CN113698497A - 靶向b-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的主题在于提供用于治疗多发性骨髓瘤的方法和组合物。其涉及与B‑细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)以及包括该CAR的免疫应答细胞。本发明公开的BMC A‑特异性CAR具有提高的包括抗肿瘤活性的免疫激活特性。
Description
本申请是2017年8月4日提交到中华人民共和国国家知识产权局的发明名称为“靶向B-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体及其用途”、申请号为“201580075540.9”的发明专利申请的分案申请。
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年12月5日提交的序列号为62/088,309的美国临时专利申请的优先权，在此将其全部内容引入本文以供参考，并要求其优先权。
技术领域
本发明公开的主题提供用于治疗癌症的方法和组合物。其涉及特异性靶向B-细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)、包括该CAR的免疫应答细胞以及使用这些细胞用于治疗癌症(例如，多发性骨髓瘤)的方法。
背景技术
基于细胞的免疫疗法是对癌症治疗具有治疗潜力的疗法。T细胞和其它免疫细胞可以通过引入编码针对抗原的人工或合成受体的遗传物质被修饰为靶向肿瘤抗原，所述受体称为嵌合抗原受体(CAR)，其对所选择的抗原具有特异性。使用CAR的靶向T细胞疗法已经显示最近在治疗恶性血液病中获得临床成功。
多发性骨髓瘤(MM)是第二常见的恶性血液病8。大约25％的患者具有高风险细胞遗传学，这预示着中位生存期小于2年9,10。尽管最近取得进展，且不论细胞遗传学，在同种异体移植的移植物抗骨髓瘤(GvM)效应以外，该疾病仍被视为是不能治愈的。但是，同种异体移植受不适格(ineligibility)及移植相关的高致病率和高死亡率所限11。与GvM效应类似，通过自体过继(adoptive)T细胞疗法，可能治愈的T细胞效应可以通过最小的毒性实现。
骨髓瘤可以是检验过继T细胞疗法的理想病症。首先，如上文所示，同种异体移植表明即使用最少的或无伴行的化疗例如在非清髓性移植或移植后供体淋巴细胞输注之后，T细胞也可以是治愈性治疗方式。第二，可能通过消耗调节性T细胞(Tregs)而进行的调节化疗提高了过继T细胞疗法的效力4,12，这样，刚完成自体移植后的期间可以是给予T细胞的最佳时间，骨髓瘤是为数不多的自体干细胞移植是标准治疗的疾病之一。第三，免疫调节药物来那度胺(Lenalidomide)可以改善基于CAR的疗法，如已在小鼠中所示13，来那度胺常用于治疗MM。第四，当与实体瘤或髓外CLL相比4，过继T细胞疗法在骨髓为主的疾病例如ALL中作用最好6,7，与All类似，骨髓瘤是骨髓的疾病。
尽管有各种原因预计过继T细胞疗法可以在MM中作用良好，但将过继T细胞疗法扩展至骨髓瘤仍面临独特的挑战。与其他B细胞恶性肿瘤不类似，仅在2％的骨髓瘤患者中观察到CD19的表达14。而且，与CD19不类似，骨髓瘤中常见的细胞外免疫表型标志物(CD138、CD38和CD56)均在其他的基本的细胞类型中得以共表达，我们预料针对任何这些靶标的CAR将导致不能接受的“脱肿瘤/在靶(off tumor,on target)”毒性6，这即使在抗体良好耐受的靶标中也是致命的，靶向HER2的CAR既是如此15。因此，需要有新的治疗策略以设计针对在MM细胞中高度表达而在正常组织中限制性表达的抗原的CAR用于治疗多发性骨髓瘤，该策略能够以最小的毒性和免疫原性诱导有效的肿瘤根除。
发明内容
本发明公开的主题通常提供与B-细胞成熟抗原(BCMA)特异性结合的嵌合抗原受体(CAR)、包括该CAR的免疫应答细胞以及这些CAR和免疫应答细胞用于治疗多发性骨髓瘤的用途。
本发明公开的主题提供CAR。在一非限定性实施例中，CAR包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)。在某些实施方式中，人scFv以大约1x10-9M至大约3x10-6M的结合亲和力(KD)与BMCA特异性结合。在某些实施方式中，人scFv以大约1x10-9M至大约1x10-8M的结合亲和力(KD)与BCMA特异性结合。
在某些实施方式中，人scFv包括：包括与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的重链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：包括与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的重链可变区；和(b)包括与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：包括选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：包括选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区；和(b)包括选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区。
在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：(a)包括具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；(b)包括具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；(c)包括具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；(d)包括具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；(e)包括具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；(f)包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；(g)包括具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；(h)包括具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；(i)包括具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；(j)包括具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；(k)包括具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；(l)包括具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；(m)包括具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；(n)包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；(o)包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；(p)包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；或(q)包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区；和包括具有SEQ IDNO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ IDNO:53所示序列的氨基酸的重链可变区；和包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区；和包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区；和包括具有SEQ IDNO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ IDNO:65所示序列的氨基酸的重链可变区；和包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。
在某些非限定性实施方式中，人scFv包括所述重链和轻链二者，任选地具有接头(linker)序列，例如，在重链可变区和轻链可变区之间具有接头肽。例如，在某些非限定性实施方式中，人scFv包括(i)包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区和(ii)包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，人scFv包括(i)包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区和(ii)包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，人scFv包括(i)包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区和(ii)包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，人scFv包括(i)包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区和(ii)包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头肽。在某些实施方式中，人scFv包括(i)包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区和(ii)包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头肽。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列的重链可变区CDR3；和(b)包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180和186的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；和(b)包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；和(b)包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1。在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包括选自SEQID NO:90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180和186的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(b)包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(c)包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:103所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(d)包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(e)包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(f)包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(g)包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(h)包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(i)包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:139所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(j)包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(k)包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(l)包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:157所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(m)包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(n)包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(o)包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:175所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；(p)包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；或(q)包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(b)包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:100所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(c)包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(d)包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:112所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(e)包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:118所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(f)包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(g)包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(h)包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:136所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(i)包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(j)包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(k)包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:154所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(l)包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(m)包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(n)包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:172所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(o)包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；(p)包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；或(q)包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:190所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，人scFv包括：(a)包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(b)包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:98所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(c)包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:105所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(d)包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:112所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(e)包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:118所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(f)包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(g)包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(h)包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(i)包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(j)包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(k)包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ IDNO:151所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(l)包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(m)包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(n)包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(o)包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；(p)包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；或(q)包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ IDNO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ IDNO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。在某些实施方式中，人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，BCMA包括SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。在某些实施方式中，人scFv与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的VL CDR3。
根据本发明公开的主题，细胞外抗原结合结构域与跨膜结构域共价连接。细胞外抗原结合结构域可以包括与细胞外抗原结合结构域的5’端共价连接的信号肽。在某些实施方式中，CAR的跨膜结构域包括CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。在某些实施方式中，跨膜结构域包括CD8多肽。在某些实施方式中，跨膜结构域包括CD28多肽。
根据本发明公开的主题，细胞内结构域包括CD3ζ多肽。在某些实施方式中，细胞内结构域还包括至少一个信号区。在某些实施方式中，至少一个信号区包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽、PD-1多肽、CTLA-4多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。在某些实施方式中，信号区是共刺激信号区。在某些实施方式中，共刺激信号区包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。在某些实施方式中，至少一个共刺激信号区包括CD28多肽。在某些实施方式中，至少一个共刺激信号区包括4-1BB多肽。在一具体的非限定性实施方式中，跨膜结构域包括CD28多肽，细胞内结构域包括CD3ζ多肽，至少一个信号结构域包括CD28多肽。
在某些实施方式中，CAR被重组表达。CAR可以由载体表达。在某些实施方式中，载体是γ-逆转录病毒载体。
本发明公开的主题还提供分离的包括上述的CAR的免疫应答细胞。在某些实施方式中，分离的免疫应答细胞用CAR转导，例如，CAR在免疫应答细胞的表面上被组成性地表达。在某些实施方式中，分离的免疫应答细胞进一步用至少一种共刺激配体转导，使得免疫应答细胞表达至少一种共刺激配体。在某些实施方式中，至少一种共刺激配体选自4-1BBL、CD80、CD86、CD70、OX40L、CD48、TNFRSF14及其组合。在某些实施方式中，分离的免疫应答细胞进一步用至少一种细胞因子转导，使得免疫应答细胞分泌至少一种细胞因子。在某些实施方式中，至少一种细胞因子选自IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-11、IL-12、IL-15、IL-17、IL-21及其组合。在某些实施方式中，分离的免疫应答细胞选自T细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、人胚胎干细胞、淋巴祖细胞、T细胞-前体细胞和可以由其分化出淋巴细胞的多能干细胞。在某些实施方式中，免疫应答细胞是T细胞。
本发明公开的主题进一步提供编码本发明公开的CAR的核酸分子、包括该核酸分子的载体以及表达该核酸分子的宿主细胞。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ IDNO:207所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:208所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:209所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:229所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:230所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ IDNO:231所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:232所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:233所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:234所示序列的核酸。在某些实施方式中，核酸分子包括具有SEQ ID NO:235所示序列的核酸。在某些实施方式中，载体是γ-逆转录病毒载体。在某些实施方式中，宿主细胞是T细胞。
而且，本发明公开的主题提供使用上述免疫应答细胞降低受试者的肿瘤负荷的方法。例如，本发明公开的主题提供降低受试者的肿瘤负荷的方法，其中该方法包括将有效量的本发明公开的免疫应答细胞给予受试者，从而诱导受试者的肿瘤细胞死亡。在某些实施方式中，该方法降低肿瘤细胞的数量。在另一实施方式中，该方法减小肿瘤的尺寸。在再另一实施方式中，该方法根除受试者的肿瘤。在某些实施方式中，肿瘤选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，肿瘤是多发性骨髓瘤。在某些实施方式中，受试者是人。在某些实施方式中，免疫应答细胞是T细胞。
而且，本发明公开的主题提供使用上述免疫应答细胞增加或延长具有瘤形成的受试者的生存期的方法。例如，本发明公开的主题提供增加或延长具有瘤形成的受试者的生存期的方法，其中该方法包括将有效量的本发明公开的免疫应答细胞给予受试者，从而增加或延长受试者的生存期。在某些实施方式中，瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，瘤形成是多发性骨髓瘤。在某些实施方式中，该方法降低或根除受试者的肿瘤负荷。
本发明公开的主题还提供产生与BCMA结合的免疫应答细胞的方法。在一非限定性实施例中，该方法包括向免疫应答细胞中导入编码包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的嵌合抗原受体(CAR)的核酸序列，其中细胞外抗原结合结构域包括与BCMA特异性结合的人scFv。
本发明公开的主题进一步提供药物组合物，其包括有效量的本发明公开的免疫应答细胞和药学可接受的赋形剂。在某些实施方式中，药物组合物用于治疗瘤形成。在某些实施方式中，瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，瘤形成是多发性骨髓瘤。
本发明公开的主题进一步提供用于治疗瘤形成的药盒，其包括本发明公开的免疫应答细胞。在某些实施方式中，药盒还包括用于使用免疫应答细胞治疗瘤形成的书面说明书。在某些实施方式中，瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，瘤形成是多发性骨髓瘤。
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)。
2.根据实施方式1所述的CAR，其中所述CAR的所述人scFv以大约1x10-9M至大约3x10-6M的结合亲和力(KD)与B细胞成熟抗原(BMCA)结合。
3.根据实施方式1或2所述的CAR，其中所述CAR的所述人scFv以大约1x10-9M至大约1x10-8M的结合亲和力(KD)与B细胞成熟抗原(BMCA)结合。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括与选自SEQID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的重链可变区。
5.根据实施方式1-4中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括选自SEQ IDNO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有选自SEQID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的序列的氨基酸的重链可变区。
7.根据实施方式6所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区。
8.根据实施方式6所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区。
9.根据实施方式6所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区。
10.根据实施方式6所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区。
11.根据实施方式6所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区。
12.根据实施方式1-11中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少大约80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的序列的氨基酸的轻链可变区。
13.根据实施方式1-12中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括选自SEQID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区。
14.根据实施方式1-13中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的序列的氨基酸的轻链可变区。
15.根据实施方式14所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区。
16.根据实施方式14所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区。
17.根据实施方式14所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区。
18.根据实施方式14所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区。
19.根据实施方式14所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。
20.根据实施方式1-19中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的重链可变区；和(b)包括与选自SEQID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少80％、大约81％、大约82％、大约83％、大约84％、大约85％、大约86％、大约87％、大约88％、大约89％、大约90％、大约91％、大约92％、大约93％、大约94％、大约95％、大约96％、大约97％、大约98％或大约99％的氨基酸序列的轻链可变区。
21.根据实施方式1-20中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区；和(b)包括选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区。
22.根据实施方式1-21中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括具有选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的序列的氨基酸的重链可变区；和(b)包括具有选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的序列的氨基酸的轻链可变区。
23.根据实施方式22所述的CAR，其中所述人scFv包括：
(a)包括具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(b)包括具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(c)包括具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(d)包括具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(e)包括具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(f)包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(g)包括具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(h)包括具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(i)包括具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(j)包括具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(k)包括具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(l)包括具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(m)包括具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(n)包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(o)包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(p)包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；或
(q)包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，和包括具有SEQ IDNO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。
24.根据实施方式23所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区。
25.根据实施方式23所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区。
26.根据实施方式23所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区。
27.根据实施方式23所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区。
28.根据实施方式23所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区。
29.根据实施方式1-28中任一项所述的CAR，其中所述人scFv在人scFv的重链可变区和轻链可变区之间包括接头。
30.根据实施方式1-29中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR3；和(b)包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR3。
31.根据实施方式30所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180和186的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR2；和(b)包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR2。
32.根据实施方式30或31所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括选自SEQ IDNO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列及其保守修饰的重链可变区CDR1；和(b)包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列及其保守修饰的轻链可变区CDR1。
33.根据实施方式1-32中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：(a)包括选自SEQ ID NO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(b)包括选自SEQ ID NO:90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180和186的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(c)包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(d)包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(e)包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列的轻链可变区CDR3。
34.根据实施方式1-33中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：
(a)包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(b)包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(c)包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(d)包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(e)包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(f)包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(g)包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(h)包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(i)包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(j)包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(k)包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(l)包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(m)包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(n)包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(o)包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；
(p)包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3；或
(q)包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸或其保守修饰的重链可变区CDR3。
35.根据实施方式34所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
36.根据实施方式34所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
37.根据实施方式34所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
38.根据实施方式34所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
39.根据实施方式34所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3。
40.根据实施方式1-39中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：
(a)包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(b)包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(c)包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(d)包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:112所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(e)包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:118所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(f)包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(g)包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(h)包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(i)包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(j)包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(k)包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(l)包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(m)包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(n)包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(o)包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；
(p)包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3；或
(q)包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸或其保守修饰的轻链可变区CDR3。
41.根据实施方式40所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
42.根据实施方式40所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
43.根据实施方式40所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
44.根据实施方式40所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
45.根据实施方式40所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
46.根据实施方式1-45中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括：
(a)包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:90所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(b)包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:96所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(c)包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:102所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(d)包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:108所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:112所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(e)包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:114所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:118所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(f)包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(g)包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:126所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(h)包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:132所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(i)包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(j)包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(k)包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(l)包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(m)包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(n)包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(o)包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(p)包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；或
(q)包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
47.根据实施方式46所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
48.根据实施方式46所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
49.根据实施方式46所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
50.根据实施方式46所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:122所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
51.根据实施方式46所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ IDNO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
52.根据实施方式1-51中任一项所述的CAR，其中所述BCMA包括SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。
53.根据实施方式1-52中任一项所述的CAR，其中所述人scFv与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合。
54.根据实施方式53所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL。
55.根据实施方式53或54所述的CAR，其中所述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:124所示序列的氨基酸的VL CDR3。
56.根据实施方式1-55中任一项所述的CAR，其中所述人scFv包括与所述细胞外抗原结合结构域的5’端共价连接的信号肽。
57.根据实施方式1-56中任一项所述的CAR，其中所述跨膜结构域包括CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。
58.根据实施方式57所述的CAR，其中所述跨膜结构域包括CD8多肽。
59.根据实施方式57所述的CAR，其中所述跨膜结构域包括CD28多肽。
60.根据实施方式1-59中任一项所述的CAR，其中所述细胞内结构域包括CD3ζ多肽。
61.根据实施方式1-60中任一项所述的CAR，其中所述细胞内结构域还包括至少一个信号区。
62.根据实施方式61所述的CAR，其中所述至少一个信号区包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽、PD-1多肽、CTLA-4多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。
63.根据实施方式61或62所述的CAR，其中所述信号区是共刺激信号区。
64.根据实施方式63所述的CAR，其中所述至少一个共刺激信号区包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。
65.根据实施方式64所述的CAR，其中所述至少一个共刺激信号区包括CD28多肽。
66.根据实施方式64所述的CAR，其中所述至少一个共刺激信号区包括4-1BB多肽。
67.根据实施方式61-65中任一项所述的CAR，其中所述跨膜结构域包括CD28多肽，所述细胞内结构域包括CD3ζ多肽，且所述信号结构域包括CD28多肽。
68.根据实施方式61-64和66中任一项所述的CAR，其中所述跨膜结构域包括CD8多肽，所述细胞内结构域包括CD3ζ多肽，且所述信号结构域包括4-1BB多肽。
69.根据实施方式1-68中任一项所述的CAR，其中所述CAR是重组表达的。
70.根据实施方式1-69中任一项所述的CAR，其中所述CAR由载体表达。
71.根据实施方式70所述的CAR，其中所述载体是γ-逆转录病毒载体。
72.一种分离的免疫应答细胞，其包括根据前述实施方式中任一项所述的CAR。
73.根据实施方式72所述的分离的免疫应答细胞，其中所述免疫应答细胞用所述CAR转导。
74.根据实施方式72或73所述的分离的免疫应答细胞，其中所述CAR在所述免疫应答细胞的表面上组成性地表达。
75.根据实施方式72-74中任一项所述的分离的免疫应答细胞，其中所述分离的免疫应答细胞进一步用至少一种共刺激配体转导，使得所述免疫应答细胞表达所述至少一种共刺激配体。
76.根据实施方式75所述的分离的免疫应答细胞，其中所述至少一种共刺激配体选自4-1BBL、CD80、CD86、CD70、OX40L、CD48、TNFRSF14及其组合。
77.根据实施方式72-76中任一项所述的分离的免疫应答细胞，其中所述分离的免疫应答细胞进一步用至少一种细胞因子转导，使得所述免疫应答细胞分泌所述至少一种细胞因子。
78.根据实施方式77所述的分离的免疫应答细胞，其中所述至少一种细胞因子选自IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-11、IL-12、IL-15、IL-17、IL-21及其组合。
79.根据实施方式72-78中任一项所述的分离的免疫应答细胞，其中所述免疫应答细胞选自T细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、人胚胎干细胞、淋巴祖细胞、T细胞-前体细胞和可以由其分化出淋巴细胞的多能干细胞。
80.根据实施方式79所述的分离的免疫应答细胞，其中所述免疫应答细胞是T细胞。
81.一种分离的核酸分子，其编码实施方式1-71中任一项所述的嵌合抗原受体(CAR)。
82.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:207所示序列的核酸。
83.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:208所示序列的核酸。
84.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:209所示序列的核酸。
85.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:229所示序列的核酸。
86.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:230所示序列的核酸。
87.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:231所示序列的核酸。
88.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:232所示序列的核酸。
89.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:233所示序列的核酸。
90.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:234所示序列的核酸。
91.根据实施方式81所述的分离的核酸分子，其包括具有SEQ ID NO:235所示序列的核酸。
92.一种载体，其包括实施方式81-91中任一项所述的分离的核酸分子。
93.根据实施方式92所述的载体，其中所述载体是γ-逆转录病毒载体。
94.一种宿主细胞，其表达实施方式81-91中任一项所述的核酸分子。
95.根据实施方式94所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是T细胞。
96.一种降低受试者的肿瘤负荷的方法，其包括将有效量的实施方式72-80中任一项所述的免疫应答细胞给予受试者，从而诱导所述受试者的肿瘤细胞死亡。
97.根据实施方式96所示的方法，其中所述方法降低肿瘤细胞的数量。
98.根据实施方式96所述的方法，其中所述方法减小肿瘤的尺寸。
99.根据实施方式96所述的方法，其中所述方法根除所述受试者的肿瘤。
100.根据实施方式96-99中任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。
101.根据实施方式100所述的方法，其中所述肿瘤是多发性骨髓瘤。
102.根据实施方式96-101中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
103.根据实施方式96-102中任一项所述的方法，其中所述免疫应答细胞是T细胞。
104.一种增加或延长具有瘤形成的受试者的生存期的方法，其包括将有效量的实施方式72-80中任一项所述的免疫应答细胞给予受试者，从而增加或延长所述受试者的生存期。
105.根据实施方式104所述的方法，其中所述瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。
106.根据实施方式105所述的方法，其中所述瘤形成是多发性骨髓瘤。
107.根据实施方式104-106中任一项所述的方法，其中所述方法降低或根除所述受试者的肿瘤负荷。
108.一种产生与B细胞成熟抗原(BMCA)结合的免疫应答细胞的方法，其包括向所述免疫应答细胞中导入核酸序列，所述核酸序列编码包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的嵌合抗原受体(CAR)，其中所述细胞外抗原结合结构域包括与BMCA特异性结合的人scFv。
109.一种药物组合物，其包括有效量的实施方式72-80中任一项所述的免疫应答细胞和药学可接受的赋形剂。
110.根据实施方式109所述的药物组合物，其中所述药物组合物用于治疗瘤形成。
111.根据实施方式110所述的药物组合物，其中所述瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。
112.根据实施方式111所述的药物组合物，其中所述瘤形成是多发性骨髓瘤。
113.一种用于治疗瘤形成的药盒，其包括实施方式72-80中任一项所述的免疫应答细胞。
114.根据实施方式113所述的药盒，其中所述药盒还包括用于使用所述免疫应答细胞治疗具有瘤形成的受试者的书面说明书。
115.根据实施方式113或114所述的药盒，其中所述瘤形成选自多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。
116.根据实施方式115所述的药盒，其中所述瘤形成是多发性骨髓瘤。
附图说明
以下可以结合附图理解以举例方式给出的具体实施方式，但无意于将本发明限定为所描述的具体的实施方式。
图1表示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的靶向BCMA的嵌合抗原受体。
图2显示正常组织和人癌细胞系中的人BCMA表达。
图3显示本发明公开的BCMA CAR在人T细胞上的表达。
图4显示靶向人BCMA的人scFv与小鼠BCMA的交叉反应活性。
图5显示本发明公开的BCMA对于过量表达BCMA的3T3细胞的杀伤活性。
图6显示本发明公开的BCMA对于人多发性骨髓瘤细胞系的杀伤活性。
图7表示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的靶向BCMA的嵌合抗原受体。
图8显示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的编码靶向BCMA的CAR的核酸分子。
图9显示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的编码靶向BCMA的CAR的核酸分子。
图10显示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的编码靶向BCMA的CAR的核酸分子。
图11显示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的编码靶向BCMA的CAR的核酸分子。
图12显示根据本发明公开主题的一个非限定性实施方式的编码靶向BCMA的CAR的核酸分子。
图13显示靶向BCMA的CAR T细胞对于人多发性骨髓瘤细胞系的细胞毒性。
图14显示靶向BCMA的CAR T细胞的细胞因子分泌的诱导。
图15显示靶向BCMA的CAR T细胞的抗肿瘤活性。
图16A和16B显示靶向BCMA的CAR T细胞的杀伤活性。(A)表示时间0时GFP+肿瘤系的百分比。(B)表示时间36小时时杀伤GFP+肿瘤系的百分比。
图17描述ET140-3的表位定位。
图18描述ET140-24的表位定位。
图19描述ET140-54的表位定位。
图20描述ET140-3、ET140-24和ET140-54的表位定位。
图21描述ET140-3、ET140-24、ET140-37、ET140-40和ET140-54的ELISA筛选数据。
图22描述ET140-3、ET140-24、ET140-37、ET140-40和ET140-54的FCAS筛选数据。
具体实施方式
本发明公开的主题通常提供靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)。在一非限定性实例中，CAR包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中细胞外抗原结合结构域与BCMA特异性结合。本发明公开的主题还提供表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞(例如，T细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、人胚胎干细胞和可由其分化出淋巴样细胞的多能干细胞)，以及使用这些免疫应答细胞治疗肿瘤例如多发性骨髓瘤的方法。
I.定义
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所属领域的技术人员通常理解的含义。以下参考文献为本领域技术人员提供本发明中使用的许多术语的一般定义：Singleton等，Dictionary of Microbiology and Molecular Biology(第二版，1994)；The Cambridge Dictionary of Science and Technology(Walker编，1988)；TheGlossary of Genetics，第五版，R.Rieger等(编)，Springer Verlag(1991)；和Hale&Marham，The Harper Collins Dictionary of Biology(1991)。除非另有说明，本文使用的以下术语具有下文给出的含义。
本文使用的术语“约”或“大约”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分地取决于如何测量或确定该值，即测量系统的局限性。例如，根据本领域的惯例，“约”可以指在3个或多于3个标准偏差的范围内。或者，“约”可以表示给定值的高达20％、优选高达10％、更优选高达5％、再更优选高达1％的范围。或者，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示在数值的一个数量级内、优选在5倍以内、更优选在2倍以内。
本文使用的术语“细胞群体”是指表达相似或不同表型的至少两种细胞的组。在非限定性实例中，细胞群体可以包括至少约10个、至少约100个、至少约200个、至少约300个、至少约400个、至少约500个、至少约600个、至少约700个、至少约800个、至少约900个、至少约1000个表达相似或不同表型的细胞。
本文使用的术语“抗体”不仅指完整的抗体分子，而且指保留免疫原结合能力的抗体分子片段。此类片段在本领域中也是众所周知的，并且在体外和体内常规使用。因此，本文使用的术语“抗体”不仅指完整的免疫球蛋白分子，而且指众所周知的活性片段F(ab')2和Fab。缺少完整抗体的Fc片段的F(ab')2和Fab片段，更快地从循环中清除，并且可能具有更少的完整抗体的非特异性组织结合(Wahl等，J.Nucl.Med.24：316～325(1983))。本发明的抗体包括完整天然抗体、双特异性抗体；嵌合抗体；Fab、Fab’、单链V区片段(scFv)、融合多肽和非常规抗体。
本文使用的术语“单链可变片段”或“scFv”是免疫球蛋白(例如小鼠或人)的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白，其共价连接形成VH::VL异源二聚体。重链(VH)和轻链(VL)直接连接或通过肽编码接头(例如，10、15、20、25个氨基酸)连接，该肽编码接头将VH的N-端与VL的C-端连接，或者将VH的C-端与VL的N-端连接。接头通常富含用于柔性的甘氨酸，以及用于溶解性的丝氨酸或苏氨酸。接头可以连接细胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区。接头的非限定性的例子公开于以下文献中：Shen等,Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO 2014/087010，在此将其内容全文并入作为参考。在某些实施方式中，接头是G4S接头。
在某些非限制性实例中，接头包括具有如下文所提供的SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸：
GGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:210]。
在某些实施方式中，编码氨基酸序列SEQ ID NO:210的核酸序列在下面提供的SEQID NO:211中给出：
GGTGGAGGTGGATCAGGTGGAGGTGGATCTGGTGGAGGTGG ATCT[SEQ ID NO:211]。
在某些实施方式中，接头包括具有如下提供的SEQ ID NO:69中所示序列的氨基酸。
SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA[SEQ ID NO:69]。
在某些实施方式中，编码氨基酸序列SEQ ID NO:69的核酸序列在下面提供的SEQID NO:70中给出：
tctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcc[SEQID NO:70]。
尽管去除了恒定区并引入了接头，scFv蛋白仍保留了原始免疫球蛋白的特异性。单链Fv多肽抗体可以由包括VH-和VL-编码序列的核酸表达，如Huston等人所述(Proc.Nat.Acad.Sci.USA，85：5879～5883，1988)。还可参见美国专利第5,091,513、5,132,405和4,956,778号；以及美国专利公开第20050196754和20050196754号。具有抑制活性的拮抗性scFv已有描述(参见例如，Zhao等，Hyrbidoma(Larchmt)200827(6)：455～51；Peter等，J Cachexia Sarcopenia Muscle 2012年8月12日；Shieh等，J Imunol 2009 183(4)：2277～85；Giomarelli等，Thromb Haemost 2007 97(6)：955～63；Fife等，J Clin Invst2006 116(8)：2252～61；Brocks等，Immunotechnology 1997 3(3)：173～84；Moosmayer等，Ther Immunol 1995 2(10：31～40)。具有刺激活性的激动性scFv已有描述(参见，例如，Peter等，J Bioi Chern 2003 25278(38)：36740～7；Xie等，Nat Biotech 1997 15(8)：768～71；Ledbetter等，Crit Rev Immunol 199717(5-6)：427～55；Ho等，BioChim BiophysActa 2003 1638(3)：257～66)。
本文使用的“F(ab)”是指结合抗原、但是是单价的并且不具有Fc部分的抗体结构的片段，例如，由木瓜蛋白酶消化的抗体产生两个F(ab)片段和一个Fc片段(例如，重(H)链恒定区；不结合抗原的Fc区)。
本文使用的“F(ab')2”是指由胃蛋白酶消化完整IgG抗体产生的抗体片段，其中该片段具有两个抗原结合(ab')(二价)区，其中每个(ab')区包括两条分开的氨基酸链，H链的一部分通过S-S键与轻(L)链连接用于结合抗原，其中H链的剩余部分连接在一起。“F(ab')2”片段可以分裂成两个单独的Fab'片段。
本文使用的术语“载体”是指任何遗传元件，例如质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、病毒、病毒颗粒等，其当关联有适当的控制元件时能够复制，并且其可以将基因序列转移到细胞中。因此，该术语包括克隆和表达载体，以及病毒载体和质粒载体。
本文使用的术语“表达载体”是指一种重组核酸序列，即重组DNA分子，其含有所需的编码序列和在特定宿主生物体中表达可操作地连接的编码序列所必需的适当的核酸序列。用于在原核生物中表达所必需的核酸序列通常包括启动子、操纵子(可选的)和核糖体结合位点，通常伴有其它序列。已知真核细胞利用启动子、增强子和终止子及聚腺苷酸化信号。
本文使用的术语“CDR”定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，其为免疫球蛋白重链和轻链的高变区。参见例如，Kabat等人,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,4th U.S.Department of Health and Human Services,National Institutesof Health(1987)。通常，抗体在可变区中包括三个重链和三个轻链CDR或CDR区。CDR提供了大多数使抗体与抗原或表位结合的接触残基。在某些实施方式中，CDR区利用Kabat系统加以界定(Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH Publication No.91-3242)。
本文使用的术语“亲和力”(affinity)是指结合强度的量度。不受理论的束缚，亲和力取决于抗体结合位点和抗原决定簇之间的立体化学匹配的紧密程度、它们之间接触区域的大小以及带电和疏水基团的分布。亲和力还包括术语“亲合力”(avidity)，其是指形成可逆复合物后抗原-抗体键的强度。用于计算抗体对抗原的亲和力的方法在本领域是已知的，包括使用结合实验来计算亲和力。功能试验(例如，流式细胞术试验)中的抗体活性也反映抗体亲和力。可以使用功能试验(例如，流式细胞术试验)对抗体和亲和力进行表型鉴定和比较。
可用于本发明方法的核酸分子包括任何编码本发明多肽或其片段的核酸分子。此类核酸分子不需要与内源核酸序列100％相同，但通常表现出基本同一性。与内源序列具有“基本同一性”的多核苷酸通常能够与双链核酸分子的至少一条链杂交。“杂交”是指在各种严格条件下，在互补多核苷酸序列(例如，本文所述的基因)或其部分之间配对形成双链分子。(参见，例如，Wahl，G.M.和S.L.Berger(1987)Methods Enzymol，152：399；Kimmel，A.R.(1987)Methods Enzymol，152：507)。
例如，严格的盐浓度通常小于约750mM NaCl和75mM柠檬酸三钠，优选小于约500mMNaCl和50mM柠檬酸三钠，更优选小于约250mM NaCl和25mM柠檬酸三钠。低严格杂交可以在不存在有机溶剂例如甲酰胺的情况下获得，而高严格杂交可以在至少约35％甲酰胺、更优选至少约50％甲酰胺的存在下获得。严格温度条件通常包括至少约30℃、更优选至少约37℃、最优选至少约42℃的温度。改变其它参数，例如杂交时间、洗涤剂例如十二烷基硫酸钠(SDS)的浓度、以及载体DNA的包含或排除，对本领域技术人员来说是公知的。通过根据需要组合这些不同条件来实现各种严格的水平。在优选的实施方式中，杂交将在30℃在750mMNaCl、75mM柠檬酸三钠和1％SDS中发生。在更优选的实施方式中，杂交将在37℃在500mMNaCl、50mM柠檬酸三钠、1％SDS、35％甲酰胺和100μg/ml变性鲑鱼精子DNA(ssDNA)中发生。在最优选的实施方式中，杂交将在42℃在250mM NaCl、25mM柠檬酸三钠、1％SDS、50％甲酰胺和200μg/ml ssDNA中发生。这些条件的有用改变对于本领域技术人员将是显而易见的。
对于大多数应用，杂交后的洗涤步骤也将在严格性上变化。洗涤严格性条件可以通过盐浓度和温度来定义。如上文，可以通过降低盐浓度或通过升高温度来提高洗涤严格性。例如，洗涤步骤的严格的盐浓度优选小于约30mM NaCl和3mM柠檬酸三钠，最优选小于约15mM NaCl和1.5mM柠檬酸三钠。洗涤步骤的严格温度条件通常包括至少约25℃、更优选至少约42℃、甚至更优选至少约68℃的温度。在优选的实施方式中，洗涤步骤将在25℃在30mMNaCl、3mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中发生。在更优选的实施方式中，洗涤步骤将在42℃在15mM NaCl、1.5mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中发生。在更优选的实施方式中，洗涤步骤将在68℃在15mM NaCl、1.5mM柠檬酸三钠和0.1％SDS中发生。这些条件的其他变化对于本领域技术人员将是显而易见的。杂交技术是本领域技术人员公知的，并且描述于例如Benton和Davis(Science 196：180，1977)；Grunstein和Rogness(Proc.Natl.Acad.Sci.，USA 72：3961，1975)；Ausubel等(Current Protocols in Molecular Biology，WileyInterscience，New York，2001)；Berger和Kimmel(Guide to Molecular CloningTechniques，1987，Academic Press，New York)；和Sambrook等，Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory Press，New York。
“基本同一性”是指与参照氨基酸序列(例如，本文所述的任何一种氨基酸序列)或核酸序列(例如，本文所述的任何一种核酸序列)表现出至少50％同一性的多肽或核酸分子。优选地，此类序列在氨基酸水平或核酸水平上与用于比较的序列的同一性为至少60％，更优选80％或85％，更优选90％、95％或甚至99％相同。
序列同一性通常使用序列分析软件(例如，Sequence Analysis SoftwarePackage of the Genetics Computer Group，University of Wisconsin BiotechnologyCenter，1710University Avenue，Madison，Wis.53705、BLAST、BESTFIT、GAP或PILEUP/PRETTYBOX程序)测量。此类软件通过对各种取代、缺失和/或其它修饰指定同源性程度来匹配相同或相似的序列。在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程序，e-3和e-100之间的概率得分表示密切相关的序列。
本文使用的术语“类似物”是指结构相关的多肽或核酸分子，其具有参照多肽或核酸分子的功能。
本文使用的术语“配体”是指结合受体的分子。具体地，配体结合另一个细胞上的受体，使细胞-细胞识别和/或相互作用。
本文使用的术语“疾病”是指破坏或干扰细胞、组织或器官的正常功能的任何病症或障碍。疾病的实例包括瘤形成或细胞的病原体感染。
本文使用的术语“有效量”是指足以具有治疗效果的量。在某些实施方式中，“有效量”是足以阻止、改善或抑制瘤形成的持续增殖、生长或转移(例如，侵袭或迁移)的量。
本文使用的术语“异源性核酸分子或多肽”是指在正常情况下不存在于细胞或获自细胞的样品中的核酸分子(例如cDNA、DNA或RNA分子)或多肽。该核酸可以来自另一有机体，或者其可以是，例如，在细胞或样品中通常不表达的mRNA分子。
如本文所用，术语“免疫应答细胞”是指在免疫应答中发挥功能的细胞或其祖细胞或子代。
如本文所用，术语“调节”是指正向或负向地改变。示例性调节包括约1％、约2％、约5％、约10％、约25％、约50％、约75％或约100％的变化。
如本文所用，术语“增加”是指正向地改变至少约5％，包括但不限于正向地改变约5％、约10％、约25％、约30％、约50％、约75％、或约100％。
如本文所用，术语“减少”是指负向地改变至少约5％，包括但不限于负向地改变约5％、约10％、约25％、约30％、约50％、约75％或约100％。
如本文所用，术语“分离的细胞”是指与天然地伴随细胞的分子和/或细胞组分分离的细胞。
如本文所用，术语“分离的”、“纯化的”或“生物纯的”是指材料不同程度地不含在其天然状态下发现的通常伴随其的组分。“分离”表示与原始来源或环境的分开程度。“纯化”表示比分离更高的分开程度。“纯化的”或“生物纯的”蛋白质充分地不含其它物质，使得没有任何杂质对蛋白质的生物特性产生实质影响或引起其他不利后果。也就是说，如果本发明的核酸或肽在通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞物质、病毒物质或培养基，或化学合成时基本上不含化学前体或其它化学品，则其是纯化的。纯度和均一性通常使用分析化学技术例如聚丙烯酰胺凝胶电泳或高效液相色谱法测定。术语“纯化的”可以表示核酸或蛋白质在电泳凝胶中产生基本上一条带。对于可以进行修饰例如磷酸化或糖基化的蛋白质，不同的修饰可以产生不同的分离蛋白，其可以分别纯化。
如本文所用，“分泌的”是指多肽通过内质网、高尔基体经由分泌通路从细胞中释放，以及作为暂时融合在细胞质膜处并将蛋白质释放到细胞外部的囊泡而释放。
如本文所用，术语“特异性结合”或“特异性与…结合”或“特异性靶向”是指多肽或其片段识别并结合所关注的生物分子(例如多肽)，但基本上不识别并结合样品中的其他分子，例如天然地包括本发明多肽的生物样品中的其他分子。
如本文所用，术语“治疗(treating、treatment)”是指试图改变所治疗的个体或细胞的疾病进程的临床干预，并且可以用于预防，或在临床病理过程期间进行。治疗的治疗效果包括，但不限于，预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理学后果、防止转移、降低疾病进展的速度、改善或减轻疾病状态、以及缓解或改善预后。通过预防疾病或病症的进展，治疗可以防止受影响或经诊断的受试者或疑似患有该病症的受试者中的病症引起的恶化，而且治疗还可以防止具有该病症风险或疑似患有该病症的受试者中病症的发作或病症症状。
如本文所用，术语“受试者”是指任何动物(例如哺乳动物)，其包括但不限于人、非人灵长类动物、啮齿动物等(例如，其将是特定治疗的接受者、或从其中收获细胞)。
II.B细胞成熟抗原(BCMA)
BCMA是过继T细胞疗法(例如CAR疗法)的理想靶标，因为BCMA参与B细胞分化和信号转导，并且已知在非恶性分化的B细胞和浆细胞上表达。尽管诱导B细胞发育不全可能有风险，CD19 CAR诱导的B细胞发育不全已经显著地耐受良好。一些研究小组已经确认了BCMA的多发性骨髓瘤(MM)表面表达，一个研究小组发现它是作为来自新鲜或冷冻的患者骨髓样品中的恶性浆细胞的FACS标志物的CD138的替代物，平均相对平均荧光强度(MFI)为9-16(n＝35)1,2。
在某些非限定性实施方式中，BCMA是具有SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的人BCMA或其片段。
SEQ ID NO:71提供如下：
MLQMAGQCSQNEYFDSLLHACIPCQLRCSSNTPPLTCQRYCNASVTNSVKGTNAILWTCLGLSLIISLAVFVLMFLLRKINSEPLKDEFKNTGSGLLGMANIDLEKSRTGDEIILPRGLEYTVEECTCEDCIKSKPKVDSDHCFPLPAMEEGATILVTTKTNDYCKSLPAALSATEIEKSISAR[SEQ ID NO:71]。
III.嵌合抗原受体(CAR)
嵌合抗原受体(CAR)是工程化的受体，其将感兴趣的特异性移植或赋予到免疫效应细胞。CAR可以用于通过逆转录病毒载体促进其编码序列的转移将单克隆抗体的特异性移植到T细胞上。
具有三代CAR。“第一代”CAR通常由细胞外抗原结合结构域(例如单链可变片段(scFv))与跨膜结构域融合、再与T细胞受体链的胞质/细胞内结构域融合而构成。“第一代”CAR通常具有来自CD3ζ链的细胞内结构域，其是来自内源性TCR的信号转导的主要传递者。“第一代”CAR可以提供从头(de novo)的抗原识别，并通过其在单个融合分子中的CD3ζ链信号结构域导致CD4+和CD8+ T细胞的激活，而不依赖于HLA介导的抗原递呈。“第二代”CAR将来自各种共刺激分子(例如CD28、4-1BB、ICOS、OX40)的细胞内结构域添加到CAR的胞质尾区，以向T细胞提供额外的信号。“第二代”CAR包括既提供共刺激(例如CD28或4-1BB)又提供激活(CD3ζ)的那些CAR。临床前研究表明，“第二代”CAR可以提高T细胞的抗肿瘤活性。例如，在慢性淋巴细胞白血病(CLL)和急性淋巴细胞白血病(ALL)患者中，靶向CD19分子的临床试验证实了“第二代”CAR修饰的T细胞的强烈功效。“第三代”CAR包括提供多种共刺激(例如CD28和4-1BB)和激活(CD3ζ)的那些CAR。
根据本发明公开的主题，CAR包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中细胞外抗原结合结构域与BCMA结合。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是scFv。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是任选地交联的Fab。在某些实施方式中，细胞外结合结构域是F(ab)2。在某些实施方式中，任何前述分子均可以包括在具有异源序列的融合蛋白中以形成细胞外抗原结合结构域。在一具体的非限定性实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括与人BCMA特异性结合的人scFv。
在某些非限定性实施方式中，CAR的细胞外抗原结合结构域对BCMA具有高结合特异性以及高结合亲和力。例如，在这些实施方式中，CAR的细胞外抗原结合结构域(例如以人scFv或其类似物实施者)以约3x10-6M或更低的解离常数(KD)与BCMA结合。在某些实施方式中，KD为约1x10-6M或更低、约1x10-7M或更低、约1x10-8M或更低、约1x10-9M或更低、约1x10-10M或更低、或者约1x10-11M或更低。在某些实施方式中，KD为约1x10-8M或更低。在某些实施方式中，KD为约1x10-11M至约3x10-6M，例如约1x10-11M至约1x10-10M、约1x10-10M至约1x10-9M、约1x10-9M至约1x10-8M、约1x10-8M至约1x10-7M、或者约1x10-7M至约1x10-6M、或者约1x10-6M至约3x10-6M。在某些实施方式中，KD为约1x10-9M至约1x10-8M。在某些实施方式中，KD为约1x10-9M至约1.5x10-9M。在某些实施方式中，KD为约1.2x10-9M。在某些实施方式中，KD为约4x10-9M至约5x10-9M。在某些实施方式中，KD为约5x10-9M。在某些实施方式中，KD为约4.8x10-9M。在某些实施方式中，KD为约8x10-9M至约9x10-9M。在某些实施方式中，KD为约8x10-9M。在某些实施方式中，KD为约8.1x10-9M。
本发明公开的CAR的细胞外抗原结合结构域(例如以人scFv或其类似物的实施方式)与BCMA的结合可以通过例如酶联免疫吸附法(ELISA)、放射免疫法(RIA)、FACS分析、生物检测法(例如，生长抑制)或Western Blot检测来确认。这些检测中的每一种通常通过使用对目的复合物具有特异性的标记试剂(例如，抗体或scFv)来检测特定目的蛋白质-抗体复合物的存在。例如，scFv可以被施加放射性标记，并用于放射免疫法(RIA)(见例如Weintraub，B.，Principles of Radioimmunoassays，Seventh Training Course onRadioligand Assay Techniques，The Endocrine Society，March，1986，其引入本文以供参考)。放射性同位素可以通过例如使用γ计数器或闪烁计数器或者通过放射自显影术的方法检测。在某些实施方式中，用荧光标志物标记BCMA靶向的细胞外抗原结合结构域。荧光标志物的非限定性实例包括绿色荧光蛋白(GFP)、蓝色荧光蛋白(例如EBFP、EBFP2、Azurite和mKalama1)、青色荧光蛋白(例如ECFP、Cerulean和CyPet)和黄色荧光蛋白(例如YFP、Citrine、Venus和YPet)。在某些实施方式中，用GFP标记靶向BCMA的人scFv。
在某些实施方式中，本发明公开的CAR的细胞外抗原结合结构域包括单链可变片段(scFv)。在一具体的非限定性实施方式中，本发明公开的CAR的细胞外抗原结合结构域包括与人BCMA特异性结合的人scFv。在某些实施方式中，通过用BCMA-Fc融合蛋白筛选scFv噬菌体文库来鉴定scFv。
CAR的细胞外抗原结合结构域
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有选自SEQID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的序列的氨基酸的重链可变区。编码氨基酸序列SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的核酸序列分别为SEQ ID NO:3、7、11、15、19、23、27、31、35、39、43、47、51、55、59、63和67。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的序列的氨基酸的轻链可变区。编码氨基酸序列SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的核酸序列分别为SEQ ID NO:4、8、12、16、20、24、28、32、36、40、44、48、52、56、60、64和68。序列SEQ ID NO:1-68示于下表1-17中。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括：包括与本文所述并如表1-17所公开的氨基酸序列同源的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区。例如，不加以任何限定，细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括：包括与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的重链可变区。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括：包括与选自SEQ IDNO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的轻链可变区。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括：(a)包括与选自SEQID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61和65的氨基酸序列的同源性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的重链可变区；和(b)包括与选自SEQ IDNO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62和66的氨基酸序列的同源性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的轻链可变区。
本发明公开的主题进一步提供包括如本文表1-17所公开的重链可变区和轻链可变区CDR例如CDR1、CDR2和CDR3的细胞外抗原结合结构域(例如scFv)。CDR结构域使用Kabat系统加以界定(Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,第5版,U.S.Department of Health and Human Services,NIH PublicationNo.91-3242)。本发明公开的主题进一步提供包括本文公开的抗体序列的保守修饰的细胞外抗原结合结构域(例如scFv)。例如，不加以任何限定，本发明公开主题的细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括：包括CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包括CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个包括本文公开的特定氨基酸序列或其保守修饰，其中细胞外抗原结合结构域保留所需的功能特性。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供一种包括重链可变区的细胞外抗原结合结构域(例如scFv)，其中重链可变区包括：(a)包括选自SEQ ID NO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列及其保守修饰的CDR1；(b)包括选自SEQ ID NO:90、96、102、108、114、120、126、132、138、144、150、156、162、168、174、180和186的氨基酸序列及其保守修饰的CDR2；和(c)包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列及其保守修饰的CDR3。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如scFv)包括轻链可变区，其中轻链结构区包括：(a)包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列及其保守修饰的CDR1；(b)包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列及其保守修饰的CDR2；和(c)包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列及其保守修饰的CDR3。
本发明公开的主题提供一种细胞外抗原结合结构域(例如scFv)，其包括：包括CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区和包括CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：(a)重链可变区CDR3包括选自SEQ ID NO:91、97、103、109、115、121、127、133、139、145、151、157、163、169、175、181和187的氨基酸序列及其保守修饰；且(b)轻链可变区CDR3包括选自SEQ ID NO:94、100、106、112、118、124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184和190的氨基酸序列及其保守修饰；其中细胞外抗原结合结构域与BCMA多肽(例如人BCMA多肽)特异性结合。在某些实施方式中，重链可变区CDR2包括选自SEQ ID NO:125、131、137、143、149、155、161、167、173、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233、239、245、251、257、263、305、317、329、341、353、365、377和389的氨基酸序列及其保守修饰；且(b)轻链可变区CDR2包括选自SEQ ID NO:93、99、105、111、117、123、129、135、141、147、153、159、165、171、177、183和189的氨基酸序列及其保守修饰；其中细胞外抗原结合结构域与BCMA多肽(例如人BCMA多肽)特异性结合。在某些实施方式中。重链可变区CDR1包括选自SEQ ID NO:89、95、101、107、113、119、125、131、137、143、149、155、161、167、173、179和185的氨基酸序列及其保守修饰；且(b)轻链可变区CDR1包括选自SEQ ID NO:92、98、104、110、116、122、128、134、140、146、152、158、164、170、176、182和188的氨基酸序列及其保守修饰；其中细胞外抗原结合结构域与BCMA多肽(例如人BCMA多肽)特异性结合。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:72，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-192 scFv(也称作“ET140-42 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:1所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表1的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的VH，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:2所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的VL，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的VL，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:91所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:92所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ IDNO:93所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的VLCDR3。
表1
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:73，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-197 scFv(也称作“ET140-47 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:5所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表2的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的VH，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:6所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的VL，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的VL，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:99所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:95所示序列的氨基酸的VHCDR1、包括具有SEQ ID NO:96所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:97所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQID NO:99所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:100所示序列的氨基酸的VLCDR3。
表2
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:74，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-180 scFv(也称作“ET140-30scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:9所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表3的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的VH，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:10所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的VL，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的VL，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:101所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:102所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:103所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:104所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:105所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:106所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表3
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:75，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-172 scFv(也称作“ET140-22 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:13所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表4的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的VH，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:14所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的VL，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的VL，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:112所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:112所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表4所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:107所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:108所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:109所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:110所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:111所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:112所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表4
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:76，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-157 scFv(也称作“ET140-7 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:17所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表5的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:17所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的VH，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:18所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的VL，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的VL，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:118所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:118所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表5所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:113所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:114所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:115所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:116所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:117所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:118所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表5
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:77，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-153 scFv(也称作“ET140-3 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:21所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表6的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表6所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:124所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表6
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:78，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-201 scFv(也称作“ET140-51 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:25所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表7的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的VH，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:26所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的VL，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的VL，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表7所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:130所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表7
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:79，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-167 scFv(也称作“ET140-17 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:29所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表8的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的VH，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:30所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的VL，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的VL，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表8所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:136所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表8
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:80，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-163 scFv(也称作“ET140-13 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:33所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表9的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:33所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的VH，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:34所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的VL，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的VL，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR3，如表9所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:142所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表9
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:81，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-127 scFv(也称作“ET140-57 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:37所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表10的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:37所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的VH，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:38所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的VL，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的VL，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表10所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:143所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表10
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:82，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-165 scFv(也称作“ET140-15 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:41所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表11的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:41所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的VH，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:42所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的VL，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的VL，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表11所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:149所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表11
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:83，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-188 scFv(也称作“ET140-38 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:45所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表12的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:45所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的VH，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:46所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的VL，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的VL，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表12所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:155所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表12
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:84，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-196 scFv(也称作“ET140-46 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:49所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表13的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:49所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的VH，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:50所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的VL，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的VL，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表13所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:161所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表13
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:85，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-204 scFv(也称作“ET140-54 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:53所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表14的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:53所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的VH，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:54所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的VL，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的VL，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表14所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:167所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表14
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:86，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-190 scFv(也称作“ET140-40 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:57所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表15的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:57所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的VH，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:58所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表15所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:173所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表15
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:87，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-187 scFv(也称作“ET140-37 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:61所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表16的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:61所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的VH，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:62所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表16所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:179所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表16
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括氨基酸序列SEQ IDNO:88，并与BCMA多肽(例如，具有氨基酸序列SEQ ID NO:71的BCMA多肽或其片段)特异性结合，其命名为ET140-174 scFv(也称作“ET140-24 scFv”)。
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是人scFv，其包括：包括具有SEQ IDNO:65所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是具有选自表17的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:65所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的VH，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括与SEQ ID NO:66所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:187所示序列或的氨基酸其保守修饰的VH CDR3，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3，如表17所示。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域包括：包括具有SEQ IDNO:185所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的VHCDR2、包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表17
包括与上述序列的VH和VL区具有高度(即80％或更高)同源性的VH和/或VL区的细胞外抗原结合结构域(例如scFv)可以通过突变(例如，定点突变或PCR介导的突变)获得，然后使用本文所述的结合试验测试所编码的改变的scFv保留的功能(即结合亲和力)。在某些实施方式中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列相对于参照序列含有取代(例如，产生序列保守修饰的保守取代)、插入或缺失，但是细胞外抗原结构域(例如scFv)包括保持与BCMA多肽结合的能力的序列。在某些实施方式中，具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列相对于参照序列含有取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但是细胞外抗原结构域(例如scFv)包括保持与BCMA多肽结合的能力的序列。在某些实施方式中，在公开的序列中共计大约1至大约10个氨基酸已被取代、插入和/或缺失。例如，不加以任何限定，VH序列或VL序列可以具有至多大约1个、至多大约2个、至多大约3个、至多大约4个、至多大约5个、至多大约6个、至多大约7个、至多大约8个、至多大约9个或至多大约10个修饰和/或取代的氨基酸残基。保守修饰的非限定性例子提供如下，例如提供于表18。
如本文所用，术语“保守序列修饰”是指不会显著影响或改变包括氨基酸序列的本发明公开的CAR(例如细胞外抗原结合结构域)的结合特征的氨基酸修饰。这种保守修饰包括氨基酸取代、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术，比如定点突变和PCR介导的突变，将修饰引入到本发明公开主题的人scFv中。可以根据氨基酸的物理化学性质如电荷和极性将氨基酸分组。保守氨基酸取代是其中氨基酸残基被相同组内的氨基酸取代。例如，氨基酸可以通过电荷分类：带正电荷的氨基酸包括赖氨酸、精氨酸、组氨酸，带负电荷的氨基酸包括天冬氨酸、谷氨酸，中性电荷氨基酸包括丙氨酸、天冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。此外，氨基酸可以通过极性分类：极性氨基酸包括精氨酸(碱性极性)、天冬酰胺、天冬氨酸(酸性极性)、谷氨酸(酸性极性)、谷氨酰胺、组氨酸(碱性极性)、赖氨酸(碱性极性)、丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸；非极性氨基酸包括丙氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、色氨酸和缬氨酸。因此，CDR区内的一个或多个氨基酸残基可以被来自相同组的其他氨基酸残基替换，并且可以使用本文所述的功能试验检测改变的抗体保留的功能(即，以上(c)至(l)中所述的功能)。在某些实施方式中，在特定序列或CDR区内改变不超过一个、不超过两个、不超过三个、不超过四个、不超过五个残基。示例性保守氨基酸取代示于表18中。
表18
| 原始残基 | 示例性保守氨基酸取代 |
| Ala(A) | Val；Leu；Ile |
| Arg(R) | Lys；Gln；Asn |
| Asn(N) | Gln；His；Asp,Lys；Arg |
| Asp(D) | Glu；Asn |
| Cys(C) | Ser；Ala |
| Gln(Q) | Asn；Glu |
| Glu(E) | Asp；Gln |
| Gly(G) | Ala |
| His(H) | Asn；Gln；Lys；Arg |
| Ile(I) | Leu；Val；Met；Ala；Phe |
| Leu(L) | Ile；Val；Met；Ala；Phe |
| Lys(K) | Arg；Gln；Asn |
| Met(M) | Leu；Phe；Ile |
| Phe(F) | Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr |
| Pro(P) | Ala |
| Ser(S) | Thr |
| Thr(T) | Val；Ser |
| Trp(W) | Tyr；Phe |
| Tyr(Y) | Trp；Phe；Thr；Ser |
| Val(V) | Ile；Leu；Met；Phe；Ala |
在某些非限定性实施方式中，CAR的细胞外抗原结合结构域可以包括连接细胞外抗原结合结构域的重链可变区和轻链可变区的接头。本文使用的术语“接头(linker)”是指共价连接两个或多个多肽或核酸使得它们彼此连接的官能团(例如，化学的或多肽)。本文使用的“肽接头”是指用于将两个蛋白偶联在一起(例如，偶联VH和VL结构域)的一个或多个氨基酸。肽接头的非限定性例子公开于Shen等人,Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO2014/087010。
在一非限定性实例中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，编码氨基酸序列SEQ ID NO:69的核苷酸序列示于SEQ ID NO:70中。在一非限定性实例中，接头包括具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，编码氨基酸序列SEQ ID NO:98的核苷酸序列示于SEQ ID NO:211中。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:212所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGS[SEQ ID NO:212]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
SGGSGGS[SEQ ID NO:213]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGS[SEQ ID NO:214]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGS[SEQ ID NO:215]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGSGGGGGGGS[SEQ ID NO:216]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:217]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:218]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:219]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:220]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
EPKSCDKTHTCPPCP[SEQ ID NO:220]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GGGGSGGGSEPKSCDKTHTCPPCP[SEQ ID NO:222]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:223所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP[SEQ IDNO:223]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
GSGSGS[SEQ ID NO:224]。
在某些实施方式中，包括具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的接头如下文提供：
AAA[SEQ ID NO:225]。
此外，细胞外抗原结合结构域可以包括将新生蛋白质导入内质网的前导序列或信号肽。如果CAR要被糖基化并锚定在细胞膜中，信号肽或前导序列可能是必需的。信号序列或前导序列可以是存在于新合成的蛋白质N-端的肽序列(长度约5、约10、约15、约20、约25或约30个氨基酸)，其引导新合成的蛋白质进入分泌通路。在非限定性实例中，信号肽与细胞外抗原结合结构域的5’端共价连接。在某些实施方式中，信号肽包含CD8多肽，其包括具有如下文所提供的SEQ ID NO:191所示序列的氨基酸。
MALPVTALLLPLALLLHAAR[SEQ ID NO:191]。
编码氨基酸序列SEQ ID NO:191的核苷酸序列如下文所提供的SEQ ID NO:192所示：
ATGGCTCTCCCAGTGACTGCCCTACTGCTTCCCCTAGCGCTTCTCCTGCATGCAGCTCGT[SEQ IDNO:192]
在另一实施方式中，信号肽包括具有如下文所提供的SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸。
METDTLLLWVLLLWVPGSTG[SEQ ID NO:205]
编码氨基酸序列SEQ ID NO:205的核苷酸序列如下文所提供的SEQ ID NO:206所示：
ATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGA[SEQ IDNO:206]
在某些实施方式中，人scFv包括重链可变区、轻链可变区、重链可变区和轻链可变区之间的接头肽、以及His-标签和HA-标签。在某些实施方式中，His-标签和HA-标签的氨基酸序列包括如下文提供的氨基酸序列SEQ ID NO:275：
TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS[SEQ ID NO:275]
编码SEQ ID NO:275的核苷酸序列是下文提供的SEQ ID NO:276：
ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGCACCATCACCATCACCATGGCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGCTTCT[SEQ ID NO:276]
在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)与包括SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的人BCMA多肽结合。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)与SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的一个或多个部分结合。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)与选自SEQ ID NO:71的氨基酸8-22、9-23、10-24、11-25、12-26、13-27、14-28和8-28的1、2、3、4、5、6或7个表位区结合。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区和包括具有SEQ IDNO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区，其任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列，例如接头多肽。在某些实施方式中，接头包括具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域是具有选自表6的VH和VL区或CDR的人scFv。在某些实施方式中，与包括SEQID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域是具有选自表6的VH和VL区或CDR的人scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括与SEQ ID NO:21所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括与SEQ ID NO:22所示氨基酸序列的同一性为至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH和包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、和包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的VHCDR3。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3。在某些实施方式中，与包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸或其保守修饰的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸或其保守修饰的VLCDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR2、和包括具有SEQID NO:124所示序列的氨基酸或其保守修饰的VL CDR3。在某些实施方式中，与包括SEQ IDNO:71的氨基酸14-22的表位区结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFv)包括：包括具有SEQ ID NO:119所示序列的氨基酸的VH CDR1、包括具有SEQ ID NO:120所示序列的氨基酸的VH CDR2、包括具有SEQ ID NO:121所示序列的氨基酸的VH CDR3、包括具有SEQ ID NO:122所示序列的氨基酸的VL CDR1、包括具有SEQ ID NO:123所示序列的氨基酸的VL CDR2、和包括具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，细胞外抗原结合结构域是ET140-3(或“ET140-153”)scFv。
CAR的跨膜结构域
在某些非限定性实施方式中，CAR的跨膜结构域包括跨越至少一部分膜的疏水性α螺旋。不同的跨膜结构域导致不同的受体稳定性。在抗原识别之后，受体聚簇且信号被传送至细胞。根据本发明公开的主题，CAR的跨膜结构域可以包括CD8多肽、CD28多肽、CD3ζ多肽、CD4多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、CTLA-4多肽、PD-1多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。
在某些实施方式中，本发明公开的CAR的跨膜结构域包括CD28多肽。CD28多肽可以具有与序列NCBI参照No:P10747或NP_006130(SEQ ID No:193)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。在某些实施方式中，CD28多肽可以具有作为SEQ ID NO:193保守部分的氨基酸序列，其长度为至少20、或者至少30、或者至少40、或者至少50并且至多220个氨基酸。另外可选地或者额外地，在非限定性的各种实施方式中，CD28多肽具有SEQ ID NO:193的氨基酸1-220、1-50、50-100、100-150、150-200或200-220的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明公开的CAR包括：包括CD28多肽的跨膜结构域和包括有包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域。在某些实施方式中，跨膜结构域和细胞内结构域中包括的CD28具有SEQ ID NO:193的氨基酸114-220的氨基酸序列。
SEQ ID NO:193提供如下：
1 MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYDNAVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD
61 SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP
121 PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR
181 SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS[SEQ ID NO:193]
根据本发明公开的主题，“CD28核酸分子”是指编码CD28多肽的多核苷酸。在某些实施方式中，编码本发明公开的CAR的跨膜结构域和细胞内结构域(例如共刺激信号区)中包括的CD28多肽(SEQ ID NO:193的氨基酸114-220)的CD28核酸分子包括具有下文提供的SEQ ID NO:194所示序列的核酸。
ATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC[SEQ ID NO:194]
在某些实施方式中，本发明公开的CAR的跨膜结构域包括CD8多肽。CD8多肽可以具有与序列NCBI参照No:AAH25715(SEQ ID No:226)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。在非限定性实施方式中，CD8多肽可以具有作为SEQ ID NO:226保守部分的氨基酸序列，其长度为至少20、或者至少30、或者至少40、或者至少50、或者至少70、或者至少100、或者至少150、或者至少200并且至多235个氨基酸。另外可选地或者额外地，在非限定性的各种实施方式中，CD28多肽具有SEQ ID NO:226的氨基酸1-235、1-50、50-100、100-150、150-200、130-210或200-235的氨基酸序列。在某些实施方式中，跨膜结构域中包括的CD8多肽具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的氨基酸序列。
SEQ ID NO:226提供如下：
1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP
61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GCYFCSALSN
121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA
181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV[SEQID NO:226]
根据本发明公开的主题，“CD8核酸分子”是指编码CD8多肽的多核苷酸。在某些实施方式中，编码本发明公开的CAR跨膜结构域中包括的CD8多肽(SEQ ID NO:226的氨基酸137-207)的CD8核酸分子包括具有下文提供的SEQ ID NO:227所示序列的核酸。
CCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACCCCGGCGCCCACGATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCCTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAC[SEQ IDNO:227]
在某些非限定性实施方式中，CAR还可以包括连接细胞外抗原结合结构域与跨膜结构域的间隔区。间隔区的柔性可以足以使抗原结合结构域在不同的方向取向，以促进抗原识别。间隔区可以是来自IgG1的铰链区，或者免疫球蛋白的CH2CH3区和CD3部分。
CAR的细胞内结构域
在某些非限定性实施方式中，CAR的细胞内结构域可以包括可以激活或刺激细胞(例如，淋巴样谱系细胞如T细胞)的CD3ζ多肽。CD3ζ包括3个ITAM，在结合抗原之后将激活信号传送至细胞(例如，淋巴样谱系细胞如T细胞)。CD3ζ多肽可以具有与SEQ ID NO:195所示序列的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。在非限定性实施方式中，CD3ζ肽可以具有作为SEQ ID NO:195保守部分的氨基酸序列，其长度为至少20、或者至少30、或者至少40、或者至少50并且至多163个氨基酸。另外可选地或者额外地，在非限定性的不同实施方式中，CD3ζ多肽具有SEQ ID NO:195的氨基酸1-163、1-50、50-100、100-150或150-163的氨基酸序列。在某些实施方式中，本发明公开的CAR的细胞内结构域中包括的CD3ζ具有SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列。
SEQ ID NO:195提供如下：
1 MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD
61 APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP RRKNPQEGLY NELQKDKMAE
121 AYSEIGMKGE RRRGKGHDGL YQGLSTATKD TYDALHMQAL PPR[SEQ ID NO:195]
根据本发明公开的主题，“CD3ζ核酸分子”是指编码CD3ζ多肽的多核苷酸。在某些实施方式中，编码本发明公开的CAR的细胞内结构域中包括的CD3ζ多肽(SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列)的CD3ζ核酸分子包括具有下文提供的SEQ ID NO:196所示序列的核酸。
AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA[SEQ ID NO:196]
在某些非限定性实施方式中，CAR的细胞内结构域进一步包括至少一个信号区。至少一个信号区可以包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽、PD-1多肽、CTLA-4多肽、LAG-3多肽、2B4多肽、BTLA多肽、合成肽(非基于与免疫应答有关的蛋白质)或其组合。
在某些实施方式中，信号区是共刺激信号区。在某些实施方式中，共刺激区包括至少一个共刺激分子，其可以提供最佳的淋巴细胞激活。如本文所用，“共刺激分子”是指淋巴细胞对抗原有效响应所需的抗原受体或其配体以外的细胞表面分子。至少一种共刺激信号区可以包括CD28多肽、4-1BB多肽、OX40多肽、ICOS多肽、DAP-10多肽或其组合。共刺激分子可以与共刺激配体结合，该共刺激配体是一经与其受体结合便产生共刺激响应的在细胞表面上表达的蛋白质，上述共刺激响应即为当抗原与其CAR分子结合时提供的影响刺激的细胞内响应。共刺激配体包括，但不限于CD80、CD86、CD70、OX40L、4-1BBL、CD48、TNFRSF14和PD-L1。作为一实例，4-1BB配体(即4-1BBL)可以与4-1BB(也称作“CD137”)结合，用于提供与CAR信号结合诱导CAR+ T细胞的效应细胞功能的细胞内信号。包括具有包括4-1BB、ICOS或DAP-10的共刺激信号区的细胞内结构域的CAR公开于U.S.7,446,190中(例如，编码4-1BB的核苷酸序列示于SEQ ID NO:15，编码ICOS的核苷酸序列示于SEQ ID NO:16，编码DAP-10的核苷酸序列示于SEQ ID NO:17)，在此将其全文并入作为参考。在某些实施方式中，CAR的分子内结构域具有包括CD28多肽的共刺激信号区。在某些实施方式中，CAR的分子内结构域具有包括两种共刺激分子CD28和4-1BB或者CD28和OX40的共刺激信号区。
4-1BB可以作为肿瘤坏死因子(TNF)配体发挥作用，并具有刺激活性。4-1BB多肽可以具有与序列NCBI参考号P41273或NP_001552的序列(SEQ ID NO:197)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。在某些实施方式中，本发明公开的CAR的细胞内结构域中包括的4-1BB多肽具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的氨基酸序列。
SEQ ID NO:197提供如下：
1 MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR
61 TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC
121 CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE
181 PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG
241 CSCRFPEEEE GGCEL[SEQ ID NO:197]
根据本发明公开的主题，“4-1BB核酸分子”是指编码4-1BB多肽的多核苷酸。在某些实施方式中，编码本发明公开的CAR的细胞内结构域中包括的4-1BB多肽(SEQ ID NO:197的氨基酸214-255)的4-1BB核酸分子包括具有如下提供的SEQ ID NO:228所示序列的核酸。
aaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg[SEQ ID NO:228]
OX40多肽可以具有与序列NCBI参考号P43489或NP_003318(SEQ ID NO:198)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:198提供如下：
1 MCVGARRLGR GPCAALLLLG LGLSTVTGLH CVGDTYPSND RCCHECRPGN GMVSRCSRSQ
61 NTVCRPCGPG FYNDVVSSKP CKPCTWCNLR SGSERKQLCT ATQDTVCRCR AGTQPLDSYK
121 PGVDCAPCPP GHFSPGDNQA CKPWTNCTLA GKHTLQPASN SSDAICEDRD PPATQPQETQ
181 GPPARPITVQ PTEAWPRTSQ GPSTRPVEVP GGRAVAAILG LGLVLGLLGP LAILLALYLL
241 RRDQRLPPDA HKPPGGGSFR TPIQEEQADA HSTLAKI[SEQ ID NO:198]
根据本发明公开的主题，“OX40核酸分子”是指编码OX40多肽的多核苷酸。
ICOS多肽可以具有与序列NCBI参考号NP_036224(SEQ ID NO:199)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:199提供如下：
1 MKSGLWYFFL FCLRIKVLTG EINGSANYEM FIFHNGGVQI LCKYPDIVQQ FKMQLLKGGQ
61 ILCDLTKTKG SGNTVSIKSL KFCHSQLSNN SVSFFLYNLD HSHANYYFCN LSIFDPPPFK
121 VTLTGGYLHI YESQLCCQLK FWLPIGCAAF VVVCILGCIL ICWLTKKKYS SSVHDPNGEY
181 MFMRAVNTAK KSRLTDVTL[SEQ ID NO:199]
根据本发明公开的主题，“ICOS核酸分子”是指编码ICOS多肽的多核苷酸。
CTLA-4是激活的T细胞所表达的抑制性受体，其在被其对应的配体(分别为CD80和CD86；B7-l和B7-2)占据时介导激活的T细胞抑制或无免疫反应性。在临床前和临床研究中，CTLA-4经由全身性抗体输注的阻断，尽管会增强内源性抗肿瘤应答，但在临床环境中具有重大无法预料的毒性。
CTLA-4含有细胞外V结构域、跨膜结构域和胞质尾区。编码不同的同种型的可替代的剪接变体已经被鉴定。膜结合的同种型作为由二硫键互连的同型二聚体发挥功能，而可溶性同种型作为单体发挥作用。细胞内结构域与CD28的细胞内结构域类似，在于其没有固有的催化活性，含有一个能够结合PI3K、PP2A和SHP-2的YVKM基序和一个能够结合含SH3蛋白质的富含脯氨酸的基序。CTLA-4在抑制T细胞反应中的一个作用似乎是直接经由TCR-近端的信号蛋白质例如CD3和LAT的SHP-2和PP2A去磷酸化。CTLA-4也可以经由与CD28竞争结合CD80/86而间接影响信号转导。另外已经显示CTLA-4与PI3K、CD80、AP2M1和PPP2R5A结合和/或相互作用。
根据本发明公开的主题，CTLA-4多肽可以具有与UniProtKB/Swiss-ProtRef.No.:P16410.3(SEQ ID NO:200)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列(本文的同源性可以使用标准软件例如BLAST或FASTA确定)或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:200提供如下：
1 MACLGFQRHK AQLNLATRTW PCTLLFFLLF IPVFCKAMHV AQPAVVLASS RGIASFVCEY
61 ASPGKATEVR VTVLRQADSQ VTEVCAATYM MGNELTFLDD SICTGTSSGN QVNLTIQGLR
121 AMDTGLYICK VELMYPPPYY LGIGNGTQIY VIDPEPCPDS DFLLWILAAV SSGLFFYSFL181LTAVSLSKML KKRSPLTTGV YVKMPPTEPE CEKQFQPYFI PIN[SEQ ID NO:200]
根据本发明公开的主题，“CTLA-4核酸分子”是指编码CTLA-4多肽的多核苷酸。
PD-1是在与其对应的表达在内源性巨噬细胞和树突细胞上的配体PD-L1和PD-L2接合时的活化T细胞的负性免疫调节物。PD-l是268个氨基酸的I型膜蛋白。PD-1具有两种配体，PD-L1和PD-L2，其为B7家族的成员。蛋白质的结构包括细胞外IgV结构域，然后是跨膜区和胞内尾区。胞内尾区含有两个位于基于免疫受体酪氨酸的抑制性基序内和基于免疫受体酪氨酸的开关基序内的磷酸化位点，该PD-1对TCR信号进行负调节。SHP-I和SHP-2磷酸酶在配体结合时与PD-1的胞质尾区结合。PD-L1的上调是肿瘤细胞可以逃避(evade)宿主免疫系统的一种机制。在临床前和临床试验中，拮抗性抗体所引起的PD-1阻断诱发经宿主内源性免疫系统介导的抗肿瘤应答。
根据本发明公开的主题，PD-1多肽可以具有与NCBI编号NP_005009.2(SEQ ID NO:201)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:201提供如下：
1 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGDNA TFTCSFSNTS
61 ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT
121 YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS
181 LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP
241 CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL[SEQ ID NO:201]
根据本发明公开的主题，“PD-1核酸分子”是指编码PD-1多肽的多核苷酸。
淋巴细胞激活蛋白3(LAG-3)是免疫细胞的负免疫调节物。LAG-3属于免疫球蛋白(Ig)超家族并含有4个细胞外Ig样结构域。LAG3基因含有8个外显子。序列数据、外显子/内含子结构和染色体定位均表明LAG3与CD4有密切关系。LAG3也称作CD223(分化簇223)。
根据本发明公开的主题，LAG-3多肽可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot Ref.No.:P18627.5(SEQ ID NO:202)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:202提供如下：
1 MWEAQFLGLL FLQPLWVAPV KPLQPGAEVP VVWAQEGAPA QLPCSPTIPL QDLSLLRRAG
61 VTWQHQPDSG PPAAAPGHPL APGPHPAAPS SWGPRPRRYT VLSVGPGGLR SGRLPLQPRV
121 QLDERGRQRG DFSLWLRPAR RADAGEYRAA VHLRDRALSC RLRLRLGQAS MTASPPGSLR
181 ASDWVILNCS FSRPDRPASV HWFRNRGQGR VPVRESPHHH LAESFLFLPQ VSPMDSGPWG
241 CILTYRDGFN VSIMYNLTVL GLEPPTPLTV YAGAGSRVGL PCRLPAGVGT RSFLTAKWTP
301 PGGGPDLLVT GDNGDFTLRL EDVSQAQAGT YTCHIHLQEQ QLNATVTLAI ITVTPKSFGS
361 PGSLGKLLCE VTPVSGQERF VWSSLDTPSQ RSFSGPWLEA QEAQLLSQPW QCQLYQGERL
421 LGAAVYFTEL SSPGAQRSGR APGALPAGHL LLFLILGVLS LLLLVTGAFG FHLWRRQWRP
481 RRFSALEQGI HPPQAQSKIE ELEQEPEPEP EPEPEPEPEP EPEQL[SEQ ID NO:202]
根据本发明公开的主题，“LAG-3核酸分子”是指编码LAG-3多肽的多核苷酸。
自然杀伤细胞受体2B4(2B4)介导在NK细胞和T细胞亚型上的非MHC限制的细胞杀死。迄今为止，2B4的功能仍在研究中，据认为2B4-S同种型是激活性受体，据认为2B4-L同种型是免疫细胞的负性免疫调节物。2B4在与其高亲和性配体CD48结合时被占据。2B4含有酪氨酸类开关基序，即使蛋白质与各种磷酸酶结合的分子开关。2B4也被称作CD244(分化簇244)。
根据本发明公开的主题，2B4多肽可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot Ref.No.:Q9BZW8.2(SEQ ID NO:203)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:203提供如下：
1 MLGQVVTLIL LLLLKVYQGK GCQGSADHVV SISGVPLQLQ PNSIQTKVDS IAWKKLLPSQ
61 NGFHHILKWE NGSLPSNTSN DRFSFIVKNL SLLIKAAQQQ DSGLYCLEVT SISGKVQTAT
121 FQVFVFESLL PDKVEKPRLQ GQGKILDRGR CQVALSCLVS RDGNVSYAWY RGSKLIQTAG
181 NLTYLDEEVD INGTHTYTCN VSNPVSWESH TLNLTQDCQN AHQEFRFWPF LVIIVILSAL
241 FLGTLACFCV WRRKRKEKQS ETSPKEFLTI YEDVKDLKTR RNHEQEQTFP GGGSTIYSMI
301 QSQSSAPTSQ EPAYTLYSLI QPSRKSGSRK RNHSPSFNST IYEVIGKSQP KAQNPARLSR
361 KELENFDVYS[SEQ ID NO:203]
根据本发明公开的主题，“2B4核酸分子”是指编码2B4多肽的多核苷酸。
B-和T-淋巴细胞衰减因子(BTLA)在T细胞的激活过程中被诱导，BTLA保持在Th1细胞上表达，但在Th2细胞上不表达。类似于PD1和CTLA4，BTLA与B7同系物B7H4相互作用。但是，与PD-1和CTLA-4不同，BTLA经由与肿瘤坏死家族受体(TNF-R)、而不仅仅是细胞表面受体的B7家族相互作用表现出T-细胞抑制。BTLA是肿瘤坏死因子(受体)超家族成员14(TNFRSF14)也称作单纯疱疹病毒侵入介导子(HVEM)的配体。BTLA-HVEM复合物对T-细胞免疫应答进行负调节。BTLA激活已经显示抑制人CD8+癌症特异性T细胞的功能。BTLA也称作CD272(分化簇272)。
根据本发明公开的主题，BTLA多肽可以具有与UniProtKB/Swiss-Prot Ref.No.:Q7Z6A9.3(SEQ ID NO:204)的同源性为至少约85％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约100％的氨基酸序列或其片段，和/或可以任选地包括至多1个或至多2个或至多3个保守氨基酸取代。
SEQ ID NO:204提供如下：
1 MKTLPAMLGT GKLFWVFFLI PYLDIWNIHG KESCDVQLYI KRQSEHSILA GDPFELECPV
61 KYCANRPHVT WCKLNGTTCV KLEDRQTSWK EEKNISFFIL HFEPVLPNDN GSYRCSANFQ
121 SNLIESHSTT LYVTDVKSAS ERPSKDEMAS RPWLLYRLLP LGGLPLLITT CFCLFCCLRR
181 HQGKQNELSD TAGREINLVD AHLKSEQTEA STRQNSQVLL SETGIYDNDP DLCFRMQEGS
241 EVYSNPCLEE NKPGIVYASL NHSVIGPNSR LARNVKEAPT EYASICVRS[SEQ ID NO:204]
根据本发明公开的主题，“BTLA核酸分子”是指编码BTLA多肽的多核苷酸。
在某些实施方式中，CAR包括：包括与人BCMA特异性结合的人scFv的细胞外抗原结合区、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及包括CD3ζ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，如图1所示。如图1所示，CAR还包括与细胞外抗原结合结构域的5’端共价连接的信号肽或前导序列。在某些实施方式中，信号肽包括具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸。
在某些实施方式中，CAR包括：包括与人BCMA特异性结合的人scFv的细胞外抗原结合区、包括CD8多肽的跨膜结构域、以及包括CD3ζ多肽和包括4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，如图7所示。如图7所示，CAR还包括与细胞外抗原结合结构域的5’端共价连接的信号肽或前导序列。在某些实施方式中，信号肽包括具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸。
在某些实施方式中，本发明公开主题的CAR可以进一步包括诱导型启动子，用于在人细胞中表达核酸序列。用于表达CAR基因的启动子可以是组成型启动子，例如泛素C(UbicC)启动子。
本发明公开的主题还提供分离的核酸分子，其编码本文所述的靶向BCMA的CAR或其功能性部分。在某些实施方式中，分离的核酸分子编码本发明公开的靶向BCMA的CAR，该CAR包括：与人BCMA特异性结合的人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及包括CD3ζ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域。在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:207所示序列的核酸：
caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgcgtctcctggacagtcgatcgccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggttggtatcaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggacagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcaaatacaagaagcagcactttggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaagtgcagctggtgcagtctggggctgagatgaagaagcctggggcctcactgaagctctcctgcaaggcttctggatacaccttcatcgactactatgtatactggatgcgacaggcccctggacaagggcttgagtccatgggatggatcaaccctaacagtggtggcacaaactatgcacagaagtttcagggcagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagcaggctgagatctgacgacaccgccatgtattactgtgcgcgctcccagcgtgacggttacatggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc[SEQ ID NO:207]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:208所示序列的核酸：
cagtctgtgctgacgcagccgccctcagtgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcctgcactgggagcagctccaacatcggggcaggttttgatgtacactggtaccagcagcttccaggaacagcccccaaactcctcatctatggtaacagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctatgacagcagcctgagtggttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccaggtccagctggtacagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggatacaccttcaccgactactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaacggcttgagtggatgggatggatcaaccctaacagtggtggcacaaactatgcacagaagtttcaggacaggatcaccgtgaccagggacacctccagcaacacaggctacatggagctgaccaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgctctccgtactctggtgttctggataaatggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc[SEQ ID NO:208]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:209所示序列的核酸：
tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatgtcttgttctggaaccagctccaacatcggaagtcactctgtaaactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctatactaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtggcctccagtctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatggcagcctgaatggtctggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtgcagtctggagcagaggtgaaaaagcccggggagtctctgaagatctcctgtaagggttctggatacagctttaccagctactggatcggctgggtgcgccagatgcccgggaaaggcctggagtggatggggatcatctatcctggtgactctgataccagatacagcccgtccttccaaggccacgtcaccatctcagctgacaagtccatcagcactgcctacctgcagtggagcagcctgaaggcctcggacaccgccatgtattactgtgcgcgctactctggttctttcgataactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc[SEQ ID NO:209]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:229所示序列的核酸：
CCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGA
CATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTCTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGAC
CTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAACTGGACCGACCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGC
TGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACTGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGG
GTCACCATCTCTTGTTCTGGACGCAGTTCCAACATCGGGAGTAATTCTGTTAACTGGTATCGACAACTCCCAGGAGCGGC
CCCCAAACTCCTCATCTATAGTAATAATCAGCGGCCCCCAGGGGTCCCTGTGCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCT
CAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCAGTCTGAAGATGAGGCCACTTATTACTGTGCAACATGGGATGACAATCTGAAT
GTTCACTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTC
TGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGG
TGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCAGCAGCTATGCTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGG
CTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATCCTTGGTATAGCAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTAC
CGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGC
GCGGTGGTTACTACTCTCATGACATGTGGTCTGAAGATTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGCggccgca
cccaccacgacgccagcgccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggc
gtgccggccagcggcggggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctgg
ccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtat
atattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaaga
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ataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatgggggga
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ccctcagcagtttctagagaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaac
taaccaatcagttcgcttctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcact
cggggcgccagtcctccgattgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgactt
gtggtctcgctgttccttgggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatg
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tttatttttttttgtcctctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttt
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tcaggttggtttttgagacagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAA
ACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACC
GATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGG
TATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAA
CACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGC
ATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTA
ATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTT
TTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAG
TATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAA
CGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAG
ATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATC
CCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCA
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TGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAA
CGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAA
GTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTC
TCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAA
CTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTAC
TCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCAT
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CTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAG
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AGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTG
GCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGT
TCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCAC
GCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAG
GGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCA
GGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACAT
GTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCC
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CCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTA
GCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAAT
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TAGTATAAATAAAAATAGATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATA
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CAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGG
GCGCCAGTCCTCCGATTGACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGG
TCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGG
GATCGGGAGACCCCTGCCCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGA
TTGTCTAGTGTCTATGACTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTG
GTGGAACTGACGAGTTCGGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCG
ACCTGAGTCCTAAAATCCCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAG
ACGAGAACCTAAAACAGTTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTC
TGCTGCAGCATCGTTCTGTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGT
TACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGA
AGAGACGTTGGGTTACCTTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGA
GACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGAC
CTGGGAAGCCTTGGCTTTTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCAT
CCGCCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACT
[SEQ ID NO:229]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:230所示序列的核酸：
GGCCCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGA
CATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTCTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGAC
CTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAACTGGACCGACCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGC
TGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGAtcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagg
gtcaccatgtcttgttctggaaccagctccaacatcggaagtcactctgtaaactggtaccagcagctcccaggaacggc
ccccaaactcctcatctatactaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacct
cagcctccctggccatcagtggcctccagtctgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatggcagcctgaat
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tggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtgcagtctggagcagaggtgaaaaagcccggggagtctctga
agatctcctgtaagggttctggatacagctttaccagctactggatcggctgggtgcgccagatgcccgggaaaggcctg
gagtggatggggatcatctatcctggtgactctgataccagatacagcccgtccttccaaggccacgtcaccatctcagc
tgacaagtccatcagcactgcctacctgcagtggagcagcctgaaggcctcggacaccgccatgtattactgtgcgcgct
actctggttctttcgataactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcacccaccacgacgccagcg
ccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggg
gggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtcc
ttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccattt
atgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaact
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ccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgc
aggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccagg
ctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttagt
ctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatg
gaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagga
tatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatct
gtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctaga
gaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgctt
ctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctccg
attgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcctt
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TTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACT[SEQ ID NO:230]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:231所示序列的核酸：
CCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGA
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CCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACT[SEQ ID NO:231]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:232所示序列的核酸：
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CCACTTCTGCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTAT
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TGCGCGTAATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACT
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CTTCAAGAACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGT
CGTGTCTTACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACA
CAGCCCAGCTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGA
AGGGAGAAAGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACG
CCTGGTATCTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGG
AGCCTATGGAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCC
TGCGTTATCCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCG
AGCGCAGCGAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCAT
TAATGCAGCTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCA
TTAGGCACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAG
GAAACAGCTATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCA
TTTGACTTGTTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTA
AATGCACAGATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAA
TAAAAATAGATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTG
CTGAGCAAGCCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTT
TTATTTTTGACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAG
GCATGGAAAAATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAA
CAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGA
TATCTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTT
CTAGAGAACCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTT
CGCTTCTCGCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTC
CTCCGATTGACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGT
TCCTTGGGAGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAG
ACCCCTGCCCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGT
GTCTATGACTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTG
ACGAGTTCGGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTC
CTAAAATCCCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACC
TAAAACAGTTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGC
ATCGTTCTGTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCC
CTTAAGTTTGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTT
GGGTTACCTTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATC
ACCCAGGTTAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGC
CTTGGCTTTTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGT
CTCTCCCCCTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACT[SEQ IDNO:232]
在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:233所示序列的核酸：
CCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGA
CATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTCTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGAC
CTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAACTGGACCGACCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGC
TGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGAcaatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgcgtctcctggacagtcg
atcgccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggttggtatcaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgat
ttatgaggacagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgacca
tctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcaaatacaagaagcagcactttggtgttcggcgga
gggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcga
gatggccgaagtgcagctggtgcagtctggggctgagatgaagaagcctggggcctcactgaagctctcctgcaaggctt
ctggatacaccttcatcgactactatgtatactggatgcgacaggcccctggacaagggcttgagtccatgggatggatc
aaccctaacagtggtggcacaaactatgcacagaagtttcagggcagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcac
agcctacatggagctgagcaggctgagatctgacgacaccgccatgtattactgtgcgcgctcccagcgtgacggttaca
tggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcacccaccacgacgccagcgccgcgaccacca
accccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgca
cacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtccttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagta
caaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagtt
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agtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggc
ctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaa
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ctcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttagtctccagaaaaag
gggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatggaaaaatacata
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gcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcagt
tcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctagagaaccatcagat
gtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgcttctcgcttctgtt
cgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctccgattgactgagtc
gcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttccttgggagggtctcc
tctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttggttttttttcttaa
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aaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcctctgtcttccatt
tgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctacactatagttcaagc
tagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagccttcccacatctaaga
ttacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgattgtgtttgtgtgtg
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cttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTTG
CAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCTG
AATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCAG
TACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGTC
TGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACCG
AAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACGT
CAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCTC
ATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCCT
TATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGATC
AGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACGT
TTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCGG
TCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACAG
TAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACCG
AAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAGC
CATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTAC
TTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCTT
CCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAGA
TGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCTG
AGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACTT
CATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGTT
CCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTGC
AAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGGC
TTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCACC
GCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGACT
CAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAACG
ACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGTA
TCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCTG
TCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAGC
AACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTGT
GGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGCG
AGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAGG
TTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTACA
CTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGATT
ACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTTGTTCTATGCCCTA
GGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACAGATGTTTTTATTT
CATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATAGATAAACGTGGAA
ATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAAGCCAGTTTGCATC
TGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTTGACATATACATGT
GAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAAAAATACATAACTG
AGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAG
TTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCCT
GCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTTT
CCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGCG
CGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATTGACTGAGTCGCCC
GGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCTG
AGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGCCCAGGGACCACCG
ACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGACTGATTTTATGCG
CCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTCGGAACACCCGGCC
GCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATCCCGATCGTTTAGG
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CTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCTGTGTTGTCTCTGT
CTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTCA
CTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCTTCTGCTCTGCAG
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在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:234所示序列的核酸：
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在一具体的非限定性实施例中，分离的核酸分子包括具有以下提供的SEQ ID NO:235所示序列的核酸：
atggaaaccgacaccctgctgctgtgggtgctgctgctgtgggtgccaggatccacaggacaggctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattacgtattctggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctatagtaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtgcctcttatgttttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccaggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggaggcaccttcagcagctatgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaaggatcatccctatccttggtacagcaaactacgcacagaagttccagggcagagtcacgattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctctggttacggttcttaccgttgggaagattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctaa[SEQ ID NO:235]
具有SEQ ID NO:207所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的28z CAR54)，该CAR包括人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头，其中包括跨膜结构域和共刺激信号区的CD28区包括SEQ ID NO:193的氨基酸114-220。
具有SEQ ID NO:208所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的28z CAR40)，该CAR包括人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及具有包括SEQID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头，其中包括跨膜结构域和共刺激信号区的CD28区包括SEQ ID NO:193的氨基酸114-220。
具有SEQ ID NO:209所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的28z CAR24)，该CAR包括人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及具有包括SEQID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头，其中包括跨膜结构域和共刺激信号区的CD28区包括SEQ ID NO:193的氨基酸114-220。
具有SEQ ID NO:234所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的28z CAR3)，该CAR包括人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及具有包括SEQID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头，其中包括跨膜结构域和共刺激信号区的CD28区包括SEQ ID NO:193的氨基酸114-220。
具有SEQ ID NO:235所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的28z CAR37)，该CAR包括人scFv、包括CD28多肽的跨膜结构域、以及具有包括SEQID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头，其中包括跨膜结构域和共刺激信号区的CD28区包括SEQ ID NO:193的氨基酸114-220。
具有SEQ ID NO:229所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的BBz CAR3)，该CAR包括人scFv、包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的CD8多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头。SEQ ID NO:229的核苷酸序列270-1031编码人scFv。SEQ ID NO:229的核苷酸序列1041-1253编码跨膜结构域中包括的CD8多肽。SEQ ID NO:229的核苷酸序列1254-1379编码细胞内结构域中包括的4-1BB多肽。SEQ ID NO:229的核苷酸序列1380-1718编码细胞内结构域中包括的CD3ξ多肽。SEQ ID NO:229的其他部分示于表19中。
表19
具有SEQ ID NO:230所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的BBz CAR24)，该CAR包括人scFv、包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的CD8多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头。SEQ ID NO:230的核苷酸序列270-1015编码人scFv。SEQ ID NO:230的核苷酸序列1023-1235编码跨膜结构域中包括的CD8多肽。SEQ IDNO:230的核苷酸序列1236-1361编码细胞内结构域中包括的4-1BB多肽。SEQ ID NO:230的核苷酸序列1362-1700编码细胞内结构域中包括的CD3ξ多肽。SEQ ID NO:230的其他部分示于表20中。
表20
具有SEQ ID NO:231所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的BBz CAR37)，该CAR包括人scFv、包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的CD8多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头。SEQ ID NO:231的核苷酸序列270-1028编码人scFv。SEQ ID NO:231的核苷酸序列1038-1250编码跨膜结构域中包括的CD8多肽。SEQ IDNO:231的核苷酸序列1251-1376编码细胞内结构域中包括的4-1BB多肽。SEQ ID NO:231的核苷酸序列1377-1715编码细胞内结构域中包括的CD3ξ多肽。SEQ ID NO:231的其他部分示于表21中。
表21
具有SEQ ID NO:232所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的BBz CAR40)，该CAR包括人scFv、包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的CD8多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头。SEQ ID NO:232的核苷酸序列270-1024编码人scFv。SEQ ID NO:232的核苷酸序列1032-1244编码跨膜结构域中包括的CD8多肽。SEQ IDNO:232的核苷酸序列1245-1370编码细胞内结构域中包括的4-1BB多肽。SEQ ID NO:232的核苷酸序列1371-1709编码细胞内结构域中包括的CD3ξ多肽。SEQ ID NO:232的其他部分示于表22中。
表22
具有SEQ ID NO:233所示核苷酸序列的分离的核酸分子编码靶向BCMA的CAR(称作靶向BCMA的BBz CAR54)，该CAR包括人scFv、包括具有SEQ ID NO:226的氨基酸137-207的CD8多肽的跨膜结构域、以及包括有包括SEQ ID NO:195的氨基酸52-163的氨基酸序列的CD3ξ多肽和包括具有SEQ ID NO:197的氨基酸214-255的4-1BB多肽的共刺激信号区的细胞内结构域，上述人scFv包括：包括具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区、包括具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区和位于重链可变区和轻链可变区之间的具有氨基酸序列SEQ ID NO:69的接头。SEQ ID NO:233的核苷酸序列270-1003编码人scFv。SEQ ID NO:233的核苷酸序列1011-1223编码跨膜结构域中包括的CD8多肽。SEQ IDNO:233的核苷酸序列1224-1349编码细胞内结构域中包括的4-1BB多肽。SEQ ID NO:233的核苷酸序列1350-1688编码细胞内结构域中包括的CD3ξ多肽。SEQ ID NO:233的其他部分示于表23中。
表23
在某些实施方式中，分离的核酸分子编码本发明公开的靶向BCMA的CAR的功能性部分。如本文所用，术语“功能性部分”是指本发明公开的靶向BCMA的CAR的保留靶向BCMA的CAR(亲本CAR)的生物活性的任意部分(portion)、一部分(part)或片段。例如，功能性部分包括靶向BCMA的CAR在与亲本CAR类似、相同甚至更高的程度上保留识别靶标细胞、治疗疾病例如多发性骨髓瘤的能力的部分、一部分或片段。在某些实施方式中，编码本发明公开的靶向BCMA的CAR的功能性部分的分离的核酸分子可以编码包括例如亲本CAR的约10％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％和95％或更多的蛋白质。
美国国家癌症研究所(National Cancer Institute，NCI)进行的一项I期临床试验(NCT02215967)使用抗BCMA CAR-转导的T细胞治疗多发性骨髓瘤33,34。NCI的临床试验中应用的抗BCMA CAR包括与人BCMA结合的小鼠scFv。使用小鼠抗体或小鼠scFv治疗人可以导致抗小鼠抗体(HAMA)应答，这可能是威胁生命的。不与NCI的临床试验类似，在某些实施方式中，本发明公开的靶向BCMA-的CAR包括人scFv，因此，与包括鼠科动物抗体的CAR相比较(参见Maus等人,Cancer Immunol Res(2003)；1(1):26-31，该文献报道了源自鼠科动物抗体的CAR潜在的免疫原性可能造成mRNA CAR的安全性问题)提供了大大降低的免疫原性风险。
III.免疫应答细胞
本发明公开的主题提供了表达包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域的CAR的免疫应答细胞，如上所述，其中细胞外抗原结合结构域与BCMA(例如人BCMA)特异性结合。免疫应答细胞可以用本发明公开的CAR来转导，使得细胞表达CAR。本发明公开的主题还提供了使用此类细胞治疗肿瘤例如多发性骨髓瘤(MM)的方法。本发明公开主题的免疫应答细胞可以是淋巴谱系细胞。包括B细胞、T细胞和自然杀伤(NK)细胞的淋巴谱系细胞，提供抗体的产生、细胞免疫系统的调节、血液中外来物质的检测、对宿主外源细胞的检测等。淋巴谱系细胞的非限定性实例包括T细胞、自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调节性T细胞、胚胎干细胞和多能干细胞(例如，可分化成淋巴样细胞的多能干细胞)。T细胞可以是在胸腺中成熟的淋巴细胞，并且主要负责细胞介导的免疫。T细胞参与获得性免疫系统。本发明公开主题的T细胞可以是任何类型的T细胞，包括但不限于辅助性T细胞、细胞毒性T细胞、记忆T细胞(包括中心记忆T细胞、干细胞样记忆T细胞(或干样记忆T细胞)和两种类型的效应记忆T细胞(例如，TEM细胞和TEMRA细胞)、调节性T细胞(也称为抑制性T细胞)、自然杀伤T细胞、粘膜相关恒定T细胞、和γδT细胞。在某些实施方式中，表达CAR的T细胞表达Foxp3以实现和维持T调节表型。自然杀伤(NK)细胞可以是作为细胞介导的免疫的一部分、并且在先天免疫应答过程中发挥作用的淋巴细胞。NK细胞不需要预先激活，以便对靶细胞发挥其细胞毒性作用。细胞毒性T细胞(CTL或杀伤T细胞)是能够诱导受感染的体细胞或肿瘤细胞死亡的T淋巴细胞的亚型。
本发明公开主题的免疫应答细胞可以表达与BCMA(例如人BCMA)特异性结合的细胞外抗原结合结构域(例如人scFV、任选交联的Fab、或F(ab)2)，用于治疗多发性骨髓瘤。此类免疫应答细胞可以给予对其有需求的受试者(例如人受试者)，用于治疗多发性骨髓瘤。在某些实施方式中，免疫应答细胞是T细胞。T细胞可以是CD4+T细胞或CD8+ T细胞。在某些实施方式中，T细胞是CD4+ T细胞。在某些实施方式中，T细胞是CD8+ T细胞。
本公开的免疫应答细胞可以进一步用至少一种共刺激配体转导，使得免疫应答细胞共表达或者诱导成共表达靶向BCMA的CAR和至少一种共刺激配体。靶向BCMA的CAR和至少一种共刺激配体之间的相互作用提供了对于免疫应答细胞(例如T细胞)的完全激活而言很重要的非抗原特异性信号。共刺激配体包括，但不限于，肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员和免疫球蛋白(Ig)超家族配体。TNF是参与全身性炎症并刺激急性期反应的细胞因子。它的主要作用是调节免疫细胞。TNF超家族的成员具有许多共同的特征。大多数TNF超家族成员被合成作为含有短胞质链段和相对长的细胞外区域的II型跨膜蛋白(细胞外C端)。TNF超家族成员包括，但不限于，神经生长因子(NGF)、CD40L(CD40L)/CD154、CD137L/4-1BBL、TNF-α、CD134L/OX40L/CD252、CD27L/CD70、Fas配体(FasL)、CD30L/CD153、肿瘤坏死因子β(TNFβ)/淋巴毒素-α(LTα)、淋巴毒素-β(LTβ)、CD257/B细胞激活因子(BAFF)/Blys/THANK/Tall-1、糖皮质激素诱导的TNF受体配体(GITRL)和TNF相关的细胞凋亡诱导配体(TRAIL)、LIGHT(TNFSF14)。免疫球蛋白(Ig)超家族是一大类参与细胞识别、结合或粘附过程的细胞表面蛋白和可溶性蛋白。这些蛋白与免疫球蛋白共享结构特征——它们具有免疫球蛋白结构域(折叠)。免疫球蛋白超家族配体包括，但不限于，CD80和CD86、CD28的两个配体、PD-1的配体PD-L1/(B7-H1)。在某些实施方式中，至少一种共刺激配体选自4-1BBL、CD80、CD86、CD70、OX40L、CD48、TNFRSF14、PD-L1及其组合。在某些实施方式中，免疫应答细胞用一种共刺激配体4-1BBL转导。在某些实施方式中，免疫应答细胞用两种共刺激配体4-1BBL和CD80转导。用至少一种共刺激配体转导的CAR描述于美国专利第8,389,282号中，在此将其全文并入作为参考。
而且，本发明公开的免疫应答细胞可以进一步用至少一种细胞因子转导，使得免疫应答细胞分泌至少一种细胞因子并且表达靶向BCMA的CAR。在某些实施方式中，至少一种细胞因子选自IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、IL-11、IL-12、IL-15、IL-17和IL-21。在某些实施方式中，细胞因子是IL-12。
BCMA特异性或者靶向BCMA的人淋巴细胞可以用于外周供体淋巴细胞，例如以下文献中所公开：Sadelain,M.等人,2003Nat Rev Cancer3:35-45(公开了遗传修饰成表达CAR的外周供体淋巴细胞)；Morgan,R.A.等人,2006Science 314:126-129(公开了遗传修饰成表达包括α和β异质二聚体的全长肿瘤抗原识别T细胞受体复合物)；Panelli,M.C.等人,2000J Immunol 164:495-504；Panelli,M.C.等人,2000J Immunol164:4382-4392(公开了源自肿瘤活组织检查中的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)的淋巴细胞培养物)；和Dupont,J.等人,2005Cancer Res65:5417-5427；Papanicolaou,G.A.等人,2003Blood 102:2498-2505(公开了使用人工抗原呈递细胞(AAPC)或脉冲树突细胞选择性地在体外扩增的抗原特异性外周血白细胞)。免疫应答细胞(例如T细胞)可以是自体的、非自体的(例如同种异体的)或者在体外得自工程化的祖细胞或干细胞。
在某些实施方式中，本发明公开的免疫应答细胞(例如T细胞)表达约1至约4、约2至约4、约3至约4、约1至约2、约1至约3、或约2至约3个载体拷贝数/细胞的本发明公开的靶向BCMA的CAR。
CTL的未纯化来源可以是本领域任何已知的，例如骨髓、胎儿、新生儿或成人或其他造血细胞来源，例如胎肝、外周血或脐带血。可以采用各种技术来分离细胞。例如，阴性选择方法可以在最初除去非CTL。对于阳性选择和阴性选择，单克隆抗体对于识别与特定细胞谱系和/或分化阶段相关的标志物特别有用。
较大比例的终末分化的细胞可以通过相对较粗的分离在最初除去。例如，最初可以使用磁珠分离，以除去大量不相关的细胞。优选地，至少约80％、通常至少70％的总造血细胞将在细胞分离之前被除去。
分离方法包括，但不限于，密度梯度离心；重调(resetting)；与改变细胞密度的颗粒结合；用涂有抗体的磁珠进行磁性分离；亲和色谱；与mAb结合或联合使用的细胞毒性剂，其包括但不限于补体和细胞毒素；和用附着于例如板、芯片的固体基质的抗体淘选、淘析或任何其他传统的技术。
分离和分析技术包括，但不限于，流式细胞术，其可以具有不同程度的改进，例如多种色彩通道、低角度和钝角光散射检测通道、阻抗通道。
可以通过使用与死细胞相关的染料比如碘化丙啶(PI)，相对于死细胞来选择细胞。优选地，将细胞收集在包括2％胎牛血清(FCS)或0.2％牛血清白蛋白(BSA)的培养基或任何其它合适的优选为无菌的等渗介质中。
IV.载体
免疫应答细胞(例如，T细胞、CTL细胞、NK细胞)的遗传修饰可以通过将基本上均质的细胞组成用重组DNA或RNA构建体转导来实现。载体可以是逆转录病毒载体(例如，γ逆转录病毒)，其用于将DNA或RNA构建体引入到宿主细胞基因组中。例如，可以将编码靶向BCMA的CAR的多核苷酸克隆到逆转录病毒载体中，并且可以由其内源性启动子、逆转录病毒长末端重复序列或者替代的内部启动子驱动表达。
也可使用非病毒载体或RNA。可以使用随机染色体整合或靶向整合(例如使用核酸酶、转录激活子样效应因子核酸酶(TALEN)、锌指核酸酶(ZFN)、和/或成簇的规律间隔的短回文重复物(CRISPR)或转基因表达(例如使用天然或化学修饰的RNA)。
对于细胞的初始遗传修饰以提供表达靶向BCMA的CAR的细胞，通常使用逆转录病毒载体进行转导，然而可以使用任何其它合适的病毒载体或非病毒递送系统。对于细胞的后续遗传修饰以提供包括有包括至少两种共刺激配体的抗原递呈复合物的细胞，逆转录病毒基因转移(转导)同样证明是有效的。逆转录病毒载体和合适的包装系的组合也是合适的，其中衣壳蛋白作用于感染人细胞。已知各种产生双嗜性病毒的细胞系，其包括但不限于PA12(Miller等人(1985)Mol.Cell.Biol.5：431～437)；PA317(Miller等人(1986)Mol.Cell.Biol.6：2895～2902)；和CRIP(Danos等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA85：6460～6464)。非嗜性颗粒也是合适的，例如，用VSVG、RD114或GALV外壳假型化的颗粒和本领域已知的任何其它颗粒。
可能的转导方法还包括将细胞与生产细胞直接共培养，例如，通过Bregni等人(1992)Blood 80：1418～1422的方法，或者在存在或不存在合适的生长因子和聚阳离子的情况下与单独的病毒上清液或浓缩载体储备液一起培养，例如通过Xu等人(1994)Exp.Hemat.22：223～230；和Hughes等人(1992)J.Clin.Invest.89：1817的方法。
转导病毒载体可用于在免疫应答细胞中表达共刺激共刺激配体(例如4-1BBL和IL-12)。优选地，所择的载体表现出高的感染效率和稳定的整合和表达(参见例如Cayouette等人，Human Gene Therapy8：423～430，1997；Kido等人，Current Eye Research15：833～844，1996；Bloomer等人，Journal of Virology 71：6641～6649，1997；Naldini等人，Science 272：263～267，1996；和Miyoshi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94：10319，1997)。可以使用的其他病毒载体包括例如腺病毒、慢病毒和腺相关病毒载体、牛痘病毒、牛乳头瘤病毒或疱疹病毒，例如Epstein-Barr病毒(另外参见例如，以下的载体：Miller，Human Gene Therapy 15-14，1990；Friedman，Science 244：1275～1281，1989；Eglitis等人，BioTechniques 6：608～614，1988；Tolstoshev等人，Current Opinion inBiotechnology 1：55～61，1990；Sharp，The Lancet 337：1277～1278,1991；Cornetta等人，Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36：311～322，1987；Anderson，Science 226：401～409，1984；Moen，Blood Cells 17：407～416，1991；Miller等，Biotechnology 7：980～990，1989；Le Gal La Salle等，Science 259：988～990，1993；和Johnson，Chest 107：77S～83S，1995)。逆转录病毒载体已被特别好地开发，并已用于临床环境中(Rosenberg等人，N.Engl.J.Med 323：370，1990；Anderson等人，美国专利第5,399,346号)。
在某些非限定性实施方式中，表达本发明公开的靶向BCMA的CAR的载体是逆转录病毒载体，例如，293galv9逆转录病毒载体。
也可以使用非病毒方法在细胞中表达蛋白质。例如，通过在脂质转染的存在下给予核酸(Feigner等人,Proc.Nat’l.Acad.Sci.U.S.A.84:7413,1987；Ono等人,Neuroscience Letters 17:259,1990；Brigham等人,Am.J.Med.Sci.298:278,1989；Staubinger等人.,Methods in Enzymology 101:512,1983)，通过脱唾液酸血清类粘蛋白-多赖氨酸缀合(Wu等人,Journal of Biological Chemistry 263:14621,1988；Wu等人,Journal of Biological Chemistry 264:16985,1989)，或者通过在外科手术条件下微注射(Wolff等人,Science 247:1465,1990)，可以将核酸分子引入到细胞中。其他用于基因转移的非病毒方式包括使用磷酸钙、DEAE葡聚糖、电穿孔和原生质体融合在体外转染。脂质体对于将DNA递送至细胞中也可以是潜在有益的。通过将正常核酸转移至可培养的细胞型(例如，自体或异种原代细胞或其子代)中，之后将细胞(或其后代)注射到靶标组织中或全身注射，也可以实现将正常基因移植到受试者的受感染组织中。也可以使用转座酶或靶向核酸酶(例如，锌指核酸酶、大范围核酸酶或TALE核酸酶)得到或获得重组受体。通过RNA电穿孔可以获得暂时的表达。
用于多核苷酸治疗方法的cDNA表达可以由任何合适的启动子(例如人巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒(SV40)或金属硫蛋白启动子)指导，并可以通过任何合适的哺乳动物调控元件或内含子(例如延长因子1α增强子/启动子/内含子结构)调节。例如，如果需要，可以使用已知偏好在特定细胞类型中指导基因表达的增强子，以指导核酸的表达。使用的增强子可以包括，但不限于，鉴定为组织或细胞特异性增强子的那些增强子。另外可选地，如果使用基因组克隆作为治疗构件，则可以通过同源的调控序列，或者如果需要的话通过源自异源性来源的调控序列，包括任意上述的启动子或调控元件，对调节进行介导。
所得的细胞可以在与未修饰细胞类似的条件下生长，从而可以将修饰的细胞扩增，并用于多种目的。
V.多肽和类似物和多核苷酸
本发明公开的主题中还包括与BCMA(例如人BCMA)特异性结合的细胞外抗原结合结构域(例如，scFv(例如人scFv)、Fab或(Fab)2)、CD3ζ、CD8、CD28等多肽或其片段、以及编码其的多核苷酸，它们以当在免疫应答细胞中表达时增强其抗肿瘤活性的方式被修饰。本发明公开的主题提供了通过产生序列中的改变来优化氨基酸序列或核酸序列的方法。此类改变包括某些突变、缺失、插入或翻译后修饰。本发明公开的主题还包括本发明公开主题的任何天然存在的多肽的类似物。类似物可以通过氨基酸序列差异、通过翻译后修饰或通过两者而不同于本发明公开主题的天然存在的多肽。本发明公开主题的类似物通常可以表现出与本发明公开主题的天然存在的氨基酸序列的全部或部分至少约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或更高的同一性。序列比较的长度为至少5、10、15、20、25、50、75、100或更多个氨基酸残基。此外，在确定同一性程度的示例性方法中，可以使用BLAST程序，e-3和e-100之间的概率得分表示密切相关的序列。修饰包括多肽的体内和体外化学衍生，例如乙酰化、羧化、磷酸化或糖基化；此类修饰可以在多肽合成或用分离的修饰酶的处理中或处理之后发生。类似物还可以通过一级序列的改变而不同于本发明公开主题的天然多肽。这些改变包括天然和诱导的遗传变体(例如，产生自通过照射或暴露于甲磺酸乙酯的随机突变，或者通过定点突变，如以下文献所述：Sambrook，Fritsch和Maniatis，Molecular Cloning:ALaboratory Manual(第二版)CSHPress，1989；或Ausubel等人，同上)。另外包括的是含有除L-氨基酸外的残基例如D-氨基酸或非天然存在的或合成的氨基酸例如β或γ氨基酸的环肽、分子和类似物。
除全长多肽以外，本发明公开的主题还提供本发明公开主题的多肽或肽结构域中任一者的片段。片段可以是至少5、10、13或15个氨基酸。在某些实施方式中，片段是至少20个连续氨基酸、至少30个连续氨基酸或至少50个相连的氨基酸。在某些实施方式中，片段是至少60至80、100、200、300或更多个相连的氨基酸。本发明公开主题的片段可以通过本领域普通技术人员已知的方法产生，或者可以由普通的蛋白质加工产生(例如从新生多肽中除去生物活性不需要的氨基酸，或者通过另外可选的mRNA剪接或另外可选的蛋白质加工事件除去氨基酸)。
非蛋白质类似物具有设计成模拟本发明蛋白质的功能活性的化学结构。这些类似物根据本发明公开主题的方法而施用。这些类似物可以超过原始多肽的生理活性。类似物设计方法是本领域公知的，并且可以根据这些方法通过修饰化学结构进行类似物的合成，使得当在免疫应答细胞中表达时，所生成的类似物增加原始多肽的抗肿瘤活性。这些化学修饰包括但不限于取代另外可选的R基团，和改变参考多肽特定碳原子的饱和度。蛋白质类似物可以相对耐受体内降解，导致施用时治疗效果更加延长。用于测量功能活性的试验包括但不限于下面实施例中描述的那些。
根据本发明公开的主题，编码与BCMA(例如，人BCMA)特异性结合的细胞外抗原结合结构域(例如scFV(例如人scFv)、Fab或(Fab)2)、CD3ζ、CD8、CD28)的多核苷酸可以通过密码子优化进行修饰。密码子优化可以改变天然存在的和重组的基因序列，以在任何给定的表达系统中实现最高可能水平的生产能力。涉及蛋白质表达不同阶段的因素包括密码子适应性、mRNA结构以及转录和翻译中的各种顺式元件。本领域技术人员已知的任何合适的密码子优化方法或技术均可用于修饰本发明公开主题的多核苷酸，其包括，但不限于，OptimumGeneTM、Encor优化和Blue Heron。.
VI.给药
可以全身性地或直接地向受试者提供本发明公开主题的靶向BCMA的CAR和表达它的免疫应答细胞，用于治疗或预防瘤形成。在某些实施方式中，将靶向BCMA的CAR和表达它的免疫应答细胞直接注射到所关注的器官(例如，受瘤形成影响的器官)中。另外可选地或额外地，将靶向BCMA的CAR和表达它的免疫应答细胞通过例如施用到循环系统中(例如，肿瘤血管系统)间接地提供至所关注的器官。可以在细胞和组合物给药之前、过程中或之后，提供扩增剂和分化剂，以增加体外或体内T细胞的产生。
本发明公开主题的靶向BCMA的CAR和表达它的免疫应答细胞可以在任何生理学可接受的媒介物中给药，通常是血管内给药，尽管它们也可以被引入骨或细胞可以找到合适的再生和分化位点的其他方便的位点中(例如，胸腺)。通常，可以施用至少1×105个细胞，最终达到1×1010个或更多。包括表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞的细胞群可以包括纯化的细胞群。本领域技术人员可以很容易地使用各种公知的方法例如荧光激活细胞分选(FACS)确定细胞群中免疫应答细胞的百分比。包含经遗传修饰的表达BCMA特异性CAR的免疫应答细胞的细胞群中的纯度范围可以是约50％至约55％、约55％至约60％、约65％至约70％、约70％至约75％、约75％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、约90％至约95％或约95至约100％。本领域技术人员可以容易地调整剂量(例如，纯度降低可能需要增加剂量)。免疫应答细胞可通过注射、导管等引入。如果需要，还可以包括因子，其包括，但不限于，白细胞介素，例如IL-2、IL-3、IL 6、IL-11、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21以及其它白细胞介素，集落刺激因子，例如G-、M-和GM-CSF，干扰素，例如γ-干扰素。
本发明公开主题的组合物包括药物组合物，其包括表达靶向CMMA的CAR的免疫应答细胞和药学可接受的载体。给药可以是自体的或非自体的。例如，表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞和包含它的组合物可以从一个受试者获得，并施用给相同受试者或不同的相容的受试者。可以通过局部注射，包括导管给药、全身性注射、局部注射、静脉内注射或胃肠外给药来给予本发明公开主题的源自外周血的T细胞或其子代(例如，体内、先体外后体内或体外获得的)。当施用本发明公开主题的药物组合物(例如，包括表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞的药物组合物)时，可以将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、混悬液、乳液)。
VII.制剂
本发明公开主题的通常表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞和包含其的组合物可以方便地作为无菌液体制剂提供，例如等渗水溶液、混悬液、乳液、分散液或粘性组合物，其可以缓冲至选定的pH。液体制剂通常比凝胶、其它粘性组合物和固体组合物更容易制备。此外，液体组合物在一定程度上更方便给药，特别是通过注射。另一方面，粘性组合物可以在适当的粘度范围内配制，以提供与特定组织的更长的接触时间。液体或粘性组合物可以包括载体，其可以是含有例如水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如甘油、丙二醇、液体聚乙二醇等)及其适当混合物的溶剂或分散介质。
无菌可注射溶液可以通过以下方法来制备：将包括表达本发明公开主题的靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞的组合物引入到所需量的合适溶剂与如果需要的各种量的其它成分中。这些组合物可以与合适的媒介物、稀释剂或赋形剂如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等混合。组合物也可以冻干。根据给药途径和所需制剂，组合物可以含有辅助性物质，例如润湿剂、分散剂或乳化剂(例如甲基纤维素)、pH缓冲剂、凝胶化或增粘添加剂、防腐剂、调味剂、着色剂等。可以参考标准教科书，例如在此并入本文以供参考的“REMINGTON’SPHARMACEUTICAL SCIENCE”，第17版，1985，以制备合适的制剂，而无需过度的实验。
可以加入增强组合物稳定性和无菌性的各种添加剂，包括抗微生物防腐剂、抗氧化剂、螯合剂和缓冲剂。通过各种抗菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸等，可以确保防止微生物的作用。可注射药物形式的延长吸收可以通过使用延迟吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶实现。然而，根据本发明，使用的任何载体、稀释剂或添加剂必须与本发明公开主题的通常表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞相容。
组合物可以是等渗的，即它们可以具有与血液和泪液相同的渗透压。本发明公开主题的组合物所需的等渗性可以使用氯化钠或其它药学上可接受的试剂例如右旋糖、硼酸、酒石酸钠、丙二醇或其它无机或有机溶质实现。氯化钠对于含有钠离子的缓冲液来说特别优选。
如果需要，组合物的粘度可以使用药学上可接受的增稠剂保持在选定的水平。可以使用甲基纤维素，因为它容易购得且经济可行并且易于操作。其它合适的增稠剂包括，例如，黄原胶、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、卡波姆等。增稠剂的浓度可以取决于所选择的试剂。要点在于使用将会实现所选粘度的量。显然，合适的载体和其它添加剂的选择将取决于确切的给药途径和特定剂型例如液体剂型的性质，(例如，是否将组合物配制成溶液、混悬液、凝胶或其他液体形式，例如延时释放形式或液体填充形式)。
本领域技术人员会认识到，组合物的组分应当选择成在化学上呈惰性，并且不会影响如本发明公开主题所述的免疫应答细胞的存活力或功效。这一点对于化学和药学原理的技术人员来说将不存在问题，或者从本公开内容和本文引用的文献通过参考标准教科书或通过简单实验(不涉及过度实验)，可以容易地避免问题。
关于本发明公开主题的免疫应答细胞的治疗用途的一个考虑是获得最佳效果所必需的细胞的量。要施用的细胞的量将根据所治疗的受试者而变化。在某些实施方式中，将约104至约1010、约105至约109或约106至约108个本发明公开主题的免疫应答细胞施用至受试者。更有效的细胞可以以甚至更少的量施用。在某些实施方式中，将至少约1x108、至少约2x108、约3x108至约4x108和约5x108个本发明公开的免疫应答细胞施用至人类受试者。何为有效剂量的精确确定可以基于对于每个受试者而言独立的因素，包括具体受试者的体型大小、年龄、性别、体重和病症。剂量可以由本领域技术人员从本公开内容和本领域的知识中容易地确定。
本领域技术人员可以容易地确定组合物中以及要在本发明公开主题的方法中施用的细胞和任选的添加剂、媒介物和/或载体的量。通常，任何添加剂(除了活性细胞和/或试剂之外)在磷酸盐缓冲盐水中以约0.001wt％至约50wt％的溶液的量存在，活性成分以微克至毫克的数量级存在，例如约0.0001wt％至约5wt％、约0.0001wt％至约1wt％、约0.0001wt％至约0.05wt％、约0.001wt％至约20wt％、约0.01wt％至约10wt％或者约0.05wt％至约5wt％。对于要给予动物或人的任何组合物，以及对于任何具体的给药方法，应当确定毒性，例如通过在合适的动物模型例如啮齿动物如小鼠中测定致死剂量(LD)和LD50；和引起适当应答的组合物的剂量、其中组分的浓度和给予组合物的时机来确定毒性。此类确定根据本领域技术人员的知识、本公开内容和本文引用的文献并不需要过度实验。并且，可以在没有过度实验的情况下确定依序给药的时间。
VIII.治疗方法
肿瘤微环境。肿瘤具有敌对于宿主免疫应答的微环境，其涉及恶性细胞一系列机制以保护自身免于免疫识别和清除。这种“敌对的肿瘤微环境”包括多种免疫抑制因子，包括浸润性调节性CD4+ T细胞(Treg)、骨髓衍生抑制细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM)、包括IL-10和TGF-β的免疫抑制性细胞因子，以及靶向由活化T细胞(CTLA-4和PD-1)表达的免疫抑制性受体的配体的表达。这些免疫抑制机制在维持耐受性和抑制不适当的免疫应答中起作用，然而在肿瘤微环境内，这些机制阻止有效的抗肿瘤免疫应答。总之，在遇到靶向的肿瘤细胞时这些免疫抑制因子可以诱导过继转移的CAR修饰的T细胞显著的无效能化或凋亡。
肿瘤免疫学的挑战。有效的肿瘤免疫需要肿瘤抗原识别和免疫效应细胞的无对抗的肿瘤清除。肿瘤抗原必须包含由肿瘤递呈并且可以被特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的肽表位。引发的CTL必须扩增到足够数量并迁移至肿瘤位点，在其中它们成熟为效应物以发挥其功能，这种功能通过辅助性T细胞增强并被Treg和抑制性巨噬细胞抑制。
用改造的T淋巴细胞的靶向T细胞治疗。T细胞改造是开创性的策略，以潜在解决许多以前观察到的早期免疫治疗方法的缺陷。在过去一年中，研究人员报道了用靶向指定抗原(分别为CD19和NY-ESO-1)的自体外周血T细胞获得了在复发16,17、化学耐药性(chemorefractory)白血病和转移性黑色素瘤18-20中的显著的完全缓解。
遗传方法的原理：细胞工程可以用于将T细胞重定向至肿瘤抗原并增强T细胞功能。遗传性T细胞修饰的一个动力是增强T细胞存活和扩增并抵消T细胞死亡、无效能化和免疫抑制的潜力。还可以改进T细胞的遗传靶向以防止正常组织的不期望的破坏。
嵌合抗原受体(CAR)：通过转移编码CAR的基因，可以产生肿瘤特异性T细胞21-26。第二代CAR包括与能够激活T细胞的细胞内信号转导结构域融合的肿瘤抗原结合结构域，以及设计成增强T细胞效能和持续性的共刺激结构域27。因此CAR设计可以协调抗原识别与信号转导——生理上由两个单独的复合物TCR异质二聚体和CD3复合物承担的两种功能。CAR的细胞外抗原结合结构域通常来源于鼠单克隆抗体(mAb)或来自受体或其配体。因此，抗原识别是非MHC限制的28,29，因此使用相同的CAR可以适用于表达靶标抗原的任何患者。通过CAR的抗原结合触发细胞内结构域中基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的磷酸化，启动溶细胞诱导、细胞因子分泌和增殖所需的信号转导级联。由于抗原识别的MHC限制被绕开，CAR靶向T细胞的功能不受HLA下调或抗原加工机制中缺陷的影响。
T细胞对于扩增和存活的要求：肿瘤特异性T细胞的增殖在体内外(ex vivo)是需要的，并且在体内可以说是希望有的。T细胞增殖必须伴随有T细胞的存活，以允许绝对的T细胞扩增和持续。为了响应于抗原而增殖，T细胞必须接收两种信号。一种是由抗原递呈细胞(APC)表面上展示的抗原肽/MHC复合物的TCR识别提供25。另一种由T细胞共刺激受体例如CD28或4-1BB受体提供。虽然T细胞的溶细胞活性不需要伴随的共刺激，但如先前所证明，对于提供共刺激信号以维持过继转移T细胞的抗肿瘤功能，存在关键需求23,27,30-32。
免疫监测：淋巴细胞是多功能“药物”，其在输注后表现出动态变化效应。在遇到抗原时，肿瘤特异性T细胞激活和/或释放多种可以触发肿瘤杀伤、T细胞增殖和其它免疫细胞的募集或免疫调节的蛋白质。因此，测量哪些蛋白质从哪些细胞以什么数量及在什么时间点分泌，对于具体患者为什么应答或不应答可以提供深入理解，并且为设计更有效的试验提供关键反馈。这些试验系统将允许直接和有意义的临床方法比较，从而有助于设计合理的下一代治疗策略。
对于治疗，给予的量是产生所需效果有效的量。可以在一次或系列给药中提供有效量。可以在推注或通过连续灌注提供有效量。
“有效量”(或“治疗有效量”)是足以在治疗时影响有益或期望的临床结果的量。有效的量可以在一个或多个剂量中给予受试者。在治疗方面，有效量是足以减轻、改善、稳定、逆转或减缓疾病的进展或以其它方式减少疾病的病理学后果的量。有效量通常由医生根据具体情况确定，并且在本领域技术范围内。当确定合适剂量以达到有效量时，通常考虑若干因素。这些因素包括受试者的年龄、性别和体重、所治疗的病症、病症的严重程度以及给予的免疫应答细胞的剂型和有效浓度。
对于使用抗原特异性T细胞的过继免疫治疗，通常输注约106至约1010(例如约109)范围内的细胞剂量。当免疫应答细胞被给予受试者并随后分化时，免疫应答细胞诱导为特异性地针对一种特定抗原(例如，BCMA)。T细胞的“诱导”可以包括例如通过缺失或无效能化实现的抗原特异性T细胞的失活。失活对于建立或重建比如在自身免疫性疾病中的耐受性特别有用。本发明公开主题的免疫应答细胞可以通过本领域已知的任何方法给药，包括但不限于胸膜给药、静脉内给药、皮下给药、结节内给药、肿瘤内给药、鞘内给药、胸膜内给药、腹膜内给药和直接施用于胸腺。在某些实施方式中，免疫应答细胞和包括其的组合物在静脉内施用于需要的受试者。
本发明公开的主题提供使用表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞(例如，T细胞)的各种方法。例如，本发明公开的主题提供减少受试者的肿瘤负荷的方法。在一个非限定性实例中，减少肿瘤负荷的方法包括将有效量的本发明公开的免疫应答细胞给予受试者，从而在受试者中诱导肿瘤细胞死亡。本发明公开的免疫应答细胞可以减少受试者的肿瘤细胞的数量、减小肿瘤尺寸和/或根除肿瘤。合适的肿瘤的非限定性例子包括多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。
本发明公开的主题还提供增加或延长患有瘤形成的受试者的存活的方法。在一非限定性实例中，增加或延长患有瘤形成的受试者的存活的方法包括将有效量的本发明公开的免疫应答细胞给予受试者，从而增加或延长受试者的存活。该方法可以减少或根除受试者的肿瘤负荷。本发明公开的主题进一步提供用于治疗或预防受试者的瘤形成的方法，其包括将本发明公开的免疫应答细胞给予受试者。
本文使用的术语“瘤形成”是指特征在于细胞或组织的病理增殖及其随后向其它组织或器官迁移或侵袭的疾病。瘤形成生长通常是不受控制的和进行性的，并且在不会引起或将导致正常细胞繁殖停止的条件下发生。瘤形成可以影响多种细胞类型、组织或器官，包括但不限于选自膀胱、结肠、骨、脑、乳腺、软骨、神经胶质、食管、输卵管、胆囊、心脏、肠、肾脏、肝脏、肺、淋巴结、神经组织、卵巢、胸膜、胰腺、前列腺、骨骼肌、皮肤、脊髓、脾、胃、睾丸、胸腺、甲状腺、气管、泌尿生殖道、输尿管、尿道、子宫、和阴道的器官，或其组织或细胞类型。瘤形成包括癌症，例如肉瘤(sarcomas)、癌(carcinoma)或浆细胞瘤(浆细胞的恶性肿瘤)。
使用本发明公开主题的免疫应答细胞可以抑制其生长的癌症包括通常对免疫治疗有应答的癌症。治疗的癌症的非限定性例子包括多发性骨髓瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、成胶质细胞瘤和Waldenstrom氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，癌症是多发性骨髓瘤。
另外，本发明公开的主题提供响应于受试者中的癌细胞而增加免疫激活细胞因子产生的方法。在一非限定性实例中，该方法包括将本发明公开的免疫应答细胞给予受试者。免疫激活细胞因子可以是粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、IFN-α、IFN-β、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-3、IL-6、IL-11、IL-7、IL-12、IL-15、IL-21、干扰素调节因子7(IRF7)及其组合。在某些实施方式中，本发明公开主题的包括BCMA特异性CAR的免疫应答细胞增加GM-CSF、IFN-γ和/或TNF-α的产生。
进行治疗的合适的人受试者通常包括可以通过临床标准区分的两个治疗组。具有“重度疾病”或“高肿瘤负荷”的受试者是具有临床可测量的肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的受试者。临床可测量的肿瘤是可以基于肿瘤质量而检测(例如通过触诊、CAT扫描、声波图、乳房X线照片或X射线；阳性生化或组织病理学标志物本身不足以识别该群体)的肿瘤。将本发明公开主题所包含的药物组合物给予这些受试者，以引起抗肿瘤应答，目的是减轻他们的病症。理想地，结果是发生肿瘤质量的减少，但是任何临床改善均构成益处。临床改善包括降低风险或进展速率或者减少肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的病理后果。
第二组合适的受试者在本领域中称为“辅助组”。他们是具有瘤形成史(例如多发性骨髓瘤)、但已对另一治疗方式有响应的个体。先前的治疗可以包括，但不限于，手术切除、放疗和传统化疗。结果，这些个体没有临床可测量的肿瘤。然而，他们被怀疑在原始肿瘤位点附近或通过转移而处于疾病进展的风险中。该组可以进一步细分为高风险个体和低风险个体。根据在初始治疗之前或之后观察到的特征进行细分。这些特征在临床领域是已知的，并且针对每种不同的瘤形成有适当的定义。通常的高风险亚组典型的特征是肿瘤(例如多发性骨髓瘤)已侵入邻近组织或者显示牵涉到淋巴结的那些。另一组具有瘤形成(例如多发性骨髓瘤)的遗传易感性，但尚未证实瘤形成的临床体征。例如，对于在乳腺癌相关的基因突变测试中呈阳性、但仍处于育龄年纪的妇女，可以希望预防性地接受本文所述的一种或多种抗原结合片段以防止瘤形成的发生，直到适合于进行预防性手术。
受试者可以具有进展形式的疾病(例如多发性骨髓瘤)，在这种情况下，治疗目标可以包括缓解或逆转疾病进展和/或减轻副作用。受试者可以具有病史，例如他们已经经过治疗，在这种情况下，治疗目标通常包括复发风险的降低或延迟。
可以对表达靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞(例如，T细胞)引入进一步修饰，以避免或最小化免疫并发症(被称为“恶性T细胞转化”)例如移植物抗宿主病(GvHD)的风险，或者当健康组织表达与肿瘤细胞相同的靶标抗原时，导致与GvHD相似的结果的风险。这个问题的潜在解决方案是将自杀基因改造到表达CAR的T细胞中。合适的自杀基因包括，但不限于，单纯疱疹病毒胸苷激酶(hsv-tk)、诱导型半胱天冬酶9自杀基因(iCasp-9)和截短的人表皮生长因子受体(EGFRt)多肽。在某些实施方案中，自杀基因是EGFRt多肽。EGFRt多肽可以通过施用抗EGFR单克隆抗体(例如西妥昔单抗(cetuximab))来使T细胞清除。EGFRt可以共价连接到靶向BCMA的CAR的细胞内结构域的3’端。自杀基因可以包括在包括编码本发明公开的靶向BCMA的CAR的核酸的载体中。以这种方式，施用设计成在恶性T细胞转化期间(例如GvHD)激活自杀基因的前药(例如，可以激活iCasp-9的AP1903)，引发自杀基因激活的表达CAR的T细胞的凋亡。
IX.药盒
本发明公开的主题提供用于治疗或预防瘤形成(例如多发性骨髓瘤)的药盒。在某些实施方式中，药盒包括治疗性或预防性组合物，该组合物包括有效量的单位剂量形式的包含靶向BCMA的CAR的免疫应答细胞。在具体实施方式中，细胞进一步表达至少一种共刺激配体。在一些实施方式中，药盒包括含有治疗性或预防性疫苗的无菌容器；此类容器可以是盒、安瓿、瓶、小瓶、管、袋子、小袋、泡罩或本领域已知的其它合适的容器形式。此类容器可以由塑料、玻璃、层压纸、金属箔或适合于容纳药物的其它材料制成。
如果需要，将免疫应答细胞与用于将细胞施用至具有瘤形成(例如多发性骨髓瘤)或有其发生风险的受试者的说明书一起提供。说明书通常包括关于组合物用于治疗或预防瘤形成(例如多发性骨髓瘤)的使用的信息。在其它实施方式中，说明书包括以下中的至少一种：对治疗剂的说明；用于治疗或预防瘤形成(例如多发性骨髓瘤)或其症状的剂量方案和给药方法；注意事项；警告；适应症；禁忌症；过量信息；不良反应；动物药理学；临床研究；和/或参考文献。说明书可以直接印在容器上(当存在时)，或作为标签贴到容器上，或作为单独的纸张、小册子、卡片或折叠式印刷品，在容器中或与容器一起提供。
实施例
除非另有说明，本发明的实施采用分子生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，其均在本领域技术人员知晓的范围内。此类技术在文献中有充分解释，比如“Molecular Cloning:A Laboratory Manual”，第二版(Sambrook，1989)；“Oligonucleotide Synthesis”(Gait，1984)；“Animal Cell Culture”(Freshney，1987)；“Methods in Enzymology”“Handbook of Experimental Immunology”(Weir，1996)；“Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells”(Miller和Calos，1987)；“Current Protocols in Molecular Biology”(Ausubel，1987)；“PCR:The PolymeraseChain Reaction”，(Mullis，1994)；“Current Protocols in Immunology”(Coligan，1991)。这些技术适用于生产本发明的多核苷酸和多肽，因此可以在制备和实施本发明时考虑。在下面的部分中将讨论用于具体实施方式的特别有用的技术。
给出以下实施例，以便为本领域普通技术人员提供如何进行和利用本发明的试验、筛选和治疗方法的充分公开和说明，并且无意于限定发明人视作其发明的范围。
实施例1-不同组织中的BCMA表达
通过考察数据库例如癌细胞系百科全书和BioGPS中的基因表达图谱，在各种恶性和正常组织中评价人BCMA的表达。如图2所示，人BCMA在淋巴瘤和多发性骨髓瘤中得到高度表达，但在其他恶性组织中没有。正常表达似乎限于B-细胞和浆细胞。基于发明人的靶向CD19的CAR T细胞的患者经验，这些正常细胞类型潜在的靶向BCMA的CAR T细胞根除可能没有显著的不良反应。任何生理抗体产生的缺乏可以用静脉内免疫球蛋白治疗来解决。
实施例2-BCMA特异性28z CAR的构建
产生多种独特的针对BCMA的完整人scFv，并产生基于这些scFv的CAR。通过用BCMA-Fc融合蛋白然后是表达人BCMA的3T3细胞筛选完整人scFv噬菌体文库(>6x1010scFv)，识别出多种scFv。进行测序之后，从79个测序的阳性克隆中发现57个独特的BCMA-Fc阳性克隆；独特克隆率为72％。针对BCMA-3T3的噬菌体抗体克隆和亲代3T3细胞系的FACS分析导致确认了25个独特的阳性克隆。
分别使用ET140-153 scFv(或“ET140-3 scFv”)、ET140-174 scFv(或“ET140-24scFv”)、ET140-187 scFv(或“ET140-37 scFv”)、ET140-190 scFv(或“ET140-40 scFv”)和ET140-204 scFv(或“ET140-54scFv”)产生靶向BCMA的28z CAR 3、24、37、40和54。这些靶向BCMA的28z CAR具有类似的结构，例如，各自均具有包括CD28多肽的跨膜结构域、和细胞内结构域，该细胞内结构域包括：CD3ξ多肽和包括CD28多肽的共刺激信号区，如图1所示。将各个这些靶向BCMA的CAR克隆到逆转录病毒载体中。然后可以将这些病毒载体转导到HEK293galv9病毒包装细胞中，以产生用于产生CAR+ T细胞的稳定的包装系。
将人T细胞(来自健康供体的未选择的(CD4和CD8)人T细胞)用逆转录病毒转导，以表达这些靶向BCMA的CAR中的每一种，使得T细胞表达这些靶向BCMA的28z CAR。靶向BCMA的CAR在人T细胞的细胞表面表达通过结合缀合A647的BCMA-Fc融合蛋白确定。评价靶向BCMA的28z CAR24的细胞表面表达，并通过流式细胞术验证细胞表面检测，如图3所示。
评价17种人scFv在人BCMA和小鼠BCMA之间的交叉反应活性。如图4所示，某些scFv例如ET140-153 scFv(或“ET140-3 scFv”)和ET140-192 scFv(或“ET140-42 scFv”)与小鼠BCMA交叉反应，因此，该scFv可以用于同系小鼠研究。
实施例3-BCMA特异性CAR的活性
对本发明公开的BCMA特异性28z CAR的抗肿瘤活性进行评价。体外数据显示，BCMA特异性CAR特异性地杀死呈递BCMA的细胞，包括MM细胞系。例如，如图5所示，表达BCMA特异性28z CAR24的T细胞杀死过量表达BCMA的3T3细胞(但不杀死过量表达无关抗原的对照3T3)。如图6所示，表达BCMA特异性28z CAR 24、40和54的T细胞杀死人MM细胞系。
实施例4-抗BCMA抗体的筛选数据
ELISA筛选：图21显示了使用特异性scFv噬菌体抗体克隆(ET140-3、ET140-24、ET140-37、ET140-40和ET140-54)针对BCMA抗原进行蛋白质ELISA筛选的代表性结果。将ELISA板分别用人BCMA ECD-Fc融合蛋白、对照-Fc融合蛋白或者作为空白对照的仅PBS涂覆。将来自针对BCMA ECD-Fc融合蛋白富集的噬菌体展示淘选池的各个噬菌体克隆在涂覆的板中孵育。通过缀合HRP的抗M13抗体检测噬菌体克隆的结合，并使用TMB底物显色。读取在450nm的吸光度。
FACS筛选：图22显示了BCMA特异性噬菌体抗体克隆ET140-3、ET140-24、ET140-37、ET140-40和ET140-54的FACS分析的代表性的图。将噬菌体克隆与3T3-BCMA细胞系一起孵育，然后与抗M13小鼠抗体一起孵育。最后，再次洗涤之后，将APC标记的抗小鼠IgG第二抗体加入到反应中。利用FACS测量结合，并表示为平均荧光强度(MFI)。将细胞与单独的第二抗体、与M13 K01辅助噬菌体一起孵育、以及仅细胞用作阴性对照。
实施例5-BCMA特异性BBz CAR的构建
产生多种独特的针对BCMA的完整人scFv，如实施例2所述。分别使用ET140-153scFv(或“ET140-3 scFv”)、ET140-174 scFv(或“ET140-24 scFv”)、ET140-187 scFv(或“ET140-37 scFv”)、ET140-190scFv(或“ET140-40 scFv”)和ET140-204 scFv(或“ET140-54scFv”)产生靶向BCMA的28z CAR 3、24、37、40和54。这些靶向BCMA的BBz CAR各自均具有包括CD8多肽的跨膜结构域、和细胞内结构域，该细胞内结构域包括：CD3ξ多肽和包括4-1BB多肽的共刺激信号区，如图7所示。将各个这些靶向BCMA的CAR克隆到SFG逆转录病毒载体中，作为例子，含有CAR载体的4-1BB如图8-12所示。
实施例6-靶向BCMA的CAR T细胞的活性
如图13所示，与无关地靶向4h11-28z MUC16的靶向CAR T细胞相比较，BCMA特异性28z CAR24溶解人MM细胞系L363、NCL-H929和U266。所观察的BCMA特异性28z CAR24表现出的细胞毒性对BCMA有特异性，因为它并不溶解BCMA阴性、CD19阳性的Raji Burkett淋巴瘤细胞系，如图13所示。
实施例7-通过靶向BCMA的CAR T细胞诱导细胞因子分泌
将靶向BCMA的28z CAR24 T细胞特异性地与MM细胞系共培养，诱导与T细胞激活一致的细胞因子分泌图谱。图14显示了将CAR T细胞与人肿瘤细胞系共培养24h(E:T比1:1)之后的IL-2分泌。具有靶向CD19的CAR T细胞(阳性对照)的淋巴浆细胞性淋巴瘤(CD19+)和具有靶向BCMA的28z CAR24 T细胞的MM细胞系显示细胞因子产生的增加。IFNg、IL-6、TNFa、sCD40L、GM-CSF均具有类似的分泌图谱(数据未示出)。
实施例8-靶向BCMA的CAR T细胞的抗肿瘤活性
1x107 U266人骨髓瘤细胞系细胞在第0天将IV注射到NSG小鼠。在第4天将1x106靶向BCMA或靶向CD19的二代CAR T细胞注射IV。第11天的图像(第7天s/p CAR T细胞注射)显示与不相关的靶向(CD19)的CAR T细胞，靶向BCMA28z CAR54 T细胞可以介导抗肿瘤应答。参见图15。
实施例9-靶向BCMA的CAR T细胞的活性
测试了靶向BCMA的CAR T细胞的特异性溶解人骨髓瘤细胞系(HMCL)的能力。靶向CD19的CAR T细胞或靶向BCMA的28z CAR24T细胞与表达GFP的肿瘤细胞系SET2(急性骨髓性白血病(AML),CD19-BCMA-)；BCWM1(淋巴浆细胞淋巴瘤(LPL),CD19-BCMA-)；L363(多发性骨髓瘤(MM),CD19-BCMA+)一起孵育。在时间0，GFP+肿瘤系的百分比示于图16A。在36小时阳性对照靶向CD19的CAR T细胞已经特异性地杀死了GFP+LPL系，并且类似地靶向BCMA的28zCAR24 T细胞已经特异性地杀死了GFP+MM系。参见图16B。
实施例10-抗BCMA抗体的表位定位
基于具有N-端生物素+SGSG接头+具有1个氨基酸间隔的15个氨基酸的ECD序列对BCMA多肽进行排序。肽库示于表24中。
表24
将肽在PBST(PBS+0.05％Tween-20)中以2ug/mL涂覆在链霉亲和素板上。洗涤并用3％BSA阻断之后，进行洗涤，然后分别向孔中加入1ug/mL ET140-3、ET140-24、ET140-54或ET901 mIgG1。所有实施例中使用的“mIgG1”表示可变区是完整人序列且Fc部分是小鼠IgG1。然后将HRP抗小鼠IgG检测抗体加入到每个孔中。最后，使用TMB底物显色。记录A450用于数据分析。结果示于图17-20。如图17和图20所示，ET140-3与SEQ ID NO:71的多肽7-13(即，氨基酸8-22、9-23、10-24、11-25、12-26、13-27和14-28)结合。如图18和图19所示，对于ET140-24或ET140-54没有发现线性表位。
总结：将3ET140抗体(mIgG1)与同种型对照ET901 mIgG1一起测试其对于BCMA-ECD的结合表型。使用由39种肽(N-端生物素+SGSG接头+15个氨基酸，1个氨基酸偏移)组成的肽库用于表位定位ELISA。这使得可以搜索BCMA-ECD的线性结合表位。使用ET901mIgG1作为每个肽的背景参考。仅ET140-3可以识别其表位区：包括SEQ ID NO:71的氨基酸14-22的区域，例如SEQ ID NO:71的氨基酸8-28。
ET140-24和ET140-54没有显示任何显著的对于肽库的结合。这表明这两种抗体识别构象表位，而不是BCMA的线性表位。
实施例11-通过表面等离子体共振的抗BCMA抗体重组抗原
ET140-153 mIgG1(或“ET140-3 mIgG1”)、ET140-174 mIgG1(或“ET140-24mIgG1”)、ET140-204 mIgG1(或“ET140-54 mIgG1”)和BCMA重组抗原之间相互作用的动力学使用BIAcore X100仪器测量。简言之，通过使Biotin CAPture试剂以2μL/min流过流动池5分钟，将50μg/mL修饰的链霉亲和素固定在传感芯片Chip CAP上。将10ug/mL生物素酰化BCMA-Fc蛋白质以30μL/min的速率上样到流动池上3分钟。按照动力学标准方案，进行0.6至15μg/mL的ESK1系列注射，每一步由以30μL/min注射3分钟和解离3分钟组成。之后，将表面用由75％v/v 8M胍-HCl和25％v/v 1M NaOH组成的溶液再生2分钟。使用BIAcore X100评价软件(2.0.1版)通过全局拟合(1:1Langmuir结合模型)得出动力学常数。结合亲和力数据示于表25。
表25
尽管前述本发明公开的主题已经出于清楚理解的目的通过说明和实施例进行了相当程度的说明，说明书和实施例均不应当理解成对本发明公开的主题进行限定。在此将本文引用的所有专利和科学文献的公开内容明确地全文并入作为参考。
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34.WO2013/154760
35.Maus et al.,Cancer Immunol Res(2003)；1(1):26-31
从前面的描述中，显然可以对本文所述的本发明进行变化和修改，以使它适用于各种用途和条件。这些实施方式也在所附权利要求的范围内。
本说明书中提到的所有专利和出版物以及通过登录号或参考号提到的序列均并入本文以供参考，其程度如同每个独立的专利和出版物以及序列被具体地单独指明并入本文以供参考。
序列表
<110> 纪念斯隆-凯特琳癌症中心
尤里卡治疗公司
<120> 靶向B-细胞成熟抗原的嵌合抗原受体及其用途
<130> 072734.0360
<140> PCT/US2015/064112
<141> 2015-12-04
<150> 62/088,309
<151> 2014-12-05
<160> 280
<170> PatentIn 版本 3.5
<210> 1
<211> 123
<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列
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<223> 人工序列描述：合成多肽
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cagtccccat cgagaggcct tgagtggctg ggaaggacat actacaggtc caagtggtat 180
aatgattatg cagtatctgt gaaaagtcga ataaccatca acccagacac atccaagaac 240
cagttctccc tgcagctgaa ctctgtgact cccgaggaca cggctgtgta ttactgtgcg 300
cgccagggtt actcttacta cggttactct gatgtttggg gtcaaggtac tctggtgacc 360
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<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
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<223> 人工序列描述：合成多肽
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caggtgcagc tggtggagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
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tacgaatctt ggggttctta cgaagttatc gatcgttggg gtcaaggtac tctggtgacc 360
gtctcctca 369
<210> 20
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<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 20
caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccggcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggtgtggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 21
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp Ser Glu Asp Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 22
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 23
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 23
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtat agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtggt 300
tactactctc atgacatgtg gtctgaagat tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc 360
tca 363
<210> 24
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 24
ctgcctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gacgcagttc caacatcggg agtaattctg ttaactggta tcgacaactc 120
ccaggagcgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccccc aggggtccct 180
gtgcgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaagatg aggccactta ttactgtgca acatgggatg acaatctgaa tgttcactat 300
gtcttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggt 336
<210> 25
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Gly Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ser
20 25 30
Asn Trp Trp Ser Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Arg Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Asp Asn Trp Lys Thr Pro Thr Thr Lys Ile Asp Gly Phe
100 105 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 26
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met
35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Gly Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys
100 105 110
Val Thr Val Leu Gly
115
<210> 27
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 27
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggggac cctgtccctc 60
acctgcggtg tctctggtgg ctccatcagc aatagtaact ggtggagttg ggtccgccag 120
ccccccggga aggggctgga gtggattggg gaaatctatc atagtgggag caccaagtac 180
aacccgtccc tcaggagtcg agtcaccata tcagtagaca agtccaagaa ccagttctcc 240
ctaaaattga gctctgtgac cgccgcggac acggccgtat attactgtgc gagacgagat 300
aactggaaga cccccactac caaaattgat ggttttgata tctggggcca agggacaatg 360
gtcaccgtct cttca 375
<210> 28
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 28
cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60
acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtaat tataaagtgg actggtacca gcagagacca 120
gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggcactggtg ggattgtggg atccaagggg 180
gatggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcggta cctgaccatc 240
aagaacatcc aggaagaaga tgagggtgac tatcactgtg gggcagacca tggcagtggg 300
agcaacttcg tgtatgtctt cggaactggg accaaggtca ccgtcctagg t 351
<210> 29
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 29
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gln Trp Gly Ser Ser Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 30
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 31
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 31
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgctctcag 300
tggggttctt cttgggatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 32
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 32
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggagatcaa acgt 324
<210> 33
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 33
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Ser Tyr His Leu Tyr Gly Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 34
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 34
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Asn Asp Tyr Thr Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met
35 40 45
Arg Val Gly Pro Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Thr Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
100 105 110
Leu Thr Val Leu Gly
115
<210> 35
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 35
gaggtgcagc tggtggagtc cggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtat attactgtgc gcgctcttct 300
taccatctgt acggttacga ttcttggggt caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 357
<210> 36
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 36
cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcactctc 60
acctgcaccc tgagcaacga ctacactaat tataaagtgg actggtacca gcagagacca 120
gggaagggcc cccggtttgt gatgcgagtg ggccctggtg ggattgtggg atccaagggg 180
gatggcatcc ctgatcgctt ctcagtcttg ggctcaggcc tgaatcgata cctgaccatc 240
aagaacatcc aggaggagga tgagagtgac taccactgtg gggcggacca tggcaccggg 300
agcaacttcg tgtacgtgtt cggcggaggg accaagctga ccgtcctagg t 351
<210> 37
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 37
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Ser Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Pro Trp Thr Trp Tyr Ser Pro Tyr Asp Gln Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 38
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 38
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Leu Met
35 40 45
Arg Val Asp Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Ser Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
100 105 110
Leu Thr Val Leu Gly
115
<210> 39
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 39
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atcatcccta tctttagtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgccagccg 300
tggacttggt actctccgta cgatcagtgg ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 360
<210> 40
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 40
cagcctgtgc tgactcagcc accttctgca tcagcctccc tgggagcctc ggtcacactc 60
acctgcaccc tgagcagcgg ctacagtaat tataaagtgg actggtatca acagagacca 120
gggaagggcc cccggtttct gatgcgagta gacaccggtg ggattgtggg atccaagggg 180
gatggcatcc ctgatcgctt ctcagtctcg ggctcaggtc tgaatcggta cctgaccatc 240
aagaacattc aggaagagga tgagagtgac taccactgtg gggcagacca tggcagtggg 300
agcaacttcg tgtgggtgtt cggcggaggg accaagctga ccgtcctagg t 351
<210> 41
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 41
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Pro Gly Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Arg Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Gly Tyr Met Ile Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 42
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 43
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 43
gaggtgcagc tggtggagac tgggggaggc ctggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgctg cctctggatt cacctttagc acctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attactcctg gtggtgatcg cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg tttcactatc tccagagaca attccaggaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctactac 300
ggttacatga tcgatatgtg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 44
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 44
gatgttgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct 300
ctcactttcg gcggagggac caaggtggaa atcaaacgt 339
<210> 45
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 45
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr
20 25 30
Tyr Val His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Asn Ala Gln Glu Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gln Trp Gly Gly Thr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 46
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ala Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Trp Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 47
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 47
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc ggctattatg tacactggtt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggttgg atcaacccta acagtggcgg cacaaacaat 180
gcacaggagt ttcaaggcag gatcaccatg accagggaca cgtccatcaa cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgctctcag 300
tggggtggta cttacgatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 48
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 48
tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccagcaggtc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcgcc tcagcctccc tggccatcag ttggctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgaa tggttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 49
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Asp Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Glu Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Trp Thr Phe Ser Gln Asp Gly Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 50
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Phe Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 51
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 51
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc cgggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata tgactttacc acctactgga tcgggtgggt gcgccagatg 120
cccgggaagg gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtccg tccgaggccg ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcaa caccgcctat 240
ttgcagtgga gtagcctgga ggcctccgac accgccatgt attactgtgc gcgcatgtgg 300
actttctctc aggatggttg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 52
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 52
caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agttatactg taagctggta ccagcaactc 120
ccaggaacgg cccccaaatt cctcatctat tctaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgct gcatgggatg acagcctgaa tggttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 53
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 105
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 54
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 55
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 55
gaagtgcagc tggtgcagtc tggggctgag atgaagaagc ctggggcctc actgaagctc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcatc gactactatg tatactggat gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtc catgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac accgccatgt attactgtgc gcgctcccag 300
cgtgacggtt acatggatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 56
<211> 315
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 56
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc taggt 315
<210> 57
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Gly Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 58
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 59
<211> 354
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 59
caggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc gactactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaac ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta acagtggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcaggacag gatcaccgtg accagggaca cctccagcaa cacaggctac 240
atggagctga ccaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgctctccg 300
tactctggtg ttctggataa atggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 60
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 60
cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttttg atgtacactg gtaccagcag 120
cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttat 300
gtcttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggt 336
<210> 61
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 61
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 62
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 62
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 63
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 63
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tccttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgctctggt 300
tacggttctt accgttggga agattcttgg ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 360
<210> 64
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 64
caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattacg tattctggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tgcctcttat 300
gttttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggt 336
<210> 65
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 66
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 67
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 67
gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60
tcctgtaagg gttctggata cagctttacc agctactgga tcggctgggt gcgccagatg 120
cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atctatcctg gtgactctga taccagatac 180
agcccgtcct tccaaggcca cgtcaccatc tcagctgaca agtccatcag cactgcctac 240
ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gcgctactct 300
ggttctttcg ataactgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctca 348
<210> 68
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 68
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 69
<211> 21
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 69
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Glu Met Ala
20
<210> 70
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 70
tctagaggtg gtggtggtag cggcggcggc ggctctggtg gtggtggatc cctcgagatg 60
gcc 63
<210> 71
<211> 184
<212> PRT
<213> 智人
<400> 71
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 72
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 72
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Arg Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly His Asn
20 25 30
Asp Val Ser Trp Tyr Gln His Leu Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Phe Asp Asp Leu Leu Pro Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Ala Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Asn Ala Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val
130 135 140
Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser
145 150 155 160
Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser
165 170 175
Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr
180 185 190
Asn Asp Tyr Ala Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp
195 200 205
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu
210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Gly Tyr Ser Tyr Tyr Gly
225 230 235 240
Tyr Ser Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210> 73
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 73
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Glu Ala Pro Arg Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Ala Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Phe Asp Asp Leu Leu Ser Ser Gly Val Ser Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val
130 135 140
Lys Pro Ser Gln Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser
145 150 155 160
Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser
165 170 175
Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr
180 185 190
Asn Asp Tyr Ala Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp
195 200 205
Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu
210 215 220
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Gly Phe Ser Gly Ser Arg
225 230 235 240
Phe Tyr Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210> 74
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 74
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Thr Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Val Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Val Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Val Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Glu Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Asp Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Ser Lys Ser Ile Val Ser Tyr
225 230 235 240
Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 75
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 75
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Arg
20 25 30
Tyr Asp Val Gln Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Phe Gly Asn Asn Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Ala Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
145 150 155 160
Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser
180 185 190
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser
195 200 205
Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gln Trp Gly Gly Val Leu Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 76
<211> 255
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 76
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Gly Tyr Glu Ser Trp Gly Ser Tyr Glu
225 230 235 240
Val Ile Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210> 77
<211> 254
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 77
Leu Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Arg Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Arg Gln Leu Pro Gly Ala Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Pro Gly Val Pro Val Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Asn Val His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn
180 185 190
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser
195 200 205
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Tyr Ser His Asp Met Trp
225 230 235 240
Ser Glu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 78
<211> 263
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 78
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met
35 40 45
Arg Val Gly Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Gly Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys
100 105 110
Val Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Gln Glu
130 135 140
Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly Thr Leu Ser Leu Thr Cys
145 150 155 160
Gly Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Ser Asn Trp Trp Ser Trp Val
165 170 175
Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Glu Ile Tyr His
180 185 190
Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Pro Ser Leu Arg Ser Arg Val Thr Ile
195 200 205
Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val
210 215 220
Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Asp Asn Trp
225 230 235 240
Lys Thr Pro Thr Thr Lys Ile Asp Gly Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly
245 250 255
Thr Met Val Thr Val Ser Ser
260
<210> 79
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 79
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Ser Arg Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met
115 120 125
Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly
130 135 140
Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly
145 150 155 160
Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys
180 185 190
Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Arg Ser Gln Trp Gly Ser Ser Trp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 80
<211> 257
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 80
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Asn Asp Tyr Thr Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Val Met
35 40 45
Arg Val Gly Pro Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Leu Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Thr Gly Ser Asn Phe Val Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
100 105 110
Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu
130 135 140
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr Met His Trp Val Arg
165 170 175
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn
180 185 190
Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met
195 200 205
Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu
210 215 220
Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Ser Tyr His
225 230 235 240
Leu Tyr Gly Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
245 250 255
Ser
<210> 81
<211> 258
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 81
Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gly Tyr Ser Asn Tyr Lys
20 25 30
Val Asp Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly Pro Arg Phe Leu Met
35 40 45
Arg Val Asp Thr Gly Gly Ile Val Gly Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Val Ser Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile
65 70 75 80
Lys Asn Ile Gln Glu Glu Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Gly Ala Asp
85 90 95
His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys
100 105 110
Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln
130 135 140
Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg
165 170 175
Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile
180 185 190
Phe Ser Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met
195 200 205
Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu
210 215 220
Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gln Pro Trp Thr
225 230 235 240
Trp Tyr Ser Pro Tyr Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
245 250 255
Ser Ser
<210> 82
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 82
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Pro Gly Gly Asp Arg Thr
180 185 190
Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
195 200 205
Ser Arg Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Gly Tyr Met Ile Asp Met
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 83
<211> 250
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 83
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ala Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Trp Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Gly Tyr Tyr Val His Trp Leu Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Asn
180 185 190
Ala Gln Glu Phe Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile
195 200 205
Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gln Trp Gly Gly Thr Tyr Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 84
<211> 249
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 84
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Phe Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Asp
145 150 155 160
Phe Thr Thr Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
180 185 190
Ser Pro Ser Val Arg Gly Arg Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile
195 200 205
Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Glu Ala Ser Asp Thr Ala
210 215 220
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Met Trp Thr Phe Ser Gln Asp Gly Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 85
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 85
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
180 185 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
195 200 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 86
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 86
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Phe Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr
145 150 155 160
Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Arg Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn
180 185 190
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Ile Thr Val Thr Arg Asp Thr Ser
195 200 205
Ser Asn Thr Gly Tyr Met Glu Leu Thr Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 87
<211> 253
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 87
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Ala Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val
130 135 140
Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala Asn
180 185 190
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser
195 200 205
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu
225 230 235 240
Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 88
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 88
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Thr Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
180 185 190
Ser Pro Ser Phe Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala
210 215 220
Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 89
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 89
Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
1 5
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 90
Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn
1 5
<210> 91
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 91
Ala Arg Gln Gly Tyr Ser Tyr Tyr Gly Tyr Ser Asp Val
1 5 10
<210> 92
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 92
Ser Ser Asn Ile Gly His Asn Asp
1 5
<210> 93
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 93
Phe Asp Asp
1
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 94
Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Ala Phe Val
1 5 10
<210> 95
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 95
Val Ser Ser Asn Ser Ala Ala Trp Asn
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<211> 7
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 96
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 97
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1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 98
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 99
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 100
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 101
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<220>
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<400> 102
Ile Ile Pro Ile Leu Gly Ile Ala
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 103
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<210> 104
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 104
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Val
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 105
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1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 106
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 107
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<220>
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<400> 108
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 109
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 111
Gly Asn Asn
1
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<220>
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 115
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 116
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<220>
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<400> 118
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 119
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<212> PRT
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<220>
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<400> 120
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 121
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 122
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 123
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 124
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 125
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<220>
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 127
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 128
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<220>
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<400> 129
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<220>
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<220>
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<400> 131
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 132
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 133
Ala Arg Ser Gln Trp Gly Ser Ser Trp Asp Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 134
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 135
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 136
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 137
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<220>
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<400> 138
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 139
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<220>
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<400> 140
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<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
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<212> PRT
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<220>
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<400> 142
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<212> PRT
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<220>
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<400> 143
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<220>
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<400> 144
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<212> PRT
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<220>
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<400> 145
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 146
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<211> 8
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<220>
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<400> 147
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<211> 13
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<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 148
Gly Ala Asp His Gly Ser Gly Ser Asn Phe Val Trp Val
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 149
Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr Ala
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 150
Ile Thr Pro Gly Gly Asp Arg Thr
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 151
Ala Arg Tyr Tyr Gly Tyr Met Ile Asp Met
1 5 10
<210> 152
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 152
Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr
1 5 10
<210> 153
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 153
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1
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 154
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1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 155
Gly Tyr Thr Phe Thr Gly Tyr Tyr
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 156
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 157
Ala Arg Ser Gln Trp Gly Gly Thr Tyr Asp Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 158
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 159
Ser Asn Asn
1
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 160
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 161
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 162
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 163
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 164
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr Thr
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 165
Ser Asn Asn
1
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 166
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Asn Gly Tyr Val
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<210> 167
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 167
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 168
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 169
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 170
Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp
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<210> 171
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 171
Glu Asp Ser
1
<210> 172
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 172
Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val
1 5 10
<210> 173
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 173
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 174
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 174
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr
1 5
<210> 175
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 175
Ala Arg Ser Pro Tyr Ser Gly Val Leu Asp Lys
1 5 10
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 176
Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Phe Asp
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 177
Gly Asn Ser
1
<210> 178
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 178
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 179
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 179
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 180
Ile Ile Pro Ile Leu Gly Thr Ala
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 181
Ala Arg Ser Gly Tyr Gly Ser Tyr Arg Trp Glu Asp Ser
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<210> 182
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 182
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 183
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 183
Ser Asn Asn
1
<210> 184
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 184
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Ala Ser Tyr Val
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 185
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Trp
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<210> 186
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 186
Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 187
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 188
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1 5
<210> 189
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 189
Thr Asn Asn
1
<210> 190
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 190
Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu Asn Gly Leu Val
1 5 10
<210> 191
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 191
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg
20
<210> 192
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 192
atggctctcc cagtgactgc cctactgctt cccctagcgc ttctcctgca tgcagctcgt 60
<210> 193
<211> 220
<212> PRT
<213> 智人
<400> 193
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 194
<211> 321
<212> DNA
<213> 智人
<400> 194
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagcccttt 120
tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 180
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 240
atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 300
gacttcgcag cctatcgctc c 321
<210> 195
<211> 163
<212> PRT
<213> 智人
<400> 195
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
100 105 110
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
115 120 125
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
130 135 140
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
145 150 155 160
Pro Pro Arg
<210> 196
<211> 339
<212> DNA
<213> 智人
<400> 196
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339
<210> 197
<211> 255
<212> PRT
<213> 智人
<400> 197
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 198
<211> 277
<212> PRT
<213> 智人
<400> 198
Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val
20 25 30
Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro
35 40 45
Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys
50 55 60
Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro
65 70 75 80
Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys
85 90 95
Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly
100 105 110
Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys
115 120 125
Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp
130 135 140
Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro
165 170 175
Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr
180 185 190
Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu
195 200 205
Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val
210 215 220
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
225 230 235 240
Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser
260 265 270
Thr Leu Ala Lys Ile
275
<210> 199
<211> 199
<212> PRT
<213> 智人
<400> 199
Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys
1 5 10 15
Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile
20 25 30
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val
35 40 45
Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp
50 55 60
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu
65 70 75 80
Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95
Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser
100 105 110
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu
115 120 125
His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro
130 135 140
Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu
145 150 155 160
Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro
165 170 175
Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser
180 185 190
Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu
195
<210> 200
<211> 223
<212> PRT
<213> 智人
<400> 200
Met Ala Cys Leu Gly Phe Gln Arg His Lys Ala Gln Leu Asn Leu Ala
1 5 10 15
Thr Arg Thr Trp Pro Cys Thr Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Ile Pro
20 25 30
Val Phe Cys Lys Ala Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala
35 40 45
Ser Ser Arg Gly Ile Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly
50 55 60
Lys Ala Thr Glu Val Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln
65 70 75 80
Val Thr Glu Val Cys Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr
85 90 95
Phe Leu Asp Asp Ser Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val
100 105 110
Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile
115 120 125
Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly
130 135 140
Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser
145 150 155 160
Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe
165 170 175
Tyr Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Leu Ser Lys Met Leu Lys Lys
180 185 190
Arg Ser Pro Leu Thr Thr Gly Val Tyr Val Lys Met Pro Pro Thr Glu
195 200 205
Pro Glu Cys Glu Lys Gln Phe Gln Pro Tyr Phe Ile Pro Ile Asn
210 215 220
<210> 201
<211> 288
<212> PRT
<213> 智人
<400> 201
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 202
<211> 525
<212> PRT
<213> 智人
<400> 202
Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp
1 5 10 15
Val Ala Pro Val Lys Pro Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val
20 25 30
Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile
35 40 45
Pro Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln
50 55 60
His Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu
65 70 75 80
Ala Pro Gly Pro His Pro Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro
85 90 95
Arg Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly
100 105 110
Arg Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln
115 120 125
Arg Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala
130 135 140
Gly Glu Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Leu Arg Leu Arg Leu Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro
165 170 175
Gly Ser Leu Arg Ala Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser
180 185 190
Arg Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln
195 200 205
Gly Arg Val Pro Val Arg Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser
210 215 220
Phe Leu Phe Leu Pro Gln Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly
225 230 235 240
Cys Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn
245 250 255
Leu Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala
260 265 270
Gly Ala Gly Ser Arg Val Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val
275 280 285
Gly Thr Arg Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly
290 295 300
Pro Asp Leu Leu Val Thr Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu
305 310 315 320
Glu Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His
325 330 335
Leu Gln Glu Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr
340 345 350
Val Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu
355 360 365
Cys Glu Val Thr Pro Val Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser
370 375 380
Leu Asp Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala
385 390 395 400
Gln Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln
405 410 415
Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser
420 425 430
Pro Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Pro Ala Gly
435 440 445
His Leu Leu Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Ser Leu Leu Leu Leu
450 455 460
Val Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro
465 470 475 480
Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln
485 490 495
Ser Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
500 505 510
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Gln Leu
515 520 525
<210> 203
<211> 370
<212> PRT
<213> 智人
<400> 203
Met Leu Gly Gln Val Val Thr Leu Ile Leu Leu Leu Leu Leu Lys Val
1 5 10 15
Tyr Gln Gly Lys Gly Cys Gln Gly Ser Ala Asp His Val Val Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Val Pro Leu Gln Leu Gln Pro Asn Ser Ile Gln Thr Lys Val
35 40 45
Asp Ser Ile Ala Trp Lys Lys Leu Leu Pro Ser Gln Asn Gly Phe His
50 55 60
His Ile Leu Lys Trp Glu Asn Gly Ser Leu Pro Ser Asn Thr Ser Asn
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Phe Ile Val Lys Asn Leu Ser Leu Leu Ile Lys Ala
85 90 95
Ala Gln Gln Gln Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Leu Glu Val Thr Ser Ile
100 105 110
Ser Gly Lys Val Gln Thr Ala Thr Phe Gln Val Phe Val Phe Glu Ser
115 120 125
Leu Leu Pro Asp Lys Val Glu Lys Pro Arg Leu Gln Gly Gln Gly Lys
130 135 140
Ile Leu Asp Arg Gly Arg Cys Gln Val Ala Leu Ser Cys Leu Val Ser
145 150 155 160
Arg Asp Gly Asn Val Ser Tyr Ala Trp Tyr Arg Gly Ser Lys Leu Ile
165 170 175
Gln Thr Ala Gly Asn Leu Thr Tyr Leu Asp Glu Glu Val Asp Ile Asn
180 185 190
Gly Thr His Thr Tyr Thr Cys Asn Val Ser Asn Pro Val Ser Trp Glu
195 200 205
Ser His Thr Leu Asn Leu Thr Gln Asp Cys Gln Asn Ala His Gln Glu
210 215 220
Phe Arg Phe Trp Pro Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys
245 250 255
Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu
260 265 270
Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr
275 280 285
Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser
290 295 300
Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile
305 310 315 320
Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser
325 330 335
Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala
340 345 350
Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu Leu Glu Asn Phe Asp Val
355 360 365
Tyr Ser
370
<210> 204
<211> 289
<212> PRT
<213> 智人
<400> 204
Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Thr Gly Lys Leu Phe Trp Val
1 5 10 15
Phe Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu
20 25 30
Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Glu His Ser Ile
35 40 45
Leu Ala Gly Asp Pro Phe Glu Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala
50 55 60
Asn Arg Pro His Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Arg Gln Thr Ser Trp Lys Glu Glu Lys Asn Ile Ser
85 90 95
Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Asn Asp Asn Gly Ser
100 105 110
Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Gln Ser Asn Leu Ile Glu Ser His Ser
115 120 125
Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser
130 135 140
Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Arg Leu Leu Pro
145 150 155 160
Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys
165 170 175
Cys Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Ala
180 185 190
Gly Arg Glu Ile Asn Leu Val Asp Ala His Leu Lys Ser Glu Gln Thr
195 200 205
Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly
210 215 220
Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Asp Leu Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser
225 230 235 240
Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Val
245 250 255
Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Val Ile Gly Pro Asn Ser Arg Leu Ala
260 265 270
Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg
275 280 285
Ser
<210> 205
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 205
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 206
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 206
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgccagg atccacagga 60
<210> 207
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 207
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgcgtctc ctggacagtc gatcgccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt tggtatcaac agcacccagg caaagccccc 120
aaactcatga tttatgagga cagtaagcgg ccctcagggg tttctaatcg cttctctggc 180
tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc atctctgggc tccaggctga ggacgaggct 240
gattattact gcagctcaaa tacaagaagc agcactttgg tgttcggcgg agggaccaag 300
ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt 360
ggatccctcg agatggccga agtgcagctg gtgcagtctg gggctgagat gaagaagcct 420
ggggcctcac tgaagctctc ctgcaaggct tctggataca ccttcatcga ctactatgta 480
tactggatgc gacaggcccc tggacaaggg cttgagtcca tgggatggat caaccctaac 540
agtggtggca caaactatgc acagaagttt cagggcaggg tcaccatgac cagggacacg 600
tccatcagca cagcctacat ggagctgagc aggctgagat ctgacgacac cgccatgtat 660
tactgtgcgc gctcccagcg tgacggttac atggattact ggggtcaagg tactctggtg 720
accgtctcct cagcggccgc aattgaagtt atgtatcctc ctccttacct agacaatgag 780
aagagcaatg gaaccattat ccatgtgaaa gggaaacacc tttgtccaag tcccctattt 840
cccggacctt ctaagccctt ttgggtgctg gtggtggttg gtggagtcct ggcttgctat 900
agcttgctag taacagtggc ctttattatt ttctgggtga ggagtaagag gagcaggctc 960
ctgcacagtg actacatgaa catgactccc cgccgccccg ggcccacccg caagcattac 1020
cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca gcctatcgct ccagagtgaa gttcagcagg 1080
agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc cagaaccagc tctataacga gctcaatcta 1140
ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg 1200
ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag 1260
atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac 1320
gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg 1380
caggccctgc cccctcgc 1398
<210> 208
<211> 1419
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 208
cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttttg atgtacactg gtaccagcag 120
cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggttat 300
gtcttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggttcta gaggtggtgg tggtagcggc 360
ggcggcggct ctggtggtgg tggatccctc gagatggccc aggtccagct ggtacagtct 420
ggggctgagg tgaagaagcc tggggcctca gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggatac 480
accttcaccg actactatat gcactgggtg cgacaggccc ctggacaacg gcttgagtgg 540
atgggatgga tcaaccctaa cagtggtggc acaaactatg cacagaagtt tcaggacagg 600
atcaccgtga ccagggacac ctccagcaac acaggctaca tggagctgac caggctgaga 660
tctgacgaca cggccgtgta ttactgtgcg cgctctccgt actctggtgt tctggataaa 720
tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc tcagcggccg caattgaagt tatgtatcct 780
cctccttacc tagacaatga gaagagcaat ggaaccatta tccatgtgaa agggaaacac 840
ctttgtccaa gtcccctatt tcccggacct tctaagccct tttgggtgct ggtggtggtt 900
ggtggagtcc tggcttgcta tagcttgcta gtaacagtgg cctttattat tttctgggtg 960
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 1020
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 1080
tccagagtga agttcagcag gagcgcagac gcccccgcgt accagcaggg ccagaaccag 1140
ctctataacg agctcaatct aggacgaaga gaggagtacg atgttttgga caagagacgt 1200
ggccgggacc ctgagatggg gggaaagccg agaaggaaga accctcagga aggcctgtac 1260
aatgaactgc agaaagataa gatggcggag gcctacagtg agattgggat gaaaggcgag 1320
cgccggaggg gcaaggggca cgatggcctt taccagggtc tcagtacagc caccaaggac 1380
acctacgacg cccttcacat gcaggccctg ccccctcgc 1419
<210> 209
<211> 1410
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 209
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatg 60
tcttgttctg gaaccagctc caacatcgga agtcactctg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat actaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tggcctccag 240
tctgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg gcagcctgaa tggtctggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt gcagtctgga 420
gcagaggtga aaaagcccgg ggagtctctg aagatctcct gtaagggttc tggatacagc 480
tttaccagct actggatcgg ctgggtgcgc cagatgcccg ggaaaggcct ggagtggatg 540
gggatcatct atcctggtga ctctgatacc agatacagcc cgtccttcca aggccacgtc 600
accatctcag ctgacaagtc catcagcact gcctacctgc agtggagcag cctgaaggcc 660
tcggacaccg ccatgtatta ctgtgcgcgc tactctggtt ctttcgataa ctggggtcaa 720
ggtactctgg tgaccgtctc ctcagcggcc gcaattgaag ttatgtatcc tcctccttac 780
ctagacaatg agaagagcaa tggaaccatt atccatgtga aagggaaaca cctttgtcca 840
agtcccctat ttcccggacc ttctaagccc ttttgggtgc tggtggtggt tggtggagtc 900
ctggcttgct atagcttgct agtaacagtg gcctttatta ttttctgggt gaggagtaag 960
aggagcaggc tcctgcacag tgactacatg aacatgactc cccgccgccc cgggcccacc 1020
cgcaagcatt accagcccta tgccccacca cgcgacttcg cagcctatcg ctccagagtg 1080
aagttcagca ggagcgcaga cgcccccgcg taccagcagg gccagaacca gctctataac 1140
gagctcaatc taggacgaag agaggagtac gatgttttgg acaagagacg tggccgggac 1200
cctgagatgg ggggaaagcc gagaaggaag aaccctcagg aaggcctgta caatgaactg 1260
cagaaagata agatggcgga ggcctacagt gagattggga tgaaaggcga gcgccggagg 1320
ggcaaggggc acgatggcct ttaccagggt ctcagtacag ccaccaagga cacctacgac 1380
gcccttcaca tgcaggccct gccccctcgc 1410
<210> 210
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 210
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 211
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 211
ggtggaggtg gatcaggtgg aggtggatct ggtggaggtg gatct 45
<210> 212
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 212
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 213
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 213
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 214
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 214
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 215
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 215
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 216
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 216
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser
<210> 217
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 217
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 218
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 218
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 219
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 219
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 220
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 220
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 221
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 221
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 222
<211> 24
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 222
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
1 5 10 15
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
20
<210> 223
<211> 62
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 223
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 224
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 224
Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 225
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 225
Ala Ala Ala
1
<210> 226
<211> 235
<212> PRT
<213> 智人
<400> 226
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Cys
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 227
<211> 213
<212> DNA
<213> 智人
<400> 227
cccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca accccggcgc ccacgatcgc gtcgcagccc 60
ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg 120
ctggacttcg cctgtgatat ctacatctgg gcgcccctgg ccgggacttg tggggtcctt 180
ctcctgtcac tggttatcac cctttactgc aac 213
<210> 228
<211> 126
<212> DNA
<213> 智人
<400> 228
aaacggggca gaaagaagct cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 229
<211> 7671
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 229
ccttctctag gcgcccccat atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt 60
gtaaacttcc ctgaccctga catgacaaga gttactaaca gcccctctct ccaagctcac 120
ttacaggctc tctacttagt ccagcacgaa gtctggagac ctctggcggc agcctaccaa 180
gaacaactgg accgaccggt gccgccacca tggaaaccga caccctgctg ctgtgggtgc 240
tgctgctgtg ggtgccagga tccacaggac tgcctgtgct gactcagcca ccctcagcgt 300
ctgggacccc cgggcagagg gtcaccatct cttgttctgg acgcagttcc aacatcggga 360
gtaattctgt taactggtat cgacaactcc caggagcggc ccccaaactc ctcatctata 420
gtaataatca gcggccccca ggggtccctg tgcgattctc tggctccaag tctggcacct 480
cagcctccct ggccatcagt gggctccagt ctgaagatga ggccacttat tactgtgcaa 540
catgggatga caatctgaat gttcactatg tcttcggaac tgggaccaag gtcaccgtcc 600
taggttctag aggtggtggt ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg 660
agatggccca ggtgcagctg gtgcagtctg gggctgaggt gaagaagcct gggtcctcgg 720
tgaaggtctc ctgcaaggct tctggaggca ccttcagcag ctatgctatc agctgggtgc 780
gacaggcccc tggacaaggg cttgagtgga tgggaaggat catccctatc cttggtatag 840
caaactacgc acagaagttc cagggcagag tcacgattac cgcggacaaa tccacgagca 900
cagcctacat ggagctgagc agcctgagat ctgaggacac ggccgtgtat tactgtgcgc 960
gcggtggtta ctactctcat gacatgtggt ctgaagattg gggtcaaggt actctggtga 1020
ccgtctcctc agcggccgca cccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca accccggcgc 1080
ccacgatcgc gtcgcagccc ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca gcggcggggg 1140
gcgcagtgca cacgaggggg ctggacttcg cctgtgatat ctacatctgg gcgcccctgg 1200
ccgggacttg tggggtcctt ctcctgtcac tggttatcac cctttactgc aacaaacggg 1260
gcagaaagaa gctcctgtat atattcaaac aaccatttat gagaccagta caaactactc 1320
aagaggaaga tggctgtagc tgccgatttc cagaagaaga agaaggagga tgtgaactga 1380
gagtgaagtt cagcaggagc gcagagcccc ccgcgtacca gcagggccag aaccagctct 1440
ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag agacgtggcc 1500
gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc ctgtacaatg 1560
aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa ggcgagcgcc 1620
ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc aaggacacct 1680
acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgctaaca gccactcgag gatccggatt 1740
agtccaattt gttaaagaca ggatatcagt ggtccaggct ctagttttga ctcaacaata 1800
tcaccagctg aagcctatag agtacgagcc atagataaaa taaaagattt tatttagtct 1860
ccagaaaaag gggggaatga aagaccccac ctgtaggttt ggcaagctag cttaagtaac 1920
gccattttgc aaggcatgga aaaatacata actgagaata gagaagttca gatcaaggtc 1980
aggaacagat ggaacagctg aatatgggcc aaacaggata tctgtggtaa gcagttcctg 2040
ccccggctca gggccaagaa cagatggaac agctgaatat gggccaaaca ggatatctgt 2100
ggtaagcagt tcctgccccg gctcagggcc aagaacagat ggtccccaga tgcggtccag 2160
ccctcagcag tttctagaga accatcagat gtttccaggg tgccccaagg acctgaaatg 2220
accctgtgcc ttatttgaac taaccaatca gttcgcttct cgcttctgtt cgcgcgcttc 2280
tgctccccga gctcaataaa agagcccaca acccctcact cggggcgcca gtcctccgat 2340
tgactgagtc gcccgggtac ccgtgtatcc aataaaccct cttgcagttg catccgactt 2400
gtggtctcgc tgttccttgg gagggtctcc tctgagtgat tgactacccg tcagcggggg 2460
tctttcacac atgcagcatg tatcaaaatt aatttggttt tttttcttaa gtatttacat 2520
taaatggcca tagtacttaa agttacattg gcttccttga aataaacatg gagtattcag 2580
aatgtgtcat aaatatttct aattttaaga tagtatctcc attggctttc tactttttct 2640
tttatttttt tttgtcctct gtcttccatt tgttgttgtt gttgtttgtt tgtttgtttg 2700
ttggttggtt ggttaatttt tttttaaaga tcctacacta tagttcaagc tagactatta 2760
gctactctgt aacccagggt gaccttgaag tcatgggtag cctgctgttt tagccttccc 2820
acatctaaga ttacaggtat gagctatcat ttttggtata ttgattgatt gattgattga 2880
tgtgtgtgtg tgtgattgtg tttgtgtgtg tgactgtgaa aatgtgtgta tgggtgtgtg 2940
tgaatgtgtg tatgtatgtg tgtgtgtgag tgtgtgtgtg tgtgtgtgca tgtgtgtgtg 3000
tgtgactgtg tctatgtgta tgactgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 3060
tgtgtgtgtg ttgtgaaaaa atattctatg gtagtgagag ccaacgctcc ggctcaggtg 3120
tcaggttggt ttttgagaca gagtctttca cttagcttgg aattcactgg ccgtcgtttt 3180
acaacgtcgt gactgggaaa accctggcgt tacccaactt aatcgccttg cagcacatcc 3240
ccctttcgcc agctggcgta atagcgaaga ggcccgcacc gatcgccctt cccaacagtt 3300
gcgcagcctg aatggcgaat ggcgcctgat gcggtatttt ctccttacgc atctgtgcgg 3360
tatttcacac cgcatatggt gcactctcag tacaatctgc tctgatgccg catagttaag 3420
ccagccccga cacccgccaa cacccgctga cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc 3480
atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc 3540
gtcatcaccg aaacgcgcga tgacgaaagg gcctcgtgat acgcctattt ttataggtta 3600
atgtcatgat aataatggtt tcttagacgt caggtggcac ttttcgggga aatgtgcgcg 3660
gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat gtatccgctc atgagacaat 3720
aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag tatgagtatt caacatttcc 3780
gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc tgtttttgct cacccagaaa 3840
cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc acgagtgggt tacatcgaac 3900
tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc cgaagaacgt tttccaatga 3960
tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag 4020
agcaactcgg tcgccgcata cactattctc agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca 4080
cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag taagagaatt atgcagtgct gccataacca 4140
tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa 4200
ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc 4260
tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa 4320
cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac ttactctagc ttcccggcaa caattaatag 4380
actggatgga ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct 4440
ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac 4500
tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa 4560
ctatggatga acgaaataga cagatcgctg agataggtgc ctcactgatt aagcattggt 4620
aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac tttagattga tttaaaactt catttttaat 4680
ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg 4740
agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc 4800
ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg 4860
tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag 4920
cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact 4980
ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt accagtggct gctgccagtg 5040
gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata gttaccggat aaggcgcagc 5100
ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg 5160
aactgagata cctacagcgt gagcattgag aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg 5220
cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag 5280
ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc 5340
gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct 5400
ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc 5460
ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc 5520
gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac 5580
cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact 5640
ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta gctcactcat taggcacccc 5700
aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat 5760
ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct ttgctcttag gagtttccta 5820
atacatccca aactcaaata tataaagcat ttgacttgtt ctatgcccta gggggcgggg 5880
ggaagctaag ccagcttttt ttaacattta aaatgttaat tccattttaa atgcacagat 5940
gtttttattt cataagggtt tcaatgtgca tgaatgctgc aatattcctg ttaccaaagc 6000
tagtataaat aaaaatagat aaacgtggaa attacttaga gtttctgtca ttaacgtttc 6060
cttcctcagt tgacaacata aatgcgctgc tgagcaagcc agtttgcatc tgtcaggatc 6120
aatttcccat tatgccagtc atattaatta ctagtcaatt agttgatttt tatttttgac 6180
atatacatgt gaatgaaaga ccccacctgt aggtttggca agctagctta agtaacgcca 6240
ttttgcaagg catggaaaaa tacataactg agaatagaaa agttcagatc aaggtcagga 6300
acagatggaa cagctgaata tgggccaaac aggatatctg tggtaagcag ttcctgcccc 6360
ggctcagggc caagaacaga tggaacagct gaatatgggc caaacaggat atctgtggta 6420
agcagttcct gccccggctc agggccaaga acagatggtc cccagatgcg gtccagccct 6480
cagcagtttc tagagaacca tcagatgttt ccagggtgcc ccaaggacct gaaatgaccc 6540
tgtgccttat ttgaactaac caatcagttc gcttctcgct tctgttcgcg cgcttatgct 6600
ccccgagctc aataaaagag cccacaaccc ctcactcggg gcgccagtcc tccgattgac 6660
tgagtcgccc gggtacccgt gtatccaata aaccctcttg cagttgcatc cgacttgtgg 6720
tctcgctgtt ccttgggagg gtctcctctg agtgattgac tacccgtcag cgggggtctt 6780
tcatttgggg gctcgtccgg gatcgggaga cccctgccca gggaccaccg acccaccacc 6840
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gaacctcctc gttcgacccc gcctcgatcc tccctttatc cagccctcac t 7671
<210> 230
<211> 7653
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 230
ggccctctag gcgcccccat atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt 60
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ttacaggctc tctacttagt ccagcacgaa gtctggagac ctctggcggc agcctaccaa 180
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<210> 231
<211> 7668
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 231
ccttctctag gcgcccccat atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt 60
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attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga taccgctcgc cgcagccgaa 5520
cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga gcgcccaata cgcaaaccgc 5580
ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca cgacaggttt cccgactgga 5640
aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg 5700
ctttacactt tatgcttccg gctcgtatgt tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 5760
acacaggaaa cagctatgac catgattacg ccaagctttg ctcttaggag tttcctaata 5820
catcccaaac tcaaatatat aaagcatttg acttgttcta tgccctaggg ggcgggggga 5880
agctaagcca gcttttttta acatttaaaa tgttaattcc attttaaatg cacagatgtt 5940
tttatttcat aagggtttca atgtgcatga atgctgcaat attcctgtta ccaaagctag 6000
tataaataaa aatagataaa cgtggaaatt acttagagtt tctgtcatta acgtttcctt 6060
cctcagttga caacataaat gcgctgctga gcaagccagt ttgcatctgt caggatcaat 6120
ttcccattat gccagtcata ttaattacta gtcaattagt tgatttttat ttttgacata 6180
tacatgtgaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc tagcttaagt aacgccattt 6240
tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagaaaagt tcagatcaag gtcaggaaca 6300
gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc ctgccccggc 6360
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cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa atgaccctgt 6540
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cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg ccagtcctcc gattgactga 6660
gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga cttgtggtct 6720
cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg gggtctttca 6780
tttgggggct cgtccgggat cgggagaccc ctgcccaggg accaccgacc caccaccggg 6840
aggtaagctg gccagcaact tatctgtgtc tgtccgattg tctagtgtct atgactgatt 6900
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gaactgacga gttcggaaca cccggccgca accctgggag acgtcccagg gacttcgggg 7020
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cctccgtctg aatttttgct ttcggtttgg gaccgaagcc gcgccgcgcg tcttgtctgc 7200
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ggcccgggct agactgttac cactccctta agtttgacct taggtcactg gaaagatgtc 7320
gagcggatcg ctcacaacca gtcggtagat gtcaagaaga gacgttgggt taccttctgc 7380
tctgcagaat ggccaacctt taacgtcgga tggccgcgag acggcacctt taaccgagac 7440
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gtcccctaca tcgtgacctg ggaagccttg gcttttgacc cccctccctg ggtcaagccc 7560
tttgtacacc ctaagcctcc gcctcctctt cctccatccg ccccgtctct cccccttgaa 7620
cctcctcgtt cgaccccgcc tcgatcctcc ctttatccag ccctcact 7668
<210> 232
<211> 7662
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 232
ccttctctag gcgcccccat atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt 60
gtaaacttcc ctgaccctga catgacaaga gttactaaca gcccctctct ccaagctcac 120
ttacaggctc tctacttagt ccagcacgaa gtctggagac ctctggcggc agcctaccaa 180
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tgctgctgtg ggtgccagga tccacaggac agtctgtgct gacgcagccg ccctcagtgt 300
ctggggcccc agggcagagg gtcaccatct cctgcactgg gagcagctcc aacatcgggg 360
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gtggggtcct tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caacaaacgg ggcagaaaga 1260
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tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc cgggaccctg 1500
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aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc cggaggggca 1620
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tgttaaagac aggatatcag tggtccaggc tctagttttg actcaacaat atcaccagct 1800
gaagcctata gagtacgagc catagataaa ataaaagatt ttatttagtc tccagaaaaa 1860
ggggggaatg aaagacccca cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa cgccattttg 1920
caaggcatgg aaaaatacat aactgagaat agagaagttc agatcaaggt caggaacaga 1980
tggaacagct gaatatgggc caaacaggat atctgtggta agcagttcct gccccggctc 2040
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gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag gacctgaaat gaccctgtgc 2220
cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt ctgctccccg 2280
agctcaataa aagagcccac aacccctcac tcggggcgcc agtcctccga ttgactgagt 2340
cgcccgggta cccgtgtatc caataaaccc tcttgcagtt gcatccgact tgtggtctcg 2400
ctgttccttg ggagggtctc ctctgagtga ttgactaccc gtcagcgggg gtctttcaca 2460
catgcagcat gtatcaaaat taatttggtt ttttttctta agtatttaca ttaaatggcc 2520
atagtactta aagttacatt ggcttccttg aaataaacat ggagtattca gaatgtgtca 2580
taaatatttc taattttaag atagtatctc cattggcttt ctactttttc ttttattttt 2640
ttttgtcctc tgtcttccat ttgttgttgt tgttgtttgt ttgtttgttt gttggttggt 2700
tggttaattt ttttttaaag atcctacact atagttcaag ctagactatt agctactctg 2760
taacccaggg tgaccttgaa gtcatgggta gcctgctgtt ttagccttcc cacatctaag 2820
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gtctatgtgt atgactgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 3060
gttgtgaaaa aatattctat ggtagtgaga gccaacgctc cggctcaggt gtcaggttgg 3120
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<210> 233
<211> 7641
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 233
ccttctctag gcgcccccat atggccatat gagatcttat atggggcacc cccgcccctt 60
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cggtattatc ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc 4020
agaatgactt ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag 4080
taagagaatt atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc 4140
tgacaacgat cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg 4200
taactcgcct tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg 4260
acaccacgat gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac 4320
ttactctagc ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac 4380
cacttctgcg ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg 4440
agcgtgggtc tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg 4500
tagttatcta cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg 4560
agataggtgc ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac 4620
tttagattga tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg 4680
ataatctcat gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg 4740
tagaaaagat caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc 4800
aaacaaaaaa accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc 4860
tttttccgaa ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt 4920
agccgtagtt aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc 4980
taatcctgtt accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact 5040
caagacgata gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac 5100
agcccagctt ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagcattgag 5160
aaagcgccac gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg 5220
gaacaggaga gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg 5280
tcgggtttcg ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga 5340
gcctatggaa aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt 5400
ttgctcacat gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct 5460
ttgagtgagc tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg 5520
aggaagcgga agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt 5580
aatgcagctg gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta 5640
atgtgagtta gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta 5700
tgttgtgtgg aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt 5760
acgccaagct ttgctcttag gagtttccta atacatccca aactcaaata tataaagcat 5820
ttgacttgtt ctatgcccta gggggcgggg ggaagctaag ccagcttttt ttaacattta 5880
aaatgttaat tccattttaa atgcacagat gtttttattt cataagggtt tcaatgtgca 5940
tgaatgctgc aatattcctg ttaccaaagc tagtataaat aaaaatagat aaacgtggaa 6000
attacttaga gtttctgtca ttaacgtttc cttcctcagt tgacaacata aatgcgctgc 6060
tgagcaagcc agtttgcatc tgtcaggatc aatttcccat tatgccagtc atattaatta 6120
ctagtcaatt agttgatttt tatttttgac atatacatgt gaatgaaaga ccccacctgt 6180
aggtttggca agctagctta agtaacgcca ttttgcaagg catggaaaaa tacataactg 6240
agaatagaaa agttcagatc aaggtcagga acagatggaa cagctgaata tgggccaaac 6300
aggatatctg tggtaagcag ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggaacagct 6360
gaatatgggc caaacaggat atctgtggta agcagttcct gccccggctc agggccaaga 6420
acagatggtc cccagatgcg gtccagccct cagcagtttc tagagaacca tcagatgttt 6480
ccagggtgcc ccaaggacct gaaatgaccc tgtgccttat ttgaactaac caatcagttc 6540
gcttctcgct tctgttcgcg cgcttatgct ccccgagctc aataaaagag cccacaaccc 6600
ctcactcggg gcgccagtcc tccgattgac tgagtcgccc gggtacccgt gtatccaata 6660
aaccctcttg cagttgcatc cgacttgtgg tctcgctgtt ccttgggagg gtctcctctg 6720
agtgattgac tacccgtcag cgggggtctt tcatttgggg gctcgtccgg gatcgggaga 6780
cccctgccca gggaccaccg acccaccacc gggaggtaag ctggccagca acttatctgt 6840
gtctgtccga ttgtctagtg tctatgactg attttatgcg cctgcgtcgg tactagttag 6900
ctaactagct ctgtatctgg cggacccgtg gtggaactga cgagttcgga acacccggcc 6960
gcaaccctgg gagacgtccc agggacttcg ggggccgttt ttgtggcccg acctgagtcc 7020
taaaatcccg atcgtttagg actctttggt gcacccccct tagaggaggg atatgtggtt 7080
ctggtaggag acgagaacct aaaacagttc ccgcctccgt ctgaattttt gctttcggtt 7140
tgggaccgaa gccgcgccgc gcgtcttgtc tgctgcagca tcgttctgtg ttgtctctgt 7200
ctgactgtgt ttctgtattt gtctgaaaat atgggcccgg gctagactgt taccactccc 7260
ttaagtttga ccttaggtca ctggaaagat gtcgagcgga tcgctcacaa ccagtcggta 7320
gatgtcaaga agagacgttg ggttaccttc tgctctgcag aatggccaac ctttaacgtc 7380
ggatggccgc gagacggcac ctttaaccga gacctcatca cccaggttaa gatcaaggtc 7440
ttttcacctg gcccgcatgg acacccagac caggtcccct acatcgtgac ctgggaagcc 7500
ttggcttttg acccccctcc ctgggtcaag ccctttgtac accctaagcc tccgcctcct 7560
cttcctccat ccgccccgtc tctccccctt gaacctcctc gttcgacccc gcctcgatcc 7620
tccctttatc cagccctcac t 7641
<210> 234
<211> 1491
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 234
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgccagg atccacagga 60
ctgcctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 120
tcttgttctg gacgcagttc caacatcggg agtaattctg ttaactggta tcgacaactc 180
ccaggagcgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccccc aggggtccct 240
gtgcgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccag 300
tctgaagatg aggccactta ttactgtgca acatgggatg acaatctgaa tgttcactat 360
gtcttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggttcta gaggtggtgg tggtagcggc 420
ggcggcggct ctggtggtgg tggatccctc gagatggccc aggtgcagct ggtgcagtct 480
ggggctgagg tgaagaagcc tgggtcctcg gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggaggc 540
accttcagca gctatgctat cagctgggtg cgacaggccc ctggacaagg gcttgagtgg 600
atgggaagga tcatccctat ccttggtata gcaaactacg cacagaagtt ccagggcaga 660
gtcacgatta ccgcggacaa atccacgagc acagcctaca tggagctgag cagcctgaga 720
tctgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg cgcggtggtt actactctca tgacatgtgg 780
tctgaagatt ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct cagcggccgc aattgaagtt 840
atgtatcctc ctccttacct agacaatgag aagagcaatg gaaccattat ccatgtgaaa 900
gggaaacacc tttgtccaag tcccctattt cccggacctt ctaagccctt ttgggtgctg 960
gtggtggttg gtggagtcct ggcttgctat agcttgctag taacagtggc ctttattatt 1020
ttctgggtga ggagtaagag gagcaggctc ctgcacagtg actacatgaa catgactccc 1080
cgccgccccg ggcccacccg caagcattac cagccctatg ccccaccacg cgacttcgca 1140
gcctatcgct ccagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc 1200
cagaaccagc tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac 1260
aagagacgtg gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa 1320
ggcctgtaca atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg 1380
aaaggcgagc gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc 1440
accaaggaca cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta a 1491
<210> 235
<211> 1488
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多核苷酸
<400> 235
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgccagg atccacagga 60
caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 120
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattacg tattctggta ccagcagctc 180
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat agtaataatc agcggccctc aggggtccct 240
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 300
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tgcctcttat 360
gttttcggaa ctgggaccaa ggtcaccgtc ctaggttcta gaggtggtgg tggtagcggc 420
ggcggcggct ctggtggtgg tggatccctc gagatggccc aggtgcagct ggtgcagtct 480
ggggctgagg tgaagaagcc tgggtcctcg gtgaaggtct cctgcaaggc ttctggaggc 540
accttcagca gctatgctat cagctgggtg cgacaggccc ctggacaagg gcttgagtgg 600
atgggaagga tcatccctat ccttggtaca gcaaactacg cacagaagtt ccagggcaga 660
gtcacgatta ccgcggacga atccacgagc acagcctaca tggagctgag cagcctgaga 720
tctgaggaca cggccgtgta ttactgtgcg cgctctggtt acggttctta ccgttgggaa 780
gattcttggg gtcaaggtac tctggtgacc gtctcctcag cggccgcaat tgaagttatg 840
tatcctcctc cttacctaga caatgagaag agcaatggaa ccattatcca tgtgaaaggg 900
aaacaccttt gtccaagtcc cctatttccc ggaccttcta agcccttttg ggtgctggtg 960
gtggttggtg gagtcctggc ttgctatagc ttgctagtaa cagtggcctt tattattttc 1020
tgggtgagga gtaagaggag caggctcctg cacagtgact acatgaacat gactccccgc 1080
cgccccgggc ccacccgcaa gcattaccag ccctatgccc caccacgcga cttcgcagcc 1140
tatcgctcca gagtgaagtt cagcaggagc gcagacgccc ccgcgtacca gcagggccag 1200
aaccagctct ataacgagct caatctagga cgaagagagg agtacgatgt tttggacaag 1260
agacgtggcc gggaccctga gatgggggga aagccgagaa ggaagaaccc tcaggaaggc 1320
ctgtacaatg aactgcagaa agataagatg gcggaggcct acagtgagat tgggatgaaa 1380
ggcgagcgcc ggaggggcaa ggggcacgat ggcctttacc agggtctcag tacagccacc 1440
aaggacacct acgacgccct tcacatgcag gccctgcccc ctcgctaa 1488
<210> 236
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 236
Ser Gly Ser Gly Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr
1 5 10 15
Phe Asp Ser
<210> 237
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 237
Ser Gly Ser Gly Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe
1 5 10 15
Asp Ser Leu
<210> 238
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 238
Ser Gly Ser Gly Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp
1 5 10 15
Ser Leu Leu
<210> 239
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 239
Ser Gly Ser Gly Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His
<210> 240
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 240
Ser Gly Ser Gly Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu
1 5 10 15
Leu His Ala
<210> 241
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 241
Ser Gly Ser Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Cys
<210> 242
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 242
Ser Gly Ser Gly Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His
1 5 10 15
Ala Cys Ile
<210> 243
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 243
Ser Gly Ser Gly Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala
1 5 10 15
Cys Ile Pro
<210> 244
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 244
Ser Gly Ser Gly Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys
1 5 10 15
Ile Pro Cys
<210> 245
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 245
Ser Gly Ser Gly Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile
1 5 10 15
Pro Cys Gln
<210> 246
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 246
Ser Gly Ser Gly Glu Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro
1 5 10 15
Cys Gln Leu
<210> 247
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 247
Ser Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys
1 5 10 15
Gln Leu Arg
<210> 248
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 248
Ser Gly Ser Gly Phe Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln
1 5 10 15
Leu Arg Cys
<210> 249
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 249
Ser Gly Ser Gly Asp Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu
1 5 10 15
Arg Cys Ser
<210> 250
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 250
Ser Gly Ser Gly Ser Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg
1 5 10 15
Cys Ser Ser
<210> 251
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 251
Ser Gly Ser Gly Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys
1 5 10 15
Ser Ser Asn
<210> 252
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 252
Ser Gly Ser Gly Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser
1 5 10 15
Ser Asn Thr
<210> 253
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 253
Ser Gly Ser Gly His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser
1 5 10 15
Asn Thr Pro
<210> 254
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 254
Ser Gly Ser Gly Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn
1 5 10 15
Thr Pro Pro
<210> 255
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 255
Ser Gly Ser Gly Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
1 5 10 15
Pro Pro Leu
<210> 256
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 256
Ser Gly Ser Gly Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro
1 5 10 15
Pro Leu Thr
<210> 257
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 257
Ser Gly Ser Gly Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro
1 5 10 15
Leu Thr Cys
<210> 258
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 258
Ser Gly Ser Gly Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu
1 5 10 15
Thr Cys Gln
<210> 259
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 259
Ser Gly Ser Gly Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr
1 5 10 15
Cys Gln Arg
<210> 260
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 260
Ser Gly Ser Gly Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys
1 5 10 15
Gln Arg Tyr
<210> 261
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 261
Ser Gly Ser Gly Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln
1 5 10 15
Arg Tyr Cys
<210> 262
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 262
Ser Gly Ser Gly Cys Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg
1 5 10 15
Tyr Cys Asn
<210> 263
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 263
Ser Gly Ser Gly Ser Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr
1 5 10 15
Cys Asn Ala
<210> 264
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 264
Ser Gly Ser Gly Ser Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys
1 5 10 15
Asn Ala Ser
<210> 265
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 265
Ser Gly Ser Gly Asn Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn
1 5 10 15
Ala Ser Val
<210> 266
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 266
Ser Gly Ser Gly Thr Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala
1 5 10 15
Ser Val Thr
<210> 267
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 267
Ser Gly Ser Gly Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser
1 5 10 15
Val Thr Asn
<210> 268
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 268
Ser Gly Ser Gly Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val
1 5 10 15
Thr Asn Ser
<210> 269
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 269
Ser Gly Ser Gly Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr
1 5 10 15
Asn Ser Val
<210> 270
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 270
Ser Gly Ser Gly Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn
1 5 10 15
Ser Val Lys
<210> 271
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 271
Ser Gly Ser Gly Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 272
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 272
Ser Gly Ser Gly Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly Thr
<210> 273
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 273
Ser Gly Ser Gly Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly Thr Asn
<210> 274
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 274
Ser Gly Ser Gly Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser Val Lys Gly
1 5 10 15
Thr Asn Ala
<210> 275
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 275
Thr Ser Gly Gln Ala Gly Gln His His His His His His Gly Ala Tyr
1 5 10 15
Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
20 25
<210> 276
<211> 75
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成寡核苷酸
<400> 276
actagtggcc aggccggcca gcaccatcac catcaccatg gcgcataccc gtacgacgtt 60
ccggactacg cttct 75
<210> 277
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人
<400> 277
Tyr Val Lys Met
1
<210> 278
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 278
Ser Gly Ser Gly
1
<210> 279
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成肽
<400> 279
Gly Ser Ser Ser Ser
1 5
<210> 280
<211> 53
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工序列描述：合成多肽
<400> 280
Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser Leu
1 5 10 15
Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr Pro
20 25 30
Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser Val
35 40 45
Lys Gly Thr Asn Ala
50
Claims (8)
1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(i)包括具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
2.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(j)包括具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
3.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(k)包括具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
4.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(l)包括具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
5.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(m)包括具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
6.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(o)包括具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
7.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(p)包括具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
8.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包括细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内结构域，其中所述细胞外抗原结合结构域是与B细胞成熟抗原(BMCA)特异性结合的人单链可变片段(scFv)，其中所述人scFv包括：
(q)包括具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包括具有SEQ IDNO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包括具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包括具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包括具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包括具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
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