RS62870B1 - Himerni antigenski receptori sa ciljanim delovanjem na receptore spregnute sa g-proteinom i njihove upotrebe - Google Patents

Himerni antigenski receptori sa ciljanim delovanjem na receptore spregnute sa g-proteinom i njihove upotrebe

Info

Publication number
RS62870B1
RS62870B1 RS20211596A RSP20211596A RS62870B1 RS 62870 B1 RS62870 B1 RS 62870B1 RS 20211596 A RS20211596 A RS 20211596A RS P20211596 A RSP20211596 A RS P20211596A RS 62870 B1 RS62870 B1 RS 62870B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
set forth
sequence set
amino acids
variable region
Prior art date
Application number
RS20211596A
Other languages
English (en)
Inventor
Renier J Brentjens
Eric L Smith
Cheng Liu
Hong Liu
Original Assignee
Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Eureka Therapeutics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Memorial Sloan Kettering Cancer Center, Eureka Therapeutics Inc filed Critical Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Publication of RS62870B1 publication Critical patent/RS62870B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001129—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/10—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K40/11—T-cells, e.g. tumour infiltrating lymphocytes [TIL] or regulatory T [Treg] cells; Lymphokine-activated killer [LAK] cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/30—Cellular immunotherapy characterised by the recombinant expression of specific molecules in the cells of the immune system
    • A61K40/31—Chimeric antigen receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4202—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K40/421—Immunoglobulin superfamily
    • A61K40/4211—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K40/00—Cellular immunotherapy
    • A61K40/40—Cellular immunotherapy characterised by antigens that are targeted or presented by cells of the immune system
    • A61K40/41—Vertebrate antigens
    • A61K40/42—Cancer antigens
    • A61K40/4256—Tumor associated carbohydrates
    • A61K40/4257—Mucins, e.g. MUC-1
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70517—CD8
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/70521—CD28, CD152
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
    • C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K40/00 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
    • C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
    • C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
    • C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2740/13043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
    • C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
    • C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis pronalaska
OBLAST TEHNIKE NA KOJU SE PRONALAZAK ODNOSI
[0001] Predmet opisan pronalaskom obezbeđuje postupke i kompozicije za lečenje kancera. Odnosi se na himerne antigenske receptore (CARs, od engl. chimeric antigen receptors) koji specifično deluju na receptore spregnute sa G-proteinom (npr. na člana D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D)), imunoreaktivne ćelije koje sadrže takve CAR i postupke upotrebe takvih ćelija za lečenje kancera (npr. multiplog mijeloma).
POZNATO STANJE TEHNIKE
[0002] Ćelijska imunoterapija je terapija sa kurativnim potencijalom u lečenju kancera. T-ćelije i druge imunske ćelije mogu biti modifikovane tako da ciljano deluju na tumorske antigene, putem uvođenja genetičkog materijala koji kodira veštačke ili sintetičke receptore za antigen označene kao himerni antigenski receptori (CAR), a koji su specifični za odabrane antigene. Ciljana T-ćelijska terapija upotrebom CAR nedavno je pokazala klinički uspeh u lečenju hematoloških maligniteta.
<9>[0003] Multipli mijelom (MM) je drugi najčešći hematološki malignitet. Približno 25% pacijenata je sa visokorizičnim citogenetičkim promenama koje ukazuju na medijanu preživljavanje manju od 2 godine.<10,11>Iako su nedavno učinjeni iskoraci, bez obzira na citogenetiku, bolest se i dalje smatra neizlečivom izvan efekta alogenog transplantata u imunoterapijskoj transplantaciji tipa “kalem protiv mijeloma” (GvM). Ipak, alogeni transplantati su ograničeni činjenicom da često dolazi do njihovog neprihvatanja, kao i da primenu transplantata prate visok morbiditet i mortalitet.<12>Slično GvM efektu, potencijalno lekovit efekat T-ćelija može biti postignut uz minimalnu toksičnost putem autologne adoptivne terapije T-ćelijama.
[0004] Mijelom može biti idealna bolest za ispitivanje adoptivne T-ćelijske terapije. Najpre, kao što je prethodno naznačeno, alogeni transplantati ukazuju da T-ćelije mogu predstavljati kurativni tretman, čak i uz minimalnu ili nikakvu istovremenu hemoterapiju, kao što je to slučaj nakon transplantacije sa transplantatima koji nisu mijeloablativni ili nakon post-transplantacionih infuzija donorskih limfocita. Drugo, kondiciona hemoterapija poboljšava efikasnost adoptivne T-ćelijske terapije<5,13>kao takve, verovatno putem mehanizam deplecije regulatornih T-ćelija (Treg), što ukazuje da bi period neposredno nakon autologne transplantacije mogao biti optimalno vreme za primenu T-ćelija, pri čemu je mijelom jedna od nekoliko bolesti gde je autologna transplantacija matičnih ćelija standard nege. Treće, imunomodulatorni lek lenalidomid može poboljšati terapiju zasnovanu na CAR, kao što je pokazano na miševima,<14>zbog č ega se lenalidomid obično i upotrebljava za lečenje MM. Četvrto, adoptivna T-ćelijska terapija najbolje funkcioniše kod bolesti u kojima preovlađuju promene u kosnoj srži kao što je ALL,<7,8>u poređenju sa solidnim tumorima ili ekstramedularnim CLL.<5>Slično kao ALL, mijelom je bolest kosne srži.
[0005] Iako postoje raznovrsni razlozi zbog kojih bi se moglo očekivati da adoptivna T-ćelijska terapija može dobro funkcionisati u MM, proširenje adoptivne T-ćelijske terapije na mijelom takođe postavlja jedinstvene izazove. Za razliku od drugih B-ćelijskih maligniteta, ekspresija CD19 se uočava kod samo 2% pacijenata sa mijelomom.<15>Štaviše, za razliku od CD19, svi uobičajeni vanćelijski imunofenotipski markeri u mijelomu (CD138, CD38 i CD56) istovremeno se eksprimiraju i na drugim suštinski bitnim tipovima ć elija, tako da možemo predvideti da bi CAR za bilo koji od ovih ciljanih molekula doveo do neprihvatljive toksičnosti tipa „izvan tumora, na ciljnom mestu”<7>koja bi mogla biti smrtonosna, čak i u slučaju ciljnih molekula za koje se antitela dobro tolerišu, kao što je to bio slučaj sa CAR koji ciljano deluju na HER2.<16>Da bismo odgovorili na ove izazove, identifikovali smo vanćelijske ciljne molekule za koje se pretpostavlja da su visoko eksprimirani u MM i da su ograničene, suštinski normalne tkivne ekspresije, a koji bi mogli biti optimalni ciljni molekuli za adoptivnu T-ćelijsku terapiju u MM. Shodno navedenom, postoje potrebe za novim terapijskim strategijama za dizajniranje CAR koji ciljano deluju na antigene koji su visoko eksprimirani u MM ćelijama i ograničene su ekspresije u normalnim tkivima, radi lečenja multiplog mijeloma, što su strategije koje su u stanju da indukuju potentnu eliminaciju tumora uz minimalnu toksičnost i imunogenost. WO2014/191128 opisuje jednolančani himerni antigenski receptor koji sadrži najmanje jedan vanćelijski domen koji vezuje ligand, transmembranski domen i jedan domen za transdukciju signala, pri čemu navedeni vanćelijski domen koji vezuje ligand sadrži scFV izveden iz specifičnog anti-CD 19 monoklonskog antitela 4G7. Jednom kada se transdukuje u T-ćeliju, na primer, upotrebom retrovirusne ili lentivirusne transdukcije, ovaj CAR doprinosi prepoznavanju antigena CD19 koji je prisutan na površini malignih B-ćelija uključenih u limfom ili leukemiju.
IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA
[0006] Predmet opisan pronalaskom generalno obezbeđuje himerne antigenske receptore (CAR) koji specifično deluju na receptore spregnute sa G-proteinom, imunoreaktivne ćelije koje sadrže takve CAR i upotrebe ovih CAR i imunoreaktivnih ćelija za lečenje multiplog mijeloma. Predmet opisan pronalaskom obezbeđuje CAR. U jednom neograničavajućem primeru, CAR se sastoji od vanćelijskog domena koji vezuje antigen, transmembranskog domena i unutarćelijskog domena, pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom.
[0007] Prema jednom aspektu, obezbeđen je himerni antigenski receptor (CAR) koji se sastoji od vanćelijskog domena za vezivanje antigena koji se vezuje za člana D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D), transmembranskog domena i unutarćelijskog domena, pri čemu vanćelijski domen koji vezuje antigen obuhvata:
(a) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:208, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:209 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:210; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:211, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:212 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:213;
(b) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:214, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:215 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:216; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:217, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:218 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:219;
(c) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:220, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:221 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:222; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:223, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:224 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:225; ili (d) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:226, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:227 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:228; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:229, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:230 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:231.
[0008] U određenim primerima izvođenja, receptor spregnut sa G-proteinom je član D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D). U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se specifično vezuje za GPRC5D sa afinitetom vezivanja (KD) od oko 1 × 10<-9>M do oko 3 × 10<-6>M. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je jednolančani varijabilni fragment (scFv). U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je mišji scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je humani scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je Fab, koji je opciono umrežen. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je F(ab)2. U određenim primerima izvođenja, bilo koji od prethodno navedenih molekula može biti sadržan u fuzionom proteinu sa heterolognom sekvencom, da bi se obrazovao vanćelijski domen koji vezuje antigen.
[0009] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86 %, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386.
[0010] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86 %, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387.
[0011] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati (a) varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386; i (b) varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387.
[0012] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0013] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 378, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0014] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati (a) varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO:1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386, i njihovih konzervativnih modifikacija i (b) varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0015] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od: SEQ ID NO:1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386. Vanćelijski domen koji vezuje antigen može sadržavati varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od:
SEQ ID NO:2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387. Vanćelijski domen koji vezuje antigen može sadržavati varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati (a) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:1 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:2; (b) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:5 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:6; (c) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:9 i varijabilni region lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:10; (d) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:13 i varijabilni region lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:14; (e) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:17 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:18; (f) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:21 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:22; (g) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:25 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:26; (h) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:29 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:30; (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:33 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:34; (j) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:37 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:38; (k) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:41 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:42; (1) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:45 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:46; (m) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:49 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:50; (n) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54; (o) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58; (p) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62; (q) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66; (r) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70; (s) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:73 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:74; (t) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:77 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:78; (u) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:81 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:82; (v) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:85 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:86; (w) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:89 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:90; (x) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:93 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:94, (y) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:302 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:303; (z) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:314 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:315; (aa) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:326 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:327; (ab) varijabilni region teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:338 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:339; (ac) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:350 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:351; (ad) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:362 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:363; (ae) varijabilni region teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:374 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:375; ili (af) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:386 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:387. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53; i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57; i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61; i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62. U drugom primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65; i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66. U još jednom primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69; i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70.
[0016] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen obuhvata i navedene teške i lake lance, opciono sa linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. Na primer, u određenim neograničavajućim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži (i) varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i (ii) varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca.
[0017] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati (a) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 i 390; i (b) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 i 393.
[0018] CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca može sadržavati aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 i 389, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (b) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 i 392, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0019] CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca može sadržavati aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 i 388, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (b) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 i 391, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0020] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: (a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 i 388; (b) CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 i 389; (c) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 i 390; (d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 i 391; (e) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 i 392; i (f) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 i 393.
[0021] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati (a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:124 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 125 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 126 ili njegove konzervativne modifikacije; (b) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 130 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 131 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 132 ili njegove konzervativne modifikacije; (c) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 136 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 137 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 138 ili njegove konzervativne modifikacije; (d) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 142 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 143 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 144 ili njegove konzervativne modifikacije; (e) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 148 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 149 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 150 ili njegove konzervativne modifikacije; (f) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 154 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 155 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 156 ili njegove konzervativne modifikacije; (g) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 160 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 161 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 162 ili njegove konzervativne modifikacije; (h) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 166 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 167 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 168 ili njegove konzervativne modifikacije; (i) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 172 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 173 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 174 ili njegove konzervativne modifikacije; (j) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 178 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 179 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 180 ili njegove konzervativne modifikacije; (k) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 184 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 185 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 186 ili njegove konzervativne modifikacije; (1) CDR1 varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 190 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 191 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 192 ili njegove konzervativne modifikacije; (m) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 196 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 197 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 198 ili njegove konzervativne modifikacije; (n) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 202 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 203 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 204 ili njegove konzervativne modifikacije; (o) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 208 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 209 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 210 ili njegove konzervativne modifikacije; (p) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 214 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 215 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 216 ili njegove konzervativne modifikacije; (q) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 220 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 221 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 222 ili njegove konzervativne modifikacije; (r) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 226 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 227 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 228 ili njegove konzervativne modifikacije; (s) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 232 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 233 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 234 ili njegove konzervativne modifikacije; (t) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 238 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 239 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 240 ili njegove konzervativne modifikacije; (u) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 244 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 245 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 246 ili njegove konzervativne modifikacije; (v) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 250 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 251 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 252 ili njegove konzervativne modifikacije; (w) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 256 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 257 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 258 ili njegove konzervativne modifikacije; (x) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 262 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 263 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 264 ili njegove konzervativne modifikacije; (y) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 304 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 305 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 306 ili njegove konzervativne modifikacije; (z) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 316 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 317 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 318 ili njegove konzervativne modifikacije; (aa) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 328 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 329 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 330 ili njegove konzervativne modifikacije; (ab) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 340 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 341 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 342 ili njegove konzervativne modifikacije; (ac) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 352 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 353 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 354 ili njegove konzervativne modifikacije; (ad) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 364 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 365 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 366 ili njegove konzervativne modifikacije; (ae) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 376 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 377 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 378 ili njegove konzervativne modifikacije; ili (af) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 388 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 389 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 390 ili njegove konzervativne modifikacije. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 202; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 203; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 204. Vanćelijski domen koji vezuje antigen može sadržavati: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 208; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 209; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 210. U drugom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 214; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 215; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 216. U još jednom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 220; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 221; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 222. U drugom primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 226; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 227; i CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 228.
[0022] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: (a) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 127 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:129 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 130 ili njegove konzervativne modifikacije; (b) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 133 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:134 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži SEQ ID NO: 135 ili njegove konzervativne modifikacije; (c) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 139 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:140 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 141 ili njegove konzervativne modifikacije; (d) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 145 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži SEQ ID NO: 146 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 147 ili njegove konzervativne modifikacije; (e) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 151 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:152 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 153 ili njegove konzervativne modifikacije; (f) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 157 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:158 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 159 ili njegove konzervativne modifikacije; (g) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 163 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:164 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 165 ili njegove konzervativne modifikacije; (h) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 169 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:170 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži SEQ ID NO: 171 ili njegove konzervativne modifikacije; (i) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 175 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:176 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 177 ili njegove konzervativne modifikacije; (j) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 181 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:182 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 183 ili njegove konzervativne modifikacije; (k) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 187 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:188 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 189 ili njegove konzervativne modifikacije; (1) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 193 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:194 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 195 ili njegove konzervativne modifikacije; (m) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 199 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:200 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 201 ili njegove konzervativne modifikacije; (n) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 205 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 207 ili njegove konzervativne modifikacije; (o) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 211 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 213 ili njegove konzervativne modifikacije; (p) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 217 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 219 ili njegove konzervativne modifikacije; (q) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 223 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 225 ili njegove konzervativne modifikacije; (r) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 229 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 231 ili njegove konzervativne modifikacije; (s) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 235 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:236 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 237 ili njegove konzervativne modifikacije; (t) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 241 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:242 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 243 ili njegove konzervativne modifikacije; (u) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 247 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:248 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 249 ili njegove konzervativne modifikacije; (v) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 253 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:254 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 255 ili njegove konzervativne modifikacije; (w) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 259 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:260 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 261 ili njegove konzervativne modifikacije; (x) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 265 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:266 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 267 ili njegove konzervativne modifikacije; (i) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 307 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 308 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 309 ili njegove konzervativne modifikacije; (z) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 319 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:320 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 321 ili njegove konzervativne modifikacije; (aa) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 331 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 332 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 333 ili njegove konzervativne modifikacije; (ab) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 343 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:344 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 345 ili njegove konzervativne modifikacije; (ac) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 355 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 356 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 357 ili njegove konzervativne modifikacije; (ad) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 367 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 368 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 369 ili njegove konzervativne modifikacije; (ae) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 379 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 380 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 381 ili njegove konzervativne modifikacije; ili (af) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 391 ili njegove konzervativne modifikacije; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 392 ili njegove konzervativne modifikacije; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 393 ili njegove konzervativne modifikacije. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 205; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 207. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 211; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 213. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom
1
navedenom u SEQ ID NO: 217; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 219. U drugom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 223; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 225. U još jednom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 229; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 231.
[0023] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: (a) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 124; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 125; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 126; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 127; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:128; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 129; (b) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 130; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 131; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 132; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 133; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:134; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 135; (c) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 136; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 137; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 138; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 139; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:140; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 141; (d) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 142; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 143; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 144; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 145; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:146; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 147; (e) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 148; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 149; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 150; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 151; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:152; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 153; (f) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 154; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 155; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 156; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 157; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:158; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 159; (g) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 160; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 161; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 162; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 163; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:164; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 165; (h) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 166; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 167; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 168; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadržiaminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 169; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:170; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 171; (i) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 172; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 173; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 174; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 175; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:176; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 177; (j) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 178; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 179; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 180; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 181; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:182; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 183; (k) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 184; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 185; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 186; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 187; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:188; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 189; (1) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 190; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 191; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 192; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 193; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:194; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 195; (m) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 196; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 197; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 198; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 199; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:200; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 201; (n) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 202; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 203; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 204; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 205; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 207; (o) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 208; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 209; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 210; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 211; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 213; (p) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 214; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koji sadrži aminokiselinekoji imaju sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 215; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 216; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 217; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 219; (q) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 220; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 221; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 222; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 223; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 225; (r) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 226; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 227; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 228; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 229; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 231; (s) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 232; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 233; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 234; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 235; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:236; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 237; (t) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 238; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 239; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 240; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 241; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:242; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 243; (u) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 244; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 245; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 246; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 247; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:248; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 249; (v) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 250; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 251; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 252; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 253; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:254; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 255; (w) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 256; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 257; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 258; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 259; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:260; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiseline koje imajusekvenca navedena u SEQ ID NO: 261; (x) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 262; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 263; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 264; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 265; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:266; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 267; (y) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 304; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 305; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 306; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 307; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:308; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 309; (z) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 316; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 317; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 318; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 319; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:320; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 321; (aa) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 328; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 329; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 330; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 331; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:332; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 333; (ab) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 340; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 341; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 342; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 343; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:344; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 345; (ac) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 352; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 353; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 354; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 355; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:356; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 357; (ad) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 364; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 365; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 366; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 367; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:368; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 369; (ae) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 376; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 377; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 378; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koji sadrži aminokiseline koje imajusekvenca navedena u SEQ ID NO: 379; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:380; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 381; ili (af) CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 388; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 389; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u
1
SEQ ID NO: 390; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 391; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:392; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 393. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može sadržavati: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 202; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 203; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 204; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 205; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 207. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 208; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 209; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 210; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 211; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 213. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 214; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 215; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 216; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 217; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 219. U drugom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 220; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 221; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 222; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 223; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 225. U još jednom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži: CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 226; CDR2 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 227; CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 228; CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 229; CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230; i CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 231. Humani scFv može sadržavati varijabilni region teškog lanca, varijabilni region lakog lanca, linkerski peptid između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca i His-tag i HA-tag. Aminokiselinska sekvenca His-taga i HA-taga može sadržavati aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO: 275, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO: 275]
[0024] Nukleotidna sekvenca koja kodira SEQ ID NO: 275 je SEQ ID NO: 276, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0025] GPRC5D koji je ovde opisan, može sadržavati aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za jedan, dva, tri ili četiri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona u N-terminalnom regionu koga čine aminokiseline 1-27 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona u ECL1 regionu koga čine aminokiseline 85-93 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona u ECL2 regionu koga čine aminokiseline 145-167 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona u ECL3 regionu koga čine aminokiseline 226-239 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 16-23 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 15-23 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga čine aminokiseline 16-25 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 10-17 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga čine aminokiseline 5-17 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga čine aminokiseline 85-95 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 157-167 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga čine aminokiseline 230-237 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 229-237 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga č ine aminokiseline 230-243 iz SEQ ID NO:97. Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za epitopski region koga čine aminokiseline 227-237 iz SEQ ID NO:97.
[0026] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 16-25 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona koga čine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 229-237 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 208, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 209, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 210, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 211, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 212 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 213.
[0027] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 5-17 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona koga čine aminokiseline 85-95 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 214, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 215, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 216, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 217, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 218 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 219.
[0028] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za jedan ili dva epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 15-23 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 230-243 SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 220, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 221, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 222, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 223, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 224 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 225.
[0029] Vanćelijski domen za vezivanje antigena koji je ovde opisan, može se vezivati za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 10-17 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona koga čine aminokiseline 157-167 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 227-237 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 226, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 227, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 228, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 229, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 230 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 231.
[0030] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, vanćelijski domen koji vezuje antigen je kovalentno spojen sa transmembranskim domenom. Vanćelijski domen koji vezuje antigen može sadržavati signalni peptid koji je kovalentno spojen sa 5' krajem vanćelijskog domena koji vezuje antigen. U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen CAR sadrži polipeptid CD8, polipeptid CD28, polipeptid CD3ζ, polipeptid CD4, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid CTLA-4, polipeptid PD-1, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju. U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen sadrži polipeptid CD8. U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen sadrži polipeptid CD28.
[0031] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3ζ. U određenim primerima izvođenja, unutarćelijski domen dalje sadrži najmanje jedan signalni region. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan signalni region sadrži polipeptid CD28, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid DAP-10, polipeptid PD-1, polipeptid CTLA-4, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju. U određenim primerima izvođenja, signalni region je ko-stimulatorni signalni region. U određenim primerima izvođenja, ko-stimulatorni signalni region obuhvata polipeptid CD28, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid DAP-10 polipeptid ili njihovu kombinaciju. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan ko-stimulatorni signalni region sadrži polipeptid CD28. U određenim primerima izvođenja,
1
najmanje jedan ko-stimulatorni signalni region sadrži polipeptid 4-1BB. U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen sadrži polipeptid CD28, unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3ζ, a ko-stimulatorni signalni domen sadrži polipeptid CD28.
[0032] CAR može biti rekombinantno eksprimiran. CAR može biti eksprimiran sa vektora. Vektor može biti γretrovirusni rektor.
[0033] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje imunoreaktivne ćelije koje sadrže prethodno opisane CAR. U određenim primerima izvođenja, izolovana imunoreaktivna ćelija se transdukuje sa CAR, na primer, CAR se konstitutivno eksprimira na površini imunoreaktivne ćelije. U određenim primerima izvođenja, izolovana imunoreaktivna ćelija se dalje transdukuje sa najmanje jednim ko-stimulatornim ligandom tako da imunoreaktivna ćelija eksprimira najmanje jedan ko-stimulatorni ligand. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan kostimulatorni ligand je izabran iz grupe koja se sastoji od 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14 i njihovih kombinacija. U određenim primerima izvođenja, izolovana imunoreaktivna ćelija se dalje transdukuje sa najmanje jednim citokinom tako da imunoreaktivna ćelija izlučuje najmanje jedan citokin. U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan citokin je izabran iz grupe koja se sastoji od IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21 i njihovih kombinacija. U pojedinim primerima izvođenja, izolovana imunoreaktivna ćelija je izabrana iz grupe koja se sastoji od T-ćelije, ćelije prirodnog ubice (NK), citotoksičnog T limfocita (CTL), regulatorne T-ćelije, humane embrionalne matične ćelije, limfoidne progenitorske ćelije, prekursorske ć elije T-ćelija i pluripotentne matične ćelije iz koje se mogu diferencirati limfoidne ćelije. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivna ćelija je T-ćelija.
[0034] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje molekule nukleinskih kiselina koji kodiraju ovde opisane CAR, vektore koji sadrže molekule nukleinskih kiselina i ćelije domaćine koje eksprimiraju takve molekule nukleinskih kiselina. U određenim primerima izvođenja, molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:397. U određenim primerima izvođenja, molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:398. U određenim primerima izvođenja, molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:399. U određenim primerima izvođenja, molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:400. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:401. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:402. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 403. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 406. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 407. Molekul nukleinske kiseline koji je ovde opisan, može sadržavati nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 408. U određenim primerima izvođenja, vektor je γ-retrovirusni vektor. U određenim primerima izvođenja, ćelija domaćin je T-ćelija.
[0035] Štaviše, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke upotrebe prethodno opisane imunoreaktivne ćelije za smanjenje opterećenja tumorom kod subjekta. Na primer, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke za lečenje i smanjenja opterećenja tumorom kod subjekta, pri čemu postupak obuhvata primenu efektivne količine imunoreaktivne ćelije koja je ovde opisana subjektu, čime se indukuje smrt tumorske ćelije kod subjekta. Postupak može smanjiti broj tumorskih ćelija. Postupak može smanjiti veličinu tumora. Postupak može eliminisati tumor kod subjekta. Subjekt može biti čovek. Imunoreaktivna ćelija može biti T-ćelija. Tumor može biti multipli mijelom ili Valdenstromova makroglobulinemija. Tumor može biti multipli mijelom.
[0036] Dodatno, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke upotrebe prethodno opisane imunoreaktivne ćelije za povećanje ili produžavanje preživljavanja subjekta sa neoplazijom. Na primer, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke za povećanje ili produžavanje preživljavanja subjekta sa neoplazijom, pri čemu postupak obuhvata primenu efektivne količine imunoreaktivne ćelije koja je ovde opisana subjektu, čime se povećava ili produžava preživljavanje subjekta. Neoplazija može biti multipli mijelom ili Valdenstromova makroglobulinemija. Neoplazija može biti multipli mijelom. Postupak može smanjiti ili eliminisati opterećenje tumorom kod subjekta.
[0037] Predmet koji je ovde opisan takođe obezbeđuje postupke za proizvodnju imunoreaktivne ćelije koja se vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom. U jednom neograničavajućem primeru, postupak obuhvata uvođenje u imunoreaktivnu ćeliju sekvence nukleinske kiseline koja kodira himerni antigenski receptor (CAR), koji se sastoji od vanćelijskog domena koji vezuje antigen, transmembranskog domena i unutarćelijskog domena, pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom. Receptor spregnut sa G-proteinom može biti član D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D). Vanćelijski domen koji vezuje antigen može biti scFv.
[0038] Prema drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže efektivnu količinu imunoreaktivnih ćelija koje su ovde opisane, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. U određenim primerima izvođenja, farmaceutske kompozicije su za lečenje neoplazije. Neoplazija može biti multipli mijelom ili Valdenstromova makroglobulinemija. Neoplazija može biti multipli mijelom.
[0039] Prema drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje komplete za lečenje neoplazije, koji sadrže imunoreaktivne ćelije koje su ovde opisane. U određenim primerima izvođenja, komplet dalje uključuje pisana uputstva za upotrebu imunoreaktivne ćelije za lečenje neoplazije. Neoplazija može biti multipli mijelom ili Valdenstromova makroglobulinemija. Neoplazija može biti multipli mijelom.
1
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0040] Detaljan opis pronalaska koji sledi, dat je u vidu primera, ali nije predviđeno da ograničava pronalazak na specifične primere izvođenja koji su opisani, već se podrazumeva da je u vezi sa priloženim nacrtom.
Slika 1 prikazuje himerni antigenski receptor koji ciljano deluje na receptor spregnut sa G-proteinom, u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 2 prikazuje ekspresiju humanog GPRC5D u normalnim tkivima i humanim kancerskim ćelijskim linijama. Slika 3 prikazuje ekspresiju GPRC5D CAR koji je ovde opisan na humanim T-ćelijama.
Slika 4 prikazuje aktivnost ubijanja 3T3 ćelija koje prekomerno eksprimiraju GPRC5D za GPRC5D koji je ovde opisan.
Slika 5 prikazuje aktivnost ubijanja humane ćelijske linije multiplog mijeloma za GPRC5D koji je ovde opisan. Slika 6 prikazuje himerni antigenski receptor sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 7 prikazuje molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 8 prikazuje molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 9 prikazuje molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 10 prikazuje citotoksičnost T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D, na humane ćelijske linije multiplog mijeloma.
Slika 11 prikazuje indukciju sekrecije citokina u T-ćelijama sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D.
Slika 12 prikazuje anti-tumorsku aktivnost za T-ćelije sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D.
Slike 13A i 13B prikazuju aktivnost ubijanja za T-ćelije sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D. (A) Prikazuje procenat GFP<+>tumorske linije u vremenu 0. (B) Pokazuje procenat ubijanja GFP<+>tumorske linije u vremenu od 36 sati.
Slika 14 ilustruje CLIPS tehnologiju. CLIPS reakcija se odvija između bromo grupa CLIPS mreže i tiolskih bočnih lanaca cisteina. Reakcija je brza i specifična u blagim uslovima. Upotrebom ove elegantne hemije, nativne proteinske sekvence se transformišu u CLIPS konstrukte sa nizom struktura. S leva na desno: dve različite pojedinačne T2 petlje, T3 dvostruka petlja, konjugovane T2+T3 petlje, stabilizovana struktura beta pločice i stabilizovani alfa heliks (Timmerman i saradnici, J. Mol. Recognit.2007; 20: 283-29).
Slika 15 ilustruje skrining biblioteke kombinatornih klipova. Ciljni protein (levo) koji sadrži diskontinualni konformacioni epitop, konvertuje se u matričnu biblioteku (u sredini). Kombinatorni peptidi se sintetišu na mini kartici koja je predmetn patentne zaštite i hemijski se konvertuju u prostorno definisane CLIPS konstrukte (desno).
Slika 16 prikazuje CLIPSTM konstrukt sa T3 petljom.
Slike 17A-17D ilustruju tehnologiju toplotnih mapa. (A) Tabela kombinovanih peptida, sa dve podsekvence naznačene kao "Petlja 1" i "Petlja 2". (B) Podaci iz A prikazani kao matrica. (C) Traka indikacije boja prikazanih u toplotnoj mapi. (D) Vizualizacija toplotne mape za podatke iz A.
Slika 18 prikazuje profile intenziteta snimljene za ET150-2. Linije su povučene od početnog ostatka do krajnjeg ostatka jednog peptida na visini na kojoj je zabeležen signal za taj peptid.
Slika 19 prikazuje analizu toplotne mape za podatake snimljene za ET150-5 u visoko strogim uslovima. Slika 20 prikazuje profile intenziteta snimljene za ET150-18.
Slika 21 prikazuje profile intenziteta snimljene za ET150-8.
Slika 22 prikazuje šematski crtež GPCR koji sadrži sedam transmembranskih heliksa (TM) i 3 vanćelijska regiona (ECL). Sa obojenim strelicama su prikazana mesta vezivanja za svako antitelo.
Slika 23 prikazuje analizu tačkastog dijagrama za sve podatke snimljene za svaki uzorak. Na dijagonali je raspodela statističkih podataka.
Slika 24 prikazuje FACS analizu sa anti-GPRC5D antitelom.
Slika 25 prikazuje FACS analizu sa anti-GPRC5D antitelom.
Slika 26 prikazuje molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
Slika 27 prikazuje molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D u skladu sa jednim neograničavajućim primerom izvođenja predmeta koji je ovde opisan.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0041] Predmet pronalaska koji je ovde opisan, generalno obezbeđuje himerne antigenske receptore (CAR) koji ciljano deluju na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. na člana D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D)). U jednom neograničavajućem primeru, CAR sadrži vanćelijski domen koji vezuje antigen, transmembranski domen i unutarćelijski domen, pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom. Predmet pronalaska koji je ovde opisan takođe obezbeđuje imunoreaktivne ćelije (npr. T-ćeliju, ćeliju prirodnog ubicu (NK), citotoksičnog T limfocita (CTL), regulatornu T-ćeliju, humanu embrionalnu matičnu ćeliju, limfoidnu progenitorsku ćeliju, prekusorsku ćeliju T-
1
ćelije i pluripotentnu matičnu ćeliju iz koje mogu biti diferencirane limfoidne ćelije) koje eksprimiraju CAR koji ciljano deluju na receptor spregnut sa G-proteinom, kao i postupke upotrebe takvih imunoreaktivnih ćelija za lečenje kancera, npr. multiplog mijeloma.
I. Definicije
[0042] Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini koji se ovde upotrebljavaju su sa značenjem koje uobičajeno podrazumeva stručnjak iz oblasti tehnike kojoj pronalazak pripada. Sledeće reference obezbeđuju stručnjaku opštu definiciju mnogih od termina koji su upotrebljeni u ovom pronalasku: Singlton i saradnici, Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2. izd. 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ur., 1988); The Glossary of Genetics, 5.izd., R. Rieger i saradnici (ur.), Springer Verlag (1991); i Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Kao što se ovde upotrebljava, termini koji slede su za značenjima koja su im pripisana u nastavku teksta, osim ukoliko nije drugačije specifično naznačeno.
[0043] Kao što se ovde upotrebljava, termin "oko" ili "približno" označava da je navedena vrednost unutar prihvatljivog opsega greške koji je utvrđen od strane prosečno iskusnog stručnjaka iz oblasti tehnike, š to će delimično zavisiti od toga kako se vrednost meri ili određuje, tj. od ograničenja sistema za merenje. Na primer, "oko" može označavati da je vrednost unutar 3 ili više od 3 standardne devijacije, shodno praksi u oblasti tehnike. Alternativno, "oko" može označavati opseg do 20%, poželjno do 10%, poželjnije do 5% i još poželjnije do 1% od date vrednosti. Alternativno, posebno u kontekstu bioloških sistema ili procesa, termin može označavati vrednost unutar reda veličine od 5 puta i poželjnije unutar reda veličine od 2 puta od vrednosti.
[0044] Kao što se ovde upotrebljava, termin "ćelijska populacija" se odnosi na grupu od najmanje dve ćelije koje eksprimiraju slične ili različite fenotipove. U neograničavajućim primerima, ćelijska populacija može uključivati najmanje oko 10, najmanje oko 100, najmanje oko 200, najmanje oko 300, najmanje oko 400, najmanje oko 500, najmanje oko 600, najmanje oko 700, najmanje oko 800, najmanje oko 900, najmanje oko 1000 ćelija koje eksprimiraju slične ili različite fenotipove.
[0045] Kao što se ovde upotrebljava, termin "antitelo" označava ne samo intaktne molekule antitela, već i fragmente molekula antitela koji zadržavaju sposobnost vezivanja imunogena. Takvi fragmenti su takođe dobro poznati u oblasti tehnike i redovno se koriste i in vitro i in vivo. Prema tome, kako se ovde upotrebljava, termin "antitelo" označava ne samo intaktne imunoglobulinske molekule već i dobro poznate aktivne fragmente F(ab')2i Fab. F(ab')2i Fab fragmenti kojima nedostaje Fe fragment intaktnog antitela, brže se čiste iz cirkulacije i mogu imati manje nespecifično vezivanje za tkivo u odnosu na intaktno antitelo (Wahl i saradnici, J. Nucl. Med. 24:316-325 (1983). Antitela opisa obuhvataju celokupna nativna antitela, bispecifična antitela; himerna antitela; Fab, Fab', jednolančane fragmente V regiona (scFv), fuzione polipeptide i nekonvencionalna antitela.
[0046] Kao što se ovde upotrebljava, termin "jednolančani varijabilni fragment" ili "scFv" je fuzioni protein varijabilnih regiona teških (VH) i lakih lanaca (VL) imunoglobulina (npr. mišjeg ili humanog) koji su kovalentno povezani tako da obrazuje VH::VL heterodimer. Teški (VH) i laki lanci (VL) su spojeni bilo direktno ili preko linkera koji kodira peptid (npr. od 10, 15, 20, 25 aminokiselina), koji povezuje N-kraj VHsa C-krajem VL, ili C-kraj VHsa N-krajem VL. Linker je obično bogat glicinom radi fleksibilnosti, kao i serinom ili treoninom radi rastvorljivosti. Linker može da povezivati varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca vanćelijskog domena koji vezuje antigen. Neograničavajući primeri linkera su opisani u Shen i saradnici, Anal. Chem. 80(6):1910-1917 (2008) i WO 2014/087010. U određenim primerima izvođenja, linker je G4S linker.
[0047] U neograničavajućem primeru, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:897, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta teksta.
[0048] GGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:284]. U određenim primerima izvođenja, sekvenca nukleinske kiseline koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:284 je navedena u SEQ ID NO:285, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
GGTGGAGGTGGATCAGGTGGAGGTGGATCTGGTGGAGGTGGATCT [SEQ ID NO:285].
[0049] U drugom neograničavajućem primeru, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98, kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA [SEQ ID NO:98]
[0050] U određenim primerima izvođenja, sekvenca nukleinske kiseline koja kodira aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO:98 je navedena u SEQ ID NO: 99, koja je obezbeđena u nastavku teksta: tctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcc [SEQ ID NO:99]
[0051] Uprkos uklanjanju konstantnih regiona i uvođenju linkera, scFv proteini zadržavaju specifičnost originalnog imunoglobulina. Jednolančana Fv polipeptidna antitela mogu biti eksprimirana sa nukleinske kiseline koja sadrži sekvence koje kodiraju VHi VL, kao što je opisano u Huston i saradnici (Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883, 1988). Pogledati takođe, U.S. Patent No. 5,091,513, 5,132,405 i 4,956,778; i U.S. Patent Publication No. 20050196754 i 20050196754. Opisani su i antagonistički scFv koji imaju inhibitornu aktivnost (pogledati, npr. Zhao i saradnici, Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6):455-51; Peter i saradnici, J Cachexia Sarcopenia Muscle 2012, 12. avgust; Shieh i saradnici, J Imunol2009 183(4):2277-85; Giomarelli i saradnici, Thromb Haemost 2007 97(6):955-63; Fife i saradnic, J Clin Invst 2006 116(8):2252-61; Brocks i saradnici, Immunotechnology 1997 3(3):173-84; Moosmayer i saradnici, Ther Immunol 1995 2(10:31-40). Opisani su i agonistički scFv koji imaju stimulatornu aktivnost (pogledati, npr. Peter i saradnici, J Bioi Chern 2003 25278(38):36740-7; Xie i saradnici, Nat Biotech 199715(8):768-71; Ledbetter i saradnici, Crit Rev Immunol1997 17(5-6):427-55; Ho i saradnici, BioChim Biophys Acta 20031638(3):257-66).
1
[0052] Kao što se ovde upotrebljava, "F(ab)" se odnosi na fragment iz strukture antitela koji vezuje antigen, ali je monovalentan i ne sadrži Fc deo, na primer, antitelo je koje nastaje digestijom sa enzimom papainom, čime se dobijaju dva F(ab) fragmenta i Fc fragment (npr. konstantni region teškog (H) lanca; Fc region koji se ne vezuje za antigen).
[0053] Kao što se ovde upotrebljava, "F(ab')2" se odnosi na fragment antitela nastao digestijom celih IgG antitela sa pepsinom, pri čemu ovaj fragment ima dva regiona koji vezuju antigen (ab') (bivalentan je), pri čemu svaki (ab') region sadrži dva razdvojena aminokiselinska lanca, deo H lanca i lakog (L) lanca koji su povezani S-S vezom radi vezivanja antigena i gde su preostali delovi H lanca zajedno povezani. „F(ab')2" fragment može biti podeljen na dva pojedinačna Fab' fragmenta.
[0054] Kao što se ovde upotrebljava, termin "vektor" se odnosi na bilo koji genetički element, kao što je plazmid, fag, transpozon, kozmid, hromozom, virus, virion itd., koji je sposoban da se replikuje kada je povezan sa odgovarajućim kontrolnim elementima i koji može preneti genske sekvence u ćelije. Prema tome, termin uključuje nosače za kloniranje i ekspresiju, kao i virusne vektore i plazmidne vektore.
[0055] Kao što se ovde upotrebljava, termin "ekspresioni vektor" se odnosi na rekombinantnu sekvencu nukleinske kiseline, tj. rekombinantni DNK molekul, koji sadrži željenu kodirajuću sekvencu i odgovarajuće sekvence nukleinskih kiselina koje su neophodne za ekspresiju operativno povezane kodirajuće sekvence u određenom organizmu domaćinu. Sekvence nukleinskih kiselina koje su neophodne za ekspresiju u prokariotima obično uključuju promotor, operator (opciono) i mesto vezivanja ribozoma, često zajedno sa drugim sekvencama. Poznato je da eukariotske ćelije koriste promotore, pojačivače i signale terminacije i poliadenilacije.
[0056] Kao što se ovde upotrebljava, "CDR" su definisani kao aminokiselinske sekvence regiona koji određuju komplementarnost antitela, a što su hipervarijabilni regioni teških i lakih lanaca imunoglobulina. Pogledati, npr. Kabat i saradnici, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. izd., U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). U principu, antitela sadrže tri CDR regiona teškog lanca i tri CDR regiona lakog lanca ili CDR regione u varijabilnom regionu. CDR obezbeđuju većinu kontaktnih ostataka za vezivanje antitela sa antigenom ili epitopom. U određenim primerima izvođenja, CDR regioni su razgraničeni upotrebom sistema po Kabatu (Kabat E.A., i saradnici (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. izd., U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No.91-3242).
[0057] Kao što se ovde upotrebljava, termin "afinitet" označava meru snage vezivanja. Bez vezivanja za teoriju, afinitet zavisi od bliskosti stereohemijskog uklapanja između mesta kombinovanja antitela i determinanti antigena, od veličine površine kontakta između njih i od raspodele naelektrisanih i hidrofobnih grupa. Afinitet takođe uključuje termin "avidnost", koji se odnosi na snagu veze antigena i anntitela nakon obrazovanja reverzibilnih kompleksa. Postupci za izračunavanje afiniteta antitela za antigen su poznati u oblasti tehnike i obuhvataju upotrebu eksperimenata vezivanja za izračunavanje afiniteta. Aktivnost antitela u funkcionalnim testovima (npr. testu protočne citometrije) takođe odražava afinitet antitela. Antitela i afiniteti se mogu fenotipski okarakterisati i uporediti upotrebom funkcionalnih testova (npr. testa protočne citometrije).
[0058] Molekuli nukleinskih kiselina korisni u postupcima opisa uključuju bilo koji molekul nukleinske kiseline koji kodira polipeptid koji je ovde opisan ili njegov fragment. Takvi molekuli nukleinskih kiselina ne moraju biti 100% identični sa sekvencom endogene nukleinske kiseline, ali će obično biti suštinski identični. Polinukleotidi koji su "suštinski identični" sa endogenom sekvencom su uobičajeno sposobni da hibridizuju sa najmanje jednim lancem dvolančanog molekula nukleinske kiseline. Pod "hibridizovanjem" se podrazumeva par koji obrazuje dvolančani molekul između komplementarnih polinukleotidnih sekvenci (npr. gena opisanog ovde), ili njihovih delova, pod različitim uslovima strogosti. (Pogledati, npr. Wahl G.M. i S.L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152:399; Kimmel A.R. (1987) Methods Enzymol.152:507).
[0059] Na primer, strogi uslovi koncentracije soli će obično podrazumevati manje od oko 750 mM NaCl i 75 mM trinatrijum citrata, poželjno manje od oko 500 mM NaCl i 50 mM trinatrijum citrata, a poželjnije manje od oko 250 mM NaCl i 25 mM trinatrijum-citrata. Hibridizacija u uslovima niske strogosti može biti postignuta u odsustvu organskog rastvarača, npr. formamida, dok se hibridizacija u visoko strogim uslovima može postići u prisustvu najmanje oko 35% formamida, a poželjnije najmanje oko 50% formamida. Strogi temperaturni uslovi će obično uključivati temperature od najmanje oko 30° C, poželjnije od najmanje oko 37° C, a najpoželjnije od najmanje oko 42° C. Variranje dodatnih parametara, kao što su vreme hibridizacije, koncentracija deterdženta, npr. natrijum dodecil sulfata (SDS) i uključivanje ili isključivanje nosača DNK, dobro su poznati stručnjacima iz oblasti tehnike. Kombinovanjem ovih raznovrsnih uslova se po potrebi mogu postići razni nivou strogosti uslova. U poželjnom primeru izvođenja, hibridizacija će se odvijati na 30° C u 750 mM NaCl, 75 mM trinatrijum citratu i sa 1% SDS-om. U poželjnijem primeru izvođenja, hibridizacija će se odvijati na 37°C u 500 mM NaCl, 50 mM trinatrijum citratu, sa 1% SDS-om, 35% formamidom i sa 100 µg/ml denaturisane DNK sperme lososa (ssDNK). U najpoželjnijem primeru izvođenja, hibridizacija će se odvijati na 42°C u 250 mM NaCl, 25 mM trinatrijum citratu, sa 1% SDS-om, 50% formamidom i sa 200 µg/ml ssDNK. Korisne varijacije ovih uslova biće očigledne stručnjacima iz oblasti tehnike.
[0060] Za većinu primena, koraci pranja koji slede nakon hibridizacije takođe će se razlikovati po strogosti. Uslovi strogosti pranja mogu biti definisani koncentracijom soli i temperaturom. Kao što je prethodno navedeno, strogost pranja može biti povećana smanjenjem koncentracije soli ili povećanjem temperature. Na primer, stroga koncentracija soli za korake pranja će poželjno biti manja od oko 30 mM NaCl i 3 mM trinatrijum citrata, a najpoželjnije manja od oko 15 mM NaCl i 1,5 mM trinatrijum citrata. Strogi temperaturni uslovi za korake pranja će obično uključivati temperaturu od najmanje oko 25°C, poželjnije od najmanje oko 42°C, a još poželjnije od najmanje oko 68°C. U poželjnom primeru izvođenja, koraci pranja će se odvijati na 25°C u 30 mM NaCl, 3 mM trinatrijum citratu i sa 0,1% SDS-a. U poželjnijem primeru izvođenja, koraci pranja će se odvijati na 42°C u 15 mM NaCl, 1,5 mM trinatrijum citratu i sa 0,1% SDS-a. U još poželjnijem primeru izvođenja, koraci pranja će se odvijati
1
na 68°C u 15 mM NaCl, 1,5 mM trinatrijum citratu i sa 0,1% SDS-a. Dodatne varijacije ovih uslova će biti očigledne stručnjacima iz oblasti tehnike. Tehnike hibridizacije su dobro poznate stručnjacima iz oblasti tehnike i opisane su, na primer, u Benton i Dejvis (Science 196:180, 1977); Grunstein i Rogness (Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72:3961, 1975); Ausubel i saradnici (Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001); Berger i Kimmel (Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York); i Sambrook i saradnici, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
[0061] Pod "suštinski identičnim" se podrazumeva polipeptid ili molekul nukleinske kiseline koga karakteriše identičnost od najmanje 50% sa referentnom aminokiselinskom sekvencom (na primer, sa bilo kojom od aminokiselinskih sekvenci koje su ovde opisane) ili sekvencom nukleinske kiseline (na primer, bilo kojom od sekvenci nukleinskih kiselina koje su ovde opisane). Poželjno, takva sekvenca je na nivou aminokiselina ili nukleinskih kiselina najmanje 60%, poželjnije 80% ili 85%, a još poželjnije 90%, 95% ili čak 99% identična sa sekvencom upotrebljenom za poređenje.
[0062] Identičnost sekvenci se obično meri upotrebom softvera za analizu sekvenci (na primer, softverskog paketa za analizu sekvenci kompanije Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705; BLAST, BESTFIT, GAP ili PILEUP/PRETTYBOX programa). Takav softver preklapa/poredi identične ili slične sekvence dodeljivanjem stepena homologije različitim supstitucijama, delecijama i/ili drugim modifikacijama. U pristupu određivanju stepena identičnosti za primer, može biti upotrebljen BLAST program, sa rezultatom verovatnoće između e-3 i e-100 koji ukazuje na blisko srodnu sekvencu.
[0063] Kao što se ovde upotrebljava, termin "analog" se odnosi na strukturno srodan polipeptid ili molekul nukleinske kiseline koji ima funkciju referentnog polipeptida ili molekula nukleinske kiseline.
[0064] Kao što se ovde upotrebljava, termin "ligand" se odnosi na molekul koji se vezuje za receptor. Preciznije, ligand vezuje receptor na drugoj ćeliji, omogućavajući prepoznavanje i/ili interakciju tipa ćelija-ćelija.
[0065] Kao što se ovde upotrebljava, termin "bolest" se odnosi na bilo koje stanje ili poremećaj koji oštećuje ili ometa normalnu funkciju ćelije, tkiva ili organa. Primeri bolesti uključuju neoplazije ili patogene infekcije ćelije.
[0066] Kao što se ovde upotrebljava, termin "efektivna količina" se odnosi na količinu dovoljnu da se ispolji terapijski efekat. U određenim primerima izvođenja, "efektivna količina" je količina dovoljna da se zaustavi, ublaži ili inhibira kontinuirana proliferacija, rast ili metastaziranje (npr. invazija ili migracija) neoplazije.
[0067] Kao što se ovde upotrebljava, termin "heterologni molekul nukleinske kiseline ili polipeptid" se odnosi na molekul nukleinske kiseline (npr. molekul cDNK, DNK ili RNK) ili polipeptid koji normalno nije prisutan u ćeliji ili uzorku dobijenom iz ćelije. Ovakva nukleinska kiselina može biti iz drugog organizma, ili može biti, na primer, molekul iRNK koji se normalno ne eksprimira u ćeliji ili uzorku.
[0068] Kao što se ovde upotrebljava, termin "imunoreaktivna ćelija" se odnosi na ćeliju koja funkcioniše u imunskom odgovoru ili na njen progenitor ili potomstvo.
[0069] Kao što se ovde upotrebljava, termin "modulisati" se odnosi na pozitivnu ili negativnu izmenu. Primeri modulacija uključuju promenu od oko 1%, oko 2%, oko 5%, oko 10%, oko 25%, oko 50%, oko 75% ili oko 100%.
[0070] Kao što se ovde upotrebljava, termin "povećanje" se odnosi na pozitivnu izmenu za najmanje oko 5%, uključujući, ali ne ograničavajući se na, pozitivnu izmenu za oko 5%, za oko 10%, za oko 25%, za oko 30%, za oko 50%, za oko 75%, ili za oko 100%.
[0071] Kao što se ovde upotrebljava, termin "smanjenje" se odnosi na negativnu izmenu za najmanje oko 5% uključujući, ali ne ograničavajući se na, negativnu izmenu za oko 5%, za oko 10%, za oko 25%, za oko 30%, za oko 50%, za oko 75%, ili za oko 100%.
[0072] Kao što se ovde upotrebljava, termin "izolovana ćelija" se odnosi na ćeliju koja je odvojena od molekulskih i/ili ćelijskih komponenti koje su ćeliji prirodno pridružene.
[0073] Kao što se ovde upotrebljava, termin "izolovan", "prečišćen" ili "biološki čist" se odnosi na materijal koji je u različitom stepenu oslobođen od komponenti koje su mu normalno pridružene kada se nalazi u njegovom nativnom stanju. „Izolovati“ označava stepen razdvajanja od originalnog izvora ili okoline. „Prečistiti“ označava stepen razdvajanja koji je viši od izolacije. "Prečišćen" ili "biološki čist" protein je dovoljno oslobođen od drugih materijala tako da bilo koja nečistoća ne utiče materijalno na biološke osobine proteina ili prouzrokuje druge štetne posledice. Naime, nukleinska kiselina ili peptid koji je ovde opisan je prečišćen ukoliko je suštinski oslobođen od ćelijskog materijala, virusnog materijala ili medijuma za kulturu kada se proizvodi tehnikama rekombinantne DNK, ili od hemijskih prekursora ili drugih hemikalija prilikom hemijske sinteze. Čistoća i homogenost se obično utvrđuju upotrebom tehnika analitičke hemije, na primer, elektroforeze na poliakrilamidnom gelu ili tečnom hromatografijom visokih performansi. Termin "prečišćen" može označavati da nukleinska kiselina ili protein predstavlja suštinski jednu traku na elektroforetskom gelu. Za protein koji može biti podvrgnut modifikacijama, na primer, fosforilaciji ili glikozilaciji, različite modifikacije mogu dovesti do izdvajanja različitih izolovanih proteina, koji mogu biti odvojeno prečišćeni.
[0074] Kao što se ovde upotrebljava, termin "sekretovan" označava polipeptid koji se oslobađa iz ćelije putem sekretornog puta kroz endoplazmatski retikulum, Golgijev aparat i u vidu vezikule koja se prolazno fuzioniše sa ćelijskom plazma membranom, čime se protein oslobađa van ćelije.
[0075] Kao što se ovde upotrebljava, termin "specifično se vezuje" ili "specifično se vezuje za" ili "specifično ciljano deluje" označava polipeptid ili njegov fragment koji prepoznaje i vezuje se za biološki molekul od interesa (npr. polipeptid), ali koji suštinski ne prepoznaje i ne vezuje druge molekule u uzorku, na primer, u biološkom uzorku koji prirodno uključuje polipeptid koji je ovde opisan.
[0076] Kao što se ovde upotrebljava, termin "lečenje" ili "tretman" se odnosi na kliničku intervenciju u pokušaju da se izmeni tok bolesti pojedinca ili ćelije koja se leči, i može biti izveden bilo u svrhu profilakse ili tokom kliničke patologije. Terapijski efekti tremana uključuju, ali nisu ograničeni na, sprečavanje pojave ili ponovnog
2
pojavljivanja bolesti, ublažavanje simptoma, značajno smanjenje bilo koje direktne ili indirektne patološke posledice bolesti, prevenciju pojave metastaza, smanjenje stope progresije bolesti, poboljšanje ili ublažavanje bolesnog stanja i remisiju ili poboljšanu prognozu. Prevencijom progresije bolesti ili poremećaja, tretman može sprečiti pogoršanje usled poremećaja kod obolelog ili dijagnostikovanog subjekta ili subjekta za koji se sumnja da ima poremećaj, ali tretman takođe može sprečiti početak poremećaja ili simptoma poremećaja kod subjekta koji je sa rizikom da oboli ili za koga se sumnja da ima poremećaj.
[0077] Kao što se ovde upotrebljava, termin "subjekat" se odnosi na bilo koju životinju (npr. sisara), uključujući, ali ne ograničavajući se na, ljude, primate različite od čoveka, glodare i slično (npr. onu koji treba da bude primalac određenog tretmana ili iz koga su ćelije prikupljene).
II. Receptor spregnut sa G-proteinom
[0078] Receptori spregnuti sa G-proteinom („GPR“), takođe poznati kao receptori sa sedam transmembranskih domena, 7TM receptori, heptaheliksni receptori, serpentinski receptori i receptori povezani sa G proteinom, čine veliku proteinsku familiju receptora koji reaguju na molekule izvan ćelije i aktiviraju puteve signalne transdukcije unutar ćelije, a končano i ćelijske odgovore. GPCR mogu biti kategorisani u šest klasa na osnovu homologije sekvenci i funkcionalne sličnosti: Klasu A (slična rodopsinu), Klasu B (familija receptora za sekretin), Klasu C (metabotropni glutamatni/feromonski), Klasu D (receptori feromona parenja gljivica), Klasu E (receptori cikličnog AMP-a) i klasu F (izglađenih/zaglađenih). U određenim primerima izvođenja, GRP su GRP Klase C. U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, GRP Klase C je član D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom.
[0079] Član D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D) je orfanski receptor bez poznatog liganda ili funkcije kod ljudi. On je član familije receptora spregnutih sa G-proteinom koje indukuje retinoična kiselina. Prekomerno je eksprimiran u ćelijama multiplog mijeloma (MM) i nije eksprimiran ili je eksprimiran u značajno nižim nivoima u bilo kojoj drugoj vrsti ćelije, benignoj ili malignoj, kao što je prikazano na Slici 2. Nekoliko grupa je identifikovalo ovaj gen kao visoko diferencijalno eksprimiran, profilisanjem genske ekspresije primarnih MM ćelija, u poređenju sa normalnim tkivom<1>ili drugim hematološkim malignitetima.<2-4>Pokazano je i da je viša ekspresija iRNK u korelaciji sa lošijim ukupnim preživljavanjem.<1>Površinsko bojenje aspirata kosne srži pacijenata sa MM je ukazalo na specifično bojenje plazma ćelija.<4>Prema saznanjima pronalazača, ovo je prvi put da je GPRC5D ciljni molekula za bilo koji terapeutik. Dodatno, prema saznanjima pronalazača, ovo je prvi put da je generisan CAR koji ciljano deluje na bilo koji receptor spregnut sa G-proteinom.
[0080] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, GPRC5D je humani GPRC5D sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:97, ili predstavlja njegove fragmente.
[0081] SEQ ID NO:97 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0082] N-terminalni region humanog GPRC5D ima aminokiseline 1-27 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 1 (ECL1) humanog GPRC5D ima aminokiseline 85-93 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 2 (ECL2) humanog GPRC5D ima aminokiseline 145-167 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 3 (ECL3) humanog GPRC5D ima aminokiseline 226-239 iz SEQ ID NO:97.
III. Himerni antigenski receptor (CAR).
[0083] Himerni antigenski receptori (CAR) su konstruisani receptori, kojima se imunskoj efektorskoj ćeliji presađuje ili obezbeđuje specifičnost od interesa. CAR mogu biti upotrebljeni za presađivanje specifičnosti monoklonskog antitela na T-ćeliju; uz prenos njihove kodirajuće sekvence koji je olakšan retrovirusnim vektorima.
[0084] Postoje tri generacije CAR. CAR „prve generacije“ se obično sastoje od vanćelijskog domena koji vezuje antigen (npr. od jednolančanih varijabilnih fragmenata (scFv)) koji je fuzionisan sa transmembranskim domenom, fuzionisan sa citoplazmatskim/unutarćelijskim domenom lanca T-ćelijskog receptora. CAR „prve generacije“ obično imaju unutarćelijski domen iz CD3ξ-lanca, koji je primarni prenosilac signala sa endogenih TCR. CAR „prve generacije“ mogu obezbediti de novo prepoznavanje antigena i prouzrokovati aktivaciju i CD4<+>i CD8<+>T-ćelija putem njihovog signalnog domena CD3ζ lanca u jednom fuzionisanom molekulu, nezavisno od prezentacije antigena posredovane sa HLA. CAR "druge generacije" dodaju unutarćelijske domene iz raznih ko-stimulatornih molekula (npr. CD28, 4-1BB, ICOS, OX40) na citoplazmatski rep CAR da bi se obezbedili dodatni signali za T-ćeliju. CAR „druge generacije“ obuhvataju one koji obezbeđuju i ko-stimulaciju (npr. CD28 ili 4-1BB) i aktivaciju (CD3ζ). Pretkliničke studije su ukazale da CAR "druge generacije" mogu poboljšati anti-tumorsku atkivnost Tćelija. Na primer, snažna efikasnost modifikovanih T-ćelija sa CAR „druge generacije“ je pokazana u kliničkim ispitivanjima usmerenim na molekul CD19 kod pacijenata sa hroničnom limfoblastnom leukemijom (CLL) i akutnom limfoblastnom leukemijom (ALL). CAR „treće generacije“ obuhvataju one koji obezbeđuju višestruku kostimulaciju (npr. CD28 i 4-1BB) i aktivaciju (CD3ζ).
[0085] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, CAR sadrži vanćelijski domen koji vezuje antigen, transmembranski domen i unutarćelijski domen, pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom. U određenim primerima izvođenja, receptor spregnut sa G-proteinom je GPRC5D. U specifičnom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv. U specifičnom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je Fab, koji je opciono umrežen. U specifičnom neograničavajućem primeru izvođenja, vanćelijski vezujući domen je F(ab)2. U specifičnom neograničavajućem primeru izvođenja, bilo koji od prethodno navedenih molekula može biti sadržan u fuzionom proteinu sa heterolognom sekvencom, da bi se obrazovao vanćelijski domen koji vezuje antigen.
[0086] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen CAR koji je ovde opisan, sa visokom je specifičnošću vezivanja, kao i sa visokim afinitetom vezivanja za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D). Na primer, u takvim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen iz CAR (naveden kao primer, na primer, u vidu scFv ili njegovog analoga) vezuje se za GPRC5D sa konstantom disocijacije (KD) od oko 3 × 10<-6>M ili manje. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 1 × 10<-6>M ili manje, oko 1 × 10<-7>M ili manje, oko 1 × 10<-8>M ili manje, ili oko 1 × 10<-9>M ili manje, oko 1 × 10<-10>M ili manje, ili oko 1 × 10<-11>M ili manje. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 1 × 10<-8>M ili manje. U određenim primerima izvođenja, KDje od oko 1 × 10<-11>M do oko 3 × 10<-6>M, na primer od oko 1 × 10<-11>M do oko 1 × 10<-10>M, od oko 1 × 10<-10>M do oko 1 × 10<-9>M, od oko 1 × 10<-9>M do oko 1 × 10<-8>M, od oko 1 × 10<-8>M do oko 1 × 10<-7>M ili od oko 1 × 10<-7>M do oko 1 × 10<-6>M, ili od oko 1 × 10<-6>M do oko 3 × 10<-6>M. U određenim primerima izvođenja, KDje od oko 1 × 10<-9>M do oko 1 × 10<-8>M. U određenim primerima izvođenja, KDje od oko 1 × 10<-9>M do oko 1,5 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 1,2 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje od oko 4 × 10<-9>M do oko 5 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 5 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 4,8 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje od oko 8 × 10<-9>M do oko 9 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 8 × 10<-9>M. U određenim primerima izvođenja, KDje oko 8,1 × 10<-9>M [0087] Vezivanje vanćelijskog domena koji vezuje antigen (navedenog kao primer, na primer, u vidu scFv ili njegovog analoga) CAR koji je ovde opisan, za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) može biti potvrđen, na primer, imunosorbentnim testom povezanim sa enzimom (ELISA), radioimunoesejem (RIA), FACS analizom, biološkim testom (npr. inhibicijom rasta) ili imunoblotovanjem. Svaka od ovih analiza u principu detektuje prisustvo kompleksa proteina i antitela od posebnog interesa, upotrebom obeleženog reagensa (npr. antitela ili scFv) koji je specifičan za kompleks od interesa. Na primer, scFv može biti radioaktivno obeležen i upotrebljen u radioimunoeseju (RIA) (pogledati, na primer, Weintraub B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, mart 1986). Radioaktivni izotop može biti detektovan upotrebom instrumenata za detekciju poput γ brojača ili scintilacionog brojača ili autoradiografijom. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen i ciljano deluje na GPRC5D je obeležen fluorescentnim markerom. Neograničavajući primeri fluorescentnih markera uključuju zeleni fluorescentni protein (GFP), plavi fluorescentni protein (npr. EBFP, EBFP2, azurit i mKalama1), cijano oboljen fluorescentni protein (npr. ECFP, Cerulean i CyPet) i žuti fluorescentni protein (npr. YFP, Citrine, Venus i YPet). U određenim primerima izvođenja, humani scFv koji ciljano deluje na GPRC5D je obeležen sa GFP.
[0088] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen CAR koji je ovde opisan, sadrži jednolančani varijabilni fragment (scFv). U jednom specifičnom primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen CAR koji je ovde opisan, sadrži humani scFv koji se specifično vezuje za humani GPRC5D. U drugom specifičnom primeru izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen CAR koji je ovde opisan sadrži mišji scFv koji se specifično vezuje za humani GPRC5D. U određenim primerima izvođenja, scFv se identifikuje skriningom scFv biblioteke faga sa ćelijama (npr.3T3 ćelijama) koje eksprimiraju GPRC5D.
Vanćelijski domen koji vezuje antigen iz CAR
[0089] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od: SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 i 93. Sekvence nukleinskih kiselina koje kodiraju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 i 93 su 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 67, 71, 75, 79, 83, 87, 91 i 95, tim redom. U pojedinim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom izabranom iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 i 94. Sekvence nukleinskih kiselina koje kodiraju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 i 94 su 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92 i 96, tim redom. Sekvence SEQ ID NOS:1-96 su opisane u Tabelama 1-24 koje slede.
[0090] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilne regione teškog i lakog lanca koji sadrže aminokiselinske sekvence homologne aminokiselinskim sekvencama koje su ovde opisane i kao š to je opisano u Tabelama 1-24. Na primer, ali ne i kao ograničenje, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83 %, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 364 i 384.
[0091] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97 %, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387.
[0092] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži (a) varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 i 386; i (b) varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 i 387.
[0093] Predmet koji je ovde opisan dalje obezbeđuje vanćelijske domene koji vezuju antigen (npr. scFv) koji sadrže CDR regione iz varijabilnog regiona teškog i varijabilnog regiona lakog lanca, npr. CDR1, CDR2 i CDR3 regione, kao što su oni opisani ovde u Tabelama 1-24. CDR regioni su razgraničeni upotrebom sistema po Kabatu (Kabat E.A. i saradnici (1991), Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Predmet koji je ovde opisan dalje obezbeđuje vanćelijske domene za vezivanje antigena (npr. scFv) koji sadrže konzervativne modifikacije sekvenci antitela koja su ovde opisana. Na primer, ali ne i kao ograničenje, vanćelijski domeni za vezivanje antigena (npr. scFv) predmeta koji je ovde opisan, sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence, pri čemu jedna ili više od ovih CDR sekvenci sadrži specifično navedene aminokiselinske sekvence koje su ovde opisane, ili njihove konzervativne modifikacije, i pri čemu vanćelijski domeni koji vezuju antigen zadržavaju željene funkcionalne osobine.
[0094] U određenim primerima izvođenja, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) koga č ine varijabilni region teškog lanca, pri čemu varijabilni region teškog lanca sadrži: (a) CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 i 388, i njihovih konzervativnih modifikacija; (b) CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 i 389, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (c) CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 i 390, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0095] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) sadrži varijabilni region lakog lanca, pri čemu varijabilni region lakog lanca sadrži: (a) CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 i 391, i njihovih konzervativnih modifikacija; (b) CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 i 392, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (c) CDR3 koga č ini aminokiselinska sekvenca izabrana iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 i 393, i njihovih konzervativnih modifikacija.
[0096] Predmet koji je ovde opisan obezbeđuje vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) koga č ine varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1, CDR2 i CDR3 sekvence, pri čemu: (a) CDR3 varijabilnog regiona teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 i 390, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (b) CDR3 varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 i 393, i njihovih konzervativnih modifikacija; pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. humani GPRC5D polipeptid). U određenim primerima izvođenja, varijabilni region teškog lanca CDR2 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 i 389, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (b) CDR2 varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 i 392, i njihovih konzervativnih modifikacija; pri čemu se vanćelijski domen koji
2
vezuje antigen specifično vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. humani GPRC5D polipeptid). U određenim primerima izvođenja, CDR1 varijabilnog regiona teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 i 388, i njihovih konzervativnih modifikacija; i (b) CDR1 varijabilnog regiona lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 i 391, i njihovih konzervativnih modifikacija; pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. humani GPRC5D polipeptid).
[0097] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 100 i specifično se vezuje za polipeptid GPRC5D (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-153 scFv (označen je i kao "ET150-3 scFv").
[0098] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 1 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 2, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:1, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:1, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:2, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:2, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:1 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 2, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:124 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:125 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:126 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:127 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:128 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:129 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:124 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:125 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:126 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:127 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:128 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:129 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 1. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:124, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:125, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:126, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:127, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:128 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:129.
Tabela 1
[0099] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 101 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-166 scFv (takođe je označen kao "ET150-16 scFv").
[0100] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:5 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:6, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je humani scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:5, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:5, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:6, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:6, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:5 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:6, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:130 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:131 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:132 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:133 ili njene
2
konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:134 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:135 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:130 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:131 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:132 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:133 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:134 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:135 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 2. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:130, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:131, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:132, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:133, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:134 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:135.
Tabela 2
[0101] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 102 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-170 scFv (takođe označen kao "ET150-20 scFv").
[0102] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:9 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:10, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko
2
92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:9, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:9, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:10, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:10, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:9 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:10, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:136 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:137 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:138 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:139 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:140 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:141 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:136 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:137 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:138 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:139 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:140 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:141 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 3. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:136, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:137, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:138, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:139, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:140 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:141.
Tabela 3
2
[0103] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:103 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-171 scFv (takođe je označen kao "ET150-21 scFv").
[0104] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:13 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:14, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:13, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:13, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:14, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:14, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:13 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:14, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:142 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:143 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:144 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:145 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:146 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:147 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:142 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:143 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:144 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:145 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:146 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:147 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 4. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:142, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:143, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:144, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:145, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:146 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:147.
Tabela 4
2
[0105] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:104 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-175 scFv (takođe označen kao "ET150-25 scFv").
[0106] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:17 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:18, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:17, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:17, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:18, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:18, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:17 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:18, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:148 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:149 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:150 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski
2
domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:151 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:152 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:153 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:148 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:149 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:150 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:151 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:152 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:153 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 5. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:148, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:149, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:150, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:151, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:152 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:153.
Tabela 5
[0107] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:105 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-154 scFv (takođe označen kao "ET150-4 scFv").
[0108] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:21 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:22, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:21, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:21, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:22, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:22, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:21 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:22, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:154 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:155 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:156 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:157 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:158 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:159 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:154 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:155 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:156 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:157 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:158 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:159 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 6. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:154, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:155, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:156, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:157, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:158 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:159.
Tabela 6
1
[0109] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:106 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-156 scFv (takođe je označen kao "ET150-6 scFv").
[0110] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:25 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:26, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:25, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:25, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:26, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:26, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:25 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:26, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:160 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:161 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:162 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:163 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:164 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:165 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:160 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:161 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:162 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:163 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:164 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:165 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 7. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:160, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:161, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:162, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:163, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:164 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:165.
2
Tabela 7
[0111] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:107 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-157 scFv (takođe je označen kao "ET150-7 scFv").
[0112] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:29 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:30, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:29, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:29, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:30, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:30, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:29 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:30, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:166 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:167 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:168 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:169 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:170 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:171 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:166 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:167 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:168 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:169 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:170 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:171 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 8. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:166, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:167, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:168, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:169, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:170 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:171.
Tabela 8
[0113] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:108 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D
4
polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-159 scFv (takođe označen kao "ET150-9 scFv").
[0114] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:33 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:34, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:33, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:33, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:34, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:34, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:33 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:34, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:172 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:173 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:174 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:175 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:176 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:177 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:172 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:173 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:174 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:175 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:176 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:177 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 9. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:172, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:173, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:174 a VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:175, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:176 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:177.
Tabela 9
[0115] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:109 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-160 scFv (takođe označen kao "ET150-10 scFv").
[0116] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:37 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:38, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:37, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:37, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:38, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:38, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:37 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:38, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:178 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:179 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:180 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:181 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:182 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:183 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:178 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:179 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:180 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:181 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:182 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:183 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 10. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:178, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:179, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:180, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:181, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:182 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:183.
Tabela 10
[0117] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:110 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-161 scFv (takođe je označen kao "ET150-11 scFv").
[0118] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:41 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:42, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:41, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:41, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:42, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:42, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:41 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:42, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:184 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:185 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:186 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:187 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:188 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:189 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:184 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:185 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:186 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:187 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:188 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:189 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 11. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:184, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:185, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:186, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:187, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:188 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:189.
Tabela 11
[0119] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:111 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-162 scFv (takođe je označen kao "ET150-12 scFv").
[0120] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:45 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:46, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:45, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:45, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:46, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:46, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:45 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:46, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:190 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:191 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:192 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:193 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:194 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:195 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:190 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:191 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:192 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:193 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:194 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:195 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 12. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:190, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:191, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:192, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:193, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:194 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:195.
Tabela 12
[0121] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:112 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-163 scFv (takođe je označen kao "ET150-13 scFv").
[0122] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:49 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:50, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:49, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:49, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:50, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:50, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:49 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:50, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:196 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:197 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:198 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:199 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa
4
sekvencom navedenom u SEQ ID NO:200 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:201 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:196 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:197 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:198 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:199 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:200 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:201 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 13. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:196, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:197, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:198 a VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:199, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:200 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:201.
Tabela 13
[0123] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:113 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-151 scFv (takođe je označen kao "ET150-1 scFv").
[0124] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:202 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:203 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:204 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:205 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:207 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:202 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:203 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:204 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:205 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:207 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 14. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:202, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:203, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:204, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:205, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:206 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:207.
Tabela 14
[0125] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:114 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-152 scFv (takođe označen kao "ET150-2 scFv").
[0126] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213.
4
Tabela 15
[0127] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:115 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-155 scFv (takođe je označen kao "ET150-5 scFv").
[0128] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFV, koga č ine varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, kao što je prikazano u Tabeli 16. U pojedinim rešenjima, u određenim aspektima, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219.
Tabela 16
[0129] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:116 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-158 scFv (takođe je označen kao "ET150-8 scFv").
4
[0130] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225.
Tabela 17
4
[0131] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:117 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-168 scFv (takođe je označen kao "ET150-18 scFv").
[0132] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:229 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:229 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom
4
navedenom u SEQ ID NO:229, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231.
Tabela 18
[0133] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:118 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-164 scFv (takođe je označen kao "ET150-14 scFv").
[0134] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:73 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:74, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:73, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:73, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:74, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:74, kao
4
što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:73 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:74, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:232 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:233 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:234 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:235 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:236 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:237 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:232 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:233 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:234 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:235 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:236 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:237 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 19. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:232, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:233, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:234, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:235, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:236 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:237.
Tabela 19
4
[0135] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:119 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-165 scFv (takođe označen kao "ET150-15 scFv").
[0136] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:77 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:78, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:77, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:77, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:78, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:78, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:77 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:78, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:238 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:239 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:240 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:241 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:242 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:243 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:238 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:239 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:240 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:241 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:242 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:243 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 20. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:238, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:239, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:240, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:241, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:242 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:243.
Tabela 20
[0137] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:120 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-167 scFv (takođe je označen kao "ET150-17 scFv").
[0138] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:81 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:82, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:81, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:81, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:82, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:82, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:81 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:82, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:244 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:245 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:246 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:247 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:248 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:249 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:244 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:245 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:246 ili njene konzervativne modifikacije, VL
1
CDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:247 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:248 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:249 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 21. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:244, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:245, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:246, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:247, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:248 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:249.
Tabela 21
[0139] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:121 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-169 scFv (takođe je označen kao "ET150-19 scFv").
[0140] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:85 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:86, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa
2
aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:85, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:85, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:86, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:86, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:85 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:86, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:250 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:251 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:252 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:253 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:254 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:255 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:250 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:251 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:252 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:253 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:254 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:255 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 22. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:250, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:251, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:252, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:253, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:254 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:255.
Tabela 22
[0141] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:122 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-172 scFv (koji se takođe naziva "ET150-22 scFv").
[0142] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:89 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:90, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:89, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:89, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:90, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:90, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:89 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:90, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:256 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:257 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:258 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:259 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:260 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:261 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:256 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:257 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:258 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:259 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:260 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:261 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 23. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:256, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:257, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:258, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:259, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:260 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:261.
Tabela 23
4
[0143] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:123 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-173 scFv (takođe je označen kao "ET150-23 scFv").
[0144] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:93 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:94, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:93, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:93, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:94, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:94, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:93 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:94, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:262 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:263 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:264 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:265 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:266 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:267 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:262 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:263 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:264 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:265 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:266 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:267 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 24. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:262, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:263, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:264, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:265 f, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:266 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:267.
Tabela 24
[0145] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:301 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-024 scFv (takođe je označen kao "ET150-174 scFv").
[0146] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:302 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:303, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:302, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:302, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:303, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:303, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:302 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:303, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:304 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:305 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:306 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:307 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:308 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:309 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:304 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:305 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:306 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:307 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:308 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:309 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 25. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:304, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:305, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:306, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:307, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:308 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:309.
Tabela 25
[0147] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:313 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-026 scFv (takođe je označen kao "ET150-176 scFv").
[0148] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:314 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:315, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:314 kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:314, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:315, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:315, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:314 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:315 kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:316 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:317 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:318 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:319 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:320 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:321 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:316 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:317 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:318 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:319 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:320 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:321 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 26. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:316, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:317, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:318, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:319, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:320 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:321.
Tabela 26
[0149] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:325 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-028 scFv (takođe je označen kao "ET150-178 scFv").
[0150] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:326 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:327, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:325 kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:325, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:326, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:326, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:325 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:327 kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:328 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:329 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:330 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:331 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:332 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:333 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:328 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:329 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:330 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:331 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:332 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:333 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 27. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:328, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:329, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:330, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:331, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:332 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:333.
Tabela 27
1
[0151] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:337 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-029 scFv (takođe označen kao "ET150-179 scFv").
[0152] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:338 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:339, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:338 kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:338, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko
2
82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna sa aminokiselinskom sekvencom navedenom u SEQ ID NO:339, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:339, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:338 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:339 kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:340 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:341 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:342 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:343 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:344 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:345 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:340 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:341 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:342 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:343 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:344 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:345 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 28. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:340, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:341, VHCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:342, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:343, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:344 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:345.
Tabela 28
[0153] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:349 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-030 scFv (takođe je označen kao "ET150-180 scFv").
[0154] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:350 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:351, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:350 kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:350, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko
4
83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:351, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:351, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:350 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:351 kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:352 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:353 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:354 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:355 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:356 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:357 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:352 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:353 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:354 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:355 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:356 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:357 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 29. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:352, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:353, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:354, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:355, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:356 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:357.
Tabela 29
[0155] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:361 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-031 scFv (takođe označen kao "ET150-181 scFv").
[0156] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:362 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:363, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:362 kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:362, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:363, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:363, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:362 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:363 kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:364 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:365 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:366 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:367 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:368 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:369 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:364 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:365 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:366 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:367 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:368 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:369 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 30. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:364, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:365, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:366, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:367, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:368 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:369.
Tabela 30
[0157] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:373 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-032 scFv (takođe je označen kao "ET150-182 scFv").
[0158] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:374 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:375, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:374 kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:374, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:375, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:375, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:374 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:375 kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:376 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:377 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:378 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:379 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:380 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:381 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:376 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:377 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:378 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:379 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:380 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:381 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 31. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:376, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:377, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:378, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:379, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:380 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:381.
Tabela 31
[0159] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:385 i specifično se vezuje za GPRC5D polipeptid (npr. GPRC5D polipeptid sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:97 ili za njegove fragmente), pri čemu je scFv označen kao ET150-033 scFv (takođe označen kao "ET150-183 scFv").
[0160] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:386 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:387, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:386 kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:386, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:387, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:387, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:386 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:387 kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:388 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:389 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:390 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:391 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:392 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:393 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:388 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:389 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:390 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:391 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:392 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:393 ili njene konzervativne modifikacije, kao što je prikazano u Tabeli 32. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:388, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:389, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:390, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:391, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:392 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:393.
Tabela 32
1
[0161] Vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) koji se sastoji od VHi/ili VLregiona sa visokom (tj.80% ili više) homologijom sa VHi VLregionima prethodno navedenih sekvenci, mogu biti dobijeni mutagenezom (npr. mutagenezom usmerenom na mesto ili posredovanom PCR-om), nakon koje sledi ispitivanje kodiranog izmenjenog scFv u kontekstu zadržavanja funkcije (tj. afiniteta vezivanja) upotrebom analiza vezivanja koje su ovde opisane. U određenim primerima izvođenja, VHsekvenca sa homologijom od najmanje 9oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije za generisanje konzervativnih modifikacija sekvence), insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu, ali vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) koji sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja GPRC5D peptida. U određenim primerima izvođenja, VLsekvenca koja je sa homologijom od najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% sadrži supstitucije (npr. konzervativne supstitucije), insercije ili delecije u odnosu na referentnu sekvencu, ali vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFv) koji sadrži tu sekvencu zadržava sposobnost vezivanja za polipeptid GPRC5D. U određenim primerima izvođenja, ukupno oko 1 do oko 10 aminokiselina je supstituisano, insertovano i/ili deletirano u opisanim sekvencama. Na primer, ali ne i kao ograničenje, VHsekvenca ili VLsekvenca, mogu imati do oko jedan, do oko dva, do oko tri, do oko četiri, do oko pet, do oko šest, do oko sedam, do oko osam, do oko devet ili do oko deset aminokiselinskih ostataka koji su modifikovani i/ili supstituisani. Neograničavajući primeri konzervativnih modifikacija su obezbeđeni u nastavku teksta, npr. u okviru Tabele 33.
[0162] Kao što se ovde upotrebljava, termin "konzervativne modifikacije sekvence" se odnosi na aminokiselinske modifikacije koje ne utiču ili ne menjaju značajno karakteristike vezivanja CAR koji je ovde opisan (npr. vanćelijskog domena koji vezuje antigen) koji sadrži datu aminokiselinsku sekvencu. Takve konzervativne modifikacije uključuju aminokiselinske supstitucije, adicije i delecije. Modifikacije mogu biti uvedene u humani scFv koji je ovde predmet opisa, upotrebom standardnih tehnika poznatih u oblasti tehnike, kao što su mutageneza usmerena na mesto i mutageneza posredovana PCR-om. Aminokiseline mogu biti klasifikovane u grupe prema njihovim fizičko-hemijskim osobinama kao što su naelektrisanje i polaritet. Konzervativne aminokiselinske supstitucije su one u kojima se aminokiselinski ostatak zamenjuje aminokiselinom unutar iste grupe. Na primer, aminokiseline mogu biti klasifikovane prema naelektrisanju: pozitivno naelektrisane aminokiseline uključuju lizin, arginin, histidin, negativno naelektrisane aminokiseline uključuju asparaginsku kiselinu, glutaminsku kiselinu, aminokiseline neutralnog naelektrisanja uključuju alanin, asparagin, cistein, glutamin, glicin, izoleucin, leucin, metionin, fenilalanin, prolin, serin, treonin, triptofan, tirozin i valin. Dodatno,
2
aminokiseline mogu biti klasifikovane prema polaritetu: polarne aminokiseline uključuju arginin (bazni, polarni), asparagin, asparaginsku kiselinu (kisela, polarna), glutaminsku kiselinu (kisela, polarna), glutamin, histidin (bazni, polarni), lizin (bazni, polarni), serin, treonin i tirozin; nepolarne aminokiseline uključuju alanin, cistein, glicin, izoleucin, leucin, metionin, fenilalanin, prolin, triptofan i valin. Prema tome, jedan ili više aminokiselinskih ostataka unutar CDR regiona može biti zamenjen drugim aminokiselinskim ostacima iz iste grupe i izmenjeno antitelo može biti ispitano u kontekstu zadržavanja funkcije (tj. funkcija prethodno navedenih od (c) do (1) iznad) upotrebom funkcionalnih testova koji su ovde opisani. U određenim primerima izvođenja, ne menja se više od jednog, više od dva, više od tri, više od četiri, više od pet ostataka unutar određene sekvence ili CDR regiona. Primeri konzervativnih aminokiselinskih supstitucija su prikazani u Tabeli 33.
Tabela 33
[0163] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen iz CAR može sadržavati linker koji povezuje varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca vanćelijskog domena koji vezuje antigen. Kao što se ovde upotrebljava, termin "linker" se odnosi na funkcionalnu grupu (npr. hemijsku ili polipeptidnu) koja kovalentno vezuje dva ili više polipeptida ili nukleinskih kiselina tako da su povezani jedni sa drugima. Kao što se ovde upotrebljava, "peptidni linker" se odnosi na jednu ili više aminokiselina koje se koriste za spajanje dva proteina zajedno (npr. u par VHi VLdomena). Neograničavajući primeri peptidnih linkera su opisani u Shen i saradnici, Anal. Chem.80(6):1910-1917 (2008) i WO 2014/087010.
[0164] U jednom neograničavajućem primeru, linker je G4S linker koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, nukleotidna sekvenca koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:98 je navedena u SEQ ID NO:99. U jednom neograničavajućem primeru, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:284. U određenim primerima izvođenja, nukleotidna sekvenca koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:307 je navedena u SEQ ID NO:285.
[0165] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:286, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGS [SEQ ID NO:286].
[0166] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:287, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
SGGSGGS [SEQ ID NO:287].
[0167] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:288, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGS [SEQ ID NO:288].
[0168] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:289, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGGS [SEQ ID NO:289].
[0169] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:290, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGGSGGGGGGGS [SEQ ID NO:290].
[0170] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:291, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:291].
[0171] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:292, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:292].
[0172] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:293, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:293].
[0173] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:294, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO:294].
[0174] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:295, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
EPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO:295].
[0175] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:296, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GGGGSGGGSEPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO:296].
[0176] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:297, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP [SEQ ID NO:297].
[0177] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:298, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
GSGSGS [SEQ ID NO:298].
[0178] U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:299, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
AAA [SEQ ID NO:299].
[0179] Dodatno, vanćelijski domen koji vezuje antigen može sadržavati liderski ili signalni peptid koji usmerava nastali protein u endoplazmatski retikulum. Signalni peptid ili liderska sekvenca mogu biti od suštinskog značaja ukoliko se CAR dalje glikoziluje i usidrava u ćelijsku membranu. Signalna ili liderska sekvenca može biti peptidna sekvenca (duga oko 5, oko 10, oko 15, oko 20, oko 25 ili oko 30 aminokiselina) prisutna na N-kraju novosintetisanih proteina, koja usmerava njihov ulazak u sekretorni put. U neograničavajućim primerima, signalni peptid je kovalentno vezan za 5' kraj vanćelijskog domena koji vezuje antigen. U određenim primerima izvođenja, signalni peptid sadrži CD8 polipeptid koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:268, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
MALPVTALLLPLALLLHAAR [SEQ ID NO:268]
[0180] Nukleotidna sekvenca koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:268 je navedena u SEQ ID NO:269, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
ATGGCTCTCCCAGTGACTGCCCTACTGCTTCCCCTAGCGCTTCTCCTGCATGCAGCTCGT [SEQ ID NO:269]
[0181] U određenim primerima izvođenja, signalni peptid sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:282, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
METDTLLLWVLLLWVPGSTG [SEQ ID NO:282]
[0182] Nukleotidna sekvenca koja kodira aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:282 je navedena u SEQ ID NO:283, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
ATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGA [SEQ ID NO:283]
[0183] U određenim primerima izvođenja, humani scFv sadrži varijabilni region teškog lanca, varijabilni region lakog lanca, linkerski peptid između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca i His-tag i HA-tag. U određenim primerima izvođenja, aminokiselinska sekvenca His-taga i HA-taga sadrži aminokiselinsku sekvencu iz SEQ ID NO:409, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO:409]
[0184] Nukloetidna sekvenca koja kodira SEQ ID NO:409 je SEQ ID NO:410, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0185] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za humani GPRC5D polipeptid koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja,
4
vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za jedan, dva, tri ili četiri od N-terminalnog regiona (aminokiseline 1-27 iz SEQ ID NO:97), ECL1 regiona (aminokiseline 85-93 iz SEQ ID NO:97), ECL2 regiona (aminokiseline 145-167 iz SEQ ID NO:97) i ECL3 regioa (aminokiseline 226-239 iz SEQ ID NO:97). U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za epitopski region u N-terminalnom regionu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, epitopski region koga čine aminokiseline 16-23 iz SEQ ID NO:97 i epitopski region koga čine aminokiseline 10-17 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u N-terminalnom regionu sadrži aminokiseline 15-23 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u N-terminalnom regionu sadrži aminokiseline 16-25 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u N-terminalnom regionu sadrži aminokiseline 10-17 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u N-terminalnom regionu sadrži aminokiseline 5-17 iz SEQ ID NO:97.
[0186] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za epitopski region u ECL1 regionu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, epitopski region koga čine aminokiseline 85-95 iz SEQ ID NO:97.
[0187] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za epitopski region u ECL2 regionu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, epitopski region koga čine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u ECL2 regionu sadrži aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u ECL2 regionu sadrži aminokiseline 157-167 iz SEQ ID NO:97.
[0188] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za epitopski region u ECL3 regionu, uključujući, ali ne ograničavajući se na, epitopski region koga čine aminokiseline 230-237 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u ECL3 regionu sadrži aminokiseline 229-237 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u ECL3 regionu sadrži aminokiseline 230-243 iz SEQ ID NO:97. U određenim primerima izvođenja, epitopski region u ECL3 regionu sadrži aminokiseline 227-237 iz SEQ ID NO:97.
[0189] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koju čine epitopski region koga čine aminokiseline 16-25 iz SEQ ID NO:97, epitopski region koga čine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97 i epitopski region koga čine aminokiseline 229-237 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 15. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:57. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:58. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:208, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:209, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:210, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:211, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:212 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:213. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je ET150-2 scFv (ili ET150-152 scFv).
[0190] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 5-17 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona koga čine aminokiseline 85- 95 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 157-164 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 16. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:61. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:62. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:214, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:215, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:216, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:217, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:218 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:219. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je ET150-155 scFv (ili ET150-5 scFv).
[0191] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za jedan ili dva epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 15-23 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 230-243 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:65. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:66, kao što je prikazano u Tabeli 17. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65 i VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:220, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:221, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:222, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:223, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:224 i VLCDR3 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:225. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je ET150-8 scFv (ili ET150-158 scFv).
[0192] U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen se vezuje za jedan, dva ili tri epitopska regiona izabrana iz grupe koja se sastoji od epitopskog regiona koga čine aminokiseline 10-17 iz SEQ ID NO:97, epitopskog regiona koga čine aminokiseline 157-167 iz SEQ ID NO:97 i epitopskog regiona koga čine aminokiseline 227-237 iz SEQ ID NO:97. Na primer, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70, opciono sa (iii) linkerskom sekvencom, na primer linkerskim peptidom, između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca. U određenim primerima izvođenja, linker sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:98. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je scFv-Fc fuzioni protein ili humani IgG pune dužine sa VHi VLregionima ili CDR izabranima iz Tabele 18. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:69. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLsa aminokiselinskom sekvencom koja je najmanje oko 80%, oko 81%, oko 82%, oko 83%, oko 84%, oko 85%, oko 86%, oko 87%, oko 88%, oko 89%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98% ili oko 99% homologna aminokiselinskoj sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:70. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLkoga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69 i VLkoga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227 ili njene konzervativne modifikacije i VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:229 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227 ili njene konzervativne modifikacije, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR1 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:229 ili njene konzervativne modifikacije, VLCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 ili njene konzervativne modifikacije i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231 ili njene konzervativne modifikacije. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži VHCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:226, VHCDR2 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:227, VHCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:228, VLCDR1 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:229, VLCDR2 koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:230 i VLCDR3 koga č ine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:231. U određenim primerima izvođenja, vanćelijski domen koji vezuje antigen je ET150-18 scFv (ili ET150-168 scFv).
Transmembranski domen CAR
[0193] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, transmembranski domen CAR sadrži hidrofobni alfa heliks koja prolazi kroz najmanje deo membrane. Različiti transmembranski domeni dovode do različite stabilnosti receptora. Nakon prepoznavanja antigena, receptori se grupišu i signal se prenosi u ćeliju. U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, transmembranski domen CAR može sadržavati polipeptid CD8, polipeptid CD28, polipeptid CD3ζ, polipeptid CD4, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid CTLA-4, polipeptid PD-1, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju.
[0194] U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen CAR koji je ovde opisan sadrži polipeptid CD28. Polipeptid CD28 može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili 100% homologna sekvenci sa NCBI referentnim brojem: P10747 ili NP_006130 (SEQ ID NO:270), ili sa njenim fragmentima, i/ili može opciono sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije. U neograničavajućim primerima izvođenja, CD28 polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je uzastopni deo SEQ ID NO:270 dužine od najmanje 20, ili najmanje 30, ili najmanje 40, ili najmanje 50 i do 220 aminokiselina. Alternativno ili dodatno, u neograničavajućim raznim primerima izvođenja, polipeptid CD28 ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama 1 do 220, 1 do 50, 50 do 100, 100 do 150, 150 do 200 ili 200 do 220 iz SEQ ID NO:270. U određenim primerima izvođenja, CAR koji je ovde opisan čine transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28. U određenim primerima izvođenja, polipeptid CD28 koji je sadržan u transmembranskom domenu i unutarćelijskom domenu je sa aminokiselinskom sekvencom u vidu aminokiselina 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0195] SEQ ID NO:270 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0196] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul CD28 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid CD28. U određenim primerima izvođenja, molekul CD28 nukleinske kiseline koji kodira polipeptid CD28 je sadržan u transmembranskom domenu i unutarćelijskom domenu (npr. kostimulatornom signalnom regionu) CAR koji je ovde opisan (aminokiseline 114 do 220 iz SEQ ID NO:270) i obuhvata nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:271, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
[0197] U određenim primerima izvođenja, transmembranski domen CAR koji je ovde opisan, sadrži polipeptid CD8. Polipeptid CD8 može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili 100% homologna sekvenci sa NCBI referentnim brojem: AAH25715 (SEQ ID NO:404), ili sa njenim fragmentima, i/ili može opciono sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije. U neograničavajućim primerima izvođenja, polipeptid CD8 može imati aminokiselinsku sekvencu koja je uzastopni deo SEQ ID NO:404 i dužine od najmanje 20, ili najmanje 30, ili najmanje 40, ili najmanje 50, ili najmanje 70, ili najmanje 100, ili najmanje 150, ili najmanje 200 i do 235 aminokiselina. Alternativno ili dodatno, u raznim neograničavajućim primerima izvođenja, polipeptid CD28 ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama od 1 do 235, 1 do 50, 50 do 100, 100 do 150, 150 do 200, 130 do 210 do 2350 iz SEQ ID NO:404. U određenim primerima izvođenja, CD8 polipeptid koji je sadržan u transmembranskom domenu ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama 137 do 207 iz SEQ ID NO:404.
[0198] SEQ ID NO:226 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0199] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul CD8 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira CD8. U određenim primerima izvođenja, molekul CD8 nukleinske kiseline koji kodira polipeptid CD8 je sadržan u transmembranskom domenu CAR koji je ovde opisan (aminokiseline 137 do 207 iz SEQ ID NO:404) i čini nukleinsku kiselinu sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:4 kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
[0200] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, CAR takođe može sadržavati spejserski region koji povezuje vanćelijski domen koji vezuje antigen sa transmembranskim domenom. Spacer region može biti dovoljno fleksibilan da dozvoli domenu vezivanja antigena da se orijentiše u različitim pravcima da bi se olakšalo prepoznavanje antigena. Spejserski region mogu činiti zglobni region iz IgG1, ili CH2CH3region imunoglobulina, i delovi CD3.
Unutarćelijski domen CAR
[0201] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, unutarćelijski domen CAR može sadržavati polipeptid CD3ζ, koji može aktivirati ili stimulisati ćeliju (npr. ćeliju limfoidne loze, npr. T-ćeliju). CD3ζ se sastoji od tri ITAM i prenosi aktivacioni signal ćeliji (npr. ćeliji limfoidne loze, npr. T-ćeliji) nakon vezivanja antigena. Polipeptid CD3ζ može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna sekvenci navedenoj u SEQ ID NO:272, ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije. U neograničavajućim primerima izvođenja, polipeptid CD3ζ može imati aminokiselinsku sekvencu koja je uzastopni deo SEQ ID NO:272 sa dužinom od najmanje 20, ili najmanje 30, ili najmanje 40, ili najmanje 50 i do 163 aminokiseline. Alternativno ili dodatno, u raznim neograničavajućim primerima izvođenja, polipeptid CD3ζ ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama 1 do 163, 1 do 50, 50 do 100, 100 do 150 ili 150 do 163 iz SEQ ID NO:272. U određenim aspektima, polipeptid CD3ζ sadržan u unutarćelijskom domenu CAR koji je ovde opisan ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama 52 do 163 iz SEQ ID NO:272.
[0202] SEQ ID NO:272 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0203] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul CD3ζ nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid CD3ζ. U određenim primerima izvođenja, molekul nukleinske kiseline CD3ζ koji kodira polipeptid CD3ζ, a koji se nalazi u unutarćelijskom domenu CAR koji su ovde opisani (aminokiseline 52 do 163 iz SEQ ID NO:272) sadrži nukleinske kiseline koje imaju sekvencu navedenu u SEQ ID NO:273, kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
[0204] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, unutarćelijski domen CAR dalje sadrži najmanje jedan signalni region. Najmanje jedan signalni region može uključivati polipeptid CD28, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid DAP-10, polipeptid PD-1, polipeptid CTLA-4, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju.
[0205] U određenim primerima izvođenja, signalni region je ko-stimulatorni signalni region. U određenim primerima izvođenja, ko-stimulatorni region sadrži najmanje jedan ko-stimulatorni molekul, koji može obezbediti optimalnu aktivaciju limfocita. Kao što se ovde upotrebljava, "ko-stimulatorni molekuli" se odnose na molekule ćelijske površine drugačije od antigenskih receptora ili njihovih liganada, koji su potrebni za efikasan odgovor limfocita na antigen. Najmanje jedan ko-stimulatorni signalni region može uključivati polipeptid CD28, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid DAP-10 polipeptid ili njihovu kombinaciju. Kostimulatorni molekul se može vezati za ko-stimulatorni ligand, koji je protein eksprimiran na ćelijskoj površini i koji nakon vezivanja za svoj receptor proizvodi ko-stimulatorni odgovor, tj. unutarćelijski odgovor koji utiče na stimulaciju kada se antigen veže za svoj CAR molekul. Kostimulatorni ligandi uključuju, ali nisu ograničeni na, CD80, CD86, CD70, OX40L, 4-1BBL, CD48, TNFRSF14 i PD-L1. Kao jedan primer, ligand 4-1BB (tj. 4-1BBL) se može vezivati za 4-1BB (takođe označen kao "CD137") da bi se obezbedio unutarćelijski signal koji u kombinaciji sa CAR signalom indukuje efektorske ćelijske funkcije kod CAR<+>T-ćelija. CAR koji uključuju unutarćelijski domen koji sadrži ko-stimulatorni signalni region koji obuhvata 4-1BB, ICOS ili DAP-10 su opisani u U.S. 7,446,190 (npr. nukleotidna sekvenca koja kodira 4-1BB je u U.S.7,446,190 navedena u SEQ ID NO:15, nukleotidna sekvenca koja kodira ICOS je navedena u SEQ ID NO:16, a nukleotidna sekvenca koja kodira DAP-10 je navedena u SEQ ID NO:17). U određenim primerima izvođenja, unutarćelijski domen CAR sadrži ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28. U određenim primerima izvođenja, unutarćelijski domen CAR sadrži ko-stimulatorni signalni region koji sadrži dva ko-stimulatorna molekula: CD28 i 4-1BB ili CD28 i OX40.
[0206] 4-1BB može delovati kao ligand faktora nekroze tumora (TNF) i imati stimulatornu aktivnost. Polipeptid 4-1BB može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili 100% homologna sekvenci sa NCBI referentnim brojem: P41273 ili NP_001552 (SEQ ID NO:274), ili njenim fragmentima, i/ili može opciono sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije. U određenim primerima izvođenja, 4-1BB polipeptid koji se nalazi u unutarćelijskom domenu CAR koji je ovde opisan, ima aminokiselinsku sekvencu sa aminokiselinama 214 do 255 iz SEQ ID NO:274. SEQ ID NO:274 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0207] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul 4-1BB nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid 4-1BB. U određenim primerima izvođenja, molekul 4-1BB nukleinske kiseline koji kodira 4-1BB polipeptid se nalazi u unutarćelijskom domenu CAR koji su ovde opisani (aminokiseline 214 do 255 iz SEQ ID NO:274) i sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:300, koja je kao što je obezbeđeno u nastavku teksta.
aaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagagga
agatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg [SEQ ID NO: 300]
[0208] OX40 polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili 100% homologna sekvenci sa NCBI referentnim brojem: P43489 ili NP_003318 (SEQ ID NO:275), ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0209] SEQ ID NO:275 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0210] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul OX40 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid OX40.
[0211] Polipeptid ICOS može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili 100% homologna sekvenci sa NCBI referentnim brojem: NP_036224 (SEQ ID NO:276), ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0212] SEQ ID NO:276 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0213] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul ICOS nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira ICOS.
[0214] CTLA-4 je inhibitorni receptor koji eksprimiraju aktivirane T-ćelije, a koji, kada su angažovani sa svojim odgovarajućim ligandima (CD80 i CD86; B7-1 i B7-2, tim redom), posreduje u aktiviranoj inhibiciji ili anergiji T-ćelija. I u pretkliničkim i u kliničkim studijama, blokada CTLA-4 sistemskom infuzijom antitela, pojačala je endogeni anti-tumorski odgovor iako su, u kliničkoj postaci, bile prisutne značajne nepredviđene toksičnosti.
[0215] CTLA-4 sadrži vanćelijski V domen, transmembranski domen i citoplazmatski rep. Okarakterisane su i alternativne varijante obrade RNK, koje kodiraju različite izoforme. Izoforma vezana za membranu funkcioniše kao homodimer koji je međusobno povezan disulfidnom vezom, dok solubilna izoforma funkcioniše kao monomer. Unutarćelijski domen je sličan onome kod CD28, po tome što nema intrinzičnu katalitičku aktivnost i sadrži jedan YVKM motiv koji je u stanju da veže PI3K, PP2A i SHP-2, kao i jedan motiv bogat prolinom koji je u stanju da veže proteine koji sadrže SH3. Deluje se da je jedna od uloga CTLA-4 u inhibiciji T-ćelijskih odgovora direktno delovanje putem defosforilacije SHP-2 i PP2A u signalnim proteinima postavljenim proksimalno u odnosu na TCR, kao što su to CD3 i LAT. CTLA-4 takođe može uticati na signalizaciju indirektno, putem kompeticije sa CD28 u vezivanju CD80/86. Pokazano je takođe da se CTLA-4 vezuje i/ili da stupa u interakciju sa PI3K, CD80, AP2M1 i PPP2R5A.
[0216] U skladu sa predmetnom pronalaska koji je ovde opisan, CTLA-4 polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna referentnom broju: P16410.3 (SEQ ID NO:277) iz UniProtKB/Swiss-Prot baze (homologija ovde može biti utvrđena upotrebom standardnog kompjuterskog programa kao š to su BLAST ili FASTA), ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0217] SEQ ID NO:277 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0218] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul CTLA-4 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira CTLA-4.
[0219] PD-1 je negativan imunski regulator aktiviranih T-ćelija nakon interakcije sa svojim odgovarajućim ligandima PD-L1 i PD-L2, eksprimiranim na endogenim makrofagima i dendritičnim ćelijama. PD-1 je membranski protein tipa I, od 268 aminokiselina. PD-1 ima dva liganda, PD-L1 i PD-L2, koji su članovi familije B7. Proteinska struktura se sastoji od vanćelijskog IgV domena praćenog transmembranskim regionom i unutarćelijskim repom. Unutarćelijski rep sadrži dva mesta fosforilacije koja se nalaze u inhibitornom motivu imunoreceptora zasnovanom na tirozinu i u motivu prekidača imunoreceptora zasnovanom na tirozinu, tako da PD-1 negativno reguliše TCR signale. SHP-I i SHP-2 fosfataze se vezuju za citoplazmatski rep PD-1 nakon vezivanja liganda. Pozitivna regulacija PD-L1 je jedan od mehanizama kojim tumorske ćelije mogu izbeći imunski sistem domaćina. U pretkliničkim i kliničkim ispitivanjima, blokada PD-1 sa antagonističkim antitelima je indukovala anti-tumorske odgovore posredovane endogenim imunskim sistemom domaćina.
[0220] U skladu sa ovde opisanim predmetom pronalaska, PD-1 polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna sa NCBI referentnim brojem: NP_005009.2 (SEQ ID NO:278), ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0221] SEQ ID NO:278 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0222] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, "molekul PD-1 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira PD-1.
[0223] Protein aktivacije limfocita 3 (LAG-3) je negativan imunski regulator imunskih ćelija. LAG-3 pripada superfamiliji imunoglobulina (lg) i sadrži 4 vanćelijska domena slična Ig. LAG3 gen sadrži 8 egzona. Svi podaci o sekvenci, organizacija egzona/introna i hromozomskoj lokaciji ukazuju na blisku vezu LAG3 sa CD4. LAG3 je takođe označen kao CD223 (klaster diferencijacije 223).
[0224] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, LAG-3 polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna referenci broj: P18627.5 (SEQ ID NO:279) iz UniProtKB/Swiss-Prot baze, ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0225] SEQ ID NO:279 je obezbeđena u nastavku teksta:
1
[0226] U skladu sa predmetom koji je ovde opisan, "molekul LAG-3 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid LAG-3.
[0227] Receptor prirodnih ćelija ubica 2B4 (2B4) posreduje u ubijanju ćelija koje nije ograničeno na MHC i nalazi se na NK ćelijama i podskupovima T-ćelija. Do danas, funkcija 2B4 se još uvek istražuje, pri čemu se veruje da je izoforma 2B4-S aktivirajući receptor, dok se za izoformu 2B4-L veruje da je negativan imunski regulator imunskih ćelija. 2B4 postaje angažovan nakon vezivanja svog liganda visokog afiniteta, CD48. 2B4 sadrži motiv prekidača na bazi tirozina, molekulski “prekidač” koji omogućava proteinu da se poveže sa raznim fosfatazama. 2B4 je takođe označen kao CD244 (klaster diferencijacije 244).
[0228] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, polipeptid 2B4 može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna referenci broj: Q9BZW8.2 (SEQ ID NO:280) iz UniProtKB/Swiss-Prot baze, ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0229] SEQ ID NO:280 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0230] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, "molekul 2B4 nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira 2B4.
[0231] Ekspresija prigušivača B- i T-limfocita (BTLA) se indukuje tokom aktivacije T-ćelija, a BTLA ostaje eksprimiran na Th1 ćelijama, ali ne i Th2 ćelijama. Slično kao PD1 i CTLA4, BTLA interaguje sa homologom B7, B7H4. Ipak, za razliku od PD-1 i CTLA-4, BTLA ispoljava inhibiciju T-ćelija putem interakcije sa receptorima familije nekroze tumora (TNF-R), a ne samo sa B7 familijom receptora ćelijske površine. BTLA je ligand superfamilije faktora nekroze tumora (receptora), člana 14 (TNFRSF14), poznatog i kao posrednik ulaska virusa herpesa (HVEM). BTLA-HVEM kompleksi negativno regulišu T-ćelijske imunske odgovore. Pokazano je da aktivacija BTLA inhibira funkciju humanih CD8<+>T-ćelija specifičnih za kancer. BTLA je takođe označen kao CD272 (klaster diferencijacije 272).
[0232] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, BTLA polipeptid može imati aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 85%, oko 90%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98%, oko 99% ili oko 100% homologna referenci broj: Q7Z6A9.3 (SEQ ID NO:281) iz UniProtKB/Swiss-Prot baze, ili njenim fragmentima, i/ili opciono može sadržavati do jedne ili do dve ili do tri konzervativne aminokiselinske supstitucije.
[0233] SEQ ID NO:281 je obezbeđena u nastavku teksta:
[0234] U skladu sa predmetom pronalaska koji je ovde opisan, "molekul BTLA nukleinske kiseline" se odnosi na polinukleotid koji kodira polipeptid BTLA.
[0235] U određenim primerima izvođenja, CAR sadrži vanćelijski region koji vezuje antigen koji se specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), transmembranski domen koji sadrži polipeptid
2
CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ζ, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, kao što je prikazano na Slici 1. Kao što je prikazano na Slici 1, CAR takođe sadrži signalni peptid ili lidersku sekvencu kovalentno vezanu za 5' kraj vanćelijskog domena koji vezuje antigen. U određenim primerima izvođenja, signalni peptid sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:282.
[0236] U određenim primerima izvođenja, CAR sadrži vanćelijski region koji vezuje antigen koji se specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ζ, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB, kao što je prikazano na Slici 6. Kao što je prikazano na Slici 6, CAR takođe sadrži signalni peptid ili lidersku sekvencu, kovalentno vezanu za 5' kraj vanćelijskog domena koji vezuje antigen. U određenim primerima izvođenja, signalni peptid sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:282.
[0237] U pojedinim primerima izvođenja, CAR predmetnog pronalaska koji je ovde opisan može dalje sadržavati inducibilni promotor, za ekspresiju sekvenci nukleinskih kiselina u humanim ćelijama. Promotori za upotrebu u ekspresiji CAR gena mogu biti konstitutivni promotori, kao što je promotor ubikvitina C (UbiC).
[0238] Predmet pronalaska koji je ovde opisan takođe obezbeđuje izolovani molekul nukleinske kiseline koji kodira CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji je ovde opisan, ili njegov funkcionalni deo. U određenim primerima izvođenja, izolovani molekul nukleinske kiseline kodira ovde opisan CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji sadrži scFv koji se specifično vezuje za humani GPRC5D, transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28. U određenim primerima izvođenja, scFv je humani scFv. U određenim primerima izvođenja, scFv je mišji scFv. U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:397, koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0239] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:398 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0240] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:399 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
4
[0241] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:400 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0242] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:401 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0243] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:402 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0244] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:403 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
[0245] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:406 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
1
[0246] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:407 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
2
[0247] U jednom specifičnom neograničavajućem primeru, izolovani molekul nukleinske kiseline sadrži nukleinske kiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:408 koja je obezbeđena u nastavku teksta:
4
[0248] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:406, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D 28z CAR1) koji sadrži humani scFv koga čine varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98 koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koji sadrži aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, pri čemu CD28 obuhvata transmembranski domen i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži aminokiseline od 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0249] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:397, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D 28z CAR2) koji sadrži humani scFv koga čine varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koji sadrži aminokiseline 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, pri čemu CD28 obuhvata transmembranski domen i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži aminokiseline od 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0250] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:398, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D 28z CAR5) koji sadrži humani scFv koga čine varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, pri čemu CD28 obuhvata transmembranski domen i ko-stimulatorni signalni region koga čine aminokiseline od 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0251] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:399, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D 28z CAR8) koji sadrži humani scFv koga čine varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, pri čemu CD28 obuhvata transmembranski domen i ko-stimulatorni signalni region koga čine aminokiseline od 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0252] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:400, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D 28z CAR18) koga č ini humani scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:69, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga čine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, pri čemu CD28 obuhvata transmembranski domen i ko-stimulatorni signalni region koga čine aminokiseline od od 114 do 220 iz SEQ ID NO:270.
[0253] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:401, kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D BBz CAR1) koga čini humani scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:53, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:54 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 koga čine aminokiseline od 137 do 207 iz SEQ ID NO:404 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB sa aminokiselinama 214-255 iz SEQ ID NO:274. Nukleotidne sekvence 6-856 iz SEQ ID NO:401 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 864-1076 iz SEQ ID NO:401 kodiraju polipeptid CD8 koji se nalazi u transmembranskom domenu. Nukleotidne sekvence 1077-1202 iz SEQ ID NO:401 kodiraju polipeptid 4-1BB koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Nukleotidne sekvence 1203-1541 iz SEQ ID NO:401 kodiraju polipeptid CD3ξ koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Ostali delovi SEQ ID NO:401 su prikazani u Tabeli 34.
[0254] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom iz SEQ ID NO:407 kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D BBz CAR2) koga čini humani scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:57, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:58 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, pri čemu je linker pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 koga č ine aminokiseline od 137 do 207 iz SEQ ID NO:404 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB sa aminokiselinama 214-255 iz SEQ ID NO:274. Nukleotidne sekvence 5-855 iz SEQ ID NO:402 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 15-812 iz SEQ ID NO:407 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 852-1064 iz SEQ ID NO:407 kodiraju polipeptid CD8 koji se nalazi u transmembranskom domenu. Nukleotidne sekvence 1065-1190 iz SEQ ID NO:407 kodiraju polipeptid 4-1BB koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Nukleotidne sekvence 1191-1529 iz SEQ ID NO:407 kodiraju polipeptid CD3ξ koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Ostali delovi SEQ ID NO:407 su prikazani u Tabeli 41.
[0255] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:402 kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D BBz CAR5) koga čini humani scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:61, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:62 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 koga čine aminokiseline od 137 do 207 iz SEQ ID NO:404 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB sa aminokiselinama 214-255 iz SEQ ID NO:274. Nukleotidne sekvence 5-855 iz SEQ ID NO:402 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 863-1075 iz SEQ ID NO:402 kodiraju polipeptid CD8 koji se nalazi u transmembranskom domenu. Nukleotidne sekvence 1076-1201 iz SEQ ID NO:402 kodiraju polipeptid 4-1BB koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Nukleotidne sekvence 1202-1540 iz SEQ ID NO:402 kodiraju polipeptid CD3ξ koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Drugi delovi SEQ ID NO:402 su prikazani u Tabeli 35.
[0256] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:408 kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D BBz CAR8) koga čini humani scFv koji sadrži varijabilni region teškog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:65, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:66 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 koga č ine aminokiseline od 137 do 207 SEQ ID NO:404 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB sa aminokiselinama 214-255 iz SEQ ID NO:274. Nukleotidne sekvence 15-824 iz SEQ ID NO:408 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 864-1076 iz SEQ ID NO:408 kodiraju polipeptid CD8koji se nalazi u transmembranskom domenu. Nukleotidne sekvence 1077-1202 iz SEQ ID NO:408 kodiraju polipeptid 4-1BB koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Nukleotidne sekvence 1203-1541 iz SEQ ID NO:408 kodiraju polipeptid CD3ξ koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Ostali delovi SEQ ID NO:408 su prikazani u Tabeli 42.
[0257] Izolovani molekul nukleinske kiseline sa nukleotidnom sekvencom SEQ ID NO:403 kodira CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D (označen kao GRPC5D BBz CAR18) koji sadrži humani scFv koga č ine varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO: 69, varijabilni region lakog lanca koga čine aminokiseline sa sekvencom navedenom u SEQ ID NO:70 i linker sa aminokiselinskom sekvencom iz SEQ ID NO:98, koji je pozicioniran između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca, a dalje i transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8 koga čine aminokiseline od 137 do 207 iz SEQ ID NO:404 i unutarćelijski domen koji sadrži CD3ξ polipeptid koga č ine aminokiseline od 52 do 163 iz SEQ ID NO:272, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB sa aminokiselinama 214-255 iz SEQ ID NO:274. Nukleotidne sekvence 6-856 iz SEQ ID NO:403 kodiraju humani scFv. Nukleotidne sekvence 864-1076 iz SEQ ID NO:403 kodiraju polipeptid CD8 koji se nalazi u transmembranskom domenu. Nukleotidne sekvence 1077-1202 iz SEQ ID NO:403 kodiraju polipeptid 4-1BB koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Nukleotidne sekvence 1203-1541 iz SEQ ID NO:403 kodiraju polipeptid CD3ξ koji se nalazi u unutarćelijskom domenu. Ostali delovi SEQ ID NO:403 su prikazani u Tabeli 36.
[0258] U određenim primerima izvođenja, izolovani molekul nukleinske kiseline kodira funkcionalni deo CAR koji je ovde opisan, sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D). Kao što se ovde upotrebljava, termin "funkcionalni deo" se odnosi na bilo koju porciju, deo ili fragment CAR koji je ovde opisan sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), čiji porcija, deo ili fragment zadržavaju biološku aktivnost CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) (matični CAR). Na primer, funkcionalni delovi obuhvataju porcije, delove ili fragmente CAR koji je ovde opisan, sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), koji zadržava sposobnost prepoznavanja ciljne ćelije, da bi se lečila bolest, npr. multipli mijelom, u sličnoj, istoj ili čak većoj meri u odnosu na matični CAR. U određenim primerima izvođenja, izolovani molekul nukleinske kiseline koji kodira funkcionalni deo CAR koji je ovde opisan i koji ciljano deluje na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), može kodirati protein koji sadrži, npr. oko 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% i 95% ili više od matičnog CAR.
III. Imunoreaktivne ćelije
[0259] Predmet pronalaska koji je ovde opisan obezbeđuje imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR koji se sastoji od vanćelijskog domena koji vezuje antigen, transmembranskog domena i unutarćelijskog domena, pri čemu se vanćelijski domen koji vezuje antigen specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), kao što je prethodno opisano. Imunoreaktivne ćelije mogu biti transdukovane sa CAR koji su ovde opisani, tako da ćelije eksprimiraju CAR. Predmet pronalaska koji je ovde opisan takođe obezbeđuje postupke upotrebe takvih ćelija za lečenje tumora, npr. multiplog mijeloma (MM). Imunoreaktivne ćelije predmeta pronalaska koji je ovde opisan, mogu biti ćelije limfoidne loze. Limfoidna loza, koja se sastoji od B-, T- i ćelija prirodnih ćelija ubica (NK), obezbeđuje proizvodnju antitela, regulaciju ćelijskog imunskog sistema, detektovanje stranih agenasa u krvi, detektovanje ćelija koje su strane za domaćina i slično. Neograničavajući primeri imunoreaktivnih ćelija limfoidne loze uključuju T-ćelije, ćelije prirodne ubice (NK), citotoksične T limfocite (CTL), regulatorne T-ćelije, embrionalne matične ćelije i pluripotentne matične ćelije (npr. one iz kojih mogu biti diferencirane limfoidne ćelije). T-ćelije mogu biti limfociti koji sazrevaju u timusu i uglavnom su odgovorni za imunitet posredovan ćelijama. T-ćelije su uključene u adoptivni imunski sistem. T-ćelije predmeta pronalaska koji je ovde opisan mogu biti bilo koja vrsta T-ćelija, uključujući, ali ne ograničavajući se na, pomoćne T-ćelije, citotoksične T-ćelije, memorijske T-ćelije (uključujući centralne memorijske T-ćelije, memorijske T-ćelije slične matičnim ćelijama (ili memorijske T-ćelije slične matičnim) i dve vrste efektorskih memorijskih T-ćelija: npr. TEMćelije i TEMRAćelije), regulatorne T-ćelije (takođe poznate kao supresorske T-ćelije), T-ćelije prirodne ubice, nepromenljive T-ćelije povezane sa sluzokožom i γδ T-ćelije. U određenim primerima izvođenja, T-ćelije koje eksprimiraju CAR eksprimiraju Foxp3 da bi se postigao i održao T regulatorni fenotip. Ćelije prirodne ubice (NK) mogu biti limfociti koji su deo imuniteta posredovanog ćelijama i deluju tokom urođenog imunskog odgovora. NK ćelije ne zahtevaju prethodnu aktivaciju da bi izvršile svoj citotoksičan efekat na ciljne ćelije. Citotoksične T-ćelije (CTL ili T-ćelije ubice) su podgrupa T-limfocita sposobnih da izazovu smrt inficiranih somatskih ili tumorskih ćelija.
[0260] Imunoreaktivne ćelije predmeta pronalaska koji je ovde opisan, mogu eksprimirati vanćelijski domen koji vezuje antigen (npr. scFV, Fab koji je opciono umrežen ili F(ab)2) koji se specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), radi lečenja multiplog mijeloma. Takve imunoreaktivne ćelije mogu biti primenjene subjektu (npr. humanom subjektu) kome je to potrebno, radi lečenja multiplog mijeloma. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivna ćelija je T-ćelija. T-ćelija može biti CD4<+>T-ćelija ili CD8<+>T-ćelija. U određenim primerima izvođenja, T-ćelija je CD4<+>T-ćelija. U određenim primerima izvođenja, T-ćelija je CD8<+>T-ćelija.
[0261] Imunoreaktivna ćelija predmeta pronalaska koji je ovde opisan, može biti dodatno transdukovana sa najmanje jednim ko-stimulatornim ligandom, tako da imunoreaktivna ćelija istovremeno eksprimira ili je indukovana da istovremeno eksprimira CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), kao i najmanje jedan ko-stimulatorni ligand. Interakcija između CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i najmanje jednog ko-stimulatornog liganda obezbeđuje signal koji nije specifičan za antigen i važan je za potpunu aktivaciju imunoreaktivne ćelije (npr. T-ćelije). Ko-stimulatorni ligandi uključuju, ali nisu ograničeni na, članove superfamilije faktora nekroze tumora (TNF) i ligande imunoglobulinske superfamilije (Ig). TNF je citokin uključen u sistemsku inflamaciju i stimuliše akutno-faznu reakciju. Njegova primarna uloga je u regulaciji imunskih ćelija. Članovi TNF superfamilije dele brojne zajedničke osobine. Većina članova TNF superfamilije se sintetiše u vidu transmembranskih proteina tipa II (sa vanćelijskim C-krajem) koji sadrže kratak citoplazmatski segment i relativno dug vanćelijski region. Članovi TNF superfamilije uključuju, ali nisu ograničeni na, faktor rasta nerava (NGF), CD40L (CD40L)/CD154, CD137L/4-1BBL, TNF-α, CD134L/OX40L/CD252, CD27L/CD70, Fas ligand (FasL), CD30L/CD153, faktor nekroze tumora beta (TNFβ)/limfotoksin-alfa (LTα), limfotoksin-beta (LTβ), CD257/B faktor aktiviranja ćelija (BAFF)/Blys/THANK/Tall-1, ligand TNF receptora indukovan glukokortikoidima (GITRL) i ligand koji indukuje apoptozu srodan TNF-u (TRAIL), LIGHT (TNFSF14). Imunoglobulinska (Ig) superfamilija je velika grupa proteina ćelijske površine i solubilnih proteina koji su uključeni u procese prepoznavanja, vezivanja ili adhezije ćelija. Ovi proteini dele strukturne karakteristike sa imunoglobulinima - oni poseduju imunoglobulinski domen (slično se uvijaju). Ligandi imunoglobulinske superfamilije uključuju, ali nisu ograničeni na, CD80 i CD86, oba liganda za CD28, PD-L1/(B7-H1) koji su ligandi za PD-1. U pojedinim primerima izvođenja, najmanje jedan ko-stimulatorni ligand je izabran iz grupe koja se sastoji od 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14, PD-L1 i njihovih kombinacija. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivna ćelija se transdukuje sa jednim ko-stimulatornim ligandom koji je 4-1BBL. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivna ćelija se transdukuje sa dva ko-stimulatorna liganda koji su 4-1BBL i CD80. CAR koji su transdukovani sa najmanje jednim ko-stimulatornim ligandom su opisani u U.S. Patent No.8,389,282.
[0262] Štaviše, ovde opisana imunoreaktivna ćelija može dodatno biti transdukovana sa najmanje jednim citokinom, tako da imunoreaktivna ćelija izlučuje najmanje jedan citokin i eksprimira CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D). U određenim primerima izvođenja, najmanje jedan citokin je izabran iz grupe koja se sastoji od IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17 i IL-21. U određenim primerima izvođenja, citokin je IL-12.
[0263] Humani limfociti specifični ili sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), koji mogu biti upotrebljeni u perifernim donorskim limfocitima, npr. su oni opisani u Sadelain M. i saradnici, 2003 Nat Rev Cancer 3:35-45 (gde su opisani periferni donorski limfociti koji su genetički modifikovani tako da eksprimiraju CAR), u Morgan R.A. i saradnici 2006 Science 314:126-129 (gde su opisani periferni donorski limfociti koji su genetički modifikovani tako da eksprimiraju kompleks T-ćelijskog receptora koji se sastoji od α i β heterodimera, a koji prepoznaje tumorski antigen pune dužine), u Panelli M.C. i saradnici 2000 J Immunol 164:495-504; Panelli M.C. i saradnici 2000 J Immunol 164:4382-4392 (gde su opisane kulture limfocita izvedene iz limfocita koji se infiltriraju u tumor (TIL), u biopsijama tumora) i u Dupont J. i saradnici 2005 Cancer Res 65:5417-5427; Papanicolaou G.A. i saradnici 2003 Blood 102:2498-2505 (gde je opisana selektivnost leukocita periferne krvi koji su specifični za antigen i umnoženi in vitro, upotrebom veštačkih ćelija koje prezentuju antigen (AAPC) ili pulsno aktiviranih dendritičnih ćelija). Imunoreaktivne ćelije (npr. T-ćelije) mogu biti autologne, neautologne (npr. alogene) ili izvedene in vitro od genetički modifikovanih progenitorskih ili matičnih ćelija.
[0264] U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivna ćelija (npr. T-ćelija) koja je ovde opisana, eksprimira od oko 1 do oko 4, od oko 2 do oko 4, od oko 3 do oko 4, od oko 1 do oko 2, od oko 1 do oko 3 ili od oko 2 do oko 3 broja kopija vektora sa CAR koji je ovde opisan/ćeliji, sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D).
[0265] Neprečišćeni izvor CTL može biti bilo koji izvor koji je poznat u oblasti tehnike, kao što su to kosna srž, fetalni, neonatalni ili adultni ili drugi izvor hematopoetskih ćelija, npr. fetalna jetra, periferna krv ili krv iz pupčane vrpce. Za razdvajanje ćelija mogu biti upotrebljene raznovrsne tehnike. Na primer, za početno uklanjanje ćelija koje nisu CTL može biti upotrebljen postupak negativne selekcije. Monoklonska antitela su posebno korisna za identifovanje markera povezanih sa određenim ćelijskim linijama i/ili fazama diferencijacije, kako tokom pozitivne, tako i tokom negativne selekcije.
[0266] Na početku, veliki deo terminalno diferenciranih ćelija može biti uklonjen relativno grubim razdvajanjem. Na primer, za početno razdvajanje mogu biti upotrebljena magnetne globule, da bi se uklonio veliki broj ćelija koje nisu relevantne. Poželjno je i da najmanje oko 80%, obično najmanje 70% ukupnih hematopoetskih ćelija bude uklonjeno pre izolacije ćelija.
[0267] Postupci za razdvajanje uključuju, ali nisu ograničeni na, centrifugiranje u gradijentu gustine; postepeno sleganje; kuplovanje sa česticama koje modifikuju gustinu ćelija; magnetnu separaciju sa magnetnim globulama koja su obložena antitelima; afinitetnu hromatografiju; upotrebu citotoksičnih agenasa spojenih ili upotrebljenih
1
zajedno sa mAb, uključujući, ali ne ograničavajući se na, proteine komplementa i citotoksine; i paniranje sa antitelom vezanim za čvrsti matriks, npr. ploču, čip, elutriaciju ili bilo koju drugu pogodnu tehniku.
[0268] Tehnike za razdvajanje i analizu uključuju, ali nisu ograničene na, protočnu citometriju, koja može biti različitog stepena sofisticiranosti, npr. sa mnoštvom kanala u boji, sa kanalima za detekciju niskog ugla i tupog rasipanja svetlosti, kanalima impedanse.
[0269] Ćelije mogu biti selektovane tako da se razlikuju mrtve ćelije, upotrebom boja koje detektuju mrtve ćelije, kao što je propidijum jodid (PI). Poželjno je da se ćelije prikupljaju u medijumu koji sadrži 2% fetalnog telećeg seruma (FCS) ili 0,2% serumskog albumina govečeta (BSA), ili u bilo kom drugom pogodnom, poželjno sterilnom, izotoničnom medijumu.
IV. Vektori
[0270] Genetička modifikacija imunoreaktivnih ćelija (npr. T-ćelija, CTL ćelija, NK ćelija) može biti postignuta transdukcijom suštinski homogene ćelijske kompozicije sa rekombinantnim DNK ili RNK konstruktom. Vektor može biti retrovirusni vektor (npr. gama retrovirusni), koji se koristi za uvođenje DNK ili RNK konstrukta u genom ćelije domaćina. Na primer, polinukleotid koji kodira receptor spregnut sa G-proteinom (npr. CAR specifičan za GPRC5D može biti kloniran u retrovirusni vektor i ekspresija može biti pokrenuta sa njegovog endogenog promotora, upotrebom retrovirusnih elemenata sa dugim terminalnim ponovcima ili alternativnog unutrašnjeg promotora.
[0271] Mogu biti upotrebljeni i vektori ili RNK koji nisu virusni. Nasumična hromozomska integracija ili ciljana integracija (npr. upotrebom nukleaze, efektorskih nukleaza sličnih aktivatoru transkripcije (TALEN), nukleaza sa cinkanim prstićima (ZFN) i/ili grupisanih, pravilno raspoređenih kratkih palindromskih ponovaka (CRISPR) ili transgenom ekspresijom (npr. upotrebom prirodne ili hemijski modifikovane RNK) mogu takođe biti upotrebljeni.
[0272] Za početnu genetičku modifikaciju ćelija, da bi se obezbedio receptor spregnut sa G-proteinom (npr. ćelije koje eksprimiraju CAR specifičan za GPRC5D, za transdukciju se generalno može koristiti retrovirusni vektor. Ipak, može biti upotrebljen i bilo koji drugi pogodan virusni vektor ili sistem isporuke koji nije virusni. Za naknadnu genetičku modifikaciju ćelija, da bi se obezbedile ćelije koje sadrže kompleks koji prezentuje antigen, a koji sadrži najmanje dva ko-stimulatorna liganda, slično efektivnim se pokazao i retrovirusni transfer gena (transdukcija). Kombinacije retrovirusnog vektora i odgovarajuće linije za pakovanje takođe su pogodne, gde su kapsidni proteini funkcionalani za inficiranje humanih ćelija. Poznate su razne ćelijske linije koje proizvode amfotropne viruse, uključujući, ali ne ograničavajući se na, PA12 (Miller i saradnici (1985) Mol. Cell. Biol. 5:431-437); PA317 (Miller i saradnici (1986) Mol. Cell. Biol. 6:2895-2902); i CRIP (Danos i saradnici (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:6460-6464). Pogodne su i neamfotropne čestice, npr. čestice pseudotipizovane sa VSVG, RD114 ili GALV omotačem i bilo koje druge koje su poznate u oblasti tehnike.
[0273] Mogući postupci transdukcije takođe uključuju direktnu ko-kulturu ćelija sa ćelijama proizvođačima, npr. postupkom Bregni i saradnika (1992) Blood 80:1418-1422, ili kultivisanje samo sa virusnim supernatantom ili koncentrovanim vektorskim štokovima, sa ili bez odgovarajućih faktora rasta i polikatjona, npr. postupkom iz Xu i saradnici (1994) Exp. Hemat.22:223-230; i Hughes i saradnici (1992) J. Clin. Invest.89:1817.
[0274] Transdukcioni virusni vektori mogu biti upotrebljeni da bi se u imunoreaktivnoj ćeliji eksprimirao i kostimulatorni ligand (npr. 4-1BBL i IL-12). Poželjno, izabrani vektor pokazuje visoku efikasnost infekcije i stabilnu integraciju i ekspresiju (pogledati, npr. Cayouette i saradnici, Human Gene Therapy 8:423-430, 1997; Kido i saradnici, Current Eye Research 15:833-844, 1996; Bloomer i saradnici, Journal of Virology 71:6641-6649, 1997; Naldini i saradnici, Science 272:263267, 1996; and Miyoshi i saradnici, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:10319, 1997). Drugi virusni vektori koji mogu biti upotrebljeni obuhvataju, na primer, adenovirusne, lentivirusne i adenoasocirane virusne vektore, iz virusa vakcinije, virusa goveđeg papiloma ili herpes virusa, kao što je Epštajn-Barov virus (pogledati takođe, na primer, vektore iz Miller, Human Gene Therapy 15-14, 1990; Friedman, Science 244:1275-1281, 1989; Eglitis i saradnici, BioTechniques 6:608-614, 1988; Tolstoshev i saradnici, Current Opinion in Biotechnology 1:55-61, 1990; Sharp, The Lancet 337:1277-1278, 1991; Cornetta i saradnici, Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36:311-322, 1987; Anderson, Science 226:401-409, 1984; Moen, Blood Cells 17:407-416, 1991; Miller i saradnici, Biotech-nology 7:980-990, 1989; Le Gal La Salle i saradnici, Science 259:988-990, 1993; i Johnson, Chest 107:77S- 83S, 1995). Retrovirusni vektori su posebno dobro razvijeni i upotrebljavani su u kliničkim uslovima (Rosenberg i saradnici, N. Engl. J. Med 323:370, 1990; Anderson i saradnici, U.S. Pat. No.5,399,346).
[0275] U određenim neograničavajućim primerima izvođenja, vektor koji eksprimira ovde opisani CAR sa ciljanim delovanjem na receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) je retrovirusni vektor, npr. retrovirusni vektor 293galv9.
[0276] Pristupi u kojima se ne upotrebljavaju virusi takođe mogu biti korišćeni za ekspresiju proteina u ćeliji. Na primer, molekul nukleinske kiseline može biti uveden u ćeliju primenom nukleinske kiseline u prisustvu lipofekcije (Feigner i saradnici, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 84:7413, 1987; Ono i saradnici, Neuroscience Letters 17:259, 1990; Brigham i saradnici, Am. J. Med. Sci. 298:278, 1989; Staubinger i saradnici, Methods in Enzimology 101:512, 1983), konjugacijom asijaloorozomukoida i polilizina (Wu i saradnici, Journal of Biological Chemistry 263:14621, 1988; Wu i saradnici, Journal of Biological Chemistry 264:16985, 1989) ili mikro-injeciranjem pod hirurškim uslovima (Wolff i saradnici, Science 247:1465, 1990). Drugi nevirusni načini za transfer gena uključuju transfekciju in vitro upotrebom kalcijum fosfata, DEAE dekstrana, elektroporacije i fuzije protoplasta. Lipozomi takođe mogu biti potencijalno korisni za isporuku DNK u ćeliju. Transplantacija normalnih gena u zahvaćena tkiva subjekta takođe može biti postignuta prenošenjem normalne nukleinske kiseline u tip ćelije koji se može
1 1
kultivisati ex vivo (npr. u autologne ili heterologne primarne ćelije ili njihova potomstva), nakon čega se ćelija (ili njeni potomci) injeciraju u ciljano tkivo ili se injeciraju sistemski. Rekombinantni receptori takođe mogu biti dobijeni ili proizvedeni upotrebom transpozaza ili ciljanih nukleaza (npr. nukleaza sa cinkanim prstićima, meganukleaza ili TALE nukleaza). Tranzijentna ekspresija se može dobiti RNK elektroporacijom.
[0277] Ekspresija cDNK za upotrebu u postupcima polinukleotidne terapije može biti usmerena sa bilo kog pogodnog promotora (npr. humanog citomegalovirusa (CMV), simijan virusa 40 (SV40) ili promotora metalotioneina) i regulisana bilo kojim odgovarajućim regulatornim elementom ili intronom sisara (npr. strukturom pojačivač/promotor/intron faktora elongacije 1 α). Na primer, ukoliko je poželjno, za usmeravanje ekspresije nukleinske kiseline mogu biti upotrebljeni pojačivači za koje je poznato da prvenstveno usmeravaju ekspresiju gena u specifičnim vrstama ćelija. Upotrebljeni pojačivaći mogu obuhvatati, bez ograničenja, one za koje je karakteristično da su pojačivači specifični za tkivo ili ćelije. Alternativno, ukoliko se kao terapijski konstrukt upotrebljava genomski klon, regulacija može biti posredovana srodnim regulatornim sekvencama ili, ukoliko je to poželjno, regulatornim sekvencama izvedenim iz heterolognog izvora, uključujući bilo koji od promotora ili regulatornih elemenata koji su prethodno opisani.
[0278] Dobijene ćelije mogu biti gajene pod uslovima koji su slični onima za nemodifikovane ćelije, pri čemu se modifikovane ćelije mogu umnožiti i upotrebiti u razovrsne svrhe.
V. Polipeptidi i analozi i polinukleotidi
[0279] U predmet koji je ovde opisan su uključeni i vanćelijski domeni koji vezuju antigen, koji se specifično vezuju za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) (npr. scFv, Fab ili (Fab)2), polipeptidi CD3ζ, CD8, CD28 itd. ili njihovi fragmenti i polinukleotidi koji ih kodiraju, a koji su modifikovani tako da pojačavaju njihovu anti-tumorsku aktivnost kada se eksprimiraju u imunoreaktivnoj ćeliji. Predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke za optimizaciju aminokiselinske sekvence ili sekvence nukleinske kiseline, proizvodnjom izmena u sekvenci. Takve izmene mogu obuhvatati određene mutacije, delecije, insercije ili post-translacione modifikacije. Predmet koji je ovde opisan dalje obuhvata analoge bilo kog polipeptida koji javlja se u prirodi i ovde je opisan. Analozi se mogu razlikovati od polipeptida koji se javlja u prirodi i koji je ovde opisan, a razlike mogu biti prisuten u vidu razlika u aminokiselinskoj sekvenci, u post-translacionim modifikacijama ili u oba. Analoge koji predstavljaju predmet pronalaska može generalno karakterisati identičnost od najmanje oko 85%, oko 90%, oko 91%, oko 92%, oko 93%, oko 94%, oko 95%, oko 96%, oko 97%, oko 98 %, oko 99% ili više sa celokupnom ili delimičnom aminokiselinskom sekvencom koja je ovde opisana i javlja se u prirodi. Dužina poređenja sekvenci je najmanje 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 ili više aminokiselinskih ostataka. Ponovo, u pristupu za određivanje stepena identičnosti za primer, može biti upotrebljen program BLAST, sa rezultatom verovatnoće između e<-3>i e<-100>što ukazuje na blisko srodne sekvence. Modifikacije obuhvataju in vivo i in vitro hemijsku derivatizaciju polipeptida, npr. acetilaciju, karboksilaciju, fosforilaciju ili glikozilaciju; takve modifikacije se mogu odvijati tokom sinteze ili obrade polipeptida ili nakon tretmana sa izolovanim modifikujućim enzimima. Analozi se takođe mogu razlikovati od polipeptida koji se javlja u prirodi koji je ovde opisan, shodno izmenama u primarnoj sekvenci. Navedeno obuhvata genetičke varijante, i prirodne i indukovane (na primer, one koje su rezultat nasumične mutageneze zračenjem ili izlaganju etanmetilsulfatu ili mutagenezi specifičnoj za mesto, kao što je opisano u Sambrook, Fritsch i Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2. izd.), CSH Press, 1989, ili Ausubel i saradnici, navedeno iznad). Uključeni su i ciklizovani peptidi, molekuli i analozi koji sadrže ostatke drugačije od L-aminokiselina, npr. D-aminokiseline ili aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi ili one koje su sintetičke, npr. beta (β) ili gama (γ) aminokiseline.
[0280] Pored polipeptida pune dužine, predmet pronalaska koji je ovde opisan, takođe obezbeđuje fragmente bilo kog od polipeptida ili peptidnih domena predmeta koji je ovde opisan. Fragment može imati najmanje 5, 10, 13 ili 15 aminokiselina. U određenim primerima izvođenja, fragment je sa najmanje 20 susednih aminokiselina, najmanje 30 susednih aminokiselina ili najmanje 50 susednih aminokiselina. U određenim primerima izvođenja, fragment je sa najmanje 60 do 80, 100, 200, 300 ili više susednih aminokiselina. Fragmenti predmeta pronalaska koji je ovde opisan, mogu biti generisani postupcima koji su poznati stručnjacima, ili mogu biti rezultat normalne obrade proteina (npr. uklanjanja aminokiselina koje nisu potrebne za biološku aktivnost iz nascentnog polipeptida ili uklanjanja aminokiselina alternativnom obradom iRNK ili događajima alternativne obrade proteina).
[0281] Neproteinski analozi imaju hemijsku strukturu dizajniranu tako da oponaša funkcionalnu aktivnost proteina koji je ovde opisan. Takvi analozi se primenjuju u skladu sa postupcima koji predstavljaju predmet pronalaska koji je ovde opisan. Takvi analozi mogu premašiti fiziološku aktivnost originalnog polipeptida. Postupci dizajna analoga su dobro poznati u oblasti tehnike, a sinteza analoga se može izvesti prema takvim postupcima, modifikovanjem hemijskih struktura, tako da dobijeni analozi povećavaju anti-neoplastičnu aktivnost originalnog polipeptida kada se eksprimiraju u imunoreaktivnoj ćeliji. Ovakve hemijske modifikacije uključuju, ali nisu ograničene na, supstituisanje alternativnih R grupa i variranje stepena zasićenosti na specifičnim atomima ugljenika referentnog polipeptida. Analozi proteina mogu biti relativno otporni na in vivo razlaganje, što rezultuje produženim terapijskim efektom nakon primene. Testovi za merenje funkcionalne aktivnosti uključuju, ali nisu ograničeni na, one opisane u Primerima u nastavku teksta.
[0282] U skladu sa ovde opisanim predmetom, polinukleotidi koji kodiraju vanćelijski domen koji vezuje antigen, koji se specifično vezuje za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) (npr. scFV, Fab ili (Fab)2), CD3ζ, CD8, CD28) mogu biti modifikovani optimizacijom kodona. Optimizacija kodona može izmeniti i prirodne i rekombinantne genske sekvence da bi se postigao najviši mogući nivo produktivnosti u bilo kom datom sistemu ekspresije. Faktori koji su uključeni u različite faze ekspresije proteina uključuju prilagodljivost kodona, strukturu
1 2
iRNK i razne cis-elemente u transkripciji i translaciji. Bilo koji pogodni postupci ili tehnologije optimizacije kodona koji su poznate stručnjacima iz oblasti tehnike, mogu biti upotrebljeni za modifikovanje polinukleotida koji su ovde opisani, uključujući, ali ne ograničavajući se na, OPTIMUMGENE™, Encor i Blue Heron optimizaciju.
VI. Primena
[0283] CAR specifični za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i imunoreaktivne ćelije koje iste eksprimiraju, a koji su predmet pronalaska koji je ovde opisan, mogu biti obezbeđeni subjektu sistemski ili direktno, radi lečenja ili prevencije neoplazije. U određenim primerima izvođenja, CAR specifični za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i imunoreaktivne ćelije koje ih eksprimiraju, direktno se injeciraju u organ od interesa (npr. organ zahvaćen neoplazijom). Alternativno ili dodatno, CAR specifični za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i imunoreaktivne ćelije koje ih eksprimiraju, primenjuju se indirektno organu od interesa, na primer, primenom u cirkulatorni sistem (npr. u vaskulaturu tumora). Sredstva za ekspanziju i diferencijaciju mogu biti obezbeđena pre, tokom ili nakon primene ćelija i kompozicija, da bi se povećala proizvodnja T-ćelija in vitro ili in vivo.
[0284] CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i imunoreaktivne ćelije koje ih eksprimiraju, a koji predstavljaju predmet pronalaska koji je ovde opisan, mogu biti primenjeni u bilo kom fiziološki prihvatljivom nosaču, normalno intravaskularno, iako takođe mogu biti uvedeni u kost ili na drugo pogodno mesto gde ćelije mogu pronaći odgovarajuće mesto za regeneraciju i diferencijaciju (npr. u timus). Uobičajeno je da može biti primenjeno najmanje 1 × 10<5>ćelija, što na kraju dostiže 1 × 10<10>ili više. Ćelijska populacija koja sadrži imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), može sadržavati prečišćenu populaciju ćelija. Stručnjaci iz oblasti tehnike mogu lako utvrditi procenat imunoreaktivnih ćelija u ćelijskoj populaciji, upotrebom raznovrsnih dobro poznatih potupaka kao što je to postupak sortiranja ćelija aktiviran fluorescencijom (FACS). Opsezi čistoće u ćelijskim populacijama koje se sastoje od genetički modifikovanih imunoreaktivnih ćelija koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), mogu biti od oko 50% do oko 55%, od oko 55% do oko 60%, od oko 65% do oko 70%, od oko 70% do oko 75%, od oko 75% do oko 80 %, od oko 80% do oko 85%; od oko 85% do oko 90%, od oko 90% do oko 95% ili od oko 95 do oko 100%. Stručnjaci iz oblasti tehnike lako mogu podestiti i doze (npr. smanjenje čistoće može zahtevati povećanje doze). Imunoreaktivne ćelije mogu biti uvedene injeciranjem, kateterom i sličnim. Ukoliko je poželjno, faktori takođe mogu biti uključeni, uključujući, ali ne ograničavajući se na, interleukine, npr. IL-2, IL-3, IL 6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, kao i druge interleukine, faktore stimulacije kolonija, kao što su G-, M- i GM-CSF, interferoni, npr. γ-interferon.
[0285] Kompozicije koji su ovde opisane obuhvataju farmaceutske kompozicije koje sadrže imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR, specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), i farmaceutski prihvatljiv nosač. Primena može biti autologna ili neautologna. Na primer, imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) i kompozicije koje ga sadrže mogu biti dobijene iz jednog subjekta i biti primenjene istom subjektu ili različitom, kompatibilnom subjektu. T-ćelije dobijene iz periferne krvi, koje predstavljaju predmet pronalaska koji je ovde opisan, ili njihovo potomstvo (npr. in vivo, ex vivo ili in vitro izvedene ćelije) mogu biti primenjene putem lokalizovane injekcije, uključujući primenu kateterom, sistemsko injeciranje, lokalizovanu injekciju, intravensku injekciju ili parenteralnu primenu. Prilikom primene farmaceutske kompozicije koja predstavlja predmet pronalaska (npr. farmaceutske kompozicije koja sadrži imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D)), ona može biti formulisana u jediničnom doznom obliku koji se može injecirati (u vidu rastvora, suspenzije, emulzije).
VII. Formulacije
[0286] Imunoreaktivne ćelije koje generalno eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D), kao i kompozicije koje ih sadrže i predstavljaju predmet ponalaska, mogu biti prikladno obezbeđene u vidu sterilnih tečnih preparata, npr. u vidu izotoničnih vodenih rastvora, suspenzija, emulzija, disperzija ili viskoznih kompozicija, koje mogu biti puferisane do izabranog pH. Tečne preparate je obično lakše pripremiti nego gelove, druge viskozne kompozicije i čvrste kompozicije. Pored toga, tečne kompozicije su nešto pogodnije za primenu, posebno injeciranjem. Viskozne kompozicije, s druge strane, mogu biti formulisane u okviru odgovarajućeg opsega viskoznosti, da bi se obezbedio duži period kontakta sa specifičnim tkivima. Tečne ili viskozne kompozicije mogu sadržavati nosače, koji mogu biti rastvarač ili disperzioni medijum koji sadrži, na primer, vodu, fiziološki rastvor, fiziološki rastvor puferisan fosfatom, poliol (na primer, glicerol, propilen glikol, tečni polietilen glikol i slično) i pogodne smeše istih.
[0287] Sterilni rastvori za injeciranje mogu biti pripremljeni uključivanjem kompozicija koje sadrže imunoreaktivne ćelije koje generalno eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji je ovde opisan, u potrebnoj količini odgovarajućeg rastvarača sa raznim količinama drugih sastojaka, po želji. Takve kompozicije mogu biti u smeši sa pogodnim nosačem, razblaživačem ili ekscipijensom kao što su to sterilna voda, fiziološki rastvor, glukoza, dekstroza ili slično. Kompozicije mogu takođe biti liofilizovane. Kompozicije mogu sadržavati pomoćne supstance kao što su agensi za vlaženje, dispergovanje ili emulgovanje (npr. metilcelulozu), pH puferski agensi, aditivi za obrazovanje gela ili povećanje viskoziteta, konzervansi, arome, boje i slično, u zavisnosti od načina primene i poželjne pripreme. Standardni tekstovi, kao što je "REMINGTON’S
1
PHARMACEUTICAL SCIENCE“, 17. izdanje, 1985, mogu biti konsultovani radi pripreme odgovarajućih preparata, bez nepotrebnog eksperimentisanja.
[0288] Mogu biti dodati i različiti aditivi koji poboljšavaju stabilnost i sterilnost kompozicije, uključujući antimikrobne konzervanse, antioksidanse, helatorne agense i pufere. Sprečavanje delovanja mikroorganizama može biti osigurano raznim antibakterijskim i antifungalnim agensima, na primer, parabenima, hlorobutanolom, fenolom, sorbinskom kiselinom i sličnim. Produžena apsorpcija farmaceutskog oblika koji se može injecirati, može se postići upotrebom agenasa koji odlažu apsorpciju, na primer, alum inurn monostearata i želatina. Bilo koji nosač, razblaživač ili aditiv koji se upotrebljava, mora biti kompatibilan sa imunoreaktivnim ćelijama koje generalno eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji je ovde opisan.
[0289] Kompozicije mogu biti izotonične, odnosno mogu imati isti osmotski pritisak kao krv i tečnost suza. Željena izotoničnost kompozicija koje su ovde opisane, može biti postignuta upotrebom natrijum hlorida, ili drugih farmaceutski prihvatljivih agenasa kao što su dekstroza, borna kiselina, natrijum tartarat, propilen glikol ili druge neorganske ili organske rastvorljive supstance. Natrijum hlorid je poželjan, posebno za pufere koji sadrže natrijumove jone.
[0290] Viskoznost kompozicija, ukoliko je to poželjno, može se održavati na izabranom nivou upotrebom farmaceutski prihvatljivog agensa za zgušnjavanje. Metilceluloza može biti upotrebljena pošto je lako dostupna i ekonomična i sa njom je lako raditi. Druga pogodna sredstva za zgušnjavanje uključuju, na primer, ksantan gumu, karboksimetil celulozu, hidroksipropil celulozu, karbomer i slično. Koncentracija zgušnjivača može zavisiti od sredstva koje je izabrano. Važna premisa je da se upotrebljava količina kojom će se postići odabrani viskozitet. Očigledno, izbor odgovarajućih nosača i drugih aditiva zavisiće od tačnog puta primene i prirode određenog doznog oblika, npr. tečnog doznog oblika (npr. toga da li je kompozicija potrebno formulisati u vidu rastvora, suspenzije, gela ili drugogo tečnog oblika, kao što je oblik sa odloženim oslobađenjm ili oblik ispunjen tečnošću).
[0291] Stručnjaci iz oblasti tehnike će jasno prepoznati da komponente kompozicija treba da budu odabrane tako da budu hemijski inertne i da ne utiču na vijabilnosti ili efikasnost imunoreaktivnih ćelija, kao što je opisano predmetom pronalaska. Ovo neće predstavljati problem stručnjacima sa iskustvom u primeni hemijskih i farmaceutskih principa, ili se problemi mogu i lako izbeći konsultovanjem standardnih tekstova ili jednostavnim eksperimentima (koji ne uključuju nepotrebno eksperimentisanje), iz ovog opisa ili iz dokumenata koji su ovde citirani.
[0292] Jedna od napomena u vezi sa terapijskom upotrebom imunoreaktivnih ćelija koje su ovde prijavljene, u vezi je sa kvantitetom ćelija koji je neophodan za postizanje optimalnog efekta. Količina ćelija koja će biti primenjena će varirati za subjekta koji se leči. U određenim primerima izvođenja, subjektu će biti primenjeno od oko 10<4>do oko 10<10>, od oko 10<5>do oko 10<9>, ili od oko 10<6>do oko 10<8>imunoreaktivnih ćelija koje su predmet ovog pronalaska. Efektivnije ćelije mogu biti primenjene u još manjem broju. U pojedinim primerima izvođenja, humanom subjektu se primenjuje najmanje oko 1 × 10<8>, oko 2 × 10<8>, oko 3 × 10<8>, oko 4 × 10<8>i oko 5 × 10<8>imunoreaktivnih ćelija predmetnog pronalaska. Precizno utvrđivanje onoga što bi se smatralo efektivnom dozom može se zasnivati na faktorima koji su individualni za svakog subjekta, uključujući njihovu veličinu, starost, pol, težinu i stanje određenog subjekta. Stručnjaci iz ove oblasti tehnike mogu lako utvrditi doze na osnovu ovog opisa i znanja iz oblasti tehnike.
[0293] Stručnjak može lako utvrditi količinu ćelija i opcionih aditiva, medijuma i/ili nosača u kompozicijama koje je potrebno primeniti u postupcima predmetnog pronalaska. Uobičajeno je da bilo koji aditivi (pored aktivne ćelije(a) i/ili agensa) budu prisutni u količini od oko 0,001% do oko 50% po težini) rastvora u fiziološkom rastvoru puferisanom fosfatom, dok je aktivan sastojak prisutan sa redom veličine opsega od mikrograma do miligrama, kao što je od oko 0,0001 tež% do oko 5 tež%, od oko 0,0001 tež% do oko 1 tež%, od oko 0,0001 tež% do oko 0,05 tež%, od oko 0,001 tež% do oko 20 tež%, od oko 0,01 tež% do oko 10 tež% ili od oko 0,05 tež% do oko 5 tež.%. Za bilo koju kompoziciju koja će biti primenjenja životinji ili čoveku i za bilo koji određeni postupak primene, potrebno je utvrditi toksičnost, kao što se to č ini određivanjem letalne doze (LD) i LD50 u odgovarajućem životinjskom modelu, npr. kod glodara kao što je miš; i, doza kompozicije(a), koncentracija komponenti u njoj i vreme primene kompozicije(a), koje izazivaju odgovarajući odgovor. Takve odrednice ne zahtevaju nepotrebno eksperimentisanje shodno znanju stručnjaka, upotrebi ovog opisa i dokumenta koji su ovde citirani. Čak se i vreme sekvencijalne primene može utvrditi bez nepotrebnog eksperimentisanja.
VIII. Postupci lečenja
[0294] Mikrookruženje tumora. Tumori imaju mikrookruženje koje je neprijateljsko prema imunskom odgovoru domaćina i isto podrazumeva niz mehanizama malignih ćelija kojima se one š tite od imunskog prepoznavanja i eliminacije. Ovo „neprijateljsko tumorsko mikrookruženje“ obuhvata niz supresivnih faktora uključujući infiltriranje regulatornih CD4<+>T-ćelija (Tregs), supresorskih ćelija izvedenih iz mijeloidne loze (MDSC), makrofaga povezanih sa tumorom (TAM), imunosupresivnih citokina uključujući IL-10 i TGF-β i ekspresiju liganada sa ciljanim delovanjem na imunosupresibne receptore koje esprimiraju aktivirane T-ćelije (CTLA-4 i PD-1). Ovi mehanizmi imunske supresije imaju ulogu u održavanju tolerancije i suzbijanju neodgovarajućih imunskih odgovora, međutim, unutar tumorskog mikrookruženja ovi mehanizmi sprečavaju efektivan anti-tumorski imunski odgovor. Zajedno, ovi imunosupresivni faktori mogu indukovati bilo izraženu anergiju ili apoptozu adoptivno prenetih T-ćelija modifikovanih sa CAR, nakon susreta sa ciljanim tumorskim ćelijama.
[0295] Izazovi u tumorskoj imunologiji. Efektivnan tumorski imunitet zahteva prepoznavanje tumorskih antigena i nesmetanu eliminaciju tumora od strane imunskih efektorskih ćelija. Tumorski antigeni moraju
1 4
sadržavati peptidne epitope koje tumor prezentuje i moraju biti prepoznati od strane specifičnih citotoksičnih T limfocita (CTL). Primarni CTL se moraju umnožiti do dovoljnog broja i migrirati do mesta tumora, gde sazrevaju u efektore da bi izvršili svoje funkcije, koje postaju pojačane dejstvom pomoćnih T-ćelija i prigušene dejstvom Treg i inhibitornih makrofaga.
[0296] Ciljana terapija T-ćelijama sa genetički izmenjenim T-limfocitima. Genetički izmenjena T-ćelija je revolucionarna strategija za potencijalno rešavanje mnogih prethodno uočenih nedostataka ranijih imunoterapijskih pristupa. Tokom prošle godine, istraživači su prijavili dramatične i potpune remisije kod relapsa<17,18>, hemorefraktorne leukemije i metastatskog melanoma<19-21>, koji je dobijen sa autolognim T-ćelijama periferne krvi koje su bile sa ciljanim delovanjem na definisani antigen (CD19 i NY-ESO-1, tim redom).
[0297] Obrazloženje za genetički pristup: Ćelijski inženjering može biti upotrebljen za preusmeravanje T-ćelija ka tumorskim antigenima i za poboljšanje funkcije T-ćelija. Jedan podsticaj za genetičko modifikovanje T-ćelija je potencijal da se poboljšaju preživljavanje i ekspanzija T-ćelija i da se nadoknadi smrt T-ćelija, anergija i supresija imuniteta. Genetički konstruisano ciljano delovanje T-ćelija može takođe biti fino podešeno da bi se sprečilo neželjeno uništavanje normalnih tkiva.
[0298] Himerni antigenski receptori (CAR): T-ćelije specifične za tumor mogu biti generiasen prenosom gena koji kodiraju CAR<22-27>. CAR druge generacije sadrže domen koji se vezuje za tumorski antigen, fuzionisan sa unutarćelijskim signalnim domenom koji je sposoban da aktivira T-ćelije i da sadrži ko-stimulatorni domen dizajniran tako da se povećaju potencija i postojanost T-ćelija<28>. CAR dizajn stoga može pomiriti prepoznavanje antigena sa transdukcijom signala, dve funkcije koje fiziološki nose dva odvojena kompleksa, TCR heterodimer i CD3 kompleks. Vanćelijski domen CAR koji vezuje antigen obično potiče iz mišjeg monoklonskog antitela (mAb) ili iz receptora ili njihovih liganada. Prema tome, prepoznavanje antigena nije ograničeno na MHC<29,30>i stoga je primenljivo bilo kom pacijentu koji eksprimira ciljni antigen, upotrebom istog CAR. Vezivanje antigena od strane CAR pokreće fosforilaciju imunoreceptorskih aktivacionih motiva zasnovanih na tirozinu (ITAM) u unutarćelijskom domenu, inicirajući signalnu kaskadu potrebnu za indukciju citolize, sekreciju citokina i proliferaciju. Pošto se time zaobilazi ograničenje na MHC u prepoznavanju antigena, na funkciju T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje, ne utiču smanjenje HLA ili defekti u mašineriji za obradu antigena.
[0299] Zahtevi za umnožavanja i opstanak T-ćelija: Potrebna je ex vivo proliferacija T-ćelija specifičnih za tumore, a može se reći da je poželjna i in vivo. Proliferacija T-ćelija mora biti praćena preživljavanjem T-ćelija da bi se omogućile apsolutna ekspanzija i postojanost T-ćelija. Da bi se razmnožavale u odgovoru na antigen, T-ćelije moraju primiti dva signala. Jedan se obezbeđuje sa TCR i prepoznavanjem antigenskih peptidnih/MHC kompleksa prikazanih na površini ćelija koje prezentuju antigen (APC)<26>. Drugi se obezbeđuje preko kostimulatornog receptora T-ćelija, kao što su receptori za CD28 ili 4-1BB. Dok citolitička aktivnost T-ćelija ne zahteva istovremenu ko-stimulaciju, postoji kritična potreba za obezbeđivanjem ko-stimulatornih signala da bi se održale anti-tumorske funkcije T-ćelija koje su adoptivno prenete, kao što je prethodno pokazano.<24,28,31-33>.
[0300] Praćenje imuniteta: Limfociti su multifunkcionalni "lekovi" koji ispoljavaju efekte koji se dinamično razvijaju nakon infuzije. Nakon susreta sa antigenom, T-ćelije specifične za tumor, aktiviraju i/ili oslobađaju raznovrsne proteine koji mogu da izazovu ubijanje tumora, proliferaciju T-ćelija i regrutovanje ili imunomodulaciju drugih imunskih ćelija. Prema tome, merenje koji se proteini izlučuju iz kojih ćelija, u kojoj količini i u kojim vremenskim tačkama obezbeđuje dublji uvid u razloge zašto određeni pacijent reaguje ili ne reaguje i obezbeđuje kritične povratne informacije za dizajniranje efektivnijih ispitivanja. Ovi sistemi analize će omogućiti direktna i smislena poređenja kliničkih pristupa i na taj način pomoći u dizajniranju racionalnih terapijskih strategija sledeće generacije.
[0301] Za lečenje, primenjena količina je količina koja je efektivna u proizvodnji željenog efekta. Efektivna količina može biti obezbeđena u jednoj ili u serijama primena. Efektivna količina može biti obezbeđena u vidu bolusa ili kontinuirane perfuzije.
[0302] "Efektivna količina" (ili, "terapijski efektivna količina") je količina dovoljna da utiče na koristan ili željeni klinički rezultat nakon lečenja. Efektivna količina može biti primenjena subjektu u jednoj ili u više doza. U pogledu lečenja, efektivna količina je količina koja je dovoljna da ublaži, poboljša, stabilizuje, preokrene ili uspori napredovanje bolesti, ili da na drugi način smanji patološke posledice bolesti. Efektivnu količinu generalno određuje ordinirajući lekar, od slučaja do slučaja, a shodno znanjima stručnjaka iz oblasti tehnike. Prilikom određivanja odgovarajuće doze za postizanje efektivne količine, u obzir se obično uzima nekoliko faktora. Ovi faktori uključuju starost, pol i težinu subjekta, stanje koje se leči, ozbiljnost stanja i oblik i efektivnu koncentraciju imunoreaktivnih ćelija koje se primenjuju.
[0303] Za adoptivnu imunoterapiju upotrebom T-ćelija specifičnih za antigen, obično se infuzijom primenjuju ćelijske doze opsega od oko 10<6>do oko 10<10>(npr. oko 10<9>). Nakon primene imunoreaktivnih ćelija subjektu i naknadne diferencijacije, indukuju se imunoreaktivne ćelije koje su specifično usmerene na jedan specifičan antigen (npr. receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D)). "Indukcija" T-ćelija može uključivati inaktivaciju T-ćelija specifičnih za antigen, npr. delecijom ili anergijom. Inaktivacija je posebno korisna za uspostavljanje ili ponovno uspostavljanje tolerancije, poput one u autoimunim poremećajima. Imunoreaktivne ćelije koje su ovde opisane, mogu biti primenjene bilo kojim postupcima koji su poznati u oblasti tehnike, uključujući, ali ne ograničavajući se na, pleuralnu primenu, intravensku primenu, subkutanu primenu, intranodalnu primenu, intratumorsku primenu, intratekalnu primenu, intrapleuralnu primenu, intraperitonealnu primenu i direktnu primenu u timus. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivne ćelije i kompozicije koje ih sadrže, intravenski se primenjuju subjektu kome je to potrebno.
[0304] Predmet pronalaska koji je ovde opisan obezbeđuje razne postupke upotrebe imunoreaktivnih ćelija (npr. T-ćelija) koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D). Na primer, predmet pronalaska koji je ovde opisan obezbeđuje postupke za smanjenje opterećenja tumorom kod subjekta.
1
U jednom neograničavajućem primeru, postupak smanjenja opterećenja tumorom obuhvata primenu efektivne količine ovde opisane imunoreaktivne ćelije subjektu, čime se izaziva smrt tumorske ćelije kod subjekta. Imunoreaktivna ćelija koja je ovde opisana može smanjiti broj tumorskih ćelija, smanjiti veličinu tumora i/ili eliminisati tumor kod subjekta. Neograničavajući primeri pogodnog tumora uključuju multipli mijelom Valdenstromovu makroglobulinemiju. U određenim primerima izvođenja, tumor je multipli mijelom.
[0305] Predmet pronalaska koji je ovde opisan takođe obezbeđuje postupke za povećanje ili produžavanje preživljavanja subjekta sa neoplazijom. U jednom neograničavajućem primeru, postupak povećanja ili produženja preživljavanja subjekta sa neoplazijom obuhvata primenu efektivne količine ovde opisane imunoreaktivne ćelije subjektu, čime se povećava ili produžava preživljavanje subjekta. Postupak može smanjiti ili eliminisati opterećenje tumorom kod subjekta. Predmet koji je ovde opisan dalje obezbeđuje postupke za lečenje ili prevenciju neoplazije kod subjekta, koji obuhvataju primenu imunoreaktivne ćelije koja je ovde opisana subjektu.
[0306] Kao što se ovde upotrebljava, termin "neoplazija" se odnosi na bolest koju karakteriše patološka proliferacija ćelije ili tkiva i njihova naknadna migracija u ili invazija drugih tkiva ili organa. Rast neoplazije je obično nekontrolisan i progresivan i odvija se u uslovima koji ne bi izazvali, ili bi prouzrokovali prestanak, umnožavanja normalnih ćelija. Neoplazije mogu uticati na različite vrste ćelija, tkiva ili organa, uključujući, ali ne ograničavajući se na, organ izabran iz grupe koja se sastoji od bešike, debelog creva, kosti, mozga, dojke, hrskavice, glije, jednjaka, jajovoda, žučne kese, srca, creva, bubrega, jetre, pluća, limfnog čvora, nervnog tkiva, jajnika, pleure, pankreasa, prostate, skeletnog mišića, kože, kičmene moždine, slezine, želuca, testisa, timusa, štitne žlezde, dušnika, urogenitalnog trakta, uretera, uretre, materice i vagine, ili nekog od njihovih tkiva ili tipa ćelija. Neoplazije uključuju kancere, kao što su sarkomi, karcinomi ili plazmacitomi (maligni tumori plazma ćelija).
[0307] Kanceri čiji rast može biti inhibiran upotrebom imunoreaktivnih ćelija predmetnog pronalaska koje su ovde opisane, obuhvataju kancere koji obično reaguju na imunoterapiju. Neograničavajući primeri kancera za lečenje uključuju multipli mijelom i Valdenstromovu makroglobulinemiju. U određenim primerima izvođenja, kancer je multipli mijelom.
[0308] Dodatno, predmet koji je ovde opisan obezbeđuje postupke za povećanje proizvodnje citokina koji aktiviraju imunitet u odgovoru na ćeliju kancera kod subjekta. U jednom neograničavajućem primeru, postupak obuhvata primenu imunoreaktivne ćelije koja je ovde opisana subjektu. Citokin koji aktivira imuni sistem može biti faktor stimulacije rasta makrofagnih/granulocitnih kolonija (GM-CSF), IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, regulatorni faktor interferona tipa 7 (IRF7) i njihove kombinacije. U određenim primerima izvođenja, imunoreaktivne ćelije uključuju CAR specifičan za receptore spregnute sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji je ovde opisan, da bi se povećala proizvodnja GM-CSF, IFN-γ i/ili TNF-α.
[0309] Pogodni humani subjekti za terapiju obično obuhvataju dve grupe tretmana koje se mogu razlikovati po kliničkim kriterijumima. Subjekti sa "uznapredovalom bolešću" ili "visokim opterećenjem tumorom" su oni koji nose klinički merljiv tumor (npr. multipli mijelom). Klinički merljiv tumor je onaj koji se može detektovani na osnovu tumorske mase (npr. palpitacijom, CAT skeniranjem, sonogramom, mamografom ili rendgenskim snimanjem; pozitivni biohemijski ili histopatološki markeri sami po sebi nisu dovoljni za identifikaciju ove populacije). Farmaceutska kompozicija opisana u predmetnom pronalasku, primenjuje se subjektu da bi se izazavao anti-tumorski odgovor, sa ciljem ublažavanja njihovog stanja. U idealnom slučaju, smanjenje tumorske mase se javlja kao rezultat, ali svako kliničko poboljšanje predstavlja korist. Kliničko poboljšanje obuhvata smanjenje rizika ili stope progresije ili smanjenje patoloških posledica tumora (npr. multiplog mijeloma).
[0310] Druga grupa pogodnih subjekata je poznata u oblasti tehnike kao "adjuvansna grupa". To su osobe koje su imale istoriju neoplazije (npr. multipli mijelom), ali su reagovali na drugu vrstu terapije. Prethodna terapija je mogla uključivati, ali bez ograničavanja, hiruršku resekciju, radioterapiju i tradicionalnu hemoterapiju. Kao rezultat navedenog, ove osobe nemaju klinički merljiv tumor. Ipak, sumnja se da su izloženi riziku progresije bolesti, bilo u blizini prvobitnog mesta tumora ili usled pojave metastaza. Ovakva grupa dalje može biti podeljena na osobe visokog i niskog rizika. Podela se vrši na osnovu karakteristika uočenih pre ili nakon početnog tretmana. Ove karakteristike su poznate u kliničkoj praksi i odgovarajuće su definisane za svaku različitu neoplaziju. Karakteristike uobičajene za podgrupe visokog rizika su one u kojima je tumor (npr. multipli mijelom) zahvatio susedna tkiva ili koga karakteriše zahvaćenost limfnih čvorova. Druga grupa ima genetičku predispoziciju za neoplazije (npr. multipli mijelom), ali još uvek nema dokazanih kliničkih znakova neoplazije (npr. multiplog mijeloma). Na primer, žene koje su pozitivne na genetičku mutaciju povezanu sa kancerom dojke, ali su još uvek u reproduktivnom dobu, mogu želeti da prime jedan ili više fragmenata koji vezuju antigen koji su ovde opisani, radi profilaktičkog lečenja, odnosno da bi se sprečila pojava neoplazije sve dok ne bude pogodno da se izvrši preventivna hirurška intervencija.
[0311] Subjekti mogu imati uznapredovali oblik bolesti (npr. multiplog mijeloma), i u tom slučaju cilj lečenja može uključivati ublažavanje ili poništavanje progresije bolesti i/ili ublažavanje neželjenih efekata. Subjekti mogu imati istoriju stanja od koga su već bili lečeni, u kom slučaju će terapijski cilj obično uključivati smanjenje ili odlaganje rizika od recidiva.
[0312] Dalja modifikacija se može uvesti u imunoreaktivne ćelije koje eksprimiraju CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) (npr. T-ćelije) da bi se sprečio ili na minimum sveo rizik od imunskih komplikacija (poznatih kao "maligna transformacija T-ćelija"), npr. od bolesti “kalem protiv domaćina” (GvHD), ili u slučajevima kada zdrava tkiva eksprimiraju iste ciljne antigene kao i tumorske ćelije, što dovodi do ishoda sličnih GvHD. Potencijalno rešenje ovog problema je uvođenje gena za “samoubistvo” u T-ćelije koje eksprimiraju CAR. Pogodni geni “samoubistva” uključuju, ali nisu ograničeni na, timidin kinazu virusa Herpes simpleks (hsv-tk), inducibilni gen za “samoubistvo” Kaspazu 9 (iCasp-9) i polipeptid skraćenog humanog epidermalnog faktora rasta (EGFRt). U određenim primerima izvođenja, gena za “samoubistvo” je polipeptid EGFRt. EGFRt polipeptid može omogućiti eliminaciju T-ćelija primenom anti-EGFR monoklonskog antitela (npr. cetuksimaba). EGFRt
1
može biti kovalentno spojen sa 3' krajem unutarćelijskog domena CAR koji je specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D). Gen za “samoubistvo” može biti uključen unutar vektora koji sadrži nukleinske kiseline koje kodiraju CAR specifične za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) koji su ovde opisani. Na ovaj način, primena proleka dizajniranog tako da aktivira gena za “samoubistvo” (npr. proleka (npr. AP1903 koji može aktivirati iCasp-9) tokom maligne transformacije T-ćelija (npr. GVHD) pokreće apoptozu u T-ćelijama koje eksprimiraju CAR i aktivirane su genom za “samoubistvo”.
IX. Kompleti
[0313] Predmet pronalaska koji je ovde opisan obezbeđuje komplete za lečenje ili prevenciju neoplazije (npr. multiplog mijeloma). U određenom primeru izvođenja, komplet sadrži terapijsku ili profilaktičku kompoziciju koja sadrži efektivnu količinu imunoreaktivne ćelije koja sadrži CAR specifičan za receptor spregnut sa G-proteinom (npr. GPRC5D) u jediničnom doznom obliku. U posebnim primerima izvođenja, ćelije dalje eksprimiraju najmanje jedan ko-stimulatorni ligand. U određenim primerima izvođenja, komplet sadrži sterilni kontejner koji sadrži terapijsku ili profilaktičku vakcinu; takvi kontejneri mogu biti kutije, ampule, boce, bočice, tube, kese, kesice, blister pakovanja ili drugi pogodni oblici spemnika koji su poznati u oblasti tehnike. Takvi spremnici mogu biti napravljeni od plastike, stakla, laminiranog papira, metalne folije ili drugih materijala pogodnih za držanje lekova.
[0314] Ukoliko je to poželjno, imunoreaktivna ćelija se obezbeđuje zajedno sa uputstvima za primenu ćelije subjektu koji ima ili je sa rizikom da razvije neoplaziju (npr. multipli mijelom). Uputstva će generalno uključivati informacije o upotrebi kompozicije za lečenje ili prevenciju neoplazije (npr. multiplog mijeloma). U drugim primerima izvođenja, uputstva uključuju najmanje jedno od sledećeg: opis terapijskog agensa; raspored primene doza i primena radi lečenja ili prevencije neoplazije (npr. multiplog mijeloma) ili njenih simptoma; mere predostrožnosti; upozorenja; indikacije; kontraindikacije; informacije o prekomernoj dozi; štetne reakcije; farmakologiju životinja; kliničke studije; i/ili reference. Uputstva mogu biti odštampana direktno na spremniku (ukoliko postoji) ili mogu biti u vidu etikete koja je nalepljena na spremnik, ili koja se ostavlja kao poseban list, pamflet, kartica ili fascikla koja se isporučuje u ili sa kontejnerom.
PRIMERI
[0315] Praksa premetnog pronalaska koristi, osim ukoliko nije drugačije naznačeno, konvencionalne tehnike molekularne biologije (uključujući rekombinantne tehnike), mikrobiologije, ćelijske biologije, biohemije i imunologije, koje su poznati kvalifikovanom stručnjaku. "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", drugo izdanje (Sambrook, 1989); "Oligonucleotide Synthesis" (Gait, 1984); "Animal Cell Culture" (Freshney, 1987); "Methods in Enzymology" "Handbook of Experimental Immunology" (Weir, 1996); "Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells" (Miller i Calos, 1987); "Current Protocols in Molecular Biology" (Ausubel, 1987); "PCR: The Polymerase Chain Reaction", (Mullis, 1994); "Current Protocols in Immunology" (Coligan, 1991). Ove tehnike se mogu primeniti u proizvodnji polinukleotida i polipeptida prema pronalasku, i, kao takve, mogu biti uzete u obzir pri izradi i primeni pronalaska. Posebno korisne tehnike za određene primere izvođenja će biti razmotrene u odeljcima koji slede.
[0316] Primeri koji slede su navedeni da bi se prosečno iskusnim stručnjacima obezbedilo potpuni opis kako da se pripreme i upotrebe analize, skrining i terapijski postupci koji su ovde opisani, a nije predviđeno da isti ograničavaju obim onoga što pronalazači smatraju svojim pronalaskom.
Primer 1 ― Ekspresija GPRC5D u raznim tkivima
[0317] Ekspresija humanog GPRC5D je procenjivana u raznim malignim i normalnim tkivima, ispitivanjem profila genske ekspresije u bazama podataka kao što su enciklopedija kancerskih ćelijskih linija i BioGPS. Kao što je prikazano na Slici 2, humani GPRC5D je bio visoko eksprimiran u multiplom mijelomu, ali ne i u drugim malignim tkivima. Delovalo je da je normalna ekspresija ograničena na plazma ćelije. Potencijalna eliminacija ove normalne vrste ćelija sa T-ćelijama sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D možda neće imati značajne štetne efekte, pri čemu se prepostavka zasniva na iskustvu pronalazača sa pacijentima tretiranim T-ćelijama sa CAR koji ciljano deluje na CD19. Svaki nedostatak proizvodnje fizioloških antitela može biti rešen intravenskim tretmanom sa imunoglobulinima.
Primer 2 - Konstrukti 28z CAR specifični za GPRC5D
[0318] Generisano je više jedinstvenih, u potpunosti humanih scFv za GPRC5D, nakon čega su generisani i CAR koji su bili zanovani na ovim scFv. Višestruki scFv su identifikovani skriningom biblioteke faga za u potpunosti humane scFv (> 6 × 10<10>scFv) sa 3T3 ćelijama koje eksprimiraju GPRC5D. Izvedena su četiri nezavisna pregleda sa 12 različitih biblioteka faga upotrebom 3T3 ćelija koje su preskomerno eksprimirale GPRC5D, čime je identifikovano 80 pozitivnih klonova. Od 80 pregledanih FACS klonova, dalje su identifikovana 72 pozitivna klona; stopa pozitivnih klonova je iznosila 90%. Nakon sekvenciranja, od 72 sekvencionirana pozitivna klona pronađeno su 32 jedinstvena i 3T3 klona koji su bili pozitivni u vezivanju GPRC5D; jedinstvena stopa pozitivnih klonova je iznosila 45%.
1
[0319] Za generisanje 28z CAR 2, 5, 8 i 18 sa ciljanim delovanjem na GPRC5D, upotrebljeni su ET150-151 scFv (ili "ET150-1 scFv"), ET150-152 scFv (ili "ET150-2 scFv"), ET150-155 scFv (ili "ET150-5 scFv"), ET150-158 (ili "ET150-8 scFv")scFv i ET150-168 scFv (ili "ET150-18 scFv"), tim redom. Ovi 28z CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D imaju sličnu strukturu, npr. svaki ima transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD28 i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ, kao i ko-stimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid CD28, kao što je prikazano na Slici 1. Svaki od ovih CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D je kloniran u retrovirusni vektor. Ovi virusni vektori su zatim transdukovani u HEK 293galv9 ćelije za pakovanje virusa, da bi se generisala stabilna linija za pakovanje u cilju generisanja CAR<+>T-ćelija.
[0320] Humane T-ćelije (neselektovane (CD4 i CD8) humane T-ćelije iz zdravog donora) transdukovane su sa svakim od ovih 28z CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D, tako da su T-ćelije eksprimirale CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D.
[0321] Ispitana je zatim ekspresija na površini ćelije za 28z CAR18 sa ciljanim delovanjem na GPRC5D, na humanim T-ćelijama, preko vezivanja humanog GPRC5D, a detekcija ćelijske površine je potvrđena protočnom citometrijom, kao što je prikazano na Slici 3.
Primer 3 - Aktivnost 28z CAR specifičnih za GPRC5D
[0322] Ispitivana je i anti-tumorska aktivnost ovde opisanih 28z CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D. In vitro podaci su pokazali da su CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D specifično ubili ćelije koje prezentuju GPRC5D, uključujući MM ćelijske linije. Na primer, kao što je prikazano na Slici 4, T-ćelije koje eksprimiraju 28z CAR18 sa ciljanim delovanjem na GPRC5D ubile su 3T3 ćelije koje prekomerno eksprimiraju GPRC5D (ali ne i kontrolne 3T3 koje prekomerno eksprimiraju drugi antigen). Kao što je prikazano na Slici 5, T-ćelije koje eksprimiraju 28z CAR 2, 5, 8 i 18 sa ciljanim delovanjem na GPRC5D su ubile humane MM ćelijske linije.
Primer 4 - Podaci o skriningu za anti-GPRC5D antitela
[0323] FACS skrining: Slika 24 prikazuje FACS analizu klonova faga za antitela specifična za GPRC5D (ET150-1, ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18). Klonovi faga su inkubirani sa 3T3-GPRC5D ćelijskom linijom, nakon čega je sledila inkubacija sa anti-M13 mišjim antitelom. Konačno, u reakciju je nakon ponovnog pranja dodato anti-mišje IgG sekundarno antitelo obeleženo sa APC. Vezivanje je mereno FACS postupkom i izraženo je kao srednji intenzitet fluorescencije (MFI). Kao negativne kontrole su upotrebljene ć elije inkubirane sa M13 K07 pomoćnim fagom i same ćelije.
Primer 5 - Konstrukt BBz CAR specifičnih za GPRC5D
[0324] Generisano je više jedinstvenih, u potpunosti humanih scFv za GPRC5D, nakon čega su generisani CAR zasnovani na ovim scFv, kao što je opisano u Primeru 2. Za generisanje BBz CAR 1, 2, 5, 8 i 18 sa ciljanim delovanjem na GPRC5D su upotrebljeni ET150-151 scFv (ili "ET150-1 scFv"), ET150-152 scFv (ili "ETF150-2 scFv"), ET150-155 scFv (ili "ET150-5 scFv"), ET150-158 scFv (ili "ET150-8 scFv") i ET150-168 scFv (ili "ET150-18 scFv"), tim redom. Ovi BBz CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D imaju sličnu strukturu, npr. svaki ima transmembranski domen koji sadrži polipeptid CD8a i unutarćelijski domen koji sadrži polipeptid CD3ξ, kao i kostimulatorni signalni region koji sadrži polipeptid 4-1BB, kao što je prikazano na Slici 6. Svaki od ovih BBz CAR sa ciljanim delovanjem na GPRC5D je kloniran u SFG retrovirusni vektor, kao što je prikazano na Slikama 7-9, 26 i 27.
Primer 6 ― Aktivnost T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D
[0325] Kao što je prikazano na Slici 10, GPRC5D 28z CAR8 je lizirao humane MM ćelijske linije L363, NCL-H929 i U266, u poređenju sa T-ćelijama sa 4h11-28z CAR koji ciljano deluje na MUC16 kao irelevantni ciljni molekul. Ispoljena citotoksičnost za GPRC5D 28z CAR8 je bila specifična za GPRC5D, pošto nije lizirala ćelijsku liniju Raji Burkitovog limfoma koja je pozitivna na CD19 i negativna na GPRC5D, kao što je prikazano na Slici 10.
Primer 7 - Indukcija sekrecije citokina sa T-ćelijama sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D
[0326] Specifična ko-kultura GPRC5D 28z CAR8 T-ćelija sa MM ćelijskom linijom indukovala je profil sekrecije citokina koji je bio u skladu sa aktivacijom T-ćelija. Slika 11 prikazuje sekreciju IL-2 u 24-časovnoj ko-kulturi CAR T-ćelija sa humanim tumorskim ćelijskim linijama (E:T odnos od 1:1). Samo su limfoplazmacitni limfom (CD19<+>GPRC5D-) sa T-ćelijama sa CAR koji ciljano deluje na CD19 (pozitivna kontrola) i MM ćelijska linija sa 28z CAR8 T-ćelijama koje ciljano deluju na GPRC5D pokazale povećanu proizvodnju citokina. Svi od IFNg, IL-6, TNFa, sCD40L, GM-CSF su imali slične profile sekrecije (podaci nisu prikazani).
1
Primer 8 - Anti-tumorska aktivnost T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D
[0327] 28z CAR18 T-ćelije sa ciljanim delovanjem na GPRC5D su posredovale u imunkom odgovoru na mijelom. U NSG miševe je 0. dana injecirano IV 1×10<7>ćelija ćelijske linije humanog mijeloma U266. Potom je 4. dana IV injecirano 1×10<6>T-ćelije sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D ili ciljanim delovanjem na CD19. Snimanje obavljeno 11. dana (7. dan s/p injekcije T-ćelija sa CAR) pokazuje da, za razliku T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na protein koji nije relevantan (CD19); T-ćelije sa 28z CAR18 koji ciljano deluje na GPRC5D mogu posredovati u anti-tumorskom odgovoru. Pogledati Sliku 12.
Primer 9 - Aktivnost T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D
[0328] Ispitana je sposobnost T-ćelija sa CAR koji ciljano deluje na GPRC5D, da specifično liziraju ćelijsku liniju humanog mijeloma (HMCL). T-ćelije sa CAR koji ciljano deluje na CD19 ili T-ćelije sa 28z CAR8 koji ciljano deluje na GPRC5D, inkubirane su sa tumorskim ćelijskim linijama koje eksprimiraju GFP, SET2 (akutna mijeloidna leukemija (AML), CD19-GPRC5D-); BCWM1 (limfoplazmacitni limfom (LPL), CD19-GPRC5D-); L363 (Multipli mijelom (MM), CD19-GPRC5D+). U trenutku 0, procenat GFP<+>tumorske linije je prikazan na Slici 13A. Nakon 36h, pozitivne kontrole, T-ćelije sa CAR koji ciljano deluje na CD19, specifično su ubile GFP<+>LPL liniju, a slično tome, T-ćelije sa 28z CAR8 koji ciljano deluje na GPRC5D su specifično ubile GFP<+>MM liniju. Pogledati Sliku 13B.
Primer 10 -- Mapiranje epitopa anti-GPRC5D antitela
[0329] Četiri anti-GPRC5D antitela: ET150-2, ET150-5, ET150-8 i ET150-18 mlgG1. "mIgG1" upotrebljen u svim Primerima označava da je varijabilni region u potpunosti humani i da je Fc deo mišji IgG1. Pogledati Tabelu 37.
Tabela 37
[0330] Ciljni protein je humani GPRC5D sa aminokiselinskom sekvencom navednom u iz SEQ ID NO:97. N-terminalni region humanog GPRC5D čine aminokiseline 1-27 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 1 (ECL1) humanog GPRC5D čine aminokiseline 85-93 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 2 (ECL2) humanog GPRC5D čine aminokiseline 145-167 iz SEQ ID NO:97. Region vanćelijske petlje 3 (ECL3) humanog GPRC5D čine aminokiseline 226-239 iz SEQ ID NO:97.
Postupci
[0331] Principi clips tehnologije -- CLIPS tehnologija strukturno fiksira peptide u definisane trodimenzionalne strukture. Rezultat navedenog postupka su funkcionalne imitacije čak i najsloženijih mesta vezivanja. CLIPS tehnologija se sada rutinski koristi za oblikovanje peptidnih biblioteka u strukture sa jednom, dvostrukom ili trostrukom petljom, kao i struktura uvijanja tipa pločica i heliksa (Slika 14).
[0332] Detaljan skrining biblioteke kombinatornih clips -- Skrining CLIPS biblioteke počinje konverzijom ciljnog proteina u biblioteku sa do 10.000 preklapajućih peptidnih konstrukata, upotrebom kombinatornog dizajna matrice. Na čvrstom nosaču se sintetiše matrica linearnih peptida, koji se naknadno oblikuju u prostorno definisane CLIPS konstrukte (Slika 15). Konstrukti koji predstavljaju oba dela diskontinuiranog epitopa u ispravnoj konformaciji, vezuju antitelo sa visokim afinitetom, što se zatim detektuje i kvantifikuje. Konstrukti koji predstavljaju nepotpun epitop, vezuju antitelo sa nižim afinitetom, dok se konstrukti koji ne sadrže epitop uopšte ne vezuju. Informacije o afinitetu se koriste u iterativnim pregledima za detaljno definisanje sekvence i konformacije epitopa.
[0333] Analiza toplotne mape -- Toplotna mapa je grafički prikaz podataka, gde su vrednosti koje ima promenljiva u dvodimenzionalnoj mapi predstavljene u vidu boja. Za CLIPS peptide sa dvostrukom petljom, takva dvodimenzionalna mapa može biti izvedena iz nezavisnih sekvenci prve i druge petlje. Na primer, sekvence od 16 CLIPS peptida prikazanih na Slici 17 su efektivne permutacije 4 jedinstvene podsekvence u petlji 1 (obojene plavom bojom na Slici 16) i 4 jedinstvene podsekvence u petlji 2 (obojene zelenom na Slici 16). Prema tome, uočeni ELISA podaci (obojeni crvenom bojom na Slici 17A) mogu biti ucrtani u grafik u vidu matrice tipa 4x4, gde svaka X koordinata odgovara sekvenci prve petlje, a svaka Y koordinata odgovara sekvenci druge petlje. Na primer, ELISA vrednost koja je zabeležena za CLIPS peptid CLSSERERVEDLFEYECELLTSEPIFHCRQEDC (označena strelicom na Slici 4A) može se naći u trećem redu, trećoj koloni na Slici 17B (označena je strelicom i
1
crvenim kvadratom). Da bi se dodatno olakšala vizualizacija, ELISA vrednosti mogu biti zamenjene bojama iz kontinuiranog gradijenta. U ovom slučaju, ekstremno niske vrednosti su obojene zelenom bojom, ekstremno visoke vrednosti su obojene crvenom, a prosečne vrednosti su obojene crnom (pogledatii Sliku 17C). Za prethodno navedeni primer, prosečna vrednost je 0,71. Kada se ova mapa boja primeni na matricu podataka prikazanu na Slici 17B, dobija se toplotna mapa u boji (pogledajte Sliku 17D, originalni podaci su i dalje označeni radi dodatne jasnoće).
[0334] Sinteza peptida - Radi rekonstrukcije epitopa ciljnog molekula sintetisana je biblioteka peptida. Amino funkcionalizovan polipropilenski nosač je dobijen kalemljenjem sa formulacijom hidrofilnog polimera koja je zaštićenog vlasništva, nakon čega je usledila reakcija sa t-butiloksikarbonil-heksametilendiaminom (BocHMDA) upotrebom dicikloheksilkarbodiimida (DCC) sa Nhidroksibenzotriazolom (HOBt) i potom cepanjem Boc-grupa upotrebom trifluorosirćetne kiseline (TFA). Standardna Fmoc-peptidna sinteza je korišćena za sintezu peptida na amino-funkcionalizovanoj čvrstoj podlozi, upotrebom prilagođenih modifikovanih JANUS stanica za rukovanje tečnostima (Perkin Elmer). Sinteza strukturnih imitacija je urađena upotrebom tehnologije hemijski povezanih peptida (engl. Chemically Linked Peptides on Scaffolds (CLIPS)) koja je zaštićeno vlasništvo komanije Pepscan. CLIPS tehnologija omogućava strukturisanje peptida u pojedinačne petlje, dvostruke petlje, trostruke petlje, nabore nalik na pločice, nabore nalik heliksima i njihove kombinacije. CLIPS matrice su dalje kuplovane sa cisteinskim ostacima. Bočni lanci višestrukih cisteina u peptidima su kuplovani sa jednom ili sa dve CLIPS matrice. Na primer, 0,5 mM rastvor P2 CLIPS (2,6-bis(bromometil)piridina) rastvoren je u amonijum bikarbonatu (20 mM, pH 7,8)/acetonitrilu (1:3(v/v)). Ovaj rastvor je dodat na peptidni mikročip. CLIPS matica vezana za bočne lance dva cisteina koji su prisutni u peptidima vezanim za čvrstu fazu peptidnog mikročipa (ploča sa 455 bunarića od po 3 µl). Peptidni mikročipovi su nežno mućkani u rastvoru tokom 30 do 60 minuta, tako da su u potpunosti bili pokriveni rastvorom. Konačno, peptidni mikročipovi su obilno oprani sa viškom H2O, pa su sonikovani u puferu za raskidanje veza koji je sadržavao 1% SDS/0,1% betamerkaptoetanol u PBS-u (pH 7,2), na 70°C tokom 30 minuta, nakon čega je usledila sonikacija u H2O tokom dodatnih 45 minuta. Peptidi koji nose T3 CLIPS su napravljeni na sličan način, ali sada sa tri cisteina.
[0335] ELISA skrining -- Vezivanje antitela za svaki od sintetisanih peptida je testiran ELISA postupkom zasnovanim na PEPSCAN testu. Peptidni mikročipovi su inkubirani sa rastvorom primarnog antitela (preko noći na 4°C). Nakon pranja, peptidni mikročipovi su inkubirani sa razblaženjem odgovarajućeg konjugata antitela sa peroksidazom (SBA) od 1/1000, tokom jednog sata na 25°C. Nakon pranja, dodati su supstrat peroksidaze, 2,2'-azino-di-3-etilbenztiazolin sulfonat (ABTS), i 2 µl/ml 3-procentnog H2O2. Nakon jednog sata, izmereno je razvijanje boje. Razvijanje boje je kvantifikovano upotrebom uređaja sa kuplovanim naelektrisanjem (CCD) -kamere i sistema za obradu slika.
[0336] Obrada podataka -- vrednosti dobijene sa CCD kamere su bile opsega od 0 do 3000 mAU, slično kao što je to slučaj sa standardnim ELISA čitačem ploča za ploče sa 96 bunarića. Rezultati su kvantifikovani i sačuvani u Peplab bazi podataka. Povremeno je bunarić sadržavao mehur vazduha, što je dovodilo do lažno pozitivne vrednosti, tako da su kartice pregledane ručno i bilo kojoj vrednost koja je bila prouzrokovana mehurićem vazduha je dodeljena vrednost 0.
[0337] Kontrola kvaliteta sinteze – Da bi se proverio kvalitet sintetitisanih peptida, paralelno je sintetisan odvojen skup pozitivnih i negativnih kontrolnih peptida. Oni su skrinovani upotrebom antitelom 57.9 (ref. Posthumus i saradnici, J. Virology, 1990, 64:3304-3309).
Rezultati
Scrining
[0338] Vezivanje antitela zavisi od kombinacije faktora, uključujući koncentraciju antitela i količine i prirodu proteina koji stupaju u kompeticiju u ELISA puferu. Takođe, uslovi prethodnog oblaganja (specifičan tretman peptidnih mikroploča pre inkubacije sa eksperimentalnim uzorkom) uticali su na vezivanje. Ovi detalji su sumirani u Tabeli 38. Za Pepscan pufer i predkondicioniranje (SQ), brojevi ukazuju na relativnu količinu proteina koji je u kompeticiji (kombinacija seruma konja i ovalbumina).
Tabela 38 -- uslovi skrininga
11
Antitelo ET150-2
[0339] Kada je ispitivano u umereno strogim uslovima, antitelo ET150-2 je avidno vezivalo peptide iz svih grupa (Slika 18). Kumulativna analiza podataka pokazuje da antitelo prepoznaje diskontinualni epitop sastavljen od peptidnih nizova16CDAEGPWGII25(N-kraj),157MFVNMTPC164(ECL2) i229PQFQRQPQW237(ECL3), pri čemu su peptidni nizovi16CDAEGPWGII25i229PQFQRQPQW237i samostalno dovoljni za vezivanje.
Antitelo ET150-5
[0340] Kada je ispitivano u visoko strogim uslovima, antitelo ET150-5 je avidno vezivalo peptide iz svih grupa (Slika 19). Kumulativna analiza podataka pokazuje da antitelo prepoznaje diskontinualni epitop sastavljen od peptidnih nizova5CIESTGDYFLLCD17(N-kraj),85NQQTAPVRYFL95(ECL1) i157MFVNMTPC164(ECL2), pri čemu je peptidni niz5CIESTGDYFLCD17i samostalno dovoljan za vezivanje.
Antitelo ET150-18
[0341] Kada je ispitivano u visoko strogim uslovima, antitelo ET150-18 je vezivalo peptide iz skupa 4 i skupa 7, koji su sadržavali strukturno ograničene peptide. Nije zabeleženo značajno vezivanje u skupovima koji su sadržavali linearne peptide (Slika 20). Kumulativna analiza podataka pokazuje da antitelo prepoznaje diskontinualni epitop sastavljen od nizova10GDYFLCD17(N-kraj),157MFVNMTPCQLN167(ECL2) i227GNPQFQRQPQW237(ECL3). Peptid se proteže preko10GDYFLCD17i227GNPQFQRQPQW237koji predstavljaju jezgro epitopa, pošto su oba peptidna niza odvojeno i kao sami da se vezivanje ostvari.
Antitelo ET150-8
[0342] Kada je ispitivano u uslovima visoke strogosti, antitelo ET150-8 je vezivalo peptide iz svih skupova, osim iz skupa 2 (Slika 21). Kumulativna analiza podataka pokazuje da antitelo prepoznaje diskontinualni epitop sastavljen od peptidnih nizova15LCDAEGPWG23(N-kraj) i230QFQRQPQWDDPVVC243(ECL3), pri čemu je peptidni niz15LCDAEGPWG23dominantni deo epitopa, pošto je samostalno dovoljan za vezivanje. Štaviše, poređenje rezultata dobijenih na skupu 1 (linearni deo) i skupu 4 (petlja) pokazuje da uvođenje strukturnih ograničenja u imitacije epitopa poboljšava vezivanje peptida, posebno u slučaju peptida koji sadrže sekvencu.
230QFQRQPQWDDPVVC243.
Zaključci
[0343] Sva istraživana antitela su prepoznavala diskontinuirane epitope, koji su mapirani upotrebom Pepscan mikročipa. Pretpostavljena jezgra epitopa su navedena u Tabeli 39. Sva antitela su obično prepoznavala preklapajuće regione na N-kraju proteina, u kombinaciji sa regionima iz jednog ili dva ECL. Dva antitela ET150-18 i ET150-8 je karakterisao preduslov strukturnih ograničenja koji su potrebni za vezivanje antitela, što ukazuje da ova dva antitela prepoznaju ne samo diskontinuirane, već i konformacione epitope. Antitela ET150-2 i ET150-5 nisu pokazala značajna odstupanja u vezivanju peptida između linearnih i peptida sa petljom.
Tabela 39 - spisak epitopa
[0344] Slika 22 je ilustracija rezultata studije u pogledu ukupne organizacije GPCR. Pošto je N-kraj veoma fleksibilan i nestrukturisan, verovatno je u prolaznoj interakciji sa ECL-ovima i obrazikr diskontinuirane imunodominantne regione.
[0345] Razlike i sličnosti u vezivanju peptida mogu biti ilustrovane analizom tačkastog dijagrama na Slici 23. Tačke podataka u gornjem levom i donjem desnom uglu ukazuju na razlike u vezivanju. Uprkos značajnom preklapanju epitopa, fine specifičnosti epitopa pojedinačnih antitela se u velikoj meri razlikuju.
Primer 11 -- Afinitet vezivanja anti-GPRC5D antitela
[0346] Slika 25 prikazuje FACS analizu fagnih klonova za antitela specifična za GPRC5D (ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18). Svako antitelo (ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18) je inkubirano sa 3T3 ili 3T3-GPRC5D ćelijama u koncentraciji od 10 ili 1 ug/mL, nakon čega je sledila inkubacija sa anti-M13 mišjim antitelom. Konačno, u reakciju je dodato anti-mišje IgG sekundarno antitelo obeleženo sa PE. Vezivanje je mereno FACS postupkom i izraženo je kao srednji intenzitet fluorescencije (MFI). Ćelije inkubirane samo sa sekundarnim antitelom, izotipskom kontrolom ET901 mIgG1 i samo sa ćelijama upotrebljavane su kao negativne kontrole.
[0347] Iako je prethodno naveden predmet pronalaska koji je ovde opisan u pojedinim detaljima, naveden samo kao ilustracija i primer, radi jasnijeg razumevanja, opise i primere ne bi trebalo tumačiti ograničavajućima za obim predmeta ovog pronalaska.
Reference
[0348]
1. Atamaniuk J. i saradnici, Overexpression of G protein-coupled receptor 5D in the bone marrow is associated with poor prognosis in patients with multiple myeloma. European journal of clinical investigation 42, 953-960 (2012).
2. Frigyesi I. i saradnici, Robust isolation of malignant plasma cells in multiple myeloma. Blood 123, 1336-1340 (2014).
3. Cohen Y., Gutwein O., Garach-Jehoshua O., Bar-Haim A. i Kornberg A. GPRC5D is a promising marker for monitoring the tumor load and to target multiple myeloma cells. Hematology (Amsterdam, Netherlands) 18, 348-351 (2013).
4. Bam R. i saradnici, GPRC5D Is a Cell Surface Plasma Cell Marker Whose Expression Is High In Myeloma Cells and Reduced Following Coculture With Osteoclasts. Blood 122, 3099 (2013).
5. Brentjens R.J. i saradnici, Safety and persistence of adoptively transferred autologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemotherapy refractory B-cell leukemias. Blood 118, 4817-4828 (2011). 6. Brentjens R.J. i saradnici, Eradication of systemic B-cell tumors by genetically targeted human T lymphocytes costimulated by CD80 and interleukin-15. Nature medicine 9, 279-286 (2003).
7. Brentjens R.J. i saradnici, CD19-Targeted T Cells Rapidly Induce Molecular Remissions in Adults with ChemotherapyRefractory Acute Lymphoblastic Leukemia. Science translational medicine 5, 177ra138 (2013).
8. Davila M.L. i saradnici, Efficacy and Toxicity Management of 19-28z CAR T Cell Therapy in B Cell Acute Lymphoblastic Leukemia. Science translational medicine 6, 224ra225 (2014).
9. Siegel R., Naishadham D. i Jemal A. Cancer statistics, 2013. CA: a cancer journal for clinicians 63, 11-30 (2013).
10. Boyd K.D. i saradnici, The clinical impact and molecular biology of del(17p) in multiple myeloma treated with conventional or thalidomide-based therapy. Genes, chromosomes & cancer 50, 765-774 (2011).
11. Shaughnessy J.D., Jr. i saradnici, A validated gene expression model of high-risk multiple myeloma is defined by deregulated expression of genes mapping to chromosome 1. Blood 109, 2276-2284 (2007).
12. Gahrton G. i saradnici, Allogeneic bone marrow transplantation in multiple myeloma. European Group for Bone Marrow Transplantation. The New England journal of medicine 325, 1267-1273 (1991).
13. Pegram H.J. i saradnici, Tumor-targeted T cells modified to secrete IL-12 eradicate systemic tumors without need for prior conditioning. Blood 119, 4133-4141 (2012).
14. Sabrina Bertilaccio M.T. i saradnici, Low-Dose Lenalidomide Improves CAR-Based Immunotherapy In CLL By Reverting T-Cell Defects In Vivo. Blood 122, 4171 (2013).
15. Bataille R. i saradnici, The phenotype of normal, reactive and malignant plasma cells. Identification of "many and multiple myelomas" and of new targets for myeloma therapy. Haematologica 91, 1234-1240 (2006).
16. Morgan R.A. i saradnici, Case report of a serious adverse event following the administration of T cells transduced with a chimeric antigen receptor recognizing ERBB2. Molecular therapy : the journal of the American Society of Gene Therapy 18, 843-851 (2010).
17. Brentjens R.J. i saradnici, Safety and persistence of adoptively transferred autologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemotherapy refractory B-cell leukemias. Blood 118, 4817-4828 (2011). 18. Brentjens R.J. i saradnici, CD19-targeted T cells rapidly induce molecular remissions in adults with chemotherapyrefractory acute lymphoblastic leukemia. Science translational medicine 5, 177ra138 (2013). 19. Hunder N.N. i saradnici, Treatment of metastatic melanoma with autologous CD4+ T cells against NY-ESO-1. N.Engl.J.Med.358, 2698-2703 (2008).
20. Rosenberg S.A., Restifo, N.P., Yang, J.C., Morgan, R.A. & Dudley, M.E. Adoptive cell transfer: a clinical path to effective cancer immunotherapy. Nat.Rev.Cancer 8, 299-308 (2008).
21. Dudley M.E. i saradnici, Adoptive cell therapy for patients with metastatic melanoma: evaluation of intensive myeloablative chemoradiation preparative regimens. J Clin Oncol 26, 5233-5239 (2008).
22. Brentjens R.J. i saradnici, Genetically targeted T cells eradicate systemic acute lymphoblastic leukemia xenografts. Clin.Cancer Res.13, 5426-5435 (2007).
23. Gade T.P. i saradnici, Targeted elimination of prostate cancer by genetically directed human T lymphocytes. Cancer Res.65, 9080-9088 (2005).
24. Maher J., Brentjens R.J., Gunset, G., Riviere I. i Sadelain, M. Human T-lymphocyte cytotoxicity and proliferation directed by a single chimeric TCRzeta /CD28 receptor. Nat.Biotechnol.20, 70-75 (2002).
25. Kershaw M.H. i saradnici, Gene-engineered T cells as a superior adjuvant therapy for metastatic cancer. J Immunol 173, 2143-2150 (2004).
26. Sadelain M., Brentjens R. i Riviere I. The promise and potential pitfalls of chimeric antigen receptors. Curr Opin Immunol (2009).2
7. Hollyman D. i saradnici, Manufacturing validation of biologically functional T cells targeted to CD19 antigen for autologous adoptive cell therapy. J Immunother 32, 169-180 (2009).
28. Sadelain M., Brentjens R. i Riviere I. The basic principles of chimeric antigen receptor design. Cancer discovery 3, 388-398 (2013).
29. Riviere I., Sadelain M. i Brentjens R.J. Novel strategies for cancer therapy: the potential of genetically modified T lymphocytes. Curr Hematol Rep 3, 290-297 (2004).
30. Stephan M.T. i saradnici, T cell-encoded CD80 and 4-1BBL induce auto- and transco-stimulation, resulting in potent tumor rejection. Nat.Med.13, 1440-1449 (2007).
31. Krause A. i saradnici, Antigen-dependent CD28 signaling selectively enhances survival and proliferation in genetically modified activated human primary T lymphocytes. J Exp Med 188, 619-626 (1998).
32. Gong M.C. i saradnici, Cancer patient T cells genetically targeted to prostate-specific membrane antigen specifically lyse prostate cancer cells and release cytokines in response to prostate-specific membrane antigen. Neoplasia.1, 123-127 (1999).
33. Lyddane C. i saradnici, Cutting Edge: CD28 controls dominant regulatory T cell activity during active immunization. J.Immunol.176, 3306-3310 (2006).
11

Claims (33)

Patentni zahtevi
1. Himerni antigenski receptor (CAR), koji se sastoji od vanćelijskog domena koji vezuje antigen, koji se vezuje za člana D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D), transmembranski domen i unutarćelijski domen, pri čemu vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži:
(a) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:208, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:209 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:210; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga č ini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:211, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:212 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:212 ID NO:213;
(b) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:214, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:215 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:216; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga č ini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:217, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:218 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:218 ID NO:219;
(c) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:220, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:221 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:222; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga č ini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:223, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:224 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:224 ID NO:225; ili
(d) varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:226, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:227 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:228; i varijabilni region lakog lanca koji sadrži CDR1 koga č ini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:229, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:230 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:230 ID BR:231.
2. CAR prema patentnom zahtevu 1, gde se vanćelijski domen koji vezuje antigen CAR vezuje za GPRC5D sa afinitetom vezivanja (Kd) od oko 1 × 10<-9>M do oko 3 × 10<-6>M.
3. CAR prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, gde je vanćelijski domen koji vezuje antigen jednolančani varijabilni fragment (scFv), Fab koji je opciono umrežen ili F(ab)2, a opciono jedan ili više od scFv, Fab i F(ab)2su sadržani u fuzionom proteinu sa heterolognom sekvencom da bi se obrazovao vanćelijski domen koji vezuje antigen.
4. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-3, gde vanćelijski domen koji vezuje antigen sadrži linker između varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca.
5. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, gde:
(a) varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:58;
(b) varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:62;
(c) varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:65 i varijabilni region lakog lanca sadrži sekvencu aminokiseline navedenu u SEQ ID NO:66; ili
(d) varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:69 i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:70.
6. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde je vanćelijski domen koji vezuje antigen scFv koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:114, SEQ ID NO:115, SEQ ID NO:116 ili SEQ ID NO:117.
7. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:57 i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:58.
8. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:61 i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:62.
9. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:65; i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:66.
10. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6, gde varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:69; i varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO:70.
11. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7, gde varijabilni region teškog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:208, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:209 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:210; i varijabilni region lakog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:211, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:212 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:213.
12. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 i 8, gde varijabilni region teškog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:214, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:215 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:216; i varijabilni region lakog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:217, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:218 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:219.
13. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 i 9, gde varijabilni region teškog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:220, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:221 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:222; i varijabilni region lakog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:223, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:224 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:225.
14. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 i 10, gde varijabilni region teškog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:226, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:227 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:228; i varijabilni region lakog lanca sadrži CDR1 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:229, CDR2 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:230 i CDR3 koga čini aminokiselinska sekvenca navedena u SEQ ID NO:231.
15. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-14, gde (a) transmembranski domen sadrži polipeptid CD8, polipeptid CD28, polipeptid CD3zeta, polipeptid CD4, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid CTLA-4, polipeptid PD-1, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju, opciono gde transmembrana domen sadrži polipeptid CD8 ili polipeptid CD28; i/ili (b) unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3zeta.
16. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-15, gde unutarćelijski domen dalje sadrži najmanje jedan signalni region, opciono gde najmanje jedan signalni region sadrži polipeptid CD28, polipeptid 4-1BB, polipeptid OX40, polipeptid ICOS, polipeptid DAP-10, polipeptid PD-1, polipeptid CTLA-4, polipeptid LAG-3, polipeptid 2B4, polipeptid BTLA, sintetički peptid (koji nije zasnovan na proteinu povezanom sa imunskim odgovorom) ili njihovu kombinaciju.
17. CAR prema patentnom zahtevu 15 ili patentnom zahtevu 16, gde je najmanje jedan signalni region kostimulatorni signalni region, opciono gde ko-stimulatorni signalni region sadrži signalni region polipeptida CD28, polipeptida 4-1BB, polipeptida OX40, polipeptida ICOS, polipeptida DAP-10 ili njihovu kombinaciju.
18. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-17, gde:
(a) transmembranski domen sadrži polipeptid CD28, a unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3zeta i signalni domen koji sadrži polipeptid CD28; ili
(b) transmembranski domen sadrži polipeptid CD8, a unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3zeta i signalni domen koji sadrži polipeptid 4-1BB.
19. CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-17, gde transmembranski domen sadrži polipeptid CD28, a unutarćelijski domen sadrži polipeptid CD3zeta i signalni domen koji sadrži polipeptid 4-1BB.
11
20. Imunoreaktivna ćelija koja sadrži CAR prema bilo kom od patentnih zahteva 1-19.
21. Imunoreaktivna ćelija prema patentnom zahtevu 20, pri čemu se imunoreaktivna ćelija transdukuje sa CAR i opciono se ćelija dalje transdukuje sa (a) najmanje jednim ko-stimulatornim ligandom, tako da imunoreaktivna ćelija eksprimira najmanje jedan ko-stimulatorni ligand; i/ili (b) najmanje jednim citokinom tako da imunoreaktivna ćelija izlučuje najmanje jedan citokin; i/ili gde je CAR konstitutivno eksprimiran na površini imunoreaktivne ćelije; i/ili gde je najmanje jedan ko-stimulatorni ligand izabran iz grupe koja se sastoji od 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14 i njihovih kombinacija; i/ili najmanje jedan citokin je izabran iz grupe koja se sastoji od IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21 i njihovih kombinacija.
22. Imunoreaktivna ćelija prema patentnom zahtevu 20 ili patentnom zahtevu 21, pri čemu je imunoreaktivna ćelija izabrana iz grupe koja se sastoji od T-ćelije, ćelije prirodnog ubice (NK), humane embrionalne matične ćelije, limfoidne progenitorske ćelije, prekusorske ćelije T-ćelije i pluripotentne matične ćelije iz koje mogu biti diferencirane limfoidne ćelije.
23. Imunoreaktivna ćelija prema patentnom zahtevu 22, pri čemu je imunoreaktivna ćelija T-ćelija, opciono pri čemu je T-ćelija citotoksični T limfocit (CTL) ili regulatorna T-ćelija (Treg).
24. Molekul nukleinske kiseline koji kodira himerni antigenski receptor (CAR) prema bilo kom od patentnih zahteva 1-19, a opciono, gde molekul nukleinske kiseline sadrži nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO:397, SEQ ID NO:398, SEQ ID NO:399 ili SEQ ID NO:400.
25. Vektor koji sadrži molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 24, i opciono, pri čemu je vektor gama-retrovirusni vektor.
26. Vektor koji sadrži molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 24, pri čemu je vektor lentivirusni vektor.
27. Ćelija domaćin koja eksprimira molekul nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 24, a opciono, pri čemu je ćelija domaćin T-ćelija.
28. Imunoreaktivna ćelija prema bilo kom od patentnih zahteva 20-23 za upotrebu u smanjenju opterećenja tumorom kod subjekta i/ili za upotrebu u povećanju ili produžavanju preživljavanja subjekta sa neoplazijom.
29. Imunoreaktivna ćelija za upotrebu prema patentnom zahtevu 28, pri čemu je tumor i/ili neoplazija multipli mijelom ili Valdenstromova makroglobulinemija, a opciono, tumor i/ili neoplazija je multipli mijelom.
30. Imunoreaktivna ćelija za upotrebu prema patentnom zahtevu 28 ili patentnom zahtevu 29, pri čemu je subjekat čovek.
31. In vitro ili ex vivo postupak za proizvodnju imunoreaktivne ćelije koja se vezuje za člana D, grupe 5, familije C receptora spregnutih sa G-proteinom (GPRC5D), koji obuhvata uvođenje molekula nukleinske kiseline prema patentnom zahtevu 24 u imunoreaktivnu ćeliju.
32. Farmaceutska kompozicija koja sadrži efektivnu količinu imunoreaktivne ćelije prema bilo kom od patentnih zahteva 20-23 i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, a opciono, farmaceutska kompozicija je za upotrebu u lečenju neoplazije.
33. Komplet za lečenje multiplog mijeloma, koji sadrži imunoreaktivnu ćeliju prema bilo kom od patentnih zahteva 20-23, a opciono, komplet dalje sadrži pisana uputstva za upotrebu imunoreaktivne ćelije za lečenje subjekta sa neoplazijom.
11
RS20211596A 2014-12-05 2015-12-04 Himerni antigenski receptori sa ciljanim delovanjem na receptore spregnute sa g-proteinom i njihove upotrebe RS62870B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462088286P 2014-12-05 2014-12-05
EP15865633.0A EP3227339B1 (en) 2014-12-05 2015-12-04 Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof
PCT/US2015/064102 WO2016090312A1 (en) 2014-12-05 2015-12-04 Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS62870B1 true RS62870B1 (sr) 2022-02-28

Family

ID=56092565

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20211596A RS62870B1 (sr) 2014-12-05 2015-12-04 Himerni antigenski receptori sa ciljanim delovanjem na receptore spregnute sa g-proteinom i njihove upotrebe

Country Status (26)

Country Link
US (5) US10633426B2 (sr)
EP (2) EP3227339B1 (sr)
JP (4) JP6919091B2 (sr)
KR (1) KR102612367B1 (sr)
CN (4) CN107428829B (sr)
AU (2) AU2015357518B2 (sr)
CA (1) CA2969864A1 (sr)
CY (1) CY1125008T1 (sr)
DK (1) DK3227339T3 (sr)
ES (1) ES2899779T3 (sr)
HR (1) HRP20211978T1 (sr)
HU (1) HUE057777T2 (sr)
IL (2) IL252621B2 (sr)
LT (1) LT3227339T (sr)
MX (2) MX385156B (sr)
MY (1) MY192065A (sr)
PH (1) PH12017501044A1 (sr)
PL (1) PL3227339T3 (sr)
PT (1) PT3227339T (sr)
RS (1) RS62870B1 (sr)
RU (1) RU2762359C2 (sr)
SA (1) SA517381665B1 (sr)
SG (2) SG11201704547RA (sr)
SI (1) SI3227339T1 (sr)
SM (1) SMT202200040T1 (sr)
WO (1) WO2016090312A1 (sr)

Families Citing this family (96)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230159637A (ko) * 2014-12-05 2023-11-21 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 G-단백질 커플화 수용체를 표적화하는 항체 및 이의 사용 방법
PT3227339T (pt) 2014-12-05 2022-01-14 Eureka Therapeutics Inc Recetores de antigénio quiméricos que têm como alvo o recetor 4 acoplado a proteína g e utilizações dos mesmos
MX2017014822A (es) 2015-05-18 2018-04-30 Tcr2 Therapeutics Inc Composiciones y métodos para la reprogramación del tcr con proteínas de fusión.
US20190233533A1 (en) 2016-06-28 2019-08-01 Umc Utrecht Holding B.V. Treatment Of IgE-Mediated Diseases With Antibodies That Specifically Bind CD38
CA3032498A1 (en) 2016-08-02 2018-02-08 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
CA3032806C (en) 2016-08-05 2021-04-27 Y-Biologics Inc. Antibody to programmed death-ligand 1 (pd-l1) and use thereof
MX2019003899A (es) 2016-10-07 2019-08-14 Tcr2 Therapeutics Inc Composiciones y metodos para reprogramacion de receptores de linfocitos t mediante el uso de proteinas de fusion.
EP3544996A2 (en) 2016-11-22 2019-10-02 TCR2 Therapeutics Inc. Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins
WO2018102795A2 (en) 2016-12-02 2018-06-07 University Of Southern California Synthetic immune receptors and methods of use thereof
WO2018127918A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A sirp alpha-cd70 fusion protein and methods of use thereof
HRP20230937T1 (hr) 2017-01-05 2023-11-24 Kahr Medical Ltd. Pd1-41bbl fuzijski protein i metode korištenja istog
WO2018127916A1 (en) 2017-01-05 2018-07-12 Kahr Medical Ltd. A pd1-cd70 fusion protein and methods of use thereof
PT3565828T (pt) 2017-01-05 2022-02-08 Kahr Medical Ltd Proteína de fusão sirp1 alfa-41bbl e seus métodos de utilização
WO2018147245A1 (ja) * 2017-02-07 2018-08-16 第一三共株式会社 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体及び該抗体を含む分子
CN110741016A (zh) 2017-04-26 2020-01-31 优瑞科生物技术公司 嵌合抗体/t-细胞受体构筑体及其用途
KR20250096881A (ko) 2017-08-09 2025-06-27 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 유전자 조작된 세포를 제조하기 위한 방법 및 조성물
WO2019032927A1 (en) 2017-08-09 2019-02-14 Juno Therapeutics, Inc. METHODS FOR PRODUCING GENETICALLY MODIFIED CELL COMPOSITIONS AND COMPOSITIONS THEREOF
US20200292526A1 (en) 2017-09-07 2020-09-17 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying cellular attributes related to outcomes associated with cell therapy
WO2019089855A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Process for generating therapeutic compositions of engineered cells
US11564946B2 (en) 2017-11-01 2023-01-31 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
KR20200074997A (ko) 2017-11-01 2020-06-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B-세포 성숙 항원에 특이적인 항체 및 키메릭 항원 수용체
KR102845789B1 (ko) 2017-11-01 2025-08-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 B 세포 성숙 항원에 특이적인 키메라 항원 수용체 및 암호화 폴리뉴클레오타이드
SG11202003657VA (en) 2017-11-01 2020-05-28 Juno Therapeutics Inc Process for producing a t cell composition
WO2019099483A1 (en) * 2017-11-14 2019-05-23 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Il-36 secreting immunoresponsive cells and uses thereof
CN111989106A (zh) 2017-12-01 2020-11-24 朱诺治疗学股份有限公司 基因工程化细胞的给药和调节方法
SG11202005217VA (en) 2017-12-08 2020-07-29 Juno Therapeutics Inc Phenotypic markers for cell therapy and related methods
WO2019113557A1 (en) 2017-12-08 2019-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Process for producing a composition of engineered t cells
AU2018379091A1 (en) 2017-12-08 2020-06-25 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
CN112888709B (zh) * 2018-03-30 2024-10-29 优瑞科生物技术公司 标靶cd22的构建体和其用途
CA3100157A1 (en) * 2018-05-16 2019-11-21 Janssen Biotech, Inc. Methods of treating cancers and enhancing efficacy of t cell redirecting therapeutics
KR20210044220A (ko) 2018-07-11 2021-04-22 카 메디컬 리미티드 SIRPalpha-4-1BBL 변이체 융합 단백질 및 이의 사용 방법
SG11202013170RA (en) 2018-07-11 2021-01-28 Kahr Medical Ltd Pd1-4-1bbl variant fusion protein and methods of use thereof
MX2021001519A (es) 2018-08-09 2021-05-27 Juno Therapeutics Inc Metodos para valorar acidos nucleicos integrados.
CA3108657A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Juno Therapeutics, Inc. Processes for generating engineered cells and compositions thereof
JP7672340B2 (ja) * 2018-10-19 2025-05-07 メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター シアリルルイスａを標的とするキメラ抗原受容体およびその使用
US12522660B2 (en) 2018-10-31 2026-01-13 C3S2 Gmbh Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same
MX2021005024A (es) 2018-11-01 2021-07-21 Juno Therapeutics Inc Metodos de tratamiento que utilizan receptores de antigenos quimericos especificos para antigeno de maduracion de celulas b.
CA3116413A1 (en) * 2018-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)
FI3886875T3 (fi) 2018-11-30 2024-07-23 Juno Therapeutics Inc Adoptiivista soluterapiaa käyttäviä hoitomenetelmiä
PE20211977A1 (es) * 2019-01-18 2021-10-05 Janssen Biotech Inc Receptores de antigenos quimericos de gprc5d y celulas que los expresan
AU2020265749A1 (en) 2019-05-01 2022-01-06 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified CD247 locus, related polynucleotides and methods
SG11202111360YA (en) 2019-05-01 2021-11-29 Juno Therapeutics Inc Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods
MA56206A (fr) 2019-06-12 2022-04-20 Juno Therapeutics Inc Combinaison thérapeutique d'une thérapie cytotoxique à médiation cellulaire et d'un inhibiteur d'une protéine de la famille bcl2 pro-survie
US20220298222A1 (en) 2019-08-22 2022-09-22 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a t cell therapy and an enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) inhibitor and related methods
EP4021582A1 (en) 2019-08-30 2022-07-06 Allogene Therapeutics, Inc. Chimeric cytokine receptors comprising tgf beta binding domains
IL292319B2 (en) 2019-10-30 2026-01-01 C3S2 Gmbh Cell selection and/or stimulation devices and methods of use
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
US10980836B1 (en) 2019-12-11 2021-04-20 Myeloid Therapeutics, Inc. Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof
US20230090117A1 (en) 2020-01-28 2023-03-23 Juno Therapeutics, Inc. Methods for t cell transduction
EP4132579A4 (en) 2020-04-10 2024-05-22 Invivyd, Inc. CORONAVIRUS S-PROTEIN SPECIFIC COMPOUNDS AND USES THEREOF
EP4150640A1 (en) 2020-05-13 2023-03-22 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
EP4171616A1 (en) 2020-06-26 2023-05-03 Juno Therapeutics GmbH Engineered t cells conditionally expressing a recombinant receptor, related polynucleotides and methods
JP2023549780A (ja) 2020-11-04 2023-11-29 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 改変されたインバリアントｃｄ３免疫グロブリンスーパーファミリー鎖遺伝子座からキメラ受容体を発現する細胞ならびに関連するポリヌクレオチドおよび方法
CN116635064A (zh) 2020-12-18 2023-08-22 世纪治疗股份有限公司 具有适应性受体特异性的嵌合抗原受体系统
WO2022148370A1 (en) * 2021-01-05 2022-07-14 Lanova Medicines Development Co., Ltd. Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof
US20240108654A1 (en) 2021-03-03 2024-04-04 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and a dgk inhibitor
CA3212398A1 (en) 2021-03-17 2022-09-22 Daniel Getts Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof
AU2022244229A1 (en) 2021-03-22 2023-09-14 Juno Therapeutics, Inc. Method to assess potency of viral vector particles
CA3210581A1 (en) 2021-03-22 2022-09-29 Neil HAIG Methods of determining potency of a therapeutic cell composition
MX2023011862A (es) * 2021-04-07 2024-01-08 Lg Chemical Ltd Polipeptido de union a gucy2c y usos del mismo.
KR20240018454A (ko) 2021-05-06 2024-02-13 주노 테라퓨틱스 게엠베하 T 세포의 자극 및 형질도입 방법
CN115386010B (zh) * 2021-05-23 2026-02-06 上海邦耀生物科技有限公司 靶向gprc5d的嵌合抗原受体及其用途
WO2023030272A1 (zh) 2021-08-30 2023-03-09 原启生物科技(上海)有限责任公司 抗gprc5d抗原结合蛋白及其用途
JP2024540304A (ja) 2021-11-03 2024-10-31 ヤンセン バイオテツク，インコーポレーテツド 抗ｃｄ３８抗体による治療におけるコルチコステロイドの減少
US20250057950A1 (en) 2022-01-14 2025-02-20 Oricell Therapeutics Co., Ltd. Chimeric antigen receptor targeting gprc5d and application thereof
CN119013393A (zh) 2022-01-28 2024-11-22 朱诺治疗学股份有限公司 制造细胞组合物的方法
WO2023143537A1 (zh) 2022-01-29 2023-08-03 恺兴生命科技(上海)有限公司 Gprc5d抗体及其应用
US20250297282A1 (en) 2022-05-05 2025-09-25 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
US20250302954A1 (en) 2022-05-11 2025-10-02 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
EP4525899A1 (en) 2022-05-17 2025-03-26 Umoja Biopharma, Inc. Manufacturing viral particles
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
CA3259061A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Umoja Biopharma, Inc. MODIFIED STEM CELLS AND THEIR USES
WO2023250122A1 (en) * 2022-06-24 2023-12-28 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Molecules that bind to enpp1 polypeptides
CA3259982A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. COMBINATION OF MODIFIED NATURAL KILLER (NK) CELLS AND ANTIBODY THERAPY AND ASSOCIATED METHODS
KR20250047766A (ko) 2022-08-05 2025-04-04 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Gprc5d 및 bcma에 특이적인 키메라 항원 수용체
CN116003598B (zh) 2022-08-30 2024-04-26 苏州缔码生物科技有限公司 靶向人gprc5d的重组人源化单克隆抗体及其应用
EP4583876A1 (en) 2022-09-08 2025-07-16 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
TW202434735A (zh) 2022-11-04 2024-09-01 美商烏莫賈生物製藥股份有限公司 展示黏著分子融合的顆粒
EP4615960A1 (en) 2022-11-09 2025-09-17 C3S2 GmbH Methods for manufacturing engineered immune cells
WO2024102954A1 (en) 2022-11-10 2024-05-16 Massachusetts Institute Of Technology Activation induced clipping system (aics)
CN121002052A (zh) 2023-02-03 2025-11-21 C3S2 有限公司 用于非病毒生产工程化免疫细胞的方法
CN121311765A (zh) 2023-04-18 2026-01-09 朱诺治疗学股份有限公司 评估治疗性细胞组合物的效力的细胞毒性测定
KR20260026101A (ko) 2023-05-23 2026-02-25 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 T 세포의 활성화 마커 및 t 세포 활성화를 평가하는 방법
EP4520346A1 (en) * 2023-09-06 2025-03-12 Gyncentrum Sp. z o.o. Cells, methods and systems for use in the treatment of a cancer with dual-car-t
WO2025059362A1 (en) 2023-09-13 2025-03-20 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapies with a cell therapy expressing a gprc5d-targeting car and related methods and uses
WO2025076472A1 (en) 2023-10-06 2025-04-10 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapies with a cell therapy expressing a gprc5d-targeting car and related methods and uses
CN117229407B (zh) * 2023-11-14 2024-02-20 成都优赛诺生物科技有限公司 一种靶向gprc5d的单域抗体、嵌合抗原受体及其应用
WO2025129084A1 (en) 2023-12-13 2025-06-19 Umoja Biopharma, Inc. Engineered induced stem cell derived myeloid cells and methods of differentiating and using same
WO2025147545A1 (en) 2024-01-03 2025-07-10 Juno Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids and related methods and uses
WO2025231174A1 (en) 2024-04-30 2025-11-06 Umoja Biopharma, Inc. Manufacturing viral particles
WO2025231408A2 (en) 2024-05-03 2025-11-06 Janssen Biotech, Inc. Methods for treating multiple myeloma with car-t cells and bispecific antibodies
WO2025231372A2 (en) 2024-05-03 2025-11-06 Janssen Biotech, Inc. Methods for treating multiple myeloma with car-t cells and bispecific antibodies
WO2025235604A1 (en) 2024-05-08 2025-11-13 Umoja Biopharma, Inc. Fusion protein for use as immune cell engager
WO2026020055A2 (en) 2024-07-18 2026-01-22 Juno Therapeutics, Inc. Methods for assessing exosomes in a cell composition and related uses
WO2026025092A1 (en) 2024-07-26 2026-01-29 Juno Therapeutics, Inc. Synthetic promoters for t cell expression

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5132405A (en) 1987-05-21 1992-07-21 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
US5091513A (en) 1987-05-21 1992-02-25 Creative Biomolecules, Inc. Biosynthetic antibody binding sites
JPS6412935A (en) 1987-07-02 1989-01-17 Mitsubishi Electric Corp Constant-speed travel device for vehicle
US5399346A (en) 1989-06-14 1995-03-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Gene therapy
US6436703B1 (en) 2000-03-31 2002-08-20 Hyseq, Inc. Nucleic acids and polypeptides
DE60143798D1 (de) 2000-06-16 2011-02-17 Cambridge Antibody Tech Immunspezifisch bindende antikörper gegen blys
WO2003016553A2 (en) 2001-08-20 2003-02-27 Genentech, Inc. Gpcr-like retinoic acid-induced gene 1 protein and nucleic acid
EP1468694A1 (en) * 2001-12-27 2004-10-20 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited Remedies for anorexia or lifestyle-related diseases and method of screening the same
US7446190B2 (en) 2002-05-28 2008-11-04 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors
US20040110139A1 (en) * 2002-12-10 2004-06-10 Isis Pharmaceuticals Inc. Modulation of G protein-coupled receptor 3 expression
WO2004058171A2 (en) 2002-12-20 2004-07-15 Protein Design Labs, Inc. Antibodies against gpr64 and uses thereof
WO2004072117A2 (en) 2003-02-13 2004-08-26 Pharmacia Corporation Antibodies to c-met for the treatment of cancers
WO2005019258A2 (en) 2003-08-11 2005-03-03 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
KR101333449B1 (ko) * 2003-12-10 2013-11-26 메다렉스, 엘.엘.시. Ｉｐ―１０ 항체 및 그의 용도
US20050266008A1 (en) * 2004-03-29 2005-12-01 Medarex, Inc. Human anti-IRTA-5 antibodies
EP2064244B1 (en) 2006-08-03 2019-06-05 MedImmune Limited ANTIBODIES DIRECTED TO alphaVbeta6 AND USES THEREOF
US9512236B2 (en) 2006-12-19 2016-12-06 Ablynx N.V. Amino acid sequences directed against GPCRS and polypeptides comprising the same for the treatment of GPCR-related diseases and disorders
DK2141997T3 (da) 2007-03-30 2013-02-11 Sloan Kettering Inst Cancer Konstitutiv ekspression af co-stimulatoriske ligander på adoptivt overførte t-lymfocytter
EP2192922A4 (en) 2007-09-17 2010-09-29 Univ California INTERNATIONALIZING HUMAN MONOCLONAL ANTIBODIES TO PROMOTE IN SITU ON PROSTATAZELLES
WO2009051633A1 (en) 2007-10-15 2009-04-23 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Gpcr crystalization method using an antibody
MX2010004482A (es) * 2007-10-25 2010-07-06 Trellis Bioscience Inc Anticuerpos anti-proteina g vsr.
EP2242773B1 (en) 2008-02-11 2017-06-14 Cure Tech Ltd. Monoclonal antibodies for tumor treatment
US9217032B2 (en) 2010-01-08 2015-12-22 Les Laboratoires Servier Methods for treating colorectal cancer
EP2596017B1 (en) 2010-07-22 2019-04-03 John W. Schrader Cross-protective antibody against influenza viral infection
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
WO2013033626A2 (en) * 2011-08-31 2013-03-07 Trustees Of Dartmouth College Nkp30 receptor targeted therapeutics
CN103483452B (zh) 2012-06-12 2021-08-13 上海细胞治疗集团有限公司 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途
WO2014087010A1 (en) 2012-12-07 2014-06-12 Ablynx N.V. IMPROVED POLYPEPTIDES DIRECTED AGAINST IgE
JO3519B1 (ar) 2013-01-25 2020-07-05 Amgen Inc تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3
PT3613439T (pt) * 2013-02-15 2021-05-12 Univ California Recetor de antigénio quimérico e métodos de utilização do mesmo
ES3058841T3 (en) * 2013-03-15 2026-03-13 Novartis Ag Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
US9890393B2 (en) 2013-05-29 2018-02-13 Cellectis Methods for engineering T cells for immunotherapy by using RNA-guided CAS nuclease system
JP2017513818A (ja) 2014-03-15 2017-06-01 ノバルティス アーゲー キメラ抗原受容体を使用する癌の処置
MX2016017393A (es) 2014-07-01 2017-09-05 Pfizer Diacuerpos heterodimericos biespecificos y sus usos.
EP3193915A1 (en) 2014-07-21 2017-07-26 Novartis AG Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars
PT3227339T (pt) 2014-12-05 2022-01-14 Eureka Therapeutics Inc Recetores de antigénio quiméricos que têm como alvo o recetor 4 acoplado a proteína g e utilizações dos mesmos
KR20230159637A (ko) * 2014-12-05 2023-11-21 메모리얼 슬로안 케터링 캔서 센터 G-단백질 커플화 수용체를 표적화하는 항체 및 이의 사용 방법
WO2017070608A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Eureka Therapeutics, Inc. Antibody/t-cell receptor chimeric constructs and uses thereof
BR112018011336A2 (pt) 2015-12-04 2018-12-04 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center anticorpo anti-fcrl5 isolado ou um fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, anticorpo scfv anti-fcrl5 isolado, anticorpo isolado ou porção de ligação ao antígeno do mesmo, composição, imunoconjugado, molécula biespecífica, ácido nucleico isolado, vetor de expressão, célula hospedeira, método para detectar fcrl5 em uma célula ou tecido inteiro, método para tratar câncer em um indivíduo, uso do anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno do mesmo, kit para tratar câncer
JP7208010B2 (ja) 2016-03-29 2023-01-18 ユニバーシティ オブ サザン カリフォルニア 癌を標的とするキメラ抗原受容体
CA3018253A1 (en) 2016-03-31 2017-10-05 University Of Southern California A highly sensitive and specific luciferase based reporter assay for antigen detection
CN108239144B (zh) 2018-01-26 2021-05-25 重庆精准生物技术有限公司 改造的铰链及其在构建car骨架中的应用
CA3116413A1 (en) 2018-11-01 2020-05-07 Juno Therapeutics, Inc. Chimeric antigen receptors specific for g protein-coupled receptor class c group 5 member d (gprc5d)

Also Published As

Publication number Publication date
IL252621A0 (en) 2017-07-31
SG11201704547RA (en) 2017-07-28
WO2016090312A1 (en) 2016-06-09
US20240294599A1 (en) 2024-09-05
JP2021040652A (ja) 2021-03-18
CN113968912A (zh) 2022-01-25
LT3227339T (lt) 2022-01-10
RU2762359C2 (ru) 2021-12-20
ES2899779T3 (es) 2022-03-14
US10633426B2 (en) 2020-04-28
US20180118803A1 (en) 2018-05-03
MX385156B (es) 2025-03-14
IL252621B2 (en) 2024-06-01
CN113968912B (zh) 2025-05-16
EP3227339B1 (en) 2021-11-10
CN107428829A (zh) 2017-12-01
US11866478B2 (en) 2024-01-09
HUE057777T2 (hu) 2022-06-28
PL3227339T3 (pl) 2022-02-21
IL310130A (en) 2024-03-01
JP2025181929A (ja) 2025-12-11
US10906956B2 (en) 2021-02-02
KR20170109537A (ko) 2017-09-29
CN113683711A (zh) 2021-11-23
HRP20211978T1 (hr) 2022-04-01
SA517381665B1 (ar) 2022-01-24
AU2015357518A1 (en) 2017-06-29
US11820806B2 (en) 2023-11-21
CA2969864A1 (en) 2016-06-09
PT3227339T (pt) 2022-01-14
NZ732574A (en) 2023-11-24
DK3227339T3 (da) 2022-01-10
SI3227339T1 (sl) 2022-02-28
PH12017501044A1 (en) 2018-03-05
MX2017007242A (es) 2018-01-25
RU2017123551A3 (sr) 2019-07-17
CN107428829B (zh) 2021-10-15
CN118271463A (zh) 2024-07-02
JP2023091037A (ja) 2023-06-29
AU2015357518B2 (en) 2021-10-07
JP2017537629A (ja) 2017-12-21
JP6919091B2 (ja) 2021-08-18
EP3227339A1 (en) 2017-10-11
CY1125008T1 (el) 2022-07-22
IL252621B1 (en) 2024-02-01
EP3227339A4 (en) 2018-08-08
MX2021008798A (es) 2021-08-24
MY192065A (en) 2022-07-25
RU2017123551A (ru) 2019-01-14
EP4015534A1 (en) 2022-06-22
SMT202200040T1 (it) 2022-03-21
SG10202007326QA (en) 2020-08-28
US20200270328A1 (en) 2020-08-27
BR112017011920A2 (en) 2018-02-27
US20200270326A1 (en) 2020-08-27
KR102612367B1 (ko) 2023-12-12
AU2022200052A1 (en) 2022-02-03
US20200270327A1 (en) 2020-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240294599A1 (en) Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof
US12139538B2 (en) Chimeric antigen receptors targeting Fc receptor-like 5 and uses thereof
EP4310097A2 (en) Chimeric antigen receptors targeting b-cell maturation antigen and uses thereof