RU2762359C2 - Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и их применение - Google Patents
Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- RU2762359C2 RU2762359C2 RU2017123551A RU2017123551A RU2762359C2 RU 2762359 C2 RU2762359 C2 RU 2762359C2 RU 2017123551 A RU2017123551 A RU 2017123551A RU 2017123551 A RU2017123551 A RU 2017123551A RU 2762359 C2 RU2762359 C2 RU 2762359C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- sequence shown
- variable region
- Prior art date
Links
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 title abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 109
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 53
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 49
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 49
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 49
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 36
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 33
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 claims abstract description 12
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 claims abstract description 12
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 1741
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 571
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 571
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 571
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 244
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 194
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 191
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 claims description 128
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 89
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 52
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 48
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 40
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 36
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 36
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 36
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 claims description 31
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 claims description 31
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 30
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 30
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 23
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 18
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 18
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 claims description 18
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 18
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 18
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims description 17
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 15
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 9
- 208000033559 Waldenström macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 8
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 7
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 claims description 7
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 claims description 7
- 201000000564 macroglobulinemia Diseases 0.000 claims description 7
- 230000011664 signaling Effects 0.000 claims description 6
- -1 CD86 Proteins 0.000 claims description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 5
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 5
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 5
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 claims description 4
- 108010021064 CTLA-4 Antigen Proteins 0.000 claims description 4
- 102000008203 CTLA-4 Antigen Human genes 0.000 claims description 4
- 229940045513 CTLA4 antagonist Drugs 0.000 claims description 4
- 102000017578 LAG3 Human genes 0.000 claims description 4
- 101150030213 Lag3 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 210000003738 lymphoid progenitor cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 claims description 2
- 102100036008 CD48 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 102100025221 CD70 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 101000716130 Homo sapiens CD48 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000934356 Homo sapiens CD70 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000648507 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 2
- 108050003558 Interleukin-17 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000013691 Interleukin-17 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100030703 Interleukin-22 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 claims description 2
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 claims description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100032101 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 9 Human genes 0.000 claims description 2
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 claims description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 claims description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 claims description 2
- 108010074108 interleukin-21 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 claims 2
- 102100026890 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 607
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 607
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 description 361
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 85
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 81
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 75
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 32
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 19
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 16
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 15
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 15
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 13
- 101001040713 Homo sapiens G-protein coupled receptor family C group 5 member D Proteins 0.000 description 11
- 102000044456 human GPRC5D Human genes 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 11
- HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K trisodium citrate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O HRXKRNGNAMMEHJ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 11
- 229940038773 trisodium citrate Drugs 0.000 description 11
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 10
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 10
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 8
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 8
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 7
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 5
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 5
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 5
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 5
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 5
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 3
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 3
- 108090001053 Gastrin releasing peptide Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102400001175 Unique cartilage matrix-associated protein C-terminal fragment Human genes 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 3
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 108010031480 Artificial Receptors Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710144268 B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N HA peptide Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 HVLSXIKZNLPZJJ-TXZCQADKSA-N 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 230000002559 cytogenic effect Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002825 functional assay Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 229960004942 lenalidomide Drugs 0.000 description 2
- GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N lenalidomide Chemical compound C1C=2C(N)=CC=CC=2C(=O)N1C1CCC(=O)NC1=O GOTYRUGSSMKFNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 231100000324 minimal toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 108091005957 yellow fluorescent proteins Proteins 0.000 description 2
- ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N (2s)-2-amino-3-phenylpropanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 ALBODLTZUXKBGZ-JUUVMNCLSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 2,5-dimethoxy-4-bromophenethylamine Chemical compound COC1=CC(CCN)=C(OC)C=C1Br YMHOBZXQZVXHBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N Ala-Gln Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O HJCMDXDYPOUFDY-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N Ala-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 XZWXFWBHYRFLEF-FSPLSTOPSA-N 0.000 description 1
- IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N Ala-Ser Chemical compound C[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O IPWKGIFRRBGCJO-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N Asn-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RJUHZPRQRQLCFL-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N Asn-Cys Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O TWXZVVXRRRRSLT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O IQTUDDBANZYMAR-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 108091005950 Azurite Proteins 0.000 description 1
- 239000010754 BS 2869 Class F Substances 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 108091005960 Citrine Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 108091005943 CyPet Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 108091005941 EBFP Proteins 0.000 description 1
- 108091005947 EBFP2 Proteins 0.000 description 1
- 108091005942 ECFP Proteins 0.000 description 1
- 108091008883 GPCRs class B Proteins 0.000 description 1
- 102000027582 GPCRs class B Human genes 0.000 description 1
- 108091008881 GPCRs class D Proteins 0.000 description 1
- 108091008885 GPCRs class E Proteins 0.000 description 1
- 108091008884 GPCRs class F Proteins 0.000 description 1
- 102000027587 GPCRs class F Human genes 0.000 description 1
- JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N Gln-Gly Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O JEFZIKRIDLHOIF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N Gly-Pro-Arg Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O JYPCXBJRLBHWME-IUCAKERBSA-N 0.000 description 1
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000874179 Homo sapiens Syndecan-1 Proteins 0.000 description 1
- WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N Ile-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 WMDZARSFSMZOQO-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 description 1
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 description 1
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- 102000000704 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 1
- FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N L-Phenylalanyl-L-lysin Natural products NCCCCC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FADYJNXDPBKVCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000880493 Leptailurus serval Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102000016193 Metabotropic glutamate receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010010914 Metabotropic glutamate receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Chemical group 0.000 description 1
- 102000004473 OX40 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 description 1
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N Phe-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-HOTGVXAUSA-N 0.000 description 1
- 108010002724 Pheromone Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N Ser-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CO)N)C(O)=O)=CNC2=C1 LZLREEUGSYITMX-JQWIXIFHSA-N 0.000 description 1
- ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N Ser-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO ILVGMCVCQBJPSH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 102100035721 Syndecan-1 Human genes 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000000173 T-lymphoid precursor cell Anatomy 0.000 description 1
- DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N Thr-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O DSGIVWSDDRDJIO-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N Tyr-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 VNYDHJARLHNEGA-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 241000545067 Venus Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 102100038344 Vomeronasal type-1 receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N acecarbromal Chemical compound CCC(Br)(CC)C(=O)NC(=O)NC(C)=O SAZUGELZHZOXHB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 1
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010070944 alanylhistidine Proteins 0.000 description 1
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N alstonine Natural products C1=CC2=C3C=CC=CC3=NC2=C2N1C[C@H]1[C@H](C)OC=C(C(=O)OC)[C@H]1C2 WYTGDNHDOZPMIW-RCBQFDQVSA-N 0.000 description 1
- 230000003042 antagnostic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011953 bioanalysis Methods 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 108091005948 blue fluorescent proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011035 citrine Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000003750 conditioning effect Effects 0.000 description 1
- 108010082025 cyan fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 238000007822 cytometric assay Methods 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011257 definitive treatment Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N dipeptide phenylalanyl-tyrosine Natural products C=1C=C(O)C=CC=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 FSXRLASFHBWESK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 210000002288 golgi apparatus Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000000833 heterodimer Substances 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 229940124622 immune-modulator drug Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000002427 pheromone receptor Substances 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002287 radioligand Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 208000001076 sarcopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 230000009258 tissue cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- GWBUNZLLLLDXMD-UHFFFAOYSA-H tricopper;dicarbonate;dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Cu+2].[Cu+2].[Cu+2].[O-]C([O-])=O.[O-]C([O-])=O GWBUNZLLLLDXMD-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 108010020532 tyrosyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/38—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
- A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
- A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/15—Cells of the myeloid line, e.g. granulocytes, basophils, eosinophils, neutrophils, leucocytes, monocytes, macrophages or mast cells; Myeloid precursor cells; Antigen-presenting cells, e.g. dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
- A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/001129—Molecules with a "CD" designation not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
- A61K39/464412—CD19 or B4
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464469—Tumor associated carbohydrates
- A61K39/46447—Mucins, e.g. MUC-1
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70517—CD8
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70521—CD28, CD152
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/7056—Lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70578—NGF-receptor/TNF-receptor superfamily, e.g. CD27, CD30, CD40, CD95
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0636—T lymphocytes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/54—F(ab')2
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
- C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
- C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/02—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a signal sequence
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/01—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif
- C07K2319/03—Fusion polypeptide containing a localisation/targetting motif containing a transmembrane segment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/33—Fusion polypeptide fusions for targeting to specific cell types, e.g. tissue specific targeting, targeting of a bacterial subspecies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/40—Fusion polypeptide containing a tag for immunodetection, or an epitope for immunisation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/10041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/10043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/13011—Gammaretrovirus, e.g. murine leukeamia virus
- C12N2740/13041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2740/13043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
- C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oncology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Virology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены химерные антигенные рецепторы (CAR) против представителя D группы 5 семейства С рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), иммунореактивная клетка, Т-клетка, молекула нуклеиновой кислоты, клетка-хозяин. Кроме того, рассмотрен способ уменьшения опухолевой нагрузки, способы продления срока выживания субъекта, способ получения иммунореактивной клетки, фармацевтические композиции, наборы. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии различных опухолей, экспрессирующих GPRC5D. 15 н. и 81 з.п. ф-лы, 31 ил., 41 табл., 11 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
По настоящей заявке испрашивается приоритет на основании предварительной патентной заявки США с серийным № 62/088286, поданной 5 декабря 2014 г., полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки и по отношению к которой испрашивается приоритет.
ВВЕДЕНИЕ
Настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения рака. Изобретение относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), которые специфически нацелены на рецептор, связанный с G-белками (например, представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D)), иммунореактивным клеткам, содержащим такие CAR, и способам применения таких клеток для лечения рака (например, множественной миеломы).
ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Клеточная иммунотерапия является терапией, обладающей потенциалом для излечения рака. T-клетки и другие иммунные клетки могут быть модифицированы для нацеливания на опухолевые антигены путем введения генетического материала, кодирующего искусственные или синтетические рецепторы для антигена, называемые химерными антигенными рецепторами (CAR), которые специфичны для выбранных антигенов. Недавно таргетированная T-клеточная терапия с использованием CAR зарекомендовала себя как клинически успешный подход к лечению злокачественных заболеваний крови.
Множественная миелома (MM) является вторым по распространенности злокачественным заболеванием крови9. Примерно 25% пациентов имеют цитогенетику с высокой степенью риска, что предвещает средний период выживания менее 2 лет10,11. Несмотря на достигнутый в последнее время прогресс, независимо от цитогенетики, заболевание по-прежнему считается неизлечимым, за исключением иммунотерапевтического эффекта «трансплантат против миеломы» (GvM) аллогенного трансплантата. Однако использование аллогенных трансплантатов ограничено несоответствием требованиям и высокой частотой связанной с трансплантацией заболеваемости и смертности12. Аналогично эффекту GvM, потенциально излечивающий эффект T-клеток может быть достигнут с минимальной токсичностью за счет аутологичной адоптивной T-клеточной терапии.
Миелома может быть идеальным заболеванием для тестирования адоптивной T-клеточной терапии. Во-первых, как указано выше, аллогенные трансплантаты продемонстрировали, что T-клетки могут быть средством радикального лечения, даже при минимальной сопутствующей химиотерапии, или без нее, например, после немиелоаблативной трансплантации или пост-трансплантационных инфузий донорских лимфоцитов. Во-вторых, кондиционирующая химиотерапия, возможно, через механизм истощения регуляторных T-клеток (Treg), повышает эффективность адоптивной T-клеточной терапии5,13, в силу этого период сразу после аутологичной трансплантации может быть оптимальным моментом для введения T-клеток, и миелома является одним из нескольких заболеваний, при которых аутологичная трансплантация стволовых клеток является стандартом лечения. В-третьих, иммуномодулирующее лекарственное средство леналидомид может повышать эффективность терапии на основе CAR, как было показано на мышах14, и леналидомид обычно используют для лечения MM. В-четвертых, адоптивная T-клеточная терапия лучше всего работает в случае заболеваний, поражающих преимущественно костный мозг, таких как ALL7,8, по сравнению с солидными опухолями или экстрамедуллярным CLL5, и аналогично ALL, миелома является заболеванием костного мозга.
Хотя есть множество причин ожидать, что адоптивная T-клеточная терапия может быть эффективной при MM, применение адоптивной T-клеточной терапии при миеломе также связано с особыми проблемами. В отличие от других B-клеточных злокачественных новообразований, экспрессия CD19 имеет место лишь у 2% пациентов с миеломой15. Более того, в отличие от CD19, все обычные внеклеточные иммунофенотипические маркеры при миеломе (CD138, CD38 и CD56) также экспрессируются на других важных типах клеток, и авторы изобретения прогнозируют, что CAR для любой из этих мишеней приводили бы к неприемлемой токсичности «внеопухолевых мишеней»7, которая может быть фатальной даже в случае мишеней, антитела к которым хорошо переносятся, как было в ситуации с нацеленными на HER2 CAR16. Для решения этих проблем авторы изобретения идентифицировали внеклеточные мишени с прогнозируемой высокой экспрессией в MM и ограниченной экспрессией в важных нормальных тканях, которые могут быть оптимальными мишенями для адоптивной T-клеточной терапии MM. Соответственно, существует потребность в новых терапевтических стратегиях для конструирования CAR, нацеленных на антигены, которые на высоком уровне экспрессируются в клетках MM и ограниченно экспрессируются в нормальных тканях, для лечения множественной миеломы; стратегиях, которые могут приводить к эффективной эрадикации опухолей с минимальной токсичностью и иммуногенностью.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение, в целом, относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), специфически нацеленным на рецептор, связанный с G-белками, иммунореактивным клеткам, содержащим такие CAR, и применению таких CAR и иммунореактивных клеток для лечения множественной миеломы.
Настоящее изобретение относится к CAR. В одном неограничивающем примере CAR содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с GPRC5D с аффинностью связывания (KD), составляющей от примерно 1×10-9 M до примерно 3×10-6 M. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv мыши. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой Fab, который, необязательно, является сшитым. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный связывающий домен представляет собой F(ab)2. В конкретных вариантах осуществления любая из вышеуказанных молекул может находиться в слитом белке с гетерологичной последовательностью, образуя внеклеточный антигенсвязывающий домен.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386; и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374, и 386, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375, и 387, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386, а также их консервативных модификаций, и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375, и 387, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2; (b) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6; (c) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10; (d) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14; (e) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18; (f) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22; (g) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26; (h) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30; (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34; (j) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38; (k) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42; (l) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46; (m) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50; (n) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54; (o) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58; (p) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62; (q) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66; (r) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70; (s) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74; (t) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78; (u) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82; (v) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86; (w) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90; (x) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, (y) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303; (z) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315; (aa) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327; (ab) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339; (ac) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351; (ad) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363; (ae) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375; или (af) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит обе из указанных тяжелой и легкой цепей, необязательно, с последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. Например, в конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390; и (b) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393.
В конкретных вариантах осуществления CDR2 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR2 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления CDR1 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388; (b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389; (c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390; (d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391; (e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392; и (f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативную модификацию; (b) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативную модификацию; (c) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативную модификацию; (d) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативную модификацию; (e) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативную модификацию; (f) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативную модификацию; (g) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативную модификацию; (h) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативную модификацию; (i) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативную модификацию; (j) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативную модификацию; (k) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативную модификацию; (l) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативную модификацию; (m) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативную модификацию; (n) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативную модификацию; (o) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативную модификацию; (p) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативную модификацию; (q) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативную модификацию; (r) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативную модификацию; (s) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативную модификацию; (t) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативную модификацию; (u) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативную модификацию; (v) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативную модификацию; (w) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативную модификацию; (x) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативную модификацию; (y) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативную модификацию; (z) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативную модификацию; (aa) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативную модификацию; (ab) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативную модификацию; (ac) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативную модификацию; (ad) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативную модификацию; (ae) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативную модификацию; или (af) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативную модификацию. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210. В другом неограниченном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативную модификацию; (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 135 или ее консервативную модификацию; (c) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативную модификацию; (d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 146 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативную модификацию; (e) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативную модификацию; (f) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативную модификацию; (g) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативную модификацию; (h) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 171 или ее консервативную модификацию; (i) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативную модификацию; (j) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативную модификацию; (k) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативную модификацию; (l) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативную модификацию; (m) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативную модификацию; (n) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативную модификацию; (o) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативную модификацию; (p) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативную модификацию; (q) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативную модификацию; (r) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативную модификацию; (s) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативную модификацию; (t) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативную модификацию; (u) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативную модификацию; (v) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативную модификацию; (w) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативную модификацию; (x) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативную модификацию; (y) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативную модификацию; (z) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативную модификацию; (aa) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативную модификацию; (ab) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативную модификацию; (ac) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативную модификацию; (ad) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативную модификацию; (ae) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативную модификацию; или (af) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативную модификацию. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129; (b) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135; (c) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141; (d) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147; (e) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153; (f) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159; (g) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165; (h) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171; (i) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177; (j) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183; (k) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189; (l) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195; (m) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201; (n) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207; (o) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213; (p) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219; (q) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225; (r) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231; (s) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237; (t) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243; (u) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249; (v) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255; (w) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261; (x) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267; (y) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309; (z) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321; (aa) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333; (ab) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345; (ac) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357; (ad) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369; (ae) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381; или (af) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231. В конкретных вариантах осуществления scFv человека содержит вариабельную область тяжелой цепи, вариабельную область легкой цепи, пептидный линкер между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, а также His-метку и HA-метку. В конкретных вариантах осуществления аминокислотная последовательность His-метки и HA-метки содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 275, которая приведена ниже:
TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO: 275]
Нуклеотидная последовательность, кодирующая SEQ ID NO: 275, соответствует SEQ ID NO: 276, которая приведена ниже:
ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGCACCATCACCATCACCATGGCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGCTTCT [SEQ ID NO: 276].
В конкретных вариантах осуществления GPRC5D содержит аминокислотную последовательность приведенную в SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя, тремя или четырьмя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа в N-концевой области, содержащей аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа в области ECL1, содержащей аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа в области ECL2, содержащей аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа в области ECL3, содержащей аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 16-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 230-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, VL CDR2 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной или двумя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
В соответствии с настоящим изобретением, внеклеточный антигенсвязывающий домен ковалентно связан с трансмембранным доменом. Внеклеточный антигенсвязывающий домен может содержать сигнальный пептид, который ковалентно связан с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен CAR содержит полипептид CD8, полипептид CD28, полипептид CD3ζ, полипептид CD4, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид CTLA-4, полипептид PD-1, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD8. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD28.
В соответствии с настоящим изобретением, внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен дополнительно содержит по меньшей мере одну сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10, полипептид PD-1, полипептид CTLA-4, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления сигнальная область представляет собой костимулирующую сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10 или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид 4-1BB. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD28, внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ и костимулирующий сигнальный домен содержит полипептид CD28.
В конкретных вариантах осуществления CAR экспрессируется рекомбинантно. CAR может экспрессироваться с вектора. В конкретных вариантах осуществления вектор представляет собой γ-ретровирусный вектор.
Настоящее изобретение также относится к выделенным иммунореактивным клеткам, содержащим вышеописанные CAR. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка трансдуцирована CAR, например, CAR конститутивно экспрессируется на поверхности иммунореактивной клетки. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним костимулирующим лигандом, вследствие чего иммунореактивная клетка экспрессирует по меньшей мере один костимулирующий лиганд. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один костимулирующий лиганд выбирают из группы, состоящей из 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14, а также их сочетаний. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним цитокином, вследствие чего иммунореактивная клетка секретирует по меньшей мере один цитокин. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21, а также их сочетаний. В некоторых вариантах осуществления выделенную иммунореактивную клетку выбирают из группы, состоящей из T-клетки, клетки-естественного киллера (NK), цитотоксического T-лимфоцита (CTL), регуляторной T-клетки, человеческой эмбриональной стволовой клетки, лимфоидной клетки-предшественника, клетки-предшественника T-клетки и плюрипотентной стволовой клетки, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка представляет собой T-клетку.
Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим раскрытые в настоящем документе CAR, векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, и клеткам-хозяевам, экспрессирующим такие молекулы нуклеиновой кислоты. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 397. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 398. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 399. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 400. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 401. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 402. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 403. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 406. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 407. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 408. В конкретных вариантах осуществления вектор представляет собой γ-ретровирусный вектор. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой T-клетку.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения вышеописанной иммунореактивной клетки для уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта. Например, настоящее изобретение относится к способу уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта, включающему введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего индуцируется гибель опухолевых клеток у субъекта. В конкретных вариантах осуществления способ приводит к уменьшению количества опухолевых клеток. В другом варианте осуществления способ приводит к уменьшению размера опухоли. В другом варианте осуществления способ приводит к уничтожению опухоли у субъекта. В конкретных вариантах осуществления субъект является человеком. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка представляет собой T-клетку. В конкретных вариантах осуществления опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления опухоль представляет собой множественную миелому.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения вышеописанной иммунореактивной клетки для увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию. Например, настоящее изобретение относится к способу увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию, включающему введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего увеличивается или продлевается срок выживания субъекта. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому. В конкретных вариантах осуществления способ приводит к уменьшению или уничтожению опухолевой нагрузки у субъекта.
Настоящее изобретение также относится к способам получения иммунореактивной клетки, которая связывается с рецептором, связанным с G-белками. В одном неограничивающем примере способ включает введение в иммунореактивную клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), который содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D). В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество раскрытых в настоящем документе иммунореактивных клеток и фармацевтически приемлемый эксципиент. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции предназначены для лечения неоплазии. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому.
Настоящее изобретение также относится к наборам для лечения неоплазии, включающим раскрытые в настоящем документе иммунореактивные клетки. В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно включает письменные инструкции по применению иммунореактивной клетки для лечения неоплазии. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР
Следующее далее подробное описание, приведенное в качестве примера, но не предназначенное для ограничения изобретения конкретными описанными вариантами осуществления, может быть понятным в сочетании с сопроводительными чертежами.
На фигуре 1 представлен химерный антигенный рецептор, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками, в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 2 показана экспрессия GPRC5D человека в нормальных тканях и линиях раковых клеток человека.
На фигуре 3 показана экспрессия раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR на T-клетках человека.
На фигуре 4 показана цитолитическая активность раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR в отношении клеток 3T3, избыточно экспрессирующих GPRC5D.
На фигуре 5 показана цитолитическая активность раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR в отношении линии клеток множественной миеломы человека.
На фигуре 6 представлен химерный антигенный рецептор, нацеленный на GPRC5D, в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 7 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 8 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 9 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 10 показана цитотоксичность нацеленных на GPRC5D CAR T-клеток в отношении линий клеток множественной миеломы человека.
На фигуре 11 показана индукция секреции цитокинов GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток.
На фигуре 12 показана противоопухолевый активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток.
На фигурах 13A и 13B показана цитолитическая активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток. (A) Показано процентное содержание GFP+ клеток опухолевой линии в момент времени 0. (B) Показан процент уничтожения GFP+ клеток опухолевой линии в момент времени 36 часов.
На фигуре 14 проиллюстрирована технология CLIPS. Реакция CLIPS происходит между группами брома каркаса CLIPS и тиоловыми группами боковых цепей остатков цистеина. Реакция является быстрой и специфической в мягких условиях. С использованием этой элегантной химии, природные белковые последовательности превращаются в CLIPS-конструкты с целым диапазоном структур. Слева направо: две разные одиночные T2 петли, T3 двойная петля, конъюгированные T2+T3 петли, стабилизированный бета-слой и стабилизированная альфа-спираль (Timmerman et al., J. Mol. Recognit. 2007; 20: 283-29).
На фигуре 15 показан скрининг комбинаторной библиотеки CLIPS. Целевой белок (слева), содержащий прерывистый конформационный эпитоп, превращают в матричную библиотеку (центр). Комбинаторные пептиды синтезируют на запатентованной миникарте и химически преобразуют в CLIPS-конструкты с определенными пространственными структурами (справа).
На фигуре 16 представлен T3-петлевой конструкт CLIPSTM.
На фигурах 17A-17D показана технология тепловых карт. (A) Таблица комбинированных пептидов с двумя подпоследовательностями, обозначенными «Петля 1» и «Петля 2». (B) Данные из A представлены в виде матрицы. (C) Шкала цветовой индикации представленной тепловой карты. (D) Изображение тепловой карты для данных из A.
На фигуре 18 представлены профили интенсивности, полученные для ET150-2. Линии проведены от начального остатка до конечного остатка одного пептида на высоте, на которой был получен сигнал для этого пептида.
На фигуре 19 представлен анализ методом тепловых карт данных, полученных для ET150-5 в условиях высокой строгости.
На фигуре 20 приведены профили интенсивности, полученные для ET150-18.
На фигуре 21 приведены профили интенсивности, полученные для ET150-8.
На фигуре 22 представлено схематическое изображение GPCR, содержащего семь трансмембранных спиралей (TM) и 3 внеклеточные области (ECL). Цветными стрелками указаны сайты связывания для каждого антитела.
На фигуре 23 представлен анализ при помощи диаграммы рассеяния всех данных, полученных для каждого образца. По диагонали представлено распределение статистических данных.
На фигуре 24 представлены результаты FACS-анализа анти-GPRC5D антител.
На фигуре 25 представлены результаты FACS-анализа анти-GPRC5D антител.
На фигуре 26 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
На фигуре 27 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение, в целом, относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), нацеленным на рецептор, связанный с G-белками ((например, представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D)). В одном неограничивающем примере CAR содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. Настоящее изобретение также относится к иммунореактивным клеткам (например, T-клетке, клетке-естественному киллеру (NK), цитотоксическому T-лимфоциту (CTL), регуляторной T-клетке, человеческой эмбриональной стволовой клетке, лимфоидной клетке-предшественнику, клетке-предшественнику T-клетки и плюрипотентной стволовой клетке, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки), экспрессирующим CAR, нацеленные на рецептор, связанный с G-белками, и способам применения таких иммунореактивных клеток для лечения рака, например, множественной миеломы.
I. Определения
Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то значение, которое им обычно придают специалисты в области, к которой относится данное изобретение. В следующих литературных источниках специалист может найти определения многих терминов, используемых в рамках данного изобретения: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2-е издание, 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5-е издание, R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991); и Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Следующие термины, используемые в настоящем документе, имеют значения, определенные для них ниже, если не указано иное.
Используемый в настоящем документе термин «примерно» или «приблизительно» означает допустимый диапазон ошибки для конкретной величины, что может определять рядовой специалист в данной области; этот диапазон будет зависеть частично от того, каким образом величину определяют или измеряют, то есть, от ограничений системы измерения. Например, «примерно» может означать «в пределах 3 или более чем 3 стандартных отклонений», в соответствии с практикой в данной области. Альтернативно, «примерно» может означать «диапазон вплоть до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5% и даже более предпочтительно до 1% от конкретной величины». Альтернативно, особенно в случае биологических систем или процессов, термин может означать «в пределах порядка величины», предпочтительно в пределах 5-кратного значения, и более предпочтительно, в пределах 2-двукратного значения величины.
Используемый в настоящем документе термин «популяция клеток» означает группу из по меньшей мере двух клеток, имеющих сходные или разные фенотипы. В неограничивающих примерах популяция клеток может включать по меньшей мере примерно 10, по меньшей мере примерно 100, по меньшей мере примерно 200, по меньшей мере примерно 300, по меньшей мере примерно 400, по меньшей мере примерно 500, по меньшей мере примерно 600, по меньшей мере примерно 700, по меньшей мере примерно 800, по меньшей мере примерно 900, по меньшей мере примерно 1000 клеток, имеющих сходные или разные фенотипы.
Используемый в настоящем документе термин «антитело» означает не только интактные молекулы антител, но также и фрагменты молекул антител, которые сохраняют способность связывать иммуноген. Такие фрагменты также хорошо известны в данной области и постоянно используются как in vitro, так и in vivo. Соответственно, используемый в настоящем документе термин «антитело» означает не только интактные молекулы иммуноглобулинов, но также и хорошо известные активные фрагменты F(ab')2 и Fab. Фрагменты F(ab')2 и Fab, которые лишены Fc-фрагмента интактного антитела, быстрее удаляются из системы циркуляции и могут отличаться меньшим неспецифическим связыванием с тканями, чем интактное антитело (Wahl et al., J. Nucl. Med. 24: 316-325 (1983). Антитела по изобретению включают полноразмерные природные антитела, биспецифические антитела; химерные антитела; Fab, Fabʹ, одноцепочечные фрагменты V-области (scFv), слитые полипептиды и необычные антитела.
Используемый в настоящем документе термин «одноцепочечный вариабельный фрагмент» или «scFv» означает слитый белок из вариабельных областей тяжелой (VH) и легкой (VL) цепей иммуноглобулина (например, мыши или человека), ковалентно связанных, с образованием VH::VL гетеродимера. Тяжелая (VH) и легкая (VL) цепи либо связаны напрямую, либо связаны с помощью закодированного пептидного линкера (например, длиной 10, 15, 20, 25 аминокислот), который соединяет N-конец VH с C-концом VL или C-конец VH с N-концом VL. Как правило, линкер бывает богат остатками глицина для гибкости, а также остатками серина или треонина для растворимости. Линкер может связывать вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи внеклеточного антигенсвязывающего домена. Неограничивающие примеры линкеров приведены в Shen et al., Anal. Chem. 80(6): 1910-1917 (2008) и WO 2014/087010, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления линкер представляет собой линкер G4S.
В неограничивающем примере линкер имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 897, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 284]. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284, приведена в SEQ ID NO: 285, которая представлена ниже:
GGTGGAGGTGGATCAGGTGGAGGTGGATCTGGTGGAGGTGGATCT [SEQ ID NO: 285].
В другом неограничивающем примере линкер имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98, которая представлена ниже.
SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA [SEQ ID NO: 98]
В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, приведена в SEQ ID NO: 99, которая представлена ниже:
tctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcc [SEQ ID NO: 99]
Несмотря на удаление константных областей и введение линкера, белки scFv сохраняют специфичность исходного иммуноглобулина. Антитела, представляющие собой одноцепочечный полипептид Fv, могут экспрессироваться с нуклеиновой кислоты, содержащей кодирующие VH и VL последовательности, как описано в Huston, et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883, 1988). Смотри также патенты США №№ 5091513, 5132405 и 4956778; и публикации патентов США №№ 20050196754 и 20050196754. Описаны антагонистические scFv, обладающие ингибирующей активностью (смотри, например, Zhao et al., Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6): 455-51; Peter et al., J Cachexia Sarcopenia Muscle 2012 August 12; Shieh et al., J Imunol 2009 183(4): 2277-85; Giomarelli et al., Thromb Haemost 2007 97(6): 955-63; Fife et al., J Clin Invst 2006 116(8): 2252-61; Brocks et al., Immunotechnology 1997 3(3): 173-84; Moosmayer et al., Ther Immunol 1995 2(10: 31-40). Описаны агонистические scFv, обладающие стимулирующей активностью (смотри, например, Peter et al., J Biol Chem 2003 25278(38): 36740-7; Xie et al., Nat Biotech 1997 15(8): 768-71; Ledbetter et al., Crit Rev Immunol1997 17(5-6): 427-55; Ho et al., BioChim Biophys Acta 2003 1638(3): 257-66).
Используемый в настоящем документе термин «F(ab)» означает фрагмент структуры антитела, который связывается с антигеном, но является одновалентным и не имеет Fc-части, например, при расщеплении антитела ферментом папаином образуются два F(ab)-фрагмента и Fc-фрагмент (например, константная область тяжелой (H) цепи; Fc-область, которая не связывается с антигеном).
Используемый в настоящем документе термин «F(ab')2» означает фрагменты антитела, получаемые при расщеплении пепсином целых IgG антител, причем данный фрагмент имеет две антигенсвязывающие области (ab') (двухвалентные), причем каждая (ab') область содержит две отдельные аминокислотные цепи, часть H-цепи и легкая (L) цепь соединены S-S связью для связывания антигена и при этом оставшиеся части H-цепей связаны вместе. «F(ab')2»-фрагмент может быть разделен на два отдельных Fab'-фрагмента.
Используемый в настоящем документе термин «вектор» означает любой генетический элемент, такой как плазмида, фаг, транспозон, космида, хромосома, вирус, вирион и так далее, который способен к репликации, будучи связан с правильными контрольными элементами, и который может переносить последовательности генов в клетки. Таким образом, термин охватывает клонирующие и экспрессионные векторы, а также вирусные векторы и плазмидные векторы.
Используемый в настоящем документе термин «экспрессионный вектор» означает рекомбинантную нуклеотидную последовательность, то есть, молекулу рекомбинантной ДНК, содержащую нужную кодирующую последовательность и соответствующие нуклеотидные последовательности, необходимые для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Нуклеотидные последовательности, необходимые для экспрессии в прокариотах, как правило, включают промотор, оператор (необязательно) и сайт связывания рибосомы, часто наряду с другими последовательностями. В эукариотических клетках, как известно, используются промоторы, энхансеры, а также последовательности терминации и сигналы полиаденилирования.
Используемый в настоящем документе термин «CDR» означает аминокислотные последовательности определяющей комплементарность области антитела, которые представляют собой гипервариабельные области тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Смотри, например, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4-е издание, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). Как правило, антитела содержат по три области CDR, или CDR, в вариабельных областях тяжелой цепи и легкой цепи. CDR предоставляют большинство контактирующих остатков для связывания антитела с антигеном или эпитопом. В конкретных вариантах осуществления границы областей CDR определяют, используя систему Kabat (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, пятое издание, U.S. Department of Health и Human Services, NIH Publication No. 91-3242).
Используемый в настоящем документе термин «аффинность» означает меру силы связывания. Без привязки к конкретной теории, аффинность зависит от близости, создаваемой стереохимическим соответствием, между антигенсвязывающим центром антитела и антигенными детерминантами, от размера области контакта между ними и от распределения заряженных и гидрофобных групп. Аффинность также включает термин «авидность», который означает силу связи антиген-антитело после образования обратимых комплексов. Методы расчета аффинности антитела для антигена известны в данной области, они включают проведение экспериментов по связыванию для расчета аффинности. Активность антитела в функциональных анализах (например, в анализе методом проточной цитометрии) также является отражением аффинности антитела. Антитела и показатели аффинности можно фенотипически характеризовать и сравнивать с использованием функциональных анализов (например, анализа методом проточной цитометрии).
Молекулы нуклеиновой кислоты, полезные в способах по изобретению, включают любую молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по изобретению или его фрагмент. Такие молекулы нуклеиновой кислоты не обязательно должны быть на 100% идентичны эндогенной нуклеотидной последовательности, однако они, как правило, будут иметь существенную идентичность. Полинуклеотиды, имеющие «существенную идентичность» с эндогенной последовательностью, как правило, способны гибридизоваться с по меньшей мере одной цепью двухцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты. «Гибридизация» означает спаривание, с образованием двухцепочечной молекулы, между комплементарными полинуклеотидными последовательностями (например, гена, описанного в настоящем документе) или их частями в разных условиях строгости. (Смотри, например, Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152: 399; Kimmel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152: 507).
Например, концентрация соли в строгих условиях, как правило, будет составлять менее примерно 750 мМ NaCl и 75 мМ цитрата тринатрия, предпочтительно менее примерно 500 мМ NaCl и 50 мМ цитрата тринатрия, и более предпочтительно менее примерно 250 мМ NaCl и 25 мМ цитрата тринатрия. Низкую строгость условий гибридизации можно получать в отсутствие органических растворителей, например, формамида, в то время как высокую строгость условий гибридизации можно получать в присутствии по меньшей мере примерно 35% формамида, и более предпочтительно по меньшей мере примерно 50% формамида. Температура в строгих условиях, как правило, включает температуру по меньшей мере примерно 30°C, более предпочтительно по меньшей мере примерно 37°C и наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 42°C. Различные дополнительные параметры, такие как время гибридизации, концентрация детергента, например, додецилсульфата натрия (SDS), а также включение или исключение ДНК-носителя, хорошо известны специалистам в данной области. Комбинируя эти различные условия по мере необходимости, можно добиваться различных уровней строгости. В предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 30°C в растворе, содержащем 750 мМ NaCl, 75 мМ цитрата тринатрия и 1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 37°C в растворе, содержащем 500 мМ NaCl, 50 мМ цитрата тринатрия, 1% SDS, 35% формамида и 100 мкг/мл денатурированной ДНК спермы лосося (оцДНК). В наиболее предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 42°C в растворе, содержащем 250 мМ NaCl, 25 мМ цитрата тринатрия, 1% SDS, 50% формамида и 200 мкг/мл оцДНК. Полезные вариации этих условий будут очевидны для специалистов в данной области.
В большинстве случаев строгость условий на этапах промывания после гибридизации также будут варьироваться. Строгость условий при промывании может определяться концентрацией соли и температурой. Как описано выше, строгость условий при промывании можно повышать путем снижения концентрации соли или путем повышения температуры. Например, концентрация соли в строгих условиях на этапах промывания предпочтительно будет составлять менее примерно 30 мМ NaCl и 3 мМ цитрата тринатрия, и наиболее предпочтительно менее примерно 15 мМ NaCl и 1,5 мМ цитрата тринатрия. Температура в строгих условиях на этапах промывания, как правило, будет включать температуру по меньшей мере примерно 25°C, более предпочтительно по меньшей мере примерно 42°C, и еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 68°C. В предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 25°C в растворе, содержащем 30 мМ NaCl, 3 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 42°C в растворе, содержащем 15 мМ NaCl, 1,5 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 68°C в растворе, содержащем 15 мМ NaCl, 1,5 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. Дополнительные вариации этих условий будут очевидны для специалистов в данной области. Методы гибридизации хорошо известны специалистам в данной области и описаны, например, в Benton and Davis (Science 196: 180, 1977); Grunstein and Rogness (Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72: 3961, 1975); Ausubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001); Berger and Kimmel (Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York); и Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.
Выражение «по существу идентичны» означает, что полипептид или молекула нуклеиновой кислоты проявляет по меньшей мере 50% идентичности с эталонной аминокислотной последовательностью (например, любой из аминокислотных последовательностей, описанных в настоящем документе) или нуклеотидной последовательностью (например, например, любой из нуклеотидных последовательностей, описанных в настоящем документе). Предпочтительно, такая последовательность на по меньшей мере 60%, более предпочтительно 80% или 85%, и более предпочтительно 90%, 95% или даже 99% идентична на аминокислотном или нуклеотидном уровне последовательности, используемой для сравнения.
Идентичность последовательностей, как правило, определяют с использованием программ анализа последовательностей (например, пакета программ для анализа последовательностей от Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705; программ BLAST, BESTFIT, GAP или PILEUP/PRETTYBOX). Такие программы сопоставляют идентичные или сходные последовательности путем присвоения степени гомологии в случае различных замен, делеций и/или других модификаций. В иллюстративном подходе для определения степени идентичности можно использовать программу BLAST с показателем вероятности от e-3 до e-100, указывающим на близкородственную последовательность.
Используемый в настоящем документе термин «аналог» означает структурно родственный полипептид или молекулу нуклеиновой кислоты, обладающие функцией эталонного полипептида или молекулы нуклеиновой кислоты.
Используемый в настоящем документе термин «лиганд» означает молекулу, которая связывается с рецептором. В частности, лиганд связывает рецептор на другой клетке, делая возможным межклеточное узнавание и/или взаимодействие.
Используемый в настоящем документе термин «заболевание» означает любое состояние или расстройство, которое нарушает или препятствует нормальному функционированию клетки, ткани или органа. Примеры заболеваний включают неоплазию или инфицирование патогенами клетки.
Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» означает количество, достаточное для достижения терапевтического эффекта. В конкретных вариантах осуществления «эффективное количество» представляет собой количество, достаточное для остановки, ослабления или ингибирования непрерывной пролиферации, роста или метастазирования (например, инвазии или миграции) неоплазии.
Используемый в настоящем документе термин «гетерологичные молекула нуклеиновой кислоты или полипептид» означает молекулу нуклеиновой кислоты (например, молекулу кДНК, ДНК или РНК) или полипептид, которые обычно не присутствуют в клетке или образце, полученном из клетки. Такая нуклеиновая кислота может быть из другого организма или она, например, может представлять собой молекулу мРНК, которая обычно не экспрессируется в клетке или образце.
Используемый в настоящем документе термин «иммунореактивная клетка» означает клетку, которая функционирует при иммунном ответе, либо ее предшественника или потомство.
Используемый в настоящем документе термин «модуляция» означает положительное или отрицательное изменение. Иллюстративная модуляция включает изменение на примерно 1%, примерно 2%, примерно 5%, примерно 10%, примерно 25%, примерно 50%, примерно 75% или примерно 100%.
Используемый в настоящем документе термин «увеличение» означает положительное изменение на по меньшей мере примерно 5%, включая, но без ограничения, положительное изменение на примерно 5%, на примерно 10%, на примерно 25%, на примерно 30%, на примерно 50%, на примерно 75% или на примерно 100%.
Используемый в настоящем документе термин «уменьшение» означает отрицательное изменение на по меньшей мере примерно 5%, включая, но без ограничения, отрицательное изменение на примерно 5%, на примерно 10%, на примерно 25%, на примерно 30%, на примерно 50%, на примерно 75% или на примерно 100%.
Используемый в настоящем документе термин «выделенная клетка» означает клетку, которая отделена от молекулярных и/или клеточных компонентов, которые обычно окружают клетку.
Используемый в настоящем документе термин «выделенный», «очищенный» или «биологически чистый» относится к материалу, который в разной степени свободен от компонентов, которые обычно окружают его в его естественном состоянии. «Выделенный» указывает на состояние отделенности от исходного источника или окружающей среды. «Очищенный» указывает на более высокую степень отделенности, чем при выделении. «Очищенный» или «биологически чистый» белок в достаточной степени свободен от других материалов, так что любые примеси существенно не влияют на биологические свойства белка или не вызывают другие неблагоприятные последствия. То есть, нуклеиновая кислота или пептид по данному изобретению являются очищенными, если они по существу свободны от клеточного материала, вирусного материала или культуральной среды в случае получения методами рекомбинантной ДНК, либо химических предшественников или других химических реагентов в случае химического синтеза. Чистоту и гомогенность, как правило, определяют методами аналитической химии, например, электрофорезом в полиакриламидном геле или высокоэффективной жидкостной хроматографией. Термин «очищенный» может указывать на то, что нуклеиновая кислота или белок образуют практически одну полосу в геле при электрофорезе. В случае белка, который может быть подвергнут модификациям, например, фосфорилированию или гликозилированию, различные модификации могут приводить к образованию разных выделенных белков, которые могут быть очищены отдельно.
Используемый в настоящем документе термин «секретируемый» относится к полипептиду, который высвобождается из клетки секреторным путем через эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи и в виде везикула, который временно сливается с клеточной плазматической мембраной, выводя белки из клетки.
Используемый в настоящем документе термин «специфически связывает» или «специфически связывается с» или «специфически нацелен» означает, что полипептид или его фрагмент узнает и связывает интересующую биологическую молекулу (например, полипептид), но практически не узнает и не связывает другие молекулы в образце, например, биологическом образце, который естественным образом содержит полипептид по изобретению.
Используемый в настоящем документе термин «лечение» или «терапия» означает клиническое вмешательство в попытке изменить течение заболевания у индивидуума или клетки, которые подвергают лечению, и которое может производиться либо в профилактических целях, либо во время клинической патологии. Терапевтические эффекты лечения включают, но не ограничиваются ими, предотвращение возникновения или рецидива заболевания, ослабление симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, снижение скорости прогрессирования заболевания, облегчение или ослабление болезненного состояния, а также достижение ремиссии или более благоприятного прогноза. В случае предотвращения заболевания или нарушения, лечение может предотвращать ухудшение состояния вследствие заболевания у субъекта с текущим или диагностированным заболеванием, или у субъекта, предположительно имеющего заболевание, однако лечение также способно предотвращать начало развития заболевания или симптома заболевания у субъекта, имеющего риск развития заболевания или предположительно имеющего заболевание.
Используемый в настоящем документе термин «субъект» означает любое животное (например, млекопитающее), включая, но без ограничения, людей, приматов, кроме человека, грызунов и тому подобное (например, которые будут получать конкретное лечение или от которых будут получены клетки).
II. Рецептор, связанный с G-белками
Рецепторы, связанные с G-белками («GPR»), также известные как рецепторы с семью трансмембранными доменами, 7TM рецепторы, гептаспиральные рецепторы, серпантинные рецепторы и рецепторы, сопряженные с G-белками, составляют большое белковое семейство рецепторов, которые воспринимают молекулы за пределами клетки и активируют внутренние пути передачи сигнала и, в конечном итоге, клеточные ответы. Рецепторы GPCR можно разделить на шесть классов на основании гомологии последовательностей и функционального сходства: класс A (родопсин-подобные), класс B (семейство рецепторов секретина), класс C (метаботропные глутаматные рецепторы/рецепторы феромона), класс D (рецепторы феромона спаривания грибков), Class E (рецепторы циклической АМФ) и класс F (Frizzled/Smoothened). В конкретных вариантах осуществления GRP представляют собой GRP класса C. В конкретных неограничивающих вариантах осуществления GRP класса C является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками.
Представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), представляет собой рецептор-сироту с неизвестными лигандами или функциями у человека. Он является членом семейства индуцируемых ретиноевой кислотой связанных с G-белками рецепторов. Он избыточно экспрессируется в клетках множественной миеломы (MM) и не экспрессируется, или экспрессируется на гораздо более низком уровне, в клетках любого другого типа, доброкачественных или злокачественных, как показано на фигуре 2. Несколько групп идентифицировали этот ген, как дифференциально экспрессируемый на высоком уровне, при профилировании экспрессии генов в клетках первичной MM по сравнению с нормальной тканью1 или другими злокачественными заболеваниями крови2-4. Показано, что более высокий уровень экспрессии мРНК коррелирует с более низкой общей выживаемостью1 пациентов. Поверхностное окрашивание пунктатов костного мозга от пациентов с MM показало окрашивание, специфичное для плазматических клеток4. Насколько известно авторам изобретения, это первый случай, когда GPRC5D был выбран мишенью для терапевтического средства. Кроме того, насколько известно авторам изобретения, это первый случай создания CAR, нацеленного на какой-либо из рецепторов, связанных с G-белками.
В некоторых неограничивающих вариантах осуществления GPRC5D представляет собой GPRC5D человека, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 97, или ее фрагменты.
SEQ ID NO: 97 приведена ниже:
MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVL PTQLLFLLSVLGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRG CVSFSWTTILCIAIGCSLLQIIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFL MALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITVLFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDP VVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNACPVTAYQHSFQVENQELSRAR DSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSPQQDAGGV
[SEQ ID NO: 97]
N-концевая область GPRC5D человека содержит аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 1 (ECL1) GPRC5D человека содержит аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 2 (ECL2) GPRC5D человека содержит аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 3 (ECL3) GPRC5D человека содержит аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97.
III. Химерный антигенный рецептор (CAR).
Химерные антигенные рецепторы (CAR) представляют собой сконструированные рецепторы, которые сообщают или придают интересующую специфичность иммунной эффекторной клетке. CAR можно использовать для придания специфичности моноклонального антитела T-клетке; при этом перенос их кодирующей последовательности осуществляют с помощью ретровирусных векторов.
Известно три поколения CAR. CAR «первого поколения», как правило, состоят из внеклеточного антигенсвязывающего домена (например, одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv)), слитого с трансмембранным доменом, слитым с цитоплазматическим/внутриклеточным доменом цепи T-клеточного рецептора. CAR «первого поколения», как правило, имеют внутриклеточный домен из CD3ξ-цепи, который является основным передатчиком сигналов от эндогенных TCR. CAR «первого поколения» могут обеспечивать узнавание de novo антигена и вызывать активацию как CD4+, так и CD8+ T-клеток через их сигнальный домен CD3ζ-цепи в одной слитой молекуле, независимо от опосредованного HLA представления антигена. В CAR «второго поколения» добавлены внутриклеточные домены из разных костимулирующих молекул (например, CD28, 4-1BB, ICOS, OX40) к цитоплазматическому хвосту CAR для обеспечения дополнительных сигналов для T-клетки. CAR «второго поколения» включают те, которые обеспечивают как костимуляцию (например, CD28 или 4-1BB), так и активацию (CD3ζ). Доклинические исследования показали, что CAR «второго поколения» способны повышать противоопухолевую активность T-клеток. Например, устойчивая эффективность T-клеток, модифицированных CAR «второго поколения», была продемонстрирована в клинических испытаниях по таргетированию молекулы CD19 у пациентов с хроническим лимфобластным лейкозом (CLL) и острым лимфобластным лейкозом (ALL). CAR «третьего поколения» включают те, которые обеспечивают множественную костимуляцию (например, CD28 и 4-1BB) и активацию (CD3ζ).
В соответствии с настоящим изобретением, CAR содержат внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, представляет собой GPRC5D. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой Fab, который, необязательно, является сшитым. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный связывающий домен представляет собой F(ab)2. В конкретном неограничивающем варианте осуществления любая из вышеуказанных молекул может находиться в слитом белке с гетерологичной последовательностью, образуя внеклеточный антигенсвязывающий домен.
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен описанного в настоящем документе CAR имеет высокую специфичность связывания, а также высокую аффинность связывания с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D). Например, в таких вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR (представляющий собой, например, scFv или его аналоги) связывается с GPRC5D с константой диссоциации (KD), составляющей примерно 3×10-6 M или менее. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 1×10-6 M или менее, примерно 1×10-7 M или менее, примерно 1×10-8 M или менее, или примерно 1×10-9 M или менее, примерно 1×10-10 M или менее, или примерно 1×10-11 M или менее. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 1×10-8 M или менее. В конкретных вариантах осуществления KD составляет от примерно 1×10-11 M до примерно 3×10-6 M, например, от примерно 1×10-11 M до примерно 1×10-10 M, от примерно 1×10-10 M до примерно 1×10-9 M, от примерно 1×10-9 M до примерно 1×10-8 M, от примерно 1×10-8 M до примерно 1×10-7 M или от примерно 1×10-7 M до примерно 1×10-6 M, или от примерно 1×10-6 M до примерно 3×10-6 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет от примерно 1×10-9 M до примерно 1×10-8 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет от примерно 1×10-9 M до примерно 1,5×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 1,2×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет от примерно 4×10-9 M до примерно 5×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 5×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 4,8×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет от примерно 8×10-9 M до примерно 9×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 8×10-9 M. В конкретных вариантах осуществления KD составляет примерно 8,1×10-9 M.
Связывание внеклеточного антигенсвязывающего домена (представляющего собой, например, scFv или его аналог) раскрытого в настоящем документе CAR с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), можно подтверждать, например, твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA), радиоиммунным анализом (RIA), FACS-анализом, биоанализом (например, ингибированием роста) или вестерн-блоттингом. Каждый из этих анализов, как правило, позволяет обнаруживать наличие конкретных интересующих комплексов белок-антитело за счет использования меченого реагента (например, антитела или scFv), специфичного для интересующего комплекса. Например, scFv можно метить радиоактивной меткой и использовать в радиоиммунном анализе (RIA) (смотри, например, публикацию Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки). Радиоактивный изотоп можно обнаруживать например, с помощью γ-счетчика или сцинтилляционного счетчика, или авторадиографии. В конкретных вариантах осуществления нацеленный на GPRC5D внеклеточный антигенсвязывающий домен мечен флуоресцентным маркером. Неограничивающие примеры флуоресцентных маркеров включают зеленый флуоресцентный белок (GFP), синий флуоресцентный белок (например, EBFP, EBFP2, азурит и mKa1ama1), циановый флуоресцентный белок (например, ECFP, лазурный и CyPet) и желтый флуоресцентный белок (например, YFP, цитрин, Венера и YPet). В конкретных вариантах осуществления нацеленный на GPRC5D scFv человека мечен GFP.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv). В одном конкретном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит scFv человека, который специфически связывается с GPRC5D человека. В другом конкретном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит scFv мыши, который специфически связывается с GPRC5D человека. В конкретных вариантах осуществления scFv идентифицируют путем скрининга фаговой библиотеки scFv с клетками (например, клетками 3T3), экспрессирующими GPRC5D.
Внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 и 93. Нуклеотидными последовательностями, кодирующими аминокислотные последовательности SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 и 93, являются SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 67, 71, 75, 79, 83, 87, 91 и 95, соответственно. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 и 94. Нуклеотидными последовательностями, кодирующими аминокислотные последовательности SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 и 94, являются SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92 и 96, соответственно. Последовательности SEQ ID NOS: 1-96 описаны в следующих далее таблицах 1-24.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, которые гомологичны аминокислотным последовательностям, описанным в настоящем документе и приведенным в таблицах 1-24. Например, и без ограничения, внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386; и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.
Настоящее изобретение также относится к внеклеточным антигенсвязывающим доменам (например, scFv), которые содержат CDR вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи, например, CDR1, CDR2 и CDR3, приведенные в настоящем документе в таблицах 1-24. Границы областей CDR определены с использованием системы Kabat (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, пятое издание, U.S. Department of Health и Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Настоящее изобретение также относится к внеклеточным антигенсвязывающим доменам (например, scFv), которые имеют консервативные модификации последовательностей антитела, раскрытых в настоящем документе. Например, и без ограничения, внеклеточные антигенсвязывающие домены (например, scFv) по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, при этом одна или более из этих последовательностей CDR содержат конкретные аминокислотные последовательности, раскрытые в настоящем документе, или их консервативные модификации, и при этом внеклеточные антигенсвязывающие домены сохраняют желательные функциональные свойства.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к внеклеточному антигенсвязывающему домену (например, scFv), содержащему вариабельную область тяжелой цепи, при этом вариабельная область тяжелой цепи содержит: (a) CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; (b) CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (c) CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390, а также их консервативных модификаций.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельная область легкой цепи содержит: (a) CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций; (b) CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций; и (c) CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393, а также их консервативных модификаций.
Настоящее изобретение относится к внеклеточному антигенсвязывающему домену (например, scFv), содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, при этом: (a) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR3 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека). В конкретных вариантах осуществления CDR2 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR2 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека). В конкретных вариантах осуществления CDR1 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-153 scFv (другое название «ET150-3 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129.
Таблица 1
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 124] | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 125] | ARGMYRSLLFYDP [SEQ ID NO: 126] |
| VL | RSNVGNYY [SEQ ID NO: 127] | DNN [SEQ ID NO: 128] | GTWDGSLSAHV [SEQ ID NO: 129] |
| Полная VH | QVQLVQSGSELKKPGASVRVSCTASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPNAGSTRYAQKFQGRVTMSTDTSTSTAYMDLSSLRSЭДТАVYYCARGMYRSLLFYDPWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 1] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcagtctgggtctgagttgaagaagcctggggcctcagtcagagtctcctgcacggcttctggatacaccttcaccagttactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtaatcaaccctaatgctggcagcacaagatacgcacagaaattccagggcagagtcaccatgagcactgacacgtccacgagcacagcctacatggacctgagcagtctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtatgtaccgttctctgctgttctacgatccgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 3] | ||
| Полная VL | QSVLTQPPSVSAAPGQKVTIPCSGSRSNVGNYYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYFCGTWDGSLSAHVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 2] | ||
| ДНК | Cagtctgtgttgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatcccctgctctggaagccgttccaacgttgggaattattatgtgtcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacaataataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattatttctgcggaacatgggatggcagcctgagtgcccatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 4] | ||
| scFv | QSVLTQPPSVSAAPGQKVTIPCSGSRSNVGNYYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYFCGTWDGSLSAHVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGSELKKPGASVRVSCTASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPNAGSTRYAQKFQGRVTMSTDTSTSTAYMDLSSLRSЭДТАVYYCARGMYRSLLFYDPWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 100] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-166 scFv (другое название «ET150-16 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 5, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135.
Таблица 2
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSNYA [SEQ ID NO: 130] | ISGSGNT [SEQ ID NO: 131] | ARGSVRYTDI [SEQ ID NO: 132] |
| VL | SGAIAGAY [SEQ ID NO: 133] | DDN [SEQ ID NO: 134] | QSYDYDSSNVL [SEQ ID NO: 135] |
| Полная VH | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 5] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgagttgggtccgccaggctccagggaagggactggagtgggtctcagctattagtggtagtggtaacacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttctgttcgttacactgatatctggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 7] | ||
| Полная VL | NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 6] | ||
| ДНК | Aattttatgctgactcagccccactcagtgtcggagtctccggggaagacggtaagcatctcctgcacccgcaccagtggcgccattgccggcgcctatgtgcagtggttccagcagcgcccgggcagtgcccccaccactgtgatctatgacgataacaaaagaccctctggggtccctgatcggttctctgggtccatcgacaagtcctccaactctgcctccctcaccatctctggactgaagactgaggacgaggctgactattattgtcagtcttatgattatgatagcagcaatgtgctattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 8] | ||
| scFv | NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 101] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-170 scFv (другое название «ET150-20 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 9, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141.
Таблица 3
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFNNYW [SEQ ID NO: 136] | IKQDGSEK [SEQ ID NO: 137] | ARSMSTAV [SEQ ID NO: 138] |
| VL | QSISSY [SEQ ID NO: 139] | AAS [SEQ ID NO: 140] | QQSYSVPYT [SEQ ID NO: 141] |
| Полная VH | EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFNNYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYADSVRGRFTISRДНКKNSLSLQLNNLRAЭДТАVYYCARSMSTAWGYDEWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 9] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtgcagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaacctctggattcacctttaataactattggatgagttgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtggccaacataaagcaagatggaagtgagaaatactacgcggactctgtgaggggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtctctgcaattgaacaacctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctctatgtctactgcttggggttacgatgaatggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 11] | ||
| Полная VL | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPADFATYYCQQSYSVPYTFGQGTKLEIKR [SEQ ID NO: 10] | ||
| ДНК | Gacatccagttgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtcggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgcagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtgtcccgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaacgt [SEQ ID NO: 12] | ||
| scFv | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPADFATYYCQQSYSVPYTFGQGTKLEIKRSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFNNYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYADSVRGRFTISRДНКKNSLSLQLNNLRAЭДТАVYYCARSMSTAWGYDEWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 102] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-171 scFv (другое название «ET150-21 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147.
Таблица 4
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 142] | INPSGGST [SEQ ID NO: 143] | ARGSSRWGGWTGDY [SEQ ID NO: 144] |
| VL | SSDVGGYNF [SEQ ID NO: 145] | DVS [SEQ ID NO: 146] | SSYTSTRTVIFAGGTKVTVL [SEQ ID NO: 147] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 13] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaaggtacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtcaacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggttcttctcgctggggtggttggactggtgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 15] | ||
| Полная VL | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLG [SEQ ID NO: 14] | ||
| ДНК | Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactttgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaagtcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcagggatttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggttgaggacgaggctgaatattactgcagctcatatacaagcactagaactgtgatattcgccggagggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 16] | ||
| scFv | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLG SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 103] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-175 scFv (другое название «ET150-25 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 17, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153.
Таблица 5
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GSTFSSYA [SEQ ID NO: 148] | ISGRGRST [SEQ ID NO: 149] | ARYYKSKDH [SEQ ID NO: 150] |
| VL | RSNIGTNY [SEQ ID NO: 151] | RNH [SEQ ID NO: 152] | AAWDDNLSGVV [SEQ ID NO: 153] |
| Полная VH | EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYKSSKDHWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 17] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagactgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatccacctttagcagctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtcgtggtcgtagcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctactacaaatcttctaaagatcattggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 19] | ||
| Полная VL | QSVLTQPPSLSGAPGQRVTISCSGSRSNIGTNYVSWXQQLPGTAPKLLIYRNHQWPSGVPDRFTGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDNLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 18] | ||
| ДНК | Cagtctgtgttgacgcagccgccctcactgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcttgttccggaagcaggtccaacatcggaactaattatgtatcctggnaccagcaactcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaatcatcagtggccctcaggggtccctgaccgattcactggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattactactgtgcagcatgggatgacaatttgagtggtgtggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 20] | ||
| scFv | QSVLTQPPSLSGAPGQRVTISCSGSRSNIGTNYVSWXQQLPGTAPKLLIYRNHQWPSGVPDRFTGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDNLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYKSSKDHWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 104] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-154 scFv (другое название «ET150-4 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 21, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159.
Таблица 6
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | AYTFTDYY [SEQ ID NO: 154] | INPKSGRT [SEQ ID NO: 155] | ARVYGYSRWSGFDL [SEQ ID NO: 156] |
| VL | SSNIGSNY [SEQ ID NO: 157] | RNN [SEQ ID NO: 158] | AAWDDSLSGYV [SEQ ID NO: 159] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVQRPGASVRVSCKAIAYTFTDYYIHWVRQAPGQGPEWMGWINPKSGRTQYAPKFQDRVTLARETPISTASMELRGLTSDDTAVYYCARVYGYSRWSGFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 21] | ||
| ДНК | Caggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgcagaggcctggggcctcagtgagggtctcctgcaaggctattgcgtacaccttcaccgactactatatccactgggtgcgacaggcccctggacaagggcctgagtggatggggtggatcaaccctaaaagtggtcgcacacagtatgcaccgaagtttcaagacagggtcaccctggccagggagacgcccatcagcacagcctccatggagctgcgcggactgacatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcgtttacggttactctcgttggtctggtttcgatctgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 23] | ||
| Полная VL | QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 22] | ||
| ДНК | Caggctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 24] | ||
| scFv | QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVQRPGASVRVSCKAIAYTFTDYYIHWVRQAPGQGPEWMGWINPKSGRTQYAPKFQDRVTLARETPISTASMELRGLTSDDTAVYYCARVYGYSRWSGFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 105] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-156 scFv (другое название «ET150-6 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 25, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165.
Таблица 7
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTTYY [SEQ ID NO: 160] | INPNGGGT [SEQ ID NO: 161] | ARGHKVYKSHPTGGYDR [SEQ ID NO: 162] |
| VL | SRDVGGYNY [SEQ ID NO: 163] | EVS [SEQ ID NO: 164] | SSYTSSSTLD [SEQ ID NO: 165] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKQPGASVKVSCQASGYTFTTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPNGGGTFYAQKFQDRVTMTRDTSTGTVYMELSSLRSDDTAVYYCARGHKVYKSHPTGGYDRWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 25] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcaatctggggctgaggtgaagcagcctggggcctcagtgaaggtttcctgccaggcatctggatacaccttcaccacttattatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctaatggtggtggcacattctacgcacagaagttccaggacagagtcaccatgaccagggacacgtccacgggcacagtctacatggaactgagcagcctgagatctgacgacactgccgtgtattactgtgcgcgcggtcataaagtttacaaatctcatccgactggtggttacgatcgttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 27] | ||
| Полная VL | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLDFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 26] | ||
| ДНК | Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagccgtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatataccagtagcagcactttagacttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 28] | ||
| scFv | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLDFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKQPGASVKVSCQASGYTFTTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPNGGGTFYAQKFQDRVTMTRDTSTGTVYMELSSLRSDDTAVYYCARGHKVYKSHPTGGYDRWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 106] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-157 scFv (другое название «ET150-7 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 29, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171.
Таблица 8
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GGTFSSYA [SEQ ID NO: 166] | IIPIFGTA [SEQ ID NO: 167] | ARSHVAWSLLDY [SEQ ID NO: 168] |
| VL | SSNIGSNY [SEQ ID NO: 169] | RNN [SEQ ID NO: 170] | AAWDDSLSGVV [SEQ ID NO: 171] |
| Полная VH | EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARSHVAWSLLDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 29] | ||
| ДНК | Gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggaggcaccttcagcagctatgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagggattatccctatctttggtacagcaaaatatgcacagaagttccagggcagagtcacgattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctctcatgttgcttggtctctgctggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 31] | ||
| Полная VL | SYELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 30] | ||
| ДНК | Tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatcctggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggtgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 32] | ||
| scFv | SYELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARSHVAWSLLDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 107] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-159 scFv (другое название «ET150-9 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 33, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177.
Таблица 9
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GGTFSSYA [SEQ ID NO: 172] | MNPNSGNT [SEQ ID NO: 173] | ARYQSYKGSQSDS [SEQ ID NO: 174] |
| VL | SSNIGSNY[SEQ ID NO: 175] | RNN [SEQ ID NO: 176] | AAWDDSLSGWV [SEQ ID NO: 177] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARYQSYKGSQSDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 33] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggaggcaccttcagcagctatgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatgaaccctaacagtggtaacacaggctatgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccaggaacacctccataagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctaccagtcttacaaaggttctcagtctgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 35] | ||
| Полная VL | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 34] | ||
| ДНК | Cagtctgtgttgacgcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 36] | ||
| scFv | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARYQSYKGSQSDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 108] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-160 scFv (другое название «ET150-10 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 37, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183.
Таблица 10
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY[SEQ ID NO: 178] | INPSGGST [SEQ ID NO: 179] | ARGGSKKWSGEKWRRENFDY [SEQ ID NO: 180] |
| VL | SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 181] | DVS [SEQ ID NO: 182] | SSYTRSSTEV [SEQ ID NO: 183] |
| Полная VH | EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGGSKKWSGEKWRRENFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 37] | ||
| ДНК | Gaggtccagctggtacagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtggttctaaaaaatggtctggtgaaaaatggcgtcgtgaaaacttcgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 39] | ||
| Полная VL | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTRSSTEVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 38] | ||
| ДНК | Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaagaagcagcactgaggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 40] | ||
| scFv | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTRSSTEVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGGSKKWSGEKWRRENFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 109] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-161 scFv (другое название «ET150-11 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 41, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189.
Таблица 11
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | EYTFTRHI [SEQ ID NO: 184] | INPGNGNT [SEQ ID NO: 185] | ARLPDQ [SEQ ID NO: 186] |
| VL | SSNIGSNT [SEQ ID NO: 187] | RNN [SEQ ID NO: 188] | AAWDDSLSGL [SEQ ID NO: 189] |
| Полная VH | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASEYTFTRHILHWVRQAPGQSLEWMGWINPGNGNTKYSQKFQVRVTFTRDTSASTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARLPDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 41] | ||
| ДНК | Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcttctgaatacaccttcactaggcatattctacattgggtgcgccaggctcccggacaaagccttgagtggatgggatggatcaacccaggcaatggtaatacaaaatattcacagaagttccaggtcagagtcacctttaccagggacacatccgcgagcacagtctatatggagctgagcagcctgagatctgaagacacggccgtgtattactgtgcgcgcctgccggatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 43] | ||
| Полная VL | SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 42] | ||
| ДНК | Tcctatgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaatactgtaaactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggtctcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 44] | ||
| scFv | SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASEYTFTRHILHWVRQAPGQSLEWMGWINPGNGNTKYSQKFQVRVTFTRDTSASTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARLPDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 110] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-162 scFv (другое название «ET150-12 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 45, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195.
Таблица 12
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFGDYG [SEQ ID NO: 190] | INWNGGST [SEQ ID NO: 191] | ARSKQDY [SEQ ID NO: 192] |
| VL | SRDAGGYNY [SEQ ID NO: 193] | EVT [SEQ ID NO: 194] | SSYGGSNNFRV [SEQ ID NO: 195] |
| Полная VH | EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 45] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggtgtggtacggcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttggtgattatggcatgagctgggtccgccaagctccagggaaggggctggagtgggtctctggtattaattggaatggtggtagcacaggttatgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctaaacaggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 47] | ||
| Полная VL | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 46] | ||
| ДНК | Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagggacgctggtggttataattatttctcctggtaccaacaacacccaggcaaagcccccaaactcctgatttatgaggtcactaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaagacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgacgatgaggctgtatattactgcagctcatatggaggcagcaacaactttcgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 48] | ||
| scFv | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 111] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-163 scFv (другое название «ET150-13 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 49, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, и VL CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201.
Таблица 13
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFSFSGTA[SEQ ID NO: 196] | ISSTGRST [SEQ ID NO: 197] | ARVSFDY [SEQ ID NO: 198] |
| VL | SSNIGAGYD [SEQ ID NO: 199] | GNS [SEQ ID NO: 200] | QSYDSSLSGSYV [SEQ ID NO: 201] |
| Полная VH | EVQLVETGGNLVQPGASLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARVSFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 49] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagactgggggaaacttggtacagccgggggcgtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcagctttagtggcactgccatgcactgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatgggtctcgactattagtagtactgggcgtagcacatactacagagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagaggcgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcgtttctttcgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 51] | ||
| Полная VL | QSVVTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKLTVLG [SEQ ID NO: 50] | ||
| ДНК | Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcagtgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcctgcactgggagcagctccaacatcggggcaggttatgatgtacactggtaccagcagcttccaggaacagcccccaaactcctcatctatggtaacagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctatgacagcagcctgagtggctcctacgtcttcggaactgggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 52] | ||
| scFv | QSVVTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVETGGNLVQPGASLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARVSFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 112] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-151 scFv (другое название «ET150-1 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 53, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207.
Таблица 14
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSSYA [SEQ ID NO: 202] | ISGRGRST [SEQ ID NO: 203] | ARYYHAGAFDL [SEQ ID NO: 204] |
| VL | SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 205] | DVS [SEQ ID NO: 206] | SSYTSSSTLV [SEQ ID NO: 207] |
| Полная VH | EVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 53] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagtctgggggagcctttgtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatgccatgacctgggtccgccaggctccagggaagggcctggaatgggtctcgactattagtggtcgtggtcgtagcacattctacgcagactccgtgaagggccggtttaccatctccagagacaattccaagaacacgctatatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctactaccatgctggtgctttcgatctgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 55] | ||
| Полная VL | QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 54] | ||
| ДНК | Cagtctgtcgtgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaagcagcagcactttggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 56] | ||
| scFv | QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 113] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-152 scFv (другое название «ET150-2 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 57, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213.
Таблица 15
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFNRYA [SEQ ID NO: 208] | ISAYNGNS [SEQ ID NO: 209] | ARMAYDS [SEQ ID NO: 210] |
| VL | SNDVGAYKY [SEQ ID NO: 211] | DVF [SEQ ID NO: 212] | FSLTSSNTYV [SEQ ID NO: 213] |
| Полная VH | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 57] | ||
| ДНК | Cagatgcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaacagatatgctatcacctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaattcacactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgggcacagcctatatggagctgaggaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcatggcttacgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 59] | ||
| Полная VL | QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 58] | ||
| ДНК | Cagtctgtgttgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgctcaccatctcctgcactggaaccagcaatgacgttggtgcttataagtatgtctcctggtatcaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatactttatgatgtctttaagcggccctcaggggtctctaatcgcttctctggctccaagtctgacaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcttctcacttacaagcagtaacacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 60] | ||
| scFv | QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 114] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-155 scFv (другое название «ET150-5 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFV, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 61, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.
Таблица 16
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSDYY [SEQ ID NO: 214] | ISSSGSTI [SEQ ID NO: 215] | ARGYGKAYDQ [SEQ ID NO: 216] |
| VL | RSNVGGNY [SEQ ID NO: 217] | RSN [SEQ ID NO: 218] | ATWDDSLSGFV [SEQ ID NO: 219] |
| Полная VH | EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 61] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactacgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttacggtaaagcttacgatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 63] | ||
| Полная VL | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 62] | ||
| ДНК | Cagtctgtgttgactcagccaccctcagcgtctgggacccccggacagagggtcaccatctcttgttctggaagcaggtccaacgtaggaggtaattatgtattttggtaccagcaagtccccggagcgacccccaaactcctcatctataggagtaatcagcggccctcgggggtccctgaccgattcgctggctccaagtctggctcctcagcctccctggccatcagtggactccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgagtggttttgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 64] | ||
| scFv | QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 115] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-158 scFv (другое название «ET150-8 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 65, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.
Таблица 17
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFRSHS [SEQ ID NO: 220] | ISSDSTYT [SEQ ID NO: 221] | ARSGGQWKYYDY [SEQ ID NO: 222] |
| VL | SLRSYY [SEQ ID NO: 223] | GKN [SEQ ID NO: 224] | NSRDSSGNPPVV [SEQ ID NO: 225] |
| Полная VH | QVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 65] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtccaccctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagaagccatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtgatagtacttacacatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctggtggtcagtggaaatactacgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 67] | ||
| Полная VL | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 66] | ||
| ДНК | Tcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaacccccctgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 68] | ||
| scFv | SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 116] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-168 scFv (другое название «ET150-18 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 69, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
Таблица 18
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSNYA [SEQ ID NO: 226] | INGRGSST [SEQ ID NO: 227] | ARYISRGLGDS [SEQ ID NO: 228] |
| VL | NSNIERNY[SEQ ID NO: 229] | DND [SEQ ID NO: 230] | GTWDSSLRGWV [SEQ ID NO: 231] |
| Полная VH | EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАTYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV [SEQ ID NO: 69] | ||
| ДНК | Gaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttgatacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaactattaatggtcgtggtagtagtacaatctacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacagccacgtattactgtgcgcgctacatctctcgtggtctgggtgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 71] | ||
| Полная VL | QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 70] | ||
| ДНК | Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcaatgtctgcggccccaggacagcaagtcaccatctcctgctctggaggcaactccaacattgagagaaattatgtatcctggtacctccagctccctggaacagcccccaaactcgtcatttttgacaatgataggcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagaggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 72] | ||
| scFv | QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАTYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV [SEQ ID NO: 117] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-164 scFv (другое название «ET150-14 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 73, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237.
Таблица 19
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 232] | INPSGGST [SEQ ID NO: 233 | ARAGMGMDT [SEQ ID NO: 234] |
| VL | SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 235] | EVS [SEQ ID NO: 236] | SSYAGSNTLV [SEQ ID NO: 237] |
| Полная VH | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 73] | ||
| ДНК | Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcgctggtatgggtatggatacttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 75] | ||
| Полная VL | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 74] | ||
| ДНК | Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcagcaacaccttggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 76] | ||
| scFv | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 118] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-165 scFv (другое название «ET150-15 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 77, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243.
Таблица 20
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTAYS [SEQ ID NO: 238] | INPSSGGA [SEQ ID NO: 239] | ARNVGGQADD [SEQ ID NO: 240] |
| VL | SSDIGGYNY [SEQ ID NO: 241] | EVN [SEQ ID NO: 242] | ASFAGRKTLV [SEQ ID NO: 243] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGQADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 77] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccgcctactctttacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaccctagcagtggtggcgcagtttatgcacagaaatttcagggtagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagtggcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcaacgttggtggtcaggctgatgactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 79] | ||
| Полная VL | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 78] | ||
| ДНК | Caatctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacattggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcaataagcggccctcaggggtccctgatcgcttctcgggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcgcctcatttgcgggcaggaagacattggtcttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 80] | ||
| scFv | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGQADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 119] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-167 scFv (другое название «ET150-17 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 81, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249.
Таблица 21
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTAYS [SEQ ID NO: 244] | INPSSGGA [SEQ ID NO: 245] | ARNVGGHADD [SEQ ID NO: 246] |
| VL | STDIGGYNY [SEQ ID NO: 247] | EVN [SEQ ID NO: 248] | ASFAGRKTLV [SEQ ID NO: 249] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGHADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 81] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaaaaagcctggggcctcagtgaaagtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccgcctactctttacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaccctagcagtggtggcgcagtttatgcacagaaatttcagggtagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagtggcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcaacgttggtggtcacgctgatgactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 83] | ||
| Полная VL | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSTDIGGYNYVSWYQHHPSKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 82] | ||
| ДНК | Caatctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcactgacattggtggttataactatgtctcctggtaccaacaccacccaagcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcaataagcggccctcaggggtccctgatcgcttctcgggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcgcctcatttgcgggcaggaagacattggtcttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 84] | ||
| scFv | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSTDIGGYNYVSWYQHHPSKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGHADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 120] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-169 scFv (другое название «ET150-19 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 85, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255.
Таблица 22
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFNTYG [SEQ ID NO: 250] | ISANNGHT [SEQ ID NO: 251] | ARGGYHHQMQRYYKATSVYSDY [SEQ ID NO: 252] |
| VL | SSNIGNNY [SEQ ID NO: 253] | DNN [SEQ ID NO: 254] | GTWDSSLSGVV [SEQ ID NO: 255] |
| Полная VH | QVQLVQSGGEVKKPGASVKVSCKASGFTFNTYGISWVRQAPGQGLEWMGWISANNGHTKSAQRFQDRVAMATDTSTSTAYMELRSLKFDDTAVYYCARGGYHHQMQRYYKATSVYSDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 85] | ||
| ДНК | Caggtccagctggtgcagtctggaggtgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtttcacctttaacacctatggcatcagttgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcgctaacaatggtcacacaaagtctgcacagaggttccaggacagagtcgccatggccacagacacatccacgagcacggcctacatggagctgaggagcctgaaatttgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtggttaccatcatcagatgcagcggtactacaaagctacttctgtttactctgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 87] | ||
| Полная VL | QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 86] | ||
| ДНК | Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatctcctgctctggaagcagctccaacattgggaataattatgtatcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacaataataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtctgccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagtggtgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 88] | ||
| scFv | QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGGEVKKPGASVKVSCKASGFTFNTYGISWVRQAPGQGLEWMGWISANNGHTKSAQRFQDRVAMATDTSTSTAYMELRSLKFDDTAVYYCARGGYHHQMQRYYKATSVYSDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 121] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-172 scFv (другое название «ET150-22 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 89, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261.
Таблица 23
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 256] | INPSGGSS [SEQ ID NO: 257] | ARAGMGMDT [SEQ ID NO: 258] |
| VL | SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 259] | EVS [SEQ ID NO: 260] | SSYAGSNTLV [SEQ ID NO: 261] |
| Полная VH | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSSSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 89] | ||
| ДНК | Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagctcaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcgctggtatgggtatggatacttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 91] | ||
| Полная VL | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 90] | ||
| ДНК | Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcagcaacaccttggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 92] | ||
| scFv | QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSSSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 122] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-173 scFv (другое название «ET150-23 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 93, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267.
Таблица 24
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 262] | INPSGGST [SEQ ID NO: 263] | ARDVISGFDS [SEQ ID NO: 264] |
| VL | SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 265] | GVS [SEQ ID NO: 266] | SSYAGVNNLM [SEQ ID NO: 267] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARDVISGFDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 93] | ||
| ДНК | Caggtgcagctggtgcaatctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacactgccgtgtattactgtgcgcgcgacgttatctctggtttcgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 95] | ||
| Полная VL | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQSPGKAPRLMIYGVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGVNNLMFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 94] | ||
| ДНК | Cagtctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacaatccccaggcaaagcccccagactcatgatttatggggtcagtaagcggccctctggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaagatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcgtcaacaatttaatgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 96] | ||
| scFv | QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQSPGKAPRLMIYGVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGVNNLMFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARDVISGFDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 123] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 301 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-024 scFv (другое название «ET150-174 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 302, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, и VL CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309.
Таблица 25
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFGDYG [SEQ ID NO: 304] | INWNGGST [SEQ ID NO: 305] | ARSKQGY [SEQ ID NO: 306] |
| VL | SRDAGGYNY [SEQ ID NO: 307] | EVT [SEQ ID NO: 308] | SSYGGSNNFRV [SEQ ID NO: 309] |
| Полная VH | EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 302] | ||
| ДНК | GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGTGTGGTACGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCTGGTATTAATTGGAATGGTGGTAGCACAGGTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTCTAAACAGGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 310] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 302] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGGGACGCTGGTGGTTATAATTATTTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAAGACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGTATATTACTGCAGCTCATATGGAGGCAGCAACAACTTTCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 311] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 301] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGGGACGCTGGTGGTTATAATTATTTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAAGACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGTATATTACTGCAGCTCATATGGAGGCAGCAACAACTTTCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGTGTGGTACGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCTGGTATTAATTGGAATGGTGGTAGCACAGGTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTCTAAACAGGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 312] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 313 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-026 scFv (другое название «ET150-176 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 314, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, и VL CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321.
Таблица 26
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSNYA [SEQ ID NO: 316] | ITNSGRST [SEQ ID NO: 317] | ARVTHRRYGSTFDS [SEQ ID NO: 318] |
| VL | SSNIGSNT [SEQ ID NO: 319] | SNN [SEQ ID NO: 320] | AAWDDSVNGYV [SEQ ID NO: 321] |
| Полная VH | QLQLQESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITNSGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMSSLRAЭДТАVYYCARVTHRRYGSTFDSRGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 314] | ||
| ДНК | CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGGGAGGCTCGGTACAGCCGGGGGGGTCTCTGAGACTGTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCACTAATAGTGGTCGTAGTACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCTTTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGTTACTCATCGTCGTTACGGTTCTACTTTCGATTCTCGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGC [SEQ ID NO: 322] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELSYELTQPPSASGTPGQRVSISCSGSSSNIGSNTVNWYQQFPGTAPKLLIHSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGPQSEDEADYYCAAWDDSVNGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 315] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCTCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCAGCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAGTAATACTGTAAACTGGTACCAACAGTTCCCCGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCCATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCCCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCTTGGGATGACAGTGTGAATGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 323] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELSYELTQPPSASGTPGQRVSISCSGSSSNIGSNTVNWYQQFPGTAPKLLIHSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGPQSEDEADYYCAAWDDSVNGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQLQLQESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITNSGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMSSLRAЭДТАVYYCARVTHRRYGSTFDSRGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 313] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCTCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCAGCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAGTAATACTGTAAACTGGTACCAACAGTTCCCCGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCCATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCCCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCTTGGGATGACAGTGTGAATGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGGGAGGCTCGGTACAGCCGGGGGGGTCTCTGAGACTGTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCACTAATAGTGGTCGTAGTACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCTTTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGTTACTCATCGTCGTTACGGTTCTACTTTCGATTCTCGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 324] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 325 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-028 scFv (другое название «ET150-178 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 326, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333.
Таблица 27
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GGTFRSYA [SEQ ID NO: 328] | IIPMLDIT [SEQ ID NO: 329] | ARTYSRSPFHMEDF [SEQ ID NO: 330] |
| VL | SSNIGGNT [SEQ ID NO: 331] | RNN [SEQ ID NO: 332] | AAWDASRQGV [SEQ ID NO: 333] |
| Полная VH | QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFRSYAITWVRQAPGQGLEWMGRIIPMLDITNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARTYSRSPFHMEDFWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 326] | ||
| ДНК | CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCCGCAGCTATGCTATCACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATGCTTGATATAACAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCACTTACTCTCGTTCTCCGTTCCATATGGAAGATTTCTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 334] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVSWYQQVPGTAPRLLIFRNNQRPPGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDASRQGVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 327] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAGGTAACACTGTCAGCTGGTACCAGCAGGTCCCAGGAACGGCCCCCAGACTCCTCATTTTTAGGAATAATCAACGGCCCCCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGACGCCAGTCGACAAGGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 335] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVSWYQQVPGTAPRLLIFRNNQRPPGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDASRQGVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFRSYAITWVRQAPGQGLEWMGRIIPMLDITNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARTYSRSPFHMEDFWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 325] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAGGTAACACTGTCAGCTGGTACCAGCAGGTCCCAGGAACGGCCCCCAGACTCCTCATTTTTAGGAATAATCAACGGCCCCCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGACGCCAGTCGACAAGGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCCGCAGCTATGCTATCACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATGCTTGATATAACAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCACTTACTCTCGTTCTCCGTTCCATATGGAAGATTTCTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 336] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-029 scFv (другое название «ET150-179 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 338, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, и VL CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345.
Таблица 28
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFTFSSYA[SEQ ID NO: 340] | ISGSGGST [SEQ ID NO: 341] | ARKYQDV [SEQ ID NO: 342] |
| VL | SSNIGSNT[SEQ ID NO: 343] | RNN [SEQ ID NO: 344] | AAWDDSLSGRV [SEQ ID NO: 345] |
| Полная VH | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRДНКKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARKYQDVWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 338] | ||
| ДНК | GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCAAATACCAGGATGTTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 346] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 339] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTAGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 347] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRДНКKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARKYQDVWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 337] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTAGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCAAATACCAGGATGTTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 348] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 349 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-030 scFv (другое название «ET150-180 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 350, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357.
Таблица 29
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GFSFSGTA [SEQ ID NO: 352] | ISSTGRST [SEQ ID NO: 353] | ARPVSSMTLSIQSDG [SEQ ID NO: 354] |
| VL | SSNIGAGYD [SEQ ID NO: 355] | GNS [SEQ ID NO: 356] | QSYDSSLRGYV [SEQ ID NO: 357] |
| Полная VH | QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARPVSSMTLSIQSDGWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 350] | ||
| ДНК | CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGCTTTAGTGGCACTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTAGTACTGGGCGTAGCACATACTACAGAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCCCGGTTTCTTCTATGACTCTGTCTATCCAGTCTGATGGTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 358] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGRAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLRGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 351] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAAGAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGAGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 359] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGRAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLRGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARPVSSMTLSIQSDGWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 349] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAAGAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGAGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGCTTTAGTGGCACTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTAGTACTGGGCGTAGCACATACTACAGAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCCCGGTTTCTTCTATGACTCTGTCTATCCAGTCTGATGGTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 360] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-031 scFv (другое название «ET150-181 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 362, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, и VL CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369.
Таблица 30
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFTSYY [SEQ ID NO: 364] | INPSGGST [SEQ ID NO: 365] | ARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDM [SEQ ID NO: 366] |
| VL | SSNIGNNY [SEQ ID NO: 367] | DNN [SEQ ID NO: 368] | GTWDSSLRNWV [SEQ ID NO: 369] |
| Полная VH | QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDMWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 362] | ||
| ДНК | CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTAGCACAAGCTACGCACAAAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCAGAAATACCATTCTCAGTACTCTCGTGGTGGTACTGGTGGTGGTATGACTCAGGATATGTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 370] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVVTQPPSVSAAPGQRVTISCSGGSSNIGNNYVSWFQQLPRTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSAALDITVLQTGDEADYYCGTWDSSLRNWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 363] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCTGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGTAGTTCCAACATTGGGAATAATTATGTTTCCTGGTTCCAACAACTCCCACGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCGCCCTGGACATCACCGTTCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACTTGGGATAGCAGCCTGAGAAATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 371] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVVTQPPSVSAAPGQRVTISCSGGSSNIGNNYVSWFQQLPRTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSAALDITVLQTGDEADYYCGTWDSSLRNWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDMWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 361] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCTGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGTAGTTCCAACATTGGGAATAATTATGTTTCCTGGTTCCAACAACTCCCACGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCGCCCTGGACATCACCGTTCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACTTGGGATAGCAGCCTGAGAAATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTAGCACAAGCTACGCACAAAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCAGAAATACCATTCTCAGTACTCTCGTGGTGGTACTGGTGGTGGTATGACTCAGGATATGTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 372] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 373 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-032 scFv (другое название «ET150-182 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 374, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381.
Таблица 31
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFSRYY [SEQ ID NO: 376] | MNPNSGNT [SEQ ID NO: 377] | ARGRYHVIDY [SEQ ID NO: 378] |
| VL | SSDVGGYNH [SEQ ID NO: 379] | EVT [SEQ ID NO: 380] | SSYAGSAHWV [SEQ ID NO: 381] |
| Полная VH | EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSRYYIHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARGRYHVIDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 374] | ||
| ДНК | GAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCAGCAGGTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCGTTACCATGTTATCGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 382] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGSPGQSLTISCTGTSSDVGGYNHVSWYQQYPGKAPKLMIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSAHWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 375] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCACTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACCATGTCTCCTGGTACCAACAGTACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCGCCCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 383] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGSPGQSLTISCTGTSSDVGGYNHVSWYQQYPGKAPKLMIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSAHWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSRYYIHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARGRYHVIDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 373] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCACTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACCATGTCTCCTGGTACCAACAGTACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCGCCCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCAGCAGGTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCGTTACCATGTTATCGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 384] | ||
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 385 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-033 scFv (другое название «ET150-183 scFv»).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 386, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393.
Таблица 32
| Антиген | Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 | ||
| CDR | 1 | 2 | 3 |
| VH | GYTFNTYY [SEQ ID NO: 388] | INPNNGGT [SEQ ID NO: 389] | ARSYDY [SEQ ID NO: 390] |
| VL | SSNIGSNY [SEQ ID NO: 391] | RNN [SEQ ID NO: 392] | AAWDDSLSGRV [SEQ ID NO: 393] |
| Полная VH | QLQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFNTYYLHWVRQAPGQGLEWMGRINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 386] | ||
| ДНК | CAGCTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCAACACCTACTATCTGCACTGGGTACGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAATGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCTCTTACGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 394] | ||
| Полная VL | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 387] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGGCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTCGGGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 395] | ||
| scFv | MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQLQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFNTYYLHWVRQAPGQGLEWMGRINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 385] | ||
| ДНК | ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGGCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTCGGGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGCTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCAACACCTACTATCTGCACTGGGTACGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAATGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCTCTTACGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 396] | ||
Внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий области VH и/или VL, имеющие высокую степень (то есть, 80% или более) гомологии с областями VH и VL последовательностей, приведенных выше, можно получать путем мутагенеза (например, сайт-направленного или ПЦР-опосредованного мутагенеза), с последующим тестированием закодированных измененных scFv на сохранение функции (то есть, аффинности связывания) с использованием анализов связывания, описанных в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления последовательность VH, имеющая по меньшей мере примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологии, имеет замены (например, консервативные замены для получения консервативных модификаций последовательности), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий данную последовательность, сохраняет способность связываться с полипептидом GPRC5D. В конкретных вариантах осуществления последовательность VL, имеющая по меньшей мере примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологии, имеет замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий данную последовательность, сохраняет способность связываться с полипептидом GPRC5D. В конкретных вариантах осуществления в общей сложности от примерно 1 до примерно 10 аминокислот были заменены, вставлены и/или делетированы в раскрытых последовательностях. Например, и без ограничения, последовательность VH или последовательность VL может иметь до примерно одного, до примерно двух, до примерно трех, до примерно четырех, до примерно пяти, до примерно шести, до примерно семи, до примерно восьми, до примерно девяти или до примерно десяти аминокислотных остатков, которые модифицированы и/или заменены. Неограничивающие примеры консервативных модификаций приведены ниже, например, в таблице 33.
Используемый в настоящем документе термин «консервативные модификации последовательности» означает аминокислотные модификации, которые существенно не затрагивают или не изменяют характеристики связывания раскрытого в настоящем документе CAR (например, внеклеточного антигенсвязывающего домена), содержащего аминокислотную последовательность. Такие консервативные модификации включают аминокислотные замены, добавления и делеции. Модификации могут быть внесены в человеческий scFv по настоящему изобретению стандартными методами, известными в данной области, такими как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Аминокислоты могут быть разделены на группы на основании их физико-химических свойств, таких как заряд и полярность. Консервативные аминокислотные замены являются такими заменами, при которых аминокислотный остаток заменен аминокислотой, относящейся к той же группе. Например, аминокислоты могут быть разделены на группы на основании заряда: положительно заряженные аминокислоты включают лизин, аргинин, гистидин; отрицательно заряженные аминокислоты включают аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту; нейтральные аминокислоты включают аланин, аспарагин, цистеин, глутамин, глицин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин и валин. Кроме того, аминокислоты могут быть разделены на группы на основании полярности: полярные аминокислоты включают аргинин (основная полярная), аспарагин, аспарагиновую кислоту (кислая полярная), глутаминовую кислоту (кислая полярная), глутамин, гистидин (основная полярная), лизин (основная полярная), серин, треонин и тирозин; неполярные аминокислоты включают аланин, цистеин, глицин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, триптофан и валин. Таким образом, один или более аминокислотных остатков в области CDR можно заменять другими аминокислотными остатками из той же группы, и измененное антитело можно тестировать на сохранение функции (то есть, функций, описанных в пунктах (c)-(l), выше) в функциональных анализах, описанных в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления не более одного, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти остатков в конкретной последовательности или области CDR изменены. Иллюстративные консервативные аминокислотные замены приведены в таблице 33.
Таблица 33
| Исходный остаток | Иллюстративные консервативные аминокислотные замены |
| Ala (A) | Val; Leu; Ile |
| Arg (R) | Lys; Gln; Asn |
| Asn (N) | Gln; His; Asp, Lys; Arg |
| Asp (D) | Glu; Asn |
| Cys (C) | Ser; Ala |
| Gln (Q) | Asn; Glu |
| Glu (E) | Asp; Gln |
| Gly (G) | Ala |
| His (H) | Asn; Gln; Lys; Arg |
| Ile (I) | Leu; Val; Met; Ala; Phe |
| Leu (L) | Ile; Val; Met; Ala; Phe |
| Lys (K) | Arg; Gln; Asn |
| Met (M) | Leu; Phe; Ile |
| Phe (F) | Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr |
| Pro (P) | Ala |
| Ser (S) | Thr |
| Thr (T) | Val; Ser |
| Trp (W) | Tyr; Phe |
| Tyr (Y) | Trp; Phe; Thr; Ser |
| Val (V) | Ile; Leu; Met; Phe; Ala |
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR может содержать линкер, соединяющий вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи внеклеточного антигенсвязывающего домена. Используемый в настоящем документе термин «линкер» означает функциональную группу (например, химическую группу или полипептид), которая ковалентно связывает два или более пептидов, или нуклеиновых кислот так, что они становятся связанными друг с другом. Используемый в настоящем документе термин «пептидный линкер» означает одну или более аминокислот, используемых для связывания между собой двух белков (например, для связывания доменов VH и VL). Неограничивающие примеры пептидных линкеров описаны в Shen et al., Anal. Chem. 80(6): 1910-1917 (2008) и WO 2014/087010.
В одном неограничивающем примере линкер представляет собой линкер G4S, который содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, приведена в SEQ ID NO: 99. В одном неограничивающем примере линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 284. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 307, приведена в SEQ ID NO: 285.
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 286, которая представлена ниже.
GGGGS [SEQ ID NO: 286].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 287, которая представлена ниже.
SGGSGGS [SEQ ID NO: 287].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 288, которая представлена ниже.
GGGGSGGGS [SEQ ID NO: 288].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 289, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 289].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 290, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGGGGS [SEQ ID NO: 290].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 291, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 291].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 292, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 292].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 293, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 293].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 294, которая представлена ниже.
GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 294].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 295, которая представлена ниже.
EPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO: 295].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 296, которая представлена ниже.
GGGGSGGGSEPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO: 296].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 297, которая представлена ниже.
ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP [SEQ ID NO: 297].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 298, которая представлена ниже.
GSGSGS [SEQ ID NO: 298].
В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 299, которая представлена ниже.
AAA [SEQ ID NO: 299].
Кроме того, внеклеточный антигенсвязывающий домен может содержать лидер или сигнальный пептид, который направляет образующийся белок в эндоплазматический ретикулум. Сигнальный пептид или лидер может быть необходим, если CAR должен быть гликозилирован и заякорен в клеточной мембране. Сигнальная последовательность или лидер может представлять собой пептидную последовательность (длиной примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25 или примерно 30 аминокислот), находящуюся на N-конце заново синтезированных белков, которая направляет их на путь секреции. В неограничивающих примерах сигнальный пептид ковалентно связан с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит полипептид CD8, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 268, которая представлена ниже.
MALPVTALLLPLALLLHAAR [SEQ ID NO: 268]
Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268, приведена в SEQ ID NO: 269, которая представлена ниже:
ATGGCTCTCCCAGTGACTGCCCTACTGCTTCCCCTAGCGCTTCTCCTGCATGCAGCTCGT [SEQ ID NO: 269]
В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282, которая представлена ниже.
METDTLLLWVLLLWVPGSTG [SEQ ID NO: 282]
Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 282, приведена в SEQ ID NO: 283, которая представлена ниже:
ATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGA [SEQ ID NO: 283]
В конкретных вариантах осуществления scFv человека содержит вариабельную область тяжелой цепи, вариабельную область легкой цепи, пептидный линкер между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, а также His-метку и HA-метку. В конкретных вариантах осуществления аминокислотная последовательность His-метки и HA-метки содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 409, которая представлена ниже:
TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO: 409]
Нуклеотидная последовательность, кодирующая SEQ ID NO: 409, приведена в SEQ ID NO: 410, которая представлена ниже:
ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGCACCATCACCATCACCATGGCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGCTTCT [SEQ ID NO: 410]
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с полипептидом GPRC5D человека, содержащим аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя, тремя или четырьмя из N-концевой области (аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97), области ECL1 (аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97), области ECL2 (аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97) и области ECL3 (аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в N-концевой области, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 16-23 из SEQ ID NO: 97, и область эпитопа, содержащую аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL1, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL2, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL2 содержит аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL2 содержит аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL3, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 230-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97.
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-2 scFv (или ET150-152 scFv).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-155 scFv (или ET150-5 scFv).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной или двумя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-8 scFv (или ET150-158 scFv).
В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями VH и VL или CDR, выбранными из таблицы 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и VL, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, и VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит VH CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, VH CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, VH CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, VL CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, VL CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и VL CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-18 scFv (или ET150-168 scFv).
Трансмембранный домен CAR
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления трансмембранный домен CAR содержит гидрофобную альфа-спираль, которая проходит через по меньшей мере часть мембраны. Разные трансмембранные домены приводят к разной стабильности рецепторов. После узнавания антигена происходит кластеризация рецепторов и сигнал передается клетке. В соответствии с настоящим изобретением, трансмембранный домен CAR может содержать полипептид CD8, полипептид CD28, полипептид CD3ζ, полипептид CD4, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид CTLA-4, полипептид PD-1, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит полипептид CD8. Полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P10747 или NP_006130 (SEQ ID NO: 270), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD28 может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 270, имеющий длину по меньшей мере 20 или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50 и вплоть до 220 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD28 имеет аминокислотную последовательность из 1-220, 1-50, 50-100, 100-150, 150-200 или 200-220 аминокислот из SEQ ID NO: 270. В конкретных вариантах осуществления CAR, раскрытый в настоящем документе, содержит трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD28, содержащийся в трансмембранном домене и внутриклеточном домене, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 114-220 из SEQ ID NO: 270.
SEQ ID NO: 270 приведена ниже:
1 MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYДНКVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD
61 SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP
121 PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR
181 SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS [SEQ ID NO: 270]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CD28» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD28, кодирующая полипептид CD28, содержащийся в трансмембранном домене и внутриклеточном домене (например, костимулирующей сигнальной области) раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 271, которая представлена ниже.
ATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC [SEQ ID NO: 271]
В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит полипептид CD8. Полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: AAH25715 (SEQ ID NO: 404), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 404, имеющий длину по меньшей мере 20 или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50, или по меньшей мере 70, или по меньшей мере 100, или по меньшей мере 150, или по меньшей мере 200 и вплоть до 235 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD8 имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 1-235, 1-50, 50-100, 100-150, 150-200, 130-210 или 200-235 из SEQ ID NO: 404. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 137-207 из SEQ ID NO: 404.
SEQ ID NO: 226 приведена ниже:
1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP
61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GCYFCSALSN
121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA
181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV [SEQ ID NO: 404].
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CD8» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD8. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD8, кодирующая полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 405, которая представлена ниже.
CCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACCCCGGCGCCCACGATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCCTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAC [SEQ ID NO: 227]
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления CAR также может содержать область спейсера, который связывает внеклеточный антигенсвязывающий домен с трансмембранным доменом. Область спейсера может быть достаточно гибкой, чтобы позволять антигенсвязывающему домену ориентироваться в разных направлениях для облегчения узнавания антигена. Область спейсера может представлять собой шарнирную область из IgG1, либо область CH2CH3 иммуноглобулина и части CD3.
Внутриклеточный домен CAR
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR может содержать полипептид CD3ζ, который может активировать или стимулировать клетку (например, клетку лимфоидной линии, например, T-клетку). CD3ζ содержит три ITAM и передает сигнал активации клетке (например, клетке лимфоидной линии, например, T-клетке) после связывания антигена. Полипептид CD3ζ может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 272, или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD3ζ может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 272, имеющий длину по меньшей мере 20, или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50 и вплоть до 163 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD3ζ имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 1-163, 1-50, 50-100, 100-150, или 150-163 из SEQ ID NO: 272. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD3ζ, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 52-163 из SEQ ID NO: 272.
SEQ ID NO: 272 приведена ниже:
1 MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD
61 APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP RRKNPQEGLY NELQKDKMAE
121 AYSEIGMKGE RRRGKGHDGL YQGLSTATKD TYDALHMQAL PPR [SEQ ID NO: 272]
В соответствии с настоящим изобретением «молекула нуклеиновой кислоты CD3ζ» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD3ζ. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD3ζ, кодирующая полипептид CD3ζ, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 273, которая представлена ниже.
AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA [SEQ ID NO: 273]
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR дополнительно содержит по меньшей мере одну сигнальную область. По меньшей мере одна сигнальная область может содержать полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10, полипептид PD-1, полипептид CTLA-4, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание.
В конкретных вариантах осуществления сигнальная область представляет собой костимулирующую сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления костимулирующая область содержит по меньшей мере одну костимулирующую молекулу, которая может обеспечивать оптимальную активацию лимфоцитов. Используемый в настоящем документе термин «костимулирующие молекулы» означает молекулы клеточной поверхности, отличные от антигенных рецепторов или их лигандов, которые необходимы для эффективного ответа лимфоцитов на антиген. По меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область может содержать полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10 или их сочетание. Костимулирующая молекула может связываться с костимулирующим лигандом, представляющим собой белок, экспрессируемый на клеточной поверхности, который при связывании с его рецептором продуцирует костимулирующий ответ, то есть, внутриклеточный ответ, который влияет на стимуляцию, возникающую, когда антиген связывается с молекулой его CAR. Костимулирующие лиганды включают, но не ограничиваются ими, CD80, CD86, CD70, OX40L, 4-1BBL, CD48, TNFRSF14 и PD-L1. В качестве одного примера, лиганд 4-1BB (то есть, 4-1BBL) может связываться с 4-1BB (также известным как «CD137»), обеспечивая внутриклеточный сигнал, который в сочетании с сигналом CAR индуцирует эффекторную клеточную функцию CAR+ T-клетки. CAR, содержащие внутриклеточный домен, который содержит костимулирующую сигнальную область, содержащую 4-1BB, ICOS или DAP-10, описаны в патенте США 7446190 (например, нуклеотидная последовательность, кодирующая 4-1BB, приведена в SEQ ID NO: 15, нуклеотидная последовательность, кодирующая ICOS, приведена в SEQ ID NO: 16 и нуклеотидная последовательность, кодирующая DAP-10, приведена в SEQ ID NO: 17 в патенте США 7446190), полное содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR содержит костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR содержит костимулирующую сигнальную область, которая содержит две костимулирующие молекулы: CD28 и 4-1BB или CD28 и OX40.
4-1BB может действовать в качестве лиганда фактора некроза опухолей (TNF) и имеет стимулирующую активность. Полипептид 4-1BB может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P41273 или NP_001552 (SEQ ID NO: 274), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В конкретных вариантах осуществления полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 214-255 из SEQ ID NO: 274. SEQ ID NO: 274 приведена ниже:
1 MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR
61 TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC
121 CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE
181 PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG
241 CSCRFPEEEE GGCEL [SEQ ID NO: 274]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты 4-1BB» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид 4-1BB. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты 4-1BB, кодирующая полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 300, которая представлена ниже.
aaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg [SEQ ID NO: 300]
Полипептид OX40 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P43489 или NP_003318 (SEQ ID NO: 275), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 275 приведена ниже:
1 MCVGARRLGR GPCAALLLLG LGLSTVTGLH CVGDTYPSND RCCHECRPGN GMVSRCSRSQ
61 NTVCRPCGPG FYNDVVSSKP CKPCTWCNLR SGSERKQLCT ATQDTVCRCR AGTQPLDSYK
121 PGVDCAPCPP GHFSPGDNQA CKPWTNCTLA GKHTLQPASN SSDAICEDRD PPATQPQETQ
181 GPPARPITVQ PTEAWPRTSQ GPSTRPVEVP GGRAVAAILG LGLVLGLLGP LAILLALYLL
241 RRDQRLPPDA HKPPGGGSFR TPIQEEQADA HSTLAKI [SEQ ID NO: 275]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты OX40» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид OX40.
Полипептид ICOS может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: NP_036224 (SEQ ID NO: 276), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 276 приведена ниже:
1 MKSGLWYFFL FCLRIKVLTG EINGSANYEM FIFHNGGVQI LCKYPDIVQQ FKMQLLKGGQ
61 ILCDLTKTKG SGNTVSIKSL KFCHSQLSNN SVSFFLYNLD HSHANYYFCN LSIFDPPPFK
121 VTLTGGYLHI YESQLCCQLK FWLPIGCAAF VVVCILGCIL ICWLTKKKYS SSVHDPNGEY
181 MFMRAVNTAK KSRLTDVTL [SEQ ID NO: 276]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты ICOS» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид ICOS.
CTLA-4 представляет собой ингибирующий рецептор, экспрессируемый активированными T-клетками, который при связывании с соответствующими ему лигандами (CD80 и CD86; B7-1 и B7-2, соответственно) опосредует ингибирование или анергию активированной T-клетки. Как в доклинических, так и в клинических исследованиях, блокирование CTLA-4 путем системной инфузии антител приводило к усилению эндогенного противоопухолевого ответа, хотя в клинических исследованиях сопровождалось значительной непредвиденной токсичностью.
CTLA-4 содержит внеклеточный V-домен, трансмембранный домен и цитоплазматический хвост. Были охарактеризованы альтернативно сплайсированные варианты, кодирующие разные изоформы. Мембраносвязанная изоформа функционирует в виде гомодимера, связанного дисульфидной связью, в то время как растворимая изоформа функционирует в виде мономера. Внутриклеточный домен аналогичен таковому у CD28 в том, что он не имеет собственной каталитической активности и содержит один мотив YVKM, способный связывать PI3K, PP2A и SHP-2, и один богатый остатками пролина мотив, способный связывать SH3-содержащие белки. Одна функция CTLA-4 в ингибировании T-клеточных ответов, судя по всему, осуществляется непосредственно через дефосфорилирование SHP-2 и PP2A TCR-проксимальных сигнальных белков, таких как CD3 и LAT. CTLA-4 также может влиять на сигнализацию опосредованно, за счет конкуренции с CD28 за связывание CD80/86. Также показано, что CTLA-4 связывается и/или взаимодействует с PI3K, CD80, AP2M1 и PPP2R5A.
В соответствии с настоящим изобретением, полипептид CTLA-4 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: P16410.3 (SEQ ID NO: 277) (гомологию между ними можно определять с использованием стандартных программ, таких как BLAST или FASTA), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 277 приведена ниже:
1 MACLGFQRHK AQLNLATRTW PCTLLFFLLF IPVFCKAMHV AQPAVVLASS RGIASFVCEY
61 ASPGKATEVR VTVLRQADSQ VTEVCAATYM MGNELTFLDD SICTGTSSGN QVNLTIQGLR
121 AMDTGLYICK VELMYPPPYY LGIGNGTQIY VIDPEPCPDS DFLLWILAAV SSGLFFYSFL
181 LTAVSLSKML KKRSPLTTGV YVKMPPTEPE CEKQFQPYFI PIN [SEQ ID NO: 277]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CTLA-4» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CTLA-4.
PD-1 является отрицательным иммунорегулятором активированных T-клеток при взаимодействии с соответствующими ему лигандами PD-L1 и PD-L2, экспрессируемыми на эндогенных макрофагах и дендритных клетках. PD-1 представляет собой мембранный белок I типа из 268 аминокислот. PD-1 имеет два лиганда, PD-L1 и PD-L2, которые являются представителями семейства B7. Структура белка содержит внеклеточный домен IgV, за которым следует трансмембранная область и внутриклеточный хвост. Внутриклеточный хвост содержит два сайта фосфорилирования, находящиеся в тирозинсодержащем ингибиторном мотиве иммунорецепторов и тирозинсодержащем переключающем мотиве иммунорецепторов, PD-1 отрицательно регулирует сигналы TCR. SHP-I и SHP-2 фосфатазы связываются с цитоплазматическим хвостом PD-1 после связывания лиганда. Повышающая регуляция PD-L1 является одним из механизмов, позволяющих опухолевым клеткам ускользать от иммунной системы хозяина. В доклинических и клинических исследованиях блокирование PD-1 антагонистическими антителами индуцировало противоопухолевые ответы, опосредованные эндогенной иммунной системой хозяина.
В соответствии с настоящим изобретением, полипептид PD-1 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности с регистрационным № NCBI: NP_005009.2 (SEQ ID NO: 278), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 278 приведена ниже:
1 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGДНК TFTCSFSNTS
61 ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT
121 YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS
181 LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP
241 CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL [SEQ ID NO: 278]
В соответствии с настоящим изобретением «молекула нуклеиновой кислоты PD-1» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид PD-1.
Белок активации лимфоцитов 3 (LAG-3) является отрицательным иммунорегулятором иммунных клеток. LAG-3 принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов (Ig) и содержит 4 внеклеточных Ig-подобных домена. Ген LAG3 содержит 8 экзонов. Данные относительно последовательности, организации экзонов/интронов и хромосомной локализации указывают на близкое родство LAG3 с CD4. LAG3 также имеет название CD223 (кластер дифференцировки 223).
В соответствии с настоящим изобретением, полипептид LAG-3 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: P18627.5 (SEQ ID NO: 279), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 279 приведена ниже:
1 MWEAQFLGLL FLQPLWVAPV KPLQPGAEVP VVWAQEGAPA QLPCSPTIPL QDLSLLRRAG
61 VTWQHQPDSG PPAAAPGHPL APGPHPAAPS SWGPRPRRYT VLSVGPGGLR SGRLPLQPRV
121 QLDERGRQRG DFSLWLRPAR RADAGEYRAA VHLRDRALSC RLRLRLGQAS MTASPPGSLR
181 ASDWVILNCS FSRPDRPASV HWFRNRGQGR VPVRESPHHH LAESFLFLPQ VSPMDSGPWG
241 CILTYRDGFN VSIMYNLTVL GLEPPTPLTV YAGAGSRVGL PCRLPAGVGT RSFLTAKWTP
301 PGGGPDLLVT GDNGDFTLRL EDVSQAQAGT YTCHIHLQEQ QLNATVTLAI ITVTPKSFGS
361 PGSLGKLLCE VTPVSGQERF VWSSLDTPSQ RSFSGPWLEA QEAQLLSQPW QCQLYQGERL
421 LGAAVYFTEL SSPGAQRSGR APGALPAGHL LLFLILGVLS LLLLVTGAFG FHLWRRQWRP
481 RRFSALEQGI HPPQAQSKIE ELEQEPEPEP EPEPEPEPEP EPEQL [SEQ ID NO: 279]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты LAG-3» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид LAG-3.
Рецептор 2B4 (2B4) клеток-естественных киллеров на NK-клетках и подмножествах T-клеток опосредует не рестриктированное по MHC уничтожение клеток. В настоящее время функцию 2B4 продолжают изучать, при этом считается, что изоформа 2B4-S является активирующим рецептором, а изоформа 2B4-L является отрицательным иммунорегулятором иммунных клеток. 2B4 блокируется при связывании его высокоаффинного лиганда, CD48. 2B4 содержит тирозинсодержащий переключающий мотив, молекулярный переключатель, позволяющий белку связываться с разными фосфатазами. 2B4 также имеет название CD244 (кластер дифференцировки 244).
В соответствии с настоящим изобретением полипептид 2B4 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: Q9BZW8.2 (SEQ ID NO: 280), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 280 приведена ниже:
1 MLGQVVTLIL LLLLKVYQGK GCQGSADHVV SISGVPLQLQ PNSIQTKVDS IAWKKLLPSQ
61 NGFHHILKWE NGSLPSNTSN DRFSFIVKNL SLLIKAAQQQ DSGLYCLEVT SISGKVQTAT
121 FQVFVFESLL PDKVEKPRLQ GQGKILDRGR CQVALSCLVS RDGNVSYAWY RGSKLIQTAG
181 NLTYLDEEVD INGTHTYTCN VSNPVSWESH TLNLTQDCQN AHQEFRFWPF LVIIVILSAL
241 FLGTLACFCV WRRKRKEKQS ETSPKEFLTI YEDVKDLKTR RNHEQEQTFP GGGSTIYSMI
301 QSQSSAPTSQ EPAYTLYSLI QPSRKSGSRK RNHSPSFNST IYEVIGKSQP KAQNPARLSR
361 KELENFDVYS [SEQ ID NO: 280]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты 2B4» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид 2B4.
Экспрессия аттенюатора B- и T-лимфоцитов (BTLA) индуцируется в процессе активации T-клеток, и BTLA остается экспрессированным на Th1 клетках, но не на Th2 клетках. Подобно PD1 и CTLA4, BTLA взаимодействует с гомологом B7, B7H4. Однако, в отличие от PD-1 и CTLA-4, BTLA вызывает ингибирование T-клеток при взаимодействии с представителями семейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNF-R), а не только представителями семейства B7 рецепторов клеточной поверхности. BTLA является лигандом для представителя 14 суперсемейства (рецепторов) фактора некроза опухолей (TNFRSF14), также известного как медиатор проникновения вируса герпеса (HVEM). Комплексы BTLA-HVEM отрицательно регулируют T-клеточные иммунные ответы. Показано, что активация BTLA приводит к ингибированию функции специфичных в отношении рака человеческих CD8+ T-клеток. BTLA также имеет название CD272 (кластер дифференцировки 272).
В соответствии с настоящим изобретением, полипептид BTLA может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: Q7Z6A9.3 (SEQ ID NO: 281), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.
SEQ ID NO: 281 приведена ниже:
1 MKTLPAMLGT GKLFWVFFLI PYLDIWNIHG KESCDVQLYI KRQSEHSILA GDPFELECPV
61 KYCANRPHVT WCKLNGTTCV KLEDRQTSWK EEKNISFFIL HFEPVLPNDN GSYRCSANFQ
121 SNLIESHSTT LYVTDVKSAS ERPSKDEMAS RPWLLYRLLP LGGLPLLITT CFCLFCCLRR
181 HQGKQNELSD TAGREINLVD AHLKSEQTEA STRQNSQVLL SETGIYDNDP DLCFRMQEGS
241 EVYSNPCLEE NKPGIVYASL NHSVIGPNSR LARNVKEAPT EYASICVRS [SEQ ID NO: 281]
В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты BTLA» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид BTLA.
В конкретных вариантах осуществления CAR содержит внеклеточную антигенсвязывающую область, которая специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ζ и костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28, как показано на фигуре 1. Как показано на фигуре 1, CAR также содержит сигнальный пептид или лидер, ковалентно связанный с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282.
В конкретных вариантах осуществления CAR содержит внеклеточную антигенсвязывающую область, которая специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ζ и костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид 4-1BB, как показано на фигуре 6. Как показано на фигуре 6, CAR также содержит сигнальный пептид или лидер, ковалентно связанный с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282.
В некоторых вариантах осуществления CAR по настоящему изобретению может дополнительно содержать индуцируемый промотор для экспрессии нуклеотидных последовательностей в клетках человека. Промоторы, используемые для экспрессии генов CAR, могут быть конститутивными промоторами, такими как промотор гена убиквитина C (UbiC).
Настоящее изобретение также относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), описанный в настоящем документе, или его функциональную часть. В конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует раскрытый в настоящем документе CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), содержащий scFv, который специфически связывается с GPRC5D человека, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления scFv представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления scFv представляет собой scFv мыши. В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 397, которая представлена ниже:
cagtctgtgttgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgctcaccatctcctgcactggaaccagcaatgacgttggtgcttataagtatgtctcctggtatcaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatactttatgatgtctttaagcggccctcaggggtctctaatcgcttctctggctccaagtctgacaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcttctcacttacaagcagtaacacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccagatgcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaacagatatgctatcacctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaattcacactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgggcacagcctatatggagctgaggaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcatggcttacgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 397]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 398, которая представлена ниже:
cagtctgtgttgactcagccaccctcagcgtctgggacccccggacagagggtcaccatctcttgttctggaagcaggtccaacgtaggaggtaattatgtattttggtaccagcaagtccccggagcgacccccaaactcctcatctataggagtaatcagcggccctcgggggtccctgaccgattcgctggctccaagtctggctcctcagcctccctggccatcagtggactccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgagtggttttgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactacgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttacggtaaagcttacgatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 398]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 399, которая представлена ниже:
TcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaacccccctgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccCaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtccaccctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagaagccatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtgatagtacttacacatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctggtggtcagtggaaatactacgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 399]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 400, которая представлена ниже:
cagtctgtcgtgacgcagccgccctcaatgtctgcggccccaggacagcaagtcaccatctcctgctctggaggcaactccaacattgagagaaattatgtatcctggtacctccagctccctggaacagcccccaaactcgtcatttttgacaatgataggcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagaggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttgatacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaactattaatggtcgtggtagtagtacaatctacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacagccacgtattactgtgcgcgctacatctctcgtggtctgggtgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 400]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 401, которая представлена ниже:
CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT
GTCGTGACGCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGT
TGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGC
GGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCT
GAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTTTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGT
CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC
TGGTGGAGTCTGGGGGAGCCTTTGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGC
AGCTATGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTGGTCGTGGTCGTAG
CACATTCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTTACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTATATCTGCAAATGA
ACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTACTACCATGCTGGTGCTTTCGATCTGTGGGGTCAA
GGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagc
gccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcgg
ggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtc
cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatt
tatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaac
tgagagtgaagttcagcaggagcgcagagccccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatcta
ggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaa
ccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagc
gccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatg
caggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccag
gctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttag
tctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcat
ggaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagg
atatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatc
tgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctag
agaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgct
tctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctcc
gattgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcct
tgggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttgg
ttttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtatt
cagaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcc
tctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctaca
ctatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagcctt
cccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgatt
gtgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgt
gtgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt
gtgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgag
acagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAA
CTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACA
GTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAT
GGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCC
TGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTC
ACCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATG
GTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAA
TATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATT
TCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAA
GATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCG
CCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGC
AAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACG
GATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAAC
GATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGG
AGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTA
ACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT
GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAG
CACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAAT
AGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGAT
TGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAAC
GTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTA
ATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC
GAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGA
ACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTT
ACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAG
CTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAA
AGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTAT
CTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATG
GAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTAT
CCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGC
GAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAG
CTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCAC
CCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGC
TATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTT
GTTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACA
GATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATA
GATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAA
GCCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTT
GACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAA
AAATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATAT
CTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTG
GTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAA
CCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTC
GCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATT
GACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGG
AGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGC
CCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGA
CTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTC
GGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATC
CCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAG
TTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCT
GTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTT
TGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACC
TTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGT
TAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTT
TTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCC
CTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCC
ATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCT
CTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAA
CTGGACCGA [SEQ ID NO: 401]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 402, которая представлена ниже:
CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT
GTGTTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGACAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGGTCCAACGT
AGGAGGTAATTATGTATTTTGGTACCAGCAAGTCCCCGGAGCGACCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAGTAATCAGCGGC
CCTCGGGGGTCCCTGACCGATTCGCTGGCTCCAAGTCTGGCTCCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGACTCCGGTCCGAG
GATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTTTGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGT
CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC
TGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGT
GACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTAC
CATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATG
AACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCGGGTTACGGTAAAGCTTACGATCAGTGGGGTCAAG
GTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagcg
ccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggg
gggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtcc
ttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccattt
atgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaact
gagagtgaagttcagcaggagcgcagagccccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctag
gacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaac
cctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcg
ccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgc
aggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccagg
ctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttagt
ctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatg
gaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagga
tatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatct
gtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctaga
gaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgctt
ctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctccg
attgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcctt
gggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttggt
tttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtattc
agaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcct
ctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctacac
tatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagccttc
ccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgattg
tgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgtg
tgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg
tgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgaga
cagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC
TTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAG
TTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATG
GTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCT
GACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCA
CCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGG
TTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAAT
ATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTT
CCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAG
ATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGC
CCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCA
AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGG
ATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACG
ATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGA
GCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAA
CTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTG
CGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGC
ACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATA
GACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATT
GATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACG
TGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAA
TCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCG
AAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAA
CTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTA
CCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGC
TTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAA
GGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATC
TTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGG
AAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATC
CCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCG
AGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGC
TGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACC
CCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT
ATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTTG
TTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACAG
ATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATAG
ATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAAG
CCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTTG
ACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAAA
AATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATC
TGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGG
TAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAAC
CATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCG
CTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATTG
ACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGA
GGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGCC
CAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGAC
TGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTCG
GAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATCC
CGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAGT
TCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCTG
TGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTT
GACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCT
TCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTT
AAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTT
TGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCC
TTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCA
TATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTC
TCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAAC
TGGACCGA [SEQ ID NO: 402]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 403, которая представлена ниже:
CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT
GTCGTGACGCAGCCGCCCTCAATGTCTGCGGCCCCAGGACAGCAAGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGCAACTCCAACAT
TGAGAGAAATTATGTATCCTGGTACCTCCAGCTCCCTGGAACAGCCCCCAAACTCGTCATTTTTGACAATGATAGGCGAC
CCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGG
GACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGAGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGT
CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC
TGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTGATACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGC
AACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAATGGTCGTGGTAGTAG
TACAATCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGA
ACAGCCTGAGAGCCGAGGACACAGCCACGTATTACTGTGCGCGCTACATCTCTCGTGGTCTGGGTGATTCTTGGGGTCAA
GGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAGGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagc
gccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcgg
ggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtc
cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatt
tatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaac
tgagagtgaagttcagcaggagcgcagagccccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatcta
ggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaa
ccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagc
gccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatg
caggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccag
gctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttag
tctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcat
ggaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagg
atatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatc
tgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctag
agaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgct
tctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctcc
gattgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcct
tgggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttgg
ttttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtatt
cagaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcc
tctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctaca
ctatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagcctt
cccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgatt
gtgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgt
gtgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt
gtgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgag
acagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAA
CTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACA
GTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAT
GGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCC
TGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTC
ACCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATG
GTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAA
TATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATT
TCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAA
GATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCG
CCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGC
AAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACG
GATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAAC
GATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGG
AGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTA
ACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT
GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAG
CACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAAT
AGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGAT
TGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAAC
GTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTA
ATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC
GAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGA
ACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTT
ACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAG
CTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAA
AGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTAT
CTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATG
GAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTAT
CCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGC
GAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAG
CTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCAC
CCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGC
TATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTT
GTTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACA
GATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATA
GATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAA
GCCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTT
GACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAA
AAATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATAT
CTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTG
GTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAA
CCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTC
GCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATT
GACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGG
AGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGC
CCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGA
CTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTC
GGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATC
CCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAG
TTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCT
GTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTT
TGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACC
TTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGT
TAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTT
TTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCC
CTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCC
ATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCT
CTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAA
CTGGACCGA [SEQ ID NO: 403]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 406, которая представлена ниже:
atggaaaccgacaccctgctgctgtgggtgctgctgctgtgggtgccaggatccacaggacagtctgtcgtgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaagcagcagcactttggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtggagtctgggggagcctttgtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatgccatgacctgggtccgccaggctccagggaagggcctggaatgggtctcgactattagtggtcgtggtcgtagcacattctacgcagactccgtgaagggccggtttaccatctccagagacaattccaagaacacgctatatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctactaccatgctggtgctttcgatctgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagaacaaaaactcatctcagaagaggatctggcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgctaa [SEQ ID NO: 406]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 407, которая представлена ниже:
CCGGTGCCGCCACcatggaaaccgacaccctgctgctgtgggtgctgctgctgtgggtgccaggatccacaggacagtct
gtgttgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgctcaccatctcctgcactggaaccagcaatgacgt
tggtgcttataagtatgtctcctggtatcaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatactttatgatgtctttaagc
ggccctcaggggtctctaatcgcttctctggctccaagtctgacaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggct
gaggacgaggctgattattactgcttctcacttacaagcagtaacacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgt
cctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccagatgcagc
tggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaac
agatatgctatcacctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaa
ttcacactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgggcacagcctatatggagctga
ggaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcatggcttacgattcttggggtcaaggtactctggtg
accgtctcctcagaacaaaaactcatctcagaagaggatctggcggccgcacccaccacgacgccagcgccgcgaccacc
aaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggggggcgcagtgc
acacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtccttctcctgtca
ctggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagt
acaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactgagagtgaagt
tcagcaggagcgcagaCGcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagag
gagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaagg
cctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggca
aggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccc
cctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccaggctctagttttg
actcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttagtctccagaaaaa
ggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatggaaaaatacat
aactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatctgtggta
agcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatctgtggtaagcag
ttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctagagaaccatcaga
tgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgcttctcgcttctgt
tcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctccgattgactgagt
cgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttccttgggagggtctc
ctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttggttttttttctta
agtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtattcagaatgtgtca
taaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcctctgtcttccat
ttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctacactatagttcaag
ctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagccttcccacatctaag
attacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgattgtgtttgtgtgt
gtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgtgtgtgtgtgtgc
atgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt
gttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgagacagagtctttc
acttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAACTTAATCGCCTT
GCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAGTTGCGCAGCCT
GAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATGGTGCACTCTCA
GTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCTGACGGGCTTGT
CTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCACCGTCATCACC
GAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGGTTTCTTAGACG
TCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAATATGTATCCGCT
CATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTTCCGTGTCGCCC
TTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAGATGCTGAAGAT
CAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGCCCCGAAGAACG
TTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCAAGAGCAACTCG
GTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGGATGGCATGACA
GTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACGATCGGAGGACC
GAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGAGCTGAATGAAG
CCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAACTGGCGAACTA
CTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTGCGCTCGGCCCT
TCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGCACTGGGGCCAG
ATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATAGACAGATCGCT
GAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATTGATTTAAAACT
TCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACGTGAGTTTTCGT
TCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAATCTGCTGCTTG
CAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCGAAGGTAACTGG
CTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAACTCTGTAGCAC
CGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTACCGGGTTGGAC
TCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGCTTGGAGCGAAC
GACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAAGGCGGACAGGT
ATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATCTTTATAGTCCT
GTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGGAAAAACGCCAG
CAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATCCCCTGATTCTG
TGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCGAGTCAGTGAGC
GAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGCTGGCACGACAG
GTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACCCCAGGCTTTAC
ACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCTATGACCATGAT
TACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTTGTTCTATGCCCT
AGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACAGATGTTTTTATT
TCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATAGATAAACGTGGA
AATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAAGCCAGTTTGCAT
CTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTTGACATATACATG
TGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAAAAATACATAACT
GAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCA
GTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGGTAAGCAGTTCC
TGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAACCATCAGATGTT
TCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCGCTTCTGTTCGC
GCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATTGACTGAGTCGCC
CGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGAGGGTCTCCTCT
GAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGCCCAGGGACCACC
GACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGACTGATTTTATGC
GCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTCGGAACACCCGGC
CGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATCCCGATCGTTTAG
GACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAGTTCCCGCCTCCG
TCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCTGTGTTGTCTCTG
TCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTTGACCTTAGGTC
ACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCTTCTGCTCTGCA
GAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTTAAGATCAAGGT
CTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTTTGACCCCCCTC
CCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCCTTGAACCTCCT
CGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCATATGAGATCTT
ATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTCTCTCCAAGCTC
ACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAACTGGACCGA
[SEQ ID NO: 407]
В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 408, которая представлена ниже:
CCGGTGCCGCCACcatggaaaccgacaccctgctgctgtgggtgctgctgctgtgggtgccaggatccacaggatcttct
gagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaag
ctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcag
ggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgag
gctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaacccccctgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcct
aggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccaggtgcagctgg
tggagtctgggggaggcctggtccaccctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagaagc
catagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtgatagtacttacac
atactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaaca
gcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctggtggtcagtggaaatactacgattactggggtcaa
ggtactctggtgaccgtctcctcagaacaaaaactcatctcagaagaggatctggcggccgcacccaccacgacgccagc
gccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcgg
ggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtc
cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatt
tatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaac
tgagagtgaagttcagcaggagcgcagaCGcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatcta
ggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaa
ccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagc
gccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatg
caggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccag
gctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttag
tctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcat
ggaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagg
atatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatc
tgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctag
agaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgct
tctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctcc
gattgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcct
tgggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttgg
ttttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtatt
cagaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcc
tctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctaca
ctatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagcctt
cccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgatt
gtgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgt
gtgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt
gtgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgag
acagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAA
CTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACA
GTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAT
GGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCC
TGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTC
ACCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATG
GTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAA
TATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATT
TCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAA
GATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCG
CCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGC
AAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACG
GATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAAC
GATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGG
AGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTA
ACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT
GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAG
CACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAAT
AGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGAT
TGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAAC
GTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTA
ATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC
GAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGA
ACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTT
ACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAG
CTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAA
AGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTAT
CTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATG
GAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTAT
CCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGC
GAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAG
CTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCAC
CCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGC
TATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTT
GTTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACA
GATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATA
GATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAA
GCCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTT
GACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAA
AAATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATAT
CTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTG
GTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAA
CCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTC
GCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATT
GACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGG
AGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGC
CCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGA
CTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTC
GGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATC
CCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAG
TTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCT
GTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTT
TGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACC
TTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGT
TAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTT
TTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCC
CTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCC
ATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCT
CTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAA
CTGGACCGA [SEQ ID NO: 408]
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 406, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D 28z CAR1), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, при этом область CD28, содержащаяся в трансмембранном домене и костимулирующей сигнальной области, содержит аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 397, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D 28z CAR2), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, при этом область CD28, содержащаяся в трансмембранном домене и костимулирующей сигнальной области, содержит аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 398, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D 28z CAR5), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, при этом область CD28, содержащаяся в трансмембранном домене и костимулирующей сигнальной области, содержит аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 399, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D 28z CAR8), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, при этом область CD28, содержащаяся в трансмембранном домене и костимулирующей сигнальной области, содержит аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 400, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D 28z CAR18), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, при этом область CD28, содержащаяся в трансмембранном домене и костимулирующей сигнальной области, содержит аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270.
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 401, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D BBz CAR1), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, содержащий аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, содержащий аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274. Последовательность нуклеотидов 6-856 из SEQ ID NO: 401 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 864-1076 из SEQ ID NO: 401 кодирует полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене. Последовательность нуклеотидов 1077-1202 из SEQ ID NO: 401 кодирует полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене. Последовательность нуклеотидов 1203-1541 из SEQ ID NO: 401 кодирует полипептид CD3ξ, содержащийся в внутриклеточном домене. Другие фрагменты SEQ ID NO: 401 приведены в таблице 34.
Таблица 34
| Фрагменты | Положения в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 401 | Число нуклеотидов |
| LTR | 1821..2290 | 470 |
| M13 прям. | 2989..3005 | 17 |
| AmpR промотор | 3480..3584 | 105 |
| AmpR | 3585..4445 | 861 |
| ori | 4616..5204 | 589 |
| сайт связывания CAP | 5492..5513 | 22 |
| lac промотор | 5528..5558 | 31 |
| lac оператор | 5566..5582 | 17 |
| M13 обр. | 5590..5606 | 17 |
| LTR | 6015..6608 | 594 |
| MMLV Psi | 6671..7028 | 358 |
| gag (укороченный) | 7093..7509 | 417 |
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 407, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D BBz CAR2), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, содержащий аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, содержащий аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274. Последовательность нуклеотидов 5-855 из SEQ ID NO: 402 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 15-812 из SEQ ID NO: 407 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 852-1064 из SEQ ID NO: 407 кодирует полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене. Последовательность нуклеотидов 1065-1190 из SEQ ID NO: 407 кодирует полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене. Последовательность нуклеотидов 1191-1529 из SEQ ID NO: 407 кодирует полипептид CD3ξ, содержащийся в внутриклеточном домене. Другие фрагменты SEQ ID NO: 407 приведены в таблице 41.
Таблица 41
| Фрагменты | Положения в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 407 | Число нуклеотидов |
| Myc | 813..842 | 30 |
| LTR | 1809..2278 | 470 |
| M13 прям. | 2977..2993 | 17 |
| AmpR промотор | 3468..3572 | 105 |
| AmpR | 3573..4433 | 861 |
| ori | 4604..5192 | 589 |
| сайт связывания CAP | 5480..5501 | 22 |
| lac промотор | 5516..5546 | 31 |
| lac оператор | 5554..5570 | 17 |
| M13 обр. | 5578..5594 | 17 |
| LTR | 6003..6596 | 594 |
| MMLV Psi | 6659..7016 | 358 |
| gag (укороченный) | 7081..7497 | 417 |
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 402, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D BBz CAR5), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, содержащий аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, содержащий аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274. Последовательность нуклеотидов 5-855 из SEQ ID NO: 402 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 863-1075 из SEQ ID NO: 402 кодирует полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене. Последовательность нуклеотидов 1076-1201 из SEQ ID NO: 402 кодирует полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене. Последовательность нуклеотидов 1202-1540 из SEQ ID NO: 402 кодирует полипептид CD3ξ, содержащийся в внутриклеточном домене. Другие фрагменты SEQ ID NO: 402 приведены в таблице 35.
Таблица 35
| Фрагменты | Положения в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 402 | Число нуклеотидов |
| LTR | 1820..2289 | 470 |
| M13 прям. | 2988..3004 | 17 |
| AmpR промотор | 3479..3583 | 105 |
| AmpR | 3584..4444 | 861 |
| ori | 4615..5203 | 589 |
| сайт связывания CAP | 5491..5512 | 22 |
| lac промотор | 5527..5557 | 31 |
| lac оператор | 5565..5581 | 17 |
| M13 обр. | 5589..5605 | 17 |
| LTR | 6014..6607 | 594 |
| MMLV Psi | 6670..7027 | 358 |
| gag (укороченный) | 7092..7508 | 417 |
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 408, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D BBz CAR8), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, содержащий аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, содержащий аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274. Последовательность нуклеотидов 15-824 из SEQ ID NO: 408 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 864-1076 из SEQ ID NO: 408 кодирует полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене. Последовательность нуклеотидов 1077-1202 из SEQ ID NO: 408 кодирует полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене. Последовательность нуклеотидов 1203-1541 из SEQ ID NO: 408 кодирует полипептид CD3ξ, содержащийся в внутриклеточном домене. Другие фрагменты SEQ ID NO: 408 приведены в таблице 42.
Таблица 42
| Фрагменты | Положения в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 408 | Число нуклеотидов |
| Myc | 825..854 | 30 |
| LTR | 1821..2290 | 470 |
| M13 прям. | 2989..3005 | 17 |
| AmpR промотор | 3480..3584 | 105 |
| AmpR | 3585..4445 | 861 |
| ori | 4616..5204 | 589 |
| сайт связывания CAP | 5492..5513 | 22 |
| lac промотор | 5528..5558 | 31 |
| lac оператор | 5566..5582 | 17 |
| M13 обр. | 5590..5606 | 17 |
| LTR | 6015..6608 | 594 |
| MMLV Psi | 6671..7028 | 358 |
| gag (укороченный) | 7093..7509 | 417 |
Выделенная молекула нуклеиновой кислоты, имеющая нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 403, кодирует GPRC5D-нацеленный CAR (обозначенный GRPC5D BBz CAR18), содержащий scFv человека, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, и линкер, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, расположенный между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, содержащий аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ, содержащий аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272, и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, содержащий аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274. Последовательность нуклеотидов 6-856 из SEQ ID NO: 403 кодирует scFv человека. Последовательность нуклеотидов 864-1076 из SEQ ID NO: 403 кодирует полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене. Последовательность нуклеотидов 1077-1202 из SEQ ID NO: 403 кодирует полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене. Последовательность нуклеотидов 1203-1541 из SEQ ID NO: 403 кодирует полипептид CD3ξ, содержащийся в внутриклеточном домене. Другие фрагменты SEQ ID NO: 403 приведены в таблице 36.
Таблица 36
| Фрагменты | Положения в нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 403 | Число нуклеотидов |
| LTR | 1821..2290 | 470 |
| M13 прям. | 2989..3005 | 17 |
| AmpR промотор | 3480..3584 | 105 |
| AmpR | 3585..4445 | 861 |
| ori | 4616..5204 | 589 |
| сайт связывания CAP | 5492..5513 | 22 |
| lac промотор | 5528..5558 | 31 |
| lac оператор | 566..5582 | 17 |
| M13 обр. | 5590..5606 | 17 |
| LTR | 6015..6608 | 594 |
| MMLV Psi | 6671..7028 | 358 |
| gag (укороченный) | 7093..7509 | 417 |
В конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует функциональную часть раскрытого в настоящем документе CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D). Используемый в настоящем документе термин «функциональная часть» означает любую часть, долю или фрагмент раскрытого в настоящем документе CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), которые сохраняют биологическую активность CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D) (исходного CAR). Например, функциональные части включают части, доли или фрагменты раскрытого в настоящем документе CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), которые сохраняют способность узнавать клетку-мишень, лечить заболевание, например, множественную миелому, в аналогичной, такой же, или даже более высокой степени, что и исходный CAR. В конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая функциональную часть раскрытого в настоящем документе CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), может кодировать белок, содержащий, например, примерно 10%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% и 95%, или более, исходного CAR.
III. Иммунореактивные клетки
Настоящее изобретение относится к иммунореактивным клеткам, экспрессирующим CAR, который содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), как описано выше. Иммунореактивные клетки могут быть трансдуцированы раскрытым в настоящем документе CAR, вследствие чего клетки экспрессируют CAR. Настоящее изобретение также относится к способам применения таких клеток для лечения опухоли, например, множественной миеломы (MM). Иммунореактивные клетки по настоящему изобретению могут представлять собой клетки лимфоидной линии. Клетки лимфоидной линии, включающие B, T-клетки и клетки-естественные киллеры (NK), обеспечивают продуцирование антител, регуляцию клеточной иммунной системы, обнаружение чужеродных агентов в крови, обнаружение клеток, чужеродных для хозяина, и тому подобное. Неограничивающие примеры иммунореактивных клеток лимфоидной линии включают T-клетки, клетки-естественные киллеры (NK), цитотоксические T-лимфоциты (CTL), регуляторные T-клетки, эмбриональные стволовые клетки и плюрипотентные стволовые клетки (например, те, из которых могут дифференцироваться лимфоидные клетки). T-клетки могут представлять собой лимфоциты, которые созревают в тимусе и несут основную ответственность за клеточно-опосредованный иммунитет. T-клетки являются частью адаптивной иммунной системы. T-клетки по настоящему изобретению могут быть T-клетками любого типа, включая, но без ограничения, T-хелперные клетки, цитотоксические T-клетки, T-клетки памяти (включая центральные T-клетки памяти, T-клетки памяти, подобные стволовым клеткам (или подобные стволовым клеткам T-клетки памяти), и два типа эффекторных T-клеток памяти: например, TEM клетки и TEMRA клетки, регуляторные T-клетки (также известные как супрессорные T-клетки), T-клетки - естественные киллеры, связанные со слизистой оболочкой инвариантные T-клетки и γδ-T-клетки. В конкретных вариантах осуществления CAR-экспрессирующие T-клетки экспрессируют Foxp3, что необходимо для достижения и поддержания фенотипа регуляторных T-клеток. Клетки-естественные киллеры (NK) могут представлять собой лимфоциты, являющиеся частью клеточно-опосредованного иммунитета и действующие в рамках врожденного иммунного ответа. NK-клетки не нуждаются в предварительной активации для оказания своего цитотоксического действия на клетки-мишени. Цитотоксические T-клетки (CTL или T-клетки-киллеры) относятся к подгруппе T-лимфоцитов, способных вызывать гибель инфицированных соматических или опухолевых клеток.
Иммунореактивные клетки по настоящему изобретению могут экспрессировать внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFV, Fab, который, необязательно, является сшитым, или F(ab)2), который специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), для лечения множественной миеломы. Такие иммунореактивные клетки можно вводить субъекту (например, субъекту-человеку), который нуждается в этом, для лечения множественной миеломы. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка представляет собой T-клетку. T-клетка может представлять собой CD4+ T-клетку или CD8+ T-клетку. В конкретных вариантах осуществления T-клетка представляет собой CD4+ T-клетку. В конкретных вариантах осуществления T-клетка представляет собой CD8+ T-клетку.
Раскрытая в настоящем документе иммунореактивная клетка может быть дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним костимулирующим лигандом, вследствие чего иммунореактивная клетка совместно экспрессирует или индуцируется для совместной экспрессии CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), и по меньшей мере одного костимулирующего лиганда. Взаимодействие между CAR, нацеленным на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), и по меньшей мере одним костимулирующим лигандом обеспечивает не специфичный для антигена сигнал, важный для полной активации иммунореактивной клетки (например, T-клетки). Костимулирующие лиганды включают, но не ограничиваются ими, лиганды-представители суперсемейства факторов некроза опухолей (TNF) и суперсемейства иммуноглобулинов (Ig). TNF представляет собой цитокин, который вовлечен в системное воспаление и стимулирует реакции острой фазы. Его основная роль заключается в регуляции иммунных клеток. Представители суперсемейства TNF имеют целый ряд общих свойств. Большинство представителей суперсемейства TNF синтезируются как трансмембранные белки II типа (внеклеточный C-конец), содержащие короткий цитоплазматический сегмент и относительно длинную внеклеточную область. Представители суперсемейства TNF включают, но не ограничиваются ими, фактор роста нервов (NGF), CD40L (CD40L)/CD154, CD137L/4-1BBL, TNF-α, CD134L/OX40L/CD252, CD27L/CD70, Fas-лиганд (FasL), CD30L/CD153, фактор некроза опухолей-бета (TNFβ)/лимфотоксин-альфа (LTα), лимфотоксин-бета (LTβ), CD257/фактор активации B-клеток (BAFF)/Blys/THANK/Tall-1, глюкокортикоид-индуцируемый лиганд рецептора TNF (GITRL) и TNF-родственный апоптоз-индуцирующий лиганд (TRAIL), LIGHT (TNFSF14). Суперсемейство иммуноглобулинов (Ig) представляет собой большую группу белков клеточной поверхности и растворимых белков, которые вовлечены в процессы узнавания, связывания или адгезии клеток. Эти белки имеют общие структурные свойства с иммуноглобулинами - они имеют домен иммуноглобулинов (складку). Лиганды суперсемейства иммуноглобулинов включают, но не ограничиваются ими, CD80 и CD86, оба лиганда для CD28, PD-L1/(B7-H1), которые являются лигандами для PD-1. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один костимулирующий лиганд выбирают из группы, состоящей из 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14, PD-L1, а также их сочетаний. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка трансдуцирована одним костимулирующим лигандом, который представляет собой 4-1BBL. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка трансдуцирована двумя костимулирующими лигандами, которые представляют собой 4-1BBL и CD80. CAR, трансдуцированные по меньшей мере одним костимулирующим лигандом, описаны в патенте США № 8389282, полное содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Кроме того, раскрытая в настоящем документе иммунореактивная клетка может быть дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним цитокином, вследствие чего иммунореактивная клетка секретирует по меньшей мере один цитокин, а также экспрессирует CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D). В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере one цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17 и IL-21. В конкретных вариантах осуществления цитокин представляет собой IL-12.
Специфичные для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), или нацеленные на него человеческие лимфоциты могут быть использованы в качестве периферических донорских лимфоцитов, например, таких, которые раскрыты в Sadelain, M., et al. 2003 Nat Rev Cancer 3: 35-45 (где описаны периферические донорские лимфоциты, генетически модифицированные для экспрессии CAR), в Morgan, R.A., et al. 2006 Science 314: 126-129 (где описаны периферические донорские лимфоциты, генетически модифицированные для экспрессии полноразмерного узнающего опухолевый антиген T-клеточного рецепторного комплекса, содержащего α и β гетеродимер), в Panelli, M.C., et al. 2000 J Immunol 164: 495-504; Panelli, M.C., et al. 2000 J Immunol 164: 4382-4392 (где описаны культуры лимфоцитов, полученные из инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TILs) в биопсиях опухолей), и в Dupont, J., et al. 2005 Cancer Res 65: 5417-5427; Papanicolaou, G.A., et al. 2003 Blood 102: 2498-2505 (где описаны селективно размноженные in vitro антигенспецифические лейкоциты периферической крови и использование искусственных антигенпредставляющих клеток (AAPC) или активированных дендритных клеток). Иммунореактивные клетки (например, T-клетки) могут быть аутологичными, не аутологичными (например, аллогенными) или полученными in vitro из генетически модифицированных предшественников или стволовых клеток.
В конкретных вариантах осуществления раскрытая в настоящем документе иммунореактивная клетка (например, T-клетка) экспрессирует от примерно 1 до примерно 4, от примерно 2 до примерно 4, от примерно 3 до примерно 4, от примерно 1 до примерно 2, от примерно 1 до примерно 3 или от примерно 2 до примерно 3 копий/клетку вектора для раскрытого в настоящем документе CAR, нацеленного на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D).
Неочищенным источником CTL может быть любой известный в данной области источник, такой как костный мозг, источник эмбриональных, неонатальных или взрослых, либо других гемопоэтических клеток, например, эмбриональная печень, периферическая кровь или пуповинная кровь. Для разделения клеток можно использовать различные методы. Например, методы отрицательной селекции позволяют исходно удалять клетки, не являющиеся CTL. Моноклональные антитела особенно полезны для идентификации маркеров, ассоциированных с конкретными клеточными линиями дифференцировки и/или стадиями дифференцировки, как для положительной, так и для отрицательной селекции.
Большая часть терминально дифференцированных клеток может быть изначально удалена относительно грубым методом разделения. Например, сначала можно использовать разделение с помощью магнитных гранул для удаления большого числа ненужных клеток. Предпочтительно, по меньшей мере примерно 80%, как правило, по меньшей мере 70% всех гемопоэтических клеток будут удалены до выделения клеток.
Методы разделения включают, но не ограничиваются ими, центрифугирование в градиенте плотности; розеткообразование; связывание с частицами, изменяющими плотность клеток; магнитное разделение с помощью покрытых антителом магнитных гранул; аффинную хроматографию; цитотоксические средства, связанные с, или используемые в сочетании с мАт, включая, но без ограничения, комплемент и цитотоксины; а также пэннинг с помощью антител, закрепленных на твердой матрице, например, планшете, чипе; элютриацию или любой другой подходящий метод.
Методы разделения и анализа включают, но не ограничиваются ими, проточную цитометрию различной степени сложности, например, с использованием нескольких цветовых каналов, каналов для детекции низкоуглового и широкоуглового светорассеяния, импеденсных каналов.
Можно отбирать клетки среди мертвых клеток, используя красители, связывающиеся с мертвыми клетками, такие как пропидия иодид (PI). Предпочтительно, клетки собирают в среду, содержащую 2% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС) или 0,2% бычьего сывороточного альбумина (БСА), или любую другую подходящую, предпочтительно стерильную, изотоническую среду.
IV. Векторы
Генетическую модификацию иммунореактивных клеток (например, T-клеток, CTL-клеток, NK-клеток) можно осуществлять, трансдуцируя по существу гомогенную композицию клеток рекомбинантным ДНК- или РНК-конструктом. Вектор может представлять собой ретровирусный вектор (например, гамма-ретровирусный), который используют для введения ДНК- или РНК-конструкта в геном клетки-хозяина. Например, полинуклеотид, кодирующий CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), может быть клонирован в ретровирусный вектор, и экспрессия может управляться с его эндогенного промотора, с ретровирусного длинного концевого повтора или с альтернативного внутреннего промотора.
Также можно использовать невирусные векторы или РНК. Можно использовать случайную хромосомную интеграцию или направленную интеграцию (например, с использованием нуклеазы, подобных активатору транскрипции эффекторных нуклеаз (TALEN), нуклеаз «цинковых пальцев» (ZFN) и/или коротких палиндромных повторов, регулярно расположенных группами (CRISPR)), или трансгенную экспрессию (например, с использованием природной или химически модифицированной РНК).
Для начальной генетической модификации клеток с целью получения клеток, экспрессирующих CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), как правило, для трансдукции используют ретровирусный вектор, однако можно использовать любую другую подходящую вирусную или невирусную систему доставки. Для последующей генетической модификации клеток с целью получения клеток, содержащих антигенпредставляющий комплекс, содержащий по меньшей мере два костимулирующих лиганда, ретровирусный перенос генов (трансдукция) также является эффективным. Также подходящими являются сочетания ретровирусного вектора и соответствующей упаковывающей линии клеток, при этом капсидные белки будут играть функциональную роль при инфицировании клеток человека. Известны различные амфотропные продуцирующие вирусы линии клеток, включая, но без ограничения, PA12 (Miller, et al. (1985) Mol. Cell. Biol. 5: 431-437); PA317 (Miller, et al. (1986) Mol. Cell. Biol. 6: 2895-2902) и CRIP (Danos, et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 6460-6464). Не амфотропные частицы также являются подходящими, например, частицы, псевдотипированные с оболочкой VSVG, RD114 или GALV, а также любые другие известные в данной области.
Возможные методы трансдукции также включают прямое совместное культивирование клеток с клетками-продуцентами, например, методом, описанным в Bregni, et al. (1992) Blood 80: 1418-1422, либо культивирование только с вирусным супернатантом или с концентрированными маточными растворами вектора с добавлением или без добавления соответствующих факторов роста и поликатионов, например, методом, описанным в Xu, et al. (1994) Exp. Hemat. 22: 223-230; и Hughes, et al. (1992) J. Clin. Invest. 89: 1817.
Трансдуцирующие вирусные векторы можно использовать для экспрессии костимулирующего лиганда (например, 4-1BBL и IL-12) в иммунореактивной клетке. Предпочтительно, выбранный вектор характеризуется высокой эффективностью инфицирования, а также стабильной интеграцией и экспрессией (смотри, например, Cayouette et al., Human Gene Therapy 8: 423-430, 1997; Kido et al., Current Eye Research 15: 833-844, 1996; Bloomer et al., Journal of Virology 71: 6641-6649, 1997; Naldini et al., Science 272: 263 267, 1996; и Miyoshi et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94: 10319, 1997). Другие вирусные векторы, которые можно использовать, включают, например, аденовирусные, лентивирусные и аденоассоциированные вирусные векторы, вирус осповакцины, вирус бычьей папилломы или вирус герпеса, например, вирус Эпштейна-Барр (также смотри, например, векторы, описанные в Miller, Human Gene Therapy 15-14, 1990; Friedman, Science 244: 1275-1281, 1989; Eglitis et al., BioTechniques 6: 608-614, 1988; Tolstoshev et al., Current Opinion in Biotechnology 1: 55-61, 1990; Sharp, The Lancet 337: 1277-1278, 1991; Cornetta et al., Nucleic Acid Research and Molecular Biology 36: 311-322, 1987; Anderson, Science 226: 401-409, 1984; Moen, Blood Cells 17: 407-416, 1991; Miller et al., Biotechnology 7: 980-990, 1989; Le Gal La Salle et al., Science 259: 988-990, 1993; и Johnson, Chest 107: 77S-83S, 1995). Ретровирусные векторы особенно хорошо разработаны и их используют в клинической практике (Rosenberg et al., N. Engl. J. Med 323: 370, 1990; Anderson et al., патент США № 5399346).
В конкретных неограничивающих вариантах осуществления вектор, экспрессирующий раскрытый в настоящем документе CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), представляет собой ретровирусный вектор, например, ретровирусный вектор 293 galv9.
Для экспрессии белка в клетке также можно использовать подходы не на основе вирусов. Например, молекулу нуклеиновой кислоты можно вводить в клетку с помощью липофекции (Feigner et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84: 7413, 1987; Ono et al., Neuroscience Letters 17: 259, 1990; Brigham et al., Am. J. Med. Sci. 298: 278, 1989; Staubinger et al., Methods in Enzymology 101: 512, 1983), асиалооросомукоида-полилизина (Wu et al., Journal of Biological Chemistry 263: 14621, 1988; Wu et al., Journal of Biological Chemistry 264: 16985, 1989) или путем микроинъекции в хирургических условиях (Wolff et al., Science 247: 1465, 1990). Другие не вирусные методы переноса генов включают трансфекцию in vitro с использованием фосфата кальция, ДЭАЭ-декстрана, электропорацию и слияние протопластов. Липосомы также могут быть потенциально полезными для доставки ДНК в клетку. Трансплантацию нормальных генов в пораженные ткани субъекта также можно осуществлять путем переноса нормальной нуклеиновой кислоты в культивируемые клетки ex vivo (например, аутологичные или гетерологичные первичные клетки или их потомство), после чего клетки (или их потомство) инъецируют в целевую ткань или инъецируют системно. Рекомбинантные рецепторы также можно создавать или получать с использованием транспозаз или направленных нуклеаз (например, нуклеаз «цинковые пальцы», мегануклеаз или TALE нуклеаз). Временную экспрессию можно получать за счет введения РНК методом электропорации.
Экспрессия кДНК для использования в методах полинуклеотидной терапии может управляться с любого подходящего промотора (например, промоторов цитомегаловируса (CMV) человека, обезьяньего вируса 40 (SV40) или металлотионеина) и регулироваться любым подходящим регуляторным элементом или интроном млекопитающих (например, структурой энхансер/промотор/интрон фактора элонгации 1α). Например, при необходимости, для управления экспрессией нуклеиновой кислоты можно использовать энхансеры, которые, как известно, предпочтительно управляют экспрессией гена в клетках определенного типа. Используемые энхансеры могут включать, без ограничения, те, которые охарактеризованы как энхансеры, специфичные для ткани или типа клеток. Альтернативно, если геномный клон используют в качестве терапевтического конструкта, регуляция может быть опосредована когнатными регуляторными последовательностями или, в случае необходимости, регуляторными последовательностями, полученными из гетерологичного источника, в том числе, любым из промоторов или регуляторных элементов, описанных выше.
Полученные клетки можно выращивать в условиях, сходных с условиями для не модифицированных клеток, при этом модифицированные клетки можно размножать и использовать для разных целей.
V. Полипептиды, аналоги и полинуклеотиды
Настоящее изобретение также относится к внеклеточным антигенсвязывающим доменам, которые специфически связываются с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), например, полипептидам scFv, Fab или (Fab)2, CD3ζ, CD8, CD28 и так далее, или их фрагментам, а также полинуклеотидам, кодирующим их, которые модифицированы способами, приводящими к усилению их противоопухолевой активности при экспрессии в иммунореактивной клетке. Настоящее изобретение относится к способам оптимизации аминокислотной последовательности или нуклеотидной последовательности за счет внесения изменений в последовательность. Такие изменения могут включать определенные мутации, делеции, вставки или посттрансляционные модификации. Настоящее изобретение также относится к аналогам любого природного полипептида по настоящему изобретению. Аналоги могут отличаться от природного полипептида по настоящему изобретению за счет различий в аминокислотной последовательности, за счет посттрансляционных модификаций или и того, и другого. Аналоги по настоящему изобретению, как правило, могут иметь по меньшей мере примерно 85%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или более идентичности со всей или с частью природной аминокислотной последовательности по настоящему изобретению. Длина сравниваемых последовательностей составляет по меньшей мере 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100 или более аминокислотных остатков. Опять-таки, в иллюстративном подходе для определения степени идентичности можно использовать программу BLAST, с показателем вероятности от e-3 до e-100, указывающим на близкородственную последовательность. Модификации включают in vivo и in vitro химическую дериватизацию полипептидов, например, ацетилирование, карбоксилирование, фосфорилирование или гликозилирование; такие модификации могут происходить во время синтеза или процессинга полипептида, или после обработки выделенными модифицирующими ферментами. Аналоги также могут отличаться от природных полипептидов по настоящему изобретению за счет изменений в первичной последовательности. Сюда относятся генетические варианты, как природные, так и индуцированные (например, возникающие в результате случайного мутагенеза при облучении или воздействии этанметилсульфата, или в результате сайт-направленного мутагенеза, описанного в Sambrook, Fritsch and Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2-е издание), CSH Press, 1989, или Ausubel et al., выше). Также включены циклизованные пептиды, молекулы и аналоги, которые содержат остатки, отличные от L-аминокислот, например, D-аминокислоты, либо неприродные или синтетические аминокислоты, например, бета (β) или гамма (γ) аминокислоты.
Помимо полноразмерных полипептидов, настоящее изобретение также относится к фрагментам любого из полипептидов или пептидных доменов по настоящему изобретению. Фрагмент может содержать по меньшей мере 5, 10, 13 или 15 аминокислот. В конкретных вариантах осуществления фрагмент содержит по меньшей мере 20 смежных аминокислот, по меньшей мере 30 смежных аминокислот или по меньшей мере 50 смежных аминокислот. В конкретных вариантах осуществления фрагмент содержит по меньшей мере 60-80, 100, 200, 300 или более смежных аминокислот. Фрагменты по настоящему изобретению могут быть получены методами, известными специалистам в данной области, или могут образовываться в результате обычного процессинга белка (например, удаления аминокислот из образующегося полипептида, которые не нужны для биологической активности, или удаления аминокислот в результате альтернативного сплайсинга мРНК или в результате альтернативного процессинга белка).
Небелковые аналоги имеют химическую структуру, разработанную для имитации функциональной активности белка по изобретению. Такие аналоги вводят способами по настоящему изобретению. Такие аналоги могут превосходить по физиологической активности исходный полипептид. Способы конструирования аналогов хорошо известны в данной области, и синтез аналогов можно выполнять такими способами, модифицируя химические структуры таким образом, что полученные аналоги превосходят по анти-неопластической активности исходный полипептид при экспрессии в иммунореактивной клетке. Такие химические модификации включают, но не ограничиваются ими, замещение альтернативных R-групп и варьирование степени насыщенности определенных атомов углерода эталонного полипептида. Белковые аналоги могут быть относительно устойчивы к деградации in vivo, результатом чего является более длительный терапевтический эффект после введения. Анализы для измерения функциональной активности включают, но не ограничиваются ими, те, которые описаны в разделе «Примеры», ниже.
В соответствии с настоящим изобретением, полинуклеотиды, кодирующие внеклеточный антигенсвязывающий домен, который специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D) (например, scFV, Fab или (Fab)2, CD3ζ, CD8, CD28), могут быть модифицированы за счет оптимизации кодонов. Оптимизация кодонов может изменять как природные, так и рекомбинантные последовательности генов, для достижения максимально возможных уровней продуктивности в любой конкретной системе экспрессии. Факторы, играющие роль на разных стадиях экспрессии белка, включают адаптируемость кодонов, структуру мРНК и различные cis-элементы в транскрипции и трансляции. Можно использовать любые подходящие методы или технологии оптимизации кодонов, известные специалистам в данной области, для модификации полинуклеотидов по настоящему изобретению, включая, но без ограничения, OPTIMUMGENE™, Encor оптимизацию и Blue Heron.
VI. Введение
CAR, специфичные для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и экспрессирующие их иммунореактивные клетки по настоящему изобретению можно предоставлять системно или непосредственно субъекту для лечения или предотвращения неоплазии. В конкретных вариантах осуществления CAR, специфичные для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и экспрессирующие их иммунореактивные клетки напрямую инъецируют в интересующий орган (например, орган, затронутый неоплазией). Альтернативно или дополнительно, CAR, специфичные для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и экспрессирующие их иммунореактивные клетки вводят опосредованно в интересующий орган, например, путем введения в систему циркуляции (например, сосудистую сеть опухоли). Средства для экспансии и дифференциации с целью увеличения продуцирования T-клеток in vitro или in vivo могут быть предоставлены до, в процессе или после введения клеток и композиций.
CAR, специфичные для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и экспрессирующие их иммунореактивные клетки по настоящему изобретению можно вводить в любом физиологически приемлемом носителе, обычно внутрисосудистым введением, хотя их также можно вводить в кость или другой удобный участок тела, где клетки могут найти подходящее место для регенерации и дифференциации (например, тимус). Как правило, можно вводить по меньшей мере 1×105 клеток, в конечном итоге доводя количество до 1 x l010 или более. Клеточная популяция, содержащая иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), может представлять собой очищенную популяцию клеток. Специалисты в данной области могут с легкостью определять процентную долю иммунореактивных клеток в клеточной популяции с использованием различных хорошо известных методов, таких как активированная флуоресценцией сортировка клеток (FACS). Степень чистоты клеточных популяций, содержащих генетически модифицированные иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), может составлять от примерно 50% до примерно 55%, от примерно 55% до примерно 60%, от примерно 65% до примерно 70%, от примерно 70% до примерно 75%, от примерно 75% до примерно 80%, от примерно 80% до примерно 85%, от примерно 85% до примерно 90%, от примерно 90% до примерно 95% или от примерно 95 до примерно 100%. Дозы могут с легкостью корректировать специалисты в данной области (например, при меньшей степени чистоты может потребоваться более высокая доза). Иммунореактивные клетки можно вводить путем инъекции, с помощью катетера или тому подобным образом. При необходимости, можно дополнительно включать факторы, в том числе, но без ограничения, интерлейкины, например, IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, а также другие интерлейкины, колониестимулирующий факторы, такие как G-, M- и GM-CSF, интерфероны, например, γ-интерферон.
Композиции по настоящему изобретению включают фармацевтические композиции, содержащие иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и фармацевтически приемлемый носитель. Введение может быть аутологичным или не аутологичным. Например, иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и содержащие их композиции можно получать от одного субъекта, и вводить тому же субъекту или другому совместимому субъекту. Полученные из периферической крови T-клетки по настоящему изобретению или их потомство (например, полученное in vivo, ex vivo или in vitro) можно вводить локальной инъекцией, включая введение с помощью катетера, системной инъекцией, локализованной инъекцией, внутривенной инъекцией или парентеральным путем введения. Вводимая фармацевтическая композиция по настоящему изобретению (например, фармацевтическая композиция, содержащая иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D)), может быть сформулирована в виде инъекционной стандартной дозы (раствора, суспензии, эмульсии).
VII. Препараты
Иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), и содержащие их композиции по настоящему изобретению можно предоставлять в виде стерильных жидких препаратов, например, изотонических водных растворов, суспензий, эмульсий, дисперсий или вязких композиций, которые могут быть забуферены для достижения выбранного значения pH. Жидкие препараты, как правило, изготавливать легче, чем гели, другие вязкие композиции и твердые композиции. Кроме того, жидкие композиции удобнее вводить, особенно путем инъекции. Вязкие композиции, с другой стороны, могут быть сформулированы в пределах соответствующего диапазона вязкости для обеспечения более длительного контакта с определенными тканями. Жидкие или вязкие композиции могут содержать носители, которые могут представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащие, например, воду, солевой раствор, фосфатно-солевой буфер, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и тому подобное), а также их подходящие смеси.
Стерильные инъекционные растворы могут быть получены путем включения композиций, содержащих иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), по настоящему изобретению в необходимое количество соответствующего растворителя с разными количествами других ингредиентов, по мере необходимости. Такие композиции могут находиться в смеси с соответствующим носителем, разбавителем или эксципиентом, таким как стерильная вода, физиологический солевой раствор, глюкоза, декстроза или тому подобное. Композиции также могут быть лиофилизированными. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие, диспергирующие средства или эмульгаторы (например, метилцеллюлоза), буферные реагенты для поддержания pH, гелеобразующие или повышающие вязкость добавки, консерванты, ароматизаторы, красители и тому подобное, в зависимости от пути введения и желательного препарата. Для получения соответствующих препаратов без излишнего экспериментирования можно руководствоваться стандартными литературными источниками, такими как «REMINGTONʹS PHARMACEUTICAL SCIENCE», 17-е издание, 1985, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки.
Можно вносить различные добавки, которые повышают стабильность и стерильность композиций, включая противомикробные консерванты, антиоксиданты, хелатирующие агенты и буферы. Предотвращать действие микроорганизмов можно с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты и тому подобного. Продолжительной абсорбции инъекционной фармацевтической формы можно добиваться за счет использования замедляющих абсорбцию средств, например, моностеарата алюминия и желатина. Однако в соответствии с настоящим изобретением, любые используемые растворители, разбавители или добавки должны быть совместимыми с иммунореактивными клетками, экспрессирующими CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), по настоящему изобретению.
Композиции могут быть изотоническими, то есть, они могут иметь такое же осмотическое давление, как у крови и слезной жидкости. Желательной изотоничности композиций по настоящему изобретению можно добиваться с помощью хлорида натрия или других фармацевтически приемлемых средств, таких как декстроза, борная кислота, натрия тартрат, пропиленгликоль или другие неорганические или органические растворенные вещества. Хлорид натрия является особенно предпочтительным для буферов, содержащих ионы натрия.
Вязкость композиций, при необходимости, можно поддерживать на желательном уровне с помощью фармацевтически приемлемого загустителя. Можно использовать метилцеллюлозу, поскольку она является легко доступной, недорогой и простой в обращении. Другие подходящие загустители включают, например, ксантановую камедь, карбоксиметилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, карбомер и тому подобное. Концентрация загустителя может зависеть от выбранного средства. Важным моментом является использование такого количества, которое позволит достичь желательной вязкости. Очевидно, что выбор соответствующих носителей и других добавок будет зависеть от конкретного пути введения и характера конкретной лекарственной формы, например, жидкой лекарственной формы (например, если композиция будет сформулирована в виде раствора, суспензии, геля или другой жидкой формы, такой как форма с замедленным высвобождением или заполненная жидкостью форма).
Специалисты в данной области понимают, что выбранные компоненты композиций должны быть химически инертными и не влиять на жизнеспособность или эффективность иммунореактивных клеток, описанных в настоящем документе. Это не будет являться проблемой для специалистов в области химии и фармацевтики, или проблем можно будет с легкостью избежать, обращаясь к стандартным руководствам или проводя простые эксперименты (без излишнего экспериментирования) на основании настоящего документа и приведенных в нем литературных источников.
Одним из соображений при терапевтическом применении иммунореактивных клеток по настоящему изобретению является количество клеток, необходимое для достижения оптимального эффекта. Количество вводимых клеток будет варьироваться для субъектов, получающих лечение. В конкретных вариантах осуществления субъекту вводят от примерно 104 до примерно 1010, от примерно 105 до примерно 109 или от примерно 106 до примерно 108 иммунореактивных клеток по настоящему изобретению. Более эффективные клетки можно вводить даже в меньших количествах. В некоторых вариантах осуществления субъекту-человеку вводят по меньшей мере примерно 1×108, примерно 2×108, примерно 3×108, примерно 4×108 и примерно 5×108 иммунореактивных клеток по настоящему изобретению. Точное определение того, что можно считать эффективной дозой, может быть основано на факторах, индивидуальных для каждого субъекта, включая размеры тела, возраст, пол, массу тела и состояние здоровья конкретного субъекта. Дозировки могут быть с легкостью определены специалистами в данной области на основании настоящего документа и общих знаний в данной области.
Квалифицированный специалист может с легкостью определять количество клеток, а также необязательные добавки, растворители, и/или носители в композициях, которые будут введены в соответствии со способами по настоящему изобретению. Как правило, любые добавки (в дополнение к активной клетке(ам) и/или средству(ам)) присутствуют в количестве от примерно 0,001% до примерно 50% по массе от массы раствора в фосфатно-солевом буфере, и активный ингредиент присутствует в количестве, порядок величины которого составляет от микрограмм до миллиграмм, например, от примерно 0,0001 масс% до примерно 5 масс%, от примерно 0,0001 масс% до примерно 1 масс%, от примерно 0,0001 масс% до примерно 0,05 масс%, от примерно 0,001 масс% до примерно 20 масс%, от примерно 0,01 масс% до примерно 10 масс%, или от примерно 0,05 масс% до примерно 5 масс%. Для любой композиции, которую предстоит вводить животному или человеку, и для любого конкретного способа введения следует определять параметры токсичности, например, путем определения летальной дозы (LD) и LD50 в соответствующей животной модели, например, на грызунах, таких как мышь; а также дозу композиции(ий), концентрацию компонентов в ней и сроки введения композиции(ий), которые приводят к подходящей ответной реакции. Такие определения не требуют излишнего экспериментирования и могут быть проведены на базе знаний квалифицированного специалиста, настоящего документа и документов, цитированных в нем. Время для последовательных введений также может быть установлено без излишнего экспериментирования.
VIII. Способы лечения
Микроокружение опухоли. Опухоли имеют микроокружение, враждебное для иммунной системы хозяина, с вовлечением целого ряда механизмов, с помощью которых злокачественные клетки защищаются от узнавания и уничтожения иммунными клетками. Это «враждебное микроокружение опухоли» включает различные иммуносупрессорные факторы, включая инфильтрирующие регуляторные CD4+ T-клетки (Treg), миелоидные супрессорные клетки (MDSC), опухоль-ассоциированные макрофаги (TAM), иммуносупрессорные цитокины, включая IL-10 и TGF-β, а также экспрессию лигандов для иммуносупрессорных рецепторов, экспрессируемых активированными T-клетками (CTLA-4 и PD-1). Эти механизмы иммуносупрессии участвуют в поддержании толерантности и подавлении неадекватных иммунных ответов, однако в микроокружении опухоли эти механизмы предотвращают эффективный противоопухолевый иммунный ответ. В совокупности эти иммуносупрессорные факторы могут вызывать либо заметную анергию, либо апоптоз адоптивно перенесенных модифицированных CAR T-клеток при встрече с целевыми опухолевыми клетками.
Проблемы иммунологии опухолей. Для эффективного противоопухолевого иммунитета необходимо узнавание опухолевых антигенов и беспрепятственное уничтожение опухоли эффекторными иммунными клетками. Опухолевые антигены должны содержать пептидные эпитопы, которые представляются опухолью и могут быть узнаны специфическими цитотоксическими T-лимфоцитами (CTL). Примированные CTL должны размножиться до достаточных количеств и мигрировать в участки опухоли, где они созревают до стадии эффекторов, чтобы выполнять свои функции, которые усиливаются за счет хелперных T-клеток и ослабляются за счет Treg и ингибирующих макрофагов.
Направленная T-клеточная терапия с помощью генетически модифицированных T-лимфоцитов. Генетическое модифицирование T-клеток является новаторской стратегией для потенциального устранения многих ранее выявленных недостатков ранних иммунотерапевтических подходов. В прошлом году исследователи сообщали о впечатляющей полной ремиссии при рецидивирующем17,18, не поддающемся химиотерапии лейкозе и метастатической меланоме19-21, достигнутой при использовании аутологичных T-клеток периферической крови, нацеленных на определенный антиген (CD19 и NY-ESO-1, соответственно).
Обоснование генетического подхода: Клеточную инженерию можно использовать для перенаправления T-клеток на опухолевые антигены и для усиления функции T-клеток. Одним из стимулов для генетической модификации T-клеток является потенциальная возможность повышения выживаемости и экспансии T-клеток и избегания гибели, анергии T-клеток и иммуносупрессии. Генетическое нацеливание T-клеток также может быть усовершенствовано для предотвращения нежелательного разрушения нормальных тканей.
Химерные антигенные рецепторы (CAR): Специфические для опухоли T-клетки могут быть получены путем переноса генов, кодирующих CAR22-27. CAR второго поколения содержат связывающий опухолевый антиген домен, слитый с внутриклеточным сигнальным доменом, способным активировать T-клетки, и костимулирующим доменом, разработанным для повышения эффективности и персистенции T-клеток28. Таким образом, конструкция CAR позволяет синхронизировать узнавание антигена и передачу сигнала, две функции, которые физиологически осуществляются двумя отдельными комплексами, гетеродимером TCR и комплексом CD3. Внеклеточный антигенсвязывающий домен в CAR, как правило, получают из мышиного моноклонального антитела (мАт), либо из рецепторов или их лигандов. Таким образом, узнавание антигена не рестриктировано MHC29,30 и, следовательно, возможно для любого пациента, в организме которого экспрессируется целевой антиген, с использованием одного и того же CAR. Связывание антигена с CAR запускает фосфорилирование активационных тирозинсодержащих мотивов иммунорецепторов (ITAM) во внутриклеточном домене, инициируя сигнальный каскад, необходимый для индукции цитолиза, секреции цитокинов и пролиферации. Поскольку рестриктирование по MHC при узнавании антигена отсутствует, на функцию CAR-направляемых T-клеток не влияет понижающая регуляция HLA или дефекты аппарата процессинга антигена.
Потребности T-клеток для экспансии и выживания: Пролиферация опухоль-специфических T-клеток необходима ex vivo и, возможно, желательна in vivo. Пролиферация T-клеток должна сопровождаться выживанием T-клеток для достижения абсолютной T-клеточной экспансии и персистенции. Для пролиферации в ответ на антиген T-клетки должны получать два сигнала. Один возникает при узнавании TCR комплексов антигенный пептид/MHC, экспонируемых на поверхности антигенпредставляющих клеток (APC)26. Другой сигнал обеспечивает T-клеточный костимулирующий рецептор, такой как рецепторы CD28 или 4-1BB. Хотя для цитолитической активности T-клеток нет необходимости в сопутствующей костимуляции, существует очень важная потребность в обеспечении костимулирующих сигналов для поддержания противоопухолевых функций адоптивно перенесенных T-клеток, как показано ранее24,28,31-33.
Иммунологический мониторинг: Лимфоциты являются многофункциональными «лекарственными средствами», которые проявляют динамично развивающиеся эффекты после инфузии. При встрече с антигеном опухоль-специфические T-клетки активируются и/или высвобождают белки, которые могут запускать уничтожение опухоли, T-клеточную пролиферацию, а также рекрутинг или иммуномодуляцию других иммунных клеток. Таким образом, определение того, какие белки секретируются из каких клеток, в каком количестве и в какой момент времени дает глубокое понимание того, почему конкретный пациент отвечает или не отвечает на лечение и обеспечивает очень важную обратную связь для разработки более эффективных испытаний. Такие системы анализа позволяют проводить непосредственные и значимые сравнения клинических подходов и, таким образом, помогают в разработке рациональных терапевтических стратегий следующего поколения.
Вводимое для лечения количество представляет собой количество, эффективное для достижения желательного результата. Эффективное количество может быть предоставлено одним введением или рядом введений. Эффективное количество может быть предоставлено болюсной инъекцией или непрерывной перфузией.
«Эффективное количество» (или «терапевтически эффективное количество») представляет собой количество, достаточное для достижения полезного или желательного клинического результата при лечении. Эффективное количество можно вводить субъекту в одной или более дозах. В случае лечения, эффективное количество представляет собой количество, достаточное для облегчения, ослабления, стабилизации, обращения вспять или замедления прогрессирования заболевания, либо иным образом уменьшения патологических последствий заболевания. Эффективное количество, как правило, определяет врач на индивидуальной основе, и его определение находится в пределах компетенции специалиста в данной области. Как правило, несколько факторов учитывают при определении соответствующей дозы для достижения эффективного количества. Такие факторы включают возраст, пол и массу тела субъекта, состояние, подвергаемое лечению, степень тяжести состояния, а также форму и эффективную концентрацию вводимых иммунореактивных клеток.
Для адоптивной иммунотерапии с использованием антигенспецифических T-клеток клетки в диапазоне доз от примерно 106 до примерно 1010 (например, примерно 109), как правило, вводят инфузией. После попадания иммунореактивных клеток в организм субъекта и последующей дифференциации индуцируются иммунореактивные клетки, которые специфически направлены против одного конкретного антигена (например, рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D)). «Индукция» T-клеток может включать инактивацию антигенспецифических T-клеток, например, за счет удаления или анергии. Инактивация особенно полезна для установления или повторного установления толерантности, как, например, при аутоиммунных заболеваниях. Иммунореактивные клетки по настоящему изобретению можно вводить любыми способами, известными в данной области, включая, но без ограничения, плевральное введение, внутривенное введение, подкожное введение, внутриузловое введение, внутриопухолевое введение, интратекальное введение, интраплевральное введение, внутрибрюшинное введение и прямое введение в тимус. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивные клетки и содержащие их композиции внутривенно вводят субъекту, который нуждается в этом.
Настоящее изобретение относится к различным способам применения иммунореактивных клеток (например, T-клеток), экспрессирующих CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D). Например, настоящее изобретение относится к способам уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта. В одном неограничивающем примере способ уменьшения опухолевой нагрузки включает введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего индуцируется гибель опухолевых клеток у субъекта. Раскрытая в настоящем документе иммунореактивная клетка способна приводить к уменьшению количества опухолевых клеток, уменьшению размера опухоли и/или уничтожению опухоли у субъекта. Неограничивающие примеры соответствующей опухоли включают множественную миелому и макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления опухоль представляет собой множественную миелому.
Настоящее изобретение также относится к способам увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию. В одном неограничивающем примере способ увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию, включает введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего увеличивается или продлевается срок выживания субъекта. Способ может приводить к уменьшению или уничтожению опухолевой нагрузки у субъекта. Настоящее изобретение также относится к способам лечения или предотвращения неоплазии у субъекта, включающим введение раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту.
Используемый в настоящем документе термин «неоплазия» означает заболевание, характеризующееся патологической пролиферацией клетки или ткани и ее последующей миграцией или инвазией в другие ткани или органы. Неопластический рост, как правило, является неконтролируемым и прогрессирующим, и происходит в условиях, которые не вызвали бы, или вызвали бы прекращение, размножения нормальных клеток. Неоплазии могут поражать разные клетки, ткани или органы, включая, но без ограничения, орган, выбранный из группы, состоящей из мочевого пузыря, толстой кишки, кости, головного мозга, молочной железы, хряща, глии, пищевода, фаллопиевой трубы, желчного пузыря, сердца, кишечника, почки, печени, легких, лимфатических узлов, нервной ткани, яичников, плевры, поджелудочной железы, предстательной железы, скелетных мышц, спинного мозга, селезенки, желудка, яичек, тимуса, щитовидной железы, трахеи, урогенитального тракта, мочеточника, уретры, матки и влагалища, либо ткани или клеток из них. Неоплазии включают такие формы рака, как саркомы, карциномы или плазмацитомы (злокачественная опухоль плазматических клеток).
Раковые опухоли, рост которых можно ингибировать с использованием иммунореактивных клеток по настоящему изобретению, включают формы рака, как правило, отвечающие на иммунотерапию. Неограничивающие примеры рака, который можно лечить, включают множественную миелому и макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления рак представляет собой множественную миелому.
Кроме того, настоящее изобретение относится к способам повышения продуцирования иммуноактивирующих цитокинов в ответ на присутствие раковой клетки в организме субъекта. В одном неограничивающем примере способ включает введение раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту. Иммуноактивирующий цитокин может представлять собой гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), IFN-α, IFN-β, IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, регуляторный фактор интерферона 7 (IRF7), а также их сочетания. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивные клетки, содержащие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), по настоящему изобретению приводят к увеличению продуцирования GM-CSF, IFN-γ и/или TNF-α.
Субъекты-люди, подходящие для терапии, как правило, составляют две группы лечения, которые различаются по клиническим критериям. Субъекты с «запущенным заболеванием» или «высокой опухолевой нагрузкой» являются субъектами, имеющими клинически определяемую опухоль (например, множественную миелому). Клиническими определяемая опухоль представляет собой опухоль, которую можно обнаружить по наличию опухолевой массы (например, при пальпации, на основании результатов КАТ-сканирования, сонограммы, маммограммы или рентгеновского снимка; наличия одних только биохимических или гистопатологических маркеров недостаточно для отнесения к этой популяции). Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению вводят данным субъектам для инициации противоопухолевого ответа с целью облегчения их состояния. В идеале, результатом является уменьшение опухолевой массы, однако любое клиническое улучшение является полезным. Клиническое улучшение включает снижение риска или скорости прогрессирования, или уменьшение патологических последствий опухоли (например, множественной миеломы).
Вторая группа подходящих субъектов известна в данной области как «адъювантная группа». К этой группе относятся индивидуумы, которые имели в анамнезе неоплазию (например, множественную миелому), но ответили на другой вид терапии. Предшествующая терапия может включать, но без ограничения, хирургическую резекцию, радиотерапию и традиционную химиотерапию. В результате данные индивидуумы не имеют клинически определяемую опухоль. Однако они могут иметь риск прогрессирования заболевания, либо рядом с зоной исходной опухоли, либо вследствие метастазов. Эту группу можно дополнительно подразделять на подгруппы индивидуумов с высокой степенью риска и с низкой степенью риска. Это разделение проводят на основе признаков, наблюдаемых до или после первичного лечения. Эти особенности известны в клинической практике и соответствующим образом определены для каждой отдельной неоплазии. Признаками, типичными для подгрупп с высокой степенью риска, является инвазия опухоли (например, множественной миеломы) в соседние ткани или признаки вовлечения лимфатических узлов. Индивидуумы другой группы имеют генетическую предрасположенность к неоплазии (например, множественной миеломе), однако у них пока не проявляются клинические признаки неоплазии (например, множественной миеломы). Например, женщины с положительными результатами теста на генетическую мутацию, связанную с раком молочной железы, но все-еще находящиеся в детородном возрасте, могут решить принимать один или более из антигенсвязывающих фрагментов, описанных в настоящем документе, в качестве профилактической меры для предотвращения развития неоплазии до тех пор, пока не наступит подходящее время для проведения превентивной хирургической операции.
Субъекты могут иметь запущенную форму заболевания (например, множественной миеломы), в этом случае цель лечения может включать облегчение или обращение вспять прогрессирования заболевания и/или ослабление побочных эффектов. Субъекты могут иметь в анамнезе состояние, для которого они уже получали лечение, в этом случае цель лечения, как правило, будет включать уменьшение риска или отсрочку рецидива.
Можно вносить дополнительные модификации в иммунореактивные клетки, экспрессирующие CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), (например, T-клетки) для предотвращения или минимизации риска иммунологических осложнений (известных как «злокачественная трансформация T-клеток»), например, реакции «трансплантат против хозяина» (GvHD) или в случае, когда здоровые ткани экспрессируют те же целевые антигены, что и клетки опухолей, что приводит к результатам, аналогичным GvHD. Потенциальным решением этой проблемы является введение генно-инженерными методами в CAR-экспрессирующие T-клетки гена самоубийства. Подходящие гены самоубийства включают, но не ограничиваются ими, ген тимидинкиназы вируса простого герпеса (hsv-tk), ген индуцируемой каспазы 9 (iCasp-9), а также ген укороченного полипептида рецептора эпидермального фактора роста (EGFRt) человека. В конкретных вариантах осуществления ген самоубийства представляет собой ген полипептида EGFRt. Полипептид EGFRt может вызывать элиминацию T-клеток при введении анти-EGFR моноклонального антитела (например, цетуксимаба). EGFRt может быть ковалентно связан с 3ʹ-концом внутриклеточного домена CAR, специфичного для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D). Ген самоубийства можно включать в вектор, содержащий нуклеиновые кислоты, кодирующие раскрытый в настоящем документе CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D). В этой ситуации введение пролекарства, предназначенного для активации гена самоубийства (например, AP1903 для активации iCasp-9), в случае злокачественной трансформации T-клеток (например, GVHD) запускает апоптоз CAR-экспрессирующих T-клеток с активированным геном самоубийства.
IX. Наборы
Настоящее изобретение относится к наборам для лечения или предотвращения неоплазии (например, множественной миеломы). В конкретном варианте осуществления набор включает терапевтическую или профилактическую композицию, содержащую эффективное количество иммунореактивной клетки, содержащей CAR, специфичный для рецептора, связанного с G-белками (например, GPRC5D), в стандартной лекарственной форме. В конкретных вариантах осуществления клетки могут дополнительно экспрессировать по меньшей мере один костимулирующий лиганд. В конкретных вариантах осуществления набор включает стерильный контейнер, содержащий терапевтическую или профилактическую вакцину; такие контейнеры могут представлять собой коробки, ампулы, бутылки, флаконы, пробирки, мешки, пакеты, блистерные упаковки или другие подходящие формы контейнеров, известные в данной области. Такие контейнеры могут быть выполнены из пластика, стекла, ламинированной бумаги, металлической фольги или других материалов, подходящих для хранения лекарственных средств.
При необходимости, иммунореактивную клетку предоставляют совместно с инструкциями по введению клетки субъекту, имеющему, или имеющему риск развития неоплазии (например, множественной миеломы). Инструкции, как правило, будут содержать информацию об использовании композиции для лечения или предотвращения неоплазии (например, множественной миеломы). В других вариантах осуществления инструкции включают по меньшей мере одно из следующего: описание лекарственного средства; схему доз и режим введения для лечения или предотвращения неоплазии (например, множественной миеломы) или ее симптомов; меры предосторожности; предупреждения; показания; противопоказания; информацию о передозировке; побочные реакции; результаты фармакологических исследований на животных, клинических исследований и/или литературные источники. Инструкции могут быть напечатаны непосредственно на контейнере (при возможности), или представлять собой этикетку, прикрепленную к контейнеру, или представлять собой отдельный листок, брошюру, карточку или папку, которые предоставляют в контейнере или вместе с ним.
ПРИМЕРЫ
При осуществлении на практике настоящего изобретения, если нет иных указаний, используют общепринятые методы молекулярной биологии (включая рекомбинантные методы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые находятся в пределах компетенции специалиста в данной области. Такие методы подробно описаны в литературе, такой как «Molecular Cloning: A Laboratory Manual», второе издание (Sambrook, 1989); «Oligonucleotide Synthesis» (Gait, 1984); «Animal Cell Culture» (Freshney, 1987); «Methods in Enzymology»; «Handbook of Experimental Immunology» (Weir, 1996); «Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells» (Miller and Calos, 1987); «Current Protocols in Molecular Biology» (Ausubel, 1987); «PCR: The Polymerase Chain Reaction», (Mullis, 1994); «Current Protocols in Immunology» (Coligan, 1991). Эти методы применимы для получения полинуклеотидов и полипептидов по изобретению и, следовательно, могут быть использованы при осуществлении на практике настоящего изобретения. Особенно полезные методы для конкретных вариантов осуществления будут описаны в следующих далее разделах.
Следующие примеры приведены, чтобы предоставить специалистам в данной области полное раскрытие и описание того, как выполнять и использовать анализ, скрининг и методы лечения по изобретению, и не предназначены для ограничения объема того, что авторы заявки считают своим изобретением.
Пример 1 - Экспрессия GPRC5D в различных тканях
Экспрессию GPRC5D человека оценивали в различных злокачественных и нормальных тканях путем изучения профилей экспрессии генов в базах данных, таких как энциклопедия линий раковых клеток и BioGPS. Как показано на фигуре 2, GPRC5D человека экспрессировался на высоком уровне во множественной миеломе, но не в других злокачественных тканях. Нормальная экспрессия, судя по всему, ограничена плазматическими клетками. Потенциальное уничтожение нацеленными на GPRC5D CAR T-клетками нормальных клеток этого типа не может иметь существенные неблагоприятные последствия, о чем свидетельствует опыт с пациентом авторов изобретения при использовании нацеленных на CD19 CAR T-клеток. Любое отсутствие физиологического продуцирования антител может быть исправлено внутривенным введением иммуноглобулинов.
Пример 2 - Конструкт GPRC5D-специфических 28z CAR
Было создано множество уникальных полностью человеческих scFv к GPRC5D и были получены CAR на основе этих scFv. Множество scFv было идентифицировано при скрининге фаговой библиотеки полностью человеческих scFv (> 6×1010 scFv) с клетками 3T3, экспрессирующими GPRC5D. Было проведено четыре независимых пэннинга с 12 разными фаговыми библиотеками против избыточно экспрессирующих GPRC5D клеток 3T3, что привело к идентификации 80 положительных клонов. При скрининге методом FACS были идентифицированы 72 положительных клона из 80 клонов; показатель выявления положительных клонов составил 90%. После секвенирования были обнаружены 32 уникальных и положительных по связыванию с GPRC5D-3T3 клонов из 72 секвенированных положительных клонов; показатель отбора уникальных клонов составил 45%.
ET150-151 scFv (или «ET150-1 scFv»), ET150-152 scFv (или «ET150-2 scFv»), ET150-155 scFv (или «ET150-5 scFv»), ET150-158 scFv (или «ET150-8 scFv») и ET150-168 scFv (или «ET150-18 scFv») были использованы для создания GPRC5D-нацеленных 28z CAR 2, 5, 8 и 18, соответственно. Эти GPRC5D-нацеленные 28z CAR имели сходную структуру, например, каждый имел трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28, как показано на фигуре 1. Каждый из этих GPRC5D-нацеленных CAR клонировали в ретровирусный вектор. Эти вирусные векторы затем были трансдуцированы в клетки-упаковщики вирусов HEK 293 galv9 для создания стабильной упаковывающей линии для получения CAR+ T-клеток.
Человеческие T-клетки (неотобранные (CD4 и CD8) человеческие T-клетки от здорового донора) были трансдуцированы каждым из этих GPRC5D-нацеленных 28z CAR, вследствие чего T-клетки экспрессировали эти GPRC5D-нацеленные CAR.
Экспрессию GPRC5D-нацеленных 28z CAR18 на поверхности человеческих T-клеток оценивали по связыванию GPRC5D человека, и обнаружение их на клеточной поверхности подтверждали методом проточной цитометрии, как показано на фигуре 3.
Пример 3 - Активность GPRC5D-специфических 28z CAR
Оценивали противоопухолевую активность раскрытых в настоящем документе GPRC5D-специфических 28z CAR. Данные in vitro показали, что GPRC5D-специфические CAR специфически уничтожали GPRC5D-представляющие клетки, включая клетки линии MM. Например, как показано на фигуре 4, T-клетки, экспрессирующие GPRC5D-специфический 28z CAR18, уничтожали клетки 3T3, избыточно экспрессирующие GPRC5D (но не контрольные клетки 3T3, избыточно экспрессирующие другой антиген). Как показано на фигуре 5, T-клетки, экспрессирующие GPRC5D-специфические 28z CAR 2, 5, 8 и 18, уничтожали клетки линии MM человека.
Пример 4 - Данные скрининга для анти-GPRC5D антител
FACS-скрининг: На фигуре 24 представлены результаты FACS-анализа фаговых клонов GPRC5D-специфического антитела (ET150-1, ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18). Фаговые клоны инкубировали с клетками линии 3T3-GPRC5D, затем с анти-M13 антителом мыши. И наконец, APC-меченое 2-е антитело против IgG мыши добавляли в реакционную смесь после промывания. Связывание измеряли методом FACS и выражали в единицах средней интенсивности флуоресценции (СИФ). Клетки, инкубированные с M13 K07 хелперным фагом, и просто клетки использовали в качестве отрицательного контроля.
Пример 5 - Конструкт GPRC5D-специфических BBz CAR
Было создано множество уникальных полностью человеческих scFv к GPRC5D и были получены CAR на основе этих scFv, как описано в примере 2. ET150-151 scFv (или «ET150-1 scFv»), ET150-152 scFv (или «ET150-2 scFv»), ET150-155 scFv (или «ET150-5 scFv»), ET150-158 scFv (или «ET150-8 scFv») и ET150-168 scFv (или «ET150-18 scFv») были использованы для создания GPRC5D-нацеленных BBz CAR 1, 2, 5, 8 и 18, соответственно. Эти GPRC5D-нацеленные BBz CAR имели сходную структуру, например, каждый имел трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид 4-1BB, как показано на фигуре 6. Каждый из этих GPRC5D-нацеленных BBz CAR клонировали в ретровирусный вектор SFG, как показано на фигурах 7-9, 26 и 27.
Пример 6 - Активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток
Как показано на фигуре 10, GPRC5D 28z CAR8 вызывал лизис клеток линий L363, NCL-H929 и U266 MM человека, в сравнении с нацеленными на постороннюю мишень 4h11-28z MUC16-нацеленными CAR T-клетками. Цитотоксичность, наблюдаемая в случае GPRC5D 28z CAR8, была специфичной для GPRC5D, поскольку отсутствовал лизис GPRC5D-отрицательных CD19-положительных клеток линии Raji лимфомы Беркитта, как показано на фигуре 10.
Пример 7 - Индукция секреции цитокинов GPRC5D-нацеленными CAR T-клетками
Совместное культивирование GPRC5D 28z CAR8 T-клеток с клетками линии MM индуцировало секрецию цитокинов, профиль которой соответствовал профилю при активации T-клеток. На фигуре 11 показана секреция IL-2 после 24 ч совместного культивирования CAR T-клеток с клетками опухолевых линий человека (соотношение E:T=1:1). Только в случае лимфоплазматической лимфомы (CD19+ GPRC5D-) с CD19-нацеленными CAR T-клетками (положительный контроль) и клеток линии MM с GPRC5D-нацеленными 28z CAR8 T-клетками наблюдали повышенное продуцирование цитокинов. Все из IFNγ, IL-6, TNFα, sCD40L, GM-CSF имели сходные профили секреции (данные не представлены).
Пример 8 - Противоопухолевая активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток
GPRC5D-нацеленные 28z CAR18 T-клетки опосредовали иммунный ответ против миеломы. 1×107 клеток линии U266 миеломы человека вводили в/в инъекцией мышам NSG в день 0. В день 4 в/в инъекцией вводили 1×106 GPRC5D-нацеленных или CD19-нацеленных T-клеток с CAR второго поколения. Визуализация в день 11 (день 7 после инъекции CAR T-клеток) показала, что, в отличие от CAR T-клеток, нацеленных на постороннюю мишень (CD19); GPRC5D-нацеленные 28z CAR18 T-клетки были способны опосредовать противоопухолевый ответ. Смотри фигуру 12.
Пример 9 - Активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток
Тестировали способность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток специфически лизировать клетки линии миеломы человека (HMCL). CD19-нацеленные CAR T-клетки или GPRC5D-нацеленные 28z CAR8 T-клетки инкубировали с экспрессирующими GFP клетками опухолевых линий SET2 (острый миелоидный лейкоз (AML), CD19-GPRC5D-); BCWM1 (лимфоплазматическая лимфома (LPL), CD19+GPRC5D-); L363 (множественная миелома (MM), CD19-GPRC5D+). В момент времени 0 процентная доля GFP+ опухолевых клеток показана на фигуре 13A. Через 36 ч используемые в качестве положительного контроля CD19-нацеленные CAR T-клетки специфически уничтожали GFP+ клетки линии LPL и, аналогично, GPRC5D-нацеленные 28z CAR8 T-клетки специфически уничтожали GFP+ клетки линии MM. Смотри фигуру 13B.
Пример 10 - Картирование эпитопов анти-GPRC5D антител
Четыре анти-GPRC5D антитела: ET150-2, ET150-5, ET150-8 и ET150-18 mIgG1. «mIgG1» при использовании во всех примерах указывает на то, что вариабельная область является полностью человеческой, а Fc-часть происходит из IgG1 мыши. Смотри таблицу 37.
Таблица 37
| Название | Происхождение | Концентрация | Расположение | Статус |
| ET150-18 mIgG1 | Fc мыши | 1,1 мг/мл | +4°C/22 | подтвержден |
| ET150-2 mIgG1 | Fc мыши | 0,66 мг/мл | +4°C/22 | подтвержден |
| ET150-5 mIgG1 | Fc мыши | 1,9 мг/мл | +4°C/22 | подтвержден |
| ET150-8 mIgG1 | Fc мыши | 2,9 мг/мл | +4°C/22 | подтвержден |
Целевой белок представляет собой GPRC5D человека, имеющий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 97. N-концевая область GPRC5D человека содержит аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 1 (ECL1) GPRC5D человека содержит аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 2 (ECL2) GPRC5D человека содержит аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 3 (ECL3) GPRC5D человека содержит аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97.
Методы
Принципы технологии CLIPS - технология CLIPS позволяет структурно фиксировать пептиды в определенные трехмерные структуры. Результатом этого является функциональная имитация даже самых сложных сайтов связывания. В настоящее время технологию CLIPS повсеместно используют для формирования пептидных библиотек в одно-, двух- или трех-петлевые структуры, а также в складчатые и спиралевидные структуры (фигура 14).
Подробности скрининга комбинаторной библиотеки CLIPS - Скрининг библиотеки CLIPS начинается с превращения целевого белка в библиотеку, включающую вплоть до 10000 перекрывающихся пептидных конструктов, с использованием дизайна комбинаторной матрицы. На твердом носителе синтезируют матрицу линейных пептидов, которые впоследствии преобразуются в CLIPS-конструкты с определенными пространственными структурами (фигура 15). Конструкты, представляющие обе части прерывистого эпитопа в правильной конформации, связывают антитело с высокой аффинностью, которую обнаруживают и количественно определяют. Конструкты, представляющие неполный эпитоп, связывают антитело с более низкой аффинностью, в то время как конструкты, не содержащие эпитоп, совсем не связывают антитело. Информацию об аффинности используют в итерационном скрининге для подробного определения последовательности и конформации эпитопов.
Анализ тепловых карт - Тепловая карта является графическим представлением данных, при котором значения, принимаемые переменной на двухмерной карте, представлены разными цветами. Для двухпетлевых пептидов CLIPS такая двухмерная карта может быть создана из независимых последовательностей первой и второй петель. Например, последовательности 16 CLIPS-пептидов, представленных на фигуре 17, являются эффективными пермутациями 4 уникальных подпоследовательностей в петле 1 (окрашено в синий цвет на фигуре 16) и 4 уникальных подпоследовательностей в петле 2 (окрашено в зеленый цвет на фигуре 16). Таким образом, полученные данные ELISA (окрашено в красный цвет на фигуре 17A) могут быть построены в виде матрицы 4×4, в которой каждая координата X соответствует последовательности первой петли, и каждая координата Y соответствует последовательности второй петли. Например, значение ELISA, наблюдаемое в случае CLIPS-пептида CLSSERERVEDLFEYECELLTSEPIFHCRQEDC (отмечено стрелкой на фигуре 4A) можно найти в третьем ряду, третьей колонки на фигуре 17B (отмечено стрелкой и красным квадратом). Для дальнейшего облегчения визуализации значения ELISA можно заменять цветами из непрерывного градиента. В этом случае чрезвычайно низкие значения окрашены зеленым цветом, чрезвычайно высокие значения окрашены красным цветом, и средние значения окрашены черным цветом (смотри фигуру 17C). Для вышеуказанного примера среднее значение составляет 0,71. Если эту цветовую карту применить к матрице данных, представленной на фигуре 17B, получается цветная тепловая карта (смотри фигуру 17D, оригинальные данные по-прежнему приведены для большей ясности).
Синтез пептидов - Для реконструирования эпитопов целевой молекулы синтезировали библиотеку пептидов. Функционализированную аминогруппами полипропиленовую подложку получали путем привитой сополимеризации с запатентованным препаратом гидрофильного полимера, за которой следовала реакция с t-бутилоксикарбонил-гексаметилендиамином (BocHMDA) с использованием дициклогексилкарбодиимида (DCC) с N-гидроксибензотриазолом (HOBt) и последующее расщепление Boc-групп трифторуксусной кислотой (TFA). Стандартный Fmoc-пептидный синтез использовали для синтеза пептидов на функционализированной аминогруппами твердой подложке с использованием специально модифицированных рабочих станций для дозирования JANUS (Perkin Elmer). Синтез структурных миметиков выполняли с использованием запатентованной технологии химического связывания пептидов на каркасах (CLIPS) компании Pepscan. Технология CLIPS позволяет структурировать пептиды в одиночные петли, двойные петли, тройные петли, складчатые, спиралевидные структуры, а также их сочетания. Матрицы CLIPS связываются с остатками цистеина. Боковые цепи нескольких остатков цистеина в пептидах связываются с одной или двумя матрицами CLIPS. Например, 0,5 мМ раствор P2 CLIPS (2,6-бис(бромметил)пиридина) растворяли в смеси бикарбоната аммония (20 мМ, pH 7,8)/ацетонитрила (1:3 (по объему)). Этот раствор добавляли на матрицы пептидов. Матрица CLIPS связывалась с боковыми цепями двух остатков цистеина, присутствующих в иммобилизованных на твердой фазе пептидах в матрице пептидов (455-луночные планшеты с 3-мкл лунками). Матрицы пептидов осторожно встряхивали в растворе в течение 30-60 минут, при этом они были полностью покрыты раствором. В завершение, матрицы пептидов интенсивно промывали избытком H2O и обрабатывали ультразвуком в деструктурирующем буфере, содержащем 1% SDS/0,1% бета-меркаптоэтанола в PBS (pH 7,2), при 70°C в течение 30 минут, с последующей обработкой ультразвуком в H2O в течение следующих 45 минут. T3 CLIPS несущие пептиды получали аналогичным образом, но в этот раз с тремя остатками цистеина.
Скрининг методом ELISA - Связывание антитела с каждым из синтезированных пептидов тестировали в анализе ELISA на основе технологии компании PEPSCAN. Матрицы пептидов инкубировали с раствором первичного антитела (в течение ночи при 4°C). После промывания матрицы пептидов инкубировали с разведенным 1/1000 конъюгатом соответствующего антитела с пероксидазой (SBA) в течение часа при 25°C. После промывания добавляли субстрат пероксидазы 2,2ʹ-азино-ди-3-этилбензтиазолина сульфонат (ABTS) и 2 мкл/мл 3-процентного раствора H2O2. Через час измеряли развившуюся окраску. Развитие окраски количественно определяли с помощью прибора с зарядовой связью (CCD) - камеры и системы обработки изображений.
Обработка данных - значения, полученные с помощью CCD камеры, находились в диапазоне от 0 до 3000 mAU, как и в случае стандартного ELISA-ридера для 96-луночных планшетов. Результаты количественно определяли и сохраняли в базу данных Peplab. Время от времени воздушный пузырь в лунке приводил к получению ложноположительных значений; карты вручную инспектировали и любые значения, вызванные воздушными пузырями, принимали за 0.
Контроль качестве синтеза - Для подтверждения качества синтезированных пептидов параллельно синтезировали отдельный набор пептидов в качестве положительного и отрицательного контроля. Проводили их скрининг с использованием антитела 57.9 (ссылка: Posthumus et al., J. Virology, 1990, 64: 3304-3309).
Результаты
Скрининг
Связывание антитела зависит от сочетания факторов, включая концентрацию антитела, а также количество и природу конкурирующих белков в буфере для ELISA. Кроме того, на связывание влияют условия предварительного нанесения (специфическая обработка матриц пептидов перед инкубацией с экспериментальным образцом). Относящиеся к этому данные приведены в таблице 38. Для буфера Pepscan и предварительной обработки (SQ) числа указывают относительное количество конкурирующего белка (сочетание лошадиного сывороточного альбумина и овальбумина).
Таблица 38 - условия скрининга
| Название | Разведение | Буфер образца | Предварительная обработка |
| ET150-18 mIgG1 | 1 мкг/мл | 1% SQ | 1% SQ |
| ET150-2 mIgG1 | 1 мкг/мл | 10% SQ | 10% SQ |
| ET150-5 mIgG1 | 1 мкг/мл | 10% SQ | 10% SQ |
| ET150-8 mIgG1 | 1 мкг/мл | 10% SQ | 10% SQ |
Антитело ET150-2
При тестировании в условиях умеренной строгости антитело ET150-2 авидно связывает пептиды из всех наборов (фигура 18). Кумулятивный анализ данных показывает, что антитело узнает прерывистый эпитоп, состоящий из пептидных фрагментов 16CDAEGPWGII25 (N-конец), 157MFVNMTPC164 (ECL2) и 229PQFQRQPQW237 (ECL3), при этом для связывания достаточно лишь пептидных фрагментов 16CDAEGPWGII25 и 229PQFQRQPQW237.
Антитело ET150-5
При тестировании в условиях высокой строгости антитело ET150-5 авидно связывает пептиды из всех наборов (фигура 19). Кумулятивный анализ данных показывает, что антитело узнает прерывистый эпитоп, состоящий из пептидных фрагментов 5CIESTGDYFLLCD17 (N-конец), 85NQQTAPVRYFL95 (ECL1) и 157MFVNMTPC164 (ECL2), при этом для связывания достаточно одного пептидного фрагмента 5CIESTGDYFLCD17.
Антитело ET150-18
При тестировании в условиях высокой строгости антитело ET150-18 связывает пептиды из набора 4 и набора 7, которые содержат пептиды с закрепленной структурой. Никакого существенного связывания не было отмечено для наборов, содержащих линейные пептиды (фигура 20). Кумулятивный анализ данных показывает, что антитело узнает прерывистый эпитоп, состоящий из фрагментов 10GDYFLLCD17 (N-конец), 157MFVNMTPCQLN167 (ECL2) и 227GNPQFQRQPQW237 (ECL3). Пептидные фрагменты 10GDYFLLCD17 и 227GNPQFQRQPQW237 представляют ядро эпитопа, поскольку оба пептидных фрагмента в отдельности достаточны для связывания.
Антитело ET150-8
При тестировании в условиях высокой строгости антитело ET150-8 связывает пептиды из всех наборов, за исключением набора 2 (фигура 21). Кумулятивный анализ данных показывает, что антитело узнает прерывистый эпитоп, состоящий из пептидных фрагментов 15LCDAEGPWG23 (N-конец) и 230QFQRQPQWDDPVVC243 (ECL3), при этом пептидный фрагмент 15LCDAEGPWG23 является доминантной частью эпитопа, поскольку его одного достаточно для связывания. Кроме того, сравнение результатов, полученных для набора 1 (линейные) и набора 4 (петля), показывает, что введение структурных ограничений для миметиков эпитопов приводит к усилению связывания пептидов, особенно в случае пептидов, содержащих последовательность 230QFQRQPQWDDPVVC243.
Выводы
Все изучаемые антитела узнавали прерывистые эпитопы, которые были картированы с использованием матриц Pepscan. Предварительные коровые эпитопы приведены в таблице 39. Все антитела обычно узнавали перекрывающиеся области на N-конце белка в сочетании с областями из одной или двух областей ECL. Два антитела ET150-18 и ET150-8 продемонстрировали потребность в структурных ограничениях для поддержания связывания антитела, это указывает на то, что данные два антитела узнают на только прерывистые, но также и конформационные эпитопы. Антитела ET150-2 и ET150-5 не обнаруживали заметных различий в связывании линейных и петлевых пептидов.
Таблица 39 - Список эпитопов
| Антитело | N-конец | ECL1 | ECL2 | ECL3 |
| ET150-2 | 16CDAEGPWGII25*) | - | 157MFVNMTPC164 | 229PQFQRQPQW237*) |
| ET150-5 | 5CIESTGDYFLLCD17*) | 85NQQTAPVRYFL95 | 157MFVNMTPC164 | - |
| ET150-8 | 15LCDAEGPWG23*) | - | - | 230QFQRQPQWDDPVVC243 |
| ET150-18 | 10GDYFLLCD17*) | - | 157MFVNMTPCQLN167 | 227GNPQFQRQPQW237*) |
*) доминантная часть
На фигуре 22 приведены результаты изучения общей организации GPCR. Поскольку N-конец является очень гибким и неструктурированным, вероятно, он временно взаимодействует с областями ECL, образуя прерывистые иммунодоминантные области.
Различия и сходство связывания пептидов могут быть проиллюстрированы с помощью анализа диаграммы рассеяния данных на фигуре 23. Точки данных в верхнем левом и нижнем правом углах указывают на различия в связывании. Несмотря на значительное перекрывание эпитопов, детальные особенности эпитопов отдельных антител различаются в большой степени.
Пример 11 - Аффинность связывания анти-GPRC5D антител
На фигуре 25 представлены результаты FACS-анализа фаговых клонов GPRC5D-специфических антител (ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18). Каждое антитело (ET150-2, ET150-5, ET150-8, ET150-18) в концентрации 10 или 1 мкг/мл инкубировали с клетками 3T3 или 3T3-GPRC5D, затем с антителом против M13 мыши. В завершение, в реакционную смесь добавляли PE-меченое 2-е антитело против IgG мыши. Связывание измеряли методом FACS и выражали в единицах средней интенсивности флуоресценции (СИФ). Клетки, инкубированные только со 2-м антителом, с контролем по изотипу ET901 mIgG1, и просто клетки использовали в качестве отрицательных контролей.
Хотя настоящее изобретение было описано в некоторых подробностях и проиллюстрировано примерами для ясности понимания, приведенное описание и примеры не должны быть истолкованы как ограничивающие объем настоящего изобретения. Содержание всех патентов и специальных литературных источников, цитированных в настоящем документе, специально включено в настоящий документ посредством ссылки.
Литература
1. Atamaniuk, J. ,et al. Over expression of Gprotein-coupled recept or 5Din the bone marrow is associated with poor prognosis in patients with multiplemyeloma. European journal of clinical investigation 42,953-960 (2012).
2. Frigyesi, I., et al. Robustisolation of malignant plasma cells in multiplemyeloma. Blood 123, 1336-1340 (2014).
3. Cohen, Y., Gutwein, O., Garach-Jehoshua, O., Bar-Haim, A. & Kornberg, A. GPRC5Disa promising marker for monitoring the tumor load and to target multiplemyeloma cells. Hematology (Amsterdam, Netherlands) 18, 348-351 (2013).
4. Bam, R., et al. GPRC5DIsa Cell Surface Plasma Cell Marker Whose Expression Is High In Myeloma Cells and Reduced Following Coculture With Osteoclasts. Blood1 22, 3099 (2013).
5. Brentjens, R.J., et al. Safety and persistence of adoptively transfer redautologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemo the rapyre fractory B-cell leukemias. Blood118, 4817-4828 (2011).
6. Brentjens, R.J., et al. Eradication of systemic B-cell tumors by genetically targeted human T lymphocytes co-stimulated by CD80 and interleukin-15. Naturemedicine 9, 279-286 (2003).
7. Brentjens, R.J., et al. CD19-Targeted T Cells Rapidly Induce Molecular Remissions in Adults with Chemo therapy-Refractory Acute Lymphoblastic Leukemia. Science translational medicine 5, 177 ra138 (2013).
8. Davila, M.L., et al. Efficacy and Toxicity Management of 19-28z CART Cell Therapy in B Cell Acute Lymphoblastic Leukemia. Science translational medicine 6, 224 ra225 (2014).
9. Siegel, R., Naishadham, D. & Jemal, A. Cancer statistics, 2013. CA: a cancer journal for clinicians 63, 11-30 (2013).
10. Boyd,K.D., et al. The clinical impact and molecular biology of del (17p) in multiplemyeloma treated with conventional or thalidomide-based therapy. Genes, chromosomes & cancer 50, 765-774 (2011).
11. Shaughnessy, J.D., Jr., et al. A validated gene expression model of high-risk multiplemyelomais defined by deregulated expression of gene smapping to chromosome1. Blood 109, 2276-2284 (2007).
12. Gahrton, G., et al. Allogeneic bone marrow transplantation in multiplemyeloma. European Group for Bone Marrow Transplantation. The New England journal of medicine 325, 1267-1273 (1991).
13. Pegram, H.J., et al. Tumor-targeted T cells modified to secrete IL-12 eradicate systemic tumors with out need for prior conditioning. Blood 119, 4133-4141 (2012).
14. Sabrina Bertilaccio, M.T., et al. Low-Dose Lenalidomide Improves CAR-Based Immunotherapy In CLL By Reverting T-Cell Defects In Vivo. Blood 122, 4171 (2013).
15. Bataille, R., et al. The phenotype of normal, reactive and malignant plasma cells. Identification of "many and multiple myelomas" and of new targets for myeloma therapy. Haematologica 91, 1234-1240 (2006).
16. Morgan, R.A., et al. Case report of aserious adverseevent following the administration of T cell stransduced with a chimericantigen recept or recognizing ERBB2. Moleculartherapy: the journal of the American Society of Gene Therapy 18, 843-851 (2010).
17. Brentjens, R.J., et al. Safety and persistence of adoptively transferred autologous CD19-targeted T cells in patients with relapsed or chemotherapy refractory B-cell leukemias. Blood 118, 4817-4828 (2011).
18. Brentjens, R.J., et al. CD19-targeted T cells rapidly induce molecular remissions in adults with chemotherapy-refractory acute lymphoblastic leukemia. Science translational medicine 5, 177ra138 (2013).
19. Hunder, N.N., et al. Treatment of metastatic melanoma with autologous CD4+ T cells against NY-ESO-1. N.Engl.J.Med. 358, 2698-2703 (2008).
20. Rosenberg, S.A., Restifo, N.P., Yang, J.C., Morgan, R.A. & Dudley, M.E. Adoptive cell transfer: a clinical path to effective cancer immunotherapy. Nat.Rev.Cancer 8, 299-308 (2008).
21. Dudley, M.E., et al. Adoptive cell therapy for patients with metastatic melanoma: evaluation of intensive myeloablative chemoradiation preparative regimens. J Clin Oncol 26, 5233-5239 (2008).
22. Brentjens, R.J., et al. Genetically targeted T cells eradicate systemic acute lymphoblastic leukemia xenografts. Clin.Cancer Res. 13, 5426-5435 (2007).
23. Gade, T.P., et al. Targeted elimination of prostate cancer by genetically directed human T lymphocytes. Cancer Res. 65, 9080-9088 (2005).
24. Maher, J., Brentjens, R.J., Gunset, G., Riviere, I. & Sadelain, M. Human T-lymphocyte cytotoxicity and proliferation directed by a single chimeric TCRzeta /CD28 receptor. Nat.Biotechnol. 20, 70-75 (2002).
25. Kershaw, M.H., et al. Gene-engineered T cells as a superior adjuvant therapy for metastatic cancer. J Immunol 173, 2143-2150 (2004).
26. Sadelain, M., Brentjens, R. & Riviere, I. The promise and potential pitfalls of chimeric antigen receptors. Curr Opin Immunol (2009).
27. Hollyman, D., et al. Manufacturing validation of biologically functional T cells targeted to CD19 antigen for autologous adoptive cell therapy. J Immunother 32, 169-180 (2009).
28. Sadelain, M., Brentjens, R. & Riviere, I. The basic principles of chimeric antigen receptor design. Cancer discovery 3, 388-398 (2013).
29. Riviere, I., Sadelain, M. & Brentjens, R.J. Novel strategies for cancer therapy: the potential of genetically modified T lymphocytes. Curr Hematol Rep 3, 290-297 (2004).
30. Stephan, M.T., et al. T cell-encoded CD80 and 4-1BBL induce auto- and transco-stimulation, resulting in potent tumor rejection. Nat.Med. 13, 1440-1449 (2007).
31. Krause, A., et al. Antigen-dependent CD28 signaling selectively enhances survival and proliferation in genetically modified activated human primary T lymphocytes. J Exp Med 188, 619-626 (1998).
32. Gong, M.C., et al. Cancer patient T cells genetically targeted to prostate-specific membrane antigen specifically lyse prostate cancer cells and release cytokines in response to prostate-specific membrane antigen. Neoplasia. 1, 123-127 (1999).
33. Lyddane, C., et al. Cutting Edge: CD28 controls dominant regulatory T cell activity during active immunization. J.Immunol. 176, 3306-3310 (2006).
Из вышеприведенного описания будет понятно, что в изобретение, описанное в настоящем документе, могут быть внесены вариации и модификации, чтобы адаптировать его к разным вариантам применения и условиям. Такие варианты осуществления также входят в объем прилагаемой формулы изобретения.
Все патенты и публикации, а также последовательности с указанными регистрационными или ссылочными номерами, упомянутые в данной спецификации, включены в настоящий документ посредством ссылки в такой же степени, как если было бы специально указано, что каждый отдельный патент или публикация, или последовательность индивидуально включены посредством ссылки.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> MEMORIAL SLOAN-KETTERING CANCER CENTER
EUREKA THERAPEUTICS, INC.
<120> ХИМЕРНЫЕ АНТИГЕННЫЕ РЕЦЕПТОРЫ, НАЦЕЛЕННЫЕ НА РЕЦЕПТОР,
СВЯЗАННЫЙ С G-БЕЛКАМИ, И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ
<130> 072734.0350
<140> PCT/US2015/064102
<141> 2015-12-04
<150> 62/088,286
<151> 2014-12-05
<160> 445
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Val Ile Asn Pro Asn Ala Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Ser Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Met Tyr Arg Ser Leu Leu Phe Tyr Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 2
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Pro Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Asn Tyr
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Ser Ala His Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 3
<211> 360
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 3
caggtgcagc tggtgcagtc tgggtctgag ttgaagaagc ctggggcctc agtcagagtc 60
tcctgcacgg cttctggata caccttcacc agttactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggagta atcaacccta atgctggcag cacaagatac 180
gcacagaaat tccagggcag agtcaccatg agcactgaca cgtccacgag cacagcctac 240
atggacctga gcagtctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtatg 300
taccgttctc tgctgttcta cgatccgtgg ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 360
<210> 4
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 4
cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
ccctgctctg gaagccgttc caacgttggg aattattatg tgtcctggta ccagcaactc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta tttctgcgga acatgggatg gcagcctgag tgcccatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 5
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 6
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Ser Cys Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly
<210> 7
<211> 348
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 7
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gactggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtaacac atactacgca 180
gactccgtga agggccggtt caccatctcc agagacaatt ccaagaacac gctgtatctg 240
caaatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtgcgcg cggttctgtt 300
cgttacactg atatctgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctca 348
<210> 8
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 8
aattttatgc tgactcagcc ccactcagtg tcggagtctc cggggaagac ggtaagcatc 60
tcctgcaccc gcaccagtgg cgccattgcc ggcgcctatg tgcagtggtt ccagcagcgc 120
ccgggcagtg cccccaccac tgtgatctat gacgataaca aaagaccctc tggggtccct 180
gatcggttct ctgggtccat cgacaagtcc tccaactctg cctccctcac catctctgga 240
ctgaagactg aggacgaggc tgactattat tgtcagtctt atgattatga tagcagcaat 300
gtgctattcg gcggagggac caagctgacc gtcctaggt 339
<210> 9
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Met Ser Thr Ala Trp Gly Tyr Asp Glu Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 10
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Val Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 11
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 11
gaggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcaa cctctggatt cacctttaat aactattgga tgagttgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtggccaac ataaagcaag atggaagtga gaaatactac 180
gcggactctg tgaggggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtct 240
ctgcaattga acaacctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgctctatg 300
tctactgctt ggggttacga tgaatggggt caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 357
<210> 12
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 12
gacatccagt tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca acagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gcagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagtg tcccgtacac ttttggccag 300
gggaccaagc tggagatcaa acgt 324
<210> 13
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 14
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 15
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 15
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaaggtac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtcaacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggttct 300
tctcgctggg gtggttggac tggtgattac tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc 360
tca 363
<210> 16
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 16
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact ttgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa agtcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcagggatt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggttgagg acgaggctga atattactgc agctcatata caagcactag aactgtgata 300
ttcgccggag ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 17
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr Lys Ser Ser Lys Asp His Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 18
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> Любая аминокислота
<400> 18
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Xaa Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn His Gln Trp Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 19
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 19
gaggtgcagc tggtggagac tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatc cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggtc gtggtcgtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctactac 300
aaatcttcta aagatcattg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 20
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<220>
<221> модифицированное основание
<222> (109)..(109)
<223> a, c, t, g, неизвестное или другое
<400> 20
cagtctgtgt tgacgcagcc gccctcactg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttccg gaagcaggtc caacatcgga actaattatg tatcctggna ccagcaactc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaatcatc agtggccctc aggggtccct 180
gaccgattca ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ctactgtgca gcatgggatg acaatttgag tggtgtggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 21
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Gln Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ile Ala Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Pro Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Arg Thr Gln Tyr Ala Pro Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Leu Ala Arg Glu Thr Pro Ile Ser Thr Ala Ser
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Gly Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Tyr Gly Tyr Ser Arg Trp Ser Gly Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 22
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 23
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 23
caggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgcagaggc ctggggcctc agtgagggtc 60
tcctgcaagg ctattgcgta caccttcacc gactactata tccactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcctgagtg gatggggtgg atcaacccta aaagtggtcg cacacagtat 180
gcaccgaagt ttcaagacag ggtcaccctg gccagggaga cgcccatcag cacagcctcc 240
atggagctgc gcggactgac atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcgtttac 300
ggttactctc gttggtctgg tttcgatctg tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc 360
tca 363
<210> 24
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 24
caggctgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 25
<211> 124
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Gly Thr Phe Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Gly Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly His Lys Val Tyr Lys Ser His Pro Thr Gly Gly Tyr Asp
100 105 110
Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 26
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Arg Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Asp Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 27
<211> 372
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 27
caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagcagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgccagg catctggata caccttcacc acttattata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta atggtggtgg cacattctac 180
gcacagaagt tccaggacag agtcaccatg accagggaca cgtccacggg cacagtctac 240
atggaactga gcagcctgag atctgacgac actgccgtgt attactgtgc gcgcggtcat 300
aaagtttaca aatctcatcc gactggtggt tacgatcgtt ggggtcaagg tactctggtg 360
accgtctcct ca 372
<210> 28
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 28
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagccg tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
tacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata ccagtagcag cactttagac 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 29
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser His Val Ala Trp Ser Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 30
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 31
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 31
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg attatcccta tctttggtac agcaaaatat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgctctcat 300
gttgcttggt ctctgctgga ttactggggt caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 357
<210> 32
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 32
tcctatgagc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatcctggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggtgtggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 33
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 33
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Gln Ser Tyr Lys Gly Ser Gln Ser Asp Ser Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 34
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 34
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 35
<211> 360
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 35
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agctatgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgctaccag 300
tcttacaaag gttctcagtc tgattcttgg ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 360
<210> 36
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 36
cagtctgtgt tgacgcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaattatg tatactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 37
<211> 127
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Ser Lys Lys Trp Ser Gly Glu Lys Trp Arg Arg Glu
100 105 110
Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 38
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 38
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Arg Ser
85 90 95
Ser Thr Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 39
<211> 381
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 39
gaggtccagc tggtacagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtggt 300
tctaaaaaat ggtctggtga aaaatggcgt cgtgaaaact tcgattactg gggtcaaggt 360
actctggtga ccgtctcctc a 381
<210> 40
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 40
caatctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagaagcag cactgaggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 41
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 41
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Glu Tyr Thr Phe Thr Arg His
20 25 30
Ile Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Val Arg Val Thr Phe Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Pro Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 42
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 42
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 43
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 43
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg cttctgaata caccttcact aggcatattc tacattgggt gcgccaggct 120
cccggacaaa gccttgagtg gatgggatgg atcaacccag gcaatggtaa tacaaaatat 180
tcacagaagt tccaggtcag agtcaccttt accagggaca catccgcgag cacagtctat 240
atggagctga gcagcctgag atctgaagac acggccgtgt attactgtgc gcgcctgccg 300
gatcagtggg gtcaaggtac tctggtgacc gtctcctca 339
<210> 44
<211> 330
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 44
tcctatgtgc tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccgggcagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcagctc caacatcgga agtaatactg taaactggta ccagcagctc 120
ccaggaacgg cccccaaact cctcatctat aggaataatc agcggccctc aggggtccct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacc tcagcctccc tggccatcag tgggctccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca gcatgggatg acagcctgag tggtctcttc 300
ggaactggga ccaaggtcac cgtcctaggt 330
<210> 45
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Gln Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 46
<211> 112
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 46
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Phe Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Lys Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Asn Asn Phe Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 47
<211> 342
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 47
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttggt gattatggca tgagctgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctctggt attaattgga atggtggtag cacaggttat 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctctaaa 300
caggattact ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct ca 342
<210> 48
<211> 336
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 48
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag ggacgctggt ggttataatt atttctcctg gtaccaacaa 120
cacccaggca aagcccccaa actcctgatt tatgaggtca ctaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aagacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgacg atgaggctgt atattactgc agctcatatg gaggcagcaa caactttcgg 300
gtgttcggcg gagggaccaa gctgaccgtc ctaggt 336
<210> 49
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Asn Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Thr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 50
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 50
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly
<210> 51
<211> 342
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 51
gaggtgcagc tggtggagac tgggggaaac ttggtacagc cgggggcgtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cagctttagt ggcactgcca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggtctcgact attagtagta ctgggcgtag cacatactac 180
agagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggccgtat attactgtgc gcgcgtttct 300
ttcgattact ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct ca 342
<210> 52
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 52
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60
tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg gcaggttatg atgtacactg gtaccagcag 120
cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaatcggcc ctcaggggtc 180
cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc cagtcctatg acagcagcct gagtggctcc 300
tacgtcttcg gaactgggac caagctgacc gtcctaggt 339
<210> 53
<211> 118
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 53
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Phe Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 54
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 55
<211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 55
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagcc tttgtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg gcctggaatg ggtctcgact attagtggtc gtggtcgtag cacattctac 180
gcagactccg tgaagggccg gtttaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctatat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctactac 300
catgctggtg ctttcgatct gtggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 56
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 56
cagtctgtcg tgacgcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtt 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactttggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 57
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 57
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Gly Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 58
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 58
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 59
<211> 342
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 59
cagatgcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttaac agatatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gccttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa ttcacactat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacggg cacagcctat 240
atggagctga ggaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcatggct 300
tacgattctt ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct ca 342
<210> 60
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 60
cagtctgtgt tgacgcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gctcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcaa tgacgttggt gcttataagt atgtctcctg gtatcaacag 120
tacccaggca aagcccccaa actcatactt tatgatgtct ttaagcggcc ctcaggggtc 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctgac aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc ttctcactta caagcagtaa cacttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 61
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 61
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 62
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 62
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ser Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 63
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 63
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgcggttac 300
ggtaaagctt acgatcagtg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 64
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 64
cagtctgtgt tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccggacagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcaggtc caacgtagga ggtaattatg tattttggta ccagcaagtc 120
cccggagcga cccccaaact cctcatctat aggagtaatc agcggccctc gggggtccct 180
gaccgattcg ctggctccaa gtctggctcc tcagcctccc tggccatcag tggactccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acagcctgag tggttttgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggt 333
<210> 65
<211> 119
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 65
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Arg Ser His
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 66
<211> 110
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 66
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 67
<211> 357
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 67
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ctggtccacc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaga agccatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagtg atagtactta cacatactac 180
gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctctggt 300
ggtcagtgga aatactacga ttactggggt caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 357
<210> 68
<211> 330
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 68
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga 120
caggcccctg tacttgtcat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actattactg taactcccgg gacagcagtg gtaacccccc tgtggtattc 300
ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggt 330
<210> 69
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val
115
<210> 70
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 70
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Phe Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 71
<211> 354
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 71
gaggtgcagc tggtggagtc cgggggaggc ttgatacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact attaatggtc gtggtagtag tacaatctac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acagccacgt attactgtgc gcgctacatc 300
tctcgtggtc tgggtgattc ttggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctca 354
<210> 72
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 72
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcaatg tctgcggccc caggacagca agtcaccatc 60
tcctgctctg gaggcaactc caacattgag agaaattatg tatcctggta cctccagctc 120
cctggaacag cccccaaact cgtcattttt gacaatgata ggcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag aggttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 73
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 73
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 74
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 74
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 75
<211> 348
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 75
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgctggt 300
atgggtatgg atacttgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctca 348
<210> 76
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 76
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatatg caggcagcaa caccttggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 77
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Ser Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Gly Gly Gln Ala Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 78
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ala Gly Arg
85 90 95
Lys Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 79
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 79
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaggg cttctggata caccttcacc gcctactctt tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta gcagtggtgg cgcagtttat 180
gcacagaaat ttcagggtag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gtggcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcaacgtt 300
ggtggtcagg ctgatgactg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 80
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 80
caatctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacattggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca ataagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctcgggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc gcctcatttg cgggcaggaa gacattggtc 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 81
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 81
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr
20 25 30
Ser Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala Val Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asn Val Gly Gly His Ala Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 82
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 82
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Thr Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Ser Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ala Gly Arg
85 90 95
Lys Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 83
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 83
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaaaaagc ctggggcctc agtgaaagtc 60
tcctgcaggg cttctggata caccttcacc gcctactctt tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcaacccta gcagtggtgg cgcagtttat 180
gcacagaaat ttcagggtag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcag cacagcctac 240
atggagctga gtggcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcaacgtt 300
ggtggtcacg ctgatgactg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 84
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 84
caatctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcac tgacattggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacac 120
cacccaagca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca ataagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctcgggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc gcctcatttg cgggcaggaa gacattggtc 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 85
<211> 129
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 85
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Asn Asn Gly His Thr Lys Ser Ala Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Asp Arg Val Ala Met Ala Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Lys Phe Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr His His Gln Met Gln Arg Tyr Tyr Lys Ala Thr
100 105 110
Ser Val Tyr Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 86
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 86
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 87
<211> 387
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 87
caggtccagc tggtgcagtc tggaggtgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggttt cacctttaac acctatggca tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgcta acaatggtca cacaaagtct 180
gcacagaggt tccaggacag agtcgccatg gccacagaca catccacgag cacggcctac 240
atggagctga ggagcctgaa atttgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtggt 300
taccatcatc agatgcagcg gtactacaaa gctacttctg tttactctga ttactggggt 360
caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 387
<210> 88
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 88
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcagtg tctgcggccc caggacagaa ggtcaccatc 60
tcctgctctg gaagcagctc caacattggg aataattatg tatcctggta ccagcaactc 120
ccaggaacag cccccaaact cctcatttat gacaataata agcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tctgccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag tggtgtggta 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 89
<211> 116
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 89
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Ser Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 90
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 90
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 91
<211> 348
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 91
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag ctcaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcgctggt 300
atgggtatgg atacttgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctca 348
<210> 92
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 92
cagtctgccc tgactcagcc tccctccgcg tccgggtctc ctggacagtc agtcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 120
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgaggtca gtaagcggcc ctcaggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgagg atgaggctga ttattactgc agctcatatg caggcagcaa caccttggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 93
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 93
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Val Ile Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 94
<211> 111
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 94
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Val
85 90 95
Asn Asn Leu Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
<210> 95
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 95
caggtgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac actgccgtgt attactgtgc gcgcgacgtt 300
atctctggtt tcgattcttg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 96
<211> 333
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 96
cagtctgccc tgactcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacaa 120
tccccaggca aagcccccag actcatgatt tatggggtca gtaagcggcc ctctggggtc 180
cctgatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccgt ctctgggctc 240
caggctgaag atgaggctga ttattactgc agctcatatg caggcgtcaa caatttaatg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggt 333
<210> 97
<211> 345
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 97
Met Tyr Lys Asp Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys
1 5 10 15
Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly Ile Ile Leu Glu Ser Leu Ala Ile Leu
20 25 30
Gly Ile Val Val Thr Ile Leu Leu Leu Leu Ala Phe Leu Phe Leu Met
35 40 45
Arg Lys Ile Gln Asp Cys Ser Gln Trp Asn Val Leu Pro Thr Gln Leu
50 55 60
Leu Phe Leu Leu Ser Val Leu Gly Leu Phe Gly Leu Ala Phe Ala Phe
65 70 75 80
Ile Ile Glu Leu Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu Phe
85 90 95
Gly Val Leu Phe Ala Leu Cys Phe Ser Cys Leu Leu Ala His Ala Ser
100 105 110
Asn Leu Val Lys Leu Val Arg Gly Cys Val Ser Phe Ser Trp Thr Thr
115 120 125
Ile Leu Cys Ile Ala Ile Gly Cys Ser Leu Leu Gln Ile Ile Ile Ala
130 135 140
Thr Glu Tyr Val Thr Leu Ile Met Thr Arg Gly Met Met Phe Val Asn
145 150 155 160
Met Thr Pro Cys Gln Leu Asn Val Asp Phe Val Val Leu Leu Val Tyr
165 170 175
Val Leu Phe Leu Met Ala Leu Thr Phe Phe Val Ser Lys Ala Thr Phe
180 185 190
Cys Gly Pro Cys Glu Asn Trp Lys Gln His Gly Arg Leu Ile Phe Ile
195 200 205
Thr Val Leu Phe Ser Ile Ile Ile Trp Val Val Trp Ile Ser Met Leu
210 215 220
Leu Arg Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro
225 230 235 240
Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu
245 250 255
Tyr Ile Val Pro Glu Leu Cys Ile Leu Tyr Arg Ser Cys Arg Gln Glu
260 265 270
Cys Pro Leu Gln Gly Asn Ala Cys Pro Val Thr Ala Tyr Gln His Ser
275 280 285
Phe Gln Val Glu Asn Gln Glu Leu Ser Arg Ala Arg Asp Ser Asp Gly
290 295 300
Ala Glu Glu Asp Val Ala Leu Thr Ser Tyr Gly Thr Pro Ile Gln Pro
305 310 315 320
Gln Thr Val Asp Pro Thr Gln Glu Cys Phe Ile Pro Gln Ala Lys Leu
325 330 335
Ser Pro Gln Gln Asp Ala Gly Gly Val
340 345
<210> 98
<211> 21
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 98
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Glu Met Ala
20
<210> 99
<211> 63
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
олигонуклеотид
<400> 99
tctagaggtg gtggtggtag cggcggcggc ggctctggtg gtggtggatc cctcgagatg 60
gcc 63
<210> 100
<211> 252
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 100
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Pro Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Asn Tyr
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Phe Cys Gly Thr Trp Asp Gly Ser Leu
85 90 95
Ser Ala His Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Arg Val Ser Cys Thr Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Val Ile Asn Pro Asn Ala Gly Ser Thr Arg Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Ser Thr Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Asp Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Met Tyr Arg Ser Leu Leu Phe Tyr Asp
225 230 235 240
Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 101
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 101
Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys
1 5 10 15
Thr Val Ser Ile Ser Cys Thr Arg Thr Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala
20 25 30
Tyr Val Gln Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala Pro Thr Thr Val
35 40 45
Ile Tyr Asp Asp Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Ile Asp Lys Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly
65 70 75 80
Leu Lys Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Tyr
85 90 95
Asp Ser Ser Asn Val Leu Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145 150 155 160
Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr Tyr
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
195 200 205
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 102
<211> 248
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 102
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Val Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ser Arg Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met
115 120 125
Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
130 135 140
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Thr Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
165 170 175
Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser
180 185 190
Val Arg Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu
195 200 205
Ser Leu Gln Leu Asn Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
210 215 220
Cys Ala Arg Ser Met Ser Thr Ala Trp Gly Tyr Asp Glu Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 103
<211> 253
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 103
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Phe Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Val Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Thr
85 90 95
Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Arg Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly
225 230 235 240
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 104
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<220>
<221> MOD_RES
<222> (37)..(37)
<223> Любая аминокислота
<400> 104
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Leu Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Ile Gly Thr Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Xaa Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn His Gln Trp Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Asn Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr Lys Ser Ser Lys Asp His Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 105
<211> 253
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 105
Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Gln
130 135 140
Arg Pro Gly Ala Ser Val Arg Val Ser Cys Lys Ala Ile Ala Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Asp Tyr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Pro Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Lys Ser Gly Arg Thr Gln Tyr
180 185 190
Ala Pro Lys Phe Gln Asp Arg Val Thr Leu Ala Arg Glu Thr Pro Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Ser Met Glu Leu Arg Gly Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Tyr Gly Tyr Ser Arg Trp Ser Gly Phe
225 230 235 240
Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 106
<211> 256
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 106
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Arg Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Asp Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Gln Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Gln Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Thr Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Asn Gly Gly Gly Thr Phe Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Asp Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Gly Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly His Lys Val Tyr Lys Ser His Pro Thr
225 230 235 240
Gly Gly Tyr Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250 255
<210> 107
<211> 251
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 107
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Lys Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser His Val Ala Trp Ser Leu Leu Asp Tyr
225 230 235 240
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 108
<211> 252
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 108
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Gln Ser Tyr Lys Gly Ser Gln Ser Asp
225 230 235 240
Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 109
<211> 259
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 109
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Arg Ser
85 90 95
Ser Thr Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Ser Lys Lys Trp Ser Gly Glu Lys
225 230 235 240
Trp Arg Arg Glu Asn Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser
<210> 110
<211> 244
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 110
Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn
20 25 30
Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Leu Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser Arg
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu
115 120 125
Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys
130 135 140
Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Glu Tyr Thr Phe
145 150 155 160
Thr Arg His Ile Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Ser Leu
165 170 175
Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Gly Asn Gly Asn Thr Lys Tyr Ser
180 185 190
Gln Lys Phe Gln Val Arg Val Thr Phe Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser
195 200 205
Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Leu Pro Asp Gln Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
225 230 235 240
Thr Val Ser Ser
<210> 111
<211> 247
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 111
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Phe Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Lys Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser
85 90 95
Asn Asn Phe Arg Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val
130 135 140
Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
145 150 155 160
Thr Phe Gly Asp Tyr Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys
165 170 175
Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly
180 185 190
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala
195 200 205
Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
210 215 220
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Lys Gln Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
225 230 235 240
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 112
<211> 248
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 112
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser
85 90 95
Leu Ser Gly Ser Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Asn
130 135 140
Leu Val Gln Pro Gly Ala Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
145 150 155 160
Phe Ser Phe Ser Gly Thr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly
165 170 175
Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr
180 185 190
Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
195 200 205
Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp
210 215 220
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 113
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 113
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Asp Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Thr Ser Ser
85 90 95
Ser Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Ala Phe Val
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Ser Tyr Ala Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr Phe Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 114
<211> 246
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 114
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr
20 25 30
Lys Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Ile Leu Tyr Asp Val Phe Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Asp Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Phe Ser Leu Thr Ser Ser
85 90 95
Asn Thr Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Asn Arg Tyr Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser His Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Leu Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Gly Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 115
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 115
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln
1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn
20 25 30
Tyr Val Phe Trp Tyr Gln Gln Val Pro Gly Ala Thr Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Arg Ser Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ala
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Ser Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg
65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Phe Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
130 135 140
Lys Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Asp Tyr Tyr Met Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile Tyr Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
195 200 205
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 116
<211> 250
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 116
Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln
1 5 10 15
Thr Val Arg Ile Thr Cys Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro
85 90 95
Pro Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu
115 120 125
Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val His
130 135 140
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
145 150 155 160
Arg Ser His Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
165 170 175
Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala
180 185 190
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn
195 200 205
Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
210 215 220
Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245 250
<210> 117
<211> 248
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 117
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Met Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Gln Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Gly Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Leu Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Val
35 40 45
Ile Phe Asp Asn Asp Arg Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Arg Gly Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Ile
130 135 140
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Ser Asn Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr Ile Tyr
180 185 190
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys
195 200 205
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser Trp
225 230 235 240
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
245
<210> 118
<211> 248
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 118
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 119
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 119
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ala Gly Arg
85 90 95
Lys Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ala Tyr Ser Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala Val Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Val Gly Gly Gln Ala Asp Asp Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 120
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 120
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Thr Asp Ile Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln His His Pro Ser Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Asn Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Phe Ala Gly Arg
85 90 95
Lys Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Arg Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ala Tyr Ser Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala Val Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Gly Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asn Val Gly Gly His Ala Asp Asp Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 121
<211> 261
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 121
Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn
20 25 30
Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln
65 70 75 80
Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu
85 90 95
Ser Gly Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr
145 150 155 160
Phe Asn Thr Tyr Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Trp Ile Ser Ala Asn Asn Gly His Thr Lys Ser
180 185 190
Ala Gln Arg Phe Gln Asp Arg Val Ala Met Ala Thr Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Arg Ser Leu Lys Phe Asp Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gly Tyr His His Gln Met Gln Arg Tyr
225 230 235 240
Tyr Lys Ala Thr Ser Val Tyr Ser Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
245 250 255
Val Thr Val Ser Ser
260
<210> 122
<211> 248
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 122
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Glu Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser
85 90 95
Asn Thr Leu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Ser Ser Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr Trp Gly Gln
225 230 235 240
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 123
<211> 249
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 123
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Ser Pro Gly Lys Ala Pro Arg Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Val
85 90 95
Asn Asn Leu Met Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser
100 105 110
Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
115 120 125
Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys
130 135 140
Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr
145 150 155 160
Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly
165 170 175
Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr
180 185 190
Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr
195 200 205
Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala
210 215 220
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Val Ile Ser Gly Phe Asp Ser Trp Gly
225 230 235 240
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 124
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 124
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 125
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 125
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 126
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 126
Ala Arg Gly Met Tyr Arg Ser Leu Leu Phe Tyr Asp Pro
1 5 10
<210> 127
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 127
Arg Ser Asn Val Gly Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 128
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 128
Asp Asn Asn
1
<210> 129
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 129
Gly Thr Trp Asp Gly Ser Leu Ser Ala His Val
1 5 10
<210> 130
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 130
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 131
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 131
Ile Ser Gly Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 132
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 132
Ala Arg Gly Ser Val Arg Tyr Thr Asp Ile
1 5 10
<210> 133
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 133
Ser Gly Ala Ile Ala Gly Ala Tyr
1 5
<210> 134
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 134
Asp Asp Asn
1
<210> 135
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 135
Gln Ser Tyr Asp Tyr Asp Ser Ser Asn Val Leu
1 5 10
<210> 136
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 136
Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp
1 5
<210> 137
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 137
Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys
1 5
<210> 138
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 138
Ala Arg Ser Met Ser Thr Ala Val
1 5
<210> 139
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 139
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 140
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 140
Ala Ala Ser
1
<210> 141
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 141
Gln Gln Ser Tyr Ser Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 142
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 142
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 143
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 143
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 144
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 144
Ala Arg Gly Ser Ser Arg Trp Gly Gly Trp Thr Gly Asp Tyr
1 5 10
<210> 145
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 145
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Phe
1 5
<210> 146
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 146
Asp Val Ser
1
<210> 147
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 147
Ser Ser Tyr Thr Ser Thr Arg Thr Val Ile Phe Ala Gly Gly Thr Lys
1 5 10 15
Val Thr Val Leu
20
<210> 148
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 148
Gly Ser Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 149
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 149
Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 150
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 150
Ala Arg Tyr Tyr Lys Ser Lys Asp His
1 5
<210> 151
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 151
Arg Ser Asn Ile Gly Thr Asn Tyr
1 5
<210> 152
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 152
Arg Asn His
1
<210> 153
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 153
Ala Ala Trp Asp Asp Asn Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 154
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 154
Ala Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 155
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 155
Ile Asn Pro Lys Ser Gly Arg Thr
1 5
<210> 156
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 156
Ala Arg Val Tyr Gly Tyr Ser Arg Trp Ser Gly Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 157
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 157
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 158
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 158
Arg Asn Asn
1
<210> 159
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 159
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 160
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 160
Gly Tyr Thr Phe Thr Thr Tyr Tyr
1 5
<210> 161
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 161
Ile Asn Pro Asn Gly Gly Gly Thr
1 5
<210> 162
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 162
Ala Arg Gly His Lys Val Tyr Lys Ser His Pro Thr Gly Gly Tyr Asp
1 5 10 15
Arg
<210> 163
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 163
Ser Arg Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 164
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 164
Glu Val Ser
1
<210> 165
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 165
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Asp
1 5 10
<210> 166
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 166
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 167
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 167
Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala
1 5
<210> 168
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 168
Ala Arg Ser His Val Ala Trp Ser Leu Leu Asp Tyr
1 5 10
<210> 169
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 169
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 170
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 170
Arg Asn Asn
1
<210> 171
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 171
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 172
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 172
Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 173
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 173
Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 174
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 174
Ala Arg Tyr Gln Ser Tyr Lys Gly Ser Gln Ser Asp Ser
1 5 10
<210> 175
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 175
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 176
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 176
Arg Asn Asn
1
<210> 177
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 177
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Trp Val
1 5 10
<210> 178
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 178
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 179
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 179
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 180
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 180
Ala Arg Gly Gly Ser Lys Lys Trp Ser Gly Glu Lys Trp Arg Arg Glu
1 5 10 15
Asn Phe Asp Tyr
20
<210> 181
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 181
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 182
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 182
Asp Val Ser
1
<210> 183
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 183
Ser Ser Tyr Thr Arg Ser Ser Thr Glu Val
1 5 10
<210> 184
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 184
Glu Tyr Thr Phe Thr Arg His Ile
1 5
<210> 185
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 185
Ile Asn Pro Gly Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 186
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 186
Ala Arg Leu Pro Asp Gln
1 5
<210> 187
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 187
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 188
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 188
Arg Asn Asn
1
<210> 189
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 189
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Leu
1 5 10
<210> 190
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 190
Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Gly
1 5
<210> 191
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 191
Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 192
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 192
Ala Arg Ser Lys Gln Asp Tyr
1 5
<210> 193
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 193
Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 194
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 194
Glu Val Thr
1
<210> 195
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 195
Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Asn Asn Phe Arg Val
1 5 10
<210> 196
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 196
Gly Phe Ser Phe Ser Gly Thr Ala
1 5
<210> 197
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 197
Ile Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 198
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 198
Ala Arg Val Ser Phe Asp Tyr
1 5
<210> 199
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 199
Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp
1 5
<210> 200
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 200
Gly Asn Ser
1
<210> 201
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 201
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Tyr Val
1 5 10
<210> 202
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 202
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 203
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 203
Ile Ser Gly Arg Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 204
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 204
Ala Arg Tyr Tyr His Ala Gly Ala Phe Asp Leu
1 5 10
<210> 205
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 205
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 206
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 206
Asp Val Ser
1
<210> 207
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 207
Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Leu Val
1 5 10
<210> 208
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 208
Gly Tyr Thr Phe Asn Arg Tyr Ala
1 5
<210> 209
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 209
Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Ser
1 5
<210> 210
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 210
Ala Arg Met Ala Tyr Asp Ser
1 5
<210> 211
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 211
Ser Asn Asp Val Gly Ala Tyr Lys Tyr
1 5
<210> 212
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 212
Asp Val Phe
1
<210> 213
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 213
Phe Ser Leu Thr Ser Ser Asn Thr Tyr Val
1 5 10
<210> 214
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 214
Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 215
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 215
Ile Ser Ser Ser Gly Ser Thr Ile
1 5
<210> 216
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 216
Ala Arg Gly Tyr Gly Lys Ala Tyr Asp Gln
1 5 10
<210> 217
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 217
Arg Ser Asn Val Gly Gly Asn Tyr
1 5
<210> 218
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 218
Arg Ser Asn
1
<210> 219
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 219
Ala Thr Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Phe Val
1 5 10
<210> 220
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 220
Gly Phe Thr Phe Arg Ser His Ser
1 5
<210> 221
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 221
Ile Ser Ser Asp Ser Thr Tyr Thr
1 5
<210> 222
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 222
Ala Arg Ser Gly Gly Gln Trp Lys Tyr Tyr Asp Tyr
1 5 10
<210> 223
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 223
Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 224
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 224
Gly Lys Asn
1
<210> 225
<211> 12
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 225
Asn Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn Pro Pro Val Val
1 5 10
<210> 226
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 226
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 227
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 227
Ile Asn Gly Arg Gly Ser Ser Thr
1 5
<210> 228
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 228
Ala Arg Tyr Ile Ser Arg Gly Leu Gly Asp Ser
1 5 10
<210> 229
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 229
Asn Ser Asn Ile Glu Arg Asn Tyr
1 5
<210> 230
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 230
Asp Asn Asp
1
<210> 231
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 231
Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Arg Gly Trp Val
1 5 10
<210> 232
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 232
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 233
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 233
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 234
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 234
Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr
1 5
<210> 235
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 235
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 236
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 236
Glu Val Ser
1
<210> 237
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 237
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Thr Leu Val
1 5 10
<210> 238
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 238
Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr Ser
1 5
<210> 239
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 239
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala
1 5
<210> 240
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 240
Ala Arg Asn Val Gly Gly Gln Ala Asp Asp
1 5 10
<210> 241
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 241
Ser Ser Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 242
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 242
Glu Val Asn
1
<210> 243
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 243
Ala Ser Phe Ala Gly Arg Lys Thr Leu Val
1 5 10
<210> 244
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 244
Gly Tyr Thr Phe Thr Ala Tyr Ser
1 5
<210> 245
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 245
Ile Asn Pro Ser Ser Gly Gly Ala
1 5
<210> 246
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 246
Ala Arg Asn Val Gly Gly His Ala Asp Asp
1 5 10
<210> 247
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 247
Ser Thr Asp Ile Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 248
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 248
Glu Val Asn
1
<210> 249
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 249
Ala Ser Phe Ala Gly Arg Lys Thr Leu Val
1 5 10
<210> 250
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 250
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Gly
1 5
<210> 251
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 251
Ile Ser Ala Asn Asn Gly His Thr
1 5
<210> 252
<211> 22
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 252
Ala Arg Gly Gly Tyr His His Gln Met Gln Arg Tyr Tyr Lys Ala Thr
1 5 10 15
Ser Val Tyr Ser Asp Tyr
20
<210> 253
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 253
Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr
1 5
<210> 254
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 254
Asp Asn Asn
1
<210> 255
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 255
Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Ser Gly Val Val
1 5 10
<210> 256
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 256
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 257
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 257
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Ser
1 5
<210> 258
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 258
Ala Arg Ala Gly Met Gly Met Asp Thr
1 5
<210> 259
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 259
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 260
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 260
Glu Val Ser
1
<210> 261
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 261
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Asn Thr Leu Val
1 5 10
<210> 262
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 262
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 263
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 263
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 264
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 264
Ala Arg Asp Val Ile Ser Gly Phe Asp Ser
1 5 10
<210> 265
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 265
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 266
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 266
Gly Val Ser
1
<210> 267
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 267
Ser Ser Tyr Ala Gly Val Asn Asn Leu Met
1 5 10
<210> 268
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 268
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg
20
<210> 269
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
олигонуклеотид
<400> 269
atggctctcc cagtgactgc cctactgctt cccctagcgc ttctcctgca tgcagctcgt 60
<210> 270
<211> 220
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 270
Met Leu Arg Leu Leu Leu Ala Leu Asn Leu Phe Pro Ser Ile Gln Val
1 5 10 15
Thr Gly Asn Lys Ile Leu Val Lys Gln Ser Pro Met Leu Val Ala Tyr
20 25 30
Asp Asn Ala Val Asn Leu Ser Cys Lys Tyr Ser Tyr Asn Leu Phe Ser
35 40 45
Arg Glu Phe Arg Ala Ser Leu His Lys Gly Leu Asp Ser Ala Val Glu
50 55 60
Val Cys Val Val Tyr Gly Asn Tyr Ser Gln Gln Leu Gln Val Tyr Ser
65 70 75 80
Lys Thr Gly Phe Asn Cys Asp Gly Lys Leu Gly Asn Glu Ser Val Thr
85 90 95
Phe Tyr Leu Gln Asn Leu Tyr Val Asn Gln Thr Asp Ile Tyr Phe Cys
100 105 110
Lys Ile Glu Val Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Leu Asp Asn Glu Lys Ser
115 120 125
Asn Gly Thr Ile Ile His Val Lys Gly Lys His Leu Cys Pro Ser Pro
130 135 140
Leu Phe Pro Gly Pro Ser Lys Pro Phe Trp Val Leu Val Val Val Gly
145 150 155 160
Gly Val Leu Ala Cys Tyr Ser Leu Leu Val Thr Val Ala Phe Ile Ile
165 170 175
Phe Trp Val Arg Ser Lys Arg Ser Arg Leu Leu His Ser Asp Tyr Met
180 185 190
Asn Met Thr Pro Arg Arg Pro Gly Pro Thr Arg Lys His Tyr Gln Pro
195 200 205
Tyr Ala Pro Pro Arg Asp Phe Ala Ala Tyr Arg Ser
210 215 220
<210> 271
<211> 321
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 271
attgaagtta tgtatcctcc tccttaccta gacaatgaga agagcaatgg aaccattatc 60
catgtgaaag ggaaacacct ttgtccaagt cccctatttc ccggaccttc taagcccttt 120
tgggtgctgg tggtggttgg tggagtcctg gcttgctata gcttgctagt aacagtggcc 180
tttattattt tctgggtgag gagtaagagg agcaggctcc tgcacagtga ctacatgaac 240
atgactcccc gccgccccgg gcccacccgc aagcattacc agccctatgc cccaccacgc 300
gacttcgcag cctatcgctc c 321
<210> 272
<211> 163
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 272
Met Lys Trp Lys Ala Leu Phe Thr Ala Ala Ile Leu Gln Ala Gln Leu
1 5 10 15
Pro Ile Thr Glu Ala Gln Ser Phe Gly Leu Leu Asp Pro Lys Leu Cys
20 25 30
Tyr Leu Leu Asp Gly Ile Leu Phe Ile Tyr Gly Val Ile Leu Thr Ala
35 40 45
Leu Phe Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr
50 55 60
Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg
65 70 75 80
Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met
85 90 95
Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu
100 105 110
Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys
115 120 125
Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu
130 135 140
Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu His Met Gln Ala Leu
145 150 155 160
Pro Pro Arg
<210> 273
<211> 339
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 273
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 60
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 120
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 180
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 240
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 300
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaa 339
<210> 274
<211> 255
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 274
Met Gly Asn Ser Cys Tyr Asn Ile Val Ala Thr Leu Leu Leu Val Leu
1 5 10 15
Asn Phe Glu Arg Thr Arg Ser Leu Gln Asp Pro Cys Ser Asn Cys Pro
20 25 30
Ala Gly Thr Phe Cys Asp Asn Asn Arg Asn Gln Ile Cys Ser Pro Cys
35 40 45
Pro Pro Asn Ser Phe Ser Ser Ala Gly Gly Gln Arg Thr Cys Asp Ile
50 55 60
Cys Arg Gln Cys Lys Gly Val Phe Arg Thr Arg Lys Glu Cys Ser Ser
65 70 75 80
Thr Ser Asn Ala Glu Cys Asp Cys Thr Pro Gly Phe His Cys Leu Gly
85 90 95
Ala Gly Cys Ser Met Cys Glu Gln Asp Cys Lys Gln Gly Gln Glu Leu
100 105 110
Thr Lys Lys Gly Cys Lys Asp Cys Cys Phe Gly Thr Phe Asn Asp Gln
115 120 125
Lys Arg Gly Ile Cys Arg Pro Trp Thr Asn Cys Ser Leu Asp Gly Lys
130 135 140
Ser Val Leu Val Asn Gly Thr Lys Glu Arg Asp Val Val Cys Gly Pro
145 150 155 160
Ser Pro Ala Asp Leu Ser Pro Gly Ala Ser Ser Val Thr Pro Pro Ala
165 170 175
Pro Ala Arg Glu Pro Gly His Ser Pro Gln Ile Ile Ser Phe Phe Leu
180 185 190
Ala Leu Thr Ser Thr Ala Leu Leu Phe Leu Leu Phe Phe Leu Thr Leu
195 200 205
Arg Phe Ser Val Val Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe
210 215 220
Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly
225 230 235 240
Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu
245 250 255
<210> 275
<211> 277
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 275
Met Cys Val Gly Ala Arg Arg Leu Gly Arg Gly Pro Cys Ala Ala Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Gly Leu Gly Leu Ser Thr Val Thr Gly Leu His Cys Val
20 25 30
Gly Asp Thr Tyr Pro Ser Asn Asp Arg Cys Cys His Glu Cys Arg Pro
35 40 45
Gly Asn Gly Met Val Ser Arg Cys Ser Arg Ser Gln Asn Thr Val Cys
50 55 60
Arg Pro Cys Gly Pro Gly Phe Tyr Asn Asp Val Val Ser Ser Lys Pro
65 70 75 80
Cys Lys Pro Cys Thr Trp Cys Asn Leu Arg Ser Gly Ser Glu Arg Lys
85 90 95
Gln Leu Cys Thr Ala Thr Gln Asp Thr Val Cys Arg Cys Arg Ala Gly
100 105 110
Thr Gln Pro Leu Asp Ser Tyr Lys Pro Gly Val Asp Cys Ala Pro Cys
115 120 125
Pro Pro Gly His Phe Ser Pro Gly Asp Asn Gln Ala Cys Lys Pro Trp
130 135 140
Thr Asn Cys Thr Leu Ala Gly Lys His Thr Leu Gln Pro Ala Ser Asn
145 150 155 160
Ser Ser Asp Ala Ile Cys Glu Asp Arg Asp Pro Pro Ala Thr Gln Pro
165 170 175
Gln Glu Thr Gln Gly Pro Pro Ala Arg Pro Ile Thr Val Gln Pro Thr
180 185 190
Glu Ala Trp Pro Arg Thr Ser Gln Gly Pro Ser Thr Arg Pro Val Glu
195 200 205
Val Pro Gly Gly Arg Ala Val Ala Ala Ile Leu Gly Leu Gly Leu Val
210 215 220
Leu Gly Leu Leu Gly Pro Leu Ala Ile Leu Leu Ala Leu Tyr Leu Leu
225 230 235 240
Arg Arg Asp Gln Arg Leu Pro Pro Asp Ala His Lys Pro Pro Gly Gly
245 250 255
Gly Ser Phe Arg Thr Pro Ile Gln Glu Glu Gln Ala Asp Ala His Ser
260 265 270
Thr Leu Ala Lys Ile
275
<210> 276
<211> 199
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 276
Met Lys Ser Gly Leu Trp Tyr Phe Phe Leu Phe Cys Leu Arg Ile Lys
1 5 10 15
Val Leu Thr Gly Glu Ile Asn Gly Ser Ala Asn Tyr Glu Met Phe Ile
20 25 30
Phe His Asn Gly Gly Val Gln Ile Leu Cys Lys Tyr Pro Asp Ile Val
35 40 45
Gln Gln Phe Lys Met Gln Leu Leu Lys Gly Gly Gln Ile Leu Cys Asp
50 55 60
Leu Thr Lys Thr Lys Gly Ser Gly Asn Thr Val Ser Ile Lys Ser Leu
65 70 75 80
Lys Phe Cys His Ser Gln Leu Ser Asn Asn Ser Val Ser Phe Phe Leu
85 90 95
Tyr Asn Leu Asp His Ser His Ala Asn Tyr Tyr Phe Cys Asn Leu Ser
100 105 110
Ile Phe Asp Pro Pro Pro Phe Lys Val Thr Leu Thr Gly Gly Tyr Leu
115 120 125
His Ile Tyr Glu Ser Gln Leu Cys Cys Gln Leu Lys Phe Trp Leu Pro
130 135 140
Ile Gly Cys Ala Ala Phe Val Val Val Cys Ile Leu Gly Cys Ile Leu
145 150 155 160
Ile Cys Trp Leu Thr Lys Lys Lys Tyr Ser Ser Ser Val His Asp Pro
165 170 175
Asn Gly Glu Tyr Met Phe Met Arg Ala Val Asn Thr Ala Lys Lys Ser
180 185 190
Arg Leu Thr Asp Val Thr Leu
195
<210> 277
<211> 223
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 277
Met Ala Cys Leu Gly Phe Gln Arg His Lys Ala Gln Leu Asn Leu Ala
1 5 10 15
Thr Arg Thr Trp Pro Cys Thr Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Ile Pro
20 25 30
Val Phe Cys Lys Ala Met His Val Ala Gln Pro Ala Val Val Leu Ala
35 40 45
Ser Ser Arg Gly Ile Ala Ser Phe Val Cys Glu Tyr Ala Ser Pro Gly
50 55 60
Lys Ala Thr Glu Val Arg Val Thr Val Leu Arg Gln Ala Asp Ser Gln
65 70 75 80
Val Thr Glu Val Cys Ala Ala Thr Tyr Met Met Gly Asn Glu Leu Thr
85 90 95
Phe Leu Asp Asp Ser Ile Cys Thr Gly Thr Ser Ser Gly Asn Gln Val
100 105 110
Asn Leu Thr Ile Gln Gly Leu Arg Ala Met Asp Thr Gly Leu Tyr Ile
115 120 125
Cys Lys Val Glu Leu Met Tyr Pro Pro Pro Tyr Tyr Leu Gly Ile Gly
130 135 140
Asn Gly Thr Gln Ile Tyr Val Ile Asp Pro Glu Pro Cys Pro Asp Ser
145 150 155 160
Asp Phe Leu Leu Trp Ile Leu Ala Ala Val Ser Ser Gly Leu Phe Phe
165 170 175
Tyr Ser Phe Leu Leu Thr Ala Val Ser Leu Ser Lys Met Leu Lys Lys
180 185 190
Arg Ser Pro Leu Thr Thr Gly Val Tyr Val Lys Met Pro Pro Thr Glu
195 200 205
Pro Glu Cys Glu Lys Gln Phe Gln Pro Tyr Phe Ile Pro Ile Asn
210 215 220
<210> 278
<211> 288
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 278
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 279
<211> 525
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 279
Met Trp Glu Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Phe Leu Gln Pro Leu Trp
1 5 10 15
Val Ala Pro Val Lys Pro Leu Gln Pro Gly Ala Glu Val Pro Val Val
20 25 30
Trp Ala Gln Glu Gly Ala Pro Ala Gln Leu Pro Cys Ser Pro Thr Ile
35 40 45
Pro Leu Gln Asp Leu Ser Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr Trp Gln
50 55 60
His Gln Pro Asp Ser Gly Pro Pro Ala Ala Ala Pro Gly His Pro Leu
65 70 75 80
Ala Pro Gly Pro His Pro Ala Ala Pro Ser Ser Trp Gly Pro Arg Pro
85 90 95
Arg Arg Tyr Thr Val Leu Ser Val Gly Pro Gly Gly Leu Arg Ser Gly
100 105 110
Arg Leu Pro Leu Gln Pro Arg Val Gln Leu Asp Glu Arg Gly Arg Gln
115 120 125
Arg Gly Asp Phe Ser Leu Trp Leu Arg Pro Ala Arg Arg Ala Asp Ala
130 135 140
Gly Glu Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala Leu Ser Cys
145 150 155 160
Arg Leu Arg Leu Arg Leu Gly Gln Ala Ser Met Thr Ala Ser Pro Pro
165 170 175
Gly Ser Leu Arg Ala Ser Asp Trp Val Ile Leu Asn Cys Ser Phe Ser
180 185 190
Arg Pro Asp Arg Pro Ala Ser Val His Trp Phe Arg Asn Arg Gly Gln
195 200 205
Gly Arg Val Pro Val Arg Glu Ser Pro His His His Leu Ala Glu Ser
210 215 220
Phe Leu Phe Leu Pro Gln Val Ser Pro Met Asp Ser Gly Pro Trp Gly
225 230 235 240
Cys Ile Leu Thr Tyr Arg Asp Gly Phe Asn Val Ser Ile Met Tyr Asn
245 250 255
Leu Thr Val Leu Gly Leu Glu Pro Pro Thr Pro Leu Thr Val Tyr Ala
260 265 270
Gly Ala Gly Ser Arg Val Gly Leu Pro Cys Arg Leu Pro Ala Gly Val
275 280 285
Gly Thr Arg Ser Phe Leu Thr Ala Lys Trp Thr Pro Pro Gly Gly Gly
290 295 300
Pro Asp Leu Leu Val Thr Gly Asp Asn Gly Asp Phe Thr Leu Arg Leu
305 310 315 320
Glu Asp Val Ser Gln Ala Gln Ala Gly Thr Tyr Thr Cys His Ile His
325 330 335
Leu Gln Glu Gln Gln Leu Asn Ala Thr Val Thr Leu Ala Ile Ile Thr
340 345 350
Val Thr Pro Lys Ser Phe Gly Ser Pro Gly Ser Leu Gly Lys Leu Leu
355 360 365
Cys Glu Val Thr Pro Val Ser Gly Gln Glu Arg Phe Val Trp Ser Ser
370 375 380
Leu Asp Thr Pro Ser Gln Arg Ser Phe Ser Gly Pro Trp Leu Glu Ala
385 390 395 400
Gln Glu Ala Gln Leu Leu Ser Gln Pro Trp Gln Cys Gln Leu Tyr Gln
405 410 415
Gly Glu Arg Leu Leu Gly Ala Ala Val Tyr Phe Thr Glu Leu Ser Ser
420 425 430
Pro Gly Ala Gln Arg Ser Gly Arg Ala Pro Gly Ala Leu Pro Ala Gly
435 440 445
His Leu Leu Leu Phe Leu Ile Leu Gly Val Leu Ser Leu Leu Leu Leu
450 455 460
Val Thr Gly Ala Phe Gly Phe His Leu Trp Arg Arg Gln Trp Arg Pro
465 470 475 480
Arg Arg Phe Ser Ala Leu Glu Gln Gly Ile His Pro Pro Gln Ala Gln
485 490 495
Ser Lys Ile Glu Glu Leu Glu Gln Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro
500 505 510
Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Pro Glu Gln Leu
515 520 525
<210> 280
<211> 370
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 280
Met Leu Gly Gln Val Val Thr Leu Ile Leu Leu Leu Leu Leu Lys Val
1 5 10 15
Tyr Gln Gly Lys Gly Cys Gln Gly Ser Ala Asp His Val Val Ser Ile
20 25 30
Ser Gly Val Pro Leu Gln Leu Gln Pro Asn Ser Ile Gln Thr Lys Val
35 40 45
Asp Ser Ile Ala Trp Lys Lys Leu Leu Pro Ser Gln Asn Gly Phe His
50 55 60
His Ile Leu Lys Trp Glu Asn Gly Ser Leu Pro Ser Asn Thr Ser Asn
65 70 75 80
Asp Arg Phe Ser Phe Ile Val Lys Asn Leu Ser Leu Leu Ile Lys Ala
85 90 95
Ala Gln Gln Gln Asp Ser Gly Leu Tyr Cys Leu Glu Val Thr Ser Ile
100 105 110
Ser Gly Lys Val Gln Thr Ala Thr Phe Gln Val Phe Val Phe Glu Ser
115 120 125
Leu Leu Pro Asp Lys Val Glu Lys Pro Arg Leu Gln Gly Gln Gly Lys
130 135 140
Ile Leu Asp Arg Gly Arg Cys Gln Val Ala Leu Ser Cys Leu Val Ser
145 150 155 160
Arg Asp Gly Asn Val Ser Tyr Ala Trp Tyr Arg Gly Ser Lys Leu Ile
165 170 175
Gln Thr Ala Gly Asn Leu Thr Tyr Leu Asp Glu Glu Val Asp Ile Asn
180 185 190
Gly Thr His Thr Tyr Thr Cys Asn Val Ser Asn Pro Val Ser Trp Glu
195 200 205
Ser His Thr Leu Asn Leu Thr Gln Asp Cys Gln Asn Ala His Gln Glu
210 215 220
Phe Arg Phe Trp Pro Phe Leu Val Ile Ile Val Ile Leu Ser Ala Leu
225 230 235 240
Phe Leu Gly Thr Leu Ala Cys Phe Cys Val Trp Arg Arg Lys Arg Lys
245 250 255
Glu Lys Gln Ser Glu Thr Ser Pro Lys Glu Phe Leu Thr Ile Tyr Glu
260 265 270
Asp Val Lys Asp Leu Lys Thr Arg Arg Asn His Glu Gln Glu Gln Thr
275 280 285
Phe Pro Gly Gly Gly Ser Thr Ile Tyr Ser Met Ile Gln Ser Gln Ser
290 295 300
Ser Ala Pro Thr Ser Gln Glu Pro Ala Tyr Thr Leu Tyr Ser Leu Ile
305 310 315 320
Gln Pro Ser Arg Lys Ser Gly Ser Arg Lys Arg Asn His Ser Pro Ser
325 330 335
Phe Asn Ser Thr Ile Tyr Glu Val Ile Gly Lys Ser Gln Pro Lys Ala
340 345 350
Gln Asn Pro Ala Arg Leu Ser Arg Lys Glu Leu Glu Asn Phe Asp Val
355 360 365
Tyr Ser
370
<210> 281
<211> 289
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 281
Met Lys Thr Leu Pro Ala Met Leu Gly Thr Gly Lys Leu Phe Trp Val
1 5 10 15
Phe Phe Leu Ile Pro Tyr Leu Asp Ile Trp Asn Ile His Gly Lys Glu
20 25 30
Ser Cys Asp Val Gln Leu Tyr Ile Lys Arg Gln Ser Glu His Ser Ile
35 40 45
Leu Ala Gly Asp Pro Phe Glu Leu Glu Cys Pro Val Lys Tyr Cys Ala
50 55 60
Asn Arg Pro His Val Thr Trp Cys Lys Leu Asn Gly Thr Thr Cys Val
65 70 75 80
Lys Leu Glu Asp Arg Gln Thr Ser Trp Lys Glu Glu Lys Asn Ile Ser
85 90 95
Phe Phe Ile Leu His Phe Glu Pro Val Leu Pro Asn Asp Asn Gly Ser
100 105 110
Tyr Arg Cys Ser Ala Asn Phe Gln Ser Asn Leu Ile Glu Ser His Ser
115 120 125
Thr Thr Leu Tyr Val Thr Asp Val Lys Ser Ala Ser Glu Arg Pro Ser
130 135 140
Lys Asp Glu Met Ala Ser Arg Pro Trp Leu Leu Tyr Arg Leu Leu Pro
145 150 155 160
Leu Gly Gly Leu Pro Leu Leu Ile Thr Thr Cys Phe Cys Leu Phe Cys
165 170 175
Cys Leu Arg Arg His Gln Gly Lys Gln Asn Glu Leu Ser Asp Thr Ala
180 185 190
Gly Arg Glu Ile Asn Leu Val Asp Ala His Leu Lys Ser Glu Gln Thr
195 200 205
Glu Ala Ser Thr Arg Gln Asn Ser Gln Val Leu Leu Ser Glu Thr Gly
210 215 220
Ile Tyr Asp Asn Asp Pro Asp Leu Cys Phe Arg Met Gln Glu Gly Ser
225 230 235 240
Glu Val Tyr Ser Asn Pro Cys Leu Glu Glu Asn Lys Pro Gly Ile Val
245 250 255
Tyr Ala Ser Leu Asn His Ser Val Ile Gly Pro Asn Ser Arg Leu Ala
260 265 270
Arg Asn Val Lys Glu Ala Pro Thr Glu Tyr Ala Ser Ile Cys Val Arg
275 280 285
Ser
<210> 282
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 282
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 283
<211> 60
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
олигонуклеотид
<400> 283
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgccagg atccacagga 60
<210> 284
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 284
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 285
<211> 45
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
олигонуклеотид
<400> 285
ggtggaggtg gatcaggtgg aggtggatct ggtggaggtg gatct 45
<210> 286
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 286
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 287
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 287
Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ser
1 5
<210> 288
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 288
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 289
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 289
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
<210> 290
<211> 18
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 290
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Ser
<210> 291
<211> 20
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 291
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser
20
<210> 292
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 292
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25
<210> 293
<211> 30
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 293
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
20 25 30
<210> 294
<211> 35
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 294
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Ser
35
<210> 295
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 295
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 296
<211> 24
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 296
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
1 5 10 15
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
20
<210> 297
<211> 62
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 297
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 298
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 298
Gly Ser Gly Ser Gly Ser
1 5
<210> 299
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 299
Ala Ala Ala
1
<210> 300
<211> 126
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 300
aaacggggca gaaagaagct cctgtatata ttcaaacaac catttatgag accagtacaa 60
actactcaag aggaagatgg ctgtagctgc cgatttccag aagaagaaga aggaggatgt 120
gaactg 126
<210> 301
<211> 271
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 301
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Thr Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr Asn Tyr Phe Ser Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Lys Thr
85 90 95
Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Asn Asn Phe Arg Val Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln
145 150 155 160
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly Ser Leu Arg
165 170 175
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Gly Met Ser
180 185 190
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly Ile
195 200 205
Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
210 215 220
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met
225 230 235 240
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser
245 250 255
Lys Gln Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 302
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 302
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Arg Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr Gly Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Gln Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 303
<211> 136
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 303
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Thr Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr Asn Tyr Phe Ser Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Lys Thr
85 90 95
Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln Ala Asp Asp Glu Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Asn Asn Phe Arg Val Phe Gly Gly
115 120 125
Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 304
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 304
Gly Phe Thr Phe Gly Asp Tyr Gly
1 5
<210> 305
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 305
Ile Asn Trp Asn Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 306
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 306
Ala Arg Ser Lys Gln Gly Tyr
1 5
<210> 307
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 307
Ser Arg Asp Ala Gly Gly Tyr Asn Tyr
1 5
<210> 308
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 308
Glu Val Thr
1
<210> 309
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 309
Ser Ser Tyr Gly Gly Ser Asn Asn Phe Arg Val
1 5 10
<210> 310
<211> 342
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 310
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggt gtggtacggc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttggt gattatggca tgagctgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctctggt attaattgga atggtggtag cacaggttat 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctctaaa 300
caggattact ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct ca 342
<210> 311
<211> 408
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 311
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgc cctgactcag cctccctccg cgtccgggtc tcctggacag 120
tcagtcacca tctcctgcac tggaaccagc agggacgctg gtggttataa ttatttctcc 180
tggtaccaac aacacccagg caaagccccc aaactcctga tttatgaggt cactaagcgg 240
ccctcagggg tccctgatcg cttctctggc tccaagtctg gcaagacggc ctccctgacc 300
gtctctgggc tccaggctga cgatgaggct gtatattact gcagctcata tggaggcagc 360
aacaactttc gggtgttcgg cggagggacc aagctgaccg tcctaggt 408
<210> 312
<211> 813
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 312
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgc cctgactcag cctccctccg cgtccgggtc tcctggacag 120
tcagtcacca tctcctgcac tggaaccagc agggacgctg gtggttataa ttatttctcc 180
tggtaccaac aacacccagg caaagccccc aaactcctga tttatgaggt cactaagcgg 240
ccctcagggg tccctgatcg cttctctggc tccaagtctg gcaagacggc ctccctgacc 300
gtctctgggc tccaggctga cgatgaggct gtatattact gcagctcata tggaggcagc 360
aacaactttc gggtgttcgg cggagggacc aagctgaccg tcctaggttc tagaggtggt 420
ggtggtagcg gcggcggcgg ctctggtggt ggtggatccc tcgagatggc cgaggtgcag 480
ctggtggagt ctgggggagg tgtggtacgg cctggggggt ccctgagact ctcctgtgca 540
gcctctggat tcacctttgg tgattatggc atgagctggg tccgccaagc tccagggaag 600
gggctggagt gggtctctgg tattaattgg aatggtggta gcacaggtta tgcagactct 660
gtgaagggcc gattcaccat ctccagagac aacgccaaga actccctgta tctgcaaatg 720
aacagtctga gagccgagga cacggccgta tattactgtg cgcgctctaa acaggattac 780
tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc tca 813
<210> 313
<211> 277
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 313
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Ser Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Ser Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Pro Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly
115 120 125
Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Leu Gln Leu
145 150 155 160
Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
165 170 175
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala Met Ser Trp
180 185 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr
195 200 205
Asn Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
210 215 220
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Ser Leu Gln Met Ser
225 230 235 240
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Val Thr
245 250 255
His Arg Arg Tyr Gly Ser Thr Phe Asp Ser Arg Gly Gln Gly Thr Leu
260 265 270
Val Thr Val Ser Ser
275
<210> 314
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 314
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Gly Gly Ser Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Asn Ser Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Ser
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Thr His Arg Arg Tyr Gly Ser Thr Phe Asp Ser Arg Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 315
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 315
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Ser Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Phe
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile His Ser Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Pro Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Asn Gly Tyr Val Phe Gly Thr Gly
115 120 125
Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 316
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 316
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
<210> 317
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 317
Ile Thr Asn Ser Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 318
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 318
Ala Arg Val Thr His Arg Arg Tyr Gly Ser Thr Phe Asp Ser
1 5 10
<210> 319
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 319
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 320
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 320
Ser Asn Asn
1
<210> 321
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 321
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Val Asn Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 322
<211> 385
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 322
cagctgcagc tgcaggagtc ggggggaggc tcggtacagc cgggggggtc tctgagactg 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct atcactaata gtggtcgtag tacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtct 240
ttgcaaatga gcagcctgag agccgaagac acggccgtgt attactgtgc gcgcgttact 300
catcgtcgtt acggttctac tttcgattct cggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc 360
tcaactagtg gccaggccgg ccagc 385
<210> 323
<211> 405
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 323
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tctcctatga gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcagca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg ggagtaatac tgtaaactgg 180
taccaacagt tccccggaac ggcccccaaa ctcctcatcc atagtaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggcccc agtctgagga tgaggctgat tattactgtg cagcttggga tgacagtgtg 360
aatggttatg tcttcggaac tgggaccaag gtcaccgtcc taggt 405
<210> 324
<211> 831
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 324
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tctcctatga gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcagca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg ggagtaatac tgtaaactgg 180
taccaacagt tccccggaac ggcccccaaa ctcctcatcc atagtaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggcccc agtctgagga tgaggctgat tattactgtg cagcttggga tgacagtgtg 360
aatggttatg tcttcggaac tgggaccaag gtcaccgtcc taggttctag aggtggtggt 420
ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg agatggccca gctgcagctg 480
caggagtcgg ggggaggctc ggtacagccg ggggggtctc tgagactgtc ctgtgcagcc 540
tctggattca cctttagcaa ctatgccatg agctgggtcc gccaggctcc agggaagggg 600
ctggagtggg tctcagctat cactaatagt ggtcgtagta catactacgc agactccgtg 660
aagggccggt tcaccatctc cagagacaat tccaagaaca cgctgtcttt gcaaatgagc 720
agcctgagag ccgaagacac ggccgtgtat tactgtgcgc gcgttactca tcgtcgttac 780
ggttctactt tcgattctcg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 831
<210> 325
<211> 276
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 325
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Arg Gln Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln Leu Val
145 150 155 160
Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val Ser
165 170 175
Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ser Tyr Ala Ile Thr Trp Val
180 185 190
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Ile Pro
195 200 205
Met Leu Asp Ile Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr
210 215 220
Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser
225 230 235 240
Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Thr Tyr Ser
245 250 255
Arg Ser Pro Phe His Met Glu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
260 265 270
Thr Val Ser Ser
275
<210> 326
<211> 121
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 326
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Ala Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Ile Pro Met Leu Asp Ile Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Thr Tyr Ser Arg Ser Pro Phe His Met Glu Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 327
<211> 134
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 327
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Thr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Val
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Arg Leu Leu Ile Phe Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Pro Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Ala Ser Arg Gln Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr
115 120 125
Lys Leu Thr Val Leu Gly
130
<210> 328
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 328
Gly Gly Thr Phe Arg Ser Tyr Ala
1 5
<210> 329
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 329
Ile Ile Pro Met Leu Asp Ile Thr
1 5
<210> 330
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 330
Ala Arg Thr Tyr Ser Arg Ser Pro Phe His Met Glu Asp Phe
1 5 10
<210> 331
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 331
Ser Ser Asn Ile Gly Gly Asn Thr
1 5
<210> 332
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 332
Arg Asn Asn
1
<210> 333
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 333
Ala Ala Trp Asp Ala Ser Arg Gln Gly Val
1 5 10
<210> 334
<211> 363
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 334
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttccgc agctatgcta tcacctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaagg atcatcccta tgcttgatat aacaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggaca aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcacttac 300
tctcgttctc cgttccatat ggaagatttc tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc 360
tca 363
<210> 335
<211> 402
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 335
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagcctgt gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaatatcg gaggtaacac tgtcagctgg 180
taccagcagg tcccaggaac ggcccccaga ctcctcattt ttaggaataa tcaacggccc 240
ccaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtctgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga cgccagtcga 360
caaggggtgt tcggcggagg gaccaagctg accgtcctag gt 402
<210> 336
<211> 828
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 336
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagcctgt gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaatatcg gaggtaacac tgtcagctgg 180
taccagcagg tcccaggaac ggcccccaga ctcctcattt ttaggaataa tcaacggccc 240
ccaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtctgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga cgccagtcga 360
caaggggtgt tcggcggagg gaccaagctg accgtcctag gttctagagg tggtggtggt 420
agcggcggcg gcggctctgg tggtggtgga tccctcgaga tggcccaggt gcagctggtg 480
cagtctgggg ctgaggtgaa gaagcctggg tcctcggtga aggtctcctg caaggcttct 540
ggaggcacct tccgcagcta tgctatcacc tgggtgcgac aggcccctgg acaagggctt 600
gagtggatgg gaaggatcat ccctatgctt gatataacaa actacgcaca gaagttccag 660
ggcagagtca cgattaccgc ggacaaatcc acgagcacag cctacatgga gctgagcagc 720
ctgagatctg aggacacggc cgtgtattac tgtgcgcgca cttactctcg ttctccgttc 780
catatggaag atttctgggg tcaaggtact ctggtgaccg tctcctca 828
<210> 337
<211> 270
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 337
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
165 170 175
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser Trp
180 185 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Ser
195 200 205
Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
210 215 220
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn
225 230 235 240
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Lys Tyr
245 250 255
Gln Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 338
<211> 114
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 338
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Lys Tyr Gln Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 339
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 339
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 340
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 340
Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala
1 5
<210> 341
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 341
Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 342
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 342
Ala Arg Lys Tyr Gln Asp Val
1 5
<210> 343
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 343
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Thr
1 5
<210> 344
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 344
Arg Asn Asn
1
<210> 345
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 345
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val
1 5 10
<210> 346
<211> 342
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 346
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cacatactac 180
gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca atgccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgcaaatac 300
caggatgttt ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct ca 342
<210> 347
<211> 405
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 347
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gctgacgcag ccgccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg gaagtaatac tgtaaactgg 180
taccagcagc tcccaggaac ggcccccaaa ctcctcatct ataggaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtccgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga tgacagcctg 360
agtggtaggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggt 405
<210> 348
<211> 810
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 348
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gctgacgcag ccgccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg gaagtaatac tgtaaactgg 180
taccagcagc tcccaggaac ggcccccaaa ctcctcatct ataggaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtccgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga tgacagcctg 360
agtggtaggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt 420
ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg agatggccga ggtgcagctg 480
gtggagtctg ggggaggctt ggtacagcct ggggggtccc tgagactctc ctgtgcagcc 540
tctggattca cctttagcag ctatgccatg agctgggtcc gccaggctcc agggaagggg 600
ctggagtggg tctcagctat tagtggtagt ggtggtagca catactacgc agactccgtg 660
aagggccggt tcaccatctc cagagacaat gccaagaaca cgctgtatct gcaaatgaac 720
agcctgagag ccgaggacac ggccgtatat tactgtgcgc gcaaatacca ggatgtttgg 780
ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 810
<210> 349
<211> 279
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 349
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Leu Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser
85 90 95
Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Tyr Val Phe Gly Thr
115 120 125
Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Val Gln
145 150 155 160
Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg
165 170 175
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Thr Ala Met His
180 185 190
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Thr Ile
195 200 205
Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg
210 215 220
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
225 230 235 240
Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Pro
245 250 255
Val Ser Ser Met Thr Leu Ser Ile Gln Ser Asp Gly Trp Gly Gln Gly
260 265 270
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
275
<210> 350
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 350
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Gly Thr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Thr Ile Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Pro Val Ser Ser Met Thr Leu Ser Ile Gln Ser Asp Gly Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 351
<211> 136
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 351
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Leu Pro Gly Arg Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Asn Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser
85 90 95
Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Tyr Val Phe Gly Thr
115 120 125
Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 352
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 352
Gly Phe Ser Phe Ser Gly Thr Ala
1 5
<210> 353
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 353
Ile Ser Ser Thr Gly Arg Ser Thr
1 5
<210> 354
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 354
Ala Arg Pro Val Ser Ser Met Thr Leu Ser Ile Gln Ser Asp Gly
1 5 10 15
<210> 355
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 355
Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp
1 5
<210> 356
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 356
Gly Asn Ser
1
<210> 357
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 357
Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Arg Gly Tyr Val
1 5 10
<210> 358
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 358
caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cagctttagt ggcactgcca tgcactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggaatg ggtctcgact attagtagta ctgggcgtag cacatactac 180
agagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggccgtat attactgtgc gcgcccggtt 300
tcttctatga ctctgtctat ccagtctgat ggttggggtc aaggtactct ggtgaccgtc 360
tcctca 366
<210> 359
<211> 408
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 359
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gttgacgcag ccgccctcag tgtctggggc cccagggcag 120
agggtcacca tctcctgcac tgggagcagc tccaacatcg gggcaggtta tgatgtacac 180
tggtaccagc agcttccagg aagagccccc aaactcctca tctatggtaa cagcaatcgg 240
ccctcagggg tccctgaccg attctctggc tccaagtctg gcacctcagc ctccctggcc 300
atcactgggc tccaggctga ggatgaggct gattattact gccagtccta tgacagcagc 360
ctgagaggtt atgtcttcgg aactgggacc aaggtcaccg tcctaggt 408
<210> 360
<211> 837
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 360
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gttgacgcag ccgccctcag tgtctggggc cccagggcag 120
agggtcacca tctcctgcac tgggagcagc tccaacatcg gggcaggtta tgatgtacac 180
tggtaccagc agcttccagg aagagccccc aaactcctca tctatggtaa cagcaatcgg 240
ccctcagggg tccctgaccg attctctggc tccaagtctg gcacctcagc ctccctggcc 300
atcactgggc tccaggctga ggatgaggct gattattact gccagtccta tgacagcagc 360
ctgagaggtt atgtcttcgg aactgggacc aaggtcaccg tcctaggttc tagaggtggt 420
ggtggtagcg gcggcggcgg ctctggtggt ggtggatccc tcgagatggc ccaggtgcag 480
ctggtgcagt ctgggggagg cgtggtccag cctgggaggt ccctgagact ctcctgtgca 540
gcctctggat tcagctttag tggcactgcc atgcactggg tccgccaggc tccagggaag 600
gggctggaat gggtctcgac tattagtagt actgggcgta gcacatacta cagagactcc 660
gtgaagggcc ggttcaccat ctccagagac aattccaaga acacgctgta tctgcaaatg 720
aacagcctga gaggcgagga cacggccgta tattactgtg cgcgcccggt ttcttctatg 780
actctgtcta tccagtctga tggttggggt caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 837
<210> 361
<211> 286
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 361
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Phe Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Arg Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ala Leu Asp Ile Thr Val Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Arg Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Met Gln Leu
145 150 155 160
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp
180 185 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Ile Ile Asn
195 200 205
Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
210 215 220
Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr Met Glu Leu Ser
225 230 235 240
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Gln
245 250 255
Lys Tyr His Ser Gln Tyr Ser Arg Gly Gly Thr Gly Gly Gly Met Thr
260 265 270
Gln Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
275 280 285
<210> 362
<211> 130
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 362
Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gln Lys Tyr His Ser Gln Tyr Ser Arg Gly Gly Thr Gly
100 105 110
Gly Gly Met Thr Gln Asp Met Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser
130
<210> 363
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 363
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Val Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Gly Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr Val Ser Trp Phe Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Arg Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Asp Asn Asn Lys Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ala Leu Asp Ile Thr Val Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Arg Asn Trp Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 364
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 364
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 365
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 365
Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
<210> 366
<211> 23
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 366
Ala Arg Gly Gln Lys Tyr His Ser Gln Tyr Ser Arg Gly Gly Thr Gly
1 5 10 15
Gly Gly Met Thr Gln Asp Met
20
<210> 367
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 367
Ser Ser Asn Ile Gly Asn Asn Tyr
1 5
<210> 368
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 368
Asp Asn Asn
1
<210> 369
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 369
Gly Thr Trp Asp Ser Ser Leu Arg Asn Trp Val
1 5 10
<210> 370
<211> 390
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 370
cagatgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcacc agctactata tgcactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaata atcaacccta gtggtggtag cacaagctac 180
gcacaaaagt tccagggcag agtcaccatg accagggaca cgtccacgag cacagtctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtcag 300
aaataccatt ctcagtactc tcgtggtggt actggtggtg gtatgactca ggatatgtgg 360
ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca 390
<210> 371
<211> 405
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 371
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt cgtgacgcag ccgccctctg tgtctgcggc cccaggacag 120
agggtcacca tctcctgctc tggaggtagt tccaacattg ggaataatta tgtttcctgg 180
ttccaacaac tcccacgaac agcccccaaa ctcctcattt atgacaataa taagcgaccc 240
tcagggattc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cgtcagccgc cctggacatc 300
accgttctcc agactgggga cgaggccgat tattactgcg gaacttggga tagcagcctg 360
agaaattggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggt 405
<210> 372
<211> 858
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 372
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt cgtgacgcag ccgccctctg tgtctgcggc cccaggacag 120
agggtcacca tctcctgctc tggaggtagt tccaacattg ggaataatta tgtttcctgg 180
ttccaacaac tcccacgaac agcccccaaa ctcctcattt atgacaataa taagcgaccc 240
tcagggattc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cgtcagccgc cctggacatc 300
accgttctcc agactgggga cgaggccgat tattactgcg gaacttggga tagcagcctg 360
agaaattggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt 420
ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg agatggccca gatgcagctg 480
gtgcagtctg gggctgaggt gaagaagcct ggggcctcag tgaaggtttc ctgcaaggca 540
tctggataca ccttcaccag ctactatatg cactgggtgc gacaggcccc tggacaaggg 600
cttgagtgga tgggaataat caaccctagt ggtggtagca caagctacgc acaaaagttc 660
cagggcagag tcaccatgac cagggacacg tccacgagca cagtctacat ggagctgagc 720
agcctgagat ctgaggacac ggccgtgtat tactgtgcgc gcggtcagaa ataccattct 780
cagtactctc gtggtggtac tggtggtggt atgactcagg atatgtgggg tcaaggtact 840
ctggtgaccg tctcctca 858
<210> 373
<211> 273
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 373
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn His Val Ser Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr
85 90 95
Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Ala His Trp Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Glu Val Gln Leu
145 150 155 160
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala Ser Val Lys Val
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Tyr Ile His Trp
180 185 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Trp Met Asn
195 200 205
Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
210 215 220
Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser
225 230 235 240
Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg
245 250 255
Tyr His Val Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
260 265 270
Ser
<210> 374
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 374
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Tyr His Val Ile Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 375
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 375
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Ser Pro Gly Gln Ser Leu Thr Ile Ser Cys Thr Gly
35 40 45
Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn His Val Ser Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Tyr Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Met Ile Tyr Glu Val Thr Lys Arg
65 70 75 80
Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr
85 90 95
Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Ala His Trp Val Phe Gly Gly Gly
115 120 125
Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 376
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 376
Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Tyr
1 5
<210> 377
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 377
Met Asn Pro Asn Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 378
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 378
Ala Arg Gly Arg Tyr His Val Ile Asp Tyr
1 5 10
<210> 379
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 379
Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn His
1 5
<210> 380
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 380
Glu Val Thr
1
<210> 381
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 381
Ser Ser Tyr Ala Gly Ser Ala His Trp Val
1 5 10
<210> 382
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 382
gaggtccagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtt 60
tcctgcaagg catctggata caccttcagc aggtactata tacactgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atgaacccta acagtggtaa cacaggctat 180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gcgcggtcgt 300
taccatgtta tcgattactg gggtcaaggt actctggtga ccgtctcctc a 351
<210> 383
<211> 405
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 383
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gttgactcag ccaccctccg cgtccgggtc tcctggacag 120
tcactcacca tctcctgcac tggaaccagc agtgacgttg gtggttataa ccatgtctcc 180
tggtaccaac agtacccagg caaagccccc aaactcatga tttatgaggt cactaagcgg 240
ccctcagggg tccctgatcg cttctctggc tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc 300
gtctctgggc tccaggctga ggatgaggct gattattact gcagctcata tgcaggcagc 360
gcccattggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggt 405
<210> 384
<211> 819
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 384
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccagtctgt gttgactcag ccaccctccg cgtccgggtc tcctggacag 120
tcactcacca tctcctgcac tggaaccagc agtgacgttg gtggttataa ccatgtctcc 180
tggtaccaac agtacccagg caaagccccc aaactcatga tttatgaggt cactaagcgg 240
ccctcagggg tccctgatcg cttctctggc tccaagtctg gcaacacggc ctccctgacc 300
gtctctgggc tccaggctga ggatgaggct gattattact gcagctcata tgcaggcagc 360
gcccattggg tgttcggcgg agggaccaag ctgaccgtcc taggttctag aggtggtggt 420
ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg agatggccga ggtccagctg 480
gtgcagtctg gggctgaggt gaagaagcct ggggcctcag tgaaggtttc ctgcaaggca 540
tctggataca ccttcagcag gtactatata cactgggtgc gacaggcccc tggacaaggg 600
cttgagtgga tgggatggat gaaccctaac agtggtaaca caggctatgc acagaagttc 660
cagggcagag tcaccatgac caggaacacc tccataagca cagcctacat ggagctgagc 720
agcctgagat ctgaggacac ggccgtgtat tactgtgcgc gcggtcgtta ccatgttatc 780
gattactggg gtcaaggtac tctggtgacc gtctcctca 819
<210> 385
<211> 269
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 385
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val Phe Gly Thr Gly
115 120 125
Thr Lys Val Thr Val Leu Gly Ser Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Met Ala Gln Leu Gln Leu
145 150 155 160
Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser Ser Val Lys Val
165 170 175
Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Thr Tyr Tyr Leu His Trp
180 185 190
Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Ile Asn
195 200 205
Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val
210 215 220
Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser
225 230 235 240
Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Tyr
245 250 255
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 386
<211> 113
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 386
Gln Leu Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Tyr Leu His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Arg Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 387
<211> 135
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 387
Met Lys Lys Thr Ala Ile Ala Ile Ala Val Ala Leu Ala Gly Phe Ala
1 5 10 15
Thr Val Ala Gln Ala Ala Glu Leu Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Pro
20 25 30
Ser Ala Ser Gly Thr Pro Gly Gln Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
35 40 45
Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr Val Tyr Trp Tyr Gln Gln Leu
50 55 60
Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Asn Asn Gln Arg Pro
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala
85 90 95
Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Arg Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr
100 105 110
Cys Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val Phe Gly Thr Gly
115 120 125
Thr Lys Val Thr Val Leu Gly
130 135
<210> 388
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 388
Gly Tyr Thr Phe Asn Thr Tyr Tyr
1 5
<210> 389
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 389
Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr
1 5
<210> 390
<211> 6
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 390
Ala Arg Ser Tyr Asp Tyr
1 5
<210> 391
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 391
Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn Tyr
1 5
<210> 392
<211> 3
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 392
Arg Asn Asn
1
<210> 393
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 393
Ala Ala Trp Asp Asp Ser Leu Ser Gly Arg Val
1 5 10
<210> 394
<211> 339
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 394
cagctgcagc tggtgcaatc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggata caccttcaac acctactatc tgcactgggt acgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggacgg atcaacccta acaatggtgg cacaaactat 180
gcacagaagt ttcagggcag ggtcaccatg accagggaca cgtccatcaa cacagcctac 240
atggagctga gcaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgctcttac 300
gattactggg gtcaaggtac tctggtgacc gtctcctca 339
<210> 395
<211> 405
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 395
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccaggctgt gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg gaagtaatta tgtatactgg 180
taccagcagc tcccaggaac ggcccccaaa ctcctcatct ataggaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtccgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga tgacagcctg 360
agtggtcggg tcttcggaac tgggaccaag gtcaccgtcc taggt 405
<210> 396
<211> 807
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 396
atgaaaaaga cagctatcgc gattgcagtg gcactggctg gtttcgctac cgtggcccag 60
gcggccgagc tccaggctgt gctgactcag ccaccctcag cgtctgggac ccccgggcag 120
agggtcacca tctcttgttc tggaagcagc tccaacatcg gaagtaatta tgtatactgg 180
taccagcagc tcccaggaac ggcccccaaa ctcctcatct ataggaataa tcagcggccc 240
tcaggggtcc ctgaccgatt ctctggctcc aagtctggca cctcagcctc cctggccatc 300
agtgggctcc ggtccgagga tgaggctgat tattactgtg cagcatggga tgacagcctg 360
agtggtcggg tcttcggaac tgggaccaag gtcaccgtcc taggttctag aggtggtggt 420
ggtagcggcg gcggcggctc tggtggtggt ggatccctcg agatggccca gctgcagctg 480
gtgcaatctg gggctgaggt gaagaagcct gggtcctcgg tgaaggtctc ctgcaaggct 540
tctggataca ccttcaacac ctactatctg cactgggtac gacaggcccc tggacaaggg 600
cttgagtgga tgggacggat caaccctaac aatggtggca caaactatgc acagaagttt 660
cagggcaggg tcaccatgac cagggacacg tccatcaaca cagcctacat ggagctgagc 720
aggctgagat ctgacgacac ggccgtgtat tactgtgcgc gctcttacga ttactggggt 780
caaggtactc tggtgaccgt ctcctca 807
<210> 397
<211> 1404
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 397
cagtctgtgt tgacgcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gctcaccatc 60
tcctgcactg gaaccagcaa tgacgttggt gcttataagt atgtctcctg gtatcaacag 120
tacccaggca aagcccccaa actcatactt tatgatgtct ttaagcggcc ctcaggggtc 180
tctaatcgct tctctggctc caagtctgac aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 240
caggctgagg acgaggctga ttattactgc ttctcactta caagcagtaa cacttatgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggcccaga tgcagctggt gcagtctgga 420
gctgaggtga agaagcctgg ggcctcagtg aaggtctcct gcaaggcttc tggttacacc 480
tttaacagat atgctatcac ctgggtgcga caggcccctg gacaaggcct tgagtggatg 540
ggatggatca gcgcttacaa tggtaattca cactatgcac agaagctcca gggcagagtc 600
accatgacca cagacacatc cacgggcaca gcctatatgg agctgaggag gctgagatct 660
gacgacacgg ccgtgtatta ctgtgcgcgc atggcttacg attcttgggg tcaaggtact 720
ctggtgaccg tctcctcagc ggccgcaatt gaagttatgt atcctcctcc ttacctagac 780
aatgagaaga gcaatggaac cattatccat gtgaaaggga aacacctttg tccaagtccc 840
ctatttcccg gaccttctaa gcccttttgg gtgctggtgg tggttggtgg agtcctggct 900
tgctatagct tgctagtaac agtggccttt attattttct gggtgaggag taagaggagc 960
aggctcctgc acagtgacta catgaacatg actccccgcc gccccgggcc cacccgcaag 1020
cattaccagc cctatgcccc accacgcgac ttcgcagcct atcgctccag agtgaagttc 1080
agcaggagcg cagacgcccc cgcgtaccag cagggccaga accagctcta taacgagctc 1140
aatctaggac gaagagagga gtacgatgtt ttggacaaga gacgtggccg ggaccctgag 1200
atggggggaa agccgagaag gaagaaccct caggaaggcc tgtacaatga actgcagaaa 1260
gataagatgg cggaggccta cagtgagatt gggatgaaag gcgagcgccg gaggggcaag 1320
gggcacgatg gcctttacca gggtctcagt acagccacca aggacaccta cgacgccctt 1380
cacatgcagg ccctgccccc tcgc 1404
<210> 398
<211> 1413
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 398
cagtctgtgt tgactcagcc accctcagcg tctgggaccc ccggacagag ggtcaccatc 60
tcttgttctg gaagcaggtc caacgtagga ggtaattatg tattttggta ccagcaagtc 120
cccggagcga cccccaaact cctcatctat aggagtaatc agcggccctc gggggtccct 180
gaccgattcg ctggctccaa gtctggctcc tcagcctccc tggccatcag tggactccgg 240
tccgaggatg aggctgatta ttactgtgca acatgggatg acagcctgag tggttttgtc 300
ttcggaactg ggaccaaggt caccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt ggagtctggg 420
ggaggcttgg tcaagcctgg agggtccctg agactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
ttcagtgact actacatgag ctggatccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtt 540
tcatacatta gtagtagtgg tagtaccata tactacgcag actctgtgaa gggccgattc 600
accatctcca gggacaacgc caagaactca ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc 660
gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgcgc ggttacggta aagcttacga tcagtggggt 720
caaggtactc tggtgaccgt ctcctcagcg gccgcaattg aagttatgta tcctcctcct 780
tacctagaca atgagaagag caatggaacc attatccatg tgaaagggaa acacctttgt 840
ccaagtcccc tatttcccgg accttctaag cccttttggg tgctggtggt ggttggtgga 900
gtcctggctt gctatagctt gctagtaaca gtggccttta ttattttctg ggtgaggagt 960
aagaggagca ggctcctgca cagtgactac atgaacatga ctccccgccg ccccgggccc 1020
acccgcaagc attaccagcc ctatgcccca ccacgcgact tcgcagccta tcgctccaga 1080
gtgaagttca gcaggagcgc agacgccccc gcgtaccagc agggccagaa ccagctctat 1140
aacgagctca atctaggacg aagagaggag tacgatgttt tggacaagag acgtggccgg 1200
gaccctgaga tggggggaaa gccgagaagg aagaaccctc aggaaggcct gtacaatgaa 1260
ctgcagaaag ataagatggc ggaggcctac agtgagattg ggatgaaagg cgagcgccgg 1320
aggggcaagg ggcacgatgg cctttaccag ggtctcagta cagccaccaa ggacacctac 1380
gacgcccttc acatgcaggc cctgccccct cgc 1413
<210> 399
<211> 1416
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 399
tcttctgagc tgactcagga ccctgctgtg tctgtggcct tgggacagac agtcaggatc 60
acatgccaag gagacagcct cagaagctat tatgcaagct ggtaccagca gaagccagga 120
caggcccctg tacttgtcat ctatggtaaa aacaaccggc cctcagggat cccagaccga 180
ttctctggct ccagctcagg aaacacagct tccttgacca tcactggggc tcaggcggaa 240
gatgaggctg actattactg taactcccgg gacagcagtg gtaacccccc tgtggtattc 300
ggcggaggga ccaagctgac cgtcctaggt tctagaggtg gtggtggtag cggcggcggc 360
ggctctggtg gtggtggatc cctcgagatg gcccaggtgc agctggtgga gtctggggga 420
ggcctggtcc accctggggg gtccctgaga ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc 480
agaagccata gcatgaactg ggtccgccag gctccaggga aggggctgga gtgggtctca 540
tccattagta gtgatagtac ttacacatac tacgcagact cagtgaaggg ccgattcacc 600
atctccagag acaacgccaa gaactcactg tatctgcaaa tgaacagcct gagagccgag 660
gacacggccg tatattactg tgcgcgctct ggtggtcagt ggaaatacta cgattactgg 720
ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct 780
ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt 840
tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct aagccctttt gggtgctggt ggtggttggt 900
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 960
agtaagagga gcaggctcct gcacagtgac tacatgaaca tgactccccg ccgccccggg 1020
cccacccgca agcattacca gccctatgcc ccaccacgcg acttcgcagc ctatcgctcc 1080
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 1140
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 1200
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 1260
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 1320
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 1380
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 1416
<210> 400
<211> 1416
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 400
cagtctgtcg tgacgcagcc gccctcaatg tctgcggccc caggacagca agtcaccatc 60
tcctgctctg gaggcaactc caacattgag agaaattatg tatcctggta cctccagctc 120
cctggaacag cccccaaact cgtcattttt gacaatgata ggcgaccctc agggattcct 180
gaccgattct ctggctccaa gtctggcacg tcagccaccc tgggcatcac cggactccag 240
actggggacg aggccgatta ttactgcgga acatgggata gcagcctgag aggttgggtg 300
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 360
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt ggagtccggg 420
ggaggcttga tacagcctgg ggggtccctg agactctcct gtgcagcctc tggattcacc 480
tttagcaact atgccatgaa ctgggtccgc caggctccag ggaaggggct ggagtgggtc 540
tcaactatta atggtcgtgg tagtagtaca atctacgcag actccgtgaa gggccggttc 600
accatctcca gagacaattc caagaacacg ctgtatctgc aaatgaacag cctgagagcc 660
gaggacacag ccacgtatta ctgtgcgcgc tacatctctc gtggtctggg tgattcttgg 720
ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct 780
ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt 840
tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct aagccctttt gggtgctggt ggtggttggt 900
ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg 960
agtaagagga gcaggctcct gcacagtgac tacatgaaca tgactccccg ccgccccggg 1020
cccacccgca agcattacca gccctatgcc ccaccacgcg acttcgcagc ctatcgctcc 1080
agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc 1140
tataacgagc tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc 1200
cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat 1260
gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc 1320
cggaggggca aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc 1380
tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc cctcgc 1416
<210> 401
<211> 7689
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 401
ccggtgccgc caccatggaa accgacaccc tgctgctgtg ggtgctgctg ctgtgggtgc 60
caggatccac aggacagtct gtcgtgacgc agcctgcctc cgtgtctggg tctcctggac 120
agtcgatcac catctcctgc actggaacca gcagtgacgt tggtggttat aactatgtct 180
cctggtacca acagcaccca ggcaaagccc ccaaactcat gatttatgat gtcagtaagc 240
ggccctcagg ggtttctaat cgcttctctg gctccaagtc tggcaacacg gcctccctga 300
ccatctctgg gctccaggct gaggacgagg ctgattatta ctgcagctca tatacaagca 360
gcagcacttt ggtattcggc ggagggacca agctgaccgt cctaggttct agaggtggtg 420
gtggtagcgg cggcggcggc tctggtggtg gtggatccct cgagatggcc gaggtgcagc 480
tggtggagtc tgggggagcc tttgtacagc ctggggggtc cctgagactc tcctgtgcag 540
cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgacctgggt ccgccaggct ccagggaagg 600
gcctggaatg ggtctcgact attagtggtc gtggtcgtag cacattctac gcagactccg 660
tgaagggccg gtttaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctatat ctgcaaatga 720
acagtctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gcgctactac catgctggtg 780
ctttcgatct gtggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctcagaacaa aaactcatct 840
cagaagagga tctggcggcc gcacccacca cgacgccagc gccgcgacca ccaaccccgg 900
cgcccacgat cgcgtcgcag cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg ccagcggcgg 960
ggggcgcagt gcacacgagg gggctggact tcgcctgtga tatctacatc tgggcgcccc 1020
tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac tgcaacaaac 1080
ggggcagaaa gaagctcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca gtacaaacta 1140
ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga ggatgtgaac 1200
tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagagc cccccgcgta ccagcagggc cagaaccagc 1260
tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg 1320
gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca 1380
atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc 1440
gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca 1500
cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta acagccactc gaggatccgg 1560
attagtccaa tttgttaaag acaggatatc agtggtccag gctctagttt tgactcaaca 1620
atatcaccag ctgaagccta tagagtacga gccatagata aaataaaaga ttttatttag 1680
tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc tagcttaagt 1740
aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt tcagatcaag 1800
gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc 1860
ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc 1920
tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc agatgcggtc 1980
cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa 2040
atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct gttcgcgcgc 2100
ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg ccagtcctcc 2160
gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga 2220
cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg 2280
gggtctttca cacatgcagc atgtatcaaa attaatttgg ttttttttct taagtattta 2340
cattaaatgg ccatagtact taaagttaca ttggcttcct tgaaataaac atggagtatt 2400
cagaatgtgt cataaatatt tctaatttta agatagtatc tccattggct ttctactttt 2460
tcttttattt ttttttgtcc tctgtcttcc atttgttgtt gttgttgttt gtttgtttgt 2520
ttgttggttg gttggttaat ttttttttaa agatcctaca ctatagttca agctagacta 2580
ttagctactc tgtaacccag ggtgaccttg aagtcatggg tagcctgctg ttttagcctt 2640
cccacatcta agattacagg tatgagctat catttttggt atattgattg attgattgat 2700
tgatgtgtgt gtgtgtgatt gtgtttgtgt gtgtgactgt gaaaatgtgt gtatgggtgt 2760
gtgtgaatgt gtgtatgtat gtgtgtgtgt gagtgtgtgt gtgtgtgtgt gcatgtgtgt 2820
gtgtgtgact gtgtctatgt gtatgactgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 2880
gtgtgtgtgt gtgttgtgaa aaaatattct atggtagtga gagccaacgc tccggctcag 2940
gtgtcaggtt ggtttttgag acagagtctt tcacttagct tggaattcac tggccgtcgt 3000
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 3060
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 3120
gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg 3180
cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt 3240
aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc 3300
ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc 3360
accgtcatca ccgaaacgcg cgatgacgaa agggcctcgt gatacgccta tttttatagg 3420
ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc 3480
gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac 3540
aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt 3600
tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag 3660
aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg 3720
aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa 3780
tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc 3840
aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag 3900
tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa 3960
ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc 4020
taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg 4080
agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa 4140
caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa 4200
tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg 4260
gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag 4320
cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg 4380
caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt 4440
ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt 4500
aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac 4560
gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag 4620
atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg 4680
tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca 4740
gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga 4800
actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca 4860
gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc 4920
agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca 4980
ccgaactgag atacctacag cgtgagcatt gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa 5040
aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc 5100
cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc 5160
gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg 5220
cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat 5280
cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca 5340
gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca 5400
aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg 5460
actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac 5520
cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac 5580
aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctttgctct taggagtttc 5640
ctaatacatc ccaaactcaa atatataaag catttgactt gttctatgcc ctagggggcg 5700
gggggaagct aagccagctt tttttaacat ttaaaatgtt aattccattt taaatgcaca 5760
gatgttttta tttcataagg gtttcaatgt gcatgaatgc tgcaatattc ctgttaccaa 5820
agctagtata aataaaaata gataaacgtg gaaattactt agagtttctg tcattaacgt 5880
ttccttcctc agttgacaac ataaatgcgc tgctgagcaa gccagtttgc atctgtcagg 5940
atcaatttcc cattatgcca gtcatattaa ttactagtca attagttgat ttttattttt 6000
gacatataca tgtgaatgaa agaccccacc tgtaggtttg gcaagctagc ttaagtaacg 6060
ccattttgca aggcatggaa aaatacataa ctgagaatag aaaagttcag atcaaggtca 6120
ggaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag cagttcctgc 6180
cccggctcag ggccaagaac agatggaaca gctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg 6240
gtaagcagtt cctgccccgg ctcagggcca agaacagatg gtccccagat gcggtccagc 6300
cctcagcagt ttctagagaa ccatcagatg tttccagggt gccccaagga cctgaaatga 6360
ccctgtgcct tatttgaact aaccaatcag ttcgcttctc gcttctgttc gcgcgcttat 6420
gctccccgag ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggggcgccag tcctccgatt 6480
gactgagtcg cccgggtacc cgtgtatcca ataaaccctc ttgcagttgc atccgacttg 6540
tggtctcgct gttccttggg agggtctcct ctgagtgatt gactacccgt cagcgggggt 6600
ctttcatttg ggggctcgtc cgggatcggg agacccctgc ccagggacca ccgacccacc 6660
accgggaggt aagctggcca gcaacttatc tgtgtctgtc cgattgtcta gtgtctatga 6720
ctgattttat gcgcctgcgt cggtactagt tagctaacta gctctgtatc tggcggaccc 6780
gtggtggaac tgacgagttc ggaacacccg gccgcaaccc tgggagacgt cccagggact 6840
tcgggggccg tttttgtggc ccgacctgag tcctaaaatc ccgatcgttt aggactcttt 6900
ggtgcacccc ccttagagga gggatatgtg gttctggtag gagacgagaa cctaaaacag 6960
ttcccgcctc cgtctgaatt tttgctttcg gtttgggacc gaagccgcgc cgcgcgtctt 7020
gtctgctgca gcatcgttct gtgttgtctc tgtctgactg tgtttctgta tttgtctgaa 7080
aatatgggcc cgggctagac tgttaccact cccttaagtt tgaccttagg tcactggaaa 7140
gatgtcgagc ggatcgctca caaccagtcg gtagatgtca agaagagacg ttgggttacc 7200
ttctgctctg cagaatggcc aacctttaac gtcggatggc cgcgagacgg cacctttaac 7260
cgagacctca tcacccaggt taagatcaag gtcttttcac ctggcccgca tggacaccca 7320
gaccaggtcc cctacatcgt gacctgggaa gccttggctt ttgacccccc tccctgggtc 7380
aagccctttg tacaccctaa gcctccgcct cctcttcctc catccgcccc gtctctcccc 7440
cttgaacctc ctcgttcgac cccgcctcga tcctcccttt atccagccct cactccttct 7500
ctaggcgccc ccatatggcc atatgagatc ttatatgggg cacccccgcc ccttgtaaac 7560
ttccctgacc ctgacatgac aagagttact aacagcccct ctctccaagc tcacttacag 7620
gctctctact tagtccagca cgaagtctgg agacctctgg cggcagccta ccaagaacaa 7680
ctggaccga 7689
<210> 402
<211> 7688
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 402
ccggtgccgc caccatggaa accgacaccc tgctgctgtg ggtgctgctg ctgtgggtgc 60
caggatccac aggacagtct gtgttgactc agccaccctc agcgtctggg acccccggac 120
agagggtcac catctcttgt tctggaagca ggtccaacgt aggaggtaat tatgtatttt 180
ggtaccagca agtccccgga gcgaccccca aactcctcat ctataggagt aatcagcggc 240
cctcgggggt ccctgaccga ttcgctggct ccaagtctgg ctcctcagcc tccctggcca 300
tcagtggact ccggtccgag gatgaggctg attattactg tgcaacatgg gatgacagcc 360
tgagtggttt tgtcttcgga actgggacca aggtcaccgt cctaggttct agaggtggtg 420
gtggtagcgg cggcggcggc tctggtggtg gtggatccct cgagatggcc gaggtgcagc 480
tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc tcctgtgcag 540
cctctggatt caccttcagt gactactaca tgagctggat ccgccaggct ccagggaagg 600
ggctggagtg ggtttcatac attagtagta gtggtagtac catatactac gcagactctg 660
tgaagggccg attcaccatc tcccagggac aacgccaaga actcactgta tctgcaaatg 720
aacagcctga gagccgagga cacggccgta tattactgtg cgcgcgggtt acggtaaagc 780
ttacgatcag tggggtcaag gtactctggt gaccgtctcc tcagaacaaa aactcatctc 840
agaagaggat ctggcggccg cacccaccac gacgccagcg ccgcgaccac caaccccggc 900
gcccacgatc gcgtcgcagc ccctgtccct gcgcccagag gcgtgccggc cagcggcggg 960
gggcgcagtg cacacgaggg ggctggactt cgcctgtgat atctacatct gggcgcccct 1020
ggccgggact tgtggggtcc ttctcctgtc actggttatc accctttact gcaacaaacg 1080
gggcagaaag aagctcctgt atatattcaa acaaccattt atgagaccag tacaaactac 1140
tcaagaggaa gatggctgta gctgccgatt tccagaagaa gaagaaggag gatgtgaact 1200
gagagtgaag ttcagcagga gcgcagagcc ccccgcgtac cagcagggcc agaaccagct 1260
ctataacgag ctcaatctag gacgaagaga ggagtacgat gttttggaca agagacgtgg 1320
ccgggaccct gagatggggg gaaagccgag aaggaagaac cctcaggaag gcctgtacaa 1380
tgaactgcag aaagataaga tggcggaggc ctacagtgag attgggatga aaggcgagcg 1440
ccggaggggc aaggggcacg atggccttta ccagggtctc agtacagcca ccaaggacac 1500
ctacgacgcc cttcacatgc aggccctgcc ccctcgctaa cagccactcg aggatccgga 1560
ttagtccaat ttgttaaaga caggatatca gtggtccagg ctctagtttt gactcaacaa 1620
tatcaccagc tgaagcctat agagtacgag ccatagataa aataaaagat tttatttagt 1680
ctccagaaaa aggggggaat gaaagacccc acctgtaggt ttggcaagct agcttaagta 1740
acgccatttt gcaaggcatg gaaaaataca taactgagaa tagagaagtt cagatcaagg 1800
tcaggaacag atggaacagc tgaatatggg ccaaacagga tatctgtggt aagcagttcc 1860
tgccccggct cagggccaag aacagatgga acagctgaat atgggccaaa caggatatct 1920
gtggtaagca gttcctgccc cggctcaggg ccaagaacag atggtcccca gatgcggtcc 1980
agccctcagc agtttctaga gaaccatcag atgtttccag ggtgccccaa ggacctgaaa 2040
tgaccctgtg ccttatttga actaaccaat cagttcgctt ctcgcttctg ttcgcgcgct 2100
tctgctcccc gagctcaata aaagagccca caacccctca ctcggggcgc cagtcctccg 2160
attgactgag tcgcccgggt acccgtgtat ccaataaacc ctcttgcagt tgcatccgac 2220
ttgtggtctc gctgttcctt gggagggtct cctctgagtg attgactacc cgtcagcggg 2280
ggtctttcac acatgcagca tgtatcaaaa ttaatttggt tttttttctt aagtatttac 2340
attaaatggc catagtactt aaagttacat tggcttcctt gaaataaaca tggagtattc 2400
agaatgtgtc ataaatattt ctaattttaa gatagtatct ccattggctt tctacttttt 2460
cttttatttt tttttgtcct ctgtcttcca tttgttgttg ttgttgtttg tttgtttgtt 2520
tgttggttgg ttggttaatt tttttttaaa gatcctacac tatagttcaa gctagactat 2580
tagctactct gtaacccagg gtgaccttga agtcatgggt agcctgctgt tttagccttc 2640
ccacatctaa gattacaggt atgagctatc atttttggta tattgattga ttgattgatt 2700
gatgtgtgtg tgtgtgattg tgtttgtgtg tgtgactgtg aaaatgtgtg tatgggtgtg 2760
tgtgaatgtg tgtatgtatg tgtgtgtgtg agtgtgtgtg tgtgtgtgtg catgtgtgtg 2820
tgtgtgactg tgtctatgtg tatgactgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg tgtgtgtgtg 2880
tgtgtgtgtg tgttgtgaaa aaatattcta tggtagtgag agccaacgct ccggctcagg 2940
tgtcaggttg gtttttgaga cagagtcttt cacttagctt ggaattcact ggccgtcgtt 3000
ttacaacgtc gtgactggga aaaccctggc gttacccaac ttaatcgcct tgcagcacat 3060
ccccctttcg ccagctggcg taatagcgaa gaggcccgca ccgatcgccc ttcccaacag 3120
ttgcgcagcc tgaatggcga atggcgcctg atgcggtatt ttctccttac gcatctgtgc 3180
ggtatttcac accgcatatg gtgcactctc agtacaatct gctctgatgc cgcatagtta 3240
agccagcccc gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct gacgggcttg tctgctcccg 3300
gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct gcatgtgtca gaggttttca 3360
ccgtcatcac cgaaacgcgc gatgacgaaa gggcctcgtg atacgcctat ttttataggt 3420
taatgtcatg ataataatgg tttcttagac gtcaggtggc acttttcggg gaaatgtgcg 3480
cggaacccct atttgtttat ttttctaaat acattcaaat atgtatccgc tcatgagaca 3540
ataaccctga taaatgcttc aataatattg aaaaaggaag agtatgagta ttcaacattt 3600
ccgtgtcgcc cttattccct tttttgcggc attttgcctt cctgtttttg ctcacccaga 3660
aacgctggtg aaagtaaaag atgctgaaga tcagttgggt gcacgagtgg gttacatcga 3720
actggatctc aacagcggta agatccttga gagttttcgc cccgaagaac gttttccaat 3780
gatgagcact tttaaagttc tgctatgtgg cgcggtatta tcccgtattg acgccgggca 3840
agagcaactc ggtcgccgca tacactattc tcagaatgac ttggttgagt actcaccagt 3900
cacagaaaag catcttacgg atggcatgac agtaagagaa ttatgcagtg ctgccataac 3960
catgagtgat aacactgcgg ccaacttact tctgacaacg atcggaggac cgaaggagct 4020
aaccgctttt ttgcacaaca tgggggatca tgtaactcgc cttgatcgtt gggaaccgga 4080
gctgaatgaa gccataccaa acgacgagcg tgacaccacg atgcctgtag caatggcaac 4140
aacgttgcgc aaactattaa ctggcgaact acttactcta gcttcccggc aacaattaat 4200
agactggatg gaggcggata aagttgcagg accacttctg cgctcggccc ttccggctgg 4260
ctggtttatt gctgataaat ctggagccgg tgagcgtggg tctcgcggta tcattgcagc 4320
actggggcca gatggtaagc cctcccgtat cgtagttatc tacacgacgg ggagtcaggc 4380
aactatggat gaacgaaata gacagatcgc tgagataggt gcctcactga ttaagcattg 4440
gtaactgtca gaccaagttt actcatatat actttagatt gatttaaaac ttcattttta 4500
atttaaaagg atctaggtga agatcctttt tgataatctc atgaccaaaa tcccttaacg 4560
tgagttttcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga 4620
tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt 4680
ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag 4740
agcgcagata ccaaatactg tccttctagt gtagccgtag ttaggccacc acttcaagaa 4800
ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag 4860
tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca 4920
gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac 4980
cgaactgaga tacctacagc gtgagcattg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa 5040
ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc 5100
agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg 5160
tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc 5220
ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc 5280
ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcgccgcag 5340
ccgaacgacc gagcgcagcg agtcagtgag cgaggaagcg gaagagcgcc caatacgcaa 5400
accgcctctc cccgcgcgtt ggccgattca ttaatgcagc tggcacgaca ggtttcccga 5460
ctggaaagcg ggcagtgagc gcaacgcaat taatgtgagt tagctcactc attaggcacc 5520
ccaggcttta cactttatgc ttccggctcg tatgttgtgt ggaattgtga gcggataaca 5580
atttcacaca ggaaacagct atgaccatga ttacgccaag ctttgctctt aggagtttcc 5640
taatacatcc caaactcaaa tatataaagc atttgacttg ttctatgccc tagggggcgg 5700
ggggaagcta agccagcttt ttttaacatt taaaatgtta attccatttt aaatgcacag 5760
atgtttttat ttcataaggg tttcaatgtg catgaatgct gcaatattcc tgttaccaaa 5820
gctagtataa ataaaaatag ataaacgtgg aaattactta gagtttctgt cattaacgtt 5880
tccttcctca gttgacaaca taaatgcgct gctgagcaag ccagtttgca tctgtcagga 5940
tcaatttccc attatgccag tcatattaat tactagtcaa ttagttgatt tttatttttg 6000
acatatacat gtgaatgaaa gaccccacct gtaggtttgg caagctagct taagtaacgc 6060
cattttgcaa ggcatggaaa aatacataac tgagaataga aaagttcaga tcaaggtcag 6120
gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc tgtggtaagc agttcctgcc 6180
ccggctcagg gccaagaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg 6240
taagcagttc ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg tccccagatg cggtccagcc 6300
ctcagcagtt tctagagaac catcagatgt ttccagggtg ccccaaggac ctgaaatgac 6360
cctgtgcctt atttgaacta accaatcagt tcgcttctcg cttctgttcg cgcgcttatg 6420
ctccccgagc tcaataaaag agcccacaac ccctcactcg gggcgccagt cctccgattg 6480
actgagtcgc ccgggtaccc gtgtatccaa taaaccctct tgcagttgca tccgacttgt 6540
ggtctcgctg ttccttggga gggtctcctc tgagtgattg actacccgtc agcgggggtc 6600
tttcatttgg gggctcgtcc gggatcggga gacccctgcc cagggaccac cgacccacca 6660
ccgggaggta agctggccag caacttatct gtgtctgtcc gattgtctag tgtctatgac 6720
tgattttatg cgcctgcgtc ggtactagtt agctaactag ctctgtatct ggcggacccg 6780
tggtggaact gacgagttcg gaacacccgg ccgcaaccct gggagacgtc ccagggactt 6840
cgggggccgt ttttgtggcc cgacctgagt cctaaaatcc cgatcgttta ggactctttg 6900
gtgcaccccc cttagaggag ggatatgtgg ttctggtagg agacgagaac ctaaaacagt 6960
tcccgcctcc gtctgaattt ttgctttcgg tttgggaccg aagccgcgcc gcgcgtcttg 7020
tctgctgcag catcgttctg tgttgtctct gtctgactgt gtttctgtat ttgtctgaaa 7080
atatgggccc gggctagact gttaccactc ccttaagttt gaccttaggt cactggaaag 7140
atgtcgagcg gatcgctcac aaccagtcgg tagatgtcaa gaagagacgt tgggttacct 7200
tctgctctgc agaatggcca acctttaacg tcggatggcc gcgagacggc acctttaacc 7260
gagacctcat cacccaggtt aagatcaagg tcttttcacc tggcccgcat ggacacccag 7320
accaggtccc ctacatcgtg acctgggaag ccttggcttt tgacccccct ccctgggtca 7380
agccctttgt acaccctaag cctccgcctc ctcttcctcc atccgccccg tctctccccc 7440
ttgaacctcc tcgttcgacc ccgcctcgat cctcccttta tccagccctc actccttctc 7500
taggcgcccc catatggcca tatgagatct tatatggggc acccccgccc cttgtaaact 7560
tccctgaccc tgacatgaca agagttacta acagcccctc tctccaagct cacttacagg 7620
ctctctactt agtccagcac gaagtctgga gacctctggc ggcagcctac caagaacaac 7680
tggaccga 7688
<210> 403
<211> 7689
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 403
ccggtgccgc caccatggaa accgacaccc tgctgctgtg ggtgctgctg ctgtgggtgc 60
caggatccac aggacagtct gtcgtgacgc agccgccctc aatgtctgcg gccccaggac 120
agcaagtcac catctcctgc tctggaggca actccaacat tgagagaaat tatgtatcct 180
ggtacctcca gctccctgga acagccccca aactcgtcat ttttgacaat gataggcgac 240
cctcagggat tcctgaccga ttctctggct ccaagtctgg cacgtcagcc accctgggca 300
tcaccggact ccagactggg gacgaggccg attattactg cggaacatgg gatagcagcc 360
tgagaggttg ggtgttcggc ggagggacca agctgaccgt cctaggttct agaggtggtg 420
gtggtagcgg cggcggcggc tctggtggtg gtggatccct cgagatggcc gaggtgcagc 480
tggtggagtc cgggggaggc ttgatacagc ctggggggtc cctgagactc tcctgtgcag 540
cctctggatt cacctttagc aactatgcca tgaactgggt ccgccaggct ccagggaagg 600
ggctggagtg ggtctcaact attaatggtc gtggtagtag tacaatctac gcagactccg 660
tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat ctgcaaatga 720
acagcctgag agccgaggac acagccacgt attactgtgc gcgctacatc tctcgtggtc 780
tgggtgattc ttggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctcagaacaa aaactcatct 840
cagaggagga tctggcggcc gcacccacca cgacgccagc gccgcgacca ccaaccccgg 900
cgcccacgat cgcgtcgcag cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg ccagcggcgg 960
ggggcgcagt gcacacgagg gggctggact tcgcctgtga tatctacatc tgggcgcccc 1020
tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac tgcaacaaac 1080
ggggcagaaa gaagctcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca gtacaaacta 1140
ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga ggatgtgaac 1200
tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagagc cccccgcgta ccagcagggc cagaaccagc 1260
tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg 1320
gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca 1380
atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc 1440
gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca 1500
cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta acagccactc gaggatccgg 1560
attagtccaa tttgttaaag acaggatatc agtggtccag gctctagttt tgactcaaca 1620
atatcaccag ctgaagccta tagagtacga gccatagata aaataaaaga ttttatttag 1680
tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc tagcttaagt 1740
aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt tcagatcaag 1800
gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc 1860
ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc 1920
tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc agatgcggtc 1980
cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa 2040
atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct gttcgcgcgc 2100
ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg ccagtcctcc 2160
gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga 2220
cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg 2280
gggtctttca cacatgcagc atgtatcaaa attaatttgg ttttttttct taagtattta 2340
cattaaatgg ccatagtact taaagttaca ttggcttcct tgaaataaac atggagtatt 2400
cagaatgtgt cataaatatt tctaatttta agatagtatc tccattggct ttctactttt 2460
tcttttattt ttttttgtcc tctgtcttcc atttgttgtt gttgttgttt gtttgtttgt 2520
ttgttggttg gttggttaat ttttttttaa agatcctaca ctatagttca agctagacta 2580
ttagctactc tgtaacccag ggtgaccttg aagtcatggg tagcctgctg ttttagcctt 2640
cccacatcta agattacagg tatgagctat catttttggt atattgattg attgattgat 2700
tgatgtgtgt gtgtgtgatt gtgtttgtgt gtgtgactgt gaaaatgtgt gtatgggtgt 2760
gtgtgaatgt gtgtatgtat gtgtgtgtgt gagtgtgtgt gtgtgtgtgt gcatgtgtgt 2820
gtgtgtgact gtgtctatgt gtatgactgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 2880
gtgtgtgtgt gtgttgtgaa aaaatattct atggtagtga gagccaacgc tccggctcag 2940
gtgtcaggtt ggtttttgag acagagtctt tcacttagct tggaattcac tggccgtcgt 3000
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 3060
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 3120
gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg 3180
cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt 3240
aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc 3300
ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc 3360
accgtcatca ccgaaacgcg cgatgacgaa agggcctcgt gatacgccta tttttatagg 3420
ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc 3480
gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac 3540
aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt 3600
tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag 3660
aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg 3720
aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa 3780
tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc 3840
aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag 3900
tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa 3960
ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc 4020
taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg 4080
agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa 4140
caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa 4200
tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg 4260
gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag 4320
cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg 4380
caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt 4440
ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt 4500
aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac 4560
gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag 4620
atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg 4680
tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca 4740
gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga 4800
actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca 4860
gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc 4920
agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca 4980
ccgaactgag atacctacag cgtgagcatt gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa 5040
aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc 5100
cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc 5160
gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg 5220
cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat 5280
cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca 5340
gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca 5400
aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg 5460
actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac 5520
cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac 5580
aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctttgctct taggagtttc 5640
ctaatacatc ccaaactcaa atatataaag catttgactt gttctatgcc ctagggggcg 5700
gggggaagct aagccagctt tttttaacat ttaaaatgtt aattccattt taaatgcaca 5760
gatgttttta tttcataagg gtttcaatgt gcatgaatgc tgcaatattc ctgttaccaa 5820
agctagtata aataaaaata gataaacgtg gaaattactt agagtttctg tcattaacgt 5880
ttccttcctc agttgacaac ataaatgcgc tgctgagcaa gccagtttgc atctgtcagg 5940
atcaatttcc cattatgcca gtcatattaa ttactagtca attagttgat ttttattttt 6000
gacatataca tgtgaatgaa agaccccacc tgtaggtttg gcaagctagc ttaagtaacg 6060
ccattttgca aggcatggaa aaatacataa ctgagaatag aaaagttcag atcaaggtca 6120
ggaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag cagttcctgc 6180
cccggctcag ggccaagaac agatggaaca gctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg 6240
gtaagcagtt cctgccccgg ctcagggcca agaacagatg gtccccagat gcggtccagc 6300
cctcagcagt ttctagagaa ccatcagatg tttccagggt gccccaagga cctgaaatga 6360
ccctgtgcct tatttgaact aaccaatcag ttcgcttctc gcttctgttc gcgcgcttat 6420
gctccccgag ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggggcgccag tcctccgatt 6480
gactgagtcg cccgggtacc cgtgtatcca ataaaccctc ttgcagttgc atccgacttg 6540
tggtctcgct gttccttggg agggtctcct ctgagtgatt gactacccgt cagcgggggt 6600
ctttcatttg ggggctcgtc cgggatcggg agacccctgc ccagggacca ccgacccacc 6660
accgggaggt aagctggcca gcaacttatc tgtgtctgtc cgattgtcta gtgtctatga 6720
ctgattttat gcgcctgcgt cggtactagt tagctaacta gctctgtatc tggcggaccc 6780
gtggtggaac tgacgagttc ggaacacccg gccgcaaccc tgggagacgt cccagggact 6840
tcgggggccg tttttgtggc ccgacctgag tcctaaaatc ccgatcgttt aggactcttt 6900
ggtgcacccc ccttagagga gggatatgtg gttctggtag gagacgagaa cctaaaacag 6960
ttcccgcctc cgtctgaatt tttgctttcg gtttgggacc gaagccgcgc cgcgcgtctt 7020
gtctgctgca gcatcgttct gtgttgtctc tgtctgactg tgtttctgta tttgtctgaa 7080
aatatgggcc cgggctagac tgttaccact cccttaagtt tgaccttagg tcactggaaa 7140
gatgtcgagc ggatcgctca caaccagtcg gtagatgtca agaagagacg ttgggttacc 7200
ttctgctctg cagaatggcc aacctttaac gtcggatggc cgcgagacgg cacctttaac 7260
cgagacctca tcacccaggt taagatcaag gtcttttcac ctggcccgca tggacaccca 7320
gaccaggtcc cctacatcgt gacctgggaa gccttggctt ttgacccccc tccctgggtc 7380
aagccctttg tacaccctaa gcctccgcct cctcttcctc catccgcccc gtctctcccc 7440
cttgaacctc ctcgttcgac cccgcctcga tcctcccttt atccagccct cactccttct 7500
ctaggcgccc ccatatggcc atatgagatc ttatatgggg cacccccgcc ccttgtaaac 7560
ttccctgacc ctgacatgac aagagttact aacagcccct ctctccaagc tcacttacag 7620
gctctctact tagtccagca cgaagtctgg agacctctgg cggcagccta ccaagaacaa 7680
ctggaccga 7689
<210> 404
<211> 235
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 404
Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
1 5 10 15
His Ala Ala Arg Pro Ser Gln Phe Arg Val Ser Pro Leu Asp Arg Thr
20 25 30
Trp Asn Leu Gly Glu Thr Val Glu Leu Lys Cys Gln Val Leu Leu Ser
35 40 45
Asn Pro Thr Ser Gly Cys Ser Trp Leu Phe Gln Pro Arg Gly Ala Ala
50 55 60
Ala Ser Pro Thr Phe Leu Leu Tyr Leu Ser Gln Asn Lys Pro Lys Ala
65 70 75 80
Ala Glu Gly Leu Asp Thr Gln Arg Phe Ser Gly Lys Arg Leu Gly Asp
85 90 95
Thr Phe Val Leu Thr Leu Ser Asp Phe Arg Arg Glu Asn Glu Gly Cys
100 105 110
Tyr Phe Cys Ser Ala Leu Ser Asn Ser Ile Met Tyr Phe Ser His Phe
115 120 125
Val Pro Val Phe Leu Pro Ala Lys Pro Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
130 135 140
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
145 150 155 160
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
165 170 175
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
180 185 190
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Asn His
195 200 205
Arg Asn Arg Arg Arg Val Cys Lys Cys Pro Arg Pro Val Val Lys Ser
210 215 220
Gly Asp Lys Pro Ser Leu Ser Ala Arg Tyr Val
225 230 235
<210> 405
<211> 213
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 405
cccaccacga cgccagcgcc gcgaccacca accccggcgc ccacgatcgc gtcgcagccc 60
ctgtccctgc gcccagaggc gtgccggcca gcggcggggg gcgcagtgca cacgaggggg 120
ctggacttcg cctgtgatat ctacatctgg gcgcccctgg ccgggacttg tggggtcctt 180
ctcctgtcac tggttatcac cctttactgc aac 213
<210> 406
<211> 1509
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 406
atggaaaccg acaccctgct gctgtgggtg ctgctgctgt gggtgccagg atccacagga 60
cagtctgtcg tgacgcagcc tgcctccgtg tctgggtctc ctggacagtc gatcaccatc 120
tcctgcactg gaaccagcag tgacgttggt ggttataact atgtctcctg gtaccaacag 180
cacccaggca aagcccccaa actcatgatt tatgatgtca gtaagcggcc ctcaggggtt 240
tctaatcgct tctctggctc caagtctggc aacacggcct ccctgaccat ctctgggctc 300
caggctgagg acgaggctga ttattactgc agctcatata caagcagcag cactttggta 360
ttcggcggag ggaccaagct gaccgtccta ggttctagag gtggtggtgg tagcggcggc 420
ggcggctctg gtggtggtgg atccctcgag atggccgagg tgcagctggt ggagtctggg 480
ggagcctttg tacagcctgg ggggtccctg agactctcct gtgcagcctc tggattcacc 540
tttagcagct atgccatgac ctgggtccgc caggctccag ggaagggcct ggaatgggtc 600
tcgactatta gtggtcgtgg tcgtagcaca ttctacgcag actccgtgaa gggccggttt 660
accatctcca gagacaattc caagaacacg ctatatctgc aaatgaacag tctgagagcc 720
gaggacacgg ccgtatatta ctgtgcgcgc tactaccatg ctggtgcttt cgatctgtgg 780
ggtcaaggta ctctggtgac cgtctcctca gaacaaaaac tcatctcaga agaggatctg 840
gcggccgcaa ttgaagttat gtatcctcct ccttacctag acaatgagaa gagcaatgga 900
accattatcc atgtgaaagg gaaacacctt tgtccaagtc ccctatttcc cggaccttct 960
aagccctttt gggtgctggt ggtggttggt ggagtcctgg cttgctatag cttgctagta 1020
acagtggcct ttattatttt ctgggtgagg agtaagagga gcaggctcct gcacagtgac 1080
tacatgaaca tgactccccg ccgccccggg cccacccgca agcattacca gccctatgcc 1140
ccaccacgcg acttcgcagc ctatcgctcc agagtgaagt tcagcaggag cgcagacgcc 1200
cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc tataacgagc tcaatctagg acgaagagag 1260
gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc cgggaccctg agatgggggg aaagccgaga 1320
aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat gaactgcaga aagataagat ggcggaggcc 1380
tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc cggaggggca aggggcacga tggcctttac 1440
cagggtctca gtacagccac caaggacacc tacgacgccc ttcacatgca ggccctgccc 1500
cctcgctaa 1509
<210> 407
<211> 7677
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 407
ccggtgccgc caccatggaa accgacaccc tgctgctgtg ggtgctgctg ctgtgggtgc 60
caggatccac aggacagtct gtgttgacgc agcctgcctc cgtgtctggg tctcctggac 120
agtcgctcac catctcctgc actggaacca gcaatgacgt tggtgcttat aagtatgtct 180
cctggtatca acagtaccca ggcaaagccc ccaaactcat actttatgat gtctttaagc 240
ggccctcagg ggtctctaat cgcttctctg gctccaagtc tgacaacacg gcctccctga 300
ccatctctgg gctccaggct gaggacgagg ctgattatta ctgcttctca cttacaagca 360
gtaacactta tgtcttcgga actgggacca aggtcaccgt cctaggttct agaggtggtg 420
gtggtagcgg cggcggcggc tctggtggtg gtggatccct cgagatggcc cagatgcagc 480
tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc tcctgcaagg 540
cttctggtta cacctttaac agatatgcta tcacctgggt gcgacaggcc cctggacaag 600
gccttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa ttcacactat gcacagaagc 660
tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacggg cacagcctat atggagctga 720
ggaggctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gcgcatggct tacgattctt 780
ggggtcaagg tactctggtg accgtctcct cagaacaaaa actcatctca gaagaggatc 840
tggcggccgc acccaccacg acgccagcgc cgcgaccacc aaccccggcg cccacgatcg 900
cgtcgcagcc cctgtccctg cgcccagagg cgtgccggcc agcggcgggg ggcgcagtgc 960
acacgagggg gctggacttc gcctgtgata tctacatctg ggcgcccctg gccgggactt 1020
gtggggtcct tctcctgtca ctggttatca ccctttactg caacaaacgg ggcagaaaga 1080
agctcctgta tatattcaaa caaccattta tgagaccagt acaaactact caagaggaag 1140
atggctgtag ctgccgattt ccagaagaag aagaaggagg atgtgaactg agagtgaagt 1200
tcagcaggag cgcagacgcc cccgcgtacc agcagggcca gaaccagctc tataacgagc 1260
tcaatctagg acgaagagag gagtacgatg ttttggacaa gagacgtggc cgggaccctg 1320
agatgggggg aaagccgaga aggaagaacc ctcaggaagg cctgtacaat gaactgcaga 1380
aagataagat ggcggaggcc tacagtgaga ttgggatgaa aggcgagcgc cggaggggca 1440
aggggcacga tggcctttac cagggtctca gtacagccac caaggacacc tacgacgccc 1500
ttcacatgca ggccctgccc cctcgctaac agccactcga ggatccggat tagtccaatt 1560
tgttaaagac aggatatcag tggtccaggc tctagttttg actcaacaat atcaccagct 1620
gaagcctata gagtacgagc catagataaa ataaaagatt ttatttagtc tccagaaaaa 1680
ggggggaatg aaagacccca cctgtaggtt tggcaagcta gcttaagtaa cgccattttg 1740
caaggcatgg aaaaatacat aactgagaat agagaagttc agatcaaggt caggaacaga 1800
tggaacagct gaatatgggc caaacaggat atctgtggta agcagttcct gccccggctc 1860
agggccaaga acagatggaa cagctgaata tgggccaaac aggatatctg tggtaagcag 1920
ttcctgcccc ggctcagggc caagaacaga tggtccccag atgcggtcca gccctcagca 1980
gtttctagag aaccatcaga tgtttccagg gtgccccaag gacctgaaat gaccctgtgc 2040
cttatttgaa ctaaccaatc agttcgcttc tcgcttctgt tcgcgcgctt ctgctccccg 2100
agctcaataa aagagcccac aacccctcac tcggggcgcc agtcctccga ttgactgagt 2160
cgcccgggta cccgtgtatc caataaaccc tcttgcagtt gcatccgact tgtggtctcg 2220
ctgttccttg ggagggtctc ctctgagtga ttgactaccc gtcagcgggg gtctttcaca 2280
catgcagcat gtatcaaaat taatttggtt ttttttctta agtatttaca ttaaatggcc 2340
atagtactta aagttacatt ggcttccttg aaataaacat ggagtattca gaatgtgtca 2400
taaatatttc taattttaag atagtatctc cattggcttt ctactttttc ttttattttt 2460
ttttgtcctc tgtcttccat ttgttgttgt tgttgtttgt ttgtttgttt gttggttggt 2520
tggttaattt ttttttaaag atcctacact atagttcaag ctagactatt agctactctg 2580
taacccaggg tgaccttgaa gtcatgggta gcctgctgtt ttagccttcc cacatctaag 2640
attacaggta tgagctatca tttttggtat attgattgat tgattgattg atgtgtgtgt 2700
gtgtgattgt gtttgtgtgt gtgactgtga aaatgtgtgt atgggtgtgt gtgaatgtgt 2760
gtatgtatgt gtgtgtgtga gtgtgtgtgt gtgtgtgtgc atgtgtgtgt gtgtgactgt 2820
gtctatgtgt atgactgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 2880
gttgtgaaaa aatattctat ggtagtgaga gccaacgctc cggctcaggt gtcaggttgg 2940
tttttgagac agagtctttc acttagcttg gaattcactg gccgtcgttt tacaacgtcg 3000
tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt gcagcacatc cccctttcgc 3060
cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct 3120
gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt tctccttacg catctgtgcg gtatttcaca 3180
ccgcatatgg tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagccccg 3240
acacccgcca acacccgctg acgcgccctg acgggcttgt ctgctcccgg catccgctta 3300
cagacaagct gtgaccgtct ccgggagctg catgtgtcag aggttttcac cgtcatcacc 3360
gaaacgcgcg atgacgaaag ggcctcgtga tacgcctatt tttataggtt aatgtcatga 3420
taataatggt ttcttagacg tcaggtggca cttttcgggg aaatgtgcgc ggaaccccta 3480
tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct catgagacaa taaccctgat 3540
aaatgcttca ataatattga aaaaggaaga gtatgagtat tcaacatttc cgtgtcgccc 3600
ttattccctt ttttgcggca ttttgccttc ctgtttttgc tcacccagaa acgctggtga 3660
aagtaaaaga tgctgaagat cagttgggtg cacgagtggg ttacatcgaa ctggatctca 3720
acagcggtaa gatccttgag agttttcgcc ccgaagaacg ttttccaatg atgagcactt 3780
ttaaagttct gctatgtggc gcggtattat cccgtattga cgccgggcaa gagcaactcg 3840
gtcgccgcat acactattct cagaatgact tggttgagta ctcaccagtc acagaaaagc 3900
atcttacgga tggcatgaca gtaagagaat tatgcagtgc tgccataacc atgagtgata 3960
acactgcggc caacttactt ctgacaacga tcggaggacc gaaggagcta accgcttttt 4020
tgcacaacat gggggatcat gtaactcgcc ttgatcgttg ggaaccggag ctgaatgaag 4080
ccataccaaa cgacgagcgt gacaccacga tgcctgtagc aatggcaaca acgttgcgca 4140
aactattaac tggcgaacta cttactctag cttcccggca acaattaata gactggatgg 4200
aggcggataa agttgcagga ccacttctgc gctcggccct tccggctggc tggtttattg 4260
ctgataaatc tggagccggt gagcgtgggt ctcgcggtat cattgcagca ctggggccag 4320
atggtaagcc ctcccgtatc gtagttatct acacgacggg gagtcaggca actatggatg 4380
aacgaaatag acagatcgct gagataggtg cctcactgat taagcattgg taactgtcag 4440
accaagttta ctcatatata ctttagattg atttaaaact tcatttttaa tttaaaagga 4500
tctaggtgaa gatccttttt gataatctca tgaccaaaat cccttaacgt gagttttcgt 4560
tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc 4620
tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc 4680
cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac 4740
caaatactgt ccttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac 4800
cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt 4860
cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct 4920
gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat 4980
acctacagcg tgagcattga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt 5040
atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg 5100
cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt 5160
gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt 5220
tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg 5280
tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg 5340
agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg aagagcgccc aatacgcaaa ccgcctctcc 5400
ccgcgcgttg gccgattcat taatgcagct ggcacgacag gtttcccgac tggaaagcgg 5460
gcagtgagcg caacgcaatt aatgtgagtt agctcactca ttaggcaccc caggctttac 5520
actttatgct tccggctcgt atgttgtgtg gaattgtgag cggataacaa tttcacacag 5580
gaaacagcta tgaccatgat tacgccaagc tttgctctta ggagtttcct aatacatccc 5640
aaactcaaat atataaagca tttgacttgt tctatgccct agggggcggg gggaagctaa 5700
gccagctttt tttaacattt aaaatgttaa ttccatttta aatgcacaga tgtttttatt 5760
tcataagggt ttcaatgtgc atgaatgctg caatattcct gttaccaaag ctagtataaa 5820
taaaaataga taaacgtgga aattacttag agtttctgtc attaacgttt ccttcctcag 5880
ttgacaacat aaatgcgctg ctgagcaagc cagtttgcat ctgtcaggat caatttccca 5940
ttatgccagt catattaatt actagtcaat tagttgattt ttatttttga catatacatg 6000
tgaatgaaag accccacctg taggtttggc aagctagctt aagtaacgcc attttgcaag 6060
gcatggaaaa atacataact gagaatagaa aagttcagat caaggtcagg aacagatgga 6120
acagctgaat atgggccaaa caggatatct gtggtaagca gttcctgccc cggctcaggg 6180
ccaagaacag atggaacagc tgaatatggg ccaaacagga tatctgtggt aagcagttcc 6240
tgccccggct cagggccaag aacagatggt ccccagatgc ggtccagccc tcagcagttt 6300
ctagagaacc atcagatgtt tccagggtgc cccaaggacc tgaaatgacc ctgtgcctta 6360
tttgaactaa ccaatcagtt cgcttctcgc ttctgttcgc gcgcttatgc tccccgagct 6420
caataaaaga gcccacaacc cctcactcgg ggcgccagtc ctccgattga ctgagtcgcc 6480
cgggtacccg tgtatccaat aaaccctctt gcagttgcat ccgacttgtg gtctcgctgt 6540
tccttgggag ggtctcctct gagtgattga ctacccgtca gcgggggtct ttcatttggg 6600
ggctcgtccg ggatcgggag acccctgccc agggaccacc gacccaccac cgggaggtaa 6660
gctggccagc aacttatctg tgtctgtccg attgtctagt gtctatgact gattttatgc 6720
gcctgcgtcg gtactagtta gctaactagc tctgtatctg gcggacccgt ggtggaactg 6780
acgagttcgg aacacccggc cgcaaccctg ggagacgtcc cagggacttc gggggccgtt 6840
tttgtggccc gacctgagtc ctaaaatccc gatcgtttag gactctttgg tgcacccccc 6900
ttagaggagg gatatgtggt tctggtagga gacgagaacc taaaacagtt cccgcctccg 6960
tctgaatttt tgctttcggt ttgggaccga agccgcgccg cgcgtcttgt ctgctgcagc 7020
atcgttctgt gttgtctctg tctgactgtg tttctgtatt tgtctgaaaa tatgggcccg 7080
ggctagactg ttaccactcc cttaagtttg accttaggtc actggaaaga tgtcgagcgg 7140
atcgctcaca accagtcggt agatgtcaag aagagacgtt gggttacctt ctgctctgca 7200
gaatggccaa cctttaacgt cggatggccg cgagacggca cctttaaccg agacctcatc 7260
acccaggtta agatcaaggt cttttcacct ggcccgcatg gacacccaga ccaggtcccc 7320
tacatcgtga cctgggaagc cttggctttt gacccccctc cctgggtcaa gccctttgta 7380
caccctaagc ctccgcctcc tcttcctcca tccgccccgt ctctccccct tgaacctcct 7440
cgttcgaccc cgcctcgatc ctccctttat ccagccctca ctccttctct aggcgccccc 7500
atatggccat atgagatctt atatggggca cccccgcccc ttgtaaactt ccctgaccct 7560
gacatgacaa gagttactaa cagcccctct ctccaagctc acttacaggc tctctactta 7620
gtccagcacg aagtctggag acctctggcg gcagcctacc aagaacaact ggaccga 7677
<210> 408
<211> 7689
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полинуклеотид
<400> 408
ccggtgccgc caccatggaa accgacaccc tgctgctgtg ggtgctgctg ctgtgggtgc 60
caggatccac aggatcttct gagctgactc aggaccctgc tgtgtctgtg gccttgggac 120
agacagtcag gatcacatgc caaggagaca gcctcagaag ctattatgca agctggtacc 180
agcagaagcc aggacaggcc cctgtacttg tcatctatgg taaaaacaac cggccctcag 240
ggatcccaga ccgattctct ggctccagct caggaaacac agcttccttg accatcactg 300
gggctcaggc ggaagatgag gctgactatt actgtaactc ccgggacagc agtggtaacc 360
cccctgtggt attcggcgga gggaccaagc tgaccgtcct aggttctaga ggtggtggtg 420
gtagcggcgg cggcggctct ggtggtggtg gatccctcga gatggcccag gtgcagctgg 480
tggagtctgg gggaggcctg gtccaccctg gggggtccct gagactctcc tgtgcagcct 540
ctggattcac cttcagaagc catagcatga actgggtccg ccaggctcca gggaaggggc 600
tggagtgggt ctcatccatt agtagtgata gtacttacac atactacgca gactcagtga 660
agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaactc actgtatctg caaatgaaca 720
gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtgcgcg ctctggtggt cagtggaaat 780
actacgatta ctggggtcaa ggtactctgg tgaccgtctc ctcagaacaa aaactcatct 840
cagaagagga tctggcggcc gcacccacca cgacgccagc gccgcgacca ccaaccccgg 900
cgcccacgat cgcgtcgcag cccctgtccc tgcgcccaga ggcgtgccgg ccagcggcgg 960
ggggcgcagt gcacacgagg gggctggact tcgcctgtga tatctacatc tgggcgcccc 1020
tggccgggac ttgtggggtc cttctcctgt cactggttat caccctttac tgcaacaaac 1080
ggggcagaaa gaagctcctg tatatattca aacaaccatt tatgagacca gtacaaacta 1140
ctcaagagga agatggctgt agctgccgat ttccagaaga agaagaagga ggatgtgaac 1200
tgagagtgaa gttcagcagg agcgcagacg cccccgcgta ccagcagggc cagaaccagc 1260
tctataacga gctcaatcta ggacgaagag aggagtacga tgttttggac aagagacgtg 1320
gccgggaccc tgagatgggg ggaaagccga gaaggaagaa ccctcaggaa ggcctgtaca 1380
atgaactgca gaaagataag atggcggagg cctacagtga gattgggatg aaaggcgagc 1440
gccggagggg caaggggcac gatggccttt accagggtct cagtacagcc accaaggaca 1500
cctacgacgc ccttcacatg caggccctgc cccctcgcta acagccactc gaggatccgg 1560
attagtccaa tttgttaaag acaggatatc agtggtccag gctctagttt tgactcaaca 1620
atatcaccag ctgaagccta tagagtacga gccatagata aaataaaaga ttttatttag 1680
tctccagaaa aaggggggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc tagcttaagt 1740
aacgccattt tgcaaggcat ggaaaaatac ataactgaga atagagaagt tcagatcaag 1800
gtcaggaaca gatggaacag ctgaatatgg gccaaacagg atatctgtgg taagcagttc 1860
ctgccccggc tcagggccaa gaacagatgg aacagctgaa tatgggccaa acaggatatc 1920
tgtggtaagc agttcctgcc ccggctcagg gccaagaaca gatggtcccc agatgcggtc 1980
cagccctcag cagtttctag agaaccatca gatgtttcca gggtgcccca aggacctgaa 2040
atgaccctgt gccttatttg aactaaccaa tcagttcgct tctcgcttct gttcgcgcgc 2100
ttctgctccc cgagctcaat aaaagagccc acaacccctc actcggggcg ccagtcctcc 2160
gattgactga gtcgcccggg tacccgtgta tccaataaac cctcttgcag ttgcatccga 2220
cttgtggtct cgctgttcct tgggagggtc tcctctgagt gattgactac ccgtcagcgg 2280
gggtctttca cacatgcagc atgtatcaaa attaatttgg ttttttttct taagtattta 2340
cattaaatgg ccatagtact taaagttaca ttggcttcct tgaaataaac atggagtatt 2400
cagaatgtgt cataaatatt tctaatttta agatagtatc tccattggct ttctactttt 2460
tcttttattt ttttttgtcc tctgtcttcc atttgttgtt gttgttgttt gtttgtttgt 2520
ttgttggttg gttggttaat ttttttttaa agatcctaca ctatagttca agctagacta 2580
ttagctactc tgtaacccag ggtgaccttg aagtcatggg tagcctgctg ttttagcctt 2640
cccacatcta agattacagg tatgagctat catttttggt atattgattg attgattgat 2700
tgatgtgtgt gtgtgtgatt gtgtttgtgt gtgtgactgt gaaaatgtgt gtatgggtgt 2760
gtgtgaatgt gtgtatgtat gtgtgtgtgt gagtgtgtgt gtgtgtgtgt gcatgtgtgt 2820
gtgtgtgact gtgtctatgt gtatgactgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt gtgtgtgtgt 2880
gtgtgtgtgt gtgttgtgaa aaaatattct atggtagtga gagccaacgc tccggctcag 2940
gtgtcaggtt ggtttttgag acagagtctt tcacttagct tggaattcac tggccgtcgt 3000
tttacaacgt cgtgactggg aaaaccctgg cgttacccaa cttaatcgcc ttgcagcaca 3060
tccccctttc gccagctggc gtaatagcga agaggcccgc accgatcgcc cttcccaaca 3120
gttgcgcagc ctgaatggcg aatggcgcct gatgcggtat tttctcctta cgcatctgtg 3180
cggtatttca caccgcatat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg ccgcatagtt 3240
aagccagccc cgacacccgc caacacccgc tgacgcgccc tgacgggctt gtctgctccc 3300
ggcatccgct tacagacaag ctgtgaccgt ctccgggagc tgcatgtgtc agaggttttc 3360
accgtcatca ccgaaacgcg cgatgacgaa agggcctcgt gatacgccta tttttatagg 3420
ttaatgtcat gataataatg gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc 3480
gcggaacccc tatttgttta tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac 3540
aataaccctg ataaatgctt caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt 3600
tccgtgtcgc ccttattccc ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag 3660
aaacgctggt gaaagtaaaa gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg 3720
aactggatct caacagcggt aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa 3780
tgatgagcac ttttaaagtt ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc 3840
aagagcaact cggtcgccgc atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag 3900
tcacagaaaa gcatcttacg gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa 3960
ccatgagtga taacactgcg gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc 4020
taaccgcttt tttgcacaac atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg 4080
agctgaatga agccatacca aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa 4140
caacgttgcg caaactatta actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa 4200
tagactggat ggaggcggat aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg 4260
gctggtttat tgctgataaa tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag 4320
cactggggcc agatggtaag ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg 4380
caactatgga tgaacgaaat agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt 4440
ggtaactgtc agaccaagtt tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt 4500
aatttaaaag gatctaggtg aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac 4560
gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag 4620
atcctttttt tctgcgcgta atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg 4680
tggtttgttt gccggatcaa gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca 4740
gagcgcagat accaaatact gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga 4800
actctgtagc accgcctaca tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca 4860
gtggcgataa gtcgtgtctt accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc 4920
agcggtcggg ctgaacgggg ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca 4980
ccgaactgag atacctacag cgtgagcatt gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa 5040
aggcggacag gtatccggta agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc 5100
cagggggaaa cgcctggtat ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc 5160
gtcgattttt gtgatgctcg tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg 5220
cctttttacg gttcctggcc ttttgctggc cttttgctca catgttcttt cctgcgttat 5280
cccctgattc tgtggataac cgtattaccg cctttgagtg agctgatacc gctcgccgca 5340
gccgaacgac cgagcgcagc gagtcagtga gcgaggaagc ggaagagcgc ccaatacgca 5400
aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac aggtttcccg 5460
actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact cattaggcac 5520
cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg agcggataac 5580
aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctttgctct taggagtttc 5640
ctaatacatc ccaaactcaa atatataaag catttgactt gttctatgcc ctagggggcg 5700
gggggaagct aagccagctt tttttaacat ttaaaatgtt aattccattt taaatgcaca 5760
gatgttttta tttcataagg gtttcaatgt gcatgaatgc tgcaatattc ctgttaccaa 5820
agctagtata aataaaaata gataaacgtg gaaattactt agagtttctg tcattaacgt 5880
ttccttcctc agttgacaac ataaatgcgc tgctgagcaa gccagtttgc atctgtcagg 5940
atcaatttcc cattatgcca gtcatattaa ttactagtca attagttgat ttttattttt 6000
gacatataca tgtgaatgaa agaccccacc tgtaggtttg gcaagctagc ttaagtaacg 6060
ccattttgca aggcatggaa aaatacataa ctgagaatag aaaagttcag atcaaggtca 6120
ggaacagatg gaacagctga atatgggcca aacaggatat ctgtggtaag cagttcctgc 6180
cccggctcag ggccaagaac agatggaaca gctgaatatg ggccaaacag gatatctgtg 6240
gtaagcagtt cctgccccgg ctcagggcca agaacagatg gtccccagat gcggtccagc 6300
cctcagcagt ttctagagaa ccatcagatg tttccagggt gccccaagga cctgaaatga 6360
ccctgtgcct tatttgaact aaccaatcag ttcgcttctc gcttctgttc gcgcgcttat 6420
gctccccgag ctcaataaaa gagcccacaa cccctcactc ggggcgccag tcctccgatt 6480
gactgagtcg cccgggtacc cgtgtatcca ataaaccctc ttgcagttgc atccgacttg 6540
tggtctcgct gttccttggg agggtctcct ctgagtgatt gactacccgt cagcgggggt 6600
ctttcatttg ggggctcgtc cgggatcggg agacccctgc ccagggacca ccgacccacc 6660
accgggaggt aagctggcca gcaacttatc tgtgtctgtc cgattgtcta gtgtctatga 6720
ctgattttat gcgcctgcgt cggtactagt tagctaacta gctctgtatc tggcggaccc 6780
gtggtggaac tgacgagttc ggaacacccg gccgcaaccc tgggagacgt cccagggact 6840
tcgggggccg tttttgtggc ccgacctgag tcctaaaatc ccgatcgttt aggactcttt 6900
ggtgcacccc ccttagagga gggatatgtg gttctggtag gagacgagaa cctaaaacag 6960
ttcccgcctc cgtctgaatt tttgctttcg gtttgggacc gaagccgcgc cgcgcgtctt 7020
gtctgctgca gcatcgttct gtgttgtctc tgtctgactg tgtttctgta tttgtctgaa 7080
aatatgggcc cgggctagac tgttaccact cccttaagtt tgaccttagg tcactggaaa 7140
gatgtcgagc ggatcgctca caaccagtcg gtagatgtca agaagagacg ttgggttacc 7200
ttctgctctg cagaatggcc aacctttaac gtcggatggc cgcgagacgg cacctttaac 7260
cgagacctca tcacccaggt taagatcaag gtcttttcac ctggcccgca tggacaccca 7320
gaccaggtcc cctacatcgt gacctgggaa gccttggctt ttgacccccc tccctgggtc 7380
aagccctttg tacaccctaa gcctccgcct cctcttcctc catccgcccc gtctctcccc 7440
cttgaacctc ctcgttcgac cccgcctcga tcctcccttt atccagccct cactccttct 7500
ctaggcgccc ccatatggcc atatgagatc ttatatgggg cacccccgcc ccttgtaaac 7560
ttccctgacc ctgacatgac aagagttact aacagcccct ctctccaagc tcacttacag 7620
gctctctact tagtccagca cgaagtctgg agacctctgg cggcagccta ccaagaacaa 7680
ctggaccga 7689
<210> 409
<211> 25
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 409
Thr Ser Gly Gln Ala Gly Gln His His His His His His Gly Ala Tyr
1 5 10 15
Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Ser
20 25
<210> 410
<211> 75
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
олигонуклеотид
<400> 410
actagtggcc aggccggcca gcaccatcac catcaccatg gcgcataccc gtacgacgtt 60
ccggactacg cttct 75
<210> 411
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 411
Tyr Val Lys Met
1
<210> 412
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 412
Cys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp
20 25 30
Cys
<210> 413
<211> 10
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 413
Cys Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly Ile Ile
1 5 10
<210> 414
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 414
Met Phe Val Asn Met Thr Pro Cys
1 5
<210> 415
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 415
Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp
1 5
<210> 416
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 416
Cys Ile Glu Ser Thr Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys Asp
1 5 10
<210> 417
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 417
Asn Gln Gln Thr Ala Pro Val Arg Tyr Phe Leu
1 5 10
<210> 418
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 418
Gly Asp Tyr Phe Leu Leu Cys Asp
1 5
<210> 419
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 419
Met Phe Val Asn Met Thr Pro Cys Gln Leu Asn
1 5 10
<210> 420
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 420
Gly Asn Pro Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp
1 5 10
<210> 421
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 421
Leu Cys Asp Ala Glu Gly Pro Trp Gly
1 5
<210> 422
<211> 14
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 422
Gln Phe Gln Arg Gln Pro Gln Trp Asp Asp Pro Val Val Cys
1 5 10
<210> 423
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 423
Cys Met Asp Tyr Asp Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg
1 5 10 15
Cys Trp Ala Ile Gly Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro
20 25 30
Cys
<210> 424
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 424
Cys Met Asp Tyr Asp Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg
1 5 10 15
Cys Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys
20 25 30
Cys
<210> 425
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 425
Cys Met Asp Tyr Asp Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg
1 5 10 15
Cys Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp
20 25 30
Cys
<210> 426
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 426
Cys Met Asp Tyr Asp Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg
1 5 10 15
Cys Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp Ile Lys Thr Ser
20 25 30
Cys
<210> 427
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 427
Cys Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu
1 5 10 15
Cys Trp Ala Ile Gly Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro
20 25 30
Cys
<210> 428
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 428
Cys Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu
1 5 10 15
Cys Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys
20 25 30
Cys
<210> 429
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 429
Cys Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu
1 5 10 15
Cys Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp
20 25 30
Cys
<210> 430
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 430
Cys Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu
1 5 10 15
Cys Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp Ile Lys Thr Ser
20 25 30
Cys
<210> 431
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 431
Cys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Trp Ala Ile Gly Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro
20 25 30
Cys
<210> 432
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 432
Cys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys
20 25 30
Cys
<210> 433
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 433
Cys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu
1 5 10 15
Cys Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp Ile Lys Thr Ser
20 25 30
Cys
<210> 434
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 434
Cys Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu Gly Cys Lys Val
1 5 10 15
Cys Trp Ala Ile Gly Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro
20 25 30
Cys
<210> 435
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 435
Cys Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu Gly Cys Lys Val
1 5 10 15
Cys Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys
20 25 30
Cys
<210> 436
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 436
Cys Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu Gly Cys Lys Val
1 5 10 15
Cys Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp
20 25 30
Cys
<210> 437
<211> 33
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
полипептид
<400> 437
Cys Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu Gly Cys Lys Val
1 5 10 15
Cys Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp Ile Lys Thr Ser
20 25 30
Cys
<210> 438
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 438
Met Asp Tyr Asp Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg
1 5 10 15
<210> 439
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 439
Phe Lys Val Lys Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu
1 5 10 15
<210> 440
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 440
Leu Ser Ser Glu Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu
1 5 10 15
<210> 441
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 441
Arg Glu Arg Val Glu Asp Leu Phe Glu Tyr Glu Gly Cys Lys Val
1 5 10 15
<210> 442
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 442
Trp Ala Ile Gly Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro
1 5 10 15
<210> 443
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 443
Cys Ile Phe Ala Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys
1 5 10 15
<210> 444
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 444
Glu Leu Leu Thr Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp
1 5 10 15
<210> 445
<211> 15
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический
пептид
<400> 445
Ser Glu Pro Ile Phe His Cys Arg Gln Glu Asp Ile Lys Thr Ser
1 5 10 15
<---
Claims (117)
1. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный антигенсвязывающий домен, который связывается с представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), трансмембранный домен и внутриклеточный домен, где внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207;
(b) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213;
(c) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219;
(d) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225; или
(e) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
2. Химерный антигенный рецептор (CAR), содержащий внеклеточный антигенсвязывающий домен, который связывается с представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), трансмембранный домен и внутриклеточный домен, где внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит:
(a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 54;
(b) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 58;
(c) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 62;
(d) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 66; или
(e) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи, приведенной в SEQ ID NO: 70.
3. CAR по п. 1 или 2, где внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с GPRC5D с аффинностью связывания (Kd), составляющей от примерно 1×10-9 M до примерно 3×10-6 M.
4. CAR по любому из пп. 1-3, где внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит линкер между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи.
5. CAR по любому из пп. 1-4, где внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv).
6. CAR по любому из пп. 1-5, где внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv мыши.
7. CAR по любому из пп. 1-5, где внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv человека.
8. CAR по п. 5 или 7, где scFv содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116 или SEQ ID NO: 117.
9. CAR по любому из пп. 1-3, где внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой Fab, который, необязательно, является сшитым.
10. CAR по любому из пп. 1-3, где внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой F(ab)2.
11. CAR по любому из пп. 5-10, где один или более из scFv, Fab и F(ab)2 находится в слитом белке с гетерологичной последовательностью, образуя внеклеточный антигенсвязывающий домен.
12. CAR по любому из пп. 1-11, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NOS: 53, 57, 61, 65 или 69.
13. CAR по любому из пп. 1-12, где вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NOS: 54, 58, 62, 66 или 70.
14. CAR по любому из пп. 1-13, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NOS: 53, 57, 61, 65 или 69, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NOS: 54, 58, 62, 66 или 70.
15. CAR по любому из пп. 1-14, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NOS: 53, 57, 61, 65 или 69, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NOS: 54, 58, 62, 66 или 70.
16. CAR по любому из пп. 1-15, где
(a) вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54;
(b) вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58;
(c) вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62;
(d) вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66; или
(e) вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70.
17. CAR по п. 16, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54.
18. CAR по п. 16, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58.
19. CAR по п. 16, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62.
20. CAR по п. 16, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66.
21. CAR по п. 16, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70.
22. CAR по любому из пп. 1-5 и 7-17, где вариабельная области тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207.
23. CAR по любому из пп. 1-5, 7-16 и 18, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213.
24. CAR по любому из пп. 1-5, 7-16 и 19, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.
25. CAR по любому из пп. 1-5, 7-16 и 20, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.
26. CAR по любому из пп. 1-5, 7-16 и 21, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
27. CAR по любому из пп. 1-26, где сигнальный пептид ковалентно связан с N-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена.
28. CAR по любому из пп. 1-27, где внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97.
29. CAR по п. 28, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.
30. CAR по п. 28 или 29, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62.
31. CAR по любому из пп. 1-27, где внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной или двумя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97.
32. CAR по п. 31, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.
33. CAR по п. 31 или 32, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66.
34. CAR по любому из пп. 1-27, где внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97.
35. CAR по п. 34, где вариабельная область тяжелой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; и вариабельная область легкой цепи содержит CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.
36. CAR по п. 34 или 35, где вариабельная область тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельная область легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70.
37. CAR по любому из пп. 1-36, где трансмембранный домен содержит полипептид CD8, полипептид CD28, полипептид CD3ζ, полипептид CD4, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид CTLA-4, полипептид PD-1, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид или их сочетание.
38. CAR по п. 37, где трансмембранный домен содержит полипептид CD8.
39. CAR по п. 37, где трансмембранный домен содержит полипептид CD28.
40. CAR по любому из пп. 1-39, где внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ.
41. CAR по любому из пп. 1-40, где внутриклеточный домен дополнительно содержит по меньшей мере одну сигнальную область.
42. CAR по п. 41, где по меньшей мере одна сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10, полипептид PD-1, полипептид CTLA-4, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид или их сочетание.
43. CAR по п. 41 или 42, где по меньшей мере одна сигнальная область содержит по меньшей мере одну костимулирующую сигнальную область.
44. CAR по п. 43, где по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10 или их сочетание.
45. CAR по п. 44, где по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28.
46. CAR по п. 44, где по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид 4-1BB.
47. CAR по любому из пп. 43-45, где трансмембранный домен содержит полипептид CD28 и внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ и по меньшей мере одну костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28.
48. CAR по любому из пп. 43, 44 и 46, где трансмембранный домен содержит полипептид CD8 и внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ и по меньшей мере одну костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид 4-1BB.
49. CAR по любому из пп. 43, 44 и 46, где трансмембранный домен содержит полипептид CD28 и внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ и по меньшей мере одну костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид 4-1BB.
50. CAR по любому из пп. 1-49, который экспрессируется рекомбинантно.
51. CAR по любому из пп. 1-50, который экспрессируется с вектора.
52. CAR по п. 51, где вектор представляет собой γ-ретровирусный вектор.
53. CAR по п. 51, где вектор представляет собой лентивирусный вектор.
54. Выделенная иммунореактивная клетка, содержащая CAR по любому из пп. 1-53, где указанная иммунореактивная клетка предназначена для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR) и ее выбирают из группы, состоящей из T-клетки, клетки-естественного киллера (NK), цитотоксического T-лимфоцита (CTL), регуляторной T-клетки, лимфоидной клетки-предшественника, клетки-предшественника T-клетки и стволовой клетки, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки.
55. Иммунореактивная клетка по п. 54, которая трансдуцирована CAR.
56. Иммунореактивная клетка по п. 54 или 55, где CAR конститутивно экспрессируется на поверхности иммунореактивной клетки.
57. Иммунореактивная клетка по любому из пп. 54-56, где указанная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере один костимулирующий лиганд, вследствие чего иммунореактивная клетка экспрессирует по меньшей мере один костимулирующий лиганд.
58. Иммунореактивная клетка по п. 57, отличающаяся тем, что по меньшей мере один костимулирующий лиганд выбирают из группы, состоящей из 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14, а также их сочетаний.
59. Иммунореактивная клетка по любому из пп. 54-58, где указанная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована молекулой нуклеиновой кислоты, кодирующей по меньшей мере один цитокин, вследствие чего иммунореактивная клетка секретирует по меньшей мере один цитокин.
60. Иммунореактивная клетка по п. 59, отличающаяся тем, что по меньшей мере один цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21, а также их сочетаний.
61. Иммунореактивная клетка по любому из пп. 54-60, представляющая собой T-клетку.
62. Т-клетка, экспрессирующая CAR по любому из пп. 1-53.
63. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая химерный антигенный рецептор (CAR) по любому из пп. 1-53.
64. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 397.
65. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 398.
66. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 399.
67. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 400.
68. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 401.
69. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 402.
70. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 403.
71. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 406.
72. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 407.
73. Молекула нуклеиновой кислоты по п. 63, содержащая нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 408.
74. Экспрессионный вектор, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 63-73.
75. Экспрессионный вектор по п. 74, представляющий собой γ-ретровирусный вектор.
76. Экспрессионный вектор по п. 74, представляющий собой лентивирусный вектор.
77. Клетка-хозяин, экспрессирующая молекулу нуклеиновой кислоты по любому из пп. 63-73.
78. Клетка-хозяин по п. 77, представляющая собой T-клетку.
79. Способ уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта, включающий введение указанному субъекту эффективного количества композиции, содержащей одну или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61, где указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит.
80. Способ по п. 79, приводящий к уменьшению количества опухолевых клеток.
81. Способ по п. 79, приводящий к уменьшению размера опухоли.
82. Способ по п. 79, приводящий к уничтожению опухоли у субъекта.
83. Способ по любому из пп. 79-82, где опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема.
84. Способ по п. 83, где опухоль представляет собой множественную миелому.
85. Способ по любому из пп. 79-84, где субъект является человеком.
86. Способ продления срока выживания субъекта, имеющего опухоль, экспрессирующую представителя D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), включающий введение указанному субъекту эффективного количества композиции, содержащей одну или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61, где указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит.
87. Способ продления срока выживания субъекта, имеющего опухоль, включающий введение указанному субъекту эффективного количества композиции, содержащей одну или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61, где:
указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит; и
указанная опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема.
88. Способ по п. 86 или 87, где указанная опухоль представляет собой множественную миелому.
89. Способ по любому из пп. 86-88, приводящий к уменьшению или уничтожению опухолевой нагрузки у субъекта.
90. Способ получения иммунореактивной клетки, которая связывается с представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), включающий введение в иммунореактивную клетку молекулы нуклеиновой кислоты по любому из пп. 63-73, где указанную иммунореактивную клетку выбирают из группы, состоящей из T-клетки, клетки-естественного киллера (NK), цитотоксического T-лимфоцита (CTL), регуляторной T-клетки, лимфоидной клетки-предшественника, клетки-предшественника T-клетки и стволовой клетки, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки.
91. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, экспрессирующей представителя D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), содержащая эффективное количество одной или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61 и фармацевтически приемлемый эксципиент, где указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит.
92. Фармацевтическая композиция для лечения опухоли, содержащая эффективное количество одной или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61 и фармацевтически приемлемый эксципиент, где:
указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит; и
указанная опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема.
93. Фармацевтическая композиция по п. 91 или 92, где указанная опухоль представляет собой множественную миелому.
94. Набор для лечения опухоли, экспрессирующей представителя D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), включающий одну или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61 и письменные инструкции по применению указанной одной или более иммунореактивной клетки для лечения указанной опухоли, где указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит.
95. Набор для лечения опухоли, включающий одну или более из иммунореактивной клетки по любому из пп. 54-61 и письменные инструкции по применению указанной одной или более иммунореактивной клетки для лечения указанной опухоли, где:
указанная одна или более иммунореактивная клетка представляет собой клетку-естественного киллера (NK), CD8+ цитотоксический T-лимфоцит (CTL) или CD8+ цитотоксический T-лимфоцит и CD4+ цитотоксический T-лимфоцит; и
указанная опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема.
96. Набор по п. 94 или 95, где указанная опухоль представляет собой множественную миелому.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201462088286P | 2014-12-05 | 2014-12-05 | |
| US62/088,286 | 2014-12-05 | ||
| PCT/US2015/064102 WO2016090312A1 (en) | 2014-12-05 | 2015-12-04 | Chimeric antigen receptors targeting g-protein coupled receptor and uses thereof |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2017123551A RU2017123551A (ru) | 2019-01-14 |
| RU2017123551A3 RU2017123551A3 (ru) | 2019-07-17 |
| RU2762359C2 true RU2762359C2 (ru) | 2021-12-20 |
Family
ID=56092565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017123551A RU2762359C2 (ru) | 2014-12-05 | 2015-12-04 | Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и их применение |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US10633426B2 (ru) |
| EP (2) | EP3227339B1 (ru) |
| JP (3) | JP6919091B2 (ru) |
| KR (1) | KR102612367B1 (ru) |
| CN (4) | CN107428829B (ru) |
| AU (2) | AU2015357518B2 (ru) |
| BR (1) | BR112017011920A2 (ru) |
| CA (1) | CA2969864A1 (ru) |
| CY (1) | CY1125008T1 (ru) |
| DK (1) | DK3227339T3 (ru) |
| ES (1) | ES2899779T3 (ru) |
| HR (1) | HRP20211978T1 (ru) |
| HU (1) | HUE057777T2 (ru) |
| IL (2) | IL252621B2 (ru) |
| LT (1) | LT3227339T (ru) |
| MX (2) | MX2017007242A (ru) |
| MY (1) | MY192065A (ru) |
| PH (1) | PH12017501044A1 (ru) |
| PL (1) | PL3227339T3 (ru) |
| PT (1) | PT3227339T (ru) |
| RS (1) | RS62870B1 (ru) |
| RU (1) | RU2762359C2 (ru) |
| SA (1) | SA517381665B1 (ru) |
| SG (2) | SG11201704547RA (ru) |
| SI (1) | SI3227339T1 (ru) |
| WO (1) | WO2016090312A1 (ru) |
Families Citing this family (74)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2899779T3 (es) | 2014-12-05 | 2022-03-14 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Receptores antigénicos quiméricos dirigidos a receptor acoplado a proteína G y usos de los mismos |
| SG11201704552TA (en) * | 2014-12-05 | 2017-07-28 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use |
| CN114634943A (zh) | 2015-05-18 | 2022-06-17 | T细胞受体治疗公司 | 使用融合蛋白对tcr重编程的组合物和方法 |
| EP3494138A1 (en) | 2016-08-02 | 2019-06-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| CA3032806C (en) * | 2016-08-05 | 2021-04-27 | Y-Biologics Inc. | Antibody to programmed death-ligand 1 (pd-l1) and use thereof |
| WO2018067993A1 (en) | 2016-10-07 | 2018-04-12 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for t-cell receptors reprogramming using fusion proteins |
| JP7291396B2 (ja) | 2016-11-22 | 2023-06-15 | ティーシーアール２ セラピューティクス インク． | 融合タンパク質を用いたｔｃｒの再プログラミングのための組成物及び方法 |
| US11299530B2 (en) | 2017-01-05 | 2022-04-12 | Kahr Medical Ltd. | SIRP alpha-CD70 fusion protein and methods of use thereof |
| DK3565828T3 (da) | 2017-01-05 | 2022-02-21 | Kahr Medical Ltd | Sirp1 alpha-41bbl-fusionsprotein og fremgangsmåder til anvendelse deraf |
| RU2769513C2 (ru) | 2017-01-05 | 2022-04-01 | Кахр Медикал Лтд. | Слитый белок pd1-4-1bbl и способы его применения |
| WO2018127916A1 (en) | 2017-01-05 | 2018-07-12 | Kahr Medical Ltd. | A pd1-cd70 fusion protein and methods of use thereof |
| RU2019128134A (ru) * | 2017-02-07 | 2021-03-09 | Дайити Санкио Компани, Лимитед | Антитело против gprc5d и молекула, содержащая антитело |
| CN110741016A (zh) | 2017-04-26 | 2020-01-31 | 优瑞科生物技术公司 | 嵌合抗体/t-细胞受体构筑体及其用途 |
| AU2018313950A1 (en) | 2017-08-09 | 2020-02-13 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for producing genetically engineered cell compositions and related compositions |
| MA49981A (fr) | 2017-08-09 | 2020-06-17 | Juno Therapeutics Inc | Procédés et compositions de préparation de cellules génétiquement modifiées |
| MA50079A (fr) | 2017-09-07 | 2020-07-15 | Juno Therapeutics Inc | Procédés d'identification de caractéristiques cellulaires relatives à des réponses associées à une thérapie cellulaire |
| CN111902159A (zh) | 2017-11-01 | 2020-11-06 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 对b细胞成熟抗原（bcma）具有特异性的嵌合抗原受体 |
| JP7258899B2 (ja) | 2017-11-01 | 2023-04-17 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | Ｔ細胞組成物を作製するための方法 |
| US12031975B2 (en) | 2017-11-01 | 2024-07-09 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy |
| CN111542596A (zh) | 2017-11-01 | 2020-08-14 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 产生工程化细胞的治疗性组合物的方法 |
| SG11202003501XA (en) | 2017-11-01 | 2020-05-28 | Juno Therapeutics Inc | Antibodies and chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen |
| US11564946B2 (en) | 2017-11-01 | 2023-01-31 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy |
| JP2021502829A (ja) | 2017-11-14 | 2021-02-04 | メモリアル スローン ケタリング キャンサー センター | Ｉｌ−３６を分泌する免疫応答性細胞およびその使用 |
| WO2019109053A1 (en) | 2017-12-01 | 2019-06-06 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for dosing and for modulation of genetically engineered cells |
| SG11202005228YA (en) | 2017-12-08 | 2020-07-29 | Juno Therapeutics Inc | Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof |
| CN112004824B (zh) | 2017-12-08 | 2024-09-13 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 生产工程化t细胞组合物的过程 |
| CN112203680A (zh) | 2017-12-08 | 2021-01-08 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 用于细胞疗法的表型标记和相关方法 |
| CN112888709A (zh) * | 2018-03-30 | 2021-06-01 | 优瑞科生物技术公司 | 标靶cd22的构建体和其用途 |
| MX2020012286A (es) | 2018-05-16 | 2021-04-28 | Janssen Biotech Inc | Metodos para tratar canceres y potenciar la eficacia de agentes terapeuticos para el redireccionamiento de celulas t. |
| EP3833759A1 (en) | 2018-08-09 | 2021-06-16 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for assessing integrated nucleic acids |
| AU2019318560A1 (en) | 2018-08-09 | 2021-02-25 | Juno Therapeutics, Inc. | Processes for generating engineered cells and compositions thereof |
| EP3867279A4 (en) * | 2018-10-19 | 2022-07-13 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | CHIMERA ANTIGEN RECEPTORS TARGETING SIALYL LEWIS A AND THEIR USES |
| EP3874024A1 (en) | 2018-10-31 | 2021-09-08 | Juno Therapeutics GmbH | Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same |
| TW202021981A (zh) * | 2018-11-01 | 2020-06-16 | 美商奇諾治療有限公司 | G蛋白偶合受體c類第5群成員d（gprc5d）特異性嵌合抗原受體 |
| PT3886875T (pt) | 2018-11-30 | 2024-06-27 | Juno Therapeutics Inc | Métodos para tratamento utilizando terapia celular adotiva |
| CA3127025A1 (en) * | 2019-01-18 | 2020-07-23 | Janssen Biotech, Inc. | Gprc5d chimeric antigen receptors and cells expressing the same |
| JP2022531577A (ja) | 2019-05-01 | 2022-07-07 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 改変されたｃｄ２４７遺伝子座からキメラ受容体を発現する細胞、関連ポリヌクレオチド、および方法 |
| WO2020223535A1 (en) | 2019-05-01 | 2020-11-05 | Juno Therapeutics, Inc. | Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods |
| MX2021015317A (es) | 2019-06-12 | 2022-03-11 | Juno Therapeutics Inc | Terapia de combinacion de una terapia citotoxica mediada por celulas y un inhibidor de una proteina de la familia bcl2 de prosupervivencia. |
| KR20220066892A (ko) | 2019-08-22 | 2022-05-24 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | Ｔ 세포 요법 및 제스트 동족체 2의 인핸서 (ｅｚｈ2) 억제제의 병용 요법 및 관련 방법 |
| WO2021084050A1 (en) | 2019-10-30 | 2021-05-06 | Juno Therapeutics Gmbh | Cell selection and/or stimulation devices and methods of use |
| EP4097218A1 (en) | 2020-01-28 | 2022-12-07 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods for t cell transduction |
| CA3179763A1 (en) | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Jonathan Belk | Compounds specific to coronavirus s protein and uses thereof |
| CN115803824A (zh) | 2020-05-13 | 2023-03-14 | 朱诺治疗学股份有限公司 | 鉴定与临床反应相关的特征的方法及其用途 |
| JP2023531531A (ja) | 2020-06-26 | 2023-07-24 | ジュノ セラピューティクス ゲーエムベーハー | 組換え受容体を条件付きで発現する操作されたｔ細胞、関連ポリヌクレオチド、および方法 |
| JP2023549780A (ja) | 2020-11-04 | 2023-11-29 | ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド | 改変されたインバリアントｃｄ３免疫グロブリンスーパーファミリー鎖遺伝子座からキメラ受容体を発現する細胞ならびに関連するポリヌクレオチドおよび方法 |
| JP2024500847A (ja) | 2020-12-18 | 2024-01-10 | センチュリー セラピューティクス，インコーポレイテッド | 適合可能な受容体特異性を有するキメラ抗原受容体システム |
| WO2022148370A1 (en) * | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Lanova Medicines Development Co., Ltd. | Anti-gprc5d monoclonal antibodies and uses thereof |
| CN117693508A (zh) | 2021-03-03 | 2024-03-12 | 朱诺治疗学股份有限公司 | T细胞疗法和dgk抑制剂的组合 |
| WO2022197949A2 (en) | 2021-03-17 | 2022-09-22 | Myeloid Therapeutics, Inc. | Engineered chimeric fusion protein compositions and methods of use thereof |
| KR20230158573A (ko) | 2021-03-22 | 2023-11-20 | 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 | 바이러스 벡터 입자의 효력을 평가하는 방법 |
| AU2022241654A1 (en) | 2021-03-22 | 2023-09-28 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of determining potency of a therapeutic cell composition |
| CN116964100A (zh) * | 2021-04-07 | 2023-10-27 | 株式会社Lg化学 | Gucy2c结合多肽及其用途 |
| WO2022234009A2 (en) | 2021-05-06 | 2022-11-10 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods for stimulating and transducing t cells |
| CN115386010A (zh) * | 2021-05-23 | 2022-11-25 | 上海邦耀生物科技有限公司 | 靶向gprc5d的嵌合抗原受体及其用途 |
| EP4397686A1 (en) | 2021-08-30 | 2024-07-10 | Oricell Therapeutics Co., Ltd. | Anti-gprc5d antigen binding protein and use thereof |
| US20230136301A1 (en) | 2021-11-03 | 2023-05-04 | Janssen Biotech, Inc. | Corticosteriod Reduction in Treatment with Anti-CD38 Antibody |
| WO2023134718A1 (zh) | 2022-01-14 | 2023-07-20 | 原启生物科技(上海)有限责任公司 | 靶向gprc5d的嵌合抗原受体及其用途 |
| WO2023147515A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Juno Therapeutics, Inc. | Methods of manufacturing cellular compositions |
| WO2023143537A1 (zh) | 2022-01-29 | 2023-08-03 | 恺兴生命科技(上海)有限公司 | Gprc5d抗体及其应用 |
| WO2023213969A1 (en) | 2022-05-05 | 2023-11-09 | Juno Therapeutics Gmbh | Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use |
| WO2023220655A1 (en) | 2022-05-11 | 2023-11-16 | Celgene Corporation | Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy |
| WO2023225569A1 (en) | 2022-05-17 | 2023-11-23 | Umoja Biopharma, Inc. | Manufacturing viral particles |
| WO2023230581A1 (en) | 2022-05-25 | 2023-11-30 | Celgene Corporation | Methods of manufacturing t cell therapies |
| WO2023240282A1 (en) | 2022-06-10 | 2023-12-14 | Umoja Biopharma, Inc. | Engineered stem cells and uses thereof |
| WO2023250122A1 (en) * | 2022-06-24 | 2023-12-28 | University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education | Molecules that bind to enpp1 polypeptides |
| WO2024007020A1 (en) | 2022-06-30 | 2024-01-04 | Indapta Therapeutics, Inc. | Combination of engineered natural killer (nk) cells and antibody therapy and related methods |
| US20240041929A1 (en) | 2022-08-05 | 2024-02-08 | Juno Therapeutics, Inc. | Chimeric antigen receptors specific for gprc5d and bcma |
| WO2024054944A1 (en) | 2022-09-08 | 2024-03-14 | Juno Therapeutics, Inc. | Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing |
| WO2024097992A2 (en) | 2022-11-04 | 2024-05-10 | Umoja Biopharma, Inc. | Particles displaying adhesion-molecule fusions |
| WO2024100604A1 (en) | 2022-11-09 | 2024-05-16 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods for manufacturing engineered immune cells |
| WO2024102954A1 (en) | 2022-11-10 | 2024-05-16 | Massachusetts Institute Of Technology | Activation induced clipping system (aics) |
| WO2024161021A1 (en) | 2023-02-03 | 2024-08-08 | Juno Therapeutics Gmbh | Methods for non-viral manufacturing of engineered immune cells |
| CN117229407B (zh) * | 2023-11-14 | 2024-02-20 | 成都优赛诺生物科技有限公司 | 一种靶向gprc5d的单域抗体、嵌合抗原受体及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526517C2 (ru) * | 2007-10-25 | 2014-08-20 | Треллис Байосайенс,Инк. | Антитела против g-белка распираторно-синцитиального вируса (rsv) |
| US20140322183A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-10-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy |
Family Cites Families (41)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5091513A (en) | 1987-05-21 | 1992-02-25 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic antibody binding sites |
| US5132405A (en) | 1987-05-21 | 1992-07-21 | Creative Biomolecules, Inc. | Biosynthetic antibody binding sites |
| JPS6412935A (en) | 1987-07-02 | 1989-01-17 | Mitsubishi Electric Corp | Constant-speed travel device for vehicle |
| US5399346A (en) | 1989-06-14 | 1995-03-21 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Gene therapy |
| US6436703B1 (en) | 2000-03-31 | 2002-08-20 | Hyseq, Inc. | Nucleic acids and polypeptides |
| WO2002002641A1 (en) | 2000-06-16 | 2002-01-10 | Human Genome Sciences, Inc. | Antibodies that immunospecifically bind to blys |
| EP1463523A4 (en) | 2001-08-20 | 2005-08-10 | Genentech Inc | PROTEIN AND NUCLEIC ACID OF THE GENDER INDUCED BY GPCR-LIKE RETINIC ACID 1 |
| AU2002367145A1 (en) * | 2001-12-27 | 2003-07-15 | Sumitomo Pharmaceuticals Co., Ltd. | Remedies for anorexia or lifestyle-related diseases and method of screening the same |
| US7446190B2 (en) | 2002-05-28 | 2008-11-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Nucleic acids encoding chimeric T cell receptors |
| US20040110139A1 (en) * | 2002-12-10 | 2004-06-10 | Isis Pharmaceuticals Inc. | Modulation of G protein-coupled receptor 3 expression |
| AU2003299778A1 (en) | 2002-12-20 | 2004-07-22 | Protein Design Labs, Inc. | Antibodies against gpr64 and uses thereof |
| WO2004072117A2 (en) | 2003-02-13 | 2004-08-26 | Pharmacia Corporation | Antibodies to c-met for the treatment of cancers |
| WO2005019258A2 (en) | 2003-08-11 | 2005-03-03 | Genentech, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immune related diseases |
| PL1691837T3 (pl) * | 2003-12-10 | 2012-11-30 | Squibb & Sons Llc | IP-10 przeciwciała i ich zastosowanie |
| US20050266008A1 (en) * | 2004-03-29 | 2005-12-01 | Medarex, Inc. | Human anti-IRTA-5 antibodies |
| MX2009001293A (es) | 2006-08-03 | 2009-02-11 | Astrazeneca Ab | Anticuerpos dirigidos a (v(6 y usos de los mismos. |
| US9512236B2 (en) | 2006-12-19 | 2016-12-06 | Ablynx N.V. | Amino acid sequences directed against GPCRS and polypeptides comprising the same for the treatment of GPCR-related diseases and disorders |
| EP2856876B1 (en) | 2007-03-30 | 2018-01-31 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Constitutive expression of costimulatory ligands on adoptively transferred T lymphocytes |
| CA2699394C (en) | 2007-09-17 | 2020-03-24 | The Regents Of The University Of California | Internalizing human monoclonal antibodies targeting prostate cancer cells in situ |
| US7947807B2 (en) | 2007-10-15 | 2011-05-24 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Method for obtaining G protein-coupled receptor (GPCR) diffraction-quality crystals employing a monoclonal antibody that binds to the third intracellular loop (IL3) |
| JP2011512332A (ja) | 2008-02-11 | 2011-04-21 | キュアー テック リミテッド | 腫瘍治療のためのモノクローナル抗体 |
| US9217032B2 (en) | 2010-01-08 | 2015-12-22 | Les Laboratoires Servier | Methods for treating colorectal cancer |
| ES2739711T3 (es) | 2010-07-22 | 2020-02-03 | John W Schrader | Anticuerpo de protección cruzada contra la infección por el virus de la gripe |
| SG190997A1 (en) | 2010-12-09 | 2013-07-31 | Univ Pennsylvania | Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer |
| WO2013033626A2 (en) * | 2011-08-31 | 2013-03-07 | Trustees Of Dartmouth College | Nkp30 receptor targeted therapeutics |
| CN103483452B (zh) * | 2012-06-12 | 2021-08-13 | 上海细胞治疗集团有限公司 | 双信号独立的嵌合抗原受体及其用途 |
| WO2014087010A1 (en) | 2012-12-07 | 2014-06-12 | Ablynx N.V. | IMPROVED POLYPEPTIDES DIRECTED AGAINST IgE |
| JO3519B1 (ar) | 2013-01-25 | 2020-07-05 | Amgen Inc | تركيبات أجسام مضادة لأجل cdh19 و cd3 |
| EP3881868B1 (en) * | 2013-02-15 | 2023-09-27 | The Regents Of The University Of California | Chimeric antigen receptor and methods of use thereof |
| ES2645393T3 (es) * | 2013-05-29 | 2017-12-05 | Cellectis | Métodos de manipulación de linfocitos T para inmunoterapia usando el sistema de nucleasa Cas guiada por ARN |
| WO2015142675A2 (en) | 2014-03-15 | 2015-09-24 | Novartis Ag | Treatment of cancer using chimeric antigen receptor |
| EP3164417A1 (en) | 2014-07-01 | 2017-05-10 | Pfizer Inc. | Bispecific heterodimeric diabodies and uses thereof |
| EP3193915A1 (en) | 2014-07-21 | 2017-07-26 | Novartis AG | Combinations of low, immune enhancing. doses of mtor inhibitors and cars |
| ES2899779T3 (es) | 2014-12-05 | 2022-03-14 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Receptores antigénicos quiméricos dirigidos a receptor acoplado a proteína G y usos de los mismos |
| SG11201704552TA (en) * | 2014-12-05 | 2017-07-28 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies targeting g-protein coupled receptor and methods of use |
| US11421013B2 (en) | 2015-10-23 | 2022-08-23 | Eureka Therapeutics, Inc. | Antibody/T-cell receptor chimeric constructs and uses thereof |
| IL259747B (en) | 2015-12-04 | 2022-09-01 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Antibodies against fcrl5 and methods of their use |
| AU2017244108B2 (en) | 2016-03-29 | 2021-03-18 | University Of Southern California | Chimeric antigen receptors targeting cancer |
| WO2017173403A1 (en) | 2016-03-31 | 2017-10-05 | University Of Southern California | A highly sensitive and specific luciferase based reporter assay for antigen detection |
| CN112125976B (zh) | 2018-01-26 | 2022-06-03 | 重庆精准生物技术有限公司 | 改造的铰链及其在构建car骨架中的应用 |
| TW202021981A (zh) | 2018-11-01 | 2020-06-16 | 美商奇諾治療有限公司 | G蛋白偶合受體c類第5群成員d（gprc5d）特異性嵌合抗原受體 |
-
2015
- 2015-12-04 ES ES15865633T patent/ES2899779T3/es active Active
- 2015-12-04 HU HUE15865633A patent/HUE057777T2/hu unknown
- 2015-12-04 CN CN201580075557.4A patent/CN107428829B/zh active Active
- 2015-12-04 DK DK15865633.0T patent/DK3227339T3/da active
- 2015-12-04 CN CN202111126092.4A patent/CN113683711A/zh active Pending
- 2015-12-04 IL IL252621A patent/IL252621B2/en unknown
- 2015-12-04 AU AU2015357518A patent/AU2015357518B2/en active Active
- 2015-12-04 WO PCT/US2015/064102 patent/WO2016090312A1/en active Application Filing
- 2015-12-04 EP EP15865633.0A patent/EP3227339B1/en active Active
- 2015-12-04 CN CN202410434671.2A patent/CN118271463A/zh active Pending
- 2015-12-04 EP EP21201788.3A patent/EP4015534A1/en active Pending
- 2015-12-04 RS RS20211596A patent/RS62870B1/sr unknown
- 2015-12-04 SI SI201531772T patent/SI3227339T1/sl unknown
- 2015-12-04 RU RU2017123551A patent/RU2762359C2/ru active
- 2015-12-04 KR KR1020177018389A patent/KR102612367B1/ko active IP Right Grant
- 2015-12-04 MX MX2017007242A patent/MX2017007242A/es unknown
- 2015-12-04 PT PT158656330T patent/PT3227339T/pt unknown
- 2015-12-04 HR HRP20211978TT patent/HRP20211978T1/hr unknown
- 2015-12-04 BR BR112017011920A patent/BR112017011920A2/pt active IP Right Grant
- 2015-12-04 MY MYPI2017000855A patent/MY192065A/en unknown
- 2015-12-04 SG SG11201704547RA patent/SG11201704547RA/en unknown
- 2015-12-04 LT LTEPPCT/US2015/064102T patent/LT3227339T/lt unknown
- 2015-12-04 JP JP2017529741A patent/JP6919091B2/ja active Active
- 2015-12-04 PL PL15865633T patent/PL3227339T3/pl unknown
- 2015-12-04 SG SG10202007326QA patent/SG10202007326QA/en unknown
- 2015-12-04 CN CN202111119531.9A patent/CN113968912A/zh active Pending
- 2015-12-04 IL IL310130A patent/IL310130A/en unknown
- 2015-12-04 CA CA2969864A patent/CA2969864A1/en active Pending
-
2017
- 2017-06-05 MX MX2021008798A patent/MX2021008798A/es unknown
- 2017-06-05 US US15/613,800 patent/US10633426B2/en active Active
- 2017-06-05 PH PH12017501044A patent/PH12017501044A1/en unknown
- 2017-06-05 SA SA517381665A patent/SA517381665B1/ar unknown
-
2020
- 2020-02-21 US US16/798,059 patent/US11820806B2/en active Active
- 2020-02-21 US US16/798,104 patent/US11866478B2/en active Active
- 2020-02-21 US US16/798,151 patent/US10906956B2/en active Active
- 2020-11-30 JP JP2020198690A patent/JP2021040652A/ja not_active Withdrawn
-
2022
- 2022-01-06 AU AU2022200052A patent/AU2022200052A1/en active Pending
- 2022-02-07 CY CY20221100105T patent/CY1125008T1/el unknown
-
2023
- 2023-05-12 JP JP2023079310A patent/JP2023091037A/ja active Pending
- 2023-11-22 US US18/517,766 patent/US20240294599A1/en active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2526517C2 (ru) * | 2007-10-25 | 2014-08-20 | Треллис Байосайенс,Инк. | Антитела против g-белка распираторно-синцитиального вируса (rsv) |
| US20140322183A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-10-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| HIRANO M et. al. "Novel reciprocal regulation of cAMP signaling and apoptosis by orphan G-protein-coupled receptor GPRC5A gene expression", Biochemical and Biophysical Research Communications, 2006, Vol. 351, pp. 185-191. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2762359C2 (ru) | Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на рецептор, связанный с g-белками, и их применение | |
| US20220089750A1 (en) | Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof | |
| RU2761632C2 (ru) | Химерные антигенные рецепторы, нацеленные на антиген созревания в-клеток, и их применение | |
| CN110650975B (zh) | 双顺反子嵌合抗原受体及其用途 | |
| TWI840351B (zh) | T細胞受體及表現其之工程化細胞 | |
| US11059891B2 (en) | Chimeric antigen receptors targeting Fc receptor-like 5 and uses thereof | |
| KR20140004174A (ko) | 암 치료를 위한 조성물 및 방법 | |
| CN111918877A (zh) | 抗cd33嵌合抗原受体及其用途 | |
| AU2017240233A1 (en) | A highly sensitive and specific luciferase based reporter assay for antigen detection | |
| JP2022502054A (ja) | ドミナントネガティブＦａｓを発現する免疫応答性細胞およびその使用 | |
| KR20230133869A (ko) | T 세포 및 종양 침윤성 림프구의 확장을 위한 조성물및 방법 | |
| KR20220041214A (ko) | Il-1 수퍼패밀리의 사이토카인의 시공적 제한 활성으로 무장된 면역반응성 세포 | |
| US20220267420A1 (en) | Foxp3 targeting agent compositions and methods of use for adoptive cell therapy | |
| CN113840918A (zh) | 优化的rag1缺陷基因疗法 | |
| CN114945673A (zh) | 无限增殖化成肌细胞系及其用途 | |
| CN115515605A (zh) | 表达造血生长因子受体的nk细胞或t细胞及用于治疗癌症的用途 | |
| EP4370541A1 (en) | Engineered t cell receptors fused to binding domains from antibodies | |
| BR122021001154B1 (pt) | Receptores de antígeno quimérico que direcionam receptor acoplado à proteína g, molécula de ácido nucleico, vetor, método in vitro ou ex vivo, composição farmacêutica, kit e usos dos mesmos |