CN111225675B - 使用过继细胞疗法治疗的制品和方法 - Google Patents

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Abstract

提供了过继细胞治疗方法，所述过继细胞治疗方法涉及给予细胞剂量，以用于治疗疾病和病症，包括某些B细胞恶性肿瘤。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述方法用于治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在一些实施方案中，所述方法用于治疗患有复发性或难治性NHL的受试者。还提供了结合过继治疗方法的制品和预防性治疗。

Description

使用过继细胞疗法治疗的制品和方法
相关申请的交叉引用
本申请要求以下的优先权：2017年6月2日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVECELL THERAPY)””的美国临时申请号62/514,774、2017年6月5日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS FOR TREATMENTUSING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/515,530、2017年6月16日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODSFOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/521,366、2017年6月29日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTUREAND METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/527,000、2017年8月24日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLESOF MANUFACTURE AND METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/549,938、2017年11月1日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELLTHERAPY)””的美国临时申请号62/580,425、2017年12月1日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS FOR TREATMENT USINGADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/593,871、2017年12月8日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE AND METHODS FORTREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/596,764、2018年1月8日提交的标题为““使用过继细胞疗法治疗的制品和方法(ARTICLES OF MANUFACTURE ANDMETHODS FOR TREATMENT USING ADOPTIVE CELL THERAPY)””的美国临时申请号62/614,957，将这些文献的内容通过引用以其整体并入。
通过引用并入序列表
本申请是与电子格式的序列表一起提交申请的。序列表以2018年6月1日创建的名为735042012140SeqList.txt的文件提供，其大小为35,306字节。将电子格式的序列表中的信息通过引用以其整体并入。
技术领域
本公开文本在一些方面涉及过继细胞疗法，所述过继细胞疗法涉及给予细胞剂量，以用于治疗患有诸如某些B细胞恶性肿瘤的疾病和病症的受试者；以及相关方法、组合物、用途和制品。所述细胞通常表达重组受体，如嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是非霍奇金淋巴瘤(NHL)，如复发性或难治性NHL或特定NHL亚型；在一些实施方案中，受试者属于NHL受试者的特定组或亚组，如过度预治疗或预后较差的受试者。
背景技术
多种免疫疗法和/或细胞疗法可用于治疗疾病和病症。例如，过继细胞疗法(包括涉及给予表达对目的疾病或障碍具有特异性的嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))和/或其他重组抗原受体的那些过继细胞疗法，以及其他过继免疫细胞和过继T细胞疗法)在癌症或其他疾病或障碍的治疗中可以是有益的。需要改进的方法。提供了满足此类需求的方法和用途。
发明内容
本文提供用于治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法、用途、组合物、配制品和制品，所述疾病或病症如癌症或肿瘤，任选地B细胞恶性肿瘤，如NHL或ALL或CLL或其亚型。所述方法和其他实施方案通常涉及向受试者给予T细胞，通常是工程化T细胞，如表达或含有重组受体(如嵌合抗原受体(CAR)或TCR)的那些工程化T细胞。
在一些实施方案中，与所提供的方法、组合物、制品和用途的任何实施方案结合给予的细胞剂量或细胞含有CD4+T细胞或其亚型或表型(如工程化的或表达重组受体的CD4+T细胞)和/或CD8+T细胞或其亚型(如工程化的或表达重组受体的CD4+细胞)。在一些实施方案中，CD8+细胞或亚型或表型是以特定剂量或量或数量存在；在一些实施方案中，CD4+细胞或亚型或表型是以特定剂量或量或数量存在。在一些实施方案中，CD8+细胞或其亚型或表型和CD4+细胞或其亚型或表型是以限定比率存在于物品或组合物或组合中或者在所述方法中被给予，所述限定比率如1:1或约1:1，或者介于1:3或约1:3与3:1或约3:1之间。在一些实施方案中，剂量或给予含有或具有特定量或数量的所述细胞的一个群体，并且所述比率是限定比率或者是天然存在的比率(如在衍生出所述细胞的受试者的血液中)，或者是在没有对特定比率进行选择或控制的情况下存在的比率。
在一些实施方案中，CD4+T细胞(或其亚组)和CD8+T细胞(或其亚组)单独地含有特异性地结合至由疾病或病症或者其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的受体。
在一些实施方案中，CD4+和CD8+细胞是一起给予和/或配制的，例如，在单一配制品中和/或来自单一容器。
在一些实施方案中，进行所述剂量的CD4+和CD8+细胞的分开给予，和/或包括分开的配制品或容器，所述配制品或容器各自单独地富含CD4+细胞或CD4+工程化细胞(如配制品含有至少某一百分比(例如，至少80％、85％、90％或95％或更多)的CD4+细胞和/或不含超过10％或超过5％CD8+T细胞的配制品)和CD8+细胞或CD8+工程化细胞(如含有至少某一百分比(例如，至少80％、85％、90％或95％或更多)的CD8+细胞和/或不含超过10％或超过5％CD4+T细胞的配制品)。
在一些方面，所述给予包括给予多种分开的组合物，所述多种分开的组合物包含含有CD4+T细胞和CD8+T细胞中的一种的第一组合物以及含有CD4+T细胞和CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。在任何所提供方法的某些实施方案中，CD4+T细胞所含的受体和/或CD8+T细胞所含的受体包含T细胞重组受体，和/或其中对CD4+T细胞和/或CD8+T细胞进行了遗传工程化以表达所述受体。
在任何所提供实施方案的一些实施方案中，第一组合物的给予和第二组合物的给予是在同一天进行，相隔约0与约12小时之间进行，相隔约0与约6小时之间进行，或相隔约0与2小时之间进行；和/或开始给予第一组合物和开始给予第二组合物是相隔约1分钟与约1小时之间进行，或相隔约5分钟与约30分钟之间进行。在任何所提供方法的某些实施方案中，第一组合物和第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
在任何所提供实施方案的某些实施方案中，第一组合物包含CD4+T细胞。在任何所提供方法的一些实施方案中，第一组合物包含CD8+T细胞。在任何所提供方法的特定实施方案中，开始给予第一组合物是在开始给予第二组合物之前进行的。在任何所提供方法的某些实施方案中，细胞的所述剂量包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或在第一和第二组合物中的一种组合物中包含受体的CD4+T细胞和在第一和第二组合物中的另一种组合物中包含受体的CD8+T细胞是以限定比率存在，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或在第一和第二组合物中所给予的包含所述受体的CD4+T细胞与包含受体的CD8+T细胞是以限定比率存在，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述限定比率为或为约1:1。在任何所提供方法的特定实施方案中，T细胞的所述剂量是作为单一剂量给予受试者，或者在两周、1个月、3个月、6个月、1年或更长时间段内仅给予一次。在任何所提供方法的某些实施方案中，T细胞的所述剂量是作为包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量的双剂量来给予，其中第一剂量和第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的多个组合物。在任何所提供方法的一些实施方案中，连续剂量是在开始给予细胞的第一剂量后至少或超过约7天或14天且小于约28天的时间点给予。
在任何所提供方法或实施方案的特定实施方案中，细胞的所述剂量包含介于1x105或约1x105个与5x108或约5x108个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、介于1x105或约1x105个与1x108或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、介于5x105或约5x105个与1x107或约1x107个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、或1x106或约1x106个至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。在任何所提供方法的某些实施方案中，T细胞的所述剂量包括给予不超过1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞。在任何所提供方法的一些实施方案中，T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108个重组受体表达T细胞之间，每个都包含端值。
在任何所提供方法的特定实施方案中，重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFRvIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AIMAGEAl、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述抗原是CD19。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述疾病或病症是NHL，并且所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(未另行规定)(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
在任何所提供方法的一些实施方案中，重组受体包括含有抗原结合结构域的细胞外结构域。在一些实施方案中，抗原结合结构域是或包括抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述片段包括通过柔性接头连接的抗体可变区。在一些实施方案中，所述片段包括scFv。在任何所提供方法的一些实施方案中，重组受体还包括间隔子和/或铰链区。
在任何所提供方法的某些实施方案中，重组受体包括细胞内信号传导区。在任何所提供方法的一些实施方案中，细胞内信号传导区包括细胞内信号传导结构域。在任何所提供方法的一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括初级信号传导结构域、能够诱导T细胞中的初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括CD3链任选CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
在任何所提供方法的特定实施方案中，重组受体还包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区之间的跨膜结构域。
在任何所提供方法的一些实施方案中，细胞内信号传导区还包括共刺激信号传导区。在一些实施方案中，共刺激信号传导区包括T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在任何所提供方法的某些实施方案中，共刺激信号传导区包括CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区位于跨膜结构域与细胞内信号传导区之间。
在任何所提供方法的某些实施方案中，重组受体是嵌合抗原受体(CAR)，任选地其中重组受体是嵌合抗原受体(CAR)，任选地其中所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域的共刺激信号传导区。
在一些实施方案中，所述制品包括容器(如小瓶)(所述容器包含含有表达重组受体的CD4+T细胞的组合物)和用于向患有疾病或病症的受试者给予以下的说明书：与包含表达重组受体的CD8+T细胞的组合物一起的作为多种组合物的所述CD4+T细胞的组合物，或包含多种CD4+T细胞的全部或一部分的单位剂量细胞以及包含表达重组受体的CD8+T细胞的组合物。在一些实施方案中，所述制品包括容器(如小瓶)(所述容器包含含有表达重组受体的CD8+T细胞的组合物)和用于向患有疾病或病症的受试者给予以下的说明书：与包含表达重组受体的CD4+T细胞的组合物一起的作为多种组合物的所述CD8+T细胞的组合物，或包含多种CD4+T细胞的全部或一部分的单位剂量细胞以及包含表达重组受体的CD8+T细胞的组合物。
在任何实施方案中的一些实施方案中，所述CAR依次包含，所述CAR包括对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且所述CAR任选地进一步包括介于所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
在任何实施方案中的一些实施方案中，CAR依次包括对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地是或包含4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
在任何实施方案中的一些实施方案中，CAR依次包含以下或由以下组成：对抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
在一些方面，所述间隔子是如下多肽间隔子：(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸，和/或包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或(d)具有以下或由以下组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或任何前述序列的变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；和/或初级信号传导结构域包含SEQ ID NO:13或14或15或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；和/或scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列，和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ IDNO:40)的CDRH3序列，或者其中scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中scFv依次包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:24所述的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:1或由其组成；共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；跨膜结构域是CD28的或包含SEQ ID NO:9或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；scFv含有FMC63的VH和VL的结合结构域或CDR；初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:30或由其组成；共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；跨膜结构域是CD28的或包含SEQ ID NO:9或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；scFv含有FMC63的VH和VL的结合结构域或CDR；初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:31或由其组成；共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；跨膜结构域是CD28的或包含SEQ ID NO:9或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；scFv含有FMC63的VH和VL的结合结构域或CDR；初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:33或由其组成；共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；跨膜结构域是CD28的或包含SEQ ID NO:9或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；scFv含有FMC63的VH和VL的结合结构域或CDR；初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在一些实施方案中，所述间隔子包含SEQ ID NO:34或由其组成；共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；跨膜结构域是CD28的或包含SEQ ID NO:9或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；scFv含有FMC63的VH和VL的结合结构域或CDR；初级信号传导结构域含有SEQ ID NO:13、14或15和/或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性。
在任何所提供制品的一些实施方案中，由CD4+细胞表达的重组受体和由CD8+T细胞表达的重组受体是相同的或不同的。在任何所提供制品的特定实施方案中，小瓶包含大于或大于约10x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约15x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约25x106个T细胞或重组受体表达T细胞。
在任何所提供制品的某些实施方案中，小瓶包含介于约1000万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约2500万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约1500万个细胞/ml、1500万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml、介于约1500万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、介于约1500万个细胞/ml与约2500万个细胞/ml之间、介于约2500万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间、介于约2500万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、和介于约5000万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述组合物进一步包含冷冻保护剂和/或所述物品进一步包括用于在给予所述受试者之前将所述组合物解冻的说明书。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述组合物或多种组合物包含一定剂量的细胞，所述剂量包含从或从约2x107至约4x107个CD8+细胞，如约2x107、2.5x107、3x107、3.5x107或4x107个CD8+细胞，以及从或从约2x107至约4x107个CD4+细胞，如约2x107、2.5x107、3x107、3.5x107或4x107个CD4+细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述组合物或多种组合物包含一定剂量的细胞，所述剂量包含约3x107个CD8+细胞和3.5x107个CD4+细胞。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述多种细胞组合物包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述限定比率为或为约1:1。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述多种组合物共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x105至1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述多种组合物共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含不超过1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述多种组合物共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108个重组受体表达T细胞之间，每个都包含端值。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时给予包含CD4+T细胞的组合物和包含CD8+T细胞的组合物。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述说明书规定相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟给予包含CD4+T细胞的组合物和包含CD8+T细胞的组合物。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书规定在给予包含CD8+细胞的组合物之前给予包含CD4+T细胞的组合物。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定在给予包含CD4+细胞的组合物之前给予包含CD8+T细胞的组合物。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AIMAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述抗原是CD19。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述疾病或病症是NHL并且所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是自体的。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述重组受体是或包括功能性非TCR抗原受体或TCR或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述重组受体包括含有抗原结合结构域的细胞外结构域。在一些实施方案中，抗原结合结构域是或包括抗体或其抗体片段，所述抗体片段任选地是单链片段。在一些实施方案中，所述片段包括通过柔性接头连接的抗体可变区。在一些实施方案中，所述片段包括scFv。
在任何所提供制品或方法的一些实施方案中，所述重组受体还包括间隔子和/或铰链区。
在任何所提供制品或方法的某些实施方案中，所述重组受体包括细胞内信号传导区。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导区包括细胞内信号传导结构域。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是或包括初级信号传导结构域、能够诱导T细胞中的初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或含有基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包括CD3链任选CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。
在任何所提供制品或方法的特定实施方案中，所述重组受体还包括设置在细胞外结构域与细胞内信号传导区之间的跨膜结构域。
在任何所提供制品或方法的一些实施方案中，所述细胞内信号传导区还包括共刺激信号传导区。在一些实施方案中，共刺激信号传导区包括T细胞共刺激分子的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述共刺激信号传导区包括CD28、4-1BB或ICOS的细胞内信号传导结构域或其信号传导部分。在一些实施方案中，共刺激信号传导区位于跨膜结构域与细胞内信号传导区之间。
在一些实施方案中，所述方法或物品用于或能够治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。在一些方面，所述方法涉及向所述受试者给予一定剂量的T细胞或多种T细胞，和/或所述制品规定向所述受试者给予一定剂量的T细胞或多种T细胞，或所述制品包括能够向所述受试者给予一定剂量的T细胞或多种T细胞的配制品。在一些方面，所述T细胞包含诸如CD8+T细胞和/或CD4+T细胞的T细胞，这些T细胞表达特异性地结合至由NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)。
在一些实施方案中，T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108个CAR表达T细胞之间，包括端值；并且所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、或3B级滤泡性淋巴瘤，并且其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态。
在任何所提供实施方案的一些实施方案中，所述方法进一步包括鉴定患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤且具有0或1的ECOG状态的受试者，或者所述制品包括规定所述受试者的治疗的信息。在任何所提供实施方案的一些实施方案中，T细胞的所述剂量和/或所给予的细胞包含限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
在一些方面，实施方案用于治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者并且涉及向所述受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞。在一些方面，T细胞的所述剂量包括限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率在一些方面为约或为1:1。在一些方面，NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(未另行规定)(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、或3B级滤泡性淋巴瘤。
在任何所提供实施方案的特定实施方案中，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为或被规定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态。在任何所提供实施方案的某些实施方案中，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为或被规定为具有0或1的ECOG状态。
在任何所提供实施方案的一些实施方案中，例如，在根据所述方法或根据所述制品中提供的信息治疗的受试者群体中，所述方法和/或用途和/或根据所述制品给予细胞实现某些结果和/或与某些降低的毒性风险相关。在一些方面，至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)和/或持久CR；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)和/或持久OR。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述反应持续大于3个月或大于6个月。在一些实施方案中，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的受试者(所述受试者在给予细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发(任选地在12个月内复发))实现OR，任选地其中所述OR持续等于或大于3个月或等于或大于6个月。在任何所提供方法的某些实施方案中，大于或大于约50％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)或3级或更高级的神经毒性。在一些实施方案中，此类受试者不展现早发性CRS和/或神经毒性。
本文提供评估对细胞疗法的反应的可能性的方法，所述方法涉及：评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性。在一些实施方案中，所述方法还涉及如果所述受试者可能实现反应，则将所述细胞疗法给予所述受试者。
本文提供选择用于治疗的受试者的方法，所述方法涉及：评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。在一些实施方案中，所述方法还涉及将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
本文提供治疗方法，所述方法涉及：基于通过将生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对用所述细胞疗法治疗有反应的受试者，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
在一些实施方案中，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续展现稳定疾病(SD)和/或进行性疾病(PD)。
在一些实施方案中，所述反应包括客观反应。在一些实施方案中，所述客观反应包括完全反应(CR)或部分反应(PR)。
本文提供评估对细胞疗法的持久反应的可能性的方法，所述方法涉及：评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性。
在一些实施方案中，所述方法还涉及如果所述受试者可能实现反应，则将所述细胞疗法给予所述受试者。
本文提供选择用于治疗的受试者的方法，所述方法涉及：评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。在一些实施方案中，所述方法还涉及将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
本文提供治疗方法，所述方法涉及：基于通过将生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性的结果，选择可能对用细胞疗法治疗有反应的受试者，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
在一些实施方案中，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现持久反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者未实现持久反应。
在一些实施方案中，所述持久反应包括持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。
在一些实施方案中，所述持久反应包括持续至少3个月的CR或PR。
本文提供评估在给予细胞疗法之后发生毒性的风险的方法，所述方法涉及评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险。
本文提供鉴定受试者的方法，所述方法涉及评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，鉴定具有在给予细胞疗法之后发生毒性的风险的受试者。
本文提供治疗方法，所述方法包括评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或所述受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及；以及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险；以及在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗。
在一些实施方案中，所述生物样品是血液或血浆样品。
在一些实施方案中，肿瘤负荷的所述体积量度是尺寸乘积之和(SPD)，或者是基于身体的CT和/或MRI成像或其他成像的体积测量。在一些实施方案中，肿瘤负荷的所述体积量度是在治疗之前、在单采术之前、或在细胞产物制造之前进行。
在一些实施方案中，所述方法还涉及如果所述受试者被给予细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
在一些实施方案中，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度高于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度低于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的低风险。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中所述分析物的中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续不发生任何毒性。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中所述分析物的中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续发生毒性。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性或CRS。
在一些实施方案中，所述毒性是1级或更高级的神经毒性或CRS。
在一些实施方案中，所述毒性是严重神经毒性或者是2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；或者所述毒性是严重CRS或者包含2级或更高级或3级或更高级的CRS。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且肿瘤负荷的所述体积量度是SPD，并且所述一种或多种分析物选自LDH、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且评估一种或多种分析物并且所述分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且评估一种或多种分析物并且所述分析物选自IL-8、IL-10和CXCL10。
在一些实施方案中，所述神经毒性是严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性。
在一些实施方案中，毒性是CRS，并且一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。
在一些实施方案中，所述CRS是严重CRS或3级或更高级的CRS。
在一些实施方案中，如果所述受试者被鉴定为具有发生毒性的风险，则向所述受试者给予：(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予要在以下时间给予：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或以降低的剂量或如下剂量给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗(clazakizumab)、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(olokizumab，CDP6038)、伊西莫单抗(elsilimomab)、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(sirukumab，CNTO136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
在一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含类固醇，任选地地塞米松。
在一些实施方案中，评估体积量度并且所述体积量度是SPD，并且阈值水平为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，所述体积量度是SPD并且阈值水平为或为约50cm2。
在一些实施方案中，一种或多种分析物是或包含LDH并且阈值水平为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。在一些实施方案中，分析物是LDH并且阈值水平为或为约500单位/升。
在一些实施方案中，所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。在一些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在一些实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在一些实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在一些实施方案中，所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。在一些实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞或者对于所述受试者是自体的。
本文提供治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108个重组受体表达T细胞之间，包括端值，所述剂量包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为约或为1:1；并且所述方法导致(1)在至少35％、至少40％或至少50％的所治疗受试者中的完全反应(CR)和/或在至少50％、至少60％或至少70％的所治疗受试者中的客观反应(OR)，并且(2)导致不超过50％的受试者展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性。
在任何所提供方法的一些实施方案中，至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的受试者实现OR，任选地其中所述OR持续等于或大于3个月或等于或大于6个月，所述受试者在给予细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤(或高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))，或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月。在任何所提供方法的特定实施方案中，大于或大于约50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性。
在一些实施方案中，所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月；至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现持久的CR；至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；和/或其中至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)，任选地其中所述OR可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或其中至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现OR的受试者保持反应或存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月。
在一些实施方案中，在给予细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤；和/或至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在给予细胞的所述剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现CNS疾病的消退。
本文提供治疗受试者的方法，所述方法涉及向患有淋巴瘤的受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由所述淋巴瘤表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中所述受试者的所述淋巴瘤与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累。在一些方面，在给予细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者包含脑病灶，任选地颞叶脑病灶。在一些例子中，所述淋巴瘤是B细胞恶性肿瘤。在一些实施方案中，所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
在任何此类实施方案的一些实施方案中，至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的完全反应(CR)或缓解和/或实现CNS疾病的降低或清除，任选地其中所述CNS疾病的CR或缓解或者降低或清除可持续或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者中可持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的截至1个月和/或截至3个月实现CNS疾病的CR或缓解或其他降低的受试者保持反应、保持缓解(例如，在CR中)、或者保持显示降低或缓解的体征，和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；和/或至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的客观反应(OR)或缓解，任选地其中所述CNS疾病的OR或缓解可持续或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者中可持续等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CNS疾病的OR或缓解的受试者保持反应或存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或所述脑病灶的大小或体积减小，任选地减小大于或大于约25％、50％、75％或更多。在一些方面，CNS疾病的降低或缓解或清除是在没有或没有显著的毒性(如神经毒性，如严重神经毒性，例如大于2级或大于3级的神经毒性)体征或症状的情况下实现的，和/或在没有因细胞疗法细胞在受试者脑中的激活或存在引起的毒性的情况下实现的，和/或是在如与其中保留CNS疾病和/或用所述疗法治疗但没有展现CNS疾病的受试者相比，毒性水平没有增加的情况下实现的。
在任何所提供方法的一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性。在任何所提供方法的一些实施方案中，至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法治疗的受试者不展现早发性CRS或神经毒性，和/或不展现开始给予后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始给予后早于5天的神经毒性发作，和/或其中在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或中值消退时间时或之后，和/或在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
在任何所提供方法的某些实施方案中，在给予细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或治疗。在任何所提供方法的某些实施方案中，在给予所述剂量之后的时间段内，不向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗，所述时间段任选地为或为约1、2、3、4、5天，或任选地为或为约6、7、8、9、10、11天，或任选地为1、2、3或4周。在任何所提供方法的某些实施方案中，在给予所述剂量之后，在所述受试者展现毒性的体征或症状之前或除非所述受试者展现毒性的体征或症状，和/或在所述受试者展现除了发热以外的毒性的体征或症状之前或除非所述受试者展现除了发热以外的毒性的体征或症状，不向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗，任选地其中所述发热不是持续的发热或所述发热在用退热药治疗后被或已经被降低或降低超过1℃。在任何所提供方法的某些实施方案中，任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，所述给予和任何随访是在门诊基础上和/或在不使所述受试者住院的情况下和/或不在医院过夜停留的情况下和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。
在任何所提供方法的一些实施方案中，在给予细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)。在任何所提供方法的某些实施方案中，在给予所述剂量之后的时间段内，不向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)，所述时间段任选地为或为约1、2、3、4、5天，或任选地为或为约6、7、8、9、10、11天，或任选地为1、2、3或4周。在任何所提供方法的某些实施方案中，在给予所述细胞剂量之后，在所述受试者展现毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状之前或除非所述受试者展现毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状，和/或在所述受试者展现除了发热以外的毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状之前或除非所述受试者展现除了发热以外的毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状，不向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)，任选地其中所述发热不是持续的发热或所述发热在用退热药治疗后被或已经被降低或降低超过1℃。在任何所提供方法的某些实施方案中，任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，所述给予和任何随访是在门诊基础上和/或在不使所述受试者住院的情况下和/或不在医院过夜停留的情况下和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述给予是在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。在任何所提供方法的一些实施方案中，如果在门诊基础上治疗或已经治疗的所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、或3B级滤泡性淋巴瘤。在一些例子中，所述NHL包括DLBCL。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述DLBCL是从头的或从滤泡性淋巴瘤(FL)转化的和/或不包含从MZL和CLL(里希特氏(Richter's))转化的DLBCL。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的ECOG状态。在任何所提供方法的一些实施方案中，在给予细胞的所述剂量时或紧临给予细胞的所述剂量之前，所述受试者在用一种或多种用于NHL的先前疗法，任选地除了给予另一剂量的表达CAR的细胞以外的一种、两种或三种先前疗法治疗缓解后复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
在任何所提供方法的一些实施方案中，在给予细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。在任何所提供方法的一些实施方案中，至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在给予细胞的所述剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现CNS疾病的消退。
在任何所提供方法的特定实施方案中，在给予细胞的所述剂量之时或之前：所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤(或高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))；所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；所述受试者没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或所述受试者在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述方法包括，在给予细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于给予细胞的所述剂量的受试者，所述受试者患有双重/三重命中淋巴瘤(或高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))、化疗难治性淋巴瘤(任选地化疗难治性DLBCL)；没有响应于用于治疗恶性肿瘤(任选地NHL)的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发；和/或患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述方法进一步包括给予另外的治疗剂或疗法，任选地并非细胞疗法，任选地并非CAR+T细胞疗法。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂或疗法用于治疗NHL或恶性肿瘤和/或增加细胞的所述剂量的持久性、活性和/或功效。在一些实施方案中，如果所述受试者在给予细胞的所述剂量后1个月内、2个月内或3个月内不展现对所述细胞疗法的反应，任选地不展现CR或OR，则给予所述另外的治疗剂或疗法。在一些实施方案中，将所述另外的治疗剂或疗法给予如下受试者：所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后被鉴定为或已被鉴定为患有稳定或进行性疾病(SD/PD)；所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)；和/或所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，在给予细胞的所述剂量或所述另外的治疗剂或疗法之前，所述方法包括鉴定或选择用于给予细胞的所述剂量的受试者，所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后患有稳定或进行性疾病(SD/PD)，具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态，患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，和/或患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在任何此类实施方案的一些实施方案中，在开始给予细胞的所述剂量之前、与或在开始给予细胞的所述剂量的同时和/或在开始给予细胞的所述剂量之后，给予所述另外的治疗剂或疗法。
在任何所提供方法的某些实施方案中，所述CAR包含对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域和衍生自任选地是CD3ζ的含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。
在任何所提供方法的特定实施方案中，在所述给予前，已经用包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行了预调理。任何所提供方法的某些实施方案进一步包括，紧临给予前，将淋巴细胞清除疗法给予所述受试者，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天以约200-400mg/m2，任选地以或以约300mg/m2(包括端值)给予环磷酰胺，和/或以约20-40mg/m2，任选地30mg/m2给予氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天以或以约300mg/m2给予环磷酰胺和以约30mg/m2给予氟达拉滨，持续3天。
在任何所提供方法的某些实施方案中，所述细胞剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的给予是通过门诊递送进行的。在任何所提供方法的一些实施方案中，细胞的所述剂量是肠胃外给予，任选地静脉内给予。
在任何所提供方法的特定实施方案中：至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)，展现大于或大于约3个月、6个月或12个月的无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)；平均而言，根据所述方法治疗的受试者展现大于或大于约6个月、12个月或18个月的中值PFS或OS；和/或所述受试者在治疗后展现至少或至少约6、12、18个月或更久的PFS或OS。在任何所提供方法的某些实施方案中，在开始给予细胞的所述剂量后在或在约14或28天，在所述受试者或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者的血液中可检测的CAR+T细胞(任选地CAR+CD8+T细胞和/或CAR+CD4+T细胞)的数量大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是自体的。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述T细胞包含作为多种组合物给予的CD4+和CD8+T细胞，所述多种组合物包括给予包含CD4+T细胞或CD8+T细胞的第一组合物和给予包含CD4+T细胞或CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述第一组合物和第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时。在任何所提供方法的某些实施方案中，第一组合物和第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述第一组合物包含CD4+T细胞。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述第一组合物包含CD8+T细胞。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在任何所提供方法的一些实施方案中，T细胞的所述剂量是作为单一剂量给予所述受试者，或者在两周、1个月、3个月、6个月、1年或更长时间段内仅给予一次。在任何所提供方法的特定实施方案中，T细胞的所述剂量是作为包含所述T细胞的第一剂量和所述T细胞的连续剂量的双剂量来给予，其中所述第一剂量和所述第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的所述多个组合物。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述连续剂量是在开始给予细胞的第一剂量后至少或超过约7天或14天且小于约28天的时间点给予。
本文提供制品，所述制品包括包含表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法，以及用于给予所述细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定：要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，所述NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；并且要给予的T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108个CAR表达T细胞之间，包括端值。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定以限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞给予T细胞的所述剂量，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
本文提供制品，所述制品包括包含表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法，以及用于给予所述细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定：要以限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞给予T细胞的所述剂量，所述比率为约或为1:1；并且要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，所述NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤。
本文提供制品，所述制品包括包含表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传工程化细胞的剂量或组合物的细胞疗法，以及用于给予所述细胞疗法的说明书，其中所述说明书规定：要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，任选地NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)，要给予的T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108个CAR表达T细胞之间，包括端值；并且要以限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞给予T细胞的所述剂量，所述比率为约或为1:1。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书进一步规定，要将细胞的所述剂量给予被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态、任选地0或1的ECOG状态的受试者。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书规定，所述给予是在如下受试者中进行：紧临给予细胞的所述剂量之前或者在或在约给予细胞的所述剂量1个月内，所述受试者没有接受能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或治疗。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述药剂是或包含抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或类固醇(任选地地塞米松)。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述说明书规定，细胞的所述剂量不用于在患有从MZL和CLL(里希特氏)转化的DLBCL的受试者中给予和/或用于患有从头的或从惰性疾病转化的DLBCL的受试者。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定，所述受试者未患从MZL和CLL(里希特氏)转化的DLBCL。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定，所述细胞疗法的给予用于如下受试者：所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤(或高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))，被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤(任选地化疗难治性DLBCL)；和/或没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述CAR包含对抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域和衍生自任选地是CD3ζ的含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。
任何所提供制品的特定实施方案进一步包含用于与淋巴细胞清除疗法一起使用、在所述淋巴细胞清除疗法之后使用或结合所述淋巴细胞清除疗法使用的说明书，所述淋巴细胞清除疗法任选地包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天以约200-400mg/m2，任选地以或以约300mg/m2(包括端值)给予环磷酰胺，和/或以约20-40mg/m2，任选地以30mg/m2给予氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述淋巴细胞清除疗法包括每天以或以约300mg/m2给予环磷酰胺，并以约30mg/m2给予氟达拉滨，持续3天。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书进一步规定，要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书进一步规定，所述细胞疗法用于肠胃外给予，任选地静脉内给予。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述细胞疗法包括从受试者获得的原代T细胞。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是自体的。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述制品包含所述细胞疗法的多种组合物，所述多种组合物包含包括CD4+T细胞或CD8+T细胞的遗传工程化细胞的第一组合物，其中所述说明书规定，所述第一组合物是与包含CD4+T细胞或CD8+T细胞中的另一种的第二组合物一起使用，任选地其中所述第一组合物的细胞和相同组合物的细胞来自相同受试者。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定，所述第一组合物和第二组合物要以限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞来给予，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述限定比率为或为约1:1。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述组合物进一步包含冷冻保护剂和/或所述制品进一步包括用于在给予所述受试者之前将所述组合物解冻的说明书。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时给予包含CD4+T细胞的组合物和包含CD8+T细胞的组合物。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书规定，包含CD4+T细胞的组合物的给予与包含CD8+T细胞的组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述说明书规定，在给予包含CD8+细胞的组合物之前给予包含CD4+T细胞的组合物。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定在给予包含CD4+细胞的组合物之前给予包含CD8+T细胞的组合物。
本文提供制品，所述制品包含能够检测一种或多种分析物的一种或多种试剂，和使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地使用细胞疗法的治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
任何所提供制品的特定实施方案进一步包括所述细胞疗法和/或进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。任何所提供制品的某些实施方案进一步包含用于治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于在所述受试者中给予治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平：在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予所述细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于所述分析物的阈值水平，则任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书进一步规定将所述细胞疗法给予所述受试者，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平：所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。本文提供了一种包括细胞疗法以及用于在生物样品中对生物样品中一种或多种分析物的水平或量或浓度的评估后或基于所述评估的结果给予所述细胞疗法的说明书的制品，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述评估包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。任何所提供制品的某些实施方案进一步包含所述试剂和/或进一步包含用于与用于检测所述分析物的所述试剂一起使用、在用于检测所述分析物的所述试剂之前使用和/或结合用于检测所述分析物的所述试剂使用的说明书。任何所提供制品的一些实施方案进一步包含治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗，和/或用于在所述受试者中给予治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
在任何所提供制品的特定实施方案中，用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平：在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞之前，(ii)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞的1、2或3天内，(iii)与开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞相伴随，和/或(iv)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞之后第一次发热时；和/或以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予所述细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在任何所提供制品的某些实施方案中，用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书进一步规定将所述细胞疗法给予所述受试者，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平：在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前，不给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
本文提供制品，所述制品包含能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂，以及用于在生物样品中对生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度的评估后或基于所述评估的结果给予所述药剂的说明书，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述评估包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述说明书规定，要在以下时间给予所述药剂：i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者后第一次发热时，和/或所述制品进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述生物样品是在给予所述药剂或细胞疗法之前从所述受试者获得。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述试剂是特异性地结合至骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述制品包含用于检测所述分析物的试剂，和/或进一步包含用于与用于检测所述分析物的所述试剂一起使用、在用于检测所述分析物的所述试剂之前使用和/或结合用于检测所述分析物的所述试剂使用的说明书。任何所提供制品的一些实施方案进一步包括所述细胞疗法，和/或进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。
在任何所提供制品的特定实施方案中，用于给予所述药剂的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述说明书进一步规定将细胞疗法给予所述受试者，其中所述药剂的给予要在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。在任何所提供制品的一些实施方案中，用于给予所述药剂的所述说明书规定，如果所述水平、量或浓度低于阈值水平，则向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中所述说明书规定，要将或可以将所述细胞疗法在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。在任何所提供制品的某些实施方案中，针对所述分析物测定或评估细胞是通过免疫测定进行的。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高级的神经毒性或CRS。在任何所提供制品的特定实施方案中：所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；和/或所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高级的或者3级或更高级的CRS。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述毒性与脑水肿相关。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述类固醇是或包含地塞米松。
在任何所提供制品的特定实施方案中，能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)或上调微小RNA-124(miR-124)。在任何所提供制品的某些实施方案中，能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
在任何所提供制品的一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述抑制剂选自：PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段；或前述任何项的组合。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述抑制剂是PLX-3397。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AIMAGE Al、HLA-A2 NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在任何所提供制品的某些实施方案中，所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
在任何所提供制品的特定实施方案中，所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在任何所提供制品的某些实施方案中，与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含小于或小于约5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如小于或小于约2.5x107、小于或小于约1.0x107、小于或小于约5.0x106、小于或小于约1.0x106、小于或小于约5.0x105或小于或小于约1x105个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。在任何所提供制品的特定实施方案中，与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x105至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如1x105至2.5x107、1x105至1.0x107、1x105至5.0x106、1x105至1.0x106、1.0x105至5.0x105、5.0x105至5x107、5x105至2.5x107、5x105至1.0x107、5x105至5.0x106、5x105至1.0x106、1.0x106至5x107、1x106至2.5x107、1x106至1.0x107、1x106至5.0x106、5.0x106至5x107、5x106至2.5x107、5x106至1.0x107、1.0x107至5x107、1x107至2.5x107或2.5x107至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
在任何所提供制品的某些实施方案中，所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。在任何所提供制品的一些实施方案中，所述一种或多种分析物是LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MCP-1β。在任何所提供制品的特定实施方案中，所述一种或多种分析物是或包含LDH。
本文提供选择用于治疗的受试者的方法，所述方法包括：(a)使生物样品与能够检测一种或多种分析物或对所述一种或多种分析物具有特异性的一种或多种试剂接触，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)，其中：所述生物样品来自作为使用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；和(b)选择受试者，在所述受试者中：(i)所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，由此鉴定具有发生针对所述细胞疗法的毒性的风险的受试者；或(ii)所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平。
在任何所提供方法的某些实施方案中：(a)选择(i)中的受试者用于向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予要在以下时间给予：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或(c)选择(i)中的受试者用于以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(b)选择(i)中的受试者用于在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在任何所提供方法的一些实施方案中，选择(i)中的受试者，并且所述方法进一步包含：(a)向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予是在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或(b)以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(c)向所述受试者给予细胞疗法如下剂量的细胞疗法的遗传工程化细胞：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(d)在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在任何所提供方法的特定实施方案中：(a)选择(ii)中的受试者用于任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予细胞疗法；(b)选择(ii)中的受试者用于向所述受试者给予细胞疗法，其中所述细胞疗法不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或选择(ii)中的受试者用于在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予细胞疗法。
在任何所提供方法的某些实施方案中，选择(ii)中的受试者，并且所述方法进一步包括任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在任何所提供方法的一些实施方案中，选择(ii)中的受试者，并且所述方法进一步包括向所述受试者给予所述细胞疗法，其中：所述细胞疗法的所述给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
本文提供治疗方法，所述治疗方法包括：(a)测定生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述生物样品来自作为任选地使用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括用于治疗疾病或病症的表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)；和(b)在所述测定后或基于所述测定的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗。
本文提供治疗方法，所述治疗方法包括，在针对一种或多种分析物的水平、量或浓度对来自受试者的生物样品的测定后或基于所述测定的结果，向所述受试者给予(i)细胞疗法，任选地包括用于治疗疾病或病症的表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，和任选地，(ii)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，其中：所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得；并且所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述测定包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。在任何所提供方法的某些实施方案中，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平：在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予所述细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在任何所提供方法的一些实施方案中，如果所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平：所述细胞疗法的所述给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
在任何所提供方法的特定实施方案中，向受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，其中：所述受试者是任选地使用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括用于治疗疾病或病症的表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且在针对一种或多种分析物的水平、量或浓度对来自受试者的生物样品的测定后或基于所述测定的结果，所述受试者已经被鉴定为具有发生毒性的风险，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
在任何所提供方法的某些实施方案中，所述测定包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。在任何所提供方法的一些实施方案中，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则将所述药剂给予所述受试者。
在任何所提供方法的特定实施方案中，在以下时间给予所述药剂：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述阈值水平是在对在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的骨髓标记呈表面阳性的细胞的平均百分比或数量的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均百分比或数量的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述试剂是特异性地结合至骨髓细胞群的标记或细胞的结合分子。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。在任何所提供方法的某些实施方案中，针对所述分析物测定或评估细胞包括免疫测定。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高级的神经毒性或CRS。在任何所提供方法的特定实施方案中：所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；和/或所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高级的或者3级或更高级的CRS。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述毒性与脑水肿相关。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
在任何所提供方法的某些实施方案中，所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述类固醇是或包含地塞米松。在任何所提供方法的特定实施方案中，能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)或上调微小RNA-124(miR-124)。
在任何所提供方法的某些实施方案中，能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
在任何所提供方法的特定实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述抑制剂选自：PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段；或前述任何项的组合。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述抑制剂是PLX-3397。在任何所提供方法的特定实施方案中，重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
在任何所提供方法的某些实施方案中，所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AIMAGE Al、HLA-A2 NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述细胞疗法包括给予从或从约1x105至1x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予不超过1x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
在任何所提供方法的特定实施方案中，与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含小于或小于约5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如小于或小于约2.5x107、小于或小于约1.0x107、小于或小于约5.0x106、小于或小于约1.0x106、小于或小于约5.0x105、或者小于或小于约1x105个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
在任何所提供方法的某些实施方案中，与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x105至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如1x105至2.5x107、1x105至1.0x107、1x105至5.0x106、1x105至1.0x106、1.0x105至5.0x105、5.0x105至5x107、5x105至2.5x107、5x105至1.0x107、5x105至5.0x106、5x105至1.0x106、1.0x106至5x107、1x106至2.5x107、1x106至1.0x107、1x106至5.0x106、5.0x106至5x107、5x106至2.5x107、5x106至1.0x107、1.0x107至5x107、1x107至2.5x107或2.5x107至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。在任何所提供方法的一些实施方案中，所述工程化细胞对于所述受试者是自体的。在任何所提供方法的特定实施方案中，所述工程化细胞对于所述受试者是同种异体的。在任何所提供方法的某些实施方案中，所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
在一些实施方案中，所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示受试者是否可能展现对使用所述细胞疗法的治疗的反应。在一些实施方案中，所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示在给予所述细胞疗法后受试者是否可能展现持久反应。在一些实施方案中，所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示在给予所述细胞疗法后受试者是否可能展现毒性。
附图说明
图1显示经历过实验室异常和在≥20％受试者中发生的治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比。*：一次多器官衰竭的5级AE，与研究治疗无关，并且是由于淋巴瘤进展所致；一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CART细胞疗法有关，在第23天发生于一名受试者中，所述受试者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子以及广谱抗生素和抗真菌药。
图2是描绘所观察到的至CRS和神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线。
图3A和图3B描绘所治疗受试者的亚组之间的3个月客观反应率(ORR)。
图4A和图4B显示在受试者的完整和核心群组中的反应(CR/PR、CR或PR)持续时间和总存活期。
图5A显示在不同剂量水平下，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。图5B显示在反应者与无反应者之间，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。图5C显示在发生或未发生任何神经毒性的受试者中，在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的药代动力学。
图6A显示在某些时间点测量的患有化疗难治性转化的DLBCL的受试者的外周血中CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+T细胞的数量。图6B描绘治疗前的轴向PET-CT图像，其显示右中颅窝中的颅内异常和右耳后区域中的皮下组织的广泛异常。图6C是治疗后的PET-CT图像，其描绘在用抗CD19CAR+T细胞治疗后，图2B中的异常的消退。图6D是治疗前的脑MRI(使用造影剂的高分辨率T1加权图像；轴向图)，其显示右中颅窝中均匀增强的肿块。图6E是治疗后的MRI图像，其显示增强的肿块几乎完全消退。图6F是复发时的轴向PET-CT图像，其显示与18F-氟脱氧葡萄糖的高摄取相关的右耳后肿瘤复发(箭头)。图6G是PET-CT成像，其显示在切开活检和CAR+T细胞的再扩增后，耳后肿瘤的消退。
图7显示在给予CAR+T细胞之前在受试者血清中测量的分析物的水平，以及与神经毒性发生的相关。
图8显示这样的图，其标绘无进展时间(月)并指示最佳总体反应和反应持久性，以及在用含有表达CAR-T的CD4+和CD8+T细胞的抗CD19细胞疗法治疗的NHL受试者的完整群组和核心群组内在单独受试者中随时间观察的单独临床结果。a：除非另有说明，否则患者在第1个月实现BOR；b：在2名患者中观察到由淋巴瘤引起的CNS受累完全消退；c：一名患者在疾病进展时在活检后发生再扩增
图9A描绘通过流式细胞术使用对截短的受体具有特异性的抗体评估的表达CAR的CD3+细胞/μL血液的中值(±四分位数)数(CD3，圆形；N＝87)；或在来自87名已经被给予抗CD19CAR表达细胞的受试者的血液样品中，通过定量聚合酶链式反应(qPCR)使用对编码CAR的载体中存在的土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)具有特异性的引物评估的整合CAR转基因的拷贝/μg基因组DNA的中值(±四分位数)数(qPCR，正方形；N＝85)。将流式细胞术中CAR+细胞检测的截止值设为CAR+门中≥25个事件，并且qPCR的检测限为≥12.5个CAR转基因拷贝/μg基因组DNA。
图9B描绘在第11±3天，在来自67名已经被给予抗CD19CAR表达细胞的受试者的血液和骨髓样品中，CD4+和CD8+CAR表达细胞的相对数量/μL。线条表示统一线，不是回归线。
图10A和图10B描绘在已经以DL1接受CAR表达T细胞的患有从头的或从惰性淋巴瘤转化的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL，NOS；N＝27)、转化的滤泡性淋巴瘤(tFL；N＝10)、从边缘区淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tMZL/tCLL；N＝4)或套细胞淋巴瘤(MCL；N-5)的受试者亚组中，CD4+和CD8+CAR+细胞在第0天与第28天之间的中值(±四分位数)曲线下面积(AUC0-28；图10A)和最大血清浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液；图10B)。
图11A和图11B描绘在已经以DL1或DL2接受CAR+细胞的受试者中，CD3+、CD4+和CD8+CAR+细胞在第0天与第28天之间的中值(±四分位数)曲线下面积(AUC0-28；图11A)和最大血清浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液；图11B)。
图12A至图12D描绘与未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中(CD4+：图12A；CD8+：图12B)，或与未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者(任何NT)中(CD4+：图12C；CD8+：图12D)，随时间的表达CAR的CD4+和CD8+CAR+细胞/μL血液的中值(±四分位数)数。
图13A和图13B描绘在依照具有CR、PR或PD的最佳总体反应(BOR)或CR、PR或PD的3个月(M3)持久反应的受试者分组的受试者中，峰值CD3+CAR+细胞/μL的数量(CD3+Cmax)。
图14A描绘在来自展现高CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax>500)和展现低CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax<500)的血清样品中的淋巴细胞清除前血液分析物水平。
图14B描绘在来自展现高CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax>500)和展现低CAR+细胞扩增的受试者(CD3+Cmax<500)的血清样品中的峰值血液分析物水平。
图15描绘标绘图，其描绘对于给予DL1或DL2的CAR+细胞的单独受试者，针对CD3+CAR+细胞的AUC0-28(细胞*天/μL)的淋巴细胞清除前SPD(cm2)。
图16A和图16B描绘与未发生CRS的受试者(0级CRS)相比，在来自发生细胞因子释放综合征的受试者(1-4级CRS)中(图16A)，或与未发生NT的受试者(1-4级NT)相比，在发生神经毒性的受试者(0级NT)中(图16B)，血清样品中的淋巴细胞清除前血液分析物水平。单位为：铁蛋白和D-二聚体(μg/L)；CRP(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图17描绘与未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中，或与未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者(任何NT)中，对指示肿瘤负荷的淋巴细胞清除前患者参数尺寸乘积之和(SPD；cm2)以及乳酸脱氢酶(LDH；U/L)水平的评估。
图18A是标绘图，其描绘在已发生神经毒性的个体(1-4级NT)或未发生NT的受试者(0级NT)中(左图)，以及在已发生CRS的个体(1-4级CRS)或未发生CRS的受试者(0级CRS)中(右图)，针对淋巴细胞清除前LDH(U/L)水平的淋巴细胞清除前SPD(cm2)。虚线表示与CRS或NT的较高比率相关的SPD(50cm2或更高)或LDH(500U/L或更高)的水平。图18B描绘基于SPD(50cm2或更高)或LDH(500U/L或更高)的水平，发生CRS或NT的优势比估计值，置信区间(CI)为95％。图18C描绘基于SPD或LDH的水平，发生CRS或NT的优势比估计值，包括针对低于阈值的值的优势比估计值，置信区间(CI)为95％。
图19描绘对于在3个月时具有持久反应的受试者与在3个月时没有反应的受试者，淋巴细胞清除前肿瘤负荷参数(SPD)和血液分析物水平。单位为：铁蛋白和D-二聚体(μg/L)；CRP和SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图20A和图20B描绘与未发生CRS的受试者(无CRS)相比，在发生细胞因子释放综合征的受试者(任何CRS)中(图20A)，或与未发生NT的受试者(无NT)相比，在发生神经毒性的受试者(任何NT)中(图20B)，血清样品中的峰值血液分析物水平。单位为：CRP(mg/L)，SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图21A描绘与具有稳定疾病(SD)或进行性疾病(PD)的受试者(N＝17)的水平相比，来自具有完全反应(CR)或部分反应(PR)的最佳总体反应(BOR)的受试者(N＝57)的血清样品中的峰值血液分析物水平。图21B描绘与具有3个月反应CR/PR的受试者(N＝35)相比，来自具有SD/PD的3个月反应的受试者(N＝31)的血清样品中的峰值血液分析物水平。单位为：CRP(mg/L)，SAA-1(mg/L)和细胞因子(pg/mL)。
图22描绘在所治疗受试者的亚组之间的第3个月的客观反应率(ORR)，置信区间为95％。
对于实现CR、PR的受试者、所有显示反应的受试者、无反应者和所有所治疗受试者，图23A和图23B描绘完整群组(图23A)和核心群组(图23B)的反应持续时间(DOR)，并且图23C和图23D描绘完整群组(图23C)和核心群组(图23D)的总存活期。对于反应持续时间，中值F/U是6.3个月。
图24显示完整DLBCL群组中经历在≥20％的患者中发生的治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比。不包括用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的5名患有MCL的患者的数据。b：一次与CAR+T细胞给予无关的脓毒性休克的5级AE。c：一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR+T细胞相关，在第23天发生于一名患者中，所述患者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子及广谱抗生素和抗真菌药。d：实验室异常。
图25显示在完整群组中，随时间的发生CRS或神经毒性的受试者的百分比。
图26显示箱形图，其展示在实施例8中描述的用于产生含有CAR T细胞的工程化细胞组合物的过程的不同阶段，富含CD4+和CD8+细胞的T细胞组合物的T细胞纯度。显示所述组合物中CD4+和CD8+细胞的频率(总白细胞的％)。
图27A至图27C显示箱形图，其展示高或低配制体积的治疗性细胞组合物中CD4+和CD8+CAR+T细胞的浓度(图27A)、存活力(图27B)和半胱天冬酶-3阴性细胞的频率(图27C)。
图28A显示用于以DL1和DL2给予的CAR T细胞组合物中存在的CD3+CAR+T细胞的数量。图28B显示用于以DL1和DL2给予的CAR T细胞组合物中存在的CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞以及CD4+CAR+TNF-α+细胞和CD8+CAR+TNF-α+细胞的数量。
图29显示在实施例6中描述的研究时间点，完整DLBCL群组中经历在≥20％的受试者中发生的治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比。不包括用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的6名患有MCL的受试者的数据。b：一次与CAR+T细胞给予无关的脓毒性休克的5级AE，发生于疾病进展的环境中。c：一次弥漫性肺泡损伤的5级AE，研究者评估为与氟达拉滨、环磷酰胺和CAR+T细胞相关，在第23天发生于一名患者中，所述患者拒绝针对进行性呼吸衰竭进行机械通气，同时患嗜中性粒细胞减少症，使用生长因子及广谱抗生素和抗真菌药。d：实验室异常。
图30描绘在所治疗受试者的亚组之间的六(6)个月客观反应率(ORR)，置信区间为95％。a包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL受试者。
对于实现CR、PR的受试者、所有显示反应的受试者、无反应者和所有所治疗受试者，图31A和图31B描绘完整群组(图31A)和核心群组(图31B)的反应持续时间(DOR)，并且图31C和图31D描绘完整群组(图31C)和核心群组(图31D)的总存活期。NE，无法估计。
具体实施方式
I.使用遗传工程化细胞的细胞疗法的方法和用途
提供工程化细胞(例如，T细胞)和/或其组合物用于治疗患有疾病或病症的受试者的方法和用途，所述疾病或病症通常是或包括癌症或肿瘤，如白血病或淋巴瘤，最特别是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。在一些方面，如与某些替代性方法相比，例如，在所治疗受试者的特定组中，所述方法和用途提供或实现改进的反应和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或其他副作用的风险。在一些实施方案中，所述方法由于以下而是有利的：给予指定数量或相对数量的工程化细胞，给予限定比率的特定类型的细胞，治疗特定患者群体(如具有特定风险状况、分期和/或先前治疗史的那些)，和/或其组合。还提供包括评估可能与毒性的发生相关联的特定参数(例如，特定生物标记或分析物的表达)的方法，以及用于治疗(例如，干预疗法)以预防和/或改善毒性的方法。还提供涉及评估可能与结果相关联的特定参数(例如，特定生物标记或分析物的表达)的方法，所述结果如治疗结果，包括反应，如完全反应(CR)或部分反应(PR)，任选地持久反应，如持续至少3个月、6个月或更久的反应；或安全性结果，如在给予免疫疗法和/或细胞疗法后毒性(例如，神经毒性或CRS)的发生。还提供基于对所述参数(如生物标记或分析物的表达)的评估来评估反应的可能性和/或毒性风险的可能性的方法。还提供用于细胞疗法中的组合物。还提供例如用于本文所提供方法中的制品和试剂盒。在一些实施方案中，所述制品和试剂盒任选地含有根据本文所提供方法使用的说明书。
在一些实施方案中，所述方法和用途包括在过继细胞疗法中向所述受试者给予表达遗传工程化(重组)细胞表面受体的细胞，所述遗传工程化(重组)细胞表面受体通常是嵌合受体(如嵌合抗原受体(CAR))，识别由白血病或淋巴瘤和/或其衍生细胞类型表达、与白血病或淋巴瘤和/或其衍生细胞类型相关和/或对白血病或淋巴瘤和/或其衍生细胞类型具有特异性的抗原。所述细胞通常在配制用于给予的组合物中给予；所述方法通常涉及将一个或多个剂量的所述细胞给予所述受试者，所述一个或多个剂量可以包括特定数量或相对数量的细胞或所述工程化细胞，和/或所述组合物内两种或更多种亚型(如CD4与CD8T细胞)的限定比率或组合物。
在一些实施方案中，将所述细胞、群体和组合物例如通过过继细胞疗法(如过继T细胞疗法)给予要治疗的患有特定疾病或病症的受试者。在一些实施方案中，所述方法涉及用一定剂量的抗原受体表达细胞(例如，CAR表达细胞)治疗患有淋巴瘤或白血病(如非霍奇金淋巴瘤(NHL))的受试者。
在一些实施方案中，所提供的方法涉及治疗特定组或亚组的受试者，例如，被鉴定为患有高风险疾病(例如，高风险NHL)的受试者。在一些方面，所述方法治疗患有某种形式的侵袭性和/或预后较差B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)(如对于标准疗法具有复发性或难治性(R/R)具有较差预后的NHL)的受试者。在一些情况下，对于疾病和/或疗法所指示的患者群体，对可用疗法、对护理标准、或对参考疗法的总体反应率(ORR；在一些情况下也称为客观反应率)小于40％和/或完全反应(CR；在一些情况下也称为完全缓解)小于20％。在一些实施方案中，在化疗难治性DLBCL中，对参考或可用治疗或护理标准疗法的ORR为约26％，并且CR率为约8％(Crump等人.Outomes in refractory aggressive diffuse large B-celllymphoma(DLBCL):Results from the international SCHOLAR study.ASCO 2016[摘要7516])。在一些方面，所提供的方法、组合物、用途和制品实现改进的且优越的对可用疗法的反应。
在一些实施方案中，所述方法、用途和制品涉及或用于治疗受试者，所述方法、用途和制品涉及例如，基于特定疾病类型、诊断标准、先前治疗和/或对先前治疗的反应，选择或鉴定特定组或亚组的受试者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗在用一种或多种先前疗法治疗后在缓解后复发或变得对于所述一种或多种先前疗法难以治疗的受试者；或对一种或多种先前疗法(例如，一个或多个标准治疗线)具有复发性或难治性(R/R)的受试者。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗患有以下疾病的受试者：未另行规定(NOS；从头和从惰性转化)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或滤泡性淋巴瘤(如3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B))。在一些实施方案中，所述方法涉及治疗具有0-1或0-2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)的受试者。在一些实施方案中，所述方法治疗预后较差的群体或通常对疗法或特定参考疗法反应较差的DLBCL患者或其受试者的群体，所述DLBCL患者或其受试者如具有一个或多个(如两个或三个)染色体易位者(如所谓的“双重命中”或“三重命中”淋巴瘤；具有易位MYC/8q24基因座，通常与t(14；18)(q32；q21)bcl-2基因或/和BCL6/3q27染色体易位组合；参见例如，Xu等人(2013)Int J Clin Exp Pathol.6(4):788-794)，和/或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发(任选地在12个月内复发)者，和/或被认为化疗难治者。
在一些方面，所提供的实施方案是基于以下观察结果：与用于细胞疗法的某些可用方法相比，所提供的方法可以用于实现具有高持久性的高反应率，而无增加的毒性风险。在一些实施方案中，所提供的方法允许用于细胞疗法的过继转移细胞的延长的持久性，和/或所述受试者中的低毒性发生率。在一些实施方案中，所述方法可以用于选择可能或更可能响应所述疗法的受试者用于用细胞疗法治疗，和/或用于确定合适的剂量或给药方案，以实现更高反应率和/或更持久反应，同时使毒性风险最小化。此类方法可以告知合理策略以促进过继细胞疗法(如CAR-T细胞疗法)的安全且有效的临床应用。
在一些实施方案中，抗原受体(例如，CAR)特异性地结合至与疾病或病症相关(如与NHL相关)的靶抗原。在一些实施方案中，与疾病或病症相关的抗原选自CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞或含有所述细胞的组合物给予受试者、组织或细胞，如患有疾病、病症或障碍，具有疾病、病症或障碍的风险，或怀疑患有疾病、病症或障碍的受试者、组织或细胞。在一些实施方案中，受试者是成年受试者。在一些实施方案中，受试者年龄超过30岁、40岁、50岁、60岁或70岁或超过约30岁、40岁、50岁、60岁或70岁。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞给予被选择或被鉴定为具有NHL的某一预后或风险的受试者。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是可以是多变疾病。一些患有NHL的受试者可以在不进行治疗的情况下存活，而其他受试者可能需要立即干预。在一些情况下，可以将患有NHL的受试者分类为可以告知疾病预后和/或推荐的治疗策略的组。在一些情况下，这些组可能是“低风险”、“中度风险”、“高风险”和/或“极高风险”，并且可以根据多种因素将患者如此分类，所述因素包括但不限于遗传异常和/或形态或身体特征。在一些实施方案中，基于NHL的风险对根据所述方法和/或用所述制品或组合物治疗的受试者进行分类或鉴定。在一些实施方案中，所述受试者是具有高风险NHL的受试者。
在一些实施方案中，在给予表达重组受体的细胞之前，所述受试者先前已经用靶向所述疾病或病症(例如，NHL)的疗法或治疗剂来治疗。在一些实施方案中，所述受试者先前已经用造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT或自体HSCT)来治疗。在一些实施方案中，所述受试者在用标准疗法治疗后具有较差预后和/或一个或多个先前治疗线已失败。在一些实施方案中，所述受试者已经进行治疗或先前已经接受除了淋巴细胞清除疗法和/或所述剂量的表达抗原受体的细胞以外的至少或约至少或约1、2、3或4种用于治疗NHL的其他疗法。在一些实施方案中，所述受试者先前已经用化学疗法或放射疗法治疗。在一些方面，所述受试者对于其他疗法或治疗剂是难以治疗的或无反应的。在一些实施方案中，所述受试者例如在用另一种疗法或治疗性干预(包括化学疗法或放射)治疗后患有持续性或复发性疾病。
在一些实施方案中，所述受试者是有资格进行移植，如有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT)的受试者。在一些此类实施方案中，在将工程化细胞(例如，CAR-T细胞)或含有所述细胞的组合物给予如本文所提供的受试者之前，所述受试者虽然有资格进行移植，但先前没有接受移植。
在一些实施方案中，所述受试者是没有资格进行移植，如没有资格进行造血干细胞移植(HSCT)(例如，同种异体HSCT)的受试者。在一些实施方案中，根据本文所提供的实施方案向这种受试者给予工程化细胞(例如，CAR-T细胞)或含有所述细胞的组合物。
在一些实施方案中，所述方法包括将细胞给予被选择或被鉴定为具有高风险NHL的受试者。在一些实施方案中，所述受试者展现一种或多种细胞遗传异常，如与高风险NHL相关。在一些实施方案中，所述受试者是基于患有特征为或被确定为以下的疾病或病症来选择或鉴定：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，要使用本文所提供的方法治疗的受试者包括患有侵袭性NHL，特别是患有未另行规定(NOS；从头和从惰性转化)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者。在一些实施方案中，所述受试者具有较差体能状态。在一些方面，要治疗的群体包括具有等于0-2之间的任何值的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)的受试者。在任何实施方案的其他方面中，要治疗的受试者包括ECOG 0-1受试者或不包括ECOG 2受试者。在任何实施方案的一些方面中，要治疗的受试者已经经历过两种或更多种先前疗法的失败。在一些实施方案中，所述受试者未患从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL；里希特氏)转化的DLBCL。在一些实施方案中，患有CLL的受试者可以展现里希特氏综合征(Richter'ssyndrome，RS)，所述里希特氏综合征被定义为CLL转化为侵袭性淋巴瘤，最常见地弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)(参见例如，Parikh等人Blood 2014 123:1647-1657)。在一些实施方案中，所述受试者患有套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方案中，所述受试者具有与较差总存活期相关联的特征。在一些实施方案中，所述受试者从未实现完全反应(CR)，从未接受自体干细胞移植(ASCT)，对于一种或多种二线疗法是难以治疗的，患有原发性难治性疾病，和/或ECOG表现得分为2。
在一些实施方案中，要治疗的受试者包括在2个治疗线失败后患有从头或从惰性淋巴瘤转化(NOS)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)并具有0-2的ECOG得分的受试者组，并且所述受试者可以任选地先前已经用同种异体干细胞移植(SCT)来治疗。在一些实施方案中，可以将这个受试者组称为“完整群组”。在一些实施方案中，如果所述受试者符合所述标准，则选择所述受试者用于用过继细胞疗法治疗。在一些实施方案中，在所述组(“完整群组”)内，如果所述受试者具有较差体能状态(例如，ECOG 2)和/或患有从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL，则不选择所述受试者用于治疗或将其从治疗排除。因此，在一些实施方案中，如果所述受试者具有在2个治疗线失败后患有从头或从惰性淋巴瘤转化(NOS)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)并具有0或1的ECOG得分的受试者，并且所述受试者任选地先前已经用同种异体干细胞移植(SCT)治疗但未患从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL，则选择所述受试者用于治疗。在一些实施方案中，可以将这个受试者组称为“核心群组”。在一些实施方案中，要治疗的受试者是“核心群组”中的受试者。
在一些方面，所提供的实施方案是基于以下观察结果：某些受试者群体(例如已经给予某一剂量的细胞疗法的“核心群组”受试者)显示大于80％的总体反应率(ORR)，且完全反应(CR)率大于55％，且具有高持久性，例如，反应维持较长时间段，例如，大于3个月，且3个月ORR超过65％，且3个月CR率为约50％。特定地，所提供的观察结果指示，在具有两个或三个染色体易位(“双重命中”或“三重命中”淋巴瘤；具有易位MYC/8q24基因座，通常与t(14；18)(q32；q21)bcl-2基因或/和BCL6/3q27染色体易位组合；参见例如，Xu等人(2013)Int J Clin Exp Pathol.6(4):788-794)、原发性难治性淋巴瘤、化疗难治性DLBCL的受试者以及先前从未实现CR的受试者中，3个月ORR较高。
在一些方面，提供用于以特定剂量给予细胞疗法的限定组合物的组合物、方法和用途，所述特定剂量与高反应率和/或高反应持久性，以及低毒性水平和/或发生率相关。在一些实施方案中，所给予的组合物或剂量是平坦和/或固定剂量(如精确平坦剂量)的细胞和/或一种或多种具有特定表型的细胞，如特定数量的此类细胞或如与目标数量相比在特定的变化性或差异范围和/或程度内的数量。在一些实施方案中，所给予的组合物或剂量含有限定比率的CD4+和CD8+细胞(例如，1:1比率的CD4+:CD8+CAR+T细胞)和/或含有在这个比率的某个变化性程度内的比率，所述变化性程度如不超过±10％，如不超过±8％，如变化性或差异程度不超过±10％，如不超过±8％。在一些实施方案中，所述CD4+和CD8+细胞是单独配制和给予的。在一些实施方案中，所给予的细胞展现一致的活性和/或功能，例如，细胞因子产生、细胞凋亡和/或扩增。在一些实施方案中，在组合物中或在制剂之间，所提供的组合物在细胞之间，例如在细胞数、细胞功能和/或细胞活性方面，展现高度一致和限定的活性以及低变化性。在一些实施方案中，组合物制剂之间的活性和/或功能的一致性，例如低变化性，允许改进的功效和/或安全性。在一些实施方案中，与给予具有高异质性的细胞组合物相比，给予限定组合物导致低产物变化性和低毒性(例如，CRS或神经毒性)。在一些实施方案中，限定的一致性组合物还展现一致的细胞扩增。这种一致性可以促进剂量、治疗窗的确定、对剂量反应的评价以及对受试者中可能与安全性或毒性结果相关联的因素的鉴定。
在一些实施方案中，在接受特定剂量水平的单一输注的某些受试者群组中，可以实现大于60％的6个月后的持久反应率。在一些实施方案中，一些群组中的受试者可以实现大于80％的总体反应率(ORR，在一些情况下也称为客观反应率)、大于60％的完全反应(CR)率和/或在6个月时的高持久CR率。在一些实施方案中，接受限定剂量的受试者显示改进的安全性结果，例如，大于三分之二的受试者不展现任何CRS或NT。在一些方面，严重CRS或严重NT的比率较低。在一些实施方案中，使用特别限定剂量时观察到的较高暴露(例如，Cmax和AUC0-28)与增加的毒性(例如，CRS或NT)无关。在一些实施方案中，受试者的特定因素(例如，某些生物标记)可以用于预测毒性风险。在一些实施方案中，所提供的实施方案可以用于实现具有低毒性风险的高反应率。
在一些实施方案中，在给予细胞疗法之前或之后向不超过25％、不超过20％、不超过15％、不超过10％或不超过5％的使用所提供组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者给予药剂(例如，托珠单抗和/或地塞米松)以改善、治疗或预防毒性。在一些实施方案中，在接受工程化细胞(例如，CAR-T细胞)之前，不向受试者给予任何预防性治疗。
在一些实施方案中，所提供的实施方案提供优点，例如，允许在门诊基础上给予细胞疗法。在一些实施方案中，根据所提供的实施方案给予细胞疗法(例如T细胞剂量)可以在门诊基础上进行或者不需要使受试者住院，如需要过夜停留的住院。在一些实施方案中，这种门诊给予可以允许增加可及性并降低成本，同时维持高的持久反应率和低毒性。在一些方面，对于已经因先前治疗而以其他方式免疫受损(例如，淋巴细胞清除后)并且在住院期或在住院环境中具有更高暴露风险的患者，门诊治疗可以是有利的。在一些方面，门诊治疗还增加了可能无法到达住院、医院环境或移植中心的受试者的治疗选择，由此扩展治疗的可及性。在一些实施方案中，在门诊基础上使用所提供的组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者留在门诊中至少3天，或者某一百分比的如此治疗的受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％或至少95％的受试者)留在门诊中至少3天。在一些方面，所述受试者留在门诊中至少4天、5天、6天、7天、8天或更久。在一些实施方案中，与用其他组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者相比，使用所提供的组合物、制品、试剂盒、方法和用途治疗的受试者显示住院期持续时间的缩短，例如，缩短至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％。
在一些实施方案中，所述方法、细胞和组合物可以向跨越患者特征和/或肿瘤负荷的范围的受试者提供高持久反应率。在一些实施方案中，所述方法、细胞和组合物可以向预后较差的高风险患者提供高持久反应率和降低的不良影响或毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法和用途提供或实现较高反应率和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或可能与细胞疗法相关的其他副作用(如神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS))的风险。在一些方面，所提供的观察结果指示较低的严重NT(sNT)或严重CRS(sCRS)的比率，以及较高的不具有任何毒性(例如，NT或CRS)的患者的比率。
在一些实施方案中，至少35％、至少40％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％或至少75％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者实现完全反应(CR)。在一些实施方案中，至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者截至一个月、截至两个月或截至三个月时实现CR或OR。
在一些实施方案中，截至开始给予细胞疗法后三个月、四个月、五个月、六个月或更久时，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者保持反应，如保持CR或OR。在一些实施方案中，这样的反应(如CR或OR)可持续至少三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或九个月，如在至少或约至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法治疗的受试者中或在实现截至一个月或截至三个月的CR的此类受试者中。在一些实施方案中，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者或实现截至一个月或截至三个月的CR的此类受试者存活或无进展存活大于或大于约三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月或九个月。
在一些实施方案中，通过根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物进行的治疗在此类受试者中观察到的所得反应在大多数所治疗受试者中与任何毒性的低风险或严重毒性的低风险相关或导致任何毒性的低风险或严重毒性的低风险。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现任何等级的CRS或任何等级的神经毒性(NT)。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现严重CRS或3级或更高级的CRS。在一些实施方案中，大于或大于约50％、60％、70％、80％或更多的根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者,不展现严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，如4级或5级神经毒性。
在一些实施方案中，至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现早发性CRS或神经毒性和/或不展现开始给予后早于1天、2天、3天或4天的CRS发作。在一些实施方案中，至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者不展现开始给予后早于3天、4天、5天、6天或7天的神经毒性发作。在一些方面，在根据所述方法和/或用所提供制品或组合物治疗的受试者之间神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或中值消退时间时或之后。在一些情况下，在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
在一些实施方案中，在给予以下后观察到此类结果：从或从约5x107至1.5x108(如5x107至1x108)个总重组受体表达T细胞，如一定剂量的T细胞(包括CD4+和CD8+T细胞)，其是按以下给予的：如本文所述的限定比率(例如，为或为约1:1比率)，和/或精确或平坦或固定数量的CAR+T细胞，或精确或平坦或固定数量的特定类型的CAR+T细胞(如CD4+CAR+T细胞和/或CD8+CAR+T细胞)，和/或一定数量的任何此类细胞，所述数量如与这个精确或平坦或固定数量相比在指定差异程度内，如不超过+或-(加或减，在一些情况下指示为±)5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％或15％。在一些实施方案中，细胞的这个平坦或固定数量为或为约2.5x107、5x107、10x107、15x107或20x107个例如总CAR+T细胞或CD8+和/或CD4+CAR+T细胞。在一些实施方案中，所述剂量中的细胞数包括5x107个CD4+CAR+T细胞(任选地2.5x107个CD4+CAR+T细胞和2.5x107个CD8+CAR+T细胞)，由其组成或本质上由其组成；在一些实施方案中，所述细胞数包括10x107个CAR+T细胞(任选地5x107个CD4+CAR+T细胞和5x107个CD8+CAR+T细胞)，由其组成或本质上由其组成。在一些方面，所给予的细胞数在前述实施方案中此类数量的某一差异程度内，例如如与细胞的此类一个或多个数量相比，在加或减(±)5％、6％、7％、8％、9％或10％内，如在加或减8％内。在一些方面，所述剂量在一个范围内，在所述范围中在此类细胞(例如，总CAR+T细胞或CD8+和/或CD4+CAR+T细胞)的数量与一种或多种结果之间观察到相关(任选地线性关系)，所述结果指示治疗反应或其持续时间(例如，实现缓解、完全缓解和/或缓解的特定持续时间的可能性)和/或前述任何项的持续时间。在一些方面，发现给予较高细胞剂量可以在受试者中导致更大反应，而没有或基本上没有影响(impact)或影响(affect)毒性(例如，CRS或神经毒性)的发生率或风险、或毒性(例如，严重CRS或严重神经毒性)的发生率或风险的程度。
在一些方面，所提供方法可以实现高反应率或特定反应率(如群体中的反应率，如在给予后某一时间(如三个月或六个月)所评估)，例如，40％或更大、45％或更大、50％或更大、55％或更大、60％或更大、65％或更大、70％或更大、75％或80％或81％、82％、83％、84％或85％或更大的ORR(如6个月或3个月ORR)，以及30％或更大、35％或更大、40％或更大、45％或更大、50％或更大、55％或更大、60％或更大、65％或更大、70％或更大、71％、72％、73％或更大或约75％或更大的CR率(如6个月或3个月CR率)，其也可持续如特定时间段或至少特定时间段，例如，在开始治疗后持续超过1、3或6个月或更久或9个月或更久。在一些实施方案中，在这种疗法的仅单一给予或剂量后接受此类反应率和持久性。在一些实施方案中，通过所提供方法和/或用所提供制品或组合物对此类受试者的治疗还使所述受试者实现高反应率，但即使在较高细胞剂量下也不展现发生毒性(如神经毒性或CRS)的较高发生率。在一些实施方案中，约或大于50％、55％或60％的实现此类反应的受试者不发生任何等级的毒性，如任何等级的CRS和/或神经毒性。
因此，在一些实施方案中，所提供的方法、制品和/或组合物可以提供优于用于治疗(如用于过继细胞疗法)的其他可用方法或解决方案或方式的优点。特定地，所提供的实施方案尤其是通过以高比率实现持久反应和降低的毒性或副作用发生率而向患有高风险NHL的受试者提供优点的那些。
A.治疗方法
本文提供治疗方法，其涉及给予工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物。还提供工程化细胞(例如，T细胞)和/或其组合物的方法和用途，包括用于治疗患有疾病或病症(如白血病或淋巴瘤，例如，非霍奇金淋巴瘤(NHL))的受试者的方法，所述方法涉及给予所述工程化细胞和/或其组合物。在一些实施方案中，如与某些替代性方法相比，所提供的方法和用途可以例如在所治疗受试者的特定组中实现改进的反应和/或更持久的反应或功效和/或降低的毒性或其他副作用的风险。在一些方面，还提供将工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物给予受试者，如患有疾病或障碍的受试者。在一些方面，还提供工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物用于治疗疾病或障碍的用途。在一些方面，还提供工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物用于制造用于治疗疾病或障碍的药物的用途。在一些方面，还提供将用于治疗疾病或障碍或用于给予的工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物给予患有疾病或障碍的受试者的方法。在一些方面，所述工程化细胞(如工程化T细胞)或含有工程化细胞的组合物的所述用途是根据本文所述的任何方法来进行。
用于给予用于过继细胞疗法的细胞的通用方法是已知的，并且可以与所提供的方法和组合物结合使用。例如，过继T细胞治疗方法描述于例如以下文献中：Gruenberg等人的美国专利申请公开号2003/0170238；Rosenberg的美国专利号4,690,915；Rosenberg(2011)Nat Rev Clin Oncol.8(10):577-85。参见例如Themeli等人(2013)Nat Biotechnol.31(10):928-933；Tsukahara等人(2013)Biochem Biophys Res Commun 438(1):84-9；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338。
所治疗的疾病或病症可以是任何疾病或病症，其中抗原的表达与疾病、病症或障碍的病因相关和/或参与所述病因，例如引起、加重或以其他方式参与这种疾病、病症或障碍。示例性疾病和病症可以包括与恶性肿瘤或细胞转化(例如癌症)、自身免疫或炎性疾病或例如由细菌、病毒或其他病原体引起的感染性疾病相关的疾病或病症。上文描述了示例性抗原，其包括与可以治疗的各种疾病和病症相关的抗原。在特定实施方案中，嵌合抗原受体或转基因TCR特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原。
所述疾病、病症和障碍尤其是肿瘤，包括实体瘤、血液学恶性肿瘤和黑色素瘤，并且包括局部和转移性肿瘤；感染性疾病，如病毒或其他病原体的感染，例如HIV、HCV、HBV、CMV、HPV和寄生虫病；以及自身免疫和炎性疾病。在一些实施方案中，所述疾病、障碍或病症是肿瘤、癌症、恶性肿瘤、肿疡或其他增殖性疾病或障碍。此类疾病包括但不限于白血病、淋巴瘤，例如，急性髓样(或髓性)白血病(AML)、慢性髓样(或髓性)白血病(CML)、急性淋巴细胞(或成淋巴细胞)白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞白血病(HCL)、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、边缘区淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤(HL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、滤泡性淋巴瘤、难治性滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和多发性骨髓瘤(MM)。在一些实施方案中，疾病或病症是选自以下的B细胞恶性肿瘤：急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。在一些实施方案中，所述疾病或病症是NHL并且所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
在一些实施方案中，NHL可以基于Lugano分类进行分期(参见例如，Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些情况下，各阶段通过罗马数字I至IV(1-4)来描述，并且影响淋巴系统外器官(结节外器官)的局限期(I或II)淋巴瘤指示为E。I期表示涉及一个结节或一组相邻结节，或不涉及结节的单一结节外病灶(IE)。2期表示涉及膈同侧的两个或更多个结节组，或者依据结节程度具有有限的连续结节外受累的I期或II期(IIE)。III期表示涉及膈两侧的结节或膈上方的结节且脾脏受累。IV期表示涉及另外的非连续淋巴外受累。另外，“巨大肿块(bulky disease)”可以用于描述胸腔中的大型肿瘤，特别是对于II期肿瘤。疾病程度是通过用于亲嗜性(avid)淋巴瘤的正电子发射断层成像(PET)-计算机断层成像(CT)以及用于非亲嗜性组织学的CT来确定。
在一些实施方案中，东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态指示物可以用于评估或选择用于治疗的受试者，例如，因先前疗法而具有较差体能的受试者(参见例如，Oken等人(1982)Am J Clin Oncol.5:649-655)。ECOG体能状态量表描述患者在其自理能力、日常活动和体能(例如，步行、工作等)方面的机能水平。在一些实施方案中，ECOG体能状态为0指示，受试者可以进行正常活动。在一些方面，ECOG体能状态为1的受试者展现体力活动中的一些限制，但是所述受试者能完全走动。在一些方面，ECOG体能状态为2的患者能大于50％走动。在一些情况下，ECOG体能状态为2的受试者也可能能够自理；参见例如，等人,(1993)Br J Cancer 67(4)773-775。反映ECOG体能状态的标准描述于下表1中：
在一些实施方案中，所述受试者患有或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤或双重/三重命中分子亚型的淋巴瘤。在一些实施方案中，淋巴瘤是双重命中淋巴瘤，其特征为存在MYC(髓细胞瘤病致癌基因)、BCL2(B细胞淋巴瘤2)和/或BCL6(B细胞淋巴瘤6)基因重排(例如，易位)。在一些实施方案中，基因重排与另一基因重排组合地影响MYC/8q24基因座。例如，另一基因重排包括涉及BCL2的t(14；18)(q32；q21)。在一些实施方案中，所述基因重排与BCL6/3q27组合地影响MYC/8q24基因座。在一些实施方案中，淋巴瘤是三重命中淋巴瘤，其特征为存在MYC、BCL2和BCL6基因重排；参见例如，Aukema等人,(2011)Blood 117:2319-2331。在此类实施方案的一些方面中，所述受试者是ECOG 0-1或未患或未被怀疑患有或未被表征为患有从MZL或CLL转化的DLBCL。在多个方面中，所述疗法被指示用于此类受试者和/或所述说明书指示给予这个群体内的受试者。在一些实施方案中，基于2016WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，可以将双重/三重命中淋巴瘤视为高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中)。
在一些实施方案中，所述疾病或病症是感染性疾病或病症，例如但不限于病毒、逆转录病毒、细菌和原生动物感染、免疫缺陷、巨细胞病毒(CMV)、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus，EBV)、腺病毒、BK多瘤病毒。在一些实施方案中，所述疾病或病症是自身免疫性或炎性疾病或病症，如关节炎(例如类风湿性关节炎(RA))、I型糖尿病、系统性红斑狼疮(SLE)、炎性肠病、银屑病、硬皮病、自身免疫性甲状腺疾病、格雷夫斯病、克罗恩病、多发性硬化症、哮喘和/或与移植相关的疾病或病症。
在一些实施方案中，与所述疾病或障碍相关的抗原选自αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、III型表皮生长因子受体突变(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同系物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如多种已知B细胞标记中的任一种。在一些实施方案中，所述抗原是或包括CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，所述抗原是或包括病原体特异性或病原体表达的抗原。在一些实施方案中，所述抗原是病毒抗原(如来自HIV、HCV、HBV等的病毒抗原)、细菌抗原和/或寄生虫抗原。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)是通过自体转移来进行，其中所述细胞是从要接受所述细胞疗法的受试者或者从衍生自这个受试者的样品分离和/或以其他方式制备。因此，在一些方面，所述细胞衍生自需要治疗的受试者(例如，患者)，并且在分离和加工后将所述细胞给予同一受试者。
在一些实施方案中，所述细胞疗法(例如，过继T细胞疗法)是通过同种异体转移来进行，其中所述细胞是从除了要接受或最终接受所述细胞疗法的受试者以外的受试者(例如，第一受试者)分离和/或以其他方式制备。在此类实施方案中，随后将所述细胞给予相同物种的不同受试者，例如，第二受试者。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相同的。在一些实施方案中，所述第一和第二受试者在遗传上是相似的。在一些实施方案中，所述第二受试者表达与所述第一受试者相同的HLA类别或超型。
所述细胞可以通过任何合适的方式给予，例如通过推注输注，通过注射(例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方案中，给定剂量是通过所述细胞的单次推注给予来给予。在一些实施方案中，给定剂量是例如在不超过3天的时间段内通过所述细胞的多次推注给予来给予，或通过所述细胞的连续输注给予来给予。在一些实施方案中，所述细胞剂量或任何其他疗法(例如，淋巴细胞清除疗法、干预疗法和/或组合疗法)的给予是通过门诊递送进行的。
为了预防或治疗疾病，适当的剂量可取决于待治疗的疾病类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、是针对预防目的还是治疗目的给予细胞、先前的治疗、受试者的临床病史和对细胞的应答以及主治医师的决断。在一些实施方案中，将组合物和细胞以合适的方式一次或经一系列治疗给予受试者。
在一些实施方案中，所述细胞是作为组合治疗的一部分来给予，如与另一种或另外的治疗性干预(如抗体或工程化细胞或受体或药剂(如细胞毒性剂或治疗剂))同时或以任何顺序依序给予。所述细胞在一些实施方案中是与一种或多种另外的治疗剂或结合另一种治疗性干预同时或以任何顺序依序共给予。在一些实施方案中，所述另外的治疗剂是本文所述的任何干预或药剂，如可以改善本文(例如在章节II中)所述的毒性症状的任何所述干预或药剂。在一些情况下，所述细胞是与另一种疗法共给予，其时间足够接近，使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的作用，或反之亦然。在一些实施方案中，所述细胞是在所述一种或多种另外的治疗剂之前给予。在一些实施方案中，所述细胞是在所述一种或多种另外的治疗剂之后给予。在一些实施方案中，一种或多种另外的药剂包括细胞因子(如IL-2)以例如增强持久性。在一些实施方案中，所述方法包括给予化学治疗剂。
在一些实施方案中，所述方法包括在所述给予之前给予化学治疗剂(例如，调理性化学治疗剂)例如以减小肿瘤负荷。
用免疫清除(例如，淋巴细胞清除)疗法预调理受试者在一些方面可以改进过继细胞疗法(ACT)的效果。
因此，在一些实施方案中，所述方法包括在开始细胞疗法之前将预调理剂给予受试者，所述预调理剂如淋巴细胞清除剂或化学治疗剂，如环磷酰胺、氟达拉滨或其组合。例如，可以在开始细胞疗法之前至少2天(如至少3、4、5、6或7天)，向所述受试者给予预调理剂。在一些实施方案中，在开始细胞疗法之前不超过7天(如不超过6、5、4、3或2天)，向所述受试者给予预调理剂。
在一些实施方案中，用环磷酰胺以介于或介于约20mg/kg与100mg/kg之间，如介于或介于约40mg/kg与80mg/kg之间的剂量对所述受试者进行预调理。在一些方面，用或用约60mg/kg的环磷酰胺对所述受试者进行预调理。在一些实施方案中，环磷酰胺可以按单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天一次给予环磷酰胺，持续一天或两天。在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含环磷酰胺的情况下，以介于或介于约100mg/m2与500mg/m2之间，如介于或介于约200mg/m2与400mg/m2之间或250mg/m2与350mg/m2之间(包括端值)的剂量向所述受试者给予环磷酰胺。在一些情况下，向所述受试者给予约300mg/m2的环磷酰胺。在一些实施方案中，环磷酰胺可以按单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天给予环磷酰胺，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，每天向所述受试者给予约300mg/m2的环磷酰胺，持续3天。
在一些实施方案中，在淋巴细胞清除剂包含氟达拉滨的情况下，以介于或介于约1mg/m2与100mg/m2之间，如介于或介于约10mg/m2与75mg/m2之间、15mg/m2与50mg/m2之间、20mg/m2与40mg/m2之间或24mg/m2与35mg/m2之间(包括端值)的剂量向所述受试者给予氟达拉滨。在一些情况下，向所述受试者给予约30mg/m2的氟达拉滨。在一些实施方案中，氟达拉滨可以按单一剂量给予或者可以按多个剂量给予，如每天给药、每隔一天给药或每三天给药。在一些实施方案中，每天给予氟达拉滨，如持续1-5天，例如持续3至5天。在一些情况下，在开始细胞疗法之前，每天向所述受试者给予约30mg/m2的氟达拉滨，持续3天。
在一些实施方案中，淋巴细胞清除剂包含药剂的组合，如环磷酰胺和氟达拉滨的组合。因此，药剂的组合可包括任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的环磷酰胺以及任何剂量或给药时间表(如上述那些剂量或给药时间表)下的氟达拉滨。例如，在一些方面，在第一剂量或后续剂量之前，向所述受试者给予60mg/kg(约2g/m2)的环磷酰胺和3至5个剂量的25mg/m2氟达拉滨。
在给予所述细胞后，在一些实施方案中，例如通过多种已知方法中的任一种测量所述工程化细胞群的生物活性。要评估的参数包括工程化或天然T细胞或其他免疫细胞与抗原的特异性结合，其是在体内例如通过成像评估，或离体例如通过ELISA或流式细胞术评估。在某些实施方案中，所述工程化细胞破坏靶细胞的能力可以使用任何合适的已知方法来测量，如例如以下文献中描述的细胞毒性测定：Kochenderfer等人,J.Immunotherapy,32(7):689-702(2009)；和Herman等人J.Immunological Methods,285(1):25-40(2004)。在某些实施方案中，所述细胞的生物活性是通过测定一种或多种细胞因子(如CD107a、IFNγ、IL-2和TNF)的表达和/或分泌来测量。在一些方面,所述生物活性是通过评估临床结果(如肿瘤负荷或负担的减小)来测量。
在某些实施方案中，以任何数量的方式对所述工程化细胞进行进一步修饰，使得其治疗或预防功效增加。例如，可以将所述群体表达的工程化CAR或TCR直接或通过接头间接缀合至靶向部分。将化合物(例如，CAR或TCR)与靶向部分缀合的实践是已知的。参见例如，Wadwa等人,J.Drug Targeting 3:1 1 1(1995)；和美国专利5,087,616。在一些实施方案中，所述细胞是作为组合治疗的一部分来给予，如与另一种治疗性干预(如抗体或工程化细胞或受体或药剂，如细胞毒性剂或治疗剂)同时或以任何顺序依序给予。所述细胞在一些实施方案中是与一种或多种另外的治疗剂或结合另一种治疗性干预同时或以任何顺序依序共给予。在一些情况下，所述细胞是与另一种疗法共给予，其时间足够接近，使得细胞群增强一种或多种另外的治疗剂的作用，或反之亦然。在一些实施方案中，所述细胞是在所述一种或多种另外的治疗剂之前给予。在一些实施方案中，所述细胞是在所述一种或多种另外的治疗剂之后给予。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的药剂包括细胞因子(如IL-2)例如以增强持久性。
B.给药
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物将一定剂量的细胞给予受试者。在一些实施方案中，所述剂量的大小或时间安排是根据所述受试者的特定疾病或病症来确定。在一些情况下，鉴于所提供的描述，针对特定疾病的所述剂量的大小或时间安排可以凭经验来确定。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量包含介于2x105或约2x105个细胞/kg与2x106或约2x106个细胞/kg之间，如介于4x105或约4x105个细胞/kg与1x106或约1x106个细胞/kg之间或介于6x105或约6x105个细胞/kg与8x105或约8x105个细胞/kg之间。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包含不超过2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如不超过或不超过约3x105个细胞/kg、不超过或不超过约4x105个细胞/kg、不超过或不超过约5x105个细胞/kg、不超过或不超过约6x105个细胞/kg、不超过或不超过约7x105个细胞/kg、不超过或不超过约8x105个细胞/kg、不超过或不超过约9x105个细胞/kg、不超过或不超过约1x106个细胞/kg、或不超过或不超过约2x106个细胞/kg。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包含至少或至少约或为或为约2x105个细胞(例如，抗原表达细胞，如CAR表达细胞)/公斤受试者体重(细胞/kg)，如至少或至少约或为或为约3x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约4x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约5x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约6x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约7x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约8x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约9x105个细胞/kg、至少或至少约或为或为约1x106个细胞/kg、或至少或至少约或为或为约2x106个细胞/kg。
在某些实施方案中，将所述细胞或单独的细胞亚型群体以约100万至约1000亿个细胞和/或每公斤体重的该细胞量的范围给予所述受试者，如例如，100万至约500亿个细胞(例如，约500万个细胞、约2500万个细胞、约5亿个细胞、约10亿个细胞、约50亿个细胞、约200亿个细胞、约300亿个细胞、约400亿个细胞，或由任两个前述值定义的范围)，如约1000万至约1000亿个细胞(例如，约2000万个细胞、约3000万个细胞、约4000万个细胞、约6000万个细胞、约7000万个细胞、约8000万个细胞、约9000万个细胞、约100亿个细胞、约250亿个细胞、约500亿个细胞、约750亿个细胞、约900亿个细胞，或由任两个前述值定义的范围)，并且在一些情况下约1亿个细胞至约500亿个细胞(例如，约1.2亿个细胞、约2.5亿个细胞、约3.5亿个细胞、约4.5亿个细胞、约6.5亿个细胞、约8亿个细胞、约9亿个细胞、约30亿个细胞、约300亿个细胞、约450亿个细胞)，或这些范围和/或每公斤体重细胞量之间的任何值。剂量可以根据所述疾病或障碍和/或患者和/或其他治疗特有的属性而变化。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量是细胞的平坦剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的所述剂量与受试者的体表面积或体重无关或不基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，遗传工程化细胞的所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x105至1x108个总CAR表达T细胞、1x105至5x107个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x105至1x107个总CAR表达T细胞、1x105至5x106个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x106个总CAR表达T细胞、1x105至1x106个总CAR表达T细胞、1x106至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x106至5x107个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x106至5x106个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x106个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x106个总CAR表达T细胞、5x106至5x108个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、5x106至5x107个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、5x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x107至5x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至5x107个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x107个总CAR表达T细胞、5x107至5x108个总CAR表达T细胞、5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x108至5x108个总CAR表达T细胞、1x108至2.5x108个总CAR表达T细胞、或2.5x108至5x108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，遗传工程化细胞的所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予包含以下数量的细胞的剂量：从或从约1x105至5x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞疗法包括使用一定剂量的细胞，所述剂量包含以下数量的细胞：至少或至少约1x105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x106、至少或至少约1x107、至少或至少约1x108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如，CAR+)细胞。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予包含以下数量的细胞的剂量：从或从约1x105至5x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、从或从约5x105至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、或从或从约1x106至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予包含以下数量的细胞的剂量：从或从约1x105至5x108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、从或从约5x105至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、或从或从约1x106至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，T细胞的所述剂量包含：5x107或约5x107个重组受体表达T细胞或者2.5x107或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞。在一些实施方案中，T细胞的所述剂量包含：1x108或约1x108个重组受体表达T细胞或者5x107或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞。在一些实施方案中，T细胞的所述剂量包含：1.5x108或约1.5x108个重组受体表达T细胞或者0.75x108或约0.75x108个重组受体表达CD8+T细胞。
在一些实施方案中，所述剂量的所述T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞或CD4+和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量的CD8+T细胞(包括在包括CD4+和CD8+T细胞的剂量中)包括介于约1x106个与5x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达CD8+细胞，例如，在约5x106至1x108的范围内的此类细胞，此类细胞1x107、2.5x107、5x107、7.5x107、1x108或5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者给予多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包括给予从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+T细胞、1x107至2.5x107个总重组受体表达CD8+T细胞、从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包括给予或约1x107、2.5x107、5x107、7.5x107、1x108或5x108个总重组受体表达CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括少于约2x1081x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在约1x106至2x108或1x106至1x108的范围内的此类细胞，如2x106、5x106、1x107、5x107、1x108或1.5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，在所述受试者是人的情况下，所述剂量包括介于约1x106与3x108之间的总重组受体(例如，CAR)表达细胞，例如，在约1x107至2x108的范围内的此类细胞，如1x107、5x107、1x108或1.5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者给予多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包括给予从或从约1x105至5x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x105至1.5x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x105至1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，所述剂量的所述T细胞包括CD4+T细胞、CD8+T细胞或CD4+和CD8+T细胞。
在一些实施方案中，例如，在所述受试者是人的情况下，所述剂量的所述CD8+T细胞(包括在包括CD4+和CD8+T细胞的剂量中)包括介于约1x106个与1x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达CD8+细胞，例如，在约5x106至1x108的范围内的此类细胞，此类细胞1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者给予多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包括给予从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+T细胞、1x107至2.5x107个总重组受体表达CD8+T细胞、从或从约1x107至0.75x108个总重组受体表达CD8+T细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，细胞的所述剂量包括给予或约1x107、2.5x107、5x107、7.5x107或1x108个总重组受体表达CD8+T细胞。
在一些实施方案中，将细胞(例如，重组受体表达T细胞)的所述剂量作为单一剂量给予所述受试者，或者在两周、1个月、3个月、6个月、1年或更长时间段内仅给予一次。
在过继细胞疗法的情况下，给予给定“剂量”涵盖给予作为单一组合物和/或单次不间断给予(例如，作为单次注射或连续输注)的给定量或数量的细胞，并且还涵盖在指定时间段中(如在不超过3天中)给予在多种单独组合物或输注中提供的作为分割剂量或作为多种组合物的给定量或数量的细胞。因此，在一些情况下，所述剂量是在单一时间点给予或起始的指定数量的细胞的单次或连续给予。然而，在一些情况下，所述剂量是在不超过三天的时间段中以多次注射或输注(如每天一次，持续三天或两天)来给予，或者是在一天的时间段中通过多次输注来给予。
因此，在一些方面，所述剂量的细胞是以单一药物组合物来给予。在一些实施方案中，所述剂量的细胞是以共同含有所述剂量的细胞的多种组合物来给予。
在一些实施方案中，术语“分割剂量”是指被分割使得在多于一天中给予的剂量。这种类型的给药涵盖在本方法中并且被认为是单一剂量。
因此，细胞的所述剂量可以作为分割剂量(例如，随时间给予的分割剂量)来给予。例如，在一些实施方案中，可以在2天中或在3天中将所述剂量给予受试者。用于分割给药的示例性方法包括在第一天给予25％的剂量并在第二天给予剩余75％的剂量。在其他实施方案中，可以在第一天给予33％的剂量，并且在第二天给予剩余的67％。在一些方面，在第一天给予10％的剂量，在第二天给予30％的剂量，并且在第三天给予60％的剂量。在一些实施方案中，分割剂量不超过3天。
在一些实施方案中，所述剂量的细胞可以通过给予各自含有一些所述剂量的细胞的多种组合物或溶液(如第一和第二，任选地更多)来给予。在一些方面，任选地在某一时间段内，分开地或独立地给予各自含有不同群体和/或亚型的细胞的多个组合物。例如，细胞的群体或亚型可以分别包括CD8+和CD4+T细胞，和/或分别可富含CD8+和富含CD4+的群体，例如，CD4+和/或CD8+T细胞，其各自单独地包括遗传工程化以表达重组受体的细胞。在一些实施方案中，所述剂量的给予包括给予第一组合物，所述第一组合物包含一定剂量的CD8+T细胞或一定剂量的CD4+T细胞，以及给予第二组合物，所述第二组合物包含所述剂量的CD4+T细胞和CD8+T细胞中的另一种。
在一些实施方案中，所述组合物或剂量的给予(例如多个细胞组合物的给予)涉及分开给予所述细胞组合物。在一些方面，所述分开给予是同时或以任何顺序依序进行。在一些实施方案中，所述剂量包含第一组合物和第二组合物，并且所述第一组合物与第二组合物的给予相隔0至12小时，相隔0至6小时或相隔0至2小时。在一些实施方案中，开始给予所述第一组合物与开始给予所述第二组合物是相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行的。在一些实施方案中，开始和/或完成所述第一组合物的给予与完成和/或开始所述第二组合物的给予是相隔不超过2小时、不超过1小时或不超过30分钟，相隔不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟进行的。
在一些组合物中，所述第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD4+T细胞。在一些组合物中，所述第一组合物(例如，所述剂量的第一组合物)包含CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量或组合物包括表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞的限定或目标比率和/或CD4+细胞与CD8+细胞的限定或目标比率，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间，如约1:1。在一些方面，具有不同细胞群的目标或所需比率(如CD4+:CD8+比率或CAR+CD4+:CAR+CD8+比率，例如，1:1)的组合物或剂量的给予涉及给予含有所述群体中的一种的细胞组合物，然后给予包含所述群体中的另一种的单独细胞组合物，其中所述给予是以或大致以所述目标或所需比率来进行。在一些方面，以限定比率给予细胞的剂量或组合物导致改进的T细胞疗法的扩增、持久性和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，所述受试者接受所述细胞的多个剂量，例如，两个或更多个剂量或多个连续剂量。在一些实施方案中，将两个剂量给予受试者。在一些实施方案中，所述受试者接受连续剂量，例如，第二剂量是在第一剂量后约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天给予。在一些实施方案中，在第一剂量后给予多个连续剂量，使得在给予所述连续剂量后给予另外的一个或多个剂量。在一些方面，在所述另外的剂量中给予所述受试者的细胞数与所述第一剂量和/或连续剂量相同或相似。在一些实施方案中，所述另外的一个或多个剂量大于先前剂量。
在一些方面，所述第一和/或连续剂量的大小是基于一个或多个标准来确定，所述标准例如所述受试者对先前治疗(例如，化学疗法)的反应、所述受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或所述受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些方面，所述第一剂量的给予与所述连续剂量的给予之间的时间为约9至约35天、约14至约28天或15至27天。在一些实施方案中，所述连续剂量的给予是在给予所述第一剂量后大于约14天且小于约28天的时间点进行的。在一些方面，所述第一剂量与连续剂量之间的时间为约21天。在一些实施方案中，所述另外的一个或多个剂量(例如连续剂量)是在给予所述连续剂量后给予的。在一些方面，所述另外的一个或多个连续剂量是在给予先前剂量后至少约14天且小于约28天给予。在一些实施方案中，所述另外的剂量是在先前剂量后小于约14天给予，例如在先前剂量后4、5、6、7、8、9、10、11、12或13天给予。在一些实施方案中，在先前剂量后小于约14天不给予剂量，和/或在先前剂量后超过约28天不给予剂量。
在一些实施方案中，细胞(例如，重组受体表达细胞)的所述剂量包含两个剂量(例如，双剂量)，包含T细胞的第一剂量和T细胞的连续剂量，其中所述第一剂量和所述第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的分割剂量。
在一些实施方案中，细胞的所述剂量通常足够大以有效减轻疾病负荷。
在一些实施方案中，所述细胞是以所需剂量来给予，所述所需剂量在一些方面包括细胞或一种或多种细胞类型的所需剂量或数量和/或细胞类型的所需比率。因此，细胞的所述剂量在一些实施方案中是基于总细胞数(或每kg体重的数量)以及单独群体或亚型的所需比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞剂量基于所需的单独群体中的细胞或单独细胞类型的总数(或每kg体重的细胞数)。在一些实施方案中，所述剂量是基于此类特征的组合，如所需的总细胞数、所需比率和所需的单独群体中的总细胞数。
在一些实施方案中，细胞(如CD8+和CD4+T细胞)的所述群体或亚型是以总细胞的所需剂量(如T细胞的所需剂量)来给予，或在所述所需剂量的容忍差异内给予。在一些方面，所需剂量是所需细胞数或每单位被给予所述细胞的受试者体重的所需细胞数，例如细胞/kg。在一些方面，所需剂量等于或高于最小细胞数或每单位体重的最小细胞数。在一些方面，在以所需剂量给予的总细胞中，单独群体或亚型是以等于或接近所需输出比率(如CD4+与CD8+的比率)存在，例如，在这个比率的某一容忍差异或误差内。
在一些实施方案中，所述细胞是以细胞的一种或多种单独群体或亚型的所需剂量(如CD4+细胞的所需剂量和/或CD8+细胞的所需剂量)来给予，或在所述所需剂量的容忍差异内给予。在一些方面，所述所需剂量是亚型或群体的所需细胞数或每单位被给予所述细胞的受试者体重的此类细胞的所需数量，例如细胞/kg。在一些方面，所述所需剂量等于或高于群体或亚型的最小细胞数或每单位体重的所述群体或亚型的最小细胞数。
因此，在一些实施方案中，所述剂量是基于总细胞的所需固定剂量和所需比率，和/或是基于一种或多种(例如，每种)单独亚型或亚群的所需固定剂量。因此，在一些实施方案中，所述剂量是基于T细胞的所需固定或最小剂量和CD4+与CD8+细胞的所需比率，和/或是基于CD4+和/或CD8+细胞的所需固定或最小剂量。
在一些实施方案中，所述细胞是以多种细胞群或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的所需输出比率来给予，或在所述所需输出比率的容忍范围内给予。在一些方面，所述所需比率可以是特定比率或者可以是比率的范围。例如，在一些实施方案中，所需比率(例如，CD4+与CD8+细胞的比率)在1:5或约1:5与5:1或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或在1:3或约1:3与3:1或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如在2:1或约2:1与1:5或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1，如为或为约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5)。在一些方面，所述容忍差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％(包括这些范围之间的任何值)内。
在特定实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指重组受体(例如CAR)表达细胞的数量。在其他实施方案中，细胞的数量和/或浓度是指所给予的所有细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)的数量或浓度。
在一些方面，所述剂量的大小是基于一个或多个标准来确定，所述标准如受试者对先前治疗(例如化学疗法)的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如，CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
在一些实施方案中，所述方法还包括给予一个或多个另外的剂量的表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞和/或淋巴细胞清除疗法，和/或重复所述方法的一个或多个步骤。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量与初始剂量相同。在一些实施方案中，所述一个或多个另外的剂量与初始剂量不同，例如，更高，如比初始剂量高2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍，或者更低，如例如更高，如比初始剂量低2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍或10倍或更多倍。在一些实施方案中，一个或多个另外的剂量的给予是基于以下来确定：受试者对初始治疗或任何先前治疗的反应、受试者的疾病负荷(如肿瘤负担、体积、大小或程度)、转移的程度或类型、分期和/或受试者发生毒性结果(例如CRS、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、神经毒性和/或针对所给予的细胞和/或重组受体的宿主免疫应答)的可能性或发生率。
C.反应、功效和存活
在一些实施方案中，尽管受试者已经对另一种疗法产生抗性，但所述给予有效治疗所述受试者。在一些实施方案中，至少30％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)；和/或至少约40％、至少约50％、至少约60％或至少约70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，至少或约至少50％的受试者、至少或约至少60％的所述受试者、至少或约至少70％的所述受试者、至少或约至少80％的所述受试者或至少或约至少90％的根据所述方法治疗的受试者实现CR和/或实现客观反应(OR)。在一些实施方案中，评估有效治疗的标准包括总体反应率(ORR；在一些情况下也称为客观反应率)、完全反应(CR；在一些情况下也称为完全反应)、反应持续时间(DOR)、无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)。
在一些实施方案中，至少40％或至少50％的根据本文所提供的方法治疗的受试者实现完全缓解(CR；在一些情况下也称为完全反应)，展现大于或大于约3个月、6个月或12个月或大于13个月或约14个月的无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)；平均而言，根据所述方法治疗的受试者展现大于或大于约6个月、12个月或18个月的中值PFS或OS；和/或所述受试者在治疗后展现至少或至少约6、12、18个月或更多个月或更久的PFS或OS。
在一些方面，受试者(例如患有NHL的受试者)的反应率是基于卢加诺标准(Luganocriteria)。(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。在一些方面，反应评估利用任何临床、血液学和/或分子方法。在一些方面，使用卢加诺标准评估的反应涉及视情况使用正电子发射断层成像(PET)-计算机断层成像(CT)和/或CT。PET-CT评价还可包括使用氟脱氧葡萄糖(FDG)用于嗜FDG淋巴瘤。在一些方面，在使用PET-CT评估嗜FDG组织学的反应的情况下，可以使用5分量表。在一些方面中，所述5分量表包含以下标准：1，没有高于背景的摄取；2，摄取≤纵隔；3，摄取>纵隔但≤肝脏；4，摄取适度>肝脏；5，摄取显著高于肝脏和/或新病灶；X，新的摄取区域不可能与淋巴瘤有关。
在一些方面，如使用卢加诺标准描述的完全反应涉及在不同可测量位点的完全代谢反应和完全放射学反应。在一些方面，这些位点包括淋巴结和淋巴外位点，其中在使用PET-CT时，CR在5分量表上被描述为得分为1、2或3，且具有或不具有残余肿块。在一些方面，在脾或骨髓内具有高生理摄取或激活的Waldeyer环或结节外位点中(例如，对于化学疗法或骨髓集落刺激因子)，摄取可以大于正常纵隔和/或肝脏。在这种情况下，如果在初始受累位点的摄取不大于周围的正常组织，即使所述组织具有高生理摄取，也可以推断为完全代谢反应。在一些方面，使用CT在淋巴结中评估反应，其中CR被描述为没有患病的淋巴外位点，并且靶淋巴结/淋巴结肿块的病变的最长横径(LDi)必须复原至≤1.5cm。其他评估位点包括骨髓，其中基于PET-CT的评估应指示在骨髓中缺乏嗜FDG疾病的证据，并且基于CT的评估应指示正常形态，如果不确定则应是IHC阴性。其他位点可以包括对器官肿大的评估，其应复原至正常。在一些方面，评估未测量的病灶和新病灶，其在CR的情况下应不存在(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。
在一些方面，使用卢加诺标准描述的部分反应(PR；在一些情况下也称为部分缓解)涉及在不同可测量位点的部分代谢和/或放射学反应。在一些方面，这些位点包括淋巴结和淋巴外位点，其中在使用PET-CT时，PR被描述为得分为4分或5分，具有与基线相比降低的摄取和任何大小的一个或多个残余肿块。在中间时期，此类发现可以指示反应中的疾病。在治疗结束时，此类发现可以指示残余疾病。在一些方面，使用CT评估淋巴结中的反应，其中PR被描述为多达6个可测量的靶结节和结节外位点的SPD减小≥50％。如果病灶太小而无法在CT上测量，则将5mm×5mm指定为默认值；如果病灶不再可见，则所述值为0mm×0mm；对于>5mm×5mm但小于正常的结节，使用实际测量进行计算。其他评估位点包括骨髓，其中基于PET-CT的评价应指示残余摄取，所述残余摄取高于正常骨髓中的摄取但与基线相比有所降低(弥漫性摄取与来自所允许化学疗法的反应性变化相容)。在一些方面，如果在结节反应的情况下在骨髓中存在持续的局灶性变化，则应考虑用MRI或活检或间隔扫描进一步评价。在一些方面，其他位点可以包括对器官肿大的评估，其中脾脏的超过正常的长度必须已经复原>50％。在一些方面，评估未测量病灶和新病灶，其在PR的情况下应不存在/正常，已复原但没有增加。也可以使用基于PET-CT和/或CT的评估来测量无反应/稳定疾病(SD)或进行性疾病(PD)。(Cheson等人,(2014)JCO 32(27):3059-3067；Johnson等人,(2015)Radiology 2:323-338；Cheson,B.D.(2015)Chin Clin Oncol 4(1):5)。
在一些方面中，无进展存活期(PFS)被描述为治疗疾病(如癌症)期间和之后，受试者带病生存但所述疾病不恶化的时间长度。在一些方面，客观应答(OR)被描述为可测量的反应。在一些方面，客观反应率(ORR；在一些情况下也称为总体反应率)被描述为实现CR或PR的患者的比例。在一些方面，总存活期(OS)被描述为从诊断日期或疾病(如癌症)治疗开始日期起，被诊断患有所述疾病的受试者仍然存活的时间长度。在一些方面，无事件存活期(EFS)被描述为在癌症治疗结束后，受试者保持没有所述治疗意图预防或延迟的某些并发症或事件的时间长度。这些事件可以包括癌症的复发或某些症状的发作，如已经扩散到骨骼的癌症引起的骨痛，或死亡。
在一些实施方案中，反应持续时间(DOR)的量度包括从记录到肿瘤反应至疾病进展的时间。在一些实施方案中，用于评估反应的参数可以包括持久反应，例如，在开始治疗的一段时间之后持续存在的反应。在一些实施方案中，持久反应是由在开始治疗后约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月的反应率来指示。在一些实施方案中，所述反应可持续超过3个月或超过6个月。
在一些方面，使用RECIST标准确定客观肿瘤反应；在一些方面，在实体瘤中确定。(Eisenhauer等人,European Journal of Cancer 45(2009)228-247.)在一些方面，使用RECIST标准确定对于靶病灶的客观肿瘤反应。在一些方面中，如使用RECIST标准确定的完全反应被描述为所有靶病灶的消失，并且任何病理性淋巴结(无论是靶标还是非靶标)必须在短轴上减少至<10mm。在其他方面中，如使用RECIST标准确定的部分反应被描述为以基线总直径为参考，靶病灶的直径总和减小至少30％。在其他方面中，进行性疾病(PD)被描述为以研究中的最小总和(如果基线总和在研究中最小，则这个最小总和包括基线总和)作为参考，靶病灶直径总和增加至少20％。除了20％的相对增加外，所述总和还必须显示至少5mm的绝对增加(在一些方面，出现一个或多个新病灶也被视为进展)。在其他方面中，疾病稳定(SD)被描述为以研究时的最小总直径作为参考，既没有足够缩小以符合PR，也没有足够增加以符合PD。
在一些方面，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物的给予通常降低或预防所述受试者中所述疾病或病症的扩展或负荷。例如，在所述疾病或病症是肿瘤的情况下，所述方法通常降低肿瘤大小、体积、转移、骨髓或可分子检测的癌症中原始细胞的百分比，和/或改进预后或存活或与肿瘤负荷相关的其他症状。
疾病负荷可以涵盖所述受试者中或所述受试者的器官、组织或体液(如肿瘤或例如可指示转移的另一位置的器官或组织)中所述疾病的总细胞数。例如，在某些血液恶性肿瘤的情况下，可以在血液或骨髓中检测和/或定量肿瘤细胞。在一些实施方案中，疾病负荷可以包括肿瘤的质量、转移的数量或程度和/或骨髓中存在的原始细胞的百分比。
在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残余白血病来确定。
在一些方面，受试者(如患有CLL的受试者)的反应率是基于国际慢性淋巴细胞白血病研讨会(IWCLL)反应标准(Hallek等人,Blood 2008年6月15日；111(12):5446-5456)。在一些方面，这些标准描述如下：完全缓解(CR；在一些情况下也称为完全反应)，其在一些方面要求不存在通过免疫表型分析的外周血克隆淋巴细胞、不存在淋巴结病、不存在肝肿大或脾肿大、不存在全身症状且血细胞计数令人满意；完全缓解伴随不完全骨髓恢复(CRi)，其在一些方面被描述为上文的CR，但没有正常的血细胞计数；部分缓解(PR；在一些情况下也称为部分反应)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数下降≥50％、淋巴结病减少≥50％、或肝或脾减小≥50％，以及外周血细胞计数改进；进展性疾病(PD)，其在一些方面被描述为淋巴细胞计数增加≥50％至>5x109/L、淋巴结病增加≥50％、肝或脾大小增加≥50％、Richter转化或由于CLL所致的新的血细胞减少；和稳定疾病，其在一些方面被描述为不符合CR、CRi、PR或PD的标准。
在一些实施方案中，如果在给予细胞的所述剂量的1个月内，受试者的淋巴结大小小于或小于约20mm，大小小于或小于约10mm或大小小于或小于约10mm，则所述受试者展现CR或OR。
在一些实施方案中，在所述受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)没有检测到CLL的指标克隆。在一些实施方案中，通过IgH深度测序评估CLL的指标克隆。在一些实施方案中，在给予所述细胞后为或为约或至少或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间，没有检测到所述指标克隆。
在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微术检测，骨髓中存在大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者患有白血病。疾病负荷的程度可以通过评估血液或骨髓中的残余白血病来确定。
在一些实施方案中，如果例如如通过光学显微术检测，骨髓中存在大于或等于5％原始细胞，如骨髓中大于或等于10％原始细胞、骨髓中大于或等于20％原始细胞、骨髓中大于或等于30％原始细胞、骨髓中大于或等于40％原始细胞或骨髓中大于或等于50％原始细胞，则受试者展现形态学疾病。在一些实施方案中，如果骨髓中存在少于5％原始细胞，则受试者展现完全或临床缓解。
在一些实施方案中，受试者可以展现完全缓解，但存在小部分形态学上(通过光学显微镜技术)不可检测的残余白血病细胞。如果受试者展现骨髓中小于5％原始细胞并且展现可分子检测的癌症，则称所述受试者展现最小残余疾病(MRD)。在一些实施方案中，可分子检测的癌症可以使用允许灵敏地检测少量细胞的多种分子技术中的任一种来评估。在一些方面，此类技术包括PCR测定，其可以确定通过染色体易位产生的独特Ig/T细胞受体基因重排或融合转录物。在一些实施方案中，可以使用流式细胞术基于白血病特异性免疫表型来鉴定癌细胞。在一些实施方案中，癌症的分子检测可以检测少至100,000个正常细胞中的1个白血病细胞。在一些实施方案中，如果如通过PCR或流式细胞术检测到100,000个细胞中至少或大于1个白血病细胞，则受试者展现可分子检测的MRD。在一些实施方案中，受试者的疾病负荷是不可分子检测的或MRD-，使得在一些情况下使用PCR或流式细胞术技术无法检测到所述受试者中的白血病细胞。
在一些实施方案中，在所述受试者的骨髓中(或在大于50％、60％、70％、80％、90％或更多的根据所述方法治疗的受试者的骨髓中)没有检测到白血病(例如CLL)的指标克隆。在一些实施方案中，通过IGH深度测序来评估白血病(例如CLL)的指标克隆。在一些实施方案中，在给予所述细胞后为或为约或至少或至少约1、2、3、4、5、6、12、18或24个月的时间，没有检测到所述指标克隆。
在一些方面，MRD是通过流式细胞术来检测。可以使用流式细胞术监测骨髓和外周血样品中的癌细胞。在特定方面中，使用流式细胞术检测或监测骨髓中癌细胞的存在。在一些方面，使用通过流式细胞术进行的多参数免疫学检测来检测癌细胞(参见例如，Coustan-Smith等人,(1998)Lancet 351:550-554)。在一些方面，使用通过质谱流式细胞术进行的多参数免疫学检测来检测癌细胞。在一些例子中，可以使用1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45或50个参数来检测癌细胞。用于检测的抗原是基于所检测的癌症选择的(Foon和Todd(1986)Blood 68:1-31)。
在一些例子中，通过骨髓抽吸物或骨髓活检收获骨髓，并分离淋巴细胞用于分析。可以使用与荧光染料(例如，异硫氰酸荧光素(FITC)、藻红蛋白、多甲藻素叶绿素蛋白或生物素)缀合的单克隆和/或多克隆抗体检测分离的淋巴细胞上的表位，如末端脱氧核苷酸基转移酶(TdT)、CD3、CD10、CD11c、CD13、CD14、CD33、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD34、CD45、CD56、CD79b、IgM和/或KORSA3544。然后可以使用流式细胞术(如多参数流式细胞术或质谱流式细胞术)来检测标记的细胞，以检测多个表位。
可以基于光散射点图鉴定和门控淋巴细胞，然后进行二次门控以鉴定表达目的免疫表型特征的细胞群。示例性表位显示于下表2中。白血病和淋巴瘤的其他免疫学分类提供于Foon和Todd(Blood(1986)68(1):1-31)中。在一些方面，MRD的流式细胞术评估可以通过对带有一种或多种CLL免疫表型(例如，低前向/侧向散射；CD3-；CD5+；CD14-；CD19+；CD23+；CD45+；CD56-)的活淋巴细胞进行定量来实现。
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在一些方面，可以使用所收获的B细胞免疫球蛋白重链(IGH)基因座的深度测序来检测微小残留病(MRD)。特定IgG重排的克隆存在可以提供标记以检测B细胞恶性肿瘤(如CLL或NHL)的存在和/或其恶性细胞的残余存在。在一些方面，从血液收获并分离细胞，如含有或怀疑含有B细胞的群体。在一些方面，从骨髓(例如从骨髓抽吸物或骨髓活检)和/或从其他生物样品收获并分离细胞。在一些方面，使用针对基因座的V区和J区内的高度保守序列的引物实现互补决定区3(CDR3)的聚合酶链式反应(PCR)扩增，其可用于鉴定细胞的克隆群体，用于评估微小残留病的目的。可以使用用于检测克隆群体的其他方法，如单细胞测序法，包括提供关于特定谱系的和/或表达特定可变链(如可变重链或其结合位点)的细胞(如克隆群体)的数量信息的那些方法。在一些方面，使用简并引物或识别不同细胞克隆之间共有的可变链区的引物(如识别IGH序列的共有V区和简并共有J区的那些引物)扩增IGH DNA。V区的示例性序列是ACACGGCCTCGTGTATTACTGT(SEQ ID NO:57)。J区的示例性简并共有序列是ACCTGAGGAGACGGTGACC(SEQ ID NO:58)。
在一些方面，PCR产物或测序结果是重排的等位基因特有的，并且用作MRD检测的克隆标记。在CDR3区域的PCR扩增之后，可以对PCR产物进行测序以产生患者特异性寡核苷酸，所述患者特异性寡核苷酸被构建为等位基因特异性PCR的探针，用于灵敏地检测在用CAR-T细胞疗法(例如CD19CAR-T细胞疗法)治疗B细胞恶性肿瘤后的MRD。在不使用共有引物产生PCR产物的例子中，可以替代地使用框架区1的V区家族特异性引物。
在一些方面，在治疗后可PCR检测的肿瘤细胞(如B细胞恶性肿瘤(如NHL或CLL)的细胞，如对应于恶性或克隆IGH序列的可检测IGH序列)的持久性与增加的复发风险相关。在一些方面，与具有持续恶性IGH序列的患者相比，治疗后恶性IGH序列呈阴性的患者(在一些方面，即使在其他标准指示进行性疾病或仅部分反应(如淋巴结增大的持久性)的情况下或在一些情况下其他标准可能与疾病或缺乏完全反应相关)可能被认为具有增加的PFS可能性或进入CR或持久CR或延长的存活期。在一些实施方案中，例如与其他临床症状(如淋巴结大小)或其他分期标准的消退相比，这种预后和分期确定与在给予所述疗法后的短时间段内观察到恶性细胞清除的治疗特别相关。例如，在一些此类方面中，如与其他可用分期或预后方法相比，样品(如骨髓)中可检测IGH或微小残留病的不存在可以是反应或反应可能性或其持久性的优选读数。在一些方面，来自MRD的结果，例如IGH深度测序信息，可以告知进一步干预或其缺乏。例如，所述方法和其他所提供的实施方案在一些情况下提供，被认为恶性IGH呈阴性的受试者在一些方面可以不进行进一步治疗或不被进一步给予所提供疗法的剂量，或者向所述受试者给予较低的或减少的剂量。相反，可以提供或规定，例如用初始给予的疗法以类似或较高剂量或用另一种治疗对通过IGH深度测序展现MRD的受试者进行进一步治疗。在一些方面，疾病或病症在给予第一剂量后持续，和/或所述第一剂量的给予不足以在所述受试者中根除所述疾病或病症。
在一些实施方案中，如与通过可比较方法使用替代性给药方案(如其中所述受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法和/或其中所述受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞和/或淋巴细胞清除剂的剂量的方法)会观察到的降低相比，所述方法以更大程度和/或更长时间段降低疾病或病症的负荷，例如，肿瘤细胞数、肿瘤大小、患者存活或无事件存活的持续时间。在一些实施方案中，检测、评估或测量所述受试者的疾病或病症的负荷。在一些方面，可以通过检测受试者中或受试者的器官、组织或体液(如血液或血清)中的疾病细胞或疾病相关细胞(例如肿瘤细胞)的总数来检测疾病负荷。在一些方面，评估受试者的存活、在某一时间段内的存活、存活程度、无事件或无症状存活的存在或持续时间或无复发存活。在一些实施方案中，评估疾病或病症的任何症状。在一些实施方案中，指定疾病或病症负荷的量度。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中所述受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法和/或其中所述受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞和/或淋巴细胞清除剂的剂量的方法)相比，所述方法改进所述受试者的无事件存活率或总存活率。例如，在一些实施方案中，通过所述方法治疗的受试者在所述剂量后6个月时的无事件存活率或概率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些方面，总存活率大于约40％、大于约50％、大于约60％、大于约70％、大于约80％、大于约90％或大于约95％。在一些实施方案中，用所述方法治疗的受试者展现至少6个月或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年的无事件存活、无复发存活或存活。在一些实施方案中，至进展时间得到改进，如至进展时间大于或大于约6个月，或至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10年。
在一些实施方案中，如与其他方法(例如，其中所述受试者接受一种或多种替代性治疗剂的方法和/或其中所述受试者不根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物接受细胞和/或淋巴细胞清除剂的剂量的方法)相比，在通过所述方法治疗后，复发的概率降低。例如，在一些实施方案中，在第一剂量后6个月时复发的概率小于约80％、小于约70％、小于约60％、小于约50％、小于约40％、小于约30％、小于约20％或小于约10％。
在一些情况下，确定所给予细胞(例如，过继转移细胞)的药代动力学，以评估利用度，例如，所给予细胞的生物利用度。用于确定过继转移细胞的药代动力学的方法可以包括从已经被给予工程化细胞的受试者中抽取外周血，并确定所述外周血中所述工程化细胞的数量或比率。用于选择和/或分离细胞的方法可以包括使用嵌合抗原受体(CAR)特异性抗体(例如，Brentjens等人,Sci.Transl.Med.2013年3月；5(177):177ra38)、蛋白L(Zheng等人,J.Transl.Med.2012年2月；10:29)、表位标记(如Strep标记序列，将其直接引入CAR中的特定位点，借此使用Strep标记的结合试剂直接评估CAR)(Liu等人(2016)NatureBiotechnology,34:430；国际专利申请公开号WO 2015095895)和与CAR多肽特异性结合的单克隆抗体(参见国际专利申请公开号WO 2014190273)。外在标记基因在一些情况下可以结合工程化细胞疗法用于允许检测或选择细胞，并且在一些情况下也用于促进细胞自杀。在一些情况下，截短的表皮生长因子受体(EGFRt)可以与所转导细胞中目的转基因(CAR或TCR)共表达(参见例如，美国专利号8,802,374)。EGFRt可能含有由抗体西妥昔单抗或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子识别的表位，所述抗体西妥昔单抗或其他治疗性抗EGFR抗体或结合分子可用于鉴定或选择已用EGFRt构建体和另一种重组受体(如嵌合抗原受体(CAR))工程化的细胞，和/或用于消除或分离表达受体的细胞。参见美国专利号8,802,374和Liu等人,Nature Biotech.2016年4月；34(4):430-434)。
在一些实施方案中，可以在给予所述细胞疗法后的时间段确定从患者获得的生物样品(例如，血液)中CAR+T细胞的数量，例如，以确定所述细胞的药代动力学。在一些实施方案中，在所述受试者或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者的血液中可检测的CAR+T细胞(任选地CAR+CD8+T细胞和/或CAR+CD4+T细胞)的数量是大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。
D.毒性
在一些实施方案中，例如，与给予替代性细胞疗法(如替代性CAR+T细胞组合物)和/或细胞的替代性给药(例如，不以限定比率给予的细胞给药)相比，所提供方法被设计为具有或包括多个特征，所述特征导致较低比率和/或较低程度的毒性、毒性结果或症状、促进毒性的概况、因子或特性，如与细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性相关或指示细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性的症状或结果。
在一些实施方案中，如与某些其他细胞疗法相比，所提供的方法不导致高比率或可能性的毒性或毒性结果，或者降低毒性或毒性结果(如神经毒性(NT)、细胞因子释放综合征(CRS))的比率或可能性。在一些实施方案中，所述方法不导致以下事件或不增加以下事件的风险：严重NT(sNT)、严重CRS(sCRS)、巨噬细胞激活综合征、肿瘤溶解综合征、至少或至少约38摄氏度发热三天或更多天、以及至少或至少约20mg/dL的CRP血浆水平。在一些实施方案中，大于或大于约30％、35％、40％、50％、55％、60％或更多的根据所提供方法治疗的受试者不展现任何等级的CRS或任何等级的神经毒性。在一些实施方案中，不超过50％的所治疗受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性。在一些实施方案中，至少50％的根据所述方法治疗的受试者(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％或更多的所治疗受试者)不展现严重毒性结果(例如，严重CRS或严重神经毒性)，如不展现3级或更高级的神经毒性和/或不展现严重CRS，或者在治疗后某一时间段内(如在给予所述细胞的一周、两周或一个月内)不如此展现。在一些实施方案中，被评估以确定某些毒性的参数包括不良事件(AE)、剂量限制性毒性(DLT)、CRS和NT。
给予过继T细胞疗法如用表达嵌合抗原受体的T细胞进行的治疗可以诱导毒性作用或结果，如细胞因子释放综合征和神经毒性。在一些例子中，这种效果或结果与高水平的循环细胞因子并行，高水平的循环细胞因子可能是观察到的毒性的基础。
在一些方面，毒性结果是细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)，或与细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)相关，或指示细胞因子释放综合征(CRS)或严重CRS(sCRS)。在一些情况下，在过继T细胞疗法和向受试者给予其他生物制品后可发生CRS，例如sCRS。参见Davila等人,Sci Transl Med 6,224ra25(2014)；Brentjens等人,Sci.Transl.Med.5,177ra38(2013)；Grupp等人,N.Engl.J.Med.368,1509-1518(2013)；和Kochenderfer等人,Blood 119,2709-2720(2012)；Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。
通常，CRS由增大的例如通过T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞和/或巨噬细胞介导的全身免疫应答引起。此类细胞可以释放大量炎症介质,如细胞因子和趋化因子。细胞因子可以触发急性炎性应答和/或诱导内皮器官损伤，从而可能导致微血管渗漏、心力衰竭或死亡。严重的危及生命的CRS可能导致肺浸润和肺损伤、肾衰竭或弥散性血管内凝血。其他严重的危及生命的毒性可以包括心脏毒性、呼吸窘迫、神经毒性和/或肝衰竭。
可以使用抗炎疗法(如抗IL-6疗法，例如，抗IL-6抗体，例如，托珠单抗)或抗生素或如所述的其他药剂治疗CRS。CRS的结果、体征和症状是已知的，并且包括本文所述的那些。在一些实施方案中，在特定剂量方案或给予实现或不实现给定的CRS相关结果、体征或症状的情况下，可以规定特定结果、体征和症状和/或其量或程度。
在给予CAR表达细胞的情况下，CRS通常在输注表达CAR的细胞后6-20天时发生。参见Xu等人,Cancer Letters 343(2014)172-78。在一些情况下，CRS在CAR T细胞输注后少于6天或超过20天时发生。CRS的发生率和时机可能与输注时的基线细胞因子水平或肿瘤负荷有关。通常，CRS涉及升高的干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α和/或白细胞介素(IL)-2的血清水平。可在CRS中被快速诱导的其他细胞因子是IL-1β、IL-6、IL-8和IL-10。
与CRS相关的示例性结果包括发热、寒颤、发冷、低血压、呼吸困难、急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、脑病、ALT/AST升高、肾衰竭、心脏病、缺氧、神经紊乱和死亡。神经系统并发症包括谵妄、癫痫样活动、意识错乱、找词困难、失语和/或变得迟钝。与CRS相关的其他结果包括疲劳、恶心、头痛、癫痫、心动过速、肌痛、皮疹、急性血管渗漏综合征、肝功能损害和肾衰竭。在一些方面，CRS与一种或多种因子(如血清铁蛋白、d-二聚体、氨基转移酶、乳酸脱氢酶和甘油三酯)的增加相关，或与低纤维蛋白原血或肝脾肿大相关。与CRS相关的其他示例性体征或症状包括血流动力学不稳定、发热型嗜中性粒细胞减少症、血清C反应蛋白(CRP)增加、凝血参数(例如，国际标准化比率(INR)、凝血酶原时间(PTI)和/或纤维蛋白原)变化、心脏和其他器官功能的变化、和/或绝对嗜中性粒细胞计数(ANC)。
在一些实施方案中，与CRS相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如在指定温度(例如大于或大于约38摄氏度)的发热两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于或大于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下各项组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少或至少约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少或至少约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫)。
示例性CRS相关结果包括增加的或高的一种或多种因子(包括细胞因子和趋化因子和与CRS相关的其他因子)的血清水平。示例性结果进一步包括一种或多种此类因子的合成或分泌的增加。这种合成或分泌可以由T细胞或与T细胞相互作用的细胞(如先天免疫细胞或B细胞)进行。
在一些实施方案中，CRS相关的血清因子或CRS相关的结果包括炎性细胞因子和/或趋化因子，所述炎性细胞因子和/或趋化因子包括干扰素γ(IFN-γ)、TNF-a、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Ra、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1、肿瘤坏死因子α(TNFα)、IL-6和IL-10、IL-1β、IL-8、IL-2、MIP-1、Flt-3L、fracktalkine和/或IL-5。在一些实施方案中，所述因子或结果包括C反应蛋白(CRP)。除了作为CRS的早期且易于测量的风险因子外，CRP也是细胞扩增的标记。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平(如≥15mg/dL)的受试者患有CRS。在一些实施方案中，被测量为具有高CRP水平的受试者未患CRS。在一些实施方案中，CRS的量度包括CRP的量度和指示CRS的另一因子。
在一些实施方案中，在CAR治疗之前、期间或之后监测一种或多种炎性细胞因子或趋化因子。在一些方面，一种或多种细胞因子或趋化因子包括IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-1β、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12、sIL-2Rα、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)或巨噬细胞炎性蛋白(MIP)。在一些实施方案中，监测IFN-γ、TNF-α和IL-6。
已经研发出似乎与CRS的发作相关的CRS标准以预测哪些患者更有可能具有发生sCRS的风险(参见Davilla等人Science translational medicine.2014；6(224):224ra25)。因素包括发热、缺氧、低血压、神经系统改变、升高的炎性细胞因子血清水平，如一组七种细胞因子(IFNγ、IL-5、IL-6、IL-10、Flt-3L、曲动蛋白和GM-CSF)，治疗诱导的这七种细胞因子的升高可能与治疗前肿瘤负荷和sCRS症状密切相关。关于CRS的诊断和管理的其他指南是已知的(参见例如，Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95)。在一些实施方案中，反映CRS等级的标准是下表3中详述的那些。
在一些实施方案中，受试者被认为响应或继发于细胞疗法或其细胞剂量的给予而发生“严重CRS”(“sCRS”)，条件是在给予后所述受试者展示：(1)在至少38摄氏度发热至少三天；(2)细胞因子升高，其包括(a)与刚刚给予后的水平相比，以下七种细胞因子的组中至少两种的至少75倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5，和/或(b)与刚刚给予后的水平相比，以下七种细胞因子的组中至少一种的至少250倍的最大倍数变化：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5；和(c)至少一种毒性临床体征，如低血压(需要至少一种静脉内血管作用加压药)或缺氧(PO2<90％)或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和/或癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括3级或更高级CRS，如表3中所示。
在一些实施方案中，与严重CRS或3级CRS或更高级CRS(如4级或更高级)相关的结果包括以下中的一种或多种：持续发热，例如在指定温度(例如大于或大于约38摄氏度)发热两天或更多天，例如三天或更多天，例如四天或更多天或至少连续三天；大于或大于约38摄氏度的发热；细胞因子的升高，如与至少两种细胞因子(例如，由以下各项组成的组中的至少两种：干扰素γ(IFNγ)、GM-CSF、IL-6、IL-10、Flt-3L、fracktalkine和IL-5和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的治疗前水平相比，例如至少或至少约75倍的最大倍数变化，或此类细胞因子中至少一种的例如至少或至少约250倍的最大倍数变化；和/或至少一种毒性临床体征，如低血压(例如，如通过至少一种静脉内血管作用加压药所测量)；缺氧(例如，血浆氧(PO2)水平低于或低于约90％)；和/或一种或多种神经病学障碍(包括精神状态变化、迟钝和癫痫)。在一些实施方案中，严重CRS包括需要在重症监护病房(ICU)中进行管理或护理的CRS。
在一些实施方案中，CRS(如严重CRS)涵盖以下的组合：(1)持续发热(在至少38摄氏度发热至少三天)和(2)至少或至少约20mg/dL的血清CRP水平。在一些实施方案中，CRS涵盖需要使用两种或更多种血管加压药的低血压或需要机械通气的呼吸衰竭。在一些实施方案中，在第二次或后续给予中增加血管加压药的剂量。
在一些实施方案中，严重CRS或3级CRS涵盖丙氨酸氨基转移酶的增加、天冬氨酸氨基转移酶的增加、寒战、发热型嗜中性粒细胞减少症、头痛、左心室功能障碍、脑病、脑积水和/或震颤。
可以规定测量或检测各种结果的方法。
在一些方面，毒性结果是神经毒性或与神经毒性相关。在一些实施方案中，与神经毒性的临床风险相关的症状包括意识错乱、谵妄、失语、表达性失语、迟钝、肌阵挛、嗜睡、精神状态改变、惊厥、癫痫样活动、癫痫(任选地如通过脑电图[EEG]证实)、升高的β淀粉样蛋白(Aβ)水平，升高的谷氨酸水平和升高的氧自由基水平。在一些实施方案中，例如使用1-5级量表基于严重程度对神经毒性进行分级(参见例如，Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)；美国国家癌症研究所—常见毒性标准第4.03版(NCI-CTCAE v4.03))。
在一些情况下，神经病学症状可能是sCRS最早症状。在一些实施方案中，观察到神经病学症状在细胞疗法输注后5至7天开始。在一些实施方案中，神经病学变化的持续时间可能在3至19天的范围内。在一些情况下，神经病学变化的恢复是在sCRS的其他症状消退后发生。在一些实施方案中，用抗IL-6和/或一种或多种类固醇治疗不会加速神经病学变化消退的时间或程度。
在一些实施方案中，如果在给予后受试者展示限制自理(例如洗澡、穿衣和脱衣、进食、如厕、服药)的以下症状，则认为受试者响应或继发于细胞疗法或其细胞剂量的给予而发生“严重神经毒性”：1)外周运动神经病的症状，包括外周运动神经的炎症或退化；2)外周感觉神经病的症状，包括外周感觉神经的炎症或退化、感觉迟钝(如感官知觉失真，导致异常和不愉快的感觉)、神经痛(如沿着神经或一组神经的剧烈疼痛感)，和/或感觉异常(如感觉神经元的功能紊乱，导致在没有刺激的情况下刺痛、麻木、压迫、冷和温的异常皮肤感觉)。在一些实施方案中，严重神经毒性包括3级或更高级神经毒性，如表4中所示。
在一些实施方案中，与其他方法相比，所述方法减轻与CRS或神经毒性相关的症状。在一些方面，与其他方法相比，所提供的方法减轻与CRS相关的症状、结果或因素，包括与严重CRS或3级或更高级的CRS相关的症状、结果或因素。例如，根据本方法治疗的受试者可能缺少可检测的CRS(例如，严重CRS或3级或更高级的CRS)的症状、结果或因素和/或具有减少的所述症状、结果或因素，如所述的(例如表3中陈述的)任何症状、结果或因素。在一些实施方案中，与通过其他方法治疗的受试者相比，根据本方法治疗的受试者可能具有减轻的神经毒性症状，如四肢无力或麻木、记忆、视力和/或智力受损、无法控制的强迫性和/或强制性行为、妄想、头痛、认知和行为问题(包括丧失运动控制、认知退化和自主神经系统功能障碍)以及性功能障碍。在一些实施方案中，根据本方法治疗的受试者可具有减轻的与外周运动神经病、外周感觉神经病、感觉迟钝、神经痛或感觉异常相关的症状。
在一些实施方案中，所述方法减轻与神经毒性相关的结果，包括对神经系统和/或脑的损害，如神经元的死亡。在一些方面，所述方法降低与神经毒性相关的因子的水平，所述因子如β淀粉样蛋白(Aβ)、谷氨酸和氧自由基。
在一些实施方案中，所述毒性结果是剂量限制性毒性(DLT)。在一些实施方案中，所述毒性结果是剂量限制性毒性。在一些实施方案中，所述毒性结果是不存在剂量限制性毒性。在一些实施方案中，剂量限制性毒性(DLT)被定义为任何3级或更高级的毒性，如通过任何已知或公开的用于评估特定毒性的指南所评估，如上述任何指南并且包括国家癌症研究所(NCI)的不良事件通用术语标准(Common Terminology Criteria for AdverseEvents，CTCAE)4.0版。
在一些实施方案中，通过根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予一定剂量的T细胞观察到的发生毒性(例如，CRS或神经毒性或严重CRS或神经毒性，例如，3级或更高级的CRS或神经毒性)的低比率、风险或可能性允许在门诊基础上给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予所述细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+T细胞)的剂量)是在门诊基础上进行，或者不需要使受试者住院，如需要过夜停留的住院。
在一些方面，在给予所述细胞剂量之前或同时，不向根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予所述细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)给予用于治疗任何毒性的干预，除非或直到所述受试者展现毒性(如神经毒性或CRS)的体征或症状。用于治疗、延迟、减弱或改善毒性的示例性药剂描述于章节II中。
在一些实施方案中，如果被给予所述细胞疗法(例如，T细胞(例如，CAR+T细胞)的剂量)的受试者(包括在门诊基础上治疗的受试者)展现发热，则给予所述受试者治疗或指示所述受试者接受或给予治疗，以减轻发热。在一些实施方案中，所述受试者的发热的特征是所述受试者的体温为(或被测量为)等于或高于某一阈值温度或水平。在一些方面，所述阈值温度是与至少低等级发热、与至少中等发热和/或与至少高等级发热相关的阈值温度。在一些实施方案中，所述阈值温度是特定温度或范围。例如，所述阈值温度可以为或为约或至少或至少约38、39、40、41或42摄氏度，和/或可以是38或约38摄氏度至39或约39摄氏度的范围、39或约39摄氏度至40或约40摄氏度的范围、40或约40摄氏度至41或约41度的范围、或41或约41摄氏度至42或约42摄氏度的范围。
在一些实施方案中，被设计为减轻发热的治疗包括用退热药治疗。退热药可以包括减轻发热的任何药剂，例如，化合物、组合物或成分，如已知具有退热作用的任何数量的药剂中的一种，如NSAID(如布洛芬、萘普生、酮洛芬和尼美舒利)、水杨酸盐(如阿司匹林、水杨酸胆碱、水杨酸镁和水杨酸钠)、扑热息痛、醋氨酚、安替比林甲胺甲烷、萘丁美酮、非那宗(Phenaxone)、安替比林、退烧药。在一些实施方案中，退热药是醋氨酚。在一些实施方案中，可以多达每四小时以12.5mg/kg的剂量口服或静脉内给予醋氨酚。在一些实施方案中，所述退热药是或包含布洛芬或阿司匹林。
在一些实施方案中，如果所述发热是持续发热，则向所述受试者给予用于治疗毒性的替代性治疗，如下文章节II中所述的任何治疗。对于在门诊基础上治疗的受试者，如果所述受试者已经和/或被确定为患有或患有持续发热，则指示所述受试者返回医院。在一些实施方案中，如果所述受试者展现等于或高于相对阈值温度的发热，并且在指定治疗(如被设计为减轻发热的治疗，如使用退热药(例如，NSAID或水杨酸盐，例如，布洛芬、醋氨酚或阿司匹林)的治疗)后，所述受试者的发热或体温不下降，或者不下降指定量或超过指定量(例如，超过1℃，并且通常不会变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃)的情况下，所述受试者已经和/或被确定为或认为患有持续发热。例如，如果所述受试者展现或被确定为展现至少或至少约38或39摄氏度的发热，所述发热即使在用诸如醋氨酚的退热药治疗后，在6小时时间段中、在8小时时间段中、或在12小时时间段中、或在24小时时间段中，没有降低或没有降低超过或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，或降低或降低约1％、2％、3％、4％或5％，则受试者被认为患有持续发热。在一些实施方案中，所述退热药的剂量是通常在这种受试者中有效减轻发热或特定类型的发热的剂量，所述特定类型的发热如与细菌或病毒感染(例如，局部或全身感染)相关的发热。
在一些实施方案中，如果所述受试者展现等于或高于相对阈值温度的发热，并且在所述受试者的发热或体温不变动约或超过约1℃，并且通常不变动约或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃的情况下，所述受试者已经和/或被确定为或认为患有持续发热。所述高于或等于某一量的变动的不存在通常是在给定时间段中测量(如在24小时、12小时、8小时、6小时、3小时或1小时时间段中，其可以从第一发热体征或高于所指示阈值的第一温度来测量)。例如，在一些实施方案中，如果受试者展现至少或至少约或至少或至少约38或39摄氏度的发热，在6小时时间段中、在8小时时间段中、或在12小时时间段中、或在24小时时间段中，所述发热的温度不会变动超过或超过约0.5℃、0.4℃、0.3℃或0.2℃，则所述受试者被认为或被确定为展现持续发热。
在一些实施方案中，所述发热是持续发热；在一些方面，有可能诱导所述毒性的初始疗法(如所述细胞疗法，如T细胞(例如，CAR+T细胞)的剂量)后，在已经确定受试者患有持续发热的时间，如在这种确定或首次这种确定的1、2、3、4、5、6小时或更短时间内，治疗所述受试者。
在一些实施方案中，在例如，如根据任何前述实施方案所测量，确定或证实所述受试者(如首次确定或证实)展现持续发热时或此后不久的时间，给予用于治疗所述毒性的一种或多种干预或药剂(如靶向毒性的疗法)。在一些实施方案中，在这种证实或确定的某一时间段内，如在这种证实或确定的30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、6小时或8小时内，给予所述一种或多种靶向毒性的疗法。
E.生物标记、分析物或参数
所提供的方法包括评估在受试者中发生与细胞疗法相关的毒性的风险的方法，所述方法涉及评估或检测与所述毒性(例如，神经毒性，如严重神经毒性，和/或CRS，如严重CRS)相关的生物标记(例如，分析物)或参数。所提供的方法还包括评估受试者响应细胞疗法的可能性的方法，所述方法涉及评估或检测与反应结果(如客观反应(OR)，包括完全反应(CR)和部分反应(PR))相关的生物标记(例如，分析物)或参数。在一些实施方案中，相关反应结果包括持久反应，如在初始反应后持续3个月、6个月、9个月、12个月或更久的反应。
在一些实施方案中，所述方法涉及评估或检测一个或一组生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或与一个或一组生物标记(例如，分析物)相关的参数(例如，浓度、量、水平或活性)。在一些情况下，所述方法可以包括将所述一个或多个参数与特定参考值(如阈值水平，本文中也称为“阈值”)相比较，所述参数例如，与发生毒性的风险相关的那些或与特定反应(如OR、CR或PR，或持久反应，如在初始反应后持续3个月、6个月、9个月、12个月或更久的反应)相关的那些。在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用细胞疗法治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及例如，基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较，给予可以治疗、预防、延迟和/或减弱毒性的发生的药剂或疗法。
在一些实施方案中，所述方法涉及评估在给予细胞疗法后受试者反应的可能性或发生毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法涉及评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞。在一些方面，所述方法涉及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险。在一些方面，所述比较可以用于确定在给予细胞疗法后受试者反应的可能性或发生毒性的风险。
在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用细胞疗法(如特定剂量的细胞疗法，包括给予特定剂量的细胞疗法，如本文(例如，章节I.A和I.B)中所述的那些)治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及基于对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较来选择受试者用于用另一种药剂(如能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗)治疗。
在一些实施方案中，所述参数是或包括患者和/或疾病或病症的属性、因素、特征。在一些实施方案中，所述参数是与肿瘤负荷相关的参数，例如，肿瘤负荷的测量。在一些方面，所述方法还涉及基于通过对生物标记的存在或不存在的评估和/或生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平的比较确定的毒性风险，进一步监测所述受试者的可能的毒性症状。在一些方面，可以获得来自所述受试者的生物样品(例如，血液样品或组织样品)用于检测生物标记(例如，分析物)的存在或不存在，如用于检测或测量生物标记的参数(例如，浓度、量、水平或活性)和/或评估生物标记的存在，用于特定结果和/或毒性的分析、相关联和/或检测。在一些实施方案中，可以从在给予所述细胞疗法之前或之后来自受试者的生物样品(例如，血液)评估某些与生物标记相关的生理学或生物学参数(包括生物标记的表达)和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以从在给予所述细胞疗法之前(治疗前)来自受试者的生物样品(例如，血液)评估生物标记或分析物的表达和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以从在给予所述细胞疗法之后(治疗后)来自受试者的生物样品(例如，血液)评估生物标记或分析物的表达和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，可以在给予所述细胞疗法之前或之后的一个或多个时间点评估生物标记(例如，分析物)的浓度、量、水平或活性和/或临床和实验室参数。在一些实施方案中，还可以确定在指定时间段期间生物标记(例如，分析物)的峰值浓度、量、水平或活性和/或临床和实验室参数。
在一些实施方案中，生物标记或分析物是由生物样品(包括细胞)或在所述生物样品中表达的可客观测量的特征或分子，可以指示特定状态或现象(如生物过程、治疗结果、细胞表型或疾病状态)或与所述特定状态或现象相关。在一些方面，可以测量或检测生物标记或分析物或与生物标记或分析物相关的参数。例如，可以检测生物标记或分析物的表达的存在或不存在。在一些方面，可以测量或检测生物标记或分析物的诸如浓度、量、水平或活性的参数。在一些实施方案中，生物标记的存在、不存在、表达、浓度、量、水平和/或活性可能与受试者的特定状态(如特定治疗结果或状态)相关，与所述特定状态相关联，指示所述特定状态和/或预测所述特定状态。在一些方面，生物标记或分析物(如本文所述的任一种)的存在、不存在、表达、浓度、量、水平和/或活性可以用于评估特定结果或状态(如特定治疗结果，包括反应结果或毒性结果)的可能性。在一些实施方案中，示例性生物标记包括细胞因子、细胞表面分子、趋化因子、受体、可溶受体、可溶血清蛋白和/或降解产物。在一些实施方案中，生物标记或分析物还可以包括患者和/或疾病或病症的特定属性、因素、特征，或指示患者的状态和/或患者的疾病或病症的因素(包括疾病负荷)和/或临床或实验室参数。
在一些实施方案中，生物标记可以单独使用或与其他生物标记组合使用，例如以生物标记组来使用。在一些实施方案中，可以将特定生物标记的表达与特定结果或毒性(例如，神经毒性的发生)相关联。在一些实施方案中，可以评估的生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、D-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α或MIP-1β。
在一些实施方案中，所述方法包括检测一种或多种生物标记的存在或不存在，如与一种或多种生物标记相关的参数(例如，浓度、量、水平或活性)，其中所述一种或多种生物标记选自乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
在一些实施方案中，所评估的参数是或包括患者和/或疾病或病症的属性、因素、特征，和/或生物标记的表达。在一些实施方案中，所述参数是或包括指示患者的状态和/或患者的疾病或病症的一个或多个因素。在一些实施方案中，所述参数指示肿瘤负荷。在一些实施方案中，指示肿瘤负荷的因素是一个或多个肿瘤的体积量度。在一些实施方案中，所述体积量度是一个或多个病灶的量度，例如肿瘤大小、肿瘤直径、肿瘤体积、肿瘤质量、肿瘤负担或体积、肿瘤相关水肿、肿瘤相关坏死和/或转移的数量或范围。在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是二维量度。例如，在一些实施方案中，将一个或多个病灶的面积计算为所有可测量肿瘤的最长直径与最长垂直直径的乘积。在一些情况下，肿瘤的体积量度是一维量度。在一些情况下，将可测量病灶的大小评估为最长直径。在一些实施方案中，测量直径乘积之和(SPD)、最长肿瘤直径(LD)、最长肿瘤直径之和(SLD)、坏死、肿瘤体积、坏死体积、坏死-肿瘤比(NTR)、瘤周水肿(PTE)和水肿-肿瘤比(ETR)。
用于测量和评估肿瘤负荷的示例性方法包括例如以下文献中所述的那些：Carceller等人,Pediatr Blood Cancer.(2016)63(8):1400-1406；和Eisenhauer等人,EurJ Cancer.(2009)45(2):228-247。在一些实施方案中，体积是通过确定所有可测量肿瘤的最大垂直直径的乘积之和来测量的直径乘积之和(SPD)。在一些方面，在一个维度上用最长直径(LD)和/或通过确定所有可测量病灶的最长肿瘤直径之和(SLD)来测量肿瘤或病灶。在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是肿瘤坏死的体积定量，例如坏死体积和/或坏死-肿瘤比(NTR)，参见Monsky等人，Anticancer Res.(2012)32(11):4951-4961。在一些方面，肿瘤的体积量度是肿瘤相关水中的体积定量，如瘤周水肿(PTE)和/或水肿-肿瘤比(ETR)。在一些实施方案中，测量可以使用受试者的成像技术来进行，所述成像技术如计算断层成像(CT)、正电子发射断层成像(PET)和/或磁共振成像(MRI)。
在一些实施方案中，肿瘤的体积量度是在筛选期间(如常规评估或抽血)确定，以证实和/或鉴定受试者的病症或疾病。
在一些实施方案中，从生物样品评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或参数。在一些方面，生物样品是体液或组织。在一些此类实施方案中，生物样品(例如，体液)是或含有全血、血清或血浆。
在一些实施方案中，在给予所述细胞疗法之前(例如，输注前)评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的存在或不存在和/或参数，例如，在开始给予工程化细胞之前多达2天、多达7天、多达14天、多达21天、多达28天、多达35天或多达40天获得。在一些实施方案中，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前(例如，输注前)从受试者获得，例如，在开始给予工程化细胞之前多达2天、多达7天、多达14天、多达21天、多达28天、多达35天或多达40天获得。
在一些实施方案中，生物样品是单采术或白细胞分离术样品。在一些实施方案中，评估一种或多种生物标记(例如，分析物)的或不存在和/或参数，或者所述生物样品是在给予所述细胞疗法之后获得。在一些实施方案中，试剂可以在给予所述细胞疗法之前或给予细胞疗法之后用于诊断目的，以鉴定受试者和/或评估治疗结果和/或毒性。
在一些实施方案中，测量一种或多种生物标记的值包括进行体外测定。在一些方面，体外测定是免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，通过以下方式测量一种或多种生物标记的值：酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定或亲合力测定。在一些情况下，一种或多种生物标记中至少一种的值是使用特异性地结合至至少一种生物标记的结合试剂来确定。在一些方面，所述结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。
在一些实施方案中，测量一种或多种生物标记(例如，分析物)的值包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，以及确定所述生物样品中所述分析物的存在或不存在、水平、量或浓度。在一些实施方案中，所述一种或多种生物标记(例如，分析物)是乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，所述一种或多种生物标记(例如，分析物)是LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，所述一种或多种生物标记(例如，分析物)是或包括LDH。
在一些方面，所述试剂是特异性地结合至所述分析物的结合分子。例如，在一些实施方案中，所述试剂是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述试剂是或包括所述分析物的底物或结合配偶体。
在一些实施方案中，在样品中检测或确定LDH的存在、不存在或参数(例如，水平、量、浓度和/或其他量度)。多种检测或确定LDH的方法是已知的。例如，测量乳酸盐通过NAD+还原为NADH而LDH转化为丙酮酸盐的测定可以用于检测样品中的LDH。在一些实施方案中，使样品在辅酶NAD的存在下与乳酸盐接触，所述辅酶NAD作为样品中LDH的量度产生NADH，然后NADH在电子转移剂的存在下发生氧化。在一些实施方案中，NADH与可以通过测量可见光范围内的吸收来检测的探针或染料前体相互作用。在一些例子中，心肌黄酶使用NADH将四唑盐(INT)还原为红色甲臜(formazan)产物，并测量所述产物。因此，在一些实施方案中，所形成的有色产物的量与样品中的LDH活性成正比。
在一些实施方案中，所述方法涉及将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险，或者由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性。在一些方面，可以基于在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中分析物的水平、量或浓度的平均值或中值值以及在所述平均值或中值值的范围或标准偏差内的值来确定示例性阈值水平，其中所述组中的每名受试者继续展现特定结果，如特定治疗结果，包括展现反应或不展现反应；或者发生毒性或不发生毒性。在一些实施方案中，确定阈值的特定方面包括下文在章节I.E.1和I.E.2中描述的那些。
1.与反应结果相关的示例性生物标记、分析物或参数
在一些实施方案中，分析物或生物标记与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应结果，如客观反应(OR)、完全反应(CR)或部分反应(PR)，或持久反应，如持续3、6、9个月或更久的OR或CR或PR。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，分析物)的较低或降低水平或增加的水平可以与反应相关，所述反应如OR、CR或PR或本文(例如，在章节I.C中)所述的任何反应结果，任选地持久反应，如持续至少3个月、6个月或更久的反应。
在一些实施方案中，分析物或生物标记与已经给予细胞疗法(如使用含有遗传工程化细胞的组合物)的受试者中的特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应或持久反应结果。在一些实施方案中，在给予细胞疗法之前从受试者获得的生物样品中一种或多种分析物的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如特定反应或持久反应结果。在一些实施方案中，特定生物标记的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定反应或持久反应结果相关联。在一些实施方案中，所述反应结果可以是本文(例如，在章节I.C中)所述的任何反应结果。
在一些实施方案中，所述方法包括将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性。在一些实施方案中，所述方法包括基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。在一些实施方案中，所述方法还包括将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。在一些实施方案中，如果所述受试者被确定为不可能实现反应或持久反应，则进一步包括将另外的治疗剂给予所述受试者。
在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)包括与反应结果和/或持久反应相关的那些。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α和C-X-C基序趋化因子10(CXCL10)。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法后的反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现反应。在一些实施方案中，所述反应是或包含客观反应。在一些实施方案中，所述客观反应是或包含完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的降低的水平可以与实现客观反应(包括完全反应(CR)或部分反应(PR))相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF或IL-10的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现反应。在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF或IL-10的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续展现稳定疾病(SD)和/或进行性疾病(PD)。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后持久反应的可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β的降低的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者未实现持久反应。
在一些实施方案中，所述反应是持久反应，如持续至少3个月的CR或PR。
在一些实施方案中，LDH的阈值水平为或为约或低于或低于约600U/L、500U/L、400U/L、300U/L或200U/L。
在一些实施方案中，铁蛋白的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约1000μg/L、900μg/L、800μg/L、700μg/L、600μg/L、500μg/L、400μg/L、300μg/L或200μg/L。
在一些实施方案中，CRP的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约20mg/L、19mg/L、18mg/L、17mg/L、16mg/L、15mg/L、14mg/L、13mg/L、12mg/L、11mg/L、10mg/L、9mg/L、8mg/L、7mg/L、6mg/L或5mg/L。
在一些实施方案中，D-二聚体的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约1000μg/L、900μg/L、800μg/L、700μg/L、600μg/L、500μg/L、400μg/L、300μg/L或200μg/L。
在一些实施方案中，SAA-1的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约100mg/L、90mg/L、80mg/L、70mg/L、60mg/L、50mg/L、40mg/L、30mg/L或20mg/L。
在一些实施方案中，IL-6的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL、3pg/mL或2pg/mL。
在一些实施方案中，IL-10的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约2pg/mL、1pg/mL、0.9pg/mL、0.8pg/mL、0.7pg/mL、0.6pg/mL或0.5pg/mL。
在一些实施方案中，IL-15的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约7pg/mL、6pg/mL、5pg/mL、4pg/mL或3pg/mL。
在一些实施方案中，IL-16的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约1000pg/mL、900pg/mL、800pg/mL、700pg/mL或600pg/mL。
在一些实施方案中，TNF-α的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约10pg/mL、9pg/mL、8pg/mL、7pg/mL或6pg/mL。
在一些实施方案中，IFN-γ的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约30pg/mL、20pg/mL、10pg/mL、9pg/mL、8pg/mL或7pg/mL；
在一些实施方案中，MIP-1α的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约40pg/mL、30pg/mL或20pg/mL；和/或
在一些实施方案中，CXCL-10的示例性阈值水平为或为约或低于或低于约1500pg/mL、1000pg/mL、900pg/mL、800pg/mL、700pg/mL、600pg/mL或500pg/mL。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后的持久反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β和TNF-α的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β和TNF-α的降低的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β或TNF-α的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β或TNF-α的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者未实现持久反应。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后的持久反应可能性的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自血红蛋白和白蛋白的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者不可能实现持久反应。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。在一些实施方案中，所述持久反应是或包含持续至少3个月的CR或PR。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中血红蛋白和白蛋白的升高的水平可以与实现持久反应(如持续至少3个月的CR或PR)相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中血红蛋白或白蛋白的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中血红蛋白或白蛋白的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在低于中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者未实现持久反应。
2.与毒性结果相关的示例性生物标记、分析物或参数
在一些实施方案中，分析物或生物标记与已经给予细胞疗法(如使用含有遗传工程化细胞的组合物)的受试者中的特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如毒性的发生。在一些实施方案中，在给予细胞疗法之前从受试者获得的生物样品中的一种或多种分析物的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果相关，与所述特定结果相关联，指示所述特定结果和/或预测所述特定结果，所述特定结果如毒性的发生，如本文(例如，章节I.D)中所述的任何毒性结果。在一些实施方案中，特定生物标记的存在、表达、水平、量或浓度可以与特定结果或毒性(例如，NT或CRS的发生)相关联。在一些实施方案中，所述毒性是可能与细胞疗法相关的毒性，如本文(例如，章节I.D)中所述的任一种。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS)。在一些实施方案中，所述毒性是严重NT或严重CRS。在一些实施方案中，所述毒性是2级或更高级的NT或者2级或更高级的CRS。在一些实施方案中，所述毒性是3级或更高级的NT或者3级或更高级的CRS。
在一些实施方案中，所述方法包括将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险。在一些实施方案中，所述方法包括给予通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，鉴定具有在给予细胞疗法之后发生毒性的风险的受试者。在一些实施方案中，所述方法还包括在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗。在一些实施方案中，所述方法还涉及如果所述受试者被给予细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
在一些实施方案中，如果所述受试者被鉴定为具有发生毒性的风险，则可以进行一个或多个以下步骤，将其给予所述受试者：(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予要在以下时间给予：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或(b)以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或(c)在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在一些实施方案中，可以评估的生物标记或分析物(包括其参数)包括乳酸脱氢酶(LDH)、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素α2(IFN-α2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)、巨噬细胞炎性蛋白1β(MIP-1β)、嗜酸性粒细胞趋化因子、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、IL-1受体α(IL-1Rα)、IL-1β、IFN-γ诱导蛋白10(IP-10)、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、D-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括铁蛋白、CRP、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α或MIP-1β。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，生物标记)的升高的水平或增加的水平可以与神经毒性(例如，严重神经毒性或3级或更高级或4级或5级神经毒性)的发生相关。在一些实施方案中，如与参考值或阈值水平相比，一种或多种此类生物标记(例如，分析物)的升高的水平或增加的水平可以与神经毒性(例如，严重神经毒性或3级或更高级或4级或5级神经毒性)的发生相关。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β的升高水平可以与发生神经毒性的较高风险相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在30％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在30％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续发生毒性。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。
在一些实施方案中，LDH的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L、600U/L或700U/L。
在一些实施方案中，铁蛋白的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约500ng/mL、600ng/mL、700ng/mL、800ng/mL、900ng/mL、1000ng/mL或1500ng/mL。
在一些实施方案中，CRP的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约20mg/L、30mg/L、40mg/L、50mg/L、60mg/L、70mg/L或80mg/L。
在一些实施方案中，IL-6的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IL-8的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL、20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IL-10的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约20pg/mL、30pg/mL、40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL或70pg/mL。
在一些实施方案中，TNF-α的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约20pg/mL或30pg/mL。
在一些实施方案中，IFN-α2的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL、70pg/mL或80pg/mL。
在一些实施方案中，MCP-1；和/或的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约200pg/mL或300pg/mL。
在一些实施方案中，MIP-1β的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约40pg/mL、50pg/mL、60pg/mL、70pg/mL或80pg/mL。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记包括选自IL-8、IL-10和CXCL10的一种或多种分析物。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记中的任一种，如果一种或多种分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。在一些实施方案中，所述毒性是严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中IL-8、IL-10和CXCL10的升高的水平可以与发生神经毒性或严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性的较高风险相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中IL-8、IL-10或CXCL10的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在30％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中IL-8、IL-10或CXCL10的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在30％内或在5％内，和/或是在低于中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续发生毒性。
在一些方面，可以关于给予细胞疗法之后发生毒性的风险的评估进行评估或分析的示例性分析物或生物标记或肿瘤负荷的体积量度包括选自以下的一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度：直径乘积之和(SPD)、LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β。在一些实施方案中，对于前述分析物或生物标记或肿瘤负荷的体积量度中的任一种，如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度高于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度低于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的低风险。在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中直径乘积之和(SPD)、LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β的升高的水平或量度可以与发生神经毒性(NT)或细胞因子释放综合征(CRS)的较高风险相关。
在一些实施方案中，所述一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β，并且所述毒性是神经毒性。在一些实施方案中，所述一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α，并且所述毒性是CRS。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中LDH、SPD、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β的升高的水平或量度可以与发生神经毒性(NT)的较高风险相关。在一些方面，在给予细胞疗法之前(治疗前)从受试者获得的生物样品中LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α的升高的水平或量度可以与发生细胞因子释放综合征(CRS)的较高风险相关。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度或直径乘积之和(SPD)的肿瘤负荷的中值或平均体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在32％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度或所述肿瘤负荷的中值或平均体积量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后仍不发生任何毒性。
在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α或MIP-1β的中值或平均水平、量或浓度或直径乘积之和(SPD)的肿瘤负荷的中值或平均体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在32％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度或所述肿瘤负荷的中值或平均体积量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续发生毒性。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且LDH的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L或600U/L。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且SPD的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约30cm2、40cm2、50cm2、60cm2、70cm2、80cm2或90cm2。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且IL-10的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约0.8pg/mL、0.9pg/mL、1pg/mL、2pg/mL、3pg/mL或4pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且IL-15的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL或7pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且IL-16的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、900pg/mL或1000pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且TNF-α的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL或10pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是神经毒性，并且MIP-1β的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约70pg/mL、80pg/mL、90pg/mL或100pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且LDH的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约300U/L、400U/L、500U/L或600U/L。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且SPD的所述阈值水平为或为约或高于或高于约20cm2、30cm2、40cm2或50cm2。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且铁蛋白的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约300ng/mL、400ng/mL、500ng/mL、600ng/mL、700ng/mL、800ng/mL、900ng/mL或1000ng/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且CRP的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约20mg/L、30mg/L或40mg/L。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且d-二聚体的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约300pg/mL、400pg/mL、500pg/mL、600pg/mL、700pg/mL、800pg/mL、900pg/mL或1000pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且IL-6的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约2pg/mL、3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL或9pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且IL-15的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约3pg/mL、4pg/mL、5pg/mL、6pg/mL、7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL或10pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且TNF-α的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约7pg/mL、8pg/mL、9pg/mL、10pg/mL或15pg/mL。
在一些实施方案中，所述毒性是CRS，并且MIP-1α的示例性阈值水平为或为约或高于或高于约20pg/mL、30pg/mL或40pg/mL。
在一些实施方案中，所述生物标记是LDH，并且在一些情况下，毒性(例如，CRS或NT)的发生与高于阈值的LDH值相关联。在一些实施方案中，所述炎性标记是LDH，并且所述阈值为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。
在一些实施方案中，如果样品中所述生物标记(例如，分析物)的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前、在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内、与开始将所述细胞疗法给予所述受试者同时和/或在开始将所述细胞疗法给予所述受试者后第一次发热时，将能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗给予所述受试者。与所提供方法结合用于治疗、预防、延迟、降低或减弱发生毒性的风险的示例性药剂或干预描述于章节II中。
在一些情况下，如果样品中所述生物标记的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则将细胞疗法以降低的剂量或如下剂量给予所述受试者：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关。在一些情况下，如果样品中所述生物标记的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下将细胞疗法给予所述受试者，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在一些实施方案中，如果所述生物标记(例如，分析物)的水平、量或浓度低于所述分析物的阈值水平，则任选地以未降低的剂量将细胞疗法给予所述受试者。在一些情况下，任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，如果所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
在所提供方法的一些方面中，通过将所述生物标记(例如，分析物)或每种生物标记(例如，分析物)的参数(例如，浓度、量、水平或活性)与所述生物标记或单独地每种生物标记的相应参数的参考值(如阈值水平)比较，确定受试者具有发生毒性(例如，神经毒性，如严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如4级或5级神经毒性和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险。在一些实施方案中，所述比较指示所述受试者是否具有发生毒性(例如，神经毒性，如严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级神经毒性，和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险，和/或指示发生所述毒性的风险的程度。在一些实施方案中，所述参考值是阈值水平或截止值，在所述阈值水平或截止值下，存在预测这种毒性将发生或者可能单独或与组中的一种或多种生物标记组合发生的良好预测价值(例如，准确度、灵敏度和/或特异性)。在一些情况下，这个参考值(例如，阈值水平)可以是或者是在进行所述方法之前预定或已知的，如从先前用细胞疗法治疗并针对生物标记或单独地组中每种生物标记的参数与毒性结果的存在(例如，神经毒性(如严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级神经毒性)和/或CRS(如严重CRS或3级或更高级的CRS)的存在)的相关进行评估的多个受试者来预定或已知。
在一些实施方案中，生物标记(例如，LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的高于或大于相应参数的参考值(例如，阈值水平)的参数与毒性风险的阳性预测相关(单独或结合对组中其他生物标记的评估)。在一些实施方案中，生物标记的等于或低于相应参数的参考值(例如，阈值水平)的参数与毒性风险的阴性预测相关(单独或结合对组中其他生物标记的评估)。
在一些实施方案中，所述阈值水平是基于对生物标记呈阳性的样品中所述生物标记(例如，分析物)的水平、量、浓度或其他量度来确定。在一些方面，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中分析物或参数的平均水平、量或浓度或量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度或量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性(例如，神经毒性，如严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级神经毒性，和/或CRS，如严重CRS或3级或更高级的CRS)。
在任何所提供方法的一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)与发生严重神经毒性(如严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级神经毒性，和/或严重CRS或3级或更高级的CRS)的风险相关，和/或预测所述风险。在一些实施方案中，所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中所述分析物或参数的平均水平、量或浓度或量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度或量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性，例如，4级或5级神经毒性，和/或严重CRS或3级或更高级的CRS。
在一些实施方案中，所述体积量度是SPD，并且在一些情况下，毒性(例如CRS或NT)的发生与高于阈值的SPD值相关。在一些实施方案中，所述体积量度是SPD，并且所述阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，所述体积量度是SPD，并且所述阈值为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。
在一些实施方案中，包括体积肿瘤测量值的参数与对细胞疗法的反应和/或发生毒性(例如，CRS或神经毒性(NT))的风险相关。
在一些实施方案中，所述体积量度是SPD，并且所述阈值水平为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。在一些实施方案中，所述体积量度是SPD，并且所述阈值水平为或为约50cm2。
在一些实施方案中，所述分析物是LDH，并且所述阈值水平为或为约300单位/升(U/L)，为或为约400U/L，为或为约500U/L，或者为或为约600U/L。在一些实施方案中，所述分析物是LDH，并且所述阈值水平为或为约500U/L。
在一些实施方案中，所述参数或生物标记是LDH。在一些实施方案中，所述生物标记是LDH，并且所述阈值是500U/L或更高。在一些实施方案中，所述参数或生物标记是SPD。在一些实施方案中，所述参数是SPD，并且所述阈值为或为约50cm2或更高。在一些实施方案中，生物标记或参数是SPD和LDH，并且所述阈值是50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH。在一些实施方案中，生物标记或参数与增加的发生CRS或NT的风险相关。
在一些实施方案中，高于阈值(例如，50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH)的参数或标记的测量与增加约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍的发生CRS或NT(如任何等级的CRS或NT)的风险相关。在一些实施方案中，低于阈值(例如，低于500cm2的SPD和低于500U/L的LDH)的参数或标记的测量与减小约2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多倍的发生CRS或NT(如任何等级的CRS或NT)的风险相关。
在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)包括与增加的细胞药代动力学(PK)参数(例如，增加的细胞最大血清浓度(Cmax)或增加的暴露(例如，曲线下面积(AUC)))相关的那些。在一些实施方案中，所述生物标记(例如，分析物)(包括其参数)包括IL-7、IL-15、MIP-1α和TNF-α。
在一些实施方案中，所述参数是与肿瘤负荷相关的参数，例如，肿瘤负荷的测量。在一些方面，所述方法还涉及基于通过评估生物标记的存在或不存在和/或将生物标记与所述生物标记的参考值或阈值水平相比较而确定的毒性风险，进一步监测所述受试者可能的毒性症状。
II.治疗或改善毒性症状的干预或药剂
在一些实施方案中，所提供的方法和制品可以与用于治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的一种或多种药剂或治疗结合使用，或者涉及或包括所述一种或多种药剂或治疗。在一些例子中，能够治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的所述药剂或其他治疗是在包含遗传工程化细胞的治疗性细胞组合物的给予之前和/或同时给予。
在一些实施方案中，能够治疗、预防、延迟或减弱毒性发生的所述药剂(例如，毒性靶向剂)或治疗是类固醇，是细胞因子受体(如IL-6受体、CD122受体(IL-2Rβ受体)或CCR2)的拮抗剂或抑制剂，或者是细胞因子(如IL-6、MCP-1、IL-10、IFN-γ、IL-8或IL-18)的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是细胞因子受体和/或细胞因子(如TGF-β)的激动剂。在一些实施方案中，所述药剂(例如激动剂、拮抗剂或抑制剂)是抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，可以采用流体推注用作干预，例如用于治疗与CRS相关的低血压。在一些实施方案中，目标血细胞比容水平>24％。在一些实施方案中，所述干预包括使用具有血液或血浆过滤的吸收性树脂技术。在一些情况下，所述干预包括透析、血浆置换或类似技术。在一些实施方案中，可以采用血管加压药或醋氨酚。
在一些实施方案中，所述药剂可以与所述疗法(如用于过继细胞疗法的细胞)依序、间歇、或同时或在相同组合物中给予。例如，所述药剂可以在免疫疗法和/或细胞疗法的给予之前、期间、同时或之后给予。
在一些实施方案中，所述药剂是在如本文所述的时间并且根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物来给予。在一些实施方案中，所述毒性靶向剂是在开始所述免疫疗法和/或细胞疗法后(如少于或不超过)3、4、5、6、7、8、9或10天内的时间给予。在一些实施方案中，所述毒性靶向剂是在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后1天、2天或3天或约1天、2天或3天内给予。
在一些实施方案中，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后在所述受试者不展现2级或更高级的CRS或2级或更高级的神经毒性的时间将所述药剂(例如，毒性靶向剂)给予受试者。在一些方面，所述毒性靶向剂是在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后在所述受试者不展现严重CRS或严重神经毒性的时间给予。因此，在开始给予所述免疫疗法和/或细胞疗法与所述毒性靶向剂之间，所述受试者是不展现2级或更高级的CRS(如严重CRS)和/或不展现2级或更高级的神经毒性(如严重神经毒性)的受试者。
用于治疗或改善毒性(如严重CRS(sCRS))的干预的非限制性例子描述于表5中。在一些实施方案中，所述干预包括托珠单抗或如所述的其他毒性靶向剂，所述干预可以在所述受试者中存在大于或大于约38℃或者大于或大于约39℃的持续或持久发热的时间进行。在一些实施方案中，在干预前，所述发热在所述受试者中持续超过10小时、超过12小时、超过16小时、或超过24小时。
在一些情况下，所述药剂或疗法或干预(例如，毒性靶向剂)是单独给予或者是作为如本文所述的组合物或配制品(如药物组合物或配制品)的一部分给予。因此，单独的或作为药物组合物的一部分的所述药剂可以静脉内或口服给予，或者通过任何其他可接受的已知给予途径或如本文所述来给予。
在一些实施方案中，与在已经发生或诊断2级或更高级的CRS或神经毒性，如在已经发生或诊断严重(例如，3级或更高级)CRS后或在已经发生或诊断严重(例如，3级或更高级)神经毒性后(例如，在已经表现出3级或更高级的CRS或神经毒性的身体体征或症状后)，用所述药剂治疗受试者的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的给予频率有所减小。在一些实施方案中，与在给予所述免疫疗法和/或细胞疗法后大于3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周或更久，针对CRS或神经毒性治疗受试者的方法中所述药剂的剂量或其频率相比，剂量方案中药剂的剂量或所述药剂的给予频率有所减小。在一些实施方案中，所述剂量减小大于或大于约1.2倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、6倍、7倍、8倍、9倍、10倍或更多。在一些实施方案中，所述剂量减小大于或大于约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更多。在一些实施方案中，给药频率下降，如日剂量的数量减小或给药天数减少。
A.类固醇
在一些实施方案中，治疗和/或预防、延迟或减弱针对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性的发生或发生所述毒性的风险的所述药剂(例如，毒性靶向剂)是类固醇，例如，皮质类固醇。皮质类固醇通常包括糖皮质激素和盐皮质激素。
任何皮质类固醇(例如，糖皮质激素)可以用于本文所提供的方法中。在一些实施方案中，糖皮质激素包括合成和非合成的糖皮质激素。示例性糖皮质激素包括但不限于：阿氯米松(alclomethasone)、阿尔孕酮(algestone)、倍氯米松(beclomethasone)(例如二丙酸倍氯米松)、倍他米松(betamethasone)(例如倍他米松17-戊酸酯、倍他米松醋酸钠、倍他米松磷酸钠、倍他米松戊酸酯)、布地奈德(budesonide)、氯倍他索(clobetasol)(例如丙酸氯倍他索)、氯倍他松(clobetasone)、氯可托龙(clocortolone)(例如氯可托龙新戊酸酯)、氯泼尼醇(cloprednol)、皮质酮、可的松(cortisone)和氢化可的松(hydrocortisone)(例如醋酸氢化可的松)、可的伐唑(cortivazol)、地夫可特(deflazacort)、地奈德(desonide)、去羟米松(desoximethasone)、地塞米松(dexamethasone)(例如地塞米松21-磷酸酯、醋酸地塞米松、地塞米松磷酸钠)、二氟拉松(diflorasone)(例如二氟拉松二醋酸酯)、二氟可龙(diflucortolone)、二氟泼尼酯(difluprednate)、甘草次酸(enoxolone)、氟扎可特(fluazacort)、氟氯奈德(flucloronide)、氟氢可的松(fludrocortisone)(例如醋酸氟氢可的松)、氟米松(flumethasone)(例如特戊酸氟米松)、氟尼缩松(flunisolide)、氟轻松(fluocinolone)(例如丙酮化氟轻松)、醋酸氟轻松(fluocinonide)、氟可丁(fluocortin)、氟可龙(fluocortolone)、氟米龙(fluorometholone)(例如醋酸氟米龙)、氟培龙(fluperolone)(例如醋酸氟培龙)、氟泼尼定(fluprednidene)、氟泼尼龙(fluprednisolone)、丙酮缩氟氢羟龙(flurandrenolide)、氟替卡松(fluticasone)(例如丙酸氟替卡松)、福莫可他(formocortal)、氯氟舒松(halcinonide)、卤倍他索(halobetasol)、卤米松(halometasone)、卤泼尼松(halopredone)、氢可他酯(hydrocortamate)、氢化可的松(例如氢化可的松21-丁酸酯、氢化可的松醋丙酯、醋酸氢化可的松、氢化可的松丁丙酸酯、丁酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、氢化可的松半琥珀酸酯、氢化可的松丙丁酸酯、磷酸氢化可的松钠、氢化可的松琥珀酸钠、戊酸氢化可的松)、依碳酸氯替泼诺(loteprednol etabonate)、马泼尼酮(mazipredone)、甲羟松(medrysone)、甲泼尼松(meprednisone)、甲泼尼龙(乙丙酸甲泼尼龙、醋酸甲泼尼龙、半琥珀酸甲泼尼龙、甲泼尼龙琥珀酸钠)、莫米松(mometasone)(如糠酸莫米松)、帕拉米松(如醋酸帕拉米松)、泼尼卡酯(prednicarbate)、泼尼松龙(prednisolone)(例如泼尼松龙25-二乙氨基乙酸酯、泼尼松龙磷酸钠、泼尼松龙21-半琥珀酸盐、醋酸泼尼松龙；泼尼松龙法尼酯、泼尼松龙半琥珀酸盐、泼尼松龙-21(β-D-葡萄糖醛酸苷)、间磺苯甲酸泼尼松龙、泼尼松龙司替酸酯、泼尼松龙叔丁乙酸酯、四氢邻苯二甲酸泼尼松龙)、泼尼松(prednisone)、泼尼松龙戊酸酯(prednival)、泼尼立定(prednylidene)、利美索龙(rimexolone)、替可的松(tixocortol)、曲安西龙(triamcinolone)(例如曲安奈德(triamcinolone acetonide)、苯曲安奈德(triamcinolone benetonide)、己曲安奈德(triamcinolone hexacetonide)、曲安奈德21-棕榈酸酯、醋酸曲安西龙)。这些糖皮质激素及其盐详细论述于例如以下文献中：Remington's Pharmaceutical Sciences,A.Osol编辑,Mack Pub.Co.,伊斯顿市,宾夕法尼亚州(第16版，1980)。
在一些例子中，所述糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲泼尼龙、泼尼松龙和泼尼松。在特定例子中，所述糖皮质激素是地塞米松。
在一些实施方案中，所述药剂是皮质类固醇并且是以对治疗、改善或减轻针对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的一种或多种症状治疗有效的量来给予。在一些实施方案中，改进或成功治疗的指示物包括确定未能表现毒性分级量表(例如，CRS或神经毒性分级量表)上的相关得分(如小于3的得分)，或者如本文所讨论的分级量表上的分级或严重程度的变化(如从4分到3分的变化，或从4分到2分、1分或0分的变化)。
在一些方面，所述皮质类固醇是以治疗有效剂量提供。治疗有效浓度可以通过在已知的体外或体内(例如动物模型)系统中进行测试，凭经验确定。例如，要给予以改善针对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或不良影响的所选皮质类固醇的量可以通过标准临床技术来确定。另外，可以采用动物模型来帮助确定最佳剂量范围。可以凭经验确定的精确剂量可以取决于具体的治疗制剂、方案和给药时间表、给予途径和疾病的严重性。
所述皮质类固醇可以按有效改善与所述毒性(如与CRS或神经毒性)相关的一种或多种症状的任何量来给予。可以将所述皮质类固醇(例如，糖皮质激素)例如以每个剂量的如下量给予70kg成人受试者：介于或介于约0.1与100mg之间、0.1至80mg、0.1至60mg、0.1至40mg、0.1至30mg、0.1至20mg、0.1至15mg、0.1至10mg、0.1至5mg、0.2至40mg、0.2至30mg、0.2至20mg、0.2至15mg、0.2至10mg、0.2至5mg、0.4至40mg、0.4至30mg、0.4至20mg、0.4至15mg、0.4至10mg、0.4至5mg、0.4至4mg、1至20mg、1至15mg或1至10mg。通常，所述皮质类固醇(如糖皮质激素)是以每个剂量的如下量给予普通成人受试者：介于或介于约0.4与20mg之间，例如，为或为约0.4mg、0.5mg、0.6mg、0.7mg、0.75mg、0.8mg、0.9mg、1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg、10mg、11mg、12mg、13mg、14mg、15mg、16mg、17mg、18mg、19mg或20mg。
在一些实施方案中，可以将所述皮质类固醇例如以如下剂量给予体重通常为约70kg至75kg的普通成人受试者：为或为约0.001mg/kg(所述受试者)、0.002mg/kg、0.003mg/kg、0.004mg/kg、0.005mg/kg、0.006mg/kg、0.007mg/kg、0.008mg/kg、0.009mg/kg、0.01mg/kg、0.015mg/kg、0.02mg/kg、0.025mg/kg、0.03mg/kg、0.035mg/kg、0.04mg/kg、0.045mg/kg、0.05mg/kg、0.055mg/kg、0.06mg/kg、0.065mg/kg、0.07mg/kg、0.075mg/kg、0.08mg/kg、0.085mg/kg、0.09mg/kg、0.095mg/kg、0.1mg/kg、0.15mg/kg、0.2mg/kg、0.25mg/kg、0.30mg/kg、0.35mg/kg、0.40mg/kg、0.45mg/kg、0.50mg/kg、0.55mg/kg、0.60mg/kg、0.65mg/kg、0.70mg/kg、0.75mg/kg、0.80mg/kg、0.85mg/kg、0.90mg/kg、0.95mg/kg、1mg/kg、1.05mg/kg、1.1mg/kg、1.15mg/kg、1.20mg/kg、1.25mg/kg、1.3mg/kg、1.35mg/kg或1.4mg/kg。
所述皮质类固醇或糖皮质激素(例如，地塞米松)可以口服(片剂、液体或液体浓缩物)(PO)、静脉内(IV)、肌内或通过任何其他已知途径或本文所述的途径(例如，关于药物配制品)给予。在一些方面，皮质类固醇是以推注形式给予，并且在其他方面中，其可以在一个时间段中给予。
在一些方面，所述糖皮质激素可以在超过一天的时间段中，如在两天中、在3天中、或在4天或更多天中给予。在一些实施方案中，所述皮质类固醇可以每天一次、每天两次、或者每天三次或更多次给予。例如，在一些例子中，所述皮质类固醇(例如地塞米松)可以一天两次以10mg(或等效量)IV给予，持续三天。
在一些实施方案中，皮质类固醇(例如，糖皮质激素)的剂量是以每次治疗逐次较低的剂量给予。因此，在一些此类治疗方案中，皮质类固醇的剂量是逐渐减少的。例如，所述皮质类固醇可以按4mg的初始剂量(或等效剂量，如关于地塞米松)给予，并且在每次连续给予时可以降低剂量，使得下一次给予的剂量为3mg，下一次给予为2mg，并且下一次给予为1mg。
通常，所给予的皮质类固醇的剂量取决于特定皮质类固醇，因为不同皮质类固醇的效力之间存在差异。通常应理解，药物的效力不同，并且剂量可以因此而变化，以获得等效效果。表6显示根据各种糖皮质激素和给予途径的效力的当量。临床给药中的等效效力是熟知的。有关等效类固醇给药(以非时间治疗方式)的信息可以参见1999年3月的BritishNational Formulary(BNF)37。
因此，在一些实施方案中，所述类固醇是按以下等效剂量量给予：从或从约1.0mg至20mg地塞米松/天，如1.0mg至15mg地塞米松/天、1.0mg至10mg地塞米松/天、2.0mg至8mg地塞米松/天、或2.0mg至6.0mg地塞米松/天，每个都包含端值。在一些情况下，类固醇是以4mg或约4mg或者8mg或约8mg地塞米松/天的等效剂量给予。
在一些实施方案中，如果发热在用托珠单抗治疗后持续，则给予所述类固醇。例如，在一些实施方案中，在持续发热的情况下，地塞米松是多达每6-12小时以5-10mg的剂量口服或静脉内给予。在一些实施方案中，托珠单抗是与补氧同时给予或在补氧后给予。
B.小神经胶质细胞抑制剂
在一些实施方案中，组合疗法中的抑制剂是小神经胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂的给予调节小神经胶质细胞的活性。在一些实施方案中，所述抑制剂是抑制小神经胶质细胞中的信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，所述小神经胶质细胞抑制剂影响小神经胶质细胞内稳态、存活和/或增殖。在一些实施方案中，所述抑制剂靶向CSF1R信号传导通路。在一些实施方案中，所述抑制剂是CSF1R的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂是小分子。在一些情况下，所述抑制剂是抗体。
在一些方面，所述抑制剂的给予导致选自以下的一种或多种作用：改变小神经角质细胞内稳态和存活力、降低或阻断小神经胶质细胞增殖、减少或消除小神经角质细胞、降低小神经角质细胞激活、降低小神经胶质细胞的一氧化氮产生、降低小神经胶质细胞中的一氧化氮合酶活性、或保护运动神经元免受小神经角质细胞激活的影响。在一些实施方案中，与即将开始给予所述抑制剂之前的时间相比，所述药剂改变CSF1R抑制的血清或血液生物标记的水平，或者降低尿液胶原蛋白1型交联N-端肽(NTX)的水平。在一些实施方案中，所述药剂的给予短暂抑制小神经胶质细胞活性的活性，和/或其中对小神经胶质细胞活性的所述抑制不是永久性的。在一些实施方案中，所述药剂的给予短暂抑制CSF1R的活性，和/或其中对CSF1R活性的所述抑制不是永久性的。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。在一些实施方案中，所述方法涉及给予小神经胶质细胞活性的抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是抑制小神经胶质细胞中信号传导通路的活性的拮抗剂。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂影响小神经角质细胞内稳态、存活和/或增殖。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)，上调微小RNA-124(miR-124)，抑制小神经胶质细胞中的一氧化氮产生，抑制一氧化氮合酶，或激活转录因子NRF2(也称为核因子(红系细胞衍生的2)样2或NFE2L2)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂靶向CSF1(也称为巨噬细胞集落刺激因子MCSF)。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂影响MCSF刺激的M-CSF受体的磷酸化(Pryer等人Proc Am Assoc Cancer Res,AACR Abstract nr DDT02-2(2009))。在一些情况下，降低小神经胶质细胞活性的药剂是MCS110(国际专利申请公开号WO 2014001802；临床试验研究记录号：A1 NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是靶向CSF1途径的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是通过与ATP竞争结合至CSF1R激酶而抑制CSF1R激酶活性的小分子。在一些实施方案中，所述药剂是抑制CFS1R受体激活的小分子。在一些情况下，CSF-1配体与CSF1R的结合被抑制。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是美国专利申请公开号US20160032248中所述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，所述药剂是选自以下的小分子抑制剂：PLX-3397、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、PLX73086(AC-708)、DCC-3014、AZD6495、GW2580、Ki20227、BLZ945、PLX647、PLX5622。在一些实施方案中，所述药剂是以下文献中所述的任何抑制剂：Conway等人,Proc Natl Acad Sci U S A,102(44):16078-83(2005)；Dagher等人,Journal of Neuroinflammation,12:139(2015)；Ohno等人,Mol Cancer Ther.5(11):2634-43(2006)；von Tresckow等人Clin Cancer Res.,21(8)(2015)；Manthey等人MolCancer Ther.(8(11):3151-61(2009)；Pyonteck等人,Nat Med.19(10):1264-1272(2013)；Haegel等人,Cancer Res AACR Abstract nr 288(2015)；Smith等人,Cancer Res AACRAbstract nr 4889(2016)；临床试验研究记录号：NCT01525602；NCT02734433；NCT02777710；NCT01804530；NCT01597739；NCT01572519；NCT01054014；NCT01316822；NCT02880371；NCT02673736；国际专利申请公开号WO 2008063888A2、WO 2006009755A2、美国专利申请公开号US20110044998、US 2014/0065141和US 2015/0119267。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-((2-(((1R,2R)-2-羟基环己基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶酰胺(BLZ945)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
其中R1是烷基吡唑或烷基甲酰胺，并且R2是羟基环烷基
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是5-((5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基)-N-((6-(三氟甲基)吡啶-3-基)甲基)吡啶-2-胺,N-[5-[(5-氯-1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基)甲基]-2-吡啶基]-6-(三氟甲基)-3-吡啶甲胺)(PLX 3397)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是5-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-3-基甲基)-N-[[4-(三氟甲基)苯基]甲基]-2-氨基吡啶二盐酸盐(PLX647)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US7893075中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-氰基-N-[2-(1-环己烯-1-基)-4-[1-[(二甲基氨基)乙酰基]-4-哌啶基]苯基]-1H-咪唑-2-甲酰胺单盐酸盐(JNJ28312141)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US7645755中描述的任何抑制剂。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是1H-咪唑-2-甲酰胺、5-氰基-N-(2-(4,4-二甲基-1-环己烯-1-基)-6-(四氢-2,2,6,6-四甲基-2H-吡喃-4-基)-3-吡啶基)-、4-氰基-1H-咪唑-2-甲酸N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯基)-6-(2,2,6,6-四甲基四氢吡喃-4-基)吡啶-3-基)酰胺、4-氰基-N-(2-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-6-(2,2,6,6-四甲基-四氢-2H-吡喃-4-基)吡啶-3-基)-1H-咪唑-2-甲酰胺(JNJ-40346527)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在另一个实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐(国际专利申请公开号WO 2009099553)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是4-(2,4-二氟苯胺基)-7-乙氧基-6-(4-甲基哌嗪-1-基)喹啉-3-甲酰胺(AZD6495)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞活性的药剂是N-{4-[(6,7-二甲氧基-4-喹啉基)氧基]-2-甲氧基苯基}-N0-[1-(1,3-噻唑-2-基)乙基]脲(Ki20227)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是靶向CSF1途径的抗体。在一些实施方案中，所述药剂是结合CSF1R的抗体。在一些实施方案中，所述抗CSF1R抗体阻断CSF1R二聚化。在一些实施方案中，所述抗CSF1R抗体阻断由结构域D4和D5形成的CSF1R二聚化界面(Ries等人Cancer Cell 25(6):846-59(2014))。在一些情况下，所述药剂选自艾马珠单抗(RG7155；RO5509554)、Cabiralizumab(FPA-008)、LY-3022855(IMC-CS4)、AMG-820、TG-3003、MCS110、H27K15、12-2D6、2-4A5(Rovida和Sbarba,J Clin Cell Immunol.6:6(2015)；临床试验研究记录号：NCT02760797；NCT01494688；NCT02323191；NCT01962337；NCT02471716；NCT02526017；NCT01346358；NCT02265536；NCT01444404；NCT02713529；NCT00757757；NCT02807844；NCT02435680；NCT01643850)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是四环素抗生素。例如，所述药剂影响小神经胶质细胞中的IL-1b、IL-6、TNF-α或iNOS浓度(等人PNAS 95(26):15769-15774(1998)；临床试验研究记录号：NCT01120899)。在一些实施方案中，所述药剂是阿片样物质拮抗剂(Younger等人Pain Med.10(4):663-672(2009))。在一些实施方案中，所述药剂降低谷氨酸能神经传递(美国专利号5,527,814)。在一些实施方案中，所述药剂调节NFkB信号传导(Valera等人J.Neuroinflammation 12:93(2015)；临床试验研究记录号：NCT00231140)。在一些实施方案中，所述药剂靶向大麻素受体(Ramírez等人J.Neurosci 25(8):1904-13(2005))。在一些实施方案中，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、利鲁唑、来那度胺和大麻素(任选地WIN55或212-2)。
在一些情况下，相信来自小神经胶质细胞的一氧化氮产生会导致或增加神经毒性。在一些实施方案中，所述药剂调节或抑制小神经胶质细胞的一氧化氮产生。在一些实施方案中，所述药剂抑制一氧化氮合酶(NOS)。在一些实施方案中，所述NOS抑制剂是Ronopterin(VAS-203)，也称为4-氨基-四氢生物蝶呤(4-ABH4)。在一些实施方案中，所述NOS抑制剂是cindunistat、A-84643、ONO-1714、L-NOARG、NCX-456、VAS-2381、GW-273629、NXN-462、CKD-712、KD-7040或胍基乙基二硫化物。在一些实施方案中，所述药剂是以下文献中所述的任何抑制剂：等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32。
在一些实施方案中，所述药剂阻断如到中枢神经系统的T细胞运输。在一些实施方案中，阻断T细胞运输可以减少或阻止免疫细胞跨越血管壁进入中枢神经系统中，包括跨越血脑屏障。在一些情况下，激活的抗原特异性T细胞在CNS中再次激活时产生促炎细胞因子，包括IFN-γ和TNF，从而导致激活驻留细胞，如小神经胶质细胞和星形胶质细胞。参见等人,Neurology.2009年6月2日；72(22):1922-1930。因此，在一些实施方案中，如通过阻断运输和/或抑制此类细胞跨越血脑屏障的能力来隔绝激活的T细胞与小神经角质细胞，可以减少或消除小神经角质细胞激活。在一些实施方案中，所述药剂抑制免疫细胞(包括T细胞)上的粘附分子。在一些实施方案中，所述药剂抑制整合素。在一些实施方案中，所述整合素是α-4整合素。在一些实施方案中，所述药剂是那他珠单抗/>在一些实施方案中，所述药剂调节细胞表面受体。在一些实施方案中，所述药剂调节鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5。在一些实施方案中，所述药剂引起细胞受体(如鞘氨醇-1-磷酸(S1P)受体，如S1PR1或S1PR5)的内化。在一些实施方案中，所述药剂是芬戈莫德或奥扎莫德(RPC-1063)。
据信转录因子NRF2例如通过开启在启动子区域中含有顺式作用元件的基因来调节抗氧化剂反应。这种元件的例子包括抗氧化剂反应元件(ARE)。在一些实施方案中，所述药剂激活NRF2。在一些实施方案中，激活小神经角质细胞中的NRF2降低小神经角质细胞对IFN和LPS的反应性。在一些实施方案中，激活NRF2抑制、减慢或降低脱髓鞘作用、轴突损失、神经元死亡和/或少突胶质细胞死亡。在一些实施方案中，所述药剂上调通过NRF2调节的细胞的细胞保护途径。在一些实施方案中，激活NRF2的药剂是富马酸二甲酯在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,399,514中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是以下文献中所述的任何抑制剂：/>等人,Cell Stem Cell.2012年11月2日；11(5):620-32.
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是(4S,4aS,5aR,12aS)-4,7-双(二甲基氨基)-3,10,12,12a-四羟基-1,11-二氧代-1,4,4a,5,5a,6,11,12a-八氢并四苯-2-甲酰胺(米诺环素)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利申请公开号US20100190755中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
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或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是3-(7-氨基-3-氧代-1H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮(来那度胺)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是(4R,4aS,7aR,12bS)-4a,9-二羟基-3-丙-2-烯基-2,4,5,6,7a,13-六氢-1H-4,12-亚甲基苯并呋喃并[3,2-e]异喹啉-7-酮(纳洛酮)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US8247425中描述的任何化合物。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是2-氨基-6-(三氟甲氧基)苯并噻唑、6-(三氟甲氧基)苯并[d]噻唑-2-胺或6-(三氟甲氧基)-1,3-苯并噻唑-2-胺(利鲁唑)或其药学上可接受的盐或其衍生物，如美国专利号US5527814中所述。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是小神经胶质细胞中信号传导通路的调节剂。在一些情况下，所述药剂降低小神经胶质细胞信号传导。在一些实施方案中，所述药剂是GM-CSF(CSF2)抑制剂。在其他实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是离子通道阻断剂。在一些具体实施方案中，所述药剂是钙通道阻断剂。例如，在一些具体例子中，所述药剂是二氢吡啶钙通道阻断剂。在一些实施方案中，所述药剂是微小RNA抑制剂。例如，所述药剂靶向miR-155。在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂选自MOR103、尼莫地平、IVIg和LNA-抗miR-155(Butoxsky等人Ann Neurol.,77(1):75-99(2015)；和Sanz等人,Br J Pharmacol.167(8):1702-1711(2012)；Winter等人,Ann Clinand Transl Neurol.2328-9503(2016)；临床试验研究记录号：NCT01517282、NCT00750867)。
在一些实施方案中，降低小神经胶质细胞激活的药剂是2,6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-1,4-二氢吡啶-3,5-二甲酸3-(2-甲氧基乙基)酯5-丙烷-2-基酯(尼莫地平)或其药学上可接受的盐或其衍生物。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号US3799934中描述的任何抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是以下化合物：
或其药学上可接受的盐。
在一些情况下，降低小神经胶质细胞激活的药剂是以只影响中枢神经系统和/或不影响肿瘤相关的巨噬细胞的形式来给予。在一些实施方案中，所述药剂促进小神经胶质细胞静止，但是不会消除或减少小神经胶质细胞的数量。在一些实施方案中，所述方法涉及特异性抑制脑中的小神经胶质细胞活性，如在Ponomarev等人,Nature Medicine,(1):64-70(2011)中所述。
降低小神经胶质细胞激活的示例性药剂和用于给予此类药剂的示例性给药方案陈述于下表7中。
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C.其他药剂(例如，细胞因子靶向剂)
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的所述药剂(例如，毒性靶向剂)是靶向细胞因子的药剂，例如，是细胞因子的拮抗剂或抑制剂，所述细胞因子如转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)、IL-2、MIP1β(CCL4)、TNFα、IL-1、干扰素γ(IFN-γ)或单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)。在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的药剂是靶向细胞因子受体(例如，抑制细胞因子受体或者是细胞因子受体的拮抗剂)，所述细胞因子受体如IL-6受体(IL-6R)、IL-2受体(IL-2R/CD25)、MCP-1(CCL2)受体(CCR2或CCR4)、TGF-β受体(TGF-βI、II或III)、IFN-γ受体(IFNGR)、MIP1β受体(例如，CCR5)、TNFα受体(例如，TNFR1)、IL-1受体(IL1-Rα/IL-1Rβ)或IL-10受体(IL-10R)。
要给予以改善针对免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状或不良影响的治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)的症状的所选药剂的量可以通过标准临床技术来确定。示例性不良事件包括但不限于丙氨酸氨基转移酶的增加、天冬氨酸氨基转移酶的增加、寒战、发热型嗜中性粒细胞减少症、头痛、低血压、左心室功能障碍、脑病、脑积水、癫痫和/或震颤。
在一些实施方案中，所述药剂是按以下剂量量来给予：从或从约30mg至5000mg，如50mg至1000mg、50mg至500mg、50mg至200mg、50mg至100mg、100mg至1000mg、100mg至500mg、100mg至200mg、200mg至1000mg、200mg至500mg或500mg至1000mg。
在一些实施方案中，所述药剂是按以下量来给予：从或从约0.5mg/kg至100mg/kg，如从或从约1mg/kg至50mg/kg、1mg/kg至25mg/kg、1mg/kg至10mg/kg、1mg/kg至5mg/kg、5mg/kg至100mg/kg、5mg/kg至50mg/kg、5mg/kg至25mg/kg、5mg/kg至10mg/kg、10mg/kg至100mg/kg、10mg/kg至50mg/kg、10mg/kg至25mg/kg、25mg/kg至100mg/kg、25mg/kg至50mg/kg或50mg/kg至100mg/kg。在一些实施方案中，所述药剂是按以下剂量量来给予：为或为约1mg/kg至10mg/kg、2mg/kg至8mg/kg、2mg/kg至6mg/kg、2mg/kg至4mg/kg或6mg/kg至8mg/kg，每个都包含端值。在一些方面，所述药剂是按以下剂量量来给予：至少或至少约或约1mg/kg、2mg/kg、4mg/kg、6mg/kg、8mg/kg、10mg/kg或更多。在一些实施方案中，所述药剂是以4mg/kg或8mg/kg的剂量给予。
在一些实施方案中，所述药剂是通过注射来给予，例如静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下注射(subconjectval injection)、结膜下注射(subconjuntivalinjection)、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posteriorjuxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。
在一些实施方案中，所述量的药剂是约或大约每天两次、每天、每隔一天、一周三次、每周、每隔一周或一个月一次来给予。
在一些实施方案中，所述药剂是作为组合物或配制品(如下文所述的药物组合物或配制品)的一部分来给予。因此，在一些情况下，如下所述给予包含所述药剂的组合物。在其他方面中，所述药剂是单独给予，并且可以通过任何已知可接受的给予途径或通过本文如关于组合物和药物配制品所述的途径来给予。
在一些实施方案中，治疗或改善免疫疗法和/或细胞疗法的毒性(如CRS或神经毒性)症状的药剂是抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗、司妥昔单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301或FM101。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-6或IL-6受体(IL-6R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-6活性的抗体，如结合至IL-6或IL-6R的抗体或抗原结合片段。例如，在一些实施方案中，所述药剂是或包含托珠单抗(阿特利珠单抗)或萨瑞鲁单抗、抗IL-6R抗体。在一些实施方案中，所述药剂是美国专利号8,562,991中描述的抗IL-6R抗体。在一些情况下，靶向IL-6的药剂是抗IL-6抗体，如司妥昔单抗、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301、FM101或奥洛吉珠单抗(CDP6038)。在一些方面，所述药剂可通过抑制配体-受体相互作用来中和IL-6活性。这种通用型方法的可行性已经用针对白细胞介素-1的天然存在的受体拮抗剂来证明。参见Harmurn,C.H.等人,Nature(1990)343:336-340。在一些方面，IL-6/IL-6R拮抗剂或抑制剂是IL-6突变蛋白，如美国专利号5591827中描述的IL-6突变蛋白。在一些实施方案中，作为IL-6/IL-6R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是托珠单抗。在一些实施方案中，托珠单抗是根据所提供的方法作为早期干预来给予，和/或与所提供的制品或组合物一起给予，剂量为或为约1mg/kg至12mg/kg，例如为或为约4mg/kg、8mg/kg或10mg/kg。在一些实施方案中，托珠单抗是通过静脉内输注来给予。在一些实施方案中，给予托珠单抗用于对醋氨酚无反应的持续10小时的高于39℃的持续发热。在一些实施方案中，如果在初始剂量48小时后症状复发，则提供托珠单抗的第二次给予。
在一些实施方案中，所述药剂是TGF-β或TGF-β受体(例如，TGF-β受体I、II或III)的激动剂或刺激剂。在一些方面，所述药剂是增加TGF-β活性的抗体，如结合至TGF-β或其一种受体的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，作为TGF-β和/或其受体的激动剂或刺激剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是MCP-1(CCL2)或MCP-1受体(例如，MCP-1受体CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和MCP-1活性的抗体，例如结合MCP-1或其一种受体(CCR2或CCR4)的抗体或抗原结合片段。在一些实施方案中，所述MCP-1拮抗剂或抑制剂是以下文献中所述的任一种：Gong等人J Exp Med.1997Jul 7；186(1):131-137；或Shahrara等人J Immunol 2008；180:3447-3456。在一些实施方案中，作为MCP-1和/或其受体(CCR2或CCR4)的拮抗剂或抑制剂的所述药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IFN-γ或IFN-γ受体(IFNGR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IFN-γ活性的抗体，例如结合至IFN-γ或其受体(IFNGR)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述IFN-γ中和抗体是以下文献中所述的任一种：Dobber等人Cell Immunol.1995年2月；160(2):185-92；或Ozmen等人J Immunol.1993年4月1日；150(7):2698-705。在一些实施方案中，作为IFN-γ/IFNGR的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-10或IL-10受体(IL-10R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是中和IL-10活性的抗体，例如结合至IL-10或IL-10R的抗体或抗原结合片段。在一些方面，IL-10中和抗体是以下文献中所述的任一种：Dobber等人CellImmunol.1995年2月；160(2):185-92；或Hunter等人J Immunol.2005年6月1日；174(11):7368-75。在一些实施方案中，作为IL-10/IL-10R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是IL-1或IL-1受体(IL-1R)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是IL-1受体拮抗剂，其是IL-1R的修饰形式，如阿那白滞素(anakinra)(参见，例如，Fleischmann等人,(2006)Annals of the rheumatic diseases.65(8):1006-12)。在一些方面，所述药剂是中和IL-1活性的抗体，如结合至IL-1或IL-1R的抗体或抗原结合片段，如康纳单抗(还参见EP 2277543)。在一些实施方案中，作为IL-1/IL-1R的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是肿瘤坏死因子(TNF)或肿瘤坏死因子受体(TNFR)的拮抗剂或抑制剂。在一些方面，所述药剂是阻断TNF活性的抗体，如结合至TNF(例如TNFα)或其受体(TNFR，例如TNFRp55或TNFRp75)的抗体或抗原结合片段。在一些方面，所述药剂选自英夫利昔单抗(infliximab)、阿达木单抗(adalimumab)、聚乙二醇化赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、戈利木单抗(golimumab)和依那西普(etanercept)。在一些实施方案中，作为TNF/TNFR的拮抗剂或抑制剂的药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。在一些实施方案中，所述药剂是影响TNF的小分子，如来那度胺(参见例如，Muller等人(1999)Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters.9(11):1625)。
在一些实施方案中，所述药剂是通过Janus激酶(JAK)和两个信号转导子和转录激活子(STAT)信号传导级联进行信号传导的拮抗剂或抑制剂。JAK/STAT蛋白是细胞因子和细胞因子受体信号传导的常见组分。在一些实施方案中，所述药剂是JAK/STAT的拮抗剂或抑制剂，如鲁索替尼(参见例如，Mesa等人(2012)Nature Reviews Drug Discovery.11(2):103-104)、托法替尼(也称为Xeljanz、Jakvinus tasocitinib和CP-690550)、巴瑞替尼(也称为LY-3009104、INCB-28050)、非戈替尼(G-146034、GLPG-0634)、甘多替尼(LY-2784544)、来他替尼(CEP-701)、莫美罗替尼(GS-0387、CYT-387)、帕克替尼(SB1518)和乌帕替尼(ABT-494)。在一些实施方案中，所述药剂是小分子、蛋白质或肽、或核酸。
在一些实施方案中，所述药剂是激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述药剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)的抑制剂。在一些实施方案中，所述抑制剂是或包含依鲁替尼或阿卡替尼(参见例如，Barrett等人,ASH 58th Annual Meeting San Diego,CA 2016年12月3-6日,摘要654；Ruella等人,ASH 58th Annual Meeting San Diego,CA 2016年12月3-6日,摘要2159)。在一些实施方案中，所述药剂是如以下文献中所述的抑制剂：美国专利号7,514,444；8,008,309；8,476,284；8,497,277；8,697,711；8,703,780；8,735,403；8,754,090；8,754,091；8.957,079；8,999,999；9,125,889；9,181,257；或9,296,753。
在一些实施方案中，可以使用装置(如具有血液或血浆过滤的吸收性树脂技术)来降低细胞因子水平。在一些实施方案中，用于降低细胞因子水平的装置是物理细胞因子吸收器，如体外细胞因子吸收器。在一些实施方案中，物理细胞因子吸收器可以用于以离体的体外方式从血流消除细胞因子。在一些实施方案中，所述药剂是多孔聚合物。在一些实施方案中，所述药剂是CytoSorb(参见，例如，Basu等人Indian J Crit Care Med.(2014)18(12):822-824)。
III.由细胞表达的重组抗原受体
在一些实施方案中，与所提供的方法结合使用或给予的细胞含有或经工程化以含有工程化受体(例如工程化抗原受体，如嵌合抗原受体(CAR))或T细胞受体(TCR)。还提供此类细胞的群体、含有此类细胞和/或富含此类细胞的组合物，如其中富集或选择某种类型的细胞(如T细胞或CD8+或CD4+细胞)的组合物。所述组合物包括用于给予(如用于过继细胞疗法)的药物组合物和配制品。还提供用于根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物将所述细胞和组合物给予受试者(例如，患者)的治疗方法。
在一些实施方案中，细胞包括通过遗传工程化引入的一个或多个核酸，并由此表达此类核酸的重组或遗传工程化产物。在一些实施方案中，通过以下方式来完成基因转移：首先刺激所述细胞，如通过将所述细胞与诱导诸如增殖、存活和/或激活(例如，如通过细胞因子或激活标记的表达所测量)的反应的刺激组合，随后转导激活的细胞，并在培养物中扩增至足以用于临床应用的数量。
所述细胞通常表达重组受体，如抗原受体(包括功能性非TCR抗原受体，例如嵌合抗原受体(CAR))和其他抗原结合受体(如转基因T细胞受体(TCR))。所述受体还包括其他嵌合受体。
A.嵌合抗原受体(CAR)
在所提供的方法和用途的一些实施方案中，嵌合受体(如嵌合抗原受体)含有一个或多个结构域，所述一个或多个结构域将提供针对所期望抗原(例如肿瘤抗原)的特异性的配体结合结构域(例如抗体或抗体片段)与细胞内信号传导结构域组合。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域是刺激或激活细胞内结构域部分，如T细胞刺激或激活结构域，从而提供初级激活信号或初级信号。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域含有或另外含有共刺激信号传导结构域以促进效应子功能。在一些实施方案中，嵌合受体在被遗传工程化至免疫细胞中时，可以调节T细胞活性，并且在一些情况下可以调节T细胞分化或内稳态，由此产生在体内具有改进的寿命、存活和/或持久性的遗传工程化细胞，如用于过继细胞治疗方法。
示例性抗原受体(包括CAR)和用于工程化此类受体并将其引入细胞中的方法包括例如以下文献中所述的那些：国际专利申请公开号WO200014257、WO 2013126726、WO2012/129514、WO 2014031687、WO2013/166321、WO2013/071154、WO2013/123061、美国专利申请公开号US2002131960、US2013287748、US20130149337、美国专利号6,451,995、7,446,190、8,252,592、8,339,645、8,398,282、7,446,179、6,410,319、7,070,995、7,265,209、7,354,762、7,446,191、8,324,353和8,479,118，以及欧洲专利申请号EP2537416，和/或以下文献中所述的那些：Sadelain等人,Cancer Discov.2013年4月；3(4):388-398；Davila等人(2013)PLoS ONE 8(4):e61338；Turtle等人,Curr.Opin.Immunol.,2012年10月；24(5):633-39；Wu等人,Cancer,2012年3月18日(2):160-75。在一些方面，所述抗原受体包括如美国专利号7,446,190中所述的CAR，以及国际专利申请公开号WO/2014055668A1中所述的那些。所述CAR的实施例包括如前述出版物中任一项中披露的CAR，如WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190、美国专利号8,389,282；Kochenderfer等人,2013,Nature Reviews Clinical Oncology,10,267-276(2013)；Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；和Brentjens等人,Sci Transl Med.2013 5(177)。还参见WO 2014031687、US 8,339,645、US 7,446,179、US 2013/0149337、美国专利号7,446,190和美国专利号8,389,282。
所述嵌合受体(如CAR)通常包括细胞外抗原结合结构域，如抗体分子的一部分，通常是所述抗体的可变重(VH)链区和/或可变轻(VL)链区，例如，scFv抗体片段。
在一些实施方案中，所述受体所靶向的抗原是多肽。在一些实施方案中，它是碳水化合物或其他分子。在一些实施方案中，如与正常或非靶向细胞或组织相比，所述抗原是在疾病或病症的细胞(例如，肿瘤或致病细胞)上选择性表达或过表达。在其他实施方案中，所述抗原是在正常细胞上表达和/或在工程化细胞上表达。
在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原是或包含选自：αvβ6整合素(avb6整合素)、B细胞成熟抗原(BCMA)、B7-H3、B7-H6、碳酸酐酶9(CA9，也称为CAIX或G250)、癌症-睾丸抗原、癌症/睾丸抗原1B(CTAG，也称为NY-ESO-1和LAGE-2)、癌胚抗原(CEA)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、C-C基序趋化因子配体1(CCL-1)、CD19、CD20、CD22、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD123、CD133、CD138、CD171、硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)、表皮生长因子蛋白(EGFR)、III型表皮生长因子受体突变(EGFR vIII)、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、肝配蛋白B2、肝配蛋白受体A2(EPHa2)、雌激素受体、Fc受体样蛋白5(FCRL5；也称为Fc受体同系物5或FCRH5)、胎儿乙酰胆碱受体(胎儿AchR)、叶酸结合蛋白(FBP)、叶酸受体α、神经节苷脂GD2、O-乙酰化GD2(OGD2)、神经节苷脂GD3、糖蛋白100(gp100)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erb-B2)、Her3(erb-B3)、Her4(erb-B4)、erbB二聚体、人高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、乙型肝炎表面抗原、人白细胞抗原A1(HLA-A1)、人白细胞抗原A2(HLA-A2)、IL-22受体α(IL-22Rα)、IL-13受体α2(IL-13Rα2)、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、L1-CAM的CE7表位、含有富亮氨酸重复序列的蛋白8家族成员A(LRRC8A)、路易斯Y、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、MAGE-A10、间皮素(MSLN)、c-Met、鼠类巨细胞病毒(CMV)、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、自然杀伤细胞2族成员D(NKG2D)配体、黑色素A(MART-1)、神经细胞粘附分子(NCAM)、癌胚胎抗原、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、孕酮受体、前列腺特异性抗原、前列腺干细胞抗原(PSCA)、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1(ROR1)、存活蛋白、滋养层糖蛋白(TPBG，也称为5T4)、肿瘤相关糖蛋白72(TAG72)、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1，也称为TYRP1或gp75)、酪氨酸酶相关蛋白2(TRP2，也称为多巴色素互变异构酶、多巴色素δ异构酶或DCT)、血管内皮生长因子受体(VEGFR)、血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)、Wilms肿瘤1(WT-1)、病原体特异性或病原体表达的抗原、或与通用标签相关的抗原、和/或生物素化分子、和/或由HIV、HCV、HBV或其他病原体表达的分子。在一些实施方案中，受体靶向的抗原包括与B细胞恶性肿瘤相关的抗原，如多种已知B细胞标记中的任一种。在一些实施方案中，所述受体靶向的抗原是CD20、CD19、CD22、ROR1、CD45、CD21、CD5、CD33、Igκ、Igλ、CD79a、CD79b或CD30。
在一些实施方案中，scFv和/或VH结构域衍生自FMC63。FMC63通常是指针对表达人源CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.,等人(1987).Leucocyte typing III.302)。FMC63抗体包含分别在SEQ ID NO:38、39中所示的CDRH1和H2、和在SEQ ID NO:40或54中所示的CDRH3、和在SEQ ID NO:35中所示的CDRL1、和CDR L236或55、以及CDR L3序列37或56。FMC63抗体包含含有SEQ ID NO:41的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:42的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，svFv包含含有SEQ ID NO:35的CDRL1序列、SEQ ID NO:36的CDRL2序列和SEQ ID NO:37的CDRL3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:38的CDRH1序列、SEQ ID NO:39的CDRH2序列和SEQ IDNO:40的CDRH3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:41中所示的FMC63的可变重链区和SEQ ID NO:42中所示的FMC63的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链与可变轻链是通过接头来连接。在一些实施方案中，接头如SEQ ID NO:24所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，svFc由SEQ ID NO:25所示的核苷酸序列或展现与SEQ ID NO:25至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列编码。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:43至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，scFv衍生自SJ25C1。SJ25C1是针对表达人源CD19的Nalm-1和Nalm-16细胞产生的小鼠单克隆IgG1抗体(Ling,N.R.,等人(1987).Leucocyte typingIII.302)。SJ25C1抗体包含分别在SEQ ID NO:47-49中所示的CDRH1、H2和H3，以及分别在SEQ ID NO:44-46中所示的CDRL1、L2和L3序列。SJ25C1抗体包含含有SEQ ID NO:50的氨基酸序列的重链可变区(VH)和含有SEQ ID NO:51的氨基酸序列的轻链可变区(VL)。在一些实施方案中，svFv包含含有SEQ ID NO:44的CDRL1序列、SEQ ID NO:45的CDRL2序列和SEQ IDNO:46的CDRL3序列的可变轻链和/或含有SEQ ID NO:47的CDRH1序列、SEQ ID NO:48的CDRH2序列和SEQ ID NO:49的CDRH3序列的可变重链。在一些实施方案中，scFv包含SEQ IDNO:50所示的SJ25C1的可变重链区和SEQ ID NO:51所示的SJ25C1的可变轻链区。在一些实施方案中，可变重链与可变轻链是通过接头来连接。在一些实施方案中，接头如SEQ ID NO:52所示。在一些实施方案中，scFv依次包含VH、接头和VL。在一些实施方案中，scFv依次包含VL、接头和VH。在一些实施方案中，scFv包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列或展现与SEQID NO:53至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的序列。
在一些实施方案中，嵌合抗原受体包括含有抗体或抗体片段的细胞外部分。在一些方面，所述嵌合抗原受体包括含有抗体或片段的细胞外部分和细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述抗体或片段包括scFv。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的抗体部分进一步包括免疫球蛋白恒定区的至少一部分，如铰链区，例如，IgG4铰链区和/或CH1/CL和/或Fc区。在一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些方面，所述恒定区的所述部分用作抗原识别组分(例如，scFv)与跨膜结构域之间的间隔子区。如与所述间隔子不存在的情况相比，所述间隔子的长度可以提供增加的所述细胞在抗原结合后的反应性。示例性间隔子包括但不限于以下文献中所述的那些：Hudecek等人(2013)Clin.Cancer Res.,19:3153；国际专利申请公开号WO 2014031687、美国专利号8,822,647或公开的申请号US2014/0271635。
一些实施方案中，恒定区或部分是人IgG(如IgG4或IgG1)的。在一些实施方案中，所述间隔子具有序列ESKYGPPCPPCP(示于SEQ ID NO:1中)，并且由SEQ ID NO:2所示的序列编码。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:3所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:4所示的序列。在一些实施方案中，所述恒定区或部分是IgD的。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:5所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有展现与SEQ ID NO:1、3、4或5中的任一者至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有SEQ ID NO:26-34所示的序列。在一些实施方案中，所述间隔子具有展现与SEQ ID NO:26-34中的任一个至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗原受体包含与细胞外结构域直接或间接连接的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体包括将细胞外结构域与细胞内信号传导结构域连接的跨膜结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含ITAM。例如，在一些方面，抗原识别结构域(例如细胞外结构域)通常与一种或多种细胞内信号传导组分(如模拟在CAR的情况下通过抗原受体复合物(如TCR复合物)进行激活和/或通过另一种细胞表面受体进行信号传导的信号传导组分)连接。在一些实施方案中，所述嵌合受体包含在细胞外结构域(例如，scFv)与细胞内信号传导结构域之间连接或融合的跨膜结构域。因此，在一些实施方案中，抗原结合组分(例如，抗体)与一个或多个跨膜结构域和细胞内信号传导结构域连接。
在一个实施方案中，使用与所述受体(例如，CAR)中的一种结构域天然相连的跨膜结构域。在一些情况下，通过氨基酸取代选择或修饰所述跨膜结构域，以避免此类结构域与相同或不同表面膜蛋白的跨膜结构域结合，以使与受体复合物的其他成员的相互作用最小化。
在一些实施方案中，所述跨膜结构域衍生自天然来源或衍生自合成来源。在所述来源是天然来源时，所述结构域在一些方面衍生自任何膜结合蛋白或跨膜蛋白。跨膜区包括衍生自以下的那些(即，至少包含以下中的一个或多个跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154。可替代地，所述跨膜结构域在一些实施方案中是合成的。在一些方面，所述合成跨膜结构域主要包含疏水残基，如亮氨酸和缬氨酸。在一些方面，将在合成跨膜结构域的每个末端发现苯丙氨酸、色氨酸和缬氨酸的三联体。在一些实施方案中，所述连接是通过接头、间隔子和/或一个或多个跨膜结构域来实现。在一些方面，所述跨膜结构域含有CD28的跨膜部分。
在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜结构域可以直接或间接连接。在一些实施方案中，所述细胞外结构域和跨膜结构域是通过间隔子(如本文所述的任一种)连接。在一些实施方案中，所述受体含有衍生出跨膜结构域的分子的细胞外部分，如CD28细胞外部分。
所述细胞内信号传导结构域包括通过天然抗原受体模拟或接近信号、通过这种受体与共刺激受体的组合模拟或接近信号、和/或仅通过共刺激受体模拟或接近信号的那些。在一些实施方案中，短的寡肽或多肽接头(例如，长度在2与10个氨基酸之间的接头，如含有甘氨酸和丝氨酸的接头，例如甘氨酸-丝氨酸双联体)存在并在CAR的跨膜结构域与细胞质信号传导结构域之间形成连接。
T细胞激活在一些方面被描述为由两个类别的细胞质信号传导序列来介导：通过TCR启动抗原依赖性初级激活的那些序列(初级细胞质信号传导序列)，和以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的那些序列(次级细胞质信号传导序列)。在一些方面，所述CAR包括此类信号传导组分中的一种或两种。
所述受体(例如，CAR)通常包括至少一种或多种细胞内信号传导组分。在一些方面，所述CAR包括调节TCR复合物的初级激活的初级细胞质信号传导序列。以刺激性方式作用的初级细胞质信号传导序列可以含有信号传导基序，所述信号传导基序被称为基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。含有初级细胞质信号传导序列的ITAM的例子包括衍生自CD3ζ链、FcRγ、CD3γ、CD3δ和CD3ε的那些。在一些实施方案中，所述CAR中的一种或多种细胞质信号传导分子含有衍生自CD3ζ的细胞质信号传导结构域、其部分或序列。
在一些实施方案中，所述受体包括TCR复合物的细胞内组分，如介导T细胞激活和细胞毒性的TCR CD3链，例如CD3ζ链。因此，在一些方面，所述抗原结合部分连接至一个或多个细胞信号传导模块。在一些实施方案中，细胞信号传导模块包括CD3跨膜结构域、CD3细胞内信号传导结构域和/或其他CD跨膜结构域。在一些实施方案中，所述受体(例如，CAR)进一步包括一种或多种其他分子(如Fc受体γ、CD8、CD4、CD25或CD16)的一部分。例如，在一些方面，所述CAR或其他嵌合受体包括CD3-zeta(CD3-ζ)或Fc受体γ与CD8、CD4、CD25或CD16之间的嵌合分子。
在一些实施方案中，在连接CAR或其他嵌合受体后，所述受体的细胞质结构域或细胞内信号传导结构域激活免疫细胞(例如工程化以表达所述CAR的T细胞)的正常效应子功能或应答中的至少一种。例如，在一些情况下，所述CAR诱导T细胞的功能，如细胞溶解活性或T辅助活性，如细胞因子或其他因子的分泌。在一些实施方案中，使用抗原受体组分或共刺激分子的细胞内信号传导结构域的截短部分代替完整的免疫刺激链，例如条件是所述截短部分转导效应子功能信号。在一些实施方案中，一个或多个细胞内信号传导结构域包括T细胞受体(TCR)的细胞质序列，并且在一些方面还包括共受体的那些细胞质序列，所述共受体在自然环境中与此类受体协同作用以在抗原受体接合后启动信号转导。
在天然TCR的情况下，完全激活通常不仅需要通过所述TCR进行信号传导，还需要共刺激信号。因此，在一些实施方案中，为了促进完全激活，所述CAR中还包括用于产生次级或共刺激信号的组分。在其他实施方案中，所述CAR不包括用于产生共刺激信号的组分。在一些方面，另外的CAR在同一细胞中表达，并且提供用于产生次级或共刺激信号的组分。
在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有T细胞共刺激分子的细胞内结构域。在一些实施方案中，所述CAR包括共刺激受体(如CD28、4-1BB、OX40、DAP10和ICOS)的信号传导结构域和/或跨膜部分。在一些方面，相同的CAR包括激活组分和共刺激组分二者。在一些实施方案中，所述嵌合抗原受体含有衍生自T细胞共刺激分子或其功能变体的细胞内结构域，如位于跨膜结构域与细胞内信号传导结构域之间。在一些方面，所述T细胞共刺激分子是CD28或41BB。
在一些实施方案中，所述激活结构域包括在一个CAR中，而所述共刺激组分由识别另一种抗原的另一个CAR提供。在一些实施方案中，所述CAR包括激活或刺激CAR、共刺激CAR，它们均在相同细胞上表达(参见WO2014/055668)。在一些方面，所述细胞包括一种或多种刺激或激活CAR和/或共刺激CAR。在一些实施方案中，所述细胞进一步包括抑制性CAR(iCAR，参见Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013年12月))，如识别除了与疾病或病症相关和/或对疾病或病症具有特异性的抗原以外的抗原的CAR，借此通过抑制性CAR与其配体的结合来减小或抑制通过疾病靶向CAR递送的激活信号，例如以减小脱靶效应。
在某些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含与CD3(例如，CD3-ζ)细胞内结构域连接的CD28跨膜和信号传导结构域。在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含与CD3ζ细胞内结构域连接的嵌合CD28和CD137(4-1BB、TNFRSF9)共刺激结构域。
在一些实施方案中，所述CAR涵盖在细胞质部分中的一个或多个(例如，两个或更多个)共刺激结构域和激活结构域(例如，初级激活结构域)。示例性CAR包含CD3-ζ、CD28和4-1BB的细胞内组分。
在一些实施方案中，所述抗原受体进一步包括标记，和/或表达所述CAR或其他抗原受体的细胞进一步包括替代标记，如细胞表面标记，所述标记可以用于证实为表达所述受体对细胞进行的转导或工程化。在一些方面，所述标记包括CD34、NGFR或表皮生长因子受体的全部或部分(例如截短形式)，如这种细胞表面受体的截短形式(例如，tEGFR)。在一些实施方案中，编码所述标记的核酸与编码接头序列(如可切割接头序列，例如，T2A)的多核苷酸可操作连接。例如，标记和任选地接头序列可以是如公开的专利申请号WO 2014031687中所披露的任一种。例如，所述标记可以是截短的EGFR(tEGFR)，其任选地连接至接头序列，如T2A可切割接头序列。
用于截短的EGFR(例如，tEGFR)的示例性多肽包含SEQ ID NO:7或16所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。示例性T2A接头序列包含SEQ ID NO:6或17所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:6或17至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述标记是并未在T细胞上天然发现的或并未在T细胞表面上天然发现的分子(例如，细胞表面蛋白)或其部分。在一些实施方案中，所述分子是非自身分子(例如，非自身蛋白)，即不被细胞过继转移到其中的宿主的免疫系统识别为“自身”的分子。
在一些实施方案中，所述标记不起任何治疗作用和/或不产生除了用作遗传工程化(例如，用于选择成功工程化的细胞)的标记以外的作用。在其他实施方案中，所述标记可以是治疗性分子或以其他方式发挥某一所需作用的分子，如用于会在体内遇到的细胞的配体，如共刺激或免疫检查点分子，以增强和/或减弱所述细胞在过继转移并遇到配体后的应答。
在一些情况下，CAR被称为第一代、第二代和/或第三代CAR。在一些方面，第一代CAR是在抗原结合时仅提供CD3链诱导的信号的CAR；在一些方面，第二代CAR是提供这种信号和共刺激信号的CAR，如包括来自共刺激受体(如CD28或CD137)的细胞内信号传导结构域的信号；在一些方面，第三代CAR是包括不同共刺激受体的多个共刺激结构域的CAR。
例如，在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)、是或含有CD28或其功能变体的跨膜部分的跨膜结构域、以及含有CD28的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，所述CAR含有抗体(例如，抗体片段)，是或含有CD28的跨膜部分或其功能变体的跨膜结构域、以及含有4-1BB的信号传导部分或其功能变体和CD3ζ的信号传导部分或其功能变体的细胞内信号传导结构域。在一些此类实施方案中，所述受体进一步包括含有Ig分子(如人Ig分子)的一部分的间隔子，如Ig铰链，例如IgG4铰链，如仅含铰链的间隔子。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的跨膜结构域是或包括人CD28(例如登录号P01747.1)的跨膜结构域或其变体，如包含SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:8至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列的跨膜结构域；在一些实施方案中，重组受体的含有跨膜结构域的部分包含SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的一个或多个细胞内信号传导组分含有人CD28的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如在天然CD28蛋白的位置186-187处具有LL至GG取代的结构域。例如，所述细胞内信号传导结构域可以包含SEQ IDNO:10或11所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:10或11至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，所述细胞内结构域包含4-1BB(例如，登录号Q07011.1)的细胞内共刺激信号传导结构域或其功能变体或部分，如SEQ ID NO:12所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:12至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，重组受体(例如，CAR)的细胞内信号传导结构域包含人CD3ζ刺激信号传导结构域或其功能变体，如人CD3ζ(登录号：P20963.2)的同种型3的112个AA的细胞质结构域或如美国专利号7,446,190或美国专利号8,911,993中所述的CD3ζ信号传导结构域。例如，在一些实施方案中，所述细胞内信号传导结构域包含如SEQ ID NO:13、14或15所示的氨基酸序列或展现与SEQ ID NO:13、14或15至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，所述间隔子仅含IgG的铰链区，如仅IgG4或IgG1的铰链，如SEQ IDNO:1所示的仅含铰链的间隔子。在其他实施方案中，所述间隔子是或含有任选地连接至CH2和/或CH3结构域的Ig铰链，例如，IgG4衍生的铰链。在一些实施方案中，所述间隔子是连接至CH2和CH3结构域的Ig铰链，例如，IgG4铰链，如在SEQ ID NO:4中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是仅连接至CH3结构域的Ig铰链，例如，IgG4铰链，如在SEQ ID NO:3中所示。在一些实施方案中，所述间隔子是或包含富含甘氨酸-丝氨酸的序列或其他柔性接头(如已知柔性接头)。
例如，在一些实施方案中，CAR包括抗体(如抗体片段，包括scFv)、间隔子(如含有免疫球蛋白分子的一部分(如铰链区和/或重链分子的一个或多个恒定区)的间隔子，如含有Ig铰链的间隔子)、含有CD28衍生的跨膜结构域的全部或部分的跨膜结构域、CD28衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ信号传导结构域。在一些实施方案中，CAR包括抗体或片段(例如scFv)、间隔子(如任何含Ig铰链的间隔子)、CD28衍生的跨膜结构域、4-1BB衍生的细胞内信号传导结构域和CD3ζ衍生的信号传导结构域。
在一些实施方案中，编码此类CAR构建体的核酸分子进一步包括编码T2A核糖体跳跃元件的序列和/或tEGFR序列(例如在编码CAR的序列的下游)。在一些实施方案中，所述序列编码SEQ ID NO:6或17所示的T2A核糖体跳跃元件或展现与SEQ ID NO:6或17至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，还可以产生表达抗原受体(例如，CAR)的T细胞以表达截短的EGFR(EGFRt)作为非免疫原性选择表位(例如，通过引入编码由T2A核糖体开关隔开的所述CAR和EGFRt的构建体以从相同构建体表达两种蛋白质)，然后可以使用所述截短的EGFR作为标记来检测此类细胞(参见例如，美国专利号8,802,374)。在一些实施方案中，序列编码SEQ ID NO:7或16所示的tEGFR序列或展现与SEQ ID NO:7或16至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的氨基酸序列。在一些情况下，所述肽(如T2A)可以导致核糖体跳过(核糖体跳跃)2A元件C末端处的肽键的合成，这导致2A序列末端与下游的下一个肽之间的分离(参见例如，de Felipe.Genetic Vaccines and Ther.2:13(2004)和deFelipe等人Traffic 5:616-626(2004))。许多2A元件是已知的。可以用于本文公开的方法和核酸中的2A序列的例子包括但不限于来自以下的2A序列：口蹄疫病毒(F2A，例如，SEQ ID NO:21)、马鼻炎A病毒(E2A，例如，SEQ ID NO:20)、明脉扁刺蛾β四体病毒(Thosea asigna virus)(T2A，例如，SEQ IDNO:6或17)和猪捷申病毒(porcine teschovirus)-1(P2A，例如，SEQ ID NO:18或19)，如美国专利公开号20070116690中所述。
由给予受试者的细胞表达的重组受体(如CAR)通常识别或特异性地结合至在所治疗的疾病或病症或其细胞中表达、与所治疗的疾病或病症或其细胞相关和/或对所治疗的疾病或病症或其细胞具有特异性的分子。在与所述分子(例如，抗原)特异性结合后，所述受体通常将免疫刺激信号(如ITAM转导的信号)递送至所述细胞中，由此促进靶向所述疾病或病症的免疫应答。例如，在一些实施方案中，所述细胞表达与抗原特异性结合的CAR，所述抗原是由所述疾病或病症的细胞或组织表达，或与所述疾病或病症相关。
B.T细胞受体(TCR)
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是表达T细胞受体(TCR)或其抗原结合部分的细胞，所述抗体或其抗原结合部分识别靶多肽(如肿瘤、病毒或自身免疫蛋白的抗原)的肽表位或T细胞表位。
在一些实施方案中，“T细胞受体”或“TCR”是含有可变α和β链(也分别称为TCRα和TCRβ)或可变γ和δ链(也分别称为TCRα和TCRβ)的分子或其抗原结合部分，并且所述分子或其抗原结合部分能够与结合至MHC分子的肽特异性结合。在一些实施方案中，所述TCR呈αβ形式。通常，以αβ和γδ形式存在的TCR的结构上大体上相似，但是表达它们的T细胞可以具有不同的解剖学位置或功能。TCR可以在细胞的表面上发现或以可溶形式发现。通常，在T细胞(或T淋巴细胞)的表面上发现TCR，在此处它通常负责识别与主要组织相容性复合物(MHC)分子结合的抗原。
除非另有说明，否则术语“TCR”应理解为涵盖完整的TCR以及其抗原结合部分或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述TCR是完整或全长TCR，包括呈αβ形式或γδ形式的TCR。在一些实施方案中，所述TCR是小于全长TCR但与在MHC分子中结合的特定肽结合(如与MHC-肽复合物结合)的抗原结合部分。在一些情况下，TCR的抗原结合部分或片段可以仅含有全长或完整TCR的结构性结构域的一部分，但是仍能够结合完整TCR所结合的肽表位(如MHC-肽复合物)。在一些情况下，抗原结合部分含有TCR的可变结构域(如TCR的可变α链和可变β链)，其足以形成用于与特定MHC-肽复合物结合的结合位点。通常，TCR的可变链含有参与对肽、MHC和/或MHC-肽复合物的识别的互补决定区。
在一些实施方案中，TCR的可变结构域含有超变环或互补决定区(CDR)，其通常是抗原识别和结合能力和特异性的主要贡献者。在一些实施方案中，TCR的CDR或其组合形成给定TCR分子的全部或基本上全部的抗原结合位点。TCR链可变区内的各种CDR通常由框架区(FR)隔开，如与CDR相比，所述框架区在TCR分子之间通常展示较低可变性(参见例如，Jores等人,Proc.Nat’l Acad.Sci.U.S.A.87:9138,1990；Chothia等人,EMBO J.7:3745,1988；还参见Lefranc等人,Dev.Comp.Immunol.27:55,2003)。在一些实施方案中，CDR3是负责抗原结合或特异性的主要CDR，或者在给定TCR可变区上在三个CDR中对于抗原识别和/或对于与肽-MHC复合物的经加工肽部分的相互作用最重要。在一些情况下，所述α链的CDR1可以与某些抗原肽的N-末端部分相互作用。在一些情况下，所述β链的CDR1可以与所述肽的C末端部分相互作用。在一些情况下，CDR2对与MHC-肽复合物的MHC部分的相互作用或对所述MHC-肽复合物的MHC部分的识别的贡献最大或者是主要负责的CDR。在一些实施方案中，所述β链的可变区可以含有另一个高变区(CDR4或HVR4)，其通常参与超抗原结合并且不参与抗原识别(Kotb(1995)Clinical Microbiology Reviews,8:411-426)。
在一些实施方案中，TCR还可以含有恒定结构域、跨膜结构域和/或短细胞质尾(参见例如，Janeway等人,Immunobiology:The Immune System in Health and Disease,第3版,Current Biology Publications,第4:33页,1997)。在一些方面，TCR的每条链可以具有一个N末端免疫球蛋白可变结构域、一个免疫球蛋白恒定结构域、跨膜区和位于C末端的短细胞质尾。在一些实施方案中，TCR与参与介导信号转导的CD3复合物的不变蛋白缔合。
在一些实施方案中，TCR链含有一个或多个恒定结构域。例如，给定TCR链(例如，α链或β链)的细胞外部分可以含有与细胞膜相邻的两个免疫球蛋白样结构域，如可变结构域(例如，Vα或Vβ；通常基于Kabat编号的氨基酸1至116，Kabat等人,“Sequences of Proteinsof Immunological Interest”,US Dept.Health and Human Services,Public HealthService National Institutes of Health,1991,第5版)和恒定结构域(例如，α链恒定结构域或Cα，通常基于Kabat编号位于所述链的位置117至259，或β链恒定结构域或Cβ，通常基于Kabat的链位于所述链的位置117至295)。例如，在一些情况下，由两条链形成的TCR的细胞外部分含有两个膜近端恒定结构域和两个膜远端可变结构域，其中可变结构域各自含有CDR。所述TCR的恒定结构域可以含有短连接序列，其中半胱氨酸残基形成二硫键，由此连接所述TCR的两条链。在一些实施方案中，TCR可在α和β链中各自具有另外的半胱氨酸残基，使得所述TCR在恒定结构域中含有两个二硫键。
在一些实施方案中，TCR链含有跨膜结构域。在一些实施方案中，跨膜结构域带正电荷。在一些情况下，TCR链含有细胞质尾。在一些情况下，所述结构允许所述TCR与其他分子(如CD3和其亚基)缔合。例如，含有具有跨膜区的恒定结构域的TCR可以将所述蛋白质锚定在细胞膜中，并与CD3信号传导装置或复合物的不变亚基缔合。CD3信号传导亚基(例如，CD3γ、CD3δ、CD3ε和CD3ζ链)的细胞内尾含有TCR复合物的信号传导能力中所涉及的一个或多个基于免疫受体酪氨酸的激活基序或ITAM。
在一些实施方案中，TCR可以是两条链α和β(或者任选地γ和δ)的异二聚体，或者其可以是单链TCR构建体。在一些实施方案中，TCR是含有如通过一个或多个二硫键连接的两条单独链(α和β链或γ和δ链)的异二聚体。
在一些实施方案中，TCR可以从一个或多个已知的TCR序列(如Vα、Vβ链的序列)产生，所述一个或多个已知的TCR序列的基本上全长的编码序列是易于获得的。用于从细胞来源获得全长TCR序列(包括V链序列)的方法是熟知的。在一些实施方案中，编码TCR的核酸可以从多种来源获得，如通过在一种或多种给定细胞内的或从所述一种或多种给定细胞分离的编码TCR的核酸的聚合酶链式反应(PCR)扩增来获得，或者通过公众可获得的TCR DNA序列的合成获得。
在一些实施方案中，TCR是从生物来源获得，如来自细胞(如来自T细胞，例如细胞毒性T细胞)、T细胞杂交瘤或其他公众可获得的来源。在一些实施方案中，T细胞可以从体内分离的细胞获得。在一些实施方案中，TCR是胸腺选择的TCR。在一些实施方案中，TCR是新表位限制性TCR。在一些实施方案中，T细胞可以是培养的T细胞杂交瘤或克隆。在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分或其抗原结合片段可以根据对TCR序列的了解以合成方式产生。
在一些实施方案中，TCR是从通过针对靶多肽抗原或其靶T细胞表位筛选候选TCR文库鉴定或选择的TCR产生。TCR文库可以通过扩增来自T细胞的Vα和Vβ库来产生，所述T细胞是从受试者分离，包括存在于PBMC、脾或其他淋巴器官中的细胞。在一些情况下，T细胞可以从肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)扩增。在一些实施方案中，TCR文库可以从CD4+或CD8+细胞产生。在一些实施方案中，所述TCR可以从正常或健康受试者的T细胞来源扩增，即正常TCR文库。在一些实施方案中，所述TCR可以从患病受试者的T细胞来源扩增，即患病TCR文库。在一些实施方案中，使用简并引物扩增Vα和Vβ的基因库，如在从人获得的样品(如T细胞)中通过RT-PCR扩增。在一些实施方案中，scTv文库可以从初始Vα和Vβ文库组装，其中将扩增产物克隆或组装以通过接头分离。根据受试者和细胞的来源，所述文库可以是HLA等位基因特异性的。可替代地，在一些实施方案中，TCR文库可以通过亲本或支架TCR分子的诱变或多样化产生。在一些方面，使所述TCR经历例如α或β链定向进化，如通过诱变来进行。在一些方面，所述TCR的CDR内的特定残基发生改变。在一些实施方案中，所选TCR可以通过亲和力成熟来修饰。在一些实施方案中，可以如通过筛选以评估针对所述肽的CTL活性来选择抗原特异性T细胞。在一些方面，可以如通过结合活性(例如对所述抗原的特定亲和力或亲合力)来选择例如存在于抗原特异性T细胞上的TCR。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分是已经修饰或工程化的。在一些实施方案中，使用定向进化方法来产生具有改变的特性(如对特定MHC-肽复合物具有更高的亲和力)的TCR。在一些实施方案中，定向进化是通过展示方法来实现，所述展示方法包括但不限于酵母展示(Holler等人(2003)Nat Immunol,4,55-62；Holler等人(2000)Proc Natl AcadSci U S A,97,5387-92)、噬菌体展示(Li等人(2005)Nat Biotechnol,23,349-54)或T细胞展示(Chervin等人(2008)J Immunol Methods,339,175-84)。在一些实施方案中，展示方法涉及工程化或修饰已知的亲本或参考TCR。例如，在一些情况下，可以使用野生型TCR作为模板用于产生诱变的TCR，其中CDR的一个或多个残基发生突变，并且选择具有所需的改变特性(如对所需靶抗原具有更高的亲和力)的突变体。
在一些实施方案中，用于产生或生成目的TCR的靶多肽的肽是已知的或者可以容易地鉴定。在一些实施方案中，适用于产生TCR或抗原结合部分的肽可以基于目的靶多肽(如下文所述的靶多肽)中HLA限制性基序的存在来确定。在一些实施方案中，使用可用的计算机预测模型来鉴定肽。在一些实施方案中，对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(Singh和Raghava(2001)Bioinformatics 17(12):1236-1237)，以及SYFPEITHI(参见Schuler等人(2007)Immunoinformatics Methods in MolecularBiology,409(1):75-93 2007)。在一些实施方案中，MHC限制性表位是HLA-A0201，其在所有高加索人的约39％-46％中表达，并因此代表用于制备TCR或其他MHC-肽结合分子的MHC抗原的合适选择。
已知使用计算机预测模型的HLA-A0201结合基序和蛋白酶体和免疫蛋白酶体的切割位点。对于预测MHC I类结合位点，此类模型包括但不限于ProPred1(更详细地描述于以下文献中：Singh和Raghava,ProPred:prediction of HLA-DR bindingsites.BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001)和SYFPEITHI(参见Schuler等人SYFPEITHI,Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction.，Immunoinformatics Methods in Molecular Biology,第409卷(1):75-93 2007)。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合部分可以是重组产生的天然蛋白或其突变形式，其中一种或多种特性(如结合特征)已经发生改变。在一些实施方案中，TCR可以衍生自各种动物物种之一，如人、小鼠、大鼠或其他哺乳动物。TCR可以是细胞结合的或呈可溶形式。在一些实施方案中，出于所提供的方法的目的，TCR呈在细胞表面上表达的细胞结合形式。
在一些实施方案中，TCR是全长TCR。在一些实施方案中，TCR是抗原结合部分。在一些实施方案中，TCR是二聚TCR(dTCR)。在一些实施方案中，TCR是单链TCR(sc-TCR)。在一些实施方案中，dTCR或scTCR具有如WO 03/020763、WO 04/033685、WO 2011/044186中所述的结构。
在一些实施方案中，TCR含有对应于跨膜序列的序列。在一些实施方案中，TCR确实含有对应于细胞质序列的序列。在一些实施方案中，TCR能够形成与CD3的TCR复合物。在一些实施方案中，TCR(包括dTCR或scTCR)可以与信号传导结构域连接，从而在T细胞表面上产生活性TCR。在一些实施方案中，TCR是在细胞表面上表达。
在一些实施方案中，dTCR含有第一多肽，其中对应于TCRα链可变区序列的序列融合至对应于TCRα链恒定区细胞外序列的序列的N末端；和第二多肽，其中对应于TCRβ链可变区序列的序列融合至对应于TCRβ链恒定区细胞外序列的序列的N末端，所述第一多肽和所述第二多肽通过二硫键连接。在一些实施方案中，所述键可以对应于天然二聚αβTCR中存在的天然链间二硫键。在一些实施方案中，所述链间二硫键在天然TCR中不存在。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入dTCR多肽对的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键二者。在一些实施方案中，TCR含有跨膜序列以锚定至膜。
在一些实施方案中，dTCR含有TCRα链，所述TCRα链含有可变α结构域、恒定α结构域和附接至所述恒定α结构域C末端的第一二聚化基序；和TCRβ链，所述TCRβ链包含可变β结构域、恒定β结构域和附接至所述恒定β结构域C末端的第一二聚化基序，其中所述第一和第二二聚化基序易于相互作用以在所述第一二聚化基序的氨基酸与所述第二二聚化基序的氨基酸之间形成共价键，从而将所述TCRα链与所述TCRβ链连接在一起。
在一些实施方案中，所述TCR是scTCR。通常，可以使用已知的方法产生scTCR，参见例如Soo Hoo,W.F.等人PNAS(USA)89,4759(1992)；Wülfing,C.和Plückthun,A.,J.Mol.Biol.242,655(1994)；Kurucz,I.等人PNAS(USA)90 3830(1993)；国际公开PCT号WO96/13593、WO 96/18105、WO99/60120、WO99/18129、WO 03/020763、WO2011/044186；和Schlueter,C.J.等人J.Mol.Biol.256,859(1996)。在一些实施方案中，scTCR含有引入的非天然链间二硫键以促进所述TCR链的缔合(参见例如，国际公开的PCT号WO 03/020763)。在一些实施方案中，scTCR是非二硫键连接的截短的TCR，其中与其C末端融合的异源亮氨酸拉链促进链缔合(参见例如，国际公开的PCT号WO 99/60120)。在一些实施方案中，scTCR含有经由肽接头与TCRβ可变结构域共价连接的TCRα可变结构域(参见例如，国际公开的PCT号WO99/18129)。
在一些实施方案中，scTCR含有由对应于TCRα链可变区的氨基酸序列构成的第一区段、由融合至对应于TCRβ链恒定结构域细胞外序列的氨基酸序列的N末端的对应于TCRβ链可变区序列的氨基酸序列构成的第二区段、和将所述第一区段的C末端连接至所述第二区段的N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR含有由融合至α链细胞外恒定结构域序列N末端的α链可变区序列构成的第一区段，和由融合至序列β链细胞外恒定和跨膜序列N末端的β链可变区序列构成的第二区段，以及任选地将所述第一区段C末端连接至所述第二区段N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR含有由融合至β链细胞外恒定结构域序列N末端的TCRβ链可变区序列构成的第一区段，和由融合至序列α链细胞外恒定和跨膜序列N末端的α链可变区序列构成的第二区段，以及任选地将所述第一区段C末端连接至所述第二区段N末端的接头序列。
在一些实施方案中，scTCR中连接所述第一和第二TCR区段的接头可以是能够在保持TCR结合特异性的同时形成单一多肽链的任何接头。在一些实施方案中，所述接头序列可以例如具有式-P-AA-P-，其中P是脯氨酸并且AA表示氨基酸序列，其中所述氨基酸是甘氨酸和丝氨酸。在一些实施方案中，所述第一和第二区段配对，使得其可变区序列定向用于这种结合。因此，在一些情况下，所述接头具有足够的长度以跨越所述第一区段的C末端与所述第二区段的N末端之间的距离，或反之亦然，但是不会太长而阻断或减少所述scTCR与靶配体的结合。在一些实施方案中，所述接头可以含有从或从约10至45个氨基酸，如10至30个氨基酸或26至41个氨基酸残基，例如29、30、31或32个氨基酸。在一些实施方案中，所述接头具有式-PGGG-(SGGGG)5-P-，其中P是脯氨酸，G是甘氨酸，并且S是丝氨酸(SEQ ID NO:28)。在一些实施方案中，所述接头具有序列GSADDAKKDAAKKDGKS(SEQ ID NO:29)。
在一些实施方案中，所述scTCR含有将α链恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基连接至β链恒定结构域的免疫球蛋白区域的残基的共价二硫键。在一些实施方案中，天然TCR中不存在链间二硫键。例如，在一些实施方案中，可以将一个或多个半胱氨酸掺入所述scTCR多肽的第一和第二区段的恒定区细胞外序列中。在一些情况下，可能需要天然和非天然二硫键二者。
在dTCR或scTCR含有引入的链间二硫键的一些实施方案中，不存在天然二硫键。在一些实施方案中，用形成天然链间二硫键的一个或多个天然半胱氨酸取代另一残基，如取代丝氨酸或丙氨酸。在一些实施方案中，引入的二硫键可以通过使第一和第二区段上的非半胱氨酸残基突变为半胱氨酸来形成。TCR的示例性非天然二硫键描述于公开的国际PCT号WO 2006/000830中。
在一些实施方案中，TCR或其抗原结合片段对靶抗原以平衡结合常数展现亲和力，所述平衡结合常数是在或在约10-5M与10-12M之间以及其中的所有单独值和范围。在一些实施方案中，靶抗原是MHC-肽复合物或配体。
在一些实施方案中，编码TCR(如α和β链)的一种或多种核酸可以通过PCR、克隆或其他合适的方法扩增，并且克隆到合适的表达载体中。所述表达载体可以是任何合适的重组表达载体，并且可以用于转化或转染任何合适的宿主。合适的载体包括设计用于繁殖和扩增或用于表达或用于两者的那些，如质粒和病毒。
在一些实施方案中，载体可以是以下系列的载体：pUC系列(Fermentas LifeSciences)、pBluescript系列(Stratagene，加利福尼亚州拉霍亚)、pET系列(Novagen，威斯康星州麦迪逊)、pGEX系列(Pharmacia Biotech，瑞典乌普萨拉)或pEX系列(Clontech，加利福尼亚州帕罗奥图)。在一些情况下，也可以使用噬菌体载体，如λG10、λGT11、λZapII(Stratagene)、λEMBL4和λNM1149。在一些实施方案中，可以使用植物表达载体，并且包括pBI01、pBI101.2、pBI101.3、pBI121和pBIN19(Clontech)。在一些实施方案中，动物表达载体包括pEUK-Cl、pMAM和pMAMneo(Clontech)。在一些实施方案中，使用病毒载体，如逆转录病毒载体。
在一些实施方案中，可以使用标准重组DNA技术来制备重组表达载体。在一些实施方案中，载体可以含有调节序列，如转录和翻译起始和终止密码子，其对引入载体的宿主(例如，细菌、真菌，植物或动物)的类型具特异性，酌情并考虑所述载体是基于DNA还是基于RNA。在一些实施方案中，载体可以含有与编码TCR或抗原结合部分(或其他MHC-肽结合分子)的核苷酸序列可操作连接的非天然启动子。在一些实施方案中，启动子可以是非病毒启动子或病毒启动子，如巨细胞病毒(CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子和在鼠干细胞病毒的长末端重复序列中发现的启动子。也考虑其他已知的启动子。
在一些实施方案中，为了产生编码TCR的载体，从分离自表达目的TCR的T细胞克隆的总cDNA对所述α和β链进行PCR扩增，并将其克隆至表达载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆至相同载体中。在一些实施方案中，将所述α和β链克隆至不同载体中。在一些实施方案中，将所产生的α和β链掺入逆转录病毒(例如，慢病毒)载体中。遗传工程化细胞和产生细胞的方法
在一些实施方案中，所提供的方法涉及向患有疾病或病症的受试者给予表达重组抗原受体的细胞。用于引入遗传工程化组分(例如，重组受体，例如，CAR或TCR)的各种方法是熟知的，并且可以与所提供的方法和组合物一起使用。示例性方法包括用于转移编码所述受体的核酸的那些，包括通过病毒(例如，逆转录病毒或慢病毒)、转导、转座子和电穿孔。
表达所述受体并且通过所提供的方法给予的细胞包括工程化细胞。遗传工程化通常涉及将编码重组或工程化组分的核酸如通过逆转录病毒转导、转染或转化引入含有所述细胞的组合物中。
C.嵌合自身抗体受体(CAAR)
在一些实施方案中，由与所提供的方法、用途、制品和组合物结合使用的工程化细胞表达的重组受体是嵌合自身抗体受体(CAAR)。在一些实施方案中，CAAR对自身抗体具有特异性。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞(如工程化以表达CAAR的T细胞)可以用于特异性地结合并杀伤表达自身抗体的细胞，但不杀伤表达正常抗体的细胞。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以用于治疗与自身抗原的表达相关的自身免疫性疾病，如自身免疫性疾病。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以靶向最终产生自身抗体并在其细胞表面上展示所述自身抗体的B细胞，将这些B细胞标记为治疗干预的疾病特异性靶标。在一些实施方案中，表达CAAR的细胞可以用于通过使用抗原特异性嵌合自身抗体受体靶向引起疾病的B细胞，有效靶向和杀伤自身免疫性疾病中的致病性B细胞。在一些实施方案中，重组受体是CAAR，如美国专利申请公开号US 2017/0051035中描述的任一种。
在一些实施方案中，CAAR包含自身抗体结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导区。在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含细胞内信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导结构域是或包含初级信号传导结构域、能够在T细胞中诱导初级激活信号的信号传导结构域、T细胞受体(TCR)组分的信号传导结构域和/或包含基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM)的信号传导结构域。在一些实施方案中，细胞内信号传导区包含次级或共刺激信号传导区(次级细胞内信号传导区)。
在一些实施方案中，自身抗体结合结构域包含自身抗原或其片段。自身抗原的选择可以取决于所靶向的自身抗体的类型。例如，可以因为自身抗原识别与特定疾病状态(例如自身免疫性疾病，如自身抗体介导的自身免疫性疾病)相关的靶细胞(如B细胞)上的自身抗体而选择所述自身抗原。在一些实施方案中，自身免疫性疾病包括寻常型天疱疮(PV)。示例性自身抗原包括桥粒芯糖蛋白1(Dsg1)和Dsg3。
D.多靶向
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品和组合物结合使用的细胞包括采用多靶向策略的细胞，所述多靶向策略如在所述细胞上表达两种或更多种遗传工程化受体，每种遗传工程化受体识别相同或不同的抗原，并且通常各自包括不同的细胞内信号传导组分。此类多靶向策略描述于例如以下文献中：国际专利申请公开号WO 2014055668A1(描述激活和共刺激CAR的组合，例如，靶向单独存在于脱靶(例如，正常细胞)上但仅一起存在于要治疗的疾病或病症的细胞上的两种不同的抗原)和Fedorov等人,Sci.Transl.Medicine,5(215)(2013)(描述表达激活和抑制性CAR的细胞，如其中激活CAR结合至同时在正常或未患病细胞和要治疗的疾病或病症的细胞上表达的一种抗原，并且抑制性CAR结合至仅在正常细胞或不期望治疗的细胞上表达的另一种抗原的那些)。
例如，在一些实施方案中，所述细胞包括表达第一遗传工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)的受体，其通常在特异性地结合至由第一受体识别的抗原(例如，第一抗原)后能够诱导激活或刺激信号至所述细胞。在一些实施方案中，所述细胞还包括第二遗传工程化抗原受体(例如，CAR或TCR)，例如嵌合共刺激受体，所述受体通常在特异性地结合至由所述第二受体识别的第二抗原后能够诱导共刺激信号至免疫细胞。在一些实施方案中，所述第一抗原与所述第二抗原是相同的。在一些实施方案中，所述第一抗原与所述第二抗原是不同的。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二遗传工程化抗原受体(例如CAR或TCR)能够诱导激活信号至所述细胞。在一些实施方案中，所述受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导组分。在一些实施方案中，由所述第一受体诱导的激活涉及信号转导或所述细胞中蛋白质表达的变化，从而导致免疫应答的起始(如ITAM磷酸化)和/或ITAM介导的信号转导级联的起始、免疫突触的形成和/或所结合受体(例如CD4或CD8等)附近的分子的聚簇、一种或多种转录因子(例如NF-κB和/或AP-1)的激活、和/或对诸如细胞因子的因子的基因表达的诱导、增殖和/或存活。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二受体包括共刺激受体(如CD28、CD137(4-1BB)、OX40和/或ICOS)的细胞内信号传导结构域或区域。在一些实施方案中，所述第一和第二受体包括不同的共刺激受体的细胞内信号传导结构域。在一个实施方案中，所述第一受体含有CD28共刺激信号传导区，并且所述第二受体含有4-1BB共刺激信号传导区，或反之亦然。
在一些实施方案中，所述第一和/或第二受体包括含有ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域和共刺激受体的细胞内信号传导结构域二者。
在一些实施方案中，所述第一受体含有包含ITAM或ITAM样基序的细胞内信号传导结构域，并且所述第二受体含有共刺激受体的细胞内信号传导结构域。与相同细胞中诱导的激活信号组合的共刺激信号是引起免疫应答的共刺激信号，所述免疫应答如稳健且持续的免疫应答，如增加的细胞因子和其他因子的基因表达、分泌，以及T细胞介导的效应子功能，如细胞杀伤。
在一些实施方案中，仅第一受体的连接和仅第二受体的连接都不会诱导稳健的免疫应答。在一些方面，如果仅连接一个受体，则所述细胞变得耐受抗原或对抗原无反应，或被抑制，和/或不会被诱导增殖或分泌因子或实施效应子功能。然而，在一些此类实施方案中，在连接多个受体时，如在遇到表达第一和第二抗原的细胞时，实现所需应答，如完全免疫激活或刺激，例如如通过一种或多种细胞因子的分泌、增殖、持久性和/或实施免疫效应子功能(如对靶细胞的细胞毒性杀伤)所指示。
在一些实施方案中，所述两个受体分别诱导激活和抑制信号至所述细胞，使得一个受体与其抗原的结合激活所述细胞或诱导应答，但是第二抑制性受体与其抗原的结合诱导抑制或减弱该应答的信号。例子是激活CAR与抑制性CAR或iCAR的组合。例如，可以使用这种策略，其中激活CAR结合在疾病或病症中表达但也在正常细胞上表达的抗原，并且抑制性受体结合至在正常细胞上表达但不在疾病或病症的细胞上表达的单独抗原。
在一些实施方案中，所述多靶向策略用于以下情况：其中与特定疾病或病症相关的抗原是瞬时地(例如，在刺激与遗传工程化结合后)或永久地在未患病细胞上表达和/或在工程化细胞本身上表达。在此类情况下，由于需要连接两个分开的和单独特异性抗原受体，特异性、选择性和/或功效可以得到改进。
在一些实施方案中，多种抗原(例如，所述第一和第二抗原)在所靶向的细胞、组织或者疾病或病症上(如在癌细胞上)表达。在一些方面，所述细胞、组织、疾病或病症是多发性骨髓瘤或多发性骨髓瘤细胞。在一些实施方案中，多种抗原中的一种或多种通常也在不需要用细胞疗法靶向的细胞(例如正常或未患病细胞或组织，和/或工程化细胞本身)上表达。在此类实施方案中，由于需要连接多个受体以实现所述细胞的应答，特异性和/或功效得以实现。
E.用于遗传工程化的载体和方法
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的工程化细胞(如T细胞)是已经遗传工程化以表达本文所述的重组受体(例如，CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，所述细胞是通过引入、递送或转移编码所述重组受体和/或其他分子的核酸序列来工程化。
在一些实施方案中，使用重组感染性病毒粒子(如例如，衍生自猿猴病毒40(SV40)、腺病毒、腺相关病毒(AAV)的载体)将重组核酸转移至细胞中。在一些实施方案中，使用重组慢病毒载体或逆转录病毒载体(如γ-逆转录病毒载体)将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Koste等人(2014)Gene Therapy 2014年4月3日.doi:10.1038/gt.2014.25；Carlens等人(2000)Exp Hematol 28(10):1137-46；Alonso-Camino等人(2013)Mol TherNucl Acids 2,e93；Park等人,Trends Biotechnol.2011年11月29日(11):550-557)。
在一些实施方案中，逆转录病毒载体具有长末端重复序列(LTR)，例如，衍生自莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、骨髓增生性肉瘤病毒(MPSV)、鼠胚胎干细胞病毒(MESV)、鼠干细胞病毒(MSCV)、脾病灶形成病毒(SFFV)或腺相关病毒(AAV)的逆转录病毒载体。大多数逆转录病毒载体衍生自鼠逆转录病毒。在一些实施方案中，所述逆转录病毒包括衍生自任何禽类或哺乳动物细胞来源的那些。所述逆转录病毒通常是双嗜性的，这意味着它们能够感染包括人在内的若干个物种的宿主细胞。在一个实施方案中，要表达的基因替代逆转录病毒的gag、pol和/或env序列。已经描述了多个说明性逆转录病毒系统(例如，美国专利号5,219,740；6,207,453；5,219,740；Miller和Rosman(1989)BioTechniques 7:980-990；Miller,A.D.(1990)Human Gene Therapy 1:5-14；Scarpa等人(1991)Virology 180:849-852；Burns等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:8033-8037；以及Boris-Lawrie和Temin(1993)Cur.Opin.Genet.Develop.3:102-109)。
慢病毒转导的方法是已知的。示例性方法描述于例如以下文献中：Wang等人(2012)J.Immunother.35(9):689-701；Cooper等人(2003)Blood.101:1637-1644；Verhoeyen等人(2009)Methods Mol Biol.506:97-114；和Cavalieri等人(2003)Blood.102(2):497-505。
在一些实施方案中，通过电穿孔将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Chicaybam等人,(2013)PLoS ONE 8(3):e60298；和Van Tedeloo等人(2000)Gene Therapy 7(16):1431-1437)。在一些实施方案中，通过转座将重组核酸转移至T细胞中(参见例如，Manuri等人(2010)Hum Gene Ther 21(4):427-437；Sharma等人(2013)Molec Ther Nucl Acids 2,e74；和Huang等人(2009)Methods Mol Biol 506:115-126)。在免疫细胞中引入和表达遗传物质的其他方法包括磷酸钙转染(例如，如以下文献中所述：Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,纽约州纽约市)、原生质体融合、阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促进的微粒轰击(Johnston,Nature,346:776-777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人,Mol.Cell Biol.,7:2031-2034(1987))。
用于转移编码重组产物的核酸的其他方法和载体是例如国际专利申请公开号WO2014055668和美国专利号7,446,190中描述的那些。
在一些实施方案中，可以在扩增期间或之后例如用T细胞受体(TCR)或嵌合抗原受体(CAR)对所述细胞(例如，T细胞)进行转染。例如，用于引入所需受体的基因的这种转染可以用任何合适的逆转录病毒载体来进行。然后可以使遗传修饰的细胞群摆脱初始刺激物(例如，抗CD3/抗CD28刺激物)，随后用第二类型的刺激物例如通过从头引入的受体进行刺激。这种第二类型的刺激物可以包括呈肽/MHC分子形式的抗原性刺激物、遗传引入的受体的同源(交联)配体(例如，CAR的天然配体)或在新受体的框架内直接结合(例如，通过识别所述受体内的恒定区)的任何配体(如抗体)。参见例如，Cheadle等人,“Chimeric antigenreceptors for T-cell based therapy”Methods Mol Biol.2012；907:645-66；或Barrett等人,Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine第65卷:333-347(2014)。
在一些情况下，可以使用不需要激活所述细胞(例如，T细胞)的载体。在一些此类情况下，可以在激活之前选择和/或转导所述细胞。因此，可以在培养所述细胞之前或之后将所述细胞工程化，并且在一些情况下在培养的至少一部分的同时或期间将所述细胞工程化。
用于引入的其他核酸(例如，基因)是要改进治疗功效的那些，如通过促进所转移细胞的存活力和/或功能；要提供用于选择和/或评价所述细胞的遗传标记的基因，如以评估体内存活或定位；要改进安全性的基因，例如，通过使所述细胞对体内阴性选择敏感，如以下文献中所述：Lupton S.D.等人,Mol.and Cell Biol.,11:6(1991)；和Riddell等人,Human Gene Therapy 3:319-338(1992)；还参见Lupton等人的PCT/US91/08442和PCT/US94/05601的公开案，其描述使用通过将显性阳性可选择标记与阴性可选择标记融合而衍生的双功能可选择融合基因。参见例如，Riddell等人，美国专利号6,040,177，第14-17栏。
F.用于遗传工程化的细胞和细胞的制备
在一些实施方案中，与所提供的方法、用途、制品或组合物结合使用的细胞(如T细胞)是已经进行遗传工程化以表达本文所述的重组受体(例如，CAR或TCR)的细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情况下使用。在一些实施方案中，工程化细胞是免疫细胞。在一些实施方案中，工程化细胞是T细胞，如CD4+或CD8+T细胞。
在一些实施方案中，核酸(如编码重组受体的核酸)是异源的，即通常在细胞或从所述细胞获得的样品中不存在，如从另一种生物体或细胞获得的核酸，所述核酸通常在被工程化的细胞和/或衍生出这种细胞的生物体中没有发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的，如在自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
细胞通常是真核细胞，如哺乳动物细胞，并且通常是人细胞。在一些实施方案中，细胞衍生自血液、骨髓、淋巴或淋巴器官，是免疫系统的细胞，如先天或适应性免疫的细胞，例如，骨髓或淋巴细胞(包括淋巴细胞，通常是T细胞和/或NK细胞)。其他示例性细胞包括干细胞，如多潜能和多能干细胞，包括诱导多能干细胞(iPSC)。细胞通常是原代细胞，如从受试者直接分离和/或从受试者分离并冷冻的那些。在一些实施方案中，细胞包括T细胞或其他细胞类型的一个或多个亚组，如整个T细胞群、CD4+细胞、CD8+细胞及其亚群，如由以下各项所定义的那些亚群：功能、激活状态、成熟度、分化的可能性、扩增、再循环、定位和/或持久能力、抗原特异性、抗原受体类型、在特定器官或区室中的存在、标记或细胞因子分泌特征和/或分化程度。关于要治疗的受试者，细胞可以是同种异体的和/或自体的。所述方法包括现成的方法。在一些方面，如对于现成的技术，所述细胞是多能和/或多潜能的，如干细胞，如诱导多能干细胞(iPSC)。在一些实施方案中，所述方法包括从受试者分离细胞，对其进行制备、加工、培养和/或工程化，并在冷冻保存之前或之后将它们重新引入同一受试者中。
T细胞和/或CD4+和/或CD8+T细胞的亚型和亚群包括幼稚T(TN)细胞、效应T细胞(TEFF)、记忆T细胞及其亚型(如干细胞记忆T(TSCM)、中枢记忆T(TCM)，效应记忆T(TEM)或终末分化效应记忆T细胞)、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、未成熟T细胞、成熟T细胞、辅助T细胞、细胞毒性T细胞、粘膜相关不变T(MAIT)细胞、天然存在和适应性调节T(Treg)细胞、辅助T细胞(如TH1细胞、TH2细胞、TH3细胞、TH17细胞、TH9细胞、TH22细胞、滤泡辅助细胞T细胞)、α/βT细胞和δ/γT细胞。
在一些实施方案中，细胞是天然杀伤(NK)细胞。在一些实施方案中，细胞是单核细胞或粒细胞，例如骨髓细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和/或嗜碱性粒细胞。
在一些实施方案中，细胞包括通过遗传工程化引入的一个或多个核酸，并由此表达此类核酸的重组或遗传工程化产物。在一些实施方案中，核酸是异源的，即通常不存在于细胞或从细胞获得的样品中，如从另一种生物或细胞获得的核酸，例如，所述核酸通常不在被工程化的细胞和/或这种细胞所来源的生物中发现。在一些实施方案中，核酸不是天然存在的，如在自然界中未发现的核酸，包括包含编码来自多种不同细胞类型的各种结构域的核酸的嵌合组合的核酸。
在一些实施方案中，工程化细胞的制备包括一个或多个培养和/或制备步骤，用于引入编码转基因受体(如CAR)的核酸的细胞可以从样品(如生物样品，例如，从受试者获得或衍生的生物样品)分离。在一些实施方案中，分离出细胞的受试者是患有疾病或病症或需要细胞疗法或将对其给予细胞疗法的受试者。在一些实施方案中，受试者是需要特定治疗性干预(如过继细胞疗法，其中细胞被分离、加工和/或工程化)的人。
因此，在一些实施方案中，细胞是原代细胞，例如，原代人细胞。样品包括直接取自受试者的组织、流体和其他样品，以及来自一个或多个处理步骤(如分离、离心、遗传工程化(例如用病毒载体转导)、洗涤和/或孵育)的样品。生物样品可以是直接从生物来源获得的样品或经过加工的样品。生物样品包括但不限于体液(如血液、血浆、血清、脑脊液、滑液、尿液和汗液)、组织和器官样品，包括由其衍生的加工样品。
在一些方面，衍生或分离出所述细胞的样品是血液或血液衍生的样品，或者是或衍生自单采术或白细胞分离术产物。示例性样品包括全血、外周血单核细胞(PBMC)、白细胞、骨髓、胸腺、组织活检、肿瘤、白血病、淋巴瘤、淋巴结、肠相关淋巴组织、粘膜相关淋巴组织、脾、其他淋巴组织、肝、肺、胃、肠、结肠、肾、胰腺、乳房、骨、前列腺、子宫颈、睾丸、卵巢、扁桃体或其他器官和/或由其衍生的细胞。在细胞疗法(例如，过继细胞疗法)的情况下，样品包括来自自体和同种异体来源的样品。
在一些实施方案中，细胞衍生自细胞系，例如，T细胞系。在一些实施方案中，细胞获自异种来源，例如获自小鼠、大鼠、非人灵长类动物和猪。
在一些实施方案中，细胞的分离包括一个或多个制备和/或基于非亲和力的细胞分离步骤。在一些例子中，将细胞洗涤、离心和/或在一种或多种试剂的存在下孵育，例如以去除不需要的组分、富集所需组分、裂解或去除对特定试剂敏感的细胞。在一些例子中，基于一种或多种性质如密度、粘附性质、尺寸、对特定组分的敏感性和/或抗性分离细胞。
在一些例子中，例如通过单采术或白细胞分离术获得来自受试者的循环血液的细胞。在一些方面，样品含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和/或血小板，并且在一些方面含有除红细胞和血小板之外的细胞。
在一些实施方案中，洗涤从受试者收集的所述血细胞以例如去除血浆级分，并将所述细胞置于适当缓冲液或介质中用于后续加工步骤。在一些实施方案中，用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤所述细胞。在一些实施方案中，所述洗涤溶液缺少钙和/或镁和/或许多或所有二价阳离子。在一些方面，洗涤步骤是在半自动化“流通式”离心机(例如，Cobe 2991细胞加工器，Baxter)中根据制造商的说明书来完成的。在一些方面，洗涤步骤是通过正切流动过滤(TFF)根据制造商的说明书完成的。在一些实施方案中，在洗涤后将所述细胞重悬浮于多种生物相容性缓冲液中，如例如无Ca++/Mg++的PBS。在某些实施方案中，去除血细胞样品的组分并将所述细胞直接重悬浮于培养基中。
在一些实施方案中，所述方法包括基于密度的细胞分离方法，如通过溶解红细胞并通过Percoll或Ficoll梯度进行离心来从外周血制备白细胞。
在一些实施方案中，所述分离方法包括基于一种或多种特定分子(如表面标记(例如，表面蛋白)、细胞内标记或核酸)在所述细胞中的表达或存在分离不同细胞类型。在一些实施方案中，可以使用基于此类标记的任何已知的分离方法。在一些实施方案中，所述分离是基于亲和力或免疫亲和力的分离。例如，在一些方面，所述分离包括基于一种或多种标记(通常是细胞表面标记)在细胞中的表达或表达水平来分离细胞和细胞群，例如，通过与特异性地结合至此类标记的抗体或结合配偶体一起孵育，之后通常进行洗涤步骤并将已经结合所述抗体或结合配偶体的细胞与尚未结合至所述抗体或结合配偶体的那些细胞分离。
此类分离步骤可以基于阳性选择(其中保留已经结合所述试剂的细胞以供进一步使用)和/或阴性选择(其中保留未与所述抗体或结合配偶体结合的细胞)。在一些例子中，保留两种级分以供进一步使用。在一些方面中，在没有可用于特异性鉴定异质群体中的细胞类型的抗体的情况下，阴性选择可能特别有用，使得最好基于由除所需群体之外的细胞表达的标记进行分离。
所述分离无需导致特定细胞群或表达特定标记的细胞的100％富集或去除。例如，特定类型的细胞(如表达标记的那些细胞)的阳性选择或富集是指增加此类细胞的数量或百分比，但是无需使不表达所述标记的细胞完全不存在。同样，特定类型的细胞(如表达标记的那些细胞)的阴性选择、去除或耗尽是指减少此类细胞的数量或百分比，但是无需使所有此类细胞完全去除。
在一些例子中，进行多轮分离步骤，其中使来自一个步骤的阳性或阴性选择的级分经历另一分离步骤，如后续阳性或阴性选择。在一些例子中，单一分离步骤可以耗尽同时表达多种标记的细胞，如通过将细胞与多种抗体或结合配偶体一起孵育，每种抗体或结合配偶体对阴性选择所靶向的标记具有特异性。同样地，可以通过将细胞与在各种细胞类型上表达的多种抗体或结合配偶体一起孵育来对多种细胞类型同时进行阳性选择。
例如，在一些方面，通过阳性向或阴性选择技术来分离T细胞的特定亚群，如对高水平的一种或多种表面标记呈阳性或表达所述高水平的一种或多种表面标记的细胞，例如，CD28+、CD62L+、CCR7+、CD27+、CD127+、CD4+、CD8+、CD45RA+和/或CD45RO+T细胞。
例如，可以使用抗CD3/抗CD28缀合的磁珠(例如，M-450CD3/CD28T细胞扩增器)对CD3+,CD28+T细胞进行阳性选择。
在一些实施方案中，分离是通过阳性选择富集特定细胞群或通过阴性选择耗尽特定细胞群来进行。在一些实施方案中，阳性或阴性选择是通过将细胞与一种或多种抗体或其他结合剂一起孵育来完成，所述一种或多种抗体或其他结合剂与分别在阳性或阴性选择的细胞上表达(标记+)或以相对较高水平表达(标记高)的一种或多种表面标记特异性结合。
在一些实施方案中，T细胞是通过在非T细胞(如B细胞、单核细胞或其他白细胞)上表达的标记(如CD14)的阴性选择从PBMC样品分离的。在一些方面，使用CD4+或CD8+选择步骤来分离CD4+辅助和CD8+细胞毒性T细胞。可以通过对在一种或多种初始、记忆和/或效应子T细胞亚群上表达或表达至相对较高程度的标记进行阳性或阴性选择，来将此类CD4+和CD8+群体进一步分选为亚群。
在一些实施方案中，将CD8+细胞针对初始、中枢记忆、效应子记忆和/或中枢记忆干细胞进一步富集或耗尽，如通过基于与相应亚群相关的表面抗原的阳性或阴性选择来进行。在一些实施方案中，进行对中枢记忆T(TCM)细胞的富集以增加功效，如改进给予后的长期存活、扩增和/或移植，这在一些方面在此类亚群中特别稳健。参见Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；Wang等人.(2012)J Immunother.35(9):689-701。在一些实施方案中，组合富含TCM的CD8+T细胞与CD4+T细胞进一步增强功效。
在实施方案中，记忆T细胞同时存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-亚组中。可以如使用抗CD8和抗CD62L抗体使PBMC富含或耗尽CD62L-CD8+和/或CD62L+CD8+级分。
在一些实施方案中，中枢记忆T(TCM)细胞的富集是基于CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和/或CD127的阳性或高表面表达；在一些方面，所述富集是基于表达或高度表达CD45RA和/或颗粒酶B的细胞的阴性选择。在一些方面，富含TCM细胞的CD8+群体的分离是通过耗尽表达CD4、CD14、CD45RA的细胞以及对表达CD62L的细胞的阳性选择或富集来进行的。在一个方面中，对中枢记忆T(TCM)细胞的富集是用基于CD4表达选择的细胞的阴性级分开始进行的，基于CD14和CD45RA的表达对所述阴性级分进行阴性选择，并基于CD62L进行阳性选择。在一些方面，此类选择是同时进行，并且在其他方面中是以任一顺序依序进行。在一些方面，用于制备CD8+细胞群或亚群的相同的基于CD4表达的选择步骤也用于产生CD4+细胞群或亚群，使得保留来自基于CD4的分离的阳性和阴性级分二者并将其用于所述方法的后续步骤中，任选地在一个或多个进一步的阳性或阴性选择步骤之后。
在特定例子中，使PBMC样品或其他白细胞样品经历CD4+细胞的选择，其中保留阴性和阳性级分二者。然后使阴性级分经历基于CD14和CD45RA或CD19的表达的阴性选择，以及基于中枢记忆T细胞特有的标记(如CD62L或CCR7)的阳性选择，其中阳性和阴性选择是以任一顺序来进行。
通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群将CD4+T辅助细胞分选为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，初始CD4+T淋巴细胞是CD45RO-,CD45RA+,CD62L+,CD4+T细胞。在一些实施方案中，中枢记忆CD4+细胞是CD62L+且CD45RO+。在一些实施方案中，效应子CD4+细胞是CD62L-且CD45RO-。
在一个例子中，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合剂通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。在一些实施方案中，所述抗体或结合配偶体结合至固体支持物或基质(如磁珠或顺磁珠)，以允许分离细胞以供阳性和/或阴性选择。例如，在一些实施方案中，使用免疫磁性(或亲和磁性)分离技术分离或隔离细胞和细胞群(综述于以下文献中：Methods in Molecular Medicine,第58卷:Metastasis ResearchProtocols,第2卷:Cell Behavior In Vitro and In Vivo,第17-25页编辑:S.A.Brooks和U.Humana Press Inc.,新泽西州托托瓦)。
在一些方面，将要分离的细胞的样品或组合物与小的可磁化或磁响应材料(如磁响应粒子或微粒，如顺磁珠(例如，如Dynalbeads或MACS珠)一起孵育。磁响应材料(例如，颗粒)通常直接或间接附着至结合配偶体(例如，抗体)，所述结合配偶体特异性地结合至需要分离(例如，需要进行阴性或阳性选择)的一个或多个细胞或细胞群上存在的分子(例如，表面标记)。
在一些实施方案中，磁粒或磁珠包含结合至特异性结合成员(如抗体或其他结合配偶体)的磁响应材料。存在许多用于磁分离方法的熟知的磁响应材料。合适的磁粒包括以下文献中所述的那些：Molday的美国专利号4,452,773，以及欧洲专利说明书EP 452342B，所述文献通过引用并入本文。胶体大小的颗粒是其他例子，如以下文献中所述的那些：Owen的美国专利号4,795,698，和Liberti等人的美国专利号5,200,084。
孵育通常在这样的条件下进行，由此抗体或结合配偶体或者与附着于磁性颗粒或珠的此类抗体或结合配偶体特异性结合的分子(如二抗或其他试剂)与细胞表面分子(如果存在于所述样品内的细胞上的话)特异性结合。
在一些方面，将样品置于磁场中，并且已经附着有磁响应或可磁化颗粒的那些细胞将被吸引至磁体并与未标记的细胞分离。对于阳性选择，保留被吸引至磁体的细胞；对于阴性选择，保留未被吸引的细胞(未标记细胞)。在一些方面，在相同的选择步骤期间进行阳性和阴性选择的组合，其中保留阳性和阴性级分并进一步加工或进行进一步分离步骤。
在某些实施方案中，磁响应颗粒被包被在一抗或其他结合伴侣、二抗、凝集素、酶或链霉亲和素中。在某些实施方案中，所述磁性颗粒通过对一种或多种标记具特异性的一抗的包被而附着于细胞。在某些实施方案中，用一抗或结合配偶体标记所述细胞而不是珠，并且然后添加细胞类型特异性二抗或其他结合配偶体(例如链霉亲和素)包被的磁性颗粒。在某些实施方案中，将链霉亲和素包被的磁性颗粒与生物素化的一抗或二抗结合使用。
在一些实施方案中，磁响应颗粒保持附着于所述细胞，所述细胞随后被孵育，培养和/或工程化；在一些方面，所述颗粒保持附着于所述细胞以用于给予患者。在一些实施方案中，将可磁化或磁响应颗粒从所述细胞去除。从细胞中去除可磁化颗粒的方法是已知的，并且包括例如使用竞争性非标记抗体和与可切割接头缀合的可磁化颗粒或抗体。在一些实施方案中，所述可磁化颗粒是可生物降解的。
在一些实施方案中，基于亲和力的选择是通过磁激活细胞分选(MACS)(MiltenyiBiotec，加利福尼亚州奥本市)来进行。磁激活细胞分选(MACS)系统能够对附着有磁化颗粒的细胞进行高纯度选择。在某些实施方案中，MACS以如下模式操作，其中在施加外部磁场之后依序洗脱非靶种类和靶种类。也就是说，使附着至磁化颗粒的细胞保持在适当的位置，而未附着的种类被洗脱。然后，在第一洗脱步骤完成后，以某种方式释放被捕获在磁场中并被阻止洗脱的种类，使得它们可以被洗脱和回收。在某些实施方案中，标记非靶细胞并将其从异质性细胞群耗尽。
在某些实施方案中，所述隔离或分离是使用进行所述方法的隔离、细胞制备、分离、加工、孵育、培养和/或配制步骤中的一个或多个步骤的系统、装置或设备来进行。在一些方面，使用所述系统在封闭或无菌环境中实施这些步骤中的每一个，例如，以使误差、用户操作和/或污染最小化。在一个例子中，所述系统是如国际专利申请公开号WO 2009/072003或US 20110003380A1中所述的系统。
在一些实施方案中，所述系统或设备在集成或独立系统中和/或以自动化或可编程方式实施所述隔离、加工、工程化和配制步骤中的一个或多个(例如所有)步骤。在一些方面，所述系统或设备包括与所述系统或设备通信的计算机和/或计算机程序，所述计算机和/或计算机程序允许用户对所述加工、隔离、工程化和配制步骤进行编程、控制、评估其结果和/或调整所述加工、隔离、工程化和配制步骤的各种方面。
在一些方面，所述分离和/或其他步骤是使用CliniMACS系统(Miltenyi Biotec)来进行，例如，用于在封闭且无菌的系统中以临床规模水平自动化分离细胞。部件可以包括集成微计算机、磁分离单元、蠕动泵和各种夹管阀。在一些方面，所述集成计算机控制仪器的所有部件，并引导系统以标准化序列执行重复程序。在一些方面，所述磁分离单元包括可移动的永磁体和用于选择柱的支架。所述蠕动泵控制整个管组的流速，并与夹管阀一起确保缓冲液通过所述系统的受控流动和细胞的连续悬浮。
在一些方面，所述CliniMACS系统使用在无菌无热原溶液中供应的抗体偶联的可磁化颗粒。在一些实施方案中，在用磁粒标记细胞后，洗涤所述细胞以去除多余颗粒。然后将细胞制备袋连接到管组，再将所述管组连接到含有缓冲液的袋和细胞收集袋。所述管组由预装配的无菌管(包括预柱和分离柱)组成，并且仅供一次性使用。在启动分离程序后，所述系统将细胞样品自动施加到分离柱上。标记的细胞保留在柱内，而未标记的细胞通过一系列洗涤步骤去除。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群是未标记的并且不保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群被标记并保留在柱中。在一些实施方案中，用于与本文描述的方法一起使用的细胞群在去除磁场后从柱中洗脱，并且收集在细胞收集袋内。
在某些实施方案中，使用CliniMACS Prodigy系统(Miltenyi Biotec)进行分离和/或其他步骤。在一些方面，CliniMACS Prodigy系统配备有细胞加工联合体，其允许通过离心自动化洗涤和分级分离细胞。CliniMACS Prodigy系统还可以包括机载相机和图像识别软件，所述图像识别软件通过辨别源细胞产物的宏观层来确定最佳的细胞分级分离终点。例如，将外周血自动分离为红细胞、白细胞和血浆层。所述CliniMACS Prodigy系统还可以包括集成的细胞培养室，其实现细胞培养方案，例如像细胞分化和扩增、抗原加载和长期细胞培养。输入端口可允许无菌移除和补充培养基，并且可以使用集成显微镜监测细胞。参见，例如，Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过流式细胞术收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群，其中针对多种细胞表面标记染色的细胞携载于流体流中。在一些实施方案中，通过制备规模(FACS)分选收集并富集(或耗尽)本文描述的细胞群。在某些实施方案中，通过使用与基于FACS的检测系统组合的微机电系统(MEMS)芯片收集并富集(或耗尽)本文所述的细胞群(参见例如，WO 2010/033140,Cho等人(2010)Lab Chip 10,1567-1573；和Godin等人(2008)JBiophoton.1(5):355-376)。在两种情况下，可以用多种标记来标记细胞，从而允许以高纯度分离明确限定的T细胞亚组。
在一些实施方案中，用一种或多种可检测标记来标记所述抗体或结合配偶体，以促进用于阳性和/或阴性选择的分离。例如，分离可以基于与荧光标记的抗体的结合。在一些例子中，基于对一种或多种细胞表面标记具特异性的抗体或其他结合配偶体的结合来分离细胞在流体流中载携，如通过荧光激活细胞分选(FACS)，包括制备规模(FACS)和/或微机电系统(MEMS)芯片，例如与流式细胞检测系统组合。此类方法允许基于多种标记同时进行阳性和阴性选择。
在一些实施方案中，制备方法包括在分离、孵育和/或工程化之前或之后冷冻(例如，冷冻保存)所述细胞的步骤。在一些实施方案中，所述冷冻和后续解冻步骤去除所述细胞群中的粒细胞，并且在一定程度上去除单核细胞。在一些实施方案中，例如，在洗涤步骤去除血浆和血小板之后，使所述细胞悬浮于冷冻溶液中。在一些方面，可以使用多种已知的冷冻溶液和参数中的任何一种。一个例子涉及使用含有20％DMSO和8％人血清白蛋白(HSA)的PBS，或其他合适的细胞冷冻培养基。然后用培养基将其1:1稀释，使得DMSO和HSA的最终浓度分别为10％和4％。然后通常将所述细胞以1°/分钟的速率冷冻至-80℃并储存在液氮储罐的气相中。
在一些实施方案中，在遗传工程化之前或结合遗传工程化孵育和/或培养所述细胞。所述孵育步骤可以包括培养、培育、刺激、激活和/或繁殖。孵育和/或工程化可以在培养容器中进行，所述培养容器是如单元、室、孔、柱、管、管组、阀、小瓶、培养皿、袋或其他用于培养或培育细胞的容器。在一些实施方案中，所述组合物或细胞是在刺激条件或刺激剂存在下孵育。此类条件包括设计用于诱导群体中细胞的增殖、扩增、激活和/或存活以模拟抗原暴露和/或引发细胞用于遗传工程化(如用于引入重组抗原受体)的那些。
所述条件可以包括以下中的一种或多种：特定培养基、温度、氧含量、二氧化碳含量、时间、药剂(例如，营养素、氨基酸、抗生素、离子和/或刺激因子，如细胞因子、趋化因子、抗原、结合配偶体、融合蛋白、重组可溶性受体和设计用于激活细胞的任何其他药剂)。
在一些实施方案中，刺激条件或刺激剂包括能够激活TCR复合物的细胞内信号传导结构域的一种或多种药剂(例如，配体)。在一些方面，所述药剂开启或启动T细胞中的TCR/CD3细胞内信号传导级联。此类药剂可以包括抗体，如对TCR具有特异性的那些，例如抗CD3。在一些实施方案中，刺激条件包括能够刺激共刺激受体的一种或多种药剂(例如，配体)，例如，抗CD28。在一些实施方案中，此类药剂和/或配体可以结合至固体支持物(如珠)和/或一种或多种细胞因子。任选地，所述扩增方法可以进一步包括将抗CD3和/或抗CD28抗体添加至培养基(例如，以至少约0.5ng/ml的浓度)的步骤。在一些实施方案中，所述刺激剂包括IL-2、IL-15和/或IL-7。在一些方面，IL-2浓度为至少约10单位/mL。
在一些方面，根据多种技术进行孵育，所述技术如以下文献中所述的那些：Riddell等人的美国专利号6,040,177；Klebanoff等人(2012)J Immunother.35(9):651-660；Terakura等人(2012)Blood.1:72-82；和/或Wang等人(2012)J Immunother.35(9):689-701。
在一些实施方案中，通过以下方式扩增T细胞：向培养起始组合物中添加饲养细胞，如非分裂外周血单核细胞(PBMC)(例如，使得对于要扩增的初始群体中的每个T淋巴细胞，所得细胞群含有至少约5、10、20或40个或更多个PBMC饲养细胞)；并孵育培养物(例如，持续足以扩增T细胞数量的时间)。在一些方面，所述非分裂饲养细胞可以包含γ照射的PBMC饲养细胞。在一些实施方案中，用约3000至3600拉德范围内的γ射线照射PBMC以防止细胞分裂。在一些方面，在添加所述T细胞群之前将饲养细胞添加至培养基。
在一些实施方案中，所述刺激条件包括适于人T淋巴细胞生长的温度，例如，至少约25摄氏度，通常至少约30摄氏度，并且通常为或为约37摄氏度。任选地，所述孵育还可以包括添加非分裂EBV转化的类淋巴母细胞(LCL)作为饲养细胞。可以用在约6000至10,000拉德范围内的γ射线照射LCL。在一些方面，所述LCL饲养细胞是以任何合适的量提供，如至少约10:1的LCL饲养细胞与初始T淋巴细胞的比率。
在实施方案中，抗原特异性T细胞(如抗原特异性CD4+和/或CD8+T细胞)是通过用抗原刺激初始或抗原特异性T淋巴细胞来获得。例如，可以通过从感染的受试者分离T细胞并用相同抗原在体外刺激所述细胞来产生针对巨细胞病毒抗原的抗原特异性T细胞系或克隆。
IV.组合物和配制品
在一些实施方案中，提供包含用重组抗原受体(例如，CAR或TCR)工程化的细胞的细胞的所述剂量作为组合物或配制品，如药物组合物或配制品。此类组合物可以根据所提供的方法或用途和/或用所提供制品或组合物来使用，如用于预防或治疗疾病、病症和障碍，或用于检测、诊断和预后方法。
术语“药物配制品”是指制剂，所述制剂所采取的形式允许其中所含活性成分的生物活性有效，并且其不含对要给予所述配制品的受试者具有不可接受的毒性的任何其他组分。
“药学上可接受的载体”是指药物配制品中除了活性成分以外的对受试者无毒的成分。药学上可接受的载体包括但不限于缓冲液、赋形剂、稳定剂或防腐剂。
在一些方面，载体的选择部分取决于特定细胞或药剂和/或给予方法。因此，有多种合适的配制品。例如，所述药物组合物可以含有防腐剂。合适的防腐剂可以包括例如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯甲酸钠和苯扎氯铵。在一些方面，使用两种或更多种防腐剂的混合物。所述防腐剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.0001％至约2％的量存在。载体描述于例如以下文献中：Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编辑(1980)。药学上可接受的载体在所用的剂量和浓度下通常对接受者无毒，并且包括但不限于：缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；六甲氯铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；烷基对羟基苯甲酸酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，如EDTA；糖类，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，如钠；金属络合物(例如锌-蛋白质络合物)；和/或非离子表面活性剂，如聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，所述组合物中包括缓冲剂。合适的缓冲剂包括例如柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸、磷酸钾和各种其他酸和盐。在一些方面，使用两种或更多种缓冲剂的混合物。所述缓冲剂或其混合物通常以按总组合物的重量计约0.001％至约4％的量存在。用于制备可给予的药物组合物的方法是已知的。示例性方法更详细地描述于例如以下文献中：Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott Williams&Wilkins；第21版(2005年5月1日)。
所述配制品或组合物还可以含有多于一种活性成分，所述活性成分可用于用细胞或药剂预防或治疗的特定适应症、疾病或病症，其中相应活性不会相互产生不利影响。此类活性成分以有效用于既定目的的量合适地组合存在。因此，在一些实施方案中，所述药物组合物进一步包括其他药物活性剂或药物，如化学治疗剂，例如天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、道诺霉素、多柔比星、氟尿嘧啶、吉西他滨、羟基脲、甲氨蝶呤、紫杉醇、利妥昔单抗、长春碱、长春新碱等。在一些实施方案中，所述药剂或细胞是以盐(例如，药学上可接受的盐)的形式给予。合适的药学上可接受的酸加成盐包括衍生自以下的那些：无机酸，如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸，硝酸和硫酸；以及有机酸，如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡萄糖酸、琥珀酸和芳基磺酸，例如对甲苯磺酸。
在一些实施方案中，所述药物组合物以有效治疗或预防所述疾病或病症的量(如治疗有效量或预防有效量)含有药剂或细胞。在一些实施方案中，通过定期评估所治疗的受试者来监测治疗或预防功效。对于数天或更长时间中重复给予，根据病症，重复所述治疗直至出现疾病症状的所需抑制为止。然而，其他剂量方案可能有用并且可以被确定。所需剂量可以通过单次推注给予所述组合物、通过多次推注给予所述组合物或通过连续输注给予所述组合物来递送。
所述药剂或细胞可以通过任何合适的方式给予，例如，通过推注输注，通过注射，例如，静脉内或皮下注射、眼内注射、眼周注射、视网膜下注射、玻璃体内注射、经中隔注射、巩膜下注射、脉络膜内注射、前房注射、结膜下(subconjectval)注射、结膜下(subconjuntival)注射、眼球筋膜囊下(sub-Tenon)注射、球后注射、球周注射或后近巩膜(posterior juxtascleral)递送。在一些实施方案中，它们通过肠胃外、肺内和鼻内给予以及(如果需要用于局部治疗的话)病灶内给予。肠胃外输注包括肌内、静脉内、动脉内、腹膜内或皮下给予。在一些实施方案中，给定剂量是通过所述细胞或药剂的单次推注给予来给予。在一些实施方案中，给定剂量是通过所述细胞或药剂例如在不超过3天的时间段中多次推注给予来给予，或通过所述细胞或药剂的连续输注给予来给予。
对于疾病的预防或治疗，适当的剂量可取决于要治疗的疾病类型、一种或多种药剂的类型、细胞或重组受体的类型、疾病的严重程度和病程、给予所述药剂或细胞用于预防性目的还是治疗性目的、先前疗法、受试者的临床病史和对所述药剂或所述细胞的反应、以及主治医师的决断。在一些实施方案中，将所述组合物一次或在一系列治疗中合适地给予受试者。
所述细胞或药剂可以使用标准给予技术、配制品和/或装置来给予。提供配制品和装置，如注射器和小瓶，用于储存和给予所述组合物。关于细胞，给予可以是自体的或异源的。例如，免疫应答细胞或祖细胞可以从一个受试者获得，并给予同一受试者或不同但相容的受试者。外周血衍生的免疫应答细胞或其后代(例如，体内、离体或体外衍生的)可以通过局部注射给予，包括导管给予、全身注射、局部注射、静脉内注射或肠胃外给予。在给予治疗组合物(例如，含有遗传修饰的免疫应答细胞或者治疗或改善神经毒性症状的药剂的药物组合物)时，通常将其配制成单位剂量可注射形式(溶液、悬浮液、乳液)。
配制品包括用于口服、静脉内、腹膜内、皮下、经肺、透皮、肌内、鼻内、经颊、舌下或栓剂给予的那些。在一些实施方案中，所述药剂或细胞群是肠胃外给予的。如本文所用术语“肠胃外”包括静脉内、肌肉内、皮下、直肠、阴道和腹膜内给予。在一些实施方案中，所述药剂或细胞群是通过静脉内、腹膜内或皮下注射使用外周全身递送给予受试者。
在一些实施方案中，组合物是作为无菌液体制剂(例如，等渗水溶液、悬浮液、乳液、分散体或粘性组合物)提供，其在一些方面可以被缓冲至所选pH。液体制剂通常比凝胶、其他粘性组合物和固体组合物更容易制备。另外，液体组合物稍微更方便给予，特别是通过注射。另一方面，粘性组合物可以配制在适当的粘度范围内，以提供与特定组织的更长接触时间。液体或粘性组合物可以包含载体，所述载体可以是含有例如以下的溶剂或分散介质：水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液体聚乙二醇)及其合适的混合物。
无菌可注射溶液可以通过以下方式来制备：将所述药剂或细胞掺入溶剂中，如掺入与合适的载体、稀释剂或赋形剂(如无菌水、生理盐水、葡萄糖、右旋糖等)的混合物中。
用于体内给予的配制品通产是无菌的。可以例如通过经无菌滤膜过滤容易地实现无菌。
V.组合疗法
在所述方法、制品、用途或组合物的一些实施方案中，将细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+T细胞))与通常除了所述细胞疗法或另一种细胞疗法以外(如除了CAR+T细胞疗法以外)的另外的治疗剂或疗法组合给予受试者。在一些实施方案中，将所述细胞疗法(例如，一定剂量的遗传工程化T细胞，如CAR+T细胞)在所提供的方法或用途中和/或与所述制品或组合物一起作为组合治疗或组合疗法的一部分来给予，如与一种或多种另外的治疗性干预同时、以任何顺序依序或间歇地给予。在一些实施方案中，所述一种或多种另外的治疗性干预包括用于治疗或预防疾病或病症(如B细胞恶性肿瘤，例如，NHL)的任何药剂或治疗，和/或用于增加所述工程化细胞疗法的功效、持久性和/或活性的任何药剂或治疗。
在一些实施方案中，将另外的治疗剂或疗法给予受试者，所述受试者对于使用所述细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+T细胞))的治疗是或可能是或被预测为是较差反应者，和/或所述受试者不反应，可能不反应和/或被预测为不反应或在某一时间内和/或在某一程度上不反应。在一些实施方案中，将所述另外的治疗剂给予受试者，所述受试者如在开始给予所述细胞疗法后1个月内、在两个月内或在三个月内不展现或不可能展现或被预测为不展现完全反应或总体反应。在一些实施方案中，将所述另外的治疗剂给予受试者，所述受试者如在给予所述细胞疗法后1个月、两个月或三个月内展现或可能展现或被预测为展现进行性疾病(PD)。在一些实施方案中，基于如此治疗或先前用所述细胞疗法治疗的多名类似情况的受试者，受试者可能或被预测为不展现反应或某一反应。
在一些实施方案中，观察到可能或更有可能展现对细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+T细胞))的较差反应的受试者包括患有NHL的受试者，所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后被鉴定为或已被鉴定为患有稳定或进行性疾病(SD/PD)，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，或者所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，所提供的方法包括选择在单独给予细胞疗法和与另外的药剂或疗法(如所述任一种)组合给予所述细胞疗法时，展现或可能展现对所述细胞疗法的较差反应的受试者。在一些实施方案中，用于在所提供的组合治疗方法中治疗的受试者是如下受试者：因患有B细胞恶性肿瘤(如NHL)而被选择，并且在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后患有稳定或进行性疾病(SD/PD)，具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态，患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)，或者患有从MZL和CLL转化的DLBCL。在一些实施方案中，所述另外的药剂或疗法可以在开始给予所述细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+T细胞))之前、与开始给予所述细胞疗法相伴随、或与开始给予所述细胞疗法同时和/或在开始给予所述细胞疗法之后给予。
在某些实施方案中，发现在给予所述细胞疗法后，所述细胞疗法在受试者血液中的药代动力学(PK)在响应(例如，展现CR或OR)与不响应(例如，展现PD)所述细胞疗法的受试者之间是相似的或无显著不同。在一些实施方案中，此类观察结果指示，所述细胞疗法在所述受试者体内已经或正在扩增，但是可能不展现最佳功效。
在一些情况下，细胞疗法的最佳功效可能取决于所给予细胞的以下能力：识别并结合至靶标(例如，靶抗原)，运输、定位至和成功进入受试者、肿瘤及其环境内的适当位点。在一些情况下，最佳功效可能取决于所给予细胞的以下能力：被激活，扩增，发挥各种效应子功能(包括细胞毒性杀伤和分泌各种因子如细胞因子)，持续(包括长期)，分化、转换或参与重编程为某些表型状态(如长期记忆、低分化和效应子状态)，避免或减少疾病局部微环境中的免疫抑制条件，在清除并重新暴露于靶配体或抗原后提供有效且稳健的回忆反应，以及避免或减少消耗、无反应性、外周耐受、终末分化和/或分化为抑制状态。
在一些方面，免疫疗法(例如，T细胞疗法)的功效可能因疾病或障碍的局部微环境(例如TME)中存在的免疫抑制活性或因素而受限。在一些方面，所述TME含有或产生可抑制T细胞疗法所给予T细胞的活性、功能、增殖、存活和/或持久性的因素或条件。
在一些实施方案中，在开始给予所述细胞疗法(例如，一定剂量的T细胞(例如，CAR+T细胞))之前、与开始给予所述细胞疗法相伴随、或与开始给予所述细胞疗法同时和/或在开始给予所述细胞疗法之后给予另外的药剂或疗法可以导致改进的所述细胞疗法的活性、功效和/或持久性和/或改进所治疗受试者的反应。在一些实施方案中，用于组合治疗或组合疗法的另外的药剂增强、加强和/或促进所述细胞疗法(例如，工程化T细胞疗法，如CAR+T细胞)的治疗效果的功效和/或安全性。在一些实施方案中，所述另外的药剂增强或改进所给予细胞(例如，表达重组受体(例如，CAR)的细胞)的功效、存活或持久性。
在一些实施方案中，所述另外的疗法的药剂是抗体或细胞毒性剂或治疗剂，例如，化学治疗剂。在一些实施方案中，用于治疗或疗法的一种或多种另外的药剂是免疫调节剂、免疫检查点抑制剂、腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂和激酶抑制剂。在一些实施方案中，所述组合治疗或组合疗法包括另外的治疗，如手术治疗、移植和/或放射疗法。
在一些实施方案中，所述另外的药剂选自蛋白磷酸酶抑制剂、激酶抑制剂、细胞因子、免疫调节剂或降低调节性T(Treg)细胞的水平或活性的药剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂借助减少或改善所给予细胞疗法的不良影响来增强安全性。在一些实施方案中，所述另外的药剂可以治疗相同疾病、病症或共病(comorbidity)。在一些实施方案中，所述另外的药剂可以改善、降低或消除与所述细胞(例如，CAR表达细胞)的给予相关的一种或多种毒性、不良影响或副作用。
在一些实施方案中，所述另外的疗法、治疗或药剂包括化学疗法、放射疗法、手术、移植、过继细胞疗法、抗体、细胞毒性剂、化学治疗剂、细胞因子、生长抑制剂、抗激素剂、激酶抑制剂、抗血管生成剂、保心药、免疫刺激剂、免疫抑制剂、免疫检查点抑制剂、抗生素、血管发生抑制剂、代谢调节剂或其他治疗剂或其任何组合。在一些实施方案中，所述另外的药剂是蛋白质、肽、核酸、小分子药剂、细胞、毒素、脂质、碳水化合物或其组合，或任何其他类型的治疗剂，例如辐射。在一些实施方案中，所述另外的疗法、药剂或治疗包括手术、化学疗法、放射疗法、移植、给予表达重组受体(例如，CAR)的细胞、激酶抑制剂、免疫检查点抑制剂、mTOR途径抑制剂、免疫抑制剂、免疫调节剂、抗体、免疫清除剂、抗体和/或其抗原结合片段、抗体缀合物、其他抗体疗法、细胞毒素、类固醇、细胞因子、肽疫苗、激素疗法、抗代谢物、代谢调节剂、抑制钙依赖性磷酸酶钙调磷酸酶或p70S6激酶FK506或抑制p70S6激酶的药物、烷化剂、蒽环类、长春花生物碱、蛋白酶体抑制剂、GITR激动剂、蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶抑制剂、溶瘤病毒和/或其他类型的免疫疗法。在一些实施方案中，所述另外的药剂或治疗是骨髓移植、使用化学治疗剂(如氟达拉滨)的T细胞清除疗法、外线束放射疗法(XRT)、环磷酰胺和/或抗体疗法。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是激酶抑制剂，例如，布鲁顿酪氨酸激酶(Btk)抑制剂，例如，依鲁替尼。在一些实施方案中，所述另外的药剂是腺苷途径或腺苷受体拮抗剂或激动剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂是免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如，来那度胺)。在一些实施方案中，所述另外的疗法、药剂或治疗是细胞毒性剂或化学治疗剂、生物疗法(例如，抗体，例如，单克隆抗体，或细胞疗法)或抑制剂(例如，激酶抑制剂)。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是化学治疗剂。示例性化学治疗剂包括蒽环类(例如，多柔比星，如脂质体多柔比星)；长春花生物碱(例如，长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨)；烷化剂(例如，环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、异环磷酰胺、替莫唑胺)；免疫细胞抗体(例如，阿仑单抗、吉妥珠单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗)；抗代谢物(包括例如叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂，如氟达拉滨)；TNFR糖皮质激素诱导的TNFR相关蛋白(GITR)激动剂；蛋白酶体抑制剂(例如，阿克拉霉素A、胶霉毒素或硼替佐米)；免疫调节剂，如沙利度胺或沙利度胺衍生物(例如，来那度胺)。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是免疫调节剂。在一些实施方案中，所述组合疗法包括可以刺激、放大和/或以其他方式增强抗肿瘤免疫应答(例如，来自所给予工程化细胞的抗肿瘤免疫应答)的免疫调节剂，如通过抑制免疫抑制信号传导或增强免疫刺激信号传导。在一些实施方案中，所述免疫调节剂是肽、蛋白质或是小分子。在一些实施方案中，所述蛋白质可以是融合蛋白或重组蛋白。在一些实施方案中，所述免疫调节剂结合至免疫靶标，如在免疫细胞(如T细胞、B细胞或抗原呈递细胞)上表达的细胞表面受体。例如，在一些实施方案中，所述免疫调节剂是抗体或抗原结合抗体片段、融合蛋白、小分子或多肽。在一些实施方案中，所述结合分子、重组受体、细胞和/或组合物是与作为抗体或其抗原结合片段(如单克隆抗体)的另外的药剂组合给予。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂阻断、抑制或抵消免疫检查点途径的组分。免疫系统具有参与维持自身耐受性和用于调节免疫应答的多个抑制途径。肿瘤可以使用某些免疫检查点途径作为免疫抗性的主要机制，特别是针对对肿瘤抗原具有特异性的T细胞(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer12:252-264)，例如工程化细胞，如CAR表达细胞。因为许多此类免疫检查点是通过配体-受体相互作用启动的，所以它们可能易于被针对配体和/或其受体的抗体阻断。与大多数抗癌剂相反，检查点抑制剂不一定直接靶向肿瘤细胞，而是靶向淋巴细胞受体或其配体，以增强免疫系统的内源性抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是免疫调节剂，所述免疫调节剂是能够抑制或阻断涉及免疫检查点分子的分子功能或信号传导通路的拮抗剂分子或者是免疫检查点抑制剂。在一些实施方案中，所述免疫检查点分子或途径是PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、LAG-3、TIM3、VISTA、腺苷2A受体(A2AR)或腺苷或涉及前述任一种的途径。在某些实施方案中，阻断免疫检查点途径的拮抗性分子(如小分子、核酸抑制剂(例如，RNAi)或抗体分子)正在变成用于癌症和其他疾病的有前景的免疫疗法途径。
在一些实施方案中，所述免疫检查点抑制剂是完全或部分降低、抑制、干扰或调节一种或多种检查点蛋白的分子。检查点蛋白调节T细胞激活或功能。这些蛋白质负责T细胞应答的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调节并维持自身耐受性和生理免疫应答的持续时间和幅度。
免疫检查点抑制剂包括以统计学上显著的方式阻断或抑制免疫系统的抑制途径的任何药剂。此类抑制剂可以包括小分子抑制剂或者可以包括结合至并阻断或抑制免疫检查点受体、配体和/或受体-配体相互作用的抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，特定受体的调节、增强和/或刺激可以胜过免疫检查点途径组分。可以被靶向用于阻断、抑制、调节、增强和/或刺激的说明性免疫检查点分子包括但不限于PD-1(CD279)、PD-L1(CD274、B7-H1)、PDL2(CD273、B7-DC)、CTLA-4、LAG-3(CD223)、TIM-3、4-1BB(CD137)、4-1BBL(CD137L)、GITR(TNFRSF18、AITR)、CD40、OX40(CD134、TNFRSF4)、CXCR2、肿瘤相关抗原(TAA)、B7-H3、B7-H4、BTLA、HVEM、GAL9、B7H3、B7H4、VISTA、KIR、2B4(属于分子的CD2家族并且在所有NK、γδ和记忆CD8+(αβ)T细胞上表达)、CD160(也称为BY55)、CGEN-15049、CEACAM(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5)、TIGIT、LAIR1、CD160、2B4、CD80、CD86、B7-H3(CD276)、B7-H4(VTCN1)、HVEM(TNFRSF14或CD270)、KIR、A2aR、MHC I类、MHC II类、GAL9、腺苷和转化生长因子受体(TGFR；例如，TGFRβ)。免疫检查点抑制剂包括抗体或其抗原结合片段或其他结合蛋白，其结合至并阻断或抑制和/或增强或刺激一种或多种任何所述分子的活性。
示例性免疫检查点抑制剂包括曲美目单抗(CTLA-4阻断抗体，也称为替西木单抗、CP-675,206)、抗OX40、PD-L1单克隆抗体(抗B7-H1；MEDI4736)、MK-3475(PD-1阻断剂)、纳武单抗(抗PD-1抗体)、CT-011(抗PD-1抗体)、BY55单克隆抗体、AMP224(抗PD-L1抗体)、BMS-936559(抗PD-L1抗体)、MPLDL3280A(抗PD-L1抗体)、MSB0010718C(抗PD-L1抗体)和伊匹单抗(抗CTLA-4抗体，也称为MDX-010和MDX-101)。免疫调节抗体的示例包括但不限于达珠单抗(Daclizumab)(Zenapax)、贝伐单抗(Bevacizumab)/>巴利昔单抗(Basiliximab)、伊匹单抗(Ipilimumab)、纳武单抗、派姆单抗(pembrolizumab)、MPDL3280A、匹利珠单抗(Pidilizumab)(CT-011)、MK-3475、BMS-936559、MPDL3280A(阿特珠单抗(Atezolizumab))、曲美目单抗、IMP321、BMS-986016、LAG525、乌瑞鲁单抗(urelumab)、PF-05082566、TRX518、MK-4166、达西珠单抗(dacetuzumab)(SGN-40)、鲁卡木单抗(lucatumumab)(HCD122)、SEA-CD40、CP-870、CP-893、MEDI6469、MEDI6383、MOXR0916、AMP-224、MSB0010718C(阿维鲁单抗(Avelumab))、MEDI4736、PDR001、rHIgM12B7、乌鲁库单抗(Ulocuplumab)、BKT140、伐立鲁单抗(Varlilumab)(CDX-1127)、ARGX-110、MGA271、利瑞鲁单抗(lirilumab)(BMS-986015、IPH2101)、IPH2201、ARGX-115、艾马珠单抗(Emactuzumab)、CC-90002和MNRP1685A或其抗体结合片段。其他示例性免疫调节剂包括例如阿福图珠单抗(可从/>获得)；培非司亭/>来那度胺(CC-5013，/>)；沙利度胺/>actimid(CC4047)；和IRX-2(人细胞因子的混合物，包括白细胞介素1、白细胞介素2和干扰素γ，CAS 951209-71-5，可从IRX Therapeutics获得)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至和/或抑制程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的药剂。PD-1是在B细胞、NK细胞和T细胞中表达的免疫检查点蛋白(Shinohara等人,1995,Genomics 23:704-6；Blank等人,2007,Cancer Immunol Immunother 56:739-45；Finger等人,1997,Gene 197:177-87；Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。PD-1的主要作用是在响应感染的炎症期间限制外周组织中T细胞的活性，以及限制自身免疫。PD-1表达是在激活的T细胞中诱导，并且PD-1与其内源性配体之一的结合通过抑制刺激性激酶起到抑制T细胞激活的作用。PD-1还起到抑制TCR“停止信号”的作用。PD-1在Treg细胞上高度表达，并且可以在配体存在下增加所述Treg细胞的增殖(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗PD1抗体已被用于治疗黑色素瘤、非小细胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌、头颈癌、三阴性乳腺癌、白血病、淋巴瘤和肾细胞癌(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Lipson等人,2013,Clin Cancer Res 19:462-8；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:3044-51；Gildener-Leapman等人,2013,Oral Oncol 49:1089-96；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85)。示例性抗PD-1抗体包括纳武单抗(BMS的Opdivo)、派姆单抗(Merck的Keytruda)、匹利珠单抗(Cure Tech的CT-011)、lambrolizumab(Merck的MK-3475)和AMP-224(Merck)，纳武单抗(也称为Opdivo、BMS-936558或MDX1106；Bristol-MyersSquibb)是特异性阻断PD-1的完全人IgG4单克隆抗体。纳武单抗(克隆5C4)和特异性地结合PD-1的其他人单克隆抗体描述于US 8,008,449和WO 2006/121168。匹利珠单抗(CT-011；Cure Tech)是与PD-1结合的人源化IgG1k单克隆抗体。匹利珠单抗和其他人源化抗PD-1单克隆抗体描述于WO2009/101611中。派姆单抗(先前称为lambrolizumab，也称为Keytruda，MK03475；Merck)是与PD-1结合的人源化IgG4单克隆抗体。派姆单抗和其他人源化抗PD-1抗体描述于US 8,354,509和WO 2009/114335中。其他抗PD-1抗体尤其包括AMP 514(Amplimmune)，例如，US 8,609,089、US 2010028330、US 20120114649和/或US20150210769中描述的抗PD-1抗体。AMP-224(B7-DCIg；Amplimmune；例如，描述于WO 2010/027827和WO2011/066342中)是阻断PD-1与B7-H1之间的相互作用的PD-L2Fc融合可溶性受体。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至或抑制PD-L1(也称为CD274和B7-H1)和/或PD-L2(也称为CD273和B7-DC)的药剂。PD-L1和PD-L2是PD-1的配体，发现于激活的T细胞、B细胞、骨髓细胞、巨噬细胞和一些类型的肿瘤细胞上。抗肿瘤疗法已集中于抗PD-L1抗体。PD-1与PD-L1的复合物抑制CD8+T细胞的增殖并降低免疫应答(Topalian等人,2012,N Engl J Med 366:2443-54；Brahmer等人,2012,N Eng J Med 366:2455-65)。抗PD-L1抗体已被用于治疗非小细胞肺癌、黑色素瘤、结直肠癌、肾细胞癌、胰腺癌、胃癌、卵巢癌、乳腺癌和血液恶性肿瘤(Brahmer等人,2012,NEng J Med 366:2455-65；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300-9；Radvanyi等人,2013,Clin Cancer Res 19:5541；Menzies&Long,2013,Ther Adv Med Oncol 5:278-85；Berger等人,2008,Clin Cancer Res 14:13044-51)。示例性抗PD-L1抗体包括MDX-1105(Medarex)、MEDI4736(Medimmune)、MPDL3280A(Genentech)、BMS-935559(Bristol-MyersSquibb)和MSB0010718C。MEDI4736(Medimmune)是结合至PD-L1并抑制所述配体与PD-1的相互作用的人单克隆抗体。MDPL3280A(Genentech/Roche)是结合至PD-L1的人Fc优化的IgG1单克隆抗体。MDPL3280A和针对PD-L1的其他人单克隆抗体描述于美国专利号7,943,743和美国公开号20120039906中。其他抗PD-L1结合剂包括YW243.55.S70(参见WO 2010/077634)和MDX-1105(也称为BMS-936559，以及例如描述于WO 2007/005874中的抗PD-L1结合剂)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是作为细胞毒性T淋巴细胞相关抗原(CTLA-4，也称为CD152)的抑制剂或结合至CTLA-4的药剂。CTLA-4是用于调节T细胞激活的共抑制分子。CTLA-4是仅在T细胞上表达的免疫球蛋白超家族的成员。CTLA-4起到抑制T细胞激活的作用，并且据报道其抑制辅助T细胞活性并增强调节性T细胞免疫抑制活性。尽管CTLA-4的准确作用机制仍在研究之中，但已经提出其通过在与CD80和CD86结合中与CD28竞争而胜出以及将抑制剂信号主动递送至T细胞来抑制T细胞激活(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。抗CTLA-4抗体已在临床试验中用于治疗黑色素瘤、前列腺癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌(Robert&Ghiringhelli,2009,Oncologist 14:848-61；Ott等人,2013,Clin Cancer Res 19:5300；Weber,2007,Oncologist 12:864-72；Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。抗CTLA-4的重要特征是抗肿瘤作用的动力学，其中在生理反应所需的初始治疗后迟滞期长达6个月。在一些情况下，在治疗开始后，在观察到缩小之前，肿瘤的大小可能实际上增加(Pardoll(2012)Nature Reviews Cancer 12:252-264)。示例性抗CTLA-4抗体包括伊匹单抗(Bristol-Myers Squibb)和曲美木单抗(Pfizer)。伊匹单抗最近已经被FDA批准用于治疗转移性黑色素瘤(Wada等人,2013,J Transl Med 11:89)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至和/或抑制淋巴细胞激活基因-3(LAG-3，也称为CD223)的药剂。LAG-3是另一种免疫检查点蛋白。LAG-3与对淋巴细胞活性的抑制相关，并且在一些情况下与淋巴细胞无反应性的诱导相关。LAG-3在免疫系统中的各种细胞上表达，包括B细胞、NK细胞和树突细胞。LAG-3是MHC II类受体的天然配体，所述MHC II类受体在黑色素瘤浸润的T细胞(包括被赋予有效免疫抑制活性的那些T细胞)上大量表达。示例性抗LAG-3抗体包括BMS-986016(Bristol-Myers Squib)，其是靶向LAG-3的单克隆抗体。IMP701(Immutep)是拮抗剂LAG-3抗体，并且IMP731(Immutep和GlaxoSmithKline)是耗尽的LAG-3抗体。其他LAG-3抑制剂包括IMP321(Immutep)，其是LAG-3的可溶部分与结合至MHC II类分子并激活抗原呈递细胞(APC)的Ig的重组融合蛋白。其他抗体描述于例如WO 2010/019570和US 2015/0259420中。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至和/或抑制T细胞免疫球蛋白结构域和粘蛋白结构域-3(TIM-3)的药剂。TIM-3最初是在激活的Th1细胞上鉴定的，以显示其是免疫应答的负调节物。TIM-3的阻断促进T细胞介导的抗肿瘤免疫，并且在一系列小鼠肿瘤模型中具有抗肿瘤活性。TIM-3阻断与其他免疫治疗剂如TSR-042、抗CD137抗体和其他的组合在增加抗肿瘤作用方面可以是加和的或协同的。TIM-3表达与许多不同的肿瘤类型(包括黑色素瘤、NSCLC和肾癌)相关，另外，肿瘤内TIM-3的表达已经被证明与跨越一系列肿瘤类型(包括NSCLC、宫颈癌和胃癌)的不良预后相关。TIM-3的阻断也有利于提高对许多慢性病毒性疾病的免疫。也已经显示TIM-3与许多配体(包括半乳糖凝集素-9、磷脂酰丝氨酸和HMGB1)相互作用，但是目前尚不清楚这些配体中哪些(如果存在)参与抗肿瘤反应的调节。在一些实施方案中，靶向TIM-3的抗体、抗体片段、小分子或肽抑制剂可以与TIM-3的IgV结构域结合以抑制与其配体的相互作用。抑制TIM-3的示例性抗体和肽描述于US 2015/0218274、WO2013/006490和US 2010/0247521中。其他抗TIM-3抗体包括RMT3-23的人源化形式(Ngiow等人,2011,Cancer Res,71:3540-3551)和克隆8B.2C12(Monney等人,2002,Nature,415:536-541)。抑制TIM-3和PD-1的双特异性抗体描述于US 2013/0156774中。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是作为CEACAM抑制剂(例如，CEACAM-1、CEACAM-3和/或CEACAM-5抑制剂)的药剂。在一些实施方案中，所述CEACAM抑制剂是抗CEACAM抗体分子。示例性抗CEACAM-1抗体描述于WO2010/125571、WO 2013/082366、WO 2014/059251和WO 2014/022332中，例如，单克隆抗体34B1、26H7和5F4；或其重组形式，如在例如US 2004/0047858、US 7,132,255和WO 99/052552中所述。在一些实施方案中，所述抗CEACAM抗体与CEACAM-5结合，如在例如Zheng等人PLoS One.(2011)6(6):e21146中所述，或者与CEACAM-1和CEACAM-5交叉反应，如在例如WO 2013/054331和US 2014/0271618中所述。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至和/或抑制4-1BB(也称为CD137)的药剂。4-1BB是属于TNFR超家族的跨膜糖蛋白。4-1BB受体存在于激活的T细胞和B细胞和单核细胞上。示例性抗4-1BB抗体是乌瑞鲁单抗(BMS-663513)，其具有潜在的免疫刺激和抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是结合至和/或抑制肿瘤坏死因子受体超家族成员4(TNFRSF4，也称为OX40和CD134)的药剂。TNFRSF4是TNFR超家族的另一个成员。OX40在静止幼稚T细胞上并非组成型表达，并且起次级共刺激免疫检查点分子的作用。示例性抗OX40抗体是MEDI6469和MOXR0916(RG7888，Genentech)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是减少调节性T细胞(Treg)群体的药剂或分子。减少Treg细胞的数量(例如，耗尽)的方法是本领域中已知的，并且包括例如CD25耗尽、环磷酰胺给予和调节糖皮质激素诱导的TNFR家族相关基因(GITR)功能。GITR是TNFR超家族的成员，其在激活的T细胞上被上调，从而增强免疫系统。在单采术之前或在给予工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前减少受试者中Treg细胞的数量，可以减少肿瘤微环境中不需要的免疫细胞(例如，Treg)的数量，并降低受试者的复发风险。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括靶向GITR和/或调节GITR功能的分子，如耗尽调节性T细胞(Treg)的GITR激动剂和/或GITR抗体。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括环磷酰胺。在一些实施方案中，所述GITR结合分子和/或调节GITR功能的分子(例如，GITR激动剂和/或Treg耗尽GITR抗体)是在工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前给予。例如，在一些实施方案中，所述GITR激动剂可以在所述细胞的单采术之前给予。在一些实施方案中，环磷酰胺是在给予(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在所述细胞的单采术之前给予受试者。在一些实施方案中，环磷酰胺和抗GITR抗体是在给予(例如，输注或再输注)工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前或在所述细胞的单采术之前给予受试者。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是作为GITR激动剂的药剂示例性GITR激动剂包括例如GITR融合蛋白和抗GITR抗体(例如，二价抗GITR抗体)，如例如美国专利号6,111,090、欧洲专利号090505B 1、美国专利号8,586,023、PCT公开号WO 2010/003118和2011/090754中描述的GITR融合蛋白；或例如美国专利号7,025,962、欧洲专利号1947183B 1、美国专利号7,812,135、美国专利号8,388,967、美国专利号8,591,886、欧洲专利号EP 1866339、PCT公开号WO 2011/028683、PCT公开号WO2013/039954、PCT公开号WO 2005/007190、PCT公开号WO 2007/133822、PCT公开号WO2005/055808、PCT公开号WO 99/40196、PCT公开号WO 2001/03720、PCT公开号WO99/20758、PCT公开号WO2006/083289、PCT公开号WO 2005/115451、美国专利号7,618,632和PCT公开号WO2011/051726中描述的抗GITR抗体。示例性抗GITR抗体是TRX518。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂增强所给予细胞(例如，CAR表达细胞)的肿瘤浸润或迁移。例如，在一些实施方案中，所述另外的药剂刺激CD40，如CD40L，例如，重组人CD40L。分化簇40(CD40)也是TNFR超家族的成员。CD40是在抗原呈递细胞上发现的共刺激蛋白，并且介导众多种免疫和炎性应答。CD40还在一些恶性肿瘤上表达，其中CD40促进增殖。示例性抗CD40抗体是达西珠单抗(SGN-40)、鲁卡木单抗(Novartis，拮抗剂)、SEA-CD40(Seattle Genetics)和CP-870,893。在一些实施方案中，增强肿瘤浸润的另外的药剂包括酪氨酸激酶抑制剂舒尼替尼、乙酰肝素酶和/或趋化因子受体(如CCR2、CCR4和CCR7)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是免疫调节剂，所述免疫调节剂作为沙利度胺的结构或功能类似物或衍生物和/或E3泛素连接酶的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂与赛拉隆蛋白(cereblon)(CRBN)结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂与CRBN和CRBN E3泛素连接酶复合物结合。在一些实施方案中，免疫调节剂上调CRBN的蛋白质或基因表达。在一些方面，CRBN是CRL4CRBN E3泛素连接酶的底物衔接子，并调节所述酶的特异性。在一些实施方案中，与CRB或CRBN E3泛素连接酶复合物的结合会抑制E3泛素连接酶的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂诱导KZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的泛素化和/或诱导IKZF1(Ikaros)和IKZF3(Aiolos)的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂通过CRL4CRBN E3泛素连接酶诱导酪蛋白激酶1A1(CK1α)的泛素化。在一些实施方案中，CK1α的泛素化导致CK1α降解。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Ikaros的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的给予导致Ikaros蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Aiolos(IKZF3)转录因子的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的泛素化。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Aiolos的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂下调Aiolos的蛋白质或基因表达。在某些实施方案中，免疫调节剂的给予导致Aiolos蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是Ikaros(IKZF1)和Aiolos(IKZF3)转录因子二者的抑制剂。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化。在某些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的降解。在一些实施方案中，免疫调节剂增强Ikaros和Aiolos二者的泛素化和降解。在一些实施方案中，免疫调节剂的给予同时导致Aiolos蛋白水平和Ikaros蛋白水平的降低。
在一些实施方案中，免疫调节剂是选择性细胞因子抑制药物(SelCID)。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制磷酸二酯酶-4(PDE4)的活性。在一些实施方案中，免疫调节剂抑制CDC25磷酸酶的酶活性。在一些实施方案中，免疫调节剂改变CDC25磷酸酶的细胞内运输。
在一些实施方案中，免疫调节剂是沙利度胺(2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-lH-异吲哚-l,3(2H)-二酮)或沙利度胺的类似物或衍生物。在某些实施方案中，沙利度胺衍生物包括具有相似生物学活性的沙利度胺的结构变体。示例性沙利度胺衍生物包括但不限于来那度胺(REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM；Celgene Corporation)、泊马度胺(也称为ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUNDTM或POMALYSTTM(Celgene Corporation))、CC-1088、CDC-501和CDC-801，以及美国专利号5,712,291；7,320,991和8,716,315；美国申请号2016/0313300；和PCT公开号WO 2002/068414和WO 2008/154252中披露的化合物。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是用苯并环中的氨基取代的1-氧代-和1,3二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉，如美国专利号5,635,517中所述，所述专利是通过引用并入本文。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是下式的化合物：
其中X和Y中的一个是-C(O)-，并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-，并且R5是氢或低级烷基，或其药学上可接受的盐。在一些实施方案中，X是-C(O)-并且Y是-CH2-。在一些实施方案中，X和Y二者都是-C(O)-。在一些实施方案中，R5是氢。在其他实施方案中，R5是甲基。
在一些实施方案中，所述免疫调节化合物是属于被取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)邻苯二甲酸免疫调节化合物和被取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚的类别的化合物，如以下文献中所述的那些：美国专利号6,281,230；6,316,471；6,335,349；和6,476,052，以及国际专利申请号PCT/US97/13375(国际公开号WO 98/03502)，所述文献各自通过引用并入本文。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是下式的化合物：
其中
X和Y中的一个是-C(O)-，并且X和Y中的另一个是-C(O)-或-CH2-；
(1)R1、R2、R3和R4各自独立地是卤素、1至4个碳原子的烷基或1至4个碳原子的烷氧基，或
(2)R1、R3、R4和R5中的一个是-NHRa，并且R1、R2、R3和R4中其余的是氢，其中Ra是氢或1至8个碳原子的烷基；
R5是氢或1至8个碳原子的烷基、苄基或卤素；
条件是如果X和Y是-C(O)-并且(i)R1、R2、R3和R4各自是氟；或(ii)R1、R2、R3和R4中的一个是氨基，则R5不是氢；
或其药学上可接受的盐。
在一些实施方案中，所述免疫调节剂是属于以下文献中披露的异吲哚免疫调剂化合物的类别的化合物：美国专利号7,091,353、美国专利公开号2003/0045552和国际申请号PCT/USOI/50401(国际公开号WO 02/059106)，所述文献各自通过引用并入本文。例如，在一些实施方案中，免疫调节剂是[2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基]-酰胺；(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯；4-(氨基甲基)-2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-异吲哚啉-1,3-二酮；N-(2-(2,6-二氧代-哌啶-3-基)-1,3-二氧代-2,3-二氢-1H-异吲哚-4-基甲基)-乙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基)-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}环丙基-甲酰胺；2-氯-N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}乙酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)-3-吡啶基甲酰胺；3-{1-氧代-4-(苄基氨基)异吲哚啉-2-基}哌啶-2,6-二酮；2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-4-(苄氨基)异吲哚啉-1,3-二酮；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)甲基}丙酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-3-吡啶基甲酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二异吲哚啉-4-基)甲基}庚酰胺；N-{(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)甲基}-2-呋喃甲酰胺；{N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基)氨基甲酰基}乙酸甲酯；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)戊酰胺；N-(2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基)-2-噻吩基甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(丁基氨基)甲酰胺；N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚啉-4-基]甲基}(辛基氨基)甲酰胺；或N-{[2-(2,6-二氧代(3-哌啶基))-1,3-二氧代异吲哚-4-基]甲基}(苄氨基)甲酰胺。
在一些实施方案中，免疫调节剂是属于以下文献中披露的异吲哚-免疫调节化合物的类别的化合物：美国专利申请公开号2002/0045643、国际公开号WO 98/54170和美国专利号6,395,754，所述文献各自通过引用并入本文。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号5,798,368中所述的四取代的2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)-1-氧代异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是通过引用并入本文的美国专利号6,403,613中披露的1-氧代和1,3-二氧代-2-(2,6-二氧代哌啶-3-基)异吲哚啉。在一些实施方案中，免疫调节剂是如均通过引用并入本文的美国专利号6,380,239和美国专利号7,244,759中所述的在吲哚啉环的4位或5位被取代的1-氧代或1,3-二氧代异吲哚啉。
在一些实施方案中，免疫调节剂是2-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸或4-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基)-4-氨基甲酰基-丁酸。在一些实施方案中，免疫调节化合物是4-氨基甲酰基-4-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、4-氨基甲酰基-2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-丁酸、2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-4-苯基氨基甲酰基-丁酸或2-{4-[(呋喃-2-基-甲基)-氨基]-1,3-二氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基}-戊二酸。
在一些实施方案中，免疫调节剂是如通过引用并入本文的美国专利号6,458,810中所述的在2位用2,6-二氧代-3-羟基哌啶-5-基取代的异吲哚啉-1-酮或异吲哚啉-1,3-二酮。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-(5-氨基-2-甲基-4-氧代-4H-喹唑啉-3-基)-哌啶-2,6-二酮或其对映体或对映体混合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是3-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮。
在一些实施方案中，免疫调节剂是如以下文献中所述：Oshima,K.等人,NihonRinsho.,72(6):1130-5(2014)；Millrine,D.等人,Trends Mol Med.,23(4):348-364(2017)；和Collins等人,Biochem J.,474(7):1127-1147(2017)。
在一些实施方案中，免疫调节剂是来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺，来那度胺、泊马度胺、阿伐度胺的立体异构体，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺、来那度胺的立体异构体、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、水合物、共晶、包合物或多晶型物。在一些实施方案中，免疫调节化合物是来那度胺或((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮)。
在一些实施方案中，所述另外的药剂包括沙利度胺药物或其类似物和/或其衍生物，如来那度胺、泊马度胺或阿普斯特。参见例如，Bertilaccio等人,Blood(2013)122:4171；Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940；Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644；和Kuramitsu等人,Cancer Gene Therapy(2015)22:487-495。来那度胺((RS)-3-(4-氨基-1-氧代-1,3-二氢-2H-异吲哚-2-基)哌啶-2,6-二酮；也称为Revlimid)是沙利度胺的合成衍生物，并且具有多种免疫调节作用，包括加强T细胞与抗原呈递细胞(APC)之间的免疫突触形成。例如，在一些情况下，来那度胺调节T细胞应答并导致增加的CD4+和CD8+T细胞中白细胞介素(IL)-2的产生，诱导T辅助(Th)应答从Th2转变为Th1，抑制调节性T细胞亚组(Treg)的扩增，以及改进滤泡性淋巴瘤和慢性淋巴细胞白血病(CLL)中免疫突触的功能(Otahal等人,Oncoimmunology(2016)5(4):e1115940)。来那度胺还具有在患有多发性骨髓瘤(MM)的患者中的直接杀肿瘤活性，并且通过影响支持细胞(如在淋巴组织的微环境中发现的哺育类细胞)直接和间接调节CLL肿瘤细胞的存活。来那度胺还可以响应通过CD3连接进行的T细胞激活或树突细胞介导的激活而增强T细胞增殖和干扰素-γ产生。来那度胺还可以诱导恶性B细胞表达更高水平的免疫刺激分子，如CD80、CD86、HLA-DR、CD95和CD40(Fecteau等人,Blood(2014)124(10):1637-1644)。在一些实施方案中，来那度胺是以每天约1mg至约20mg的剂量来给予，例如，每天约1mg至约10mg、约2.5mg至约7.5mg、约5mg至约15mg，如每天约5mg、10mg、15mg或20mg。在一些实施方案中，来那度胺是以约10μg/kg至5mg/kg的剂量来给予，例如，约100μg/kg至约2mg/kg、约200μg/kg至约1mg/kg、约400μg/kg至约600μg/kg，如约500μg/kg。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是B细胞抑制剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂是选自CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1或其组合的抑制剂的一种或多种B细胞抑制剂。在一些实施方案中，B细胞抑制剂是抗体(例如，单特异性或双特异性抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述另外的药剂是表达靶向B细胞靶(例如，CD10、CD19、CD20、CD22、CD34、CD123、CD79a、CD79b、CD179b、FLT-3或ROR1)的重组受体的工程化细胞。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是CD20抑制剂，例如，抗CD20抗体(例如，抗CD20单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD20抗体包括但不限于利妥昔单抗、奥法木单抗、奥瑞珠单抗(也称为GA101或RO5072759)、维妥珠单抗、奥比妥珠单抗、TRU-015(Trubion Pharmaceuticals)、奥卡妥珠单抗(也称为AME-133v或奥卡妥珠单抗)和Pro131921(Genentech)。参见例如，Lim等人Haematologica.(2010)95(1):135-43。在一些实施方案中，抗CD20抗体包含利妥昔单抗。利妥昔单抗是嵌合小鼠/人单克隆抗体IgG1κ，其结合至CD20并引起CD20表达细胞的细胞溶解。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括利妥昔单抗。在一些实施方案中，CD20抑制剂是小分子。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是CD22抑制剂，例如，抗CD22抗体(例如，抗CD22单特异性或双特异性抗体)或其片段。示例性抗CD22抗体包括依帕珠单抗和RFB4。在一些实施方案中，CD22抑制剂是小分子。在一些实施方案中，抗体是单特异性抗体，任选地与诸如化学治疗剂的第二药剂缀合。例如，在一些实施方案中，抗体是抗CD22单克隆抗体-MMAE缀合物(例如，DCDT2980S)。在一些实施方案中，抗体是抗CD22抗体的scFv，例如，抗体RFB4的scFv。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属(Pseudomonas)外毒素-A(例如，BL22)的全部或片段融合。在一些实施方案中，scFv与假单胞菌属外毒素-A(例如，moxetumomab pasudotox)的全部或片段(例如，38kDa片段)融合。在一些实施方案中，抗CD22抗体是抗CD19/CD22双特异性抗体，任选地与毒素缀合。例如，在一些实施方案中，抗CD22抗体包含抗CD19/CD22双特异性部分(例如，两个scFv配体，识别人CD19和CD22)，任选地连接至白喉毒素(DT)的全部或一部分，例如，白喉毒素(DT)的前389个氨基酸(DT 390)，例如，配体导向的毒素，如DT2219ARL。在一些实施方案中，双特异性部分(例如，抗CD19/抗CD22)与诸如脱糖基化蓖麻毒素A链(例如，Combotox)的毒素连接。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是细胞因子或者是在肿瘤微环境中诱导增加的细胞因子表达的药剂。细胞因子具有与T细胞扩增、分化、存活和体内平衡相关的重要功能。可以给予接受所提供的方法或用途中的组合疗法、本文所提供的重组受体、细胞和/或组合物的受试者的细胞因子包括以下中的一种或多种：IL-2、IL-4、IL-7、IL-9、IL-15、IL-18和IL-21。在一些实施方案中，所给予的细胞因子是IL-7、IL-15或IL-21或其组合。在一些实施方案中，将细胞因子给予对工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的给予具有次最佳反应的受试者改进所给予细胞(例如CAR表达细胞)的功效和/或抗肿瘤活性。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是细胞因子，如作为细胞内介质作用于另一种细胞的蛋白质。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(FSH)、甲状腺刺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板产生素(TPO)；神经生长因子，如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15；肿瘤坏死因子，如TNF-α或TNF-β；以及其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。例如，免疫调节剂是细胞因子，并且所述细胞因子是IL-4、TNF-α、GM-CSF或IL-2。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂包括白细胞介素-15(IL-15)多肽、白细胞介素-15受体α(IL-15Rα)多肽或其组合，例如，hetIL-15(Admune Therapeutics，LLC)。hetIL-15是IL-15与IL-15Rα的异二聚非共价复合物。hetIL-15描述于例如以下文献中：U.S.8,124,084、U.S.2012/0177598、U.S.2009/0082299、U.S.2012/0141413和U.S.2011/0081311。在一些实施方案中，免疫调节剂可以含有一种或多种细胞因子。例如，白细胞介素可以包括白细胞白细胞介素注射剂(Multikine)，其是天然细胞因子的组合。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是腺苷水平和/或腺苷途径组分的调节剂。腺苷可以在体内起免疫调节剂的功能。例如，腺苷和一些非选择性激活腺苷受体亚型的腺苷类似物减少炎症氧化产物的嗜中性粒细胞产生(Cronstein等人,Ann.N.Y.Acad.Sci.451:291,1985；Roberts等人,Biochem.J.,227:669,1985；Schrier等人,J.Immunol.137:3284,1986；Cronstein等人,ClinicalImmunol.Immunopath.42:76,1987)。在一些情况下，细胞外腺苷或腺苷类似物的浓度在特定环境(例如,肿瘤微环境(TME))中可能增加。在一些情况下，腺苷或腺苷类似物信号传导取决于缺氧或者缺氧或其调节中所涉及的因子，例如,缺氧诱导型因子(HIF)。在一些实施方案中，腺苷信号传导的增加可以增加细胞内cAMP和cAMP依赖性蛋白激酶，从而导致抑制促炎性细胞因子产生，并且可以导致免疫抑制分子的合成和Treg的发展(Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605)。在一些实施方案中，所述另外的药剂可以降低或逆转腺苷、腺苷类似物和/或腺苷信号传导的免疫抑制作用。在一些实施方案中，所述另外的药剂可以减少或逆转缺氧驱动的A2-腺苷酸能T细胞免疫抑制。在一些实施方案中，所述另外的药剂选自腺苷受体的拮抗剂、细胞外腺苷降解剂、CD39/CD73胞外酶的腺苷产生的抑制剂、和缺氧-HIF-1α信号传导的抑制剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是抑制腺苷受体的活性和/或量的药剂。特定实施方案考虑到，借助细胞外腺苷抑制剂(如阻止细胞外腺苷形成、降解细胞外腺苷、使细胞外腺苷失活和/或减少细胞外腺苷的药剂)和/或腺苷受体抑制剂(如腺苷受体拮抗剂)对细胞外腺苷或腺苷受体的抑制或减少可以增强免疫应答，如巨噬细胞、嗜中性粒细胞、粒细胞、树突细胞、T细胞和/或B细胞介导的应答。此外，Gs蛋白介导的cAMP依赖性细胞内途径的抑制剂和腺苷受体触发的Gi蛋白介导的细胞内途径的抑制剂也可以增加急性和慢性炎症。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是腺苷受体拮抗剂或激动剂，例如，腺苷受体A2a、A2b、A1和A3中的一种或多种的拮抗剂或激动剂。分别地，A1和A3抑制腺苷酸环化酶活性，并且A2a和A2b刺激腺苷酸环化酶活性。某些腺苷受体(如A2a、A2b和A3)可以在炎症期间抑制或降低免疫应答。因此，拮抗免疫抑制性腺苷受体可以扩大、加强或增强免疫应答，例如来自所给予细胞(例如，CAR表达T细胞)的免疫应答。在一些实施方案中，所述另外的药剂抑制细胞外腺苷的产生和腺苷通过腺苷受体触发的信号传导。例如，通过抑制或减少产生腺苷的局部组织缺氧；通过降解积累的细胞外腺苷(或使其失活)；通过阻止或减少免疫细胞上腺苷受体的表达；和/或通过抑制/拮抗腺苷配体通过腺苷受体进行的信号传导，可以增强免疫应答、局部组织炎症和所靶向组织破坏的增强。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是腺苷受体拮抗剂。在一些实施方案中，拮抗剂是腺苷受体(如A2a、A2b或A3受体)的小分子或化学化合物。在一些实施方案中，拮抗剂是结合腺苷受体但是不触发Gi蛋白依赖性细胞内途径的肽或拟肽。此类拮抗剂的例子描述于以下文献中：美国专利号5,565,566、5,545,627、5,981,524、5,861,405、6,066,642、6,326,390、5,670,501、6,117,998、6,232,297、5,786,360、5,424,297、6,313,131、5,504,090和6,322,771。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是A2受体(A2R)拮抗剂，如A2a拮抗剂。示例性A2R拮抗剂包括但不限于KW6002(伊曲茶碱(istradefyline))、SCH58261、咖啡因、副黄嘌呤、3,7-二甲基-1-炔丙基黄嘌呤(DMPX)、8-(间氯苯乙烯基)咖啡因(CSC)、MSX-2、MSX-3、MSX-4、CGS-15943、ZM-241385、SCH-442416、瑞德南特(preladenant)、韦帕南特(vipadenant)(BII014)、V2006、ST-1535、SYN-115、PSB-1115、ZM241365、FSPTP、和靶向A2R表达的抑制性核酸(例如，siRNA或shRNA)、或靶向A2R的任何抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述另外的药剂是描述于例如以下文献中的A2R拮抗剂：Ohta等人,ProcNatl Acad Sci U S A(2006)103:13132-13137；Jin等人,Cancer Res.(2010)70(6):2245-2255；Leone等人,Computational and Structural Biotechnology Journal(2015)13:265-272；Beavis等人,Proc Natl Acad Sci U S A(2013)110:14711-14716；和Pinna,A.,Expert Opin Investig Drugs(2009)18:1619-1631；Sitkovsky等人,Cancer Immunol Res(2014)2(7):598-605；US 8,080,554；US 8,716,301；US 20140056922；WO2008/147482；US8,883,500；US 20140377240；WO02/055083；US 7,141,575；US 7,405,219；US 8,883,500；US 8,450,329；和US 8,987,279。
在特定实施方案中，腺苷受体拮抗剂是特异性地结合编码腺苷受体的mRNA的反义分子、抑制性核酸分子(例如，小抑制性RNA(siRNA))或催化核酸分子(例如，核酶)。在一些实施方案中，反义分子、抑制性核酸分子或催化核酸分子结合编码A2a、A2b或A3的核酸。在一些实施方案中，反义分子，抑制性核酸分子或催化核酸靶向所述腺苷受体下游的生化途径。例如，反义分子或催化核酸可以抑制Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径中涉及的酶。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括腺苷受体(如A2a、A2b或A3)的显性阴性突变体形式。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是抑制细胞外腺苷的药剂。抑制细胞外腺苷的药剂包括使细胞外腺苷无功能(或降低这种功能)的药剂，如修饰腺苷结构以抑制腺苷通过腺苷受体进行信号传导的能力的物质。在一些实施方案中，所述另外的药剂是产生细胞外腺苷或降解腺苷的酶、其修饰形式或其调节剂。例如，在一些实施方案中，所述另外的药剂是酶(例如，腺苷脱氨酶)或另一种催化分子，所述酶或另一种催化分子选择性地结合并破坏腺苷，从而消除或显著降低内源形成的腺苷通过腺苷受体进行信号传导并终止炎症的能力。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是腺苷脱氨酶(ADA)或其修饰形式，例如，重组ADA和/或聚乙二醇修饰的ADA(ADA-PEG)，其可以抑制细胞外腺苷的局部组织积累。ADA-PEG已用于治疗患有ADA SCID的患者(Hershfield(1995)Hum Mutat.5:107)。在一些实施方案中，抑制细胞外腺苷的药剂包括阻止或减少细胞外腺苷形成，和/或阻止或减少细胞外腺苷积累，从而消除或显著降低腺苷的免疫抑制作用的药剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂特异性地抑制参与对促炎性分子的合成和/或分泌的调节的酶和蛋白质，所述另外的药剂包括核转录因子的调节剂。对腺苷受体表达、或Gs蛋白或Gi蛋白依赖性细胞内途径、或cAMP依赖性细胞内途径的抑制可以导致免疫应答的增加/增强。
在一些实施方案中，所述另外的药剂可以靶向生成或产生细胞外腺苷的胞外酶。在一些实施方案中，所述另外的药剂靶向共同作用于产生细胞外腺苷的CD39和CD73胞外酶。CD39(也称为外核苷三磷酸二磷酸水解酶)将细胞外ATP(或ADP)转化为5'AMP。随后，CD73(也称为5'核苷酸酶)将5'AMP转化为腺苷。CD39的活性可通过NDP激酶和腺苷酸激酶的作用逆转，而CD73的活性是不可逆的。CD39和CD73在肿瘤基质细胞(包括内皮细胞和Treg)上表达，并且也在许多癌细胞上表达。例如，在肿瘤微环境的缺氧条件下，CD39和CD73在内皮细胞上的表达增加。肿瘤缺氧可能是由于供血不足和杂乱的肿瘤脉管系统影响输氧所致(Carroll和Ashcroft(2005),Expert.Rev.Mol.Med.7(6):1-16)。缺氧也抑制将腺苷转化为AMP的腺苷酸激酶(AK)，从而导致非常高的细胞外腺苷浓度。因此，响应缺氧以高浓度释放腺苷，缺氧是在实体瘤中或实体瘤周围的肿瘤微环境(TME)中频繁出现的条件。在一些实施方案中，所述另外的药剂是以下中的一种或多种：抗CD39抗体或其抗原结合片段、抗CD73抗体或其抗原结合片段(例如，MEDI9447或TY/23)、α-β-亚甲基-腺苷二磷酸(ADP)、ARL67156、POM-3、IPH52(参见例如，Allard等人Clin Cancer Res(2013)19(20):5626-5635；Hausler等人,Am J Transl Res(2014)6(2):129-139；Zhang,B.,Cancer Res.(2010)70(16):6407-6411)。
在一些实施方案中，根据所提供方法和/或用所提供制品或组合物给予的另外的药剂是化学治疗剂(有时称为细胞毒性剂)。在特定实施方案中，所述化学治疗剂是本领域技术人员已知可有效治疗、预防或改善诸如癌症的过度增殖障碍的任何药剂。化学治疗剂包括但不限于小分子、合成药物、肽、多肽、蛋白质、核酸(例如，DNA和RNA多核苷酸，其包括但不限于编码生物活性蛋白质、多肽或肽的反义核苷酸序列、三螺旋和核苷酸序列)、抗体、合成或天然无机分子、模拟剂和合成或天然有机分子。在特定实施方案中，化学治疗药物包括烷化剂、蒽环类、细胞骨架破坏剂(紫杉烷类)、埃博霉素、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、激酶抑制剂、核苷酸类似物和前体类似物、肽抗生素、基于铂的药剂以及长春花生物碱和衍生物。
化学治疗剂可以包括但不限于阿巴瑞克、阿地白介素、阿仑单抗、阿利维A酸、别嘌呤醇、六甲蜜胺、氨磷汀、阿那曲唑、三氧化二砷、天冬酰胺酶、活性BCG、贝伐单抗、贝沙罗汀、博来霉素、硼替佐米、白消安、卡鲁睾酮、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、塞来昔布、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、西那卡塞、顺铂、克拉屈滨、环磷酰胺、阿糖胞苷、达卡巴嗪、更生霉素、阿法达贝泊汀、道诺霉素、地尼白介素、右雷佐生、多西紫杉醇、多柔比星、屈他雄酮、Elliott's B溶液、表柔比星、阿法依泊汀、雌莫司汀、依托泊苷、依西美坦、非格司亭、氟尿嘧啶、氟达拉滨、氟尿嘧啶、氟维司群、吉西他滨、吉妥珠单抗奥佐米星、吉非替尼、戈舍瑞林、羟基脲、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、干扰素α-2a、干扰素α-2b、伊立替康、来曲唑、甲酰四氢叶酸、左旋咪唑、洛莫司汀、meclorethamine、甲地孕酮、美法仑、巯嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、甲氧沙林、甲泼尼龙、丝裂霉素C、米托坦、米托蒽醌、诺龙、诺菲单抗、奥利美生、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕米膦酸二钠、培加酶、培门冬酶、培非司亭、培美曲塞、喷司他丁、哌泊溴烷、普卡霉素、聚苯丙生、卟菲尔钠、丙卡巴肼、奎纳克林、拉布立酶、利妥昔单抗、沙格司亭、链脲佐菌素、滑石、他莫昔芬、特罗凯、替莫唑胺、替尼泊苷、睾内酯、硫鸟嘌呤、噻替哌、拓扑替康、托瑞米芬、托西莫单抗、曲妥珠单抗、维A酸、尿嘧啶氮芥、戊柔比星、长春碱、长春新碱、长春瑞滨和唑来膦酸盐。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是缺氧诱导型因子1α(HIF-1α)信号传导的抑制剂。示例性HIF-1α抑制剂包括地高辛(digoxin)、吖啶黄素(acriflavine)、瑟土因-7(sirtuin-7)和甘那特匹(ganetespib)。
在一些实施方案中，所述另外的药剂包括蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂，例如，本文所述的蛋白质酪氨酸磷酸酶抑制剂。在一些实施方案中，蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-1抑制剂，例如本文所述的SHP-1抑制剂，如例如，葡萄糖酸锑钠。在一些实施方案中，蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂是SHP-2抑制剂，例如本文所述的SHP-2抑制剂。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是激酶抑制剂。激酶抑制剂(如CDK4激酶抑制剂、BTK激酶抑制剂、MNK激酶抑制剂或DGK激酶抑制剂)可以调节肿瘤细胞中存在的组成型活性的存活途径和/或调节免疫细胞的功能。在一些实施方案中，激酶抑制剂是布鲁顿酪氨酸激酶(BTK)抑制剂，例如依鲁替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯3-激酶(PI3K)抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是CDK4抑制剂，例如CDK4/6抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是mTOR抑制剂，如例如雷帕霉素、雷帕霉素类似物、OSI-027。mTOR抑制剂可以是例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂，例如mTORC1抑制剂和/或mTORC2抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是MNK抑制剂或双重PI3K/mTOR抑制剂。在一些实施方案中，其他示例性激酶抑制剂包括AKT抑制剂哌立福辛(perifosine)、mTOR抑制剂坦罗莫司(temsirolimus)、Src激酶抑制剂达沙替尼(dasatinib)和福他替尼(fostamatinib)、JAK2抑制剂帕克替尼和鲁索替尼、PKCβ抑制剂恩扎妥林(enzastaurin)和苔藓抑素，以及AAK抑制剂阿立塞替(alisertib)。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的BTK抑制剂：依鲁替尼(PCI-32765)；GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。在一些实施方案中，BTK抑制剂不会降低或抑制白细胞介素-2诱导型激酶(ITK)的激酶活性，并且选自GDC-0834；RN-486；CGI-560；CGI-1764；HM-71224；CC-292；ONO-4059；CNX-774；和LFM-A13。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如，依鲁替尼(1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]哌啶-1-基]丙-2-烯-1-酮；也称为PCI-32765)。在一些实施方案中，激酶抑制剂是BTK抑制剂，例如，依鲁替尼(PCI-32765)，并且依鲁替尼是按以下剂量来给予：每天约250mg、300mg、350mg、400mg、420mg、440mg、460mg、480mg、500mg、520mg、540mg、560mg、580mg、600mg(例如，250mg、420mg或560mg)持续一段时间，例如，每天给予持续21天周期，或每天给予持续28天周期。在一些实施方案中，给予1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多个周期的依鲁替尼。在一些实施方案中，BTK抑制剂是国际申请WO 2015/079417中描述的BTK抑制剂。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是PI3K抑制剂。PI3K是参与细胞周期调节和淋巴瘤存活的PI3K/Akt/mTOR途径的核心。示例性PI3K抑制剂包括艾代拉利司(idelalisib)(PI3Kδ抑制剂)。在一些实施方案中，所述另外的药剂是艾代拉利司和利妥昔单抗。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是雷帕霉素的哺乳动物靶标(mTOR)的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是选自以下的mTOR抑制剂：坦罗莫司；利罗莫司(ridaforolimus)(也称为AP23573和MK8669)；依维莫司(RAD001)；雷帕霉素(AY22989)；simapimod；AZD8055；PF04691502；SF1126；和XL765。在一些实施方案中，所述另外的药剂是丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)抑制剂，如威罗非尼(vemurafenib)、达拉菲尼(dabrafenib)和曲美替尼(trametinib)。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的药剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括B细胞淋巴瘤2(BCL-2)抑制剂(例如，维奈托克(venetoclax)，也称为ABT-199或GDC-0199；或ABT-737)。维奈托克是抑制抗细胞凋亡蛋白BCL-2的小分子(4-(4-{[2-(4-氯苯基)-4,4-二甲基-1-环己烯-1-基]甲基}-1-哌嗪基)-N-({3-硝基-4-[(四氢-2H-吡喃-4-基甲基)氨基]苯基}磺酰基)-2-(1H-吡咯并[2,3-b]吡啶-5-基氧基)苯甲酰胺)。调节促细胞凋亡或抗细胞凋亡蛋白的其他药剂包括BCL-2抑制剂ABT-737、纳维托克(navitoclax)(ABT-263)；用于最大功效的Mcl-1siRNA或Mcl-1抑制剂类视色素N-(4-羟苯基)维甲酰胺(4-HPR)。在一些实施方案中，所述另外的药剂提供促细胞凋亡刺激，如重组肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)，其可以通过结合至肿瘤细胞表面上的TRAIL死亡受体DR-4和DR-5激活细胞凋亡途径；或TRAIL-R2激动抗体。
在一些实施方案中，所述另外的药剂包括细胞毒性剂，例如，CPX-351(CelatorPharmaceuticals)、阿糖胞苷、道诺霉素、沃沙隆沙星(vosaroxin)(SunesisPharmaceuticals)、沙帕他滨(Cyclacel Pharmaceuticals)、伊达比星或米托蒽醌。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括低甲基化剂，例如，DNA甲基转移酶抑制剂，例如，阿扎胞苷或地西他滨。
在另一个实施方案中，所述另外的疗法是移植，例如，同种异体干细胞移植。
在一些实施方案中，所述另外的疗法是淋巴细胞清除疗法。在一些实施方案中，淋巴细胞清除是在例如给予工程化细胞(例如，CAR表达细胞)之前对受试者进行。在一些实施方案中，所述淋巴细胞清除包括给予以下中的一种或多种：美法仑、环磷酰胺(Cytoxan)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和氟达拉滨。在一些实施方案中，在工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的给予(例如，输注)之前、伴随所述给予或在所述给予之后，将淋巴细胞清除化学疗法给予受试者。在一个例子中，在工程化细胞(例如，CAR表达细胞)的给予之前将所述淋巴细胞清除化学疗法给予受试者。
在一些实施方案中，所述另外的药剂是溶瘤病毒。在一些实施方案中，溶瘤病毒能够在癌细胞中选择性复制并触发所述癌细胞的死亡或减慢所述癌细胞的生长。在一些情况下，溶瘤病毒对非癌细胞无影响或影响极小。溶瘤病毒包括但不限于溶瘤腺病毒、溶瘤单纯疱疹病毒、溶瘤逆转录病毒、溶瘤细小病毒、溶瘤痘苗病毒、溶瘤辛德毕斯病毒(oncolyticSinbis virus)、溶瘤流感病毒或溶瘤RNA病毒(例如，溶瘤呼肠孤病毒、溶瘤新城疫病毒(NDV)、溶瘤麻疹病毒或溶瘤水疱性口炎病毒(VSV))。
其他示例性组合疗法、治疗和/或药剂包括抗过敏剂、止吐药、镇痛药和辅助疗法。在一些实施方案中，所述另外的药剂包括细胞保护剂，如神经保护剂、自由基清除剂、心脏保护剂、蒽环类外渗中和剂和营养素。
在一些实施方案中，用作另外的药剂的抗体与本文所述的治疗剂缀合或以其他方式结合，所述治疗剂是例如化学治疗剂(例如，环磷酰胺、氟达拉滨、组蛋白脱乙酰酶抑制剂、脱甲基剂、肽疫苗、抗肿瘤抗生素、酪氨酸激酶抑制剂、烷化剂、抗微管剂或抗有丝分裂剂)、抗过敏剂、止吐剂(anti-nausea agent)(或止吐药(anti-emetic))、止痛药或细胞保护剂。在一些实施方案中，所述另外的药剂是抗体-药物缀合物。
任何本文所述的另外的药剂可以作为所提供的方法、用途、制品或组合物中所述的组合疗法(如在包含所述组合疗法的一种或多种药剂和药学上可接受的载体的药物组合物中，如本文所述的任一种)制备和给予。在一些实施方案中，所提供的方法、用途、制品或组合物中的组合疗法可以与所述另外的药剂、疗法或治疗同时、伴随或以任何顺序依序给予，其中这种给予提供每种药剂在受试者体内的治疗有效水平。在一些实施方案中，所述另外的药剂可以与所提供的方法、用途、制品或组合物中的组合疗法共给予，例如，作为同一药物组合物的一部分或使用相同递送方法。在一些实施方案中，所述另外的药剂是与所述细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+T细胞))同时给予，但是是在分开组合物中给予。在一些实施方案中，在给予所述细胞之前，将所述另外的药剂与所述工程化细胞(例如，CAR表达细胞)一起孵育。
在一些例子中，所述一种或多种另外的药剂是在给予所述细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+T细胞))之后或之前给予，相隔所选时间段。在一些例子中，所述时间段是1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、2周、3周、1个月、2个月或3个月。在一些例子中，所述一种或多种另外的药剂是多次给予。在一些实施方案中，所述另外的药剂是在所提供的方法、用途、制品或组合物中的细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(CAR+T细胞))之前给予，例如，在给予前2周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天。在一些实施方案中，所述另外的药剂是在所提供的方法、用途、制品或组合物中的细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(例如，CAR+T细胞))之后给予，例如，在给予后2周、12天、10天、8天、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天。
所述另外的药剂的剂量可以是任何治疗有效量，例如，本文所述的任何剂量量，并且所述另外的药剂的适当剂量可以取决于要治疗的疾病的类型、所给予的结合分子、重组受体、细胞和/或组合物的类型、剂量和/或频率、疾病的严重程度和病程、先前疗法、患者的临床病史和对细胞疗法(例如，一定剂量的工程化T细胞(CAR+T细胞))的反应以及主治医师的决断。
VI.制品和试剂盒
还提供了制品和试剂盒，其含有表达重组受体的工程化细胞或其组合物，以及任选地使用说明书，例如根据所提供的方法进行给予的说明书。
在一些实施方案中，提供了制品和/或试剂盒，其包括包含治疗有效量的本文所述的任何工程化细胞的组合物，以及向受试者给药以治疗疾病或病症的说明书。在一些实施方案中，所述说明书可以规定本文所提供方法的一些或所有要素。在一些实施方案中，所述说明书规定给予用于细胞疗法的细胞的具体指导，例如，用于给予的剂量、时间安排、受试者的选择和/或鉴定以及用于给予的条件。在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于疗法(例如，淋巴细胞清除疗法和/或组合疗法，如本文所述的任一种)的一种或多种另外的药剂，并且任选地进一步包括用于给予用于疗法的另外的药剂的说明书。在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包含用于淋巴细胞清除疗法的药剂，并且任选地进一步包括用于给予淋巴细胞清除疗法的说明书。在一些实施方案中，所述说明书可以作为伴随用于给予的组合物的标签或包装说明书而包含在内。
在一些实施方案中，所述说明书规定选择或鉴定用于疗法的受试者的标准。在一些实施方案中，此类标准包括患有NHL或其亚型和/或高风险NHL的受试者。在一些实施方案中，所述说明书规定，要治疗的受试者包括患有特征为或被确定为以下的疾病或病症的受试者：侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)。在特定实施方案中，要治疗的受试者包括患有侵袭性NHL的受试者，特定地患有未另行规定(NOS)并且在一些方面包括从头的和从惰性转化的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的受试者。在一些方面，要治疗的受试者或群体可以包括和/或进一步包括患有原发性纵隔B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者。在一些实施方案中，要治疗的受试者或群体包括具有较差体能状态的那些受试者。在一些方面，要治疗的群体包括例如具有等于0-2之间的任何值的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)的受试者。在任何实施方案的其他方面中，要治疗的受试者包括ECOG0-1受试者并且不包括ECOG2受试者。在任何实施方案的一些实施方案中，要治疗的受试者已经历过两种或更多种先前疗法的失败。在一些实施方案中，所述受试者未患从边缘区淋巴瘤(MZL)和慢性淋巴细胞白血病(CLL；里希特氏)转化的DLBCL和/或患有特征为从头或从惰性疾病转化的DLBCL。在一些实施方案中，所述受试者患有套细胞淋巴瘤(MCL)。在一些实施方案中，所述说明书规定，所述细胞疗法的给予用于如下受试者：所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤(或高级B细胞淋巴瘤，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学)，已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤(例如，化疗难治性DLBCL)和/或没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)。
在一些实施方案中，说明书规定了待给予的细胞的剂量。例如，在一些实施方案中，所述说明书中规定的剂量包括介于约1x106个与3x108个之间的总重组受体(例如，CAR)表达细胞，例如，在约1x107至2x108个的范围内的此类细胞，如1x107、5x107、1x108或1.5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。在一些实施方案中，向患者给予多个剂量，并且每个剂量或总剂量可以在任何前述值内。
在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含含有表达重组受体的多个CD4+T细胞的容器(任选地小瓶)，和含有表达重组受体的多个CD8+T细胞的容器(任选地小瓶)。在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含含有表达重组受体的多个CD4+T细胞的容器(任选地小瓶)，并且在同一容器中进一步包含表达重组受体的多个CD8+T细胞。在一些实施方案中，冷冻保护剂与所述细胞一起被包括。在一些方面，所述容器是袋。
在一些实施方案中，所述容器(如所述小瓶)包含大于或大于约10x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约15x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约25x106个T细胞或重组受体表达T细胞。在一些方面，所述小瓶包含介于约1000万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约2500万个细胞/ml之间、介于约1000万个细胞/ml与约1500万个细胞/ml、1500万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml、介于约1500万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、介于约1500万个细胞/ml与约2500万个细胞/ml之间、介于约2500万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间、介于约2500万个细胞/ml与约5000万个细胞/ml之间、和介于约5000万个细胞/ml与约7000万个细胞/ml之间。
在一些实施方案中，规定用于给予的多个小瓶或多个细胞或单位剂量的细胞共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x105至1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。在一些方面，所述制品包含一个或多个单位剂量的所述CD4+和CD8+细胞或CD4+受体+细胞和CD8+受体+细胞，其中所述单位剂量包含介于1x107或约1x107个与2x108或约2x108个之间的重组受体表达T细胞、介于5x107或约5x107个与1.5x108或约1.5x108个之间的重组受体表达T细胞、5x107或约5x107个重组受体表达T细胞、1x108或约1x108个重组受体表达T细胞、或1.5x108或约1.5x108个重组受体表达T细胞，任选地其中所述制品中的信息规定给予一个或多个单位剂量和/或对应于此一个或多个单位剂量的体积。在一些情况下，所述制品包含一个或多个单位剂量的所述CD8+细胞，其中所述剂量包含介于5x106或约5x106个与1x108或约1x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞，所述剂量包含介于1x107或约1x107个与0.75x108或约0.75x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞，所述剂量包含2.5x107或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞，或所述剂量包含5x107或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞，或所述剂量包含0.75x108或约0.75x108个重组受体表达CD8+T细胞，任选地其中所述制品中的信息规定给予一个或多个单位剂量和/或对应于此一个或多个单位剂量的体积。在一些实施方案中，所述制品中的细胞共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含不超过1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞。
在一些实施方案中，规定用于给予的每个小瓶或所述多个小瓶或多个细胞或单位剂量的细胞共同包含细胞的平坦剂量或细胞的固定剂量，使得细胞的所述剂量与受试者的体表面积或体重无关或不基于受试者的体表面积或体重。
在一些实施方案中，细胞的单位剂量是或包含可以按单一剂量给予受试者或患者的数量或量的细胞(如工程化T细胞)。
在一些实施方案中，规定用于给予的每个小瓶或所述多个小瓶或多个细胞或单位剂量的细胞共同包含包括以下的剂量：少于约5x108个总重组受体(例如，CAR)表达细胞、T细胞或外周血单核细胞(PBMC)，例如，在约1x106至5x108的范围内的此类细胞，如2x106、5x106、1x107、5x107、1x108或5x108个总此类细胞，或任两个前述值之间的范围。
在一些实施方案中，规定用于给予的每个小瓶或所述多个小瓶或多个细胞或单位剂量的细胞共同包含一定剂量的遗传工程化细胞，所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x105至1x108个总CAR表达T细胞、1x105至5x107个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x105至1x107个总CAR表达T细胞、1x105至5x106个总CAR表达T细胞、1x105至2.5x106个总CAR表达T细胞、1x105至1x106个总CAR表达T细胞、1x106至5x108个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x106至1x108个总CAR表达T细胞、1x106至5x107个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、1x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x106至5x106个总CAR表达T细胞、1x106至2.5x106个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至1x107个总CAR表达T细胞、2.5x106至5x106个总CAR表达T细胞、5x106至5x108个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x106至1x108个总CAR表达T细胞、5x106至5x107个总CAR表达T细胞、5x106至2.5x107个总CAR表达T细胞、5x106至1x107个总CAR表达T细胞、1x107至5x108个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、1x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x107至5x107个总CAR表达T细胞、1x107至2.5x107个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至1x108个总CAR表达T细胞、2.5x107至5x107个总CAR表达T细胞、5x107至5x108个总CAR表达T细胞、5x107至2.5x108个总CAR表达T细胞、5x107至1x108个总CAR表达T细胞、1x108至5x108个总CAR表达T细胞、1x108至2.5x108个总CAR表达T细胞、或2.5x108至5x108个总CAR表达T细胞。
在一些实施方案中，规定用于给予的每个小瓶或所述多个小瓶或多个细胞或单位剂量的细胞共同包含一定剂量的遗传工程化细胞，所述剂量包含至少或至少约1x105个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x105个CAR表达细胞、至少或至少约5x105个CAR表达细胞、至少或至少约1x106个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x106个CAR表达细胞、至少或至少约5x106个CAR表达细胞、至少或至少约1x107个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x107个CAR表达细胞、至少或至少约5x107个CAR表达细胞、至少或至少约1x108个CAR表达细胞、至少或至少约2.5x108个CAR表达细胞、或至少或至少约5x108个CAR表达细胞。
在一些实施方案中，用于给予一定剂量的工程化细胞的说明书规定给予如下数量的细胞：从或从约1x105至5x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量的细胞，所述剂量包含以下数量的细胞：至少或至少约1x105个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，如至少或至少1x106、至少或至少约1x107、至少或至少约1x108个此类细胞。在一些实施方案中，所述数量是关于CD3+或CD8+的总数，在一些情况下也是关于重组受体表达(例如CAR+)细胞。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予一定剂量，所述剂量包含以下数量的细胞：1x105或约1x105至5x108个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、5x105或约5x105至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞、或1x106或约1x106至1x107个CD3+或CD8+总T细胞或CD3+或CD8+重组受体表达细胞，每个都包含端值。在一些实施方案中，所述细胞疗法包括给予包含以下数量的细胞的剂量：从或从约1x105至5x108个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、从或从约5x105至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞、或从或从约1x106至1x107个总CD3+/CAR+或CD8+/CAR+细胞，每个都包含端值。
在一些实施方案中，所述说明书可以规定给予的剂量方案和时间安排。例如，在一些实施方案中，所述说明书可以规定向所述受试者给予细胞的多个剂量，例如，两个或更多个剂量。在一些实施方案中，所述说明书规定所述多个剂量的时间安排，例如，第二剂量是在第一剂量之后约4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天时给予；和/或规定每个剂量中的剂量量。
在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含表达重组受体的多个CD4+T细胞；和用于向患有疾病或病症的受试者给予所述多个CD4+T细胞的全部或一部分以及进一步给予表达重组受体的CD8+T细胞的说明书。在一些实施方案中，所述说明书规定在给予所述CD8+细胞之前给予所述CD4+T细胞。在一些情况下，所述说明书规定在给予所述CD4+细胞之前给予所述CD8+T细胞。在一些实施方案中，所述制品或试剂盒包含表达重组受体的多个CD8+T细胞；和用于向患有疾病或病症的受试者给予所述多个CD8+T细胞的全部或一部分以及表达重组受体的CD4+T细胞的说明书。在一些实施方案中，所述说明书规定给予所述细胞的剂量方案和时间安排。
在一些方面，所述说明书规定相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时给予所述CD4+T细胞的全部或一部分以及所述CD8+T细胞的全部或一部分。在一些情况下，所述说明书规定相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟给予所述CD4+T细胞和所述CD8+T细胞。
在一些实施方案中，所述说明书规定了细胞或一种或多种细胞类型的剂量或数量和/或细胞类型(例如，单独群体或亚型)的比率，如CD4+与CD8+的比率。在一些实施方案中，细胞的群体或亚型，如CD8+和CD4+T细胞。例如，在一些实施方案中，所述说明书规定，所述细胞是以多个细胞群体或亚型(如CD4+和CD8+细胞或亚型)的输出比率来给予，或在所述输出比率的容忍范围内给予，所述输出比率是介于5:1或约5:1与5:1或约5:1之间(或大于约1:5且小于约5:1)，或介于1:3或约1:3与3:1或约3:1之间(或大于约1:3且小于约3:1)，如介于2:1或约2:1与1:5或约1:5之间(或大于约1:5且小于约2:1)，如为或为约5:1、4.5:1、4:1、3.5:1、3:1、2.5:1、2:1、1.9:1、1.8:1、1.7:1、1.6:1、1.5:1、1.4:1、1.3:1、1.2:1、1.1:1、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9:1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5或1:5。在一些方面，所述容忍差异在所需比率的约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％、约50％(包括这些范围之间的任何值)内。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于疗法(例如本文所述的淋巴细胞清除疗法和/或组合疗法)的一种或多种另外的药剂，以及任选的用于给予所述另外的药剂的说明书。在一些例子中，所述制品可以进一步含有一种或多种治疗剂。在一些实施方案中，所述治疗剂是免疫调节剂、细胞毒性剂、抗癌剂或放射性治疗剂。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于在所述受试者中给予治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。在一些实施方案中，所述药剂是或包含抗IL-6抗体或抗IL-6受体抗体。例如，在一些实施方案中，所述药剂或治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。例如，在一些实施方案中，所述药剂或治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。
在一些实施方案中，能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)或上调微小RNA-124(miR-124)。在一些情况下，所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。在一些实施方案中，所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。例如，所述药剂是PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段，或前述任何项的组合。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步包括用于测定生物样品(例如，来自作为给予候选者或已给予所述疗法的受试者的生物样品)的一种或多种试剂，以及任选的所述试剂或测定的使用说明书。在一些实施方案中，所述生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。在一些实施方案中，所述试剂可以在给予所述细胞疗法之前或在给予细胞疗法之后用于诊断目的，以鉴定受试者和/或评估治疗结果和/或毒性。例如，在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒进一步含有用于测量与毒性相关的特定生物标记(例如，细胞因子或分析物)的水平的试剂，以及测量说明书。在一些实施方案中，所述试剂包括用于进行体外测定以测量所述生物标记(例如，分析物)的组分，所述体外测定如免疫测定、基于适体的测定、组织学或细胞学测定或mRNA表达水平测定。在一些实施方案中，所述体外测定选自酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫印迹、免疫沉淀、放射免疫测定(RIA)、免疫染色、流式细胞术测定、表面等离子体共振(SPR)、化学发光测定、侧流免疫测定、抑制测定和亲合力测定。在一些方面，所述试剂是特异性地结合所述生物标记(例如，分析物)的结合试剂。在一些情况下，所述结合试剂是抗体或其抗原结合片段、适体或核酸探针。
在一些实施方案中，所述制品和/或试剂盒包含能够检测一种或多种分析物的一种或多种试剂，以及用于使用所述试剂测定来自作为治疗候选者的受试者的生物样品的说明书，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。在一些实施方案中，还包括用于测定与分析物的阈值水平相比，所述受试者中所述分析物的存在或不存在、水平、量或浓度的说明书。
在一些实施方案中，包括所述说明书，其规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。在一些情况下，所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则将细胞疗法以降低的剂量或如下剂量给予所述受试者：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关。在一些情况下，所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平，则在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
在一些实施方案中，用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。在一些实施方案中，用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前，不将能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗给予所述受试者。在一些方面，用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
所述制品和/或试剂盒可以进一步包括细胞疗法和/或进一步包括与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。在一些实施方案中，包括用于给予所述药剂的说明书，并且所述说明书规定如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。在一些方面，所述说明书进一步规定将细胞疗法给予所述受试者，其中所述药剂的给予要在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。
所述制品和/或试剂盒可以包括容器以及在所述容器上或与所述容器相关联的标签或包装说明书。合适的容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。所述容器可以由各种材料(如玻璃或塑料)形成。在一些实施方案中，所述容器容纳组合物自身或所述组合物与有效治疗、预防和/或诊断病症的另一种组合物的组合。在一些实施方案中，所述容器具有无菌入口。示例性容器包括静脉内溶液袋、小瓶(包括具有可被注射针刺穿的塞子的那些)或用于口服给予的药剂的瓶子或小瓶。所述标签或包装说明书可以指示，所述组合物用于治疗疾病或病症。所述制品可以包括(a)其中含有组合物的第一容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括第二药剂。在一些实施方案中，所述制品可以包括(a)其中含有第一组合物的第一容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞的亚型；和(b)其中含有组合物的第二容器，其中所述组合物包括表达重组受体的工程化细胞的不同亚型。所述制品可以进一步包括包装说明书，其指示所述组合物可以用于治疗特定病症。可替代地或另外地，所述制品可以进一步包括另一个或相同容器，所述容器包含药学上可接受的缓冲液。所述制品可以进一步包括其他材料，如其他缓冲液、稀释剂、过滤器、针和/或注射器。
VII.示例性实施方案
所提供的实施方案包括：
1.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予一定剂量的CD4+和CD8+T细胞，所述CD4+和所述CD8+T细胞各自单独包含特异性地结合至所述疾病或病症或者其细胞或组织表达的和/或与所述疾病或病症相关的靶抗原的受体，其中所述给予包括给予多种分开的组合物，所述多种分开的组合物包含含有所述CD4+T细胞和所述CD8+T细胞中的一种的第一组合物，以及给予含有所述CD4+T细胞和所述CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
2.根据实施方案1所述的方法，其中所述CD4+T细胞包含的受体和/或所述CD8+T细胞包含的受体包含重组受体，和/或其中对所述CD4+T细胞和/或所述CD8+T细胞进行了遗传工程化以表达所述受体。
3.根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中：
所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予是在同一天进行，是相隔介于约0与约12小时之间、相隔介于约0与约6小时之间或相隔介于约0至2小时之间进行；或
开始给予所述第一组合物和开始给予所述第二组合物是相隔介于约1分钟与约1小时之间或相隔介于约5分钟与约30分钟之间进行。
4.根据实施方案1-3中任一项所述的方法，其中所述第一组合物和第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
5.根据实施方案1-4中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD4+T细胞。
6.根据实施方案1-5中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD8+T细胞。
7.根据实施方案1-6中任一项所述的方法，其中开始给予所述第一组合物是在开始给予所述第二组合物之前进行。
8.根据实施方案1-7中任一项所述的方法，其中：
细胞的所述剂量包含限定比率的表达重组受体的CD4+细胞与表达重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或
在所述第一和第二组合物中的一种组合物中包含所述受体的所述CD4+T细胞和在所述第一和第二组合物中的另一种组合物中包含所述受体的所述CD8+T细胞是以限定比率存在，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或
在所述第一和第二组合物中给予的包含所述受体的所述CD4+T细胞和包含所述受体的所述CD8+T细胞是以限定比率存在，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
9.根据实施方案8所述的方法，其中所述限定比率为或为约1:1。
10.根据实施方案1-9中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量是作为单一剂量给予所述受试者，或者在两周、1个月、3个月、6个月、1年或更长时间段内仅给予一次。
11.根据实施方案1-9中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量是作为包含所述T细胞的第一剂量和所述T细胞的连续剂量的双剂量来给予，其中所述第一剂量和所述第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的所述多个组合物。
12.根据实施方案11所述的方法，其中所述连续剂量是在开始给予细胞的所述第一剂量后至少或超过约7天或14天且小于约28天的时间点给予。
13.根据实施方案1-12中任一项所述的方法，其中：
细胞的所述剂量包含介于1x105或约1x105个与5x108或约5x108个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、介于1x105或约1x105个与1x108或约1x108个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、介于5x105或约5x105个与1x107或约1x107个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞、或介于1x106或约1x106个与1x107或约1x107个之间的总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值。
14.根据实施方案1-13中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量包括给予不超过1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞。
15.根据实施方案1-14中任一项所述的方法，其中CD4+和CD8+T细胞的所述剂量包含：
介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108或约1x108个重组受体表达T细胞之间，每个都包含端值；
介于1x107或约1x107个与2x108或约2x108个之间的重组受体表达T细胞；
介于5x107或约5x107个与1.5x108或约1.5x108个之间的重组受体表达T细胞；
5x107或约5x107个重组受体表达T细胞；或
1x108或约1x108个重组受体表达T细胞；或
所述剂量包含1.5x108或约1.5x108个重组受体表达T细胞；
介于5x106或约5x106个与1x108或约1x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞；
介于1x107或约1x107个与0.75x108或约0.75x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞；
2.5x107或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞；
5x107或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞；和/或
0.75x108或约0.75x108个重组受体表达CD8+T细胞。
16.根据实施方案1-15中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。
17.根据实施方案1-16中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
18.根据实施方案1-17中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
19.根据实施方案1-18中任一项所述的方法，其中所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
20.根据实施方案1-19中任一项所述的方法，其中所述抗原是CD19。
21.根据实施方案1-20中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
22.根据实施方案1-21中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是NHL并且所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
23.根据实施方案1-22中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)，任选地其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)，任选地其中所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
24.一种制品，其包含(1)小瓶，所述小瓶含有包含表达重组受体的多种CD4+T细胞的组合物，和(2)用于向患有疾病或病症的受试者给予以下的说明书：
单位剂量的在所述组合物中的细胞，所述单位剂量包含所述多种CD4+T细胞的全部或一部分，以及单位剂量的包含表达重组受体的CD8+T细胞的组合物，其中所述小瓶不包含所述单位剂量的包含表达所述重组受体的CD8+T细胞的所述组合物。
25.一种制品，其包含(1)小瓶，所述小瓶含有包含表达重组受体的多种CD8+T细胞的组合物，和(2)用于向患有疾病或病症的受试者给予以下的说明书：
单位剂量的在所述组合物中的细胞，所述单位剂量包含所述多种CD8+T细胞的全部或一部分，以及单位剂量的包含表达重组受体的CD4+T细胞的组合物，其中所述小瓶不包含所述单位剂量的包含表达所述重组受体的CD4+T细胞的所述组合物。
26.根据实施方案24或实施方案25所述的制品，其中：
所述CD4+细胞表达的重组受体与所述CD8+T细胞表达的重组受体是相同的；
所述CD4+细胞表达的重组受体与所述CD8+T细胞表达的重组受体是不同的；或
所述CD4+细胞表达的重组受体和所述CD8+T细胞表达的重组受体结合至相同抗原，所述抗原是由所述疾病或病症或者其细胞或组织表达或与所述疾病或病症或者其细胞或组织相关。
27.根据实施方案24-26中任一项所述的制品，其中所述小瓶包含大于或大于约10x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约15x106个T细胞或重组受体表达T细胞、大于或大于约25x106个T细胞或重组受体表达T细胞。
28.根据实施方案24-27中任一项所述的制品，其中所述小瓶包含介于约1000万个细胞/mL与约7000万个细胞/mL之间、介于约1000万个细胞/mL与约5000万个细胞/mL之间、介于约1000万个细胞/mL与约2500万个细胞/mL之间、介于约1000万个细胞/mL与约1500万个细胞/mL、1500万个细胞/mL与约7000万个细胞/mL之间、介于约1500万个细胞/mL与约5000万个细胞/mL之间、介于约1500万个细胞/mL与约2500万个细胞/mL之间、介于约2500万个细胞/mL与约7000万个细胞/mL之间、介于约2500万个细胞/mL与约5000万个细胞/mL之间、和介于约5000万个细胞/mL与约7000万个细胞/mL之间。
29.根据实施方案24-28中任一项所述的制品，其中所述组合物进一步包含冷冻保护剂，和/或所述制品进一步包括用于在给予所述受试者之前将所述组合物解冻的说明书。
30.根据实施方案24-29中任一项所述的制品，其中：
所述制品中表达所述重组受体的所述多种CD4+细胞和表达所述重组受体的所述多种CD8+细胞，和/或所述小瓶中的所述CD4+细胞和所述CD8+细胞是以限定比率存在，所述限定比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或
所述制品进一步包含规定以限定比率的表达所述重组受体的所述多种CD4+细胞的细胞与表达所述重组受体的所述多种CD8+细胞的细胞和/或限定比率的所述CD4+细胞与所述CD8+细胞给予所述多种细胞的信息或说明书，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间；和/或
所述制品进一步包含规定以限定体积或重量比给予所述小瓶中的配制品的信息或说明书，所述限定体积或重量比任选地以体积或重量计为或为约1:1和/或介于3:1或约3:1与1:3或约1:3之间，和/或任选地对应于表达所述重组受体的CD4+细胞与表达所述重组受体的CD8+细胞的比率和/或CD4+细胞与CD8+细胞的比率，所述比率任选地为或为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
31.根据实施方案30所述的制品，其中所述限定比率为或为约1:1。
32.根据实施方案24-31中任一项所述的制品，其中
规定用于给予的所述多个小瓶或多种细胞或单位剂量的细胞共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含从或从约1x105至5x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、1x105至1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、从或从约5x105至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞，每个都包含端值；
所述制品包含一个或多个单位剂量的所述CD4+和CD8+细胞或所述CD4+受体+细胞和CD8+受体+细胞，其中所述单位剂量包含介于1x107或约1x107个与2x108或约2x108个之间的重组受体表达T细胞、介于5x107或约5x107个与1.5x108或约1.5x108个之间的重组受体表达T细胞、5x107或约5x107个重组受体表达T细胞、1x108或约1x108个重组受体表达T细胞、或1.5x108或约1.5x108个重组受体表达T细胞，任选地其中所述制品中的信息规定给予一个或多个单位剂量和/或对应于此一个或多个单位剂量的体积；
所述制品包含一个或多个单位剂量的所述CD8+细胞，其中所述剂量包含介于5x106或约5x106个与1x108或约1x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞，所述剂量包含介于1x107或约1x107个与0.75x108或约0.75x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞，所述剂量包含2.5x107或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞，或所述剂量包含5x107或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞，或所述剂量包含0.75x108或约0.75x108个重组受体表达CD8+T细胞，任选地其中所述制品中的信息规定给予一个或多个单位剂量和/或对应于此一个或多个单位剂量的体积。
33.根据实施方案24-32中任一项所述的制品，其中所述制品中的所述细胞共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含不超过1x108个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x107个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过1x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞、不超过0.5x106个总重组受体表达T细胞或总T细胞。
34.根据实施方案24-33中任一项所述的制品，其中所述多个容器共同包含一定剂量的细胞，所述剂量包含：
介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108个重组受体表达T细胞之间，每个都包含端值；
介于1x107或约1x107个与2x108或约2x108个之间的重组受体表达T细胞；
介于5x107或约5x107个与1.5x108或约1.5x108个之间的重组受体表达T细胞；
5x107或约5x107个重组受体表达T细胞；
1x108或约5x107个重组受体表达T细胞；
1.5x108或约1.5x108个重组受体表达T细胞；
介于5x106或约5x106个与1x108或约1x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞；
介于1x107或约1x107个与0.75x108或约0.75x108个之间的重组受体表达CD8+T细胞；
2.5x107或约2.5x107个重组受体表达CD8+T细胞；
5x107或约5x107个重组受体表达CD8+T细胞；或
0.75x108或约0.75x108个重组受体表达CD8+T细胞。
35.根据实施方案24-34中任一项所述的制品，其中所述说明书规定相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时给予所述CD4+T细胞的全部或一部分和所述CD8+T细胞的全部或一部分。
36.根据实施方案24-34中任一项所述的制品，其中所述说明书规定相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟给予所述CD4+T细胞和所述CD8+T细胞。
37.根据实施方案24-36中任一项所述的制品，其中所述说明书规定在给予所述CD8+细胞之前给予所述CD4+T细胞。
38.根据实施方案24-36中任一项所述的制品，其中所述说明书规定在给予所述CD4+细胞之前给予所述CD8+T细胞。
39.根据实施方案24-38中任一项所述的制品，其中所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。
40.根据实施方案24-39中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是癌症。
41.根据实施方案24-40中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
42.根据实施方案24-41中任一项所述的制品，其中所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFRvIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
43.根据实施方案24-42中任一项所述的制品，其中所述抗原是CD19。
44.根据实施方案24-43中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
45.根据实施方案24-44中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是NHL并且所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、富含T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤(TCHRBCL)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
46.根据实施方案24-45中任一项所述的制品，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
47.根据实施方案24-46中任一项所述的制品，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
48.根据实施方案24-46中任一项所述的制品，其中所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。
49.一种治疗患有或怀疑患有B细胞恶性肿瘤、任选地非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由所述NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：
T细胞的所述剂量包含介于2.5x107或约2.5x107个CAR表达T细胞与2x108个CAR表达T细胞之间，包括端值，任选地介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108或约1x108个CAR表达T细胞之间，包括端值；并且
所述恶性肿瘤(任选地NHL)包含弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤，并且其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态，任选地其中所述方法进一步包括将所述受试者鉴定为患有弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤且具有0或1的ECOG状态。
50.根据实施方案49所述的方法，其中T细胞的所述剂量包含限定比率的表达CAR的CD4+细胞与表达CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
51.一种治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由所述NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，T细胞的所述剂量包含限定比率的表达所述CAR的CD4+细胞与表达所述CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为约或为1:1，其中所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、或3B级滤泡性淋巴瘤。
52.根据实施方案51所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态。
53.根据实施方案51或实施方案52所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的ECOG状态。
54.根据实施方案49-53中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全反应(CR)，任选地其中所述CR可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述CR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)，任选地其中所述OR可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者保持反应或存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的受试者(所述受试者在给予细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发(任选地在12个月内复发))实现OR，任选地其中所述OR持续等于或大于3个月或等于或大于6个月。
55.根据实施方案49-54中任一项所述的方法，其中：
所述细胞对于所述受试者是自体的，并且对于所述疗法的产生，不要求和/或规定单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)；和/或
所述细胞是通过如下过程产生，所述过程对于至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的患有所述疾病或病症的受试者或所选受试者群体，能够产生用于根据所述方法的给予和结果的细胞产物。
56.根据实施方案49-55中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约50％、约60％、约70％或约80％的根据所述方法治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或不展现3级或更高级的神经毒性，和/或大于40％或50％或55％不展现任何神经毒性或CRS。
57.一种治疗患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由所述NHL表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中：
T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个重组受体表达T细胞与1x108个重组受体表达T细胞之间，包括端值，所述剂量包含限定比率的表达所述重组受体的CD4+细胞与表达所述重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为约或为1:1；并且
所述方法导致(1)至少35％、至少40％或至少50％的所治疗受试者的完全反应(CR)和/或至少50％、至少60％或至少70％的所治疗受试者的客观反应(OR)，并且(2)导致不超过50％的受试者展现高于2级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或高于2级的神经毒性。
58.根据实施方案57所述的方法，其中至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的所述受试者(所述受试者在给予细胞的所述剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤，或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发)实现OR，任选地其中所述OR可持续等于或大于3个月或等于或大于6个月。
59.根据实施方案57所述的方法，其中：
所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月；和/或
至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现持久的CR；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现客观反应(OR)，任选地其中所述OR可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述OR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的用所述方法治疗并实现OR的受试者保持反应或存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月。
60.根据实施方案49-59中任一项所述的方法，其中：
在给予细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤；和/或
至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述方法治疗并在给予细胞的所述剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现所述CNS疾病的消退。
61.一种治疗受试者的方法，所述方法包括向患有淋巴瘤的受试者给予一定剂量的T细胞，所述剂量包含表达特异性地结合至由所述淋巴瘤表达的靶抗原的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞，其中所述受试者的所述淋巴瘤与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累。
62.根据实施方案60或实施方案61所述的方法，其中，在给予细胞的所述剂量之时或之前，所述受试者包含脑病灶，任选地颞叶脑病灶。
63.根据实施方案62所述的方法，其中所述淋巴瘤是B细胞恶性肿瘤。
64.根据实施方案61或实施方案62所述的方法，其中所述淋巴瘤是非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
65.根据实施方案60-64中任一项所述的方法，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的完全反应(CR)或缓解，任选地其中所述CNS疾病的所述CR或缓解可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现所述CR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至1个月和/或截至3个月实现CNS疾病的CR或缓解的受试者保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；和/或
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述方法治疗的受试者实现CNS疾病的客观反应(OR)或缓解，任选地其中所述CNS疾病的所述OR或缓解可持续(或在至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者中可持续)等于或大于3个月或等于或大于6个月；和/或
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CNS疾病的所述OR或缓解的受试者保持反应或存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
所述脑病灶的大小或体积减小，任选地减小大于或大于约25％、50％、75％或更多；和/或
CNS疾病的降低或缓解或清除得以实现，任选地在至少35％、至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者中实现。
66.根据实施方案49-65中任一项所述的方法，其中：
大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述方法治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；和/或
至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述方法治疗的受试者不展现早发性CRS或神经毒性，和/或不展现开始给予后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始给予后早于5天的神经毒性发作和/或其中在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作是在根据所述方法治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或中值消退时间时或之后，和/或在根据所述方法治疗的受试者之间神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
67.根据实施方案49-66中任一项所述的方法，其中：
在给予细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或治疗；和/或
在给予所述剂量之后的时间段内，不向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗，所述时间段任选地为或为约1、2、3、4、5天，或任选地为或为约6、7、8、9、10、11天，或任选地为1、2、3或4周；和/或
在给予所述剂量之后，在所述受试者展现毒性的体征或症状之前或除非所述受试者展现毒性的体征或症状，和/或在所述受试者展现除了发热以外的毒性的体征或症状之前或除非所述受试者展现除了发热以外的毒性的体征或症状，不向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗，任选地其中所述发热不是持续的发热或所述发热在用退热药治疗后被或已经被降低或降低超过1℃；和/或
任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，所述给予和任何随访是在门诊基础上和/或在不使所述受试者住院的情况下和/或不在医院过夜停留的情况下和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。
68.根据实施方案49-67中任一项所述的方法，其中：
在给予细胞的所述剂量之前，尚未向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)；和/或
在给予所述剂量之后的时间段内，不向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)，所述时间段任选地为或为约1、2、3、4、5天，或任选地为或为约6、7、8、9、10、11天，或任选地为1、2、3或4周；和/或
在给予所述细胞剂量之后，在所述受试者展现毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状之前或除非所述受试者展现毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状，和/或在所述受试者展现除了发热以外的毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状之前或除非所述受试者展现除了发热以外的毒性(任选地神经毒性或CRS)的体征或症状，不向所述受试者给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)，任选地其中所述发热不是持续的发热或所述发热在用退热药治疗后被或已经被降低或降低超过1℃；和/或
任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，所述给予和任何随访是在门诊基础上和/或在不使所述受试者住院的情况下和/或不在医院过夜停留的情况下和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。
69.根据实施方案49-67中任一项所述的方法，其中：
所述给予是在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行；并且
如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
70.根据实施方案49-60和64-69中任一项所述的方法，其中所述NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
71.根据实施方案49-60和64-70中任一项所述的方法，其中所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、或3B级滤泡性淋巴瘤。
72.根据实施方案49-60和64-71中任一项所述的方法，其中所述NHL包含DLBCL。
73.根据实施方案49-60和70-72中任一项所述的方法，其中所述DLBCL不包含从MZL和CLL(里希特氏)转化的DLBCL和/或被给予细胞的所述剂量的所述受试者患有特征为从头或从惰性转化的DLBCL和/或未患从MZL和CLL转化的DLBCL。
74.根据实施方案49-60和64-73中任一项所述的方法，其中所述NHL不包含PMBCL和/或被给予细胞的所述剂量的所述受试者不包含PMBCL。
75.根据实施方案57-73中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态。
76.根据实施方案49-75中任一项所述的方法，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的ECOG状态。
77.根据实施方案49-76中任一项所述的方法，其中，在给予细胞的所述剂量时或紧临给予细胞的所述剂量之前，所述受试者在用一种或多种用于所述NHL的先前疗法，任选地除了给予另一剂量的表达CAR的细胞以外的一种、两种或三种先前疗法治疗缓解后复发，或者变得用所述先前疗法难以治疗。
78.根据实施方案49-77中任一项所述的方法，其中，在给予细胞的所述剂量之时或之前：
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤；和/或
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤(任选地化疗难治性DLBCL)；和/或
所述受试者没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
所述受试者在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发。
79.根据实施方案49-78中任一项所述的方法，所述方法包括在给予细胞的所述剂量之前，鉴定或选择用于给予细胞的所述剂量的受试者，所述受试者：
患有双重/三重命中淋巴瘤；
患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；
尚未响应于用于治疗所述恶性肿瘤、任选地NHL的先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发；和/或
患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
80.根据实施方案49-79中任一项所述的方法，所述方法进一步包括给予另外的治疗剂或疗法，任选地并非细胞疗法，任选地并非CAR+T细胞疗法。
81.根据实施方案80所述的方法，其中所述另外的治疗剂或疗法用于治疗NHL或恶性肿瘤和/或增加细胞的所述剂量的持久性、活性和/或功效。
82.根据实施方案80或实施方案81所述的方法，其中如果所述受试者在给予细胞的所述剂量后1个月内、2个月内或3个月内不展现对所述细胞疗法的反应，任选地不展现CR或OR，则给予所述另外的治疗剂或疗法。
83.根据实施方案80或实施方案81所述的方法，其中将所述另外的治疗剂或疗法给予如下受试者：
所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后被鉴定为或已被鉴定为患有稳定或进行性疾病(SD/PD)；
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)；或
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有从MZL和CLL转化的DLBCL。
84.根据实施方案80-83中任一项所述的方法，所述方法包括在给予细胞的所述剂量或所述另外的治疗剂或疗法之前，鉴定或选择用于给予细胞的所述剂量的受试者，所述受试者：
在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后，患有稳定或进行性疾病(SD/PD)；
具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；
患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)；或
患有从MZL和CLL转化的DLBCL。
85.根据实施方案80-84中任一项所述的方法，其中所述另外的治疗剂或疗法是在开始给予细胞的所述剂量之前、与开始给予细胞的所述剂量一起、或在开始给予细胞的所述剂量的同时和/或在开始给予细胞的所述剂量之后给予。
86.根据实施方案49-85中任一项所述的方法，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且所述CAR任选地进一步包含介于所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；
所述CAR依次包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地为或包含4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或
所述CAR依次包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；并且其中：
所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸，和/或包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或(d)具有以下或由以下组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或任何前述序列的变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；和/或
所述初级信号传导结构域包含与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN的CDRL1序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQ ID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)、和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ ID NO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQ ID NO:40)，或其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv依次包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:24所述的氨基酸序列。
87.根据实施方案49-86中任一项所述的方法，其中所述抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。
88.根据实施方案1-23和49-87中任一项所述的方法，其中，在所述给予前，已经用包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行了预调理。
89.根据实施方案1-23和49-88中任一项所述的方法，所述方法进一步包括紧临给予前，将淋巴细胞清除疗法给予所述受试者，所述淋巴细胞清除疗法包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺。
90.根据实施方案88或实施方案89所述的方法，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天以约200-400mg/m2、任选地以或以约300mg/m2(包括端值)给予环磷酰胺，和/或以约20-40mg/m2、任选地30mg/m2给予氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天，或者其中所述淋巴细胞清除疗法包括以约500mg/m2给予环磷酰胺。
91.根据实施方案88或实施方案89所述的方法，其中：
所述淋巴细胞清除疗法包括每天以或以约300mg/m2给予环磷酰胺和以约30mg/m2给予氟达拉滨，持续3天；和/或
所述淋巴细胞清除疗法包括每天以或以约500mg/m2给予环磷酰胺和以约30mg/m2给予氟达拉滨，持续3天。
92.根据实施方案49-91中任一项所述的方法，其中任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，所述细胞剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的给予是通过门诊递送进行的。
93.根据实施方案92所述的方法，其中如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
94.根据实施方案49-92中任一项所述的方法，其中细胞的所述剂量是肠胃外给予，任选地静脉内给予。
95.根据实施方案49-94中任一项所述的方法，其中：
至少40％或至少50％的根据所述方法治疗的受试者实现完全缓解(CR)，展现大于或大于约3个月、6个月或12个月的无进展存活期(PFS)和/或总存活期(OS)；
平均而言，根据所述方法治疗的受试者展现超过6个月、12个月或18个月或者超过约6个月、12个月或18个月的平均PFS或OS；和/或
所述受试者在治疗后展现至少或至少约6、12、18个月或更久的PFS或OS。
96.根据实施方案1-23和49-95中任一项所述的方法，其中，在开始给予细胞的所述剂量后在或在约14或28天，在所述受试者或在通过所述方法如此治疗的大多数受试者的血液中可检测的CAR+T细胞(任选地CAR+CD8+T细胞和/或CAR+CD4+T细胞)的数量大于1个细胞/μL、大于5个细胞/μL或大于10个细胞/μL。
97.根据实施方案1-23和49-96中任一项所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
98.根据实施方案1-23和49-97中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
99.根据实施方案1-23和49-97中任一项所述的方法，其中所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。
100.根据实施方案49-99中任一项所述的方法，其中所述T细胞包含表达所述CAR的CD4+T细胞和表达所述CAR的CD8+T细胞，并且所述给予包括给予多种分开的组合物，所述多种分开的组合物包含含有CD4+T细胞和CD8+T细胞中的一种的第一组合物以及含有CD4+T细胞或CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
101.根据实施方案100所述的方法，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或其中所述第一组合物的给予和所述第二组合物的给予是在同一天进行，是相隔介于约0与约12小时之间、相隔介于约0与约6小时之间或相隔介于约0与2小时之间进行；和/或
开始给予所述第一组合物和开始给予所述第二组合物是相隔介于约1分钟与约1小时之间或相隔介于约5分钟与约30分钟之间进行。
102.根据实施方案100或实施方案101所述的方法，其中所述第一组合物和第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
103.根据实施方案100-102中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD4+T细胞。
104.根据实施方案100-102中任一项所述的方法，其中所述第一组合物包含所述CD8+T细胞。
105.根据实施方案100-104中任一项所述的方法，其中所述第一组合物是在所述第二组合物之前给予。
106.根据实施方案49-105中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量是作为单一剂量给予所述受试者，或者在两周、1个月、3个月、6个月、1年或更长时间段内仅给予一次。
107.根据实施方案49-106中任一项所述的方法，其中T细胞的所述剂量是作为包含所述T细胞的第一剂量和所述T细胞的连续剂量的双剂量来给予，其中所述第一剂量和所述第二剂量中的一个或两个包括给予T细胞的所述多个组合物。
108.根据实施方案107所述的方法，其中所述连续剂量是在开始给予细胞的所述第一剂量后至少或超过约7天或14天且小于约28天的时间点给予。
109.一种评估对细胞疗法的反应的可能性的方法，所述方法包括：
(a)评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性。
110.根据实施方案109所述的方法，所述方法进一步包括，如果所述受试者可能实现反应，则将所述细胞疗法给予所述受试者。
111.一种选择用于治疗的受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。
112.根据实施方案111所述的方法，所述方法进一步包括将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的所述受试者。
113.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)基于通过将生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对细胞疗法的反应的可能性的结果，选择可能对用所述细胞疗法治疗有反应的受试者，其中所述一种或多种分析物选自铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
114.根据实施方案109-113中任一项所述的方法，其中：
如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现反应。
115.根据实施方案109-114中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的所述分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现反应。
116.根据实施方案109-114中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的所述分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续展现稳定疾病(SD)和/或进行性疾病(PD)。
117.根据实施方案109-116中任一项所述的方法，其中所述反应包括客观反应。
118.根据实施方案117所述的方法，其中所述客观反应包括完全反应(CR)或部分反应(PR)。
119.一种评估对细胞疗法的持久反应的可能性的方法，所述方法包括：
(a)评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较，由此确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性。
120.根据实施方案119所述的方法，所述方法进一步包括，如果所述受试者可能实现反应，则将所述细胞疗法给予所述受试者。
121.一种选择用于治疗的受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性的结果，选择可能对治疗有反应的受试者。
122.根据实施方案121所述的方法，所述方法进一步包括将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
123.一种治疗方法，所述方法包括：
(a)基于通过将生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度与阈值水平单独比较来确定受试者将实现对所述细胞疗法的持久反应的可能性的结果，选择可能对用细胞疗法治疗有反应的受试者，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、CXCL-10、IL-8、MCP-1和MIP-1β，其中：
所述生物样品来自作为用所述细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法包括一定剂量的表达重组受体的遗传工程化细胞；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)将所述细胞疗法给予被选择用于治疗的受试者。
124.根据实施方案120-123中任一项所述的方法，其中：
如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，则所述受试者可能实现持久反应，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度高于阈值水平，则所述受试者不可能实现持久反应。
125.根据实施方案120-124中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者继续实现持久反应。
126.根据实施方案120-124中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中的分析物的中值或平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在11％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中在给予用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后所述组中的每名受试者未实现持久反应。
127.根据实施方案120-126中任一项所述的方法，其中所述持久反应包括持续等于或大于3个月、4个月、5个月或6个月的完全反应(CR)或部分反应(PR)。
128.根据实施方案120-127中任一项所述的方法，其中所述持久反应包括持续至少3个月的CR或PR。
129.一种评估在给予细胞疗法后发生毒性的风险的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：
所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险。
130.一种鉴定受试者的方法，所述方法包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：
所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)基于通过将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，鉴定具有在给予细胞疗法之后发生毒性的风险的受试者。
131.一种治疗方法，其包括：
(a)评估来自受试者的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度或所述受试者中肿瘤负荷的体积量度，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-α2、MCP-1、MIP-1α和MIP-1β，其中：
所述受试者是用所述细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及；以及
(b)将所述样品中所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度与阈值水平单独比较，由此确定在给予所述细胞疗法之后发生毒性的风险；以及
(c)在所述评估后或基于所述评估的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗。
132.根据实施方案129-131中任一项所述的方法，其中所述生物样品是血液或血浆样品。
133.根据实施方案129-132中任一项所述的方法，其中肿瘤负荷的所述体积量度是尺寸乘积之和(SPD)，或者是基于身体的CT和/或MRI成像或其他成像的体积测量。
134.根据实施方案133所述的方法，其中肿瘤负荷的所述体积量度是在治疗之前、在单采术之前、或在细胞产物制造之前进行。
135.根据实施方案129-134中任一项所述的方法，所述方法进一步包括，如果所述受试者被给予细胞疗法并且被鉴定为具有发生毒性的风险，则监测所述受试者的毒性症状。
136.根据实施方案129-135中任一项所述的方法，其中：
如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度高于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的风险，并且如果一种或多种所述分析物的水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度低于阈值水平，则所述受试者具有发生毒性的低风险。
137.根据实施方案129-136中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中所述分析物的中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在高于所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的标准偏差内，或者是或是约所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续不发生任何毒性。
138.根据实施方案129-137中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在接受细胞疗法之前从受试者组获得的生物样品中所述分析物的中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在低于所述中值或平均水平、量或浓度或肿瘤负荷的体积量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物之后继续发生毒性。
139.根据实施方案129-138中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性或CRS。
140.根据实施方案129-139中任一项所述的方法，其中所述毒性是1级或更高级的神经毒性或CRS。
141.根据实施方案129-140中任一项所述的方法，其中：
所述毒性是严重神经毒性或者是2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；或
所述毒性是严重CRS或者包含2级或更高级或3级或更高级的CRS。
142.根据实施方案129-141中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性，并且所述肿瘤负荷的体积量度是SPD，并且所述一种或多种分析物选自LDH、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α和MIP-1β。
143.根据实施方案129-141中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性，并且评估一种或多种分析物，并且所述分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β。
144.根据实施方案129-141中任一项所述的方法，其中所述毒性是神经毒性，并且评估一种或多种分析物并且所述分析物选自IL-8、IL-10和CXCL10。
145.根据实施方案144所述的方法，其中所述神经毒性是严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性。
146.根据实施方案129-141中任一项所述的方法，其中毒性是CRS，并且所述一种或多种分析物或肿瘤负荷的体积量度选自LDH、SPD、CRP、d-二聚体、IL-6、IL-15、TNF-α和MIP-1α。
147.根据实施方案146所述的方法，其中所述CRS是严重CRS或3级或更高级的CRS。
148.根据实施方案129-147中任一项所述的方法，其中如果所述受试者被鉴定为具有发生毒性的风险，则向所述受试者给予：
(a)(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予要在以下时间给予：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或
(b)具有降低的剂量或如下剂量的细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(c)在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予所述受试者。
149.根据实施方案148所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
150.根据实施方案149所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
151.根据实施方案148所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含类固醇(任选地地塞米松)。
152.根据实施方案129-142和148-151中任一项所述的方法，其中评估体积量度并且所述体积量度是SPD，并且所述阈值水平为或为约30cm2，为或为约40cm2，为或为约50cm2，为或为约60cm2，或者为或为约70cm2。
153.根据实施方案152所述的方法，其中所述体积量度是SPD并且所述阈值水平为或为约50cm2。
154.根据实施方案129-151中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物是或包含LDH，并且所述阈值水平为或为约300单位/升，为或为约400单位/升，为或为约500单位/升，或者为或为约600单位/升。
155.根据实施方案154中任一项所述的方法，其中所述分析物是LDH并且所述阈值水平为或为约500单位/升。
156.根据实施方案109-155中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。
157.根据实施方案109-156中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
158.根据实施方案109-157中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
159.根据实施方案109-158中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
160.根据实施方案109-159中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
161.根据实施方案109-160中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。
162.根据实施方案161所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞，或者对于所述受试者是自体的。
163.一种选择用于治疗的受试者的方法，所述方法包括：
(a)使生物样品与能够检测一种或多种分析物或对所述一种或多种分析物具有特异性的一种或多种试剂接触，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)，
其中：
所述生物样品来自作为使用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且
所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞；以及
(b)选择受试者，在所述受试者中：
(i)所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，由此鉴定具有发生针对所述细胞疗法的毒性的风险的受试者；或
(ii)所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平。
164.根据实施方案163所述的方法，其中：
(a)选择(i)中的受试者用于向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予要在以下时间给予：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或
(b)选择(i)中的受试者用于以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(c)选择(i)中的受试者用于在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
165.根据实施方案163或实施方案164所述的方法，其中选择(i)中的受试者，并且所述方法进一步包含：
(a)向所述受试者给予(1)能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，和(2)所述细胞疗法，其中所述药剂的给予是在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或
(b)以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(c)向所述受试者给予细胞疗法如下剂量的细胞疗法的遗传工程化细胞：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
(d)在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
166.根据实施方案163或实施方案164所述的方法，其中：
(a)选择(ii)中的受试者用于任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予细胞疗法；
(b)选择(ii)中的受试者用于向所述受试者给予细胞疗法，其中所述细胞疗法不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或
(c)选择(ii)中的受试者用于在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予细胞疗法。
167.根据实施方案163、164或166所述的方法，其中选择(ii)中的受试者，并且所述方法进一步包括任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
168.根据实施方案163、164、166和167中任一项所述的方法，其中选择(ii)中的受试者，并且所述方法进一步包括向所述受试者给予所述细胞疗法，其中：
所述细胞疗法的所述给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或
要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
169.一种治疗方法，其包括：
(a)测定生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，其中所述生物样品来自作为任选地使用细胞疗法治疗的候选者的受试者，所述细胞疗法任选地包括用于治疗疾病或病症的表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)；以及
(b)在所述测定后或基于所述测定的结果，向所述受试者给予所述细胞疗法以及任选地能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗。
170.一种治疗患有或怀疑患有疾病或病症的受试者的方法，所述方法包括：
(1)向所述受试者给予用于治疗或特异性识别所述疾病或病症的细胞疗法，所述细胞疗法包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，以及任选地，(2)向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，其中：
所述给予是在一个或多个治疗前参数的评估后进行，或者是以基于一个或多个治疗前参数的所述评估的结果的方式来进行，其中：
(a)所述一个或多个治疗前参数包含与所述受试者中所述疾病或病症的负荷相关或相关联，或者是所述受试者中所述疾病或病症的负荷的替代物的参数，所述参数任选地包含一种或多种分析物和/或一种或多种体积或其他身体测量，
(b)所述一个或多个治疗前参数的所述评估包括评估是或来自从所述受试者获得的样品的生物样品中的量或水平、一种或多种分析物的水平、量或浓度，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得，其中所述样品是在给予所述细胞疗法之前，并且任选地在单采术之前或在制造用于给予的细胞之前，从所述受试者获得，和/或所述一种或多种分析物与疾病负荷相关和/或所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)；和/或
(c)所述一个或多个治疗前参数的所述评估任选地包括评估所述受试者中所述疾病或病症的体积测量，所述体积测量任选地是通过成像获得的测量，任选地尺寸乘积之和(SPD)结果或一种或多种其他体积测量，任选地基于对身体进行的CT和/或MRI成像或其他成像，所述体积测量是在治疗之前并且任选地在单采术或制造细胞之前进行。
171.根据实施方案170所述的方法，其中所述一个或多个治疗前参数的评估包括测定一种或多种分析物，所述测定包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述一种或多种分析物的试剂与所述生物样品接触，并测定所述一种或多种分析物在所述生物样品中的水平、量或浓度。
172.根据实施方案170或实施方案171所述的方法，其中所述一个或多个治疗前参数的评估包括(A)评估是或来自在治疗之前和/或在单采术或细胞加工之前从所述受试者获得的样品的生物样品中任选地与疾病负荷相关的一种或多种分析物的水平、量或浓度，和(B)评估疾病负荷的体积量度，其中疾病负荷的所述量度任选地是尺寸乘积之和(SPD)结果或一种或多种其他体积测量，任选地基于对身体进行的CT和/或MRI成像或其他成像和/或是在治疗之前、在单采术之前、或在细胞产物制造之前进行。
173.根据实施方案169-172中任一项所述的方法，其中，如果从所述治疗前评估得到或通过所述治疗前评估获得的所述水平、量或浓度和/或量度或其组合等于或高于阈值水平：
所述给予包括向所述受试者进一步给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的所述药剂或其他治疗，任选地其中所述进一步给予是在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，或在4、5或6天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或
给予所述受试者的所述细胞疗法是按以下剂量给予：(A)如与所述水平、量或浓度和/或量度或其组合低于所述阈值水平的情况相比降低的剂量，或(B)与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关的剂量，或(C)与最大耐受剂量或批准的剂量或最大批准剂量相比降低的剂量，用于患有所述疾病或病症的受试者或用于治疗所述疾病或病症；和/或
向所述受试者给予所述细胞疗法是在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下进行或规定要在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下进行，任选地其中如果所述水平、量、浓度、量度或浓度低于所述阈值或没有被评估，则要将所述细胞疗法在门诊基础上或在没有入院一天或多天或过夜的情况下以其他方式给予受试者。
174.根据实施方案169-173中任一项所述的方法，其中，如果从所述治疗前评估得到或通过所述治疗前评估获得的所述水平、量或浓度和/或量度或其组合低于阈值水平：
所述细胞疗法的所述给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或
要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者；和/或
给予所述受试者的所述细胞疗法是按以下剂量给予：(A)比在所述水平、量或浓度和/或量度或其组合等于或高于所述阈值水平的情况下会给予的剂量高的剂量，任选地是T细胞或工程化T细胞或指定表型的T细胞的量，或(B)为或为约最大耐受剂量或批准用于治疗患有所述疾病或病症的受试者的最大剂量的剂量，任选地是T细胞或工程化T细胞或指定表型的T细胞的量。
175.一种预防性治疗方法，所述方法包括向受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗，其中：
所述受试者是任选地用细胞疗法治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括用于治疗疾病或病症的表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物；并且
在一个或多个治疗前参数的评估后或基于所述评估，所述受试者已被鉴定为具有发生毒性的风险，其中：
(a)所述一个或多个治疗前参数包含与所述受试者中所述疾病或病症的负荷相关或相关联，或者是所述受试者中所述疾病或病症的负荷的替代物的参数，所述参数任选地包含一种或多种分析物和/或一种或多种体积或其他身体测量，或
(b)所述一个或多个治疗前参数的所述评估包括评估是或来自从所述受试者获得的样品的生物样品中的量或水平，从受试者获得或从来自受试者的样品获得的生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度，一种或多种分析物的水平、量或浓度，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中：
(i)所述一个或多个治疗前参数包含与所述受试者中所述疾病或病症的负荷相关或相关联，或者是所述受试者中所述疾病或病症的负荷的替代物的参数，所述参数任选地包含一种或多种分析物和/或一种或多种体积或其他身体测量，
(ii)所述一个或多个治疗前参数的所述评估包括评估是或来自从所述受试者获得的样品的生物样品中的量或水平、一种或多种分析物的水平、量或浓度，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得，其中所述样品是在给予所述细胞疗法之前，并且任选地在单采术之前或在制造用于给予的细胞之前，从所述受试者获得，和/或所述一种或多种分析物与疾病负荷相关和/或所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)；和/或
(ii)所述一个或多个治疗前参数的所述评估任选地包括评估所述受试者中所述疾病或病症的体积测量，所述体积测量任选地是通过成像获得的测量，任选地尺寸乘积之和(SPD)结果或一种或多种其他体积测量，任选地基于对身体进行的CT和/或MRI成像或其他成像，所述体积测量是在治疗之前并且任选地在单采术或制造细胞之前进行；或
其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
176.根据实施方案175所述的方法，其中所述测定包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度，和/或其中如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则将所述药剂给予所述受试者，并且任选地其中在以下时间给予所述药剂：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。
177.根据实施方案175或实施方案176所述的方法，其中所述一个或多个治疗前参数的评估包括(A)评估是或来自在治疗之前和/或在单采术或细胞加工之前从所述受试者获得的样品的生物样品中任选地与疾病负荷相关的一种或多种分析物的水平、量或浓度，和(B)评估疾病负荷的体积量度，其中疾病负荷的所述量度任选地是尺寸乘积之和(SPD)结果或一种或多种其他体积测量，任选地基于对身体进行的CT和/或MRI成像或其他成像和/或是在治疗之前、在单采术之前、或在细胞产物制造之前进行。
178.根据实施方案169-177中任一项所述的方法，其中所述阈值水平是在在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中所述分析物或参数的平均水平、量或浓度或量度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度或量度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
179.根据实施方案169-178中任一项所述的方法，其中所述试剂是特异性地结合至所述分析物的结合分子。
180.根据实施方案169-179中任一项所述的方法，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
181.根据实施方案169-180中任一项所述的方法，其中所述生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。
182.根据实施方案169-181中任一项所述的方法，其中针对所述分析物测定或评估细胞包括免疫测定。
183.根据实施方案169-182中任一项所述的方法，其中所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高级的神经毒性或CRS。
184.根据实施方案169-183中任一项所述的方法，其中：
所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；和/或
所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高级的或者3级或更高级的CRS。
185.根据实施方案169-184中任一项所述的方法，其中所述毒性与脑水肿相关。
186.根据实施方案169-185中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。
187.根据实施方案186所述的方法，其中所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
188.根据实施方案169-187中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
189.根据实施方案169-188中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
190.根据实施方案169-189中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。
191.根据实施方案169-190中任一项所述的方法，其中所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
192.根据实施方案186所述的方法，其中所述类固醇是或包含地塞米松。
193.根据实施方案186所述的方法，其中能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)或上调微小RNA-124(miR-124)。
194.根据实施方案193所述的方法，其中能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
195.根据实施方案193或实施方案194所述的方法，其中所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
196.根据实施方案193-195中任一项所述的方法，其中所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。
197.根据实施方案193-196中任一项所述的方法，其中所述药剂选自：
PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；
艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段；或前述任何项的组合。
198.根据实施方案193-197中任一项所述的方法，其中所述抑制剂是PLX-3397。
199.根据实施方案1-23和109-198中任一项所述的方法，其中所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。
200.根据实施方案1-23和109-199中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
201.根据实施方案1-23和109-200中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
202.根据实施方案1-23和109-201中任一项所述的方法，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
203.根据实施方案1-23和109-202中任一项所述的方法，其中所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
204.根据实施方案1-23和109-203中任一项所述的方法，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
205.根据实施方案1-23和109-204中任一项所述的方法，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
206.根据实施方案205所述的方法，其中所述CAR包含特异性地结合至所述抗原的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
207.根据实施方案1-23和109-206中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。
208.根据实施方案207所述的方法，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
209.根据实施方案1-23和109-208中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予从或从约1x105至1x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，从或从约5x105至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，或从或从约1x106至1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，每个都包含端值。
210.根据实施方案1-23和109-209中任一项所述的方法，其中所述细胞疗法包括给予不超过1x108个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x107个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过1x106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)，不超过0.5x106个总重组受体表达细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC)。
211.根据实施方案109-210中任一项所述的方法，其中与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含小于或小于约5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如小于或小于约2.5x107、小于或小于约1.0x107、小于或小于约5.0x106、小于或小于约1.0x106、小于或小于约5.0x105、或者小于或小于约1x105个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
212.根据实施方案109-211中任一项所述的方法，其中与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x105至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如1x105至2.5x107、1x105至1.0x107、1x105至5.0x106、1x105至1.0x106、1.0x105至5.0x105、5.0x105至5x107、5x105至2.5x107、5x105至1.0x107、5x105至5.0x106、5x105至1.0x106、1.0x106至5x107、1x106至2.5x107、1x106至1.0x107、1x106至5.0x106、5.0x106至5x107、5x106至2.5x107、5x106至1.0x107、1.0x107至5x107、1x107至2.5x107或2.5x107至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
213.根据实施方案109-212中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对于所述受试者是自体的。
214.根据实施方案109-213中任一项所述的方法，其中所述工程化细胞对于所述受试者是同种异体的。
215.根据实施方案109-214中任一项所述的方法，其中所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
216.根据实施方案163-215中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物是LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MCP-1β。
217.根据实施方案163-215中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、MCP-1和MIP-1β，并且所述毒性是神经毒性。
218.根据实施方案163-215中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物选自IL-8和IL-10，并且所述毒性是神经毒性，任选地严重神经毒性或3级或更高级的神经毒性。
219.根据实施方案163-215中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β，并且所述毒性是CRS或神经毒性。
220.根据实施方案109-219中任一项所述的方法，其中所述一种或多种分析物是或包含LDH。
221.一种包含一个或多个剂量的细胞疗法和给予所述细胞疗法的说明书的制品，每个剂量包含表达嵌合抗原受体(CAR)的细胞，其中所述说明书规定：
要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，所述NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；并且
所述说明书规定给予一定数量的T细胞或指定表型的细胞，或者规定给予对应于或含有所述规定细胞数量的量或体积的一种或多种配制品，其中细胞的所述规定数量包含介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108个CAR表达T细胞之间(包括端值)、介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1.5x108或约1.5x108个CAR表达T细胞之间、5x107或约5x107个CAR表达T细胞、1x108或约1x108个CAR表达T细胞、或1.5x108或约1.5x108个CAR表达T细胞、介于2.5x107或约2.5x107个CD8+CAR表达T细胞与5x107或约5x107个CD8+CAR表达T细胞之间(包括端值)、介于2.5x107或约2.5x107个CAR表达T细胞与0.75x108或约0.75x108个CD8+CAR表达T细胞之间、或者2.5x107或约2.5x107个CD8+CAR表达T细胞、5x107或约5x107个CAR表达T细胞、或者0.75x108或约0.75x108个CD8+CAR表达T细胞，或者给予前述任一项的存活群体。
222.根据实施方案221所述的制品，其中所述说明书规定以限定比率的表达所述CAR的CD4+细胞与CD8+细胞给予所述细胞疗法，或者规定给予对应于这个限定比率的量或体积的所述一种或多种配制品，或者包含具有这个比率的所述细胞的配制品，或者包含这个比率的表达所述CAR的所述细胞和/或这个比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
223.一种包含细胞疗法、或细胞疗法的多种组合物之一以及用于给予所述细胞疗法的说明书的制品，所述细胞疗法包括表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述说明书规定：
T细胞的所述剂量要以限定比率的表达所述CAR的CD4+细胞与表达所述CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞来给予，所述比率为约或为1:1；并且
要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，所述NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)的原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)或3B级滤泡性淋巴瘤。
224.一种包含细胞疗法、或细胞疗法的多种组合物之一以及用于给予所述细胞疗法的说明书的制品，所述细胞疗法包括表达嵌合抗原受体(CAR)的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述说明书规定：
要将细胞的所述剂量给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者，任选地NHL选自侵袭性NHL、NOS(从头的和从惰性转化的)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或滤泡性淋巴瘤(FL)，任选地3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)；
要给予的T细胞的所述剂量包含介于5x107或约5x107个CAR表达T细胞与1x108个CAR表达T细胞之间，包括端值；并且
T细胞的所述剂量要以限定比率的表达所述CAR的CD4+细胞与表达所述CAR的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞来给予，所述比率为约或为1:1。
225.根据实施方案222或实施方案223所述的制品，其中所述说明书进一步规定要将所述细胞疗法给予被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态和/或被鉴定为或已被鉴定为具有0或1的ECOG状态的受试者。
226.根据实施方案221-225中任一项所述的制品，其中：
所述说明书规定，所述给予是在如下受试者中进行：紧临给予细胞的所述剂量之前或者在或在约给予细胞的所述剂量1个月内，所述受试者没有接受能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或治疗；和/或
所述说明书没有规定，给予在给予细胞的所述剂量之前已经给予抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)，和/或尚未给予类固醇(任选地地塞米松)的受试者；和/或
所述说明书没有规定，给予如下药剂：所述药剂是抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体(任选地托珠单抗或司妥昔单抗)、类固醇(任选地地塞米松)和/或用于预防性降低CRS或神经毒性的风险或治疗CRS或神经毒性的目的的药剂；和/或没有规定，在给予细胞的所述剂量之后的一定时间段内给予所述药剂，所述时间段任选地为或为约1、2、3、4、5天，或任选地为或为约6、7、8、9、10、11天，或任选地为1、2、3或4周；和/或没有规定，在所述受试者展现任选地除了发热以外的神经毒性和/或CRS的体征或症状之前或除非所述受试者展现任选地除了发热以外的神经毒性和/或CRS的体征或症状，给予所述药剂，任选地其中所述发热不是持续的发热或所述发热在用退热药治疗后被或已经被降低或降低超过1℃；和/或
所述说明书规定，任选地除非在所述制品中的说明书或信息中以其他方式鉴定出所述受试者或所述受试者的细胞特有的风险因子，或任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，在门诊基础上和/或在不使所述受试者住院的情况下和/或不在医院过夜停留的情况下和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下给予所述细胞剂量。
227.根据实施方案226所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果在门诊基础上在不需要住院或在医院过夜停留的情况下给予所述细胞剂量之后，所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则要使所述受试者住院或在医院过夜停留和/或要给予所述受试者用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
228.根据实施方案226或实施方案227所述的制品，其中所述药剂是或包含抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体，任选地托珠单抗或司妥昔单抗；和/或类固醇，任选地地塞米松。
229.根据实施方案221-228中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述受试者患有特征为从头或从惰性疾病转化的DLBCL和/或未患从MZL和CLL(里希特氏)转化的DLBCL。
230.根据实施方案221-229中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述受试者未患原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)。
231.根据实施方案221-230中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述细胞的给予是在被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤的受试者中进行。
232.根据实施方案221-231中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述细胞疗法的给予用于如下受试者：所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤，被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤，任选地化疗难治性DLBCL；没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发。
233.根据实施方案221-232中任一项所述的制品，其中所述说明书规定向受试者进一步给予另外的治疗剂或疗法，任选地并非细胞疗法，任选地并非CAR+T细胞疗法。
234.根据实施方案233所述的制品，其中所述另外的治疗剂或疗法是用于治疗所述NHL或恶性肿瘤和/或增加细胞的所述剂量的持久性、活性和/或功效的药剂。
235.根据实施方案233或实施方案234所述的制品，其中所述说明书规定，所述另外的治疗剂或疗法的给予是在给予细胞的所述剂量后1个月内、2个月内或3个月内，不展现对所述细胞疗法的反应，任选地不展现CR或OR的受试者中进行。
236.根据实施方案233-235中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述另外的治疗剂或疗法的给予是在如下受试者中进行：
所述受试者在用先前疗法(任选地使用化学治疗剂的先前疗法)治疗后被鉴定为或已被鉴定为患有稳定或进行性疾病(SD/PD)；
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有为2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)；或
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有从MZL和CLL转化的DLBCL。
237.根据实施方案233-236中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，所述另外的治疗剂或疗法用于在开始给予细胞的所述剂量之前、与开始给予细胞的所述剂量一起、或在开始给予细胞的所述剂量的同时和/或在开始给予细胞的所述剂量之后给予。
238.根据实施方案221-237中任一项所述的制品，其中所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域以及衍生自任选地是CD3ζ的含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域。
239.根据实施方案221-238中任一项所述的制品，其中所述抗原是B细胞抗原，其任选地是CD19。
240.根据实施方案221-239中任一项所述的制品，所述制品进一步包含用于与淋巴细胞清除疗法一起使用、在所述淋巴细胞清除疗法之后使用或结合所述淋巴细胞清除疗法使用的说明书，所述淋巴细胞清除疗法任选地包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。
241.根据实施方案240所述的制品，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天以约200-400mg/m2，任选地以或以约300mg/m2(包括端值)给予环磷酰胺，和/或以约20-40mg/m2，任选地30mg/m2给予氟达拉滨，持续2-4天，任选地持续3天。
242.根据实施方案240或实施方案241所述的制品，其中所述淋巴细胞清除疗法包括每天以或以约300mg/m2给予环磷酰胺，并以约30mg/m2给予氟达拉滨，持续3天。
243.根据实施方案221-242中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，任选地除非或直到所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
244.根据实施方案243所述的制品，其中如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则所述说明书进一步规定，要使所述受试者住院或在医院过夜停留和/或要给予所述受试者用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
245.根据实施方案221-244中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，所述细胞疗法用于肠胃外给药，任选静脉内给药。
246.根据实施方案221-245中任一项所述的制品，其中所述细胞疗法包括从所述受试者获得的原代T细胞。
247.根据实施方案221-246中任一项所述的制品，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
248.根据实施方案221-246中任一项所述的制品，其中所述T细胞对于所述受试者是同种异体的。
249.根据实施方案221-248中任一项所述的制品，其中所述制品包含所述细胞疗法的多种组合物之一，所述多种组合物包含包括CD4+T细胞或CD8+T细胞的遗传工程化细胞的第一组合物，其中所述说明书规定，所述第一组合物是与包含所述CD4+T细胞或所述CD8+T细胞中的另一种的第二组合物一起使用，任选地其中所述第一组合物的细胞和相同组合物的细胞来自相同受试者。
250.根据实施方案249所述的制品，其中所述说明书规定，所述第一组合物和第二组合物要以限定比率的表达所述重组受体的CD4+细胞与表达所述重组受体的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞来给予，所述比率任选地为约1:1或者介于约1:3与约3:1之间。
251.根据实施方案250所述的制品，其中所述限定比率为或为约1:1。
252.根据实施方案221-251中任一项所述的制品，其中所述组合物进一步包含冷冻保护剂和/或所述制品进一步包括用于在给予所述受试者之前将所述组合物解冻的说明书。
253.根据实施方案249-252中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时给予包含所述CD4+T细胞的组合物和包含所述CD8+T细胞的组合物。
254.根据实施方案249-253中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟给予包含所述CD4+T细胞的组合物和包含所述CD8+T细胞的组合物。
255.根据实施方案249-254中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，在给予包含所述CD8+细胞的组合物之前给予包含所述CD4+T细胞的组合物。
256.根据实施方案249-254中任一项所述的制品，其中所述说明书规定，在给予包含所述CD4+细胞的组合物之前给予包含所述CD8+T细胞的组合物。
257.一种制品，所述制品包含能够检测一种或多种分析物的一种或多种试剂，和使用所述试剂测定来自受试者的生物样品的说明书，所述受试者是任选地使用细胞疗法的治疗的候选者，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
258.根据实施方案257所述的制品，所述制品进一步包含所述细胞疗法和/或进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。
259.根据实施方案257或实施方案258所述的制品，所述制品进一步包含用于治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于在所述受试者中给予治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
260.根据实施方案257-259中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于所述分析物的阈值水平：
在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时；和/或
以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予所述细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
261.根据实施方案257-259中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于所述分析物的阈值水平，则任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
262.根据实施方案257-261中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定将所述细胞疗法给予所述受试者，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平：
所述细胞疗法的给予不包括在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或
要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
263.根据实施方案257-262中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
264.一种制品，所述制品包含：
细胞疗法，所述细胞疗法任选地包括表达重组受体的遗传工程化细胞的剂量或组合物，和
用于在生物样品中对生物样品中一种或多种分析物的水平或量或浓度的评估后或基于所述评估的结果给予所述细胞疗法的说明书，所述生物样品是在给予所述细胞疗法之前从所述受试者获得和/或所述生物样品不包含所述重组受体和/或所述工程化细胞，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
265.根据实施方案264所述的制品，其中所述评估包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。
266.根据实施方案265所述的制品，所述制品进一步包含所述试剂和/或进一步包含用于与用于检测所述分析物的所述试剂一起使用、在用于检测所述分析物的所述试剂之前使用和/或结合用于检测所述分析物的所述试剂使用的说明书。
267.根据实施方案264-266中任一项所述的制品，所述制品进一步包含治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗和/或用于在所述受试者中给予治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的一种或多种药剂或治疗的说明书。
268.根据实施方案264-267中任一项所述的制品，其中用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平：
在以下时间向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂或其他治疗：(i)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞之前，(ii)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞的1、2或3天内，(iii)与开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞相伴随，和/或(iv)在开始给予所述治疗性细胞组合物或所述遗传工程化细胞之后第一次发热时；和/或
以降低的剂量或如下剂量向所述受试者给予所述细胞疗法：与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关，或在大多数受试者和/或大多数患有所述受试者患有或怀疑患有的疾病或病症的受试者中与给予所述细胞疗法后发生毒性或严重毒性的风险无关；和/或
在住院环境中和/或在入院一天或多天的情况下向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中要在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下将所述细胞疗法以其他方式给予受试者。
269.根据实施方案264-268中任一项所述的制品，其中用于给予所述细胞疗法的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平，任选地在门诊基础上或在没有入院一天或多天的情况下，任选地以未降低的剂量向所述受试者给予所述细胞疗法。
270.根据实施方案264-269中任一项所述的制品，其中所述说明书进一步规定将所述细胞疗法给予所述受试者，并且其中所述说明书进一步规定，如果所述分析物的水平、量或浓度低于阈值水平：
在给予所述细胞疗法之前或伴随给予所述细胞疗法和/或在发生除了发热以外的毒性的体征或症状之前，不给予能够治疗、预防、延迟或减弱所述毒性的发生的药剂或治疗；和/或
要将或可以将所述细胞疗法的给予在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
271.根据实施方案264-270中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
272.一种制品，所述制品包含能够治疗、预防、延迟、降低或减弱毒性发生或毒性发生风险的药剂，以及用于在生物样品中对生物样品中一种或多种分析物的水平、量或浓度的评估后或基于所述评估的结果给予所述药剂的说明书，其中所述一种或多种分析物选自LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、MIP-1β、嗜酸性粒细胞趋化因子、G-CSF、IL-1Rα、IL-1Rβ、IP-10、穿孔素和D-二聚体(纤维蛋白降解产物)。
273.根据实施方案272所述的制品，其中所述评估包括检测，所述检测任选地包括使能够直接或间接检测所述分析物的试剂与所述生物样品接触，和确定所述生物样品中所述分析物的水平、量或浓度。
274.根据实施方案272或实施方案273所述的制品，其中所述说明书规定，要在以下时间给予所述药剂：i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者后第一次发热时，和/或所述制品进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。
275.根据实施方案272-274中任一项所述的制品，其中所述生物样品是在给予所述药剂或细胞疗法之前从所述受试者获得。
276.根据实施方案257-275中任一项所述的制品，其中所述试剂是特异性地结合至所述分析物的结合分子。
277.根据实施方案257-276中任一项所述的制品，其中所述试剂是抗体或其抗原结合片段。
278.根据实施方案257-277中任一项所述的制品，其中所述生物样品是或者获得自血液、血浆或血清样品。
279.根据实施方案272-278中任一项所述的制品，所述制品进一步包含用于检测所述分析物的试剂和/或进一步包含用于与用于检测所述分析物的所述试剂一起使用、在用于检测所述分析物的所述试剂之前使用和/或结合用于检测所述分析物的所述试剂使用的说明书。
280.根据实施方案272-279中任一项所述的制品，所述制品进一步包含所述细胞疗法和/或进一步包含与使用所述细胞疗法的治疗一起使用、在使用所述细胞疗法的治疗之前使用和/或结合使用所述细胞疗法的治疗使用的说明书。
281.根据实施方案272-280中任一项所述的制品，其中用于给予所述药剂的所述说明书规定，如果所述样品中所述分析物的水平、量或浓度等于或高于阈值水平，则向所述受试者给予所述药剂。
282.根据实施方案281所述的制品，其中所述说明书进一步规定将细胞疗法给予所述受试者，其中所述药剂的给予要在以下时间进行：(i)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之前，(ii)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者的1、2或3天内，(iii)与开始将所述细胞疗法给予所述受试者相伴随，和/或(iv)在开始将所述细胞疗法给予所述受试者之后第一次发热时。
283.根据实施方案272-282中任一项所述的制品，其中用于给予所述药剂的所述说明书规定，如果所述水平、量或浓度低于阈值水平，则向所述受试者给予所述细胞疗法，任选地其中所述说明书规定，要将或可以将所述细胞疗法在门诊环境中和/或在不使所述受试者住院过夜或连续住院一或多天的情况下和/或在不使所述受试者住院一或多天的情况下给予所述受试者。
284.根据实施方案272-283中任一项所述的制品，其中所述阈值水平是在接受表达重组受体的治疗性细胞组合物之前从一组受试者获得的生物样品中的分析物的平均水平、量或浓度的25％内、在20％内、在15％内、在10％内或在5％内，和/或是在所述平均水平、量或浓度的标准偏差内，其中所述组中的每名受试者在接受用于治疗相同疾病或病症的表达重组受体的治疗性细胞组合物后继续发生毒性。
285.根据实施方案257-284中任一项所述的制品，其中针对所述分析物测定或评估细胞是通过免疫测定进行的。
286.根据实施方案257-285中任一项所述的制品，其中所述毒性包含神经毒性或细胞因子释放综合征(CRS)，任选地1级或更高级的神经毒性或CRS。
287.根据实施方案257-286中任一项所述的制品，其中：
所述毒性包含严重神经毒性和/或包含2级或更高级的神经毒性、3级或更高级的神经毒性、至少延长的3级神经毒性，或者是或高于4级或5级神经毒性；和/或
所述毒性包含严重CRS和/或包含2级或更高级的或者3级或更高级的CRS。
288.根据实施方案257-287中任一项所述的制品，其中所述毒性与脑水肿相关。
289.根据实施方案257-288中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含以下中的一种或多种：类固醇；选自IL-10、IL-10R、IL-6、IL-6受体、IFNγ、IFNGR、IL-2、IL-2R/CD25、MCP-1、CCR2、CCR4、MIP1β、CCR5、TNFα、TNFR1、IL-1和IL-1Rα/IL-1β的细胞因子受体或细胞因子的拮抗剂或抑制剂；或能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的药剂。
290.根据实施方案289所述的制品，其中所述拮抗剂或抑制剂是或包含选自以下的药剂：抗体或抗原结合片段、小分子、蛋白质或肽和核酸。
291.根据实施方案257-290中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是抗IL-6抗体或抗IL6受体抗体。
292.根据实施方案257-291中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含选自以下的药剂：托珠单抗、司妥昔单抗、克拉吉珠单抗、萨瑞鲁单抗、奥洛吉珠单抗(CDP6038)、伊西莫单抗、ALD518/BMS-945429、司卢库单抗(CNTO 136)、CPSI-2634、ARGX-109、FE301和FM101。
293.根据实施方案257-292中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含托珠单抗。
294.根据实施方案257-293中任一项所述的制品，其中所述药剂或其他治疗是或包含司妥昔单抗。
295.根据实施方案289所述的制品，其中所述类固醇是或包含地塞米松。
296.根据实施方案289所述的制品，其中能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞活性或功能的所述药剂选自抗炎剂、NADPH氧化酶(NOX2)的抑制剂、钙通道阻断剂、钠通道阻断剂，抑制GM-CSF，抑制CSF1R，特异性地结合CSF-1，特异性地结合IL-34，抑制核因子κB(NF-κB)的激活，激活CB2受体和/或是CB2激动剂、磷酸二酯酶抑制剂，抑制微小RNA-155(miR-155)或上调微小RNA-124(miR-124)。
297.根据实施方案296所述的制品，其中能够预防、阻断或降低小神经胶质细胞激活或功能的所述药剂是小分子、肽、蛋白质、抗体或其抗原结合片段、抗体模拟物、适体或核酸分子。
298.根据实施方案296或实施方案297所述的制品，其中所述药剂选自米诺环素、纳洛酮、尼莫地平、利鲁唑、MOR103、来那度胺、大麻素(任选地WIN55或212-2)、静脉内免疫球蛋白(IVIg)、异丁司特、抗miR-155锁核酸(LNA)、MCS110、PLX-3297、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945、艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003。
299.根据实施方案296-298中任一项所述的制品，其中所述药剂是集落刺激因子1受体(CSF1R)的抑制剂。
300.根据实施方案296-299中任一项所述的制品，其中所述抑制剂选自：
PLX-3397、PLX647、PLX108-D1、PLX7486、JNJ-40346527、JNJ28312141、ARRY-382、AC-708、DCC-3014、5-(3-甲氧基-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苄基)嘧啶-2,4-二胺(GW2580)、AZD6495、Ki20227、BLZ945或其药用盐或前药；
艾马珠单抗、IMC-CS4、FPA008、LY-3022855、AMG-820和TG-3003，或是其抗原结合片段；或前述任何项的组合。
301.根据实施方案296-300中任一项所述的制品，其中所述抑制剂是PLX-3397。
302.根据实施方案24-48和257-301中任一项所述的制品，其中所述重组受体特异性地结合至与所述疾病或病症相关的抗原或者在与所述疾病或病症相关的病灶环境中的细胞中表达的抗原。
303.根据实施方案24-48和257-302中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是癌症。
304.根据实施方案24-48和257-303中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是骨髓瘤、白血病或淋巴瘤。
305.根据实施方案24-48和257-304中任一项所述的制品，其中所述疾病或病症是B细胞恶性肿瘤和/或是急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、成人ALL、慢性成淋巴细胞性白血病(CLL)、非霍奇金淋巴瘤(NHL)和弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
306.根据实施方案302-305中任一项所述的制品，其中所述抗原是ROR1、B细胞成熟抗原(BCMA)、碳酸酐酶9(CAIX)、tEGFR、Her2/neu(受体酪氨酸激酶erbB2)、L1-CAM、CD19、CD20、CD22、间皮素、CEA和乙型肝炎表面抗原、抗叶酸受体、CD23、CD24、CD30、CD33、CD38、CD44、EGFR、上皮糖蛋白2(EPG-2)、上皮糖蛋白40(EPG-40)、EPHa2、erb-B2、erb-B3、erb-B4、erbB二聚体、EGFR vIII、叶酸结合蛋白(FBP)、FCRL5、FCRH5、胎儿乙酰胆碱受体、GD2、GD3、HMW-MAA、IL-22R-α、IL-13R-α2、激酶插入结构域受体(kdr)、κ轻链、路易斯Y、L1细胞粘附分子(L1-CAM)、黑色素瘤相关抗原(MAGE)-A1、MAGE-A3、MAGE-A6、优先表达的黑色素瘤抗原(PRAME)、存活蛋白、TAG72、B7-H6、IL-13受体α2(IL-13Ra2)、CA9、GD3、HMW-MAA、CD171、G250/CAIX、HLA-AI MAGE Al、HLA-A2NY-ESO-1、PSCA、叶酸受体-a、CD44v6、CD44v7/8、avb6整合素、8H9、NCAM、VEGF受体、5T4、胎儿AchR、NKG2D配体、CD44v6、双重抗原、癌症-睾丸抗原、间皮素、鼠CMV、粘蛋白1(MUC1)、MUC16、PSCA、NKG2D、NY-ESO-1、MART-1、gp100、癌胚胎抗原、ROR1、TAG72、VEGF-R2、癌胚抗原(CEA)、Her2/neu、雌激素受体、孕酮受体、肝配蛋白B2、CD123、c-Met、GD-2、O-乙酰化GD2(OGD2)、CE7、Wilms肿瘤1(WT-1)、细胞周期蛋白、细胞周期蛋白A2、CCL-1、CD138、G蛋白偶联受体5D(GPCR5D)或病原体特异性抗原。
307.根据实施方案24-48和257-306中任一项所述的制品，其中所述重组受体是T细胞受体或功能性非T细胞受体。
308.根据实施方案24-48和257-307中任一项所述的制品，其中所述重组受体是嵌合抗原受体(CAR)。
309.根据实施方案308所述的制品，其中所述CAR包含与所述抗原特异性地结合的细胞外抗原识别结构域和包含ITAM的细胞内信号传导结构域，其中任选地，所述细胞内信号传导结构域包含CD3-zeta(CD3ζ)链的细胞内结构域；和/或其中所述CAR进一步包含共刺激信号传导区，所述共刺激信号传导区任选地包含CD28或4-1BB的信号传导结构域。
310.根据实施方案24-48和257-309中任一项所述的制品，其中所述工程化细胞包含T细胞，任选地CD4+和/或CD8+。
311.根据实施方案310所述的制品，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
312.根据实施方案257-311中任一项所述的制品，其中与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含小于或小于约5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如小于或小于约2.5x107、小于或小于约1.0x107、小于或小于约5.0x106、小于或小于约1.0x106、小于或小于约5.0x105、或者小于或小于约1x105个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
313.根据实施方案257-312中任一项所述的制品，其中与发生毒性或严重毒性的风险无关的所述剂量是或包含从或从约1x105至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))，如1x105至2.5x107、1x105至1.0x107、1x105至5.0x106、1x105至1.0x106、1.0x105至5.0x105、5.0x105至5x107、5x105至2.5x107、5x105至1.0x107、5x105至5.0x106、5x105至1.0x106、1.0x106至5x107、1x106至2.5x107、1x106至1.0x107、1x106至5.0x106、5.0x106至5x107、5x106至2.5x107、5x106至1.0x107、1.0x107至5x107、1x107至2.5x107或2.5x107至5x107个总重组受体表达细胞(任选地CAR+细胞、总T细胞或总外周血单核细胞(PBMC))。
314.根据实施方案257-313中任一项所述的制品，其中所述试剂被可检测地标记，任选地被荧光标记。
315.根据实施方案257-314中任一项所述的制品，其中所述一种或多种分析物是LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MCP-1β。
316.根据实施方案257-315中任一项所述的制品，其中所述一种或多种分析物是或包含LDH。
317.根据实施方案221-316中任一项所述的制品，其中：
所述CAR包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、衍生自任选地是或包含4-1BB的共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域，并且所述CAR任选地进一步包含介于所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子；
所述CAR依次包含对所述抗原具有特异性的scFv、跨膜结构域、任选地为或包含4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；或
所述CAR依次包含对所述抗原具有特异性的scFv、间隔子、跨膜结构域、任选地是4-1BB信号传导结构域的衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、和任选地是或包含CD3ζ信号传导结构域的衍生自含有ITAM的初级信号传导分子的细胞质信号传导结构域；并且其中：
所述间隔子任选地是多肽间隔子，所述多肽间隔子(a)包含免疫球蛋白铰链或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，(b)包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4铰链)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成，和/或包含约15个或更少氨基酸，并且不包含CD28细胞外区域或CD8细胞外区域，或(c)长度为或为约12个氨基酸，和/或包含免疫球蛋白铰链(任选地IgG4)或所述免疫球蛋白铰链的修饰形式的全部或一部分或由其组成；或(d)具有以下或由以下组成：SEQ ID NO:1的序列，由SEQ ID NO:2、SEQ IDNO:30、SEQ ID NO:31、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:34编码的序列，或任何前述序列的变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性，或(e)包含式X1PPX2P或由其组成，其中X1是甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸并且X2是半胱氨酸或苏氨酸；和/或
所述共刺激结构域包含SEQ ID NO:12或其变体，所述变体与所述序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性；和/或
所述初级信号传导结构域包含与其具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列同一性的SEQ ID NO:13或14或15；和/或
所述scFv包含RASQDISKYLN的CDRL1序列(SEQ ID NO:35)、SRLHSGV的CDRL2序列(SEQ ID NO:36)和/或GNTLPYTFG的CDRL3序列(SEQ ID NO:37)、和/或DYGVS的CDRH1序列(SEQ ID NO:38)、VIWGSETTYYNSALKS的CDRH2序列(SEQ ID NO:39)和/或YAMDYWG的CDRH3序列(SEQ ID NO:40)，或其中所述scFv包含FMC63的可变重链区和FMC63的可变轻链区和/或FMC63的CDRL1序列、FMC63的CDRL2序列、FMC63的CDRL3序列、FMC63的CDRH1序列、FMC63的CDRH2序列和FMC63的CDRH3序列，或者与前述任一项结合相同的表位或与前述任一项竞争结合，并且任选地其中所述scFv依次包含VH、任选地包含SEQ ID NO:24的接头和VL，和/或所述scFv包含柔性接头和/或包含如SEQ ID NO:24所述的氨基酸序列。
318.根据权利要求221-317中任一项所述的制品，其中所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示受试者是否可能展现对使用所述细胞疗法的治疗的反应。
319.根据权利要求221-317中任一项所述的制品，其中所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示在给予所述细胞疗法后受试者是否可能展现持久反应。
320.根据权利要求221-317中任一项所述的制品，其中所述说明书针对所述一种或多种分析物中的每一种单独地提供关于阈值水平的信息，所述信息指示在给予所述细胞疗法后受试者是否可能展现毒性。
VIII.定义
术语“多肽”与“蛋白质”可互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，并且不限于最小长度。多肽(包括所提供的受体和其他多肽，例如接头或肽)可以包括氨基酸残基，包括天然和/或非天然氨基酸残基。所述术语还包括多肽的表达后修饰，例如糖基化、唾液酸化、乙酰化和磷酸化。在一些方面，多肽可以含有关于自然或天然序列的修饰，只要蛋白质保持所需活性即可。这些修饰可能是故意的(如通过定点诱变)，或者可能是偶然的(如通过产生所述蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误)。
如本文所用，“受试者”是哺乳动物，如人或其他动物，并且通常是人。在一些实施方案中，给予一种或多种药剂、细胞、细胞群或组合物的受试者(例如，患者)是哺乳动物，通常是灵长类动物，如人。在一些实施方案中，所述灵长类动物是猴或猿。所述受试者可以是雄性或雌性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、幼年、青春期、成年和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，如啮齿动物。
如本文所用，“治疗(treatment)”(及其语法变体，如“治疗”(“treat”或“treating”))是指疾病或病症或障碍、或者与之相关的症状、不良效应或结果或表型的完全或部分改善或减轻。理想的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、症状的缓解、疾病的任何直接或间接病理后果的减少、预防转移、降低疾病进展的速度、改善或缓解疾病状态以及缓解或改善预后。所述术语并不意味着完全治愈疾病或完全消除任何症状或对所有症状或结果的一种或多种影响。
如本文所用，“延迟疾病的发生”意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定、抑制和/或延期疾病(如癌症)的发生。这种延迟可以具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。在一些实施方案中，足够或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体不会患上疾病。例如，可能延迟晚期癌症，如转移的发生。
如本文所用，“预防”包括在可能易患疾病但尚未被诊断患有所述疾病的受试者中提供关于所述疾病的发生或复发的预防。在一些实施方案中，所提供的细胞和组合物用于延迟疾病的发生或延缓疾病的进展。
如本文所用，“抑制”功能或活性是在与除了目的条件或参数以外的其他都相同的条件相比时，或者可替代地如与另一种条件相比，减少功能或活性。例如，与不存在所述细胞的情况下的肿瘤生长速率相比，抑制肿瘤生长的细胞降低肿瘤的生长速率。
在给予的情况下，药剂(例如，药物配制品、细胞或组合物)的“有效量”是指在所需剂量/量下和所需时间段中有效实现所需结果(如治疗或预防结果)的量。
药剂(例如，药物配制品或细胞)的“治疗有效量”是指在所需剂量下和所需时间段中有效实现所需治疗结果(如针对疾病、病症或障碍的治疗)和/或治疗的药代动力学或药效学作用的量。治疗有效量可以根据诸如以下的因素而变化：疾病状态、受试者的年龄、性别和体重、和所给予的细胞群。在一些实施方案中，所提供的方法涉及以有效量(例如，治疗有效量)给予细胞和/或组合物。
“预防有效量”是指在所需剂量下和在所需时间段中有效实现所需预防结果的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病的早期阶段之前或在疾病的早期阶段用于受试者，所以预防有效量将小于治疗有效量。在肿瘤负荷较低的情况下，在一些方面，预防有效量将高于治疗有效量。
如本文所用术语“约”是指本技术领域的技术人员容易知道的相应值的通常误差范围。本文中在提到“约”某个值或参数时包括(并描述)涉及该值或参数本身的实施方案。
除非上下文明确指示其他含义，否则如本文所用的单数形式“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物。例如，“一个/一种(a)”或“一个/一种(an)”意指“至少一个/种”或“一个/种或多个/种”。
贯穿本公开文本，要求保护的主题的各种方面以范围形式呈现。应理解，以范围形式描述仅为了方便和简洁，并且不应被视为对要求保护的主题的范围的硬性限制。因此，应将范围的描述视为已明确公开所有可能的子范围以及该范围内的单独数值。例如，在提供值的范围的情况下，应理解，该范围上限与下限之间的每个中间值以及此所述范围中的任何其他所述值或中间值涵盖于要求保护的主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在所述较小范围内，并且也涵盖于要求保护的主题内，受制于在所陈述范围内任何明确排除的限值。在所述范围包括一个或两个所述限值时，排除所包括限值中的任一个或两个的范围也包括在要求保护的主题中。无论范围的广度如何，这都适用。
如本文所用，组合物是指两种或更多种产物、物质或化合物(包括细胞)的任何混合物。其可以是溶液、悬浮液、液体、粉末、糊剂、水性、非水性或其任何组合。
如本文所用，当提及一种或多种特定细胞类型或细胞群时，“富集”是指例如与所述组合物中的总细胞数或组合物体积相比，或者相对于其他细胞类型，如通过基于所述群体或细胞表达的标记的阳性选择，或通过基于在要耗尽的所述细胞群或细胞上不存在的标记的阴性选择，增加所述细胞类型或群体的数量或百分比。所述术语不需要从组合物完全去除其他细胞、细胞类型或群体，并且不需要如此富集的细胞在被富集组合物中以等于或甚至接近100％存在。
如本文所用，细胞或细胞群针对特定标记呈“阳性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中的可检测存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的存在，其中所述染色可通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或与已知对所述标记呈阳性的细胞的水平基本上相似的水平，和/或显著高于已知对所述标记呈阴性的细胞的水平的水平。
如本文所用，细胞或细胞群对特定标记呈“阴性”的陈述是指，特定标记(通常是表面标记)在细胞上或细胞中不存在基本上可检测的存在。当提及表面标记时，所述术语是指如通过流式细胞术(例如通过用特异性地结合至所述标记的抗体染色并检测所述抗体)所检测的表面表达的不存在，其中所述染色未通过流式细胞术以如下水平检测到：显著高于在其他都相同的条件下用同种型匹配的对照或荧光减一(FMO)门控对照通过实施相同程序检测到的染色的水平，和/或显著低于已知对所述标记呈阳性的细胞的水平的水平，和/或与已知对所述标记呈阴性的细胞的水平基本上相似的水平。
如本文所用的术语“载体”是指能传播其所连接的另一核酸分子的核酸分子。所述术语包括作为自我复制核酸结构的载体以及掺入已引入其的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
除非另外定义，否则本文使用的所有技术术语、符号和其他技术和科学术语或用辞旨在具有与所要求保护的主题所属领域通常理解的含义相同的含义。在一些情况下，具有一般理解的含义的术语是为了清楚和/或为了便于参考而在本文中定义，并且本文中包括此类定义不一定被解释为表示与通常理解的实质性差异。
本申请中提及的所有出版物(包括专利文献、科学文章和数据库)都是出于所有目的通过引用以其整体并入，其并入程度如同每个单独的出版物是通过引用单独并入一般。如果本文所述的定义与通过引用并入本文的专利、申请、公开的申请和其他出版物中所述的定义冲突或以其他方式不一致，则本文所述的定义优先于通过引用并入本文的定义。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，而不应解释为限制所描述的主题。
IX.实施例
仅出于说明性目的包括以下实施例，并不意图限制本发明的范围。
实施例1：向患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者给予表达抗 CD19CAR的细胞
A.受试者和治疗
将含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物给予至患有B细胞恶性肿瘤的受试者。
实施例1.A.1
这个实施例1.A.1中描述了在将这种疗法给予患有B细胞恶性肿瘤的患者的正在进行的临床研究中经特定时间点(1.A.1)进行评价的结果。具体地，一个群组(完整群组)的(在这一时间点，五十五名(55名))成年人受试者在2个治疗线失败后患有复发性或难治性(R/R)侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)，包括从头或从惰性淋巴瘤转化(NOS)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、高级B细胞淋巴瘤(具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))、从慢性淋巴细胞白血病(CLL)或边缘区淋巴瘤(MZL)转化的DLBCL、原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。所治疗的受试者包括东部肿瘤协作组(ECOG)得分在0与2之间(中值随访期为3.2个月)的那些。完整群组不包括患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者。基于先前的同种异体干细胞移植(SCT)、继发中枢神经系统(CNS)受累或ECOG得分为2，没有排除受试者，并且对于单采术不需要最小绝对淋巴细胞计数(ALC)。
单独评估完整群组内核心亚组(完整群组内的受试者，不包括患有较差体能状态(ECOG 2)、从边缘区淋巴瘤(MZL)和/或慢性淋巴细胞白血病(CLL，里希特氏)转化的DLBCL的那些受试者，以及患有原发性纵隔大b细胞淋巴瘤(PMBCL)和3b级滤泡性淋巴瘤(FL3B)的受试者(核心群组))的受试者的结果。核心群组包括如下受试者：患有DLBCL，NOS和转化的滤泡性淋巴瘤(tFL)或高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)或高级B细胞淋巴瘤(具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中))且东部肿瘤协作组体能状态(ECOGPS)为0或1。在实施例1.A.1中的时间点，评估这个核心群组内的44名受试者的结果。
在实施例1.A.1中的所述时间点，完整和核心群组的受试者的人口统计学和基线特征示于表E1中。
*到最后一次含化疗方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发
所给予的治疗性T细胞组合物是通过包括基于免疫亲和力(例如，免疫磁性选择)从来自要治疗的单独受试者的白细胞分离术样品富集CD4+和CD8+细胞的过程来产生。将分离的CD4+和CD8+T细胞单独激活并用编码抗CD19CAR的病毒载体(例如，慢病毒载体)独立转导，之后以低体积对工程化细胞群进行单独扩增和冷冻保存。所述CAR含有衍生自鼠类抗体的抗CD19scFv(衍生自FMC63的可变区，VL-接头-VH定向)、免疫球蛋白衍生的间隔子、衍生自CD28的跨膜结构域、衍生自4-1BB的共刺激区和CD3-ζ细胞内信号传导结构域。所述病毒载体进一步含有编码截短的受体的序列，所述截短的受体用作CAR表达的替代标记；所述序列通过T2A核糖体跳跃序列与所述CAR序列隔开。
在静脉内给予之前，将冷冻保存的细胞组合物解冻。治疗性T细胞剂量是作为限定细胞组合物通过给予以约1:1的目标比率给予的经配制CD4+CAR+细胞群和经配制CD8+CAR+群体来给予。向受试者给予如下单一剂量或双剂量的CAR表达T细胞(每个单一剂量分别通过CD4+CAR表达T细胞和CD8+CAR表达T细胞的单独输注来给予)：剂量水平1(DL-1)的单一剂量，其含有5x107个总CAR表达T细胞(n＝30，对于在实施例1.A.1中评估的受试者)；DL1的双剂量，其中每个剂量的给予相隔约十四(14)天(n＝6，对于在实施例1.A.1中评估的受试者，在第1天和第14天给予，包括由于给药错误，通过二剂量时间表无意中接受两个DL2剂量的一名受试者)；或剂量水平2(DL-2)的单一剂量，其含有1x108个总CAR表达T细胞(n＝18，对于在实施例1.A.1中评估的受试者)。所给予组合物的目标剂量水平和T细胞亚组的数量示于表E2中。
在CAR+T细胞输注之前开始，受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法持续三(3)天。所述受试者在淋巴细胞清除后2-7天时接受CAR表达T细胞。
实施例1.A.2
对于实施例1.A.2，在上文此实施例1中描述的临床研究中的后续时间点，分析结果。在实施例1.A.2中的这个分析时间点，已经治疗74名患者(51名男性，23名女性)。所述受试者包括完整DLBCL群组中的六十九(69)名受试者(包括67名DLBCL NOS(45名从头，14名从FL转化，8名从CLL或MZL转化)、1名3B级FL和1名PMBCL)和MCL群组中的5名受试者。在完整(DLBCL)群组的受试者中，中值年龄为61岁(范围26，82)，中值先前疗法为3(范围1，12)，46名(67％)为化疗难治性，32名(46％)具有任何先前移植，并且至少16名(23％)患者患有双重/三重命中淋巴瘤。在1.A.2中的这个时间点评估核心群组中的四十九(49)名受试者。
B.安全性
评估在给予所述CAR-T细胞疗法后，治疗紧急不良事件(TEAE)的存在或不存在。还评估并监测受试者的神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语、脑病、肌阵挛发作、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表评级。常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)。参见发表于2009年5月28日的不良事件通用术语(CTCAE)第4版，美国卫生及公众服务部(v4.03：2010年6月14日)；和Guido Cavaletti&Paola MarmiroliNature Reviews Neurology 6,657-666(2010年12月)。还确定并监测细胞因子释放综合征(CRS)，并基于严重程度进行评级。参见Lee等人,Blood.2014；124(2):188-95。在一些情况下，在淋巴细胞清除时开始至CAR+T细胞给予后90天，报告并收集不良事件数据。
实施例1.B.1
实施例1.B.1描述了基于实施例1.A.1中的分析时间点的结果。
图1描绘观察到已经历实验室异常和在≥20％的受试者中发生的TEAE的此类受试者的百分比。除了图1中显示的TEAE以外，在≥5％患者中观察到3-4级的以下事件项：白细胞计数下降(13.6％)、脑病(12％)、高血压(7％)。所观察到的毒性程度在剂量水平1与2之间一致。
在实施例1.B.1分析中，在84％的完整群组受试者中，没有观察到严重的(3级或更高级)细胞因子释放综合征(CRS)和严重神经毒性。另外，观察到60％的完整群组受试者未发生任何等级的CRS或神经毒性。在剂量水平之间没有观察到CRS、神经毒性(NT)、sCRS或严重神经毒性(sNT)的发生率的差异。表E3汇总了在接受至少一个剂量的CAR-T细胞后28天，患者中细胞因子释放综合征(CRS)和神经毒性不良事件的发生率。如表E3中所示，在接受单一剂量DL2或双剂量DL1的任何受试者中均未观察到sCRS(3-4级)。在完整群组受试者中的16％(9/55)和核心子集受试者中的18％(8/44)中观察到严重神经毒性或严重CRS(3-4级)。11％(n＝6)的受试者接受托珠单抗，24％(n＝13)的受试者接受地塞米松。在完整群组内的ECOG2受试者中，所观察到的CRS和神经毒性的比率分别为71％和29％。
包括一名由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的患者
图2显示描绘所观察到的至CRS和/或神经毒性发作的时间的Kaplan meier曲线，用于在1.B.1中分析。如图所示，所观察到的到CRS发作和神经毒性发作的中值时间分别为5天和11天，其中在开始给予细胞疗法后不到72小时，仅11％的患者经历CRS发作。到CRS和神经毒性消退至1级或更佳的中值时间分别为5天和7天。到CRS和神经毒性完全消退的中值时间分别为5天和11天。结果与以下结论一致：受试者中任何CRS或神经毒性的早期发作率都较低。
实施例1.B.2
实施例1.B.2描述了在实施例1.B.2中时间点的评估。到此时间点，从淋巴细胞清除(LD)至给予表达CAR的T细胞后90天收集不良事件(AE)数据。在第二时间点，评价DLBCL群组(完整群组)中69名受试者的安全性，38名已接受DL1单一剂量，25名已接受DL2单一剂量，并且6名已接受DL1双剂量时间表。除了CRS或NT以外最常见的TEAE包括嗜中性粒细胞减少症(41％，28/69)、疲劳(30％，21/69)、血小板减少症(30％，21/69)和贫血(26％，18/69)。观察到一名5级TEAE弥漫性肺泡损伤。
没有观察到急性输注毒性，并且观察到完全群组中的大多数受试者(64％(44/69))没有CRS或NT，这表明可以在门诊递送表达CAR的T细胞。CAR T细胞相关毒性(包括CRS和NT)的比率在剂量水平之间没有差异。观察到安全性概况在群组和剂量水平之间是相似的。在完整群组的经历过任何等级CRS或NT的25名受试者(36％)中，21名(30％)具有CRS且14名(20％)具有NT。没有受试者具有3级CRS，并且只有1名(1％，1/69)具有4级CRS且需要ICU护理；另外29％(20/69)具有1-2级CRS。在20％的具有NT的受试者中，6％(4/69)具有1-2级且14％(10/69)具有3-4级；2名(3％)患有癫痫。没有观察到5级CRS或5级NT。没有观察到脑水肿的发生。所有CRS和NT事件都已消退，但一例1级震颤除外，其在分析时仍在持续。到首次CRS和NT发作的中值时间分别为5天(范围2，12)和10天(范围5，23)。在输注后的前72小时中，没有观察到受试者具有NT，并且观察到仅10％(7/69)具有CRS(均为1级)；在>70％的受试者中，在CRS后发生NT。总之，十三(13)名受试者(19％)需要使用抗细胞因子疗法(1名(1％)单独使用托珠单抗，6名(9％)单独使用地塞米松，或6名(9％)使用此二者)干预CRS或NT，且只有一名需要任何血管加压药支持。托珠单抗和地塞米松的中值剂量分别为1和6。中值CRS和NT持续时间分别为5天和11天。对核心群组(n＝49)的分析也显示相似的CRS和NT率。
在这个评估中，在两种剂量水平下都观察到CRS和/或NT的低发生率和晚期发作，从而支持门诊输注的可行性，如在首次发热体征或发热持续超过某一时间段时住院。没有观察到5级CRS或5级NT，并且所有严重CRS和严重NT都已消退。此外，约3名患者中的2名没有CRS或NT，从而支持可以在门诊基础上给予所述细胞。在1.B.2中评估时，四名受试者已经在门诊环境中接受治疗。此外，在接受DL1或DL2的受试者中没有观察到毒性的显著差异，表明在不增加毒性或安全性问题的风险的情况下实现了更高的反应率。
C.治疗后的反应结果
监测受试者的反应，包括通过在给予所述CAR+T细胞后1、3、6、7、12、18和24个月评估肿瘤负荷。
实施例1.C.1
实施例1.C.1描述了基于实施例1.A.1和1.B.1中的分析时间点的结果。
反应率列于表E4中。在受试者的所述群组中观察到高持久反应率，所述群组包括过度预治疗或具有较差预后和/或具有复发或难治性疾病的受试者。对于核心(n＝44)群组中所有剂量的受试者，所观察到的总体反应率(ORR)为86％，并且所观察到的完全反应(CR)率为59％。对于核心群组，在三个月时，总体反应率(ORR)为66％；在核心群组中三个月的CR率为50％。在核心群组中，3个月的ORR在剂量水平1下为58％(11/19)，在剂量水平2下为78％；剂量水平1的3个月CR率为42％(8/19)，并且剂量水平2的3个月CR率为56％(5/9)，与所提出的对治疗结果的剂量反应效应一致。另外，结果符合剂量与反应持久性之间的关系。
DL1S：DL1 1-剂量时间表；DL2S：DL2 1-剂量时间表；DL1D：DL1 2-剂量时间表；
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。不包括在数据快照前28天治疗的患者。
b分母是在数据快照日期之前(在第3个月进行功效评估或进行PD或死亡的在先评估)，在≥3个月前接受CAR T细胞疗法的患者数量。
c包括由于给药错误而按DL2 2-剂量时间表治疗的一名患者
完整和核心群组中不同受试者亚组之间的总体反应率分别显示于图3A和图3B中。在大风险(poor-risk)DLBCL亚组中，反应率总体上较高。在具有双重/三重命中分子亚型的患者中，在3个月时观察到大于50％的ORR，所述患者患有原发性难治性或化疗难治性DLBCL或之前从未实现过CR。在2名患者中观察到淋巴瘤引起的CNS受累完全消退。
在评价的特定时间点之前六个月或更长时间治疗的受试者中，在三个月时已经处于反应中的十(10)名患者中，9名(90％)在六个月时仍有反应。在评价时间点，核心亚组中97％已经反应的受试者存活并且处于随访中，中值随访时间为3.2个月。
完整和核心群组的受试者的反应持续时间和总存活期的结果(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR))分别显示于图4A和图4B中。如图所示，在反应者中观察到延长的存活，且在具有CR的受试者中观察到反应持久性增加。虽然5/6的具有较差体能状态(ECOG 2)的受试者已经死亡，但所有在三个月时处于反应中的患者在评价时都保持存活。
图8显示绘制完整和核心群组内的单独受试者的无进展时间(月)的图。每个条形表示单一患者。阴影指示最佳总体反应(在每种情况下，除非另有指示，否则在1个月时实现)；纹理指示剂量(实心＝剂量水平1，单一剂量；交叉阴影线，剂量水平2，单一剂量；竖直阴影线＝剂量水平1，双剂量)。水平箭头指示进行中的反应。某些单独受试者最初(例如，在1个月时)被评估为展现稳定疾病(SD)或部分反应(PR)，之后被观察到已经实现PR(例如，SD转化为PR)或CR。在此类情况下，如图所示，单独患者条形的阴影指示最佳总体反应，并且沿着每个单独受试者条形的点(与阴影同样对应于所实现的反应)指示在所述受试者中观察到每例SD、PR和/或CR发生的时间。
在两名患者中观察到淋巴瘤引起的CNS受累完全消退。观察到一名受试者中的CAR+细胞在复发后在活组织检查后扩增。在活检后展现扩增的受试者患有化疗难治性转化的DLBCL(生发中心亚型，具有BCL2重排以及多拷贝的MYC和BCL6)。已经以DL-1给予所述受试者CAR+T细胞，并且在某些时间点测量CD3+/CAR+、CD4+/CAR+、CD8+/CAR+T细胞在外周血中的数量，显示于图6A中。所述受试者先前已经用五个先前治疗线治疗并且对于所述先前治疗线是难治的，所述先前治疗线包括剂量调节的依托泊苷、多柔比星和环磷酰胺与长春新碱和泼尼松加利妥昔单抗(DA-EPOCH-R)以及来自8/8HLA匹配的无关供体的中等强度同种异体干细胞移植。在同种异体干细胞移植之后且在接受CAR+T细胞之前，所述受试者在所有血液谱系中显示100％供体嵌合状态，已经停止进行免疫抑制疗法，并且未患移植物抗宿主病(GVHD)。在给予CAR+T细胞之前，所述受试者患有通过正电子发射断层摄影术和计算机断层摄影术(PET-CT)观察(图6B)并且通过磁共振成像(MRI)证实(图6D)的耳周肿块和颞叶病灶。
在接受抗CD19CAR-T细胞治疗后，如PET-CT(图6C)和脑MRI(图6E)所示，受试者在输注后28天实现CR，并且没有观察到神经毒性或CRS的体征。输注CAR-T细胞后三个月，在这名受试者中注意到耳周肿块的复发(图6F)，并进行切开活检。如图6A中所示，在活检后，在没有进行进一步治疗的情况下，可见肿瘤消退。药代动力学分析显示所述CAR+T细胞在外周血中显著再扩增(达到高于所观察到的初始扩增的水平，在输注后约113天时观察到峰值水平)，这与肿瘤消退一致。然后所述受试者继续实现第二次CR，如通过在活检后一个月时的重分期PET-CT所证实(图6G)，并且在CAR-T细胞输注后6个月时仍保持CR。对所述受试者的进一步评估显示，CNS反应是持久的，并且所述受试者在12个月时仍保持CR。
已经接受活检且之后观察到CAR+T细胞的再扩增的受试者的结果与以下结论一致：CAR+T细胞的再扩增和激活可以在功能性或活性CAR+T细胞减少或损失和/或在针对CAR-T细胞疗法的抗肿瘤反应后的复发后在体内起始。此外，在初始CAR+T细胞输注之后较晚的体内再扩增后，CAR+T细胞能够再次发挥抗肿瘤活性。这个结果支持，CAR+T细胞的再扩增和激活可以在体内被触发，并且再激活CAR+T细胞的方法可以进一步扩大CAR+T细胞的功效。
在两名具有CNS受累的DLBCL受试者中观察到完全反应且未发生任何等级的神经毒性。这些结果与以下观察一致：本文所提供的实施方案的CAR+T细胞能容易地到达CNS并发挥效应子功能以减小或消除CNS肿瘤，而不增加或不显著增加毒性(如神经毒性)的风险。在其他研究中，在用抗CD19CAR T细胞治疗的患有ALL的受试者中，在神经毒性的发生率与脑中CNS白血病(已经观察到其响应这种CAR T细胞疗法)的存在之间没有观察到任何明确相关。因此，虽然在一些情况下可能在用CAR-T疗法治疗后发生神经毒性，但是这种神经毒性可能不一定是脑中的靶标表达或CNS中CAR T细胞活性的结果，并且可能并非是由于所述CAR+T细胞的“中靶(on-target)”毒性引起的。
实施例1.C.2
实施例1.C.2描述了基于实施例1.A.2和1.B.2中的分析时间点的结果。
直到实施例1.C.2中的时间点，评价完整DLBCL群组中的68名受试者的反应。总体或客观反应(OR)率、3个月和6个月的客观反应率分别为75％(51/68)、49％(27/55)和40％(14/35)。完全反应(CR)率、3个月CR率和6个月CR率分别为56％(38/68)、40％(22/55)和37％(13/35)。与DL1相比，在以DL2治疗的受试者中观察到朝向改进的3个月反应率的趋势：对于ORR，63％(12/19；95％CI 38，84)相对于40％(12/30；95％CI 23，59)，p＝0.148；且对于CR，58％(11/19；95％CI 34，80)相对于27％(8/30；95％CI：12，46)，p＝0.0385。在16名双重/三重命中淋巴瘤受试者中，ORR为81％并且3个月CR率为60％。
在核心群组(对于实施例1.C.2中的时间点，n＝49)中，OR、3个月OR率和6个月OR率分别为84％(41/49)、65％(26/40)和57％(13/23)。CR率、3个月CR率和6个月CR率分别为61％(30/49)、53％(21/40)和52％(12/23)。在较高剂量下在3个月时观察到改进的持久ORR和CR的类似趋势。具体地，与给予DL1的核心群组受试者中52％(11/21；95％CI 30，74)和33％(7/21；95％CI 15，57)的3个月ORR率和CR率相比，对于给予DL2的核心群组中的受试者，3个月ORR为80％(12/15；95％CI 52，96)并且3个月CR为73％(11/15；95％CI 45，92)，且分别地p＝0.159和p＝0.0409。在已经接受DL2且进行3个月随访的核心群组受试者(n＝15)中，3个月ORR为80％并且3个月CR为73％。
在1.C.2中的此时间点，完整群组和核心群组中的中值DOR分别为5.0个月和9.2个月；在完整群组中，CR的中值持续时间为9.2个月。在核心群组中尚未达到CR的中值持续时间。完整群组中的中值总存活期(OS)为13.7个月，并且在核心群组中尚未达到中值总存活期。完整群组中的6个月OS为75％，且中值随访期为5.8个月。核心群组中的6个月OS为88％，且中值随访期为5.6个月。
D.对血液中CAR+T细胞的评估
基于来自实施例1.A.1、1.B.1和1.C.1中描述的时间点的数据，所述药代动力学分析以评估在治疗后的不同时间点，外周血中CAR+T细胞的数量。分析来自DLBCL群组中在实施例1.A.1中的时间点评估的五十五(55)名受试者和套细胞淋巴瘤(MCL)群组中四(4)名受试者(在相同时间点评估)的数据，如下文实施例2中所述。使用已验证的流式细胞术进行药代动力学(PK)测量，以检测在CAR构建体中表达的标记，并进行基于定量PCR的测定以检测CAR构建体的整合。使用抗CD19抗体通过流式细胞术评估B细胞发育不良。如图5A中所示，在两个所给予剂量水平下，在整个评估过程中检测CD4+和CD8+CAR表达细胞，如通过在对数标度上标绘的细胞数/μL血液(中值±四分位数)所测量。对于外周血中的CD3+/CAR+、CD4+/CAR+和CD8+/CAR+T细胞亚组，接受DL2的受试者相对于DL1具有更高的中值Cmax和中值AUC0-28(CD3+、CD4+和CD8+的AUC0-28：DL2与DL1分别为1836与461，350与182，以及1628与114；对于CD8+，p<0.05；Cmax：DL2与DL1分别为99.8与27.9，15.1与5.2，以及73.1与5.5个细胞/μL)。到最大CD3+CAR+T细胞扩增的中值时间为15天(范围8-29)，并且在剂量水平之间没有差异。CD4+和CD8+CAR表达T细胞以相对类似的水平定位至骨髓。
如与较低剂量水平相比，在给予较高剂量水平的受试者中观察到增加的中值曲线下面积(AUC)(血液中随时间而变的CD8+CAR+T细胞数)，且没有观察到毒性增加。在反应者(CR/PR)中观察到比无反应者(PD)更高的CD8+/CAR+T细胞暴露；即使在疾病已经进展的受试者中，也观察到在评估时间(包括直至3个月和6个月)期间的细胞持久性(图5B)。CD8+CAR+T细胞的中值Cmax和中值AUC0-28在有反应的受试者中更高并且在第3个月时具有持久的反应(在第3个月的CR/PR与第3个月的PD中，CD8+Cmax中值＝20.8与5.5；CD8+AUC0-28中值＝235与55)。在针对CAR T细胞持久性进行评价的受试者中，在第3个月，29名受试者中分别有90％和93％具有可检测的CD8+和CD4+CAR+T细胞；在第6个月，19名受试者中分别有63％和58％具有可检测的CD8+和CD4+CAR+T细胞。在第3个月和第6个月，在具有持久反应或复发的受试者之间没有观察到CAR+T细胞持久性的统计学显著差异。即使在第3个月时在几乎所有受试者(97％，34/35)中且在第6个月时在100％受试者(24/24)中显示B细胞发育不良(<1个细胞/μl)，但在11名具有PK的受试者的89％中在复发时CAR+T细胞是可检测的。
没有观察到如与DL1相比在DL2下更高的Cmax和AUC0-28与增加的CRS或NT相关。对于任何NT或对于>2级CRS，CD4+/CAR+和CD8+/CAR+T细胞的中值AUC分别比DL2的中值AUC高5至10倍和3至5倍。观察到较高的疾病负荷和炎性细胞因子的基线水平与较高的CAR+T细胞峰值水平、较高的细胞因子峰值水平和较高的CRS和NT发生率相关。结果与以下结论一致：在DL2下较高的Cmax和中值AUC0-28未增加CRS或NT。
结果与以下结论一致：即使在具有较差反应的受试者中，治疗也导致工程化细胞的延长的暴露和持久性。在一些实施方案中，在工程化细胞在受试者体内持续存在时(例如，如通过外周血中的细胞水平所测量)，例如在复发或疾病进展后，使用组合方法，如给予免疫检查点调节剂或其他免疫调节剂。在一些方面，在给予所述其他药剂或治疗之后，已经持续延长时间的细胞再次扩增或被激活和/或展现抗肿瘤功能。在发生神经毒性的受试者的血液中，通常随时间观察到较高的中值CD4+和CD8+CAR+T细胞数(图5C)。结果指示，所述CAR+T细胞在3个月时展现扩增和持续存在、反应持久性，这些指标在较高剂量水平下增加，而毒性不增加。观察到的结果与以下意见一致：血液中CAR+T细胞和细胞因子的高峰值水平可能与NT和CRS相关，并且可能受基线受试者因素影响。观察到CAR+T细胞在复发时存在，表明组合或再治疗方法可以提供某些优势。
E.血液分析物和神经毒性、CRS和反应
在给予所述CAR+T细胞之前，在受试者(在实施例1.A.1中的时间点评估的那些)的血清中测量各种治疗前血液分析物(包括细胞因子)。使用多重细胞因子测定来测量细胞因子。使用基于单变量非参数检验的统计学分析来评估与发生神经毒性的风险的潜在相关性。
图7显示在CAR+T细胞疗法后未发生神经毒性的受试者与发生神经毒性的受试者中，以单位(LDH，U/L；铁蛋白，ng/mL；CRP，mg/L；细胞因子，pg/mL)表示的所评估分析物的中值水平。观察到某些血液分析物(包括LDH、铁蛋白、CRP、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β)的水平与发生神经毒性的风险的水平相关(Wilcoxon p值<0.05，不进行多重数调整)。特定地，结果与以下结论一致：LDH(其在一些实施方案中是疾病负荷的替代物)的治疗前水平可以用于潜在神经毒性风险评估和/或对某些受试者的治疗的风险适应性给药或调整。此外，在给予所述CAR-T细胞组合物之前测量的肿瘤负荷与发生神经毒性的风险相关联(Spearman p值<0.05)。在一些方面，LDH水平可以单独评估和/或与另一种治疗前参数组合评估，如疾病负荷的另一种量度或指示物，如体积肿瘤测量值，如尺寸乘积之和(SPD)，或疾病负荷的其他基于CT或基于MRI的体积测量值。在一些方面，评估指示疾病负荷的一个或多个参数，并且在一些情况下，所述参数可以指示在所述T细胞疗法后发生神经毒性的风险的存在、不存在或程度。在一些方面，所述一个或多个参数包括LDH和/或体积肿瘤测量值。
在另一个分析中，在实施例1.A.1中的时间点的DLBCL群组中的五十五(55)名受试者，以及下文实施例2中所述的套细胞淋巴瘤(MCL)中的四(4)名受试者包括在关于与安全性评价的相关性的分析中。在针对安全性评价的59名受试者中，在32％中观察到CRS(30％是1-2级，0％是3级，2％是4级)；在20％中观察到NT(5％是1-2级，10％是3级，5％是4级)。剂量水平与CRS或NT无关(分别为p＝0.565和p＝1.00)。与任何等级的CRS和NT相关的受试者因素是较差体能状态(例如ECOG状态2)(p＝0.03)和较高疾病负荷(p<0.05)，如通过基于成像结果的直径乘积之和(SPD)所测量。被观察到与任何等级NT的发生相关的CAR+T细胞输注前临床实验室参数和CAR+T细胞输注前细胞因子测量包括较高的血清LDH、铁蛋白和CRP，以及较高的血浆IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、IFN-α2、MCP-1和MIP-1β(各自的p<0.05)。IL-8、IL-10和CXCL10的较高的CAR+T细胞输注前血浆水平也与3-4级NT相关(各自的p<0.05)。
在针对反应评价的DLBCL群组的54名受试者中，较高ECOG得分和从CLL或MZL转化的DLBCL与第3个月的较低持久反应相关联(二者的p＝0.02)。与最佳ORR相关的CAR+T细胞输注前参数包括铁蛋白、LDH、CXCL10、G-CSF和IL-10的较低值，并且与3个月时的持久反应相关的那些CAR+T细胞输注前参数包括较低的铁蛋白、CRP、LDH、CXCL10、IL-8、IL-10、IL-15、MCP-1、MIP-1β、TNF-α以及较高的CAR+T输注前血红蛋白和白蛋白(各自的p<0.05)。
在一些情况下，对单采术样品和用于给予的CAR+T细胞组合物进行了评估并将其与临床结果相关。结果显示，T细胞记忆亚组和T细胞功能可能与某些临床结果相关联。
结果显示，某些基线患者特征(包括治疗前的炎性状态和高肿瘤负荷)可以用于指示在给予CAR表达T细胞后具有毒性增加风险的患者。观察到低肿瘤负荷和低炎性状态与改进的毒性概况和更佳的反应持久性相关。结果支持，在治疗过程中较早地治疗受试者和/或评估一组临床和实验室生物标记以针对潜在早期干预对受试者进行风险分层，可以减轻毒性风险并改进反应持久性。
实施例2：向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的受试者给予表达抗CD19CAR的细胞
将如实施例1中所述产生的含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物给予四(4)名患有套细胞淋巴瘤(MCL)且1个治疗线已失败的人受试者。在静脉内给予之前，将冷冻保存的细胞组合物解冻。所述治疗性T细胞组合物是作为限定组合物细胞产物来给予，其具有以约1:1的目标比率给予的衍生自相同受试者的CAR+工程化T细胞的经配制CD4+和CD8+群体。以含有5x107个CAR表达T细胞的剂量水平1(DL1)的单一剂量向受试者给予一定剂量的CAR表达T细胞(作为CD4+和CD8+CAR表达T细胞的分割剂量)。在CAR+T细胞输注之前三(3)天开始，受试者接受使用氟达拉滨(flu，30mg/m2)和环磷酰胺(Cy，300mg/m2)的淋巴细胞清除化学疗法。
如实施例1中所述监测受试者的反应和毒性。在任何受试者中均没有观察到CRS或神经毒性。在所治疗的4名受试者中，两(2)名受试者实现PR(非持久)，并且两(2)名受试者患有进行性疾病。
实施例3：进一步评估在给予抗CD19 CAR表达细胞后，患有复发性和难治性非霍奇 金淋巴瘤(NHL)的受试者的反应、安全性、药代动力学、药效学和血液分析物
在上文实施例1中所述的临床研究中的后续时间点评估患者的反应结果、安全性结果、药代动力学和药效学参数以及血液分析物。
A.受试者和治疗
这个实施例中呈现的在此时间点的分析是基于对已经给予所述抗CD19CAR表达细胞的完整DLBCL群组中总计91名受试者(88名(65名来自核心群组)针对反应进行评估，且91名(67名来自核心群组)针对安全性进行评估)的评估。所述完整群组包括DLBCL(NOS，从头和从任何惰性淋巴瘤转化)，ECOG 0-2；用于分析的所述核心群组包括患有DLBCL(NOS和从滤泡性淋巴瘤(tFL)转化)或高级B细胞淋巴瘤并具有0或1的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)的受试者。核心群组中约90％的被治疗患者具有预测3-6个月的短中值总存活期(OS)的至少1种大风险疾病特征，如双重/三重命中表达子、原发性难治性疾病、对2个或更多个治疗线的难治性、从未实现过CR、或从未接受过自体干细胞移植(ASCT)。在一些实施方案中，向不包括ECOG得分为2的受试者或已经接受在先造血干细胞移植(HSCT)的受试者在内的患有未另行规定(NOS；从头的和从滤泡性淋巴瘤转化的tFL)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或高级B细胞淋巴瘤(具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学)的受试者群组给予如本文所提供的CAR-T组合物。在一些实施方案中，以DL2的单一剂量(1x108个总CAR表达T细胞)向核心群组的受试者给予抗CD19CAR+T细胞。
在此时间点，总计140名受试者已进行白细胞分离术，其中10名正在等待制造的组合物，2名在制造前已退出，并且2名的组合物无法利用。在另外18名其产物可利用的受试者中，4名正在等待治疗，4名已经退出，并且10名已经发生进行性疾病或已经死亡。已经给予总计108名受试者所述抗CD19CAR表达细胞，其中6名无法评价并且11名接受不合规的抗CD19CAR表达细胞(组合物不一定符合某些规范，但被认为对于给予是安全的)。受试者已经接受DL1(n＝45)、DL1(n＝6)或DL2(n＝40)的双剂量。已经向患有套细胞淋巴瘤(MCL)的六(6)名受试者以DL1给予CAR+细胞(五名用合规产物治疗，一名用不合规产物治疗)，并且五(5)名已经完成28天的随访。一名MCL受试者已经发生CRS，并且没有受试者接受过托珠单抗或地塞米松。对于DLBCL群组中98％的进行单采术的受试者(126/128)，产物是可利用的。
在此时间点的受试者包括已经在门诊环境中治疗的5名患者(包括四(4)名以DL1治疗的受试者、一(1)名以DL2治疗；其中四(4)名包括在核心群组中)。对于在门诊环境中治疗的受试者，中值年龄为57岁(范围26-61)，3名患有DLBCL，NOS，1名患有tFL，且1名患有PMBCL。所有五(5)名受试者的ECOG得分都为0或1。关于门诊结果的数据包括已经在门诊环境中治疗的三(3)名另外的受试者的结果(总计八(8)名受试者)，并且其数据在这个实施例中用于分析的时间点之后变得可用。
在所述时间点完整和核心群组受试者的人口统计学和基线特征示于表E5中。
HSCT，造血干细胞移植；LD，淋巴细胞清除。
a在试验起始时，包括在DLBCL，NOS组织学中；基于最新的WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，现在被视为“高级B细胞淋巴瘤”，其具有MYC和BCL2和/或BCL6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中)。
b到最后一次含化学疗法方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发。
B.治疗后的安全性和反应结果
如表E6中所示，客观反应率(ORR)为74％，包括52％的显示完全反应(CR)的受试者。任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)的发生率为35％，有1％严重CRS；并且任何等级的神经毒性(NT)的发生率为19％，有1％严重NT。
a四名以DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
b包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
c包括所有在数据快照日期前28天已接受至少一个剂量的合规CAR表达细胞产物或者死亡的受试者。
如表E7中所示，在完整DLBCL群体中观察到高反应率和低严重毒性。
a包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
b包括所有在数据快照日期前28天已接受至少一个剂量的合规CAR+表达细胞或者死亡的受试者。
如表E8中所示，在受试者的核心群组中观察到高反应率和剂量依赖性反应。
a四名以DL1D治疗的患者(核心)具有类似结果。
b包括具有PD、死亡或28天重分期扫描事件的患者。一名患者未能进行重分期扫描。
c分母是在数据快照日期之前(在第3个月进行功效评估或进行PD或死亡的在先评估)，在≥3个月前接受CAR+细胞的患者数量。
d分母是在数据快照日期之前(在第6个月进行功效评估或进行PD或死亡的在先评估)，在≥6个月前接受CAR+细胞的患者数量。
大风险DLBCL亚组(包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL患者)中的不同受试者亚组之间的三个月客观反应率(ORR)显示于图22中。结果显示大风险DLBCL亚组中的高持久ORR。
完整群组和核心群组受试者的反应持续时间(DOR)和总存活期的结果(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR))显示于图23A-23D中。结果还显示80％(16/20)的在3个月时具有CR的受试者在6个月时仍处于CR中，并且92％(11/12)的在6个月时具有反应(CR或PR)的受试者继续显示更长期的反应。
图24描绘在此时间点被观察到已经经历实验室异常和治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比(不包括5名用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的患有MCL的患者的数据)。除了图24中显示的TEAE以外，在≥5％的患者中观察到3-4级的以下事件项：脑病(8％)、全血细胞减少症(5％)和发热型嗜中性粒细胞减少症(7％)。八名患者(9％)具有输注毒性，所述输注毒性被定义为与CAR+细胞给予相关的给予当天的AE，包括潮红、头痛、发热、发烧、寒战、寒颤、呕吐、皮疹、荨麻疹、瘙痒、低血压、哮鸣、支气管痉挛、呼吸短促、恶心、呕吐、背痛、咳嗽和输注相关反应。事件包括寒战(2)、发烧(5)、潮红(1)、头痛(1)、低血压(1)、输注相关反应(1)、皮疹(1)、瘙痒(1)和呕吐(1)，其中有6个1级事件、1个2级(寒战)和1个3级(低血压)事件。核心群组中的TEAE与完整群组中的TEAE没有显著差异。在门诊环境组中治疗的受试者的最常见的相关TEAE是CRS、低血压、呕吐、贫血和呼吸困难。
表E9示出对于接受DL1S和DL2S的受试者，在完整或核心群组的25％或更多受试者中发生的TEAE和神经毒性。在DLBCL群体中没有观察到明显的剂量-毒性关系。
a包括4名以剂量水平1，双剂量时间表治疗的患者。
b实验室异常。
图25描绘在给予CAR+细胞后的不同时间点被观察到具有CRS和/或NT的受试者的数量和百分比。在这项评估中，观察到至第一个CRS或NT事件发作的中值时间分别为5(范围1-14)或10(范围3-23)天。在CAR+细胞给予后的前72小时内，1名患者具有NT(1级)，并且仅14％(91名中的13名)具有CRS(7个1级，6个2级)。CRS或NT的中值持续时间(Q1，Q3)分别为5(4，8)或10.5(7，19)天。在17例中的12例(71％)中，在CRS后发生NT。除了一个1级震颤和2名患者因具有进行中的NT的进行性疾病而死亡以外，所有可评价的NT事件都在分析时消退(基于所报告事件的安全性数据库，包括在这个实施例中所述的分析时间点之后分析的其他受试者)。
在完整群组(n＝91)中，向具有CRS或NT发作的所选受试者给予使用托珠单抗和/或地塞米松的如下抗细胞因子疗法：仅托珠单抗，4％(n＝4)；仅地塞米松，9％(n＝8)；托珠单抗和地塞米松，8％(n＝7)。地塞米松剂量的中值数为6(范围，2-99)；并且托珠单抗剂量的中值数为1(范围，1-3)。
表E10显示以DL1或DL2接受单一剂量的核心群组中受试者的毒性结果。未发生因CRS或NT所致的死亡。到CRS发作的中值时间为5天(范围，2-14)，并且到NT发作的中值时间为11.5天(范围，5-23)。在核心群组中，13％(n＝9)接受托珠单抗，并且18％(n＝12)接受地塞米松，以改善毒性。18％的受试者(67名中的12名)展现与脑病一致的神经毒性项，包括脑病(13％)，6％(67名中的4名)患有失语，并且3％(67名中的2名)患有癫痫。在表E10中，显示在所有剂量水平下或特定地在给予DL1或DL2的受试者中，展现所指示毒性结果的受试者的数量或占总受试者的％(括号)。还在括号中显示上和下95％置信区间。
a四名按DL1D治疗的患者具有类似结果。
b包括意识错乱状态、脑病、失语、共济失调、小脑综合征、谵妄、意识水平下降、头晕、淡漠情感、手眼协调能力受损、记忆缺陷、震颤、激越、注意力障碍、构音困难、精神状态变化、肌无力、癫痫、嗜睡和尿失禁。
在十二(12)名接受非合规产品的受试者中，10名以DL1给予，2名以DL2给予，都具有28天随访。在33％的受试者(4/12)中观察到CRS，并且在任何受试者中都没有观察到NT。两名受试者接受托珠单抗并且3名受试者接受地塞米松。毒性率与在给予合规产品的受试者的较大群组中观察到的那些是可比的。在接受非合规产品的受试者中，药代动力学(PK)扩增在具有CRS/NT的受试者、具有高肿瘤负荷或LDH水平的受试者中较高。
C.对门诊给予的评估
在此时间点评价总计八(8)名已在多个临床地点在门诊环境中治疗的受试者的数据(中值年龄为58.5，ECOG为0或1)，包括3名数据在出于这个实施例的目的分析的时间点之后可用的受试者。对于在住院环境中治疗的受试者，平均住院长度为15.6天(SD 9.6，n＝86)，且对于在门诊环境中治疗的受试者，平均住院长度为9.3天(SD 11.9，n＝8)。在门诊环境中治疗的受试者中，观察到住院长度减少40％。在门诊CAR+T细胞给予后在住院前的中值天数为5天(范围：4-22)。在门诊给予后，都不需要入住重症监护室(ICU)。
在8名在门诊环境中治疗且具有超过28天的给予后随访的那些受试者中，1名在整个剂量限制性毒性阶段的持续期间都留在门诊。七(7)名患者因发热而住院(1名在研究第4天住院，其余在研究≥第5天住院)，6名患者因CRS而住院(4名1级，2名2级)，并且2名患者具有1级NT。没有患者经历严重CRS或NT。一(1)名患者是用托珠单抗而不用地塞米松针对CRS(2级)进行治疗，并且没有患者是用地塞米松针对CRS或NT进行治疗。一名患者在CAR+T细胞给予后3天时住院。
在91名在住院和门诊环境中治疗的受试者中，11名受试者(12％)需要入住ICU以管理毒性；8名受试者(9％)需要入住ICU以管理CRS或NT；2名受试者(2％)需要入住ICU以管理急性呼吸事件(一名与CAR+T细胞给予有关，一名无关)。六(6)名受试者(6％)进行插管治疗(基于所报告事件的安全性数据库，包括在这个实施例中描述的分析时间点之后分析的其他受试者；n＝94)；7名受试者(7％)接受血管加压药(基于TEAE评估中所报告事件的安全性数据库，限定为在CAR+T细胞给予后的前28天中展现低血压)；并且2名受试者(2％)经历血液滤过(基于所报告事件的安全性数据库)。结果显示，极少数患者需要ICU水平的护理和相关程序。结果支持门诊给予的可行性，其具有在门诊环境中对毒性的安全管理、适当教育和门诊监测。
对门诊给予的评估支持安全门诊给予的可行性。30％的受试者没有再次住院。
D.药代动力学评估
在DLBCL群组中具有可评估PK的87名受试者中，在给予前(治疗前或淋巴细胞清除化学疗法(LDC)前)的时间点和治疗后的各个时间点(以给予当天为第1天)的外周血和骨髓中的CAR+T细胞数量，其是通过流式细胞术(使用对用作替代标记的截短受体具有特异性的抗体)以及定量聚合酶链式反应(qPCR)(使用对存在于编码嵌合抗原受体(CAR)的载体中的土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE)具有特异性的引物)来评估。评估标绘第0天与第28天之间所指示CAR+细胞群的每微升数量的曲线下面积(AUC0-28)，以及CAR+细胞的最大或峰值血液浓度(Cmax；CAR+细胞/μL血液)。通过流式细胞术，通过用CD19染色评估外周血中的B细胞发育不良。使用多重细胞因子测定来测量细胞因子。对于安全性分析，汇集来自所有接受不同剂量水平的受试者的数据。对于反应分析，将数据按剂量水平分层。统计学分析是双侧的，不进行多重数调节。
图9A显示在不同所指示时间点所检测的每微升血液的CAR T细胞数量，如通过qPCR或流式细胞术所评估。图9B显示在第11+3天，每微升血液与每微升骨髓的CAR+细胞。如图9A中所示，通过基于流式细胞术的测定和基于qPCR的测定二者观察来自受试者的样品中CAR表达细胞的水平。如图9B中所示，PK结果被评估的所有受试者(对于流式细胞术和qPCR，分别地n＝86和85，不包括一名不具有可用流式细胞术结果的患者和2名不具有可用qPCR结果的患者)在血液和骨髓中显示可检测的CAR表达细胞数。结果与以下观察结果一致：CAR+T细胞被相似地输送至骨髓和血液。
在以下接受剂量水平1(DL1)的不同患者亚组中比较CD4+和CD8+CAR表达细胞随时间的水平(如通过AUC0-28和Cmax所评估)：从头(DLBCL，NOS)或从滤泡性淋巴瘤转化(tFL)的弥漫性大B细胞淋巴瘤(核心；N＝32)、从边缘区淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病转化的DLBCL(tMZL/tCLL；N＝4)或套细胞淋巴瘤(MCL；N＝5)，所述患者已经以DL1接受CAR表达T细胞。如图10A和图10B中所示，AUC0-28和Cmax在不同疾病亚组中的受试者之间变化，且CD4+和CD8+CAR表达细胞的扩增在非核心亚组中趋于较低。PMBCL(n＝2)和FL3B(n＝1)由于患者数量有限而没有显示。在接受DL2的受试者中的扩增与在接受DL1的受试者中类似。
E.依据剂量水平的药代动力学评估
还比较核心群组(受试者患有DLBCL，NOS或高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)；N＝59)中已接受剂量水平1(DL1；n＝32)的受试者和已接受剂量水平2(DL2；n＝27)的那些受试者的CD3+、CD4+和CD8+CAR表达细胞的AUC0-28和Cmax。如图11A和图11B中以及表E11中所示，与已接受DL1的受试者相比，在接受DL2的受试者中观察到CD3+、CD4+和CD8+CAR表达细胞的中值AUC0-28较高。类似地，在完整DLBCL群组中观察到已接受DL2的受试者中较高扩增的趋势。如与已接受DL1的那些受试者相比，在已接受DL2的受试者中也观察到3个月时较高的反应持久性(DOR)，而毒性没有增加。CD4+和CD8+CAR+细胞的到Cmax(Tmax)的中值时间在接受DL1和DL2的受试者之间是类似的。
在DL2中观察到相比于DL1增加的CAR+T细胞暴露，对应于DL2受试者中增加的反应持久性而没有增加的毒性。
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F.持久性
分别基于可检测CD3+、CD4+或CD8+CAR表达细胞水平和在血液中检测到的CD19+B细胞水平，在已经给予CAR+T细胞的患有DLBCL的可评价受试者中，在不同时间点评估CAR表达细胞和CD19+B细胞发育不良(CD19+B细胞的低数量或不存在)的持久性。结果示于表E12中。在进展时(不论BOR的进展时间；n＝37)评价的受试者中，在进展时观察到0.17个CD4+CAR+细胞/μL的中值(范围，0-65.5个细胞/μL)和0.15个CD8+CAR+细胞/μL的中值(范围，0-131.8个细胞/μL)。在复发时(在实现CR后的进展时)评价的受试者(n＝12)中，在复发时观察到CD4+CAR表达细胞的0.17/μL的中值(范围，0-35.1个细胞/μL)和CD8+CAR表达细胞的0.20个细胞/μL的中值(范围，0-131.8个细胞/μL)。在12个月时，在75％的患有DLBCL的可评价受试者中观察到CAR表达细胞的长期持久性。还在12个月时在75％的受试者中以及在不论何种复发状态的受试者中观察到B细胞发育不良的长期持久性。结果与以下结论一致：抗CD19CAR表达细胞在大多数受试者中展现长期持久性，并且表明即使在复发患者中也有持续进行低水平疾病控制的潜力。
在复发的受试者中，91.7％(11/12)在复发时在血液中具有可检测的CAR表达细胞。这个结果与以下结论一致：在一些实施方案中，组合疗法或其他干预可以用于扩大和/或加强表达CAR的细胞(例如可被消耗的那些)。
G药代动力学评估和毒性
还比较具有任何等级(在这项评估中，1-4级中的任一个；没有观察到5级CRS或NT)的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的核心群组中的受试者与未被评估为展现任何等级的CRS或NT的受试者的CD4+和CD8+CAR表达细胞的AUC0-28和Cmax。中值CD4+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无CRS(0级；n＝43)为59(18，210)，并且对于任何CRS(1-4级；n＝20)为267(91，1510)(p＝0.001)；中值CD8+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无CRS(0级；n＝43)为310(36，900)，并且对于任何CRS(1-4级；n＝20)为605(174，5619)(p＝0.021)；中值CD4+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无NT(0级；n＝50)为71(23，244)，并且对于任何NT(1-4级；n＝13)为1269(184，3057)(p＝0.003)；中值CD8+CAR+AUC0-28(Q1，Q3)对于无NT(0级；n＝50)为304(43，799)，并且对于任何NT(1-4级；n＝13)为2463(607，7691)(p＝0.004)。如上文所述并且如图12A-图12D中所示，较高的随时间变化的CD4+和CD8+CAR表达细胞水平与CRS和NT相关。
H.药代动力学评估和反应
在具有CR、PR或PD的最佳总体反应(BOR)的受试者中，随时间评估峰值CD3+CAR+细胞/μL数(CD3+Cmax)。如图13A和图13B中所示，在具有更高扩增的受试者中观察到朝向更佳BOR的趋势，且在受试者之间具有变化性。
I.依据血液分析物和患者参数的药代动力学评估
如与展现CAR+CD3+血液Cmax<500个CAR+T细胞/μL的受试者(N＝7)中相比，在展现CAR+CD3+血液Cmax>500个CAR+T细胞/μL的受试者(N＝55)中评估CAR+T细胞治疗前(淋巴细胞清除化学疗法前)血浆细胞因子水平，所述血浆细胞因子包括白细胞介素-7(IL-7)、IL-15、巨噬细胞炎性蛋白(MIP-1α)。如图14A中所示，观察到升高的CAR+T细胞治疗前细胞因子血浆水平与CAR+CD3+Cmax>500个CAR+T细胞/μL相关(Wilcoxon P值<.05(不进行多重数调整)；除了IL-7，p＝0.07)。
如与展现CAR+CD3+血液Cmax<500个CAR+T细胞/μL的受试者(N＝9)相比，还在展现CAR+CD3+血液Cmax>500个CAR+T细胞/μL的受试者(N＝68)中评估各种血浆细胞因子(IL-6、IL-10、IL-16、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、MIP-1α、MIP-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和C-X-C基序趋化因子10(CXCL10))的峰值水平。如图14B中所示，观察到较高的峰值细胞因子水平与CAR+CD3+Cmax>500个CAR+T细胞/μL相关(Wilcoxon P值<0.05；不进行多重数调整)。
评估在CAR+T细胞治疗前(淋巴细胞清除化学疗法(LDC)前)体积肿瘤测量值尺寸乘积之和(SPD)(作为肿瘤负荷的指示物)与CD3+CAR+T细胞的AUC0-28(代表随时间的CAR+T暴露)之间的关系。如图15中所示，在基线SPD与CD3+AUC0-28之间观察到正相关性，且Spearman相关系数为0.32且p＝0.019。
J.治疗前患者参数以及反应和毒性结果
比较具有任何等级(此处，1-4级)细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的受试者与不具有任何CRS或NT(0级)的CAR+T细胞治疗前(LDC前)分析物水平，包括细胞因子和炎性标记，如铁蛋白、C反应蛋白(CRP)、D-二聚体(纤维蛋白降解产物)、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、MIP-1α和MIP-1β。在这个群组中，在具有1-4级CRS的受试者中，除了一个CRS事件之外的所有CRS事件都被确定为1级或2级。如图16A(CRS)和图16B(NT)中所示，基于单变量分析，观察到较高峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与CRS和NT相关(除了对于CRS的铁蛋白(p＝0.14)和对于CRS的CRP(p＝0.09)外，所有分析物的Wilcoxon P值<0.05)。对于CRS，在多变量分析中调整肿瘤负荷后，MIP-1β、IL-10和TNF的p<0.05；对于NT，IL-15、IL-6、MIP-1α和TNF的p<0.05。
在观察到未发生CRS或神经毒性的受试者与观察到已发生CRS或NT的受试者之间比较治疗前(LDC前)患者参数，如乳酸脱氢酶(LDH)水平和作为肿瘤负荷指示物的体积肿瘤测量值，如尺寸乘积之和(SPD)。如图17中所示，使用单变量统计学分析，具有CRS或NT的受试者展现较高水平的治疗前患者参数，如SPD(cm2)和LDH(U/L)水平；观察到此类水平与CRS或NT相关联。所观察到与CRS和NT相关的其他患者参数包括自诊断以来的较短时间(对于CRS和NT分别为p＝0.05和p＝0.09)。所观察到与CRS或NT无关的患者参数包括年龄(分别为p＝0.19和p＝0.54)和先前治疗次数(分别为p＝0.67和p＝0.59)、疾病阶段0-2与3-4(p＝0.79，p＝0.51)和患者体重(分别为p＝0.35和p＝0.44)。
图18A显示单独患者之间的治疗前SPD和LDH水平(点；单独点的阴影指示单独患者是否展现任何等级的神经毒性(左侧图)或者是否展现任何等级的CRS(右侧图))。在图18A中，y轴和x轴上的虚线分别描绘SPD≥50cm2和LDH≥500U/L。如图18A中所示，观察到约50cm2或更高的SPD和/或约500U/L或更高的LDH与NT和CRS的风险相关。在高于或低于图18A中的虚线所指示的SPD和LDH水平的受试者中发生CRS或NT的计算的优势比估计值(置信区间(CI)为95％)描绘于图18B和图18C中。优势比超过1指示增加的发生CRS或NT的概率或可能性。如图所示，观察到50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH与增加的发生CRS或NT的风险相关。观察到50cm2或更高的SPD和500U/L或更高的LDH与增加约8倍的发生任何等级CRS和NT的风险相关，并且低于50cm2的SPD和低于500U/L的LDH显示降低的任何等级CRS和NT的风险。结果与以下一致：基线患者参数(包括高肿瘤负荷和炎性生物标记)与CAR+T细胞扩增和增加的CRS和神经毒性的比率。
用单变量统计学分析比较在3个月时具有和不具有持久反应的受试者的各种治疗前(LDC前)患者参数，包括与肿瘤负荷相关的标记(SPD)、炎性细胞因子和其他血液分析物，包括LDH、铁蛋白、CRP、D-二聚体、SAA-1、IL-6、IL-10、IL-15、IL-16、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α和CXCL10。如图19中所示，观察到肿瘤负荷的某些标记、炎症标记或炎性细胞因子在展现持久反应的受试者中较低(除了SPD以外(p＝0.1274)，所有参数的p值<0.05)。在单独分析时，在接受DL2的受试者中观察到类似结果。观察到基线患者参数(包括高肿瘤负荷和炎性生物标记)与持久反应的负相关性。在一些方面，这种负相关性可能是由于CAR+T细胞的较高扩增和消耗所致。
使用基于单变量非参数检验的统计学分析评估患者因素、临床关联和血液分析物与发生某些程度的CRS和NT之间的关系。表E13列出了单变量分析的结果。在这项评估中，年龄<40随和无先前HSCT与CRS或NT的发生率相关。没有观察到年龄<40岁的受试者具有与更老患者在统计学上不同的较高肿瘤负荷的比率。与ECOG得分为0-1的受试者相比，ECOG得分为2的受试者不具有在统计学上不同的较高肿瘤负荷的比率。不具有先前HSCT或双重/三重命中或双重表达子的那些与CRS或NT无关。
K.峰值血液分析物、反应和毒性
比较具有1-4级细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性(NT)的受试者与没有观察到任何CRS或NT的受试者的血液分析物的峰值治疗后血浆水平，所述血液分析物包括细胞因子和炎性标记，如CRP、血清淀粉样蛋白A1(SAA-1)、IL-2、IL-6、IL-10、IL-15、TNF-α、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、CXCL10和C-C基序趋化因子配体13(CCL13)。如图20A(CRS；CRS 0级，n＝51；CRS 1-4级，n＝28)和图20B(NT；NT 0级，n＝63；NT 1-4级，n＝16)中所示，观察到较高峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与CRS和NT相关(除了IL-15(分别为P＝0.05和0.006)，无CRS相比于任何CRS以及无NT相比于任何NT的Wilcoxon P值<0.001)。
与具有稳定疾病(SD)或进行性疾病(PD)的受试者(N＝17)的水平相比，对于具有完全反应(CR)或部分反应(PR)的最佳总体反应(BOR)的受试者(N＝57)；或与在3个月时展现CR/PR的受试者(N＝35)相比，对于具有3个月SD或PD(SD/PD)的受试者(N＝31)，评估血液分析物的峰值血浆水平，所述血液分析物包括细胞因子和炎性标记，如CRP、SAA-1、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-15、淋巴毒素-α(LT-α)、TNF-α、IFN-γ、MIP-1α、MIP-1β、MCP-1、CXCL10和转化生长因子β(TGF-β)。如图21A(最佳总体反应(BOR))和图21B(第3个月的反应)中所示，观察到较低峰值血浆细胞因子水平和炎性标记水平与较佳的BOR和第3个月的反应相关(Wilcoxon P值<0.05，不进行多重数调整)。
在这项研究中，将所述抗CD19CAR+细胞组合物的给予给予至具有大风险疾病特征的患有复发性/难治性侵袭性非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者。观察到反应(包括持久反应)，包括在DL2下的81％ORR、63％CR，且在所有剂量水平下有80％的在3个月时处于CR中的患者在6个月时仍处于CR中，在所有剂量水平下治疗的受试者的中值DOR为9.2个月，且在这个实施例中的分析时间点尚未达到CR的中值持续时间。结果也与可管理毒性水平以及有利的安全性概况一致，所述毒性水平和安全性概况在一些实施方案中可能与门诊给予一致。观察到严重CRS(1％)和严重神经毒性(12％)的低比率，在前72小时中事件极少。结果与门诊给予的可行性一致。
药代动力学评估显示，CAR+T细胞的较高扩增通常与增加的CRS和NT的比率相关。与接受DL2的受试者相比，接受DL2的受试者显示较高CAR T暴露，这通常对应于增加的反应持久性而不增加毒性发生率。在一些方面，观察到治疗前(如LDC前)患者因素(包括稳态和炎性细胞因子和肿瘤负荷)与极高扩增和毒性相关和/或驱动极高扩增和毒性。显示所给予的CAR+T细胞在所有患者的血液和骨髓中扩增，且在受试者之间和在疾病类型之间存在变化性。所给予的CAR+T细胞还展现长期持久性，有75％(9/12)的可评价患者在12个月时具有可检测的CAR T细胞。观察到在复发时CAR T细胞和B细胞发育不良仍然存在(分别是11/12和12/12的患者)，从而支持肿瘤可以逃避CAR T细胞的作用，并且组合策略可以有效预防复发，或者扩大、加强或增强消耗的CAR T细胞。通常，在较高扩增下观察到较高反应的趋势，且在受试者之间存在变化性，从而支持其他患者因素和/或疾病特征(例如，肿瘤负荷)可以有助于确定反应。
实施例4：用于给予的治疗性T细胞组合物的属性和用于产生组合物的过程
使用流式细胞术和体外测定，对用于在上述实施例1和2中给予的、含有表达对CD19特异的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的示例性治疗性T细胞组合物评估了大于一百种表型、功能和细胞健康相关属性。检测了针对在如下临床研究中招募的受试者产生的治疗性细胞组合物，所述临床研究评价用于治疗复发性/难治性B细胞非霍奇金淋巴瘤的抗CD19CAR-T细胞疗法(N＝63；核心群组)。针对各种属性，在工程化之前和之后评估细胞。所评估的示例性属性示于表E14中。使用流式细胞术检查所述CAR T细胞的记忆和细胞健康表型。使用体外抗原特异性生物测定评估T细胞功能性。对已经经历了代表性次数的冻融循环的治疗性T细胞组合物进行表征和释放测试。
为了产生用于给予的细胞组合物，通过白细胞分离术从受试者分离自体细胞。对白细胞分离术样品进行产生CAR表达细胞的过程。所述过程涉及使用自动化洗涤来洗涤细胞和基于免疫亲和的选择来纯化CD4+和CD8+T细胞，得到分别富含CD8+(其中99％(内部四分位数间距(IQR)98％-100％)的细胞的中值为CD8+)和CD4+(其中99％(IQR 99％-100％)的细胞的中值为CD4+)细胞的两种组合物。
使富含CD4+和CD8+的组合物的细胞单独经历用具有41BB共刺激结构域的编码抗CD19CAR的载体进行的慢病毒转导。然后将所转导群体在用于细胞扩增的刺激试剂的存在下单独孵育。在给予之前，将所扩增的CD8+和CD4+细胞单独配制并冷冻保存并储存。为了使批次和/或衍生自不同患者的细胞组合物(如具有不同患者属性的那些)之间指示细胞健康的参数的差异降至最低，在批次之间使细胞保持恒定体积。细胞产物展现出紧密的存活细胞浓度范围(基于对一组受试者的细胞组合物的评估，CD8+：中值为31x106个细胞/mL，IQR为28-40x106个细胞/mL，N＝38；CD4+：中值为35x106个细胞/mL，IQR为31-40x106个，N＝36)。
如图26中所示且如表E15中所汇总，自动化T细胞纯化得到纯的CD8+和CD4+T细胞群。这种策略降低转导非T细胞的概率并得到治疗性细胞组合物中的高T细胞纯度，与扩增持续时间无关。
在给予地点，将细胞组合物解冻并根据对应于适当剂量中CD8+CAR+和CD4+CAR+细胞数的每种组合物的目标体积分开给予(如对于DL1，含有5x107个总CAR表达T细胞(表达CAR的CD4+细胞和表达CAR的CD8+细胞各自为2.5x107个)，或对于DL2，含有1x108个总CAR表达T细胞(表达CAR的CD4+细胞和表达CAR的CD8+细胞各自为5x107个))。
在临床试验期间，存在从高体积配制到低体积配制的过程变化。变化后的治疗性细胞组合物以恒定的低体积配制，并严格控制存活细胞浓度范围。在一些情况下，使用低体积配制代替高体积配制。评估指示用于给予的组合物中的CAR表达T细胞的健康的参数，如通过在以高体积和低体积配制的细胞组合物中测量解冻后存活力、细胞表面膜联蛋白V表达和活性细胞内半胱天冬酶3的水平。
从高体积配制到低体积配制的过程变化导致增加过程稳健性并降低细胞健康属性的变化性。来自单独细胞组合物的CD4+和CD8+T细胞之间的存活细胞的浓度、百分比和活性半胱天冬酶-3阴性细胞的百分比的值显示于图27A-图27C中并且汇总于表E16中。膜联蛋白V表达细胞的中值百分比为11％(IQR为9％-18％；N＝33)的CD8+CAR+T细胞和10％(IQR为8％-17％；N＝31)的CD4+CAR+T细胞。观察到半胱天冬酶3表达与膜联蛋白V表达相似。转变至低体积配制导致增加过程稳健性并减小细胞健康属性的变化性。
精确控制用于给予的组合物中CAR+CD4+和CAR+CD8+T细胞的量。观察到实际给予受试者的示例性组的细胞数在以下给定剂量的目标细胞数的8％内或更少：
·2.4-2.7x107(目标±8％)个CD4+CAR+T细胞和2.4-2.7x107(目标±8％)个CD8+CAR+T细胞，用于以DL1给予细胞的受试者(n＝48)
·4.6-5.1x107(目标±8％)个CD4+CAR+T细胞或4.6-5.1x107(目标±8％)个CD8+CAR+T细胞，用于以DL2给予细胞的受试者(n＝20)。
发现所给予剂量的范围在受试者的不同示例性组中具有低变化性：
·在DL1下48-52×106个CD3+CAR+T细胞(n＝34)
·在DL2下96-101×106个CD3+CAR+T细胞(n＝29)
·在DL1下24-27x106个CD4+CAR+或CD8+CAR+T细胞(n＝34)
·在DL2下46-51x106个CD4+CAR+或CD8+CAR+T细胞(n＝29)。
如图28A中所示，观察到给予受试者的CAR表达T细胞组合物展现高T细胞纯度和批次之间的低差异。鉴于例如过程和产物控制，观察到含有CART细胞的治疗性细胞组合物的细胞特异性T细胞功能具有低批次间变化性。
体外抗原特异性细胞因子积累和细胞内细胞因子染色(ICS)显示，对于多种细胞因子(IL-2、TNF-α和IFN-γ)的细胞因子产生，批次之间具有相似的低变异。在示例性ICS实验中，将来自组合物的细胞用CD19刺激，针对细胞因子(包括TNF-α)和表面蛋白(包括作为记忆表型标记的C-C趋化因子受体7型(CCR7))染色，并通过流式细胞术进行分析。确定了在用于给予的组合物中呈细胞因子或表面蛋白阳性的细胞的数量。图28B显示用于以DL1和DL2给予的CAR T细胞组合物中存在的CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞、CD4+CAR+TNF-α+和CD8+CAR+TNF-α+细胞、CD4+CAR+CCR7+和CD8+CAR+CCR7+细胞的数量。这些结果汇总于表E17中。结果显示CD4+CAR+和CD8+CAR+细胞、CD4+CAR+TNF-α+和CD8+CAR+TNF-α+细胞、CD4+CAR+CCR7+和CD8+CAR+CCR7+细胞的数量的低变化性。例如，观察到对TNF-α产生呈阳性的细胞数的窄范围(n＝61)。
指示在用CD19刺激后CAR+细胞的肿瘤坏死因子α(TNFα)产生的参数在不同批次之间显示出窄范围，其中对于CD4+CAR+T细胞(N＝59)相对标准偏差(RSD)为37％，且对于CD8+CAR+T细胞(N＝61)相对标准偏差(RSD)为51％。
结果与以下观察结果一致：含有精确且一致剂量的CD4+和CD8+CAR T细胞的组合物、对CD4+和CD8+T细胞培养条件的控制和优化、细胞因子产生的低变化性、和/或用于给予的组合物的恒定配制和体积，可以导致组合物中一致的细胞健康。在所提供的实施方案中，这种制造和控制过程的各方面有助于使用来自多个不同受试者的细胞工程化并且针对给予多个不同受试者产生的此类细胞组合物的属性的低变化性。在一些方面，此类方面包括在受试者之间使用精确、一致的平坦剂量的所给予的CD4+和CD8+细胞；控制和优化CD4+和CD8+T细胞培养条件，如在不同受试者之间导致表型(例如，CCR7)和体外功能(例如，在抗原刺激后的IL-2、TNF-α和IFN-γ产生)的低药物产品批次间变化性的那些；以及使用药物产品的恒定配制和体积，这可以导致或促成通过所述方法产生的治疗性细胞组合物之间在指示细胞健康的属性方面的一致性。
实施例5：针对表达抗CD19 CAR的细胞的给予，对来自患有复发和难治性非霍奇金 淋巴瘤(NHL)的受试者的给予前后肿瘤活检进行生物标记评估
在给予CAR表达细胞之前和/或之后从受试者收集的肿瘤活检中评估几种生物标记的表达。
A.肿瘤活检样品
肿瘤活检是基于实施例1.A.2中的评估时间点从患有复发性或难治性(R/R)弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或套细胞淋巴瘤(MCL)的所选受试者收集，所述受试者接受上文实施例1和2中所述的使用含有表达对CD19具有特异性的嵌合抗原受体(CAR)的自体T细胞的治疗性CAR+T细胞组合物的治疗。肿瘤活检是在给予所述CAR+T细胞之前(治疗前)和在给予之后7至20天(治疗后)获得。这个实施例中描述在进行中的研究中经实施例1.A.2中的时间点进行评价的结果。检查了来自总计28名受试者(25名DLBCL和3名MCL)的43个活检(26个治疗前；17个治疗后和15个匹配对)的结果。
B.对生物标记、反应和安全性结果的评估
使用对编码抗CD19CAR的mRNA具有特异性的原位杂交(ISH)探针对肿瘤活检中CAR+T细胞的浸润进行定量。使用检测CAR表达细胞的细胞表面替代标记(CD4、CD8、CD19、CD20、CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1)的多重免疫荧光(IF)测定来计数CAR+T细胞、非CAR T细胞和B细胞。将肿瘤活检切片用苏木精和伊红(H&E)染色，并评估组织质量和肿瘤鉴定。使用图像分析软件分析免疫荧光图像。使用基于单变量t检验的统计分析来评估与反应结果的潜在相关性，并且p值是双侧的，不进行多重数调整。
评估受试者的反应和安全性结果，包括通过在给予所述CAR+T细胞后的不同时间点(包括给予后3个月)评估肿瘤负荷，并确定所述受试者是否患有进行性疾病(PD)、稳定疾病(SD)、部分反应(PR)或完全反应(CR)。所评价的安全性结果包括神经毒性(神经系统并发症，包括以下症状：意识错乱、失语、脑病、肌阵挛发作、惊厥、嗜睡和/或精神状态改变)，根据美国国家癌症研究所—常见毒性标准(CTCAE)量表4.03版(NCI-CTCAE v4.03)，按1-5量表分级。
C.结果
在被评估活检的受试者中观察到的客观反应率(ORR；包括CR和PR)为71％(20/28)。在被评估活检的受试者的36％(10/28；1级、2级)中观察到1级、2级CRS，并且在被评估活检的受试者的18％(5/28)中观察到2-4级NT。
观察到治疗前肿瘤活检含有变化的细胞组成：肿瘤细胞(中值：77％；范围5-96％)、CD4+细胞(0.90％；0.02-15％)，和CD8+细胞(1.5％；0-23％)。结果显示，与具有PD的那些受试者相比，在CAR+T细胞给予后3个月时具有CR或PR的受试者在治疗前肿瘤中具有较高内源CD4+细胞百分比(CR、PR中值：7.9％；PD中值：0.38％；p<0.0001)。治疗前肿瘤中CD8+细胞的百分比在3个月反应组之间没有差异(CR、PR中值：1.9％；PD中值：0.47％；p＝0.6496)。
在治疗后活检中，观察到CAR+T细胞已经浸润肿瘤，并且在活检样品中构成多达22％的细胞。观察到与继续实现SD或PD的最佳总体反应(BOR)的受试者(中值：0.51％)相比，在继续实现CR(中值：3.9％)或PR(中值：1.1％)的受试者中，治疗后样品(给予后7至20天)中的肿瘤浸润水平更高。虽然观察到CD4+和CD8+CAR T细胞二者在治疗后时间点(给予后7至20天)已浸润肿瘤区域，但观察到如与继续实现SD或PD的BOR的受试者相比，在此治疗后时间点继续实现CR的受试者具有较高的CD8+CAR+T细胞与CD4+CAR+T细胞的比率(CR中值：0.83；SD、PD中值：0.14；p＝0.0097)。
比较来自单独受试者的匹配的治疗前与治疗后活检，结果显示朝向以下的趋势：如与最终实现SD或PD的BOR的受试者相比，最终实现CR或PR的BOR的受试者的肿瘤中CD8+细胞(CAR+T和非CAR T)具有更大的治疗后增加(CR、PR中值变化：+5.3％；SD、PD中值变化：+0.06％；p＝0.1225)。
免疫抑制因子(包括CD73、FOXP3、CD163、IDO和PD-L1)的表达在治疗前(CD73(中值：1.5％；范围0-42％)、FOXP3(0.10％；0-1.5％)、IDO(0.06％；0-11％)、CD163(1.2％；0-24％)和PD-L1(0.16％；0-56％))和治疗后(CD73(1.6％；0-53％)、FOXP3(0.09％；0-4.3％)、IDO(0.28％；0-15％)、CD163(3.6％；0-22％)和PD-L1(3.3％；0-65％))在受试者之间变化。观察到匹配的活检中CD8+细胞的治疗后增加与IDO(R2＝0.64)和PD-L1(R2＝0.61)表达的治疗后增加相关。这个结果与以下结论一致：在评估时间时CD8+CAR+细胞的浸润可以指示实现一定程度的反应或反应持续时间的潜在可能性，并且此类细胞的存在和/或活性可以导致TME因子的上调。
D.结论
观察到在CAR+T细胞给予后第3个月的持久反应与治疗前肿瘤中的较高CD4+细胞水平相关。在治疗后肿瘤细胞中，观察到CAR+T细胞(CD4+和CD8+二者)浸润了所述肿瘤和相邻组织。ORR与肿瘤活检中的CAR+T细胞增加相关。与治疗前肿瘤活检中的CD8+水平相比，治疗后肿瘤活检中CD8+水平的增加与增加的IDO和PD-L1表达相关。在一些实施方案中，靶向这些途径的疗法(如在给予所述CAR-T细胞时或在给予所述CAR-T细胞后给予的那些)可以在CAR+T细胞给予后增强一种或多种治疗结果或其持续时间。
实施例6：在给予抗CD19 CAR表达细胞后，在患有复发性和难治性非霍奇金淋巴瘤 (NHL)的受试者中对反应和安全性结果的进一步评估
在上文实施例1和3中描述的临床研究中的后续时间点在患者中评估反应和安全性结果。
A.受试者和治疗
这个实施例中呈现的在此时间点进行的分析是基于对已经给予抗CD19CAR表达细胞的完整群组中总计102名受试者(73名在核心群组中)的评估。所述完整群组包括如下受试者：在2个治疗线后患有DLBCL(DLBCL，NOS从头和从滤泡性淋巴瘤转化)；高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)；从CLL或MZL转化的DLBCL；PMBCL；和FL3B，ECOG 0-2；用于分析的所述核心群组包括如下受试者：患有DLBCL(NOS和从滤泡性淋巴瘤转化(tFL))或高级B细胞淋巴瘤(双重/三重命中)且东部肿瘤协作组体能状态(ECOG PS)为0或1。完整和核心群组中约90％的所治疗患者具有预测3-6个月的短中值总存活期(OS)的至少一种大风险疾病特征(参见Crump等人,Blood(2017)130:1800-1808；和Van de Neste等人,Bone MarrowTransplant.(2016)51(1):51-7)，如双重/三重命中表达子、原发性难治性疾病、对2个或更多个治疗线的难治性、从未实现过CR、从未接受过自体干细胞移植(ASCT)或ECOG PS为2。
在此时间点，总计134名受试者已进行白细胞分离术，其中2名受试者的组合物无法利用。对于DLBCL群组中99％的进行单采术的受试者(132/134)，产物是可利用的。在另外18名产物可利用的受试者中，5名已经退出，并且13名已经发生进行性疾病或已经死亡。已经向总计114名受试者给予抗CD19CAR表达细胞，其中12名接受非合规抗CD19CAR表达细胞(组合物不一定符合某些规范，但被认为对于给予是安全的)。受试者已经接受DL1(n＝45)、DL1(n＝6)或DL2(n＝51)的双剂量。已经向患有套细胞淋巴瘤(MCL)七(7)名受试者以DL1给予CAR+细胞。在此时间点，在门诊环境中治疗八(8)名受试者。
在所述时间点的完整和核心群组受试者的人口统计学和基线特征示于表E18中。
HSCT，造血干细胞移植。IPI，国际预后指数；SD，稳定疾病；WHO，世界卫生组织。
a在试验起始时，包括在DLBCL，NOS组织学中；基于最新的WHO标准(Swerdlow等人,(2016)Blood 127(20):2375-2390)，现在被视为高级B细胞淋巴瘤，其具有myc和bcl2和/或bcl6重排以及DLBCL组织学(双重/三重命中)。
b到最后一次含有化学疗法的方案的SD或PD或在自体SCT后<12个月复发。
B.治疗后的安全性和反应结果
表E19显示完整和核心群组的安全性结果。如图所示，没有观察到因CRS或NT所致的死亡。在完整群组中，到CRS发作的中值时间为5天(范围，2-12天)，并且到NT发作的中值时间为10天(范围，3-23天)。在完整群组中，17％(n＝17)接受托珠单抗，并且21％(n＝21)接受皮质类固醇，作为毒性干预。在核心群组中，与DL1相比，在DL2下没有观察到CRS或NT增加。
a三名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
图29描绘在此时间点完整群组(n＝102)中被观察到已经经历实验室异常和治疗紧急不良事件(TEAE)的受试者的百分比(不包括用合规产品以DL1治疗且随访至少28天的6名患有MCL的受试者的数据；显示在20％或更多受试者中发生的TEAE和实验室异常)。
如表E20中所示，在患有复发性或难治性(R/R)DLBCL的受试者中观察到高反应率。结果与核心群组中对治疗结果的剂量反应作用一致。肿瘤负荷高于阈值(如大于50cm2的尺寸乘积之和(SPD)的体积肿瘤测量值所指示)的受试者在接受DL1和DL2的受试者之间类似地分布(每组中受试者的约1/3)。
a三名按DL1D(剂量水平1，双剂量时间表)治疗的患者具有类似结果。
包括核心群组中以所有剂量水平治疗的所有DLBCL患者的大风险DLBCL亚组中不同受试者亚组之间的六个月客观反应率(ORR)显示于图30中。结果显示大风险DLBCL亚组对抗CD19CAR+T细胞给予的高持久ORR。
完整群组和核心群组受试者的反应持续时间(DOR，中值随访期为8个月)和总存活期(依据最佳总体反应分组(无反应者、CR/PR、CR和/或PR)，中值随访期为12个月)的结果显示于图31A-图31D中。结果显示，在核心群组中，88％的在3个月时具有CR的受试者在6个月时继续显示CR，并且93％的在6个月时展现CR的受试者继续显示更长期的反应。
结果与以下观察结果一致：给予含有精确一致剂量的CD4+和CD8+CAR+T细胞的抗CD19CAR+细胞组合物在患有R/R侵袭性NHL且具有较差预后和/或过度预治疗的受试者中引起持久反应。结果在核心群组中显示有利的持久反应率，在6个月时具有49％ORR和46％CR率，且93％的在6个月时处于CR中的受试者(在所有剂量水平下)在此时间点仍处于反应中。结果也与可管理毒性和有利的安全性概况一致，包括低严重CRS(1％)和严重神经毒性(13％)比率，这在一些方面支持门诊给予。
本发明并不旨在限于具体公开的实施方案的范围，所提供的实施例例如是为了说明本发明的各种方面。根据本文的描述和传授，对组合物和方法的各种修改将变得清楚。可以在不脱离本公开文本的真实范围和精神的情况下实践这些变化，并且这些变化旨在落入本公开文本的范围内。
序列
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/>
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序列表
<110> JUNO THERAPEUTICS, INC.
ALBERTSON, Tina
<120> 使用过继细胞疗法治疗的制品和方法
<130> 735042012140
<140> 尚未分配
<141> 同时随同提交
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<151> 2018-01-08
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260 265 270
His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val
275 280 285
Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His
290 295 300
Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro
305 310 315 320
Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala
325 330 335
Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly
340 345 350
Ile Gly Leu Phe Met
355
<210> 8
<211> 27
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 8
Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 9
<211> 66
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 9
Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser Asn
1 5 10 15
Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro Leu
20 25 30
Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly
35 40 45
Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe
50 55 60
Trp Val
65
<210> 10
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<300>
<308> UniProt P10747
<309> 1989-07-01
<400> 10
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 11
<211> 41
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD28
<400> 11
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Gly Gly His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 12
<211> 42
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> 4-1BB
<300>
<308> UniProt Q07011.1
<309> 1995-02-01
<400> 12
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 13
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 13
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 14
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Glu Pro Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<223> CD3ζ
<400> 15
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Lys Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 335
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> tEGFR
<400> 16
Arg Lys Val Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu
1 5 10 15
Ser Ile Asn Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Asp Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe
35 40 45
Thr His Thr Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr
50 55 60
Val Lys Glu Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn
65 70 75 80
Arg Thr Asp Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg
85 90 95
Thr Lys Gln His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile
100 105 110
Thr Ser Leu Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val
115 120 125
Ile Ile Ser Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp
130 135 140
Lys Lys Leu Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn
145 150 155 160
Arg Gly Glu Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu
165 170 175
Cys Ser Pro Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser
180 185 190
Cys Arg Asn Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu
195 200 205
Leu Glu Gly Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln
210 215 220
Cys His Pro Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly
225 230 235 240
Arg Gly Pro Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro
245 250 255
His Cys Val Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr
260 265 270
Leu Val Trp Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His
275 280 285
Pro Asn Cys Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro
290 295 300
Thr Asn Gly Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala
305 310 315 320
Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met
325 330 335
<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> T2A
<400> 17
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 18
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P2A
<400> 18
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 19
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> P2A
<400> 19
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 20
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> E2A
<400> 20
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 21
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> F2A
<400> 21
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<220>
<221> 重复序列
<222> (5)...(9)
<223> SGGGG重复5次
<400> 22
Pro Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 23
Gly Ser Ala Asp Asp Ala Lys Lys Asp Ala Ala Lys Lys Asp Gly Lys
1 5 10 15
Ser
<210> 24
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 24
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 25
<211> 735
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> scFv
<400> 25
gacatccaga tgacccagac cacctccagc ctgagcgcca gcctgggcga ccgggtgacc 60
atcagctgcc gggccagcca ggacatcagc aagtacctga actggtatca gcagaagccc 120
gacggcaccg tcaagctgct gatctaccac accagccggc tgcacagcgg cgtgcccagc 180
cggtttagcg gcagcggctc cggcaccgac tacagcctga ccatctccaa cctggaacag 240
gaagatatcg ccacctactt ttgccagcag ggcaacacac tgccctacac ctttggcggc 300
ggaacaaagc tggaaatcac cggcagcacc tccggcagcg gcaagcctgg cagcggcgag 360
ggcagcacca agggcgaggt gaagctgcag gaaagcggcc ctggcctggt ggcccccagc 420
cagagcctga gcgtgacctg caccgtgagc ggcgtgagcc tgcccgacta cggcgtgagc 480
tggatccggc agccccccag gaagggcctg gaatggctgg gcgtgatctg gggcagcgag 540
accacctact acaacagcgc cctgaagagc cggctgacca tcatcaagga caacagcaag 600
agccaggtgt tcctgaagat gaacagcctg cagaccgacg acaccgccat ctactactgc 660
gccaagcact actactacgg cggcagctac gccatggact actggggcca gggcaccagc 720
gtgaccgtga gcagc 735
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<220>
<221> 变体
<222> (1)...(1)
<223> Xaa1 = 甘氨酸、半胱氨酸或精氨酸
<220>
<221> 变体
<222> (4)...(4)
<223> Xaa4 = 半胱氨酸或苏氨酸
<400> 26
Xaa Pro Pro Xaa Pro
1 5
<210> 27
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 27
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 28
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 28
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 29
<211> 61
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 29
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro
1 5 10 15
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
20 25 30
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro
35 40 45
Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 30
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 30
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 31
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 31
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 32
Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 33
Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 34
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 铰链
<400> 34
Glu Val Val Val Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L1
<400> 35
Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr Leu Asn
1 5 10
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L2
<400> 36
Ser Arg Leu His Ser Gly Val
1 5
<210> 37
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR L3
<400> 37
Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr Phe Gly
1 5
<210> 38
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H1
<400> 38
Asp Tyr Gly Val Ser
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H2
<400> 39
Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 CDR H3
<400> 40
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
1 5
<210> 41
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 VH
<400> 41
Glu Val Lys Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr
20 25 30
Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Leu Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Lys His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 VL
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr
100 105
<210> 43
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> FMC63 scFv
<400> 43
Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr His Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Gln
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Thr Gly Ser Thr Ser Gly
100 105 110
Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys Gly Glu Val Lys
115 120 125
Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Gln Ser Leu Ser
130 135 140
Val Thr Cys Thr Val Ser Gly Val Ser Leu Pro Asp Tyr Gly Val Ser
145 150 155 160
Trp Ile Arg Gln Pro Pro Arg Lys Gly Leu Glu Trp Leu Gly Val Ile
165 170 175
Trp Gly Ser Glu Thr Thr Tyr Tyr Asn Ser Ala Leu Lys Ser Arg Leu
180 185 190
Thr Ile Ile Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Leu Lys Met Asn
195 200 205
Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Lys His Tyr
210 215 220
Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
225 230 235 240
Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 44
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR L1
<400> 44
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala
1 5 10
<210> 45
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR L2
<400> 45
Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser
1 5
<210> 46
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR L3
<400> 46
Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 47
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR H1
<400> 47
Ser Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 48
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR H2
<400> 48
Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 49
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 CDR H3
<400> 49
Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 50
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 VH
<400> 50
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 VL
<400> 51
Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser
65 70 75 80
Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr
85 90 95
Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 接头
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> SJ25C1 scFv
<400> 53
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser
130 135 140
Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
145 150 155 160
Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
165 170 175
Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn
180 185 190
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe
195 200 205
Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe
210 215 220
Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys
225 230 235 240
Leu Glu Ile Lys Arg
245
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> PRT
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acctgaggag acggtgacc 19

Claims (59)

1.表达嵌合抗原受体(CAR)的T细胞在制备用于治疗受试者中非霍奇金淋巴瘤(NHL)的药物中的用途，所述药物包含T细胞的单位剂量，其中：
所述CAR特异性地结合至由所述NHL表达的靶抗原；T细胞的所述单位剂量包含介于2.5x 107或约2.5x 107个存活的CAR表达T细胞与2x 108或约2x 108个存活的CAR表达T细胞之间，包括端值；并且
所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)或3B级滤泡性淋巴瘤，并且其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态，
其中T细胞的所述单位剂量包含限定比率的表达所述CAR的存活的CD4+细胞与表达所述CAR的存活的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为介于约1:3与约3:1之间，
其中所述抗原为CD19，并且所述CAR包含对CD19具有特异性的scFv；且
其中所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列、和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ IDNO:40)的CDRH3序列。
2.根据权利要求1所述的用途，其中T细胞的所述单位剂量包含限定比率的表达所述CAR的存活的CD4+细胞与表达所述CAR的存活的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为约1:1。
3.根据权利要求1所述的用途，其中：
至少35％、至少40％或至少50％的根据所述用途治疗的受试者实现完全反应(CR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现CR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的CR；
至少60％、70％、80％、90％或95％的截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者在实现所述CR后保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活等于或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述用途治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的实现OR的受试者展现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；
至少35％、至少40％或至少50％的实现OR的受试者在实现所述OR后保持反应或存活等于或大于3个月和/或等于或大于6个月；和/或
至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的受试者实现OR或持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR，所述受试者在给予T细胞的所述单位剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤，或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述细胞对于所述受试者是自体的，并且
对于所述药物的制备，不要求和/或规定单采术的最小绝对淋巴细胞计数(ALC)；和/或
所述细胞是通过如下过程产生，所述过程对于至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的所述受试者或所选受试者群体，能够产生用于根据所述用途给予的细胞产物。
5.根据权利要求1所述的用途，其中：
大于或大于约50％、约60％、约70％或约80％的根据所述用途治疗的受试者不展现3级或更高级的细胞因子释放综合征(CRS)和/或不展现3级或更高级的神经毒性，和/或大于40％或50％或55％不展现任何神经毒性或CRS。
6.根据权利要求1所述的用途，其中：
T细胞的所述单位剂量包含介于5x 107或约5x 107个存活的CAR表达T细胞与1x 108个存活的CAR表达T细胞，包括端值。
7.根据权利要求6所述的用途，其中至少40％、至少50％、至少60％、至少70％的受试者实现OR或持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR，所述受试者在给予T细胞的所述单位剂量之时或之前患有或被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤，或在给予自体干细胞移植(ASCT)后复发。
8.根据权利要求6所述的用途，其中：
所述CR或所述OR持续超过3个月或超过6个月；至少20％、至少25％、至少35％、至少40％或至少50％的根据所述用途治疗的受试者实现持续超过3个月或超过6个月的CR；
至少60％、70％、80％、90％或95％的根据所述用途治疗并实现CR的受试者保持CR或保持反应或保持存活等于或大于3个月或等于或大于6个月或等于或大于9个月；
至少60％、70％、80％、90％或95％的根据所述用途治疗并截至1个月和/或截至3个月实现CR的受试者保持反应、保持CR、和/或存活或无进展存活大于为或大于3个月和/或等于或大于6个月和/或等于大于9个月；
至少50％、至少60％或至少70％的根据所述用途治疗的受试者实现客观反应(OR)；
至少60％、70％、80％、90％或95％的受试者实现持续等于或大于3个月或等于或大于6个月的OR；和/或
至少至少35％、至少40％或至少50％的根据所述用途治疗并实现OR的受试者保持反应或存活等于或大于3个月和/或等于或大于6个月。
9.根据权利要求1所述的用途，其中：
在给予T细胞的所述单位剂量之时或之前，所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤；和/或
至少70％、至少80％、至少90％或至少95％的根据所述用途治疗并在给予T细胞的所述单位剂量之时或之前展现或被鉴定为展现具有CNS受累的淋巴瘤的受试者实现所述CNS疾病的消退。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中：
大于或大于约30％、35％、40％或50％的根据所述用途治疗的受试者不展现任何等级的细胞因子释放综合征(CRS)或神经毒性；
至少或至少约45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的根据所述用途治疗的受试者不展现开始给予后早于3天的CRS发作，和/或不展现开始给予后早于5天的神经毒性发作；和/或
在根据所述用途治疗的受试者之间神经毒性的中值发作是在根据所述用途治疗的受试者的CRS的中值峰处或之后、或中值消退时间时或之后，和/或在根据所述用途治疗的受试者之间神经毒性的中值发作大于或大于约8、9、10或11天。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中在给予T细胞的所述单位剂量之前，尚未向所述受试者给予能够治疗、预防、延迟、降低或减弱给予T细胞的所述单位剂量之后的毒性发生或毒性发生风险的药剂或治疗。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述药剂是或包含抗IL-6抗体、抗IL-6R抗体或类固醇。
13.根据权利要求11所述的用途，其中所述药剂是或包含托珠单抗、司妥昔单抗或地塞米松。
14.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中：
T细胞的所述单位剂量的给予和任何随访是在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行；并且
如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者给予用于治疗、预防、降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
15.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述NHL选自侵袭性NHL、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、NOS(从头的和从惰性转化的)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和/或3B级滤泡性淋巴瘤(FL3B)。
16.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述NHL包括弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)、或3B级滤泡性淋巴瘤。
17.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述NHL包含DLBCL。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述DLBCL不包含从MZL和CLL(里希特氏)转化的DLBCL和/或被给予T细胞的所述剂量的所述受试者患有特征为从头或从惰性转化的DLBCL和/或不包含从MZL和CLL转化的DLBCL。
19.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述NHL不包含PMBCL和/或被给予T细胞的所述单位剂量的所述受试者不包含PMBCL。
20.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中，在给予所述药物时或紧临给予所述药物之前，所述受试者在用一种或多种用于所述NHL的先前疗法治疗缓解后复发，或者变得用一种或多种用于所述NHL的先前疗法难以治疗。
21.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中，在给予T细胞的所述单位剂量之时或之前：
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有双重/三重命中淋巴瘤；
所述受试者被鉴定为或已被鉴定为患有化疗难治性淋巴瘤或化疗难治性DLBCL；
所述受试者没有响应于先前疗法实现完全缓解(CR)；和/或
所述受试者在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发。
22.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，所述方法包括在给予T细胞的所述单位剂量之前，鉴定或选择用于给予T细胞的所述单位剂量的受试者，所述受试者：
患有双重/三重命中淋巴瘤；
患有化疗难治性淋巴瘤；
尚未响应于用于治疗所述NHL的先前疗法实现完全缓解(CR)；
在接受自体干细胞移植(ASCT)后1年内或不到1年内复发；和/或
患有与中枢神经系统(CNS)受累相关或涉及中枢神经系统(CNS)受累的淋巴瘤。
23.根据权利要求21所述的用途，其中所述化疗难治性淋巴瘤为化疗难治性DLBCL。
24.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中向所述受试者给予另外的治疗剂或疗法。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述另外的治疗剂或疗法为细胞疗法。
26.根据权利要求25所述的用途，其中所述细胞疗法并非CAR+T细胞疗法。
27.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中：
所述CAR包含跨膜结构域、衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、包含CD3ζ信号传导结构域的细胞质信号传导结构域、以及介于所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
28.根据权利要求27所述的用途，其中所述共刺激分子是或包含4-1BB。
29.根据权利要求27所述的用途，其中所述间隔子由免疫球蛋白铰链的全部或一部分组成并且长度为15个或更少氨基酸。
30.根据权利要求27所述的用途，其中所述间隔子由长度为或为约12个氨基酸组成。
31.根据权利要求27所述的用途，其中所述间隔子由SEQ ID NO:1所示的序列组成。
32.根据权利要求27所述的用途，其中所述scFv包含SEQ ID NO:41所示的VH序列和SEQID NO:42所示的VL序列。
33.根据权利要求27所述的用途，其中所述scFv包含SEQ ID NO:43所示的序列。
34.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中，在给予T细胞的所述单位剂量之前，已经用包括给予氟达拉滨和/或环磷酰胺的淋巴细胞清除疗法对所述受试者进行了预调理。
35.根据权利要求34所述的用途，其中：
所述T细胞单位剂量和/或所述淋巴细胞清除疗法的给予是通过门诊递送进行的；并且
如果所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则使所述受试者住院或在医院停留过夜和/或向所述受试者给予用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
36.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中T细胞的所述单位剂量是肠胃外给予。
37.根据权利要求36所述的用途，其中所述T细胞的所述单位剂量是静脉内给予。
38.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述T细胞是从受试者获得的原代T细胞。
39.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述T细胞对于所述受试者是自体的。
40.根据权利要求1-9中任一项所述的用途，其中所述药物包含含有CD4+T细胞或CD8+T细胞中的一种的第一组合物并且与含有所述CD4+T细胞或所述CD8+T细胞中的另一种的第二组合物一起给予，用于在给予T细胞的所述单位剂量中使用，其中T细胞的所述单位剂量包含表达所述
CAR的CD4+T细胞和表达所述CAR的CD8+T细胞并且作为多种分开的组合物被给予，所述多种分开的组合物包含含有所述CD4+T细胞或所述
CD8+T细胞中的一种的第一组合物以及含有所述CD4+T细胞或所述
CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
41.根据权利要求40所述的用途，其中：
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔0至12小时、相隔0至6小时或相隔0至2小时，或其中所述第一组合物和所述第二组合物在同一天给予，相隔介于约0与约12小时之间、相隔介于约0与约6小时之间或相隔介于约0与2小时之间进行；和/或
所述第一组合物和所述第二组合物的给予相隔介于约1分钟与约1小时之间或相隔介于约5分钟与约30分钟之间进行。
42.根据权利要求40所述的用途，其中所述第一组合物和第二组合物的给予相隔不超过2小时、不超过1小时、不超过30分钟、不超过15分钟、不超过10分钟或不超过5分钟。
43.根据权利要求40中任一项所述的用途，其中：
所述第一组合物包含所述CD4+T细胞；或
所述第一组合物包含所述CD8+T细胞。
44.根据权利要求43所述的用途，其中所述第一组合物在所述第二组合物之前给予。
45.根据权利要求40所述的用途，其中T细胞的所述单位剂量包含约1x 108个重组受体表达细胞。
46.一种包含细胞疗法和给予所述细胞疗法的说明书的制品，所述细胞疗法包括表达嵌合抗原受体(CAR)的CD4+T细胞和表达所述CAR的CD8+T细胞，其中所述说明书规定：
(i)所述细胞疗法包含给予患有或被鉴定患有非霍奇金淋巴瘤(NHL)的受试者的T细胞的所述单位剂量，所述NHL选自弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、原发性纵隔大B细胞淋巴瘤(PMBCL)、NOS(从头的或从惰性淋巴瘤转化的)或3B级滤泡性淋巴瘤，其中所述受试者被鉴定为或已被鉴定为具有0、1或2的东部肿瘤协作组体能状态(ECOG)状态；并且
(ii)给予T细胞的所述单位剂量或对应于或含有T细胞的所述单位剂量的量或体积的配制品，其中T细胞的所述单位剂量包含约5x 107个存活的CAR表达T细胞至2x 108个存活的CAR表达T细胞，包括端值，其中T细胞的所述单位剂量包含限定比率的表达所述CAR的存活的CD4+细胞与表达所述CAR的存活的CD8+细胞和/或限定比率的CD4+细胞与CD8+细胞，所述比率为介于约1:3与约3:1之间，
其中所述抗原为CD19，并且所述CAR包含对CD19具有特异性的scFv；且
其中所述scFv包含RASQDISKYLN(SEQ ID NO:35)的CDRL1序列、SRLHSGV(SEQ ID NO:36)的CDRL2序列和/或GNTLPYTFG(SEQ ID NO:37)的CDRL3序列、和/或DYGVS(SEQ ID NO:38)的CDRH1序列、VIWGSETTYYNSALKS(SEQ ID NO:39)的CDRH2序列和/或YAMDYWG(SEQ IDNO:40)的CDRH3序列。
47.根据权利要求46所述的制品，其中所述说明书规定以表达所述CAR的存活的CD4+细胞与存活的CD8+细胞的限定比率给予所述细胞疗法。
48.根据权利要求46或权利要求47所述的制品，其中：
所述说明书规定，所述单位剂量的给予可以在门诊基础上和/或不需要住院或在医院过夜停留的情况下进行。
49.根据权利要求48所述的制品，其中所述说明书进一步规定，如果在门诊基础上在不需要住院或在医院过夜停留的情况下给予所述单位剂量之后，所述受试者展现持续的发热或在用退热药治疗后没有被或还没有被降低或降低超过1℃的发热，则要使所述受试者住院或在医院过夜停留和/或要给予所述受试者用于治疗或预防或降低或减弱神经毒性和/或细胞因子释放综合征或其风险的药剂或治疗。
50.根据权利要求49所述的制品，其中所述药剂是或包含抗IL-6抗体或抗IL-6R抗体。
51.根据权利要求49所述的制品，其中所述药剂是或包含托珠单抗或司妥昔单抗；和/或类固醇。
52.根据权利要求51所述的制品，其中所述类固醇为地塞米松。
53.根据权利要求46或权利要求47所述的制品，所述制品进一步包含用于与淋巴细胞清除疗法一起使用、在所述淋巴细胞清除疗法之后使用或结合所述淋巴细胞清除疗法使用的说明书。
54.根据权利要求53所述的制品，其中所述淋巴细胞清除疗法任选地包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。
55.根据权利要求46或权利要求47所述的制品，其中T细胞的所述单位剂量包含含有CD4+T细胞或CD8+T细胞中的一种的第一组合物和含有CD4+T细胞或CD8+T细胞中的另一种的第二组合物。
56.根据权利要求55所述的制品，其中所述说明书规定，所述第一组合物是与包含所述CD4+T细胞或所述CD8+T细胞中的另一种的第二组合物一起使用。
57.根据权利要求55或权利要求56所述的制品，其中所述第一组合物的细胞和相同组合物的细胞来自相同受试者。
58.根据权利要求55或权利要求56所述的制品，其中所述说明书规定，所述第一组合物和所述第二组合物要以限定比率的表达所述重组受体的存活的CD4+细胞与表达所述重组受体的存活的CD8+细胞和/或限定比率的存活的CD4+细胞与存活的CD8+细胞来给予，所述比率为约1:1。
59.根据权利要求46或权利要求47所述的制品，其中：
所述CAR包含跨膜结构域、衍生自共刺激分子的细胞质信号传导结构域、包含CD3ζ信号传导结构域的细胞质信号传导结构域、以及介于所述跨膜结构域与所述scFv之间的间隔子。
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