KR20210102888A - Ｇ 단백질 결합 수용체 ｃ 클래스 5 그룹 ｄ 멤버(ｇｐｒｃ5ｄ)에 특이적인 키메라 항원 수용체 - Google Patents
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
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- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2878—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
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- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
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- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
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- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
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- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
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- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
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- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
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- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
Abstract
G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 항체 부분 및 GPRC5D에 특이적인 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 키메라 항원 수용체(CAR)가 제공된다. 본 개시 내용은 또한 상기 GPRC5D-결합 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포 및 이의 입양 세포 요법에서의 용도에 관한 것이다.
Description
본 개시는 일부 측면에서 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 항체 부분 및 GPRC5D에 특이적인 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 CAR에 관한 것이다. 본 개시 내용은 또한 상기 GPRC5D-결합 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포 및 이의 입양 세포 요법에서의 용도에 관한 것이다.
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 가출원들: 제62/754,576호(제목 “G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 키메라 항원 수용체”, 2018년 11월 1일 출원), 제62/774,159호(제목 “G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 키메라 항원 수용체”, 2018년 11월 30일 출원), 제62/819,422호(제목 “G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 키메라 항원 수용체”, 2019년 3월 15일 출원), 제62/904,197호(제목 “G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적인 키메라 항원 수용체”, 2019년 9월 23일 출원), 및 제62/904,187호(제목 “키메라 항원 수용체를 암호화하는 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드 작제물(construct)”, 2019년 9월 23일 출원)의 우선권을 주장하고, 이의 내용들은 그 전체가 참조로 포함된다.
서열 목록의 참조 포함
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 제출된다. 서열 목록은 2019년 10월 31일에 생성된 735042013740SeqList.TXT라는 제목의 파일로 제공되며 이의 크기는 294 킬로바이트이다. 전자 형식의 서열 목록 내 정보는 그 전체가 참조로 포함된다.
G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)는 G 단백질 결합 수용체이며, 이의 특이적인 작용은 아직 밝혀지지 않았다. 다른 혈액학상 악성 종양이 있는 환자의 골수 샘플에서 GPRC5D의 최소한의 발현과 비교하여 다발성 골수종(MM)이 있는 환자의 골수 샘플에서 GPRC5D의 발현은 높다. 이 발현에 기초하여 GPRC5D는 MM 종양의 표지자 및 치료 표적이 될 수 있다. 다양한 GPRC5D-결합 키메라 항원 수용체(CAR) 및 상기 CAR을 발현하는 세포가 이용 가능하다. 그러나, 예컨대 입양 세포 요법에 사용하기 위한 개선된 GPRC5D-결합 CAR 및 조작된 GPRC5D-CAR 발현 표적 세포에 대한 필요성이 남아있다. 상기 필요성을 충족시키는 구현예가 본원에 제공된다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 영역 및 (ii) 서열 번호: 22, 24,26, 28, 30, 32 또는 34 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유하는 키메라 항원 수용체가 본원에 제공된다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 22, 24,26, 28, 30, 32 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 135, 152, 162, 165, 167 또는 169 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 169 또는 170 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 133, 129, 137, 144, 151, 156, 164 또는 171 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 가변 중쇄(VH) 및 (ii) (a) 서열 번호: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 또는 174 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 또는 161 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173, 175 또는 297 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 키메라 항원 수용체의 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 (약) 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 갖는다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나, 또는 전술한 임의의 갯수 사이의 길이를 갖는다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 면역글로불린으로부터 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상이 IgG4 또는 IgG2, 선택적으로 인간 IgG4 또는 인간 IgG2로부터 전부 또는 일부가 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지, CH2 및 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 IgG4 및 IgG2로부터 유래한 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4와 비교해 적어도 하나의 아미노산 대체를 함유한 변형된 IgG4, IgG2/4 키메라 CH2 및 IgG4 CH3 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 (i) 서열 번호: 17에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 17에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 17의 기능적 변이체; 또는 (iii) 125개 이상의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 17에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 48에 제시된 (또한 서열 번호: 74에 제시된) 뉴클레오타이드의 서열에 의해 암호화된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 21 및 22에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하고; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 23 및 24에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 25 및 26에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 25 및 26에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 27 및 28에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 29 및 30에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 29 및 30에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 31 및 32에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 33 및 34에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 33 및 34에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 110, 111 및 107의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 112, 113 및 114의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 118, 119 및 117의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 141 및 137의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 143 및 144의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 148, 149 및 147의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 167, 168 및 164의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 174, 89 및 175의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 25 및 26에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 29 및 30에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 33 및 34에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 21 및 22에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 23및 24에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 23 및 24에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 27 및 28에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 31 및 32에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 마우스 GPRC5D에 교차 반응성이거나 결합하고 및/또는 시노몰구스 GPRC5D에 교차 반응성이거나 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 마우스 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D에 교차 반응성이 아니거나 결합하지 않는다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열, 또는 각각 서열 번호: 27 및 28에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 키메라 항원 수용체는 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH; 및 서열 번호: 28에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 각각 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 상기 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 함유한 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역 및 VL 영역은 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 320)를 함유한 링커에 의해 연결된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 또는 13 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 또는 13 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 또는 13 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 또는 11 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 7 또는 11 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 또는 11 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 또는 14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 또는 14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 또는 14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 또는 12 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 8 또는 12 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 또는 12 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항원 결합 도메인은 서열 번호: 264에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 세포내 세포질 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 기능적 변이체의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 도메인은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포내 신호 전달 도메인, 예컨대 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포내 신호 전달 영역 사이에 존재한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 CD4, CD28, 또는 CD8로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 28에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역;을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 또는 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; VH 영역은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 VH 영역은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 또는 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 또는 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 또는 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CDf28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역;을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다.
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 또는 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역;을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 또는 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역;을 함유하는 키메라 항원 수용체가 또한 본원에 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 28에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7 또는 서열 번호: 8에 제시된 scFv를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 28에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 함유하고; 그리고 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 scFv를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 28에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 함유하고; 그리고 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 scFv를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 46에 제시된 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 19에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 함유한다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서를 암호화하는 핵산은 하나 이상의 변형된 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 함유하고, 상기 변형된 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 73에 제시된 서열에 함유된 기준 스플라이스 공여 부위 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 아미노산 치환을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 정규(canonical), 비정규(non-canonical) 또는 숨은 스플라이스 부위이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 적어도 또는 약 0.4, 0.5, 0.6, 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예측 점수를 갖고/거나; 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 aatctaagtacggac (서열 번호: 176), tcaactggtacgtgg(서열 번호:177), acaattagtaaggca(서열 번호:178) and/or accacaggtgtatac(서열 번호:179)을 함유하고/거나; 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호:180) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호:181)를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 적어도 또는 약 0.70, 0.75, 0.80, 0.85, 0.90, 0.95, 0.99 또는 1.0의 스플라이스 부위 예측 점수를 갖고/거나; 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위(들)는 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호: 177)를 함유하고/거나; 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호: 180)를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 적어도 하나는 기준 스플라이스 수용체 및/또는 기준 스플라이스 공여 부위의 스플라이스 부위 접합부의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 잠재성(silent)이고/거나 서열 번호: 73과 비교하여 퇴화 코돈을 생성하고/거나 암호화된 스페이서의 아미노산 서열을 변경하지 않는다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 변형된 스플라이스 공여 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호: 182), tcaactggtatgtgg(서열 번호: 183), accatctccaaggcc(서열 번호: 184) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호: 185)에 제시되고; 및/또는 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 186), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 187) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 변형된 스플라이스 공여 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 183)에 제시되고 및/또는 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 186) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 (또한 서열 번호: 48에 제시된) 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 73에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 283에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 284에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 스페이서는 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 일부에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 발현 시, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타낸다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포에서 발현 시, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 기준 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 기준 폴리뉴클레오타이드는 폴리뉴클레오타이드와 동일한 아미노산 서열을 암호화하고, 여기서 기준 폴리뉴클레오타이드는 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 함유하고/거나 서열 번호: 73에 제시된 스페이서를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, RNA 이질성은 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과하여 감소된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 기준 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타낸다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기영동, 칩-기반 모세관 전기영동, 분석적 초원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 키메라 수용체는 제1 키메라 수용체이고 폴리뉴클레오타이드는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 더 함유한다. 따라서, 본원에는 또한 본원에 제공된 임의의 것을 포함하여 GPRC5D에 대해 지향된 제1 키메라 수용체, 및 제2 키메라 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 키메라 수용체는 하나 이상의 다중 시스트론 요소(들)에 의해 분리된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 다중 시스트론 요소는 리보솜 스킵 서열이거나 이를 함유한다. 일부 구현예에서, 리보솜 스킵 서열은 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 요소이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 44, 45 및 319 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기된다(codon diverged). 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 319에 제시된 서열이거나 이를 포함한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된, GPRC5D 이외의 것과 같은 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 또는 FcRH5 중에서 선택된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원은 BCMA이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 197에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 198에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 197에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 198에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역;을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 서열 번호: 251에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 서열 번호: 246에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 가변 중쇄(VH) 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 함유한 링커를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 scFv는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 320)를 함유한 링커를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유하고 및/또는 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나는 코돈 분기된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열 및 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열은 약 30 이내, 약 20 이내, 또는 약 10 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 갖는다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 암호화된 CAR의 발현을 제어하는 프로모터에 작동 가능하게 연결되고, 선택적으로 프로모터는 이종 프로모터이고, 선택적으로 이종 프로모터는 인간 신장 인자 1 알파(EF1α) 프로모터 또는 MND 프로모터 또는 이의 변이체이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 두 CAR을 암호화하고, 제1 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 제1 CAR의 발현을 제어하는 제1 프로모터에 작동 가능하게 연결되고 그리고 제2 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 제2 CAR의 발현을 제어하는 제2 프로모터에 작동 가능하게 연결된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 프로모터는 독립적으로 이종 프로모터이고, 예컨대 이종 프로모터는 인간 신장 인자 1 알파(EF1α) 프로모터 또는 MND 프로모터 또는 이의 변이체이거나 이를 함유한다. 상기 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 프로모터는 동일하다. 상기 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 프로모터는 상이하다.
제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 함유한 벡터가 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터이다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 함유한 조작된 세포가 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 본원에 제공된 키메라 수용체를 함유하고 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 더 함유한다.
본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 함유한 조작된 세포가 또한 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 세포의 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 상기 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 또는 FcRH5 중에서 선택된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원은 BCMA이다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 상기 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 가변 중쇄(VH) 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 상기 임의의 구현예의 일부에서, 상기 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 상기 구현예의 일부에서, 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 함유한다. 상기 구현예의 일부에서, 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 320)를 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단이다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단이다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유하고 및/또는 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
조작된 세포의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 림프구이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 T 세포이고 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 대상체로부터 획득한 1차 세포로부터 조작되었다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 복수의 조작된 세포 중에 있고, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원-비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
본원에 제공된 임의의 키메라 수용체를 함유한 조성물이 또한 제공된다. 본원에 제공된 임의의 조작된 세포를 함유한 조성물이 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:1이다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체인 또는 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제1 조작된 세포; 및 제2 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제2 조작된 세포;를 함유하는 조성물이 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포 중에서, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제2 조작된 세포 중에서, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 CAR은 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 또는 FcRH5 중에서 선택된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 항원은 BCMA이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 상기 구현예의 일부에서, VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포 내 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 가변 중쇄(VH) 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물의 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 상기 구현예의 일부에서, 상기 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR 내 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR 내 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 320)를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR 내 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR 내 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 조성물 내 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 조성물 내 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 조성물 내 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유하고 및/또는 조성물 내 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물의 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제1 조작된 세포는 T 세포를 함유하고, 선택적으로 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제1 조작된 세포는 T 세포를 함유하고, 선택적으로 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:1이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포는 T 세포를 함유하고, 선택적으로 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 복수의 제2 조작된 세포는 T 세포를 함유하고, 선택적으로 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:1이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 제1 복수의 조작된 세포 및 제2 복수의 조작된 세포를 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1, 선택적으로 (약) 1:1의 비율로 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 제1 키메라 항원 수용체를 발현하는 제1 복수의 세포 및 제2 키메라 항원 수용체를 발현하는 제2 복수의 세포를 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1의 비율로 함유한다. 특정 구현예에서, 조성물 내 제1 복수의 조작된 세포 및 제2 복수의 조작된 세포의 비율은 (약) 1:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 멸균된다.
본원에 제공된 임의의 조성물의 용도가 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 질병 또는 병태를 가진 대상체를 치료할 용도를 위한 것이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 다발성 골수종, 선택적으로 재발성/불응성 다발성 골수종이다. 본원에 제공된 사용을 위해 제공된 용도 및 조성물은 제공된 임의의 방법의 측면에 따라 대상체를 치료하기 위한 것일 수 있다.
질병 또는 장애를 지닌 대상체에게, 본원에 제공된 임의의 조작된 세포를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물 또는 본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물을 투여하는 것을 포함한 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, 약 1.25 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, 약 1.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, 약 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, 약 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, 또는 (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1.0 x 107개, (약) 1.5 x 107개, (약) 2.5 x 107개, (약) 5.0 x 107개, (약) 7.5 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 2.25 x 108개, (약) 3.0 x 108개, (약) 4.5 x 108개, (약) 6.0 x 108개, (약) 8.0 x 108개 또는 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체인 또는 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제1 조작된 세포를 함유하는 제1 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제2 조작된 세포를 함유하는 제2 조성물의 용도가 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물들은 질병 또는 병태를 가진 대상체를 치료할 용도를 위해 함께 사용된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 다발성 골수종, 선택적으로 재발성/불응성 다발성 골수종이다. 본원에 제공된 사용을 위해 제공된 용도 및 조성물은 제공된 임의의 방법의 측면에 따라 대상체를 치료하기 위한 것일 수 있다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체인 또는 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제1 조작된 세포를 함유하는 조성물을 질병 또는 장애를 가진 대상체에 투여하는 것; 및 제2 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제2 조작된 세포를 함유하는 조성물을 상기 대상체에 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포의 단위 용량 및 복수의 제2 조작된 세포의 단위 용량은 독립적으로 (약) 1.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.5 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.25 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 0.6 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 2.25 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 7.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포의 단위 용량 및 복수의 제2 조작된 세포의 단위 용량은 독립적으로 (약) 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, 또는 (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1.5 x 107개, (약) 2.5 x 107개, (약) 5.0 x 107개, (약) 7.5 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 2.25 x 108개, (약) 3.0 x 108개, (약) 4.5 x 108개, (약) 6.0 x 108개, (약) 8.0 x 108개 또는 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포를 함유한 조성물과 복수의 제2 조작된 세포를 함유한 조성물은 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 투여된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포를 함유한 조성물과 복수의 제2 조작된 세포를 함유한 조성물은 순차적으로 임의의 순서로 투여된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 치료 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 복수의 제1 조작된 세포 중에서, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 치료 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 복수의 제2 조작된 세포 중에서, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 치료 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR에 의해 표적화되는 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 또는 FcRH5 중에서 선택된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 제2 항원은 BCMA이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197 중 임의 번호에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198 중 임의 번호에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) 서열 번호: 197에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VH 및 (ii) 서열 번호: 198에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유하는 VL 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고; 및 VL 영역은 서열 번호: 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 함유하는 가변 중쇄(VH) 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 함유하는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유함 -; (2) 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3을 함유하고, VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2, 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제공된 방법에서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물의 조작된 세포 내 제2 CAR은 세포외 항원 결합 도메인을 함유하고, 여기서 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제공된 방법에서 또는 치료 용도의 조성물 내 조작된 세포 내 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 상기 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 조작된 세포 내 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 조작된 세포 내 제2 CAR의 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물 내 조작된 세포 내 제2 CAR의 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 320)를 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR에서 VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단이다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 227, 238, 239, 240 또는 241 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 VH 영역 및 VL 영역을 가지고, 여기서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하거나; 또는 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다. 제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 VH 영역 및 VL 영역을 가지고, 여기서 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 함유하고, 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 함유하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하고; 및/또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8로부터, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인이거나 이를 함유하고 및/또는 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 또한 공자극 신호 전달 영역을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 A 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 방법 또는 치료 용도의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 함유한다.
본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에서 (i) 제1 항원 결합 도메인을 함유한 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및 (ii) 제2 항원 결합 도메인을 함유한 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드가 있으며; 여기서 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은 (a) 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 여기서 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 함유하고; 여기서 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이하다.
(i) GPRC5D 또는 BCMA 중 하나에 결합할 수 있는 제1 항원 결합 도메인을 함유한 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및 (ii) GPRC5D 또는 BCMA 중 다른 하나에 결합할 수 있는 제2 항원 결합 도메인을 함유한 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공되며; 여기서 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은 (a) 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 여기서 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 함유하고; 여기서 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이하다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 동일한 항원에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 동일한 항원의 상이한 에피토프에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 상이한 항원에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인은 질병 또는 병태의 세포에 의해 발현되거나 이와 관련된 제1 항원에 결합하고 제2 항원 결합 도메인은 동일한 질병 또는 병태의 세포에 의해 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 결합한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 GPRC5D-발현 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 BCMA-발현 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 병태는 BCMA-발현 및 GPRC5D-발현 암이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 형질 세포 악성 종양이고 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 다발성 골수종이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 재발성/불응성 다발성 골수종이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 독립적으로 GPRC5D, BCMA, CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5로 구성된 그룹에서 선택된 항원에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인은 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인은 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원 결합 도메인은 BCMA에 결합한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 항원 결합 도메인은 GPRC5D에 결합한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)는 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인이거나 이를 함유하고, (b)는 스페이서이거나 이를 함유하고, (c)는 막관통 도메인이거나 이를 함유하고, (d)는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 하나이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 둘이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 각각이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)는 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인이거나 이를 함유하고, (b)는 스페이서이거나 이를 함유하고, (c)는 막관통 도메인이거나 이를 함유하고, (d)는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 제2 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 20 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 포함하고; 및/또는 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열은 약 20 이내의 서열 상동성 염기쌍을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 제2 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 5 내지 약 15 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 함유하고; 및/또는 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열은 약 5 내지 약 15 이내의 서열 상동성 염기쌍을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 제2 CAR에서 (a) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 10 이내의 연속적인 상동성 염기쌍을 함유하고; 및/또는 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열은 약 10 이내의 서열 상동성 염기쌍을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산은 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 분리되고, 선택적으로 여기서 다중 시스트론 요소는 이중 시스트론 요소이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 IRES이거나 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드이고 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드는 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 요소이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기된다(codon diverged). 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T2A를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기된다(codon diverged). 제공된 임의의 구현예의 일부에서, T2A를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 319에 제시된 서열이거나 이를 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열은 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열은 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 전사 이후, 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타낸다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산의 전사 이후, 제1 핵산으로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타낸다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 폴리뉴클레오타이드의 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산의 전사 이후, 제2 핵산으로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타낸다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산에 존재하는 임의의 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 내의 임의의 잠재적 스플라이스 공여 또는 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드 내의 임의의 잠재적 스플라이스 공여 또는 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 209에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 210에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 211에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 230에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 231에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 232에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 197 및 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하는 VH 영역 및 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 대해 적어도 또는 약 90%, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 125에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 126에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 127에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 130에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 131에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 132에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 함유하는 VH 영역 및 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 대해 적어도 또는 약 90%, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 209에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 210에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 211에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 230에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 231에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 232에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유하고; 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 125에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 126에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 127에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 및 서열 번호: 130에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 131에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 132에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 197 및 198에 제시된 아미노산 서열을 함유하는 VH 영역 및 VL 영역을 함유하고; 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 함유하는 VH 영역 및 VL 영역을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열을 함유하고 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 264 또는 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 스페이서이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 면역글로불린의 일부를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 함유하고, 여기서 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이며; CH2 영역은 IgG4 CH2의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 함유하고, 여기서 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이며; 및/또는 CH3 영역은 IgG4 CH3의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 함유하고, 여기서 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지 영역, CH2 및 CH3은 인간 IgG4로부터의 힌지의 전부 또는 일부, CH2의 전부 또는 일부 및 CH3의 전부 또는 일부를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 힌지 영역, CH2 및 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지, CH2 및 CH3을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지와 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 함유하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 스페이서이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 (약) 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 가지며, 선택적으로 여기서 스페이서는 (약) 224, (약) 225, (약) 226, (약) 227, (약) 228 또는 (약) 229개 아미노산 길이이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (b)는 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나에서 (b)는 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나에서 (b)는 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (c)는 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (c)는 CD4, CD28 또는 CD8의 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8의 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (c)는 인간 CD28 막관통 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (c)는 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나에서 (c)는 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나에서 (c)는 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나에서 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나에서 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나에서 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나에서 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, (a)는 제1 항원 결합 도메인 또는 제2 항원 결합 도메인이거나 이를 함유하고, (b)는 스페이서이거나 이를 함유하고, (c)는 막관통 도메인이거나 이를 함유하고, (d)는 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역이거나 이를 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나는 (a) GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 여기서 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, (b) 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서, (c) 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 (d) 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나는 (a) BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인 - 선택적으로 여기서 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, (b) 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서, (c) 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 (d) 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열은 제1 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열 대비 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR은 GPRC5D에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유하고 제2 CAR은 BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 제1 CAR은 BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유하고 제2 CAR은 GPRC5D에 결합하는 항원 결합 도메인을 함유한다.
(i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공되고, 여기서 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산은 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고; 여기서 제1 CAR은 GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 여기서 제2 CAR은 BCMA에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 그리고 여기서 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열은 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열 대비 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치한다.
(i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공되고, 여기서 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산은 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고; 여기서 제1 CAR은 BCMA에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 여기서 제2 CAR은 GPRC5D에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 함유하고; 그리고 여기서 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열은 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열 대비 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 44 또는 서열 번호: 45에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 44에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 45에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 319에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 299에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 298에 제시된 서열을 암호화한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 302에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 301에 제시된 서열을 암호화한다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 315에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 316에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 함유한다.
뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공되며, 여기서 폴리뉴클레오타이드는 GPRC5D-결합 도메인, BCMA-결합 도메인, 및 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 함유하는 세포내 신호 전달 영역을 암호화한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 317에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 함유한다.
제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 함유한 벡터가 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터이다.
본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 함유한 조작된 세포가 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 본원에 제공된 키메라 수용체를 함유하고 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 더 함유한다.
본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드를 함유한 조작된 세포가 또한 제공된다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 림프구이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 NK 세포 또는 T 세포이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 T 세포이고 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 대상체로부터 획득한 1차 세포로부터 조작되었다.
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조작된 세포는 복수의 조작된 세포 중에 있고, 복수의 세포의 (약) 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원-비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 함유한다.
본원에 제공된 임의의 키메라 수용체를 함유한 조성물이 또한 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1이다. 일부 구현예에서, 조성물에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 비율은 1:2 내지 2:1이다. 일부 구현예에서, 조성물에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 비율은 1:1이다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 또한 함유한다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 조성물은 멸균된다.
질병 또는 장애를 지닌 대상체에게, 본원에 제공된 임의의 조작된 세포를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물 또는 본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함한 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, 또는 (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1.5 x 107개, (약) 2.5 x 107개, (약) 5.0 x 107개, (약) 7.5 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 2.25 x 108개, (약) 3.0 x 108개, (약) 4.5 x 108개, (약) 6.0 x 108개, (약) 8.0 x 108개 또는 (약) 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 3.0 x 108개 또는 (약) 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
질병 또는 장애를 지닌 대상체에게, 본원에 제공된 임의의 조작된 세포를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물 또는 본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체를 함유한 본원에 제공된 임의의 조성물 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함한 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 단위 용량은 (약) 1.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 2.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
각각 본원에 제공된 임의의 키메라 항원 수용체인 또는 본원에 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제 조작된 세포를 함유하는 조성물을 질병 또는 장애를 가진 대상체에 투여하는 것; 및 제2 키메라 항원 수용체를 함유하는 복수의 제2 조작된 세포를 함유하는 조성물을 상기 대상체에 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 또한 본원에 제공된다. 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 복수의 제1 조작된 세포의 단위 용량 및 복수의 제2 조작된 세포의 단위 용량은 독립적으로 (약) 1.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.5 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.25 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 0.6 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 2.25 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 7.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 1.2 x 109개의 CAR-발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개의 CAR-발현 T 세포 내지 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포, (약) 1.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 함유한다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 장애는 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)의 발현과 연관된다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 장애는 또한 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현과 연관된다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, BCMA와 연관된 질병 또는 장애는 자가면역 질환 또는 장애이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 자가면역 질환 또는 장애는 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소성 자반증(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 샤가스병(Chagas’ disease), 그레이브병(Grave’s disease), 베게너 육아종증(Wegener’s granulomatosis), 다발성 결절성 동맥염(poly-arteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren’s syndrome), 심상성 천포창(pemphigus vulgaris), 피부 경화증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신장병(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노드 증후군(Reynaud’s syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture’s disease), Kawasaki disease(가와사키 병), 자가면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)이다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 질병 또는 장애는 암이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 GPRC5D-발현 암이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 형질 세포 악성 종양이고 혈장 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 다발성 골수종(MM)이다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 암은 재발성/불응성 다발성 골수종이다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발하였다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발한 대상체가 치료를 위해 선택된다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 단위 용량을 투여하기 전에, 대상체는 앞서 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받았다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 세포의 제1 단위 용량 및 세포의 제2 단위 용량을 투여하기 전에, 대상체는 앞서 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받았다.
제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, BCMA-표적화된 요법은 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하는 조성물을 포함한다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발하였다. 제공된 방법의 제공된 임의의 구현예의 일부에서, 대상체는 이전의 투여 이후에 BCMA 항원 또는 에피토프 손실을 나타내는 다발성 골수종 세포, BCMA 하향조절 및/또는 BCMA-음성 종양 세포를 포함한다.
도 1a는 암 세포주 백과사전(Cancer Cell Line Encyclopedia) CD138 mRNA 발현 데이터를 도시한다(log2 스케일). 암의 유형(좌에서 우로): 상부 호흡소화관암(32); 식도암(25); 전립선암(7); 다발성 골수종(30); 담관암(8); 폐암(131); 췌장암(44); 신장암(34); 유방암(58); 대장암(61); 위암(38); 수막종(3); 간암(28); 신경교종(62); 골육종(10); 갑상선암(12); 자궁내막암(27); 연조직암(21); 중피종(11); 난소암(51); 연골육종(4); 소세포성 폐암(53); 흑색종(61); 신경모세포종(17); 수모세포종(4); 유잉육종(12); 호지킨 림프종(12); DLBCL(18); 기타 림프종(28); B 세포암(15); CML(15); 버킷 림프종(11); T 세포암(16); AML(34); 기타 백혈병(1).
도 1b는 악성 세포주에서 GPRC5D의 mRNA 발현을 도시한다[n=1036; 암 세포주 백과사전(CCLE)]. RMA(robust multi-array average); DLBCL(미만성 거대 B 세포 림프종); CML(만성 골수성 백혈병); ALL(급성 림프모구 백혈병); AML(급성 골수성 백혈병); NSC(비소세포성). 암의 유형(좌에서 우로): 다발성 골수종(30); 기타 백혈병(1); DLBCL(18); CML(15); 수막종(3); 기타 림프종(28); 버킷 림프종(11); 호지킨 림프종(12); T 세포암(16); B 세포암(15); 담관암(8); AML(34); 췌장암(44); 갑상선암(12); 대장암(61); 신장암(34); 골육종(10); 요로암(27); 유방암(58); 신경모세포종(17); 비소세포성 폐암(131); 유잉육종(12); 전립선암(7); 흑색종(61); 상부 호흡소화관암(32); 자궁내막암(27); 수모세포종(4); 간암(28); 난소암(51); 위암(38); 신경교종(62); 소세포성 폐암(53); 중피종(11); 식도암(25); 기타(150); 연골육종(4).
도 2a는 다양한 장기에 대한 CD138 GTEx RNASeq 발현 데이터를 도시한다. 조직(tissue)의 유형(좌에서 우로): 소뇌, 대뇌반구, 전대상피질, 전두엽, 피질, 편도체, 해마, 측좌핵, 미상(caudate), 피각(putamen), S상 결장, 경골신경, 골격근, 자궁, 식도근(muscularis of esophagus), 위식도 식도 접합부(gastroesophagal junction of esophagus), 시상하부, 지방(adipose), 자궁경부, 관상 동맥, 경부 척수, 흑질, 난소, 경골동맥, 유방 조직, 나팔관, 지방(adipose), 신장, 좌심실, 자궁경부, 부신, 방광, 전혈, 피부(햇빛에 노출), 피부(햇빛에 노출 안됨), 대동맥, 편도, 소장, 췌장, 간, 심방이(atrial appendage), 질(vagina), 위, 전립선, 비장, 제대혈, 갑상선, 횡행결장, 뇌하수체, 식도 점막, 고환, 작음 침샘, 폐, 골수.
도 2b는 Gtex RNASeq 데이터(Gtex 708 ENSG00000111291.4)에 따라 정상 조직에서 GPRC5D의 mRNA 발현을 도시한다. 점선은 CD138-뷴류 1차 MM 세포(Blueprint RNAseq; n=9)에서 GPRC5D 발현 수준을 나타낸다. FPKM(fragments per kilobase of transcript per million mapped reads). 조직(tissue)의 유형(좌에서 우로): 소뇌, 대뇌반구, 전대상피질, 전두엽, 피질, 편도체, 해마, 측좌핵, 미상(caudate), 피각(putamen), S상 결장, 경골신경, 골격근, 자궁, 식도근(muscularis of esophagus), 위식도 식도 접합부(gastroesophagal junction of esophagus), 시상하부, 지방(adipose), 자궁경부, 관상 동맥, 경부 척수, 흑질, 난소, 경골동맥, 유방 조직, 나팔관, 지방(adipose), 신장, 좌심실, 자궁경부, 부신, 방광, 전혈, 피부(햇빛에 노출), 피부(햇빛에 노출 안됨), 대동맥, 편도, 소장, 췌장, 간, 심방이(atrial appendage), 질(vagina), 위, 전립선, 비장, 제대혈, 갑상선, 횡행결장, 뇌하수체, 식도 점막, 고환, 작음 침샘, 폐, 골수, 1차 MM(골수).
도 2c는 1차 인간 조직 세포 유형에 대한 Blueprint RNAseq에 의한 GPRC5D mRNA 발현을 도시한다. FPKM(fragments per kilobase of transcript per million mapped reads).
도 3a는 RNA-seq에 의한 GPRC5D 발현이 중앙값 GPRC5D 발현 위(>) 또는 아래(<)였던 MM을 가진 대상체들로 계층화한 무진행 생존율(PFS)에 대한 카플란-마이어 곡선을 도시한다. 유의성은 동일한 위험의 로그 순위 검정법에 의해 결정되었다(p=0.0031; n=765).
도 3b는 GPRC5D 발현 수준으로 계층화한, MM을 가진 대상체들에 대한 국제 병기 분류 체계(ISS)를 도시한다(n= 중앙값 위 369, 중앙값 아래 374).
도 3c 내지 3h는 GPRC5D 발현 수준으로 계층화한, MM 대상체들 중에서 일반적인 세포유전학적 이상 빈도를 도시한다(n= 중앙값 위 287-291, 중앙값 아래 280-282).
도 4a는 면역 조직화학적 검출 이후, 세포주상에서 GPRC5D 단백질의 이상치(outlier) 상자 그림 정량화를 도시한다. 이상치 상자 그림은 중앙값 막(membrane) 광학 밀도 및 사분위(IQR)를 나타내고; 수염(whisker)은 1.5xIQR이다. 상기 단백질을 발현하도록 조작된 K562 세포에서 GPRC5D 발현의 평균 형광 강도(MFI)는 K562-GPRC5D 지정 세포주를 따라오는 숫자로 주어진다.
도 4b는 MM 환자들의 83개 골수 샘플에서 자동화된 정량적 면역형광법을 도시한다. 각 기둥은 개별 환자 샘플을 나타낸다.
도 4c는 MM 환자들의 83개 골수 샘플에서 자동화된 정량적 면역형광법에 의해 결정되는, CD138+ 세포의 50%를 넘는 수가 BCMA, GPRC5D, 또는 BCMA나 GPRC5D를 발현한 환자 샘플의 백분율을 도시한다.
도 4d는 CD138+ 세포상에서 BCMA 및 GPRC5D 발현의 상관관계를 도시하며; R2= 0.156이다.
도 5는 ELISA 기반 기술에 의해 산정한, GPRC5D 표적화된 scFv의 서브세트의 선형, 배좌(conformational) 및 불연속 에피토프 결합을 도시한다.
도 6a 및 6b는 표시된 scFv 및 스페이서를 함유하는 CAR의 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달을 도시한다. 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포는 42개 CAR/GFP 이중 시스트론 작제물(construct) 중 1개로 형질도입되었다. 5x105개의 생존 가능한 GFP+ 주르카트 세포를 평판 배양하고 표적 항원 부재 하에 형질도입 11일 후 RFP 발현에 대해 모니터링하였다. RFP 및 GFP의 발현은 모두 긴장성(tonic) 신호 전달을 나타냈고; GFP의 발현 단독으로 CAR이 긴장성 신호 전달 없이 형질도입되었음을 나타냈다.
도 6c 내지 6e는 20시간 동안 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포를 (내인성 GPRC5D를 발현하는) MM.1S 세포와 2:1로 배양한 후에 측정한, 긴(도 6c) 스페이서, 중간(도 6d) 스페이서 및 짧은(도 6e) 스페이서를 가진 후보 CAR들의 항원-의존적 대 항원-비의존적 신호 전달을 도시한다. [RFP+GFP+/총 GFP+ 세포]에 의해 결정된 CAR T 세포 신호 전달 백분율. 데이터는 2개의 실험을 나타냄.
도 6f는 y축을 따라 GFP+로 표시되는 CAR 형질도입된 세포를 도시한다. Nur77 발현의 대리물(surrogate)인 RFP는 x축을 따라 표시된다. 표시된 백분율은 RFP+인 형질도입된 GFP+ 세포만(상위 사분면 만)의 것이다.
도 7a는 세포질 GFP를 가진 인간 G 단백질 결합 수용체(GPCR)의 라이브러리 중 하나를 일시적으로 발현하는 HEK293 세포가 항-GPRC5D scFv 클론 203, 긴 스페이서 및 세포질 mCherry 761을 일시적으로 발현하는 공배양된 HEK293 세포에 결합(둘 모두 현탁액)하는 것을, 자동화된 유세포 분석법에 의해 정량화하여 도시한다. 유의성에 대한 사전 지정된 임계값(빨간선): Z 점수 3; p<0.0027.
도 7b는 항-GPRC5D scFv 클론 203 mIgG2a Fc 키메라 항체가 표시된 세포 표면 단백질을 발현하는 HEK293 세포에 결합한 것을 도시한다. >4400 막관통 단백질의 마이크로어레이 스크린에서 식별된 잠재적 표적외(off-target) 단백질 및 비특정 결합제에 대한 결합의 확인이 도시된다. ZsGreen1, 형질주입 대조군; 동종형, 무관한 scFv-mIgG2a Fc 음성 대조군; CTLA-4/CD86 상호작용, 양성 대조군.
도 7c는 GPRC5D (203) CAR을 통해 활성화되는 잠재적인 표적외(off-target) 단백질 PCDH1A 또는 FCGR2A의 평가 결과를 도시한다. GPRC5D (203) CAR 및 GFP를 함유하는 이중 시스트론 플라스미드를 발현하는 주르카트 Nur77-RFP 활성화 리포터 세포를 표시된 항원, GPRC5D(양성 대조군) 또는 BCMA(음성 대조군)를 발현하는 K562 세포와 공배양하였다. 활성화는 %RFP+GFP+/총 GFP+로 결정되었다.
도 7d는 유세포 분석에 의해 RFP 발현의 변화를 측정하여 산정된 바와 같이, MM 세포주의 GPRC5D의 CRISPR-Cas9 매개 녹아웃이 GPRC5D (203) CAR-주르카트 Nur77 리포터 세포의 활성화를 폐기하였음을 도시한다.
도 8a는 MM 세포주 및 1차 MM 세포(박스 표시)에 걸쳐 GPRC5D mRNA 발현을 도시한다.
도 8b는 용해율로 표시하고, 공여체 일치하는 모의 형질도입된 CAR T 세포로 정규화(두 공여체의 각각에서 기술적으로 3회; 평균 ± SD)한 바와 같이, 24시간 공배양 후에 MM1.S, OPM2, 및 RPMI-8226 표적 세포에 대하여 GPRC5D (203)-발현하는 CAR T 세포 세포 독성의 결과를 도시한다.
도 9a는 루시페린의 첨가 후에 ATP-의존적 생체 발광에 의해 표시되고; 종양 세포-단독 대조군으로 정규화한 바와 같이(각각 3회 수행한 2개의 실험에서 얻은 혼주(pooled) 데이터, 평균 ± SEM; p<0.001); 24시간의 공배양 후에 표시된 scFv를 포함하는 CAR T 세포에 의해 유도된 OPM2-ffLuc MM 세포의 세포 사멸을 도시한다.
도 9b 및 9c는 CAR+ T 세포:BMMC 1:1의 비율로 항-GPRC5D CAR T 세포와 밤새 공배양한 후에 여러 번 재발한 MM을 가진 환자의 1차 골수 단핵 세포(BMMC)의 사멸을 도시하는 유세포 분석을 도시한다. MM 세포, CD138+/CD38hi; 생존 가능한 CD3- 세포상에서 점들을 게이팅하였다.
도 9d는 CD138+/ CD3-에 대해 점을 찍은, 추가 환자들의 1차 BMMC의 유세포 분석을 도시한다.
도 10a 내지 10c는 OPM2 MM 세포와 1대1로 또는 단독으로 24시간 동안 공배양한 후에 Multiplex Luminex Assay에 의해 상청액에서 측정한, 표시된 scFv를 포함하는 CAR T 세포에 의해 생산된 사이토카인을 도시한다.
도 11a 및 11b는 단독으로, B-ALL(Nalm6; GPRC5D-)와 함께, 또는 MM(OPM2; 내인성 GPRC5D+) 세포와 함께 1대1의 비율로 배양된 모의 형질도입된 또는 GPRC5D (203)-발현하는 CAR T 세포의 증식을 도시하고 도 11c 및 11d는 이의 활성화를 도시한다. T 세포는 공배양 전에 CellTrace Violet(CTV)으로 염색하였고, 72시간 후에 CD4, CD8, 및 CD25에 대해 염색하였다. (A, B) 증식은 CTV 형광의 희석으로 표시된다. (C, D) 활성화는 증가된 CD25 형광으로 표시된다.
도 12a는 스페이서에 특이적인 항체를 사용하여 측정한, CAR T 세포에서 CAR 발현의 대표적인 FACS 분석을 도시한다.
도 12b는 표시된 항-GPRC5D scFv 클론을 포함하는 CAR T 세포를 함유하는 3x106개의 4-1BB를 OPM2 주사 후 14일에 치료된 마우스의 생존율을 도시한다(n=8/arm).
도 12c는 두 실험 중 하나로부터의 RPMI-8226 이종 이식 모델에서 마우스 종양 체적과 생존율을 도시하며; 중앙값 생존 일수 29일 대 50일(p<0.05; n=5/arm, 두 실험을 대표함).
도 12d는 RPMI-8226 이종 이식 모델에서 마우스 종양 체적과 CAR T 세포 팽창을 도시하며; CAR을 검출하기 위해 스페이서에 항체를 사용하여 말초 혈액의 유세포 분석에 의해 모니터링한 바와 같다(p<0.001; n=10/arm; 두 시점).
도 13a는 extGLuc을 암호화하는 이중 시스트론 작제물을 발현하고 scFv CD19(SJ25C1) 또는 GPRC5D (203) 및 4-1BB 또는 CD28 공자극 도메인을 포함하는 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 3x106개의 T 세포를 OPM2 주사 후 21일에 치료된 마우스의 생존율을 도시한다(n=5/arm).
도 13b, c, 및 d는 도 13a에서 마우스의 종양 부담(OPM-ffLuc의 D-루시페린 생체 발광 이미징 [BLI])을 도시한다.
도 13e는 CAR T 세포 치료 7일차에 수행된 도 13a에서 마우스의 CAR T 세포 귀소(extGLuc CAR T 세포의 코엘렌테라진 BLI)의 결과를 도시한다.
도 14a 및 14b는 OPM2 주사 후 14일에 투여된, GPRC5D-표적화된 및 BCMA-표적화된 CAR T 세포 요법의 단위 용량 반응을 도시한다(n=8 마우스/arm). 도 14a에서, OPM-ffLuc의 BLI에 의해 산정된 종양 부담이 도시된다. 도 14b에서, 생존율이 도시된다(도시된 p 값은 모의 형질도입되거나 엉뚱하게 표적화된 CAR T 세포 대비 값이다).
도 15a 내지 15c는 GPRC5D (203), 항-BCMA 또는 모의 가공된 T 세포를 20가지 상이한 정상 1차 인간 세포 유형 또는 OPM2 세포와 20시간 공배양한 이후 IFN-감마(도 15a), TNF-알파(도 15b) 및 IL-2(도 15c) 수준을 도시한다(평균 ± SD).
도 15d는 긴장성 신호 전달에 대한 뮤린 및 시노몰구스 교차 반응성 scFv 클론의 스크리닝 결과를 도시한다. %RFP+는 (GFP+ CAR-형질도입된 세포 대비) 1:1의 효과기(effector): 표적(target) 비율로 공배양 후 활성화를 나타낸다.
도 16a 내지 16c는 마우스에 인간/뮤린 교차 반응성 항-GPRC5D scFv(클론 205)를 함유하는 CAR을 발현하는 3 x 106개의 인간 T 세포 주사 이후 체질량 변화(도 16a), 신체 온도(도 16b) 또는 OPM2-ffLuc 세포(도 16c)의 BLI를 도시한다.
도 17a는 CAR 발현의 대표적인 FACs 분석을 도시하며, 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 시노몰구스 GPRC5D 중 하나를 발현하도록 형질도입된 비인간 영장류(NHP) T 세포에서 절단된 수용체 대리 표지자를 사용하여 측정된 바와 같다.
도 17b는 다양한 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 자가 표적 항원 제시 세포(tAPC)에 대하여 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 모의 T 세포 중 하나를 발현하도록 형질도입된 NHP T 세포에 의한 표적 용해를 도시하고 도 17c는 이에 의한 IFNγ 생산을 도시한다.
도 17d는 다양한 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 표적 K562 또는 K562-GPRC5D 세포에 대하여 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 모의 T 세포 중 하나를 발현하도록 형질도입된 NHP T 세포에 의한 표적 용해를 도시하고 도 17e는 이에 의한 IFNγ 생산을 도시한다.
도 18a는 주입 후 21일에 말초 혈액 및 골수에서 CAR T 세포 지속성의 측정으로서 CAR을 암호화하는 DNA에 대한 PCR 결과를 도시한다. CAR 형질도입된 NHP T 세포를 양성 대조군으로 사용하였다.
도 18b 내지 18d는 시노몰구스 원숭이에게 인간/시노몰구스 교차 반응성 항-GPRC5D scFv 클론 202를 함유하는 CAR을 발현하도록 변형된 시노몰구스 T 세포를 주사한 후 1일부터 21일까지의 병리학적 평가 결과를 도시한다. 도 18b는 신체 온도를 도시하고, 도 18c는 체질량 변화를 도시하고, 도 18d는 체질량을 도시한다.
0일차에 1x106개의 OPM2WT 세포 및 OPM2BCMA-KO (GFP/ffLuc+) 세포의 혼합 집단을 주사하고 8일과 16일차에 표시된 CAR T 세포 3x106개를 주사한 마우스에 있어서, 도 19a는 7일과 15일차의 BLI 이미지를 도시하고 도 19b는 34일차의 이미지를 도시한다(n=5 마우스/arm, 2개 실험을 대표함).
도 20a 및 20b는 도 19a와 19b에 기술한 바와 같이 OPM2 세포 및 CAR T 세포 혼합 집단을 주사한 마우스의 골수에서 OPM2 세포를 도시한다. arm 당 3개 마우스의 대표적인 그래프. 생/사(live/dead) 게이팅을 수행하였지만 표시되지는 않았다(비슷한 결과가 있는 n=2회 반복 실험).
도 21a는 예시적인 항-BCMA CAR을 통해 최소한의 긴장성 신호 전달을 도시한다.
도 21b는 예시적인 항-BCMA CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 표적 세포의 용해를 도시한다.
도 21c는 표적 세포와 공배양 시 예시적인 항-BCMA CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마 분비를 도시한다.
도 22a는 각각 GPRC5D 또는 BCMA가 녹아웃된 OPM2 세포에서 유세포 분석에 의해 산정된, GPRC5D 발현 또는 BCMA 발현의 손실을 도시한다.
도 22b는 예시적인 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR의 항원 특이적인 활성화를 도시한다.
도 23은 다발성 골수종 세포주에서 BCMA 및 GPRC5D 유전자 발현 수준을 도시한다.
도 24는 다발성 골수종 및 대조군 세포주에서 BCMA 및 GPRC5D 단백질 발현 수준을 도시한다.
도 25a 및 25b는 OPM2 WT 세포(도 25a), OPM2 BCMA KO 세포(도 25b; 상단 패널) 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포(도 25b; 하단 패널)를 주사한 마우스에서 OPM2 종양 부담을 도시한다. 항-BCMA CAR(BCMA) 또는 항-GPRC5D CAR(GPRC5D)을 발현하는 세포를 함유하는 세포 조성물, 또는 1:1 비율(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)에서 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포를 함유하도록 생성된 세포 풀을 함유하는 세포 조성물로 마우스를 치료하였다.
도 26은 OPM2 종양 세포를 주사하고 항-GPRC5D CAR(GPRC5D) 또는 항-BCMA CAR(BCMA)을 발현하는 세포의, 또는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)의 세 가지 다른 단위 용량으로 치료한 마우스의 생존율을 도시한다.
도 27은 RPMI8226 세포를 주사하고 항-GPRC5D CAR(GPRC5D) 또는 항-BCMA CAR(BCMA)을 발현하는 세포의, 또는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)의 세 가지 다른 단위 용량으로 치료한 마우스에서 종양 체적을 도시한다.
도 28은 도 27에서 마우스의 생존율을 도시한다.
도 29는 항-BCMA 및 항-GPRC5D 이중 표적화 전략을 도시한다. (i) 및 (ii)는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포의 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)을 나타낸다. (iii) 및 (iv)는 이중 시스트론 작제물을 나타내며, 각각은 자가 절단 펩타이드에 의해 분리되는 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR을 함유한다. (v)는 “단일 줄기(single stalk)” 접근법을 나타내고, 여기서 항-BCMA scFv 및 항-GPRC5D scFv는 나란히 존재하며, 링커에 의해서만 분리된다.
도 30은 도 29로부터 각각의 작제물이 있는 세포의 레트로바이러스 형질도입 이후, 세포 표면상에서 표시된 작제물의 발현을 도시한다.
도 31은 유세포 분석에 의해 산정한, 도 29에서 도시한 작제물 각각의 레트로바이러스 형질도입 효율을 도시한다.
도 32a는 용해된 종양 세포의 백분율로 표시한, 야생형 OPM2 다발성 골수종 세포주와 공배양 시 도 29에서 도시한 작제물을 발현하는 T 세포의 세포 독성을 도시한다. E:T 비율을 증가시키면서 CAR 발현 T 세포 및 표적 세포를 배양하였다.
도 32b는 용해된 종양 세포의 백분율로 표시한, BCMA 녹아웃 OPM2 세포주와 공배양 시 도 29에서 도시한 작제물을 발현하는 세포의 세포 독성을 도시한다. E:T 비율을 증가시키면서 CAR 발현 T 세포 및 표적 세포를 배양하였다.
도 33a는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 BCMA- 및 GPRC5D 발현 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 33b는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 BCMA-발현, GPRC5D-음성 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 33c는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 GPRC5D-발현, BCMA-음성 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 34a는 표시된 CAR(들)을 발현하는 T 세포로 치료한 후 OPM2 야생형 세포를 주사한 마우스의 생존을 도시한다.
도 34b는 표시한 CAR(들)을 발현하는 T 세포로 치료한 후, BCMA 녹아웃 OPM2 세포를 두 번째로 주사한 후의 34a에서 마우스의 생존을 도시한다.
도 35a 내지 35c는 3 x 106개의 CAR 발현 T 세포로 치료한 후, BCMA 녹아웃 OPM2 세포(2 x 106개)를 1차로 주사한 후 30일에(도 35a) 또는 105일에(도 35b), 또는 BCMA 녹아웃 OPM2 세포(3 x 106개)를 두 번째로 주사한 후 36일에(도 35c) 마우스에서, 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 성장을 도시한다.
도 36은 2 x 106개의 야생형 OPM2 세포를 주사한 후, 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포의 보다 적은 단위 용량(5 x 105)으로 치료한 마우스의 생존을 도시한다.
도 37a 내지 37c는 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료 후 0일차(도 37a), 15일차(도 37b) 또는 22일차(도 37c)에 야생형 OPM2 세포를 주사한 마우스에서 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 부담을 도시한다.
도 38은 표시한 CAR(들)을 발현하는 5 x 105개의 세포로 치료한 후, 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스에서, 야생형 OPM2 세포(왼쪽 패널) 및 BCMA 녹아웃 OPM2 세포(오른쪽 패널)의 생체 발광 이미징을 통해 산정한, 종양 부담을 도시한다.
도 39는 표시한 CAR(들)을 발현하는 2.5 x 105개의 세포로 치료한 후, 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스의 생존을 도시한다.
도 40a 내지 40c는 표시한 CAR(들)을 발현하는 5 x 105개의 세포로 치료한 후 0일차에(도 40a), 22일차에(도 40b) 또는 34일차에(도 40c) 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스에서 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 부담을 도시한다.
도 41a 및 41b는 비코돈 분기된 이중 시스트론 작제물에서 후행(trailing) CAR(각각 BCMA 및 GPRC5D)의 발현 손실을 도시한다.
도 42a 및 42b는 이중 시스트론 작제물의 코돈 분기가 후행 CAR(각각 BCMA 및 GPRC5D)의 발현을 구제함을 도시한다.
도 43은 표적 세포와의 공배양 후에 표시된 CAR(들)을 발현하는 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 자극을 도시한다.
도 44a 내지 44c는 표적 세포와의 공배양 시, 표시된 CAR(들)을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파의 발현을 (각각) 도시한다.
도 45는 OPM2 WT 세포, OPM2 BCMA KO 세포 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포와의 공배양 시, 표시된 CAR(들)로 형질도입된 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 항원 특이적인 활성화를 도시한다.
도 46a 내지 46c는 OPM2 WT 세포, OPM2 BCMA KO 세포 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포와 공배양될 때, 표시된 CAR(들)을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파의 발현을 (각각) 도시한다.
도 47a는 OPM2 WT 세포를 주사하고 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서 (BLI로 산정한) 종양 부담을 도시한다. 도 47b 및 47c는 OPM2 WT 및 BCMA KO 세포 조합물(도 47b) 또는 OPM2 WT 및 GPRC5D KO 세포 조합물(도 47c)을 주사하고 표시한 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서 (BLI로 산정한) 종양 부담을 도시한다.
도 48은 도 47a 내지 47c에서 마우스의 생존율을 도시한다.
도 1b는 악성 세포주에서 GPRC5D의 mRNA 발현을 도시한다[n=1036; 암 세포주 백과사전(CCLE)]. RMA(robust multi-array average); DLBCL(미만성 거대 B 세포 림프종); CML(만성 골수성 백혈병); ALL(급성 림프모구 백혈병); AML(급성 골수성 백혈병); NSC(비소세포성). 암의 유형(좌에서 우로): 다발성 골수종(30); 기타 백혈병(1); DLBCL(18); CML(15); 수막종(3); 기타 림프종(28); 버킷 림프종(11); 호지킨 림프종(12); T 세포암(16); B 세포암(15); 담관암(8); AML(34); 췌장암(44); 갑상선암(12); 대장암(61); 신장암(34); 골육종(10); 요로암(27); 유방암(58); 신경모세포종(17); 비소세포성 폐암(131); 유잉육종(12); 전립선암(7); 흑색종(61); 상부 호흡소화관암(32); 자궁내막암(27); 수모세포종(4); 간암(28); 난소암(51); 위암(38); 신경교종(62); 소세포성 폐암(53); 중피종(11); 식도암(25); 기타(150); 연골육종(4).
도 2a는 다양한 장기에 대한 CD138 GTEx RNASeq 발현 데이터를 도시한다. 조직(tissue)의 유형(좌에서 우로): 소뇌, 대뇌반구, 전대상피질, 전두엽, 피질, 편도체, 해마, 측좌핵, 미상(caudate), 피각(putamen), S상 결장, 경골신경, 골격근, 자궁, 식도근(muscularis of esophagus), 위식도 식도 접합부(gastroesophagal junction of esophagus), 시상하부, 지방(adipose), 자궁경부, 관상 동맥, 경부 척수, 흑질, 난소, 경골동맥, 유방 조직, 나팔관, 지방(adipose), 신장, 좌심실, 자궁경부, 부신, 방광, 전혈, 피부(햇빛에 노출), 피부(햇빛에 노출 안됨), 대동맥, 편도, 소장, 췌장, 간, 심방이(atrial appendage), 질(vagina), 위, 전립선, 비장, 제대혈, 갑상선, 횡행결장, 뇌하수체, 식도 점막, 고환, 작음 침샘, 폐, 골수.
도 2b는 Gtex RNASeq 데이터(Gtex 708 ENSG00000111291.4)에 따라 정상 조직에서 GPRC5D의 mRNA 발현을 도시한다. 점선은 CD138-뷴류 1차 MM 세포(Blueprint RNAseq; n=9)에서 GPRC5D 발현 수준을 나타낸다. FPKM(fragments per kilobase of transcript per million mapped reads). 조직(tissue)의 유형(좌에서 우로): 소뇌, 대뇌반구, 전대상피질, 전두엽, 피질, 편도체, 해마, 측좌핵, 미상(caudate), 피각(putamen), S상 결장, 경골신경, 골격근, 자궁, 식도근(muscularis of esophagus), 위식도 식도 접합부(gastroesophagal junction of esophagus), 시상하부, 지방(adipose), 자궁경부, 관상 동맥, 경부 척수, 흑질, 난소, 경골동맥, 유방 조직, 나팔관, 지방(adipose), 신장, 좌심실, 자궁경부, 부신, 방광, 전혈, 피부(햇빛에 노출), 피부(햇빛에 노출 안됨), 대동맥, 편도, 소장, 췌장, 간, 심방이(atrial appendage), 질(vagina), 위, 전립선, 비장, 제대혈, 갑상선, 횡행결장, 뇌하수체, 식도 점막, 고환, 작음 침샘, 폐, 골수, 1차 MM(골수).
도 2c는 1차 인간 조직 세포 유형에 대한 Blueprint RNAseq에 의한 GPRC5D mRNA 발현을 도시한다. FPKM(fragments per kilobase of transcript per million mapped reads).
도 3a는 RNA-seq에 의한 GPRC5D 발현이 중앙값 GPRC5D 발현 위(>) 또는 아래(<)였던 MM을 가진 대상체들로 계층화한 무진행 생존율(PFS)에 대한 카플란-마이어 곡선을 도시한다. 유의성은 동일한 위험의 로그 순위 검정법에 의해 결정되었다(p=0.0031; n=765).
도 3b는 GPRC5D 발현 수준으로 계층화한, MM을 가진 대상체들에 대한 국제 병기 분류 체계(ISS)를 도시한다(n= 중앙값 위 369, 중앙값 아래 374).
도 3c 내지 3h는 GPRC5D 발현 수준으로 계층화한, MM 대상체들 중에서 일반적인 세포유전학적 이상 빈도를 도시한다(n= 중앙값 위 287-291, 중앙값 아래 280-282).
도 4a는 면역 조직화학적 검출 이후, 세포주상에서 GPRC5D 단백질의 이상치(outlier) 상자 그림 정량화를 도시한다. 이상치 상자 그림은 중앙값 막(membrane) 광학 밀도 및 사분위(IQR)를 나타내고; 수염(whisker)은 1.5xIQR이다. 상기 단백질을 발현하도록 조작된 K562 세포에서 GPRC5D 발현의 평균 형광 강도(MFI)는 K562-GPRC5D 지정 세포주를 따라오는 숫자로 주어진다.
도 4b는 MM 환자들의 83개 골수 샘플에서 자동화된 정량적 면역형광법을 도시한다. 각 기둥은 개별 환자 샘플을 나타낸다.
도 4c는 MM 환자들의 83개 골수 샘플에서 자동화된 정량적 면역형광법에 의해 결정되는, CD138+ 세포의 50%를 넘는 수가 BCMA, GPRC5D, 또는 BCMA나 GPRC5D를 발현한 환자 샘플의 백분율을 도시한다.
도 4d는 CD138+ 세포상에서 BCMA 및 GPRC5D 발현의 상관관계를 도시하며; R2= 0.156이다.
도 5는 ELISA 기반 기술에 의해 산정한, GPRC5D 표적화된 scFv의 서브세트의 선형, 배좌(conformational) 및 불연속 에피토프 결합을 도시한다.
도 6a 및 6b는 표시된 scFv 및 스페이서를 함유하는 CAR의 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달을 도시한다. 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포는 42개 CAR/GFP 이중 시스트론 작제물(construct) 중 1개로 형질도입되었다. 5x105개의 생존 가능한 GFP+ 주르카트 세포를 평판 배양하고 표적 항원 부재 하에 형질도입 11일 후 RFP 발현에 대해 모니터링하였다. RFP 및 GFP의 발현은 모두 긴장성(tonic) 신호 전달을 나타냈고; GFP의 발현 단독으로 CAR이 긴장성 신호 전달 없이 형질도입되었음을 나타냈다.
도 6c 내지 6e는 20시간 동안 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포를 (내인성 GPRC5D를 발현하는) MM.1S 세포와 2:1로 배양한 후에 측정한, 긴(도 6c) 스페이서, 중간(도 6d) 스페이서 및 짧은(도 6e) 스페이서를 가진 후보 CAR들의 항원-의존적 대 항원-비의존적 신호 전달을 도시한다. [RFP+GFP+/총 GFP+ 세포]에 의해 결정된 CAR T 세포 신호 전달 백분율. 데이터는 2개의 실험을 나타냄.
도 6f는 y축을 따라 GFP+로 표시되는 CAR 형질도입된 세포를 도시한다. Nur77 발현의 대리물(surrogate)인 RFP는 x축을 따라 표시된다. 표시된 백분율은 RFP+인 형질도입된 GFP+ 세포만(상위 사분면 만)의 것이다.
도 7a는 세포질 GFP를 가진 인간 G 단백질 결합 수용체(GPCR)의 라이브러리 중 하나를 일시적으로 발현하는 HEK293 세포가 항-GPRC5D scFv 클론 203, 긴 스페이서 및 세포질 mCherry 761을 일시적으로 발현하는 공배양된 HEK293 세포에 결합(둘 모두 현탁액)하는 것을, 자동화된 유세포 분석법에 의해 정량화하여 도시한다. 유의성에 대한 사전 지정된 임계값(빨간선): Z 점수 3; p<0.0027.
도 7b는 항-GPRC5D scFv 클론 203 mIgG2a Fc 키메라 항체가 표시된 세포 표면 단백질을 발현하는 HEK293 세포에 결합한 것을 도시한다. >4400 막관통 단백질의 마이크로어레이 스크린에서 식별된 잠재적 표적외(off-target) 단백질 및 비특정 결합제에 대한 결합의 확인이 도시된다. ZsGreen1, 형질주입 대조군; 동종형, 무관한 scFv-mIgG2a Fc 음성 대조군; CTLA-4/CD86 상호작용, 양성 대조군.
도 7c는 GPRC5D (203) CAR을 통해 활성화되는 잠재적인 표적외(off-target) 단백질 PCDH1A 또는 FCGR2A의 평가 결과를 도시한다. GPRC5D (203) CAR 및 GFP를 함유하는 이중 시스트론 플라스미드를 발현하는 주르카트 Nur77-RFP 활성화 리포터 세포를 표시된 항원, GPRC5D(양성 대조군) 또는 BCMA(음성 대조군)를 발현하는 K562 세포와 공배양하였다. 활성화는 %RFP+GFP+/총 GFP+로 결정되었다.
도 7d는 유세포 분석에 의해 RFP 발현의 변화를 측정하여 산정된 바와 같이, MM 세포주의 GPRC5D의 CRISPR-Cas9 매개 녹아웃이 GPRC5D (203) CAR-주르카트 Nur77 리포터 세포의 활성화를 폐기하였음을 도시한다.
도 8a는 MM 세포주 및 1차 MM 세포(박스 표시)에 걸쳐 GPRC5D mRNA 발현을 도시한다.
도 8b는 용해율로 표시하고, 공여체 일치하는 모의 형질도입된 CAR T 세포로 정규화(두 공여체의 각각에서 기술적으로 3회; 평균 ± SD)한 바와 같이, 24시간 공배양 후에 MM1.S, OPM2, 및 RPMI-8226 표적 세포에 대하여 GPRC5D (203)-발현하는 CAR T 세포 세포 독성의 결과를 도시한다.
도 9a는 루시페린의 첨가 후에 ATP-의존적 생체 발광에 의해 표시되고; 종양 세포-단독 대조군으로 정규화한 바와 같이(각각 3회 수행한 2개의 실험에서 얻은 혼주(pooled) 데이터, 평균 ± SEM; p<0.001); 24시간의 공배양 후에 표시된 scFv를 포함하는 CAR T 세포에 의해 유도된 OPM2-ffLuc MM 세포의 세포 사멸을 도시한다.
도 9b 및 9c는 CAR+ T 세포:BMMC 1:1의 비율로 항-GPRC5D CAR T 세포와 밤새 공배양한 후에 여러 번 재발한 MM을 가진 환자의 1차 골수 단핵 세포(BMMC)의 사멸을 도시하는 유세포 분석을 도시한다. MM 세포, CD138+/CD38hi; 생존 가능한 CD3- 세포상에서 점들을 게이팅하였다.
도 9d는 CD138+/ CD3-에 대해 점을 찍은, 추가 환자들의 1차 BMMC의 유세포 분석을 도시한다.
도 10a 내지 10c는 OPM2 MM 세포와 1대1로 또는 단독으로 24시간 동안 공배양한 후에 Multiplex Luminex Assay에 의해 상청액에서 측정한, 표시된 scFv를 포함하는 CAR T 세포에 의해 생산된 사이토카인을 도시한다.
도 11a 및 11b는 단독으로, B-ALL(Nalm6; GPRC5D-)와 함께, 또는 MM(OPM2; 내인성 GPRC5D+) 세포와 함께 1대1의 비율로 배양된 모의 형질도입된 또는 GPRC5D (203)-발현하는 CAR T 세포의 증식을 도시하고 도 11c 및 11d는 이의 활성화를 도시한다. T 세포는 공배양 전에 CellTrace Violet(CTV)으로 염색하였고, 72시간 후에 CD4, CD8, 및 CD25에 대해 염색하였다. (A, B) 증식은 CTV 형광의 희석으로 표시된다. (C, D) 활성화는 증가된 CD25 형광으로 표시된다.
도 12a는 스페이서에 특이적인 항체를 사용하여 측정한, CAR T 세포에서 CAR 발현의 대표적인 FACS 분석을 도시한다.
도 12b는 표시된 항-GPRC5D scFv 클론을 포함하는 CAR T 세포를 함유하는 3x106개의 4-1BB를 OPM2 주사 후 14일에 치료된 마우스의 생존율을 도시한다(n=8/arm).
도 12c는 두 실험 중 하나로부터의 RPMI-8226 이종 이식 모델에서 마우스 종양 체적과 생존율을 도시하며; 중앙값 생존 일수 29일 대 50일(p<0.05; n=5/arm, 두 실험을 대표함).
도 12d는 RPMI-8226 이종 이식 모델에서 마우스 종양 체적과 CAR T 세포 팽창을 도시하며; CAR을 검출하기 위해 스페이서에 항체를 사용하여 말초 혈액의 유세포 분석에 의해 모니터링한 바와 같다(p<0.001; n=10/arm; 두 시점).
도 13a는 extGLuc을 암호화하는 이중 시스트론 작제물을 발현하고 scFv CD19(SJ25C1) 또는 GPRC5D (203) 및 4-1BB 또는 CD28 공자극 도메인을 포함하는 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 3x106개의 T 세포를 OPM2 주사 후 21일에 치료된 마우스의 생존율을 도시한다(n=5/arm).
도 13b, c, 및 d는 도 13a에서 마우스의 종양 부담(OPM-ffLuc의 D-루시페린 생체 발광 이미징 [BLI])을 도시한다.
도 13e는 CAR T 세포 치료 7일차에 수행된 도 13a에서 마우스의 CAR T 세포 귀소(extGLuc CAR T 세포의 코엘렌테라진 BLI)의 결과를 도시한다.
도 14a 및 14b는 OPM2 주사 후 14일에 투여된, GPRC5D-표적화된 및 BCMA-표적화된 CAR T 세포 요법의 단위 용량 반응을 도시한다(n=8 마우스/arm). 도 14a에서, OPM-ffLuc의 BLI에 의해 산정된 종양 부담이 도시된다. 도 14b에서, 생존율이 도시된다(도시된 p 값은 모의 형질도입되거나 엉뚱하게 표적화된 CAR T 세포 대비 값이다).
도 15a 내지 15c는 GPRC5D (203), 항-BCMA 또는 모의 가공된 T 세포를 20가지 상이한 정상 1차 인간 세포 유형 또는 OPM2 세포와 20시간 공배양한 이후 IFN-감마(도 15a), TNF-알파(도 15b) 및 IL-2(도 15c) 수준을 도시한다(평균 ± SD).
도 15d는 긴장성 신호 전달에 대한 뮤린 및 시노몰구스 교차 반응성 scFv 클론의 스크리닝 결과를 도시한다. %RFP+는 (GFP+ CAR-형질도입된 세포 대비) 1:1의 효과기(effector): 표적(target) 비율로 공배양 후 활성화를 나타낸다.
도 16a 내지 16c는 마우스에 인간/뮤린 교차 반응성 항-GPRC5D scFv(클론 205)를 함유하는 CAR을 발현하는 3 x 106개의 인간 T 세포 주사 이후 체질량 변화(도 16a), 신체 온도(도 16b) 또는 OPM2-ffLuc 세포(도 16c)의 BLI를 도시한다.
도 17a는 CAR 발현의 대표적인 FACs 분석을 도시하며, 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 시노몰구스 GPRC5D 중 하나를 발현하도록 형질도입된 비인간 영장류(NHP) T 세포에서 절단된 수용체 대리 표지자를 사용하여 측정된 바와 같다.
도 17b는 다양한 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 자가 표적 항원 제시 세포(tAPC)에 대하여 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 모의 T 세포 중 하나를 발현하도록 형질도입된 NHP T 세포에 의한 표적 용해를 도시하고 도 17c는 이에 의한 IFNγ 생산을 도시한다.
도 17d는 다양한 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 표적 K562 또는 K562-GPRC5D 세포에 대하여 시노몰구스 교차 반응성 GPRC5D CAR 또는 모의 T 세포 중 하나를 발현하도록 형질도입된 NHP T 세포에 의한 표적 용해를 도시하고 도 17e는 이에 의한 IFNγ 생산을 도시한다.
도 18a는 주입 후 21일에 말초 혈액 및 골수에서 CAR T 세포 지속성의 측정으로서 CAR을 암호화하는 DNA에 대한 PCR 결과를 도시한다. CAR 형질도입된 NHP T 세포를 양성 대조군으로 사용하였다.
도 18b 내지 18d는 시노몰구스 원숭이에게 인간/시노몰구스 교차 반응성 항-GPRC5D scFv 클론 202를 함유하는 CAR을 발현하도록 변형된 시노몰구스 T 세포를 주사한 후 1일부터 21일까지의 병리학적 평가 결과를 도시한다. 도 18b는 신체 온도를 도시하고, 도 18c는 체질량 변화를 도시하고, 도 18d는 체질량을 도시한다.
0일차에 1x106개의 OPM2WT 세포 및 OPM2BCMA-KO (GFP/ffLuc+) 세포의 혼합 집단을 주사하고 8일과 16일차에 표시된 CAR T 세포 3x106개를 주사한 마우스에 있어서, 도 19a는 7일과 15일차의 BLI 이미지를 도시하고 도 19b는 34일차의 이미지를 도시한다(n=5 마우스/arm, 2개 실험을 대표함).
도 20a 및 20b는 도 19a와 19b에 기술한 바와 같이 OPM2 세포 및 CAR T 세포 혼합 집단을 주사한 마우스의 골수에서 OPM2 세포를 도시한다. arm 당 3개 마우스의 대표적인 그래프. 생/사(live/dead) 게이팅을 수행하였지만 표시되지는 않았다(비슷한 결과가 있는 n=2회 반복 실험).
도 21a는 예시적인 항-BCMA CAR을 통해 최소한의 긴장성 신호 전달을 도시한다.
도 21b는 예시적인 항-BCMA CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 표적 세포의 용해를 도시한다.
도 21c는 표적 세포와 공배양 시 예시적인 항-BCMA CAR을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마 분비를 도시한다.
도 22a는 각각 GPRC5D 또는 BCMA가 녹아웃된 OPM2 세포에서 유세포 분석에 의해 산정된, GPRC5D 발현 또는 BCMA 발현의 손실을 도시한다.
도 22b는 예시적인 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR의 항원 특이적인 활성화를 도시한다.
도 23은 다발성 골수종 세포주에서 BCMA 및 GPRC5D 유전자 발현 수준을 도시한다.
도 24는 다발성 골수종 및 대조군 세포주에서 BCMA 및 GPRC5D 단백질 발현 수준을 도시한다.
도 25a 및 25b는 OPM2 WT 세포(도 25a), OPM2 BCMA KO 세포(도 25b; 상단 패널) 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포(도 25b; 하단 패널)를 주사한 마우스에서 OPM2 종양 부담을 도시한다. 항-BCMA CAR(BCMA) 또는 항-GPRC5D CAR(GPRC5D)을 발현하는 세포를 함유하는 세포 조성물, 또는 1:1 비율(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)에서 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포를 함유하도록 생성된 세포 풀을 함유하는 세포 조성물로 마우스를 치료하였다.
도 26은 OPM2 종양 세포를 주사하고 항-GPRC5D CAR(GPRC5D) 또는 항-BCMA CAR(BCMA)을 발현하는 세포의, 또는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)의 세 가지 다른 단위 용량으로 치료한 마우스의 생존율을 도시한다.
도 27은 RPMI8226 세포를 주사하고 항-GPRC5D CAR(GPRC5D) 또는 항-BCMA CAR(BCMA)을 발현하는 세포의, 또는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)의 세 가지 다른 단위 용량으로 치료한 마우스에서 종양 체적을 도시한다.
도 28은 도 27에서 마우스의 생존율을 도시한다.
도 29는 항-BCMA 및 항-GPRC5D 이중 표적화 전략을 도시한다. (i) 및 (ii)는 항-BCMA CAR 발현 세포 및 항-GPRC5D CAR 발현 세포의 풀(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포)을 나타낸다. (iii) 및 (iv)는 이중 시스트론 작제물을 나타내며, 각각은 자가 절단 펩타이드에 의해 분리되는 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR을 함유한다. (v)는 “단일 줄기(single stalk)” 접근법을 나타내고, 여기서 항-BCMA scFv 및 항-GPRC5D scFv는 나란히 존재하며, 링커에 의해서만 분리된다.
도 30은 도 29로부터 각각의 작제물이 있는 세포의 레트로바이러스 형질도입 이후, 세포 표면상에서 표시된 작제물의 발현을 도시한다.
도 31은 유세포 분석에 의해 산정한, 도 29에서 도시한 작제물 각각의 레트로바이러스 형질도입 효율을 도시한다.
도 32a는 용해된 종양 세포의 백분율로 표시한, 야생형 OPM2 다발성 골수종 세포주와 공배양 시 도 29에서 도시한 작제물을 발현하는 T 세포의 세포 독성을 도시한다. E:T 비율을 증가시키면서 CAR 발현 T 세포 및 표적 세포를 배양하였다.
도 32b는 용해된 종양 세포의 백분율로 표시한, BCMA 녹아웃 OPM2 세포주와 공배양 시 도 29에서 도시한 작제물을 발현하는 세포의 세포 독성을 도시한다. E:T 비율을 증가시키면서 CAR 발현 T 세포 및 표적 세포를 배양하였다.
도 33a는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 BCMA- 및 GPRC5D 발현 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 33b는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 BCMA-발현, GPRC5D-음성 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 33c는 표시된 CAR 작제물을 발현하는 T 세포가 GPRC5D-발현, BCMA-음성 표적 세포와 24시간 동안 공배양될 때 다양한 사이토카인을 분비하는 능력을 도시한다.
도 34a는 표시된 CAR(들)을 발현하는 T 세포로 치료한 후 OPM2 야생형 세포를 주사한 마우스의 생존을 도시한다.
도 34b는 표시한 CAR(들)을 발현하는 T 세포로 치료한 후, BCMA 녹아웃 OPM2 세포를 두 번째로 주사한 후의 34a에서 마우스의 생존을 도시한다.
도 35a 내지 35c는 3 x 106개의 CAR 발현 T 세포로 치료한 후, BCMA 녹아웃 OPM2 세포(2 x 106개)를 1차로 주사한 후 30일에(도 35a) 또는 105일에(도 35b), 또는 BCMA 녹아웃 OPM2 세포(3 x 106개)를 두 번째로 주사한 후 36일에(도 35c) 마우스에서, 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 성장을 도시한다.
도 36은 2 x 106개의 야생형 OPM2 세포를 주사한 후, 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포의 보다 적은 단위 용량(5 x 105)으로 치료한 마우스의 생존을 도시한다.
도 37a 내지 37c는 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료 후 0일차(도 37a), 15일차(도 37b) 또는 22일차(도 37c)에 야생형 OPM2 세포를 주사한 마우스에서 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 부담을 도시한다.
도 38은 표시한 CAR(들)을 발현하는 5 x 105개의 세포로 치료한 후, 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스에서, 야생형 OPM2 세포(왼쪽 패널) 및 BCMA 녹아웃 OPM2 세포(오른쪽 패널)의 생체 발광 이미징을 통해 산정한, 종양 부담을 도시한다.
도 39는 표시한 CAR(들)을 발현하는 2.5 x 105개의 세포로 치료한 후, 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스의 생존을 도시한다.
도 40a 내지 40c는 표시한 CAR(들)을 발현하는 5 x 105개의 세포로 치료한 후 0일차에(도 40a), 22일차에(도 40b) 또는 34일차에(도 40c) 야생형 및 5-10% BCMA 녹아웃 OPM2 세포의 혼합 조성물을 주사한 마우스에서 생체 발광 이미징을 통해 산정한 종양 부담을 도시한다.
도 41a 및 41b는 비코돈 분기된 이중 시스트론 작제물에서 후행(trailing) CAR(각각 BCMA 및 GPRC5D)의 발현 손실을 도시한다.
도 42a 및 42b는 이중 시스트론 작제물의 코돈 분기가 후행 CAR(각각 BCMA 및 GPRC5D)의 발현을 구제함을 도시한다.
도 43은 표적 세포와의 공배양 후에 표시된 CAR(들)을 발현하는 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 자극을 도시한다.
도 44a 내지 44c는 표적 세포와의 공배양 시, 표시된 CAR(들)을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파의 발현을 (각각) 도시한다.
도 45는 OPM2 WT 세포, OPM2 BCMA KO 세포 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포와의 공배양 시, 표시된 CAR(들)로 형질도입된 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 항원 특이적인 활성화를 도시한다.
도 46a 내지 46c는 OPM2 WT 세포, OPM2 BCMA KO 세포 또는 OPM2 GPRC5D KO 세포와 공배양될 때, 표시된 CAR(들)을 발현하는 1차 인간 T 세포에 의한 IFN-감마, IL-2 및 TNF-알파의 발현을 (각각) 도시한다.
도 47a는 OPM2 WT 세포를 주사하고 표시된 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서 (BLI로 산정한) 종양 부담을 도시한다. 도 47b 및 47c는 OPM2 WT 및 BCMA KO 세포 조합물(도 47b) 또는 OPM2 WT 및 GPRC5D KO 세포 조합물(도 47c)을 주사하고 표시한 CAR(들)을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서 (BLI로 산정한) 종양 부담을 도시한다.
도 48은 도 47a 내지 47c에서 마우스의 생존율을 도시한다.
G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D) 및 GPRC5D-발현 세포 및 질병을 표적화한 또는 겨냥한 키메라 항원 수용체(CAR)가 본원에 제공된다. 제공된 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 조작된 T 세포와 같은 세포 및 상기 세포를 함유한 조성물이 또한 제공된다. GPRC5D는 특정 질병 및 악성과 같은 병태에서 또는 이의 조직 또는 세포상에서, 예를 들어 정상 조직에서 거의 발현되지 않고 예컨대 재발된 또는 새로 진단된 골수종 환자의 예를 들어 악성 형질 세포 상에서 발현되는, 예를 들어, 이종으로 발현되는 것으로 관찰된다. 제공되는 구현예 중에 키메라 항원 수용체(CAR)를 포함한 GPRC5D-결합 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 암호화된 CAR과 같은 암호화된 수용체, 및 상기를 포함하는 조성물 및 제조품을 포함하여 질병 및 병태의 치료 및/또는 상기 세포 유형을 표적화하는 데 유용한 접근법이 있다. 상기 수용체는 일반적으로 GPRC5D에 특이적인 항체(항원 결합 항체 단편, 예컨대 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 도메인 항체 단편 및 scFv를 포함한 단일 사슬 단편 포함)를 함유할 수 있다. 상기 GPRC5D 결합 수용체, 예를 들어, 항-GPRC5D CAR을 발현하고/거나 상기 수용체를 암호화하는 핵산을 함유하는 조작된 세포 또는 재조합 세포와 같은 세포, 및 상기 세포를 함유한 조성물 및 제조품 및 치료 용량이 또한 제공된다.
CAR T 세포 요법과 같은 입양 T 세포 요법은 B 세포 성숙 항원(BCMA)을 표적화하는 데 1차적으로 초점을 맞춘 임상적 노력으로 다발성 골수종 치료에 대한 가능성을 보여주었다. 하지만, BCMA가 많은 악성 형질 세포상에서 발현되기는 하지만, 일부 경우에 발현 수준이 이질적일 수 있다. 일부 측면에서, 표적 항원 발현의 이질성은 가변적인 또는 일관성 없는 반응으로 이어질 수 있다. 일부 측면에서, 세포외 도메인의 감마 세크레타제 매개 분계(shedding)로 인해 세포 표면상에서 BCMA의 발현이 시간에 따라 변한다는 것도 관찰되었다. CD19 및 CD22 CAR 항원들을 관찰한 것과 유사하게, BCMA 표적화된 T 세포 요법 후에 재발한 다발성 골수종(MM) 환자들에서 BCMA 항원 하향조절이 발생하는 것으로 보고되었다(Brudno et al. (2018) J. Clin. Oncol., JCO2018778084,; Cohen et al. (2017) Blood 130:505). 또한, 일부 맥락에서, 재조합 수용체는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달(“긴장성 신호 전달(tonic signaling)”로도 공지됨)을 나타낼 수 있으며, 이는 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 T 세포의 분화 및/또는 소진의 증가로 인해 바람직하지 않은 효과로 이어질 수 있다. 일부 측면에서, 상기 활성은 T 세포의 활성, 효과 또는 효능을 제한할 수 있다. 일부 경우에, 재조합 수용체 발현을 위한 세포의 조작 및 생체 외 시험에서 팽창 동안, 세포는 재조합 수용체를 통한 긴장성 신호 전달로 인해 소진을 나타내는 표현형을 나타낼 수 있다. 일부 경우에, 대안적인 또는 추가적인 MM 표적화된 T 세포 요법 접근법이 필요하다.
제공되는 구현예는 다발성 골수종을 위한 CAR T 세포 표적으로서 GPRC5D에 관한 것이다. GPRC5D(예를 들어 서열 번호: 49에 제시된 Uniprot Acc. No. Q9NZD1)는 RAIG(레티노산 유도성 유전자-1)군에 속하는 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버이다. 이것은 두 개의 동형 단백질이 보고되고, 동형 단백질의 차이는 단백질의 세포내 C 말단에서 발생하는, 일곱개의 막관통 나선형 39kDa G 단백질 결합 수용체이다. 본원의 결과는 GPRC5D가 다발성 골수종에서 높은 수준으로 발현되고, 종합적으로, 대부분의 정상 조직에서 낮은 수준으로 발현된다는 것을 보여준다.
본원의 관찰은 다발성 골수종 세포상에서 GPRC5D의 단백질 발현을 입증하고, 이것이 잠재적인 표적내/종양외 독성의 평가를 기반으로 한 것을 포함하여 MM 치료를 위한 실행 가능한 CAR T 세포 표적이 될 수 있음을 뒷받침한다. 또한 제공된 키메라 항원 수용체 중에는 낮은 긴장성 신호 전달을 표시하는 키메라 항원 수용체가 있어, 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달의 가능성을 최소화한다. 구체적으로, 본원에 제공되는 항-GPRC5D CAR은 높은 항원-의존적 활성화 및 최소한의 긴장성 신호 전달을 보이는 CAR을 포함한다. 구체적으로, CAR의 항체 단편의 세포외 부분에서 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)의 특정 배향을 갖는 것을 포함하고/거나 특정 길이의 스페이서를 함유하는 특정 작제물은 더 짧은 스페이서를 갖는 것과 같이 대체 가능한 항-GPRC5D CAR 형식에 비하여 높은 항원-의존적 활성화와 낮은 긴장성 신호 전달을 포함한 유리한 특성을 나타내는 것으로 확인된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 일반적으로 CAR의 세포외 항원 결합 도메인 및 막관통 도메인을 연결하도록 그 사이에 위치한 아미노산 서열이다. 항-GPRC5D CAR의 특정 구현예에서, 스페이서는 예를 들어 IgG4 또는 IgG2 유래 면역글로불린의 일부, 예컨대 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 함유한 일부이다. 상기 스페이서들 중에는 길이가 125개 아미노산보다 큰, 예컨대 길이가 150개 아미노산보다 큰, 180개 아미노산보다 큰 또는 200개 아미노산보다 큰 길이를 갖는 것을 포함하여 인간 면역글로불린 또는 이의 변형된 형태의 부분들이 있다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 스페이서는 혼성(hybrid) 또는 키메라 스페이서이고/거나 예컨대 글리코실화를 줄이거나 방지하기 위해 변형된다. 일부 구현예에서, 제공되는 항-GPRC5D CAR은 서열 번호: 17에 제시된 바와 같은, IgG4/IgG2 힌지 - IgG4/IgG2 CH2 - IgG4 CH3 면역글로불린 혼성/변형된 스페이서를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공되는 CAR 중에는 RNA 이질성을 감소시키고/거나, 세포 산물 로트(lots) 중에서 암호화된 수용체의 표면 발현과 같은 발현을 변형시키기 위해, 예를 들어 증가시키거나 보다 일관되도록 만들기 위해 최적화되거나, 코돈 사용과 같은 최적화를 위해 설계된 특정 특징을 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 것이 있다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 비밀 또는 숨겨진 스플라이스 부위를 제거하는 것과 같이 기준 폴리뉴클레오타이드에 비해 변형되어 RNA 이질성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 포유류, 예를 들어 인간 세포, 예컨대 인간 T 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 측면에서, 변형된 폴리뉴클레오타이드는 세포에서 발현될 때 개선된, 예를 들어, 증가되거나 보다 균일하거나 보다 일관된 수준의 발현, 예를 들어 표면 발현을 초래한다. 상기 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 GPRC5D-결합 세포 표면 단백질을 발현하는 조작된 세포의 생성을 위한 작제물에 이용될 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
다발성 골수종 형질 세포에 대하여 치료제로 사용하기 위해 자가 1차 T 세포상에서 발현되는 항-GPRC5D CAR을 활용하는 단일요법 접근법이 제공된다. 일부 구현예에서, 단일요법 접근법은 BCMA-발현 MM 형질 세포를 적게 가지거나 가지지 않는 및/또는 항-BCMA CAR을 이용한 치료에 대해 차도(remission)를 보인 이후에 재발하거나, 치료에 불응성이 되거나, 치료에 실패하거나 치료에 불내성(intolerant)이 된 것으로 알려진 또는 의심이 되는 또는 선택된 대상체들에서 바람직할 수 있다.
다발성 골수종과 같은 특정 질병 또는 병태와 관련된 제1 항원 및 제2 항원을 표적화하는 다중 표적화 전략이 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 상이한 항원에 특이적으로 결합하거나 이를 표적화하는 다중 재조합 수용체는 동일한 폴리뉴클레오타이드 작제물에 의해 암호화되거나, 본원에 제공된 동일한 세포, 조성물 및 방법에 포함된다. 일부 구현예에서, 복수의 항원, 예를 들어, 제1 항원 및 제2 항원이 암세포 상과 같이 표적화되는 세포, 조직 또는 질병 또는 병태에서 발현되거나 발현되는 것으로 의심된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다.
예를 들어, MM 형질 세포에 대한 치료제로 사용하기 위해 항-GPRC5D CAR 발현 세포를 항-BCMA CAR 발현 세포와 조합하는 이중 요법 표적화 접근법이 본원에 또한 제공된다. 일부 측면에서, 이중 표적화 접근법은 MM 형질 세포상에서 BCMA 및/또는 GPRC5D의 이종 발현(heterogeneous expression)과 관련한 한계를 극복하는 데 유리할 수 있다. GPRC5D 및 BCMA는 특정 질병 및 악성과 같은 병태에서 또는 이의 조직 또는 세포상에서, 예를 들어 정상 조직에서 거의 발현되지 않고 예컨대 재발된 또는 새로 진단된 골수종 환자의 예를 들어 악성 형질 세포 상에서 발현되는, 예를 들어, 이종으로 발현되는 것으로 관찰된다. 암을 포함한 다양한 질병 및 병태에서 GPRC5D 및 BCMA의 역할로 인해, GPRC5D 및 BCMA는 모두 치료 표적이다.
일부 경우에, 본원에 제공된 바와 같이 두 항원을 동시에 표적화하면 항원 탈출로 인한 재발을 최소화하는 것에 더하여 환자에게서 반응의 깊이와 지속성을 향상할 수 있다. B 세포 악성 종양에서 CAR T 세포 시험으로부터 얻은 데이터에 의해 입증된 바와 같이 CAR T 세포 요법에 대한 내성의 메커니즘은 표적 항원의 손실 또는 하향조절(“탈출”)이 될 수 있다. (Robbie G. Majzner and Crystal L. Mackall, Cancer Discov August 22 2018; DOI 10.1158/2159-8290.CD-18-0442). 상기와 같은 조합 또는 이중 표적화 전략은 단일 항원 표적화만을 포함하는 단일요법 접근법과 비교하여 두 개의 항원을 표적화하는 것에 기초하여 상승적인 또는 향상된 종양 반응을 달성할 수 있다. 실제로, 본원의 연구는 BCMA 및 GPRC5D 발현이 서로 독립적임을 입증한다. 이중 표적화 접근법은 항원 손실에 대한 가능성으로 인한 문제를 극복하고/거나 MM에서 항원 표적화를 최대화하는 데 유리할 수 있다. 본원의 관찰은 다발성 골수종 세포상에서 GPRC5D, BCMA 또는 둘 모두의 단백질 발현을 입증하고, 두 항원이 잠재적인 표적내/종양외 독성의 평가를 기반으로 한 것을 포함하여 MM 치료를 위한 실행 가능한 CAR T 세포 표적이 될 수 있음을 뒷받침한다.
제공되는 구현예 중에 키메라 항원 수용체(CAR)을 포함한 GPRC5D-결합 수용체 및 BCMA-결합 수용체를 암호화하는 핵산 분자 및 암호화된 CAR과 같은 암호화된 수용체, 및 상기를 포함하는 조성물 및 제조품을 포함하여 질병 및 병태의 치료 및/또는 상기 세포 유형을 표적화하는 데 유용한 접근법이 있다. 상기 수용체는 일반적으로 GPRC5D 또는 BCMA에 특이적인 항체(항원 결합 항체 단편, 예컨대 중쇄 가변(VH) 영역, 단일 도메인 항체 단편 및 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 단편 포함)를 함유할 수 있다. 상기 GPRC5D 결합 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR) 및 BCMA 결합 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)을 발현하고/거나 상기 수용체를 암호화하는 핵산을 함유하는 조작된 세포 또는 재조합 세포와 같은 세포, 및 상기 세포를 함유한 조성물 및 제조품 및 치료 용량이 또한 제공된다. 제공된 구현예 중에 항-GPRCD CAR 및 항-BCMA CAR과 같은 다중 CAR의 발현을 위해 이중 시스트론인 폴리뉴클레오타이드가 있다. 본원의 관찰은 세포에서 다중 CAR, 예를 들어 항-GPRC5D CAR 및 항-BCMA CAR의 발현은 CAR들 중 하나 이상을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 코돈 분기하여 향상될 수 있음을 입증한다. 두 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물의 코돈 분기는 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’프라임(또는 C 말단)인 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 발현을 향상시키는 것으로 확인된다.
추가로, 특정 길이의 스페이서를 함유하는 제공되는 CAR은 더 짧은 스페이서를 갖는 것과 같이 대체 가능한 항-GPRC5D 또는 BCMA CAR 형식에 비하여 높은 항원-의존적 활성화와 낮은 긴장성 신호 전달을 포함한 유리한 특성을 나타내는 것으로 확인된다. 일부 구현예에서, CAR의 스페이서 성분은 일반적으로 CAR의 세포외 항원 결합 도메인 및 막관통 도메인을 연결하도록 그 사이에 위치한 아미노산 서열이다. 항-GPRC5D 또는 항-BCMA CAR의 특정 구현예에서, 스페이서는 예를 들어 IgG4 또는 IgG2 유래 면역글로불린의 일부이고, 예컨대 힌지 도메인, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 함유한 일부이다. 상기 스페이서들 중에는 길이가 125개 아미노산보다 큰, 예컨대 길이가 150개 아미노산보다 큰, 180개 아미노산보다 큰 또는 200개 아미노산보다 큰 길이를 갖는 것을 포함하여 인간 면역글로불린 또는 이의 변형된 형태의 부분들이 있다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 스페이서는 혼성(hybrid) 또는 키메라 스페이서이고/거나 예컨대 글리코실화를 줄이거나 방지하기 위해 변형된다. 일부 구현예에서, 제공되는 항-GPRC5D 또는 항-BCMA CAR은 서열 번호: 17에 제시된 바와 같은, IgG4/IgG2 힌지 - IgG4/IgG2 CH2 - IgG4 CH3 면역글로불린 혼성/변형된 스페이서를 포함한다. 특정 구현예에서, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 숨은 스플라이스 및/또는 수용체 부위와 같은 스플라이스 부위를 제고하도록 변형된 스페이서 영역을 함유한다. 스페이서를 암호화하는 예시적인 뉴클레오타이드가 기술된다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 48에 제시된 (또는 서열 번호: 74에 제시된) 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은 세포(예를 들어, T 세포)에서 발현될 때 감소된 RNA 이질성을 나타낸다. 일부 구현예에서, CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오타이드는 또한 발현을 더 향상하도록 코돈 최적화될 수 있다.
본 출원에서 언급된 특허 문헌, 과학 논문 및 데이터베이스를 포함한 모든 출판물은 각각의 개별 출판물이 개별적으로 참조로 통합된 것과 동일한 정도로 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로 포함된다. 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 기타 출판물에 제시된 정의와 상반되거나 달리 부합하지 않는 경우, 본원에 제시된 정의가 본원에 참조로 포함된 정의보다 우선한다.
본원에 사용된 섹션 제목은 단지 조직화를 위한 목적이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
I. GPRC5D 결합 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
일부 측면에서, GPRC5D 분자에 결합하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체와 같은 GPRC5D 결합제(binding agent, 결합 제제), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)와 같은 GPRC5D 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. GPRC5D 결합 세포 표면 단백질은 일반적으로 GPRC5D에, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질과 같은 GPRC5D 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편) 및/또는 기타 결합 펩타이드를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 제제(agent)는 GPRC5D의 세포외 부분에 결합한다.
제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 것들이 있다. 일부 측면에서, GPRC5D 결합 폴리펩타이드를 함유하는 것과 같은 암호화된 수용체 및 조성물 및 제조품 및 상기의 용도가 또한 제공된다.
GPRC5D 결합 폴리펩타이드 중에는 단일 사슬 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편)와 같은 항체 또는 이의 부분이 존재한다. 일부 예에서, 재조합 수용체는 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 것과 같은 키메라 항원 수용체이다. 제공된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 재조합 GPRC5D 결합 수용체의 발현을 위해 세포에 도입될 수 있는 것과 같은 디옥시리보핵산(DNA) 또는 RNA 작제물과 같은 작제물에 편입될 수 있다.
1. 암호화된 재조합 GPRC5D 결합 수용체의 성분
제공된 GPRC5D 결합 수용체는 일반적으로 세포외 결합 분자 및 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 수용체 중에는 항-GPRC5D 항체를 함유한 재조합 세포 표면 수용체와 같은 항체를 함유한 폴리펩타이드가 있다. 상기 수용체는 상기 항체를 함유한 키메라 항원 수용체를 포함한다.
제공된 재조합 수용체 중에는 GPRC5D 결합 단편을 포함하는 항원 수용체가 있다. 재조합 수용체는 항-GPRC5D 항체(예를 들어, GPRC5D 항원 결합 단편)를 함유하는 항원 수용체와 같이 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 항원 수용체를 포함한다. 항원 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 기능성 비-TCR 항원 수용체가 있다. 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
a. 세포외 항원 결합 도메인
키메라 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)가 있다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 세포외 항원 결합 도메인을 포함하며, 이는 항-GPRC5D 항체이거나 이를 포함한다. 따라서, 키메라 수용체(예를 들어, CAR)는 전형적으로 하나 이상의 GPRC5D 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원 결합 단편, 도메인 또는 부분 또는 하나 이상의 항체 가변 영역 및/또는 항체 분자, 예컨대 본원에 기술된 것을 세포외 부분에 포함한다.
본 명세서에서 용어 “항체(antibody)”는 가장 넓은 의미로 사용되며, 온전한 항체 및 기능성(항원-결합) 항체 단편을 포함하는 다클론 및 단클론 항체를 포함하며, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 단편 항원 결합(Fab) 단편, F(ab’)2 단편, Fab’ 단편, Fv 단편, 재조합 IgG(rIgG) 단편, 가변 중쇄(VH) 영역, 단일 사슬 가변 단편(scFv)을 포함한 단일 사슬 항체 단편 및 단일 도메인 항체(예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디(nanobody)) 단편을 포함한다. 상기 용어는 유전자 조작된 및/또는 달리 변형된 형태의 면역글로불린, 예컨대 인트라바디(intrabodies), 펩티바디(peptibodies), 키메라 항체, 완전한 인간 항체, 인간화된 항체 및 이종 접합 항체, 다중 특이적(예를 들어, 이중 특이적 또는 삼중 특이적) 항체, 디아바디(diabodies), 트리아바디(triabodies) 및 테트라바디(tetrabodies), 탠덤 디-scFv, 탠덤 트리-scFv를 포괄한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 본 명세서에서 “항원 결합 단편(antigen-binding fragment)”으로도 지칭되는 이의 기능성 항체 단편을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 IgG 및 이의 하위 클래스, IgM, IgE, IgA 및 IgD를 포함하는 임의의 클래스 또는 하위 클래스의 항체를 포함하는 온전한 또는 전장 항체를 포괄한다.
용어 “초가변 영역(hypervariable region)” 또는 “HVR”과 동의어인 “상보성 결정 영역(complementarity determining region)” 및 “CDR”은 항원 특이성 및/또는 결합 친화도를 부여하는 항체 가변 영역 내의 비인접 아미노산 서열을 지칭하는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 있고 각각의 경쇄 가변 영역에는 3개의 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 있다. “프레임워크 영역(framework region)” 및 “FR”은 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-H1, FR-H2, FR-H3 및 FR-H4)이 있고, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에는 4개의 FR(FR-L1, FR-L2, FR-L3 및 FR-L4)이 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 문헌[Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” 넘버링 체계); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” 넘버링 체계); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745,” (“Contact” 넘버링 체계); Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” 넘버링 체계); Honegger A and Pluckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” 넘버링 체계); 및 Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM” 넘버링 체계)]에 기재된 것을 포함한 다수의 잘 알려진 체계 중 어느 하나를 사용하여 용이하게 결정될 수 있다.
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 식별에 사용된 체계에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 체계는 구조적 정렬을 기반으로 하는 반면 Chothia 체계는 구조 정보를 기반으로 한다. Kabat 및 Chothia 체계 모두에 대한 넘버링은 삽입 문자, 예를 들어 “30a”에 의해 수용되는 삽입(insertion) 및 일부 항체에서 나타나는 결실(deletion)이 있는 가장 일반적인 항체 영역 서열 길이에 기반한다. 이 두 체계는 상이한 위치에 특정 삽입 및 결실(“삽입-결실(indel)”)을 배치하여 차이가 있는 넘버링이 된다. Contact 체계는 복잡한 결정 구조의 분석에 기반하며 여러 측면에서 Chothia 넘버링 체계와 유사하다. AbM 체계는 Oxford Molecular’s AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 것에 기반한 Kabat와 Chothia 정의 사이의 절충안이다.
하기 표 1은 Kabat, Chothia, AbM 및 Contact 체계에 의해 각각 확인된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 위치 경계를 열거한다. CDR-H1의 경우, Kabat 및 Chothia 넘버링 체계 둘 다를 사용하여 잔기 넘버링이 나열된다. FR들은 예를 들어 CDR-L1 앞에 위치한 FR-L1, CDR-L1과 CDR-L2 사이에 위치한 FR-L2, CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한 FR-L3과 같은 식으로 CDR들 사이에 위치한다. 도시된 Kabat 넘버링 체계는 H35A 및 H35B에 삽입을 배치하기 때문에, 도시된 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때 Chothia CDR-H1 루프의 끝은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다.
| 표 1. 다양한 넘버링 체계에 따른 CDR의 경계 | ||||
| CDR | Kabat | Chothia | AbM | Contact |
| CDR-L1 | L24--L34 | L24--L34 | L24--L34 | L30--L36 |
| CDR-L2 | L50--L56 | L50--L56 | L50--L56 | L46--L55 |
| CDR-L3 | L89--L97 | L89--L97 | L89--L97 | L89--L96 |
| CDR-H1 (Kabat 넘버링1) |
H31--H35B | H26--H32..34 | H26--H35B | H30--H35B |
| CDR-H1 (Chothia 넘버링2) |
H31--H35 | H26--H32 | H26--H35 | H30--H35 |
| CDR-H2 | H50--H65 | H52--H56 | H50--H58 | H47--H58 |
| CDR-H3 | H95--H102 | H95--H102 | H95--H102 | H93--H101 |
| 1 - Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD 2 - Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 |
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따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 “CDR” 또는 “상보적 결정 영역(complementary determining region)” 또는 개별 지정 CDR(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 상보성 결정 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR(예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역 아미노산 서열에 있는 해당 CDR의 아미노산 서열을 함유한다고 언급될 경우, 상기 CDR은 전술한 체계 중 어느 하나 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같은 가변 영역 내의 해당 CDR(예를 들어, CDR-H3)의 서열을 갖는다고 이해된다. 일부 구현예에서, 특정 CDR 서열이 명시된다. 제공된 항체의 예시적인 CDR 서열은 다양한 넘버링 체계를 사용하여 기재되지만, 제공된 항체는 전술한 다른 넘버링 체계 중 어느 하나 또는 당업자에게 공지된 다른 넘버링 체계에 따라 기재된 바와 같은 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
마찬가지로, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예컨대 이의 가변 영역의 FR 또는 개별 지정 FR(들)(예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 공지된 체계 중 어느 하나에 의해 정의된 바와 같은 (또는 특정) 프레임워크 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 경우에, CDR과 같은 특정 CDR, FR 또는 FR들 또는 CDR들의 식별을 위한 체계는 Kabat, Chothia, AbM 또는 Contact 방법 또는 다른 공지된 체계에 의해 정의된 바와 같이 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 제공된다.
용어 “가변 영역(variable region)” 또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는 데 관여하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 도메인을 지칭한다. 천연 항체의 중쇄 및 경쇄(각각 VH 및 VL) 가변 영역은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각각의 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역(framework region, FR) 및 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, 문헌[Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007)]을 참조한다). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 또한, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보적 VL 또는 VH 도메인 라이브러리를 각각 선별하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터의 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다(예를 들어, 문헌[Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)]을 참조한다).
제공된 CAR에 포함된 항체 중에는 항체 단편이 있다. “항체 단편(antibody fragment)” 또는 “항원 결합 단편(antigen-binding fragment)”은 온전한 항체가 결합하는 항원에 결합하는 온전한 항체의 일부를 포함하는 온전한 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예는 Fv, Fab, Fab’, Fab’-SH, F(ab’)2; 디아바디; 선형 항체; 중쇄 가변(VH) 영역, scFv와 같은 단일 사슬 항체 분자 및 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체; 및 항체 단편들로 형성된 다중 특이적 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에 있는 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 항체 단편이거나 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 항체는 scFv와 같은 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 단일 사슬 항체 단편이다.
단일 도메인 항체(sdAb)는 항체의 중쇄 가변 영역의 전부 또는 일부 또는 경쇄 가변 영역의 전부 또는 일부를 포함하는 항체 단편이다. 특정 구현예에서, 단일 도메인 항체는 인간 단일 도메인 항체이다.
항체 단편은 온전한 항체의 단백질 가수 분해 소화 및 재조합 숙주 세포에 의한 생산을 포함하나 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 합성 링커, 예를 들어 펩타이드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 항체 영역 또는 사슬을 갖는 것과 같이 자연적으로 발생하지 않고/거나 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 생성되지 않을 수 있는 배열을 포함하는 단편과 같은 재조합으로 생성된 단편이다. 일부 측면에서, 항체 단편은 scFv이다.
“인간화된(humanized)” 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비인간 CDR로부터 유래되고 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR로부터 유래된 항체이다. 인간화된 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래된 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비인간 항체의 “인간화된 형태(humanized form)”는 모체 비인간 항체의 특이성 및 친화도를 유지하면서, 통상적으로 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거친 비인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화된 항체의 일부 FR 잔기는 비인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래된 항체)의 해당 잔기로 치환되어 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화도가 회복되거나 개선된다.
제공된 CAR에 포함된 항- GPRC5D 항체 중에는 인간 항체가 있다. “인간 항체(human antibody)”는 인간 또는 인간 세포 또는 인간 항체 라이브러리를 포함하는 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-암호화 서열을 이용하는 비인간 공급원에 의해 생성된 항체의 아미노산 서열에 해당하는 아미노산 서열을 갖는 항체이다. 상기 용어는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비인간인 것과 같은 비인간 항원 결합 영역을 포함하는 비인간 항체의 인간화된 형태를 배제한다. 상기 용어는 인간 항체의 항원 결합 단편을 포함한다.
인간 항체는 항원 공격(antigenic challenge)에 반응하여 온전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 온전한 항체를 생성하도록 변형된 형질전환동물(transgenic animal)에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 상기 동물은 통상적으로 내인성 면역글로불린 유전자 자리를 대체하거나 또는 동물의 염색체 내로 무작위 통합되거나 염색체 외에 존재하는 인간 면역글로불린 유전자 자리의 전부 또는 일부를 함유한다. 상기 형진전환동물에서, 내인성 면역글로불린 유전자 자리는 일반적으로 불활성화되어 있다. 인간 항체는 또한 인간 레퍼토리로부터 유래된 항체 암호화 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무세포 라이브러리를 포함한, 인간 항체 라이브러리로부터 유래될 수 있다.
제공된 CAR에 포함된 항체 중에는 단클론 항체 단편을 포함하는 단클론 항체인 것이 있다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 “단클론 항체(monoclonal antibody)”는 실질적으로 균질한 항체의 집단 내에서 또는 이로부터 수득된 항체를 지칭하는데, 즉, 단클론 항체 제제의 생산 동안 발생하거나 자연적으로 발생하는 돌연변이를 함유하는 가능한 변이체(상기 변이체는 일반적으로 미미한 양으로 존재함)를 제외하고 이 집단을 포함한 개별 항체는 동일하다. 통상적으로 상이한 에피토프를 겨냥하는 상이한 항체를 포함하는 다클론 항체 제제와는 대조적으로, 단클론 항체 제제의 각 단클론 항체는 항원 상의 단일 에피토프를 겨냥한다. 상기 용어는 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 요구하는 것으로 해석되어서는 안된다. 단클론 항체는 혼성세포, 재조합 DNA 방법, 파지 디스플레이 및 기타 항체 디스플레이 방법으로부터의 생성을 포함하되 이에 한정되지 않는 다양한 기술에 의해 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, CAR은 항체의 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역(예를 들어, scFv 항체 단편)과 같은 항체 분자의 GPRC5D 결합 부분 또는 부분들을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 GPRC5D 결합 CAR은 제공된 CAR의 GPRC5D 결합 특성을 부여하는 항-GPRC5D 항체와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 도메인은 기술된 임의의 항-GPRC5D 항체이거나 기술된 임의의 항-GPRC5D 항체로부터 유래될 수 있다(예를 들어, 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329, WO 2018/017786]을 참조한다). 상기 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 단편 중 어느 하나가 제공된 CAR에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329 또는 WO 2018/017786]에 기술된 항체로부터 유래된 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 scFv인 항원 결합 도메인을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체(예를 들어, 항-GPRC5D 항체) 또는 항원 결합 단편은 기술된 바와 같은 중쇄 및/또는 경쇄 가변(VH 또는 VL) 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열을 함유하고 기술된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열을 함유한다. 또한 항체 중에는 상기 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 동일한 서열을 갖는 것이 존재한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항체 단편은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329, 및 WO 2018/017786]에 기술된 항체 또는 항체 결합 단편 중 어느 하나의 VH 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 가변(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 (a) 서열 번호: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 152, 162, 165, 167 및 169 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 168 및 170 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 122, 129, 137, 144, 151, 156, 164 및 171 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호:75, 76 및 77; 각각 서열 번호: 78, 79 및 77; 각각 서열 번호: 80, 81 및 77; 각각 서열 번호: 82, 83 및 84; 각각 서열 번호: 90, 91 및 92; 각각 서열 번호: 93, 94 및 92; 각각 서열 번호: 95, 96 및 92; 각각 서열 번호: 97, 98 및 99; 각각 서열 번호: 105, 106 및 107; 각각 서열 번호: 108, 109 및 107; 각각 서열 번호: 110, 111 및 107; 각각 서열 번호: 112, 113 및 114; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122; 각각 서열 번호: 123, 124 및 122; 각각 서열 번호: 125, 126 및 122; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129; 각각 서열 번호: 135, 136 및 137; 각각 서열 번호: 138, 139 및 137; 각각 서열 번호: 140, 141 및 137; 각각 서열 번호: 142, 143 및 144; 각각 서열 번호: 135, 150 및 151; 각각 서열 번호: 152, 153 및 151; 각각 서열 번호: 140, 154 및 151; 각각 서열 번호: 142, 155 및 156; 각각 서열 번호: 162, 163 및 164; 각각 서열 번호: 165, 166 및 164; 각각 서열 번호: 167, 168 및 164; 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호:75, 76 및 77; 각각 서열 번호: 78, 79 및 77; 각각 서열 번호: 80, 81 및 77; 각각 서열 번호: 82, 83 및 84; 각각 서열 번호: 90, 91 및 92; 각각 서열 번호: 93, 94 및 92; 각각 서열 번호: 95, 96 및 92; 각각 서열 번호: 97, 98 및 99; 각각 서열 번호: 105, 106 및 107; 각각 서열 번호: 108, 109 및 107; 각각 서열 번호: 110, 111 및 107; 각각 서열 번호: 112, 113 및 114; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122; 각각 서열 번호: 123, 124 및 122; 각각 서열 번호: 125, 126 및 122; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129; 각각 서열 번호: 135, 136 및 137; 각각 서열 번호: 138, 139 및 137; 각각 서열 번호: 140, 141 및 137; 각각 서열 번호: 142, 143 및 144; 각각 서열 번호: 135, 150 및 151; 각각 서열 번호: 152, 153 및 151; 각각 서열 번호: 140, 154 및 151; 각각 서열 번호: 142, 155 및 156; 각각 서열 번호: 162, 163 및 164; 각각 서열 번호: 165, 166 및 164; 각각 서열 번호: 167, 168 및 164; 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VH 영역은 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 어느 하나를 포함하고, 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역을 포함하는 제공된 CAR(예를 들어, 항-GPRC5D CAR)에서 항체 또는 항체 단편은 경쇄 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 더 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 영역 및 VL 영역, 또는 VH 영역 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 상기 구현예에서, VH 영역 서열은 상기 기술된 임의의 VH 서열일 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 Fab 또는 scFv와 같은 항원 결합 단편이다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CAR은 상기 임의의 VH 영역 및 가변 경쇄 영역 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 VH 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역, 또는 VH 영역 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 상기 구현예에서, VH 영역 서열은 상기 기술된 임의의 VH 서열일 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 Fab 또는 scFv와 같은 항원 결합 단편이다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329 및 WO 2018/017786] 중 어느 하나에 기술된 VL 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 (a) 서열 번호: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 및 174 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 및 161 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 및 175 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87; 각각 서열 번호: 88, 89 및 87; 각각 서열 번호: 100, 101 및 102; 각각 서열 번호: 103, 104 및 102; 각각 서열 번호: 115, 116 및 117; 각각 서열 번호: 118, 119 및 117; 각각 서열 번호: 130, 131 및 132; 각각 서열 번호: 133, 134 및 132; 각각 서열 번호: 145, 146 및 147; 각각 서열 번호: 148, 149 및 147; 각각 서열 번호: 157, 158 및 159; 각각 서열 번호: 160, 161 및 159; 각각 서열 번호: 172, 86 및 173; 각각 서열 번호: 174, 89 및 175; 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87; 각각 서열 번호: 88, 89 및 87; 각각 서열 번호: 100, 101 및 102; 각각 서열 번호: 103, 104 및 102; 각각 서열 번호: 115, 116 및 117; 각각 서열 번호: 118, 119 및 117; 각각 서열 번호: 130, 131 및 132; 각각 서열 번호: 133, 134 및 132; 각각 서열 번호: 145, 146 및 147; 각각 서열 번호: 148, 149 및 147; 각각 서열 번호: 157, 158 및 159; 각각 서열 번호: 160, 161 및 159; 각각 서열 번호: 172, 86 및 173; 각각 서열 번호: 174, 89 및 175; 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다.
본원에 제공된 CAR 중에는, 제공된 CAR에서 항-GPRC5D 항체와 같은 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, CAR이 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3을 포함하고; 그리고 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33의 아미노산 서열을 포함하고 항체 또는 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22, 각각 서열 번호: 23 및 24, 각각 서열 번호: 25 및 26, 각각 서열 번호: 27 및 28, 각각 서열 번호: 29 및 30, 각각 서열 번호: 31 및 32, 또는 각각 서열 번호: 33 및 34의 아미노산 서열, 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 적어도 90%의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
예를 들어, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 21 및 22; 서열 번호: 23 및 24; 서열 번호: 25 및 26; 서열 번호: 27 및 28; 서열 번호: 29 및 30; 서열 번호: 31 및 32; 서열 번호: 33 및 34 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함한다. 다른 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 21 및 63; 서열 번호: 23 및 64; 서열 번호: 25 및 65; 서열 번호: 27 및 66; 서열 번호: 29 및 67; 서열 번호: 31 및 68; 서열 번호: 33 및 69 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv) 또는 디아바디 또는 단일 도메인 항체(sdAb)와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 scFv이다. 일부 구현예에서, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어, scFv)은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함한다. 링커는 전형적으로 펩타이드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩타이드 링커이다. 링커 중에는 글리신과 세린이 풍부하고/거나 일부 경우에는 트레오닌이 풍부한 것이 있다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 용해도를 향상시킬 수 있는 리신 및/또는 글루타메이트와 같은 하전된 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 하나 이상의 프롤린을 포함한다.
따라서, 제공된 CAR은 단일 사슬 항체 단편, 예컨대 scFv 및 디아바디, 특히 인간 단일 사슬 항체 단편을 포함하고, 전형적으로 VH 및 VL 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 링커(들)를 포함하는 항-GPRC5D 항체를 함유한다. 링커는 전형적으로 펩타이드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩타이드 링커, 예컨대 글리신과 세린이 풍부한 것이다.
일부 측면에서, 글리신 및 세린(및/또는 트레오닌)이 풍부한 링커는 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 상기 아미노산(들)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들은 적어도 (약) 50%, 55%, 60%, 70% 또는 75%의 글리신, 세린 및/또는 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 실질적으로 전부 글리신, 세린 및/또는 트레오닌으로 구성된다. 링커는 일반적으로 약 5 내지 약 50개 아미노산 길이, 전형적으로 (약)10 내지 30, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개 아미노산 길이이고, 일부 예에서 10 내지 25개 아미노산 길이이다. 예시적인 링커는 서열 GGGGS(4GS; 서열 번호: 50) 또는 GGGS(3GS; 서열 번호: 51)의 다양한 반복 횟수, 예컨대 상기 서열의 2, 3, 4 및 5회 사이의 반복을 갖는 링커를 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 52(GGGGSGGGGSGGGGS)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 또한 서열 번호: 53(GSTSGSGKPGSGEGSTKG)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 또한 서열 번호: 54(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 47(GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 서열 번호: 47, 52 또는 54에 제시된 링커와 같은 GGGS(서열 번호: 51) 또는 GGGGS(서열 번호: 50)의 반복을 갖는 링커를 포함하여, 글리신/세린이 풍부한 링커와 같은 상기 언급된 링커 중 하나 이상을 포함하는, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어, scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단일 수 있다. 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단일 수 있다. 특정 구현예에서, 단편(예를 들어, scFv)은 VH 영역 또는 이의 부분, 이어서 링커, 이어서 VL 영역 또는 이의 부분을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 단편(예를 들어, scFv)은 VL 영역 또는 이의 부분, 이어서 링커, 이어서 VH 영역 또는 이의 부분을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 제공되는 scFv는 서열 번호: 1-14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 서열 번호: 1-14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 21에 제시된 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 22에 제시된 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 21에 제시된 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 63에 제시된 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 75, 76 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 78, 79 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 257에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 257에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 258에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 258에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 23에 제시된 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 24에 제시된 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 23에 제시된 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 64에 제시된 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 90, 91 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 93, 94 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 3에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 259에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 259에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 4에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 4에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 260에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 260에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 25에 제시된 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 26에 제시된 서열 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 25에 제시된 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 65에 제시된 서열 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 105, 106 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 108, 109 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 110, 111 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 112, 113 및 114의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 118, 119 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 26에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 65에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 5에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 5에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 261에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 261에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 6에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 6에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 262에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 262에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 27에 제시된 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 28에 제시된 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 27에 제시된 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 66에 제시된 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 263에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 263에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 264에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 264에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 29에 제시된 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 30에 제시된 서열 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 29에 제시된 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 67에 제시된 서열 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 135, 136 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 138, 139 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 140, 141 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 142, 143 및 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 148, 149 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 30에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 67에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 265에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 265에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 10에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 266에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 266에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 31에 제시된 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 32에 제시된 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 31에 제시된 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 68에 제시된 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 135, 150 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 152, 153 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 11에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 267에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 267에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 268에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 268에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 33에 제시된 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 34에 제시된 서열 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 33에 제시된 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 69에 제시된 서열 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 162, 163 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 165, 166 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 167, 168 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 174, 89 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 34에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 69에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 269에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 269에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 270에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 270에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 CAR에서 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 중에는 인간 항체가 있다. 제공된 인간 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)의 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 D 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 및/또는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 J 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VH 영역을 함유하고/거나; 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 V 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 J 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3에 해당한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 해당한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H1 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H2 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H2를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절, D 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H3 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절, D 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L1 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L1을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L2 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L2를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L3 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L3을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 인간 생식세포계열 유전자 분절 서열을 함유하는 프레임워크 영역을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 FR4)이 V 분절 및/또는 J 분절과 같은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 영역을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 FR4)이 V 분절 및/또는 J 분절과 같은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL 영역을 함유한다. 예를 들어, 상기 일부 구현예에서, VH 영역 및/또는 VL 영역 내에 함유된 프레임워크 영역 서열은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역과 비교하여 10개 이내의 아미노산, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이내의 아미노산이 상이하다.
b. 스페이서
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 포함하는 CAR과 같은 재조합 수용체는 또한 면역글로불린 불변 영역 또는 이의 변이체 또는 변형된 버전의 적어도 일부이거나 이를 포함할 수 있는 스페이서를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역글로불린 불변 영역의 부분은 힌지 영역(예를 들어, IgG4 힌지 영역), 및/또는 CH1, CH2 또는 CH3 및/또는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 부분은 IgG4 또는 IgG1과 같은 인간 IgG의 것이다. 일부 측면에서, 불변 영역의 부분은 항원 결합 도메인(예를 들어, scFv)과 같은 항원-인식 성분과 막관통 도메인 사이에서 스페이서 영역으로 기능한다. 일부 구현예에서, 스페이서의 길이는 CAR 발현 세포와 같은 CAR 발현 세포와 GPRC5D 발현 종양 세포와 같은 CAR의 표적 사이의 생물리학적 시냅스 거리를 최적화하도록 조정된다. 일부 구현예에서, CAR은 T 세포에 의해 발현되고, 스페이서의 길이는 T 세포 활성화에 적합하거나 CAR T 세포 성능을 최적화하기 위한 길이로 조정된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 스페이서의 부재 시와 비교하거나 상이한 길이(예를 들어, 더 짧은 길이)의 대체 가능한 스페이서와 비교하여, 항원 결합 후 세포의 반응성을 증가시키는 길이일 수 있다. 일부 실시예에서, 스페이서는 (약) 12개 아미노산 길이이거나 또는 12개 이내의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 100개 이상의 아미노산 길이, 예컨대 110, 125, 130, 135, 140, 145, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240 또는 250개 이상의 아미노산 길이이다. 예시적인 스페이서는 적어도 약 10 내지 300개 아미노산, 약 10 내지 200개 아미노산, 약 50 내지 175개 아미노산, 약 50 내지 150개 아미노산, 약 10 내지 125개 아미노산, 약 50 내지 100개 아미노산, 약 100 내지 300개 아미노산, 약 100 내지 250개 아미노산, 약 125 내지 250개 아미노산 또는 약 200 내지 250개의 아미노산을 갖는 것을 포함하고, 열거된 범위 중 어느 하나의 종점 사이 임의의 정수를 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12개 이상의 아미노산, 적어도 약 119개 이하의 아미노산, 약 125개 이상의 아미노산, 약 200개 이상의 아미노산 또는 약 220개 이상의 아미노산 또는 약 225개 이상의 아미노산 길이이다.
일부 구현예에서, 스페이서는 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 이상 또는 (약) 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나, 또는 전술한 임의의 갯수 사이의 길이이다.
예시적인 스페이서는 IgG 힌지를 단독으로, 하나 이상의 CH2 및 CH3 도메인에 연결된 IgG 힌지를, 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG 힌지를 포함한다. 일부 구현예에서, IgG 힌지, CH2 및/또는 CH3은 IgG4 또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있고, 예컨대 인간 IgG4 또는 인간 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4, IgG2 및/또는 IgG2 및 IgG4로부터 유래된 힌지, CH2 및/또는 CH3 서열(들) 중 하나 이상을 함유하는 키메라 폴리펩타이드일 수 있다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이며; CH2 영역은 IgG4 CH2 영역의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 CH2 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 IgG4 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH2 영역이고 IgG2 CH2 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH2 영역이며; 및/또는 CH3 영역은 IgG4 CH3 영역의 전부 또는 일부 및/또는 IgG2 CH3 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 IgG4 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG4 CH3 영역이고 IgG2 CH3 영역은 선택적으로 인간 IgG2 CH3 영역이다. 일부 구현예에서, 힌지, CH2 및 CH3은 IgG4로부터의 힌지 영역, CH2 및 CH3의 각각의 전부 또는 일부를 포함한다. 일부 구현예에서, 힌지 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지 영역을 포함하고; CH2 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH2 영역을 포함하고/거나; CH3 영역은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 CH3 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 인간 IgG4 힌지 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지; 인간 IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 인간 IgG4 CH3 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4 및/또는 IgG2로부터 전부 또는 일부 유래될 수 있고 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 단일 아미노산 돌연변이와 같은 돌연변이를 함유할 수 있다. 일부 예에서, 아미노산 변형은 IgG4의 힌지 영역에서 세린(S)을 프롤린(P)으로 치환한 것이다. 일부 구현예에서, 아미노산 변형은 서열 번호: 281에 제시된 전장 IgG4 Fc 서열의 CH2 영역에서 177번 위치의 N177Q 돌연변이 또는 서열 번호: 282에 제시된 전장 IgG2 Fc 서열의 CH2 영역에서 176번 위치의 N176Q와 같이 글리코실화 이질성을 감소시키기 위해 아스파라긴(N)을 글루타민(Q)으로 치환한 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역이거나 이들을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 약 228개의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 17에 제시된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 아미노산 서열 ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(서열 번호: 17)를 포함한다.
일부 구현예에서, 스페이서는 코돈 발현을 위해 및/또는 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하기에 최적화된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 74에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 73에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 283에 제시된 핵산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서에 대한 코딩 서열은 서열 번호: 284에 제시된 핵산 서열을 포함한다.
추가로 예시적인 스페이서는 문헌[Hudecek et al. (2013) Clin. Cancer Res., 19:3153, Hudecek et al. (2015) Cancer Immunol. Res., 3(2):125-135 또는 국제 특허 출원 공개 번호 WO2014031687]에 기재된 것을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오타이드 서열은 발현 시 RNA 이질성을 감소시키도록 최적화된다. 일부 구현예에서, 스페이서의 뉴클레오타이드 서열은 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 스플라이스 부위에서 스플라이스 이벤트의 가능성을 감소시키도록 최적화된다.
일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 285에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 286에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 288에 제시된 아미노산 서열을 가지며, 서열 번호: 287에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 73, 74, 283 또는 284에 제시된 폴리뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 73, 74, 283 또는 284에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 스페이서는 선택적으로 코돈 사용을 위해 및/또는 RNA 이질성을 감소시키기 위해 최적화된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 대해 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 갖는다. 숨은 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위를 제거하는 방식 등 RNA 이질성을 감소시키기 위한 방법이 아래에서, 예컨대 섹션 I.B.2.b에서 기술된다. 관찰에 따르면 숨은 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위는 CAR에 존재할 때 특정 면역글로불린 스페이서의 스플라이스 영역에 존재하는 것으로 나타났다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR 내의 스페이서는, 하나 이상의 숨은 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위가 세포에서 발현 이후에, mRNA와 같이, 작제물로부터 전사된 RNA의 이질성을 감소시키기 위해 제거되고/거나 변형된, 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 (또한 서열 번호: 48에 제시된) 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 283에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 284에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
c. 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 성분
항원 인식 성분은 일반적으로 CAR의 경우에 TCR 복합체와 같은 항원 수용체 복합체를 통한 활성화 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 모방하는 신호 전달 성분과 같은 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분에 연결된다. 따라서, 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)는 본원에 기재된 것과 같은 하나 이상의 막관통 도메인 및 본원에 기재된 것과 같은 하나 이상의 세포내 성분을 포함하는 세포내 신호 전달 도메인에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 세포외 도메인에 융합된다. 일 구현예에서, 수용체(예를 들어, CAR)에 있는 도메인 중 하나와 자연적으로 회합하는 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에, 막관통 도메인은 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막관통 도메인에 대한 상기 도메인의 결합을 피하도록 아미노산 치환에 의해 변형되거나 선택되어 수용체 복합체의 다른 멤버와의 상호 작용이 최소화된다.
일부 구현예에서, 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유래된다. 공급원이 천연인 경우, 일부 측면에서, 도메인은 임의의 막-결합 또는 막관통 단백질로부터 유래된다. 막관통 도메인은 T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 사슬, CD3 엡실론, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137 및/또는 CD154로부터 유래된 것을 포함한다(즉, 적어도 이들의 막관통 도메인(들)을 포함한다). 예를 들어, 막관통 도메인은 서열 번호: 55 또는 서열 번호: 56에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 CD28 막관통 도메인일 수 있다. 대안적으로 일부 구현예에서 막관통 도메인은 합성이다. 일부 측면에서, 합성 막관통 도메인은 주로 류신 및 발린과 같은 소수성 잔기를 포함한다. 일부 측면에서, 페닐알라닌, 트립토판 및 발린의 트리플릿(triplet)이 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 연결은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인에 의한 것이다.
세포내 신호 전달 도메인 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공자극 수용체와 조합으로 상기 수용체를 통한 신호 및/또는 공자극 수용체 단독을 통한 신호를 모방하거나 이와 유사한 것이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예를 들어 글리신 및 세린, 예를 들어 글리신-세린 더블릿(doublet)을 함유하는 것과 같은 2 내지 10개 아미노산 길이의 링커가 CAR의 막관통 도메인과 세포내 신호 전달 도메인 사이에 존재하고 연결을 형성한다.
수용체, 예를 들어 CAR은 일반적으로 하나 이상의 세포내 신호 전달 성분 또는 성분들을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체는 T 세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어 CD3 제타(CD3-ζ) 사슬과 같은 TCR 복합체의 세포내 성분 또는 신호 전달 도메인을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, GPRC5D 결합 항체는 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어 CAR은 또한 Fc 수용체 γ, CD8, CD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가 분자의 일부를 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, CAR은 CD3-제타(CD3-ζ) 또는 Fc 수용체 γ와 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이에 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR의 결찰시, CAR의 세포질 도메인 또는 세포내 신호 전달 도메인은 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 정상 효과기 기능 또는 반응 중 적어도 하나를 자극 및/또는 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 맥락에서, CAR은 T 세포의 기능, 예컨대 세포 용해 활성 또는 T-헬퍼 활성, 예컨대 사이토카인 또는 기타 인자의 분비를 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인의 절단 부분은 예를 들어 그것이 효과기 기능 신호를 형질도입하는 경우 온전한 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인 또는 도메인들은 T 세포 수용체(TCR)의 세포질 서열 및 일부 측면에서 천연 맥락에서 항원 수용체 결합 후에 신호 전달을 개시하기 위해 상기 수용체와 협력하여 작용하는 공-수용체 및/또는 상기 분자의 임의의 유도체 또는 변이체 및/또는 동일한 기능적 능력을 갖는 임의의 합성 서열의 세포질 서열을 또한 포함한다.
천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공자극 신호가 필요하다. 따라서, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진하기 위해, 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분이 CAR에 또한 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 측면에서, 추가의 CAR이 동일한 세포에서 발현되고 2차 또는 공자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.
일부 측면에서, T 세포 활성화는 두 종류의 세포질 신호 전달 서열, 즉 TCR을 통한 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 서열(1차 세포질 신호 전달 서열) 및 항원-비의존적 방식으로 작용하여 2차 또는 공자극 신호를 제공하는 서열(2차 세포질 신호 전달 서열)에 의해 매개되는 것으로 설명된다. 일부 측면에서, CAR은 상기 종류의 세포질 신호 전달 서열 중 하나 또는 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 자극 및/또는 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호 전달 모티프를 함유할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 함유하는 ITAM의 예에는 TCR 또는 CD3 제타, FcR 감마, CD3 감마, CD3 델타 및 CD3 엡실론으로부터 유래된 것이 포함된다. 일부 구현예에서, CAR의 세포내 신호 전달 영역은 CD3 제타로부터 유래된 세포질 신호 전달 도메인, 이의 일부 또는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, CD3 제타는 서열 번호: 57 또는 서열 번호: 58에 제시된 핵산 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 신호 전달 도메인(예를 들어, 세포내 또는 세포질 신호 전달 도메인) 및/또는 T 세포 공자극 분자와 같은 공자극 분자의 막관통 부분을 포함한다. 예시적인 공자극 분자는 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS를 포함한다. 예를 들어, 공자극 분자는 4-1BB로부터 유래될 수 있고, 서열 번호: 59 또는 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 동일한 CAR은 자극성 또는 활성화 성분(예를 들어, 세포질 신호 전달 서열) 및 공자극 성분 둘 다를 포함한다.
일부 구현예에서, 자극성 또는 활성화 성분은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공자극 성분은 다른 항원을 인식하는 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극성 CAR 및 공자극 CAR을 포함하며, 둘 다 동일한 세포 상에서 발현된다(WO 2014/055668 참조). 일부 측면에서, GPRC5D 표적화 CAR은 자극성 또는 활성화 CAR이고; 다른 측면에서, 이는 공자극 CAR이다. 일부 구현예에서, 세포는 또한 억제성 CAR(iCAR, Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) December, 2013 참조), 예컨대 GPRC5D 외의 항원을 인식하는 CAR을 포함하고, 이로써 GPRC5D-표적화 CAR을 통해 전달된 자극성 또는 활성화 신호는 이의 리간드에 대한 억제성 CAR의 결합에 의해 감소 또는 억제되어 예를 들어 표적외 효과(off-target effect)를 감소시킨다.
특정 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 CD3(예를 들어, CD3-제타) 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포내 도메인에 연결된, 키메라 CD28 및 4-1BB(CD137, TNFRSF9) 공자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 세포질 부분에 하나 이상의, 예를 들어 2개 이상의 공자극 도메인 및 자극성 또는 활성화 도메인, 예를 들어 1차 활성화 도메인을 포함한다. 예시적인 CAR에는 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포내 성분이 포함된다.
일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR의 제공된 구현예는 본원에 기술된 예컨대 섹션 I.1a에 기술된 임의의 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 세포외 항원 결합 도메인; IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지를 포함하는 스페이서; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 약 228개 아미노산 길이인 또는 서열 번호: 73, 74, 283 또는 284의 임의 번호에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 바와 같은 서열 번호: 17에 제시된 스페이서인 것과 같은 IgG4 CH3 영역; 인간 CD28의 막관통 도메인과 같은 막관통 도메인; 및 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 함유한다. 상기 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인은 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이다. 특정 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 인간 4-1BB의 세포 내 신호 전달 도메인이다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 19에 제시된 서열이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포질 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 것과 같은 인간 CD3-제타 세포질 신호 전달 도메인이다. 일부 구현예에서, 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 19에 제시된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR의 제공된 구현예는 서열 번호: 289에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 289에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR의 제공된 구현예는 서열 번호: 290에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 290에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
2. 예시적인 특징
제공된 임의의 구현예의 일부에서, 항-GPRC5D CAR 및/또는 항-GPRC5D 항원 결합 도메인은 다발성 골수종 형질 세포상에서 GPRC5D와 같은 GPRC5D에 특이적으로 결합한다. 임의의 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 단편은 GPRC5D에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 결합(binding)은 인간 GPRC5D, 마우스 GPRC5D 단백질, 또는 비인간 영장류(예를 들어, 시노몰구스 원숭이) GPRC5D 단백질에 대한 것일 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 항-GPRC5D CAR 및/또는 항-GPRC5D 항원 결합 도메인 중에는 인간 GPRC5D 단백질에 결합하는 것이 있다. 항체 또는 다른 결합 분자가 GPRC5D 단백질에 결합하거나 GPRC5D 단백질에 특이적으로 결합한다는 관찰이 반드시 모든 종의 GPRC5D 단백질에 결합한다는 것을 의미하지는 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GPRC5D 단백질에 결합하는 특징, 예컨대 이에 대해 특이적으로 결합하는 능력 및/또는 기준 항체와 이에 대해 결합하기 위해 경쟁하는 능력 및/또는 특정 친화도로 결합하는 능력 또는 특정 정도로 경쟁하는 능력은, 일부 구현예에서, 인간 GPRC5D 단백질에 관한 능력을 지칭하고 항체는 다른 종, 예컨대 마우스의 GPRC5D 단백질에 관하여 상기 특징을 갖지 않을 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 인간 GPRC5D 단백질, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질의 에피토프 또는 영역, 예컨대 서열 번호: 49(Uniprot Q9NZD1)의 아미노산 서열을 포함하는 인간 BCMA 단백질 또는 이의 대립유전자 변이체 또는 스플라이스 변이체에 특이적으로 결합한다.
일 구현예에서, 비인간 GPRC5D 단백질 또는 다른 비-GPRC5D 단백질과 같은 비관련, 비-GPRC5D 단백질에 대한 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR의 결합 정도는 예를 들어 방사선면역분석(RIA)에 의해 측정된 바와 같이 인간 GPRC5D 단백질 또는 인간 막 결합 GPRC5D에 대한 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR의 결합의 10% 미만 또는 약 10%이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중에는, 마우스 GPRC5D 단백질에 대한 결합이 인간 GPRC5D 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%인 항체 또는 항원 결합 도메인 또는 CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중에는, 시노몰구스 원숭이 GPRC5D 단백질에 대한 결합이 인간 GPRC5D 단백질에 대한 항체의 결합의 10% 미만 또는 10% 또는 약 10%인 항체가 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항원 결합 도메인 중에는, 시노몰구스 원숭이 GPRC5D 단백질 및/또는 마우스 GPRC5D 단백질에 대한 결합이 인간 GPRC5D 단백질에 대한 항체의 결합과 유사하거나 대략 동일한 항체가 있다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체는 임의의 다수의 공지된 방법에 의해 측정된 바와 같이 인간 GPRC5D 단백질과 같은 GPRC5D 단백질에 특정 친화도 이상으로 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 친화도는 평형 해리 상수(KD)로 표시되고; 일부 구현예에서, 친화도는 EC50으로 표시된다.
어떤 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 단편)가 특정 리간드(예를 들어, 항원, 예컨대 GPRC5D 단백질)에 특이적으로 결합하는지 여부를 결정하고/거나 결합 친화도를 산정하기 위한 다양한 분석이 공지되어 있다. 예컨대 당업계에 널리 공지된 다수의 임의의 결합 분석을 이용하여, 항원, 예를 들어, GPRC5D, 예컨대 인간 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D 또는 마우스 GPRC5D에 대한 결합 분자, 예를 들어, 항체의 결합 친화도를 결정하는 것은 당업자의 수준 이내이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, BIAcore®기구를 사용하여 표면 플라스몬 공명(SPR) 분석을 이용하여, 2개의 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 단편과 항원, 예컨대 GPRC5D 단백질) 사이 복합체의 결합 동역학 및 상수를 결정할 수 있다(예를 들어, 문헌[Scatchard et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660, 1949; Wilson, Science 295:2103, 2002; Wolff et al., Cancer Res. 53:2560, 1993; 및 미국 특허 번호 5,283,173, 5,468,614] 또는 동등물 참조).
SPR은 분자가 표면에 결합하거나 표면에서 해리될 때 센서 표면의 분자 농도 변화를 측정한다. SPR 신호의 변화는 표면에 가까운 질량 농도의 변화에 정비례하여 두 분자 사이의 결합 동역학을 측정할 수 있다. 복합체에 대한 해리 상수는 완충제가 칩을 통과할 때 시간에 대하여 굴절률의 변화를 모니터링함으로써 측정할 수 있다. 하나의 단백질과 다른 단백질의 결합을 측정하기 위한 다른 적합한 분석에는 예를 들어, 효소결합면역흡착분석(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA) 및 방사선면역분석(radioimmunoassay, RIA)과 같은 면역분석 또는 단백질의 분광학적 또는 광학적 특성의 변화를 형광, UV 흡수, 원편광 이색성(circular dichroism) 또는 핵 자기 공명(nuclear magnetic resonance, NMR)을 통해 모니터링함으로써 결합을 측정하는 것이 포함된다. 다른 예시적인 분석은 웨스턴 블롯, ELISA, 분석적 초원심 분리, 분광법, 유세포 분석, 발현된 폴리뉴클레오타이드 또는 단백질 결합의 검출을 위한 염기서열 분석 및 기타 방법을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 결합 분자(예를 들어, CAR의 항체 또는 이의 단편 또는 항원 결합 도메인)는, 105 M-1과 같거나 이보다 더 큰 친화도 또는 KA(즉, 1/M의 단위를 가진 특정 결합 상호 작용의 평형 결합 상수; 2분자 상호 작용을 가정할 때 이 결합 반응에 대한 온-레이트(on-rate) [kon 또는 ka] 대 오프-레이트(off-rate) [koff 또는 kd]의 비율과 같음)를 띠고, 항원, 예를 들어, GPRC5D 단백질 또는 그 안의 에피토프에 결합한다(예컨대, 특이적으로 결합한다). 일부 구현예에서, CAR의 항체 또는 이의 단편 또는 항원 결합 도메인은 펩타이드 에피토프에 대해 10-5 M과 같거나 이보다 작은 KD(즉, M의 단위를 가진 특정 결합 상호 작용의 평형 해리 상수; 2분자 상호 작용을 가정할 때 이 결합 반응에 대한 오프-레이트 [koff 또는 kd] 대 온-레이트 [kon 또는 ka]의 비율과 같음)의 결합 친화도를 나타낸다. 예를 들면, 평형 해리 상수 KD 범위는 10-5 M 내지 10-13 M이고, 예컨대, 10-7 M 내지 10-11 M, 10-8 M 내지 10-10 M 또는 10-9 M 내지 (약) 10-10 M이다. 온-레이트(결합 비율 상수; kon 또는 ka; 1/Ms 단위) 및 오프-레이트(해리 비율 상수; koff 또는 kd; 1/s 단위)는 당업계에 공지된 임의의 분석 방법, 예를 들어, 표면 플라스몬 공명(SPR)을 이용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, GPRC5D 단백질, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질에 대한 CAR의 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 또는 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 해리 상수는 (약) 0.01nM 내지 500nM, (약) 0.01nM 내지 400nM, (약) 0.01nM 내지 100nM, (약) 0.01nM 내지 50nM, (약) 0.01nM 내지 10nM, (약) 0.01nM 내지 1nM, (약) 0.01nM 내지 0.1nM, (약) 0.1nM 내지 500nM, (약) 0.1nM 내지 400nM, (약) 0.1nM 내지 100nM, (약) 0.1nM 내지 50nM, (약) 0.1nM 내지 10nM, (약) 0.1nM 내지 1nM, (약) 0.5nM 내지 200nM, (약) 1nM 내지 500nM, (약) 1nM 내지 100nM, (약) 1nM 내지 50nM, (약) 1nM 내지 10nM, (약) 2nM 내지 50nM, (약) 10nM 내지 500nM, (약) 10nM 내지 100nM, (약) 10nM 내지 50nM, (약) 50nM 내지 500nM, (약) 50nM 내지 100nM 또는 (약) 100nM 내지 500nM이다. 특정 구현예에서, GPRC5D 단백질, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질에 대한 항체의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수 KD는 400nM, 300nM, 200nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하이거나; 400nM, 300nM, 200nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하 미만이거나; 약 400nM, 300nM, 200nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하이다. 일부 구현예에서, 항체는 GPRC5D 단백질, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질에 나노몰 이하의 결합 친화도, 예를 들어 약 1nM 미만의 결합 친화도, 예컨대 약 0.9nM, 약 0.8nM, 약 0.7nM, 약 0.6nM, 약 0.5nM, 약 0.4nM, 약 0.3nM, 약 0.2nM 또는 약 0.1nM 또는 그 이하 미만의 결합 친화도로 결합한다.
일부 구현예에서, 결합 친화도는 높은 친화도 또는 낮은 친화도로 분류될 수 있다. 일부 경우에, 낮은 내지 중간 정도의 친화도 결합을 나타내는 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 단편) 또는 CAR의 항원 결합 도메인은 최대 107M-1, 최대 106M-1, 최대 105M-1의 KA를 나타낸다. 일부 경우에, 특정 에피토프에 대해 높은 친화도 결합을 나타내는 결합 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 단편)는 그러한 에피토프와 적어도 107M-1, 적어도 108M-1, 적어도 109M-1, 적어도 1010M-1, 적어도 1011M-1, 적어도 1012M-1, 또는 적어도 1013M-1의 KA로 상호 작용한다. 일부 구현예에서, GPRC5D 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 CAR의 항-GPRC5D 항체 또는 이의 단편 또는 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수 KD는 (약) 0.01 nM 내지 약 1μM, 0.1nM 내지 1μM, 1nM 내지 1μM, 1nM 내지 500nM, 1nM 내지 100nM, 1nM 내지 50nM, 1nM 내지 10nM, 10nM 내지 500nM, 10nM 내지 100nM, 10nM 내지 50nM, 50nM 내지 500nM, 50nM 내지 100nM 또는 100nM 내지 500nM이다. 특정 구현예에서, GPRC5D 단백질에 대한 결합 분자, 예를 들어 CAR의 항-GPRC5D 항체 또는 이의 단편 또는 항원 결합 도메인의 결합 친화도(EC50) 및/또는 평형 해리 상수 KD의 해리 상수는 1μM, 500nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하이거나; 약 1μM, 500nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하이거나; 또는 1μM, 500nM, 100nM, 50nM, 40nM, 30nM, 25nM, 20nM, 19nM, 18nM, 17nM, 16nM, 15nM, 14nM, 13nM, 12nM, 11nM, 10nM, 9nM, 8nM, 7nM, 6nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM 또는 1nM 또는 그 이하 미만이다. 특정 항체의 친화도의 정도는 기준 항체와 같은 공지된 항체의 친화도와 비교될 수 있다.
일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종으로부터의 GPRC5D 단백질에 대한 CAR의 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 도메인과 같은 결합 분자의 결합 친화도는 종 교차 반응성을 결정하기 위해 비교될 수 있다. 예를 들어, 종 교차 반응성은 높은 교차 반응성 또는 낮은 교차 반응성으로 분류될 수 있다. 일부 구현예에서, 상이한 항원, 예를 들어, 상이한 종, 예컨대 인간, 시노몰구스 원숭이 또는 마우스의 GPRC5D 단백질에 대한 평형 해리 상수 KD는 종 교차 반응성을 결정하기 위해 비교될 수 있다. 일부 구현예에서, CAR의 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 도메인의 종 교차 반응성은 높을 수 있고, 예를 들어 항-GPRC5D 항체는 인간 GPRC5D 및 종 변이체 GPRC5D에 유사한 정도로 결합하고, 예를 들어 인간 GPRC5D에 대한 KD 및 종 변이체 GPRC5D에 대한 KD의 비율은 1 또는 약 1이다. 일부 구현예에서, CAR의 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 도메인의 종 교차 반응성은 낮을 수 있고, 예를 들어 항-GPRC5D 항체는 인간 GPRC5D에 대한 높은 친화도를 가지나 종 변이체 GPRC5D에 대해 낮은 친화도를 갖거나 또는 이와 반대이다. 예를 들어, 종 변이체 GPRC5D에 대한 KD와 인간 GPRC5D에 대한 KD의 비율은 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 200, 500, 1000, 2000 또는 그 이상보다 크며, 항-GPRC5D 항체는 낮은 종 교차 반응성을 갖는다. 종 교차 반응성의 정도는 기준 항체와 같은 공지된 항체의 종 교차 반응성과 비교될 수 있다.
제공된 CAR 중에는 항원-의존적 활성 또는 신호 전달, 즉 항원, 예를 들어 GPRC5D의 부재 하에 부재 또는 배경 수준에서 측정 가능한 신호 전달 활성을 나타내는 CAR이 있다. 따라서, 일부 측면에서, 제공된 CAR은 항원, 예를 들어 GPRC5D의 부재하에 존재하는 긴장성 신호 전달 또는 항원-비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내지 않거나 배경 이하 또는 허용 가능하거나 낮은 수준으로 나타낸다. 일부 구현예에서, 제공된 항-GPRC5D CAR 발현 세포는 세포 독성 활성, 사이토카인 생성 및 증식 능력을 포함하여 생물학적 활성 또는 기능을 나타낸다.
일부 구현예에서, 세포 독성 활성과 같은 키메라 수용체의 생물학적 활성 또는 기능적 활성은 다수의 공지된 방법 중 어느 하나를 사용하여 측정될 수 있다. 활성은 시험관 내 또는 생체 내에서 산정되거나 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 대상체(예를 들어, 인간)에 투여되면 활성을 산정할 수 있다. 산정 매개변수는 예를 들어, 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외 시험에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포를 특이적으로 결합하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 분석과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정할 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 인터루킨-2(IL-2), 인터페론-감마(IFNγ), 인터루킨-4(IL-4), TNF-알파(TNFα), 인터루킨-6(IL-6), 인터루킨-10(IL-10), 인터루킨-12(IL-12), 과립구-대식 세포 집락-자극 인자(GM-CSF), CD107a 및/또는 TGF-베타(TGFβ)와 같은 특정 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석하여 측정할 수 있다. 사이토카인 측정 분석법은 당업계에 널리 공지되어 있으며, ELISA, 세포내 사이토카인 염색, 세포 계량 비드 어레이, RT-PCR, ELISPOT, 유세포 분석 및 관련 사이토카인에 대해 반응하는 세포가 테스트 샘플의 존재 하에 반응성(예를 들어, 증식)이 테스트되는 생체 분석을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 산정하여 측정된다.
일부 측면에서, 리포터 세포주는 항-GPRC5D CAR 발현 세포를 통한 항원 비의존적 활성 및/또는 긴장성 신호 전달을 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 주르카트 세포주와 같은 T 세포주는 내인성 Nur77 전사 조절 요소의 제어 하에 발현된 적색 형광 단백질과 같은 형광 단백질 또는 다른 검출 가능한 분자와 같은 리포터 분자를 함유한다. 일부 구현예에서, Nur77 리포터 발현은 세포 내인성이며, T 세포 내의 1차 활성화 신호, T 세포 수용체(TCR) 성분의 신호 전달 도메인 및/또는 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프(ITAM), 예컨대 CD3ζ 사슬을 포함한 신호 전달 도메인을 함유한 재조합 리포터를 통한 신호 전달에 의존한다. Nur77 발현은 일반적으로 사이토카인 신호 전달 또는 톨-유사 수용체(toll-like receptor, TLR) 신호 전달과 같은 다른 신호 전달 경로에 영향을 받지 않는데, 상기 신호 전달은 세포 외인성 방식으로 작용할 수 있고 재조합 수용체를 통한 신호 전달에 의존하지 않을 수 있다. 따라서, 적절한 신호 전달 영역을 함유하는 외인성 재조합 수용체(예를 들어 항-GPRC5D CAR)를 발현하는 세포만이 자극시(예를 들어, 특이적 항원의 결합) Nur77을 발현할 수 있다. 일부 경우에, Nur77 발현은 자극(예를 들어: 항원)량에 대한 용량 의존적 반응을 나타낼 수도 있다.
일부 구현예에서, 제공된 항-GPRC5D CAR은, 동일한 아미노산 서열을 가지고 있지만 제거된 비-스플라이스 부위 및/또는 비-코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는, 다른 CAR과 비교하여 세포의 표면상에서 개선된 발현을 나타낸다. 일부 구현예에서, 세포의 표면상에서 재조합 수용체의 발현은 산정할 수 있다. 세포의 표면상에서 재조합 수용체의 발현을 결정하기 위한 접근법은 키메라 항원 수용체(CAR) 특이적인 항체(예를 들어, Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 2013 Mar; 5(177): 177ra38), Protein L(Zheng et al., J. Transl. Med. 2012 Feb; 10:29), 에피토프 태그 및 CAR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 단클론 항체(국제 특허 출원 공개 번호 WO2014190273 참조)의 사용을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포(예를 들어, 1차 T 세포)의 표면상에서 재조합 수용체의 발현은, 예를 들어 재조합 수용체에 결합할 수 있는 결합 분자 또는 검출될 수 있는 이의 일부를 이용하여 유세포 분석으로 산정할 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 발현을 검출하기 위해 사용되는 결합 분자는 항-이디오타입 항체, 예를 들어 결합 도메인(예를 들어, scFv)에 특이적인 항-이디오타입 작용제 항체 또는 이의 일부이다. 일부 구현예에서, 결합 분자는 단리되거나 정제된 항원, 예를 들어 재조합으로 발현된 항원이거나 이를 포함한다.
A. 이중 항원-표적화 키메라 항원 수용체
키메라 항원 수용체 및/또는 이의 부분(예를 들어, 사슬)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 본원에 기술된 BCMA 및 GPRC5D(예를 들어, 항원 결합 단편)에 결합하는 키메라 항원 수용체, 예컨대 항-BCMA scFv 및 항-GPRC5D scFv를 포함하는 키메라 항원 수용체(“단일 줄기” 키메라 항원 수용체)를 암호화하는 것이 있다. 폴리뉴클레오타이드에는 예를 들어 백본 변형을 갖는 것을 포함하여 천연 및/또는 비천연 발생 뉴클레오타이드 및 염기를 포함하는 것이 포함될 수 있다. 용어 “핵산 분자(nucleic acid molecule)”, “핵산(nucleic acid)” 및 “폴리뉴클레오타이드(polynucleotide)”는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오타이드 중합체를 지칭한다. 상기 뉴클레오타이드 중합체는 천연 및/또는 비천연 뉴클레오타이드를 함유할 수 있으며, DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이에 제한되지 않는다. “핵산 서열(nucleic acid sequence)”은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드의 선형 서열을 지칭한다. 일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 317에 제시된 서열을 포함할 수 있다.
일부 경우에, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는, 일부 경우에 GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 분자를 암호화하는 핵산 서열의 상류에서 암호화되거나 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산 서열의 5’ 말단에서 연결되는, 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 경우에, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩타이드로부터 유래된 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 271에 제시된 IgG 카파 사슬의 신호 펩타이드, 또는 서열 번호: 272 또는 273-276에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 278에 제시된 GMCSFR 알파 사슬의 신호 펩타이드 및 서열 번호: 277에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 279에 제시된 CD8 알파 신호 펩타이드의 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 280에 제시된 CD33 신호 펩타이드의 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 경우에, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 대리 표지자 또는 다른 표지자와 같은 추가 분자를 암호화하는 핵산 서열을 함유할 수 있거나, 추가 성분, 예컨대 프로모터, 조절 요소 및/또는 다중 시스트론 요소를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은 임의의 추가 성분에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 경우에, 항-GPRC5D scFv 및 항-BCMA scFv는 가요성 링커를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 예컨대 서열 번호: 320에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 분리된다. 일부 경우에, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 수용체를 포함하는 작제물은 또한 4-1BB 공자극 도메인(서열 번호: 60; 서열 번호: 19 암호화)을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 MM 형질 세포에 대한 치료제로서 GPRC5D 및 BCMA와 모두 결합하는 CAR을 발현한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 scFv들 중 하나 이상의 발현을 향상하기 위해 코돈 분기된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공되는 CAR 중에는 RNA 이질성을 감소시키고/거나, 예컨대 아래 섹션 IB에 기재된 바와 같이, 세포 산물 로트(lots) 중에서 암호화된 수용체의 표면 발현과 같은 발현을 변형시키기 위해, 예를 들어 증가시키거나 보다 일관되도록 만들기 위해 최적화되거나, 코돈 사용과 같은 최적화를 위해 설계된 특정 특징을 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 것이 있다. 따라서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
제1 및 제2 scFv를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한 제공된 폴리뉴클레오타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현하도록 조작된 T 세포와 같은 세포 및 상기 세포를 함유한 조성물이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 아래 섹션 IB에 기술된 바와 같이 변형된다.
B. 재조합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드
키메라 항원 수용체 및/또는 이의 부분(예를 들어, 사슬)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 본원에 기재된 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 암호화하는 것이 있다. 폴리뉴클레오타이드에는 예를 들어 백본 변형을 갖는 것을 포함하여 천연 및/또는 비천연 발생 뉴클레오타이드 및 염기를 포함하는 것이 포함될 수 있다. 용어 “핵산 분자(nucleic acid molecule)”, “핵산(nucleic acid)” 및 “폴리뉴클레오타이드(polynucleotide)”는 상호 교환적으로 사용될 수 있으며, 뉴클레오타이드 중합체를 지칭한다. 상기 뉴클레오타이드 중합체는 천연 및/또는 비천연 뉴클레오타이드를 함유할 수 있으며, DNA, RNA 및 PNA를 포함하나 이에 제한되지 않는다. “핵산 서열(nucleic acid sequence)”은 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드의 선형 서열을 지칭한다.
일부 경우에, GPRC5D-결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는, 일부 경우에 GPRC5D-결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열의 상류에서 암호화되거나 항원 결합 도메인을 암호화하는 핵산 서열의 5’ 말단에서 연결되는, 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 경우에, GPRC5D-결합 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 핵산 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드는 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 서열을 함유한다. 일부 측면에서, 신호 서열은 천연 폴리펩타이드로부터 유래된 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 다른 측면에서, 신호 서열은 이종 또는 비천연 신호 펩타이드를 암호화할 수 있다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 271에 제시된 IgG 카파 사슬의 신호 펩타이드, 또는 서열 번호: 272 또는 273-276에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 278에 제시된 GMCSFR 알파 사슬의 신호 펩타이드 및 서열 번호: 277에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 279에 제시된 CD8 알파 신호 펩타이드의 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 측면에서, 비제한적인 예시적 신호 펩타이드는 서열 번호: 280에 제시된 CD33 신호 펩타이드의 신호 펩타이드를 포함한다. 일부 경우에, GPRC5D-결합 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 대리 표지자 또는 다른 표지자와 같은 추가 분자를 암호화하는 핵산 서열을 함유할 수 있거나, 추가 성분, 예컨대 프로모터, 조절 요소 및/또는 다중 시스트론 요소를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 수용체를 암호화하는 핵산 서열은 임의의 추가 성분에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드 작제물을 포함하여, 제1 항원 결합 도메인을 갖는 제1 CAR 및 제2 항원 결합 도메인을 갖는 제2 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물이 또한 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물에 의해 암호화된 제1 CAR 및 제2 CAR은 상이한 항원에 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 본원에 기술된 임의의 CAR와 같은, GPRC5D에 결합할 수 있는 제1 CAR 및 BCMA에 결합할 수 있는 제2 CAR을 암호화한다. BCMA에 결합하는 예시적인 CAR은 본원에, 예컨대 섹션 II에 기술되어 있다. 일부 구현예에서, 세포는 MM 형질 세포에 대한 치료제로서 항-GPRC5D CAR 및 항-BCMA CAR을 발현한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 CAR들 중 하나 이상의 발현을 향상하기 위해 코돈 분기된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공되는 CAR 중에는 RNA 이질성을 감소시키고/거나, 세포 산물 로트(lots) 중에서 암호화된 수용체의 표면 발현과 같은 발현을 변형시키기 위해, 예를 들어 증가시키거나 보다 일관되도록 만들기 위해 최적화되거나, 코돈 사용과 같은 최적화를 위해 설계된 특정 특징을 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 것이 있다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 비밀 또는 숨겨진 스플라이스 부위를 제거하는 것과 같이 기준 폴리뉴클레오타이드에 비해 변형되어 RNA 이질성을 감소시킨다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 예컨대 포유류, 예를 들어 인간 세포, 예컨대 인간 T 세포에서의 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 측면에서, 변형된 폴리뉴클레오타이드는 세포에서 발현될 때 개선된, 예를 들어, 증가되거나 보다 균일하거나 보다 일관된 수준의 발현, 예를 들어 표면 발현을 초래한다. 상기 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 세포 표면 단백질을 발현하는 조작된 세포의 생성을 위한 작제물에 이용될 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
제1 및 제2 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함한 제공된 폴리뉴클레오타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 발현하도록 조작된 T 세포와 같은 세포 및 상기 세포를 함유한 조성물이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물에서 하나 이상의 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위가 세포에서 발현 이후에, mRNA와 같이, 작제물로부터 전사된 RNA의 이질성을 감소시키기 위해 변형된다.
1. 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드
일부 측면에서 제1 항원에 결합, 예컨대 특이적으로 결합할 수 있는 제1 키메라 항원 수용체, 및 제2 항원에 결합, 예컨대 특이적으로 결합할 수 있는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 항-GPRCD CAR 및 항-BCMA CAR과 같은 다중 CAR의 발현을 위해 이중 시스트론인 폴리뉴클레오타이드가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 본원에 제공된 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 핵산 및 항-BCMA CAR과 같은 제2 CAR을 암호화하는 핵산을 함유할 수 있으며, 이들은 동일한 세포에서 두 CAR의 발현을 위해 다중 시스트론 요소에 의해 분리된다. 일부 측면에서, BCMA-결합 폴리펩타이드 또는 GPRC5D-결합 폴리펩타이드를 함유한 것과 같은 암호화된 키메라 항원 수용체, 및 상기의 조성물 및 제조품 및 용도가 또한 제공되며, 이들은 MM 형질 세포에 대한 치료제로서 사용하기 위한 것일 수 있다.
BCMA-결합 폴리펩타이드 및 GPRC5D-결합 폴리펩타이드 중에는 단일 사슬 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편)와 같은 항체 또는 이의 부분이 존재한다. 일부 예에서, 키메라 항원 수용체는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 예에서, 키메라 항원 수용체는 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 제공된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 재조합 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR의 발현을 위해 세포에 도입될 수 있는 것과 같은 디옥시리보핵산(DNA) 또는 RNA 작제물과 같은 작제물에 편입될 수 있다.
일부 측면에서, BCMA 분자에 결합하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체와 같은 BCMA 결합제(binding agent, 결합 제제), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)와 같은 BCMA 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. BCMA-결합 세포 표면 단백질은 일반적으로 BCMA에, 예컨대 인간 BCMA 단백질과 같은 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편) 및/또는 기타 결합 펩타이드를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 제제(agent)는 BCMA의 세포외 부분에 결합한다.
일부 측면에서, GPRC5D 분자에 결합하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체와 같은 GPRC5D 결합제(binding agent, 결합 제제), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)와 같은 BCMA 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. GPRC5D 결합 세포 표면 단백질은 일반적으로 GPRC5D에, 예컨대 인간 GPRC5D 단백질과 같은 GPRC5D 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편) 및/또는 기타 결합 펩타이드를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 제제(agent)는 GPRC5D의 세포외 부분에 결합한다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 키메라 항원 수용체는 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 CAR들 중 하나 이상의 발현을 향상하기 위해 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 성분 또는 제1 및/또는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기되었다. 일부 구현예에서, 코돈 분기는 하나 이상의 키메라 항원 수용체의 발현을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 코돈 분기는, 다른 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’인 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 키메라 항원 수용체의 발현을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물에서 하나 이상의 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위가 세포에서 발현 이후에, mRNA와 같이, 작제물로부터 전사된 RNA의 이질성을 감소시키기 위해 변형된다.
일부 구현예에서, 두 CAR을 암호화하는 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드 작제물이 본원에 제공된다. 본원에서는, 폴리뉴클레오타이드 작제물의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR의 발현이 폴리뉴클레오타이드 작제물의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 다른 CAR에 비해 감소하는 것으로 관찰된다. 일부 구현예에서, 다른 암호화된 CAR 대비 3’인 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR은 “후행(trailing)” CAR로 식별된다. 유사하게, 다른 암호화된 CAR 대비 5’인 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR은 “선행(leading)” CAR로 식별된다. 일부 구현예에서, “선행(leading)” CAR은 다른 CAR 대비 N 말단으로 발현되는 CAR에 해당하고, “후행(trailing)” CAR은 다른 CAR 대비 C 말단으로 발현되는 CAR에 해당한다.
본원에서는, 3’에 위치한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR(“후행” CAR)의 발현은 다른 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR(“선행” CAR) 대비 감소하는 것으로 관찰된다. 일부 구현예에서, DNA 재조합은 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’에 위치한 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 손실, 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’인 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR의 발현의 손실, 또는 둘 모두로 귀결된다는 것이 고려된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드 작제물은 상기 손실을 방지하기 위해, 예컨대 CAR(예를 들어, 선행 CAR 또는 후행 CAR) 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 코돈 분기하여 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, 상기 CAR 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 제1 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 제2 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 20개 염기쌍, 15개 염기쌍, 10개 염기쌍 또는 5개 염기쌍 이내로 서열 상동성을 공유하도록, 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이의 성분, 예컨대 GPRC5D-결합 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 성분은 코돈 분기된다.
상기 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 세포 표면 단백질을 발현하는 조작된 세포의 생성을 위한 작제물에 이용될 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
a. 코돈 분기
제공된 임의의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드 작제물은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 CAR들 중 하나 이상의 발현을 향상하기 위해 코돈 분기된다. 본원의 관찰은 또한 세포에서 다중 CAR, 예를 들어 항-GPRC5D CAR 및 항-BCMA CAR의 발현은 CAR들 중 하나 이상을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 코돈 분기하여 향상될 수 있음을 입증한다. 본원에서는, 두 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물의 코돈 분기는 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’프라임(또는 C 말단)인 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 발현, 예를 들어, 후행 CAR의 발현이 코돈 분기에 의해 향상되는 것으로 확인된다.
일부 구현예에서, 두 CAR을 암호화하는 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드 작제물이 본원에 제공된다. 본원에서는, 폴리뉴클레오타이드 작제물의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR의 발현이 폴리뉴클레오타이드 작제물의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 다른 CAR에 비해 감소하는 것으로 관찰된다. 구체적으로, 본원에서는, 3’에 위치한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR은 다른 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR 대비 감소하는 것으로 관찰된다.
일부 구현예에서, DNA 재조합은 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’에 위치한 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 일부 또는 전부의 손실, 다른 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 대비 3’인 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR의 발현의 손실, 또는 둘 모두로 귀결된다는 것이 고려된다. DNA 재조합은 두 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열들 사이의 서열 상동성 때문에 이 손실로 귀결되는 것이 고려된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 폴리뉴클레오타이드 작제물은 상기 손실을 방지하기 위해, 예컨대 CAR들 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 코돈 분기하여 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, CAR들 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 두 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열들 사이의 상동성을 감소시키기 위해 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, 두 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열들 사이의 상동성 감소는 후행 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 상동 재조합 및 일부 또는 전부의 손실 확률을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 코돈 분기는 후행 CAR을 암호화하는 서열의 손실, 후행 CAR의 발현의 손실, 또는 둘 모두를 방지하기 위해 선행 CAR의 뉴클레오타이드 서열을 변형하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 코돈 분기는 후행 CAR을 암호화하는 서열의 손실, 후행 CAR의 발현의 손실, 또는 둘 모두를 방지하기 위해 후행 CAR의 뉴클레오타이드 서열을 변형하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 CAR 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은, 제1 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 제2 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 약 20개 염기쌍, 약 15개 염기쌍, 약 10개 염기쌍 또는 약 5개 염기쌍 이내로 서열 상동성을 공유하도록, 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, CAR들 중 하나를 암호화하는 뉴클레오타이드 염기 순서 분석은, 두 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 두 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 내에서 발견되는 임의의 하나의 서열에서 약 20개 이내, 약 15개 이내, 약 10개 이내 또는 약 5개 이내의 연속적이고 동일한 염기를 공유하도록, 코돈 분기된다.
일부 구현예에서, 다음 CAR 성분들: (a) 항원 결합 도메인; (b) 스페이서; (c) 막관통 도메인; (d) 세포내 신호 전달 영역 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, (b) 내지 (d) 성분들 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열이 코돈 분기되고, 그 결과 제1 CAR의 하나 이상의 성분이 제2 CAR의 동일한 성분의 것과 상이한 뉴클레오타이드 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 성분들 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 제2 CAR에서 동일한 성분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 것과 상이하지만, 제1 CAR에서 성분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 제2 CAR에서 동일한 성분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 동일한 아미노산 서열을 암호화한다.
일부 구현예에서, 제1 CAR에서 스페이서를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 305에 의해 제공되고 제2 CAR에서 동일한 스페이서를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 74에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 CAR에서 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 307에 의해 제공되고 제2 CAR에서 동일한 막관통 도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 56에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 CAR에서 세포내 신호 전달 영역의 4-1BB 엔도도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 308에 의해 제공되고 제2 CAR에서 세포내 신호 전달 영역의 동일한 4-1BB 엔도도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 60에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 4-1BB 엔도도메인은 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 CAR에서 세포내 신호 전달 영역의 CD3제타 엔도도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 309에 의해 제공되고 제2 CAR에서 세포내 신호 전달 영역의 동일한 CD3제타 엔도도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 58에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CD3zeta 엔도도메인은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열에 의해 제공된다.
일부 구현예에서, 제1 CAR의 항원 결합 도메인은 제2 CAR의 항원 결합 도메인과 상이한 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 자신의 원래 서열과 비교하여 볼 때 코돈 분기된다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인을 암호화하는 코돈 분기된 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 311에 의해 제공되고 동일한 항원 결합 도메인을 암호화하는 원래 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 264에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR 중 다른 하나의 항원 결합 도메인은 자신의 원래 서열과 비교하여 볼 때 코돈 분기되지 않는다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR 중 다른 하나의 항원 결합 도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 310에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, 제1 또는 제2 CAR 중 다른 하나의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 의해 제공된다.
일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 또는 이의 성분, 예컨대 GPRC5D-결합 scFv, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 성분은 코돈 분기된다. 상기 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 세포 표면 단백질을 발현하는 조작된 세포의 생성을 위한 작제물에 이용될 수 있다. 따라서, 본원에 제공된 코돈 분기된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
b. 다중 시스트론 요소
제공된 임의의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 또한 번역(translation) 후에 제1 및 제2 핵산 서열의 번역 산물을 산출하기 위해 제1 및 제2 핵산 서열 사이에 내부 리보솜 유입점(IRES)을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 (예를 들어, 제1 및 제2 키메라 수용체를 암호화하는) 유전자 산물의 공발현을 허용하는 IRES(내부 리보솜 유입점)를 함유하는 이중 시스트론 단위로 조작될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 단일 프로모터의 조절 하에서 IRES에 의해 분리되는, 본원에 제공되는 항-GPRC5D 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR)를 암호화하는 핵산 및 항-BCMA 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 암호화하는 핵산을 함유할 수 있다.
그렇지 않으면, 제공된 임의의 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 제1 및 제2 핵산 서열 사이에 연결 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 함유하고, 여기서 연결 펩타이드는 번역 도중 또는 후에 제1 및 제2 핵산 서열의 번역 산물을 분리한다. 일부 측면에서, 연결 펩타이드는 자가 절단 펩타이드, 또는 리보솜 스키핑을 일으키는 펩타이드, 선택적으로 T2A 펩타이드를 함유한다. 일부 구현예에서, 단일 프로모터는 단일 개방형 해독틀(open reading frame, ORF)에서 자가-절단 펩타이드(예를 들어, 2A 절단 서열) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어, 퓨린)를 암호화하는 서열에 의해 서로 분리된 (예를 들어, 제1 및 제2 결합 분자, 예를 들어 항체 재조합 수용체를 암호화하는) 두 개 또는 세 개의 유전자를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서, 상기 ORF는 번역 동안(T2A의 경우) 또는 후에 개별적인 단백질로 절단되는 단일 폴리펩타이드를 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 스키핑) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음 펩타이드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, 문헌[de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 de Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)] 참조). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 본원에 개시된 방법 및 폴리뉴클레오타이드에 사용될 수 있는 2A 서열의 예에는 문헌[미국 특허 공개 번호 20070116690]에 기술된 바와 같은, 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열 번호: 42 또는 43), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열 번호: 40 또는 41), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열 번호: 35, 36 또는 37) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열 번호: 38 또는 39)이 있으며, 하지만 이에 한정되지 않는다.
제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드 작제물에서, 제1 CAR을 암호화하는 제1 핵산 서열 및 제2 CAR을 암호화하는 제2 핵산 서열은 리보솜 스킵 요소, 예컨대 T2A를 암호화하는 핵산 염기 순서 분석에 의해 분리된다. 따라서, 번역 도중 또는 후에, 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체는 개별 단백질로 절단된다. 제공된 임의의 폴리뉴클레오타이드 작제물에서, T2A를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기될 수 있다.
2. 폴리뉴클레오타이드의 특징
a. 코돈 최적화
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 인간에서의 발현을 위한 코돈 최적화에 의해 변형된다. 일부 측면에서, 코돈 최적화는 스플라이스 부위 식별 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위한 단계 및/또는 RNA 이질성을 감소시키기 위한 각 반복 단계 전 및/또는 후에 고려될 수 있다. 코돈 최적화는 일반적으로 예를 들어 어떠한 것도 과부하 또는 제한되지 않도록 인간 전달 RNA의 존재비(abundance), 예를 들어 공개된 존재비로 선택된 코돈의 백분율의 균형을 맞추는 것을 포함한다. 일부 경우에, 대부분의 아미노산이 하나 이상의 코돈에 의해 암호화되고 코돈 사용은 일반적으로 유기체마다 다르기 때문에 상기 균형을 맞추는 것이 필요하거나 유용하다. 형질주입 또는 형질도입된 유전자 또는 핵산과 숙주 세포 사이의 코돈 사용의 차이는 핵산 분자로부터의 단백질 발현에 영향을 미칠 수 있다. 하기 표 2는 예시적인 인간 코돈 사용 빈도 표를 제시한다. 일부 구현예에서, 코돈-최적화된 핵산 서열을 생성하기 위해, 인간 사용 빈도와 균형을 이루는 코돈을 선택하도록 코돈이 선택된다. 아미노산에 대한 코돈의 중복성은 표 2에 도시된 바와 같이 상이한 코돈이 하나의 아미노산을 코딩하게 한다. 교체를 위한 코돈을 선택함에 있어서, 코돈 변화가 아미노산 서열에 영향을 미치지 않도록, 생성된 돌연변이는 잠재성 돌연변이인 것이 바람직하다. 일반적으로, 코돈의 마지막 뉴클레오타이드(예를 들어, 제3 위치의)는 아미노산 서열에 영향을 미치지 않으면서 변하지 않고 유지될 수 있다.
| 표 2. 인간 코돈 사용 빈도 | ||||||||
| 인간 코돈 | 아미노산 |
빈도/
1000 |
수(number) | 인간 코돈 | 아미노산 |
빈도/
1000 |
수(number) | |
| TTT | F | 17.6 | 714298 | TCT | S | 15.2 | 618711 | |
| TTC | F | 20.3 | 824692 | TCC | S | 17.7 | 718892 | |
| TTA | L | 7.7 | 311881 | TCA | S | 12.2 | 496448 | |
| TTG | L | 12.9 | 525688 | TCG | S | 4.4 | 179419 | |
| CTT | L | 13.2 | 536515 | CCT | P | 17.5 | 713233 | |
| CTC | L | 19.6 | 796638 | CCC | P | 19.8 | 804620 | |
| CTA | L | 7.2 | 290751 | CCA | P | 16.9 | 688038 | |
| CTG | L | 39.6 | 1611801 | CCG | P | 6.9 | 281570 | |
| ATT | I | 16 | 650473 | ACT | T | 13.1 | 533609 | |
| ATC | I | 20.8 | 846466 | ACC | T | 18.9 | 768147 | |
| ATA | I | 7.5 | 304565 | ACA | T | 15.1 | 614523 | |
| ATG | M | 22 | 896005 | ACG | T | 6.1 | 246105 | |
| GTT | V | 11 | 448607 | GCT | A | 18.4 | 750096 | |
| GTC | V | 14.5 | 588138 | GCC | A | 27.7 | 1127679 | |
| GTA | V | 7.1 | 287712 | GCA | A | 15.8 | 643471 | |
| GTG | V | 28.1 | 1143534 | GCG | A | 7.4 | 299495 | |
| TAT | Y | 12.2 | 495699 | TGT | C | 10.6 | 430311 | |
| TAC | Y | 15.3 | 622407 | TGC | C | 12.6 | 513028 | |
| TAA | * | 1 | 40285 | TGA | * | 1.6 | 63237 | |
| TAG | * | 0.8 | 32109 | TGG | W | 13.2 | 535595 | |
| CAT | H | 10.9 | 441711 | CGT | R | 4.5 | 184609 | |
| CAC | H | 15.1 | 613713 | CGC | R | 10.4 | 423516 | |
| CAA | Q | 12.3 | 501911 | CGA | R | 6.2 | 250760 | |
| CAG | Q | 34.2 | 1391973 | CGG | R | 11.4 | 464485 | |
| AAT | N | 17 | 689701 | AGT | S | 12.1 | 493429 | |
| AAC | N | 19.1 | 776603 | AGC | S | 19.5 | 791383 | |
| AAA | K | 24.4 | 993621 | AGA | R | 12.2 | 494682 | |
| AAG | K | 31.9 | 1295568 | AGG | R | 12 | 486463 | |
| GAT | D | 21.8 | 885429 | GGT | G | 10.8 | 437126 | |
| GAC | D | 25.1 | 1020595 | GGC | G | 22.2 | 903565 | |
| GAA | E | 29 | 1177632 | GGA | G | 16.5 | 669873 | |
| GAG | E | 39.6 | 1609975 | GGG | G | 16.5 | 669768 | |
예를 들어, 코돈 TCT, TCC, TCA, TCG, AGT 및 AGC는 모두 세린을 코딩한다(DNA의 T는 RNA의 U와 동일하다는 것에 유의한다). 상기 표 2에 제시된 바와 같은 인간 코돈 사용 빈도로부터, 상기 코돈에 대한 상응하는 사용 빈도는 각각 15.2, 17.7, 12.2, 4.4, 12.1 및 19.5이다. TCG가 4.4 %에 해당하기 때문에, 상기 코돈이 유전자 합성에 일반적으로 사용된다면, 상기 코돈의 tRNA는 제한적일 것이다. 코돈 최적화에서, 목표는 전이 유전자가 발현되도록 의도된 동물 종에서 정상적인 사용 빈도와 각 코돈의 사용의 균형을 맞추는 것이다.
b. 스플라이스 부위
하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위가 식별되고, 식별된 스플라이스 공여 부위 중 하나 이상의 또는 그 근처의 핵산 서열이 변형된, 폴리뉴클레오타이드가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 이어서 생성된 변형 핵산 서열(들)이 합성되고 합성된 것이 RNA 이질성에 의해 지시된 바와 같이 스플라이싱을 시험하기 위해 세포를 형질도입하기 위해 사용된다.
예컨대 본 명세서에 제공된 임의의 항체, 수용체(예컨대 키메라 항원 수용체와 같은 항원 수용체) 및/또는 GPRC5D 특이적 및/또는 BCMA 특이적 결합 단백질을 암호화하는 것과 같이, 본 명세서에서 관찰된(예컨대 최적화 방법에 의해) 하나 이상의 핵산 서열을 함유하거나 이질성을 감소시키기 위해 변형되어, 별개의 참조 서열을 함유하거나 변형되지 않은 것과 비교하여, CAR과 같은 폴리펩타이드의 개선된 특징을 가져오는, 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공된다. 상기 특징 중에는 하나 이상의 숨은 스플라이스 부위와 같은 하나 이상의 스플라이스 부위의 존재로부터 초래된 것과 같은 RNA 이질성에서의 개선 및/또는 폴리펩타이드를 발현하도록 조작된 상이한 치료적 세포 조성물 또는 세포 중에서 발현의 수준, 균일성, 또는 일관성의 증가와 같은 암호화된 단백질의 발현 및/또는 표면 발현의 개선이 포함된다.
스플라이스 부위는 발현 세포로부터 RNA를 수확하고, 역전사 효소 중합효소연쇄반응(RT-PCR)에 의해 증폭하고, 아가로스 겔 전기영동에 의해 분리분석하여, 출발 서열과 비교하여 RNA의 이질성을 결정함으로써 폴리뉴클레오타이드 서열에서 식별할 수 있다. 일부 경우에, 개선된 서열은 추가 코돈 최적화 및 스플라이스 부위 제거를 위해 유전자 합성 공급 업체에 다시 제출될 수 있고, 이어서 아가로스 겔 상의 RNA가 최소 RNA 이질성을 나타낼 때까지 추가의 숨은 스플라이스 부위 평가, 변형, 합성 및 시험이 이어질 수 있다.
숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위의 제거를 위해 변형된 폴리뉴클레오타이드가 또한 제공된다. 유전체 핵산 서열은 일반적으로, 사실상, 포유류 세포에서, 전사 직후 또는 전사와 동시에 가공을 거치고, 여기에서 유전체 디옥시리보핵산(DNA) 서열로부터 전사된 초기(nascent) 전구체 메신저 리보핵산(전구체-mRNA)은, 일부 경우에 진핵 세포에서 인트론을 제거하기 위해 스플라이싱을 통해 편집되고, 이어서 엑손의 결찰로 이어진다. 스플라이스 부위에 대한 공통 서열(consensus sequence)은 공지되어 있지만, 일부 측면에서, 스플라이스 부위를 정의하는 특정 뉴클레오타이드 정보는 복잡할 수 있고 이용 가능한 방법에 기초하여 선뜻 명백하지 않을 수 있다. 숨은 스플라이스 부위는 표준 공통 서열을 기반으로 예측되지 않고 가변적으로 활성화되는 스플라이스 부위이다. 따라서, 숨은 스플라이스 부위에서 전구체-mRNA의 가변 스플라이싱은 진핵 세포에서의 발현 시 전사된 mRNA 산물에서의 이질성으로 이어진다.
전이 유전자의 발현을 위해 생성된 폴리뉴클레오타이드는 전형적으로 인트론을 함유하지 않은 상보적 DNA(cDNA)와 같은 핵산 서열 또는 이의 부분으로부터 작제된다. 따라서, 상기 서열의 스플라이싱이 일어나지 않을 것으로 예상된다. 그러나, cDNA 서열 내의 숨은 스플라이스 부위의 존재는 전사된 mRNA에서 의도하지 않거나 바람직하지 않은 스플라이싱 반응 및 이질성으로 이어질 수 있다. 상기 이질성은 변형된 발현 및/또는 활성을 나타내는 가변 아미노산 서열을 가진 절단된 단백질 산물과 같은 의도하지 않은 단백질 산물의 번역을 초래한다.
일부 구현예에서, 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하면 전이 유전자 산물, 예컨대 전이 유전자로부터 번역된 폴리펩타이드, 예컨대 항-GPRC5D CAR 폴리펩타이드의 발현을 개선 또는 최적화할 수 있다. 암호화된 GPRC5D CAR 분자와 같은 암호화된 전이 유전자의 숨은 스플라이스 부위에서의 스플라이싱은 단백질 발현, 예를 들어 세포 표면 상에서의 발현 감소로 이어질 수 있고/거나 기능 감소, 예를 들어 세포내 신호 전달의 감소로 이어질 수 있다. 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 제거하도록 최적화된 항-GPRC5D CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본원에 제공된다. 코돈 발현에 최적화된 항-GPRC5D CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 스플라이스 부위에 관한 본 명세서의 방법 또는 관찰에 의해 식별된 것과 같은 하나 이상의 서열이 존재하고/거나 본 명세서에서 식별된 스플라이스 부위 중 어느 하나와 같은 식별된 스플라이스 부위가 존재하지 않는, 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 특정 조건 하에서 발현되고/거나 특정 세포 유형, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포로 도입될 때 특정 정도 미만의 RNA 이질성 또는 스플라이스 형태를 나타내는 것이 있으며, 상기 폴리펩타이드를 함유하고/거나 상기 특성을 나타내는 세포 및 조성물 및 제조품이 있다. 일부 구현예에서, 전사된 RNA의 RNA 이질성은 숨은 스플라이스 부위를 제거하고/거나 코돈 최적화에 의해 변형된 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상 넘게 감소한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오타이드는 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 전사된 RNA의 RNA 동질성을 나타낸다.
일부 구현예에서, 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위를 제거하면 전이 유전자 산물, 예컨대 전이 유전자로부터 번역된 폴리펩타이드, 예컨대 항-BCMA CAR 폴리펩타이드의 발현을 향상 또는 최적화할 수 있다. 암호화된 BCMA CAR 분자와 같은 암호화된 전이 유전자의 숨은 스플라이스 부위에서의 스플라이싱은 단백질 발현, 예를 들어 세포 표면상에서의 발현 감소 및/또는 기능 감소, 예를 들어 세포내 신호 전달의 감소로 이어질 수 있다. 숨은 스플라이스 부위를 감소시키거나 제거하도록 최적화된 항-BCMA CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 본원에 제공된다. 코돈 발현에 최적화된 항-BCMA CAR 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 및/또는 스플라이스 부위에 관한 본 명세서의 방법 또는 관찰에 의해 식별된 것과 같은 하나 이상의 서열이 존재하고/거나 본 명세서에서 식별된 스플라이스 부위 중 어느 하나와 같은 식별된 스플라이스 부위가 존재하지 않는, 폴리뉴클레오타이드가 또한 본원에 제공된다. 제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 특정 조건 하에서 발현되고/거나 특정 세포 유형, 예컨대 인간 T 세포, 예컨대 1차 인간 T 세포로 도입될 때 특정 정도 미만의 RNA 이질성 또는 스플라이스 형태를 나타내는 것이 있으며, 상기 폴리펩타이드를 함유하고/거나 상기 특성을 나타내는 세포 및 조성물 및 제조품이 있다. 일부 구현예에서, 전사된 RNA의 RNA 이질성은 숨은 스플라이스 부위를 제거하고/거나 코돈 최적화에 의해 변형된 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 (약) 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상 넘게 감소한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오타이드는 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 또는 그 이상의 전사된 RNA의 RNA 동질성을 나타낸다.
RNA 이질성은 본 명세서에 제공되거나 기재되거나 공지된 다수의 임의의 방법에 의해 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 전사된 핵산의 RNA 이질성은 예컨대 역전사 효소 중합효소연쇄반응(reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)에 의해 전사된 핵산을 증폭한 후 하나 이상의 증폭된 산물에서 크기 차이와 같은 하나 이상의 차이를 검출함으로써 결정된다. 일부 구현예에서, RNA 이질성은 상이한 크기의 증폭된 산물의 수 또는 상이한 크기의 다양한 증폭된 산물의 비율에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, RNA, 예컨대 총 RNA 또는 세포질의 폴리아데닐화된 RNA는 일부 경우에 전사된 RNA 내 전이 유전자의 상류에 위치된 발현 벡터에서 프로모터 서열의 일부에 해당하는 5’ 비번역 영역(5′ UTR)에 특이적인 프라이머 및 전사된 RNA 서열 내 발현된 전이 유전자의 하류에 위치된 3’ 비번역 영역(3′ UTR)에 특이적인 프라이머 또는 전이 유전자 내의 서열에 특이적인 프라이머를 사용하여 역전사 효소 중합효소연쇄반응(RT-PCR)에 의해 증폭되고 최적화된 전이 유전자를 발현하는 세포로부터 수확된다. 특정 구현예에서, 5’ 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머 및 3’ 비번역 영역(UTR)에 있는 서열에 상보적인 하나 이상의 프라이머가 전이 유전자를 증폭하기 위해 이용된다. 당업자는 메신저 RNA와 같은 RNA를 분리분석할 수 있고, 여러 방법으로 이의 이질성을 분석할 수 있다. 비제한적이고 예시적인 방법에는 아가로스 겔 전기영동, 칩-기반 모세관 전기영동, 분석적 원심 분리, 장흐름 분획법, 및 크기 배제 크로마토그래피 또는 액체 크로마토그래피와 같은 크로마토그래피가 포함된다.
일부 측면에서, 잠재적 숨은 스플라이스 부위(전이 유전자 전사물(transcript)과 같은 전사물에 존재하는 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위)의 존재는 세포에서 발현 후, 전사물의 RNA 이질성을 초래할 수 있다. 일부 구현예에서, 전이 유전자 전사물에 존재할 수 있고, 바람직하지 않고/거나 전사물의 코돈 최적화 후 및/또는 전사에서의 돌연변이 또는 실수 또는 오류에 의해 다양한 기본 서열로부터 전이 유전자 전사물에 생성될 수 있는 하나 이상의 잠재적 스플라이스 부위가 식별된다. 제공된 구현예의 일부 측면에서, 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 식별된다. 일부 구현예에서, 스플라이스 수용체 및/또는 공여 부위(들)는 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여 부위(들)이다.
일부 구현예에서, RNA 이질성을 나타낼 수 있는, 재조합 수용체와 같은 전이 유전자를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드와 같은 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 잠재적 스플라이스 부위(예를 들어, 정규, 비정규 및/또는 숨은 스플라이스 수용체 및/또는 공여 부위(들) 또는 분지 부위)가 식별 및/또는 변형된다. 상기 기준 폴리뉴클레오타이드와 비교하여 감소된 수의 상기 스플라이스 부위를 갖는 폴리펩타이드가 또한 제공된다.
일부 측면에서, 핵산 서열에서 하나 이상의 스플라이스 부위의 식별은 반복 과정이다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 식별 또는 예측하기 위해 출발 또는 기준 서열과 컴퓨터 계산으로 또는 알고리즘적으로 비교할 수 있는 데이터베이스, 유전자 합성 벤더 또는 다른 공급원에 전이 유전자, 예컨대 GPRC5D- 또는 BCMA-결합 수용체, 예를 들어 항-GPRC5D 또는 항-BCMA CAR을 암호화하는 출발 또는 기준 서열을 제출하는 등, 스플라이스 부위 및/또는 코돈 최적화 예측 도구를 사용하여 스플라이스 부위를 식별할 수 있다. 일부 구현예에서, 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위해 서열을 변형한 후, 하나 이상의 다른 또는 추가 스플라이스 부위 예측 도구(들)를 사용하여, 변경 또는 변형된 핵산 서열과 같은 서열의 하나 이상의 추가 산정을 수행하여 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위 제거를 추가로 평가한다.
일부 측면에서, RNA 이질성은 진핵 세포에 존재하는 스플라이소좀(spliceosome) 활성의 결과일 수 있다. 일부 측면에서, 스플라이싱은 전형적으로 스플라이소좀이 촉매 작용을 하는 일련의 반응들에서 수행된다. 스플라이스 부위에 대한 공통 서열(consensus sequence)은 공지되어 있지만, 일부 측면에서, 스플라이스 부위를 정의하는 특정 뉴클레오타이드 정보는 복잡할 수 있고 이용 가능한 방법에 기초하여 선뜻 명백하지 않을 수 있다. 숨은 스플라이스 부위는 표준 공통 서열을 기반으로 예측되지 않고 가변적으로 활성화되는 스플라이스 부위이다. 따라서, 숨은 스플라이스 부위에서 전구체-mRNA의 가변 스플라이싱은 진핵 세포에서의 발현 후 전사된 mRNA 생성물에서의 이질성으로 이어진다. 일부 경우에, 스플라이소좀 인트론 내에서, 공여 부위(일반적으로 인트론의 5’ 말단에 있음), 분지 부위(인트론의 3’ 말단 근처) 및 수용체 부위(인트론의 3’ 말단)가 스플라이싱 이벤트에 필요하다. 스플라이스 공여 부위는 인트론의 5’ 말단에서 GU 서열을 포함할 수 있으며, 대규모로 매우 덜 보존된 영역을 갖는다. 인트론의 3’ 말단에 있는 스플라이스 수용체 부위는 AG 서열로 종결될 수 있다.
일부 구현예에서, 잠재적 숨은 스플라이스 부위를 포함하는 스플라이스 부위는 서열을 공지된 스플라이스 부위 서열, 예컨대 서열 데이터베이스에 있는 서열과 비교함으로써 식별될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위를 상기 부위에서 스플라이싱 이벤트의 확률 및 잠재적 스플라이스 부위를 식별하는 스플라이스 부위 예측 도구, 예컨대 Human Splice Finder(Desmet et al., Nucl. Acids Res. 37(9):e67 (2009)), 신경망 스플라이스 부위 예측 도구, NNSplice(Reese et al., J. Comput. Biol., 4(4):311 (1997)), GeneSplicer(Pertea et al., Nucleic Acids Res. 2001 29(5): 1185-1190) 또는 NetUTR(Eden and Brunak, Nucleic Acids Res. 32(3):1131 (2004))에 의한 분석을 위해 뉴클레오타이드 서열을 제출함으로써 컴퓨터를 사용하여 식별할 수 있다. 추가 스플라이스 예측 도구에는 RegRNA, ESEfinder 및 MIT 스플라이스 예측기가 포함된다. GeneSplicer와 같은 스플라이스 부위 예측 도구는 인간, 노랑 초파리(Drosophila melanogaster), 열대열 말라리아 원충(Plasmodium falciparum), 애기장대(Arabidopsis thaliana) 및 쌀과 같은 상이한 종에 대한 데이터베이스에서 성공적으로 훈련 및/또는 테스트되었다. 일부 구현예에서, 상이한 예측 도구는 상이한 데이터베이스에서 상이한 정도 및/또는 상이한 종에 대해 적응될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 예측 도구는 특정 데이터베이스에서 및/또는 특정 종에 대한 이의 유용성에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 문헌[Saxonov et al., (2000) Nucleic Acids Res., 28, 185-190.] 참조.
일부 구현예에서, 하나 이상의 스플라이스 부위 예측 도구가 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위를 결정하는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 로컬로 실행할 수 있고/거나; 사용자 사이트에서 데이터 세트로 재훈련될 수 있고/거나; 특정 종(예컨대 인간)에 대한 데이터베이스를 사용할 수 있고/거나; 여러 플랫폼에 대해 컴파일할 수 있고/거나; 서열 선택에 대한 실시간 예측을 허용하고/거나; 특정 도구나 플러그인을 수정할 수 있도록 OSI 인증 오픈 소스 소프트웨어인 스플라이스 부위 예측 도구를 사용할 수 있다. 사용할 수 있는 예시적인 도구는 NNSplice, GeneSplicer 또는 둘 다를 포함한다.
일부 측면에서, 스플라이스 부위 예측 도구는 전이 유전자 서열을 함유하는 폴리뉴클레오타이드 서열과 같은 서열에서 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위의 목록을 식별하기 위해 사용될 수 있다. 일부 측면에서, 예측 도구는 또한 폴리뉴클레오타이드에서 하나 이상의 서열에 대한 하나 이상의 예측 점수를 생성할 수 있고, 이는 하나 이상의 서열이 스플라이스 공여 또는 수용체 부위 서열일 가능성을 나타낼 수 있다.
일부 구현예에서, 특정 스플라이스 부위에 대한 예측 점수를 임계값 점수 또는 기준 점수와 비교하여 제거 또는 삭제를 위한 후보인 특정 스플라이스 부위를 결정하거나 식별한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 예측된 스플라이스 부위는 예측 점수가 임계 점수 또는 기준 점수보다 크거나 작지 않을 때 잠재적 스플라이스 부위로 식별된다. 일부 측면에서, 특정 스플라이스 부위를 제거하거나 삭제하기 위한 고려 사항은 기준 점수 또는 임계 점수와 비교한 예측 점수; 및 특정 스플라이스 부위가 바람직하거나 의도적인지 여부(예를 들어 스플라이싱 이벤트가 전사 및/또는 번역의 조절에 보다 유리하거나 필요한 경우)를 포함한다. 일부 측면에서, 결과적인 스플라이스 변이체가 원하는 기능을 상실하거나 손상된 기능을 가질 가능성이 제거 또는 삭제를 위한 특정 공여 및/또는 수용체 부위를 결정할 때 또한 고려될 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 또는 1.0(예를 들어, 1.0이 최대 등급)의 스플라이스 이벤트 점수 또는 스플라이스 이벤트 확률을 나타내고, 상기 부위는 스플라이스 부위 제거 또는 삭제를 위한 후보가 될 수 있다. 일부 측면에서, 하나 이상의 잠재적 스플라이스 공여체 및/또는 스플라이스 부위에서 예를 들어 GeneSplicer에 의해 사용되는 점수는 해당 서열에 대해 true 마르코프 모델(true Markov model)에 의해 반환된 로그-오즈(log-odds) 점수 사이의 차이에 기초하며, 해당 점수는 false 마르코프 모델(false Markov model)에 의해 계산된다. 특정 구현예에서, 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로, 또는 개별적으로 평가된다. 일부 구현예에서, 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 스플라이스 공여체/수용체 쌍으로 평가된다.
일부 구현예에서, 바람직하지 않은 숨은 스플라이싱 이벤트에 관여할 수 있거나 바람직하지 않은 RNA 이질성을 초래하는 하나 이상의 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위(들), 예컨대 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위가 제거된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 스플라이스 부위를 제거하는 것은 제거 후보인 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위 근처에서 또는 이를 함유하는 부위에서 하나 이상의 뉴클레오타이드를 변형(예를 들어, 치환 또는 교체에 의함)하는 것을 포함한다. 일부 측면에서, 스플라이스 부위에 있거나, 근처에 있거나 이를 함유하는 코돈 내의 특정 뉴클레오타이드가 변형(예를 들어, 치환 또는 교체)된다. 일부 측면에서, 변형(예컨대 치환 또는 교체)은 상기 부위에서 특정 코돈에 의해 암호화된 아미노산을 보유 또는 보존하면서, 동시에 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위를 제거한다.
일부 구현예에서, 변형을 위한 스플라이스 부위에 있는 또는 근처에 있는 코돈은 잠재적 스플라이스 부위에 2개의 뉴클레오타이드 중 하나 또는 둘 다를 포함하는 하나 이상의 코돈(일부 경우에 “스플라이스 부위 코돈”으로 지칭)을 포함한다. 잠재적 스플라이싱이 코돈의 두 뉴클레오타이드 사이에서 발생할 것으로 예측되는 경우, 상기 코돈은 상기 스플라이스 부위에 대한 유일한 스플라이스 부위 코돈이다. 잠재적 스플라이싱이 2개의 인접한 코돈 사이, 예를 들어 제1 코돈의 마지막 뉴클레오타이드와 다음 코돈의 제1 뉴클레오타이드 사이에서 발생할 것으로 예측되는 경우, 상기 2개의 코돈이 스플라이스 부위 코돈이다. 예를 들어, 2개의 코돈의 경계에 있을 것으로 예측되는 스플라이스 부위에 대해, 2개의 인접한 코돈은 뉴클레오타이드 변형의 후보가 될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 하나의 스플라이스 부위 코돈을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 스플라이스 부위 코돈 둘 다를 포함한다. 일부 구현예에서, 잠재적 스플라이스 공여 부위는 하나 또는 두 스플라이스 부위 코돈을 변형하여 제거된다. 일부 구현예에서, 잠재적 스플라이스 수용체 공여 부위는 하나 또는 두 스플라이스 부위 코돈을 변형하여 제거된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 스플라이스 부위 코돈에 대한 동의 코돈(synonymous codon)이 없는 경우, 스플라이스 부위의 하나 또는 두 코돈은 변형되지 않는다. 일부 구현예에서, 특정 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능한 동의 코돈이 없는 경우, 근처 코돈에 있는 하나 이상의 뉴클레오타이드가 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 변형된 하나 이상의 코돈은 스플라이스 부위 코돈을 포함하고, 여기서 변형은 스플라이스 부위의 하나 또는 두 뉴클레오타이드를 상이한 뉴클레오타이드 또는 상이한 뉴클레오타이드들로 바꾸는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 스플라이스 공여 부위는 하나 또는 두 스플라이스 부위 코돈을 변형시킴으로써 제거되고, 여기서 변형은 스플라이스 부위의 하나 또는 두 뉴클레오타이드를 상이한 뉴클레오타이드로 변화시키지 않으나, 근처의 뉴클레오타이드(예를 들어, 스플라이스 부위에 인접한 코돈의 일부)가 변형된다. 일부 구현예에서, 변형될 수 있는 근처의 또는 인접한 뉴클레오타이드는 스플라이스 부위 코돈의 상류 또는 하류에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 코돈 이내에 있는 코돈과 같은 근처의 또는 인접한 코돈의 일부인 뉴클레오타이드의 변형을 포함한다.
일부 경우에, 폴리뉴클레오타이드는 예측된 스플라이스 부위의 확률을 감소시키기 위해, 암호화된 아미노산 서열을 보존하면서 수동으로 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위의 적어도 80%, 85%, 90% 또는 95%의 확률을 갖는 하나 이상의 예측된 스플라이스 부위는 스플라이싱 이벤트의 확률을 감소시키기 위해 수동으로 변형된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 변형(들)은 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7개 뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 교체 또는 치환에 의한 것이다. 일부 구현예에서, 변형(들)은 스플라이스 공여 부위의 접합부에 있거나 스플라이스 수용체 부위의 접합부에 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 적어도 하나는 스플라이스 수용체 및/또는 스플라이스 공여 부위의 스플라이스 부위 접합부의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재한다. 일부 구현예에서, 숨은 스플라이스 부위의 확률이 감소된 상태로 변형된 핵산 서열의 라이브러리가 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 스플라이스 공여체/수용체 쌍으로 평가된다. 특정 구현예에서, 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위는 독립적으로 또는 개별적으로 평가되며, 스플라이스 공여체/수용체 쌍의 부분이 평가되지는 않는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 예측된 스플라이스 부위는 제거되지 않는다. 일부 구현예에서, 전사물의 프로모터 영역 내의 공지된 또는 예측된 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위는 제거되지 않는다.
일부 구현예에서, 하나 또는 두 개의 스플라이스 부위 코돈 또는 하나 이상의 근처의 또는 인접한 코돈(예를 들어, 동의 코돈이 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능하지 않은 경우)을 변형시킴으로써 하나 이상의 잠재적 공여체 스플라이스 부위가 제거된다. 일부 구현예에서, 하나 또는 두 개의 스플라이스 부위 코돈 또는 하나 이상의 근처의 또는 인접한 코돈(예를 들어, 동의 코돈이 스플라이스 부위 코돈에 이용 가능하지 않은 경우)을 변형시킴으로써 하나 이상의 잠재적 수용체 스플라이스 부위가 제거된다. 일부 구현예에서, 변형되는 근처의 또는 인접한 코돈은 스플라이스 부위로부터 1, 2 또는 3개의 코돈 내에 있는 코돈과 같은 스플라이스 부위 코돈의 상류 또는 하류에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 코돈 이내에 있는 코돈을 포함한다. 일부 구현예에서, 스플라이싱에 대한 잠재적 분지 부위(branch site)는 제거되거나 삭제된다. 일부 측면에서, 분지 부위의 또는 그 근처의 코돈 내의 뉴클레오타이드는 숨은 스플라이싱을 제거하고/거나 RNA 이질성을 감소시키기 위해 변형, 예를 들어 치환 또는 교체될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변형은 (예컨대 스플라이스 공여 부위, 스플라이스 수용체 부위 또는 스플라이스 분지 부위에서) 스플라이싱에 관여할 수 있는 뉴클레오타이드 중 하나의 치환 또는 교체를 수반할 수 있어서, 코돈에 의해 암호화된 아미노산은 보존되고, 뉴클레오타이드 치환 또는 교체는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 폴리펩타이드 서열을 변화시키지 않는다. 일부 경우에, 코돈 내 세 번째 위치는 다른 두 위치보다 더 퇴화적이다. 따라서, 다양한 동의 코돈이 특정 아미노산을 암호화할 수 있다(예를 들어, 상기 섹션 I.B.2.a 참조). 일부 구현예에서, 변형은 폴리뉴클레오타이드가 도입되는 세포의 종(예를 들어, 인간)에 사용된 동의 코돈으로 코돈을 교체하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 종은 인간이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 코돈은 해당 코돈과 유사한 사용 빈도(예를 들어, 가장 가까운 사용 빈도)를 갖는 동의 코돈 또는 종에서 가장 빈번하게 사용되는 상응하는 동의 코돈으로 교체된다(예를 들어, 상기 섹션 I.B.2.a 참조).
일부 구현예에서, 초기 제안된 변형 후에, 스플라이스 부위의 제거를 위한 전이 유전자 후보를 산정한다. 일부 측면에서, 제안된 변형은 변형 및/또는 코돈 최적화 후 제안된 변형을 산정하고 임의의 추가의 잠재적 스플라이스 부위를 식별하기 위해 재평가될 수 있다. 일부 측면에서, 코돈 최적화 및/또는 스플라이스 부위 제거를 위해 서열을 변형한 후, 변경 또는 변형된 핵산 서열과 같은 서열의 하나 이상의 추가 산정을 수행하여 숨은 스플라이스 부위와 같은 스플라이스 부위 제거에 대해 동일한 또는 하나 이상의 다른 또는 추가 스플라이스 부위 예측 도구를 사용하여 추가로 평가한다. 일부 측면에서, 제안된 변형이 후속 단계에 대해 고려되며, 반복 최적화가 이용될 수 있다. 일부 측면에서, 예를 들어 초기에 결정된 바와 같은 전사물의 이질성과 비교하여 전사물의 이질성이 감소될 때까지 식별 및/또는 변형 단계 중 임의 단계를 반복할 수 있다. 일부 구현예에서, 동일한 코돈에서의 상이한 뉴클레오타이드 교체 또는 상이한 위치 또는 코돈에서의 변형과 같은 추가 또는 상이한 변형이 반복적인 평가 및 산정 후에 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 해당 상이한 동의 코돈은 해당 코돈과 유사한 사용 빈도(예를 들어, 다음으로 가장 가까운 사용 빈도)를 갖는 코돈 또는 특정 종에서 두 번째로 가장 빈번하게 사용되는 것과 같이 사용될 수 있다(예를 들어, 하기 섹션 II.B.2 참조).
일부 측면에서, 제안된 변형은 예를 들어 변형이 폴리뉴클레오타이드에서 바람직하지 않은 또는 추가 제한 부위를 생성하는지 여부를 산정하기 위해 추가로 평가될 수 있다. 일부 측면에서, 추가 제한 부위가 바람직하지 않을 수 있고, 추가의 또는 상이한 변형(예를 들어, 동일한 코돈에서 상이한 뉴클레오타이드 치환 또는 상이한 위치 또는 코돈에서의 변형)이 고려될 수 있다. 일부 측면에서, 지정된 제한 부위와 같은 특정 제한 부위가 회피된다. 일부 측면에서, 변형이 실질적으로 스플라이스 부위 예측 점수를 감소시키지 않으면, 추가 또는 대안적인 변형이 제안될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위 예측 점수는 상기 방법의 한 번 이상의 반복 후에, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75% 이상 감소하거나 낮아질 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 단계, 도구, 기능, 공정 또는 스크립트를 실행하기 위해 컴퓨터 시스템이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 스플라이스 부위의 제거 또는 삭제를 위한 스플라이스 부위 예측, 평가 및 변형은 컴퓨터 구현 방법 및/또는 컴퓨터 구현 단계인 단계를 포함하는 방법에 의해 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 서열을 공지된 데이터베이스와 비교하기, 스플라이스 부위 예측 점수를 계산하기, 잠재적 뉴클레오타이드 변형을 결정하기, 코돈 최적화 및/또는 반복 단계 중 어느 하나를 컴퓨터에 의해 또는 컴퓨터로 구현된 단계, 도구, 기능, 공정 또는 스크립트를 사용하여 수행할 수 있다. 특정 구현예에서, 프로세서 및 메모리를 포함하는 컴퓨터 시스템이 제공되며, 여기서 메모리는 프로세서로 하여금 본 명세서에 제공된 방법의 단계 중 임의의 하나 이상을 수행하게 하는 작동 가능한 명령을 함유한다. 일부 구현예에서, 단계, 기능, 공정 또는 스크립트는 컴퓨터로, 예를 들어 하나 이상의 컴퓨터 프로그램을 사용하여 및/또는 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 수행된다.
가능한 스플라이스 부위를 식별 및/또는 제거하기 위한 예시적인 단계, 기능, 공정 또는 스크립트는 서열 선택, FASTA 포맷 서열 기록, 코돈 테이블 로딩(예를 들어, www.kazusa.or.jp/codon로부터), GeneSplicer 실행, 예측을 로딩, 코돈을 분석, 예측에서의 중복 결정, 다음으로 높은 사용 동의 코돈 식별, 제한 부위 검토, 주석 작성 또는 다른 코돈 산정 중 하나 이상의 단계를 포함한다. 특정 단계는 정방향 및 역방향 가닥(strand)을 모두 산정할 수 있다. 일부 측면에서, 반복적인 최적화를 가능하게 하기 위해, 이전의 주석 스플라이스 부위 변형이 또한 고려될 수 있다. 일부 구현예에서, 단계, 기능, 공정 또는 스크립트 중 임의의 하나 이상이 반복될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오타이드 또는 본원에 제공된 작제물은, 스플라이스 이벤트 및/또는 발현 감소 및/또는 RNA 이질성 증가에 기여할 수 있는 하나 이상의 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위를 제거하기 위한 변형을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 폴리뉴클레오타이드는 스플라이스 이벤트를 제거 또는 감소시키기 위해 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드의 스페이서 영역에서 변형된다. 제공된 CAR에서 변형되거나 포함되지 않은 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 176, 177, 178, 179, 180 또는 181에 제시된다. 일부 구현예에서, 잠재적 스플라이스 및/또는 공여 부위를 감소시키거나 제거하기 위한 상기 부위의 변형된 뉴클레오타이드는 서열 번호: 182, 183, 184, 185, 186, 187 또는 188에 제시된다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 제공된 폴리뉴클레오타이드 또는 다른 CAR은 서열 번호: 182, 183, 184, 185, 186, 187 또는 188에 제시된 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 항-GPRC5D CAR은 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 283에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 284에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
c. 다른 특징
예를 들어, 키메라 항원 수용체를 생산하기 위해, 폴리뉴클레오타이드를 함유한 벡터 및 그 벡터를 함유한 숙주 세포가 또한 제공된다. 키메라 항원 수용체를 생산하는 방법이 또한 제공된다. 핵산은 항체의 VL 영역 및/또는 VH 영역(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 포함하는 키메라 항원 수용체를 암호화할 수 있다. 핵산은 항체의 VL 영역 및/또는 VH 영역(예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)을 각각 포함하는 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 암호화할 수 있다. 추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 하나 이상의 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 추가 구현예에서, 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 상기 일 구현예에서, 숙주 세포는 항체의 VH 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함한다(예를 들어, 이 벡터로 형질 전환되었다). 또 다른 상기 구현예에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL 영역 및 항체의 VH 영역을 포함하는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 제1 항체를 포함하는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 제2 항체를 포함하는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다(예를 들어, 이들로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 숙주 세포는 하나 이상의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터를 포함한다(예컨대, 이 벡터로 형질 전환되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 숙주 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 숙주 세포는 상이한 키메라 항원 수용체 또는 동일한 키메라 항원 수용체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 각각의 숙주 세포는 하나의 키메라 항원 수용체보다 많이 발현할 수 있다.
항-GPRC5D 키메라 항원 수용체를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 키메라 수용체 항체를 암호화하는 핵산 서열이 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같이 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
항-BCMA 키메라 항원 수용체를 제조하는 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 키메라 수용체 항체를 암호화하는 핵산 서열이 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-BCMA 키메라 항원 수용체의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같이 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
항-GPRC5D 키메라 항원 수용체 및 항-BCMA 키메라 항원 수용체 모두를 포함하는 키메라 항원 작제물 제조 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 상기 키메라 수용체 항체 둘 모두를 암호화하는 핵산 서열이 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 일부 구현예에서, 이중 CAR의 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같이 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
GPRC5D 및 BCMA 모두에 결합하는 키메라 항원 수용체 제조 방법이 또한 제공된다. 키메라 수용체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어 본 명세서에 기재된 바와 같이 두 키메라 수용체 항체 모두를 암호화하는 핵산 서열이 숙주 세포에서 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 단리되고 하나 이상의 벡터에 삽입될 수 있다. 상기 핵산 서열은 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 서열 분석될 수 있다. 일부 구현예에서, BCMA 및 GPRC5D에 결합하는 키메라 항원 수용체 제조 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 제공된 바와 같이 수용체의 발현에 적합한 조건 하에서 항체를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 숙주 세포를 배양하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-BCMA 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포 및 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 세포 조성물을 제조하는 방법이 제공된다.
원핵생물 이외에, 사상성 진균 또는 효모와 같은 진핵생물 미생물은, 글리코실화 경로가 인간 세포에서의 경로와 유사하거나 이를 모방하도록 변형되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체의 생성을 초래하는, 진균 및 효모 균주를 포함하는 항체-암호화 벡터를 위한 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 문헌[Gerngross, Nat. Biotech. 22:1409-1414 (2004), 및 Li et al., Nat. Biotech. 24:210-215 (2006)]을 참조한다.
폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S, DG44. Lec13 CHO 세포 및 FUT8 CHO 세포를 포함하는 CHO 세포; PER.C6®세포; 및 NSO 세포를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)는 효모에서 발현될 수 있다(예를 들어, 문헌[미국 공개 번호 US 2006/0270045 A1] 참조). 일부 구현예에서, 특정 진핵 생물 숙주 세포는 중쇄 및/또는 경쇄(예를 들어, VH 영역 및/또는 VL 영역)에 대해 원하는 번역 후 변형을 만들 수 있는 능력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CHO 세포는 293 세포에서 생성된 동일한 폴리펩타이드보다 시알릴화 수준이 높은 폴리펩타이드를 생성한다. 특정 예에서, 인간 면역 세포와 같은 면역 세포는 키메라 항원 수용체를 암호화하는 제공된 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용된다. 일부 예에서, 면역 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ 면역 세포와 같은 T 세포이다.
II. BCMA-결합 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
일부 측면에서, BCMA 분자에 결합하는 재조합 수용체 또는 키메라 항원 수용체와 같은 BCMA 결합제(binding agent, 결합 제제), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)와 같은 BCMA 결합 세포 표면 단백질을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 상기 수용체를 발현하는 세포가 제공된다. BCMA-결합 세포 표면 단백질은 일반적으로 BCMA에, 예컨대 인간 BCMA 단백질과 같은 BCMA 단백질에 특이적으로 결합하는 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편) 및/또는 기타 결합 펩타이드를 함유한다. 일부 측면에서, 상기 제제(agent)는 BCMA의 세포외 부분에 결합한다.
제공된 폴리뉴클레오타이드 중에는 BCMA에 특이적으로 결합하는 항원 수용체와 같은 재조합 수용체를 암호화하는 것이 있다. 일부 측면에서, BCMA-결합 폴리펩타이드를 함유하는 것과 같은 암호화된 수용체 및 조성물 및 제조품 및 상기의 용도가 또한 제공된다.
BCMA-결합 폴리펩타이드 중에는 단일 사슬 항체(예를 들어, 항원 결합 항체 단편)와 같은 항체 또는 이의 부분이 존재한다. 일부 예에서, 재조합 수용체는 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유하는 것과 같은 키메라 항원 수용체이다. 제공된 폴리뉴클레오타이드는 암호화된 재조합 BCMA 결합 수용체의 발현을 위해 세포에 도입될 수 있는 것과 같은 디옥시리보핵산(DNA) 또는 RNA 작제물과 같은 작제물에 편입될 수 있다.
BCMA 결합 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 섹션 I(예를 들어, 섹션 I.C.)을 포함하여 유사한 선행 섹션들에 제시된 바와 같은 특징들을 포함한다.
제공된 BCMA 결합 수용체는 일반적으로 세포외 결합 분자 및 세포내 신호 전달 도메인을 함유한다. 제공된 수용체 중에는 항-BCMA를 함유한 재조합 세포 표면 수용체와 같은 항체를 함유한 폴리펩타이드가 있다. 상기 수용체는 상기 항체를 함유한 키메라 항원 수용체를 포함한다.
제공된 재조합 수용체 중에는 BCMA 결합 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체가 있다. 재조합 수용체는 항-BCMA 항체(예를 들어, BCMA 항원 결합 단편)를 함유하는 항원 수용체와 같이 BCMA에 특이적으로 결합하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 항원 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 기능성 비-TCR 항원 수용체가 있다. 재조합 수용체를 발현하는 세포, 및 BCMA 발현과 관련된 질병 및 장애(예를 들어, 다발성 골수종)의 치료와 같은 입양 세포 요법에서의 이의 용도가 또한 제공된다.
키메라 수용체 중에는 키메라 항원 수용체(chimeric antigen receptor, CAR)가 있다. CAR과 같은 키메라 수용체는 일반적으로 세포외 항원 결합 도메인을 포함하며, 이는 항-BCMA 항체이거나 이를 포함한다. 따라서, 키메라 수용체(예를 들어, CAR)는 전형적으로 하나 이상의 BCMA 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원 결합 단편, 도메인 또는 부분 또는 하나 이상의 항체 가변 영역 및/또는 항체 분자, 예컨대 본원에 기술된 것을 세포외 부분에 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 CAR은 항체의 중쇄 가변(VH) 영역 및/또는 경쇄 가변(VL) 영역(예를 들어, scFv 항체 단편)과 같은 항체 분자의 GPRC5D 결합 부분 또는 부분들을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 GPRC5D 결합 CAR은 제공된 CAR의 GPRC5D 결합 특성을 부여하는 항-GPRC5D 항체와 같은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 도메인은 기술된 임의의 항-GPRC5D 항체이거나 기술된 임의의 항-GPRC5D 항체로부터 유래될 수 있다(예를 들어, 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329, WO 2018/017786]을 참조한다). 상기 항-GPRC5D 항체 또는 항원 결합 단편 중 어느 하나가 제공된 CAR에서 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D CAR은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329 또는 WO 2018/017786]에 기술된 항체로부터 유래된 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 scFv인 항원 결합 도메인을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체(예를 들어, 항-GPRC5D 항체) 또는 항원 결합 단편은 기술된 바와 같은 중쇄 및/또는 경쇄 가변(VH 또는 VL) 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 함유하는 VH 영역 서열을 함유하고 기술된 바와 같은 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 함유하는 VL 영역 서열을 함유한다. 또한 항체 중에는 상기 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99% 동일한 서열을 갖는 것이 존재한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 항체 단편은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329, 및 WO 2018/017786]에 기술된 항체 또는 항체 결합 단편 중 어느 하나의 VH 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 중쇄 가변(VH) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VH 영역을 갖거나 또는 상기 VH 서열에 존재하는 CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 (a) 서열 번호: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 152, 162, 165, 167 및 169 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 168 및 170 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 122, 129, 137, 144, 151, 156, 164 및 171 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호:75, 76 및 77; 각각 서열 번호: 78, 79 및 77; 각각 서열 번호: 80, 81 및 77; 각각 서열 번호: 82, 83 및 84; 각각 서열 번호: 90, 91 및 92; 각각 서열 번호: 93, 94 및 92; 각각 서열 번호: 95, 96 및 92; 각각 서열 번호: 97, 98 및 99; 각각 서열 번호: 105, 106 및 107; 각각 서열 번호: 108, 109 및 107; 각각 서열 번호: 110, 111 및 107; 각각 서열 번호: 112, 113 및 114; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122; 각각 서열 번호: 123, 124 및 122; 각각 서열 번호: 125, 126 및 122; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129; 각각 서열 번호: 135, 136 및 137; 각각 서열 번호: 138, 139 및 137; 각각 서열 번호: 140, 141 및 137; 각각 서열 번호: 142, 143 및 144; 각각 서열 번호: 135, 150 및 151; 각각 서열 번호: 152, 153 및 151; 각각 서열 번호: 140, 154 및 151; 각각 서열 번호: 142, 155 및 156; 각각 서열 번호: 162, 163 및 164; 각각 서열 번호: 165, 166 및 164; 각각 서열 번호: 167, 168 및 164; 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호:75, 76 및 77; 각각 서열 번호: 78, 79 및 77; 각각 서열 번호: 80, 81 및 77; 각각 서열 번호: 82, 83 및 84; 각각 서열 번호: 90, 91 및 92; 각각 서열 번호: 93, 94 및 92; 각각 서열 번호: 95, 96 및 92; 각각 서열 번호: 97, 98 및 99; 각각 서열 번호: 105, 106 및 107; 각각 서열 번호: 108, 109 및 107; 각각 서열 번호: 110, 111 및 107; 각각 서열 번호: 112, 113 및 114; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122; 각각 서열 번호: 123, 124 및 122; 각각 서열 번호: 125, 126 및 122; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129; 각각 서열 번호: 135, 136 및 137; 각각 서열 번호: 138, 139 및 137; 각각 서열 번호: 140, 141 및 137; 각각 서열 번호: 142, 143 및 144; 각각 서열 번호: 135, 150 및 151; 각각 서열 번호: 152, 153 및 151; 각각 서열 번호: 140, 154 및 151; 각각 서열 번호: 142, 155 및 156; 각각 서열 번호: 162, 163 및 164; 각각 서열 번호: 165, 166 및 164; 각각 서열 번호: 167, 168 및 164; 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함한다.
본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 일부 구현예에서, VH 영역은 기술된 바와 같은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3 중 어느 하나를 포함하고, 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 대해 각각 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역을 포함하는 제공된 CAR(예를 들어, 항-GPRC5D CAR)에서 항체 또는 항체 단편은 경쇄 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 더 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 VH 영역 및 VL 영역, 또는 VH 영역 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유한다. 상기 구현예에서, VH 영역 서열은 상기 기술된 임의의 VH 서열일 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 Fab 또는 scFv와 같은 항원 결합 단편이다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 CAR은 상기 임의의 VH 영역 및 가변 경쇄 영역 또는 이의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 같은 항체를 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 VH 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역, 또는 VH 영역 및 VL 영역의 충분한 항원 결합 부분을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 상기 구현예에서, VH 영역 서열은 상기 기술된 임의의 VH 서열일 수 있다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 Fab 또는 scFv와 같은 항원 결합 단편이다. 상기 일부 구현예에서, 항체는 또한 불변 영역을 함유하는 전장 항체이다.
일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 문헌[WO 2016/090312, WO 2016/090329 및 WO 2018/017786] 중 어느 하나에 기술된 VL 영역을 갖는다.
일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열, 또는 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68, 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 경쇄 가변(VL) 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 VL 영역을 갖거나 또는 상기 VL 서열에 존재하는 CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3을 함유하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 Kabat 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 Chothia 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 영역은 AbM 넘버링에 따른 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 (a) 서열 번호: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 및 174 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 및 161 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 및 175 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 함유한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87; 각각 서열 번호: 88, 89 및 87; 각각 서열 번호: 100, 101 및 102; 각각 서열 번호: 103, 104 및 102; 각각 서열 번호: 115, 116 및 117; 각각 서열 번호: 118, 119 및 117; 각각 서열 번호: 130, 131 및 132; 각각 서열 번호: 133, 134 및 132; 각각 서열 번호: 145, 146 및 147; 각각 서열 번호: 148, 149 및 147; 각각 서열 번호: 157, 158 및 159; 각각 서열 번호: 160, 161 및 159; 각각 서열 번호: 172, 86 및 173; 각각 서열 번호: 174, 89 및 175; 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87; 각각 서열 번호: 88, 89 및 87; 각각 서열 번호: 100, 101 및 102; 각각 서열 번호: 103, 104 및 102; 각각 서열 번호: 115, 116 및 117; 각각 서열 번호: 118, 119 및 117; 각각 서열 번호: 130, 131 및 132; 각각 서열 번호: 133, 134 및 132; 각각 서열 번호: 145, 146 및 147; 각각 서열 번호: 148, 149 및 147; 각각 서열 번호: 157, 158 및 159; 각각 서열 번호: 160, 161 및 159; 각각 서열 번호: 172, 86 및 173; 각각 서열 번호: 174, 89 및 175; 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열 번호: 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 각각 함유한다.
본원에 제공된 CAR 중에는, 제공된 CAR에서 항-GPRC5D 항체와 같은 항체 또는 항체 단편이 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 포함하는, CAR이 있다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33 중 어느 하나로부터 선택된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3을 포함하고; 그리고 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69 중 어느 하나로부터 선택된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 영역은 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33의 아미노산 서열을 포함하고 항체 또는 항원 결합 단편의 VL 영역은 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32 또는 34의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22, 각각 서열 번호: 23 및 24, 각각 서열 번호: 25 및 26, 각각 서열 번호: 27 및 28, 각각 서열 번호: 29 및 30, 각각 서열 번호: 31 및 32, 또는 각각 서열 번호: 33 및 34의 아미노산 서열, 또는 상기 VH 및 VL 중 어느 하나에 대해 적어도 90%의 서열 동일성, 예컨대 이에 대해 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 서열 동일성을 갖는 임의의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다.
예를 들어, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 21 및 22; 서열 번호: 23 및 24; 서열 번호: 25 및 26; 서열 번호: 27 및 28; 서열 번호: 29 및 30; 서열 번호: 31 및 32; 서열 번호: 33 및 34 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함한다. 다른 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 및 VL 영역은 서열 번호: 21 및 63; 서열 번호: 23 및 64; 서열 번호: 25 및 65; 서열 번호: 27 및 66; 서열 번호: 29 및 67; 서열 번호: 31 및 68; 서열 번호: 33 및 69 중에서 선택된 아미노산 서열을 각각 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 CAR에서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv) 또는 디아바디 또는 단일 도메인 항체(sdAb)와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 VH 영역만을 포함하는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역을 포함하는 scFv이다. 일부 구현예에서, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어, scFv)은 중쇄 가변(VH) 영역 및 경쇄 가변(VL) 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 하나 이상의 링커를 포함한다. 링커는 전형적으로 펩타이드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩타이드 링커이다. 링커 중에는 글리신과 세린이 풍부하고/거나 일부 경우에는 트레오닌이 풍부한 것이 있다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 용해도를 향상시킬 수 있는 리신 및/또는 글루타메이트와 같은 하전된 잔기를 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 또한 하나 이상의 프롤린을 포함한다.
따라서, 제공된 CAR은 단일 사슬 항체 단편, 예컨대 scFv 및 디아바디, 특히 인간 단일 사슬 항체 단편을 포함하고, 전형적으로 VH 및 VL 영역과 같은 두 개의 항체 도메인 또는 영역을 연결하는 링커(들)를 포함하는 항-GPRC5D 항체를 함유한다. 링커는 전형적으로 펩타이드 링커, 예를 들어 가요성 및/또는 수용성 펩타이드 링커, 예컨대 글리신과 세린이 풍부한 것이다.
일부 측면에서, 글리신 및 세린(및/또는 트레오닌)이 풍부한 링커는 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%의 상기 아미노산(들)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이들은 적어도 (약) 50%, 55%, 60%, 70% 또는 75%의 글리신, 세린 및/또는 트레오닌을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 실질적으로 전부 글리신, 세린 및/또는 트레오닌으로 구성된다. 링커는 일반적으로 약 5 내지 약 50개 아미노산 길이, 전형적으로 (약)10 내지 30, 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개 아미노산 길이이고, 일부 예에서 10 내지 25개 아미노산 길이이다. 예시적인 링커는 서열 GGGGS(4GS; 서열 번호: 50) 또는 GGGS(3GS; 서열 번호: 51)의 다양한 반복 횟수, 예컨대 상기 서열의 2, 3, 4 및 5회 사이의 반복을 갖는 링커를 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 52(GGGGSGGGGSGGGGS)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 또한 서열 번호: 53(GSTSGSGKPGSGEGSTKG)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 또한 서열 번호: 54(SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다. 예시적인 링커는 서열 번호: 47(GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA)에 제시된 서열을 갖거나 이로 구성된 것들을 포함한다.
따라서, 일부 구현예에서, 제공된 구현예는 서열 번호: 47, 52 또는 54에 제시된 링커와 같은 GGGS(서열 번호: 51) 또는 GGGGS(서열 번호: 50)의 반복을 갖는 링커를 포함하여, 글리신/세린이 풍부한 링커와 같은 상기 언급된 링커 중 하나 이상을 포함하는, 단일 사슬 항체 단편(예를 들어, scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 아미노 말단일 수 있다. 일부 구현예에서, VH 영역은 VL 영역에 대한 카르복시 말단일 수 있다. 특정 구현예에서, 단편(예를 들어, scFv)은 VH 영역 또는 이의 부분, 이어서 링커, 이어서 VL 영역 또는 이의 부분을 포함할 수 있다. 다른 구현예에서, 단편(예를 들어, scFv)은 VL 영역 또는 이의 부분, 이어서 링커, 이어서 VH 영역 또는 이의 부분을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 본원에 제공되는 scFv는 서열 번호: 1-14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하거나, 서열 번호: 1-14 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 21에 제시된 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 22에 제시된 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 21에 제시된 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 63에 제시된 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 75, 76 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 78, 79 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 257에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 257에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 258에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 258에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 23에 제시된 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 24에 제시된 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 23에 제시된 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 64에 제시된 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 90, 91 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 93, 94 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 3에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 259에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 259에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 4에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 4에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 260에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 260에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 25에 제시된 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 26에 제시된 서열 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 25에 제시된 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 65에 제시된 서열 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 105, 106 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 108, 109 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 110, 111 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 112, 113 및 114의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 118, 119 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 26에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 65에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 5에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 5에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 261에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 261에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 6에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 6에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 262에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 262에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 27에 제시된 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 28에 제시된 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 27에 제시된 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 66에 제시된 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 263에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 263에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 264에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 264에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 29에 제시된 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 30에 제시된 서열 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 29에 제시된 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 67에 제시된 서열 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 135, 136 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 138, 139 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 140, 141 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 142, 143 및 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 148, 149 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 30에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 67에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 9에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 265에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 265에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 10에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 266에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 266에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 31에 제시된 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 32에 제시된 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 31에 제시된 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 68에 제시된 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 135, 150 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 152, 153 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 11에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 11에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 267에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 267에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 12에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 12에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 268에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 268에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공되는 항-GPRC5D CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 33에 제시된 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 34에 제시된 서열 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR은, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 33에 제시된 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 69에 제시된 서열 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 162, 163 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 165, 166 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 167, 168 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 174, 89 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 함유하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 34에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 69에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 13에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 269에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 269에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 14에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 270에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 270에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다.
제공된 CAR에서 항체(예를 들어, 항원 결합 단편) 중에는 인간 항체가 있다. 제공된 인간 항-GPRC5D 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)의 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 D 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분, 및/또는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 J 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VH 영역을 함유하고/거나; 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 V 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분 및/또는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 카파 또는 람다 사슬 J 분절에 의해 암호화된 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 부분을 포함하는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 CDR-H1, CDR-H2 및/또는 CDR-H3에 해당한다. 일부 구현예에서, VH 영역의 일부는 프레임워크 영역 1(FR1), FR2, FR3 및/또는 FR4에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 CDR-L1, CDR-L2 및/또는 CDR-L3에 해당한다. 일부 구현예에서, VL 영역의 일부는 FR1, FR2, FR3 및/또는 FR4에 해당한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H1 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H1을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H2 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H2을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절, D 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H3 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-H3을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 중쇄 V 분절, D 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-H3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-H3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L1 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L1을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L1 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L1을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L2 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L2을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L2 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L2를 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L3 영역의 아미노산 서열에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 CDR-L3을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 생식세포계열 뉴클레오타이드 인간 경쇄 V 분절 및 J 분절에 의해 암호화된 서열 내의 해당 CDR-L3 영역과 비교하여 1, 2 또는 3개 이내의 아미노산이 차이가 있거나 100% 동일한 서열을 갖는 CDR-L3을 함유한다.
일부 구현예에서, 인간 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)는 인간 생식세포계열 유전자 분절 서열을 함유하는 프레임워크 영역을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역(예를 들어, FR1, FR2, FR3 및 FR4)이 V 분절 및/또는 J 분절과 같은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 영역을 함유한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 인간 항체는 프레임워크 영역(예를 들어,.FR1, FR2, FR3 및 FR4)이 V 분절 및/또는 J 분절과 같은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역에 대해 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VL 영역을 함유한다. 예를 들어, 상기 일부 구현예에서, VH 영역 및/또는 VL 영역 내에 함유된 프레임워크 영역 서열은 인간 생식세포계열 항체 분절에 의해 암호화된 프레임워크 영역과 비교하여 10개 이내의 아미노산, 예컨대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 또는 1개 이내의 아미노산이 상이하다.
일부 구현예에서, 다른 재조합 수용체는 항-BCMA CAR과 같은 항-BCMA 수용체이다. 본원의 제공된 세포, 방법 및 용도에서 임의의 항-BCMA CAR의 사용 또는 편입이 고려된다. 예를 들어, 다중 시스트론(예를 들어, 이중 시스트론) 발현 벡터에서 본원에 제공된 항-GPRC5D 수용체 및 다른 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드도 마찬가지로 고려된다. 예시적인 항-BCMA CAR 분자는 문서[WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647, WO 2019/090003]에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, CAR은 BCMA, 예를 들어 인간 BCMA에 특이적인 항-BCMA CAR이다. 마우스 항-인간 BCMA 항체 및 인간 항-인간 항체를 포함하여 항-BCMA 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체 및 상기 키메라 수용체를 발현하는 세포가 앞서 기재되었다. 문헌[Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 및 WO2017173256]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 문헌[WO 2016/090320 또는 WO 2016/090327]에 기재된 항체로부터 유래된 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 scFv와 같은 항원 결합 도메인을 함유한다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 190에 제시된 서열 또는 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 189에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 190에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 237에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 242에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 242에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 247에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 191에 제시된 서열 또는 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 192에 제시된 서열 또는 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 191에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 192에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 238에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 238에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 243에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 243에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 248에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 193에 제시된 서열 또는 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 194에 제시된 서열 또는 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 193에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 194에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 239에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 239에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 244에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 244에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 249에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 195에 제시된 서열 또는 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 196에 제시된 서열 또는 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 195에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 196에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 240에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 240에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 245에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 245에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 250에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 197에 제시된 서열 또는 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 198에 제시된 서열 또는 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 197에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 198에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 246에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 246에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 251 또는 252에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 또는 252에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-BCMA 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 포함하는 CAR과 같은 재조합 수용체는 또한 상기 섹션 I.1.b.에 기술된 임의의 것과 같은 스페이서를 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항-BCMA 항체(예를 들어, 항원 결합 단편)를 포함하는 CAR과 같은 재조합 수용체는 또한 상기 섹션 I.1.c.에 기술된 임의의 것과 같은 막관통 도메인을 포함한다.
II. 조작된 세포
본원에 기재된 바와 같이 항-GPRC5D 수용체를 포함하는 세포외 도메인을 함유하는 것과 같은 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체)를 함유하는 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 또한 예컨대 GPRC5D 결합 수용체를 발현하는 세포가 특정 유형의 세포 예컨대 T 세포, CD8+ 또는 CD4+ 세포 또는 조성물에서 총세포의 적어도 50, 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 그 이상의 백분율을 구성하는 상기 세포의 집단, 상기 세포를 함유하고/거나 상기 세포가 농축된 조성물이 제공된다.
재조합 항-GPRC5D 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR) 및 적어도 제2 재조합 수용체를 함유하도록 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 항-BCMA 수용체이다. 일부 구현예에서, 제2 수용체는 CAR이다. 일부 구현예에서, 항-GPRC5D 수용체는 CAR이고 제2 수용체는 CAR이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 본원에 제공된 바와 같은 재조합 항-GPRC5D 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR), 및 항-BCMA 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 함유한다. 항-BCMA 수용체는 본원 또는 다른 곳에 기술된 항-BCMA CAR과 같은 임의의 공지된 항-BCMA 수용체일 수 있다(예를 들어, 문헌[WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647] 참조). 예시적인 항-BCMA CAR은 섹션 II에 기술되어 있다. 임의의 기술된 항-BCMA CAR은 GPRC5D 및 BCMA 모두를 표적화하기 위해 항-GPRC5D CAR과 함께 임의의 제공된 다중 표적화 접근법에서 제2 CAR로서 사용할 수 있을 것으로 고려된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 조작된 세포는 하나 이상의 다른 재조합 수용체(들)를 발현하는 하나 이상의 조작된 세포의 집단(들)과 조합할 수 있다. 상기 조작된 세포의 집단은 동일한 또는 별개의 조성물로 제형화될 수 있다. 조성물 중에는 예컨대 입양 세포 요법을 위한 투여용 약학 조성물 및 제형이 있다. 대상체(예를 들어, 환자)에게 본원에 제공된 세포 또는 조성물 중 임의의 것을 투여하는 치료 방법이 또한 제공된다.
따라서, 항체를 함유하는 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR을 함유하는 세포가 또한 제공된다. 세포는 일반적으로 포유류 세포와 같은 진핵 세포이며, 통상적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프, 또는 림프성 기관으로부터 유래되며, 선천성 또는 적응성 면역 세포와 같은 면역 계통의 세포, 예를 들어 림프구, 통상적으로 T 세포 및/또는 NK 세포를 포함한 골수성 또는 림프성 세포이다. 다른 예시적인 세포에는 유도된 다능성 줄기세포(induced pluripotent stem cell: iPSC)를 포함한, 다분화능 및 다능성 줄기세포와 같은 줄기세포가 포함된다. 세포는 통상적으로 대상체로부터 직접 단리되고/거나 대상체로부터 단리되고 동결된 세포와 같은 1차 세포이다. 일부 구현예에서, 세포에는 T 세포 또는 다른 세포 유형의 하나 이상의 서브세트, 예컨대 전체 T 세포의 집단, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이의 하위 집단, 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 가능성, 팽창, 재순환, 국소화 및/또는 지속성 용량, 항원 특이성, 항원 수용체 유형, 특정 기관 또는 구획에의 존재, 표지자 또는 사이토카인 분비 프로필 및/또는 분화 정도에 의해 정의되는 것이 포함된다. 치료될 대상체와 관련하여, 세포는 동종이계 및/또는 자가 조직일 수 있다. 상기 방법 중에는 기성 방법이 포함된다. 일부 측면에서, 예컨대 기성 기술에 대해, 세포는 유도된 다능성 줄기세포(iPSC)와 같은 줄기세포 등과 같은 다능성 및/또는 다분화능이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 바와 같이 대상체로부터 세포를 단리하고, 세포를 준비, 가공, 배양 및/또는 조작하고, 냉동 보존 전 또는 후에 동일한 환자에게 이 세포를 재도입하는 것을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 하위 유형 및 하위 집단 중에는 나이브 T(naive T, TN) 세포, 효과기 T 세포(effector T cell, TEFF), 기억 T 세포 및 이들의 하위-유형, 예컨대 줄기세포 기억 T(stem cell memory T, TSCM), 중앙 기억 T(central memory T, TCM), 효과기 기억 T(effector memory T, TEM) 또는 말단 분화된 효과기 기억 T 세포, 종양 침윤성 림프구(tumor-infiltrating lymphocytes, TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 연관 불변 T(mucosa-associated invariant T, MAIT) 세포, 천연 발생 및 적응성 조절 T(regulatory T, Treg) 세포, 헬퍼 T 세포, 예컨대 TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 있다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살생(natural killer, NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 단핵구 또는 과립구, 예를 들어 골수성 세포, 대식 세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입된 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드를 포함하고, 이에 의해 상기 폴리뉴클레오타이드의 재조합 또는 유전적으로 조작된 산물을 발현한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 이종 기원인데, 즉, 다른 유기체 또는 세포로부터 수득된 것과 같이 세포 또는 세포로부터 수득된 샘플에는 정상적으로 존재하지 않으며, 예를 들어, 이는 조작되는 세포 및/또는 상기 세포가 유래된 유기체에서 보통 발견되지 않는다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오타이드는 다수의 상이한 세포 유형으로부터 다양한 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 키메라 조합을 포함하는 것을 포함한 자연에서 발견되지 않는 폴리뉴클레오타이드와 같이 천연 발생이 아니다. 일부 구현예에서, 세포(예를 들어, 조작된 세포)는 본원에 기술된 재조합 수용체를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터와 같이 본원에 기술된 바와 같은 벡터(예를 들어, 바이러스 벡터, 발현 벡터 등)를 포함한다.
A. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하기 위한, 그리고 상기 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 생산하기 위한 방법, 폴리뉴클레오타이드, 조성물, 및 키트가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 재조합 수용체(예를 들어, CAR)는 세포 또는 다수의 세포로 유전자 조작될 수 있다. 유전자 조작은 일반적으로, 예컨대 렌티바이러스 형질도입, 레트로바이러스 형질도입, 형질주입 또는 형질전환에 의해 재조합 또는 조작된 성분을 암호화하는 핵산을 세포 내로 도입하는 것을 수반한다.
일부 구현예에서, 유전자 전달은 먼저 세포를 자극하고, 예컨대 세포를 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 조합하고, 예를 들어 사이토카인 또는 활성화 표지자의 발현에 의해 측정된 바와 같이, 뒤이어 활성화된 세포의 형질도입 및 임상 적용에 충분한 수로 배양에서 팽창시켜 달성된다.
일부 맥락에서, 자극 인자(예를 들어, 림포카인 또는 사이토카인)의 과발현은 대상체에 유독할 수 있다. 따라서, 일부 맥락에서, 조작된 세포는 예컨대 입양 면역 요법에서 투여 시에 생체 내에서 세포를 음성 선택에 취약하게 하는 유전자 분절을 포함한다. 예를 들어, 일부 측면에서, 세포는 세포가 투여되는 환자의 생체 내 조건 변화의 결과로서 제거될 수 있도록 조작된다. 음성 선택 가능한 표현형은 투여된 제제, 예를 들어 화합물에 대한 민감성을 부여하는 유전자의 삽입으로부터 초래될 수 있다. 음성 선택 가능한 유전자는 간시클로비르(ganciclovir) 민감성을 부여하는 단순 헤르페스 바이러스 I형 티미딘 키나아제(HSV-I TK) 유전자(Wigler et al., Cell 2:223, 1977), 세포성 히포크산틴 포스포리보실 전달효소(hypoxanthine phosphoribosyltransferase, HPRT) 유전자, 세포성 아데닌 포스포리보실 전달효소(adenine phosphoribosyltransferase, APRT) 유전자, 박테리아 시토신 디아미나제(Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992))를 포함한다.
일부 측면에서, 세포는 또한 사이토카인 또는 다른 인자의 발현을 촉진하도록 조작된다. 유전자 조작된 성분, 예를 들어 항원 수용체, 예를 들어 CAR을 도입하는 다양한 방법이 널리 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적인 방법은 바이러스, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질도입, 트랜스포손 및 전기 천공법을 통한 것을 포함하여 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 전달을 위한 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는, 예를 들어, 시미안 바이러스 40(SV40), 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스(adeno-associated virus, AAV)로부터 유래된 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여 세포 내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 HIV-1 렌티바이러스 기반 벡터와 같은 재조합 렌티바이러스 벡터(렌티벡터; 예를 들어, Amado et al., Science. 1999 Jul 30;285(5428):674-676 참조), 또는 감마-레트로바이러스 벡터와 같은 레트로바이러스 벡터(예를 들어, 문헌[Koste et al. (2014) Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25; Carlens et al. (2000) Exp Hematol 28(10): 1137-46; Alonso-Camino et al. (2013) Mol Ther Nucl Acids 2, e93; Park et al., Trends Biotechnol. 2011 November 29(11): 550-557] 참조)를 사용하여 T 세포 내로 전달된다.
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터는 긴 말단 반복 서열(LTR)을 갖는다. 일부 구현예에서, 벡터는 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스(MoMLV), 골수증식 육종바이러스(myeloproliferative sarcoma virus, MPSV), 뮤린 배아줄기세포 바이러스(murine embryonic stem cell virus, MESV), 뮤린 줄기세포 바이러스(murine stem cell virus, MSCV), 비장 병소 형성 바이러스(spleen focus forming virus, SFFV), 인간 면역결핍 바이러스 1형(HIV-1), 인간 면역결핍 바이러스 2형(HIV-2/SIV) 또는 아데노 연관 바이러스(AAV)로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 벡터는 자가 비활성화(SIN)되어 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 조건부 복제(이동 가능) 벡터이다. 대부분의 렌티바이러스 벡터는 인간, 펠린(고양이과) 또는 시미안(유인원) 바이러스로부터 유래된다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 뮤린 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 렌티바이러스 또는 레트로바이러스는 임의의 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것을 포함한다. 렌티바이러스 또는 레트로바이러스는 통상적으로 인간을 포함하여 몇몇 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미하는, 암포트로픽(amphotropic)이다. 일 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스의 gag(객), pol(폴) 및/또는 env(엔브) 서열을 대체한다. 렌티바이러스 형질도입 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Wang et al. (2012) J. Immunother. 35(9): 689-701; Cooper et al. (2003) Blood. 101:1637-1644; Verhoeyen et al. (2009) Methods Mol Biol. 506: 97-114; 및 Cavalieri et al. (2003) Blood. 102(2): 497-505]에 기술되어 있다. 다수의 예시적인 레트로바이러스 계통이 또한 (예를 들어, 문헌[Amado et al., (1999) Science 285(5428):674-676, 미국 특허 번호 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; Miller and Rosman (1989) BioTechniques 7:980-990; Miller (1990) Human Gene Therapy 1:5-14; Scarpa et al. (1991) Virology 180:849-852; Burns et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:8033-8037; 및 Boris-Lawrie and Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3:102-109])에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 전기 천공법을 통해 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌[Chicaybam et al, (2013) PLoS ONE 8(3): e60298 및 Van Tedeloo et al. (2000) Gene Therapy 7(16): 1431-1437] 참조). 일부 구현예에서, 재조합 폴리뉴클레오타이드는 전위(transposition)를 통해 T 세포 내로 전달된다(예를 들어, 문헌[Manuri et al. (2010) Hum Gene Ther 21(4): 427-437; Sharma et al. (2013) Molec Ther Nucl Acids 2, e74; 및 Huang et al. (2009) Methods Mol Biol 506: 115-126] 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 다른 방법에는 인산칼슘 형질주입(예를 들어, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 기재된 바와 같음), 원형질체 융합, 양이온성 리포솜-매개 형질주입; 텅스텐 입자 촉진 미세 입자 충격(Johnston(1990) 346: 776-777); 및 인산스트론튬 DNA 공동 침전(Brash et al., (1987) Mol. Cell Biol.7: 2031-2034)이 포함된다. 재조합 산물을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 전달을 위한 다른 접근법 및 벡터는 예를 들어, 문헌[국제 특허 출원, 공개 번호: WO2014055668 및 미국 특허 번호 7,446,190]에 기재된 것이다.
추가 폴리뉴클레오타이드 중에서, 예를 들어 도입을 위한 유전자는, 예컨대 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진함으로써 치료의 결과를 개선하기 위한 유전자; 예컨대 생체 내 생존 또는 국소화를 산정하기 위한 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 표지자를 제공하기 위한 유전자; 문헌[Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)]에 기술된 바와 같이 예를 들어 생체 내에서 음성 선택에 세포를 예민하게 만들어 안전성을 개선하기 위한 유전자가 있고; 또한 우성 양성 선택 가능한 표지자를 음성 선택 가능한 표지자와 융합시켜 유래된 2작용성 선택 가능한 융합 유전자의 용도를 기술하는 문헌[국제 출원 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601 by Lupton et al.]을 참조한다. 예를 들어, 문헌[Riddell et al., 미국 특허 번호 6,040,177의 14-17열]을 참조한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 재조합 수용체(예를 들어, CAR)는 세포 또는 다수의 세포에서 발현되도록 유전자 조작될 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 재조합 수용체 및 제2 결합 분자, 예를 들어, 재조합 수용체는 동일하거나 별개의 핵산 분자에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 추가의 결합 분자는 세포 또는 다수의 세포에서 발현되도록 조작된다. 일부 구현예에서, 제2 결합 분자는 본원 또는 문헌[WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647]에 기술된 항-BCMA CAR과 같은 항-BCMA 수용체이다.
일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 암호화된 재조합 수용체의 발현을 조절하는 프로모터 및/또는 증진인자 또는 조절 요소를 함유할 수 있다. 일부 예에서, 프로모터 및/또는 증진인자 또는 조절 요소는 조건 의존적인 프로모터, 증진인자 및/또는 조절 요소일 수 있다. 일부 예에서, 상기 요소들은 전이 유전자의 발현을 구동한다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는 HTLV1 증진인자(서열 번호: 61)를 가진 EF1알파 프로모터와 같은 프로모터에 작동 가능하게 연결될 수 있다. 일부 예에서, CAR 전이 유전자는 전이 유전자의 하류에 위치한 우드척 간염 바이러스(WHP) 전사 후 조절 요소(WPRE; 서열 번호: 62)에 작동 가능하게 연결된다.
일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동하는 단일 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 핵산 분자, 예를 들어, 전사물은 다중 시스트론(이중 시스트론 또는 삼중 시스트론, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,060,273 참조)일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 전사 단위는 단일 프로모터로부터의 메시지에 의해 (예를 들어, 제1 및 제2 키메라 수용체를 암호화하는) 유전자 산물의 공발현을 허용하는 IRES(내부 리보솜 유입점)를 함유하는 이중 시스트론 단위로 조작될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 벡터 또는 작제물은 단일 프로모터의 조절 하에서 IRES에 의해 분리되는, 본원에 제공되는 항-GPRC5D 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR)를 암호화하는 핵산 및 항-BCMA 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 암호화하는 핵산을 함유할 수 있다.
대안적으로, 일부 경우에, 단일 프로모터는 단일 개방형 해독틀(open reading frame, ORF)에서 자가-절단 펩타이드(예를 들어, 2A 절단 서열) 또는 프로테아제 인식 부위(예를 들어, 퓨린)를 암호화하는 서열에 의해 서로 분리된 (예를 들어, 제1 및 제2 결합 분자, 예를 들어 항체 재조합 수용체를 암호화하는) 두 개 또는 세 개의 유전자를 함유하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 따라서, 상기 ORF는 번역 동안(T2A의 경우) 또는 후에 개별적인 단백질로 절단되는 단일 폴리펩타이드를 암호화한다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보솜이 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 합성을 건너뛰도록(리보솜 스키핑) 유발할 수 있으며, 이는 2A 서열의 말단과 다음 펩타이드 하류 사이의 분리로 이어진다(예를 들어, 문헌[de Felipe, Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004) 및 de Felipe et al. Traffic 5:616-626 (2004)] 참조). 많은 2A 요소가 공지되어 있다. 본원에 개시된 방법 및 폴리뉴클레오타이드에 사용될 수 있는 2A 서열의 예에는 문헌[미국 특허 공개 번호 20070116690]에 기술된 바와 같은, 구제역 바이러스(F2A, 예를 들어, 서열 번호: 42 또는 43), 말 비염 A 바이러스(E2A, 예를 들어, 서열 번호: 40 또는 41), 토세아 아시그나 바이러스(T2A, 예를 들어, 서열 번호: 35, 36 또는 37) 및 돼지 테스코 바이러스-1(P2A, 예를 들어, 서열 번호: 38 또는 39)이 있으며, 하지만 이에 한정되지 않는다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상이한 또는 별개의 프로모터는 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어, 재조합 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자의 발현을 구동한다.
본원에 제공된 임의의 재조합 수용체, 예를 들어, 항-GPRC5D 재조합 수용체 및/또는 추가적인 재조합 수용체는 수용체를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 임의의 조합 또는 배열로 함유하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화될 수 있다. 예를 들어, 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 폴리뉴클레오타이드는 1개, 2개, 3개 또는 그 이상의 상이한 수용체 또는 도메인을 암호화할 수 있다. 일부 구현예에서, 하나의 벡터 또는 작제물은 하나 이상의 재조합 수용체를 암호화하는 핵산을 함유하고, 별개의 벡터 또는 작제물은 추가적인 결합 분자, 예를 들어 항체 및/또는 재조합 수용체, 예컨대 항-BCMA 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 함유한다. 각각의 핵산 분자는 또한 하나 이상의 대리 표지자, 예컨대 형광 단백질(예를 들어, 녹색 형광 단백질(GFP)) 또는 세포 표면 표지자(예를 들어, 절단된 EGFR(tEGFR)과 같은 절단된 표면 표지자)를 암호화할 수 있으며, 이는 수용체를 발현하도록 세포의 형질도입 또는 조작을 확인하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 외인성 표지 유전자는 조작된 세포 요법과 관련하여 세포의 검출 또는 선택을 허용하고, 일부 경우에는 또한 ADCC에 의한 세포 자살을 촉진하는 데 이용된다. 예시적인 표지 유전자는 절단형 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFRt)를 포함하며, 이는 형질도입된 세포에서 관심 전이 유전자(예를 들어, CAR 또는 TCR)와 함께 공발현될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 8,802,374 참조). EGFRt는 항체 세툭시맙(Erbitux®에 의해 인식되는 에피토프를 함유한다. 상기 이유로 Erbitux®를 사용하여 키메라 항원 수용체(CAR)와 같은 다른 재조합 수용체와 또한 공-조작된 세포를 포함하여 EGFRt 작제물로 조작된 세포를 식별하거나 선택할 수 있다.
일부 구현예에서, 표지자는 T 세포에서 자연적으로 발견되지 않거나 또는 T 세포 표면에서 자연적으로 발견되지 않는 분자(예를 들어, 세포 표면 단백질) 또는 이의 부분이다.
일부 구현예에서, 상기 분자는 비자기(non-self) 분자, 예를 들어 비자기 단백질, 즉 세포가 입양으로 전달될 숙주의 면역 체계에 의해 “자기(self)”로 인식되지 않는 분자이다.
일부 구현예에서, 표지자는 치료 기능을 하지 않고/거나 유전자 조작을 위한, 예를 들어 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 표지자로서 사용되는 것 외에 다른 효과를 생성하지 않는다. 기타 구현예에서, 표지자는 치료적 분자 또는 달리 일부 원하는 효과를 나타내는 분자, 예컨대 생체 내에서 세포가 조우하게 될 리간드, 예컨대 입양 전달 및 리간드와의 조우 시 세포의 반응을 강화하고/거나 약화시키는 공자극 또는 면역 관문 분자일 수 있다.
상기 임의의 기재와 같은 핵산 분자, 벡터 또는 작제물 중 하나 이상을 함유하는 조성물이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 핵산 분자, 벡터, 작제물 또는 조성물은 결합 분자, 예를 들어, 항체 또는 재조합 수용체 및/또는 추가적인 결합 분자 중 어느 하나를 발현하도록 T 세포와 같은 세포를 조작하는데 사용될 수 있다.
B. 조작을 위한 세포 제조
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 및/또는 제조 단계를 포함한다. 재조합 수용체(예를 들어, CAR)의 도입을 위한 세포는 예를 들어 대상체로부터 수득되거나 유래된 생물학적 샘플과 같은 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리되는 대상체는 질병 또는 병태가 있거나 세포 요법이 필요하거나 또는 세포 요법이 투여될 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 입양 세포 요법과 같은(이를 위해 세포를 단리, 가공 및/또는 조작함) 특정한 치료적 개입이 필요한 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 1차 세포, 예를 들어 1차 인간 세포이다. 샘플에는 대상체에서 직접 채취한 조직, 유체 및 기타 샘플뿐만 아니라 분리, 원심분리, 유전자 조작(예를 들어, 바이러스 벡터를 이용한 형질도입), 세척 및/또는 인큐베이션과 같은 하나 이상의 가공 단계에서 생성된 샘플이 포함된다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원으로부터 직접 수득된 샘플 또는 가공된 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플에는 체액, 예컨대 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀, 조직 및 장기 샘플 (이로부터 유래된 가공 샘플 포함)이 포함되나, 이에 한정되지 않는다.
일부 측면에서, 세포가 유래되거나 단리된 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술 산물이거나 이로부터 유래된다. 예시적인 샘플에는 전혈, 말초 혈액 단핵 세포(peripheral blood mononuclear cell, PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간 , 폐, 위, 창자, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁경부, 고환, 난소, 편도 또는 기타 장기 및/또는 이로부터 유래된 세포가 포함된다. 샘플에는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법의 맥락에서 자가 및 동종이계 공급원으로부터의 샘플이 포함된다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주, 예를 들어 T 세포주로부터 유래된다. 일부 구현예에서 세포는 이종성 공급원, 예를 들어 마우스, 랫트(rat), 비인간 영장류 또는 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 조제 및/또는 비친화도 기반 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 실시예에서, 세포는 예를 들어 원치 않는 성분의 제거, 원하는 성분의 농축, 특정 시약에 민감한 세포를 용해하거나 제거하기 위해, 하나 이상의 시약의 존재 하에 세척, 원심분리 및/또는 배양된다. 일부 실시예에서, 세포는 하나 이상의 특성, 예컨대 밀도, 부착 특성, 크기, 특정 성분에 대한 민감성 및/또는 내성에 기초하여 분리된다.
일부 예에서, 대상체의 순환 혈액으로부터의 세포는 예를 들어 성분채집술 또는 백혈구 성분채집술에 의해 수득된다. 일부 측면에서, 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 포함한 림프구를 함유하고, 일부 측면에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 대상체로부터 수집된 혈액 세포는, 예를 들어 혈장 분획을 제거하고 후속 가공 단계를 위한 적절한 완충제 또는 배지에 세포를 배치하기 위해 세척한다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 세척 용액에는 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 많은 또는 모든 2가 양이온이 결여되어 있다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 반자동 “병류(flow-through)” 원심분리기(예를 들어, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)로 달성된다. 일부 측면에서, 세척 단계는 제조업체의 지침에 따라 접선 유동 여과(tangential flow filtration, TFF)에 의해 달성된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충제, 예를 들어 Ca++/Mg++이 없는 PBS에서 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분이 제거되고 이 세포는 배양 배지에서 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 밀도 기반 세포 분리 방법, 예컨대 적혈구를 용해시켜 말초 혈액으로부터 백혈구의 조제 및 Percoll 또는 Ficoll 구배를 통한 원심분리를 포함한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 표지자, 예를 들어, 표면 단백질, 세포내 표지자 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 표지자에 기초한 분리를 위한 임의의 공지된 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 분리는 친화도- 또는 면역 친화도-기반 분리이다. 예를 들어, 일부 측면에서 단리에는 하나 이상의 표지자, 통상적으로 세포 표면 표지자의 세포 발현 또는 발현 수준에 기초하여, 예를 들어 상기 표지자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 인큐베이션 후 일반적으로 세척 단계 및 항체 또는 결합 파트너와 결합하지 않은 세포로부터 항체 또는 결합 파트너와 결합한 세포의 분리에 의한 세포 및 세포의 집단의 분리가 포함된다.
상기 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가 사용을 위해 유지되는 양성 선택 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합하지 않은 세포가 유지되는 음성 선택에 기초할 수 있다. 일부 실시예에서, 두 분획 모두 추가 사용을 위해 유지된다. 일부 측면에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 항체가 이용 가능하지 않은 경우에 특히 유용할 수 있어서, 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현된 표지자에 기초하여 가장 잘 수행된다.
분리는 특정 표지자를 발현하는 특정 세포의 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거로 귀결될 필요는 없다. 예를 들어, 표지자를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선택 또는 농축은 상기 세포의 수 또는 백분율을 증가시키는 것을 지칭하나, 상기 표지자를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재로 귀결될 필요는 없다. 마찬가지로, 표지자를 발현하는 것과 같은 특정 유형의 세포의 음성 선택, 제거 또는 고갈은 상기 세포의 수 또는 백분율을 감소시키는 것을 지칭하나, 상기 모든 세포의 완전한 제거로 귀결될 필요는 없다.
일부 예에서, 다수 라운드의 분리 단계가 수행되고, 여기서 한 단계에서 양성 또는 음성 선택된 분획은 후속 양성 또는 음성 선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거친다. 일부 예에서, 단일 분리 단계는 예컨대 각각 음성 선택을 위해 표적화된 표지자에 대해 특이적인 다수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 다수의 표지자를 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있다. 마찬가지로, 다수의 세포 유형이 다양한 세포 유형에서 발현되는 복수의 항체 또는 결합 파트너와 세포를 인큐베이션함으로써 동시에 양성 선택될 수 있다.
예를 들어, 일부 측면에서, 예컨대 하나 이상의 표면 표지자를 높은 수준으로 발현하거나 양성인 세포와 같은 T 세포, 예를 들어 CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+ 및/또는 CD45RO+ T 세포의 특정 하위 집단이 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 CD3/CD28 접합 자성 비드(예를 들어, DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T Cell Expander, MACSiBeads™ 등)를 사용하여 양성 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선택에 의한 특정 세포의 집단에 대한 농축, 및/또는 음성 선택에 의한 특정 세포의 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선택은 각각 양성 또는 음성 선택된 세포 상에서 발현(표지자+)되거나 상대적으로 보다 높은 수준으로 발현(표지자high)된 하나 이상의 표면 표지자에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 다른 결합제와 세포를 인큐베이션함으로써 달성된다.
일부 구현예에서, T 세포는 B 세포, 단핵구 또는 다른 백혈구, 예컨대 CD14와 같은 비-T 세포 상에서 발현되는 표지자의 음성 선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 측면에서, CD4+ 또는 CD8+ 선택 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포 독성 T 세포를 분리하는 데 사용된다. 상기 CD4+ 및 CD8+ 집단은, 하나 이상의 나이브(naive), 기억 및/또는 효과기(effector) T 세포 하위 집단 상에서 발현되거나 상대적으로 보다 높은 정도로 발현되는 표지자에 대한 양성 또는 음성 선택에 의해 하위 집단으로 추가 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, CD8+ 세포는 예컨대 각각의 하위 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 또는 음성 선택에 의해 나이브, 중앙 기억, 효과기 기억 및/또는 중앙 기억 줄기세포에 대해 추가로 농축되거나 고갈된다. 일부구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 특정 기능을 증가시키기 위해, 예컨대 투여 후의 장기간 생존, 팽창 및/또는 생착을 향상하기 위해 수행되며, 이는 일부 측면에서 상기 하위 집단에서 특히 견고하다(문헌[Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82; Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701] 참조). 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 조합은 반응을 더욱 증진한다.
일부 구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여 CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+ 분획에 대해 농축되거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 고도의 표면 발현에 기초하고; 일부 측면에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현하거나 높게 발현하는 세포에 대한 음성 선택에 기초한다. 일부 측면에서, TCM 세포에 대해 농축된 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선택 또는 농축에 의해 수행된다. 일 측면에서, 중앙 기억 T(TCM) 세포에 대한 농축은 CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 수행되며, 이는 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택, 및 CD62L에 기초한 양성 선택을 거친다. 일부 측면에서, 상기 선택은 동시에 수행되며 다른 측면에서, 순차적으로, 어떠한 순서로든 수행된다. 일부 측면에서, CD8+ 세포의 집단 또는 하위 집단을 제조하는 데 사용된 동일한 CD4 발현 기반 선택 단계가 CD4+ 세포의 집단 또는 하위 집단을 생성하는 데 또한 사용되어, CD4 기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획 모두가 유지되고, 선택적으로 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선택 단계 후에 방법의 후속 단계에서 사용된다.
특정 예에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플은 음성 및 양성 분획이 모두 유지되는 CD4+ 세포의 선택에 노출된다. 이어서 음성 분획은 CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선택 및 CD62L 또는 CCR7과 같은 중앙 기억 T 세포의 표지자 특성에 기초한 양성 선택을 거치고, 여기서 양성 및 음성 선택은 어느 순서로든 수행된다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포의 집단을 확인해서 나이브, 중앙 기억 및 효과기 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중앙 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 효과기 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
일 예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 농축하기 위해, 단클론 항체 칵테일은 통상적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 양성 및/또는 음성 선택을 위한 세포의 분리가 가능하도록 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포의 집단은 면역자성(또는 자성친화도) 분리 기법을 사용하여 분리되거나 단리된다(문헌[Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In vitro and In vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks 및 U. Schumacher ⓒHumana Press Inc., Totowa, NJ]에서 검토됨).
일부 측면에서, 분리될 세포 샘플 또는 세포 조성물은 작고, 자화 가능한 또는 자성 반응성 물질, 예컨대 자성 반응성 입자 또는 미세입자, 예컨대 상자성 비드(예를 들어, Dynalbeads®또는 MACS®비드)와 함께 인큐베이션된다. 자성 반응성 물질(예를 들어, 입자)은 일반적으로 분리가 바람직한, 예를 들어 음성 또는 양성 선택이 바람직한 세포 또는 세포의 집단에 존재하는 분자(예를 들어, 표면 표지자)에 특이적으로 결합하는 결합 파트너(예를 들어, 항체)에 직접 또는 간접적으로 부착된다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 항체 또는 다른 결합 파트너와 같은 특이적인 결합 부재에 결합되는 자성 반응성 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에 사용되는 널리 공지된 많은 자성 반응 물질이 있다. 적합한 자성 입자에는 문헌[본 명세서에 참조로 통합된 Molday, 미국 특허 번호 4,452,773 및 유럽 특허 명세서 EP 452342 B]에 기재된 것이 포함된다. 콜로이드 크기의 입자, 예컨대 문헌[Owen 미국 특허 번호 4,795,698 및 Liberti et al., 미국 특허 번호 5,200,084]에 기재된 것이 다른 예이다.
인큐베이션은 일반적으로 항체 또는 결합 파트너 또는 분자, 예컨대 자성 입자 또는 비드에 부착된 상기 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 다른 시약이 샘플 내의 세포 상에 존재하는 경우 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 수행된다.
일부 측면에서, 샘플은 자기장에 배치되고, 이에 부착된 자성 반응성 또는 자화 가능 입자를 갖는 상기 세포는 자석에 끌려당겨지고 표지되지 않은 세포로부터 분리될 것이다. 양성 선택의 경우, 자석에 끌려당겨진 세포가 유지되고; 음성 선택의 경우, 끌려당겨지지 않은 세포(비표지 세포)가 유지된다. 일부 측면에서, 양성 및 음성 선택의 조합이 동일한 선택 단계 동안 수행되며, 상기 양성 및 음성 분획은 유지되고 추가적으로 가공되거나 추가적인 분리 단계를 거친다.
특정 구현예에서, 자성 반응성 입자는 1차 항체 또는 다른 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘으로 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자는 하나 이상의 표지자에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포 유형 특이적 2차 항체- 또는 다른 결합 파트너(예를 들어, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘 코팅된 자성 입자는 비오틴이 부착된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자성 반응성 입자는 후속적인 인큐베이션, 배양 및/또는 조작될 세포에 부착되어 남아있고; 일부 측면에서, 상기 입자는 환자에게 투여하기 위한 세포에 부착되어 남아있는다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자성 반응성 입자는 세포로부터 제거된다. 세포에서 자화 가능 입자를 제거하는 방법은 공지되어 있고, 예를 들어 경쟁 비-표지 항체 및 절단 가능한 링커에 접합된 자화 가능 입자 또는 항체 등의 사용을 포함한다. 일부 구현예에서, 자화 가능 입자는 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화도-기반 선택은 자성 활성화 세포 분류(MACS®Miltenyi Biotec, Auburn, CA)를 통한 것이다. 자성 활성화 세포 분류(MACS®시스템은 이에 부착된 자화된 입자를 갖는 세포를 고순도로 선택할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS®는 외부 자기장의 적용 후에 비-표적 종 및 표적 종이 순차적으로 용리되는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자에 부착된 세포는 부착되지 않은 종이 용리되는 반면 제자리에 유지된다. 이어서, 상기 제1 용리 단계가 완료된 후, 자기장에 포획되고 용리가 방지된 종은 용리 및 회수될 수 있는 상당한 방식으로 해제된다. 특정 구현예에서, 비 표적 세포는 표지되고 이종 세포의 집단으로부터 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 본 방법의 단리, 세포 조제, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형화 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 디바이스 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 측면에서, 시스템은 예를 들어 오류, 사용자 취급 및/또는 오염을 최소화하기 위해 폐쇄 또는 멸균 환경에서 상기 단계 각각을 수행하는 데 사용된다. 일 예에서, 시스템은 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO2009/072003 또는 미국 출원 20110003380 A1]에 기재된 바와 같은 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합 또는 독립 언어 시스템 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로 단리, 가공, 조작 및 제형화 단계 중 하나 이상, 예를 들어 모두를 수행한다. 일부 측면에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 산정하고/거나 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 다양한 측면을 조정할 수 있게 하는, 상기 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 측면에서, 분리 및/또는 다른 단계는 예를 들어 폐쇄 및 멸균 시스템에서 임상 규모 수준에서 세포의 자동 분리를 위해 CliniMACS®시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 구성 요소에는 통합 마이크로 컴퓨터, 자성 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브가 포함될 수 있다. 일부 측면에서, 통합 컴퓨터는 기기의 모든 구성 요소를 제어하고 시스템에 표준화된 순서로 반복된 절차를 수행하도록 지시한다. 일부 측면에서, 자성 분리 유닛은 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 배관 세트 전체의 유량을 제어하고, 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충제의 흐름 제어와 세포의 지속적인 현탁을 보장한다.
일부 측면에서 CliniMACS®시스템은 멸균, 비발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자화성 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 이어서, 세포 조제 백은 배관 세트에 연결되고, 이는 차례로 완충제를 함유하는 백 및 세포 수집 백에 연결된다. 배관 세트는 전치칼럼 및 분리 컬럼을 포함한 사전 조립된 멸균 배관으로 구성되며 일회용이다. 분리 프로그램이 시작된 후, 시스템은 세포 샘플을 분리 컬럼에 자동으로 적용한다. 표지된 세포는 칼럼 내에 유지되는 반면, 표지되지 않은 세포는 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되지 않고 칼럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 표지되고 칼럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포의 집단은 자기장을 제거한 후 칼럼으로부터 용리되고, 세포 수집 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 다른 단계는 CliniMACS Prodigy®시스템(Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. 일부 측면에서 CliniMACS Prodigy®시스템에는 원심 분리에 의해 세포의 자동 세척 및 분획화를 가능하게 하는 세포 가공 유닛이 구비되어 있다. CliniMACS Prodigy®시스템에는 공급원 세포 산물의 거시적인 층을 식별하여 최적의 세포 분획화 종점을 결정하는 내장 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어도 포함될 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리될 수 있다. CliniMACS Prodigy®시스템에는 또한 예를 들어, 세포 분화 및 팽창, 항원 로딩 및 장기 세포 배양과 같은 세포 배양 프로토콜을 달성하는 통합 세포 배양 챔버가 포함될 수 있다. 입력 포트는 배지의 멸균 제거 및 보충을 가능하게 할 수 있고 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터링할 수 있다(예를 들어, 문헌[Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82, 및 Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701] 참조).
일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 유세포 분석을 통해 수집 및 농축(또는 고갈)되고, 여기서 다수의 세포 표면 표지자에 대해 염색된 세포는 유체 스트림으로 운반된다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 제조 규모(FACS) 분류를 통해 수집 및 농축(또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 본원에 기술된 세포 집단은 FACS 기반 검출 시스템과 조합된 미세전자기계 시스템(microelectromechanical system, MEMS) 칩을 사용하여 수집 및 농축(또는 고갈)된다(예를 들어, 문헌[WO 2010/033140, Cho et al. (2010) Lab Chip 10, 1567-1573; 및 Godin et al. (2008) J Biophoton. 1(5):355-376] 참조). 두 경우 모두에서, 세포는 다수의 표지자로 표지될 수 있으며, 이는 고순도로 명확한 T 세포 서브세트의 단리를 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 표지자로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선택을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체에 대한 결합에 기초할 수 있다. 일부 예에서, 하나 이상의 세포 표면 표지자에 특이적인 항체 또는 다른 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 예를 들어 유세포 분석 검출 시스템과 조합하여 예컨대 제조 규모(FACS) 및/또는 미세전자기계 시스템(MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류(fluorescence-activated cell sorting, FACS)에 의해 유체 스트림에서 수행된다. 상기 방법은 다수의 표지자에 기초하여 양성 및 음성 선택을 동시에 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션 및/또는 조작 전이든 후이든 세포를 동결하는 단계, 예를 들어, 냉동 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 세포의 집단에서 과립구 및 어느 정도 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 세포는 예를 들어, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 이후에 동결 용액에서 현탁된다. 일부 측면에서, 공지된 다양한 동결 용액 및 매개변수 중 어느 하나가 사용될 수 있다. 일 예는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민(HSA)을 함유하는 PBS 또는 다른 적합한 세포 동결 배지를 사용하는 것을 포함한다. 이어서, 상기를 DMSO 및 HSA의 최종 농도가 각각 10% 및 4%가 되도록 배지로 1:1로 희석시킨다. 이어서 세포를 분당 1°의 속도로 -80℃까지 동결시키고 액체 질소 저장 탱크에 기체상으로 저장한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법은 양성(cultivation), 인큐베이션, 배양 및/또는 유전자 조작 단계를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 고갈된 세포 집단 및 배양-개시 조성물을 인큐베이션 및/또는 조작하는 방법이 제공된다.
따라서, 일부 구현예에서, 세포 집단은 배양-개시 조성물에서 인큐베이션된다. 인큐베이션 및/또는 조작은 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰(well), 칼럼, 관, 배관 세트, 밸브, 바이알(vial), 배양 접시, 백(bag) 또는 세포 배양 또는 양성을 위한 다른 용기에서 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작과 관련하여 또는 그 전에 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 육성, 자극, 활성화 및/또는 번식(propagation)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재 하에 인큐베이션된다. 상기 조건은 집단에서 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하고, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 프라이밍하도록 설계된 것을 포함한다.
상기 조건은 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 제제(agents), 예를 들어 영양소, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자, 예컨대 사이토카인, 케모카인(chemokines), 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화시키기 위해 설계된 임의의 기타 제제 중 하나 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 제제는 TCR 복합체의 세포내 신호 전달 도메인을 자극할 수 있는 하나 이상의 제제(예를 들어, 리간드)를 포함한다. 일부 측면에서, 상기 제제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포내 신호 전달 계단식 다단계 반응을 켜거나 개시한다. 상기 제제는 TCR 성분 및/또는 공자극 수용체에 특이적인 항체와 같은 항체, 예를 들어 비드와 같은 고체 지지체에 결합된 항-CD3, 항-CD28 및/또는 하나 이상의 사이토카인을 포함할 수 있다. 선택적으로, 팽창 방법은 (예를 들어, 적어도 약 0.5ng/ml 이상의 농도에서) 배양 배지에 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극제(stimulating agent)는 IL-2 및/또는 IL-15, 예를 들어, 적어도 약 10 유닛/mL의 IL-2 농도를 포함한다.
일부 측면에서, 인큐베이션은 예컨대 문헌[미국 특허 번호 6,040,177 Riddell et al., Klebanoff et al. (2012) J Immunother. 35(9): 651-660, Terakura et al. (2012) Blood.1:72-82 및/또는 Wang et al. (2012) J Immunother. 35(9):689-701]에 기술된 기술에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 배양-개시 조성물 배양보조 세포, 예컨대 비분할 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)에 첨가하고(예를 들어, 생성된 세포의 집단은 팽창될 초기 집단 중 각각의 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40 이상의 PBMC 배양보조 세포를 함유하도록); 상기 배양물을 (예를 들어, T 세포 수를 팽창시키기에 충분한 시간 동안) 인큐베이션하여 팽창된다. 일부 측면에서, 비분할 배양보조 세포는 감마-조사된 PBMC 배양보조 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC에 약 3000 내지 3600 라드(rad) 범위의 감마선을 조사하여 세포 분열을 방지한다. 일부 측면에서, 배양보조 세포는 T 세포 집단의 첨가 전에 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예를 들어, 약 25℃ 이상, 일반적으로 약 30℃ 이상 및 일반적으로 37℃ 또는 약 37℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션은 배양보조 세포로서 비분할 EBV 형질 전환 림프아구 세포(LCL)를 첨가하는 것을 더 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 라드 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. 일부 측면에서, LCL 배양보조 세포는 임의의 적합한 양으로 제공되며, 예컨대 LCL 배양보조 세포 대 초기 T 림프구의 비율이 약 10:1 이상으로 제공된다.
구현예에서, 항원 특이적 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포와 같은 항원 특이적 T 세포는 항원으로 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 자극하여 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 단리하고 시토메갈로 바이러스 항원으로 시험관 내에서 세포를 자극함으로써 같은 항원에 대해 생성될 수 있다.
C. 다중 표적화를 위한 조작된 세포, 벡터 및 조성물
다수의 항원에 결합하고/거나 다수의 항원을 표적화할 수 있는 조작된 세포와 같은 세포가 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 다수의 항원을 표적화하는 전략을 통해 개선된 선택성 및 특이성이 달성된다. 상기 전략은 일반적으로, 별개의 유전자 조작된 항원 수용체 상에 전형적으로 존재하고 별개의 항원에 특이적으로 결합하는, 다수의 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 항원에 결합하는 능력을 갖도록 조작된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 다중 특이적 결합 분자를 발현하도록 조작된다. 일부 구현예에서, 세포는 다수의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하고, 이들 각각은 하나의 항원 또는 다수의 항원, 예를 들어 본원에 기재된 어느 하나와 같은 GPRC5D를 표적화하는 하나의 수용체 및 종양 항원과 가은 또 다른 항원, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 또 다른 수용체를 표적화할 수 있다. 예시적인 항-BCMA 수용체는 본원 및 문서[WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647]에 기술되어 있다.
일부 측면에서, 복수의 유전자 조작된 항원 수용체가 세포에 도입되고, 이는 상이한 항원에 특이적으로 결합하며, 각각은 세포 또는 조직 또는 이의 세포를 표적화하는 질병 또는 병태에서 발현된다. 일부 측면에서 상기 특징은 표적외 효과(off-target effect)의 가능성을 해결하거나 감소시키고 및/또는 반응을 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 질병 또는 병태에서 발현된 단일 항원이 또한 비-질병 또는 정상 세포에서 발현되는 경우, 상기 다중 표적화 접근법은 세포를 활성화시키거나 또는 특정 효과기 기능을 유도하기 위해 다중 항원 수용체를 통한 결합을 요구함으로써 원하는 세포 유형에 대한 선택성을 제공할 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 세포는 하나 이상의 상이한 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하도록 조작될 수 있으며, 이들 각각은 하나의 항원 또는 다수의 항원을 표적화할 수 있다.
본원에 제공된 결합 분자 또는 세포 중 임의의 하나 이상을 함유하는 것과 같은 다중 특이적 세포 또는 조성물이 또한 제공된다. 일부 측면에서, 항-GPRC5D 수용체 또는 이의 도메인을 포함하는 세포 표면 단백질 및 GPRC5D 상의 상이한 항원 또는 상이한 에피토프에 결합하는, 추가 키메라 수용체 또는 이의 도메인과 같은 추가 세포 표면 단백질 또는 이의 도메인을 함유하는 세포와 같은 다중 특이적 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 추가 키메라 수용체는 BCMA 항원 또는 BCMA의 에피토프에 결합하고 또는 추가 항원은 BCMA이다. 일부 구현예에서, 결합 분자, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체 중 하나 이상이 GPRC5D에 결합하고/거나 이를 표적화하는, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체 및/또는 세포 또는 조성물은 GPRC5D 상의 하나 이상의 상이한 에피토프를 표적화한다. 일부 구현예에서, 다중 특이적 결합 분자 및/또는 재조합 수용체 또는 세포 또는 조성물은 GPRC5D 상의 하나 이상의 상이한 에피토프 및 BCMA 상의 하나 이상의 에피토프를 표적화한다.
일부 구현예에서, 조성물 내의 세포가 하나 이상의 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체를 발현하는, 세포의 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 항체 및/또는 이의 부분, 예를 들어 이의 항원 결합 단편을 포함하는 하나 이상의 아미노산 서열을 암호화하는 하나 이상의 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 또는 작제물을 포함한다(일부 경우에 이것으로 형질전환 또는 형질주입 또는 형질도입되었다). 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 상기 세포를 함유하는 조성물이 제공된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 세포는 상이한 수용체 또는 동일한 수용체를 발현할 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 내의 세포는 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어 다중 특이적 수용체, 예를 들어 CAR을 발현한다.
일부 측면에서, 제공된 구현예는 GPRC5D 및 특정 질병 또는 병태와 관련된 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 다중 표적화 전략을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원은 다중 특이적 결합 분자 및/또는 다중 결합 분자 및/또는 각각 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 다수의 세포, 예를 들어 하나 이상의 세포에 의해 표적화된다. 일부 구현예에서, 제2 또는 추가 항원을 표적화하는 재조합 수용체는 GPRC5D 결합 분자, 예를 들어, 항-GPRC5D CAR로서 동일한 세포 상에서 또는 상이한 세포상에서 발현된다.
일부 구현예에서, 제2 항원에 특이적으로 결합하거나 이를 표적화하는 다른 재조합 수용체가 본원에 제공된 세포, 조성물 및 방법에 포함된다. 일부 구현예에서, 복수의 항원, 예를 들어, 제1 항원(예를 들어, GPRC5D) 및 제2 또는 추가 항원(예를 들어, BCMA)이 암세포 상과 같이 표적화되는 세포, 조직 또는 질병 또는 병태에서 발현되거나 발현되는 것으로 의심된다. 일부 측면에서, 세포, 조직, 질병 또는 병태는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다.
일부 측면에서, 제2 항원, 예를 들어 질병 특이적 항원 및/또는 관련 항원과 같은 추가 항원은 다발성 골수종, 예컨대 BCMA, CD38(환형 ADP 리보오스 가수 분해 효소), CD138(신데칸-1, 신데칸, SYN-1), CS-1(CS1, CD2 서브세트 1, CRACC, SLAMF7, CD319 및 19A24), BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5 상에서 발현된다. 다른 예시적인 다발성 골수종 항원은 CD56, TIM-3, CD33, CD123, CD44, CD20, CD40, CD74, CD200, EGFR, β2-마이크로글로불린, HM1.24, IGF-1R, IL-6R, TRAIL-R1 및 액티빈(activin) 수용체 IIA형(ActRIIA)을 포함한다(문헌[Benson and Byrd, J. Clin. Oncol. (2012) 30(16): 2013-15; Tao and Anderson, Bone Marrow Research (2011):924058; Chu et al., Leukemia (2013) 28(4):917-27; Garfall et al., Discov Med. (2014) 17(91):37-46] 참조). 일부 구현예에서, 항원은 림프성 종양, 골수종, AIDS(에이즈) 관련 림프종 및/또는 CD38과 같은 이식 후 림프구 증식에 존재하는 것을 포함한다. 상기 항원을 겨냥하는 항체 또는 항원 결합 단편은 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 8,153,765; 8,603477, 8,008,450; 미국 공개 번호 US20120189622 또는 US20100260748; 및/또는 국제 출원 공개 번호 WO 2006/099875, WO 2009/080829, WO 2012/092612, WO2014210064, WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647]에 기술된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예를 들어, scFv)은 다중 특이적 항체, 다중 특이적 키메라 수용체, 예컨대 다중 특이적 CAR 및/또는 다중 특이적 세포에 함유되어 있다.
일부 구현예에서, 제공된 세포는 제공된 CAR 및 하나 이상의 다른 재조합 수용체, 예컨대 항-BCMA 재조합 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 발현한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포는 본원에 제공된 항-GPRC5D 수용체를 암호화하는 하나 이상의 폴리뉴클레오타이드뿐만 아니라 하나 이상의 다른 재조합 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포는 동일한 또는 별개의 조성물에서, 항-GPRC5D 수용체가 아닌 재조합 수용체를 발현하는 다른 조작된 세포, 예컨대 항-BCMA 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)를 발현하는 조작된 세포와 조합되고, 제공된 임의의 방법 또는 용도에서 함께 또는 개별적으로 투여될 수 있다. 임의의 재조합 수용체는 임의의 제공된 세포에서, 제공된 세포가 본원에 제공된 항-GPRC5D 수용체 및 다른 수용체 모두를 발현하도록, 제공된 항-GPRC5D 수용체와 조합될 수 있다. 항-GPRC5D 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR)를 발현하는 세포는 동일한 또는 별개의 조성물에서, 본원에 제공된 방법 또는 용도로 사용하기 위해, 임의의 재조합 수용체를 발현하는 세포와 조합될 수 있다. 상기 세포, 조성물, 및 폴리뉴클레오타이드는 본원의 다른 곳에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 다른 재조합 수용체는 항-BCMA CAR과 같은 항-BCMA 수용체이다. 본원의 제공된 세포, 방법 및 용도에서 임의의 항-BCMA CAR의 사용 또는 편입이 고려된다. 예를 들어, 다중 시스트론(예를 들어, 이중 시스트론) 발현 벡터에서 본원에 제공된 항-GPRC5D 수용체 및 다른 수용체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드도 마찬가지로 고려된다. 예시적인 항-BCMA CAR 분자는 문서[WO 2013/154760, WO 2015/052538, WO 2015/090229, WO 2015/092024, WO 2015/158671, WO 2016/014565, WO 2016/014789, WO 2016/094304, WO 2016/166630, WO 2017/021450, WO 2017/083511, WO 2017/130223, WO 2017/211900, WO 2018/085690, WO 2018/028647]에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, CAR은 BCMA, 예를 들어 인간 BCMA에 특이적인 항-BCMA CAR이다. 마우스 항-인간 BCMA 항체 및 인간 항-인간 항체를 포함하여 항-BCMA 항체를 함유하는 키메라 항원 수용체 및 상기 키메라 수용체를 발현하는 세포가 앞서 기재되었다. 문헌[Carpenter et al., Clin Cancer Res., 2013, 19(8):2048-2060, WO 2016/090320, WO2016090327, WO2010104949A2 및 WO2017173256]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 문헌[WO 2016/090320 또는 WO 2016/090327]에 기재된 항체로부터 유래된 가변 중쇄(VH) 및/또는 가변 경쇄(VL) 영역을 함유하는 scFv와 같은 항원 결합 도메인을 함유한다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 189에 제시된 서열 또는 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 190에 제시된 서열 또는 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 189에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 190에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 237에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 242에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 242에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 247에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 247에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 191에 제시된 서열 또는 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 192에 제시된 서열 또는 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 191에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 192에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 238에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 238에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 243에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 243에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 248에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 248에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 193에 제시된 서열 또는 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 194에 제시된 서열 또는 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 193에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 194에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 239에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 239에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 244에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 244에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 249에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 249에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 195에 제시된 서열 또는 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 196에 제시된 서열 또는 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 195에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 196에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 240에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 240에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 245에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 245에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 250에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 250에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
제공되는 항-BCMA CAR 중에는, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열 번호: 197에 제시된 서열 또는 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역을 함유하고, 서열 번호: 198에 제시된 서열 또는 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 VL 영역을 함유하는, CAR이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, 제공된 CAR의 항체 또는 항원 결합 단편은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 갖는 VH 영역 및 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 갖는 VL 영역을 함유한다. 일부 구현예에서, VH 영역은 서열 번호: 197에 제시된 서열을 포함하고 VL 영역은 서열 번호: 198에 제시된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 scFv와 같은 단일 사슬 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호: 246에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 246에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 일부 구현예에서, 항-BCMA CAR은 서열 번호: 251 또는 252에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 251 또는 252에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 세포 및 방법은 세포 상에 2개 이상의 유전자 조작 수용체의 발현과 같은 다중 표적화 전략을 포함하며, 각각은 상이한 항원을 인식하고 일부 측면에서 각각은 상이한 세포내 신호 전달 성분을 포함한다. 상기 다중 표적화 전략은 예를 들어, 문헌[국제 특허 출원 공개 번호 WO 2014/055668(활성화 및 공자극 CAR의 조합, 예를 들어, 표적외, 예를 들어 정상 세포 상에 개별적으로 존재하나 치료될 질병 또는 병태가 있는 세포에만 함께 존재하는 2개의 상이한 항원을 표적화하는 것에 관해 기술) 및 Fedorov et al. (2013), Sci. Transl. Medicine, 5(215)(활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포, 예컨대 활성화 CAR이 정상 또는 비-질병 세포 및 치료될 질병 또는 병태가 있는 세포 둘 다에서 발현된 하나의 항원에 결합하고, 억제 CAR이 정상 세포 또는 치료가 바람직하지 않은 세포 상에서만 발현되는 다른 항원에 결합하는 것에 관해 기술)]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 각각이 하나 이상의 재조합 수용체를 발현하도록 조작된, 복수의 세포가 제공된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 한 세포는 GPRC5D에 결합 및/또는 이를 표적화하는 결합 분자를 발현하도록 조작되고, 다른 세포는 추가 또는 제2 항원에 결합 및/또는 이를 표적화하는 결합 분자를 발현하도록 조작된다. 일부 구현예에서, 추가 또는 제2 항원은 BCMA이다. 일부 구현예에서, 세포는 각각 다중 특이적 결합 분자, 예를 들어, 다중 특이적 재조합 수용체를 발현할 수 있고, 여기서 하나 이상의 표적 항원은 GPRC5D이다. 상기 구현예의 일부에서, 복수의 세포는 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 복수의 세포는 상기 세포와 동시에, 함께 또는 순차적으로 투여되고, 예를 들어, 같은 날에 투여되고/거나 임의의 순서로, 순차적으로 또는 간헐적으로 다른 조작된 세포와 함께 복수로 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GPRC5D 결합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 조작된 세포는 임의의 순서로, 상이한 표적 항원(예를 들어, BCMA) 또는 GPRC5D 상의 상이한 에피토프에 결합하는 결합 분자를 발현하는 다른 조작된 세포와 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 복수의 세포는 동일한 조성물에 있을 수 있다.
IV. 약학 조성물
약학 조성물 및 제형을 포함하여, 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR) 및 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 상기 조성물 중에는 제공된 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 복수의 조작된 세포와 같은 조작된 세포를 포함하는 것이 있다.
약학 조성물 및 제형을 포함하여, 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, 항-GPRC5D CAR), 및 항-BCMA 재조합 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)와 같은 제2 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 및 조작된 세포를 포함하는 조성물이 또한 제공된다. 상기 조성물 중에는 제공된 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 및/또는 항-BCMA 재조합 수용체(예를 들어, 항-BCMA CAR)와 같은 제2 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는, 복수의 조작된 세포와 같은 조작된 세포를 포함하는 것이 있다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 제공된 항-GPRC5D CAR을 발현하는 그리고 항-BCMA CAR도 발현하는 복수의 조작된 세포와 같은 조작된 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 조성물은 항-GPRC5D scFv 및 항-BCMA scFv를 포함하는 것과 같은 GPRC5D 및 BCMA에 결합하는 제공된 CAR을 발현하는 조작된 세포를 포함한다.
GPRC5D-결합 재조합 키메라 항원 수용체 및 상기 수용체를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 병용 치료 또는 요법을 위한 추가 제제를 포함하는 약학 제형이 제공된다. 약학(적) 조성물 및 제형은 일반적으로 하나 이상의 임의적인 약학적으로 허용 가능한 운반체(들) 또는 부형제(들)를 포함한다. 일부 구현예에서, 조성물은 하나 이상의 추가적인 치료제를 포함한다.
용어 “약학적 제형(pharmaceutical formulation)”은 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있도록 하는 형태이고, 상기 제형이 투여되는 대상체에 허용 가능하지 않을 정도로 독성인 추가 성분을 함유하지 않는 제제(preparation)를 지칭한다.
“약학적으로 허용 가능한 운반체(pharmaceutically acceptable carrier)”는 활성 성분 외의 약학적 제형 안에 있는 성분을 지칭하고, 이는 대상체에 무독성이다. 약학적으로 허용 가능한 운반체는 완충제, 부형제, 안정제 또는 보존제를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 측면에서, 운반체의 선택은 특정 세포, 결합 분자 및/또는 항체 및/또는 투여 방법에 의해 부분적으로 결정된다. 따라서, 적합한 제형이 다양하게 존재한다. 예를 들어, 약학 조성물은 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산 나트륨 및 염화 벤잘코늄을 포함할 수 있다. 일부 측면에서, 2개 이상의 보존제가 혼합되어 사용된다. 보존제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.0001% 내지 약 2 중량%의 양으로 존재한다. 운반체는, 예를 들어, 문헌[Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 기술되어 있다. 약학적으로 허용 가능한 운반체는 일반적으로 사용된 용량 및 농도에서 수용체(recipient)에게 무독성이며, 인산염, 구연산염 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤잘코늄 클로라이드; 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로 헥사놀; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신과 같은 아미노산; 글루코스, 마노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류 및 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨과 같은 설탕; 나트륨과 같은 염 형성 카운터 이온; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온 계면활성제를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
일부 측면에서 완충제는 조성물에 포함된다. 적합한 완충제는 예를 들어, 구연산, 구연산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 다른 산 및 염을 포함한다. 일부 측면에서, 2개 이상의 완충제 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 통상적으로 전체 조성물의 약 0.001% 내지 약 4 중량%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약학 조성물의 제조 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법이 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)]에 보다 상세하게 기술되어 있다.
본원에 기술된 항체 제형은 동결 건조된 제형 및 수용액을 포함할 수 있다.
제형 또는 조성물은 또한 결합 분자 또는 세포, 바람직하게는 결합 분자 또는 세포에 상보적인 활성을 가진 것으로 치료될 특정 징후, 질병 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 함유할 수 있으며, 여기서 각각의 활성이 서로 악영향을 미치지 않는다. 상기 활성 성분은 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합하여 적합하게 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약학 조성물은 화학 요법제, 예를 들어 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 젬시타빈, 히드록시우레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맙, 빈블라스틴, 빈크리스틴 등과 같은 다른 약학적 활성제 또는 약물을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 또는 항체는 염의 형태, 예를 들어, 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 투여된다. 적합한 약학적으로 허용 가능한 산 부가 염은 염산, 브롬화 수소산, 인산, 메타인산, 질산 및 황산과 같은 무기산 및 타르타르산, 아세트산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산, 벤조산, 글리콜산, 글루콘산, 숙신산 및 아릴술폰산, 예를 들어 p-톨루엔술폰산과 같은 유기산으로부터 유도된 것을 포함한다.
활성 성분은 마이크로캡슐, 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로에멀션, 나노 입자 및 나노캡슐) 또는 거대에멀젼에 포획될 수 있다. 특정 구현예에서, 약학 조성물은 사이클로덱스트린 포접 복합체와 같은 포접 복합체 또는 리포솜으로서 제형화된다. 리포솜은 특정 조직에 대해 숙주 세포(예를 들어, T 세포 또는 NK 세포)를 표적화하는 역할을 할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Szoka et al., Ann. Rev. Biophys. Bioeng., 9: 467 (1980) 및 미국 특허 4,235,871, 4,501,728, 4,837,028 및 5,019,369]에 기재된 것과 같은 리포솜 제조에 이용 가능한 방법이 많이 있다.
일부 측면에서 약학 조성물은 치료될 부위의 감작을 유발하기 전에 그리고 충분한 시간을 가지고 조성물의 전달이 발생하도록 시간 방출, 지연 방출 및 서방출형 전달 시스템을 채용할 수 있다. 많은 유형의 방출 전달 시스템이 이용 가능하고 공지되어 있다. 상기 시스템은 조성물의 반복 투여를 피할 수 있어서, 대상체와 의사의 편의성을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서 약학 조성물은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량과 같이 질병 또는 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 양으로 결합 분자 및/또는 세포를 함유한다. 일부 구현예에서 치료적 또는 예방적 효능은 치료된 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 병태에 따라 며칠 또는 그 이상에 걸쳐 반복 투여되는 경우, 질병 증상의 원하는 억제가 발생할 때까지 치료가 반복된다. 그러나, 다른 투여량 요법이 유용할 수 있고 결정될 수 있다. 원하는 투여량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속적인 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 분자를 함유하는 유전적으로 조작된 세포의 맥락에서, 약 1백만 내지 약 1000억 세포의 범위로, 예컨대, 예를 들어, 1백만 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 5백만 세포, 약 2천 5백만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 1천만 내지 약 1000억 세포(예를 들어, 약 2천만 세포, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억 세포 또는 전술한 수치 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위) 및 일부 경우에 약 1억 세포 내지 약 500억 세포(예를 들어, 약 1억 2천만 세포, 약 2억 5천만 세포, 약 3억 5천만 세포, 약 4억 5천만 세포, 약 6억 5천만 세포, 약 8억 세포, 약 9억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포) 또는 상기 범위 사이에 있는 임의의 수치 및/또는 대상체의 체중 1킬로그램당 상기와 같은 수의 세포가 대상체에 투여된다. 일부 측면에서, 결합 분자, 예를 들어 CAR을 발현하는 유전자 조작 세포의 맥락에서, 조성물은 투여를 위해 본원에 기술된 대략 또는 그 이상의 세포 수와 같이 세포 요법의 단위 용량을 위한 투여를 위한 세포 수 이상을 함유할 수 있다.
세포는 표준 투여 기술, 제형 및/또는 디바이스를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를 위해 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 디바이스가 제공된다. 세포의 투여는 자가 또는 이종 기원일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응성 세포 또는 전구체(progenitor)는 하나의 대상체로부터 수득될 수 있고, 동일한 대상체 또는 상이하고, 양립 가능한 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래 면역 반응성 세포 또는 이의 자손(예를 들어, 생체 내, 생체 외 시험 또는 시험관 내 유래)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사 또는 비경구 투여를 포함하는 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료 조성물(예를 들어, 유전자 변형 면역 반응성 세포를 함유하는 약학 조성물)을 투여할 때, 일반적으로 이는 주사 가능한 단위 투여량 형태(용액, 현탁액, 에멀션)로 제형화될 것이다.
제형에는 경구, 정맥내, 복강내, 피하, 폐, 경피, 근육내, 비강내, 볼, 설하 또는 좌약 투여를 위한 것이 포함된다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 “비경구(parenteral)”는 정맥내, 근육내, 피하, 직장, 질, 두개내, 흉부내 및 복강내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 집단은 정맥내, 복강내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서 조성물은 멸균 액체 제제로서, 예를 들어, 등장성 수용액, 현탁액, 에멀션, 분산액 또는 점성 조성물로 제공되며, 이는 일부 측면에서 선택된 pH로 완충될 수 있다. 액체 제제는 일반적으로 겔, 다른 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조가 보다 용이하다. 또한, 액체 조성물은 특히 주사에 의해 투여하기가 다소 더 편리하다. 반면에, 점성 조성물은 적절한 점도 범위 내에서 제형화되어 특정 조직과의 보다 긴 접촉 기간을 제공할 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 예를 들어, 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액상 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 함유하는 용매 또는 분산 배지일 수 있는 운반체를 포함할 수 있다.
멸균 주사용 용액은 적합한 운반체, 희석제 또는 멸균수, 생리식염수, 포도당, 덱스트로스 등과 같은 부형제와의 혼화제와 같은 용매에 결합 분자를 통합함으로써 제조될 수 있다. 조성물은 또한 냉동 건조될 수 있다. 조성물은 원하는 투여 경로 및 제제에 따라, 습윤제, 분산제 또는 유화제(예를 들어, 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 향상 첨가제, 보존제, 향미제, 색소 등과 같은 보조 물질을 함유할 수 있다. 일부 측면에서, 적합한 제조를 위하여 표준 텍스트를 참조할 수 있다.
항균 보존제, 항산화제, 킬레이팅제 및 완충제를 포함한, 조성물의 안정성 및 멸균성을 향상시키는 다양한 첨가제를 첨가할 수 있다. 미생물의 작용의 예방은 다양한 항균 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등에 의해 보장될 수 있다. 주사용 약학적 형태의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 초래될 수 있다.
서방성 제제가 제조될 수 있다. 서방성 제제의 적합한 예는 항체를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 상기 매트릭스는 성형품(shaped article), 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태이다.
생체 내 투여에 사용될 제형은 일반적으로 멸균된다. 멸균은, 예를 들어, 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
병용 요법을 위한 약학 조성물이 또한 제공된다. 본원에 기재된 병용 요법을 위한 임의의 추가 제제, 예컨대 섹션 II.C에 기재된 제제는 하나 이상의 약학 조성물로서 제조되어, 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 본원에 기재된 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와 함께 투여될 수 있다. 병용 요법은 예를 들어, 결합 분자, 재조합 수용체 및/또는 세포가 추가 제제로서 동일한 약학 조성물 또는 별도의 약학 조성물에 존재하는, 하나 이상의 약학 조성물로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 추가 조작된 세포, 예를 들어 BCMA-표적화된 재조합 수용체와 같은 상이한 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포이고, 동일한 조성물 또는 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 각각의 약학 조성물은 특정 결합 분자, 재조합 수용체, 세포, 예를 들어, 조작된 세포 및/또는 추가 제제 및 특정 투여 요법 및/또는 전달 방법에 따라 적합한 제형으로 제형화된다.
V. 방법 및 용도
예컨대 GPRC5D가 발현되는 질병, 병태 및 장애의 치료 및/또는 검출, 진단 및 예후 방법에서 GPRC5D-표적화된 재조합 수용체, 조작된 세포, 및 이의 약학 조성물 및 제형의 사용 방법 및 용도가 또한 제공된다. 상기 방법 및 용도 중에는 제공된 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 복수의 조작된 세포와 같은 조작된 세포를 대상체에 투여하는 것을 수반하는 것이 있다. 병용 요법 및/또는 병용 치료 방법이 또한 제공된다.
A. 치료 및 예방 방법 및 용도
항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 방법과 용도, 예컨대 치료 및 예방 용도가 또한 제공된다. 상기 방법 및 용도는 예를 들어 분자(예를 들어, 재조합 수용체), 세포(예를 들어, 조작된 세포) 또는 상기를 함유하는 조성물을, GPRC5D 발현과 관련되고/거나 세포 또는 조직이 GPRC5D를 발현하는, 예를 들어, 특이적으로 발현하는 질병, 병태 또는 장애와 같은 GPRC5D와 관련된 질병, 병태 또는 장애를 가진 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 분자, 세포 및/또는 조성물은 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로 투여된다. 상기 방법 및 치료 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 세포(예를 들어, 조작된 세포)의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 결합 분자 또는 세포 또는 상기를 포함하는 조성물을, 질병 또는 병태를 가진 것으로 의심되거나, 가지고 있거나, 가졌었던 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 이를 통해 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다. GPRC5D와 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한, 본원에 제공된 임의의 조성물, 예컨대 약학 조성물의 용도, 예컨대 치료 요법에서의 용도가 본원에 또한 제공된다.
항-GPRC5D 및 항-BCMA 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 방법과 용도, 예컨대 치료 및 예방 용도가 또한 제공된다. 상기 방법 및 용도는 예를 들어 분자(예를 들어, 재조합 수용체), 세포(예를 들어, 조작된 세포) 또는 상기를 함유하는 조성물을, GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련되고/거나 세포 또는 조직이 GPRC5D 및/또는 BCMA를 발현하는, 예를 들어, 특이적으로 발현하는 질병, 병태 또는 장애와 같은 GPRC5D 및/또는 BCMA와 관련된 질병, 병태 또는 장애를 가진 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 치료 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 분자, 세포 및/또는 조성물은 질병 또는 장애의 치료에 효과적인 유효량으로 투여된다. 상기 방법 및 치료 및 상기 치료 방법을 수행하기 위한 약제의 제조에서 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 세포(예를 들어, 조작된 세포)의 용도가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 결합 분자 또는 세포 또는 상기를 포함하는 조성물을, 질병 또는 병태를 가진 것으로 의심되거나, 가지고 있거나, 가졌었던 대상체에 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 본 방법은 이를 통해 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다. GPRC5D 및/또는 BCMA와 관련된 질병 또는 장애의 치료를 위한, 본원에 제공된 임의의 조성물, 예컨대 약학 조성물의 용도, 예컨대 치료 요법에서의 용도가 본원에 또한 제공된다.
본원에서 사용된 바와 같은 “치료(treatment, treat, treating)”는 질병 또는 병태 또는 장애 또는 이와 관련된 증상, 역효과 또는 결과 또는 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 지칭한다. 치료의 바람직한 효과는 질병의 발생 또는 재발의 예방, 증상의 완화, 질병의 직접적 또는 간접적인 병리적 결과 중 어느 하나의 감소, 전이 방지, 질병 진행의 속도 감소, 질병 상태의 개선 또는 완화 및 차도 또는 향상된 예후를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 용어는 질병의 완전한 치료 또는 모든 증상이나 결과에 있어 임의의 증상이나 영향(들)의 완전한 제거를 의미하지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같은 “질병의 발병 지연(delaying development of a disease)”은 질병(예컨대 암)의 발병을 미룸, 방해, 늦춤, 지연, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 상기 지연은 치료 중인 대상체 및/또는 질병의 이력에 따라 다양한 시간의 길이일 수 있다. 충분하거나 유의미한 지연은 대상체에 질병이 발병하지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포함할 수 있다. 예를 들면, 전이의 발병과 같이 말기 암이 지연될 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 “예방(preventing)”은 질병에 걸릴 성향을 가질 수 있으나 아직 질병으로 진단되지 않은 대상체에서 질병의 발생 또는 재발과 관련하여 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 분자 및 조성물은 질병의 발병을 지연시키거나 질병의 진행을 늦추는 데 사용된다.
본원에서 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 “억제(suppress)”한다는 것은 다른 조건과 비교하여 또는 대안적으로 관심 조건 또는 매개변수를 제외하고 달리 동일한 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 항체 또는 조성물 또는 세포는 항체 또는 조성물 또는 세포의 부재 시에 종양의 성장 속도에 비해 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
제제, 예를 들어 약학적 제형, 결합 분자, 항체, 세포 또는 조성물의 “유효량(effective amount)”은 투여의 맥락에서, 치료적 또는 예방적 결과와 같은 원하는 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량/양에서와 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다.
제제, 예를 들어 약학적 제형, 결합 분자, 항체 세포 또는 조성물의 “치료적 유효량(therapeutically effective amount)”은 예컨대 질병, 병태 또는 장애의 치료 및/또는 치료의 약동학적 또는 약력학적 효과를 위해 원하는 치료적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 기간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 대상체의 질병 상태, 연령, 성별 및 체중 및 투여된 세포의 집단과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 분자, 항체, 세포 및/또는 조성물을 유효량, 예를 들어 치료적 유효량으로 투여하는 것을 포함한다.
“예방적 유효량(prophylactically effective amount)”은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량에서와 시간 동안의 효과적인 양을 지칭한다. 반드시는 아니나 통상적으로, 예방적 투여량이 질병 이전 또는 초기 단계의 대상체에서 사용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
본원에서 사용된 바와 같은 “대상체(subject)” 또는 “개체(individual)”는 포유 동물이다. 일부 구현예에서, “포유 동물(mammal)”은 인간, 비인간 영장류, 가축 및 농장 동물 및 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 저빌쥐, 마우스, 흰 담비, 랫트(rat), 고양이, 원숭이 등을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은 예를 들어, 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85]에 기술되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
치료될 질병 중에는 GPRC5D와 관련된 임의의 질병 또는 장애 또는 GPRC5D가 특이적으로 발현되고/거나 GPRC5D가 치료를 위해 표적화되는 임의의 질병 또는 장애가 있다(본원서에서 또한 “GPRC5D-관련 질병 또는 장애”로서 상호교환적으로 지칭). GPRC5D 발현과 관련된 암은 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종과 같은 혈액 악성 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, GPRC5D와 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애 또는 악성 종양이다. 일부 구현예에서, GPRC5D와 관련된 질병 또는 장애는 다발성 골수종 또는 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)이다. 특정 구현예에서, 질병 또는 장애는 다발성 골수종이다.
치료될 질병 중에는 GPRC5D 및/또는 BCMA와 관련된 임의의 질병 또는 장애 또는 GPRC5D 및/또는 BCMA가 특이적으로 발현되고/거나 GPRC5D 및/또는 BCMA가 치료를 위해 표적화되는 임의의 질병 또는 장애가 있다(본원서에서 또한 “GPRC5D-관련 질병 또는 장애” 또는 “BCMA-관련 질병 또는 장애”로서 상호교환적으로 지칭). GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 암은 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종과 같은 혈액 악성 종양을 포함한다. 일부 구현예에서, GPRC5D 및/또는 BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애 또는 악성 종양이다. 일부 구현예에서, GPRC5D 및/또는 BCMA와 관련된 질병 또는 장애는 다발성 골수종 또는 발덴스트롬 거대글로불린혈증(Waldenstrom’s Macroglobulinemia)이다. 특정 구현예에서, 질병 또는 장애는 다발성 골수종이다.
일부 구현예에서, 질병 또는 장애는 GPRC5D 및 BCMA의 발현과 관련이 있다. 일부 구현예에서, 질병이 있는 세포는 두 항원 모두 발현하는 것으로 의심된다. 일부 구현예에서, 상기 항원들 중 하나 또는 둘 모두는 일부 질병이 있는 세포가 더 이상 두 항원을 발현하지 않을 수 있다는 점에서 항원 손실이 되기 쉽다. 따라서, 일부 구현예에서, GPRC5D 및 BCMA 둘 모두를 표적화하는 이중 표적화 접근법이 유리할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 GPRC5D-관련 질병 또는 장애가 있거나, 의심되거나 또는 발병할 위험이 있는 대상체를 식별할 수 있다. 따라서, GPRC5D 발현과 관련된 질병 또는 장애를 가진 대상체를 식별하고, 제공된 GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포로 치료하기 위해 상기 대상체를 선택하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 GPRC5D- 및/또는 BCMA-관련 질병 또는 장애가 있거나, 의심되거나 또는 발병할 위험이 있는 대상체를 식별할 수 있다. 따라서, GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애를 가진 대상체를 식별하고, 제공된 GPRC5D- 및/또는 BCMA-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및/또는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포로 치료하기 위해 상기 대상체를 선택하는 방법이 제공된다.
예를 들어, 대상체는 GPRC5D-발현 암과 같은, 상승된 GPRC5D 발현과 관련된 질병 또는 장애가 존재하는지 선별하는 검진을 받을 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법은 GPRC5D-관련 질병(예를 들어, 종양)의 존재를 선별 또는 검출하는 것을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 상승된 GPRC5D 발현과 관련된 질병 또는 장애가 있는 것으로 의심되는 환자에게서 샘플을 수득하여 GPRC5D의 발현 수준을 분석할 수 있다. 일부 측면에서, GPRC5D-관련 질병 또는 장애에 대해 양성반응을 보이는 대상체를 본 방법에 의한 치료 대상으로 선정할 수 있고, 이 대상체에 본원에 기술된 바와 같은, GPRC5D-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체를 함유하는 세포, 또는 이의 약학 조성물의 치료적 유효량을 투여할 수 있다.
예를 들어, 대상체는 GPRC5D- 및/또는 BCMA-발현 암과 같은, 상승된 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애가 존재하는지 선별하는 검진을 받을 수 있다. 일부 구현예에서, 본 방법은 GPRC5D- 및/또는 BCMA-관련 질병(예를 들어, 종양)의 존재를 선별 또는 검출하는 것을 포함한다. 따라서, 일부 측면에서, 상승된 GPRC5D 및/또는 BCMA 발현과 관련된 질병 또는 장애가 있는 것으로 의심되는 환자에게서 샘플을 수득하여 GPRC5D 및/또는 BCMA의 발현 수준을 분석할 수 있다. 일부 측면에서, GPRC5D- 및/또는 BCMA-관련 질병 또는 장애에 대해 양성반응을 보이는 대상체를 본 방법에 의한 치료 대상으로 선정할 수 있고, 이 대상체에 본원에 기술된 바와 같은, GPRC5D-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하고 BCMA-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체를 발현하는 세포를 포함하는 조성물, 또는 이의 약학 조성물의 치료적 유효량을 투여할 수 있다. 일부 측면에서, GPRC5D- 및/또는 BCMA-관련 질병 또는 장애에 대해 양성반응을 보이는 대상체를 본 방법에 의한 치료 대상으로 선정할 수 있고, 이 대상체에 본원에 기술된 바와 같은, GPRC5D-결합 분자 및 BCMA-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 세포를 포함하는 조성물, GPRC5D-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체 및 BCMA-결합 분자를 포함하는 재조합 수용체를 발현하는 세포, 또는 이의 약학 조성물의 치료적 유효량을 투여할 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어 GPRC5D-특이적 항체 및/또는 GPRC5D-표적화 키메라 수용체를 발현하는 세포 및/또는, 화학 요법, 방사선 및/또는 조혈 줄기세포 이식(hematopoietic stem cell transplantation, HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT를 포함한 다른 요법으로 치료 후에 질병이 지속되거나 재발하였다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 대상체가 다른 GPRC5D-표적화된 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 대상체는 재발하지 않았지만, 재발의 위험이 있는 것으로, 예컨대 재발의 위험이 높은 것으로 판단되고, 따라서 화합물 또는 조성물을 예를 들어 재발의 가능성을 낮추거나 재발을 예방하기 위해 예방적으로 투여한다.
일부 구현예에서, 대상체는 BCMA CAR 요법 또는 다른 BCMA-표적화된 요법인 선행 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 상기 BCMA CAR 요법 또는 다른 BCMA-표적화된 요법 이후 불응성이거나 재발하였다. 일부 경우에, 대상체는 요법 이후 BCMA 항원-음성 종양 세포 및/또는 BCMA 항원/에피토프 손실로 인해 불응성이거나 재발하였다.
일부 구현예에서, 대상체는 다른 요법으로 치료, 예컨대 BCMA-특이적 항체, BCMA-표적화된 수용체, 및/또는 BCMA-표적화된 키메라 수용체를 발현하는 세포로 치료 이후 질병이 지속되거나 재발하였다. 일부 구현예에서, 상기 투여는 대상체가 BCMA-표적화된 요법과 같은 다른 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 대상체는 재발하지 않았지만, 재발의 위험이 있는 것으로, 예컨대 재발의 위험이 높은 것으로 판단되고, 따라서 화합물 또는 조성물을 예를 들어 재발의 가능성을 낮추거나 재발을 예방하기 위해 예방적으로 투여한다.
일부 구현예에서, 대상체는 조혈 줄기세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT에 적합한 것과 같이 이식에 적합한 대상체이다. 상기 구현예의 일부에서, 대상체는 본원에 제공된 바와 같은, 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 전, 적합함에도 불구하고 이전에 이식을 받지 않았다.
일부 구현예에서, 대상체는 이식에 적합하지 않은, 예컨대 조혈 줄기세포 이식(HSCT), 예를 들어, 동종이계 HSCT 또는 자가 HSCT에 적합하지 않은 대상체이다. 상기 구현예의 일부에서, 상기 대상체에 본원에 제공된 구현예에 따라, 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 투여한다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 투여 개시 전에, 대상체는 하나 이상의 선행 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20번 이상의 선행 요법을 받았다. 일부 구현예에서, 대상체는 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10번 이상의 선행 요법을 받았다.
일부 측면에서, 대상체는 하나 이상의 선행 요법 중 하나 이상, 예를 들어, 각각, 개별적으로 이후에 재발하였거나 이에 불응성이다. 일부 측면에서, 선행 요법은 자가 줄기세포 이식(ASCT); 면역 조절제; 프로테아좀 억제제; 및 항-CD38 항체를 이용한 치료를 포함한다(대상체가 하나 이상의 요법에 대해 후보가 아니었거나 사용이 금지되지 않은 한). 일부 구현예에서, 면역 조절제는 탈리도마이드, 레날리도마이드 또는 포말리도마이드 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 프로테아좀 억제제는 보르테조밉, 카필조밉 또는 익사조밉 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 항-CD38 항체는 다라투무맙이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 진행성 질병이 요법에 대한 최선의 반응이 아닌 한 각 요법에 대해 적어도 2회 이상의 연속 치료 주기를 거쳐야 한다.
일부 구현예에서, 본 방법은 특정 기준, 진단 또는 징후에 기초하여 제공된 항-GPRC5D 항체, 재조합 수용체 및/또는 상기 수용체를 포함하는 세포로 치료하기 위한 특정 대상체를 포함하거나 배제하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량의 투여 시점에, 대상체는 형질 세포 백혈병(PCL)의 병력이 있거나 이에 대해 활성이 있지 않았다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL의 병력이 있거나 이에 대해 활성이 있는 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL, 예컨대 2차 PCL이 발병한 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 기준, 진단 또는 징후에 대한 산정은 제공된 방법에 따라 치료의 적격성 또는 적합성을 위해 대상체를 선별하는 시점에, 치료 요법의 다양한 단계에서, 림프구 고갈 요법을 받는 시점 및/또는 조작된 세포 또는 이의 조성물의 투여 시 또는 투여 개시 직전에 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 특정 기준, 진단 또는 징후에 기초하여 제공된 항-GPRC5D 및 항-BCMA 항체, 재조합 수용체 및/또는 상기 수용체를 포함하는 세포로 치료하기 위한 특정 대상체를 포함하거나 배제하는 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 세포의 단위 용량의 투여 시점에, 대상체는 형질 세포 백혈병(PCL)의 병력이 있거나 이에 대해 활성이 있지 않았다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL의 병력이 있거나 이에 대해 활성이 있는 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체가 투여 시점에 PCL, 예컨대 2차 PCL이 발병한 경우, 대상체는 제공된 방법에 따라 치료되는 것으로부터 배제될 수 있다. 일부 구현예에서, 기준, 진단 또는 징후에 대한 산정은 제공된 방법에 따라 치료의 적격성 또는 적합성을 위해 대상체를 선별하는 시점에, 치료 요법의 다양한 단계에서, 림프구 고갈 요법을 받는 시점 및/또는 조작된 세포 또는 이의 조성물의 투여 시 또는 투여 개시 직전에 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료는 요법에 대한 대상체에 의한 면역 반응을 유도하지 않으며, 및/또는 질병 또는 병태의 효과적인 치료를 방해할 정도로 상기 반응을 유도하지 않는다. 일부 측면에서, 면역원성 및/또는 이식편 대 숙주 반응의 정도는 상이하지만 비교 가능한 치료로 관찰된 것보다 작다. 예를 들어, 제공된 항-GPRC5D 항체를 포함하는 CAR을 발현하는 세포를 이용한 입양 세포 요법의 경우, 일부 구현예에서 면역원성의 정도는, 유사한, 예를 들어 중첩 에피토프에 결합하고/거나 항체, 예컨대 마우스 또는 원숭이 또는 토끼 또는 인간화된 항체와 GPRC5D 결합을 두고 경쟁하는, 상이한 항체를 포함한 CAR에 비해 감소된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 입양 세포 요법을 포함하며, 이에 의해 GPRC5D-결합 분자(예를 들어, 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR)를 포함하는 제공된 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 대상체에 투여한다. 상기 투여는 GPRC5D-표적화된 방식으로 세포의 활성화(예를 들어, T 세포 활성화)를 촉진할 수 있어서, 질병 또는 장애가 있는 세포가 파괴를 위해 표적화된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 입양 세포 요법을 포함하며, 이에 의해 GPRC5D-결합 분자(예를 들어, 항-GPRC5D 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR)를 포함하는 제공된 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포 및 BCMA-결합 분자(예를 들어, 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR)를 포함하는 제공된 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포를 대상체에 투여한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 입양 세포 요법을 포함하며, 이에 의해 GPRC5D-결합 분자 및 BCMA-결합 분자(예를 들어, 항-GPRC5D 및 항-BCMA 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR)를 포함하는 제공된 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작 세포를 대상체에 투여한다.
따라서, 제공된 방법 및 용도는 입양 세포 요법에 대한 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 대상체, 조직 또는 세포, 예컨대, 질병, 병태 또는 장애가 있거나, 이를 가질 위험이 있거나 또는 가질 것으로 의심되는 것에 세포 또는 세포를 함유하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포, 집단 및 조성물이 치료될 특정 질병 또는 병태가 있는 대상체에, 예를 들어 입양 T 세포 요법과 같은 입양 세포 요법을 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 세포 또는 조성물은 대상체, 예컨대 질병 또는 병태가 있거나 이를 가질 위험이 있는 대상체에 투여된다. 일부 측면에서, 본 방법은 예컨대 GPRC5D-발현 암에서 종양 부담을 감소시킴으로써 이에 의해 질병 또는 병태의 하나 이상의 증상을 치료한다(예를 들어, 개선한다).
입양 세포 요법을 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며 제공된 방법 및 조성물과 관련하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법 방법은, 예를 들어, 문헌[미국 특허 출원 공개 번호 2003/0170238(Gruenberg et al); 미국 특허 번호 4,690,915(Rosenberg); Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)]에 기술되어 있다. 예를 들어, 문헌[Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338]을 참조한다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 대상체 또는 상기 대상체로부터 유래된 샘플로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 따라서, 일부 측면에서, 세포는 치료가 필요한 대상체, 예를 들어, 환자로부터 유래되고, 세포는 단리 및 가공 후에 동일한 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법, 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 동종이계 전달에 의해 수행되며, 세포는 세포 요법을 받을 예정이거나 최종적으로 받은 대상체, 예를 들어, 제1 대상체 외의 대상체로부터 단리 및/또는 달리 제조된다. 상기 구현예에서, 세포는 이어서 같은 종의 상이한 대상체, 예를 들어, 제2 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스(HLA class) 또는 수퍼타입(supertype)을 발현한다.
일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체는 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 세포, 세포 집단 또는 조성물이 투여되는 대상체는 비인간 영장류이다. 일부 구현예에서, 비인간 영장류는 원숭이(예를 들어, 시노몰구스 원숭이) 또는 유인원(ape)이다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있으며, 유아, 소아, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함한 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류(예를 들어, 마우스, 랫트 등)와 같은 비영장류 포유 동물이다. 일부 실시예에서, 환자 또는 대상체는 질병, 입양 세포 요법 및/또는 사이토카인 방출 증후군(cytokine release syndrome, CRS)과 같은 독성 결과물의 산정을 위한 검증된 동물 모델이다.
GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 상기를 발현하는 세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어, 주사, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하(subconjunctival) 주사, 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, 및 GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및 상기를 발현하는 세포는, 임의의 적합한 수단, 예를 들어, 주사, 예를 들어, 정맥내 또는 피하 주사, 안구내(intraocular) 주사, 안구주위(periocular) 주사, 망막하(subretinal) 주사, 유리체내(intravitreal) 주사, 중격-경유성(trans-septal) 주사, 공막하(subscleral) 주사, 맥락막내(intrachoroidal) 주사, 전방내(intracameral) 주사, 결막 하(subconjunctival) 주사, 서브 테논(sub-Tenon) 주사, 안구뒤(retrobulbar) 주사, 안구주위(peribulbar) 주사 또는 후부 점막 주사(posterior juxtascleral) 전달에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 이는 비경구, 폐내 및 비강내 및 국소 치료가 바람직한 경우 병변내 투여에 의해 투여된다. 비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내, 두개내, 흉부내 또는 피하 투여를 포함한다. 투약 및 투여는 투여가 단기 인지 장기 인지에 따라 부분적으로 좌우될 수 있다. 다양한 투약 스케쥴은 다양한 시점에 걸쳐 단일 또는 다중 투여, 볼루스 투여 및 펄스 주입을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 결합 분자, 재조합 수용체 또는 세포의 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 결합 분자 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 진행 과정, 결합 분자 또는 재조합 수용체가 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지 여부, 이전 치료, 환자의 임상 이력 및 재조합 수용체 또는 세포에 대한 반응 및 주치의의 판단에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서 조성물 및 분자 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료에 걸쳐 환자에게 적합하게 투여된다.
일부 구현예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 효능 및/또는 반응에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 효능은 질병 상태를 평가함으로써 결정된다. 질병 상태를 평가하기 위한 예시적인 방법은 전기영동 및 면역 고정에 의해 혈액 및/또는 소변과 같은 생물학적 유체에서 M 단백질의 측정; 혈액에서 sFLC(κ 및 λ)의 정량화; 골격 검사; 및 골수외 질병이 있는 대상체에서 양전자 방출 단층 촬영(positron emission tomography, PET)/컴퓨터 단층 촬영(computed tomography, CT)에 의한 이미징을 포함한다. 일부 구현예에서, 질병 상태는 골수 검사에 의해 평가될 수 있다.
일부 예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 혈액 및/또는 골수에서 재조합 수용체 또는 세포의 팽창 및 지속성에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 재조합 수용체 또는 조작된 세포의 항종양 활성에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서 항종양 활성은 전체 반응 속도(overall response rate, ORR) 및/또는 국제 골수종 워킹 그룹(International Myeloma Working Group, IMWG) 균일한 반응 기준(Uniform Response Criteria)에 의해 결정된다(문헌[Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17(8):e328-346] 참조). 일부 구현예에서, 반응은 최소 잔류 질병(minimal residual disease, MRD) 평가를 사용하여 평가된다. 일부 구현예에서, MRD는 유세포 분석 및 고처리량 서열분석(sequencing), 예를 들어, 딥 시퀀싱(deep sequencing)과 같은 방법에 의해 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 반응은 재조합 수용체 또는 세포의 투여 후 반응의 지속 기간에 기초하여 평가된다. 일부 예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 독성에 기초할 수 있다. 일부 구현예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 재조합 수용체 및/또는 세포가 투여되는 대상체의 건강 관련 삶의 질(health-related quality of life, HRQoL)에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여의 단위 용량 및/또는 빈도는 상기 기준 중 어느 하나에 기초하여 변경, 즉, 증가 또는 감소될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료될 질병 또는 장애는 다발성 골수종이다. 일부 구현예에서, 다발성 골수종에 대한 측정 가능한 질병 기준은 (1) 혈청 M-단백질 1g/dL 이상; (2) 소변 M-단백질 200mg 이상/24시간; (3) 수반된 비정상적인 κ 대 λ의 비율로 혈청 프리 경쇄(serum free light chain, sFLC) 수준 10mg/dL 이상을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 경쇄 질병은 혈청 또는 소변에서 측정 가능한 질병이 없는 대상체에 대해서만 허용 가능하다.
일부 구현예에서, 동부 종양학 그룹 협회(Eastern Cooperative Oncology Group, ECOG) 수행 상태 지표는 치료를 위한 대상체, 예를 들어 선행 요법으로부터 수행도가 좋지 않았던 대상체를 평가하거나 선택하기 위해 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Oken et al.(1982) Am J Clin Oncol. 5:649-655] 참조). 수행 상태의 ECOG 척도는 스스로를 돌보는 능력, 일상 활동 및 신체 능력(예를 들어, 걷기, 일하기 등)의 관점에서 환자의 기능 수준을 설명한다. 일부 구현예에서, 0의 ECOG 수행 상태는 대상체가 정상적인 활동을 수행할 수 있음을 나타낸다. 일부 측면에서, 1의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 신체 활동에 일부 제한을 보이나 대상체는 완전히 보행할 수 있다. 일부 측면에서, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 환자는 50% 이상 보행할 수 있다. 일부 경우에, 2의 ECOG 수행 상태를 갖는 대상체는 스스로를 돌볼 수도 있다; 예를 들어, 문헌[Sønsen et al., (1993) Br J Cancer 67(4) 773-775]을 참조한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 또는 치료 요법에 따라 투여될 대상체는 0 또는 1의 ECOG 수행 상태를 가진 대상체를 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 투여는 다른 요법에 내성이 있는 대상체일지라도 대상체를 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 적어도 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95% 이상에서 객관적인 반응(objective response, OR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, OR은 엄격한 완전 반응(stringent complete response, sCR), 완전 반응(complete response, CR), 매우 우수한 부분 반응(very good partial response, VGPR), 부분 반응(partial response, PR) 및 최소 반응(minimal response, MR)을 달성하는 대상체를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 85% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR), 완전 반응(CR), 매우 우수한 부분 반응(VGPR) 또는 부분 반응(PR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 기술된 구현예에 따라 대상체에게 투여될 때, 단위 용량 또는 조성물은 투여된 대상체의 20%, 30%, 40% 50%, 60% 또는 70% 이상에서 엄격한 완전 반응(sCR) 또는 완전 반응(CR)을 달성할 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 단위 용량은 약 5.0 x 107, 1.5 x 108, 3.0 x 108 또는 4.5 x 108개의 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 예시적인 단위 용량은 약 1.0 x 107, 1.25 x 107, 1.5 x 107, 2.0 x 107, 2.0 x 107, 2.5 x 107, 3.0 x 107, 3.5 x 107, 4.0 x 107, 4.5x 107, 5.0 x 107, 7.5 x 107, 1.5 x 108, 2.25 x 108, 3.0 x 108, 4.5 x 108, 또는 6.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다. 일부 측면에서, 예를 들어, 본원에 제공된 방법에 따른, 치료에 대한 특정 반응은 국제 골수종 워킹 그룹(IMWG) 균일한 반응 기준에 기초하여 평가될 수 있다(문헌[Kumar et al. (2016) Lancet Oncol 17(8):e328-346] 참조). 일부 구현예에서, OR과 같은 특정 결과를 달성하기 위한 예시적인 단위 용량은 약 5.0 x 107개의 CAR 발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 치료의 독성 및/또는 부작용(side-effect)은 재조합 수용체, 예를 들어, CAR, 세포 및/또는 조성물의 투여의 단위 용량 및/또는 빈도를 조절하기 위해 모니터링 및 사용될 수 있다. 예를 들어, 유해 효과(adverse event) 및 실험실 이상(laboratory abnormality)은 투여의 단위 용량 및/또는 빈도를 조절하기 위해 모니터링 및 사용될 수 있다. 유해 효과로는 주입 반응, 사이토카인 방출 증후군(CRS), 신경 독성, 대식 세포 활성화 증후군 및 종양 용해 증후군(TLS)이 포함된다. 상기 사례 중 일부는 용량 제한 독성을 확립할 수 있고 단위 용량 감소 및/또는 치료의 종료를 담보할 수 있다. 투여의 단위 용량 및/또는 빈도를 확립하기 위한 지침으로 사용될 수 있는 다른 부작용 또는 유해 효과는, 피로, 발열 또는 열성 호중구 감소증, 설정된 기간(예를 들어, 2주 이하 또는 7일 이하) 동안의 아미노기 전이효소 증가, 두통, 뼈 통증, 저혈압, 저산소증, 오한, 설사, 메스꺼움/구토, 신경 독성(예를 들어, 혼란, 실어증, 발작, 경련, 무기력 및/또는 정신 상태 변화), 파종성 혈관 내 응고, 기타 무증상 비혈액학적 임상 실험실 이상, 예컨대 전해질 이상을 포함하나 이에 제한되지 않는 비혈액학적 부작용 사례를 포함한다. 투여의 단위 용량 및/또는 빈도를 확립하기 위한 지침으로 사용될 수 있는 다른 부작용 또는 유해 효과는, 호중구 감소증, 백혈구 감소증, 혈소판 감소증, 동물 및/또는 B 세포 결여증 및 저감마글로불린혈증을 포함하나 이에 제한되지 않는 혈액학적 유해 효과를 포함한다.
일부 구현예에서, 제공된 방법에 따른 치료는 예를 들어, 다른 요법의 투여와 비교하여, 더 낮은 속도 및/또는 더 낮은 정도의 독성, 독성 결과 또는 증상, 독성 촉진 프로파일, 인자 또는 특성, 예컨대 사이토카인 방출 증후군(CRS) 또는 신경 독성과 관련되거나 이를 나타내는 증상 또는 결과, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 신경 독성을 초래할 수 있다.
특정 구현예에서, 결합 분자 또는 재조합 수용체를 함유하는 유전자 조작된 세포의 맥락에서, 대상체에 약 1백만 내지 약 1000억개의 세포의 범위 및/또는 체중 1kg 당 세포의 양, 예컨대, 예를 들어, 약 1백만 내지 약 500억개의 세포(예를 들어, 약 5 백만 세포, 약 1천만 세포, 약 1천250만 세포, 약 1천5백만 세포, 약 2천만 세포, 약 2천5백만 세포, 약 5억 세포, 약 10억 세포, 약 50억 세포, 약 200억 세포, 약 300억 세포, 약 400억개의 세포, 또는 상기 수치들 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 예컨대 약 1천만 내지 약 1000억개의 세포(예를 들어, 약 1천만 세포, 약 1천250만 세포, 약 1천5백만 세포, 약 2천만 세포, 약 2천5백만 세포, 약 3천만 세포, 약 4천만 세포, 약 5천만 세포, 약 6천만 세포, 약 7천만 세포, 약 8천만 세포, 약 9천만 세포, 약 100억 세포, 약 250억 세포, 약 500억 세포, 약 750억 세포, 약 900억개의 세포. 또는 상기 수치들 중 임의의 2개에 의해 정의된 범위), 및 일부 경우에 약 1억 세포 내지 약 500억개의 세포(예를 들어, 약 1억2천만 세포, 약 1억5천만 세포, 약 2억5천만 세포, 약 3억 세포, 약 3억5천만 세포, 약 4억5천만 세포, 약 5억 세포, 약 6억 세포, 약 6억5천만 세포, 약 8억 세포, 약 9억 세포, 약 10억 세포, 약 12억 세포, 약 30억 세포, 약 300억 세포, 약 450억 세포, 또는 약 500억개의 세포) 또는 상기 범위 사이 임의의 수치 및/또는 체중 1kg 당으로 투여된다. 또한, 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 특수한 속성에 따라 달라질 수 있다.
일부 구현예에서, 본 방법은 조작된 세포의 단위 용량 또는 조작된 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물은 치료 요법에 사용될 수 있으며, 여기서 치료 요법은 조작된 세포의 단위 용량 또는 조작된 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 예를 들어 본원에 기재된 임의의 수의 상기 세포와 같은 특정 수 또는 범위의 재조합 수용체 발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 단위 용량의 세포를 함유하는 조성물이 투여될 수 있다. 일부 측면에서, 세포 집단 또는 세포 조성물에서 CAR 발현 세포의 수, 양 또는 비율은 본원에 제공된 결합 분자 또는 수용체에 특이적으로 결합할 수 있는, 대리 표지자 검출에 의해, 예를 들어 유세포 분석 또는 다른 수단에 의해, 또는 표지된 항원과 같은 표지된 분자의 결합을 검출함으로써 산정될 수 있다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우에, 단위 용량은 약 1 x 106개 초과의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 약 2 x 109개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를, 예를 들어, 약 2.5 x 107 내지 약 1.2 x 109개의 상기 세포 수 범위내에서, 예컨대, 2.5 x 107, 5 x 107, 1.5 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 8 x 108 또는 1.2 x 109개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우에, 단위 용량은 약 1 x 106개 초과의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 약 2 x 109개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를, 예를 들어, 약 1.0 x 107 내지 약 1.2 x 109개의 상기 세포 수 범위내에서, 예컨대, 1.0 x 107, 1.25 x 107, 1.5 x 107, 2.0 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1.5 x 108, 2.25 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 6.0 x 108, 8 x 108, 또는 1.2 x 109개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우에, 단위 용량은 약 1 x 106개 초과의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 약 2 x 109개 미만의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포 또는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를, 예를 들어, 약 1.0 x 107 내지 약 6.5 x 108개의 상기 세포 수, 약 1.5 x 107 내지 약 6.0 x 108개의 상기 세포 수, 약 1.5 x 107 내지 약 6.5 x 108 개의 상기 세포 수, 약 2.5 x 107 내지 약 6.0 x 108개의 상기 세포 수, 또는 약 5.0 x 107 내지 약 6.0 x 108개의 상기 세포 수 범위내에서 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 단위 용량은 (약) 2.5 x 107 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내지 (약) 1.2 x 109 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC; (약) 5.0 x 107 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); (약) 1.5 x 108 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC를 포함한다(각 수치 포함). 일부 구현예에서, 상기 수는 CD3+ 또는 CD8+, 일부 경우에는 또한 CAR-발현(예를 들어, CAR+) 세포의 총 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1.2 x 109개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 5.0 x 107 내지 (약) 4.5 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, 또는 (약) 1.5 x 108 내지 (약) 3.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+CAR-발현 세포의 세포 수를 포함한다(각 수치 포함).
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 단위 용량은 (약) 1.0 x 107 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내지 (약) 1.2 x 109 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC; (약) 2.0 x 107 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 말초 혈액 단핵 세포(PBMC); (약) 1.5 x 108 CAR-발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108 CAR-발현 T 세포, 총 T 세포 또는 총 PBMC를 포함한다(각 수치 포함). 일부 구현예에서, 상기 수는 CD3+ 또는 CD8+, 일부 경우에는 또한 CAR-발현(예를 들어, CAR+) 세포의 총 수를 기준으로 한다. 일부 구현예에서, 단위 용량은 (약) 1.0 x 107 내지 (약) 1.2 x 109개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 1.5 x 107 내지 (약) 1.2 x 109개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1.2 x 109개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 1.5 x 107 내지 (약) 8.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 8.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 1.5 x 107 내지 (약) 6.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 6.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 5.0 x 107 내지 (약) 6.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, (약) 5.0 x 107 내지 (약) 4.5 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포, 또는 (약) 1.5 x 108 내지 (약) 3.0 x 108개의 CD3+ 또는 CD8+ 총 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포의 세포 수를 포함한다(각 수치 포함).
일부 구현예에서, 단위 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량에 포함된 단위 용량의 CD8+ T 세포는 (약) 1 x 106 내지 (약) 2 x 109개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포, 예를 들어, (약) 5 x 107 내지 (약) 4.5 x 108개의 상기 세포의 범위내, 예컨대 (약) 2.5 x 107, (약) 5 x 107, (약) 1.5 x 108, (약) 3 x 108, (약) 4.5 x 108, (약) 8 x 108, 또는 (약) 1.2 x 109개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 단위 용량에 포함된 단위 용량의 CD8+ T 세포는 (약) 1 x 106 내지 (약) 2 x 109개의 총 재조합 수용체(예를 들어, CAR)-발현 CD8+ 세포, 예를 들어, (약) 1 x 107 내지 (약) 4.5 x 108개의 상기 세포의 범위내, 예컨대 (약) 1.0 x 107, (약) 1.25 x 107, (약) 1.5 x 107, (약) 2.0 x 107, (약) 2.5 x 107, (약) 5 x 107, (약) 7.5 x 107, (약) 1.5 x 108, (약) 3 x 108, (약) 4.5 x 108, (약) 6.0 x 108, (약) 8 x 108, 또는 (약) 1.2 x 109개의 총 상기 세포 수, 또는 전술한 수치 중 임의의 2개 사이의 범위내 수를 포함한다.
일부 구현예에서, 단위 용량의 세포, 예를 들어 재조합 수용체-발현 T 세포가 단일 단위 용량으로 대상체에 투여되거나 2주, 1개월, 3개월, 6개월, 1년 이상의 기간 내에 1회만 투여된다. 일부 구현예에서, 환자는 다중 단위 용량으로 투여받고, 각각의 단위 용량 또는 총 용량은 전술한 수치 중 어느 하나 내에 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 투여를 위한 조작된 세포 또는 투여를 위한 조작된 세포의 조성물은 세포 건강을 나타내거나 이와 일치하는 특성을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 단위 용량의 (약) 또는 적어도 (약) 70, 75, 80, 85 또는 90%의 CAR+ 세포는 세포자연사 표지자의 발현 부재와 같은, 세포 건강 또는 생물학적으로 활성인 CAR 세포를 나타내는 하나 이상의 특성 또는 표현형을 나타낸다.
특정 구현예에서, 표현형은 세포자연사의 부재 및/또는 세포가 세포자연사 과정을 겪고 있다는 표시이거나 이를 포함한다. 세포자연사(apoptosis)는 블리빙(blebbing), 세포 수축, 핵 단편화, 염색질 응축, 염색체 DNA 단편화 및 전체적인 mRNA 붕괴를 포함하여, 특징적인 세포 변화 및 사멸로 이어지는 일련의 고정된 형태적 및 생화학적 이벤트를 포함하는 예정된 세포 사멸 과정이다. 일부 측면에서, 세포자연사의 초기 단계는 특정 카스파제, 예를 들어 2, 8, 9 및 10의 활성화에 의해 표시될 수 있다. 일부 측면에서, 세포자연사의 중간 내지 말기 단계는 막 완전성의 추가 손실, 염색질 응축 및 DNA 단편화를 특징으로 하며, 카스파제 3, 6 및 7의 활성화와 같은 생화학적 이벤트를 포함한다.
특정 구현예에서, 표현형은 예정된 세포 사멸과 관련된 하나 이상의 인자, 예를 들어 세포자연사를 개시하는 것으로 공지된 전-세포자연사 인자, 예를 들어 사멸 수용체 경로의 멤버, 미토콘드리아(내인성) 경로의 활성화된 멤버, 예를 들어 Bax, Bad 및 Bid와 같은 Bcl-2 계열 멤버 및 카스파제의 음성 발현이다. 특정 구현예에서, 표현형은 세포 조성물과 함께 인큐베이션되거나 세포 조성물과 접촉할 때 세포자연사를 겪는 세포에 우선적으로 결합하는 지시약, 예를 들어 아넥신 V 분자 또는 TUNEL 염색에 의한 이의 부재이다. 일부 구현예에서, 표현형은 세포에서 세포자연사 상태를 나타내는 하나 이상의 표지자의 발현이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 표현형은 카스파제 3과 같은 카스파제의 발현 및/또는 활성화 부재이다. 일부 측면에서, 카스파제-3의 활성화는 세포자연사의 증가 또는 재생을 나타낸다. 특정 구현예에서, 카스파제 활성화는 공지된 방법에 의해 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 활성화된 카스파제에 특이적으로 결합하는 (즉, 절단된 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는) 항체는 카스파제 활성화를 검출하는 데 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 표현형은 활성 카스파제 3-이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포자연사의 표지자는 세포자연사와 관련된 세포의 특징을 검출하는 시약이다. 특정 구현예에서, 시약은 아넥신 V 분자이다.
일부 구현예에서, 투여를 위한 조작된 세포를 함유하는 조성물은 세포 건강을 나타내거나 또는 이와 일치하는 표현형을 나타내는 특정 수 또는 양의 세포를 함유한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량에서 CAR-발현 T 세포의 약 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 세포자연사 표지자를 발현하고, 선택적으로 아넥신 V(Annexin V) 또는 활성 카스파제 3(Caspase 3)을 발현한다. 임의의 구현예 중 일부에서, 조작된 T 세포의 단위 용량에서 CAR-발현 T 세포의 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 아넥신 V 또는 활성 카스파제 3을 발현한다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포는 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 면역 세포이다. 일부 구현예에서, 면역 세포는 T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포는 CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포는 CAR T 세포와 같은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 조합이다. 일부 예에서, CD4+ 세포 대 CD8+ 세포(CD4:CD8)의 비율은 1:10, 1:9, 1:8, 1:7, 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1이다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈구 성분채집술 후 및 림프구 고갈 화학 요법 전에 가교 요법(bridging therapy)을 받을 수 있다. 치료 의사는 제공된 조성물 또는 세포의 제조 동안, 예를 들어 질병 관리를 위해 가교 요법이 필요한지를 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 가교 요법은 항체(예를 들어, 다라투무맙) 등의 생물학적 제제를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 개시 전에 가교 요법이 중단된다. 일부 구현예에서, 가교 요법은 림프구 고갈 전 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 7일, 10일, 14일, 21일, 28일, 45일 또는 60일에 전에 중단된다.
세포가 포유 동물(예를 들어, 인간)에게 투여되면, 일부 측면에서 조작된 세포 집단 및/또는 항체의 생물학적 활성은 다수의 공지된 방법 중 어느 하나에 의해 측정된다. 산정 매개변수는 생체 내에서, 예를 들어 영상화에 의해 또는 생체 외 시험에서, 예를 들어 ELISA 또는 유세포 분석에 의해 항원에 조작된 또는 천연 T 세포 또는 다른 면역 세포를 특이적으로 결합하는 것을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 파괴하는 능력은 예를 들어 문헌[Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009), 및 Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포 독성 분석과 같은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법을 이용하여 측정할 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 또한 특정 사이토카인, 예컨대 CD 107a, IFNγ, IL-2 및 TNF의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정할 수 있다. 일부 측면에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 산정하여 측정한다.
특정 구현예에서, 조작된 세포는 이들의 치료적 또는 예방적 효능이 증가하도록 임의의 수의 방식으로 변형된다. 예를 들어, 일부 구현예에서 집단에 의해 발현된 조작된 CAR 또는 TCR은 표적화 모이어티에 링커를 통해 직접적으로 또는 간접적으로 접합된다. 화합물, 예를 들어 CAR 또는 TCR을 표적화 모이어티에 접합시키는 실시는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Wadwa et al., J. Drug Targeting, 3(2):111 (1995), 및 미국 특허 5,087,616]을 참조한다.
B. 병용 요법
GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 및 용도, 예컨대 치료 및 예방 용도를 포함하는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다. GPRC5D-결합 및 BCMA-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 재조합 수용체(예를 들어, CAR)를 발현하는 조작된 세포, 상기 수용체를 발현하는 복수의 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물의 투여 및 용도, 예컨대 치료 및 예방 용도를 포함하는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포는 예컨대 하나 이상의 추가 치료적 개입과 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 임의의 순서로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료적 개입은 예를 들어 항체, 조작된 세포, 수용체 및/또는 제제, 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 세포 및/또는 세포 독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 하나 이상의 추가 제제, 요법 및/또는 치료, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 추가 제제, 요법 및/또는 치료제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 면역 조절제, 면역 관문 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나아제 억제제와 같은 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다. 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 세포 및/또는 조성물 및 하나 이상의 추가 치료적 개입을 포함하는 병용 치료 또는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포는 예컨대 하나 이상의 추가 치료적 개입과 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 임의의 순서로 병용 치료 또는 병용 요법의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가 치료적 개입은 예를 들어 항체, 조작된 세포, 수용체 및/또는 제제, 예컨대 재조합 수용체를 발현하는 세포 및/또는 세포 독성제 또는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 하나 이상의 추가 제제, 요법 및/또는 치료, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 추가 제제, 요법 및/또는 치료제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 면역 조절제, 면역 관문 억제제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 키나아제 억제제와 같은 치료 또는 요법을 위한 하나 이상의 추가 제제의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법은 외과 치료, 이식 및/또는 방사선 요법과 같은 추가 치료를 포함한다. 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 세포 및/또는 조성물 및 하나 이상의 추가 치료적 개입을 포함하는 병용 치료 또는 병용 요법의 방법이 또한 제공된다.
일부 구현예에서, 병용 치료 또는 병용 요법을 위한 추가 제제는 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 치료 효과의 효능 및/또는 안전성을 강화, 증진 및/또는 촉진시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 결합 분자 또는 재조합 수용체를 발현하는 세포의 효능, 생존 또는 지속성을 강화하거나 개선시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 포스파타아제 억제제, 키나아제 억제제, 사이토카인, 면역 조절제, 또는 조절 T(Treg) 세포의 수준 또는 활성을 감소시키는 제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 결합 분자, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 유해 효과를 감소시키거나 개선시킴으로써 안전성을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 동일한 질병, 병태 또는 동반질병을 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 유해 효과 또는 부작용을 개선, 감소 또는 제거할 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 재조합 수용체, 세포 또는 조성물의 투여 전, 동안 또는 후에 치료와 관련된 경미한 부작용을 개선 또는 감소 또는 제거하기 위해 아세트아미노펜과 같은 통증 관리 약물 또는 디펜히드라민과 같은 항히스타민제를 투여할 수 있다. 일부 예에서, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물, 예를 들어, CAR 발현 세포의 투여와 관련된 하나 이상의 독성, 유해 효과 또는 부작용을 감소시키거나 제거하기 위해 적혈구 및 혈소판 주입 및/또는 집락-자극 인자를 투여할 수 있다. 일부 구현예에서, 치료로 인한 부작용을 치료하기 위해 예방적 또는 경험적 항 감염제(예를 들어, 폐포자충폐렴[pneumocystis pneumonia, PCP] 예방을 위한 트리메토프림/설파메톡사졸, 광범위 항생제, 항진균제 또는 열성 호중구 감소증을 위한 항 바이러스제)를 투여할 수 있다. 일부 예에서, 필요한 경우, 치료 결과로서 발생하는 림프구 감소증 및/또는 호중구 감소증을 치료하기 위해 예방법이 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 요법, 치료 또는 제제는 화학 요법, 방사선 요법, 수술, 이식, 입양 세포 요법, 항체, 세포 독성제, 화학 요법제, 사이토카인, 성장 억제제, 항 호르몬제, 키나아제 억제제, 항 혈관 형성제, 심장 보호제, 면역 자극제, 면역 억제제, 면역 관문 억제제, 항생제, 혈관 형성 억제제, 대사 조절제 또는 다른 치료제 또는 이들의 임의의 조합물을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질, 펩타이드, 핵산, 소분자 제제, 세포, 독소, 지질, 탄수화물 또는 이들의 조합물 또는 임의의 다른 유형의 치료제, 예를 들어 방사선이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 수술, 화학 요법, 방사선 요법, 이식, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하는 세포의 투여, 키나아제 억제제, 면역 관문 억제제, mTOR 경로 억제제, 면역 억제제, 면역 조절제, 항체, 면역 제거제, 항체 및/또는 이의 항원 결합 단편, 항체 접합체, 기타 항체 요법, 세포 독소, 스테로이드, 사이토카인, 펩타이드 백신, 호르몬 요법, 항 대사제, 대사 조절제, 칼슘 의존성 포스파타제 칼시뉴린 또는 p70S6 키나아제 FK506을 억제하거나 또는 p70S6 키나아제를 억제하는 약물, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 프로테아좀 억제제, GITR 작용제, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제, 단백질 키나아제 억제제, 종양 용해 바이러스 및/또는 다른 유형의 면역 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제 또는 치료는 골수 이식, 플루다라빈과 같은 화학 요법제를 이용한 T 세포 제거 요법, 외부 빔 방사선 요법(external-beam radiation therapy, XRT), 시클로포스파미드 및/또는 항체 요법이다.
일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 추가 제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 그 뿐만 아니라 추가 제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나아제(Bruton’s tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포(예컨대 종양/암 세포) 상에서 감마 세크레타제의 표적, 예를 들어 GPRC5D의 막내 절단을 억제 또는 감소시키는 감마 세크레타제 억제제와 같은 감마 세크레타제 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어 단클론 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나아제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 추가 제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체 및/또는 조성물, 예를 들어 CAR 발현 세포는 다른 조작된 세포, 예를 들어 다른 CAR 발현 세포와 조합하여 그 뿐만 아니라 추가 제제와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제, 예를 들어 브루톤 티로신 키나아제(Bruton’s tyrosine kinase, Btk)의 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포(예컨대 종양/암 세포) 상에서 감마 세크레타제의 표적, 예를 들어 GPRC5D 및/또는 BCMA의 막내 절단을 억제 또는 감소시키는 감마 세크레타제 억제제와 같은 감마 세크레타제 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 요법, 제제 또는 치료는 세포 독성제 또는 화학 요법제, 생물학적 요법(예를 들어, 항체, 예를 들어 단클론 항체 또는 세포 요법) 또는 억제제(예를 들어, 키나아제 억제제)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 화학 요법제이다. 예시적인 화학 요법제는 안트라사이클린(예를 들어, 리포솜 독소루비신과 같은 독소루비신); 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데신, 비노렐빈); 알킬화제(예를 들어, 시클로포스파미드, 데카르바진, 멜팔란, 이포스파미드, 테모졸로마이드); 면역 세포 항체(예를 들어, 알렘투주맙, 겜투주맙, 리툭시맙, 토시투모맙); 항 대사제(예를 들어, 엽산 길항제, 피리미딘 유사체, 플루다라빈과 같은 퓨린 유사체 및 아데노신 디아미나제 억제제 포함); TNFR 글루코코티코이드 유도 TNFR 관련 단백질(glucocorticoid induced TNFR related protein, GITR) 작용제; 프로테아좀 억제제(예를 들어, 아클라시노마이신 A, 글리오톡신 또는 보르테조밉); 탈리도마이드 또는 탈리도마이드 유도체(예를 들어, 레날리도마이드)와 같은 면역 조절제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 요법 또는 치료는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 추가 요법은 조작된 세포, 예를 들어 추가 CAR 발현 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는 본원에 제공된 조작된 세포, 예를 들어 항-GPRC5D CAR 발현 세포와 동일하거나 상이한 재조합 수용체를 발현하는 CAR 발현 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원 및/또는 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 본원에 기재된 재조합 수용체, 예를 들어 GPRC5D와 동일한 항원의 상이한 에피토프를 인식한다. 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 상이한 항원, 예를 들어 상이한 종양 항원 또는 항원의 조합을 인식한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포 상에서 발현된 재조합 수용체, 예를 들어 CAR은 초기 계통 표지자, 예를 들어 암 줄기세포를 발현하는 암 세포를 표적화하는 반면, 다른 CAR 발현 세포는 후기 계통 표지자를 발현하는 암 세포를 표적화한다. 상기 구현예에서, 추가 조작된 세포는 본원에 기재된 CAR 발현 세포의 투여 전, 투여와 동시 또는 투여 후에 투여된다(예를 들어, 주입). 일부 구현예에서, 추가 조작된 세포는 동종이계 CAR을 발현한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자의 구성은 1차 세포내 신호 전달 도메인 및 2개 이상, 예를 들어 2, 3, 4 또는 5개 이상의 공자극 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는 동일하거나 상이한 1차 세포내 신호 전달 도메인, 동일하거나 상이한 공자극 신호 전달 도메인 또는 동일한 수 또는 상이한 수의 공자극 신호 전달 도메인을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 CAR 분자는 분할된 CAR로서 구성될 수 있고, 여기서 CAR 분자 중 하나는 항원 결합 도메인 및 공자극 도메인(예를 들어, 4-1BB)을 포함하고, 한편 다른 CAR 분자는 항원 결합 도메인 및 1차 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, CD3 제타)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 하나 이상의 항-GPRC5D 결합 분자를 발현하도록 조작된 세포 및/또는 상이한 항원을 표적화하는 추가 결합 분자, 예를 들어 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 본원에, 예를 들어 섹션 I.C.에 기재된 세포 또는 복수의 세포 중 어느 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 상이한 에피토프 및/또는 항원, 예를 들어 질병 또는 병태와 관련된 상이한 항원을 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 다발성 골수종에서 발현되는 제2 또는 추가 항원, 예를 들어 CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및/또는 FcRH5를 표적화하는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 면역 조절제이다. 일부 구현예에서, 병용 요법은 항 종양 면역 반응, 예를 들어 투여된 조작된 세포로부터 항 종양 면역 반응을, 예컨대 면역 억제 신호 전달을 억제하거나 면역 자극 신호 전달을 강화함으로써 자극, 증폭 및/또는 달리 강화할 수 있는 면역 조절제를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 펩타이드, 단백질이거나 소분자이다. 일부 구현예에서, 단백질은 융합 단백질 또는 재조합 단백질일 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 세포, 예컨대 T 세포, B 세포 또는 항원-제시 세포 상에서 발현된 세포 표면 수용체와 같은 면역학적 표적에 결합한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 면역 조절제는 항체 또는 항원 결합 항체 단편, 융합 단백질, 소분자 또는 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예컨대 단클론 항체인 추가 제제와 조합하여 투여된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 면역 관문 경로의 성분을 차단, 억제 또는 방해한다. 면역 체계에는 자체 내성을 유지하고 면역 반응을 조절하는 데 관여하는 다중 억제 경로가 있다. 종양은 특히 종양 항원에 특이적인 T 세포(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264), 예를 들어 CAR 발현 세포와 같은 조작된 세포에 대한 면역 내성의 주요 메커니즘으로 특정 면역 관문 경로를 사용할 수 있다. 많은 상기 면역 관문은 리간드-수용체 상호 작용에 의해 개시되기 때문에, 리간드 및/또는 이들의 수용체에 대한 항체에 의해 쉽게 차단될 수 있다.
따라서, 소분자, 핵산 억제제(예를 들어, RNAi) 또는 항체 분자와 같은 면역 관문 경로를 차단하는 길항 분자를 이용하는 요법은 암 및 다른 질병에 대한 면역 요법의 유망한 수단이 되고 있다. 대다수의 항암제와 대조적으로, 관문 억제제는 반드시 종양 세포를 직접 표적화하는 것이 아니라 면역 체계의 내인성 항 종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 이의 리간드를 표적화한다.
본원에 사용된 바와 같이 용어 “면역 관문 억제제(immune checkpoint inhibitor)”는 하나 이상의 관문 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 관문 단백질은 T-세포 활성화 또는 기능을 조절한다. 상기 단백질은 T-세포 반응의 공자극 또는 억제성 상호 작용을 담당한다. 면역 관문 단백질은 생리적 면역 반응의 자체 내성 및 지속 및 진폭을 조절하고 유지한다. 일부 구현예에서, 대상체에 본원에 기재된 임의의 것과 같은 질병 또는 병태, 예를 들어 암에 대해, 면역 반응, 예를 들어 본원에 제공된 GPRC5D-결합 분자 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 의해 영향을 받는 면역 반응을 향상시키거나 증진시킬 수 있는 추가 제제를 투여할 수 있다.
면역 관문 억제제에는 면역 체계의 억제 경로를 통계적으로 유의한 방식으로 차단 또는 억제하는 임의의 제제가 포함된다. 상기 억제제에는 소분자 억제제가 포함될 수 있거나, 면역 관문 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하고 이를 차단하거나 억제하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 포함될 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극은 면역 관문 경로 성분을 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극에 대해 표적화될 수 있는 예시적인 면역 관문 분자에는 PD-1(CD279), PD-L1(CD274, B7-H1), PDL2(CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3(CD223), TIM-3, 4-1BB(CD137), 4-1BBL(CD137L), GITR(TNFRSF18, AITR), CD40, OX40(CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원(tumor associated antigens, TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4(CD2 분자 패밀리에 속하고 모든 NK, γδ 및 기억 CD8+(αβ) T 세포 상에서 발현됨), CD160(또한 BY55로 지칭), CGEN-15049, CEACAM(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3(CD276), B7-H4(VTCN1), HVEM(TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신 및 형질 전환 성장 인자 수용체(transforming growth factor receptor, TGFR; 예를 들어, TGFR 베타)가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 면역 관문 억제제에는 임의의 상기 분자 중 하나 이상의 활성에 결합하고 이를 차단 또는 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 다른 결합 단백질이 포함된다.
예시적인 면역 관문 억제제에는 트레멜리무맙(CTLA-4 차단 항체; 티실리무맙, CP-675,206으로도 공지), 항-OX40, PD-L1 단클론 항체(항-B7-H1; MEDI4736), MK-3475(PD-1 차단제), 니볼루맙(항-PD-1 항체), CT-011(항-PD-1 항체), BY55 단클론 항체, AMP224(항-PD-L1 항체), BMS-936559(항-PD-L1 항체), MPLDL3280A(항-PD-L1 항체), MSB0010718C(항-PD-L1 항체) 및 이필리무맙(항-CTLA-4 항체; Yervoy®MDX-010 및 MDX-101로도 공지)이 포함된다. 예시적인 면역 조절 항체에는 다클리주맙(Zenapax), 베바시주맙(Avastin®바실리시맙(Basiliximab), 이필리무맙(Ipilimumab), 니볼루맙(Nivolumab), 펨브롤리주맙(pembrolizumab), MPDL3280A, 피딜리주맙(CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A(아테졸리주맙(Atezolizumab)), 트레멜리무맙(tremelimumab), IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙(urelumab), PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C(아벨루맙(Avelumab)), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙(Ulocuplumab), BKT140, 발리루맙(CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 릴리루맙(BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙(Emactuzumab), CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 다른 예시적인 면역조절제에는, 예를 들어, 아푸투주맙(Roche®로부터 이용 가능); 페그필그라스팀(Neulasta®레날리도마이드(CC-5013, Revlimid®탈리도마이드(Thalomid®액티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터루킨 1, 인터루킨 2 및 인터페론 감마, IRX Therapeutics으로부터 이용 가능한 CAS 951209-71-5를 포함하는 인간 사이토카인 혼합물)가 포함된다.
예정된 세포 사멸 1(Programmed cell death 1, PD-1)은 B 세포, NK 세포 및 T 세포에서 발현되는 면역 관문 단백질이다(Shinohara et al., 1995, Genomics 23:704-6; Blank et al., 2007, Cancer Immunol Immunother 56:739-45; Finger et al., 1997, Gene 197:177-87; Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). PD-1의 주요 역할은 감염에 대한 반응으로 염증 중에 말초 조직에서 T 세포의 활성을 제한하는 것뿐만 아니라 자가 면역을 제한하는 것이다. PD-1 발현은 활성화된 T 세포에서 유도되고, 내인성 리간드 중 하나에 PD-1의 결합은 자극성 키나아제를 억제함으로써 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 또한 TCR “정지 신호(stop signal)”를 억제하는 작용을 한다. PD-1은 Treg 세포 상에서 높게 발현되고 리간드의 존재 하에서 이의 증식을 증가시킬 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-PD 1 항체는 흑색종, 비-소세포폐암, 방광암, 전립선암, 대장암, 두경부암, 삼중-음성 유방암, 백혈병, 림프종 및 신장 세포암의 치료에 사용되어 왔다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Lipson et al., 2013, Clin Cancer Res 19:462-8; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:3044-51; Gildener-Leapman et al., 2013, Oral Oncol 49:1089-96; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85). 예시적인 항 PD-1 항체에는 니볼루맙(Opdivo by BMS), 펨브롤리주맙(Keytruda by Merck), 피딜리주맙(CT-011 by Cure Tech), 람브롤리주맙(MK-3475 by Merck) 및 AMP-224(Merck)가 포함되고, 니볼루맙(Opdivo, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 지칭; Bristol-Myers Squibb)은 PD-1을 특이적으로 차단하는 완전한 인간 IgG4 단클론 항체이다. PD-1에 특이적으로 결합하는 니볼루맙(클론 5C4) 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌[미국 특허 8,008,449 및 국제 출원 WO2006/121168]에 기술되어 있다. 피딜리주맙(CT-011; Cure Tech)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG1k 단클론 항체이다. 피딜리주맙(Pidilizumab) 및 다른 인간화된 항 PD-1 단클론 항체는 문헌[국제 출원 WO2009/101611]에 기술되어 있다. 펨브롤리주맙(이전에 람브롤리주맙(lambrolizumab)으로 공지되었고, 키트루다(Keytruda), MK03475로도 지칭; Merck)은 PD-1에 결합하는 인간화된 IgG4 단클론 항체이다. 펨브롤리주맙(Pembrolizumab) 및 다른 인간화된 항-PD-1 항체는 문헌[미국 특허 US 8,354,509 및 국제 출원 WO2009/114335]에 기술되어 있다. 다른 항-PD-1 항체는 다른 것들, 예를 들어 문헌[US 8,609,089, US 2010028330, US 20120114649 및/또는 US 20150210769]에 기술된 항-PD-1 항체들 중에서 AMP 514(Amplimmune)를 포함한다. AMP-224(B7-DCIg; Amplimmune; 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/027827 및 WO2011/066342]에 기술됨)는 PD-1과 B7-H1 사이의 상호 작용을 차단하는 PD-L2 Fc 융합 가용성 수용체이다.
PD-L1(CD274 및 B7-H1로도 공지) 및 PD-L2(CD273 및 B7-DC로도 공지)는 활성화된 T 세포, B 세포, 골수성 세포, 대식 세포 및 일부 유형의 종양 세포에서 발견되는, PD-1에 대한 리간드이다. 항 종양 요법은 항-PD-L1 항체에 중점을 두었다. PD-1 및 PD-L1의 복합체는 CD8+ T 세포의 증식을 억제하고 면역 반응을 감소시킨다(Topalian et al., 2012, N Engl J Med 366:2443-54; Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65). 항-PD-L1 항체는 비-소세포폐암, 흑색종, 대장암(colorectal cancer), 신장 세포암, 췌장암, 위암, 난소암, 유방암 및 혈액 악성 종양의 치료에 사용되어 왔다(Brahmer et al., 2012, N Eng J Med 366:2455-65; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300-9; Radvanyi et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5541; Menzies & Long, 2013, Ther Adv Med Oncol 5:278-85; Berger et al., 2008, Clin Cancer Res 14:13044-51). 예시적인 항-PD-L1 항체에는 MDX-1105(Medarex), MEDI4736(Medimmune), MPDL3280A(Genentech), BMS-935559(Bristol-Myers Squibb) 및 MSB0010718C가 포함된다. MEDI4736(Medimmune)은 PD-L1에 결합하고 PD-1과 리간드의 상호 작용을 억제하는 인간 단클론 항체이다. MDPL3280A(Genentech/Roche)는 PD-L1에 결합하는 인간 Fc 최적화된 IgG1 단클론 항체이다. PD-L1에 대한 MDPL3280A 및 다른 인간 단클론 항체는 문헌[미국 특허 번호 7,943,743 및 미국 출원 공개 번호 20120039906]에 기술되어 있다. 다른 항-PD-L1 결합제에는 YW243.55.S70(국제 출원 WO2010/077634 참조) 및 MDX-1105(BMS-936559로도 지칭 및 예를 들어 , 국제 출원 WO2007/005874에 기재된 항-PD-L1 결합제)가 포함된다.
CD152로도 공지된 세포 독성 T-림프구 관련 항원(Cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen, CTLA-4)은 T-세포 활성화를 조절하는 기능을 하는 공동-억제 분자이다. CTLA-4는 T-세포 상에서 독점적으로 발현되는 면역글로불린 상과(superfamily)의 멤버이다. CTLA-4는 T-세포 활성화를 억제하는 작용을 하며, 헬퍼 T-세포 활성을 억제하고 조절 T-세포 면역 억제 활성을 향상시키는 것으로 보고되어 있다. CTLA-4의 정확한 작용 기전은 여전히 연구 중이지만, CD80 및 CD86에 결합하는 데 CD28을 능가하고 T 세포에 억제제 신호를 능동적으로 전달함으로써 T 세포 활성화를 억제하는 것으로 제안되었다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 항-CTLA-4 항체는 흑색종, 전립선암, 소세포폐암, 비-소세포폐암의 치료를 위한 임상 시험에서 사용되어 왔다(Robert & Ghiringhelli, 2009, Oncologist 14:848-61; Ott et al., 2013, Clin Cancer Res 19:5300; Weber, 2007, Oncologist 12:864-72; Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89). 항-CTLA-4의 중요한 특징은 항 종양 효과의 동역학이며, 생리적 반응에 필요한 초기 치료 후 최대 6개월의 지연 기간이 있다. 일부 경우에, 치료 개시 후 감소가 보이기 전에 종양 크기가 실제로 증가할 수 있다(Pardoll (2012) Nature Reviews Cancer 12:252-264). 예시적인 항-CTLA-4 항체에는 이필리무맙(Bristol-Myers Squibb) 및 트레멜리무맙(Pfizer)이 포함된다. 이필리무맙(ipilimumab)은 최근 전이성 흑색종 치료에 대한 FDA 승인을 받았다(Wada et al., 2013, J Transl Med 11:89).
CD223으로도 공지된, 림프구 활성화 유전자-3(Lymphocyte activation gene-3, LAG-3)은 또 다른 면역 관문 단백질이다. LAG-3은 림프구 활성의 억제 및 일부 경우에 림프구 아네르기(anergy)의 유도와 관련되어 있다. LAG-3은 B 세포, NK 세포 및 수지상 세포를 포함한 면역 체계의 다양한 세포 상에서 발현된다. LAG-3은 MHC 클래스 II 수용체에 대한 천연 리간드이며, 이는 강력한 면역 억제 활성이 부여된 세포를 포함하여 흑색종 침윤성 T 세포 상에서 실질적으로 발현된다. 예시적인 항-LAG-3 항체에는 LAG-3을 표적화하는 단클론 항체인 BMS-986016(Bristol-Myers Squib)이 포함된다. IMP701(Immutep)은 LAG-3 항체 길항제이고 IMP731(Immutep 및 GlaxoSmithKline)은 LAG-3 항체를 고갈시킨다. 다른 LAG-3 억제제에는 MHC 클래스 II 분자에 결합하고 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC)를 활성화시키는 LAG-3의 가용성 부분 및 Ig의 재조합 융합 단백질인 IMP321(Immutep)이 포함된다. 다른 항체는 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO2010/019570 및 미국 출원 2015/0259420]에 기술되어 있다.
활성화된 Th1 세포 상에서 초기에 확인된 T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인-3(T-cell immunoglobulin domain and mucin domain-3, TIM-3)은 면역 반응의 음성 조절자인 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 T-세포 매개 항 종양 면역을 촉진하고 다양한 마우스 종양 모델에서 항 종양 활성을 갖는다. 다른 면역 치료제, 예컨대 TSR-042, 항 CD137 항체 및 기타와 TIM-3 봉쇄의 조합은 항 종양 효과를 증가시키는 데 부가적이거나 상승적일 수 있다. TIM-3 발현은 흑색종, NSCLC 및 신장암을 포함하는 다수의 상이한 종양 유형과 관련이 있으며, 또한 종양내 TIM-3의 발현은 NSCLC, 자궁경부암 및 위암을 포함하는 다양한 종양 유형에 걸친 나쁜 예후와 상관 관계가 있는 것으로 나타났다. TIM-3의 봉쇄는 또한, 다수의 만성 바이러스성 질병에 대한 면역 증가를 촉진시키는데 관심이 있다. TIM-3은 또한 갈렉틴-9(galectin-9), 포스파티딜세린(phosphatidylserine) 및 HMGB1을 포함하는 다수의 리간드와 상호 작용하는 것으로 나타났지만, 상기 중 어느 것이(있는 경우) 항 종양 반응의 조절과 관련이 있는지는 현재 명확하지 않다. 일부 구현예에서, TIM-3을 표적화하는 항체, 항체 단편, 소분자 또는 펩타이드 억제제는 TIM-3의 IgV 도메인에 결합하여 이의 리간드와의 상호 작용을 억제할 수 있다. TIM-3을 억제하는 예시적인 항체 및 펩타이드는 문헌[미국 출원 US 2015/0218274, 국제 출원 WO2013/006490 및 미국 출원 US 2010/0247521]에 기술되어 있다. 다른 항-TIM-3 항체에는 RMT3-23의 인간화된 버전(Ngiow et al., 2011, Cancer Res, 71:3540-3551) 및 클론 8B.2C12(Monney et al., 2002, Nature, 415:536-541)가 포함된다. TIM-3 및 PD-1을 억제하는 이중 특이적 항체는 문헌[미국 출원 US 2013/0156774]에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CEACAM 억제제(예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5 억제제)이다. 일부 구현예에서, CEACAM의 억제제는 항-CEACAM 항체 분자이다. 예시적인 항-CEACAM-1 항체, 예를 들어 단클론 항체 34B1, 26H7 및 5F4는 문헌[국제 출원 WO 2010/125571, WO 2013/082366, WO 2014/059251 및 WO 2014/022332]에 기술되어 있으며; 또는 이의 재조합 형태는 예를 들어 문헌[미국 출원 US 2004/0047858, US 7,132,255 및 국제 출원 WO 99/052552]에 기술된 바와 같다. 일부 구현예에서, 항-CEACAM 항체는, 예를 들어 문헌[Zheng et al. PLoS One. (2011) 6(6): e21146]에 기술된 바와 같이 CEACAM-5에 결합하거나, 예를 들어, 문헌[국제 출원 WO 2013/054331 및 미국 출원 US 2014/0271618]에 기술된 바와 같이 CEACAM-1 및 CEACAM-5와 교차 반응한다.
CD137로도 공지된 4-1BB는 TNFR 상과(superfamily)에 속하는 막관통 당단백질이다. 4-1BB 수용체는 활성화된 T 세포 및 B 세포 및 단핵구 상에 존재한다. 예시적인 항-4-1BB 항체는 잠재적 면역자극 및 항종양제 활성을 갖는 우렐루맙(BMS-663513)이다.
OX40 및 CD134로도 공지된 종양 괴사 인자 수용체 상과(superfamily), 멤버 4(TNFRSF4)는 TNFR 상과(superfamily)의 다른 멤버이다. OX40은 휴지기 나이브 T 세포(naive T cell)에서 구성적으로 발현되지 않으며, 2차 공자극 면역 관문 분자로서 작용한다. 예시적인 항-OX40 항체는 MEDI6469 및 MOXR0916(RG7888, Genentech)이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 조절 T 세포(Treg) 집단을 감소시키는 분자를 포함한다. Treg 세포의 수를 감소(예를 들어, 고갈)시키는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 CD25 고갈, 시클로포스파미드 투여 및 글루코코티코이드-유도 TNFR 패밀리 관련 유전자(Glucocorticoid-induced TNFR family related gene, GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역 체계를 강화시키는 활성화된 T 세포 상에서 상향 조절되는 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. 성분채집술 전 또는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여 전에, 대상체에서 Treg 세포의 수를 감소시키는 것은, 종양 미세 환경에서 원치 않는 면역 세포(예를 들어, Treg)의 수를 감소시키고, 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제 및/또는 조절 T 세포(Treg)를 고갈시키는 GITR 항체와 같은, GITR을 표적화하고/거나 GITR 기능을 조절하는 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 시클로포스파미드(cyclophosphamide)를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능을 조절하는 분자(예를 들어, GITR 작용제 및/또는 GITR 항체 고갈 Treg)는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제는 세포의 성분채집술 전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드 및 항-GITR 항체는 조작된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 투여(예를 들어, 주입 또는 재주입) 전에 또는 세포의 성분채집술 전에 대상체에 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 GITR 작용제이다. 예시적인 GITR 작용제는 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예컨대 예를 들어 미국 특허 번호 6,111,090, 유럽 특허 번호 090505B 1, 미국 특허 번호 8,586,023, PCT 공개 번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기술된 GITR 융합 단백질 또는 예를 들어, 미국 특허 번호 7,025,962, 유럽 특허 번호 1947183B 1, 미국 특허 번호 7,812,135, 미국 특허 번호 8,388,967, 미국 특허 번호 8,591,886, 유럽 특허 번호 EP1866339, PCT 공개 번호 WO 2011/028683, PCT 공개 번호 WO 2013/039954, PCT 공개 번호 WO2005/007190, PCT 공개 번호 WO 2007/133822, PCT 공개 번호 WO2005/055808, PCT 공개 번호 WO 99/40196, PCT 공개 번호 WO 2001/03720, PCT 공개 번호 WO99/20758, PCT 공개 번호 WO2006/083289, PCT 공개 번호 WO 2005/115451, 미국 특허 번호 7,618,632 및 PCT 공개 번호 WO 2011/051726에 기술된 항-GITR 항체를 포함한다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 투여된 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포의 종양 침윤 또는 이행(transmigration)을 향상시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD40, 예컨대 CD40L, 예를 들어 재조합 인간 CD40L을 자극한다. 분화 클러스터 40(CD40)은 또한 TNFR 상과(superfamily)의 멤버이다. CD40은 항원-제시 세포에서 발견되는 공자극 단백질이며 광범위한 면역 및 염증 반응을 매개한다. CD40은 또한 일부 악성 종양에서 발현되어 증식을 촉진한다. 예시적인 항-CD40 항체는 다세투주맙(SGN-40), 루카투무맙(Novartis, 길항제), SEA-CD40(Seattle Genetics) 및 CP-870,893이다. 일부 구현예에서, 종양 침윤을 향상시키는 추가 제제는 티로신 키나아제 억제제, 수니티닙(sunitnib), 헤파라나제(heparanase) 및/또는 케모카인 수용체, 예컨대 CCR2, CCR4 및 CCR7을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 탈리도마이드 약물 또는 이의 유사체 및/또는 이의 유도체, 예컨대 레날리도마이드, 포말리도마이드(pomalidomide) 또는 아프레밀라스트(apremilast)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Bertilaccio et al., Blood (2013) 122:4171, Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940; Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644 및 Kuramitsu et al., Cancer Gene Therapy (2015) 22:487-495]를 참조한다. 레날리도마이드((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-디하이드로-2H-이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-디온; 레블리미드(Revlimid)로도 공지)는 탈리도마이드의 합성 유도체이고, T 세포와 항원 제시 세포(antigen presenting cell, APC) 사이의 면역 시냅스 형성의 시행을 포함하여 다수의 면역 조절 효과를 갖는다. 예를 들어, 일부 경우에, 레날리도마이드는 T 세포 반응을 조절하고, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 인터루킨(IL)-2 생성의 증가를 초래하고, Th2에서 Th1로 T 헬퍼(Th) 반응의 이동을 유도하고, T 세포의 조절(Treg) 서브세트의 팽창을 억제하고, 여포성 림프종 및 만성 림프구성 백혈병(chronic lymphocytic leukemia, CLL)에서 면역 시냅스의 기능을 향상시킨다(Otahal et al., Oncoimmunology (2016) 5(4):e1115940). 레날리도마이드는 또한, 다발성 골수종(MM) 환자에게서 직접적인 종양파괴 활성을 가지며, 림프 조직의 미세 환경에서 발견되는 간호사 유사 세포(nurse-like cell)와 같은 지지 세포에 영향을 미침으로써 CLL 종양 세포의 생존을 직접 및 간접적으로 조절한다. 레날리도마이드는 또한 CD3 결찰 또는 수지상 세포-매개 활성화를 통한 T 세포의 활성화에 반응하여 T-세포 증식 및 인터페론-γ 생산을 강화할 수 있다. 레날리도마이드는 또한, 악성 B 세포가 CD80, CD86, HLA-DR, CD95 및 CD40과 같은 더 높은 수준의 면역 자극 분자를 발현하도록 유도할 수 있다(Fecteau et al., Blood (2014) 124(10):1637-1644). 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 1mg 내지 약 20mg, 예를 들어, 약 1mg 내지 약 10mg, 약 2.5mg 내지 약 7.5mg, 약 5mg 내지 약 15mg, 예컨대 약 5mg, 10mg, 15mg 또는 20mg의 투여량으로 매일 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 약 10μg/kg 내지 5mg/kg, 예를 들어, 약 100μg/kg 내지 약 2mg/kg, 약 200μg/kg 내지 약 1mg/kg, 약 400μg/kg 내지 약 600μg/kg, 예컨대 약 500μg/kg의 단위 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 리툭시맙(rituximab)은 약 350-550mg/m2(예를 들어, 350-375, 375-400, 400-425, 425-450, 450-475 또는 475-500mg/m2)의 투여량으로, 예를 들어 정맥 내 투여된다. 일부 구현예에서, 레날리도마이드는 낮은 단위 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1의 억제제 또는 이들의 조합물 중에서 선택된 하나 이상의 B 세포 억제제이다. 일부 구현예에서, B-세포 억제제는 항체(예를 들어, 단일- 또는 이중 특이적 항체) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 표적, 예를 들어 CD10, CD19, CD20, CD22, CD34, CD123, CD79a, CD79b, CD179b, FLT-3 또는 ROR1을 표적으로 하는 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD20 억제제, 예를 들어 항-CD20 항체(예를 들어, 항-CD20 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD20 항체에는 리툭시맙(rituximab), 오파투무맙(ofatumumab), 옥렐리주맙(ocrelizumab; GA101 또는 RO5072759로도 공지), 벨투주맙(veltuzumab), 오비누투주맙(obinutuzumab), TRU-015 (Trubion Pharmaceuticals), 오카라투주맙(ocaratuzumab; AME-133v로도 공지) 및 Pro131921(Genentech)이 포함되지만 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 문헌[Lim et al. Haematologica. (2010) 95(1):135-43]을 참조한다. 일부 구현예에서, 항-CD20 항체는 리툭시맙을 포함한다. 리툭시맙은 CD20에 결합하고 CD20 발현 세포의 세포 용해를 유발하는 키메라 마우스/인간 단클론 항체 IgG1 카파이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 리툭시맙을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20 억제제는 소분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 CD22 억제제, 예를 들어 항-CD22 항체(예를 들어, 항-CD22 단일- 또는 이중-특이적 항체) 또는 이의 단편이다. 예시적인 항-CD22 항체는 에프라투주맙 및 RFB4를 포함한다. 일부 구현예에서, CD22 억제제는 소분자이다. 일부 구현예에서, 항체는 선택적으로 화학 요법제와 같은 제2 제제에 접합된 단일 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 단클론 항체-MMAE 접합체(예를 들어, DCDT2980S)이다. 일부 구현예에서, 항체는 항-CD22 항체의 scFv, 예를 들어 항체 RFB4의 scFv이다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(Pseudomonas exotoxin-A)(예를 들어, BL22)의 전부 또는 단편에 융합된다. 일부 구현예에서, scFv는 슈도모나스 외독소-A(예를 들어, 목세투모맙 파수도톡스(moxetumomab pasudotox))의 전부 또는 단편(예를 들어, 38 kDa 단편)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 선택적으로 독소에 접합된, 항-CD19/CD22 이중 특이적 항체이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 항-CD22 항체는 디프테리아 독소(diphtheria toxin, DT)의 전부 또는 일부, 예를 들어, 디프테리아 독소(DT)의 처음 389개 아미노산, DT 390, 예를 들어 리간드-지향 독소(ligand-directed toxin), 예컨대 DT2219ARL에 선택적으로 연결된 항-CD19/CD22 이중 특이적 부분(예를 들어, 인간 CD19 및 CD22를 인식하는 2개의 scFv 리간드)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이중 특이적 부분(예를 들어, 항-CD19/항-CD22)은 독소, 예컨대 탈글리코실화 리신 A 사슬(예를 들어, 콤보톡스)에 연결된다.
일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 사이토카인이거나 종양 미세 환경에서 사이토카인의 발현 증가를 유도하는 제제이다. 사이토카인은 T 세포 팽창, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 한다. 본원에 제공된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물을 받는 대상체에게 투여될 수 있는 사이토카인에는 IL-2, IL-4, IL-7, IL- 9, IL-15, IL-18 및 IL-21 중 하나 이상이 포함된다. 본원에 제공된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, BCMA-결합 재조합 수용체, GPRC5D- 및 BCMA-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물을 받는 대상체에게 투여될 수 있는 사이토카인에는 IL-2, IL-4, IL-7, IL- 9, IL-15, IL-18 및 IL-21 중 하나 이상이 포함된다. 일부 구현예에서, 투여되는 사이토카인은 IL-7, IL-15 또는 IL-21 또는 이들의 조합물이다. 일부 구현예에서, 대상체에 대한 사이토카인 투여는 투여된 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포의 반응 또는 항-종양 활성 등 특정 측면을 향상할 수 있다.
사이토카인은 세포 간 매개체로서 다른 세포 상에서 작용하는, 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질을 지칭할 수 있다. 상기 사이토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩타이드 호르몬이다. 사이토카인 중에는 성장 호르몬, 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬 및 소 성장 호르몬(bovine growth hormone); 부갑상선 호르몬(parathyroid hormone); 티록신(thyroxine); 인슐린; 프로인슐린(proinsulin); 릴랙신(relaxin); 프로릴랙신(prorelaxin); 당단백질 호르몬(glycoprotein hormones), 예컨대 여포 자극 호르몬(FSH), 갑상선 자극 호르몬(TSH) 및 황체 형성 호르몬(LH); 간 성장 인자(hepatic growth factor); 섬유아세포 성장 인자(fibroblast growth factor); 프로락틴(prolactin); 태반성 락토겐(placental lactogen); 종양 괴사 인자-알파 및 -베타(tumor necrosis factor-alpha and -beta); 뮬러관 억제 물질(mullerian-inhibiting substance); 마우스 성선자극호르몬 관련 펩타이드(mouse gonadotropin-associated peptide); 인히빈(inhibin); 액티빈(activin); 혈관 내피 성장 인자; 인테그린(integrin); 트롬보포이에틴(TPO); 신경 성장 인자, 예컨대 NGF-베타; 혈소판 성장 인자; TGF-알파 및 TGF-베타 등의 형질 전환 성장 인자(TGF); 인슐린 유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골 유도성 인자(osteoinductive factor); 인터페론-알파, 베타 및 -감마와 같은 인터페론; 대식 세포-CSF(M-CSF)와 같은 집락 자극 인자(colony stimulating factor, CSF); 과립구-대식 세포-CSF(GM-CSF); 과립구-CSF(G-CSF); 인터루킨(IL), 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; TNF-알파 또는 TNF-베타와 같은 종양 괴사 인자인 IL-15; 및 LIF 및 키트 리간드(kit ligand, KL)를 포함한 다른 폴리펩타이드 인자가 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 사이토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 천연(native) 서열 사이토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다. 예를 들어, 면역 조절제는 사이토카인이고 사이토카인은 IL-4, TNF-α, GM-CSF 또는 IL-2이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 인터루킨-15(IL-15) 폴리펩타이드, 인터루킨-15 수용체 알파(IL-15Rα) 폴리펩타이드 또는 이들의 조합물, 예를 들어 hetIL-15(Admune Therapeutics, LLC)를 포함한다. hetIL-15는 IL-15 및 IL-15Rα의 이종이량체성(heterodimeric) 비공유 복합체이다. hetIL-15는 예를 들어, 문헌[U.S. 8,124,084, U.S. 2012/0177598, U.S. 2009/0082299, U.S. 2012/0141413 및 U.S. 2011/0081311]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 하나 이상의 사이토카인을 함유할 수 있다. 예를 들어, 인터루킨은 천연 사이토카인의 조합물인 백혈구 인터루킨 주사(Multikine)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 면역 조절제는 톨-유사 수용체(Toll-like receptor, TLR) 작용제, 보조제 또는 사이토카인이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 요법과 관련된 하나 이상의 독성 또는 부작용을 개선 또는 중화시키는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 스테로이드(예를 들어, 코르티코스테로이드), TNFα 억제제 및 IL-6 억제제 중에서 선택된다. TNFα 억제제의 예는 항-TNFα 항체 분자, 예컨대 인플릭시맙(infliximab), 아달리무맙(adalimumab), 세르톨리주맙 페골(certolizumab pegol) 및 골리무맙(golimumab)이다. TNFα 억제제의 다른 예는 엔타네르셉트(entanercept)와 같은 융합 단백질이다. TNFα의 소분자 억제제는 잔틴(xanthine) 유도체(예를 들어, 펜톡시필린(pentoxifylline)) 및 부프로피온(bupropion)을 포함하나 이에 제한되지 않는다. IL-6 억제제의 예는 항-IL-6 항체 분자, 예컨대 토실리주맙(tocilizumab), 사릴루맙(sarilumab), 엘실리모맙(elsilimomab), CNTO 328, ALD518/BMS-945429, CNTO 136, CPSI-2364, CDP6038, VX30, ARGX-109, FE301 및 FM101이다. 일부 구현예에서, 항-IL-6 항체 분자는 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아나킨라(anakinra)와 같은 IL-1R 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수준 및/또는 아데노신 경로 성분의 조절제이다. 아데노신은 신체에서 면역 조절제로서 기능할 수 있다. 예를 들어, 아데노신 수용체 하위 유형(subtypes)을 비선택적으로 활성화시키는 아데노신 및 일부 아데노신 유사체는 염증성 산화 산물의 호중구 생성을 감소시킨다(Cronstein et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 451:291, 1985; Roberts et al., Biochem. J., 227:669, 1985; Schrier et al., J. Immunol. 137:3284, 1986; Cronstein et al., Clinical Immunol. Immunopath. 42:76, 1987). 일부 경우에, 세포외 아데노신 또는 아데노신 유사체의 농도는 특정 환경, 예를 들어, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)에서 증가할 수 있다. 일부 경우에, 아데노신 또는 아데노신 유사체 신호 전달은 저산소증(hypoxia) 또는 저산소증과 관련된 인자 또는 이의 조절, 예를 들어 저산소증 유도성 인자(hypoxia inducible factor, HIF)에 의존한다. 일부 구현예에서, 아데노신 신호 전달의 증가는 세포내 cAMP 및 cAMP-의존성 단백질 키나아제를 증가시켜, 염증-전 사이토카인 생성의 억제를 초래할 수 있고, 면역 억제 분자의 합성 및 Treg의 발달로 이어질 수 있다(Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605). 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신, 아데노신 유사체 및/또는 아데노신 신호 전달의 면역 억제 효과를 감소시키거나 역효과를 낼 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 구동 A2-아데노신성 T 세포(hypoxia-driven A2-adenosinergic T cell) 면역 억제를 감소시키거나 역전시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체의 길항제, 세포외 아데노신-퇴화 작용제, CD39/CD73 체외 효소에 의한 아데노신 생성 억제제 및 저산소증-HIF-1α 신호 전달 억제제 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제이다.
세포외 아데노신의 억제제(예컨대, 세포외 아데노신의 형성을 방지, 분해, 불활성화 및/또는 감소시키는 제제) 및/또는 아데노신 수용체 억제제(예컨대, 아데노신 수용체 길항제)에 의한 세포외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제 또는 감소는 대식 세포, 호중구, 과립구, 수지상 세포, T- 및/또는 B 세포-매개 반응과 같은 면역 반응을 강화할 수 있다. 또한, Gs 단백질 매개 cAMP 의존성 세포내 경로 억제제 및 아데노신 수용체-촉발 Gi 단백질 매개 세포내 경로 억제제는 또한 급성 및 만성 염증을 증가시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제, 예를 들어 아데노신 수용체 A2a, A2b, A1 및 A3 중 하나 이상의 길항제 또는 작용제이다. 아데닐레이트 시클라아제(adenylate cyclase) 활성을 각각 A1 및 A3은 억제하고, A2a 및 A2b는 자극한다. A2a, A2b 및 A3과 같은 특정 아데노신 수용체는 염증 중에 면역 반응을 억제하거나 감소시킬 수 있다. 따라서, 길항성 면역 억제 아데노신 수용체는 면역 반응, 예를 들어, 투여된 세포, 예를 들어 CAR- 발현 T 세포로부터의 면역 반응을 증강, 증진 또는 향상시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 및 아데노신 수용체를 통한 아데노신-촉발 신호 전달의 생성을 억제한다. 예를 들어, 면역 반응의 강화, 국소 조직 염증 및 표적화된 조직 파괴는, 아데노신 생성 국소 조직 저산소증을 억제 또는 감소시킴으로써; 축적된 세포외 아데노신을 분해(또는 불활성화)함으로써; 면역 세포 상에서 아데노신 수용체의 발현을 방지하거나 감소시킴으로써; 및/또는 아데노신 수용체를 통해 아데노신 리간드에 의한 신호 전달을 억제/길항함으로써, 향상될 수 있다.
길항제는 생물학적 반응을 유발하지 않으면서 세포 수용체에 결합하는 제제로서 다른 것의 작용을 무효화하는 경향이 있는 임의의 물질이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3 수용체에 대한 길항제인 화학적 화합물이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체에 결합하지만 Gi 단백질 의존성 세포내 경로를 촉발하지 않는, 펩타이드 또는 펩타이드 유사체이다. 예시적인 길항제는 문헌[미국 특허 번호 5,565,566; 5,545, 627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 A2a 길항제와 같은 A2 수용체(A2R) 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제에는 KW6002(이스트라데필린(istradefyline)), SCH58261, 카페인(caffeine), 파라잔틴(paraxanthine), 3,7-디메틸-1-프로파르길잔틴(DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데난트(preladenant), 비파데난트(vipadenant, BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP, 및 A2R 발현을 표적화하는 억제성 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA, 또는 A2R을 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 포함된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 문헌[Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8,883,500; US 20140377240; WO02/055083; US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279]에 기재된 A2R 길항제이다.
일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체를 암호화하는 mRNA에 특이적으로 결합하는, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자(예를 들어, 소형 억제성 RNA(small inhibitory RNA, siRNA)) 또는 촉매 핵산 분자(예를 들어, 리보자임)이다. 일부 구현예에서, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산 분자는 A2a, A2b 또는 A3을 암호화하는 핵산에 결합한다. 일부 구현예에서, 역배열 분자, 억제성 핵산 분자 또는 촉매 핵산은 아데노신 수용체의 생화학적 경로 하류를 표적화한다. 예를 들어, 역배열 분자 또는 촉매 핵산은 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로에 관여하는 효소를 억제할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 수용체, 예컨대 A2a, A2b 또는 A3의 우성 음성 돌연변이체 형태를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포외 아데노신을 억제하는 추가 제제는, 세포외 아데노신을 비기능성으로 만드는(또는 상기 기능을 감소시키는) 제제, 예컨대, 아데노신의 구조를 변형시켜 아데노신 수용체를 통해 신호를 전달하는 아데노신의 능력을 억제하는 물질을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신 생성 또는 아데노신 분해 효소, 이의 변형된 형태 또는 이의 조절제이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신에 선택적으로 결합하여 파괴하고, 이렇게 하여 내인성으로 형성된 아데노신의 아데노신 수용체를 통한 신호 전달 및 염증을 종결시키는 능력을 파괴 또는 현저히 감소시키는, 효소(예를 들어, 아데노신 탈아미노효소) 또는 다른 촉매 분자이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 아데노신 탈아미노효소(ADA) 또는 이의 변형된 형태, 예를 들어 재조합 ADA 및/또는 폴리에틸렌 글리콜-변형 ADA(ADA-PEG)이며, 이는 세포외 아데노신의 국소 조직 축적을 억제할 수 있다. ADA-PEG는 ADA SCID 환자의 치료에 사용되어 왔다(Hershfield (1995) Hum Mutat. 5:107). 일부 구현예에서, 세포외 아데노신을 억제하는 제제는 세포외 아데노신의 형성을 방지 또는 감소시키고/거나 세포외 아데노신의 축적을 방지 또는 감소시켜 아데노신의 면역 억제 효과를 파괴하거나 실질적으로 감소시키는 제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵 전사 인자의 조절제를 포함하여, 전-염증성 분자의 합성 및/또는 분비 조절에 관여하는 효소 및 단백질을 특이적으로 억제한다. 아데노신 수용체 발현 또는 Gs 단백질- 또는 Gi 단백질-의존성 세포내 경로 또는 cAMP 의존성 세포내 경로 발현의 억제는 면역 반응의 증가/향상을 초래할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신을 생성 또는 생산하는 체외 효소(ectoenzyme)를 표적화할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포외 아데노신을 생성하기 위해 협력하여 기능하는 CD39 및 CD73 체외 효소를 표적화한다. CD39(엑토뉴클레오사이드 트리포스페이트 디포스포하이드로라제로도 불림)는 세포외 ATP(또는 ADP)를 5’AMP로 전환시킨다. 이어서, CD73(5’뉴클레오티다제로도 불림)은 5’AΜΡ를 아데노신으로 전환시킨다. CD39의 활성은 NDP 키나아제 및 아데닐레이트 키나아제의 작용에 의해 가역적이지만, CD73의 활성은 비가역적이다. CD39 및 CD73은 내피 세포 및 Treg를 포함하는 종양 간질 세포(tumor stromal cell) 및 다수의 암 세포에서도 발현된다. 예를 들어, 내피 세포에서 CD39 및 CD73의 발현은 종양 미세 환경의 저산소 조건 하에서 증가된다. 종양 저산소증은 산소 전달을 약화시키는 불충분한 혈액 공급 및 조직화되지 않은 종양 혈관 구조로부터 생길 수 있다(Carroll and Ashcroft (2005), Expert. Rev. Mol. Med. 7(6):1-16). 저산소증은 또한 아데노신을 AMP로 전환시키는 아데닐레이트 키나아제(adenylate kinase, AK)를 억제하여 매우 높은 세포외 아데노신 농도를 야기한다. 따라서, 아데노신은 고형 종양에서 또는 주위에서, 종양 미세 환경(tumor microenvironment, TME)을 빈번하게 발생시키는 상태인 저산소증에 반응하여 고농도로 방출된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항-CD39 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 항-CD73 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 MEDI9447 또는 TY/23, α-β-메틸렌-아데노신 디포스페이트(ADP), ARL 67156, POM-3, IPH52 중 하나 이상이다(예를 들어, 문헌[Allard et al. Clin Cancer Res (2013) 19(20):5626-5635; Hausler et al., Am J Transl Res (2014) 6(2):129-139; Zhang, B., Cancer Res. (2010) 70(16):6407-6411]을 참조한다).
일부 구현예에서, 추가 제제는 저산소증 유도성 인자 1 알파(hypoxia inducible factor 1 alpha, HIF-1α) 신호 전달의 억제제이다. HIF-1α의 예시적인 억제제는 디곡신(digoxin), 아크리플라빈(acriflavine), 시르투인-7(sirtuin-7) 및 가네테스핍(ganetespib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 단백질 티로신 포스파타아제 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 단백질 티로신 포스파타아제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는 SHP-1 억제제, 예를 들어, 본원에 기재된 SHP-1 억제제, 예컨대 스티보글루코네이트 나트륨(sodium stibogluconate)이다. 일부 구현예에서, 단백질 티로신 포스파타아제 억제제는 SHP-2 억제제, 예를 들어 본원에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 키나아제 억제제이다. CDK4 키나아제 억제제, BTK 키나아제 억제제, MNK 키나아제 억제제 또는 DGK 키나아제 억제제와 같은 키나아제 억제제는 종양 세포에 존재하는 구성적인 활성 생존 경로를 조절하고/거나 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 브루톤 티로신 키나아제(Bruton’s tyrosine kinase, BTK) 억제제, 예를 들어 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나아제(PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 CDK4 억제제, 예를 들어 CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 mTOR 억제제, 예컨대 예를 들어 라파마이신, 라파마이신 유사체, OSI-027이다. mTOR 억제제는 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어 mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 MNK 억제제 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 다른 예시적인 키나아제 억제제는 AKT 억제제 페리포신(perifosine), mTOR 억제제 템시로리무스(temsirolimus), Src 키나아제 억제제 다사티닙(dasatinib) 및 포스타마티닙(fostamatinib), JAK2 억제제 파크리티닙(pacritinib) 및 룩솔리티닙(ruxolitinib), PKCβ억제제 엔자스타우린(enzastaurin) 및 브리오스타틴(bryostatin) 및 AAK 억제제 알리세르팁(alisertib)을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 이브루티닙(PCI- 32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된 BTK 억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터루킨-2-유도성 키나아제(ITK)의 키나아제 활성을 감소시키거나 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13 중에서 선택된다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로-2-페-1-논; PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어 이브루티닙(PCI-32765)이고, 이브루티닙은 어떤 시간의 기간 동안 매일, 예를 들어 21일 주기 동안 매일 또는 28일 주기 동안 매일, 약 250mg, 300mg, 350mg, 400mg, 420mg, 440mg, 460mg, 480mg, 500mg, 520mg, 540mg, 560mg, 580mg, 600mg(예를 들어, 250mg, 420mg 또는 560mg)의 단위 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 이상의 주기로 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 문헌[국제 출원 WO 2015/079417]에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십(idelalisib, PI3Kδ 억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 라파마이신(mTOR)의 포유류 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나아제 억제제는 템시로리무스(temsirolimus); 리다포로리무스(ridaforolimus, AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버로리무스(everolimus, RAD001); 라파마이신(AY22989); 시마피모드(simapimod); AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765 중에서 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 베무라페닙(vemurafenib), 다브라페닙(dabrafenib) 및 트라메티닙(trametinib)과 같은 미토겐-활성화 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 전- 또는 항-세포자연사(apoptotic) 단백질을 조절하는 제제이다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 B-세포 림프종 2(B-cell lymphoma 2, BCL-2) 억제제(예를 들어, ABT-199 또는 GDC-0199로도 명명되는 베네토클락스(venetoclax); 또는 ABT-737)를 포함한다. 베네토클락스는 항-세포자연사 단백질인 BCL-2를 억제하는, 소분자(4-(4-{[2-(4-클로로페닐)-4,4-디메틸-1-사이클로헥세-1-닐]메틸}-1-피페라지닐)-N-({3-니트로-4-[(테트라하이드로-2H-피란-4-일메틸)아미노]페닐}설포닐)-2-(1H-피롤로[2,3-b]피리딘-5-일옥시)벤즈아마이드)이다. 전- 또는 항-세포자연사 단백질을 조절하는 다른 제제는 최대 효능을 위한 BCL-2 억제제 ABT-737, 나비토클락스(navitoclax, ABT-263); Mcl-1 siRNA 또는 Mcl-1 억제제 레티노이드 N-(4-하이드록시페닐) 레틴아마이드(4-HPR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 재조합 종양 괴사 인자-관련 세포자연사 유도 리간드(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)와 같은 전-세포자연사 자극을 제공하며, 이는 종양 세포 표면의 TRAIL 사멸 수용체 DR-4 및 DR-5 또는 TRAIL-R2 작용제 항체에 결합함으로써 세포자연사 경로를 활성화할 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 인돌아민 2,3-이산화효소(IDO) 억제제를 포함한다. IDO는 아미노산, L-트립토판의 키누레닌(kynurenine)으로의 분해를 촉매 작용하는 효소이다. 예를 들어, 전립선암, 대장암, 췌장암, 자궁경부암, 위암, 난소암, 두부암 및 폐암과 같은 많은 암이 IDO를 과발현한다. 혈장 세포의 수지상 세포(plasmacytoid dendritic cell, pDC), 대식 세포 및 수지상 세포(DC)는 IDO를 발현할 수 있다. 일부 측면에서, L-트립토판의 감소(예를 들어, IDO에 의해 촉매 작용)는 T-세포 아네르기 및 세포자연사를 유도함으로써 면역 억제 환경을 초래한다. 따라서, 일부 측면에서, IDO 억제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 효능을, 예를 들어, 투여된 CAR 발현 세포의 억제 또는 사멸을 감소시킴으로써, 향상시킬 수 있다. IDO의 예시적인 억제제는 1-메틸-트립토판, 인독시모드(indoximod, New Link Genetics, 예를 들어 Clinical Trial Identifier Nos. NCT01191216; NCT01792050 참조) 및 INCB024360(Incyte Corp., 예를 들어 Clinical Trial Identifier Nos. NCT01604889; NCT01685255 참조)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 세포 독성제, 예를 들어 CPX-351(Celator Pharmaceuticals), 시타라빈(cytarabine), 다우노루비신(daunorubicin), 보사록신(vosaroxin, Sunesis Pharmaceuticals), 사파시타빈(sapacitabine, Cyclacel Pharmaceuticals), 이다루비신(idarubicin) 또는 미토산트론(mitoxantrone)을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 저메틸화제(hypomethylating agent), 예를 들어 DNA 메틸전달효소(DNA methyltransferase) 억제제, 예를 들어 아자시티딘(azacytidine) 또는 데시타빈(decitabine)을 포함한다.
다른 구현예에서, 추가 요법은 이식, 예를 들어 동종이계(allogeneic) 줄기세포 이식이다.
일부 구현예에서, 추가 요법은 림프구 고갈 요법(lymphodepleting therapy)이다. 림프구 고갈 화학 요법은 재조합 수용체 발현 세포, 예컨대 CAR T 세포의 생착 및 활성을 개선하는 것으로 생각된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 항상성 증식을 통해 생체 내에서 증식하도록 입양적으로 전달된 종양 특이적 T 세포를 강화할 수 있다(Grossman 2004, Stachel 2004). 일부 구현예에서, 화학 요법은 CD4+CD25+ 조절 T 세포를 감소 또는 제거할 수 있으며, 이는 종양 표적화 입양으로 전달된 T 세포의 기능을 억제할 수 있다(Turk 2004). 일부 구현예에서, 입양 T 세포 요법에 앞선 림프구 고갈 화학 요법은 골수에서 간질 세포 유래 인자 1(stromal cell-derived factor 1, SDF-1)의 발현을 향상시킬 수 있으며, T 세포 표면 상에 발현된 CXCR-4와 SDF-1의 결합을 통해 1차 종양 부위로 변형된 T 세포의 귀소를 강화할 수 있다(Pinthus 2004). 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 대상체의 종양 부담을 더 감소시키고 잠재적으로 CRS의 위험 및 중증도를 낮출 수 있다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈은 예를 들어, 조작된 세포 예를 들어, CAR 발현 세포를 투여하기 전에 대상체에서 수행된다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈은 멜팔란(melphalan), 사이톡산(Cytoxan), 시클로포스파미드 및/또는 플루다라빈 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여(예를 들어, 주입) 전, 투여와 동시 또는 투여 후에 대상체에 투여된다. 일 예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포의 투여 전에 대상체에 투여된다. 일부 구현예에서 림프구 고갈 화학 요법은 조작된 세포를 투여하기 1 내지 10일 전, 예컨대 조작된 세포의 투여 개시 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10일 전 또는 조작된 세포의 투여 개시 적어도 2일 이상 전, 예컨대 3, 4, 5, 6 또는 7일 이상 전에 투여된다. 일부 구현예에서, 대상체에 조작된 세포의 투여 개시 7일 이내 전, 예컨대 6, 5, 4, 3 또는 2일 이내 전에 사전 조절제를 투여한다. 조작된 세포가 투여되는 림프구 고갈 화학 요법 후의 날 수는 임상적 또는 물류 환경에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 예에서, 용량 조정 또는 기타 림프구 고갈 화학 요법으로의 변경은 대상체의 기본 장기 기능과 같은 대상체의 건강에 따른, 치료 의사의 결정에 따라, 실시될 수 있다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법은 림프구 고갈제, 예컨대 시클로포스파미드, 플루다라빈 또는 이들의 조합물의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체에 대상체의 체중 1kg 당 (약) 20mg 내지 (약) 100mg, 예컨대 (약) 40mg 내지 (약) 80mg의 용량으로 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 측면에서, 대상체에 약 60mg/kg의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 1일 또는 2일 동안 매일 1회 투여한다. 일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 시클로포스파미드를 포함하는 경우, 대상체에 (약) 100mg/m2 내지 500mg/m2(대상체의 체표면적), 예컨대 (약) 200mg/m2 내지 400mg/m2 또는 250mg/m2 내지 350mg/m2(수치 포함)의 단위 용량으로 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 300mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시클로포스파미드는 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 2 내지 4일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 300mg/m2의 시클로포스파미드를 투여한다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체에 (약) 1mg/m2 내지 100mg/m2(대상체의 체표면적), 예컨대 (약) 10mg/m2 내지 75mg/m2, 15mg/m2 내지 50mg/m2, 20mg/m2 내지 40mg/m2 또는 24mg/m2 내지 35mg/m2(수치 포함)의 단위 용량으로 플루다라빈을 투여한다. 일부 경우에, 대상체에 약 30mg/m2의 플루다라빈을 투여한다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 단위 용량으로 투여될 수 있거나, 예컨대 매일, 격일 또는 3일마다 주어진 복수의 단위 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예컨대 1 내지 5일 동안, 예를 들어 2 내지 4일 동안 매일 투여된다. 일부 경우에, 대상체에 세포 요법의 개시 전 3일 동안 매일 약 30mg/m2의 플루다라빈을 투여한다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈제는 시클로포스파미드 및 플루다라빈의 조합물과 같은 제제의 조합물을 포함한다. 따라서, 제제의 조합물은 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 시클로포스파미드 및 상기 기재된 바와 같은 임의의 단위 용량 또는 투여 일정의 플루다라빈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 측면에서, 대상체에 3일 동안 플루다라빈 (약) 30mg/m2을 매일 및 시클로포스파미드 (약) 300mg/m2을 매일 투여한다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈 화학 요법 전에 덱사메타손 또는 다른 스테로이드를 제외한, 구토 방지제 요법이 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 메스나(Mesna)는 출혈성 방광염의 병력이 있는 대상체에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 종양 용해 바이러스이다. 일부 구현예에서, 종양 용해 바이러스는 암세포에서 선택적으로 복제하고 암세포의 사멸을 촉발하거나 암세포의 성장을 늦출 수 있다. 일부 경우에, 종양 용해 바이러스는 비-암세포에 효과가 없거나 최소한의 효과를 보인다. 종양 용해 바이러스에는 종양 용해성 아데노바이러스, 종양 용해성 단순 헤르페스 바이러스, 종양 용해성 레트로바이러스, 종양 용해성 파보바이러스, 종양 용해성 우두 바이러스, 종양 용해성 신비스(Sinbis) 바이러스, 종양 용해성 인플루엔자 바이러스 또는 종양 용해성 RNA 바이러스(예를 들어, 종양 용해성 레오바이러스, 종양 용해성 뉴캐슬병 바이러스(Newcastle Disease Virus, NDV), 종양 용해성 홍역 바이러스 또는 종양 용해성 수포성 구내염 바이러스(vesicular stomatitis virus, VSV))가 포함되나 이에 제한되지 않는다.
기타 예시적인 병용 요법, 치료 및/또는 제제는 항 알레르기성 제제, 항구토제, 진통제 및 부가물 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 신경보호제, 자유라디칼 제거제, 심장보호제, 안트라사이클린 혈관외유출 중화제 및 영양소와 같은 세포보호제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가 제제로서 사용되는 항체는 치료제, 예를 들어, 화학 요법제(예를 들어, 사이톡산(Cytoxan), 플루다라빈, 히스톤 탈아세틸효소 억제제, 탈메틸화제, 펩타이드 백신, 항종양 항생제, 티로신 키나아제 억제제, 알킬화제, 항-미세소관제 또는 항-유사분열제), 항-알레르기제, 항-구역질제(또는 항구토제), 진통제 또는 본원에 기재된 세포 보호제에 접합되거나 그렇지 않으면 결합된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 항체 약물 접합체이다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 DNA, RNA 또는 단백질 수준에서 특정 인자를 조절, 억제 또는 자극하여, 예컨대 특정 측면을 향상하거나 증진할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 핵산, 예를 들어, DNA 또는 RNA 수준에서 투여된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 세포 내에서 상기 인자를 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 억제성 핵산, 예를 들어, dsRNA, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA 또는 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 회문 반복체(clustered regularly interspaced short palindromic repeat, CRISPR), 전사 활성제 유사 효과기 뉴클레아제(transcription-activator like effector nuclease, TALEN) 또는 징크 핑거 엔도뉴클레아제(zinc finger endonuclease, ZFN)가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포에서 억제성 분자의 발현을 억제하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서 억제제는 shRNA이다. 일부 구현예에서, 억제성 분자는 조작된 세포, 예를 들어, CAR 발현 세포 내에서 억제된다. 일부 구현예에서, T 세포 기능을 조절 또는 조정하는, 예를 들어, 억제하는 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자를 암호화하는 핵산 분자는 프로모터, 예를 들어, HI- 또는 U6-유래 프로모터와 작동 가능하게 연결되어, 억제성 분자의 발현을 억제하는 dsRNA 분자가 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포 내에서 발현된다. 예를 들어, 문헌[Brummelkamp TR, et al. (2002) Science 296: 550- 553; Miyagishi M, et al. (2002) Nat. Biotechnol. 19: 497-500]을 참조한다.
일부 구현예에서, 추가 제제는 본원에 기재된 임의의 면역 관문 억제제와 같은, 억제성 분자를 암호화하는 유전자를 파괴할 수 있다. 일부 구현예에서, 파괴는 결실(deletion), 예를 들어, 전체 유전자, 엑손 또는 영역의 결실 및/또는 외인성 서열로 대체에 의해 및/또는 돌연변이, 예를 들어 유전자 내, 통상적으로 유전자의 엑손 내에서 프레임시프트 또는 미스센스 돌연변이에 의한다. 일부 구현예에서, 파괴는 조기 정지 코돈이 유전자 내로 통합되는 것을 초래하여, 억제성 분자가 발현되지 않거나 세포 표면 상에서 발현될 수 있고/거나 세포 신호 전달을 매개할 수 있는 형태로 발현되지 않는다. 파괴는 일반적으로 DNA 수준에서 수행된다. 파괴는 일반적으로 일시적이지 않거나, 영구적이거나 비가역적이다.
일부 측면에서, 파괴는 DNA 결합 단백질 또는 DNA 결합 핵산을 사용하는 것과 같은 유전자 편집에 의해 수행되며, 이는 파괴를 위해 표적화하는 영역에서 유전자에 특이적으로 결합하거나 그에 혼성화된다. 일부 측면에서, 단백질 또는 핵산은 예컨대 키메라 또는 융합 단백질에서, 뉴클레아제에 결합되거나 이와 복합체를 형성한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 파괴는 파괴되는 유전자에 특이적인, DNA 표적화 단백질 및 뉴클레아제, 예컨대 징크 핑거 뉴클레아제(ZFN) 또는 TAL 효과기 뉴클레아제(TALEN) 또는 RNA-가이드 뉴클레아제, 예컨대 클러스터링되고 규칙적으로 산재된 짧은 회문 핵산(CRISPR)-Cas 시스템, 예컨대 CRISPR-Cas9 시스템을 포함하는 융합을 이용하여 달성된다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포를 생산 또는 생성하는 방법은 유전자 조작된 항원 수용체(예를 들어, CAR)를 암호화하는 핵산 분자, 및 억제성 분자에 특이적인, 예컨대 DNA 표적화 단백질과 ZFN 또는 TALEN과 같은 뉴클레아제 또는 CRISPR-Cas9 시스템과 같은 RNA-가이드 뉴클레아제의 융합인 유전자 편집 뉴클레아제인 억제성 분자를 표적화하는 제제를 암호화하는 핵산 분자를 세포의 집단으로 도입하는 것을 포함한다.
본원에 기재된 임의의 추가 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와의 병용 요법, 예컨대 병용 요법 중 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 운반체, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 포함하는 약학 조성물로서 제조 및 투여될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 추가 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합(및 BCMA-결합) 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체) 및/또는 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포와의 병용 요법, 예컨대 병용 요법 중 하나 이상의 제제 및 약학적으로 허용 가능한 운반체, 예컨대 본원에 기재된 임의의 것을 포함하는 약학 조성물로서 제조 및 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, GPRC5D-결합 재조합 수용체(예를 들어, 키메라 항원 수용체), 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 조작된 세포, 상기 분자(예를 들어, 재조합 수용체)를 발현하는 복수의 조작된 세포는 추가 제제, 요법 또는 치료와 임의의 순서로 동시에, 함께 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 상기 투여는 대상체의 신체에서 각각의 제제를 치료적 유효 수준으로 제공한다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 예를 들어 동일한 약학 조성물의 일부로서 또는 동일한 전달 방법을 사용하여 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물과 공동-투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물과 동시에 하지만 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 추가 조작된 세포, 예를 들어 상이한 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포이고, 동일한 조성물 또는 별도의 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 추가 제제는 세포의 투여 전에 조작된 세포, 예를 들어 CAR 발현 세포와 함께 인큐베이션된다.
일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 투여 전 또는 후속으로, 선택된 기간에 의해 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 (및 BCMA-결합) 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 투여 전 또는 후속으로, 선택된 기간에 의해 분리되어 투여된다. 일부 예에서, 상기 기간은 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 2개월 또는 3개월이다. 일부 예에서, 하나 이상의 추가 제제는 여러 번 투여되고/거나 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물은 여러 번 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 전에, 예를 들어 투여 2주, 12일, 10일, 8일, 1주일, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 추가의 제제는 본원에 기재된 GPRC5D-결합 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 후에, 예를 들어 투여 2주, 12일, 10일, 8일, 1주, 6일, 5일, 4일, 3일, 2일 또는 1일 후에 투여된다.
추가 제제의 단위 용량은 임의의 치료적 유효량, 예를 들어 본원에 기재된 임의의 단위 용량일 수 있고, 추가 제제의 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 투여될 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물의 유형, 단위 용량 및/또는 빈도, 질병의 중증도 및 경과, 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물이 예방 또는 치료 목적으로 투여되는지, 이전 요법, 환자의 임상 이력 및 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물에 대한 반응 및 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 재조합 수용체, 세포 및/또는 조성물 및/또는 추가 제제 및/또는 요법은 한 번, 반복해서 환자에게 투여되거나 일련의 치료에 걸쳐 투여될 수 있다.
VI. 제조품 또는 키트
제공된 재조합 수용체(예를 들어, CAR), 유전자 조작된 세포 및/또는 상기를 포함하는 조성물을 함유하는 제조품 또는 키트가 또한 제공된다. 제조품에는 용기 및 표지(label) 또는 용기 위의 또는 그와 연관된 포장 삽입물 등이 포함될 수 있다. 적합한 용기에는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, 시험관, IV 용액백 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 일부 구현예에서, 용기는 멸균 접근 포트를 갖는다. 예시적인 용기에는 주사용 바늘에 의해 천공될 수 있는 마개가 있는 것을 포함하여 정맥 주사용 용액백, 바이알이 포함된다. 제조품 또는 키트는 조성물이 본원에 기재된 병태(예를 들어, 다발성 골수종)와 같은 특정 병태를 치료하는 데 사용될 수 있음을 나타내는 포장 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 제조품 또는 키트에는 약학적으로 허용 가능한 완충제를 포함하는 다른 용기 또는 동일한 용기가 추가로 포함될 수 있다. 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘 및/또는 주사기와 같이 다른 물질이 추가로 포함될 수 있다.
표지 또는 포장 삽입물은 조성물이 개체(individual)에서 GPRC5D 발현 또는 GPRC5D 관련 질병, 장애 또는 병태의 치료에 사용됨을 표시할 수 있다. 용기 상에 있거나 용기와 관련된 표지 또는 포장 삽입물은 제형의 재구성 및/또는 사용에 대한 지시를 표시할 수 있다. 표지 또는 포장 삽입물은 제형이 개체에서 GPRC5D-발현 또는 GPRC5D-관련 질병, 장애 또는 병태를 치료 또는 예방하기 위한 피하, 정맥내 또는 다른 투여 방식에 유용하거나 의도된 것임을 추가로 표시할 수 있다.
일부 구현예에서 용기는 조성물을 그 자체로 또는 병태를 치료, 예방 및/또는 진단하는 데 효과적인 다른 조성물과 조합하여 보유한다. 제조품 또는 키트는 (a) 조성물이 함유된 제1 용기(즉, 제1 약제) - 여기서 상기 조성물은 재조합 수용체(예를 들어, CAR 또는 CAR을 함유한 조작된 세포)를 포함함 -; 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기(즉, 제2 약제) - 여기서 상기 조성물은 세포 독성제 또는 다른 치료제와 같은 추가 제제를 포함하고, 제조품 또는 키트는 표지 또는 포장 삽입물 상에 유효량의 제2 약제로 대상체를 치료하기 위한 설명을 추가로 포함함 - 를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제조품 또는 키트는 (a) 조성물이 함유된 제1 용기(즉, 제1 약제) - 여기서 상기 조성물은 항-GPRC5D 재조합 수용체(예를 들어, CAR 또는 CAR을 함유한 조작된 세포)를 포함함 -; 및 (b) 조성물이 함유된 제2 용기(즉, 제2 약제) - 여기서 상기 조성물은 상이한 GPRC5D의 에피토프 또는 상이한 항원(예를 들어, BCMA)을 향하는 제2 재조합 수용체(예를 들어, CAR 또는 CAR을 함유한 조작된 세포)를 포함하고, 제조품 또는 키트는 표지 또는 포장 삽입물 상에 유효량의 제2 약제로 대상체를 치료하기 위한 설명을 더 포함함 - 를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 제조품 또는 키트는 (c) 조성물이 함유된 제3 용기(즉, 제3 약제) - 여기서 상기 조성물은 세포 독성제 또는 다른 치료제와 같은 추가 제제를 포함하고, 제조품 또는 키트는 표지 또는 포장 삽입물 상에 유효량의 제3 약제로 대상체를 치료하기 위한 설명을 더 포함함 - 를 더 포함할 수 있다.
VII. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어, 표기법 및 다른 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는 청구된 주제가 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 의도된다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 갖는 용어는 명확성 및/또는 용이한 참조를 위해 본원에서 정의되며, 본원에 상기 정의를 포함하는 것이 당업계에서 일반적으로 이해되는 것과 실질적인 차이를 나타내는 것으로 반드시 해석되는 것은 아니다.
본원에서 사용된 바와 같이, 항체의 “해당하는 형태(corresponding form)”에 대한 언급은 두 항체의 특성 또는 활성을 비교할 때, 동일한 형태의 항체를 사용하여 특성을 비교함을 의미한다. 예를 들어, 어떤 항체가 제1 항체의 해당하는 형태의 활성과 비교하여 더 큰 활성을 갖는다고 언급된 경우, 이는 상기 항체의 scFv와 같은 특정 형태가 제1 항체의 scFv 형태와 비교하여 더 큰 활성을 갖는다는 것을 의미한다.
본원에서 용어 “Fc 영역(Fc region)”은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 상기 용어는 천연 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 일 구현예에서, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 Cys226 또는 Pro230으로부터 중쇄의 카르복실-말단까지 연장된다. 그러나, Fc 영역의 C-말단 리신(Lys447)은 존재하거나 존재하지 않을 수 있다. 본원에 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역에서 아미노산 잔기의 넘버링은 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991]에 기재된 바와 같은 EU 색인으로도 불리는 EU 넘버링 시스템에 따른다.
용어 “전장 항체(full length antibody)”, “온전한 항체(intact antibody)” 및 “전체 항체(whole antibody)”는 본원에 정의된 바와 같이 천연 항체 구조와 실질적으로 유사한 구조를 갖거나 Fc 영역을 함유하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
“단리된(isolated)” 항체는 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 것이다. 일부 구현예에서, 항체는 예를 들어 전기영동(예를 들어, SDS-PAGE, 등전점 전기영동(isoelectric focusing: IEF), 모세관 전기영동) 또는 크로마토그래피(예를 들어, 이온 교환 또는 역상 HPLC)에 의해 결정된 바와 같이 95% 또는 99% 초과의 순도로 정제된다. 항체 순도 산정 방법의 검토에 대해서는 예를 들어, 문헌[Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007)]을 참조한다.
“단리된(isolated)” 핵산은 이의 자연 환경의 성분으로부터 분리된 핵산 분자를 지칭한다. 단리된 핵산은 통상적으로 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체 외에 또는 이의 천연 염색체 위치와는 상이한 염색체 위치에 존재한다.
“항-GPRC5D 항체를 암호화하는 단리된 핵산(isolated nucleic acid encoding an anti-GPRC5D antibody)”은 단일 벡터 또는 별도의 벡터에서 상기 핵산 분자(들) 및 숙주 세포에서 하나 이상의 위치에 존재하는 상기 핵산 분자(들)을 포함하여 항체 중쇄 및 경쇄(또는 이의 단편)를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자를 지칭한다.
용어 “숙주 세포(host cell)”, “숙주 세포주(host cell line)” 및 “숙주 세포 배양물(host cell culture)”은 상호 교환적으로 사용되며, 상기 세포의 자손을 포함하여 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 “형질 전환체(transformants)” 및 “형질 전환된 세포(transformed cells)”를 포함하고, 이는 1차 형질 전환 세포 및 계대 수(number of passages)에 관계없이 이로부터 유래된 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량에서 모세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으나 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질 전환된 세포에서 선별되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이체 자손이 본원에 포함된다.
용어 “폴리펩타이드(polypeptide)” 및 “단백질(protein)”은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 상호 교환적으로 사용되며, 최소 길이로 제한되지 않는다. 항체 및 항체 사슬 및 다른 펩타이드(예를 들어, 링커)를 포함한 폴리펩타이드는 천연 및/또는 비천연 아미노산 잔기를 포함하여 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 상기 용어들은 또한 폴리펩타이드의 발현 후 변형, 예를 들어 글리코실화, 시알릴화, 아세틸화, 인산화 등을 포함한다. 일부 측면에서, 폴리펩타이드는 단백질이 원하는 활성을 유지하는 한 천연 또는 자연 서열에 대한 변형을 함유할 수 있다. 상기 변형은 부위-지정 돌연변이 유발을 통한 것과 같이 의도적일 수 있거나, 단백질을 생성하는 숙주의 돌연변이 또는 PCR 증폭으로 인한 오류를 통한 것과 같이 우발적일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, “아미노산 서열 동일성 백분율(percent (%) amino acid sequence identity)” 및 “동일성 백분율(percent identity)” 및 “서열 동일성(sequence identity)”은 아미노산 서열(기준 폴리펩타이드 서열)에 대하여 사용될 때, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하지 않고 최대 백분율의 서열 동일성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고 필요하다면 갭을 도입한 후 기준 폴리펩타이드 서열의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열(예를 들어, 대상체 항체 또는 단편) 내 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 목적의 정렬은 예를 들어 공개적으로 이용 가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign(DNASTAR) 소프트웨어를 이용하여 당업계 기술 범위 내에서 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 당업자는 비교될 서열의 전장에 대해 최대 정렬을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 매개변수를 결정할 수 있다.
아미노산 치환은 폴리펩타이드에서 하나의 아미노산을 다른 아미노산으로 대체하는 것을 포함할 수 있다. 아미노산 치환은 관심 결합 분자(예를 들어, 항체)에 도입될 수 있고, 그 산물은 원하는 활성, 예를 들어 유지/향상된 항원 결합 또는 감소된 면역원성에 대해 선별된다.
아미노산은 일반적으로 하기와 같은 공통적인 측쇄(side-chain) 특성에 따라 그룹화될 수 있다:
(1) 소수성: 노르루신(Norleucine), Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: His, Lys, Arg;
(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro;
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존적 아미노산 치환은 상기 클래스 중 하나의 멤버를 다른 클래스로 교환하는 것을 포함할 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 “벡터(vector)”는 이에 연결된 다른 핵산을 번식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 상기 용어는 자가-복제 핵산 구조로서의 벡터 및 이것이 도입된 숙주 세포의 유전체에 편입된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 이것이 작동 가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 상기 벡터는 본원에서 “발현 벡터(expression vector)”로 지칭된다.
용어 “포장 삽입물(package insert)”은 지시, 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 상기 치료 산물의 용도와 관련한 사용 금기 및/또는 경고에 대한 정보를 함유한 치료 산물의 상업적 포장에 관례적으로 포함되는 설명을 지칭하기 위해 사용된다.
본원에 사용된 바와 같이, 단수 형태(“a”, “an” 및 “the”)는 문맥상 명백하게 다르게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, 단수 형태(“a” 또는 “an”)는 “적어도 하나(at least one)” 또는 “하나 이상(one or more)”을 의미한다. 본원에 기재된 측면, 구현예 및 변형은 측면, 구현예 및 변형을 “포함하는(comprising)”, “구성하는(consisting)” 및/또는 “본질적으로 구성하는(consisting essentially of)”을 포함하는 것으로 이해된다.
본 개시 전체에서, 청구된 주제의 다양한 측면이 범위 형식으로 제시된다. 범위 형식의 기재는 단지 편의 및 간결성을 위한 것이며 청구된 주제의 범위에 대한 융통성 없는 제한으로 해석되어서는 안된다는 것을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 모든 가능한 하위 범위 및 상기 범위 내의 개별 수치를 구체적으로 개시한 것으로 간주되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 상기 범위의 상한 내지 하한 사이 각각의 사이에 오는 값과 상기 언급된 범위에서 임의의 다르게 언급되거나 사이에 오는 값은 청구된 주제 내에 포함되는 것으로 이해된다. 상기 더 작은 범위의 상한 내지 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있고, 또한 언급된 범위에서 임의의 구체적으로 배제된 한계를 조건으로 청구된 주제 내에 포함된다. 언급된 범위가 한계 중 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 상기 포함된 한계 중 하나 또는 둘 모두를 제외한 범위도 청구된 주제에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본원에 사용된 용어 “약(about)”은 본 기술 분야의 당업자에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 본원에서 “약(about)”의 값 또는 매개변수에 대한 언급은 상기 값 또는 매개변수 자체에 관한 구현예를 포함(기술)한다. 예를 들어, “약 X”를 지칭하는 기재는 “X”의 기재를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같이, “조성물(composition)”은 세포를 포함하여 둘 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 지칭한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이들의 임의의 조합물일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “양성(positive)”이라는 진술은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 검출 가능하게 존재함을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 존재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 높은 수준에서 유세포 분석에 의해 검출 가능하다.
본원에 사용된 바와 같이, 세포 또는 세포의 집단이 특정 표지자에 대해 “음성(negative)”이라는 진술은 특정 표지자, 통상적으로 표면 표지자가 세포 상에 또는 세포 내에 실질적으로 검출 가능하게 존재하지 않음을 지칭한다. 표면 표지자를 언급할 때, 상기 용어는 유세포 분석에 의해, 예를 들어, 이 표지자에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 상기 항체를 검출함으로써 검출된 바와 같은 표면 발현의 부재를 지칭하며, 이 염색은 달리 동일한 조건 하에서 동종형-매칭된 대조군으로 같은 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 상위 수준에서 및/또는 표지자에 대해 양성인 것으로 공지된 세포에 대한 것보다 실질적으로 더 낮은 수준에서 및/또는 표지자에 대해 음성인 것으로 공지된 세포에 대한 것과 비교하여 실질적으로 유사한 수준에서 유세포 분석에 의해 검출되지 않는다.
VIII. 예시적인 구현예
제공된 구현예 중에는 하기가 있다:
구현예 1. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 2. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 및 33 중에서 선택된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 VH 영역; 및 (ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 및 69 중에서 선택된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 VL 영역을 포함함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 3. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) (a) 서열 번호: 75, 78, 80, 82, 90, 93, 95, 97, 105, 108, 110, 112, 120, 123, 125, 127, 135, 138, 140, 142, 152, 162, 165, 167 및 169 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 76, 79, 81, 83, 91, 94, 96, 98, 106, 109, 111, 113, 121, 124, 126, 128, 136, 139, 141, 143, 150, 153, 154, 155, 163, 166, 168 및 170 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 77, 84, 92, 99, 107, 114, 122, 129, 137, 144, 151, 156, 164 및 171 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 85, 88, 100, 103, 115, 118, 130, 133, 145, 148, 157, 160, 172 및 174 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 86, 89, 101, 104, 116, 119, 131, 134, 146, 149, 158 및 161 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173, 175 및 297 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 125개 이상의 아미노산 길이의 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 4. 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 5.
구현예 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 125 내지 300 또는 약 125 내지 약 300, 125 내지 250 또는 약 125 내지 약 250, 125 내지 230 또는 약 125 내지 약 230, 125 내지 200 또는 약 125 내지 약 200, 125 내지 180 또는 약 125 내지 약 180, 125 내지 150 또는 약 125 내지 약 150, 150 내지 300 또는 약 150 내지 약 300, 150 내지 250 또는 약 150 내지 약 250, 150 내지 230 또는 약 150 내지 약 230, 150 내지 200 또는 약 150 내지 약 200, 150 내지 180 또는 약 150 내지 약 180, 180 내지 300 또는 약 180 내지 약 300, 180 내지 250 또는 약 180 내지 약 250, 125 내지 300 또는 약 125 내지 약 300, 180 내지 230 또는 약 180 내지 약 230, 180 내지 200 또는 약 180 내지 약 200, 200 내지 300 또는 약 200 내지 약 300, 200 내지 250 또는 약 200 내지 약 250, 200 내지 230 또는 약 200 내지 약 230, 230 내지 300 또는 약 230 내지 약 300, 230 내지 250 또는 약 230 내지 약 250, 250 내지 300 또는 약 250 내지 약 300의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 6. 구현예 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개, 또는 적어도 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나 또는 전술한 임의의 수치 사이의 길이를 갖거나; 또는 상기 스페이서는 약 또는 적어도 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나 또는 전술한 임의의 수치 사이의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 7. 구현예 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 면역글로불린의 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 8. 구현예 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 9. 구현예 8에 있어서, 상기 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고/거나; 상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이고/거나; 상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하며, 여기서 상기 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 10. 구현예 8 또는 구현예 9에 있어서, 상기 힌지 영역, CH2 및 CH3은 인간 IgG4로부터의 힌지의 전부 또는 일부, CH2의 전부 또는 일부 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 11. 구현예 8 또는 구현예 9에 있어서, 상기 힌지 영역, CH2 및 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지, CH2 및 CH3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 12. 구현예 1 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지와 비교하여 적어도 하나의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 13. 구현예 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 (i) 서열 번호: 17에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 17에 대해 적어도 (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 17의 기능적 변이체; 또는 (iii) 적어도 125개의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분;이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 14. 구현예 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 서열 번호: 17에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 15. 구현예 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 16. 구현예 1 내지 15 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 26에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 65에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 30에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 67에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 34에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 69에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 17. 구현예 1 내지 16 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 110, 111 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 112, 113 및 114의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 118, 119 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 141 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 143 및 144의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 148, 149 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 167, 168 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 174, 89 및 175의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 18. 구현예 1 내지 17 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 21 및 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 23 및 64에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 25 및 26에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 25 및 65에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 29 및 30에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 29 및 67에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 31 및 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 33 및 34에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 33 및 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 19. 구현예 1 내지 18 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 20. 구현예 1 내지 19 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 82, 83 및 84의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 88, 89 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 97, 98 및 99의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 103, 104 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 142, 155 및 156의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 160, 161 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 21. 구현예 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 21 및 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 23 및 64에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 31 및 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 22. 구현예 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 마우스 GPRC5D에 교차 반응성이거나 결합하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 23. 구현예 1 내지 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 시노몰구스 GPRC5D에 교차 반응성이거나 결합하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 24. 구현예 1 내지 21 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 마우스 GPRC5D 또는 시노몰구스 GPRC5D에 교차 반응성이 아니거나 결합하지 않는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 25. 구현예 1 내지 21 및 24 중 어느 하나에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 26. 구현예 1 내지 21, 24 및 25 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 27. 구현예 1 내지 21 및 24 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 28. 구현예 1 내지 21 및 24 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 29. 구현예 1 내지 21 및 24 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 30. 구현예 1 내지 21 및 24 내지 26 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 31. 구현예 1 내지 21 및 24 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 32. 구현예 1 내지 31 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 33. 구현예 1 내지 32 중 어느 하나에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 34. 구현예 1 내지 33 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 35. 구현예 34에 있어서, 상기 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 36. 구현예 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 37. 구현예 1 내지 36 중 어느 하나에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 257, 259, 261, 263, 265, 267 및 269 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 257, 259, 261, 263, 265, 267 및 269 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 38. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 39. 구현예 1 내지 37 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 40. 구현예 1 내지 37 및 39 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 41. 구현예 1 내지 36 및 38 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 42. 구현예 1 내지 37, 39 및 41 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 43. 구현예 1 내지 35 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 44. 구현예 1 내지 35 및 43 중 어느 하나에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 258, 260, 262, 264, 266, 268 및 270 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 258, 260, 262, 264, 266, 268 및 270 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 45. 구현예 1 내지 35, 43 및 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 46. 구현예 1 내지 35, 43 및 44 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 47. 구현예 1 내지 35, 43, 44 및 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 48. 구현예 1 내지 35, 43, 44 및 46 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 49. 구현예 1 내지 35, 43, 44, 46 및 48 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 50. 구현예 1 내지 49 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 세포내 세포질 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 51. 구현예 50에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 52. 구현예 50 또는 구현예 51에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 기능적 변이체의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 53. 구현예 50 내지 52 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 54. 구현예 50 내지 53 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 55. 구현예 50 내지 54 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 56. 구현예 55에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 57. 구현예 55 또는 구현예 56에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 58. 구현예 55 내지 57 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 59. 구현예 55 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 60. 구현예 55 내지 59 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 61. 구현예 55 내지 58 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 62. 구현예 55 내지 58 및 61 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 63. 구현예 55 내지 62 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 막관통 도메인과 세포내 신호 전달 영역 사이에 존재하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 64. 구현예 1 내지 63 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 65. 구현예 1 내지 64 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 66. 구현예 1 내지 65 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 인간의 것이거나 인간 단백질로부터 유래된 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 67. 구현예 1 내지 66 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 68. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및 (4) CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 69. 구현예 68에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 70. (1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서, 상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역; 또는 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역;을 포함함 -; (2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 인간 CD28 유래 막관통 도메인; 및 (4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체.
구현예 71. 구현예 68 내지 70 중 어느 하나에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7 또는 서열 번호: 8에 제시된 scFv를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 72. 구현예 68 내지 71 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 73. 구현예 72에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 74. 구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 (a) 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 (b) 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 75. 구현예 68 내지 74 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 46에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 76. 구현예 68 내지 73 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 (a) 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 (b) 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 77. 구현예 68 내지 73 및 76 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 19에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 78. 구현예 1 내지 77 중 어느 하나에 있어서, 상기 암호화된 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체.
구현예 79. 구현예 1 내지 78 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
구현예 80. 구현예 79에 있어서, 상기 스페이서를 암호화하는 상기 핵산은 적어도 하나의 변형된 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형된 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 73에 제시된 서열에 함유된 기준 스플라이스 공여 부위 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 81. 구현예 80에 있어서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 82. 구현예 80 또는 구현예 81에 있어서, 상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 정규(canonical), 비정규(non-canonical) 또는 숨은 스플라이스 부위인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 83. 구현예 80 내지 82 중 어느 하나에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 (약) 0.4, (약) 0.5, (약) 0.6, (약) 0.70, (약) 0.75, (약) 0.80, (약) 0.85, (약) 0.90, (약) 0.95, (약) 0.99 또는 (약) 1.0의 스플라이스 부위 예측 점수를 갖고/거나;
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 (약) 40%, (약) 50%, (약) 60%, (약) 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90%, (약) 95%, (약) 99% 또는 (약) 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 84. 구현예 80 내지 83 중 어느 하나에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 aatctaagtacggac(서열 번호: 176), tcaactggtacgtgg(서열 번호:177), acaattagtaaggca(서열 번호:178) 및/또는 accacaggtgtatac(서열 번호:179)를 포함하고/거나;
상기 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호:180) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호:181)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 85. 구현예 80 내지 84 중 어느 하나에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 (약) 0.70, (약) 0.75, (약) 0.80, (약) 0.85, (약) 0.90, (약) 0.95, (약) 0.99 또는 (약) 1.0의 스플라이스 부위 예측 점수를 갖고/거나;
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90%, (약) 95%, (약) 99% 또는 (약) 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 86. 구현예 80 내지 85 중 어느 하나에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호:177)를 포함하고/거나;
상기 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호:180)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 87. 구현예 80 내지 86 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형 중 적어도 하나는 상기 기준 스플라이스 수용체 및/또는 기준 스플라이스 공여 부위의 스플라이스 부위 접합부의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 잔기 이내에 존재하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 88.
구현예 80 내지 87 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 잠재성(silent)이고/거나 서열 번호: 73과 비교하여 퇴화 코돈을 생성하고/거나 상기 암호화된 스페이서의 아미노산 서열을 변경하지 않는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 89.
구현예 80 내지 88 중 어느 하나에 있어서,
상기 변형된 스플라이스 공여 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호:182), tcaactggtatgtgg(서열 번호:183), accatctccaaggcc(서열 번호:184) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호:185)에 제시되고/거나;
상기 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호:186), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 187) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 90. 구현예 80 내지 89 중 어느 하나에 있어서, 상기 변형된 스플라이스 공여 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 183)에 제시되고/거나 상기 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 186) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 91. 구현예 80 내지 90 중 어느 하나에 있어서, 상기 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 부분에 의해 암호화된 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 92. 구현예 79 내지 91 중 어느 하나에 있어서, 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 발현 시, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 적어도 (약) 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90% 또는 (약) 95%의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 93. 구현예 79 내지 92 중 어느 하나에 있어서, 세포에서 발현 시, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 기준 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 기준 폴리뉴클레오타이드는 상기 폴리뉴클레오타이드와 동일한 아미노산 서열을 암호화하고, 여기서 상기 기준 폴리뉴클레오타이드는 상기 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나 상기 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하고/거나 서열 번호: 73에 제시된 스페이서를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 94. 구현예 93에 있어서, 상기 RNA 이질성은 (약) 10%, (약) 15%, (약) 20%, (약) 25%, (약) 30%, (약) 40%, 또는 50% 이상을 초과하여 감소된 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 95. 구현예 93 또는 구현예 94에 있어서, 상기 기준 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 (약) 10%, (약) 15%, (약) 20%, (약) 25%, (약) 30%, (약) 40%, (약) 50% 이상 초과한 RNA 이질성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 96. 구현예 79 내지 95 중 어느 하나에 있어서, 상기 RNA 동질성 및/또는 이질성은 아가로스 겔 전기영동, 칩-기반 모세관 전기영동, 분석적 초원심 분리, 장흐름 분획법 또는 액체 크로마토그래피에 의해 결정되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 97. 구현예 79 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 98. 구현예 79 내지 96 중 어느 하나에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 제1 키메라 항원 수용체이고 상기 폴리뉴클레오타이드는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 99. 구현예 98에 있어서, 상기 제1 및 제2 키메라 항원 수용체는 하나 이상의 다중 시스트론 요소(들)에 의해 분리되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 100. 구현예 99에 있어서, 상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소는 리보솜 스킵 서열이거나 이를 포함하고, 선택적으로 상기 리보솜 스킵 서열은 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 요소인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 101. 구현예 100에 있어서, 상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 상기 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기(codon diverged)되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 102. 구현예 100 내지 101 중 어느 하나에 있어서, 상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 상기 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 319에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 103. 구현예 98 내지 102 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 항원 수용체(CAR)는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 104. 구현예 103에 있어서, 상기 제2 CAR은 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 105. 구현예 103 또는 구현예 104에 있어서, 상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 106. 구현예 103 내지 105 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 107. 구현예 103 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 108. 구현예 107에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 제2 CAR의 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 109. 구현예 103 내지 106 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 및 215 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 및 216 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 및 217 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 및 235 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 및 236 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 및 232 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 (약) 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 110. 구현예 107 내지 109 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
111.
구현예 107 내지 109 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 112. 구현예 107 내지 111 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 113. 구현예 107 내지 112 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 114. 구현예 107 내지 113 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 115. 구현예 114에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 116. 구현예 107 내지 115 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 117. 구현예 116에 있어서, 상기 제2 CAR의 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 118. 구현예 107 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 119. 구현예 107 내지 117 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 120. 구현예 107 내지 119 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 121. 구현예 107 내지 120 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 122. 구현예 107 내지 121 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 123. 구현예 104 내지 122 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 124. 구현예 104 내지 123 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 125. 구현예 124에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 126. 구현예 104 내지 125 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 127. 구현예 126에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 128. 구현예 126 또는 구현예 127에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 129. 구현예 126 내지 128 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 130. 구현예 126 내지 129 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 131. 구현예 130에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 132. 구현예 130 또는 구현예 131에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 133. 구현예 98 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 키메라 항원 수용체 및 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 134. 구현예 130 내지 132 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 135. 구현예 130 내지 133 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 136. 구현예 104 내지 135 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 137. 구현예 79 내지 97 중 어느 하나에 있어서, CAR을 암호화하는 상기 뉴클레오타이드 서열은 상기 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 암호화된 CAR의 발현을 제어하는 프로모터에 작동 가능하게 연결되고, 선택적으로 상기 프로모터는 이종 프로모터이고, 선택적으로 상기 이종 프로모터는 인간 신장 인자 1 알파(EF1α) 프로모터 또는 MND 프로모터 또는 이의 변이체이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 138. 구현예 98 내지 136 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 상기 제1 CAR의 발현을 제어하는 제1 프로모터에 작동 가능하게 연결되고 상기 제2 CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 상기 폴리뉴클레오타이드가 도입된 세포로부터 발현될 때 상기 제2 CAR의 발현을 제어하는 제2 프로모터에 작동 가능하게 연결되며, 선택적으로 상기 제1 및 제2 프로모터는 독립적으로 이종 프로모터이고, 선택적으로 상기 이종 프로모터는 인간 신장 인자 1 알파(EF1α) 프로모터 또는 MND 프로모터 또는 이의 변이체이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 139. 구현예 138에 있어서, 상기 제1 및 제2 프로모터는 동일한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 140. 구현예 138에 있어서, 상기 제1 및 제2 프로모터는 상이한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 141. (i) 제1 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및 (ii) 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 상기 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은: (a) 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 142. 구현예 141에 있어서, 상기 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 동일한 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 143. 구현예 141 또는 구현예 142에 있어서, 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 동일한 항원의 상이한 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 144. 구현예 141에 있어서, 상기 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 상이한 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 145. 구현예 141 내지 144 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인은 질병 또는 병태의 세포에 의해 발현되거나 이와 관련된 제1 항원에 결합하고 상기 제2 항원 결합 도메인은 상기 동일한 질병 또는 병태의 세포에 의해 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 146. 구현예 145에 있어서, 상기 질병 또는 병태는 암인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 147. 구현예 146에 있어서, 상기 질병 또는 병태는 GPRC5D-발현 암 또는 BCMA-발현 암인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 148. 구현예 146 또는 구현예 147에 있어서, 상기 암은 형질 세포 악성 종양이고 상기 형질 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 149. 구현예 146 내지 148 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 다발성 골수종인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 150. 구현예 146 내지 149 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 재발성/불응성 다발성 골수종인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 151. 구현예 141 내지 150 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 및 제2 항원 결합 도메인은 독립적으로 GPRC5D, BCMA, CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5로 구성된 그룹에서 선택된 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 152. 구현예 141 내지 151 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인은 B 세포 성숙 항원(BCMA)에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 153. 구현예 141 내지 151 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인은 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 154. 구현예 152 또는 구현예 153에 있어서, 상기 제2 항원 결합 도메인은 BCMA에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 155. 구현예 152 또는 구현예 153에 있어서, 상기 제2 항원 결합 도메인은 GPRC5D에 결합하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 156. (i) GPRC5D 또는 BCMA 중 하나에 결합할 수 있는 제1 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및 (ii) GPRC5D 또는 BCMA 중 다른 하나에 결합할 수 있는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 상기 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은: (a) 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 그리고 상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 157. 구현예 141 내지 156 중 어느 하나에 있어서, 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 하나인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 158. 구현예 141 내지 156 중 어느 하나에 있어서, 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 둘인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 159. 구현예 141 내지 156 중 어느 하나에 있어서, 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상은 (b) 내지 (d) 중 각각인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 160. 구현예 141 내지 159 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 상기 제2 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 20 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 포함하고/거나;
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열은 약 20 이내의 서열 상동성 염기쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 161. 구현예 141 내지 160 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 상기 제2 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 5 내지 약 15 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 포함하고/거나;
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열은 약 5 내지 약 15 이내의 서열 상동성 염기쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 162. 구현예 141 내지 161 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들) 및 상기 제2 CAR에서 상기 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 약 10 이내의 연속적인 상동성 염기쌍을 포함하고/거나;
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열은 약 10 이내의 서열 상동성 염기쌍을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 163. 구현예 141 내지 162 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산은 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 분리되고, 선택적으로 여기서 다중 시스트론 요소는 이중 시스트론 요소인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 164. 구현예 163에 있어서, 상기 다중 시스트론 요소는 IRES이거나 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 165. 구현예 164에 있어서, 상기 다중 시스트론 요소는 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드이고 상기 리보솜 스킵 서열 또는 자가 절단 펩타이드는 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 요소인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 166. 구현예 141 내지 165 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 167. 구현예 141 내지 166 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열은 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 168. 구현예 141 내지 167 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 169. 구현예 141 내지 168 중 어느 하나에 있어서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 전사 이후, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 170. 구현예 141 내지 169 중 어느 하나에 있어서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산의 전사 이후, 상기 제1 핵산으로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 171. 구현예 141 내지 170 중 어느 하나에 있어서, 인간 세포에서, 선택적으로 인간 T 세포에서 상기 폴리뉴클레오타이드의 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산의 전사 이후, 상기 제2 핵산으로부터 전사된 mRNA, 선택적으로 메신저 RNA는 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%의 RNA 동질성을 나타내는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 172. 구현예 141 내지 171 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산에 존재하는 임의의 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 173. 구현예 141 내지 172 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 내 임의의 잠재적 스플라이스 공여 및/또는 스플라이스 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 174. 구현예 141 내지 173 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드 내의 임의의 잠재적 스플라이스 공여 또는 수용체 부위는 약 또는 적어도 약 0.70, 0.65, 0.60, 0.55, 0,50, 0.45, 0.40, 0.35, 0.30, 0.25, 0.20 미만의 스플라이스 예측 점수를 나타내고/거나 70% 미만, 65% 미만, 60% 미만, 55% 미만, 50% 미만, 45% 미만, 40% 미만, 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만 또는 20% 미만의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 175. 구현예 141 내지 174 중 어느 하나에 있어서, 상기 (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 176. 구현예 141 내지 175 중 어느 하나에 있어서, 상기 (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 177. 구현예 141 내지 176 중 어느 하나에 있어서, 상기 (a)의 제1 및/또는 제2 항원 결합 도메인은 가변 중쇄(VH) 영역 및 가변 경쇄(VL) 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 178. 구현예 141 내지 177 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 209에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 210에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 211에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 230에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 231에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 232에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 179. 구현예 141 내지 178 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 197 및 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 180. 구현예 141 내지 179 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 대해 적어도 또는 약 90%, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 181. 구현예 141 내지 180 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 125에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 126에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 127에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 130에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 131에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 132에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 182. 구현예 141 내지 181 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 183. 구현예 141 내지 182 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 대해 적어도 또는 약 90%, 적어도 또는 약 91%, 적어도 또는 약 92%, 적어도 또는 약 93%, 적어도 또는 약 94%, 적어도 또는 약 95%, 적어도 또는 약 96%, 적어도 또는 약 97%, 적어도 또는 약 98%, 적어도 또는 약 99%의 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 184. 구현예 141 내지 183 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 209에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 210에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 211에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 230에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 231에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 232에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하고; 및
상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 125에 제시된 바와 같은 CDR-H1, 서열 번호: 126에 제시된 바와 같은 CDR-H2 및 서열 번호: 127에 제시된 바와 같은 CDR-H3을 포함하는 VH 영역 및 서열 번호: 130에 제시된 바와 같은 CDR-L1, 서열 번호: 131에 제시된 바와 같은 CDR-L2 및 서열 번호: 132에 제시된 바와 같은 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 185. 구현예 141 내지 184 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 각각 서열 번호: 197 및 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하고; 및
상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 VH 영역 및 VL 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 186. 구현예 141 내지 185 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열을 포함하고 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 187. 구현예 141 내지 186 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 188. 구현예 141 내지 187 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 264 또는 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 189. 구현예 141 내지 188 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 하나는 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 상기 제1 또는 제2 항원 결합 도메인 중 다른 하나는 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 190. 구현예 141 내지 189 중 어느 하나에 있어서, (b)는 면역글로불린의 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 191. 구현예 141 내지 190 중 어느 하나에 있어서, (b)는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 192. 구현예 191에 있어서,
상기 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고;
상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이고/거나;
상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 193. 구현예 191 또는 구현예 192에 있어서, 상기 힌지 영역, CH2 및 CH3은 인간 IgG4로부터의 힌지의 전부 또는 일부, CH2의 전부 또는 일부 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 194. 구현예 191 또는 구현예 193에 있어서, 상기 힌지 영역, 상기 CH2 및 상기 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지, CH2 및 CH3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 195. 구현예 141 내지 194 중 어느 하나에 있어서, (b)는 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지와 비교하여 하나 이상의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 196. 구현예 141 내지 195 중 어느 하나에 있어서, (b)는 (약) 125 내지 300개 아미노산 길이, 125 내지 250개 아미노산 길이, 125 내지 230개 아미노산 길이, 125 내지 200개 아미노산 길이, 125 내지 180개 아미노산 길이, 125 내지 150개 아미노산 길이, 150 내지 300개 아미노산 길이, 150 내지 250개 아미노산 길이, 150 내지 230개 아미노산 길이, 150 내지 200개 아미노산 길이, 150 내지 180개 아미노산 길이, 180 내지 300개 아미노산 길이, 180 내지 250개 아미노산 길이, 180 내지 230개 아미노산 길이, 180 내지 200개 아미노산 길이, 200 내지 300개 아미노산 길이, 200 내지 250개 아미노산 길이, 200 내지 230개 아미노산 길이, 230 내지 300개 아미노산 길이, 230 내지 250개 아미노산 길이 또는 250 내지 300개 아미노산 길이를 가지며, 선택적으로 여기서 상기 스페이서는 (약) 224, (약) 225, (약) 226, (약) 227, (약) 228 또는 (약) 229개 아미노산 길이인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 197. 구현예 141 내지 196 중 어느 하나에 있어서, (b)는 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 198. 구현예 141 내지 197 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 하나에서 (b)는 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 다른 하나에서 (b)는 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 199. 구현예 141 내지 198 중 어느 하나에 있어서, (c)는 CD4, CD28 또는 CD8의 막관통 도메인, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8의 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 200. 구현예 141 내지 199 중 어느 하나에 있어서, (c)는 인간 CD28 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 201. 구현예 141 내지 200 중 어느 하나에 있어서, (c)는 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 202. 구현예 141 내지 201 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 하나에서 (c)는 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 다른 하나에서 (c)는 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 203. 구현예 141 내지 202 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 204. 구현예 141 내지 203 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 205. 구현예 141 내지 204 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 206. 구현예 141 내지 205 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 하나에서 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 다른 하나에서 (d)의 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 207. 구현예 141 내지 206 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 208. 구현예 141 내지 207 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 209. 구현예 141 내지 208 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 210. 구현예 141 내지 209 중 어느 하나에 있어서, 상기 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 211. 구현예 141 내지 210 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 하나에서 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되고 상기 제1 CAR 또는 상기 제2 CAR 중 다른 하나에서 (d)의 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 212. 구현예 141 내지 211 중 어느 하나에 있어서,
상기 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 하나는 (a) GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, (b) 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서, (c) 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 (d) 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제1 CAR 또는 제2 CAR 중 다른 하나는 (a) BCMA에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, (b) 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서, (c) 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 (d) 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 213. 구현예 141 내지 212 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열 대비 상기 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 214. 구현예 141 내지 213 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR은 GPRC5D에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하고 상기 제2 CAR은 BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 215. 구현예 141 내지 213 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 CAR은 BCMA에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하고 상기 제2 CAR은 GPRC5D에 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 216. (i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산은 상기 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고; 상기 제1 CAR은: GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 상기 제2 CAR은: BCMA에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 그리고 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열 대비 상기 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 217. (i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드에 있어서, 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산은 상기 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고; 상기 제1 CAR은: BCMA에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 48에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 상기 제2 CAR은: GPRC5D에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -, 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 스페이서, 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인, 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고; 그리고 상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열 대비 상기 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 218. 구현예 163 내지 217 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 219. 구현예 163 내지 218 중 어느 하나에 있어서, 상기 다중 시스트론 요소는 서열 번호: 44 또는 서열 번호: 45에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 220. 구현예 141 내지 215 및 217 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호: 299에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
구현예 221. 구현예 141 내지 215 및 217 내지 219 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 298에 제시된 서열을 암호화하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 222. 구현예 141 내지 216, 218 및 219 중 어느 하나에 있어서, 서열 번호: 302에 제시된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
구현예 223. 구현예 141 내지 216, 218, 219 및 222 중 어느 하나에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 서열 번호: 301에 제시된 서열을 암호화하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드.
구현예 224. 구현예 79 내지 223 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 벡터.
구현예 225. 구현예 224에 있어서, 상기 벡터는 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
구현예 226. 구현예 225에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
구현예 227. 구현예 1 내지 78 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체를 포함하는, 세포.
구현예 228. 구현예 141에 있어서, 상기 키메라 항원 수용체는 제1 키메라 수용체이고 상기 세포는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 229. 구현예 79 내지 223 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 세포.
구현예 230. 구현예 79 내지 97 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포에 있어서, 상기 폴리뉴클레오타이드는 제1 폴리뉴클레오타이드이고, 상기 세포는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 231. 구현예 228 또는 구현예 230에 있어서, 상기 제2 키메라 항원 수용체(CAR)는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 232. 구현예 231에 있어서, 상기 제2 CAR은 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 233. 구현예 231 또는 구현예 232에 있어서, 상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 234. 구현예 231 내지 233 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 235. 구현예 142 내지 234 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 (약) 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 236. 구현예 235에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 237. 구현예 231 내지 234 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 238. 구현예 228 내지 237 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 239. 구현예 235 내지 238 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 240. 구현예 235 내지 239 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 250. 구현예 235 내지 249 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 251. 구현예 231 내지 250 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 252. 구현예 251에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 253. 구현예 235 내지 252 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 254. 구현예 253에 있어서, 상기 제2 CAR의 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 255. 구현예 235 내지 254 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 256. 구현예 235 내지 254 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 257. 구현예 231 내지 256 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 258. 구현예 231 내지 257 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 259. 구현예 235 내지 258 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 260. 구현예 231 내지 259 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 260. 구현예 232 내지 259 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 261. 구현예 260에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는 세포.
구현예 262. 구현예 232 내지 261 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 263. 구현예 262에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 264. 구현예 262 또는 구현예 263에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 265. 구현예 262 내지 264 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 266. 구현예 262 내지 265 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 267. 구현예 266에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 268. 구현예 266 또는 구현예 267에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 269. 구현예 266 내지 268 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 270. 구현예 266 내지 269 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 271. 구현예 228 내지 270 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 272. 구현예 227 내지 271 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포는 림프구인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 273. 구현예 272에 있어서, 상기 세포는 NK 세포 또는 T 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 274. 구현예 272 또는 구현예 273에 있어서, 상기 세포는 T 세포이고 상기 T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 275. 구현예 227 내지 274 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포는 대상체로부터 수득된 1차 세포인 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 276. 구현예 227 내지 275에 있어서, 복수의 상기 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포.
구현예 277. 구현예 1 내지 78 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체를 포함하는 조성물.
구현예 278. 구현예 227 내지 277 중 어느 하나의 세포 또는 구현예 227 내지 277 중 어느 하나의 복수의 세포를 포함하는 조성물.
구현예 279. 구현예 278에 있어서, 상기 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 280. 구현예 1 내지 78 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체이거나 구현예 79 내지 97 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포; 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포를 포함하는, 조성물.
구현예 281. 구현예 280에 있어서, 복수의 상기 제1 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 282. 구현예 280 또는 281에 있어서, 복수의 상기 제2 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 283. 구현예 280 내지 282 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 284. 구현예 280 내지 283 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은 상기 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 285. 구현예 283 또는 구현예 284에 있어서, 상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 286. 구현예 280 내지 285 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 287. 구현예 280 내지 286 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 288. 구현예 287에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
구현예 289. 구현예 280 내지 286 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 290. 구현예 286 내지 289 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 291. 구현예 286 내지 290 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 292. 구현예 286 내지 291 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 293. 구현예 286 내지 292 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 294. 구현예 286 내지 293 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 295. 구현예 294에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 296. 구현예 286 내지 295 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 297. 구현예 296에 있어서, 상기 제2 CAR의 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 298. 구현예 286 내지 297 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 299. 구현예 286 내지 298 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR에서 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 300. 구현예 286 내지 299 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 301. 구현예 286 내지 300 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 302. 구현예 286 내지 301 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 303. 구현예 286 내지 302 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD38 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 304. 구현예 286 내지 303 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 305. 구현예 304에 있어서, 상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 306. 구현예 286 내지 305 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 307. 구현예 306에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 308. 구현예 306 또는 구현예 307에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 309. 구현예 306 내지 308 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 310. 구현예 306 내지 309 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 311. 구현예 310에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 312. 구현예 310 또는 구현예 311에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 313. 구현예 310 내지 312 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 314. 구현예 280 내지 312 중 어느 하나에 있어서, 상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 315. 구현예 310 내지 312 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 316. 구현예 280 내지 315 중 어느 하나에 있어서, 상기 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 317. 구현예 208 내지 316 중 어느 하나에 있어서, 상기 복수의 제1 세포는 T 세포를 포함하고, 선택적으로 상기 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 318. 구현예 186 내지 222에 있어서, 상기 복수의 제2 세포는 T 세포를 포함하고, 선택적으로 상기 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 319. 구현예 280 내지 318 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 상기 제1 복수의 세포 및 상기 제2 복수의 세포를 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1, 선택적으로 약 1:1의 비율로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 320. 구현예 280 내지 319 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 상기 제1 키메라 항원 수용체를 발현하는 상기 제1 복수의 세포 및 상기 제2 키메라 항원 수용체를 발현하는 상기 제2 복수의 세포를 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1, 선택적으로 약 1:1의 비율로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 321. 구현예 277 내지 320 중 어느 하나에서, 상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 322. 구현예 277 내지 321 중 어느 하나에 있어서, 상기 조성물은 멸균된 것임을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 323. 구현예 227 내지 276 중 임의의 구현예의 세포를 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
구현예 324. 구현예 277 내지 322 또는 388 중 임의의 구현예의 세포를 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
구현예 325. 구현예 1 내지 67 중 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체이거나 구현예 68 내지 79 중 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 활성 성분으로 포함하는 복수의 제2 세포 제2 단위 용량을 포함하는 조성물을 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
구현예 326. 질병 또는 장애가 있는 대상체에게 구현예 79 내지 97 중 임의의 구현예의 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물 또는 구현예 280 내지 325 및 388 중 임의의 구현예의 조성물을 투여하는 것을 포함한, 치료 방법.
구현예 327. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 구현예 227 내지 276 중 어느 하나의 세포의 용도.
구현예 328. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 구현예 277 내지 322 또는 388 중 어느 하나의 조성물의 용도.
구현예 329. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 구현예 227 내지 276 중 어느 하나의 세포의 용도.
구현예 330. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 구현예 277 내지 322 또는 388 중 어느 하나의 조성물의 용도.
구현예 331. 구현예 326 내지 330 중 어느 하나의 방법 또는 용도에 있어서 또는 구현예 323 내지 325 중 어느 하나의 용도를 위한 약학 조성물에 있어서, 상기 세포의 단위 용량은 약 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.25 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 4.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 또는 약 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는(각 수치 포함) 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 약학 조성물.
구현예 331. 구현예 326 내지 330 중 어느 하나의 방법 또는 용도에 있어서 또는 구현예 323 내지 325 중 어느 하나의 용도를 위한 약학 조성물에 있어서, 상기 세포의 단위 용량은 (약) 1.5 x 107개, (약) 2.5 x 107개, (약) 5.0 x 107개, (약) 7.5 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 2.25 x 108개, (약) 3.0 x 108개, (약) 4.5 x 108개, (약) 6.0 x 108개, (약) 8.0 x 108개 또는 (약) 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 약학 조성물.
구현예 332. 질병 또는 장애의 치료를 위해, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 구현예 1 내지 67 중 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체이거나 구현예 68 내지 79 중 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포 제2 단위 용량을 포함하는 조성물의 용도.
구현예 333. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한, 구현예 1 내지 67 중 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체이거나 구현예 68 내지 79 중 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포 제2 단위 용량을 포함하는 조성물의 용도.
구현예 334. 질병 또는 장애가 있는 대상체에게 구현예 1 내지 78 중 임의의 구현예의 키메라 항원 수용체이거나 구현예 79 내지 97 중 임의의 구현예의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포 제1 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 단계; 및 상기 대상체에게 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포 제2 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료 방법.
구현예 335. 구현예 334에 있어서, 상기 복수의 세포 제1 단위 용량 및 상기 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량은 독립적으로 (약) 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.5 x 109개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.25 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 0.6 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 2.25 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 7.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 또는 (약) 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는(각 수치 포함) 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 336. 구현예 334 또는 335 중 어느 하나의 방법 또는 용도에 있어서 또는 구현예 323 내지 325 중 어느 하나의 약학 조성물에 있어서, 상기 복수의 제1 세포를 포함하는 조성물 및 상기 복수의 제2 세포를 포함하는 조성물은 동시에, 순차적으로 또는 간헐적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 약학 조성물.
구현예 337. 구현예 334 내지 336 중 어느 하나에 있어서, 상기 복수의 제1 세포를 포함하는 조성물과 상기 복수의 제2 세포를 포함하는 조성물은 순차적으로 임의의 순서로 투여되는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 338. 구현예 334 내지 337 중 어느 하나에 있어서, 복수의 상기 제1 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 339. 구현예 334 내지 338 중 어느 하나에 있어서, 복수의 상기 제2 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 340. 구현예 334 내지 339 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 341. 구현예 334 내지 339 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은 상기 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 342. 구현예 340 또는 구현예 341에 있어서, 상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 343. 구현예 334 내지 342 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 344. 구현예 334 내지 343 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 345. 구현예 344에 있어서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 346. 구현예 344 또는 345 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 및 215 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 및 216 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 및 217 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 및 235 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 및 236 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 및 232 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 347. 구현예 344 내지 346 중 어느 하나에 있어서,
(a):
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(b):
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 348. 구현예 344 내지 347 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 349. 구현예 344 내지 348 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 350. 구현예 344 내지 349 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 351. 구현예 350에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 352. 구현예 344 내지 351 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 353. 구현예 352에 있어서, 상기 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 354. 구현예 344 내지 353 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 355. 구현예 344 내지 354 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 356. 구현예 344 내지 355 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 357. 구현예 344 내지 356 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 358. 구현예 344 내지 357 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는 상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 359. 구현예 344 내지 358 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 360. 구현예 344 내지 359 중 어느 하나에 있어서,
상기 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 361. 구현예 360에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 362. 구현예 344 내지 361 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 363. 구현예 362에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 364. 구현예 362 또는 구현예 363에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 365. 구현예 362 내지 364 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 366. 구현예 362 내지 365 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 367. 구현예 366에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 368. 구현예 366 또는 구현예 367에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 369. 구현예 366 내지 368 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 370. 구현예 366 내지 369 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 371. 구현예 344 내지 370 중 어느 하나에 있어서, 상기 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 372. 구현예 326 내지 371 중 어느 하나에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 GPRC5D의 발현과 관련된 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 373. 구현예 372에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현과 더 관련된 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 374. 구현예 326 내지 373 중 어느 하나에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 375. 구현예 326 내지 374 중 어느 하나에 있어서, BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 자가면역 질환 또는 장애인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 376. 구현예 375에 있어서, 상기 자가면역 질환 또는 장애는 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소성 자반증(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 샤가스병(Chagas’ disease), 그레이브병(Grave’s disease), 베게너 육아종증(Wegener’s granulomatosis), 다발성 결절성 동맥염(poly-arteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren’s syndrome), 심상성 천포창(pemphigus vulgaris), 피부 경화증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신장병(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노드 증후군(Reynaud’s syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture’s disease), Kawasaki disease(가와사키 병), 자가면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 377. 구현예 326 내지 376 중 어느 하나에 있어서, 상기 질병 또는 장애는 암인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 378. 구현예 377에 있어서, 상기 암은 GPRC5D 발현 암인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 379. 구현예 377 또는 구현예 378에 있어서, 상기 암은 형질 세포 악성 종양이고 상기 형질 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 380. 구현예 377 내지 379 중 어느 하나에 있어서, 상기 암은 다발성 골수종(MM)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 381. 구현예 380에 있어서, 상기 암은 재발성/불응성 다발성 골수종인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 382. 구현예 326 내지 381 중 어느 하나에 있어서,
상기 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 또는 재발하였거나; 또는
상기 방법은 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발한 치료를 위한 대상체를 선택하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 383. 구현예 326 내지 333 및 335 내지 382 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포의 단위 용량을 투여하기 전에, 상기 대상체는 앞서 상기 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받은 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 384. 구현예 334에 있어서, 상기 세포의 제1 단위 용량 및 상기 세포의 제2 단위 용량을 투여하기 전에, 대상체는 앞서 상기 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받은 것을 특징으로 하는, 방법.
구현예 385. 구현예 383 또는 구현예 384 중 어느 하나에 있어서, 상기 BCMA-표적화된 요법은 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하는 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 386. 구현예 383 내지 385 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발한 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 387. 구현예 326 내지 386 중 어느 하나에 있어서, 상기 대상체는 이전의 투여 이후에 BCMA 항원 또는 에피토프 손실을 나타내는 다발성 골수종 세포, BCMA 하향조절 및/또는 BCMA-음성 종양 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도.
구현예 388. 구현예 278 또는 구현예 279에 있어서, 상기 조성물은 복수의 세포를 포함하고, 상기 세포의 적어도 일부는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 상기 제1 CAR을 포함하고, 상기 세포의 일부는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 CAR을 포함하고, 선택적으로 상기 제2 항원은 BCMA이고, 상기 세포의 일부는 상기 제1 CAR 및 상기 제2 CAR을 모두 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물.
구현예 389. 구현예 1 내지 78 중 어느 하나의 키메라 항원 수용체이고/거나 구현예 79 내지 97 중 어느 하나의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포; 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포를 포함하는, 조합물(combination).
구현예 390. 구현예 389에 있어서, 복수의 상기 제1 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 약 10%, 9%, 8%, 7%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 391. 구현예 389 또는 390에 있어서, 복수의 상기 제2 세포 중에서, 상기 복수의 세포의 (약) 10%, (약) 9%, (약) 8%, (약) 7%, (약) 5%, (약) 4%, (약) 3%, (약) 2% 또는 (약) 1% 미만이 긴장성(tonic) 신호 전달 및/또는 항원 비의존적 활성 또는 신호 전달을 나타내는 키메라 항원 수용체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 392. 구현예 389 내지 391 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 393. 구현예 389 내지 391 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은 상기 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 394. 구현예 392 또는 구현예 393에 있어서, 상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5로 구성된 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 395. 구현예 389 내지 394 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 396. 구현예 389 내지 395 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은: (i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 및/또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 397. 구현예 396에 있어서, 상기 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 398. 구현예 396 또는 397에 있어서, 상기 제2 CAR은: (1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인 - 여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은 (i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 209, 212 또는 215에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 210, 213 또는 216에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208, 211, 214 또는 217에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및 (ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231, 234 또는 236에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223, 226, 229 또는 232에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함 -; (2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 및/또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서; (3) 막관통 도메인; 및 (4) 세포내 신호 전달 영역;을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 399. 구현예 396 내지 398 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 212, 213 및 214의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 233, 234 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 400. 구현예 396 내지 399 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 401. 구현예 396 내지 400 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98%, (약) 99% 또는 (약) 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 402. 구현예 396 내지 401 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 403. 구현예 396 내지 402 중 어느 하나에 있어서, 상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 404. 구현예 403에 있어서, 상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 405. 구현예 396 내지 404 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 406. 구현예 405에 있어서, 상기 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 407. 구현예 396 내지 406 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 408. 구현예 396 내지 406 중 어느 하나에 있어서, 상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 409. 구현예 396 내지 408 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 410. 구현예 396 내지 409 중 어느 하나에 있어서, 상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 411. 구현예 396 내지 410 중 어느 하나에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 215, 216 및 217의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 235, 236 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 412. 구현예 396 내지 411 중 어느 하나에 있어서, 상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 413. 구현예 396 내지 412 중 어느 하나에 있어서,
상기 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 414. 구현예 413에 있어서, 상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 415. 구현예 396 내지 414 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 416. 구현예 415에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 417. 구현예 415 또는 구현예 416에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 418. 구현예 415 내지 417 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 419. 구현예 415 내지 418 중 어느 하나에 있어서, 상기 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 420. 구현예 419에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 421. 구현예 419 또는 구현예 420에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 422. 구현예 419 내지 421 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 423. 구현예 419 내지 422 중 어느 하나에 있어서, 상기 공자극 신호 전달 영역은 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 424. 구현예 389 내지 423 중 어느 하나에 있어서, 상기 암호화된 제2 키메라 항원 수용체는 N 말단에서 C 말단까지 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 순서대로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물.
구현예 425. 구현예 389 내지 424 중 어느 하나의 조합물과, 선택적으로 상기 제1 및 제2 복수의 세포의 단위 용량을, 선택적으로 구현예 326 내지 387 중 어느 하나의 방법 또는 용도에 따라, 투여하기 위한 사용 설명을 포함하는 키트.
구현예 426. 구현예 389 내지 424 중 어느 하나의 조합물 또는 구현예 425의 키트를 포함하는 제조품.
구현예 427. 구현예 426에 있어서, 상기 복수의 제1 세포의 단위 용량을 포함하는 제1 용기 및 상기 복수의 제2 세포의 단위 용량을 포함하는 제2 용기 - 선택적으로 상기 제1 및 제2 용기는 독립적으로 바이알(vial) 또는 백(bag)임 - 를 포함하는, 제조품.
구현예 428. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 장애는 암인, 구현예 389 내지 424 중 어느 하나의 조합물의 용도.
구현예 429. 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 구현예 389 내지 424 중 어느 하나의 조합물의 용도.
구현예 430. 구현예 389 내지 424 중 임의의 구현예의 조합물을 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하기 위한 약학 조성물.
IX.
실시예들
하기 실시예들은 예시적인 목적으로만 포함되며 본 발명의 범위를 한정하려는 의도는 아니다.
실시예 1: 다발성 골수종(MM)에서 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)의 발현
D. GPRC5D mRNA 발현
다발성 골수종(MM)의 면역 요법에 대한 잠재적인 세포 표면 표적을 식별 및 평가하기 위해, 30 MM 세포주를 포함한 1,000개가 넘는 악성 세포주에 걸친 mRNA 발현을 암 세포주 백과사전(CCLE; Barretina et al., Nature. (2012) 483(7391): 603-607)을 이용하여 인실리코(in silico)로 평가하였다. 종양 세포에 더하여 1차 비악성 조직 유형에서 mRNA 발현을 평가하기 위해 유전자형-조직 발현(GTEx) 프로젝트 데이터베이스(The GTEx Consortium, Nat Genet. (2013) 45(6): 580-585)를 또한 조사하였다.
CD138을 대조군 표지자로 사용하였는데, CD138이 정상 및 악성 형질 세포를 식별하는 데 사용하는 일반적인 표면 표지자이기 때문이다. CD138은 MM 세포주와 대부분의 종양 유형의 세포주에서 높은 수준으로 발현되었으며, 상부 호흡소화관 종양에서 가장 높은 평균 발현을 나타냈다(도 1a). GPRC5D mRNA는 MM 세포주에서 높게 발현되었지만(n=30); CD138과 대조적으로, 다른 종양 유형은 유의미한 발현을 나타내지 않았다(도 1b).
유전자형-조직 발현(GTEx) 데이터베이스에서 온 1차 정상(비악성) 조직 유형에서의 발현 분석은 다른 조직들 중에서도 식도, 피부, 폐 및 간에서 높은 CD138 mRNA 발현을 나타냈다(도 2a). 이와 대조적으로, GPRC5D mRNA는 피부 샘플에서 가변적인 발현을 제외하고는 임의의 정상 조직에서 높게 발현되지 않았다(도 2b). 인간 골수 샘플에서 GTEx mRNA 발현의 분석은 말초 혈액의 B 세포에서보다 1차 악성 형질 세포 및 정상 형질 세포에서 각각 1000배 및 500배 높은 GPRC5D mRNA 발현을 나타냈다(도 2c).
GPRC5D mRNA 발현과 임상 결과 사이의 관계를 평가하기 위해, MMRF CoMMpass 임상 시험(NCT0145429)에서 765명의 환자의 공개적으로 이용 가능한 CD138-분류된 RNAseq 발현 데이터(research.mmrf.org; version IA13)를 분석하였다. 환자는 (1) 중앙값 위의 GPRC5D 발현을 보인 환자와 (2) 중앙값 아래의 GPRC5D 발현을 보인 환자의 두 그룹으로 계층화하였다. 더 높은 GPRC5D 발현은 단축된 무진행 생존율과 현저한 상관관계가 있었다(도 3a). 하지만, GPRC5D 발현은 국제 병기 분류 체계(ISS) 점수(도 3b; n=중앙값 위 369, 중앙값 아래 374) 또는 유전자 증폭, 결실, 및 위치이동을 포함한 임의의 평가된 일반적인 세포유전학적 이상(도 3c 내지 3h; n=중간값 위 287~291, 중간값 아래 280~282)과 상관관계가 없었다.
E. GPRC5D 단백질 발현
1. 면역 조직 화학(IHC)적 분석
다발성 골수종 세포에서 GPRC5D 단백질을 평가한 이전 보고서들은 유세포 분석을 이용하여 세포 표면 발현을 식별할 수 없었다(Frigyesi. et al. Robust isolation of malignant plasma cells in multiple myeloma. Blood 123, 1336-40 (2014)). 이러한 부정적인 결과는 다양한 이용 가능한 시약을 사용하여 확인되었다. 대신에, GPRC5D 단백질 발현을 평가하기 위해, GPRC5D를 발현하도록 조작된 K562 세포(K562-GPRC5D)와 내인성 GPRC5D를 발현하는 인간 MM 세포주(OPM-2 및 NCI-H929) 상에서, 단클론 인간 항-GPRC5D 항체(Abcam, 품목 번호 ab55044)를 사용하여, 항-GPRC5D 면역 조직 화학(IHC)적 분석을 수행하였다. 슬라이드들을 다중 결합 호스래디시 과산화효소-링커 항체-접합 시스템 및 색소원(chromogen) 3,3’-다이아미노벤지딘(GPRC5D 변역 반응을 시각화하기 위해 갈색 염색으로 보임)으로 처리하고 헤마톡실린으로 대조 염색하였다. GPRC5D 발현 세포는 양성 염색을 보였고, 모 K562 세포에서는 염색이 관찰되지 않았고, 그리고 1차 인간 편도 조직에서 희귀 형질 세포의 염색만 관찰되었다. 각 세포주의 IHC 이미지에 대한 막(membrane) 광학 밀도(평균 ± 사분위 범위)의 디지털 이미지 분석(Halo)에 의한 이상치(outlier) 상자 그림 정량화를 사용하여 가장 큰 범위를 나타내는 항체 농도를 결정하였다(도 4a).
2. 다발성 골수종(MM)에서 GPRC5D 및 BCMA 발현
83명의 골수종 환자의 1차 골수 샘플에 대하여 다중 정량적 면역형광법(Q-IF)을 이용하여 CD138, BCMA, 및 GPRC5D 발현을 정량화하였다. 다발성 골수종 환자들의 83개 골수 샘플의 포르말린 고정되고 파라핀 포매된 부분을 (1) 토끼 항-인간 CD138 및 형광단 로다민 6G, (2) 마우스 항-인간 B 세포 성숙 항원(BCMA) 및 형광단 DCC, 및 (3) 마우스 항-인간 G 단백질 결합 수용체 C 족 5 그룹 D 멤버(GPRC5D) 및 형광단 CY5를 사용하는 다중 면역형광법에 의한 분석 전에 항원 복원(antigen retrieval)을 거쳤다. 염색된 골수 샘플의 전체 부분을 설정된 노출에서 Pannoramic P250 슬라이드 스캐너를 사용하여 스캔하였다(3DHISTECH, Perkin Elmer, Waltham, MA). 양성 세포의 백분율은 Halo 2.0 이미지 분석 플랫폼(Indica Labs, Corrales, NM)을 사용하여 각 표지자에 대해 양성률(positivity) 임계값을 설정한 것을 기초로 하였다. 양성 및 음성 세포의 수를 세었다. 양성 세포는 CD138+ 종양 세포들 중에서 선택하였고 양성 백분율을 CD138+ 종양 세포들로 정규화하였다. BCMA 및 GPRC5D의 유병률을 1% 이상의 양성률을 가진 CD138+ 종양 세포들 중에서 측정하였다.
도 4b에 도시된 바와 같이, 산정된 골수 샘플의 98%는 적어도 CD138+ 세포의 서브세트에서 GPRC5D-양성 염색을 나타냈다. 샘플들에서, 대부분의 CD138+ 세포는 BCMA 및 GPRC5D 둘 모두에 대해 양성이었지만, CD138+ 세포의 우세한 집단이 두 항원 중 하나에서만 발현하거나 둘 모두에서 발현되지 않은 샘플이 여럿 있었다. CD138+ 세포의 50% 넘는 수가 또한 BCMA, GPRC5D, 또는 BCMA나 GPRC5D에 대해 양성인 샘플의 백분율을 또한 83개 1차 환자 샘플 중에서 산정하였다(도 4c). 구체적으로, 일부 BCMA-표적화된 CAR T 세포 요법 시험(NCT02215967, NCT02658929)에 사용된, CD138+ 세포 상의 50% 항원 발현 이상의 컷오프(cut-off)를 사용하여, 샘플의 65%(54/83)가 이 수준을 넘는 GPRC5D 발현을 보이고, 샘플의 73%(61/83)가 BCMA에 대해 이 임계값을 충족하고, 한편 88%(73/83)가 BCMA 또는 GPRC5D의 발현을 고려하였을 때 이 임계값을 충족하는 것으로 관찰되었다(도 4c).
피어슨 상관관계 분석을 사용하여 회귀선에 적합성을 나타내는 R2를 가진 BCMA 및 GPRC5D 발현 사이의 상관관계의 유의성을 평가하였다. 분석은 CD138+ 세포 상의 GPRC5D 발현이 BCMA 발현과 관련이 없음을 나타냈다(R2=0.156; 도 4d).
3. 비악성 조직에서의 GPRC5D 발현
정상 조직에서 GPRC5D 단백질 발현을 평가하였다. 3명의 인간 공여체로부터 각각 온, 30개의 상이한 1차 정상 조직의 중심부 생검을 면역 염색법으로 평가하였다. 이들 중에서, 24개는 GPRC5D 단백질을 발현하지 않았다(부신, 골수, 유방(n=5), 뇌(소뇌), 뇌(대뇌), 뇌(뇌하수체), 식도, 심장, 간, 폐(기관지주위 샘 아님), 중피세포, 난소, 말초 신경, 태반, 전립선, 침샘, 비장, 골격근, 고환, 흉선, 갑상선, 편도, 자궁, 및 자궁경부 조직).
IHC에서 양성 염색 징후를 보인 조직 유형의 경우, 비인간 영장류(시노몰구스 원숭이; 인간에 대해 96% 아미노산 상동성; 항체 교차 반응성)의 샘플을 사용하여 염색을 반복하였고, 이는 비슷한 결과를 산출하였다. IHC 발현 결과는 인간, 시노몰구스, 및 뮤린 조직에서 RNA 제자리 교잡법(in situ hybridization)(RNA-ISH)에 의하여, 일부 경우에 qPCR에 의하여 확인하였다(표 E1). 비-형질 세포 정상 조직 중에서, IHC는 모낭 모구 및 기관지 주변부 샘으로부터 유래한 것을 포함한 세포들에서 양성이었고, 모낭 모구는 RNA 제자리 교잡법(ISH) 및 정량적 PCR에 의해 발현이 확인된 유일한 조직이었다. 피부의 정량적 PCR은 약한 양성(표 E1)이었고, 피부에서 드문 세포 유형으로 제한된 발현과 일치하였다.
표 E1. 비악성 조직에서의 GPRC5D 발현
실시예 2: 항-GPRC5D scFv의 생성 및 에피토프 매핑
A. 항-GPRC5D scFv의 생성
인간 B 세포 유래 scFv 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 GPRC5D를 발현하는 세포에는 결합하지만 비-GPRC5D 단백질을 발현하는 세포에는 결합하지 않는 GPRC5D 특이적인 scFv를 식별하였다. 선별을 위한 GPRC5D를 발현하는 세포를 생성하기 위해, NIH-3T3 섬유아세포에 레트로바이러스를 통해 인간 GPRC5D cDNA를 안정적으로 형질도입하여 파지 디스플레이 라이브러리 패닝(panning)을 위해 안정한 인공 항원 제시 세포(hGPRC5D-aAPCs)를 생성하였다. hGPRC5D-aAPCs 상에서 GPRC5D의 발현은 유세포 분석에 의해 확인되었고, 높은 발현 아클론(subclone)이 팽창되었다. hGPRC5D-aAPCs에 대하여 인간 B 세포 유래 scFv 파지 디스플레이 라이브러리의 패닝에 의해 파지 디스플레이를 수행하였다.
파지 라이브러리 선별 후에, 양성 클론을 서열분석하였고, 고유 클론은 인간 MM 세포주 MM.1S 및 NCI-H929에는 결합하지만 급성 골수성 백혈병(AML) 세포주 SET2에는 결합하지 않는 두 번째 검증 단계를 거쳤다. 서른 두(32)개의 고유 클론이 각각 5개 및 3개 하위족을 커버하는 경쇄 및 중쇄 CDR을 가진 것으로 식별되었고, HCDR3 길이는 6 내지 23개 아미노산 범위였다. MM.1S 및 NCI-H929 세포에는 결합하지만, GPRC5D-음성 세포주에는 결합하지 않는 가장 특이적인 결합을 나타낸 7개 클론을 아래에서 기술하는 바와 같이 CAR 작제물로 발전시키기 위해 선택하였다.
B. 에피토프 매핑
GPRC5D의 세포외 도메인을 커버하는 중첩 15량체 펩타이드의 라이브러리를 합성하여 가요성 지지체에 화학적으로 연결하여, 위에서 생성된 GPRC5D 표적화된 scFv의 서브세트의 선형, 배좌(conformational) 및 불연속 (펩타이드를 지지체에 화학적으로 결합을 통하여) 에피토프 결합을, ELISA-기반 방법을 사용하여 산정하였다. scFv는 식별된 scFv 중 적어도 하나에 의해 결합된 GPRC5D 7-막관통 단백질의 모든 세포외 루프와 함께, 다양한 에피토프에 결합하였다(도 5).
실시예 3: 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체(CAR) 및 항-GPRC5D CAR을 발현하는 세포의 생성
다양한 구조 형식으로 위에서 식별된 7개 후보로부터의 GPRC5D-표적화된 인간 scFv를 통합시켜 키메라 항원 수용체(CAR)를 조작하였다(표 E3).
위에서 기술한 각 scFv를 함유한 항원 결합 도메인을 암호화한, CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물을 생성하였고, 여기서 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)는 (서열 번호: 52에 제시된 잔기를 함유한) 링커에 의해 연결되었고 각 scFv는 VH/VL 배향 및 VL/VH 배향이 되도록 생성되었다.
각각 생성된 CAR 작제물은 scFv 항원 결합 도메인; 세 가지 상이한 길이의 면역글로불린 유래 스페이서 도메인[짧은(힌지 단독, 12aa; 서열 번호: 15); 중간(힌지-CH3, 119aa, 서열 번호: 16); 또는 Fc 수용체 결합을 제한하기 위해 CH2 변형이 있는 긴(힌지-CH2-CH3, 228aa; 서열 번호: 17, 서열 번호: 73에 제시된 서열에 의해 암호화됨)] 중 하나; 인간 CD28 유래 막관통 도메인(서열 번호: 18); 인간 4-1BB 유래 세포내 신호 전달 도메인(서열 번호: 19); 및 인간 CD3제타 유래 세포내 신호 전달 도메인(서열 번호: 20)을 함유했다.
표 E3은 예시적인 생성된 항-GPRC5D CAR 작제물의 성분, 및 서열 번호를 제시한다.
표 E3. GPRC5D CAR 작제물의 성분
CAR을 암호화하는 핵산 작제물이 예시적인 녹색 형광 단백질(GFP)을 더 암호화하는 이중 시스트론 작제물로서 생성되었고, 이는 자가 절단 T2A 서열(서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는, 서열 번호: 44에 제시된 서열)에 의해 CAR 서열로부터 분리되었다.
상기 핵산 작제물을 세포의 형질도입을 위해 렌티바이러스 발현 벡터 또는 레트로바이러스 발현 벡터로 클로닝하였다. 렌티바이러스 작제물을 위해, 긴 스페이서를 함유한 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 코돈 최적화하고 잠재적 스플라이스 부위에 대해 산정하고 잠재적 예측된 스플라이스 부위의 제거를 포함하여 보존적인 방식으로 변형시켰다. 인간 세포에서 발현을 위한 코돈 최적화 이후, DNA 서열의 스플라이스 부위에 대해 분석하였다(예를 들어, NNSPLICE 버전 0.9 온라인 스플라이스 부위 예측 도구; fruitfly.org, Berkeley Drosophila Genome Project, Berkeley, CA). 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위를 독립적으로 평가하였다. 예를 들어, 프로모터 영역 및 긴 스페이서 영역에서, 0.7보다 큰(스플라이스 이벤트 70% 확률보다 큰) 스플라이스 부위 점수를 가진 식별된 스플라이스 공여 및 스플라이스 수용체 부위를 잠재성 돌연변이에 의해 변형하여 스플라이스 부위 점수를 0.7 미만으로 감소시켰다. 상기 영역들 중에서 스플라이스 부위 제거를 위한 코돈 최적화 이후에 더 긴 스페이서 영역 서열들 내의 것들을 더 변형하였다. CAR의 더 긴 스페이서를 암호화하는 변형된 뉴클레오타이드 서열의 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 74에 제시된다.
1차 인간 T 세포의 형질도입을 위해, 아래 연구들에 기술된 바와 같이, 1차 인간 T 세포를 건강한 공여체 또는 뉴욕 혈액 센터(New York, NY)로부터 수득된 전혈로부터 단리하였다. T 세포를 재조합 IL-2, IL-7 및 IL-15의 존재 하에, 24시간 동안 식물성혈구응집소(2mg/mL) 또는 항-CD3/항-CD3 자성 비드 1:1 비율로 자극하였다. T 세포가 자극 개시 2일 내지 3일 후에 바이러스로 회전 접종에 의해 형질도입되었고, 팽창시킨 후 세포를 수확하였으며, 일부 경우에, 냉동 보존하고 사용하기 전에 해동하였다. 형질도입 효율은 4 내지 10일에 유세포 분석에 의해 결정하였다.
실시예 4: 상이한 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체(CAR)로부터 항원 비의존적(긴장성) 신호 전달의 산정
상동성 의존적 수선(HDR)을 통해 표적화된 통합에 의해 Nur77 녹-인 리포터(knock-in reporter)를 함유한 적합한 안정한 주르카트 T 세포 리포터 세포주를 생성하였고, 여기서 리포터 분자를 암호화하는 핵산 서열이 내인성 Nur77 자리에 삽입되었다. 예시적인 적색 형광 단백질(RFP) 리포터 분자는, 정지 코돈 전에, 그리고 “자가 절단” T2A 요소(서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는, 서열 번호: 45에 제시된 서열) 후에, Nur77 발현의 리포터로서 동시 발현을 허용하기 위해, 주르카트 T 세포 클론 E6-1(ATCC®TIB-152™) 내인성 Nr4a1(Nur77) 유전자의 인프레임 하류에 삽입되도록 HDR을 통해 표적화하였다.
Nur77-RFP 주르카트 T 세포주에 GFP를 함유한 이중 시스트론 작제물과 상기 실시예 3에 기술된 42개의 상이한 CAR 작제물 중 하나를 안정적으로 형질도입하였다. Nur77이 T 림프구에서 즉각적인 초기 유전자 생성물이기 때문에 Nur77-리포터 세포주가 CAR-조작된 세포에서 T 세포 활성화를 산정하는데 사용되었고; 전사는 CD3 제타 신호 전달의 하류에서 특이적으로 개시되며 사이토카인 또는 TLR 매개 신호의 영향을 받지 않는다. 본 모델에서, 긴장성 신호 전달은 GPRC5D 항원 자극의 부재 하에서 RFP 발현으로 표시되었다.
CAR-형질도입된 Nur77-RFP 주르카트 T 세포 각각의 5x105개를 GPRC5D-발현 세포의 부재 하에서 인큐베이션하였다. CAR의 형질도입은 GFP에 의해 측정하였고 긴장성 신호 전달은 형질도입 후 2일, 7일 및 11일에 RFP를 발현한 GFP-발현(즉, CAR-형질도입된) 세포의 백분율로 결정하였다. GFP+ 세포로부터 검출된 긴장성 및 비긴장성 신호 전달은 도 6a-6b에 요약되어 있다. 분석 결과는 CAR 작제물 중에서 다양한 긴장성 신호 전달을 보여주었으며, 인간 GPRC5D-203 scFv(VL/VH 및 VH/VL)를 포함한 작제물이 가장 낮은 긴장성 신호 전달을 표시하였다. 상기 CAR을 발현하는 세포에서 가장 높은 긴장성 신호 전달 수준과 관련된 특정 CAR 작제물은 또한 주르카트 리포터 세포의 낮은 성장과 관련이 있는 것으로 관찰되었으며 추가 평가로부터 배재했다(짧은 스페이서가 있는 GPRC5D-204 VH/VL 및 VL/VH와 중간 스페이서가 있는 GPRC5D-206 VL/VH).
CAR 작제물의 항원-비의존적 신호 전달 및 항원-의존적 신호 전달을 비교하였다. CAR-형질도입된 Nur77-RFP 주르카트 T 세포 또는 비-형질도입된 모 세포를 항원의 존재 없이 또는 GPRC5D-발현 MM.1S 골수종 세포의 존재 하에 1:2의 효과기:표적(E:T) 비율로 인큐베이션하였다. 20시간 후에 CAR의 형질도입의 척도 또는 T 세포 신호 전달의 척도로서 각각 GFP 및 RFP 신호를 산정하였다. 항원 부재 하에서 RFP 신호를 표시하는 CAR-형질도입된 주르카트 세포(GFP+)의 백분율을 항원의 존재 하에서 RFP 신호를 표시하는 상기 세포에 대하여 점을 찍었다(도 6c-6e). 이 분석의 결과는 긴 스페이서의 편입이 CAR을 통한 항원 매개 신호 전달을 증가시지만, 더 짧은 스페이서를 가진 CAR 작제물에서 관찰되는 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달을 유도할 가능성은 낮다는 것을 보여주었다.
도 6f는 GPRC5D 항원(MM.1S 골수종 세포)의 부재하에서(패널의 맨 윗줄; 항원-비의존적 긴장성 신호 전달) 또는 존재하에서(패널 맨 아랫줄; 항원-의존적 신호 전달) 인큐베이션 후에, 예시적인 긴 스페이서를 함유한 항-GPRC5D CAR-발현 작제물 또는 비-형질도입된 모 세포의 대표적인 흐름도를 도시한다. CAR-형질도입된 세포는 y축을 따라 GFP+로 표시되고, 신호 전달은 x축을 따라 RFP+로 표시된다. 각 패널의 오른쪽 상단 사분면에 표시된 값은 RFP+였던 GFP+ 세포의 백분율이다. 테스트한 CAR 중에서, 긴 스페이서가 있는 GPRC5D-203 VL/VH는 항원 노출 후 활성화 비율이 가장 높았던 반면 가장 낮은 긴장성 신호 전달 비율을 유지하였다.
실시예 5: 인간 항-GPRC5D CAR의 특이성
GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR의 scFv 항원 결합 도메인의 결합 특이성 및 표적외 결합에 대해 테스트하였다.
A. 세포-세포 상호 작용 분석
G 단백질 결합 수용체(GPCR) 중에서 신호 전달 도메인을 결여한 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR의 결합 특이성을 테스트하였다. 비-신호 전달 CAR을 세포질 mCherry를 포함한 세포 표면 발현 벡터를 사용하여 HEK293 세포에서 일시적으로 발현하였다. 동시에, 인간 GPCR 라이브러리의 개별 수용체의 cDNA를, 세포질 GFP를 발현하는 벡터에 담아, HEK293 세포에서 일시적으로 발현하였다. 이들 중에서, 202 GPCR은 25% 초과 형질도입의 품질 관리를 통과하였고 표적외 결합에 대해 선별되었다. 세포-세포 상호 작용을 검출하는 자동화된 유세포 분석을 사용하여 결합을 결정하였다. 예시적인 GPRC5D CAR은 평가한 모든 GPCR과 비교하여 GPRC5D과 독점적으로 상호 작용하였다(도 7a; 유의성에 대한 사전 지정된 임계값(수평선): Z 점수 3; P<0.0027).
B. 세포 마이크로어레이 분석
GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR의 특이성은 scFv-Fc IHC 분석에서 확인되었다. 각각 4,417개 인간 세포막단백질 중 하나를 발현하는 개별 HEK293 세포 집단을 현미경 슬라이드 상의 세포 마이크로어레이 스팟에서 성장시켜 mIgG2a Fc 동종형 음성 대조군인 mIgG2a Fc 항체에 융합된 항-GPRC5D-203 VL/VH scFv(서열 번호: 8)로 선별하였다. 세포 마이크로어레이의 결합을 형광 표지된 항-mIgG2a 2차 항체로 자동화된 형광 현미경법에 의해 산정하였다.
결과는 GPRC5D에 대한 강한 결합 및 2개의 추가 단백질인 프로토카데린 알파 1(PCDH1A) 및 Fc 감마 수용체 2A(CD32a; FCGR2A, Fc 상호 작용에 대한 잠재성이 공지된 단백질)에 대한 약한 중간 잠재성 표적외 결합을 나타냈다. 이 단백질들을 발현하는 세포의 소규모 두 번째 스크린은 결합에 대한 잠재성을 나타냈다(도 7b).
C. 표적외 항원-의존적 활성화
표적외 효과(off-target effect)에 기초해 기능적 활성을 평가하기 위해, 잠재적 표적외(off-target) 결합제(binder) PCDH1A 및 FCGR2A를 K562 세포에서 발현하고, 실시예 4에 기술된 분석법을 사용하여, GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 발현하도록 형질도입된 주르카트 Nur77/RFP 리포터 세포와 공배양하였다. BCMA를 발현하는 K562 세포를 음성 대조군으로 사용하였다. 세포를 5:1, 1:1 및 1:5의 E:T 비율에서 인큐베이션하였다. 각 조건마다 RFP+ 세포/GFP+ CAR-형질도입된 세포 백분율을 결정하였다. 도 7c에 도시된 바와 같이, K562-GPRC5D 세포와의 공배양만이 항-GPRC5D CAR-발현 리포터 세포의 활성화를 초래했고; K562-PCDH1A, K562-FCGR2A, 또는 K562-BCMA의 공배양은 항-GPRC5D CAR-발현 리포터를 활성화하지 않았다.
D. GPRC5D-의존적 활성화
GPRC5D 203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR이 GPRC5D를 특이적으로 인식하는지 더 확인하기 위해, CRISPR-Cas9 시스템을 사용하여 GPRC5D를 OPM2 세포에서 녹아웃하였다. 간단히, GPRC5D 엑손 1에 근접하고 그 내에 있는 5개의 CRISPR RNA(crRNA) 가이드(gRNA)를 선택하였다(서열 번호: 292-296). crRNA들을 Alt-R CRISP-Cas9 전이-활성화 crRNA(tracrRNA)와 1:1 비율로 복합체를 형성하여 두 부분으로 구성된 gRNA를 생성하였다. 모든 5개의 gRNA를 혼주하여(pooled) Cas9와 2:1의 비율로 인큐베이션하여 리보핵단백질(RNP) 복합체를 생성하였다. OPM2 세포를 GPRC5D를 표적화하는 Cas9 RNP로 전기 천공하였다. 전기 천공된 세포를 팽창 및 클로닝하였으며, 팽창된 클론을 중합효소연쇄반응(PCR)에 의해 선별하여 GPRC5D 자리에서 결실(deletion)을 확인하였다.
OPM2 모 세포 또는 GPRC5D-녹아웃 세포를 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR 또는 항-BCMA CAR을 발현하도록 조작된 주르카트 Nur77RFP 세포(실시예 4에 기술됨)와 1:1 비율로 배양하고, 20시간 동안 인큐베이션하였다. 유세포 분석으로 RFP 발현의 변화를 측정하여 상기 CAR의 활성화를 산정하였다. 도 7d에 도시된 바와 같이, OPM2 세포와의 공배양 후에 GPRC5D-203 VL/VH CAR에 의해 매개된 주르카트 Nur77/RFP 리포터 세포의 활성화는, 이들이 대신 CRISPR-Cas9을 사용하여 GPRC5D가 녹아웃된 OPM2 세포와 공배양되었을 때 폐기되었다.
이 결과들은 항-GPRC5D-203 (VL/VH), 긴 스페이서 CAR이 GPRC5D를 특이적으로 인식함을 보여주었다.
실시예 6: GPRC5D 표적화된 CAR T 세포 요법의
시험관 내
활성
세포 독성 활성 및 항원의 존재 하에서 사이토카인의 생산을 유도하는 능력에 기초하여 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 포함하는 CAR T 세포의 기능적 활성을 테스트하였다. 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해, 인간 공여 대상체로부터의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 T 세포를 단리하였다. 실시예 3에 기술된 바와 같이, 단리된 T 세포에 항-GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물을 함유한 레트로바이러스 벡터를 형질도입하였다. 대조군으로, 동일한 공여체의 T 세포에 항-BCMA scFv 또는 엉뚱하게 표적화된 항-CD19 scFv를 포함한 CAR을 형질도입하였고, 또는 모의 형질도입하였다.
A. 세포 독성
MM 세포주에 대한 CCLE RNAseq 또는 1차 MM 세포(도 8a; 상자에 도시된 1차 다발성 골수종 세포)에 대한 Blueprint RNAseq에 의해 다발성 골수종 세포주 및 1차 다발성 골수종 세포의 패널의 GPRC5D mRNA 발현을 평가하였다. CAR T 세포를 MM1.S, OPM2, 및 RPMI-8226 세포주와 여러 효과기 대 표적(E:T) 비율의 범위에서 24시간 동안 공배양하고 세포 용해를 모니터링하였다. 도 8b에 도시된 바와 같이, 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포는 모든 세 세포주에서 세포 독성을 유도하였고, 공여체와 일치하는, 모의 형질도입된 T 세포로 정규화되었다.
CAR T 세포를 반딧불이 루시퍼라아제(OPM2-ffLuc MM)를 발현하도록 조작된 (내인성 BCMA 및 GPRC5D를 발현하는) OPM2 인간 MM 표적 세포주와 여러 E:T 비율의 범위에서 24시간 동안 공배양하였다. 루시페린의 첨가 후에 ATP-의존적 생체 발광에 의해 표적 세포의 사멸을 결정하고, 표적 종양 세포 단독 배양물 내의 사멸로 정규화하였다(N=3, 평균 ± stdev). 도 9a에 도시된 바와 같이, 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포는 넓은 범위의 효과기 대 표적(E:T) 비율의 범위에서, 0.03:1의 E:T 비율에서 80%부터 1:1의 E:T 비율에서 98%까지 세포 독성을 유도하였다. 이 결과들은 항-BCMA CAR T 세포와의 공배양물과 유사하였는데, 두 MM 항원 표적화된 공배양물의 세포 독성은 OPM2-ffLuc MM 세포를 엉뚱하게 표적화된 항-CD19 CAR T 세포와 공배양했을 때 보인 백그라운드 세포 독성보다 크게 높았다.
1차 세포에 대한 세포 독성을 또한, 여러 번 재발한 MM을 가진 환자의 흡인물의 1차 골수 분자 세포(BMMC)와 1:1의 CAR+ T 세포:BMMC로 CAR T 세포를 밤새, 예를 들어, 24-48시간 공배양하여 산정하였다. CD3 음성 세포 상에서 게이팅 후에 CD138+/CD38hi였던 생존 가능한 BMMC의 백분율에 기초하여 유세포 분석에 의해 공여체로부터의 1차 골수 흡인물 MM 세포의 사멸을 산정하였다. 1차 골수 흡인물 MM 세포(CD138+/CD38hi)의 사멸을 보여주는 유세포 분석이 도 9b에 도시되어 있다. BMMC 세포와 동일한 공여체로부터, GPRC5D- 또는 BCMA-표적화된 CAR T 세포의 공배양은 CD138+/CD38hi 분획의 사멸을 90% 넘게 감소시켰지만, CD19-표적화된(“엉뚱하게 표적화된”) CAR T 세포의 공배양은 그렇지 않았다(도 9b; 상자). T 세포 팽창 또는 형질도입 효율에 의한 기여를 피하기 위해, CD138+/CD3-였던 BMMC의 백분율을 도 9c에 도시된 바와 같이 결정하였다. 추가 공여체들로부터 나온, 신호 전달 도메인이 없는 BCMA-표적화된 CAR(“del CAR”) 또는 표시된 BCMA- 또는 GPRC5D-표적화된 scFv를 포함하는 T 세포와 공배양한 BMMC의 유세포 분석이 도 9d에 도시된다. 모든 경우에, 항-GPRC5D CAR-T 세포는 신호 전달 도메인이 없는 CAR을 가진 T 세포(“del CAR”)보다 크게 높은 세포 독성을 유도하였고, BCMA-표적화된 CAR T 세포와 유사하였다.
B. 사이토카인 분비
CAR T 세포를 OPM2 MM 세포와 1:1로 또는 단독으로 24시간 동안 공배양하고, Luminex®Multiplex Assay에 의해 사이토카인의 분석을 위해 상청액을 수집하였다.
도 10a 내지 10c에 도시된 바와 같이, OPM2 MM 세포주와 공배양 후에 사이토카인 분비 프로파일은 평가한 사이토카인들 중에서 GPRC5D 또는 BCMA 표적화된 CAR T 세포 사이에서 유사하였다. 특히, OPM2 세포와 공배양된 엉뚱하게 표적화된 CD19-표적화된 대조군 CAR T 세포 또는 표적 세포의 부재 하에서 배양된 CAR T 세포와 비교해볼 때 어느 항원을 표적화하든 CAR T 세포는 IFNγ, MIP-1a, TNFα(효과기); GM-CSF, IL2(자극성); MIP-1b(화학-유인적); sCD40L, 및 IL13(조절성)이 가장 크게 증가하여 다기능성 사이토카인 프로파일을 분비하였다.
실시예 7: GPRC5D 표적화된 CAR T 세포 요법의 증식 및 활성화 활성
항원 발현 세포와 공배양 후에, GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 포함하는 CAR T 세포의 증식 및 활성화 활성을 테스트하였다. 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해, 인간 공여 대상체로부터의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 T 세포를 단리하였다. 단리된 T 세포를 활성화하여, 실시예 3에 기술된 바와 같이, 항-GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물 - 단, 상기 작제물은 GFP 꼬리표(tag)를 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함하지 않음 - 을 함유한 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 대조군으로, 동일한 공여체의 T 세포에 항-BCMA scFv를 포함한 CAR을 형질도입하였고, 또는 모의 형질도입하였다.
모의 형질도입한 T 세포 또는 항-GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR T 세포를 단독으로(표적 없음), B 세포 급성 림프모구 백혈병(B-ALL) 세포(Nalm6; GPRC5D-), 또는 MM 세포(OPM2; GPRC5D+)와 1:1의 효과기(T 세포):표적(세포주) 비율로 배양하였다. T 세포는 공배양 전에 CellTrace Violet(CTV)으로 염색하였고, 72시간 후에 CD4, CD8, 및 CD25에 대해 염색하였다. CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 CTV 형광의 희석으로서 증식을 측정하였고, CD25의 상향 조절을 표시하는, 증가한 CD25(인터루킨-2 수용체 알파; IL2RA) 형광에 의해 활성화를 측정하였다.
대표적인 데이터가 도 11a-11d에 제시되며, 이는 반응이 유사하게 특이적이었음을 보여준다. 항-GPRC5D CAR T 세포는 OPM2 세포의 존재 하에서 (도 11a 및 11b에서 CellTrace Violet의 희석으로 표시된 바와 같이) 증식하였고 활성화 표지자 CD25를 상향 조절하였지만, (도 11c 및 11d에 도시된 바와 같이) B-ALL Nalm6 세포와의 공배양 시에는 그러지 않았다. 모의 형질도입한 세포는 MM 표적 세포에 반응하지 않았다.
실시예 8: GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의 생체 내 활성
골수 우세형 질병으로 이어지는, OPM2 인간 골수종 세포주 이종 이식 모델을 사용하여 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의 생체 내 효과를 평가하였다. NOD scid 감마(NSG™) 마우스에 꼬리 정맥을 통해 2 x 106 OPM2-ffLuc 세포를 주사하고, 14일 또는 21일 동안 생착 및 팽창하도록 놓아둔 후에 3 x 106 CAR T 세포의 꼬리 정맥 주사로 1회 치료(single treatment)하였다. 대조군 마우스는 T 세포(“종양 단독”)를 받지 않았거나 동일한 공여체로부터 모의 가공된 T 세포(“모의”)를 받았다. ffLuc의 생체 발광 이미징(BLI)을 사용하여 종양 부담을 모니터링하였다.
실시예 3에 기술된 바와 같이 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드(단, GFP 꼬리표를 암호화하는 뉴클레오타이드 없음)를 함유한 렌티바이러스 벡터를 사용하여 인간 공여 대상체의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 T 세포를 형질도입하였다. 실시예 3에 기술된 바와 같이, 산정된 CAR은 세 가지 항-GPRC5D scFv, GPRC5D-200 VL/VH scFv(서열 번호: 2), GPRC5D-202 VH/VL scFv(서열 번호: 5) 또는 GPRC5D-203 VL/VH scFv(서열 번호: 8) 중 하나, 긴 스페이서, 인간 CD28 유래 막관통 도메인, 인간 4-1BB 공자극 도메인 및 CD3제타 세포내 신호 전달 도메인을 포함하였다. 도 12a에 도시된 바와 같이, FACS 분석은 상기 스페이서에 특이적인 항체를 사용하여 측정된 바와 같이, 상이한 CAR 벡터가 T 세포의 표면에서 유사하게 발현된 것을 보여주었다.
3 x 106 CAR T 세포를 투여한 종양을 가진 마우스의 생존을 OPM2 주사 후 14일 동안 (CAR 작제물 당 8 마우스) 모니터링하였다. 도 12b에 도시된 바와 같이, GPRC5D 표적화된 CAR T 세포 각각의 치료는 치료를 하지 않았거나 모의 형질주입된 T 세포로 치료한 것과 비교하여 이 모델에서 마우스의 생존을 증가시켰다. CAR T 세포 주사 후 100일에, GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서를 포함한 CAR로 치료한 마우스만 100% 생존을 유지하였다.
OPM2 모델에 더하여, GPRC5D 저(low) mRNA 발현 인간 다발성 골수종 세포주, RPMI-8226, 이종 이식 모델을 사용하여 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의 생체 내 효과를 평가하였다. NSG 마우스에 RPMI-8226 세포를 피하 주사하였다. 종양이 뚜렷하게 감지될 때 (0일차), 마우스를 유사한 종양 체적을 가진 치료군과 대조군으로 계층화하고 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서를 발현하는 3 x 106 세포를 정맥내 1회 주사하여 치료하였다. 대조군 마우스는 T 세포(“종양 단독”)를 받지 않았거나 모의 가공된 T 세포(“모의”)를 받았다. 초기 항-종양 효능을 종양 체적으로 모니터링하였고, CAR T 세포 팽창을 3일 내지 14일에 말초 혈액의 유세포 분석에 의해 모니터링하였다. 도 12c 및 12d에 도시된 바와 같이, GPRC5D-표적화된 CAR 매개 항-종양 활성 및 생체 내 CAR T 세포 팽창을 발현하도록 유전적으로 변형된 T 세포가 관찰되었다.
실시예 9: GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의
생체 내
활성에 대한 상이한 공자극 도메인의 효과
골수 우세형 질병으로 이어지는, OPM2 인간 골수종 세포주 이종 이식 모델을 사용하여 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의 생체 내 효과를 평가하였다. NOD scid 감마(NSG™) 마우스에 꼬리 정맥을 통해 2 x 106 OPM2-ffLuc 세포를 주사하고 14일 또는 21일 동안 생착 및 팽창하도록 놓아둔 후에 3 x 106 CAR T 세포의 꼬리 정맥 주사로 1회 치료하였다. 대조군 마우스는 T 세포를 받지 않았거나 동일한 공여체로부터 모의 가공된 T 세포를 받았다. ffLuc의 생체 발광 이미징(BLI)을 사용하여 종양 부담을 모니터링하였다.
항-GPRC5D CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해, 실시예 3에 기술된 바와 같이 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물을, 이어서 생체 내 추적을 위해 외부 가우스 루시퍼라아제(extGLuc)를 암호화하는 뉴클레오타이드를, 레트로바이러스 벡터에 클로닝하여, 인간 공여 대상체의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 T 세포를 형질도입하는 데 사용하였다. 실시예 3에 기술된 바와 같이, 산정된 CAR은 GPRC5D-203 VL/VH scFv(서열 번호: 8); 긴 스페이서, 인간 CD28 유래 막관통 도메인, 인간 4-1BB 공자극 도메인 및 CD3제타 세포내 신호 전달 도메인을 포함하였다. GPRC5D-203 VL/VH scFv를 포함한 CAR 작제물을 또한 상기 기술된 바와 같이 생성하였는데, 단, 4-1BB 공자극 신호 전달 영역은 CD28 공자극 신호 전달 영역(서열 번호: 46)으로 치환하였다.
OPM2 종양을 가진 마우스를 4-1BB 공자극 신호 전달 도메인 또는 CD28 유래 공자극 신호 전달 도메인을 함유한 3 x 106 항-GPRC5D CAR T 세포로 치료한 후 생존 및 종양 성장을 모니터링하여 상이한 공자극 신호 전달 영역을 함유한 CAR T 세포의 활성을 비교하였다. 이 실시예에서, 마우스는 치료 전에 더 큰 종양 부담을 제공하기 위해 OPM2 주사 후 21일에 치료하였고, CAR 작제물 당 5 마우스를 치료하였다.
CAR T 세포는 4-1BB 유래 공자극 도메인이 있는 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR(GD-41BBz로 표기) 또는 상기와 동일한 CAR이지만 CD28 유래 공자극 신호 전달 도메인이 있는 CAR(GD-CD28z로 표기)을 포함하는 CAR을 함유하였다. 긴 스페이서와 CD28 공자극 도메인이 있는, 엉뚱한 단백질 CD19에 표적화된 CAR(19-CD28z로 표기)을 발현하는 CAR T 세포를 이용한 치료를 또한 음성 대조군으로 연구하였다. 이 실험에서, T 세포를 형질도입하는 데 사용된 CAR 발현 벡터는 또한 P2A 요소에 의한 CAR 코딩 서열로부터 분리된 CD8 막관통 도메인이 있는 키메라 외부 가우스 루시퍼라아제(extGLuc) 유전자를 포함하였다. ExtGLuc 발현 세포는, 동일한 마우스에서 종양 세포(ffLuc를 통해서) 및 CAR T 세포(ExtGLuc를 통해서) 생체 내 BLI를 허용하는 ffLuc BLI에 필요한 루시페린과 구별되는 기질인 코엘렌테라진의 주사 후 이미징할 수 있다.
치료한 마우스의 생존은 항-CD19 CAR T 세포로 치료한 마우스와 비교하여, 공자극 신호 전달 도메인과 상관없이 어느 한 항-GPRC5D CAR 작제물로 치료 후에 비교적 연장되었다(도 13a).
OPM2-ffLuc 종양 세포의 루시페린이 있는 BLI는 어느 한 공자극 도메인이 있는 항-GPRC5D CAR 작제물이 CAR T 세포 주사 후 2일 내지 7일 사이에 OPM2 세포를 박멸하였고 박멸은 우세하게 오래감을 나타냈다(도 13b-13d). 이와는 대조적으로, 항-CD19 CAR T 세포로 치료한 후의 마우스에서 종양 성장은 계속되었다. OPM2 BLI 신호의 부재 하에서 60일경에 항-GPRC5D CAR T 세포 치료된 마우스의 사망은 인간 T 세포를 NSG 마우스에 주사한 것의 공지된 공여체 의존적 한계인, 이종성 GvHD에 의해 이차적으로 발생하였다(King et al. (2009) Clin. Exp. Immunol. 157:104-118; Covassin et al. (20110 Clin. Exp. Immunol. 166:269-280).
CAR T 세포 치료 후 7일에 extGLuc를 발현하는 CAR T 세포의 코엘렌테라진 BLI를 모니터링하여 CAR T 세포가 MM으로 귀소하는 능력을 산정하였다. 도 13e에 도시된 바와 같이, 어느 한 공자극 도메인이 있는 GPRC5D 표적화된 CAR T 세포는 치료 후 일주일에 코엘렌테라진 주사 후 MM 이종 이식의 부위로 국소화되었고, 눈에 보이게 되었다.
실시예 10: 골수종 모델에서 생체 내 항-GPRC5D 및 항-BCMA CAR T 세포 요법의 단위 용량 반응
추가 연구에서, 동일한 CAR 백본에서, 항-GPRC5D 및 항-BCMA CAR T 세포 요법을 OPM2 인간 골수종 세포주 이종 이식 모델에서 평가하였다. 실시예 3에 기술된 바와 같이, 항-GPRC5D CAR은 GPRC5D-203 VL/VH scFv(서열 번호: 8)를 긴 스페이서, 인간 CD28 유래 막관통 도메인, 인간 4-1BB 공자극 도메인 및 CD3제타 세포내 신호 전달 도메인과 함께 함유하였다. 항-BCMA CAR도 동일한 백본에서 생성되었는데, 단, 항-GPRC5D scFv 대신에 항-BCMA scFv를 함유하였다. 상기 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물을 렌티바이러스 벡터로 클로닝하여 인간 공여체의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 T 세포를 형질도입하는 데 사용하였다.
약 2 x 106개의 OPM2-ffLuc 세포를 NOD scid 감마(NSG™)에 주사하여 실질적으로 실시예 7에 기술된 바와 같이 OPM2 인간 골수종 세포주 이종 이식 모델을 생성하였다. OPM2 주사 후 14일에, 마우스에 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포 또는 항-BCMA CAR-발현 T 세포의 저용량(3.3 x 105) 또는 더 높은 용량(1 x 106)을 투여하였다(N=8/조건). 비교를 위해 치료하지 않은 마우스와 모의 형질도입된 T 세포를 토여한 마우스를 또한 모니터링하였다(N=8/조건). 생존 및 종양 부담(OPM-ffLuc의 BLI)을 최대 90일 동안 3 내지 9일마다 모니터링하였다.
치료된 마우스에서 두 용량에 걸쳐 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포는 종양 퇴행을 유도하는 데 있어서(도 14a; 각각 세모 대 네모), 그리고 생존을 연장하는 데 있어서(도 14b; 세모 대 네모) BCMA-표적화된 CAR T 세포와 유사하거나 그보다 나았다. 용량 반응은 두 유형의 CAR T 세포 요법 모두에 대한 종양 퇴행 동역학에서 주목되었다(도 14a).
실시예 11: 표적내/종양외 효과의 평가
모낭에서 검출된 GPRC5D 발현을 부분적인 이유로(실시예 1, 표 E1 참조), GPRC5D-표적화된 CAR T 세포 요법의 비종양, 표적내 효과의 효과를 세포, 뮤린 및 비인간 영장류 모델 시스템에서 연구하였다.
A. GPRC5D-표적화된 CAR T 세포에 대한 필수 정상 세포의 효과
필수 정상 세포에 의한 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포의 잠재적인 활성화를 평가하기 위해, 1차 인간 T 세포를, GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 발현하도록 유전자 변형하여, 단리된 1차 인간 세포 유형의 패널과 공배양한 후, 사이토카인 방출을 측정하였다. GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 발현하는 T 세포와 양성 대조군 OPM2 MM 세포의 공배양은 상당한 IFN, IL-2, 및 TNF 방출로 이어졌지만, 조사한 20개 정상 조직 유형 중 임의의 조직과 공배양 후 배지에서 사이토카인의 양은 아주 적었다(도 15a-15c). 예를 들어, IFN은 정상 조직에서 단리된 세포와 공배양 후 가장 높은 값과 비교하였을 때 OPM2 공배양 후 2600배 더 높았다.
B. 리포터 세포에서 표적내/종양외 효과
마우스 및 비인간 영장류에서 표적내 비종양 효과를 연구하기 위해, 인간 GPRC5D(hGPRC5D)에 대해 각각 82% 및 96% 아미노산 상동성을 갖는, 뮤린 GPRC5D(mGPRC5D) 및/또는 시노몰구스 GPRC5D(cGPRC5D)에 교차 반응성인 항-GPRC5D CAR을 식별하였다. 인간(hGPRC5D), cGPRC5D 또는 mGPRC5D를 발현하도록 K562 세포를 형질도입하였다. 상기 기술된 주르카트 Nur77-RFP 활성화 리포터 세포주를 실시예 3에 기술된 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 작제물로 형질도입하였다. 각 표적 세포 유형을 각 항-GPRC5D CAR-발현 리포터 세포와 1:1의 효과기:표적 비율로 공배양 후 RFP+ 세포/GFP+ CAR-형질도입된 세포 %로 CAR 활성화를 측정하였다. 또한 음성 대조군으로 리포터 세포를 모 K562 세포와 인큐베이션하였다.
GPRC5D-200 VL/VH, GPRC5D-201 VL/VH, GPRC5D-202 VH/VL, GPRC5D-203 VL/VH, GPRC5D-205 VL/VH, 및 GPRC5D-206 VH/VL 중에서 선택된 긴 스페이서 및 scFv를 함유한 예시적인 CAR에 대한 결과가 도 15b에 제공된다. GPRC5D-203 VL/VH scFv를 함유한 CAR을 발현하는 세포는 mGPRC5D 또는 cGPRC5D에 대해 교차 반응성이 아니었다. GPRC5D-205 VL/VH scFv를 함유한 CAR을 발현하는 세포는 mGPRC5D 및 cGPRC5D에 대해 교차 반응성이었고, 도 15d에 도시된 다른 4개의 CAR은 cGPRC5D에 결합했다.
C. 마우스 모델에서 표적내/종양외 효과
mGPRC5D 교차 반응성 GPRC5D-205 VL/VH scFv, 긴 스페이서 CAR 또는 비교차 반응성 GPRC5D-203 VL/VH scFv, 긴 스페이서 CAR을 포함하는 CAR을 발현하는 인간 CAR T 세포를 뮤린 종양 모델에서 테스트하였다. OPM2-ffLuc 세포를 NOD scid 감마(NSG™)에 주사하여 상기 기술된 바와 같이 OPM2 인간 골수종 세포주 이종 이식 모델을 생성하였다. 마우스에 OPM2 MM 세포주 후 14일에 3 x 106개의 인간 CAR+ T 세포를 주사하였다. 치료하지 않은 및 모의 형질도입된 T 세포 치료가 대조군 역할을 하였다. 13일 동안 신체 온도 및 중량을 포함한 임상적 관찰을 진행하였고, 종양 부담(OPM2 BLI에 의해 산정)을 14일 동안 2 내지 3일 마다 측정하였다.
교차 반응성 GPRC5D-205 VL/VH 및 비교차 반응성 GPRC5D-203 VL/VH CAR-함유 T 세포 내성이 우수하였고, 이는 비치료군과 상이한 CAR T 세포 치료군 사이에 크게 차이가 없는 중량 및 신체 온도 곡선에 의해 확인된다(각각 도 16a 및 도 16b). 또한, 교차 반응성 GPRC5D-205 VL/VH 및 비교차 반응성 GPRC5D-203 VL/VH CAR-함유 T 세포 요법은 모두 OPM2 종양 부담을 줄이는 데 있어서 활성을 보였다(도 16c). 또한, 어느 치료 조건에 대해서도 털 손실 또는 다른 명시적인 임상적 독성 징후는 관찰되지 않았다.
D. 비인간 영장류(NHP) 모델에서 표적내/종양외 효과
cGPRC5D 교차 반응성 GPRC5D-202 VH/VL scFv, 긴 스페이서 CAR을 포함한 CAR을 발현하는 인간 CAR T 세포를 영장류 종양 모델에서 테스트하였다. T 세포는 1001, 1002 및 1003으로 표기한 세(3) 수컷 비인간 영장류(NHP, 시노몰구스 원숭이)에서 T 세포를 수확 및 단리하였고, cGPRC5D 교차 반응성 GPRC5D-202 VH/VL CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유한 레트로바이러스로 형질도입하였다. 표 E11A에 도시된 바와 같이, CAR의 NHP T 세포로의 형질도입률은 CD3+ 세포의 36~49%였다. 유전자 전달 이후, NHP T 세포는 생존 가능하였다(80~92%). 도 17a는 리보솜 스킵 요소에 의해 암호화 CAR 핵산 서열로부터 분리된, 대리 표지자로서 사용되는 동시 발현된 절단된 수용체에 기초하여 측정한, CAR 발현의 대표적인 FACs 분석을 제공한다.
표 E11A: 세포의 특성
자가 표적 항원 제시 세포(tAPC) 및 K562-cGPRC5D 세포에 대해 NHP T 세포의 세포 용해 활성 및 사이토카인 생산을 평가하였다. 도 17b-17e에 도시된 바와 같이, NHP T 세포는 세포 용해 활성(도 17b 및 17d), 및 항원에 노출한 것에 대한 반응으로 인터페론 감마 방출(GPRC5D를 발현하는 세포와 1:1 E:T 비율로 공배양 후 10,000pg/mL 상청액에 근접)(도 17c 및 17e)을 나타내는, 기능적인 것으로 확인되었다.
세(3) NHP(즉, 1001, 1002 및 1003, 이들로부터 위에서 CAR T 세포가 생성되었다)에 림프구 고갈 조건화 시클로포스파미드(40mg/kg)로 CAR T 세포 주사 2일 및 4일 전에 사전 처리한 후, 10 x 106개의 CAR+ caspase3- 자가 시노몰구스 T 세포/kg(위에 기술된 바와 같이 생성된)를 투여하였다. T 세포 주사 8일 전부터 시작하여 T 세포 주사 후 21일 동안 계속해서 2~7일 마다 신체 온도 및 중량을 포함한 임상적 관찰을 진행하였다. 가능한 독성 검출 민감도를 높이기 위해, GPRC5D의 모낭 발현에 대한 우려 때문에 CAR T 세포 주사 4일 전에 세 NHP 모두 또한 피부 자극성 이미퀴모드(skin irritant imiquimod)에 노출하였다. CAR T 세포 주사 4일 후, 각 NHP는 항원 저장소 작용을 하고 CAR T 세포 팽창을 증진하도록10 x 106개의 cGPRC5D+ 카스파제-자가 인공 항원 제시 T 세포/kg을 받았다. CAR T 세포 투여 21일 후에, NHP를 육안 및 조직학 검사를 위해 희생시켰다.
말초 혈액 및 골수에서 주입 21일 후에 GPRC5D-202 VH/VL-함유 CAR을 암호화하는 DNA에 대해 PCR을 사용하여 T 세포 지속성을 모니터링하였다. 2 내지 4 컬(curl)(20μm 두께)의 FFPE 세포 펠릿 또는 조직 샘플에서 총 RNA를 단리하였고, cDNA 합성 키트를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 다음과 같이 정량화된 프라이머를 사용하여 PCR을 수행하였다: 각각 0.25μM의 GPRC5D 정방향 프라이머(5’-ACTGCATCGAGTCCACTGGAGA-3’; 서열 번호: 253) 및 역방향 프라이머(5’-GGATCTTTCGCATGAGGAAGAG-3’, 서열 번호: 254), 및 각각 0.25μM의 하우스키핑 유전자 β-액틴 정방향 프라이머(5’-AGCATCCCCCAAAGTTCAC-3’; 서열 번호: 255) 및 역방향 프라이머(5’-AAGGGACTTCCTGTAACAACG-3’, 서열 번호: 256). PCR 반응을 384-웰 PCR 플레이트에서 이중으로 수행하였다. CAR 형질도입된 NHP T 세포를 양성 대조군으로 사용하였다. 도 18a에 도시된 바와 같이, 주입 후 CAR T 세포 지속성은 육안 및 조직학 검사를 위해 희생 시에 3/3 NHP의 말초 혈액에서 그리고 2/3 NHP의 골수에서 검출되었다.
GPRC5D-202 VH/VL-함유 CAR T 세포 요법은 임상적 관찰, CAR T 세포 치료 후에 안정적으로 유지된, 신체 온도(도 18b) 및 중량 곡선(도 18c, 18d)에 의해 확인된 바와 같이 내성이 우수하였다. 현미경 검사 결과 요약이 표 E11B에 제공된다. IFN-감마, IL-6 또는 기타 전-염증성 사이토카인의 증가는 없었고, 또한 임상 화학에서 유의미한 변화도 관찰되지 않았다. 털 손실 또는 피부, 폐 또는 기타 조직에 대한 기타 임상적인 손상 징후는 임상적으로 또는 병리학적으로 확인되지 않았다. 이 데이터를 종합하면 NHP 모델에서 GPRC5D 특이적인 CAR T 세포의 투여는 CAR T 세포의 존재와 관련하여 명시적인 독성 또는 조직 병리를 일으키지 않았다는 관찰과 일치한다.
표 E11B. 21일차의 현미경 검사 연구결과 요약
실시예 12: 뮤린 BCMA 항원 손실 모델에서 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포의 평가
BCMA-음성 다발성 골수종에 대한 뮤린 모델을 생성하여 상기 모델의 동물에 투여하였을 때 GPRC5D-표적화된 CAR T 세포의 효과를 산정하는 데 사용하였다.
BMCA-녹아웃 종양 세포를 생성하기 위해, GFP/루시퍼라아제 Cas9-발현 OPM2 세포에 BCMA 단일 가이드 RNA(sgRNA)-함유 렌티바이러스를 형질도입하였다. 서열 번호: 291에 제시된 표적 서열을 겨냥하는, BCMA sgRNA를 pLentiV2 플라스미드로 클로닝하고, 이어서 패키징 플라스미드(Pax2 및 Vsvg)로 293T 세포에 공동 형질주입하였다. 10μg/mL 폴리브렌의 존재 하에서 형질도입을 수행하였다. 형질도입된 세포를 4μg/mL 퓨로마이신으로 10일 동안 선별하고 단일 세포를 96-웰 플레이트에서 평판 배양하였다. 개별 집락을 팽창시키고 항-BCMA 항체로 염색하여 BCMA 녹아웃을 확인하였다. 확인된 BCMA 녹아웃 OPM2-GL-Cas9 세포의 클론을 실험을 위해 추가로 팽창시켰다.
(BCMA-표적화된 제제로 치료 후 재발 또는 진행으로 이어질 가능성이 있는) 다발성 골수종 환경에서 BCMA 항원-음성 종양 세포의 존재를 모델링하기 위해, NSG 마우스에 0일차에 비조작된 OPM2WT(약 75%) 및 GFP/ffLuc+ CRISPR-매개 OPM2BCMA-KO(약 25%)의 혼합 집단(1x106 총 OPM2 세포)을 주사하였다. OPM2 세포의 집단을 7일 동안 생착 및 팽창하도록 두었다. 8일차에, 마우스에 CD19 또는 BCMA를 표적화한 4x106개의 CAR T 세포를 주사하였다. 16일차에, 이전에 BCMA-표적화 CAR T 세포를 주사한 마우스에 항-BCMA CAR 또는 GPRC5D-203 VL/VH, 긴 스페이서 CAR을 발현하는 4x106 개의 T 세포를 주사하였다.
BLI를 사용하여 OPM2BMCAKO 세포(GFP/ffLUC를 발현하는 세포의 집단)를 검출하기 위해 마우스를 이미징하였다. 34일차에 마우스의 이미징은 8일 및 16일차에 BCMA-표적화 CAR T 세포 주사를 맞은 마우스에서 OPM2 BMCAKO 하위-집단이 진행되었음을 보여주었다. 대조적으로, 8일차에 BCMA-표적화 CAR T 세포를 그리고 16일차에 GPRC5D-표적화 CAR T 세포를 받은 마우스는 34일차에 발광을 나타내지 않았다(도 19a 및 19b). 이 결과는 항-GPRC5D CAR T 세포가 BCMA 항원을 발현하지 않는 또는 BCMA-유도된 CAR T 세포에 반응하지 않는 종양 세포의 맥락에서조차도, 다발성 골수종에서 항-종양 활성을 나타낼 수 있으며; GPRC5D-203 VL/VH CAR-발현 T 세포에 의해 종양 탈출이 구제될 수 있다는 연구결과와 일치하였다.
35일차에 유세포 분석에 의해 골수에서 CD138hi/GFP+ 세포의 백분율을 분석하여 진행하는 마우스의 골수에서 OPM2 세포의 조성물(hCD138+; WT: GFP-; BCMA-KO: GFP+)을 산정하였다. CD19-, BCMA-, 또는 GPRC5D-표적화 CAR T 세포로 치료한 마우스의 붉어진 골수로부터 OPM2(hCD138+) 조성물(WT:GFP-; BCMAKO:GFP+)을 산정하였다(도 20a 및 20b; 3 마우스/arm을 대표함; 비슷한 결과가 있는 n=2회 반복 실험). 생사(live and dead) 게이팅을 수행하였지만 표시되지는 않았다. 8일차에 BCMA-표적화 CAR T 세포의 주사를 맞은 마우스의 대부분의 골수 세포는 35일차에 CD138hi/GFP+였다(도 20a 및 20b). 이 결과는 종양 세포의 OPM2BCMA-KO 하위-집단의 지속성 및/또는 진행에도 불구하고 OPM2WT 세포를 박멸하는 BCMA-표적화 CAR T 세포의 능력과 일치하였다.
실시예 13: GPRC5D 및 BCMA를 표적화하는 이중-표적화 키메라 항원 수용체(CAR)-조작된 T 세포 조성물의 생성
BCMA 및 GPRC5D의 이중-표적화를 위해 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 함유한, 이중-표적화 T 세포 조성물을 생성하였다. 두 개의 조작된 T 세포 조성물을 생성하였는데, 하나는 항-BCMA CAR을 발현하도록 조작되었고 다른 하나는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 조작되었으며 개별 세포 조성물을 혼주하였다.
예시적인 항-BCMA CAR은 BCMA를 발현하는 세포와 결합할 수 있는 scFv 항원 결합 도메인(예를 들어, BCMA-55, VL/VH scFv(서열 번호: 241); 서열 번호: 73에 제시된 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 제시된 면역글로불린 힌지-CH2-CH3; 인간 CD28-유래 막관통 도메인(예를 들어, 서열 번호: 18); 인간 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 19); 및 인간 CD3제타-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 20)을 함유하였다.
예시적인 항-GPRC5D CAR은 GPRC5D와 결합할 수 있는 scFv 항원 결합 도메인(예를 들어, GPRC5D-203, VL/VH scFv(서열 번호: 8); 서열 번호: 73에 제시된 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 제시된 면역글로불린 힌지-CH2-CH3; 인간 CD28-유래 막관통 도메인(예를 들어, 서열 번호: 18); 인간 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 19); 및 인간 CD3제타-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 20)을 함유하였다.
A. 항-GPRC5D 및 항-BCMA CAR을 발현하는 혼주된 T 세포의 생성
각 개별 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 하류 리보솜 스킵 요소(예컨대 자가 절단 T2A 서열(서열 번호: 37에 제시된 아미노산 서열을 암호화하는, 서열 번호: 44에 제시된 서열))에 연결되어 렌티바이러스 발현 벡터로 클로닝되었다. T 세포 조성물은 개별적으로 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 조작되었다. 각각에 대하여, 인간 공여 대상체의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 Nur77-RFP 주르카트 T 세포주 또는 1차 T 세포를 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 핵산을 함유한 렌티바이러스 벡터 중 하나로 형질도입하였다. 형질도입 후에, 일부 경우에는 팽창 후에, T 세포를 각각의 CAR에 특이적인 항체로 염색하고 유세포 분석에 의해 분석하여, 세포의 형질도입과 CAR의 발현을 확인하였다.
사용하기 전에, 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR로 형질도입된 수확한 1차 인간 T 세포를 1:1의 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포의 비율로 혼주하였다(“αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포”).
실시예 14: 항-BCMA CAR의 산정
상기 실시예에 기술된 예시적인 항-BCMA CAR의 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달과 또한 BCMA 발현 및 비발현 세포의 존재 하에서 증식 및 활성화를 산정하였다.
A. 항원-의존적(긴장성 신호 전달)
앞의 실시예들에 기술된 Nur77-RFP 리포터 세포주를 항-CD19 CAR을 암호화하는 바이러스 벡터(대조군) 또는 실시예 13에 기술된 예시적인 항-BCMA CAR로 형질도입하였고, 단, 형질도입을 위한 대리 표지자는 슈퍼-폴드(super-fold) 녹색 형광 단백질 sfGFP였다. 본 모델에서, 긴장성 신호 전달은 BCMA 항원 자극의 부재 하에서 RFP 발현으로 표시되었다. CAR 발현 세포를 항원 자극없이 인큐베이션하여 3일 동안 항원-비의존적(긴장성) 신호 전달의 정도를 산정하고 유세포 분석에 의해 RFP의 발현을 평가하였다.
도 21a에 도시된 바와 같이, 예시적인 항-BCMA CAR-발현 세포는, CAR-발현 세포(GFP+ 세포로 표시됨) 중에서 RFP+ 세포의 백분율(긴장성 리포터 활성화를 나타냄)에 의해 확인한 바와 같이, 항원 자극의 부재 하에서 낮은 RFP 발현을 나타냈다.
B. BCMA-표적화된 CAR T 세포의 증식 및 활성화
BCMA를 상이한 수준으로 발현한 BCMA 발현 세포와 예시적인 항-BCMA CAR 발현 T 세포를 인큐베이션한 후 세포 용해 활성, 사이토카인 방출 및 증식을 산정하였다. 가용성 BCMA의 존재 또는 부재 하에서 모든 활성을 평가하였다.
두 명의 인간 공여체(D#1 및 D#2)로부터 수확한, 1:1 비율의 CD4+ 및 CD8+ 1차 T 세포를 CD3/CD28 비드로 자극하고 BMCA-55 CAR을 안정적으로 발현하는 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 형질도입된 세포를 1:3, 1:1 또는 3:1의 E:T 비율로 BCMA-발현 표적 세포의 존재 하에서 배양하였다. 동일한 공여체로부터 모의 가공된 T 세포도 대조군으로 사용하기 위해 표적 세포와 혼합하였다. 표면의 BCMA 항원 밀도를 상이한 수준으로(항원 밀도: Daudi (<1000 BCMA 분자/세포) < RPMI-8226 < K562-BCMA) 나타낸, BCMA+ 표적 세포, Daudi, RPMI-8226 및 K562-BCMA 세포를 T 세포와 인큐베이션하기 전에 카르복시플루오레신 숙신이미딜 에스테르(carboxyfluorescein succinimidyl ester, CFSE)로 염색하였다. BCMA를 발현하지 않고 세포 추적 바이올렛(cell trace violet, CTV)으로 염색된 동일한 수의 표적 음성 세포가 또한 T 세포 및 BCMA+ 표적 세포와의 배양물에 포함되었다. 24시간 인큐베이션 후, 남은 BCMA+ 대 BCMA-표적 세포를 유세포 분석으로 측정하였고, 세포 독성을 나타내는 표적 세포 용해도를 산정하였다.
항-BCMA CAR-발현 T 세포는 BCMA 발현 수준과 관계없이 표적 세포와 함께 배양될 때 유사한 세포 용해 활성을 나타냈다(도 21b). 또한, 세포당 100,000개 초과의 분자를 발현하는 표적 세포(NCI-H929)에 대해 유사한 결과가 관찰되었다. 모의 가공된 T 세포는 BCMA+ 표적 세포주 중 어느 것에 대하여도 활성을 나타내지 않았다. BCMA 발현에 대해 음성인 표적 세포는 테스트된 임의의 공여체로부터의 항-BCMA CAR T 세포에 의해 용해되지 않았다(데이터는 표시하지 않음).
인큐베이션 후 상청액에서 축적된 IFN-γ, TNF-α 및 IL-2 사이토카인에 대해 분석하였다. 항-BCMA CAR T 세포가 BCMA-발현 표적 세포와의 결합 후에 다양한 사이토카인을 방출했고; 방출된 사이토카인의 수준은 일반적으로 항원의 증가 수준에 상응한다는(즉, Daudi < RPMI 8226 < K562-BCMA) 결론과 데이터가 일치했다. IFN-γ에 대한 결과가 도 21c에 도시되고; TNF-α 및 IL-2에 대해 유사한 데이터가 관찰되었다(데이터는 표시하지 않음). 항-BCMA CAR T 세포는 BCMA 음성 표적에 대한 반응으로 사이토카인을 방출하지 않았으며, 어떠한 표적 세포도 존재하지 않는 경우 사이토카인을 발현하지도 않았고, 이는 BCMA+ 표적 세포에 대한 특이성 및 긴장성 신호 전달의 결여를 입증하였다.
가용성 BCMA의 존재 대 부재 하에서 항-BCMA CAR 발현 T 세포의 활성을 산정하였다. 예시적인 항-BCMA CAR을 발현하는 T 세포를 RPMI-8226 종양 세포와, 재조합 BCMA-Fc와, 또는 NCI-H929 다발성 골수종 세포로부터 유래한 세포 배양 상청액(BCMA-분비 세포주, 가용성 BCMA를 함유한 상청액)과 공배양하였다. 종양 세포 용해 또는 사이토카인 생산은 NCI-H929 유래 가용성 BCMA의 어떠한 농도(최대 1000 ng/mL)에 의해서도 영향을 받지 않는 것으로 관찰되었다. 종양 세포 용해 및 사이토카인 생산 둘 모두는 유사하게 높은 생리학적 수준의 재조합 BCMA에서만 단지 최소한으로 감소되었다.
항-BCMA CAR 발현 T 세포 및 모의 가공된 T 세포에서 BCMA에 대한 반응으로 증식을 측정하였다. 형질 도입된 T 세포를 세포 추적 바이올렛(CTV)으로 표지하고 1:1의 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 72 시간 동안 BCMA 양성 표적 세포, BCMA 음성 표적 세포 또는 무세포의 존재 하에서 배양하였다. 유세포 분석에 의해 증식을 측정하였다. BCMA 양성 표적 세포와의 인큐베이션에 대한 반응으로 항-BCMA CAR 발현 T 세포에 대해서만 T 세포(CD4+ 및 CD8+ T 세포)의 증식이 관찰되었다(데이터 표시 안함).
실시예 15: 항-GPRC5D 및 항-BCMA CAR-발현 세포를 함유한 조작된 T 세포 조성물의 시험관 내 산정
A. BCMA 또는 GPRC5D KO 세포의 존재 하에서 항원-의존적 활성
항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR의 특이성을 이해하기 위해, GPRC5D 또는 BCMA를 앞의 실시예 5 및 12에 각각 기술된 바와 같이 OPM2 세포로부터 녹아웃하였다. 도 22a에 도시된 바와 같이, 유세포 분석을 통해 OPM2 GPRC5D KO 세포에서 GPRC5D 발현의 결여와 OPM2 BCMA KO 세포에서 BCMA 발현의 결여를 확인하였다. OPM2 야생형(OPM2 WT) 세포가 대조군 역할을 하였는데, GPRC5D 및 BCMA 모두의 발현을 보였다.
항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 또는 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포를 함유한 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포 조성물의 항원 특이적 활성을 산정하였다. 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포 조성물을 OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO, 또는 OPM2 BCMA KO 세포와 1:1의 비율로 20시간 동안 공배양하였다. 상기 세포 조성물에 의해 발현된 CAR의 항원 특이적 자극은 유세포 분석에 의한 RFP 발현의 변화를 측정하여 산정하였다.
도 22b에 도시된 바와 같이, GPRC5D-표적화 CAR(αGPRC5D)만을 또는 BCMA-표적화 CAR(αBCMA)만을 발현하는 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 활성화는, 이들을 OPM2 세포와 공배양하고 이때 GPRC5D 또는 BCMA를 각각 녹아웃하였을 때, 관찰되지 않았다. 이 결과는 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR이 이들 각각의 항원에 특이적이라는 연구결과와 일치한다.
실시예 16: GPRC5D- 및 BCMA-표적화 CAR을 발현하는 세포를 함유한 이중 표적화 혼주 세포 조성물의 생체 내 산정
다양한 뮤린 다발성 골수종 모델을 생성하고 이를 사용하여 (1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포, 또는 (3) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 혼주한 세포를 함유한 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 T 세포 조성물의 생체 내 효과를 산정하였다.
A. 다발성 골수종 세포주에 의한 GPRC5D 및 BCMA의 발현
뮤린 다발성 골수종 모델을 생성하기 전에 다양한 다발성 골수종 세포주 중에서 GPRC5D 및 BCMA의 상대적인 mRNA 및 단백질 발현 수준을 산정하였다.
암 세포주 백과사전(CCLE)에 의해 제공된 바와 같이, GPRC5D 및 BCMA의 mRNA 발현 수준은 다음 다발성 골수종 세포주: KMS12BM, RPMI8226, U266B1, MM.1S, OPM2, 및 NCI-H929에서 RNA 서열분석(RNA-seq)에 의해 결정하였다. 도 23에 도시된 바와 같이, KMS12BM 및 RPMI8226 세포주는 분석한 모든 세포주 중에서 두 유전자에 대해 가장 낮은 발현 수준을 나타냈다. U266B1 세포주는 다른 세포주들과 비교하여 중간 수준의 GPRC5D 및 BCMA 유전자 발현을 나타냈다. MM.1S 및 OPM2 세포주는 다른 세포들과 비교하여 높은 수준의 GPRC5D 유전자 발현과 중간 수준의 BCMA 유전자 발현을 나타냈다. 마지막으로, NCI-H929는 테스트한 모든 세포주 중에서 GPRC5D 및 BCMA에 대해 가장 높은 유전자 발현 수준을 나타냈다.
도 24에 도시된 바와 같이, 다음 세포주: K562 모세포, GPRC5D를 발현하도록 조작된 K562 세포, KMS12BM, MM.1S, NCI-H929, OPM2, 및 RPMI8226에서 GPRC5D 및 BCMA에 대한 단백질 발현 수준을 추가로 분석하였다. 5 x 105개의 총 세포를 항-BCMA 또는 항-GPRC5D 항체, 및 생존력 표지자로 공동 표지하고, 발현을 유세포 분석에 의해 결정하였다. GPRC5D 단백질 발현의 측면에서, GPRC5D를 발현하도록 조작된 K562 세포가 양성 대조군 역할을 하였는데 가장 높은 수준의 GPRC5D 발현을 보였고, 한편 모 K562 세포는 음성 대조군 역할을 하였으며 무시할만한 수준의 GPRC5D를 발현하였다. mRNA 발현 데이터와 일반적으로 일치하게, KMS12BM 및 RPMI8226은 상대적으로 낮은 수준의 GPRC5D 단백질을 발현하였다. NCI-H929는 중간 수준의 GPRC5D 단백질을 발현하였고, MM.1S 및 OPM-2는 상대적으로 높은 수준의 GPRC5D 단백질을 발현하였다. BCMA 단백질 발현의 측면에서, KMS12BM, MM1S, 및 RPMI8226는 모두 낮은 내지 중간 수준의 BCMA 단백질을 발현하였고, OPM-2는 높은 수준의 BCMA 단백질을 발현하였다. 여전히, NCI-H929 세포는 가장 높은 수준의 BCMA 단백질을 발현하였다.
종합해보면, 이 결과는 RPMI8226 세포주가 상대적으로 낮은 GPRC5D 발현을 나타내고 OPM2 세포주는 상대적으로 높은 수준의 GPRC5D 발현을 나타낸다는 연구결과와 일치한다.
B. OPM2 뮤린 이종 이식 모델에서 항-BCMA 및 항-GPRC5D를 발현하는 T 세포 조성물의 산정
(1) 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포, (2) 항-BCMA CAR을 발현하는 세포, 또는 (3) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 혼주한 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 이중 BCMA- 및 GPRC5D-표적화 1차 인간 T 세포 조성물을 표적 항원들 중 어느 하나 또는 둘 모두를 발현하는 종양이 있는 뮤린 종양 모델에서 테스트하였다.
상기 종양 모델을 생성하기 위해, 실시예 5 및 12에 기술된 바와 같이 OPM2-rFLuc 세포에서 GPRC5D 및 BCMA를 개별적으로 녹아웃하여 단일 녹아웃 GPRC5D 및 BCMA OPM2 세포주(각각 “OPM2 GPRC5D KO” 및 “OPM2 BCMA KO”)를 생성하였다. 대조군으로, GPRC5D 및 BCMA 둘 모두를 발현하는 OPM2-rFLuc 세포(OPM2 WT)를 단일 녹아웃 세포주와 비교하였다. NOD scid 감마(NSG™)에 2 x 106개의 총 OPM2, OPM2 GPRC5D KO, 또는 OPM2 BCMA KO 세포를 주사하였다. 주사 후 14일(0일)에, 종양의 생체 발광을 결정하고 비슷한 종양 크기를 가진 마우스를 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D) 또는 항-BCMA CAR(αBCMA)을 발현하도록 조작된 세포를 함유한, 또는 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 함유한 1차 T 세포 조성물로 치료하였다. 마우스에 OPM2 세포 주사 후 14일에 다음 세 가지 T 세포 조성물 용량: 5 x 105개의 총 CAR T 세포, 1 x 106개의 총 CAR T 세포, 또는 2 x 106개의 총 CAR T 세포 중 하나를 주사하였다. 치료하지 않은 및 모의 형질도입된 T 세포 조성물이 대조군 역할을 하였다.
도 25a 및 25b에 도시된 바와 같이, 3 x 106개의 총 CAR T 세포를 투여한 마우스에서, 종양 부담(OPM2 BLI에 의해 산정)은 주사한 OPM2 세포 유형에 상관없이, αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포로 치료한 마우스에서 낮게 유지되었다. 대조적으로, 항-BCMA CAR(αBCMA)을 발현하는 세포만으로 치료한 마우스는 OPM2 BCMA KO 세포를 주사했을 때 종양 부담이 증가하는 것으로 나타났다(도 25b; 위 패널). 유사하게, 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)을 발현하는 세포만으로 치료한 마우스는 OPM2 GPRC5D KO 세포를 주사했을 때 종양 부담이 증가하는 것으로 나타났다(도 25b; 아래 패널). 이 결과는 개별 CAR이 그들의 표적화된 항원에 특이적이라는 일반적인 연구결과와 일치한다.
비슷한 실험에서, NOD scid 감마(NSG™) 마우스를, BCMA 및 GPRC5D를 발현하는 OPM2 세포 주사 후에, (1) 항-BCMA CAR을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 조작된 세포, 또는 (3) αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 함유한 조성물에서 온 5 x 105, 1 x 106, 또는 2 x 106개의 총 1차 인간 T 세포로 치료하였다. 대조군으로, 마우스를 또한 모의 형질도입된 1차 인간 T 세포 조성물로 치료하였다. 도 26에 도시된 바와 같이, 100일까지 생존을 산정하였다. 도시된 바와 같이, αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 함유한 T 세포 조성물의 투여는 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포를 함유한 T 세포 조성물의 투여와 비교하여 이 모델에서 항-종양 효능을 향상시켰다.
C. RPMI8226 뮤린 이종 이식 모델에서 T 세포 조성물의 산정
OPM2 모델에 더하여, GPRC5D 저 발현 RPMI-8226 모델을 사용하여 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)을 발현하는 세포 또는 항-BCMA CAR(αBCMA)을 발현하는 세포, 또는 둘 모두를 함유한 인간 T 세포 조성물의 생체 내 효과를 평가하였다.
총 1 x 107개의 RPMI8226 세포를 NOD scid 감마(NSG™)에 피하 주사하였다. RPMI226 세포 주사 후 약 25일에, (1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)을 발현하도록 조작된 세포, 또는 (3) GPRC5D-표적화 CAR을 발현하는 세포 대 BCMA-표적화 CAR을 발현하는 세포의 비율을 1:1로 하여 생성된 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 CAR-발현 T 세포 조성물을 투여하였다. 마우스를 RPMI8226 세포 주사 후 25일에 다음 세 가지 T 세포 조성물 용량: 1.25 x 106개의 총 CAR T 세포, 2.5 x 106개의 총 CAR T 세포, 또는 5 x 106개의 총 CAR T 세포 중 하나로 치료하였다. 치료하지 않은 및 모의 형질도입된 T 세포 치료가 대조군 역할을 하였다.
도 27에 도시된 바와 같이, 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서 용량-의존적 방식으로 종양 체적이 증가하였다. 대조적으로 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포, 또는 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포로 치료한 마우스는 종양 체적이 최소한의 증가를 보였다. 특히, 이 결과는 테스트한 모든 용량(5 x 106, 2.5 x 106, 및 1.25 x 106)에서, αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포는, 혼주된 T 세포 조성물에서 항-BCMA CAR의 기여도가 절반임에도 불구하고, 항-BCMA CAR만을 발현하는 T 세포에 비슷한 효능을 가졌음을 나타냈다. 이 결과는 혼주된 조성물에서 항-GPRC5D-CAR 발현 세포는 단일 용량보다 더 큰 방식으로 기여하는 것을 나타낸다. 도 28에 도시된 바와 같이, 100일까지 생존을 산정하였다. 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포로 치료한 마우스가 시간에 따라서 생존의 감소를 나타냈지만, 더 많은 용량에서 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포로 치료한 마우스는 항-BCMA CAR만을 발현하는 T 세포로 치료한 마우스와 비슷한 효능을 나타냈다는 점에서, 생존 분석은 비슷한 결과를 보여주었다. 이 결과들은 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포로 치료한 것이 저 GPRC5D 발현 종양 모델에서 덜 효능적일 수 있지만, 항-GPRC5D CAR은 이중 표적화 CAR-발현 세포 조성물에 의해 항-종양 효능에 기여할 수 있다는 일반적인 연구결과와 일치한다.
실시예 17: 이중 시스트론 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR-조작된 T 세포 조성물의 생성
1차 인간 T 세포 조성물을 조작하여, BCMA 및 GPRC5D의 이중-표적화를 위해 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 세포를 함유한, 이중-표적화 T 세포 조성물을 생산하였다. 도 29에 요약된 바와 같이, 다섯 개의 조작된 T 세포 조성물을 생성하였다. 각각의 생성된 CAR 작제물은 GPRC5D(예를 들어, 서열 번호: 8) 또는 BCMA(예를 들어, 서열 번호: 241)에 대한 예시적인 scFv 항원 결합 도메인; 긴 스페이서(힌지-CH2-CH3, 228aa; 서열 번호: 17; Fc 수용체 결합을 제한하기 위해 CH2 변형이 있음); 인간 CD28 유래 막관통 도메인(서열 번호: 18); 인간 4-1BB 유래 세포내 신호 전달 도메인(서열 번호: 19) 또는 인간 CD28 유래 세포내 신호 전달 도메인(서열 번호: 18); 및 인간 CD3제타 유래 세포내 신호 전달 도메인(서열 번호: 20)을 함유하였다.
한 전략(도 29의 (i) 및 (ii)로 표시됨)에서, BCMA 또는 GPRC5D에 대해 단일 CAR을 발현하는 세포를 동시에 제조하고 이를 항-BCMA CAR-발현 세포 및 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 함유한 단일 조성물로 혼주하였다(GPRC5D 및 BCMA 혼주 세포). 혼주된 조성물의 항-BCMA CAR-발현 T 세포를 조작하여 4-1BB 공자극 도메인(서열 번호: 312)을 포함한 항-BCMA CAR을 발현하도록 하였다. 혼주된 조성물의 항-GPRC5D CAR-발현 T 세포를 조작하여 4-1BB 공자극 도메인(서열 번호: 313) 또는 CD28 공자극 도메인(서열 번호: 314)을 포함한 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 하였다. 이 결과로 두 개의 상이한 혼주된 조성물이 생성되었다. 제1 조성물은 4-1BB 공자극 도메인을 포함한 항-BCMA CAR을 발현하는 세포 및 4-1BB 공자극 도메인을 포함한 항-GPRC5D CAR을 발현하는 세포를 포함하였다(BCMA-41BB 및 GPRC5D-41BB 혼주 세포). 제2 조성물은 4-1BB 공자극 도메인을 포함한 항-BCMA CAR을 발현하는 세포 및 CD28 공자극 도메인을 포함한 항-GPRC5D CAR을 발현하는 세포를 포함하였다(BCMA-41BB 및 GPRC5D-CD28 혼주 세포). 항-BCMA CAR만을 또는 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포를 함유한 개별 조성물을 생성하여 대조군 역할을 하도록 하였다.
도 29의 (iii) 및 (iv)에 도시된, 또 다른 이중 표적화 전략에서, 두 개의 개별 CAR(항-BCMA 및 항-GPRC5D)을 암호화한 이중 시스트론 작제물을 생성하였고, 여기서 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을, T2A 이중 시스트론 자가 절단 펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(서열 번호: 37을 암호화하는, 서열 번호: 319)에 의해 분리하였다. 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드의 상동 재조합을 줄이기 위해 상이한 CAR을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 코돈 분기하였다. (iii)에 도시된 작제물에서, 두 CAR은 모두 4-1BB 공자극 도메인을 포함하였다(BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; 서열 번호: 315). (iv)에 도시된 작제물에서, 항-BCMA CAR은 4-1BB 공자극 도메인을 포함하였고 항-GPRC5D CAR은 CD28 공자극 도메인을 포함하였다(BCMA-41BB-GPRC5D-CD28; 서열 번호: 316).
(v)에 도시된 바와 같이 추가 이중 표적화 전략에서, BCMA에 특이적인 scFv 및 GPRC5D에 특이적인 scFv를 협력하여 암호화하는(GPRC5D-BCMA-41BB; 서열 번호: 317), “단일 줄기” CAR 작제물을 생성하였고, 여기서 상기 두 scFv를 암호화하는 서열은 가요성 링커에 의해 분리되었다(서열 번호: 320). 예시적인 작제물은 4-1BB 공자극 도메인(서열 번호: 19를 암호화하는, 서열 번호: 60)을 포함하였다.
실질적으로 실시예 3에 기술된 바와 같이, 1차 인간 T 세포의 형질도입을 위해 레트로바이러스 발현 벡터에 다양한 CAR을 암호화하는 핵산 작제물을 클로닝하였다. 세포의 레트로바이러스 형질도입 후에, 다양한 작제물의 발현을, 항-GPRC5D CAR 또는 항-BCMA CAR 특이적 시약으로, 또는 모든 CAR 작제물에 공통인 스페이서 도메인에 대한 항체로 유세포 분석에 의해 산정하였다. 도 30에 도시된 바와 같이, 모든 테스트한 작제물은 1차 인간 T 세포에 의해 비슷하게 발현되었다. 형광 마이너스 1(fluorescence minus one, FMO) 음성 대조군은 발현을 나타내지 않았다.
형질도입 후 4 내지 10일에, 각 CAR에 특이적인 시약을 사용하여 1차 인간 T 세포의 형질도입 효율을 산정하였다. 결과는 도 31에 도시되어 있다. 산정한 모든 공여체에 대해서, 이중 표적화 이중 시스트론 작제물로 조작된 세포(도 31의 iii 및 iv으로 도시) 또는 “단일 줄기” 작제물(도 31의 v로 도시)에 대한 레트로바이러스 형질도입 효율은, 혼주된 CAR 조성물에 존재하는 단일 CAR을 발현하도록 조작된 세포(도 31의 i 및 ii로 도시)와 비교하여, 50-70% 사이에 오는 것으로 결정되었다. 도시된 결과는 대표적인 공여체의 것이다.
실시예 18: 이중 시스트론 항-BCMA 및 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체의 시험관 내 산정
A. T 세포 조성물의 세포 독성
실시예 17에 기술된 바와 같이 생성된, CAR-발현 1차 인간 T 세포를 OPM2 야생형 다발성 골수종 세포주 또는 BCMA 녹아웃(KO) OPM2 세포주와 24시간 동안 E:T 비율을 증가시키면서 공배양하였고 세포 용해를 산정하였다. 단일 표적화 CAR-발현 세포 조성물이 다음과 같이 대조군 역할을 하였다: 4-1BB 공자극 도메인이 있는 항-BCMA CAR(BCMA-41BB), 4-1BB 공자극 도메인이 있는 항-GPRC5D CAR(GPRC5D-41BB), 또는 CD28 공자극 도메인이 있는 항-GPRC5D CAR(GPRC5D-CD28). 음성 대조군으로, 세포가 동일한 항-BCMA CAR을 발현하지만, 4-1BB 및 CD3제타 신호 전달 도메인을 결여한(BCMA del CAR; 서열 번호: 318) 세포 조성물을 생성하였다.
도 32a에 도시된 바와 같이, 예시적인 생성된 모든 세포 조성물은 BCMA del CAR을 발현하는 세포를 제외하고 야생형 OPM2 표적 세포를 효과적으로 용해할 수 있었다. 도 32b에 도시된 바와 같이, 예시적인 생성된 모든 세포 조성물은 BCMA del CAR을 발현하는 세포와 단일 표적화 BCMA-41BB CAR을 발현하는 세포를 제외하고 BCMA KO OPM2 표적 세포를 용해할 수 있었고, 이는 그 표적 항원에 대한 항-BCMA CAR의 선택성과 일치한다. 결과는 평균±SEM으로 제공되며 3회 수행한 대표적인 실험에 대해 도시되어 있다.
B. T 세포 조성물의 사이토카인 분비
예시적인 생성된 세포 조성물을 BCMA 및 GPRC5D 모두를(도 33a), BCMA만(도 33b), 또는 GPRC5D만(도 33c) 발현하는 표적 세포와 1:1의 비율로 24시간 동안 공배양하였다. Luminex®Multiplex Assay에 의해 사이토카인의 분석을 위해 상청액을 수집하였다. 결과는 도 33a-33c에서 예시적인 사이토카인 GM-CSF, IFNg, IL-13 및 IL-2에 대해(좌측에서 우측으로) 도시되어 있고; 농도는 pg/mL이며, 눈금 단위는 50,000pg/mL 및 100,000pg/mL을 나타낸다.
두 항원을 발현하는 표적 세포와 배양하였을 때, 예시적인 생성된 모든 세포 조성물은, BCMA del CAR을 발현하는 세포를 제외하고, 사이토카인 분비를 나타냈다. BCMA만을 발현하는 표적 세포와 배양하였을 때, 단일 표적화 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포 조성물(GPRC5D-41BB 및 GPRC5D-CD28)은 검출 가능한 수준에서 상기 산정된 사이토카인을 분비하지 않았다. 유사하게, GPRC5D만을 발현하는 표적 세포와 배양하였을 때, 단일 표적화 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포 조성물(BCMA-41BB)은 검출 가능한 수준에서 상기 산정된 사이토카인을 분비하지 않았다. 이 결과들은 예시적인 생성된 CAR 작제물을 발현하도록 조작된 T 세포가 항원 특이적인 사이토카인 분비를 할 수 있다는 연구결과와 일반적으로 일치한다.
실시예 19: 이중 시스트론 항-BCMA 및 항-GPRC5D 키메라 항원 수용체의 생체 내 산정
뮤린 다발성 골수종 모델을 사용하여 실시예 17 및 18에 기술된 예시적인 생성된 단일- 및 이중-항원 표적화 CAR 작제물을 발현하도록 조작된 세포를 함유한 T 세포 조성물의 생체 내 효과를 산정하였다. OPM2 뮤린 이종 이식 모델에서 연구를 수행하였다. 반딧불이 루시퍼라아제(OPM2-ffLuc) 또는 막에 묶인 cyprinda 루시퍼라아제(OPM2 Cyprinda Luc)를 발현하도록 OPM2 세포주를 조작하였다. NOD scid 감마(NSG™) 마우스에 0일차에 꼬리 정맥을 통해 2 x 106개의 OPM2-ffLuc 세포를 주사하고, 14일 동안 생착 및 팽창하도록 놓아 두었다.
A. OPM2 뮤린 이종 이식 모델에서 이중 표적화 CAR의 효과
(1) 항-BCMA del CAR만을 발현하는 세포; BCMA del CAR, (2) 4-1BB 공자극 도메인을 포함하는 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포; BCMA-41BB, (3) BCMA 및 GPRC5D를 표적화하는 “단일 줄기” 작제물을 발현하는 세포; GPRC5D-BCMA-41BB, 또는 (4) 이중 시스트론 요소에 의해 분리된 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR 모두 암호화하는 이중 시스트론 작제물을 발현하는 세포, BCMA-41BB-GPRC5D-41BB 형식 또는 BCMA-41BB-GPRC5D-CD28 형식;을 함유한 1차 인간 T 세포 조성물을 OPM2 뮤린 이종 이식 모델에서 테스트하였다.
OPM2-ffLuc 세포의 생착 후 14일에, 마우스를 다음 CAR 작제물: (1) BCMA del CAR; (2) BCMA-41BB CAR; (3) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB CAR; (4) BCMA-41BB-GPRC5D-CD28 CAR; 또는 (5) GPRC5D-BCMA-41BB 중 하나를 발현하는 T 세포 3 x 106개의 꼬리 정맥 주사로 치료하였다. BCMA del CAR 및 단일 표적화 CAR이 대조군 역할을 하였다.
도 34a는 치료한 마우스의 생존 곡선을 도시한다. BCMA del CAR로 치료한 마우스(음성 대조군)의 중앙 생존값(mOS)은 32일이었고, 반면 다른 그룹들의 mOS는 105일까지 모니터링하였을 때 도달하지 못하였다(p<0.05).
관련된 실험에서, 실질적으로 이전 실시예들에 기술된 바와 같이, BCMA 녹아웃(KO) OPM2 세포주를 생성하였다. 도 34a에서 생존한 마우스에 2 x 106개의 BCMA KO OPM2 세포의 두 번째 주사를 재투여하였다. 도 34b에 도시된 바와 같이, 단일 표적화 BCMA-41BB CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스의 mOS는 재투여(re-challenge) 후 37이었는데, 반면 이중 표적화 CAR 작제물 중 임의로 치료한 마우스의 mOS는 도달하지 못했다(p<0.05).
OPM2 세포의 원래 주사 후 30일과 105일에, 그리고 BCMA KO OPM2 세포를 재투여 후 36일에 치료한 마우스의 종양 부담을 생체 발광 이미징(BLI)에 의해 산정하였다(도 35a-35c). 도 35a 및 35b에 도시된 바와 같이, BCMA del CAR로 치료한 마우스만 재투여 전에 종양 부담을 나타냈다. 도 35c에 도시된 바와 같이, 단일 표적화 BCMA-41BB CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스는, 이중 표적화 CAR 작제물을 발현하는 세포로 치료한 마우스와 비교하였을 때, BCMA KO OPM2 세포를 재투여한 이후 상당한 종양 부담을 나타냈다.
이 결과들은 단일 표적화 항-BCMA CAR이 BCMA 및 GPRC5D 모두를 표적화하는 접근법과 비교할 때, BCMA를 발현하지 않는 종양 세포를 제어하는 데 있어서 덜 효과적이라는 연구결과와 일치한다.
B. 뮤린 다발성 골수종 모델에서 CAR 공자극 신호 전달 도메인들의 비교
OPM2-ffLuc 종양 세포의 생착 및 팽창 이후에, 마우스를 다음 단일- 또는 이중-표적화 작제물: (1) BCMA del CAR; (2) BCMA-41BB; (3) GPRC5D-41BB; (4) GPRC5D-CD28; (5) GPRC5D-BCMA-41BB; (6) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; 또는 (7) BCMA-41BB-GPRC5D-CD28 중 하나를 발현하는 T 세포 5 x 105개로 치료하였다. BCMA del CAR 및 단일 표적화 CAR이 대조군 역할을 하였다.
마우스의 생존은 도 36에 도시되어 있다. BCMA del CAR로 치료한 마우스(음성 대조군)의 mOS는 38일이었다. 대조적으로, 다른 모든 치료 그룹에서 마우스의 mOS는 38일을 넘어 크게 증가하였다(p<0.05). CD28 공자극 도메인을 포함하는 단일 표적화 항-GPRC5D CAR을 발현하는 세포를 이용한 치료는 다른 작제물을 발현하는 세포를 이용한 치료와 비교할 때, 더 짧은 mOS와 관련이 있었다(p<0.05).
OPM2 세포 주사 후 14일(도 37a), 29일(도 37b), 및 36일(도 37c)에 생체 발광 이미징(BLI)을 통해 종양 부담을 산정하였다. 도 37a에 도시된 바와 같이, 모든 그룹의 마우스가 CAR T 세포 조성물로 치료 시에 상당한 종양 부담을 보였다. 도 37b 및 도 37c는 OPM2 세포 주사 후 각각 29일 또는 36일에 BCMA del CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스(음성 대조군)이 상당한 종양 부담을 나타냈음을 보여준다. 또한, 단일 표적화 GPRC5D-CD28 CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스는 최소한의 종양 부담을 보였다. 대조적으로, 다른 모든 그룹은 29일에 종양 부담이 줄었고 36일에 감지할 정도의 종양 부담을 나타내지 않았다.
C. 뮤린 다발성 골수종 항원 탈출 모델에서 CAR 공자극 신호 전달 도메인들의 비교
뮤린 다발성 골수종 항원 탈출 모델에서 상이한 공자극 도메인들의 효과를 이해하기 위해, NSG 마우스에 0일차에 꼬리 정맥을 통해 막에 묶인 cyprinda 루시퍼라아제(OPM2 Cyprinda Luc)를 발현하도록 조작된 OPM2 세포 2 x 106개에 반딧불이 루시퍼라아제(Firefly Luc)를 발현하도록 조작된 BCMA KO OPM2 세포 5-10%를 첨가한 것을 주사하였다. 사용된 상이한 루시퍼라아제는 야생형 OPM2 세포 및 BCMA KO OPM2 세포의 차동 이미징(differential imaging)을 가능하게 하였다. 종양 세포를 14일 동안 생착 및 팽창하도록 두었다.
14일에, 마우스를 다음 작제물: (1) BCMA del CAR; (2) BCMA-41BB; (3) BCMA-41BB 및 GPRC5D-41BB 혼주 세포; (4) BCMA-41BB 및 GPRC5D-CD28 혼주 세포; (5) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; (6) BCMA-41BB-GPRC5D-CD28; 또는 (7) GPRC5D-BCMA-41BB 중 하나를 발현하도록 조작된 T 세포 5 x 105개로 치료하였다. BCMA del CAR 및 단일 표적화 CAR이 대조군 역할을 하였다.
28일에 BLI에 의해 종양 부담을 산정하였다. 도 38에 도시된 바와 같이, CAR T 세포를 이용한 치료는 모든 그룹에서 OPM2 야생형 세포를 박멸하였다. 대조적으로, CD28 공자극 도메인을 포함하는 항-GPRC5D CAR T 세포를 발현하는 CAR T 세포는 혼주된 T 세포 조성물에 또는 이중 시스트론 작제물에 포함되어 있든, BCMA KO OPM2 세포 박멸에 실패하였다.
유사한 실험에서, NSG 마우스에 0일차에 OPM2 야생형 및 BCMA KO OPM2 세포의 혼합된 조성물을 정맥 내 주사하여 골수-성 다발성 골수종 이종 이식 모델을 형성하였다. 상기 세포를 14일 동안 생착 및 팽창하도록 둔 후, 마우스를 다음 작제물: (1) BCMA del CAR; (2) BCMA-41BB 및 GPRC5D-41BB 혼주 세포; (3) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB; 및 (4) GPRC5D-BCMA-41BB 중 하나를 발현하는 T 세포 2.5 x 105개의 단일 정맥 내 주사로 치료하였다. BCMA del CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스가 음성 대조군 역할을 하였다. 이 실험에서, 음성 대조군을 제외한 모든 CAR 작제물이 4-1BB 공자극 도메인을 포함하였다.
OPM2 주사 후 14일에 표시된 세포 조성물로 치료한 마우스의 생존이 도 39에 도시된다. BCMA del CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스와 비교하여, 다른 모든 치료 그룹은 큰 생존의 증가를 보였다(모든 CAR 대 대조군에 대해 p<0.001). 특히, 단일 줄기 GPRC5D-BCMA-41BB CAR을 발현하는 세포로 치료한 마우스는 (1) BCMA-41BB-GPRC5D-41BB 작제물을 발현하는 세포 또는 (2) GPRC5D-41BB CAR을 발현하는 세포 및 BCMA-41BB CAR을 발현하는 세포(1:1의 비율로 혼주됨)로 치료한 마우스와 비교할 때 상당히 더 짧은 생존을 나타냈다(다른 두 이중 표적화 접근법 중 어느 하나와 비교하여 단일 줄기에 대해 p<0.05).
종양 세포의 주사 후 14일(도 40a), 36일(도 40b), 및 48일(도 40c)에 BLI에 의해 골수-성 모델의 종양 부담을 산정하였다. 모든 치료 그룹은 도 40a에 도시된 바와 같이 CAR T 세포 치료 시에 종양 부담을 나타냈다. 도 40b에 도시된 바와 같이, 모든 치료는 36일에 OPM2 야생형 세포를 효과적으로 제어할 수 있었다. 하지만, 도 40c에 도시된 바와 같이, 48일에 GPRC5D-4-1BB/BCMA-41BB CAR 혼주 세포 조성물 및 BCMA-41BB-GPRC5D-41BB 이중 시스트론 작제물 세포 조성물이 단일 줄기 CAR 작제물(GPRC5D-BCMA-41BB)을 발현하는 세포를 함유한 조성물보다 더 효과적이었다.
실시예 20: 항-GPRC5D 및 항-BCMA 키메라 항원 수용체를 암호화하는 추가적인 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드의 생성
항-GPRC5D CAR 및 항-BCMA CAR 모두를 암호화하는 추가적인 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드를 생성하였다.
예시적인 항-GPRC5D CAR은 GPRC5D와 결합할 수 있는 scFv 항원 결합 도메인(예를 들어, GPRC5D-203, VL/VH scFv(서열 번호: 8); 서열 번호: 73에 제시된 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 제시된 면역글로불린 힌지-CH2-CH3; 인간 CD28-유래 막관통 도메인(예를 들어, 서열 번호: 18); 인간 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 19); 및 인간 CD3제타-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 20)을 함유하였다.
예시적인 항-BCMA CAR은 BCMA를 발현하는 세포와 결합할 수 있는 scFv 항원 결합 도메인(예를 들어, BCMA-55, VL/VH scFv(서열 번호: 241); 서열 번호: 73에 제시된 서열에 의해 암호화된, 서열 번호: 17에 제시된 면역글로불린 힌지-CH2-CH3; 인간 CD28-유래 막관통 도메인(예를 들어, 서열 번호: 18); 인간 4-1BB-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 19); 및 인간 CD3제타-유래 세포내 신호 전달 도메인(예를 들어, 서열 번호: 20)을 함유하였다.
상기 CAR 각각을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 단일 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드 작제물에 조합하기 전에 개별적으로 코돈 최적화하였다.
이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드는 두 가지 형식으로 생성되었다. 제1 형식은 항-BCMA CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 대해 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단(폴리펩타이드의 N 말단)을 향해 위치한 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열로 생성되었다(“αGPRC5D-αBCMA”; 서열 번호: 301을 암호화하는 서열 번호: 303). 제2 형식은 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 대해 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단(폴리펩타이드의 N 말단)을 향해 위치한 항-BCMA CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열로 생성되었다(“αBCMA-αGPRC5D”; 서열 번호: 298을 암호화하는 서열 번호: 300). 항-GPRC5D CAR 및 항-BCMA CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 하류 리보솜 스킵 요소(예컨대 자가 절단 T2A 펩타이드; 서열 번호: 37을 암호화하는 서열 번호: 44 또는 45).
폴리뉴클레오타이드 작제물을 T 세포 형질도입을 위해 렌티바이러스 발현 벡터에 클로닝하였다. 주르카트 세포를 αGPRC5D-αBCMA CAR 형식 또는 αBCMA-αGPRC5D CAR 형식을 함유한 폴리뉴클레오타이드 이중 시스트론 작제물을 함유한 렌티바이러스 벡터로 안정적으로 형질도입하였다. 대조군으로, 주르카트 세포를 또한 단일 항원 표적화 항-GRPC5D CAR 또는 항-BCMA CAR을 암호화하는 작제물로 형질도입하였다. 형질도입은 5 x 105 셀/웰로 실행하였고 CAR의 발현은 3일차에 결정하였다. CAR의 발현은 각 CAR의 항원 결합 도메인에 특이적인 결합 시약을 사용하여 유세포 분석에 의해 산정하였다.
유세포 분석은 3’-위치한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR(후행 CAR)의 발현은 5’-위치한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR(선행 CAR)과 비교하여 또는 단일 CAR만을 암호화하는 작제물의 발현과 비교하여 두 이중 시스트론 형식 모두에서 크게 감소하였다. 구체적으로, 도 41a는 산정한 형식들 중에서 항-BCMA CAR의 발현 백분율의 결과를 도시하고, 도 41b는 산정한 형식들 중에서 항-GPRC5D CAR의 발현을 도시한다. 형질도입된 주르카트 세포의 유전체 DNA의 PCR 분석은 3’-위치한 CAR-암호화 뉴클레오타이드 서열이 재조합을 통해 손실되었음을 나타냈다(데이터는 표시되지 않음).
실시예 21: 항-GPRC5D 및 항-BCMA 키메라 항원 수용체를 암호화하는 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드의 코돈 분기
3’-위치한 CAR-암호화 뉴클레오타이드 서열의 가능한 재조합 및 손실을 줄이기 위해, 상기 CAR들 중 하나를 암호화하는 핵산 서열을 코돈 분기하였다. 이 실시예에서, 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 핵산 서열은 실시예 20에 기술된 서열과 비교하여 코돈 분기되었다.
구체적으로, scFv, 면역글로불린 스페이서, CD28 막관통 도메인, 4-1BB 엔도도메인, 및 CD3제타 엔도도메인을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 부분들을 코돈 분기하여, 이 성분들의 각각을 암호화하는 뉴클레오타이드가 항-BCMA CAR에서 동일한 성분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 비교하여 뉴클레오타이드 수준에서 다르지만 여전히 동일한 아미노산 서열을 암호화하도록 하였다. 뉴클레오타이드 서열은 이중 시스트론 작제물의 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 항-BCMA CAR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 사이에 연속적인(또는 인접한) 서열 상동성 염기쌍이 10개 이내가 되도록 코돈 분기되었다. 항-GPRC5D CAR의 코돈 분기 이후, 폴리뉴클레오타이드 서열의 스플라이스 부위에 대해 분석하였다(예를 들어, NNSPLICE 버전 0.9 온라인 스플라이스 부위 예측 도구; fruitfly.org, Berkeley Drosophila Genome Project, Berkeley, CA). 스플라이스 공여 부위 및 스플라이스 수용체 부위를 독립적으로 평가하였다. 예를 들어, 프로모터 영역 및 긴 스페이서 영역에서, 0.7보다 큰(스플라이스 이벤트 70% 확률보다 큰) 스플라이스 부위 점수를 가진 식별된 스플라이스 공여 및 스플라이스 수용체 부위를 잠재성 돌연변이에 의해 변형하여 스플라이스 부위 점수를 0.7 미만으로 감소시켰다.
폴리뉴클레오타이드 이중 시스트론 작제물을 함유한 렌티바이러스 벡터를 사용하여 주르카트 T 세포를 형질도입하였고 각 CAR 항원 결합 도메인에 특이적인 결합 시약을 사용하여 유세포 분석에 의해 CAR의 세포 표면 발현을 모니터링하였다.
도 42a 및 42b에 도시된 바와 같이, 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드 작제물의 코돈 분기는 3’-위치한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 CAR의 발현을 원래의 이중 시스트론 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 동일한 CAR의 발현과 비교하여 상당히 향상시켰다. 예를 들면, 도 42a에 도시된 바와 같이, 항-BCMA CAR의 발현은 원래의 αGPRC5D-αBCMA 이중 시스트론 작제물로 형질도입한 세포에서 상대적으로 낮았지만, 각각의 코돈 분기된(CD) 작제물로 형질도입된 세포에서 상당히 향상되었다. 마찬가지로, 도 42b에 도시된 바와 같이, 항-GPRC5D CAR의 발현은 원래의 αBCMA-αGPRC5D 이중 시스트론 작제물로 형질도입한 세포에서 상대적으로 낮았지만, 각각의 코돈 분기된(CD) 작제물로 형질도입된 세포에서 상당히 향상되었다.
실시예 22: GPRC5D/BCMA 이중 표적화 CAR-조작된 T 세포 조성물의 시험관 내 산정
(1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포, 또는 (3) 실시예 5에 기술된 바와 같이, αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA 형식의, 코돈 분기된 이중 시스트론 작제물의 형질도입에 의해 두 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포를 함유한 T 세포 조성물, 즉 주르카트 Nur77-RFP 리포터 또는 1차 T 세포를 항원-발현 세포와 공배양 시 각각의 항원 특이적인 활성을 산정하였다. 인간 공여 대상체의 백혈구 성분채집술 샘플로부터 면역 친화도 기반 농축에 의해 단리된 Nur77-RFP 주르카트 T 세포주 또는 1차 T 세포를 단일 CAR 작제물을 암호화하는 렌티바이러스 벡터 또는 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR을 암호화하는 이중 시스트론 작제물(이중 표적화 세포)을 함유한 렌티바이러스 벡터로 형질도입하였다. 형질도입 후에, 일부 경우에는 팽창 후에, T 세포를 각각의 CAR에 특이적인 항체로 염색하고 유세포 분석에 의해 분석하여, 세포의 형질도입과 CAR의 발현을 확인하였다.
일부 실험에서, 실시예 13에 기술된 바와 같이, 항-BCMA CAR 및 항-GPRC5D CAR을 개별적으로 발현하는 세포를 함유한 혼주된 T 세포 조성물을 산정하였다(“αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포”).
A. 다발성 골수종 세포주의 존재 하에서 항원-의존적 활성
조작된 주르카트 세포를 다양한 양의 BCMA 및 GPRC5D를 발현하는 다발성 골수종 세포주와 1:1의 E:T 비율로 20시간 동안 공배양하였다. 다발성 골수종 세포주는 KMS12BM, MM.1S, NCI-H929, OPM-2, 및 RPMI8226을 포함하였다(상기 세포주 상에서 GPRC5D 및 BCMA의 발현 수준을 기술하는 실시예 16 참조). 만성 골수성 백혈병(CML) 세포주 K562, 및 GPRC5D를 발현하도록 조작된 K562 세포주가 각각 음성 및 양성 대조군으로 포함되었다. 유세포 분석으로 RFP 발현의 변화를 측정하여 상기 CAR의 항원 특이적 자극을 산정하였다.
도 43에 도시된 바와 같이, αBCMA, αGPRC5D, αBCMA-αGPRC5D, 또는 αGPRC5D-αBCMA CAR을 발현하는 주르카트 Nur77/RFP 리포터 세포를 다양한 다발성 골수종 세포주로 공배양하여 자극하였으며 이는 RFP 신호에 양성인 세포의 백분율(%Nur77)에 의해 입증된다. 도시된 바와 같이, αGPRC5D CAR만을 발현하는 세포는 KMS12BM 세포주와 같은 특정 표적 세포에 덜 반응했지만, 이중 표적화 CAR을 발현하는 세포 조성물에서는 리포터 활성이 증가하였다.
B.
다발성 골수종 세포주의 존재 하에서 사이토카인 분비
(1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포, (3) αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA 형식의 이중 시스트론 작제물의 형질도입에 의해 두 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포를 함유한 T 세포, 또는 (4) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 혼주한 혼주 T 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 1차 인간 T 세포 조성물 각각의 항원 특이적 활성을 산정하였다. 대조군으로, 1차 인간 T 세포 조성물을 모의 형질도입하였다. T 세포를 KMS12BM, MM.1S, NCI-H929, OPM2, 및 RPMI8226 다발성 골수종 세포주와 1:1의 E:T 비율로 24시간 동안 공배양하고, Luminex®Multiplex Assay에 의한 사이토카인 분석을 위해 상청액을 수집하였다.
1차 인간 T 세포 조성물을 다양한 다발성 골수종 세포주와 공배양 후 IFNγ, IL-2, TNFα의 분비 수준을 산정하였으며, 각각 도 44a, 44b, 및 44c에 도시된 바와 같다. 모의 형질도입한 T 세포 조성물을 제외하고, 테스트한 모든 1차 인간 T 세포 조성물에서 사이토카인 분비가 관찰되었다. 특정 세포주의 경우, 사이토카인 분비는 αGPRC5D CAR만을 또는 αBCMA CAR만을 발현하도록 조작된 세포 조성물에 비하여, 이중 표적화 αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA 형식 또는 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 함유한 세포 조성물에 의해 증가하였다.
D. BCMA 또는 GPRC5D KO 세포의 존재 하에서 항원-의존적 활성
항원 손실의 맥락에서 항-BCMA 및 항-GPRC5D CAR의 항원-의존적 활성을 이해하기 위해, OPM2 세포에서 GPRC5D 또는 BCMA를 녹아웃하여 항원 손실 모델을 만들었다. 실시예 5에 기술된 바와 같이 OPM2 세포에서 GPRC5D를 녹아웃하였다. 실시예 12에 기술된 바와 같이 OPM2 세포에서 BMCA를 녹아웃하였다.
유세포 분석을 통해 OPM2 GPRC5D KO 세포에서 GPRC5D 발현의 결여와 OPM2 BCMA KO 세포에서 BCMA 발현의 결여를 확인하였다. OPM2 야생형(OPM2 WT) 세포가 대조군 역할을 하였는데, GPRC5D 및 BCMA 모두의 발현을 보였다(예를 들어, 도 22a 참조).
항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 또는 항-BCMA CAR (αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포를 함유한, 또는 αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA 형식의 이중 시스트론 작제물의 형질도입에 의해 두 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포를 함유한, 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포 조성물의 항원 특이적 활성을 산정하였다. 다양한 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포 조성물을 OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO, 또는 OPM2 BCMA KO 세포와 1:1의 비율로 20시간 동안 공배양하였다. 상기 세포 조성물에 의해 발현된 CAR의 항원 특이적 자극은 유세포 분석에 의한 RFP 발현의 변화를 측정하여 산정하였다.
도 45에 도시된 바와 같이, GPRC5D-표적화 CAR(αGPRC5D)만을 또는 BCMA-표적화 CAR(αBCMA)만을 발현하는 비-혼주된 주르카트 Nur77-RFP 리포터 세포의 활성화는, 이들을 GPRC5D 또는 BCMA이 각각 녹아웃된 OPM2 세포와 공배양하였을 때, 관찰되지 않았다. 대조적으로, OPM2 세포에서 BCMA 또는 GPRC5D를 녹아웃하였을 때 αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA CAR을 발현하는 세포를 함유한 주르카트 Nur77-RFP 리포터 이중 표적화 세포 조성물에서 활성화는 유지되었다. 이 결과들은 αBCMA-αGPRC5D 및 αGPRC5D-αBCMA CAR 형식을 함유한 이중 표적화 조작된 T 세포는 표적화된 항원들 중 하나의 부재 하에서도 활성화를 매개할 수 있다는 것을 보여준다.
E. BCMA 또는 GPRC5D KO 세포의 존재 하에서 사이토카인 분비
항원 손실의 효과를 추가로 산정하기 위해, OPM2 WT, OPM2 GPRC5D KO, 또는 OPM2 BCMA KO 세포를 1:1의 비율로 24시간 동안 1차 인간 T 세포 조성물과 배양하고, 상기 T 세포에 의한 사이토카인 분비를 산정하였다. 1차 인간 T 세포 조성물은 (1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포, (3) αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA 형식의 이중 시스트론 작제물의 형질도입에 의해 두 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포, 또는 (4) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포 CAR을 1:1의 비율로 혼주한 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유하였다. 모의 형질도입한 T 세포 조성물이 대조군 역할을 하였다.
OPM2 세포와의 공배양 이후, Luminex®Multiplex Assay에 의한 사이토카인의 분석을 위해 상청액을 수집하였다. IFNγ, IL-2, TNFα의 분비 수준을 산정하였으며, 각각 도 46a, 46b, 및 46c에 도시된 바와 같다. 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 또는 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하는 T 세포에 의한 사이토카인 분비는, 이들을 GPRC5D 또는 BCMA이 각각 녹아웃된 OPM2 세포와 공배양하였을 때, 관찰되지 않았다. 하지만, 사이토카인 분비는 OPM2에서 GPRC5D 또는 BCMA를 녹아웃하였을 때 αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA CAR을 발현하는 이중 표적화 세포를 함유한 조성물에서와 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포 조성물에서 T 세포 내에 유지되었다. 이 결과들은 이중 표적화 세포는, 세포가 αBCMA-αGPRC5D 또는 αGPRC5D-αBCMA CAR 형식으로 공-형질도입되거나 αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 포함하는 경우, 항원들 중 하나의 부재에도 불구하고 사이토카인을 분비할 수 있다는 것을 나타낸다.
실시예 23: GPRC5D- 및 BCMA-표적화 CAR을 발현하는 세포를 함유한 이중 표적화 세포 조성물의 생체 내 산정
OPM2 뮤린 다발성 골수종 모델을 생성하고 이를 사용하여 (1) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)만을 발현하도록 조작된 세포, (2) 항-BCMA CAR(αBCMA)만을 발현하도록 조작된 세포, 또는 (3) αGPRC5D-αBCMA 형식의 이중 시스트론 작제물의 형질도입에 의해 두 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포, 또는 (4) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 혼주한 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 T 세포 조성물의 생체 내 효과를 산정하였다.
A. OPM2 뮤린 이종 이식 모델에서 항-BCMA 및 항-GPRC5D를 발현하는 T 세포 조성물의 산정
실험을 수행하였으며, 여기서 NOD scid 감마(NSG™) 마우스를 (1) 항-BCMA CAR(αBCMA)을 발현하는 세포, (2) 항-GPRC5D CAR(αGPRC5D)을 발현하는 세포, (3) αGPRC5D-αBCMA 형식의 두 CAR을 암호화하는 이중 시스트론 작제물로 생성된 이중 표적화 세포, 또는 (4) 항-BCMA CAR 또는 항-GPRC5D CAR을 발현하도록 개별적으로 조작된, 항-BCMA CAR-발현 세포 대 항-GPRC5D CAR-발현 세포를 1:1의 비율로 혼주한 혼주 세포(αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포)를 함유한 조성물로부터의 3 x 106개의 총 1차 인간 T 세포로 치료하였다. OPM2 세포 조성물 주사 후 14일에 T 세포 조성물을 투여하였다. 이 실험에서, 마우스에 100% OPM2 WT 세포, 95% OPM2 WT 세포 및 5% OPM2 BCMA KO 세포, 또는 95% OPM2 WT 세포 and 5% OPM2 GPRC5D KO 세포를 주사하였다. 대조군으로, 마우스를 또한 모의 형질도입된 1차 인간 T 세포 조성물로 치료하였다.
도 47a에 도시된 바와 같이, BLI에 의해 산정한 종양 부담은 100% OPM2 WT 세포를 투여한, 주사를 맞은 치료하지 않은 및 모의 치료한 마우스에서 상당히 증가하였다. 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포로 치료한 마우스에서도 40일에 종양 부담의 증가가 관찰되었다. 대조적으로, 도 47b에 도시된 바와 같이, 항-BCMA CAR만을 발현하는 세포를 함유한 T 세포 조성물을 이용한 치료는 5% OPM2 BCMA KO 세포를 주사한 마우스에서 20일 이전에 종양 부담의 증가를 초래하였다. 유사하게, 항-GPRC5D CAR만을 발현하는 세포를 함유한 T 세포 조성물로 치료한 마우스는 5% OPM2 GPRC5D KO 세포를 주사한 마우스에서 10일 이전에 종양 부담의 증가를 초래하였다(도 47c). αGPRC5D 및 αBCMA 혼주 세포를 함유한 조성물로 치료한 마우스와, αGPRC5D-αBCMA 이중 시스트론 작제물의 CAR을 발현하는 이중 표적화 세포를 함유한 조성물로 치료한 마우스는 60일까지 상대적으로 미미한 종양 부담의 증가를 나타냈다. 또한, 5% OPM2 GPRC5D KO 세포로 치료한 마우스의 종양 부담이 αGPRC5D-αBCMA 이중 시스트론 작제물을 발현하는 세포를 이용한 치료에 의해 가장 잘 제어되었다.
유사한 결과가 이 연구의 CAR T 세포 주사 후 80일이 지난 마우스의 생존 분석으로부터 관찰되었다(도 48). 도시된 바와 같이, 5% OPM2 GPRC5D KO 세포를 주사하고 항-GPRC5D CAR을 발현하는 세포로만 치료한 마우스에서 생존이 감소하였다. 5% OPM2 BCMA KO 세포를 주사하고 항-BCMA CAR을 발현하는 세포로만 치료한 마우스에서도 생존이 감소하였다.
본 발명은 본 발명의 다양한 측면을 설명하기 위해, 예를 들어 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위를 제한하려는 것이 아니다. 기술된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본 명세서의 기재 및 가르침에서 명백해질 것이다. 상기 변형은 본 개시의 진정한 범위와 정신에서 벗어나지 않고 실시될 수 있으며,본 개시의 범위에 속하도록 의도된다.
하기와 같이 표 3에 서열 목록을 제시한다.
서열
| # | 서열 | 주석 |
| 1 | EVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVL | GPRC5D-200 VH/VL |
| 2 | QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS | GPRC5D-200 VL/VH |
| 3 | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVL | GPRC5D-201 VH/VL |
| 4 | QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS | GPRC5D-201 VL/VH |
| 5 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVL | GPRC5D-202 VH/VL |
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| 8 | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS | GPRC5D-203 VL/VH |
| 9 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMANFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVL | GPRC5D-204 VH/VL |
| 10 | NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS | GPRC5D-204 VL/VH |
| 11 | EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVL | GPRC5D-205 VH/VL |
| 12 | QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV | GPRC5D-205 VL/VH |
| 13 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSSGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVL | GPRC5D-206 VH/VL |
| 14 | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS | GPRC5D-206 VL/VH |
| 15 | ESKYGPPCPPCP | 짧은 스페이서 |
| 16 | ESKYGPPCPPCPGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK | 중간 스페이서 (힌지-CH3 119 aa) |
| 17 | ESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK | 긴 스페이서 (IgG4/IgG2 힌지- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 스페이서; 228 aa) |
| 18 | MFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWV | CD28 막관통 도메인 |
| 19 | KRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL | 4-1BB-유래 세포내 공-신호 전달 서열 (aa) |
| 20 | RVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | CD3-제타 유래 세포내 신호 전달 도메인 (aa) |
| 21 | EVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS | GPRC5D-200 VH |
| 22 | QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLG | GPRC5D-200 VL |
| 23 | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS | GPRC5D-201 VH |
| 24 | QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLG | GPRC5D-201 VL |
| 25 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSS | GPRC5D-202 VH |
| 26 | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVLG | GPRC5D-202 VL |
| 27 | QVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS | GPRC5D-203 VH |
| 28 | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLG | GPRC5D-203 VL |
| 29 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS | GPRC5D-204 VH |
| 30 | NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLG | GPRC5D-204 VL |
| 31 | EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTATYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV | GPRC5D-205 VH |
| 32 | QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLG | GPRC5D-205 VL |
| 33 | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS | GPRC5D-206 VH |
| 34 | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLG | GPRC5D-206 VL |
| 35 | EGRGSLLTCGDVEENPGP | T2A 펩타이드 (aa) |
| 36 | GSGEGRGSLLTCGDVEENPGP | T2A 펩타이드 (aa) |
| 37 | LEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPR | T2A 펩타이드 (aa) |
| 38 | ATNFSLLKQAGDVEENPGP | P2A 펩타이드 (aa) |
| 39 | GSGATNFSLLKQAGDVEENPGP | P2A 펩타이드 (aa) |
| 40 | QCTNYALLKLAGDVESNPGP | E2A 펩타이드 (aa) |
| 41 | GSGQCTNYALLKLAGDVESNPGP | E2A 펩타이드 (aa) |
| 42 | VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP | F2A 펩타이드 (aa) |
| 43 | GSGVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP | F2A 펩타이드 (aa) |
| 44 | ctcgagggcggcggagagggcagaggaagtcttctaacatgcggtgacgtggaggagaatcccggccctagg | T2A 펩타이드 (nt) |
| 45 | cttgaaggtggtggcgaaggcagaggcagcctgcttacatgcggagatgtggaagagaaccccggacctaga | T2A 펩타이드 (nt) |
| 46 | RSKRSRLLHSDYMNMTPRRPGPTRKHYQPYAPPRDFAAYRS | CD28 공자극 도메인 |
| 47 | GSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA | 링커 |
| 48 | gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgag aaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaag |
긴 스페이서 (nt) |
| 49 | MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVLPTQLLFLLSVLGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRGCVSFSWTTILCIAIGCSLLQIIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFLMALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITVLFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDPVVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNACPVTAYQHSFQVENQELSRARDSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSPQQDAGGV | GPRC5D 단백질 (Uniprot Q9NZD1) |
| 50 | GGGGS | 4GS 링커 |
| 51 | GGGS | 3GSlinker |
| 52 | GGGGSGGGGSGGGGS | 링커 |
| 53 | GSTSGSGKPGSGEGSTKG | 링커 |
| 54 | SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA | 링커 |
| 55 | atgttttgggtgctggtcgtggtcggaggggtgctggcctgttacagcctgctggtgacagtcgctttcatcatcttctgggtg | CD28 막관통 도메인 (nt) - 최적화되지 않음 |
| 56 | atgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtc | CD28 막관통 도메인 (nt) - 최적화됨 |
| 57 | agagtcaagttttccaggtccgccgacgctccagcctaccagcaggggcagaaccagctgtacaacgagctgaacctgggcagaagggaagagtacgacgtcctggataagcggagaggccgggaccctgagatgggcggcaagcctcggcggaagaacccccaggaaggcctgtataacgaactgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggcatgaagggcgagcggaggcggggcaagggccacgacggcctgtatcagggcctgtccaccgccaccaaggatacctacgacgccctgcacatgcaggccctgcccccaagg | CD3-제타 유래 세포내 신호 전달 도메인 (nt) |
| 58 | agagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | CD3-제타 유래 세포내 신호 전달 도메인 (nt) - 최적화됨 |
| 59 | aagcgggggagaaagaaactgctgtatattttcaaacagccctttatgagacctgtgcagactacccaggaggaagacggatgcagctgtaggtttcccgaggaagaggaaggaggctgtgagctg | 4-1BB-유래 세포내 공-신호 전달 서열 (nt) |
| 60 | aagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctg | 4-1BB-유래 세포내 공-신호 전달 서열 (nt) - 최적화됨 |
| 61 | ggatctgcgatcgctccggtgcccgtcagtgggcagagcgcacatcgcccacagtccccgagaagttggggggaggggtcggcaattgaaccggtgcctagagaaggtggcgcggggtaaactgggaaagtgatgtcgtgtactggctccgcctttttcccgagggtgggggagaaccgtatataagtgcagtagtcgccgtgaacgttctttttcgcaacgggtttgccgccagaacacagctgaagcttcgaggggctcgcatctctccttcacgcgcccgccgccctacctgaggccgccatccacgccggttgagtcgcgttctgccgcctcccgcctgtggtgcctcctgaactgcgtccgccgtctaggtaagtttaaagctcaggtcgagaccgggcctttgtccggcgctcccttggagcctacctagactcagccggctctccacgctttgcctgaccctgcttgctcaactctacgtctttgtttcgttttctgttctgcgccgttacagatccaagctgtgaccggcgcctac | HTLV1 증진인자를 갖는 EF1알파 프로모터 |
| 62 | aatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtattcttaactatgttgctccttttacgctatgtggatacgctgctttaatgcctttgtatcatgctattgcttcccgtatggctttcattttctcctccttgtataaatcctggttgctgtctctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgtttgctgacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttcgctttccccctccctattgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtggtgttgtcggggaaatcatcgtcctttccttggctgctcgcctgtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgctacgtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcggcctcttccgcgtcttcgccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccgcctccccgc | 우드척 간염 바이러스(WHP) 전사 후 조절 요소(WPRE) |
| 63 | QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVL | GPRC5D-200 VL |
| 64 | QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVL | GPRC5D-201 VL |
| 65 | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVL | GPRC5D-202 VL |
| 66 | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVL | GPRC5D-203 VL |
| 67 | NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVL | GPRC5D-204 VL |
| 68 | QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVL | GPRC5D-205 VL |
| 69 | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVL | GPRC5D-206 VL |
| 70 | ATGCCGCTGCTGCTACTGCTGCCCCTGCTGTGGGCAGGGGCTCTAGCTTCTTCTGAGCTGACCCAAGATCCTGCCGTGTCTGTGGCTCTGGGCCAGACAGTGCGGATTACCTGTCAGGGCGATAGCCTGAGAAGCTACTACGCCAGCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCTCCCGTGCTGGTCATCTACGGCAAGAACAACAGACCCAGCGGCATCCCCGATAGATTCAGCGGAAGCAGCTCTGGCAATACCGCCAGCCTGACAATTACTGGCGCCCAGGCCGAAGATGAGGCCGACTACTACTGCAACAGCAGAGACAGCTCCGGCAATCCTCCTGTGGTTTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTGCTGGGAAGTAGAGGTGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGCGGATCTCTTGAAATGGCTCAGGTGCAGCTGGTGGAATCAGGCGGTGGACTTGTTCACCCTGGCGGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGATCCCACAGCATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCAGCATCAGCAGCGACAGCACCTACACCTACTATGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAGAAGTGGCGGCCAGTGGAAGTACTACGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACAGTTAGCTCTGAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCCGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAGATGTTCTGGGTGCTCGTGGTCGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACAGCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTCTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCAGCCTATCAGCAGGGCCAAAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGATAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGACGCACTGCACATGCAGGCCCTGCCACCTAGA | 항-GPRC5D CAR nt |
| 71 | MPLLLLLPLLWAGALA | CD33 신호 서열 |
| 72 | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | 항-GPRC5D CAR |
| 73 | gaatctaagtacggaccgccctgccctccctgccctgctcctcctgtggctggaccaagcgtgttcctgtttccacctaagcctaaagataccctgatgatttcccgcacacctgaagtgacttgcgtggtcgtggacgtgagccaggaggatccagaagtgcagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtccacaatgctaagactaaaccccgagaggaacagtttcagtcaacttaccgggtcgtgagcgtgctgaccgtcctgcatcaggattggctgaacgggaaggagtataagtgcaaagtgtctaataagggactgcctagctccatcgagaaaacaattagtaaggcaaaagggcagcctcgagaaccacaggtgtataccctgccccctagccaggaggaaatgaccaagaaccaggtgtccctgacatgtctggtcaaaggcttctatccaagtacatcgccgtggagtgggaatcaaatgggcagcccgagaacaattacaagaccacaccacccgtgctggactctgatggaagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctcgctggcaggagggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgcacaatcattatacacagaagtcactgagcctgtccctgggcaaa | IgG4/IgG2 힌지- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 스페이서 (nt) |
| 74 | gagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaag | 최적화된 SSE IgG4/IgG2 힌지- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 스페이서 (nt) |
| 75 | GFTFSSY | CDRH1 |
| 76 | SGRGRS | CDRH2 |
| 77 | YYHAGAFDL | CDRH3 |
| 78 | GFTFSSYAMT | CDRH1 |
| 79 | TISGRGRSTF | CDRH2 |
| 80 | SYAMT | CDRH1 |
| 81 | TISGRGRSTFYADSVKG | CDRH2 |
| 82 | GFTFSSYA | CDRH1 |
| 83 | ISGRGRST | CDRH2 |
| 84 | ARYYHAGAFDL | CDRH3 |
| 85 | TGTSSDVGGYNYVS | CDRL1 |
| 86 | DVSKRPS | CDRL2 |
| 87 | SSYTSSSTLV | CDRL3 |
| 88 | SSDVGGYNY | CDRL1 |
| 89 | DVS | CDRL2 |
| 90 | GYTFNRY | CDRH1 |
| 91 | SAYNGN | CDRH2 |
| 92 | MAYDS | CDRH3 |
| 93 | GYTFNRYAIT | CDRH1 |
| 94 | WISAYNGNSH | CDRH2 |
| 95 | RYAIT | CDRH1 |
| 96 | WISAYNGNSHYAQKLQG | CDRH2 |
| 97 | GYTFNRYA | CDRH1 |
| 98 | ISAYNGNS | CDRH2 |
| 99 | ARMAYDS | CDRH3 |
| 100 | TGTSNDVGAYKYVS | CDRL1 |
| 101 | DVFKRPS | CDRL2 |
| 102 | FSLTSSNTYV | CDRL3 |
| 103 | SNDVGAYKY | CDRL1 |
| 104 | DVF | CDRL2 |
| 105 | GFTFSDY | CDRH1 |
| 106 | SSSGST | CDRH2 |
| 107 | GYGKAYDQ | CDRH3 |
| 108 | GFTFSDYYMS | CDRH1 |
| 109 | YISSSGSTIY | CDRH2 |
| 110 | DYYMS | CDRH1 |
| 111 | YISSSGSTIYYADSVKG | CDRH2 |
| 112 | GFTFSDYY | CDRH1 |
| 113 | ISSSGSTI | CDRH2 |
| 114 | ARGYGKAYDQ | CDRH3 |
| 115 | SGSRSNVGGNYVF | CDRL1 |
| 116 | RSNQRPS | CDRL2 |
| 117 | ATWDDSLSGFV | CDRL3 |
| 118 | RSNVGGNY | CDRL1 |
| 119 | RSN | CDRL2 |
| 120 | GFTFRSH | CDRH1 |
| 121 | SSDSTY | CDRH2 |
| 122 | SGGQWKYYDY | CDRH3 |
| 123 | GFTFRSHSMN | CDRH1 |
| 124 | SISSDSTYTY | CDRH2 |
| 125 | SHSMN | CDRH1 |
| 126 | SISSDSTYTYYADSVKG | CDRH2 |
| 127 | GFTFRSHS | CDRH1 |
| 128 | ISSDSTYT | CDRH2 |
| 129 | ARSGGQWKYYDY | CDRH3 |
| 130 | QGDSLRSYYAS | CDRL1 |
| 131 | GKNNRPS | CDRL2 |
| 132 | NSRDSSGNPPVV | CDRL3 |
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| 134 | GKN | CDRL2 |
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| 136 | SGSGN | CDRH2 |
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| 139 | AISGSGNTY | CDRH2 |
| 140 | NYAMS | CDRH1 |
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| 142 | GFTFSNYA | CDRH1 |
| 143 | ISGSGNT | CDRH2 |
| 144 | ARGSVRYTDI | CDRH3 |
| 145 | TRTSGAIAGAYVQ | CDRL1 |
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| 148 | SGAIAGAY | CDRL1 |
| 149 | DDN | CDRL2 |
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| 186 | cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa | 변형된 스플라이스 수용체 부위 |
| 187 | gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc | 변형된 스플라이스 수용체 부위 |
| 188 | cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct | 변형된 스플라이스 수용체 부위 |
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| 240 | SYELTQPPSASGTPGQRVTMSCSGTSSNIGSHSVNWYQQLPGTAPKLLIYTNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLQSEDEADYYCAAWDGSLNGLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGHVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARYSGSFDNWGQGTLVTVSS | BCMA-52 scFv |
| 241 | QSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSS | BCMA-55 scFv |
| 242 | gaggtgcagctggtggagtccggaggaggcctggtgaagccaggaggctccctgaggctgtcttgcgcagccagcggcttcacctttagcgactactatatgtcctggatcagacaggcacctggcaagggcctggagtgggtgagctacatcagctcctctggctccacaatctactatgccgactctgtgaagggccggtttaccatcagcagagataacgccaagaattccctgtatctgcagatgaacagcctgagggccgaggacacagccgtgtactattgcgccaaggtggacggcgattacaccgaggattattggggccagggcacactggtgaccgtgagctccggcggcggcggctctggaggaggaggcagcggcggaggaggctcccagtctgccctgacacagccagccagcgtgtccggctctcccggacagtccatcacaatctcttgtaccggctctagctccgacgtgggcaagtacaacctggtgtcctggtatcagcagccccctggcaaggcccctaagctgatcatctacgatgtgaacaagaggccatctggcgtgagcaatcgcttcagcggctccaagtctggcaataccgccacactgaccatcagcggcctgcagggcgacgatgaggcagattactattgttctagctacggcggcagcagatcctacgtgttcggcacaggcaccaaggtgaccgtgctggaatctaagtacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | 항-BMCA CAR |
| 243 | gaggtgcagctggtgcagagcggaggaggcctggtgcagcctggcaggtccctgcgcctgtcttgcaccgccagcggcttcacatttggcgactatgccatgtcctggttcaagcaggcaccaggcaagggcctggagtgggtgggctttatccgctctaaggcctacggcggcaccacagagtatgccgccagcgtgaagggccggttcaccatcagccgggacgactctaagagcatcgcctacctgcagatgaactctctgaagaccgaggacacagccgtgtactattgcgcagcatggagcgccccaaccgattattggggccagggcaccctggtgacagtgagctccggcggcggcggctctggaggaggaggaagcggaggaggaggatccgacatccagatgacacagtcccctgcctttctgtccgcctctgtgggcgatagggtgaccgtgacatgtcgcgcctcccagggcatctctaactacctggcctggtatcagcagaagcccggcaatgcccctcggctgctgatctacagcgcctccaccctgcagagcggagtgccctcccggttcagaggaaccggctatggcacagagttttctctgaccatcgacagcctgcagccagaggatttcgccacatactattgtcagcagtcttacaccagccggcagacatttggccccggcacaagactggatatcaaggagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | 항-BMCA CAR |
| 244 | gaggtgcagctggtggagtccggaggaggcctggtgaagccaggaggctctctgaggctgagctgcgcagcctccggcttcaccttttctgactactatatgagctggatcaggcaggcaccaggcaagggcctggagtgggtgtcttacatcagctcctctggcagcacaatctactatgccgactccgtgaagggcaggttcaccatctctcgcgataacgccaagaatagcctgtatctgcagatgaactccctgcgggccgaggatacagccgtgtactattgcgccaaggtggacggccccccttcctttgatatctggggccagggcacaatggtgaccgtgagctccggaggaggaggatccggcggaggaggctctggcggcggcggctctagctatgtgctgacccagccaccatccgtgtctgtggcacctggacagacagcaaggatcacctgtggagcaaacaatatcggcagcaagtccgtgcactggtaccagcagaagcctggccaggccccaatgctggtggtgtatgacgatgacgatcggcccagcggcatccctgagagattttctggcagcaactccggcaataccgccacactgaccatctctggagtggaggcaggcgacgaggcagattacttctgtcacctgtgggaccggagcagagatcactacgtgttcggcacaggcaccaagctgaccgtgctggaatctaagtacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | 항-BMCA CAR |
| 245 | Agctatgagctgacacagcctccaagcgcctctggcacacctggacagcgagtgacaatgagctgtagcggcaccagcagcaacatcggcagccacagcgtgaactggtatcagcagctgcctggcacagcccctaaactgctgatctacaccaacaaccagcggcctagcggcgtgcccgatagattttctggcagcaagagcggcacaagcgccagcctggctatttctggactgcagagcgaggacgaggccgactattattgtgccgcctgggacggctctctgaacggccttgtttttggcggaggcaccaagctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggcggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgaagtgaagaagcctggcgagagcctgaagatcagctgcaaaggcagcggctacagcttcaccagctactggatcggctgggtccgacagatgcctggcaaaggccttgagtggatgggcatcatctaccccggcgacagcgacaccagatacagccctagctttcagggccacgtgaccatcagcgccgacaagtctatcagcaccgcctacctgcagtggtccagcctgaaggcctctgacaccgccatgtactactgcgccagatactctggcagcttcgacaattggggccagggcacactggtcaccgtgtccagcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | 항-BMCA CAR |
| 246 | cagtctgccctgacacagcctgccagcgttagtgctagtcccggacagtctatcgccatcagctgtaccggcaccagctctgacgttggctggtatcagcagcaccctggcaaggcccctaagctgatgatctacgaggacagcaagaggcccagcggcgtgtccaatagattcagcggcagcaagagcggcaacaccgccagcctgacaattagcggactgcaggccgaggacgaggccgattactactgcagcagcaacacccggtccagcacactggtttttggcggaggcaccaagctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggcggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgagatgaagaaacctggcgcctctctgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcatcgactactacgtgtactggatgcggcaggcccctggacagggactcgaatctatgggctggatcaaccccaatagcggcggcaccaattacgcccagaaattccagggcagagtgaccatgaccagagacaccagcatcagcaccgcctacatggaactgagccggctgagatccgacgacaccgccatgtactactgcgccagatctcagcgcgacggctacatggattattggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | 항-BMCA CAR |
| 247 | EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKVDGDYTEDYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQSALTQPASVSGSPGQSITISCTGSSSDVGKYNLVSWYQQPPGKAPKLIIYDVNKRPSGVSNRFSGSKSGNTATLTISGLQGDDEADYYCSSYGGSRSYVFGTGTKVTVLESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | 항-BMCA CAR |
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| 256 | AAGGGACTTCCTGTAACAACG | 하우스키핑 유전자 β-액틴 역방향 프라이머 |
| 257 | GAAGTGCAGCTGGTTGAAAGCGGCGGAGCCTTTGTTCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTTAGCAGCTACGCCATGACCTGGGTCCGACAGGCTCCTGGCAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCACCATCAGCGGCAGAGGCAGAAGCACCTTCTACGCCGATAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAACAGCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGCGCCAGATATTATCACGCTGGCGCCTTCGATCTGTGGGGCCAGGGAACACTGGTCACAGTGTCTAGTGGAAGCAGAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGCGGTAGCGGTGGTGGTGGATCTCTTGAAATGGCCCAGAGCGTGGTCACACAGCCTGCCTCTGTTTCTGGCTCTCCTGGCCAGAGCATCACAATCAGCTGTACCGGCACCAGCTCTGACGTCGGCGGCTACAATTACGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCTAAGCTGATGATCTACGACGTGTCCAAGAGGCCCAGCGGCGTGTCCAATAGATTCAGCGGCTCCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTTACAATCAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCAGCAGCTACACCAGCAGCAGCACACTGGTTTTTGGAGGCGGCACCAAGCTGACCGTGCTT | GPRC5D-200 VH/VL (nt) |
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| 270 | CAATCTGCTCTGACACAGCCTGCCAGCGTGTCCGGATCTCCTGGCCAGAGCATCACCATCAGCTGTACCGGCACCAGCTCTGATGTCGGCGGCTACAATTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGCACCCCGGCAAGGCCCCTAAAGTGATGATCTACGACGTGTCCAAGCGGCCCAGCGGCATCAGCAATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATTAGCGGACTGCAGGTTGAGGACGAGGCCGAGTACTACTGCAGCAGCTACACCAGCACCAGAACCGTGATCTTTGCTGGCGGCACCAAAGTGACAGTGCTGGGAAGTAGAGGCGGCGGAGGATCTGGCGGAGGTGGAAGTGGCGGAGGCGGATCTCTTGAAATGGCTCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAAAAACCTGGCGCCTCCGTGAAGGTGTCCTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACCAGCTACTACATGCACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGACAAGGACTTGAGTGGATGGGCATCATCAACCCTAGCGGCGGCAGCACAAGATACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCAGAGACACCTCCACCAGCACAGTGTATATGGAACTGAGCAGCCTGCGGAGCGAGGACACAGCCGTGTACTATTGTGCCAGAGGCAGCAGCAGATGGGGCGGATGGACAGGCGATTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACAGTGTCTAGC | GPRC5D-206 VL/VH (nt) |
| 271 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctccggagcatacgga | 인간 IgG -카파 신호 서열 (nt) |
| 272 | MVLQTQVFISLLLWISGAYG | 인간 IgG -카파 신호 펩타이드 서열(aa) |
| 273 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctctggcgcctacggc | 인간 IgG -카파 신호 서열 (nt) |
| 274 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctctggcgcctatgga | 인간 IgG -카파 신호 서열 (nt) |
| 275 | atggtgctgcagacacaggtgttcatctccctgctgctgtggatctctggagcatacgga | 인간 IgG -카파 신호 서열 (nt) |
| 276 | atggtgctgcagacacaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctccggagcatacgga | 인간 IgG -카파 신호 서열 (nt) |
| 277 | atgcttctcctggtgacaagccttctgctctgtgagttaccacacccagcattcctcctgatccca | GMCSFR 알파 사슬 신호 서열 |
| 278 | MLLLVTSLLLCELPHPAFLLIP | GMCSFR 알파 사슬 신호 펩타이드 |
| 279 | MALPVTALLLPLALLLHA | CD8 알파 신호 펩타이드 |
| 280 | MPLLLLLPLLWAGALA | CD33 신호 펩타이드 |
| 281 | ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK | 인간 IgG4 Fc (Uniprot P01861) |
| 282 | ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK | 인간 IgG2 Fc (Uniprot P01859) |
| 283 | GAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCAGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAATTGGTACGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAA | IgG4/IgG2 힌지- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 스페이서 코돈 최적화만 됨 (nt) |
| 284 | gaatctaagtacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaag | 대안적인 CO/SSE IgG4/IgG2 힌지- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 (nt) |
| 285 | gaatctaagtacggaccgccctgccccccttgccct | 스페이서 (IgG4힌지) (nt) |
| 286 | ESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK | 힌지-CH2-CH3 스페이서 (aa) |
| 287 | attgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagccc | CD28 엑토도메인 스페이서 (nt) |
| 288 | IEVMYPPPYLDNEKSNGTIIHVKGKHLCPSPLFPGPSKP | CD28 엑토도메인 스페이서 (aa) |
| 289 | ATGCCGCTGCTGCTACTGCTGCCCCTGCTGTGGGCAGGGGCTCTAGCTTCTTCTGAGCTGACCCAAGATCCTGCCGTGTCTGTGGCTCTGGGCCAGACAGTGCGGATTACCTGTCAGGGCGATAGCCTGAGAAGCTACTACGCCAGCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCTCCCGTGCTGGTCATCTACGGCAAGAACAACAGACCCAGCGGCATCCCCGATAGATTCAGCGGAAGCAGCTCTGGCAATACCGCCAGCCTGACAATTACTGGCGCCCAGGCCGAAGATGAGGCCGACTACTACTGCAACAGCAGAGACAGCTCCGGCAATCCTCCTGTGGTTTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTGCTGGGAAGTAGAGGTGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGCGGATCTCTTGAAATGGCTCAGGTGCAGCTGGTGGAATCAGGCGGTGGACTTGTTCACCCTGGCGGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGATCCCACAGCATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCAGCATCAGCAGCGACAGCACCTACACCTACTATGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAGAAGTGGCGGCCAGTGGAAGTACTACGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACAGTTAGCTCTGAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCCGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAGATGTTCTGGGTGCTCGTGGTCGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACAGCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTCTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCAGCCTATCAGCAGGGCCAAAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGATAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGACGCACTGCACATGCAGGCCCTGCCACCTAGA | 항-GPRC5D CAR |
| 290 | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | 항-GPRC5D CAR |
| 291 | CAATGGTCAGAGTCGACCTT | BCMA sgRNA 표적 서열 |
| 292 | GGGUGUGGACCUCACCAGAA | GPRC5D 엑손 1 gRNA1 |
| 293 | GAGAAGAAAAUAGUCUCCAG | GPRC5D 엑손 1 gRNA2 |
| 294 | GUGACUCUCAUCAUGACCAG | GPRC5D 엑손 1 gRNA3 |
| 295 | GACGACCGGGUCGUCCCACU | GPRC5D 엑손 1 gRNA4 |
| 296 | GAGAACCAGGAGCUCUCCAG | GPRC5D 엑손 1 gRNA5 |
| 297 | SSYTSTRTVIFAG | CDRL3 |
| 298 | MVLQTQVFISLLLWISGAYGQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPRMPLLLLLPLLWAGALASSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | BCMA-GPRC5D CAR (aa) |
| 299 | ATGGTGCTGCAGACCCAGGTGTTCATCAGCCTGCTGCTGTGGATCTCTGGCGCCTATGGACAGTCTGCCCTGACACAGCCTGCCAGCGTTAGTGCTAGTCCCGGACAGTCTATCGCCATCAGCTGTACCGGCACCAGCTCTGACGTTGGCTGGTATCAGCAGCACCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGATGATCTACGAGGACAGCAAGAGGCCCAGCGGCGTGTCCAATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATTAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCAGCAGCAACACCCGGTCCAGCACACTGGTTTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTGCTGGGATCTAGAGGTGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGCGGATCTCTTGAAATGGCTGAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAGATGAAGAAACCTGGCGCCTCTCTGAAGCTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCATCGACTACTACGTGTACTGGATGCGGCAGGCCCCTGGACAGGGACTCGAATCTATGGGCTGGATCAACCCCAATAGCGGCGGCACCAATTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCAGAGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCCGGCTGAGATCCGACGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGATCTCAGCGCGACGGCTACATGGATTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCAGCGAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCCGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAGATGTTCTGGGTGCTCGTGGTCGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACAGCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTCTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCAGCCTATCAGCAGGGCCAAAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGATAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGACGCACTGCACATGCAGGCCCTGCCACCTAGACTTGAAGGTGGTGGCGAAGGCAGAGGCAGCCTGCTTACATGCGGAGATGTGGAAGAGAACCCCGGACCTAGAATGCCGCTGCTGCTACTGCTGCCCCTGCTGTGGGCAGGGGCTCTAGCTTCTTCTGAGCTGACCCAAGATCCTGCCGTGTCTGTGGCTCTGGGCCAGACAGTGCGGATTACCTGTCAGGGCGATAGCCTGAGAAGCTACTACGCCAGCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCTCCCGTGCTGGTCATCTACGGCAAGAACAACAGACCCAGCGGCATCCCCGATAGATTCAGCGGAAGCAGCTCTGGCAATACCGCCTCCCTGACAATTACTGGCGCCCAGGCCGAAGATGAGGCCGACTACTACTGCAACAGCAGAGACAGCTCCGGCAATCCTCCTGTGGTGTTTGGAGGCGGAACCAAACTGACCGTGCTGGGCAGCAGAGGTGGAGGTGGAAGCGGCGGTGGAGGCTCCGGAGGAGGCGGAAGCCTTGAGATGGCACAGGTGCAGCTGGTGGAATCAGGCGGTGGACTTGTTCACCCTGGCGGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCCGGTCCCACAGCATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCAGCATCAGCAGCGACAGCACCTACACCTACTATGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAGAAGTGGCGGCCAGTGGAAGTACTACGACTATTGGGGACAGGGCACCCTGGTCACAGTTAGCTCTGAATCCAAATACGGTCCTCCATGCCCTCCATGCCCAGCTCCACCCGTTGCTGGACCAAGCGTGTTTCTGTTCCCACCAAAGCCCAAGGATACACTCATGATTAGCAGAACCCCAGAAGTGACATGTGTCGTCGTGGACGTTTCCCAAGAGGACCCTGAGGTCCAGTTTAACTGGTATGTGGATGGAGTGGAGGTGCATAATGCTAAGACTAAGCCAAGAGAAGAGCAGTTTCAGTCCACCTATAGAGTGGTCTCCGTGCTCACCGTGCTGCATCAGGACTGGCTCAATGGCAAGGAATATAAGTGTAAAGTCTCCAACAAAGGACTGCCATCCAGCATCGAAAAGACCATTAGCAAGGCCAAAGGACAGCCTAGAGAGCCTCAGGTCTACACTCTGCCTCCCTCCCAAGAAGAGATGACTAAGAACCAGGTCTCTCTGACCTGCCTGGTGAAGGGATTCTACCCTTCCGACATTGCTGTGGAGTGGGAGTCCAATGGACAGCCAGAGAATAACTATAAGACTACACCACCCGTGCTCGATAGCGACGGCTCATTCTTTCTGTACTCTCGGCTGACAGTGGACAAGAGCAGATGGCAGGAGGGAAACGTCTTTAGCTGCTCCGTGATGCATGAGGCTCTGCATAACCACTATACCCAGAAGTCTCTGTCCCTGAGCCTCGGCAAAATGTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTCGGAGGCGTGCTGGCTTGCTATTCCCTGCTGGTCACAGTGGCCTTCATTATCTTCTGGGTGAAACGGGGAAGAAAGAAACTCCTGTATATATTCAAACAACCATTTATGAGACCAGTACAAACTACTCAAGAAGAGGATGGCTGTAGCTGCCGGTTTCCCGAAGAAGAGGAAGGAGGATGTGAACTGCGGGTGAAGTTCTCCAGAAGCGCCGACGCCCCTGCCTACCAGCAGGGACAGAATCAGCTGTATAACGAACTGAACCTGGGCAGAAGGGAGGAATACGACGTCCTGGACAAGAGACGAGGCCGGGACCCCGAGATGGGCGGAAAGCCTCGGCGGAAGAACCCCCAGGAAGGCCTGTACAACGAACTGCAGAAGGACAAGATGGCTGAAGCTTACTCCGAGATCGGCATGAAAGGAGAGCGGAGGCGGGGCAAGGGCCACGACGGCCTGTATCAGGGCCTGTCCACCGCCACAAAGGATACCTACGATGCCCTCCATATGCAGGCTCTGCCTCCAAGA | BCMA-GPRC5D CAR 코돈 분기됨 (nt) |
| 300 | ATGGTGCTGCAGACCCAGGTGTTCATCAGCCTGCTGCTGTGGATCTCTGGCGCCTATGGACAGTCTGCCCTGACACAGCCTGCCAGCGTTAGTGCTAGTCCCGGACAGTCTATCGCCATCAGCTGTACCGGCACCAGCTCTGACGTTGGCTGGTATCAGCAGCACCCTGGCAAGGCCCCTAAGCTGATGATCTACGAGGACAGCAAGAGGCCCAGCGGCGTGTCCAATAGATTCAGCGGCAGCAAGAGCGGCAACACCGCCAGCCTGACAATTAGCGGACTGCAGGCCGAGGACGAGGCCGATTACTACTGCAGCAGCAACACCCGGTCCAGCACACTGGTTTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTGCTGGGATCTAGAGGTGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGCGGATCTCTTGAAATGGCTGAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAGATGAAGAAACCTGGCGCCTCTCTGAAGCTGAGCTGCAAGGCCAGCGGCTACACCTTCATCGACTACTACGTGTACTGGATGCGGCAGGCCCCTGGACAGGGACTCGAATCTATGGGCTGGATCAACCCCAATAGCGGCGGCACCAATTACGCCCAGAAATTCCAGGGCAGAGTGACCATGACCAGAGACACCAGCATCAGCACCGCCTACATGGAACTGAGCCGGCTGAGATCCGACGACACCGCCATGTACTACTGCGCCAGATCTCAGCGCGACGGCTACATGGATTATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTGTCCAGCGAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCCGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAGATGTTCTGGGTGCTCGTGGTCGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACAGCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTCTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCAGCCTATCAGCAGGGCCAAAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGATAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGACGCACTGCACATGCAGGCCCTGCCACCTAGACTTGAAGGTGGTGGCGAAGGCAGAGGCAGCCTGCTTACATGCGGAGATGTGGAAGAGAACCCCGGACCTAGAATGCCGCTGCTGCTACTGCTGCCCCTGCTGTGGGCAGGGGCTCTAGCTTCTTCTGAGCTGACCCAAGATCCTGCCGTGTCTGTGGCTCTGGGCCAGACAGTGCGGATTACCTGTCAGGGCGATAGCCTGAGAAGCTACTACGCCAGCTGGTATCAGCAGAAGCCTGGACAGGCTCCCGTGCTGGTCATCTACGGCAAGAACAACAGACCCAGCGGCATCCCCGATAGATTCAGCGGAAGCAGCTCTGGCAATACCGCCAGCCTGACAATTACTGGCGCCCAGGCCGAAGATGAGGCCGACTACTACTGCAACAGCAGAGACAGCTCCGGCAATCCTCCTGTGGTTTTTGGCGGAGGCACCAAGCTGACAGTGCTGGGAAGTAGAGGTGGCGGAGGATCTGGCGGCGGAGGAAGCGGAGGCGGCGGATCTCTTGAAATGGCTCAGGTGCAGCTGGTGGAATCAGGCGGTGGACTTGTTCACCCTGGCGGAAGCCTGAGACTGTCTTGTGCCGCCAGCGGCTTCACCTTCAGATCCCACAGCATGAACTGGGTCCGACAGGCCCCTGGCAAAGGCCTTGAATGGGTGTCCAGCATCAGCAGCGACAGCACCTACACCTACTATGCCGACAGCGTGAAGGGCAGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCGTGTACTACTGTGCTAGAAGTGGCGGCCAGTGGAAGTACTACGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACAGTTAGCTCTGAGTCTAAATACGGACCGCCTTGTCCTCCTTGTCCCGCTCCTCCTGTTGCCGGACCTTCCGTGTTCCTGTTTCCTCCAAAGCCTAAGGACACCCTGATGATCAGCAGGACCCCTGAAGTGACCTGCGTGGTGGTGGATGTGTCCCAAGAGGATCCCGAGGTGCAGTTCAACTGGTATGTGGACGGCGTGGAAGTGCACAACGCCAAGACCAAGCCTAGAGAGGAACAGTTCCAGAGCACCTACAGAGTGGTGTCCGTGCTGACAGTGCTGCACCAGGATTGGCTGAACGGCAAAGAGTACAAGTGCAAGGTGTCCAACAAGGGCCTGCCTAGCAGCATCGAGAAAACCATCTCCAAGGCCAAGGGCCAGCCAAGAGAGCCCCAGGTTTACACACTGCCTCCAAGCCAAGAGGAAATGACCAAGAATCAGGTGTCCCTGACATGCCTGGTCAAGGGCTTCTACCCCTCCGATATCGCCGTGGAATGGGAGAGCAATGGCCAGCCTGAGAACAACTACAAGACCACACCTCCTGTGCTGGACAGCGACGGCAGTTTCTTCCTGTATAGTAGACTCACCGTGGATAAATCAAGATGGCAAGAGGGCAACGTGTTCAGCTGCAGCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTACACCCAGAAAAGCCTGAGCCTGTCTCTGGGCAAGATGTTCTGGGTGCTCGTGGTCGTTGGCGGAGTGCTGGCCTGTTACAGCCTGCTGGTTACCGTGGCCTTCATCATCTTTTGGGTCAAGCGGGGCAGAAAGAAGCTGCTCTACATCTTCAAGCAGCCCTTCATGCGGCCCGTGCAGACCACACAAGAGGAAGATGGCTGCTCCTGCAGATTCCCCGAGGAAGAAGAAGGCGGCTGCGAGCTGAGAGTGAAGTTCAGCAGATCCGCCGACGCTCCAGCCTATCAGCAGGGCCAAAACCAGCTGTACAACGAGCTGAACCTGGGGAGAAGAGAAGAGTACGACGTGCTGGATAAGCGGAGAGGCAGAGATCCTGAAATGGGCGGCAAGCCCAGACGGAAGAATCCTCAAGAGGGCCTGTATAATGAGCTGCAGAAAGACAAGATGGCCGAGGCCTACAGCGAGATCGGAATGAAGGGCGAGCGCAGAAGAGGCAAGGGACACGATGGACTGTACCAGGGCCTGAGCACCGCCACCAAGGATACCTATGACGCACTGCACATGCAGGCCCTGCCACCTAGA | BCMA-GPRC5D CAR 원래 (nt) |
| 301 | MPLLLLLPLLWAGALASSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPRLEGGGEGRGSLLTCGDVEENPGPRMVLQTQVFISLLLWISGAYGQSALTQPASVSASPGQSIAISCTGTSSDVGWYQQHPGKAPKLMIYEDSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSNTRSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEMKKPGASLKLSCKASGYTFIDYYVYWMRQAPGQGLESMGWINPNSGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAMYYCARSQRDGYMDYWGQGTLVTVSSESKYGPPCPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFQSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGKMFWVLVVVGGVLACYSLLVTVAFIIFWVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCELRVKFSRSADAPAYQQGQNQLYNELNLGRREEYDVLDKRRGRDPEMGGKPRRKNPQEGLYNELQKDKMAEAYSEIGMKGERRRGKGHDGLYQGLSTATKDTYDALHMQALPPR | GPRC5D-BCMA CAR (aa) |
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| 316 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctctggcgcctatggacagtctgccctgacacagcctgccagcgttagtgctagtcccggacagtctatcgccatcagctgtaccggcaccagctctgacgttggctggtatcagcagcaccctggcaaggcccctaagctgatgatctacgaggacagcaagaggcccagcggcgtgtccaatagattcagcggcagcaagagcggcaacaccgccagcctgacaattagcggactgcaggccgaggacgaggccgattactactgcagcagcaacacccggtccagcacactggtttttggcggaggcaccaagctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggcggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgagatgaagaaacctggcgcctctctgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcatcgactactacgtgtactggatgcggcaggcccctggacagggactcgaatctatgggctggatcaaccccaatagcggcggcaccaattacgcccagaaattccagggcagagtgaccatgaccagagacaccagcatcagcaccgcctacatggaactgagccggctgagatccgacgacaccgccatgtactactgcgccagatctcagcgcgacggctacatggattattggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctagactcgagggcggcggagagggaaggggatccctcctgacctgtggcgacgtcgaggaaaatcctggccccaggatgccgctgctgctactgctgcccctgctgtgggcaggggctctagcttcttctgagctgacccaagatcctgccgtgtctgtggctctgggccagacagtgcggattacctgtcagggcgatagcctgagaagctactacgccagctggtaccaacaaaagcccggacaggctcctgtgctcgtcatttatggcaagaacaacagaccttccggaatccccgataggttttccggaagctcctctggaaatacagcttccctcaccatcactggcgcccaagctgaagatgaagctgactattattgtaactccagagacagctccggcaatcctcctgtcgtgttcggaggcggaacaaaattgaccgtgctcggcagcaggggcggaggcggctctggaggtggcgggtccggcggaggaggcagcctggagatggcccaggtccaactcgtcgaatcaggcggtggacttgttcatcccggcggaagcctgaggctctcttgtgccgcttccggattcacttttagatcccacagcatgaactgggtccgacaagctcccggcaaaggccttgaatgggtgtccagcatcagcagcgacagcacctacacctactatgccgacagcgtgaaaggaaggttcacaatctctagggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctcagggctgaggatacagctgtctattattgtgctagaagtggcggccagtggaagtactacgactactggggacaaggcacactcgtgacagttagctctgaaagcaagtatggccccccctgcccaccctgccctgccccacccgtggctggccccagcgtctttctcttcccccctaaacccaaagatacactcatgatttccagaacacccgaggtcacatgtgtcgtcgtcgacgtcagccaggaagaccctgaagtccaatttaattggtacgtcgatggagtcgaggtccataatgctaaaacaaaacccagggaagagcaatttcaatccacatatagggtcgtcagcgtcctcaccgtcctccatcaagactggctcaatggaaaggaatataaatgtaaagtcagcaataaaggactcccctcctccattgaaaagacaattagcaaagctaaaggacaacccagggaacctcaagtgtataccctgcctcccagccaggaagagatgacaaaaaaccaagtcagcctcacctgtctcgtgaaaggattttatcctagcgacattgctgtcgagtgggaatccaacggacaacccgaaaataattataaaacaaccccccccgtcctcgattccgatggaagcttttttctctacagcaggctgacagtcgacaagagcaggtggcaggaaggaaatgtcttttcctgttccgtcatgcatgaagctctccataatcattatacacaaaagtccctctccctcagcctcggaaaaatgttttgggtcctggtcgtggtgggaggcgtcctcgcttgctattccctcctcgtgacagtcgcctttattatcttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagggtcaaattttccaggagcgctgatgcccccgcttaccaacaaggacagaatcaactctataatgaactcaatctcggcaggagggaggaatatgatgtcctcgacaaaagaaggggaagggaccccgagatgggaggaaaacctaggagaaaaaacccccaggaaggactctacaacgaactccaaaaggataaaatggctgaagcttattccgaaattggcatgaaaggagaaagaaggaggggaaaaggccatgacggcctctatcaaggactctccacagctacaaaagacacatacgatgccctccatatgcaagctctcccccccagg | BCMA-41BB-GPRC5D-CD28 이중 CAR |
| 317 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctctggcgcctatggacaggtccaactcgtcgaatcaggcggtggacttgttcatcccggcggaagcctgaggctctcttgtgccgcttccggatttacatttagatcccacagcatgaactgggtccgacaagctcccggcaaaggccttgaatgggtgtccagcatcagcagcgacagcacctacacctactatgccgacagcgtgaaaggaaggttcacaatctctagggacaacgccaagaacagcctgtacctgcagatgaactccctcagggctgaggatacagctgtctattattgtgctagaagtggcggccagtggaagtactacgactactggggacaaggcacactcgtgacagttagctctggcagcaggggcggaggcggcagcggaggaggcggctccggcggaggaggcagcctggagatggcctcttctgagctgacccaagatcctgccgtgtctgtggctctgggccagacagtgcggattacctgtcagggcgatagcctgagaagctactacgccagctggtaccaacaaaagcccggacaggctcctgtgctcgtcatttatggcaagaacaacagaccttccggaatccccgataggttttccggaagctcctctggaaatacagcttccctcaccatcactggcgcccaagctgaagatgaagctgactattattgtaactccagagacagctccggcaatcctcctgtcgtgttcggaggcggaacaaaactcaccgtcctcggaggtggaggatctggaggcggtggaagcggagggggcggttccggtggcgggggatctcagtctgccctgacacagcctgccagcgttagtgctagtcccggacagtctatcgccatcagctgtaccggcaccagctctgacgttggctggtatcagcagcaccctggcaaggcccctaagctgatgatctacgaggacagcaagaggcccagcggcgtgtccaatagattcagcggcagcaagagcggcaacaccgccagcctgacaattagcggactgcaggccgaggacgaggccgattactactgcagcagcaacacccggtccagcacactggtttttggcggaggcaccaagctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggcggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgagatgaagaaacctggcgcctctctgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcatcgactactacgtgtactggatgcggcaggcccctggacagggactcgaatctatgggctggatcaaccccaatagcggcggcaccaattacgcccagaaattccagggcagagtgaccatgaccagagacaccagcatcagcaccgcctacatggaactgagccggctgagatccgacgacaccgccatgtactactgcgccagatctcagcgcgacggctacatggattattggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtcaagcggggcagaaagaagctgctctacatcttcaagcagcccttcatgcggcccgtgcagaccacacaagaggaagatggctgctcctgcagattccccgaggaagaagaaggcggctgcgagctgagagtgaagttcagcagatccgccgacgctccagcctatcagcagggccaaaaccagctgtacaacgagctgaacctggggagaagagaagagtacgacgtgctggataagcggagaggcagagatcctgaaatgggcggcaagcccagacggaagaatcctcaagagggcctgtataatgagctgcagaaagacaagatggccgaggcctacagcgagatcggaatgaagggcgagcgcagaagaggcaagggacacgatggactgtaccagggcctgagcaccgccaccaaggatacctatgacgcactgcacatgcaggccctgccacctaga | GPRC5D-BCMA-41BB CAR |
| 318 | atggtgctgcagacccaggtgttcatcagcctgctgctgtggatctctggcgcctatggacagtctgccctgacacagcctgccagcgttagtgctagtcccggacagtctatcgccatcagctgtaccggcaccagctctgacgttggctggtatcagcagcaccctggcaaggcccctaagctgatgatctacgaggacagcaagaggcccagcggcgtgtccaatagattcagcggcagcaagagcggcaacaccgccagcctgacaattagcggactgcaggccgaggacgaggccgattactactgcagcagcaacacccggtccagcacactggtttttggcggaggcaccaagctgacagtgctgggatctagaggtggcggaggatctggcggcggaggaagcggaggcggcggatctcttgaaatggctgaagtgcagctggtgcagtctggcgccgagatgaagaaacctggcgcctctctgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcatcgactactacgtgtactggatgcggcaggcccctggacagggactcgaatctatgggctggatcaaccccaatagcggcggcaccaattacgcccagaaattccagggcagagtgaccatgaccagagacaccagcatcagcaccgcctacatggaactgagccggctgagatccgacgacaccgccatgtactactgcgccagatctcagcgcgacggctacatggattattggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagcgagtctaaatacggaccgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggaccttccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagcaggacccctgaagtgacctgcgtggtggtggatgtgtcccaagaggatcccgaggtgcagttcaactggtatgtggacggcgtggaagtgcacaacgccaagaccaagcctagagaggaacagttccagagcacctacagagtggtgtccgtgctgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaagggcctgcctagcagcatcgagaaaaccatctccaaggccaagggccagccaagagagccccaggtttacacactgcctccaagccaagaggaaatgaccaagaatcaggtgtccctgacatgcctggtcaagggcttctacccctccgatatcgccgtggaatgggagagcaatggccagcctgagaacaactacaagaccacacctcctgtgctggacagcgacggcagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaagatggcaagagggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgcacaaccactacacccagaaaagcctgagcctgtctctgggcaagatgttctgggtgctcgtggtcgttggcggagtgctggcctgttacagcctgctggttaccgtggccttcatcatcttttgggtc | BCMA del CAR |
| 319 | ctcgagggcggcggagagggaaggggatccctcctgacctgtggcgacgtcgaggaaaatcctggccccagg | T2A |
| 320 | GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS | 링커 |
SEQUENCE LISTING
<110> Sather, Blythe D.
Smith, Eric L.
de Imus, Cyr
Harrington, Kimberly
Jones, Jon
Chen, Aye
Tareen, Semih
Hess, Erik
Ponko, Stefan
Olshefsky, Audrey
Fernandez de Larrea, Carlos
Brentjens, Renier
Juno Therapeutics, Inc.
Memorial Sloan Kettering Cancer Center
<120> CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS SPECIFIC FOR
G PROTEIN-COUPLED RECEPTOR CLASS C GROUP 5 MEMBER D (GPRC5D)
<130> 73504-20137.40
<140> Not yet assigned
<141> Concurrently herewith
<150> US 62/754,576
<151> 2018-11-01
<150> US 62/774,159
<151> 2018-11-30
<150> US 62/819,422
<151> 2019-03-15
<150> US 62/904,197
<151> 2019-09-23
<150> US 62/904,187
<151> 2019-09-23
<160> 320
<170> FastSEQ for Windows Version 4.0
<210> 1
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 VH/VL
<400> 1
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1 5 10 15
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Ser Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
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Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Ser Val Val
130 135 140
Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile
145 150 155 160
Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser
165 170 175
Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Asp
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Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Val
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 - VL/VH
<400> 2
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Phe Val
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Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr
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Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
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Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu Trp
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VH/VL
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1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Gly Thr Ala Tyr
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85 90 95
Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
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Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala
130 135 140
Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly
145 150 155 160
Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln
165 170 175
Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg
180 185 190
Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr
195 200 205
Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
210 215 220
Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly
225 230 235 240
Thr Lys Val Thr Val Leu
245
<210> 4
<211> 246
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VL-VH
<400> 4
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Asn Arg Tyr Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Gly Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 5
<211> 249
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VH/VL
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Ser Val Leu Thr
130 135 140
Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser
145 150 155 160
Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn Tyr Val Phe Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ser Asn
180 185 190
Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala Gly Ser Lys Ser Gly
195 200 205
Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala
210 215 220
Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Phe Val Phe
225 230 235 240
Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
245
<210> 6
<211> 249
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VL/VH
<400> 6
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ser Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
195 200 205
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 7
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VH/VL
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser His
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Ser Ser Glu
130 135 140
Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln Thr Val Arg
145 150 155 160
Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser Trp Tyr
165 170 175
Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr Gly Lys Asn
180 185 190
Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly
195 200 205
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu Asp Glu Ala
210 215 220
Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro Pro Val Val
225 230 235 240
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245 250
<210> 8
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VL/VH
<400> 8
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu
115 120 125
Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
145 150 155 160
Arg Ser His Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
195 200 205
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 9
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VH/VL
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Asn Phe Met Leu Thr Gln
130 135 140
Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys Thr Val Ser Ile Ser Cys
145 150 155 160
Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala Tyr Val Gln Trp Phe Gln
165 170 175
Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val Ile Tyr Asp Asp Asn Lys
180 185 190
Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Ile Asp Lys Ser
195 200 205
Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys Thr Glu Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Asn Val Leu
225 230 235 240
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245 250
<210> 10
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VL/VH
<400> 10
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Ser Cys Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
195 200 205
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 11
<211> 250
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VH/VL
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Ser Val Val
130 135 140
Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln Gln Val Thr Ile
145 150 155 160
Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn Tyr Val Ser Trp
165 170 175
Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val Ile Phe Asp Asn
180 185 190
Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser
195 200 205
Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu
210 215 220
Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Arg Gly Trp Val
225 230 235 240
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
245 250
<210> 12
<211> 248
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VL/VH
<400> 12
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Phe Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Asn Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
245
<210> 13
<211> 253
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VH/VL
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln
130 135 140
Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser
145 150 155 160
Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn
165 170 175
Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Met
180 185 190
Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe Ser
195 200 205
Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln
210 215 220
Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Arg
225 230 235 240
Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
245 250
<210> 14
<211> 253
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VL/VH
<400> 14
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> short spacer
<400> 15
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 16
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> medium spacer (hinge-CH3 119 aa)
<400> 16
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg
1 5 10 15
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
20 25 30
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
35 40 45
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
50 55 60
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
85 90 95
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
100 105 110
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
115
<210> 17
<211> 228
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> long spacer (IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4
CH3 spacer; 228 aa)
<400> 17
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
1 5 10 15
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Leu Gly Lys
225
<210> 18
<211> 28
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD28 transmembrane domain
<400> 18
Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser
1 5 10 15
Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
20 25
<210> 19
<211> 42
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(aa)
<400> 19
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
1 5 10 15
Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
20 25 30
Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
35 40
<210> 20
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(aa)
<400> 20
Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly
1 5 10 15
Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr
20 25 30
Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys
35 40 45
Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys
50 55 60
Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg
65 70 75 80
Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala
85 90 95
Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
100 105 110
<210> 21
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 VH
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Phe Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 22
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 VL
<400> 22
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 23
<211> 114
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VH
<400> 23
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Gly Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 24
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VL
<400> 24
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 25
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VH
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 26
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VL
<400> 26
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ser Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VH
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser His
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 28
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VL
<400> 28
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 29
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VH
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 113
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VL
<400> 30
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Ser Cys Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly
<210> 31
<211> 116
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VH
<400> 31
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val
115
<210> 32
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VL
<400> 32
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Phe Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 33
<211> 121
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VH
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VL
<400> 34
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 35
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 35
Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 36
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 36
Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu
1 5 10 15
Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 37
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A peptide (aa)
<400> 37
Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg
20
<210> 38
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P2A peptide (aa)
<400> 38
Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val Glu Glu Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 39
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> P2A peptide (aa)
<400> 39
Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Glu Asn Pro Gly Pro
20
<210> 40
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> E2A peptide (aa)
<400> 40
Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 41
<211> 23
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> E2A peptide (aa)
<400> 41
Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp
1 5 10 15
Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 42
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> F2A peptide (aa)
<400> 42
Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val
1 5 10 15
Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20
<210> 43
<211> 25
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> F2A peptide (aa)
<400> 43
Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
20 25
<210> 44
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A peptide (nt)
<400> 44
ctcgagggcg gcggagaggg cagaggaagt cttctaacat gcggtgacgt ggaggagaat 60
cccggcccta gg 72
<210> 45
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A peptide (nt)
<400> 45
cttgaaggtg gtggcgaagg cagaggcagc ctgcttacat gcggagatgt ggaagagaac 60
cccggaccta ga 72
<210> 46
<211> 41
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD28 co-stimulatory domain
<400> 46
Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met Asn Met Thr
1 5 10 15
Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro Tyr Ala Pro
20 25 30
Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
35 40
<210> 47
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Linker
<400> 47
Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Glu Met Ala
20
<210> 48
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> long spacer (nt)
<400> 48
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
<210> 49
<211> 345
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> GPRC5D protein (Uniprot Q9NZD1)
<400> 49
Met Tyr Lys Asp Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly Ile Ile Leu Glu Ser Leu Ala Ile Leu
20 25 30
Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met
35 40 45
Arg Lys Ile Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Leu
50 55 60
Leu Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Ala Phe Ala Phe
65 70 75 80
Ile Ile Glu Leu Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe
85 90 95
Gly Val Leu Phe Ala Leu Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser
100 105 110
Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Cys Val Ser Phe Ser Trp Thr Thr
115 120 125
Ile Leu Cys Ile Ala Ile Gly Cys Ser Leu Leu Gln Ile Ile Ile Ala
130 135 140
Thr Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Met Met Phe Val Asn
145 150 155 160
Met Thr Pro Cys Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Val Leu Leu Val Tyr
165 170 175
Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe
180 185 190
Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ile
195 200 205
Thr Val Leu Phe Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro
225 230 235 240
Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu
245 250 255
Tyr Ile Val Pro Glu Leu Cys Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu
260 265 270
Cys Pro Leu Gln Gly Asn Ala Cys Pro Val Thr Ala Tyr Gln His Ser
275 280 285
Phe Gln Val Glu Asn Gln Glu Leu Ser Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly
290 295 300
Ala Glu Glu Asp Val Ala Leu Thr Ser Tyr Gly Thr Pro Ile Gln Pro
305 310 315 320
Gln Thr Val Asp Pro Thr Gln Glu Cys Phe Ile Pro Gln Ala Lys Leu
325 330 335
Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Gly Val
340 345
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4GS linker
<400> 50
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 51
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3GSlinker
<400> 51
Gly Gly Gly Ser
1
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 53
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 53
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 54
<211> 21
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 54
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Glu Met Ala
20
<210> 55
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD28 transmembrane domain (nt) - not optimized
<400> 55
atgttttggg tgctggtcgt ggtcggaggg gtgctggcct gttacagcct gctggtgaca 60
gtcgctttca tcatcttctg ggtg 84
<210> 56
<211> 84
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD28 transmembrane domain (nt) - optimized
<400> 56
atgttctggg tgctcgtggt cgttggcgga gtgctggcct gttacagcct gctggttacc 60
gtggccttca tcatcttttg ggtc 84
<210> 57
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(nt)
<400> 57
agagtcaagt tttccaggtc cgccgacgct ccagcctacc agcaggggca gaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg cagaagggaa gagtacgacg tcctggataa gcggagaggc 120
cgggaccctg agatgggcgg caagcctcgg cggaagaacc cccaggaagg cctgtataac 180
gaactgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggcatgaa gggcgagcgg 240
aggcggggca agggccacga cggcctgtat cagggcctgt ccaccgccac caaggatacc 300
tacgacgccc tgcacatgca ggccctgccc ccaagg 336
<210> 58
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3-zeta derived intracellular signaling domain
(nt) - optimized
<400> 58
agagtgaagt tcagcagatc cgccgacgct ccagcctatc agcagggcca aaaccagctg 60
tacaacgagc tgaacctggg gagaagagaa gagtacgacg tgctggataa gcggagaggc 120
agagatcctg aaatgggcgg caagcccaga cggaagaatc ctcaagaggg cctgtataat 180
gagctgcaga aagacaagat ggccgaggcc tacagcgaga tcggaatgaa gggcgagcgc 240
agaagaggca agggacacga tggactgtac cagggcctga gcaccgccac caaggatacc 300
tatgacgcac tgcacatgca ggccctgcca cctaga 336
<210> 59
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(nt)
<400> 59
aagcggggga gaaagaaact gctgtatatt ttcaaacagc cctttatgag acctgtgcag 60
actacccagg aggaagacgg atgcagctgt aggtttcccg aggaagagga aggaggctgt 120
gagctg 126
<210> 60
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-1BB-derived intracellular co-signaling sequence
(nt) - optimized
<400> 60
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 60
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 120
gagctg 126
<210> 61
<211> 544
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> EF1alpha promoter with HTLV1 ehancer
<400> 61
ggatctgcga tcgctccggt gcccgtcagt gggcagagcg cacatcgccc acagtccccg 60
agaagttggg gggaggggtc ggcaattgaa ccggtgccta gagaaggtgg cgcggggtaa 120
actgggaaag tgatgtcgtg tactggctcc gcctttttcc cgagggtggg ggagaaccgt 180
atataagtgc agtagtcgcc gtgaacgttc tttttcgcaa cgggtttgcc gccagaacac 240
agctgaagct tcgaggggct cgcatctctc cttcacgcgc ccgccgccct acctgaggcc 300
gccatccacg ccggttgagt cgcgttctgc cgcctcccgc ctgtggtgcc tcctgaactg 360
cgtccgccgt ctaggtaagt ttaaagctca ggtcgagacc gggcctttgt ccggcgctcc 420
cttggagcct acctagactc agccggctct ccacgctttg cctgaccctg cttgctcaac 480
tctacgtctt tgtttcgttt tctgttctgc gccgttacag atccaagctg tgaccggcgc 540
ctac 544
<210> 62
<211> 589
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Woodchuck Hepatitis Virus (WHP)
Posttranscriptional Regulatory Element (WPRE)
<400> 62
aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctatgttgct 60
ccttttacgc tatgtggata cgctgcttta atgcctttgt atcatgctat tgcttcccgt 120
atggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctcttta tgaggagttg 180
tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact 240
ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct 300
attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg 360
ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc 420
gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc 480
aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt 540
cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgc 589
<210> 63
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 VL
<400> 63
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 64
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VL
<400> 64
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 65
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VL
<400> 65
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ser Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 66
<211> 109
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VL
<400> 66
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105
<210> 67
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VL
<400> 67
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Ser Cys Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 68
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VL
<400> 68
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Phe Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 69
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VL
<400> 69
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 70
<211> 2028
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-GPRC5D CAR nt
<400> 70
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagcttc ttctgagctg 60
acccaagatc ctgccgtgtc tgtggctctg ggccagacag tgcggattac ctgtcagggc 120
gatagcctga gaagctacta cgccagctgg tatcagcaga agcctggaca ggctcccgtg 180
ctggtcatct acggcaagaa caacagaccc agcggcatcc ccgatagatt cagcggaagc 240
agctctggca ataccgccag cctgacaatt actggcgccc aggccgaaga tgaggccgac 300
tactactgca acagcagaga cagctccggc aatcctcctg tggtttttgg cggaggcacc 360
aagctgacag tgctgggaag tagaggtggc ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 420
ggcggatctc ttgaaatggc tcaggtgcag ctggtggaat caggcggtgg acttgttcac 480
cctggcggaa gcctgagact gtcttgtgcc gccagcggct tcaccttcag atcccacagc 540
atgaactggg tccgacaggc ccctggcaaa ggccttgaat gggtgtccag catcagcagc 600
gacagcacct acacctacta tgccgacagc gtgaagggca gattcaccat ctccagagac 660
aacgccaaga acagcctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg 720
tactactgtg ctagaagtgg cggccagtgg aagtactacg actattgggg ccagggcacc 780
ctggtcacag ttagctctga gtctaaatac ggaccgcctt gtcctccttg tcccgctcct 840
cctgttgccg gaccttccgt gttcctgttt cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc 900
agcaggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggatgtgt cccaagagga tcccgaggtg 960
cagttcaact ggtatgtgga cggcgtggaa gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag 1020
gaacagttcc agagcaccta cagagtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 1080
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag 1140
aaaaccatct ccaaggccaa gggccagcca agagagcccc aggtttacac actgcctcca 1200
agccaagagg aaatgaccaa gaatcaggtg tccctgacat gcctggtcaa gggcttctac 1260
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1320
acacctcctg tgctggacag cgacggcagt ttcttcctgt atagtagact caccgtggat 1380
aaatcaagat ggcaagaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1440
aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg tctctgggca agatgttctg ggtgctcgtg 1500
gtcgttggcg gagtgctggc ctgttacagc ctgctggtta ccgtggcctt catcatcttt 1560
tgggtcaagc ggggcagaaa gaagctgctc tacatcttca agcagccctt catgcggccc 1620
gtgcagacca cacaagagga agatggctgc tcctgcagat tccccgagga agaagaaggc 1680
ggctgcgagc tgagagtgaa gttcagcaga tccgccgacg ctccagccta tcagcagggc 1740
caaaaccagc tgtacaacga gctgaacctg gggagaagag aagagtacga cgtgctggat 1800
aagcggagag gcagagatcc tgaaatgggc ggcaagccca gacggaagaa tcctcaagag 1860
ggcctgtata atgagctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg 1920
aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc 1980
accaaggata cctatgacgc actgcacatg caggccctgc cacctaga 2028
<210> 71
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD33 signal sequence
<400> 71
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
<210> 72
<211> 660
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-GPRC5D CAR
<400> 72
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu
115 120 125
Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
145 150 155 160
Arg Ser His Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
195 200 205
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
260 265 270
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
275 280 285
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
290 295 300
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
305 310 315 320
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
325 330 335
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
340 345 350
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
355 360 365
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
370 375 380
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
385 390 395 400
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
405 410 415
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
420 425 430
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
435 440 445
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
450 455 460
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe
465 470 475 480
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
485 490 495
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys
500 505 510
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
515 520 525
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
530 535 540
Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
545 550 555 560
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
565 570 575
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
580 585 590
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
595 600 605
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
610 615 620
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
625 630 635 640
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
645 650 655
Leu Pro Pro Arg
660
<210> 73
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 spacer
(nt)
<400> 73
gaatctaagt acggaccgcc ctgccctccc tgccctgctc ctcctgtggc tggaccaagc 60
gtgttcctgt ttccacctaa gcctaaagat accctgatga tttcccgcac acctgaagtg 120
acttgcgtgg tcgtggacgt gagccaggag gatccagaag tgcagttcaa ctggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtccacaa tgctaagact aaaccccgag aggaacagtt tcagtcaact 240
taccgggtcg tgagcgtgct gaccgtcctg catcaggatt ggctgaacgg gaaggagtat 300
aagtgcaaag tgtctaataa gggactgcct agctccatcg agaaaacaat tagtaaggca 360
aaagggcagc ctcgagaacc acaggtgtat accctgcccc ctagccagga ggaaatgacc 420
aagaaccagg tgtccctgac atgtctggtc aaaggcttct atccaagtga catcgccgtg 480
gagtgggaat caaatgggca gcccgagaac aattacaaga ccacaccacc cgtgctggac 540
tctgatggaa gtttctttct gtattccagg ctgaccgtgg ataaatctcg ctggcaggag 600
ggcaacgtgt tctcttgcag tgtcatgcac gaagccctgc acaatcatta tacacagaag 660
tcactgagcc tgtccctggg caaa 684
<210> 74
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> optimized SSE IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4
CH3 spacer (nt)
<400> 74
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caag 684
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 75
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
1 5
<210> 76
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 76
Ser Gly Arg Gly Arg Ser
1 5
<210> 77
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3
<400> 77
Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu
1 5
<210> 78
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 78
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Thr
1 5 10
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 79
Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe
1 5 10
<210> 80
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 80
Ser Tyr Ala Met Thr
1 5
<210> 81
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 81
Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 82
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 82
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 83
Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 84
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3
<400> 84
Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 85
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 85
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL2
<400> 86
Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 87
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL3
<400> 87
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Val
1 5 10
<210> 88
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 88
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 89
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL2
<400> 89
Asp Val Ser
1
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 90
Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr
1 5
<210> 91
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 91
Ser Ala Tyr Asn Gly Asn
1 5
<210> 92
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3
<400> 92
Met Ala Tyr Asp Ser
1 5
<210> 93
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 93
Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr Ala Ile Thr
1 5 10
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 94
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His
1 5 10
<210> 95
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 95
Arg Tyr Ala Ile Thr
1 5
<210> 96
<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 96
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 97
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 97
Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr Ala
1 5
<210> 98
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
<400> 98
Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser
1 5
<210> 99
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3
<400> 99
Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser
1 5
<210> 100
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 100
Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr Lys Tyr Val Ser
1 5 10
<210> 101
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL2
<400> 101
Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser
1 5
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL3
<400> 102
Phe Ser Leu Thr Ser Ser Asn Thr Tyr Val
1 5 10
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 103
Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr Lys Tyr
1 5
<210> 104
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL2
<400> 104
Asp Val Phe
1
<210> 105
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH1
<400> 105
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
1 5
<210> 106
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
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Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile
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Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val Lys
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Gly
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
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Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
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Gly
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH2
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Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
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<211> 13
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRH3
<400> 171
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<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 172
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Phe Val Ser
1 5 10
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<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL3
<400> 173
Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Arg Thr Val Ile
1 5 10
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<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL1
<400> 174
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Phe
1 5
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<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CDRL3
<400> 175
Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys
1 5 10 15
Val Thr Val Leu
20
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<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice donor site
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<210> 177
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice donor site
<400> 177
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<210> 178
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice donor site
<400> 178
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<210> 179
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice donor site
<400> 179
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<210> 180
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice acceptor site
<400> 180
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<210> 181
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> splice acceptor site
<400> 181
gggcaacgtg ttctcttgca gtgtcatgca cgaagccctg c 41
<210> 182
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice donor site
<400> 182
agtctaaata cggac 15
<210> 183
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice donor site
<400> 183
tcaactggta tgtgg 15
<210> 184
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice donor site
<400> 184
accatctcca aggcc 15
<210> 185
<211> 15
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice donor site
<400> 185
gccccaggtt tacac 15
<210> 186
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice acceptor site
<400> 186
cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca a 41
<210> 187
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice acceptor site
<400> 187
gggcaacgtg ttcagctgca gcgtgatgca cgaggccctg c 41
<210> 188
<211> 41
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> modified splice acceptor site
<400> 188
cgccttgtcc tccttgtccc gctcctcctg ttgccggacc t 41
<210> 189
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-23 VH
<400> 189
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 190
<211> 110
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-23 VL
<400> 190
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asp Val Gly Lys Tyr
20 25 30
Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu
100 105 110
<210> 191
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-25 VH
<400> 191
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 192
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-25 VL
<400> 192
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly
50 55 60
Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile Asp Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Ser Arg Gln
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Arg Leu Asp Ile Lys
100 105
<210> 193
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-26 VH
<400> 193
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser
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1 5 10 15
Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Met Leu Val Val Tyr
35 40 45
Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp Arg Ser Arg Asp His
85 90 95
Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
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1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ser Gly Ser Phe Asp Asn Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
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Thr Val Ser Ser
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Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
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Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
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Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
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Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr
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Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
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65 70 75 80
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85 90 95
Ala Arg Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
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Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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Gly
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
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165 170 175
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Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
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35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln
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Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala
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Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile
195 200 205
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<213> Artificial Sequence
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
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Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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100 105 110
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Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
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180 185 190
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195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp
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Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
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Leu
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100 105 110
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165 170 175
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195 200 205
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210 215 220
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225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 241
<211> 244
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-55 scFv
<400> 241
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
180 185 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
195 200 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 242
<211> 1959
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 242
gaggtgcagc tggtggagtc cggaggaggc ctggtgaagc caggaggctc cctgaggctg 60
tcttgcgcag ccagcggctt cacctttagc gactactata tgtcctggat cagacaggca 120
cctggcaagg gcctggagtg ggtgagctac atcagctcct ctggctccac aatctactat 180
gccgactctg tgaagggccg gtttaccatc agcagagata acgccaagaa ttccctgtat 240
ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac acagccgtgt actattgcgc caaggtggac 300
ggcgattaca ccgaggatta ttggggccag ggcacactgg tgaccgtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg cagcggcgga ggaggctccc agtctgccct gacacagcca 420
gccagcgtgt ccggctctcc cggacagtcc atcacaatct cttgtaccgg ctctagctcc 480
gacgtgggca agtacaacct ggtgtcctgg tatcagcagc cccctggcaa ggcccctaag 540
ctgatcatct acgatgtgaa caagaggcca tctggcgtga gcaatcgctt cagcggctcc 600
aagtctggca ataccgccac actgaccatc agcggcctgc agggcgacga tgaggcagat 660
tactattgtt ctagctacgg cggcagcaga tcctacgtgt tcggcacagg caccaaggtg 720
accgtgctgg aatctaagta cggaccgcct tgtcctcctt gtcccgctcc tcctgttgcc 780
ggaccttccg tgttcctgtt tcctccaaag cctaaggaca ccctgatgat cagcaggacc 840
cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaagagg atcccgaggt gcagttcaac 900
tggtatgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca agcctagaga ggaacagttc 960
cagagcacct acagagtggt gtccgtgctg acagtgctgc accaggattg gctgaacggc 1020
aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccta gcagcatcga gaaaaccatc 1080
tccaaggcca agggccagcc aagagagccc caggtttaca cactgcctcc aagccaagag 1140
gaaatgacca agaatcaggt gtccctgaca tgcctggtca agggcttcta cccctccgat 1200
atcgccgtgg aatgggagag caatggccag cctgagaaca actacaagac cacacctcct 1260
gtgctggaca gcgacggcag tttcttcctg tatagtagac tcaccgtgga taaatcaaga 1320
tggcaagagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg aggccctgca caaccactac 1380
acccagaaaa gcctgagcct gtctctgggc aagatgttct gggtgctcgt ggtcgttggc 1440
ggagtgctgg cctgttacag cctgctggtt accgtggcct tcatcatctt ttgggtcaag 1500
cggggcagaa agaagctgct ctacatcttc aagcagccct tcatgcggcc cgtgcagacc 1560
acacaagagg aagatggctg ctcctgcaga ttccccgagg aagaagaagg cggctgcgag 1620
ctgagagtga agttcagcag atccgccgac gctccagcct atcagcaggg ccaaaaccag 1680
ctgtacaacg agctgaacct ggggagaaga gaagagtacg acgtgctgga taagcggaga 1740
ggcagagatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga atcctcaaga gggcctgtat 1800
aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg agatcggaat gaagggcgag 1860
cgcagaagag gcaagggaca cgatggactg taccagggcc tgagcaccgc caccaaggat 1920
acctatgacg cactgcacat gcaggccctg ccacctaga 1959
<210> 243
<211> 1950
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 243
gaggtgcagc tggtgcagag cggaggaggc ctggtgcagc ctggcaggtc cctgcgcctg 60
tcttgcaccg ccagcggctt cacatttggc gactatgcca tgtcctggtt caagcaggca 120
ccaggcaagg gcctggagtg ggtgggcttt atccgctcta aggcctacgg cggcaccaca 180
gagtatgccg ccagcgtgaa gggccggttc accatcagcc gggacgactc taagagcatc 240
gcctacctgc agatgaactc tctgaagacc gaggacacag ccgtgtacta ttgcgcagca 300
tggagcgccc caaccgatta ttggggccag ggcaccctgg tgacagtgag ctccggcggc 360
ggcggctctg gaggaggagg aagcggagga ggaggatccg acatccagat gacacagtcc 420
cctgcctttc tgtccgcctc tgtgggcgat agggtgaccg tgacatgtcg cgcctcccag 480
ggcatctcta actacctggc ctggtatcag cagaagcccg gcaatgcccc tcggctgctg 540
atctacagcg cctccaccct gcagagcgga gtgccctccc ggttcagagg aaccggctat 600
ggcacagagt tttctctgac catcgacagc ctgcagccag aggatttcgc cacatactat 660
tgtcagcagt cttacaccag ccggcagaca tttggccccg gcacaagact ggatatcaag 720
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 780
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 840
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 900
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tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 1020
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 1080
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 1140
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 1200
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 1260
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 1320
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 1380
agcctgagcc tgtctctggg caagatgttc tgggtgctcg tggtcgttgg cggagtgctg 1440
gcctgttaca gcctgctggt taccgtggcc ttcatcatct tttgggtcaa gcggggcaga 1500
aagaagctgc tctacatctt caagcagccc ttcatgcggc ccgtgcagac cacacaagag 1560
gaagatggct gctcctgcag attccccgag gaagaagaag gcggctgcga gctgagagtg 1620
aagttcagca gatccgccga cgctccagcc tatcagcagg gccaaaacca gctgtacaac 1680
gagctgaacc tggggagaag agaagagtac gacgtgctgg ataagcggag aggcagagat 1740
cctgaaatgg gcggcaagcc cagacggaag aatcctcaag agggcctgta taatgagctg 1800
cagaaagaca agatggccga ggcctacagc gagatcggaa tgaagggcga gcgcagaaga 1860
ggcaagggac acgatggact gtaccagggc ctgagcaccg ccaccaagga tacctatgac 1920
gcactgcaca tgcaggccct gccacctaga 1950
<210> 244
<211> 1953
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 244
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agctgcgcag cctccggctt caccttttct gactactata tgagctggat caggcaggca 120
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ccatccgtgt ctgtggcacc tggacagaca gcaaggatca cctgtggagc aaacaatatc 480
ggcagcaagt ccgtgcactg gtaccagcag aagcctggcc aggccccaat gctggtggtg 540
tatgacgatg acgatcggcc cagcggcatc cctgagagat tttctggcag caactccggc 600
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ctgcagaaag acaagatggc cgaggcctac agcgagatcg gaatgaaggg cgagcgcaga 1860
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<210> 245
<211> 1974
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 245
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 246
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tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 540
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accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 1620
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 247
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Asp Tyr Thr Glu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser
130 135 140
Gly Ser Pro Gly Gln Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser
145 150 155 160
Asp Val Gly Lys Tyr Asn Leu Val Ser Trp Tyr Gln Gln Pro Pro Gly
165 170 175
Lys Ala Pro Lys Leu Ile Ile Tyr Asp Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly
180 185 190
Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu
195 200 205
Thr Ile Ser Gly Leu Gln Gly Asp Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser
210 215 220
Ser Tyr Gly Gly Ser Arg Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val
225 230 235 240
Thr Val Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala
245 250 255
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
290 295 300
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
305 310 315 320
Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
340 345 350
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
355 360 365
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
405 410 415
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
420 425 430
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
435 440 445
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
465 470 475 480
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
485 490 495
Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
500 505 510
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
515 520 525
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
530 535 540
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
545 550 555 560
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
565 570 575
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
580 585 590
Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
595 600 605
Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
610 615 620
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
625 630 635 640
Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
645 650
<210> 248
<211> 650
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 248
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Phe Lys Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly Phe Ile Arg Ser Lys Ala Tyr Gly Gly Thr Thr Glu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile
65 70 75 80
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Ala Trp Ser Ala Pro Thr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ala Phe Leu
130 135 140
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gln
145 150 155 160
Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Asn Ala
165 170 175
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro
180 185 190
Ser Arg Phe Arg Gly Thr Gly Tyr Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Ile
195 200 205
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260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
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290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
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Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
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Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
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Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu
465 470 475 480
Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val
485 490 495
Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met
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Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe
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Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg
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Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn
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Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg
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Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro
580 585 590
Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala
595 600 605
Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His
610 615 620
Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp
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Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
645 650
<210> 249
<211> 651
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 249
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Asp Gly Pro Pro Ser Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Met Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser
130 135 140
Val Ala Pro Gly Gln Thr Ala Arg Ile Thr Cys Gly Ala Asn Asn Ile
145 150 155 160
Gly Ser Lys Ser Val His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
165 170 175
Met Leu Val Val Tyr Asp Asp Asp Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu
180 185 190
Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser
195 200 205
Gly Val Glu Ala Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys His Leu Trp Asp
210 215 220
Arg Ser Arg Asp His Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val
225 230 235 240
Leu Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro
245 250 255
Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
340 345 350
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val
465 470 475 480
Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp
485 490 495
Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe
500 505 510
Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg
515 520 525
Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser
530 535 540
Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr
545 550 555 560
Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys
565 570 575
Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn
580 585 590
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595 600 605
Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly
610 615 620
His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr
625 630 635 640
Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
645 650
<210> 250
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 250
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Met Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asn Ile Gly Ser His
20 25 30
Ser Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
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50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Gly Ser Leu
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Asn Gly Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser
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Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr
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Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys
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260 265 270
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275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
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Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
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Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
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Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
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Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln
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Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser
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Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro
645 650 655
Pro Arg
<210> 251
<211> 654
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 251
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
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195 200 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
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305 310 315 320
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325 330 335
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340 345 350
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
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370 375 380
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385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
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420 425 430
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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515 520 525
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545 550 555 560
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595 600 605
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645 650
<210> 252
<211> 653
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BMCA CAR
<400> 252
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1 5 10 15
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
20 25 30
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
35 40 45
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
50 55 60
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
65 70 75 80
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
85 90 95
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
115 120 125
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
130 135 140
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
145 150 155 160
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
165 170 175
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
180 185 190
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
195 200 205
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
210 215 220
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
260 265 270
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
275 280 285
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Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
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Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
325 330 335
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
340 345 350
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
355 360 365
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
370 375 380
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
385 390 395 400
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
405 410 415
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420 425 430
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
435 440 445
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
450 455 460
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
465 470 475 480
Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile
485 490 495
Ile Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr
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515 520 525
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595 600 605
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Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
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645 650
<210> 253
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D CAR forward primer
<400> 253
actgcatcga gtccactgga ga 22
<210> 254
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D CAR reverse primer
<400> 254
ggatctttcg catgaggaag ag 22
<210> 255
<211> 19
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> housekeeping gene B-actin forward primer
<400> 255
agcatccccc aaagttcac 19
<210> 256
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> housekeeping gene B-actin reverse primer
<400> 256
aagggacttc ctgtaacaac g 21
<210> 257
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 VH/VL (nt)
<400> 257
gaagtgcagc tggttgaaag cggcggagcc tttgttcagc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt cacctttagc agctacgcca tgacctgggt ccgacaggct 120
cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccacc atcagcggca gaggcagaag caccttctac 180
gccgatagcg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccgtgt actactgcgc cagatattat 300
cacgctggcg ccttcgatct gtggggccag ggaacactgg tcacagtgtc tagtggaagc 360
agaggcggcg gaggatctgg cggaggcggt agcggtggtg gtggatctct tgaaatggcc 420
cagagcgtgg tcacacagcc tgcctctgtt tctggctctc ctggccagag catcacaatc 480
agctgtaccg gcaccagctc tgacgtcggc ggctacaatt acgtgtcctg gtatcagcag 540
caccccggca aggcccctaa gctgatgatc tacgacgtgt ccaagaggcc cagcggcgtg 600
tccaatagat tcagcggctc caagagcggc aacaccgcca gccttacaat cagcggactg 660
caggccgagg acgaggccga ttactactgc agcagctaca ccagcagcag cacactggtt 720
tttggaggcg gcaccaagct gaccgtgctt 750
<210> 258
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-200 - VL/VH (nt)
<400> 258
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caccccggca aggcccctaa gctgatgatc tacgacgtgt ccaagaggcc cagcggcgtg 180
tccaatagat tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgacaat tagcggactg 240
caggccgagg acgaggccga ttactactgt agcagctaca ccagcagcag cacactggtg 300
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctt ggaagtagag gcggcggagg aagcggaggc 360
ggaggatctg gtggtggtgg atctctggaa atggccgagg tgcagctggt ggaatctggc 420
ggagcttttg ttcagcctgg cggcagcctg agactgtctt gtgctgccag cggcttcacc 480
ttcagcagct acgccatgac ctgggtccga caggctcctg gcaaaggcct tgaatgggtg 540
tccaccatct ccggcagagg cagaagcacc ttctacgccg atagcgtgaa gggcagattc 600
acaatcagcc gggacaacag caagaacacc ctgtacctgc agatgaactc cctgagagcc 660
gaggacaccg ccgtgtacta ctgcgccaga tattatcacg ctggcgcctt cgatctgtgg 720
ggccagggaa cactggtcac cgttagttct 750
<210> 259
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VH/VL (nt)
<400> 259
caaatgcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta caccttcaat agatacgcca tcacctgggt ccgacaggcc 120
cctggacaag gacttgaatg gatgggctgg atcagcgcct acaacggcaa tagccactac 180
gcccagaaac tgcagggcag agtgaccatg accaccgata cctctaccgg caccgcctac 240
atggaactgc ggagactgag aagcgacgac accgccgtgt actactgtgc cagaatggcc 300
tacgatagct ggggccaggg aaccctggtt acagtgtcta gtggaagcag aggcggcgga 360
ggatctggcg gaggtggtag tggcggaggc ggatctcttg aaatggccca gtctgtgctg 420
acccagcctg cctctgtttc tggctctcct ggccaaagcc tgaccatctc ttgtaccggc 480
acaagcaacg acgtgggagc ctacaaatac gtgtcctggt atcagcagta ccccggcaag 540
gcccctaagc tgatcctgta cgacgtgttc aagaggccca gcggcgtgtc caatagattc 600
agcggcagca agtccgacaa caccgccagc ctgacaatca gcggactgca ggccgaagat 660
gaggccgact actactgctt cagcctgacc tccagcaaca cctacgtgtt cggcaccggc 720
accaaagtga cagtgctt 738
<210> 260
<211> 738
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-201 VL-VH (nt)
<400> 260
caatctgtgc tgacacagcc tgccagcgtg tccggatctc ctggacagag cctgaccatc 60
agctgtaccg gcaccagcaa tgacgtgggc gcctacaaat acgtgtcctg gtatcagcag 120
taccccggca aggcccctaa gctgatcctg tacgacgtgt tcaagaggcc cagcggcgtg 180
tccaatagat tcagcggcag caagagcgac aacaccgcca gcctgacaat tagcggactg 240
caggccgagg acgaggccga ctactactgt tttagcctga cctccagcaa cacctacgtg 300
ttcggcaccg gcacaaaagt gacagtgctg ggaagtagag gcggcggagg atctggcgga 360
ggtggaagtg gcggaggcgg atctcttgaa atggcccaga tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga aaaaacctgg cgcctccgtg aaggtgtcct gcaaggcttc tggctacacc 480
ttcaacagat acgccatcac ctgggtccga caggcccctg gacaaggact tgaatggatg 540
ggctggatct ccgcctacaa cggcaatagc cactacgccc agaaactgca gggcagagtg 600
accatgacca ccgatacctc taccggcaca gcctacatgg aactgcggag actgagatcc 660
gacgacaccg ccgtgtacta ctgtgccaga atggcctacg atagctgggg ccagggaacc 720
ctggttaccg tttcttct 738
<210> 261
<211> 747
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VH/VL (nt)
<400> 261
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ctggttaagc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc gactactaca tgagctggat cagacaggcc 120
cctggcaaag gcctggaatg ggtgtcctac atcagcagct ctggcagcac catctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actattgtgc cagaggctac 300
ggcaaggcct acgatcaatg gggccagggc acactggtca cagtgtctag tggaagtaga 360
ggcggcggag gatctggcgg aggtggaagt ggcggaggcg gttctcttga aatggcccag 420
tctgtgctga cccagcctcc ttctgcttct ggcacacctg gccagagagt gaccatcagc 480
tgtagcggca gcagaagcaa cgtcggcggc aactacgtgt tctggtatca gcaggtccca 540
ggcgccacac ctaaactgct gatctacaga agcaatcagc ggcccagcgg cgtgcccgat 600
agatttgccg gatctaagtc tggcagctcc gccagcctgg ccatttctgg actgagatct 660
gaggacgagg ccgattacta ctgcgccacc tgggatgata gcctgagcgg ctttgtgttt 720
ggcaccggca ccaaagtgac cgtgctt 747
<210> 262
<211> 747
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-202 VL/VH (nt)
<400> 262
caatctgtgc tgacacagcc tcctagcgcc tctggaacac ctggccagag agtgaccatc 60
agctgtagcg gcagcagaag caacgtcggc ggcaactacg tgttctggta tcagcaggtc 120
ccaggcgcca cacctaagct gctgatctac agaagcaatc agcggcctag cggcgtgccc 180
gatagatttg ccggaagcaa gagcggcagc tctgccagcc ttgccatctc tggactgaga 240
agcgaggacg aggccgacta ctactgtgcc acctgggatg atagcctgag cggcttcgtg 300
tttggcaccg gcaccaaagt gacagtgctg ggaagtagag gcggcggagg atctggcgga 360
ggtggaagtg gcggaggcgg atctcttgaa atggccgagg tgcagctggt ggaatctggt 420
ggcggacttg tgaagcctgg cggctctctg agactgtctt gtgccgccag cggcttcacc 480
ttcagcgatt actacatgag ctggatcaga caggcccctg gcaaaggcct ggaatgggtg 540
tcctacatca gctccagcgg ctctaccatc tactacgccg acagcgtgaa gggcagattc 600
accatcagcc gggacaacgc caagaacagc ctgtacctgc agatgaactc cctgagagcc 660
gaggacaccg ccgtgtacta ttgtgccaga ggctacggca aggcctacga tcaatggggc 720
cagggcacac tggtcaccgt tagttct 747
<210> 263
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VH/VL (nt)
<400> 263
caagttcagc tggtggaatc tggcggcgga ctggttcatc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt cacctttaga agccacagca tgaactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccagc atcagcagcg acagcaccta cacctactac 180
gccgacagcg tgaagggcag attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cagcctgtac 240
ctgcagatga actccctgag agccgaggac accgccgtgt actactgtgc tagatctggc 300
ggacagtgga agtactacga ctactggggc cagggcaccc tggtcacagt tagctctgga 360
agtagaggcg gcggaggaag cggaggcgga ggttctggtg gcggaggatc tctggaaatg 420
gccagcagcg aactgacaca ggaccctgca gtgtctgtgg ccctgggcca gacagtgcgg 480
attacttgtc agggcgacag cctgcggagc tactatgcct cttggtatca gcagaagccc 540
ggccaggctc ctgtgctggt tatctacggc aagaacaaca gacccagcgg catccccgat 600
agattcagcg gaagcagctc tggcaatacc gccagcctga caattactgg cgcccaggcc 660
gaagatgagg ccgactacta ctgcaacagc agagacagct ccggcaatcc tcctgtggtt 720
tttggcggag gcaccaagct gacagtgctc 750
<210> 264
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-203 VL/VH (nt)
<400> 264
tcttctgagc tgacccaaga tcctgccgtg tctgtggctc tgggccagac agtgcggatt 60
acctgtcagg gcgatagcct gagaagctac tacgccagct ggtatcagca gaagcctgga 120
caggctcccg tgctggtcat ctacggcaag aacaacagac ccagcggcat ccccgataga 180
ttcagcggaa gcagctctgg caataccgcc agcctgacaa ttactggcgc ccaggccgaa 240
gatgaggccg actactactg caacagcaga gacagctccg gcaatcctcc tgtggttttt 300
ggcggaggca ccaagctgac agtgctggga agtagaggtg gcggaggatc tggcggcgga 360
ggaagcggag gcggcggatc tcttgaaatg gctcaggtgc agctggtgga atcaggcggt 420
ggacttgttc accctggcgg aagcctgaga ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcaccttc 480
agatcccaca gcatgaactg ggtccgacag gcccctggca aaggccttga atgggtgtcc 540
agcatcagca gcgacagcac ctacacctac tatgccgaca gcgtgaaggg cagattcacc 600
atctccagag acaacgccaa gaacagcctg tacctgcaga tgaactccct gagagccgag 660
gacaccgccg tgtactactg tgctagaagt ggcggccagt ggaagtacta cgactattgg 720
ggccagggca ccctggtcac agttagctct 750
<210> 265
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VH/VL (nt)
<400> 265
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ctggttcaac ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc aattacgcca tgagctgggt ccgacaggcc 120
cctggaaaag gccttgaatg ggtgtccgcc atcagcggca gcggcaatac ctactacgcc 180
gactctgtga agggcagatt caccatcagc cgggacaaca gcaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacc gccgtgtact attgtgccag aggcagcgtg 300
cggtacaccg atatttgggg ccagggcaca ctggtcacag tgtctagtgg aagtagaggc 360
ggcggaggat ctggcggagg tggaagtggc ggaggcggtt ctctggaaat ggccaacttc 420
atgctgaccc agcctcacag cgtgtccgag tctccaggca agaccgtgtc catcagctgc 480
accagaacaa gcggagccat tgccggcgct tacgtgcagt ggttccagca gaggcctgga 540
agcgctccta ccaccgtgat ctacgacgac aacaagaggc ctagcggcgt gcccgataga 600
ttcagcggct ccatcgacaa gagcagcaac agcgccagcc tgacaatcag cggcctgaaa 660
acagaggacg aggccgacta ctactgccag agctacgact acgacagcag caacgtgctg 720
tttggaggcg gcaccaagct gacagtgctt 750
<210> 266
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-204 VL/VH (nt)
<400> 266
aacttcatgc tgacccagcc tcacagcgtg tccgagtctc caggcaagac cgtgtccatc 60
agctgcacca gaacaagcgg agccattgcc ggcgcttacg tgcagtggtt ccagcagagg 120
cctggaagcg ctcctaccac cgtgatctac gacgacaaca agaggcctag cggcgtgccc 180
gatagattca gcggcagcat cgacaagagc agcaacagcg ccagcctgac aatcagcggc 240
ctgaaaacag aggacgaggc cgactactac tgccagagct acgactacga cagcagcaac 300
gtgctgtttg gcggaggcac caagctgaca gtgcttggaa gtagaggcgg cggaggaagc 360
ggaggcggag gatctggtgg tggtggatct ctggaaatgg ccgaagtgca gctggtcgag 420
tctggcggag gacttgttca acctggcggc agcctgagac tgtcttgtgc cgcttccggc 480
ttcaccttca gcaactacgc catgtcctgg gtccgacagg cccctggaaa aggactggaa 540
tgggtgtccg ccatcagcgg ctctggcaat acctactacg ccgacagcgt gaagggcaga 600
ttcaccatca gccgggacaa cagcaagaac accctgtacc tgcagatgaa ctccctgaga 660
gccgaggaca ccgccgtgta ctattgtgcc agaggcagcg tgcggtacac cgatatttgg 720
ggccagggca cactggtcac cgtgtcatct 750
<210> 267
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VH/VL (nt)
<400> 267
gaagtgcagc tggttgaatc tggcggcgga ctgattcagc ctggcggatc tctgagactg 60
agctgtgccg ccagcggctt caccttcagc aactacgcca tgaactgggt ccgacaggcc 120
cctggcaaag gccttgaatg ggtgtccacc atcaacggca gaggcagcag caccatctac 180
gccgattctg tgaagggcag attcaccatc agccgggaca acagcaagaa caccctgtac 240
ctgcagatga acagcctgag agccgaggac accgccacct attactgtgc cagatatatc 300
agcagaggcc tgggcgattc ttggggccag ggaacactgg tcacagtgtc tagtggaagt 360
agaggcggcg gaggatctgg cggaggtgga agtggcggag gcggttctct tgaaatggcc 420
cagtctgtgg tcacccagcc acctagcatg tctgccgctc caggacagca agtgaccatc 480
tcttgtagcg gcggcaacag caacatcgag cggaactacg tgtcctggta tctgcagctg 540
cctggcacag cccctaagct ggtcatcttc gacaacgaca gacggcccag cggcatcccc 600
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc agcgccacac tgggaattac aggactgcag 660
acaggcgacg aggccgacta ctattgtggc acctgggaca gctccctgag aggctgggtt 720
ttcggaggcg gcacaaagct gacagtgctc 750
<210> 268
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-205 VL/VH (nt)
<400> 268
cagtctgtgg ttacacagcc tcctagcatg tctgccgctc ccgggcagca agtgaccatc 60
tcttgtagcg gcggcaacag caacatcgag cggaactacg tgtcctggta tctgcagctg 120
cctggcacag cccctaagct ggtcatcttc gacaacgaca gacggcccag cggcatcccc 180
gatagatttt ctggcagcaa gagcggcacc agcgccacac tgggaattac aggactgcag 240
acaggcgacg aggccgacta ctattgtggc acctgggact ctagcctgag aggctgggtt 300
ttcggcggag gcacaaagct gacagtgctg ggaagtagag gcggcggagg atctggcgga 360
ggtggaagtg gcggaggcgg atctcttgaa atggccgagg tgcagctggt ggaatcaggc 420
ggaggactga ttcagcctgg cggctctctg agactgtctt gtgccgccag cggcttcacc 480
ttcagcaact acgccatgaa ctgggtccga caggcccctg gcaaaggcct tgaatgggtg 540
tccaccatca acggcagagg cagcagcacc atctacgccg attctgtgaa gggcagattc 600
accatcagcc gggacaacag caagaacacc ctgtacctgc agatgaactc cctgagagcc 660
gaggacaccg ccacctatta ctgtgccaga tatatcagca gaggcctggg cgattcttgg 720
ggccagggaa cactggtcac agtctctagt 750
<210> 269
<211> 759
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VH/VL (nt)
<400> 269
caagttcagc tggttcagtc tggcgccgaa gtgaagaaac ctggcgcctc tgtgaaggtg 60
tcctgcaagg ccagcggcta cacctttacc agctactaca tgcactgggt ccgacaggcc 120
cctggacaag gacttgagtg gatgggcatc atcaacccta gcggcggcag cacaagatac 180
gcccagaaat tccagggcag agtgaccatg accagagaca ccagcacctc caccgtgtat 240
atggaactga gcagcctgcg gagcgaggac acagccgtgt actattgtgc cagaggcagc 300
agcagatggg gcggatggac aggcgattat tggggccagg gaaccctggt cacagtgtct 360
agtggaagta gaggcggcgg aggatctggc ggaggtggaa gtggcggagg cggatctctt 420
gaaatggccc agtctgccct gacacagcct gcctctgttt ctggctctcc tggccagagc 480
atcaccatca gctgtaccgg caccagctct gatgtcggcg gctacaattt cgtgtcctgg 540
tatcagcagc accccggcaa ggcccctaaa gtgatgatct acgacgtgtc caagcggccc 600
agcggcatca gcaatagatt cagcggcagc aagagcggca acaccgccag cctgacaatt 660
agcggactgc aggttgagga cgaggccgag tactactgca gcagctacac aagcaccaga 720
accgtgatct tcgctggcgg caccaaagtg acagtgctc 759
<210> 270
<211> 759
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-206 VL/VH (nt)
<400> 270
caatctgctc tgacacagcc tgccagcgtg tccggatctc ctggccagag catcaccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgatgtcggc ggctacaatt tcgtgtcctg gtatcagcag 120
caccccggca aggcccctaa agtgatgatc tacgacgtgt ccaagcggcc cagcggcatc 180
agcaatagat tcagcggcag caagagcggc aacaccgcca gcctgacaat tagcggactg 240
caggttgagg acgaggccga gtactactgc agcagctaca ccagcaccag aaccgtgatc 300
tttgctggcg gcaccaaagt gacagtgctg ggaagtagag gcggcggagg atctggcgga 360
ggtggaagtg gcggaggcgg atctcttgaa atggctcagg tgcagctggt gcagtctggc 420
gccgaagtga aaaaacctgg cgcctccgtg aaggtgtcct gcaaggcttc tggctacacc 480
tttaccagct actacatgca ctgggtccga caggcccctg gacaaggact tgagtggatg 540
ggcatcatca accctagcgg cggcagcaca agatacgccc agaaattcca gggcagagtg 600
accatgacca gagacacctc caccagcaca gtgtatatgg aactgagcag cctgcggagc 660
gaggacacag ccgtgtacta ttgtgccaga ggcagcagca gatggggcgg atggacaggc 720
gattattggg gccagggaac cctggtcaca gtgtctagc 759
<210> 271
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal sequence (nt)
<400> 271
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 272
<211> 20
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal peptide(aa)
<400> 272
Met Val Leu Gln Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser
1 5 10 15
Gly Ala Tyr Gly
20
<210> 273
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal sequence (nt)
<400> 273
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctacggc 60
<210> 274
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal sequence (nt)
<400> 274
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
<210> 275
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal sequence (nt)
<400> 275
atggtgctgc agacacaggt gttcatctcc ctgctgctgt ggatctctgg agcatacgga 60
<210> 276
<211> 60
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> human IgGkappa signal sequence (nt)
<400> 276
atggtgctgc agacacaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctccgg agcatacgga 60
<210> 277
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal sequence
<400> 277
atgcttctcc tggtgacaag ccttctgctc tgtgagttac cacacccagc attcctcctg 60
atccca 66
<210> 278
<211> 22
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GMCSFR alpha chain signal peptide
<400> 278
Met Leu Leu Leu Val Thr Ser Leu Leu Leu Cys Glu Leu Pro His Pro
1 5 10 15
Ala Phe Leu Leu Ile Pro
20
<210> 279
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD8 alpha signal peptide
<400> 279
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala
<210> 280
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD33 signal peptide
<400> 280
Met Pro Leu Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala
1 5 10 15
<210> 281
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human IgG4 Fc (Uniprot P01861)
<400> 281
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 282
<211> 326
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> Human IgG2 Fc (Uniprot P01859)
<400> 282
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 283
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2- IgG4 CH3 spacer
codon optimized only (nt)
<400> 283
gagtctaaat acggaccgcc ttgtcctcct tgtccagctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ttggtacgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
aagaatcagg tgtccctgac atgcctggtc aagggcttct acccctccga tatcgccgtg 480
gaatgggaga gcaatggcca gcctgagaac aactacaaga ccacacctcc tgtgctggac 540
agcgacggca gtttcttcct gtatagtaga ctcaccgtgg ataaatcaag atggcaagag 600
ggcaacgtgt tcagctgcag cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaaa 660
agcctgagcc tgtctctggg caaa 684
<210> 284
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Alternative CO/SSE IgG4/IgG2 hinge- IgG2/IgG4 CH2-
IgG4 CH3 (nt)
<400> 284
gaatctaagt acggaccgcc ttgtcctcct tgtcccgctc ctcctgttgc cggaccttcc 60
gtgttcctgt ttcctccaaa gcctaaggac accctgatga tcagcaggac ccctgaagtg 120
acctgcgtgg tggtggatgt gtcccaagag gatcccgagg tgcagttcaa ctggtatgtg 180
gacggcgtgg aagtgcacaa cgccaagacc aagcctagag aggaacagtt ccagagcacc 240
tacagagtgg tgtccgtgct gacagtgctg caccaggatt ggctgaacgg caaagagtac 300
aagtgcaagg tgtccaacaa gggcctgcct agcagcatcg agaaaaccat ctccaaggcc 360
aagggccagc caagagagcc ccaggtttac acactgcctc caagccaaga ggaaatgacc 420
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Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
290 295 300
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
305 310 315 320
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
325 330 335
Arg Glu Glu Gln Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
340 345 350
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
355 360 365
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
370 375 380
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
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Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
405 410 415
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
420 425 430
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
435 440 445
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450 455 460
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val
485 490 495
Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr
500 505 510
Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu
515 520 525
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Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys
545 550 555 560
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Leu Pro Leu Leu Trp Ala Gly Ala Leu Ala Ser Ser Glu Leu Thr Gln
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885 890 895
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-GPRC5D CAR codon diverged (nt)
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acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 960
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 1020
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gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 1260
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cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 1800
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tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 1920
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 1980
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta gacttgaagg tggtggcgaa 2040
ggcagaggca gcctgcttac atgcggagat gtggaagaga accccggacc tagaatgccg 2100
ctgctgctac tgctgcccct gctgtgggca ggggctctag cttcttctga gctgacccaa 2160
gatcctgccg tgtctgtggc tctgggccag acagtgcgga ttacctgtca gggcgatagc 2220
ctgagaagct actacgccag ctggtatcag cagaagcctg gacaggctcc cgtgctggtc 2280
atctacggca agaacaacag acccagcggc atccccgata gattcagcgg aagcagctct 2340
ggcaataccg cctccctgac aattactggc gcccaggccg aagatgaggc cgactactac 2400
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gacattgctg tggagtggga gtccaatgga cagccagaga ataactataa gactacacca 3420
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actactcaag aagaggatgg ctgtagctgc cggtttcccg aagaagagga aggaggatgt 3780
gaactgcggg tgaagttctc cagaagcgcc gacgcccctg cctaccagca gggacagaat 3840
cagctgtata acgaactgaa cctgggcaga agggaggaat acgacgtcct ggacaagaga 3900
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gatacctacg atgccctcca tatgcaggct ctgcctccaa ga 4122
<210> 300
<211> 4122
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-GPRC5D CAR original (nt)
<400> 300
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ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 480
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 540
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 600
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accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 840
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gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 3360
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 3420
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 3480
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 3540
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 3600
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 3660
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 3720
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 3780
gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctccag cctatcagca gggccaaaac 3840
cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 3900
agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag cccagacgga agaatcctca agagggcctg 3960
tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 4020
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 4080
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta ga 4122
<210> 301
<211> 1374
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-BCMA CAR (aa)
<400> 301
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1 5 10 15
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130 135 140
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420 425 430
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
435 440 445
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
450 455 460
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
465 470 475 480
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe
485 490 495
Trp Val Leu Val Val Val Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu
500 505 510
Val Thr Val Ala Phe Ile Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys
515 520 525
Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr
530 535 540
Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly
545 550 555 560
Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala
565 570 575
Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg
580 585 590
Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu
595 600 605
Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn
610 615 620
Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met
625 630 635 640
Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly
645 650 655
Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala
660 665 670
Leu Pro Pro Arg Leu Glu Gly Gly Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu
675 680 685
Thr Cys Gly Asp Val Glu Glu Asn Pro Gly Pro Arg Met Val Leu Gln
690 695 700
Thr Gln Val Phe Ile Ser Leu Leu Leu Trp Ile Ser Gly Ala Tyr Gly
705 710 715 720
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln
725 730 735
Ser Ile Ala Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Trp Tyr
740 745 750
Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Asp Ser
755 760 765
Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly
770 775 780
Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala
785 790 795 800
Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Arg Ser Ser Thr Leu Val Phe Gly
805 810 815
Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser
820 825 830
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val
835 840 845
Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Met Lys Lys Pro Gly Ala Ser Leu
850 855 860
Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ile Asp Tyr Tyr Val
865 870 875 880
Tyr Trp Met Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ser Met Gly Trp
885 890 895
Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
900 905 910
Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu
915 920 925
Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg
930 935 940
Ser Gln Arg Asp Gly Tyr Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
945 950 955 960
Thr Val Ser Ser Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
965 970 975
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
980 985 990
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
995 1000 1005
Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
1010 1015 1020
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
1025 1030 1035 1040
Phe Gln Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
1045 1050 1055
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
1060 1065 1070
Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
1075 1080 1085
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr
1090 1095 1100
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
1105 1110 1115 1120
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
1125 1130 1135
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
1140 1145 1150
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
1155 1160 1165
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
1170 1175 1180
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Met Phe Trp Val Leu Val Val Val
1185 1190 1195 1200
Gly Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile
1205 1210 1215
Ile Phe Trp Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys
1220 1225 1230
Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys
1235 1240 1245
Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val
1250 1255 1260
Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn
1265 1270 1275 1280
Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val
1285 1290 1295
Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg
1300 1305 1310
Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys
1315 1320 1325
Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg
1330 1335 1340
Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys
1345 1350 1355 1360
Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
1365 1370
<210> 302
<211> 4122
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-BCMA CAR codon diverged (nt)
<400> 302
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagcttc ttctgagctg 60
acccaagatc ctgccgtgtc tgtggctctg ggccagacag tgcggattac ctgtcagggc 120
gatagcctga gaagctacta cgccagctgg tatcagcaga agcctggaca ggctcccgtg 180
ctggtcatct acggcaagaa caacagaccc agcggcatcc ccgatagatt cagcggaagc 240
agctctggca ataccgcctc cctgacaatt actggcgccc aggccgaaga tgaggccgac 300
tactactgca acagcagaga cagctccggc aatcctcctg tggtgtttgg aggcggaacc 360
aaactgaccg tgctgggcag cagaggtgga ggtggaagcg gcggtggagg ctccggagga 420
ggcggaagcc ttgagatggc acaggtgcag ctggtggaat caggcggtgg acttgttcac 480
cctggcggaa gcctgagact gtcttgtgcc gccagcggct tcaccttccg gtcccacagc 540
atgaactggg tccgacaggc ccctggcaaa ggccttgaat gggtgtccag catcagcagc 600
gacagcacct acacctacta tgccgacagc gtgaagggca gattcaccat ctccagagac 660
aacgccaaga acagcctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg 720
tactactgtg ctagaagtgg cggccagtgg aagtactacg actattgggg acagggcacc 780
ctggtcacag ttagctctga atccaaatac ggtcctccat gccctccatg cccagctcca 840
cccgttgctg gaccaagcgt gtttctgttc ccaccaaagc ccaaggatac actcatgatt 900
agcagaaccc cagaagtgac atgtgtcgtc gtggacgttt cccaagagga ccctgaggtc 960
cagtttaact ggtatgtgga tggagtggag gtgcataatg ctaagactaa gccaagagaa 1020
gagcagtttc agtccaccta tagagtggtc tccgtgctca ccgtgctgca tcaggactgg 1080
ctcaatggca aggaatataa gtgtaaagtc tccaacaaag gactgccatc cagcatcgaa 1140
aagaccatta gcaaggccaa aggacagcct agagagcctc aggtctacac tctgcctccc 1200
tcccaagaag agatgactaa gaaccaggtc tctctgacct gcctggtgaa gggattctac 1260
ccttccgaca ttgctgtgga gtgggagtcc aatggacagc cagagaataa ctataagact 1320
acaccacccg tgctcgatag cgacggctca ttctttctgt actctcggct gacagtggac 1380
aagagcagat ggcaggaggg aaacgtcttt agctgctccg tgatgcatga ggctctgcat 1440
aaccactata cccagaagtc tctgtccctg agcctcggca aaatgttttg ggtgctggtg 1500
gtggtcggag gcgtgctggc ttgctattcc ctgctggtca cagtggcctt cattatcttc 1560
tgggtgaaac ggggaagaaa gaaactcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca 1620
gtacaaacta ctcaagaaga ggatggctgt agctgccggt ttcccgaaga agaggaagga 1680
ggatgtgaac tgcgggtgaa gttctccaga agcgccgacg cccctgccta ccagcaggga 1740
cagaatcagc tgtataacga actgaacctg ggcagaaggg aggaatacga cgtcctggac 1800
aagagacgag gccgggaccc cgagatgggc ggaaagcctc ggcggaagaa cccccaggaa 1860
ggcctgtaca acgaactgca gaaggacaag atggctgaag cttactccga gatcggcatg 1920
aaaggagagc ggaggcgggg caagggccac gacggcctgt atcagggcct gtccaccgcc 1980
acaaaggata cctacgatgc cctccatatg caggctctgc ctccaagact cgagggcggc 2040
ggagagggca gaggaagtct tctaacatgc ggtgacgtgg aggagaatcc cggccctagg 2100
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 2160
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 2220
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 2280
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 2340
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 2400
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 2460
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 2520
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 2580
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 2640
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 2700
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 2760
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 2820
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 2880
accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 2940
gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg 3000
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 3060
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 3120
ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac 3180
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc 3240
atctccaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa 3300
gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 3360
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 3420
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 3480
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 3540
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 3600
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 3660
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 3720
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 3780
gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctccag cctatcagca gggccaaaac 3840
cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 3900
agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag cccagacgga agaatcctca agagggcctg 3960
tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 4020
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 4080
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta ga 4122
<210> 303
<211> 4122
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-BCMA CAR original (nt)
<400> 303
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagcttc ttctgagctg 60
acccaagatc ctgccgtgtc tgtggctctg ggccagacag tgcggattac ctgtcagggc 120
gatagcctga gaagctacta cgccagctgg tatcagcaga agcctggaca ggctcccgtg 180
ctggtcatct acggcaagaa caacagaccc agcggcatcc ccgatagatt cagcggaagc 240
agctctggca ataccgccag cctgacaatt actggcgccc aggccgaaga tgaggccgac 300
tactactgca acagcagaga cagctccggc aatcctcctg tggtttttgg cggaggcacc 360
aagctgacag tgctgggaag tagaggtggc ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 420
ggcggatctc ttgaaatggc tcaggtgcag ctggtggaat caggcggtgg acttgttcac 480
cctggcggaa gcctgagact gtcttgtgcc gccagcggct tcaccttcag atcccacagc 540
atgaactggg tccgacaggc ccctggcaaa ggccttgaat gggtgtccag catcagcagc 600
gacagcacct acacctacta tgccgacagc gtgaagggca gattcaccat ctccagagac 660
aacgccaaga acagcctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg 720
tactactgtg ctagaagtgg cggccagtgg aagtactacg actattgggg ccagggcacc 780
ctggtcacag ttagctctga gtctaaatac ggaccgcctt gtcctccttg tcccgctcct 840
cctgttgccg gaccttccgt gttcctgttt cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc 900
agcaggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggatgtgt cccaagagga tcccgaggtg 960
cagttcaact ggtatgtgga cggcgtggaa gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag 1020
gaacagttcc agagcaccta cagagtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 1080
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag 1140
aaaaccatct ccaaggccaa gggccagcca agagagcccc aggtttacac actgcctcca 1200
agccaagagg aaatgaccaa gaatcaggtg tccctgacat gcctggtcaa gggcttctac 1260
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1320
acacctcctg tgctggacag cgacggcagt ttcttcctgt atagtagact caccgtggat 1380
aaatcaagat ggcaagaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1440
aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg tctctgggca agatgttctg ggtgctcgtg 1500
gtcgttggcg gagtgctggc ctgttacagc ctgctggtta ccgtggcctt catcatcttt 1560
tgggtcaagc ggggcagaaa gaagctgctc tacatcttca agcagccctt catgcggccc 1620
gtgcagacca cacaagagga agatggctgc tcctgcagat tccccgagga agaagaaggc 1680
ggctgcgagc tgagagtgaa gttcagcaga tccgccgacg ctccagccta tcagcagggc 1740
caaaaccagc tgtacaacga gctgaacctg gggagaagag aagagtacga cgtgctggat 1800
aagcggagag gcagagatcc tgaaatgggc ggcaagccca gacggaagaa tcctcaagag 1860
ggcctgtata atgagctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg 1920
aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc 1980
accaaggata cctatgacgc actgcacatg caggccctgc cacctagact cgagggcggc 2040
ggagagggca gaggaagtct tctaacatgc ggtgacgtgg aggagaatcc cggccctagg 2100
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 2160
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 2220
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 2280
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 2340
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 2400
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 2460
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 2520
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 2580
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 2640
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 2700
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 2760
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 2820
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 2880
accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 2940
gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg 3000
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 3060
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 3120
ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac 3180
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc 3240
atctccaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa 3300
gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 3360
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 3420
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 3480
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 3540
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 3600
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 3660
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 3720
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 3780
gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctccag cctatcagca gggccaaaac 3840
cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 3900
agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag cccagacgga agaatcctca agagggcctg 3960
tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 4020
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 4080
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta ga 4122
<210> 304
<211> 48
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> huCD33 signal peptide (nt)
<400> 304
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagct 48
<210> 305
<211> 684
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Long spacer codon diverged (nt)
<400> 305
gaatccaaat acggtcctcc atgccctcca tgcccagctc cacccgttgc tggaccaagc 60
gtgtttctgt tcccaccaaa gcccaaggat acactcatga ttagcagaac cccagaagtg 120
acatgtgtcg tcgtggacgt ttcccaagag gaccctgagg tccagtttaa ctggtatgtg 180
gatggagtgg aggtgcataa tgctaagact aagccaagag aagagcagtt tcagtccacc 240
tatagagtgg tctccgtgct caccgtgctg catcaggact ggctcaatgg caaggaatat 300
aagtgtaaag tctccaacaa aggactgcca tccagcatcg aaaagaccat tagcaaggcc 360
aaaggacagc ctagagagcc tcaggtctac actctgcctc cctcccaaga agagatgact 420
aagaaccagg tctctctgac ctgcctggtg aagggattct acccttccga cattgctgtg 480
gagtgggagt ccaatggaca gccagagaat aactataaga ctacaccacc cgtgctcgat 540
agcgacggct cattctttct gtactctcgg ctgacagtgg acaagagcag atggcaggag 600
ggaaacgtct ttagctgctc cgtgatgcat gaggctctgc ataaccacta tacccagaag 660
tctctgtccc tgagcctcgg caaa 684
<210> 306
<211> 184
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> BCMA protein (Uniprot Q02223)
<400> 306
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
1 5 10 15
Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
20 25 30
Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
35 40 45
Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu
50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu
85 90 95
Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu
100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
115 120 125
Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
145 150 155 160
Thr Asn Asp Tyr Cys Lys Ser Leu Pro Ala Ala Leu Ser Ala Thr Glu
165 170 175
Ile Glu Lys Ser Ile Ser Ala Arg
180
<210> 307
<211> 84
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<220>
<223> huCD28 transmembrane domain codon diverged (nt)
<400> 307
atgttttggg tgctggtggt ggtcggaggc gtgctggctt gctattccct gctggtcaca 60
gtggccttca ttatcttctg ggtg 84
<210> 308
<211> 126
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 4-1BB endodomain codon diverged (nt)
<400> 308
aaacggggaa gaaagaaact cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aagaggatgg ctgtagctgc cggtttcccg aagaagagga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 309
<211> 336
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> CD3zeta endodomain codon diverged (nt)
<400> 309
cgggtgaagt tctccagaag cgccgacgcc cctgcctacc agcagggaca gaatcagctg 60
tataacgaac tgaacctggg cagaagggag gaatacgacg tcctggacaa gagacgaggc 120
cgggaccccg agatgggcgg aaagcctcgg cggaagaacc cccaggaagg cctgtacaac 180
gaactgcaga aggacaagat ggctgaagct tactccgaga tcggcatgaa aggagagcgg 240
aggcggggca agggccacga cggcctgtat cagggcctgt ccaccgccac aaaggatacc 300
tacgatgccc tccatatgca ggctctgcct ccaaga 336
<210> 310
<211> 732
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-55 scFv (nt)
<400> 310
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 60
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 120
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 180
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 240
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 300
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 360
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 420
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 480
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 540
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 600
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 660
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 720
accgtgtcca gc 732
<210> 311
<211> 750
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D scFv codon diverged (nt)
<400> 311
tcttctgagc tgacccaaga tcctgccgtg tctgtggctc tgggccagac agtgcggatt 60
acctgtcagg gcgatagcct gagaagctac tacgccagct ggtatcagca gaagcctgga 120
caggctcccg tgctggtcat ctacggcaag aacaacagac ccagcggcat ccccgataga 180
ttcagcggaa gcagctctgg caataccgcc tccctgacaa ttactggcgc ccaggccgaa 240
gatgaggccg actactactg caacagcaga gacagctccg gcaatcctcc tgtggtgttt 300
ggaggcggaa ccaaactgac cgtgctgggc agcagaggtg gaggtggaag cggcggtgga 360
ggctccggag gaggcggaag ccttgagatg gcacaggtgc agctggtgga atcaggcggt 420
ggacttgttc accctggcgg aagcctgaga ctgtcttgtg ccgccagcgg cttcaccttc 480
cggtcccaca gcatgaactg ggtccgacag gcccctggca aaggccttga atgggtgtcc 540
agcatcagca gcgacagcac ctacacctac tatgccgaca gcgtgaaggg cagattcacc 600
atctccagag acaacgccaa gaacagcctg tacctgcaga tgaactccct gagagccgag 660
gacaccgccg tgtactactg tgctagaagt ggcggccagt ggaagtacta cgactattgg 720
ggacagggca ccctggtcac agttagctct 750
<210> 312
<211> 2399
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-41BB CAR
<400> 312
ccatatgaga tcttatatgg ggcacccccg ccccttgtaa acttccctga ccctgacata 60
acaagagtta ctaacagccc ctctctccaa gctcacttac aggctctcta cttagtccag 120
cacgaagtct ggagacctct ggcggcagcc taccaagaac aactggaccg accggtggta 180
cctcaccctt accgagtcgg cgacacagtg tgggtccgcc gacaccagac taagaaccta 240
gaacctcgct ggaaaggacc ttacacagtc ctgctgacca cccccaccgc cctcaaagta 300
gacggcatcg cagcttggat acacgccgcc cacgtgaagg ctgccgaccc cgggggtgga 360
ccatcctcta gactgccatg gtgctgcaga cccaggtgtt catcagcctg ctgctgtgga 420
tctctggcgc ctatggacag tctgccctga cacagcctgc cagcgttagt gctagtcccg 480
gacagtctat cgccatcagc tgtaccggca ccagctctga cgttggctgg tatcagcagc 540
accctggcaa ggcccctaag ctgatgatct acgaggacag caagaggccc agcggcgtgt 600
ccaatagatt cagcggcagc aagagcggca acaccgccag cctgacaatt agcggactgc 660
aggccgagga cgaggccgat tactactgca gcagcaacac ccggtccagc acactggttt 720
ttggcggagg caccaagctg acagtgctgg gatctagagg tggcggagga tctggcggcg 780
gaggaagcgg aggcggcgga tctcttgaaa tggctgaagt gcagctggtg cagtctggcg 840
ccgagatgaa gaaacctggc gcctctctga agctgagctg caaggccagc ggctacacct 900
tcatcgacta ctacgtgtac tggatgcggc aggcccctgg acagggactc gaatctatgg 960
gctggatcaa ccccaatagc ggcggcacca attacgccca gaaattccag ggcagagtga 1020
ccatgaccag agacaccagc atcagcaccg cctacatgga actgagccgg ctgagatccg 1080
acgacaccgc catgtactac tgcgccagat ctcagcgcga cggctacatg gattattggg 1140
gccagggaac cctggtcacc gtgtccagcg agtctaaata cggaccgcct tgtcctcctt 1200
gtcccgctcc tcctgttgcc ggaccttccg tgttcctgtt tcctccaaag cctaaggaca 1260
ccctgatgat cagcaggacc cctgaagtga cctgcgtggt ggtggatgtg tcccaagagg 1320
atcccgaggt gcagttcaac tggtatgtgg acggcgtgga agtgcacaac gccaagacca 1380
agcctagaga ggaacagttc cagagcacct acagagtggt gtccgtgctg acagtgctgc 1440
accaggattg gctgaacggc aaagagtaca agtgcaaggt gtccaacaag ggcctgccta 1500
gcagcatcga gaaaaccatc tccaaggcca agggccagcc aagagagccc caggtttaca 1560
cactgcctcc aagccaagag gaaatgacca agaatcaggt gtccctgaca tgcctggtca 1620
agggcttcta cccctccgat atcgccgtgg aatgggagag caatggccag cctgagaaca 1680
actacaagac cacacctcct gtgctggaca gcgacggcag tttcttcctg tatagtagac 1740
tcaccgtgga taaatcaaga tggcaagagg gcaacgtgtt cagctgcagc gtgatgcacg 1800
aggccctgca caaccactac acccagaaaa gcctgagcct gtctctgggc aagatgttct 1860
gggtgctcgt ggtcgttggc ggagtgctgg cctgttacag cctgctggtt accgtggcct 1920
tcatcatctt ttgggtcaag cggggcagaa agaagctgct ctacatcttc aagcagccct 1980
tcatgcggcc cgtgcagacc acacaagagg aagatggctg ctcctgcaga ttccccgagg 2040
aagaagaagg cggctgcgag ctgagagtga agttcagcag atccgccgac gctccagcct 2100
atcagcaggg ccaaaaccag ctgtacaacg agctgaacct ggggagaaga gaagagtacg 2160
acgtgctgga taagcggaga ggcagagatc ctgaaatggg cggcaagccc agacggaaga 2220
atcctcaaga gggcctgtat aatgagctgc agaaagacaa gatggccgag gcctacagcg 2280
agatcggaat gaagggcgag cgcagaagag gcaagggaca cgatggactg taccagggcc 2340
tgagcaccgc caccaaggat acctatgacg cactgcacat gcaggccctg ccacctaga 2399
<210> 313
<211> 2028
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-41BB CAR
<400> 313
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagcttc ttctgagctg 60
acccaagatc ctgccgtgtc tgtggctctg ggccagacag tgcggattac ctgtcagggc 120
gatagcctga gaagctacta cgccagctgg tatcagcaga agcctggaca ggctcccgtg 180
ctggtcatct acggcaagaa caacagaccc agcggcatcc ccgatagatt cagcggaagc 240
agctctggca ataccgccag cctgacaatt actggcgccc aggccgaaga tgaggccgac 300
tactactgca acagcagaga cagctccggc aatcctcctg tggtttttgg cggaggcacc 360
aagctgacag tgctgggaag tagaggtggc ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 420
ggcggatctc ttgaaatggc tcaggtgcag ctggtggaat caggcggtgg acttgttcac 480
cctggcggaa gcctgagact gtcttgtgcc gccagcggct tcaccttcag atcccacagc 540
atgaactggg tccgacaggc ccctggcaaa ggccttgaat gggtgtccag catcagcagc 600
gacagcacct acacctacta tgccgacagc gtgaagggca gattcaccat ctccagagac 660
aacgccaaga acagcctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg 720
tactactgtg ctagaagtgg cggccagtgg aagtactacg actattgggg ccagggcacc 780
ctggtcacag ttagctctga gtctaaatac ggaccgcctt gtcctccttg tcccgctcct 840
cctgttgccg gaccttccgt gttcctgttt cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc 900
agcaggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggatgtgt cccaagagga tcccgaggtg 960
cagttcaact ggtatgtgga cggcgtggaa gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag 1020
gaacagttcc agagcaccta cagagtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 1080
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag 1140
aaaaccatct ccaaggccaa gggccagcca agagagcccc aggtttacac actgcctcca 1200
agccaagagg aaatgaccaa gaatcaggtg tccctgacat gcctggtcaa gggcttctac 1260
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1320
acacctcctg tgctggacag cgacggcagt ttcttcctgt atagtagact caccgtggat 1380
aaatcaagat ggcaagaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1440
aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg tctctgggca agatgttctg ggtgctcgtg 1500
gtcgttggcg gagtgctggc ctgttacagc ctgctggtta ccgtggcctt catcatcttt 1560
tgggtcaagc ggggcagaaa gaagctgctc tacatcttca agcagccctt catgcggccc 1620
gtgcagacca cacaagagga agatggctgc tcctgcagat tccccgagga agaagaaggc 1680
ggctgcgagc tgagagtgaa gttcagcaga tccgccgacg ctccagccta tcagcagggc 1740
caaaaccagc tgtacaacga gctgaacctg gggagaagag aagagtacga cgtgctggat 1800
aagcggagag gcagagatcc tgaaatgggc ggcaagccca gacggaagaa tcctcaagag 1860
ggcctgtata atgagctgca gaaagacaag atggccgagg cctacagcga gatcggaatg 1920
aagggcgagc gcagaagagg caagggacac gatggactgt accagggcct gagcaccgcc 1980
accaaggata cctatgacgc actgcacatg caggccctgc cacctaga 2028
<210> 314
<211> 2025
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-CD28 CAR
<400> 314
atgccgctgc tgctactgct gcccctgctg tgggcagggg ctctagcttc ttctgagctg 60
acccaagatc ctgccgtgtc tgtggctctg ggccagacag tgcggattac ctgtcagggc 120
gatagcctga gaagctacta cgccagctgg tatcagcaga agcctggaca ggctcccgtg 180
ctggtcatct acggcaagaa caacagaccc agcggcatcc ccgatagatt cagcggaagc 240
agctctggca ataccgccag cctgacaatt actggcgccc aggccgaaga tgaggccgac 300
tactactgca acagcagaga cagctccggc aatcctcctg tggtttttgg cggaggcacc 360
aagctgacag tgctgggaag tagaggtggc ggaggatctg gcggcggagg aagcggaggc 420
ggcggatctc ttgaaatggc tcaggtgcag ctggtggaat caggcggtgg acttgttcac 480
cctggcggaa gcctgagact gtcttgtgcc gccagcggct tcaccttcag atcccacagc 540
atgaactggg tccgacaggc ccctggcaaa ggccttgaat gggtgtccag catcagcagc 600
gacagcacct acacctacta tgccgacagc gtgaagggca gattcaccat ctccagagac 660
aacgccaaga acagcctgta cctgcagatg aactccctga gagccgagga caccgccgtg 720
tactactgtg ctagaagtgg cggccagtgg aagtactacg actattgggg ccagggcacc 780
ctggtcacag ttagctctga gtctaaatac ggaccgcctt gtcctccttg tcccgctcct 840
cctgttgccg gaccttccgt gttcctgttt cctccaaagc ctaaggacac cctgatgatc 900
agcaggaccc ctgaagtgac ctgcgtggtg gtggatgtgt cccaagagga tcccgaggtg 960
cagttcaact ggtatgtgga cggcgtggaa gtgcacaacg ccaagaccaa gcctagagag 1020
gaacagttcc agagcaccta cagagtggtg tccgtgctga cagtgctgca ccaggattgg 1080
ctgaacggca aagagtacaa gtgcaaggtg tccaacaagg gcctgcctag cagcatcgag 1140
aaaaccatct ccaaggccaa gggccagcca agagagcccc aggtttacac actgcctcca 1200
agccaagagg aaatgaccaa gaatcaggtg tccctgacat gcctggtcaa gggcttctac 1260
ccctccgata tcgccgtgga atgggagagc aatggccagc ctgagaacaa ctacaagacc 1320
acacctcctg tgctggacag cgacggcagt ttcttcctgt atagtagact caccgtggat 1380
aaatcaagat ggcaagaggg caacgtgttc agctgcagcg tgatgcacga ggccctgcac 1440
aaccactaca cccagaaaag cctgagcctg tctctgggca agatgttctg ggtgctcgtg 1500
gtcgttggcg gagtgctggc ctgttacagc ctgctggtta ccgtggcctt catcatcttt 1560
tgggtcagga gtaagaggag caggctcctg cacagtgact acatgaacat gactccccgc 1620
cgccccgggc ccacccgcaa gcattaccag ccctatgccc caccacgcga cttcgcagcc 1680
tatcgctcca gagtgaagtt cagcagatcc gccgacgctc cagcctatca gcagggccaa 1740
aaccagctgt acaacgagct gaacctgggg agaagagaag agtacgacgt gctggataag 1800
cggagaggca gagatcctga aatgggcggc aagcccagac ggaagaatcc tcaagagggc 1860
ctgtataatg agctgcagaa agacaagatg gccgaggcct acagcgagat cggaatgaag 1920
ggcgagcgca gaagaggcaa gggacacgat ggactgtacc agggcctgag caccgccacc 1980
aaggatacct atgacgcact gcacatgcag gccctgccac ctaga 2025
<210> 315
<211> 4122
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-41BB-GPRC5D-41BB dual CAR
<400> 315
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 120
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 180
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 240
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 300
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 360
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 420
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 480
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 540
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 600
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 660
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 720
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 780
accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 840
gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg 900
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 960
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 1020
ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac 1080
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc 1140
atctccaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa 1200
gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 1260
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 1320
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 1380
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1440
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 1500
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 1560
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 1620
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 1680
gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctccag cctatcagca gggccaaaac 1740
cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 1800
agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag cccagacgga agaatcctca agagggcctg 1860
tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 1920
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 1980
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta gactcgaggg cggcggagag 2040
ggaaggggat ccctcctgac ctgtggcgac gtcgaggaaa atcctggccc caggatgccg 2100
ctgctgctac tgctgcccct gctgtgggca ggggctctag cttcttctga gctgacccaa 2160
gatcctgccg tgtctgtggc tctgggccag acagtgcgga ttacctgtca gggcgatagc 2220
ctgagaagct actacgccag ctggtaccaa caaaagcccg gacaggctcc tgtgctcgtc 2280
atttatggca agaacaacag accttccgga atccccgata ggttttccgg aagctcctct 2340
ggaaatacag cttccctcac catcactggc gcccaagctg aagatgaagc tgactattat 2400
tgtaactcca gagacagctc cggcaatcct cctgtcgtgt tcggaggcgg aacaaaattg 2460
accgtgctcg gcagcagggg cggaggcggc tctggaggtg gcgggtccgg cggaggaggc 2520
agcctggaga tggcccaggt ccaactcgtc gaatcaggcg gtggacttgt tcatcccggc 2580
ggaagcctga ggctctcttg tgccgcttcc ggattcactt ttagatccca cagcatgaac 2640
tgggtccgac aagctcccgg caaaggcctt gaatgggtgt ccagcatcag cagcgacagc 2700
acctacacct actatgccga cagcgtgaaa ggaaggttca caatctctag ggacaacgcc 2760
aagaacagcc tgtacctgca gatgaactcc ctcagggctg aggatacagc tgtctattat 2820
tgtgctagaa gtggcggcca gtggaagtac tacgactact ggggacaagg cacactcgtg 2880
acagttagct ctgaaagcaa gtatggcccc ccctgcccac cctgccctgc cccacccgtg 2940
gctggcccca gcgtctttct cttcccccct aaacccaaag atacactcat gatttccaga 3000
acacccgagg tcacatgtgt cgtcgtcgac gtcagccagg aagaccctga agtccaattt 3060
aattggtacg tcgatggagt cgaggtccat aatgctaaaa caaaacccag ggaagagcaa 3120
tttcaatcca catatagggt cgtcagcgtc ctcaccgtcc tccatcaaga ctggctcaat 3180
ggaaaggaat ataaatgtaa agtcagcaat aaaggactcc cctcctccat tgaaaagaca 3240
attagcaaag ctaaaggaca acccagggaa cctcaagtgt ataccctgcc tcccagccag 3300
gaagagatga caaaaaacca agtcagcctc acctgtctcg tgaaaggatt ttatcctagc 3360
gacattgctg tcgagtggga atccaacgga caacccgaaa ataattataa aacaaccccc 3420
cccgtcctcg attccgatgg aagctttttt ctctacagca ggctgacagt cgacaagagc 3480
aggtggcagg aaggaaatgt cttttcctgt tccgtcatgc atgaagctct ccataatcat 3540
tatacacaaa agtccctctc cctcagcctc ggaaaaatgt tttgggtcct ggtcgtggtg 3600
ggaggcgtcc tcgcttgcta ttccctcctc gtgacagtcg cctttattat cttctgggtg 3660
aaaagaggaa ggaaaaaact cctgtatatt tttaaacaac cttttatgag acctgtccaa 3720
acaacccagg aagaggacgg atgtagctgt aggtttcctg aagaggagga gggaggatgt 3780
gaactcaggg tcaaattttc caggagcgct gatgcccccg cttaccaaca aggacagaat 3840
caactctata atgaactcaa tctcggcagg agggaggaat atgatgtcct cgacaaaaga 3900
aggggaaggg accccgagat gggaggaaaa cctaggagaa aaaaccccca ggaaggactc 3960
tacaacgaac tccaaaagga taaaatggct gaagcttatt ccgaaattgg catgaaagga 4020
gaaagaagga ggggaaaagg ccatgacggc ctctatcaag gactctccac agctacaaaa 4080
gacacatacg atgccctcca tatgcaagct ctccccccca gg 4122
<210> 316
<211> 4119
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA-41BB-GPRC5D-CD28 dual CAR
<400> 316
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 120
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 180
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 240
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 300
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 360
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 420
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 480
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 540
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 600
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 660
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 720
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 780
accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 840
gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg 900
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 960
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 1020
ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac 1080
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc 1140
atctccaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa 1200
gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 1260
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 1320
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 1380
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1440
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 1500
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 1560
aagcggggca gaaagaagct gctctacatc ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag 1620
accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc agattccccg aggaagaaga aggcggctgc 1680
gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc gacgctccag cctatcagca gggccaaaac 1740
cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg 1800
agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag cccagacgga agaatcctca agagggcctg 1860
tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc 1920
gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag 1980
gatacctatg acgcactgca catgcaggcc ctgccaccta gactcgaggg cggcggagag 2040
ggaaggggat ccctcctgac ctgtggcgac gtcgaggaaa atcctggccc caggatgccg 2100
ctgctgctac tgctgcccct gctgtgggca ggggctctag cttcttctga gctgacccaa 2160
gatcctgccg tgtctgtggc tctgggccag acagtgcgga ttacctgtca gggcgatagc 2220
ctgagaagct actacgccag ctggtaccaa caaaagcccg gacaggctcc tgtgctcgtc 2280
atttatggca agaacaacag accttccgga atccccgata ggttttccgg aagctcctct 2340
ggaaatacag cttccctcac catcactggc gcccaagctg aagatgaagc tgactattat 2400
tgtaactcca gagacagctc cggcaatcct cctgtcgtgt tcggaggcgg aacaaaattg 2460
accgtgctcg gcagcagggg cggaggcggc tctggaggtg gcgggtccgg cggaggaggc 2520
agcctggaga tggcccaggt ccaactcgtc gaatcaggcg gtggacttgt tcatcccggc 2580
ggaagcctga ggctctcttg tgccgcttcc ggattcactt ttagatccca cagcatgaac 2640
tgggtccgac aagctcccgg caaaggcctt gaatgggtgt ccagcatcag cagcgacagc 2700
acctacacct actatgccga cagcgtgaaa ggaaggttca caatctctag ggacaacgcc 2760
aagaacagcc tgtacctgca gatgaactcc ctcagggctg aggatacagc tgtctattat 2820
tgtgctagaa gtggcggcca gtggaagtac tacgactact ggggacaagg cacactcgtg 2880
acagttagct ctgaaagcaa gtatggcccc ccctgcccac cctgccctgc cccacccgtg 2940
gctggcccca gcgtctttct cttcccccct aaacccaaag atacactcat gatttccaga 3000
acacccgagg tcacatgtgt cgtcgtcgac gtcagccagg aagaccctga agtccaattt 3060
aattggtacg tcgatggagt cgaggtccat aatgctaaaa caaaacccag ggaagagcaa 3120
tttcaatcca catatagggt cgtcagcgtc ctcaccgtcc tccatcaaga ctggctcaat 3180
ggaaaggaat ataaatgtaa agtcagcaat aaaggactcc cctcctccat tgaaaagaca 3240
attagcaaag ctaaaggaca acccagggaa cctcaagtgt ataccctgcc tcccagccag 3300
gaagagatga caaaaaacca agtcagcctc acctgtctcg tgaaaggatt ttatcctagc 3360
gacattgctg tcgagtggga atccaacgga caacccgaaa ataattataa aacaaccccc 3420
cccgtcctcg attccgatgg aagctttttt ctctacagca ggctgacagt cgacaagagc 3480
aggtggcagg aaggaaatgt cttttcctgt tccgtcatgc atgaagctct ccataatcat 3540
tatacacaaa agtccctctc cctcagcctc ggaaaaatgt tttgggtcct ggtcgtggtg 3600
ggaggcgtcc tcgcttgcta ttccctcctc gtgacagtcg cctttattat cttctgggtg 3660
aggagtaaga ggagcaggct cctgcacagt gactacatga acatgactcc ccgccgcccc 3720
gggcccaccc gcaagcatta ccagccctat gccccaccac gcgacttcgc agcctatcgc 3780
tccagggtca aattttccag gagcgctgat gcccccgctt accaacaagg acagaatcaa 3840
ctctataatg aactcaatct cggcaggagg gaggaatatg atgtcctcga caaaagaagg 3900
ggaagggacc ccgagatggg aggaaaacct aggagaaaaa acccccagga aggactctac 3960
aacgaactcc aaaaggataa aatggctgaa gcttattccg aaattggcat gaaaggagaa 4020
agaaggaggg gaaaaggcca tgacggcctc tatcaaggac tctccacagc tacaaaagac 4080
acatacgatg ccctccatat gcaagctctc ccccccagg 4119
<210> 317
<211> 2832
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GPRC5D-BCMA-41BB CAR
<400> 317
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
caggtccaac tcgtcgaatc aggcggtgga cttgttcatc ccggcggaag cctgaggctc 120
tcttgtgccg cttccggatt tacatttaga tcccacagca tgaactgggt ccgacaagct 180
cccggcaaag gccttgaatg ggtgtccagc atcagcagcg acagcaccta cacctactat 240
gccgacagcg tgaaaggaag gttcacaatc tctagggaca acgccaagaa cagcctgtac 300
ctgcagatga actccctcag ggctgaggat acagctgtct attattgtgc tagaagtggc 360
ggccagtgga agtactacga ctactgggga caaggcacac tcgtgacagt tagctctggc 420
agcaggggcg gaggcggcag cggaggaggc ggctccggcg gaggaggcag cctggagatg 480
gcctcttctg agctgaccca agatcctgcc gtgtctgtgg ctctgggcca gacagtgcgg 540
attacctgtc agggcgatag cctgagaagc tactacgcca gctggtacca acaaaagccc 600
ggacaggctc ctgtgctcgt catttatggc aagaacaaca gaccttccgg aatccccgat 660
aggttttccg gaagctcctc tggaaataca gcttccctca ccatcactgg cgcccaagct 720
gaagatgaag ctgactatta ttgtaactcc agagacagct ccggcaatcc tcctgtcgtg 780
ttcggaggcg gaacaaaact caccgtcctc ggaggtggag gatctggagg cggtggaagc 840
ggagggggcg gttccggtgg cgggggatct cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt 900
agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc 960
tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct aagctgatga tctacgagga cagcaagagg 1020
cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca 1080
attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc gattactact gcagcagcaa cacccggtcc 1140
agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga 1200
ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg 1260
gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc 1320
agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga 1380
ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc 1440
cagggcagag tgaccatgac cagagacacc agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc 1500
cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac 1560
atggattatt ggggccaggg aaccctggtc accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg 1620
ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca 1680
aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat 1740
gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac 1800
aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg 1860
ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac 1920
aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc atctccaagg ccaagggcca gccaagagag 1980
ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg 2040
acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc 2100
cagcctgaga acaactacaa gaccacacct cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc 2160
ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc 2220
agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg 2280
ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg 2340
gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc aagcggggca gaaagaagct gctctacatc 2400
ttcaagcagc ccttcatgcg gcccgtgcag accacacaag aggaagatgg ctgctcctgc 2460
agattccccg aggaagaaga aggcggctgc gagctgagag tgaagttcag cagatccgcc 2520
gacgctccag cctatcagca gggccaaaac cagctgtaca acgagctgaa cctggggaga 2580
agagaagagt acgacgtgct ggataagcgg agaggcagag atcctgaaat gggcggcaag 2640
cccagacgga agaatcctca agagggcctg tataatgagc tgcagaaaga caagatggcc 2700
gaggcctaca gcgagatcgg aatgaagggc gagcgcagaa gaggcaaggg acacgatgga 2760
ctgtaccagg gcctgagcac cgccaccaag gatacctatg acgcactgca catgcaggcc 2820
ctgccaccta ga 2832
<210> 318
<211> 1560
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> BCMA del CAR
<400> 318
atggtgctgc agacccaggt gttcatcagc ctgctgctgt ggatctctgg cgcctatgga 60
cagtctgccc tgacacagcc tgccagcgtt agtgctagtc ccggacagtc tatcgccatc 120
agctgtaccg gcaccagctc tgacgttggc tggtatcagc agcaccctgg caaggcccct 180
aagctgatga tctacgagga cagcaagagg cccagcggcg tgtccaatag attcagcggc 240
agcaagagcg gcaacaccgc cagcctgaca attagcggac tgcaggccga ggacgaggcc 300
gattactact gcagcagcaa cacccggtcc agcacactgg tttttggcgg aggcaccaag 360
ctgacagtgc tgggatctag aggtggcgga ggatctggcg gcggaggaag cggaggcggc 420
ggatctcttg aaatggctga agtgcagctg gtgcagtctg gcgccgagat gaagaaacct 480
ggcgcctctc tgaagctgag ctgcaaggcc agcggctaca ccttcatcga ctactacgtg 540
tactggatgc ggcaggcccc tggacaggga ctcgaatcta tgggctggat caaccccaat 600
agcggcggca ccaattacgc ccagaaattc cagggcagag tgaccatgac cagagacacc 660
agcatcagca ccgcctacat ggaactgagc cggctgagat ccgacgacac cgccatgtac 720
tactgcgcca gatctcagcg cgacggctac atggattatt ggggccaggg aaccctggtc 780
accgtgtcca gcgagtctaa atacggaccg ccttgtcctc cttgtcccgc tcctcctgtt 840
gccggacctt ccgtgttcct gtttcctcca aagcctaagg acaccctgat gatcagcagg 900
acccctgaag tgacctgcgt ggtggtggat gtgtcccaag aggatcccga ggtgcagttc 960
aactggtatg tggacggcgt ggaagtgcac aacgccaaga ccaagcctag agaggaacag 1020
ttccagagca cctacagagt ggtgtccgtg ctgacagtgc tgcaccagga ttggctgaac 1080
ggcaaagagt acaagtgcaa ggtgtccaac aagggcctgc ctagcagcat cgagaaaacc 1140
atctccaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggttt acacactgcc tccaagccaa 1200
gaggaaatga ccaagaatca ggtgtccctg acatgcctgg tcaagggctt ctacccctcc 1260
gatatcgccg tggaatggga gagcaatggc cagcctgaga acaactacaa gaccacacct 1320
cctgtgctgg acagcgacgg cagtttcttc ctgtatagta gactcaccgt ggataaatca 1380
agatggcaag agggcaacgt gttcagctgc agcgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1440
tacacccaga aaagcctgag cctgtctctg ggcaagatgt tctgggtgct cgtggtcgtt 1500
ggcggagtgc tggcctgtta cagcctgctg gttaccgtgg ccttcatcat cttttgggtc 1560
<210> 319
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> T2A
<400> 319
ctcgagggcg gcggagaggg aaggggatcc ctcctgacct gtggcgacgt cgaggaaaat 60
cctggcccca gg 72
<210> 320
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> linker
<400> 320
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
Claims (255)
- 키메라 항원 수용체로서,
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 적어도 125개의 아미노산 길이의 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 키메라 항원 수용체로서,
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 및 33 중에서 선택된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2) 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 VH 영역; 및
(ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 및 69 중에서 선택된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2) 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 VL 영역;을 포함함;
(2) 적어도 125개의 아미노산 길이의 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 키메라 항원 수용체로서,
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) (a) 서열 번호: 75, 78, 80, 90, 93, 95, 105, 108, 110, 120, 123, 125, 135, 138, 140, 152, 162, 165 및 167 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1; (b) 서열 번호: 76, 79, 81, 91, 94, 96, 106, 109, 111, 121, 124, 126, 136, 139, 141, 150, 153, 154, 163, 166 및 168 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H2; 및 (c) 서열 번호: 77, 92, 107, 122, 137, 151 및 164 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H3을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 85, 100, 115, 130, 145, 157 및 172 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1; (b) 서열 번호: 86, 101, 116, 131, 146 및 158 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L2; 및 (c) 서열 번호: 87, 102, 117, 132, 147, 159, 173 및 297 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역;을 포함함;
(2) 적어도 125개의 아미노산 길이의 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 제2항 또는 제3항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 21, 23, 25, 27, 29, 31 또는 33에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 63, 64, 65, 66, 67, 68 또는 69에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 125 내지 300 또는 약 125 내지 약 300, 125 내지 250 또는 약 125 내지 약 250, 125 내지 230 또는 약 125 내지 약 230, 125 내지 200 또는 약 125 내지 약 200, 125 내지 180 또는 약 125 내지 약 180, 125 내지 150 또는 약 125 내지 약 150, 150 내지 300 또는 약 150 내지 약 300, 150 내지 250 또는 약 150 내지 약 250, 150 내지 230 또는 약 150 내지 약 230, 150 내지 200 또는 약 150 내지 약 200, 150 내지 180 또는 약 150 내지 약 180, 180 내지 300 또는 약 180 내지 약 300, 180 내지 250 또는 약 180 내지 약 250, 125 내지 300 또는 약 125 내지 약 300, 180 내지 230 또는 약 180 내지 약 230, 180 내지 200 또는 약 180 내지 약 200, 200 내지 300 또는 약 200 내지 약 300, 200 내지 250 또는 약 200 내지 약 250, 200 내지 230 또는 약 200 내지 약 230, 230 내지 300 또는 약 230 내지 약 300, 230 내지 250 또는 약 230 내지 약 250, 250 내지 300 또는 약 250 내지 약 300의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 또는 적어도 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나, 또는 전술한 임의의 갯수 사이의 길이를 갖거나; 또는
상기 스페이서는 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개 또는 적어도 약 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228 또는 229개의 아미노산 길이이거나, 또는 전술한 임의의 갯수 사이의 길이를 갖는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 면역글로불린의 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 힌지 영역, CH2 및 CH3 영역의 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제8항에 있어서,
상기 힌지 영역은 IgG4 힌지 영역 및/또는 IgG2 힌지 영역의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG4 힌지 영역이고 상기 IgG2 힌지 영역은 선택적으로 인간 IgG2 힌지 영역이고;
상기 CH2 영역은 IgG4 CH2 및/또는 IgG2 CH2의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 CH2는 선택적으로 인간 IgG4 CH2이고 상기 IgG2 CH2는 선택적으로 인간 IgG2 CH2이고/거나;
상기 CH3 영역은 IgG4 CH3 및/또는 IgG2 CH3의 전부 또는 일부를 포함하고, 여기서 상기 IgG4 CH3은 선택적으로 인간 IgG4 CH3이고 상기 IgG2 CH3은 선택적으로 인간 IgG2 CH3인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제8항 또는 제9항에 있어서,
상기 힌지 영역, CH2 및 CH3은 인간 IgG4로부터의 힌지의 전부 또는 일부, CH2의 전부 또는 일부 및 CH3의 전부 또는 일부를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제8항 또는 제9항에 있어서,
상기 힌지 영역, 상기 CH2 및 상기 CH3 중 하나 이상은 키메라이고 인간 IgG4 및 인간 IgG2로부터의 힌지, CH2 및 CH3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 IgG4/2 키메라 힌지 영역 또는 인간 IgG4 힌지와 비교하여 적어도 하나의 아미노산 교체를 포함하는 변형된 IgG4 힌지 영역; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 (i) 서열 번호: 17에 제시된 서열; (ii) 서열 번호: 17에 대해 적어도 (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 서열 번호: 17의 기능적 변이체; 또는 (iii) 적어도 125개의 아미노산 길이인 (i) 또는 (ii)의 인접 부분;이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 서열 번호: 17에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 26에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 26에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 25에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 65에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 65에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 30에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 30에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 29에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 29에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 67에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 67에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 34에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 34에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 33에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 33에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 69에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 69에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 110, 111 및 107의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 115, 116 및 117의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 141 및 137의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 145, 146 및 147의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 167, 168 및 164의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 172, 86 및 173의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 169, 170 및 171의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 174, 89 및 297의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 21 및 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 23 및 64에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 25 및 26에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 25 및 65에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 29 및 30에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 29 및 67에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 31 및 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 33 및 34에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 33 및 69에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 22에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 21에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 63에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 63에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 24에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 23에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 23에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 64에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 64에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 32에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 32에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 31에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 31에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 68에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 68에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 80, 81 및 77의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 85, 86 및 87의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 95, 96 및 92의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 100, 101 및 102의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 140, 154 및 151의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 157, 158 및 159의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 21 및 22에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 21 및 63에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 23 및 24에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 23 및 64에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 31 및 32에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 31 및 68에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 28에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 27에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 서열 번호: 66에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 66에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서,
서열 번호: 27에 제시된 가변 중쇄(VH) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 가변 경쇄(VL) 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역;을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 127, 128 및 129의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 133, 134 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 27 및 28에 제시된 아미노산 서열 또는 각각 서열 번호: 27 및 66에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 단일 사슬 항체 단편인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역 및 상기 VL 영역은 가요성 링커에 의해 연결되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제31항에 있어서,
상기 링커는 아미노산 서열 GGGGSGGGGSGGGGS(서열 번호: 52)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 257, 259, 261, 263, 265, 267 및 269 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 257, 259, 261, 263, 265, 267 및 269 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 5, 7, 9, 11 및 13 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 1, 3, 7 및 11 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제34항 또는 제37항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 32항 및 제40항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 258, 260, 262, 264, 266, 268 및 270 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호: 258, 260, 262, 264, 266, 268 및 270 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항, 제40항 및 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 6, 8, 10, 12 및 14 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항, 제40항 및 제41항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항 또는 제40항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 2, 4, 8 및 12 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32항, 제40항, 제41항 및 제43항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제32 또는 제40 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 세포내 세포질 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제47항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 기능적 변이체의 세포질 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제47항 또는 제48항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제47항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인 또는 이의 신호 전달 부분을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항 또는 제51항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항 또는 제51항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항, 제51항 및 제54항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제50항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 상기 막관통 도메인과 상기 세포내 신호 전달 영역 사이에 존재하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 CD28로부터 유래된 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 키메라 항원 수용체로서,
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및
(4) CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 T 세포 공자극 분자의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 제60항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 VH 영역은 각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 VL 영역은 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 키메라 항원 수용체로서,
(1) 인간 G 단백질 결합 수용체 C 클래스 5 그룹 D 멤버(GPRC5D)에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역; 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 함유하는 VL 영역; 또는
각각 서열 번호: 125, 126 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는
각각 서열 번호: 120, 121 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역; 또는
각각 서열 번호: 123, 124 및 122의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하는 VH 영역, 및 각각 서열 번호: 130, 131 및 132의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 VL 영역을 포함함;
(2) IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 인간 CD28로부터 유래한 막관통 도메인; 및
(4) 인간 CD3-제타(CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 및 인간 CD28 또는 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 키메라 항원 수용체. - 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 27에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 및 서열 번호: 28 또는 66에 제시된 VL 영역 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 7 또는 서열 번호: 8에 제시된 scFv를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제60항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제60항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 (a) 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 (b) 서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20 및 서열 번호: 46에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제60항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 (a) 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 (b) 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 키메라 항원 수용체. - 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
- 제68항에 있어서,
상기 스페이서를 암호화하는 상기 핵산은 적어도 하나의 변형된 스플라이스 공여(donor) 및/또는 스플라이스 수용체 부위를 포함하고, 상기 변형된 스플라이스 공여 및/또는 수용체 부위는 서열 번호: 73에 제시된 서열에 함유된 기준 스플라이스 공여 부위 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위에 해당하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항에 있어서,
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 및 제70항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 (약) 0.4, (약) 0.5, (약) 0.6, (약) 0.70, (약) 0.75, (약) 0.80, (약) 0.85, (약) 0.90, (약) 0.95, (약) 0.99 또는 (약) 1.0의 스플라이스 부위 예측 점수를 갖고/거나;
상기 기준 스플라이스 공여 및/또는 기준 스플라이스 수용체 부위는 적어도 (약) 40%, (약) 50%, (약) 60%, (약) 70%, (약) 75%, (약) 80%, (약) 85%, (약) 90%, (약) 95%, (약) 99% 또는 (약) 100%의 확률로 스플라이스 이벤트에 관련될 것으로 예측되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 aatctaagtacggac(서열 번호: 176), tcaactggtacgtgg(서열 번호:177), acaattagtaaggca(서열 번호:178) 및/또는 accacaggtgtatac(서열 번호:179)를 포함하고/거나;
상기 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호:180) 및/또는 gggcaacgtgttctcttgcagtgtcatgcacgaagccctgc(서열 번호:181)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 기준 스플라이스 공여 부위는 서열 tcaactggtacgtgg(서열 번호:177)를 포함하고/거나;
상기 기준 스플라이스 수용체 부위는 서열 aagtttctttctgtattccaggctgaccgtggataaatctc(서열 번호:180)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형은 침묵(silent)이고/거나 서열 번호: 73과 비교하여 퇴화 코돈을 생성하고/거나 상기 암호화된 스페이서의 아미노산 서열을 변경하지 않는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 변형된 스플라이스 공여 부위는 agtctaaatacggac(서열 번호:182), tcaactggtatgtgg(서열 번호:183), accatctccaaggcc(서열 번호:184) 및/또는 gccccaggtttacac(서열 번호:185)에 제시되고/거나;
상기 변형된 스플라이스 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호:186), gggcaacgtgttcagctgcagcgtgatgcacgaggccctgc(서열 번호: 187) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 변형된 스플라이스 공여 부위는 tcaactggtatgtgg(서열 번호: 183)에 제시되고/거나 상기 변형된 수용체 부위는 cagtttcttcctgtatagtagactcaccgtggataaatcaa(서열 번호: 186) 및/또는 cgccttgtcctccttgtcccgctcctcctgttgccggacct(서열 번호:188)에 제시되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제69항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 스페이서는 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제68항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서,
세포에서 발현 시, 상기 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 RNA, 선택적으로 메신저 RNA(mRNA)는 기준 폴리뉴클레오타이드로부터 전사된 mRNA의 이질성에 비해 감소된 이질성을 나타내고, 상기 기준 폴리뉴클레오타이드는 상기 폴리뉴클레오타이드와 동일한 아미노산 서열을 암호화하고,
여기서 상기 기준 폴리뉴클레오타이드는 상기 스페이서를 암호화하는 핵산에서 하나 이상의 스플라이스 공여 부위 및/또는 하나 이상의 스플라이스 수용체 부위의 존재에 의해 상이하고/거나, 상기 폴리뉴클레오타이드에 비해 하나 이상의 뉴클레오타이드 변형을 포함하고/거나, 서열 번호: 73에 제시된 스페이서를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 인간 세포에서 발현을 위해 코돈 최적화된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제68항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 제1 키메라 항원 수용체이고 상기 폴리뉴클레오타이드는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제80항에 있어서,
상기 제1 및 제2 키메라 항원 수용체는 하나 이상의 다중 시스트론 요소(들)에 의해 분리되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제81항에 있어서,
상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소는 리보솜 스킵 서열이거나 이를 포함하고, 선택적으로 상기 리보솜 스킵 서열은 T2A, P2A, E2A 또는 F2A 요소인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제82항에 있어서,
상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 상기 뉴클레오타이드 서열은 코돈 분기(codon diverged)되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제82항 또는 제83항에 있어서,
상기 하나 이상의 다중 시스트론 요소를 암호화하는 상기 뉴클레오타이드 서열은 서열 번호: 319에 제시된 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제80항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 키메라 항원 수용체(CAR)는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제85항에 있어서,
상기 제2 CAR은 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제85항 또는 제86항에 있어서,
상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제85항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제85항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 제2 CAR의 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제85항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은
(i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206 및 209 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207 및 210 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208 및 211 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227 및 230 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228 및 231 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223 및 226 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역;을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 (약) 228개의 아미노산 길이인 스페이서 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제89항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 세포외 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제86항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제86항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제86항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제103항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제103항 또는 제104항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제103항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제106항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS, 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제80항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제106항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은:
인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는
서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제106항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은:
인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는
서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 폴리뉴클레오타이드로서,
(i) 제1 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및
(ii) 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열을 포함하며,상기 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은: (a) 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 폴리뉴클레오타이드로서,
(i) GPRC5D 또는 BCMA 중 하나에 결합할 수 있는 제1 항원 결합 도메인을 포함하는 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열; 및
(ii) GPRC5D 또는 BCMA 중 다른 하나에 결합할 수 있는 제2 항원 결합 도메인을 포함하는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열;
을 포함하며,
상기 제1 CAR 및 제2 CAR 각각은: (a) 상기 제1 항원 결합 도메인 또는 상기 제2 항원 결합 도메인, (b) 스페이서, (c) 막관통 도메인 및 (d) 세포내 신호 전달 도메인 및 공자극 신호 전달 영역을 포함한 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상 및 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상은 동일한 아미노산 서열을 포함하고; 그리고
상기 제1 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)은 상기 제2 CAR에서 (b) 내지 (d) 중 동일한 하나 이상을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열(들)과 서열이 상이한 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제80항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 및 상기 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 중 적어도 하나는 코돈 분기된 것임을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 폴리뉴클레오타이드로서,
(i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하며,
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산은 상기 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고;
상기 제1 CAR은 GPRC5D에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -; 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서; 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인; 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제2 CAR은 BCMA에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -; 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서; 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인; 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열 대비 상기 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 폴리뉴클레오타이드로서,
(i) 제1 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제1 핵산 서열, (ii) 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 제2 핵산 서열 및 (iii) 다중 시스트론 요소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하며,
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 및 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산은 상기 다중 시스트론 요소에 의해 분리되고;
상기 제1 CAR은 BCMA에 결합하는 제1 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제1 항원 결합 도메인은 서열 번호: 310에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -; 서열 번호: 74에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서; 서열 번호: 56에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인; 및 서열 번호: 58에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 60에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제2 CAR은 GPRC5D에 결합하는 제2 항원 결합 도메인 - 선택적으로 상기 제2 항원 결합 도메인은 서열 번호: 311에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화됨 -; 서열 번호: 305에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 스페이서; 서열 번호: 307에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 막관통 도메인; 및 서열 번호: 309에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 세포내 신호 전달 도메인 및 서열 번호: 308에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 공자극 신호 전달 영역을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하고;
상기 제1 CAR을 암호화하는 상기 제1 핵산 서열은 상기 제2 CAR을 암호화하는 상기 제2 핵산 서열 대비 상기 폴리뉴클레오타이드의 5’ 말단을 항해 위치하는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제80항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열 및 상기 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 약 30 이내, 약 20 이내, 또는 약 10 이내의 연속적인 서열 상동성 염기쌍을 갖는 것을 특징으로 하는, 폴리뉴클레오타이드. - 제68항 내지 제117항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 벡터.
- 제118항에 있어서, 상기 벡터는 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는, 벡터.
- 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 포함하는, 세포.
- 제120항에 있어서,
상기 키메라 항원 수용체는 제1 키메라 수용체이고 상기 세포는 제2 키메라 항원 수용체를 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제68항 내지 제117항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는, 세포.
- 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포로서,
상기 폴리뉴클레오타이드는 제1 폴리뉴클레오타이드이고,
상기 세포는 제2 키메라 항원 수용체(CAR)를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 제2 폴리뉴클레오타이드를 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제121항 또는 제123항에 있어서,
상기 제2 키메라 항원 수용체(CAR)는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제124항에 있어서,
상기 제2 CAR은 스페이서, 막관통 도메인 및 세포내 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제124항 또는 제125항에 있어서,
상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제124항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 세포. - 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 (약) 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 또는 209에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 또는 210에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208 또는 211에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227 또는 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228 또는 231에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223 또는 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제134항에 있어서,
상기 단일 사슬 항체 단편은 단일 사슬 가변 단편(scFv)이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 제2 CAR의 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 제2 CAR의 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제137항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제128항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제125항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제125항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제142항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제42항 또는 제143항에 있어서,
상기 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 세포. - 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체를 포함하는, 조성물.
- 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 세포 또는 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 복수의 세포를 포함하는, 조성물.
- 제143항에 있어서,
상기 조성물은 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 조성물로서,
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포; 및
제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포를 포함하는, 조성물. - 제148항에 있어서,
상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 또는 제149항에 있어서,
상기 제2 CAR은 상기 제2 항원에 결합하는 세포외 항원 결합 도메인, 스페이서, 막관통 도메인, 및 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제149항 또는 제150항에 있어서,
상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제149항 내지 제151항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206, 또는 209에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207, 또는 210에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208 또는 211에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227 또는 230에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228 또는 231에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223 또는 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제156항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 제2 CAR의 VL 영역에 대한 아미노 말단인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 제2 CAR의 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제162항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제153항 내지 제163항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제150항 내지 제164항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제150항 내지 제165항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제150항 내지 제166항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하고, 상기 세포내 신호 전달 도메인은 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있고, T 세포 수용체(TCR) 성분이고/거나 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프(ITAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제167항에 있어서,
상기 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제150항 내지 제168항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제169항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제170항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제169항 내지 제171항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 복수의 제1 세포는 T 세포를 포함하고, 선택적으로 상기 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제173항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 복수의 제2 세포는 T 세포를 포함하고, 선택적으로 상기 T 세포는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하고, 선택적으로 CD4+ 대 CD8+ T 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제174항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물에서 상기 제1 복수의 세포 및 상기 제2 복수의 세포의 비율은 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1, 선택적으로 약 1:1인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제148항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물은 상기 제1 키메라 항원 수용체를 발현하는 상기 제1 복수의 세포 및 상기 제2 키메라 항원 수용체를 발현하는 상기 제2 복수의 세포를 약 1:3 내지 3:1, 선택적으로 약 1:2 내지 2:1, 선택적으로 약 1:1의 비율로 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 질병 또는 병태가 있는 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 제145항 내지 제176항 중 어느 한 항의 약학 조성물.
- 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 세포를 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
- 제145항 내지 제176항, 제233항 또는 제234항 중 어느 한 항의 조성물을 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
- 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포의 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 활성 성분으로 포함하는 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량을 포함하는 조성물을 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하는 데 사용하기 위한 약학 조성물.
- 질병 또는 장애가 있는 대상체에게 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 세포의 단위 용량을 포함하는 조성물 또는 제145항 내지 제180항, 제233항 또는 제234 중 어느 한 항의 조성물을 투여하는 것을 포함한, 치료 방법.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 세포의 용도.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 제145항 내지 제180항, 제233항 또는 제234항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 제120항 내지 제144항 중 어느 한 항의 세포의 용도.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 제145항 내지 제180항, 제233항 또는 제234항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
- 제181항 내지 제185항 중 어느 한 항의 방법 또는 용도에 있어서 또는 제177항 내지 제180항 중 어느 한 항의 용도를 위한 약학 조성물에 있어서,
상기 세포의 단위 용량은 약 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, 약 1.25 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, 약 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 4.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, 또는 약 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 내지 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는(각 수치 포함) 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 약학 조성물. - 제181항 내지 제186항 중 어느 한 항의 방법 또는 용도에 있어서 또는 제177항 내지 제180항 중 어느 한 항의 용도를 위한 약학 조성물에 있어서,
상기 세포의 단위 용량은 (약) 1.5 x 107개, (약) 2.5 x 107개, (약) 5.0 x 107개, (약) 7.5 x 107개, (약) 1.5 x 108개, (약) 2.25 x 108개, (약) 3.0 x 108개, (약) 4.5 x 108개, (약) 6.0 x 108개, (약) 8.0 x 108개 또는 (약) 1.2 x 109개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 약학 조성물. - 치료 방법으로서,
질병 또는 장애가 있는 대상체에게 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포의 제1 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 단계; 및
상기 대상체에게 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량을 포함하는 조성물을 투여하는 단계;
를 포함하는, 치료 방법. - 질병 또는 장애의 치료를 위해, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포의 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량을 포함하는 조성물의 용도.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포의 제1 단위 용량을 포함하는 조성물 및 제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량을 포함하는 조성물의 용도.
- 제188항 내지 제190항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 복수의 제1 세포의 제1 단위 용량 및 상기 복수의 제2 세포의 제2 단위 용량은 독립적으로 (약) 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.5 x 109개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.25 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 0.6 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 1.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 2.25 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 6.0 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 7.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포, (약) 2.5 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 1.2 x 109개 CAR 발현 T 세포, (약) 5.0 x 107개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 4.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 또는 (약) 1.5 x 108개 CAR 발현 T 세포 내지 (약) 3.0 x 108개의 CAR 발현 T 세포를 포함하는(각 수치 포함) 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도. - 제188항 내지 제190항 중 어느 한 항의 방법 또는 용도에 있어서 또는 제180항의 사용하기 위한 약학 조성물에 있어서,
상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제192항에 있어서,
상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제188항 내지 제193항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제188항 내지 제194항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제188항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206 및 209 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207 및 210 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208 및 211 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227 및 230 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228, 231 및 234 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223 및 226 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제197항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제199항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제200항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제201항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 상기 VL 영역에 대한 카르복시 말단인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제202항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제203항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 및 241 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제204항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제188항 내지 제205항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제206항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 CD4, CD28 또는 CD8 유래, 선택적으로 인간 CD4, 인간 CD28 또는 인간 CD8 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제207항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28 유래 막관통 도메인이거나 이를 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 막관통 도메인은 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 18에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제195항 내지 제208항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제209항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 도메인은 CD3-제타(CD3ζ) 사슬 또는 이의 기능적 변이체 또는 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD3 제타 사슬의 세포질 신호 전달 도메인 이거나 이를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제209항 또는 제210항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 20에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제209항 내지 제211항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 세포내 신호 전달 영역은 공자극 신호 전달 영역을 더 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제212항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 CD28, 인간 4-1BB 또는 인간 ICOS의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제212항 또는 제213에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제212항 또는 제213항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은:
인간 CD28의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는
서열 번호: 46에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 46에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제212항 내지 제214항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 공자극 신호 전달 영역은:
인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인; 및/또는
서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 19에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 질병 또는 장애는 GPRC5D의 발현과 관련된 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제217항에 있어서,
상기 질병 또는 장애는 B 세포 성숙 항원(BCMA)의 발현과 더 관련된 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제218항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 질병 또는 장애는 B 세포 관련 장애인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제219항 중 어느 한 항에 있어서,
BCMA와 관련된 상기 질병 또는 장애는 자가면역 질환 또는 장애인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제220항에 있어서,
상기 자가면역 질환 또는 장애는 전신 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus, SLE), 루푸스 신염, 염증성 장질환, 류마티스 관절염, ANCA 관련 혈관염, 특발성 혈소판 감소성 자반증(idiopathic thrombocytopenia purpura, ITP), 혈전성 혈소판 감소성 자반증(thrombotic thrombocytopenia purpura, TTP), 자가 면역성 혈소판 감소증, 샤가스병(Chagas’ disease), 그레이브병(Grave’s disease), 베게너 육아종증(Wegener’s granulomatosis), 다발성 결절성 동맥염(poly-arteritis nodosa), 쇼그렌 증후군(Sjogren’s syndrome), 심상성 천포창(pemphigus vulgaris), 피부 경화증(scleroderma), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 건선(psoriasis), IgA 신장병(nephropathy), IgM 다발성 신경병(polyneuropathies), 혈관염(vasculitis), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 레이노드 증후군(Reynaud’s syndrome), 항인지질 증후군(anti-phospholipid syndrome), 굿파스처 병(Goodpasture’s disease), Kawasaki disease(가와사키 병), 자가면역 용혈성 빈혈(autoimmune hemolytic anemia), 중증 근무력증(myasthenia gravis) 또는 진행성 사구체 신염(progressive glomerulonephritis)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제221항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 질병 또는 장애는 암인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제222항에 있어서,
상기 암은 GPRC5D 발현 암인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제222항 또는 제223항에 있어서,
상기 암은 형질 세포 악성 종양이고 상기 형질 세포 악성 종양은 다발성 골수종(MM) 또는 형질세포종(plasmacytoma)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제222항 내지 제224항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 암은 다발성 골수종(MM)인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제225항에 있어서,
상기 암은 재발성/불응성 다발성 골수종인 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제226항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 또는 재발하였거나; 또는
상기 방법은 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발한 치료를 위한 대상체를 선택하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제187항 및 제191항 내지 제227항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포의 단위 용량을 투여하기 전에, 상기 대상체는 앞서 상기 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받은 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제188항 내지 제228항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 세포의 제1 단위 용량 및 상기 세포의 제2 단위 용량을 투여하기 전에, 대상체는 앞서 상기 질병 또는 장애 치료를 위해 BCMA-표적화된 요법의 투여를 받은 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제228항 또는 제229항에 있어서,
상기 BCMA-표적화된 요법은 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포를 포함하는 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제228항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 BCMA-표적화된 요법의 투여 이후, 선택적으로 BCMA에 특이적으로 결합하는 CAR을 포함하는 T 세포의 투여 이후 불응성이거나 재발한 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제181항 내지 제231항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 이전의 투여 이후에 BCMA 항원 또는 에피토프 손실을 나타내는 다발성 골수종 세포, BCMA 하향조절 및/또는 BCMA-음성 종양 세포를 포함하는 것을 특징으로 하는, 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물. - 제146항 또는 제147항에 있어서,
상기 조성물은 복수의 세포를 포함하고, 상기 세포의 적어도 일부는 GPRC5D에 특이적으로 결합하는 상기 제1 CAR을 포함하고, 상기 세포의 일부는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 제2 CAR을 포함하고, 선택적으로 상기 제2 항원은 BCMA이고, 상기 세포의 일부는 상기 제1 CAR 및 상기 제2 CAR을 모두 포함하는 것을 특징으로 하는, 조성물. - 제233항에 있어서,
상기 제1 CAR을 발현하는 세포 대 상기 제2 CAR을 발현하는 세포의 비율은 (약) 1:3 내지 3:1, 선택적으로 1:2 내지 2:1, 선택적으로 (약) 1:1인 것을 특징으로 하는, 조성물. - 조합물로서,
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항의 키메라 항원 수용체이고/거나 제68항 내지 제79항 중 어느 한 항의 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 제1 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제1 세포; 및
제2 키메라 항원 수용체를 포함하는 복수의 제2 세포;
를 포함하는, 조합물. - 제235항에 있어서,
상기 제2 키메라 수용체는 다발성 골수종에 발현되거나 이와 관련된 제2 항원에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제236항에 있어서,
상기 제2 항원은 B 세포 성숙 항원(BCMA), CD38, CD138, CS-1, BAFF-R, TACI 및 FcRH5로 구성된 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제236항 또는 제237항에 있어서,
상기 제2 항원은 BCMA인 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제235항 내지 제238항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 및/또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항에 있어서,
상기 VH 영역은 서열 번호: 189, 191, 193, 195 또는 197에 제시된 VH 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고; 상기 VL 영역은 서열 번호: 190, 192, 194, 196 또는 198에 제시된 VL 영역 아미노산 서열 내에 함유된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제235항 내지 제240항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR은:
(1) BCMA에 특이적으로 결합하는 세포외 항원 결합 도메인,
여기서 상기 세포외 항원 결합 도메인은:
(i) (a) 서열 번호: 199, 202, 206 또는 209에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-H1); (b) 서열 번호: 200, 203, 207 또는 210에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-H2); 및 (c) 서열 번호: 201, 204, 205, 208 또는 211에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-H3)을 포함하는 가변 중쇄(VH) 영역; 및
(ii) (a) 서열 번호: 218, 221, 224, 227, 230, 233 또는 235에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 1(CDR-L1); (b) 서열 번호: 219, 222, 225, 228 또는 231에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 2(CDR-L2); 및 (c) 서열 번호: 220, 223 또는 226에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 상보성 결정 영역 3(CDR-L3)을 포함하는 가변 경쇄(VL) 영역을 포함함;
(2) 스페이서, 선택적으로 IgG4/2 키메라 힌지 또는 변형된 IgG4 힌지; IgG2/4 키메라 CH2 영역; 및 IgG4 CH3 영역을 포함하고, 선택적으로 약 228개의 아미노산 길이인 스페이서, 및/또는 서열 번호: 17에 제시된 스페이서;
(3) 막관통 도메인; 및
(4) 세포내 신호 전달 영역;
을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제241항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 201의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 218, 219 및 220의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 202, 203 및 204의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 221, 222 및 223의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 199, 200 및 205의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 224, 225 및 226의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 206, 207 및 208의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 227, 228 및 229의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제242항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제240항 내지 제243항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 189에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98%, (약) 99% 또는 (약) 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 190에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 191에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 192에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 193에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 194에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 195에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 196에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 (a) 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열 또는 (b) 서열 번호: 197에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열 및 서열 번호: 198에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제244항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 189 및 서열 번호: 190에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 191 및 서열 번호: 192에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 193 및 서열 번호: 194에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 서열 번호: 195 및 서열 번호: 196에 제시된 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제245항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제246항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 237, 238, 239, 240 또는 241에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제239항 내지 제247항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제2 CAR의 VH 영역은 각각 서열 번호: 209, 210 및 211의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3을 포함하고, 상기 제2 CAR의 VL 영역은 각각 서열 번호: 230, 231 및 232의 아미노산 서열을 포함하는 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3을 포함하고/거나;
상기 제2 CAR의 VH 영역 및 VL 영역은 각각 서열 번호: 197 및 서열 번호: 198에 제시된 아미노산 서열을 포함하고/거나;
상기 항원 결합 도메인은 서열 번호: 241에 제시된 아미노산 서열 또는 서열 번호: 241에 제시된 서열에 대해 적어도 (약) 90%, (약) 91%, (약) 92%, (약) 93%, (약) 94%, (약) 95%, (약) 96%, (약) 97%, (약) 98% 또는 (약) 99%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제235항 내지 제248항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제1 키메라 항원 수용체 및 상기 제2 키메라 항원 수용체 중 적어도 하나는 4-1BB 또는 이의 신호 전달 부분, 선택적으로 인간 4-1BB의 세포내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포내 신호 전달 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, 조합물. - 제235항 내지 제249항 중 어느 한 항의 조합물과 사용 설명을 포함하며, 선택적으로 상기 설명은 상기 제1 및 제2 복수의 세포의 단위 용량을, 선택적으로 제174항 내지 제216항 중 어느 한 항의 방법 또는 용도 또는 사용하기 위한 약학 조성물에 따라, 투여하기 위한 것인, 키트.
- 제235항 내지 제249항 중 어느 한 항의 조합물 또는 제250항의 키트를 포함하는 제조품.
- 제251항에 있어서,
상기 복수의 제1 세포의 단위 용량을 포함하는 제1 용기 및 상기 복수의 제2 세포의 단위 용량을 포함하는 제2 용기를 포함하고, 선택적으로 상기 제1 및 제2 용기는 독립적으로 바이알(vial) 또는 백(bag)인 것인, 제조품. - 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 장애는 암인, 제235항 내지 제249항 중 어느 한 항의 조합물의 용도.
- 질병 또는 장애의 치료를 위한, 선택적으로 상기 질병 또는 병태는 암인, 약제의 제조를 위한 제235항 내지 제249항 중 어느 한 항의 조합물의 용도.
- 제235항 내지 제249항 중 어느 한 항의 조합물을 활성 성분으로 함유한, 질병 또는 장애, 선택적으로 암을 치료하기 위한 약학 조성물.
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