JP2023522857A - Ｂ細胞成熟抗原を標的とするキメラ抗原受容体によって操作された細胞療法に関する方法および使用 - Google Patents

Ｂ細胞成熟抗原を標的とするキメラ抗原受容体によって操作された細胞療法に関する方法および使用 Download PDF

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Abstract

特定の形質細胞悪性腫瘍を含む疾患および状態を処置するための、T細胞などの細胞の用量の投与を含む養子細胞療法に関連する方法および使用を提供する。細胞は、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）などの組換え受容体を発現する。いくつかの態様において、方法は、多発性骨髄腫（MM）を有する対象を処置するためのものである。TIFF2023522857000052.tif121170

Description

関連出願の相互参照
本出願は、2020年4月10日に出願された「METHODS AND USES RELATED TO CELL THERAPY ENGINEERED WITH A CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR TARGETING B-CELL MATURATION ANTIGEN」と題する米国仮出願第63/008,564号の優先権を主張し、その内容はあらゆる目的のために参照によりその全体が組み入れられる。
配列表の参照による組入れ
本出願は電子形式の配列表と共に出願されている。配列表は、2021年4月8日に作成された735042023640SeqList.Txtという名称のファイルとして提供され、そのサイズは345,310バイトである。配列表の電子形式の情報は参照によりその全体が本明細書に組み入れられる。
分野
本開示は、いくつかの局面において、ある特定の形質細胞悪性腫瘍を含む疾患および状態を処置するための、T細胞などの細胞の用量の投与を伴う養子細胞療法に関する方法および使用に関する。細胞は、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）などの組換え受容体を発現する。いくつかの態様において、方法は、多発性骨髄腫（MM）を有する対象を処置するためのものである。
背景
B細胞成熟抗原（BCMA）は、成熟Bリンパ球上に発現される膜貫通III型タンパク質である。そのリガンドの1つ、TNFファミリーのB細胞活性化因子（BAFF）、または増殖誘導リガンド（APRIL）にBCMAが結合した後、生存促進性細胞シグナルがB細胞に送達され、これが形質細胞の生存に必要であることが分かっている。BCMAの発現は、がん、自己免疫障害および感染症を含むいくつかの疾患に関連している。BCMA結合性キメラ抗原受容体（CAR）、およびそのようなCARを発現する細胞を含む様々なBCMA指向性療法が利用可能である。しかし、操作された抗BCMA CAR発現細胞を伴う養子細胞療法方法を含む、BCMAに関連する疾患および状態を処置するための改善された方法が依然として必要とされている。そのような必要性を満たす態様が本明細書において提供される。
概要
B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される。細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用も提供される。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）のある用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを対象に投与する工程であって、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の前に投与される、工程。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されている対象に投与する工程。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の候補である対象に投与する工程。
以下の工程を伴う、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）のある用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを対象に投与する工程であって、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の前に投与される、工程。
以下の工程を伴う、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されている対象に投与する工程。
以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の候補である対象に投与する工程。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内に、対象に、IL-1Raの少なくとも1用量が投与されている。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも1用量には、IL-1Raの少なくとも2用量が含まれる。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを対象に投与する工程であって、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量を対象に投与する工程であって、IL-1Raの少なくとも1用量が、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の対象への投与前約24時間以内または投与前約24時間に投与され、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を対象に投与する工程であって、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に、対象に、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されており、操作されたT細胞の該用量の投与の後に、対象に、IL-1Raの少なくとも1用量が投与されることになる、工程。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
以下の工程を伴う、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを対象に投与する工程であって、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
以下の工程を伴う、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の21、18、15もしくは12時間以内、または約21、18、15もしくは12時間以内に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の21時間以内または約21時間以内に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の18時間以内または約18時間以内に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の15時間以内または約15時間以内に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の12時間以内または約12時間以内に投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の前に投与されるIL-Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量が含まれる。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の前に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の6、5、4、3もしくは2時間以内、または約6、5、4、3もしくは2時間以内に投与される。いくつかの態様において、IL-1RA2の少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の6時間前または約6時間前に投与される。いくつかの態様において、IL-1RA2の少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の5時間前または約5時間前に投与される。いくつかの態様において、IL-1RA2の少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の4時間前または約4時間前に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。いくつかの態様において、IL-1RA2の少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の2時間前または約2時間前に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用はまた、操作されたT細胞の該用量を投与した後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程を伴う。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7または8用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの3、4、5、6または7用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも3用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも4用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの5用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも6用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも7用量が含まれる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量には、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与されるIL-1Raの少なくとも8用量が含まれる。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作された細胞の該用量の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、連続した日にわたって毎日投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は4用量であり、4用量のうちの1つは、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続4日間にわたって毎日投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続5日間にわたって毎日投与される5用量である。いくつかの態様において、IL-1Raのある用量は、2～5日目に24時間ごと（q24h）に投与される。
以下の工程を伴う、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法および使用が本明細書において提供される:インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも6用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを対象に投与する工程であって、細胞療法が、1日目に投与され、（a）IL-1Raの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に、任意で操作されたT細胞の該用量の投与の前夜に、投与され、（b）IL-1Raの1用量が、1日目の操作されたT細胞の該用量の投与前約3時間以内または投与前約3時間に投与され、（c）IL-1Raの4用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与され、4用量のうちの1用量が、2、3、4および5日目に毎日投与される、工程。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用はまた、対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、操作された細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの追加の少なくとも1用量を投与する工程を伴う。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、複数の用量の投与を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、複数の用量は、CRSの症状または徴候が消散されるまで、連続した日にわたって毎日投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、複数の用量は、CRSの症状または徴候が消散されるまで、連続した日にわたって1日2回投与される。いくつかの態様において、IL-1Raのある用量は、12時間ごと（q12h）に投与される。いくつかの態様において、対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、IL-1Raのある用量は、CRSの症状または徴候が消散するまで、12時間ごと（q12h）に投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの毎日の投与は、毎日同じ時間またはほぼ同じ時間に投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raは組換えIL-1Raである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raは、SEQ ID NO:256に示す配列、またはIL-1Rアンタゴニストとしての機能を保持する、SEQ ID NO:256に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくはそれ以上の配列同一性を有する配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raは、SEQ ID NO:256に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raは、IL-1Rアンタゴニストとしての機能を保持する、SEQ ID NO:256に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％またはそれ以上の配列同一性を有する配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raはアナキンラである。いくつかの態様において、アナキンラは組換えアナキンラである。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、組換えIL-1Raの各用量は、500mgもしくは約500mg、400mgもしくは約400mg、300mgもしくは約300mg、200mgもしくは約200mg、100mgもしくは約100mg、もしくは50mgもしくは約50mg、または以上のいずれかにより定義される範囲である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、500mgもしくは約500mg、400mgもしくは約400mg、300mgもしくは約300mg、200mgもしくは約200mg、100mgもしくは約100mg、もしくは50mgもしくは約50mg、または以上のいずれかにより定義される範囲である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、500mgまたは約500mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、400mgまたは約400mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、300mgまたは約300mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、200mgまたは約200mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、組換えIL-1Raの各用量は、50mgまたは約50mgから、200mgまたは約200mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、組換えIL-1Raの各用量は、100mgまたは約100mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの各用量は、50mgまたは約50mgである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raは皮下投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法の投与に関連する毒性の発生の重症度を低下させ、毒性の発生を減弱し、および/または予防する。任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法の投与に関連する毒性の発生の重症度を低下させる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法の投与に関連する毒性の発生を減弱する。任意の提供される態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法の投与に関連する毒性の発生を予防する。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、毒性はサイトカイン放出症候群（CRS）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CRSは、重度のCRS、またはグレード3以上のCRSである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CRSは重度である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CRSは、3以上のCRSである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、毒性は神経毒性（NT）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、NTは、重度のNT、またはグレード2以上のNT、もしくはグレード3以上のNTである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、NTは、重度のNTである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、NTは、グレード2以上のNTである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、NTは、グレード3以上のNTである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、毒性は、マクロファージ活性化症候群（MAS）または血球貪食性リンパ組織球症（HLH）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、毒性はマクロファージ活性化症候群（MAS）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、毒性は血球貪食性リンパ組織球症（HLH）である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量の投与の時点または投与の前に、BCMAに特異的な第2のCARを発現する操作されたT細胞の先行用量、BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、およびBCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が対象に投与されている。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を対象に投与する工程であって、操作されたT細胞の該用量の投与の時点または投与の前に、BCMAに特異的な第2のCARを発現する操作されたT細胞の先行用量、BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、およびBCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が対象に投与されている、工程。
以下の工程を伴う、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置するための方法および使用が本明細書において提供される:BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、BCMAに特異的な第2のCARを発現する操作されたT細胞の先行用量、BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、およびBCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与、の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法を以前に受けたことのある対象に、投与する工程。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発している。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の1年以内または約1年以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の1年以内または約1年以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発している。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の1年以内または約1年以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の6ヶ月以内または約6ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の6ヶ月以内または約6ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発している。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の6ヶ月以内または約6ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の3ヶ月以内または約3ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の3ヶ月以内または約3ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発している。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前の3ヶ月以内または約3ヶ月以内に、1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは、二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）であるか、または二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは二重特異性抗体である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは二重特異性抗体を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEは、AMG 420/BI 836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135およびREGN5458のうちの1つまたは複数の中から選択される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはAMG 420/BI 836909である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはAMG 701である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはCC-93269である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはJNJ-64007957である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはPF-06863135である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性TCEはREGN5458である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性ADCは、ベランタマブ・マフォドチン（Belantamab mafodotin）（GSK2857916）、MEDI2228、CC-99712およびAMG 224のうちの1つまたは複数の中から選択される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性ADCはベランタマブ・マフォドチン（GSK2857916）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性ADCはMEDI2228である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性ADCはCC-99712である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA指向性ADCはAMG 224である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、（a）SEQ ID NO:116に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:119に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）;それぞれSEQ ID NO:97、101および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;それぞれSEQ ID NO:96、100および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;それぞれSEQ ID NO:95、99および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;それぞれSEQ ID NO:94、98および102に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:104、106および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;または、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含むVHおよびSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含むVL、を含む細胞外抗原結合ドメイン、（b）IgG4/2キメラヒンジもしくは改変IgG4ヒンジ、IgG2/4キメラCH2領域、およびIgG4 CH3領域を含むスペーサー、例えば、約228アミノ酸長であるスペーサー、またはSEQ ID NO:174に示すスペーサー、（c）膜貫通ドメイン、ならびに（d）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む細胞内シグナル伝達領域を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、VHは、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列であるか、またはSEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含み、VLは、SEQ ID NO:119のアミノ酸配列であるか、またはSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、VHは、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列であり、VLは、SEQ ID NO:119のアミノ酸配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、VHは、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含み、VLは、SEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインはscFvを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインはscFvである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、VHとVLとがフレキシブルリンカーによって連結される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、フレキシブルリンカーは、アミノ酸配列
Figure 2023522857000002
を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、フレキシブルリンカーはアミノ酸配列
Figure 2023522857000003
である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、VHはVLのカルボキシ末端側にある。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:114のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸は、（a）SEQ ID NO:113のヌクレオチドの配列、（b）それに対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列、または（c）（a）もしくは（b）の縮重配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸は、SEQ ID NO:113のヌクレオチドの配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸は、SEQ ID NO:113に対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸は、SEQ ID NO:115のヌクレオチドの配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、ヒトCD28由来の膜貫通ドメインであるか、またはヒトCD28由来の膜貫通ドメインを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、ヒトCD28由来の膜貫通ドメインである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、ヒトCD28由来の膜貫通ドメインを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に示す配列であるか、またはSEQ ID NO:138に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインSEQ ID NO:138に示す配列。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様において、第1のCARは、SEQ ID NO:125に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:127に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）;ならびに/または、それぞれSEQ ID NO:260、261および262に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:257、258および259に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL、を有する細胞外抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様において、VHは、SEQ ID NO:125のアミノ酸配列であるか、またはSEQ ID NO:125のアミノ酸配列を含み、VLは、SEQ ID NO:127のアミノ酸配列であるか、またはSEQ ID NO:127のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、細胞外抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:128のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:128のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に示す配列であるか、またはSEQ ID NO:143に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に示す配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、細胞質シグナル伝達ドメインは、SEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、CD28、4-1BBもしくはICOSの細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、CD28の細胞内シグナル伝達ドメインを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、ICOSの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、4-1BBはヒト4-1BBである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列であるか、またはSEQ ID NO:4に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、共刺激シグナル伝達領域は、膜貫通ドメインとCD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインとの間にある。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、そのN末端からC末端に向かって順に、細胞外抗原結合ドメイン、スペーサー、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達領域を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、（a）SEQ ID NO:116に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:119に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）を含む細胞外抗原結合ドメイン、（b）改変IgG4ヒンジ、IgG2/4キメラCH2領域、およびIgG4 CH3領域を含み、約228アミノ酸長であるスペーサー、（c）ヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに（d）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達領域とを含む細胞内シグナル伝達領域を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、（a）SEQ ID NO:114に示す配列またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む細胞外抗原結合ドメイン、（b）SEQ ID NO:174に示す配列またはSEQ ID NO:174に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含むスペーサー、（c）SEQ ID NO:138に示す配列またはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む膜貫通ドメイン、ならびに（d）SEQ ID NO:143に示す配列またはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む細胞質シグナル伝達と、SEQ ID NO:4に示す配列またはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む細胞内シグナル伝達領域を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、（a）SEQ ID NO:114に示す配列を含む細胞外抗原結合ドメイン、（b）SEQ ID NO:174に示す配列を含むスペーサー、（c）SEQ ID NO:138に示す配列を含む膜貫通ドメイン、ならびに（d）SEQ ID NO:143に示す配列を含む細胞質シグナル伝達と、SEQ ID NO:4に示す配列を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む細胞内シグナル伝達領域を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、SEQ ID NO:19に示す配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、SEQ ID NO:13に示す配列またはそれに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、SEQ ID NO:13に示す配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARは、SEQ ID NO:13に対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％または99％の配列同一性を呈するポリヌクレオチド配列によってコードされる。
第1のCARがSEQ ID NO:312に示す配列を含むいくつかの態様において。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARと第2のCARとは、BCMAの同じエピトープに結合する。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARと第2のCARとは、BCMAの異なるエピトープに結合する。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARと第2のCARとは異なる。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、それぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、およびそれぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域、SEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域、SEQ ID NO:265に示す配列のアミノ酸残基22～493、ならびに/またはSEQ ID NO:266によってコードされる配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、それぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:263に示す配列のアミノ酸残基22～493を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:264によってコードされる配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:263に示す配列のアミノ酸残基22～493、およびSEQ ID NO:264によってコードされる配列を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:263に示す配列のアミノ酸残基22～493、および/またはSEQ ID NO:264よってコードされる配列を含む。いくつかの態様において、第2のCARは、SEQ ID NO:312によってコードされる配列を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは多価CARである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:267～304のいずれか1つに示す配列の残基22で始まり末端までのアミノ酸残基を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは多価CARである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:265～302のいずれか1つに示す配列の残基22で始まり末端までのアミノ酸残基を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、センチリン含有CARを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARは、SEQ ID NO:310に示す配列のアミノ酸残基22～334を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARと第2のCARとは同じである。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量を以前に投与されたことのある同じ対象から得られたT細胞を含む試料から生成される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、対象に第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量が投与された後に対象から得られたT細胞を含む試料から生成される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、対象から得られた試験試料において、（i）第2のCARを発現する細胞、または（ii）第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、対象から得られた試験試料において、第2のCARを発現する細胞の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、対象から得られた試験試料において、第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、試験試料は、同じ対象由来の第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量を生成するためにT細胞を含む試料を得るのと同時に対象から得られる。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量を含む組成物中の（i）第2のCARを発現する細胞、または（ii）第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、第2のCARを発現する細胞の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、方法は、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量を含む組成物中の第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程をさらに含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARを発現する細胞の存在または量を評価する工程は、操作されたT細胞を含む試料、または組成物の該用量と、精製BCMAまたは組換えBCMAとを接触させることによって実行される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARを発現する細胞の存在または量を評価する工程は、操作されたT細胞の試料または該用量と、BCMA-Fcとを接触させることによって実行される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程は、定量ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって実行される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、表面BCMAを発現する細胞への曝露に続く細胞外抗原結合ドメインおよび/もしくは第1のCARの結合または第1のCARの機能もしくは活性を示す尺度は、可溶型または脱落（shed）型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない。任意の提供される態様のいくつかにおいて、表面BCMAを発現する細胞への細胞外抗原結合ドメインの結合は、可溶型または脱落型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない。任意の提供される態様のいくつかにおいて、表面BCMAを発現する細胞への第1のCARの結合は、可溶型または脱落型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない。任意の提供される態様のいくつかにおいて、表面BCMAを発現する細胞への曝露に続く第1のCARの機能または活性を示す尺度は、可溶型または脱落型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない。任意の提供される態様のいくつかにおいて、可溶型または脱落型のBCMAの濃度または量は、対象もしくは多発性骨髄腫患者の、または多発性骨髄腫患者集団における平均での、血清または血液または血漿中に存在する濃度または量に対応するか、または同じアッセイにおいて、参照抗BCMA組換え受容体、例えば参照抗BCMA CARを発現する細胞では、結合または尺度が低減もしくはブロックされるかまたは実質的に低減もしくはブロックされる可溶型もしくは脱落型BCMAの濃度もしくは量である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1×107個または約1×107個のCAR＋T細胞から、2×109個または約2×109個のCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1×107個または約1×107個のCAR＋T細胞から、1×109個または約1×109個のCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1×108個または約1×108個のCAR＋T細胞から、1×108個または約1×108個のCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の該用量は、5×107個または約5×107個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1×108個または約1×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1.5×108個または約1.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、2×108個または約2×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、2.5×108個または約2.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、3×108個または約3×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、3.5×108個または約3.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、4×108個または約4×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、4.5×108個または約4.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、5×108個または約5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、5.5×108個または約5.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、6×108個または約6×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、8×108個または約8×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1×109個または約1×109個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、1.5×109個または約1.5×109個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、2×109個または約2×109個の細胞またはCAR＋T細胞を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、CD4＋T細胞とCD8＋T細胞との組合せを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、CD4＋CAR＋T細胞とCD8＋CAR＋T細胞との組合せを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋CAR＋T細胞対CD8＋CAR＋T細胞および/またはCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比は、1:1もしくはおよそ1:1であるか、または1:3もしくはおよそ1:3から、3:1もしくはおよそ3:1である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋CAR＋T細胞対CD8＋CAR＋T細胞の比は、1:1またはおよそ1:1である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋CAR＋T細胞対CD8＋CAR＋T細胞の比は、1:3またはおよそ1:3から、3:1またはおよそ3:1である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、CD4＋CAR＋T細胞とCD8＋CAR＋T細胞との組合せを含む。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比は、1:1もしくはおよそ1:1であるか、または1:3もしくはおよそ1:3から、3:1もしくはおよそ3:1である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比は、1:1またはおよそ1:1である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、CD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比は、1:3またはおよそ1:3から、3:1またはおよそ3:1である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量は、CD3＋CAR＋T細胞を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量中のCAR＋T細胞の25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満、または約25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満は、アポトーシスのマーカー、例えば、アネキシンVまたは活性カスパーゼ3を発現する。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量中のCAR＋T細胞の25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満、または約25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満は、アポトーシスのマーカーを発現する。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーはアネキシンVである。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは活性カスパーゼ3である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、20～40または約20～40mg/m2対象体表面積のフルダラビンの投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、30または約30mg/m2のフルダラビンの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、200～400または約200～400mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドの投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、第1のCARを発現する操作されたT細胞の該用量の投与の前に、300または約300mg/m2のシクロホスファミドの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、リンパ球枯渇療法は、3日間にわたる、30または約30mg/m2対象体表面積のフルダラビンの毎日の投与、および300または約300mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドの毎日の投与を含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA発現に関連する疾患または障害は、自己免疫疾患または自己免疫障害である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA発現に関連する疾患または障害はがんである。任意の提供される態様のいくつかにおいて、BCMA発現がん。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんはB細胞悪性腫瘍である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは、リンパ腫、白血病または形質細胞悪性腫瘍（plasma cell malignancy）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんはリンパ腫であり、リンパ腫は、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（NHL）、ホジキンリンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（mucosa-associated lymphatic tissue lymphoma）（MALT）、辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫、結節性単球様B細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、肺B細胞血管中心性リンパ腫（pulmonary B cell angiocentric lymphoma）、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（LPL）またはマントル細胞リンパ腫（MCL）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは白血病であり、白血病は、慢性リンパ性白血病（CLL）、形質細胞性白血病または急性リンパ性白血病（ALL）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは形質細胞悪性腫瘍であり、形質細胞悪性腫瘍は、多発性骨髄腫（MM）または形質細胞腫である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは多発性骨髄腫（MM）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは再発性および/または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは再発性または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは再発性多発性骨髄腫（MM）である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、がんは難治性多発性骨髄腫（MM）である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象に、疾患または障害のための3つ以上の先行療法、例えば、4つ以上の先行療法が投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、疾患または障害のための3つ以上の先行療法、任意で4つ以上の先行療法は、自家幹細胞移植（ASCT）、免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤および抗CD38抗体の中から選択される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、免疫調節剤は、サリドマイド、レナリドミドおよびポマリドミドの中から選択される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブおよびイキサゾミブの中から選択される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、抗CD38抗体は、ダラツムマブであるか、またはダラツムマブを含む。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象に、3～15もしくは4～15の先行療法、または約10の先行療法が投与されている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数の後に再発しているか、または3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、1つもしくは複数の先行療法後に再発しているか、または1つもしくは複数の先行療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、少なくとも3つもしくは少なくとも4つの先行療法後に再発しているか、または少なくとも3つもしくは少なくとも4つの先行療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、少なくとも3つの先行療法後に再発しているか、または少なくとも3つの先行療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、少なくとも4つの先行療法後に再発しているか、または少なくとも4つの先行療法に対して難治性になっている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、レナリドミド、ポマリドミドおよび/または抗CD38モノクローナル抗体に対して難治性または不応になっている。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、先行自家幹細胞移植を受けている。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、先行自家幹細胞移植を受けていない。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、活動性の形質細胞性白血病（PCL）も形質細胞性白血病（PCL）の病歴も有しない。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、二次性の形質細胞性白血病（PCL）を発症している。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、成人対象であるか、または25もしくは35歳もしくはそれ以上である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は成人対象である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は25歳以上である。任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は35歳以上である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、疾患または障害の診断から、およそ4年、または2～15年もしくは2～12年経っている。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、対象は、IMWG高リスク細胞遺伝学を有する。
図1は、5×107個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル1（DL1）の単回用量、1.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2（DL2）の単回用量、または4.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3（DL3）の単回用量で、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なCARを発現する自己T細胞を含有する組成物が投与されている、再発性および/または難治性多発性骨髄腫（MM）を有するヒト対象における完全奏効（CR）率および厳密完全奏効（stringent complete response）（sCR）率、最良部分奏効（very good partial response）（VGPR）率ならびに部分奏効（PR）率を含む客観的奏効率（ORR）を示す。b DL3コホートの1人の対象は、29日目のベースライン後の奏効評価を欠いたため、有効性について評価することができなかった。 図2は、CAR発現T細胞の投与後の、最長追跡調査時のDL1コホートの対象（n＝14）に対する経時的な奏効の評価を示す。 図3は、CARをコードするベクター配列（ベクターコピー/ゲノムDNA 1μg）を検出するための全血試料から得られたゲノムDNA調製物の定量ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって測定した場合の、DL1、DL2およびDL3コホートの対象の末梢血におけるCAR＋T細胞の拡大増殖および長期持続性を示す。LLOQ、定量下限;LLOD、検出下限。 図4Aは、PRよりも悪い全体奏効を有する対象（MRまたはSD;非レスポンダー）と比較して、PR以上の全体奏効を有する対象（PR、VGPR、CRまたはsCR;非レスポンダー）における、CAR＋T細胞投与前、および投与後の様々な時点（29日目、2ヶ月目および3ヶ月目）での対象の血清中の可溶性BCMA（sBCMA）のレベル（ng/mL）を示す。図4Bは、PR以上の全体奏効を呈した対象（PR、VGPR、CRまたはsCR;レスポンダー）、およびPRよりも悪い奏効を呈した対象（MRまたはSD;非レスポンダー）におけるCAR＋T細胞投与前（処置前）のsBCMAのレベルを示す。 図5A～図5Dは、それぞれが多発性骨髄腫患者に由来する40の操作されたCAR＋T細胞組成物の例示的な表現型プロファイルを示す。CD4＋集団（図5A）およびCD8＋集団（図5B）のCAR＋T細胞組成物間のCD45RA×CCR7発現プロファイルを示す。CD4＋集団（図5C）およびCD8＋集団（図5D）のCAR＋T細胞組成物間のCD27×CD28発現プロファイルを示す。各CAR＋T細胞組成物は、ドット（●）、クロス（×）、菱形（◇）または三角形（Δ）によって示されている。 図5Aの説明を参照のこと。 図5Aの説明を参照のこと。 図5Aの説明を参照のこと。
詳細な説明
B細胞成熟抗原（BCMA）ならびにBCMA発現細胞およびBCMA発現疾患に結合するか、それらを標的とするか、または指向するものを含む、方法および使用、操作された細胞、組成物、組合せ、製造物品ならびに化合物が本明細書において提供される。提供される方法は、BCMAに関連する疾患または状態を処置するために使用され得る。BCMAは、ある特定の疾患および状態、例えば、悪性腫瘍またはその組織もしくは細胞上に、例えば、特に再発性/難治性多発性骨髄腫（R/R MM）を含む多発性骨髄腫（MM）を有する対象の悪性形質細胞上に発現され、例えば、正常組織ではほとんど発現しないことが観察される。提供される態様の中には、そのような疾患および状態の処置に有用なアプローチならびに/またはそのような細胞タイプを標的とするために有用なアプローチがあり、これには、キメラ抗原受容体（CAR）を含むBCMA結合性組換え受容体を含む細胞、ならびにそれを含む組成物および製造物品が含まれる。
いくつかの局面において、組換えIL-1Raなどのインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）をBCMA標的指向型細胞療法と組み合わせて投与する工程を伴う処置方法が提供される。提供される方法の態様において、IL-1Raは、BCMA標的指向型細胞療法（例えば抗BCMA CAR-T細胞）の投与直前、投与と同時、および/または投与直後に投与される。特定の態様において、IL-1Raの少なくとも1用量は、BCMA標的指向型細胞療法（例えば抗BCMA CAR-T細胞）の投与直前に投与され、BCMA標的指向型療法の投与後に短時間（例えば、最大1週間または5日間）継続されて、細胞療法に関連する可能性のある毒性を低下させ、予防し、および/または減弱することができる。したがって、いくつかの局面において、提供される方法は、BCMA標的指向型細胞療法（例えば抗BCMA CAR-T細胞）の投与時に対象に生じ得るまたは生じる可能性がある毒性の予防的処置を提供する。いくつかの局面において、提供されるアプローチはまた、いくつかの場合において、細胞療法、例えば、キメラ抗原受容体（CAR）を含むBCMA結合性組換え受容体を含む細胞を用いる細胞療法、およびそれを含む組成物を含む処置に関連し得るサイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（NT）/神経学的事象（NE）および/またはマクロファージ活性化症候群（MAS）などの毒性の発生の重症度を低下させ、毒性の発生を減弱し、および/または予防するのに有用である。いくつかの局面において、方法および使用は、細胞療法の投与に関連する毒性、任意でサイトカイン放出症候群（CRS）の発症を1日以上遅延させる。いくつかの態様において、方法および使用は、細胞療法の投与に関連するCRSの発症を1日以上遅延させる。
いくつかの局面において、BCMAに対する1つまたは複数の先行療法を以前に受けたことのある対象に、例えば、BCMAに結合するか、BCMAを標的とするか、または指向する組換え受容体を発現する操作された細胞を含む細胞療法を投与する工程を伴う処置方法も提供される。いくつかの局面において、対象は、BCMAを指向する先行療法、例えば、BCMA結合剤またはBCMAターゲティング剤、例えば、BCMAターゲティング抗体-薬物コンジュゲート（ADC）、BCMAターゲティングT細胞エンゲージャー（TCE）、またはBCMAターゲティングキメラ抗原受容体（CAR）を発現する細胞による以前の処置または療法を受けていてもよい。いくつかの局面において、対象は、先行療法、例えば先行BCMA指向性療法に不応であり得るか、先行療法、例えば先行BCMA指向性療法後に再発し得るか、または先行療法、例えば先行BCMA指向性療法に対して難治性であり得る。いくつかの局面において、提供される方法および使用は、先行BCMA指向性療法に不応であったか、先行BCMA指向性療法後に再発したか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になった対象に使用され得る。いくつかの局面において、提供される態様は、例えば、先行療法、例えば先行BCMA指向性療法に不応であったか、先行療法、例えば先行BCMA指向性療法後に再発したか、または先行療法、例えば先行BCMA指向性療法に対して難治性になった対象に対して、高い奏効率、有害事象（例えば毒性）の低い発生率、長期化された奏効、およびいくつかの場合において経時的な奏効の改善という有利な効果をもたらし得る。
本明細書において提供される方法は、例えば、BCMAを指向するか、またはBCMAに結合するCARなどの組換え受容体を発現するT細胞を含有するかまたはT細胞が濃縮された細胞のある用量の投与を伴う。BCMA結合性組換え受容体は、一般に、BCMAに特異的な抗体（抗原結合性抗体フラグメント、例えば、単鎖可変フラグメント（scFv）を含む単鎖フラグメント、単一ドメイン抗体フラグメント、重鎖可変（VH）領域を含む）を含む抗原結合ドメインを含むことができる。そのようなBCMA結合性組換え受容体、例えば抗BCMA CARを発現する操作された細胞もしくは組換え細胞、例えば操作されたT細胞、および/またはそのような受容体をコードする核酸を含む操作された細胞もしくは組換え細胞、例えば操作されたT細胞は、提供される方法で使用するための、およびそのような細胞を含有する治療的用量を投与するための組成物として提供され得る。
養子細胞療法（関心対象の疾患または障害に特異的な組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体（CAR）および他の組換え抗原受容体を発現する細胞の投与を伴うもの、ならびに他の養子免疫細胞療法および養子T細胞療法を含む）は、がんならびに他の疾患および障害の処置において有効な場合がある。一定の状況では、利用可能な養子細胞療法のアプローチが、いつも全く申し分ないというわけではないこともある。いくつかの局面において、最適な有効性が、投与された細胞の、標的、例えばBCMAなどの標的抗原を認識してそれに結合する能力、対象内、腫瘍内およびその環境内の適当な部位に輸送され、局在し、その中にうまく進入する能力、活性化状態になって拡大増殖する能力、細胞傷害性の殺滅およびサイトカインなどの様々な因子の分泌を含む種々のエフェクター機能を発揮する能力、存続する能力（長期間存続する能力を含む）、一定の表現型状態に分化し、移行し、またはそれら一定の表現型状態へのリプログラミングにエンゲージする能力、クリアランスおよび標的リガンドまたは標的抗原への再曝露に続いて有効でロバストなリコール応答を与え、疲弊、アネルギー、最終分化、および/または抑制状態への分化を回避しまたは低減する能力に依存する場合もある。
いくつかの局面において、多発性骨髄腫などの疾患または障害の処置のために利用可能なアプローチは複雑であり、必ずしも完全に満足のいくものでない場合がある。いくつかの局面において、処置レジメンの選択は、薬物の利用可能性、先行療法に対する奏効、再発の強烈性、自家幹細胞移植（ASCT）の適格性、および療法ありまたはなしで再発が起こったかどうかを含む多数の要因に依存し得る。いくつかの局面において、MMは再発および寛解を結果としてもたらし、既存のレジメンは、いくつかの場合において、再発および/または処置からの毒性を結果としてもたらし得る。いくつかの場合において、特に悪性の疾患を有する対象、例えば様々な療法後に持続性もしくは再発性疾患を有する対象、高い疾患負荷、例えば高い腫瘍負荷量を有する対象、および/または特に悪性の種類の疾患、例えば形質細胞腫を有する対象は、処置が特に困難であり得、これらの対象におけるある特定の療法に対する奏効は、不良であり得るか、または短い持続期間を有し得る。いくつかの場合において、重度に予め処置された対象、例えば、いくつかの異なる先行療法後に再発した対象は、低い奏効率および/または有害事象の高い発生率を呈し得る。
いくつかの局面において、養子細胞療法の治療効果は、そのような細胞が投与される対象における毒性（例えば、CRS、NTまたはMAS）の発生によって制限される場合があり、この毒性は、いくつかの場合において、投与される細胞のある特定の用量または曝露では重度である可能性がある。いくつかの場合において、そのような細胞の用量を高くすると、例えば、拡大増殖および/または持続性を促進することなどによって細胞への曝露を増加させることによって治療効果を高めることができるが、それらはまた、毒性またはさらに重度の毒性を発生するリスクを増大させ得る。いくつかの局面において、投与される細胞の一部は、急速に拡大増殖または増殖する細胞を含むことができ、これはまた、毒性またはさらに重度の毒性を発生するリスクに寄与し得る。また、いくつかの場合において、対象の疾患負荷が高くなれば、毒性またはさらに重度の毒性を発生するリスクも増大し得る。対象に細胞療法を投与するためのある特定の利用可能な方法は、必ずしも完全に満足できるものではない場合がある。対象における細胞の用量の増加または投与される細胞の拡大増殖もしくは増殖の促進は、さらに高い奏効率だけでなく、毒性の発生の増加にも関連し得る。
提供される方法は、例えば、予防的処置のために、BCMA標的指向型細胞療法の前におよび/またはBCMA標的指向型細胞療法と組み合わせてIL-1Ra（例えば組換えIL-1Ra）を投与する工程を伴い、免疫療法および/または養子細胞療法に関連し得る毒性の体系的管理を可能にする。提供される方法は、細胞療法に関連し得るCRS、NTおよび/またはMASなどの毒性の発生の重症度を予防し、低下させ、細胞療法に関連し得るCRS、NTおよび/またはMASなどの毒性の発生を減弱し、改善し、処置し、および/または予防する際に利用可能なアプローチを上回る利点を提供する。いくつかの局面において、毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための提供される方法は、細胞療法のための細胞のある用量の投与の前の組換えIL-1Raなどの治療剤の予防的投与を伴う。いくつかの局面において、組換えIL-1Raなどの追加の治療剤の予防的投与は、細胞療法の効力または治療効果を低下させることなく、細胞療法の投与時に始まる毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するという利点を提供し得る。いくつかの局面において、提供される方法および使用は、治療アウトカム（例えば、良好なアウトカムまたは奏効、例えば、完全奏効、厳密完全奏効もしくは最良部分奏効、および/または持続的な奏効またはアウトカム）の高いまたは指定された所望の程度の可能性を達成することができるかまたはそれに関連し得るほか、対象に細胞療法を投与した後の毒性アウトカムまたは毒性を発生するリスクの比較的低いまたは最小化されたまたは所望の程度の可能性にも関連し得る細胞の投与を可能にする。
いくつかの局面において、提供される方法および使用は、高い奏効率および低い毒性率（例えば、CRSまたはNE、例えば、グレード3以上のCRS、またはグレード3以上の神経毒性）と共に、細胞の投与後に細胞の長期化された持続を呈する細胞療法をもたらす。いくつかの局面において、比較的高用量のBCMA結合性CAR発現細胞を投与することができることが本明細書において観察されており、そのような用量は、重度の毒性（例えば、グレード3以上のCRS、またはグレード3以上の神経毒性）の非常に低い発生率を含め、低い毒性率で高い客観的奏効率をもたらすことが観察されている。いくつかの局面において、提供される方法は、毒性を改善するための治療剤を予防的に投与することによって、重度の毒性などの毒性の発生の重症度をさらに低下させるか、重度の毒性などの毒性の発生を減弱するか、遅延させるか、または予防するために使用され得る。いくつかの場合において、提供される態様はまた、投与された操作された細胞の改善された拡大増殖および/または持続を可能とし、いくつかの場合において、長期化された奏効および/または経時的に改善される奏効を結果としてもたらす。いくつかの局面において、提供される態様による悪性または難治性疾患を有する対象（例えば、重度に予め処置された対象、高い腫瘍負荷量を有する対象および/または悪性疾患種を有する対象）の処置は、安全、有効および持続的な処置を提供することが観察された。
様々な局面において、そのような受容体をコードするポリヌクレオチド、操作された細胞、および細胞組成物を含む、提供される方法および使用に使用するためのBCMA結合性組換え受容体は、細胞療法に対する最適な奏効を低下させ得るある特定の制限を克服し得るか、またはそれに対抗し得るある特定の所望の特性を呈する。いくつかの局面において、BCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞を用いた細胞療法は、先行BCMA指向性療法を以前に受けたことがあるが先行BCMA指向性療法に不応であった、先行BCMA指向性療法後に再発した、および/または先行BCMA指向性療法に対して難治性になった対象に投与される。
いくつかの局面において、本明細書における例示的なBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞を含有する組成物は、操作された細胞の細胞の健康の一貫性を呈することが観察され、改善された臨床奏効と関連付けられた。いくつかの状況において、提供される方法および使用に使用するための操作された細胞、および細胞組成物は、毒性の発生の重症度を予防し、低下させ、毒性の発生を減弱し、改善し、処置し、および/または予防する際に、ならびに組換え受容体の活性、およびBCMAターゲティング細胞療法に対する奏効を改善するために、BCMAを標的とする利用可能な療法を上回る様々な利点を提供することができる。追加的に、操作された細胞、または操作された細胞を含む組成物の提供される方法および使用は、比較的高用量を含む試験された様々な異なる用量レベルにおいて、高い奏効率、持続的な奏効、および低い率の有害事象を結果としてもたらす、対象の処置における利点を提供することが観察されている。さらに、操作された細胞、または操作された細胞を含む組成物の提供される方法および使用は、特に悪性および/もしくは難治性の疾患を有する対象、または再発したかつ/もしくは疾患に対する先行BCMA指向性処置を含む多数の異なる以前の処置に対して難治性である対象の処置において利点を提供することが観察されている。
本出願において言及する刊行物は、特許文書、科学論文およびデータベースを含めていずれも、あたかも個々の刊行物が参照により個別に本明細書に組み入れられた場合と同じ程度に、あらゆる目的で、その全体が本明細書に組み入れられる。本明細書において示される定義が、参照により本明細書に組み入れられる特許、特許出願、公開特許出願および他の刊行物において示される定義と相反するかまたは他の形で矛盾する場合は、本明細書において示される定義が、参照により本明細書に組み入れられる定義に優先する。
本明細書において使用されるセクション見出しには構成上の目的しかなく、記載されている主題を限定すると解釈してはならない。
I. B細胞成熟抗原に特異的なキメラ抗原受容体を発現する操作された細胞のための方法および使用
例えば、疾患、状態および障害の処置におけるB細胞成熟抗原（BCMA）結合組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物の投与方法および使用、例えば、治療的および予防的な使用が本明細書において提供される。いくつかの局面において、疾患、状態または障害としては、BCMAが発現されるもの、例えば、がんまたは腫瘍が挙げられる。いくつかの局面において、提供される方法は、BCMAを指向する以前の処置または療法、例えば、BCMA結合剤またはBCMAターゲティング剤、例えば、BCMAターゲティング抗体-薬物コンジュゲート（ADC）、BCMAターゲティングT細胞エンゲージャー（TCE）、またはBCMAターゲティングキメラ抗原受容体（CAR）を発現する細胞による以前の処置または療法を受けている対象に、操作された細胞またはその組成物を投与する工程を伴う。そのような方法の中でも、例えば、処置方法および使用は、抗BCMA組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、例えば、操作された複数の細胞を対象に投与する工程を伴うものである。併用療法および/または処置の方法も提供される。いくつかの局面において、操作された細胞またはその組成物および追加の作用物質の投与を伴う予防的および治療的な方法および使用も提供される。
いくつかの局面において、追加の治療剤、例えば、いくつかの場合において細胞療法に関連し得る毒性（例えば、サイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（NT）/神経学的事象（NE）および/またはマクロファージ活性化症候群（MAS）の発生の重症度を低下させる、いくつかの場合において細胞療法に関連し得る毒性（例えば、サイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（NT）/神経学的事象（NE）および/またはマクロファージ活性化症候群（MAS）の発生を減弱する、および/または予防するための予防的な使用のための治療剤の投与を伴う併用療法方法も提供される。いくつかの局面において、追加の治療剤は、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）、例えばアナキンラである。いくつかの局面において、提供される方法および使用は、BCMA指向性療法、例えば、BCMA結合性分子（例えば、キメラ抗原受容体（CAR）、T細胞エンゲージャー、抗体、抗体-薬物コンジュゲート）を伴う先行療法を以前に投与されたことのある対象などの特定の対象の処置を含む。いくつかの局面において、提供される方法は、先行BCMA指向性療法を以前に受けたことがありかつ先行BCMA指向性療法に不応であった、先行BCMA指向性療法後に再発した、および/または先行BCMA指向性療法に対して難治性になった対象の処置を可能にする。
そのような提供される方法および使用としては、例えば、BCMAに関連する疾患、状態または障害、例えば、BCMA発現に関連する、および/または細胞もしくは組織がBCMAを発現する、例えば、特異的に発現する疾患、状態または障害（例えば多発性骨髄腫）を有する対象に、操作された細胞（例えば、BCMAに特異的な組換え受容体を発現する）またはそれを含有する組成物および/もしくは追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）と組み合わされた組成物を投与する工程を伴う治療的な方法および使用が挙げられる。いくつかの態様において、細胞および/または組成物は、疾患または障害の処置を行うのに有効な量で投与される。いくつかの態様において、細胞および/または追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）は、いくつかの場合において細胞療法に関連し得る毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する有効量で投与される。
そのような方法および処置、ならびにそのような治療的および/または予防的な方法を実行するための医薬品の製造または調製における細胞（例えば、CARなどの組換え受容体を発現する操作された細胞）、組成物および/または追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）の使用が本明細書において提供される。いくつかの局面において、疾患または障害、例えば、BCMAに関連する疾患または障害、例えば多発性骨髄腫を処置するための医薬品の製造に使用するための、操作された細胞および/またはそれを含有する組成物が提供される。いくつかの局面において、本明細書において記載される任意の細胞療法などの細胞療法に関連し得る毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防するための医薬品の製造に使用するための1つまたは複数の追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）が提供される。いくつかの局面において、疾患または障害を治療するための1つまたは複数の医薬品の製造に使用するための組合せ、例えば、操作された細胞および/またはそれを含有する組成物と、追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）とを含む組合せが提供される。
いくつかの態様において、方法は、疾患または状態を有する、有していた、または有すると疑われる対象に、組換え受容体を発現する操作された細胞、またはそれおよび/もしくは追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）を含む組成物を投与することによって実行される。いくつかの態様において、方法は、それにより、対象の疾患または状態または障害を処置する。BCMAに関連する疾患または障害の処置のための、本明細書において提供される薬学的組成物などの組成物のいずれかの使用、例えば、処置レジメンでの使用も本明細書において提供される。いくつかの態様において、方法は、それにより、操作された細胞（例えば、BCMAに特異的な組換え受容体を発現する）、および/または操作された細胞を含む組成物によって処置される疾患または障害を有する対象において、いくつかの場合において細胞療法に関連し得る毒性の発生の重症度を低下させ、毒性の発生を減弱し、および/または予防する。BCMAに関連する疾患もしくは障害の処置のための、例えば、処置レジメンでの使用のための、ならびに/または、例えば、いくつかの場合において細胞療法に関連し得る毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/もしくは予防するための予防的処置レジメンのための組成物のいずれか、例えば、本明細書において提供される薬学的組成物、および/または組合せ、例えば、本明細書において提供される薬学的組成物の組合せの使用も本明細書において提供される。
提供される態様はまた、いくつかの状況において、本明細書において記載されるものなどの特定のBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞の投与は、高い奏効率および低い率の有害事象、例えばサイトカイン放出症候群（CRS）または神経学的事象（NE;もしくは神経毒性;NT）を結果としてもたらすという臨床試験からの観察に基づく。いくつかの局面において、提供される方法および使用は、有害事象が少なく高い奏効率をもたらし得る、細胞療法のための操作された細胞の比較的高用量の投与を可能にする。
A. 治療的な方法および使用
BCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物の投与方法および使用、例えば治療的な使用が本明細書において提供される。
本明細書において使用される場合、「処置（treatment）」（および「処置する（treat）」または「処置すること（treating）」などのその文法的変形例）は、疾患もしくは状態もしくは障害、またはそれに関連する症状、有害作用もしくはアウトカム、もしくは表現型の完全または部分的な改善または低減を指す。処置の望ましい効果としては、疾患の発生または再発の予防、症状の緩和、疾患の直接的または間接的な病理学的結果の減少、転移の予防、疾患進行速度の低下、疾患状態の改善または緩和、および寛解、または予後の改善が挙げられるがそれに限定されるわけではない。該用語は、疾患の完全な治癒、またはあらゆる症状もしくはアウトカムに対するいずれかの症状もしくは作用の完全な排除を意味するものではない。
本明細書において使用される場合、「疾患の発症を遅延させる」は、疾患（がんなど）の発症を延期する、妨害する、遅延する、遅らせる、安定化する、抑制する、および/または延ばすことを意味する。この遅延は、疾患、および/または処置されている対象の病歴に応じて、様々な時間長であり得る。十分なまたは顕著な遅延とは、事実上、対象が疾患を発症しないという点で予防を包含し得る。例えば、転移の発生などの後期がんが遅延され得る。
本明細書において使用される「予防すること」は、疾患の素因を有し得るが、疾患とまだ診断されていない対象における疾患の発生または再発に関して予防を提供することを含む。いくつかの態様において、本明細書において記載される操作された細胞、および組成物は、疾患の発症を遅延させるため、もしくは疾患の進行を遅らせるため、ならびに/または有害事象もしくは副作用、例えば毒性の発生の重症度を低下させる、有害事象もしくは副作用、例えば毒性の発生を減弱する、および/もしくは予防するために使用される。
本明細書において使用される場合、機能または活性を「抑制する」ことは、関心対象の状態もしくはパラメーターを除いて他の点では同じ状態と比較した場合、または別の状態と比較した場合に、機能または活性を低下させることである。例えば、腫瘍成長を抑制する抗体または組成物または細胞は、該抗体または組成物または細胞の非存在下での腫瘍の成長速度と比較して、腫瘍の成長速度を低下させる。
投与に関連して、作用物質、例えば、薬学的製剤、抗体、細胞または組成物の「有効量」は、治療的結果または予防的結果などの所望の結果を達成するために、必要な投薬量/量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。
作用物質、例えば、薬学的製剤、抗体、細胞または組成物の「治療有効量」は、疾患、状態もしくは障害の処置、および/または処置の薬物動態学的もしくは薬力学的効果のためなどの所望の治療的結果を達成するために、必要な投薬量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。治療有効量は、対象の疾患状態、年齢、性別および体重、ならびに投与される細胞の集団などの要因に従って変動し得る。いくつかの態様において、提供される方法は、分子、抗体、細胞および/または組成物を有効量、例えば治療有効量で投与する工程を伴う。
「予防有効量」は、所望の予防的結果を達成するために、必要な投薬量で、かつ期間にわたって有効な量を指す。必ずしもそうとは限らないが、典型的には、予防用量は疾患の初期段階の前または疾患の初期段階で対象に使用されるため、予防有効量は治療有効量よりも少ない。
本明細書において使用される場合、「対象」または「個体」は哺乳動物である。いくつかの態様において、「哺乳動物」は、ヒト、非ヒト霊長動物、家畜および飼育動物、ならびに動物園の動物、スポーツ用の動物、またはペット動物、例えば、イヌ、ウマ、ウサギ、ウシ、ブタ、ハムスター、アレチネズミ、マウス、フェレット、ラット、ネコ、サルなどを含む。いくつかの態様において、対象はヒトである。
養子細胞療法のための細胞の投与の方法は公知であり、提供される方法および組成物との繋がりで使用され得る。例えば、養子T細胞療法の方法は、例えば、Gruenberg et alの米国特許出願公開第2003/0170238号、Rosenbergの米国特許第4,690,915号、Rosenberg（2011）Nat Rev Clin Oncol.8（10）:577-85）に記載されている。例えば、Themeli et al.（2013）Nat Biotechnol.31（10）:928-933;Tsukahara et al.（2013）Biochem Biophys Res Commun 438（1）:84-9;Davila et al.（2013）PLoS ONE 8（4）:e61338を参照されたい。
1. 処置される対象および適応症
処置される疾患の中には、BCMAに関連するいずれかの疾患もしくは障害、またはBCMAが特異的に発現されるおよび/もしくはBCMAが処置のために標的とされているいずれかの疾患もしくは障害（本明細書において区別なく「BCMA関連疾患または障害」とも呼ばれる）がある。BCMA発現に関連するがんには、多発性骨髄腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症などの血液悪性腫瘍、ならびにホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫の両方が含まれる。BCMAの概説については、Coquery et al.,Crit Rev Immunol.,2012,32（4）:287-305を参照されたい。BCMAは腫瘍細胞の生存を媒介することに関与しているため、がん療法の潜在的な標的である。マウス抗ヒトBCMA抗体を含むキメラ抗原受容体、およびそのようなキメラ受容体を発現する細胞は、以前に記載されている。Carpenter et al.,Clin Cancer Res.,2013,19（8）:2048-2060を参照されたい。
いくつかの態様において、BCMAに関連する疾患または障害は、B細胞関連障害である。いくつかの態様において、BCMAに関連する疾患または障害は、神経膠芽腫、リンパ腫様肉芽腫症、移植後リンパ増殖性障害、免疫調節性障害、重鎖病、原発性アミロイドーシスもしくは免疫細胞関連アミロイドーシス、または重度不定単一クローン性高ガンマグロブリン血症（monoclonal gammopathy of undetermined significance）の中からの1つまたは複数の疾患または状態である。
いくつかの態様において、BCMAに関連する疾患または障害は、自己免疫疾患または自己免疫障害である。そのような自己免疫疾患または自己免疫障害としては、全身性エリテマトーデス（SLE）、ループス腎炎、炎症性腸疾患、関節リウマチ（例えば若年性関節リウマチ）、ANCA関連血管炎、特発性血小板減少性紫斑病（ITP）、血栓性血小板減少性紫斑病（TTP）、自己免疫性血小板減少症、シャガス病、グレーブス病、ウェゲナー肉芽腫症、結節性多発動脈炎、シェーグレン症候群、尋常性天疱瘡、強皮症、多発性硬化症、乾癬、IgA腎症、IgM多発ニューロパチー、血管炎、真性糖尿病、レイノー病、抗リン脂質症候群、グッドパスチャー病、川崎病、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症または進行性糸球体腎炎が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
ある特定の疾患および状態では、BCMAは、悪性細胞およびがん上に発現される。いくつかの態様において、がん（例えばBCMA発現がん）はB細胞悪性腫瘍である。いくつかの態様において、がん（例えばBCMA発現がん）は、リンパ腫、白血病または形質細胞悪性腫瘍である。本明細書において企図されるリンパ腫としては、バーキットリンパ腫（例えば、地域性のバーキットリンパ腫、または散発性のバーキットリンパ腫）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、ホジキンリンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（MALT）、辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫、結節性単球様B細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、肺B細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（LPL）またはマントル細胞リンパ腫（MCL）が挙げられるがそれに限定されるわけではない。本明細書において企図される白血病としては、慢性リンパ性白血病（CLL）、形質細胞性白血病または急性リンパ性白血病（ALL）が挙げられるがそれに限定されるわけではない。また、多発性骨髄腫（例えば、非分泌型多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫）または形質細胞腫を含むがそれに限定されるわけではない形質細胞悪性腫瘍も本明細書において企図される。いくつかの態様において、疾患または状態は、多発性骨髄腫（MM）、例えば再発性および/または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）である。いくつかの態様において、疾患または状態は、形質細胞腫、例えば髄外性形質細胞腫である。いくつかの態様において、対象は、形質細胞腫、例えば髄外性形質細胞腫を有しない。処置され得る、BCMAに関連する疾患、障害または状態（例えばBCMA発現がん）の中には、神経芽細胞腫、腎細胞がん、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、上皮扁平細胞がん（epithelial squamous cell cancer）、黒色腫、骨髄腫（例えば多発性骨髄腫）、胃がん、脳がん、肺がん、膵がん、子宮頸がん、卵巣がん、肝がん、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、副腎がんおよび頭頸部がんが含まれるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、方法は、BCMA関連疾患または障害を有するか、有すると疑われるか、または発症するリスクがある対象を同定し得る。したがって、BCMA発現の上昇に関連する疾患または障害を有する対象を同定し、BCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞による処置のために対象を選択する方法が提供される。
いくつかの局面において、例えば、対象は、BCMA発現の上昇に関連する疾患または障害、例えば、BCMA発現がんの存在についてスクリーニングされ得る。いくつかの態様において、方法は、BCMA関連疾患、例えば、腫瘍またはがん、例えば多発性骨髄腫の存在をスクリーニングまたは検出する工程を含む。したがって、いくつかの局面において、試料は、BCMA発現の上昇に関連する疾患または障害を有すると疑われる患者から得られ、BCMAの発現レベルについてアッセイされ得る。いくつかの局面において、BCMA関連疾患または障害について陽性と判定された対象が、本方法による処置のために選択され得、本明細書において記載される、BCMAに結合する組換え受容体（例えばCAR）を含む操作された細胞またはその薬学的組成物の治療有効量を投与され得る。
2. 先行療法
いくつかの態様において、操作された細胞の投与を開始する前に、対象に、1つまたは複数の先行療法が投与されている。いくつかの局面において、提供される方法および使用に従って処置される対象としては、1つまたは複数の先行療法が投与されている対象が挙げられる。いくつかの局面において、提供される方法および使用に従って処置される対象としては、1つもしくは複数の先行療法が投与されており、1つもしくは複数の先行療法後に再発しており、および/または1つもしくは複数の先行療法に対して難治性になっている対象が挙げられる。いくつかの態様において、対象に、少なくとも1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19または20以上の先行療法が投与されている。いくつかの態様において、対象に、少なくとも3、4、5、6、7、8、9、10またはそれ以上の先行療法投与されている。いくつかの態様において、先行療法のいずれか1つまたは複数は、BCMA指向性療法、例えば、BCMA指向性抗骨髄腫療法である。
いくつかの態様において、対象に、操作された細胞を投与する前にBCMA指向性療法が投与されている。いくつかの態様において、操作された細胞の投与を開始する前に、対象に、1、2または3つの先行BCMA指向性療法が投与されている。いくつかの態様において、対象に、T細胞エンゲージャー（TCE）療法、抗体-薬物コンジュゲート（ADC）療法およびキメラ抗原受容体発現T細胞（CAR T細胞）療法の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が投与されている。いくつかの態様において、対象に、BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）療法、BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）療法およびBCMA指向性CAR T細胞療法の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が投与されている。いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法は、モノクローナル抗体を含む。いくつかの局面において、例示的な先行BCMA指向性療法としては、Mullard et al.,Nat Rev Drug Discov.2019 Jul;18（7）:481-484;Duell et al.,（2019）Clin.Pharmacol.Ther.,106:781-791;O'Donnell et al.,Ther Adv Hematol.2017 Feb;8（2）:41-53;Borrello et al.,J Clin Invest.2019;129（6）:2175-2177;Lin et al.Molecular Cancer（2019）18:154;およびSteiner et al.,（2020）memo-Magazine of European Medical Oncology 13:43-49に記載されているもの、または本明細書において記載される任意のBCMA指向性療法が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法は抗BCMAモノクローナル抗体である。例示的な抗BCMAモノクローナル抗体としては、脱フコシル化モノクローナル抗体であるSEA-BCMAが挙げられる（例えば、Van Epps et al.,Cancer Res July 1 2018（78）（13 Supplement）3833;Abdallah et al.,Journal of Clinical Oncology 2019 37:15＿suppl,TPS8054-TPS8054を参照）。
任意の態様のいくつかにおいて、対象は、1つもしくは複数の先行療法に対して不応になっているか、1つもしくは複数の先行療法後に持続性疾患もしくは再発性疾患を有しているか、または1つもしくは複数の先行療法に対して難治性であるかもしくは難治性になっている。いくつかの局面において、対象は、例えば、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体（例えばBCMA結合性CAR）を発現する細胞を用いた細胞療法を投与する時点または投与する前に、再発しているか、1つまたは複数の先行療法に対して難治性になっている。いくつかの局面において、対象は、1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法に対して不応であるか、1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。いくつかの態様において、提供される方法または使用に従って処置される対象としては、1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法に対して不応であった、1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法後に再発している、および/または1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている対象が挙げられる。いくつかの局面において、BCMA指向性療法は、本明細書において記載されるいずれかなどのT細胞エンゲージャー（TCE）療法、抗体-薬物コンジュゲート（ADC）療法およびCAR T細胞療法のうちの1つまたは複数を含む。いくつかの局面において、提供される態様に従って処置される対象としては、本明細書において記載される1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または本明細書において記載される1つもしくは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている対象が挙げられる。
任意の態様のいくつかにおいて、対象は、本明細書において記載されるBCMA結合性CARを含む操作されたT細胞の該用量の投与の前の18ヶ月以内、1年以内、9ヶ月以内、6ヶ月以内もしくは3ヶ月以内、または約18ヶ月以内、1年以内、9ヶ月以内、6ヶ月以内もしくは3ヶ月以内に、先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の態様のいくつかにおいて、対象は、本明細書において記載されるBCMA結合性CARを含む操作されたT細胞の該用量の投与の前の1年以内または約1年以内に、先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の態様のいくつかにおいて、対象は、本明細書において記載されるBCMA結合性CARを含む操作されたT細胞の該用量の投与の前の6ヶ月以内または約6ヶ月以内に、先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。任意の態様のいくつかにおいて、対象は、本明細書において記載されるBCMA結合性CARを含む操作されたT細胞の該用量の投与の前の3ヶ月以内または約3ヶ月以内に、先行BCMA指向性療法後に再発しているか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている。
a. T細胞エンゲージャー（TCE）
いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法はT細胞エンゲージャー（TCE）療法である。いくつかの局面において、TCEは、腫瘍細胞抗原の表面とT細胞受容体（TCR）複合体の成分とに同時に結合して、標的表面抗原を有する腫瘍細胞のT細胞媒介殺傷を誘導する抗体である。いくつかの局面において、細胞溶解性シナプスの形成後、T細胞は、パーフォリンおよびグランザイムBを放出し、最終的に腫瘍細胞のアポトーシスをもたらす。T細胞の活性化は、サイトカインの一過性放出をもたらし得、これは他の免疫細胞に関与し、腫瘍組織に対する免疫応答を広げ、T細胞の増殖と、腫瘍細胞の連続的な殺傷とをもたらし得る。例示的なTCE療法としては、二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）療法および二重特異性抗体が挙げられる（例えば、Mullard et al.,Nat Rev Drug Discov.2019 Jul;18（7）:481-484;Duell et al.,（2019）Clin.Pharmacol.Ther.,106:781-791;O'Donnell et al.,Ther Adv Hematol.2017 Feb;8（2）:41-53を参照）。いくつかの態様において、BCMA指向性TCE、例えば、Tリンパ球上に見られるCD3抗原を指向するものに融合された、1つがBCMAを指向する2つの単鎖可変フラグメント（scFv）を含むBiTEは、BCMAおよびCD3を標的とする。
例示的な先行BCMA指向性TCEとしては、AMG 420/BI 836909（抗BCMA/抗CD3 BiTE;Hipp et al.,Leukemia（2017）31:1743-1751;Topp et al.Journal of Clinical Oncology.2019.37（15）suppl,8007-8007）、AMG 701（半減期延長抗BCMA/抗CD3 BiTE;Cho et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:135;Cho et al.,Clinical Lymphoma,Myeloma and Leukemia,19（10）:e54）、CC-93269（抗BCMA/抗CD3二重特異性抗体;Costa et al.ASH Annual Meeting.2019.Abstract ＃143）、JNJ-64007957（抗CD3/抗BCMA二重特異性モノクローナル抗体;Girgis et al.Blood.2016.128（22）:5668）、PF-06863135（抗CD3/抗BCMA二重特異性モノクローナル抗体;Lesokhin et al.,Blood（2018）132（Supplement 1）:3229;Raje et al.,Blood（2019）134（Supplement＿1）:1869）およびREGN5458（抗BCMA/抗CD3 BiTE;Cooper et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:3176）が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
b. 抗体-薬物コンジュゲート（ADC）
いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法は、抗体-薬物コンジュゲート（ADC）療法である。ADCは、不安定な結合を有する化学リンカー、例えば合成化学リンカーによって生物学的に活性な薬物（「ペイロード」とも呼ばれる、例えば、細胞傷害性化学物質）に共有結合した組換えモノクローナル抗体（mAb）を含む。いくつかの局面において、ADCは、抗体部分によって、腫瘍細胞などの標的細胞の表面上の抗原を同定し、それに結合し、次いで吸収または内在化される。ADCが内在化された後、生物学的に活性な薬物、例えば細胞傷害性化学物質は、リソソームに放出され、細胞質ゾルに輸送されて、標的細胞を死滅させる。いくつかの局面において、ADCはまた、標的細胞、例えば腫瘍細胞の抗体依存-細胞媒介細胞傷害（ADCC）および抗体依存-細胞媒介食作用を誘発することもできる。いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法は、BCMAに特異的である、BCMAに結合する、および/またはBCMAを標的とする抗体またはその抗原結合性フラグメントを含むADCを含む。
例示的な先行BCMA指向性ADCとしては、ベランタマブ・マフォドチン（GSK2857916）、MEDI2228、CC-99712およびAMG 224が挙げられるがそれに限定されるわけではない。いくつかの態様において、先行BCMA指向性ADCは、非切断型リンカーであるマレイミドカプロイルを介して、有糸分裂阻害剤モノメチルオーリスタチンFにコンジュゲートされた、BCMAに対して高い親和性（KD約0.5nM）を有するヒト化、脱フコシル化IgG1 mAbを含有するベランタマブ・マフォドチン（GSK2857916）である（例えば、Tai et al.Blood.2014.123（20）:3128-3138を参照）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性ADCは、プロテアーゼ切断性ピロロベンゾジアゼピンリンカーを介してコンジュゲートされた抗BCMA抗体を含有するMEDI2228である（例えば、Kinneer et al.Blood.2017.130（Supplement＿1）:3153;Xing et al.,Blood（2019）134（Supplement＿1）:1817を参照）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性ADCはCC-99712である。いくつかの態様において、先行BCMA指向性ADCは、AMG 224である（抗BCMA-MCC-DM1;抗BCMAは抗ヒトBCMA IgG1抗体であり、MCCは、抗体内のリジン残基にコンジュゲートされた非切断型リンカー4-（N-マレイミドメチル）シクロヘキサン-1-カルボキシレートであり、DM1は、MCCにコンジュゲートされたアンサマイシン抗生物質マイタンシンの半合成誘導体である;例えば、O'Donnell et al.,Ther Adv Hematol.2017 Feb;8（2）:41-53を参照）。
c. キメラ抗原受容体（CAR）発現T細胞
いくつかの態様において、先行BCMA指向性療法はキメラ抗原受容体発現T細胞（CAR T細胞）療法である。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、操作された細胞、例えば、抗BCMA組換え受容体のいずれかを発現する操作されたT細胞を含む。
例示的な先行BCMA指向性CAR T細胞療法としては、イデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel,bb2121;Raje et al.N Engl J Med.2019.380:1726-1737）、JNJ-4528（Madduri et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:577）/LCAR-B38M（Wang et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:579）、P-BCMA-101（Costello et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:3184）、bb21217（Berdeja et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:927）、CT103A（Li et al.Blood.2019;134（Supplement＿1）:929）、CT053（Ji et al.,Blood.2019;134（Supplement＿1）:4435）、MTV273、CART-BCMA、C-CAR088（Yao et al.Blood.2019;134（Supplement＿1）:50）、または例えば、国際公開公報第2018/085690号;国際公開公報第2016/094304号;国際公開公報第2018/085690号;国際公開公報第2016/014789号;国際公開公報第2019/108900号;国際公開公報第2018/014038号;国際公開公報第2017/173256号;国際公開公報第2016/090320号;国際公開公報第2016/090327号;国際公開公報第2019/090003号;国際公開公報第2017/025038号;米国特許第2016/0046724号;米国特許第2017/0183418号;Fu et al.,Blood.2019;134:3154;Cohen et al.J.Clin.Invest.2019.129（6）:2210-2221;Ali et al.,Blood 2016;128（13）:1688 1700;Borrello et al.,J Clin Invest.2019;129（6）:2175-2177;Lin et al.Molecular Cancer（2019）18:154;およびSteiner et al.,（2020）memo-Magazine of European Medical Oncology 13:43-49）に記載されている任意のBCMA指向性CAR T療法が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、本明細書において記載される任意のBCMA結合性組換え受容体、例えば、セクションIIIに記載される任意の抗BCMA CARを発現する操作された細胞を含む。いくつかの局面において、先行BCMA指向性CAR T療法は、国際公開公報第2019/090003号に記載されている抗BCMA CARを発現する操作された細胞を含む。いくつかの局面において、先行BCMA指向性CAR T療法は、各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2016/090320号、国際公開公報第2016/090327号、国際公開公報第2010/104949号、国際公開公報第2017/173256号またはCarpenter et al.,Clin Cancer Res.,2013,19（8）:2048-2060に記載されている抗体またはその抗原結合性フラグメントに由来する可変重（VH）領域および/または可変軽（VL）領域を含むscFvである抗原結合ドメインを含む抗BCMA CARを発現する操作された細胞を含む。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、それぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、およびそれぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域、ならびに/またはSEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域、ならびに/またはSEQ ID NO:265に示す配列のアミノ酸残基22～493、ならびに/またはSEQ ID NO:266によってコードされる配列を含む抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、それぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、およびそれぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域、ならびに/またはSEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域、ならびに/またはSEQ ID NO:263に示す配列のアミノ酸残基22～493、ならびに/またはSEQ ID NO:264によってコードされる配列を含む抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:265に示す配列の成熟ポリペプチド配列を含む抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:263に示す配列の成熟ポリペプチド配列を含む抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:312に示す配列を含む抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、イデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel、bb2121）であるか、またはイデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel、bb2121）を含む（例えば、各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられるRaje et al.N Engl J Med.2019.380:1726-1737;国際公開公報第2018/085690号;国際公開公報第2016/094304号;国際公開公報第2018/085690号または国際公開公報第2016/014789号を参照）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、その配列が、各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2018/085690号;国際公開公報第2016/094304号;国際公開公報第2018/085690号もしくは国際公開公報第2016/014789号に示されている抗BCMA CARであるか、またはその配列が、各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2018/085690号;国際公開公報第2016/094304号;国際公開公報第2018/085690号もしくは国際公開公報第2016/014789号に示されている抗BCMA CARを含む。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、二重エピトープ結合CARなどの多価CAR、例えば、BCMA上の異なるエピトープを指向する2つの異なる単一ドメイン抗体、例えばVHHを含むCARである抗BCMA CARを含む。いくつかの局面において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:303～309に示す配列の中から選択される、BCMAの1つまたは複数のエピトープに結合する抗BCMA CARを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、JNJ-4528（LCAR-B38Mとも呼ばれる）であるか、またはJNJ-4528（LCAR-B38Mとも呼ばれる）を含む（例えば、各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられるMadduri et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:577;Wang et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:579;Xu et al.PNAS 2019.116（19）9543-9551;Zhao et al.,Journal of Hematology＆Oncology 11:141（2018）;国際公開公報第2018/028647号;国際公開公報第2017/025038号を参照）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:265～302のいずれか1つに示す配列の残基22で始まり末端までのアミノ酸残基、および/もしくはSEQ ID NO:2675～302のいずれか1つに示す配列の成熟ポリペプチド配列を含むCAR、ならびに/またはSEQ ID NO:265～302のいずれか1つに示すCARをコードするヌクレオチドの配列によってコードされるCAR、ならびに/または各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2018/028647号もしくは国際公開公報第2017/025038号に記載されているいずれかを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:265～302のいずれか1つに示す配列の残基22で始まり末端までのアミノ酸残基を含むCARを含む。
いくつかの局面において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、単鎖可変フラグメント（scFv）の代わりに、細胞外結合ドメインとしてセンチリンを含む。いくつかの局面において、センチリンは、高い特異性および広い範囲の結合親和性を有するが、scFvよりも小さい改変フィブロネクチンIII型（FN3）ドメインタンパク質である（例えば、Goldberg et al.,Protein Eng Des Sel.2016 Dec;29（12）:563-572を参照）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、P-BCMA-101であるか、またはP-BCMA-101を含む（各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられるCostello et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:3184;Fu et al.,Blood.2019;134:3154;国際公開公報第2018/014038号および国際公開公報第2019/173636号）。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:310に示す配列のアミノ酸残基22～334、および/もしくはSEQ ID NO:310に示す配列の成熟ポリペプチド配列を含むCAR、ならびに/またはSEQ ID NO:310のいずれか1つに示すCARをコードするヌクレオチドの配列によってコードされるCAR、ならびに/または各々参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開公報第2018/014038号もしくは国際公開公報第2019/173636号に記載されているいずれかを含む。いくつかの態様において、先行BCMA指向性CAR T細胞療法は、SEQ ID NO:310に示す配列のアミノ酸残基22～334を含むCARを含む。
先行養子細胞療法、例えば先行BCMA指向性組換え受容体（例えばCAR）発現T細胞療法（CAR T細胞療法）を受けたことのある対象のために、提供される方法および使用はまた、処置される対象から得られた試料を、先行BCMA指向性組換え受容体（例えばCAR）の存在、量および/またはレベルについて評価する工程を含む。いくつかの局面において、先行BCMA指向性組換え受容体（例えばCAR）の存在、量および/またはレベルに関する評価を使用して、対象における先行投与組換え受容体発現細胞を発現する既存細胞を検出し、必要に応じて、先行組換え受容体によって以前に操作されていない細胞または先行組換え受容体を発現しない細胞を選択することができる。いくつかの局面において、そのような方法を使用して、先行組換え受容体（例えばCAR）によって既に操作されている細胞の再操作を低減または防止することができる。
任意の態様のいくつかにおいて、対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARを発現する細胞が存在しない場合、または対象から得られた試料中に、例えば、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現するように操作するための細胞を生成するために得られた試料中に、先行BCMA指向性CARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列が存在しない場合、対象は、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現するように操作された細胞の投与のために選択される。いくつかの局面において、対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARを発現する細胞が存在するか、または対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列が存在するとしても、対象は依然として、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現するように操作された細胞の投与のために選択される。いくつかの局面において、方法および使用は、対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARを発現する細胞が存在する場合、または対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列が存在する場合、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を含む操作されたT細胞の該用量を生成するために、先行BCMA指向性CARを含まないT細胞を選択する工程を伴い得る。任意の態様のいくつかにおいて、対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARを発現する細胞が存在する場合、または対象から得られた試料中に、先行BCMA指向性CARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列が存在する場合、先行BCMA指向性CARを発現するそのような細胞、または先行BCMA指向性CARをコードするヌクレオチドを含むそのような細胞は、操作から、例えば、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現させるための操作から、および/または投与から除外され、例えば、対象への投与のための組成物から除外される。
いくつかの局面において、先行BCMA指向性組換え受容体発現細胞（例えば、CAR T細胞）療法が投与されている対象では、例えば、下記のセクションIIIなど、本明細書において記載されるBCMA特異的CARを発現するように細胞を操作するために、対象から得られる初代細胞を含有する試料が、先行組換え受容体の存在について評価される。
いくつかの局面において、処置される対象から得られた試料は、先行組換え受容体の発現、または先行組換え受容体をコードする核酸配列の存在を検出することによって評価され得る。いくつかの局面において、先行組換え受容体の存在は、生物学的試料由来のタンパク質または核酸の存在、非存在、レベルおよび/または量を検出することができる任意の方法を使用して評価され得る。いくつかの態様において、先行組換え受容体の存在は、対象、例えば、先行組換え受容体発現細胞療法、例えば先行BCMA指向性CAR T細胞療法が投与されている、療法のための疾患または状態を有する対象に、操作された細胞、または細胞組成物を投与した後に、操作された細胞の薬物動態学的パラメーター、バイオアベイラビリティ、持続性、拡大増殖および/または数を評価または決定するために使用され得る任意の方法を使用して評価され得る。
いくつかの局面において、提供される態様に従って処置される対象から得られた試料は、先行組換え受容体の発現に基づいて、先行組換え受容体によって以前に操作された細胞の存在および/または量について評価される。対象から得られた試料中の先行組換え受容体によって以前に操作された細胞の存在および/または量は、例えば、核酸ベースの方法、例えば定量PCR（qPCR）;または細胞ベースの方法、例えば、フローサイトメトリー、もしくは他のアッセイ、例えば、イムノアッセイ、ELISA、もしくはクロマトグラフィー/質量分析に基づくアッセイを使用して評価され得る。先行組換え受容体、または先行組換え受容体を発現する細胞は、フローサイトメトリーベースの方法、または定量PCRベースの方法、および公知の方法を使用する総細胞数への外挿によって検出され得る。例えば、Brentjens et al.,Sci Transl Med.2013 5（177）,Park et al,Molecular Therapy 15（4）:825-833（2007）,Savoldo et al.,JCI 121（5）:1822-1826（2011）,Davila et al.,（2013）PLoS ONE 8（4）:e61338,Davila et al.,Oncoimmunology 1（9）:1577-1583（2012）,Lamers,Blood 2011 117:72-82,Jensen et al.,Biol Blood Marrow Transplant 2010 September;16（9）:1245-1256,Brentjens et al.,Blood 2011 118（18）:4817-4828を参照されたい。
先行組換え受容体の存在を評価するための例示的な核酸ベースの方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応ベースの方法、例えば、定量PCR（qPCR）、デジタルPCR（dPCR）または液滴デジタルPCR（ddPCR）が挙げられる。いくつかの局面において、特定の配列の存在、非存在および/または量は、先行組換え受容体をコードする核酸配列の全部または一部に特異的に結合し得る、先行組換え受容体をコードする核酸配列の全部または一部を検出し得る、認識し得る、および/または増幅し得るプローブまたはプライマーを使用して検出され得る。いくつかの態様において、qPCRまたは他の核酸ベースの方法に使用されるプライマーもしくはプローブは、組換えタンパク質（例えば先行組換え受容体）をコードする核酸、ならびに/またはプラスミドおよび/もしくはベクターの他の構成要素もしくは要素（調節エレメント、例えばプロモーター、転写、および/または転写後の調節要素もしくは応答要素、あるいはマーカー、例えばサロゲートマーカーが挙げられる）に結合し、これを認識し、かつ/または増幅するために特異的である。いくつかの局面において、先行組換え受容体の存在を評価するための例示的な核酸ベースの方法としては、ハイスループットRNAシークエンシング（RNA-seq）、または試料中の核酸の発現を評価するための他のハイスループット方法が挙げられる。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性組換え受容体発現細胞（例えばCAR T細胞）療法が投与されている対象では、対象から得られた初代細胞を含有する試料は、先行BCMA指向性組換え受容体に特異的な配列または操作に使用される核酸の他の成分（例えば、調節エレメント、ウイルス配列など）を検出および/または増幅することができるプローブまたはプライマーを使用したqPCRによって評価される。いくつかの局面において、対象から得られた試料が、低レベル、例えば、qPCRによって検出される場合、先行組換え受容体の検出下限（LLOD）よりも低いレベルを含む場合、対象から得られた初代細胞は、本明細書において提供される方法および使用に従ってBCMA特異的CARを用いて操作するために使用される。
先行組換え受容体の存在を評価するための例示的な細胞またはタンパク質ベースの方法としては、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、酵素免疫測定法（EIA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、表面プラズモン共鳴（SPR）、ウエスタンブロット、ラテラルフローアッセイ、免疫組織化学的検査、タンパク質アレイまたは免疫-PCR（iPCR）が挙げられる。
いくつかの態様において、先行BCMA指向性組換え受容体発現細胞（例えばCAR T細胞）療法が投与されている対象では、対象から得られた初代細胞を含有する試料は、単離または精製抗原、例えば組換え発現抗原、例えば組換えBCMA-Fc（IgGのFc領域にそのC末端で融合した可溶性ヒトBCMA）などの試薬を使用してフローサイトメトリーによって評価される。いくつかの局面において、対象から得られた試料が、低レベル、例えば、BCMA-Fcを使用するフローサイトメトリーによって検出される場合、先行組換え受容体の検出下限（LLOD）よりも低いレベルを含む場合、対象から得られた初代細胞は、本明細書において提供される方法および使用に従ってBCMA特異的CARを用いて操作するために使用される。
d. 他の先行療法および治療歴
いくつかの局面において、提供される方法および使用に従って処置される対象は、1つもしくは複数の先行療法後に再発しているか、または1つもしくは複数の先行療法に対して難治性になっている対象である。いくつかの局面において、先行療法としては、対象が該療法のうちの1つもしくは複数の候補でないか、または該療法のうちの1つもしくは複数の禁忌であった場合を除いて、自家幹細胞移植（ASCT）、免疫調節剤、プロテアソーム阻害剤および抗CD38抗体による処置が挙げられる。いくつかの局面において、対象は、対象が該療法のうちの1つもしくは複数の候補でないか、または該療法のうちの1つもしくは複数の禁忌であった場合を除いて、（1）自家幹細胞移植、（2）単独で、または組み合わせて、プロテアソーム阻害剤および免疫調節剤、ならびに（3）併用療法または単独療法の一部としての抗CD38モノクローナル抗体から選択される3つ以上の療法による処置を含む3つ以上の先行療法に対して再発しているか、または難治性になっている。いくつかの態様において、免疫調節剤は、サリドマイド、レナリドミドまたはポマリドミドの中から選択される。いくつかの態様において、プロテアソーム阻害剤は、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブまたはイキサゾミブの中から選択される。いくつかの態様において、抗CD38抗体は、ダラツムマブであるか、またはダラツムマブを含む。いくつかの態様において、対象は、進行性疾患がレジメンに対する最良の奏効であった場合を除いて、各レジメンについて少なくとも2回の連続サイクルの処置を受けていなければならない。
いくつかの局面において、対象は、例えば、対象から得られた生物学的試料、例えば、血液または血清由来の可溶性BCMA（sBCMA）のレベルについてスクリーニングされ得る。いくつかの局面において、対象は、細胞療法による処置の前にsBCMAのレベルについてスクリーニングされ得る。いくつかの局面において、方法は、BCMA発現に関連する疾患または障害、例えば、腫瘍またはがん、例えば多発性骨髄腫を有する対象におけるsBCMAのレベルまたは量をスクリーニングまたは検出する工程を含む。いくつかの局面において、試料は、BCMAに関連する疾患または障害を有すると疑われる患者から得られ、例えば、可溶性タンパク質レベルを検出するためのアッセイ、例えば酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）を使用して、sBCMAのレベルまたは量についてアッセイされ得る。いくつかの局面において、多発性骨髄腫（MM）を有する対象では、sBCMAレベルは、骨髄生検における形質細胞の割合と相関し得る。いくつかの局面において、多発性骨髄腫（MM）を有する対象では、sBCMAレベルは、処置に対する奏効の低下、または全生存期間もしくは無増悪生存期間の短縮と相関し得る（例えば、Ghermezi et al.,Haematologica 2017,102（4）:785-795を参照）。いくつかの局面において、低いsBCMAレベルを呈する対象が、本方法による処置のために選択され得、本明細書において記載される、BCMAに結合する組換え受容体（例えばCAR）を含む操作された細胞またはその薬学的組成物の治療有効量を投与され得る。いくつかの局面において、高いsBCMAレベルを呈する対象が、本方法による処置のために選択され得、本明細書において記載される、BCMAに結合する組換え受容体（例えばCAR）を含む操作された細胞またはその薬学的組成物の治療有効量を投与され得、ここで、CARの抗原結合ドメインは、可溶性BCMAに結合する親和性が低い。いくつかの態様において、CARの抗原結合ドメインが細胞表面BCMAに結合する能力は、sBCMAの存在下で低下しないか、または実質的に低下しない。
いくつかの態様において、対象は、例えば、別のBCMA特異的抗体による処置、ならびに/またはBCMAターゲティングキメラ受容体を発現する細胞による処置、ならびに/または化学療法、放射線および/もしくは造血幹細胞移植（HSCT）、例えば、同種HSCTもしくは自家HSCTを含む他の療法による処置後の持続性または再発性疾患を有する。いくつかの態様において、投与は、対象が別のBCMA標的指向型療法に対して抵抗性になっているにもかかわらず、対象を有効に処置する。いくつかの態様において、対象は、再発していないが、再発に関してリスクが高い、例えば、再発のリスクが高いと判定され、したがって、化合物または組成物は、例えば、再発の可能性を低下させるか、または再発を予防するために予防的に投与される。
いくつかの態様において、対象は、移植に適格である、例えば、造血幹細胞移植（HSCT）、例えば、同種HSCTまたは自家HSCTに適格である対象である。いくつかのそのような態様において、対象は、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物の投与前に、適格であるにもかかわらず以前に移植を受けていない。
いくつかの態様において、対象は、移植に適格でない、例えば、造血幹細胞移植（HSCT）、例えば、同種HSCTまたは自家HSCTに適格でない対象である。いくつかのそのような態様において、そのような対象は、本明細書において提供される態様に従って、BCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物を投与される。
いくつかの態様において、方法は、特定の基準、診断または適応症に基づいて、提供される抗BCMA抗体、組換え受容体、および/またはそのような受容体を含む細胞による処置のために特定の対象を含めるかまたは除外することを伴い得る。いくつかの態様において、細胞または処置前リンパ球枯渇化学療法の用量の投与の時点で、対象は、活動性の形質細胞性白血病（PCL）も形質細胞性白血病（PCL）の病歴も有しない。いくつかの態様において、対象が投与時に活動性のPCL、またはPCLの病歴を有した場合、対象は、提供される方法従って処置することから除外され得る。いくつかの態様において、対象が投与時に二次性PCLなどのPCLを発症する場合、対象は、提供される方法に従って処置することから除外され得る。いくつかの態様において、基準、診断または適応症の評価は、提供される方法による処置の適格性もしくは適合性について対象をスクリーニングする際に、処置レジメンの様々な工程で、リンパ球枯渇療法を投与する際に、および/または操作された細胞もしくはその組成物の投与開始時もしくは投与開始直前に行われ得る。
3. 操作された細胞の投与
いくつかの態様において、方法は、BCMAに結合する組換え受容体（例えばCAR）を発現する遺伝子操作された細胞が対象に投与される養子細胞療法を伴う。そのような投与は、BCMA標的指向方式で細胞の活性化（例えば、T細胞活性化）を促進することができ、その結果、疾患または障害の細胞は分解のために標的とされる。
そのため、提供される方法および使用は、養子細胞療法のための方法および使用を含む。いくつかの態様において、方法は、対象、例えば、疾患、状態もしくは障害を有するか、そのリスクがあるか、またはそれを有すると疑われる対象への細胞、または細胞を含有する組成物の投与を含む。いくつかの態様において、細胞、集団および組成物は、例えば養子T細胞療法などの養子細胞療法によって、処置されるべき特定の疾患または状態を有する対象に投与される。いくつかの態様において、細胞または組成物は、対象、例えば疾患もしくは状態を有するか、またはそのリスクがある対象に投与される。いくつかの局面において、方法はそれにより、BCMA発現がんにおける腫瘍負荷量を減少させることなどにより、疾患または状態の1つまたは複数の症状を処置する、例えば、寛解させる。
養子細胞療法のための細胞の投与の方法は公知であり、提供される方法および組成物との繋がりで使用され得る。例えば、養子T細胞療法の方法は、例えば、Gruenberg et alの米国特許出願公開第2003/0170238号、Rosenbergの米国特許第4,690,915号、Rosenberg（2011）Nat Rev Clin Oncol.8（10）:577-85）に記載されている。例えば、Themeli et al.（2013）Nat Biotechnol.31（10）:928-933;Tsukahara et al.（2013）Biochem Biophys Res Commun 438（1）:84-9;Davila et al.（2013）PLoS ONE 8（4）:e61338を参照されたい。
いくつかの態様において、細胞療法、例えば、養子細胞療法、例えば、養子T細胞療法は、自家移植により実行され、その場合、細胞は、細胞療法を受けることになる対象から、またはそのような対象に由来する試料から単離および/または他に調製される。そのため、いくつかの局面において、細胞は、処置を必要とする対象、例えば、患者に由来し、細胞は、単離および処理後に同じ対象に投与される。
いくつかの態様において、細胞療法、例えば、養子細胞療法、例えば、養子T細胞療法は、同種移植により実行され、その場合、細胞は、細胞療法を受けることになるか、または最終的に受ける対象以外の対象、例えば、第1の対象から単離および/または他に調製される。そのような態様において、細胞は次に、同じ種の異なる対象、例えば、第2の対象に投与される。いくつかの態様において、第1および第2の対象は遺伝学的に同一である。いくつかの態様において、第1および第2の対象は遺伝学的に類似している。いくつかの態様において、第2の対象は、第1の対象と同じHLAクラスまたはスーパータイプを発現する。
いくつかの態様において、細胞、細胞集団、または組成物が投与される対象は霊長動物、例えばヒトである。いくつかの態様において、細胞、細胞集団、または組成物が投与される対象は非ヒト霊長動物（NHP）である。いくつかの態様において、非ヒト霊長動物はサル（例えば、カニクイザル）または類人猿である。対象は男性（雄）または女性（雌）であることができ、乳児期、若年期、思春期、成年期、および老年期対象を含む、任意の好適な年齢であることができる。いくつかの態様において、対象は非霊長哺乳動物、例えば齧歯動物（例えば、マウス、ラットなど）である。いくつかの例において、患者または対象は、疾患、養子細胞療法のための、および/または毒性アウトカム、例えばサイトカイン放出症候群（CRS）を評価するための、検証された動物モデルである。
BCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物は、任意の好適な手段により、例えば、注射、例えば、静脈内もしくは皮下注射、眼内注入、眼周囲注射、網膜下注射、硝子体内注射、経中隔注射、強膜下注射、脈絡膜内注射、前房内注射、結膜下注射、結膜下注射、テノン嚢下注射、球後注射、眼球周囲注射、または後部強膜近傍送達により投与され得る。いくつかの態様において、それらは、非経口、肺内、および鼻腔内投与、および、局所的な処置のために所望される場合には病巣内投与により投与される。非経口注入は、筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、頭蓋内、胸腔内、または皮下投与を含む。投薬および投与は、投与が短期間であるのか、それとも慢性的であるのかに部分的に依存し得る。様々な投薬スケジュールとしては、様々な時点にかけての単回または複数回の投与、ボーラス投与、およびパルス注入が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
疾患の予防または処置のために、操作された細胞、またはそれを含む組成物の適切な投薬量は、処置される疾患の種類、操作された細胞またはそれを含む組成物の種類、疾患の重症度および経過、操作された細胞またはそれを含む組成物が予防目的または治療目的のために投与されるかどうか、先行する療法、患者の臨床歴、および組換え受容体または細胞に対する奏効、ならびに主治医の裁量に依存し得る。組成物および分子および細胞は、いくつかの態様において、患者に1回でまたは一連の処置にかけて好適に投与される。
いくつかの態様において、処置は、療法に対する対象による免疫応答を誘導せず、かつ/または疾患もしくは状態の有効な処置を予防する程度までそのような応答を誘導しない。いくつかの局面において、免疫原性および/または移植片対宿主応答の程度は、異なるが同等の処置で観察されるものよりも小さい。例えば、提供される抗BCMA抗体を含むCARを発現する細胞を使用する養子細胞療法の場合、免疫原性の程度は、いくつかの態様において、類似した、例えば、オーバーラップするエピトープに結合するおよび/または抗体、例えばマウスもしくはサルもしくはウサギもしくはヒト化抗体とBCMAへの結合について競合する異なる抗体を含むCARと比較して低減されている。
ある特定の態様において、組換え受容体を含む遺伝子操作された細胞に関連して、対象は、10万個もしくは約10万個から、1000億個もしくは約1000億個の細胞および/または対象の体重1キログラム当たりのその細胞の量、例えば、10万個から、500億個もしくは約500億個の細胞（例えば、500万個もしくは約500万個の細胞、2500万個もしくは約2500万個の細胞、5億個もしくは約5億個の細胞、10億個もしくは約10億個の細胞、50億個もしくは約50億個の細胞、200億個もしくは約200億個の細胞、300億個もしくは約300億個の細胞、400億個もしくは約400億個の細胞、または以上の値の任意の2つにより定義される範囲）、100万個から、500億個もしくは約500億個の細胞（例えば、500万個もしくは約500万個の細胞、2500万個もしくは約2500万個の細胞、5億個もしくは約5億個の細胞、10億個もしくは約10億個の細胞、50億個もしくは約50億個の細胞、200億個もしくは約200億個の細胞、300億個もしくは約300億個の細胞、400億個もしくは約400億個の細胞、または以上の値の任意の2つにより定義される範囲）、例えば1000万個もしくは約1000万個から、1000億個もしくは約1000億個の細胞（例えば、2000万個もしくは約2000万個の細胞、2500万個もしくは約2500万個の細胞、3000万個もしくは約3000万個の細胞、4000万個もしくは約4000万個の細胞、5000万個もしくは約5000万個の細胞、6000万個もしくは約6000万個の細胞、7000万個もしくは約7000万個の細胞、8000万個もしくは約8000万個の細胞、9000万個もしくは約9000万個の細胞、100億個もしくは約100億個の細胞、250億個もしくは約250億個の細胞、500億個もしくは約500億個の細胞、750億個もしくは約750億個の細胞、900億個もしくは約900億個の細胞、または以上の値の任意の2つにより定義される範囲）、およびいくつかの場合において、1億個もしくは約1億個の細胞から、500億個もしくは約500億個の細胞（例えば、1億2000万個もしくは約1億2000万個の細胞、1億5000万個もしくは約1億5000万個の細胞、2億5000万個もしくは約2億5000万個の細胞、3億個もしくは約3億個の細胞、3億5000万個もしくは約3億5000万個の細胞、4億5000万個もしくは約4億5000万個の細胞、6億個もしくは約6億個の細胞、6億5000万個もしくは約6億5000万個の細胞、8億個もしくは約8億個の細胞、9億個もしくは約9億個の細胞、12億個もしくは約12億個の細胞、30億個もしくは約30億個の細胞、300億個もしくは約300億個の細胞、450億個もしくは約450億個の細胞）またはこれらの範囲の間および/もしくは対象の体重1キログラム当たりの任意の値の範囲を投与される。ここでも、投薬量は、疾患もしくは障害および/または患者および/または他の処置に特有の属性に依存して変動し得る。
いくつかの態様において、方法は、操作された細胞のある用量、または操作された細胞のある用量を含む組成物を投与する工程を含む。いくつかの態様において、操作された細胞、または操作された細胞を含有する組成物は、処置レジメンにおいて使用可能であり、処置レジメンは、操作された細胞のある用量、または操作された細胞のある用量を含む組成物を投与する工程を含む。いくつかの態様において、用量は、例えば、特定の数または範囲の組換え受容体発現T細胞、総T細胞、または総末梢血単核細胞（PBMC）、例えば任意の数の本明細書において記載されるそのような細胞を含有することができる。いくつかの態様において、細胞のある用量を含有する組成物が投与され得る。いくつかの局面において、細胞集団または細胞組成物中のCAR発現（CAR＋）細胞の数、量または割合は、サロゲートマーカーの検出により、例えば、フローサイトメトリーもしくは他の手段により、または本明細書において提供される受容体に特異的に結合することができる標識された分子、例えば標識された抗原の結合を検出することにより評価され得る。
提供される方法に関連して、投与される細胞は、BCMA結合性（抗BCMA）組換え受容体、例えばCARを発現するように操作された免疫細胞である。いくつかの態様において、免疫細胞はT細胞である。いくつかの態様において、投与される細胞はCD4＋T細胞である。いくつかの態様において、投与される細胞はCD8＋T細胞である。いくつかの態様において、投与される細胞は、CD4＋T細胞とCD8＋T細胞との組合せ、例えば、いくつかの局面において同じ容器または細胞組成物もしくは懸濁液内にあるCD4＋CAR T細胞とCD8＋CAR T細胞との組合せである。いくつかの例において、投与されるCD4＋細胞対CD8＋細胞の比（CD4:CD8）、例えば、懸濁液もしくは組成物または容器内の比は、1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1である。いくつかの態様において、比は、許容される誤り率内で、1:3～3:1であるか、または1:4もしくは約1:4から、4:1もしくは約4:1、もしくは1:3もしくは約1:3から、3:1もしくは約3:1、もしくは1:2もしくは約1:2から、2:1もしくは約2:1、もしくはそのような比のいずれかである。いくつかの態様において、比は、1:3または約1:3から、3:1または約3:1である。いくつかの態様において、比は、1:2または約1:2から、2:1または約2:1である。いくつかの局面において、療法を投与されている対象では、および/または細胞組成物を生成するために試料が採取され、処理される対象では、CD4＋CAR-T細胞対CD8＋CAR-T細胞の比、またはCD4＋細胞対CD8＋細胞の比は、所望の範囲内、例えば、1:4もしくは約1:4から、4:1もしくは約4:1、もしくは1:3もしくは約1:3から、3:1もしくは約3:1、もしくは1:2もしくは約1:2から、2:1もしくは約2:1であるか、またはそのような対象の所与のパーセンテージについて、例えば、そのような対象の少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、もしくは少なくとも80％、もしくは少なくとも85％、もしくは少なくとも90％、もしくは少なくとも95％について、そのような所望の比内である。
いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、例えば、1.0×107個もしくは約1.0×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のそのような細胞、例えば、1.0×107個、1.5×107個、2.0×107個、2.5×107個、5×107個、1.5×108個、3×108個、4.5×108個、6×108個、8×108個もしくは1.2×109個、または約1.0×107個、1.5×107個、2.0×107個、2.5×107個、5×107個、1.5×108個、3×108個、4.5×108個、6×108個、8×108個もしくは1.2×109個のそのような総細胞の範囲、または以上の値の任意の2つの間の範囲で、1×106個または約1×106個よりも多い総組換え受容体（例えばCAR）発現（CAR＋）細胞、T細胞または末梢血単核細胞（PBMC）、および2×109個または約2×109個よりも少ない総組換え受容体（例えばCAR）発現細胞、T細胞または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、例えば、2.5×107個もしくは約2.5×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のそのような細胞、例えば、2.5×107個、5×107個、1.5×108個、3×108個、4.5×108個、6×108個、8×108個もしくは1.2×109個、または約2.5×107個、5×107個、1.5×108個、3×108個、4.5×108個、6×108個、8×108個もしくは1.2×109個のそのような総細胞の範囲、または以上の値の任意の2つの間の範囲で、1×106個または約1×106個よりも多い総組換え受容体（例えばCAR）発現（CAR＋）細胞、T細胞または末梢血単核細胞（PBMC）、および2×109個または約2×109個よりも少ない総組換え受容体（例えばCAR）発現細胞、T細胞または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、5×107個または約5×107個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、1.5×108個または約1.5×108個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、3×108個または約3×108個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、4.5×108個または約4.5×108個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、6×108個または約6×108個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、8×108個または約8×108個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量は、1.2×109個または約1.2×109個の総組換え受容体（例えば、CAR）発現細胞、T細胞、または末梢血単核細胞（PBMC）を含む。
いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、1×105個または約1×105個から、2×109個または約2×109個の総CAR発現（CAR＋）T細胞、1×105個または約1×105個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、5×107個または5×107個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、2.5×107個または約2.5×107個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、1×107個または約1×107個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、5×106個または約5×106個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、2.5×106個または約2.5×106個の総CAR＋T細胞、1×105個または約1×105個から、1×106個または約1×106個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、5×107個または約5×107個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、2.5×107個または約2.5×107個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、1×107個または約1×107個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、5×106個または約5×106個の総CAR＋T細胞、1×106個または約1×106個から、2.5×106個または約2.5×106個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、5×107個または約5×107個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、2.5×107個または約2.5×107個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、1×107個または約1×107個の総CAR＋T細胞、2.5×106個または約2.5×106個から、5×106個または約5×106個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、5×107個または約5×107個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、2.5×107個または約2.5×107個の総CAR＋T細胞、5×106個または約5×106個から、1×107個または約1×107個の総CAR＋T細胞、1×107個または約1×107個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、1×107個または約1×107個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、1×107個または約1×107個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、1×107個または約1×107個から、5×107個または約5×107個の総CAR＋T細胞、1×107個または約1×107個から、2.5×107個または約2.5×107個の総CAR＋T細胞、2.5×107個または約2.5×107個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、2.5×107個または約2.5×107個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、2.5×107個または約2.5×107個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、2.5×107個または約2.5×107個から、5×107個または約5×107個の総CAR＋T細胞、5×107個または約5×107個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、5×107個または約5×107個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、5×107個または約5×107個から、1×108個または約1×108個の総CAR＋T細胞、1×108個または約1×108個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞、1×108個または約1×108個から、2.5×108個または約2.5×108個の総CAR＋T細胞、2.5×108個または約2.5×108個から、5×108個または約5×108個の総CAR＋T細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、1.0×107個もしくは約1.0×107個から、8×108個もしくは約8×108個の総CAR＋（CAR＋）T細胞、1.0×107個もしくは約1.0×107個から、6.5×108個もしくは約6.5×108個の総CAR＋T細胞、1.5×107個もしくは約1.5×107個から、6.5×108個もしくは約6.5×108個の総CAR＋T細胞、1.5×107個もしくは約1.5×107個から、6.0×108個もしくは約6.0×108個の総CAR＋T細胞、2.5×107個もしくは約2.5×107個から、6.0×108個もしくは約6.0×108個の総CAR＋T細胞、または5.0×107個もしくは約5.0×107個から、6.0×108個もしくは約6.0×108個の総CAR＋T細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、0.5×108個または約0.5×108個から、8×108個または約8×108個の総CAR＋（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、1.5×108個または約1.5×108個から、4.5×108個または約4.5×108個の総CAR＋（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、1.5×108個または約1.5×108個から、5.4×108個または約5.4×108個の総CAR＋（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、用量は、5×107個または約5×107個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.0×107個または約1.0×107個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.5×108個または約1.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、3×108個または約3×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、3.5×108個または約3.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、4.0×108個または約4.0×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、4.5×108個または約4.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、5.0×108個または約5.0×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、5.4×108個または約5.4×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、5.5×108個または約5.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6×108個または約6×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6.5×108個または約6.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、7.0×108個または約7.0×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、7.5×108個または約7.5×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、8×108個または約8×108個の総CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.2×109個または約1.2×109個の総CAR＋細胞である。
いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、2.5×107個または約2.5×107個のCAR＋（CAR＋）T細胞、総T細胞または総末梢血単核細胞（PBMC）から、1.2×109個または約1.2×109個のCAR＋T細胞、総T細胞または総PBMC、5.0×107個または約5.0×107個のCAR＋T細胞、総T細胞または総末梢血単核細胞（PBMC）から、6.0×108個または約6.0×108個のCAR＋T細胞、総T細胞または総PBMC、5.0×107個または約5.0×107個のCAR＋T細胞から、4.5×108個または約4.5×108個のCAR＋T細胞、総T細胞または総末梢血単核細胞（PBMC）、1.5×108個または約1.5×108個のCAR＋T細胞から、3.0×108個または約3.0×108個のCAR＋T細胞、総T細胞または総PBMC（両端の値を含む）を含む。いくつかの態様において、この数は、CD3＋またはCD8＋、いくつかの場合においてはさらにCAR＋（例えばCAR＋）細胞の総数に関する。いくつかの態様において、用量は、2.5×107個もしくは約2.5×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のCD3＋もしくはCD8＋総T細胞、もしくはCD3＋もしくはCD8＋CAR＋細胞、5.0×107個もしくは約5.0×107個から、6.0×108個もしくは約6.0×108個のCD3＋もしくはCD8＋総T細胞、もしくはCD3＋もしくはCD8＋CAR＋細胞、5.0×107個もしくは約5.0×107個から、4.5×108個もしくは約4.5×108個のCD3＋もしくはCD8＋総T細胞、もしくはCD3＋もしくはCD8＋CAR＋細胞、または1.5×108個もしくは約1.5×108個から、3.0×108個もしくは約3.0×108個のCD3＋もしくはCD8＋総T細胞、もしくはCD3＋もしくはCD8＋CAR＋細胞（両端の値を含む）の細胞の数を含む。
いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞の用量は、CD3＋CAR＋（CAR＋）またはCD4＋/CD8＋CAR＋（CAR＋）細胞の総数に関する。いくつかの態様において、用量は、1.0×107個もしくは約1.0×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、1.5×107個もしくは約1.5×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、2.0×107個もしくは約2.0×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、2.5×107個もしくは約2.5×107個から、1.2×109個もしくは約1.2×109個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、5.0×107個もしくは約5.0×107個から、6.0×108個もしくは約6.0×108個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、5.0×107個もしくは約5.0×107個から、4.5×108個もしくは約4.5×108個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞、または1.5×108個もしくは約1.5×108個から、3.0×108個もしくは約3.0×108個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞、もしくはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞（両端の値を含む）の遺伝子操作された細胞の数を含む。いくつかの態様において、用量は、1.0×107、1.5×107、2.0×107、2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個、または約1.0×107、1.5×107、2.0×107、2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個のCD3＋もしくはCD4＋/CD8＋総T細胞またはCD3＋CAR＋もしくはCD4＋/CD8＋CAR＋細胞を含む。いくつかの態様において、用量は、2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個、または約2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個のCD3＋CAR＋細胞を含む。いくつかの態様において、用量は、1.0×107、1.5×107、2.0×107、2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個、または約1.0×107、1.5×107、2.0×107、2.5×107、5×107、1.5×108、3×108、4.5×108、6×108、8×108もしくは1.2×109個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞を含む。いくつかの態様において、用量は、5×107個または約5×107個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.5×108個または約1.5×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、3×108個または約3×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、4.5×108個または約4.5×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6×108個または約6×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6.5×108個または約6.5×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、8×108個または約8×108個のCD3＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.2×109個または約1.2×109個のCD3＋CAR＋細胞である。
いくつかの態様において、用量は、1.0×107個または約1.0×107個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.5×107個または約1.5×107個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、2.0×107個または約2.0×107個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、2.5×107個または約2.5×107個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、5×107個または約5×107個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.5×108個または約1.5×108個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、3×108個または約3×108個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、4.5×108個または約4.5×108個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6×108個または約6×108個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、8×108個または約8×108個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.2×109個または約1.2×109個のCD4＋/CD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、2.5×107個または約2.5×107個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、5×107個または約5×107個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.5×108個または約1.5×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、3×108個または約3×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、4.5×108個または約4.5×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6×108個または約6×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、6.5×108個または約6.5×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、8×108個または約8×108個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。いくつかの態様において、用量は、1.2×109個または約1.2×109個のCD4＋またはCD8＋CAR＋細胞である。
いくつかの態様において、用量のT細胞は、CD4＋T細胞、CD8＋T細胞、またはCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む。
いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、用量のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞の合計は、例えば、2.5×107個または約2.5×107個から、1.2×109個または約1.2×109個のそのような細胞の範囲、例えば、5×107個または約5×107個から、4.5×108個または約4.5×108個のそのような細胞の範囲で、1×106個または約1×106個から、2×109個または約2×109個の総CAR発現CD4＋細胞およびCAR発現CD8＋細胞、例えば、1.0×107個もしくは約1.0×107個、2.5×107個もしくは約2.5×107個、2.0×107個もしくは約2.0×107個、2.5×107個もしくは約2.5×107個、5×107個もしくは約5×107個、1.5×108個もしくは約1.5×108個、3×108個もしくは約3×108個、4.5×108個もしくは約4.5×108個、6×108個もしくは約6×108個、6.5×108個もしくは約6.5×108個、8×108個もしくは約8×108個、もしくは1.2×109個もしくは約1.2×109個のそのような総細胞、または以上の値の任意の2つの間の範囲を含む。いくつかの態様において、例えば、対象がヒトである場合、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む用量中を含め、用量のCD8＋T細胞は、例えば、2.5×107個または約2.5×107個から、1.2×109個または約1.2×109個のそのような細胞の範囲、例えば、5×107個または約5×107個から、4.5×108個または約4.5×108個のそのような細胞の範囲で、1×106個または約1×106個から、2×109個または約2×109個の総組換え受容体（例えばCAR）発現CD8＋細胞、例えば、2.5×107個もしくは約2.5×107個、5×107個もしくは約5×107個、1.5×108個もしくは約1.5×108個、3×108個もしくは約3×108個、4.5×108個もしくは約4.5×108個、6×108個もしくは約6×108個、8×108個もしくは約8×108個、もしくは1.2×109個もしくは約1.2×109個のそのような総細胞、または以上の値の任意の2つの間の範囲を含む。
いくつかの態様において、細胞、例えば、組換え受容体発現T細胞の用量は、対象に単回用量として投与されるか、または2週、1ヶ月、3ヶ月、6ヶ月、1年もしくはより長い期間内に1回のみ投与される。いくつかの態様において、患者は、複数回の用量を投与され、用量の各々または総用量は、以上の任意の値以内であることができる。いくつかの態様において、投与のための操作された細胞または投与のための操作された細胞の組成物は、細胞の健康を指し示すか、またはそれと合致する特性を呈する。いくつかの態様において、そのような用量の70％、75％、80％、85％もしくは90％、または約70％、75％、80％、85％もしくは90％、または少なくとも70％、75％、80％、85％もしくは90％、または少なくとも約70％、75％、80％、85％もしくは90％のCAR＋細胞は、細胞の健康または生物学的に活性のCAR細胞を指し示す1つまたは複数の特性または表現型、例えばアポトーシスマーカーの発現の非存在を呈する。
特定の態様において、表現型は、アポトーシスおよび/もしくは細胞がアポトーシスプロセスを起こしているという徴候の非存在であるか、または該非存在を含む。アポトーシスは、小疱形成、細胞収縮、核フラグメンテーション、クロマチン凝縮、染色体DNAフラグメンテーション、および大域的なmRNA分解を含む、特徴的な細胞変化および死に繋がる一連の定型的な形態学的および生化学的事象を含むプログラム細胞死のプロセスである。いくつかの局面において、アポトーシスの早期ステージは、ある特定のカスパーゼ、例えば、2、8、9、および10の活性化により指し示され得る。いくつかの局面において、アポトーシスの中期から後期ステージは、膜完全性のさらなる喪失、クロマチン凝縮およびDNAフラグメンテーションにより特徴付けられ、これには、カスパーゼ3、6、および7の活性化などの生化学的事象が含まれる。
特定の態様において、表現型は、プログラム細胞死と関連付けられる1つまたは複数の因子の発現陰性であり、該因子としては、例えばアポトーシスを開始させることが公知のアポトーシス促進因子、例えば、細胞死受容体経路のメンバー、ミトコンドリア（内因性）経路の活性化されたメンバー、例えばBcl-2ファミリーメンバー、例えば、Bax、Bad、およびBid、ならびにカスパーゼである。ある特定の態様において、表現型は、細胞組成物とインキュベートされるか、またはそれに接触させた場合にアポトーシスを起こしている細胞に優先的に結合する、指標、例えば、アネキシンV分子またはTUNEL染色の非存在である。いくつかの態様において、表現型は、細胞におけるアポトーシス状態を指し示す1つもしくは複数のマーカーの発現であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、表現型は、カスパーゼ、例えばカスパーゼ3の発現および/または活性化の欠如である。いくつかの局面において、カスパーゼ-3の活性化は、アポトーシスの増加または再開を指し示す。ある特定の態様において、カスパーゼ活性化は公知の方法により検出され得る。いくつかの態様において、活性化されたカスパーゼに特異的に結合する（すなわち、切断されたポリペプチドに特異的に結合する）抗体が、カスパーゼ活性化を検出するために使用され得る。特定の態様において、表現型は、活性カスパーゼ3-であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、アポトーシスのマーカーは、アポトーシスと関連付けられる細胞における特色を検出する試薬である。ある特定の態様において、試薬はアネキシンV分子である。
いくつかの態様において、投与のための操作された細胞を含有する組成物は、ある特定の数または量の、細胞の健康を指し示すか、またはそれと合致する表現型を呈する細胞を含有する。任意の態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の用量中のCAR＋T細胞の約25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％または1％未満は、アポトーシスのマーカー、任意でアネキシンVまたは活性カスパーゼ3を発現する。任意の態様のいくつかにおいて、操作されたT細胞の用量中のCAR＋T細胞の5％、4％、3％、2％または1％未満は、アネキシンVまたは活性カスパーゼ3を発現する。
いくつかの態様において、操作された細胞、またはそれを含む組成物は、組合せ処置の部分として、例えば、別の治療的介入、例えば、別の抗体または操作された細胞または受容体または作用物質、例えば、細胞傷害剤または治療剤と同時に、または任意の順序で逐次的に投与される。
操作された細胞、またはそれを含む組成物は、いくつかの態様において、1つもしくは複数の追加の治療剤と共にまたは別の治療的介入との繋がりで、同時的または任意の順序で逐次的のいずれかで、併用投与される。いくつかの状況において、細胞は、別の療法と時間的に十分に近接して併用投与され、その結果、細胞集団は1つまたは複数の追加の治療剤の効果を増強するか、またはその逆である。いくつかの態様において、操作された細胞、またはそれを含む組成物は、1つまたは複数の追加の治療剤の前に投与される。いくつかの態様において、操作された細胞、またはそれを含む組成物は、1つまたは複数の追加の治療剤の後に投与される。
いくつかの態様において、対象に、白血球アフェレーシスの後、およびリンパ球枯渇化学療法の前に、ブリッジング療法が投与され得る。処置医は、提供される組成物または細胞の製造中に、例えば疾患制御のためにブリッジング療法が必要であるかどうかを決定することができる。いくつかの態様において、ブリッジング療法は、抗体（例えばダラツムマブ）などの生物学的作用物質を含まない。いくつかの態様において、ブリッジング療法は、リンパ球枯渇の開始前に中止される。いくつかの態様において、ブリッジング療法は、リンパ球枯渇の1日、2日、3日、4日、5日、7日、10日、14日、21日、28日、45日、または60日前に中止される。
細胞が哺乳動物（例えばヒト）に投与されると、操作された細胞集団および/または抗体の生物学的活性は、いくつかの局面において、いくつかの公知の方法のいずれかによって測定される。評価するためのパラメーターとしては、インビボで、例えばイメージングによる、またはエクスビボで、例えばELISAもしくはフローサイトメトリーによる、抗原への操作されたT細胞もしくは天然のT細胞または他の免疫細胞の特異的結合が挙げられる。ある特定の態様において、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力は、当技術分野において公知の任意の好適な方法、例えば、Kochenderfer et al.,J.Immunotherapy,32（7）:689-702（2009）、およびHerman et al.J.Immunological Methods,285（1）:25-40（2004）に記載されている細胞傷害性アッセイを使用して測定され得る。ある特定の態様において、細胞の生物学的活性はまた、CD 107a、IFNγ、IL-2およびTNFなどのある特定のサイトカインの発現および/または分泌をアッセイすることによって測定され得る。いくつかの局面において、生物学的活性は、臨床アウトカム、例えば、腫瘍負荷量または腫瘍量の低下を評価することによって測定される。
ある特定の態様において、操作された細胞は、それらの治療効果または予防効果が増加するように、任意の数の方法で改変される。例えば、集団によって発現される操作されたCARまたはTCRは、いくつかの態様において、直接的に、またはリンカーを介して間接的に、ターゲティング部分にコンジュゲートされる。ターゲティング部分への化合物、例えば、CARまたはTCRのコンジュゲートの実行は、当技術分野において公知である。例えば、参照によりその全体が組み入れられるWadwa et al.,J.Drug Targeting,3（2）:111（1995）、および米国特許第5,087,616号を参照されたい。
4. 治療アウトカム
いくつかの態様において、投与の用量および/または頻度は、療法のアウトカム、例えば、有効性、奏効および/または安全性、例えば、CRS、NTおよび/またはMASを含む毒性などの有害事象の欠如または減少に基づいて決定される。
a. 奏効
いくつかの態様において、有効性は、疾患状態を評価することにより決定される。疾患状態を評価する例示的な方法としては、電気泳動および免疫固定法による生体液、例えば血液および/または尿中のMタンパク質の測定、血液中のsFLC（κおよびλ）の定量化、骨格検査、ならびに髄外疾患を有する対象における陽電子放出断層撮影法（PET）/コンピュータ断層撮影法（CT）によるイメージングが挙げられる。いくつかの態様において、疾患状態は、骨髄検査により評価され得る。いくつかの例において、投与の用量および/または頻度は、血液および/または骨髄中の組換え受容体または細胞の拡大増殖および持続により決定される。いくつかの態様において、投与の用量および/または頻度は、組換え受容体または操作された細胞の抗腫瘍活性に基づいて決定される。いくつかの態様において、抗腫瘍活性は、全体奏効率（ORR）および/またはInternational Myeloma Working Group（IMWG）Uniform Response Criteriaにより決定される（Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346を参照）。いくつかの態様において、奏効は、最小残留疾患（MRD）評価を使用して評価される。いくつかの態様において、MRDは、フローサイトメトリーおよびハイスループットシークエンシング、例えば、ディープシークエンシングなどの方法により評価され得る。いくつかの局面において、MRD陰性疾患を有する対象としては、105中の1の有核細胞またはより高い最小感度（すなわち、10-5の感度）を有するアッセイ、例えばフローサイトメトリー（次世代フローサイトメトリー;NGF）またはハイスループットシークエンシング、例えば、ディープシークエンシングもしくは次世代シークエンシング（NGS）により除外される、骨髄吸引液における異常なクローン形質性細胞の非存在を呈する対象が挙げられる。
いくつかの局面において、持続したMRD陰性は、最小1年の間隔で確認される、髄（NGFもしくはNGS、または両方）におけるおよび下記に定義されるイメージングによるMRD陰性を呈する対象を含む。その後の評価が、陰性の持続期間（例えば、5年におけるMRD陰性）をさらに特定するために使用され得る。いくつかの局面において、フローMRD陰性は、105中の1の有核細胞またはより高い最小感度を有する多発性骨髄腫におけるMRD検出のためのEuroFlow標準操作手順（または検証された同等の方法）を使用して骨髄吸引液におけるNGFによる表現型的に異常なクローン形質性細胞の非存在を呈する対象を含む。いくつかの局面において、シークエンシングMRD陰性は、クローンの存在が、105中の1の有核細胞またはより高い最小感度を有するLymphoSIGHTプラットフォーム（または検証された同等の方法）を使用して骨髄吸引液のDNAシークエンシング後に得られる2つ未満の同一のシークエンシングリードとして定義される、骨髄吸引液におけるNGSによるクローン形質性細胞の非存在を呈する対象を含む。いくつかの局面において、イメージングプラスMRD陰性は、NGFまたはNGSに加えて、ベースラインもしくは先行するPET/CTにおいて見出される増加したトレーサー取込みのあらゆる区画の消失またはより少ない縦隔血プールSUVへの減少または周囲正常組織未満への減少により評価されるMRD陰性を呈する対象を含む（Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346を参照）。
いくつかの態様において、奏効は、組換え受容体または細胞の投与後の奏効の持続期間に基づいて評価される。いくつかの例において、投与の用量および/または頻度は毒性に基づき得る。いくつかの態様において、用量および/または頻度は、組換え受容体および/または細胞が投与される対象の健康関連の生活の質（HRQoL）に基づいて決定され得る。いくつかの態様において、投与の用量および/または頻度は、上記の基準のいずれかに基づいて変更、すなわち、増加または減少され得る。
いくつかの局面において、対象の生存、ある特定の期間内の生存、生存の程度、無事象もしくは無症状生存の存在もしくは持続期間、または無再発生存が評価される。いくつかの態様において、疾患または状態の任意の症状が評価される。いくつかの態様において、腫瘍負荷量の度合が特定される。いくつかの態様において、決定のための例示的なパラメーターは、腫瘍における寛解または改善を指し示す特定の臨床アウトカムを含む。そのようなパラメーターとしては、客観的奏効（OR）、完全奏効（CR）、厳密完全奏効（sCR）、最良部分奏効（VGPR）、部分奏効（PR）、最小奏効（MR）、安定疾患（SD）、進行性疾患（PD）または再発（例えば、International Myeloma Working Group（IMWG）Uniform Response Criteriaを参照;Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346を参照）、客観的奏効率（ORR）、無増悪生存期間（PFS）および全生存期間（OS）を含む、疾患制御の持続期間が挙げられる。いくつかの態様において、奏効は、最小残留疾患（MRD）評価を使用して評価される。パラメーターのための特有の閾値は、本明細書において提供される方法の有効性を決定するために設定され得る。いくつかの態様において、処置される疾患または障害は多発性骨髄腫である。いくつかの態様において、多発性骨髄腫のための測定可能な疾患基準は、（1）1g/dLまたはより高い血清Mタンパク質;（2）24時間当たり200mgまたはより高い尿Mタンパク質;（3）異常なκ対λ比を伴う、10mg/dLまたはより高い関与する血清遊離軽鎖（sFLC）レベルを含むことができる。いくつかの場合において、軽鎖病は、血清または尿において測定可能な疾患を有しない対象についてのみ許容される。
いくつかの局面において、例えば、提供される態様による療法に対する奏効は、細胞療法の投与の開始後の指定された時点において測定され得る。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の1、2、3、6、9、12、18、24、30もしくは36ヶ月後もしくは約1、2、3、6、9、12、18、24、30もしくは36ヶ月後、または以上のいずれかにより定義される範囲内である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の4、8、12、16、20、24、28、32、36、48もしくは52週後、または以上のいずれかにより定義される範囲内である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の1ヶ月後または約1ヶ月後である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の3ヶ月後または約3ヶ月後である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の6ヶ月後または約6ヶ月後である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の9ヶ月後または約9ヶ月後である。いくつかの態様において、指定された時点は、投与の開始の12ヶ月後または約12ヶ月後である。
いくつかの態様において、指定された時点の3、6、9もしくは12ヶ月後または約3、6、9もしくは12ヶ月後に決定される奏効またはアウトカムは、初期の指定された時点において決定される奏効またはアウトカムと等しいか、またはそれと比べて改善している。例えば、いくつかの局面において、初期の指定された時点において決定される奏効またはアウトカムが、安定疾患（SD）、進行性疾患（PD）または再発である場合、提供される態様にしたがって処置される対象は、その後の時点において、初期の指定された時点の3、6、9もしくは12ヶ月後または約3、6、9もしくは12ヶ月後に、初期の指定された時点における奏効もしくはアウトカムに等しい、または客観的奏効（OR）、完全奏効（CR）、厳密完全奏効（sCR）、最良部分奏効（VGPR）もしくは部分奏効（PR）である奏効もしくはアウトカムである、等しいまたは改善された奏効またはアウトカムを示すことができる（例えば、International Myeloma Working Group（IMWG）Uniform Response Criteriaによるより良好な奏効アウトカムを呈する;Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346を参照）。いくつかの局面において、提供される態様にしたがって処置される対象は、決定の2つの時点の間で改善された奏効またはアウトカムを示すことができる。いくつかの局面において、対象は、例えば、投与の開始の4週後に、評価のための初期の指定された時点におけるPRまたはVGPRを呈することができ、次に後の時点、例えば、投与の開始の12週後に、改善された奏効、例えばCRまたはsCRを呈することができる。いくつかの点において、無増悪生存期間（PFS）は、対象が疾患と共に生存するが、疾患が悪化しない、がんなどの疾患の処置の間およびその後の時間の長さとして記載される。いくつかの局面において、客観的奏効（OR）は、測定可能な奏効として記載される。いくつかの局面において、客観的奏効率（ORR;いくつかの場合において全体奏効率としても公知である）は、CRまたはPRを達成した患者の割合として記載される。いくつかの局面において、全生存期間（OS）は、疾患を有すると診断された対象が依然として生存している、がんなどの疾患の診断日または処置の開始日のいずれかからの時間の長さとして記載される。いくつかの局面において、無事象生存期間（EFS）は、処置により予防または遅延が意図されたある特定の合併症または事象を対象が有しないままである、がん終了のための処置後の時間の長さとして記載される。これらの事象は、がんの復帰またはある特定の症状、例えば骨に拡大したがんからの骨疼痛の開始、もしくは死を含んでもよい。
いくつかの態様において、奏効の持続期間（DOR）の度合としては、腫瘍奏効の記録から疾患進行までの時間が挙げられる。いくつかの態様において、奏効を評価するためのパラメーターは、持続的な奏効、例えば、療法の開始からの時間的期間後に持続する奏効を含むことができる。いくつかの態様において、持続的な奏効は、療法の開始の約1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18または24ヶ月後の奏効率により指し示される。いくつかの態様において、奏効またはアウトカムは、3、6、9もしくは12ヶ月超、または約3、6、9もしくは12ヶ月超にわたって持続的である。
いくつかの態様において、Eastern Cooperative Oncology Group（ECOG）パフォーマンスステータス指標は、処置のための対象、例えば、先行療法からの不良な成績を有していた対象を評価または選択するために使用され得る（例えば、Oken et al.,（1982）Am J Clin Oncol.5:649-655を参照）。ECOG Scale of Performance Statusは、自分自身の面倒を見る能力、1日当たりの活動性、および身体能力（例えば、歩行、労働など）の観点での患者の機能性のレベルを記載する。いくつかの態様において、0のECOGパフォーマンスステータスは、対象が正常な活動を行うことができることを指し示す。いくつかの局面において、1のECOGパフォーマンスステータスを有する対象は、身体活動において何らかの制限を呈するが、対象は完全に歩行可能である。いくつかの局面において、2のECOGパフォーマンスステータスを有する患者は50％より高く歩行可能である。いくつかの場合において、2のECOGパフォーマンスステータスを有する対象はまた、自分自身の面倒を見る能力を有し得る;例えば、Sorensen et al.,（1993）Br J Cancer 67（4）773-775を参照。いくつかの態様において、本明細書において提供される方法または処置レジメンにしたがって投与される対象は、0または1のECOGパフォーマンスステータスを有する対象を含む。
いくつかの態様において、投与は、対象が別の療法に対して抵抗性になっているにもかかわらず、対象を処置することができる。いくつかの態様において、本明細書において記載される態様にしたがって対象に投与される場合、用量または組成物は、投与された対象の少なくとも50％、少なくとも60％、少なくとも70％、少なくとも80％、少なくとも90％、または少なくとも95％において、客観的奏効（OR）を達成する能力を有する。いくつかの態様において、ORは、厳密完全奏効（sCR）、完全奏効（CR）、最良部分奏効（VGPR）、部分奏効（PR）および最小奏効（MR）を達成する対象を含む。いくつかの態様において、本明細書において記載される態様にしたがって対象に投与される場合、用量または組成物は、投与された対象の少なくとも50％、60％、70％、80％、または85％において、厳密完全奏効（sCR）、完全奏効（CR）、最良部分奏効（VGPR）または部分奏効（PR）を達成する能力を有する。いくつかの態様において、本明細書において記載される態様にしたがって対象に投与される場合、用量または組成物は、投与された対象の少なくとも20％、30％、40％ 50％、60％または70％において厳密完全奏効（sCR）または完全奏効（CR）を達成する能力を有する。いくつかの態様において、例示的な用量は、約1.0×107、1.5×107、2.0×107、2.5×107、5.0×107、1.5×108、3.0×108、4.5×108、6.0×108または8.0×108個のCAR発現（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、例示的な用量は、約5.0×107、1.5×108、3.0×108、4.5×108、6.0×108または8.0×108個のCAR発現（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、例示的な用量は、約5.0×107、1.5×108、3.0×108、4.5×108、6.0×108または8.0×108個のCAR発現（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの局面において、処置、例えば、本明細書において提供される方法に対する特定の奏効は、International Myeloma Working Group（IMWG）Uniform Response Criteria（Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346を参照）に基づいて評価され得る。
いくつかの態様において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約5.0×107個のCAR発現（CAR＋）T細胞を含む。いくつかの態様において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約1.5×108個のCAR＋T細胞を含む。いくつかの態様において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約3.0×108個のCAR＋T細胞を含む。いくつかの態様において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約4.5×108個のCAR＋T細胞を含む。いくつかの態様において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約6.0×108個のCAR＋T細胞を含む。いくつかの局面において、特定のアウトカム、例えば、OR、および/または毒性もしくは重度の毒性の非存在を達成するための例示的な用量は、約8.0×108個のCAR＋T細胞を含む。
b. 安全性
いくつかの態様において、処置の毒性、有害事象および/または副作用をモニタリングし、1つもしくは複数の追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）の投与を評価するために、ならびに/または追加の治療剤の用量および/もしくは頻度を調節するために、ならびに/または組換え受容体、例えば、CAR、細胞およびもしくは組成物の投与の用量および/もしくは頻度を調節するために使用することができる。例えば、有害事象および臨床検査異常をモニタリングし、投与の用量および/または頻度を調節するために使用することができる。有害事象としては、注入反応、サイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（NT）、マクロファージ活性化症候群（MAS）/血球貪食性リンパ組織球症（HLH）および腫瘍溶解症候群（TLS）が挙げられる。そのような事象のいずれも、用量制限毒性を確立し、用量の減少、および/または処置の終了を必要とする可能性がある。投与の用量および/または頻度を確立するための指針として使用され得る他の副作用または有害事象としては、非血液学的有害事象が挙げられ、非血液学的有害事象としては、疲労、発熱または発熱性好中球減少症、設定期間（例えば、2週間以下または7日以下）にわたるトランスアミナーゼの増加、頭痛、骨疼痛、低血圧、低酸素、悪寒、下痢、悪心/嘔吐、神経毒性（例えば、錯乱、失語症、発作、痙攣、嗜眠、および/または精神状態の変化）、播種性血管内凝固、他の無症候性非血液学的臨床検査異常、例えば電解質異常が挙げられるがそれに限定されるわけではない。投与の用量および/または頻度を確立するための指針として使用され得る他の副作用または有害事象としては、血液学的有害事象が挙げられ、血液学的有害事象としては、好中球減少症、白血球減少症、血小板減少症、動物、ならびに/またはB細胞形成不全および低ガンマグロブリン血症が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、治療剤（例えばCAR T細胞）の投与対象における毒性アウトカムを評価またはモニタリングすることができる。いくつかの態様において、毒性アウトカムは、毒性事象、例えば、サイトカイン放出症候群（CRS）、重度のCRS（sCRS）、マクロファージ活性化症候群（MAS）、腫瘍溶解症候群、3日以上にわたる少なくとも摂氏38度もしくは少なくとも約摂氏38度の発熱、および少なくとも20mg/dLもしくは少なくとも約20mg/dLのC反応性タンパク質（CRP）の血漿レベル、神経毒性（NT）ならびに/もしくは重度の神経毒性（sNT）の存在であるか、またはそれらに関連する。いくつかの態様において、毒性アウトカムは、その存在または非存在が対象における毒性の特定の程度、重症度またはレベルを特定し得る徴候、もしくは症状、特定の徴候、ならびにその症状および/または量もしくは程度である。治療剤（例えばCAR-T細胞）の望ましくない毒性アウトカムに関連する特定の徴候、症状および/またはその量もしくは程度を特定または決定することは、当業者のレベルの範囲内である。
いくつかの局面において、毒性アウトカムは、サイトカイン放出症候群（CRS）もしくは重度のCRS（sCRS）であるか、またはサイトカイン放出症候群（CRS）もしくは重度のCRS（sCRS）に関連するか、またはサイトカイン放出症候群（CRS）もしくは重度のCRS（sCRS）を指し示す。CRS、例えばsCRSは、いくつかの場合において、養子T細胞療法、および他の生物学的生成物の対象の投与後に起こり得る。Davila et al.,Sci Transl Med 6,224ra25（2014）;Brentjens et al.,Sci.Transl.Med.5,177ra38（2013）;Grupp et al.,N.Engl.J.Med.368,1509-1518（2013）;およびKochenderfer et al.,Blood 119,2709-2720（2012）;Xu et al.,Cancer Letters 343（2014）172-78を参照されたい。
典型的には、CRSは、例えば、T細胞、B細胞、NK細胞、単球および/またはマクロファージによって媒介される過剰な全身性免疫応答によって引き起こされる。そのような細胞は、サイトカインおよびケモカインなどの大量の炎症性メディエーターを放出し得る。サイトカインは、急性炎症反応を誘発し得、および/または内皮器官損傷を誘発し得、これにより、微小血管漏出、心不全または死がもたらされ得る。重度の、生命を脅かすCRSは、肺浸潤および肺傷害、腎不全または播種性血管内凝固をもたらし得る。他の重度の、生命を脅かす毒性としては、心毒性、呼吸窮迫、神経毒性および/または肝不全が挙げられ得る。いくつかの局面において、発熱、特に高い発熱（≧38.5℃または≧101.3°F）は、CRSと関連付けられる。いくつかの場合において、CRSの特色または症状は感染症を模倣する。いくつかの態様において、感染症はまた、CRS症状を示す対象において考慮され、培養によるモニタリングおよび経験的な抗生物質療法が投与され得る。CRSと関連付けられる他の症状としては、心臓機能障害、成人呼吸窮迫症候群、腎不全および/または肝不全、凝固障害、播種性血管内凝固、ならびに毛細血管漏出症候群が挙げられ得る。
CAR発現細胞の投与に関連して、CRSは、典型的には、CARを発現する細胞の注入の6～20日後に起こる。Xu et al.,Cancer Letters 343（2014）172-78を参照されたい。いくつかの場合において、CRSは、CAR T細胞注入の6日後未満または20日後超に起こる。CRSの発生率およびタイミングは、注入時のベースラインサイトカインレベルまたは腫瘍負荷量に関連し得る。一般に、CRSは、インターフェロン（IFN）-γ、腫瘍壊死因子（TNF）-αおよび/またはインターロイキン（IL）-2の血清レベルの上昇を伴う。CRSでは迅速に誘導され得る他のサイトカインには、IL-1β、IL-6、IL-8およびIL-10がある。CRSは、疾患負荷が増大した多発性骨髄腫を有する対象ではさらに重度であると記載されており、炎症マーカー、C反応性タンパク質（CRP）およびフェリチンの上昇と共に、IL-6、IFN-γおよび他のサイトカインを含む血清サイトカインの増加に関連する（Cohen et al.,J Clin Invest.2019:1-12.;Brudno et al.,Blood 2016;127（26）:3321 3330;Lee et al.,Blood 2015;126（8）:104;Davila et al.,Sci Transl Med 2014;6（224）:224ra225）。
CRSに関連する例示的な徴候または症状としては、発熱、硬直、悪寒、低血圧、呼吸困難、急性呼吸窮迫症候群（ARDS）、脳症、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（AST）/アラニントランスアミナーゼ（ALT）上昇、腎不全、心障害、低酸素、精神異常および死が挙げられる。神経学的合併症としては、譫妄、発作様活動、錯乱、喚語困難（word-finding difficulty）、失語症および/または昏迷状態が挙げられる。他のCRS関連の徴候またはアウトカムとしては、疲労、悪心、頭痛、発作、頻脈、筋痛、発疹、急性血管漏出症候群、肝機能低下および腎不全が挙げられる。いくつかの局面において、CRSは、血清フェリチン、d-ダイマー、アミノトランスフェラーゼ、乳酸デヒドロゲナーゼおよびトリグリセリドなどの1つもしくは複数の因子の増加、または低フィブリノーゲン血症もしくは肝脾腫に関連する。CRSに関連する他の例示的な徴候または症状としては、血行動態不安定、発熱性好中球減少症、血清C反応性タンパク質（CRP）の増加、凝固パラメーター（例えば、国際標準化比（INR）、プロトロンビン時間（PTI）および/またはフィブリノーゲン）の変化、心臓および他の臓器機能の変化、ならびに/または好中球絶対数（ANC）が挙げられる。
いくつかの態様において、CRSに関連する徴候または症状としては、持続性発熱、例えば、2日間以上、例えば3日間以上、例えば4日間以上、もしくは少なくとも3日間連続した日にわたる指定された体温、例えば、摂氏38度超もしくは約摂氏38度超の発熱;摂氏38度超もしくは約摂氏38度超の発熱;サイトカインの上昇（例えば、IFNγまたはIL-6）;および/または毒性の少なくとも1つの臨床徴候、例えば低血圧（例えば、少なくとも1つの静脈内血管作動性昇圧薬（intravenous vasoactive pressor）によって測定される場合）;低酸素（例えば、90％未満または約90％未満の血漿酸素（PO2）レベル）;および/または1つもしくは複数の神経障害（精神状態の変化、鈍麻および発作を含む）のうちの1つまたは複数が挙げられる。いくつかの態様において、神経毒性（NT）は、CRSと同時に観察され得る。
例示的なCRS関連アウトカムとしては、サイトカインおよびケモカイン、ならびにCRSに関連する他の因子を含む1つまたは複数の因子の増加または高血清レベルが挙げられる。例示的なアウトカムとしては、そのような因子のうちの1つまたは複数の合成または分泌の増加がさらに挙げられる。そのような合成または分泌は、T細胞、またはT細胞と相互作用する細胞、例えば、自然免疫細胞またはB細胞によるものであり得る。
sCRSを発症するリスクが高い患者を予測するために、CRSの発症と相関すると思われるCRS基準が開発されている（Davila et al.Sci Transl Med 2014;6（224）:224ra225を参照）。因子としては、発熱、低酸素、低血圧、神経学的変化、処置によって誘発される上昇が処置前の腫瘍負荷量およびsCRS症状の両方とよく相関し得る、炎症性サイトカインの血清レベル上昇が挙げられる。CRSの診断および管理に関する他の指針が公知である（例えば、Lee et al,Blood.2014;124（2）:188-95を参照）。いくつかの態様において、CRSグレードを反映した基準は、下記の表1に詳述されるものである。
（表１）CRSの例示的なグレード付け基準
Figure 2023522857000004
いくつかの態様において、CRSグレードを反映した基準は、下記の表2に詳述されるものである。
（表２）CRSの例示的なグレード付け基準
Figure 2023522857000005
いくつかの態様において、高用量血管収縮剤療法は、下記の表3に記載されるものを含む。
（表３）高用量血管収縮剤（全用量が3時間以上要求される）
Figure 2023522857000006
a VASST試験血管収縮剤当量式:ノルエピネフリン換算用量＝［ノルエピネフリン（μg/分）］＋［ドパミン（μg/kg/分）÷2］＋［エピネフリン（μg/分）］＋［フェニレフリン（μg/分）÷10］
いくつかの態様において、毒性アウトカムは重度のCRSである。いくつかの態様において、毒性アウトカムは、重度のCRSの非存在（例えば中等度または軽度のCRS）である。いくつかの態様において、重度のCRSは、表1および表2に記載されるものなど、3以上のグレードを有するCRSを含む。いくつかの態様において、重度のCRSは、グレード2、3、4または5のCRSなど、2以上のグレードを有するCRSを含む。
いくつかの局面において、毒性アウトカムは、神経毒性であるか、または神経毒性に関連する。いくつかの態様において、神経毒性の臨床的リスクに関連する徴候または症状としては、錯乱、譫妄、失語症、表出性失語症、鈍麻、ミオクローヌス、嗜眠、精神状態の変化、痙攣、発作様活動、発作（任意で、脳波図（EEG）によって確認される）、ベータアミロイド（Aβ）レベルの上昇、グルタメートレベルの上昇、および酸素ラジカルレベルの上昇が挙げられる。いくつかの態様において、神経毒性は、重症度に基づいて（例えば、グレード1～5の尺度を使用してグレード付けされる（例えば、Guido Cavaletti＆Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6,657-666（December 2010）;National Cancer Institute-Common Toxicity Criteria version 4.03（NCI-CTCAE v4.03）を参照。いくつかの態様において、投与後に、対象が、1）末梢性運動ニューロパチーの症状、例えば、末梢運動神経の炎症または変性;2）末梢性感覚ニューロパチーの症状、例えば、末梢感覚神経の炎症もしくは変性、感覚異常、例えば、異常で不快な感覚をもたらす感覚認知の歪み、神経痛、例えば、神経もしくは神経群に沿った激しい疼痛感覚、ならびに/または錯感覚、例えば、刺激のない状態で刺痛、しびれ、圧迫、寒さおよび温感という異常な皮膚感覚をもたらす感覚ニューロンの機能障害の中から、セルフケア（例えば、入浴、着衣および脱衣、食事、トイレの使用、服薬）を制限する症状を示す場合、対象は、細胞療法、もしくはその細胞の用量の投与に応答して、または細胞療法、もしくはその細胞の用量の投与に続発して「重度の神経毒性」を発生すると考えられる。いくつかの態様において、重度の神経毒性は、表4に記載されるものなど、3以上のグレードを有する神経毒性を含む。いくつかの態様において、重度の神経毒性は、2以上のグレードを有する神経毒性、例えば、グレード2、3、4または5の神経毒性を含む。
（表４）神経毒性の例示的なグレード付け基準
Figure 2023522857000007
いくつかの局面において、神経毒性は、CRSに関連し得るか、またはCRSとは独立しているかもしくは別個であり得る。いくつかの局面において、神経毒性は、CRSの早期発症、ならびに血清および中枢神経系（CNS）内の炎症性サイトカインの急速な上昇に関連し、場合により血液脳関門（BBB）の破壊をもたらし得る（Gus et al.,Cancer Discov 2017;7（12）:1404 1419）。いくつかの局面において、ピーク血清IL-6、IFN-γおよびMIP-1αの増加は、神経毒性に関連し得る。いくつかの場合において、神経毒性はまた、いくつかの場合において神経毒性に関与するIL-1アルファ（IL-1α）およびIL-1ベータ（IL-1β）の炎症誘発作用の内因性阻害剤であるピーク内因性IL-1Raの増加に関連する。いくつかの局面において、重度の神経毒性の場合では、全身性炎症（例えば、IL-6、IL-10およびインターフェロン-ガンマ（IFNγ））に通常関連するサイトカインのレベルが上昇していることが観察される。
いくつかの態様において、毒性アウトカムは用量制限毒性である。いくつかの態様において、毒性アウトカムは、用量制限毒性の非存在である。いくつかの態様において、用量制限毒性（DLT）は、例えば、上記に記載され、National Cancer Institute（NCI）Common Terminology Criteria for Adverse Events（CTCAE）バージョン4.0を含む、特定の毒性を評価するための任意の公知の指針または公表された指針によって評価される場合、任意のグレード3以上の毒性として定義される。
いくつかの局面において、毒性は、マクロファージ活性化症候群（MAS）（血球貪食性リンパ組織球症（HLH）とも呼ばれる）である。いくつかの局面において、MAS/HLHは、NKおよび細胞傷害性T細胞機能の障害に関連し、広範囲の原因、症状およびアウトカムを有する。いくつかの局面において、MAS/HLHは、CRSと重複するいくつかの特徴を有する過剰炎症反応をもたらす。いくつかの局面において、MASは、投与された細胞の制御されない活性化および増殖、ならびにその後のマクロファージの活性化に関連し得る。いくつかの局面において、MASは、高いグレードの非寛解熱、血球減少および肝脾腫を特徴とし得る。MASに見られる例示的な観察結果としては、炎症性サイトカインレベルの上昇、血清フェリチン、可溶性IL-2受容体（sCD25）、トリグリセリド、循環ナチュラルキラー（NK）細胞の減少、トランスアミナーゼレベルの上昇、急性肝不全の徴候、凝固障害および播種性血管内凝固が挙げられる。いくつかの局面において、MASとCRSとの間の臨床症状および観察結果には重複があるが、肝脾腫およびリンパ節症などの際立った特徴もある。いくつかの局面において、血液悪性腫瘍を有する対象では、MAS/HLHを発症するリスクが高まる。いくつかの場合において、MAS/HLH、またはCRS関連MAS/HLH様症候群（MALS）を有する対象は、IL-18、IL-8、IP-10、MCP-1、MIGおよび/またはMIP-1βなどのサイトカインレベルの上昇を示す（例えば、Teachy et al.,Cancer Discov.2016;6:664-679;Shimabukuro-Vornhagen,Journal for ImmunoTherapy of Cancer.2018;6:56を参照）。
MAS/HLHの臨床的リスクに関連する例示的な徴候または症状としては、持続的な高熱（≧38.5℃）、および時折アデノパチーを伴うリンパ造血系器官の拡大（脾腫大/肝腫大）が挙げられ、いくつかの場合において、肺、神経、皮膚および消化管の合併症も存在し得る;検査所見、例えば、汎血球減少症、高フェリチン血症、低フィブリノーゲン血症、およびD-ダイマーレベルの上昇、高トリグリセリド血症、ならびに肝機能の異常。いくつかの局面において、進行中の感染症がMAS/HLHのトリガーとなり得、進行中の感染症が、ヘルペス、サイトメガロウイルス（CMV）およびエプスタイン・バーウイルス（EBV）などの最も一般的なウイルスによって引き起こされる感染症のための標準的な検査を使用してモニタリングされ、他の感染性因子（例えば、マイコバクテリア、寄生虫および真菌、特にカンジダ（Candida）およびムコール（Mucor））が、特定の臨床的特徴または疫学的特徴に従って除外される。いくつかの局面において、MAS/HLHに関連する徴候について、骨髄吸引液が試験される。
いくつかの局面において、MAS/HLHの例示的な診断基準は、いくつかの場合において以下の2つの基準のいずれかが満たされる場合、悪性腫瘍に関連するHLHについて2014年にさらに改訂されたHLH-2004コンセンサス基準に基づき得る（Lehmberg et al.,Haematologica.2015;100（8）:997-1004）:
1. MAS/HLHと一致する分子診断
2. MAS/HLHの診断基準が満たされる（以下の8つの基準のうち5つ）:
a. 持続する高熱（≧38.5℃）
b. 脾腫大
c. 血球減少（末梢血中の3つの系統のうちの2つに影響を及ぼす）:ヘモグロビン＜90g/L、血小板＜100×109/L、および好中球＜1.0×109/L
d. トリグリセリド≧3.0mmol/L（すなわち、265mg/dL）、またはフィブリノーゲン≦1.5g/L
e. 骨髄、脾臓および/またはリンパ節内の血球貪食
f. NK細胞活性が低いか、または存在しない（局所検査参照範囲による）
g. フェリチン≧500ng/mL
h. 可溶性CD25（すなわち、可溶性IL-2受容体）≧2,400U/mL。
いくつかの態様において、提供される方法による処置は、例えば、他の療法の投与と比較して、低い率および/もしくは低い程度の毒性、毒性アウトカムもしくは症状、毒性促進プロファイル、因子、もしくは特性、例えば、サイトカイン放出症候群（CRS）もしくは神経毒性、例えば、重度のCRSもしくは重度の神経毒性に関連するもしくはそれらを指し示す症状もしくはアウトカム、またはMAS/HLHをもたらし得る。いくつかの態様において、提供される方法による処置は、例えば、他の療法の投与と比較して、低い率および/もしくは低い程度の毒性、毒性アウトカムもしくは症状、毒性促進プロファイル、因子、もしくは特性、例えば、サイトカイン放出症候群（CRS）もしくは神経毒性、例えば、重度のCRSもしくは重度の神経毒性に関連するもしくはそれらを指し示す症状もしくはアウトカム、またはMAS/HLHと共に、高い奏効率、例えば、高いOR率、CR率、sCR率、VGPR率もしくはPR率、および/または持続的な奏効をもたらし得る。いくつかの態様において、提供される方法による処置は、奏効率を高め、毒性の率または程度を低下させ得る。いくつかの局面において、そのような結果はまた、他の療法の投与と比較して、投与された細胞の増大した拡大増殖または長期化された持続を伴い得る。
B. 併用療法
BCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）、組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、該受容体を発現する複数の操作された細胞、および/またはそれを含む組成物、ならびに1つもしくは複数の追加の治療剤の投与および使用、例えば、治療的な使用および予防的な使用を含む併用療法の方法も提供される。
いくつかの態様において、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体（例えばキメラ抗原受容体）、および/または該分子（例えば組換え受容体）を発現する操作された細胞は、組合せ処置または併用療法の一部として、例えば、任意の順序で、1つまたは複数の追加の治療的介入と同時に、それと逐次的に、またはそれと断続的に投与される。いくつかの態様において、1つまたは複数の追加の治療的介入は、例えば、抗体、操作された細胞、受容体および/もしくは作用物質、例えば、組換え受容体を発現する細胞、ならびに/または細胞傷害剤もしくは治療剤、例えば化学療法剤を含む。いくつかの態様において、併用療法は、1つまたは複数の追加の作用物質、療法および/または処置、例えば、本明細書において記載される追加の作用物質、療法および/または処置のいずれかの投与を含む。いくつかの態様において、併用療法は、処置または治療のための1つまたは複数の追加の作用物質、例えば、細胞療法に関連し得る毒性を改善するための作用物質、例えば、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）、例えば、組換えIL-1Ra、IL-6ターゲティング剤、ステロイド;リンパ球枯渇療法、または他の作用物質、例えば、免疫調節剤、免疫チェックポイント阻害剤、アデノシン経路もしくはアデノシン受容体アンタゴニストもしくはアゴニスト、および/またはキナーゼ阻害剤の投与を含む。いくつかの態様において、組合せ処置または併用療法は、追加の処置、例えば、外科的処置、移植および/または放射線療法を含む。本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）、細胞および/または組成物と、1つまたは複数の追加の治療的介入とを含む組合せ処置または併用療法の方法も提供される。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、投与された操作された細胞またはそれを含む組成物の有害作用を低減または改善することによって安全性を高める。いくつかの態様において、追加の作用物質は、同じ疾患、状態または併存症を処置することができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞および/または組成物、例えばCAR発現細胞の投与に関連する1つまたは複数の毒性、有害作用または副作用を改善、低減または排除することができ、いくつかの局面において、本明細書において提供される任意の予防的な方法で使用され得る。いくつかの態様において、組合せ処置または併用療法のための追加の作用物質は、操作された細胞またはそれを含む組成物の治療効果の有効性および/または安全性を高め、増強し、および/または促進する。いくつかの態様において、追加の作用物質は、投与された細胞、例えば、組換え受容体を発現する細胞の有効性、生存または持続性を高めるか、または改善する。いくつかの態様において、追加の作用物質は、タンパク質ホスファターゼ阻害剤、キナーゼ阻害剤、サイトカイン、免疫調節物質、または制御性T（Treg）細胞のレベルもしくは活性を低下させる作用物質の中から選択される。
本明細書において記載される追加の作用物質のいずれかは、本明細書において記載される任意のBCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、または例えば、併用療法の1つもしくは複数の作用物質と、薬学的に許容される担体、例えば、本明細書において記載される任意のものとを含む薬学的組成物中に該細胞を含む組成物との併用療法として調製および投与され得る。いくつかの態様において、本明細書において記載される任意のBCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、または該細胞を含む組成物は、追加の作用物質、療法または処置と同時に、並行して、または逐次的に任意の順序で投与され得、そのような投与は、対象の体内の作用物質の各々の治療有効レベルを提供する。いくつかの態様において、追加の作用物質は、例えば、同じ薬学的組成物の一部として、または同じ送達方法を使用して、本明細書において記載される任意のBCMA結合性組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、または該細胞を含む組成物と併用投与され得る。いくつかの態様において、追加の作用物質は、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物と同時に投与されるが、別個の組成物で投与される。いくつかの態様において、追加の作用物質は、追加の操作された細胞、例えば、異なる組換え受容体を発現するように操作された細胞であり、同じ組成物または別個の組成物で投与される。いくつかの態様において、追加の作用物質は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞と、細胞を投与する前にインキュベートされる。
いくつかの例において、1つまたは複数の追加の作用物質は、選択された期間によって隔てられた、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物を投与した後または投与する前に投与される。いくつかの例において、期間は、1日、2日、3日、4日、5日、6日、1週間、2週間、3週間、1ヶ月、2ヶ月または3ヶ月である。いくつかの例において、1つもしくは複数の追加の作用物質は複数回投与され、ならびに/または本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/もしくは組成物は複数回投与される。例えば、いくつかの態様において、追加の作用物質は、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物の前に、例えば、投与の2週間、12日、10日、8日、1週間、6日、5日、4日、3日、2日または1日前に投与される。例えば、いくつかの態様において、追加の作用物質は、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物の後に、例えば、投与の2週間、12日、10日、8日、1週間、6日、5日、4日、3日、2日または1日後に投与される。
追加の作用物質の用量は、任意の治療有効量、例えば、本明細書において記載される任意の用量であり得、追加の作用物質の適切な投薬量は、処置される疾患の種類、投与される組換え受容体、細胞および/または組成物の種類、疾患の重症度および経過、用量および/または頻度、疾患の重症度および経過、組換え受容体、細胞および/または組成物が予防目的または治療目的のために投与されるかどうか、先行する療法、患者の臨床歴、および組換え受容体、細胞および/または組成物に対する奏効、ならびに主治医の裁量に依存し得る。組換え受容体、細胞および/もしくは組成物ならびに/または追加の作用物質および/もしくは療法は、一度に患者に投与され得るか、一連の処置にわたって繰り返され得るか、または投与され得る。
いくつかの局面において、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物のある用量の投与が繰り返される。いくつかの局面において、対象に、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物の初回用量と同じである、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物の1つまたは複数の追加の用量が投与される。いくつかの局面において、対象に、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物の初回用量とは異なる、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物の1つまたは複数の追加の用量が投与される。いくつかの局面において、追加の用量は、初回用量よりも高い。いくつかの局面において、追加の用量は、初回用量よりも低い。いくつかの態様において、対象に、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物の1用量のみが投与される。いくつかの態様において、操作された細胞、および/または操作された細胞を含有する組成物のある用量の投与は繰り返されない。
1. 予防療法
いくつかの局面において、提供される方法および使用は、予防療法として追加の療法の投与を伴う。いくつかの態様において、予防療法では、追加の作用物質および/または併用療法が、ある特定の事象の前、または疾患の初期段階で投与される。いくつかの局面において、予防療法は、細胞療法の投与前、および/または細胞療法のアウトカムの発現、例えば、細胞療法由来の毒性などの有害事象の発生などの前に始まる。いくつかの態様において、予防療法は、予防手段、例えば、細胞療法の投与後の毒性などの有害事象を予防するための療法を含む。いくつかの局面において、細胞療法によって処置される対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法が提供される。いくつかの局面において、毒性としては、細胞療法に関連し得る毒性が挙げられる。
いくつかの態様において、予防療法は、本明細書において記載される、BCMAに結合する組換え受容体を発現する操作された細胞、および/またはそのような細胞を含む組成物の治療効果の安全性を高め、増強し、および/または促進することができる。いくつかの態様において、例えば、予防療法のための追加の作用物質は、操作された細胞、または組成物の有害作用を低減または改善することによって安全性を高める。いくつかの態様において、追加の作用物質は、操作された細胞、または組成物、例えばCAR発現細胞の投与に関連する1つまたは複数の毒性、有害作用または副作用を改善、低減または排除することができる。上記のように、養子細胞療法などの細胞療法に関連し得る毒性などの有害事象としては、サイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（神経学的事象;NEとも呼ばれる）およびマクロファージ活性化症候群（MAS）が挙げられ得る。いくつかの局面において、マクロファージ産生IL-1は、CRSを誘発する点で何らかの役割を果たす。いくつかの局面において、CRSは、播種性血管内凝固にも関連し得、MASに類似する臨床像および病理像を呈し得る（例えば、Hay et al.British Journal of Haematology 2018;183（3）:364-374を参照）。
いくつかの局面において、併用療法のための追加の作用物質は、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）である。いくつかの態様において、IL-1Raは、予防的処置として投与される。いくつかの局面において、IL-1Raは、操作された細胞、例えば、組換え受容体を発現するT細胞のある用量の投与の前に投与される。いくつかの態様において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作された細胞の該用量の投与の前に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの投与は、操作された細胞のある用量の投与の後に継続される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、細胞のある用量の投与の後に投与される。
いくつかの局面において、併用療法および/または予防療法のためのIL-1Raは、アナキンラ（Kineret）またはその改変形態、例えば、N末端Pro-Ala-Ser（PAS）部分によって改変されたアナキンラである（例えば、Powers et al.,J Biol Chem.2020 Jan 17;295（3）:868-882を参照）。いくつかの局面において、IL-1Raはアナキンラである。アナキンラの例示的な配列は、SEQ ID NO:256に示されている。いくつかの局面において、アナキンラは、中等度から重度の活動性関節リウマチ（RA）を有する18歳以上の対象に対する投与について承認された組換えIL-1Raである。IL-1RaによるIL-1ブロックは、投与された細胞療法のインタクトな抗腫瘍効果を維持しながら、重度のCRSを予防することができる。IL-1Raは血液脳関門を通過することができるため、神経学的事象の重症度を低下させることができ、MAS/HLHを低減するために使用され得る。IL-1によって活性化されたヒトミクログリアは、誘導性一酸化窒素合成酵素および炎症誘発性サイトカインを産生し得るため（Tarassishin et al.,Glia 62,999-1013（2014））、IL-1をブロックすると、重度のCRSおよび重度の神経学的事象が減少するか、または予防され得る。いくつかの局面において、予防療法としてのIL-1Raの投与は、CRS、神経学的事象またはMASなどの有害事象の発生、発生率および重症度の改善をもたらし得る。
いくつかの局面において、対象に、養子細胞療法、例えば、操作された細胞、例えば、本明細書において提供される、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法に関連し得る毒性の発生の重症度を低下させ、毒性の発生を減弱し、および/または予防するための予防療法として、IL-1Ra、例えばアナキンラが投与される。いくつかの局面において、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの1つまたは複数の用量は、予防的投与である。
任意の態様のいくつかにおいて、対象に、操作された細胞の該用量の前にIL-1Raの少なくとも1用量が投与される。いくつかの局面において、BCMAに特異的なCARを含む操作された細胞のある用量を含む細胞療法は、IL-1Raの少なくとも1用量が既に投与されている対象に投与される。いくつかの態様において、提供される方法および使用は、BCMAに特異的なCARを含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を投与する前に、IL-1Raの少なくとも1用量を対象に投与する工程を伴う。いくつかの局面において、操作されたT細胞の該用量の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量は、IL-1Raの予防的投与である。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内に対象に投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用は、IL-1Raの少なくとも2用量と、BCMAに特異的なCARを含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを投与する工程を伴う。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の後に投与される。いくつかの局面において、BCMAに特異的なCARを含む操作されたT細胞の該用量は、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内にIL-1Raの少なくとも1用量が投与されている対象に投与され、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程が、操作されたT細胞の該用量の後に投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の21、18、15、12、9、6もしくは3時間以内、もしくは約21、18、15、12、9、6もしくは3時間以内に、または以上のいずれかにより定義される範囲内で対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の24、21、18、15もしくは12時間以内、もしくは約24、21、18、15もしくは12時間以内に、または以上のいずれかにより定義される範囲内で対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の21時間以内または約21時間以内に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の18時間以内または約18時間以内に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の15時間以内または約15時間以内に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の前の12時間以内または約12時間以内に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の夕方または夜に対象に投与される。いくつかの局面において、方法および使用は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の6、5、4、3もしくは2時間以内、または約6、5、4、3もしくは2時間以内にIL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程を伴う。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも2用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の18時間以内または約18時間以内に投与され、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の12時間以内または約12時間以内に投与され、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の夕方または夜に対象に投与され、IL-1Raの1用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される。
いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも2用量が、対象に投与される。いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9または10用量が投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raの少なくとも1用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7、8、9または10用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7または8用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの3、4、5、6または7用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与される。いくつかの態様において、IL-1Raの5用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与される。いくつかの態様において、IL-1Raの4用量は、操作されたT細胞の該用量を投与した後に投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raの該用量は、連続した日にわたって毎日投与される。いくつかの局面において、そのような用量は、操作されたT細胞の該用量の投与の後、連続した日にわたって毎日投与される。いくつかの局面において、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの5用量の各々は、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続5日間にわたって毎日投与される。いくつかの局面において、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの4用量の各々は、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続4日間にわたって毎日投与される。いくつかの局面において、操作されたT細胞の該用量は1日目に投与され、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの4用量のうちの1つが、2日目、3日目、4日目および5日目の各々に投与される。
いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの合計2、3、4、5、6、7、8、9または10用量が投与される。いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの合計5、6、7、8または9用量が投与される。いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの合計7用量が投与される。いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの合計8用量が投与される。いくつかの局面において、対象に、IL-1Raの合計9用量が投与される。
任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの毎日の投与は、毎日同じ時間またはほぼ同じ時間に投与される。任意の提供される態様のいくつかにおいて、IL-1Raの毎日の投与の該用量は、約24時間空けて（q24h）投与される。
いくつかの局面において、方法および使用はまた、対象が毒性の徴候もしくは症状を呈する場合、または毒性、例えばサイトカイン放出症候群（CRS）、神経毒性（NT）もしくはマクロファージ活性化症候群（MAS）/血球貪食性リンパ組織球症（HLH）の発症時に、IL-1Raの追加の少なくとも1用量を投与する工程を含む。いくつかの局面において、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、操作されたT細胞の投与後に、IL-1Raの追加の少なくとも1用量が対象に投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、2日ごと、1日1回、1日2回、1日3回または1日4回投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、1日2回投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、1日1回投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、CRSの徴候または症状が消散されるまで投与される。いくつかの局面において、IL-1Raの追加の少なくとも1用量は、追加の1用量である。したがって、いくつかの局面において、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、IL-1RAのある用量が1日2回投与される。いくつかの局面において、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、IL-1RAのある用量が約12時間ごと（q12h）に投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、細胞療法、例えば、抗BCMAキメラ抗原受容体（CAR）を発現する操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法と組み合わせて投与されるIL-1Raは組換えIL-1Raである。いくつかの局面において、組換えIL-1Raは非グリコシル化されている。いくつかの局面において、組換えIL-1Raはアナキンラである。任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raは、SEQ ID NO:256に示す配列、またはIL-1Rアンタゴニストとしての機能を保持する、SEQ ID NO:256に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくはそれ以上の配列同一性を含む配列を含む。任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raは、SEQ ID NO:256に示す配列を含む。いくつかの局面において、IL-1Raはアナキンラであり、アナキンラの各用量は、500、400、300、200、100もしくは50mg、もしくは約500、400、300、200、100もしくは50mg、または以上のいずれかにより定義される範囲である。いくつかの態様において、アナキンラの用量の各々は、200mgまたは約200mgである。いくつかの態様において、アナキンラの用量の各々は、100mgまたは約100mgである。
いくつかの態様において、IL-1Raは、皮下投与によって投与される。いくつかの局面において、アナキンラは、皮下投与によって、100mgまたは約100mgの用量で毎日投与される。いくつかの局面において、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、アナキンラは、皮下投与によって、100mgまたは約100mgの用量で1日2回投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用は、多発性骨髄腫（MM）、例えば、再発性または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）などの疾患または障害を有する対象への、本明細書において記載される、BCMAに特異的なキメラ抗原受容体（CAR）（例えば、SEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域を含む）を発現する操作されたT細胞を含む細胞療法と組み合わせた、アナキンラなどの組換えIL-1Raの予防的投与を伴う。任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法を投与する前に、IL-Raの2用量、例えば、皮下投与される100mgのアナキンラを含む各用量を投与する工程を伴い、組換えIL-1Raの1用量は、細胞療法を投与する前の夜または夕方に投与され、組換えIL-1Raの1用量は、細胞療法を投与する3時間前または約3時間前に投与される。任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用はまた、細胞療法を投与した後に連続5日間にわたってIL-1Raを毎日投与し続ける工程を伴い、各用量は、皮下投与される100mgのアナキンラを含む。任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用はまた、細胞療法を投与した後に連続4日間にわたってIL-1Raを毎日投与し続ける工程を伴い、各用量は、皮下投与される100mgのアナキンラを含む。任意の態様のいくつかにおいて、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、組換えIL-1Raの1つまたは複数の用量が、CRSが消散するまで1日2回投与される。任意の態様のいくつかにおいて、組換えIL-1Raは、毎日同じ時間またはほぼ同じ時間に投与される。任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raの1用量は、約24時間ごとに投与される。任意の態様のいくつかにおいて、IL-1Raの1用量は、約12時間ごとに投与される。
任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法を投与する前に、IL-1Raの2用量、例えば、皮下投与される100mgのアナキンラを含む各用量を投与する工程と、ここで、IL-1Raの1用量が、細胞療法を投与する前の夜または夕方に投与され、IL-1Raの1用量が、細胞療法を投与する3時間前または約3時間前に投与され（1日目）、2～5日目に、IL-1Raの1用量、例えば、皮下投与される約100mgのアナキンラを含む用量を毎日（例えばq24h）投与する工程とを伴う。
任意の態様のいくつかにおいて、方法および使用は、細胞療法を投与する前に、IL-1Raの2用量、例えば、皮下投与される100mgのアナキンラを含む各用量を投与する工程と、ここで、組換えIL-1Raの1用量が、細胞療法を投与する前の夜または夕方に投与され、IL-1Raの1用量が、細胞療法を投与する3時間前または約3時間前に投与され（1日目）、対象がCRSの徴候もしくは症状を呈する場合、またはCRSの発症時に、2～5日目に、IL-1Raの2用量、例えば、皮下投与される約100mgのアナキンラを含む用量を毎日（例えばq12h）投与する工程とを伴う。
任意の態様のいくつかにおいて、提供される方法および使用、例えば、予防的な方法および使用は、毒性の発生の重症度を低下させ、毒性の発生を減弱し、および/または予防する。任意の態様のいくつかにおいて、毒性はサイトカイン放出症候群（CRS）である。任意の態様のいくつかにおいて、CRSは、重度のCRS、またはグレード3以上のCRSである。任意の態様のいくつかにおいて、毒性は神経毒性（NT）である。任意の態様のいくつかにおいて、NTは、重度のNT、またはグレード2以上のNT、もしくはグレード3以上のNTである。任意の態様のいくつかにおいて、毒性は、マクロファージ活性化症候群（MAS）または血球貪食性リンパ組織球症（HLH）である。
いくつかの態様において、方法は、操作されたT細胞（例えばCAR T細胞）を投与した後に毒性を発生するリスクがある対象として同定される対象の予防的処置のために使用される。例えば、ある特定の対象は、養子T細胞療法（例えばCAR T細胞）が投与されると、重度のCRSなどの毒性を発生する感受性を高めるか、または発生する可能性を高める危険因子を呈し得る。したがって、操作されたT細胞（例えばCAR T細胞）を投与した後に毒性を発生するリスクがある対象を同定し、対象に操作されたT細胞（例えばCAR T細胞）を投与する前に、本明細書において記載される予防的な方法のいずれかによる処置のために対象を選択する方法が提供される。
いくつかの態様において、毒性はサイトカイン放出症候群（CRS）である。CRS、例えばsCRSは、いくつかの場合において、養子T細胞療法、および他の生物学的生成物の対象の投与後に起こり得る。Davila et al.,Sci Transl Med 6,224ra25（2014）;Brentjens et al.,Sci.Transl.Med.5,177ra38（2013）;Grupp et al.,N.Engl.J.Med.368,1509-1518（2013）;およびKochenderfer et al.,Blood 119,2709-2720（2012）;Xu et al.,Cancer Letters 343（2014）172-78を参照されたい。sCRSを発症するリスクが高い患者を予測するために、CRSの発症と相関すると思われるCRS基準が開発されている（Davilla et al.Science translational medicine.2014;6（224）:224ra25を参照）。CRSの例示的な特徴は、セクションI.4.bに記載されている。
いくつかの態様において、対象が操作されたT細胞（例えばCAR T細胞）を投与した後に毒性を発生するリスクがあると同定された場合、対象は、本明細書において記載される方法のいずれかによる処置のために選択される。いくつかの態様において、対象が1つまたは複数の因子を呈する場合、対象は、毒性（例えばCRS）を発生するリスクがあると同定される。いくつかの態様において、因子としては、発熱、低酸素、低血圧、神経学的変化、および/または炎症マーカーレベルの上昇が挙げられる。いくつかの態様において、炎症マーカーは、C反応性タンパク質（CRP）、赤血球沈降速度（ESR）、アルブミン、フェリチン、β2ミクログロブリン（β2-M）、乳酸デヒドロゲナーゼ（LDH）、サイトカインまたはケモカインである。いくつかの場合において、炎症マーカーはLDHである。いくつかの例において、炎症マーカーは、IL-7、IL15、MIP-1アルファまたはTNF-アルファであるサイトカインまたはケモカインである。いくつかの態様において、因子としては、腫瘍負荷量の体積測定値が挙げられる。いくつかの態様において、腫瘍負荷量の体積測定値は、直径の積の和（SPD）、最長腫瘍直径（LD）、最長腫瘍直径の和（SLD）、腫瘍体積、壊死体積、壊死-腫瘍比（NTR）、腫瘍周囲浮腫（PTE）および浮腫-腫瘍比（ETR）である。
いくつかの態様において、対象から得られた試料中の炎症マーカーのレベルが閾値を超える場合、対象は、操作されたT細胞を投与した後に毒性を発生するリスクがあると同定される。いくつかの態様において、炎症マーカーはLDHである。いくつかの態様において、閾値は、300単位/リットルもしくは約300単位/リットルであるか、400単位/リットルもしくは約400単位/リットルであるか、500単位/リットルもしくは約500単位/リットルであるか、または600単位/リットルもしくは約600単位/リットルである。いくつかの態様において、炎症マーカーはLDHであり、閾値は、300単位/リットルもしくは約300単位/リットルであるか、400単位/リットルもしくは約400単位/リットルであるか、500単位/リットルもしくは約500単位/リットルであるか、または600単位/リットルもしくは約600単位/リットルである。
いくつかの態様において、対象の腫瘍負荷量の体積測定値が閾値を超える場合、対象は、操作されたT細胞を投与した後に毒性を発生するリスクがあると同定される。いくつかの態様において、腫瘍負荷量の体積測定値はSPDである。いくつかの態様において、閾値は、30cm2もしくは約30cm2であるか、40cm2もしくは約40cm2であるか、50cm2もしくは約50cm2であるか、60cm2もしくは約60cm2であるか、または70cm2もしくは約70cm2である。いくつかの態様において、体積測定値はSPDであり、閾値は、30cm2もしくは約30cm2であるか、40cm2もしくは約40cm2であるか、50cm2もしくは約50cm2であるか、60cm2もしくは約60cm2であるか、または70cm2もしくは約70cm2である。
2. リンパ球枯渇療法
いくつかの態様において、追加の療法はリンパ球枯渇療法である。リンパ球枯渇化学療法は、CAR T細胞などの組換え受容体発現細胞の生着および活性を改善すると考えられている。いくつかの態様において、リンパ球枯渇化学療法は、恒常性増殖を介してインビボで増殖するように、養子移入された腫瘍特異的T細胞を増強し得る。いくつかの態様において、化学療法は、CD4＋CD25＋制御性T細胞を減少させるか、または排除し得、これにより、腫瘍標的養子移入T細胞の機能を抑制することができる。いくつかの態様において、養子T細胞療法の前のリンパ球枯渇化学療法は、骨髄内の間質細胞由来因子1（SDF-1）の発現を増強し、SDF-1とT細胞表面に発現されたCXCR-4との結合を介して原発腫瘍部位への操作されたT細胞のホーミングを増強し得る。いくつかの態様において、リンパ球枯渇化学療法は、対象の腫瘍負荷量をさらに減少させ、CRSのリスクおよび重症度を潜在的に低下させ得る。
いくつかの態様において、リンパ球枯渇は、例えば、操作された細胞、例えばCAR発現細胞を投与する前に、対象に対して行われる。いくつかの態様において、リンパ球枯渇は、メルファラン、Cytoxan、シクロホスファミドおよび/またはフルダラビンのうちの1つまたは複数を投与することを含む。いくつかの態様において、リンパ球枯渇化学療法は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与（例えば注入）の前に、投与（例えば注入）と同時に、または投与（例えば注入）後に対象に投与される。一例では、リンパ球枯渇化学療法は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与の前に対象に投与される。いくつかの態様において、リンパ球枯渇化学療法は、操作された細胞の投与の1～10日前に、例えば、操作された細胞の投与の開始の1、2、3、4、5、6、7、8、9もしくは10日前に、または操作された細胞の投与の開始の少なくとも2日前に、例えば、操作された細胞の投与の開始の少なくとも3、4、5、6または7日前に投与される。いくつかの態様において、対象は、操作された細胞の投与の7日以下の前、例えば6、5、4、3または2日以下の前にプレコンディショニング剤を投与される。操作された細胞が投与されるリンパ球枯渇化学療法後の日数は、臨床的状況または物流上の状況に基づいて決定することができる。いくつかの例において、リンパ球枯渇化学療法レジメンに対する用量調節または他の変更は、処置医によって決定されるような対象の健康状態、例えば、対象の基礎となる臓器機能に起因して実施され得る。
いくつかの態様において、リンパ球枯渇化学療法は、リンパ球枯渇剤、例えば、シクロホスファミド、フルダラビンまたはそれらの組合せの投与を含み、いくつかの態様において、対象は、20mg/kg対象体重または約20mg/kg対象体重から、100mg/kg対象体重または約100mg/kg対象体重、例えば、40mg/kgまたは約40mg/kgから、80mg/kgまたは約80mg/kgの用量でシクロホスファミドを投与される。いくつかの局面において、対象に、約60mg/kgのシクロホスファミドが投与される。いくつかの態様において、シクロホスファミドは、1または2日にわたり1日1回投与される。いくつかの態様において、リンパ球枯渇剤がシクロホスファミドを含む場合、対象は、100mg/m2対象体表面積または約100mg/m2対象体表面積から、500mg/m2対象体表面積または約500mg/m2対象体表面積、例えば、200mg/m2もしくは約200mg/m2から、400mg/m2もしくは約400mg/m2、または250mg/m2もしくは約250mg/m2から、350mg/m2もしくは約350mg/m2（両端の値を含む）の用量のシクロホスファミドを投与される。いくつかの事例において、対象は約100mg/m2のシクロホスファミドを投与される。いくつかの事例において、対象は約150mg/m2のシクロホスファミドを投与される。いくつかの事例において、対象は約200mg/m2のシクロホスファミドを投与される。いくつかの事例において、対象は約250mg/m2のシクロホスファミドを投与される。いくつかの事例において、対象は約300mg/m2のシクロホスファミドを投与される。いくつかの態様において、シクロホスファミドは、単回用量で投与され得るか、または複数の用量、例えば1日ごと、1日おきもしくは3日ごとに与えられる複数の用量で投与され得る。いくつかの態様において、シクロホスファミドは、例えば1～5日間、例えば、2～4日間毎日投与される。いくつかの事例において、対象は、約300mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドを3日間、細胞療法の開始前に毎日投与される。いくつかの態様において、対象は、合計で300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2、900mg/m2、1000mg/m2、1200mg/m2、1500mg/m2、1800mg/m2、2000mg/m2、2500mg/m2、2700mg/m2、3000mg/m2、3300mg/m2、3600mg/m2、4000mg/m2もしくは5000mg/m2、もしくは以上のいずれかにより定義される範囲、または約300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2、900mg/m2、1000mg/m2、1200mg/m2、1500mg/m2、1800mg/m2、2000mg/m2、2500mg/m2、2700mg/m2、3000mg/m2、3300mg/m2、3600mg/m2、4000mg/m2もしくは5000mg/m2、もしくは以上のいずれかにより定義される範囲のシクロホスファミドを細胞療法の開始前に投与される。
いくつかの態様において、リンパ球枯渇剤がフルダラビンを含む場合、対象は、1mg/m2対象体表面積または約1mg/m2対象体表面積から、100mg/m2対象体表面積または約100mg/m2対象体表面積、例えば、10mg/m2もしくは約10mg/m2から、75mg/m2もしくは約75mg/m2、15mg/m2もしくは約15mg/m2から、50mg/m2もしくは約50mg/m2、20mg/m2もしくは約20mg/m2から、40mg/m2もしくは約40mg/m2、または24mg/m2もしくは約24mg/m2から、35mg/m2もしくは約35mg/m2（両端の値を含む）の用量のフルダラビンを投与される。いくつかの事例において、対象は、約10mg/m2のフルダラビンを投与される。いくつかの事例において、対象は、約15mg/m2のフルダラビンを投与される。いくつかの事例において、対象は、約20mg/m2のフルダラビンを投与される。いくつかの事例において、対象は、約25mg/m2のフルダラビンを投与される。いくつかの事例において、対象は、約30mg/m2のフルダラビンを投与される。いくつかの態様において、フルダラビンは、単回用量で投与され得るか、または複数の用量、例えば1日ごと、1日おきもしくは3日ごとに与えられる複数の用量で投与され得る。いくつかの態様において、フルダラビンは、例えば1～5日間、例えば、2～4日間、毎日投与される。いくつかの事例において、対象は、約30mg/m2対象体表面積のフルダラビンを3日間、細胞療法の開始前に毎日投与される。いくつかの態様において、対象は、合計で10mg/m2、20mg/m2、25mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2、60mg/m2、70mg/m2、80mg/m2、90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、150mg/m2、180mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、270mg/m2、300mg/m2、330mg/m2、360mg/m2、400mg/m2もしくは500mg/m2、もしくは以上のいずれかにより定義される範囲、または約10mg/m2、20mg/m2、25mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2、60mg/m2、70mg/m2、80mg/m2、90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、150mg/m2、180mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、270mg/m2、300mg/m2、330mg/m2、360mg/m2、400mg/m2もしくは500mg/m2、もしくは以上のいずれかにより定義される範囲のシクロホスファミドを細胞療法の開始前に投与される。
いくつかの態様において、リンパ球枯渇剤は、単一の薬剤、例えばシクロホスファミドまたはフルダラビンを含む。いくつかの態様において、対象は、フルダラビンも他のリンパ球枯渇剤もなしに、シクロホスファミドのみを投与される。いくつかの態様において、投与前に、対象は、200～400もしくは約200～400mg/m2対象体表面積、任意で300もしくは約300mg/m2のシクロホスファミドの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法を受けている。いくつかの態様において、対象は、シクロホスファミドも他のリンパ球枯渇剤もなしに、フルダラビンのみを投与される。いくつかの態様において、投与前に、対象は、20～40もしくは約20～40mg/m2対象体表面積、任意で30もしくは約30mg/m2のフルダラビンの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法を受けている。
いくつかの態様において、リンパ球枯渇剤は、薬剤の組合せ、例えばシクロホスファミドとフルダラビンとの組合せを含む。そのため、薬剤の組合せは、上記されるものなどの、任意の用量または投与スケジュールのシクロホスファミド、および上記されるものなどの、任意の用量または投与スケジュールのフルダラビンを含んでもよい。例えば、いくつかの局面において、対象は、30mg/m2対象体表面積または約30mg/m2対象体表面積のフルダラビンを3日間毎日投与され、300mg/m2対象体表面積または約300mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドを3日間毎日投与される。
いくつかの態様において、デキサメタゾンまたは他のステロイドを除く制吐薬療法が、リンパ球枯渇化学療法の前に与えられ得る。いくつかの態様において、出血性膀胱炎の病歴を有する対象にMesnaが使用され得る。
3. 他の追加の療法
いくつかの態様において、アセトアミノフェン、またはジフェンヒドラミンなどの抗ヒスタミン剤などの疼痛管理薬が、処置に関連する軽微な副作用を改善または低減または排除するために、本明細書において提供される組換え受容体、操作されたT細胞、または操作されたT細胞の組成物もしくは用量の投与前、投与中または投与後に投与され得る。いくつかの例において、赤血球および血小板輸血、ならびに/またはコロニー刺激因子を投与して、細胞および/または組成物、例えばCAR発現細胞の投与に関連する1つまたは複数の毒性、有害作用または副作用を低減または排除することができる。いくつかの態様において、予防的または経験的抗感染剤（例えば、ニューモシスチス肺炎（PCP）予防のためのトリメトプリム/スルファメトキサゾール、広域抗生物質、抗真菌剤、または発熱性好中球減少症のための抗ウイルス剤）を投与して、処置から生じる副作用を処置することができる。いくつかの例において、必要に応じて、処置の結果として生じるリンパ球減少症および/または好中球減少症を処置するために予防が提供され得る。
いくつかの態様において、追加の療法、処置または作用物質としては、化学療法、放射線療法、手術、移植、養子細胞療法、抗体、細胞傷害剤、化学療法剤、サイトカイン、成長阻害剤、抗ホルモン剤、キナーゼ阻害剤、抗血管新生剤、心臓保護剤、免疫刺激剤、免疫抑制剤、免疫チェックポイント阻害剤、抗生物質、血管新生阻害剤、代謝調節剤もしくは他の治療剤またはそれらの任意の組合せが挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子作用物質、細胞、毒素、脂質、炭水化物もしくはそれらの組合せ、または任意の他の種類の治療剤、例えば放射線である。いくつかの態様において、追加の療法、作用物質または処置としては、手術、化学療法、放射線療法、移植、組換え受容体、例えばCARを発現する細胞、キナーゼ阻害剤、免疫チェックポイント阻害剤、mTOR経路阻害剤、免疫抑制剤、免疫調節物質、抗体、免疫除去剤（immunoablative agent）、抗体および/もしくはその抗原結合性フラグメント、抗体コンジュゲート、他の抗体療法、細胞毒素、ステロイド、サイトカイン、ペプチドワクチン、ホルモン療法、代謝拮抗物質、代謝調節剤、カルシウム依存性ホスファターゼカルシニューリンもしくはp70S6キナーゼFK506）のいずれかを阻害するか、もしくはp70S6キナーゼを阻害する薬物、アルキル化剤、アントラサイクリン、ビンカアルカロイド、プロテアソーム阻害剤、GITRアゴニスト、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、プロテインキナーゼ阻害剤、腫瘍溶解性ウイルス、ならびに/または他の種類の免疫療法の投与が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質または処置は、骨髄移植、化学療法剤、例えば、フルダラビンを使用するT細胞除去療法、体外照射療法（XRT）、シクロホスファミドおよび/または抗体療法である。
いくつかの態様において、細胞、BCMA結合性組換え受容体および/または組成物、例えばCAR発現細胞は、他の操作された細胞、例えば他のCAR発現細胞と組み合わせて投与される。いくつかの態様において、追加の作用物質は、キナーゼ阻害剤、例えば、ブルトン型チロシンキナーゼ（Btk）の阻害剤、例えばイブルチニブである。いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン経路アンタゴニストもしくはアゴニスト、またはアデノシン受容体アンタゴニストもしくはアゴニストである。いくつかの態様において、追加の作用物質は、免疫調節物質、例えば、サリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えばレナリドミド）である。いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞（腫瘍/がん細胞など）上のガンマセクレターゼの標的、例えばBCMAの膜内切断を阻害または低減するガンマセクレターゼ阻害剤などのガンマセクレターゼ阻害剤である。いくつかの態様において、追加の療法、作用物質または処置は、細胞傷害剤もしくは化学療法剤、生物学的療法（例えば、抗体、例えば、モノクローナル抗体、または細胞療法）、または阻害剤（例えばキナーゼ阻害剤）である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は化学療法剤である。例示的な化学療法剤としては、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン、例えばリポソームドキソルビシン）;ビンカアルカロイド（例えば、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン、ビノレルビン）;アルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、デカルバジン（decarbazine）、メルファラン、イホスファミド、テモゾロミド）;免疫細胞抗体（例えば、アレムツズマブ、ゲムツズマブ、リツキシマブ、トシツモマブ）;代謝拮抗物質（例えば、葉酸アンタゴニスト、ピリミジン類似体、プリン類似体およびアデノシンデアミナーゼ阻害剤、例えばフルダラビンを含む）;TNFR糖質コルチコイド誘導性TNFR関連タンパク質（GITR）アゴニスト;プロテアソーム阻害剤（例えば、アクラシノマイシンA、グリオトキシンまたはボルテゾミブ）;免疫調節物質、例えば、サリドマイドまたはサリドマイド誘導体（例えばレナリドミド）が挙げられる。
いくつかの態様において、追加の療法または処置は、細胞療法、例えば養子細胞療法である。いくつかの態様において、追加の療法は、操作された細胞、例えば、追加のCAR発現細胞の投与を含む。いくつかの態様において、追加の操作された細胞は、本明細書において提供される操作された細胞と同じまたは異なる組換え受容体を発現するCAR発現細胞、例えば抗BCMA CAR発現細胞である。いくつかの態様において、追加の操作された細胞上に発現される組換え受容体、例えばCARは、異なる抗原および/またはエピトープを認識する。いくつかの態様において、追加の操作された細胞上に発現される組換え受容体、例えばCARは、本明細書において記載される組換え受容体と同じ抗原、例えばBCMAの異なるエピトープを認識する。いくつかの態様において、追加の操作された細胞上に発現される組換え受容体、例えばCARは、異なる抗原、例えば、異なる腫瘍抗原、または抗原の組合せを認識する。例えば、いくつかの態様において、追加の操作された細胞上に発現される組換え受容体、例えばCARは、初期系統マーカーを発現するがん細胞、例えばがん幹細胞を標的とするのに対して、他のCAR発現細胞は、後期系統マーカーを発現するがん細胞を標的とする。そのような態様において、追加の操作された細胞は、本明細書において記載されるCAR発現細胞の投与（例えば注入）の前に、投与（例えば注入）と同時に、または投与（例えば注入）後に投与される。いくつかの態様において、追加の操作された細胞は、同種CARを発現する。
いくつかの態様において、CAR分子のうちの1つまたは複数の構成は、一次細胞内シグナル伝達ドメインと、2つ以上、例えば、2、3、4または5つ以上の共刺激シグナル伝達ドメインとを含む。いくつかの態様において、CAR分子のうちの1つまたは複数は、同じもしくは異なる一次細胞内シグナル伝達ドメイン、同じもしくは異なる共刺激シグナル伝達ドメイン、または同じ数もしくは異なる数の共刺激シグナル伝達ドメインを有し得る。いくつかの態様において、CAR分子のうちの1つまたは複数はスプリットCARとして構成され得、ここで、CAR分子のうちの1つは抗原結合ドメインおよび共刺激ドメイン（例えば4-1BB）を含み、他方のCAR分子は抗原結合ドメインおよび一次細胞内シグナル伝達ドメイン（例えばCD3ゼータ）を含む。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、抗BCMA組換え受容体のうちの1つもしくは複数を発現するように操作された細胞、および/または異なる抗原を標的とする追加の分子、例えば組換え受容体、例えばCARを発現するように操作された細胞のいずれかである。いくつかの態様において、追加の作用物質は、本明細書、例えばセクションIIIにおいて記載される細胞または複数の細胞のいずれかを含む。いくつかの態様において、追加の作用物質は、異なるエピトープおよび/または抗原、例えば、疾患または状態に関連する異なる抗原を標的とする組換え受容体、例えばCARを発現するように操作された細胞である。いくつかの態様において、追加の作用物質は、多発性骨髄腫で発現される第2または追加の抗原、例えば、GPRC5D、CD38、CD138、CS-1、BAFF-R、TACIおよび/またはFcRH5を標的とする組換え受容体、例えばCARを発現するように操作された細胞である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は免疫調節剤である。いくつかの態様において、併用療法は、例えば、免疫抑制シグナル伝達を阻害するかまたは免疫刺激シグナル伝達を増強することによって、抗腫瘍免疫応答、例えば、投与された操作された細胞からの抗腫瘍免疫応答を刺激、増幅および/または増強することができる免疫調節剤を含む。いくつかの態様において、免疫調節剤は、ペプチド、タンパク質であるか、または小分子である。いくつかの態様において、タンパク質は、融合タンパク質または組換えタンパク質であり得る。いくつかの態様において、免疫調節剤は、免疫細胞、例えばT細胞、B細胞または抗原提示細胞上に発現される細胞表面受容体などの免疫学的標的に結合する。例えば、いくつかの態様において、免疫調節剤は、抗体もしくは抗原結合性抗体フラグメント、融合タンパク質、小分子またはポリペプチドである。いくつかの態様において、組換え受容体、細胞および/または組成物は、抗体またはその抗原結合性フラグメント、例えばモノクローナル抗体である追加の作用物質と組み合わせて投与される。
いくつかの態様において、免疫調節剤は、免疫チェックポイント経路の成分をブロック、阻害するか、または免疫チェックポイント経路の成分に対抗する。免疫系は、自己寛容の維持、および免疫応答の調節に関与する複数の阻害経路を有する。腫瘍は、特に腫瘍抗原に特異的なT細胞（Pardoll（2012）Nature Reviews Cancer 12:252-264）、例えば、CAR発現細胞などの操作された細胞に対する免疫耐性の主要な機構として、ある特定の免疫チェックポイント経路を使用することができる。多くのそのような免疫チェックポイントはリガンド-受容体相互作用によって開始されるため、それらは、リガンドおよび/またはそれらの受容体に対する抗体によって容易にブロックされ得る。
したがって、免疫チェックポイント経路をブロックするアンタゴニスト分子、例えば、小分子、核酸阻害剤（例えばRNAi）または抗体分子による療法は、がんおよび他の疾患のための免疫療法の有望な手段になりつつある。大部分の抗がん剤とは対照的に、チェックポイント阻害剤は、必ずしも腫瘍細胞を直接標的とするのではなく、むしろ免疫系の内因性抗腫瘍活性を増強するためにリンパ球受容体またはそれらのリガンドを標的とする。
本明細書において使用される場合、「免疫チェックポイント阻害剤」という用語は、1つもしくは複数のチェックポイントタンパク質を完全にもしくは部分的に減少させる、阻害する、1つもしくは複数のチェックポイントタンパク質に干渉する、または1つもしくは複数のチェックポイントタンパク質を調節する分子を指す。チェックポイントタンパク質は、T細胞の活性化または機能を調節する。これらのタンパク質は、T細胞応答の共刺激性または阻害性相互作用を担う。免疫チェックポイントタンパク質は、自己寛容、ならびに生理学的免疫応答の持続時間および振幅を調節および維持する。いくつかの態様において、対象に、疾患または状態、例えばがん、例えば、本明細書において記載されるいずれかに対する免疫応答、例えば、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物によってもたらされる免疫応答を高めるか、または増強することができる追加の作用物質が投与され得る。
免疫チェックポイント阻害剤としては、免疫系の阻害経路を統計的に有意にブロックまたは阻害する任意の作用物質が挙げられる。そのような阻害剤は、免疫チェックポイント受容体、リガンドおよび/または受容体-リガンド相互作用に結合し、それをブロックまたは阻害する小分子阻害剤を含み得るか、または抗体もしくはその抗原結合性フラグメントを含み得る。いくつかの態様において、特定の受容体の調節、増強および/または刺激は、免疫チェックポイント経路成分に打ち勝つことができる。ブロッキング、阻害、調節、増強および/または刺激の標的となり得る例示的な免疫チェックポイント分子としては、PD-1（CD279）、PD-L1（CD274、B7-H1）、PDL2（CD273、B7-DC）、CTLA-4、LAG-3（CD223）、TIM-3、4-1BB（CD137）、4-1BBL（CD137L）、GITR（TNFRSF18、AITR）、CD40、OX40（CD134、TNFRSF4）、CXCR2、腫瘍関連抗原（TAA）、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4（CD2分子ファミリーに属し、NK細胞、γδ細胞およびメモリーCD8＋（αβ）T細胞上いずれにも発現される）、CD160（BY55とも呼ばれる）、CGEN-15049、CEACAM（例えば、CEACAM-1、CEACAM-3および/またはCEACAM-5）、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3（CD276）、B7-H4（VTCN1）、HVEM（TNFRSF14またはCD270）、KIR、A2aR、MHCクラスI、MHCクラスII、GAL9、アデノシンおよびトランスフォーミング成長因子受容体（TGFR;例えばTGFRベータ）挙げられるがそれに限定されるわけではない。免疫チェックポイント阻害剤としては、該分子のいずれかの1つもしくは複数に結合し、該分子のいずれかの1つもしくは複数の活性をブロックもしくは阻害および/または増強もしくは刺激する抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、または他の結合タンパク質が挙げられる。
例示的な免疫チェックポイント阻害剤としては、トレメリムマブ（CTLA-4遮断抗体、チシリムマブ、CP-675,206としても公知）、抗OX40、PD-L1モノクローナル抗体（抗B7-H1;MEDI4736）、MK-3475（PD-1ブロッカー）、ニボルマブ（抗PD-1抗体）、CT-011（抗PD-1抗体）、BY55モノクローナル抗体、AMP224（抗PD-L1抗体）、BMS-936559（抗PD-L1抗体）、MPLDL3280A（抗PD-L1抗体）、MSB0010718C（抗PD-L1抗体）ならびにイピリムマブ（抗CTLA-4抗体、Yervoy（登録商標）、MDX-010およびMDX-101としても公知）が挙げられる。例示的な免疫調節抗体としては、ダクリズマブ（ゼナパックス）、ベバシズマブ（Avastin（登録商標））、バシリキシマブ、イピリムマブ、ニボルマブ、ペムブロリズマブ、MPDL3280A、ピジリズマブ（CT-011）、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A（アテゾリズマブ）、トレメリムマブ、IMP321、BMS-986016、LAG525、ウレルマブ、PF-05082566、TRX518、MK-4166、ダセツズマブ（SGN-40）、ルカツムマブ（HCD122）、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C（アベルマブ）、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、ウロクプルマブ、BKT140、バリルマブ（CDX-1127）、ARGX-110、MGA271、リリルマブ（BMS-986015、IPH2101）、IPH2201、ARGX-115、エマクツズマブ、CC-90002およびMNRP1685Aまたはこれらの抗体結合性フラグメントが挙げられるがそれに限定されるわけではない。他の例示的な免疫調節物質としては、例えば、アフツズマブ（Roche（登録商標）から入手可能）、ペグフィルグラスチム（Neulasta（登録商標））、レナリドミド（CC-5013、Revlimid（登録商標））、サリドマイド（Thalomid（登録商標））、アクチミド（CC4047）、ならびにIRX-2（インターロイキン1、インターロイキン2、およびインターフェロンガンマを含むヒトサイトカインの混合物、CAS 951209-71-5、IRX Therapeuticsから入手可能）が挙げられる。
プログラム細胞死1（PD-1）は、B細胞、NK細胞およびT細胞に発現される免疫チェックポイントタンパク質である（Shinohara et al.,1995,Genomics 23:704-6;Blank et al.,2007,Cancer Immunol Immunother 56:739-45;Finger et al.,1997,Gene 197:177-87;Pardoll（2012）Nature Reviews Cancer 12:252-264）。PD-1の主な役割は、感染に応答して炎症中の末梢組織内のT細胞の活性を制限すること、および自己免疫を制限することである。PD-1発現は、活性化T細胞内で誘導され、PD-1のその内因性リガンドの1つへの結合は、刺激キナーゼを阻害することによってT細胞活性化を阻害するように作用する。PD-1はまた、TCR「停止シグナル」を阻害するように作用する。PD-1は、Treg細胞上に高度に発現され、リガンドの存在下でそれらの増殖を増加させ得る（Pardoll（2012）Nature Reviews Cancer 12:252-264）。抗PD 1抗体は、黒色腫、非小細胞肺がん、膀胱がん、前立腺がん、結腸直腸がん、頭頸部がん、トリプルネガティブ乳がん、白血病、リンパ腫および腎細胞がんの処置に使用されている（Topalian et al.,2012,N Engl J Med 366:2443-54;Lipson et al.,2013,Clin Cancer Res 19:462-8;Berger et al.,2008,Clin Cancer Res 14:3044-51;Gildener-Leapman et al.,2013,Oral Oncol 49:1089-96;Menzies＆Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85）。例示的な抗PD-1抗体としては、ニボルマブ（BMS製のOpdivo）、ペムブロリズマブ（Merck製のKeytruda）、ピジリズマブ（Cure Tech製のCT-011）、ランブロリズマブ（Merck製のMK-3475）およびAMP-224（Merck）が挙げられ、ニボルマブ（Opdivo、BMS-936558またはMDX1106とも呼ばれる;Bristol-Myers Squibb）は、PD-1を特異的にブロックする完全ヒトIgG4モノクローナル抗体である。ニボルマブ（クローン5C4）、およびPD-1に特異的に結合する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第8,008,449号および国際公開公報第2006/121168号に記載されている。ピジリズマブ（CT-011;Cure Tech）は、PD-1に結合するヒト化IgG1kモノクローナル抗体である。ピジリズマブおよび他のヒト化抗PD-1モノクローナル抗体は、国際公開公報第2009/101611号に記載されている。ペムブロリズマブ（以前はランブロリズマブとして知られており、Keytruda、MK03475とも呼ばれる;Merck）は、PD-1に結合するヒト化IgG4モノクローナル抗体である。ペムブロリズマブおよび他のヒト化抗PD-1抗体は、米国特許第8,354,509号および国際公開公報第2009/114335号に記載されている。他の抗PD-1抗体としては、とりわけ、AMP 514（Amplimmune）、例えば、米国特許第8,609,089号、米国特許第2010028330号、米国特許第20120114649号および/または米国特許第20150210769号に記載されている抗PD-1抗体が挙げられる。AMP-224（B7-DCIg;Amplimmune;例えば、国際公開公報第2010/027827号および国際公開公報第2011/066342号に記載されている）は、PD-1とB7-H1との間の相互作用をブロックするPD-L2 Fc融合可溶性受容体である。
PD-L1（CD274およびB7-H1としても知られる）およびPD-L2（CD273およびB7-DCとしても知られる）は、PD-1のリガンドであり、活性化T細胞、B細胞、骨髄系細胞、マクロファージ、およびいくつかの種類の腫瘍細胞上に見出される。抗腫瘍療法では、抗PD-L1抗体に焦点が当てられてきた。PD-1とPD-L1との複合体は、CD8＋T細胞の増殖を阻害し、免疫応答を低下させる（Topalian et al.,2012,N Engl J Med 366:2443-54;Brahmer et al.,2012,N Eng J Med 366:2455-65）。抗PD-L1抗体は、非小細胞肺がん、黒色腫、結腸直腸がん、腎細胞がん、膵がん、胃がん、卵巣がん、乳がんおよび血液悪性腫瘍の処置に使用されている（Brahmer et al.,2012,N Eng J Med 366:2455-65;Ott et al.,2013,Clin Cancer Res 19:5300-9;Radvanyi et al.,2013,Clin Cancer Res 19:5541;Menzies＆Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85;Berger et al.,2008,Clin Cancer Res 14:13044-51）。例示的な抗PD-L1抗体としては、MDX-1105（Medarex）、MEDI4736（Medimmune）MPDL3280A（Genentech）、BMS-935559（Bristol-Myers Squibb）およびMSB0010718Cが挙げられる。MEDI4736（Medimmune）は、PD-L1に結合し、PD-1とのリガンドの相互作用を阻害するヒトモノクローナル抗体である。MDPL3280A（Genentech/Roche）は、PD-L1に結合するヒトFc最適化IgG1モノクローナル抗体である。MDPL3280A、およびPD-L1に対する他のヒトモノクローナル抗体は、米国特許第7,943,743号および米国特許公開第20120039906号に記載されている。他の抗PD-L1結合剤としては、YW243.55.S70（国際公開公報第2010/077634号を参照）およびMDX-1105（BMS-936559とも呼ばれ、例えば、国際公開公報第2007/005874号に記載されている抗PD-L1結合剤）が挙げられる。
CD152としても知られる細胞傷害性Tリンパ球関連抗原（CTLA-4）は、T細胞活性化を調節するように機能する共阻害性分子である。CTLA-4は、T細胞上にのみ発現される免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーである。CTLA-4は、T細胞活性化を阻害するように作用し、ヘルパーT細胞活性を阻害し、制御性T細胞免疫抑制活性を増強することが報告されている。CTLA-4の正確な作用機序は調査中のままであるが、CD80およびCD86に結合する点でCD28を打ち負かすことによって、ならびに阻害剤シグナルをT細胞に能動的に送達することによって、CTLA-4がT細胞活性化を阻害することが示唆されている（Pardoll（2012）Nature Reviews Cancer 12:252-264）。抗CTLA-4抗体は、黒色腫、前立腺がん、小細胞肺がん、非小細胞肺がんの処置のための臨床試験で使用されている（Robert＆Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61;Ott et al.,2013,Clin Cancer Res 19:5300;Weber,2007,Oncologist 12:864-72;Wada et al.,2013,J Transl Med 11:89）。抗CTLA-4の重要な特徴は、生理学的応答に必要な初期処置後最大6ヶ月の遅滞期を有する抗腫瘍効果の動態である。いくつかの場合において、腫瘍は、処置開始後、減少が見られる前に実際にサイズが増大し得る（Pardoll（2012）Nature Reviews Cancer 12:252-264）。例示的な抗CTLA-4抗体としては、イピリムマブ（Bristol-Myers Squibb）およびトレメリムマブ（Pfizer）が挙げられる。イピリムマブは、近年、転移性黒色腫の処置のためにFDAの承認を受けている（Wada et al.,2013,J Transl Med 11:89）。
CD223としても知られるリンパ球活性化遺伝子3（LAG-3）は、別の免疫チェックポイントタンパク質である。LAG-3は、リンパ球活性の阻害、およびいくつかの場合においてリンパ球アネルギーの誘導に関連している。LAG-3は、B細胞、NK細胞および樹状細胞を含む、免疫系の様々な細胞上に発現される。LAG-3は、MHCクラスII受容体の天然リガンドであり、強力な免疫抑制活性を有するものを含む黒色腫浸潤T細胞上に実質的に発現される。例示的な抗LAG-3抗体としては、LAG-3を標的とするモノクローナル抗体であるBMS-986016（Bristol-Myers Squib）が挙げられる。IMP701（Immutep）はアンタゴニストLAG-3抗体であり、IMP731（ImmutepおよびGlaxoSmithKline）は枯渇LAG-3抗体である。他のLAG-3阻害剤としては、LAG-3の可溶性部分と、MHCクラスII分子に結合し、抗原提示細胞（APC）を活性化するIgとの組換え融合タンパク質であるIMP321（Immutep）が挙げられる。他の抗体は、例えば、国際公開公報第2010/019570号および米国特許第2015/0259420号に記載されている。
活性化Th1細胞上で最初に同定されたT細胞免疫グロブリンドメインおよびムチンドメイン-3（TIM-3）は、免疫応答の負の調節因子であることが示されている。様々なマウス腫瘍モデルでは、TIM-3のブロックは、T細胞媒介性抗腫瘍免疫を促進し、抗腫瘍活性を有する。TIM-3ブロックと、例えば、TSR-042、抗CD137抗体などの他の免疫療法剤との組合せは、抗腫瘍効果を増加させる点で相加的または相乗的であり得る。TIM-3の発現は、黒色腫、NSCLCおよび腎がんを含むいくつかの異なる腫瘍型と関連しており、さらに、腫瘍内TIM-3の発現は、NSCLC、子宮頸がんおよび胃がんを含む様々な腫瘍型にわたって予後不良と相関することが示されている。TIM-3のブロックはまた、いくつかの慢性ウイルス性疾患に対する免疫の増加を促進する点でも興味深い。TIM-3はまた、ガレクチン-9、ホスファチジルセリンおよびHMGB1を含むいくつかのリガンドと相互作用することが示されているが、これらのうちのいずれが、仮に、抗腫瘍応答の調節に関連するかは現在のところ明らかではない。いくつかの態様において、TIM-3を標的とする抗体、抗体フラグメント、小分子またはペプチド阻害剤は、TIM-3のIgVドメインに結合して、そのリガンドとの相互作用を阻害することができる。TIM-3を阻害する例示的な抗体およびペプチドは、米国特許第2015/0218274号、国際公開公報第2013/006490号および米国特許第2010/0247521号に記載されている。他の抗TIM-3抗体としては、ヒト化バージョンのRMT3-23（Ngiow et al.,2011,Cancer Res,71:3540-3551）およびクローン8B.2C12（Monney et al.,2002,Nature,415:536-541）が挙げられる。TIM-3およびPD-1を阻害する二重特異性抗体は、米国特許第2013/0156774号に記載されている。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、CEACAM阻害剤（例えば、CEACAM-1、CEACAM-3および/またはCEACAM-5阻害剤）である。いくつかの態様において、CEACAMの阻害剤は抗CEACAM抗体分子である。例示的な抗CEACAM-1抗体は、国際公開公報第2010/125571号、国際公開公報第2013/082366号国際公開公報第2014/059251号および国際公開公報第2014/022332号に記載されており、例えば、米国特許第2004/0047858号、米国特許第7,132,255号および国際公開公報第99/052552号に記載されているような、例えば、モノクローナル抗体34B1、26H7および5F4、またはその組換え形態。いくつかの態様において、抗CEACAM抗体は、例えば、Zheng et al.PLoS One.（2011）6（6）:e21146）に記載されているようにCEACAM-5に結合するか、または例えば、国際公開公報第2013/054331号および米国特許第2014/0271618号に記載されているように、CEACAM-1およびCEACAM-5と交差反応する。
CD137としても知られる4-1BBは、TNFRスーパーファミリーに属する膜貫通糖タンパク質である。4-1BB受容体は、活性化T細胞ならびにB細胞および単球上に存在する。例示的な抗4-1BB抗体は、潜在的な免疫刺激活性および抗新生物活性を有するウレルマブ（BMS-663513）である。
OX40およびCD134としても知られる腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーメンバー4（TNFRSF4）は、TNFRスーパーファミリーの別のメンバーである。OX40は、静止期ナイーブT細胞上に構成的に発現されず、二次共刺激免疫チェックポイント分子として作用する。例示的な抗OX40抗体は、MEDI6469およびMOXR0916（RG7888、Genentech）である。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、制御性T細胞（Treg）集団を減少させる分子が挙げられる。Treg細胞の数を減少させる（例えば、Treg細胞を枯渇させる）方法は、当技術分野において公知であり、例えば、CD25枯渇、シクロホスファミド投与、および糖質コルチコイド誘導性TNFRファミリー関連遺伝子（GITR）機能の調節を含む。GITRは、活性化T細胞上でアップレギュレートされ、これにより免疫系を増強するTNFRスーパーファミリーのメンバーである。アフェレーシスの前、または操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与の前に対象のTreg細胞の数を減少させることにより、腫瘍微小環境内で望ましくない免疫細胞（例えばTreg）の数を減少させることができ、対象の再発リスクを低下させる。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、GITRを標的とする分子、および/またはGITR機能を調節する分子、例えば、制御性T細胞（Treg）を枯渇させるGITRアゴニストおよび/またはGITR抗体が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質としてはシクロホスファミドが挙げられる。いくつかの態様において、GITRターゲティング分子、および/またはGITR機能を調節する分子（例えば、GITRアゴニストおよび/またはTreg枯渇GITR抗体）は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の前に投与される。例えば、いくつかの態様において、GITRアゴニストは、細胞のアフェレーシスの前に投与され得る。いくつかの態様において、シクロホスファミドは、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与（例えば、注入または再注入）の前、または細胞のアフェレーシスの前に対象に投与される。いくつかの態様において、シクロホスファミドおよび抗GITR抗体は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与（例えば、注入または再注入）の前、または細胞のアフェレーシスの前に対象に投与される。
いくつかの態様において、追加の作用物質はGITRアゴニストである。例示的なGITRアゴニストとしては、例えば、GITR融合タンパク質および抗GITR抗体（例えば二価抗GITR抗体）、例えば、米国特許第6,111,090号、欧州特許第090505号、米国特許第8,586,023号、PCT公開番号:国際公開公報第2010/003118号および国際公開公報第2011/090754号に記載されているGITR融合タンパク質、または例えば、各々参照によりその全体が組み入れられる米国特許第7,025,962号、欧州特許第1947183号、米国特許第7,812,135号、米国特許第8,388,967号、米国特許第8,591,886号、欧州特許第1866339号、PCT公開番号国際公開公報第2011/028683号、PCT公開番号国際公開公報第2013/039954号、PCT公開番号国際公開公報第2005/007190号、PCT公開番号国際公開公報第2007/133822号、PCT公開番号国際公開公報第2005/055808号、PCT公開番号国際公開公報第99/40196号、PCT公開番号国際公開公報第2001/03720号、PCT公開番号国際公開公報第99/20758号、PCT公開番号国際公開公報第2006/083289号、PCT公開番号国際公開公報第2005/115451号、米国特許第7,618,632号およびPCT公開番号国際公開公報第2011/051726号に記載されている抗GITR抗体などが挙げられる。例示的な抗GITR抗体はTRX518である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、投与された細胞、例えばCAR発現細胞の腫瘍浸潤または遊出を増強する。例えば、いくつかの態様において、追加の作用物質は、CD40、例えばCD40L、例えば組換えヒトCD40Lを刺激する。分化クラスター40（CD40）も、TNFRスーパーファミリーのメンバーである。CD40は、抗原提示細胞上に見られる共刺激タンパク質であり、多種多様な免疫応答および炎症反応を媒介する。CD40はまた、いくつかの悪性腫瘍上に発現され、増殖を促進する。例示的な抗CD40抗体は、ダセツズマブ（SGN-40）、ルカツムマブ（Novartis、アンタゴニスト）、SEA-CD40（Seattle Genetics）およびCP-870,893である。いくつかの態様において、腫瘍浸潤を増強する追加の作用物質としては、チロシンキナーゼ阻害剤スニチニブ、ヘパラナーゼならびに/またはケモカイン受容体、例えば、CCR2、CCR4およびCCR7が挙げられる。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、サリドマイド薬物またはその類似体および/もしくはその誘導体、例えば、レナリドミド、ポマリドミドまたはアプレミラストが挙げられる。例えば、Bertilaccio et al.,Blood（2013）122:4171,Otahal et al.,Oncoimmunology（2016）5（4）:e1115940;Fecteau et al.,Blood（2014）124（10）:1637-1644およびKuramitsu et al.,Cancer Gene Therapy（2015）22:487-495）を参照されたい。レナリドミド（（RS）-3-（4-アミノ-1-オキソ-1,3-ジヒドロ-2H-イソインドール-2-イル）ピペリジン-2,6-ジオン;Revlimidとしても知られる）は、サリドマイドの合成誘導体であり、T細胞と抗原提示細胞（APC）との間の免疫シナプス形成の強化を含む複数の免疫調節効果を有する。例えば、いくつかの場合において、レナリドミドは、濾胞性リンパ腫および慢性リンパ性白血病（CLL）では、T細胞応答を調節し、CD4＋およびCD8＋T細胞内のインターロイキン（IL）-2産生を増加させ、Th2からTh1へのTヘルパー（Th）応答のシフトを誘導し、T細胞（Treg）の制御性サブセットの拡大増殖を阻害し、免疫学的シナプスの機能を改善する（Otahal et al.,Oncoimmunology（2016）5（4）:e1115940）。レナリドミドはまた、多発性骨髄腫（MM）患者では、直接的な殺腫瘍活性を有し、リンパ系組織の微小環境に見られるナース様細胞などの支持細胞に影響を及ぼすことによって、CLL腫瘍細胞の生存を直接的および間接的に調節する。レナリドミドはまた、CD3ライゲーションまたは樹状細胞媒介性活性化を介したT細胞の活性化に応答して、T細胞増殖およびインターフェロンγ産生を増強することができる。レナリドミドはまた、悪性B細胞がさらに高レベルの免疫刺激分子、例えば、CD80、CD86、HLA-DR、CD95およびCD40を発現するように誘導することができる（Fecteau et al.,Blood（2014）124（10）:1637-1644）。いくつかの態様において、レナリドミドは、1日約1mg～約20mg、例えば、約1mg～約10mg、約2.5mg～約7.5mg、約5mg～約15mg、例えば、1日約5mg、10mg、15mgまたは20mgの投薬量で投与される。いくつかの態様において、レナリドミドは、約10μg/kg～5mg/kg、例えば、約100μg/kg～約2mg/kg、約200μg/kg～約1mg/kg、約400μg/kg～約600μg/kg、例えば約500μg/kgの用量で投与される。いくつかの態様において、リツキシマブは、約350～550mg/m2（例えば、350～375、375～400、400～425、425～450、450～475、または475～500mg/m2）の投薬量で、例えば静脈内投与される。いくつかの態様において、レナリドミドは、低用量で投与される。
いくつかの態様において、追加の作用物質はB細胞阻害剤である。いくつかの態様において、追加の作用物質は、CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3もしくはROR1の阻害剤、またはそれらの組合せの中から選択される1つまたは複数のB細胞阻害剤である。いくつかの態様において、B細胞阻害剤は、抗体（例えば、単一特異性抗体または二重特異性抗体）またはその抗原結合性フラグメントである。いくつかの態様において、追加の作用物質は、B細胞標的、例えば、CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3またはROR1を標的とする組換え受容体を発現する操作された細胞である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、CD20阻害剤、例えば抗CD20抗体（例えば、抗CD20単一特異性抗体または抗CD20二重特異性抗体）またはそのフラグメントである。例示的な抗CD20抗体としては、リツキシマブ、オファツムマブ、オクレリズマブ（GA101またはRO5072759としても知られる）、ベルツズマブ、オビヌツズマブ、TRU-015（Trubion Pharmaceuticals）、オカラツズマブ（ocaratuzumab）（AME-133vまたはオカラツズマブとしても知られる）およびPro131921（Genentech）が挙げられるがそれに限定されるわけではない。例えば、Lim et al.Haematologica.（2010）95（1）:135-43を参照されたい。いくつかの態様において、抗CD20抗体は、リツキシマブを含む。リツキシマブは、CD20に結合し、CD20発現細胞の細胞溶解を引き起こすキメラマウス/ヒトモノクローナル抗体IgG1カッパである。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、リツキシマブが挙げられる。いくつかの態様において、CD20阻害剤は小分子である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、CD22阻害剤、例えば、抗CD22抗体（例えば、抗CD22単一特異性抗体または抗CD22二重特異性抗体）またはそのフラグメントである。例示的な抗CD22抗体としては、エプラツズマブおよびRFB4が挙げられる。いくつかの態様において、CD22阻害剤は小分子である。いくつかの態様において、抗体は、化学療法剤などの第2の作用物質に任意でコンジュゲートされた単一特異性抗体である。例えば、いくつかの態様において、抗体は、抗CD22モノクローナル抗体-MMAEコンジュゲート（例えばDCDT2980S）である。いくつかの態様において、抗体は、抗CD22抗体のscFv、例えば、抗体RFB4のscFvである。いくつかの態様において、scFvは、緑膿菌外毒素-A（例えばBL22）の全部またはフラグメントに融合される。いくつかの態様において、scFvは、緑膿菌外毒素-Aの全部またはフラグメント（例えば、緑膿菌外毒素-Aの38kDaのフラグメント）に融合される（例えばモキセツモマブパスドトクス）。いくつかの態様において、抗CD22抗体は、任意で毒素にコンジュゲートされた抗CD19/CD22二重特異性抗体である。例えば、いくつかの態様において、抗CD22抗体は、ジフテリア毒素（DT）、例えば、ジフテリア毒素（DT）、DT390の最初の389アミノ酸、例えば、DT2219ARLなどのリガンド指向性毒素）の全部または一部に任意で連結された抗CD19/CD22二重特異性部分、（例えば、ヒトCD19およびCD22を認識する2つのscFvリガンド）を含む。いくつかの態様において、二重特異性部分（例えば抗CD19/抗CD22）は、脱グリコシル化リシンA鎖（例えばCombotox）などの毒素に連結される。
いくつかの態様において、免疫調節剤はサイトカインである。いくつかの態様において、免疫調節剤は、サイトカインであるか、または腫瘍微小環境内でサイトカインの発現増加を誘導する作用物質である。サイトカインは、T細胞の拡大増殖、分化、生存および恒常性に関連する重要な機能を有する。本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物を投与される対象に投与され得るサイトカインとしては、IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-18およびIL-21のうちの1つまたは複数が挙げられる。いくつかの態様において、投与されるサイトカインは、IL-7、IL-15もしくはIL-21、またはそれらの組合せである。いくつかの態様において、操作された細胞、例えばCAR発現細胞の投与に対して最適以下の応答を有する対象にサイトカインを投与すると、投与された細胞、例えばCAR発現細胞の効力および/または抗腫瘍活性が改善される。
「サイトカイン」とは、細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する、1つの細胞集団によって放出されるタンパク質の総称を意味する。そのようなサイトカインの例には、リンホカイン、モノカインおよび従来のポリペプチドホルモンがある。サイトカインとしては、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、N-メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン;副甲状腺ホルモン;チロキシン;インスリン;プロインスリン;リラキシン;プロリラキシン;糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（FSH）、甲状腺刺激ホルモン（TSH）および黄体形成ホルモン（LH）;肝成長因子;線維芽細胞成長因子;プロラクチン;胎盤性ラクトゲン;腫瘍壊死因子-アルファおよび-ベータ;ミュラー管抑制因子;マウスゴナドトロピン関連ペプチド;インヒビン;アクチビン;血管内皮成長因子;インテグリン;トロンボポエチン（TPO）;神経成長因子、例えばNGF-ベータ;血小板成長因子;トランスフォーミング成長因子（TGF）、例えば、TGF-アルファおよびTGF-ベータ;インスリン様成長因子-Iおよび-II;エリスロポエチン（EPO）;骨誘導因子;インターフェロン、例えば、インターフェロン-アルファ、ベータ、および-ガンマ;コロニー刺激因子（CSF）、例えばマクロファージ-CSF（M-CSF）;顆粒球-マクロファージ-CSF（GM-CSF）;および顆粒球-CSF（G-CSF）;インターロイキン（IL）、例えば、IL-1、IL-1アルファ、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12;IL-15、腫瘍壊死因子、例えば、TNF-アルファまたはTNF-ベータ;ならびにLIFおよびkitリガンド（KL）を含む他のポリペプチド因子が挙げられる。本明細書において使用される場合、サイトカインという用語は、天然源由来または組換え細胞培養物由来のタンパク質、および天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物を含む。例えば、免疫調節剤はサイトカインであり、サイトカインはIL-4、TNF-α、GM-CSFまたはIL-2である。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、インターロイキン-15（IL-15）ポリペプチド、インターロイキン-15受容体アルファ（IL-15Rα）ポリペプチドまたはそれらの組合せ、例えば、hetIL-15（Admune Therapeutics,LLC）が挙げられる。hetIL-15は、IL-15とIL-15Rαとのヘテロ二量体非共有結合複合体である。hetIL-15は、例えば、米国特許第8,124,084号、米国特許第2012/0177598号、米国特許第2009/0082299号、米国特許第2012/0141413号および米国特許第2011/0081311号に記載されている。いくつかの態様において、免疫調節剤は、1つまたは複数のサイトカインを含有することができる。例えば、インターロイキンとしては、天然サイトカインの組合せである白血球インターロイキン注射（Multikine）が挙げられ得る。いくつかの態様において、免疫調節剤は、Toll様受容体（TLR）アゴニスト、アジュバントまたはサイトカインである。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞療法に関連する1つまたは複数の毒性または副作用を改善または中和する作用物質である。いくつかの態様において、追加の作用物質は、ステロイド（例えばコルチコステロイド）、TNFαの阻害剤、およびIL-6またはIL-6シグナル伝達の阻害剤の中から選択される。TNFα阻害剤の例には、抗TNFα抗体分子、例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブペゴールおよびゴリムマブがある。TNFα阻害剤の別の例には、エタネルセプトなどの融合タンパク質がある。TNFαの小分子阻害剤としては、キサンチン誘導体（例えばペントキシフィリン）およびブプロピオンが挙げられるがそれに限定されるわけではない。IL-6阻害剤の例には、抗IL-6受容体（抗IL-6R）抗体分子、例えば、トシリズマブ、サリルマブ、エルシリモマブ（elsilimomab）、CNTO 328、ALD518/BMS-945429、CNTO 136、CPSI-2364、CDP6038、VX30、ARGX-109、FE301およびFM101がある。いくつかの態様において、抗IL-6R抗体分子はトシリズマブである。いくつかの局面において、トシリズマブは、炎症性サイトカインであるインターロイキン-6（IL-6）とその受容体IL-6受容体（IL-6R）との間の相互作用をブロックする。いくつかの局面において、IL-6の阻害剤は抗IL-6抗体である。いくつかの局面において、例示的な抗IL-6抗体はシルツキシマブである。いくつかの局面において、シルツキシマブは、IL-6自体に結合し、IL-6が免疫エフェクター細胞を活性化するのを防ぐことによってIL-6シグナル伝達をブロックする。
いくつかの局面において、細胞療法に関連する1つまたは複数の毒性または副作用を改善または中和する追加の作用物質としては、抗GM-CSF剤、例えば、GM-CSFを中和するヒト化モノクローナル抗体であるレンジルマブ（Sterner et al.,Blood（2018）132（Supplement 1）:961;Sterner et al.,Blood.2019;133（7）:697-709）;T細胞枯渇抗体アレムツズマブ、抗胸腺細胞グロブリン（ATG）、シクロホスファミド、ルキソリチニブまたはイブルチニブ（Borrega et al.,HemaSphere.April 2019;3（2）:191）が挙げられる。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、IL-1Rアンタゴニスト、例えばアナキンラである。いくつかの態様において、追加の作用物質はアナキンラである。いくつかの局面において、アナキンラは、トシリズマブおよびコルチコステロイドによる処置に不応である、重度のCRSを有する対象に投与される。いくつかの態様において、追加の作用物質はアナキンラであり、アナキンラの例示的な投薬量は、1日25mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、125mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mgもしくは500mg、もしくは1日約25mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、125mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mgもしくは500mg、または1日、以上のいずれかにより定義される範囲、例えば、1日100mgである。いくつかの局面において、アナキンラの例示的な1日用量は、100mgまたは約100mgである。いくつかの局面において、アナキンラの例示的な1日用量は、200mgまたは約200mgである。いくつかの局面において、アナキンラは、皮下投与される。いくつかの局面において、アナキンラは、CRSが消散するまで、例えば、SC投与される100mgの1日用量で投与される。いくつかの局面において、アナキンラは、CRSが消散するまで、例えば、SC投与される200mgの1日用量、例えば、2つの100mg用量間で分割して投与される。いくつかの局面において、いくつかの場合において神経学的事象またはMAS/HLHと組み合わせて、対象が重度のCRSを呈する場合、CRS、神経学的事象および/またはMAS/HLHなどの有害事象が消散するまで、アナキンラは100mg、1日2回（例えば、12時間ごと）SC投与される。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシンレベルおよび/またはアデノシン経路成分の調節物質である。アデノシンは、体内で免疫調節剤として機能し得る。例えば、アデノシン受容体サブタイプを非選択的に活性化するアデノシンおよびいくつかのアデノシン類似体は、炎症性酸化生成物の好中球産生を減少させる（Cronstein et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.451:291,1985;Roberts et al.,Biochem.J.,227:669,1985;Schrier et al.,J.Immunol.137:3284,1986;Cronstein et al.,Clinical Immunol.Immunopath.42:76,1987）。いくつかの場合において、細胞外アデノシンまたはアデノシン類似体の濃度は、特定の環境、例えば腫瘍微小環境（TME）内で増加し得る。いくつかの場合において、アデノシンまたはアデノシン類似体シグナル伝達は、低酸素、または低酸素もしくはその調節に関与する因子、例えば低酸素誘導因子（HIF）に依存する。いくつかの態様において、アデノシンシグナル伝達が増加すると、炎症誘発性サイトカイン産生の阻害をもたらす細胞内cAMPおよびcAMP依存性プロテインキナーゼが増加し得、免疫抑制分子の合成と、Tregの発達とがもたらされ得る（Sitkovsky et al.,Cancer Immunol Res（2014）2（7）:598-605）。いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン、アデノシン類似体および/またはアデノシンシグナル伝達の免疫抑制作用を低減または逆転させることができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、低酸素駆動性A2-アデノシン作動性T細胞免疫抑制を低減または逆転させることができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン受容体のアンタゴニスト、細胞外アデノシン分解剤、CD39/CD73エクト酵素によるアデノシン生成の阻害剤、および低酸素-HIF-1αシグナル伝達の阻害剤の中から選択される。いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン受容体アンタゴニストまたはアゴニストである。
細胞外アデノシンの阻害剤（細胞外アデノシンの形成を防止し、細胞外アデノシンを分解し、不活性にし、および/または減少させる作用物質など）、および/またはアデノシン受容体阻害剤（アデノシン受容体アンタゴニストなど）による細胞外アデノシンまたはアデノシン受容体の阻害または減少は、免疫応答、例えば、マクロファージ、好中球、顆粒球、樹状細胞、T細胞および/またはB細胞媒介性応答を増強することができる。さらに、Gsタンパク質媒介性cAMP依存性細胞内経路の阻害剤、およびアデノシン受容体誘発Giタンパク質媒介性細胞内経路の阻害剤もまた、急性および慢性炎症を増加させ得る。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン受容体アンタゴニストまたはアゴニスト、例えば、アデノシン受容体A2a、A2b、A1およびA3のうちの1つまたは複数のアンタゴニストまたはアゴニストである。A1およびA3は、それぞれアデニル酸シクラーゼ活性を阻害し、A2aおよびA2bは、アデニル酸シクラーゼ活性を刺激する。ある特定のアデノシン受容体、例えば、A2a、A2bおよびA3は、炎症中の免疫応答を抑制または低減することができる。したがって、免疫抑制性アデノシン受容体に拮抗することは、免疫応答、例えば、投与された細胞、例えばCAR発現T細胞からの免疫応答を増大するか、増強するか、または高めることができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシン受容体を介した細胞外アデノシンの産生およびアデノシン誘発シグナル伝達を阻害する。例えば、免疫応答、局所組織炎症、および標的とされた組織破壊の増強は、アデノシン産生局所組織低酸素を阻害もしくは低減することによって、蓄積した細胞外アデノシンを分解（または不活性化）することによって、免疫細胞上のアデノシン受容体の発現を防止するか、もしくは減少させることによって、および/またはアデノシン受容体を介したアデノシンリガンドによるシグナル伝達を阻害する/アデノシン受容体を介したアデノシンリガンドによるシグナル伝達に拮抗することによって増強され得る。
アンタゴニストは、生物学的応答を誘発することなく細胞受容体に結合する作用物質として、別のものの作用を無効にする傾向がある任意の物質である。いくつかの態様において、アンタゴニストは、アデノシン受容体、例えば、A2a、A2bまたはA3受容体に対するアンタゴニストである化学化合物である。いくつかの態様において、アンタゴニストは、アデノシン受容体に結合するがGiタンパク質依存性細胞内経路を誘発しないペプチドまたはペプチド模倣体である。例示的なアンタゴニストは、米国特許第5,565,566号、米国特許第5,545,627号、米国特許第5,981,524号、米国特許第5,861,405号、米国特許第6,066,642号、米国特許第6,326,390号、米国特許第5,670,501号、米国特許第6,117,998号、米国特許第6,232,297号、米国特許第5,786,360号、米国特許第5,424,297号、米国特許第6,313,131号、米国特許第5,504,090号および米国特許第6,322,771号に記載されている。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、A2受容体（A2R）アンタゴニスト、例えばA2aアンタゴニストである。例示的なA2Rアンタゴニストとしては、KW6002（イストラデフィリン）、SCH58261、カフェイン、パラキサンチン、3,7-ジメチル-1-プロパルギルキサンチン（DMPX）、8-（m-クロロスチリル）カフェイン（CSC）、MSX-2、MSX-3、MSX-4、CGS-15943、ZM-241385、SCH-442416、プレラデナント、ビパデナント（BII014）、V2006、ST-1535、SYN-115、PSB-1115、ZM241365、FSPTP、およびA2R発現を標的とする阻害性核酸、例えば、siRNAもしくはshRNA、またはA2Rを標的とする任意の抗体もしくはその抗原結合性フラグメントが挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、例えば、Ohta et al.,Proc Natl Acad Sci U S A（2006）103:13132-13137;Jin et al.,Cancer Res.（2010）70（6）:2245-2255;Leone et al.,Computational and Structural Biotechnology Journal（2015）13:265-272;Beavis et al.,Proc Natl Acad Sci U S A（2013）110:14711-14716;およびPinna,A.,Expert Opin Investig Drugs（2009）18:1619-1631;Sitkovsky et al.,Cancer Immunol Res（2014）2（7）:598-605;米国特許第8,080,554号;米国特許第8,716,301号;米国特許第20140056922号;国際公開公報第2008/147482号;米国特許第8,883,500号;米国特許第20140377240号;国際公開公報第02/055083号;米国特許第7,141,575号;米国特許第7,405,219号;米国特許第8,883,500号;米国特許第8,450,329号および米国特許第8,987,279号）に記載されているA2Rアンタゴニストである。
いくつかの態様において、アンタゴニストは、アデノシン受容体をコードするmRNAに特異的に結合するアンチセンス分子、阻害性核酸分子（例えば低分子阻害性RNA（siRNA））または触媒核酸分子（例えばリボザイム）である。いくつかの態様において、アンチセンス分子、阻害性核酸分子または触媒核酸分子は、A2a、A2bまたはA3をコードする核酸に結合する。いくつかの態様において、アンチセンス分子、阻害性核酸分子または触媒核酸は、アデノシン受容体の下流の生化学的経路を標的とする。例えば、アンチセンス分子または触媒核酸は、Gsタンパク質依存性細胞内経路またはGiタンパク質依存性細胞内経路に関与する酵素を阻害することができる。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、アデノシン受容体、例えば、A2a、A2bまたはA3のドミナントネガティブ変異型が挙げられる。
いくつかの態様において、細胞外アデノシンを阻害する追加の作用物質としては、細胞外アデノシンを非機能性にする（またはそのような機能を低下させる）作用物質、例えば、アデノシンの構造を改変して、アデノシン受容体を介してシグナル伝達するアデノシンの能力を阻害する物質が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞外アデノシン生成酵素もしくはアデノシン分解酵素、その改変形態またはその調節物質である。例えば、いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシンに選択的に結合してアデノシンを破壊し、それによって、内因的に形成されたアデノシンがアデノシン受容体を介してシグナル伝達し、炎症を終結させる能力を無効にするかまたは顕著に低下させる酵素（例えばアデノシンデアミナーゼ）または別の触媒分子である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、アデノシンデアミナーゼ（ADA）またはその改変形態、例えば、細胞外アデノシンの局所組織蓄積を阻害することができる組換えADAおよび/またはポリエチレングリコール修飾ADA（ADA-PEG）である。ADA-PEGは、ADA SCID患者の処置に使用されてきた（Hershfield（1995）Hum Mutat.5:107）。いくつかの態様において、細胞外アデノシンを阻害する作用物質としては、細胞外アデノシンの形成を防止もしくは低減する、および/または細胞外アデノシンの蓄積を防止もしくは低減し、それによって、アデノシンの免疫抑制作用を無効にするか、もしくは実質的に低減する作用物質が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、核転写因子の調節因子を含め、炎症誘発性分子の合成および/または分泌の調節に関与する酵素およびタンパク質を特異的に阻害する。アデノシン受容体の発現、またはGsタンパク質依存性細胞内経路もしくはGiタンパク質依存性細胞内経路、もしくはcAMP依存性細胞内経路の発現の抑制は、免疫応答の増加/増強をもたらし得る。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞外アデノシンを生成または産生するエクト酵素を標的とすることができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、細胞外アデノシンを生成するためにタンデムで機能するCD39エクト酵素およびCD73エクト酵素を標的とする。CD39（エクトヌクレオシド三リン酸ジホスホヒドロラーゼとも呼ばれる）は、細胞外ATP（またはADP）を5'AMPに変換する。その後、CD73（5'ヌクレオチダーゼとも呼ばれる）は、5'AMPをアデノシンに変換する。CD39の活性は、NDPキナーゼおよびアデニル酸キナーゼの作用によって可逆的であるが、CD73の活性は不可逆的である。CD39およびCD73は、内皮細胞およびTregを含む腫瘍間質細胞上に、ならびに多くのがん細胞上にも発現される。例えば、内皮細胞上のCD39およびCD73の発現は、腫瘍微小環境の低酸素条件下で増加する。腫瘍低酸素は、不十分な血液供給と、無秩序な腫瘍脈管構造とに起因し、酸素の送達を損ない得る（Carroll and Ashcroft（2005）,Expert.Rev.Mol.Med.7（6）:1-16）。低酸素はまた、アデノシンをAMPに変換するアデニル酸キナーゼ（AK）を阻害し、非常に高い細胞外アデノシン濃度をもたらす。したがって、アデノシンは、固形腫瘍内または固形腫瘍周囲の腫瘍微小環境（TME）内で頻繁に発生する状態である低酸素に応答して高濃度で放出される。いくつかの態様において、追加の作用物質は、抗CD39抗体またはその抗原結合性フラグメント、抗CD73抗体またはその抗原結合性フラグメント、例えば、MEDI9447またはTY/23、α-β-メチレン-アデノシン二リン酸（ADP）、ARL 67156、POM-3、IPH52のうちの1つまたは複数である（例えば、Allard et al.Clin Cancer Res（2013）19（20）:5626-5635;Hausler et al.,Am J Transl Res（2014）6（2）:129-139;Zhang,B.,Cancer Res.（2010）70（16）:6407-6411を参照）。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、低酸素誘導因子1アルファ（HIF-1α）シグナル伝達の阻害剤である。HIF-1αの例示的な阻害剤としては、ジゴキシン、アクリフラビン、サーチュイン-7およびガネテスピブが挙げられる。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤、例えば、本明細書において記載されるタンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤が挙げられる。いくつかの態様において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、SHP-1阻害剤、例えば、本明細書において記載されるSHP-1阻害剤、例えばスチボグルコン酸ナトリウムである。いくつかの態様において、タンパク質チロシンホスファターゼ阻害剤は、SHP-2阻害剤、例えば、本明細書において記載されるSHP-2阻害剤である。
いくつかの態様において、追加の作用物質はキナーゼ阻害剤である。キナーゼ阻害剤、例えば、CDK4キナーゼ阻害剤、BTKキナーゼ阻害剤、MNKキナーゼ阻害剤またはDGKキナーゼ阻害剤は、腫瘍細胞に存在する構成的に活性な生存経路を調節し、および/または免疫細胞の機能を調節することができる。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、ブルトン型チロシンキナーゼ（BTK）阻害剤、例えばイブルチニブである。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、ホスファチジルイノシトール-4,5-二リン酸3-キナーゼ（PI3K）阻害剤である。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、CDK4阻害剤、例えばCDK4/6阻害剤である。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、mTOR阻害剤、例えば、ラパマイシン、ラパマイシン類似体、OSI-027などである。mTOR阻害剤は、例えば、mTORC1阻害剤および/またはmTORC2阻害剤、例えば、mTORC1阻害剤および/またはmTORC2阻害剤であり得る。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、MNK阻害剤または二重PI3K/mTOR阻害剤である。いくつかの態様において、他の例示的なキナーゼ阻害剤としては、AKT阻害剤ペリホシン、mTOR阻害剤テムシロリムス、Srcキナーゼ阻害剤ダサチニブおよびフォスタマチニブ、JAK2阻害剤パクリチニブおよびルキソリチニブ、PKCβ阻害剤エンザスタウリンおよびブリオスタチン、ならびにAAK阻害剤アリセルチブが挙げられる。
いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、イブルチニブ（PCI-32765）;GDC-0834;RN-486;CGI-560;CGI-1764;HM-71224;CC-292;ONO-4059;CNX-774;およびLFM-A13から選択されるBTK阻害剤である。いくつかの態様において、BTK阻害剤は、インターロイキン-2誘導性キナーゼ（ITK）のキナーゼ活性を低下または阻害せず、GDC-0834;RN-486;CGI-560;CGI-1764;HM-71224;CC-292;ONO-4059;CNX-774;およびLFM-A13から選択される。
いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、BTK阻害剤、例えば、イブルチニブである（1-［（3R）-3-［4-アミノ-3-（4-フェノキシフェニル）-1H-ピラゾロ［3,4-d］ピリミジン-1-イル］ピペリジン-1-イル］プロパ-2-エン-1-オン;PCI-32765としても知られる）。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、BTK阻害剤、例えば、イブルチニブ（PCI-32765）であり、イブルチニブは、約250mg、300mg、350mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、560mg、580mg、600mg（例えば、250mg、420mgまたは560mg）の用量で、一定期間にわたって毎日、例えば、21日間サイクルにわたって毎日、または28日間サイクルにわたって毎日投与される。いくつかの態様において、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12サイクルまたはそれ以上のサイクルのイブルチニブが投与される。いくつかの態様において、BTK阻害剤は、国際公開公報第2015/079417号に記載されているBTK阻害剤である。
いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤はPI3K阻害剤である。PI3Kは、細胞周期調節およびリンパ腫生存に関与するPI3K/Akt/mTOR経路の中心である。例示的なPI3K阻害剤としては、イデラリシブ（PI3Kδ阻害剤）が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、イデラリシブおよびリツキシマブである。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、哺乳類ラパマイシン標的タンパク質（mTOR）の阻害剤である。いくつかの態様において、キナーゼ阻害剤は、テムシロリムス;リダフォロリムス（AP23573およびMK8669としても知られる）;エベロリムス（RAD001）;ラパマイシン（AY22989）;シマピモド（simapimod）;AZD8055;PF04691502;SF1126;およびXL765から選択されるmTOR阻害剤である。いくつかの態様において、追加の作用物質は、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（MAPK）の阻害剤であり、例えば、ベムラフェニブ、ダブラフェニブおよびトラメチニブである。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、アポトーシス促進性タンパク質または抗アポトーシス性タンパク質を調節する作用物質である。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、B細胞リンパ腫2（BCL-2）阻害剤（例えば、ベネトクラクス、ABT-199もしくはGDC-0199;またはABT-737とも呼ばれる）が挙げられる。ベネトクラクスは、抗アポトーシス性タンパク質BCL-2を阻害する小分子（4-（4-｛［2-（4-クロロフェニル）-4,4-ジメチル-1-シクロヘキセン-1-イル］メチル｝-1-ピペラジニル）-N-（｛3-ニトロ-4-［（テトラヒドロ-2H-ピラン-4-イルメチル）アミノ］フェニル｝スルホニル）-2-（1H-ピロロ［2,3-b］ピリジン-5-イルオキシ）ベンズアミド）である。アポトーシス促進性タンパク質または抗アポトーシス性タンパク質を調節する他の作用物質としては、BCL-2阻害剤ABT-737、ナビトクラクス（ABT-263）;最大有効性のためのMcl-1 siRNAまたはMcl-1阻害剤レチノイドN-（4-ヒドロキシフェニル）レチナミド（4-HPR）が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、腫瘍細胞表面上のTRAIL細胞死受容体DR-4およびDR-5、またはTRAIL-R2アゴニスト抗体に結合することによってアポトーシス経路を活性化することができるアポトーシス促進性刺激、例えば組換え腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導リガンド（TRAIL）を提供する。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、インドールアミン2,3-ジオキシゲナーゼ（IDO）阻害剤が挙げられる。IDOは、キヌレニンへのアミノ酸L-トリプトファンの分解を触媒する酵素である。多くのがん、例えば、前立腺がん、結腸直腸がん、膵がん、子宮頸がん、胃がん、卵巣がん、頭部がんおよび肺がんは、IDOを過剰発現する。形質細胞様樹状細胞（pDC）、マクロファージおよび樹状細胞（DC）は、IDOを発現し得る。いくつかの局面において、L-トリプトファン（例えば、IDOによって触媒される）の減少は、T細胞アネルギーおよびアポトーシスを誘導することによって免疫抑制環境をもたらす。したがって、いくつかの局面において、IDO阻害剤は、例えば、投与されたCAR発現細胞の抑制または死を減少させることによって、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物の有効性を増強することができる。IDOの例示的な阻害剤としては、1-メチル-トリプトファン、インドキシモド（New Link Genetics）（例えば、Clinical Trial Identifier No.NCT01191216;NCT01792050を参照）およびINCB024360（Incyte Corp.）（例えば、Clinical Trial Identifier No.NCT01604889;NCT01685255を参照）が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、追加の作用物質としては、細胞傷害剤、例えば、CPX-351（Celator Pharmaceuticals）、シタラビン、ダウノルビシン、ボサロキシン（Sunesis Pharmaceuticals）、サパシタビン（Cyclacel Pharmaceuticals）、イダルビシンまたはミトキサントロンが挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、低メチル化剤、例えばDNAメチルトランスフェラーゼ阻害剤、例えば、アザシチジンまたはデシタビンが挙げられる。
別の態様において、追加の療法は、移植、例えば、同種幹細胞移植である。
いくつかの態様において、追加の作用物質は腫瘍溶解性ウイルスである。いくつかの態様において、腫瘍溶解性ウイルスは、がん細胞内で選択的に複製し、がん細胞の死を誘発するか、またはがん細胞の増殖を遅らせることができる。いくつかの場合において、腫瘍溶解性ウイルスは、非がん細胞に影響を及ぼさないか、または最小限の影響しか及ぼさない。腫瘍溶解性ウイルスとしては、腫瘍溶解性アデノウイルス、腫瘍溶解性単純ヘルペスウイルス、腫瘍溶解性レトロウイルス、腫瘍溶解性パルボウイルス、腫瘍溶解性ワクシニアウイルス、腫瘍溶解性シンドビスウイルス、腫瘍溶解性インフルエンザウイルスまたは腫瘍溶解性RNAウイルス（例えば、腫瘍溶解性レオウイルス、腫瘍溶解性ニューカッスル病ウイルス（NDV）、腫瘍溶解性麻疹ウイルスまたは腫瘍溶解性水疱性口内炎ウイルス（VSV））が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
他の例示的な併用療法、処置および/または作用物質としては、抗アレルゲン剤、制吐薬、鎮痛薬および補助療法が挙げられる。いくつかの態様において、追加の作用物質としては、細胞保護剤、例えば、神経保護薬、フリーラジカルスカベンジャー、心保護物質、アントラサイクリン血管外漏出中和物質および栄養素が挙げられる。
いくつかの態様において、追加の作用物質として使用される抗体は、治療剤、例えば、本明細書において記載される化学療法剤（例えば、Cytoxan、フルダラビン、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤、脱メチル化剤、ペプチドワクチン、抗腫瘍抗生物質、チロシンキナーゼ阻害剤、アルキル化剤、抗微小管剤または有糸分裂阻害剤）、抗アレルギー剤、抗悪心剤（または制吐薬）、鎮痛剤または細胞保護剤にコンジュゲートされるか、またはそうでなければ結合される。いくつかの態様において、追加の作用物質は抗体-薬物コンジュゲートである。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、DNA、RNAまたはタンパク質レベルで特定の因子を調節、阻害または刺激して、本明細書において提供されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または組成物の有効性を高めるか、または増強することができる。いくつかの態様において、追加の作用物質は、投与された細胞、例えば、組換え受容体、例えばCARを発現するように操作された細胞内の核酸レベル、例えば、DNAまたはRNAで因子を調節することができる。いくつかの態様において、阻害性核酸、例えば阻害性核酸、例えばdsRNA、例えば、siRNAもしくはshRNA、またはclustered regularly interspaced short palindromic repeats（CRISPR）、転写活性化因子様エフェクターヌクレアーゼ（TALEN）もしくはジンクフィンガーエンドヌクレアーゼ（ZFN）を使用して、操作された細胞、例えばCAR発現細胞内の阻害性分子の発現を阻害することができる。いくつかの態様において、阻害剤はshRNAである。いくつかの態様において、阻害性分子は、操作された細胞、例えばCAR発現細胞内で阻害される。いくつかの態様において、T細胞機能を調節または調整する、例えば阻害する分子の発現を阻害するdsRNA分子をコードする核酸分子は、阻害性分子の発現を阻害するdsRNA分子が、操作された細胞、例えばCAR発現細胞内で発現されるように、プロモーター、例えば、HI由来プロモーターまたはU6由来プロモーターに機能的に連結される。例えば、Brummelkamp TR,et al.（2002）Science 296:550-553;Miyagishi M,et al.（2002）Nat.Biotechnol.19:497-500を参照されたい。
いくつかの態様において、追加の作用物質は、阻害性分子、例えば、本明細書において記載される任意の免疫チェックポイント阻害剤をコードする遺伝子を破壊することができる。いくつかの態様において、破壊は、遺伝子内、典型的には遺伝子のエクソン内の欠失、例えば、遺伝子全体、エクソンもしくは領域の欠失、および/または外因性配列による置換、および/または突然変異、例えば、フレームシフトもしくはミスセンス突然変異によるものである。いくつかの態様において、破壊は、阻害性分子が発現されないように、または細胞表面上に発現することができるおよび/もしくは細胞シグナル伝達を媒介することができる形態で発現されないように、遺伝子に組み込みまれる未熟終止コドンをもたらす。破壊は、一般に、DNAレベルで実行される。破壊は、一般に、永続的、不可逆的であるか、または一過性ではない。
いくつかの局面において、破壊は、例えば、破壊の標的領域で遺伝子に特異的に結合またはハイブリダイズするDNA結合タンパク質またはDNA結合核酸を使用する遺伝子編集によって実行される。いくつかの局面において、タンパク質または核酸は、例えば、キメラタンパク質または融合タンパク質内のヌクレアーゼにカップリングされるか、またはヌクレアーゼと複合体化される。例えば、いくつかの態様において、破壊は、破壊される遺伝子に特異的なDNAターゲティングタンパク質とヌクレアーゼ、例えば、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ZFN）もしくはTALエフェクターヌクレアーゼ（TALEN）、またはRNAガイド型ヌクレアーゼ、例えばclustered regularly interspersed short palindromic nucleic acid（CRISPR）-Cas系、例えばCRISPR-Cas9系とを含む融合物を使用して行われる。いくつかの態様において、遺伝子操作された細胞、例えばCAR発現細胞を産生または生成する方法は、遺伝子操作された抗原受容体（例えばCAR）をコードする核酸分子、および遺伝子編集ヌクレアーゼである阻害性分子を標的とする作用物質をコードする核酸分子、例えば、DNAターゲティングタンパク質とZFNもしくはTALENなどのヌクレアーゼとの融合物、または阻害性分子に特異的なCRISPR-Cas9系などのRNAガイド型ヌクレアーゼを細胞集団に導入する工程を含む。
II. BCMA結合性組換え受容体およびコーディングポリヌクレオチド
BCMA分子に結合するかまたはそれを認識するBCMA結合性組換え受容体またはキメラ抗原受容体、BCMA結合性組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体;CAR）をコードするポリヌクレオチド、およびそのような受容体を発現する細胞がいくつかの局面において提供される。いくつかの局面において、BCMA結合性組換え受容体を発現する細胞、およびそのような細胞を含む組成物は、本明細書において提供される方法または使用に従って使用される。BCMA結合性組換え受容体は、一般に、BCMA、例えばBCMAタンパク質、例えばヒトBCMAタンパク質を特異的に認識する、例えばそれに特異的に結合する、抗体（例えば、抗原結合性抗体フラグメント）、および/または他の結合性ペプチドを含有する。いくつかの局面において、作用物質は、BCMAの細胞外部分に結合する。そのようなポリヌクレオチドを含むか、またはそのような受容体を発現する細胞、例えば、操作された細胞、およびそのような操作された細胞を含む組成物もまた提供される。いくつかの局面において、そのような細胞および組成物を用いる方法、ならびに治療方法等におけるその使用もまた提供される。
いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体、例えばCARをコードするポリヌクレオチドは、例えば、コドン使用頻度について、RNA不均質性を低減させるために、かつ/またはコードされる受容体の発現、例えば表面発現を改変する、例えば、増加させるもしくは細胞製品ロット間でより一貫したものとするために最適化されているか、または最適化のために設計されたある特定の特色を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体をコードするポリヌクレオチドは、参照ポリヌクレオチドと比較して、例えば潜在性または隠れスプライス部位を除去するため、RNA不均質性を低減させるために改変される。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体をコードするポリヌクレオチドは、哺乳動物細胞、例えば、ヒト細胞、例えばヒトT細胞内での発現などのためにコドン最適化される。いくつかの局面において、改変されたポリヌクレオチドは、細胞内で発現された場合に、改善された、例えば、増加したまたはより均一なまたはより一貫したレベルの発現、例えば、表面発現を結果としてもたらす。そのようなポリヌクレオチドは、コードされるBCMA結合性細胞表面タンパク質を発現する操作された細胞の生成のために構築物中で利用され得る。そのため、本明細書において提供されるポリヌクレオチドによりコードされる組換え受容体を発現する細胞ならびに養子細胞療法、例えばBCMA発現と関連付けられる疾患および障害、例えば多発性骨髄腫におけるその使用もまた提供される。
ポリヌクレオチドの中には、BCMA、例えばヒトBCMAを特異的に認識する、例えばそれに特異的に結合する組換え受容体、例えば抗原受容体をコードするものがある。いくつかの局面において、コードされる受容体、例えばBCMA結合性ポリペプチドを含有するもの、ならびにその組成物および製造物品および使用もまた提供される。いくつかの局面において、そのようなポリヌクレオチドは、免疫細胞、例えばT細胞を操作して、例えば、セクションIIIなどの本明細書において記載される方法を使用してBCMA結合性組換え受容体を発現させて、方法、例えば、本明細書において提供される治療的および/または予防的な方法に使用するための操作された細胞または細胞組成物を生成するために使用され得る。
BCMA結合性ポリペプチドの中には、抗体、例えば単鎖抗体（例えば、抗原結合性抗体フラグメント）、またはその部分がある。いくつかの例において、組換え受容体はキメラ抗原受容体、例えば抗BCMA抗体またはその抗原結合性フラグメントを含有するキメラ抗原受容体である。任意の態様において、抗原、例えばBCMAを特異的に認識する、CAR中の抗体または抗原結合性フラグメントは、該抗原に特異的に結合する。提供されるポリヌクレオチドは、構築物、例えばデオキシリボ核酸（DNA）またはリボ核酸（RNA）構築物、例えばコードされるBCMA結合性組換え受容体の発現のために細胞に導入され得る構築物に組み込まれ得る。
いくつかの場合において、BCMA結合性組換え受容体をコードするポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有し、これは、いくつかの場合において、BCMA結合性組換え受容体をコードする核酸配列の上流にコードされるか、または抗原結合ドメインをコードする核酸配列の5'端において連結される。いくつかの場合において、BCMA結合性組換え受容体、例えば、キメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸配列を含有するポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有する。いくつかの局面において、シグナル配列は、天然ポリペプチドに由来するシグナルペプチドをコードし得る。他の局面において、シグナル配列は、異種のまたは非天然のシグナルペプチドをコードし得る。いくつかの局面において、非限定的な例示的なシグナルペプチドとしては、SEQ ID NO:167もしくは168～171に示すヌクレオチド配列によってコードされる、SEQ ID NO:166に示すIgGカッパ鎖のシグナルペプチド;SEQ ID NO:155に示すヌクレオチド配列によってコードされる、SEQ ID NO:154に示すGMCSFRアルファ鎖;SEQ ID NO:146に示すCD8アルファシグナルペプチド;またはSEQ ID NO:142に示すCD33シグナルペプチドが挙げられる。いくつかの場合において、BCMA結合性組換え受容体をコードするポリヌクレオチドは、追加の分子、例えばサロゲートマーカーもしくは他のマーカーをコードする核酸配列を含有することができるか、または追加の成分、例えばプロモーター、調節エレメントおよび/もしくはマルチシストロン性エレメントを含有することができる。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体をコードする核酸配列は、追加の成分のいずれかに機能的に連結され得る。
いくつかの状況において、療法に対する最適な奏効は、一貫性および信頼性をもって細胞の表面に発現されかつ/または標的抗原に結合するCARなどの操作された組換え受容体の能力に依存し得る。例えば、いくつかの場合において、導入された導入遺伝子（例えば、組換え受容体をコードする）から転写されたRNAの不均質性は、いくつかの場合において、細胞療法において使用される細胞、例えばヒトT細胞において発現される場合に、組換え受容体の発現および/または活性に影響し得る。いくつかの状況において、CARなどの組換え受容体中のスペーサーの長さおよび種類は、受容体の発現、活性および/または機能に影響し得る。
提供される態様は、いくつかの状況において、特定のスペーサーおよび核酸配列の最適化は、組換え受容体の一貫したおよび堅牢な発現に繋がり得るという観察に基づく。いくつかの態様において、提供される方法で使用されるBCMA結合性組換え受容体は、細胞療法、特にBCMAターゲティング細胞療法のための利用可能なアプローチを上回る利点を提供する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、可溶性BCMAへの結合について低い親和性を有する、完全ヒト抗原結合ドメインを含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、標的細胞の表面上に発現されるBCMAに対する増強された結合を結果としてもたらす改変されたスペーサーを含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、いくつかの場合において、抗原非依存的なシグナル伝達からの細胞の疲弊の低減、および可溶性BCMAによる阻害の欠如を結果としてもたらし得る、低減された抗原非依存的なトニックシグナル伝達を呈することが観察される。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、低密度または低レベルのBCMAを発現する標的細胞に対して活性または効力を呈する。いくつかの局面において、記載されるBCMA結合性組換え受容体の利点としては、BCMA結合剤またはBCMAターゲティング剤、例えば、BCMAターゲティング抗体-薬物コンジュゲート（ADC）、BCMAターゲティングT細胞エンゲージャー（TCE）、またはBCMAターゲティングキメラ抗原受容体（CAR）を発現する細胞による以前の処置または療法を含む、BCMAに対する先行療法を以前に受けたことがあり、かつ/またはBCMAに対する先行療法に不応であったか、BCMAに対する先行療法後に再発したか、もしくはBCMAに対する先行療法に対して難治性になっている対象に使用され得ることが挙げられる。本明細書において提供されるように、BCMA結合性組換え受容体の利点、例えば、安定性、高発現、抗原非依存的な（例えばトニック）シグナル伝達の減少、可溶性BCMAによる低結合、高い奏効率、有害事象（例えば毒性）の低い発生率、長期化された奏効、およびいくつかの場合において経時的な奏効の改善は、先行BCMA指向性療法に不応であったか、先行BCMA指向性療法後に再発したか、または先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている対象に使用され得る。
また、いくつかの状況において、ある特定の組換え受容体は、抗原非依存的な活性またはシグナル伝達（「トニックシグナル伝達」としても公知）を呈することができ、これは、組換え受容体を発現するT細胞の分化および/または疲弊の増加などに起因して、望ましくない効果に繋がり得る。いくつかの局面において、そのような活性は、T細胞の活性、効果または効力を制限し得る。いくつかの場合において、組換え受容体発現のための細胞の操作およびエクスビボ拡大増殖の間に、細胞は、組換え受容体を通じたトニックシグナル伝達に起因して、疲弊を指し示す表現型を呈し得る。
いくつかの状況において、組換え受容体が特異的に結合するか、それを認識するか、または標的とする特定の標的抗原の特性は、受容体の活性に影響し得る。いくつかの状況において、B細胞成熟抗原（BCMA）は典型的には悪性形質性細胞上に発現され、細胞療法のための魅力的な治療標的である。いくつかの場合において、BCMAは、ガンマセクレターゼにより切断されて、可溶性BCMA（sBCMA）、または「シェディング」された形態のBCMAを生成し、標的細胞の表面上に発現されるBCMAを低減させ得る。いくつかの場合において、抗BCMAキメラ抗原受容体などのBCMA結合性分子の活性は、可溶性BCMAの存在によりブロックまたは阻害され得る。改善された戦略が、細胞療法に対する最適な奏効のため、特に、BCMA、例えば標的細胞の表面上に発現されるBCMAに特異的に結合するか、それを認識するか、または標的とする組換え受容体のために必要とされる。
例えば、本明細書において提供される方法および使用において用いられる細胞中で発現される、BCMA結合性組換え受容体は、一般的には、細胞外結合性ドメインおよび細胞内シグナル伝達ドメインを含有する。これらBCMA結合性組換え受容体の中には、抗体を含有するポリペプチド、例えばそのような抗体を含有する単鎖細胞表面タンパク質、例えば、組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体が含まれる。
BCMA結合性組換え受容体の中には、提供される抗体またはその断片（例えば、BCMA結合性断片）の1つを含む単鎖細胞表面タンパク質、例えば組換え受容体（例えば、抗原受容体）がある。組換え受容体としては、BCMAに特異的に結合するか、またはそれを特異的に認識する抗原受容体、例えば提供される抗BCMA抗体、例えば、抗原結合性フラグメントを含有する抗原受容体が挙げられる。抗原受容体の中には、機能的な非TCR抗原受容体、例えばキメラ抗原受容体（CAR）がある。組換え受容体を発現する細胞ならびに養子細胞療法、例えばBCMA発現と関連付けられる疾患および障害におけるその使用もまた提供される。
CARを含む、例示的な抗原受容体、ならびにそのような抗原受容体の操作および細胞への導入の方法としては、例えば、各々その全体が本明細書に組み込まれる国際特許出願公開WO200014257、WO2013126726、WO2012/129514、WO2014031687、WO2013166321、WO2013071154、WO2013123061、米国特許出願公開US2002131960、US2013287748、US20130149337、米国特許第6,451,995号、同第7,446,190号、同第8,252,592号、同第8,339,645号、同第8,398,282号、同第7,446,179号、同第6,410,319号、同第7,070,995号、同第7,265,209号、同第7,354,762号、同第7,446,191号、同第8,324,353号、および同第8,479,118号、および欧州特許出願EP2537416に記載されるもの、ならびに/またはSadelain et al.,Cancer Discov.2013 April;3（4）:388-398;Davila et al.（2013）PLoS ONE 8（4）:e61338;Turtle et al.,Curr.Opin.Immunol.,2012 October;24（5）:633-39;Wu et al.,Cancer,2012 March 18（2）:160-75に記載されるものが挙げられる。いくつかの局面において、抗原受容体としては、米国特許第7,446,190号に記載されるCAR、および国際特許出願公開WO2014055668に記載されるものが挙げられる。例示的なCARとしては、上述の刊行物、例えばWO2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、US 7,446,190、およびUS 8,389,282のいずれかに開示され、かつ抗原結合性部分、例えば、scFvが本明細書において提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントにより置き換えられているCARが挙げられる。
いくつかの局面において、提供される態様において用いられるBCMA特異的CARは、例えばWO 2019/090003に記載されるものを含む。
いくつかの局面において、提供される態様において用いられるBCMA特異的CARは、SEQ ID NO:15～20の中から選択されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO 15～20のいずれかに記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈するアミノ酸配列を有する。いくつかの態様において、CARは、SEQ ID NO:19に記載されるアミノ酸配列、またはSEQ ID NO:19に記載されるアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈するアミノ酸配列を有する。
いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO 9～14のいずれかに示す核酸配列、またはSEQ ID NO:9～14のいずれかに示す核酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO:13もしくはSEQ ID NO:14に示す核酸配列、またはSEQ ID NO:13もしくはSEQ ID NO:14に示す核酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO:13に示す核酸配列、またはSEQ ID NO:13に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO:13に示す核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO:14に示す核酸配列、またはSEQ ID NO:14に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくは少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、CARは、ポリヌクレオチド、例えばSEQ ID NO:14に示す核酸配列を有するポリヌクレオチドによりコードされる。
いくつかの態様において、抗原結合ドメインをコードする核酸は、（a）SEQ ID NO:30、31、50、51、59、60、82、84、113、および115のいずれかに記載されるヌクレオチドの配列、（b）SEQ ID NO:30、31、50、51、59、60、82、84、113、および115のいずれかに対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列、または（c）（a）もしくは（b）の縮重配列を含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインをコードする核酸は、（a）SEQ ID NO:29、49、58、83、114、126、128、129、130のいずれかに記載されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列、（b）SEQ ID NO:29、49、58、83、114、126、128、129、130のいずれかに記載されるアミノ酸配列をコードするヌクレオチドの配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列、または（c）（a）もしくは（b）の縮重配列を含む。
A. 抗原結合ドメイン
キメラ受容体の中には、キメラ抗原受容体（CAR）がある。キメラ受容体、例えばCARは、一般的には、提供される抗BCMA抗体の1つを含むか、それであるか、またはその中に含まれるか、またはそれを構成する細胞外抗原結合ドメインを含む。そのため、キメラ受容体、例えば、CARは、典型的には、それらの細胞外部分中に、1つまたは複数のBCMA結合性ドメイン、例えば1つもしくは複数の抗原結合性フラグメント、ドメイン、もしくは部分、または1つもしくは複数の抗体可変領域、および/もしくは抗体分子、例えば本明細書に記載されるものを含む。
用語「抗体」は本明細書において、最も広い意味で用いられ、インタクトな抗体および機能的（抗原結合）抗体断片を含む、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体を含み、該断片は、抗原結合性フラグメント（Fab）断片、F（ab’）2断片、Fab’断片、Fv断片、組換え IgG（rIgG）断片、抗原に特異的に結合できる重鎖可変（VH）領域、単鎖可変断片（scFv）を含む単鎖抗体断片、および単一ドメイン抗体（例えば、sdAb、sdFv、ナノボディ）断片を含む。この用語は、遺伝子操作されたおよび/または他の方法で改変された形態の免疫グロブリン、例えば、イントラボディ、ペプチボディ、キメラ抗体、完全ヒト抗体、ヒト化抗体、およびヘテロコンジュゲート抗体、多重特異性、例えば二重特異性または三重特異性の抗体、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムdi-scFv、タンデムtri-scFvを包含する。特に明記されない限り、用語「抗体」は、本明細書において「抗原結合断片」とも呼ばれるその機能的抗体断片を包含すると理解されるべきである。この用語はまた、IgGおよびそのサブクラス、IgM、IgE、IgA、およびIgDを含む、任意のクラスまたはサブクラスの抗体を含む、インタクトなまたは全長の抗体も包含する。
用語「相補性決定領域」および「CDR」は、「超可変領域」または「HVR」と同義であり、抗原特異性および/または結合親和性を与える、抗体可変領域内のアミノ酸の非連続的配列を指すことが当技術分野において公知である。一般に、各重鎖可変領域には3つのCDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)があり、各軽鎖領域には3つのCDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)がある。「フレームワーク領域」および「FR」は、重鎖および軽鎖の可変領域の非CDR部分を指すことが当技術分野において公知である。一般に、各完全長重鎖可変領域には4つのFR(FR-H1、FR-H2、FR-H3、およびFR-H4)があり、各完全長軽鎖可変領域には4つのFR(FR-L1、FR-L2、FR-L3、およびFR-L4)がある。
所与のCDRまたはFRの正確なアミノ酸配列境界は、いくつかの周知の方式のいずれかを用いて容易に特定することができる。これらの方式には、Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (「Kabat」ナンバリング方式); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (「Chothia」ナンバリング方式); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (「Contact」ナンバリング方式);Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (「IMGT」ナンバリング方式); Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70(「Aho」ナンバリング方式);およびMartin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272(「AbM」ナンバリング方式)によって説明されているものが含まれる。
所与のCDRまたはFRの境界は、特定のために使用される方式に応じて変動し得る。例えば、Kabat方式は、構造アライメントに基づいているのに対し、Chothia方式は、構造情報に基づいている。Kabat方式とChothia方式のどちらのナンバリングも、最も一般的な抗体領域配列長に基づいており、挿入には挿入文字、例えば「30a」によって対応し、一部の抗体には欠失が現れる。これら2つの方式は、ある種の挿入および欠失(「インデル」)を異なる位置に配置するため、異なる番号が付与される。Contact方式は、複合体結晶構造の解析に基づいており、Chothiaナンバリング方式と多くの点で類似している。AbM方式は、Oxford MolecularのAbM抗体モデリングソフトウェアによって使用されているものに基づく、Kabat定義とChothia定義の折衷案である。
下記の表5は、Kabat、Chothia、AbM、およびContact方式によってそれぞれ特定された、CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3およびCDR-H1、CDR-H2、CDR-H3の例示的な位置境界を一覧にしている。CDR-H1について、残基のナンバリングは、Kabatナンバリング方式およびChothiaナンバリング方式の両方を用いて記載されている。FRはCDRの間に位置しており、例えば、FR-L1はCDR-L1の前方に位置し、FR-L2はCDR-L1とCDR-L2の間に位置し、FR-L3はCDR-L2とCDR-L3の間に位置し、以下同様である。示されているKabatのナンバリング方式ではH35AおよびH35Bに挿入を配置するため、Chothia CDR-H1ループの末端は、示されているKabatのナンバリング方式の慣例を用いてナンバリングすると、ループの長さに応じてH32とH34の間で変動することに留意されたい。
（表５）様々なナンバリング方式に基づく、CDRの境界
Figure 2023522857000008
1 - Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD
2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948
したがって、別段の指定が無い限り、所与の抗体またはその領域、例えばその可変領域の「CDR」もしくは「相補性決定領域」、または個々の指定されたCDR(例えば、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)は、前述の方式のいずれかまたは他の公知の方式によって定められた、ある(または具体的な)相補性決定領域を包含すると理解されるべきである。例えば、特定のCDR(例えばCDR-H3)が、所与のVH領域またはVL領域のアミノ酸配列中に対応するCDRのアミノ酸配列を含むと記載されている場合、そのようなCDRは、前述の方式のいずれかまたは他の公知の方式によって定めた場合に、対応するCDR(例えばCDR-H3)の配列を可変領域内に有していると理解される。いくつかの態様において、具体的なCDR配列が指定される。提供される抗体の例示的なCDR配列は、様々なナンバリング方式を用いて説明されるが、提供される抗体は、他の前述のナンバリング方式のいずれかまたは当業者に公知の他のナンバリング方式に従って説明されるようなCDRを含むことができると理解される。
同様に、別段の指定が無い限り、所与の抗体またはその領域、例えばその可変領域のFRまたは個々の指定されたFR(例えば、FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4)は、公知の方式のいずれかによって定められる、ある(または具体的な)フレームワーク領域を包含すると理解されるべきである。場合によっては、個々のCDR、FR、または複数のFRもしくはCDRを特定するための方式は指定される。例えば、CDRは、Kabat、Chothia、AbM、IMGT、もしくはContactの方法、または他の公知の方式によって定められる。他の場合において、CDRまたはFRの特定のアミノ酸配列が与えられる。
用語「可変領域」または「可変ドメイン」は、抗体の抗原への結合に関与する抗体重鎖または軽鎖のドメインを指す。ネイティブな抗体の重鎖および軽鎖の可変領域（それぞれVHおよびVL）は一般に、各ドメインが4つの保存されたフレームワーク領域（FR）および3つのCDRを含む、類似の構造を有する（例えば、Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)を参照）。単一VHまたはVLドメインが、抗原結合特異性を付与するのに十分である場合がある。さらに、特定の抗原に結合する抗体が、それぞれ相補的VLまたはVHドメインのライブラリーをスクリーニングするために、抗原に結合する抗体に由来するVHまたはVLドメインを用いて単離される場合がある。例えば、Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)；Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)を参照。
CAR中に含まれる抗体の中には、抗体断片がある。「抗体断片」または「抗原結合断片」は、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子を指す。抗体の例としては、これらに限定されないが、Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F（ab’）2ダイアボディ；直線状抗体；重鎖可変（VH）領域、単鎖抗体分子、例えばscFv、およびVH領域のみを含む単一ドメイン抗体；ならびに抗体断片から形成された多重特異性抗体が挙げられる。一部の態様では、CARにおける抗原結合ドメインは、可変重鎖（VH）および可変軽鎖（VL）領域を含む抗体断片であるか、またはそれを含む。特定の態様では、抗体は、重鎖可変（VH）領域および/または軽鎖可変（VL）領域を含む単鎖抗体断片、例えばscFvである。
シングルドメイン抗体（sdAb）は、抗体の重鎖可変領域の全てもしくは一部または軽鎖可変領域の全てもしくは一部を含む抗体断片である。ある特定の態様において、シングルドメイン抗体はヒトシングルドメイン抗体である。
抗体断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解消化ならびに組換え宿主細胞による生成を含むが、これに限定されない様々な技法によって作ることができる。いくつかの態様において、抗体は、組換えにより生成された断片、例えば、天然では生じない配置を含む断片、例えば、2つもしくはそれ以上の抗体領域もしくは鎖が合成リンカー、例えば、ペプチドリンカーでつながっている断片、および/または天然のインタクトな抗体の酵素消化では生成されないことがある断片である。いくつかの局面において、抗体断片はscFvである。
「ヒト化」抗体とは、すべての、または実質的にすべてのCDRアミノ酸残基が非ヒトCDRに由来し、すべての、または実質的にすべてのFRアミノ酸残基がヒトFRに由来する抗体である。ヒト化抗体は、任意で、ヒト抗体に由来する抗体定常領域の少なくとも一部を含んでもよい。「ヒト化型」の非ヒト抗体とは、典型的には、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながらヒトに対する免疫原性を小さくするためにヒト化されている、非ヒト抗体のバリアントを指す。いくつかの態様において、ヒト化抗体にある、いくつかのFR残基は、例えば、抗体特異性または親和性を回復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、CDR残基が得られた抗体）に由来する対応する残基で置換される。
CARに含まれる抗BCMA抗体の中にはヒト抗体がある。「ヒト抗体」は、ヒトまたはヒト細胞、または、ヒト抗体ライブラリーを含む、ヒト抗体レパートリーもしくは他のヒト抗体コーディング配列を利用する非ヒト供給源により産生される抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。該用語は、全てのまたは実質的に全てのCDRが非ヒトであるものなどの、非ヒト抗原結合性領域を含むヒト化型の非ヒト抗体を除外する。該用語はヒト抗体の抗原結合性フラグメントを含む。
ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答してインタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように改変されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することにより調製されてもよい。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン座位を置き換えるか、または染色体外に存在するかもしくは動物の染色体に無作為に組み込まれるヒト免疫グロブリン座位の全体または部分を含有する。そのようなトランスジェニック動物において、内因性免疫グロブリン座位は一般的には不活性化されている。ヒト抗体はまた、ヒトレパートリーに由来する抗体コーディング配列を含有する、ファージディスプレイおよび無細胞ライブラリーを含む、ヒト抗体ライブラリーに由来してもよい。
CARに含まれる抗体の中には、モノクローナル抗体断片を含む、モノクローナル抗体であるものがある。「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書において使用される場合、実質的に均質な抗体の集団から得られるか、または該集団内の抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体は、天然に存在する突然変異を含有するか、またはモノクローナル抗体調製物の製造の間に生じる起こり得るバリアントを除いて同一であり、そのようなバリアントは一般的には微量で存在する。異なるエピトープに対して方向付けられた異なる抗体を典型的には含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、モノクローナル抗体調製物の各々のモノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して方向付けられている。該用語は、任意の特定の方法による抗体の製造を要求すると解釈されるべきではない。モノクローナル抗体は様々な技術により製造されてもよく、該技術としては、ハイブリドーマからの生成、組換えDNA法、ファージ-ディスプレイおよび他の抗体ディスプレイ法が挙げられるがそれに限定されるわけではない。
いくつかの態様において、CARは、抗体分子の1つまたは複数のBCMA結合性部分、例えば抗体の重鎖可変（VH）領域および/または軽鎖可変（VL）領域、例えば、scFv抗体断片を含む。いくつかの態様において、本明細書に記載のBCMA結合性CAR、例えば提供される方法における使用のためのBCMA結合性CARは、CARのBCMA結合特性を付与する抗体、例えば抗BCMA抗体、またはその抗原結合性フラグメントを含有する。いくつかの態様において、抗体または抗原結合ドメインは、記載される任意の抗BCMA抗体であり得るか、または記載される任意の抗BCMA抗体に由来し得る。例えば、Carpenter et al.,Clin Cancer Res.,2013,19（8）:2048-2060、WO 2016090320、WO2016090327、WO2010104949およびWO2017173256を参照。そのような抗BCMA抗体または抗原結合性フラグメントのいずれも、CARにおいて使用することができる。いくつかの態様において、抗BCMA CARは、WO 2016090320またはWO2016090327に記載される抗体に由来する可変重鎖（VH）および/または可変軽鎖（VL）領域を含有するscFvである抗原結合ドメインを含有する。
いくつかの態様において、抗体、例えば、抗BCMA抗体または抗原結合性フラグメントは、記載される重鎖および/もしくは軽鎖可変（VHもしくはVL）領域配列、または十分なその抗原結合性部分を含有する。いくつかの態様において、抗BCMA抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、記載されるCDR-H1、CDR-H2および/もしくはCDR-H3を含有するVH領域配列または十分なその抗原結合性部分を含有する。いくつかの態様において、抗BCMA抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、記載されるCDR-L1、CDR-L2および/もしくはCDR-L3を含有するVL領域配列または十分な抗原結合性部分を含有する。いくつかの態様において、抗BCMA抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、記載されるCDR-H1、CDR-H2および/またはCDR-H3を含有するVH領域配列を含有し、かつ記載されるCDR-L1、CDR-L2および/またはCDR-L3を含有するVL領域配列を含有する。抗体の中にはまた、そのような配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％または少なくとも約90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％同一の配列を有するものがある。
いくつかの態様において、抗体は、VH領域配列または十分なその抗原結合性部分、例えば上記のVH配列のいずれか（例えば、CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3および/またはCDR-H4）のみを含む単一ドメイン抗体（sdAb）である。
いくつかの態様において、VH領域を含む本明細書において提供される抗体（例えば、抗BCMA抗体）またはその抗原結合性フラグメントは、軽鎖または十分なその抗原結合性部分をさらに含む。例えば、いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、VH領域およびVL領域、またはVHおよびVL領域の十分な抗原結合性部分を含有する。そのような態様において、VH領域配列は上記のVH配列のいずれかであることができる。いくつかのそのような態様において、抗体は抗原結合性フラグメント、例えばFabまたはscFvである。いくつかのそのような態様において、抗体は、定常領域も含有する全長抗体である。
いくつかの態様において、CAR中の抗体、例えば、その抗原結合性フラグメントは、SEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131のいずれか1つから選択されるアミノ酸配列、もしくはSEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131のいずれか1つから選択される重鎖可変（VH）領域アミノ酸に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するVH領域を有するか、またはそのようなVH配列中に存在するCDR-H1、CDR-H2、および/もしくはCDR-H3を含有する。いくつかの態様において、CAR中の抗体または抗体断片は、WO 2016/090327、WO 2016/090320、またはWO 2017/173256に記載される抗体または抗体結合性断片のいずれかのVH領域を有する。
いくつかの態様において、CAR中の抗体、例えば、その抗原結合性フラグメントは、SEQ ID NO:33、53、62、88、119、127、および132のいずれか1つから選択されるアミノ酸配列、もしくはSEQ ID NO:33、53、62、88、119、127、および132のいずれか1つから選択される軽鎖可変（VL）領域アミノ酸に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するVL領域を有するか、またはそのようなVL配列中に存在するCDR-L1、CDR-L2、および/もしくはCDR-L3を含有する。いくつかの態様において、CAR中の抗体または抗体断片は、WO 2016/090327、WO 2016/090320、またはWO 2017/173256に記載される抗体または抗体結合性断片のいずれかのVL領域を有する。
いくつかの態様において、CAR中の抗体、例えば、その抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:32および33のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:32および33に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:52および53のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:52および53に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:61および62のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:61および62に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:85および88のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:85および88に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:116および119のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:116および119に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:125および127のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:125および127に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列;それぞれSEQ ID NO:131および132のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:131および132に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様において、CAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:32および33のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:32および33に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:52および53のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:52および53に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:61および62のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:61および62に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:85および88のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:85および88に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:116および119のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:116および119に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:125および127のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:125および127に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:131および132のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:131および132に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様において、CAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:32および33のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:52および53のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:61および62のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:85および88のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:116および119のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:125および127のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:131および132のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、CARにおいて、抗体またはその抗原結合性フラグメントはVHおよびVL領域を含み、かつVH領域は、SEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131のいずれか1つから選択されるVH領域アミノ酸配列内に含有される重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:33、53、62、88、119、127、132のいずれか1つから選択されるVL領域アミノ酸配列内に含有される軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む。
いくつかの態様において、CARにおいて、抗体またはその抗原結合性フラグメントはVHおよびVL領域を含み、かつVH領域は、SEQ ID NO:32のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:33のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:53のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:61のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:62のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:85のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:88のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:119のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:125のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:127のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含み;VH領域は、SEQ ID NO:131のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:132のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、CARにおいて、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、VHおよびVL領域を含み、かつVH領域は、SEQ ID NO:32のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:33のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:52のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:53のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:61のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:62のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:85のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:88のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:119のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:125のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:127のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:131のアミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:132のアミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む。
いくつかの態様において、CAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:32および33のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:52および53のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:61および62のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:85および88のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:116および119のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:125および127のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、それぞれSEQ ID NO:131および132のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、それにおいて提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:116および119、または上記のVHおよびVLのいずれかに対して少なくとも90％の配列同一性、例えばそれに対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有する任意の抗体もしくはその抗原結合性フラグメント、または上記のVHおよびVLのいずれかのVH領域内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3ならびにVL領域内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む任意の抗体もしくはその抗原結合性フラグメントから選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、それにおいて提供される抗体またはその抗原結合性フラグメントのVHおよびVL領域は、SEQ ID NO:116および119から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、PCT/US2020/063492に記載されるとおりの抗イディオタイプ抗体を用いて、これらの配列を含む抗原結合性ドメインの発現を検出する。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、単鎖抗体断片、例えば単鎖可変断片（scFv）またはダイアボディまたは単一ドメイン抗体（sdAb）である。いくつかの態様において、抗体または抗原結合性フラグメントは、VH領域のみを含む単一ドメイン抗体である。いくつかの態様において、抗体または抗原結合性フラグメントは、重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を含むscFvである。いくつかの態様において、単鎖抗体断片（例えばscFv）は、2つの抗体ドメインまたは領域、例えば重鎖可変（VH）領域および軽鎖可変（VL）領域を連結する1つまたは複数のリンカーを含む。リンカーは、典型的には、ペプチドリンカー、例えば、柔軟性および/または可溶性ペプチドリンカーである。リンカーの中には、グリシンおよびセリンおよび/またはいくつかの場合においてスレオニンに富んだものがある。いくつかの態様において、リンカーは、荷電性残基、例えばリジンおよび/またはグルタミン酸をさらに含み、これは溶解性を向上させ得る。いくつかの態様において、リンカーは1つまたは複数のプロリンをさらに含む。
よって、提供される抗BCMA抗体としては、単鎖抗体断片、例えばscFvおよびダイアボディ、特にはヒト単鎖抗体断片、典型的には2つの抗体ドメインまたは領域、例えばVHおよびVL領域を連結するリンカーを含むものが挙げられる。リンカーは、典型的には、ペプチドリンカー、例えば、柔軟性および/または可溶性ペプチドリンカー、例えばグリシンおよびセリンに富んだものである。
いくつかの局面において、グリシンおよびセリン（および/またはスレオニン）に富んだリンカーは、少なくとも80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％のそのようなアミノ酸を含む。いくつかの態様において、それらは、少なくとも50％、55％、60％、70％、もしくは75％または少なくとも約50％、55％、60％、70％、もしくは75％の、グリシン、セリン、および/またはスレオニンを含む。いくつかの態様において、リンカーは、実質的に完全にグリシン、セリン、および/またはスレオニンから構成される。リンカーは、一般的には、約5～約50アミノ酸の長さ、典型的には10または約10から30または約30、例えば、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、または30、およびいくつかの例において10～25アミノ酸の長さである。例示的なリンカーとしては、様々な数の配列GGGGS（4GS;SEQ ID NO:7）またはGGGS（3GS;SEQ ID NO:2）のリピート、例えばそのような配列の2、3、4、および5個のリピートを有するリンカーが挙げられる。例示的なリンカーとしては、SEQ ID NO:1 (GGGGSGGGGSGGGGS)に記載される配列を有するか、またはそれからなるものが挙げられる。例示的なリンカーとしては、SEQ ID NO:176 (GSTSGSGKPGSGEGSTKG)に記載される配列を有するか、またはそれからなるものがさらに挙げられる。例示的なリンカーとしては、SEQ ID NO:255 (SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)に記載される配列を有するか、またはそれからなるものがさらに挙げられる。
よって、いくつかの態様において、提供される態様は、GGGS（SEQ ID NO:2）またはGGGGS（SEQ ID NO:7）のリピートを有するリンカー、例えばSEQ ID NO:1に記載されるリンカーを含む、上述のリンカー、例えばグリシン/セリンリッチリンカーの1つまたは複数を含む、単鎖抗体断片、例えば、scFvを含む。
いくつかの態様において、リンカーは、SEQ ID NO:1に記載される配列を含有するアミノ酸配列を有する。断片、例えば、scFvは、VH領域またはその部分、続いてリンカー、続いてVL領域またはその部分を含んでもよい。断片、例えば、scFvは、VL領域またはその部分、続いてリンカー、続いてVH領域またはその部分を含んでもよい。
表6は、提供される方法および使用において用いるための、BCMA結合性組換え受容体、例えば抗BCMAキメラ抗原受容体（CAR）に含まれ得る、例示的な抗原結合ドメイン、例えば抗体または抗原結合性フラグメントのSEQ ID NOを提供する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3配列を含むVH領域ならびにCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL領域（Kabatのナンバリングによる）を含む、BCMA結合性抗体またはその断片を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるVH領域配列およびVL領域配列を含む、BCMA結合性抗体もしくはその断片、または下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるVH領域配列およびVL領域配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有するVHおよびVL領域アミノ酸配列を含む抗体を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるVH領域配列およびVL領域配列を含む、BCMA結合性抗体またはその断片を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるscFv配列を含む、BCMA結合性抗体もしくはその断片、または下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるscFv配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有するscFvアミノ酸配列を含む抗体を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、SEQ ID NO:114に記載されるscFv配列を含む、BCMA結合性抗体もしくはその断片、またはそれに対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、もしくは99％の配列同一性を有するscFvアミノ酸配列を含む抗体を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、下記の表6の各々の行に列記されるSEQ ID NOに記載されるscFv配列を含む、BCMA結合性抗体またはその断片を含有する。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、SEQ ID NO:114に記載されるscFv配列を含む、BCMA結合性抗体またはその断片を含有する。
（表６）例示的な抗原結合ドメインのための配列識別子（SEQ ID NO）
Figure 2023522857000009
CAR中の抗体、例えば抗原結合性フラグメントの中には、ヒト抗体がある。提供されるヒト抗BCMA抗体、例えば、抗原結合性フラグメントのいくつかの態様において、ヒト抗体は、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメントによりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、もしくは100％の配列同一性を有する部分、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Dセグメントによりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、もしくは100％の配列同一性を有する部分、および/もしくは生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Jセグメントによりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、もしくは100％の配列同一性を有する部分を含むVH領域を含有し、かつ/または生殖系列ヌクレオチドヒトカッパもしくはラムダ鎖Vセグメントによりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、もしくは100％の配列同一性を有する部分、および/もしくは生殖系列ヌクレオチドヒトカッパもしくはラムダ鎖Jセグメントによりコードされるアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、もしくは100％の配列同一性を有する部分を含むVL領域を含有する。いくつかの態様において、VH領域の部分は、CDR-H1、CDR-H2および/またはCDR-H3に対応する。いくつかの態様において、VH領域の部分は、フレームワーク領域1（FR1）、FR2、FR2および/またはFR4に対応する。いくつかの態様において、VL領域の部分は、CDR-L1、CDR-L2および/またはCDR-L3に対応する。いくつかの態様において、VL領域の部分は、FR1、FR2、FR2および/またはFR4に対応する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H1領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-H1を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H1領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-H1を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H2領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-H2を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H2領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-H2を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメント、DセグメントおよびJセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H3領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-H3を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト重鎖Vセグメント、DセグメントおよびJセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-H3領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-H3を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L1領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-L1を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L1領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-L1を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L2領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-L2を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖Vセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L2領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-L2を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖VセグメントおよびJセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L3領域のアミノ酸配列に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するCDR-L3を含有する。例えば、ヒト抗体は、いくつかの態様において、生殖系列ヌクレオチドヒト軽鎖VセグメントおよびJセグメントによりコードされる配列内の対応するCDR-L3領域と比較して100％同一であるか、または1、2もしくは3つ以下のアミノ酸差異を有する配列を有するCDR-L3を含有する。
いくつかの態様において、ヒト抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、ヒト生殖系列遺伝子セグメント配列を含有するフレームワーク領域を含有する。例えば、いくつかの態様において、ヒト抗体は、フレームワーク領域、例えばFR1、FR2、FR3およびFR4が、ヒト生殖系列抗体セグメント、例えばVセグメントおよび/またはJセグメントによりコードされるフレームワーク領域に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するVH領域を含有する。いくつかの態様において、ヒト抗体は、フレームワーク領域、例えばFR1、FR2、FR3およびFR4が、ヒト生殖系列抗体セグメント、例えばVセグメントおよび/またはJセグメントによりコードされるフレームワーク領域に対して少なくとも95％、96％、97％、98％、99％、または100％の配列同一性を有するVL領域を含有する。例えば、いくつかのそのような態様において、VH領域および/またはVL領域内に含有されるフレームワーク領域配列は、ヒト生殖系列抗体セグメントによりコードされるフレームワーク領域配列と比較して、10個以下のアミノ酸、例えば9、8、7、6、5、4、3、2または1個以下のアミノ酸だけ異なる。
いくつかの態様において、参照抗体は、国際特許出願国際公開WO 2010/104949に記載されるマウス抗BCMA scFvであることができる。
抗体、例えば、抗原結合性フラグメントは、免疫グロブリン定常領域の少なくとも部分、例えば1つまたは複数の定常領域ドメインを含有してもよい。いくつかの態様において、定常領域は、軽鎖定常領域および/または重鎖定常領域1（CH1）を含む。いくつかの態様において、抗体は、CH2および/またはCH3ドメイン、例えばFc領域を含む。いくつかの態様において、Fc領域は、ヒトIgG、例えばIgG1またはIgG4のFc領域である。
B. スペーサー
いくつかの態様において、本明細書において提供される方法および使用において用いられる操作された細胞により発現されるものなど、本明細書において提供される抗体（例えば、抗原結合性フラグメント）を含む組換え受容体、例えばCARは、スペーサーまたはスペーサー領域をさらに含む。スペーサーは典型的にはペプチドスペーサーであり、一般に、CAR内でCARの抗原結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する。いくつかの局面において、スペーサーは、免疫グロブリン定常領域またはそのバリアントもしくは改変バージョンの少なくとも部分、例えば免疫グロブリンのヒンジ領域、例えばIgGヒンジ領域、例えば、IgG4もしくはIgG4由来ヒンジ領域、ならびに/またはCH1/CLおよび/もしくはFc領域であるか、またはそれを含むものであってもよい。いくつかの態様において、スペーサーは、CD8αを含むかCD8αであるヒンジ領域を含む。いくつかの態様において、CD8αは、ヒトCD8αである。いくつかの態様において、定常領域またはその部分の1つもしくは複数は、ヒトIgG、例えばヒトIgG4またはIgG1またはIgG2のものである。一般に、スペーサー、例えば定常領域の部分は、抗原認識成分（例えば、scFv）と膜貫通ドメインとの間のスペーサー領域として役立つ。いくつかの態様において、スペーサーの長さおよび/または組成は、CARとその標的との間の相互作用のある特定の特色を最適化または促進するように設計され、いくつかの局面において、それは、CARの標的発現細胞上のその標的への結合の間またはその際またはその後にCAR発現細胞とCARの標的を発現する細胞との間の生物物理学的シナプス距離を最適化するように設計され、いくつかの局面において、標的発現細胞はBCMA発現腫瘍細胞である。いくつかの態様において、CARはT細胞により発現され、スペーサーの長さは、T細胞活性化のためまたはCAR T細胞の性能を最適化するために適した長さである。いくつかの態様において、スペーサーは、組換え受容体、例えば、CARのリガンド結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置するスペーサー領域である。いくつかの態様において、スペーサー領域は、組換え受容体、例えば、CARのリガンド結合ドメインと膜貫通ドメインとの間に位置する領域である。
いくつかの態様において、スペーサーは、スペーサーの非存在下および/または長さにおいてのみ異なるものなどの異なるスペーサーの存在下と比較して抗原結合後の細胞の増加した応答性を提供する長さであることができる。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくとも100アミノ酸の長さ、例えば少なくとも110、125、130、135、140、145、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、または250個のアミノ酸の長さである。いくつかの例において、スペーサーは、12もしくは約12個のアミノ酸の長さであるか、または12個以下のアミノ酸の長さである。例示的なスペーサーとしては、列記される範囲のいずれかの端点の間の任意の整数を含む、少なくとも約10～300個のアミノ酸、約10～200個のアミノ酸、約50～175個のアミノ酸、約50～150個のアミノ酸、約10～125個のアミノ酸、約50～100個のアミノ酸、約100～300個のアミノ酸、約100～250個のアミノ酸、約125～250個のアミノ酸、または約200～250個のアミノ酸を有するものが挙げられる。いくつかの態様において、スペーサーまたはスペーサー領域は、少なくとも約12個のアミノ酸、少なくとも約119個のアミノ酸もしくはそれ未満、少なくとも約125個のアミノ酸、少なくとも約200個のアミノ酸、または少なくとも約220個のアミノ酸、または少なくとも約225個のアミノ酸の長さである。
いくつかの態様において、スペーサーは、125～300個のアミノ酸の長さ、125～250個のアミノ酸の長さ、125～230個のアミノ酸の長さ、125～200個のアミノ酸の長さ、125～180個のアミノ酸の長さ、125～150個のアミノ酸の長さ、150～300個のアミノ酸の長さ、150～250個のアミノ酸の長さ、150～230個のアミノ酸の長さ、150～200個のアミノ酸の長さ、150～180個のアミノ酸の長さ、180～300個のアミノ酸の長さ、180～250個のアミノ酸の長さ、180～230個のアミノ酸の長さ、180～200個のアミノ酸の長さ、200～300個のアミノ酸の長さ、200～250個のアミノ酸の長さ、200～230個のアミノ酸の長さ、230～300個のアミノ酸の長さ、230～250個のアミノ酸の長さまたは250～300個のアミノ酸の長さを有する。いくつかの態様において、スペーサーは、少なくとも130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、221、222、223、224、225、226、227、228もしくは229個もしくは少なくとも約130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、221、222、223、224、225、226、227、228もしくは229個もしくは130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、221、222、223、224、225、226、227、228もしくは229個もしくは約130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、221、222、223、224、225、226、227、228もしくは229個のアミノ酸の長さ、または以上のいずれかの間の長さである。
例示的なスペーサーとしては、免疫グロブリン定常領域の部分を含有するもの、例えばIgヒンジ、例えばIgGヒンジドメインを含有するものが挙げられる。いくつかの局面において、スペーサーは、単独でのIgGヒンジ、CH2およびCH3ドメインの1つもしくは複数に連結されたIgGヒンジ、またはCH3ドメインに連結されたIgGヒンジを含む。いくつかの態様において、IgGヒンジ、CH2および/またはCH3は、IgG4またはIgG2に全体的または部分的に由来することができる。いくつかの態様において、スペーサーは、IgG4、IgG2、および/またはIgG2およびIgG4に由来するヒンジ、CH2および/またはCH3配列の1つまたは複数を含有するキメラポリペプチドであることができる。いくつかの態様において、ヒンジ領域はIgG4ヒンジ領域および/もしくはIgG2ヒンジ領域の全体もしくは部分を含み、IgG4ヒンジ領域は任意でヒトIgG4ヒンジ領域であり、かつIgG2ヒンジ領域は任意でヒトIgG2ヒンジ領域であり;CH2領域はIgG4 CH2領域および/もしくはIgG2 CH2領域の全体もしくは部分を含み、IgG4 CH2領域は任意でヒトIgG4 CH2領域であり、かつIgG2 CH2領域は任意でヒトIgG2 CH2領域であり;かつ/またはCH3領域はIgG4 CH3領域および/もしくはIgG2 CH3領域の全体もしくは部分を含み、IgG4 CH3領域は任意でヒトIgG4 CH3領域であり、かつIgG2 CH3領域は任意でヒトIgG2 CH3領域である。いくつかの態様において、ヒンジ、CH2およびCH3は、IgG4からのヒンジ領域、CH2およびCH3の各々の全体または部分を含む。いくつかの態様において、ヒンジ領域はキメラであり、ヒトIgG4およびヒトIgG2からのヒンジ領域を含み;CH2領域はキメラであり、ヒトIgG4およびヒトIgG2からのCH2領域を含み;かつ/またはCH3領域はキメラであり、ヒトIgG4およびヒトIgG2からのCH3領域を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、IgG4/2キメラヒンジまたはヒトIgG4ヒンジ領域と比較して少なくとも1つのアミノ酸置換を含む改変されたIgG4ヒンジ;ヒトIgG2/4キメラCH2領域;およびヒトIgG4 CH3領域を含む。
いくつかの態様において、スペーサーは、IgG4および/またはIgG2に全体的または部分的に由来することができ、1つまたは複数のドメイン中の1つまたは複数の単一アミノ酸突然変異などの突然変異を含有することができる。いくつかの例において、アミノ酸改変は、IgG4のヒンジ領域におけるセリン（S）のプロリン（P）への置換である。いくつかの態様において、アミノ酸改変は、グリコシル化不均質性を低減させるためのアスパラギン（N）のグルタミン（Q）への置換、例えばSEQ ID NO:173に記載される全長IgG4 Fc配列のCH2領域中の177位におけるN177Q突然変異、またはSEQ ID NO:172に記載される全長IgG2 Fc配列のCH2領域中の176位におけるN176Qである。いくつかの態様において、スペーサーは、IgG4/2キメラヒンジもしくは改変されたIgG4ヒンジ;IgG2/4キメラCH2領域;およびIgG4 CH3領域であるか、もしくはそれを含み、任意で約228個のアミノ酸の長さであり;またはSEQ ID NO:174に記載されるスペーサーであるか、もしくはそれを含む。いくつかの態様において、スペーサーは、アミノ酸配列
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を含む。
いくつかの態様において、スペーサーは、コドン発現のためおよび/または潜在性スプライス部位などのスプライス部位を排除するために最適化されているポリヌクレオチドによりコードされる。いくつかの態様において、スペーサーのためのコーディング配列は、SEQ ID NO:200に記載される核酸配列を含む。いくつかの態様において、スペーサーのためのコーディング配列は、SEQ ID NO:236または8に記載される核酸配列を含む。
追加の例示的なスペーサーとしては、Hudecek et al.（2013）Clin.Cancer Res.,19:3153、Hudecek et al.（2015）Cancer Immunol.Res.,3（2）:125-135、または国際特許出願国際公開WO2014031687に記載されるものが挙げられるがそれに限定されるわけではない。いくつかの態様において、スペーサーのヌクレオチド配列は、発現後のRNA不均質性を低減させるために最適化される。いくつかの態様において、スペーサーのヌクレオチド配列は、潜在性スプライス部位を低減させるためまたはスプライス部位におけるスプライス事象の可能性を低減させるために最適化される。
いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:237に記載されるアミノ酸配列を有し、かつSEQ ID NO:238に記載されるポリヌクレオチド配列によりコードされる。いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:157に記載されるアミノ酸配列を有する。いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:156に記載されるアミノ酸配列を有する。いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:134に記載されるアミノ酸配列を有し、かつSEQ ID NO:135に記載されるポリヌクレオチド配列によりコードされる。いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:175、200、236もしくは8に記載されるポリヌクレオチド配列またはSEQ ID NO:175、200、236もしくは8に対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％もしくはより高い配列同一性を呈するポリヌクレオチドによりコードされる、SEQ ID NO:174に記載されるアミノ酸配列を有する。いくつかの態様において、スペーサーは、コドン使用頻度のためおよび/またはRNA不均質性を低減させるために任意で最適化されているポリヌクレオチドによりコードされる、SEQ ID NO:174に対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％またはより高い配列同一性を呈するアミノ酸配列を有する。
いくつかの態様において、スペーサーは、SEQ ID NO:200に記載されるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列であるか、またはそれを含む。
C. 膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達成分
抗原認識成分（例えば、抗原結合ドメイン）は、一般的には、シグナル伝達成分、例えば、抗原受容体複合体、例えばCARの場合にはTCR複合体を通じて刺激および/もしくは活性化を模倣する、ならびに/または別の細胞表面受容体を介してシグナル伝達するシグナル伝達成分を含有する1つまたは複数の細胞内シグナル伝達領域に連結される。そのため、いくつかの態様において、BCMA結合性ドメイン（例えば、抗体またはその抗原結合性フラグメント）は、本明細書に記載されるものなどの1つまたは複数の膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達領域または本明細書に記載されるものなどの1つもしくは複数の細胞内成分を含むドメインに連結される。いくつかの態様において、膜貫通ドメインは細胞外ドメインに融合している。1つの態様において、受容体、例えば、CAR中のドメインの1つと天然に会合している膜貫通ドメインが使用される。いくつかの事例において、膜貫通ドメインは、同じまたは異なる表面膜タンパク質の膜貫通ドメインへのそのようなドメインの結合を回避して受容体複合体の他のメンバーとの相互作用を最小化するように選択されるか、またはそのようにアミノ酸置換により改変される。
膜貫通ドメインは、いくつかの態様において、天然供給源または合成供給源のいずれかに由来する。供給源が天然の場合、ドメインは、いくつかの局面において、任意の膜結合または膜貫通タンパク質に由来する。膜貫通ドメインとしては、T細胞受容体のアルファ、ベータもしくはゼータ鎖、CD3イプシロン、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、および/またはCD154に由来する（すなわち少なくともその膜貫通ドメインを含む）ものが挙げられる。例えば、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:139またはSEQ ID NO:140に記載される核酸配列によりコードされる、SEQ ID NO:138に記載されるアミノ酸の配列を含むCD28膜貫通ドメインであることができる。いくつかの態様において、膜貫通ドメインは、CD8αに由来する膜貫通ドメインであるか、またはCD8αに由来する膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、CD8αは、ヒトCD8αである。代替的に、膜貫通ドメインは、いくつかの態様において、合成である。いくつかの局面において、合成の膜貫通ドメインは、ロイシンおよびバリンなどの疎水性残基を主に含む。いくつかの局面において、フェニルアラニン、トリプトファンおよびバリンのトリプレットが合成の膜貫通ドメインの各々の末端に見出される。いくつかの態様において、連結は、リンカー、スペーサー、および/または膜貫通ドメインによる。
細胞内シグナル伝達領域またはドメインの中には、天然の抗原受容体を通じたシグナル、共刺激受容体と組み合わせてそのような受容体を通じたシグナル、および/または共刺激受容体単独を通じたシグナルを模倣または近似するものがある。いくつかの態様において、短いオリゴまたはポリペプチドリンカー、例えば、2～10個のアミノ酸の長さのリンカー、例えばグリシンおよびセリン、例えば、グリシン-セリンダブレットを含有するものが存在し、CARの膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間の連結を形成する。
受容体、例えば、CARは、一般的には、少なくとも1つの細胞内シグナル伝達成分を含む細胞内シグナル伝達領域を含む。いくつかの態様において、受容体は、TCR複合体の細胞内成分またはシグナル伝達ドメイン、例えばT細胞活性化および細胞傷害性を媒介するTCR CD3鎖、例えば、CD3ゼータ鎖を含む。そのため、いくつかの局面において、BCMA結合性抗体は、1つまたは複数の細胞シグナル伝達モジュールに連結されている。いくつかの態様において、細胞シグナル伝達モジュールは、CD3膜貫通ドメイン、CD3細胞内シグナル伝達ドメイン、および/または他のCD膜貫通ドメインを含む。いくつかの態様において、受容体、例えば、CARは、1つまたは複数の追加の分子、例えばFc受容体γ、CD8、CD4、CD25、またはCD16の部分をさらに含む。例えば、いくつかの局面において、CARは、CD3-ゼータ（CD3-ζ）またはFc受容体γとCD8、CD4、CD25またはCD16との間のキメラ分子を含む。
いくつかの態様において、CARのライゲーションの際またはその後に、CARの細胞質ドメインまたは細胞内シグナル伝達ドメインは、免疫細胞、例えば、CARを発現するように操作されたT細胞の正常なエフェクター機能または応答の少なくとも1つを刺激しかつ/または活性化させる。例えば、いくつかの状況において、CARは、T細胞の機能、例えば細胞溶解活性またはT-ヘルパー活性、例えばサイトカインもしくは他の因子の分泌を誘導する。いくつかの態様において、抗原受容体成分または共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインの切断された部分が、例えば、それがエフェクター機能シグナルを伝達する場合に、インタクトな免疫賦活鎖の代わりに使用される。いくつかの態様において、1つまたは複数の細胞内シグナル伝達ドメインは、T細胞受容体（TCR）の細胞質配列、ならびにいくつかの局面においてはまた、天然の状況においてそのような受容体と協奏的に作用して抗原受容体エンゲージメント後にシグナル伝達を開始させる補助受容体の細胞質配列、および/またはそのような分子の任意の誘導体もしくはバリアント、および/または同じ機能的な能力を有する任意の合成配列を含む。
天然のTCRの状況において、完全な活性化は、一般的には、TCRを通じたシグナル伝達だけでなく、共刺激シグナルも要求する。そのため、いくつかの態様において、完全な活性化を促進するために、二次的または共刺激シグナルを生成するための成分もまたCARに含まれる。他の態様において、CARは、共刺激シグナルを生成するための成分を含まない。いくつかの局面において、追加のCARが同じ細胞中で発現され、二次的または共刺激シグナルを生成するための成分を提供する。
T細胞活性化は、いくつかの局面において、2つのクラスの細胞質シグナル伝達配列:TCRを通じた抗原依存性の一次活性化を開始させるもの（一次細胞質シグナル伝達配列）、および抗原非依存性の方式で二次または共刺激シグナルを提供するように作用するもの（二次細胞質シグナル伝達配列）により媒介されるとして記載される。いくつかの局面において、CARは、細胞質シグナル伝達配列のそのようなクラスの1つまたは両方を含む。
いくつかの局面において、CARは、TCR複合体の一次刺激および/または活性化を調節する一次細胞質シグナル伝達配列を含む。刺激性の方式で作用する一次細胞質シグナル伝達配列は、免疫受容体チロシンベース活性化モチーフまたはITAMとして公知であるシグナル伝達モチーフを含有してもよい。一次細胞質シグナル伝達配列を含有するITAMの例としては、TCRまたはCD3ゼータ、FcRガンマ、CD3ガンマ、CD3デルタおよびCD3イプシロンに由来するものが挙げられる。いくつかの態様において、CAR中の細胞内シグナル伝達領域またはドメインは、CD3ゼータに由来する細胞質シグナル伝達ドメイン、その部分、または配列を含有する。いくつかの態様において、CD3ゼータは、SEQ ID NO:144またはSEQ ID NO:145に記載される核酸配列によりコードされる、SEQ ID NO:143に記載されるアミノ酸の配列を含む。
いくつかの態様において、CARは、T細胞共刺激分子などの共刺激分子のシグナル伝達ドメイン（例えば、細胞内もしくは細胞質シグナル伝達ドメイン）および/または膜貫通部分を含む。例示的な共刺激分子としては、CD28、4-1BB、OX40、DAP10、およびICOSが挙げられる。例えば、共刺激分子は4-1BBに由来することができ、SEQ ID NO:5またはSEQ ID NO:6に記載されるヌクレオチド配列によりコードされる、SEQ ID NO:4に記載されるアミノ酸配列を含むことができる。いくつかの局面において、同じCARは、刺激性または活性化成分（例えば、細胞質シグナル伝達配列）および共刺激成分の両方を含む。
いくつかの態様において、刺激性または活性化成分は1つのCAR内に含まれる一方、共刺激成分は、別の抗原を認識する別のCARにより提供される。いくつかの態様において、CARは、両方とも同じ細胞上に発現される、活性化または刺激性CAR、および共刺激性CARを含む（WO2014/055668を参照）。いくつかの局面において、BCMAターゲティングCARは刺激性または活性化CARであり、他の局面において、それは共刺激性CARである。いくつかの態様において、細胞は、阻害性CAR（iCAR、Fedorov et al.,Sci.Transl.Medicine,5（215）（December,2013）を参照）、例えばBCMA以外の抗原を認識するCARをさらに含み、それにより、BCMAターゲティングCARを通じて送達される刺激性または活性化シグナルは、阻害性CARのそのリガンドへの結合により減少または阻害され、それにより例えばオフターゲット効果が低減される。
ある特定の態様において、細胞内シグナル伝達領域は、CD3（例えば、CD3-ゼータ）細胞内ドメインに連結されたCD28膜貫通およびシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ゼータ細胞内ドメインに連結されたキメラCD28およびCD137（4-1BB、TNFRSF9）共刺激ドメインを含む。
いくつかの態様において、CARは、細胞質部分中に、1つまたは複数の、例えば、2つまたはより多くの、共刺激ドメインおよび刺激性または活性化ドメイン、例えば、一次活性化ドメインを包含する。例示的なCARとしては、CD3-ゼータ、CD28、および4-1BBの細胞内成分が挙げられる。
いくつかの態様において、提供されるキメラ抗原受容体は、（a）B細胞成熟抗原（BCMA）を特異的に認識する細胞外抗原結合ドメイン、例えば本明細書に記載される任意の抗原結合ドメイン、（b）少なくとも125個のアミノ酸の長さのスペーサー、（c）膜貫通ドメイン、および（d）細胞内シグナル伝達領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:116および119のアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:116および119に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含むVH領域およびVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:116のVH領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3であるかまたはそれを含むVH領域、ならびにSEQ ID NO:119のVL領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3であるかまたはそれを含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:97、101および103を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:96、100および103を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:95、99および103を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:94、98および102を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:104、106および108を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:116のアミノ酸配列であるかまたはそれを含むVH領域およびSEQ ID NO:119のアミノ酸配列であるかまたはそれを含むVL領域を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む。
いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達領域は、刺激性細胞質シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、刺激性細胞質シグナル伝達ドメインは、T細胞において一次活性化シグナルを誘導する能力を有し、T細胞受容体（TCR）成分であり、かつ/または免疫受容体チロシンベース活性化モチーフ（ITAM）を含む。いくつかの態様において、刺激性細胞質シグナル伝達ドメインは、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインもしくはその機能的なバリアントもしくはシグナル伝達部分であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、刺激性細胞質ドメインは、ヒトのものであるか、またはヒトタンパク質に由来する。いくつかの態様において、刺激性細胞質ドメイン は、SEQ ID NO:143に記載される配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、刺激性細胞質ドメインをコードする核酸は、SEQ ID NO:144に記載される配列であるか、もしくはそれを含むか、またはそのコドン最適化配列および/もしくは縮重配列である。他の態様において、刺激性細胞質シグナル伝達ドメインをコードする核酸は、SEQ ID NO:145に記載される配列であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達領域は、共刺激シグナル伝達領域をさらに含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、CD28、4-1BBもしくはICOSの細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、ヒトのものであるか、またはヒトタンパク質に由来する。他の態様において、共刺激シグナル伝達領域は、SEQ ID NO:4に記載される配列もしくはSEQ ID NO:4に記載される配列に対して少なくとも90％の配列同一性を呈するアミノ酸の配列であるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、共刺激領域をコードする核酸は、SEQ ID NO:5に記載される配列であるか、もしくはそれを含むか、またはそのコドン最適化配列および/もしくは縮重配列である。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域をコードする核酸は、SEQ ID NO:6に記載される配列を含む。いくつかの態様において、共刺激シグナル伝達領域は、膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達領域との間にある。いくつかの態様において、膜貫通ドメインは、CD4、CD28、もしくはCD8に由来する膜貫通ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインは、CD28に由来する膜貫通ドメインであるか、またはそれを含む。いくつかの態様において、膜貫通ドメインは、ヒトのものであるか、またはヒトタンパク質に由来する。他の態様において、膜貫通ドメインは、SEQ ID NO:138に記載される配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を呈するアミノ酸の配列であるか、またはそれを含む。
キメラ抗原受容体であって、（1）ヒトB細胞成熟抗原（BCMA）に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメインであって、（i）SEQ ID NO:116のVH領域配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変重鎖（VH）、および（ii）SEQ ID NO:119のいずれかのVL領域配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、または99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む可変軽鎖（VL）領域を含む、細胞外抗原結合ドメイン、（2）SEQ ID NO:174に記載されるか、またはスペーサーをコードする核酸が、SEQ ID NO:200に記載される配列であるか、もしくはそれを含む、スペーサー、（3）膜貫通ドメイン、任意でヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに（4）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインおよびT細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達領域を含む、キメラ抗原受容体が提供される。そのようなキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドもまた提供される。
いくつかの態様において、VH領域は、SEQ ID NO:116のVH領域配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、SEQ ID NO:119のVL領域配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むか;またはVH領域は、それぞれSEQ ID NO:97、101および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;VH領域は、それぞれSEQ ID NO:96、100および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;VH領域は、それぞれSEQ ID NO:95、99および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;またはVH領域は、それぞれSEQ ID NO:94、98および102の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域は、それぞれSEQ ID NO:104、106および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む。
キメラ抗原受容体であって、（1）ヒトB細胞成熟抗原（BCMA）に特異的に結合する細胞外抗原結合ドメインであって、SEQ ID NO:116のVH領域配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含む可変重鎖（VH）領域およびSEQ ID NO:119のVL領域配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含む可変軽鎖（VL）領域を含むか;またはVH領域が、SEQ ID NO:116のVH領域配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含み、かつVL領域が、SEQ ID NO:119のVL領域配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むか;またはVH領域が、それぞれSEQ ID NO:97、101および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域が、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;VH領域が、それぞれSEQ ID NO:96、100および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域が、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;VH領域が、それぞれSEQ ID NO:95、99および103の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域が、それぞれSEQ ID NO:105、107および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含むか;またはVH領域が、それぞれSEQ ID NO:94、98および102の配列を含むCDR-H1、CDR-H2、およびCDR-H3を含み、かつVL領域が、それぞれSEQ ID NO:104、106および108の配列を含むCDR-L1、CDR-L2、およびCDR-L3を含む、細胞外抗原結合ドメイン、（2）SEQ ID NO:174に記載されるか、またはスペーサーをコードする核酸が、SEQ ID NO:200に記載される配列であるか、もしくはそれを含む、スペーサー、（3）膜貫通ドメイン、任意でヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに（4）任意でヒト4-1BBまたはヒトCD28由来の、ヒトCD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインおよびT細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞内シグナル伝達領域を含む、キメラ抗原受容体が提供される。そのようなキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドもまた提供される。いくつかの態様において、細胞外抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:116のVH領域配列およびSEQ ID NO:119のVL領域配列を含む。いくつかの態様において、そのような受容体の抗原結合ドメインはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む。いくつかの態様において、キメラ抗原受容体の他のドメイン、領域、または成分は、本明細書に記載される任意のドメイン、領域、または成分を含む。
D. サロゲートマーカー
いくつかの態様において、CAR、またはCARをコードするポリヌクレオチドは、受容体を発現させるための形質導入または操作を確認するために使用され得る、細胞表面マーカー（例えば、切断型細胞表面マーカー）などのサロゲートマーカーをさらに含む。例えば、いくつかの局面において、細胞の検出または選択を可能とするため、そしてまたいくつかの場合において、ADCCによる細胞自殺を促進するために、外因性マーカー遺伝子が、操作型細胞療法との繋がりで利用される。例示的なマーカー遺伝子としては、形質導入された細胞中で関心対象の導入遺伝子（例えば、CARまたはTCR）と共発現され得る切断型上皮増殖因子受容体（EGFRt）が挙げられる（例えば、米国特許第8,802,374号を参照）。EGFRtは、抗体セツキシマブ（Erbitux（登録商標））により認識されるエピトープを含有する。この理由のため、Erbitux（登録商標）は、別の組換え受容体、例えばキメラ抗原受容体（CAR）でも併用操作された細胞を含む、EGFRt構築物で操作された細胞を同定または選択するために使用され得る。追加的に、EGFRtは、細胞療法との繋がりで自殺機構として一般的に使用される。いくつかの局面において、EGFRtが関心対象の導入遺伝子（例えばCARまたはTCR）と細胞中で共発現される場合、それは、ADCCを介して移入された遺伝子改変細胞を低減または枯渇させるためにセツキシマブモノクローナル抗体により標的とされ得る（米国特許第8,802,374号およびLiu et al.,Nature Biotech.2016 April;34（4）:430-434を参照）。重要なことに、tEGFRを使用する自殺殺傷アプローチは、抗体エピトープの利用可能性を要求する。そのようなマーカー遺伝子の別の例は、前立腺特異的膜抗原（PSMA）またはその改変された形態である。PSMAまたはその改変された形態は、PSMAターゲティング分子、例えば抗体またはその抗原結合性フラグメントにより結合または認識されるアミノ酸の配列を含んでもよい。PSMAターゲティング分子は、別の組換え受容体、例えば本明細書において提供されるキメラ抗原受容体（CAR）でも併用操作された細胞を含む、PSMAまたは改変された構築物で操作された細胞を同定または選択するために使用され得る。いくつかの局面において、マーカーは、CD34、神経成長因子受容体（NGFR）、上皮増殖因子受容体（例えば、EGFR）、またはPSMAの全体または部分（例えば、切断された形態）を含む。
例示的なサロゲートマーカーとしては、細胞表面ポリペプチドの切断型、例えば、非機能性であり、かつシグナルもしくは細胞表面ポリペプチドの全長型により通常伝達されるシグナルを伝達しないかまたは伝達できない、かつ/または内部移行しないかまたは内部移行できない、切断型が挙げることができる。例示的な切断型細胞表面ポリペプチドとしては、成長因子または他の受容体の切断型、例えば、切断型ヒト上皮成長因子受容体2（tHER2）、切断型上皮増殖因子受容体（tEGFR、SEQ ID NO:246に示される例示的なtEGFR配列）、もしくは前立腺特異的膜抗原（PSMA）、またはその改変型が挙げられる。tEGFRは、tEGFR構築物により操作されている細胞およびコードされる外因性タンパク質を特定もしくは選択する、かつ/またはコードされる外因性タンパク質を発現する細胞を除去もしくは分離するために用いることができる、抗体セツキシマブ（Erbitux(登録商標)）または他の治療用抗EGFR抗体もしくは結合分子によって認識されるエピトープを含み得る。米国特許第8,802,374号およびLiu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434)を参照。一部の局面では、マーカー、例えばサロゲートマーカーには、CD34、NGFR、CD19、もしくは切断型CD19、例えば、切断型非ヒトCD19、または上皮増殖因子受容体（例えば、tEGFR）の全部または一部（例えば、切断型）が含まれる。一部の態様では、マーカーは、蛍光タンパク質、例えば、緑色蛍光タンパク質（GFP）、強化緑色蛍光タンパク質（EGFP）、例えばスーパーフォールド（super-fold）GFP（sfGFP）、赤色蛍光タンパク質（RFP）、例えばtdTomato、mCherry、mStrawberry、AsRed2、DsRedまたはDsRed2、シアン蛍光タンパク質（CFP）、青緑色蛍光タンパク質（BFP）、強化青色蛍光タンパク質（EBFP）、および黄色蛍光タンパク質（YFP）、ならびにこれらの蛍光タンパク質の種バリアント、単量体バリアント、およびコドン最適化および/または強化バリアントを含むそれらのバリアントであるか、またはそれらを含む。一部の態様では、マーカーは、酵素、例えばルシフェラーゼ、大腸菌（E. coli）由来のLacZ遺伝子、アルカリホスファターゼ、分泌型胚性アルカリホスファターゼ（secreted embryonic alkaline phosphatase）（SEAP）、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）であるかまたはそれを含む。例示的な発光レポーター遺伝子としては、ルシフェラーゼ（luc）、β-ガラクトシダーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ（CAT）、β-グルクロニダーゼ（GUS）、またはそのバリアントが挙げられる。
一部の態様では、マーカーは選択マーカーである。一部の態様では、選択マーカーは、外因性の作用物質または薬物に対する耐性を付与するポリペプチドであるかまたはそれを含む。一部の態様では、選択マーカーは抗生物質耐性遺伝子である。一部の態様では、選択マーカーは、哺乳類細胞に対して抗生物質耐性を付与する抗生物質耐性遺伝子である。一部の態様では、選択マーカーは、ピューロマイシン耐性遺伝子、ハイグロマイシン耐性遺伝子、ブラストサイジン耐性遺伝子、ネオマイシン耐性遺伝子、ジェネテシン耐性遺伝子、もしくはゼオシン耐性遺伝子、またはその改変型であるかまたはそれを含む。
いくつかの態様において、マーカーをコードする核酸は、切断可能なリンカー配列、例えばT2A等のリンカー配列をコードするポリヌクレオチドに機能的に連結されている。国際公開公報第2014031687号参照。いくつかの態様において、T2Aリボソームスイッチによって分離されるCARおよびサロゲートマーカーをコードする構築体の導入は、同じ構築体から2つのタンパク質を発現することができ、その結果、サロゲートマーカーは、そのような構築体を発現する細胞を検出するためのマーカーとして使用することができる。いくつかの態様において、サロゲートマーカー、および任意でリンカー配列は、国際公開公報第2014031687号に開示されているいずれかであり得る。例えば、マーカーは、2A切断可能リンカー配列（例えば、本明細書中の他の箇所に記載されているT2A、P2A、E2A、またはF2A切断可能リンカー）等のリンカー配列に連結されていてもよい切断型EGFR（tEGFR）またはPSMAであり得る。切断型EGFRサロゲートマーカーについての例示的なポリペプチドは、SEQ ID NO:246に示されるアミノ酸の配列、またはSEQ ID NO:246と少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、もしくはそれを超える配列同一性を示すアミノ酸の配列を含む。いくつかの態様において、スペーサーは、グリシン-セリンリッチ配列または公知のフレキシブルリンカー等の他のフレキシブルリンカーであるか、またはこれを含む。
いくつかの態様において、マーカーは、T細胞上に天然には見出されないか、またはT細胞の表面上に天然には見出されない分子、例えば細胞表面タンパク質、またはその一部である。
いくつかの態様において、分子は、非自己分子、例えば非自己タンパク質、すなわち、細胞が養子移入されることとなる宿主の免疫系によって「自己」として認識されない分子である。
いくつかの態様において、マーカーは、治療機能を果たさず、かつ/または遺伝子操作についての、例えばうまく操作された細胞を選択するためのマーカーとして使用される以外の効果をもたらさない。他の態様において、マーカーは、養子移入およびリガンドとの遭遇後に細胞の応答を増強かつ/または減衰させるような、共刺激または免疫チェックポイント分子等の、インビボで遭遇する細胞に対するリガンド等の、普通であれば何らかの所望の効果を発揮する治療分子または分子であり得る。
場合によっては、CARは、第1世代CAR、第2世代CAR、および/または第3世代CARと称される。いくつかの局面において、第1世代CARは、抗原結合の際に、または抗原結合に応答してCD3鎖誘導シグナルを単独で提供するものである;いくつかの局面において、第2世代CARは、そのようなシグナルおよび共刺激シグナルを提供するもの、例えば、CD28またはCD137（すなわち4-1BB）等の共刺激受容体由来の細胞内シグナル伝達ドメインを含むものである;いくつかの局面において、いくつかの局面における第3世代CARは、異なる共刺激受容体の複数の共刺激ドメインを含むものである。
いくつかの態様において、キメラ抗原受容体は、本明細書中に記載される抗体または断片を含有する細胞外部分を含む。いくつかの局面において、キメラ抗原受容体は、本明細書中に記載される抗体または断片を含有する細胞外部分、および細胞内シグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、抗体または断片は、VH領域のみを含むscFvまたは単一ドメイン抗体を含み、細胞内シグナル伝達ドメインはITAMを含有する。いくつかの局面において、細胞内シグナル伝達ドメインは、CD3ゼータ（CD3ζ）鎖のゼータ鎖のシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、キメラ抗原受容体は、細胞外ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとを連結する膜貫通ドメインを含む。いくつかの局面において、膜貫通ドメインは、CD28の膜貫通部分を含有する。細胞外ドメインおよび膜貫通は、直接的または間接的に連結され得る。いくつかの態様において、細胞外ドメインおよび膜貫通は、本明細書中に記載されるいずれか等のスペーサーによって連結されている。いくつかの態様において、キメラ抗原受容体は、共刺激分子（例えば、T細胞共刺激分子）の細胞内ドメインを、例えば膜貫通ドメインと細胞内シグナル伝達ドメインとの間に、含有する。いくつかの局面において、T細胞共刺激分子は、CD28または4-1BBである。
いくつかの態様において、受容体（例えばCAR）の膜貫通ドメインは、ヒトCD28の膜貫通ドメインまたはそのバリアント、例えばヒトCD28の27アミノ酸膜貫通ドメイン（受託番号:P10747.1）である。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトCD28の細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能的バリアント、例えばその41アミノ酸ドメインおよび/またはそのような、天然CD28タンパク質の186～187位にてLLからGGへの置換を有するドメインを含む。いくつかの態様において、細胞内ドメインは、4-1BBの細胞内共刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能的バリアント、例えばヒト4-1BBの42アミノ酸細胞質ドメイン（受託番号Q07011.1）を含む。いくつかの態様において、細胞内シグナル伝達ドメインは、ヒトCD3ζのアイソフォーム3の112AA細胞質ドメイン（受託番号:P20963.2）、または米国特許第7,446,190号に記載されているCD3ゼータシグナル伝達ドメイン等のヒトCD3ゼータ刺激シグナル伝達ドメインまたはその機能的バリアントを含む。
例えば、いくつかの態様において、CARは、本明細書中に記載される、sdAbおよびscFvが挙げられるヒトBCMA抗体のいずれか等のBCMA抗体または断片、Igヒンジ含有スペーサーのいずれか等のスペーサー、CD28膜貫通ドメイン、CD28細胞内シグナル伝達ドメイン、およびCD3ゼータシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、CARは、本明細書中に記載される、sdAbおよびscFvが挙げられるヒトBCMA抗体のいずれか等のBCMA抗体または断片、Igヒンジ含有スペーサーのいずれか等のスペーサー、CD28膜貫通ドメイン、4-1BB細胞内シグナル伝達ドメイン、およびCD3ゼータシグナル伝達ドメインを含む。いくつかの態様において、そのようなCAR構築体は、例えばCARの下流側に、T2Aリボソームスキップエレメントおよび/またはtEGFR配列さらに含む。
特定の態様において、多重特異性CAR等の多重特異性組換え受容体は、例えば、二重特異性抗体、多重特異性単鎖抗体、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、およびテトラボディ、タンデムジ-scFv、ならびにタンデムトリ-scFvを含む多重特異性抗体のいずれか、例えば上記セクションI.A.に記載のいずれかを含有し得る。
本明細書において提供される態様において用いられる他の例示的なBCMA特異的CARとしては、イデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel,bb2121;Raje et al.N Engl J Med.2019.380:1726-1737）、JNJ-4528（Madduri et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:577）/LCAR-B38M（Wang et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:579）、P-BCMA-101（Costello et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:3184）、bb21217（Berdeja et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:927）、CT103A（Li et al.Blood.2019;134（Supplement＿1）:929）、CT053（Ji et al.,Blood.2019;134（Supplement＿1）:4435）、MTV273,CART-BCMA,C-CAR088（Yao et al.Blood.2019;134（Supplement＿1）:50）または、例えば、国際公開第2018/085690号;国際公開第2016/094304号;国際公開第2018/085690号;国際公開第2016/014789号;国際公開第2019/108900号;国際公開第2018/014038号;国際公開第2017/173256号;国際公開第2016/090320号、国際公開第2016/090327号、国際公開第2019/090003号;国際公開第2017/025038号;米国特許出願公開第2016/0046724号;米国特許出願公開第2017/0183418号;Fu et al.,Blood.2019;134:3154;Cohen et al.J.Clin.Invest.2019.129（6）:2210-2221;Ali et al.,Blood 2016;128（13）:1688 1700;Borrello et al.,J Clin Invest.2019;129（6）:2175-2177;Lin et al.Molecular Cancer（2019）18:154;およびSteiner et al.,（2020）memo-Magazine of European Medical Oncology 13:43-49）に記載されている任意のBCMA指向性CAR T療法が挙げられる。
いくつかの態様において、抗BCMA CARは、それぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;ならびに/またはSEQ ID NO:125に示される配列を含むVH領域およびSEQ ID NO:127に示される配列を含むVL領域;ならびに/またはSEQ ID NO:265に示される配列のアミノ酸残基22～493、および/もしくはSEQ ID NO:266によってコードされる配列を含む。いくつかの局面において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:265に示される配列の成熟ポリペプチド配列を含む。いくつかの態様において、抗BCMA CARは、それぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域;ならびにそれぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;ならびに/またはSEQ ID NO:125に示される配列を含むVH領域およびSEQ ID NO:127に示される配列を含むVL領域;ならびに/またはSEQ ID NO:263に示される配列のアミノ酸残基22～493、および/もしくはSEQ ID NO:264に示される配列を含む。いくつかの局面において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:263に示される配列の成熟ポリペプチド配列を含む。いくつかの局面において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:312に示される配列の成熟ポリペプチド配列を含む。いくつかの態様において、BCMA特異的CARは、イデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel、bb2121）（例えば、Raje et al.N Engl J Med.2019.380:1726-1737;国際公開第2018/085690号;国際公開第2016/094304号;国際公開第2018/085690号または国際公開第2016/014789号参照）であるか、またはイデカブタゲンビクルユーセル（Ide-cel、bb2121）を含む。いくつかの態様において、BCMA特異的CARは、参照によりその全体が本明細書に組み入れられる、国際公開第2018/085690号;国際公開第2016/094304号;国際公開第2018/085690号または国際公開第2016/014789号に記載されているものを含む。
いくつかの態様において、抗BCMA CARは、二重エピトープ結合CAR、例えばBCMA上の異なるエピトープに指向された2つの異なる単一ドメイン抗体、例えばVHHを含むCARなどの多価CARである。いくつかの局面において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:303～309に示される配列の中から選択されるBCMAの1つまたは複数のエピトープに結合する。いくつかの態様において、BCMA特異的CARは、JNJ-4528（LCAR-B38Mとも呼ばれる）（例えば、Madduri et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:577;Wang et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:579;Xu et al.PNAS 2019.116（19）9543-9551;Zhao et al.,Journal of Hematology＆Oncology 11:141（2018）;国際公開第2018/028647号;国際公開第2017/025038号参照）であるかまたはJNJ-4528（LCAR-B38Mとも呼ばれる）を含む。いくつかの態様において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:265～302の任意の1つに示される配列の残基22において始まり末端までのアミノ酸残基、および/またはSEQ ID NO:265～302の任意の1つに示される配列の成熟ポリペプチド配列、および/またはSEQ ID NO:265～302の任意の1つに示されるCARをコードするヌクレオチドの配列によってコードされるCAR;および/または参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開第2018/028647号もしくは国際公開第2017/025038号に記載されている任意のものを含む。いくつかの態様において、抗BCMA CARは、SEQ ID NO:265～302の任意の1つに示される配列の残基22において始まり末端までのアミノ酸残基を含む。
いくつかの局面において、BCMA特異的CARは、単鎖可変フラグメント（scFv）の代わりに、細胞外結合ドメインとしてセンチリンを含む。いくつかの局面において、センチリンは、高い特異性および広い範囲の結合親和性を有するが、scFvよりも小さい改変されたフィブロネクチンIII型（FN3）ドメインタンパク質である（例えば、Goldberg et al.,Protein Eng Des Sel.2016 Dec;29（12）:563-572を参照）。いくつかの態様において、BCMA特異的CAR P-BCMA-101（Costello et al.Blood.2019.134（Supplement＿1）:3184;Fu et al.,Blood.2019;134:3154;国際公開第2018/014038号および国際公開第2019/173636号参照）。いくつかの態様において、BCMA特異的CARは、SEQ ID NO:310に示される配列のアミノ酸残基22～334、および/またはSEQ ID NO:310に示される配列の成熟ポリペプチド配列、および/またはSEQ ID NO:310の任意の1つに示されるCARをコードするヌクレオチドの配列によってコードされるCAR;および/または参照によりその全体が本明細書に組み入れられる国際公開第2018/014038号もしくは国際公開第2019/173636号に記載されている任意のものを含む。いくつかの態様において、BCMA特異的CARは、SEQ ID NO:310に示される配列のアミノ酸残基22～334を含む。
E. BCMA結合性組換え受容体の例示的な特徴
いくつかの局面において、操作された細胞によって発現される組換え受容体中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、参照抗体などの他の抗体によって特異的に結合されるエピトープと類似するもしくは重複するエピトープ、もしくは参照抗体などの他の抗体によって特異的に結合されるエピトープとは異なるエピトープなどの特定のエピトープを認識することもしくは結合すること、参照抗体などの他の抗体と結合について競合する能力、および/または特定の結合親和性を含む結合特性など、1つまたは複数の特定の機能的特徴を有する。他の態様において、組換え受容体中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、参照抗体などの他の抗体によって特異的に結合されるエピトープとは異なるかまたは重複しないエピトープを認識する、例えば特異的に認識する、または結合する、例えば特異的に結合する。例えば、組換え受容体中の抗体によって特異的に結合されるエピトープは、参照抗体などの他の抗体によって特異的に結合されるエピトープとは異なる。いくつかの態様において、抗体およびその抗原結合性フラグメントは、参照抗体などの他の抗体と結合に関して直接競合しないか、またはより低い程度で競合する。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、BCMAタンパク質を特異的に認識するかまたはBCMAタンパク質に特異的に結合する。態様のいずれにおいても、BCMAを特異的に認識する組換え受容体中の抗体または抗原結合性フラグメントは、BCMAを特異的に結合する。本明細書で提供されるいくつかの態様において、BCMAタンパク質は、ヒトBCMA、マウスBCMAタンパク質、または非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）BCMAタンパク質を指す。本明細書の態様のいずれかのいくつかの態様において、BCMAタンパク質はヒトBCMAタンパク質を指す。抗体または組換え受容体がBCMAタンパク質に結合する、またはBCMAタンパク質に特異的に結合するという観察は、抗体または組換え受容体がすべての種のBCMAタンパク質に結合することを必ずしも意味しない。例えば、いくつかの態様において、BCMAタンパク質に特異的に結合する、および/もしくはBCMAタンパク質への結合について参照抗体と競合する、ならびに/または特定の親和性で結合する、もしくは特定の程度で競合する能力などの、BCMAタンパク質への結合の特徴は、いくつかの態様において、ヒトBCMAタンパク質に関する能力を指し、抗体は、マウスなどの別の種のBCMAタンパク質に関してこの特徴を有していなくてもよい。
いくつかの態様において、抗体または抗原結合性フラグメントは、特定のスプライスバリアントまたは対立遺伝子バリアントなどの、BCMAの天然に存在するバリアントを含む哺乳動物BCMAタンパク質に結合する。
いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:164（GenBank番号BAB60895.1）もしくはSEQ ID NO:165（NCBI番号NP＿001183.2）のアミノ酸配列を含むヒトBCMAタンパク質またはその対立遺伝子バリアントもしくはスプライスバリアントなどのヒトBCMAタンパク質のエピトープまたは領域になど、ヒトBCMAタンパク質に特異的に結合する。一態様において、ヒトBCMAタンパク質は、転写物バリアントによってコードされるか、またはSEQ ID NO:163に示されるアミノ酸の配列を有するアイソフォームである。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:147（GenBank番号EHH60172.1）に示されるカニクイザルBCMAタンパク質などのカニクイザルBCMAタンパク質に結合する。いくつかの態様において、抗体はヒトBCMAに結合するが、SEQ ID NO:147（GenBank番号EHH60172.1）に示されるカニクイザルBCMAタンパク質などのカニクイザルBCMAタンパク質には結合しないか、またはより低いレベルもしくは程度もしくは親和性で結合する。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:179（NCBI番号NP＿035738.1）に示されるマウスBCMAタンパク質などのマウスBCMAタンパク質に結合しないか、またはより低いレベルもしくは程度もしくは親和性で結合する。いくつかの態様において、抗体は、SEQ ID NO:179（NCBI番号NP＿035738.1）に示されるマウスBCMAタンパク質などのマウスBCMAタンパク質に結合する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトBCMAタンパク質および/またはカニクイザルBCMAタンパク質への抗体の結合よりも低い親和性で、マウスBCMAタンパク質に結合する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトBCMAタンパク質への抗体の結合より低い親和性で、マウスBCMAタンパク質および/またはカニクイザルBCMAタンパク質に結合する。いくつかの態様において、抗体は、ヒトBCMAタンパク質への抗体の結合と比較して類似の結合親和性でマウスBCMAタンパク質および/またはカニクイザルBCMAタンパク質に結合する。
いくつかの態様において、提供される抗原結合ドメインまたはCARは、可溶性BCMAと比較して、膜結合型BCMAへの優先的な結合を示す。いくつかの態様において、提供される抗原結合ドメインまたはCARは、可溶性BCMAと比較して、膜結合型BCMAに対してより大きな結合親和性を示す。
一態様において、非ヒトBCMAタンパク質または他の非BCMAタンパク質などの無関係な非BCMAタンパク質への抗BCMA抗体または抗原結合ドメインまたはCARの結合の程度は、例えばラジオイムノアッセイ（RIA）によって測定した場合に、ヒトBCMAタンパク質またはヒト膜結合型BCMAへの抗体または抗原結合ドメインまたはCARの結合の10％未満または約10％未満である。いくつかの態様において、組換え受容体中の抗体または抗原結合ドメインとしては、マウスBCMAタンパク質への結合がヒトBCMAタンパク質への抗体の結合の10％未満または10％または約10％である抗体または抗原結合ドメインまたは組換え受容体がある。いくつかの態様において、組換え受容体中の抗体または抗原結合ドメインとしては、カニクイザルBCMAタンパク質への結合がヒトBCMAタンパク質への抗体の結合の10％未満または10％または約10％である抗体がある。いくつかの態様において、組換え受容体中の抗体または抗原結合ドメインとしては、カニクイザルBCMAタンパク質および/またはマウスBCMAタンパク質への結合がヒトBCMAタンパク質への抗体の結合と類似するかまたは概ね同じである抗体がある。いくつかの態様において、組換え受容体中の抗体または抗原結合ドメインとしては、可溶性BCMAタンパク質への結合が膜結合型BCMAタンパク質への抗体の結合の10％未満または10％または約10％である抗体または抗原結合ドメインまたは組換え受容体がある。
いくつかの態様において、抗体は、BCMAタンパク質、例えばヒトBCMA、マウスBCMAタンパク質、もしくは非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）BCMAタンパク質に特異的に結合し、および/もしくは参照抗体とこれらへの結合について競合し、ならびに/または特定の親和性でこれらに結合するか、もしくは特定の程度まで競合する。
いくつかの態様において、組換え受容体中の抗体は、いくつかの公知の方法のいずれかによって測定されるように、少なくともある特定の親和性で、ヒトBCMAタンパク質などのBCMAタンパク質を結合することができる。いくつかの態様において、親和性は、平衡解離定数（KD）によって表され、いくつかの態様において、親和性はEC50によって表される。
結合親和性を評価するための、および/または抗体もしくはそのフラグメントまたは組換え受容体が特定のリガンド（例えば、BCMAタンパク質などの抗原）に特異的に結合するかどうかを判定するための様々なアッセイが公知である。例えば、当技術分野で周知であるいくつかの結合アッセイのいずれかを使用することによって、抗原、例えば、ヒトBCMAまたはカニクイザルBCMAまたはマウスBCMAなどのBCMAに対する抗体または組換え受容体の結合親和性を決定することは当業者のレベルの範囲内である。例えば、いくつかの態様において、表面プラズモン共鳴（SPR）分析を使用して（例えば、Scatchard et al.,Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660、1949;Wilson,Science 295:2103,2002;Wolff et al.,Cancer Res.53:2560,1993;および米国特許第5,283,173号、米国特許第5,468,614号または同等のもの）、2つのタンパク質（例えば、抗体またはそのフラグメントおよびBCMAタンパク質などの抗原）間の複合体の結合動態および定数を決定するために、BIAcore（登録商標）機器を使用することができる。
SPRは、分子が表面に結合するまたは表面から解離する際のセンサ表面における分子の濃度の変化を測定する。SPRシグナルの変化は、表面に近い質量濃度の変化に正比例し、それによって2つの分子間の結合動態の測定を可能にする。複合体の解離定数は、緩衝液がチップ上を通過するときの時間に対する屈折率の変化をモニタリングすることによって決定することができる。あるタンパク質の別のタンパク質への結合を測定するための他の適切なアッセイとしては、例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ELISA）およびラジオイムノアッセイ（RIA）などのイムノアッセイ、または蛍光、UV吸収、円二色性もしくは核磁気共鳴（NMR）を通じてタンパク質の分光学的特性もしくは光学特性の変化をモニタリングすることによる結合の決定が挙げられる。他の例示的なアッセイとしては、ウエスタンブロット、ELISA、分析的超遠心分離、分光法、フローサイトメトリー、配列決定および発現されたポリヌクレオチドの検出またはタンパク質の結合のための他の方法が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、CARの抗体もしくはそのフラグメントまたは抗原結合ドメインは、105M-1に等しいまたは105M-1を超える親和性またはKA（すなわち、1/Mの単位での特定の結合相互作用の平衡会合定数;二分子相互作用を仮定して、この会合反応のオン速度［konまたはka］のオフ速度［koffまたはkd］に対する比に等しい）で、抗原、例えばBCMAタンパク質またはその中のエピトープに結合する、例えば特異的に結合する。いくつかの態様において、CARの抗体もしくはそのフラグメントまたは抗原結合ドメインは、10-5Mに等しいまたは10-5M未満のKD（すなわち、M単位での特定の結合相互作用の平衡解離定数;二分子相互作用を仮定して、この会合反応のオフ速度［koffまたはkd］のオン速度［konまたはka］に対する比に等しい）で、ペプチドエピトープに対する結合親和性を示す。例えば、平衡解離定数KDは、10-7M～10-11M、10-8M～10-10M、または10-9M～10-10Mなど、10-5M～10-13Mの範囲である。オン速度（会合速度定数;konまたはka;1/M秒の単位）およびオフ速度（解離速度定数;koffまたはkd;1/秒の単位）は、当技術分野で公知のアッセイ方法のいずれか、例えば表面プラズモン共鳴（SPR）を用いて決定することができる。
いくつかの態様において、ヒトBCMAタンパク質などの約BCMAタンパク質に対するCARの抗体（例えば、抗原結合性フラグメント）または抗原結合ドメインの結合親和性（EC50）および/または解離定数は、0.01nM～約500nM、0.01nM～約400nM、0.01nM～約100nM、0.01nM～約50nM、0.01nM～約10nM、0.01nM～約1nM、0.01nM～約0.1nM、0.1nM～約500nM、0.1nM～約400nM、0.1nM～約100nM、0.1nM～約50nM、0.1nM～約10nM、0.1nM～約1nM、0.5nM～約200nM、1nM～約500nM、1nM～約100nM、1nM～約50nM、1nM～約10nM、2nM～約50nM、10nM～約500nM、10nM～約100nM、10nM～約50nM、50nM～約500nM、50nM～約100nMもしくは100nM～約500nMまたは約0.01nM～約500nM、約0.01nM～約400nM、約0.01nM～約100nM、約0.01nM～約50nM、約0.01nM～約10nM、約0.01nM～約1nM、約0.01nM～約0.1nM、約0.1nM～約500nM、約0.1nM～約400nM、約0.1nM～約100nM、約0.1nM～約50nM、約0.1nM～約10nM、約0.1nM～約1nM、約0.5nM～約200nM、約1nM～約500nM、約1nM～約100nM、約1nM～約50nM、約1nM～約10nM、約2nM～約50nM、約10nM～約500nM、約10nM～約100nM、約10nM～約50nM、約50nM～約500nM、約50nM～約100nMもしくは約100nM～約500nMである。ある特定の態様において、ヒトBCMAタンパク質などのBCMAタンパク質に対する抗体の結合親和性（EC50）および/または平衡解離定数KDは、400nM、300nM、200nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または400nM、300nM、200nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満または約400nM、300nM、200nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満である。いくつかの態様において、抗体は、ナノモル濃度以下の結合親和性、例えば約1nM未満、例えば約0.9nM未満、約0.8nM未満、約0.7nM未満、約0.6nM未満、約0.5nM未満、約0.4nM未満、約0.3nM未満、約0.2nM未満または約0.1nM未満またはそれ未満の結合親和性で、ヒトBCMAタンパク質などのBCMAタンパク質に結合する。
いくつかの態様において、結合親和性は、高親和性としてまたは低親和性として分類され得る。いくつかの場合において、低～中親和性結合を示す抗体もしくはそのフラグメントまたは組換え受容体もしくは組換え受容体、例えばCARの抗原結合ドメイン、例えばCARは、最大107M-1、最大106M-1、最大105M-1のKAを示す。いくつかの場合において、特定のエピトープへの高親和性結合を示す抗体もしくはそのフラグメントまたは組換え受容体は、少なくとも107M-1、少なくとも108M-1、少なくとも109M-1、少なくとも1010M-1、少なくとも1011M-1、少なくとも1012M-1または少なくとも1013M-1のKAで、このようなエピトープと相互作用する。いくつかの態様において、BCMAタンパク質に対する組換え受容体、例えばCARの抗BCMA抗体もしくはそのフラグメントまたは抗原結合ドメインの結合親和性（EC50）および/または平衡解離定数KDは、0.01nM～約1μM、0.1nM～1μM、1nM～1μM、1nM～500nM、1nM～100nM、1nM～50nM、1nM～10nM、10nM～500nM、10nM～100nM、10nM～50nM、50nM～500nM、50nM～100nMもしくは100nM～500nMまたは約0.01nM～約1μM、約0.1nM～1μM、約1nM～1μM、約1nM～500nM、約1nM～100nM、約1nM～50nM、約1nM～10nM、約10nM～500nM、約10nM～100nM、約10nM～50nM、約50nM～500nM、約50nM～100nMもしくは約100nM～500nMである。ある特定の態様において、BCMAタンパク質に対する組換え受容体、例えばCARの抗BCMA抗体もしくはそのフラグメントまたは抗原結合ドメインの結合親和性（EC50）および/または平衡解離定数の解離定数KDは、1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満または約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満である。特定の抗体の親和性の程度は、参照抗体などの公知の抗体の親和性と比較することができる。
いくつかの態様において、種交差反応性を決定するために、異なる抗原、例えば異なる種由来のBCMAタンパク質に対する、組換え受容体、例えばCARの抗BCMA抗体または抗原結合ドメインの結合親和性を比較することができる。例えば、種交差反応性は、高い交差反応性または低い交差反応性として分類することができる。いくつかの態様において、種交差反応性を決定するために、異なる抗原、例えばヒト、カニクイザルまたはマウスなどの異なる種からのBCMAタンパク質についての平衡解離定数KDを比較することができる。いくつかの態様において、CARの抗BCMA抗体または抗原結合ドメインの種交差反応性は高くなり得る、例えば、抗BCMA抗体は、ヒトBCMAおよび種バリアントBCMAに同様の程度で結合する、例えば、ヒトBCMAに対するKDと種バリアントBCMAに対するKDの比は1または約1である。いくつかの態様において、CARの抗BCMA抗体または抗原結合ドメインの種交差反応性は低くなり得る、例えば、抗BCMA抗体はヒトBCMAに対して高い親和性を有するが、種バリアントBCMAに対して低い親和性を有するか、またはその逆である。例えば、種バリアントBCMAに対するKDとヒトBCMAに対するKDの比は、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000またはそれ以上を超え、抗BCMA抗体は低い種交差反応性を有する。種交差反応性の程度は、参照抗体などの公知の抗体の種交差反応性と比較することができる。
いくつかの態様において、特定の形態またはトポロジカーのタイプに対する優先的な結合または相対的親和性を決定するために、抗原、例えば可溶性BCMAタンパク質の異なる形態またはトポロジーのタイプに対するCARの抗BCMA抗体または抗原結合ドメインの結合親和性が、膜結合型BCMAに対する結合親和性と比較される。例えば、いくつかの局面において、提供される抗BCMA抗体または抗原結合ドメインは、可溶性BCMAと比較して膜結合型BCMAに対する優先的結合を示すことができ、および/または可溶性BCMAと比較して膜結合型BCMAに対するより大きな結合親和性を示すことができる。いくつかの態様において、優先的結合または相対的結合親和性を決定するために、BCMAタンパク質の異なる形態またはトポロジーのタイプに対する平衡解離定数KDを比較することができる。いくつかの態様において、可溶性BCMAと比較した膜結合型BCMAへの優先的結合または相対的親和性は高くなり得る。例えば、いくつかの場合において、可溶性BCMAに対するKDと膜結合型BCMAに対するKDの比は、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000を超えるかまたはそれ以上であり、抗体または抗原結合ドメインは、膜結合型BCMAに対して優先的に結合するか、またはより高い結合親和性を有する。いくつかの場合において、膜結合型BCMAに対するKAと可溶性BCMAに対するKAの比は、10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000を超えるかまたはそれ以上であり、抗体または抗原結合ドメインは、膜結合型BCMAに対して優先的に結合するか、またはより高い結合親和性を有する。いくつかの場合において、CARの抗体または抗原結合ドメインは、可溶性BCMAおよび膜結合型BCMAを同様の程度で結合する、例えば、可溶性BCMAに対するKDと膜結合型BCMAに対するKDの比は、1または約1である。いくつかの場合において、CARの抗体または抗原結合ドメインは、可溶性BCMAおよび膜結合型BCMAを同様の程度で結合する、例えば、可溶性BCMAに対するKAと膜結合型BCMAに対するKAの比は、1または約1である。膜結合型BCMAまたは可溶性BCMAに対する優先的結合または相対的親和性の程度は、参照抗体などの公知の抗体のものと比較することができる。
いくつかの態様において、組換え受容体、例えばCAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトBCMAタンパク質および非ヒトBCMAタンパク質または他の非BCMAタンパク質に類似の程度で結合する。例えば、いくつかの態様において、CARの抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたは抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:164（GenBank番号BAB60895.1）もしくはSEQ ID NO:165（NCBI番号NP＿001183.2）のアミノ酸配列を含むヒトBCMAタンパク質またはその対立遺伝子バリアントもしくはスプライスバリアントなどのヒトBCMAタンパク質に、平衡解離定数（KD）で結合し、SEQ ID NO:147（GenBank番号EHH60172.1）に示されるカニクイザルBCMAタンパク質などのカニクイザルBCMAなどの非ヒトBCMAに、類似または概ね同じ、または2倍未満異なる、または5倍未満異なるKDで結合する。
いくつかの態様において、組換え受容体、例えばCAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、可溶性BCMAタンパク質および膜結合型BCMAタンパク質に、同じ程度で、類似または概ね同じ、または2倍未満異なる、または5倍未満異なる平衡解離定数（KD）で結合する。
例えば、いくつかの態様において、組換え受容体、例えばCAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満または約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満のKDでヒトBCMAに結合し、約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満または約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満のKDでカニクイザルBCMAに結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nMもしくはそれ未満または1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満または約1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nMもしくは1nM未満もしくはそれ未満のKDでマウスBCMAタンパク質に結合する。いくつかの態様において、組換え受容体、例えばCAR中の抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトBCMA、カニクイザルBCMAおよびマウスBCMAに高親和性で結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトBCMAおよびカニクイザルBCMAに高親和性で結合し、マウスBCMAに低親和性で結合する。いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントは、ヒトBCMAおよび他の種からのBCMA、またはBCMAタンパク質の他のバリアントに高親和性で結合する。
いくつかの態様において、抗体またはその抗原結合性フラグメントの抗原、例えばヒトBCMAタンパク質などのBCMAタンパク質への結合能力または結合能を決定するために、特定の表面プラズモン共鳴（SPR）条件を使用して測定される総結合能（Rmax）が使用される。SPR分析の場合、「リガンド」は、センサの表面上の固定化された標的分子、例えばBCMAタンパク質であり、「分析物」は、「リガンド」への結合に関して試験される分子、例えば抗体である。例えば、「分析物」は、BCMAタンパク質に結合する抗体またはその抗原結合性フラグメントのいずれでもあり得る。SPRにおける特定のリガンドと分析物の対について、Rmaxは、特定の条件に対して1:1の結合化学量論モデルを仮定して決定することができる。結合能（Rmax）は、以下の式を使用して決定した:Rmax（RU）＝（分析物分子量）/（リガンド分子量）×固定化されたリガンドレベル（RU）。例えば、特定のSPR条件では、抗体またはその抗原結合性フラグメントのいずれかと、ヒトBCMAまたはカニクイザルBCMAなどのBCMAタンパク質との間の結合のRmaxは、少なくとも50共鳴単位（RU）または少なくとも約50共鳴単位（RU）、例えば約25RU、20RU、15RU、10RU、5RUまたは1RUである。
いくつかの態様において、CAR中のヒト抗体などの抗体は、一般に細胞外エピトープまたは領域などのBCMAタンパク質の特定のエピトープまたは領域に特異的に結合する。BCMAタンパク質は、細胞外ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインを含有するIII型膜184アミノ酸タンパク質である。SEQ ID NO:164に示されるヒトBCMAアミノ酸配列に関して、細胞外ドメインはアミノ酸1～54に対応し、アミノ酸55～77は膜貫通ドメインに対応し、アミノ酸78～184は細胞質ドメインに対応する。
組換え受容体、例えばCARとしては、抗原依存性活性またはシグナル伝達、すなわち抗原、例えばBCMAの非存在下で測定可能に存在しないかまたはバックグラウンドレベルで存在するシグナル伝達活性を示す組換え受容体、例えばCARがある。したがって、いくつかの局面において、組換え受容体、例えばCARは、存在する抗原、例えばBCMAの非存在下において、持続性シグナル伝達もしくは抗原非依存的な活性もしくはシグナル伝達を示さないか、またはバックグラウンドレベルもしくは許容可能なレベルもしくは低いレベルを超えない持続性シグナル伝達または抗原非依存性活性もしくはシグナル伝達を示す。いくつかの態様において、提供される抗BCMA CAR発現細胞は、細胞傷害活性、サイトカイン産生および増殖する能力を含む生物学的活性または機能を示す。
いくつかの態様において、細胞傷害活性などのキメラ受容体の生物学的活性または機能的活性を、いくつかの公知の方法のいずれをも使用して測定することができる。活性は、インビトロまたはインビボのいずれかで評価または決定することができる。いくつかの態様において、細胞が対象（例えば、ヒト）に投与されると、活性を評価することができる。評価すべきパラメーターには、例えばインビボで、例えばイメージングによって、またはエクスビボで、例えばELISAもしくはフローサイトメトリーによって、操作されたまたは天然のT細胞または他の免疫細胞の抗原への特異的結合が含まれる。ある特定の態様において、操作された細胞が標的細胞を破壊する能力は、例えば、Kochenderfer et al.,J.Immunotherapy,32（7）:689-702（2009）およびHerman et al.J.Immunological Methods,285（1）:25-40（2004）に記載されている細胞傷害性アッセイなどの当技術分野で公知の任意の適切な方法を使用して測定することができる。ある特定の態様において、細胞の生物学的活性はまた、ある特定のサイトカイン、例えば、インターロイキン-2（IL-2）、インターフェロン-ガンマ（IFNγ）、インターロイキン-4（IL-4）、TNF-アルファ（TNFα）、インターロイキン-6（IL-6）、インターロイキン-10（IL-10）、インターロイキン-12（IL-12）、顆粒球-マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）、CD107aおよび/またはTGF-ベータ（TGFβ）の発現および/または分泌をアッセイすることによって測定され得る。サイトカインを測定するためのアッセイは当技術分野で周知であり、ELISA、細胞内サイトカイン染色、サイトメトリビーズアレイ、RT-PCR、ELISPOT、フローサイトメトリー、および関連するサイトカインに応答性の細胞を試験試料の存在下で応答性（例えば、増殖）について試験するバイオアッセイが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの局面において、生物学的活性は、腫瘍負荷量または腫瘍量の低下などの臨床アウトカムを評価することによって測定される。
いくつかの局面においては、抗原非依存的な活性および/または抗BCMA CAR発現細胞を介した持続性シグナル伝達をモニターするために、レポーター細胞株を使用することができる。いくつかの態様において、Jurkat細胞株などのT細胞株は、内因性Nur77転写調節エレメントの制御下で発現される、蛍光タンパク質などのレポーター分子または赤色蛍光タンパク質などの他の検出可能な分子を含有する。いくつかの態様において、Nur77レポーター発現は細胞内因性であり、T細胞中の一次活性化シグナル、T細胞受容体（TCR）成分のシグナル伝達ドメイン、および/またはCD3ζ鎖などの免疫受容活性化チロシンモチーフ（ITAM）を含むシグナル伝達ドメインを含有する組換えレポーターを介したシグナル伝達に依存する。Nur77発現は、細胞外因性に作用し得、組換え受容体を介したシグナル伝達に依存しないことがあり得る、サイトカインシグナル伝達またはToll様受容体（TLR）シグナル伝達などの他のシグナル伝達経路によって一般に影響を受けない。したがって、適切なシグナル伝達領域を含有する外因性組換え受容体、例えば抗BCMA CARを発現する細胞のみが、刺激（例えば、特異的抗原の結合）時にNur77を発現することができる。いくつかの場合において、Nur77発現はまた、刺激（例えば、抗原）の量に対する用量依存的応答を示すことができる。
いくつかの態様において、提供される抗BCMA CARは、例えば、同一のアミノ酸配列を有するが、非スプライス部位が除去されたおよび/またはコドン最適化されたヌクレオチド配列によってコードされる代替CARと比較して、細胞の表面上での改善された発現を示す。いくつかの態様において、細胞の表面上での組換え受容体の発現は評価することができる。細胞の表面上での組換え受容体の発現を決定するためのアプローチには、キメラ抗原受容体（CAR）特異的抗体（例えば、Brentjens et al.,Sci.Transl.Med.2013 Mar;5（177）:177ra38）、プロテインL（Zheng et al.,J.Transl.Med.2012 Feb;10:29）、エピトープタグ、およびCARポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル抗体（国際公開第2014190273号を参照）の使用が含まれ得る。いくつかの態様において、細胞、例えば初代T細胞の表面上での組換え受容体の発現は、検出することができる組換え受容体またはその一部に結合することができる結合分子を使用して、例えばフローサイトメトリーによって評価することができる。いくつかの態様において、組換え受容体の発現を検出するために使用される結合分子は、抗イディオタイプ抗体、例えば結合ドメイン、例えばscFvに対して特異的な抗イディオタイプアゴニスト抗体またはその一部である。例示的な抗イディオタイプ抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるPCT/US2020/063492に記載されている。いくつかの態様において、結合分子は、単離されたもしくは精製された抗原、例えば組換え発現された抗原であるか、または単離されたもしくは精製された抗原、例えば組換え発現された抗原を含む。
F. 多重特異性抗体
ある特定の態様において、BCMA結合性組換え受容体は多重特異性である。多重特異性組換え受容体には、二重特異性受容体が含まれる。多重特異性結合パートナー、例えば抗体は、同じまたは異なる抗原内に存在し得る少なくとも2つの異なる部位に対して結合特異性を有する。ある特定の態様において、結合特異性の一方はBCMAに対するものであり、他方は別の抗原に対するものである。いくつかの態様において、さらなる結合ドメインは、第3の抗原もしくはそれより多くの抗原に結合し、および/または第3の抗原もしくはそれより多くの抗原を認識する。ある特定の態様において、二重特異性抗体は、BCMAの2つの異なるエピトープに結合し得る。二重特異性抗体はまた、BCMAを発現する細胞に細胞傷害剤を局在化させるために使用され得る。二重特異性抗体は、完全長抗体または抗体フラグメントとして調製することができる。多重特異性抗体としては、多重特異性単鎖抗体、例えば、ダイアボディ、トリアボディおよびテトラボディ、タンデムジ-scFvおよびタンデムトリ-scFvがある。抗体（例えば、抗原結合性フラグメント）を含有する多重特異性キメラ受容体、例えば多重特異性CARも提供される。抗BCMA抗体を含む細胞表面タンパク質と、BCMA上の異なる抗原または異なるエピトープに結合する、さらなるキメラ受容体などのさらなる細胞表面タンパク質とを含有する細胞など、抗体または抗体を含むポリペプチドを含有する多重特異性細胞も提供される。
例示的な抗原としては、B細胞特異的抗原、他の腫瘍特異的抗原、例えば白血病（例えば、B細胞白血病）、リンパ腫（例えば、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫など）、または骨髄腫、例えば多発性骨髄腫（MM）、形質細胞悪性腫瘍（例えば、形質細胞腫）上に特異的に発現されるかまたはこれらに関連する抗原が挙げられる。例えば、抗原としては、B細胞慢性リンパ性白血病（CLL）、びまん性大細胞型B細胞リンパ腫（DLBCL）、急性骨髄性白血病（AML）、急性リンパ性白血病（ALL）、バーキットリンパ腫（例えば、風土病型バーキットリンパ腫または散発型バーキットリンパ腫）、マントル細胞リンパ腫（MCL）、非小細胞肺がん（NSCLC）、慢性骨髄性（myeloid）（または骨髄性（myelogenous））白血病（CML）、有毛細胞白血病（HCL）、小リンパ球性リンパ腫（SLL）、辺縁帯リンパ腫、ホジキンリンパ腫（HL）、非ホジキンリンパ腫（NHL）、未分化大細胞リンパ腫（ALCL）、難治性濾胞性リンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（MALT）、辺縁帯リンパ腫、結節性単球様B細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、大細胞型リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、肺B細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（LPL）、神経芽細胞腫、腎細胞癌腫、結腸がん、結腸直腸がん、乳がん、上皮扁平上皮がん、黒色腫、多発性骨髄腫（例えば、非分泌型多発性骨髄腫、くすぶり型多発性骨髄腫）などの骨髄腫、胃がん、食道がん、脳がん、肺がん（例えば、小細胞肺がん）、膵がん、子宮頸がん、卵巣がん、肝臓がん（例えば、肝がん、肝細胞腫など）、膀胱がん、前立腺がん、精巣がん、甲状腺がん、子宮がん、脾臓がん（例えば、脾リンパ腫）、副腎がんおよび/または頭頸部がん上に特異的に発現される抗原またはこれらに関連する抗原、ならびにT細胞上に発現される抗原が挙げられる。
いくつかの態様において、マルチターゲティング戦略のための第2のまたは追加の抗原には、抗原の少なくとも1つがユニバーサル腫瘍抗原またはそのファミリーメンバーであるものが含まれる。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原は、腫瘍上に発現される抗原である。いくつかの態様において、例えば組換え受容体のBCMA結合性ドメインは、第2のまたは追加の抗原と同じ腫瘍型上の抗原を標的とする。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原はまた、ユニバーサル腫瘍抗原であり得、または腫瘍型に特異的な腫瘍抗原であり得る。
例示的な第2のまたは追加の抗原としては、CD4、CD5、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、CD138、B7、MUC-1、Ia、HM1.24、HLA-DR、テネイシン、血管新生因子、VEGF、PIGF、ED-Bフィブロネクチン、がん遺伝子、がん遺伝子産物、CD66a-d、壊死抗原、Ii、IL-2、T101、TAC、IL-6、ROR1、TRAIL-R1（DR4）、TRAIL-R2（DR5）、Her2、L1-CAM、メソテリン、CEA、B型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD24、CD30、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、erbB二量体、EGFRvIII、FBP、FCRL5、FCRH5、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーD（GPRC5D）、HMW-MAA、IL-22R-アルファ、IL-13R-アルファ2、kdr、カッパ軽鎖、ルイスY、L1細胞接着分子（L1-CAM）、メラノーマ関連抗原（MAGE）-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、メラノーマの優先的発現抗原（PRAME）、サバイビン、EGP2、EGP40、TAG72、B7-H6、IL-13受容体a2（IL-13Ra2）、CA9、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ESO-1、PSCA、葉酸受容体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6インテグリン、8H9、NCAM、VEGF受容体、5T4、胎児AchR、NKG2Dリガンド、二重抗原、ユニバーサルタグに関連する抗原、がん精巣抗原、MUC1、MUC16、NY-ESO-1、MART-1、gp100、がん胎児抗原、VEGF-R2、がん胎児抗原（CEA）、前立腺特異的抗原、PSMA、Her2/neu、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、c-Met、GD-2、O-アセチル化GD2（OGD2）、CE7、ウィルムス腫瘍1（WT-1）、サイクリン、サイクリンA2、CCL-1、hTERT、MDM2、CYP1B、WT1、リビン、AFP、p53、サイクリン（D1）、CS-1、BAFF-R、TACI、CD56、TIM-3、CD123、L1細胞接着分子、MAGE-A1、MAGE A3、サイクリン、例えばサイクリンA1（CCNA1）および/または病原体特異的抗原、ビオチン化分子、HIV、HCV、HBVおよび/もしくは他の病原体によって発現される分子、ならびに/またはいくつかの局面においては、これらのネオエピトープもしくはネオアンチゲンが挙げられる。いくつかの態様において、抗原はユニバーサルタグと会合しているか、またはユニバーサルタグである。
いくつかの局面において、抗原、例えば疾患特異的抗原および/または関連抗原などの第2のまたは追加の抗原は、Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーD（GPRC5D）、CD38（環状ADPリボース加水分解酵素）、CD138（シンデカン-1、シンデカン、SYN-1）、CS-1（CS1、CD2サブセット1、CRACC、SLAMF7、CD319および19A24）、BAFF-R、TACIおよび/またはFcRH5など、多発性骨髄腫上に発現される。他の例示的な多発性骨髄腫抗原としては、CD56、TIM-3、CD33、CD123、CD44、CD20、CD40、CD74、CD200、EGFR、β2-ミクログロブリン、HM1.24、IGF-1R、IL-6R、TRAIL-R1、およびアクチビン受容体IIA型（ActRIIA）が挙げられる。Benson and Byrd,J.Clin.Oncol.（2012）30（16）:2013-15;Tao and Anderson,Bone Marrow Research（2011）:924058;Chu et al.,Leukemia（2013）28（4）:917-27;Garfall et al.,Discov Med.（2014）17（91）:37-46を参照されたい。いくつかの態様において、抗原としては、CD38など、リンパ系腫瘍、骨髄腫、AIDS関連リンパ腫、および/または移植後のリンパ増殖上に存在する抗原が挙げられる。このような抗原に対して指向される抗体または抗原結合性フラグメントは公知であり、例えば、米国特許第8,153,765号;米国特許第8,603477号、米国特許第8,008,450号;米国特許出願公開第20120189622号または米国特許出願公開第20100260748号;および/または国際公開第2006099875号、国際公開第2009080829号または国際公開第2012092612号または国際公開第2014210064号に記載されているものが挙げられる。いくつかの態様において、このような抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、scFv）は、多重特異性抗体、多重特異性CARなどの多重特異性キメラ受容体、および/または多重特異性細胞中に含有される。
G. 最適化された抗BCMA CARポリヌクレオチド
いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体、例えば抗BCMA CARなどの導入遺伝子をコードする開始または参照配列は、コドン最適化および/またはスプライス部位除去について評価される。
いくつかの態様において、方法は、BCMAに対して特異的なscFv抗原結合ドメインと、SEQ ID NO:174に示されるスペーサーなどのスペーサーと、4-1BB由来の共刺激シグナル伝達ドメインなどの共刺激シグナル伝達領域と、CD3ゼータシグナル伝達領域とを含有するCARなどの抗BCMA CARで行われる。例示的な同定されたスプライスドナー部位およびスプライスアクセプター部位、ならびにそれらの対応するスコアが、例示的な抗BCMA CARについて以下の表7および8に列挙されている。
（表７）予測されるスプライスドナー部位
Figure 2023522857000011
（表８）予測されるスプライスアクセプター部位
Figure 2023522857000012
Figure 2023522857000013
いくつかの態様において、次いで、得られる修飾された核酸配列が合成され、細胞を形質導入して、RNA不均一性によって示されるスプライシングについて試験するために使用される。例示的な方法は以下のとおりであり、実施例に記載されている。簡潔には、発現する細胞からRNAを採取し、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）によって増幅し、アガロースゲル電気泳動によって分離して、出発配列と比較してRNAの不均一性を決定する。いくつかの場合において、改良された配列は、さらなるコドン最適化およびスプライス部位除去のために遺伝子合成ベンダーに再提出され、その後、アガロースゲル上のRNAが最小限のRNA不均一性を示すまで、さらなる潜在的スプライス部位の評価、修飾、合成および試験が行われ得る。
いくつかの態様において、本明細書に提供される抗BCMA CARなどの導入遺伝子をコードするコード核酸配列または本明細書に提供される構築物を最適化するための提供される方法は、潜在的スプライス部位（例示的なコドン最適化されたおよびスプライス部位が除去されたスペーサー配列については、例えば、SEQ ID NO:200を参照）を低減または除去し、かつヒトコドン使用を最適化する（例示的なコドン最適化およびスペーサー配列については、例えば、SEQ ID NO:236を参照）ためである。例示的な最適化戦略は、実施例に記載されている。
いくつかの態様において、（a）以下に記載される抗原結合性ドメインのいずれをも含む、BCMAを特異的に認識する細胞外抗原結合ドメイン;（b）少なくとも125アミノ酸長のスペーサー;（c）膜貫通ドメイン;および（d）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を含むキメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドであって、細胞における該ポリヌクレオチドの発現後に、該ポリヌクレオチドからの転写されたRNA、任意でメッセンジャーRNA（mRNA）は、少なくとも70％、75％、80％、85％、90％または95％のRNA均一性を示す、ポリヌクレオチドが提供される。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:116および119に示されるアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:116および119に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含むVH領域およびVL領域を含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:116から選択されるVH領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3であるかまたはこれらを含むVH領域と、SEQ ID NO:119から選択されるVL領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3であるかまたはこれらを含むVL領域とを含む。いくつかの態様において、いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:97、101および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:96、100および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:95、99および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:94、98および102のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:104、106および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはSEQ ID NO:116に示されるアミノ酸配列であるかもしくはSEQ ID NO:116に示されるアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:119に示されるアミノ酸配列であるかもしくはSEQ ID NO:119に示されるアミノ酸配列を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドによってコードされるキメラ抗原受容体中の例示的な抗原結合ドメインとしては、本明細書中の表6の各行に記載されるものが挙げられる。このような態様のいずれにおいても、CARの膜貫通ドメインは、CD28に由来する膜貫通ドメインであるか、またはCD28に由来する膜貫通ドメインを含み;細胞内シグナル伝達領域は、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインまたはその機能的バリアントもしくはシグナル伝達部分を含み、共刺激シグナル伝達領域は、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
いくつかの態様において、（a）以下に記載される抗原結合ドメインのいずれをも含む、BCMAを特異的に認識する細胞外抗原結合ドメイン;（b）（b）コード核酸が、SEQ ID NO:200に示される配列であるか、もしくはSEQ ID NO:200に示される配列を含むか、もしくはSEQ ID NO:200に示される配列からなるか、もしくはSEQ ID NO:200に示される配列から本質的になるか、またはSEQ ID NO:174に示されるアミノ酸の配列をコードするスペーサー;（c）膜貫通ドメイン;および（d）細胞内シグナル伝達領域をコードする核酸を含む、キメラ抗原受容体をコードするポリヌクレオチドが提供される。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:116および119に示されるアミノ酸配列、またはそれぞれSEQ ID NO:116および119に対して少なくとも90％の同一性を有するアミノ酸の配列を含むVH領域およびVL領域を含む。いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、SEQ ID NO:116から選択されるVH領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3であるかまたはこれらを含むVH領域と、SEQ ID NO:119から選択されるVL領域アミノ酸配列内に含有されるCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3であるかまたはこれらを含むVL領域とを含む。いくつかの態様において、いくつかの態様において、抗原結合ドメインは、それぞれSEQ ID NO:97、101および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:96、100および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:95、99および103のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:105、107および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはそれぞれSEQ ID NO:94、98および102のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、ならびにそれぞれSEQ ID NO:104、106および108のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域;またはSEQ ID NO:116に示されるアミノ酸配列であるかもしくはSEQ ID NO:116に示されるアミノ酸配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:119に示されるアミノ酸配列であるかもしくはSEQ ID NO:119に示されるアミノ酸配列を含むVL領域を含む。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドによってコードされるキメラ抗原受容体中の例示的な抗原結合ドメインとしては、本明細書中の表9の各行に記載されるものが挙げられる。このような態様のいずれにおいても、CARの膜貫通ドメインは、CD28に由来する膜貫通ドメインであるか、またはCD28に由来する膜貫通ドメインを含み;細胞内シグナル伝達領域は、CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインまたはその機能的バリアントもしくはシグナル伝達部分を含み、共刺激シグナル伝達領域は、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む。
コドン最適化（O）および/またはスプライス部位除去（SSE）のために改変されたポリヌクレオチドを含む、例示的な改変されたポリヌクレオチドも本明細書で提供される。このようなポリヌクレオチドの例が表6に示されており、スプライス部位除去およびコドン最適化前（非opt）の例示的なCAR構築物の構成要素の例示的なヌクレオチド（nt）配列、スプライス部位除去および最適化後（O/SSE）のCAR構築物の構成要素の核酸（nt）配列、ならびに核酸配列によってコードされる対応するアミノ酸（aa）配列が提供されている。構成要素には、IgG-κシグナル伝達配列（ss）、抗BCMA scFv、スペーサー領域、膜貫通（tm）ドメイン、共シグナル伝達配列（4-1BB co-sigまたはCD28 co-sig）、CD3-ζシグナル伝達ドメイン（CD3-ζ）、T2Aリボソームスキップエレメント（T2A）および切断型EGF受容体（EGFRt）配列が含まれる。例示的なCAR構築物のポリヌクレオチド配列は、SEQ ID NO:15～20に示されるアミノ酸配列をコードするSEQ ID NO:9～14に示される。
（表９）例示的なBCMA CAR成分（SEQ ID NO）
Figure 2023522857000014
III. 操作された細胞および操作された細胞を作製するための過程
本明細書に記載されるBCMAを結合する細胞外ドメインを含有する例示的な組換え受容体などの組換え受容体（例えば、キメラ抗原受容体）を含有する操作された細胞などの細胞も提供される。このような細胞の集団、このような細胞を含有するおよび/またはそのような細胞が濃縮された組成物、例えばBCMA結合性組換え受容体を発現する細胞が、組成物中の総細胞またはT細胞もしくはCD8＋もしくはCD4＋細胞などのある特定の種類の細胞の少なくとも50、60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％またはそれ以上を構成する組成物も提供される。組成物としては、養子細胞療法などの投与のための薬学的組成物および製剤がある。細胞および組成物を対象、例えば患者に投与するための治療方法、ならびにこのような方法において使用するための細胞および薬学的組成物も提供される。
したがって、抗体を含有する組換え受容体を発現する遺伝子操作された細胞、例えばCARを含有する細胞も提供される。細胞は一般に真核細胞、例えば哺乳動物細胞であり、典型的にはヒト細胞である。いくつかの態様において、細胞は、血液、骨髄、リンパ、またはリンパ器官に由来し、免疫系の細胞、例えば自然免疫または適応免疫の細胞、例えばリンパ球を含む骨髄系細胞またはリンパ球系細胞、典型的にはT細胞および/またはNK細胞である。他の例示的な細胞としては、幹細胞、例えば、人工多能性幹細胞（iPSC）を含む複能性幹細胞および多能性幹細胞が挙げられる。細胞は、典型的には、対象から直接単離された初代細胞および/または対象から単離され、凍結された初代細胞などの初代細胞である。いくつかの態様において、細胞には、T細胞または他の細胞型の1つまたは複数のサブセット、例えば全T細胞集団、CD4＋細胞、CD8＋細胞およびこれらの亜集団、例えば機能、活性化状態、成熟度、分化の可能性、拡大増殖、再循環、局在化、および/または持続能力、抗原特異性、抗原受容体の種類、特定の器官もしくは区画における存在、マーカーもしくはサイトカイン分泌プロファイル、および/または分化の程度によって定義されるものが含まれる。処置されるべき対象に関して、細胞は同種異系および/または自己であり得る。方法としては、オフザシェルフの方法が挙げられる。いくつかの局面において、オフザシェルフの技術などについて、細胞は、人工多能性幹細胞（iPSC）などの幹細胞などの多能性および/または複能性である。いくつかの態様において、方法は、対象から細胞を単離すること、本明細書中に記載されるように細胞を調製すること、処理すること、培養することおよび/または操作すること、ならびに凍結保存の前または後に細胞を同じ患者に再導入することを含む。
T細胞および/またはCD4＋および/またはCD8＋T細胞のサブタイプおよび亜集団としては、ナイーブT（TN）細胞、エフェクターT細胞（TEFF）、メモリーT細胞およびそのサブタイプ、例えば、幹細胞メモリーT（TSCM）、セントラルメモリーT（TCM）、エフェクターメモリーT（TEM）または最終分化エフェクターメモリーT細胞、腫瘍浸潤リンパ球（TIL）、未成熟T細胞、成熟T細胞、ヘルパーT細胞、細胞傷害性T細胞、粘膜関連インバリアントT（MAIT）細胞、天然に存在するおよび適応性の制御性T（Treg）細胞、ヘルパーT細胞、例えばTH1細胞、TH2細胞、TH3細胞、TH17細胞、TH9細胞、TH22細胞、濾胞性ヘルパーT細胞、アルファ/ベータT細胞、およびデルタ/ガンマT細胞がある。
いくつかの局面において、本明細書において提供される例示的なBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞を含有する組成物は、いくつかの局面において、操作された細胞の増加した持続および耐久性と関連付けられる、セントラルメモリーT細胞（TCM）表現型と関連付けられた免疫細胞サブタイプ、例えば、CD4＋またはCD8＋T細胞サブタイプが濃縮されていることが観察された。
いくつかの態様において、細胞はナチュラルキラー（NK）細胞である。いくつかの態様において、細胞は単球または顆粒球、例えば骨髄系細胞、マクロファージ、好中球、樹状細胞、肥満細胞、好酸球および/または好塩基球である。
いくつかの態様において、細胞は、遺伝子操作を介して導入された1つまたは複数のポリヌクレオチドを含み、それによってこのようなポリヌクレオチドの組換えまたは遺伝子操作された産物を発現する。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは異種である、すなわち、例えば、操作されている細胞および/またはこのような細胞が由来する生物において通常は見出されない別の生物または細胞から得られるポリヌクレオチドなど、細胞または細胞から得られる試料中に通常は存在しない。いくつかの態様において、ポリヌクレオチドは、複数の異なる細胞型に由来する様々なドメインをコードするポリヌクレオチドのキメラな組合せを含むポリヌクレオチドを含む、天然には見出されないポリヌクレオチドなど、天然に存在しない。いくつかの態様において、細胞（例えば、操作された細胞）は、本明細書に記載されるベクター（例えば、ウイルスベクター、発現ベクターなど）、例えば本明細書に記載される組換え受容体をコードする核酸を含むベクターを含む。
特定の例では、キメラ抗原受容体をコードする提供されるポリペプチドを発現させるために、ヒト免疫細胞などの免疫細胞が使用される。いくつかの例において、免疫細胞は、初代CD4＋およびCD8＋細胞などの初代細胞を含む、CD4＋および/またはCD8＋免疫細胞などのT細胞である。
特定の態様において、操作された細胞は、1つもしくは複数のインプット組成物からおよび/または単一の生物学的試料から濃縮されたT細胞のアウトプット組成物を生成する過程によって作製される。ある特定の態様において、アウトプット組成物は、組換え受容体、例えば抗BCMA CARなどのCARを発現する細胞を含有する。特定の態様において、アウトプット組成物の細胞は、治療、例えば自己細胞療法として対象に投与するのに適している。いくつかの態様において、アウトプット組成物は、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物である。
いくつかの態様において、操作された細胞を生成するまたは作製するための過程は、生物学的試料を収集または取得する工程;生物学的試料からのインプット細胞を単離、選択または濃縮する工程;インプット細胞を冷凍保存および保管する工程;刺激条件下でインプット細胞を解凍および/またはインキュベートする工程;組換えポリヌクレオチド、例えばCARなどの組換え受容体をコードするポリヌクレオチドを発現または含有するように刺激された細胞を操作する工程;操作された細胞を閾値量、密度または拡大増殖まで培養する工程;培養された細胞をアウトプット組成物中に製剤化する工程;細胞が注入のために放出されるまで、および/または対象に投与されるのに適するまで、製剤化されたアウトプット細胞を凍結保存および保管する工程、の一部または全部を含む過程によるものである。いくつかの態様において、過程全体が、濃縮されたT細胞、例えば、CD4＋およびCD8＋T細胞の単一の組成物を用いて行われる。ある特定の態様において、前記過程は、濃縮されT細胞の単一のアウトプット組成物を生成または作製するための過程より前および/またはその間に組み合わされる濃縮されたT細胞の2つまたはそれより多くのインプット組成物を用いて実行される。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞は、操作されたT細胞、例えば組換え受容体を発現するように形質導入されたT細胞であるか、またはこれを含む。
特定の態様において、組換え受容体（例えば、抗BCMA CAR）を発現する操作された細胞のアウトプット組成物は、細胞の当初組成物および/またはインプット組成物から作製される。いくつかの態様において、インプット組成物は、濃縮されたT細胞、濃縮されたCD4＋T細胞、および/または濃縮されたCD8＋T細胞の組成物（本明細書では、以下、それぞれ、濃縮されたT細胞の組成物、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物、および濃縮されたCD8＋T細胞の組成物とも呼ばれる。）である。いくつかの態様において、CD4＋T細胞が濃縮された組成物は、少なくとも60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％、または99.9％のCD4＋T細胞を含有する。特定の態様において、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物は、100％のCD4＋T細胞を含有するか、または約100％のCD4＋T細胞を含有する。ある特定の態様において、濃縮されたT細胞の組成物は、20％未満、10％未満、5％未満、1％未満、0.1％未満、もしくは0.01％未満のCD8＋T細胞を含むかもしくは含有し、および/またはCD8＋T細胞を含有しない、および/またはCD8＋T細胞を含まないかもしくは実質的に含まない。いくつかの態様において、細胞の集団は本質的にCD4＋T細胞からなる。いくつかの態様において、CD8＋T細胞が濃縮された組成物は、少なくとも75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％もしくは99.9％のCD8＋T細胞を含有するか、または100％のCD8＋T細胞を含有するか、または約100％のCD8＋T細胞を含有する。ある特定の態様において、濃縮されたCD8＋T細胞の組成物は、20％未満、10％未満、5％未満、1％未満、0.1％未満、もしくは0.01％未満のCD4＋T細胞を含むかもしくは含有し、および/またはCD4＋T細胞を含有しない、および/またはCD4＋T細胞を含まないかもしくは実質的に含まない。いくつかの態様において、細胞の集団は本質的にCD8＋T細胞からなる。
特定の態様において、操作された細胞のアウトプット組成物は、濃縮されたT細胞、濃縮されたCD4＋T細胞、および/または濃縮されたCD8＋T細胞を含有する細胞の組成物由来を含む細胞を組み合わせ、混合し、および/またはプールすることによって生成および/または作製される細胞の当初組成物またはインプット組成物から作製される。いくつかの態様において、細胞のインプット組成物は、組み合わされた、混合された、および/またはプールされたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物である。特定の態様において、インプット組成物は、30％～70％、35％～65％、40％～60％、45％～55％、または約50％もしくは50％のCD4＋T細胞と、30％～70％、35％～65％、40％～60％、45％～55％、または約50％もしくは50％のCD8＋T細胞とを含有する。ある特定の態様において、インプット組成物は、45％～55％、約50％または50％のCD4＋T細胞と、45％～55％、約50％または50％のCD8＋T細胞とを含有する。
ある特定の態様において、操作された細胞を作製するための過程は、細胞、例えばインプット組成物の細胞を活性化および/もしくは刺激すること;例えば、形質導入もしくは形質移入によって組換えタンパク質をコードするポリヌクレオチドを導入するために、活性化および/もしくは刺激された細胞を遺伝子操作すること;ならびに/または、例えば、増殖および/もしくは拡大増殖を促進する条件下で、操作された細胞を培養することの1つまたは複数をさらに含むことができる。特定の態様において、提供される方法は、細胞がインキュベートされ、活性化され、刺激され、操作され、形質導入され、形質移入され、および/または培養された後に生産されたアウトプット組成物を採取、収集および/または製剤化することに関連して使用され得る。
いくつかの態様において、1つまたは複数の過程工程は、少なくとも部分的に、無血清培地中で行われる。いくつかの態様において、無血清培地は、組成が明らかな、または組成が十分に明らかな細胞培養培地である。ある特定の態様において、無血清培地は、加工処理された、例えば阻害剤および/または成長因子を除去するために濾過された制御培養培地である。いくつかの態様において、無血清培地はタンパク質を含有する。ある特定の態様において、無血清培地は、血清アルブミン、加水分解物、成長因子、ホルモン、担体タンパク質、および/または付着因子を含有してもよい。いくつかの態様において、無血清培地はサイトカインを含む。いくつかの態様において、無血清培地はサイトカインまたは組換えサイトカインを含む。いくつかの態様において、無血清培地は組換えIL-2、IL-15および/またはIL-7を含む。いくつかの態様において、無血清培地はグルタミンを含む。いくつかの態様において、無血清培地は、グルタミンならびに組換えIL-2、IL-15およびIL-7を含む。
いくつかの態様において、無血清培地は、1つまたは複数のタンパク質または他の添加剤を含有する基礎培地を含む。いくつかの態様において、インキュベーションの全部または一部は基礎培地中で行われる。いくつかの態様において、基礎培地は、無機塩、糖、アミノ酸、ならびに必要に応じてビタミン、有機酸、および/または緩衝液または他の周知の細胞培養栄養素の混合物を含有する。栄養素に加えて、培地はまた、pHおよび浸透圧を維持する一助となる。いくつかの局面において、無血清培地の成分は、細胞の成長、増殖および/または拡大増殖を支援する。
多種多様な市販の基礎培地が当業者に周知であり、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）、ロズウェルパーク記念研究所培地（RPMI）、イスコフ改変ダルベッコ培地およびハム培地が挙げられる。いくつかの態様において、基礎培地は、イスコフ改変ダルベッコ培地、RPMI-1640またはα-MEMである。いくつかの態様において、基礎培地は平衡塩溶液（例えば、PBS、DPBS、HBSS、EBSS）である。いくつかの態様において、基礎培地は、ダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）、最小必須培地（MEM）、基礎培地イーグル（BME）、F-10、F-12、RPMI1640、グラスゴー最小必須培地（GMEM）、アルファ最小必須培地（アルファMEM）、イスコフ改変ダルベッコ培地、およびM199から選択される。いくつかの態様において、基礎培地は、複合培地（例えば、RPMI-1640、IMDM）である。いくつかの態様において、基礎培地は、OpTmizer（商標）CTS（商標）T-Cell Expansion Basal Medium（ThermoFisher）である。
いくつかの態様において、基礎培地は、タンパク質またはペプチドをさらに含み得る。いくつかの態様において、少なくとも1つのタンパク質は、非哺乳動物起源のものではない。いくつかの態様において、少なくとも1つのタンパク質は、ヒトタンパク質であるか、またはヒトに由来する。いくつかの態様において、少なくとも1つのタンパク質は組換えタンパク質である。いくつかの態様において、少なくとも1つのタンパク質として、アルブミン、トランスフェリン、インスリン、フィブロネクチン、アプロチニン、またはフェチュインが挙げられる。いくつかの態様において、タンパク質は、アルブミン、インスリン、またはトランスフェリンの1つまたは複数、任意でヒトもしくは組換えアルブミン、インスリン、またはトランスフェリンの1つまたは複数を含む。
いくつかの態様において、タンパク質は、アルブミンまたはアルブミン置換物である。いくつかの態様において、アルブミンはヒト由来アルブミンである。いくつかの態様において、アルブミンは組換えアルブミンである。いくつかの態様において、アルブミンは、天然のヒト血清アルブミンである。いくつかの態様において、アルブミンは、組換えヒト血清アルブミンである。いくつかの態様において、アルブミンは、非ヒト供給源由来の組換えアルブミンである。アルブミン置換物は、任意のタンパク質またはポリペプチド源であり得る。そのようなタンパク質またはポリペプチド試料の例として、ウシ下垂体抽出物、植物加水分解物（例えばイネ加水分解物）、ウシ胎児アルブミン（フェチュイン）、卵白アルブミン、ヒト血清アルブミン（HSA）、または別の動物由来アルブミン、チキン抽出物、ウシ胚抽出物、AlbuMAX（登録商標）I、およびAlbuMAX（登録商標）IIが挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、タンパク質またはペプチドは、トランスフェリンを含む。いくつかの態様において、タンパク質またはペプチドは、フィブロネクチンを含む。いくつかの態様において、タンパク質またはペプチドは、アプロチニンを含む。いくつかの態様において、タンパク質はフェチュインを含む。
いくつかの態様において、1つまたは複数の追加のタンパク質は、基礎培地に添加される血清代替補助剤の一部である。血清代替補助剤の例として、例えば、Immune Cell Serum Replacement（ThermoFisher、＃A2598101）またはSmith et al.Clin Transl Immunology.2015 Jan;4（1）:e31に記載されているものが挙げられる。
ある特定の態様において、基礎培地に追加の添加剤が補充される。細胞培養培地への添加剤として、栄養素、糖、例えばグルコース、アミノ酸、ビタミン、またはATPおよびNADH等の添加剤が挙げられ得るが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、基礎培地はさらに、L-グルタミン等のグルタミンを含む。いくつかの局面において、グルタミンは、L-グルタミン等のグルタミンの遊離形態である。いくつかの態様において、基礎培地中のL-グルタミン等のグルタミンの濃度は、200mM未満、例えば150mM未満、100mM以下、例えば20mM～120mM、または40mM～100mM、例えばまたは約80mMである。いくつかの態様において、L-グルタミンの濃度は、約0.5mM～約5mM（2mMなど）である。
いくつかの態様において、基礎培地は、合成アミノ酸、例えばL-グルタミンのジペプチド形態、例えばL-アラニル-L-グルタミンをさらに含有する。いくつかの態様において、基礎培地中のL-グルタミンのジペプチド形態（例えば、L-アラニル-L-グルタミン）の濃度は約0.5mM～5mMである。いくつかの態様において、基礎培地中のL-グルタミンのジペプチド形態（例えば、L-アラニル-L-グルタミン）の濃度は約2mMである。
いくつかの態様において、提供される方法は、臨床使用のための、例えば、養子細胞療法における細胞の調製における1つの工程、複数の工程またはすべての工程が、細胞を非無菌条件に曝露させることなく行われるように行われる。いくつかの態様において、細胞は、すべて閉鎖された無菌の系または装置内で選択され、刺激され、形質導入され、洗浄され、および製剤化される。いくつかの態様において、工程の1つまたは複数は、閉鎖系または装置とは別に実行される。いくつかのそのような態様において、細胞は、別個の閉鎖系への無菌移送などによって、閉鎖系または装置とは別に無菌条件下で移送される。
A. 操作のための細胞の調製
いくつかの態様において、操作された細胞の調製は、1つまたは複数の培養および/または調製工程を含む。組換え受容体（例えば、CAR）を導入するための細胞は、生物学的試料などの試料、例えば対象から得られたまたは対象に由来する試料から単離され得る。いくつかの態様において、細胞が単離される対象は、疾患もしくは症状を有する対象、または細胞療法を必要とする対象、または細胞療法が投与される対象である。いくつかの態様における対象は、そのために細胞が単離され、処理され、および/または操作されている養子細胞療法などの特定の治療的介入を必要とするヒトである。
したがって、いくつかの態様における細胞は、初代細胞、例えば初代ヒト細胞である。試料としては、対象から直接採取された組織、流体および他の試料、ならびに分離、遠心分離、遺伝子工学（例えばウイルスベクターによる形質導入）、洗浄、および/またはインキュベーションなどの1つまたは複数の加工処理段階から生じる試料が挙げられる。生物学的試料は、生物源から直接得られた試料、または加工処理された試料であり得る。生体試料として、以下に限定されないが、体液、例えば血液、血漿、血清、脳脊髄液、滑液、尿および汗、組織、ならびに器官試料が挙げられ、それらに由来する加工処理された試料が挙げられる。
いくつかの局面において、細胞が由来するもしくは単離される試料は、血液もしくは血液由来試料であるか、またはアフェレーシスもしくは白血球アフェレーシス産物であるかもしくはそれに由来する。例示的な試料には、全血、末梢血単核細胞（PBMC）、白血球、骨髄、胸腺、組織生検、腫瘍、白血病、リンパ腫、リンパ節、腸関連リンパ系組織、粘膜関連リンパ系組織、脾臓、他のリンパ組織、肝臓、肺、胃、腸、結腸、腎臓、膵臓、乳房、骨、前立腺、子宮頸部、精巣、卵巣、扁桃腺もしくは他の器官、および/またはこれらに由来する細胞が含まれる。試料には、細胞療法、例えば養子細胞療法の状況において、自己および同種の供給源からの試料が含まれる。
いくつかの態様において、細胞は細胞株、例えばT細胞株に由来する。いくつかの態様における細胞は、異種供給源から、例えばマウス、ラット、非ヒト霊長類またはブタから得られる。
いくつかの態様において、細胞の単離は、1つまたは複数の調製および/または非親和性ベースの細胞分離工程を含む。いくつかの例において、例えば、望ましくない成分を除去し、所望の成分を濃縮し、特定の試薬に感受性の細胞を溶解または除去するために、細胞は、1つまたは複数の試薬の存在下で、洗浄、遠心分離、および/またはインキュベートされる。いくつかの例において、細胞が、密度、接着特性、サイズ、感受性、および/または特定の成分に対する耐性等の1つまたは複数の特性に基づいて分離される。
いくつかの例において、対象の循環血由来の細胞が、例えばアフェレーシスまたは白血球アフェレーシスによって、得られる。試料は、いくつかの局面において、T細胞、単球、顆粒球、B細胞、他の有核白血球、赤血球、および/または血小板が挙げられるリンパ球を含有し、いくつかの局面において、赤血球および血小板以外の細胞を含有する。
いくつかの態様において、対象から採取された血球は、例えば、血漿画分を除去するために、そしてその後の加工処理段階に適切な緩衝液または培地内に細胞を入れるために、洗浄される。いくつかの態様において、細胞は、リン酸緩衝生理食塩水（PBS）で洗浄される。いくつかの態様において、洗浄液は、カルシウムおよび/またはマグネシウムおよび/または多くの、もしくはすべての二価カチオンを欠いている。いくつかの局面において、洗浄工程は、製造者の指示に従って半自動「フロースルー」遠心分離機（例えば、Cobe 2991セルプロセッサ、Baxter）で達成される。いくつかの局面において、洗浄工程は、製造者の指示に従ってタンジェンシャルフロー濾過（TFF）によって達成される。いくつかの態様において、細胞は、洗浄後に、例えばCa＋＋/Mg＋＋フリーPBS等の種々の生体適合性緩衝液中に再懸濁される。ある特定の態様において、血球試料の成分が除去されて、細胞は、培養培地中に直接再懸濁される。
いくつかの局面において、単離されたまたは分泌されたポリペプチドの産生のために、原核生物に加えて、糸状菌または酵母などの真核生物微生物が、抗体をコードするベクターのための好適なクローニング宿主または発現宿主であり、そのグリコシル化経路が、ヒト細胞におけるグリコシル化経路を模倣するか、または近似するように改変されており、その結果、部分的または完全ヒトのグリコシル化パターンを有する抗体の産生をもたらす真菌および酵母株が挙げられる。Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414（2004）およびLi et al.,Nat.Biotech.24:210-215（2006）を参照されたい。
単離されたまたは分泌されたポリペプチドを含むポリペプチドを発現するために使用され得る例示的な真核細胞には、COS7細胞を含むCOS細胞;293-6E細胞を含む293細胞;CHO-S、DG44を含むCHO細胞、Lec13 CHO細胞およびFUT8 CHO細胞;PER.C6（登録商標）細胞;ならびにNSO細胞が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、抗体重鎖および/または軽鎖（例えば、VH領域および/またはVL領域）は、酵母において発現され得る。例えば、米国特許出願公開第2006/0270045号を参照されたい。いくつかの態様において、特定の真核宿主細胞は、重鎖および/または軽鎖（例えば、VH領域および/またはVL領域）に所望の翻訳後修飾を行うその能力に基づいて選択される。例えば、いくつかの態様において、CHO細胞は、293細胞で産生される同じポリペプチドよりも高いレベルのシアリル化を有するポリペプチドを産生する。
いくつかの態様において、調製方法は、形質導入および操作のための単離、選択および/もしくは濃縮および/もしくはインキュベーションの前もしくは後のいずれかに、ならびに/または操作された細胞の培養および/もしくは採取の後に、細胞を凍結、例えば凍結保存するための工程を含む。いくつかの態様において、凍結およびその後の解凍工程は、細胞集団中の顆粒球およびある程度まで単球を除去する。いくつかの態様において、細胞は、例えば、血漿および血小板を除去するための洗浄工程の後で、凍結溶液中に懸濁される。いくつかの局面において、様々な公知の凍結溶液およびパラメーターのいずれもが使用され得る。いくつかの態様において、細胞は、12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、もしくは5.0％DMSO、または約12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、もしくは5.0％DMSO、または1％～15％、6％～12％、5％～10％、もしくは6％～8％DMSOの最終濃度を有する媒体および/または溶液中で凍結される、例えば、凍結保護または凍結保存される。特定の態様において、細胞は、5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、もしくは0.25％HSA、または約5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、もしくは0.25％HSA、または0.1％～-5％、0.25％～4％、0.5％～2％、もしくは1％～2％HSAの最終濃度を有する媒体および/または溶液中で凍結される、例えば、凍結保護または凍結保存される。一例は、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、または他の適切な細胞凍結媒体を使用することを含む。次いで、DMSOおよびHSAの最終濃度がそれぞれ10％および4％になるように、これを媒体で1:1希釈する。次いで、細胞は、一般に、毎分1℃または約1℃の速度で-80℃または約-80℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵される。
いくつかの態様において、細胞または集団の単離は、1つまたは複数の調製および/または非親和性ベースの細胞分離工程を含む。いくつかの例において、例えば、望ましくない成分を除去し、所望の成分を濃縮し、特定の試薬に感受性の細胞を溶解または除去するために、細胞は、1つまたは複数の試薬の存在下で、洗浄、遠心分離、および/またはインキュベートされる。いくつかの例において、細胞が、密度、接着特性、サイズ、感受性、および/または特定の成分に対する耐性等の1つまたは複数の特性に基づいて分離される。いくつかの態様において、方法として、赤血球を溶解することによる末梢血からの白血球の調製、およびパーコールまたはフィコール勾配による遠心分離等の密度ベースの細胞分離方法が挙げられる。
いくつかの態様において、選択工程の少なくとも一部は、選択試薬との細胞のインキュベーションを含む。例えば、表面マーカー、例えば表面タンパク質、細胞内マーカーまたは核酸などの1つまたは複数の特異的分子の細胞内または細胞上での発現または存在に基づいて、1つまたは複数の異なる細胞型を選択するための1つまたは複数の選択試薬を使用して実施され得る選択方法の一部としての、1つの選択試薬または複数の選択試薬とのインキュベーション。いくつかの態様において、そのようなマーカーに基づく分離のための1つの選択試薬または複数の選択試薬を使用する任意の公知の方法が使用され得る。いくつかの態様において、1つの選択試薬または複数の選択試薬は、親和性またはイムノアフィニティーベースの分離である分離をもたらす。例えば、いくつかの局面における選択は、1つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの細胞の発現または発現レベルに基づいて細胞および細胞集団を分離するための1つの試薬または複数の試薬とのインキュベーション、例えば、そのようなマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーションを含み、一般に、洗浄工程および抗体または結合パートナーに結合した細胞の、抗体または結合パートナーに結合しなかった細胞からの分離が後続する。
そのような過程のいくつかの局面において、ある体積の細胞が、ある量の所望の親和性ベースの選択試薬と混合される。イムノアフィニティーベースの選択は、分離されている細胞と、細胞上のマーカーに特異的に結合する分子、例えば固体表面、例えば粒子上の抗体または他の結合パートナーとの間の好ましいエネルギー相互作用をもたらす任意のシステムまたは方法を使用して行うことができる。いくつかの態様において、方法は、細胞のマーカーに特異的な選択剤（例えば抗体）でコーティングされたビーズ、例えば磁気ビーズなどの粒子を使用して行われる。粒子（例えばビーズ）は、振盪または混合しながら、エネルギー的に有利な相互作用を促進するのを助けるために一定の細胞密度対粒子（例えば、ビーズ）比で、チューブまたはバッグなどの容器内の細胞とインキュベートまたは混合することができる。他の事例では、方法は、選択の全部または一部が例えば遠心回転下で遠心チャンバーの内部キャビティ内で行われる細胞の選択を含む。いくつかの態様において、イムノアフィニティーに基づく選択試薬などの選択試薬との細胞のインキュベーションが、遠心チャンバーにおいて行われる。ある特定の態様において、単離または分離は、国際公開2009/072003号または米国特許出願公開第20110003380号に記載されているシステム、装置または器具を使用して行われる。1つの例において、システムは、国際公開第2016/073602号に記載されているようなシステムである。
いくつかの態様において、遠心チャンバーのキャビティ内でこのような選択工程またはその一部（例えば、抗体で被覆された粒子、例えば磁気ビーズとのインキュベーション）を行うことによって、ユーザは、様々な溶液の体積、処理中の溶液の添加およびそのタイミングなどのある特定のパラメーターを制御することができ、他の利用可能な方法と比較して利点を提供することができる。例えば、インキュベーション中にキャビティ内の液体体積を減少させる能力は、キャビティ内の細胞の総数に影響を及ぼすことなく、選択において使用される粒子（例えばビーズ試薬）の濃度、したがって溶液の化学ポテンシャルを増加させることができる。これにより、処理されている細胞と選択のために使用される粒子との間での対相互作用を強化することができる。いくつかの態様において、例えば、本明細書に記載されるシステム、回路および制御に関連付けられている場合に、チャンバー内でインキュベーション工程を実行することにより、ユーザはインキュベーション中の所望の回数で溶液の攪拌を行うことができ、これも相互作用を改善することができる。
いくつかの態様において、選択工程の少なくとも一部は遠心チャンバー中で行われ、選択試薬との細胞のインキュベーションを含む。このような過程のいくつかの局面において、ある体積の細胞が、製造者の説明書に従って同じ数の細胞および/または同じ体積の細胞を選択するためにチューブまたは容器中で同様の選択を行う際に通常用いられるよりもはるかに少ない量の所望の親和性ベースの選択試薬と混合される。いくつかの態様において、製造業者の指示に従って、同じ数の細胞および/または同じ体積の細胞に対するチューブまたは容器ベースでのインキュベーションにおける細胞の選択のために使用される同じ選択試薬の量の5％以下、10％以下、15％以下、20％以下、25％以下、50％以下、60％以下、70％以下または80％以下である量の1つまたは複数の選択試薬が使用される。
いくつかの態様において、選択、例えば細胞のイムノアフィニティーベースの選択のために、細胞は、選択試薬、例えば、濃縮および/または枯渇することを所望する細胞上の表面マーカーに特異的に結合するが、組成物中の他の細胞上の表面マーカーには特異的に結合しない分子、例えば、抗体を含む選択緩衝液も含有する組成物中で、チャンバーのキャビティ内においてインキュベートされ、選択試薬は、足場、例えば、ポリマーまたは表面、例えば、ビーズ、例えば、磁気ビーズ、例えば、CD4およびCD8に対して特異的なモノクローナル抗体に結合された磁気ビーズに任意で結合されている。いくつかの態様においては、記載されるように、選択が振盪または回転を伴ってチューブ内で行われる場合、同じ数の細胞または同じ体積の細胞の選択の概ね同一のまたは類似の効率を達成するために典型的に使用されるか、または必要である選択試薬の量と比較して、実質的により少ない（例えば、前記量の5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％または80％以下である）量で、選択試薬がチャンバーのキャビティ内の細胞に添加される。いくつかの態様において、例えば、10mL～200mL、例えば、少なくとも10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLまたは少なくとも約10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLの試薬のインキュベーションで標的体積を達成するために、インキュベーションは、細胞および選択試薬に選択緩衝液を添加して行われる。いくつかの態様において、選択緩衝液および選択試薬は、細胞への添加の前に予め混合される。いくつかの態様において、選択緩衝液および選択試薬は、細胞に別々に加えられる。いくつかの態様において、選択インキュベーションは、エネルギー的に有利な相互作用を促進するのを助けることができ、それによって高い選択効率を達成しながらより少ない全体的な選択試薬の使用を可能にする周期的な穏やかな混合条件で行われる。
いくつかの態様において、選択試薬とのインキュベーションの総期間は、5分～6時間、例えば、30分～3時間、または約5分～6時間、例えば、約30分～3時間、例えば、少なくとも30分、60分、120分もしくは180分または少なくとも約30分、60分、120分もしくは180分である。
いくつかの態様において、インキュベーションは、一般に、回転の存在下などの混合条件下で、一般に比較的低い力または速度、例えば細胞をペレット化するために使用される速度よりも低い速度、例えば600rpm～1700rpmまたは約600rpm～1700rpm（例えば、600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpmまたは約600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpmまたは少なくとも600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpm）、例えば、80g～100gまたは約80g～100g（例えば、80g、85g、90g、95g、もしくは100g、または約80g、85g、90g、95g、もしくは100g、または少なくとも80g、85g、90g、95g、もしくは100g）の試料またはチャンバーもしくは他の容器の壁でのRCFで行われる。いくつかの態様において、回転は、このような低速での回転の反復する間隔とそれに続く休止期間、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10秒間の回転および/または休止、例えば約1または2秒間の回転とそれに続く約5、6、7、または8秒間の休止を使用して行われる。
いくつかの態様において、このような過程は、チャンバーが一体化されている完全に閉鎖系内で実行される。いくつかの態様において、この過程（およびいくつかの局面においては、アフェレーシス試料などの細胞を含有する試料を洗浄する、前の洗浄工程などの1つまたは複数の追加の工程も）は、自動化されたプログラムを使用して単一の閉鎖系で洗浄および結合工程を完了するために、細胞、試薬および他の成分が適切な時間にチャンバー中に引き込まれ、チャンバーから押し出され、遠心分離が行われるように、自動化された様式で行われる。
いくつかの態様において、細胞および選択試薬および/または試薬のインキュベーションおよび/または混合後、インキュベートされた細胞は、特定の1つまたは複数の試薬の存在または非存在に基づいて細胞を選択するために分離に供される。いくつかの態様において、分離は、選択試薬との細胞のインキュベーションがその中で行われたのと同じ閉鎖系において行われる。いくつかの態様において、選択試薬とのインキュベーション後、選択試薬が結合した細胞を含むインキュベートされた細胞は、細胞のイムノアフィニティーベースの分離のためのシステム中に移される。いくつかの態様において、イムノアフィニティーベースの分離のためのシステムは、磁気分離カラムであるか、または磁気分離カラムを含有する。
いくつかの態様において、単離方法は、表面マーカー、例えば表面タンパク質、細胞内マーカー、または核酸などの1つまたは複数の特異的分子の細胞内での発現または存在に基づく異なる細胞型の分離を含む。いくつかの態様において、このようなマーカーに基づく任意の公知の分離方法が使用され得る。いくつかの態様において、分離は、親和性またはイムノアフィニティーベースの分離である。例えば、いくつかの局面における単離は、1つまたは複数のマーカー、典型的には細胞表面マーカーの細胞の発現または発現レベルに基づいた細胞および細胞集団の分離、例えば、そのようなマーカーに特異的に結合する抗体または結合パートナーとのインキュベーションを含み、一般に、洗浄工程および抗体または結合パートナーに結合した細胞の、抗体または結合パートナーに結合しなかった細胞からの分離が後続する。
このような分離工程は、試薬を結合した細胞がさらなる使用のために保持される陽性選択、および/または抗体または結合パートナーに結合しなかった細胞が保持される陰性選択に基づくことができる。いくつかの例において、両方の画分がさらなる使用のために保持される。いくつかの局面において、陰性選択は、所望の集団以外の細胞によって発現されるマーカーに基づいて分離が最良に行われるように、不均一な集団において細胞型を特異的に特定する抗体が利用可能でない場合に特に有用であり得る。
いくつかの態様において、過程工程は、例えば、親和性ベースの選択を行うことができるシステムまたは器具を使用した、インキュベートされた細胞の陰性および/または陽性選択をさらに含む。いくつかの態様において、単離は、陽性選択による特定の細胞集団の濃縮、または陰性選択による特定の細胞集団の枯渇によって行われる。いくつかの態様において、陽性または陰性選択は、それぞれ陽性または陰性に選択された細胞上で発現される（マーカー＋）または比較的高いレベルで発現される（マーカー高）1つまたは複数の表面マーカーに特異的に結合する1つまたは複数の抗体または他の結合剤と共に細胞をインキュベートすることによって達成される。
分離は、特定の細胞集団または特定のマーカーを発現する細胞の100％の濃縮または除去をもたらす必要はない。例えば、マーカーを発現する細胞などの特定の型の細胞の陽性選択または濃縮は、そのような細胞の数またはパーセンテージを増加させることを指すが、マーカーを発現しない細胞の完全な非存在をもたらす必要はない。同様に、マーカーを発現する細胞などの特定の型の細胞の陰性選択、除去または枯渇は、そのような細胞の数またはパーセンテージを減少させることを指すが、すべてのそのような細胞の完全な除去をもたらす必要はない。
いくつかの例において、複数回の分離工程が行われ、1つの工程から陽性にまたは陰性に選択された画分が、その後の陽性または陰性選択などの別の分離工程に供される。いくつかの例において、それぞれが陰性選択のために標的とされるマーカーに対して特異的である複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることなどによって、単一の分離工程が、複数のマーカーを発現する細胞を同時に枯渇させることができる。同様に、様々な細胞型の上に発現される複数の抗体または結合パートナーと共に細胞をインキュベートすることによって、複数の細胞型を同時に陽性に選択することができる。
例えば、いくつかの局面において、1つもしくは複数の表面マーカーが陽性であるか、または高いレベルの1つもしくは複数の表面マーカーを発現する細胞、例えばCD28＋、CD62L＋、CCR7＋、CD27＋、CD127＋、CD4＋、CD8＋、CD45RA＋および/またはCD45RO＋T細胞などのT細胞の特定の亜集団が、陽性または陰性選択技術によって単離される。
例えば、CD3＋、CD28＋T細胞は、抗CD3/抗CD28コンジュゲート磁気ビーズ（例えば、DYNABEADS（登録商標）M-450 CD3/CD28 T Cell Expander、MACSiBeads（商標）など）を用いて陽性に選択することができる。
いくつかの態様において、T細胞は、B細胞、単球またはCD14などの他の白血球などの非T細胞上に発現されるマーカーの陰性選択によってPBMC試料から分離される。いくつかの局面において、CD4＋ヘルパーおよびCD8＋細胞傷害性T細胞を、組成物から、例えばPBMC組成物、例えば白血球アフェレーシスによって得られたPBMC組成物から分離するために、CD4＋および/またはCD8＋選択工程が使用される。このようなCD4＋およびCD8＋集団は、いくつかの局面においては、1つまたは複数のナイーブ、メモリーおよび/またはエフェクターT細胞亜集団上で発現されるまたは比較的高い程度に発現されるマーカーについての陽性または陰性選択によって、亜集団へとさらに選別することができる。いくつかの態様において、CD4＋およびCD8＋細胞は所望の比で混合される。
いくつかの態様において、CD8＋細胞は、それぞれの亜集団に関連する表面抗原に基づく陽性または陰性選択などによって、ナイーブ、セントラルメモリー、エフェクターメモリー、および/またはセントラルメモリー幹細胞がさらに濃縮または枯渇される。いくつかの態様においては、有効性を増大させるために、例えば、投与後の長期生存、拡大増殖および/または生着を改善するために、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮が行われ、これはいくつかの局面ではこのような亜集団において特に堅牢である。Terakura et al.（2012）Blood.1:72-82;Wang et al.（2012）J Immunother.35（9）:689-701を参照されたい。いくつかの態様においては、TCMを濃縮されたCD8＋T細胞とCD4＋T細胞を組み合わせることにより、有効性がさらに増強される。
複数の態様において、メモリーT細胞は、CD8＋末梢血リンパ球のCD62L＋およびCD62L-サブセットの両方に存在する。PBMCは、抗CD8および抗CD62L抗体を使用するなどして、CD62L-CD8＋および/またはCD62L＋CD8＋画分を濃縮または枯渇させることができる。
いくつかの態様において、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、CD45RO、CD62L、CCR7、CD27、CD28、CD3および/またはCD127の陽性または高い表面発現に基づき、いくつかの局面において、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、CD45RAおよび/またはグランザイムBを発現するかまたは高度に発現する細胞の陰性選択に基づく。いくつかの局面において、TCM細胞が濃縮されたCD8＋集団の単離は、CD4、CD14、CD45RAを発現する細胞の枯渇、およびCD62Lを発現する細胞の陽性選択または濃縮によって行われる。一局面において、セントラルメモリーT（TCM）細胞の濃縮は、CD4発現に基づいて選択された細胞の陰性画分から開始して行われ、該陰性画分は、CD14およびCD45RAの発現に基づく陰性選択、ならびにCD62Lに基づく陽性選択に供される。このような選択は、いくつかの局面においては、同時に実行され、他の局面においては、いずれかの順序で逐次的に実行される。いくつかの局面において、CD4に基づく分離からの陽性画分と陰性画分の両方が保持され、任意で1つまたは複数のさらなる陽性または陰性選択工程に続いて前記方法の後続の工程において使用されるように、CD8＋細胞集団または亜集団の調製に使用されるのと同じCD4発現に基づく選択工程も、CD4＋細胞集団または亜集団を生成するために使用される。
いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞は、CD27＋、CD28＋、CD62L＋、CCR7＋、CD45RA-および/またはCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞はCD62L＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞はCCR7＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞はCCR7＋およびCD45RA-である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞はCD62L＋およびCCR7＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞は、CD62L＋/CD45RA-、CCR7＋/CD45RA-、CD62L＋/CCR7＋またはCD62L＋/CCR7＋/CD45RA-であり、CD44の中程度から高発現を有する。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD8＋細胞は、CD27＋/CD28＋/CD62L＋/CD45RA-、CD27＋/CD28＋/CCR7＋/CD45RA-、CD27＋/CD28＋/CD62L＋/CCR7＋またはCD27＋/CD28＋/CD62L＋/CCR7＋/CD45RA-である。
特定の態様において、生物学的試料、例えばPBMCまたは他の白血球の試料は、CD4＋T細胞の選択に供され、陰性画分と陽性画分の両方が保持される。ある特定の態様において、CD8＋T細胞は、陰性画分から選択される。いくつかの態様において、生物学的試料はCD8＋T細胞の選択に供され、陰性画分および陽性画分の両方が保持される。ある特定の態様において、CD4＋T細胞は陰性画分から選択される。
特定の例では、PBMCの試料または他の白血球試料がCD4＋細胞の選択に供され、陰性画分と陽性画分の両方が保持される。次いで、陰性画分が、CD14およびCD45RAの発現に基づく陰性選択、ならびにCD62LまたはCCR7などのセントラルメモリーT細胞に特徴的なマーカーに基づく陽性選択に供され、陽性選択および陰性選択はいずれの順序でも行われる。
いくつかの態様において、CD4＋Tヘルパー細胞は、細胞表面抗原を有する細胞集団を同定することによって、ナイーブ、セントラルメモリーおよびエフェクター細胞に選別される。CD4＋リンパ球は、標準的な方法によって得ることができる。いくつかの態様において、ナイーブCD4＋Tリンパ球は、CD45RO-、CD45RA＋、CD62L＋、CD4＋T細胞である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCD62L＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCD62L＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞は、CD27＋、CD28＋、CD62L＋、CCR7＋、CD45RA-および/またはCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCD62L＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCCR7＋およびCD45RO＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCCR7＋およびCD45RA-である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞はCD62L＋およびCCR7＋である。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞は、CD62L＋/CD45RA-、CCR7＋/CD45RA-、CD62L＋/CCR7＋またはCD62L＋/CCR7＋/CD45RA-であり、CD44の中程度から高発現を有する。いくつかの態様において、セントラルメモリーCD4＋細胞は、CD27＋/CD28＋/CD62L＋/CD45RA-、CD27＋/CD28＋/CCR7＋/CD45RA-、CD27＋/CD28＋/CD62L＋/CCR7＋またはCD27＋/CD28＋/CD62L＋/CCR7＋/CD45RA-である。いくつかの態様において、エフェクターCD4＋細胞はCD62L-およびCD45RO-である。
一例では、陰性選択によってCD4＋細胞を濃縮するために、モノクローナル抗体カクテルは、典型的には、CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DRおよびCD8に対する抗体を含む。いくつかの態様において、陽性選択および/または陰性選択のための細胞の分離を可能にするために、抗体または結合パートナーは、磁気ビーズまたは常磁性ビーズなどの固体支持体またはマトリックスに結合されている。例えば、いくつかの態様において、細胞および細胞集団は、免疫磁気（または親和性磁気）分離技術（Methods in Molecular Medicine,vol.58:Metastasis Research Protocols,Vol.2:Cell Behavior In vitro and In vivo,p17-25 Edited by:S.A.Brooks and U.Schumacher（著作権）Humana Press Inc.,Totowa,NJに概説されている。）を使用して分離または単離される。
いくつかの局面において、分離されるべき細胞の試料または組成物は、磁気応答性粒子または微粒子、例えば常磁性ビーズ（例えば、Dynabeads（登録商標）またはMACS（登録商標）ビーズなど）などの小型の磁化可能なまたは磁気応答性の材料と共にインキュベートされる。磁気応答性材料、例えば粒子は、一般に、分離することが望まれる、例えば陰性または陽性に選択することが望まれる1つの細胞、複数の細胞または細胞の集団上に存在する分子、例えば表面マーカーに特異的に結合する結合パートナー、例えば抗体に直接または間接的に付着されている。
いくつかの態様において、磁性粒子またはビーズは、抗体または他の結合パートナーなどの特異的結合メンバーに結合された磁気応答性の材料を含む。磁気的分離法において使用される多くの周知の磁気的応答性材料が存在する。適切な磁性粒子には、参照により本明細書に組み入れられるMoldayの米国特許第4,452,773号および欧州特許第452342号に記載されているものが含まれる。Owenの米国特許第4,795,698号、およびLibertiら、米国特許第5,200,084号に記載されているものなどのコロイドサイズの粒子は、他の例である。
インキュベーションは、一般に、試料内の細胞上に細胞表面分子が存在する場合に、磁性粒子またはビーズに付着されている抗体もしくは結合パートナーまたはこのような抗体もしくは結合パートナーに特異的に結合する二次抗体もしくはその他の試薬などの分子が細胞表面分子に特異的に結合する条件下で行われる。
いくつかの局面において、試料は磁場中に置かれ、磁気応答性粒子または磁化可能粒子が付着した細胞は、磁石に引き付けられ、非標識細胞から分離される。陽性選択の場合、磁石に引き付けられた細胞が保持され、陰性選択の場合、引き寄せられていない細胞（非標識細胞）が保持される。いくつかの局面においては、陽性画分と陰性画分が保持され、さらに処理されるかまたはさらなる分離工程に供される同一の選択工程中に、陽性選択と陰性選択の組み合わせが実行される。
ある特定の態様において、磁気応答性粒子は、一次抗体もしくはその他の結合パートナー、二次抗体、レクチン、酵素、またはストレプトアビジンコーティングされる。ある特定の態様において、磁性粒子は、1つまたは複数のマーカーに対して特異的な一次抗体のコーティングを介して細胞に付着されている。ある特定の態様において、ビーズではなく細胞が一次抗体または結合パートナーで標識され、次いで、細胞型特異的二次抗体または他の結合パートナー（例えばストレプトアビジン）でコーティングされた磁性粒子が添加される。ある特定の態様において、ストレプトアビジンでコーティングされた磁性粒子は、ビオチン化一次抗体または二次抗体と組み合わせて使用される。
いくつかの態様において、磁気応答性粒子は、その後にインキュベートされ、培養され、および/または操作されるべき細胞に付着されたままであり、いくつかの局面において、前記粒子は、患者への投与のために細胞に付着されたままである。いくつかの態様において、磁化可能粒子または磁気応答性粒子は、細胞から除去される。細胞から磁化可能粒子を除去するための方法は公知であり、例えば、競合する非標識抗体、磁化可能粒子、または切断可能なリンカーにコンジュゲートされた抗体などの使用を含む。いくつかの態様において、磁化可能粒子は生分解性である。
いくつかの態様において、親和性ベースの選択は、磁気活性化細胞選別（MACS（登録商標））（Miltenyi Biotec,Auburn,CA）を介する。Magnetic Activated Cell Sorting（MACS（登録商標））システムは、磁化された粒子が付着した細胞の高純度選択を可能にする。ある特定の態様において、MACS（登録商標）は、外部磁場の印加後に非標的種および標的種が逐次的に溶出されるモードで動作する。すなわち、磁化された粒子に付着した細胞は、付着していない種が溶出される間、適所に保持される。次いで、この第1の溶出工程が終了した後、磁場中に捕捉されて溶出しなかった種は、溶出して回収できるように何らかの方法で開放される。ある特定の態様において、非標的細胞は、標識され、細胞の不均一な集団から枯渇される。
ある特定の態様において、単離または分離は、前記方法の単離、細胞調製、分離、処理、インキュベーション、培養、および/または製剤化工程の1つまたは複数を行うシステム、装置または器具を使用して行われる。いくつかの局面において、システムは、例えば、エラー、ユーザによる取り扱いおよび/または汚染を最小限に抑えるために、閉鎖された環境または無菌環境でこれらの工程の各々を実行するために使用される。一例では、システムは、国際公開第2009/072003号、または米国特許出願公開第20110003380号に記載されているようなシステムである。
いくつかの態様において、システムまたは器具は、一体化されたもしくは自己完結型システムで、および/または自動化されたもしくはプログラム可能な様式で、単離、加工処理、操作および製剤化工程の1つまたは複数、例えばすべてを実行する。いくつかの局面において、システムまたは器具は、システムまたは器具と通信するコンピュータおよび/またはコンピュータプログラムを含み、これによりユーザは、加工処理、単離、操作および製剤化工程の様々な局面をプログラムし、制御し、それらのアウトカムを評価し、および/または調整することができる。
いくつかの局面において、分離および/または他の工程は、例えば、閉鎖された系および無菌系における臨床規模レベルでの細胞の自動化された分離のために、CliniMACS（登録商標）システム（Miltenyi Biotec）を使用して行われる。構成要素は、内蔵型マイクロコンピュータ、磁気分離ユニット、蠕動ポンプおよび様々なピンチバルブを含むことができる。いくつかの局面における内蔵型コンピュータは、機器のすべての構成要素を制御し、標準化された順序で反復手順を実行するようにシステムに指示する。磁気分離ユニットは、いくつかの局面において、可動永久磁石と、選択カラム用のホルダとを含む。蠕動ポンプは、チューブセット全体の流量を制御し、ピンチバルブと共に、システムを通る緩衝液の制御された流れおよび細胞の連続的な懸濁が確実に生じるようにする。
CliniMACS（登録商標）システムは、いくつかの局面において、無菌の非発熱原性溶液で供給される抗体結合磁化可能粒子を使用する。いくつかの態様において、細胞を磁性粒子で標識した後、細胞を洗浄して過剰な粒子を除去する。次いで、細胞調製バッグをチューブセットに接続し、次いで、緩衝液を含有するバッグおよび細胞収集バッグにチューブセットを接続する。チューブセットは、プレカラムおよび分離カラムを含む予め組み立てられた無菌チューブからなり、使い捨て用である。分離プログラムの開始後、システムは自動的に細胞試料を分離カラムに適用する。標識された細胞はカラム内に保持され、標識されていない細胞は一連の洗浄工程によって除去される。いくつかの態様において、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は標識されておらず、カラムに保持されない。いくつかの態様において、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は標識されており、カラムに保持される。いくつかの態様において、本明細書に記載される方法で使用するための細胞集団は、磁場の除去後にカラムから溶出され、細胞収集バッグ内に採取される。
ある特定の態様において、分離および/または他の工程は、CliniMACS Prodigy（登録商標）システム（Miltenyi Biotec）を使用して行われる。CliniMACS Prodigy（登録商標）システムは、いくつかの局面において、遠心分離による細胞の自動化された洗浄および分画を可能にする細胞加工処理ユニットを備えている。CliniMACS Prodigy（登録商標）システムはまた、ソース細胞産物の巨視的層を識別することによって最適な細胞分画終点を決定する搭載カメラおよび画像認識ソフトウェアを含むことができる。例えば、末梢血は、赤血球、白血球および血漿層に自動的に分離され得る。CliniMACS Prodigy（登録商標）システムはまた、例えば、細胞分化および拡大増殖、抗原負荷、ならびに長期細胞培養などの細胞培養プロトコルを達成する内蔵の細胞培養チャンバーを含むことができる。インプットポートは、培地の無菌除去および補充を可能にすることができ、細胞は、内蔵の顕微鏡を使用してモニタリングすることができる。例えば、Klebanoff et al.（2012）J Immunother.35（9）:651-660、Terakura et al.,（2012）Blood.1:72-82、およびWang et al.,（2012）J Immunother.35（9）:689-701。
いくつかの態様において、本明細書に記載される細胞集団は、フローサイトメトリーを介して採取および濃縮（または枯渇）され、複数の細胞表面マーカーについて染色された細胞は流体の流れで運ばれる。いくつかの態様において、本明細書に記載される細胞集団は、分取規模の（FACS）選別によって採取および濃縮（または枯渇）される。ある特定の態様において、本明細書に記載される細胞集団は、FACSベースの検出システムと組み合わせた微小電気機械システム（MEMS）チップの使用によって採取および濃縮（または枯渇）される（例えば、国際公開第2010/033140号、Cho et al.（2010）Lab Chip 10,1567-1573;およびGodin et al.（2008）J Biophoton.1（5）:355-376を参照。いずれの場合にも、複数のマーカーで細胞を標識することができ、高純度での明確なT細胞サブセットの単離が可能になる。
いくつかの態様において、抗体または結合パートナーは、陽性選択および/または陰性選択のための分離を容易にするために、1つまたは複数の検出可能なマーカーで標識される。例えば、分離は、蛍光標識された抗体への結合に基づき得る。いくつかの例において、1つまたは複数の細胞表面マーカーに対して特異的な抗体または他の結合パートナーの結合に基づく細胞の分離は、例えばフローサイトメトリーの検出システムと組み合わせた、分取規模（FACS）および/または微小電気機械システム（MEMS）チップを含む蛍光活性化細胞選別（FACS）などによって、流体流で運ばれる。このような方法は、複数のマーカーに基づく陽性および陰性選択を同時に可能にする。
いくつかの態様において、単離および/または選択は、濃縮されたT細胞、例えばCD3＋T細胞、CD4＋T細胞、および/またはCD8＋T細胞の1つまたは複数のインプット組成物をもたらす。いくつかの態様において、2つまたはそれより多くの別個のインプット組成物が、単一の生物学的試料から単離され、選択され、濃縮され、または取得される。いくつかの態様において、別個のインプット組成物は、同じ対象から収集され、採取され、および/または取得された別個の生物学的試料から単離され、選択され、濃縮され、および/または取得される。
ある特定の態様において、1つまたは複数のインプット組成物は、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.5％、少なくとも99.9％、または100％もしくは約100％のCD3＋T細胞を含む濃縮されたT細胞の組成物であるか、またはこれを含む。特定の態様において、濃縮されたT細胞のインプット組成物は、CD3＋T細胞から本質的になる。
ある特定の態様において、1つまたは複数のインプット組成物は、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.5％、少なくとも99.9％、または100％もしくは約100％のCD4＋T細胞を含む濃縮されたCD4＋T細胞の組成物であるか、またはこれを含む。ある特定の態様において、CD4＋T細胞のインプット組成物は、40％未満、35％未満、30％未満、25％未満、20％未満、15％未満、10％未満、5％未満、1％未満、0.1％未満もしくは0.01％未満のCD8＋T細胞を含み、および/またはCD8＋T細胞を含有せず、および/またはCD8＋T細胞を含まないもしくは実質的に含まない。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞の組成物は、CD4＋T細胞から本質的になる。
ある特定の態様において、1つまたは複数の組成物は、少なくとも60％、少なくとも65％、少なくとも70％、少なくとも75％、少なくとも80％、少なくとも85％、少なくとも90％、少なくとも95％、少なくとも98％、少なくとも99％、少なくとも99.5％、少なくとも99.9％、または100％もしくは約100％のCD8＋T細胞であるかまたはこれを含むCD8＋T細胞の組成物であるか、または該組成物を含む。ある特定の態様において、CD8＋T細胞の組成物は、40％未満、35％未満、30％未満、25％未満、20％未満、15％未満、10％未満、5％未満、1％未満、0.1％未満もしくは0.01％未満のCD4＋T細胞を含有し、および/またはCD4＋T細胞を含有せず、および/またはCD4＋T細胞を含まないもしくは実質的に含まない。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞の組成物は、CD8＋T細胞から本質的になる。
いくつかの態様において、調製方法は、単離、インキュベーションおよび/または操作の前または後に細胞を凍結、例えば凍結保存する工程を含む。いくつかの態様において、凍結およびその後の解凍工程は、細胞集団中の顆粒球およびある程度まで単球を除去する。いくつかの態様において、細胞は、例えば、血漿および血小板を除去するための洗浄工程の後で、凍結溶液中に懸濁される。いくつかの局面において、様々な公知の凍結溶液およびパラメーターのいずれもが使用され得る。一例は、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、または他の適切な細胞凍結媒体を使用することを含む。次いで、DMSOおよびHSAの最終濃度がそれぞれ10％および4％になるように、これを媒体で1:1希釈する。次いで、細胞は、毎分1℃の速度で-80℃まで凍結され、液体窒素貯蔵タンクの気相中に貯蔵される。
B. 活性化および刺激
いくつかの態様において、細胞は、遺伝子操作より前に、または遺伝子操作に関連してインキュベートおよび/または培養される。インキュベーション工程は、培養（culture）、培養（cultivation）、刺激、活性化および/または増殖を含むことができる。いくつかの態様において、組成物または細胞は、刺激条件または刺激因子の存在下でインキュベートされる。そのような条件として、集団中の細胞の増殖、拡大増殖、活性化、および/もしくは生存を誘導し、抗原曝露を模倣し、および/または遺伝子操作のために、例えば組換え抗原受容体の導入のために細胞をプライミングするように設計された条件が挙げられる。
いくつかの態様において、提供される方法は、培養（cultivation）、インキュベーション、培養（culture）および/または遺伝子工学工程を含む。例えば、いくつかの態様において、枯渇した細胞集団および培養開始組成物をインキュベートおよび/または操作するための方法が提供される。したがって、いくつかの態様において、細胞集団は培養開始組成物中でインキュベートされる。
インキュベーションおよび/または操作は、ユニット、チャンバー、ウェル、カラム、チューブ、チューブセット、バルブ、バイアル、培養皿、バッグ、または培養もしくは細胞を培養するための他の容器等の培養容器内で実行され得る。
条件は、特定の培地、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、例えば栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および/または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞を活性化するように設計された任意の他の作用物質の1つまたは複数を含むことができる。
いくつかの態様において、刺激条件または作用物質は、TCR複合体の細胞内シグナル伝達ドメインを刺激または活性化することができる1つまたは複数の作用物質、例えばリガンドを含む。いくつかの局面において、作用物質は、T細胞におけるTCR/CD3細胞内シグナル伝達カスケードをオンにするか、または開始させる。そのような作用物質は、抗体、例えばTCRに対して特異的な抗体、例えば抗CD3抗体を含むことができる。いくつかの態様において、刺激条件は、共刺激受容体、例えば抗CD28を刺激することができる1つまたは複数の作用物質、例えばリガンドを含む。いくつかの態様において、このような作用物質および/またはリガンドは、ビーズなどの固体支持体、および/または1つもしくは複数のサイトカインに結合され得る。任意で、拡大増殖方法は、抗CD3および/または抗CD28抗体を（例えば、少なくとも約0.5ng/mlの濃度で）培地に添加する工程をさらに含み得る。いくつかの態様において、刺激剤は、IL-2、IL-15および/またはIL-7を含む。いくつかの局面において、IL-2濃度は少なくとも約10単位/mLである。
いくつかの局面において、インキュベーションは、Riddellらの米国特許第6,040,177号、Klebanoff et al.（2012）J Immunother.35（9）:651-660、Terakura et al.（2012）Blood.1:72-82、および/またはWang et al.（2012）J Immunother.35（9）:689-701に記載されている技術等の技術に従って行われる。
いくつかの態様において、T細胞は、（例えば、得られた細胞の集団が、拡大増殖させるべき当初集団中の各Tリンパ球に対して、少なくとも約5、10、20または40またはそれ以上のPBMCフィーダー細胞を含有するように）培養開始組成物に非分裂末梢血単核細胞（PBMC）などのフィーダー細胞を添加し、（例えば、T細胞の数を増大させるのに十分な時間）培養物をインキュベートすることによって拡大増殖される。いくつかの局面において、非分裂フィーダー細胞は、ガンマ線照射されたPBMCフィーダー細胞を含むことができる。いくつかの態様において、PBMCは、細胞分裂を防ぐために約3000～3600ラドの範囲のガンマ線を照射される。いくつかの局面において、フィーダー細胞は、T細胞集団の添加より前に培養培地に添加される。
いくつかの態様において、刺激条件は、ヒトTリンパ球の成長に適した温度、例えば、少なくとも約25℃、一般に少なくとも約30℃、一般に約37℃または約37℃を含む。任意で、インキュベーションは、フィーダー細胞としてEBVで形質転換された非分裂リンパ芽球様細胞（LCL）を添加することをさらに含み得る。LCLは、約6000～1万ラドの範囲のガンマ線を照射することができる。いくつかの局面におけるLCLフィーダー細胞は、少なくとも約10:1のLCLフィーダー細胞対最初のTリンパ球の比などの任意の適切な量で提供される。
複数の態様において、抗原特異的CD4＋および/またはCD8＋T細胞などの抗原特異的T細胞は、ナイーブまたは抗原特異的Tリンパ球を抗原で刺激することによって得られる。例えば、感染した対象からT細胞を単離し、同じ抗原でインビトロにおいて細胞を刺激することによって、サイトメガロウイルス抗原に対して抗原特異的T細胞株またはクローンを生成することができる。
いくつかの態様において、1つまたは複数の刺激条件または刺激因子の存在下でのインキュベーションの少なくとも一部は、例えば、国際公開第2016/073602号に記載されているように、遠心回転下で遠心チャンバーの内部キャビティ内で行われる。いくつかの態様において、遠心チャンバー内で行われるインキュベーションの少なくとも一部は、刺激および/または活性化を誘導するための1つまたは複数の試薬と混合することを含む。いくつかの態様において、選択された細胞などの細胞は、遠心チャンバー内で刺激条件または刺激因子と混合される。このようなプロセスのいくつかの局面において、ある体積の細胞が、細胞培養プレートまたは他の系において同様の刺激を行うときに通常用いられる量よりもはるかに少ない量の1つまたは複数の刺激条件または刺激因子と混合される。
いくつかの態様においては、周期的な振盪または回転を伴って遠心チャンバー内で、例えばチューブまたはバッグ内で混合されずに選択が行われる場合、同じ数の細胞または同じ体積の細胞の選択の概ね同一のまたは類似の効率を達成するために典型的に使用されるか、または必要である刺激因子の量と比較して、実質的により少ない（例えば、前記量の5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％または80％以下である）量で、刺激因子がチャンバーのキャビティ内の細胞に添加される。いくつかの態様において、例えば、10mL～200mL、例えば、少なくとも10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLまたは少なくとも約10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLまたは約10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLまたは10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mLもしくは200mLの試薬のインキュベーションで標的体積を達成するために、インキュベーションは、細胞および刺激剤にインキュベーション緩衝液を添加して行われる。いくつかの態様において、インキュベーション緩衝液および刺激剤は、細胞への添加の前に予め混合される。いくつかの態様において、インキュベーション緩衝液および刺激剤は、細胞に別々に加えられる。いくつかの態様において、刺激インキュベーションは、エネルギー的に有利な相互作用を促進するのを助けることができ、それによって細胞の刺激および活性化を達成しながらより少ない全体的な刺激剤の使用を可能にする周期的な穏やかな混合条件で行われる。
いくつかの態様において、インキュベーションは、一般に、回転の存在下などの混合条件下で、一般に比較的低い力または速度、例えば細胞をペレット化するために使用される速度よりも低い速度、例えば600rpm～1700rpmまたは約600rpm～1700rpm（例えば、600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpmまたは約600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpmまたは少なくとも600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpm）、例えば、80g～100gまたは約80g～100g（例えば、80g、85g、90g、95g、もしくは100g、または約80g、85g、90g、95g、もしくは100g、または少なくとも80g、85g、90g、95g、もしくは100g）の試料またはチャンバーもしくは他の容器の壁でのRCFで行われる。いくつかの態様において、回転は、このような低速での回転の反復する間隔とそれに続く休止期間、例えば、1、2、3、4、5、6、7、8、9、または10秒間の回転および/または休止、例えば約1または2秒間の回転とそれに続く約5、6、7、または8秒間の休止を使用して行われる。
いくつかの態様において、例えば刺激剤とのインキュベーションの総期間は、1時間～96時間、1時間～72時間、1時間～48時間、4時間～36時間、8時間～30時間または12時間～24時間または約1時間～96時間、1時間～72時間、1時間～48時間、4時間～36時間、8時間～30時間または12時間～24時間、例えば少なくとも6時間、12時間、18時間、24時間、36時間もしくは72時間または少なくとも約6時間、12時間、18時間、24時間、36時間もしくは72時間である。いくつかの態様において、さらなるインキュベーションは、1時間～48時間、4時間～36時間、8時間～30時間、もしくは12時間～24時間、または約1時間～48時間、4時間～36時間、8時間～30時間、もしくは12時間～24時間（両端の値を含む）の時間である。
特定の態様において、刺激条件は、1つもしくは複数のサイトカインと共におよび/または1つもしくは複数のサイトカインの存在下で、濃縮されたT細胞の組成物をインキュベートすること、培養する（culturing）こと、および/または培養する（cultivating）ことを含む。特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインは、組換えサイトカインである。いくつかの態様において、1つまたは複数のサイトカインは、ヒト組換えサイトカインである。ある特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインは、T細胞によって発現され、かつ/またはT細胞に内在性である受容体に結合し、かつ/または結合することができる。特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインは、サイトカインの4-アルファ-ヘリックスバンドルファミリーのメンバーであるか、またはこれを含む。いくつかの態様において、サイトカインの4-α-ヘリックスバンドルファミリーのメンバーとして、インターロイキン-2（IL-2）、インターロイキン-4（IL-4）、インターロイキン-7（IL-7）、インターロイキン-9（IL-9）、インターロイキン12（IL-12）、インターロイキン15（IL-15）、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、刺激は、例えば形質導入より前に、細胞の活性化および/または増殖をもたらす。
C. 遺伝子操作のためのベクターおよび方法
BCMA結合性組換え受容体（例えば、CAR）を発現し、そのような組換え受容体を発現する遺伝子操作された細胞を産生するための方法、ポリヌクレオチド、組成物およびキットも提供される。いくつかの態様において、1つまたは複数の組換え受容体（例えば、CAR）または他の分子を、細胞または複数の細胞に遺伝子操作することができる。遺伝子操作は、一般に、レトロウイルス形質導入、形質移入または形質転換等による、組換えまたは操作された成分をコードする核酸の細胞への導入を含む。
キメラ抗原受容体および/またはその一部、例えば鎖をコードするポリヌクレオチドも提供される。提供されるポリヌクレオチドとしては、本明細書に記載される抗BCMAキメラ抗原受容体（例えば、抗原結合性フラグメント）をコードするものがある。1つまたは複数の抗体および/またはその一部をコードするポリヌクレオチド、例えば本明細書に記載の抗BCMA抗体（例えば、抗原結合性フラグメント）の1つもしくは複数ならびに/または他の抗体および/もしくはそれらの一部、例えば他の標的抗原を結合する抗体および/もしくはその一部をコードするポリヌクレオチドも提供される。ポリヌクレオチドは、例えば骨格修飾を有するポリヌクレオチドを含む、天然および/または非天然のヌクレオチドおよび塩基を包含するポリヌクレオチドを含み得る。「核酸分子」、「核酸」および「ポリヌクレオチド」という用語は互換的に使用され得、ヌクレオチドのポリマーを指す。このようなヌクレオチドのポリマーは、天然および/または非天然ヌクレオチドを含有し得、限定されないが、DNA、RNAおよびPNAを含み得る。「核酸配列」は、核酸分子またはポリヌクレオチドを含むヌクレオチドの直鎖配列を指す。
コドン使用のために、および/または潜在的スプライス部位などのスプライス部位を排除するために最適化されたポリヌクレオチドも提供される。本明細書に記載される任意のキメラ抗原受容体などのキメラ抗原受容体のコード配列を最適化および産生する方法も提供される。このような方法は、本明細書のセクションIIに記載されている。
例えば、抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはこのような抗体もしくはフラグメントを含有する組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を産生するための、本明細書に記載されるポリヌクレオチドのいずれかなどのポリヌクレオチドを含有するベクター、および該ベクターを含有する宿主細胞も提供される。いくつかの態様において、ベクターはウイルスベクターである。いくつかの態様において、ベクターはレトロウイルスベクターまたはレンチウイルスベクターである。抗体もしくはその抗原結合性フラグメントまたはこのような抗体もしくはフラグメントを含有する組換え受容体（例えばCAR）を発現する細胞を産生する方法も提供される。
いくつかの態様において、核酸は、抗体のVL領域を含むアミノ酸配列および/またはVH領域を含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および/または重鎖）をコードし得る。核酸は、抗体のVL領域を含む1つまたは複数のアミノ酸配列および/またはVH領域を含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および/または重鎖）をコードし得る。さらなる態様において、このようなポリヌクレオチドを含む1つまたは複数のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる態様において、このようなポリヌクレオチドを含む宿主細胞が提供される。1つのこのような態様において、宿主細胞は、抗体のVH領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクターを含む（例えば、該ベクターで形質転換されている）。別のこのような態様において、宿主細胞は、（1）抗体のVL領域を含むアミノ酸配列および抗体のVH領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（2）抗体のVL領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第1のベクターおよび抗体のVH領域を含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第2のベクターを含む（例えば、（1）または（2）のベクターで形質転換されている）。いくつかの態様において、宿主細胞は、1つもしくは複数の抗体および/またはその一部、例えばその抗原結合性フラグメントを含む1つまたは複数のアミノ酸配列をコードする1つまたは複数の核酸を含む1つまたは複数のベクターを含む（例えば、1つまたは複数の該ベクターで形質転換されている）。いくつかの態様において、1つまたは複数のこのような宿主細胞が提供される。いくつかの態様において、1つまたは複数のこのような宿主細胞を含有する組成物が提供される。いくつかの態様において、1つまたは複数の宿主細胞は、異なる抗体または同じ抗体を発現することができる。いくつかの態様において、宿主細胞の各々は2つ以上の抗体を発現することができる。
抗BCMAキメラ抗原受容体を作製する方法も提供される。キメラ受容体の組換え産生のために、例えば本明細書に記載されるようなキメラ受容体抗体をコードする核酸配列を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニングおよび/または発現のために1つまたは複数のベクター中に挿入し得る。このような核酸配列は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。いくつかの態様において、抗BCMAキメラ抗原受容体を作製する方法であって、受容体の発現に適した条件下で、上記のように抗体をコードする核酸配列を含む宿主細胞を培養することを含む、方法が提供される。
いくつかの場合において、BCMA結合性組換え受容体、例えば、キメラ抗原受容体（CAR）をコードする核酸配列を含有するポリヌクレオチドは、シグナルペプチドをコードするシグナル配列を含有する。いくつかの局面において、シグナル配列は、天然ポリペプチドに由来するシグナルペプチドをコードし得る。他の局面において、シグナル配列は、異種のまたは非天然のシグナルペプチドをコードし得る。いくつかの局面において、非限定的な例示的シグナルペプチドには、SEQ ID NO:166に示されているか、またはSEQ ID NO:167もしくは168～171に示されているヌクレオチド配列によってコードされるIgGカッパ鎖のシグナルペプチド;SEQ ID NO:154に示され、SEQ ID NO:155に示されているヌクレオチド配列によってコードされるGMCSFRアルファ鎖;SEQ ID NO:146に示されているCD8アルファシグナルペプチド;またはSEQ ID NO:142に示されているCD33シグナルペプチドが含まれる。
いくつかの態様において、ベクターまたは構築物は、コードされた組換え受容体の発現を調節するためのプロモーターおよび/またはエンハンサーまたは調節エレメントを含有することができる。いくつかの例において、プロモーターおよび/またはエンハンサーまたは調節エレメントは、条件依存性プロモーター、エンハンサーおよび/または調節エレメントであり得る。いくつかの例において、これらのエレメントは導入遺伝子の発現を駆動する。いくつかの例において、CAR導入遺伝子は、HTLV1エンハンサーを有するEF1αプロモーター（SEQ ID NO:151）などのプロモーターに機能的に連結され得る。いくつかの例において、CAR導入遺伝子は、導入遺伝子の下流に位置するウッドチャック肝炎ウイルス（WHP）転写後調節エレメント（WPRE;SEQ ID NO:253）に機能的に連結される。
いくつかの態様において、ベクターまたは構築物は、1つまたは複数の核酸分子の発現を駆動する単一のプロモーターを含有することができる。いくつかの態様において、このような核酸分子、例えば転写物は、マルチシストロン性（バイシストロン性またはトリシストロン性、例えば、米国特許第6,060,273号参照）であり得る。例えば、いくつかの態様において、転写単位は、IRES（配列内リボソーム進入部位）を含有するバイシストロン性単位として操作することができ、これにより、単一のプロモーターからメッセージによる（例えば、第1および第2のキメラ受容体をコードする）遺伝子産物の同時発現が可能となる。あるいは、いくつかの場合においては、単一のプロモーターが、単一のオープンリーディングフレーム（ORF）内に、自己切断ペプチド（例えば、2A切断配列）またはプロテアーゼ認識部位（例えばフューリン）をコードする配列によって互いに分離された（例えば、第1および第2の組換え受容体または組換え受容体の一部をコードする）2つまたは3つの遺伝子を含有するRNAの発現を指示し得る。したがって、前記ORFは、単一のポリペプチドをコードしており、これは、翻訳中（T2Aの場合）または翻訳後のいずれかに、個々のタンパク質に切断される。いくつかの場合において、T2A等のペプチドは、リボソームに、2AエレメントのC末端でのペプチド結合の合成をスキップさせて（リボソームスキップ）、2A配列の末端と、下流側の隣のペプチドとの間に分離をもたらすことができる（例えば、de Felipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13（2004）およびde Felipe et al.Traffic 5:616-626（2004）参照）。多くの2Aエレメントが公知である。本明細書中で開示される方法およびポリヌクレオチドにおいて使用され得る2A配列の例として、以下に限定されないが、米国特許出願公開第20070116690号に記載されるような口蹄疫ウイルス（F2A、例えばSEQ ID NO:152または153）、ウマ鼻炎Aウイルス（E2A、例えばSEQ ID NO:148または149）、トセア・アシグナ（Thosea asigna）ウイルス（T2A、例えばSEQ ID NO:241、242または243）およびブタテスコウイルス-1（P2A、例えばSEQ ID NO:201または202）由来の2A配列である。いくつかの態様において、1つまたは複数の異なるプロモーターまたは別個のプロモーターは、1つまたは複数の組換え受容体またはその一部をコードする1つまたは複数の核酸分子の発現を駆動する。
本明細書で提供される組換え受容体のいずれも、例えばBCMA結合性組換え受容体および/または追加の組換え受容体は、任意の組み合わせまたは配置で、受容体をコードする1つまたは複数の核酸分子を含有するポリヌクレオチドによってコードされ得る。例えば、1つ、2つ、3つ、またはそれ以上のポリヌクレオチドが、1つ、2つ、3つ、またはそれ以上の異なる受容体またはドメインをコードすることができる。いくつかの態様において、1つのベクターまたは構築物が、1つまたは複数の結合組換え受容体をコードする核酸分子を含有し、別個のベクターまたは構築物が、追加の分子、例えば追加の組換え受容体をコードする核酸分子を含有する。核酸分子のそれぞれはまた、表面マーカー、例えば切断型EGFR（tEGFR）などの1つまたは複数のマーカーをコードすることができる。
上記のいずれかなど、核酸分子、ベクターまたは構築物の1つまたは複数を含有する組成物も提供される。いくつかの態様において、T細胞などの細胞を操作して、任意の組換え受容体および/または追加の分子を発現させるために、核酸分子、ベクター、構築物または組成物を使用することができる。
いくつかの態様において、1つまたは複数の組換え受容体（例えば、CAR）は、細胞または複数の細胞中で発現されるように遺伝子操作することができる。いくつかの態様において、第1の組換え受容体および第2の分子、例えば組換え受容体は、同じまたは別個の核酸分子によってコードされる。いくつかの態様において、さらなる分子が、細胞または複数の細胞において発現されるように操作される。
1. 遺伝子導入
いくつかの態様において、操作された細胞を産生するための方法は、組換え受容体（例えば抗BCMA CAR）をコードするポリヌクレオチドの例えば刺激されたまたは活性化された細胞などの細胞への導入を含む。特定の態様において、組換えタンパク質は、セクションIに記載されているいずれかなどの組換え受容体である。組換え受容体などの組換えタンパク質をコードする核酸分子の細胞への導入は、多くの公知のベクターのいずれをも使用して実施され得る。このようなベクターには、レンチウイルス系およびガンマレトロウイルス系を含むウイルス系および非ウイルス系、ならびにPiggyBacまたはSleepingBeautyに基づく遺伝子導入系などのトランスポゾンに基づく系が含まれる。例示的な方法には、ウイルスの、例えばレトロウイルスまたはレンチウイルスの形質導入、トランスポゾンおよびエレクトロポレーションを介することを含む、受容体をコードする核酸の導入のための方法が含まれる。いくつかの態様において、操作は、濃縮されたT細胞の1つまたは複数の操作された組成物を産生する。
ある特定の態様において、刺激されたT細胞の1つまたは複数の組成物は、濃縮されたT細胞の2つの別個の刺激された組成物であるか、濃縮されたT細胞の2つの別個の刺激された組成物を含む。特定の態様において、濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物、例えば、同じ生物学的試料から選択され、単離され、および/または濃縮された濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物は別々に操作される。ある特定の態様において、2つの別個の組成物は、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物を含む。特定の態様において、2つの別個の組成物は、濃縮されたCD8＋T細胞の組成物を含む。いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋T細胞および濃縮されたCD8＋T細胞の2つの別個の組成物は、別々に遺伝子操作される。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞の単一の組成物が遺伝子操作される。ある特定の態様において、単一の組成物は、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物である。いくつかの態様において、単一の組成物は、操作の前に別個の組成物から組み合わされた濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物である。
いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の別々の組成物は単一の組成物に組み合わされ、遺伝子操作される、例えば形質導入または形質移入される。ある特定の態様において、遺伝子操作が実施された後におよび/または完了した後に、濃縮されたCD4＋および濃縮されたCD8＋T細胞の別々の操作された組成物は単一の組成物に組み合わされる。
いくつかの態様において、遺伝子導入は、例えばサイトカインまたは活性化マーカーの発現によって測定される増殖、生存および/または活性化などの応答を誘導する刺激と細胞を組み合わせることなどによって、まず細胞を刺激し、その後、活性化された細胞を形質導入し、臨床用途に十分な数まで培養で拡大増殖させることによって達成される。ある特定の態様において、遺伝子導入は、刺激条件下で、例えばセクションIII-Bに記載される方法のいずれかによって、まず細胞をインキュベートすることによって達成される。
いくつかの状況において、刺激因子（例えば、リンホカインまたはサイトカイン）の過剰発現は、対象にとって毒性であり得る。したがって、いくつかの状況において、操作された細胞は、養子免疫療法における投与後など、インビボで細胞が陰性選択を受けやすいようにする遺伝子セグメントを含む。例えば、いくつかの局面において、細胞は、細胞が投与される患者のインビボ状態の変化の結果として排除され得るように操作される。陰性選択可能な表現型は、投与された作用物質、例えば化合物に対する感受性を付与する遺伝子の挿入に起因し得る。陰性選択可能な遺伝子には、ガンシクロビル感受性を付与する単純ヘルペスウイルスI型チミジンキナーゼ（HSV-I TK）遺伝子（Wigler et al.,Cell 2:223,1977）;細胞のヒポキサンチンホスホリボシルトランスフェラーゼ（HPRT）遺伝子、細胞のアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（APRT）遺伝子、細菌のシトシンデアミナーゼ（Mullen et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33（1992））が含まれる。
いくつかの局面において、細胞は、サイトカインまたは他の因子の発現を促進するようにさらに操作される。遺伝子操作された成分、例えば抗原受容体、例えばCARを導入するための様々な方法が周知であり、提供される方法および組成物と共に使用され得る。例示的な方法には、ウイルスの、例えばレトロウイルスまたはレンチウイルスの形質導入、トランスポゾンおよびエレクトロポレーションを介することを含む、受容体をコードするポリヌクレオチドの導入のための方法が含まれる。
いくつかの態様において、組換えポリヌクレオチドは、例えばサルウイルス40（SV40）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（AAV）に由来するベクターなどの、組換え感染性ウイルス粒子を使用して、細胞中に導入される。いくつかの態様において、組換えポリヌクレオチドは、組換えレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、例えばガンマレトロウイルスベクターを使用して、T細胞中に導入される（例えば、Koste et al.（2014）Gene Therapy 2014 Apr 3.doi:10.1038/gt.2014.25;Carlens et al.（2000）Exp.Hematol 28（10）:1137-46;Alonso-Camino et al.（2013）Mol Ther Nucl Acids 2,e93;Park et al.,Trends Biotechnol.2011 November 29（11）:550-557参照）。
いくつかの態様において、遺伝子操作のための方法は、組成物の1つまたは複数の細胞を、組換えタンパク質、例えば組換え受容体をコードする核酸分子と接触させることによって行われる。いくつかの態様において、接触は、スピノキュレーション（例えば遠心接種）等の遠心分離により行われ得る。そのような方法として、国際公開第2016/073602号に記載されている方法のいずれもが挙げられる。例示的な遠心チャンバーとして、A-200/FおよびA-200遠心チャンバーを含むSepax（登録商標）およびSepax（登録商標）2システムと共に使用されるもの、ならびにそのようなシステムと共に使用される種々のキットを含む、Biosafe SAによって製造かつ販売されているものが挙げられる。例示的なチャンバー、システム、ならびに加工処理機器およびキャビネットが、例えば、米国特許第6,123,655号、米国特許第6,733,433号、および米国特許出願公開第2008/0171951号、ならびに国際公開第00/38762号に記載されており、これらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。そのようなシステムと共に使用される例示的なキットとして、BioSafe SAによって製造物品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1、またはCS-900.2で販売されている単回使用キットが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、接触は、スピノキュレーション（例えば遠心接種）等の遠心分離により行われ得る。いくつかの態様において、細胞、ウイルス粒子および試薬を含有する組成物は、一般に、比較的低い力または速度、例えば細胞をペレット化するのに使用される速度よりも低い速度、例えば600rpm～1700rpmまたは約600rpm～1700rpm（例えば、600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpm、または約600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpm、または少なくとも600rpm、1000rpm、もしくは1500rpm、もしくは1700rpm）にて回転させることができる。いくつかの態様において、回転は、例えばチャンバーまたはキャビティの内壁または外壁にて測定されて、100g～3200gまたは約100g～3200g（例えば、100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または約100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または少なくとも100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または少なくとも約100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g）の力、例えば相対遠心力にて実行される。「相対遠心力」またはRCFという用語は、一般に、回転軸と比較された空間内の特定の点において、地球の重力と比べて、物体または物質（細胞、試料、またはペレット、および/または回転されているチャンバーもしくはその他の容器内の点など）に対して付与される有効な力であると理解される。値は、重力、回転速度、および回転半径（回転軸およびRCFが測定されている物体、物質、または粒子からの距離）を考慮して、周知の式を使用して決定され得る。
いくつかの態様において、導入は、組成物の1つまたは複数の細胞を、組換えタンパク質、例えば組換え受容体をコードする核酸分子と接触させることによって実行される。いくつかの態様において、接触は、スピノキュレーション（例えば遠心接種）等の遠心分離により行われ得る。そのような方法として、国際公開第2016/073602号に記載されている方法のいずれもが挙げられる。例示的な遠心チャンバーとして、A-200/FおよびA-200遠心チャンバーを含むSepax（登録商標）およびSepax（登録商標）2システムと共に使用されるもの、ならびにそのようなシステムと共に使用される種々のキットを含む、Biosafe SAによって製造かつ販売されているものが挙げられる。例示的なチャンバー、システム、ならびに加工処理機器およびキャビネットが、例えば、米国特許第6,123,655号、米国特許第6,733,433号、および米国特許出願公開第2008/0171951号、ならびに国際公開第00/38762号に記載されており、これらの各々の内容は、その全体が参照により本明細書に組み入れられる。そのようなシステムと共に使用される例示的なキットとして、BioSafe SAによって製造物品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1、またはCS-900.2で販売されている単回使用キットが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの態様において、系は、系内で実行される形質導入工程および1つまたは複数の種々の他の加工処理工程、例えば、本明細書または国際公開第2016/073602号に記載される遠心チャンバー系により、またはこれに関連して実行することができる1つまたは複数の加工処理段階の局面を操作、自動化、制御、かつ/または監視するための機器が挙げられる他の機器と共に含まれ、かつ/またはこれに関連して配置される。当該機器は、いくつかの態様において、キャビネット内に収容されている。いくつかの態様において、機器として、制御回路を収容するハウジング、遠心分離機、カバー、モーター、ポンプ、センサ、ディスプレイ、およびユーザインターフェースを備えるキャビネットが挙げられる。例示的な装置が、米国特許第6,123,655号、米国特許第6,733,433号および米国特許出願公開第2008/0171951号に記載されている。
いくつかの態様において、系は、一連の容器、例えばバッグ、チューブ、栓、クランプ、コネクタ、および遠心チャンバーを含む。いくつかの態様において、バッグ等の容器は、同じ容器または別個の容器、例えば同じバッグまたは別個のバッグ内に、形質導入されることとなる細胞およびウイルスベクター粒子を含有するバッグ等の1つまたは複数の容器を含む。いくつかの態様において、系はさらに、方法の間に、チャンバーおよび/または他の成分中に引き込まれて、成分および/または組成物を希釈、再懸濁、かつ/または洗浄する希釈剤および/または洗浄液等の媒体を含有するバッグ等の1つまたは複数の容器を含む。容器は、系内の1つまたは複数の位置、例えば、インプットライン、希釈剤ライン、洗浄ライン、廃棄物ライン、および/またはアウトプットラインに対応する位置に連結され得る。
いくつかの態様において、チャンバーは、例えばその回転軸周りに、チャンバーの回転を行うことができる遠心分離機に関連する。回転は、細胞の形質導入に関連して、かつ/または他の加工処理段階の1つもしくは複数において、インキュベーションの前、この間、かつ/またはこの後に起こり得る。ゆえに、いくつかの態様において、種々の加工処理段階の1つまたは複数が、回転下で、例えば特定の力で実行される。チャンバーは典型的に、チャンバーが遠心分離中に垂直に位置し、かつ側壁および軸が垂直または略垂直であり、端壁が水平または略水平であるように、垂直または略垂直に回転することができる。
いくつかの態様において、細胞、ベクター、例えば、ウイルス粒子および試薬を含有する組成物は、一般に、比較的低い力または速度、例えば細胞をペレット化するのに使用される速度よりも低い速度、例えば600rpm～1700rpmまたは約600rpm～1700rpm（例えば、600rpm、1000rpm、もしくは1500rpmもしくは1700rpm、または約600rpm、1000rpm、もしくは1500rpmもしくは1700rpm、または少なくとも600rpm、1000rpm、もしくは1500rpmもしくは1700rpm）にて回転させることができる。いくつかの態様において、回転は、例えばチャンバーまたはキャビティの内壁または外壁にて測定されて、100g～3200gまたは約100g～3200g（例えば、100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または約100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または少なくとも100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g、または少なくとも約100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g、もしくは3200g）の力、例えば相対遠心力にて実行される。「相対遠心力」またはRCFという用語は、一般に、回転軸と比較された空間内の特定の点において、地球の重力と比べて、物体または物質（細胞、試料、またはペレット、および/または回転されているチャンバーもしくはその他の容器内の点など）に対して付与される有効な力であると理解される。値は、重力、回転速度、および回転半径（回転軸およびRCFが測定されている物体、物質、または粒子からの距離）を考慮して、周知の式を使用して決定され得る。
いくつかの態様において、遺伝子操作、例えば形質導入の少なくとも一部の間、および/または遺伝子操作に続いて、細胞は、細胞の培養（cultivation）または拡大増殖などのために、遺伝子操作された細胞の培養のためにバイオリアクターバッグアセンブリに移される。
2. ウイルスベクター
いくつかの態様において、組換え核酸は、例えばサルウイルス40（SV40）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス（AAV）に由来するベクターなどの、組換え感染性ウイルス粒子を使用して、細胞中に移入される。いくつかの態様において、組換え核酸が、組換えレンチウイルスベクターまたはレトロウイルスベクター、例えばガンマレトロウイルスベクターを使用して、T細胞中に移入される（例えば、Koste et al.（2014）Gene Therapy 2014 Apr 3.doi:10.1038/gt.2014.25;Carlens et al.（2000）Exp Hematol 28（10）:1137-46;Alonso-Camino et al.（2013）Mol Ther Nucl Acids 2,e93;Park et al.,Trends Biotechnol.,2011 November 29（11）:550-557参照）。
いくつかの態様において、ウイルスベクターまたは非ウイルスDNAは、異種組換えタンパク質をコードする核酸を含有する。いくつかの態様において、異種組換え分子は、組換え受容体、例えば抗原受容体、例えば遺伝子サイレンシングのためのSBトランスポゾン、キャプシドに封入されたトランスポゾン、例えばゲノム組換えのための相同二本鎖核酸またはレポーター遺伝子（例えば、GFPなどの蛍光タンパク質）またはルシフェラーゼであるか、またはこれらを含む。
いくつかの態様において、レトロウイルスベクターは、長い末端反復配列（LTR）を有し、例えば、レトロウイルスベクターは、モロニーマウス白血病ウイルス（MoMLV）、骨髄増殖性肉腫ウイルス（MPSV）、マウス胚性幹細胞ウイルス（MESV）、マウス幹細胞ウイルス（MSCV）、脾フォーカス形成ウイルス（SFFV）またはヒト免疫不全ウイルス1型（HIV-1）に由来する。ほとんどのレトロウイルスベクターは、マウスレトロウイルスに由来する。いくつかの態様において、レトロウイルスとして、任意の鳥類細胞源または哺乳動物細胞源に由来するものが挙げられる。レトロウイルスは典型的に、アンホトロピックであり、これは、ヒトが挙げられるいくつかの種の宿主細胞に感染できることを意味する。一態様において、発現されることとなる遺伝子は、レトロウイルスのgag配列、pol配列、および/またはenv配列に取って代わる。いくつかの例示的なレトロウイルス系が記載されている（例えば、米国特許第5,219,740号、米国特許第6,207,453号、米国特許第5,219,740号;Miller and Rosman（1989）BioTechniques 7:980-990;Miller,A.D.（1990）Human Gene Therapy 1:5-14;Scarpa et al.（1991）Virology 180:849-852;Burns et al.（1993）Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037;およびBoris-Lawrie and Temin（1993）Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109）。
レンチウイルス形質導入の方法は公知である。例示的な方法が、例えば、Wang et al.（2012）J.Immunother.35（9）:689-701;Cooper et al.（2003）Blood.101:1637-1644;Verhoeyen et al.（2009）Methods Mol Biol.506:97-114;およびCavalieri et al.（2003）Blood.102（2）:497-505に記載されている。
いくつかの態様において、ウイルスベクター粒子は、レトロウイルスゲノムベースのベクターに由来する、例えばレンチウイルスゲノムベースのベクターに由来するゲノムを含有する。提供されるウイルスベクターのいくつかの局面において、CARなどの抗原受容体などの組換え受容体をコードする異種核酸は、ベクターゲノムの5'LTR配列と3'LTR配列との間に含有され、および/または位置する。
いくつかの態様において、ウイルスベクターゲノムは、HIV-1ゲノムまたはSIVゲノムなどのレンチウイルスゲノムである。例えば、レンチウイルスベクターは、病原性遺伝子を多重に減衰させることによって生成されており、例えば、遺伝子env、vif、vpuおよびnefを欠失させることができ、治療目的のためにベクターをより安全にする。レンチウイルスベクターは公知である。Naldini et al.,（1996および1998）;Zufferey et al.,（1997）;Dull et al.,1998、米国特許第6,013,516号;および米国特許第5,994,136号）を参照のこと。いくつかの態様において、これらのウイルスベクターはプラスミドベースまたはウイルスベースであり、外来核酸を組み込みむため、選択のため、および核酸を宿主細胞に移入するための必須配列を運搬するように構成される。公知のレンチウイルスは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（「ATCC」;10801 University Blvd.,Manassas,Va.20110-2209）などの寄託機関またはコレクションから容易に入手することができ、または一般に利用可能な技術を使用して公知の供給源から単離することができる。
レンチウイルスベクターの非限定的な例としては、ヒト免疫不全ウイルス1（HIV-1）、HIV-2、サル免疫不全ウイルス（SIV）、ヒトTリンパ球向性ウイルス1（HTLV-1）、HTLV-2またはウマ伝染性貧血ウイルス（E1AV）などのレンチウイルスに由来するものが挙げられる。例えば、レンチウイルスベクターは、HIV病原性遺伝子を多重に減衰させることによって生成されており、例えば、遺伝子env、vif、vpr、vpuおよびnefが欠失され、治療目的のためにベクターをより安全にする。レンチウイルスベクターは当技術分野で公知であり、Naldini et al.,（1996および1998）;Zufferey et al.,（1997）;Dull et al.,1998、米国特許第6,013,516号;および米国特許第5,994,136号）を参照されたい。いくつかの態様において、これらのウイルスベクターはプラスミドベースまたはウイルスベースであり、外来核酸を組み込みむため、選択のため、および核酸を宿主細胞に移入するための必須配列を運搬するように構成される。公知のレンチウイルスは、アメリカンタイプカルチャーコレクション（「ATCC」;10801 University Blvd.,Manassas,Va.20110-2209）などの寄託機関またはコレクションから容易に入手することができ、または一般に利用可能な技術を使用して公知の供給源から単離することができる。
いくつかの態様において、ウイルスゲノムベクターは、レンチウイルスなどのレトロウイルスの5'および3'LTRの配列を含有することができる。いくつかの局面において、ウイルスゲノム構築物は、レンチウイルスの5'および3'LTRからの配列を含有し得、特にレンチウイルスの5'LTRおよびレンチウイルスからの不活性化されたまたは自己不活型の3'LTRからのRおよびU5配列を含有することができる。LTR配列は、任意の種由来の任意のレンチウイルス由来のLTR配列であり得る。例えば、LTR配列は、HIV、SIV、FIVまたはBIV由来のLTR配列であり得る。典型的には、LTR配列はHIV LTR配列である。
いくつかの態様において、HIVウイルスベクターなどのウイルスベクターの核酸は、追加の転写単位を欠く。ベクターゲノムは、不活性化されたまたは自己不活型の3'LTRを含有することができる（Zufferey et al.J Virol 72:9873,1998;Miyoshi et al.,J Virol 72:8150,1998）。例えば、自己不活型（SIN）ベクターを作製するために、ウイルスベクターRNAを作製するために使用される核酸の3'LTRのU3領域における欠失を使用することができる。次いで、この欠失は、逆転写中にプロウイルスDNAの5'LTRに導入され得る。自己不活型ベクターは一般に、3'長い末端反復配列（LTR）からのエンハンサー配列およびプロモーター配列の欠失を有し、これはベクター組み込み中に5'LTRに複製される。いくつかの態様において、LTRの転写活性を消失させるために、TATAボックスの除去を含めて、十分な配列を除去することができる。これにより、形質導入された細胞中での完全長ベクターRNAの産生を防ぐことができる。いくつかの局面において、3'LTRのU3エレメントは、そのエンハンサー配列、TATAボックス、Sp1およびNF-κB部位の欠失を含有する。自己不活型3'LTRの結果として、進入および逆転写後に生成されるプロウイルスは、不活化された5'LTRを含有する。これは、ベクターゲノムの動員のリスクおよび近くの細胞プロモーターに対するLTRの影響を低減させることによって安全性を改善することができる。自己不活型3'LTRは、当該分野で公知の任意の方法によって構築することができる。いくつかの態様において、これは、ベクターの力価またはベクターのインビトロもしくはインビボ特性に影響を及ぼさない。
任意で、レンチウイルス5'LTRからのU3配列は、ウイルス構築物中のプロモーター配列、例えば異種プロモーター配列で置き換えることができる。これにより、パッケージング細胞株から回収されたウイルスの力価を増加させることができる。エンハンサー配列も含めることができる。パッケージング細胞株におけるウイルスRNAゲノムの発現を増加させる任意のエンハンサー/プロモーターの組み合わせが使用され得る。一例では、CMVエンハンサー/プロモーター配列が使用される（米国特許第5,385,839号および米国特許第5,168,062号）。
ある特定の態様において、挿入突然変異誘発のリスクは、レンチウイルスベクターゲノムなどのレトロウイルスベクターゲノムを組み込み欠損であるように構築することによって最小限に抑えることができる。非組込み型ベクターゲノムを作製するために、様々なアプローチを遂行することができる。いくつかの態様においては、pol遺伝子のインテグラーゼ酵素成分が不活性なインテグラーゼを有するタンパク質をコードするように、pol遺伝子のインテグラーゼ酵素成分中に突然変異を操作することができる。いくつかの態様においては、例えば、一方もしくは両方の付着部位を変異もしくは欠失させることによって、または欠失もしくは改変によって3'LTR近位ポリプリン鎖（PPT）を非機能性にすることによって組み込みを防止するように、ベクターゲノム自体を改変することができる。いくつかの態様において、非遺伝的アプローチが利用可能であり、これらには、インテグラーゼの1つまたは複数の機能を阻害する薬理学的作用物質が含まれる。アプローチは相互に排他的ではない;すなわち、アプローチの2つ以上を一度に使用することができる。例えば、インテグラーゼおよび付着部位の両方が非機能性であり得るか、またはインテグラーゼおよびPPT部位が非機能性であり得るか、または付着部位およびPPT部位が非機能性であり得るか、またはそれらのすべてが非機能性であり得る。このような方法およびウイルスベクターゲノムは公知であり、入手可能である（Philpott and Thrasher,Human Gene Therapy 18:483,2007.Engelman et al.J Virol 69:2729,1995;Brown et al J Virol 73:9011（1999）;国際公開第2009/076524号;McWilliams et al.,J Virol,77:11150,2003;PowellおよびLevin J Virol 70:5288,1996を参照）。
いくつかの態様において、ベクターは、原核生物宿主細胞などの宿主細胞における増殖のための配列を含有する。いくつかの態様において、ウイルスベクターの核酸は、細菌細胞などの原核細胞における増殖のための1つまたは複数の複製起点を含有する。いくつかの態様において、原核生物の複製起点を含むベクターはまた、その発現が薬物耐性などの検出可能または選択可能なマーカーを付与する遺伝子を含有し得る。
ウイルスベクターゲノムは、典型的には、パッケージング細胞株またはプロデューサー細胞株中に形質移入することができるプラスミド形態で構築される。そのゲノムがウイルスベクターゲノムのRNAコピーを含有するレトロウイルス粒子を作製するために、様々な公知の方法のいずれをも使用することができる。いくつかの態様において、第1に、構造タンパク質の他にウイルスベクター粒子を生成するのに必要な酵素を包含するパッケージングプラスミド、および第2に、ウイルスベクター自体、すなわち導入されるべき遺伝物質という少なくとも2つの構成要素が、ウイルスベースの遺伝子送達系の作製に関与する。これらの構成要素の一方または両方の設計に、バイオセーフティ保護手段を導入することができる。
いくつかの態様において、パッケージングプラスミドは、エンベロープタンパク質以外のすべてのレトロウイルス、例えばHIV-1のタンパク質を含有することができる（Naldini et al.,1998）。他の態様において、ウイルスベクターは、さらなるウイルス遺伝子、例えば、病原性に関連するウイルス遺伝子、例えば、vpr、vif、vpuおよびnef、ならびに/またはHIVの主要なトランス活性化因子であるTatを欠くことができる。いくつかの態様において、HIVベースのレンチウイルスベクターなどのレンチウイルスベクターは、親ウイルスの3つの遺伝子:gag、polおよびrevのみを含み、これは組換えを通じた野生型ウイルスの再構成の可能性を低減または排除する。
いくつかの態様において、ウイルスベクターゲノムは、ウイルスベクターゲノムから転写されたウイルスゲノムRNAをウイルス粒子中にパッケージングするために必要なすべての成分を含有するパッケージング細胞株に導入される。あるいは、ウイルスベクターゲノムは、関心対象の1つまたは複数の配列、例えば組換え核酸に加えて、ウイルス成分をコードする1つまたは複数の遺伝子を含み得る。しかしながら、いくつかの局面においては、標的細胞におけるゲノムの複製を防止するために、複製に必要な内因性ウイルス遺伝子が除去され、パッケージング細胞株に別々に提供される。
いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、粒子を生成するために必要な成分を含有する1つまたは複数のプラスミドベクターで形質移入される。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、LTR、シス作用性パッケージング配列および関心対象の配列、すなわちCARなどの抗原受容体をコードする核酸を含むウイルスベクターゲノムを含有するプラスミド;ならびにウイルスの酵素的および/または構造的構成要素、例えばGag、polおよび/またはrevをコードする1つまたは複数のヘルパープラスミドで形質移入される。いくつかの態様において、レトロウイルスベクター粒子を生成する様々な遺伝子成分を分離するために、複数のベクターが利用される。いくつかのそのような態様において、パッケージング細胞に別個のベクターを提供することにより、そのようにしなければ、複製能を有するウイルスを生成し得る組換え事象の機会が減少する。いくつかの態様において、すべてのレトロウイルス成分を有する単一のプラスミドベクターを使用することができる。
いくつかの態様において、レンチウイルスベクター粒子などのレトロウイルスベクター粒子は、宿主細胞の形質導入効率を増大させるために偽型化される。例えば、いくつかの態様において、レンチウイルスベクター粒子などのレトロウイルスベクター粒子はVSV-G糖タンパク質で偽型化され、これは広い細胞宿主範囲を提供し、形質導入され得る細胞型を拡大する。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、例えば、シンドビスウイルスエンベロープ、GALVまたはVSV-Gなどの異種指向性、多種指向性または両種指向性エンベロープを含めるために、非天然のエンベロープ糖タンパク質をコードするプラスミドまたはポリヌクレオチドで形質移入される。
いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、ウイルスゲノムRNAをレンチウイルスベクター粒子中にパッケージングするためにトランスで必要とされるウイルスの調節タンパク質および構造タンパク質を含む成分を提供する。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、レンチウイルスタンパク質を発現し、機能性レンチウイルスベクター粒子を産生することができる任意の細胞株であり得る。いくつかの局面において、適切なパッケージング細胞株は、293（ATCC CCL X）、293T、HeLA（ATCC CCL 2）、D17（ATCC CCL 183）、MDCK（ATCC CCL 34）、BHK（ATCC CCL-10）およびCf2Th（ATCC CRL 1430）細胞を含む。
いくつかの態様において、パッケージング細胞株はウイルスタンパク質を安定に発現する。例えば、いくつかの局面において、gag、pol、revおよび/または他の構造遺伝子を含有するが、LTRおよびパッケージング構成要素を含まないパッケージング細胞株を構築することができる。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、異種タンパク質をコードする核酸分子および/またはエンベロープ糖タンパク質をコードする核酸を含有するウイルスベクターゲノムと共に、1つまたは複数のウイルスタンパク質をコードする核酸分子で一過性に形質移入され得る。
いくつかの態様において、ウイルスベクターならびにパッケージングおよび/またはヘルパープラスミドは、形質移入または感染を介してパッケージング細胞株中に導入される。パッケージング細胞株は、ウイルスベクターゲノムを含有するウイルスベクター粒子を産生する。形質移入または感染のための方法は周知である。非限定的な例としては、リン酸カルシウム、DEAE-デキストランおよびリポフェクション法、エレクトロポレーションおよびマイクロインジェクションが挙げられる。
組換えプラスミドならびにレトロウイルスLTRおよびパッケージング配列を（例えば、リン酸カルシウム沈殿によって）特別な細胞株に導入する場合、パッケージング配列は、組換えプラスミドのRNA転写物をウイルス粒子にパッケージングすることを可能にし得、次いで、ウイルス粒子は培養培地中に分泌され得る。次いで、いくつかの態様において、組換えレトロウイルスを含有する培地は採取され、任意で濃縮され、遺伝子導入のために使用される。例えば、いくつかの局面において、パッケージングプラスミドおよびトランスファーベクターのパッケージング細胞株への同時形質移入後、ウイルスベクター粒子は培養培地から回収され、当業者によって使用される標準的な方法によって滴定される。
いくつかの態様において、レンチウイルスベクターなどのレトロウイルスベクターは、レンチウイルス粒子の生成を可能にするプラスミドの導入によって、例示的なHEK 293T細胞株などのパッケージング細胞株中で産生され得る。いくつかの態様において、パッケージング細胞は形質移入され、ならびに/またはgagおよびpolをコードするポリヌクレオチドと、抗原受容体、例えばCARなどの組換え受容体をコードするポリヌクレオチドとを含有する。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、任意でおよび/または追加的に、revタンパク質をコードするポリヌクレオチドで形質移入され、および/またはrevタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する。いくつかの態様において、パッケージング細胞株は、任意でおよび/または追加的に、VSV-Gなどの非天然のエンベロープ糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドで形質移入され、および/またはVSV-Gなどの非天然のエンベロープ糖タンパク質をコードするポリヌクレオチドを含有する。いくつかのそのような態様において、細胞、例えばHEK 293T細胞の形質移入の約2日後、細胞上清は、回収および滴定することができる組換えレンチウイルスベクターを含有する。
回収および/または産生されたレトロウイルスベクター粒子は、記載される方法を使用して標的細胞を形質導入するために使用することができる。標的細胞に入ると、ウイルスRNAは逆転写され、核内に移入され、宿主ゲノム中に安定に組み込まれる。ウイルスRNAの組み込みの1日または2日後に、組換えタンパク質、例えばCARなどの抗原受容体の発現を検出することができる。
いくつかの態様において、提供される方法は、複数の細胞を含む細胞組成物をウイルス粒子と接触させる、例えばインキュベートすることによって細胞に形質導入する方法を含む。いくつかの態様において、形質移入または形質導入される細胞は、対象から得られた初代細胞、例えば対象から濃縮および/または選択された細胞であるか、またはこれを含む。
いくつかの態様において、組成物の形質導入されるべき細胞の濃度は、少なくとも1.0×105細胞/mL、5×105細胞/mL、1×106細胞/mL、5×106細胞/mL、1×107細胞/mL、5×107細胞/mLもしくは1×108細胞/mLまたは少なくとも約1.0×105細胞/mL、5×105細胞/mL、1×106細胞/mL、5×106細胞/mL、1×107細胞/mL、5×107細胞/mLもしくは1×108細胞/mLまたは約1.0×105細胞/mL、5×105細胞/mL、1×106細胞/mL、5×106細胞/mL、1×107細胞/mL、5×107細胞/mLもしくは1×108細胞/mLなど、1.0×105細胞/mL～1.0×108細胞/mLまたは約1.0×105細胞/mL～1.0×108細胞/mLである。
いくつかの態様において、ウイルス粒子は、形質導入される細胞の総数あたりの、ウイルスベクター粒子またはその感染単位（IU）のコピーのある特定の比（IU/細胞）で提供される。例えば、いくつかの態様において、ウイルス粒子は、接触中に、細胞1個当たり0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50もしくは60IUまたは約0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50もしくは60IUまたは少なくとも0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50もしくは60IUまたは少なくとも約0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50もしくは60IUのウイルスベクター粒子で存在する。
いくつかの態様において、ウイルスベクター粒子の力価は、1x106IU/mL～1x108IU/mLまたは約1x106IU/mL～1x108IU/mL、例えば5x106IU/mL～5x107IU/mLまたは約5x106IU/mL～5x107IU/mL、例えば少なくとも6x106IU/mL、7x106IU/mL、8x106IU/mL、9x106IU/mL、1x107IU/mL、2x107IU/mL、3x107IU/mL、4x107IU/mLまたは5x107IU/mLである。
いくつかの態様において、形質導入は、100未満、例えば一般に60、50、40、30、20、10、5未満またはそれ以下の感染効率（MOI）で達成することができる。
いくつかの態様において、方法は、細胞をウイルス粒子と接触またはインキュベートすることを含む。いくつかの態様において、接触は、30分～72時間、例えば30分～48時間、30分～24時間または1時間～24時間、例えば少なくとも30分、1時間、2時間、6時間、12時間、24時間、36時間もしくはそれ以上または少なくとも約30分、1時間、2時間、6時間、12時間、24時間、36時間もしくはそれ以上である。
いくつかの態様において、接触は溶液中で行われる。いくつかの態様において、0.5mL～500mLまたは約0.5mL～500mL、例えば、0.5mL～200mL、0.5mL～100mL、0.5mL～50mL、0.5mL～10mL、0.5mL～5mL、5mL～500mL、5mL～200mL、5mL～100mL、5mL～50mL、5mL～10mL、10mL～500mL、10mL～200mL、10mL～100mL、10mL～50mL、50mL～500mL、50mL～200mL、50mL～100mL、100mL～500mL、100mL～200mLもしくは200mL～500mLまたは約0.5mL～200mL、0.5mL～100mL、0.5mL～50mL、0.5mL～10mL、0.5mL～5mL、5mL～500mL、5mL～200mL、5mL～100mL、5mL～50mL、5mL～10mL、10mL～500mL、10mL～200mL、10mL～100mL、10mL～50mL、50mL～500mL、50mL～200mL、50mL～100mL、100mL～500mL、100mL～200mLもしくは200mL～500mLの体積で、細胞およびウイルス粒子を接触させる。
ある特定の態様において、インプット細胞は、ウイルスDNAによってコードされる組換え受容体に結合するか、またはウイルスDNAによってコードされる組換え受容体を認識する結合分子を含む粒子で処理され、インキュベートされ、または接触される。
いくつかの態様において、ウイルスベクター粒子との細胞のインキュベーションは、ウイルスベクター粒子で形質導入された細胞を含むアウトプット組成物をもたらすか、または生成する。
いくつかの態様において、組換えポリヌクレオチドは、エレクトロポレーションを介してT細胞中に移入される（例えば、Chicaybam et al,（2013）PLoS ONE 8（3）:e60298およびVan Tedeloo et al.（2000）Gene Therapy7（16）:1431-1437参照）。いくつかの態様において、組換えポリヌクレオチドは、転位を介してT細胞中に移入される（例えば、Manuri et al.（2010）Hum Gene Ther 21（4）:427-437;Sharma et al.（2013）Molec Ther Nucl Acids 2,e74;およびHuang et al.（2009）Methods Mol Biol 506:115-126参照）。遺伝物質を免疫細胞内に導入して発現させる他の方法として、リン酸カルシウム形質移入（例えば、Current Protocols in Molecular Biology,John Wiley＆Sons,New York.N.Y.に記載されている）、プロトプラスト融合、カチオン性リポソーム媒介形質移入;タングステン粒子促進微粒子砲撃（Johnston,Nature,346:776-777（1990））;およびリン酸ストロンチウムDNA共沈殿（Brash et al.,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034（1987））が挙げられる。
組換え産物をコードするポリヌクレオチドを移入するための他のアプローチおよびベクターとして、例えば、国際公開公報第2014055668号および米国特許第7,446,190号に記載されているものがある。
付加的なポリヌクレオチド、例えば、導入用の遺伝子として、例えば移入された細胞の生存力および/または機能を促進することによって、療法の有効性を向上させるもの;細胞の選択および/または評価のための、例えばインビボでの生存また局在化を評価するための遺伝的マーカーを提供するための遺伝子;Lupton S.D.et al.,Mol.and Cell Biol.,11:6（1991）およびRiddell et al.,Human Gene Therapy 3:319-338（1992）によって記載されているように、例えば、細胞をインビボで陰性選択を受けやすくすることによって、安全性を向上させるための遺伝子があり;ドミナント陽性選択可能マーカーを陰性選択可能マーカーと融合させることから得られる二機能性の選択可能な融合遺伝子の使用を記載する、Luptonらによる国際公開PCT/US91/08442号および国際公開PCT/US94/05601号の公報も参照。例えば、Riddellらの米国特許第6,040,177号の第14～17段参照。
3. マルチターゲティングのための操作された細胞、ベクターおよび組成物
複数の抗原に結合するおよび/または複数の抗原を標的とすることができる操作された細胞などの細胞も提供される。いくつかの態様において、改善された選択性および特異性は、複数の抗原を標的とする戦略を通じて達成される。このような戦略は、一般に、典型的には異なる遺伝子操作された抗原受容体上に存在し、異なる抗原に特異的に結合する複数の抗原結合ドメインを含む。いくつかの態様において、細胞は、2つ以上の抗原を結合する能力を有するように操作される。例えば、いくつかの態様において、細胞は、多重特異性組換え受容体を発現するように操作される。いくつかの態様において、細胞は、それぞれが1つの抗原または複数の抗原を標的とすることができる複数の組換え受容体、例えば本明細書に記載されるいずれかなどの、BCMAを標的とする1つの受容体、および別の抗原、例えば腫瘍抗原を標的とする別の受容体を発現する。いくつかの局面において、細胞で標的とされるべき疾患もしくは症状またはその組織もしくは細胞の中または上にそれぞれ発現される異なる抗原に特異的に結合する複数の遺伝子操作された抗原受容体が細胞中に導入される。このような特徴は、いくつかの局面において、オフターゲット効果の可能性に対処するか、もしくはオフターゲット効果の可能性を低減することができ、または有効性を増大させることができる。例えば、疾患または症状中で発現される単一の抗原が非疾患細胞または正常細胞の上または中でも発現される場合には、このようなマルチターゲティングアプローチは、細胞を活性化するためにまたは特定のエフェクター機能を誘導するために複数の抗原受容体を介した結合を必要とすることによって所望の細胞型に対する選択性を提供することができる。いくつかの態様において、それぞれが1つの抗原または複数の抗原を標的とすることができる1つまたは複数の異なる組換え受容体を発現するように、複数の細胞を操作することができる。
本明細書に記載される組換え受容体のいずれかを含有する多重特異性細胞、例えば、抗BCMA組換え受容体と、BCMA上の異なる抗原または異なるエピトープに結合する、組換えキメラ受容体などの追加の細胞表面タンパク質とを含有する細胞も提供される。いくつかの態様において、多重特異性組換え受容体の1つまたは複数がBCMAを結合し、および/または標的とする組換え受容体を発現する細胞の組成物が提供される。いくつかの態様において、多重特異性組換え受容体は、BCMA上の1つまたは複数の異なるエピトープを標的とする。
いくつかの態様において、細胞の各タイプが1つまたは複数の組換え受容体を発現する細胞の組成物が提供される。いくつかの態様において、細胞は、1つもしくは複数の抗体および/またはその一部、例えばその抗原結合性フラグメントを含む1つまたは複数のアミノ酸配列をコードする1つまたは複数の核酸を含む1つまたは複数のベクターを含む（例えば、1つまたは複数の該ベクターで形質転換されている）。いくつかの態様において、1つまたは複数のこのような細胞が提供される。いくつかの態様において、1つまたは複数のこのような細胞を含有する組成物が提供される。いくつかの態様において、1つまたは複数の細胞は、異なる抗体または同じ抗体を発現することができる。いくつかの態様において、細胞の各々は、1つまたは複数の抗体、例えば2つ以上の抗体を発現する。いくつかの態様において、細胞の各々は多重特異性受容体、例えばCARを発現する。
いくつかの態様において、細胞は、BCMAおよび特定の疾患または症状に関連する第2のまたは追加の抗原を標的とするマルチターゲティング戦略を含む。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原は、多重特異性受容体および/またはそれぞれが1つもしくは複数の組換え受容体を発現するように操作された複数の細胞、例えば1つまたは複数の細胞によって標的とされる。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原を標的とする組換え受容体は、BCMA結合性組換え受容体と同じ細胞上または異なる細胞上で発現される。
いくつかの態様において、マルチターゲティング戦略のための第2のまたは追加の抗原には、抗原の少なくとも1つがユニバーサル腫瘍抗原またはそのファミリーメンバーであるものが含まれる。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原は、腫瘍上に発現される抗原である。いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体は、第2のまたは追加の抗原と同じ腫瘍型上の抗原を標的とする。いくつかの態様において、第2のまたは追加の抗原はまた、ユニバーサル腫瘍抗原であり得、または腫瘍型に特異的な腫瘍抗原であり得る。いくつかの態様において、細胞は、処置されるべき疾患または症状で発現される第2のまたは追加の抗原を認識し、刺激性または活性化シグナルを誘導する追加の遺伝子操作された抗原受容体をさらに含む。
例示的な抗原としては、CD4、CD5、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、CD138、B7、MUC-1、Ia、HM1.24、HLA-DR、テネイシン、血管新生因子、VEGF、PIGF、ED-Bフィブロネクチン、がん遺伝子、がん遺伝子産物、CD66a-d、壊死抗原、Ii、IL-2、T101、TAC、IL-6、ROR1、TRAIL-R1（DR4）、TRAIL-R2（DR5）、B細胞成熟抗原（BCMA）、tEGFR、Her2、L1-CAM、メソテリン、CEA、B型肝炎表面抗原、抗葉酸受容体、CD24、CD30、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、erbB二量体、EGFRvIII、FBP、FCRL5、FCRH5、胎児アセチルコリン受容体、GD2、GD3、Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーD（GPRC5D）、HMW-MAA、IL-22R-アルファ、IL-13R-アルファ2、kdr、カッパ軽鎖、ルイスY、L1細胞接着分子（L1-CAM）、メラノーマ関連抗原（MAGE）-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、メラノーマの優先的発現抗原（PRAME）、サバイビン、EGP2、EGP40、TAG72、B7-H6、IL-13受容体a2（IL-13Ra2）、CA9、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE A1、HLA-A2 NY-ESO-1、PSCA、葉酸受容体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6インテグリン、8H9、NCAM、VEGF受容体、5T4、胎児AchR、NKG2Dリガンド、二重抗原、ユニバーサルタグに関連する抗原、がん精巣抗原、MUC1、MUC16、NY-ESO-1、MART-1、gp100、がん胎児抗原、VEGF-R2、がん胎児抗原（CEA）、前立腺特異的抗原、PSMA、Her2/neu、エストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、エフリンB2、CD123、c-Met、GD-2、O-アセチル化GD2（OGD2）、CE7、ウィルムス腫瘍1（WT-1）、サイクリン、サイクリンA2、CCL-1、hTERT、MDM2、CYP1B、WT1、リビン、AFP、p53、サイクリン（D1）、CS-1、BCMA、BAFF-R、TACI、CD56、TIM-3、CD123、L1細胞接着分子、MAGE-A1、MAGE A3、サイクリン、例えばサイクリンA1（CCNA1）および/または病原体特異的抗原、ビオチン化分子、HIV、HCV、HBVおよび/もしくは他の病原体によって発現される分子、ならびに/またはいくつかの局面においては、これらのネオエピトープもしくはネオアンチゲンが挙げられる。いくつかの態様において、抗原はユニバーサルタグと会合しているか、またはユニバーサルタグである。
いくつかの態様において、複数の抗原、例えば第1の抗原、例えばBCMA、および第2のまたは追加の抗原は、がん細胞上など、標的とされている細胞、組織、または疾患もしくは症状上で発現される。いくつかの局面において、細胞、組織、疾患または症状は、多発性骨髄腫または多発性骨髄腫細胞である。複数の抗原のうちの1つまたは複数はまた、一般に、細胞療法で標的とすることが望まれていない細胞、例えば正常なもしくは非疾患細胞もしくは組織、および/または操作された細胞自体でも発現される。このような態様においては、細胞の応答を達成するために複数の受容体のライゲーションを必要とすることによって、特異性および/または有効性が達成される。
いくつかの局面において、抗原、例えば疾患特異的抗原および/または関連抗原などの第2のまたは追加の抗原は、Gタンパク質共役受容体クラスCグループ5メンバーD（GPRC5D）、CD38（環状ADPリボース加水分解酵素）、CD138（シンデカン-1、シンデカン、SYN-1）、CS-1（CS1、CD2サブセット1、CRACC、SLAMF7、CD319および19A24）、BAFF-R、TACIおよび/またはFcRH5など、多発性骨髄腫上に発現される。他の例示的な多発性骨髄腫抗原としては、CD56、TIM-3、CD33、CD123、CD44、CD20、CD40、CD74、CD200、EGFR、β2-ミクログロブリン、HM1.24、IGF-1R、IL-6R、TRAIL-R1、およびアクチビン受容体IIA型（ActRIIA）が挙げられる。Benson and Byrd,J.Clin.Oncol.（2012）30（16）:2013-15;Tao and Anderson,Bone Marrow Research（2011）:924058;Chu et al.,Leukemia（2013）28（4）:917-27;Garfall et al.,Discov Med.（2014）17（91）:37-46を参照されたい。いくつかの態様において、抗原としては、CD38など、リンパ系腫瘍、骨髄腫、AIDS関連リンパ腫、および/または移植後のリンパ増殖上に存在する抗原が挙げられる。このような抗原に対して指向される抗体または抗原結合性フラグメントは公知であり、例えば、米国特許第8,153,765号;米国特許第8,603477号、米国特許第8,008,450号;米国特許出願公開第20120189622号または米国特許出願公開第20100260748号;および/または国際公開第2006099875号、国際公開第2009080829号または国際公開第2012092612号または国際公開第2014210064号に記載されているものが挙げられる。いくつかの態様において、このような抗体またはその抗原結合性フラグメント（例えば、scFv）は、多重特異性抗体、多重特異性CARなどの多重特異性キメラ受容体、および/または多重特異性細胞中に含有される。
いくつかの態様において、前記細胞および方法は、それぞれが異なる抗原を認識し、典型的にはそれぞれが異なる細胞内シグナル伝達成分を含む、細胞上の2つ以上の遺伝子操作された受容体の発現などのマルチターゲティング戦略を含む。このようなマルチターゲティング戦略は、例えば、国際公開第2014055668号（例えば、非標的、例えば正常細胞上に個別に存在するが、処置されるべき疾患または症状の細胞上には一緒にのみ存在する2つの異なる抗原を標的とする刺激性または活性化CARおよび共刺激性CARの組み合わせを記載する）およびFedorov et al.,Sci.Transl.Medicine,5（215）（December,2013）（刺激性または活性化CARおよび阻害性CARを発現する細胞、例えば、刺激性または活性化CARが、正常細胞または非疾患細胞および処置されるべき疾患または症状の細胞の両方で発現される1つの抗原に結合し、阻害性CARが、正常細胞または処置することが望まれていない細胞でのみ発現される別の抗原に結合する細胞を記載する）に記載されている。
いくつかの態様において、それぞれが1つまたは複数の組換え受容体を発現するように操作された複数の細胞が提供される。例えば、いくつかの態様において、1つの細胞は、BCMAを結合するおよび/または標的とする組換え受容体を発現するように操作され、別の細胞は、追加のまたは第2の抗原を結合するおよび/または標的とする組換え受容体を発現するように操作される。いくつかの態様において、細胞はそれぞれ多重特異性組換え受容体を発現することができ、標的抗原の1つまたは複数はBCMAである。このような態様のいくつかでは、複数の細胞を一緒にまたは別々に投与することができる。いくつかの態様において、複数の細胞は、細胞と同時にまたは併用して投与され、例えば同日に投与され、および/または任意の順序で、複数の中の別の操作された細胞と逐次的にまたは断続的に投与される。例えば、いくつかの態様において、BCMA結合性組換え受容体、例えばCARを発現する操作された細胞は、異なる標的抗原またはBCMA上の異なるエピトープを結合する組換え受容体を発現する別の操作された細胞と同時にまたは任意の順序で逐次的に投与される。いくつかの態様において、複数の細胞は同じ組成物中に存在することができる。細胞の例示的な組成物には、下記のセクションIVに記載される組成物が含まれる。
D. 操作された細胞の培養、拡大増殖および製剤化
いくつかの態様において、提供される方法は、細胞を培養するための、例えば、増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で細胞を培養するための1つまたは複数の工程を含む。いくつかの態様において、細胞は、遺伝子操作する工程、例えば形質導入または形質移入によって組換えポリペプチドを細胞に導入する工程の後に、増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で培養される。特定の態様において、細胞は、細胞が刺激条件下でインキュベートされて、組換えポリヌクレオチド、例えば組換え受容体をコードするポリヌクレオチドにより形質導入または形質移入された後に、培養される。
ある特定の態様において、操作されたT細胞の1つまたは複数の組成物は、濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物であるか、濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物を含む。特定の態様において、濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物、例えば、同じ生物学的試料から選択され、単離され、および/または濃縮された濃縮されたT細胞の2つの別個の組成物は、刺激する条件下で別々に培養される。ある特定の態様において、2つの別個の組成物は、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物を含む。特定の態様において、2つの別個の組成物は、濃縮されたCD8＋T細胞の組成物を含む。いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋T細胞および濃縮されたCD8＋T細胞の2つの別個の組成物は、例えば増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で別々に培養される。
いくつかの態様においては、濃縮されたT細胞の単一の組成物が培養される。いくつかの態様において、単一の組成物は、培養の前に別個の組成物から組み合わされた濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物である。いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の別々の組成物は、単一の組成物に組み合わされ、例えば増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で培養される。ある特定の態様において、培養が実施された後におよび/または完了した後に、濃縮されたCD4＋および濃縮されたCD8＋T細胞の別々の培養された組成物は単一の組成物に組み合わされる。
いくつかの態様において、培養は、増殖および/または拡大増殖を促進する条件下で行われる。いくつかの態様において、このような条件は、集団中の細胞の増殖、拡大増殖、活性化および/または生存を誘導するように設計され得る。特定の態様において、刺激する条件は、特定の培地、温度、酸素含量、二酸化炭素含量、時間、作用物質、例えば栄養素、アミノ酸、抗生物質、イオン、および/または刺激因子、例えば、サイトカイン、ケモカイン、抗原、結合パートナー、融合タンパク質、組換え可溶性受容体、ならびに細胞の成長、分裂および/または拡大増殖を促進するように設計された任意の他の作用物質の1つまたは複数を含むことができる。
特定の態様において、細胞は、1つまたは複数のサイトカインの存在下で培養される。特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインは、組換えサイトカインである。いくつかの態様において、1つまたは複数のサイトカインは、ヒト組換えサイトカインである。ある特定の態様において、1つまたは複数のサイトカインは、T細胞によって発現され、かつ/またはT細胞に内在性である受容体に結合し、かつ/または結合することができる。特定の態様において、1つまたは複数のサイトカイン、例えば組換えサイトカインは、サイトカインの4-アルファ-ヘリックスバンドルファミリーのメンバーであるか、またはサイトカインの4-アルファ-ヘリックスバンドルファミリーのメンバーを含む。いくつかの態様において、サイトカインの4-α-ヘリックスバンドルファミリーのメンバーとして、インターロイキン-2（IL-2）、インターロイキン-4（IL-4）、インターロイキン-7（IL-7）、インターロイキン-9（IL-9）、インターロイキン12（IL-12）、インターロイキン15（IL-15）、顆粒球コロニー刺激因子（G-CSF）、および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（GM-CSF）が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、1つまたは複数の組換えサイトカインには、IL-2、IL-7および/またはIL-15が含まれる。いくつかの態様において、細胞、例えば操作された細胞は、サイトカイン、例えば組換えヒトサイトカインの存在下で、1IU/mL～2,000IU/mL、10IU/mL～100IU/mL、50IU/mL～200IU/mL、100IU/mL～500IU/mL、100IU/mL～1,000IU/mL、500IU/mL～2,000IU/mL、または100IU/mL～1,500IU/mLの濃度にて培養される。
いくつかの態様において、培養は、ヒトTリンパ球などの初代免疫細胞の増殖に適した温度、例えば少なくとも約25℃、一般に少なくとも約30℃、一般に37℃または約37℃を一般に含む条件下で行われる。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞の組成物は、25～38℃、例えば30～37℃、例えば37℃±2℃または約37℃±2℃の温度でインキュベートされる。いくつかの態様において、インキュベーションは、培養（culture）、例えば培養（cultivation）または拡大増殖が細胞の所望のまたは閾値の密度、数または用量をもたらすまでの期間にわたって行われる。いくつかの態様において、インキュベーションは、24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間もしくはそれ以上を超えるまたは約24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間もしくはそれ以上を超えるまたは24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間もしくはそれ以上または約24時間、48時間、72時間、96時間、5日間、6日間、7日間、8日間、9日間もしくはそれ以上にわたる。
特定の態様において、培養は閉鎖系で行われる。ある特定の態様において、培養は、無菌条件下で閉鎖系で行われる。特定の態様において、培養は、提供されるシステムの1つまたは複数の工程と同じ閉鎖系において実行される。いくつかの態様において、濃縮されたT細胞の組成物は閉鎖系から取り出され、培養のためにバイオリアクター内に配置され、および/またはバイオリアクターに接続される。培養のための適切なバイオリアクターの例には、GE Xuri（商標）W25、GE Xuri（商標）W5、Sartorius BioSTAT（登録商標）RM20｜50、Finesse SmartRocker（商標）Bioreactor Systems、およびPall（登録商標）XRSBioreactor Systemsが含まれるが、これらに限定されない。いくつかの態様において、バイオリアクターは、培養段階の少なくとも一部の間に細胞を灌流および/または混合するために使用される。
いくつかの態様において、混合は、揺動および/もしくは運動であるか、または揺動および/もしくは運動を含む。いくつかの場合において、バイオリアクターは、いくつかの局面において、酸素移動を増加させることができる運動または揺動を受けることができる。バイオリアクターを運動させることは、水平軸に沿った回転、垂直軸に沿った回転、バイオリアクターの傾いたもしくは傾斜した水平軸に沿った揺動運動、またはこれらの任意の組み合わせを含み得るが、これらに限定されない。いくつかの態様において、インキュベーションの少なくとも一部は揺動しながら行われる。揺動速度および揺動角度は、所望の攪拌を達成するように調整され得る。いくつかの態様において、揺動角度は、20°、19°、18°、17°、16°、15°、14°、13°、12°、11°、10°、9°、8°、7°、6°、5°、4°、3°、2°または1°である。ある特定の態様において、揺動角度は6～16°である。他の態様において、揺動角度は7～16°である。他の態様において、揺動角度は8～12°である。いくつかの態様において、揺動速度は、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40rpmである。いくつかの態様において、揺動速度は、4rpm～12rpm、例えば4rpm～6rpmである（両端の値を含む）。
いくつかの態様において、バイオリアクターは、0.01L/分、0.05L/分、0.1L/分、0.2L/分、0.3L/分、0.4L/分、0.5L/分、1.0L/分、1.5L/分もしくは2.0L/分、もしくは2.0L/分を超える、約0.01L/分、0.05L/分、0.1L/分、0.2L/分、0.3L/分、0.4L/分、0.5L/分、1.0L/分、1.5L/分もしくは2.0L/分、もしくは2.0L/分を超えるまたは少なくとも0.01L/分、0.05L/分、0.1L/分、0.2L/分、0.3L/分、0.4L/分、0.5L/分、1.0L/分、1.5L/分もしくは2.0L/分もしくは2.0L/分を超える一定の空気流で、37℃または37℃付近の温度および5％または5％付近のCO2レベルを維持する。ある特定の態様において、培養の少なくとも一部は、例えば培養の開始および/または培養される細胞の密度に関連するタイミングに応じて、290ml/日、580ml/日、および/または1160ml/日の速度などで、灌流を用いて行われる。いくつかの態様において、細胞培養拡大増殖の少なくとも一部は、5°～10°、例えば6°の角度、5～15RPM、例えば6RMPまたは10RPMの速度などの一定の揺動速度などで、揺動運動を用いて行われる。
いくつかの態様において、細胞療法および/または操作された細胞を製造、生成または生産するための提供される方法は、インキュベーション、操作および培養の前または後の提供される加工処理工程から生じる遺伝子操作された細胞の製剤化などの細胞の製剤化、ならびに/または記載される1つもしくは複数の他の加工処理段階を含み得る。いくつかの態様において、細胞の製剤化を含む加工処理段階の1つまたは複数は、閉鎖系で行うことができる。いくつかの場合において、細胞は、細胞療法および/または操作された細胞を製造、生成または生産するための1つまたは複数の段階（例えば、遠心チャンバーおよび/または閉鎖系において実行される）において加工処理され、培養、例えば培養（cultivation）および拡大増殖の前もしくは後の提供される形質導入加工処理段階から生じる遺伝子操作された細胞の製剤化などの細胞の製剤化、ならびに/または記載される1つもしくは複数の他の加工処理工程を含み得る。
いくつかの態様において、組換え抗原受容体、例えばCARまたはTCRで操作された細胞を含む細胞の用量は、薬学的組成物または製剤などの組成物または製剤として提供される。このような組成物は、提供される方法に従って、例えば、疾患、症状および障害の予防もしくは処置において、または検出、診断および予後診断方法において使用することができる。いくつかの場合において、細胞は、単回単位投薬量投与または複数回投薬量投与などの投薬量投与のための量で製剤化され得る。
いくつかの態様において、細胞は、バッグまたはバイアルなどの容器中に製剤化することができる。
いくつかの態様において、細胞は、いくつかの局面においては薬学的に許容される担体または賦形剤を含み得る薬学的に許容される緩衝液中に製剤化される。いくつかの態様において、加工処理は、対象への投与のために薬学的に許容されるかまたは所望される培地または製剤緩衝液への培地の交換を含む。いくつかの態様において、加工処理段階は、1つまたは複数の任意に加えられる薬学的に許容される担体または賦形剤を含むことができる薬学的に許容される緩衝液中に細胞を置き換えるために、形質導入されたおよび/または拡大増殖された細胞を洗浄することを含むことができる。薬学的に許容される担体または賦形剤を含むこのような薬学的形態の例は、細胞および組成物を対象に投与するために許容される形態と併せて以下に記載されているいずれでもあり得る。いくつかの態様における薬学的組成物は、治療有効量または予防有効量など、疾患または症状を処置または予防するのに有効な量で細胞を含有する。
いくつかの態様において、製剤緩衝液は、凍結保存剤を含有する。いくつかの態様において、細胞は、1.0％～30％のDMSO溶液、例えば、5％～20％のDMSO溶液または5％～10％のDMSO溶液を含有する凍結保存溶液を用いて製剤化される。いくつかの態様において、凍結保存溶液は、例えば、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、もしくはその他の適切な細胞凍結培地であるか、または例えば、20％DMSOおよび8％ヒト血清アルブミン（HSA）を含有するPBS、もしくはその他の適切な細胞凍結培地を含有する。いくつかの態様において、凍結保存溶液は、例えば、少なくとも7.5％もしくは約7.5％のDMSOであるか、または例えば、少なくとも7.5％もしくは約7.5％のDMSOを含有する。いくつかの態様において、加工処理段階は、形質導入および/または拡大増殖された細胞を洗浄して、凍結保存溶液中に細胞を置き換えることを含むことができる。いくつかの態様において、細胞は、12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、もしくは5.0％DMSO、または約12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、もしくは5.0％DMSO、または1％～15％、6％～12％、5％～10％、もしくは6％～8％DMSOの最終濃度を有する媒体および/または溶液中で凍結される、例えば、凍結保護または凍結保存される。特定の態様において、細胞は、5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、もしくは0.25％HSA、または約5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、もしくは0.25％HSA、または0.1％～5％、0.25％～4％、0.5％～2％、もしくは1％～2％HSAの最終濃度を有する媒体および/または溶液中で凍結される、例えば、凍結保護または凍結保存される。
いくつかの態様において、製剤化は、培養されたまたは拡大増殖された細胞などの細胞を洗浄、希釈、または濃縮することを含む1つまたは複数の加工処理段階を用いて行われる。いくつかの態様において、加工処理は、所与の用量またはその分割量で投与するための細胞の数を含む単位用量形態組成物など、所望の濃度または数に細胞を希釈または濃縮することを含むことができる。いくつかの態様において、加工処理段階は、体積を減らし、それによって所望に応じて細胞濃度を上昇させることを含み得る。いくつかの態様において、加工処理段階は、体積を増やし、それによって所望に応じて細胞濃度を低下させることを含み得る。いくつかの態様において、加工処理は、ある体積の製剤緩衝液を形質導入および/または拡大増殖された細胞に添加することを含む。いくつかの態様において、製剤緩衝液の体積は、10mL～1000mL、または約10mL～1000mL、例えば、少なくとも50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL、もしくは1000mL、または少なくとも約50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL、もしくは1000mL、または約50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL、もしくは1000mL、または50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL、もしくは1000mLである。
いくつかの態様において、細胞組成物を製剤化するためのそのような加工処理段階は、閉鎖系で行われる。このような加工処理段階の例は、細胞処理システムに関連する1つまたは複数のシステムまたはキットと共に遠心チャンバーを用いて、例えば、Sepax（登録商標）またはSepax2（登録商標）細胞処理システムと共に使用するためのものを含む、Biosafe SAによって製造および販売されている遠心チャンバーを用いて、実施され得る。例示的なシステムおよびプロセスは、国際公開第2016/073602号に記載されている。いくつかの態様において、方法は、遠心チャンバーの内部キャビティからの製剤化された組成物の圧出を行うことを含み、該製剤化された組成物は、説明した上記の態様のいずれかにおいて、薬学的に許容される緩衝液などの製剤緩衝液中で製剤化された結果として得られる細胞組成物である。いくつかの態様において、製剤化された組成物の圧出は、閉鎖系の一部として遠心チャンバーと動作可能に連結された容器、例えば、本明細書に記載される生物医学的材料容器のバイアルに向けて行われる。いくつかの態様において、生物医学材料容器は、1つまたは複数の加工処理段階を実行する閉鎖系または装置に統合および/もしくは動作可能に接続するように構成され、ならびに/または統合されるか、もしくは動作可能に接続される。いくつかの態様において、生物医学的材料容器は、出力ラインまたは出力位置でシステムに接続されている。いくつかの場合において、閉鎖系は、入口チューブで生物医学材料容器のバイアルに接続されている。本明細書に記載される生物医学材料容器と共に使用するための例示的な閉鎖系には、Sepax（登録商標）およびSepax（登録商標）2システムが含まれる。
いくつかの態様において、遠心チャンバーまたは細胞処理システムに結合されたものなどの閉鎖系は、製剤化された組成物の圧出のために1つまたは複数の容器を接続できるポートを有するチューブラインの各端部に結合された多方向チューブマニホールドを含む、マルチポートアウトプットキットを含む。いくつかの局面において、所望の数または複数のバイアルを、マルチポートアウトプットのポートのうちの1つまたは複数、通常2つまたはそれ以上、例えば、少なくとも3、4、5、6、7、8またはそれ以上に無菌的に接続することができる。例えば、いくつかの態様において、1つまたは複数の容器、例えば生物医学材料容器をポートに、または全部よりは少ない数のポートに取り付けることができる。したがって、いくつかの態様において、系は、複数の生物医学材料容器のバイアル中へのアウトプット組成物の圧出を行うことができる。
いくつかの局面において、細胞は、複数のアウトプット容器、例えば、バイアルのうちの1つまたは複数に、投与量投与のための、例えば、単一の単位投薬量の投与または複数投薬量の投与のための量で、圧出され得る。例えば、いくつかの態様において、バイアルはそれぞれ、所与の用量またはその分割量で投与するための細胞数を含んでよい。したがって、各バイアルは、いくつかの局面において、投与のための単一の単位用量を含み得るか、または複数のバイアルのうちの1つより多く、例えばバイアルのうちの2つまたはバイアルのうちの3つが合わさって投与用量を構成するように、所望の用量の分割量を含んでよい。
したがって、容器、例えばバッグまたはバイアルは、通常、投与されるべき細胞、例えばその1つまたは複数の単位用量を含む。単位用量は、対象に投与されるべき細胞の量もしくは数、または投与されるべき細胞の数の2倍（もしくはそれより多く）であってよい。単位用量は、対象に投与される細胞の最低用量または可能な限り低用量であってよい。
いくつかの態様において、容器、例えばバッグまたはバイアルの各々は、細胞の単位用量を個別に含む。したがって、いくつかの態様において、各容器は、同じまたはおおよそまたは実質的に同じ数の細胞を含む。いくつかの態様において、各単位用量は、少なくとも1×106、2×106、5×106、1×107、5×107、もしくは1×108個、または少なくとも約1×106、2×106、5×106、1×107、5×107、もしくは1×108個の操作された細胞、総細胞、T細胞、またはPBMCを含む。いくつかの態様において、各容器、例えばバッグまたはバイアル中の製剤化された細胞組成物の体積は、10mL～100mL、例えば、少なくとも20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、もしくは100mL、または少なくとも約20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、もしくは100mLである。いくつかの態様において、容器、例えばバッグまたはバイアル内の細胞を凍結保存することができる。いくつかの態様において、容器、例えばバイアルは、さらなる使用まで液体窒素中に保存することができる。
いくつかの局面において、操作された細胞または細胞組成物は、操作された細胞または操作された細胞を含有する細胞組成物が注入のために遊離される前、対象への投与の準備ができる前、および/または対象に投与される前を含む、製造プロセス中の1つまたは複数の段階または時点で評価される。いくつかの態様において、操作された細胞または細胞組成物は、操作された細胞、ならびに/または例えば操作された細胞もしくは細胞組成物の一部、部分および/もしくは試料上で提供される態様による抗BCMA CARを発現している細胞の数、量またはパーセンテージを評価した後に、注入のために遊離され、対象への投与の準備ができており、および/または対象に投与される。特定の態様において、操作された細胞または細胞組成物は、細胞が安全である、例えば、無菌であるおよび/もしくは遊離していると判定され、ならびに/または本明細書中に記載されるような抗BCMA CARをコードする核酸配列の必要な閾値コピー数未満もしくは閾値コピー数超を含有するなど、1つもしくは複数の方法の完了後に所望の生物学的特徴を有すると判定された後に、注入のために遊離され、対象への投与の準備ができており、および/または対象に投与される。いくつかの態様において、CAR発現細胞の数および/またはパーセンテージを決定して、投与のための細胞の適切な用量を決定するために、そのような評価を使用することができる。いくつかの局面において、以前の養子細胞療法、例えば、先行BCMA指向性組換え受容体（例えば、CAR）発現T細胞療法（CAR T細胞療法）を受けたことがある対象については、提供される方法および使用はまた、以前のBCMA指向性組換え受容体（例えば、CAR）の存在、量および/またはレベルについて操作された細胞または細胞組成物を評価することを含むことができる。いくつかの局面において、先行BCMA指向性組換え受容体（例えば、CAR）の存在、量および/またはレベルについての評価は、先行組換え受容体を発現する任意の残存する細胞を検出し、必要に応じて、以前の組換え受容体を依然として発現する細胞を除外するか、または以前の組換え受容体を発現しない細胞を濃縮するために使用することができる。いくつかの局面において、このような方法は、先行組換え受容体（例えば、CAR）を依然として含有する細胞の投与を低減または防止するために使用することができる。
いくつかの態様において、抗BCMA CAR（およびいくつかの場合において、先行組換え受容体）の存在および/または量は、組換え受容体の発現または組換え受容体をコードする核酸配列の存在を検出することによって評価される。いくつかの局面において、組換え受容体の存在は、生物学的試料からのタンパク質または核酸の存在、非存在、レベルおよび/または量を検出することができる任意の方法を使用して、例えば、定量PCR（qPCR）などの核酸ベースの方法;またはフローサイトメトリーなどの細胞ベースの方法、またはイムノアッセイ、ELISAもしくはクロマトグラフィー/質量分析ベースのアッセイなどの他のアッセイを使用して評価することができる。抗BCMA CARまたは抗BCMA CARを発現する細胞は、フローサイトメトリーベースの方法または定量PCRベースの方法および公知の方法を用いた総細胞数への外挿によって検出され得る。例えば、Brentjens et al.,Sci Transl Med.2013 5（177）,Park et al,Molecular Therapy 15（4）:825-833（2007）,Savoldo et al.,JCI 121（5）:1822-1826（2011）,Davila et al.,（2013）PLoS ONE 8（4）:e61338,Davila et al.,Oncoimmunology 1（9）:1577-1583（2012）,Lamers,Blood 2011 117:72-82,Jensen et al.,Biol Blood Marrow Transplant 2010 September;16（9）:1245-1256,Brentjens et al.,Blood 2011 118（18）:4817-4828を参照されたい。
組換え受容体の存在を評価するための例示的な核酸ベースの方法には、定量PCR（qPCR）、デジタルPCR（dPCR）または液滴デジタルPCR（ddPCR）などのポリメラーゼ連鎖反応ベースの方法が含まれる。いくつかの局面において、特定の配列の存在、非存在および/または量は、組換え受容体をコードする核酸配列の全部または一部を特異的に結合し、検出し、認識し、および/または増幅することができるプローブまたはプライマーを使用して検出することができる。いくつかの態様において、qPCRまたは他の核酸ベースの方法に使用されるプライマーまたはプローブは、組換えタンパク質（例えば、抗BCMA CAR、いくつかの場合において、先行組換え受容体）をコードする核酸、ならびに/または調節要素、例えばプロモーター、転写および/もしくは転写後調節要素もしくは応答要素、もしくはマーカー、例えばサロゲートマーカーが挙げられる、プラスミドおよび/もしくはベクターの他の構成要素もしくは要素を結合し、認識し、かつ/または増幅するために特異的である。いくつかの局面において、組換え受容体の存在を評価するための例示的な核酸ベースの方法には、ハイスループットRNAシークエンシング（RNA-seq）または試料中の核酸の発現を評価するための他のハイスループット方法が含まれる。いくつかの局面において、抗BCMA CARをコードする核酸の存在および/または量について操作された細胞または組成物を評価するための例示的な方法には、国際公開第2020/033916号に記載されているものが含まれる。
組換え受容体（例えば、抗BCMA CAR、およびいくつかの場合において、先行組換え受容体）の存在を評価するための例示的な細胞またはタンパク質ベースの方法には、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着測定法（ELISA）、酵素免疫アッセイ（EIA）、ラジオイムノアッセイ（RIA）、表面プラズモン共鳴（SPR）、ウエスタンブロット、ラテラルフローアッセイ、免疫組織化学、タンパク質アレイまたは免疫-PCR（iPCR）が含まれる。
いくつかの態様において、操作された細胞または細胞組成物中のBCMA指向性組換え受容体（例えば、抗BCMA CAR、およびいくつかの場合において、先行組換え受容体）を発現する細胞の存在は、単離または精製された抗原、例えば組換え発現された抗原、例えば組換えBCMA-Fc（IgGのFc領域にそのC末端で融合した可溶性ヒトBCMA）などの試薬を使用して検出することができる。いくつかの態様において、操作された細胞または細胞組成物中の抗BCMA CAR発現細胞の存在は、抗BCMA CARの存在を特異的に検出することができる試薬、例えば抗イディオタイプ抗体、結合ドメイン、例えばscFvに特異的な抗イディオタイプアゴニスト抗体、またはその一部を使用して検出することができる。例示的な抗イディオタイプ抗体は、参照によりその全体が本明細書に組み入れられるPCT/US2020/063492に記載されている。いくつかの態様において、結合分子は、単離されたもしくは精製された抗原、例えば組換え発現された抗原であるか、または単離されたもしくは精製された抗原、例えば組換え発現された抗原を含む。いくつかの場合において、例えば、先行BCMA指向性組換え受容体発現細胞（例えば、CAR T細胞）療法を受けたことがある対象について、単離されたまたは精製された抗原（例えば、組換えBCMA-Fc;提供される方法に従って使用するための、先行BCMA指向性組換え受容体および抗BCMA CARを含む、BCMAに結合する任意の組換え受容体を検出する）を用いて評価したBCMA結合性組換え受容体の量またはレベルと、特定の組換え受容体特異的試薬、例えば特異的抗BCMA CARに対する抗イディオタイプ抗体を用いて検出した抗BCMA CARの量またはレベルとを比較することができる。いくつかの場合において、2つの量の差は、先行組換え受容体、例えば先行BCMA指向性CAR T療法を発現する細胞の存在および/または量を示し得る。
いくつかの態様において、本方法によって作製されるそのような細胞、またはそのような細胞を含む組成物は、疾患または症状を処置するために対象に投与される。
E. 例示的なプロセスおよび特徴
いくつかの態様において、提供される方法に従って使用される、記載される抗BCMA CARを発現する操作された細胞などの操作された細胞は、細胞を選択、単離、活性化、刺激、拡大増殖、培養、および/または製剤化するためのプロセスによって生産または生成される。いくつかの態様において、そのような方法は、記載されている任意のものを含む。
いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋T細胞の少なくとも1つの別個の組成物および濃縮されたCD8＋T細胞の少なくとも1つの別個の組成物は、単一の生物学的試料、例えば、患者もしくは健康な個体などの同じドナー由来のPBMCまたは他の白血球の試料から単離され、選択され、濃縮され、または取得される。いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋T細胞の別個の組成物および生じた濃縮されたCD8＋T細胞の別個の組成物は、例えば、単一の対象から取得され、収集され、および/または採取された単一の生物学的試料などの同じ生物学的試料から最初に単離され、選択され、および/または濃縮された。いくつかの態様において、生物学的試料はまずCD4＋T細胞の選択に供され、陰性画分と陽性画分の両方が保持され、陰性画分はさらにCD8＋T細胞の選択に供される。他の態様において、生物学的試料はまずCD8＋T細胞の選択に供され、陰性画分と陽性画分の両方が保持され、陰性画分はさらにCD4＋T細胞の選択に供される。いくつかの態様において、選択の方法は、国際公開第2015/164675号に記載されるように行われる。いくつかの局面においては、濃縮されたCD8＋T細胞の少なくとも1つの組成物および濃縮されたCD4＋T細胞の少なくとも1つの組成物が、同じ生物学的試料からの、例えば同じドナー患者または健康な個体からの別個の組成物であるように、濃縮されたCD8＋T細胞の少なくとも1つの組成物を生成するために、生物学的試料はまずCD8＋T細胞について陽性に選択され、次いで濃縮されたCD4＋T細胞の少なくとも1つの組成物を生成するためにCD4＋T細胞について陰性画分が陽性に選択される。いくつかの局面において、濃縮されたT細胞の2つ以上の別個の組成物、例えば、少なくとも1つは濃縮されたCD4＋T細胞の組成物であり、少なくとも1つは同じドナー由来の濃縮されたCD8＋T細胞の別個の組成物であり、凍結保存培地中で別々に凍結、例えば凍結保護または凍結保存される。
いくつかの態様において、濃縮されたCD4＋T細胞の組成物からの細胞および濃縮されたCD8＋T細胞の組成物からの細胞は混合され、組み合わされ、および/またはプールされて、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含有するインプット組成物を生成する。ある特定の態様において、濃縮されたCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞の組成物は、刺激条件下で細胞をインキュベートする前にプールされ、混合され、および/または組み合わされる。ある特定の態様において、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物は、生物学的試料からCD4＋およびCD8＋T細胞を単離し、濃縮し、および/または選択した後にプールされ、混合され、および/または組み合わされる。特定の態様において、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物は、濃縮されたCD4＋およびCD8＋T細胞の組成物を凍結、例えば凍結保存し、解凍した後にプールされ、混合され、および/または組み合わされる。
特定の態様において、インプット組成物は、3:1～1:3、2:1～1:2、1.5～0.75、1.25～0.75、または1.2～0.8のCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比を含有する。特定の態様において、インプット組成物は、3:1～1:3のCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比を含有する。特定の態様において、インプット組成物は、2:1～1:2のCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比を含有する。ある特定の態様において、インプット組成物は、2:1または約2:1のCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比を含有する。ある特定の態様において、インプット組成物は、1:1または約1:1のCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比を含有する。
いくつかの局面において、濃縮されたT細胞の2つ以上の別個の組成物、例えば、少なくとも1つは濃縮されたCD4＋T細胞の組成物であり、少なくとも1つは同じ生物学的試料からの濃縮されたCD8＋T細胞の別個の組成物であり、解凍ならびに混合、組み合わせ、および/またはプールされ、組成物は、混合され、組み合わされ、および/またはプールされる前または後に任意で洗浄され得る。いくつかの局面において、濃縮されたT細胞の混合された、組み合わされた、および/またはプールされた、および任意で洗浄された組成物は、インプット組成物を形成する。いくつかの局面において、（例えば、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を1:1または約1:1の比で含む）インプット組成物は、（例えば、T細胞活性化のためのCD3/CD28コンジュゲート磁気ビーズとのインキュベーションによって）刺激性試薬と接触させることによって活性化および/または刺激される。いくつかの局面において、活性化/刺激された細胞組成物は、細胞組成物のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞中で同じ組換えタンパク質を発現させるために、例えば組換えタンパク質（例えばCAR）をコードするウイルスベクターを使用して、操作され、形質導入され、および/または形質移入される。いくつかの局面において、方法は、細胞組成物から刺激性試薬、例えば磁気ビーズを除去することを含む。いくつかの局面において、操作されたCD4＋T細胞および操作されたCD8＋T細胞を含有する細胞組成物は、例えば、その中のCD4＋T細胞および/またはCD8＋T細胞集団の拡大増殖のために培養される。ある特定の態様において、培養からの細胞組成物は、例えば製剤緩衝液中で細胞組成物を洗浄することによって、採取および/または収集および/または製剤化される。ある特定の態様において、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を含む製剤化された細胞組成物は、凍結保存培地中で凍結される、例えば凍結保護または凍結保存される。いくつかの局面において、製剤中の操作されたCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞は、同じドナーまたは生物学的試料に由来し、同じ組換えタンパク質（例えば、CAR）を発現し、製剤は、それを必要とする対象、例えば同じドナーに投与される。
いくつかの態様において、提供される方法に従って使用される、記載される抗BCMA CARを発現する操作された細胞などの操作された細胞、およびこのような細胞を含有する組成物、例えば抗BCMAキメラ抗原受容体（CAR）を発現するCD4＋およびCD8＋T細胞を含有する組成物は、後続の加工処理段階のために定義された比で選択された細胞を組み合わせる前に、試料からCD4＋およびCD8＋T細胞を別々に選択することを含む例示的なプロセスによって生産または生成される。
例示的なプロセスのいくつかの局面において、CD4＋細胞およびCD8＋細胞の別個の組成物が、ヒト白血球アフェレーシス試料からの単離されたPBMCから選択され、選択された細胞組成物は凍結保存される。いくつかの態様において、ヒト対象は、多発性骨髄腫（MM）を有する対象である。いくつかの局面において、選択されたCD4＋およびCD8＋T細胞組成物は、その後解凍され、刺激、形質導入および拡大増殖のための工程を行う前に、1:1の比の生存CD4＋T細胞対生存CD8＋T細胞で混合される。例示的な態様において、無血清培地中、1:1のビーズ対細胞比で、結合した抗CD3抗体および抗CD28抗体を有する常磁性のポリスチレン被覆されたビーズの存在下において、約3×106細胞/mLの密度で、混合された細胞組成物からの約300×106個のT細胞（150×106個のCD4＋および150×106個のCD8＋T細胞）を刺激する。いくつかの態様において、培地は組換えIL-2、IL-7およびIL-15も含有する。刺激は、18～30時間のインキュベーションによって行われる。
例示的なプロセスのいくつかの局面において、インキュベーション後、刺激された細胞組成物からのおよそ100×106個の生存細胞が洗浄され、組換えIL-2、IL-7およびIL-15を含有する例示的な無血清培地に再懸濁される。いくつかの場合において、形質導入補助剤は添加されない。いくつかの局面においては、60分間のスピノキュレーションに続く約37℃での約18時間～30時間のインキュベーションによって、細胞は、（例えば、BCMAに特異的なscFv抗原結合ドメイン、CD28膜貫通領域、4-1BB共刺激シグナル伝達領域およびCD3-ゼータ由来の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する）本明細書に記載される例示的抗BCMA CARのいずれかをコードする例示的レンチウイルスベクターで形質導入される。いくつかの局面において、スピノキュレーション後の細胞の密度は約1×106細胞/mLである。
いくつかの態様において、次いで、インキュベーションおよび形質導入段階中に使用されたIL-2、IL-7およびIL-15の2倍の濃度を含有する約500mLの例示的無血清培地中でバイオリアクター（例えば、揺動バイオリアクター）に移すことによって、形質導入された細胞を拡大増殖のために培養する。いくつかの例示的なプロセスにおいては、例示的培地はポロキサマーを含有しない。
いくつかの局面において、0.6×106細胞/mL超または約0.6×106細胞/mLの閾値細胞密度が達成された後、定期的に、例えば約2～約15分、1000mLの体積まで新鮮な培地のショットを添加して、培地を段階的に添加し、0.6×106×細胞/mL超または約0.6×106細胞/mLの閾値生存細胞密度が達成されるまで、細胞を一定の揺動条件（非灌流）下で培養する。いくつかの態様においては、生細胞密度が0.8×106細胞/mLを超えれば、1000mLの標的体積まで、例えば上記のように第1の培地が段階的に添加され、次いで、以下に説明するように灌流が開始される組み合わせ充填/灌流段階が開始される。いくつかの局面において、培地はその後、連続的な混合を伴う半連続的な灌流によって置き換えられる。いくつかの態様において、灌流速度および/または揺動速度は、細胞密度が増加するにつれて拡大増殖期中に少なくとも1回増加される。いくつかの態様において、灌流速度は、細胞密度が増加するにつれて拡大増殖期中に少なくとも1回増加される。いくつかの態様において、生細胞密度によって決定される1日当たり総体積で（例えば、ある密度に達したら、より高い速度で）、例えば、1日当たり約750mLまたは1500mLの総新鮮培地が培養物に添加される速度まで（より高い細胞濃度に達した場合には、より高い速度で）、約0.5時間ごと～約1.5または2時間ごとなど定期的に1日を通じて新鮮な培地のショットを添加して、培地が段階的に培養物に添加される。いくつかの態様において、約3500×106または5500×106の拡大増殖の例示的閾値が達成された1日後に細胞を採取する。いくつかの態様において、有核細胞（TNC）の総数が少なくとも3500×106または少なくとも約3500×106に達した1日後の時点およびTNC数が少なくとも5500×106または少なくとも約5500×106の全有核細胞に達した時点で細胞を採取する。採取後に、磁場への曝露によって、抗CD3および抗CD28抗体コンジュゲートビーズは、細胞組成物から除去される。次いで、細胞を製剤化し、投与のための冷凍バッグ（例えばCryoStore（商標）Freezing Bags）およびさらなる分析のためのバイアル中に分注し、凍結保存する。いくつかの場合においては、30mL体積の製剤化された細胞組成物をバッグごとに分注する。いくつかの事例において、標的細胞数が総アウトプット組成物に対して適合する限り、細胞は可変の濃度で凍結保存される。
いくつかの態様において、提供される方法に従って使用される、記載される抗BCMA CARを発現する操作された細胞などの操作された細胞、およびこのような細胞を含有する組成物、例えば抗BCMAキメラ抗原受容体（CAR）を発現するCD4＋およびCD8＋T細胞を含有する組成物は、別の例示的なプロセスによって生産または生成される。例示的なプロセスでは、初代CD4＋およびCD8＋細胞は、多発性骨髄腫（MM）を有する対象からを含む、ヒト白血球アフェレーシス試料からのPBMCを含有する生物学的試料から濃縮される。いくつかの局面において、濃縮されたCD4＋および濃縮されたCD8＋細胞組成物は別々に凍結保存され、続いて、刺激、形質導入および拡大増殖のための工程を実施する前に、解凍され、1:1の生存CD4＋T細胞対生存CD8＋T細胞の比で混合される。いくつかの局面において、濃縮されたCD4＋および濃縮されたCD8＋細胞組成物は別々に凍結保存され、続いて、刺激、形質導入および拡大増殖のための工程を実施する前に、解凍され、2:1の生存CD4＋T細胞対生存CD8＋T細胞の比で混合される。
いくつかの態様において、混合された細胞組成物からの約300×106個のT細胞（例えば、150×106個のCD4＋および150×106個のCD8＋T細胞）は、約3×106細胞/mLの密度で、組換えIL-2、IL-7およびIL-15を含有する例示的な無血清培地中において、1:1のビーズ対細胞比で、抗CD3および抗CD28抗体が結合された常磁性ポリスチレン被覆ビーズの存在下で18～30時間インキュベートされる。
いくつかの局面において、インキュベーションの後、60分間のスピノキュレーションに続く約37℃での約18時間～30時間のインキュベーションによって、インキュベートされた細胞組成物からの少なくともおよそ100×106個および最大およそ200×106個の生存細胞は、サイトカインを含む例示的な無血清培地中において、（例えば、BCMAに特異的なscFv抗原結合ドメイン、CD28膜貫通領域、4-1BB共刺激シグナル伝達領域、およびCD3-ゼータ由来の細胞内シグナル伝達ドメインを含有する）本明細書中に記載される例示的な抗BCMA CARのいずれかをコードするレンチウイルスベクターで形質導入される。
いくつかの態様において、インキュベーションおよび形質導入段階中に使用されたIL-2、IL-7およびIL-15の2倍の濃度を含有する約500mLの例示的無血清培地中、バイオリアクター（例えば、揺動バイオリアクター）中での培養によって、形質導入された細胞を次いで拡大増殖させる。いくつかの局面において、培地はポロキサマーを含有しないか、または含まない。いくつかの局面において、0.6×106細胞/mL超または約0.6×106細胞/mL超の細胞密度が達成されたと推定された後、定期的に、例えば約2～約15分、1000mLの体積まで新鮮な培地のショットを添加して、培地を段階的に添加し、0.6×106×細胞/mL超または約0.6×106細胞/mL超の閾値生存細胞密度が達成されるまで、細胞を一定の揺動条件（非灌流）下で培養する。いくつかの局面においては、生細胞密度が0.8×106細胞/mLを超えれば、1000mLの標的体積まで、上記のように第1の培地が段階的に添加され、次いで、灌流が開始される組み合わせ充填/灌流段階が開始される。いくつかの態様において、培地は、連続的な混合を伴う半連続的な灌流によって置き換えられる。いくつかの局面において、灌流速度および/または揺動速度は、細胞密度が増加するにつれて拡大増殖期中に少なくとも1回増加される。いくつかの態様において、灌流速度は、細胞密度が増加するにつれて拡大増殖期中に少なくとも1回増加される。いくつかの局面において、生細胞密度によって決定される1日当たり総体積で（例えば、ある密度に達したら、より高い速度で）、例えば、1日当たり約750mLまたは1500mLの総新鮮培地が培養物に添加される速度まで（例えば、より高い細胞濃度に達した場合には、より高い速度で）、0.5時間または約0.5時間ごと～1.5もしくは2時間ごとまたは約1.5もしくは2時間ごとなど定期的に1日を通じて新鮮な培地のショットを添加して、培地が段階的に培養物に添加される。いくつかの態様において、有核細胞（TNC）の総数が少なくとも1000×106または少なくとも約1000×106に達した1日後の時点およびTNC数が少なくとも2400×106または少なくとも約2400×106の全有核細胞に達した時点で、少なくとも85％の生存率で、細胞を採取する。いくつかの局面において、採取後に、抗CD3および抗CD28抗体コンジュゲートビーズは、細胞組成物から除去される。
いくつかの態様において、次いで、細胞は製剤化され、例えば下流での貯蔵または使用のために、組成物の一定分量は容器に移される。いくつかの態様において、製剤化された組成物またはその一部は、例えば対象への潜在的な投与のための細胞組成物の凍結保存および保存に適した凍結バッグ（CryoStore（商標）Freezing Bagsなど）に移され、および/または組成物もしくはその一部は、細胞のさらなる分析のためなどにバイアルまたは他の容器に移される。いくつかの局面において、細胞は、下流の解凍および投与のための使用に適した条件下などで凍結保存される。いくつかの場合において、30mL体積の製剤化された細胞が個々のバッグにおいて使用される。いくつかの事例において、例えば、投与のための細胞という状況で各用量中のCAR＋T細胞の一貫した数または濃度を可能にするために、細胞は可変的な総細胞濃度で凍結保存される。いくつかの態様において、標的CAR＋CD3＋細胞数は、30mLあたりまたはバッグあたり所望の数または概ね所望の数（例えば、37.5×106個または約37.5×106個）のCAR＋CD3＋細胞であり、いくつかの態様において、異なるドナーまたは患者から生成された組成物の間で異なる総細胞濃度を含む。
いくつかの局面において、様々な多発性骨髄腫患者から得られた個々の白血球アフェレーシス試料について、このような試料から操作された細胞組成物を生成するためのこのような例示的なプロセスは、5～8日の活性化の開始から採取までの前記プロセスの一部の期間の範囲、および5.5日のこれらの試料間での平均期間をもたらすことができる。いくつかの局面において、この試料の群についての前記プロセスにわたる累積集団倍加の平均数は、約5であり得る。
いくつかの局面において、本明細書中に記載される例示的なプロセスは、いくつかのヒト多発性骨髄腫白血球アフェレーシス試料から操作されたT細胞組成物を生成するために使用することができる。いくつかの局面において、細胞表現型、機能および細胞工学を反映するパラメーターを含む様々なパラメーターが評価される。いくつかの態様において、T細胞純度、T細胞系統表現、形質導入頻度および機能性は、異なる例示的なプロセス（例えば、上記の）を使用してこれらの白血球アフェレーシス産物を用いて生成された組成物と実質的に同様であることが観察される。いくつかの局面において、異なる例示的なプロセス（例えば、上記の）と比較して、上記の例示的プロセスを使用した生産により、集団倍加の数の減少および活性化開始と採取の間の平均日数の減少が観察される。いくつかの局面において、セントラルメモリー表現型細胞の類似のまたは増大したパーセンテージ（およびエフェクターメモリー表現型細胞の類似のまたは低下したパーセンテージ）が、本明細書中に記載される異なる例示的なプロセスによって生産された操作された細胞組成物において観察される。
いくつかの態様において、試料の多数または高いパーセンテージについて、例えば、（例えば、自己細胞療法の状況において）治療用組成物で処置されるべき対象または患者などの異なる個々の対象または患者にそれぞれ由来する試料の全部または高いパーセンテージについて、特定の成功率、例えば高い成功率または閾値率を上回る成功率、例えば、治療用細胞組成物を生成することができる、例えばある種の必要とされるまたは所望される特徴を有するこのような組成物を生成することができる高い成功率をいくつかの局面において有するプロセスを使用して、操作された細胞組成物が生成される。いくつかの局面において、対象または患者は、がん、例えば血液または血液がん、例えば多発性骨髄腫などの疾患または症状を有する。いくつかの局面において、試料の高いパーセンテージについて治療用細胞組成物を生成することが可能な試料は、例えば試料またはその細胞の細胞表現型または他のパラメーターに関して可変である患者試料が挙げられる患者試料である。いくつかの態様において、例えば、他のプロセスを介して生成された細胞組成物と比較して、改善されたまたは高い程度の細胞の健康を有する操作された細胞組成物。いくつかの態様において、組成物は、アポトーシスマーカー陰性の細胞を高いパーセンテージで含む。いくつかの態様において、操作された細胞組成物は、頑強なサイトカイン産生を有する多機能細胞を含む組成物を生成する方法によって生成される。いくつかの態様において、操作された細胞組成物は、メモリー表現型について濃縮された、セントラルメモリー表現型について濃縮された、および/またはCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、グランザイムB-および/またはCD127＋である細胞について濃縮されたT細胞組成物を生成する方法によって生成される。いくつかの態様において、組成物中の細胞の少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、もしくは80％もしくはそれ以上（または特定の方法を用いて生産された試料の少なくとも半分もしくは過半数について、もしくは特定の方法を用いて生産された試料について平均で、組成物中の細胞の少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、もしくは80％もしくはそれ以上）、組成物中のT細胞の少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、もしくは80％もしくはそれ以上、または組成物中の操作されたT細胞の少なくとも20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、もしくは80％もしくはそれ以上は、セントラルメモリー表現型のT細胞であり、CD27＋、CD28＋であり、CCR7＋、CD45RA-であり、および/またはCCR7＋、CD45RO＋である。いくつかの態様において、組成物中の細胞の少なくとも50、55、60、65、70、75、もしくは80もしくは85もしくは90もしくは95％もしくはそれ以上（または特定の方法を用いて生産された試料の少なくとも半分もしくは過半数について、もしくは特定の方法を用いて生産された試料について平均で、組成物中の細胞の少なくとも50、55、60、65、70、75、もしくは80もしくは85もしくは90もしくは95％もしくはそれ以上）、組成物中のT細胞の少なくとも50、55、60、65、70、75、もしくは80もしくは85もしくは90もしくは95％もしくはそれ以上、または組成物中の操作されたT細胞の少なくとも50、55、60、65、70、75、もしくは80もしくは85もしくは90もしくは95％もしくはそれ以上は、メモリー表現型のT細胞であり、CD45RA-であり、および/またはCD45RO＋である。
ある特定の態様において、組成物の細胞は、セントラルメモリー細胞の部分および/または頻度が高い。いくつかの態様において、組成物の細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、メモリー表現型であるか、セントラルメモリー表現型であるか、またはセントラルメモリーT細胞である。ある特定の態様において、組成物の細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーT細胞である。ある特定の態様において、組成物の細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、メモリー表現型であるか、セントラルメモリー表現型であるか、またはセントラルメモリーT細胞である。いくつかの態様において、組成物のT細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、メモリー表現型であるか、セントラルメモリー表現型であるか、またはセントラルメモリーT細胞である。ある特定の態様において、組成物のT細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、メモリー表現型であるか、セントラルメモリー表現型であるか、またはセントラルメモリーT細胞である。ある特定の態様において、組成物のT細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、メモリー表現型であるか、セントラルメモリー表現型であるか、またはセントラルメモリーT細胞である。いくつかの態様において、組成物のCD4＋T細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、セントラルメモリーCD4＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD4＋T細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD4＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD4＋T細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD4＋T細胞である。いくつかの態様において、組成物のCD4＋CAR＋T細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、セントラルメモリーCD4＋CAR＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD4＋CAR＋T細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD4＋CAR＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD4＋CAR＋T細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD4＋CAR＋T細胞である。いくつかの態様において、組成物のCD8＋T細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、セントラルメモリーCD8＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD8＋T細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD8＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD8＋T細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD8＋T細胞である。いくつかの態様において、組成物のCD8＋CAR＋T細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、セントラルメモリーCD8＋CAR＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD8＋CAR＋T細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD8＋CAR＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCD8＋CAR＋T細胞の40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD8＋CAR＋T細胞である。いくつかの態様において、組成物のCAR＋T細胞（例えば、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞）の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、セントラルメモリーCD4＋またはCD8＋T細胞である。ある特定の態様において、組成物のCAR＋T細胞（例えば、CD4＋T細胞およびCD8＋T細胞）の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、セントラルメモリーCD4＋またはCD8＋T細胞である。いくつかの態様において、組成物中の細胞の少なくとも30％もしくは30％もしくは約30％、少なくとも40％もしくは40％もしくは約40％、少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、少なくとも70％もしくは70％もしくは約70％、少なくとも75％もしくは75％もしくは約75％、少なくとも80％もしくは80％もしくは約80％、少なくとも85％もしくは85％もしくは約85％、少なくとも90％もしくは90％もしくは約90％、少なくとも95％もしくは95％もしくは約95％、または95％超は、CD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-、および/またはCD127＋である。いくつかの態様において、組成物中のCAR＋T細胞の少なくとも50％もしくは50％もしくは約50％、少なくとも55％もしくは55％もしくは約55％、少なくとも60％もしくは60％もしくは約60％、または少なくとも65％もしくは65％もしくは約65％は、CD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-、および/またはCD127＋である。
いくつかの態様において、本方法の反復は、任意で複数の異なる個々の対象の間で本方法が実施されるヒト生物学的試料から、複数の組成物を生産する。いくつかの態様において、複数の組成物におけるメモリー表現型の細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物におけるセントラルメモリー表現型の細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物におけるCD27＋、CD28＋、CCR7＋、CD45RA-、CD45RO＋、CD62L＋、CD3＋、CD95＋、グランザイムB-、および/またはCD127＋である細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物におけるCCR7＋/CD45RA-またはCCR7＋/CD45RO＋である細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物の操作されたCD4＋T細胞（例えば、CAR＋CD4＋T細胞）中のセントラルメモリーCD4＋T細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物の操作されたCD8＋T細胞（例えば、CAR＋CD8＋T細胞）中のセントラルメモリーCD8＋T細胞の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。いくつかの態様において、複数の組成物の操作されたT細胞（例えば、CAR＋T細胞）中のセントラルメモリーT細胞（例えば、CD4＋セントラルメモリーT細胞およびCD8＋セントラルメモリーT細胞）の平均（average）（すなわち、平均（mean））または中央値パーセンテージは、40％もしくは約40％～65％もしくは約65％、40％もしくは約40％～45％もしくは約45％、45％もしくは約45％～50％もしくは約50％、50％もしくは約50％～55％もしくは約55％、55％もしくは約55％～60％もしくは約60％、または60％もしくは約60％～65％もしくは約65％である。
IV. 薬学的組成物
薬学的組成物および製剤を含む、BCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞を含む組成物も提供される。このような組成物としては、提供される抗BCMA組換え受容体（例えばCAR）を発現する操作された細胞、例えば複数の操作された細胞を含む組成物がある。いくつかの局面において、提供される方法および使用、例えば治療的方法および使用において使用するための組成物、例えば細胞組成物も提供される。いくつかの態様において、提供される組成物は、疾患または障害、例えば多発性骨髄腫を有する対象に投与された場合に、ある特定の治療アウトカム、例えば応答または安全性アウトカムを達成することができる。
BCMA結合性組換えキメラ抗原受容体または前記受容体を発現する操作された細胞、前記受容体を発現する複数の操作された細胞、および/または組合せ処置もしくは治療のための追加の作用物質を含む薬学的製剤が提供される。薬学的組成物および製剤は、一般に、1つまたは複数の任意の薬学的に許容される担体または賦形剤を含む。いくつかの態様において、組成物は、少なくとも1つの追加の治療剤を含む。
「薬学的製剤」という用語は、その中に含有される活性成分の生物学的活性が有効であることを可能にするような形態であり、製剤が投与される対象にとって許容不能に毒性である追加の成分を含有しない調製物を指す。
「薬学的に許容される担体」とは、対象に無毒な、活性成分以外の、薬学的製剤中にある成分を指す。薬学的に許容される担体には、緩衝液、賦形剤、安定剤、または防腐剤が含まれるが、これに限定されない。
一部の局面では、担体の選択は、一つには、特定の細胞によって、さらなる治療剤によって、および/または投与方法によって決定される。従って、様々な適切な製剤がある。例えば、薬学的組成物は防腐剤を含有してもよい。適切な防腐剤には、例えば、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸ナトリウム、および塩化ベンザルコニウムが含まれ得る。一部の局面では、2種類以上の防腐剤の混合物が用いられる。防腐剤またはその混合物は典型的には全組成物の重量に対して約0.0001％～約2％の量で存在する。担体は、例えば、Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)に記載されている。薬学的に許容される担体は、一般的に、使用される投与量および濃度でレシピエントに無毒であり、緩衝液、例えば、リン酸、クエン酸、および他の有機酸;アスコルビン酸およびメチオニンを含む抗酸化物質;防腐剤(例えば、オクタデシルジメチルベンジル塩化アンモニウム;塩化ヘキサメトニウム;塩化ベンザルコニウム;塩化ベンゼトニウム;フェノール、ブチルアルコールもしくはベンジルアルコール;アルキルパラベン、例えば、メチルパラベンもしくはプロピルパラベン;カテコール;レゾルシノール;シクロヘキサノール;3-ペンタノール;およびm-クレゾール);低分子量(約10残基未満)ポリペプチド;タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン;親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン;アミノ酸、例えば、グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリジン;グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖、二糖、および他の糖質;キレート剤、例えば、EDTA;糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール;塩を形成する対イオン、例えば、ナトリウム;金属錯体(例えば、Zn-タンパク質錯体);ならびに/または非イオン界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール(PEG)を含むが、これに限定されない。
一部の局面では、緩衝剤が前記組成物に含まれる。適切な緩衝剤には、例えば、クエン酸、クエン酸ナトリウム、リン酸、リン酸カリウム、ならびに様々な他の酸および塩が含まれる。一部の局面では、2種類以上の緩衝剤の混合物が用いられる。緩衝剤またはその混合物は典型的には全組成物の重量に対して約0.001％～約4重量％の量で存在する。投与可能な薬学的組成物を調製するための方法は公知である。例示的な方法は、例えば、Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)において、さらに詳細に説明されている。
前記製剤または組成物はまた、前記細胞またはその組成物で処置されている特定の適応症、疾患、または状態に有用な複数種の活性成分、好ましくは前記細胞またはその組成物に対して補完的な活性を有するものを含有してよく、この場合、それぞれの活性は互いに悪影響を及ぼさない。このような活性成分は、所期の目的に有効な量で組み合わせられて適切に存在する。従って、一部の態様では、薬学的組成物は、他の薬学的に活性な薬剤または薬物、例えば、化学療法剤、例えば、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、シスプラチン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、ヒドロキシウレア、メトトレキセート、パクリタキセル、リツキシマブ、ビンブラスチン、ビンクリスチンなどをさらに含む。
薬学的組成物は、一部の態様では、細胞またはその組成物を、前記疾患または状態を処置または予防するのに有効な量、例えば、治療的有効量または予防的有効量で含む。治療有効性または予防有効性は、一部の態様では、処置される対象を定期的に評価することによってモニタリングされる。状態に応じて数日またはそれより長期間にわたって反復投与するために、疾患症状の望ましい抑止が起こるまで処置は繰り返される。しかしながら、他のレジメンが有用な場合があり、確かめることができる。望ましい投与量は組成物の単回ボーラス投与によって送達されてもよく、組成物の複数回ボーラス投与によって送達されてもよく、組成物の連続注入投与によって送達されてもよい。
ある特定の態様において、組換え受容体、例えばCARを含有する遺伝子操作された細胞との関連において、100万もしくは約100万個から、1000億個もしくは約1000億個の範囲の細胞、例えば、100万個から、500億個または約500億個の細胞（例えば、500万個もしくは約500万個の細胞、2500万個もしくは約2500万個の細胞、5000万個もしくは約5000万個の細胞、5億個もしくは約5億個の細胞、10億個もしくは約10億個の細胞、50億個もしくは約50億個の細胞、200億個もしくは約200億個の細胞、300億個もしくは約300億個の細胞、400億個もしくは約400億個の細胞、または前述の値の任意の2つによって定義される範囲）、例えば、1000万個もしくは約1000万個から、1000億個もしくは約1000億個の細胞（例えば、2000万個もしくは約2000万個の細胞、3000万個もしくは約3000万個の細胞、4000万個もしくは約4000万個の細胞、6000万個もしくは約6000万個の細胞、7000万個もしくは約7000万個の細胞、8000万個もしくは約8000万個の細胞、9000万個もしくは約9000万個の細胞、100億個もしくは約100億個の細胞、250億個もしくは約250億個の細胞、500億個もしくは約500億個の細胞、750億個もしくは約750億個の細胞、900億個もしくは約900億個の細胞、または前述の値の任意の2つによって定義される範囲）、いくつかの場合においては、1億個もしくは約1億個の細胞から、500億個もしくは約500億個の細胞（例えば、1億2000万個もしくは約1億2000万個の細胞、1億5000万個もしくは約1億5000万個の細胞、2億5000万個もしくは約2億5000万個の細胞、3億個もしくは約3億個の細胞、3億5000万個もしくは約3億5000万個の細胞、4億5000万個もしくは約4億5000万個の細胞、6億5000万個もしくは約6億5000万個の細胞、8億個もしくは約8億個の細胞、9億個もしくは約9億個の細胞、12億個もしくは約12億個の細胞、30億個もしくは約30億個の細胞、300億個もしくは約300億個の細胞、450億個もしくは約450億個の細胞）またはこれらの範囲の間の任意の値、および/または対象の体重1kg当たりこのような数の細胞が対象に投与される。いくつかの局面において、組換え受容体、例えばCARを発現する遺伝子操作された細胞との関連において、組成物は、概ねまたは少なくとも、投与のために本明細書に、例えば、セクションI.A（3）に記載されている細胞の数など、少なくとも、細胞療法の用量の投与のための細胞の数を含有することができる。
これらは、標準的な投与技法、製剤、および/または装置を用いて投与され得る。前記組成物を保管および投与するための製剤および装置、例えば、注射器およびバイアルが提供される。細胞の投与は自家投与でもよく、または異種投与でもよい。例えば、ある対象から免疫応答性細胞または前駆細胞を入手し、同じ対象または異なる適合性の対象に投与することができる。末梢血に由来する免疫応答性細胞またはその子孫(例えば、インビボ、エクスビボ、またはインビトロで得られる)を、カテーテル投与を含む局所注射、全身注射、局所注射、静脈内注射、または非経口投与を介して投与することができる。治療用組成物(例えば、遺伝子組換えされた免疫応答性細胞を含有する薬学的組成物)が投与される時に、一般的に、注射用単位剤形(溶液、懸濁液、エマルジョン)の形で製剤化される。
製剤には、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、皮下投与、肺投与、経皮投与、筋肉内投与、鼻腔内投与、頬投与、舌下投与、または坐剤投与のための製剤が含まれる。一部の態様では、前記細胞集団は非経口投与される。本明細書で使用する用語「非経口」は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与、腟投与、頭蓋内、胸腔内、および腹腔内投与を含む。一部の態様では、前記細胞集団は、静脈内注射、腹腔内注射、または皮下注射による末梢全身送達を用いて対象に投与される。
組成物は、一部の態様では、滅菌した液体調製物、例えば、等張性水溶液、懸濁液、エマルジョン、分散液として提供されるか、または粘性のある組成物として提供され、これらは、一部の局面では、選択されたpHまで緩衝化されてもよい。液体調製物は、通常、ゲル、他の粘性のある組成物、および固体組成物より調製しやすい。さらに、液体組成物の方が、投与するのに、特に、注射によって投与するのに若干便利である。他方で、粘性のある組成物は、特定の組織との長い接触期間をもたらすように適切な粘性の範囲内で製剤化することができる。液体組成物または粘性のある組成物は、例えば、水、食塩水、リン酸緩衝食塩水、ポリオール(例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール)、およびその適切な混合物を含有する、溶媒または分散媒でもよい担体を含んでもよい。
滅菌注射液は、前記治療剤を溶媒の中に取り入れて、例えば、適切な担体、希釈剤、または賦形剤、例えば、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどと混合して調製することができる。
インビボ投与のために使用しようとする製剤は一般的に無菌である。無菌性は、容易に、例えば、滅菌濾過膜で濾過することによって成し遂げられ得る。
併用療法のための薬学的組成物も提供される。本明細書において記載される併用療法のための追加の作用物質のいずれか、例えば、セクションI.Bに記載の作用物質は、本明細書において記載されるBCMA結合性組換え受容体を発現する操作された細胞を用いて、1つまたは複数の薬学的組成物として調製および投与され得る。併用療法は、例えば、組換え受容体を発現する細胞が追加の作用物質と同じ薬学的組成物中にある1つもしくは複数の薬学的組成物で、または別個の薬学的組成物で投与され得る。例えば、いくつかの態様において、追加の作用物質は、追加の操作された細胞、例えば、異なる組換え受容体を発現するように操作された細胞であり、同じ組成物または別個の組成物で投与される。いくつかの態様において、薬学的組成物の各々は、特定の細胞、例えば、組換え受容体を発現する操作された細胞、および/または追加の作用物質、ならびに特定の投与レジメンおよび/または送達方法に従って、好適な製剤に製剤化される。
V. 製造物品またはキット
提供される遺伝子操作された細胞（例えば、BCMA結合性組換え受容体を発現する）を含む製造物品もしくはキット、ならびに/または例えば併用療法のためのそれらおよび/もしくは追加の治療剤（例えば組換えIL-1Ra）を含む組成物も提供される。提供される組換え受容体（例えばCAR）、遺伝子操作された細胞、および/またはそれらを含む組成物を含む製造物品またはキットも提供される。製造物品は、容器と、容器上のまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書とを含み得る。好適な容器には、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、試験管、IV溶液バッグなどが含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。いくつかの態様において、容器は、滅菌アクセスポートを有する。例示的な容器には、注射用の針によって穿刺可能なストッパを有するものを含め、静脈内溶液バッグ、バイアルが含まれる。製造物品またはキットは、組成物が、特定の状態、例えば、本明細書において記載される状態（例えば多発性骨髄腫）を処置するために使用され得ることを示す添付文書をさらに含み得る。代替的または追加的に、製造物品またはキットは、薬学的に許容される緩衝液を含む別のまたは同じ容器をさらに含み得る。製造物品またはキットは、他の材料、例えば、他の緩衝液、希釈剤、フィルタ、針および/またはシリンジをさらに含み得る。
ラベルまたは添付文書は、組成物が、個体のBCMA発現またはBCMA関連の疾患、障害または状態を処置するために使用されることを示し得る。容器上にあるかまたは容器に関連付けられたラベルまたは添付文書は、製剤の再構成および/または使用のための指示を示し得る。ラベルまたは添付文書は、製剤が、個体のBCMA発現またはBCMA関連の疾患、障害または状態を処置または予防するための皮下投与、静脈内投与、または他の投与様式に有用であるかまたはそれらを対象とすることをさらに示し得る。
いくつかの態様において、容器は、それ自体が状態を処置、予防および/もしくは診断するのに有効な組成物、または状態を処置、予防および/もしくは診断するのに有効な別の組成物と組み合わせた組成物を保持する。製造物品またはキットは、（a）抗体（例えば抗BCMA抗体）もしくはその抗原結合性フラグメントまたは組換え受容体（例えばCAR）を含む組成物が収容された第1の容器（すなわち、第1の医薬品）と、（b）例えば併用療法のための追加の作用物質、例えばIL-1Ra（例えばアナキンラ）、細胞傷害性作用物質または他の治療剤を含む組成物が収容された第2の容器（すなわち、第2の医薬品）とを含み得、この物品またはキットは、有効量の第2の医薬品によって対象を処置するためのラベルまたは添付文書上の説明書をさらに含む。
VI. 定義
本明細書において使用される場合、抗体の「対応する形態」への言及は、2つの抗体の特性または活性を比較する場合、同じ形態の抗体を使用して特性を比較することを意味する。例えば、抗体が第1の抗体の対応する形態の活性よりも大きな活性を有すると述べられている場合、それは、特定の形態、例えば、その抗体のscFvが、第1の抗体のscFv形態よりも大きな活性を有することを意味する。
本明細書における「Fc領域」という用語は、定常領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖のC末端領域を定義するために使用される。該用語は、天然配列Fc領域およびバリアントFc領域を含む。一態様において、ヒトIgG重鎖Fc領域は、Cys226またはPro230から重鎖のカルボキシル末端まで延在する。ただし、Fc領域のC末端リジン（Lys447）は、存在しても存在しなくてもよい。本明細書において別段の指定がない限り、Fc領域または定常領域内のアミノ酸残基のナンバリングは、Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991に記載されているような、EUインデックスとも呼ばれるEUナンバリングシステムに従う。
「全長抗体」、「インタクトな抗体」および「全抗体」という用語は、本明細書において、天然の抗体構造と実質的に同様の構造を有する抗体、または本明細書において定義されるFc領域を含む重鎖を有する抗体を指すために区別なく使用される。
「単離された」抗体とは、その天然の環境の成分から分離されたものである。いくつかの態様において、抗体は、例えば、電気泳動（例えば、SDS-PAGE、等電点電気泳動（IEF）、キャピラリー電気泳動）またはクロマトグラフィー（例えば、イオン交換HPLCまたは逆相HPLC）によって決定される場合、純度95％または99％超まで精製される。抗体純度の評価方法の概説については、例えば、Flatman et al.,J.Chromatogr.B 848:79-87（2007）を参照されたい。
「単離された」核酸とは、その天然の環境の成分から分離された核酸分子を指す。単離された核酸は、該核酸分子を通常含む細胞に含まれる核酸分子を含むが、該核酸分子は、染色体外に、またはその天然の染色体位置とは異なる染色体位置に存在する。
「抗BCMA抗体をコードする単離された核酸」は、抗体の重鎖および軽鎖（またはそのフラグメント）をコードする1つまたは複数の核酸分子、例えば、単一のベクターまたは別個のベクター内のそのような核酸分子、および宿主細胞内の1つまたは複数の位置に存在するそのような核酸分子を指す。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」および「宿主細胞培養物」という用語は、区別なく使用され、外因性核酸が導入された細胞、例えば、そのような細胞の子孫を指す。宿主細胞には、「形質転換体」および「形質転換細胞」が含まれ、これらには、初代形質転換細胞と、継代数を問わずそれに由来する子孫とが含まれる。子孫は、親細胞と核酸含有量が完全に同一でない場合があるが、突然変異を含み得る。最初に形質転換された細胞においてスクリーニングまたは選択されたものと同じ機能または生物学的活性を有する変異子孫が本明細書において含まれる。
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指すために区別なく使用され、最小の長さに限定されない。抗体および抗体鎖ならびに他のペプチド、例えば、リンカーおよびBCMA結合性ペプチドを含むポリペプチドは、天然および/または非天然アミノ酸残基を含むアミノ酸残基を含み得る。該用語はまた、ポリペプチドの発現後改変、例えば、グリコシル化、シアリル化、アセチル化、リン酸化などを含む。いくつかの局面において、ポリペプチドは、タンパク質が所望の活性を維持する限り、天然（native）または天然（natural）の配列に関する改変を含み得る。これらの改変は、例えば、部位特異的突然変異誘発を介する意図的なものであってよいか、または例えば、タンパク質を産生する宿主の突然変異、もしくはPCR増幅によるエラーを介する偶発的なものであってよい。
本明細書において使用される場合、アミノ酸配列（参照ポリペプチド配列）に関して使用される場合の「パーセント（％）アミノ酸配列同一性」および「パーセント同一性」および「配列同一性」は、最大パーセント配列同一性を達成するために配列をアラインメントし、必要に応じてギャップを導入した後、いかなる保存的置換も配列同一性の一部として考慮せずに、参照ポリペプチド配列内のアミノ酸残基と同一である、候補配列（例えば、対象の抗体またはフラグメント）内のアミノ酸残基のパーセンテージとして定義される。パーセントアミノ酸配列同一性を決定するためのアラインメントは、例えば、BLAST、BLAST-2、ALIGNまたはMegalign（DNASTAR）ソフトウェアなどの公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して、当技術分野における技能の範囲内である様々な方法で達成され得る。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大アラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含め、配列をアラインメントするための適切なパラメータを決定することができる。
アミノ酸置換は、別のアミノ酸によるポリペプチド内の1つのアミノ酸の置換を含み得る。関心対象の組換え受容体にアミノ酸置換を導入し、所望の活性、例えば、抗原結合の保持/改善、または免疫原性の低下について生成物をスクリーニングしてもよい。
アミノ酸は、一般に、以下の一般的な側鎖特性に従って分類され得る:
（1）疎水性:ノルロイシン、Met、Ala、Val、Leu、Ile;
（2）中性親水性:Cys、Ser、Thr、Asn、Gln;
（3）酸性:Asp、Glu;
（4）塩基性:His、Lys、Arg;
（5）鎖の配向に影響を及ぼす残基:Gly、Pro;
（6）芳香族:Trp、Tyr、Phe。
非保存的アミノ酸置換は、これらのクラスのうちの1つのメンバーを別のクラスと交換することを含む。
本明細書において使用される「ベクター」という用語は、それが連結されている別の核酸を増殖させることができる核酸分子を指す。該用語は、自己複製核酸構造としてのベクター、およびベクターが導入されている宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターを含む。特定のベクターは、それらが機能的に連結されている核酸の発現を導くことができる。そのようなベクターは、本明細書において「発現ベクター」と呼ばれる。
「添付文書」という用語は、治療用製品の市販パッケージに通例含まれる説明書であって、そのような治療用製品の使用に関する指標、用法、投与量、投与、併用療法、禁忌および/または警告に関する情報を含む説明書を指すために使用される。
本明細書において使用される場合、単数形「a」、「an」および「the」は、文脈上他に明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。例えば、「a」または「an」は、「少なくとも1つ」または「1つまたは複数」を意味する。本明細書において記載される局面、態様および変形例は、局面、態様および変形例を「含む（comprising）」、それら「からなる（consisting of）」および/または「から本質的になる（consisting essentially of）」ことを含むことが理解される。
本開示を通して、特許請求される主題の様々な局面は、範囲形式で提示される。範囲形式での説明は、単に便宜および簡潔さのためのものであり、特許請求される主題の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲、およびその範囲内の個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。例えば、値の範囲が提供される場合、その範囲の上限と下限との間の各介在値、およびその記載された範囲内の任意の他の記載値または介在値は、特許請求される主題内に包含されることが理解される。これらの小さい方の範囲の上限および下限は、小さい方の範囲に独立して含まれてもよく、記載された範囲内の任意の具体的に除外された限界を条件として、特許請求される主題内に包含される。記載された範囲が限界値の一方または両方を含む場合、それらの含まれる限界値の一方または両方を除外した範囲も、特許請求される主題に含まれる。これは、範囲の幅に関係なく適用される。
本明細書において使用される「約」という用語は、この技術分野の当業者に容易に知られているそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする態様を含む（および説明する）。例えば、「約X」に言及する記載は、「X」という記載を含む。
本明細書において使用される場合、「組成物」は、細胞を含む2つ以上の生成物、物質または化合物の任意の混合物を指す。「組成物」は、溶液、懸濁液、液体、粉末、ペースト、水性、非水性またはそれらの任意の組合せであり得る。
本明細書において使用される場合、細胞または細胞集団が特定のマーカーについて「陽性」であるという記述は、特定のマーカー、典型的には表面マーカーが細胞上または細胞内に検出可能に存在することを指す。表面マーカーに言及する場合、該用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体によって染色し、該抗体を検出することによって検出される表面発現の存在を指し、染色は、他の点では同一の条件下でアイソタイプ適合対照を用いて同じ手順を実行することによって検出された染色を実質的に上回るレベルで、および/またはマーカーについて陽性であると知られている細胞に関するレベルと実質的に同様のレベルで、および/またはマーカーについて陰性であると知られている細胞に関するレベルよりも実質的に高いレベルで、フローサイトメトリーによって検出可能である。
本明細書において使用される場合、細胞または細胞集団が特定のマーカーについて「陰性」であるという記述は、特定のマーカー、典型的には表面マーカーが細胞上または細胞内に実質的に検出可能に存在しないことを指す。表面マーカーに言及する場合、該用語は、フローサイトメトリーによって、例えば、マーカーに特異的に結合する抗体によって染色し、該抗体を検出することによって検出される表面発現の非存在を指し、染色は、他の点では同一の条件下でアイソタイプ適合対照を用いて同じ手順を実行することによって検出された染色を実質的に上回るレベルで、および/またはマーカーについて陽性であると知られている細胞に関するレベルよりも実質的に低いレベルで、および/またはマーカーについて陰性であると知られている細胞に関するレベルと比較して実質的に同様のレベルで、フローサイトメトリーによって検出されない。
他に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語、表記、ならびに他の技術的および科学的な用語または専門用語は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。いくつかの場合において、一般的に理解される意味を有する用語は、明確にするためおよび/または容易に参照するために本明細書において定義され、本明細書においてそのような定義を含めることは、当技術分野において一般に理解されるものとの実質的な差を表すと必ずしも解釈されるべきではない。
VII. 例示的な態様
提供される態様の中には、以下のものがある:
1. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）のある用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与される、工程。
2. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されている対象に投与する工程。
3. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の候補である対象に投与する工程。
4. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）のある用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与される、工程。
5. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されている対象に投与する工程。
6. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の候補である対象に投与する工程。
7. 操作されたT細胞の前記用量の前の24時間以内または約24時間以内に、対象に、IL-1Raの少なくとも1用量が投与されている、態様1～6のいずれかの方法。
8. IL-1Raの少なくとも1用量が、IL-1Raの少なくとも2用量を含む、態様1～7のいずれかの方法。
9. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の投与後に投与される、工程。
10. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量を該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法の該対象への投与前約24時間以内または投与前約24時間に投与され、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
11. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を該対象に投与する工程であって、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に、該対象に、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量が投与されており、操作されたT細胞の該用量の投与の後に、該対象に、IL-1Raの少なくとも1用量が投与されることになる、工程。
12. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および
操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
13. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
14. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および
操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
15. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の21、18、15もしくは12時間以内、または約21、18、15もしくは12時間以内に投与される、態様1～14のいずれかの方法。
16. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量を含む、態様1～15のいずれかの方法。
17. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の6、5、4、3もしくは2時間以内、または約6、5、4、3もしくは2時間以内に投与される、態様16の方法。
18. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される、態様16または態様17の方法。
19. IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の前記用量の投与の前の24時間以内または約24時間以内に投与され、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される、態様16～18のいずれかの方法。
20. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程をさらに含む、態様1～8および態様15～19のいずれかの方法。
21. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7または8用量を含む、態様9～20のいずれかの方法。
22. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの3、4、5、6または7用量を含む、態様9～21のいずれかの方法。
23. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の4用量を含む、態様9～22のいずれかの方法。
24. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの5用量を含む、態様9～22のいずれかの方法。
25. 操作された細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、連続した日にわたって毎日投与される、態様9～24のいずれかの方法。
26. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が4用量であり、該4用量のうちの1つが、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続4日間にわたって毎日投与される、態様9～25のいずれかの方法。
27. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続5日間にわたって毎日投与される5用量である、態様9～25のいずれかの方法。
28. IL-1Raのある用量が、2～5日目に24時間ごと（q24h）に投与される、態様20～27のいずれかの方法。
29. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも6用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該細胞療法が、1日目に投与され、かつ、
（a）該IL-1Raの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に、任意で操作されたT細胞の該用量の投与の前夜に、投与され、
（b）該IL-1Raの1用量が、1日目の操作されたT細胞の該用量の投与前約3時間以内または投与前約3時間に投与され、
（c）該IL-1Raの4用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与され、該4用量のうちの1用量が、2、3、4および5日目に毎日投与される、
工程。
30. 対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、操作されたT細胞の前記用量の投与の後に、IL-1Raの追加の少なくとも1用量を投与する工程をさらに含む、態様1～29のいずれかの方法。
31. IL-1Raの追加の少なくとも1用量が、複数の用量の投与を含み、任意で、該複数の用量が、CRSの症状または徴候が消散されるまで、連続した日にわたって毎日投与される、態様30の方法。
32. 複数の用量が、CRSの症状または徴候が消散されるまで、連続した日にわたって1日2回投与される、態様31の方法。
33. 対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、IL-1Raのある用量が、CRSの症状または徴候が消散するまで、12時間ごと（q12h）に投与される、態様20～32のいずれかの方法。
34. IL-1Raの毎日の投与が、毎日同じ時間またはほぼ同じ時間に投与される、態様30～33のいずれかの方法。
35. I L-1Raが組換えIL-1Raである、態様1～34のいずれかの方法。
36. IL-1Raが、SEQ ID NO:256に示す配列、またはIL-1Rアンタゴニストとしての機能を保持する、SEQ ID NO:256に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくはそれ以上の配列同一性を有する配列を含む、態様1～35のいずれかの方法。
37. IL-1Raがアナキンラである、態様1～36のいずれかの方法。
38. アナキンラが組換えアナキンラである、態様37の方法。
39. IL-1Raの各用量が、500mgもしくは約500mg、400mgもしくは約400mg、300mgもしくは約300mg、200mgもしくは約200mg、100mgもしくは約100mg、もしくは50mgもしくは約50mg、または前述のいずれかによって定義される範囲であり、任意で、組換えIL-1Raの各用量が、50mgまたは約50mgから、200mgまたは約200mgである、態様1～38のいずれかの方法。
40. IL-1Raの各用量が、100mgまたは約100mgである、態様1～39のいずれかの方法。
41. IL-1Raが皮下投与される、態様1～40のいずれかの方法。
42. 細胞療法の投与に関連する毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する、態様1～41のいずれかの方法。
43. 毒性がサイトカイン放出症候群（CRS）である、態様4～8および態様13～42のいずれかの方法。
44. CRSが、重度のCRS、またはグレード3以上のCRSである、態様43の方法。
45. 毒性が神経毒性（NT）である、態様4～8および態様13～42のいずれかの方法。
46. NTが、重度のNT、またはグレード2以上のNT、もしくはグレード3以上のNTである、態様45の方法。
47. 毒性が、マクロファージ活性化症候群（MAS）または血球貪食性リンパ組織球症（HLH）である、態様4～8および態様13～42のいずれかの方法。
48. 操作されたT細胞の前記用量の投与の時点または投与の前に、
BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が対象に投与されている、態様1～47のいずれかの方法。
49. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を該対象に投与する工程であって、操作されたT細胞の該用量の投与の時点または投与の前に、
BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が該対象に投与されている、工程。
50. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、
BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法を以前に受けたことのある対象に、投与する工程。
51. 対象が、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、態様48～50のいずれかの方法。
52. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前の1年以内または約1年以内に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、態様48～51のいずれかの方法。
53. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前の6ヶ月以内または約6ヶ月以内に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、態様48～51のいずれかの方法。
54. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前の3ヶ月以内または約3ヶ月以内に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、態様48～51のいずれかの方法。
55. BCMA指向性TCEが、二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）であるか、または二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）を含む、態様48～54のいずれかの方法。
56. BCMA指向性TCEが、AMG 420/BI 836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135およびREGN5458のうちの1つまたは複数の中から選択される、態様48～55のいずれかの方法。
57. BCMA指向性ADCが、ベランタマブ・マフォドチン（GSK2857916）、MEDI2228、CC-99712およびAMG 224のうちの1つまたは複数の中から選択される、態様48～56のいずれかの方法。
58. 第1のCARが、
（a）SEQ ID NO:116に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:119に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）;
それぞれSEQ ID NO:97、101および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;
それぞれSEQ ID NO:96、100および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;
それぞれSEQ ID NO:95、99および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;
それぞれSEQ ID NO:94、98および102に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:104、106および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;または
SEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含むVHおよびSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含むVL
を含む細胞外抗原結合ドメイン、
（b）IgG4/2キメラヒンジもしくは改変IgG4ヒンジ、IgG2/4キメラCH2領域、およびIgG4 CH3領域を含み、任意で約228アミノ酸長である、スペーサー、またはSEQ ID NO:174に示すスペーサー、
（c）膜貫通ドメイン、任意でヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに
（d）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
を含む、態様1～57のいずれかの方法。
59. VHがSEQ ID NO:116のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含み、VLがSEQ ID NO:119のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む、態様58の方法。
60. 細胞外抗原結合ドメインがscFvを含む、態様58または態様59の方法。
61. VHとVLとがフレキシブルリンカーによって連結され、任意で、該フレキシブルリンカーが、アミノ酸配列
Figure 2023522857000015
を含む、態様58～60のいずれかの方法。
62. VHがVLのカルボキシ末端側にある、態様58～61のいずれかの方法。
63. 細胞外抗原結合ドメインが、SEQ ID NO:114のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様58～62のいずれかの方法。
64. 細胞外抗原結合ドメインがSEQ ID NO:114のアミノ酸配列を含む、態様58～63のいずれかの方法。
65. 細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸が、（a）SEQ ID NO:113のヌクレオチドの配列、（b）それに対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列、または（c）（a）もしくは（b）の縮重配列を含む、態様58～64のいずれかの方法。
66. 細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸がSEQ ID NO:115のヌクレオチドの配列を含む、態様58～65のいずれかの方法。
67. 膜貫通ドメインが、ヒトCD28由来の膜貫通ドメインであるかまたはヒトCD28由来の膜貫通ドメインを含む、態様58～66のいずれかの方法。
68. 膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、態様58～67のいずれかの方法。
69. 第1のCARが、
SEQ ID NO:125に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:127に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）、ならびに/または
それぞれSEQ ID NO:260、261および262に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:257、258および259に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL
を含む細胞外抗原結合ドメインを含む、態様1～57のいずれかの方法。
70. VHがSEQ ID NO:125のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:125のアミノ酸配列を含み、VLがSEQ ID NO:127のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:127のアミノ酸配列を含む、態様69の方法。
71. 細胞外抗原結合ドメインが、SEQ ID NO:128のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:128のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、態様69または態様70の方法。
72. 細胞質シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、態様58～71のいずれかの方法。
73. 共刺激シグナル伝達領域が、CD28、4-1BBもしくはICOSの細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む、態様58～72のいずれかの方法。
74. 共刺激シグナル伝達領域が、4-1BBの、任意でヒト4-1BBの、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、態様58～73のいずれかの方法。
75. 共刺激シグナル伝達領域が、SEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、態様58～74のいずれかの方法。
76. 共刺激シグナル伝達領域が、膜貫通ドメインとCD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインとの間にある、態様58～75のいずれかの方法。
77. 第1のCARが、そのN末端からC末端に向かって順に、細胞外抗原結合ドメイン、スペーサー、膜貫通ドメインおよび細胞内シグナル伝達領域を含む、態様1～76のいずれかの方法。
78. 第1のCARが、
（a）SEQ ID NO:116に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:119に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）
を含む細胞外抗原結合ドメイン、
（b）改変IgG4ヒンジ、IgG2/4キメラCH2領域、およびIgG4 CH3領域を含み、約228アミノ酸長であるスペーサー、
（c）ヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに
（d）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、4-1BBの細胞内シグナル伝達ドメインを含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
を含む、態様1～77のいずれかの方法。
79. 第1のCARが、
（a）SEQ ID NO:114に示す配列またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む細胞外抗原結合ドメイン、
（b）SEQ ID NO:174に示す配列またはSEQ ID NO:174に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含むスペーサー、
（c）SEQ ID NO:138に示す配列またはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む膜貫通ドメイン、ならびに
（d）SEQ ID NO:143に示す配列またはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む細胞質シグナル伝達と、SEQ ID NO:4に示す配列またはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
を含む、態様1～78のいずれかの方法。
80. 第1のCARが、
（a）SEQ ID NO:114に示す配列を含む細胞外抗原結合ドメイン、
（b）SEQ ID NO:174に示す配列を含むスペーサー、
（c）SEQ ID NO:138に示す配列を含む膜貫通ドメイン、ならびに
（d）SEQ ID NO:143に示す配列を含む細胞質シグナル伝達と、SEQ ID NO:4に示す配列を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
を含む、態様1～79のいずれかの方法。
81. 第1のCARが、SEQ ID NO:19に示す配列を含む、態様1～80のいずれかの方法。
82. 第1のCARが、SEQ ID NO:13に示す配列またはそれに対して少なくとも85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を呈する配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる、態様1～81のいずれかの方法。
83. 第1のCARが、SEQ ID NO:13に示す配列を含むポリヌクレオチド配列によってコードされる、態様1～68および態様72～82のいずれかの方法。
84. 第1のCARが、SEQ ID NO:312に示す配列を含む、態様1～57および態様69～77のいずれかの方法。
85. 第1のCARと第2のCARとが、BCMAの同じエピトープに結合する、態様48～84のいずれかの方法。
86. 第1のCARと第2のCARとが、BCMAの異なるエピトープに結合する、態様48～84のいずれかの方法。
87. 第1のCARと第2のCARとが異なる、態様48～86のいずれかの方法。
88. 第2のCARが、
それぞれSEQ ID NO:260、261および262のアミノ酸配列を含むCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3を含むVH領域、およびそれぞれSEQ ID NO:257、258および259のアミノ酸配列を含むCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3を含むVL領域、
SEQ ID NO:125に示す配列を含むVH領域、およびSEQ ID NO:127に示す配列を含むVL領域、
SEQ ID NO:263に示す配列のアミノ酸残基22～493、ならびに/または
SEQ ID NO:264によってコードされる配列
を含む、態様48～87のいずれかの方法。
89. 第2のCARが多価CARである、態様48～88のいずれかの方法。
90. 第2のCARが、SEQ ID NO:265～302のいずれか1つに示す配列の残基22で始まり末端までのアミノ酸残基を含む、態様48～89のいずれかの方法。
91. 第2のCARが、センチリン含有CARを含む、態様48～89のいずれかの方法。
92. 第2のCARが、SEQ ID NO:310に示す配列のアミノ酸残基22～334を含む、態様48～91のいずれかの方法。
93. 第1のCARと第2のCARとが同じである、態様48～85のいずれかの方法。
94. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量を以前に投与されたことのある同じ対象から得られたT細胞を含む試料から生成される、態様48～93のいずれかの方法。
95. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量が対象に投与された後に該対象から得られたT細胞を含む試料から生成される、態様48～94のいずれかの方法。
96. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量を投与する前に、対象から得られた試験試料において、
（i）第2のCARを発現する細胞、または
（ii）第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列
の存在または量を評価する工程をさらに含む、態様48～95のいずれかの方法。
97. 試験試料が、同じ対象由来の第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量を生成するためにT細胞を含む試料を得るのと同時に対象から得られる、態様94～96のいずれかの方法。
98. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前に、第1のCARを含む操作されたT細胞の該用量を含む組成物中の
（i）第2のCARを発現する細胞、または
（ii）第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列
の存在または量を評価する工程をさらに含む、態様48～97のいずれかの方法。
99. 第2のCARを発現する細胞の存在または量を評価する工程が、操作されたT細胞の前記用量を含む試料または組成物と、精製BCMAまたは組換えBCMA、任意でBCMA-Fcとを接触させることによって実行される、態様96～98のいずれかの方法。
100. 第2のCARをコードする構築物中に存在するヌクレオチド配列の存在または量を評価する工程が、定量ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって実行される、態様96～98のいずれかの方法。
101. 表面BCMAを発現する細胞への曝露に続く細胞外抗原結合ドメインおよび/もしくは第1のCARの結合または第1のCARの機能もしくは活性を示す尺度が、可溶型または脱落型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない、態様58～100のいずれかの方法。
102. 可溶型または脱落型のBCMAの濃度または量が、対象もしくは多発性骨髄腫患者の、または多発性骨髄腫患者集団における平均での、血清または血液または血漿中に存在する濃度または量に対応するか、または同じアッセイにおいて、参照抗BCMA組換え受容体、任意で参照抗BCMA CARを発現する細胞では、結合または尺度が低減もしくはブロックされるかまたは実質的に低減もしくはブロックされる可溶型もしくは脱落型BCMAの濃度もしくは量である、態様101の方法。
103. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1×107個または約1×107個のCAR＋T細胞から、2×109個または約2×109個のCAR＋T細胞を含む、態様1～102のいずれかの方法。
104. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1×107個または約1×107個のCAR＋T細胞から、1×109個または約1×109個のCAR＋T細胞を含む、態様1～103のいずれかの方法。
105. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1×108個または約1×108個のCAR＋T細胞から、8×108個または約8×108個のCAR＋T細胞を含む、態様1～104のいずれかの方法。
106. 操作されたT細胞の前記用量が、5×107個または約5×107個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～104のいずれかの方法。
107. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1.5×108個または約1.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～105のいずれかの方法。
108. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、3×108個または約3×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～105のいずれかの方法。
109. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、4.5×108個または約4.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～105のいずれかの方法。
110. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、5.5×108個または約5.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～105のいずれかの方法。
111. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、6×108個または約6×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、態様1～105のいずれかの方法。
112. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、CD4＋T細胞とCD8＋T細胞との組合せを含む、態様1～111のいずれかの方法。
113. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、CD4＋CAR＋T細胞とCD8＋CAR＋T細胞との組合せを含む、態様1～112のいずれかの方法。
114. CD4＋CAR＋T細胞対CD8＋CAR＋T細胞および/またはCD4＋T細胞対CD8＋T細胞の比が、1:1もしくはおよそ1:1であるか、または1:3もしくはおよそ1:3から、3:1もしくはおよそ3:1である、態様112または態様113の方法。
115. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、CD3＋CAR＋T細胞を含む、態様1～114のいずれかの方法。
116. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量中のCAR＋T細胞の25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満、または約25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％もしくは1％未満が、アポトーシスのマーカー、任意でアネキシンVまたは活性カスパーゼ3を発現する、態様1～115のいずれかの方法。
117. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前に、20～40もしくは約20～40mg/m2対象体表面積、任意で30もしくは約30mg/m2のフルダラビンの2～4日間にわたる毎日の投与、および/または200～400もしくは約200～400mg/m2対象体表面積、任意で300もしくは約300mg/m2のシクロホスファミドの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている、態様1～116のいずれかの方法。
118. リンパ球枯渇療法が、3日間にわたる、30または約30mg/m2対象体表面積のフルダラビンの毎日の投与、および300または約300mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドの毎日の投与を含む、態様117の方法。
119. BCMA発現に関連する疾患または障害が、自己免疫疾患または自己免疫障害である、態様1～118のいずれかの方法。
120. BCMA発現に関連する疾患または障害が、がん、任意でBCMA発現がんである、態様1～119のいずれかの方法。
121. がんがB細胞悪性腫瘍である、態様120の方法。
122. がんが、リンパ腫、白血病または形質細胞悪性腫瘍である、態様120または態様121の方法。
123. がんがリンパ腫であり、該リンパ腫が、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（NHL）、ホジキンリンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（MALT）、辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫、結節性単球様B細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、肺B細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（LPL）またはマントル細胞リンパ腫（MCL）である、態様120～122のいずれかの方法。
124. がんが白血病であり、該白血病が、慢性リンパ性白血病（CLL）、形質細胞性白血病または急性リンパ性白血病（ALL）である、態様120～122のいずれかの方法。
125. がんが形質細胞悪性腫瘍であり、該形質細胞悪性腫瘍が、多発性骨髄腫（MM）または形質細胞腫である、態様120～122のいずれかの方法。
126. がんが、多発性骨髄腫（MM）、任意で再発性または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）である、態様120～122および態様125のいずれかの方法。
127. 疾患または障害のための3つ以上の先行療法、任意で4つ以上の先行療法が対象に投与されており、
任意で、該先行療法が、
自家幹細胞移植（ASCT）、
免疫調節剤、
プロテアソーム阻害剤、および
抗CD38抗体
の中から選択される、
態様1～126のいずれかの方法。
128. 免疫調節剤が、サリドマイド、レナリドミドおよびポマリドミドの中から選択される、態様127の方法。
129. プロテアソーム阻害剤が、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブおよびイキサゾミブの中から選択される、態様127または態様128の方法。
130. 抗CD38抗体がダラツムマブであるかまたはダラツムマブを含む、態様127～129のいずれかの方法。
131. 対象に、3～15もしくは4～15の先行療法、または約10の先行療法が投与されている、態様1～130のいずれかの方法。
132. 対象が、前記3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数の後に再発しているか、または該3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数に対して難治性になっている、態様127～131のいずれかの方法。
133. 対象が、前記3つ以上の先行療法のうちの少なくとも3つもしくは少なくとも4つの後に再発しているか、または該3つ以上の先行療法のうちの少なくとも3つもしくは少なくとも4つに対して難治性になっている、態様127～132のいずれかの方法。
134. 対象が、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、レナリドミド、ポマリドミドおよび/または抗CD38モノクローナル抗体に対して難治性または不応になっている、態様132または態様133の方法。
135. 対象が先行自家幹細胞移植を受けている、態様1～134のいずれかの方法。
136. 対象が先行自家幹細胞移植を受けていない、態様1～134のいずれかの方法。
137. 対象が、活動性の形質細胞性白血病（PCL）も形質細胞性白血病（PCL）の病歴も有しない、態様1～136のいずれかの方法。
138. 対象が、二次性の形質細胞性白血病（PCL）を発症している、態様1～137のいずれかの方法。
139. 対象が、成人対象であるか、または25もしくは35歳もしくはそれ以上である、態様1～138のいずれかの方法。
140. 対象が、疾患または障害の診断から、およそ4年、または2～15年もしくは2～12年経っている、態様1～139のいずれかの方法。
141. 対象が、IMWG高リスク細胞遺伝学を有する、態様1～140のいずれかの方法。
VIII. 実施例
以下の実施例は、例証の目的だけで含まれ、本発明の範囲を限定するようには意図されない。
実施例1:BCMAに結合する核酸構築物およびキメラ抗原受容体（CAR）の生成
それぞれがヒト抗-BCMA scFv抗原結合ドメインを含む例示的なキメラ抗原受容体（CAR）をコードするポリヌクレオチドを生成した。生成したCARの中には、国際公開公報第2016090320号、国際公開公報第2016090327号および国際公開公報第2019090003号に記載されているVH配列およびVL配列を含むscFvを含むCARがあった。scFvのいくつかの場合において、VHはVLのアミノ末端側にあり、いくつかの場合において、VLはVHのアミノ末端側にあった。生成したCAR内の例示的なscFv領域を表E1に示す。
（表Ｅ１）例示的なscFvのための配列識別子（SEQ ID NO）
Figure 2023522857000016
Chemical Linkage of Peptides onto Scaffolds（CLIPS;Pepscan Presto BV,Lelystad,The Netherlands;例えば、Timmerman et al.,（2007）J.Mol.Recognit.20:283-329を参照）による完全な不連続エピトープマッピングに基づいて、認識された、例えば、例示的な抗BCMA scFvクローンによって特異的に結合されたエピトープを決定した。BCMA-23およびBCMA-25 scFvは、線状形態で認識され得る、SNTPPLTCQR（SEQ ID NO:160に示す）のペプチドに結合することが観察された。いくつかの局面において、そのような抗体は、SEQ ID NO:160のそのようなペプチドの残基を含む非線形または線形エピトープを認識し、いくつかの局面において、CIPCQLR（SEQ ID NO:159に示す）、SNTPPLTCQRおよび/またはSVTNSVK（SEQ ID NO:161に示す）の残基をさらに含む非線形エピトープを認識する。BCMA-26 scFvは、CSQNEYF（SEQ ID NO:162に示す）およびLLHACIPCQLR（SEQ ID NO:158に示す）に存在する残基を含むエピトープを認識することが観察された。BCMA-52-scFv-mFcは、以下の不連続ペプチド、すなわち、QNEYF（SEQ ID NO:91）、CIPCQL（SEQ ID NO:92）およびCQRYC（SEQ ID NO:93）の残基を含むエピトープに結合することが観察された。BCMA-55-scFvは、以下の配列、すなわち、MLMAG（SEQ ID NO:122）、YFDSLL（SEQ ID NO:123）およびQLRCSSNTPPL（SEQ ID NO:124）を個々に含む、ヒトBCMAポリペプチド配列の不連続部分を含むペプチドに存在する残基を含むエピトープに特異的に結合することが観察された。
例示的なポリヌクレオチドCAR構築物には、ヒトIgG-カッパシグナル伝達配列（SEQ ID NO:167、コードSEQ ID NO:166）をコードする核酸;上記のヒト抗BCMA scFv;スペーサー（改変IgG4-ヒンジCH2-CH3（SEQ ID NO:175、コードSEQ ID NO:174）を含むスペーサーなど）;「ロングスペーサー」またはLSとも呼ばれる）;ヒトCD28膜貫通ドメイン;ヒト4-1BB由来細胞内共シグナル伝達配列;およびヒトCD3-ゼータ由来細胞内シグナル伝達ドメインを含めた。
様々なBCMA CARをコードするヌクレオチド配列を潜在的なスプライス部位について評価し、潜在的な予想潜在性スプライスドナー部位およびアクセプター部位の除去を含む保存的様式で改変した。
そのようなCARをコードするcDNAクローンを、下流のリボソームスキップエレメント（T2Aコード配列SEQ ID NO:244または245、コードSEQ ID NO:243など）、続いて切断型受容体コード配列に連結し、レンチウイルス発現ベクターにクローニングした。
実施例2:再発性または難治性多発性骨髄腫（MM）を有する対象への抗BCMA CAR発現細胞の投与
再発性および/または難治性多発性骨髄腫（MM）を有するヒト対象に、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なCARを発現する自己T細胞を含有するキメラ抗原受容体（CAR）発現T細胞組成物を投与した。
A. 対象および処置
3つ以上の以前の処置（いずれの場合も、それが禁忌であるなどの理由により、対象がそのような処置を受ける候補でなかった場合を除いて、少なくともプロテアソーム阻害剤、免疫調節剤および抗CD38モノクローナル抗体を含む3つ以上の以前の処置）を受けている、再発性または難治性（R/R）多発性骨髄腫（MM）を有する成人ヒト対象に、上記の実施例1に記載される、BCMAに特異的な例示的なCARを発現するように操作された自己T細胞を含有する組成物を投与した。
MMを有する個々の対象から得られた白血球アフェレーシス試料由来のCD4＋およびCD8＋細胞集団のイムノアフィニティーに基づく濃縮、例えば、1:1またはおよそ1:1の比でそのような集団の細胞を組み合わせること、ならびに刺激、細胞形質導入および拡大増殖のために、例示的な無血清培地中での様々なCD4＋CAR T細胞対CD8＋CAR T細胞の比による細胞の凍結保存および生成を含む加工処理段階に組み合わせた細胞を供することを含むプロセスによって、投与したT細胞組成物を生成した。該プロセスは、出発試料、および様々な製造プロセスを用いて生成された細胞組成物と比較して、セントラルメモリー表現型が濃縮されたことが観察される細胞組成物をもたらした。CARには、実施例1に記載されるように、BCMA-55由来scFv結合ドメインと、改変IgG由来CH2-CH3-ヒンジスペーサーと、CD28膜貫通ドメインと、4-1BBエンドドメインおよびCD3ゼータエンドドメインを連続して含む細胞内シグナル伝達領域とを含めた。
CAR＋T細胞注入の2～7日前に、対象に、フルダラビン（flu、30mg/m2/日）およびシクロホスファミド（Cy、300mg/m2/日）を用いたリンパ球枯渇化学療法（LDC）を3日間投与し、LDCは、CAR＋T細胞注入の少なくとも48時間前に完了した。凍結保存した細胞組成物を、静脈内投与の前にベッドサイドで解凍し、注入日を1日目とした。1日目に、対象に、以下のようにCAR発現T細胞の用量を投与した:5×107個の総CAR発現T細胞を含有する用量レベル1（DL1）の単回用量、または1.5×108個の総CAR発現T細胞を含有する用量レベル2（DL2）の単回用量。
特定の分析時点で、19人の成人対象が、このような処置を含む進行中の臨床試験に登録されていた。この特定の時点でのこれらの19人の対象のうち、13人の対象に、それぞれDL1またはDL2のいずれかで抗BCMA CAR＋細胞を投与した。これらの13人の対象のうち、進行中の試験のこの特定の時点で、8人の対象が安全性を示す属性について評価可能であった（1ヶ月以上の追跡調査に基づく評価可能性）（n＝5 DL1;n＝3 DL2）。1人の対象は、LDC後の敗血症のためにCAR＋T細胞を投与することができず、CAR＋T細胞投与前に死亡した。この時点で、3人の対象（いずれもDL1）が、International Myeloma Working Group（IMWG）uniform response criteria（Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346）に従って、確認された奏効について評価可能であった（2ヶ月以上の追跡調査に基づく評価可能性）。
この時点で評価したこれらの8人の対象では、追跡期間中央値は5週間（4～13週間の範囲）であった。年齢中央値は53歳（36～66歳の範囲）であり、診断からの時間中央値は4年（2～12年の範囲）であった。対象は、MMのために10の中央値の先行レジメン（4～15の範囲の先行レジメン）を受けていた。8人の対象のうち、4人（50％）は、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、レナリドミド、ポマリドミドおよび抗CD38モノクローナル抗体に対して難治性であった（最終療法の60日間以内に応答も進行もなかった）。8人の対象のうち7人（88％）が先行自家幹細胞移植を受けており、8人のうち4人（50％）がIMWG高リスク細胞遺伝学を有した。
進行中の試験のその時点の評価時に、DL1またはDL2を投与した評価した対象では、用量制限毒性（DLT）は観察されなかった。いずれもグレード1または2のサイトカイン放出症候群（CRS）が、その時点で8人の対象のうち6人（75％）に観察されていた。その時点で、8人の該対象ではCRSの発症中央値は9日間（4～10日間の範囲）であり、持続期間中央値は4.5日間（2～19日間の範囲）であった。その時点でグレード2のCRSを有する対象のいずれも血管収縮剤による補助を必要とせず、1人の対象のみにトシリズマブを投与した。対象のいずれもグレード3以上のCRSを呈しなかった。8人の対象のうち3人（38％）が神経学的有害事象（AE）を経験していた。その時点で8人の対象のうち2人がグレード1の事象を呈し、1人が、ステロイド投与後24時間以内に消散したグレード3の事象（嗜眠）を呈した。神経学的AEの発現は9、11および12日間であり、神経学的AEを経験している3人の対象では、持続時間はそれぞれ2、3および1日間であった。この時点での分析の時点でグレード3の神経毒性（NT）を経験していた対象は、LDCを受ける直前に二次性の形質細胞性白血病（PCL）を発症していた。
二次性PCLを有する対象を含め、その時点での8人の対象全員が、客観的奏効の証拠を有していたことが観察された。いずれもDL1を投与した3人の対象は、確認された奏効を達成したことが観察されたが（1人が部分奏効、PR;2人が厳密完全奏効、sCR）、残りの対象は未確認のままであった（1人が完全奏効、CR;2人が最良部分奏効、VGPR;1 人がPR、1人が最小奏効、MR）。評価時点では、対象に進行は観察されなかった。
結果は、評価した用量レベルでは、抗BCMA CAR細胞療法の投与が好ましい安全性プロファイルを呈したことを示し、進行中の臨床試験のこの時点でDLTは報告されなかった。結果は、この時点でグレード3以上のNTの発生率が低く、臨床奏効ではグレード3以上のCRSは観察されなかったという結論と一致していた。
実施例3:再発性または難治性多発性骨髄腫（MM）を有する対象への抗BCMA CAR発現細胞の投与後の奏効および安全性アウトカムのさらなる評価
実施例2に記載される臨床試験内のその後の時点で、対象の奏効および安全性アウトカムを評価し、ある特定の追加の対象には異なる用量の細胞を投与した。
A. 対象および処置
この実施例に示される時点での分析は、抗BCMA CAR発現細胞を投与した合計44人の対象の評価に基づく。44人の対象は、3つ以上の以前の処置（いずれの場合も、それが禁忌であるなどの理由により、対象がそのような処置を受ける候補でなかった場合を除いて、少なくとも（1）自家幹細胞移植、（2）単独で、または組み合わせて、プロテアソーム阻害剤および免疫調節剤、ならびに（3）併用療法の一部、または単独療法としての抗CD38モノクローナル抗体を含む3つ以上の以前の処置）を受け、それらが奏効しなかった、再発性または難治性（R/R）多発性骨髄腫（MM）を有する成人ヒト対象であった。処置した対象の中には、療法の最後のラインに至らず、0～1のEastern Cooperative Oncology Group（ECOG）スコアを有する対象がいた。該対象は、該対象から得られた試料におけるBCMA発現のレベルに基づいて選択しなかった。
1日目に、対象に、以下のようにCAR＋T細胞の用量を投与した:5×107個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル1（DL1）の単回用量、1.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2（DL2）の単回用量、3.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2A（DL2A）の単回用量、または4.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3（DL3）の単回用量。投与後15日目に骨髄検査を行い、投与後29日目に疾患を評価した。
客観的奏効率（ORR）、完全奏効（CR）、厳密完全奏効（sCR）、部分奏効（PR）、最良部分奏効（VGPR）、最小残留疾患（MRD）、進行性疾患（PD）、安定疾患（SD）および最小奏効（MR）（例えば、International Myeloma Working Group（IMWG）uniform response criteria;Kumar et al.（2016）Lancet Oncol 17（8）:e328-346に従う）、ならびに重篤有害事象（SAE）などの何らかの有害事象の発現を含む奏効について、対象を経時的にモニタリングした。スクリーニング評価で優勢なクローン型が同定された対象では、次世代シークエンシング（NGS）によって最小残留疾患（MRD）を評価した。
抗BCMA CARをコードするベクターに特異的なプライマー（ベクターコピー/ゲノムDNA 1μg）を使用して、対象から得られた全血試料由来のゲノムDNA調製物の定量ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）によって、CAR発現T細胞の投与後1、5、8、11、15、22、29、60および90日目に、DL1、DL2およびDL3コホートにおける対象の末梢血中の抗BCMA CAR＋T細胞の拡大増殖および長期持続性を評価した。また、CAR＋T細胞の投与前、およびCAR＋T細胞の投与後の様々な時点で、対象から得られた血清試料中の可溶性BCMA（sBCMA）のレベルを測定した。
その時点でのコホート全体、DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートの対象の人口統計学およびベースライン特性を表E2に示す。対象は、一般に、高度に難治性の骨髄腫を有し、対象の77％が高リスク細胞遺伝学を有した。ブリッジング療法を投与した対象の50％超が、抗BCMA CAR＋T細胞の投与を受ける前に疾患進行を呈した。対象はまた、血清Mタンパク質レベルおよび尿Mタンパク質レベル、血清遊離軽鎖（FLC）レベル、ならびに骨髄および髄外性形質細胞腫内の形質細胞の存在によって示されるように、CAR＋T細胞の投与前に一般に高い腫瘍負荷量を有することが示された。
（表Ｅ２）対象の人口統計学およびベースライン特性
Figure 2023522857000017
BM、骨髄;ECOG、Eastern Cooperative Oncology Group;EMP髄外性形質細胞腫;ISS、International Staging System;sFLC、血清遊離軽鎖。
a高リスク細胞遺伝学は、局所検査に基づき、del（17p）、t（4;14）、t（14;16）、1q21 ampを含む。
その時点でのコホート全体、DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートの対象の治療歴を表E3に示す。
（表Ｅ３）対象の治療歴特性
Figure 2023522857000018
SCT、幹細胞移植;IMiD、免疫調節薬;PI、プロテアソーム阻害剤。
B. 処置後の安全性および奏効アウトカム
表E4は、コホート全体、DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートに生じた重篤有害事象（SAE）を示す。
（表Ｅ４）CAR＋細胞投与後の安全性アウトカム
Figure 2023522857000019
CRS、サイトカイン放出症候群;DLT、用量制限毒性;SAE、重篤有害事象;AESI、特に注目すべき有害事象。
a肺炎、虫垂炎、カンピロバクター感染、蜂窩織炎、敗血症。
b錯乱状態、興奮、反射消失、嗜眠、意識の低下状態。
錯乱の神経学的事象、ならびに咽頭反射の欠如、急性腎障害、および院内感染としてのクレブシエラ（Klebsiella）肺炎敗血症と共に、骨髄腫に関連する慢性腎疾患の病歴を有し、CAR＋T細胞の投与後19日目に死亡した、DL3コホートの対象に、グレード4のCRSのDLTが生じた。
表E5は、CRSおよび神経学的事象に関するコホート全体、DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートの安全性アウトカムを示す。神経学的事象は、一般にCRSに関連していた。グレード1または2のCRSは全対象の71％に生じたが、グレード3以上のCRSは全対象の9％のみに観察された。1人の対象に、反射消失というグレード4の神経学的事象が認められた。CRS事象を有した1人の対象は、高用量血管収縮剤を必要とした。
（表Ｅ５）サイトカイン放出症候群および神経学的事象
Figure 2023522857000020
CRS、サイトカイン放出症候群。
例えば、臨床検査評価に基づいて決定されるような長期の血球減少に関して、リンパ球枯渇化学療法の開始前のグレード3または4の貧血および血小板減少症が対象の18％に生じた。29日間よりも長く続くグレード3または4の血球減少が、28/42の対象（67％）に生じた。3ヶ月の追跡調査では、3ヶ月目までに17/24の対象（71％）において血球減少がグレード2以下に消散した。いくつかの場合において、臨床検査評価の1週間以内に輸血を用いず、または臨床検査評価の1週間（ペグフィルグラスチムについては2週間）以内に成長因子の補助を用いず回復がグレード2以下と定義された消散までの時間中央値は、好中球減少症については2.1ヶ月、貧血については2.2ヶ月、血小板減少症については3.4ヶ月であった。
コホート全体、DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートの中での最良全体奏効（best overall response）に基づく客観的奏効率（ORR）を図1に示す。全対象では82％のORRが観察され、対象の48％がVGPRよりも良好な奏効を呈した。5×107個の総CAR発現T細胞（DL1）の最低用量レベルでは、43％の完全奏効（CR）率が観察された。DL3コホートの1人の対象については、29日目の時点でベースライン後の奏効評価が欠如していたため、有効性を評価することができなかった。表E6は、MRD評価が可能であった21人の対象に対する次世代シークエンシング（NGS）による最小残留疾患（MRD）評価の結果を示す。
（表Ｅ６）NGSによるMRD評価
Figure 2023522857000021
CAR発現T細胞の投与後の、最長追跡調査時のDL1コホートの対象（n＝14）に対する経時的な奏効の評価を図2に示す。一般に、奏効は経時的に改善し続けることが観察され、14人の対象のうち5人（36％）では、29日目の後に奏効が強まることが示された。29日目の時点で、MRDについて評価した9人の対象のうち6人がMRD陰性であり（NGSによって評価）、2ヶ月目に1人の対象についてMRD評価を行った。
C. 持続性
DL1コホート、DL2コホートおよびDL3コホートの対象の末梢血中のCAR＋T細胞の拡大増殖および長期持続性を図3に示す。結果は、全用量レベルで観察されたCAR＋T細胞の堅牢な拡大増殖と一致していた（DL1、DL2およびDL3）。一般に、150×106個以上の総CAR発現T細胞（DL2およびDL3）の用量を投与した対象では、2ヶ月目を越えた持続性の増大が観察された。
D. 可溶性BCMA
CAR＋T細胞投与前、および投与後の様々な時点での対象の血清中の可溶性BCMA（sBCMA）（ng/mL）のレベルを図4Aに示す。図4Bは、PR以上の全体奏効を呈した対象（レスポンダー）、およびPRよりも悪い奏効を呈した対象（MRまたはSD;非レスポンダー）におけるCAR＋T細胞投与前（処置前）のsBCMAのレベルを示す。広範囲のsBCMAレベルにわたって対象に奏効が観察され、奏効、または奏効の欠如はsBCMAレベルと相関しなかった。sBCMAレベルの低下が抗BCMA CAR投与後に観察され、抗BCMA CAR＋細胞による腫瘍殺傷活性と一致した。結果は、29日目またはそれ以降の時点で、PRよりも悪い全体奏効を有する対象（MRまたはSD;非レスポンダー）と比較して、PR以上の全体奏効を有する対象（PR、VGPR、CRまたはsCR;レスポンダー）の方が観察されるsBCMA減少が大きいことを示した。結果は、抗BCMA CAR＋T細胞が高い処置前レベルのsBCMAによって阻害されなかったという観察結果と一致していた。
E. 結論
結果は、77％が高リスク細胞遺伝学を有した、再発性/難治性多発性骨髄腫（R/R MM）を有する重度に前処置された対象では、完全ヒト抗原結合ドメインを発現し、セントラルメモリーT細胞表現型が濃縮された集団をもたらす製造プロセスによって生成される抗BCMA CAR＋細胞の投与に応答した全体奏効率（ORR）（82％）が高かったという観察結果と一致していた。試験した全用量レベルで、投与した細胞の堅牢な拡大増殖が観察され、対象のおよそ27％が完全奏効（CR）または厳密完全奏効（sCR）を達成し、奏効が経時的に強まるという一般的な観察結果を伴った。投与した最低用量レベル（50×106個のCAR＋T細胞）では、43％という高い割合のCRおよびsCRが観察された。結果はまた、グレード3以上のCRS（9％）およびグレード3以上の神経学的事象（7％）という低い割合を含め、管理可能な毒性プロファイルと一致した。グレード1または2のCRSが対象のおよそ71％に観察され、グレード1または2の神経学的事象が対象の18％に観察された。結果はまた、処置前レベルの可溶性BCMAが高い対象では、抗BCMA CAR＋T細胞が活性を示したことを示した。
実施例4:再発性または難治性多発性骨髄腫（MM）を有する対象への抗BCMA CAR発現細胞の投与後の奏効および安全性アウトカムのさらなる評価
実施例2および3に記載される臨床試験内のその後の時点で、患者の奏効および安全性アウトカムを評価し、ある特定の追加の対象には異なる用量の細胞を投与した。
A. 対象および処置
この実施例に示される時点での分析は、抗BCMA CAR発現細胞を投与した合計51人の対象の評価に基づく。51人の対象は、3つ以上の以前の処置（いずれの場合も、それが禁忌であるなどの理由により、対象がそのような処置を受ける候補でなかった場合を除いて、少なくとも（1）自家幹細胞移植、（2）プロテアソーム阻害剤、（3）免疫調節剤および/または（4）抗CD38モノクローナル抗体を含む3つ以上の以前の処置）を受け、それらが奏効しなかった、再発性または難治性（R/R）多発性骨髄腫（MM）を有する成人ヒト対象であった。
1日目に、対象に、以下のようにCAR＋T細胞の用量を投与した:3.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2A（DL2A）の単回用量、4.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3（DL3）の単回用量、または6.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3A（DL3A）の単回用量。上記の実施例2および3に記載されるように、対象をモニタリングし、奏効を評価した。
B. 処置後の安全性および奏効アウトカム
評価時に、51人の対象に、DL2A（n＝19）、DL3（n＝19）およびDL3A（n＝13）で抗BCMA CAR発現細胞を投与していた。年齢中央値は61（33～77）歳であった。診断からの時間中央値は7.0（1.7～23.6）年であった。対象は、中央値6（3～18）の先行レジメンを有した。全体として、対象の92％が2つの先行免疫調節剤療法、2つのプロテアソーム阻害剤療法および抗CD38モノクローナル抗体療法を受けており、92％が先行自家幹細胞移植（ASCT）を受けており、対象の96％が最終療法に対して難治性であった。対象の61％がブリッジング療法を受けていた（77％が難治性であった）。2人の対象が、用量制限毒性:DL2Aでは7日間を超えるグレード3の神経学的事象（NE）、およびDL3では28日間を超えるグレード4の好中球減少症を有した。1人の対象は、注入後53日目に寄与因子としてステロイド誘発性ミオパシーを伴う無関係なグレード5の心停止を有した。グレード3/4のサイトカイン放出症候群（CRS）が対象の2％に生じた（いずれかのグレード、92％）。発症および消散までの時間中央値は、2（1～4）日および3（1～10）日であった。グレード3/4のNEが対象の4％に生じた（いずれかのグレード、10％）。発症および消散までの時間中央値は、6（1～6）日および5（2～8）日であった。トシリズマブおよび/またはステロイド（78％）、アナキンラ（14％）および/または血管収縮剤（6％）を用いてCRS/NEを管理した。29日目に、グレード3以上の貧血、好中球減少症および血小板減少症が対象の21％、55％および44％に生じた（グレード2以下のいずれかの血球減少に消散するまでの時間中央値、≦2.1ヶ月）。グレード3以上の感染が14％に生じた。表E7に示すように、合計44人の対象を奏効について評価した。PFS中央値に達しなかった。全用量レベルで堅牢な細胞拡大増殖が観察された。
（表Ｅ７）CAR＋細胞投与後の安全性アウトカム
Figure 2023522857000022
aDL2A、DL3、DL3Aおよび全体について、n＝19、19、13および51。
C. 結論
結果は、3.0×108個、4.5×108個または6.0×108個の総抗BCMA CAR＋T細胞の投与に応答した管理可能な安全性プロファイルおよび高い奏効率という観察結果と一致しており、91％の客観的奏効率（ORR）を伴い、39％の対象が完全奏効（CR）または厳密CR（sCR）を達成した。経時的な応答の強まりが観察された。
実施例5:再発性または難治性多発性骨髄腫（MM）を有する対象への抗BCMA CAR発現細胞の投与を伴うインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の予防的投与
B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なCARを発現する自己T細胞を含有するキメラ抗原受容体（CAR）発現T細胞組成物を投与した、再発性および/または難治性多発性骨髄腫（MM）を有するヒト対象に、インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）、アナキンラ（AKR）を予防的に投与して、サイトカイン放出症候群（CRS）などの潜在的な事象の発症、発生率および重症度に対する影響を評価した。
上記の実施例1に記載される、BCMAに特異的な例示的なCARを発現するように、自己T細胞を含有する組成物を操作し、3つ以上の以前の処置を受けていた、再発性または難治性（R/R）多発性骨髄腫（MM）を有する成人ヒト対象に投与した。
上記の実施例2に一般的に記載されているプロセスによって、投与したT細胞組成物を生成した。CARには、実施例1に記載されるように、BCMA-55由来scFv結合ドメインと、改変IgG由来CH2-CH3-ヒンジスペーサーと、CD28膜貫通ドメインと、4-1BBエンドドメインおよびCD3ゼータエンドドメインを連続して含む細胞内シグナル伝達領域とを含め、最適化したポリヌクレオチドがCARをコードしていた。
CAR＋T細胞注入の2～7日前に、対象に、フルダラビン（flu、30mg/m2/日）およびシクロホスファミド（Cy、300mg/m2/日）を用いたリンパ球枯渇化学療法（LDC）を3日間投与し、LDCは、CAR＋T細胞注入の少なくとも48時間前に完了した。細胞組成物を静脈内投与し、注入日を1日目とした。1日目に、対象に以下のようにCAR＋T細胞の用量を投与する:4.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3（DL3）の単回用量、または6.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3A（DL3A）の単回用量。具体的には、この実施例に記載される試験では、14人の患者に、6.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する単回用量を投与した。
対象に、CAR＋T細胞注入の前に、100mgのAKRの2用量を皮下（SC）投与した:抗BCMA CAR発現細胞の投与の前夜に1用量を投与し、1日目に、抗BCMA CAR発現細胞の投与の3時間前に1用量を投与した（n＝14）。次いで、対象に、抗BCMA CAR発現細胞の投与後に追加の4用量のAKRを投与した:連続4日間にわたって、100mgのSC AKRの単回用量を1日1回投与した（2～5日目にそれぞれの用量;例えばq24h）。CRS発症の場合、CRSが消散するまで、100mgのSC AKRを1日2回投与した（例えばq12h）。AKRの該用量を毎日ほぼ同じ時間に投与した。CRSの悪化の場合および/または神経毒性の発現の場合、毒性管理ガイドラインに従った。アナキンラによる予防的処置後の抗BCMA CAR発現T細胞の安全性および忍容性について、適合する抗BCMA CAR発現T細胞製品を投与し、少なくとも1用量の予防的AKRを投与した全対象を評価した。
抗BCMA CAR発現細胞を投与したが、AKRによって処置しなかった対象を対照群とした（n＝19）。AKR処置群および非AKR処置群では、先行レジメン数の中央値は6および5であり、それぞれ対象の57％および68％に対してブリッジング療法を使用した。
Lee（2014）基準によって等級付けされるサイトカイン放出症候群（CRS）の発生率および発症、神経学的事象（NE）、対象の血液中のCAR発現細胞の拡大増殖および持続（例えば薬物動態）、ならびにIMWG Uniform Response Criteriaによる客観的奏効率（ORR）、完全奏効率（CR）または厳密完全奏効（sCR）を含む、CAR発現T細胞処置に対する奏効を決定した。追跡調査範囲の中央値は、AKRによって処置した対象では3.0（1.8～6.2）ヶ月、対照対象では8.8（5.3～12.2）ヶ月であった。結果を表E8に示す。
AKR予防の使用は、NE、感染、マクロファージ活性化症候群/血球貪食性リンパ組織球症（MAS/HLH）、CAR＋T細胞拡大増殖の発生率、または疾患応答に対して有害作用を有しないことが観察された。特に、CRSの総頻度は対象の2つの群で類似していたが、AKR処置対象の方がグレード2のCRS事象が少なかった;相対リスク（95％CI）＝0.54（0.21、1.38）。グレード3以上のCRS事象は、いずれの群にも見られなかった。神経学的事象（NE）、グレード3以上の感染、およびMAS/HLHの発生率も群間で同様であった。AKRによって処置した対象では、トシリズマブおよびステロイドの使用が数値的に低かった。CAR＋T細胞拡大増殖動態は、2つの群で類似していた。2ヶ月での有効性について全対象を評価し、全体奏効率（ORR）は、AKR処置対象では100％、対照対象では95％であった。
（表Ｅ８）CAR＋細胞投与後の疾患特性および安全性アウトカム
Figure 2023522857000023
CRS:サイトカイン放出症候群;G:グレード;HLH:血球貪食性リンパ組織球症;LDH:乳酸デヒドロゲナーゼ;MAS:マクロファージ活性化症候群;NE:神経学的事象;S:ステロイド;T:トシリズマブ;ULN:正常上限値。
これらの結果は、グレード2以上のCRSの発生率が、抗BCMA CAR発現T細胞の投与と組み合わせたアナキンラ予防によって低下し得るという知見と一致している。
実施例6:MMに対するBCMA指向性療法によって以前に処置された、再発性または難治性多発性骨髄腫（MM）を有する対象への抗BCMA CAR発現細胞の投与
先行BCMA指向性療法を以前に受けている、再発性および/または難治性多発性骨髄腫（MM）を有するヒト対象に、B細胞成熟抗原（BCMA）に特異的なCARを発現する自己T細胞を含有するキメラ抗原受容体（CAR）発現T細胞組成物を投与した。
MMに対する先行BCMA指向性療法を受け、IMWG response criteriaによる少なくとも部分奏効（PR）を達成し、その後進行した、再発性または難治性（R/R）多発性骨髄腫（MM）を有する成人ヒト対象に、上記の実施例1に記載される、BCMAに特異的な例示的なCARを発現するように操作された自己T細胞を含有する組成物を投与する。先行BCMA指向性療法は、BCMA指向性CAR発現T細胞療法;標的表面抗原を有する腫瘍細胞のT細胞媒介殺傷を誘導するために、表面腫瘍細胞抗原とT細胞受容体（TCR）複合体の成分とに同時に結合する抗体を含むBCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）;およびBCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）を含み得る。先行BCMA指向性CAR発現T細胞療法を受けている対象の場合、試験開始の少なくとも6ヶ月前に、先行CAR T細胞療法の最後の投与を受けていなければならない。先行BCMA指向性抗骨髄腫療法を受けた対象であれば、少なくとも3つの先行抗骨髄腫処置レジメンを受けている必要はなく、最後の抗骨髄腫レジメンに対して難治性である必要はない。
一般に上記の実施例2に記載されているプロセスによって、投与するT細胞組成物を生成する。いくつかの場合において、先行BCMA指向性CAR発現T細胞療法を受けている対象では、例えば、組換えBCMA-Fc（そのC末端でIgGのFc領域に融合した可溶性ヒトBCMA）によるフローサイトメトリー染色によって、および/または先行BCMA指向性CARをコードする核酸配列を含有する構築物中に存在する配列に特異的なプライマーもしくはプローブを用いた定量ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって、先行BCMA指向性CARの存在または発現について、例えば、白血球アフェレーシス試料から得られた、対象由来の初代T細胞集団を評価する。療法のためのBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）には、実施例1に記載されるように、BCMA-55由来scFv結合ドメインと、改変IgG由来CH2-CH3-ヒンジスペーサーと、CD28膜貫通ドメインと、4-1BBエンドドメインおよびCD3ゼータエンドドメインを連続して含む細胞内シグナル伝達領域とを含め、最適化したポリヌクレオチドがCARをコードしていた。
いくつかの場合において、先行BCMA指向性CAR発現T細胞療法を受けている対象では、細胞療法のための先行BCMA指向性CARおよび/またはBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR;実施例1に記載）の存在、量または数について、投与のための、例えば、実施例1に記載されるBCMA結合性CARを発現する生成した細胞組成物を評価する。いくつかの場合において、組換えBCMA-Fcによるフローサイトメトリー染色によって、細胞療法のための先行BCMA指向性CAR発現細胞、およびBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）を発現する細胞の存在、量または数を検出することができる。いくつかの場合において、細胞療法のためのBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）に特異的な抗イディオタイプ抗体によるフローサイトメトリー染色によって、細胞療法のためのBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）を発現する細胞の存在、量または数を検出することができる。いくつかの場合において、細胞療法のためのBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）をコードする核酸配列を含有する構築物中に存在する配列に特異的なプライマーまたはプローブを用いたqPCRによっても、細胞療法のためのBCMA結合性CAR（例えば、新たなBCMA結合性CAR）の存在を評価する。そのような量または数のいずれも、投与のための細胞組成物中に存在する先行BCMA指向性CARの存在および/もしくは割合を決定するために、ならびに/または細胞療法のためのBCMA結合性CARを発現する細胞の用量を決定するために使用することができる。
CAR＋T細胞注入の2～7日前に、対象に、フルダラビン（flu、30mg/m2/日）およびシクロホスファミド（Cy、300mg/m2/日）を用いたリンパ球枯渇化学療法（LDC）を3日間投与し、LDCは、CAR＋T細胞注入の少なくとも48時間前に完了した。細胞組成物を静脈内投与し、注入日を1日目とする。1日目に、対象に以下のようにCAR＋T細胞の用量を投与する:5×107個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル1（DL1）の単回用量;1.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2（DL2）の単回用量;3.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル2A（DL2A）の単回用量;4.5×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3（DL3）の単回用量;または6.0×108個の総CAR＋T細胞を含有する用量レベル3A（DL3A）の単回用量。
IMWG Uniform Response Criteriaによる客観的奏効率（ORR）、完全奏効率（CR）または厳密完全奏効（sCR）を含む、CAR発現T細胞処置に対する奏効を決定する。有害事象（AE）の発生率および重症度、ならびに臨床検査異常の発生率および重症度も決定する。
実施例7:例示的な製造プロセスによって生成されたT細胞組成物の評価
例示的なプロセスでは、10人の健常ドナーおよび40人の多発性骨髄腫患者を含む50人の別個のヒト対象から採取したアフェレーシス（各対象から1アフェレーシス）から、抗BCMA CARを発現する自己T細胞を含有する50のCAR＋T細胞組成物を生成した。CD4＋およびCD8＋T細胞をアフェレーシス試料から選択し、別個に凍結保存した。次いで、細胞を解凍し、生存CD4＋細胞対生存CD8＋細胞の1:1の比で、別個のCD4＋T細胞およびCD8＋T細胞を組み合わせた。一般に実施例2に記載されるように、組み合わせたCD4＋およびCD8＋T細胞を刺激し、CARをコードするベクターを形質導入し、例示的な無血清培地中で拡大増殖し、凍結保存によって凍結した。
例示的な代替プロセスでは、55人の個々のヒトがん対象から得られた白血球アフェレーシス試料由来のT細胞のイムノアフィニティーに基づく選択を含むプロセスによって、治療T細胞組成物を生成した。バルクT細胞を、CARをコードするウイルスベクターによる活性化および形質導入、拡大増殖および凍結保存に供した。
凍結組成物中の細胞を解凍し、生存率、活性カスパーゼ3（CAS）などのアポトーシスマーカーの発現、ならびにCD3、CD4、CD8、CD27、CD28、CCR7、CD45RAおよびCARの表面発現についてフローサイトメトリーによって評価した。組成物中のCD3＋CAR＋細胞におけるCD3＋細胞のパーセンテージ、CAR＋アポトーシスマーカー陰性細胞のパーセンテージ、ならびに組成物中のセントラルメモリーCD4＋CAR＋細胞およびセントラルメモリーCD8＋CAR＋細胞のパーセンテージを決定した。製造プロセスによって生成された細胞組成物の細胞表現型を評価し、いくつかの局面において、代替プロセスによって生成された細胞組成物の細胞表現型と比較した。
この実施例の製造プロセスは、それを実行したヒト生物学的試料の100％において、患者への細胞組成物投与時にCARを発現する細胞の閾値数を含む特定の所定の特徴を満たす操作された細胞組成物をもたらした。図5Aおよび図5Bは、40人の多発性骨髄腫対象由来の試料の群から個別に生成された組成物について、それぞれ、組成物中のCD4＋CAR＋細胞（図5A）およびCD8＋CAR＋細胞（図5B）の示された表現型の細胞のパーセンテージ（CD45RAおよびCCR7の表面発現に基づく）に関する中央値（水平線）、四分位範囲（箱）および1.5倍の四分位範囲（ひげ）を示す。図5Cおよび図5Dは、40人の多発性骨髄腫対象由来の試料の群から個別に生成された組成物について、それぞれ、組成物中のCD4＋CAR＋細胞（図5C）およびCD8＋CAR＋細胞（図5D）の示された表現型の細胞のパーセンテージ（CD27およびCD28の表面発現に基づく）に関する中央値（水平線）、四分位範囲（箱）および1.5倍の四分位範囲（ひげ）を示す。一連の多発性骨髄腫患者から得られた個々の白血球アフェレーシス試料について、そのような試料から操作された細胞組成物を生成するためのこの例示的なプロセスを使用して、活性化の開始から採取までのプロセスの一部の期間の範囲は7～10日間であり、これらの試料では平均期間はおよそ7.5日間であることが観察された。異なる試料間のプロセスの経過にわたる累積集団倍加の平均数はおよそ7.5であることがさらに決定された。
この試験では、例示的なプロセスによって産生された細胞組成物中の操作されたT細胞集団は、アポトーシスマーカーを発現する15％未満の細胞を含み、出発試料、および例示的な代替プロセスを使用して生成された細胞組成物と比較して、セントラルメモリー表現型について濃縮されていた。
開示した特定態様は、例えば本発明の様々な局面を例示するなどの目的で提供されているのであって、本発明の範囲は、それらの特定態様に限定されるものではない。記載の組成物および方法の様々な変更態様は、本明細書における記載および教示から、明らかになるであろう。そのような変形は、本開示の真の範囲および要旨から逸脱することなく実施することができ、本発明の範囲に包含されるものとする。
配列
Figure 2023522857000024
Figure 2023522857000025
Figure 2023522857000026
Figure 2023522857000027
Figure 2023522857000028
Figure 2023522857000029
Figure 2023522857000030
Figure 2023522857000031
Figure 2023522857000032
Figure 2023522857000033
Figure 2023522857000034
Figure 2023522857000035
Figure 2023522857000036
Figure 2023522857000037
Figure 2023522857000038
Figure 2023522857000039
Figure 2023522857000040
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Figure 2023522857000043
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Figure 2023522857000048
Figure 2023522857000049
Figure 2023522857000050
Figure 2023522857000051

Claims (100)

  1. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
    インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に投与され、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
  2. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
    BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および
    操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
  3. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
    インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも2用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に投与され、該IL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与される、工程。
  4. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
    BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間にインターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも1用量を投与されている対象に投与する工程、および
    操作されたT細胞の該用量の投与の後に、IL-1Raの少なくとも1用量を投与する工程。
  5. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約21、18、15もしくは12時間以内または投与前約21、18、15もしくは12時間に投与される、請求項1～4のいずれか一項記載の方法。
  6. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量を含む、請求項1～5のいずれか一項記載の方法。
  7. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の6、5、4、3もしくは2時間以内、または約6、5、4、3もしくは2時間以内に投与される、請求項6記載の方法。
  8. 操作されたT細胞の前記用量の投与の前に投与されるIL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の前の3時間以内または約3時間以内に投与される、請求項6または請求項7記載の方法。
  9. IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の前記用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に投与され、IL-1Raの少なくとも2用量のうちの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約3時間以内または投与前約3時間に投与される、請求項6～8のいずれか一項記載の方法。
  10. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも2、3、4、5、6、7または8用量を含む、請求項1～9のいずれか一項記載の方法。
  11. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの3、4、5、6または7用量を含む、請求項1～10のいずれか一項記載の方法。
  12. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与されるIL-1Raの4用量を含む、請求項1～11のいずれか一項記載の方法。
  13. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が、連続した日にわたって毎日投与される、請求項1～12のいずれか一項記載の方法。
  14. 操作されたT細胞の前記用量の投与の後に投与されるIL-1Raの少なくとも1用量が4用量であり、該4用量のうちの1つが、操作されたT細胞の該用量の投与の後に連続4日間にわたって毎日投与される、請求項1～13のいずれか一項記載の方法。
  15. IL-1Raのある用量が、2～5日目に24時間ごと（q24h）に投与される、請求項1～14のいずれか一項記載の方法。
  16. 以下の工程を含む、細胞療法によって処置されるB細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象における毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する方法:
    インターロイキン-1受容体アンタゴニスト（IL-1Ra）の少なくとも6用量と、BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法とを、該対象に投与する工程であって、
    該細胞療法が、1日目に投与され、かつ、
    （a）該IL-1Raの1用量が、操作されたT細胞の該用量の投与前約24時間以内または投与前約24時間に、任意で操作されたT細胞の該用量の投与の前夜に、投与され、
    （b）該IL-1Raの1用量が、1日目の操作されたT細胞の該用量の投与前約3時間以内または投与前約3時間に投与され、
    （c）該IL-1Raの4用量が、操作されたT細胞の該用量の投与の後に投与され、該4用量のうちの1用量が、2、3、4および5日目に毎日投与される、
    工程。
  17. 対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、操作されたT細胞の前記用量の投与の後に、IL-1Raの追加の少なくとも1用量を投与する工程をさらに含む、請求項1～16のいずれか一項記載の方法。
  18. IL-1Raの追加の少なくとも1用量が、CRSの症状または徴候が消散するまでの連続した日にわたる毎日のIL-1Raの追加の少なくとも1用量の投与を含む、請求項17記載の方法。
  19. IL-1Raの追加の少なくとも1用量が、CRSの症状または徴候が消散するまで、連続した日にわたって毎日投与される追加の1用量である、請求項18記載の方法。
  20. 対象がサイトカイン放出症候群（CRS）の症状または徴候を呈する場合、IL-1Raのある用量が、CRSの症状または徴候が消散するまで、12時間ごと（q12h）に投与される、請求項13～19のいずれか一項記載の方法。
  21. IL-1Raの毎日の投与が、毎日同じ時間またはほぼ同じ時間に投与される、請求項13～20のいずれか一項記載の方法。
  22. IL-1Raが組換えIL-1Raである、請求項1～21のいずれか一項記載の方法。
  23. IL-1Raが、SEQ ID NO:256に示す配列、またはIL-1Raとしての機能を保持する、SEQ ID NO:256に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％もしくはそれ以上の配列同一性を有する配列を含む、請求項1～22のいずれか一項記載の方法。
  24. IL-1Raがアナキンラである、請求項1～23のいずれか一項記載の方法。
  25. IL-1Raの各用量が、500mgもしくは約500mg、400mgもしくは約400mg、300mgもしくは約300mg、200mgもしくは約200mg、100mgもしくは約100mg、もしくは50mgもしくは約50mg、または前述のいずれかによって定義される範囲であり、任意で、組換えIL-1Raの各用量が、50mgまたは約50mgから、200mgまたは約200mgである、請求項1～24のいずれか一項記載の方法。
  26. IL-1Raの各用量が、100mgまたは約100mgである、請求項1～25のいずれか一項記載の方法。
  27. IL-1Raが皮下投与される、請求項1～26のいずれか一項記載の方法。
  28. 細胞療法の投与に関連する毒性の発生の重症度を低下させる、毒性の発生を減弱する、および/または予防する、請求項1～27のいずれか一項記載の方法。
  29. 毒性がサイトカイン放出症候群（CRS）である、請求項3～28のいずれか一項記載の方法。
  30. CRSが、重度のCRS、またはグレード3以上のCRSである、請求項29記載の方法。
  31. 毒性が神経毒性（NT）である、請求項3～28のいずれか一項記載の方法。
  32. NTが、重度のNT、またはグレード2以上のNT、もしくはグレード3以上のNTである、請求項31記載の方法。
  33. 毒性が、マクロファージ活性化症候群（MAS）または血球貪食性リンパ組織球症（HLH）である、請求項3～28のいずれか一項記載の方法。
  34. 操作されたT細胞の前記用量の投与の時点または投与の前に、
    BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
    BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
    BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
    の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が対象に投与されている、請求項1～33のいずれか一項記載の方法。
  35. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
    BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を該対象に投与する工程であって、操作されたT細胞の該用量の投与の時点または投与の前に、
    BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
    BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
    BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
    の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法が該対象に投与されている、工程。
  36. 以下の工程を含む、B細胞成熟抗原（BCMA）発現に関連する疾患または障害を有するまたは有すると疑われる対象を処置する方法:
    BCMAに特異的な第1のキメラ抗原受容体（CAR）を含む操作されたT細胞のある用量を含む細胞療法を、
    BCMAに特異的な第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量、
    BCMA指向性T細胞エンゲージャー（TCE）の先行投与、および
    BCMA指向性抗体-薬物コンジュゲート（ADC）の先行投与
    の中から選択される1つまたは複数の先行BCMA指向性療法を以前に受けたことのある対象に、投与する工程。
  37. 対象が、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、請求項34～36のいずれか一項記載の方法。
  38. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与前約1年以内または投与前約1年に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、請求項34～37のいずれか一項記載の方法。
  39. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与前約6ヶ月以内または投与前約6ヶ月に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、請求項34～38のいずれか一項記載の方法。
  40. 対象が、第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与前約3ヶ月以内または投与前約3ヶ月に、前記1つまたは複数の先行BCMA指向性療法後に再発しているか、あるいは該1つまたは複数の先行BCMA指向性療法に対して難治性になっている、請求項34～39のいずれか一項記載の方法。
  41. BCMA指向性TCEが、二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）であるか、または二重特異性抗体もしくは二重特異性T細胞エンゲージャー（BiTE）を含む、請求項34～40のいずれか一項記載の方法。
  42. BCMA指向性TCEが、AMG 420/BI 836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135およびREGN5458のうちの1つまたは複数の中から選択される、請求項34～41のいずれか一項記載の方法。
  43. BCMA指向性ADCが、ベランタマブ・マフォドチン（GSK2857916）、MEDI2228、CC-99712およびAMG 224のうちの1つまたは複数の中から選択される、請求項34～42のいずれか一項記載の方法。
  44. 第1のCARが、
    SEQ ID NO:116に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:119に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）;
    それぞれSEQ ID NO:97、101および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;
    それぞれSEQ ID NO:96、100および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;
    それぞれSEQ ID NO:95、99および103に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:105、107および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL;ならびに/または
    それぞれSEQ ID NO:94、98および102に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:104、106および108に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL
    を含む細胞外抗原結合ドメインを含む、請求項1～43のいずれか一項記載の方法。
  45. VHがSEQ ID NO:116のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:116のアミノ酸配列を含み、VLがSEQ ID NO:119のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:119のアミノ酸配列を含む、請求項44記載の方法。
  46. 細胞外抗原結合ドメインが、SEQ ID NO:114のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:114のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項44または請求項45記載の方法。
  47. 細胞外抗原結合ドメインをコードする核酸が、（a）SEQ ID NO:113のヌクレオチドの配列、（b）それに対して少なくとも90％の配列同一性を有するヌクレオチドの配列、（c）（a）もしくは（b）の縮重配列、および/または（d）SEQ ID NO:115のヌクレオチドの配列を含む、請求項44～46のいずれか一項記載の方法。
  48. 第1のCARが、
    （a）IgG4/2キメラヒンジもしくは改変IgG4ヒンジ、IgG2/4キメラCH2領域、およびIgG4 CH3領域を含み、任意で約228アミノ酸長である、スペーサー、またはSEQ ID NO:174に示すスペーサー、
    （b）膜貫通ドメイン、任意でヒトCD28由来の膜貫通ドメイン、ならびに
    （c）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
    を含む、
    請求項1～47のいずれか一項記載の方法。
  49. 膜貫通ドメインが、ヒトCD28由来の膜貫通ドメインであるかまたはヒトCD28由来の膜貫通ドメインを含む、請求項44～48のいずれか一項記載の方法。
  50. 膜貫通ドメインが、SEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:138に示す配列もしくはSEQ ID NO:138に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、請求項44～49のいずれか一項記載の方法。
  51. 第1のCARが、
    SEQ ID NO:125に示す配列内に含まれる重鎖相補性決定領域1（CDR-H1）、重鎖相補性決定領域2（CDR-H2）および重鎖相補性決定領域3（CDR-H3）を含む可変重鎖（VH）、ならびに、SEQ ID NO:127に示す配列内に含まれる軽鎖相補性決定領域1（CDR-L1）、軽鎖相補性決定領域2（CDR-L2）および軽鎖相補性決定領域3（CDR-L3）を含む可変軽鎖（VL）;ならびに/または
    それぞれSEQ ID NO:260、261および262に示すCDR-H1、CDR-H2およびCDR-H3配列を含むVH、ならびに、それぞれSEQ ID NO:257、258および259に示すCDR-L1、CDR-L2およびCDR-L3配列を含むVL
    を含む細胞外抗原結合ドメインを含む、請求項1～43のいずれか一項記載の方法。
  52. VHがSEQ ID NO:125のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:125のアミノ酸配列を含み、VLがSEQ ID NO:127のアミノ酸配列であるかまたはSEQ ID NO:127のアミノ酸配列を含む、請求項51記載の方法。
  53. 細胞外抗原結合ドメインが、SEQ ID NO:128のアミノ酸配列またはSEQ ID NO:128のアミノ酸配列に対して少なくとも90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％もしくは99％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む、請求項51または請求項52のいずれか一項記載の方法。
  54. 第1のCARが、
    （a）CD8ヒンジ領域を含むスペーサー、
    （b）膜貫通ドメイン、任意でヒトCD8由来の膜貫通ドメイン、ならびに
    （c）CD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインと、T細胞共刺激分子の細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む共刺激シグナル伝達領域とを含む、細胞内シグナル伝達領域
    を含む、請求項1～43および請求項51～53のいずれか一項記載の方法。
  55. 細胞質シグナル伝達ドメインが、SEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:143に示す配列もしくはSEQ ID NO:143に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、請求項44～54のいずれか一項記載の方法。
  56. 共刺激シグナル伝達領域が、CD28、4-1BBもしくはICOSの細胞内シグナル伝達ドメインまたはそのシグナル伝達部分を含む、請求項44～59のいずれか一項記載の方法。
  57. 共刺激シグナル伝達領域が、4-1BBの、任意でヒト4-1BBの、細胞内シグナル伝達ドメインを含む、請求項44～56のいずれか一項記載の方法。
  58. 共刺激シグナル伝達領域が、SEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列であるか、またはSEQ ID NO:4に示す配列もしくはSEQ ID NO:4に示す配列に対して少なくとも90％の配列同一性を有するアミノ酸の配列を含む、請求項44～57のいずれか一項記載の方法。
  59. 共刺激シグナル伝達領域が、膜貫通ドメインとCD3-ゼータ（CD3ζ）鎖の細胞質シグナル伝達ドメインとの間にある、請求項44～58のいずれか一項記載の方法。
  60. 第1のCARが、SEQ ID NO:19に示す配列を含む、請求項1～50および請求項55～59のいずれか一項記載の方法。
  61. 第1のCARが、SEQ ID NO:312に示す配列を含む、請求項1～43および請求項51～59のいずれか一項記載の方法。
  62. 第1のCARと第2のCARとが、BCMAの同じエピトープに結合する、請求項34～61のいずれか一項記載の方法。
  63. 第1のCARと第2のCARとが、BCMAの異なるエピトープに結合する、請求項34～61のいずれか一項記載の方法。
  64. 第1のCARと第2のCARとが異なる、請求項34～63のいずれか一項記載の方法。
  65. 第1のCARと第2のCARとが同じである、請求項34～62のいずれか一項記載の方法。
  66. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量を以前に投与されたことのある同じ対象から得られたT細胞を含む試料から生成される、請求項34～65のいずれか一項記載の方法。
  67. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、第2のCARを含む操作されたT細胞の先行用量が対象に投与された後に該対象から得られたT細胞を含む試料から生成される、請求項34～66のいずれか一項記載の方法。
  68. 表面BCMAを発現する細胞への曝露に続く細胞外抗原結合ドメインおよび/もしくは第1のCARの結合または第1のCARの機能もしくは活性を示す尺度が、可溶型または脱落型のBCMAの存在下で、低減もブロックもされず、実質的に低減もブロックもされない、請求項44～67のいずれか一項記載の方法。
  69. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1×107個または約1×107個のCAR＋T細胞から、1×109個または約1×109個のCAR＋T細胞を含む、請求項1～68のいずれか一項記載の方法。
  70. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1×108個または約1×108個のCAR＋T細胞から、8×108個または約8×108個のCAR＋T細胞を含む、請求項1～69のいずれか一項記載の方法。
  71. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、1.5×108個または約1.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、請求項1～70のいずれか一項記載の方法。
  72. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、3×108個または約3×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、請求項1～70のいずれか一項記載の方法。
  73. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、4.5×108個または約4.5×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、請求項1～70のいずれか一項記載の方法。
  74. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、6×108個または約6×108個の細胞またはCAR＋T細胞を含む、請求項1～70のいずれか一項記載の方法。
  75. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量が、CD4＋T細胞とCD8＋T細胞との組合せ、任意でCD4＋CAR＋T細胞とCD8＋CAR＋T細胞との組合せを含む、請求項1～74のいずれか一項記載の方法。
  76. 第1のCARを含む操作されたT細胞の前記用量の投与の前に、20～40もしくは約20～40mg/m2対象体表面積、任意で30もしくは約30mg/m2のフルダラビンの2～4日間にわたる毎日の投与、および/または200～400もしくは約200～400mg/m2対象体表面積、任意で300もしくは約300mg/m2のシクロホスファミドの2～4日間にわたる毎日の投与を含むリンパ球枯渇療法が対象に投与されている、請求項1～75のいずれか一項記載の方法。
  77. リンパ球枯渇療法が、それぞれ毎日3日間にわたる、30または約30mg/m2対象体表面積のフルダラビン、および300または約300mg/m2対象体表面積のシクロホスファミドの投与を含む、請求項76記載の方法。
  78. BCMA発現に関連する疾患または障害が、自己免疫疾患または自己免疫障害である、請求項1～77のいずれか一項記載の方法。
  79. BCMA発現に関連する疾患または障害が、がん、任意でBCMA発現がんである、請求項1～78のいずれか一項記載の方法。
  80. がんがB細胞悪性腫瘍である、請求項79記載の方法。
  81. がんが、リンパ腫、白血病または形質細胞悪性腫瘍である、請求項79または請求項80記載の方法。
  82. がんがリンパ腫であり、該リンパ腫が、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（NHL）、ホジキンリンパ腫、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、濾胞性リンパ腫、小型非切れ込み核細胞性リンパ腫、粘膜関連リンパ組織リンパ腫（MALT）、辺縁帯リンパ腫、脾リンパ腫、結節性単球様B細胞リンパ腫、免疫芽球性リンパ腫、大細胞リンパ腫、びまん性混合細胞型リンパ腫、肺B細胞血管中心性リンパ腫、小リンパ球性リンパ腫、縦隔原発B細胞リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫（LPL）またはマントル細胞リンパ腫（MCL）である、請求項79～81のいずれか一項記載の方法。
  83. がんが白血病であり、該白血病が、慢性リンパ性白血病（CLL）、形質細胞性白血病または急性リンパ性白血病（ALL）である、請求項79～81のいずれか一項記載の方法。
  84. がんが形質細胞悪性腫瘍であり、該形質細胞悪性腫瘍が、多発性骨髄腫（MM）または形質細胞腫である、請求項79～81のいずれか一項記載の方法。
  85. がんが、多発性骨髄腫（MM）、任意で再発性または難治性多発性骨髄腫（R/R MM）である、請求項79～81および請求項84のいずれか一項記載の方法。
  86. 疾患または障害のための3つ以上の先行療法、任意で4つ以上の先行療法が対象に投与されており、
    任意で、該先行療法が、
    自家幹細胞移植（ASCT）、
    免疫調節剤、
    プロテアソーム阻害剤、および
    抗CD38抗体
    の中から選択される、
    請求項1～85のいずれか一項記載の方法。
  87. 免疫調節剤が、サリドマイド、レナリドミドおよびポマリドミドの中から選択される、請求項86記載の方法。
  88. プロテアソーム阻害剤が、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブおよびイキサゾミブの中から選択される、請求項86または請求項87記載の方法。
  89. 抗CD38抗体がダラツムマブであるかまたはダラツムマブを含む、請求項86～88のいずれか一項記載の方法。
  90. 対象に、3～15もしくは4～15の先行療法、または約10の先行療法が投与されている、請求項1～89のいずれか一項記載の方法。
  91. 対象が、前記3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数の後に再発しているか、または該3つ以上の先行療法のうちの1つもしくは複数に対して難治性になっている、請求項86～90のいずれか一項記載の方法。
  92. 対象が、前記3つ以上の先行療法のうちの少なくとも3つもしくは少なくとも4つの後に再発しているか、または該3つ以上の先行療法のうちの少なくとも3つもしくは少なくとも4つに対して難治性になっている、請求項86～91のいずれか一項記載の方法。
  93. 対象が、ボルテゾミブ、カーフィルゾミブ、レナリドミド、ポマリドミドおよび/または抗CD38モノクローナル抗体に対して難治性または不応になっている、請求項91または請求項92記載の方法。
  94. 対象が先行自家幹細胞移植を受けている、請求項1～93のいずれか一項記載の方法。
  95. 対象が先行自家幹細胞移植を受けていない、請求項1～93のいずれか一項記載の方法。
  96. 対象が、活動性の形質細胞性白血病（PCL）も形質細胞性白血病（PCL）の病歴も有しない、請求項1～95のいずれか一項記載の方法。
  97. 対象が、二次性の形質細胞性白血病（PCL）を発症している、請求項1～96のいずれか一項記載の方法。
  98. 対象が、成人対象であるか、または25もしくは35歳もしくはそれ以上である、請求項1～97のいずれか一項記載の方法。
  99. 対象が、疾患または障害の診断から、およそ4年、または2～15年もしくは2～12年経っている、請求項1～98のいずれか一項記載の方法。
  100. 対象が、IMWG高リスク細胞遺伝学を有する、請求項1～99のいずれか一項記載の方法。
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