CN115916223A - 与用靶向b细胞成熟抗原的嵌合抗原受体工程化的细胞疗法相关的方法和用途 - Google Patents

与用靶向b细胞成熟抗原的嵌合抗原受体工程化的细胞疗法相关的方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了与过继细胞疗法相关的方法和用途，所述过继细胞疗法涉及施用一定剂量的细胞，如T细胞，用于治疗包括某些浆细胞恶性肿瘤的疾病和病症。所述细胞表达重组受体，如对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述方法用于治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者。

Description

与用靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体工程化的细胞疗法相关的方法和用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2020年4月10日提交的标题为“与用靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体工程化的细胞疗法相关的方法和用途”的美国临时申请号63/008,564，出于所有目的将其内容通过引用以其整体并入。
通过引用序列表并入
本申请连同电子格式的序列列表一起提交。序列表以2021年4月8日创建的名为735042023640SeqList.Txt的文件提供，其大小为345,310字节。将电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
技术领域
在一些方面，本公开文本涉及过继细胞疗法的方法和用途，所述过继细胞疗法涉及施用一定剂量的细胞，如T细胞，用于治疗疾病和病症，包括某些浆细胞恶性肿瘤。所述细胞表达重组受体，如对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述方法用于治疗患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者。
背景技术
B细胞成熟抗原(BCMA)是在成熟B淋巴细胞上表达的III型跨膜蛋白。在BCMA与其配体之一即TNF家族的B细胞激活因子(BAFF)或增殖诱导配体(APRIL)结合后，促存活细胞信号被递送至B细胞，这已被发现是浆细胞存活所必需的。BCMA的表达与若干种疾病有关联，所述疾病包括癌症、自身免疫性障碍和感染性疾病。各种BCMA定向疗法(包括BCMA结合嵌合抗原受体(CAR))以及表达此类CAR的细胞都是可用的。然而，仍然需要用于治疗与BCMA相关的疾病和病症的改进方法，包括涉及工程化抗BCMA CAR表达细胞的过继细胞疗法。本文提供了满足此类需求的实施方案。
发明内容
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途。还提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向所述受试者施用一定剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在所述剂量的工程化T细胞之前施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向作为细胞疗法候选者的受试者施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途涉及向所述受试者施用一定剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在所述剂量的工程化T细胞之前施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途涉及向已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途包括向作为细胞疗法候选者的受试者施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述受试者在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内已被施用至少一个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述至少一个剂量的IL-1Ra包括至少两个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，其中在向所述受试者施用细胞疗法之前的为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后要向所述受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途涉及向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途涉及向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约21、18、15或12小时内施用。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约21小时内施用。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约18小时内施用。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约15小时内施用。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约12小时内施用。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之前施用的至少一个剂量的IL-Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约6、5、4、3或2小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约6小时施用至少两个剂量的IL-1RA2中的一个剂量。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约5小时施用至少两个剂量的IL-1RA2中的一个剂量。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约4小时施用至少两个剂量的IL-1RA2中的一个剂量。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约2小时施用至少两个剂量的IL-1RA2中的一个剂量。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量，并且在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述方法和用途还涉及在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少2个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的3、4、5、6或7个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少3个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少4个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的5个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少6个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少7个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少8个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，连续几天每天施用在所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra是4个剂量，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续4天每天施用所述四个剂量中的一个。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra是在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续5天每天施用的5个剂量。在一些实施方案中，在第2-5天每24小时(q24h)施用一定剂量的IL-1Ra。
本文提供了用于降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法和用途，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法和用途涉及向所述受试者施用至少6个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中所述细胞疗法在第1天施用，并且：(a)在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用一个剂量的IL-1Ra，任选地在施用所述剂量的工程化T细胞之前的夜晚施用；(b)在第1天施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra；(c)在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用四个剂量的IL-1Ra，其中在第2、3、4和5天每天施用所述四个剂量中的一个剂量。
在任何所提供的实施方案中的一些中，如果受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则方法和用途还涉及在施用所述剂量的工程化细胞之后施用至少一个另外剂量的IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，至少一个另外剂量的IL-1Ra包括施用多个剂量。在任何所提供的实施方案中的一些中，连续几天每天施用多个剂量，直到CRS的症状或体征消退。在任何所提供的实施方案中的一些中，连续几天每天两次施用多个剂量，直到CRS的症状或体征消退。在一些实施方案中，每12小时(q12h)施用一定剂量的IL-1Ra。在一些实施方案中，如果受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则每12小时(q12h)施用一定剂量的IL-1Ra，直到CRS的症状或体征消退。
在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每日施用在每天同一时间或约同一时间施用。
在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra是重组IL-1Ra。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra包括SEQ ID NO:256所示的序列或与SEQ ID NO:256具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性且保留IL-1R拮抗剂功能的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra包括SEQ ID NO:256所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra包括与SEQ ID NO:256具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性且保留IL-1R拮抗剂功能的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra是阿那白滞素。在一些实施方案中，阿那白滞素是重组阿那白滞素。
在任何所提供的实施方案中的一些中，重组IL-1Ra的每个剂量是为或约500mg、为或约400、为或约300、为或约200mg、为或约100mg或为或约50mg、或前述任一项限定的范围。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每一个剂量是为或约500mg、为或约400、为或约300、为或约200mg、为或约100或为或约50mg、或前述任一项限定的范围。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每个剂量是为或约500mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每个剂量是为或约400mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每个剂量是为或约300mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每个剂量是为或约200mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，重组IL-1Ra的每个剂量是从为或约50mg至为或约200mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，重组IL-1Ra的每个剂量是为或约100mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，IL-1Ra的每个剂量是为或约50mg。在任何所提供的实施方案中的一些中，皮下施用IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述方法和用途降低与细胞疗法的施用相关的毒性的严重程度、减弱和/或预防所述毒性的发作。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述方法和用途降低与细胞疗法的施用相关的毒性发作的严重程度。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述方法和用途减弱与细胞疗法的施用相关的毒性的发作。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述方法和用途预防与细胞疗法的施用相关的毒性的发作。
在任何所提供的实施方案中的一些中，毒性是细胞因子释放综合征(CRS)。在任何所提供的实施方案中的一些中，CRS是重度CRS或3级或更高分级的CRS。在任何所提供的实施方案中的一些中，CRS是重度的。在任何所提供的实施方案中的一些中，CRS是3级或更高分级的CRS。在任何所提供的实施方案中的一些中，毒性是神经毒性(NT)。在任何所提供的实施方案中的一些中，NT是重度NT、或2级或更高分级的NT、或3级或更高分级的NT。在任何所提供的实施方案中的一些中，NT是重度NT。在任何所提供的实施方案中的一些中，NT是2级或更高分级的NT。在任何所提供的实施方案中的一些中，NT是3级或更高分级的NT。在任何所提供的实施方案中的一些中，毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)或噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。在任何所提供的实施方案中的一些中，毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)。在任何所提供的实施方案中的一些中，毒性是噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：先前剂量的表达对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，所述受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：先前剂量的表达对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
本文提供了用于治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法和用途，所述方法和用途涉及向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的表达对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，所述受试者先前已接受过一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：先前剂量的表达对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是一种或多种先前BCMA定向疗法难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，受试者在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，是一种或多种先前BCMA定向疗法难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，受试者在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，是一种或多种先前BCMA定向疗法难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，受试者在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，在一种或多种先前BCMA定向疗法后复发。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，是一种或多种先前BCMA定向疗法难治的。
在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是或包括双特异性抗体或双特异性T细胞接合剂(BiTE)。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是双特异性抗体。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE包括双特异性抗体。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是双特异性T细胞接合剂(BiTE)。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE包括双特异性T细胞接合剂(BiTE)。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE选自AMG 420/BI836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135和REGN5458中的一种或多种。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是AMG 420/BI 836909。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是AMG 701。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是CC-93269。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是JNJ-64007957。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是PF-06863135。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向TCE是REGN5458。
在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向ADC选自贝兰他单抗莫福汀(Belantamab mafodotin)(GSK2857916)、MEDI2228、CC-99712和AMG 224中的一种或多种。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向ADC是贝兰他单抗莫福汀(GSK2857916)。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向ADC是MEDI2228。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向ADC是CC-99712。在任何所提供的实施方案中的一些中，BCMA定向ADC是AMG 224。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR含有：(a)细胞外抗原结合结构域，其包含：包含SEQ ID NO:116所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:119所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；分别包含SEQ ID NO:97、101和103所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及分别包含SEQ ID NO:105、107和108所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；分别包含SEQ ID NO:96、100和103所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及分别包含SEQ ID NO:105、107和108所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；分别包含SEQ IDNO:95、99和103所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及分别包含SEQ ID NO:105、107和108所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；分别包含SEQ ID NO:94、98和102所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及分别包含SEQ ID NO:104、106和108所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；或包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的VH以及包含SEQ IDNO:119的氨基酸序列的VL；(b)间隔子，其包含IgG4/2嵌合铰链或经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4 CH3区，如长度为约228个氨基酸的间隔子或SEQ ID NO:174所示的间隔子；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，共刺激信号传导区包含T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
在任何所提供的实施方案中的一些中，VH是或包括SEQ ID NO:116的氨基酸序列；并且VL是或包括SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，VH是SEQ ID NO:116的氨基酸序列；并且VL是SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，VH包括SEQ ID NO:116的氨基酸序列；并且VL包括SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，细胞外抗原结合结构域包括scFv。在任何所提供的实施方案中的一些中，细胞外抗原结合结构域是scFv。在任何所提供的实施方案中的一些中，VH和VL通过柔性接头连接。在任何所提供的实施方案中的一些中，柔性接头包括氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:1)。在任何所提供的实施方案中的一些中，柔性接头是氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:1)。在任何所提供的实施方案中的一些中，VH位于VL的羧基末端。
在任何所提供的实施方案中的一些中，细胞外抗原结合结构域包括SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，细胞外抗原结合结构域包括SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，细胞外抗原结合结构域包括与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，编码细胞外抗原结合结构域的核酸包括(a)SEQ ID NO:113的核苷酸序列；(b)与其具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；或(c)(a)或(b)的简并序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，编码细胞外抗原结合结构域的核酸包括SEQ ID NO:113的核苷酸序列。在任何提供的实施方案中的一些中，编码细胞外抗原结合结构域的核酸包括与SEQ ID NO:113具有至少90％序列同一性的核苷酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，编码细胞外抗原结合结构域的核酸包括SEQ ID NO:115的核苷酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是或包括来自人CD28的跨膜结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是来自人CD28的跨膜结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域包括来自人CD28的跨膜结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是或包括SEQ ID NO:138所示的序列或与SEQ IDNO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是或包括SEQ ID NO:138所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是SEQ ID NO:138所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域包括SEQ ID NO:138所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是或包括与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域是与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，跨膜结构域包括与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，第一CAR含有细胞外抗原结合结构域，所述细胞外抗原结合结构域具有：包含SEQ ID NO:125所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:127所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；和/或分别包含SEQ ID NO:260、261和262所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及分别包含SEQ ID NO:257、258和259所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL。在一些实施方案中，VH是或包括SEQ ID NO:125的氨基酸序列；并且VL是或包括SEQ ID NO:127的氨基酸序列。在一些实施方案中，细胞外抗原结合结构域包括SEQ IDNO:128的氨基酸序列或与SEQ ID NO:128的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域是或包括SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域是或包括SEQ ID NO:143所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域是SEQ ID NO:143所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域包括SEQ ID NO:143所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域是或包括与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域是与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，胞质信号传导结构域包括与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括CD28的细胞内信号传导结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括ICOS的细胞内信号传导结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括4-1BB的细胞内信号传导结构域。在任何所提供的实施方案中的一些中，4-1BB是人4-1BB。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区是或包括SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ ID NO:4所示序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区是或包括SEQ ID NO:4所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区是SEQ ID NO:4所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括SEQ ID NO:4所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区是与SEQ ID NO:4所示序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区包括与SEQ ID NO:4所示序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，共刺激信号传导区位于跨膜结构域与CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域之间。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR从其N末端到C末端依次含有：细胞外抗原结合结构域、间隔子、跨膜结构域和细胞内信号传导区。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR含有(a)细胞外抗原结合结构域，其包含：包含SEQ ID NO:116所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:119所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；(b)间隔子，其包含经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4CH3区，所述间隔子的长度为约228个氨基酸；(c)来自人CD28的跨膜结构域；以及(d)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，共刺激信号传导区包含4-1BB的细胞内信号传导结构域。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR含有(a)细胞外抗原结合结构域，其包含SEQ ID NO:114所示的序列或与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(b)间隔子，其包含SEQ ID NO:174所示的序列或与SEQ ID NO:174具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；(c)跨膜结构域，其包含SEQ ID NO:138所示的序列或与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；以及(d)细胞内信号传导区，其包含胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述胞质信号传导结构域包含SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述共刺激信号传导区包含SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ ID NO:4所示序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR含有(a)细胞外抗原结合结构域，其包含SEQ ID NO:114所示的序列；(b)间隔子，其包含SEQ ID NO:174所示的序列；(c)跨膜结构域，其包含SEQ ID NO:138所示的序列；以及(d)细胞内信号传导区，其包含含有SEQ IDNO:143所示序列的胞质信号传导结构域和含有SEQ ID NO:4所示序列的共刺激信号传导区。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR含有SEQ ID NO:19所示的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR由以下多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列包含SEQ ID NO:13所示的序列或与其展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR由包含SEQ ID NO:13所示序列的多核苷酸序列编码。在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR由展现出与SEQ ID NO:13至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的多核苷酸序列编码。
在一些实施方案中，其中第一CAR含有SEQ ID NO:312所示的序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR和第二CAR结合BCMA的相同表位。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR和第二CAR结合BCMA的不同表位。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR和第二CAR是不同的。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括：VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；包含SEQ IDNO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸残基22-493；和/或由SEQ ID NO:266编码的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸残基22-493。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括由SEQ ID NO:264编码的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸残基22-493和由SEQ ID NO:264编码的序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括SEQ IDNO:263所示序列的氨基酸残基22-493和/或由SEQ ID NO:264编码的序列。在一些实施方案中，第二CAR包括由SEQ ID NO:312编码的序列。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR是多价CAR。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括从SEQ ID NO:267-304中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR是多价CAR。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括从SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括含有Centyrin的CAR。在任何所提供的实施方案中的一些中，第二CAR包括SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334。
在任何所提供的实施方案中的一些中，第一CAR和第二CAR是相同的。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞由包含自同一受试者获得的T细胞的样品产生，所述受试者先前已被施用先前剂量的包含第二CAR的工程化T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，在受试者已被施用先前剂量的包含第二CAR的工程化T细胞之后，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞由包含自所述受试者获得的T细胞的样品产生。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括在自受试者获得的测试样品中评估以下项的存在或量：(i)表达第二CAR的细胞，或(ii)编码第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括在自受试者获得的测试样品中评估以下项的存在或量：表达第二CAR的细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括在自受试者获得的测试样品中评估以下项的存在或量：编码第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，在获得包含T细胞的样品的同时，自受试者获得测试样品，用于产生所述剂量的表达第一CAR的来自同一受试者的工程化T细胞。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括评估以下项的存在或量：(i)表达第二CAR的细胞，或(ii)在包含所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞的组合物中的编码第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括评估以下项的存在或量：表达第二CAR的细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括评估以下项的存在或量：在包含所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞的组合物中的编码第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。在任何所提供的实施方案中的一些中，通过使样品或所述剂量的包含工程化T细胞的组合物与纯化或重组的BCMA接触来评估表达第二CAR的细胞的存在或量。在任何所提供的实施方案中的一些中，通过使样品或所述剂量的工程化T细胞与BCMA-Fc接触来评估表达第二CAR的细胞的存在或量。
在任何所提供的实施方案中的一些中，通过定量聚合酶链式反应(qPCR)来评估编码第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列的存在或量。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，在暴露于表达表面BCMA的细胞后，细胞外抗原结合结构域和/或第一CAR的结合或指示所述第一CAR的功能或活性的量度未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。在任何所提供的实施方案中的一些中，在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，细胞外抗原结合结构域与表达表面BCMA的细胞的结合未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。在任何所提供的实施方案中的一些中，在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，第一CAR与表达表面BCMA的细胞的结合未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。在任何所提供的实施方案中的一些中，在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，在暴露于表达表面BCMA的细胞后，指示第一CAR的功能或活性的量度未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。在任何所提供的实施方案中的一些中，可溶性或脱落形式的BCMA的浓度或量对应于所述受试者或多发性骨髓瘤患者的血清或血液或血浆中存在的浓度或量，或者多发性骨髓瘤患者群体中的平均浓度或平均量；或者为一定浓度或量的所述可溶性或脱落BCMA，在所述浓度或量下在相同测定中对于表达参考抗BCMA重组受体(如参考抗BCMA CAR)的细胞，所述结合或量度被降低或阻断或被明显降低或阻断。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1x107个CAR+T细胞至为或约2x109个CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1x107个CAR+T细胞至为或约1x109个CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1x108个CAR+T细胞至为或约1x108个CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的工程化T细胞包括为或约5x107个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1.5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约2x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约2.5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约3x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约3.5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约4x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约4.5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约5.5x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约6x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约8x108个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1x109个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约1.5x109个细胞或CAR+T细胞。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有为或约2x109个细胞或CAR+T细胞。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有CD4+T细胞和CD8+T细胞的组合。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞包括CD4+CAR+T细胞和CD8+CAR+T细胞的组合。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+CAR+T细胞与CD8+CAR+T细胞的比率和/或CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率为或为约1:1或者在为或约1:3与为或约3:1之间。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+CAR+T细胞与CD8+CAR+T细胞的比率为约1:1。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+CAR+T细胞与CD8+CAR+T细胞的比率是或在为或约1:3与为或约3:1之间。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞包括CD4+CAR+T细胞和CD8+CAR+T细胞的组合。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率为或为约1:1或者在为或约1:3与为或约3:1之间。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率为或为约1:1。在任何所提供的实施方案中的一些中，CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率是或在为或约1:3与为或约3:1之间。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞含有CD3+CAR+T细胞。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞中少于或少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的CAR+T细胞表达凋亡标记物，如膜联蛋白V或活性半胱天冬酶3。在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞中少于或少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的CAR+T细胞表达凋亡标记物。在一些实施方案中，凋亡标记物是膜联蛋白V。在一些实施方案中，凋亡标记物是活性半胱天冬酶3。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括施用为或约20-40mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括施用为或约200-400mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺。在任何所提供的实施方案中的一些中，在施用所述剂量的表达第一CAR的工程化T细胞之前，受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约300mg/m2的环磷酰胺，持续2-4天。在任何所提供的实施方案中的一些中，淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨以及每天施用为或约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，持续3天。
在任何所提供的实施方案中的一些中，与BCMA表达相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。在任何所提供的实施方案中的一些中，与BCMA表达相关的疾病或障碍是癌症。在任何所提供的实施方案中的一些中，表达BCMA的癌症。
在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是B细胞恶性肿瘤。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是淋巴瘤，并且所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样B细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)或套细胞淋巴瘤(MCL)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是白血病，并且所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是浆细胞恶性肿瘤，并且所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(MM)或浆细胞瘤。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是多发性骨髓瘤(MM)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是复发性或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是复发性多发性骨髓瘤(MM)。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述癌症是难治性多发性骨髓瘤(MM)。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者已被施用三种或更多种针对所述疾病或障碍的先前疗法，如四种或更多种先前疗法。在任何所提供的实施方案中的一些中，所述三种或更多种针对所述疾病或障碍的先前疗法、或所述四种或更多种先前疗法选自：自体干细胞移植(ASCT)、免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂和抗CD38抗体。在任何所提供的实施方案中的一些中，免疫调节剂选自沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。在任何所提供的实施方案中的一些中，蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。在任何所提供的实施方案中的一些中，抗CD38抗体是或包括达雷木单抗。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者已被施用3与15种之间或4与15种之间的先前疗法或约10种先前疗法。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在三种或更多种先前疗法中的一种或多种后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在一种或多种先前疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在至少3种或至少4种先前疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在至少3种先前疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者在至少4种先前疗法后复发或是其难治的。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是硼替佐米、卡非佐米、来那度胺、泊马度胺和/或抗CD38单克隆抗体难治的或对其无反应。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者已经进行过先前自体干细胞移植。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者没有进行过先前自体干细胞移植。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者没有活动性浆细胞白血病(PCL)或其病史。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者已经患上继发性浆细胞白血病(PCL)。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是成人受试者或年龄为25或35岁或更大。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是成人受试者。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是25岁或更大。在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者是35岁或更大。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者从诊断所述疾病或障碍起有约4年的时间或2与15年之间或2与12年之间的时间。
在任何所提供的实施方案中的一些中，受试者具有IMWG高危细胞遗传学。
附图说明
图1示出了在含有5x107个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平1(DL1)、含有1.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2(DL2)或含有4.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3(DL3)下，在已被施用含有表达对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的CAR的自体T细胞的组合物的患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(MM)的人受试者中的客观反应率(ORR)，其包括完全反应(CR)率和严格的完全反应(sCR)率、非常好的部分反应(VGPR)率以及部分反应(PR)率。b DL3群组中的一名受试者由于缺少第29天基线后反应评价而无法评价功效。
图2示出了在施用CAR表达T细胞后，在最长的随访的DL1群组的受试者中，反应随时间的评估(n＝14)。
图3示出了在DL1、DL2和DL3群组的受试者的外周血中CAR+T细胞的扩增和长期持久性，如通过对来自全血样品的基因组DNA制剂进行用于检测编码CAR的载体序列的定量聚合酶链式反应(qPCR)所测量(载体拷贝/μg基因组DNA)。LLOQ，定量下限；LLOD，检测下限。
图4A示出了相比于具有比PR更差的总体反应(MR或SD；无反应者)的受试者，在具有PR或更好的总体反应(PR、VGPR、CR或sCR；反应者)的受试者中，在CAR+T细胞施用之前和施用之后不同时间点(第29天、第2个月和第3个月)在受试者血清中可溶性BCMA(sBCMA)(ng/mL)的水平。图4B示出了在展现出PR或更好的总体反应(PR、VGPR、CR或sCR；反应者)的受试者中和展现出比PR更差的反应(MR或SD；无反应者)的受试者中，在CAR+T细胞施用之前(治疗前)的sBCMA水平。
图5A-5D描绘了40种工程化CAR+T细胞组合物的示例性表型概况，每种组合物均来自多发性骨髓瘤患者。针对CD4+群体(图5A)和CD8+群体(图5B)，示出CAR+T细胞组合物中的CD45RA×CCR7表达概况。针对CD4+群体(图5C)和CD8+群体(图5D)，示出CAR+T细胞组合物中的CD27×CD28表达概况。由点(●)、叉(×)、菱形(◇)或三角形(Δ)示出每种CAR+T细胞组合物。
具体实施方式
本文提供了方法和用途、工程化细胞、组合物、组合、制品和化合物，包括结合、靶向或定向于B细胞成熟抗原(BCMA)以及表达BCMA的细胞和疾病的那些。所提供的方法可以用于治疗与BCMA相关的疾病或病症。观察到BCMA在某些疾病和病症(如恶性肿瘤)或其组织或细胞上表达，例如在恶性浆细胞上表达，特别地在患有多发性骨髓瘤(MM)(包括复发性/难治性多发性骨髓瘤(R/R MM))的受试者中，例如在正常组织上很少表达。所提供的实施方案包括可用于治疗此类疾病和病症和/或靶向此类细胞类型的方法，所述方法包括包含BCMA结合重组受体(包括嵌合抗原受体(CAR))的细胞以及包含所述细胞的组合物和制品。
在一些方面，提供了治疗方法，其涉及施用白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)(如重组IL-1Ra)与BCMA靶向细胞疗法的组合。在所提供的方法的实施方案中，IL-1Ra正好在施用BCMA靶向细胞疗法(例如抗BCMA CAR-T细胞)之前、并行和/或之后施用。在特定实施方案中，至少一个剂量的IL-1Ra正好在施用BCMA靶向细胞疗法(例如抗BCMA CAR-T细胞)之前施用，并且可以在施用BCMA靶向疗法后持续较短的时间(例如长达一周或5天)，以减少、预防和/或减弱与细胞疗法相关的可能毒性。因此，在一些方面，所提供的方法提供了在施用BCMA靶向细胞疗法(例如抗BCMA CAR-T细胞)后在受试者中可能产生的毒性的预防性治疗。在一些方面，所提供的方法还可用于降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性发作，所述毒性如细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(NT)/神经病学事件(NE)和/或巨噬细胞活化综合征(MAS)，在一些情况下，所述毒性可能与此类治疗相关，此类治疗包括细胞疗法，例如用包含BCMA结合重组受体(包括嵌合抗原受体(CAR))的细胞和包含所述细胞的组合物进行细胞疗法。在一些方面，所述方法和用途使与细胞疗法相关的毒性(任选地是细胞因子释放综合征(CRS))的发作延迟一天或更长时间。在一些实施方案中，所述方法和使用使与细胞疗法的施用相关的CRS的发作延迟一天或更长时间。
在一些方面，还提供了治疗方法，其涉及向先前已接受过一种或多种定向于BCMA的先前疗法的受试者施用细胞疗法，例如包括表达结合、靶向或定向于BCMA的重组受体的工程化细胞。在一些方面，受试者可能已接受过定向于BCMA的先前疗法，包括使用BCMA结合剂或BCMA靶向剂的先前治疗或疗法，如BCMA靶向抗体-药物缀合物(ADC)、BCMA靶向T细胞接合剂(TCE)或表达BCMA靶向嵌合抗原受体(CAR)的细胞。在一些方面，受试者可能对先前疗法(如先前BCMA定向疗法)无反应、在其后复发或是其难治的。在一些方面，所提供的方法和用途可以用于对先前BCMA定向疗法无反应、在其后复发或变得其难治的受试者。在一些方面，所提供的实施方案可以导致高反应率、低不良事件(例如毒性)发生率、反应延长以及在一些情况下反应随时间改善的有利效果，例如，在对先前疗法(如先前BCMA定向疗法)无反应、在其后复发或变得其难治的受试者中。
本文提供的方法涉及施用一定剂量的细胞，如含有或富集表达定向于或结合BCMA的重组受体(如CAR)的T细胞。BCMA结合重组受体通常可以含有抗原结合结构域，所述抗原结合结构域包括对BCMA具有特异性的抗体(包括抗原结合抗体片段，如单链片段，包括单链可变片段(scFv)、单结构域抗体片段、重链可变(VH)区)。表达此类BCMA结合重组受体(例如抗BCMA CAR)和/或含有编码此类受体的核酸的工程化或重组细胞(例如工程化T细胞)可以作为组合物提供，用于所提供的方法中并用于施用含有此类细胞的治疗剂量。
过继细胞疗法(包括涉及施用表达对目标疾病或障碍具有特异性的重组受体(如嵌合抗原受体(CAR)和/或其他重组抗原受体)的细胞的那些过继细胞疗法以及其他过继免疫细胞疗法和过继T细胞疗法)可以有效治疗癌症以及其他疾病和障碍。在某些情况下，过继细胞疗法的可用方法可能并不总是完全令人满意。在一些方面，所施用的细胞的以下能力：识别并结合至靶标(例如，靶抗原，如BCMA)，运输、定位至并成功进入受试者、肿瘤及其环境内的适当部位，被激活、扩增、发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子(如细胞因子))，持续(包括长期)存在，分化、转变或参与重新编程为某些表型状态，在清除和再暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆反应，以及避免或减少耗竭、无反应性、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些方面，用于治疗疾病或障碍(如多发性骨髓瘤)的可用方法是复杂的，并且可能并不总是完全令人满意。在一些方面，选择治疗方案可能取决于许多因素，包括药物可用性、对先前疗法的反应、复发的侵袭性、自体干细胞移植(ASCT)的资格以及复发是在疗法中还是在疗法后发生。在一些方面，MM导致复发和缓解，并且在一些情况下，现有的方案可能导致复发和/或来自治疗的毒性。在一些情况下，患有特别侵袭性疾病的受试者，如在各种疗法之后患有持续性或复发性疾病的受试者、具有高疾病负荷(如高肿瘤负荷)的受试者、和/或患有特别侵袭性疾病类型(如浆细胞瘤)的受试者可能特别难以治疗，并且这些受试者中对某些疗法的反应可能很差或持续时间短。在一些情况下，已进行大量预治疗的受试者(例如，在若干种不同的先前疗法之后已经复发的受试者)可能展现出低反应率和/或不良事件的高发生率。
在一些方面，过继细胞疗法的治疗效果可能受到施用此类细胞的受试者中毒性(例如，CRS、NT或MAS)发生的限制，在一些情况下，在所施用细胞的某些剂量或暴露下，所述毒性可能是重度的。在一些情况下，虽然较高剂量的此类细胞可以增加治疗效果(例如，通过增加对细胞的暴露，如通过促进扩增和/或持久性)，但是它们也可能导致更高的发生毒性或更严重毒性的风险。在一些方面，一些施用的细胞可以含有迅速扩增或增殖的细胞，这也可能促成发生毒性或更严重毒性的风险。而且，在一些情况下，具有较高疾病负荷的受试者也可能具有更高的发生毒性或更严重毒性的风险。某些用于向受试者给予细胞疗法的可行方法可能并不总是完全令人满意。增加细胞的剂量或促进所施用细胞在受试者中的扩增或增殖可能与较高反应率有关，但也可能与毒性发生的增加有关。
所提供的方法涉及在BCMA靶向细胞疗法之前和/或与其组合施用IL-1Ra(例如重组IL-1Ra)，如用于预防性治疗，并允许系统地管理可能与免疫疗法和/或过继细胞疗法相关的毒性。所提供的方法在预防毒性(如可能与细胞疗法相关的CRS、NT和/或MAS)发作、降低毒性的严重程度、减弱、改善、治疗和/或预防毒性发作方面提供了优于可用方法的优点。在一些方面，所提供的用于降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性发作的方法涉及在施用一定剂量的用于细胞疗法的细胞之前预防性施用治疗剂，如重组IL-1Ra。在一些方面，预防性施用另外的治疗剂(如重组IL-1Ra)可以提供以下优点：在不降低细胞疗法的效力或治疗效果的情况下，降低施用细胞疗法时开始的毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性的发作。在一些方面，所提供的方法和用途允许以下细胞的给药，所述细胞可以实现或可以关联于治疗结局(例如，有利的结局或反应，如完全反应、严格的完全反应或非常好的部分反应，和/或持久反应或结局)的高度或指定所需程度的可能性，并且还可以关联于在向受试者施用细胞疗法后发生毒性结局或毒性的风险的相对较低程度或最小化程度或所需程度的可能性。
在一些方面，所提供的方法和用途产生以下细胞疗法，所述细胞疗法展现出在施用所述细胞之后细胞的延长的持久性以及高反应率和低毒性(例如，CRS或NE，如3级或更高分级的CRS或3级或更高分级的神经毒性)率。在一些方面，本文已经观察到，可以施用相对较高剂量的BCMA结合CAR表达细胞，并且观察到这种剂量导致高客观反应率和低毒性率，包括非常低的重度毒性(例如，3级或更高分级的CRS或3级或更高分级的神经毒性)发生率。在一些方面，所提供的方法可以用于通过预防性施用用于改善毒性的治疗剂来进一步降低毒性的严重程度、减弱、延迟或预防毒性(如重度毒性)的发作。在一些情况下，所提供的实施方案还允许所施用的工程化细胞的改善的扩增和/或持久性，并且在一些情况下导致延长的反应和/或随时间改善的反应。在一些方面，观察到根据所提供的实施方案对患有侵袭性或难治性疾病的受试者(例如，经大量预治疗的受试者、具有高肿瘤负荷的受试者和/或患有侵袭性疾病类型的受试者)的治疗提供了安全、有效且持久的治疗。
在多个方面，用于所提供的方法和用途中的BCMA结合重组受体(包括编码此类受体的多核苷酸、工程化细胞和细胞组合物)展现出可以克服或抵消某些限制的某些所需特性，所述某些限制可能减少对细胞疗法的最佳反应。在一些方面，向先前已接受过先前BCMA定向疗法但没有反应、在其后复发和/或变得其难治的受试者施用表达BCMA结合重组受体的工程化细胞的细胞疗法。
在一些方面，观察到含有表达本文的示例性BCMA结合重组受体的工程化细胞的组合物展现出工程化细胞的细胞健康的一致性，并且所述组合物与改善的临床反应相关。在一些情境下，用于所提供的方法和用途中的工程化细胞和细胞组合物可以提供优于靶向BCMA的可用疗法的各种优点，例如预防毒性发作、降低毒性的严重程度、减弱、改善、治疗和/或预防毒性发作，并改善重组受体的活性和对BCMA靶向细胞疗法的反应。另外，已经观察到工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物的所提供方法和用途在治疗受试者方面提供了优点，其在所测试的各种不同剂量水平(包括相对较高剂量)下导致高反应率、持久反应和低不良事件率。此外，已经观察到工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物的所提供方法和用途在治疗以下受试者方面提供了优点，所述受试者患有特别侵袭性和/或难治性疾病或者对针对所述疾病的多种不同先前治疗(包括先前BCMA定向治疗)复发和/或是其难治的。
本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)出于所有目的通过引用以其整体并入，在程度上如同每个单独的出版物通过引用单独并入。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开申请和其他出版物中所述的定义相反或在其他方面不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。I.表达对B细胞成熟抗原具有特异性的嵌合抗原受体的工程化细胞的方法和用途
本文提供了表达B细胞成熟抗原(BCMA)结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞、和/或包含所述工程化细胞的组合物如在治疗疾病、病症和障碍中的施用方法和用途，如治疗性和预防性用途。在一些方面，所述疾病、病症或障碍包括表达BCMA的那些，如癌症或肿瘤。在一些方面，所提供的方法涉及向以下受试者施用工程化细胞或其组合物，所述受试者已接受过定向于BCMA的先前治疗或疗法，如使用BCMA结合剂或BCMA靶向剂的先前治疗或疗法，如BCMA靶向抗体-药物缀合物(ADC)、BCMA靶向T细胞接合剂(TCE)或表达BCMA靶向嵌合抗原受体(CAR)的细胞。此类方法(如治疗方法)和用途包括涉及向受试者施用表达抗BCMA重组受体(例如CAR)的工程化细胞(如多种工程化细胞)的那些。还提供了组合疗法和/或治疗的方法。在一些方面，还提供了涉及施用工程化细胞或其组合物以及另外药剂的预防性和治疗性方法和用途。
在一些方面，还提供了组合治疗方法，其涉及施用另外的治疗剂，例如，用于预防性用途的治疗剂以降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性(例如，细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(NT)/神经病学事件(NE)和/或巨噬细胞活化综合征(MAS))的发作，在某些情况下，所述毒性可能与细胞疗法相关。在一些方面，另外的治疗剂是白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，例如阿那白滞素。在一些方面，所提供的方法和用途包括对特定受试者的治疗，如先前已被施用BCMA定向疗法的受试者，所述定向疗法如涉及BCMA结合分子(例如，嵌合抗原受体(CAR)、T细胞接合剂、抗体、抗体-药物缀合物)的先前疗法。在一些方面，所提供的方法允许治疗以下受试者，所述受试者先前已接受过先前BCMA定向疗法并且对先前BCMA定向疗法没有反应、在其后复发和/或变得其难治。
此类提供的方法和用途包括治疗方法和用途，例如，涉及向受试者施用工程化细胞(例如，表达对BCMA具有特异性的重组受体)或含有其的组合物和/或与另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)的组合，所述受试者患有与BCMA相关的疾病、病症或障碍，如与BCMA表达相关的疾病、病症或障碍(例如多发性骨髓瘤)，和/或患有其中细胞或组织表达(例如特异性表达)BCMA的疾病、病症或障碍。在一些实施方案中，以实现所述疾病或障碍的治疗的有效量施用所述细胞和/或组合物。在一些实施方案中，以实现降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性发作的有效量施用所述细胞和/或另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)，在一些情况下，所述毒性可能与细胞疗法相关。
本文提供了细胞(例如，表达重组受体如CAR的工程化细胞)、组合物和/或另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)在此类方法和治疗中的用途，以及在制造或制备用于执行此类治疗性和/或预防性方法的药物中的用途。在一些方面，提供了工程化细胞和/或含有其的组合物，用于制造用于治疗疾病或障碍(如与BCMA相关的疾病或障碍，例如多发性骨髓瘤)的药物。在一些方面，提供了一种或多种另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)，用于制造用于降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性发作的药物，所述毒性可能与细胞疗法(如本文所述的任何细胞疗法)相关。在一些方面，提供了组合(如包含工程化细胞的组合)和/或含有工程化细胞的组合物以及另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)，用于制造一种或多种用于治疗疾病或障碍的药物。
在一些实施方案中，所述方法通过向患有、曾经患有或怀疑患有所述疾病或病症的受试者施用表达重组受体的工程化细胞或包含所述工程化细胞的组合物和/或另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)来执行。在一些实施方案中，所述方法由此治疗受试者的所述疾病或病症或障碍。本文还提供了任何所述组合物(如本文所提供的药物组合物)用于治疗与BCMA相关的疾病或障碍的用途，如用于治疗方案中。在一些实施方案中，所述方法由此降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性的发作，在一些情况下，所述毒性可能与细胞疗法相关，所述受试者患有要用工程化细胞(例如，表达对BCMA具有特异性的重组受体)和/或包含工程化细胞的组合物治疗的疾病或障碍。本文还提供了任何所述组合物(如本文所提供的药物组合物)和/或组合(如本文所提供的医药组合物的组合)用于治疗与BCMA相关的疾病或障碍的用途，如用于治疗方案中；和/或用于预防性治疗方案，例如，以降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性的发作，在一些情况下，所述毒性可能与细胞疗法相关。
在一些情境下，所提供的实施方案还基于临床研究的观察结果，即施用表达特定BCMA结合重组受体的工程化细胞(如本文所述的那些)导致高反应率和低不良事件(如细胞因子释放综合征(CRS)或神经病学事件(NE；或神经毒性，NT))率。在一些方面，所提供的方法和用途允许施用相对较高剂量的工程化细胞用于细胞疗法，这可能导致高反应率和较少的不良事件。
A.治疗方法和用途
本文提供了表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述重组受体(例如CAR)的工程化细胞、多种表达所述受体的工程化细胞、和/或包含所述细胞的组合物的施用方法和用途，如治疗性用途。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体，如“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指疾病或病症或障碍或者与之相关的症状、不良影响或结局或表型的完全或部分改善或减轻。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓解、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或缓解疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不意味着完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结局的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发展”意指推迟、阻碍、减慢、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发展。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的受试者。足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为受试者不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发展。
如本文所用，“预防”包括提供关于受试者的疾病的发生或复发的预防，所述受试者可能易患所述疾病但尚未被诊断患有所述疾病。在一些实施方案中，如本文所述的工程化细胞和组合物用于延迟疾病的发展或减慢疾病的进展和/或降低不良事件或副作用(例如毒性)的严重程度、减弱和/或预防不良事件或副作用(例如毒性)的发作。
如本文所用，当与除了目的条件或参数以外其他都相同的条件相比时，或者可替代地，如与另一种条件相比，“抑制”功能或活性是降低功能或活性。例如，与不存在抗体或组合物或细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的该抗体或组合物或细胞降低肿瘤的生长速率。
在施用的情境下，药剂(例如药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在必要的剂量/量下和必要的时间段内有效实现所需结果(例如治疗性或预防性结果)的量。
药剂(例如药物配制品、抗体、细胞或组合物)的“治疗有效量”是指在必要的剂量下和必要的时间段内有效实现所需治疗结果(如针对治疗疾病、病症或障碍)和/或治疗的药代动力学或药效动力学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下的因素而变化：疾病状态，受试者的年龄、性别和体重，以及所施用的细胞群。在一些实施方案中，所提供的方法涉及以有效量(例如，治疗有效量)施用分子、抗体、细胞和/或组合物。
“预防有效量”是指在必要的剂量和持续必要的时间段的情况下能有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以预防有效量将小于治疗有效量。
如本文所用，“受试者”或“个体”是哺乳动物。在一些实施方案中，“哺乳动物”包括人、非人灵长类动物、家畜和农场动物，以及动物园、运动或宠物动物，如狗、马、兔、牛、猪、仓鼠、沙鼠、小鼠、雪貂、大鼠、猫、猴等。在一些实施方案中，受试者是人。
用于过继细胞疗法的细胞的施用方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞疗法方法描述于例如授予Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；授予Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat RevClin Oncol.8(10):577-85。参见例如，Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
1.要治疗的受试者和适应症
要治疗的疾病包括与BCMA相关的任何疾病或障碍或者其中特异性表达BCMA和/或其中已经靶向BCMA以进行治疗的任何疾病或障碍(本文中还可互换地称为“BCMA相关疾病或障碍”)。与BCMA表达相关的癌症包括血液恶性肿瘤，如多发性骨髓瘤、华氏巨球蛋白血症以及霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤二者。关于BCMA的综述，参见Coquery等人,Crit RevImmunol.,2012,32(4):287-305。由于BCMA已经参与介导肿瘤细胞存活，因此它是癌症疗法的潜在靶标。先前已经描述过含有小鼠抗人BCMA抗体的嵌合抗原受体和表达此类嵌合受体的细胞。参见Carpenter等人,Clin Cancer Res.,2013,19(8):2048-2060。
在一些实施方案中，与BCMA相关的疾病或障碍是B细胞相关障碍。在一些实施方案中，与BCMA相关的疾病或障碍是选自以下中的一种或多种疾病或病症：胶质母细胞瘤、淋巴瘤样肉芽肿病、移植后淋巴增生性障碍、免疫调节性障碍、重链疾病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性、或意义不明的单克隆丙种球蛋白病。
在一些实施方案中，与BCMA相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。此类自身免疫疾病或障碍包括但不限于系统性红斑狼疮(SLE)、狼疮性肾炎、炎性肠病、类风湿性关节炎(例如，幼年型类风湿性关节炎)、ANCA相关的血管炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、自身免疫性血小板减少症、恰加斯氏病(Chagas’disease)、格雷夫斯病(Grave’s disease)、韦格纳肉芽肿病(Wegener’sgranulomatosis)、结节性多动脉炎、舍格伦综合征(Sjogren’s syndrome)、寻常型天疱疮、硬皮病、多发性硬化症、银屑病、IgA肾病、IgM多发性神经病变、血管炎、糖尿病、雷诺氏综合征(Reynaud’s syndrome)、抗磷脂综合征、古德帕斯丘氏病(Goodpasture’s disease)、川崎病、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力或进行性肾小球性肾炎。
在某些疾病和病症中，BCMA在恶性细胞和癌症上表达。在一些实施方案中，所述癌症(例如表达BCMA的癌症)是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述癌症(例如，表达BCMA的癌症)是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。本文所考虑的淋巴瘤包括但不限于伯基特淋巴瘤(例如，地方性伯基特淋巴瘤或散发性伯基特淋巴瘤)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样B细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)或套细胞淋巴瘤(MCL)。此处考虑的白血病包括但不限于慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。本文还考虑浆细胞恶性肿瘤，包括但不限于多发性骨髓瘤(例如，非分泌性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤)或浆细胞瘤。在一些实施方案中，所述疾病或病症是多发性骨髓瘤(MM)，如复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是浆细胞瘤，如髓外浆细胞瘤。在一些实施方案中，所述受试者不患有浆细胞瘤，如髓外浆细胞瘤。可以被治疗的与BCMA相关的疾病、障碍或病症(例如，表达BCMA的癌症)包括但不限于神经母细胞瘤、肾细胞癌、结肠癌、结直肠癌、乳腺癌、上皮鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、胃癌、脑癌、肺癌、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、肾上腺癌和头颈癌。
在一些实施方案中，所述方法可以鉴定患有、怀疑患有或有风险患上与BCMA相关的疾病或障碍的受试者。因此，提供了用于鉴定患有与BCMA表达升高相关的疾病或障碍的受试者以及选择他们进行表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞治疗的方法。
在一些方面，例如，可以对受试者筛选与BCMA表达升高相关的疾病或障碍(如表达BCMA的癌症)的存在。在一些实施方案中，所述方法包括筛选或检测BCMA相关疾病(例如肿瘤或癌症，如多发性骨髓瘤)的存在。因此，在一些方面，可以从怀疑患有与BCMA表达升高相关的疾病或障碍的患者获得样品，并对其测定BCMA的表达水平。在一些方面，可以选择测试为对于BCMA相关疾病或障碍呈阳性的受试者进行通过本发明方法的治疗，并且可以向其施用治疗有效量的如本文所述的包含结合BCMA的重组受体(例如CAR)的工程化细胞或其药物组合物。
2.先前疗法
在一些实施方案中，在开始施用工程化细胞之前，受试者已接受过一种或多种先前疗法。在一些方面，要根据所提供的方法和用途治疗的受试者包括已接受过一种或多种先前疗法的受试者。在一些方面，要根据所提供的方法和用途待治疗的受试者包括已接受过一种或多种先前疗法并且在一种或多种先前疗法后复发和/或变得其难治的受试者。在一些实施方案中，所述受试者已接受过至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20种或更多种先前疗法。在一些实施方案中，所述受试者已接受过至少3、4、5、6、7、8、9、10种或更多种先前疗法。在一些实施方案中，任何一种或多种先前疗法是BCMA定向疗法，如BCMA定向抗骨髓瘤疗法。
在一些实施方案中，受试者在施用工程化细胞之前已接受过BCMA定向疗法。在一些实施方案中，在开始施用工程化细胞之前，受试者已接受过1、2或3种先前BCMA定向疗法。在一些实施方案中，受试者已接受过一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：T细胞接合剂(TCE)疗法、抗体-药物缀合物(ADC)疗法和表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)疗法。在一些实施方案中，受试者已接受过一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：BCMA定向T细胞接合剂(TCE)疗法、BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)疗法和BCMA定向CAR T细胞疗法。在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法包含单克隆抗体。在一些方面，示例性的先前BCMA定向疗法包括但不限于以下文献中描述的那些：Mullard等人,Nat Rev Drug Discov.2019年7月；18(7):481-484；Duell等人,(2019)Clin.Pharmacol.Ther.,106:781-791；O’Donnell等人,Ther Adv Hematol.2017年2月；8(2):41–53；Borrello等人,J Clin Invest.2019；129(6):2175-2177；Lin等人Molecular Cancer(2019)18:154；以及Steiner等人,(2020)简报-Magazine of European Medical Oncology13:43–49，或本文所述的任何BCMA定向疗法。
在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法是抗BCMA单克隆抗体。示例性的抗BCMA单克隆抗体包括SEA-BCMA，其是一种非岩藻糖基化的单克隆抗体(参见例如，Van Epps等人,Cancer Res 2018年7月1日(78)(增刊13)3833；Abdallah等人,Journal of ClinicalOncology 2019 37:15_增刊,TPS8054-TPS8054)。
在任何实施方案中的一些中，受试者对一种或多种先前疗法没有反应，在其后患有持续性或复发性疾病，或者是其难治的或变得其难治。在一些方面，受试者对一种或多种先前疗法复发或是其难治的，例如，在施用表达本文所述的BCMA结合重组受体(例如，BCMA结合CAR)的细胞的细胞疗法时或之前。在一些方面，受试者对一种或多种先前BCMA定向疗法没有反应，在其后复发，或是其难治的。在一些实施方案中，要根据所提供的方法或用途治疗的受试者包括对一种或多种先前BCMA定向疗法没有反应、在其后复发和/或是其难治的受试者。在一些方面，BCMA定向疗法包括以下一种或多种：T细胞接合剂(TCE)疗法、抗体-药物缀合物(ADC)疗法和CAR T细胞疗法，如本文所述的任何疗法。在一些方面，要根据所提供的实施方案治疗的受试者包括在本文所述的一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的受试者。
在任何实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的包含本文所述的BCMA结合CAR的工程化T细胞之前为或约18个月、1年、9个月、6个月或3个月内，在先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的包含本文所述的BCMA结合CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，在先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的包含本文所述的BCMA结合CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，在先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。在任何实施方案中的一些中，受试者在施用所述剂量的包含本文所述的BCMA结合CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，在先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
a.T细胞接合剂(TCE)
在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法是T细胞接合剂(TCE)疗法。在一些方面，TCE是同时结合肿瘤细胞抗原表面和T细胞受体(TCR)复合物成分以诱导T细胞介导的携带靶表面抗原的肿瘤细胞的杀伤的抗体。在一些方面，在形成溶细胞突触后，T细胞释放穿孔素和颗粒酶B，最终导致肿瘤细胞凋亡。T细胞的活化可以导致细胞因子的瞬时释放，所述细胞因子与其他免疫细胞接合并扩大对肿瘤组织的免疫反应并且可以导致T细胞的增殖和肿瘤细胞的连续杀伤。示例性TCE疗法包括双特异性T细胞接合剂(BiTE)疗法和双特异性抗体(参见例如，Mullard等人,Nat Rev Drug Discov.2019年7月；18(7):481-484；Duell等人,(2019)Clin.Pharmacol.Ther.,106:781-791；O’Donnell等人,Ther Adv Hematol.2017年2月；8(2):41–53)。在一些实施方案中，BCMA定向TCE靶向BCMA和CD3，例如BiTE，其包括两个单链可变片段(scFv)，一个针对BCMA，与另一个单链可变片段融合，所述另一个单链可变片段针对T淋巴细胞上发现的CD3抗原。
示例性的先前BCMA定向TCE包括但不限于AMG 420/BI 836909(抗BCMA/抗CD3BiTE；Hipp等人,Leukemia(2017)31:1743-1751；Topp等人Journal of ClinicalOncology.2019.37(15)增刊,8007-8007)、AMG 701(半衰期延长的抗BCMA/抗CD3 BiTE；Cho等人Blood.2019.134(增刊_1):135；Cho等人,Clinical Lymphoma,Myeloma andLeukemia,19(10):e54)、CC-93269(抗BCMA/抗CD3双特异性抗体；Costa等人ASH AnnualMeeting.2019.摘要#143)、JNJ-64007957(抗CD3/抗BCMA双特异性单克隆抗体；Girgis等人Blood.2016.128(22):5668)、PF-06863135(抗CD3/抗BCMA双特异性单克隆抗体；Lesokhin等人,Blood(2018)132(增刊1):3229；Raje等人,Blood(2019)134(增刊_1):1869)和REGN5458(抗BCMA/抗CD3 BiTE；Cooper等人Blood.2019.134(增刊_1):3176)。
b.抗体-药物缀合物(ADC)
在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法是抗体-药物缀合物(ADC)疗法。ADC包括重组单克隆抗体(mAb)，其通过具有不稳定键的化学接头(例如合成性化学接头)与生物活性药物(也称为“有效载荷”，例如细胞毒性化学物质)共价结合。在一些方面，ADC凭借抗体部分识别并结合靶细胞(如肿瘤细胞)表面上的抗原，然后被吸收或内化。ADC内化后，生物活性药物(例如细胞毒性化学物质)在溶酶体中释放，并运输到细胞溶质中以杀伤靶细胞。在一些方面，ADC还可以触发对靶细胞(例如肿瘤细胞)的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用。在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法包括ADC，其包含对BCMA具有特异性、结合和/或靶向BCMA的抗体或其抗原结合片段。
示例性的先前BCMA定向ADC包括但不限于贝兰他单抗莫福汀(GSK2857916)、MEDI2228、CC-99712和AMG 224。在一些实施方案中，先前BCMA定向ADC是贝兰他单抗莫福汀(GSK2857916)，其含有人源化的非岩藻糖基化的IgG1 mAb，其与BCMA具有高亲和力(KD为0.5nM)，其经由不可切割接头马来酰亚胺基己酰与抗有丝分裂剂单甲基澳瑞他汀F缀合(参见例如，Tai等人Blood.2014.123(20):3128–3138)。在一些实施方案中，先前BCMA定向ADC是MEDI2228，其含有经由蛋白酶可切割的吡咯并苯并二氮杂
Figure BDA0003980595070000211
接头缀合的抗BCMA抗体(参见例如；Kinneer等人Blood.2017.130(增刊_1):3153；Xing等人,Blood(2019)134(增刊_1):1817)。在一些实施方案中，先前BCMA定向ADC是CC-99712。在一些实施方案中，先前BCMA定向ADC是AMG 224(抗BCMA–MCC–DM1；抗BCMA是抗人BCMA IgG1抗体；MCC是与抗体中赖氨酸残基缀合的不可切割接头4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯；并且DM1是与MCC缀合的安沙霉素抗生素美登素的半合成衍生物；参见例如，O'Donnell等人,Ther AdvHematol.2017年2月；8(2):41–53)。
c.嵌合抗原受体(CAR)表达T细胞
在一些实施方案中，先前BCMA定向疗法是嵌合抗原受体表达T细胞(CAR T细胞)疗法。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包括工程化细胞，例如表达任何抗BCMA重组受体的工程化T细胞。
示例性的先前BCMA定向CAR T细胞疗法包括但不限于Idecabtagene vicliuel(Ide-cel，bb2121；Raje等人N Engl J Med.2019.380:1726-1737)、JNJ-4528(Madduri等人Blood.2019.134(增刊_1):577)/LCAR-B38M(Wang等人Blood.2019.134(增刊_1):579)、P-BCMA-101(Costello等人Blood.2019.134(增刊_1):3184)、bb21217(Berdeja等人Blood.2019.134(增刊_1):927)、CT103A(Li等人Blood.2019；134(增刊_1):929)、CT053(Ji等人,Blood.2019；134(增刊_1):4435)、MTV273、CART-BCMA、C-CAR088(Yao等人Blood.2019；134(增刊_1):50)或以下文献中描述的任何BCMA定向CAR T疗法：例如，WO2018/085690；WO 2016/094304；WO 2018/085690；WO 2016/014789；WO 2019/108900；WO/2018/014038；WO 2017/173256；WO 2016/090320；WO 2016/090327；WO 2019/090003；WO2017/025038；US 2016/0046724；US 2017/0183418；Fu等人,Blood.2019；134:3154；Cohen等人J.Clin.Invest.2019.129(6):2210-2221；Ali等人,Blood2016；128(13):1688 1700；Borrello等人,J Clin Invest.2019；129(6):2175-2177；Lin等人Molecular Cancer(2019)18:154；以及Steiner等人,(2020)简报-Magazine of European Medical Oncology13:43–49。
在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含表达本文所述的任何BCMA结合重组受体(例如第III部分所述的任何抗BCMA CAR)的工程化细胞。在一些方面，先前BCMA定向CAR T疗法包含表达WO 2019/090003中所述的抗BCMA CAR的工程化细胞。在一些方面，先前BCMA定向CAR T疗法包含表达抗BCMA CAR的工程化细胞，所述抗BCMA CAR含有抗原结合结构域，所述抗原结合结构域是scFv，所述scFv含有源自WO 2016/090320、WO 2016/090327、WO 2010/104949、WO 2017/173256或Carpenter等人,Clin Cancer Res.,2013,19(8):2048-2060(其各自通过引用以其整体特此并入)中所述的抗体或抗原结合片段的重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区。
在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMA CAR，其包含：VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和/或包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；和/或SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸残基22-493；和/或由SEQ ID NO:266编码的序列。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMA CAR，其包含：VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和/或包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；和/或SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸残基22-493；和/或由SEQ ID NO:264编码的序列。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMA CAR，其包含SEQ ID NO:265所示序列的成熟多肽序列。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMACAR，其包含SEQ ID NO:263所示序列的成熟多肽序列。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMA CAR，其包含SEQ ID NO:312所示的序列。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法是或包含Idecabtagene vicleucel(Ide cel，bb2121)(参见例如，Raje等人N Engl J Med.2019.380:1726-1737；WO 2018/085690；WO 2016/094304；WO2018/085690或WO 2016/014789；其各自通过引用以其整体特此并入)。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法是或包含抗BCMA CAR，其序列示于WO 2018/085690、WO 2016/094304、WO 2018/085690或WO 2016/014789中，其各自通过引用以其整体特此并入。
在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含作为多价CAR的抗BCMACAR，如结合双表位的CAR，例如，包含两种不同单结构域抗体(例如VHH，其针对BCMA上的不同表位)的CAR。在一些方面，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含抗BCMA CAR，其结合BCMA的选自SEQ ID NO:303-309所示序列的一个或多个表位。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法是或包含JNJ-4528(也称为LCAR-B38M)(参见例如，Madduri等人Blood.2019.134(增刊_1):577；Wang等人Blood.2019.134(增刊_1):579；Xu等人PNAS2019.116(19)9543-9551；Zhao等人,Journal of Hematology&Oncology 11:141(2018)；WO2018/028647；WO 2017/025038；其各自通过引用以其整体特此并入)。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含CAR，其包含从SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基，和/或SEQ ID NO:2675-302中任一个所示序列的成熟多肽序列，和/或由编码SEQ ID NO:265-302中任一个所示CAR的核苷酸序列编码的CAR，和/或WO 2018/028647或WO 2017/025038(其各自通过引用以其整体特此并入)中描述的任一种。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含CAR，其包含从SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基。
在一些方面，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含作为细胞外结合结构域的Centyrin，而不包含单链可变片段(scFv)。在一些方面，Centyrin是经修饰的III型纤连蛋白(FN3)结构域蛋白，具有高特异性和大范围的结合亲和力，但比scFv小(参见例如，Goldberg等人,Protein Eng Des Sel.2016年12月；29(12):563-572)。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法是或包含P-BCMA-101(Costello等人Blood.2019.134(增刊_1):3184；Fu等人,Blood.2019；134:3154；WO 2018/014038和WO 2019/173636，其各自通过引用以其整体特此并入)。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含CAR，其包含SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334，和/或SEQ ID NO:310所示序列的成熟多肽序列，和/或由编码SEQ ID NO:310中任一个所示CAR的核苷酸序列编码的CAR，和/或WO2018/014038或WO 2019/173636(其各自通过引用以其整体特此并入)中描述的任一种。在一些实施方案中，先前BCMA定向CAR T细胞疗法包含CAR，其包含SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334。
对于已接受过先前过继细胞疗法(如先前BCMA定向重组受体(例如CAR)表达T细胞疗法(CAR T细胞疗法))的受试者，所提供的方法和用途还包括评估自要治疗受试者获得的样品中的先前BCMA定向重组受体(如CAR)的存在、量和/或水平。在一些方面，对先前BCMA定向重组受体(例如CAR)的存在、量和/或水平的评估可以用于检测表达先前施用的重组受体表达细胞的受试者中的现存细胞，并且如果需要，选择先前未用先前重组受体工程化的细胞或不表达先前重组受体的细胞。在一些方面，此类方法可以用于减少或防止已经用先前重组受体(例如CAR)工程化的细胞的再工程化。
在任何实施方案中的一些中，如果表达先前BCMA定向CAR的细胞不存在于从受试者获得的样品中，或者编码先前BCMA定向CAR的构建体中存在的核苷酸序列不存在于从受试者获得的样品中(例如，在为产生用于工程化以达本文提供的BCMA结合重组受体的细胞而获得的样品中)，则选择受试者施用工程化以表达本文提供的BCMA结合重组受体的细胞。在一些方面，即使表达先前BCMA定向CAR的细胞存在于从受试者获得的样品中，或者编码先前BCMA定向CAR的构建体中存在的核苷酸序列存在于从受试者获得的样品中，仍选择受试者施用工程化以表达本文提供的BCMA结合重组受体的细胞。在一些方面，如果表达先前BCMA定向CAR的细胞存在于从受试者获得的样品中，或者编码先前BCMA定向CAR的构建体中存在的核苷酸序列存在于从受试者获得的样品中，则所述方法和用途可以涉及选择不包含先前BCMA定向CAR的T细胞，以产生所述剂量的包含本文提供的BCMA结合重组受体的工程化T细胞。在任何实施方案中的一些中，如果表达先前BCMA定向CAR的细胞存在于从受试者获得的样品中，或者编码先前BCMA定向CAR的构建体中存在的核苷酸序列存在于从受试者获得的样品中，则表达先前BCMA定向CAR或包含编码先前BCMA定向CAR的核苷酸序列的细胞被排除在工程化之外，例如工程化以表达本文提供的BCMA结合重组受体，和/或被排除在施用之外，例如，被排除在用于施用给受试者的组合物之外。
在一些方面，对于已接受过先前BCMA定向重组受体表达细胞(例如，CAR T细胞)疗法的受试者，评估含有从受试者获得的原代细胞(例如，用于工程化所述细胞以表达如本文所述的BCMA特异性CAR，如下文第III部分所述)的样品中是否存在先前重组受体。
在一些方面，可以通过检测先前重组受体的表达或编码先前重组受体的核酸序列的存在来评估来自要治疗受试者的样品。在一些方面，可以使用能够检测来自生物样品中的蛋白质或核酸的存在、不存在、水平和/或量的任何方法来评估先前重组受体的存在。在一些实施方案中，可以使用任何方法来评估先前重组受体的存在，所述方法可以用于评估或确定在向受试者施用工程化细胞或细胞组合物之后工程化细胞的药代动力学参数、生物利用度、持久性、扩增和/或数量，所述受试者例如为患有要治疗的疾病或病症、已被施用先前重组受体表达细胞疗法(例如先前BCMA定向CAR T细胞疗法)的受试者。
在一些方面，基于先前重组受体的表达，评估来自要根据所提供的实施方案治疗的受试者的样品中先前用先前重组受体工程化的细胞的存在和/或量。可以使用例如基于核酸的方法，如定量PCR(qPCR)；或基于细胞的方法，如流式细胞术；或其他测定，如免疫测定ELISA或基于色谱/质谱的测定来评估来自受试者的样品中先前用先前重组受体工程化的细胞的存在和/或量。先前重组受体或表达先前重组受体的细胞可以通过基于流式细胞术或基于定量PCR的方法检测，并使用已知方法外推至总细胞数。参见例如，Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)；Park等人,Molecular Therapy 15(4):825–833(2007)；Savoldo等人,JCI 121(5):1822-1826(2011)；Davila等人,(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Davila等人,Oncoimmunology 1(9):1577-1583(2012)；Lamers,Blood 2011117:72-82；Jensen等人,Biol Blood Marrow Transplant 2010年9月；16(9):1245–1256；Brentjens等人,Blood 2011 118(18):4817-4828。
用于评估先前重组受体的存在的示例性基于核酸的方法包括基于聚合酶链式反应的方法，如定量PCR(qPCR)、数字PCR(dPCR)或微滴式数字PCR(ddPCR)。在一些方面，可以使用探针或引物检测特定序列的存在、不存在和/或量，所述探针或引物可以特异性结合、检测、识别和/或扩增编码先前重组受体的核酸序列的全部或一部分。在一些实施方案中，用于qPCR或其他基于核酸的方法的引物或探针对结合、识别和/或扩增编码重组蛋白(例如，先前重组蛋白)的核酸、和/或质粒和/或载体的其他组分或元件具有特异性，所述其他组分或元件包括调节元件(例如启动子、转录和/或转录后调节元件或反应元件)或标记物(例如替代标记物)。在一些方面，用于评估先前重组受体的存在的示例性基于核酸的方法包括高通量RNA测序(RNA-seq)或用于评估样品中核酸表达的其他高通量方法。
在一些实施方案中，对于已接受过先前BCMA定向重组受体表达细胞(例如CAR-T细胞)疗法的受试者，使用探针或引物通过qPCR评估含有从受试者获得的原代细胞的样品，所述探针或引物可以检测和/或扩增对先前BCMA定向重组受体或用于工程化的核酸的其他组分(例如调节元件、病毒序列等)具有特异性的序列。在一些方面，如果来自受试者的样品含有低水平的先前重组受体，例如低于qPCR检测的先前重组受体的检测下限(LLOD)，则根据本文所提供的方法和用途，将来自受试者的原代细胞用于BCMA特异性CAR的工程化。
用于评估先前重组受体的存在的示例性基于细胞或蛋白质的方法包括流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、放射免疫测定(RIA)、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹、侧向流测定、免疫组织化学、蛋白质阵列或免疫PCR(iPCR)。
在一些实施方案中，对于已接受过先前BCMA定向重组受体表达细胞(例如CAR T细胞)疗法的受试者，使用试剂(如分离或纯化的抗原，例如重组表达的抗原，例如重组BCMA-Fc(在其C末端与IgG的Fc区融合的可溶性人BCMA))通过流式细胞术评估含有从受试者获得的原代细胞的样品。在一些方面，如果来自受试者的样品含有低水平的先前重组受体，例如低于使用BCMA-Fc通过流式细胞术检测的先前重组受体的检测下限(LLOD)，则根据本文所提供的方法和用途，将来自受试者的原代细胞用于BCMA特异性CAR的工程化。
d.其他先前疗法和病史
在一些方面，要根据所提供的方法和用途治疗的受试者是在一种或多种先前疗法后复发或是其难治的受试者。在一些方面，所述先前疗法包括使用以下各项的治疗：自体干细胞移植(ASCT)、免疫调节剂、蛋白酶体抑制剂、以及抗CD38抗体；除非所述受试者不是一种或多种所述疗法的候选者或者忌用一种或多种所述疗法。在一些方面，所述受试者已经复发或是三种或更多种先前疗法难治的，包括使用选自以下的三种或更多种疗法的治疗：(1)自体干细胞移植，(2)单独或组合的蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂，以及(3)作为组合疗法的一部分或单一疗法的抗CD38单克隆抗体；除非所述受试者不是一种或多种所述疗法的候选者或忌用一种或多种所述疗法。在一些实施方案中，所述免疫调节剂选自沙利度胺、来那度胺或泊马度胺。在一些实施方案中，所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米或伊沙佐米。在一些实施方案中，所述抗CD38抗体是或包含达雷木单抗。在一些实施方案中，除非疾病进展对方案有最佳反应，否则受试者必须已经经受每个方案的至少2个连续的治疗周期。
在一些方面，可以针对例如来自受试者的生物样品(如血液或血清)中的可溶性BCMA(sBCMA)水平筛选受试者。在一些方面，可以针对在用细胞疗法治疗之前的sBCMA水平筛选受试者。在一些方面，所述方法包括在患有与BCMA表达相关的疾病或障碍(例如，肿瘤或癌症，如多发性骨髓瘤)的受试者中筛选或检测sBCMA的水平或量。在一些方面，可以从怀疑患有与BCMA相关的疾病或障碍的患者获得样品，并且例如使用检测可溶性蛋白水平的测定(如酶联免疫吸附测定(ELISA))来测定sBCMA的水平或量。在一些方面，在患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者中，sBCMA水平可能与骨髓活检中浆细胞的比例相关。在一些方面，在患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者中，sBCMA水平可能与对治疗的反应降低或较短的总存活期或无进展存活期相关(参见例如，Ghermezi等人,Haematologica 2017,102(4):785–795)。在一些方面，展现出低sBCMA水平的受试者可以被选择进行本发明方法的治疗，并且可以向其施用治疗有效量的如本文所述的包含结合BCMA的重组受体(例如CAR)的工程化细胞或其药物组合物。在一些方面，可以选择展现出高sBCMA水平的受试者进行本发明方法的治疗，并且可以向其施用治疗有效量的如本文所述的包含结合BCMA的重组受体(例如CAR)的工程化细胞或其药物组合物，其中所述CAR的抗原结合结构域对结合可溶性BCMA具有低亲和力。在一些实施方案中，在sBCMA存在下，CAR的抗原结合结构域结合细胞表面BCMA的能力未被降低或未被明显降低。
在一些实施方案中，例如在用另一种BCMA特异性抗体和/或表达BCMA靶向嵌合受体的细胞和/或其他疗法(包括化疗、辐射和/或造血干细胞移植(HSCT)(例如同种异体HSCT或自体HSCT))治疗之后，受试者患有顽固性或复发性疾病。在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种BCMA靶向疗法产生抗性，但所述施用仍有效地治疗所述受试者。在一些实施方案中，受试者尚未复发，但是被确定为具有复发风险(例如具有高复发风险)，因此预防性地施用化合物或组合物，例如以降低复发的可能性或防止复发。
在一些实施方案中，所述受试者是有资格进行移植，如有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)的受试者。在一些此类实施方案中，在施用如本文所提供的表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞、和/或包含所述工程化细胞的组合物之前，受试者尽管符合条件但先前尚未接受过移植。
在一些实施方案中，受试者是没有资格进行移植，如没有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)的受试者。在一些此类实施方案中，根据本文提供的实施方案，向这样的受试者施用表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞、和/或包含所述工程化细胞的组合物。
在一些实施方案中，所述方法可以涉及基于特定标准、诊断或适应症，包括或排除进行使用所提供的抗BCMA抗体、重组受体和/或包含此类受体的细胞的疗法的特定受试者。在一些实施方案中，在施用所述剂量的细胞或治疗前淋巴细胞清除化疗时，所述受试者未患有活动性浆细胞白血病(PCL)或其病史。在一些实施方案中，如果受试者在施用时患有活动性PCL或其病史，则可以将受试者排除在根据所提供的方法治疗之外。在一些实施方案中，如果受试者在施用时患上PCL(如继发性PCL)，则可以将受试者排除在根据所提供的方法治疗之外。在一些实施方案中，对标准、诊断或适应症的评估可以在筛选受试者根据所提供的方法治疗的资格或适用性时、在治疗方案的各个步骤、在接受淋巴细胞清除疗法时、和/或在开始施用工程化细胞或其组合物时或之前立即进行。
3.工程化细胞的施用
在一些实施方案中，所述方法涉及过继细胞疗法，其中向受试者施用表达结合BCMA的重组受体(例如CAR)的基因工程化细胞。这种施用能以靶向BCMA的方式促进细胞激活(例如，T细胞激活)，使得疾病或障碍的细胞被靶向而遭到破坏。
因此，所提供的方法和用途包括用于过继细胞疗法的方法和用途。在一些实施方案中，所述方法包括向受试者(如患有、有风险患上或怀疑患有所述疾病、病症或障碍的受试者)施用所述细胞或含有所述细胞的组合物。在一些实施方案中，向患有要例如通过过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)治疗的特定疾病或病症的受试者施用所述细胞、群体和组合物。在一些实施方案中，向受试者(如患有或有风险患上所述疾病或病症的受试者)施用所述细胞或组合物。在一些方面，所述方法由此治疗所述疾病或病症(例如，改善所述疾病或病症的一种或多种症状)，如通过减轻表达BCMA的癌症中的肿瘤负荷。
用于过继细胞疗法的细胞的施用方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如授予Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；授予Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat RevClin Oncol.8(10):577-85。参见例如，Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如过继细胞疗法，例如过继T细胞疗法)通过自体转移进行，其中从要接受所述细胞疗法的受试者或从源自这样的受试者的样品中分离和/或以其他方式制备所述细胞。因此，在一些方面，所述细胞源自需要治疗的受试者(例如患者)，并且在分离和处理后向同一受试者施用所述细胞。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如过继细胞疗法，例如过继T细胞疗法)通过同种异体转移进行，其中从除了将要接受或最终接受所述细胞疗法的受试者以外的受试者(例如第一受试者)分离和/或以其他方式制备所述细胞。在此类实施方案中，然后向同一物种的不同受试者(例如第二受试者)施用所述细胞。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者与所述第一受试者表达相同的HLA类别或超类型。
在一些实施方案中，施用所述细胞、细胞群或组合物的受试者是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，施用所述细胞、细胞群或组合物的受试者是非人灵长类动物(NHP)。在一些实施方案中，所述非人灵长类动物是猴(例如食蟹猴)或猿。所述受试者可以是雄性或雌性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青少年、成年和老年受试者。在一些实施方案中，所述受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物(例如小鼠、大鼠等)。在一些例子中，所述患者或受试者是用于疾病、过继细胞疗法和/或用于评估毒性结局(如细胞因子释放综合征(CRS))的经验证的动物模型。
表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞、和/或包含所述工程化细胞的组合物可以通过任何合适的方式施用，例如通过注射，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房内注射、结膜下注射、结膜下注射、眼球筋膜下(sub-Tenon)注射、眼球后注射、眼球周注射或后近巩膜(posterior juxtascleral)递送。在一些实施方案中，将它们通过肠胃外、肺内和鼻内以及(如果需要局部治疗)病灶内施用来施用。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、颅内、胸腔内或皮下施用。给药和施用可以部分取决于施用是短期的还是长期的。各种给药时间表包括但不限于在不同时间点的单次或多次施用、推注施用和脉冲输注。
为了预防或治疗疾病，工程化细胞或包含其的组合物的适当剂量可以取决于要治疗的疾病类型、工程化细胞或包含其的组合物的类型、疾病的严重程度和病程、施用工程化细胞或包含其的组合物是出于预防目的还是治疗目的、先前疗法、患者的临床病史和对重组受体或细胞的反应以及主治医师的决断。在一些实施方案中，适合地一次性或在一系列治疗中向患者施用所述组合物和分子和细胞。
在一些实施方案中，所述治疗不诱导受试者对疗法的免疫反应，和/或诱导这样的反应没有达到阻止疾病或病症的有效治疗的程度。在一些方面，免疫原性和/或移植物抗宿主反应的程度小于用不同但可比较的治疗所观察到的程度。例如，与包含结合类似的(例如重叠的)表位和/或与所述抗体竞争结合BCMA的不同抗体(如小鼠或猴或兔或人源化抗体)的CAR相比，在使用表达CAR(其包含所提供的抗BCMA抗体)细胞的过继细胞疗法的情况下，在一些实施方案中免疫原性的程度降低。
在某些实施方案中，在含有所述重组受体的基因工程化细胞的情境下，向受试者施用如下范围的细胞：为或约10万至为或约1000亿个细胞和/或每千克受试者体重的该细胞量的范围，例如10万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约50000万个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞、或任两个前述值限定的范围)、100万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约50000万个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞、或任两个前述值限定的范围)，如为或约1000万至为或约1000亿个细胞(例如，为或约2000万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约3000万个细胞、为或约4000万个细胞、为或约5000万个细胞、为或约6000万个细胞、为或约7000万个细胞、为或约8000万个细胞、为或约9000万个细胞、为或约100亿个细胞、为或约250亿个细胞、为或约500亿个细胞、为或约750亿个细胞、为或约900亿个细胞、或任两个前述值限定的范围)，并且在一些情况下为或约10000万个细胞至为或约500亿个细胞(例如，为或约12000万个细胞、为或约15000万个细胞、为或约25000万个细胞、为或约30000万个细胞、为或约35000万个细胞、为或约45000万个细胞、为或约60000万个细胞、为或约65000万个细胞、为或约80000万个细胞、为或约90000万个细胞、为或约12亿个细胞、为或约30亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约450亿个细胞)或在这些范围和/或每千克受试者体重的这些范围之间的任何值。同样，剂量可以根据疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，所述方法包括施用一定剂量的所述工程化细胞或包含一定剂量的所述工程化细胞的组合物。在一些实施方案中，所述工程化细胞或包含工程化细胞的组合物可用于治疗方案中，其中所述治疗方案包括施用一定剂量的所述工程化细胞或包含一定剂量的所述工程化细胞的组合物。在一些实施方案中，所述剂量可以包含例如特定数量或范围的重组受体表达T细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如本文所述的任何数量的此类细胞。在一些实施方案中，可以施用含有一定剂量的所述细胞的组合物。在一些方面，细胞群或细胞组合物中CAR表达(CAR+)细胞的数量、量或比例可以通过检测替代标记物(例如，通过流式细胞术或其他方式)或通过检测标记的分子(如标记的抗原)的结合来评估，所述标记的分子可以与本文提供的受体特异性地结合。
与所提供的方法有关，所施用的细胞是被工程化以表达BCMA结合(抗BCMA)重组受体(例如CAR)的免疫细胞。在一些实施方案中，所述免疫细胞是T细胞。在一些实施方案中，所施用的细胞是CD4+T细胞。在一些实施方案中，所施用的细胞是CD8+T细胞。在一些实施方案中，所施用的细胞是CD4+T细胞和CD8+T细胞的组合，如CD4+CAR T细胞和CD8+CAR T细胞的组合，其在一些方面位于同一容器或细胞组合物或悬浮液内。在一些例子中，所施用的CD4+细胞与CD8+细胞(CD4:CD8)的比率(如所述悬浮液或组合物或容器内的比率)是1:10、1:9、1:8、1:7、1:6、1:5、1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1。在一些实施方案中，所述比率在可容忍的错误率内是在1:3与3:1之间、或在为或约1:4与为或约4:1之间、或在为或约1:3与为或约3:1之间、或在为或约1:2与为或约2:1之间、或任何此类比率。在一些实施方案中，所述比率是为或约1:3至为或约3:1。在一些实施方案中，所述比率是为或约1:2至为或约2:1。在一些方面中，在接受治疗的受试者和/或从中获取样品并处理以产生细胞组合物的受试者中，CD4+CAR-T细胞与CD8+CAR-T细胞的比率或CD4+与CD8+细胞的比率在所需的范围内，如在为或约1:4与为或约4:1之间、或在为或约1:3与为或约3:1之间、或在为或约1:2与为或约2:1之间，或者对于给定百分比的此类受试者(如至少65％、至少70％、至少75％或至少80％或至少85％或至少90％或至少95％的此类受试者)，在此类所需的比率内。
在一些实施方案中，例如在受试者是人的情况下，所述剂量包含大于或大于约1x106个总重组受体(例如，CAR)表达(CAR+)细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)且少于或少于约2x109个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如在为或约1.0x107至为或约1.2x109个此类细胞的范围内(如为或约1.0x107、1.5x107、2.0x107、2.5x107、5x107、1.5x108、3x108、4.5x108、6x108、8x108或1.2x109个总此类细胞)，或任何两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，例如在受试者是人的情况下，所述剂量包含大于或大于约1x106个总重组受体(例如，CAR)表达(CAR+)细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)且少于或少于约2x109个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如在为或约2.5x107至为或约1.2x109个此类细胞的范围内(如为或约2.5x107、5x107、1.5x108、3x108、4.5x108、6x108、8x108或1.2x109个总此类细胞)，或任何两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约5x107个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约1.5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约3x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约4.5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约6x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约8x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。在一些实施方案中，例如，在受试者是人的情况下，所述剂量包含为或约1.2x109个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)。
在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含从为或约1x105至为或约2x109个总CAR表达(CAR+)T细胞、从为或约1x105至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x107个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约1x107个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约5x106个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约2.5x106个总CAR+T细胞、从为或约1x105至为或约1x106个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x107个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约1x107个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约5x106个总CAR+T细胞、从为或约1x106至为或约2.5x106个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约2.5x107个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约1x107个总CAR+T细胞、从为或约2.5x106至为或约5x106个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约2.5x107个总CAR+T细胞、从为或约5x106至为或约1x107个总CAR+T细胞、从为或约1x107至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x107至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约1x107至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约1x107至为或约2.5x107个总CAR+T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x107至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x107至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x107至为或约5x107个总CAR+T细胞、从为或约5x107至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约5x107至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约5x107至为或约1x108个总CAR+T细胞、从为或约1x108至为或约5x108个总CAR+T细胞、从为或约1x108至为或约2.5x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x108至为或约5x108个总CAR+T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含从为或约1.0x107至为或约8x108个总CAR+(CAR+)T细胞、从为或约1.0x107至为或约6.5x108个总CAR+T细胞、从为或约1.5x107至为或约6.5x108个总CAR+T细胞、从为或约1.5x107至为或约6.0x108个总CAR+T细胞、从为或约2.5x107至为或约6.0x108个总CAR+T细胞、或者从为或约5.0x107至为或约6.0x108个总CAR+T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含从为或约0.5x108至为或约8x108个CAR+(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含从为或约1.5x108至为或约4.5x108个CAR+(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含从为或约1.5x108至为或约5.4x108个CAR+(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5x107个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.0x107个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约3x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约3.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约4.0x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约4.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5.0x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5.4x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约7.0x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约7.5x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约8x108个总CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.2x109个总CAR+细胞。
在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞包含在为或约2.5x107个CAR+(CAR+)T细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)与为或约1.2x109个CAR+T细胞、总T细胞或总PBMC之间，在为或约5.0x107个CAR+T细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)与为或约6.0x108个CAR+T细胞、总T细胞或总PBMC之间，在为或约5.0x107个CAR+T细胞与为或约4.5x108个CAR+T细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)之间，在为或约1.5x108个CAR+T细胞与为或约3.0x108个CAR+T细胞、总T细胞或总PBMC之间(每个都包含端值)。在一些实施方案中，所述数量参考CD3+或CD8+的总数，在一些情况下，也参考CAR+(CAR+)细胞。在一些实施方案中，所述剂量包含从或从约2.5x107至或至约1.2x109个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+CAR+细胞、从或从约5.0x107至或至约6.0x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+CAR+细胞、从或从约5.0x107至或至约4.5x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+CAR+细胞、或从或从约1.5x108至或至约3.0x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+CAR+细胞(每个都包含端值)。
在一些实施方案中，所述剂量的基因工程化细胞参考CD3+CAR+(CAR+)细胞或CD4+/CD8+CAR+(CAR+)细胞的总数。在一些实施方案中，所述剂量包含如下数量的基因工程化细胞：从或从约1.0x107至或至约1.2x109个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、从或从约1.5x107至或至约1.2x109个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、从或从约2.0x107至或至约1.2x109个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、从或从约2.5x107至或至约1.2x109个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、从或从约5.0x107至或至约6.0x108个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、从或从约5.0x107至或至约4.5x108个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞、或从或从约1.5x108至或至约3.0x108个CD3+或CD4+/CD8+总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞(每个都包含端值)。在一些实施方案中，所述剂量包含为或约1.0x107、1.5x107、2.0x107、2.5x107、5x107、1.5x108、3x108、4.5x108、6x108、8x108或1.2x109个CD3+或CD4+/CD8+个总T细胞或CD3+CAR+或CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量包含为或约2.5x107、5x107、1.5x108、3x108、4.5x108、6x108、8x108或1.2x109个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量包含为或约1.0x107、1.5x107、2.0x107、2.5x107、5x107、1.5x108、3x108、4.5x108、6x108、8x108或1.2x109个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5x107个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.5x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约3x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约4.5x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6.5x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约8x108个CD3+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.2x109个CD3+CAR+细胞。
在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.0x107个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.5x107个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约2.0x107个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约2.5x107个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5x107个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.5x108个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约3x108个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约4.5x108个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6x108个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约8x108个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.2x109个CD4+/CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约2.5x107个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约5x107个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.5x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约3x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约4.5x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约6.5x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约8x108个CD4+或CD8+CAR+细胞。在一些实施方案中，所述剂量是为或约1.2x109个CD4+或CD8+CAR+细胞。
在一些实施方案中，所述剂量的T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞或CD4+T细胞和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量的CD4+T细胞和CD8+T细胞的总量包含在为或约1x106与为或约2x109个之间的总CAR表达CD4+细胞和CAR表达CD8+细胞，例如在为或约2.5x107至为或约1.2x109个此类细胞的范围内，例如在为或约5x107至为或约4.5x108个此类细胞的范围内；如为或约1.0x107、为或约2.5x107、为或约2.0x107、为或约2.5x107、为或约5x107、为或约1.5x108、为或约3x108、为或约4.5x108、为或约6x108、为或约6.5x108、为或约8x108、或为或约1.2x109个总此类细胞，或任何两个前述值之间的范围内。在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量的CD8+T细胞(包括在包括CD4+T细胞和CD8+T细胞的剂量中)包含在为或约1x106与为或约2x109个总重组受体(例如，CAR)表达CD8+细胞，例如在为或约2.5x107至为或约1.2x109个此类细胞的范围内，例如在为或约5x107至为或约4.5x108个此类细胞的范围内；如为或约2.5x107、为或约5x107、为或约1.5x108、为或约3x108、为或约4.5x108、为或约6x108、为或约8x108、或为或约1.2x109个总此类细胞，或任何两个前述值之间的范围内。
在一些实施方案中，将所述剂量的细胞(例如，重组受体表达T细胞)作为单一剂量施用于受试者，或者在两周、一个月、三个月、六个月、1年或更长的时间段内仅施用一次。在一些实施方案中，向患者施用多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，用于施用的工程化细胞或用于施用的工程化细胞的组合物展现出指示细胞健康或与细胞健康一致的特性。在一些实施方案中，这种剂量的为或约或至少或至少约70％、75％、80％、85％或90％的CAR+细胞展现出指示细胞健康或生物活性CAR细胞的一种或多种特性或表型，如不存在凋亡标记物的表达。
在特定实施方案中，所述表型是或包括凋亡的不存在和/或细胞正在经历凋亡过程的指征。凋亡是程序性细胞死亡的过程，其包括一系列刻板的形态和生化事件，所述事件导致特征性的细胞变化和死亡，包括起泡、细胞收缩、核分裂、染色质凝聚、染色体DNA片段化和整体mRNA衰变。在一些方面，凋亡的早期阶段可以由某些半胱天冬酶(例如2、8、9和10)的激活来指示。在一些方面，凋亡的中期至晚期阶段的特征在于膜完整性的进一步丧失、染色质凝聚和DNA片段化，包括生化事件，如半胱天冬酶3、6和7的激活。
在特定实施方案中，所述表型是与程序性细胞死亡相关的一种或多种因子的阴性表达，所述一种或多种因子例如已知启动凋亡的促凋亡因子，例如死亡受体途径的成员、线粒体(固有)途径的激活成员(如Bcl-2家族成员，例如Bax、Bad和Bid)以及半胱天冬酶。在某些实施方案中，所述表型是不存在指示物(例如膜联蛋白V分子或通过TUNEL染色)，其当与细胞组合物一起孵育或接触细胞组合物时优先结合经历凋亡的细胞。在一些实施方案中，所述表型是或包括细胞中指示凋亡状态的一种或多种标记物的表达。在一些实施方案中，所述表型是缺乏半胱天冬酶(如半胱天冬酶3)的表达和/或激活。在一些方面，半胱天冬酶-3的激活指示凋亡的增加或恢复。在某些实施方案中，半胱天冬酶激活可以通过已知方法检测。在一些实施方案中，与激活的半胱天冬酶特异性结合(即，与切割过的多肽特异性结合)的抗体可以用于检测半胱天冬酶激活。在特定实施方案中，所述表型是或包括活性半胱天冬酶3-。在一些实施方案中，所述凋亡标记物是检测细胞中与凋亡相关的特征的试剂。在某些实施方案中，所述试剂是膜联蛋白V分子。
在一些实施方案中，用于施用的含有工程化细胞的组合物包含一定数量或量的细胞，所述细胞展现出指示细胞健康或与细胞健康一致的表型。在一些任何实施方案中，在所述剂量的工程化T细胞中少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的CAR+T细胞表达凋亡标记物，任选地是膜联蛋白V或活性半胱天冬酶3。在一些任何实施方案中，在所述剂量的工程化T细胞中少于5％、4％、3％、2％或1％的CAR+T细胞表达膜联蛋白V或活性半胱天冬酶3。
在一些实施方案中，将工程化细胞或包含其的组合物作为组合治疗的一部分施用，如与另一种治疗性干预(如另一种抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂))同时施用或以任何顺序依序施用。
在一些实施方案中，将工程化细胞或包含其的组合物与一种或多种另外的治疗剂或结合另一种治疗性干预同时或以任何顺序依序共施用。在一些情境下，将细胞与另一种疗法在时间上足够接近地共同施用，使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的效果，或反之亦然。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之前施用工程化细胞或包含其的组合物。在一些实施方案中，在一种或多种另外的治疗剂之后施用工程化细胞或包含其的组合物。
在一些实施方案中，受试者可以在白细胞单采术之后和淋巴细胞清除化疗之前接受桥接疗法。在制造所提供的组合物或细胞期间，治疗医师可以决定例如为了疾病控制是否有必要进行桥接疗法。在一些实施方案中，桥接疗法不包括生物制剂，如抗体(例如，达雷木单抗)。在一些实施方案中，桥接疗法在开始淋巴细胞清除之前停止。在一些实施方案中，桥接疗法在淋巴细胞清除之前1天、2天、3天、4天、5天、7天、10天、14天、21天、28天、45天或60天停止。
在向哺乳动物(例如人)施用所述细胞后，工程化细胞群和/或抗体的生物活性在一些方面通过许多已知方法中的任一种来测量。待评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，所述工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用本领域已知的任何合适的方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，还可以通过测定某些细胞因子(如CD 107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量所述细胞的生物活性。在一些方面中，通过评估临床结局(如肿瘤负担或负荷的减少)来测量生物活性。
在某些实施方案中，所述工程化细胞以任何数量的方式进行修饰，使得其治疗或预防功效增加。例如，在一些实施方案中，将由群体表达的工程化CAR或TCR直接或通过接头间接与靶向部分缀合。将化合物(例如CAR或TCR)与靶向部分缀合的实践在本领域是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting,3(2):111(1995)和美国专利5,087,616，通过引用以其整体并入。
4.治疗结局
在一些实施方案中，基于治疗的结局(如功效、反应和/或安全性，如不良事件(如毒性，包括CRS、NT和/或MAS))的缺乏或减少)确定施用的剂量和/或频率。
a.反应
在一些实施方案中，通过评价疾病状态来确定功效。用于评估疾病状态的示例性方法包括：通过电泳和免疫固定测量生物液体(如血液和/或尿液)中的M蛋白；血液中sFLC(κ和λ)的定量；骨骼检查；并通过正电子发射断层扫描(PET)/计算机断层扫描(CT)对患有髓外疾病的受试者进行成像。在一些实施方案中，可以通过骨髓检查来评价疾病状态。在一些例子中，所施用的剂量和/或频率通过血液和/或骨髓中重组受体或细胞的扩增和持久性来确定。在一些实施方案中，所施用的剂量和/或频率基于重组受体或工程化细胞的抗肿瘤活性来确定。在一些实施方案中，抗肿瘤活性通过总体反应率(ORR)和/或国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准来确定(参见Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)。在一些实施方案中，使用微小残留病(MRD)评估来评价反应。在一些实施方案中，MRD可以通过诸如流式细胞术和高通量测序(例如，深度测序)的方法来评估。在一些方面，患有MRD阴性疾病的受试者包括那些在骨髓抽吸物中展现出不存在异常克隆浆细胞的受试者，其通过最低灵敏度为105有核细胞中的1个有核细胞或更高(即10-5灵敏度)的测定(如流式细胞术(下一代流式细胞术；NGF)或高通量测序，例如深度测序或下一代测序(NGS))被排除。
在一些方面，持续的MRD阴性包括在骨髓中(NGF或NGS、或两者)并且通过以下定义的成像展现出MRD阴性的受试者，确认间隔最少1年。后续评价可以用于进一步指定阴性持续时间(例如，5年时MRD阴性)。在一些方面，流式MRD阴性包括使用在多发性骨髓瘤中的MRD检测的EuroFlow标准操作程序(或经过验证的等效方法)在骨髓抽吸物中通过NGF展现出不存在表型异常克隆浆细胞的受试者，其中最低灵敏度为在105个有核细胞中的1个有核细胞或更高。在一些方面，测序MRD阴性包括在骨髓抽吸物中通过NGS展现出不存在克隆浆细胞的受试者，其中克隆的存在被定义为使用LymphoSIGHT平台对骨髓抽吸物进行DNA测序(或经验证的等效方法)后获得的少于两个相同的测序读段，其中最低灵敏度为105个有核细胞中的1个有核细胞或更高。在一些方面，成像加MRD阴性包括展现出如通过NGF或NGS评估的MRD阴性以及在基线或先前的PET/CT时发现的示踪剂摄取增加的每个区域的消失或减少至较小的纵隔血池SUV或减少至小于周围正常组织的受试者(参见Kumar等人(2016)LancetOncol 17(8):e328-346)。
在一些实施方案中，基于施用重组受体或细胞后的反应的持续时间来评价反应。在一些例子中，施用的剂量和/或频率可以基于毒性。在一些实施方案中，可以基于施用重组受体和/或细胞的受试者的健康相关生活质量(HRQoL)来确定剂量和/或频率。在一些实施方案中，施用的剂量和/或频率可以基于上述标准中的任一个来改变，即增加或减少。
在一些方面，评估受试者的存活、特定时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，规定肿瘤负荷的量度。在一些实施方案中，用于确定的示例性参数包括指示肿瘤的改良或改善的特定临床结局。此类参数包括：疾病控制的持续时间，所述疾病控制包括客观反应(OR)、完全反应(CR)、严格的完全反应(sCR)、非常好的部分反应(VGPR)、部分反应(PR)、最小反应(MR)、疾病稳定(SD)、疾病进展(PD)或复发(参见例如，国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准；参见Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)、客观反应率(ORR)、无进展存活期(PFS)和总存活期(OS)。在一些实施方案中，使用微小残留病(MRD)评估来评价反应。可以设定参数的具体阈值以确定本文提供的方法的功效。在一些实施方案中，待治疗的疾病或障碍是多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，多发性骨髓瘤的可测量疾病标准可以包括：(1)血清M蛋白1g/dL或更高；(2)尿M蛋白200mg或更高/24小时；(3)涉及的血清游离轻链(sFLC)水平10mg/dL或更高，具有异常的κ与λ比率。在一些情况下，轻链疾病仅适用于血清或尿液中没有可测量疾病的受试者。
在一些方面，对例如根据所提供的实施方案的疗法的反应可以在开始施用所述细胞疗法之后的指定时间点测量。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约1、2、3、6、9、12、18、24、30或36个月、或在前述任一项限定的范围内。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后4、8、12、16、20、24、28、32、36、48或52周、或在前述任一项限定的范围内。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约1个月。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约3个月。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约6个月。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约9个月。在一些实施方案中，所述指定时间点是在开始所述施用后为或约12个月。
在一些实施方案中，与在初始指定时间点测定的反应或结局相比，在所述指定时间点之后为或约3、6、9或12个月时测定的反应或结局是相等的或改善的。例如，在一些方面，如果在初始指定时间点测定的反应或结局是稳定疾病(SD)、进展性疾病(PD)或复发，则在随后的时间点在最初指定时间点之后为或约3、6、9或12个月，根据所提供的实施方案治疗的受试者可以显示出相等或改善的反应或结局(例如，根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准展现出更好的反应结局；参见Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)，即等于初始指定时间点的反应或结局，或是客观反应(OR)、完全反应(CR)、严格完全反应(sCR)、非常好的部分反应(VGPR)或部分反应(PR)的反应或结局。在一些方面，根据所提供的实施方案治疗的受试者可以在两个测定时间点之间显示改善的反应或结局。在一些方面，所述受试者可以在用于评估的初始指定时间点(例如，在施用开始后4周)展现出PR或VGPR，然后在稍后的时间点(例如，开始施用后12周)展现出改善的反应，如CR或sCR。在一些方面，无进展存活期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后受试者伴随疾病存活但疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观反应(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR；在一些情况下也称为总体反应率)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总存活期(OS)被描述为从诊断日期或疾病(如癌症)治疗开始日期起，被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活的时间长度。在一些方面，无事件存活期(EFS)被描述为在癌症治疗结束后，受试者保持没有所述治疗意图预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可以包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些实施方案中，反应持续时间(DOR)的量度包括从记录到肿瘤反应至疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久反应，例如，在从开始疗法起的一个时间段之后持续存在的反应。在一些实施方案中，持久反应是由在治疗开始后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月的反应率来指示。在一些实施方案中，所述反应或结局可持续大于或大于约3、6、9或12个月。
在一些实施方案中，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态指示物可以用于评估或选择用于治疗的受试者，例如，因先前疗法而具有较差体能的受试者(参见例如，Oken等人(1982)Am J Clin Oncol.5:649-655)。ECOG体能状态量表描述患者在其自理能力、日常活动和体能(例如，步行、工作等)方面的机能水平。在一些实施方案中，ECOG体能状态为0指示受试者可以进行正常活动。在一些方面，ECOG体能状态为1的受试者展现体力活动中的一些限制，但是所述受试者能完全走动。在一些方面，ECOG体能状态为2的患者能大于50％走动。在一些情况下，ECOG体能状态为2的受试者也可能能够自理；参见例如
Figure BDA0003980595070000341
等人,(1993)Br J Cancer 67(4)773-775。在一些实施方案中，将根据本文提供的方法或治疗方案施用的受试者包括ECOG体能状态为0或1的受试者。
在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性，但所述施用可以治疗所述受试者。在一些实施方案中，当根据本文所述的实施方案施用至受试者时，所述剂量或所述组合物能够在至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、或至少95％被施用的受试者中实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，OR包括实现严格的完全反应(sCR)、完全反应(CR)、非常好的部分反应(VGPR)、部分反应(PR)和最小反应(MR)的受试者。在一些实施方案中，当根据本文所述的实施方案施用于受试者时，所述剂量或所述组合物能够在至少50％、60％、70％、80％或85％被施用的受试者中实现严格的完全反应(sCR)、完全反应(CR)、非常好的部分反应(VGPR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，当根据本文所述的实施方案施用于受试者时，所述剂量或组合物能够在至少20％、30％、40％、50％、60％或70％被施用的受试者中实现严格的完全反应(sCR)或完全反应(CR)。在一些实施方案中，示例性剂量包含约1.0x107、1.5x107、2.0x107、2.5x107、5.0x107、1.5x108、3.0x108、4.5x108、6.0x108或8.0x108个CAR表达(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，示例性剂量包含约5.0x107、1.5x108、3.0x108、4.5x108、6.0x108或8.0x108个CAR表达(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，示例性剂量包含约5.0x107、1.5x108、3.0x108、4.5x108、6.0x108或8.0x108个CAR表达(CAR+)T细胞。在一些方面，对例如根据本文提供的方法的治疗的特定反应可以基于国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准来评估(参见Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)。
在一些实施方案中，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约5.0x107个CAR表达(CAR+)T细胞。在一些实施方案中，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约1.5x108个CAR+T细胞。在一些实施方案中，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约3.0x108个CAR+T细胞。在一些实施方案中，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约4.5x108个CAR+T细胞。在一些实施方案中，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约6.0x108个CAR+T细胞。在一些方面，实现特定结局(如OR和/或不存在毒性或重度毒性)的示例性剂量包含约8.0x108个CAR+T细胞。
b.安全性
在一些实施方案中，可以监测治疗的毒性、不良事件和/或副作用，并将其用于评估一种或多种另外的治疗剂(例如重组IL-1Ra)的施用和/或调节另外的治疗剂的剂量和/或频率；和/或调节重组受体(例如CAR)、细胞和或组合物的剂量和/或施用频率。例如，可以监测不良事件和实验室异常，并将其用于调整施用剂量和/或频率。不良事件包括输注反应、细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(NT)、巨噬细胞活化综合征(MAS)/噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)和肿瘤溶解综合征(TLS)。任何此类事件都可以建立剂量限制性毒性，并保证剂量减少和/或终止治疗。可以用作确定施用剂量和/或频率的指南的其他副作用或不良事件包括非血液系统不良事件，其包括但不限于疲劳、发热或发热性嗜中性粒细胞减少症、转氨酶在设定的持续时间内增加(例如，少于或等于2周或少于或等于7天)、头痛、骨痛、低血压、缺氧、发冷、腹泻、恶心/呕吐、神经毒性(例如，意识模糊、失语、癫痫发作、抽搐、嗜睡和/或精神状态改变)、弥散性血管内凝血、其他无症状的非血液系统临床实验室异常(如电解质异常)。可以用作确定施用剂量和/或频率的指南的其他副作用或不良事件包括血液系统不良事件，其包括但不限于嗜中性粒细胞减少症、白细胞减少症、血小板减少症、动物和/或B细胞发育不全和低丙种球蛋白血症。
在一些实施方案中，可以评估或监测受试者对施用治疗剂(例如CAR T细胞)的毒性结局。在一些实施方案中，毒性结局是毒性事件或与毒性事件的存在有关，所述毒性事件例如细胞因子释放综合征(CRS)、重度CRS(sCRS)、巨噬细胞活化综合征(MAS)、肿瘤溶解综合征、至少在或在约38摄氏度发热三天或更多天且C反应蛋白(CRP)的血浆水平为至少或至少约20mg/dL、神经毒性(NT)和/或重度神经毒性(sNT)。在一些实施方案中，毒性结局是一种体征或症状、特定的多种体征和症状和/或其量或程度，其存在或不存在可指定受试者中毒性的特定程度、严重程度或水平。熟练技术人员熟练地掌握指定或确定与治疗剂(例如CAR-T细胞)的不期望毒性结局相关的特定体征、症状和/或其量或程度。
在一些方面，毒性结局是细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)，或与细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)相关，或指示细胞因子释放综合征(CRS)或重度CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法并向受试者施用其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。
通常，CRS由例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的过度的全身免疫反应引起。此类细胞可以释放大量炎性介质，如细胞因子和趋化因子。细胞因子可能引发急性炎症反应和/或诱导内皮器官损伤，所述内皮器官损伤可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。重度的危及生命的CRS可能导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他重度的危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。在一些方面，发热、尤其是高热(≥38.5℃或≥101.3°F)与CRS相关。在一些情况下，CRS的特征或症状类似于感染。在一些实施方案中，在呈现CRS症状的受试者中也考虑感染，并且可以施用通过培养的监测和经验性抗生素疗法。与CRS相关的其他症状可以包括心功能障碍、成人呼吸窘迫综合征、肾和/或肝衰竭、凝血障碍、弥散性血管内凝血和毛细血管渗漏综合征。
在施用CAR表达细胞的情境下，CRS通常发生在输注表达CAR的细胞后6-20天。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天时发生。CRS的发生率和时机可能与在输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS包括干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白介素(IL)-2的血清水平升高。可在CRS中快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。CRS已被描述为在较高疾病负荷的多发性骨髓瘤受试者中更严重，并与包括IL-6、IFN-γ和其他细胞因子在内的血清细胞因子增加以及炎症标记物、C反应蛋白(CRP)和铁蛋白升高相关(Cohen等人,J Clin Invest.2019:1-12.；Brudno等人,Blood 2016；127(26):3321 3330；Lee等人,Blood 2015；126(8):104；Davila等人,Sci Transl Med 2014；6(224):224ra225)。
与CRS相关的示例性体征或症状包括发热、僵直、寒战、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、天冬氨酸转氨酶(AST)/丙氨酸转氨酶(ALT)升高、肾衰竭、心脏病、缺氧、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫样活动、意识模糊、找词困难、失语和/或变得迟钝。其他CRS相关体征或结局包括疲劳、恶心、头痛、癫痫发作、心动过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、氨基转移酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。与CRS相关的其他示例性体征或症状包括血流动力学不稳定、发热型嗜中性粒细胞减少症、血清C反应蛋白(CRP)增加、凝血参数(例如，国际标准化比率(INR)、凝血酶原时间(PTI)和/或纤维蛋白原)变化、心脏和其他器官功能的变化、和/或绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)。
在一些实施方案中，与CRS相关的体征或症状包括以下中的一种或多种：持续性发热，例如，在指定温度(例如，高于或高于约38摄氏度)下发热两天或更多天(例如三天或更多天，例如，四天或更多天或至少连续三天)；在高于或高于约38摄氏度下发热；细胞因子(例如IFNγ或IL-6)升高；和/或毒性的至少一种临床体征，例如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管用加压器来测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经障碍(包括精神状态变化，迟钝和癫痫发作)。在一些实施方案中，可以与CRS同时观察到神经毒性(NT)。
示例性CRS相关结局包括增加的或高的一种或多种因子(包括细胞因子和趋化因子和与CRS相关的其他因子)的血清水平。示例性结局还包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以由T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)进行。
已经研发出CRS标准，其显现出与CRS的发作相关联，以预测哪些患者更可能有发生sCRS的风险(参见Davila等人Sci Transl Med 2014；6(224):224ra225)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经病学变化、炎性细胞因子的血清水平升高，所述炎性细胞因子的治疗诱导的升高可能与治疗前的肿瘤负荷和sCRS症状二者密切相关。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如，Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS分级的标准是下表1中详述的那些。
Figure BDA0003980595070000371
在一些实施方案中，反映CRS分级的标准是下表2中详述的那些。
Figure BDA0003980595070000372
Figure BDA0003980595070000381
在一些实施方案中，高剂量血管加压药疗法包括下表3中所述的那些。
Figure BDA0003980595070000382
在一些实施方案中，毒性结局是重度CRS。在一些实施方案中，毒性结局是重度CRS的不存在(例如中度或轻度CRS)。在一些实施方案中，重度CRS包括3级或更高分级的CRS，如表1和表2中所示。在一些实施方案中，重度CRS包括2级或更高分级的CRS，例如2级、3级、4级或5级CRS。
在一些方面，毒性结局是神经毒性或与神经毒性相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的体征或症状包括意识模糊、谵妄、失语、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地如通过脑电图(EEG)确认)、β淀粉样蛋白(Aβ)水平升高、谷氨酸水平升高和氧自由基水平升高。在一些实施方案中，基于严重程度对神经毒性进行分级(例如，使用1-5级量表(参见例如Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。在一些实施方案中，如本文所用，如果在施用后受试者显示出如下限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的症状，则认为受试者响应于或继发于细胞疗法或其一个剂量细胞的施用而产生“重度神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真)，导致异常和不愉快的感觉、神经痛(如沿着神经或一组神经的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常如感觉神经元的功能性紊乱，导致在没有刺激的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉。在一些实施方案中，重度神经毒性包括3级或更高分级的神经毒性，如表4所示。在一些实施方案中，重度神经毒性包括2级或更高分级的神经毒性，例如2级、3级、4级或5级神经毒性。
Figure BDA0003980595070000391
在一些方面，神经毒性可能与CRS相关，或可能不依赖于或独立于CRS。在一些方面，神经毒性可能与CRS的早期发作以及血清和中枢神经系统(CNS)中炎性细胞因子的快速升高相关，可能导致血脑屏障(BBB)的破坏(Gus等人,Cancer Discov 2017；7(12):14041419)。在一些方面，血清IL-6、IFN-γ和MIP-1α峰值的增加可能与神经毒性相关。在一些情况下，神经毒性还与内源性IL-1Ra峰值的增加相关，IL-1Ra是IL-1α(IL-1α)和IL-1β(IL-1β)(它们在一些情况下与神经毒性有关)促炎作用的内源性抑制剂。在一些方面，在重度神经毒性的情况下，观察到通常与全身炎症相关的细胞因子(例如，IL-6、IL-10和干扰素γ(IFNγ))的水平更高。
在一些实施方案中，毒性结局是剂量限制性毒性。在一些实施方案中，毒性结局是不存在剂量限制性毒性。在一些实施方案中，剂量限制性毒性(DLT)被定义为任何3级或更高分级的毒性，如通过任何已知或公开的用于评估特定毒性的指南(如上述任何指南并且包括国家癌症研究所(NCI)的不良事件通用术语标准(Common Terminology Criteria forAdverse Events，CTCAE)4.0版)所评估。
在一些方面，毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)(也称为噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH))。在一些方面，MAS/HLH与NK和细胞毒性T细胞功能受损相关，并具有广泛的原因、症状和结局。在一些方面，MAS/HLH导致高炎症反应，其中一些特征与CRS重叠。在一些方面，MAS可能与所施用细胞的不受控制的活化和增殖以及随后的巨噬细胞活化相关。在一些方面，MAS可以表现为高分级、非缓解性发热、血细胞减少和肝脾肿大。在MAS中发现的示例性观察结果包括炎性细胞因子水平升高、血清铁蛋白、可溶性IL-2受体(sCD25)、甘油三酯、循环的自然杀伤(NK)细胞减少、转氨酶水平升高、急性肝衰竭迹象、凝血病和弥散性血管内凝血病。在一些方面，MAS和CRS在临床表现和观察结果上有重叠，但也有诸如肝脾肿大和淋巴结病等区别特征。在一些方面，患有血液恶性肿瘤的受试者患MAS/HLH的风险更高。在一些情况下，患有MAS/HLH或CRS相关MAS/HLH样综合征(MALS)的受试者表现出细胞因子(如IL-18、IL-8、IP-10、MCP-1、MIG和/或MIP-1β)水平升高(参见例如，Teachy等人,CancerDiscov.2016；6:664–679；Shimabukuro-Vornhagen,Journal for ImmunoTherapy ofCancer.2018；6:56)。
与MAS/HLH的临床风险相关的示例性体征或症状包括持续高烧(≥38.5℃)和淋巴造血器官肿大(脾/肝肿大)，偶尔伴有腺病，在一些情况下，还可能存在肺、神经、皮肤和胃肠受累；实验室观察结果，如全血细胞减少、高铁蛋白血症、低纤维蛋白原血症和D-二聚体水平升高、高甘油三酯血症和肝功能异常。在一些方面，持续感染可能是MAS/HLH的诱因，并且使用针对由最常见的病毒(如疱疹病毒、巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(Epstein-Barrvirus，EBV))引起的感染的标准测试来监测持续感染，并且根据特定的临床或流行病学特征，应排除其他传染源(例如分枝杆菌、寄生虫和真菌，特别是念珠菌属和毛霉属)。在一些方面，测试骨髓抽吸物的与MAS/HLH相关的迹象。
在一些方面，MAS/HLH的示例性诊断标准可以基于HLH-2004共识标准，其在2014年进一步关于恶性肿瘤相关的HLH做了修订(Lehmberg等人,Haematologica.2015；100(8):997–1004)；在一些情况下，只要满足以下两个标准之一：
1.符合MAS/HLH的分子诊断
2.满足MAS/HLH的诊断标准(以下8项标准中的5项)：
a.持续性高热(≥38.5℃)
b.脾肿大
c.血细胞减少症(影响外周血3个谱系中的2个)：血红蛋白<90g/L，血小板<100x109/L，以及嗜中性粒细胞<1.0x109/L
d.甘油三酯≥3.0mmol/L(即265mg/dL)或纤维蛋白原≤1.5g/L
e.骨髓、脾和/或淋巴结中的噬血细胞作用
f.低或无NK细胞活性(根据当地实验室参考范围)
g.铁蛋白≥500ng/mL
h.可溶性CD25(即可溶性IL-2受体)≥2400U/mL。
在一些实施方案中，例如，与施用其他疗法相比，根据所提供的方法的治疗可以导致更低比率和/或更低程度的毒性、毒性结局或症状、毒性促进特征、因子或特性，如与细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(如重度CRS或重度神经毒性)或MAS/HLH相关或指示其的症状或结局。在一些实施方案中，例如，与施用其他疗法相比，根据所提供的方法的治疗可以导致更高的反应率(例如更高的OR、CR、sCR、VGPR或PR率)和/或更持久的反应，以及更低比率和/或更低程度的毒性、毒性结局或症状、毒性促进特征、因子或特性，如与细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(如重度CRS或重度神经毒性)或MAS/HLH相关或指示其的症状或结局。在一些实施方案中，根据所提供的方法的治疗可以导致较高的反应率和较低比率或程度的毒性。在一些方面，与施用其他疗法相比，此类结果还可以伴随所施用的细胞的更高的扩增或延长的持久性。
B.组合疗法
还提供了组合疗法的方法，所述组合疗法包括BCMA结合重组受体(例如CAR)、表达所述重组受体(例如CAR)的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞和/或包含所述工程化细胞的组合物的施用和用途，如治疗性和预防性用途。
在一些实施方案中，将本文所述的BCMA结合分子(例如，嵌合抗原受体)和/或表达所述分子(例如，重组受体)的工程化细胞作为组合治疗或组合疗法的一部分例如与一种或多种另外的治疗性干预同时、以任何顺序依序或间歇地施用。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗性干预包括例如抗体、工程化细胞、受体和/或药剂(如表达重组受体的细胞和/或细胞毒性剂或治疗剂(例如化学治疗剂))。在一些实施方案中，组合疗法包括施用一种或多种另外的药剂、疗法和/或治疗，例如本文所述的另外的药剂、疗法和/或治疗中的任一种。在一些实施方案中，组合疗法包括施用一种或多种用于治疗或疗法的另外的药剂，如用于改善可能与细胞疗法相关的毒性的药剂，如白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)(例如重组IL-1Ra)、IL-6靶向剂、类固醇；施用淋巴细胞清除疗法或其他药剂，如免疫调节剂、免疫检查点抑制剂、腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂和/或激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述组合治疗或组合疗法包括另外的治疗，如手术治疗、移植和/或放射疗法。还提供了组合治疗或组合疗法的方法，所述组合治疗或组合疗法包括本文所述的BCMA结合重组受体(例如，CAR)、细胞和/或组合物以及一种或多种另外的治疗性干预。
在一些实施方案中，另外的药剂借助减少或改善所施用工程化细胞或包含其的组合物的不良影响来增强安全性。在一些实施方案中，另外的药剂可以治疗同一疾病、病症或共病(comorbidity)。在一些实施方案中，另外的药剂可以改善、减少或消除与施用所述细胞和/或组合物(例如CAR表达细胞)相关的一种或多种毒性、不良影响或副作用，并且在一些方面可以用于本文所提供的任何预防性方法中。在一些实施方案中，用于组合治疗或组合疗法的另外的药剂增强、加强和/或促进工程化细胞或包含其的组合物的治疗作用的功效和/或安全性。在一些实施方案中，另外的药剂增强或改进所施用细胞(例如，表达重组受体的细胞)的功效、存活或持久性。在一些实施方案中，另外的药剂选自蛋白磷酸酶抑制剂、激酶抑制剂、细胞因子、免疫调节剂或降低调节性T(Treg)细胞的水平或活性的药剂。
可以制备本文所述的任何另外的药剂并将其与表达本文所述的任何BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞或包含所述细胞的组合物作为组合疗法施用，如以包含组合疗法的一种或多种药剂和药学上可接受的载体(如本文所述的任一种)的药物组合物施用。在一些实施方案中，表达本文所述的任何BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞或包含所述细胞的组合物可以与另外的药剂、疗法或治疗同时、并行或以任何顺序依序施用，其中这种施用提供每种药剂在受试者体内的治疗有效水平。在一些实施方案中，另外的药剂可以与表达本文所述的任何BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞或包含所述细胞的组合物共施用，例如作为同一药物组合物的一部分或使用相同的递送方法来共施用。在一些实施方案中，另外的药剂与本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞或组合物同时但在单独的组合物中施用。在一些实施方案中，另外的药剂是另外的工程化细胞(例如被工程化以表达不同重组受体的细胞)并在同一组合物或在单独的组合物中施用。在一些实施方案中，在施用细胞之前，将另外的药剂与工程化细胞(例如，CAR表达细胞)一起孵育。
在一些例子中，在施用本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物之后或之前(相隔所选时间段)，施用一种或多种另外的药剂。在一些例子中，所述时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月或3个月。在一些例子中，多次施用一种或多种另外的药剂和/或多次施用本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物。例如，在一些实施方案中，在本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物之前，例如在施用前两周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天，施用另外的药剂。例如，在一些实施方案中，在本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物之后，例如在施用后两周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天，施用另外的药剂。
另外的药剂的剂量可以是任何治疗有效量，例如本文所述的任何剂量的量，并且另外的药剂的适当剂量可以取决于待治疗疾病的类型，所施用的重组受体、细胞和/或组合物的类型、剂量和/或频率，疾病的严重程度和病程，施用重组受体、细胞和/或组合物是出于预防目的还是治疗目的，先前疗法，患者的临床病史和对重组受体、细胞和/或组合物的反应，以及主治医师的决断。可以将重组受体、细胞和/或组合物和/或另外的药剂和/或疗法一次施用至患者、重复地施用或经一系列治疗来施用。
在一些方面，重复施用一定剂量的工程化细胞和/或包含所述工程化细胞的组合物。在一些方面，所述受试者接受一个或多个另外的剂量的所述工程化细胞和/或含有所述工程化细胞的组合物，其与所述工程化细胞和/或含有所述工程化细胞的组合物的初始剂量相同。在一些方面，所述受试者接受一个或多个另外的剂量的所述工程化细胞和/或含有所述工程化细胞的组合物，其不同于所述工程化细胞和/或含有所述工程化细胞的组合物的初始剂量。在一些方面，所述另外的剂量高于初始剂量。在一些方面，所述另外的剂量低于初始剂量。在一些实施方案中，向所述受试者仅施用一个剂量的工程化细胞和/或含有所述工程化细胞的组合物。在一些实施方案中，不重复施用一定剂量的工程化细胞和/或包含所述工程化细胞的组合物。
1.预防性疗法
在一些方面，所提供的方法和用途涉及施用作为预防性疗法的另外的疗法。在一些实施方案中，对于预防性疗法，在特定事件之前或在疾病的早期阶段施用另外的药剂和/或组合疗法。在一些方面，预防性疗法在施用细胞疗法之前和/或在产生细胞疗法的结局(例如像，产生不良事件，如来自细胞疗法的毒性)之前开始。在一些实施方案中，预防性疗法包括预防性措施，如用于预防施用细胞疗法后的不良事件(如毒性)的疗法。在一些方面，提供了用于降低要用细胞疗法治疗的受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性发作的方法。在一些方面，毒性包括可能与细胞疗法相关的毒性。
在一些实施方案中，预防性疗法可以增强、加强和/或促进如本文所述的表达结合BCMA的重组受体的工程化细胞和/或包含此类细胞的组合物的治疗效果的安全性。在一些实施方案中，例如用于预防性疗法的另外的药剂借助降低或改善工程化细胞或组合物的不良影响来增强安全性。在一些实施方案中，另外的药剂可以改善、降低或消除与工程化细胞或组合物(例如，CAR表达细胞)的施用相关的一种或多种毒性、不良影响或副作用。如上所述，可能与细胞疗法(如过继细胞疗法)相关的不良事件(如毒性)可以包括细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(也称为神经病学事件；NE)和巨噬细胞活化综合征(MAS)。在一些方面，巨噬细胞产生的IL-1在引发CRS中起作用。在一些方面，CRS也可能与弥散性血管内凝血相关，并可以展现出与MAS相似的临床和病理图片(参见例如，Hay等人British Journal ofHaematology 2018；183(3):364-374)。
在一些方面，用于组合疗法的另外的药剂是白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)。在一些实施方案中，施用IL-1Ra作为预防性治疗。在一些方面，在施用一定剂量的工程化细胞(例如表达重组受体的T细胞)之前施用IL-1Ra。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化细胞之前施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用一定剂量的工程化细胞之后继续施用IL-1Ra。在一些方面，在施用一定剂量的细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
在一些方面，用于组合疗法和/或预防性疗法的IL-1Ra是阿那白滞素(Kineret)或其修饰形式，如用N-末端Pro-Ala-Ser(PAS)部分修饰的阿那白滞素(参见例如，Powers等人,J Biol Chem.2020年1月17日；295(3):868-882)。在一些方面，IL-1Ra是阿那白滞素。阿那白滞素的示例性序列示于SEQ ID NO:256中。在一些方面，阿那白滞素是批准施用于18岁或以上的中度至重度活动性类风湿性关节炎(RA)受试者的重组IL-1Ra。通过IL-1Ra阻断IL-1可以预防重度CRS，同时保持所施用细胞疗法的完整抗肿瘤功效。IL-1Ra可以穿越血脑屏障，从而可以降低神经病学事件的严重程度，并且可以用于减轻MAS/HLH。被IL-1激活的人小胶质细胞可以产生诱导型一氧化氮合酶和促炎细胞因子(Tarassishin等人,Glia 62,999–1013(2014))，因此，阻断IL-1可导致重度CRS和重度神经病学事件的减少或预防。在一些方面，施用IL-1Ra作为预防性疗法可导致不良事件(如CRS、神经病学事件或MAS)的发作、发生率和严重程度的改善。
在一些方面，受试者接受作为预防性疗法的IL-1Ra，例如阿那白滞素，例如以降低可能与过继细胞疗法相关的毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性的发作，所述过继细胞疗法如包含一定剂量的工程化细胞(例如包含如本文所提供的对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞)的细胞疗法。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的一个或多个剂量的IL-1Ra是预防性施用。
在任何实施方案中的一些中，受试者在所述剂量的工程化细胞之前接受至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向已经施用至少一个剂量的IL-1Ra的受试者施用包含一定剂量的工程化细胞(其包含对BCMA具有特异性的CAR)的细胞疗法。在一些实施方案中，所提供的方法和用途涉及在施用细胞疗法之前向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的CAR的工程化T细胞。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra是预防性施用IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。
在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途涉及施用至少两个剂量的IL-1Ra和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的CAR的工程化T细胞。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内已被施用至少一个剂量的IL-1Ra的受试者施用所述剂量的包含对BCMA具有特异性的CAR的工程化T细胞；并且在所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约21、18、15、12、9、6或3小时、或前述任一项限定的范围内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24、21、18、15或12小时、或前述任一项限定的范围内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约21小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约18小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约15小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在所述剂量的工程化T细胞之前为或约12小时内向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前的晚上或夜晚向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，所述方法和用途涉及在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约6、5、4、3或2小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra。在任何实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用至少两个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用一个剂量的IL-1Ra，并且在为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约18小时内施用一个剂量的IL-1Ra，并且在为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约12小时内施用一个剂量的IL-1Ra，并且在为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之前的晚上或夜晚向受试者施用一个剂量的IL-1Ra，并且在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra。
在一些方面，向受试者施用至少两个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向受试者施用至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量的IL-1Ra。
在任何实施方案中的一些中，在施用所述剂量的工程化T细胞之后向受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后向受试者施用至少2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用3、4、5、6或7个剂量的IL-1Ra。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用5个剂量的IL-1Ra。在一些实施方案中，在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用4个剂量的IL-1Ra。
在任何实施方案中的一些中，连续几天每天施用所述剂量的IL-1Ra。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续几天每天施用这些剂量。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续5天每天施用在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的5个剂量的IL-1Ra中的每个剂量。在一些方面，在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续4天每天施用在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的4个剂量的IL-1Ra中的每个剂量。在一些方面，在第1天施用所述剂量的工程化T细胞，并且在第2天、第3天、第4天和第5天中的每一天施用在施用所述剂量工程化T细胞之后施用的4个剂量的IL-1Ra中的一个。
在一些方面，向受试者施用总共2、3、4、5、6、7、8、9或10个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向受试者施用总共5、6、7、8或9个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向受试者施用总共7个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向受试者施用总共8个剂量的IL-1Ra。在一些方面，向受试者施用总共9个剂量的IL-1Ra。
在任何所提供的实施方案中的一些中，在每天同一时间或约同一时间给予IL-1Ra的每天施用。在任何所提供的实施方案中的一些中，间隔约24小时(q24h)施用所述剂量的IL-1Ra的每天施用。
在一些方面，所述方法和用途还包括如果受试者展现出毒性(如细胞因子释放综合征(CRS)、神经毒性(NT)或巨噬细胞活化综合征(MAS)/噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH))的体征或症状，或在毒性发作时，则施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra。在一些方面，如果受试者展现出CRS的体征或症状或在CRS发作时，则在施用工程化T细胞之后向受试者施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra。在一些方面，每两天一次、每天一次、每天两次、每天三次或每天四次施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra。在一些方面，每天两次施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra。在一些方面，每天一次施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra。在一些方面，施用至少一个另外的剂量的IL-1Ra，直到CRS的体征或症状消退。在一些方面，至少一个另外的剂量的IL-1Ra是一个另外的剂量。因此，在一些方面，如果受试者展现出CRS的体征或症状或在CRS发作时，则每天两次施用一定剂量的IL-1RA。在一些方面，如果受试者展现出CRS的体征或症状或在CRS发作时，则约每12小时(q12h)施用一定剂量的IL-1RA。
在任何实施方案中的一些中，与细胞疗法(例如，包含一定剂量的表达抗BCMA嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞的细胞疗法)组合施用的IL-1Ra是重组IL-1Ra。在一些方面，重组IL-1Ra是非糖基化的。在一些方面，重组IL-1Ra是阿那白滞素。在任何实施方案中的一些中，IL-1Ra包含SEQ ID NO:256所示的序列或与SEQ ID NO:256具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性且保留IL-1R拮抗剂功能的序列。在任何实施方案中的一些中，IL-1Ra包含SEQ ID NO:256所示的序列。在一些方面，IL-1Ra是阿那白滞素，并且阿那白滞素的每个剂量是为或约500、400、300、200、100或50mg、或前述任一项限定的范围。在一些实施方案中，阿那白滞素的每个剂量是为或约200mg。在一些实施方案中，阿那白滞素的每个剂量是为或约100mg。
在一些实施方案中，通过皮下施用而施用IL-1Ra。在一些方面，通过皮下施用，以每天为或约100mg的剂量施用阿那白滞素。在一些方面，如果受试者展现出CRS的体征或症状或在CRS发作时，通过皮下施用每天两次以为或约100mg的剂量施用阿那白滞素。
在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途涉及向受试者预防性施用重组IL-1Ra(如阿那白滞素)与细胞疗法的组合，所述细胞疗法包含表达如本文所述的对BCMA具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)(例如，包含含有SEQ ID NO:125所示序列的VH区和含有SEQID NO:127所示序列的VL区)的工程化T细胞，所述受试者患有疾病或障碍，如多发性骨髓瘤(MM)，例如复发性或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途涉及在施用细胞疗法之前施用两个剂量的IL-Ra，如每个剂量包含皮下施用的100mg阿那白滞素，其中在施用细胞疗法之前的夜晚或晚上施用一个剂量的重组IL-1Ra，并且在施用细胞疗法之前为或约3小时施用一个剂量的重组IL-1Ra。在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途还涉及在施用细胞疗法之后继续施用IL-1Ra，连续5天每天施用，每个剂量包含皮下施用的100mg阿那白滞素。在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途还涉及在施用细胞疗法之后继续施用IL-1Ra，连续4天每天施用，每个剂量包含皮下施用的100mg阿那白滞素。在任何实施方案中的一些中，如果受试者展现出CRS的体征或症状或在CRS发作时，则施用一个或多个剂量的重组IL-1Ra，每天两次，直到CRS消退。在任何实施方案中的一些中，在每天同一时间或约同一时间施用重组IL-1Ra。在任何实施方案中的一些中，约每24小时施用一个剂量的IL-1Ra。在任何实施方案中的一些中，约每12小时施用一个剂量的IL-1Ra。
在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途涉及在施用细胞疗法之前施用两个剂量的IL-1Ra，如每个剂量包含皮下施用的100mg阿那白滞素，其中在施用细胞疗法之前的夜晚或晚上施用一个剂量的IL-1Ra，并且在施用细胞疗法之前(第1天)为或约3小时施用一个剂量的IL-1Ra，并在第2-5天每天(例如q24h)施用一个剂量的IL-1Ra，如包括皮下施用约100mg阿那白滞素的剂量。
在任何实施方案中的一些中，所述方法和用途涉及在施用细胞疗法之前施用两个剂量的IL-1Ra，如每个剂量包含皮下施用的100mg阿那白滞素，其中在施用细胞疗法之前的夜晚或晚上施用一个剂量的重组IL-1Ra，并且在施用细胞疗法之前(第1天)为或约3小时施用一个剂量的IL-1Ra，并且如果受试者展现出CRS的体征或症状或CRS的发作，则在第2-5天每天(例如q12h)施用两个剂量的IL-1Ra，如包含皮下施用的约100mg阿那白滞素的剂量。
在任何实施方案中的一些中，所提供的方法和用途，例如预防性方法和用途降低毒性的严重程度、减弱和/或预防毒性的发作。在任何实施方案中的一些中，毒性是细胞因子释放综合征(CRS)。在任何实施方案中的一些中，CRS是重度CRS或3级或更高分级的CRS。在任何实施方案中的一些中，毒性是神经毒性(NT)。在任何实施方案中的一些中，NT是重度NT、或2级或更高分级的NT、或3级或更高分级的NT。在任何实施方案中的一些中，毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)或噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。
在一些实施方案中，所述方法用于预防性治疗以下受试者，所述受试者被鉴定为在施用工程化T细胞(例如CAR T细胞)之后有发生毒性风险的受试者。例如，某些受试者一旦施用了过继T细胞疗法(例如CAR T细胞)，可能会展现出使其更易感或更可能发生毒性(如重度CRS)的风险因素。因此，提供了用于鉴定在施用工程化T细胞(例如CAR T细胞)之后有发生毒性风险的受试者并在受试者接受施用工程化T细胞(例如CAR T细胞)之前选择受试者进行本文所述的任何预防性方法的治疗的方法。
在一些实施方案中，毒性是细胞因子释放综合征(CRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法并向受试者施用其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,SciTransl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509–1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709–2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。已经研发出CRS标准，其显现出与CRS的发作相关联，以预测哪些患者更可能有发生sCRS的风险(参见Davilla等人Sciencetranslational medicine.2014；6(224):224ra25)。CRS的示例性特征描述于第I.4.b部分中。
在一些实施方案中，如果受试者在施用工程化T细胞(例如CAR T细胞)之后被鉴定为有发生毒性的风险，则选择受试者进行本文所述的任何方法的治疗。在一些实施方案中，如果受试者展现出一个或多个因素，则受试者被鉴定为有发生毒性(例如CRS)的风险。在一些实施方案中，因素包括发烧、缺氧、低血压、神经病学改变和/或炎症标记物水平升高。在一些实施方案中，炎症标记物是C反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、白蛋白、铁蛋白、β2微球蛋白(β2-M)、乳酸脱氢酶(LDH)、细胞因子或趋化因子。在一些情况下，炎症标记物是LDH。在一些例子中，炎症标记物是细胞因子或趋化因子，所述细胞因子或趋化因子是IL-7、IL15、MIP-1α或TNF-α。在一些实施方案中，因素包括肿瘤负荷的体积量度。在一些实施方案中，肿瘤负荷的体积量度是直径乘积之和(SPD)、最长肿瘤直径(LD)、最长肿瘤直径之和(SLD)、肿瘤体积、坏死体积、坏死-肿瘤比率(NTR)、瘤周水肿(PTE)和水肿-肿瘤比率(ETR)。
在一些实施方案中，如果来自受试者的样品中的炎症标记物水平高于阈值，则受试者被鉴定为在施用工程化T细胞之后有发生毒性的风险。在一些实施方案中，炎症标记物是LDH。在一些实施方案中，阈值为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。在一些实施方案中，炎症标记物是LDH，并且阈值为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。
在一些实施方案中，如果受试者体内肿瘤负荷的体积量度高于阈值，则受试者被鉴定为在施用工程化T细胞之后有发生毒性的风险。在一些实施方案中，肿瘤负荷的体积量度是SPD。在一些实施方案中，阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，体积量度是SPD，并且阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。
2.淋巴细胞清除疗法
在一些实施方案中，另外的疗法是淋巴细胞清除疗法。淋巴细胞清除化疗被认为可以改善重组受体表达细胞(如CAR T细胞)的植入和活性。在一些实施方案中，淋巴细胞清除化疗可以增强过继转移的肿瘤特异性T细胞，以通过稳态增殖在体内增殖。在一些实施方案中，化疗可以减少或消除CD4+CD25+调节性T细胞，其可以抑制肿瘤靶向过继转移的T细胞的功能。在一些实施方案中，过继T细胞疗法之前的淋巴细胞清除化疗可以增强骨髓中基质细胞衍生因子1(SDF-1)的表达，通过SDF-1与T细胞表面上表达的CXCR-4的结合增强经修饰的T细胞归巢至原发肿瘤部位。在一些实施方案中，淋巴细胞清除化疗还可以减少受试者的肿瘤负荷并潜在地降低CRS的风险和严重程度。
在一些实施方案中，在例如施用工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前对受试者进行淋巴细胞清除。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除包括施用以下中的一种或多种：美法仑、Cytoxan、环磷酰胺和/或氟达拉滨。在一些实施方案中，在施用(例如，输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前、与其并行或之后，向受试者施用淋巴细胞清除化疗。在一个例子中，在施用工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前向受试者施用淋巴细胞清除化疗。在一些实施方案中，在施用工程化细胞之前1至10天，如在开始施用工程化细胞之前1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天，或在开始施用工程化细胞之前至少2天，如至少3、4、5、6或7天，施用淋巴细胞清除化疗。在一些实施方案中，在开始施用工程化细胞之前不超过7天，如之前不超过6、5、4、3或2天，向受试者施用预调理剂。可以根据临床或逻辑情况确定在淋巴细胞清除化疗后多少天施用工程化细胞。在一些例子中，可能由于受试者的健康(如由治疗医师确定的受试者的潜在器官功能)而实施对淋巴细胞清除化疗方案的剂量调整或其他改变。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除化疗包括施用淋巴细胞清除剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。在一些实施方案中，以在或在约20mg/kg与100mg/kg受试者体重之间(如在或在约40mg/kg与80mg/kg之间)的剂量向受试者施用环磷酰胺。在一些方面，向受试者施用约60mg/kg的环磷酰胺。在一些实施方案中，每天一次施用环磷酰胺，持续一天或两天。在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺的情况下，以在或在约100mg/m2与500mg/m2受试者体表面积之间，如在或在约200mg/m2与400mg/m2之间，或250mg/m2与350mg/m2之间(包含端值)的剂量向受试者施用环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约100mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约150mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约200mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约250mg/m2的环磷酰胺。在一些情况下，向受试者施用约300mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，可以将环磷酰胺按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天、每隔一天或每三天给予。在一些实施方案中，每天施用环磷酰胺，如持续1-5天，例如持续2至4天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，向受试者每天施用约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，持续3天。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前，向受试者施用总计为或约300mg/m2、400mg/m2、500mg/m2、600mg/m2、700mg/m2、800mg/m2、900mg/m2、1000mg/m2、1200mg/m2、1500mg/m2、1800mg/m2、2000mg/m2、2500mg/m2、2700mg/m2、3000mg/m2、3300mg/m2、3600mg/m2、4000mg/m2或5000mg/m2的环磷酰胺，或前述任一项限定的范围的环磷酰胺。
在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨的情况下，向受试者施用剂量在或在约1mg/m2与100mg/m2受试者体表面积之间，如在或在约10mg/m2与75mg/m2之间、15mg/m2与50mg/m2之间、20mg/m2与40mg/m2之间、或24mg/m2与35mg/m2之间的氟达拉滨(包含端值)。在一些情况下，向受试者施用约10mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用约15mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用约20mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用约25mg/m2的氟达拉滨。在一些情况下，向受试者施用约30mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，可以将氟达拉滨按单一剂量施用或者可以按多个剂量施用，如每天、每隔一天或每三天给予。在一些实施方案中，每天施用氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续2至4天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，向受试者每天施用约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨，持续3天。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前，向受试者施用总计为或约10mg/m2、20mg/m2、25mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2、60mg/m2、70mg/m2、80mg/m2，90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、150mg/m2、180mg/m2、200mg/m2、250mg/m2、270mg/m2、300mg/m2、330mg/m2、360mg/m2、400mg/m2或500mg/m2的环磷酰胺，或前述任一项限定的范围的环磷酰胺。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含单一药剂，如环磷酰胺或氟达拉滨。在一些实施方案中，向受试者仅施用环磷酰胺，而不施用氟达拉滨或其他淋巴细胞清除剂。在一些实施方案中，在施用之前，受试者已接受过淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约200-400mg/m2受试者体表面积、任选地为或约300mg/m2的环磷酰胺，持续2-4天。在一些实施方案中，向受试者仅施用氟达拉滨，例如不施用环磷酰胺或其他淋巴细胞清除剂。在一些实施方案中，在施用之前，受试者已接受过淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约20-40mg/m2受试者体表面积、任选地为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺与氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可以包括任何剂量或施用时间表(如上述那些)下的环磷酰胺以及任何剂量或施用时间表(如上述那些)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，向受试者每天施用为或约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨以及每天施用为或约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，持续3天。
在一些实施方案中，可以在淋巴细胞清除化疗之前给予除地塞米松或其他类固醇以外的止吐疗法。在一些实施方案中，美司钠可以用于具有出血性膀胱炎病史的受试者。
3.其他另外的疗法
在一些实施方案中，疼痛管理药物(如对乙酰氨基酚)或抗组胺药(如苯海拉明)可以在施用本文所提供的重组受体、工程化T细胞或工程化T细胞的组合物或剂量之前、期间或之后施用，以改善或减少或消除与治疗相关的次要副作用。在一些例子中，可以施用红细胞和血小板输血和/或集落刺激因子，以减少或消除与施用细胞和/或组合物(例如CAR表达细胞)相关的一种或多种毒性、不良影响或副作用。在一些实施方案中，可以施用预防性或经验性抗感染剂(例如，用于肺孢子虫性肺炎(PCP)预防的甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、广谱抗生素、抗真菌剂或用于发热性嗜中性粒细胞减少症的抗病毒剂)来治疗由治疗产生的副作用。在一些例子中，必要时，可以提供预防以治疗因治疗而发生的淋巴细胞减少症和/或嗜中性粒细胞减少症。
在一些实施方案中，另外的疗法、治疗或药剂包括化学疗法、放射疗法、手术、移植、过继细胞疗法、抗体、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂、保心药、免疫刺激剂、免疫抑制剂、免疫检查点抑制剂、抗生素、血管发生抑制剂、代谢调节剂或其他治疗剂或其任何组合。在一些实施方案中，另外的药剂是蛋白质、肽、核酸、小分子药剂、细胞、毒素、脂质、碳水化合物或其组合，或任何其他类型的治疗剂，例如辐射。在一些实施方案中，另外的疗法、药剂或治疗包括手术、化学疗法、放射疗法、移植、施用表达重组受体(例如CAR)的细胞、激酶抑制剂、免疫检查点抑制剂、mTOR途径抑制剂、免疫抑制剂、免疫调节剂、抗体、免疫清除剂、抗体和/或其抗原结合片段、抗体缀合物、其他抗体疗法、细胞毒素、类固醇、细胞因子、肽疫苗、激素疗法、抗代谢物、代谢调节剂、抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶或p70S6激酶FK506或抑制p70S6激酶的药物、烷化剂、蒽环类、长春花生物碱、蛋白酶体抑制剂、GITR激动剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、溶瘤病毒和/或其他类型的免疫疗法。在一些实施方案中，另外的药剂或治疗是骨髓移植、使用化疗剂(如氟达拉滨)的T细胞清除疗法、外线束放疗(XRT)、环磷酰胺和/或抗体疗法。
在一些实施方案中，将细胞、BCMA结合重组受体和/或组合物(例如，CAR表达细胞)与其他工程化细胞(例如，其他CAR表达细胞)组合施用。在一些实施方案中，另外的药剂是激酶抑制剂，例如，布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)抑制剂，例如，依鲁替尼。在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂。在一些实施方案中，另外的药剂是免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如，来那度胺)。在一些实施方案中，另外的药剂是γ分泌酶抑制剂，如抑制或降低细胞(如肿瘤/癌症细胞)上γ分泌酶的靶标(例如BCMA)的膜内切割的γ分泌酶抑制剂。在一些实施方案中，另外的疗法、药剂或治疗是细胞毒性剂或化学治疗剂、生物疗法(例如，抗体，例如，单克隆抗体，或细胞疗法)或抑制剂(例如，激酶抑制剂)。
在一些实施方案中，另外的药剂是化学治疗剂。示例性化学治疗剂包括蒽环类(例如多柔比星，如脂质体多柔比星)；长春花生物碱(例如长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨)；烷化剂(例如环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、异环磷酰胺、替莫唑胺)；免疫细胞抗体(例如阿仑单抗、吉妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗)；抗代谢物(包括例如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂如氟达拉滨)；TNFR糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)激动剂；蛋白酶体抑制剂(例如阿克拉霉素A、胶霉毒素或硼替佐米)；免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如来那度胺)。
在一些实施方案中，另外的疗法或治疗是细胞疗法，例如过继细胞疗法。在一些实施方案中，另外的疗法包括施用工程化细胞，例如另外的CAR表达细胞。在一些实施方案中，另外的工程化细胞是CAR表达细胞，其表达与本文提供的工程化细胞(例如抗BCMA CAR表达细胞)相同或不同的重组受体。在一些实施方案中，在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如CAR)识别不同的抗原和/或表位。在一些实施方案中，在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如CAR)与本文所述的重组受体识别相同抗原(例如BCMA)的不同表位。在一些实施方案中，在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如CAR)识别不同的抗原，例如不同的肿瘤抗原或抗原的组合。例如，在一些实施方案中，在另外的工程化细胞上表达的重组受体(例如CAR)靶向表达早期谱系标记物的癌细胞(例如癌干细胞)，而其他CAR表达细胞靶向表达晚期谱系标记物的癌细胞。在此类实施方案中，在施用(例如输注)本文所述的CAR表达细胞之前、与其并行或之后施用另外的工程化细胞。在一些实施方案中，另外的工程化细胞表达同种异体CAR。
在一些实施方案中，一种或多种CAR分子的构型包含一个初级细胞内信号传导结构域和两个或更多个(例如2、3、4或5或更多个)共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，一种或多种CAR分子可以具有相同或不同的初级细胞内信号传导结构域、相同或不同的共刺激信号传导结构域、或相同数量或不同数量的共刺激信号传导结构域。在一些实施方案中，一种或多种CAR分子可以被配置为分离的CAR，其中一种CAR分子包含抗原结合结构域和共刺激结构域(例如4-1BB)，而另一种CAR分子包含抗原结合结构域和初级细胞内信号传导结构域(例如CD3ζ)。
在一些实施方案中，另外的药剂是被工程化以表达一种或多种抗BCMA重组受体的细胞和/或被工程化以表达靶向不同抗原的另外的分子(例如重组受体，例如CAR)的细胞中的任一种。在一些实施方案中，另外的药剂包括本文(例如在第III部分中)所述的细胞中的任何一种或多种细胞。在一些实施方案中，另外的药剂是被工程化以表达靶向不同表位和/或抗原(例如与疾病或病症相关的不同抗原)的重组受体(例如CAR)的细胞。在一些实施方案中，另外的药剂是被工程化以表达靶向多发性骨髓瘤中表达的第二或另外的抗原(例如GPRC5D、CD38、CD138、CS-1、BAFF-R、TACI和/或FcRH5)的重组受体(例如CAR)的细胞。
在一些实施方案中，另外的药剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，组合疗法包括可以刺激、放大和/或以其他方式增强抗肿瘤免疫反应(例如，来自所施用工程化细胞的抗肿瘤免疫反应)的免疫调节剂，如通过抑制免疫抑制信号传导或增强免疫刺激信号传导。在一些实施方案中，免疫调节剂是肽、蛋白质或是小分子。在一些实施方案中，所述蛋白质可以是融合蛋白或重组蛋白。在一些实施方案中，免疫调节剂结合免疫靶标，如在免疫细胞(如T细胞、B细胞或抗原呈递细胞)上表达的细胞表面受体。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段、融合蛋白、小分子或多肽。在一些实施方案中，将重组受体、细胞和/或组合物与作为抗体或其抗原结合片段(如单克隆抗体)的另外的药剂组合施用。
在一些实施方案中，免疫调节剂阻断、抑制或抵消免疫检查点途径的组分。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫反应的多个抑制途径。肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制，特别是针对对肿瘤抗原具有特异性的T细胞(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)，例如工程化细胞，如CAR表达细胞。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用开始的，所以它们可以容易地被针对配体和/或其受体的抗体阻断。
因此，用阻断免疫检查点途径的拮抗性分子(如小分子、核酸抑制剂(例如RNAi)或抗体分子)的疗法正在成为针对癌症和其他疾病的免疫疗法的有前途的途径。与大多数抗癌剂相反，检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。
如本文所用，术语“免疫检查点抑制剂”是指完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节T细胞激活或功能。这些蛋白质负责T细胞反应的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节和维持自身耐受性和生理免疫反应的持续时间和幅度。在一些实施方案中，可以向受试者施用另外的药剂，所述另外的药剂可以增强或加强针对疾病或病症(例如癌症，如本文所述的任一种)的免疫反应，例如由表达本文所提供的BCMA结合重组受体和/或组合物的工程化细胞所产生的免疫反应。
免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。此类抑制剂可以包括小分子抑制剂或者可以包括与免疫检查点受体、配体结合并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的示例性免疫检查点分子包括但不限于PD-1(CD279)、PD-L1(CD274、B7-H1)、PDL2(CD273、B7-DC)、CTLA-4、LAG-3(CD223)、TIM-3、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GITR(TNFRSF18、AITR)、CD40、OX40(CD134、TNFRSF4)、CXCR2、肿瘤相关抗原(TAA)、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4(属于分子的CD2家族并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I类、MHC II类、GAL9、腺苷和转化生长因子受体(TGFR；例如，TGFRβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，其结合至并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美木单抗(CTLA-4阻断抗体，也称为替西木单抗、CP-675,206)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-H1；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD-1抗体)、CT-011(抗PD-1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PD-L1抗体)、BMS-936559(抗PD-L1抗体)、MPLDL3280A(抗PD-L1抗体)、MSB0010718C(抗PD-L1抗体)和伊匹单抗(抗CTLA-4抗体，也称为
Figure BDA0003980595070000501
MDX-010和MDX-101)。示例性免疫调节抗体包括但不限于达珠单抗(Daclizumab)(Zenapax)、贝伐单抗
Figure BDA0003980595070000502
巴利昔单抗(Basiliximab)、伊匹单抗、纳武单抗、派姆单抗、MPDL3280A、匹地利珠单抗(CT-011)、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A(阿特珠单抗)、曲美木单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗(SGN-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C(阿维鲁单抗)、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌洛鲁单抗(Ulocuplumab)、BKT140、伐立鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127)、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(BMS-986015、IPH2101)、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗(Emactuzumab)、CC-90002和MNRP1685A或其抗体结合片段。其他示例性免疫调节剂包括例如阿夫土珠单抗(afutuzumab)(可以从
Figure BDA0003980595070000506
获得)；培非司亭
Figure BDA0003980595070000503
来那度胺(CC-5013，
Figure BDA0003980595070000504
)；沙利度胺
Figure BDA0003980595070000505
actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白介素1、白介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
程序性细胞死亡1(PD-1)是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer ImmunolImmunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)NatureReviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在响应于感染的炎症过程中限制外周组织中T细胞的活性，以及限制自身免疫。在激活的T细胞中诱导PD-1表达，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还起到抑制TCR“停止信号”的作用。PD-1在Treg细胞上高度表达，并且可以在配体的存在下增加它们的增殖(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗PD 1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Lipson等人,2013,ClinCancer Res 19:462-8；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:3044-51；Gildener-Leapman等人,2013,Oral Oncol 49:1089-96；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol5:278-85)。示例性抗PD-1抗体包括纳武单抗(BMS的Opdivo)、派姆单抗(Merck的Keytruda)、匹地利珠单抗(Cure Tech的CT-011)、兰姆利珠单抗(lambrolizumab)(Merck的MK-3475)和AMP-224(Merck)，纳武单抗(也称为Opdivo、BMS-936558或MDX1106；Bristol-Myers Squibb)是特异性阻断PD-1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性地结合PD-1的其他人单克隆抗体描述于US 8,008,449和WO 2006/121168中。匹地利珠单抗(CT-011；Cure Tech)是与PD-1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹地利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体描述于WO 2009/101611中。派姆单抗(先前称为兰姆利珠单抗，也称为Keytruda，MK03475；Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体描述于US 8,354,509和WO 2009/114335中。其他抗PD-1抗体尤其包括AMP514(Amplimmune)，例如，US 8,609,089、US 2010028330、US 20120114649和/或US20150210769中描述的抗PD-1抗体。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，描述于WO 2010/027827和WO2011/066342中)是阻断PD-1与B7-H1之间的相互作用的PD-L2 Fc融合可溶性受体。
PD-L1(也称为CD274和B7-H1)和PD-L2(也称为CD273和B7-DC)是PD-1的配体，发现于激活的T细胞、B细胞、骨髓细胞、巨噬细胞和一些类型的肿瘤细胞上。抗肿瘤疗法已集中于抗PD-L1抗体。PD-1与PD-L1的复合物抑制CD8+T细胞的增殖并降低免疫反应(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65)。抗PD-L1抗体已被用于治疗非小细胞肺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌和血液恶性肿瘤(Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300-9；Radvanyi等人,2013,Clin Cancer Res 19:5541；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85；Berger等人,2008,Clin Cancer Res14:13044-51)。示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(Medarex)、MEDI4736(Medimmune)、MPDL3280A(Genentech)、BMS-935559(Bristol-Myers Squibb)和MSB0010718C。MEDI4736(Medimmune)是结合至PD-L1并抑制所述配体与PD-1的相互作用的人单克隆抗体。MDPL3280A(Genentech/Roche)是结合至PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906中。其他抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO 2010/077634)和MDX-1105(也称为BMS-936559，以及例如描述于WO 2007/005874中的抗PD-L1结合剂)。
细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4)也称为CD152，是功能为调节T细胞激活的一种共抑制分子。CTLA-4是仅在T细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。CTLA-4起到抑制T细胞激活的作用，并且据报道其抑制辅助T细胞活性并增强调节性T细胞免疫抑制活性。尽管CTLA-4的明确作用机制仍在研究之中，但已经表明其通过在与CD80和CD86结合中与CD28竞争而胜出以及积极地将抑制剂信号传递至T细胞来抑制T细胞激活(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗CTLA-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(Robert&Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300；Weber,2007,Oncologist 12:864-72；Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。抗CTLA-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学，其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下，在观察到缩小之前，肿瘤可能实际上在治疗开始后增大(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美木单抗(Pfizer)。伊匹单抗最近获得FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤(Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。
淋巴细胞激活基因-3(LAG-3)也称为CD223，是另一种免疫检查点蛋白。LAG-3与对淋巴细胞活性的抑制相关，并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。LAG-3在免疫系统中的各种细胞上表达，包括B细胞、NK细胞和树突细胞。LAG-3是MHC II类受体的天然配体，所述MHC II类受体在黑色素瘤浸润的T细胞(包括被赋予有效免疫抑制活性的那些T细胞)上大量表达。示例性抗LAG-3抗体包括BMS-986016(Bristol-Myers Squib)，其是靶向LAG-3的单克隆抗体。IMP701(Immutep)是拮抗剂LAG-3抗体，并且IMP731(Immutep和GlaxoSmithKline)是耗尽的LAG-3抗体。其他LAG-3抑制剂包括IMP321(Immutep)，其是LAG-3的可溶部分和结合MHC II类分子并激活抗原呈递细胞(APC)的Ig的重组融合蛋白。其他抗体描述于例如WO 2010/019570和US 2015/0259420中。
最初在激活的Th1细胞上鉴定的T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(TIM-3)已被证明是免疫反应的负调节物。TIM-3的阻断促进T细胞介导的抗肿瘤免疫，并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。TIM-3阻断与其他免疫治疗剂(如TSR-042、抗CD137抗体和其他)的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。TIM-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、NSCLC和肾癌)相关，另外，肿瘤内TIM-3的表达已经被证明与跨越一系列肿瘤类型(包括NSCLC、宫颈癌和胃癌)的不良预后相关。TIM-3的阻断也有利于提高对许多慢性病毒性疾病的免疫。TIM-3也已被证明与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和HMGB1)相互作用，尽管目前尚不清楚这些配体中有哪些(如果有的话)是与抗肿瘤反应的调节有关。在一些实施方案中，靶向TIM-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与TIM-3的IgV结构域结合以抑制与其配体的相互作用。抑制TIM-3的示例性抗体和肽描述于US 2015/0218274、WO 2013/006490和US 2010/0247521中。其他抗TIM-3抗体包括RMT3-23的人源化形式(Ngiow等人,2011,Cancer Res,71:3540-3551)和克隆8B.2C12(Monney等人,2002,Nature,415:536-541)。抑制TIM-3和PD-1的双特异性抗体描述于US2013/0156774中。
在一些实施方案中，另外的药剂是CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)。在一些实施方案中，CEACAM抑制剂是抗CEACAM抗体分子。示例性抗CEACAM-1抗体描述于WO 2010/125571、WO 2013/082366、WO 2014/059251和WO 2014/022332中，例如，单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或其重组形式，如在例如US 2004/0047858、US 7,132,255和WO 99/052552中所述。在一些实施方案中，抗CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如在例如Zheng等人PLoS One.(2011)6(6):e21146中所述；或与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如在例如WO 2013/054331和US 2014/0271618中所述。
4-1BB也称为CD137，是属于TNFR超家族的跨膜糖蛋白。4-1BB受体存在于激活的T细胞和B细胞和单核细胞上。示例性抗4-1BB抗体是乌瑞鲁单抗(BMS-663513)，其具有潜在的免疫刺激和抗肿瘤活性。
肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4)也称为OX40和CD134，是TNFR超家族的另一个成员。OX40在静止幼稚T细胞上并非组成型表达，并且起次级共刺激免疫检查点分子的作用。示例性抗OX40抗体是MEDI6469和MOXR0916(RG7888，Genentech)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括减少调节性T细胞(Treg)群体的分子。减小(例如，耗尽)Treg细胞数量的方法是本领域中已知的，并且包括例如CD25耗尽、环磷酰胺施用和调节糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)功能。GITR是TNFR超家族的成员，其在激活的T细胞上被上调，从而增强免疫系统。在单采术之前或在施用工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前减小受试者中Treg细胞的数量可以减小肿瘤微环境中不需要的免疫细胞(例如，Treg)的数量并降低所述受试者的复发风险。在一些实施方案中，另外的药剂包括靶向GITR和/或调节GITR功能的分子，如耗尽调节性T细胞(Treg)的GITR激动剂和/或GITR抗体。在一些实施方案中，另外的药剂包括环磷酰胺。在一些实施方案中，在工程化细胞(例如CAR表达细胞)之前施用GITR靶向分子和/或调节GITR功能的分子(例如GITR激动剂和/或耗尽Treg的GITR抗体)。例如，在一些实施方案中，GITR激动剂可以在细胞的单采术之前施用。在一些实施方案中，在施用(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在细胞的单采术之前，将环磷酰胺施用至受试者。在一些实施方案中，在施用(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在细胞的单采术之前，将环磷酰胺和抗GITR抗体施用至受试者。
在一些实施方案中，另外的药剂是GITR激动剂。示例性GITR激动剂包括例如GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如，二价抗GITR抗体)，例如美国专利号6,111,090、欧洲专利号090505B 1、美国专利号8,586,023、PCT公开号WO 2010/003118和2011/090754中描述的GITR融合蛋白；或例如美国专利号7,025,962、欧洲专利号1947183B 1、美国专利号7,812,135、美国专利号8,388,967、美国专利号8,591,886、欧洲专利号EP 1866339、PCT公开号WO2011/028683、PCT公开号WO 2013/039954、PCT公开号WO 2005/007190、PCT公开号WO 2007/133822、PCT公开号WO2005/055808、PCT公开号WO 99/40196、PCT公开号WO 2001/03720、PCT公开号WO99/20758、PCT公开号WO2006/083289、PCT公开号WO 2005/115451、美国专利号7,618,632和PCT公开号WO 2011/051726中描述的抗GITR抗体，每个均通过引用以其整体并入。示例性抗GITR抗体是TRX518。
在一些实施方案中，另外的药剂增强所施用细胞(例如CAR表达细胞)的肿瘤浸润或迁移。例如，在一些实施方案中，另外的药剂刺激CD40，如CD40L，例如，重组人CD40L。分化簇40(CD40)也是TNFR超家族的成员。CD40是在抗原呈递细胞上发现的共刺激蛋白，并且介导众多种免疫反应和炎性反应。CD40还在一些恶性肿瘤上表达，其中CD40促进增殖。示例性抗CD40抗体是达西珠单抗(SGN-40)、鲁卡木单抗(Novartis，拮抗剂)、SEA-CD40(SeattleGenetics)和CP-870,893。在一些实施方案中，增强肿瘤浸润的另外的药剂包括酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、乙酰肝素酶和/或趋化因子受体(如CCR2、CCR4和CCR7)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括沙利度胺药物或其类似物和/或其衍生物，如来那度胺、泊马度胺或阿普斯特。参见例如，Bertilaccio等人,Blood(2013)122:4171；Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940；Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644；和Kuramitsu等人,Cancer Gene Therapy(2015)22:487-495。来那度胺((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮；也称为Revlimid)是沙利度胺的合成衍生物，并且具有多种免疫调节作用，包括加强T细胞与抗原呈递细胞(APC)之间的免疫突触形成。例如，在一些情况下，来那度胺调节T细胞反应并导致增加CD4+和CD8+T细胞中白介素(IL)-2的产生，诱导T辅助(Th)反应从Th2转变为Th1，抑制调节性T细胞子集(Treg)的扩增，以及改进滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中免疫突触的功能(Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺在患有多发性骨髓瘤(MM)的患者中也具有直接的肿瘤杀伤活性，并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的呵护样(nurse-like)细胞)直接和间接地调节CLL肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应于经由CD3连接激活T细胞或树突细胞介导的激活而增强T细胞增殖和干扰素-γ产生。来那度胺还可以诱导恶性B细胞表达更高水平的免疫刺激分子，如CD80、CD86、HLA-DR、CD95和CD40(Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644)。在一些实施方案中，以每天约1mg至约20mg，例如每天约1mg至约10mg、约2.5mg至约7.5mg、约5mg至约15mg，如每天约5mg、10mg、15mg或20mg的剂量来施用来那度胺。在一些实施方案中，以约10μg/kg至5mg/kg，例如约100μg/kg至约2mg/kg、约200μg/kg至约1mg/kg、约400μg/kg至约600μg/kg，如约500μg/kg的剂量施用来那度胺。在一些实施方案中，以约350-550mg/m2(例如，350-375、375-400、400-425、425-450、450-475或475-500mg/m2)的剂量，例如静脉内施用利妥昔单抗。在一些实施方案中，以低剂量施用来那度胺。
在一些实施方案中，另外的药剂是B细胞抑制剂。在一些实施方案中，另外的药剂是一种或多种B细胞抑制剂，其选自CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1或其组合的抑制剂。在一些实施方案中，B细胞抑制剂是抗体(例如，单特异性或双特异性抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的药剂是表达靶向B细胞靶标(例如，CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1)的重组受体的工程化细胞。
在一些实施方案中，另外的药剂是CD20抑制剂，例如，抗CD20抗体(例如，抗CD20单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD20抗体包括但不限于利妥昔单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗(也称为GA101或RO5072759)、维妥珠单抗、奥比妥珠单抗、TRU-015(TrubionPharmaceuticals)、奥卡妥珠单抗(也称为AME-133v或奥卡妥珠单抗)和Pro131921(Genentech)。参见例如Lim等人Haematologica.(2010)95(1):135-43。在一些实施方案中，抗CD20抗体包括利妥昔单抗。利妥昔单抗是嵌合小鼠/人单克隆抗体IgG1κ，其与CD20结合并引起CD20表达细胞的细胞裂解。在一些实施方案中，另外的药剂包括利妥昔单抗。在一些实施方案中，CD20抑制剂是小分子。
在一些实施方案中，另外的药剂是CD22抑制剂，例如，抗CD22抗体(例如，抗CD22单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD22抗体包括依帕珠单抗和RFB4。在一些实施方案中，CD22抑制剂是小分子。在一些实施方案中，抗体是单特异性抗体，任选地与第二药剂(如化学治疗剂)缀合。例如，在一些实施方案中，抗体是抗CD22单克隆抗体-MMAE缀合物(例如，DCDT2980S)。在一些实施方案中，抗体是抗CD22抗体的scFv，例如，抗体RFB4的scFv。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属(Pseudomonas)外毒素-A(例如，BL22)的全部或片段融合。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属外毒素-A(例如，moxetumomab pasudotox)的全部或片段(例如，38kDa片段)融合。在一些实施方案中，抗CD22抗体是抗CD19/CD22双特异性抗体，任选地与毒素缀合。例如，在一些实施方案中，抗CD22抗体包含抗CD19/CD22双特异性部分(例如，两个scFv配体，识别人CD19和CD22)，其任选地连接至白喉毒素(DT)的全部或一部分，例如白喉毒素(DT)的前389个氨基酸(DT 390)，例如配体引导的毒素如DT2219ARL。在一些实施方案中，双特异性部分(例如抗CD19/抗CD22)连接至毒素如脱糖基化蓖麻毒素A链(例如，Combotox)。
在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子。在一些实施方案中，免疫调节剂是细胞因子或者是诱导肿瘤微环境中的细胞因子表达增加的药剂。细胞因子具有与T细胞扩增、分化、存活和稳态有关的重要功能。可以向接受本文提供的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物的受试者施用的细胞因子包括以下中的一种或多种：IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-18和IL-21。在一些实施方案中，所施用的细胞因子是IL-7、IL-15或IL-21或其组合。在一些实施方案中，将细胞因子施用至对工程化细胞(例如CAR表达细胞)的施用具有次最佳反应的受试者改善了所施用细胞(例如CAR表达细胞)的功效和/或抗肿瘤活性。
“细胞因子”意指由一个细胞群释放的作为细胞间介体作用于另一种细胞的蛋白质的通用术语。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(FSH)、甲状腺刺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15；肿瘤坏死因子，如TNF-α或TNF-β；以及其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。例如，免疫调节剂是细胞因子，并且细胞因子是IL-4、TNF-α、GM-CSF或IL-2。
在一些实施方案中，另外的药剂包括白介素-15(IL-15)多肽、白介素-15受体α(IL-15Rα)多肽、或其组合(例如hetIL-15(Admune Therapeutics,LLC))。hetIL-15是IL-15与IL-15Rα的异二聚体非共价复合物。hetIL-15描述于例如以下文献中：U.S.8,124,084、U.S.2012/0177598、U.S.2009/0082299、U.S.2012/0141413和U.S.2011/0081311。在一些实施方案中，免疫调节剂可以含有一种或多种细胞因子。例如，白介素可以包括白细胞-白介素注射剂(Multikine)，其是天然细胞因子的组合。在一些实施方案中，免疫调节剂是Toll样受体(TLR)激动剂、佐剂或细胞因子。
在一些实施方案中，另外的药剂是改善或中和与细胞疗法相关的一种或多种毒性或副作用的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂选自类固醇(例如皮质类固醇)、TNFα抑制剂以及IL-6或IL-6信号传导的抑制剂。TNFα抑制剂的例子是抗TNFα抗体分子，如英利昔单抗、阿达木单抗、培赛利珠单抗(certolizumab pegol)和戈利木单抗。TNFα抑制剂的另一个例子是融合蛋白，如依那西普。TNFα的小分子抑制剂包括但不限于黄嘌呤衍生物(例如己酮可可碱)和安非他酮。IL-6抑制剂的例子是抗IL-6受体(抗IL-6R)抗体分子，如托珠单抗(tocilizumab)、萨瑞鲁单抗、伊西莫单抗(elsilimomab)、CNTO 328、ALD518/BMS-945429、CNTO 136、CPSI-2364、CDP6038、VX30、ARGX-109、FE301和FM101。在一些实施方案中，所述抗IL-6R抗体分子是托珠单抗。在一些方面，托珠单抗阻断炎性细胞因子白介素-6(IL-6)与其受体IL-6受体(IL-6R)之间的相互作用。在一些方面，IL-6的抑制剂是抗IL-6抗体。在一些方面，示例性抗IL-6抗体是司妥昔单抗。在一些方面，西妥昔单抗通过结合IL-6并阻止IL-6激活免疫效应细胞来阻断IL-6信号传导。
在一些方面，改善或中和一种或多种与细胞疗法相关的毒性或副作用的另外的试剂包括抗GM-CSF试剂，如仑兹鲁单抗(lenzilumab)，其是中和GM-CSF的人源化单克隆抗体(Sterner等人,Blood(2018)132(增刊1):961；Sterner等人,Blood.2019；133(7):697-709)；T细胞耗尽抗体阿仑单抗、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、环磷酰胺、鲁索替尼或依鲁替尼(Borrega等人,HemaSphere.2019年4月；3(2):191)。
在一些实施方案中，另外的药剂是IL-1R拮抗剂，如阿那白滞素。在一些实施方案中，另外的药剂是阿那白滞素。在一些方面，向患有重度CRS且对托珠单抗和皮质类固醇的治疗无效的受试者施用阿那白滞素。在一些实施方案中，另外的药剂是阿那白滞素，并且阿那白滞素的示例性剂量是每天为或约25mg、50mg、60mg、70mg、80mg、90mg、100mg、110mg、120mg、125mg、150mg、200mg、250mg、300mg、400mg或500mg、或前述任一项限定的任何范围，如每天100mg。在一些方面，阿那白滞素的示例性每天剂量是为或约100mg。在一些方面，阿那白滞素的示例性每天剂量是为或约200mg。在一些方面，皮下施用阿那白滞素。在一些方面，施用阿那白滞素直到CRS消退，例如SC施用的100mg的每天剂量。在一些方面，施用阿那白滞素直到CRS消退，例如SC施用的200mg的每天剂量，如分为两个100mg剂量。在一些方面，如果受试者展现出重度CRS，并且在一些情况下，与神经病学事件或MAS/HLH结合，则施用阿那白滞素100mg，每天两次(例如，每12小时一次)SC，直到不良事件(如CRS、神经病学事件和/或MAS/HLH)消退。
在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷水平和/或腺苷途径组分的调节剂。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如，腺苷和一些非选择性激活腺苷受体亚型的腺苷类似物减少炎症氧化产物的嗜中性粒细胞产生(Cronstein等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.451:291,1985；Roberts等人,Biochem.J.,227:669,1985；Schrier等人,J.Immunol.137:3284,1986；Cronstein等人,Clinical Immunol.Immunopath.42:76,1987)。在一些情况下，细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度在特定环境(例如肿瘤微环境(TME))中可能增加。在一些情况下，腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或在缺氧或其调节中所涉及的因子，例如缺氧诱导因子(HIF)。在一些实施方案中，腺苷信号传导的增加可以增加细胞内cAMP和cAMP依赖性蛋白激酶，从而导致抑制促炎细胞因子产生，并且可以导致免疫抑制分子的合成和Treg的发展(Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中，另外的药剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制效应。在一些实施方案中，另外的药剂可以减少或逆转缺氧驱动的A2-腺苷酸能T细胞免疫抑制。在一些实施方案中，另外的药剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、CD39/CD73胞外酶产生腺苷的抑制剂和缺氧-HIF-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。
通过细胞外腺苷的抑制剂(例如防止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(例如腺苷受体拮抗剂)可以增强免疫反应，如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞、T细胞和/或B细胞介导的反应。此外，Gs蛋白介导的cAMP依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的Gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。
在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂，例如腺苷受体A2a、A2b、A1和A3中的一种或多种的拮抗剂或激动剂。分别地，A1和A3抑制腺苷酸环化酶活性，并且A2a和A2b刺激腺苷酸环化酶活性。某些腺苷受体(如A2a、A2b和A3)可以在炎症期间抑制或降低免疫反应。因此，拮抗免疫抑制性腺苷受体可以扩大、加强或增强免疫反应，例如来自所施用细胞(例如表达CAR的T细胞)的免疫反应。在一些实施方案中，另外的药剂抑制细胞外腺苷的产生和腺苷通过腺苷受体触发的信号传导。例如，通过抑制或减少产生腺苷的局部组织缺氧；通过降解积累的细胞外腺苷(或使其失活)；通过阻止或减少免疫细胞上腺苷受体的表达；和/或通过抑制/拮抗腺苷配体通过腺苷受体进行的信号传导，可以增强免疫反应、局部组织炎症和所靶向组织破坏的增强。
拮抗剂是作为与细胞受体结合而不引发生物学反应的药剂，倾向于消除另一种物质的作用的任何物质。在一些实施方案中，拮抗剂是化学化合物，其是腺苷受体(如A2a、A2b或A3受体)的拮抗剂。在一些实施方案中，拮抗剂是结合腺苷受体但是不触发Gi蛋白依赖性细胞内途径的肽或拟肽。示例性拮抗剂描述于以下文献中：美国专利号5,565,566、5,545,627、5,981,524、5,861,405、6,066,642、6,326,390、5,670,501、6,117,998、6,232,297、5,786,360、5,424,297、6,313,131、5,504,090和6,322,771。
在一些实施方案中，另外的药剂是A2受体(A2R)拮抗剂，如A2a拮抗剂。示例性A2R拮抗剂包括KW6002(伊曲茶碱(istradefyline))、SCH58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(DMPX)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(CSC)、MSX-2、MSX-3、MSX-4、CGS-15943、ZM-241385、SCH-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(BII014)、V2006、ST-1535、SYN-115、PSB-1115、ZM241365、FSPTP和靶向A2R表达的抑制性核酸(例如，siRNA或shRNA)或靶向A2R的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，另外的药剂是描述于例如以下文献中的A2R拮抗剂：Ohta等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2006)103:13132-13137；Jin等人,Cancer Res.(2010)70(6):2245-2255；Leone等人,Computational and Structural Biotechnology Journal(2015)13:265-272；Beavis等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2013)110:14711-14716；和Pinna,A.,Expert OpinInvestig Drugs(2009)18:1619-1631；Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605；US 8,080,554；US 8,716,301；US 20140056922；WO 2008/147482；US 8,883,500；US 20140377240；WO 02/055083；US 7,141,575；US 7,405,219；US 8,883,500；US 8,450,329和US 8,987,279。
在一些实施方案中，拮抗剂是特异性地结合编码腺苷受体的mRNA的反义分子、抑制性核酸分子(例如，小抑制性RNA(siRNA))或催化性核酸分子(例如，核酶)。在一些实施方案中，反义分子、抑制性核酸分子或催化性核酸分子结合编码A2a、A2b或A3的核酸。在一些实施方案中，反义分子、抑制性核酸分子或催化核酸靶向腺苷受体下游的生化途径。例如，反义分子或催化核酸可以抑制Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径中涉及的酶。在一些实施方案中，另外的药剂包括腺苷受体(如A2a、A2b或A3)的显性阴性突变形式。
在一些实施方案中，抑制细胞外腺苷的另外的药剂包括使细胞外腺苷无功能(或降低这种功能)的药剂，例如修饰腺苷结构以抑制腺苷通过腺苷受体进行信号传导的能力的物质。在一些实施方案中，另外的药剂是细胞外产生腺苷或腺苷降解的酶，其修饰形式或其调节剂。例如，在一些实施方案中，另外的药剂是酶(例如，腺苷脱氨酶)或另一种催化分子，所述酶或另一种催化分子选择性地结合并破坏腺苷，从而消除或显著降低内源形成的腺苷通过腺苷受体进行信号传导并终止炎症的能力。
在一些实施方案中，另外的药剂是腺苷脱氨酶(ADA)或其修饰形式，例如，重组ADA和/或聚乙二醇修饰的ADA(ADA-PEG)，其可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ADA-PEG已用于治疗患有ADA SCID的患者(Hershfield(1995)Hum Mutat.5:107)。在一些实施方案中，抑制细胞外腺苷的药剂包括阻止或减少细胞外腺苷形成，和/或阻止或减少细胞外腺苷积累，从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂特异性地抑制参与对促炎性分子的合成和/或分泌进行调节的酶和蛋白质，所述另外的药剂包括核转录因子的调节剂。对腺苷受体表达、或Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径、或cAMP依赖性细胞内途径的抑制可以导致免疫反应的增加/增强。
在一些实施方案中，另外的药剂可以靶向生成或产生细胞外腺苷的胞外酶。在一些实施方案中，另外的药剂靶向共同作用于产生细胞外腺苷的CD39和CD73胞外酶。CD39(也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外ATP(或ADP)转化为5'AMP。随后，CD73(也称为5'核苷酸酶)将5'AMP转化为腺苷。CD39的活性可通过NDP激酶和腺苷酸激酶的作用逆转，而CD73的活性是不可逆的。CD39和CD73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和Treg)上表达，并且也在许多癌细胞上表达。例如，在肿瘤微环境的低氧条件下，CD39和CD73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能源于血液供应不足和肿瘤血管杂乱，从而影响氧气的输送(Carrolland Ashcroft(2005),Expert.Rev.Mol.Med.7(6):1–16)。缺氧也抑制将腺苷转化为AMP的腺苷酸激酶(AK)，从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此，响应于缺氧以高浓度释放腺苷，缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围的肿瘤微环境(TME)中频繁出现的条件。在一些实施方案中，另外的药剂是抗CD39抗体或其抗原结合片段、抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如MEDI9447或TY/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(ADP)、ARL 67156、POM-3、IPH52中的一种或多种(参见例如Allard等人Clin Cancer Res(2013)19(20):5626-5635；Hausler等人,Am JTransl Res(2014)6(2):129-139；Zhang,B.,Cancer Res.(2010)70(16):6407-6411)。
在一些实施方案中，另外的药剂是缺氧诱导因子1α(HIF-1α)信号传导的抑制剂。示例性HIF-1α抑制剂包括地高辛、吖啶黄素、瑟土因-7(sirtuin-7)和加特司匹(ganetespib)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂，例如，本文所述的蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂。在一些实施方案中，蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-1抑制剂，例如本文所述的SHP-1抑制剂，例如，葡萄糖酸锑钠。在一些实施方案中，蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-2抑制剂，例如本文所述的SHP-2抑制剂。
在一些实施方案中，另外的药剂是激酶抑制剂。激酶抑制剂(如CDK4激酶抑制剂、BTK激酶抑制剂、MNK激酶抑制剂或DGK激酶抑制剂)可以调节肿瘤细胞中存在的组成型活性的存活途径和/或调节免疫细胞的功能。在一些实施方案中，激酶抑制剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂，例如依鲁替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯3-激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是CDK4抑制剂，例如CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是mTOR抑制剂，例如雷帕霉素、雷帕霉素类似物、OSI-027。mTOR抑制剂可以是例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂，例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是MNK抑制剂或双重PI3K/mTOR抑制剂。在一些实施方案中，其他示例性激酶抑制剂包括AKT抑制剂哌立福辛(perifosine)、mTOR抑制剂替西罗莫司(temsirolimus)、Src激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)和福他替尼(fostamatinib)、JAK2抑制剂帕克替尼和鲁索替尼、PKCβ抑制剂恩扎妥林(enzastaurin)和苔藓抑素，以及AAK抑制剂阿立塞替(alisertib)。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的BTK抑制剂：依鲁替尼(PCI-32765)；GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。在一些实施方案中，BTK抑制剂不会降低或抑制白介素-2诱导型激酶(ITK)的激酶活性，并且选自GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如，依鲁替尼(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮；也称为PCI-32765)。在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如依鲁替尼(PCI-32765)，并且按以下剂量来施用依鲁替尼：每天约250mg、300mg、350mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、560mg、580mg、600mg(例如，250mg、420mg或560mg)持续一段时间，例如，每天施用持续21天周期，或每天施用持续28天周期。在一些实施方案中，施用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个周期的依鲁替尼。在一些实施方案中，BTK抑制剂是国际申请WO 2015/079417中描述的BTK抑制剂。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是PI3K抑制剂。PI3K是参与细胞周期调节和淋巴瘤存活的PI3K/Akt/mTOR途径的核心。示例性PI3K抑制剂包括艾代拉利司(idelalisib)(PI3Kδ抑制剂)。在一些实施方案中，另外的药剂是艾代拉利司和利妥昔单抗。
在一些实施方案中，另外的药剂是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的mTOR抑制剂：坦罗莫司；利罗莫司(ridaforolimus)(也称为AP23573和MK8669)；依维莫司(RAD001)；雷帕霉素(AY22989)；simapimod；AZD8055；PF04691502；SF1126；和XL765。在一些实施方案中，另外的药剂是丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂，如威罗菲尼(vemurafenib)、达拉非尼(dabrafenib)和曲美替尼(trametinib)。
在一些实施方案中，另外的药剂是调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的药剂。在一些实施方案中，另外的药剂包括B细胞淋巴瘤2(BCL-2)抑制剂(例如，维奈托克(venetoclax)，也称为ABT-199或GDC-0199；或ABT-737)。维奈托克是抑制抗细胞凋亡蛋白BCL-2的小分子(4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基}-1-哌嗪基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺)。调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的其他药剂包括BCL-2抑制剂ABT-737、那维妥拉(navitoclax)(ABT-263)；用于最大功效的Mcl-1siRNA或Mcl-1抑制剂类视色素N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)。在一些实施方案中，另外的药剂提供促细胞凋亡刺激，如重组肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)，其可以通过与肿瘤细胞表面上的TRAIL死亡受体DR-4和DR-5结合激活细胞凋亡途径；或TRAIL-R2激动抗体。
在一些实施方案中，另外的药剂包括吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂。IDO是一种催化氨基酸L-色氨酸降解为犬尿氨酸的酶。许多癌症过表达IDO，例如前列腺癌、结直肠癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、卵巢癌、头癌和肺癌。浆细胞样树突细胞(pDC)、巨噬细胞和树突细胞(DC)可以表达IDO。在一些方面，L-色氨酸的减少(例如由IDO催化)通过诱导T细胞无反应性和凋亡而导致免疫抑制环境。因此，在一些方面，例如通过减少所施用的CAR表达细胞的抑制或死亡，IDO抑制剂可以增强本文所述的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物的功效。IDO的示例性抑制剂包括但不限于1-甲基色氨酸indoximod(New LinkGenetics)(参见例如，临床试验标识号NCT01191216；NCT01792050)和INCB024360(IncyteCorp.)(参见例如，临床试验标识号NCT01604889；NCT01685255)。
在一些实施方案中，另外的药剂包括细胞毒性剂，例如，CPX-351(CelatorPharmaceuticals)、阿糖胞苷、多柔比星、沃沙隆沙星(vosaroxin)(SunesisPharmaceuticals)、沙帕他滨(Cyclacel Pharmaceuticals)、伊达比星或米托蒽醌。在一些实施方案中，另外的药剂包括低甲基化剂，例如，DNA甲基转移酶抑制剂，例如，阿扎胞苷或地西他滨。
在另一个实施方案中，另外的疗法是移植，例如，同种异体干细胞移植。
在一些实施方案中，另外的药剂是溶瘤病毒。在一些实施方案中，溶瘤病毒能够在癌细胞中选择性地复制并触发所述癌细胞的死亡或减慢所述癌细胞的生长。在一些情况下，溶瘤病毒对非癌细胞无影响或影响极小。溶瘤病毒包括但不限于溶瘤腺病毒、溶瘤单纯疱疹病毒、溶瘤逆转录病毒、溶瘤细小病毒、溶瘤痘苗病毒、溶瘤辛德毕斯病毒(oncolyticSinbis virus)、溶瘤流感病毒或溶瘤RNA病毒(例如，溶瘤呼吸弧病毒、溶瘤新城疫病毒(NDV)、溶瘤麻疹病毒或溶瘤水疱性口炎病毒(VSV))。
其他示例性组合疗法、治疗和/或药剂包括抗过敏剂、止吐药、镇痛药和辅助疗法。在一些实施方案中，另外的药剂包括细胞保护剂，如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂和营养素。
在一些实施方案中，用作另外的药剂的抗体与本文所述的治疗剂缀合或以其他方式结合，所述治疗剂是例如化学治疗剂(例如，环磷酰胺、氟达拉滨、组蛋白脱乙酰化酶抑制剂、脱甲基剂、肽疫苗、抗肿瘤抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗微管剂或抗有丝分裂剂)、抗过敏剂、止吐剂(anti-nausea agent)(或止吐药(anti-emetic))、止痛药或细胞保护剂。在一些实施方案中，另外的药剂是抗体-药物缀合物。
在一些实施方案中，另外的药剂可以在DNA、RNA或蛋白质水平上调节、抑制或刺激特定因子，以增强或加强本文提供的表达BCMA结合重组受体的工程化细胞和/或组合物的功效。在一些实施方案中，另外的药剂可以在所施用的细胞(例如被工程化以表达重组受体(例如CAR)的细胞)内在核酸(例如DNA或RNA)水平上调节因子。在一些实施方案中，抑制性核酸(例如抑制性核酸，例如dsRNA，例如siRNA或shRNA)或成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)或锌指核酸内切酶(ZFN)可以用于抑制工程化细胞(例如CAR表达细胞)中抑制性分子的表达。在一些实施方案中，抑制剂是shRNA。在一些实施方案中，抑制性分子在工程化细胞(例如CAR表达细胞)内被抑制。在一些实施方案中，编码抑制调节(“modulate”或“regulate”)(例如抑制)T细胞功能的分子的表达的dsRNA分子的核酸分子可操作地连接至启动子(例如源自HI或U6的启动子)，使得抑制所述抑制性分子的表达的dsRNA分子在工程化细胞(例如CAR表达细胞)内表达。参见例如BrummelkampTR,等人(2002)Science 296:550-553；Miyagishi M,等人(2002)Nat.Biotechnol.19:497-500。
在一些实施方案中，另外的药剂(如本文所述的任何免疫检查点抑制剂)能够破坏编码抑制性分子的基因。在一些实施方案中，破坏是通过缺失(例如整个基因、外显子或区域的缺失)，和/或用外源序列替代，和/或通过在基因内通常在基因的外显子内的突变(例如移码或错义突变)。在一些实施方案中，破坏导致提前终止密码子并入基因中，使得抑制性分子不表达或不以能够在细胞表面上表达和/或能够介导细胞信号传导的形式表达。破坏通常在DNA水平上进行。破坏通常是永久性的、不可逆的或非暂时性的。
在一些方面，破坏通过基因编辑如使用在被靶向进行破坏的区域处与基因特异性地结合或杂交的DNA结合蛋白或DNA结合核酸进行。在一些方面，所述蛋白质或核酸与核酸酶偶联或复合，例如以嵌合或融合蛋白的形式。例如，在一些实施方案中，使用对所破坏的基因具有特异性的、包含DNA靶向蛋白质和核酸酶的融合物(如锌指核酸酶(ZFN)或TAL效应子核酸酶(TALEN)或RNA指导的核酸酶(如成簇的规律间隔短回文重复序列(CRISPR)-Cas系统，如CRISPR-Cas9系统))来实现破坏。在一些实施方案中，产生或生成基因工程化细胞(例如CAR表达细胞)的方法包括向细胞群中引入编码基因工程化抗原受体(例如CAR)的核酸分子和编码靶向抑制性分子的药剂的核酸分子，所述药剂是对抑制分子具有特异性的基因编辑核酸酶，例如DNA靶向蛋白质和核酸酶的融合物(如ZFN或TALEN或RNA指导的核酸酶(如CRISPR-Cas9系统))。
II.BCMA结合重组受体及其编码多核苷酸
在一些方面，提供了结合或识别BCMA分子的BCMA结合重组受体或嵌合抗原受体、编码BCMA结合重组受体(例如嵌合抗原受体；CAR)的多核苷酸以及表达此类受体的细胞。在一些方面，根据本文所提供的方法或用途使用表达BCMA结合重组受体的细胞和包含此类细胞的组合物。BCMA结合重组受体通常含有抗体(例如，抗原结合抗体片段)和/或特异性地识别(如特异性地结合至)BCMA(如BCMA蛋白，如人BCMA蛋白)的其他结合肽。在一些方面，所述药剂与BCMA的细胞外部分结合。还提供了包含此类多核苷酸或表达此类受体的细胞(例如，工程化细胞)以及包含此类工程化细胞的组合物。在一些方面，还提供了使用此类细胞和组合物的方法以及其如在治疗方法中的用途。
在一些实施方案中，编码BCMA结合重组受体(例如CAR)的多核苷酸被优化或含有某些特征，所述某些特征被设计用于优化(如用于密码子使用)以降低RNA异质性和/或修饰(例如，增加或赋予)编码的受体在细胞产物批次之间更一致的表达(如表面表达)。在一些实施方案中，与参考多核苷酸相比，编码BCMA结合重组受体的多核苷酸被修饰，例如以去除隐秘或隐藏的剪接位点，从而降低RNA异质性。在一些实施方案中，编码BCMA结合重组受体的多核苷酸是密码子优化的，如以用于在哺乳动物(例如人)细胞(如人T细胞)中表达。在一些方面，当在细胞中表达时，经修饰的多核苷酸导致改善的，例如增加的或更均匀或更一致的表达(例如，表面表达)水平。此类多核苷酸可以用于构建体中，以产生表达编码的BCMA结合细胞表面蛋白的工程化细胞。因此，还提供了表达由本文所提供的多核苷酸编码的重组受体的细胞及其在过继细胞疗法(如与BCMA表达相关的疾病和障碍(如多发性骨髓瘤)的治疗)中的用途。
所述多核苷酸包括编码特异性地识别(如特异性地结合)BCMA(如人BCMA)的重组受体(如抗原受体)的那些。在一些方面，还提供了编码的受体(如含有BCMA结合多肽的那些)及其组合物和制品以及用途。在一些方面，此类多核苷酸可以用于使免疫细胞(例如T细胞)工程化以表达BCMA结合重组受体，例如使用本文(例如第III部分)所述的方法，以产生工程化细胞或细胞组合物，以用于方法(如本文所提供的治疗性和/或预防性方法)中。
BCMA结合多肽包括抗体，如单链抗体(例如，抗原结合抗体片段)或其部分。在一些实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体，如含有抗BCMA抗体或其抗原结合片段的那些。在任何实施方案中，在CAR中特异性地识别抗原(例如BCMA)的抗体或抗原结合片段与所述抗原特异性地结合。所提供的多核苷酸可以掺入构建体(如脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)构建体，如可以引入细胞中以表达编码的BCMA结合重组受体的那些)中。
在一些情况下，编码BCMA结合重组受体的多核苷酸含有编码信号肽的信号序列，在一些情况下其在编码BCMA结合重组受体的核酸序列的上游编码或者在编码抗原结合结构域的核酸序列的5'末端处接合。在一些情况下，含有编码BCMA结合重组受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))的核酸序列的多核苷酸含有编码信号肽的信号序列。在一些方面，信号序列可以编码源自天然多肽的信号肽。在其他方面，信号序列可以编码异源或非天然信号肽。在一些方面，非限制性示例性信号肽包括SEQ ID NO:166所示的、由SEQ ID NO:167或168-171所示的核苷酸序列编码的IgGκ链的信号肽；SEQ ID NO:154所示的、由SEQ ID NO:155所示的核苷酸序列编码的GMCSFRα链；SEQ ID NO:146所示的CD8α信号肽；或SEQ ID NO:142所示的CD33信号肽。在一些情况下，编码BCMA结合重组受体的多核苷酸可以含有编码另外的分子(如替代标记物或其他标记物)的核酸序列，或者可以含有另外的组分，如启动子、调节元件和/或多顺反子元件。在一些实施方案中，编码BCMA结合重组受体的核酸序列可以与任何另外的组分可操作地连接。
此外，在一些情境下，对疗法的最佳反应可以取决于工程化重组受体(如CAR)在细胞表面上一致且可靠地表达和/或结合靶抗原的能力。例如，在一些情况下，来自所引入的转基因(例如，编码重组受体)的转录的RNA的异质性可能在用于细胞疗法中的细胞(如人T细胞)中表达的一些情况下影响重组受体的表达和/或活性。在一些情境下，重组受体(如CAR)中的间隔子的长度和类型可能影响受体的表达、活性和/或功能。
在一些情境下，所提供的实施方案基于以下观察结果：特定间隔子和核酸序列的优化可以导致重组受体的一致且稳健的表达。在一些实施方案中，在所提供的方法中使用的BCMA结合重组受体提供了优于细胞疗法(特别是BCMA靶向细胞疗法)的可用方法的优点。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有具有对于结合可溶性BCMA的低亲和力的完全人抗原结合结构域。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有经修饰的间隔子，其导致与在靶细胞表面上表达的BCMA的增强的结合。在一些实施方案中，观察到BCMA结合重组受体展现出降低的抗原非依赖性强直信号传导，这在一些情况下可以导致降低的通过抗原非依赖性信号传导的细胞耗竭，以及通过可溶性BCMA的抑制的缺乏。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体展现出针对表达低密度或低水平的BCMA的靶细胞的活性或效力。在一些方面，所描述的BCMA结合重组受体的优点包括，它们可以用于先前接受过定向于BCMA的先前疗法和/或对其无反应、在其后复发或变得其难治的受试者中，所述先前疗法包括先前使用BCMA结合剂或BCMA靶向剂(如BCMA靶向抗体-药物缀合物(ADC)、BCMA靶向T细胞接合剂(TCE)或表达BCMA靶向嵌合抗原受体(CAR)的细胞)的治疗或疗法。如本文所提供的，BCMA结合重组受体的优点，如稳定性、高表达、减少的抗原非依赖性(例如，强直性)信号传导、可溶性BCMA的低结合、高反应率、低不良事件(例如，毒性)发生率、延长的反应，以及在一些情况下，反应随时间得到改善，因此可以用于对先前BCMA定向疗法无反应、在其后复发或变得其难治的受试者中。
此外，在一些情境下，某些重组受体可以展现出抗原非依赖性活性或信号传导(也称为“强直信号传导”)，这可能导致不希望的作用，如由于表达重组受体的T细胞的分化增加和/或耗竭。在一些方面，此类活性可能限制T细胞的活性、作用或效力。在一些情况下，在用于重组受体表达的细胞的工程化和离体扩增过程中，所述细胞可能由于通过重组受体的强直信号传导而展现出指示耗竭的表型。
在一些情境下，重组受体特异性地结合、识别或靶向的特定靶抗原的特性可能影响受体的活性。在一些情境下，B细胞成熟抗原(BCMA)通常在恶性浆细胞上表达，并且是细胞疗法的有吸引力的治疗性靶标。在一些情况下，BCMA可以被γ分泌酶切割，产生可溶性BCMA(sBCMA)或“脱落”形式的BCMA，从而减少在靶细胞表面上表达的BCMA。在一些情况下，BCMA结合重组受体(如抗BCMA嵌合抗原受体(CAR))的活性可以通过可溶性BCMA的存在而被阻断或抑制。对于对细胞疗法，特别是特异性地结合、识别或靶向BCMA(如在靶细胞表面上表达的BCMA)的重组受体的最佳反应，需要改善的策略。
BCMA结合重组受体(例如在本文所提供的方法和用途中使用的细胞中表达的)通常含有细胞外结合结构域和细胞内信号传导结构域。BCMA结合重组受体包括含有抗体的多肽，包括含有此类抗体的单链细胞表面蛋白(例如，重组受体，如嵌合抗原受体)。
BCMA结合重组受体包括包含所提供的抗体或其片段(例如，BCMA结合片段)中的一种的单链细胞表面蛋白，如重组受体(例如，抗原受体)。重组受体包括特异性地结合或特异性地识别BCMA的抗原受体，如含有所提供的抗BCMA抗体(例如抗原结合片段)的抗原受体。抗原受体包括功能性非TCR抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR)。还提供表达重组受体的细胞及其在过继细胞疗法(例如与BCMA表达相关的疾病和障碍的治疗)中的用途。
示例性抗原受体(包括CAR)以及将此类抗原受体工程化并引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO 200014257、WO 2013126726、WO2012/129514、WO 2014031687、WO 2013166321、WO 2013071154、WO 2013123061，美国专利申请公开号US 2002131960、US 2013287748、US 20130149337，美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP 2537416，各自以其整体并入本文；和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388–398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18(2):160-75。在一些方面，抗原受体包括如美国专利号7,446,190中描述的CAR，以及国际专利申请公开号WO 2014055668中描述的那些。示例性CAR包括任何上述出版物(如WO 2014031687、US8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、US 7,446,190和US 8,389,282)中披露的CAR，并且其中抗原结合部分(例如scFv)被如本文所提供的抗体或其抗原结合片段替代。
在一些方面，在所提供的实施方案中使用的BCMA特异性CAR包括例如WO 2019/090003中描述的那些。
在一些方面，在所提供的实施方案中使用的BCMA特异性CAR具有选自SEQ ID NO:15-20的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:15-20中任一个所示的氨基酸序列展现出至少或约至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，CAR具有SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列展现出至少或约至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ ID NO:9-14中任一个所示的核酸序列或与SEQ ID NO:9-14中任一个所示的核酸序列展现出至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列的多核苷酸。在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ ID NO:13或SEQ IDNO:14所示的核酸序列或与SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:14所示的核酸序列展现出至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列的多核苷酸。在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ ID NO:13所示的核酸序列或与SEQ ID NO:13展现出至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列的多核苷酸。在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ ID NO:13所示的核酸序列的多核苷酸。在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ ID NO:14所示的核酸序列或与SEQ ID NO:14展现出至少或至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列的多核苷酸。在一些实施方案中，CAR由多核苷酸编码，所述多核苷酸如具有SEQ IDNO:14所示的核酸序列的多核苷酸。
在一些实施方案中，编码抗原结合结构域的核酸包含：(a)SEQ ID NO:30、31、50、51、59、60、82、84、113和115中任一个所示的核苷酸序列；(b)与SEQ ID NO:30、31、50、51、59、60、82、84、113和115中任一个具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；或(c)(a)或(b)的简并序列。在一些实施方案中，编码抗原结合结构域的核酸包含：(a)编码SEQ ID NO:29、49、58、83、114、126、128、129、130中任一个所示氨基酸序列的核苷酸序列；(b)与编码SEQID NO:29、49、58、83、114、126、128、129、130中任一个所示氨基酸序列的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；或(c)(a)或(b)的简并序列。
A.抗原结合结构域
嵌合受体包括嵌合抗原受体(CAR)。嵌合受体(如CAR)通常包含细胞外抗原结合结构域，其包括所提供的抗BCMA抗体中的一种、是所提供的抗BCMA抗体中的一种或包含在所提供的抗BCMA抗体中的一种内或者包含所提供的抗BCMA抗体中的一种。因此，嵌合受体(例如CAR)通常在其细胞外部分中包含一个或多个BCMA结合结构域，如一个或多个抗原结合片段、结构域或部分，或一个或多个抗体可变区和/或抗体分子(如本文所述的那些)。
本文中的术语“抗体”在最广泛的意义上使用，并且包括多克隆和单克隆抗体，包括完整抗体和功能性(抗原结合)抗体片段，包括片段抗原结合(Fab)片段、F(ab')2片段、Fab'片段、Fv片段、重组IgG(rIgG)片段、能够特异性地结合抗原的重链可变(VH)区、单链抗体片段(包括单链可变片段(scFv))以及单结构域抗体(例如，sdAb、sdFv、纳米抗体)片段。所述术语涵盖免疫球蛋白的基因工程化的和/或以其他方式修饰的形式，如胞内抗体、肽体、嵌合抗体、全人抗体、人源化抗体和异缀合抗体、多特异性(例如，双特异性或三特异性)抗体、双抗体、三抗体和四抗体、串联双scFv、串联三scFv。除非另有说明，否则术语“抗体”应当理解为涵盖其功能抗体片段，在本文也称为“抗原结合片段”。所述术语还涵盖完整或全长抗体，包括任何类别或亚类(包括IgG及其亚类、IgM、IgE、IgA和IgD)的抗体。
术语“互补决定区”和“CDR”与“高变区”或“HVR”同义，在本领域中是已知的，是指抗体可变区内的非连续氨基酸序列，其赋予抗原特异性和/或结合亲和力。通常，在每个重链可变区中有三个CDR(CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)，并且在每个轻链可变区中有三个CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3)。“框架区”和“FR”在本领域中是已知的，是指重链和轻链的可变区的非CDR部分。通常，每个全长重链可变区有四个FR(FR-H1、FR-H2、FR-H3和FR-H4)，并且每个全长轻链可变区有四个FR(FR-L1、FR-L2、FR-L3和FR-L4)。
给定CDR或FR的精确氨基酸序列边界可以使用许多熟知的方案中的任一种容易地确定，包括以下中所述的那些：Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins ofImmunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(“Kabat”编号方案)；Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948(“Chothia”编号方案)；MacCallum等人,J.Mol.Biol.262:732-745(1996),“Antibody-antigen interactions:Contact analysis and binding site topography,”J.Mol.Biol.262,732-745”。(“Contact”编号方案)；Lefranc MP等人,“IMGT uniquenumbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Igsuperfamily V-like domains,”Dev Comp Immunol,2003年1月；27(1):55-77(“IMGT”编号方案)；Honegger A和Plückthun A,“Yet another numbering scheme forimmunoglobulin variable domains:an automatic modeling and analysis tool,”JMol Biol,2001年6月8号；309(3):657-70(“Aho”编号方案)；以及Martin等人,“Modelingantibody hypervariable loops:a combined algorithm,”PNAS,1989,86(23):9268-9272(“AbM”编号方案)。
给定CDR或FR的边界可能根据用于鉴定的方案而变化。例如，Kabat方案是基于结构比对，而Chothia方案是基于结构信息。Kabat和Chothia方案的编号都基于最常见的抗体区域序列长度，其中通过插入字母(例如“30a”)提供插入，并且在一些抗体中出现缺失。这两种方案将某些插入和缺失(“插入缺失(indel)”)放置在不同的位置，从而产生不同的编号。Contact方案是基于对复杂晶体结构的分析，并且在许多方面与Chothia编号方案相似。AbM方案是Kabat与Chothia定义之间的折衷，是基于Oxford Molecular's AbM抗体建模软件使用的方案。
下表5列出了分别通过Kabat、Chothia、AbM和Contact方案鉴定的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3以及CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3的示例性位置边界。对于CDR-H1，使用Kabat和Chothia两种编号方案列出残基编号。FR位于CDR之间，例如，FR-L1位于CDR-L1之前，FR-L2位于CDR-L1与CDR-L2之间，FR-L3位于CDR-L2与CDR-L3之间，等等。应注意，因为所示的Kabat编号方案在H35A和H35B处放置插入，所以当使用所示的Kabat编号惯例进行编号时，Chothia CDR-H1环的末端根据环的长度在H32与H34之间变化。
Figure BDA0003980595070000641
1-Kabat等人(1991),“Sequences of Proteins of Immunological Interest,”第5版Public Health Service,National Institutes of Health,马里兰州贝塞斯达
2-Al-Lazikani等人,(1997)JMB 273,927-948
因此，除非另有规定，否则应当理解给定抗体或其区域(如其可变区)的“CDR”或“互补决定区”或单独指定的CDR(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3)涵盖如由任何前述方案或其他已知方案所定义的一个(或特定的)互补决定区。例如，在声明特定的CDR(例如，CDR-H3)含有给定VH或VL区氨基酸序列中的相应CDR的氨基酸序列的情况下，应理解，这种CDR具有在可变区内的相应CDR(例如，CDR-H3)的序列，如由任何前述方案或其他已知方案所定义的。在一些实施方案中，指定了特定的CDR序列。使用各种编号方案描述所提供抗体的示例性CDR序列，但应当理解，所提供抗体可以包括如根据任何其他上述编号方案或熟练技术人员已知的其他编号方案所描述的CDR。
同样，除非另有规定，否则给定抗体或其区域如其可变区的FR或单独指定的一个或多个FR(例如，FR-H1、FR-H2、FR-H3、FR-H4)应理解为涵盖如任何已知方案所定义的一个(或特定)框架区。在一些情况下，指定用于鉴定特定的CDR、FR或多个FR或多个CDR的方案，如通过Kabat、Chothia、AbM、IMGT或Contact方法或其他已知方案定义的CDR。在其他情况下，给出了CDR或FR的特定氨基酸序列。
术语“可变区”或“可变结构域”是指抗体重链或轻链的参与抗体与抗原的结合的结构域。天然抗体的重链和轻链的可变区(分别为VH和VL)通常具有相似的结构，其中每个结构域包含四个保守的框架区(FR)和三个CDR。(参见例如Kindt等人Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman and Co.,第91页(2007)。单一VH或VL结构域可能足以赋予抗原结合特异性。此外，可以使用来自结合抗原的抗体的VH或VL结构域分离结合所述特定抗原的抗体，以分别筛选互补的VL或VH结构域的文库。参见例如，Portolano等人,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等人,Nature 352:624-628(1991)。
CAR中所包括的抗体包括抗体片段。“抗体片段”或“抗原结合片段”是指除了完整抗体以外的分子，其包含完整抗体的结合完整抗体所结合的抗原的一部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双抗体；线性抗体；重链可变(VH)区、单链抗体分子(如scFv)和仅含有VH区的单结构域抗体；和由抗体片段形成的多特异性抗体。在一些实施方案中，CAR中的抗原结合结构域是或包含抗体片段，所述抗体片段含有可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区。在特定实施方案中，抗体是包含重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区的单链抗体片段(例如scFv)。
单结构域抗体(sdAb)是包含抗体的全部或部分重链可变区或者全部或部分轻链可变区的抗体片段。在某些实施方案中，单结构域抗体是人单结构域抗体。
抗体片段可以通过各种技术制备，包括但不限于完整抗体的蛋白水解消化以及通过重组宿主细胞产生。在一些实施方案中，抗体是重组产生的片段，如包含天然不存在的排列的片段(如具有通过合成接头(例如，肽接头)连接的两个或更多个抗体区或链的那些)，和/或可不通过酶消化天然存在的完整抗体产生的片段。在一些方面，所述抗体片段是scFv。
“人源化”抗体是如下抗体，其中所有或基本上所有CDR氨基酸残基都源自非人CDR并且所有或基本上所有FR氨基酸残基都源自人FR。人源化抗体任选地可以包括源自人抗体的抗体恒定区的至少一部分。非人抗体的“人源化形式”是指非人抗体的变体，其已经经历人源化以通常降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。在一些实施方案中，人源化抗体中的一些FR残基被来自非人抗体(例如，CDR残基所来源的抗体)的相应残基取代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
CAR中所包括的抗BCMA抗体包括人抗体。“人抗体”是具有与人或人细胞或者利用人抗体库或其他人抗体编码序列(包括人抗体文库)的非人来源产生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。所述术语不包括包含非人抗原结合区的非人抗体的人源化形式，如所有或基本上所有CDR都是非人的那些。所述术语包括人抗体的抗原结合片段。
人抗体可以通过将免疫原施用至转基因动物来制备，所述转基因动物已经被修饰以响应于抗原激发产生完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有人免疫球蛋白基因座的全部或部分，其替代内源免疫球蛋白基因座或者其存在于在染色体外或随机整合到动物的染色体中。在此类转基因动物中，内源免疫球蛋白基因座通常已经失活。人抗体也可以源自含有源自人库的抗体编码序列的人抗体文库，包括噬菌体展示和无细胞文库。
CAR中所包括的抗体包括作为单克隆抗体的那些，包括单克隆抗体片段。如本文所用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同质抗体的群体(即，构成所述群体的单独抗体是相同的，但含有天然存在的突变或在单克隆抗体制剂的产生期间产生的可能变体除外，此类变体通常以少量存在)获得或在所述群体内的抗体。与通常包括针对不同表位的不同抗体的多克隆抗体制剂形成对比，单克隆抗体制剂的每种单克隆抗体针对抗原上的单一表位。所述术语不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。单克隆抗体可以通过多种技术制备，包括但不限于从杂交瘤产生、重组DNA方法、噬菌体展示和其他抗体展示方法。
在一些实施方案中，CAR包括抗体分子的一个或多个BCMA结合部分，如抗体的重链可变(VH)区和/或轻链可变(VL)区(例如scFv抗体片段)。在一些实施方案中，本文所述的(例如，用于所提供的方法中)BCMA结合CAR含有赋予CAR的BCMA结合特性的抗体，如抗BCMA抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，抗体或抗原结合结构域可以是所述任何抗BCMA抗体或源自所述任何抗BCMA抗体。参见例如，Carpenter等人,Clin Cancer Res.,2013,19(8):2048-2060、WO 2016090320、WO 2016090327、WO 2010104949和WO 2017173256。任何此类抗BCMA抗体或抗原结合片段都可以用于CAR中。在一些实施方案中，抗BCMA CAR含有抗原结合结构域，其是scFv，所述scFv含有源自WO 2016090320或WO 2016090327中描述的抗体的可变重链(VH)区和/或可变轻链(VL)区。
在一些实施方案中，所述抗体(例如，抗BCMA抗体或抗原结合片段)含有如所述的重链和/或轻链可变(VH或VL)区或其足够的抗原结合部分。在一些实施方案中，抗BCMA抗体(例如，抗原结合片段)包含含有如所述的CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3的VH区序列或其足够的抗原结合部分。在一些实施方案中，抗BCMA抗体(例如，抗原结合片段)包含含有如所述的CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3的VL区序列或足够的抗原结合部分。在一些实施方案中，抗BCMA抗体(例如，抗原结合片段)包含含有如所述的CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3的VH区序列，并且包含含有如所述的CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3的VL区序列。所述抗体还包括具有与这样的序列至少或至少约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％相同的序列的那些。
在一些实施方案中，所述抗体是单结构域抗体(sdAb)，所述单结构域抗体仅包含VH区序列或其足够的抗原结合部分，如任何上述VH序列(例如，CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3和/或CDR-H4)。
在一些实施方案中，包含VH区的本文所提供的抗体(例如，抗BCMA抗体)或其抗原结合片段还包含轻链或其足够的抗原结合部分。例如，在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含VH区和VL区、或VH和VL区的足够的抗原结合部分。在此类实施方案中，VH区序列可以是任何上述VH序列。在一些此类实施方案中，所述抗体是抗原结合片段，如Fab或scFv。在一些此类实施方案中，所述抗体是还含有恒定区的全长抗体。
在一些实施方案中，CAR中的抗体(例如，其抗原结合片段)具有重链可变(VH)区，所述重链可变区具有选自SEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131中任一个的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131中任一个的VH区氨基酸具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或者含有存在于这样的VH序列中的CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3。在一些实施方案中，CAR中的抗体或抗体片段具有WO 2016/090327、WO 2016/090320或WO 2017/173256中描述的任何抗体或抗体结合片段的VH区。
在一些实施方案中，CAR中的抗体(例如，其抗原结合片段)具有轻链可变(VL)区，所述轻链可变区具有选自SEQ ID NO:33、53、62、88、119、127和132中任一个的氨基酸序列，或与选自SEQ ID NO:33、53、62、88、119、127和132中任一个的VL区氨基酸具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列；或者含有存在于这样的VL序列中的CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3。在一些实施方案中，CAR中的抗体或抗体片段具有WO 2016/090327、WO 2016/090320或WO 2017/173256中描述的任何抗体或抗体结合片段的VL区。
在一些实施方案中，CAR中的抗体(例如其抗原结合片段)的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:32和33的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:32和33具有至少90％同一性的氨基酸序列；分别地SEQ ID NO:52和53的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:52和53具有至少90％同一性的氨基酸序列；分别地SEQ ID NO:61和62的氨基酸序列，或分别地与SEQ IDNO:61和62具有至少90％同一性的氨基酸序列；分别地SEQ ID NO:85和88的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:85和88具有至少90％同一性的氨基酸序列：分别地SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:116和119具有至少90％同一性的氨基酸序列；分别地SEQ ID NO:125和127的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:125和127具有至少90％同一性的氨基酸序列；分别地SEQ ID NO:131和132的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:131和132具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CAR中的抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQID NO:32和33的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:32和33具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:52和53的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:52和53具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:61和62的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:61和62具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:85和88的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:85和88具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:116和119具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:125和127的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:125和127具有至少90％同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含：分别地SEQ ID NO:131和132的氨基酸序列，或分别地与SEQ ID NO:131和132具有至少90％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，CAR中的抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含SEQ ID NO:32和33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含SEQ IDNO:52和53的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含SEQ ID NO:61和62的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含SEQ ID NO:85和88的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:125和127的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:131和132的氨基酸序列。
在一些实施方案中，在CAR中，所述抗体或其抗原结合片段包含VH和VL区，并且所述VH区包含选自SEQ ID NO:32、52、61、85、116、125、131中任一个的VH区氨基酸序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)；并且所述VL区包含选自SEQ ID NO:33、53、62、88、119、127、132中任一个的VL区氨基酸序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)。
在一些实施方案中，在CAR中，所述抗体或其抗原结合片段包含VH和VL区，并且所述VH区包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:61的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，在CAR中，所述抗体或其抗原结合片段包含VH和VL区，并且所述VH区包含SEQ ID NO:32的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含SEQ ID NO:33的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:52的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ IDNO:53的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQID NO:61的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:131的氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含SEQ ID NO:132的氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一些实施方案中，CAR中的抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ IDNO:32和33的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:52和53的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:61和62的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:85和88的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:125和127的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段的VH和VL区分别包含SEQ ID NO:131和132的氨基酸序列。
在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含选自以下的氨基酸序列：SEQ ID NO:116和119，或与任何上述VH和VL具有至少90％序列同一性(如至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或其99％序列同一性)的任何抗体或其抗原结合片段，或包含任何上述VH和VL的VH区内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3以及VL区内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，本文提供的抗体或其抗原结合片段的VH和VL区包含选自SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列。在一些实施方案中，如PCT/US2020/063492中所述的抗独特型抗体用于检测包含这些序列的抗原结合结构域的表达。
在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段是单链抗体片段，如单链可变片段(scFv)或双抗体或单结构域抗体(sdAb)。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是仅包含VH区的单结构域抗体。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段是包含重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区的scFv。在一些实施方案中，所述单链抗体片段(例如scFv)包括连接两个抗体结构域或区域(如重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如，柔性和/或可溶性肽接头。接头包括富含甘氨酸和丝氨酸和/或在一些情况下苏氨酸的那些接头。在一些实施方案中，接头还包括可以改善溶解度的带电荷的残基，如赖氨酸和/或谷氨酸。在一些实施方案中，接头还包括一个或多个脯氨酸。
因此，所提供的抗BCMA抗体包括单链抗体片段，如scFv和双抗体，特别是人单链抗体片段，通常包含连接两个抗体结构域或区域(如VH和VL区)的一个或多个接头。接头通常是肽接头，例如柔性和/或可溶性肽接头，例如富含甘氨酸和丝氨酸的一种肽接头。
在一些方面，富含甘氨酸和丝氨酸(和/或苏氨酸)的接头包括至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的此类氨基酸。在一些实施方案中，它们包括至少为或约50％、55％、60％、70％或75％的甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸。在一些实施方案中，接头基本上完全由甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸组成。接头的长度通常在约5个与约50个氨基酸之间，通常在为或约10个与为或约30个之间，例如10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个、25个、26个、27个、28个、29个或30个，并且在一些例子中长度在10个与25个氨基酸之间。示例性接头包括具有不同数量的序列GGGGS(4GS；SEQ ID NO:7)或GGGS(3GS；SEQ ID NO:2)的重复(如在2、3、4与5个之间的这种序列的重复)的接头。示例性接头包括具有SEQ ID NO:1(GGGGSGGGGSGGGGS)所示序列或由其组成的那些接头。示例性接头还包括具有SEQ ID NO:176(GSTSGSGKPGSGEGSTKG)所示序列或由其组成的那些接头。示例性接头还包括具有SEQ IDNO:255(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)中所示序列或由其组成的那些接头。
因此，在一些实施方案中，所提供的实施方案包括单链抗体片段(例如，scFv)，其包含一个或多个上述接头，如富含甘氨酸/丝氨酸的接头(包括具有GGGS(SEQ ID NO:2)或GGGGS(SEQ ID NO:7)重复的接头，如SEQ ID NO:1所示的接头)。
在一些实施方案中，接头具有含有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸序列。片段(例如，scFv)可以包括VH区或其部分，接着是接头，接着是VL区或其部分。片段(例如，scFv)可以包括VL区或其部分，接着是接头，接着是VH区或其部分。
表6提供了示例性抗原结合结构域(如抗体或抗原结合片段)的SEQ ID NO，所述抗原结合结构域可包含在要在所提供的方法和用途中使用的BCMA结合重组受体(如抗BCMA嵌合抗原受体(CAR))中。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含含有CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH区和含有CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL区，如下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示(根据Kabat编号)。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的VH区序列和VL区序列；或者含有包含与下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的VH区序列和VL区序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的VH和VL区氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的VH区序列和VL区序列。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的scFv序列；或者含有包含与下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的scFv序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的scFv氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含SEQ ID NO:114所示的scFv序列；或者含有包含与其具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的scFv氨基酸序列的抗体。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含下表6的每一行中列出的SEQ ID NO所示的scFv序列。在一些实施方案中，BCMA结合重组受体含有BCMA结合抗体或其片段，所述BCMA结合抗体或其片段包含SEQ ID NO:114所示的scFv序列。
Figure BDA0003980595070000691
CAR中的抗体(例如抗原结合片段)包括人抗体。在所提供的人抗BCMA抗体(例如，抗原结合片段)的一些实施方案中，人抗体含有VH区，所述VH区包含与由种系核苷酸人重链V区段编码的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的一部分、与由种系核苷酸人重链D区段编码的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的一部分、和/或与由种系核苷酸人重链J区段编码的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的一部分；和/或含有VL区，所述VL区包含与由种系核苷酸人κ或λ链V区段编码的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的一部分、和/或与由种系核苷酸人κ或λ链J区段编码的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的一部分。在一些实施方案中，VH区的所述部分对应于CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3。在一些实施方案中，VH区的所述部分对应于框架区1(FR1)、FR2、FR2和/或FR4。在一些实施方案中，VL区的所述部分对应于CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3。在一些实施方案中，VL区的所述部分对应于FR1、FR2、FR2和/或FR4。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-H1，所述CDR-H1与由种系核苷酸人重链V区段编码的序列内的相应CDR-H1区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-H1，所述序列与由种系核苷酸人重链V区段编码的序列内的相应CDR-H1区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-H2，所述CDR-H2与由种系核苷酸人重链V区段编码的序列内的相应CDR-H2区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-H2，所述序列与由种系核苷酸人重链V区段编码的序列内的相应CDR-H2区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-H3，所述CDR-H3与由种系核苷酸人重链V区段、D区段和J区段编码的序列内的相应CDR-H3区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-H3，所述序列与由种系核苷酸人重链V区段、D区段和J区段编码的序列内的相应CDR-H3区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-L1，所述CDR-L1与由种系核苷酸人轻链V区段编码的序列内的相应CDR-L1区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-L1，所述序列与由种系核苷酸人轻链V区段编码的序列内的相应CDR-L1区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-L2，所述CDR-L2与由种系核苷酸人轻链V区段编码的序列内的相应CDR-L2区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-L2，所述序列与由种系核苷酸人轻链V区段编码的序列内的相应CDR-L2区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)含有CDR-L3，所述CDR-L3与由种系核苷酸人轻链V区段和J区段编码的序列内的相应CDR-L3区的氨基酸序列具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些实施方案中，人抗体含有具有如下序列的CDR-L3，所述序列与由种系核苷酸人轻链V区段和J区段编码的序列内的相应CDR-L3区相比为100％相同或具有不多于一个、两个或三个氨基酸差异。
在一些实施方案中，人抗体(例如，抗原结合片段)包含含有人种系基因区段序列的框架区。例如，在一些实施方案中，人抗体含有VH区，其中框架区(例如FR1、FR2、FR3和FR4)与由人种系抗体区段(如V区段和/或J区段)编码的框架区具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。在一些实施方案中，人抗体含有VL区，其中框架区(例如FR1、FR2、FR3和FR4)与由人种系抗体区段(如V区段和/或J区段)编码的框架区具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性。例如，在一些此类实施方案中，VH区和/或VL区内含有的框架区序列与由人种系抗体区段编码的框架区序列相比相差不多于10个氨基酸，如不多于9、8、7、6、5、4、3、2或1个氨基酸。
在一些实施方案中，参考抗体可以是在国际专利申请公开号WO 2010/104949中描述的小鼠抗BCMA scFv。
所述抗体(例如，抗原结合片段)可以含有免疫球蛋白恒定区的至少一部分，如一个或多个恒定区结构域。在一些实施方案中，所述恒定区包括轻链恒定区和/或重链恒定区1(CH1)。在一些实施方案中，所述抗体包括CH2和/或CH3结构域，如Fc区。在一些实施方案中，所述Fc区是人IgG(如IgG1或IgG4)的Fc区。
B.间隔子
在一些实施方案中，包含本文所提供的抗体(例如，抗原结合片段)的重组受体(例如，CAR)(如由本文所提供的方法和用途中使用的工程化细胞表达的那些)还包含间隔子或间隔子区域。间隔子通常是多肽间隔子，并且通常在CAR内位于CAR的抗原结合结构域与跨膜结构域之间。在一些方面，间隔子可以是或包括免疫球蛋白恒定区或其变体或经修饰的形式的至少一部分，如免疫球蛋白的铰链区(如IgG铰链区，例如IgG4或IgG4来源的铰链区)和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，间隔子包含铰链区，所述铰链区包含或是CD8α。在一些实施方案中，CD8α是人CD8α。在一些实施方案中，恒定区或其一个或多个部分是人IgG的，如人IgG4或IgG1或IgG2的。一般而言，间隔子(如恒定区的所述部分)用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区域。在一些实施方案中，间隔子的长度和/或组成被设计为优化或促进CAR与其靶标之间的相互作用的某些特征；在一些方面，间隔子的长度和/或组成被设计为优化在CAR与其在表达靶标的细胞上的靶标结合期间或之时或之后CAR表达细胞与表达所述CAR的靶标的细胞之间的生物物理突触距离；在一些方面，所述表达靶标的细胞是表达BCMA的肿瘤细胞。在一些实施方案中，CAR由T细胞表达，并且间隔子的长度是与T细胞激活或优化CAR T细胞性能兼容的长度。在一些实施方案中，间隔子是位于重组受体(例如，CAR)的配体结合结构域与跨膜结构域之间的间隔子区域。在一些实施方案中，间隔子区域是位于重组受体(例如，CAR)的配体结合结构域与跨膜结构域之间的区域。
在一些实施方案中，间隔子可以具有这样的长度，与不存在间隔子和/或存在不同间隔子(如仅长度不同的间隔子)的情况相比，所述长度在抗原结合后提供增加的细胞反应性。在一些实施方案中，间隔子具有至少100个氨基酸的长度，如至少110、125、130、135、140、145、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240或250个氨基酸的长度。在一些例子中，间隔子具有为或约12个氨基酸的长度或者具有不超过12个氨基酸的长度。示例性间隔子包括具有至少约10至300个氨基酸、约10至200个氨基酸、约50至175个氨基酸、约50至150个氨基酸、约10至125个氨基酸、约50至100个氨基酸、约100至300个氨基酸、约100至250个氨基酸、约125至250个氨基酸或约200至250个氨基酸(并且包括任何列出的范围的端点之间的任何整数)的那些。在一些实施方案中，间隔子或间隔子区域具有至少约12个氨基酸、至少约119个氨基酸、至少约125个氨基酸、至少约200个氨基酸、或至少约220个氨基酸或至少约225个氨基酸的长度。
在一些实施方案中，间隔子具有125至300个氨基酸的长度、125至250个氨基酸的长度、125至230个氨基酸的长度、125至200个氨基酸的长度、125至180个氨基酸的长度、125至150个氨基酸的长度、150至300个氨基酸的长度、150至250个氨基酸的长度、150至230个氨基酸的长度、150至200个氨基酸的长度、150至180个氨基酸的长度、180至300个氨基酸的长度、180至250个氨基酸的长度、180至230个氨基酸的长度、180至200个氨基酸的长度、200至300个氨基酸的长度、200至250个氨基酸的长度、200至230个氨基酸的长度、230至300个氨基酸的长度、230至250个氨基酸的长度或250至300个氨基酸的长度。在一些实施方案中，间隔子具有至少或至少约或者具有或具有约130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、221、222、223、224、225、226、227、228或229个氨基酸的长度或者前述任一项之间的长度。
示例性间隔子包括含有免疫球蛋白恒定区的一个或多个部分的那些，如含有Ig铰链(如IgG铰链结构域)的那些。在一些方面，间隔子包括单独的IgG铰链、与CH2和CH3结构域中的一个或多个连接的IgG铰链或者与CH3结构域连接的IgG铰链。在一些实施方案中，IgG铰链、CH2和/或CH3可以全部或部分源自IgG4或IgG2。在一些实施方案中，间隔子可以是含有源自IgG4、IgG2和/或IgG2和IgG4的铰链、CH2和/或CH3序列中的一种或多种的嵌合多肽。在一些实施方案中，铰链区包含IgG4铰链区和/或IgG2铰链区的全部或一部分，其中IgG4铰链区任选地是人IgG4铰链区，并且IgG2铰链区任选地是人IgG2铰链区；CH2区包含IgG4 CH2区和/或IgG2 CH2区的全部或一部分，其中IgG4 CH2区任选地是人IgG4 CH2区，并且IgG2 CH2区任选地是人IgG2 CH2区；和/或CH3区包含IgG4 CH3区和/或IgG2 CH3区的全部或一部分，其中IgG4 CH3区任选地是人IgG4 CH3区，并且IgG2 CH3区任选地是人IgG2 CH3区。在一些实施方案中，铰链CH2和CH3包含来自IgG4的铰链区CH2和CH3中的每一个的全部或一部分。在一些实施方案中，铰链区是嵌合的并且包含来自人IgG4和人IgG2的铰链区；CH2区是嵌合的并且包含来自人IgG4和人IgG2的CH2区；和/或CH3区是嵌合的并且包含来自人IgG4和人IgG2的CH3区。在一些实施方案中，间隔子包含IgG4/2嵌合铰链或含有与人IgG4铰链区相比的至少一个氨基酸替代的经修饰的IgG4铰链；人IgG2/4嵌合CH2区；和人IgG4 CH3区。
在一些实施方案中，间隔子可以全部或部分源自IgG4和/或IgG2，并且可以含有突变，如在一个或多个结构域中的一个或多个单氨基酸突变。在一些例子中，氨基酸修饰是在IgG4的铰链区中脯氨酸(P)对丝氨酸(S)的取代。在一些实施方案中，氨基酸修饰是用谷氨酰胺(Q)取代天冬酰胺(N)以降低糖基化异质性，如SEQ ID NO:173所示全长IgG4 Fc序列的CH2区中的位置177处的N177Q突变，或者SEQ ID NO:172所示全长IgG2 Fc序列的CH2区中的位置176处的N176Q。在一些实施方案中，间隔子是或包含IgG4/2嵌合铰链或经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4 CH3区，并且任选地具有约228个氨基酸的长度；或SEQ IDNO:174所示的间隔子。在一些实施方案中，间隔子包含氨基酸序列
ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:174)。
在一些实施方案中，间隔子由已针对密码子表达和/或以消除剪接位点(如隐秘的剪接位点)而进行优化的多核苷酸编码。在一些实施方案中，间隔子的编码序列包含SEQ IDNO:200所示的核酸序列。在一些实施方案中，间隔子的编码序列包含SEQ ID NO:236或8所示的核酸序列。
另外的示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些：Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；Hudecek等人(2015)Cancer Immunol.Res.,3(2):125-135或国际专利申请公开号WO 2014031687。在一些实施方案中，间隔子的核苷酸序列被优化以降低表达后的RNA异质性。在一些实施方案中，间隔子的核苷酸序列被优化以减少隐秘的剪接位点或减少剪接位点处发生剪接事件的可能性。
在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:237所示的氨基酸序列，并且由SEQ IDNO:238所示的多核苷酸序列编码。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:157所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:156所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:134所示的氨基酸序列，并且由SEQ ID NO:135所示的多核苷酸序列编码。在一些实施方案中，间隔子具有SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列，其由SEQID NO:175、200、236或8所示的多核苷酸序列或与SEQ ID NO:175、200、236或8展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的多核苷酸编码。在一些实施方案中，间隔子具有与SEQ ID NO:174展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列，其由已任选地针对密码子使用和/或以降低RNA异质性而进行优化的多核苷酸编码。
在一些实施方案中，间隔子是或包含由SEQ ID NO:200所示的核苷酸序列编码的氨基酸序列。
C.跨膜结构域和细胞内信号传导组分
抗原识别组分(例如，抗原结合结构域)通常与一个或多个含有信号传导组分的细胞内信号传导区连接，所述信号传导组分例如模拟通过抗原受体复合物(如TCR复合物)的刺激和/或激活的信号传导组分，在CAR的情况下和/或经由另一种细胞表面受体发出信号的信号传导组分。因此，在一些实施方案中，BCMA结合结构域(例如抗体或其抗原结合片段)与一个或多个跨膜结构域(如本文所述的那些)和包含一种或多种细胞内组分(如本文所述的那些)的细胞内信号传导区或细胞内信号传导结构域连接。在一些实施方案中，跨膜结构域与洗胞外结构域融合。在一个实施方案中，使用天然地与受体(例如，CAR)中的结构域之一缔合的跨膜结构域。在一些情况下，通过氨基酸取代选择或修饰跨膜结构域以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以最小化与受体复合物的其他成员的相互作用。
在一些实施方案中，跨膜结构域源自天然或合成来源。当来源是天然的时，在一些方面，所述结构域可以源自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜结构域包括源自以下各项的那些(即，包含以下各项的至少一个或多个跨膜结构域)：T细胞受体的α、β或ζ链，CD3ε，CD4，CD5，CD8，CD9，CD16，CD22，CD28，CD33，CD37，CD45，CD64，CD80，CD86，CD134，CD137和/或CD154。例如，跨膜结构域可以是CD28跨膜结构域，所述CD28跨膜结构域包含SEQ ID NO:138所示的氨基酸序列，其由SEQ ID NO:139或SEQ ID NO:140所示的核酸序列编码。在一些实施方案中，跨膜结构域是或包含源自CD8α的跨膜结构域。在一些实施方案中，CD8α是人CD8α。可替代地，在一些实施方案中，跨膜结构域是合成的。在一些方面，合成跨膜结构域主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。
细胞内信号传导区或细胞内信号传导结构域包括模拟或接近以下的那些：经由天然抗原受体的信号、经由这种受体与共刺激受体的组合的信号和/或仅经由共刺激受体的信号。在一些实施方案中，短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个之间的氨基酸的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在并形成CAR的跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间的连接。
受体(例如CAR)通常包括含有至少一种或多种细胞内信号传导组分的细胞内信号传导区。在一些实施方案中，受体包括TCR复合物的细胞内组分或信号传导结构域，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，BCMA结合抗体与一个或多个细胞信号传导模块连接。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，受体(例如，CAR)还包括一种或多种另外的分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，CAR包括CD3-zeta(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接CAR之时或之后，CAR的胞质结构域或细胞内信号传导结构域刺激和/或激活免疫细胞(例如，工程化以表达CAR的T细胞)的正常效应子功能或反应中的至少一种。例如，在一些情境下，CAR诱导T细胞的功能，如细胞溶解活性或T辅助细胞活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域的截短部分(例如，如果其转导效应子功能信号的话)代替完整的免疫刺激链。在一些实施方案中，一个或多个细胞内信号传导结构域包含T细胞受体(TCR)的胞质序列，并且在一些方面还包括共受体(其在天然背景下与这种受体并行起作用以在抗原受体接合后启动信号转导)和/或此类分子的任何衍生物或变体的那些，和/或具有相同功能能力的任何合成序列。
在天然TCR的情境下，完全激活通常不仅需要通过TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，用于生成次级或共刺激信号的组分也被包括在所述CAR中。在其他实施方案中，CAR不包括用于生成共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于生成次级或共刺激信号的组分。
在一些方面，将T细胞激活描述为由两个类别的胞质信号传导序列来介导：通过TCR起始抗原依赖性初级激活的那些(初级胞质信号传导序列)，以及以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些(次级胞质信号传导序列)。在一些方面，CAR包括此类胞质信号传导序列中的一种或两种。
在一些方面，CAR包括调节TCR复合物的初级刺激和/或激活的初级胞质信号传导序列。以刺激方式起作用的初级胞质信号传导序列可以含有信号传导基序(其称为免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM)。含有ITAM的初级胞质信号传导序列的例子包括源自TCR或CD3ζ、FcRγ、CD3γ、CD3δ和CD3ε的那些。在一些实施方案中，CAR中的细胞内信号传导区或细胞内信号传导结构域含有源自CD3ζ的胞质信号传导结构域、其部分或序列。在一些实施方案中，CD3ζ包含SEQ ID NO:143所示的氨基酸序列，其由SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145所示的核酸序列编码。
在一些实施方案中，CAR包括共刺激分子(如T细胞共刺激分子)的信号传导结构域(例如细胞内或胞质信号传导结构域)和/或跨膜部分。示例性共刺激分子包括CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS。例如，共刺激分子可以源自4-1BB，并且可以包含SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列，其由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:6所示的核苷酸序列编码。在一些方面，同一CAR包括刺激或激活组分(例如，胞质信号传导序列)和共刺激组分二者。
在一些实施方案中，刺激或激活组分被包括在一个CAR中，而共刺激组分由识别另一种抗原的另一种CAR提供。在一些实施方案中，CAR包括在同一细胞上表达的激活或刺激CAR和共刺激CAR(参见WO 2014/055668)。在一些方面，BCMA靶向CAR是刺激或激活CAR；在其他方面，其是共刺激CAR。在一些实施方案中，细胞还包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月))，如识别除BCMA以外的抗原的CAR，由此通过BCMA靶向CAR递送的刺激或激活信号通过抑制性CAR与其配体的结合而被减小或被抑制，例如以降低脱靶效应。
在某些实施方案中，细胞内信号传导区包含连接至CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含连接至CD3ζ细胞内结构域的嵌合CD28和CD137(4-1BB，TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，CAR涵盖在胞质部分中的一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和刺激或激活结构域(例如初级激活结构域)。示例性CAR包括CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些实施方案中，所提供的嵌合抗原受体包含：(a)特异性地识别B细胞成熟抗原(BCMA)的细胞外抗原结合结构域，如本文所述的任何抗原结合结构域；(b)长度为至少125个氨基酸的间隔子；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内信号传导区。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含分别含有SEQ ID NO:116和119的氨基酸序列或者分别与SEQID NO:116和119具有至少90％同一性的氨基酸序列的VH区和VL区。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区是或包含SEQ ID NO:116的VH区氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区是或包含SEQ ID NO:119的VL区氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:97、101和103的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:96、100和103的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:95、99和103的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:94、98和102的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:104、106和108的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区是或包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列，所述VL区是或包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。
在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含刺激型胞质信号传导结构域。在一些实施方案中，刺激型胞质信号传导结构域能够在T细胞中诱导初级激活信号，是T细胞受体(TCR)组分，和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)。在一些实施方案中，刺激型胞质信号传导结构域是或包括CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分。在一些实施方案中，刺激型胞质结构域是人的或源自人蛋白质。在一些实施方案中，刺激型胞质结构域是或包含SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码刺激型胞质结构域的核酸是或包括SEQ ID NO:144所示的序列，或者是密码子优化的序列和/或其简并序列。在其他实施方案中，编码刺激型胞质信号传导结构域的核酸是或包括SEQ ID NO:145所示的序列。在一些实施方案中，细胞内信号传导区还包括共刺激信号传导区。在一些实施方案中，共刺激信号传导区包括T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区包括CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区包括4-1BB的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，共刺激信号传导区是人的或源自人蛋白质。在其他实施方案中，共刺激信号传导区是或包括SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ ID NO:4所示的序列展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码共刺激区的核酸是或包括SEQ ID NO:5所示的序列，或者是密码子优化的序列和/或其简并序列。在一些实施方案中，编码共刺激信号传导区的核酸包括SEQ ID NO:6所示的序列。在一些实施方案中，共刺激信号传导区位于跨膜结构域与细胞内信号传导区之间。在一些实施方案中，跨膜结构域是或包含源自CD4、CD28或CD8的跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域是或包含源自CD28的跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域是人的或源自人蛋白质。在其他实施方案中，跨膜结构域是或包括SEQ ID NO:138所示的序列或与SEQ ID NO:138展现出至少90％序列同一性的氨基酸序列。
提供了嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含：(1)特异性地结合人B细胞成熟抗原(BCMA)的细胞外抗原结合结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域包含：(i)含有与SEQID NO:116的VH区序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的可变重链(VH)；和(ii)含有与SEQ ID NO:119中任一个的VL区序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的可变轻链(VL)；(2)SEQ ID NO:174所示的间隔子，或者其中编码所述间隔子的核酸是或包含SEQ ID NO:200所示的序列；(3)跨膜结构域、任选来自人CD28的跨膜结构域；以及(4)包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域的细胞内信号传导区。还提供了编码这种嵌合抗原受体的多核苷酸。
在一些实施方案中，VH区包含SEQ ID NO:116的VH区序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；并且VL区包含SEQ ID NO:119的VL区序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者VH区包含分别含有SEQ ID NO:97、101和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；VH区包含分别含有SEQ ID NO:96、100和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含分别含有SEQID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；VH区包含分别含有SEQ ID NO:95、99和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者VH区包含分别含有SEQ ID NO:94、98和102的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且VL区包含分别含有SEQ ID NO:104、106和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
提供了嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含：(1)与人B细胞成熟抗原(BCMA)特异性地结合的细胞外抗原结合结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域包含：含有SEQ IDNO:116的VH区序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的可变重链(VH)区和含有SEQ ID NO:119的VL区序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的可变轻链(VL)区；或者所述VH区包含SEQID NO:116的VH区序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；并且所述VL区包含SEQ ID NO:119的VL区序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:97、101和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:96、100和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:95、99和103的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或者所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:94、98和102的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，并且所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:104、106和108的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；(2)SEQ ID NO:174所示的间隔子，或其中编码所述间隔子的核酸是或包含SEQ ID NO:200所示的序列；(3)跨膜结构域、任选来自人CD28的跨膜结构域；以及(4)包含人CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和T细胞共刺激分子(任选地来自人4-1BB或人CD28)的细胞内信号传导结构域的细胞内信号传导区。还提供了编码这种嵌合抗原受体的多核苷酸。在一些实施方案中，细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:116的VH区序列和SEQ ID NO:119的VL区序列。在一些实施方案中，这种受体的抗原结合结构域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。在一些实施方案中，嵌合抗原受体的其他结构域、区域或组分包括本文所述的任何结构域、区域或组分。
D.替代标记物
在一些实施方案中，CAR或编码CAR的多核苷酸还包括替代标记物，如细胞表面标记物(例如，截短的细胞表面标记物)，其可以用于确认细胞的转导或工程化以表达受体。例如，在一些方面，非固有标记基因结合工程化细胞疗法用于允许检测或选择细胞，并且在一些情况下还用于促进通过ADCC进行细胞自杀。示例性标记基因包括截短的表皮生长因子受体(EGFRt)，其可以与转导细胞中的目标转基因(CAR或TCR)共表达(参见，例如美国专利号8,802,374)。EGFRt含有由抗体西妥昔单抗
Figure BDA0003980595070000771
识别的表位。出于这个原因，
Figure BDA0003980595070000772
可以用于鉴定或选择已经用EGFRt构建体工程化的细胞，包括还用另一种重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))共同工程化的细胞。另外地，EGFRt通常用作结合细胞疗法的自杀机制。在一些方面，当EGFRt在具有目标转基因(例如CAR或TCR)的细胞中共表达时，它可以被西妥昔单抗单克隆抗体靶向，以经由ADCC减少或耗尽转化的经基因修饰的细胞(参见，美国专利号8,802,374和Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434)。重要地，使用tEGFR的自杀杀伤途径要求抗体表位的可用性。这种标记基因的另一个例子是前列腺特异性膜抗原(PSMA)或其修饰形式。PSMA或其修饰形式可以包含被PSMA靶向分子(如抗体或其抗原结合片段)结合或由其识别的氨基酸序列。PSMA靶向分子可以用于鉴定或选择已经用PSMA或经修饰的构建体工程化的细胞，包括还用另一种重组受体(如本文所提供的嵌合抗原受体(CAR))共工程化的细胞。在一些方面，所述标记物包括全部或部分(例如，截短形式)的CD34、神经生长因子受体(NGFR)、表皮生长因子受体(例如，EGFR)或PSMA。
示例性替代标记物可以包括截短形式的细胞表面多肽，如是非功能性的并且不转导或不能转导信号或通常被细胞表面多肽的全长形式转导的信号、和/或不内化或不能内化的截短形式。示例性截短的细胞表面多肽包括截短形式的生长因子或其他受体，如截短的人表皮生长因子受体2(tHER2)、截短的表皮生长因子受体(tEGFR，在SEQ ID NO:246所示的示例性tEGFR序列)或前列腺特异性膜抗原(PSMA)或其修饰形式。tEGFR可以含有被抗体西妥昔单抗
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或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，其可以被用于鉴定或选择已经用tEGFR构建体和编码的外源蛋白质工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达所编码的外源蛋白质的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,NatureBiotech.2016年4月；34(4):430-434)。在一些方面，标记物(例如替代标记物)包括全部或部分(例如截短形式)的CD34、NGFR、CD19或截短的CD19(例如截短的非人CD19)或表皮生长因子受体(例如tEGFR)。在一些实施方案中，标记物是或包含荧光蛋白，例如绿色荧光蛋白(GFP)、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)(例如超折叠GFP(sfGFP))、红色荧光蛋白(RFP)(例如tdTomato、mCherry、mStrawberry、AsRed2、DsRed或DsRed2)、青色荧光蛋白(CFP)、蓝绿色荧光蛋白(BFP)、增强型蓝色荧光蛋白(EBFP)和黄色荧光蛋白(YFP)及其变体，包括荧光蛋白的物种变体、单体变体和密码子优化的和/或增强的变体。在一些实施方案中，标记物是或包含酶(如萤光素酶)、来自大肠杆菌的lacZ基因、碱性磷酸酶、分泌的胚胎碱性磷酸酶(SEAP)、氯霉素乙酰转移酶(CAT)。示例性发光报告基因包括萤光素酶(luc)、β-半乳糖苷酶、氯霉素乙酰转移酶(CAT)、β-葡萄糖醛酸酶(GUS)或其变体。
在一些实施方案中，标记物是选择标记物。在一些实施方案中，选择标记物是或包含赋予对外源药剂或药物的抗性的多肽。在一些实施方案中，选择标记物是抗生素抗性基因。在一些实施方案中，选择标记物是向哺乳动物细胞赋予抗生素抗性的抗生素抗性基因。在一些实施方案中，选择标记物是或包含嘌呤霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、杀稻瘟菌素抗性基因、新霉素抗性基因、遗传霉素抗性基因或博莱霉素抗性基因或其修饰形式。
在一些实施方案中，编码标记物的核酸与编码接头序列(如可切割接头序列，例如T2A)的多核苷酸可操作地连接。参见WO 2014031687。在一些实施方案中，引入编码由T2A核糖体开关隔开的CAR和替代标记物的构建体可以表达来自相同构建体的两种蛋白质，使得替代标记物可以用作检测表达这种构建体的细胞的标记物。在一些实施方案中，替代标记物和任选的接头序列可以是如国际公开号WO 2014031687中所披露的任一种。例如，标记物可以是截短的EGFR(tEGFR)或PSMA，其任选地与接头序列(如2A可切割接头序列(例如，T2A、P2A、E2A或F2A可切割接头，如本文别处所述的))连接。截短的EGFR替代标记物的示例性多肽包含SEQ ID NO:246所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:246至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，间隔子是或包含富甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头，如已知的柔性接头。
在一些实施方案中，标记物是未在T细胞上天然发现或未在T细胞表面上天然发现的分子(例如，细胞表面蛋白)或其部分。
在一些实施方案中，分子是非自身分子，例如非自身蛋白质，即不被细胞过继转移至其中的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中，标记物不提供任何治疗功能和/或不产生除了用作基因工程化标记物(例如，用于选择成功工程化的细胞)以外的作用。在其他实施方案中，标记物可以是治疗性分子或以其他方式发挥一定所需作用的分子，如会在体内遇到的细胞的配体，如共刺激或免疫检查点分子，以增强和/或减弱细胞在过继转移和遇到配体后的反应。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合后或响应于抗原结合而仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体(如CD28或CD137(即4-1BB))的细胞内信号传导结构域的CAR；在一些方面，第三代CAR是在一些方面包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分。在一些方面，嵌合抗原受体包括含有本文所述的抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，抗体或片段包括scFv或仅包含VH区的单结构域抗体，并且细胞内信号传导结构域含有ITAM。在一些方面，细胞内信号传导结构域包括CD3-ζ(CD3ζ)链的ζ链的信号传导结构域。在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括连接细胞外结构域与细胞内信号传导结构域的跨膜结构域。在一些方面，跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。细胞外结构域和跨膜结构域可以直接或间接连接。在一些实施方案中，细胞外结构域和跨膜结构域通过间隔子(如本文所述的任何间隔子)连接。在一些实施方案中，嵌合抗原受体含有共刺激分子(例如T细胞共刺激分子)的细胞内结构域，如在跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，T细胞共刺激分子是CD28或4-1BB。
在一些实施方案中，受体(例如CAR)的跨膜结构域是人CD28的跨膜结构域或其变体，例如人CD28(登录号：P10747.1)的27个氨基酸的跨膜结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体，如其41个氨基酸的结构域，和/或在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的这种结构域。在一些实施方案中，细胞内结构域包含4-1BB的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体，如人4-1BB(登录号Q07011.1)的42个氨基酸的胞质结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的同种型3的112个AA的胞质结构域或如美国专利号7,446,190中所述的CD3ζ信号传导结构域。
例如，在一些实施方案中，CAR包括BCMA抗体或片段(如本文所述的任何人BCMA抗体，包括sdAb和scFv)、间隔子(如任何含有Ig铰链的间隔子)、CD28跨膜结构域、CD28细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR包括BCMA抗体或片段(如本文所述的任何人BCMA抗体，包括sdAb和scFv)、间隔子(如任何含有Ig铰链的间隔子)、CD28跨膜结构域、4-1BB细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，此类CAR构建体例如在CAR的下游还包括T2A核糖体跳跃元件和/或tEGFR序列。
在某些实施方案中，多特异性重组受体(如多特异性CAR)可以含有任何多特异性抗体，包括例如双特异性抗体、多特异性单链抗体，例如双抗体、三抗体和四抗体、串联双scFv和串联三scFv，如上文第I.A部分中所述的任一种。
本文提供的实施方案中使用的其他示例性BCMA特异性CAR包括Idecabtagenevicliuel(Ide cel，bb2121；Raje等人N Engl J Med.2019.380:1726-1737)、JNJ-4528(Madduri等人Blood.2019.134(增刊_1):577)/LCAR-B38M(Wang等人Blood.2019.134(增刊_1):579)、P-BCMA-101(Costello等人Blood.2019.134(增刊_1):3184)、bb21217(Berdeja等人Blood.2019.134(增刊_1):927)、CT103A(Li等人Blood.2019；134(增刊_1):929)、CT053(Ji等人,Blood.2019；134(增刊_1):4435)、MTV273、CART-BCMA、C-CAR088(Yao等人Blood.2019；134(增刊_1):50)或以下文献中描述的任何BCMA定向CAR T疗法：例如，WO2018/085690；WO 2016/094304；WO 2018/085690；WO 2016/014789；WO 2019/108900；WO/2018/014038；WO 2017/173256；WO 2016/090320；WO 2016/090327；WO 2019/090003；WO2017/025038；US 2016/0046724；US 2017/0183418；Fu等人,Blood.2019；134:3154；Cohen等人J.Clin.Invest.2019.129(6):2210-2221；Ali等人,Blood2016；128(13):1688 1700；Borrello等人,J Clin Invest.2019；129(6):2175-2177；Lin等人Molecular Cancer(2019)18:154；以及Steiner等人,(2020)简报-Magazine of European Medical Oncology13:43–49。
在一些实施方案中，抗BCMA CAR包含：VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ IDNO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ IDNO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和/或包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；和/或SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸残基22-493；和/或由SEQ ID NO:266编码的序列。在一些方面，抗BCMA CAR包含SEQ ID NO:265所示序列的成熟多肽序列。在一些实施方案中，抗BCMA CAR包含：VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和/或包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；和/或SEQ IDNO:263所示序列的氨基酸残基22-493；和/或SEQ ID NO:264所示的序列。在一些方面，抗BCMA CAR包含SEQ ID NO:263所示序列的成熟多肽序列。在一些方面，抗BCMA CAR包含SEQID NO:312所示序列的成熟多肽序列。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR是或包含Idecabtagene vicliuel(Ide cel，bb2121)(参见例如，Raje等人N Engl J Med.2019.380:1726-1737；WO 2018/085690；WO 2016/094304；WO 2018/085690或WO 2016/014789)。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR包括WO 2018/085690、WO 2016/094304、WO 2018/085690或WO 2016/014789(其通过引用以其整体特此并入)中描述的那些。
在一些实施方案中，抗BCMA CAR是多价CAR，如结合双表位的CAR，例如，包含两种不同单结构域抗体(例如VHH，其针对BCMA上的不同表位)的CAR。在一些方面，抗BCMA CAR结合BCMA的选自SEQ ID NO:303-309所示序列的一个或多个表位。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR是或包含JNJ-4528(也称为LCAR-B38M)(参见例如，Madduri等人Blood.2019.134(增刊_1):577；Wang等人Blood.2019.134(增刊_1):579；Xu等人PNAS 2019.116(19)9543-9551；Zhao等人,Journal of Hematology&Oncology11:141(2018)；WO 2018/028647；WO2017/025038)。在一些实施方案中，抗BCMA CAR包含从SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基，和/或SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的成熟多肽序列，和/或由编码SEQ ID NO:265-302中任一个所示CAR的核苷酸序列编码的CAR，和/或WO 2018/028647或WO 2017/025038(其通过引用以其整体特此并入)中描述的任一种。在一些实施方案中，抗BCMA CAR包含从SEQ ID NO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基。
在一些方面，BCMA特异性CAR包含Centyrin作为细胞外结合结构域，而不包含单链可变片段(scFv)。在一些方面，centyrin是经修饰的III型纤连蛋白(FN3)结构域蛋白，具有高特异性和大范围的结合亲和力，但比scFv小(参见例如，Goldberg等人,Protein Eng DesSel.2016年12月；29(12):563-572)。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR P-BCMA-101(Costello等人Blood.2019.134(增刊_1):3184；Fu等人,Blood.2019；134:3154；WO 2018/014038和WO 2019/173636)。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR包含SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334，和/或SEQ ID NO:310所示序列的成熟多肽序列，和/或由编码SEQID NO:310中任一个所示CAR的核苷酸序列编码的CAR，和/或WO 2018/014038或WO 2019/173636(其通过引用以其整体特此并入)中描述的任一种。在一些实施方案中，BCMA特异性CAR包含SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334。
E.BCMA结合重组受体的示例性特征
在一些方面，工程化细胞表达的重组受体中的抗体或其抗原结合片段具有一个或多个规定的功能特征(如结合特性)，包括识别或结合至特定表位(如与其他抗体(如参考抗体)所特异性地结合的表位类似或重叠的表位或者与其他抗体(如参考抗体)所特异性地结合的表位不同的表位)、与其他抗体(如参考抗体)竞争结合的能力、和/或特定的结合亲和力。在其他实施方案中，在重组受体中的抗体或其抗原结合片段识别(如特异性地识别)或结合(例如，特异性地结合)至以下表位，所述表位不同于其他抗体(如参考抗体)所特异性地结合的表位或不与其重叠。例如，重组受体中的抗体所特异性地结合的表位与其他抗体(如参考抗体)所特异性地结合的表位不同。在一些实施方案中，所述抗体及其抗原结合片段不直接与其他抗体(如参考抗体)竞争结合或在较低程度上竞争结合。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段特异性地识别或特异性地结合至BCMA蛋白。在任何实施方案中，重组受体中特异性地识别BCMA的抗体或抗原结合片段特异性地结合BCMA。在本文提供的一些实施方案中，BCMA蛋白是指人BCMA、小鼠BCMA蛋白或非人灵长类(例如食蟹猴)BCMA蛋白。在本文的任何实施方案中的一些中，BCMA蛋白是指人BCMA蛋白。抗体或重组受体与BCMA蛋白结合或与BCMA蛋白特异性地结合的观察结果并不一定意味着其与每种物种的BCMA蛋白结合。例如，在一些实施方案中，与BCMA蛋白结合的特征(如与其特异性地结合和/或与参考抗体竞争其结合和/或以特定亲和力结合或在某种程度上竞争的能力)在一些实施方案中是指对于人BCMA蛋白的能力，并且抗体对于另一物种(如小鼠)的BCMA蛋白可能不具有此功能。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段与哺乳动物BCMA蛋白(包括与天然存在的BCMA变体，如某些剪接变体或等位基因变体)结合。
在一些实施方案中，抗体与人BCMA蛋白，例如与人BCMA蛋白的表位或区域，如与包含SEQ ID NO:164(GenBank号BAB60895.1)或SEQ ID NO:165(NCBI号NP_001183.2)的氨基酸序列的人BCMA蛋白或其等位基因变体或剪接变体特异性地结合。在一个实施方案中，人BCMA蛋白由转录物变体编码或是具有SEQ ID NO:163所示氨基酸序列的同种型。在一些实施方案中，抗体与食蟹猴BCMA蛋白(如SEQ ID NO:147(GenBank号EHH60172.1)所示食蟹猴BCMA蛋白)结合。在一些实施方案中，抗体与人BCMA结合，但与食蟹猴BCMA蛋白(例如SEQ IDNO:147(GenBank号EHH60172.1)所示的食蟹猴BCMA蛋白)不结合或以较低水平或程度或亲和力结合。在一些实施方案中，抗体与小鼠BCMA蛋白(例如SEQ ID NO:179(NCBI号NP_035738.1)所示的小鼠BCMA蛋白)不结合或以较低水平或程度或亲和力结合。在一些实施方案中，抗体与小鼠BCMA蛋白(例如SEQ ID NO:179(NCBI号NP_035738.1)所示的小鼠BCMA蛋白)结合。在一些实施方案中，抗体与小鼠BCMA蛋白结合的亲和力低于其与人BCMA蛋白和/或食蟹猴BCMA蛋白的结合。在一些实施方案中，抗体与小鼠BCMA蛋白和/或食蟹猴BCMA蛋白结合的亲和力低于其与人BCMA蛋白的结合。在一些实施方案中，抗体与小鼠BCMA蛋白和/或食蟹猴BCMA蛋白结合的结合亲和力类似于其与人BCMA蛋白的结合。
在一些实施方案中，与可溶性BCMA相比，所提供的抗原结合结构域或CAR展现出与膜结合的BCMA的优先结合。在一些实施方案中，与可溶性BCMA相比，所提供的抗原结合结构域或CAR展现出对膜结合的BCMA的更大结合亲和力。
在一个实施方案中，抗BCMA抗体或抗原结合结构域或CAR与不相关的非BCMA蛋白(如非人BCMA蛋白或其他非BCMA蛋白)的结合程度是所述抗体或抗原结合结构域或CAR与人BCMA蛋白或人膜结合的BCMA的结合的小于或小于约10％，如例如通过放射免疫测定(RIA)所测量的。在一些实施方案中，重组受体中的抗体或抗原结合结构域包括如下抗体或抗原结合结构域或重组受体，其中与小鼠BCMA蛋白的结合是所述抗体与人BCMA蛋白的结合的小于或为或约10％。在一些实施方案中，重组受体中的抗体或抗原结合结构域包括如下抗体，其中与食蟹猴BCMA蛋白的结合是所述抗体与人BCMA蛋白的结合的小于或为或约10％。在一些实施方案中，重组受体中的抗体或抗原结合结构域包括如下抗体，其中与食蟹猴BCMA蛋白和/或小鼠BCMA蛋白的结合类似于或约等于所述抗体与人BCMA蛋白的结合。在一些实施方案中，重组受体中的抗体或抗原结合结构域包括如下抗体或抗原结合结构域或重组受体，其中与可溶性BCMA蛋白的结合是所述抗体与膜结合的BCMA蛋白的结合的小于或为或约10％。
在一些实施方案中，所述抗体与BCMA蛋白(例如人BCMA、小鼠BCMA蛋白或非人灵长类动物(例如，食蟹猴)BCMA蛋白)特异性地结合，和/或所述抗体与参考抗体竞争其结合，和/或所述抗体以特定亲和力结合或在某种程度上竞争。
在一些实施方案中，重组受体中的抗体能够以至少特定的亲和力结合BCMA蛋白(如人BCMA蛋白)，如通过多种已知方法中的任一种所测量的。在一些实施方案中，亲和力由平衡解离常数(KD)表示；在一些实施方案中，亲和力由EC50表示。
已知多种用于评估结合亲和力和/或确定抗体或其片段或重组受体是否与特定配体(例如抗原，如BCMA蛋白)特异性地结合的测定。例如通过使用本领域熟知的多种结合测定中的任一种确定抗体或重组受体对抗原(例如BCMA，如人BCMA或食蟹猴BCMA或小鼠BCMA)的结合亲和力在熟练技术人员的水平内。例如，在一些实施方案中，使用表面等离子体共振(SPR)分析，可以使用
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仪器来确定两种蛋白质(例如，抗体或其片段与抗原(如BCMA蛋白))之间的复合物的结合动力学和常数(参见例如，Scatchard等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660,1949；Wilson,Science 295:2103,2002；Wolff等人,CancerRes.53:2560,1993；和美国专利号5,283,173、5,468,614或等同物)。
在分子结合至表面或从表面解离时，SPR测量传感器表面处分子浓度的变化。SPR信号的变化与靠近表面的质量浓度变化成正比，从而允许测量两个分子之间的结合动力学。可以通过监测当缓冲液经过芯片时折射率关于时间的变化来确定与复合物的解离常数。用于测量一种蛋白质与另一种蛋白质的结合的其他合适的测定包括例如免疫测定(如酶联免疫吸附测定(ELISA)和放射免疫测定(RIA))，或通过借助荧光、紫外吸收、圆二色性或核磁共振(NMR)监测蛋白质的光谱或光学特性的变化来确定结合。其他示例性测定包括但不限于蛋白质印迹、ELISA、分析型超速离心、光谱法、流式细胞术、测序和用于检测所表达的多核苷酸或蛋白质结合的其他方法。
在一些实施方案中，CAR的抗体或其片段或抗原结合结构域与抗原(例如，BCMA蛋白或其中的表位)结合(例如特异性地结合)，其中亲和力或KA(即，特定结合相互作用的平衡缔合常数，单位为1/M；等于对于此缔合反应的缔合速率[k缔合或ka]与解离速率[k解离或kd]的比率，假定双分子相互作用)等于或大于105M-1。在一些实施方案中，CAR的抗体或其片段或抗原结合结构域展现出对肽表位的结合亲和力，其KD(即，特定结合相互作用的平衡解离常数，单位为M；等于该缔合反应的解离速率[k解离或kd]与缔合速率[k缔合或ka]的比率，假定是双分子相互作用)等于或小于10-5M。例如，平衡解离常数KD在10-5M至10-13M，如10-7M至10- 11M、10-8M至10-10M、或10-9M至10-10M的范围内。缔合速率(缔合速率常数；k缔合或ka；单位为1/Ms)和解离速率(解离速率常数；k解离或kd；单位为1/s)可以使用本领域中已知的任何测定方法(例如，表面等离子体共振(SPR))来测定。
在一些实施方案中，CAR的抗体(例如抗原结合片段)或抗原结合结构域与BCMA蛋白(如人BCMA蛋白)的结合亲和力(EC50)和/或解离常数为从或从约0.01nM至约500nM、从或从约0.01nM至约400nM、从或从约0.01nM至约100nM、从或从约0.01nM至约50nM、从或从约0.01nM至约10nM、从或从约0.01nM至约1nM、从或从约0.01nM至约0.1nM，为从或从约0.1nM至约500nM、从或从约0.1nM至约400nM、从或从约0.1nM至约100nM、从或从约0.1nM至约50nM、从或从约0.1nM至约10nM、从或从约0.1nM至约1nM、从或从约0.5nM至约200nM、从或从约1nM至约500nM、从或从约1nM至约100nM、从或从约1nM至约50nM、从或从约1nM至约10nM、从或从约2nM至约50nM、从或从约10nM至约500nM、从或从约10nM至约100nM、从或从约10nM至约50nM、从或从约50nM至约500nM、从或从约50nM至约100nM、或者从或从约100nM至约500nM。在某些实施方案中，所述抗体与BCMA蛋白(如人BCMA蛋白)的结合亲和力(EC50)和/或平衡解离常数KD为等于或小于或约400nM、300nM、200nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或更小。在一些实施方案中，所述抗体以次纳摩尔的结合亲和力，例如以小于约1nM(例如小于约0.9nM、约0.8nM、约0.7nM、约0.6nM、约0.5nM、约0.4nM、约0.3nM、约0.2nM、或约0.1nM或更小)的结合亲和力与BCMA蛋白(如人BCMA蛋白)结合。
在一些实施方案中，可以将结合亲和力分类为高亲和力或低亲和力。在一些情况下，展现出低至中亲和力结合的重组受体(例如CAR)的抗体或其片段或重组受体的抗原结合结构域展现出至多107M-1、至多106M-1、至多105M-1的KA。在一些情况下，展现出与特定表位的高亲和力结合的抗体或其片段或重组受体以至少107M-1、至少108M-1、至少109M-1、至少1010M-1、至少1011M-1、至少1012M-1或至少1013M-1的KA与这种表位相互作用。在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)的抗BCMA抗体或其片段或抗原结合结构域与BCMA蛋白的结合亲和力(EC50)和/或平衡解离常数KD为从或从约0.01nM至约1μM、0.1nM至1μM、1nM至1μM、1nM至500nM、1nM至100nM、1nM至50nM、1nM至10nM、10nM至500nM、10nM至100nM、10nM至50nM、50nM至500nM、50nM至100nM、或100nM至500nM。在某些实施方案中，重组受体(例如CAR)的抗BCMA抗体或其片段或抗原结合结构域与BCMA蛋白的结合亲和力(EC50)和/或平衡解离常数的解离常数KD为或为约或者小于或小于约1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或更小。可以将特定抗体的亲和力程度与已知抗体(如参考抗体)的亲和力进行比较。
在一些实施方案中，可以比较重组受体(例如CAR)的抗BCMA抗体或抗原结合结构域对不同抗原(例如来自不同物种的BCMA蛋白)的结合亲和力以确定物种交叉反应性。例如，可以将物种交叉反应性分类为高交叉反应性或低交叉反应性。在一些实施方案中，可以比较对于不同抗原(例如来自不同物种(如人、食蟹猴或小鼠)的BCMA蛋白)的平衡解离常数KD以确定物种交叉反应性。在一些实施方案中，CAR的抗BCMA抗体或抗原结合结构域的物种交叉反应性可以是高的，例如，抗BCMA抗体与人BCMA和物种变体BCMA以类似的程度结合，例如，对于人BCMA的KD与对于物种变体BCMA的KD的比率为或为约1。在一些实施方案中，CAR的抗BCMA抗体或抗原结合结构域的物种交叉反应性可以是低的，例如，抗BCMA抗体对人BCMA具有高亲和力，但对物种变体BCMA具有低亲和力，反之亦然。例如，对于物种变体BCMA的KD与对于人BCMA的KD的比率为大于10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000或更大，并且抗BCMA抗体具有低物种交叉反应性。物种交叉反应性的程度可以与已知抗体(如参考抗体)的物种交叉反应性进行比较。
在一些实施方案中，将CAR的抗BCMA抗体或抗原结合结构域对不同形式或拓扑类型的抗原(例如，可溶性BCMA蛋白)的结合亲和力与对膜结合BCMA的结合亲和力相比较，以确定对特定形式或拓扑类型的优先结合或相对亲和力。例如，在一些方面，所提供的抗BCMA抗体或抗原结合结构域可以展现出与可溶性BCMA相比对膜结合BCMA的优先结合，和/或展现出与可溶性BCMA相比对膜结合BCMA的更大结合亲和力。在一些实施方案中，可以比较对不同形式或拓扑类型的BCMA蛋白的平衡解离常数KD，以确定优先结合或相对结合亲和力。在一些实施方案中，与可溶性BCMA相比，对膜结合BCMA的优先结合或相对亲和力可能较高。例如，在一些情况下，对可溶性BCMA的KD与对膜结合BCMA的KD的比率大于10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000或更大，并且抗体或抗原结合结构域优先结合膜结合BCMA或者对膜结合BCMA具有更高结合亲和力。在一些情况下，对膜结合BCMA的KA与对可溶性BCMA的KA的比率大于10、15、20、25、30、40、50、60、70、80、90、100、200、500、1000、2000或更大，并且抗体或抗原结合结构域优先结合膜结合BCMA或者对膜结合BCMA具有更高结合亲和力。在一些情况下，CAR的抗体或抗原结合结构域以类似的程度结合可溶性BCMA和膜结合BCMA，例如，对可溶性BCMA的KD与对膜结合BCMA的KD的比率为或为约1。在一些情况下，CAR的抗体或抗原结合结构域以类似的程度结合可溶性BCMA和膜结合BCMA，例如，对可溶性BCMA的KA与对膜结合BCMA的KA的比率为或为约1。可以将对膜结合BCMA或可溶性BCMA的优先结合程度或者相对亲和力与已知抗体(如参考抗体)的所述优先结合程度或相对亲和力相比较。
在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)中的抗体或其抗原结合片段与人BCMA蛋白和非人BCMA蛋白或其他非BCMA蛋白以类似的程度结合。例如，在一些实施方案中，CAR的抗体或其抗原结合片段或抗原结合结构域与人BCMA蛋白(如包含SEQ ID NO:164(GenBank号BAB60895.1)或SEQ ID NO:165(NCBI号NP_001183.2)的氨基酸序列的人BCMA蛋白或其等位基因变体或剪接变体)以平衡解离常数(KD)结合，并且与非人BCMA(如食蟹猴BCMA，如SEQID NO:147(GenBank号EHH60172.1)所示的食蟹猴BCMA蛋白)以类似的、或约相等的、或小于2倍差异或小于5倍差异的KD结合。
在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)中的抗体或其抗原结合片段与可溶性BCMA蛋白和膜结合的BCMA蛋白以类似的程度结合，其中平衡解离常数(KD)是类似的或大约相同的或小于2倍的差异或小于5倍的差异。
例如，在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)中的抗体或其抗原结合片段与人BCMA以约或小于或小于约1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或更小的KD结合，并且与食蟹猴BCMA以约或小于或小于约1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或更小的KD结合。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与小鼠BCMA蛋白以约或小于或小于约1μM、500nM、100nM、50nM、40nM、30nM、25nM、20nM、19nM、18nM、17nM、16nM、15nM、14nM、13nM、12nM、11nM、10nM、9nM、8nM、7nM、6nM、5nM、4nM、3nM、2nM、或1nM或更小的KD结合。在一些实施方案中，重组受体(例如CAR)中的抗体或其抗原结合片段与人BCMA、食蟹猴BCMA和小鼠BCMA以高亲和力结合。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与人BCMA和食蟹猴BCMA以高亲和力结合，并且与小鼠BCMA以低亲和力结合。在一些实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段与人BCMA和来自其他物种的BCMA或BCMA蛋白的其他变体以高亲和力结合。
在一些实施方案中，将如使用特定的表面等离子体共振(SPR)条件所测量的总结合容量(Rmax)用于确定所述抗体或其抗原结合片段与抗原(例如，BCMA蛋白，如人BCMA蛋白)的结合能力或容量。对于SPR分析，“配体”是在传感器表面上的固定化靶分子(例如BCMA蛋白)，并且“分析物”是用于与“配体”结合的测试分子(例如抗体)。例如，“分析物”可以是与BCMA蛋白结合的任何抗体或其抗原结合片段。对于SPR中的特定配体和分析物对，可以针对特定条件在假定1:1结合化学计量模型的情况下确定Rmax。使用下式来确定结合容量(Rmax)：Rmax(RU)＝(分析物分子量)/(配体分子量)×固定化配体水平(RU)。例如，在特定的SPR条件下，在任何抗体或其抗原结合片段与BCMA蛋白(如人BCMA或食蟹猴BCMA)之间的结合的Rmax为至少或至少约50个共振单位(RU)，如约25RU、20RU、15RU、10RU、5RU或1RU。
在一些实施方案中，CAR中的抗体(如人抗体)与BCMA蛋白的特定表位或区域(如通常为细胞外表位或区域)特异性地结合。BCMA蛋白是含有细胞外结构域、跨膜结构域和胞质结构域的184个氨基酸的III型膜蛋白。关于SEQ ID NO:164所示的人BCMA氨基酸序列，细胞外结构域对应于氨基酸1-54，氨基酸55-77对应于跨膜结构域，并且氨基酸78-184对应于胞质结构域。
重组受体(例如CAR)包括展现出抗原依赖性活性或信号传导的重组受体(例如CAR)，即在不存在抗原(例如BCMA)的情况下信号传导活性可测量地不存在或处于背景水平。因此，在一些方面，重组受体(例如CAR)在不存在当前抗原(例如BCMA)的情况下不展现出基础信号传导或抗原非依赖性活性或信号传导或者展现出不超过背景或可耐受或低水平的强直信号传导或抗原非依赖性活性或信号传导。在一些实施方案中，所提供的抗BCMACAR表达细胞展现出生物活性或功能，包括细胞毒性活性、细胞因子产生和增殖能力。
在一些实施方案中，嵌合受体的生物活性或功能活性(如细胞毒性活性)可以使用多种已知方法中的任一种来测量。可以在体外或体内评估或确定所述活性。在一些实施方案中，可以在将所述细胞施用至受试者(例如，人)后评估活性。要评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其例如在体内例如通过成像进行评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术进行评估。在某些实施方案中，所述工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用本领域已知的任何合适的方法来测量，所述方法例如描述于例如以下文献中的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)，和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，所述细胞的生物活性还可以通过测定如下某些细胞因子的表达和/或分泌来测量：如白介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFNγ)、白介素-4(IL-4)、TNF-α(TNFα)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、白介素-12(IL-12)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、CD107a和/或TGF-β(TGFβ)。测量细胞因子的测定是本领域所熟知的，并且包括但不限于ELISA、细胞内细胞因子染色、流式微珠阵列、RT-PCR、ELISPOT、流式细胞术和在存在测试样品的情况下测试对相关细胞因子有反应的细胞的反应性(例如，增殖)的生物测定。在一些方面中，通过评估临床结局(如肿瘤负担或负荷的减少)来测量生物活性。
在一些方面，报告细胞系可以用于监测通过抗BCMA CAR表达细胞的抗原非依赖性活性和/或强直信号传导。在一些实施方案中，T细胞系(如Jurkat细胞系)含有在内源性Nur77转录调节元件的控制下表达的报告分子，如荧光蛋白或其他可检测分子(如红色荧光蛋白)。在一些实施方案中，所述Nur77报告基因表达是细胞固有的并且依赖于通过重组报告物的信号传导，所述重组报告物含有T细胞中的初级激活信号、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域(如CD3ζ链)。Nur77表达通常不受其他信号传导途径(如细胞因子信号传导或toll样受体(TLR)信号传导)的影响，所述其他信号传导途径可能以细胞非固有方式起作用，并且可能不依赖于通过重组受体的信号传导。因此，只有表达含有适当的信号传导区的外源重组受体(例如抗BCMA CAR)的细胞才能够在刺激(例如，特异性抗原的结合)时表达Nur77。在一些情况下，Nur77表达还可以显示对刺激(例如，抗原)的量的剂量依赖性反应。
在一些实施方案中，如与具有相同氨基酸序列但由未进行剪接位点消除和/或密码子优化的核苷酸序列编码的替代CAR相比，所提供的抗BCMA CAR在细胞表面上展现出改善的表达。在一些实施方案中，可以评估细胞表面上重组受体的表达。用于确定重组受体在细胞表面上的表达的方法可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013年3月；5(177):177ra38)、蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012年2月；10:29)、表位标签、以及与CAR多肽特异性地结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。在一些实施方案中，所述细胞(例如，原代T细胞)表面上重组受体的表达可以例如通过流式细胞术使用可与所述重组受体或其一部分结合的可被检测到的结合分子来评估。在一些实施方案中，用于检测重组受体表达的结合分子是抗独特型抗体，例如，对结合结构域(例如，scFv)或其一部分具有特异性的抗独特型激动剂抗体。示例性抗独特型抗体描述于PCT/US2020/063492中，通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，所述结合分子是或包含分离的或纯化的抗原，例如重组表达的抗原。
F.多特异性抗体
在某些实施方案中，BCMA结合重组受体是多特异性的。多特异性重组受体包括双特异性受体。多特异性结合配偶体(例如抗体)对至少两个不同的位点具有结合特异性，所述至少两个不同的位点可以在相同或不同的抗原中。在某些实施方案中，所述结合特异性中的一种是针对BCMA，并且另一种是针对另一种抗原。在一些实施方案中，另外的结合结构域和/或识别第三种或更多种抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合BCMA的两个不同表位。双特异性抗体也可以用于将细胞毒性剂定位于表达BCMA的细胞。可以将双特异性抗体制备成全长抗体或抗体片段。所述多特异性抗体包括多特异性单链抗体(例如双抗体、三抗体和四抗体)、串联双scFv和串联三scFv。还提供含有抗体(例如抗原结合片段)的多特异性嵌合受体，如多特异性CAR。还提供含有抗体或多肽(包含抗体)的多特异性细胞，例如含有细胞表面蛋白(包括抗BCMA抗体)和与不同抗原或BCMA上的不同表位结合的另外的细胞表面蛋白(如另外的嵌合受体)的细胞。
示例性抗原包括B细胞特异性抗原、其他肿瘤特异性抗原，例如在白血病(例如B细胞白血病)、淋巴瘤(例如霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤等)或骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤(MM)、浆细胞恶性肿瘤(例如浆细胞瘤))上特异性地表达或与所述肿瘤相关的抗原。例如，抗原包括在如下肿瘤上特异性地表达或与如下肿瘤相关的那些抗原：B细胞慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、急性骨髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞性白血病(ALL)、伯基特淋巴瘤(例如地方性伯基特淋巴瘤或散发性伯基特淋巴瘤)、套细胞淋巴瘤(MCL)、非小细胞肺癌(NSCLC)、慢性骨髓性(或粒细胞性)白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)、小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL)、边缘区淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、难治性滤泡性淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、边缘区淋巴瘤、结节单核细胞样B细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞性淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)、神经母细胞瘤、肾细胞癌、结肠癌、结直肠癌、乳腺癌、上皮鳞状细胞癌、黑色素瘤、骨髓瘤(如多发性骨髓瘤(例如非分泌性多发性骨髓瘤、郁积型多发性骨髓瘤))、胃癌、食道癌、脑癌、肺癌(例如小细胞肺癌)、胰腺癌、宫颈癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)(例如肝癌(hepaticcarcinoma)、肝细胞瘤等)、膀胱癌、前列腺癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、脾癌(例如脾淋巴瘤)、肾上腺癌和/或头颈癌，以及在T细胞上表达的抗原。
在一些实施方案中，用于多靶向策略的第二或另外的抗原包括其中至少一种抗原是通用肿瘤抗原或其家族成员的那些抗原。在一些实施方案中，所述第二或另外的抗原是在肿瘤上表达的抗原。在一些实施方案中，重组受体的BCMA结合结构域靶向与所述第二或另外的抗原相同的肿瘤类型上的抗原。在一些实施方案中，所述第二或另外的抗原可以是通用肿瘤抗原或可以是为肿瘤类型所特有的肿瘤抗原。
示例性第二或另外的抗原包括CD4、CD5、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、CD138、B7、MUC-1、Ia、HM1.24、HLA-DR、腱生蛋白、血管生成因子、VEGF、PIGF、ED-B纤连蛋白、致癌基因、致癌基因产物、CD66a-d、坏死抗原、Ii、IL-2、T101、TAC、IL-6、ROR1、TRAIL-R1(DR4)、TRAIL-R2(DR5)、Her2、L1-CAM、间皮素、CEA、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD24、CD30、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、erbB二聚体、EGFR vIII、FBP、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、G蛋白偶联受体C类5族成员D(GPRC5D)、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ轻链、Lewis Y、L1-细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、生存素、EGP2、EGP40、TAG72、B7-H6、IL-13受体a2(IL-13Ra2)、CA9、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、双抗原、与通用标签相关的抗原、癌症-睾丸抗原、MUC1、MUC16、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、肾母细胞瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、hTERT、MDM2、CYP1B、WT1、活素、AFP、p53、细胞周期蛋白(D1)、CS-1、BAFF-R、TACI、CD56、TIM-3、CD123、L1-细胞粘附分子、MAGE-A1、MAGE A3、细胞周期蛋白(如细胞周期蛋白A1(CCNA1))和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由HIV、HCV、HBV和/或其他病原体表达的分子；和/或在一些方面，其新表位或新抗原。在一些实施方案中，所述抗原与通用标签相关或者是通用标签。
在一些方面，所述抗原(例如第二或另外的抗原，如疾病特异性抗原和/或相关抗原，如G蛋白偶联受体C类5族成员D(GPRC5D)、CD38(环状ADP核糖水解酶)、CD138(多配体聚糖-1、多配体聚糖、SYN-1)、CS-1(CS1、CD2子集1、CRACC、SLAMF7、CD319和19A24)、BAFF-R、TACI和/或FcRH5)在多发性骨髓瘤上表达。其他示例性多发性骨髓瘤抗原包括CD56、TIM-3、CD33、CD123、CD44、CD20、CD40、CD74、CD200、EGFR、β2-微球蛋白、HM1.24、IGF-1R、IL-6R、TRAIL-R1和IIA型激活素受体(ActRIIA)。参见Benson和Byrd,J.Clin.Oncol.(2012)30(16):2013-15；Tao和Anderson,Bone Marrow Research(2011):924058；Chu等人,Leukemia(2013)28(4):917-27；Garfall等人,Discov Med.(2014)17(91):37-46。在一些实施方案中，抗原包括存在于淋巴肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关的淋巴瘤和/或移植后淋巴组织增生上的那些，如CD38。针对此类抗原的抗体或抗原结合片段是已知的并且包括例如以下文献中所述的那些：美国专利号8,153,765、8,603477、8,008,450；美国公开号US20120189622或US20100260748；和/或国际PCT公开号WO2006099875、WO 2009080829或WO 2012092612或WO2014210064。在一些实施方案中，此类抗体或其抗原结合片段(例如，scFv)包含在多特异性抗体、多特异性嵌合受体(如多特异性CAR)和/或多特异性细胞中。
G.优化的抗BCMA CAR多核苷酸
在一些实施方案中，对编码转基因(如BCMA结合重组受体，例如抗BCMA CAR)的起始或参考序列进行针对密码子优化和/或剪接位点去除的评估。
在一些实施方案中，所述方法在抗BCMA CAR(如含有对BCMA具有特异性的scFv抗原结合结构域、间隔子(如SEQ ID NO:174所示的间隔子)、共刺激信号传导区(如来自4-1BB的共刺激信号传导结构域)和CD3ζ信号传导区的CAR)上进行。针对示例性抗BCMA CAR，在以下表7和表8中列出了示例性的已鉴定的剪接供体位点和剪接受体位点及其相应的得分。
Figure BDA0003980595070000871
Figure BDA0003980595070000872
Figure BDA0003980595070000881
Figure BDA0003980595070000891
在一些实施方案中，所得的一种或多种经修饰的核酸序列然后被合成并用于转导细胞以测试剪接，如通过RNA异质性所指示。示例性方法如下并描述在实施例中。简而言之，从表达细胞收集RNA，将其通过逆转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增，并通过琼脂糖凝胶电泳进行解析，以确定与起始序列相比RNA的异质性。在一些情况下，可以将改善的序列重新提交至基因合成供应商以进行进一步的密码子优化和剪接位点去除，接着进行进一步的隐秘剪接位点评价、修饰、合成和测试，直到琼脂糖凝胶上的RNA展现出最小的RNA异质性。
在一些实施方案中，用于优化编码转基因(如本文提供的抗BCMA CAR或本文提供的构建体)的编码核酸序列的所提供的方法是既减少或消除隐秘剪接位点(参见例如，对于示例性密码子优化和剪接位点消除的间隔子序列，SEQ ID NO:200)又优化人密码子使用(参见例如，对于示例性密码子优化和间隔子序列，SEQ ID NO:236)。示例性优化策略描述于实施例中。
在一些实施方案中，提供了编码嵌合抗原受体的多核苷酸，其包含编码以下的核酸：(a)特异性地识别BCMA的细胞外抗原结合结构域，包括以下描述的任何抗原结合结构域；(b)长度为至少125个氨基酸的间隔子；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内信号传导区，其中在细胞中表达所述多核苷酸之后，由多核苷酸转录的RNA、任选信使RNA(mRNA)展现出至少70％、75％、80％、85％、90％或95％RNA同质性。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含分别含有SEQ ID NO:116和119所示氨基酸序列或者分别与SEQ ID NO:116和119具有至少90％同一性的氨基酸序列的VH区和VL区。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区是或包含选自SEQ ID NO:116的VH区氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区是或包含选自SEQ ID NO:119的VL区氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:97、101和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:96、100和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:95、99和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQID NO:94、98和102的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQID NO:104、106和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区是或包含SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列，所述VL区是或包含SEQ ID NO:119所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，由多核苷酸编码的嵌合抗原受体中的示例性抗原结合结构域包括本文表6的每一行中描述的那些。在任何此类实施方案中，CAR的跨膜结构域是或包含源自CD28的跨膜结构域；细胞内信号传导区包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分，并且共刺激信号传导区包含4-1BB的细胞内信号传导结构域。
在一些实施方案中，提供了编码嵌合抗原受体的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码以下的核酸：(a)特异性识别BCMA的细胞外抗原结合结构域，包括以下描述的任何抗原结合结构域；(b)(b)间隔子，其中所述编码核酸是或包含SEQ ID NO:200所示的序列或由其组成或基本上由其组成或者编码SEQ ID NO:174所示的氨基酸序列；(c)跨膜结构域；以及(d)细胞内信号传导区。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含分别含有SEQ ID NO:116和119所示氨基酸序列或者分别与SEQ ID NO:116和119具有至少90％同一性的氨基酸序列的VH区和VL区。在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区是或包含选自SEQ ID NO:116的VH区氨基酸序列内含有的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区是或包含选自SEQ ID NO:119的VL区氨基酸序列内含有的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。在一些实施方案中，在一些实施方案中，所述抗原结合结构域包含VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:97、101和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:96、100和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:95、99和103的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:105、107和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:94、98和102的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:104、106和108的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；或VH区和VL区，所述VH区是或包含SEQ ID NO:116所示的氨基酸序列，所述VL区是或包含SEQ ID NO:119所示的氨基酸序列。在一些实施方案中，由多核苷酸编码的嵌合抗原受体中的示例性抗原结合结构域包括本文表9的每一行中描述的那些。在任何此类实施方案中，CAR的跨膜结构域是或包含源自CD28的跨膜结构域；细胞内信号传导区包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域或其功能变体或信号传导部分，并且共刺激信号传导区包含4-1BB的细胞内信号传导结构域。
本文还提供了示例性经修饰的多核苷酸，包括密码子优化(O)和/或剪接位点消除(SSE)修饰的多核苷酸。此类多核苷酸的例子示于表6中，其中提供了在剪接位点消除和密码子优化之前(未opt)的示例性CAR构建体的组分的示例性核苷酸(nt)序列、在剪接位点消除和优化(O/SSE)后的CAR构建体的组分的核酸(nt)序列、以及由核酸序列编码的相应氨基酸(aa)序列。所述组分包括IgG-κ信号传导序列(ss)、抗BCMA scFv、间隔子区域、跨膜(tm)结构域、共信号传导序列(4-1BB co-sig或CD28 co-sig)、CD3-ζ信号传导结构域(CD3-ζ)、T2A核糖体跳跃元件(T2A)和截短的EGF受体(EGFRt)序列。示例性CAR构建体的多核苷酸序列如SEQ ID NO:9-14所示，其编码SEQ ID NO:15-20所示的氨基酸序列。
Figure BDA0003980595070000901
Figure BDA0003980595070000911
III.工程化细胞和产生工程化细胞的过程
还提供含有重组受体(例如嵌合抗原受体)的细胞(如工程化细胞)，所述重组受体例如含有结合本文所述的BCMA的细胞外结构域的示例性重组受体。还提供此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富集了此类细胞的组合物，如其中表达BCMA结合重组受体的细胞构成组合物中总细胞或某种类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)的至少50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多。所述组合物包括用于施用(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供了用于向受试者(例如患者)施用所述细胞和组合物的治疗方法，以及用于此类方法中的细胞和药物组合物。
因此，还提供表达含有抗体的重组受体的基因工程化细胞，例如含有CAR的细胞。所述细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，所述细胞源自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如骨髓或淋巴细胞，包括淋巴细胞，通常为T细胞和/或NK细胞。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能干细胞和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。所述细胞通常是原代细胞，如直接从受试者分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，所述细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个子集，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记物或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于要治疗的受试者，所述细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现有技术，所述细胞是多能的和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞，对其进行制备、处理、培养和/或工程化，如本文所述，并且在低温保存之前或之后将它们重新引入同一患者体内。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)、效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、黏膜相关恒定T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。
在一些方面，观察到含有表达本文所提供的示例性BCMA结合重组受体的工程化细胞的组合物富集了与中枢记忆T细胞(TCM)表型相关的免疫细胞亚型(例如CD4+或CD8+T细胞亚型)，所述中枢记忆T细胞在一些方面与工程化细胞的增加的持久性和耐久性相关。
在一些实施方案中，所述细胞是自然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，所述细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，所述细胞包括经由基因工程化引入的一种或多种多核苷酸，并且由此表达此类多核苷酸的重组或基因工程化的产物。在一些实施方案中，所述多核苷酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的多核苷酸，例如，所述多核苷酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中被发现。在一些实施方案中，所述多核苷酸不是天然存在的如自然界中未发现的多核苷酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的多核苷酸的嵌合组合的核酸。在一些实施方案中，所述细胞(例如工程化细胞)包含如本文所述的载体(例如病毒载体、表达载体等)，如包含编码本文所述的重组受体的核酸的载体。
在特定例子中，免疫细胞(如人免疫细胞)用于表达所提供的编码嵌合抗原受体的多肽。在一些例子中，所述免疫细胞是T细胞，如CD4+和/或CD8+免疫细胞，包括原代细胞，如原代CD4+和CD8+细胞。
在特定实施方案中，所述工程化细胞通过如下过程来产生，所述过程从一种或多种输入组合物和/或从单个生物样品产生经富集T细胞的输出组合物。在某些实施方案中，所述输出组合物含有表达重组受体(例如CAR，如抗BCMA CAR)的细胞。在特定实施方案中，所述输出组合物的细胞适合于作为疗法(例如自体细胞疗法)向受试者施用。在一些实施方案中，所述输出组合物是经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。
在一些实施方案中，用于生成或产生工程化细胞的过程是通过如下过程来进行的，所述过程包括以下中的一些或全部步骤：收集或获得生物样品；从生物样品中分离、选择或富集输入细胞；低温保存和储存输入细胞；解冻和/或在刺激条件下孵育输入细胞；将所刺激的细胞进行工程化以表达或含有重组多核苷酸，例如编码重组受体如CAR的多核苷酸；将工程化细胞培育至阈值量、密度或扩增；将培育的细胞配制在输出组合物中；和/或低温保存和储存配制的输出细胞，直到细胞被释放用于输注和/或适合于向受试者施用。在一些实施方案中，整个过程用经富集T细胞(例如CD4+和CD8+T细胞)的单一组合物进行。在某些实施方案中，所述过程用经富集T细胞的两种或更多种输入组合物进行，所述两种或更多种输入组合物在所述过程之前和/或期间被组合以产生或生产经富集T细胞的单一输出组合物。在一些实施方案中，富集的T细胞是或包含工程化的T细胞，例如，转导以表达重组受体的T细胞。
在特定实施方案中，表达重组受体(例如抗BCMA CAR)的工程化细胞的输出组合物是由细胞的初始和/或输入组合物产生的。在一些实施方案中，所述输出组合物是经富集T细胞、经富集CD4+T细胞和/或经富集CD8+T细胞的组合物(在下文也分别称为经富集T细胞的组合物、经富集CD4+T细胞的组合物和经富集CD8+T细胞的组合物)。在一些实施方案中，经富集CD4+T细胞的组合物含有至少60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD4+T细胞。在特定实施方案中，经富集CD4+T细胞的组合物含有100％的CD4+T细胞或含有约100％的CD4+T细胞。在某些实施方案中，经富集T细胞的组合物包含或含有少于20％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD8+T细胞，和/或不含有CD8+T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述细胞群基本上由CD4+T细胞组成。在一些实施方案中，富集CD8+T细胞的组合物含有至少75％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或99.9％CD8+T细胞，或者含有或含有约100％CD8+T细胞。在某些实施方案中，经富集CD8+T细胞的组合物包括或含有少于20％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％CD4+T细胞，和/或不含CD4+T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+T细胞。在一些实施方案中，所述细胞群基本上由CD8+T细胞组成。
在特定实施方案中，工程化细胞的输出组合物是由细胞的初始或输入组合物产生的，所述初始或输入组合物是通过组合、混合和/或合并细胞(包括来自含有经富集T细胞、经富集CD4+T细胞、和/或经富集CD8+T细胞的细胞组合物)而产生和/或制备的。在一些实施方案中，细胞的输入组合物是组合的、混合的和/或合并的CD4+和CD8+T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述输入组合物含有在30％与70％之间、在35％与65％之间、在40％与60％之间、在45％与55％之间、或约50％或50％的CD4+T细胞以及在30％与70％之间、在35％与65％之间、在40％与60％之间、在45％与55％之间或约50％或50％的CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述输入组合物含有在45％与55％之间、约50％或50％的CD4+T细胞和在45％与55％之间、约50％或50％的CD8+T细胞。
在某些实施方案中，用于产生工程化细胞的过程还可以包括以下中的一种或多种：激活和/或刺激细胞，例如输入组合物的细胞；和/或将激活和/或刺激的细胞进行基因工程化，例如以通过转导或转染引入编码重组蛋白的多核苷酸；和/或例如在促进增殖和/或扩增的条件下，培育工程化细胞。在特定实施方案中，所提供的方法可以与收获、收集和/或配制在细胞已经被孵育、激活、刺激、工程化、转导、转染和/或培育之后产生的输出组合物结合使用。
在一些实施方案中，所述一个或多个过程步骤至少部分是在无血清培养基中进行。在一些实施方案中，所述无血清培养基是定义的或明确定义的细胞培养基。在某些实施方案中，所述无血清培养基是受控培养基，其已经过处理，例如被过滤以去除抑制剂和/或生长因子。在一些实施方案中，所述无血清培养基含有蛋白质。在某些实施方案中，所述无血清培养基可含有血清白蛋白、水解产物、生长因子、激素、载体蛋白和/或附着因子。在一些实施方案中，所述无血清培养基包括细胞因子。在一些实施方案中，所述无血清培养基包括细胞因子或重组细胞因子。在一些实施方案中，所述无血清培养基包括重组IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些实施方案中，所述无血清培养基包括谷氨酰胺。在一些实施方案中，所述无血清培养基包括谷氨酰胺以及重组IL-2、IL-15和IL-7。
在一些实施方案中，所述无血清培养基包含含有一种或多种蛋白质或其他添加剂的基础培养基。在一些实施方案中，全部或部分所述孵育是在基础培养基中进行的。在一些实施方案中，所述基础培养基含有无机盐、糖、氨基酸和任选地维生素、有机酸和/或缓冲液或其他熟知的细胞培养营养素的混合物。除了营养素外，所述培养基还有助于维持pH和渗透压。在一些方面，所述无血清培养基的组分支持细胞生长、增殖和/或扩增。
多种可商业购得的基础培养基对本领域技术人员而言是熟知的，并且包括杜尔贝科改良的伊格尔培养基(DMEM)、罗斯威尔公园纪念学院培养基(Roswell Park MemorialInstitute Medium，RPMI)、伊斯科夫改良的杜尔贝科培养基和哈氏(Hams)培养基。在一些实施方案中，所述基础培养基是伊斯科夫改良的杜尔贝科培养基、RPMI-1640或α-MEM。在一些实施方案中，所述基础培养基是平衡盐溶液(例如，PBS、DPBS、HBSS、EBSS)。在一些实施方案中，所述基础培养基选自杜尔贝科改良的伊格尔培养基(DMEM)、最小必需培养基(MEM)、伊格尔基础培养基(BME)、F-10、F-12、RPMI 1640、格拉斯哥最小必需培养基(GMEM)、α最小必需培养基(αMEM)、伊斯科夫改良的杜尔贝科培养基和M199。在一些实施方案中，所述基础培养基是复合培养基(例如，RPMI-1640、IMDM)。在一些实施方案中，所述基础培养基是OpTmizerTMCTSTMT细胞扩增基础培养基(ThermoFisher)。
在一些实施方案中，所述基础培养基还可以包含蛋白质或肽。在一些实施方案中，所述至少一种蛋白质不是非哺乳动物来源的。在一些实施方案中，所述至少一种蛋白质是人蛋白质或源自人。在一些实施方案中，所述至少一种蛋白质是重组的。在一些实施方案中，所述至少一种蛋白质包括白蛋白、转铁蛋白、胰岛素、纤连蛋白、抑肽酶或胎球蛋白。在一些实施方案中，所述蛋白质包含白蛋白、胰岛素或转铁蛋白中的一种或多种，任选地人或重组白蛋白、胰岛素或转铁蛋白中的一种或多种。
在一些实施方案中，所述蛋白质是白蛋白或白蛋白替代品。在一些实施方案中，所述白蛋白是人源白蛋白。在一些实施方案中，所述白蛋白是重组白蛋白。在一些实施方案中，所述白蛋白是天然人血清白蛋白。在一些实施方案中，所述白蛋白是重组人血清白蛋白。在一些实施方案中，所述白蛋白是来自非人来源的重组白蛋白。白蛋白替代品可以是任何蛋白质或多肽来源。这样的蛋白质或多肽样品的例子包括但不限于牛垂体提取物、植物水解物(例如，大米水解物)、胎牛白蛋白(胎球蛋白)、卵白蛋白、人血清白蛋白(HSA)或另一种动物来源的白蛋白、鸡提取物、牛胚胎提取物、
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I和
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II。在一些实施方案中，所述蛋白质或肽包括转铁蛋白。在一些实施方案中，所述蛋白质或肽包括纤连蛋白。在一些实施方案中，所述蛋白质或肽包括抑肽酶。在一些实施方案中，所述蛋白质包括胎球蛋白。
在一些实施方案中，所述一种或多种另外的蛋白质是被添加至基础培养基中的血清替代物补充剂的一部分。血清替代物补充剂的例子包括例如免疫细胞血清替代物(ThermoFisher，#A2598101)或Smith等人Clin Transl Immunology.2015年1月；4(1):e31中所述的那些。
在某些实施方案中，所述基础培养基补充有另外的添加剂。细胞培养基的添加剂可以包括但不限于营养素、糖(例如，葡萄糖)、氨基酸、维生素或添加剂(如ATP和NADH)。
在一些实施方案中，所述基础培养基还包含谷氨酰胺，如L-谷氨酰胺。在一些方面，谷氨酰胺是游离形式的谷氨酰胺，如L-谷氨酰胺。在一些实施方案中，所述基础培养基中谷氨酰胺(如L-谷氨酰胺)的浓度小于200mM，如小于150mM、100mM或更小，如20mM至120mM或40mM至100mM，如或约80mM。在一些实施方案中，L-谷氨酰胺的浓度为约0.5mM至约5mM(如2mM)。
在一些实施方案中，所述基础培养基还含有合成氨基酸，如L-谷氨酰胺的二肽形式，例如L-丙氨酰-L-谷氨酰胺。在一些实施方案中，所述基础培养基中的二肽形式的L-谷氨酰胺(例如，L-丙氨酰-L-谷氨酰胺)的浓度为约0.5mM-5mM。在一些实施方案中，所述基础培养基中的二肽形式的L-谷氨酰胺(例如，L-丙氨酰基-L-谷氨酰胺)的浓度为约2mM。
在一些实施方案中，进行所提供的方法，使得用于临床用途(例如，用于过继细胞疗法)的细胞的制备中的一个、多个或所有步骤是在使细胞不暴露于非无菌条件的情况下进行。在一些实施方案中，所述细胞被选择、刺激、转导、洗涤和配制，其全部在封闭的无菌系统或设备内。在一些实施方案中，所述一个或多个步骤是在封闭系统或设备之外进行。在一些此类实施方案中，将细胞在无菌条件下从封闭系统或装置转移出去，如通过无菌转移将其转移到单独的封闭系统中。
A.用于工程化的细胞的制备
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤。用于引入重组受体(例如CAR)的细胞可以从样品(如生物样品，例如获自或源自受试者的样品)中分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其施用细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，所述受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，所述细胞是原代细胞，例如原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个加工步骤(如分离、离心、基因工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。所述生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。
在一些方面，细胞从其中来源或分离的样品是血液或血液来源的样品，或者是或源自单采术或白细胞单采术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检物、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、黏膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或源自其的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的背景下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，所述细胞源自细胞系，例如T细胞系。在一些实施方案中，所述细胞获得自异种来源，例如获得自小鼠、大鼠、非人灵长类动物或猪。
在一些实施方案中，所述细胞的分离包括一个或多个制备步骤和/或非基于亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在存在一种或多种试剂的情况下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，细胞基于一种或多种特性来分离，所述特性如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或耐药性。
在一些例子中，例如通过单采术或白细胞单采术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些方面，所述样品含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的血细胞以例如去除血浆级分，并将所述细胞置于适当缓冲液或介质中以用于后续的处理步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述细胞。在一些实施方案中，所述洗涤溶液缺乏钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，根据制造商的说明书，通过半自动“流通”离心机(例如，Cobe2991细胞加工器，Baxter)完成洗涤步骤。在一些方面，根据制造商的说明书，通过切向流过滤(TFF)完成洗涤步骤。在一些实施方案中，洗涤后将细胞重悬于多种生物相容性缓冲液(例如不含Ca++/Mg++的PBS)中。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将所述细胞直接重悬于培养基中。
在一些方面，对于产生分离的或分泌的多肽，除原核生物之外，真核微生物(如丝状真菌或酵母)也是编码抗体的载体的合适的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经被修饰为模拟或接近人细胞中的那些糖基化途径从而产生具有部分或完全人糖基化模式的抗体的真菌和酵母菌株。参见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等人,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
可用于表达多肽(包括分离的或分泌的多肽)的示例性真核细胞包括但不限于COS细胞，包括COS 7细胞；293细胞，包括293-6E细胞；CHO细胞，包括CHO-S、DG44、Lec13 CHO细胞和FUT8 CHO细胞；PER.
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细胞；以及NSO细胞。在一些实施方案中，可以在酵母中表达抗体重链和/或轻链(例如，VH区和/或VL区)。参见例如，美国公开号US 2006/0270045 A1。在一些实施方案中，基于其对重链和/或轻链(例如，VH区和/或VL区)进行所需的翻译后修饰的能力来选择特定的真核宿主细胞。例如，在一些实施方案中，CHO细胞产生的多肽比在293细胞中产生的相同多肽具有更高的唾液酸化水平。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、选择和/或富集、和/或用于转导和工程化的孵育之前或之后，和/或在培育和/或收获工程化细胞之后，冷冻(例如低温保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和后续解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任一种。在一些实施方案中，将所述细胞在介质和/或溶液中冷冻(例如，低温保护或低温保存)，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、或5.0％的DMSO，或在1％与15％之间、在6％与12％之间、在5％与10％之间、或在6％与8％之间的DMSO。在特定实施方案中，将所述细胞在介质和/或溶液中冷冻(例如，低温保护或低温保存)，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、或0.25％的HSA，或者在0.1％与-5％之间、在0.25％与4％之间、在0.5％与2％之间、或在1％与2％之间的HSA。一个例子包括使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将细胞以等于或约1摄氏度/分钟的速率冷冻至等于或约-80摄氏度并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，所述细胞或群体的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞在存在一种或多种试剂的情况下洗涤、离心和/或孵育，例如以去除不需要的组分、针对所需组分进行富集、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，细胞基于一种或多种特性来分离，所述特性如密度、粘附特性、大小、对特定组分的敏感性和/或耐药性。在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过裂解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度离心而从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，选择步骤的至少一部分包括将细胞与选择试剂一起孵育。与一种或多种选择试剂一起孵育，例如作为选择方法的一部分可以使用一种或多种选择试剂来进行，以用于基于一种或多种特定分子(如表面标记物(例如表面蛋白)、细胞内标记物或核酸)在细胞中或细胞上的表达或存在来选择一种或多种不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的利用一种或多种选择试剂基于此类标记进行分离的方法。在一些实施方案中，一种或多种选择试剂导致分离，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，选择包括与一种或多种试剂一起孵育，用于基于一种或多种标记物(通常是细胞表面标记物)的细胞表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过与特异性地结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并分离已结合抗体或结合配偶体的细胞与未结合至抗体或结合配偶体的那些细胞。
在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的基于亲和力的所需选择试剂混合。基于免疫亲和力的选择可以使用任何系统或方法进行，所述系统或方法使得在分离的细胞与特异性结合至细胞上的标记物的分子(例如，固体表面(例如颗粒)上的抗体或其他结合配偶体)之间产生有利的能量相互作用。在一些实施方案中，方法是使用颗粒(如珠，例如磁珠)进行，所述颗粒包被有对细胞的标记物具有特异性的选择剂(例如抗体)。可以将颗粒(例如珠)与细胞在容器(如管或袋)中一起孵育或混合，同时振荡或混合，其中细胞密度与颗粒(例如，珠)的比率是恒定的，以帮助促进能量上有利的相互作用。在其他情况下，所述方法包括选择细胞，其中所述选择的全部或一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行。在一些实施方案中，将细胞与选择试剂(如基于免疫亲和力的选择试剂)一起孵育是在离心室中进行。在某些实施方案中，使用在国际专利申请公开号WO2009/072003或US 20110003380 A1中所述的系统、装置或设备进行分离或分开。在一个例子中，所述系统是如国际公开号WO2016/073602中所述的系统。
在一些实施方案中，通过在离心室的空腔中实施此类选择步骤或其部分(例如，与抗体涂覆的颗粒(例如磁珠)一起孵育)，用户能够控制某些参数，例如各种溶液的体积、在处理期间溶液的添加及其时间安排，与其他可用方法相比，这可以提供多种优势。例如，在孵育期间减少空腔中液体体积的能力可以增加选择中使用的颗粒(例如珠试剂)的浓度，并由此增加溶液的化学势，而不影响空腔中的细胞总数量。这又可以增强正在处理的细胞与用于选择的颗粒之间的成对相互作用。在一些实施方案中，例如，在与如本文所述的系统、电路和控制相关联时，在室中进行孵育步骤，允许用户在孵育期间的一个或多个所需时间实现对溶液的搅动，这也可以改善相互作用。
在一些实施方案中，选择步骤的至少一部分是在离心室中进行，其包括将细胞与选择试剂一起孵育。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的基于亲和力的所需选择试剂混合，所述量远少于根据制造商的说明书在管或容器中进行类似选择以用于选择相同数量的细胞和/或相同体积的细胞时通常采用的量。在一些实施方案中，所采用的一种或多种选择试剂的量是根据制造商的说明书在基于管或容器的孵育中针对相同细胞数量和/或相同细胞体积进行细胞选择所采用的一种或多种相同选择试剂的量的不超过5％、不超过10％、不超过15％、不超过20％、不超过25％、不超过50％、不超过60％、不超过70％或不超过80％。
在一些实施方案中，对于细胞的选择，例如基于免疫亲和力的选择，将细胞在室空腔中在组合物中孵育，所述组合物还含有具有选择试剂的选择缓冲液，所述选择试剂例如特异性地结合至希望富集和/或耗尽的细胞上(而不是组合物中其他细胞上)的表面标记的分子，例如抗体，其任选地偶联到支架(例如聚合物或表面，例如珠，例如磁珠，例如与对CD4和CD8具有特异性的单克隆抗体偶联的磁珠)。在一些实施方案中，如所描述的，将选择试剂添加至室空腔中的细胞，所添加的量与在振荡或旋转的管中进行选择时，实现相同数量的细胞或相同体积的细胞的大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的选择试剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞和选择试剂添加选择缓冲液的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL，如至少或约至少10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL试剂的孵育的目标体积。在一些实施方案中，将选择缓冲液和选择试剂在添加至所述细胞之前预先混合。在一些实施方案中，将所述选择缓冲液和选择试剂单独添加至所述细胞。在一些实施方案中，选择孵育是在周期性温和混合条件下进行的，这可有助于促进能量上有利的相互作用，从而允许使用较少的总选择试剂来实现高选择效率。
在一些实施方案中，与选择试剂一起孵育的总持续时间为或为约5分钟至6小时，例如30分钟至3小时，例如至少或约至少30分钟、60分钟、120分钟或180分钟。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在样品或室壁或其他容器壁处的一定RCF下，所述RCF从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转使用以这种低速旋转和之后的休息时间段的重复间隔来进行，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，例如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，这种过程是在与所述室为整体的完全封闭的系统内进行的。在一些实施方案中，这个过程(并且在一些方面还有一个或多个另外的步骤，例如预先洗涤步骤洗涤含有细胞的样品，例如单采术样品)以自动化方式进行，使得将细胞、试剂和其他组分在适当时间吸入和推出所述室并进行离心，以便使用自动化程序在单一封闭系统中完成洗涤和结合步骤。
在一些实施方案中，在孵育和/或混合细胞和一种和/或多种选择试剂后，使所孵育的细胞经历分离，以基于一种或多种特定试剂的存在或不存在来选择细胞。在一些实施方案中，在同一封闭系统中进行分离，其中将细胞与所述选择试剂一起进行孵育。在一些实施方案中，在与所述选择试剂一起孵育后，将所孵育的细胞(包括其中已经结合选择试剂的细胞)转移到系统中用于基于免疫亲和力来分离细胞。在一些实施方案中，用于基于免疫亲和力的分离的系统是或含有磁分离柱。
在一些实施方案中，分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记物(例如，表面蛋白)、细胞内标记物或核酸)在细胞中的表达或存在来分离不同的细胞类型。在一些实施方案中，可以使用任何已知的基于此类标记的用于分离的方法。在一些实施方案中，分开是基于亲和力或基于免疫亲和力的分开。例如，在一些方面，分离包括基于细胞的一种或多种标记(通常为细胞表面标记物)的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如通过和与此类标记物特异性地结合的抗体或结合配偶体一起孵育，然后通常是洗涤步骤和从那些未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞中分离已结合所述抗体或结合配偶体的细胞。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记物进行分离。
在一些实施方案中，所述处理步骤还包括对所孵育的细胞进行阴性和/或阳性选择，如使用可以进行基于亲和力的选择的系统或设备。在一些实施方案中，通过经由阳性选择富集特定细胞群，或经由阴性选择耗尽特定细胞群来进行分离。在一些实施方案中，通过以下方式完成阳性或阴性选择：将细胞与特异性结合至一种或多种表面标记物的一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育，所述一种或多种表面标记物分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记物+)或以相对较高的水平表达(标记物高)。
分离无需导致特定细胞群或表达特定标记物的细胞的100％富集或去除。例如，对特定类型的细胞(如表达标记物的那些)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但不需要使不表达所述标记物的细胞完全不存在。同样，对特定类型的细胞(如表达标记物的那些)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但不需要使所有此类细胞完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中使来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一个分离步骤，如随后的阳性或阴性选择。在一些例子中，单个分离步骤可以同时耗尽表达多种标记物的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体(每种抗体或结合配偶体对被靶向用于阴性选择的标记物具有特异性)一起孵育。同样，通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育，可以同时对多个细胞类型进行阳性选择。
例如，在一些方面，T细胞的特定亚群，如对一种或多种表面标记物呈阳性或高水平表达的细胞(例如CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞)通过阳性或阴性选择技术来分离。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，
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M-450CD3/CD28T细胞扩增器、MACSiBeadsTM等)阳性选择CD3+、CD28+T细胞。
在一些实施方案中，通过阴性选择在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞，如CD14)上表达的标记物，将T细胞与PBMC样品分离。在一些方面，CD4+和/或CD8+选择步骤用于从组合物(如从PBMC组合物，如经由白细胞单采术获得的组合物)分离CD4+辅助T细胞和CD8+细胞毒性T细胞。在一些方面，通过对在一种或多种幼稚、记忆和/或效应T细胞亚群上表达或以相对较高程度表达的标记物的阳性或阴性选择，可以将此类CD4+和CD8+群体进一步分类成亚群。在一些实施方案中，CD4+和CD8+细胞以所需的比率混合。
在一些实施方案中，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原进行阳性或阴性选择，将CD8+细胞针对幼稚、中央记忆、效应记忆和/或中央记忆干细胞进一步富集或耗尽。在一些实施方案中，针对中枢记忆T(TCM)细胞进行富集以增加功效，如以改善施用后的长期存活、扩增和/或植入，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含TCM的CD8+T细胞与CD4+T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。可以例如使用抗CD8和抗CD62L抗体将PBMC针对CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分进行富集或耗尽。
在一些实施方案中，对中央记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD27、CD28、CD3和/或CD127的阳性或高表面表达；在一些方面，它是基于表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，富集TCM细胞的CD8+群体的分离是通过耗尽表达CD4、CD14、CD45RA的细胞以及对表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行的。在一个方面，中枢记忆T(TCM)细胞的富集从基于CD4表达所选择的阴性细胞级分开始进行，所述阴性细胞级分基于CD14和CD45RA的表达进行阴性选择且基于CD62L进行阳性选择。在一些方面这种选择是同时进行的，而在其他方面以任何顺序依序进行。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于生成CD4+细胞群或亚群，使得来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分被保留并用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个其他阳性或阴性选择步骤之后。
在一些实施方案中，中央记忆CD8+细胞呈CD27+、CD28+、CD62L+、CCR7+、CD45RA-和/或CD45RO+。在一些实施方案中，中央记忆CD8+细胞呈CD62L+和CD45RO+。在一些实施方案中，中枢记忆CD8+细胞呈CCR7+和CD45RO+。在一些实施方案中，中枢记忆CD8+细胞呈CCR7+和CD45RA-。在一些实施方案中，中央记忆CD8+细胞呈CD62L+和CCR7+。在一些实施方案中，中央记忆CD8+细胞呈CD62L+/CD45RA-、CCR7+/CD45RA-、CD62L+/CCR7+、或CD62L+/CCR7+/CD45RA-，并且具有中等至高表达的CD44。在一些实施方案中，中央记忆CD8+细胞呈CD27+/CD28+/CD62L+/CD45RA-、CD27+/CD28+/CCR7+/CD45RA-、CD27+/CD28+/CD62L+/CCR7+、或CD27+/CD28+/CD62L+/CCR7+/CD45RA-。
在特定实施方案中，使生物样品(例如PBMC或其他白细胞的样品)经历CD4+T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD8+T细胞选自阴性级分。在一些实施方案中，使生物样品经受CD8+T细胞的选择，其中同时保留阴性和阳性级分。在某些实施方案中，CD4+T细胞选自阴性级分。
在特定例子中，PBMC样品或其他白细胞样品进行CD4+细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分。然后使阴性级分经历基于CD14和CD45RA的表达的阴性选择和基于中央记忆T细胞所特有的标记物(如CD62L或CCR7)的阳性选择，其中阳性和阴性选择是以任何顺序进行的。
在一些实施方案中，通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群，将CD4+T辅助细胞分类为幼稚、中央记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L+和CD45RO+。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L+和CD45RO+。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD27+、CD28+、CD62L+、CCR7+、CD45RA-和/或CD45RO+。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L+和CD45RO+。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞呈CCR7+和CD45RO+。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞呈CCR7+和CD45RA-。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L+和CCR7+。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L+/CD45RA-、CCR7+/CD45RA-、CD62L+/CCR7+、或CD62L+/CCR7+/CD45RA-，并且具有中等至高表达的CD44。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD27+/CD28+/CD62L+/CD45RA-、CD27+/CD28+/CCR7+/CD45RA-、CD27+/CD28+/CD62L+/CCR7+、或CD27+/CD28+/CD62L+/CCR7+/CD45RA-。在一些实施方案中，效应CD4+细胞呈CD62L-和CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或结合配偶体与固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)结合，以允许细胞分离以用于阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分开技术来分开或分离细胞和细胞群(综述于Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis ResearchProtocols,第2卷:Cell Behavior In vitro and In vivo,第17-25页S.A.Brooks和U.Schumacher编辑
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Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将待分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应颗粒或微粒，如顺磁珠(例如像
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或
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珠))一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接地附着于结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体与希望分离(例如，希望阴性地或阳性地选择)的一个细胞、多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)特异性结合。
在一些实施方案中，所述磁性颗粒或珠包含与特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)结合的磁响应材料。有许多在磁分离方法中使用的熟知的磁响应材料。合适的磁性颗粒包括在Molday,美国专利号4,452,773和欧洲专利说明书EP 452342B中所述的那些，将所述专利通过引用特此并入。胶体大小的颗粒(例如在Owen美国专利号4,795,698和Liberti等人,美国专利号5,200,084中所述的那些)是其他的例子。
孵育通常在如下条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将样品置于磁场中，并且具有附着于其上的磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引到磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被磁铁吸引的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记的细胞)。在一些方面，在同一选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步处理或经历另外的分离步骤。
在某些实施方案中，所述磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒通过对一种或多种标记物具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，并且然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，所述磁响应颗粒保持附着于所述细胞，所述细胞随后被孵育、培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附着于所述细胞以向患者施用。在一些实施方案中，从所述细胞中去除可磁化或磁响应颗粒。用于从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体、可磁化颗粒或与可切割接头缀合的抗体等。在一些实施方案中，所述可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是通过磁激活细胞分选
Figure BDA0003980595070001004
(Miltenyi Biotec，加利福尼亚州奥本)来进行的。磁激活细胞分选
Figure BDA0003980595070001005
系统能够高纯度选择附接有磁化颗粒的细胞。在某些实施方案中，
Figure BDA0003980595070001006
以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依序洗脱非靶种类和靶种类。也就是说，附着于磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在完成第一次洗脱步骤之后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，所述非靶细胞被标记并从异质细胞群中耗尽。
在某些实施方案中，使用如下系统、装置或设备进行分离或分开，所述系统、装置或设备进行所述方法的分离、细胞制备、分开、处理、孵育、培养和/或制备步骤中的一个或多个。在一些方面，所述系统用于在封闭或无菌环境中进行这些步骤中的每一个，例如以最小化错误、用户操作和/或污染。在一个例子中，该系统是如国际专利申请公开号WO 2009/072003或US 20110003380 A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动化或可编程方式进行分离、处理、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如，全部)。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，其允许用户对加工、分离、工程化和配制步骤的各个方面进行编程、控制、评估其结局和/或调整。
在一些方面，使用
Figure BDA0003980595070001011
系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤，例如用于在封闭和无菌系统中在临床规模水平上的细胞的自动化分离。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制所述仪器的所有部件并指示所述系统以标准化顺序执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，
Figure BDA0003980595070001012
系统使用抗体偶联的可磁化颗粒，其在无菌、无热原的溶液中提供。在一些实施方案中，在用磁性颗粒标记细胞后，洗涤所述细胞以去除过量的颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，所述管组又连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统自动将细胞样品施加到分离柱。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文所述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS
Figure BDA0003980595070001013
系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS
Figure BDA0003980595070001014
系统配备有细胞处理单元，其允许自动化洗涤和通过离心来分级分离细胞。CliniMACS
Figure BDA0003980595070001015
系统还可以包括机载相机和图像识别软件，所述图像识别软件通过辨识源细胞产品的宏观层来确定最佳细胞分级终点。例如，可以将外周血自动分离成红细胞、白细胞和血浆层。CliniMACS
Figure BDA0003980595070001016
系统还可以包括集成的细胞培育室，其实现细胞培养方案，如细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660；Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；和Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过流式细胞术收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记物染色的细胞在流体流中携载。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分类收集和富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用微机电系统(MEMS)芯片结合基于FACS的检测系统来收集和富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如，WO 2010/033140，Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355-376。在两种情况下，细胞可以用多种标记物来标记，从而允许以高纯度分离明确定义的T细胞子集。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测的标记物来标记抗体或结合配偶体，以促进用于阳性和/或阴性选择的分离。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记物具有特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞携载于流体流中，如通过荧光激活细胞分选(FACS)(包括制备规模(FACS))和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，所述分离和/或选择产生经富集T细胞，例如CD3+T细胞、CD4+T细胞和/或CD8+T细胞的一种或多种输入组合物。在一些实施方案中，从单一生物样品中分离、选择、富集或获得两种或更多种单独的输入组合物。在一些实施方案中，从单独的生物样品中分离、选择、富集和/或获得单独的输入组合物，所述单独的生物样品从同一受试者收集、获取和/或获得。
在某些实施方案中，所述一种或多种输入组合物是或包括经富集T细胞的组合物，所述组合物包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％或为或为约100％的CD3+T细胞。在特定实施方案中，经富集T细胞的输入组合物基本上由CD3+T细胞组成。
在某些实施方案中，所述一种或多种输入组合物是或包括经富集CD4+T细胞的组合物，所述组合物包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％、或为或约100％的CD4+T细胞。在某些实施方案中，所述CD4+T细胞的输入组合物包含少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD8+T细胞，和/或不含有CD8+T细胞，和/或不含或基本上不含CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述经富集T细胞的组合物基本上由CD4+T细胞组成。
在某些实施方案中，所述一种或多种组合物是或包括CD8+T细胞的组合物，所述组合物是或包含至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％、至少99.5％、至少99.9％、或为或约100％的CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述CD8+T细胞的组合物含有少于40％、少于35％、少于30％、少于25％、少于20％、少于15％、少于10％、少于5％、少于1％、少于0.1％或少于0.01％的CD4+T细胞，和/或不含有CD4+T细胞，和/或不含或基本上不含CD4+T细胞。在一些实施方案中，经富集T细胞的组合物基本上由CD8+T细胞组成。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，低温保存)细胞的步骤。在一些实施方案中，冷冻和后续解冻步骤去除细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如在洗涤步骤之后将细胞悬浮在冷冻溶液中以去除血浆和血小板。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任一种。一个例子包括使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后将细胞以1摄氏度/分钟的速率冷冻至-80摄氏度并储存在液氮储罐的气相中。
B.激活和刺激
在一些实施方案中，在基因工程化之前或结合基因工程化来孵育和/或培养细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。在一些实施方案中，在刺激条件或刺激剂的存在下孵育所述组合物或细胞。此类条件包括设计用于在群体中诱导细胞的增殖、扩增、激活和/或存活以模拟抗原暴露和/或引发细胞用于遗传工程化(如用于引入重组抗原受体)的那些。
在一些实施方案中，所提供的方法包括培育、孵育、培养和/或基因工程步骤。例如，在一些实施方案中，提供了用于孵育耗尽的细胞群和培养起始组合物和/或将它们工程化的方法。因此，在一些实施方案中，在培养起始组合物中孵育细胞群。
孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。
条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他旨在激活细胞的药剂))。
在一些实施方案中，刺激条件或刺激剂包括能够刺激或激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如，配体)。在一些方面，所述药剂在T细胞中开启或启动TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可包括抗体如对于TCR具有特异性的抗体，例如抗CD3。在一些实施方案中，刺激条件包括一种或多种药剂例如配体，其能够刺激共刺激受体，例如抗CD28。在一些实施方案中，这种药剂和/或配体可结合至固体支撑物如珠和/或一种或多种细胞因子。任选地，所述扩增方法还可以包括向培养基中(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)添加抗CD3和/或抗CD28抗体的步骤。在一些实施方案中，所述刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，根据多种技术进行孵育，例如以下文献中所述的那些：授予Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651–660；Terakura等人(2012)Blood.1:72–82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞，如非分裂外周血单核细胞(PBMC)(例如，使得对于待扩增的初始群体中的每个T淋巴细胞，所得细胞群含有至少约5、10、20或40个或更多个PBMC饲养细胞)；并且孵育培养物(例如，持续足以扩增T细胞数量的时间)。在一些方面，所述非分裂饲养细胞可以包含γ照射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，将PBMC用范围为约3000至3600拉德的γ射线辐照，以防止细胞分裂。在一些方面，在添加所述T细胞群之前将所述饲养细胞添加到培养基中。
在一些实施方案中，刺激条件包括适合于人T淋巴细胞生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常在或约在37摄氏度。任选地，孵育还可以包括加入非分裂的EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用约6000至10,000拉德范围内的γ射线辐射LCL。在一些方面，所述LCL饲养细胞以任何合适的量(如LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率为至少约10:1)提供。
在实施方案中，通过用抗原刺激幼稚或抗原特异性T淋巴细胞获得抗原特异性T细胞，如抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞。例如，可以通过从被感染的受试者分离T细胞并在体外用相同抗原刺激所述细胞，针对巨细胞病毒抗原来产生抗原特异性T细胞系或克隆。
在一些实施方案中，在一种或多种刺激条件或刺激剂存在下进行的孵育的至少一部分是在离心室的内部空腔中进行，例如在离心旋转下进行，如国际公开号WO2016/073602中所述的。在一些实施方案中，在离心室中进行的孵育的至少一部分包括与一种或多种试剂混合以诱导刺激和/或激活。在一些实施方案中，将细胞(如选择的细胞)与刺激条件或刺激剂在离心室中混合。在此类过程的一些方面，将一定体积的细胞与一定量的一种或多种刺激条件或刺激剂混合，所述刺激条件或刺激剂远小于在细胞培养板或其他系统中进行类似刺激时通常使用的刺激条件或刺激剂。
在一些实施方案中，将刺激剂以一定的量添加至室空腔中的细胞，所述一定的量与例如在周期性振荡或旋转的管或袋中进行选择而不在离心室中混合时，对相同细胞数量或相同细胞体积实现大致相同或类似的选择效率通常使用或将需要的刺激剂的量相比显著较小(例如不大于所述量的5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％或80％)。在一些实施方案中，在向细胞和刺激剂中添加孵育缓冲液的情况下进行孵育，以实现例如10mL至200mL(如至少或约至少或为约或为10mL、20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL、100mL、150mL或200mL)试剂的孵育的目标体积。在一些实施方案中，在添加细胞之前预先混合孵育缓冲液和刺激剂。在一些实施方案中，将所述孵育缓冲液和刺激剂单独添加至所述细胞中。在一些实施方案中，在周期性温和混合条件下进行刺激孵育，这可能有助于促进能量上有利的相互作用，并且从而允许在实现细胞的刺激和激活的同时使用较少的总体刺激剂。
在一些实施方案中，孵育通常在混合条件下进行，如在旋转的存在下，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于使细胞沉淀的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如，为或约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)，如在样品或室壁或其他容器壁处的一定RCF下，所述RCF从或从约80g至100g(例如，为或约或至少80g、85g、90g、95g或100g)。在一些实施方案中，旋转使用以这种低速旋转和之后的休息时间段的重复间隔来进行，例如旋转和/或休息1、2、3、4、5、6、7、8、9或10秒，例如旋转大约1或2秒，然后休息大约5、6、7或8秒。
在一些实施方案中，例如与刺激剂一起孵育的总持续时间在或在约1小时与96小时之间、1小时与72小时之间、1小时与48小时之间、4小时与36小时之间、8小时与30小时之间或12小时与24小时之间，例如至少或约至少6小时、12小时、18小时、24小时、36小时或72小时。在一些实施方案中，进一步孵育进行如下时间：在或约在1小时与48小时之间、4小时与36小时之间、8小时与30小时之间或12小时与24小时之间并包含端值。
在特定实施方案中，所述刺激条件包括用一种或多种细胞因子和/或在一种或多种细胞因子存在下孵育、培养和/或培育经富集T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，所述一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。
在一些实施方案中，所述刺激导致例如在转导之前细胞的激活和/或增殖。
C.用于基因工程化的载体和方法
还提供了用于表达BCMA结合重组受体(例如CAR)以及用于生产表达此类重组受体的基因工程化细胞的方法、多核苷酸、组合物和试剂盒。在一些实施方案中，可以将一种或多种重组受体(例如CAR)或其他分子基因工程化至细胞或多种细胞中。基因工程化通常涉及将编码重组或工程化组分的核酸引入细胞中，例如通过逆转录病毒转导、转染或转化。
还提供了编码所述嵌合抗原受体和/或其部分(例如，链)的多核苷酸。所提供的多核苷酸包括编码本文所述的抗BCMA嵌合抗原受体(例如，抗原结合片段)的那些。还提供编码一种或多种抗体和/或其部分的多核苷酸，例如编码本文所述的抗BCMA抗体(例如抗原结合片段)和/或其他抗体和/或其部分(例如，结合其他靶抗原的抗体和/或其部分)中的一种或多种的那些核酸。所述多核苷酸可以包括包含天然和/或非天然存在的核苷酸和碱基的那些，例如包括具有骨架修饰的那些。术语“核酸分子”、“核酸”和“多核苷酸”可以互换使用，并且是指核苷酸的聚合物。核苷酸的此类聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸，并且包括但不限于DNA、RNA和PNA。“核酸序列”是指构成核酸分子或多核苷酸的核苷酸的线性序列。
还提供了已针对密码子使用和/或消除剪接位点(如隐秘剪接位点)进行优化的多核苷酸。还提供了优化和产生嵌合抗原受体(如本文所述的任何嵌合抗原受体)的编码序列的方法。此类方法描述在本文的第II部分中。
还提供了含有所述多核苷酸(例如本文所述的任何多核苷酸)的载体和含有所述载体的宿主细胞，例如用于产生抗体或其抗原结合片段的宿主细胞或者表达含有此类抗体或片段的重组受体(例如CAR)的细胞。在一些实施方案中，所述载体是病毒载体。在一些实施方案中，所述载体是逆转录病毒载体或慢病毒载体。还提供了用于产生抗体或其抗原结合片段或表达含有此类抗体或片段的重组受体(例如CAR)的细胞的方法。
在一些实施方案中，核酸可以编码构成抗体的VL区的氨基酸序列和/或构成抗体的VH区的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。核酸可以编码构成抗体的VL区的一个或多个氨基酸序列和/或构成抗体的VH区的氨基酸序列(例如抗体的轻链和/或重链)。在其他实施方案中，提供包含此类多核苷酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。在其他实施方案中，提供了包含此类多核苷酸的宿主细胞。在一个这样的实施方案中，宿主细胞包含载体(例如，已经用载体转化)，所述载体包含编码构成抗体的VH区的氨基酸序列的核酸。在另一个这样的实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用以下各项转化)：(1)含有编码构成抗体的VL区的氨基酸序列和构成抗体的VH区的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)含有编码构成抗体的VL区的氨基酸序列的核酸的第一载体和含有编码构成抗体的VH区的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一些实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用以下项转化)一种或多种载体，所述一种或多种载体包含编码一种或多种氨基酸序列的一种或多种核酸，所述一种或多种氨基酸序列构成一种或多种抗体和/或其部分(例如其抗原结合片段)。在一些实施方案中，提供一种或多种此类宿主细胞。在一些实施方案中，提供含有一种或多种此类宿主细胞的组合物。在一些实施方案中，所述一种或多种宿主细胞可以表达不同的抗体或相同的抗体。在一些实施方案中，每种宿主细胞可以表达多于一种抗体。
还提供了制备抗BCMA嵌合抗原受体的方法。对于嵌合受体的重组产生，可以分离编码嵌合受体抗体(例如，如本文所述)的核酸序列，并将其插入至一种或多种载体中，以用于在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。使用常规程序(例如，通过使用能够与编码抗体重链和轻链的基因特异性地结合的寡核苷酸探针)可以容易地分离和测序此类核酸序列。在一些实施方案中，提供了制备抗BCMA嵌合抗原受体的方法，其中所述方法包括在适用于表达所述受体的条件下培养包含编码如以上所提供的抗体的核酸序列的宿主细胞。
在一些情况下，含有编码BCMA结合重组受体(例如，嵌合抗原受体(CAR))的核酸序列的多核苷酸含有编码信号肽的信号序列。在一些方面，信号序列可以编码源自天然多肽的信号肽。在其他方面，信号序列可以编码异源或非天然信号肽。在一些方面，非限制性示例性信号肽包括SEQ ID NO:166所示或由SEQ ID NO:167或168-171所示核苷酸序列编码的IgGκ链的信号肽；SEQ ID NO:154所示且由SEQ ID NO:155所示核苷酸序列编码的GMCSFRα链；SEQ ID NO:146所示的CD8α信号肽；或SEQ ID NO:142所示的CD33信号肽。
在一些实施方案中，所述载体或构建体可以含有启动子和/或增强子或调节编码的重组受体的表达的调节元件。在一些例子中，所述启动子和/或增强子或调节元件可以是条件依赖性启动子、增强子和/或调节元件。在一些例子中，这些元件驱动转基因的表达。在一些例子中，所述CAR转基因可以与启动子(如具有HTLV1增强子的EF1α启动子(SEQ ID NO:151))可操作地连接。在一些例子中，所述CAR转基因与位于转基因下游的土拨鼠肝炎病毒(WHP)转录后调节元件(WPRE；SEQ ID NO:253)可操作地连接。
在一些实施方案中，所述载体或构建体可以含有驱动一种或多种核酸分子的表达的单个启动子。在一些实施方案中，此类核酸分子(例如转录物)可以是多顺反子的(双顺反子的或三顺反子的，参见例如美国专利号6,060,273)。例如，在一些实施方案中，可以将转录单元工程化为含有IRES(内部核糖体进入位点)的双顺反子单元，其允许通过来自单个启动子的信息共表达基因产物(例如其编码第一和第二嵌合受体)。可替代地，在一些情况下，单个启动子可引导RNA的表达，所述RNA在单个开放阅读框(ORF)中含有两个或三个基因(例如编码第一和第二重组受体或重组受体的一部分)，所述基因通过编码自切割肽(例如，2A切割序列)或蛋白酶识别位点(例如，弗林蛋白酶(furin))的序列彼此分开。因此，ORF编码单个多肽，其在翻译期间(在T2A的情况下)或翻译后被切割成单个蛋白质。在一些情况下，肽(如T2A)可导致核糖体跳过2A元件C末端处肽键的合成(核糖体跳跃)，导致2A序列末端与下游的下一个肽之间分开(参见例如，de Felipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。已知许多2A元件。可以用于本文公开的方法和多核苷酸中的2A序列的例子包括但不限于来自以下病毒的2A序列：口蹄疫病毒(F2A，例如SEQ ID NO:152或153)、马鼻炎A病毒(E2A，例如SEQ ID NO:148或149)、明脉扁刺蛾β四体病毒(T2A，例如SEQ ID NO:241、242或243)和猪捷申病毒-1(P2A，例如SEQ ID NO:201或202)，如美国专利公开号20070116690中所述。在一些实施方案中，所述一种或多种不同或单独的启动子驱动编码一种或多种重组受体或其部分的一种或多种核酸分子的表达。
本文提供的任何重组受体(例如，BCMA结合重组受体和/或另外的重组受体)可以由含有编码所述受体的一种或多种核酸分子的多核苷酸以任何组合或排列进行编码。例如，一种、两种、三种或更多种多核苷酸可以编码一种、两种、三种或更多种不同的受体或结构域。在一些实施方案中，一种载体或构建体含有编码一种或多种结合重组受体的核酸分子，并且单独的载体或构建体含有编码另外的分子(例如另外的重组受体)的核酸分子。核酸分子中的每一种还可以编码一种或多种标记物，如表面标记物，例如截短的EGFR(tEGFR)。
还提供含有一种或多种核酸分子、载体或构建体(如上文所述的任何核酸分子、载体或构建体)的组合物。在一些实施方案中，所述核酸分子、载体、构建体或组合物可以用于将细胞(如T细胞)工程化以表达任何重组受体和/或另外的分子。
在一些实施方案中，可以使一种或多种重组受体(例如CAR)基因工程化，以在细胞或多种细胞中表达。在一些实施方案中，第一重组受体和第二分子(例如重组受体)由同一或单独的核酸分子编码。在一些实施方案中，使另外的分子工程化以在细胞或多种细胞中表达。
1.基因转移
在一些实施方案中，用于产生工程化细胞的方法包括将编码重组受体(例如，抗BCMA CAR)的多核苷酸引入细胞(例如刺激的或激活的细胞)中。在特定实施方案中，所述重组蛋白是重组受体，如在第I部分中描述的任何重组受体。在细胞中引入编码重组蛋白(如重组受体)的核酸分子可以使用许多已知载体中的任一种进行。此类载体包括病毒和非病毒系统，包括慢病毒和γ逆转录病毒系统，以及基于转座子的系统，如基于PiggyBac或Sleeping Beauty的基因转移系统。示例性方法包括用于转移编码受体的核酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。在一些实施方案中，工程化产生经富集T细胞的一种或多种工程化组合物。
在某些实施方案中，刺激的T细胞的一种或多种组合物是或包括经富集T细胞的两种单独刺激的组合物。在特定实施方案中，将经富集T细胞的两种单独组合物，例如，已从相同生物样品中选择、分离和/或富集的经富集T细胞的两种单独组合物分别工程化。在某些实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD4+T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD8+T细胞的组合物。在一些实施方案中，将经富集CD4+T细胞和经富集CD8+T细胞的两种单独组合物分别基因工程化。在一些实施方案中，将经富集T细胞的单一组合物基因工程化。在某些实施方案中，所述单一组合物是经富集CD4+T细胞的组合物。在一些实施方案中，所述单一组合物是在工程化之前已从单独组合物合并的经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。
在一些实施方案中，将经富集CD4+和CD8+T细胞的单独组合物组合为单一组合物并且进行基因工程化，例如转导或转染。在某些实施方案中，在已经进行和/或完成基因工程化之后将经富集CD4+和经富集CD8+T细胞的单独工程化组合物合并为单一组合物。
在一些实施方案中，通过以下方式完成基因转移：首先刺激细胞，如通过将其与诱导反应(如增殖、存活和/或激活)的刺激物进行组合，例如如通过细胞因子或激活标记物的表达测量的，然后转导激活的细胞，并且在培养中扩增至足以用于临床应用的数量。在某些实施方案中，通过如下方式完成基因转移：首先将细胞在刺激条件下孵育，如通过第III-B部分中所述的方法中的任一种。
在一些情境下，刺激因子(例如，淋巴因子或细胞因子)的过表达可能对受试者有毒性。因此，在一些情境下，所述工程化细胞包括导致细胞在体内(如在过继免疫疗法中施用后)对阴性选择易感的基因区段。例如，在一些方面，使细胞工程化，使得它们可以由于施用它们的患者的体内条件的变化而被消除。阴性选择性表型可以由赋予对所施用的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性选择性基因包括单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因(Wigler等人,Cell 2:223,1977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因；细菌胞嘧啶脱氨酶基因(Mullen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33(1992))。
在一些方面，对细胞进一步工程化以促进细胞因子或其他因子的表达。用于引入基因工程化组分(例如，抗原受体，例如CAR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码受体的多核苷酸的那些，包括通过病毒(如逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组多核苷酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组多核苷酸转移到T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol TherNucl Acids 2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29日(11):550–557)。
在一些实施方案中，用于基因工程化的方法通过使组合物的一个或多个细胞与编码重组蛋白(例如，重组受体)的核酸分子接触来进行。在一些实施方案中，接触可以通过离心如旋转接种(例如离心接种)来实现。此类方法包括如国际公开号WO 2016/073602中所述的那些方法中的任一种。示例性离心室包括由Biosafe SA生产和销售的那些，包括用于
Figure BDA0003980595070001071
和
Figure BDA0003980595070001072
2系统的那些，包括A-200/F和A-200离心室以及用于此类系统的各种试剂盒。示例性室、系统和处理仪器和机柜描述于例如以下文献中：美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和公开的美国专利申请公开号US 2008/0171951，以及公开的国际专利申请公开号WO 00/38762，将其各自的内容通过引用以其整体并入本文。用于此类系统的示例性试剂盒包括但不限于由BioSafe SA以产品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1或CS-900.2销售的一次性试剂盒。
在一些实施方案中，接触可以通过离心(如旋转接种，例如离心接种)来实现。在一些实施方案中，可以使含有细胞、病毒颗粒和试剂的组合物旋转，通常以相对较低的力或速度旋转，例如速度低于用于沉淀细胞的速度，例如为或为约600rpm至1700rpm(例如，为或为约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)。在一些实施方案中，旋转是以从或从约100g至3200g(例如，为或约或至少或至少约100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g或3200g)的力(例如，相对离心力)来进行，如例如在室或空腔的内壁或外壁处所测量。术语“相对离心力”或RCF通常被理解为在如与旋转轴相比在空间的特定点处，相对于地球的重力，施加在物体或物质(例如细胞、样品或团粒和/或所旋转的室或其他容器中的点)上的有效力。所述值可以使用熟知的公式来确定，所述公式考虑到重力、旋转速度和旋转半径(与旋转轴的距离以及测量RCF的物体、物质或颗粒)。
在一些实施方案中，引入通过使组合物的一个或多个细胞与编码重组蛋白(例如，重组受体)的核酸分子接触来进行。在一些实施方案中，接触可以通过离心如旋转接种(例如离心接种)来实现。此类方法包括如国际公开号WO 2016/073602中所述的那些方法中的任一种。示例性离心室包括由Biosafe SA生产和销售的那些，包括用于
Figure BDA0003980595070001081
和
Figure BDA0003980595070001082
2系统的那些，包括A-200/F和A-200离心室以及用于此类系统的各种试剂盒。示例性室、系统和处理仪器和机柜描述于例如以下文献中：美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和公开的美国专利申请公开号US 2008/0171951，以及公开的国际专利申请公开号WO 00/38762，将其各自的内容通过引用以其整体并入本文。用于此类系统的示例性试剂盒包括但不限于由BioSafe SA以产品名CS-430.1、CS-490.1、CS-600.1或CS-900.2销售的一次性试剂盒。
在一些实施方案中，将系统与其他仪器一起包括和/或置于与其他仪器相关联，所述其他仪器包括用于操作、自动化、控制和/或监测转导步骤以及在系统中执行的一个或多个各种其他处理步骤(例如，可以使用或结合如本文或在国际公开号WO 2016/073602中所述的离心室系统进行的一个或多个处理步骤)的方面的仪器。在一些实施方案中，这种仪器容纳于机柜中。在一些实施方案中，所述仪器包括机柜，所述机柜包括外壳，所述外壳含有控制电路、离心机、罩、电机、泵、传感器、显示器和用户界面。示例性装置描述于美国专利号6,123,655、美国专利号6,733,433和US 2008/0171951中。
在一些实施方案中，所述系统包含一系列容器，例如袋、管、旋塞、夹子、连接器和离心室。在一些实施方案中，所述容器(如袋)包括一个或多个容器(例如袋)，其在同一容器或单独容器(例如同一袋子或单独袋子)中含有要转导的细胞和病毒载体颗粒。在一些实施方案中，所述系统还包括一个或多个容器(例如袋子)，所述容器含有介质，例如稀释剂和/或洗涤溶液，在所述方法期间将所述介质抽入室和/或其他部件中以稀释、重悬和/或洗涤组分和/或组合物。所述容器可以连接在系统中的一个或多个位置，例如连接在对应于输入管线、稀释剂管线、洗涤管线、废液管线和/或输出管线的位置。
在一些实施方案中，所述室与离心机相关联，离心机能够实现所述室的旋转，例如围绕其旋转轴旋转。结合细胞的转导和/或在一个或多个其他处理步骤中，旋转可以发生在孵育之前、期间和/或之后。因此，在一些实施方案中，各个处理步骤中的一个或多个在旋转下(例如在特定的力下)进行。所述室通常能够竖直或大致竖直地旋转，使得所述室在离心期间竖直放置，并且侧壁和轴是竖直或大致竖直的，且一个或多个端壁是水平或大致水平的。
在一些实施方案中，可以使含有细胞、载体(例如病毒颗粒)和试剂的组合物旋转，通常以相对较低的力或速度旋转，如速度低于用于沉淀细胞的速度，如从或从约600rpm至1700rpm(例如为或为约或至少600rpm、1000rpm或1500rpm或1700rpm)。在一些实施方案中，旋转是以从或从约100g至3200g(例如，为或约或至少或至少约100g、200g、300g、400g、500g、1000g、1500g、2000g、2500g、3000g或3200g)的力(例如，相对离心力)来进行，如例如在室或腔室的内壁或外壁处所测量。术语“相对离心力”或RCF通常被理解为在如与旋转轴相比在空间的特定点处，相对于地球的重力，施加在物体或物质(例如细胞、样品或团粒和/或所旋转的室或其他容器中的点)上的有效力。所述值可以使用熟知的公式来确定，所述公式考虑到重力、旋转速度和旋转半径(与旋转轴的距离以及测量RCF的物体、物质或颗粒)。
在一些实施方案中，在基因工程的至少一部分(例如转导)期间，和/或在基因工程之后，将细胞转移到生物反应器袋组件中，用于培养经基因工程化的细胞，例如用于培育或扩增细胞。
2.病毒载体
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒颗粒(例如源自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移到细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移到T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol Ther Nucl Acids2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29日(11):550–557)。
在一些实施方案中，病毒载体或非病毒DNA含有编码异源重组蛋白的核酸。在一些实施方案中，所述异源重组分子是或包括重组受体(例如抗原受体)、SB转座子(例如用于基因沉默)、衣壳包封的转座子、同源双链核酸(例如用于基因组重组)或报告基因(例如荧光蛋白，如GFP)或萤光素酶。
在一些实施方案中，所述逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如，源自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体源自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括源自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干种物种的宿主细胞。在一个实施方案中，要表达的基因替代逆转录病毒gag、pol和/或env序列。已经描述了许多例示性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109)。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如以下文献中：Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637–1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；以及Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒含有源自基于逆转录病毒基因组的载体(例如源自基于慢病毒基因组的载体)的基因组。在所提供的病毒载体的一些方面，编码重组受体(如抗原受体，如CAR)的异源核酸被包含在和/或位于载体基因组的5'LTR与3'LTR序列之间。
在一些实施方案中，病毒载体基因组是慢病毒基因组，如HIV-1基因组或SIV基因组。例如，已经通过多次减弱毒力基因生成慢病毒载体，例如，可以使基因env、vif、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是已知的。参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998；美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
慢病毒载体的非限制性例子包括源自慢病毒的那些，例如人免疫缺陷病毒1(HIV-1)、HIV-2、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)、人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)、HTLV-2或马感染贫血病毒(E1AV)。例如，已经通过多次减弱HIV毒力基因生成慢病毒载体，例如，使基因env、vif、vpr、vpu和nef缺失，使得载体对于治疗目的更安全。慢病毒载体是本领域已知的，参见Naldini等人,(1996和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998；美国专利号6,013,516和5,994,136。在一些实施方案中，这些病毒载体是基于质粒的或基于病毒的，并且被配置为携带用于掺入外来核酸的基本序列，用于选择和用于将核酸转移到宿主细胞中。已知的慢病毒可以容易地从保管机构或保藏中心(如美国典型培养物保藏中心(“ATCC”；弗吉尼亚州马纳萨斯大学大道(University Blvd.)10801号20110-2209))获得，或者使用常用技术从已知来源分离。
在一些实施方案中，病毒基因组载体可以含有逆转录病毒(如慢病毒)的5'和3'LTR的序列。在一些方面，病毒基因组构建体可含有来自慢病毒的5'和3'LTR的序列，并且具体而言可以含有来自慢病毒的5'LTR的R和U5序列以及来自慢病毒的失活或自失活3'LTR。LTR序列可以是来自任何物种的任何慢病毒的LTR序列。例如，它们可以是来自HIV、SIV、FIV或BIV的LTR序列。通常，LTR序列是HIV LTR序列。
在一些实施方案中，病毒载体(例如HIV病毒载体)的核酸缺乏另外的转录单元。载体基因组可以含有失活或自失活的3'LTR(Zufferey等人J Virol 72：9873,1998；Miyoshi等人,J Virol 72:8150,1998)。例如，用于产生病毒载体RNA的核酸的3'LTR的U3区中的缺失可以用于产生自失活(SIN)载体。然后可以在逆转录期间将此缺失转移到原病毒DNA的5'LTR。自失活载体通常具有自3'长末端重复序列(LTR)的增强子和启动子序列缺失，所述缺失在载体整合期间被拷贝到5'LTR中。在一些实施方案中，可以消除足够的序列，包括去除TATA盒，以消除LTR的转录活性。这可以防止在经转导细胞中产生全长载体RNA。在一些方面，3'LTR的U3元件含有其增强子序列、TATA盒、Sp1和NF-κB位点的缺失。由于自失活3'LTR，在进入和逆转录之后产生的原病毒含有失活的5'LTR。这可以通过降低动员载体基因组的风险和LTR对附近细胞启动子的影响来提高安全性。可以通过本领域已知的任何方法来构建自失活3'LTR。在一些实施方案中，这不会影响载体滴度或载体的体外或体内特性。
任选地，来自慢病毒5'LTR的U3序列可以在病毒构建体中用启动子序列(如异源启动子序列)替代。这可以增加从包装细胞系中回收的病毒的滴度。也可以包括增强子序列。可以使用增加病毒RNA基因组在包装细胞系中的表达的任何增强子/启动子组合。在一个例子中，使用CMV增强子/启动子序列(美国专利号5,385,839和美国专利号5,168,062)。
在某些实施方案中，可以通过将逆转录病毒载体基因组(例如慢病毒载体基因组)构建为整合缺陷性来使插入诱变的风险降至最低。可以采用多种途径来产生非整合型载体基因组。在一些实施方案中，可以将一种或多种突变工程化至pol基因的整合酶组分中，使得其编码具有无活性整合酶的蛋白质。在一些实施方案中，可以修饰载体基因组本身以通过例如使一个或两个附接位点突变或缺失来防止整合，或者通过缺失或修饰使3'LTR近端多嘌呤束(PPT)没有功能。在一些实施方案中，可以使用非遗传途径；这些途径包括抑制整合酶的一种或多种功能的药理学药剂。这些途径并不相互排斥；也就是说，可以一次使用多于一种所述途径。例如，整合酶和附接位点两者可以都没有功能，或者整合酶和PPT位点可以没有功能，或者附接位点和PPT位点可以没有功能，或者它们全部都可以没有功能。此类方法和病毒载体基因组是已知的并且是可获得的(参见Philpott和Thrasher,Human GeneTherapy 18:483,2007；Engelman等人J Virol 69:2729,1995；Brown等人J Virol 73:9011(1999)；WO 2009/076524；McWilliams等人,J Virol 77:11150,2003；Powell和Levin JVirol 70:5288,1996)。
在一些实施方案中，载体含有用于在宿主细胞(例如原核宿主细胞)中繁殖的序列。在一些实施方案中，病毒载体的核酸含有用于在原核细胞(如细菌细胞)中繁殖的一个或多个复制起点。在一些实施方案中，包括原核复制起点的载体还可以含有这样的基因，其表达赋予可检测或可选择标记物如抗药性。
所述病毒载体基因组通常以质粒形式构建，其可以转染到包装细胞系或生产细胞系中。可以使用多种已知方法中的任一种来产生逆转录病毒颗粒，其基因组含有病毒载体基因组的RNA拷贝。在一些实施方案中，至少两种组分参与制备基于病毒的基因递送系统：第一，包装质粒，包括结构蛋白以及产生病毒载体颗粒所必需的酶，第二，病毒载体本身，即，要转移的遗传物质。可以在设计这些组分中的一个或两个时引入生物安全保护措施。
在一些实施方案中，所述包装质粒可以含有除了包膜蛋白以外的所有逆转录病毒(如HIV-1)蛋白(Naldini等人,1998)。在其他实施方案中，病毒载体可能缺乏另外的病毒基因(例如与毒力有关的那些，例如vpr、vif、vpu和nef和/或Tat(HIV的主要反式激活因子))。在一些实施方案中，慢病毒载体(如基于HIV的慢病毒载体)仅包含三种亲本病毒的基因：gag、pol和rev，这减少或消除了野生型病毒通过重组而重构的可能性。
在一些实施方案中，将病毒载体基因组引入包装细胞系中，所述细胞系含有将从病毒载体基因组转录的病毒基因组RNA包装至病毒颗粒中所需的所有组分。可替代地，除了所述一种或多种目的序列(例如重组核酸)以外，病毒载体基因组可包含一种或多种编码病毒组分的基因。然而，在一些方面，为了防止基因组在靶细胞中复制，将复制所需的内源病毒基因去除，并且在包装细胞系中单独提供。
在一些实施方案中，用含有产生颗粒所必需的组分的一种或多种质粒载体转染包装细胞系。在一些实施方案中，用含有病毒载体基因组(包括LTR、顺式作用包装序列和目的序列，即编码抗原受体(如CAR)的核酸)的质粒；以及编码病毒酶和/或结构组分(如Gag、pol和/或rev)的一种或多种辅助质粒转染包装细胞系。在一些实施方案中，利用多个载体分离产生逆转录病毒载体颗粒的各种遗传组分。在一些此类实施方案中，向包装细胞提供单独的载体减少了重组事件的可能性，否则可能产生有复制能力的病毒。在一些实施方案中，可以使用具有所有逆转录病毒组分的单个质粒载体。
在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(例如慢病毒载体颗粒)假型化以增加宿主细胞的转导效率。例如，在一些实施方案中，将逆转录病毒载体颗粒(例如慢病毒载体颗粒)用VSV-G糖蛋白假型化，其提供宽细胞宿主范围，从而扩展可以转导的细胞类型。在一些实施方案中，用编码非天然包膜糖蛋白的质粒或多核苷酸转染包装细胞系，以例如包括嗜异性、多嗜性或双嗜性包膜，如辛德比斯病毒包膜、GALV或VSV-G。
在一些实施方案中，包装细胞系提供将病毒基因组RNA包装至慢病毒载体颗粒中反式作用所需的组分，包括病毒调节蛋白和结构蛋白。在一些实施方案中，包装细胞系可以是能够表达慢病毒蛋白并产生功能性慢病毒载体颗粒的任何细胞系。在一些方面，合适的包装细胞系包括293(ATCC CCL X)、293T、HeLA(ATCC CCL 2)、D17(ATCC CCL 183)、MDCK(ATCC CCL 34)、BHK(ATCC CCL-10)和Cf2Th(ATCC CRL 1430)细胞。
在一些实施方案中，包装细胞系稳定地表达一种或多种病毒蛋白质。例如，在一些方面，可以构建含有gag、pol、rev和/或其他结构基因但没有LTR和包装组分的包装细胞系。在一些实施方案中，可以用编码一种或多种病毒蛋白的核酸分子以及含有编码异源蛋白的核酸分子的病毒载体基因组和/或编码包膜糖蛋白的核酸对包装细胞系进行瞬时转染。
在一些实施方案中，将病毒载体和包装质粒和/或辅助质粒通过转染或感染引入包装细胞系中。包装细胞系产生含有病毒载体基因组的病毒载体颗粒。用于转染或感染的方法是众所周知的。非限制性例子包括磷酸钙、DEAE-葡聚糖和脂质转染方法、电穿孔和显微注射。
在将重组质粒和逆转录病毒LTR和包装序列引入特殊细胞系(例如，通过磷酸钙沉淀)中时，包装序列可以允许要包装至病毒颗粒中的重组质粒的RNA转录，然后所述病毒颗粒可能会被分泌到培养基中。在一些实施方案中，随后收集含有重组逆转录病毒的培养基，任选地将其浓缩，并用于基因转移。例如，在一些方面，在将包装质粒和转移载体共转染至包装细胞系后，从培养基回收病毒载体颗粒，并通过本领域技术人员使用的标准方法进行滴定。
在一些实施方案中，可以通过引入质粒以允许产生慢病毒颗粒，而在包装细胞系(如示例性HEK 293T细胞系)中产生逆转录病毒载体，如慢病毒载体。在一些实施方案中，包装细胞被转染和/或含有编码gag和pol的多核苷酸，以及编码重组受体(例如抗原受体，例如CAR)的多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码rev蛋白的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些实施方案中，包装细胞系被任选地和/或另外用编码非天然包膜糖蛋白(例如VSV-G)的多核苷酸转染和/或含有所述多核苷酸。在一些此类实施方案中，在转染细胞(例如，HEK 293T细胞)后大约两天，细胞上清液含有可以回收并滴定的重组慢病毒载体。
所回收和/或产生的逆转录病毒载体颗粒可以用于使用如所述的方法转导靶细胞。一旦进入靶细胞中，病毒RNA就被逆转录，进入细胞核中并稳定整合到宿主基因组中。在病毒RNA整合后一天或两天，可以检测到重组蛋白(例如抗原受体，如CAR)的表达。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及通过使包含多个细胞的细胞组合物与病毒颗粒接触(例如孵育)来转导细胞的方法。在一些实施方案中，待转染或转导的细胞是或包含从受试者获得的原代细胞，例如从受试者富集和/或选择的细胞。
在一些实施方案中，组合物中的待转导的细胞的浓度为从或从约1.0x105个细胞/mL至1.0x108个细胞/mL，如至少或约至少或约1.0x105个细胞/mL、5x105个细胞/mL、1x106个细胞/mL、5x106个细胞/mL、1x107个细胞/mL、5x107个细胞/mL或1x108个细胞/mL。
在一些实施方案中，病毒颗粒以病毒载体颗粒拷贝或其感染单位(IU)与待转导的细胞总数的某一比率(IU/细胞)来提供。例如，在一些实施方案中，病毒颗粒在接触期间以为或约或至少为或至少约0.5、1、2、3、4、5、10、15、20、30、40、50或60IU的病毒载体颗粒/细胞存在。
在一些实施方案中，病毒载体颗粒的滴度在或在约1x106IU/mL与1x108IU/mL之间，如在或在约5x106IU/mL与5x107IU/mL之间，如至少6x106IU/mL、7x106IU/mL、8x106IU/mL、9x106IU/mL、1x107IU/mL、2x107IU/mL、3x107IU/mL、4x107IU/mL或5x107IU/mL。
在一些实施方案中，可以按小于100(如通常小于60、50、40、30、20、10、5或更小)的感染复数(MOI)来实现转导。
在一些实施方案中，所述方法涉及使细胞与病毒颗粒接触或一起孵育。在一些实施方案中，接触进行30分钟至72小时，例如30分钟至48小时、30分钟至24小时或1小时至24小时，例如至少或约至少30分钟、1小时、2小时、6小时、12小时、24小时、36小时或更长时间。
在一些实施方案中，接触在溶液中进行。在一些实施方案中，使细胞和病毒颗粒以如下体积接触：从或从约0.5mL至500mL，如从或从约0.5mL至200mL、0.5mL至100mL、0.5mL至50mL、0.5mL至10mL、0.5mL至5mL、5mL至500mL、5mL至200mL、5mL至100mL、5mL至50mL、5mL至10mL、10mL至500mL、10mL至200mL、10mL至100mL、10mL至50mL、50mL至500mL、50mL至200mL、50mL至100mL、100mL至500mL、100mL至200mL或200mL至500mL。
在某些实施方案中，用包含结合分子的颗粒对输入细胞进行处理、孵育或接触，所述结合分子结合至或识别由病毒DNA编码的重组受体。
在一些实施方案中，细胞与病毒载体粒子的孵育导致或产生包含用病毒载体粒子转导的细胞的输出组合物。
在一些实施方案中，通过电穿孔将重组多核苷酸转移到T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298；和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，通过转座将重组多核苷酸转移至T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec TherNucl Acids 2,e74；以及Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如在Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,纽约.N.Y.中所述)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；以及磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的多核苷酸的其他途径和载体是例如国际专利申请公开号WO 2014055668和美国专利号7,446,190中所述的那些。
另外的多核苷酸(例如，用于引入的基因)包括用于改善治疗功效的那些，例如通过促进转移细胞的活力和/或功能；提供用于选择和/或评价细胞的遗传标记物的基因，例如以评估体内存活或定位；改善安全性的基因，例如通过使细胞在体内对阴性选择易感，如Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human GeneTherapy 3:319-338(1992)所述；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的公开，其描述了使用源自将显性阳性选择性标记物与阴性选择性标记物融合的双功能选择性融合基因。参见例如Riddell等人,美国专利号6,040,177,第14-17栏。
3.用于多靶向的工程化细胞、载体和组合物
还提供可以结合和/或靶向多种抗原的细胞，如工程化细胞。在一些实施方案中，通过靶向多种抗原的策略实现改善的选择性和特异性。此类策略通常涉及多个抗原结合结构域，其通常存在于不同的基因工程化抗原受体上并特异性地结合不同的抗原。在一些实施方案中，将细胞工程化为具有结合多于一种抗原的能力。例如，在一些实施方案中，将细胞工程化以表达多特异性重组受体。在一些实施方案中，所述细胞表达多种重组受体，其每一种都可以靶向一种抗原或多种抗原，例如一种受体(如本文所述的任一种)靶向BCMA且另一种受体靶向另一种抗原(例如肿瘤抗原)。在一些方面，将与不同抗原特异地结合的多种基因工程化抗原受体引入细胞中，所述不同抗原中的每一种在将被细胞或组织或其细胞靶向的疾病或病症之中或之上表达。在一些方面，此类特征可以解决脱靶效应或减少脱靶效应的可能性或增加功效。例如，在疾病或病症中表达的单个抗原也在非患病或正常细胞之上或之中表达的情况下，此类多靶向途径可以通过要求经由多种抗原受体结合来激活细胞或诱导特定效应子功能，从而提供对所需细胞类型的选择性。在一些实施方案中，可以将多种细胞工程化以表达一种或多种不同重组受体，其每一种都可以靶向一种抗原或多种抗原。
还提供含有本文所述的任何重组受体的多特异性细胞，如含有抗BCMA重组抗体和与不同抗原或BCMA上的不同表位结合的另外的细胞表面蛋白(如重组嵌合受体)的细胞。在一些实施方案中，提供表达重组受体的细胞的组合物，其中所述多特异性重组受体中的一种或多种结合和/或靶向BCMA。在一些实施方案中，所述多特异性重组受体靶向BCMA上的一个或多个不同的表位。
在一些实施方案中，提供细胞的组合物，其中每种类型的细胞表达一种或多种重组受体。在一些实施方案中，所述细胞包含(例如，已经用以下项转化)一种或多种载体，所述一种或多种载体包含编码一种或多种氨基酸序列的一种或多种核酸，所述一种或多种氨基酸序列构成一种或多种抗体和/或其部分(例如其抗原结合片段)。在一些实施方案中，提供一种或多种此类细胞。在一些实施方案中，提供含有一种或多种此类细胞的组合物。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞可以表达不同的抗体或相同的抗体。在一些实施方案中，每种细胞表达一种或多种抗体，如多于一种抗体。在一些实施方案中，每种细胞表达多特异性受体，例如CAR。
在一些实施方案中，所述细胞包括靶向BCMA和与特定疾病或病症相关的第二或另外的抗原的多靶向策略。在一些实施方案中，所述第二或另外的抗原被多特异性受体和/或多种细胞(例如，一种或多种细胞)靶向，每种细胞被工程化以表达一种或多种重组受体。在一些实施方案中，靶向第二或另外的抗原的重组受体在与BCMA结合重组受体相同的细胞上或不同的细胞上表达。
在一些实施方案中，用于多靶向策略的第二或另外的抗原包括其中至少一种抗原是通用肿瘤抗原或其家族成员的那些抗原。在一些实施方案中，所述第二或另外的抗原是在肿瘤上表达的抗原。在一些实施方案中，所述BCMA结合重组受体靶向与所述第二或另外的抗原相同的肿瘤类型上的抗原。在一些实施方案中，所述第二或另外的抗原可以是通用肿瘤抗原或可以是为肿瘤类型所特有的肿瘤抗原。在一些实施方案中，所述细胞还包含识别在待治疗的疾病或病症上表达的第二或另外的抗原并诱导刺激或激活信号的另外的基因工程化抗原受体。
示例性的抗原包括CD4、CD5、CD8、CD14、CD15、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD46、CD52、CD54、CD74、CD80、CD126、CD138、B7、MUC-1、Ia、HM1.24、HLA-DR、腱生蛋白、血管生成因子、VEGF、PIGF、ED-B纤连蛋白、致癌基因、致癌基因产物、CD66a-d、坏死抗原、Ii、IL-2、T101、TAC、IL-6、ROR1、TRAIL-R1(DR4)、TRAIL-R2(DR5)、B细胞成熟抗原(BCMA)、tEGFR、Her2、L1-CAM、间皮素、CEA、乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD24、CD30、CD44、EGFR、EGP-2、EGP-4、EPHa2、ErbB2、ErbB3、ErbB4、erbB二聚体、EGFR vIII、FBP、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、G蛋白偶联受体C类5族成员D(GPRC5D)、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、kdr、κ轻链、Lewis Y、L1-细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、黑色素瘤优先表达抗原(PRAME)、生存素、EGP2、EGP40、TAG72、B7-H6、IL-13受体a2(IL-13Ra2)、CA9、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2 NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、双抗原、与通用标签相关的抗原、癌症-睾丸抗原、MUC1、MUC16、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、前列腺特异性抗原、PSMA、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、肾母细胞瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、hTERT、MDM2、CYP1B、WT1、活素、AFP、p53、细胞周期蛋白(D1)、CS-1、BCMA、BAFF-R、TACI、CD56、TIM-3、CD123、L1-细胞粘附分子、MAGE-A1、MAGE A3、细胞周期蛋白(如细胞周期蛋白A1(CCNA1))和/或病原体特异性抗原、生物素化分子、由HIV、HCV、HBV和/或其他病原体表达的分子；和/或在一些方面，其新表位或新抗原。在一些实施方案中，所述抗原与通用标签相关或者是通用标签。
在一些实施方案中，所述多种抗原(例如，第一抗原(例如BCMA)和第二或另外的抗原)在所靶向的细胞、组织或者疾病或病症上(例如在癌细胞上)表达。在一些方面，细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。所述多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(如正常或未患病细胞或组织)和/或工程化细胞本身上表达。在此类实施方案中，通过需要连接多个受体以实现细胞的反应，实现特异性和/或功效。
在一些方面，所述抗原(例如第二或另外的抗原，如疾病特异性抗原和/或相关抗原，如G蛋白偶联受体C类5族成员D(GPRC5D)、CD38(环状ADP核糖水解酶)、CD138(多配体聚糖-1、多配体聚糖、SYN-1)、CS-1(CS1、CD2子集1、CRACC、SLAMF7、CD319和19A24)、BAFF-R、TACI和/或FcRH5)在多发性骨髓瘤上表达。其他示例性多发性骨髓瘤抗原包括CD56、TIM-3、CD33、CD123、CD44、CD20、CD40、CD74、CD200、EGFR、β2-微球蛋白、HM1.24、IGF-1R、IL-6R、TRAIL-R1和IIA型激活素受体(ActRIIA)。参见Benson和Byrd,J.Clin.Oncol.(2012)30(16):2013-15；Tao和Anderson,Bone Marrow Research(2011):924058；Chu等人,Leukemia(2013)28(4):917-27；Garfall等人,Discov Med.(2014)17(91):37-46。在一些实施方案中，抗原包括存在于淋巴肿瘤、骨髓瘤、AIDS相关的淋巴瘤和/或移植后淋巴组织增生上的那些，如CD38。针对此类抗原的抗体或抗原结合片段是已知的并且包括例如以下文献中所述的那些：美国专利号8,153,765、8,603477、8,008,450；美国公开号US 20120189622或US20100260748；和/或国际PCT公开号WO 2006099875、WO 2009080829或WO 2012092612或WO2014210064。在一些实施方案中，此类抗体或其抗原结合片段(例如，scFv)包含在多特异性抗体、多特异性嵌合受体(如多特异性CAR)和/或多特异性细胞中。
在一些实施方案中，所述细胞和方法包括多靶向策略，如例在细胞上表达两种或更多种基因工程化受体，每种受体识别不同的抗原并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号WO 2014055668 A1(描述刺激或激活和共刺激CAR的组合，例如，靶向单独存在于脱靶(例如正常细胞)上，但仅一起存在于待治疗疾病或病症的细胞上的两种不同抗原)和Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月)(描述表达刺激或激活和抑制性CAR的细胞，例如这样的细胞，其中刺激或激活CAR与同时在正常或非患病细胞和待治疗疾病或病症的细胞上表达的一种抗原结合，并且抑制性CAR与仅在正常细胞或不希望治疗的细胞上表达的另一种抗原结合)。
在一些实施方案中，提供多种细胞，每种细胞被工程化以表达一种或多种重组受体。例如，在一些实施方案中，将一种细胞工程化以表达结合和/或靶向BCMA的重组受体，并且将另一种细胞工程化以表达结合和/或靶向另外或第二抗原的重组受体。在一些实施方案中，所述细胞可以各自表达多特异性重组受体，其中靶抗原中的一种或多种是BCMA。在一些此类实施方案中，所述多种细胞可以一起或单独施用。在一些实施方案中，所述多种细胞与所述细胞同时或并行地施用，例如与所述多种细胞中的另一种工程化细胞在同一天和/或以任何顺序依序或间歇地施用。例如，在一些实施方案中，将表达BCMA结合重组受体(例如CAR)的工程化细胞与表达结合不同靶抗原或BCMA上的不同表位的重组受体的另一种工程化细胞同时或以任何顺序依序施用。在一些实施方案中，所述多种细胞可以在同一组合物中。细胞的示例性组合物包括以下第IV部分中所述的组合物。
D.工程化细胞的培育、扩增和配制
在一些实施方案中，所提供的方法包括用于培育细胞(例如在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞)的一个或多个步骤。在一些实施方案中，在基因工程化的步骤(例如通过转导或转染将重组多肽引入细胞)之后，在促进增殖和/或扩增的条件下培育细胞。在特定实施方案中，在刺激条件下孵育细胞并用重组多核苷酸(例如编码重组受体的多核苷酸)转导或转染细胞之后培育细胞。
在某些实施方案中，工程化T细胞的一种或多种组合物是或包括经富集T细胞的两种单独组合物。在特定实施方案中，将经富集T细胞的两种单独组合物，例如，从相同生物样品中选择、分离和/或富集的经富集T细胞的两种单独组合物分别在刺激条件下培育。在某些实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD4+T细胞的组合物。在特定实施方案中，所述两种单独组合物包括经富集CD8+T细胞的组合物。在一些实施方案中，将经富集CD4+T细胞和经富集CD8+T细胞的两种单独组合物分别例如在促进增殖和/或扩增的条件下培育。
在一些实施方案中，培育经富集T细胞的单一组合物。在一些实施方案中，所述单一组合物是在培育之前已从单独组合物合并的经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。在一些实施方案中，将经富集的CD4+和经CD8+T细胞的单独组合物组合为单一组合物并且例如在促进增殖和/或扩增的条件下培育。在某些实施方案中，在已经进行和/或完成培育之后将经富集CD4+和经富集CD8+T细胞的单独培育的组合物合并为单一组合物。
在一些实施方案中，培育是在促进增殖和/或扩增的条件下进行的。在一些实施方案中，此类条件可以经设计以诱导群体中的细胞的增殖、扩增、激活和/或存活。在特定实施方案中，刺激条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子(如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和任何其他被设计成促进细胞的生长、分裂和/或扩增的药剂))。
在特定实施方案中，在一种或多种细胞因子存在下培育所述细胞。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子是重组细胞因子。在一些实施方案中，所述一种或多种细胞因子是人重组细胞因子。在某些实施方案中，所述一种或多种细胞因子结合和/或能够结合由T细胞表达的和/或对T细胞而言内源的受体。在特定实施方案中，所述一种或多种细胞因子(例如重组细胞因子)是或包括细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员。在一些实施方案中，细胞因子的4-α-螺旋束家族的成员包括但不限于白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)、白介素7(IL-7)、白介素9(IL-9)、白介素12(IL-12)、白介素15(IL-15)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。在一些实施方案中，所述一种或多种重组细胞因子包括IL-2、IL-7和/或IL-15。在一些实施方案中，在存在如下浓度的细胞因子(例如，重组人细胞因子)的情况下培育所述细胞(例如，工程化细胞)：在1IU/mL与2,000IU/mL之间、在10IU/mL与100IU/mL之间、在50IU/mL与200IU/mL之间、在100IU/mL与500IU/mL之间、在100IU/mL与1,000IU/mL之间、在500IU/mL与2,000IU/mL之间或在100IU/mL与1,500IU/mL之间。
在一些实施方案中，培育是在如下条件下进行，所述条件通常包括适合于原代免疫细胞(如人T淋巴细胞)生长的温度，例如至少约25摄氏度，通常为至少约30摄氏度，并且通常为或为约37摄氏度。在一些实施方案中，在25至38摄氏度(如30至37摄氏度，例如为或约37摄氏度±2摄氏度)的温度下孵育经富集的T细胞的组合物。在一些实施方案中，将孵育进行一段时间直至培养(例如培育或扩增)产生所希望的或阈值密度、数量或剂量的细胞。在一些实施方案中，孵育是大于或大于约或持续为或约24小时、48小时、72小时、96小时、5天、6天、7天、8天、9天或更长时间。
在特定实施方案中，在封闭系统中进行培育。在某些实施方案中，在无菌条件下在封闭系统中进行培育。在特定实施方案中，在与所提供系统的一个或多个步骤相同的封闭系统中进行培育。在一些实施方案中，将经富集T细胞的组合物从封闭系统中去除并且置于用于培育的生物反应器中和/或与其连接。合适的用于培育的生物反应器的例子包括但不限于GE XuriTM W25、GE XuriTM W5、Sartorius
Figure BDA0003980595070001161
RM 20|50、FinesseSmartRockerTM生物反应器系统和
Figure BDA0003980595070001162
XRS生物反应器系统。在一些实施方案中，在培育步骤的至少一部分期间，使用生物反应器灌注和/或混合细胞。
在一些实施方案中，混合是或包括摇摆和/或运动。在一些情况下，生物反应器可以经受运动或摇摆，其在一些方面可以增加氧气传递。使生物反应器运动可以包括但不限于沿着水平轴线旋转、沿着竖直轴线旋转、沿着生物反应器的倾斜(tilted或inclined)的水平轴线的摇摆运动、或其任何组合。在一些实施方案中，在摇摆的情况下进行孵育的至少一部分。可以调节摇摆速度和摇摆角度以实现所希望的搅动。在一些实施方案中，摇摆角度为20°、19°、18°、17°、16°、15°、14°、13°、12°、11°、10°、9°、8°、7°、6°、5°、4°、3°、2°或1°。在某些实施方案中，摇摆角度在6-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在7-16°之间。在其他实施方案中，摇摆角度在8-12°之间。在一些实施方案中，摇摆速率为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40rpm。在一些实施方案中，摇摆速率在4rpm与12rpm之间，例如在4rpm与6rpm之间，包含端值。
在一些实施方案中，使生物反应器保持等于或接近37℃的温度和等于或接近5％的CO2水平，具有如下稳定空气流量：为、为约或至少0.01L/min、0.05L/min、0.1L/min、0.2L/min、0.3L/min、0.4L/min、0.5L/min、1.0L/min、1.5L/min、或2.0L/min或大于2.0L/min。在某些实施方案中，在灌注的情况下，如以290ml/天、580ml/天和/或1160ml/天的速率(例如，这取决于与培育起始相关的时间安排和/或经培育细胞的密度)进行培育的至少一部分。在一些实施方案中，在摇摆运动(例如以在5°与10°之间(如6°)的角度，以恒定摇摆速度(例如在5与15RPM之间(如6RMP或10RPM)的速度))的情况下进行细胞培养物扩增的至少一部分。
在一些实施方案中，所提供的用于制造、生成或产生细胞疗法和/或工程化细胞的方法可以包括在孵育、工程化和培育和/或如所述的一个或多个其他处理步骤之前或之后配制细胞，例如配制由所提供的处理步骤产生的基因工程化细胞。在一些实施方案中，一个或多个加工步骤(包括配制细胞)可以在封闭系统中进行。在一些情况下，在用于制造、生成或产生细胞疗法和/或工程化细胞的一个或多个步骤(例如在离心室和/或封闭系统中进行的)中处理细胞，可以包括在培养(例如培育和扩增)和/或如所述的一个或多个其他处理步骤之前或之后配制细胞，例如配制由所提供的转导处理步骤产生的基因工程化细胞。
在一些实施方案中，提供包含用重组抗原受体(例如，CAR或TCR)工程化的细胞的细胞剂量作为组合物或配制品，如药物组合物或配制品。此类组合物可以根据所提供的方法使用，如用于预防或治疗疾病、病症和障碍，或用于检测、诊断和预后方法中。在一些情况下，可以以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量配制细胞。
在一些实施方案中，可以将细胞配制到容器(如袋或小瓶)中。
在一些实施方案中，将细胞配制在药学上可接受的缓冲液中，所述药学上可接受的缓冲液在一些方面可以包括药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，处理包括将介质交换成药学上可接受的或施用于受试者所需的介质或配制缓冲液。在一些实施方案中，处理步骤可以涉及洗涤转导的和/或扩增的细胞以替代药学上可接受的缓冲液中的细胞，所述药学上可接受的缓冲液可以包括一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。包括药学上可接受的载体或赋形剂的此类药物形式的例子可以是下文与将细胞和组合物施用于受试者可接受的形式结合描述的任何形式。在一些实施方案中，药物组合物以有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)含有细胞。
在一些实施方案中，配制缓冲液含有低温保存剂。在一些实施方案中，用低温保存剂溶液配制细胞，所述低温保存剂溶液含有1.0％至30％的DMSO溶液，如5％至20％的DMSO溶液或5％至10％的DMSO溶液。在一些实施方案中，低温保存剂溶液是或含有例如含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS、或其他合适的细胞冷冻介质。在一些实施方案中，低温保存剂溶液是或含有例如至少或约7.5％DMSO。在一些实施方案中，加工步骤可以涉及洗涤经转导的和/或扩增的细胞以交换在低温保存剂溶液中的细胞。在一些实施方案中，将所述细胞在介质和/或溶液中冷冻(例如，低温保护或低温保存)，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约12.5％、12.0％、11.5％、11.0％、10.5％、10.0％、9.5％、9.0％、8.5％、8.0％、7.5％、7.0％、6.5％、6.0％、5.5％、或5.0％的DMSO，或在1％与15％之间、在6％与12％之间、在5％与10％之间、或在6％与8％之间的DMSO。在特定实施方案中，将所述细胞在介质和/或溶液中冷冻(例如，低温保护或低温保存)，所述介质和/或溶液具有最终浓度为或为约5.0％、4.5％、4.0％、3.5％、3.0％、2.5％、2.0％、1.5％、1.25％、1.0％、0.75％、0.5％、或0.25％的HSA，或者在0.1％与5％之间、在0.25％与4％之间、在0.5％与2％之间、或在1％与2％之间的HSA。
在一些实施方案中，使用一个或多个处理步骤进行配制，所述步骤包括洗涤、稀释或浓缩细胞，如培养或扩增的细胞。在一些实施方案中，处理可以包括将细胞稀释或浓缩至所需浓度或数量，如包括用于以给定剂量或其部分用的细胞数量的单位剂型组合物。在一些实施方案中，处理步骤可以包括减小体积，从而根据需要增加细胞的浓度。在一些实施方案中，处理步骤可以包括增加体积，从而根据需要减小细胞的浓度。在一些实施方案中，处理包括向转导的和/或扩增的细胞添加一定体积的配制缓冲液。在一些实施方案中，配制缓冲液的体积是从或从约10mL至1000mL，如至少或约至少或为约或为50mL、100mL、200mL、300mL、400mL、500mL、600mL、700mL、800mL、900mL或1000mL。
在一些实施方案中，用于配制细胞组合物的此类处理步骤在封闭系统中进行。此类处理步骤的例子可以使用与跟细胞处理系统相关的一个或多个系统或套件结合的离心室(例如由Biosafe SA生产和出售的离心室，包括用于与
Figure BDA0003980595070001181
或Sepax
Figure BDA0003980595070001182
细胞处理系统一起使用的那些)来进行。示例性系统和过程描述于国际公开号WO 2016/073602中。在一些实施方案中，所述方法包括实现自离心室的内部空腔压出经配制组合物，所述经配制组合物是在如所述的任何以上实施方案中、在配制缓冲液(如药学上可接受的缓冲液)中配制的所得细胞组合物。在一些实施方案中，将经配制组合物输送至作为封闭系统的一部分与离心室可操作地连接的容器(如本文所述的生物医学材料器皿的小瓶)。在一些实施方案中，所述生物医学材料器皿被配置用于整合至和或可操作连接至并且/或者被整合至或可操作地连接至进行一个或多个处理步骤的封闭系统或装置。在一些实施方案中，所述生物医学材料器皿在输出管线或输出位置处连接至系统。在一些情况下，所述封闭系统在入口管处连接至生物医学材料器皿的小瓶。与本文所述的生物医学材料器皿一起使用的示例性封闭系统包括
Figure BDA0003980595070001183
和
Figure BDA0003980595070001184
2系统。
在一些实施方案中，如与离心室或细胞处理系统相关联的封闭系统包括多端口输出试剂盒，所述试剂盒含有在管线各末端与端口相关联的多路管歧管，所述端口可以连接至一个或多个容器以供经配制组合物输送。在一些方面，所需数量或多个小瓶可以无菌连接至多端口输出中的一个或多个，通常两个或更多个，如至少3、4、5、6、7、8个或更多个端口。例如，在一些实施方案中，一个或多个容器(例如生物医学材料器皿)可以附接至所述端口或少于全部的所述端口。因此，在一些实施方案中，所述系统可以实现将输出组合物输送至生物医学材料器皿的多个小瓶中。
在一些方面，可以将细胞以用于剂量施用(如用于单一单位剂量施用或多剂量施用)的量输送至多个输出容器(例如，小瓶)中的一个或多个。例如，在一些实施方案中，小瓶可以各自含有以给定剂量或其部分施用的细胞数量。因此，在一些方面，每个小瓶可以含有用于施用的单一单位剂量，或者可以含有所需剂量的一部分，使得多个小瓶中的多于一个，如两个小瓶或3个小瓶一起构成用于施用的剂量。
因此，所述容器(例如袋或小瓶)通常含有要施用的细胞，例如，其一个或多个单位剂量。单位剂量可以是要施用于受试者的细胞的量或数量，或者是要施用的细胞的数量的两倍(或更多数量)。它可以是要施用于受试者的细胞的最低剂量或最低可能剂量。
在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)单独地包含单位剂量的细胞。因此，在一些实施方案中，每个容器包含相同或大致或基本相同数量的细胞。在一些实施方案中，每个单位剂量含有至少或约至少1x106、2x106、5x106、1x107、5x107或1x108个工程化细胞、总细胞、T细胞或PBMC。在一些实施方案中，每个容器(例如袋或小瓶)中的经配制细胞组合物的体积为10mL至100mL，如至少或约至少20mL、30mL、40mL、50mL、60mL、70mL、80mL、90mL或100mL。在一些实施方案中，容器(例如袋或小瓶)中的细胞可以是低温保存的。在一些实施方案中，容器(例如小瓶)可以储存在液氮中，直到进一步使用。
在一些方面，在制造过程期间的一个或多个阶段或时间点(包括在工程化细胞或含有工程化细胞的细胞组合物被释放以进行输注、准备好向受试者施用和/或向受试者施用之前)评估工程化细胞或细胞组合物。在一些实施方案中，在评估已被工程化的细胞和/或表达根据所提供的实施方案的抗BCMA CAR的细胞(例如，关于工程化细胞或细胞组合物的一部分、级分和/或样品)的数量、量或百分比之后，工程化细胞或细胞组合物被释放以进行输注、准备好向受试者施用和/或向受试者施用。在特定实施方案中，在完成所述一种或多种方法后所述细胞被确定为安全的(例如，无菌的和/或游离的)和/或具有期望的生物特征(如含有少于或多于编码本文所述的抗BCMA CAR的核酸序列的所需阈值拷贝数)之后，工程化细胞或细胞组合物被释放以进行输注、准备好向受试者和/或向受试者施用。在一些实施方案中，这种评估可以用于确定CAR表达细胞的数量和/或百分比，以确定用于施用的细胞的适当剂量。在一些方面，对于已接受过先前过继细胞疗法(如先前BCMA定向重组受体(例如CAR)表达T细胞疗法(CAR T细胞疗法))的受试者，所提供的方法和用途还可以包括评估工程化细胞或细胞组合物中先前BCMA定向重组受体(例如CAR)的存在、量和/或水平。在一些方面，对先前BCMA定向重组受体(例如CAR)的存在、量和/或水平的评估可以用于检测表达先前重组受体的任何剩余细胞，并且如果需要，排除仍表达先前重组受体的此类细胞或富集不表达先前重组受体的细胞。在一些方面，此类方法可以用于减少或防止施用仍含有先前重组受体(例如CAR)的细胞。
在一些实施方案中，通过检测重组受体的表达或编码重组受体的核酸序列的存在来评估抗BCMA CAR(以及在一些情况下，先前重组受体)的存在和/或量。在一些方面，重组受体的存在可以使用如下任何方法来评估，所述方法能够检测生物样品中蛋白质或核酸的存在、不存在、水平和/或量，例如，使用基于核酸的方法，如定量PCR(qPCR)；或基于细胞的方法，如流式细胞术；或其他测定，如免疫测定、ELISA或基于色谱/质谱的测定。抗BCMA CAR或表达抗BCMA CAR的细胞可以通过基于流式细胞术或基于定量PCR的方法检测，并使用已知方法外推至总细胞数。参见例如，Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)；Park等人,Molecular Therapy 15(4):825–833(2007)；Savoldo等人,JCI 121(5):1822-1826(2011)；Davila等人,(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Davila等人,Oncoimmunology 1(9):1577-1583(2012)；Lamers,Blood 2011 117:72-82；Jensen等人,Biol Blood MarrowTransplant 2010年9月；16(9):1245–1256；Brentjens等人,Blood 2011118(18):4817-4828。
用于评估重组受体的存在的示例性基于核酸的方法包括基于聚合酶链式反应的方法，如定量PCR(qPCR)、数字PCR(dPCR)或微滴式数字PCR(ddPCR)。在一些方面，可以使用探针或引物检测特定序列的存在、不存在和/或量，所述探针或引物可以特异性结合、检测、识别和/或扩增编码重组受体的核酸序列的全部或一部分。在一些实施方案中，用于qPCR或其他基于核酸的方法的引物或探针对结合、识别和/或扩增编码重组蛋白(例如抗BCMACAR，并且在一些情况下，先前重组蛋白)的核酸、和/或质粒和/或载体的其他组分或元件具有特异性，所述其他组分或元件包括调节元件(例如启动子、转录和/或转录后调节元件或反应元件)或标记物(例如替代标记物)。在一些方面，用于评估重组受体的存在的示例性基于核酸的方法包括高通量RNA测序(RNA-seq)或用于评估样品中核酸表达的其他高通量方法。在一些方面，用于评估工程化细胞或组合物中编码抗BCMA CAR的核酸的存在和/或量的示例性方法包括WO 2020/033916中所述的那些。
用于评估重组受体(例如抗BCMA CAR，并且在一些情况下，先前重组受体)的存在的示例性基于细胞或蛋白质的方法包括流式细胞术、酶联免疫吸附测定(ELISA)、酶免疫测定(EIA)、放射免疫测定(RIA)、表面等离子体共振(SPR)、蛋白质印迹、侧向流测定、免疫组织化学、蛋白质阵列或免疫PCR(iPCR)。
在一些实施方案中，工程化细胞或细胞组合物中BCMA定向重组受体(例如，抗BCMACAR，并且在一些情况下，先前重组受体)表达细胞的存在可以使用如下试剂检测，所述试剂例如分离或纯化的抗原，例如重组表达的抗原，例如重组BCMA-Fc(在其C末端与IgG的Fc区融合的可溶性人BCMA)。在一些实施方案中，工程化细胞或细胞组合物中抗BCMA CAR表达细胞的存在可以使用如下试剂检测，所述试剂能够特异性地检测抗BCMA CAR的存在，如抗独特型抗体、对结合结构域(例如scFv)具有特异性的抗独特型激动剂抗体或其一部分。示例性抗独特型抗体描述于PCT/US2020/063492中，通过引用以其整体并入本文。在一些实施方案中，所述结合分子是或包含分离的或纯化的抗原，例如重组表达的抗原。在一些情况下，例如，对于已接受过先前BCMA定向重组受体表达细胞(例如CAR T细胞)疗法的受试者，可以将使用分离或纯化的抗原(例如，重组BCMA Fc；检测与BCMA结合的任何重组受体，包括先前BCMA定向重组受体和用于根据所提供的方法使用的抗BCMA CAR)评估的BCMA结合重组受体的量或水平与使用特定重组受体特异性试剂(例如，针对特异性抗BCMA CAR的抗独特型抗体)检测的抗BCMA CAR的量或水平进行比较。在一些情况下，两个量之间的差异可以指示表达先前重组受体(例如先前BCMA定向CAR T疗法)的细胞的存在和/或量。
在一些实施方案中，将通过所述方法产生的此类细胞或包含此类细胞的组合物施用于受试者以治疗疾病或病症。
E.示例性过程和特征
在一些实施方案中，通过用于选择、分离、激活、刺激、扩增、培育和/或配制细胞的过程产生或生成根据所提供的方法使用的工程化细胞，如表达如所描述的抗BCMA CAR的那些。在一些实施方案中，此类方法包括如所描述的任一种。
在一些实施方案中，经富集CD4+T细胞的至少一种单独组合物和经富集CD8+T细胞的至少一种单独组合物是从单一生物样品(例如，来自同一供体(如患者或健康个体)的PBMC或其他白细胞样品)中分离、选择、富集或获得的。在一些实施方案中，最初从同一生物样品(如获得、收集、和/或获取自单一受试者的单一生物样品)中产生(例如分离、选择和/或富集)经富集CD4+T细胞的单独组合物和经富集CD8+T细胞的单独组合物。在一些实施方案中，首先使生物样品经历CD4+T细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分，并且进一步使阴性级分经历CD8+T细胞的选择。在其他实施方案中，首先使生物样品经历CD8+T细胞的选择，其中保留了阴性和阳性级分，并且进一步使阴性级分经历CD4+T细胞的选择。在一些实施方案中，如在国际PCT公开号WO2015/164675中所述进行选择方法。在一些方面，首先对生物样品阳性选择CD8+T细胞以生成经富集CD8+T细胞的至少一种组合物，并且然后对阴性级分阳性选择CD4+T细胞以生成经富集CD4+T细胞的至少一种组合物，使得经富集CD8+T细胞的至少一种组合物和经富集CD4+T细胞的至少一种组合物是来自同一生物样品(例如，来自同一供体患者或健康个体)的单独组合物。在一些方面，将经富集T细胞的两种或更多种分开的组合物(例如，至少一种是来自同一供体的经富集CD4+T细胞的组合物，并且至少一种是经富集CD8+T细胞的单独组合物)单独地冷冻(例如低温保护或低温保存)在低温保存介质中。
在一些实施方案中，将来自经富集CD4+T细胞的组合物的细胞和来自经富集CD8+T细胞的组合物的细胞混合、组合和/或合并以产生含有CD4+T细胞和CD8+T细胞的输入组合物。在某些实施方案中，在刺激条件下在孵育细胞之前合并、混合和/或组合经富集CD4+T细胞和CD8+T细胞的组合物。在某些实施方案中，在从生物样品中分离、富集和/或选择CD4+和CD8+T细胞之后，合并、混合和/或组合经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。在特定实施方案中，在冷冻(例如，低温保存)和解冻经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物之后，合并、混合和/或组合经富集CD4+和CD8+T细胞的组合物。
在特定实施方案中，所述输入组合物含有在3:1与1:3之间、在2:1与1:2之间、在1.5与0.75之间、在1.25与0.75之间、或在1.2与0.8之间的比率的CD4+T细胞与CD8+T细胞。在特定实施方案中，所述输入组合物含有在3:1与1:3之间的比率的CD4+T细胞与CD8+T细胞。在特定实施方案中，所述输入组合物含有在2:1与1:2之间的比率的CD4+T细胞与CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述输入组合物含有为或约2:1的比率的CD4+T细胞与CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述输入组合物含有为或约1:1的比率的CD4+T细胞与CD8+T细胞。
在一些方面，将经富集T细胞的两种或更多种分开的组合物(例如，至少一种是来自同一生物样品的经富集CD4+T细胞的组合物，并且至少一种是来自同一生物样品的经富集CD8+T细胞的单独组合物)解冻并混合、组合和/或合并，并且在混合、组合和/或合并之前或之后可以任选地洗涤所述组合物。在一些方面，经富集T细胞的经混合、组合和/或合并和任选地洗涤的组合物形成输入组合物。在一些方面，通过与刺激试剂接触(例如，通过与用于T细胞激活的CD3/CD28缀合的磁珠孵育)来激活和/或刺激输入组合物(例如，包含比率为或约1:1的CD4+T细胞和CD8+T细胞)。在一些方面，例如使用编码重组蛋白(例如CAR)的病毒载体对激活/刺激的细胞组合物进行工程化、转导和/或转染，以在细胞组合物的CD4+T细胞和CD8+T细胞中表达相同的重组蛋白。在一些方面，所述方法包括从细胞组合物中去除刺激试剂，例如磁珠。在一些方面，培育含有工程化CD4+T细胞和工程化CD8+T细胞的细胞组合物，例如用于其中的CD4+T细胞和/或CD8+T细胞群的扩增。在某些实施方案中，例如通过在配制缓冲液中洗涤细胞组合物来收获和/或收集和/或配制来自培育的细胞组合物。在某些实施方案中，将包含CD4+T细胞和CD8+T细胞的配制细胞组合物冷冻(例如低温保护或低温保存)在低温保存介质中。在一些方面，所述配制品中的工程化CD4+T细胞和CD8+T细胞源自同一供体或生物样品并表达相同的重组蛋白(例如CAR)，并且将所述配制品施用至对其有需要的受试者(如同一供体)。
在一些实施方案中，根据所提供的方法使用的工程化细胞(如表达如所描述的抗BCMA CAR的那些)以及包含此类细胞的组合物(如含有表达抗BCMA嵌合抗原受体(CAR)的CD4+和CD8+T细胞的组合物)是通过示例性过程产生或生成的，所述示例性过程包括从样品单独选择CD4+和CD8+T细胞，之后将所选择的细胞以限定的比率组合以用于后续处理步骤。
在示例性方法的一些方面中，从来自人白细胞单采术样品的分离的PBMC选择CD4+和CD8+细胞的单独组合物，并且将选择的细胞组合物低温保存。在一些实施方案中，所述人受试者是患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者。在一些方面，随后，在进行刺激、转导和扩增步骤之前，将所选择的CD4+和CD8+T细胞组合物解冻，并以1:1的活CD4+T细胞与活CD8+T细胞的比率混合。在示例性实施方案中，在无血清培养基中，以1:1的珠与细胞比率，在具有附接的抗CD3和抗CD28抗体的由聚苯乙烯包被的顺磁性珠的存在下，以约3x106个细胞/mL的密度刺激来自混合的细胞组合物的大约300x106个T细胞(150x106个CD4+和150x106个CD8+T细胞)。在一些实施方案中，所述培养基还含有重组IL-2、IL-7和IL-15。通过孵育将刺激进行18至30小时之间。
在示例性过程的一些方面中，在孵育后，洗涤来自刺激的细胞组合物的大约100x106个活细胞，并将其重悬浮于含有重组IL-2、IL-7和IL-15的示例性无血清培养基中。在一些情况下，不添加转导佐剂。在一些方面，用编码本文所述的任何示例性抗BCMA CAR(例如，含有对BCMA具有特异性的scFv抗原结合结构域、CD28跨膜区、4-1BB共刺激信号传导区和CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域)的示例性慢病毒载体通过以下方式转导细胞：旋转接种60分钟，接着在约37℃下孵育约18至30小时。在一些方面，旋转接种后的细胞密度约为约1x106个细胞/mL。
在一些实施方案中，然后通过转移到生物反应器(例如摇摆运动生物反应器)中的约500mL示例性无血清培养基中来培育转导的细胞以进行扩增，所述示例性无血清培养基含有两倍于在孵育和转导步骤期间所用的浓度的IL-2、IL-7和IL-15。在一些示例性过程中，示例性培养基不含有泊洛沙姆。
在一些方面，在实现大于或约0.6x106个细胞/mL的阈值细胞密度之后，逐步添加培养基，定期(如在约2与约15分钟之间)添加新鲜培养基的注液至1000mL的体积，并且在稳定的摇摆条件下(非灌注)培育细胞直到实现大于或约0.6x106个细胞/mL的阈值活细胞密度。在一些实施方案中，如果活细胞密度大于0.8x106个细胞/mL，则开始组合填充/灌注步骤，其中以例如如上所示的逐步方式添加第一培养基，直到目标体积为1000mL，然后如按以下所述的开始灌注。在一些方面，然后，通过伴随连续混合的半连续灌注替换培养基。在一些实施方案中，在扩增阶段期间随着细胞密度增加将灌注速率和/或摇摆速度增加至少一倍。在一些实施方案中，在扩增阶段期间随着细胞密度增加灌注速率增加至少一倍。在一些实施方案中，以逐步的方式将培养基添加到培养物中，每天的总体积由活细胞密度决定(如一旦达到某一密度，则以较高的速率)，直至速率例如导致每天向培养物中添加大约750mL或1500mL的总新鲜培养基(当达到更高的细胞浓度时，以更高的速率)，在一天中定期(例如在约每0.5小时与约每1.5或2小时之间)添加新鲜培养基的注液。在一些实施方案中，在达到约3500x106或5500x106的示例性扩增阈值之后的那天收获细胞。在一些实施方案中，某一天在有核细胞(TNC)总数已经达到至少或至少大约3500x106个之后的时候以及在TNC数量已经达到至少或至少大约5500x106个总有核细胞的某个时间点时收获细胞。在收获后，通过暴露于磁场将抗CD3和抗CD28抗体缀合的珠从细胞组合物中除去。然后配制细胞，将其等分至用于施用的冷冻袋(例如CryoStoreTM冷冻袋)和用于进一步分析的小瓶中，并低温保存。在一些情况下，每袋等分30mL体积的配制的细胞组合物。在一些情况下，细胞以可变的浓度低温保存，只要满足总输出组合物的靶细胞数即可。
在一些实施方案中，根据所提供的方法使用的工程化细胞(如表达如所描述的抗BCMA CAR的那些)以及包含此类细胞的组合物(如含有表达抗BCMA嵌合抗原受体(CAR)的CD4+和CD8+T细胞的组合物)是通过另一个示例性过程产生或生成的。在示例性过程中，原代CD4+和CD8+细胞从来自人白细胞单采术样品(包括来自患有多发性骨髓瘤(MM)的受试者)的含PBMC的生物样品中富集。在一些方面，在进行刺激、转导和扩增步骤之前，将富集的CD4+和富集的CD8+细胞组合物单独地低温保存，并且随后以1:1的活CD4+T细胞与活CD8+T细胞的比率混合。在一些方面，在进行刺激、转导和扩增步骤之前，将富集的CD4+和富集的CD8+细胞组合物单独地低温保存，并且随后以2:1的活CD4+T细胞与活CD8+T细胞的比率混合。
在一些实施方案中，在含有重组IL-2、IL-7和IL-15的示例性无血清培养基中，以1:1的珠与细胞比率，在具有附接的抗CD3和抗CD28抗体的由顺磁性聚苯乙烯包被的珠的存在下，以约3x106个细胞/mL的密度将来自混合的细胞组合物的大约300x106个T细胞(例如150x106个CD4+和150x106个CD8+T细胞)孵育18与30小时之间。
在一些方面，在孵育后，用编码本文所述的任何示例性抗BCMA CAR(例如，含有对BCMA具有特异性的scFv抗原结合结构域、CD28跨膜区、4-1BB共刺激信号传导区和CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域)的示例性慢病毒载体在具有细胞因子的示例性无血清培养基中通过以下方式转导来自孵育的细胞组合物的至少约100x106直至约200x106个活细胞：旋转接种60分钟，接着在约37℃下孵育约18至30小时。
在一些实施方案中，然后通过在生物反应器(例如摇摆运动生物反应器)中的约500mL示例性无血清培养基中培育来扩增转导的细胞，所述无血清培养基含有两倍于在孵育和转导步骤期间所用的浓度的IL-2、IL-7和IL-15。在一些方面，所述培养基不包含或不含泊洛沙姆。在一些方面，在认为实现大于或大于约0.6x106个细胞/mL的细胞密度之后，逐步添加培养基，定期(如在约2与约15分钟之间)添加新鲜培养基的注液至1000mL的体积，并且在稳定的摇摆条件下(非灌注)培育细胞直到实现大于或约0.6x106个细胞/mL的阈值活细胞密度。在一些方面，如果活细胞密度大于0.8x106个细胞/mL，则开始组合填充/灌注步骤，其中以如上所示的逐步方式添加第一培养基，直到目标体积为1000mL，然后开始灌注。在一些实施方案中，通过伴随连续混合的半连续灌注替换培养基。在一些方面，在扩增阶段期间随着细胞密度增加将灌注速率和/或摇摆速度增加至少一倍。在一些实施方案中，在扩增阶段期间随着细胞密度增加灌注速率增加至少一倍。在一些方面，以逐步的方式将培养基添加到培养物中，每天的总体积由活细胞密度决定(例如，一旦达到某一密度，则以较高的速率)，直至速率例如导致每天向培养物中添加大约750mL或1500mL的总新鲜培养基(例如，当达到更高的细胞浓度时，以更高的速率)，在一天中定期(例如在为或约每0.5小时与为或约每1.5或2小时之间)添加新鲜培养基的注液。在一些实施方案中，某一天在有核细胞(TNC)总数达到至少或至少大约1000x106个之后的时候以及在TNC数量达到至少或至少大约2400x106个总有核细胞的某个时间点时收获细胞，活力为至少85％。在一些方面，在收获后，将抗CD3和抗CD28抗体缀合的珠从细胞组合物中除去。
在一些实施方案中，然后配制细胞，并将组合物的等分试样转移到容器中，例如用于下游存储或使用。在一些实施方案中，将配制的组合物或其部分转移至适合于例如用于潜在地施用至受试者的细胞组合物的低温保存和存储的冷冻袋(如CryoStoreTM冷冻袋)中，和/或将组合物或其部分转移至小瓶或其他容器中例如用于细胞的进一步分析。在一些方面，例如在适合于下游解冻和施用用途的条件下，将细胞低温保存。在一些情况下，将30mL体积的配制细胞用于单独的袋中。在一些情况下，将细胞以可变的总细胞浓度低温保存，例如，以允许在细胞用于施用的情境下每个剂量中有一致数量或浓度的CAR+T细胞。在一些实施方案中，目标CAR+CD3+细胞数量为每30mL或每袋有等于或大约所需数量(例如为或约37.5x106个)的CAR+CD3+细胞，这在一些实施方案中涉及由不同的供体或患者产生的组合物之间总细胞浓度的变化。
在一些方面，对于从一系列多发性骨髓瘤患者中获得的个体白细胞单采术样品，这种示例性过程从此类样品中产生工程化细胞组合物可以导致从激活开始到收获的过程部分的持续时间范围在5天与8天之间，并且这些样品之间的平均持续时间为5.5天。在一些方面，对于这组样品，在过程中的平均累积群体倍增数可以为大约5。
在一些方面，本文所述的示例性过程可以用于从许多人多发性骨髓瘤白细胞单采术样品中产生工程化T细胞组合物。在一些方面，评估了各种参数，包括反映细胞表型、功能和细胞工程化的那些参数。在一些实施方案中，观察到T细胞纯度、T细胞谱系代表、转导频率和功能基本上与使用不同的示例性过程(例如，以上所述)用这些白细胞单采术产物产生的组合物的类似。在一些方面，观察到与不同的示例性过程(例如，以上所述)相比，使用以上所述的示例性过程生产时群体倍增数和在激活开始与收获之间的平均持续天数减少。在一些方面，在通过本文所述的不同示例性过程生产的工程化细胞组合物中观察到中央记忆表型细胞的百分比类似或增加(和效应记忆表型细胞的百分比类似或减少)。
在一些实施方案中，使用如下过程产生工程化细胞，所述过程在一些方面具有特定的成功率，如高成功率或大于阈值率的成功率，如能够生成治疗性细胞组合物的那些，如能够针对大数量或百分比的样品(如针对各自源自不同个体受试者或患者(如有待用治疗性组合物治疗的受试者或患者)的所有或高百分比的样品)生成具有某些所需或期望特征的此类组合物(例如，在自体细胞疗法的情境下)。在一些方面，受试者或患者患有疾病或病症，如癌症，如血癌或血液癌症，如多发性骨髓瘤。在一些方面，所述样品(针对其高百分比，可能由其生成治疗性细胞组合物)是患者样品，包括例如就细胞表型或其样品或细胞的其他参数而言可变的患者样品。在一些实施方案中，如与经由其他过程生成的细胞组合物相比，所述工程化细胞组合物具有改善的或高度的细胞健康。在一些实施方案中，所述组合物包含高百分比的呈凋亡标记物阴性的细胞。在一些实施方案中，所述工程化细胞组合物是通过如下方法产生的，所述方法产生包含具有稳健的细胞因子产生的多功能细胞。在一些实施方案中，所述工程化细胞组合物是通过如下方法产生的，所述方法产生富集了记忆表型、富集了中央记忆表型和/或富集了呈CD27+、CD28+、CCR7+、CD45RA-、CD45RO+、CD62L+、CD3+、颗粒酶B-和/或CD127+的细胞的T细胞组合物。在一些实施方案中，所述组合物中的细胞的、所述组合物中的T细胞的、或所述组合物中的工程化T细胞的至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％或更多(或者，对于使用特定方法生产的至少一半或大多数样品，或者平均而言使用特定方法产生的样品，组合物中的细胞的至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％或更多)是具有中央记忆表型的T细胞；呈CD27+、CD28+；呈CCR7+、CD45RA-；和/或呈CCR7+、CD45RO+。在一些实施方案中，所述组合物中的细胞的、所述组合物中的T细胞的、或所述组合物中的工程化T细胞的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％或85％或90％或95％或更多(或者，对于使用特定方法生产的至少一半或大多数样品，或者平均而言使用特定方法产生的样品，组合物中的细胞的至少50％、55％、60％、65％、70％、75％或80％或85％或90％或95％或更多)是具有记忆表型的T细胞；呈CD45RA-；和/或呈CD45RO+。
在某些实施方案中，所述组合物的细胞具有高份额和/或频率的中央记忆细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的细胞具有记忆表型、具有中央记忆表型或者是中央记忆T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的细胞是中央记忆T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的细胞具有记忆表型、具有中央记忆表型或者是中央记忆T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的T细胞具有记忆表型、具有中央记忆表型或者是中央记忆T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的T细胞具有记忆表型、具有中央记忆表型或者是中央记忆T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的T细胞具有记忆表型、具有中央记忆表型或者是中央记忆T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的CD4+T细胞是中央记忆CD4+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CD4+T细胞是中央记忆CD4+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的CD4+T细胞是中央记忆CD4+T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的CD4+CAR+T细胞是中央记忆CD4+CAR+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CD4+CAR+T细胞是中央记忆CD4+CAR+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的CD4+CAR+T细胞是中央记忆CD4+CAR+T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的CD8+T细胞是中央记忆CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CD8+T细胞是中央记忆CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的CD8+T细胞是中央记忆CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的CD8+CAR+T细胞是中央记忆CD8+CAR+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CD8+CAR+T细胞是中央记忆CD8+CAR+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％、在为或约45％与为或约50％、在为或约50％与为或约55％、在为或约55％与为或约60％、或在为或约60％与为或约65％之间的CD8+CAR+T细胞是中央记忆CD8+CAR+T细胞。在一些实施方案中，所述组合物的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的CAR+T细胞(例如，CD4+T细胞和CD8+T细胞)是中央记忆CD4+或CD8+T细胞。在某些实施方案中，所述组合物的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CAR+T细胞(例如，CD4+T细胞和CD8+T细胞)是中央记忆CD4+或CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述组合物中的至少或为或约30％、至少或为或约40％、至少或为或约50％、至少或为或约60％、至少或为或约70％、至少或为或约75％、至少或为或约80％、至少或为或约85％、至少或为或约90％、至少或为或约95％、或大于95％的细胞呈CD27+、CD28+、CCR7+、CD45RA-、CD45RO+、CD62L+、CD3+、CD95+、颗粒酶B-和/或CD127+。在一些实施方案中，所述组合物中的至少或为或约50％、至少或为或约55％、至少或为或约60％、或至少或为或约65％的CAR+T细胞呈CD27+、CD28+、CCR7+、CD45RA-、CD45RO+、CD62L+、CD3+、CD95+、颗粒酶B-和/或CD127+。
在一些实施方案中，所述方法的迭代产生多种组合物，任选地从人生物样品中产生，其中所述方法在多名不同的单独受试者中进行。在一些实施方案中，所述多种组合物中的具有记忆表型的细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的具有中央记忆表型的细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的呈CD27+、CD28+、CCR7+、CD45RA-、CD45RO+、CD62L+、CD3+、CD95+、颗粒酶B-和/或CD127+的细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的呈CCR7+/CD45RA-或CCR7+/CD45RO+的细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的工程化CD4+T细胞(例如，CAR+CD4+T细胞)中的中央记忆CD4+T细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的工程化CD8+T细胞(例如，CAR+CD8+T细胞)中的中央记忆CD8+T细胞的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。在一些实施方案中，所述多种组合物中的工程化T细胞(例如，CAR+T细胞)中的中央记忆T细胞(例如，CD4+中央记忆T细胞和CD8+中央记忆T细胞)的平均的(即，平均)或中值百分比在为或约40％与为或约65％之间、在为或约40％与为或约45％之间、在为或约45％与为或约50％之间、在为或约50％与为或约55％之间、在为或约55％与为或约60％之间、或在为或约60％与为或约65％之间。
IV.药物组合物
还提供包括表达BCMA结合重组受体的工程化细胞的组合物，其包括药物组合物和配制品。此类组合物包括包含表达所提供的抗BCMA重组受体(例如CAR)的工程化细胞(如多种工程化细胞)的那些。在一些方面，还提供了组合物，例如用于所提供的方法和用途(例如治疗方法和用途)的细胞组合物。在一些实施方案中，当施用至患有疾病或障碍(例如多发性骨髓瘤)的受试者时，所提供的组合物能够实现某些治疗结局，例如反应或安全性结局。
提供了药物配制品，其包含BCMA结合重组嵌合抗原受体或表达所述受体的工程化细胞、表达所述受体的多种工程化细胞和/或用于组合治疗或疗法的另外的药剂。药物组合物和配制品通常包括一种或多种任选的药学上可接受的载体或赋形剂。在一些实施方案中，组合物包括至少一种另外的治疗剂。
术语“药物配制品”是指这样的制剂，其处于使得其中所含活性成分的生物活性有效的形式，并且不含对施用配制品的受试者具有不可接受的毒性的另外的组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分之外对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些方面，载体的选择部分地由特定细胞、另外的治疗剂和/或通过施用方法确定。因此，存在多种合适的配制品。例如，药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面中，使用两种或更多种防腐剂的混合物。防腐剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)中。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲液，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，在组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾以及各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。缓冲剂或其混合物通常以总组合物重量的约0.001％至约4％的量存在。用于制备可施用的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如Remington:The Science andPractice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)中。
所述配制品或组合物还可含有可用于用细胞或其组合物治疗的特定适应症、疾病或病症的多于一种活性成分，优选具有与所述细胞或其组合物互补的活性的那些成分，其中各自的活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量以组合形式适当地存在。因此，在一些实施方案中，所述药物组合物还包括其他药学活性剂或药物，如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、柔红霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。
在一些实施方案中，所述药物组合物含有有效治疗或预防疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)的细胞或其组合物。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗功效或预防功效。对于数天或更长时间的重复施用，取决于病症，重复进行治疗直至发生所希望的对疾病症状的抑制。然而，其他施用方案可能有用并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注施用组合物、通过多次推注施用组合物或通过连续输注施用组合物来递送。
在某些实施方案中，在含有所述重组受体(例如，CAR)的基因工程化细胞的情境下，向受试者施用如下范围的细胞：为或约一百万至为或约1000亿个细胞、例如100万至为或约500亿个细胞(例如，为或约500万个细胞、为或约2500万个细胞、为或约5000万个细胞、为或约50000万个细胞、为或约10亿个细胞、为或约50亿个细胞、为或约200亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约400亿个细胞、或任两个前述值限定的范围)，如为或约1000万至为或约1000亿个细胞(例如，为或约2000万个细胞、为或约3000万个细胞、为或约4000万个细胞、为或约6000万个细胞、为或约7000万个细胞、为或约8000万个细胞、为或约9000万个细胞、为或约100亿个细胞、为或约250亿个细胞、为或约500亿个细胞、为或约750亿个细胞、为或约900亿个细胞、或任两个前述值限定的范围)，并且在一些情况下，为或约10000万个细胞至为或约500亿个细胞(例如，为或约12000万个细胞、为或约15000万个细胞、为或约25000万个细胞、为或约30000万个细胞、为或约35000万个细胞、为或约45000万个细胞、为或约65000万个细胞、为或约80000万个细胞、为或约90000万个细胞、为或约12亿个细胞、为或约30亿个细胞、为或约300亿个细胞、为或约450亿个细胞)或在这些范围和/或每千克受试者体重的这种细胞数量的范围之间的任何值。在一些方面，在表达重组受体(例如，CAR)的基因工程化细胞的情境下，组合物可以含有用于施用一定剂量的细胞疗法的至少所述数量的细胞，如用于施用的约或至少本文(例如，在第I.A(3)部分中)所述一定数量的细胞。
可以使用标准施用技术、配制品和/或设备来施用细胞。提供了用于储存和施用组合物的配制品和装置，如注射筒和小瓶。细胞的施用可以是自体的或异源的。例如，免疫反应细胞或祖细胞可以从一名受试者获得，并且将其施用至同一受试者或不同的相容受试者。外周血来源的免疫反应细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以通过局部注射施用，包括导管施用、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外施用。在施用治疗性组合物(例如，含有遗传修饰的免疫反应细胞的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂施用的那些。在一些实施方案中，肠胃外施用所述细胞群。如本文所用，术语“肠胃外”包括静脉内、肌内、皮下、直肠、阴道、颅内、胸腔内和腹膜内施用。在一些实施方案中，通过静脉内、腹膜内或皮下注射使用外周全身递送向受试者施用细胞群。
在一些实施方案中，组合物作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物，在一些方面可以将其缓冲至选择的pH。液体制剂一般比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物制备起来更容易。另外地，液体组合物稍微更方便施用，特别是通过注射。另一方面，粘性组合物可以在适当的粘度范围内配制，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，所述载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过在溶剂中掺入治疗剂来制备，所述溶剂如与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)混合。
用于体内施用的配制品通常是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌性。
还提供用于组合疗法的药物组合物。可以制备用于本文所述的组合疗法的任何另外的药剂(如第I.B部分所述的药剂)，并将其与表达本文所述的BCMA结合重组受体的工程化细胞作为一种或多种药物组合物施用。可以将组合疗法在一种或多种药物组合物中施用，例如，其中表达重组受体的细胞与另外的药剂在同一药物组合物中或在单独的药物组合物中。例如，在一些实施方案中，另外的药剂是另外的工程化细胞(例如被工程化以表达不同重组受体的细胞)并在同一组合物或在单独的组合物中施用。在一些实施方案中，根据特定的细胞(例如表达重组受体的工程化细胞)和/或另外的药剂、以及特定的剂量方案和/或递送方法，将每种药物组合物配制成合适的配制品。
V.制品或试剂盒
还提供了制品或试剂盒，所述制品或试剂盒含有所提供的基因工程化细胞(例如，表达BCMA结合重组受体)和/或包含所述细胞和/或另外的治疗剂(例如，重组IL-1Ra)的组合物，例如，用于组合疗法。还提供了制品或试剂盒，所述制品或试剂盒含有所提供的重组受体(例如CAR)、基因工程化细胞和/或包含所述细胞的组合物。所述制品可以包含容器和在所述容器上或与所述容器相连的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射筒、试管、IV输液袋等。容器可以由多种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶，包括具有可被注射用针刺穿的塞子的那些。所述制品或试剂盒可以还包含包装插页，其指示所述组合物可以用于治疗特定病症如本文所述的病症(例如多发性骨髓瘤)。可替代地或另外地，所述制品或试剂盒可还包括另一个或相同的包含药学上可接受的缓冲液的容器。它还可包括其他材料，如其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针和/或注射筒。
所述标签或包装插页可以指示所述组合物用于治疗个体中表达BCMA的或BCMA相关的疾病、障碍或病症。在容器上或与容器相关的标签或包装插页可以指示关于重构和/或使用配制品的指导说明。所述标签或包装插页可以进一步指示所述配制品可用于或旨在用于皮下、静脉内或其他方式的施用以治疗或预防个体中表达BCMA的或BCMA相关的疾病、障碍或病症。
在一些实施方案中，容器容纳组合物自身或与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物组合的组合物。所述制品或试剂盒可以包含(a)在其中含有组合物(即第一药物)的第一容器，其中所述组合物包含抗体(例如抗BCMA抗体)或其抗原结合片段或重组受体(例如CAR)；和(b)在其中含有组合物(即第二药物)的第二容器，其中所述组合物包含另外的药剂(例如，用于组合疗法，如IL-1Ra(例如阿那白滞素)、细胞毒性剂或其他治疗剂)，并且所述制品或试剂盒还包含在标签或包装插页上的用于采用有效量的所述第二药物治疗受试者的说明书。
VI.定义
如本文所用，提及抗体的“相应形式”意指当比较两种抗体的特性或活性时，使用相同形式的抗体来比较特性。例如，如果声明抗体与第一抗体的对应形式的活性相比具有更高的活性，则意味着特定形式(如所述抗体的scFv)与第一抗体的scFv形式相比具有更高的活性。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的含有恒定区的至少一部分的C末端区。所述术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区从Cys226或从Pro230延伸至重链的羧基末端。然而，Fc区的C末端赖氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非本文另有说明，否则Fc区或恒定区中氨基酸残基的编号是根据EU编号系统(也称为EU索引)，如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991。
术语“全长抗体”、“完整抗体”和“全抗体”在本文中可互换地使用以指代具有与天然抗体结构基本上类似的结构或具有含有如本文所定义的Fc区的重链的抗体。
“分离的”抗体是已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或色谱(例如，离子交换或反相HPLC)确定的，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度。关于评估抗体纯度的方法的综述，参见例如Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“分离的”核酸是指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括细胞中含有的核酸分子，所述细胞通常含有所述核酸分子，但所述核酸分子存在于染色体外或存在于不同于其天然染色体位置的染色体位置。
“编码抗BCMA抗体的分离的核酸”是指编码抗体重链和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括在单个载体或单独载体中这样的一种或多种核酸分子、以及在宿主细胞中的一个或多个位置存在的这样的一种或多种核酸分子。
术语“宿主细胞”、“宿主细胞系”和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且是指已引入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“转化细胞”，其包括原代转化细胞和源自其的后代，不考虑传代次数。后代的核酸含量可能与亲代细胞不完全相同，但可能含有突变。本文包括如在初始转化细胞中所筛选或选择的，具有相同功能或生物活性的突变体后代。
术语“多肽”与“蛋白质”可互换使用以指代氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所述抗体和抗体链以及其他肽(例如，接头和BCMA结合肽))可以包括含有天然和/或非天然氨基酸残基的氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化等。在一些方面，多肽可以含有关于自然或天然序列的修饰，只要蛋白质维持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(例如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(例如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
如本文所用，在关于氨基酸序列(参考多肽序列)使用时，“氨基酸序列同一性百分比(％)”和“同一性百分比”和“序列同一性”被定义为，在比对序列并在必要时引入空位以实现最大序列同一性百分比并且不将任何保守取代视作序列同一性的一部分之后，候选序列(例如，主题抗体或片段)中与参考多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。用于确定氨基酸序列同一性百分比的比对可以以本领域熟知的多种方式来实现，例如使用公众可获得的计算机软件，如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以确定用于比对序列的适当参数，包括为了在所比较的序列的全长上实现最大比对所需要的任何算法。
氨基酸取代可以包括用另一种氨基酸替代多肽中的一个氨基酸。可以将氨基酸取代引入目标重组受体和针对所需活性(例如，保留/改善的抗原结合、或降低的免疫原性)筛选的产物中。
通常可以根据以下常见的侧链特性将氨基酸进行分组：
(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
(3)酸性：Asp、Glu；
(4)碱性：His、Lys、Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly、Pro；
(6)芳香族的：Trp、Tyr、Phe
非保守氨基酸取代将涉及将这些类别之一的成员与另一个类别交换。
如本文所用，术语“载体”是指能够传播与其连接的另一核酸的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞基因组中的载体。某些载体能够指导它们可操作地连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
术语“包装插页”用于指通常包括在治疗产品的商业包装中的说明书，所述说明书含有关于使用此类治疗产品的适应症、用法、剂量、施用、组合疗法、禁忌症和/或警告的信息。
除非上下文另有明确规定，否则如本文所用，单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指代物。例如，“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”意指“至少一个/一种”或“一个/一种或多个/多种”。应理解，本文所述的方面、实施方案和变化包括“包含”方面、实施方案和变化、“由方面、实施方案和变化组成”和/或“本质上由方面、实施方案和变化组成”。
贯穿本公开文本，所要求保护的主题的各个方面以范围形式呈现。应当理解，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，并且不应被解释为对所要求保护的主题的范围的僵硬限制。因此，应该认为范围的描述具体公开了所有可能的子范围以及该范围内的单个数值。例如，在提供了值的范围的情况下，应理解，在该范围的上限和下限之间的每个中间值以及在所陈述范围内的任何其他所述或中间值涵盖在所要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地被包括在所述较小范围内，并且也涵盖在所要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何确切排除的限制。在所陈述范围包括限制中的一者或两者的情况下，排除了那些包括的限制中的任一者或两者的范围也包括在所要求保护的主题内。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用的术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的常用误差范围。本文对“约”某一值或参数的提及包括(并描述)针对所述值或参数本身的实施方案。例如，涉及“约X”的描述包括“X”的描述。
如本文所用，“组合物”是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记物呈“阳性”的陈述是指特定标记物(通常为表面标记物)在细胞上或细胞中的可检测的存在。当提及表面标记物时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的存在，例如通过用与所述标记物特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平是可检测的，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上与已知对所述标记物呈阳性的细胞的水平相似，和/或所述水平基本上高于已知对所述标记物呈阴性的细胞的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记物呈“阴性”的陈述是指特定标记物(通常为表面标记物)在细胞上或细胞中不存在实质上可检测的存在。当提及表面标记物时，所述术语是指如通过流式细胞术检测到的，表面表达的不存在，例如通过用与所述标记物特异性结合的抗体进行染色并检测所述抗体，其中所述染色通过流式细胞术以如下水平没有检测到，所述水平基本上高于在其他方面相同的条件下用同种型匹配对照进行相同程序检测到的染色，和/或所述水平基本上低于已知对所述标记物呈阳性的细胞的水平，和/或所述水平与已知对所述标记物呈阴性的细胞的水平相比是基本上相似的。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语、符号以及其他技术和科学术语或用辞意图具有与所要求保护的主题所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义具有通常理解的含义的术语，并且本文中包含的此类定义不应被解释为表示与本领域通常理解的实质性差异。
VII.示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
1.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包括一定剂量的包含对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用至少一个剂量的IL-1Ra。
2.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
3.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向作为细胞疗法候选者的受试者施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
4.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向所述受试者施用一定剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用至少一个剂量的IL-1Ra。
5.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)的受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
6.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向作为细胞疗法候选者的受试者施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内已被施用至少一个剂量的IL-1Ra。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的方法，其中所述至少一个剂量的IL-1Ra包含至少两个剂量的IL-1Ra。
9.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
10.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)，其中在向所述受试者施用细胞疗法之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
11.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中所述受试者在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后要向所述受试者施用至少一个剂量的IL-1Ra。
12.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括：
向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
13.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
14.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
15.根据实施方案1-14中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约21、18、15或12小时内施用。
16.根据实施方案1-15中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra。
17.根据实施方案16所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约6、5、4、3或2小时内施用。
18.根据实施方案16或17所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用。
19.根据实施方案16-18中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量，并且在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。
20.根据实施方案1-8和15-19中任一项所述的方法，所述方法还包括在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
21.根据实施方案9-20中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的IL-1Ra。
22.根据实施方案9-21中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的3、4、5、6或7个剂量的IL-1Ra。
23.根据实施方案9-22中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含4个剂量的工程化T细胞。
24.根据实施方案9-22中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的5个剂量的IL-1Ra。
25.根据实施方案9-24中任一项所述的方法，其中连续几天每天施用在施用所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra。
26.根据实施方案9-25中任一项所述的方法，其中施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra是4个剂量，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续4天每天施用所述四个剂量中的一个。
27.根据实施方案9-25中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra是在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续5天每天施用的5个剂量。
28.根据实施方案20-27中任一项所述的方法，其中在第2-5天每24小时(q24h)施用一定剂量的IL-1Ra。
29.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向所述受试者施用至少6个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中所述细胞疗法在第1天施用，并且：
(a)在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用一个剂量的IL-1Ra，任选地在施用所述剂量的工程化T细胞之前的夜晚施用；
(b)在第1天施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra；
(c)在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用四个剂量的IL-1Ra，其中在第2、3、4和5天每天施用所述四个剂量中的一个剂量。
30.根据实施方案1-29中任一项所述的方法，所述方法还包括如果所述受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个另外剂量的IL-1Ra。
31.根据实施方案30所述的方法，其中所述至少一个另外剂量的IL-1Ra包括施用多个剂量，任选地其中连续几天每天施用所述多个剂量，直到CRS的症状或体征消退。
32.根据实施方案31所述的方法，其中连续几天每天两次施用所述多个剂量，直到CRS的症状或体征消退。
33.根据实施方案20-32中任一项所述的方法，其中，如果所述受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则每12小时(q12h)施用一定剂量的IL-1Ra，直到CRS的症状或体征消退。
34.根据实施方案30-33中任一项所述的方法，其中在每天同一时间或约同一时间给予IL-1Ra的每天施用。
35.根据实施方案1-34中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra是重组IL-1Ra。
36.根据实施方案1-35中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra包含SEQ ID NO:256所示的序列或与SEQ ID NO:256具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性且保留IL-1R拮抗剂功能的序列。
37.根据实施方案1-36中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra是阿那白滞素。
38.根据实施方案37所述的方法，其中阿那白滞素是重组阿那白滞素。
39.根据实施方案1-38中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra的每个剂量是为或约500mg、为或约400mg、为或约300mg、为或约200mg、为或约100mg或为或约50mg、或前述任一项限定的范围，任选地其中所述重组IL-1Ra的每个剂量是从为或约50mg至为或约200mg。
40.根据实施方案1-39中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra的每个剂量是为或约100mg。
41.根据实施方案1-40中任一项所述的方法，其中皮下施用所述IL-1Ra。
42.根据实施方案1-41中任一项所述的方法，其中所述方法降低与所述细胞疗法的施用相关的毒性的严重程度、减弱和/或预防所述毒性的发作。
43.根据实施方案4-8和13-42中任一项所述的方法，其中所述毒性是细胞因子释放综合征(CRS)。
44.根据实施方案43所述的方法，其中所述CRS是重度CRS或3级或更高分级的CRS。
45.根据实施方案4-8和13-42中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性(NT)。
46.根据实施方案45所述的方法，其中所述NT是重度NT、或2级或更高分级的NT、或3级或更高分级的NT。
47.根据实施方案4-8和13-42中任一项所述的方法，其中所述毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)或噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。
48.根据实施方案1-47中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，所述受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
49.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，所述受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
50.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，所述受试者先前已接受一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
51.根据实施方案48-50中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
52.根据实施方案48-51中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
53.根据实施方案48-51中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
54.根据实施方案48-51中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
55.根据实施方案48-54中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向TCE是或包含双特异性抗体或双特异性T细胞接合剂(BiTE)。
56.根据实施方案48-55中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向TCE选自AMG420/BI 836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135和REGN5458中的一种或多种。
57.根据实施方案48-56中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向ADC选自贝兰他单抗莫福汀(GSK2857916)、MEDI2228、CC-99712和AMG 224中的一种或多种。
58.根据实施方案1-57中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含：
(a)细胞外抗原结合结构域，其包含：
包含SEQ ID NO:116所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含在SEQ ID NO:119所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；
包含SEQ ID NO:97、101和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；
包含SEQ ID NO:96、100和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；
包含SEQ ID NO:95、99和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；
包含SEQ ID NO:94、98和102分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:104、106和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；或
包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列的VH以及包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列的VL；
(b)间隔子，其包含IgG4/2嵌合铰链或经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4 CH3区，所述间隔子任选地具有约228个氨基酸的长度；或SEQ ID NO:174所示的间隔子；
(c)跨膜结构域，任选地来自人CD28的跨膜结构域；以及
(d)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区包含T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
59.根据实施方案58所述的方法，其中所述VH是或包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列；并且所述VL是或包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
60.根据实施方案58或59所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含scFv。
61.根据实施方案58-60中任一项所述的方法，其中所述VH和所述VL通过柔性接头连接，任选地其中所述柔性接头包含氨基酸序列GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO:1)。
62.根据实施方案58-61中任一项所述的方法，其中所述VH在所述VL的羧基末端。
63.根据实施方案58-62中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
64.根据实施方案58-63中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列。
65.根据实施方案58-64中任一项所述的方法，其中编码所述细胞外抗原结合结构域的核酸包含(a)SEQ ID NO:113的核苷酸序列；(b)与其具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；或(c)(a)或(b)的简并序列。
66.根据实施方案58-65中任一项所述的方法，其中编码所述细胞外抗原结合结构域的核酸包含SEQ ID NO:115的核苷酸序列。
67.根据实施方案58-66中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是或包含来自人CD28的跨膜结构域。
68.根据实施方案58-67中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是或包含SEQID NO:138所示的序列或与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
69.根据实施方案1-57中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含细胞外抗原结合结构域，所述细胞外抗原结合结构域包含：
包含SEQ ID NO:125所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:127所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；和/或
包含SEQ ID NO:260、261和262分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:257、258和259分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL。
70.根据实施方案69所述的方法，其中所述VH是或包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列；并且所述VL是或包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。
71.根据实施方案69或实施方案70所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与SEQ ID NO:128的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
72.根据实施方案58-71中任一项所述的方法，其中胞质信号传导结构域是或包含SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
73.根据实施方案58-72中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区包含CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
74.根据实施方案58-73中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区包含4-1BB、任选人4-1BB的细胞内信号传导结构域。
75.根据实施方案58-74中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区是或包含SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ ID NO:4所示的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
76.根据实施方案58-75中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区位于所述跨膜结构域与所述CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域之间。
77.根据实施方案1-76中任一项所述的方法，其中所述第一CAR从其N末端至C末端依次包含：所述细胞外抗原结合结构域、所述间隔子、所述跨膜结构域和所述细胞内信号传导区。
78.根据实施方案1-77中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含
(a)细胞外抗原结合结构域，其包含：
包含SEQ ID NO:116所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:119所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；
(b)间隔子，其包含经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4 CH3区，所述间隔子具有约228个氨基酸的长度；
(c)来自人CD28的跨膜结构域；以及
(d)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区包含4-1BB的细胞内信号传导结构域。
79.根据实施方案1-78中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含
(a)细胞外抗原结合结构域，其包含SEQ ID NO:114所示的序列或与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
(b)间隔子，其包含SEQ ID NO:174所示的序列或与SEQ ID NO:174具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；
(c)跨膜结构域，其包含SEQ ID NO:138所示的序列或与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列；以及
(d)细胞内信号传导区，其包含胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述胞质信号传导结构域包含SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列，所述共刺激信号传导区包含SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ IDNO:4所示的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
80.根据实施方案1-79中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含
(a)细胞外抗原结合结构域，其包含SEQ ID NO:114所示的序列；
(b)间隔子，其包含SEQ ID NO:174所示的序列；
(c)跨膜结构域，其包含SEQ ID NO:138所示的序列；以及
(d)细胞内信号传导区，其包含含有SEQ ID NO:143所示的序列的胞质信号传导结构域和含有SEQ ID NO:4所示的序列的共刺激信号传导区。
81.根据实施方案1-80中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含SEQ ID NO:19所示的序列。
82.根据实施方案1-81中任一项所述的方法，其中所述第一CAR由以下多核苷酸序列编码，所述多核苷酸序列包含SEQ ID NO:13所示的序列或与其展现出至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
83.根据实施方案1-68和72-82中任一项所述的方法，其中所述第一CAR由包含SEQID NO:13所示序列的多核苷酸序列编码。
84.根据实施方案1-57和69-77中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含SEQID NO:312所示的序列。
85.根据实施方案48-84中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR结合BCMA的相同表位。
86.根据实施方案48-84中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR结合BCMA的不同表位。
87.根据实施方案48-86中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR是不同的。
88.根据实施方案48-87中任一项所述的方法，其中所述第二CAR包含：
VH区和VL区，所述VH区包含分别含有SEQ ID NO:260、261和262的氨基酸序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述VL区包含分别含有SEQ ID NO:257、258和259的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
包含SEQ ID NO:125所示序列的VH区和包含SEQ ID NO:127所示序列的VL区；
SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸残基22-493；和/或
由SEQ ID NO:264编码的序列。
89.根据实施方案48-88中任一项所述的方法，其中所述第二CAR是多价CAR。
90.根据实施方案48-89中任一项所述的方法，其中所述第二CAR包含从SEQ IDNO:265-302中任一个所示序列的残基22开始至其末端的氨基酸残基。
91.根据实施方案48-89中任一项所述的方法，其中所述第二CAR包含含有Centyrin的CAR。
92.根据实施方案48-91中任一项所述的方法，其中所述第二CAR包含SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸残基22-334。
93.根据实施方案48-85中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR是相同的。
94.根据实施方案48-93中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞由包含自同一受试者获得的T细胞的样品产生，所述受试者先前已被施用先前剂量的包含所述第二CAR的工程化T细胞。
95.根据实施方案48-94中任一项所述的方法，其中在所述受试者已被施用先前剂量的包含所述第二CAR的工程化T细胞之后，所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞由包含自所述受试者获得的T细胞的样品产生。
96.根据实施方案48-95中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括在自所述受试者获得的测试样品中评估以下项的存在或量：(i)表达所述第二CAR的细胞，或(ii)编码所述第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。
97.根据实施方案94-96中任一项所述的方法，其中在获得包含T细胞的样品的同时，自所述受试者获得所述测试样品，用于产生所述剂量的包含所述第一CAR的来自同一受试者的工程化T细胞。
98.根据实施方案48-97中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前，所述方法还包括评估以下项的存在或量：(i)表达所述第二CAR的细胞，或(ii)在包含所述剂量的含有所述第一CAR的工程化T细胞的组合物中的编码所述第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列。
99.根据实施方案96-98中任一项所述的方法，其中通过使包含所述剂量的工程化T细胞的样品或组合物与纯化的或重组的BCMA、任选BCMA-Fc接触来评估表达所述第二CAR的细胞的存在或量。
100.根据实施方案96-98中任一项所述的方法，其中通过定量聚合酶链式反应(qPCR)来评估编码所述第二CAR的构建体中存在的核苷酸序列的存在或量。
101.根据实施方案58-100中任一项所述的方法，其中在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，在暴露于表达表面BCMA的细胞后，所述细胞外抗原结合结构域和/或所述第一CAR的结合或指示所述第一CAR的功能或活性的量度未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。
102.根据实施方案101所述的方法，其中所述可溶性或脱落形式的BCMA的浓度或量对应于所述受试者或多发性骨髓瘤患者的血清或血液或血浆中存在的浓度或量，或者多发性骨髓瘤患者群体中的平均浓度或平均量；或者为一定浓度或量的所述可溶性或脱落BCMA，在所述浓度或量下在相同测定中对于表达参考抗BCMA重组受体、任选参考抗BCMACAR的细胞，所述结合或量度被降低或阻断或者被明显降低或阻断。
103.根据实施方案1-102中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含在为或约1x107个与为或约2x109个之间的CAR+T细胞。
104.根据实施方案1-103中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含在为或约1x107个与为或约1x109个之间的CAR+T细胞。
105.根据实施方案1-104中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含在为或约1x108个与为或约8x108个之间的CAR+T细胞。
106.根据实施方案1-104中任一项所述的方法，其中所述剂量的工程化T细胞包含为或约5x107个细胞或CAR+T细胞。
107.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约1.5x108个细胞或CAR+T细胞。
108.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约3x108个细胞或CAR+T细胞。
109.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约4.5x108个细胞或CAR+T细胞。
110.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约5.5x108个细胞或CAR+T细胞。
111.根据实施方案1-105中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约6x108个细胞或CAR+T细胞。
112.根据实施方案1-111中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含CD4+T细胞和CD8+T细胞的组合。
113.根据实施方案1-112中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含CD4+CAR+T细胞和CD8+CAR+T细胞的组合。
114.根据实施方案112或113所述的方法，其中CD4+CAR+T细胞与CD8+CAR+T细胞的比率和/或CD4+T细胞与CD8+T细胞的比率为或为约1:1或者在为或约1:3与为或约3:1之间。
115.根据实施方案1-114中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含CD3+CAR+T细胞。
116.根据实施方案1-115中任一项所述的方法，其中在所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞中少于或少于约25％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的CAR+T细胞表达凋亡标记物、任选膜联蛋白V或活性半胱天冬酶3。
117.根据实施方案1-116中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前，所述受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约20-40mg/m2受试者体表面积、任选为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，和/或每天施用为或约200-400mg/m2受试者体表面积、任选为或约300mg/m2的环磷酰胺，持续2-4天。
118.根据实施方案117所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨以及每天施用为或约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，持续3天。
119.根据实施方案1-118中任一项所述的方法，其中所述与BCMA表达相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。
120.根据实施方案1-119中任一项所述的方法，其中所述与BCMA表达相关的疾病或障碍是癌症，任选地是表达BCMA的癌症。
121.根据实施方案120所述的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
122.根据实施方案120或121所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。
123.根据实施方案120-122中任一项所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤，并且所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样B细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)或套细胞淋巴瘤(MCL)。
124.根据实施方案120-122中任一项所述的方法，其中所述癌症是白血病，并且所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
125.根据实施方案120-122中任一项所述的方法，所述癌症是浆细胞恶性肿瘤，并且所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(MM)或浆细胞瘤。
126.根据实施方案120-122和125中任一项所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤(MM)，任选地是复发性或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。
127.根据实施方案1-126中任一项所述的方法，其中所述受试者已被施用三种或更多种针对所述疾病或障碍的先前疗法、任选四种或更多种先前疗法，所述先前疗法任选地选自：
自体干细胞移植(ASCT)；
免疫调节剂；
蛋白酶体抑制剂；以及
抗CD38抗体。
128.根据实施方案127所述的方法，其中所述免疫调节剂选自沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。
129.根据实施方案127或128所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。
130.根据实施方案127-129中任一项所述的方法，其中所述抗CD38抗体是或包含达雷木单抗。
131.根据实施方案1-130中任一项所述的方法，其中所述受试者已被施用3与15种之间或4与15种之间的先前疗法或约10种先前疗法。
132.根据实施方案127-131中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述3种或更多种先前疗法中的一种或多种后复发或是其难治的。
133.根据实施方案127-132中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述3种或更多种先前疗法中的至少3种或至少4种后复发或是其难治的。
134.根据实施方案132或133所述的方法，其中所述受试者是硼替佐米、卡非佐米、来那度胺、泊马度胺和/或抗CD38单克隆抗体难治的或对其无反应。
135.根据实施方案1-134中任一项所述的方法，其中所述受试者已经进行过先前自体干细胞移植。
136.根据实施方案1-134中任一项所述的方法，其中所述受试者没有进行过先前自体干细胞移植。
137.根据实施方案1-136中任一项所述的方法，其中所述受试者没有活动性浆细胞白血病(PCL)或其病史。
138.根据实施方案1-137中任一项所述的方法，其中所述受试者已经患上继发性浆细胞白血病(PCL)。
139.根据实施方案1-138中任一项所述的方法，其中所述受试者是成年受试者或年龄为25或35岁或更大。
140.根据实施方案1-139中任一项所述的方法，其中所述受试者从诊断所述疾病或障碍起有约4年的时间或2与15年之间或2与12年之间的时间。
141.根据实施方案1-140中任一项所述的方法，其中所述受试者具有IMWG高风险细胞遗传学。
VIII.实施例
以下实施例仅出于说明性目的而被包括，并且不意图限制本发明的范围。
实施例1：核酸构建体和结合至BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的产生
产生编码示例性嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸，所述示例性嵌合抗原受体各自含有人抗BCMA scFv抗原结合结构域。所产生的CAR包括含有scFv的CAR，所述scFv含有WO2016090320、WO 2016090327和WO 2019090003中描述的VH和VL序列。在scFv的一些情况下，VH在VL的氨基末端，并且在一些情况下，VL在VH的氨基末端。所产生的CAR中的示例性scFv区示于表E1中。
Figure BDA0003980595070001401
识别(例如，被示例性抗BCMA scFv克隆特异性结合)的表位基于通过支架上肽的化学连接(CLIPS；Pepscan Presto BV，荷兰莱利斯塔德；参见例如，Timmerman等人,(2007)J.Mol.Recognit.20:283-329)进行的完全不连续表位作图来确定。观察到BCMA-23和BCMA-25scFv与肽SNTPPLTCQR(SEQ ID NO:160所示)结合，所述肽可以以线性形式被识别。在一些方面，此类抗体识别包括SEQ ID NO:160这种肽的残基的非线性或线性表位，并且在一些方面，识别还包括CIPCQLR(SEQ ID NO:159所示)、SNTPPLTCQR和/或SVTNSVK(SEQ ID NO:161所示)的残基的非线性表位。观察到BCMA-26scFv识别包含存在于CSQNEYF(SEQ ID NO:162所示)和LLHACIPCQLR(SEQ ID NO:158所示)中的残基的表位。观察到BCMA-52-scFv-mFc与含有以下不连续肽的残基的表位结合：QNEYF(SEQ ID NO:91)、CIPCQL(SEQ ID NO:92)和CQRYC(SEQ ID NO:93)。观察到BCMA-55-scFv与以下表位特异性地结合，所述表位含有存在于包含人BCMA多肽序列的不连续部分的肽中的残基，所述不连续部分单独地包含以下序列：MLMAG(SEQ ID NO:122)、YFDSLL(SEQ ID NO:123)和QLRCSSNTPPL(SEQ ID NO:124)。
示例性多核苷酸CAR构建体含有编码人IgG-κ信号传导序列的核酸(SEQ ID NO:167，编码SEQ ID NO:166)；上述人抗BCMA scFv；间隔子(如含有经修饰的IgG4铰链CH2-CH3(SEQ ID NO:175，编码SEQ ID NO:174)的间隔子；也称为“长间隔子”或LS)；人CD28跨膜结构域；人4-1BB来源的细胞内共信号传导序列；以及人CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域。
评估了编码多种BCMA CAR的核苷酸序列的潜在剪接位点，并以保守方式进行了修饰，包括去除潜在的预测隐秘剪接供体和受体位点。
将编码此类CAR的cDNA克隆与下游核糖体跳跃元件(如T2A编码序列SEQ ID NO:244或245，编码SEQ ID NO:243)连接，接着与截短的受体编码序列连接，并将其克隆到慢病毒表达载体中。
实施例2：向复发性或难治性多发性骨髓瘤(MM)受试者施用抗BCMA CAR表达细胞
将含有表达对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的CAR的自体T细胞的嵌合抗原受体(CAR)表达T细胞组合物施用于患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(MM)的人受试者。
A.受试者和治疗
将含有被工程化以表达对BCMA具有特异性的示例性CAR(描述于以上实施例1中)的自体T细胞的组合物施用于患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)的成人受试者，他们已接受过3种或更多种先前治疗(所述3种或更多种先前治疗至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和抗CD38单克隆抗体，在除了受试者不是接受这种治疗的候选者(如通过忌用的方式)之外的每一种情况下)。
所施用的T细胞组合物已经通过如下过程产生，所述过程包括从来自患有MM的单独受试者的白细胞单采术样品进行CD4+和CD8+细胞群的基于免疫亲和力的富集，将此类群体的细胞(如以为或约1:1的比率)合并，以及使所述合并的细胞经受处理步骤，包括刺激、在示例性无血清培养基中的细胞转导和扩增、低温保存、以及产生具有一定范围的CD4+与CD8+CAR T细胞比率的细胞。与起始样品和使用不同的制造过程产生的细胞组合物相比，观察到所述过程产生的细胞组合物富集了中央记忆表型。所述CAR含有BCMA-55来源的scFv结合结构域、经修饰的IgG来源的CH2-CH3-铰链间隔子、CD28跨膜结构域和细胞内信号传导区(包括串联的4-1BB胞内域和CD3ζ胞内域，如实施例1所述)。
CAR+T细胞输注前的两天至七天，受试者接受了使用氟达拉滨(flu，30mg/m2/天)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2/天)的淋巴细胞清除化疗(LDC)，持续3天，LDC在CAR+T细胞输注前的至少48小时完成。在静脉内施用之前，将低温保存的细胞组合物在床旁解冻，其中输液日指定为第1天。在第1天，向受试者施用如下剂量的CAR表达T细胞：含有5x107个总CAR表达T细胞的单剂量的剂量水平1(DL1)或含有1.5x108个总CAR表达T细胞的单剂量的剂量水平2(DL2)。
在分析的特定时间点，已有19名成人受试者参加了正在进行的涉及这种疗法的临床研究。在这个特定时间点的这19名受试者中，有13名受试者已被施用抗BCMA CAR+细胞，每名受试者都以DL1或DL2施用。在这13名受试者中，在正在进行的研究的这个特定时间点，有8名受试者可评价指示安全性的属性(基于≥1个月随访的可评价性)(n＝5DL1；n＝3DL2)。由于LDC后的败血症导致在CAR+T细胞施用之前死亡，一名受试者无法接受CAR+T细胞。根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准(Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)，三名受试者(全部DL1)在这个时间点可评价确认的反应(基于≥2个月随访的可评价性)。
对于在这个时间点评估的这8名受试者，中值随访为5周(范围为4-13周)。中值年龄为53岁(范围为36-66岁)，并且从诊断起的中值时间为4年(范围为2-12年)。受试者已接受过针对MM的中值为10种的先前方案(范围为4-15种先前方案)。在这8名受试者中，有4名(50％)是硼替佐米、卡非佐米、来那度胺、泊马度胺和抗CD38单克隆抗体难治的(在最后一次疗法后的60天内无反应或进展)。8名受试者中有7名(88％)已接受过先前自体干细胞移植，并且8名受试者中有4名(50％)具有IMWG高风险细胞遗传学。
在正在进行的研究的时间点进行评估时，在接受DL1或DL2的所评估的受试者中未观察到剂量限制性毒性(DLT)。在所述时间点，已在8名受试者中的6名(75％)中观察到细胞因子释放综合征(CRS)(所有均为1级或2级)。在这8名受试者中，在所述时间点的中值CRS发作时间为9天(范围为4-10天)，并且中值持续时间为4.5天(范围为2-19天)。在所述时间点具有2级CRS的受试者中，没有一名需要血管加压药支持，并且只有1名受试者接受过托珠单抗。没有一名受试者展现出3级或更高分级的CRS。8名受试者中有3名(38％)已经经历过神经病学不良事件(AE)。在所述时间点，八名受试者中有两名展现出1级事件，并且1名展现出3级事件(嗜睡)，其在接受类固醇后24小时内已经缓解。对于3名经历神经病学AE的受试者，神经病学AE的发作分别为9、11和12天，持续时间分别为2、3和1天。截至这个时间点的分析，经历过3级神经毒性(NT)的受试者在接受LDC之前已患上继发性浆细胞白血病(PCL)。
观察到在所述时间点的全部8名受试者都有客观反应的证据，包括患有继发性PCL的受试者。观察到三名受试者(均施用了DL1)已实现了确认的反应(1名为部分反应，PR；2名为严格的完全反应，sCR)，而其余受试者仍未确认(1名为完全反应，CR；2名为非常好的部分反应，VGPR；1名为PR；1名为最小反应，MR)。截至评估的时间点，没有观察到受试者有进展。
结果表明，在评估的剂量水平下，抗BCMA CAR细胞疗法的施用展现出有利的安全性，并且在正在进行的临床研究中的这个时间点尚无DLT报告。结果与以下结论一致：在这个时间点，3级或更高分级的NT的发生率较低，并且临床反应上没有观察到3级或更高分级的CRS。
实施例3：向复发性或难治性多发性骨髓瘤(MM)受试者施用抗BCMA CAR表达细胞 后进一步评估反应和安全性结局
在实施例2中描述的临床研究中的后续时间点评估受试者的反应和安全性结局，其中某些另外的受试者接受不同剂量的细胞。
A.受试者和治疗
在该实施例中呈现的时间点的分析基于对总计44名受试者的评估，这些受试者已被施用抗BCMA CAR表达细胞。所述44名受试者是患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)的成人受试者，他们已接受过失败的3种或更多种先前治疗(所述3种或更多种先前治疗至少包括(1)自体干细胞移植，(2)单独或组合的蛋白酶体抑制剂和免疫调节剂，以及(3)作为组合疗法的一部分或单一疗法的抗CD38单克隆抗体，在除了受试者不是接受这种治疗的候选者(如通过忌用的方式)之外的每一种情况下)。治疗的受试者包括最后一个治疗线失败且东部肿瘤协作组(ECOG)得分在0与1之间的受试者。受试者不是根据受试者的样品中BCMA表达水平选择的。
在第1天，如下向受试者施用一定剂量的CAR+T细胞：含有5x107个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平1(DL1)、含有1.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2(DL2)、含有3.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2A(DL2A)、或含有4.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3(DL3)。施用后第15天，进行骨髓检查，并在施用后第29天评估疾病。
随时间推移监测受试者的反应，包括客观反应率(ORR)、完全反应(CR)、严格的完全反应(sCR)、部分反应(PR)、非常好的部分反应(VGPR)、微小残留病(MRD)、疾病进展(PD)、疾病稳定(SD)和最小反应(MR)(例如，根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)统一反应标准；Kumar等人(2016)Lancet Oncol 17(8):e328-346)；以及任何不良事件的发展，如严重不良事件(SAE)。在筛选评价时鉴定出主要克隆型的受试者中，通过下一代测序(NGS)评估微小残留病(MRD)。
在施用CAR表达T细胞后第1、5、8、11、15、22、29、60和90天，通过使用对编码抗BCMACAR的载体具有特异性的引物(载体拷贝/μg基因组DNA)对来自受试者的全血样品的基因组DNA制剂进行定量聚合酶链式反应(qPCR)，评估DL1、DL2和DL3群组中的受试者外周血中抗BCMA CAR+T细胞的扩增和长期持久性。在施用CAR+T细胞之前和施用CAR+T细胞后的不同时间点，还测量了受试者的血清样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平。
在所述时间点的全部、DL1、DL2和DL3群组受试者的人口统计学和基线特征示于表E2中。受试者通常患有高度难治性骨髓瘤，其中77％的受试者具有高风险细胞遗传学。接受了桥接疗法的受试者的多于50％在接受抗BCMA CAR+T细胞施用之前展现出疾病进展。如通过血清和尿液M蛋白水平、血清游离轻链(FLC)水平以及在骨髓和髓外浆细胞瘤中的浆细胞的存在所指示，受试者在施用CAR+T细胞之前通常具有高肿瘤负荷。
Figure BDA0003980595070001431
Figure BDA0003980595070001441
所述时间点的全部、DL1、DL2和DL3群组受试者的治疗史示于表E3中。
Figure BDA0003980595070001442
SCT，干细胞移植；IMiD，免疫调节药物；PI，蛋白酶体抑制剂。
B.治疗后的安全性和反应结局
表E4示出了在全部、DL1、DL2和DL3群组中发生的严重不良事件(SAE)。
Figure BDA0003980595070001443
CRS，细胞因子释放综合征；DLT，剂量限制性毒性；SAE，严重不良事件；AESI，特别关注的不良事件。
a肺炎、阑尾炎、弯曲菌感染、蜂窝组织炎、败血症。
b意识模糊状态、激动、无反射、嗜睡、意识状态低迷。
DL3群组中的一名受试者发生了4级CRS的DLT，所述受试者有与骨髓瘤相关的慢性肾脏疾病史，伴有意识模糊的神经病学事件以及缺乏咽反射、急性肾损伤和院内感染形式的克雷伯氏肺炎杆菌败血症，并在施用CAR+T细胞后第19天死亡。
表E5显示了全部、DL1、DL2和DL3群组在CRS和神经病学事件方面的安全性结局。神经病学事件通常与CRS相关。1级或2级CRS发生在全部受试者的71％中，而3级或更高分级的CRS仅在全部受试者的9％中观察到。一名受试者经历了4级的无反射的神经病学事件。一名具有CRS事件的受试者需要高剂量血管加压药。
Figure BDA0003980595070001444
Figure BDA0003980595070001451
CRS，细胞因子释放综合征。
关于延长的血细胞减少症，例如，如根据实验室评估所确定的，在18％的受试者中发生了在淋巴细胞清除化疗开始之前3级或4级贫血和血小板减少症。28/42名受试者(67％)发生了持续时间超过29天的3级或4级血细胞减少症。在3个月的随访中，17/24名受试者(71％)的血细胞减少症在第3个月时消退至≤2级。在一些情况下，到消退的中值时间对于嗜中性粒细胞减少症为2.1个月，对于贫血为2.2个月并且对于血小板减少症为3.4个月，其中在一些情况下，在实验室评估的1周内没有输血的情况下或在实验室评估的1周内没有生长因子支持的情况下(培非格司亭，2周)，消退被定义为2级或更低。
在全部、DL1、DL2和DL3群组之中基于最佳总体反应的客观反应率(ORR)示于图1中。在所有受试者中，观察到82％的ORR，其中受试者的48％展现出比VGPR更好的反应。在最低剂量水平的5x107个总CAR表达T细胞(DL1)中观察到43％的完全反应(CR)率。DL3群组中的一名受试者由于缺少第29天基线后反应评价而无法评价功效。表E6示出了通过下一代测序(NGS)在21名可以进行MRD评价的受试者中进行的微小残留病(MRD)评估的结果。
Figure BDA0003980595070001452
在施用CAR表达T细胞(n＝14)后，在最长的随访时，DL1群组中的受试者随时间而变的反应的评估示于图2中。通常，观察到反应随时间而继续改善，其中14名受试者中的五(5)名(36％)在第29天后显示出反应的加强。在进行MRD评价的九(9)名受试者中有六(6)名在第29天呈MRD阴性(如通过NGS所评估的)，其中一名受试者在第2个月进行MRD评估。
C.持久性
CAR+T细胞在DL1、DL2和DL3群组中的受试者的外周血中的扩增和长期持久性示于图3中。结果与在所有剂量水平(DL1、DL2和DL3)下观察到的CAR+T细胞的稳健扩增一致。通常，在施用了≥150x106个总CAR表达T细胞的剂量(DL2和DL3)的受试者中，观察到过去第2个月增加的持久性。
D.可溶性BCMA
在CAR+T细胞施用之前和施用后不同时间点的受试者血清中可溶性BCMA(sBCMA)水平(ng/mL)示于图4A中。图4B示出了展现出PR或更好的总体反应的受试者(反应者)中和展现出比PR更差的反应的受试者(MR或SD；无反应者)中在CAR+T细胞施用之前(治疗前)的sBCMA水平。在受试者中跨越广泛范围的sBCMA水平观察到反应，并且反应或缺乏反应与sBCMA水平无关。抗BCMA CAR施用后观察到sBCMA水平下降，这与抗BCMA CAR+细胞的肿瘤杀伤活性一致。结果显示，与具有比PR差的总体反应(MR或SD)的受试者相比，在具有PR或更好的总体反应的受试者(PR、VGPR、CR或sCR；反应者)中在第29天或以后观察到较大的sBCMA下降。结果与抗BCMA CAR+T细胞不受高的治疗前sBCMA水平抑制的观察结果一致。
E.结论
结果与以下观察结果一致：响应于施用抗BCMA CAR+细胞(所述细胞表达完全人抗原结合结构域并且是通过制造过程产生的)的高总体反应率(ORR)(82％)在进行大量预治疗的患有复发性/难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)的受试者(77％的受试者具有高风险细胞遗传学)中是高的，所述制造过程产生富集了中央记忆T细胞表型的群体。在所测试的所有剂量水平下观察到所施用的细胞的稳健扩增，并且大约27％的受试者实现了完全反应(CR)或严格的完全反应(sCR)，其中普遍观察到随着时间的推移反应加强。在施用的最低剂量水平(50x106个CAR+T细胞)下观察到CR和sCR的43％高比率。结果也与可管理的毒性特征一致，包括3级或更高分级的CRS(9％)和3级或更高分级神经病学事件(7％)的低比率。在大约71％的受试者中观察到1级或2级CRS，并且在18％的受试者中观察到1级或2级神经病学事件。结果还显示，抗BCMA CAR+T细胞在具有治疗前的高可溶性BCMA水平的受试者中显示出活性。
实施例4：向复发性或难治性多发性骨髓瘤(MM)受试者施用抗BCMA CAR表达细胞 后进一步评估反应和安全性结局
在实施例2和3描述的临床研究中的后续时间点在患者中评估反应和安全性结局，其中某些另外的受试者接受不同剂量的细胞。
A.受试者和治疗
在该实施例中呈现的时间点的分析基于对总计51名受试者的评估，这些受试者已被施用抗BCMA CAR表达细胞。所述51名受试者是患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)的成人受试者，他们已接受过失败的3种或更多种先前治疗(所述3种或更多种先前治疗至少包括(1)自体干细胞移植，(2)蛋白酶体抑制剂，(3)免疫调节剂，和/或(4)抗CD38单克隆抗体，在除了受试者不是接受这种治疗的候选者(如通过忌用的方式)之外的每一种情况下)。
在第1天，如下向受试者施用一定剂量的CAR+T细胞：含有3.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2A(DL2A)、含有4.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3(DL3)、或含有6.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3A(DL3A)。如以上实施例2和3所述，监测受试者并评估反应。
B.治疗后的安全性和反应结局
在评估时，51名受试者已接受过DL2A(n＝19)、DL3(n＝19)和DL3A(n＝13)的抗BCMA CAR表达细胞。中值年龄为61岁(33-77岁)；从诊断起的中值时间为7.0(1.7-23.6)年；并且受试者进行过中值为6(3-18)种先前方案。总体而言，92％的受试者进行过2次免疫调节剂疗法、2次蛋白酶体抑制剂疗法以及抗CD38单克隆抗体疗法，92％的受试者进行过先前自体干细胞移植(ASCT)，96％的受试者是最后一次疗法难治的；61％的受试者进行过桥接疗法(77％的受试者是桥接疗法难治的)。两名受试者具有剂量限制性毒性：在DL2A下3级神经病学事件(NE)持续多于7天，在DL3下4级嗜中性粒细胞减少症持续>28天。一名受试者在输注后53天出现与类固醇诱导的肌病(作为一种促成因素)无关的5级心脏骤停。2％的受试者发生了3/4级细胞因子释放综合征(CRS)(任何分级，92％)；到发作的中值时间和到消退的中值时间分别为2(1-4)天和3(1-10)天。4％的受试者发生了3/4级NE(任何分级，10％)。到发作的中值时间和到消退的中值时间分别为6(1-6)天和5(2-8)天。使用托珠单抗和/或类固醇(78％)、阿那白滞素(14％)和/或血管加压药(6％)治疗CRS/NE。在第29天，21％、55％和44％的受试者发生了3级或更高分级的贫血、嗜中性粒细胞减少症和血小板减少症(到消退至2级或更低分级的任何血细胞减少症的中值时间为≤2.1个月)。14％的受试者发生3级或更高分级感染。评估了总计44名受试者的反应，如表E7所示。未达到中值PFS。在所有剂量水平下均观察到稳健的细胞扩增。
Figure BDA0003980595070001471
对于DL2A、DL3、DL3A和全部，an＝19、19、13和51。
C.结论
结果与以下观察结果一致：响应于施用3.0x108、4.5x108或6.0x108个总抗BCMACAR+T细胞的可管理的安全性和高反应率，其中91％的客观反应率(ORR)，并且39％的受试者实现完全反应(CR)或严格CR(sCR)。观察到随着时间的推移反应加强。
实施例5：向复发性或难治性多发性骨髓瘤(MM)受试者预防性施用白介素-1受体 拮抗剂(IL-1Ra)并施用抗BCMA CAR表达细胞
向患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(MM)的、施用了嵌合抗原受体(CAR)表达T细胞组合物(所示组合物含有表达对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的CAR的自体T细胞)的人受试者预防性施用白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)阿那白滞素(AKR)，以评估对潜在事件(如细胞因子释放综合征(CRS))的发作、发生率和严重程度的作用。
将含有自体T细胞的组合物工程化以表达对BCMA具有特异性的示例性CAR(描述于以上实施例1中)，并将其施用于已接受过3种或更多种先前治疗的患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)的成人受试者。
通过通常如以上实施例2中所述的过程产生所施用的T细胞组合物。所述CAR含有BCMA-55来源的scFv结合结构域、经修饰的IgG来源的CH2-CH3-铰链间隔子、CD28跨膜结构域和细胞内信号传导区(包括串联的4-1BB胞内域和CD3ζ胞内域)，其中优化编码所述CAR的多核苷酸，如实施例1所述。
CAR+T细胞输注前的两天至七天，受试者接受了使用氟达拉滨(flu，30mg/m2/天)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2/天)的淋巴细胞清除化疗(LDC)，持续3天，LDC在CAR+T细胞输注前的至少48小时完成。静脉内施用所述细胞组合物，其中输注日指定为第1天。在第1天，向受试者施用如下剂量的CAR+T细胞：含有4.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3(DL3)或含有6.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3A(DL3A)。具体地，在该实施例所述的研究中，向十四名患者施用含有6.0x108个总CAR+T细胞的单剂量。
受试者在CAR+T细胞输注之前接受了皮下(SC)施用的2个剂量的100mg AKR：在施用抗BCMA CAR表达细胞之前的夜晚施用一个剂量，并且在第1天在施用抗BCMA CAR表达细胞之前3小时施用一个剂量(n＝14)。在施用抗BCMA CAR表达细胞后，受试者再接受四个另外剂量的AKR：连续四天每天施用一次100mg SC AKR的单剂量(第2-5天各一个剂量；例如q24h)。在CRS发作的情况下，每天两次(例如，q12h)施用100mg SC AKR，直到CRS消退。在每天约同一时间施用所述剂量的AKR。在CRS恶化的情况下和/或在神经毒性发作的情况下，遵循毒性管理指南。评价所有接受合格的抗BCMA CAR表达T细胞产品并接受至少1个剂量的预防性AKR的受试者在用阿那白滞素进行预防性治疗后抗BCMA CAR表达T细胞的安全性和耐受性。
施用抗BCMA CAR表达细胞但未用AKR治疗的受试者用作对照组(n＝19)。在AKR治疗组和非AKR治疗组中，先前方案的中值数分别为6和5，并且分别57％和68％的受试者使用了桥接疗法。
根据IMWG统一反应标准确定由Lee(2014)标准分级的细胞因子释放综合征(CRS)的发生率和发作、神经病学事件(NE)、受试者血液中CAR表达细胞的扩增和持久性(例如，药代动力学)、以及对CAR表达T细胞治疗的反应(包括客观反应率(ORR)、完全反应(CR)率或严格完全反应(sCR)率)。对于AKR治疗的受试者，中值随访范围为3.0(1.8-6.2)个月；对于对照受试者，中值随访范围为8.8(5.3-12.2)个月。结果示于图E8中。
观察到AKR预防的使用对NE、感染、巨噬细胞活化综合征/噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(MAS/HLH)、CAR+T细胞扩增或疾病反应的发生率没有不良影响。特别地，在这两组受试者中CRS的总频率相似，但在AKR治疗的受试者中2级CRS事件更少；相对风险(95％CI)＝0.54(0.21，1.38)。这两组均未观察到3级或更高分级的CRS事件。这两组之间的神经病学事件(NE)、3级或更高分级感染和MAS/HLH的发生率也是相似的。在AKR治疗的受试者中，托珠单抗和类固醇的使用在数字上较低。这两组中的CAR+T细胞扩增动力学是相似的。评估所有受试者在两个月时的功效，其中在AKR治疗的受试者中总体反应率(ORR)为100％，在对照受试者中总体反应率为95％。
Figure BDA0003980595070001481
CRS：细胞因子释放综合征；G：分级；HLH：噬血细胞性淋巴组织细胞增生症；LDH：乳酸脱氢酶；MAS：巨噬细胞活化综合征；NE：神经病学事件；S：类固醇；T：托珠单抗；ULN：正常上限。
这些结果与以下发现一致：阿那白滞素预防结合抗BCMA CAR表达T细胞的施用可以降低2级或更高分级的CRS的发生率。
实施例6：向先前用针对MM的BCMA定向疗法治疗的复发性或难治性多发性骨髓瘤 (MM)受试者施用抗BCMA CAR表达细胞
将含有表达对B细胞成熟抗原(BCMA)具有特异性的CAR的自体T细胞的嵌合抗原受体(CAR)表达T细胞组合物施用于患有复发性和/或难治性多发性骨髓瘤(MM)的、先前已接受先前BCMA定向疗法的人受试者。
向患有复发性或难治性(R/R)多发性骨髓瘤(MM)的成人受试者施用含有被工程化以表达对BCMA具有特异性的示例性CAR(描述于以上实施例1中)的自体T细胞的组合物，所述受试者已接受针对MM的先前BCMA定向疗法、根据IMWG反应标准实现至少部分反应(PR)并随后进展。先前BCMA定向疗法可以包括BCMA定向CAR表达T细胞疗法；BCMA定向T细胞接合剂(TCE)，其包括同时结合表面肿瘤细胞抗原和T细胞受体(TCR)复合物组分的抗体，以诱导T细胞介导的对携带目标表面抗原的肿瘤细胞的杀伤；以及BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。对于已接受过先前BCMA定向CAR表达T细胞疗法的受试者，必须在研究开始前至少6个月接受最后一次先前CAR T细胞疗法的施用。接受过先前BCMA定向抗骨髓瘤疗法的受试者无需接受至少3种先前抗骨髓瘤治疗方案，也无需是最后一种抗骨髓瘤方案难治的。
通过通常如以上实施例2中所述的过程产生所施用的T细胞组合物。在一些情况下，对于已接受过先前BCMA定向CAR表达T细胞疗法的受试者，例如，通过用重组BCMA-Fc(在其C末端与IgG的Fc区融合的可溶性人BCMA)进行流式细胞术染色、和/或通过用对含有编码先前BCMA定向CAR的核酸序列的构建体中存在的序列具有特异性的引物或探针进行定量聚合酶链式反应(PCR)，评估受试者的初级T细胞群(例如，从白细胞单采术样品获得)中先前BCMA定向CAR的存在或表达。用于所述疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合的CAR)含有BCMA-55来源的scFv结合结构域、经修饰的IgG来源的CH2-CH3-铰链间隔子、CD28跨膜结构域和细胞内信号传导区(包括串联的4-1BB胞内域和CD3ζ胞内域)，其中优化编码所述CAR的多核苷酸，如实施例1所述。
在一些情况下，对于已接受过先前BCMA定向CAR表达T细胞疗法的受试者，评估所产生的用于施用的细胞组合物(例如，表达实施例1所述的BCMA结合CAR)中先前BCMA定向CAR和/或用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR；描述于实施例1中)的存在、量或数量。在一些情况下，可以通过用重组BCMA-Fc进行流式细胞术染色来检测先前BCMA定向CAR表达细胞以及表达用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR)的细胞的存在、量或数量。在一些情况下，可以通过用对用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR)具有特异性的抗独特型抗体进行的流式细胞术染色来检测表达用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR)的细胞的存在、量或数量。在一些情况下，还通过用引物或探针进行的qPCR来评估用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR)的存在，所述引物或探针对含有编码用于细胞疗法的BCMA结合CAR(例如，新的BCMA结合CAR)的核酸序列的构建体中存在的序列具有特异性。任何这样的量或数量都可以用于确定用于施用的细胞组合物中存在的先前BCMA定向CAR的存在和/或比例，和/或用于确定表达用于细胞疗法的BCMA结合CAR的细胞的剂量。
CAR+T细胞输注前的两天至七天，受试者接受了使用氟达拉滨(flu，30mg/m2/天)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2/天)的淋巴细胞清除化疗(LDC)，持续3天，LDC在CAR+T细胞输注前的至少48小时完成。静脉内施用所述细胞组合物，其中输注日指定为第1天。在第1天，如下向受试者施用一定剂量的CAR+T细胞：含有5x107个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平1(DL1)；含有1.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2(DL2)；含有3.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平2A(DL2A)；含有4.5x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3(DL3)；或含有6.0x108个总CAR+T细胞的单剂量的剂量水平3A(DL3A)。
根据IMWG统一反应标准确定对CAR表达T细胞治疗的反应，包括客观反应率(ORR)、完全反应(CR)率或严格完全反应(sCR)率。还确定了不良事件(AE)的发生率和严重程度以及实验室异常的发生率与严重程度。
实施例7：评估通过示例性制造过程产生的T细胞组合物
在示例性过程中，从收集自50名单独的人受试者的单采术(每名受试者一个单采术)(包括10名健康供体和40名多发性骨髓瘤患者)中产生了含有表达抗BCMA CAR的自体T细胞的50种CAR+T细胞组合物。从单采术样品中选择CD4+和CD8+T细胞，并单独低温保存。然后将细胞解冻，并且将单独的CD4+T细胞和CD8+T细胞以1:1的活CD4+与CD8+细胞的比率组合。刺激组合的CD4+和CD8+T细胞，将其在示例性无血清培养基中用编码CAR的载体转导并扩增，并通过低温保存冷冻，通常如实施例2中所述。
在示例性替代性过程中，通过包括从来自55名单独人癌症受试者的白细胞单采术样品中基于免疫亲和力选择T细胞的过程来产生治疗性T细胞组合物。将混合T细胞进行激活并用编码CAR的病毒载体转导，扩增并低温保存。
将冷冻组合物中的细胞解冻，并通过流式细胞术评估其活力，凋亡标记物(如活性半胱天冬酶3(CAS))的表达，以及CD3、CD4、CD8、CD27、CD28、CCR7、CD45RA和CAR的表面表达。确定CD3+细胞的百分比、组合物中CD3+CAR+细胞中的CAR+凋亡标记物阴性细胞的百分比、以及组合物中中央记忆CD4+CAR+细胞和中央记忆CD8+CAR+细胞的百分比。评估通过制造过程产生的细胞组合物的细胞表型，并且在一些方面，将其与通过替代性过程产生的细胞组合物的细胞表型进行比较。
此实施例的制造过程产生经历所述制造过程的100％的人生物样品中满足某些预定特征的工程化细胞组合物，所述预定特征包括向患者施用的细胞组合物中的表达CAR的细胞的阈值数量。图5A和图5B示出了对于由40名多发性骨髓瘤受试者的样品组单独产生的组合物，分别在组合物中的CD4+CAR+细胞(图5A)中和CD8+CAR+细胞(图5B)中所示表型(基于CD45RA和CCR7表面表达)的细胞的百分比的中值(水平线)、四分位差(框)和1.5x四分位差(须)。图5C和图5D示出了对于由40名多发性骨髓瘤受试者的样品组单独产生的组合物，分别在组合物中的CD4+CAR+细胞(图5C)中和CD8+CAR+细胞(图5D)中所示表型(基于CD27和CD28表面表达)的细胞的百分比的中值(水平线)、四分位差(框)和1.5x四分位差(须)。对于从一系列多发性骨髓瘤患者中获得的个体白细胞单采术样品，使用此示例性过程从此类样品中产生工程化细胞组合物，观察到从激活开始到收获的过程部分的持续时间范围在7天与10天之间，并且这些样品之间的平均持续时间为大约7.5天。进一步确定，在不同样品之间，整个过程中的平均累积群体倍增数为大约7.5。
在这项研究中，在通过示例性过程生产的细胞组合物中的工程化T细胞群包括小于15％的表达凋亡标记物的细胞，并且如与起始样品和与使用示例性替代性过程产生的细胞组合物相比，其富集了中央记忆表型。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施方案例如是为了说明本发明的各个方面。根据本文的描述和传授，对所述组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不背离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践此类变化，并且此类变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
Figure BDA0003980595070001511
Figure BDA0003980595070001521
Figure BDA0003980595070001531
Figure BDA0003980595070001541
Figure BDA0003980595070001551
Figure BDA0003980595070001561
Figure BDA0003980595070001571
Figure BDA0003980595070001581
Figure BDA0003980595070001591
Figure BDA0003980595070001601
Figure BDA0003980595070001611
Figure BDA0003980595070001621
Figure BDA0003980595070001631
Figure BDA0003980595070001641
Figure BDA0003980595070001651
Figure BDA0003980595070001661
Figure BDA0003980595070001671
Figure BDA0003980595070001681
Figure BDA0003980595070001691
Figure BDA0003980595070001701
Figure BDA0003980595070001711
Figure BDA0003980595070001721
Figure BDA0003980595070001731
Figure BDA0003980595070001741
Figure BDA0003980595070001751
Figure BDA0003980595070001761
序列表
<110> 朱诺治疗学股份有限公司
<120> 与用靶向B细胞成熟抗原的嵌合抗原受体工程化的细胞疗法相关的方法和用途
<130> 735042023640
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
<150> 63/008,564
<151> 2020-04-10
<160> 312
<170> 用于Windows的FastSEQ 4.0版
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> (4GS)3接头
<400> 1
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1               5                   10                  15
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 3GS接头
<400> 2
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 3
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BB/CD3 ζ预测的剪接受体位点
<400> 3
gctgagagtc aagttttcca ggtccgccga cgctccagcc t 41
<210> 4
<211> 42
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BB来源的细胞内共信号传导序列
<400> 4
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1               5                   10                  15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
            20                  25                  30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
        35                  40
<210> 5
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BB来源的细胞内共信号传导序列
<400> 5
aagcggggga gaaagaaact gctgtatatt ttcaaacagc cctttatgag acctgtgcag 60
actacccagg aggaagacgg atgcagctgt aggtttcccg aggaagagga aggaggctgt 120
gagctg 126
<210> 6
<211> 126
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 4-1BB来源的细胞内共信号传导序列
<400> 6
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 120
gagctg 126
<210> 7
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 4GS接头
<400> 7
Gly Gly Gly Gly Ser
1               5
<210> 8
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 替代性CO/SSE间隔子
<400> 8
gaatctaagt acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
<210> 9
<211> 1959
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 9
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc cctgaggctg 60
tcttgcgcag ccagcggctt cacctttagc gactactata tgtcctggat cagacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagctcct ctggctccac aatctactat 180
gccgactctg tgaagggccg gtttaccatc agcagagata acgccaagaa ttccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcgattaca ccgaggatta ttggggccag ggcacactgg tgaccgtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg cagcggcgga ggaggctccc agtctgccct gacacagcca 420
gccagcgtgt ccggctctcc cggacagtcc atcacaatct cttgtaccgg ctctagctcc 480
gacgtgggca agtacaacct ggtgtcctgg tatcagcagc cccctggcaa ggcccctaag 540
ctgatcatct acgatgtgaa caagaggcca tctggcgtga gcaatcgctt cagcggctcc 600
aagtctggca ataccgccac actgaccatc agcggcctgc agggcgacga tgaggcagat 660
tactattgtt ctagctacgg cggcagcaga tcctacgtgt tcggcacagg caccaaggtg 720
accgtgctgg aatctaagta cggaccgcct tgtcctcctt gtcccgctcc tcctgttgcc 780
ggaccttccg tgttcctgtt tcctccaaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 840
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaagagg atcccgaggt gcagttcaac 900
tggtatgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagttc 960
cagagcacct acagagtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggattg gctgaacggc 1020
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccta gcagcatcga gaaaaccatc 1080
tccaaggcca agggccagcc aagagagccc caggtttaca cactgcctcc aagccaagag 1140
gaaatgacca agaatcaggt gtccctgaca tgcctggtca agggcttcta cccctccgat 1200
atcgccgtgg aatgggagag caatggccag cctgagaaca actacaagac cacacctcct 1260
gtgctggaca gcgacggcag tttcttcctg tatagtagac tcaccgtgga taaatcaaga 1320
tggcaagagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1380
acccagaaaa gcctgagcct gtctctgggc aagatgttct gggtgctcgt ggtcgttggc 1440
ggagtgctgg cctgttacag cctgctggtt accgtggcct tcatcatctt ttgggtcaag 1500
cggggcagaa agaagctgct ctacatcttc aagcagccct tcatgcggcc cgtgcagacc 1560
acacaagagg aagatggctg ctcctgcaga ttccccgagg aagaagaagg cggctgcgag 1620
ctgagagtga agttcagcag atccgccgac gctccagcct atcagcaggg ccaaaaccag 1680
ctgtacaacg agctgaacct ggggagaaga gaagagtacg acgtgctgga taagcggaga 1740
ggcagagatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga atcctcaaga gggcctgtat 1800
aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaat gaagggcgag 1860
cgcagaagag gcaagggaca cgatggactg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1920
acctatgacg cactgcacat gcaggccctg ccacctaga 1959
<210> 10
<211> 1950
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 10
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caagcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 780
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 840
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 900
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 960
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 1020
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 1080
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 1140
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 1200
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 1260
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 1320
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 1380
agcctgagcc tgtctctggg caagatgttc tgggtgctcg tggtcgttgg cggagtgctg 1440
gcctgttaca gcctgctggt taccgtggcc ttcatcatct tttgggtcaa gcggggcaga 1500
aagaagctgc tctacatctt caagcagccc ttcatgcggc ccgtgcagac cacacaagag 1560
gaagatggct gctcctgcag attccccgag gaagaagaag gcggctgcga gctgagagtg 1620
aagttcagca gatccgccga cgctccagcc tatcagcagg gccaaaacca gctgtacaac 1680
gagctgaacc tggggagaag agaagagtac gacgtgctgg ataagcggag aggcagagat 1740
cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag aatcctcaag agggcctgta taatgagctg 1800
cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga 1860
ggcaagggac acgatggact gtaccagggc ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgac 1920
gcactgcaca tgcaggccct gccacctaga 1950
<210> 11
<211> 1953
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 11
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctggaatcta agtacggacc gccttgtcct ccttgtcccg ctcctcctgt tgccggacct 780
tccgtgttcc tgtttcctcc aaagcctaag gacaccctga tgatcagcag gacccctgaa 840
gtgacctgcg tggtggtgga tgtgtcccaa gaggatcccg aggtgcagtt caactggtat 900
gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccta gagaggaaca gttccagagc 960
acctacagag tggtgtccgt gctgacagtg ctgcaccagg attggctgaa cggcaaagag 1020
tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg cctagcagca tcgagaaaac catctccaag 1080
gccaagggcc agccaagaga gccccaggtt tacacactgc ctccaagcca agaggaaatg 1140
accaagaatc aggtgtccct gacatgcctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1200
gtggaatggg agagcaatgg ccagcctgag aacaactaca agaccacacc tcctgtgctg 1260
gacagcgacg gcagtttctt cctgtatagt agactcaccg tggataaatc aagatggcaa 1320
gagggcaacg tgttcagctg cagcgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1380
aaaagcctga gcctgtctct gggcaagatg ttctgggtgc tcgtggtcgt tggcggagtg 1440
ctggcctgtt acagcctgct ggttaccgtg gccttcatca tcttttgggt caagcggggc 1500
agaaagaagc tgctctacat cttcaagcag cccttcatgc ggcccgtgca gaccacacaa 1560
gaggaagatg gctgctcctg cagattcccc gaggaagaag aaggcggctg cgagctgaga 1620
gtgaagttca gcagatccgc cgacgctcca gcctatcagc agggccaaaa ccagctgtac 1680
aacgagctga acctggggag aagagaagag tacgacgtgc tggataagcg gagaggcaga 1740
gatcctgaaa tgggcggcaa gcccagacgg aagaatcctc aagagggcct gtataatgag 1800
ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga 1860
agaggcaagg gacacgatgg actgtaccag ggcctgagca ccgccaccaa ggatacctat 1920
gacgcactgc acatgcaggc cctgccacct aga 1953
<210> 12
<211> 1974
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 12
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg ggatctagag gtggcggagg atctggcggc 360
ggaggaagcg gaggcggcgg atctcttgaa atggctgaag tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga agaagcctgg cgagagcctg aagatcagct gcaaaggcag cggctacagc 480
ttcaccagct actggatcgg ctgggtccga cagatgcctg gcaaaggcct tgagtggatg 540
ggcatcatct accccggcga cagcgacacc agatacagcc ctagctttca gggccacgtg 600
accatcagcg ccgacaagtc tatcagcacc gcctacctgc agtggtccag cctgaaggcc 660
tctgacaccg ccatgtacta ctgcgccaga tactctggca gcttcgacaa ttggggccag 720
ggcacactgg tcaccgtgtc cagcgagtct aaatacggac cgccttgtcc tccttgtccc 780
gctcctcctg ttgccggacc ttccgtgttc ctgtttcctc caaagcctaa ggacaccctg 840
atgatcagca ggacccctga agtgacctgc gtggtggtgg atgtgtccca agaggatccc 900
gaggtgcagt tcaactggta tgtggacggc gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagcct 960
agagaggaac agttccagag cacctacaga gtggtgtccg tgctgacagt gctgcaccag 1020
gattggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaggtgtcca acaagggcct gcctagcagc 1080
atcgagaaaa ccatctccaa ggccaagggc cagccaagag agccccaggt ttacacactg 1140
cctccaagcc aagaggaaat gaccaagaat caggtgtccc tgacatgcct ggtcaagggc 1200
ttctacccct ccgatatcgc cgtggaatgg gagagcaatg gccagcctga gaacaactac 1260
aagaccacac ctcctgtgct ggacagcgac ggcagtttct tcctgtatag tagactcacc 1320
gtggataaat caagatggca agagggcaac gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaggcc 1380
ctgcacaacc actacaccca gaaaagcctg agcctgtctc tgggcaagat gttctgggtg 1440
ctcgtggtcg ttggcggagt gctggcctgt tacagcctgc tggttaccgt ggccttcatc 1500
atcttttggg tcaagcgggg cagaaagaag ctgctctaca tcttcaagca gcccttcatg 1560
cggcccgtgc agaccacaca agaggaagat ggctgctcct gcagattccc cgaggaagaa 1620
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cagggccaaa accagctgta caacgagctg aacctgggga gaagagaaga gtacgacgtg 1740
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
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Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
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Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
    450                 455                 460
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
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Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
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Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
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    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
    130                 135                 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile
145                 150                 155                 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
                165                 170                 175
Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
        195                 200                 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp
    210                 215                 220
Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225                 230                 235                 240
Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
                245                 250                 255
Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
            260                 265                 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
        275                 280                 285
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
    290                 295                 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
305                 310                 315                 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
                325                 330                 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
            340                 345                 350
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
        355                 360                 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
    370                 375                 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385                 390                 395                 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
                405                 410                 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
            420                 425                 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
        435                 440                 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
    450                 455                 460
Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val
465                 470                 475                 480
Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp
                485                 490                 495
Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
            500                 505                 510
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
        515                 520                 525
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
    530                 535                 540
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
545                 550                 555                 560
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
                565                 570                 575
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
            580                 585                 590
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
        595                 600                 605
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
    610                 615                 620
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
625                 630                 635                 640
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                645                 650
<210> 18
<211> 658
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 18
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
            20                  25                  30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
            100                 105                 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
    130                 135                 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser
145                 150                 155                 160
Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly
                165                 170                 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
            180                 185                 190
Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile
        195                 200                 205
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala
    210                 215                 220
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln
225                 230                 235                 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
                245                 250                 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
            260                 265                 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
        275                 280                 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
    290                 295                 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305                 310                 315                 320
Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
                325                 330                 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
            340                 345                 350
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
        355                 360                 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
    370                 375                 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385                 390                 395                 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
                405                 410                 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
            420                 425                 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
        435                 440                 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
    450                 455                 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val
465                 470                 475                 480
Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr
                485                 490                 495
Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
            500                 505                 510
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
        515                 520                 525
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
    530                 535                 540
Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
545                 550                 555                 560
Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu
                565                 570                 575
Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly
            580                 585                 590
Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
        595                 600                 605
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
    610                 615                 620
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
625                 630                 635                 640
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
                645                 650                 655
Pro Arg
<210> 19
<211> 654
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 19
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
            20                  25                  30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
    50                  55                  60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
                85                  90                  95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
        115                 120                 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
    130                 135                 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145                 150                 155                 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
                165                 170                 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
            180                 185                 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
        195                 200                 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
    210                 215                 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
                245                 250                 255
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            420                 425                 430
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
465                 470                 475                 480
Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile
                485                 490                 495
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Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
    530                 535                 540
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
545                 550                 555                 560
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
                565                 570                 575
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
            580                 585                 590
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
        595                 600                 605
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
    610                 615                 620
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
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Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                645                 650
<210> 20
<211> 653
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BMCA CAR
<400> 20
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
            20                  25                  30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
    50                  55                  60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
                85                  90                  95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
        115                 120                 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
    130                 135                 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145                 150                 155                 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
                165                 170                 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
            180                 185                 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
        195                 200                 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
    210                 215                 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
                245                 250                 255
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
            260                 265                 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
        275                 280                 285
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
    290                 295                 300
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
305                 310                 315                 320
Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
                325                 330                 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
            340                 345                 350
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
        355                 360                 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
    370                 375                 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385                 390                 395                 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
                405                 410                 415
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
            420                 425                 430
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
        435                 440                 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
    450                 455                 460
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
465                 470                 475                 480
Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile
                485                 490                 495
Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr
            500                 505                 510
Met Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln
        515                 520                 525
Pro Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser Arg Val Lys
    530                 535                 540
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
545                 550                 555                 560
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
                565                 570                 575
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
            580                 585                 590
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
        595                 600                 605
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
    610                 615                 620
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
625                 630                 635                 640
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                645                 650
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 21
Tyr Phe Asp Ser Leu
1               5
<210> 22
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 CDR-L1
<400> 22
Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser
1               5                   10
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 CDR-L2
<400> 23
Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser
1               5
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 CDR-L3
<400> 24
Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val
1               5                   10
<210> 25
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23预测的剪接受体位点
<400> 25
ggctgattat tattgtagct catatggagg tagtaggtct t 41
<210> 26
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23预测的剪接受体位点
<400> 26
ctactacatg agctggatcc gccaggctcc agggaagggg c 41
<210> 27
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 27
ctactatatg tcctggatca gacaggcacc tggcaagggc c 41
<210> 28
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 28
ggcagattac tattgttcta gctacggcgg cagcagatcc t 41
<210> 29
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 scFv
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
    130                 135                 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
145                 150                 155                 160
Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly
                165                 170                 175
Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly
            180                 185                 190
Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
        195                 200                 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser
    210                 215                 220
Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Leu
<210> 30
<211> 729
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 scFv
<400> 30
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagtagac 300
ggagactaca cagaggacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaggtgga 360
ggcggttcag gcggaggtgg ctctggcggt ggcggatcgc agtctgccct gactcagcct 420
gcctccgtgt ctgggtctcc tggacagtcg atcactatct cctgcactgg aagcagcagt 480
gatgttggca aatataatct tgtctcctgg taccaacagc ccccaggcaa agcccccaag 540
ctcataattt atgacgtcaa taagcggccc tcaggggttt ctaatcgctt ctctggctcc 600
aagtctggca acacggccac cctgacaatc tctgggctcc agggtgacga cgaggctgat 660
tattattgta gctcatatgg aggtagtagg tcttatgtct tcggaactgg gaccaaggtg 720
accgtccta 729
<210> 31
<211> 729
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 scFv
<400> 31
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc cctgaggctg 60
tcttgcgcag ccagcggctt cacctttagc gactactata tgtcctggat cagacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagctcct ctggctccac aatctactat 180
gccgactctg tgaagggccg gtttaccatc agcagagata acgccaagaa ttccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcgattaca ccgaggatta ttggggccag ggcacactgg tgaccgtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg cagcggcgga ggaggctccc agtctgccct gacacagcca 420
gccagcgtgt ccggctctcc cggacagtcc atcacaatct cttgtaccgg ctctagctcc 480
gacgtgggca agtacaacct ggtgtcctgg tatcagcagc cccctggcaa ggcccctaag 540
ctgatcatct acgatgtgaa caagaggcca tctggcgtga gcaatcgctt cagcggctcc 600
aagtctggca ataccgccac actgaccatc agcggcctgc agggcgacga tgaggcagat 660
tactattgtt ctagctacgg cggcagcaga tcctacgtgt tcggcacagg caccaaggtg 720
accgtgctg 729
<210> 32
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 VH链
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 33
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 VL链
<400> 33
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr
            20                  25                  30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
        35                  40                  45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65                  70                  75                  80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
                85                  90                  95
Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
            100                 105                 110
<210> 34
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23、-26 CDR-H1
<400> 34
Asp Tyr Tyr Met Ser
1               5
<210> 35
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23、-26 CDR-H2
<400> 35
Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1               5                   10                  15
Gly
<210> 36
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-23 CDR-H3
<400> 36
Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr
1               5
<210> 37
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-H1
<400> 37
Asp Tyr Ala Met Ser
1               5
<210> 38
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-H2
<400> 38
Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala Ser
1               5                   10                  15
Val Lys Gly
<210> 39
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-H3
<400> 39
Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr
1               5
<210> 40
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L1
<400> 40
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala
1               5                   10
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L2
<400> 41
Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser
1               5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 CDR-L3
<400> 42
Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln Thr
1               5
<210> 43
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点
<400> 43
ctatgccatg tcctggttca ggcaggcacc aggcaagggc c 41
<210> 44
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点
<400> 44
gtccgcctct gtgggcgata gggtgaccgt gacatgtcgc g 41
<210> 45
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点
<400> 45
gtgggcttta tccgctctaa ggcctacggc ggcaccacag a 41
<210> 46
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点
<400> 46
gtgacatgtc gcgcctccca gggcatctct aactacctgg c 41
<210> 47
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点
<400> 47
tacagcgcct ccaccctgca gagcggagtg ccctcccggt t 41
<210> 48
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 48
ctatgccatg tcctggttca agcaggcacc aggcaagggc c 41
<210> 49
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 scFv序列
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65                  70                  75                  80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu
    130                 135                 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145                 150                 155                 160
Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala
                165                 170                 175
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
            180                 185                 190
Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile
        195                 200                 205
Asp Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser
    210                 215                 220
Tyr Thr Ser Arg Gln Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
225                 230                 235                 240
<210> 50
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 scFV
<400> 50
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
<210> 51
<211> 720
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 scFV (O/SSE)
<400> 51
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caagcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
<210> 52
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 VH链
<400> 52
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
            20                  25                  30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
    50                  55                  60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65                  70                  75                  80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                85                  90                  95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 53
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-25 VL链
<400> 53
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
    50                  55                  60
Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
            100                 105
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 CDR-H3
<400> 54
Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile
1               5
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 CDR-L1
<400> 55
Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val His
1               5                   10
<210> 56
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 CDR-L2
<400> 56
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser
1               5
<210> 57
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 CDR-L3
<400> 57
His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His Tyr Val
1               5                   10
<210> 58
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 scFv序列
<400> 58
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
    130                 135                 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile
145                 150                 155                 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
                165                 170                 175
Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
            180                 185                 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
        195                 200                 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp
    210                 215                 220
Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225                 230                 235                 240
Leu
<210> 59
<211> 723
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 scFV
<400> 59
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctg 723
<210> 60
<211> 723
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 scFV (O/SSE)
<400> 60
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc tctgaggctg 60
agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgtcttac atcagctcct ctggcagcac aatctactat 180
gccgactccg tgaagggcag gttcaccatc tctcgcgata acgccaagaa tagcctgtat 240
ctgcagatga actccctgcg ggccgaggat acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcccccctt cctttgatat ctggggccag ggcacaatgg tgaccgtgag ctccggagga 360
ggaggatccg gcggaggagg ctctggcggc ggcggctcta gctatgtgct gacccagcca 420
ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
aataccgcca cactgaccat ctctggagtg gaggcaggcg acgaggcaga ttacttctgt 660
cacctgtggg accggagcag agatcactac gtgttcggca caggcaccaa gctgaccgtg 720
ctg 723
<210> 61
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 VH链
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
        35                  40                  45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Met Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 62
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-26 VL链
<400> 62
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
            20                  25                  30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
        35                  40                  45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
    50                  55                  60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65                  70                  75                  80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His
                85                  90                  95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
            100                 105
<210> 63
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1
<400> 63
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
1               5
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1
<400> 64
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly
1               5                   10
<210> 65
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1
<400> 65
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
1               5
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H1
<400> 66
Ser Tyr Trp Ile Gly
1               5
<210> 67
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2
<400> 67
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1               5
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2
<400> 68
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg
1               5                   10
<210> 69
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2
<400> 69
Tyr Pro Gly Asp Ser Asp
1               5
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H2
<400> 70
Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 71
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H3
<400> 71
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn
1               5
<210> 72
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-H3
<400> 72
Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn
1               5
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L1
<400> 73
Ser Ser Asn Ile Gly Ser His Ser
1               5
<210> 74
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L1
<400> 74
Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His Ser Val Asn
1               5                   10
<210> 75
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L2
<400> 75
Thr Asn Asn
1
<210> 76
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L2
<400> 76
Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser
1               5
<210> 77
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 CDR-L3
<400> 77
Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Gly Leu Val
1               5                   10
<210> 78
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52预测的剪接受体位点
<400> 78
ctggccatca gtggcctcca gtctgaggat gaggctgatt a 41
<210> 79
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52预测的剪接受体位点
<400> 79
agatacagcc cgtccttcca aggccacgtc accatctcag c 41
<210> 80
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 80
ctggctattt ctggactgca gagcgaggac gaggccgact a 41
<210> 81
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 81
agatacagcc ctagctttca gggccacgtg accatcagcg c 41
<210> 82
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 scFv
<400> 82
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt gcagtctgga 420
gcagaggtga aaaagcccgg ggagtctctg aagatctcct gtaagggttc tggatacagc 480
tttaccagct actggatcgg ctgggtgcgc cagatgcccg ggaaaggcct ggagtggatg 540
gggatcatct atcctggtga ctctgatacc agatacagcc cgtccttcca aggccacgtc 600
accatctcag ctgacaagtc catcagcact gcctacctgc agtggagcag cctgaaggcc 660
tcggacaccg ccatgtatta ctgtgcgcgc tactctggtt ctttcgataa ctggggtcaa 720
ggtactctgg tgaccgtctc ctca 744
<210> 83
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 scFv
<400> 83
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
            20                  25                  30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
            100                 105                 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
        115                 120                 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
    130                 135                 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser
145                 150                 155                 160
Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly
                165                 170                 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
            180                 185                 190
Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile
        195                 200                 205
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala
    210                 215                 220
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln
225                 230                 235                 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
                245
<210> 84
<211> 744
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 scFv (O/SSE)
<400> 84
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg ggatctagag gtggcggagg atctggcggc 360
ggaggaagcg gaggcggcgg atctcttgaa atggctgaag tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga agaagcctgg cgagagcctg aagatcagct gcaaaggcag cggctacagc 480
ttcaccagct actggatcgg ctgggtccga cagatgcctg gcaaaggcct tgagtggatg 540
ggcatcatct accccggcga cagcgacacc agatacagcc ctagctttca gggccacgtg 600
accatcagcg ccgacaagtc tatcagcacc gcctacctgc agtggtccag cctgaaggcc 660
tctgacaccg ccatgtacta ctgcgccaga tactctggca gcttcgacaa ttggggccag 720
ggcacactgg tcaccgtgtc cagc 744
<210> 85
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VH链
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
    50                  55                  60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
            100                 105                 110
Thr Val Ser Ser
        115
<210> 86
<211> 350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VH链
<400> 86
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gcgctactct 300
ggttctttcg ataactgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctcagc 350
<210> 87
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VH链 (O/SSE)
<400> 87
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60
agctgcaaag gcagcggcta cagcttcacc agctactgga tcggctgggt ccgacagatg 120
cctggcaaag gccttgagtg gatgggcatc atctaccccg gcgacagcga caccagatac 180
agccctagct ttcagggcca cgtgaccatc agcgccgaca agtctatcag caccgcctac 240
ctgcagtggt ccagcctgaa ggcctctgac accgccatgt actactgcgc cagatactct 300
ggcagcttcg acaattgggg ccagggcaca ctggtcaccg tgtccagc 348
<210> 88
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VL链
<400> 88
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
            20                  25                  30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
        35                  40                  45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
    50                  55                  60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65                  70                  75                  80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105                 110
<210> 89
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VL链
<400> 89
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 90
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52 VL链 (O/SSE)
<400> 90
agctatgagc tgacacagcc tccaagcgcc tctggcacac ctggacagcg agtgacaatg 60
agctgtagcg gcaccagcag caacatcggc agccacagcg tgaactggta tcagcagctg 120
cctggcacag cccctaaact gctgatctac accaacaacc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcaca agcgccagcc tggctatttc tggactgcag 240
agcgaggacg aggccgacta ttattgtgcc gcctgggacg gctctctgaa cggccttgtt 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctg gga 333
<210> 91
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA结合表位1
<400> 91
Gln Asn Glu Tyr Phe
1               5
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA结合表位2
<400> 92
Cys Ile Pro Cys Gln Leu
1               5
<210> 93
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-52-scFV-mFc BCMA结合表位3
<400> 93
Cys Gln Arg Tyr Cys
1               5
<210> 94
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1
<400> 94
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr
1               5
<210> 95
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1
<400> 95
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val Tyr
1               5                   10
<210> 96
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1
<400> 96
Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
1               5
<210> 97
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H1
<400> 97
Asp Tyr Tyr Val Tyr
1               5
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2
<400> 98
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
1               5
<210> 99
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2
<400> 99
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn
1               5                   10
<210> 100
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2
<400> 100
Asn Pro Asn Ser Gly Gly
1               5
<210> 101
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H2
<400> 101
Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
<210> 102
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H3
<400> 102
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr
1               5                   10
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-H3
<400> 103
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr
1               5
<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L1
<400> 104
Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp
1               5
<210> 105
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L1
<400> 105
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly
1               5
<210> 106
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L2
<400> 106
Glu Asp Ser
1
<210> 107
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L2
<400> 107
Glu Asp Ser Lys Arg Pro Ser
1               5
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 CDR-L3
<400> 108
Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val
1               5                   10
<210> 109
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55预测的剪接受体位点
<400> 109
gccctcaggg gtttctaatc gcttctctgg ctccaagtct g 41
<210> 110
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55预测的剪接受体位点
<400> 110
cgaggctgat tattactgca gctcaaatac aagaagcagc a 41
<210> 111
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 111
cgaggccgat tactactgca gcagcaacac ccggtccagc a 41
<210> 112
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55预测的剪接受体位点 (O/SSE)
<400> 112
gcccagcggc gtgtccaata gattcagcgg cagcaagagc g 41
<210> 113
<211> 732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 scFv
<400> 113
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt 360
ggatccctcg agatggccga agtgcagctg gtgcagtctg gggctgagat gaagaagcct 420
ggggcctcac tgaagctctc ctgcaaggct tctggataca ccttcatcga ctactatgta 480
tactggatgc gacaggcccc tggacaaggg cttgagtcca tgggatggat caaccctaac 540
agtggtggca caaactatgc acagaagttt cagggcaggg tcaccatgac cagggacacg 600
tccatcagca cagcctacat ggagctgagc aggctgagat ctgacgacac cgccatgtat 660
tactgtgcgc gctcccagcg tgacggttac atggattact ggggtcaagg tactctggtg 720
accgtctcct ca 732
<210> 114
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 scFv
<400> 114
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
            20                  25                  30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
    50                  55                  60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
                85                  90                  95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
        115                 120                 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
    130                 135                 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145                 150                 155                 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
                165                 170                 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
            180                 185                 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
        195                 200                 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
    210                 215                 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ser
<210> 115
<211> 732
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 scFv (O/SSE)
<400> 115
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 180
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 240
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 300
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 360
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 420
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 480
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 540
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 600
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 660
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 720
accgtgtcca gc 732
<210> 116
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VH链
<400> 116
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
            20                  25                  30
Tyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
            100                 105                 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 117
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VH链
<400> 117
gaagtgcagc tggtgcagtc tggggctgag atgaagaagc ctggggcctc actgaagctc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcatc gactactatg tatactggat gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtc catgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac accgccatgt attactgtgc gcgctcccag 300
cgtgacggtt acatggatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 118
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VH链 (O/SSE)
<400> 118
gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgag atgaagaaac ctggcgcctc tctgaagctg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcatc gactactacg tgtactggat gcggcaggcc 120
cctggacagg gactcgaatc tatgggctgg atcaacccca atagcggcgg caccaattac 180
gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg accagagaca ccagcatcag caccgcctac 240
atggaactga gccggctgag atccgacgac accgccatgt actactgcgc cagatctcag 300
cgcgacggct acatggatta ttggggccag ggaaccctgg tcaccgtgtc cagc 354
<210> 119
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VL链
<400> 119
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1               5                   10                  15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
            20                  25                  30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
        35                  40                  45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
    50                  55                  60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65                  70                  75                  80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
                85                  90                  95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
            100                 105
<210> 120
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VL链
<400> 120
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc ta 312
<210> 121
<211> 312
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55 VL链 (O/SSE)
<400> 121
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 180
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 240
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 300
ctgacagtgc tg 312
<210> 122
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA结合表位1
<400> 122
Met Leu Met Ala Gly
1               5
<210> 123
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA结合表位2
<400> 123
Tyr Phe Asp Ser Leu Leu
1               5
<210> 124
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-55-scFV-mFc BCMA结合表位3
<400> 124
Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu
1               5                   10
<210> 125
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C1 VH链
<400> 125
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
            20                  25                  30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
    50                  55                  60
Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser
        115
<210> 126
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C1 VH-VL scFv
<400> 126
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
            20                  25                  30
Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
    50                  55                  60
Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
            100                 105                 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala
    130                 135                 140
Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser
145                 150                 155                 160
Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
                165                 170                 175
Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
            180                 185                 190
Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
        195                 200                 205
Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys
    210                 215                 220
Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu
225                 230                 235                 240
Glu Ile Lys
<210> 127
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C1 VL链
<400> 127
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
            20                  25                  30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
                85                  90                  95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
            100                 105                 110
<210> 128
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C1 VL-VH scFv
<400> 128
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
            20                  25                  30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
                85                  90                  95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile
        115                 120                 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val
    130                 135                 140
Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile
145                 150                 155                 160
Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp
                165                 170                 175
Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg Gly
            180                 185                 190
Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln
        195                 200                 205
Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu
    210                 215                 220
Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr
225                 230                 235                 240
Val Ser Ser
<210> 129
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C2 VH-VL scFv
<400> 129
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
            20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met
        35                  40                  45
Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly
        115                 120                 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Val Met Thr Gln Ser
    130                 135                 140
His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys
145                 150                 155                 160
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys
                165                 170                 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr
            180                 185                 190
Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe
        195                 200                 205
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr
    210                 215                 220
Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
225                 230                 235                 240
Leu Asp Ile Lys
<210> 130
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C2 VL-VH scFv
<400> 130
Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
            20                  25                  30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Gly Gly Gly Gly Ser
            100                 105                 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ile Gln Leu Val Gln
        115                 120                 125
Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Leu Ser Cys
    130                 135                 140
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe Gly Met Asn Trp Val Lys
145                 150                 155                 160
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met Ala Trp Ile Asn Thr Tyr
                165                 170                 175
Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe Lys Gly Arg Phe Ala Phe
            180                 185                 190
Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu
        195                 200                 205
Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Arg Gly Glu Ile Tyr
    210                 215                 220
Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225                 230                 235                 240
Thr Val Ser Ala
<210> 131
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C2 VH链
<400> 131
Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Asp Leu Lys Lys Pro Gly Glu
1               5                   10                  15
Thr Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Phe
            20                  25                  30
Gly Met Asn Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Phe Lys Trp Met
        35                  40                  45
Ala Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Ser Tyr Phe Ala Asp Asp Phe
    50                  55                  60
Lys Gly Arg Phe Ala Phe Ser Val Glu Thr Ser Ala Thr Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Glu Ile Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Gly Phe Ala Tyr Trp
            100                 105                 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
        115                 120
<210> 132
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA-C2 VL链
<400> 132
Asp Val Val Met Thr Gln Ser His Arg Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
            20                  25                  30
Val Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala
65                  70                  75                  80
Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys
            100                 105
<210> 133
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BMCA表位
<400> 133
Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu
1               5
<210> 134
<211> 39
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞外结构域间隔子
<400> 134
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1               5                   10                  15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
            20                  25                  30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro
        35
<210> 135
<211> 117
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞外结构域间隔子
<400> 135
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagccc 117
<210> 136
<211> 41
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞内域
<400> 136
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1               5                   10                  15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
            20                  25                  30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
        35                  40
<210> 137
<211> 123
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28胞内域
<400> 137
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 60
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 120
tcc 123
<210> 138
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 138
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
            20                  25
<210> 139
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 139
atgttttggg tgctggtcgt ggtcggaggg gtgctggcct gttacagcct gctggtgaca 60
gtcgctttca tcatcttctg ggtg 84
<210> 140
<211> 84
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28跨膜结构域
<400> 140
atgttctggg tgctcgtggt cgttggcgga gtgctggcct gttacagcct gctggttacc 60
gtggccttca tcatcttttg ggtc 84
<210> 141
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD28TM预测的剪接受体位点
<400> 141
aggggtgctg gcctgttaca gcctgctggt gacagtcgct t 41
<210> 142
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD33信号肽
<400> 142
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1               5                   10                  15
<210> 143
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域
<400> 143
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1               5                   10                  15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
            20                  25                  30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
        35                  40                  45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
    50                  55                  60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65                  70                  75                  80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
                85                  90                  95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            100                 105                 110
<210> 144
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域
<400> 144
agagtcaagt tttccaggtc cgccgacgct ccagcctacc agcaggggca gaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg cagaagggaa gagtacgacg tcctggataa gcggagaggc 120
cgggaccctg agatgggcgg caagcctcgg cggaagaacc cccaggaagg cctgtataac 180
gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240
aggcggggca agggccacga cggcctgtat cagggcctgt ccaccgccac caaggatacc 300
tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc ccaagg 336
<210> 145
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> CD3-ζ来源的细胞内信号传导结构域
<400> 145
agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct ccagcctatc agcagggcca aaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggataa gcggagaggc 120
agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat 180
gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc 240
agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300
tatgacgcac tgcacatgca ggccctgcca cctaga 336
<210> 146
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CD8α信号肽
<400> 146
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala
<210> 147
<211> 183
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<220>
<223> 食蟹猴BCMA; GenBank号EHH60172.1
<400> 147
Met Leu Gln Met Ala Arg Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu His Asp Cys Lys Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Thr Pro
            20                  25                  30
Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Met Thr Asn Ser Val
        35                  40                  45
Lys Gly Met Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu Ile
    50                  55                  60
Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Thr Phe Leu Leu Arg Lys Met Ser
65                  70                  75                  80
Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu Leu
                85                  90                  95
Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Gly Arg Thr Gly Asp Glu Ile
            100                 105                 110
Val Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
        115                 120                 125
Asp Cys Ile Lys Asn Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe Pro
    130                 135                 140
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
145                 150                 155                 160
Asn Asp Tyr Cys Asn Ser Leu Ser Ala Ala Leu Ser Val Thr Glu Ile
                165                 170                 175
Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
            180
<210> 148
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A肽
<400> 148
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1               5                   10                  15
Asn Pro Gly Pro
            20
<210> 149
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> E2A肽
<400> 149
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1               5                   10                  15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
            20
<210> 150
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> EF1a/HTLV启动子正向引物
<400> 150
ctttttcgca acgggtttgc 20
<210> 151
<211> 544
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有HTLV1增强子的EF1α启动子
<400> 151
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctac 544
<210> 152
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A肽
<400> 152
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1               5                   10                  15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
            20
<210> 153
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> F2A肽
<400> 153
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1               5                   10                  15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
            20                  25
<210> 154
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号肽
<400> 154
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1               5                   10                  15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
            20
<210> 155
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> GMCSFRα链信号序列
<400> 155
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 156
<211> 229
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链-CH2-CH3间隔子
<400> 156
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe
1               5                   10                  15
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
            20                  25                  30
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
        35                  40                  45
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
    50                  55                  60
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
                85                  90                  95
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
            100                 105                 110
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
        115                 120                 125
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
    130                 135                 140
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
145                 150                 155                 160
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
                165                 170                 175
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
            180                 185                 190
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
        195                 200                 205
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
    210                 215                 220
Leu Ser Leu Gly Lys
225
<210> 157
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 铰链-CH3间隔子
<400> 157
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1               5                   10                  15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
            20                  25                  30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
        35                  40                  45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
    50                  55                  60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
                85                  90                  95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
            100                 105                 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
        115
<210> 158
<211> 11
<212> PRT
<213> 智人(智人(Homo sapiens))
<220>
<223> 人BCMA表位 (残基17-27)
<400> 158
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg
1               5                   10
<210> 159
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA表位 (残基21-27)
<400> 159
Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg
1               5
<210> 160
<211> 10
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA表位 (残基30-39)
<400> 160
Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg
1               5                   10
<210> 161
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA表位 (残基44-50)
<400> 161
Ser Val Thr Asn Ser Val Lys
1               5
<210> 162
<211> 7
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA表位 (残基8-15)
<400> 162
Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe
1               5
<210> 163
<211> 135
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA变体; GenBank号ABN42510.1
<400> 163
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
            20                  25                  30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Arg Ser Gly Leu Leu
        35                  40                  45
Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu Ile
    50                  55                  60
Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
65                  70                  75                  80
Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe Pro
                85                  90                  95
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
            100                 105                 110
Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu Ile
        115                 120                 125
Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
    130                 135
<210> 164
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA; GenBank号BAB60895.1
<400> 164
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
            20                  25                  30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
        35                  40                  45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
    50                  55                  60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
                85                  90                  95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
            100                 105                 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
        115                 120                 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
    130                 135                 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145                 150                 155                 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
                165                 170                 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
            180
<210> 165
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人BCMA; NCBI号NP_001183.2
<400> 165
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1               5                   10                  15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
            20                  25                  30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
        35                  40                  45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
    50                  55                  60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65                  70                  75                  80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
                85                  90                  95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
            100                 105                 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
        115                 120                 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
    130                 135                 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145                 150                 155                 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
                165                 170                 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
            180
<210> 166
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号肽
<400> 166
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1               5                   10                  15
Gly Ala Tyr Gly
            20
<210> 167
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号序列
<400> 167
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 168
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号序列
<400> 168
atggtgctgc agacacaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 169
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号序列
<400> 169
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctacggc 60
<210> 170
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号序列
<400> 170
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
<210> 171
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG -κ信号序列
<400> 171
atggtgctgc agacacaggt gttcatctcc ctgctgctgt ggatctctgg agcatacgga 60
<210> 172
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人IgG2 Fc (Uniprot P01859)
<400> 172
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
            100                 105                 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
        115                 120                 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
    130                 135                 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145                 150                 155                 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
                165                 170                 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
            180                 185                 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
        195                 200                 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
    210                 215                 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225                 230                 235                 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
                245                 250                 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
            260                 265                 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
        275                 280                 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
    290                 295                 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305                 310                 315                 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
                325
<210> 173
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 人IgG4 Fc (Uniprot P01861)
<400> 173
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1               5                   10                  15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
            20                  25                  30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
        35                  40                  45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
    50                  55                  60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
                85                  90                  95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
            100                 105                 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
        115                 120                 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
    130                 135                 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145                 150                 155                 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
                165                 170                 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
            180                 185                 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
        195                 200                 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
    210                 215                 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225                 230                 235                 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
                245                 250                 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
            260                 265                 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
        275                 280                 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
    290                 295                 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305                 310                 315                 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
                325
<210> 174
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG4/IgG2 铰链- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3间隔子
<400> 174
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1               5                   10                  15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
            20                  25                  30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
        35                  40                  45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
    50                  55                  60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr
65                  70                  75                  80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
                85                  90                  95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
            100                 105                 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
        115                 120                 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
    130                 135                 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145                 150                 155                 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
                165                 170                 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
            180                 185                 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
        195                 200                 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
    210                 215                 220
Ser Leu Gly Lys
225
<210> 175
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> IgG4/IgG2 铰链- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3间隔子
<400> 175
gaatctaagt acggaccgcc ctgccctccc tgccctgctc ctcctgtggc tggaccaagc 60
gtgttcctgt ttccacctaa gcctaaagat accctgatga tttcccgcac acctgaagtg 120
acttgcgtgg tcgtggacgt gagccaggag gatccagaag tgcagttcaa ctggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtccacaa tgctaagact aaaccccgag aggaacagtt tcagtcaact 240
taccgggtcg tgagcgtgct gaccgtcctg catcaggatt ggctgaacgg gaaggagtat 300
aagtgcaaag tgtctaataa gggactgcct agctccatcg agaaaacaat tagtaaggca 360
aaagggcagc ctcgagaacc acaggtgtat accctgcccc ctagccagga ggaaatgacc 420
aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtc aaaggcttct atccaagtga catcgccgtg 480
gagtgggaat caaatgggca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 540
tctgatggaa gtttctttct gtattccagg ctgaccgtgg ataaatctcg ctggcaggag 600
ggcaacgtgt tctcttgcag tgtcatgcac gaagccctgc acaatcatta tacacagaag 660
tcactgagcc tgtccctggg caaa 684
<210> 176
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>接头
<400> 176
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1               5                   10                  15
Lys Gly
<210> 177
<211> 399
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> MND启动子
<400> 177
tttatttagt ctccagaaaa aggggggaat gaaagacccc acctgtaggt ttggcaagct 60
aggatcaagg ttaggaacag agagacagca gaatatgggc caaacaggat atctgtggta 120
agcagttcct gccccggctc agggccaaga acagttggaa cagcagaata tgggccaaac 180
aggatatctg tggtaagcag ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggtccccag 240
atgcggtccc gccctcagca gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag 300
gacctgaaat gaccctgtgc cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt 360
tcgcgcgctt ctgctccccg agctcaataa aagagccca 399
<210> 178
<211> 554
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 经修饰的EF1α启动子
<400> 178
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctacggctag cgcc 554
<210> 179
<211> 185
<212> PRT
<213> 小鼠(Mus musculus)
<220>
<223> 小鼠BCMA; NCBI号NP_035738.1
<400> 179
Met Ala Gln Gln Cys Phe His Ser Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His
1               5                   10                  15
Ala Cys Lys Pro Cys His Leu Arg Cys Ser Asn Pro Pro Ala Thr Cys
            20                  25                  30
Gln Pro Tyr Cys Asp Pro Ser Val Thr Ser Ser Val Lys Gly Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Leu Trp Ile Phe Leu Gly Leu Thr Leu Val Leu Ser Leu Ala
    50                  55                  60
Leu Phe Thr Ile Ser Phe Leu Leu Arg Lys Met Asn Pro Glu Ala Leu
65                  70                  75                  80
Lys Asp Glu Pro Gln Ser Pro Gly Gln Leu Asp Gly Ser Ala Gln Leu
                85                  90                  95
Asp Lys Ala Asp Thr Glu Leu Thr Arg Ile Arg Ala Gly Asp Asp Arg
            100                 105                 110
Ile Phe Pro Arg Ser Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys Glu
        115                 120                 125
Asp Cys Val Lys Ser Lys Pro Lys Gly Asp Ser Asp His Phe Phe Pro
    130                 135                 140
Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys Thr
145                 150                 155                 160
Gly Asp Tyr Gly Lys Ser Ser Val Pro Thr Ala Leu Gln Ser Val Met
                165                 170                 175
Gly Met Glu Lys Pro Thr His Thr Arg
            180                 185
<210> 180
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 180
cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca a 41
<210> 181
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 181
gggcaacgtg ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg c 41
<210> 182
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 182
cggagtgctg gcctgttaca gcctgctggt taccgtggcc t 41
<210> 183
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 183
gctgagagtg aagttcagca gatccgccga cgctccagcc t 41
<210> 184
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 184
acacctccac tggatcccca agagctggat atcctgaaaa c 41
<210> 185
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 185
accggattcc tcctgatcca agcctggcca gagaacagaa c 41
<210> 186
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 186
acggccagtt tagcctggct gtggtgtctc tgaacatcac c 41
<210> 187
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 187
aagtttcttt ctgtattcca gactgaccgt ggataaatct c 41
<210> 188
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接受体位点
<400> 188
cgccttgtcc tccttgtccc gctcctcctg ttgccggacc t 41
<210> 189
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 189
agtctaaata cggac 15
<210> 190
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 190
tcaactggta tgtgg 15
<210> 191
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 191
accatctcca aggcc 15
<210> 192
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 192
gccccaggtt tacac 15
<210> 193
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 193
tcagcagatc cgccg 15
<210> 194
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 194
ctcctgtgtg aactc 15
<210> 195
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 195
tcggaaagtg tgcaa 15
<210> 196
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 196
cagcacggcc agttt 15
<210> 197
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 197
aaccggggcg agaac 15
<210> 198
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 198
ctggaaggcg agccc 15
<210> 199
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的剪接供体位点
<400> 199
tgttcatgtg agcgg 15
<210> 200
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 优化的SSE IgG4/IgG2 铰链- IgG2/IgG4 CH2- IgG4
CH3间隔子
<400> 200
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
<210> 201
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A肽
<400> 201
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1               5                   10                  15
Pro Gly Pro
<210> 202
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> P2A肽
<400> 202
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1               5                   10                  15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
            20
<210> 203
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>预测的剪接受体位点
<400> 203
cgccttgtcc tccttgtcca gctcctcctg ttgccggacc t 41
<210> 204
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>预测的剪接受体位点
<400> 204
cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca a 41
<210> 205
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>预测的剪接受体位点
<400> 205
accggattcc tcctgattca ggcctggcca gagaacagaa c 41
<210> 206
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 206
cgtctaggta agttt 15
<210> 207
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 207
gaccaaggtg accgt 15
<210> 208
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 208
tgcactggta ccagc 15
<210> 209
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 209
taaactggta ccagc 15
<210> 210
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 210
atctcctgta agggt 15
<210> 211
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 211
ggtcaaggta ctctg 15
<210> 212
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 212
gaggacagta agcgg 15
<210> 213
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 213
ggtcaaggta ctctg 15
<210> 214
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 214
tgcctccgtg tctgc 15
<210> 215
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 215
caccaaggtg accgt 15
<210> 216
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 216
tgaactggta tcagc 15
<210> 217
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 217
atctcttgaa atggt 15
<210> 218
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 218
ggccagggca cactg 15
<210> 219
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 219
gaggacagca agagg 15
<210> 220
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 220
ggccagggaa ccctg 15
<210> 221
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 221
tgccagcgtt agtgc 15
<210> 222
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 222
aatctaagta cggac 15
<210> 223
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 223
tcaactggta cgtgg 15
<210> 224
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 224
acaattagta aggca 15
<210> 225
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 225
accacaggtg tatac 15
<210> 226
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 226
tttccaggtc cgccg 15
<210> 227
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 227
ctgctctgtg agtta 15
<210> 228
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 228
acgcaaagtg tgtaa 15
<210> 229
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 229
caacatggtc agttt 15
<210> 230
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 230
aacagaggtg aaaac 15
<210> 231
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接供体位点
<400> 231
ctggagggtg agcca 15
<210> 232
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>启动子预测的剪接受体位点
<400> 232
tggctccgcc tttttcccga gggtggggga gaaccgtata t 41
<210> 233
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>启动子预测的剪接受体位点
<400> 233
tgaactgcgt ccgccgtcta ggtaagttta aagctcaggt c 41
<210> 234
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>启动子预测的剪接受体位点
<400> 234
ttctgttctg cgccgttaca gatccaagct gtgaccggcg c 41
<210> 235
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 在WPRE的5′处的反向引物
<400> 235
gatatcgaat tcctgcagcc 20
<210> 236
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 间隔子 - 密码子优化
<400> 236
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtccagctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caaa 684
<210> 237
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 237
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1               5                   10
<210> 238
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 间隔子 (IgG4铰链)
<400> 238
gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36
<210> 239
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 间隔子预测的剪接受体位点
<400> 239
aagtttcttt ctgtattcca ggctgaccgt ggataaatct c 41
<210> 240
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 间隔子预测的剪接受体位点
<400> 240
gggcaacgtg ttctcttgca gtgtcatgca cgaagccctg c 41
<210> 241
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽
<400> 241
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1               5                   10                  15
Gly Pro
<210> 242
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽
<400> 242
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1               5                   10                  15
Glu Asn Pro Gly Pro
            20
<210> 243
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽
<400> 243
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1               5                   10                  15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
            20
<210> 244
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽
<400> 244
ctcgagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggcccta gg 72
<210> 245
<211> 72
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> T2A肽
<400> 245
cttgaaggtg gtggcgaagg cagaggcagc ctgcttacat gcggagatgt ggaagagaac 60
cccggaccta ga 72
<210> 246
<211> 357
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的EGFR (tEGFR)序列
<400> 246
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1               5                   10                  15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly
            20                  25                  30
Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe
        35                  40                  45
Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala
    50                  55                  60
Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu
65                  70                  75                  80
Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile
                85                  90                  95
Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu
            100                 105                 110
Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala
        115                 120                 125
Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu
    130                 135                 140
Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr
145                 150                 155                 160
Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys
                165                 170                 175
Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly
            180                 185                 190
Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu
        195                 200                 205
Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys
    210                 215                 220
Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu
225                 230                 235                 240
Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met
                245                 250                 255
Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala
            260                 265                 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
        275                 280                 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
    290                 295                 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305                 310                 315                 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
                325                 330                 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
            340                 345                 350
Ile Gly Leu Phe Met
        355
<210> 247
<211> 1074
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的EGFR (tEGFR)序列
<400> 247
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atcccacgca aagtgtgtaa cggaataggt attggtgaat ttaaagactc actctccata 120
aatgctacga atattaaaca cttcaaaaac tgcacctcca tcagtggcga tctccacatc 180
ctgccggtgg catttagggg tgactccttc acacatactc ctcctctgga tccacaggaa 240
ctggatattc tgaaaaccgt aaaggaaatc acagggtttt tgctgattca ggcttggcct 300
gaaaacagga cggacctcca tgcctttgag aacctagaaa tcatacgcgg caggaccaag 360
caacatggtc agttttctct tgcagtcgtc agcctgaaca taacatcctt gggattacgc 420
tccctcaagg agataagtga tggagatgtg ataatttcag gaaacaaaaa tttgtgctat 480
gcaaatacaa taaactggaa aaaactgttt gggacctccg gtcagaaaac caaaattata 540
agcaacagag gtgaaaacag ctgcaaggcc acaggccagg tctgccatgc cttgtgctcc 600
cccgagggct gctggggccc ggagcccagg gactgcgtct cttgccggaa tgtcagccga 660
ggcagggaat gcgtggacaa gtgcaacctt ctggagggtg agccaaggga gtttgtggag 720
aactctgagt gcatacagtg ccacccagag tgcctgcctc aggccatgaa catcacctgc 780
acaggacggg gaccagacaa ctgtatccag tgtgcccact acattgacgg cccccactgc 840
gtcaagacct gcccggcagg agtcatggga gaaaacaaca ccctggtctg gaagtacgca 900
gacgccggcc atgtgtgcca cctgtgccat ccaaactgca cctacggatg cactgggcca 960
ggtcttgaag gctgtccaac gaatgggcct aagatcccgt ccatcgccac tgggatggtg 1020
ggggccctcc tcttgctgct ggtggtggcc ctggggatcg gcctcttcat gtga 1074
<210> 248
<211> 1074
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的EGFR (tEGFR)序列 (O/SSE)
<400> 248
atgctgctcc tcgtgacaag cctgctcctg tgtgaactcc ctcatccagc ttttctgctc 60
attcctcgga aagtgtgcaa cggcatcggc atcggagagt tcaaggacag cctgagcatc 120
aatgccacca acatcaagca cttcaagaat tgcaccagca tcagcggcga cctgcacatt 180
ctgcctgtgg cctttagagg cgacagcttc acccacacac ctccactgga tccccaagag 240
ctggatatcc tgaaaaccgt gaaagagatt accggattcc tcctgatcca agcctggcca 300
gagaacagaa ccgatctgca cgccttcgag aacctcgaga tcatcagagg ccggaccaaa 360
cagcacggcc agtttagcct ggctgtggtg tctctgaaca tcaccagtct gggcctgaga 420
agcctgaaag aaatctccga cggcgacgtg atcatctccg gaaacaagaa cctgtgctac 480
gccaacacca tcaactggaa gaagctgttc ggcacctccg gccagaaaac aaagatcatc 540
tctaaccggg gcgagaacag ctgcaaggcc accggacaag tttgtcacgc cctgtgtagc 600
cctgaaggct gttggggacc cgaacctaga gactgtgtgt cctgccggaa tgtgtcccgg 660
ggcagagaat gtgtggataa gtgcaacctg ctggaaggcg agccccgcga gtttgtggaa 720
aacagcgagt gcatccagtg tcaccccgag tgtctgcccc aggccatgaa cattacatgc 780
accggcagag gccccgacaa ctgtattcag tgcgcccact acatcgacgg ccctcactgc 840
gtgaaaacat gtccagctgg cgtgatggga gagaacaaca ccctcgtgtg gaagtatgcc 900
gacgccggac atgtgtgcca cctgtgtcac cctaattgca cctacggctg taccggacct 960
ggcctggaag gatgccctac aaacggccct aagatcccca gcattgccac cggaatggtt 1020
ggagccctgc tgcttctgtt ggtggtggcc ctcggaatcg gcctgttcat gtga 1074
<210> 249
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的标记物预测的剪接受体位点
<400> 249
actcctcctc tggatccaca ggaactggat attctgaaaa c 41
<210> 250
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的标记物预测的剪接受体位点
<400> 250
acagggtttt tgctgattca ggcttggcct gaaaacagga c 41
<210> 251
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的标记物预测的剪接受体位点
<400> 251
atggtcagtt ttctcttgca gtcgtcagcc tgaacataac a 41
<210> 252
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 截短的标记物预测的剪接供体位点
<400> 252
tcttcatgtg agcgg 15
<210> 253
<211> 589
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 土拨鼠肝炎病毒 (WHP)
转录后调节元件 (WPRE)
<400> 253
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589
<210> 254
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 预测的剪接位点
<400> 254
tcaattggta cgtgg 15
<210> 255
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 接头
<400> 255
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1               5                   10                  15
Ser Leu Glu Met Ala
            20
<210> 256
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 阿那白滞素
<400> 256
Met Arg Pro Ser Gly Arg Lys Ser Ser Lys Met Gln Ala Phe Arg Ile
1               5                   10                  15
Trp Asp Val Asn Gln Lys Thr Phe Tyr Leu Arg Asn Asn Gln Leu Val
            20                  25                  30
Ala Gly Tyr Leu Gln Gly Pro Asn Val Asn Leu Glu Glu Lys Ile Asp
        35                  40                  45
Val Val Pro Ile Glu Pro His Ala Leu Phe Leu Gly Ile His Gly Gly
    50                  55                  60
Lys Met Cys Leu Ser Cys Val Lys Ser Gly Asp Glu Thr Arg Leu Gln
65                  70                  75                  80
Leu Glu Ala Val Asn Ile Thr Asp Leu Ser Glu Asn Arg Lys Gln Asp
                85                  90                  95
Lys Arg Phe Ala Phe Ile Arg Ser Asp Ser Gly Pro Thr Thr Ser Phe
            100                 105                 110
Glu Ser Ala Ala Cys Pro Gly Trp Phe Leu Cys Thr Ala Met Glu Ala
        115                 120                 125
Asp Gln Pro Val Ser Leu Thr Asn Met Pro Asp Glu Gly Val Met Val
    130                 135                 140
Thr Lys Phe Tyr Phe Gln Glu Asp Glu
145                 150
<210> 257
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L1
<400> 257
Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His
1               5                   10                  15
<210> 258
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L2
<400> 258
Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
1               5
<210> 259
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-L3
<400> 259
Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr
1               5
<210> 260
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H1
<400> 260
Asp Tyr Ser Ile Asn
1               5
<210> 261
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H2
<400> 261
Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg
1               5                   10                  15
Gly
<210> 262
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDR-H3
<400> 262
Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
1               5
<210> 263
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA CAR
<400> 263
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu
            20                  25                  30
Ala Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu
        35                  40                  45
Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys
    50                  55                  60
Pro Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln
65                  70                  75                  80
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
                85                  90                  95
Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr
            100                 105                 110
Cys Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys
        115                 120                 125
Leu Glu Ile Lys Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly
    130                 135                 140
Glu Gly Ser Thr Lys Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu
145                 150                 155                 160
Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
                165                 170                 175
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly
            180                 185                 190
Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro
        195                 200                 205
Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr
    210                 215                 220
Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp
225                 230                 235                 240
Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
                245                 250                 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr
            260                 265                 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
        275                 280                 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
    290                 295                 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
305                 310                 315                 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
                325                 330                 335
Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
            340                 345                 350
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
        355                 360                 365
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
    370                 375                 380
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
385                 390                 395                 400
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
                405                 410                 415
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
            420                 425                 430
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
        435                 440                 445
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
    450                 455                 460
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
465                 470                 475                 480
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490
<210> 264
<211> 1485
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA CAR
<400> 264
atggcactcc ccgtcaccgc ccttctcttg cccctcgccc tgctgctgca tgctgccagg 60
cccgacattg tgctcactca gtcacctccc agcctggcca tgagcctggg aaaaagggcc 120
accatctcct gtagagccag tgagtccgtc acaatcttgg ggagccatct tattcactgg 180
tatcagcaga agcccgggca gcctccaacc cttcttattc agctcgcgtc aaacgtccag 240
acgggtgtac ctgccagatt ttctggtagc gggtcccgca ctgattttac actgaccata 300
gatccagtgg aagaagacga tgtggccgtg tattattgtc tgcagagcag aacgattcct 360
cgcacatttg gtgggggtac taagctggag attaagggaa gcacgtccgg ctcagggaag 420
ccgggctccg gcgagggaag cacgaagggg caaattcagc tggtccagag cggacctgag 480
ctgaaaaaac ccggcgagac tgttaagatc agttgtaaag catctggcta taccttcacc 540
gactacagca taaattgggt gaaacgggcc cctggaaagg gcctcaaatg gatgggttgg 600
atcaataccg aaactaggga gcctgcttat gcatatgact tccgcgggag attcgccttt 660
tcactcgaga catctgcctc tactgcttac ctccaaataa acaacctcaa gtatgaagat 720
acagccactt acttttgcgc cctcgactat agttacgcca tggactactg gggacaggga 780
acctccgtta ccgtcagttc cgcggccgca accacaacac ctgctccaag gccccccaca 840
cccgctccaa ctatagccag ccaaccattg agcctcagac ctgaagcttg caggcccgca 900
gcaggaggcg ccgtccatac gcgaggcctg gacttcgcgt gtgatattta tatttgggcc 960
cctttggccg gaacatgtgg ggtgttgctt ctctcccttg tgatcactct gtattgtaag 1020
cgcgggagaa agaagctcct gtacatcttc aagcagcctt ttatgcgacc tgtgcaaacc 1080
actcaggaag aagatgggtg ttcatgccgc ttccccgagg aggaagaagg agggtgtgaa 1140
ctgagggtga aattttctag aagcgccgat gctcccgcat atcagcaggg tcagaatcag 1200
ctctacaatg aattgaatct cggcaggcga gaagagtacg atgttctgga caagagacgg 1260
ggcagggatc ccgagatggg gggaaagccc cggagaaaaa atcctcagga ggggttgtac 1320
aatgagctgc agaaggacaa gatggctgaa gcctatagcg agatcggaat gaaaggcgaa 1380
agacgcagag gcaaggggca tgacggtctg taccagggtc tctctacagc caccaaggac 1440
acttatgatg cgttgcatat gcaagccttg ccaccccgct aatga 1485
<210> 265
<211> 495
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 265
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe
        35                  40                  45
Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Gly Val Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Ala Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg
        115                 120                 125
Asp Tyr Glu Phe Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
145                 150                 155                 160
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr
                165                 170                 175
Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
            180                 185                 190
Arg Glu Gly Val Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr
        195                 200                 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
    210                 215                 220
Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala
225                 230                 235                 240
Ala Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp
                245                 250                 255
Tyr Glu Phe Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser
            260                 265                 270
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
        275                 280                 285
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
    290                 295                 300
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
305                 310                 315                 320
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
                325                 330                 335
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
            340                 345                 350
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
        355                 360                 365
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
    370                 375                 380
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
385                 390                 395                 400
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
                405                 410                 415
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
            420                 425                 430
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
        435                 440                 445
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
    450                 455                 460
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
465                 470                 475                 480
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490                 495
<210> 266
<211> 622
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 266
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe
        35                  40                  45
Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Gly Val Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Ala Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg
        115                 120                 125
Asp Tyr Glu Phe Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
145                 150                 155                 160
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr
                165                 170                 175
Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
            180                 185                 190
Arg Glu Gly Val Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr
        195                 200                 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
    210                 215                 220
Lys Thr Val Tyr Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala
225                 230                 235                 240
Ala Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp
                245                 250                 255
Tyr Glu Phe Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
            260                 265                 270
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
        275                 280                 285
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu
    290                 295                 300
Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
305                 310                 315                 320
Glu Gly Val Ile Cys Ile Ser Arg Ser Asp Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala
                325                 330                 335
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys
            340                 345                 350
Thr Val Tyr Leu Gln Met Ile Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Ala
        355                 360                 365
Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Ala Asp Cys Ser Gly Tyr Leu Arg Asp Tyr
    370                 375                 380
Glu Phe Arg Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr
385                 390                 395                 400
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
                405                 410                 415
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
            420                 425                 430
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp
        435                 440                 445
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile
    450                 455                 460
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
465                 470                 475                 480
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
                485                 490                 495
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
            500                 505                 510
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
        515                 520                 525
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
    530                 535                 540
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
545                 550                 555                 560
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
                565                 570                 575
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
            580                 585                 590
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
        595                 600                 605
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
    610                 615                 620
<210> 267
<211> 488
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 267
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly
145                 150                 155                 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Met
                165                 170                 175
Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala
            180                 185                 190
Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly
        195                 200                 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Val Leu Gln
    210                 215                 220
Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala
225                 230                 235                 240
Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
                245                 250                 255
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
            260                 265                 270
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
        275                 280                 285
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
    290                 295                 300
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
305                 310                 315                 320
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
                325                 330                 335
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
            340                 345                 350
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
        355                 360                 365
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
    370                 375                 380
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
385                 390                 395                 400
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
                405                 410                 415
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
            420                 425                 430
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
        435                 440                 445
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
    450                 455                 460
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
465                 470                 475                 480
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485
<210> 268
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 268
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val
145                 150                 155                 160
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                165                 170                 175
Cys Ala Ala Ser Gly Arg Thr Phe Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala
            180                 185                 190
Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr
        195                 200                 205
Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
    210                 215                 220
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
225                 230                 235                 240
Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Asp Arg Lys Ser Val Met
                245                 250                 255
Ser Ile Arg Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
            260                 265                 270
Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
        275                 280                 285
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
    290                 295                 300
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
305                 310                 315                 320
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
                325                 330                 335
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
            340                 345                 350
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
        355                 360                 365
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
    370                 375                 380
Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
385                 390                 395                 400
Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu
                405                 410                 415
Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly
            420                 425                 430
Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
        435                 440                 445
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
    450                 455                 460
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
                485                 490                 495
Pro Arg
<210> 269
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 269
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
                165                 170                 175
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg
            180                 185                 190
Thr Phe Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
        195                 200                 205
Phe Val Ala Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu
    210                 215                 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
225                 230                 235                 240
Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
                245                 250                 255
Tyr Cys Ala Ala Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr
            260                 265                 270
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
305                 310                 315                 320
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
                325                 330                 335
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
            340                 345                 350
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
        355                 360                 365
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
    370                 375                 380
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe
385                 390                 395                 400
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
                405                 410                 415
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
            420                 425                 430
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
        435                 440                 445
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
    450                 455                 460
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
465                 470                 475                 480
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
                485                 490                 495
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 270
<211> 493
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 270
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
    50                  55                  60
Phe Val Ala Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
                85                  90                  95
Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Ala Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr
        115                 120                 125
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
    130                 135                 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
145                 150                 155                 160
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
                165                 170                 175
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
            180                 185                 190
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
        195                 200                 205
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
    210                 215                 220
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
225                 230                 235                 240
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
                245                 250                 255
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr
            260                 265                 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
        275                 280                 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
    290                 295                 300
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
305                 310                 315                 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
                325                 330                 335
Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
            340                 345                 350
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
        355                 360                 365
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
    370                 375                 380
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
385                 390                 395                 400
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
                405                 410                 415
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
            420                 425                 430
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
        435                 440                 445
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
    450                 455                 460
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
465                 470                 475                 480
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490
<210> 271
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 271
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
    50                  55                  60
Phe Val Ala Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
                85                  90                  95
Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Ala Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr
        115                 120                 125
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
    130                 135                 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu
145                 150                 155                 160
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys
                165                 170                 175
Ala Ala Ser Glu His Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg
            180                 185                 190
Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg
        195                 200                 205
Asp Ile Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
    210                 215                 220
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
225                 230                 235                 240
Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp
                245                 250                 255
Ala Ala Asp Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser
            260                 265                 270
Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
        275                 280                 285
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
    290                 295                 300
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
305                 310                 315                 320
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
                325                 330                 335
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
            340                 345                 350
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
        355                 360                 365
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
    370                 375                 380
Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
385                 390                 395                 400
Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu
                405                 410                 415
Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly
            420                 425                 430
Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
        435                 440                 445
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
    450                 455                 460
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
                485                 490                 495
Pro Arg
<210> 272
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 272
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Thr Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu
    50                  55                  60
Phe Val Ala Ala Ile Ser Leu Ser Pro Thr Leu Ala Tyr Tyr Ala Glu
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
                85                  90                  95
Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
            100                 105                 110
Tyr Cys Ala Ala Asp Arg Lys Ser Val Met Ser Ile Arg Pro Asp Tyr
        115                 120                 125
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
    130                 135                 140
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
145                 150                 155                 160
Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Arg Ser
                165                 170                 175
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His Thr Phe Ser Ser His Val
            180                 185                 190
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala
        195                 200                 205
Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys
    210                 215                 220
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr Leu
225                 230                 235                 240
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                245                 250                 255
Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
            260                 265                 270
Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro
        275                 280                 285
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
    290                 295                 300
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
305                 310                 315                 320
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
                325                 330                 335
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
            340                 345                 350
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
        355                 360                 365
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
    370                 375                 380
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
385                 390                 395                 400
Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
                405                 410                 415
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
            420                 425                 430
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
        435                 440                 445
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
    450                 455                 460
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
465                 470                 475                 480
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
                485                 490                 495
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 273
<211> 489
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 273
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly
145                 150                 155                 160
Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Thr
                165                 170                 175
Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe
            180                 185                 190
Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser
        195                 200                 205
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val
    210                 215                 220
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
225                 230                 235                 240
Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly Ala Trp Gly Gln
                245                 250                 255
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro
            260                 265                 270
Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu
        275                 280                 285
Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg
    290                 295                 300
Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
305                 310                 315                 320
Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys
                325                 330                 335
Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg
            340                 345                 350
Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro
        355                 360                 365
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
    370                 375                 380
Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
385                 390                 395                 400
Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
                405                 410                 415
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
            420                 425                 430
Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
        435                 440                 445
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
    450                 455                 460
Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
465                 470                 475                 480
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485
<210> 274
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 274
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val
145                 150                 155                 160
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr
                165                 170                 175
Cys Thr Ala Ser Gly Arg Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe
            180                 185                 190
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp
        195                 200                 205
Ser Gly Gly Ser Thr Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
    210                 215                 220
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser
225                 230                 235                 240
Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile
                245                 250                 255
Glu Val Glu Glu Phe Gly Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
            260                 265                 270
Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala
        275                 280                 285
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg
    290                 295                 300
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys
305                 310                 315                 320
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
                325                 330                 335
Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu
            340                 345                 350
Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln
        355                 360                 365
Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly
    370                 375                 380
Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
385                 390                 395                 400
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
                405                 410                 415
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
            420                 425                 430
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
        435                 440                 445
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
    450                 455                 460
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
                485                 490                 495
Pro Pro Arg
<210> 275
<211> 509
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 275
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp
        115                 120                 125
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
                165                 170                 175
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg
            180                 185                 190
Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
        195                 200                 205
Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala
    210                 215                 220
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
225                 230                 235                 240
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
                245                 250                 255
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly
            260                 265                 270
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr
        275                 280                 285
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
    290                 295                 300
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
305                 310                 315                 320
Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala
                325                 330                 335
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
            340                 345                 350
Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
        355                 360                 365
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
    370                 375                 380
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
385                 390                 395                 400
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
                405                 410                 415
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
            420                 425                 430
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
        435                 440                 445
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
    450                 455                 460
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
465                 470                 475                 480
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
                485                 490                 495
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 276
<211> 494
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 276
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly
        115                 120                 125
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly
145                 150                 155                 160
Leu Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu
                165                 170                 175
His Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
            180                 185                 190
Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr
        195                 200                 205
Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
    210                 215                 220
Ala Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
225                 230                 235                 240
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe
                245                 250                 255
Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr
            260                 265                 270
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
        275                 280                 285
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
    290                 295                 300
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp
305                 310                 315                 320
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile
                325                 330                 335
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
            340                 345                 350
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
        355                 360                 365
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
    370                 375                 380
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
385                 390                 395                 400
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
                405                 410                 415
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
            420                 425                 430
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
        435                 440                 445
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
    450                 455                 460
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
465                 470                 475                 480
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490
<210> 277
<211> 499
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 277
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly
        115                 120                 125
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu
145                 150                 155                 160
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser
                165                 170                 175
Cys Ala Ala Ser Glu His Thr Phe Ser Ser His Val Met Gly Trp Phe
            180                 185                 190
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val Ala Val Ile Gly Trp
        195                 200                 205
Arg Asp Ile Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
    210                 215                 220
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
225                 230                 235                 240
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Arg Arg Ile
                245                 250                 255
Asp Ala Ala Asp Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val
            260                 265                 270
Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala
        275                 280                 285
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg
    290                 295                 300
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys
305                 310                 315                 320
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
                325                 330                 335
Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu
            340                 345                 350
Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln
        355                 360                 365
Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly
    370                 375                 380
Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
385                 390                 395                 400
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
                405                 410                 415
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
            420                 425                 430
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
        435                 440                 445
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
    450                 455                 460
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
465                 470                 475                 480
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
                485                 490                 495
Pro Pro Arg
<210> 278
<211> 504
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 278
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Ala Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Thr Cys Thr Ala Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Ala Phe Ser Thr Tyr Phe Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Gly Ile Ala Trp Ser Gly Gly Ser Thr Ala
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ser Arg Gly Ile Glu Val Glu Glu Phe Gly
        115                 120                 125
Ala Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Arg
                165                 170                 175
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Glu His Thr Phe Ser Ser His
            180                 185                 190
Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ser Val
        195                 200                 205
Ala Val Ile Gly Trp Arg Asp Ile Ser Thr Ser Tyr Ala Asp Ser Val
    210                 215                 220
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr
225                 230                 235                 240
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                245                 250                 255
Ala Ala Arg Arg Ile Asp Ala Ala Asp Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly
            260                 265                 270
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
        275                 280                 285
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
    290                 295                 300
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
305                 310                 315                 320
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
                325                 330                 335
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
            340                 345                 350
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
        355                 360                 365
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
    370                 375                 380
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
385                 390                 395                 400
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
                405                 410                 415
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
            420                 425                 430
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
        435                 440                 445
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
    450                 455                 460
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
465                 470                 475                 480
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
                485                 490                 495
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 279
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 279
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Arg
145                 150                 155                 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr
                165                 170                 175
Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe
            180                 185                 190
Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala
        195                 200                 205
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn
    210                 215                 220
Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val
225                 230                 235                 240
Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr Gly Cys Phe Asp
                245                 250                 255
Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
            260                 265                 270
Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro
        275                 280                 285
Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro
    290                 295                 300
Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp
305                 310                 315                 320
Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu
                325                 330                 335
Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
            340                 345                 350
Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu
        355                 360                 365
Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
    370                 375                 380
Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
385                 390                 395                 400
Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu
                405                 410                 415
Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly
            420                 425                 430
Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu
        435                 440                 445
Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly
    450                 455                 460
Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
465                 470                 475                 480
Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
                485                 490                 495
Pro Arg
<210> 280
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 280
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu
145                 150                 155                 160
Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                165                 170                 175
Cys Ala Gly Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe
            180                 185                 190
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser
        195                 200                 205
Met Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
    210                 215                 220
Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met
225                 230                 235                 240
Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly
                245                 250                 255
Thr Gly Cys Ser Thr Tyr Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr
            260                 265                 270
Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
305                 310                 315                 320
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
                325                 330                 335
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
            340                 345                 350
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
        355                 360                 365
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
    370                 375                 380
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe
385                 390                 395                 400
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
                405                 410                 415
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
            420                 425                 430
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
        435                 440                 445
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
    450                 455                 460
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
465                 470                 475                 480
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
                485                 490                 495
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 281
<211> 518
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 281
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
                165                 170                 175
Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
            180                 185                 190
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
        195                 200                 205
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
    210                 215                 220
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
225                 230                 235                 240
Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu
                245                 250                 255
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr
            260                 265                 270
Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu
        275                 280                 285
Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
    290                 295                 300
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
305                 310                 315                 320
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
                325                 330                 335
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
            340                 345                 350
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
        355                 360                 365
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
    370                 375                 380
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
385                 390                 395                 400
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
                405                 410                 415
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
            420                 425                 430
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
        435                 440                 445
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
    450                 455                 460
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
465                 470                 475                 480
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
                485                 490                 495
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
            500                 505                 510
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
        515
<210> 282
<211> 503
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 282
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg
145                 150                 155                 160
Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly
                165                 170                 175
Arg Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
            180                 185                 190
Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly
        195                 200                 205
Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg
    210                 215                 220
Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro
225                 230                 235                 240
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr
                245                 250                 255
Tyr Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr
            260                 265                 270
Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro
        275                 280                 285
Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro
    290                 295                 300
Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu
305                 310                 315                 320
Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys
                325                 330                 335
Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly
            340                 345                 350
Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val
        355                 360                 365
Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu
    370                 375                 380
Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp
385                 390                 395                 400
Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn
                405                 410                 415
Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg
            420                 425                 430
Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly
        435                 440                 445
Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu
    450                 455                 460
Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu
465                 470                 475                 480
Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His
                485                 490                 495
Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 283
<211> 508
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 283
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu
145                 150                 155                 160
Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser
                165                 170                 175
Cys Ala Gly Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe
            180                 185                 190
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser
        195                 200                 205
Met Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
    210                 215                 220
Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met
225                 230                 235                 240
Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly
                245                 250                 255
Thr Gly Cys Ser Thr Tyr Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr
            260                 265                 270
Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
    290                 295                 300
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
305                 310                 315                 320
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
                325                 330                 335
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
            340                 345                 350
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
        355                 360                 365
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
    370                 375                 380
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe
385                 390                 395                 400
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
                405                 410                 415
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
            420                 425                 430
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
        435                 440                 445
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
    450                 455                 460
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
465                 470                 475                 480
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
                485                 490                 495
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 284
<211> 513
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 284
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Met
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Asp Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Gln Ser Thr Tyr
        35                  40                  45
Thr Val Asn Ser Asp Val Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Gly Ala Ile Met Trp Asn Asp Gly Ile Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Leu Gln Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Phe Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Leu Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ser Lys Gly Arg Tyr Ser Glu Tyr Glu
        115                 120                 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
145                 150                 155                 160
Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Gln Pro Arg Gly
                165                 170                 175
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg Thr Phe Ser Thr Tyr
            180                 185                 190
Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
        195                 200                 205
Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp
    210                 215                 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp Asn Ala Lys Asn Met
225                 230                 235                 240
Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                245                 250                 255
Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr Gly Cys Phe Asp Ala
            260                 265                 270
Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        275                 280                 285
Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
    290                 295                 300
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
305                 310                 315                 320
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
                325                 330                 335
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser
            340                 345                 350
Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
        355                 360                 365
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
    370                 375                 380
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
385                 390                 395                 400
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
                405                 410                 415
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
            420                 425                 430
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
        435                 440                 445
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
    450                 455                 460
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
465                 470                 475                 480
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
                485                 490                 495
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
            500                 505                 510
Arg
<210> 285
<211> 500
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 285
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
                85                  90                  95
Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr
        115                 120                 125
Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu
    130                 135                 140
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu
145                 150                 155                 160
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
                165                 170                 175
Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg
            180                 185                 190
Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp
        195                 200                 205
Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile
    210                 215                 220
Asn Arg Asn Asn Ala Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu
225                 230                 235                 240
Lys Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser
                245                 250                 255
Ile Met Ser Ile Gln Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr
            260                 265                 270
Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro
        275                 280                 285
Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys
    290                 295                 300
Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala
305                 310                 315                 320
Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu
                325                 330                 335
Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys
            340                 345                 350
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
        355                 360                 365
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
    370                 375                 380
Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
385                 390                 395                 400
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
                405                 410                 415
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
            420                 425                 430
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
        435                 440                 445
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
    450                 455                 460
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
465                 470                 475                 480
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
                485                 490                 495
Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 286
<211> 510
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 286
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
                85                  90                  95
Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr
        115                 120                 125
Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu
    130                 135                 140
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
                165                 170                 175
Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr
            180                 185                 190
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
        195                 200                 205
Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr
    210                 215                 220
Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala Glu
225                 230                 235                 240
Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala
                245                 250                 255
Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln Pro
            260                 265                 270
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr
        275                 280                 285
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
    290                 295                 300
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
305                 310                 315                 320
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp
                325                 330                 335
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile
            340                 345                 350
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
        355                 360                 365
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
    370                 375                 380
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
385                 390                 395                 400
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
                405                 410                 415
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
            420                 425                 430
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
        435                 440                 445
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
    450                 455                 460
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
465                 470                 475                 480
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
                485                 490                 495
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505                 510
<210> 287
<211> 520
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 287
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
                85                  90                  95
Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu
            100                 105                 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys Ser Thr Tyr
        115                 120                 125
Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu
    130                 135                 140
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
                165                 170                 175
Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu
            180                 185                 190
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val
        195                 200                 205
Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser
    210                 215                 220
Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly
225                 230                 235                 240
Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala Glu Asn Leu Val Val Leu Gln
                245                 250                 255
Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala
            260                 265                 270
Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
        275                 280                 285
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
    290                 295                 300
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
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Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
                325                 330                 335
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
            340                 345                 350
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
        355                 360                 365
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
    370                 375                 380
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
385                 390                 395                 400
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
                405                 410                 415
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
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Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
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Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
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Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
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Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
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His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
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<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 288
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1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
            20                  25                  30
Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
        35                  40                  45
Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
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Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly
                325                 330                 335
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    370                 375                 380
Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser
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Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu
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Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg
            420                 425                 430
Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln
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Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr
    450                 455                 460
Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp
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Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala
                485                 490                 495
Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 289
<211> 510
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 289
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
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        35                  40                  45
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    50                  55                  60
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Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
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Gly Cys Phe Asp Ala Gln Ile Ile Asp Tyr Trp Gly Lys Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
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Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
                165                 170                 175
Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr
            180                 185                 190
Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
        195                 200                 205
Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr
    210                 215                 220
Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala Glu
225                 230                 235                 240
Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala
                245                 250                 255
Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln Pro
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Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr
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Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
    290                 295                 300
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
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Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp
                325                 330                 335
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile
            340                 345                 350
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
        355                 360                 365
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
    370                 375                 380
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
385                 390                 395                 400
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
                405                 410                 415
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
            420                 425                 430
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
        435                 440                 445
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    450                 455                 460
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465                 470                 475                 480
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
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Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
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<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 290
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu
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Val Gln Pro Arg Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly Arg
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Thr Phe Ser Thr Tyr Gly Met Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Glu Phe Val Ala Ser Lys Ala Ser Met Asn Tyr Ser Gly Arg
65                  70                  75                  80
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ala Arg Asp
                85                  90                  95
Asn Ala Lys Asn Met Val Phe Leu Gln Met Asn Asn Leu Lys Pro Glu
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Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser
                165                 170                 175
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            180                 185                 190
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        275                 280                 285
Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala
    290                 295                 300
Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg
305                 310                 315                 320
Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys
                325                 330                 335
Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu
            340                 345                 350
Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu
        355                 360                 365
Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln
    370                 375                 380
Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly
385                 390                 395                 400
Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
                405                 410                 415
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
            420                 425                 430
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
        435                 440                 445
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
    450                 455                 460
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
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Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
                485                 490                 495
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
            500                 505                 510
Pro Pro Arg
        515
<210> 291
<211> 492
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 291
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
145                 150                 155                 160
Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu
                165                 170                 175
Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg
            180                 185                 190
Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala
        195                 200                 205
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
    210                 215                 220
Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val
225                 230                 235                 240
Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala Asp Tyr
                245                 250                 255
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr
            260                 265                 270
Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro
        275                 280                 285
Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val
    290                 295                 300
His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro
305                 310                 315                 320
Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu
                325                 330                 335
Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro
            340                 345                 350
Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys
        355                 360                 365
Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe
    370                 375                 380
Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu
385                 390                 395                 400
Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp
                405                 410                 415
Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys
            420                 425                 430
Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala
        435                 440                 445
Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys
    450                 455                 460
Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr
465                 470                 475                 480
Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490
<210> 292
<211> 502
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 292
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
145                 150                 155                 160
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg
                165                 170                 175
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala
            180                 185                 190
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile
        195                 200                 205
Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
    210                 215                 220
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
225                 230                 235                 240
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu
                245                 250                 255
Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
            260                 265                 270
Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
        275                 280                 285
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
    290                 295                 300
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
305                 310                 315                 320
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
                325                 330                 335
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
            340                 345                 350
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
        355                 360                 365
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
385                 390                 395                 400
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
                405                 410                 415
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
            420                 425                 430
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
        435                 440                 445
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
    450                 455                 460
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
465                 470                 475                 480
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
                485                 490                 495
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 293
<211> 512
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 293
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145                 150                 155                 160
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
                165                 170                 175
Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
            180                 185                 190
Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro
        195                 200                 205
Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr
    210                 215                 220
Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
225                 230                 235                 240
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
                245                 250                 255
Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly
            260                 265                 270
Pro Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr
        275                 280                 285
Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
    290                 295                 300
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
305                 310                 315                 320
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
                325                 330                 335
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu
            340                 345                 350
Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile
        355                 360                 365
Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp
    370                 375                 380
Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
385                 390                 395                 400
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
                405                 410                 415
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
            420                 425                 430
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
        435                 440                 445
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
    450                 455                 460
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
465                 470                 475                 480
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
                485                 490                 495
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505                 510
<210> 294
<211> 497
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 294
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
145                 150                 155                 160
Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
                165                 170                 175
Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala
            180                 185                 190
Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg
        195                 200                 205
Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
    210                 215                 220
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
225                 230                 235                 240
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala
                245                 250                 255
Gly Pro Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
            260                 265                 270
Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr
        275                 280                 285
Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala
    290                 295                 300
Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile
305                 310                 315                 320
Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser
                325                 330                 335
Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr
            340                 345                 350
Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu
        355                 360                 365
Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu
    370                 375                 380
Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln
385                 390                 395                 400
Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu
                405                 410                 415
Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly
            420                 425                 430
Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln
        435                 440                 445
Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu
    450                 455                 460
Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr
465                 470                 475                 480
Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro
                485                 490                 495
Arg
<210> 295
<211> 502
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 295
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
145                 150                 155                 160
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg
                165                 170                 175
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala
            180                 185                 190
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile
        195                 200                 205
Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
    210                 215                 220
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
225                 230                 235                 240
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu
                245                 250                 255
Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln
            260                 265                 270
Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro
        275                 280                 285
Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu
    290                 295                 300
Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp
305                 310                 315                 320
Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly
                325                 330                 335
Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg
            340                 345                 350
Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln
        355                 360                 365
Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala
385                 390                 395                 400
Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu
                405                 410                 415
Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp
            420                 425                 430
Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu
        435                 440                 445
Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile
    450                 455                 460
Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr
465                 470                 475                 480
Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met
                485                 490                 495
Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 296
<211> 507
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 296
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asn Ser Val Asn Gly Arg Phe Pro Ile Asn Arg Asn Asn Ala
                85                  90                  95
Glu Asn Leu Val Val Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Arg Lys Ser Ile Met Ser Ile Gln
        115                 120                 125
Pro Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145                 150                 155                 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala
                165                 170                 175
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser
            180                 185                 190
Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly
        195                 200                 205
Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp
    210                 215                 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
225                 230                 235                 240
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr
                245                 250                 255
Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala Asp Tyr Trp
            260                 265                 270
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro
        275                 280                 285
Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu
    290                 295                 300
Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His
305                 310                 315                 320
Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu
                325                 330                 335
Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
            340                 345                 350
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
        355                 360                 365
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
    370                 375                 380
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
385                 390                 395                 400
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
                405                 410                 415
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
            420                 425                 430
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
        435                 440                 445
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
    450                 455                 460
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
465                 470                 475                 480
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
                485                 490                 495
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 297
<211> 491
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 297
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala
145                 150                 155                 160
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser
                165                 170                 175
Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly
            180                 185                 190
Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn
        195                 200                 205
Ser Val Lys Gly Arg Phe Pro Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr
    210                 215                 220
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr
225                 230                 235                 240
Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Ser Ala Asp Tyr Trp
                245                 250                 255
Gly Gln Gly Thr His Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro
            260                 265                 270
Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu
        275                 280                 285
Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His
    290                 295                 300
Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu
305                 310                 315                 320
Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr
                325                 330                 335
Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
            340                 345                 350
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
        355                 360                 365
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
    370                 375                 380
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
385                 390                 395                 400
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
                405                 410                 415
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
            420                 425                 430
Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu
        435                 440                 445
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
    450                 455                 460
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
465                 470                 475                 480
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490
<210> 298
<211> 501
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 298
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu
145                 150                 155                 160
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
                165                 170                 175
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp
            180                 185                 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr
        195                 200                 205
Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe
    210                 215                 220
Pro Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
225                 230                 235                 240
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly
                245                 250                 255
Lys Trp Pro Ala Gly Ser Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr His Val
            260                 265                 270
Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala
    290                 295                 300
Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe
305                 310                 315                 320
Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val
                325                 330                 335
Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys
            340                 345                 350
Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
        355                 360                 365
Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
385                 390                 395                 400
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
                405                 410                 415
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
            420                 425                 430
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
        435                 440                 445
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
    450                 455                 460
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
465                 470                 475                 480
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
                485                 490                 495
Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 299
<211> 511
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 299
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
145                 150                 155                 160
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
                165                 170                 175
Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
            180                 185                 190
Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
        195                 200                 205
Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr
    210                 215                 220
Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Pro Ile Ser Arg Asp Asn
225                 230                 235                 240
Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp
                245                 250                 255
Thr Ala Gly Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Ser
            260                 265                 270
Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr His Val Thr Val Ser Ser Thr Ser
        275                 280                 285
Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala
    290                 295                 300
Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly
305                 310                 315                 320
Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile
                325                 330                 335
Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val
            340                 345                 350
Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
        355                 360                 365
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
    370                 375                 380
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg
385                 390                 395                 400
Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln
                405                 410                 415
Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp
            420                 425                 430
Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro
        435                 440                 445
Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp
    450                 455                 460
Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg
465                 470                 475                 480
Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr
                485                 490                 495
Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505                 510
<210> 300
<211> 496
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 300
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
145                 150                 155                 160
Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
                165                 170                 175
Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro
            180                 185                 190
Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr
        195                 200                 205
Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe Pro Ile Ser Arg Asp
    210                 215                 220
Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
225                 230                 235                 240
Asp Thr Ala Gly Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly
                245                 250                 255
Ser Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr His Val Thr Val Ser Ser Thr
            260                 265                 270
Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile
        275                 280                 285
Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala
    290                 295                 300
Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr
305                 310                 315                 320
Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu
                325                 330                 335
Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile
            340                 345                 350
Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp
        355                 360                 365
Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
    370                 375                 380
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
385                 390                 395                 400
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
                405                 410                 415
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
            420                 425                 430
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
        435                 440                 445
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
    450                 455                 460
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
465                 470                 475                 480
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                485                 490                 495
<210> 301
<211> 501
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 301
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Val Gln Leu
145                 150                 155                 160
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
                165                 170                 175
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp
            180                 185                 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe Val Thr Ser Ile Thr
        195                 200                 205
Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser Val Lys Gly Arg Phe
    210                 215                 220
Pro Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
225                 230                 235                 240
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly
                245                 250                 255
Lys Trp Pro Ala Gly Ser Ala Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr His Val
            260                 265                 270
Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr
        275                 280                 285
Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala
    290                 295                 300
Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe
305                 310                 315                 320
Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val
                325                 330                 335
Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys
            340                 345                 350
Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr
        355                 360                 365
Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu
    370                 375                 380
Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro
385                 390                 395                 400
Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly
                405                 410                 415
Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro
            420                 425                 430
Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr
        435                 440                 445
Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly
    450                 455                 460
Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln
465                 470                 475                 480
Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln
                485                 490                 495
Ala Leu Pro Pro Arg
            500
<210> 302
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 多价抗BCMA CAR
<400> 302
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
            20                  25                  30
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly
        35                  40                  45
Thr Leu Ser Lys Asn Thr Val Ala Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
    50                  55                  60
Glu Arg Gly Phe Val Ala Ser Ile Thr Trp Asp Gly Arg Thr Thr Tyr
65                  70                  75                  80
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
                85                  90                  95
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
            100                 105                 110
Ala Val Tyr Val Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Pro Ala
        115                 120                 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
    130                 135                 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
145                 150                 155                 160
Ser Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Ala Gly
                165                 170                 175
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Gly Thr Leu Ser Lys
            180                 185                 190
Asn Thr Val Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Gly Phe
        195                 200                 205
Val Thr Ser Ile Thr Cys Asp Gly Arg Thr Thr Tyr Tyr Ala Asn Ser
    210                 215                 220
Val Lys Gly Arg Phe Pro Ile Ser Arg Asp Asn Ala Glu Asn Thr Val
225                 230                 235                 240
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Gly Tyr Val
                245                 250                 255
Cys Ala Asp Leu Gly Lys Trp Pro Ala Gly Ser Ala Asp Tyr Trp Gly
            260                 265                 270
Gln Gly Thr His Val Thr Val Ser Ser Thr Ser Thr Thr Thr Pro Ala
        275                 280                 285
Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser
    290                 295                 300
Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr
305                 310                 315                 320
Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala
                325                 330                 335
Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys
            340                 345                 350
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
        355                 360                 365
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
    370                 375                 380
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
385                 390                 395                 400
Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
                405                 410                 415
Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
            420                 425                 430
Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
        435                 440                 445
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
    450                 455                 460
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
465                 470                 475                 480
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
                485                 490                 495
Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
            500                 505
<210> 303
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 303
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln
1               5                   10
<210> 304
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 304
Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys
1               5                   10
<210> 305
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 305
Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro
1               5                   10
<210> 306
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 306
Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser
1               5                   10
<210> 307
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 307
Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg
1               5                   10                  15
Tyr Cys Asn
<210> 308
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 308
Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser
1               5                   10
<210> 309
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> BCMA表位
<400> 309
Ala Ser Val Thr Asn Ser Val Lys Gly Thr Asn Ala
1               5                   10
<210> 310
<211> 334
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA Centyrin CAR
<400> 310
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro Met Leu Pro Ala Pro Lys Asn Leu Val Val Ser
            20                  25                  30
Arg Ile Thr Glu Asp Ser Ala Arg Leu Ser Trp Thr Ala Pro Asp Ala
        35                  40                  45
Ala Phe Asp Ser Phe Pro Ile Arg Tyr Ile Glu Thr Leu Ile Trp Gly
    50                  55                  60
Glu Ala Ile Trp Leu Asp Val Pro Gly Ser Glu Arg Ser Tyr Asp Leu
65                  70                  75                  80
Thr Gly Leu Lys Pro Gly Thr Glu Tyr Ala Val Val Ile Thr Gly Val
                85                  90                  95
Lys Gly Gly Arg Phe Ser Ser Pro Leu Val Ala Ser Phe Thr Thr Thr
            100                 105                 110
Thr Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser
        115                 120                 125
Gln Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly
    130                 135                 140
Ala Val His Thr Arg Gly Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp
145                 150                 155                 160
Ala Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile
                165                 170                 175
Thr Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
            180                 185                 190
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
        195                 200                 205
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
    210                 215                 220
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly Gln Asn
225                 230                 235                 240
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
                245                 250                 255
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
            260                 265                 270
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
        275                 280                 285
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
    290                 295                 300
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
305                 310                 315                 320
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
                325                 330
<210> 311
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223>信号序列
<400> 311
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1               5                   10                  15
His Ala Ala Arg Pro
            20
<210> 312
<211> 472
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗BCMA CAR
<400> 312
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1               5                   10                  15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
            20                  25                  30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
        35                  40                  45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
    50                  55                  60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65                  70                  75                  80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
                85                  90                  95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
            100                 105                 110
Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
        115                 120                 125
Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly
    130                 135                 140
Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp
145                 150                 155                 160
Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp
                165                 170                 175
Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp
            180                 185                 190
Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala
        195                 200                 205
Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
    210                 215                 220
Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225                 230                 235                 240
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
                245                 250                 255
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
            260                 265                 270
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
        275                 280                 285
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
    290                 295                 300
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
305                 310                 315                 320
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
                325                 330                 335
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
            340                 345                 350
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
        355                 360                 365
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
    370                 375                 380
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
385                 390                 395                 400
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
                405                 410                 415
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
            420                 425                 430
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
        435                 440                 445
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
    450                 455                 460
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465                 470

Claims (100)

1.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
2.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括：
向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且
在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
3.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向所述受试者施用至少两个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少一个剂量的IL-1Ra；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
4.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内所述受试者已被施用至少一个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)；并且在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个剂量的IL-1Ra。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-1Ra在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约21、18、15或12小时内施用。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少一个剂量的IL-Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra。
7.根据权利要求6所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约6、5、4、3或2小时内施用。
8.根据权利要求6或7所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前施用的至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量，并且在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用至少两个剂量的IL-1Ra中的一个剂量。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少2、3、4、5、6、7或8个剂量的IL-1Ra。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的3、4、5、6或7个剂量的IL-1Ra。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra包含在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的4个剂量的IL-1Ra。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中连续几天每天施用在施用所述剂量的工程化细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中施用所述剂量的工程化T细胞之后施用的至少一个剂量的IL-1Ra是4个剂量，其中在施用所述剂量的工程化T细胞之后连续4天每天施用所述四个剂量中的一个。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中在第2-5天每24小时(q24h)施用一定剂量的IL-1Ra。
16.一种降低受试者中毒性的严重程度、减弱和/或预防受试者中毒性发作的方法，所述受试者患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的、要用细胞疗法治疗的疾病或障碍，所述方法包括向所述受试者施用至少6个剂量的白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中所述细胞疗法在第1天施用，并且：
(a)在施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约24小时内施用一个剂量的IL-1Ra，任选地在施用所述剂量的工程化T细胞之前的夜晚施用；
(b)在第1天施用所述剂量的工程化T细胞之前为或约3小时内施用一个剂量的IL-1Ra；
(c)在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用四个剂量的IL-1Ra，其中在第2、3、4和5天每天施用所述四个剂量中的一个剂量。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，所述方法还包括如果所述受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则在施用所述剂量的工程化T细胞之后施用至少一个另外剂量的IL-1Ra。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述至少一个另外剂量的IL-1Ra包括连续几天每天施用至少一个另外剂量的IL-1Ra，直到CRS的症状或体征消退。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述至少一个另外剂量的IL-1Ra是连续几天每天施用的一个另外的剂量，直到CRS的症状或体征消退。
20.根据权利要求13-19中任一项所述的方法，其中，如果所述受试者展现出细胞因子释放综合征(CRS)的症状或体征，则每12小时(q12h)施用一定剂量的IL-1Ra，直到CRS的症状或体征消退。
21.根据权利要求13-20中任一项所述的方法，其中在每天同一时间或约同一时间给予IL-1Ra的每天施用。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra是重组IL-1Ra。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra包含SEQ ID NO:256所示的序列或与SEQ ID NO:256具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高序列同一性且保留IL-1Ra功能的序列。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra是阿那白滞素。
25.根据权利要求1-24中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra的每个剂量是为或约500mg、为或约400mg、为或约300mg、为或约200mg、为或约100mg或为或约50mg、或前述任一项限定的范围，任选地其中所述重组IL-1Ra的每个剂量是从为或约50mg至为或约200mg。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述IL-1Ra的每个剂量是为或约100mg。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中皮下施用所述IL-1Ra。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中所述方法降低与所述细胞疗法的施用相关的毒性的严重程度、减弱和/或预防所述毒性的发作。
29.根据权利要求3-28中任一项所述的方法，其中所述毒性是细胞因子释放综合征(CRS)。
30.根据权利要求29所述的方法，其中所述CRS是重度CRS或3级或更高分级的CRS。
31.根据权利要求3-28中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性(NT)。
32.根据权利要求31所述的方法，其中所述NT是重度NT、或2级或更高分级的NT、或3级或更高分级的NT。
33.根据权利要求3-28中任一项所述的方法，其中所述毒性是巨噬细胞活化综合征(MAS)或噬血细胞性淋巴组织细胞增生症(HLH)。
34.根据权利要求1-33中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，所述受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
35.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，其中在施用所述剂量的工程化T细胞时或之前，所述受试者已被施用一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
36.一种治疗患有或怀疑患有与B细胞成熟抗原(BCMA)表达相关的疾病或障碍的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用细胞疗法，所述细胞疗法包含一定剂量的含有对BCMA具有特异性的第一嵌合抗原受体(CAR)的工程化T细胞，所述受试者先前已接受一种或多种选自以下的先前BCMA定向疗法：
先前剂量的包含对BCMA具有特异性的第二CAR的工程化T细胞；
先前施用BCMA定向T细胞接合剂(TCE)；以及
先前施用BCMA定向抗体-药物缀合物(ADC)。
37.根据权利要求34-36中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
38.根据权利要求34-37中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约1年内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
39.根据权利要求34-38中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约6个月内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
40.根据权利要求34-39中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前为或约3个月内，所述受试者在所述一种或多种先前BCMA定向疗法后复发或是其难治的。
41.根据权利要求34-40中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向TCE是或包含双特异性抗体或双特异性T细胞接合剂(BiTE)。
42.根据权利要求34-41中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向TCE选自AMG420/BI836909、AMG 701、CC-93269、JNJ-64007957、PF-06863135和REGN5458中的一种或多种。
43.根据权利要求34-42中任一项所述的方法，其中所述BCMA定向ADC选自贝兰他单抗莫福汀(GSK2857916)、MEDI2228、CC-99712和AMG 224中的一种或多种。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含细胞外抗原结合结构域，所述细胞外抗原结合结构域包含
包含SEQ ID NO:116所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:119所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；
包含SEQ ID NO:97、101和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；
包含SEQ ID NO:96、100和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；
包含SEQ ID NO:95、99和103分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:105、107和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL；和/或
包含SEQ ID NO:94、98和102分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:104、106和108分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述VH是或包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列；并且所述VL是或包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列。
46.根据权利要求44或权利要求45所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列或与SEQ ID NO:114的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
47.根据权利要求44-46中任一项所述的方法，其中编码所述细胞外抗原结合结构域的核酸包含(a)SEQ ID NO:113的核苷酸序列；(b)与其具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；(c)(a)或(b)的简并序列；和/或(d)SEQ ID NO:115的核苷酸序列。
48.根据权利要求1-47中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含：
(a)间隔子，其包含IgG4/2嵌合铰链或经修饰的IgG4铰链、IgG2/4嵌合CH2区和IgG4 CH3区，所述间隔子任选地具有约228个氨基酸的长度；或SEQ ID NO:174所示的间隔子；
(b)跨膜结构域，任选地来自人CD28的跨膜结构域；以及
(c)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区包含T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
49.根据权利要求44-48中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是或包含来自人CD28的跨膜结构域。
50.根据权利要求44-49中任一项所述的方法，其中所述跨膜结构域是或包含SEQ IDNO:138所示的序列或与SEQ ID NO:138具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
51.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含细胞外抗原结合结构域，所述细胞外抗原结合结构域包含
包含SEQ ID NO:125所示序列内含有的重链互补决定区1(CDR-H1)、重链互补决定区2(CDR-H2)和重链互补决定区3(CDR-H3)的可变重链(VH)，以及包含SEQ ID NO:127所示序列内含有的轻链互补决定区1(CDR-L1)、轻链互补决定区2(CDR-L2)和轻链互补决定区3(CDR-L3)的可变轻链(VL)；和/或
包含SEQ ID NO:260、261和262分别所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3序列的VH，以及包含SEQ ID NO:257、258和259分别所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3序列的VL。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述VH是或包含SEQ ID NO:125的氨基酸序列；并且所述VL是或包含SEQ ID NO:127的氨基酸序列。
53.根据权利要求51或权利要求52中任一项所述的方法，其中所述细胞外抗原结合结构域包含SEQ ID NO:128的氨基酸序列或与SEQ ID NO:128的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列。
54.根据权利要求1-43和51-53中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含
(a)间隔子，其包含CD8铰链区；
(b)跨膜结构域，任选地来自人CD8的跨膜结构域；以及
(c)细胞内信号传导区，其包含CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域和共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区包含T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
55.根据权利要求44-54中任一项所述的方法，其中所述胞质信号传导结构域是或包含SEQ ID NO:143所示的序列或与SEQ ID NO:143具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
56.根据权利要求44-59中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区包含CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
57.根据权利要求44-56中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区包含4-1BB、任选人4-1BB的细胞内信号传导结构域。
58.根据权利要求44-57中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区是或包含SEQ ID NO:4所示的序列或与SEQ ID NO:4所示的序列具有至少90％序列同一性的氨基酸序列。
59.根据权利要求44-58中任一项所述的方法，其中所述共刺激信号传导区在所述跨膜结构域与所述CD3-zeta(CD3ζ)链的胞质信号传导结构域之间。
60.根据权利要求1-50和55-59中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含SEQ IDNO:19所示的序列。
61.根据权利要求1-43和51-59中任一项所述的方法，其中所述第一CAR包含SEQ IDNO:312所示的序列。
62.根据权利要求34-61中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR结合BCMA的相同表位。
63.根据权利要求34-61中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR结合BCMA的不同表位。
64.根据权利要求34-63中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR是不同的。
65.根据权利要求34-62中任一项所述的方法，其中所述第一CAR和所述第二CAR是相同的。
66.根据权利要求34-65中任一项所述的方法，其中其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞由包含自同一受试者获得的T细胞的样品产生，所述受试者先前已被施用先前剂量的包含所述第二CAR的工程化T细胞。
67.根据权利要求34-66中任一项所述的方法，其中在所述受试者已被施用先前剂量的包含所述第二CAR的工程化T细胞之后，所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞由包含自所述受试者获得的T细胞的样品产生。
68.根据权利要求44-67中任一项所述的方法，其中在存在可溶性或脱落形式的BCMA的情况下，在暴露于表达表面BCMA的细胞后，所述细胞外抗原结合结构域和/或所述第一CAR的结合或指示所述第一CAR的功能或活性的量度未被降低或阻断或未被明显降低或阻断。
69.根据权利要求1-68中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含在为或约1x 107个与为或约1x 109个之间的CAR+T细胞。
70.根据权利要求1-69中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含在为或约1x 108个与为或约8x 108个之间的CAR+T细胞。
71.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约1.5x 108个细胞或CAR+T细胞。
72.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约3x 108个细胞或CAR+T细胞。
73.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约4.5x 108个细胞或CAR+T细胞。
74.根据权利要求1-70中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含为或约6x 108个细胞或CAR+T细胞。
75.根据权利要求1-74中任一项所述的方法，其中所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞包含CD4+T细胞和CD8+T细胞、任选CD4+CAR+T细胞和CD8+CAR+T细胞的组合。
76.根据权利要求1-75中任一项所述的方法，其中在施用所述剂量的包含所述第一CAR的工程化T细胞之前，所述受试者已被施用淋巴细胞清除疗法，所述淋巴细胞清除疗法包括每天施用为或约20-40mg/m2受试者体表面积、任选为或约30mg/m2的氟达拉滨，持续2-4天，和/或每天施用为或约200-400mg/m2受试者体表面积、任选为或约300mg/m2的环磷酰胺，持续2-4天。
77.根据权利要求76所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括施用为或约30mg/m2受试者体表面积的氟达拉滨以及施用为或约300mg/m2受试者体表面积的环磷酰胺，均每天施用，持续3天。
78.根据权利要求1-77中任一项所述的方法，其中所述与BCMA表达相关的疾病或障碍是自身免疫性疾病或障碍。
79.根据权利要求1-78中任一项所述的方法，其中所述与BCMA表达相关的疾病或障碍是癌症，任选地是表达BCMA的癌症。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述癌症是B细胞恶性肿瘤。
81.根据权利要求79或权利要求80所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤、白血病或浆细胞恶性肿瘤。
82.根据权利要求79-81中任一项所述的方法，其中所述癌症是淋巴瘤，并且所述淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、霍奇金淋巴瘤、华氏巨球蛋白血症、滤泡性淋巴瘤、小无裂细胞性淋巴瘤、黏膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、边缘区淋巴瘤、脾淋巴瘤、结节单核细胞样B细胞淋巴瘤、免疫母细胞淋巴瘤、大细胞淋巴瘤、弥漫性混合细胞淋巴瘤、肺B细胞血管中心淋巴瘤、小淋巴细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性淋巴瘤(LPL)或套细胞淋巴瘤(MCL)。
83.根据权利要求79-81中任一项所述的方法，其中所述癌症是白血病，并且所述白血病是慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、浆细胞白血病或急性淋巴细胞性白血病(ALL)。
84.根据权利要求79-81中任一项所述的方法，其中所述癌症是浆细胞恶性肿瘤，并且所述浆细胞恶性肿瘤是多发性骨髓瘤(MM)或浆细胞瘤。
85.根据权利要求79-81和84中任一项所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤(MM)，任选地是复发性或难治性多发性骨髓瘤(R/R MM)。
86.根据权利要求1-85中任一项所述的方法，其中所述受试者已被施用三种或更多种针对所述疾病或障碍的先前疗法、任选四种或更多种先前疗法，所述先前疗法任选地选自：
自体干细胞移植(ASCT)；
免疫调节剂；
蛋白酶体抑制剂；以及
抗CD38抗体。
87.根据权利要求86所述的方法，其中所述免疫调节剂选自沙利度胺、来那度胺和泊马度胺。
88.根据权利要求86或权利要求87所述的方法，其中所述蛋白酶体抑制剂选自硼替佐米、卡非佐米和伊沙佐米。
89.根据权利要求86-88中任一项所述的方法，其中所述抗CD38抗体是或包含达雷木单抗。
90.根据权利要求1-89中任一项所述的方法，其中所述受试者已被施用3与15种之间或4与15种之间的先前疗法或约10种先前疗法。
91.根据权利要求86-90中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述3种或更多种先前疗法中的一种或多种后复发或是其难治的。
92.根据权利要求86-91中任一项所述的方法，其中所述受试者在所述3种或更多种先前疗法中的至少3种或至少4种后复发或是其难治的。
93.根据权利要求91或权利要求92所述的方法，其中所述受试者是硼替佐米、卡非佐米、来那度胺、泊马度胺和/或抗CD38单克隆抗体难治的或对其无反应。
94.根据权利要求1-93中任一项所述的方法，其中所述受试者已经进行过先前自体干细胞移植。
95.根据权利要求1-93中任一项所述的方法，其中所述受试者没有进行过先前自体干细胞移植。
96.根据权利要求1-95中任一项所述的方法，其中所述受试者没有活动性浆细胞白血病(PCL)或其病史。
97.根据权利要求1-96中任一项所述的方法，其中所述受试者已经患上继发性浆细胞白血病(PCL)。
98.根据权利要求1-97中任一项所述的方法，其中所述受试者是成人受试者或年龄为25或35岁或更大。
99.根据权利要求1-98中任一项所述的方法，其中所述受试者从诊断所述疾病或障碍起有约4年的时间或2与15年之间或2与12年之间的时间。
100.根据权利要求1-99中任一项所述的方法，其中所述受试者具有IMWG高风险细胞遗传学。
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