactgagcctgtccctgggcaaa atg gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctc ctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaa gcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtg acctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgagg tgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaa cgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacc tacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggatt Espaçador de ggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaa dobradiça gggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggcc 196 IgG4/IgG2 - aagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctc IgG2/IgG4 CH2- IgG4 caagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgac CH3 (nt) O/SSE atgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtg gaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaaga ccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcct gtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagag ggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc acaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctggg caagatg ttttgggtgctggtcgtggtcggaggggtgctggcctgtt Domínio 197 acagcctgctggtgacagtcgctttcatcatcttctgggt transmembrana de g CD28 (nt)

ttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgtt Domínio 198 acagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggt transmembrana de c CD28 (nt) (O/SSE)

199 FRSTIYGSRLRIRNL ROR1, epitopo 1

200 LSVSAELVPTSSW ROR1, epitopo 2

201 HCKVSGNPPPTIRW ROR1, epitopo 3

202 WFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRL ROR1, epitopo 4

203 VSSTGVLFV ROR1, epitopo 5

SEQ ID Descrição Nº: Sequência 204 LFVKFGPPPTASP ROR1, epitopo 6 205 DEYEEDGFCQP ROR1, epitopo 7 206 QPYRGIACARFIGN ROR1, epitopo 8 207 SQFAIPSLCHYAFP ROR1, epitopo 9 208 AFPYCDETSSVP ROR1, epitopo 10 209 NVLCQTEYIFARSNPMILMR ROR1, epitopo 11 210 LKLPNCEDLPQP ROR1, epitopo 12 211 PESPEAANCIRIGIP ROR1, epitopo 13 212 VDYRGTVSVTKSGR ROR1, epitopo 14 213 SQYPHTHTFTALRF ROR1, epitopo 15 214 DSKEKNKMEILYILV ROR1, epitopo 16

MHRPRRRGTRPPLLALLAALLLAARGAAAQETELSVSAELVP TSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCKVSGN PPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRLRIRNLDTTDT GYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGYSDEYEEDG FCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIENQITAAFTMIG TSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSSVPKPRDLCRDEC EILENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQPESPEAA NCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKSGRQCQP WNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWCFTLD

ENFKSDLCDIPACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAIPLAIAL LFFFICVCRNNQKSSSAPVQRQPKHVRGQNVEMSMLNAYKPK ROR1 humana (Homo 215 SKAKELPLSAVRFMEELGECAFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVA sapiens) (Uniprot IKTLKDYNNPQQWTEFQQEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQEQ Q01973)

PVCMLFEYINQGDLHEFLIMRSPHSDVGCSSDEDGTVKSSLD HGDFLHIAIQIAAGMEYLSSHFFVHKDLAARNILIGEQLHVK ISDLGLSREIYSADYYRVQSKSLLPIRWMPPEAIMYGKFSSD SDIWSFGVVLWEIFSFGLQPYYGFSNQEVIEMVRKRQLLPCS EDCPPRMYSLMTECWNEIPSRRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHT SSTTPSGGNATTQTTSLSASPVSNLSNPRYPNYMFPSQGITP QGQIAGFIGPPIPQNQRFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTG PPRVIQHCPPPKSRSPSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEANI PLLPHMSIPNHPGGMGITVFGNKSQKPYKIDSKQASLLGDAN IHGHTESMISAEL

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

MHRPRRRGTRPPLLALLAALLLAARGAAAQETELSVSAEL VPTSSWNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCK VSGNPPPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRLRIRN LDTTDTGYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGY SDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIEN QITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSS VPKPRDLCRDECEILENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLP NCEDLPQPESPEAANCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVD YRGTVSVTKSGRQCQPWNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHS

YCRNPGNQKEAPWCFTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKN KMEILYILVPSVAIPLAIALLFFFICVCRNNQKSSSPPVQ ROR1 de macaco RQPKHVRGQNVEMSMLNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELG Rhesus (Macaca 216 ECAFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEF mulatta) (Uniprot QQEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQEQPVCMLFEYMNQGDL F6RUP2)

HEFLIMRSPHSDVGCSSDEDGTVKSSLDHGDFLHIAIQIA AGMEYLSSHFFVHKDLAARNILIGEQLHVKISDLGLSREI YSADYYRVQSKSLLPIRWMPPEAIMYGKFSSDSDIWSFGV VLWEIFSFGLQPYYGFSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDCPPR MYSLMTECWNEIPSRRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTT PSGGNATTQTTSLSASPVSNLSNPRYPNYIFPSQGITPQG QIAGFIGPPIPQNQRFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTG PPRVIQHCPPPKSRSPSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEA NIPLLPHMSIPNHPGGMGITVFGNKSQKPYKIDAKQASLL GDANIHGHTESMISAEL MLRTAHKLLYLILPLSFSLPFFFFSETELSVSAELVPTSS WNISSELNKDSYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCKVSGNP PPTIRWFKNDAPVVQEPRRLSFRSTIYGSRLRIRNLDTTD

TGYFQCVATNGKEVVSSTGVLFVKFGKDEYEEDGFCQPYR ROR1 de macaco

GIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIENQITAAFTMIGTSSH cynomolgus (Macaca

LSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSSVPKPRDLCRDECEI 217 fasicularis) ROR1

LENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQPESPEAA (Uniprot NCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKSGRQC A0A2K5WTX7)

QPWNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWC FTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAI PLAIALLFFFICVCRNNQKSSSPPVQRQPKHVRGQNVEMS MLNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELGECAFGKIYKGHLYL

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

PGMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEFQQEASLMAELHHPN IVCLLGAVTQEQPVCMLFEYMNQGDLHEFLIMRSPHSDVG CSSDEDGTVKSSLDHGDFLHIAIQIAAGMEYLSSHFFVHK DLAARNILIGEQLHVKISDLGLSREIYSADYYRVQSKSLL PIRWMPPEAIMYGKFSSDSDIWSFGVVLWEIFSFGLQPYY GFSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDCPPRMYSLMTECWNEIPS RRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTTPSGGNATTQTTSLS ASPVSNLSNPRYPNYIFPSQGITPQGQIAGFIGPPIPQNQ RFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTGPPRVIQHCPPPKSR SPSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEANIPLLPHMSIPNHP GGMGITVFGNKSQKPYKIDAKQASLLGDANIHGHTESMIS AEL SYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCKVSGNPPPTIRWFKND APVVQEPRRLSFRSTIYGSRLRIRNLDTTDTGYFQCVATN GKEVVSSTGVLFVKFGPPPTASPGYSDEYEEDGFCQPYRG IACARFIGNRTVYMESLHMQGEIENQITAAFTMIGTSSHL SDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSSVPKPRDLCRDECEIL ENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLPNCEDLPQPESPEAAN CIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVDYRGTVSVTKSGRQCQ PWNSQYPHTHTFTALRFPELNGGHSYCRNPGNQKEAPWCF

TLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKNKMEILYILVPSVAIP LAIALLFFFICVCRNNQKSSSPPVQRQPKHVRGQNVEMSM ROR1 de macaco LNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELGECAFGKIYKGHLYLP cynomolgus (Macaca 218 GMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEFQQEASLMAELHHPNI fasicularis) ROR1 VCLLGAVTQEQPVCMLFEYMNQGDLHEFLIMRSPHSDVGC (Uniprot SSDEDGTVKSSLDHGDFLHIAIQIAAGMEYLSSHFFVHKD A0A2K5WTX4)

LAARNILIGEQLHVKISDLGLSREIYSADYYRVQSKSLLP IRWMPPEAIMYGKFSSDSDIWSFGVVLWEIFSFGLQPYYG FSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDCPPRMYSLMTECWNEIPSR RPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTTPSGGNATTQTTSLSA SPVSNLSNPRYPNYIFPSQGITPQGQIAGFIGPPIPQNQR FIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPTGPPRVIQHCPPPKSRS PSSASGSTSTGHVTSLPSSGSNQEANIPLLPHMSIPNHPG GMGITVFGNKSQKPYKIDAKQASLLGDANIHGHTESMISA EL

SEQ ID Descrição Nº: Sequência

MHRPRRRGTRPPPLALLAALLLAARGADAQETELSVSAEL VPTSSWNTSSEIDKGSYLTLDEPMNNITTSLGQTAELHCK VSGNPPPSIRWFKNDAPVVQEPRRISFRATNYGSRLRIRN LDTTDTGYFQCVATNGKKVVSTTGVLFVKFGPPPTASPGS SDEYEEDGFCQPYRGIACARFIGNRTVYMESLHMQGEIEN QITAAFTMIGTSSHLSDKCSQFAIPSLCHYAFPYCDETSS VPKPRDLCRDECEVLENVLCQTEYIFARSNPMILMRLKLP NCEDLPQPESPEAANCIRIGIPMADPINKNHKCYNSTGVD YRGTVSVTKSGRQCQPWNSQYPHTHSFTALRFPELNGGHS YCRNPGNQKEAPWCFTLDENFKSDLCDIPACDSKDSKEKN

KMEILYILVPSVAIPLAIAFLFFFICVCRNNQKSSSPPVQ ROR1 de camundongo

RQPKPVRGQNVEMSMLNAYKPKSKAKELPLSAVRFMEELG 219 (mus musculus) ECTFGKIYKGHLYLPGMDHAQLVAIKTLKDYNNPQQWTEF (Uniprot Q9Z139)

QQEASLMAELHHPNIVCLLGAVTQEQPVCMLFEYMNQGDL HEFLIMRSPHSDVGCSSDEDGTVKSSLDHGDFLHIAIQIA AGMEYLSSHFFVHKDLAARNILIGEQLHVKISDLGLSREI YSADYYRVQSKSSLPIRWMPPEAIMYGKFSSDSDIWSFGV VLWEIFSFGLQPYYGFSNQEVIEMVRKRQLLPCSEDCPPR MYSLMTECWNEIPSRRPRFKDIHVRLRSWEGLSSHTSSTT PSGGNATTQTTSLSASPVSNLSNPRFPNYMFPSQGITPQG QIAGFIGPAIPQNQRFIPINGYPIPPGYAAFPAAHYQPAG PPRVIQHCPPPKSRSPSSASGSTSTGHVASLPSSGSNQEA NVPLLPHMSIPNHPGGMGITVFGNKSQKPYKIDSKQSSLL GDSHIHGHTESMISAEV

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Anticorpo antirreceptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1) ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR-H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR- L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) contidas em SEQ ID Nº: 115; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124; a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106; ou a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR-H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

2. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR- H3 contidas em SEQ ID Nº: 112 e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 115.

3. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR- H3 contidas em SEQ ID Nº: 121 e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 124.

4. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR- H3 contidas em SEQ ID Nº: 103 e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

5. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-H1, uma CDR-H2 e uma CDR- H3 contidas em SEQ ID Nº: 130 e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 contidas em SEQ ID Nº: 106.

6. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que a região VH compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 1 (CDR- H1), uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 2 (CDR-H2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia pesada 3 (CDR-H3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 1 (CDR-L1), uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 2 (CDR-L2) e uma região determinante de complementaridade de cadeia leve 3 (CDR-L3) que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-

L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente; a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente; ou a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR- L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

7. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 e 6, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 67, 71 e 73, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 75, 77 e 79, respectivamente.

8. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3 e 6, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 82, 86 e 88, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 90, 92 e 94, respectivamente.

9. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 4 e 6,

caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 52, 56 e 58, respectivamente, e a região VL compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

10. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 5 e 6, caracterizado pelo fato de que a região VH compreende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresen- tadas em SEQ ID Nºs: 52, 97 e 99, respectivamente, e a região VL compre- ende uma CDR-L1, uma CDR-L2 e uma CDR-L3 que compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 60, 62 e 64, respectivamente.

11. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 1 ou 6, caracterizado pelo fato de que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124;

a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

12. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende: uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%,

86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124; a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106; ou a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

13. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 6, 7, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 112 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 115.

14. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3, 6, 8, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99%

de identidade com SEQ ID Nº: 121 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 124.

15. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 4, 6, 9, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 103 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

16. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 5, 6, 10, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que a região VH é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 130 e a região VL é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 106.

17. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 6, 11 e 12, caracterizado pelo fato de que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

18. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, caracterizado pelo fato de que compreende uma região variável de cadeia pesada (VH) e uma região variável de cadeia leve (VL), em que: a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente; a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente; ou a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

19. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 6, 7, 11, 12, 13, 17 e 18, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 112 e 115, respectivamente.

20. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 3, 6, 8, 11, 12, 14, 17 e 18, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 121 e 124, respectivamente.

21. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 4, 6, 9, 11, 12, 15, 17 e 18, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região

VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 103 e 106, respectivamente.

22. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 5, 6, 10, 11, 12, 16, 17 e 18, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região VL são ou compreendem as sequências apresentadas em SEQ ID Nºs: 130 e 106, respectivamente.

23. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um anticorpo de comprimento total.

24. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é um fragmento de ligação a antígeno.

25. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 24, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo é recombinante.

26. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 25, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região VL são humanas ou são provenientes de uma proteína humana.

27. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 22 e 24 a 26, caracterizado pelo fato de que o fragmento de ligação a antígeno do mesmo compreende um Fv com uma única cadeia (scFv).

28. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a região VH é amino-terminal à região VL.

29. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 27, caracterizado pelo fato de que a região VH é carbóxi-terminal à região VL.

30. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27 a 29, caracterizado pelo fato de que a região VH e a região VL são unidas através de um ligante flexível.

31. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o ligante flexível compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 41.

32. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27, 28, 30 e 31, caracterizado pelo fato de que o scFv é ou compreende a sequên- cia apresentada em SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 118, 127, 109 ou 134.

33. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27, 28 e 30 a 32, caracterizado pelo fato de que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 118.

34. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27, 28 e 30 a 32, caracterizado pelo fato de que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 127.

35. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27, 28 e 30 a 32, caracterizado pelo fato de que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 109.

36. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 27, 28 e 30 a 32, caracterizado pelo fato de que o scFv é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 134.

37. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 36, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a uma proteína receptor órfão 1 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR1) humana.

38. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 37, caracterizado pelo fato de que a proteína ROR1 humana compreende uma sequência de aminoácidos apresentada em SEQ ID Nº: 144, 145 ou 146.

39. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com a reivindicação 37 ou 38, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga especificamente a um epitopo que consiste na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199 ou um epitopo presente na sequência apresentada em SEQ ID Nº: 199.

40. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 37 a 39, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga ainda a um ou mais epitopos que consistem em uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214 ou um epitopo presente dentro de uma sequência selecionada a partir de qualquer uma de SEQ ID Nºs: 200-214.

41. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 40, caracterizado pelo fato de que o dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo não se liga, não exibe reatividade cruzada com ou se liga em um nível ou grau ou afinidade a uma proteína receptor órfão 2 de tipo tirosina quinase de receptor (ROR2), opcionalmente uma proteína ROR2 humana.

42. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 41, caracterizado pelo fato de que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação do dito anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo a uma proteína ROR2 humana é pelo menos ou cerca de 75%, 80%, 90%, 95% ou 99% menor do que a extensão, nível ou grau ou afinidade de ligação a uma proteína ROR1 humana.

43. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 42, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10- 11 M a cerca de 1 x 10-7 M.

44. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) a partir de cerca de 1 x 10- 8 M a cerca de 1 x 10-7 M.

45. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 43, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de dissociação em equilíbrio (KD) de cerca de 5 x 10-11 M a cerca de 1 x 10-10 M.

46. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 45,

caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s.

47. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-3 1/s a cerca de 1 x 10-2 1/s.

48. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 46, caracterizado pelo fato de que o anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo se liga à proteína ROR1 humana com uma constante de taxa de dissociação (kd ou koff) a partir de cerca de 1 x 10-5 1/s a cerca de 1 x 10-4 1/s.

49. Proteína da superfície celular com uma única cadeia, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48.

50. Conjugado, caracterizado pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48 e uma molécula ou porção heteróloga.

51. Conjugado, de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que a molécula ou porção heteróloga é uma porção terapêutica.

52. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1 (CAR), caracterizado pelo fato de que compreende um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, uma região transmembrana e uma região de sinalização intracelular.

53. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a reivindicação 52, caracterizado pelo fato de que compreende ainda um espaçador entre o domínio de ligação a antígeno extracelular e o domínio transmembrana.

54. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a reivindicação 53, caracterizado pelo fato de que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

55. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a reivindicação 53 ou 54, caracterizado pelo fato de que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

56. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que o espaçador tem menos ou cerca de 15 aminoácidos de comprimento.

57. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 56, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 1, 26, 27, 29, 31, 32, 33 ou 135.

58. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 57, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG4, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG4 humana ou uma variante da mesma.

59. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 57, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma porção de uma região de dobradiça compreende a totalidade ou uma porção de uma região de dobradiça de IgG2, opcionalmente uma região de dobradiça de IgG2 humana ou uma variante da mesma.

60. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 58, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 1.

61. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 58, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135.

62. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante da mesma.

63. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 62, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma porção de uma região CH3 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 e/ou uma região CH3 de IgG2, em que a CH3 de IgG4 é opcionalmente uma região CH3 de IgG4 humana e a CH3 de IgG2 é opcionalmente uma região CH3 de IgG2 humana.

64. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, 62 e 63, caracterizado pelo fato de que o espaçador tem ou tem cerca de 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 ou 125 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

65. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 62 a 64, caracterizado pelo fato de que o espaçador tem cerca de 120 aminoácidos de comprimento.

66. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 62 a 65, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 3 ou 138.

67. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 62 a 66, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 3 ou 138.

68. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, caracterizado pelo fato de que o espaçador compreende pelo menos uma porção de uma região de dobradiça, pelo menos uma porção de uma região CH2 e pelo menos uma porção de uma região CH3 de uma imunoglobulina ou uma variante das mesmas.

69. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 68, caracterizado pelo fato de que pelo menos uma porção de uma região CH2 compreende a totalidade ou uma porção de uma região CH2 de IgG4 e/ou uma região CH2 de IgG2, em que a região CH2 de IgG4 é opcionalmente uma região CH2 de IgG4 humana e a região CH2 de IgG2 é opcionalmente uma região CH2 de IgG2 humana.

70. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55, 68 e 69, caracterizado pelo fato de que o espaçador tem ou tem cerca de 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229 ou 230 aminoácidos de comprimento ou tem um comprimento entre qualquer um dos anteriores.

71. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 68 a 70, caracterizado pelo fato de que: uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 compreendem a totalidade ou uma porção de uma região CH2 e a totalidade ou uma porção de uma região CH3 de IgG4 humana; ou uma ou mais da região de dobradiça, a região CH2 e a região CH3 é quimérica e compreende uma dobradiça, uma região CH2 e uma região CH3 de IgG4 humana e IgG2 humana; ou o espaçador compreende uma região de dobradiça quimérica de IgG4/2 ou uma região de dobradiça de IgG4 modificada que compreende pelo menos uma substituição de aminoácido comparado com uma região de dobradiça de IgG4 humana; uma região CH2 quimérica de IgG2/4; e uma região CH3 de IgG4.

72. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 68 a 71, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade com SEQ ID Nº: 37 ou 194.

73. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 53 a 55 e 68 a 72, caracterizado pelo fato de que o espaçador é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 37 ou 194.

74. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 73, caracterizado pelo fato de que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD4, CD28 ou CD8.

75. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 74, caracterizado pelo fato de que a região transmembrana é ou compreende um domínio transmembrana de CD28, opcionalmente uma CD28 humana.

76. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 75, caracterizado pelo fato de que o domínio transmembrana é ou compreende SEQ ID Nº: 8 ou 149 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 8 ou 149.

77. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 76, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização intracelular compreende um domínio de sinalização intracelular capaz de induzir a um sinal de ativação primário em uma célula T, é um componente de receptor de célula T (TCR) e/ou compreende um motivo de ativação com base em tirosina imunorreceptor (ITAM).

78. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 77, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ), opcionalmente uma cadeia CD3ζ humana.

79. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 78, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%,

93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 13, 14 ou 15.

80. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 79, caracterizado pelo fato de que o domínio de sinalização intracelular é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 13.

81. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52-80, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização intracelular compreende ainda uma região de sinalização coestimuladora.

82. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a reivindicação 81, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora está entre a região transmembrana e o domínio de sinalização intracelular.

83. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com a reivindicação 81 ou 82, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de uma molécula coestimuladora de células T ou uma porção de sinalização da mesma.

84. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 83, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, 4-1BB ou ICOS.

85. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 84, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de CD28, opcionalmente uma CD28 humana.

86. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 85, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 10 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 10.

87. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 84, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora compreende um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB, opcionalmente uma 4-1BB humana.

88. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 84 e 87, caracterizado pelo fato de que a região de sinalização coestimuladora é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 12 ou uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos igual ou cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com SEQ ID Nº: 12.

89. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 88, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico codificado compreende a partir de seu N- para C-términos na ordem: o domínio de ligação a antígeno extracelular, o espaçador, a região transmembrana e a região de sinalização intracelular.

90. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 89, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno é um scFv e o receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seu N- para C- términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende o scFv, um espaçador que compreende uma dobradiça de IgG4 modificada, opcionalmente compreendendo a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 135; um domínio transmembrana,

opcionalmente um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora, opcionalmente compreendendo um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

91. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 81 a 89, caracterizado pelo fato de que o domínio de ligação a antígeno é um scFv e o receptor antigênico quimérico codificado compreende, a partir de seu N- para C- términos na ordem: um domínio de ligação a antígeno extracelular que compreende o scFv, um espaçador que compreende uma região de dobradiça-CH3 de IgG4 modificada, opcionalmente compreendendo a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 138; um domínio transmembrana, opcionalmente um domínio transmembrana de uma CD28 humana; e uma região de sinalização intracelular que compreende um domínio de sinalização citoplasmático de uma cadeia CD3-zeta (CD3ζ) e um domínio de sinalização intracelular de uma região de sinalização coestimuladora, opcionalmente compreendendo um domínio de sinalização intracelular de 4-1BB.

92. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 91, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184, 185, 186, 187, 188 ou 189.

93. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

94. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 93, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 184.

95. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

96. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92 e 95, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 185.

97. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186.

98. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92 e 97, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 186.

99. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187.

100. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92 e 99, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 187.

101. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188.

102. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92 e 101, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 188.

103. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189 ou uma sequência que exibe pelo menos 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%,

94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de sequência com a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189.

104. Receptor antigênico quimérico anti-ROR1, de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 92 e 103, caracterizado pelo fato de que o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 é ou compreende a sequência apresentada em SEQ ID Nº: 189.

105. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica o anticorpo anti-ROR1 ou um domínio de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48.

106. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49.

107. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica o conjugado como definido na reivindicação 50 ou 51.

108. Polinucleotídeo, caracterizado pelo fato de que compreende um ácido nucleico que codifica o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104.

109. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 105 a 108, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo é otimizado através de eliminação do sítio de emenda.

110. Polinucleotídeo, de acordo com qualquer uma das reivindicações 105 a 109, caracterizado pelo fato de que o polinucleotídeo tem códons otimizados para expressão em uma célula humana.

111. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110.

112. Vetor, de acordo com a reivindicação 111, caracterizado pelo fato de que o vetor é um vetor viral.

113. Vetor, de acordo com a reivindicação 112, caracterizado pelo fato de que o vetor viral é um vetor retroviral ou um vetor lentiviral.

114. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49 ou o conjugado como definido na reivindicação 50 ou

51.

115. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104.

116. Célula, caracterizada pelo fato de que compreende o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110 ou o vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113.

117. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 116, caracterizada pelo fato de que é um linfócito.

118. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 116, caracterizada pelo fato de que é uma célula NK ou uma célula T.

119. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 118, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula T e a célula T é uma célula T CD4+ ou uma célula T CD8+.

120. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 119, caracterizada pelo fato de que a célula é uma célula primária obtida a partir de um indivíduo.

121. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 120, caracterizada pelo fato de que, dentre uma pluralidade de células, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8%, igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade compreendem um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

122. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121.

123. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, o conjugado como definido na reivindicação 50 ou 51 ou o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104.

124. Composição, de acordo com a reivindicação 122 ou 123, caracterizada pelo fato de que compreende ainda um excipiente farmaceuticamente aceitável.

125. Composição, de acordo com a reivindicação 122 ou 124, caracterizada pelo fato de que a composição compreende células T CD4+ e CD8+ e a proporção de células T CD4+ para CD8+ é a partir de igual ou cerca de 1:3 a 3:1, opcionalmente igual ou cerca de 1:2 a 2:1, opcionalmente igual ou cerca de 1:1.

126. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 122, 124 e 125, caracterizada pelo fato de que, dentre uma pluralidade de células na composição, menos do que igual ou cerca de 10%, igual ou cerca de 9%, igual ou cerca de 8%, igual ou cerca de 7%, igual ou cerca de 5%, igual ou cerca de 4%, igual ou cerca de 3%, igual ou cerca de 2% ou igual ou cerca de 1% das células na pluralidade compreendem um receptor antigênico quimérico anti-ROR1 que exibe sinalização tônica e/ou atividade ou sinalização independente de antígeno.

127. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121 ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 122 a 126 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

128. Célula, de acordo com qualquer uma das reivindicações 114 a 121, ou composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 122 a 126, caracterizada pelo fato de que é para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

129. Uso da célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121 ou da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 122 a 126, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

130. Uso da célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121 ou da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 122 a 126, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

131. Método de tratamento, caracterizado pelo fato de que compreende administrar o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, o conjugado como definido na reivindicação 50 ou 51, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104, o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110 ou o vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113 a um indivíduo que tem uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

132. Anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 48, proteína da superfície celular com uma única cadeia de acordo com a reivindicação 49, conjugado de acordo com a reivindicação 50 ou 51, receptor antigênico quimérico anti-ROR1 de acordo com qualquer uma das reivindicações 52 a 104, polinucleotídeo de acordo com qualquer uma das reivindicações 105 a 110 ou vetor de acordo com qualquer uma das reivindicações 111 a 113, caracterizados pelo fato de que são para uso no tratamento de uma doença ou transtorno associado à ROR1.

133. Uso do anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, conjugado como definido na reivindicação 50 ou 51, receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104, polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110 ou vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113, caracterizado pelo fato de que é para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

134. Uso do anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, conjugado de acordo com a reivindicação 50 ou 51, receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104, polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110 ou vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113, caracterizado pelo fato de que é para o tratamento de uma doença ou transtorno associado à proteína ROR1.

135. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor ou uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 134, caracterizados pelo fato de que a doença ou transtorno associado à proteína ROR1 é um câncer.

136. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 135, caracterizados pelo fato de que o câncer é um câncer que expressa ROR1.

137. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 136, caracterizados pelo fato de que o câncer é associado a um tumor sólido que expressa ROR1 ou uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

138. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 137, caracterizados pelo fato de que o câncer é associado a um tumor sólido que expressa ROR1.

139. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 137 ou 138, caracterizados pelo fato de que o câncer está associado com um tumor sólido é selecionado a partir do grupo que consiste em neuroblastoma, carcinoma de células renais, câncer de cólon, câncer colorretal, câncer de mama, câncer de células escamosas epiteliais, melanoma, mieloma, câncer de estômago, câncer de cérebro, câncer de pulmão, câncer de pâncreas, câncer cervical, câncer de ovário, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de próstata, câncer testicular, câncer de tireoide, câncer de útero, câncer de adrenal e câncer de cabeça e pescoço.

140. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 139, caracterizados pelo fato de que o câncer de pulmão não é câncer de pulmão de células pequenas (NSCLC), adenocarcinoma de pulmão, adenocarcinoma, carcinoma de células escamosas, carcinoma de células pequenas e carcinoide atípico.

141. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 140, caracterizados pelo fato de que o câncer de pulmão é um NSCLC.

142. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 139, caracterizados pelo fato de que o câncer de mama é um câncer de mama triplo negativo (TNBC).

143. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 127 a 137, caracterizados pelo fato de que o câncer é associado a uma malignidade hematológica que expressa ROR1.

144. Método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou uso de acordo com a reivindicação 143, caracterizados pelo fato de que a malignidade hematológica é selecionada a partir de grupo que consiste em leucemia de células B, linfoma, leucemia linfocítica crônica (CLL) de células B, leucemia mieloide aguda (AML), leucemia linfocítica aguda (ALL), linfoma de Burkitt ou linfoma de células do manto (MCL).

145. Kit, caracterizado pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, o conjugado, como definido na reivindicação 50 ou 51, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104, o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110, o vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113, a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121 ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 122 a 126 e instruções para uso, opcionalmente, em que as instruções são para administração do anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, a proteína da superfície celular com uma única cadeia, o conjugado, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1, a célula ou a composição, opcionalmente de acordo com o método, célula, composição, anticorpo ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo, proteína da superfície celular com uma única cadeia, conjugado, receptor antigênico quimérico, polinucleotídeo ou vetor para uso ou o uso como definido em qualquer uma das reivindicações 127 a 144.

146. Artigo de fabricação,fabricação caracterizado pelo fato de que compreende o anticorpo anti-ROR1 ou fragmento de ligação a antígeno do mesmo como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 48, a proteína da superfície celular com uma única cadeia como definida na reivindicação 49, o conjugado como definido na reivindicação 50 ou 51, o receptor antigênico quimérico anti-ROR1 como definido em qualquer uma das reivindicações 52 a 104, o polinucleotídeo como definido em qualquer uma das reivindicações 105 a 110, o vetor como definido em qualquer uma das reivindicações 111 a 113, a célula como definida em qualquer uma das reivindicações 114 a 121 ou a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 122 a 126 ou o kit como definido na reivindicação 145.

24 horas após estim.

Com ROR1-Fc ligada à placa

Petição 870210068460, de 28/07/2021, pág. 760/805 Proporção relativa para R12 24 horas após estim.

ROR1-Fc ligada à placa 1/45

Proporção relativa para R12 Doador 24 horas após estim.

Com ROR1-Fc ligada à placa Doador Doador

Proporção relativa para R12

Petição 870210068460, de 28/07/2021, pág. 761/805 Proporção relativa para R12 Proporção relativa para R12 Proporção relativa para R12 24-70 horas 24-70 horas 24-70 horas

Doador Doador Doador 2/45

Petição 870210068460, de 28/07/2021, pág. 762/805 Intensidade total integrada de Objeto Intensidade total integrada de Objeto vermelho corrigida para a linha de base vermelho corrigida para a linha de base 2 2 (RCU x μm /imagem) (RCU x μm /imagem) Doador

Doador

Tempo decorrido (horas) Tempo decorrido (horas)

Simulado Tumor apenas 3/45